ES2946110T3 - Lípido catiónico ionizable para la administración de ARN - Google Patents

Lípido catiónico ionizable para la administración de ARN Download PDF

Info

Publication number
ES2946110T3
ES2946110T3 ES15724466T ES15724466T ES2946110T3 ES 2946110 T3 ES2946110 T3 ES 2946110T3 ES 15724466 T ES15724466 T ES 15724466T ES 15724466 T ES15724466 T ES 15724466T ES 2946110 T3 ES2946110 T3 ES 2946110T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
compound
carbons
lipid
mol
consist
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES15724466T
Other languages
English (en)
Inventor
Joseph Payne
Padmanabh Chivukula
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Arcturus Therapeutics Inc
Original Assignee
Arcturus Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US14/546,105 external-priority patent/US9593077B2/en
Priority claimed from US14/707,876 external-priority patent/US9365610B2/en
Application filed by Arcturus Therapeutics Inc filed Critical Arcturus Therapeutics Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2946110T3 publication Critical patent/ES2946110T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C333/00—Derivatives of thiocarbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C333/02—Monothiocarbamic acids; Derivatives thereof
    • C07C333/04—Monothiocarbamic acids; Derivatives thereof having nitrogen atoms of thiocarbamic groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
    • A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
    • A61K48/0033—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being non-polymeric
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C333/00—Derivatives of thiocarbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C333/02—Monothiocarbamic acids; Derivatives thereof
    • C07C333/10—Monothiocarbamic acids; Derivatives thereof having nitrogen atoms of thiocarbamic groups being part of any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom, e.g., N-acyl-thiocarbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
    • C07J1/0003—Androstane derivatives
    • C07J1/0007—Androstane derivatives not substituted in position 17
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J31/00—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J31/006—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J31/003
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0043—Nose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/12—Aerosols; Foams
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers comprising non-phosphatidyl surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids or non-phosphatidyl liposomes coated or grafted with polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering nucleic acids [NA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Lo que se describe son compuestos de fórmulas Π, HI, IV y V. El compuesto de fórmula II consta de un compuesto en el que R1 y R2 son ambos un alquilo lineal que consta de 1 a 12 carbonos, un alquenilo o alquinilo que consta de 2 a 12 carbonos; L1 y L2 consisten ambos en un alquileno o alquenileno lineal que consta de 5 a 18 carbonos, o que forma un heterociclo con N; X es S; L3 consiste en un enlace o un alquileno lineal que consta de 1 a 6 carbonos, o forma un heterociclo con N; R3 consiste en un alquileno lineal o ramificado que consta de 1 a 6 carbonos; y R4 y R5 son iguales o diferentes, cada uno de los cuales consta de hidrógeno o un alquilo lineal o ramificado que consta de 1 a 6 carbonos. El compuesto de fórmulas HI y IV consiste en un compuesto en el que R1 consiste en un alquilo ramificado de 12 a 20 carbonos; R2 consiste en un alquilo lineal de 5 a 10 carbonos o un alquilo ramificado de 12 a 20 carbonos; L1 y L2 consisten cada uno en un enlace o un alquilo lineal que tiene de 1 a 3 átomos de carbono; X consiste en S u O; L3 consiste en un enlace o un alquilo inferior; R3 consiste en un alquilo inferior; y R4 y R5 son iguales o diferentes, consistiendo cada uno de ellos en un alquilo inferior. El compuesto de fórmula V consiste en un compuesto en el que R1 consiste en un alquilo lineal o ramificado que consta de 1 a 18 carbonos, un alquenilo o alquinilo que consta de 2 a 12 carbonos o un colesterilo; R2 consiste en un 606338680v1 alquilo o alquenilo lineal o ramificado que consta de 1 a 18 carbonos; L1 consiste en un alquilo lineal que consta de 5 a 9 carbonos o, cuando R1 consiste en un colesterilo, entonces L1 consiste en un alquileno o alquenilo lineal que consta de 3 a 4 carbonos; X1 consta de -0-(CO)- o -(CO)-0-; X2 consiste en S u O; La consiste en un enlace o un alquileno lineal de 1 a 6 carbonos; R3 consiste en un alquileno lineal o ramificado con 1 a 6 carbonos; y R4 y R5 son iguales o diferentes, consistiendo cada uno de ellos en un alquilo lineal o ramificado de 1 a 6 carbonos. El compuesto de fórmulas II, III, IV y V puede comprender una de sus sales farmacéuticamente aceptable. cada uno consiste en un alquilo lineal o ramificado de 1 a 6 carbonos. El compuesto de fórmulas II, III, IV y V puede comprender una de sus sales farmacéuticamente aceptable. cada uno consiste en un alquilo lineal o ramificado de 1 a 6 carbonos. El compuesto de fórmulas II, III, IV y V puede comprender una de sus sales farmacéuticamente aceptable. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Lípido catiónico ionizable para la administración de ARN
ANTECEDENTES
[0001] Un número de diferentes tipos de ácidos nucleicos están siendo desarrollados actualmente como agentes terapéuticos para el tratamiento de un conjunto de enfermedades. Estos ácidos nucleicos incluyen ADN en terapia genética, ácidos nucleicos de interferencia basados en plásmidos, ácidos nucleicos pequeños de interferencia para ser utilizados en ARN de interferencia (ARNi), que incluye ARNpi, ARNml, moléculas antisentido, ribozimas y aptámeros. Dado que estas moléculas están siendo desarrolladas, se ha creado una necesidad de producirlas de una forma que sea estable y tenga una vida útil larga y que puedan incorporarse en un disolvente orgánico anhidro o aprótico polar anhidro para facilitar las encapsulaciones de los ácidos nucleicos sin reacciones secundarias que puedan tener lugar en una solución acuosa polar o disolventes no polares.
[0002] La presente invención se refiere a composiciones de lípidos novedosas que facilitan la administración intracelular de moléculas biológicamente activas y terapéuticas. La presente invención se refiere también a composiciones farmacéuticas que comprenden tales composiciones de lípidos y que son útiles para administrar cantidades terapéuticamente eficaces de moléculas biológicamente activas a las células de pacientes.
[0003] La administración de un compuesto terapéutico a un sujeto es importante por sus efectos terapéuticos y normalmente puede obstaculizarse por la capacidad limitada del compuesto a alcanzar células y tejidos diana. La mejora de tales compuestos para entrar en las células diana de tejidos mediante una variedad de medios de administración es crucial. La presente invención se refiere a los lípidos novedosos, en composiciones y procedimientos de preparación para facilitar la administración intracelular dirigida de moléculas biológicamente activas.
[0004] Los ejemplos de moléculas biológicamente activas de los cuales a menudo no se alcanza el direccionamiento eficaz hacia un tejido de paciente incluyen: (1) múltiples proteínas que incluyen proteínas de inmunoglobulina, (2) polinucleótidos, tales como ADN genómico, ADNc o ARNm (3) polinucleótidos antisentido; y (4) muchos compuestos con peso molecular bajo, tanto de origen sintético como natural, tales como las hormonas peptídicas y antibióticos.
[0005] Uno de los desafíos fundamentales a los que se enfrentan actualmente los médicos es que están siendo desarrollados actualmente un conjunto de tipos diferentes de ácidos nucleicos como agentes terapéuticos para el tratamiento de un conjunto de enfermedades. Estos ácidos nucleicos incluyen ADN en terapia genética, plásmidos, ácidos nucleicos pequeños de interferencia (ANpi), ARNpi y microARN (ARNmi) para ser utilizados en ARN de interferencia (ARNi), moléculas antisentido, ribozimas, antagomirs y aptámeros. Todos estos ácidos nucleicos están siendo desarrollados, existe una necesidad de producir formulaciones de lípidos que sean fáciles de fabricar y puedan administrarse fácilmente a un tejido diana.
[0006] El documento WO 2013/086373 describe lípidos para la administración de agentes activos. El documento WO 2013/185116 describe lípidos para formulaciones de administración de agentes terapéuticos.
CARACTERÍSTICAS DE LA PRESENTE INVENCIÓN
[0007] La presente invención reivindicada se refiere a compuestos de fórmula III
Figure imgf000002_0001
en la que
R1 consiste en un alquilo ramificado de 12 a 20 carbonos; R2 consiste en un alquilo ramificado de 12 a 20 carbonos; L1 y L2 cada uno consiste en un enlace o un alquilo lineal que tiene de 1 a 3 átomos de carbono; X consiste en S u O; L3 consiste en un enlace; R3 se selecciona entre etileno, n-propileno o isopropileno, y R4 y R5 son el mismo o diferentes, consistiendo cada uno en un alquilo lineal o ramificado que consiste en de 1 a 6 carbonos o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
[0008] En una realización del compuesto de la fórmula III, X es S. En otra realización del compuesto de la fórmula III, R3 es etileno. En otra realización del compuesto de la fórmula III, R3 es n-propileno o isopropileno. En otra realización del compuesto de la fórmula III, R4 y R5 son por separado metilo, etilo o isopropilo. En otra realización del compuesto de la fórmula III, L1 y L2 cada uno consiste en un enlace. En otra realización del compuesto de la fórmula III, L1 y L2 cada uno consiste en un metileno. En otra realización del compuesto de la fórmula III, R1 y R2 cada uno consiste en 19 o 20 átomos de carbono. En otra realización del compuesto de la fórmula III, R1 y R2 cada uno consiste en 13 o 14 átomos de carbono. En otra realización del compuesto de la fórmula III, en la que L3 consiste en un enlace, R3 es etileno, X es S, y R4y R5 son cada uno son metilo. En otra realización del compuesto de la fórmula III o IV, L3 consiste en un enlace, R3 consiste en n-propileno, X consiste en S, y R4 y R5 cada uno consiste en metilo. En otra realización del compuesto de la fórmula III, L3 consiste en un enlace, R3 consiste en isopropileno, X consiste en S, y R4 y R5 cada uno consiste en metilo.
[0009] En el presente documento se describen los compuestos de la fórmula I, II, III, IV y V. Se describe, pero no se reivindica, un compuesto de la fórmula I
Figure imgf000003_0001
en la que
R1 y R2 cada uno consiste en un alquilo lineal que consiste en 1 a 9 carbonos, un alquenilo o alquinilo que consiste en 2 a 11 carbonos; L1 y L2 cada uno consiste en alquileno o alquenileno lineal que consiste en 5 a 18 carbonos, o que forman un heterociclo con N; X1 y X3 ambos consisten en -CO-O-;
X2 consiste en S u O; L3 consiste en un enlace o un alquileno lineal que consiste en 1 a 6 carbonos, o que forma un heterociclo con N; R3 consiste en un alquileno lineal o ramificado que consiste en 1 a 6 carbonos; y R4 y R5 son los mismos o diferentes, consistiendo cada uno en un hidrógeno o un alquilo lineal o ramificado que consiste en 1 a 6 carbonos;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
[0010] También se describe, pero no se reivindica en el presente documento, un compuesto de la Fórmula II
Figure imgf000003_0002
en la que
R1 y R2 ambos consisten en un alquilo lineal que consiste en 1 a 12 carbonos, un alquenilo o alquinilo que consiste en 2 a 12 carbonos; L1 y L2 ambos consisten en un alquileno o alquenileno lineal que consiste en 5 a 18 carbonos, o forman un heterociclo con N; X consiste en S, L3 consiste en un enlace o un alquileno lineal que consiste en 1 a 6 carbonos, o forma un heterociclo con N; R3 consiste en un alquileno lineal o ramificado que consiste en 1 a 6 carbonos; y R4 y R5 son los mismos o diferentes, consistiendo cada uno en un hidrógeno o un alquilo lineal o ramificado que consiste en 1 a 6 carbonos;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
[0011] En el compuesto de la fórmula II, ambos L1 y L2 pueden consistir en un alquileno lineal que consiste en cinco carbonos. En el compuesto de la fórmula I, R3 puede ser etileno o propileno. En el compuesto de la fórmula I, R4 y R5 pueden ser el mismo o diferentes, cada uno puede ser hidrógeno, metilo o etilo. En el compuesto de la fórmula I, L3 puede ser un enlace. En el compuesto de la fórmula I, ambos R1 y R2 pueden consistir en un alquenilo lineal que consiste en diez carbonos.
[0012] También se describe, pero no se reivindica en el presente documento, un compuesto de la fórmula IV
Figure imgf000004_0001
en la que
R1 consiste en un alquilo ramificado de 12 a 20 carbonos; R2 consiste en un alquilo lineal de 5 a 10 carbonos o un alquilo ramificado de 12 a 20 carbonos; L1 y L2 cada uno consiste en un enlace o un alquilo lineal que tiene de 1 a 3 átomos de carbono; X consiste en S u O; L3 consiste en un enlace o un alquilo inferior; R3 es un alquilo inferior, y R4 y R5 son el mismo o diferentes, consistiendo cada uno en un alquilo inferior; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
[0013] En el compuesto de la fórmula IV, L3 puede consistir en un enlace. En el compuesto de la fórmula IV, X puede ser S. En el compuesto de la fórmula IV, R3 puede ser etileno. En el compuesto de la IV, R3 puede ser n-propileno o isopropileno. En el compuesto de la fórmula IV, R4 y R5 pueden ser, por separado, metilo, etilo o isopropilo. En el compuesto de la fórmula IV, L1 y L2 cada uno consiste en un enlace. En el compuesto de la fórmula IV, L1 y L2 cada uno consiste en un metileno. En el compuesto de la fórmula IV, R1 y R2 cada uno puede consistir en alquilo ramificado. En el compuesto de la fórmula IV, R2 puede consistir en un alquilo. En el compuesto de la fórmula IV, R1 y R2 cada uno puede consistir en 19 o 20 átomos de carbono. En el compuesto de la fórmula III o IV, R1 o R2 cada uno puede consistir en 13 o 14 átomos de carbono. En el compuesto de la fórmula III o IV, L3 puede consistir en metileno, R3 puede ser etileno, X2 puede ser S, y R4 y R5 cada uno puede ser metilo. En el compuesto de la fórmula IV, en la que L3 puede consistir en un enlace, R3 puede ser etileno, X puede ser S y R4 y R5 cada uno puede ser metilo. En el compuesto de la fórmula IV, L3 puede consistir en un enlace, R3 puede consistir en n-propileno, X puede consistir en S, y R4 y R5 cada uno puede consistir en metilo. En el compuesto de la fórmula IV, L3 puede consistir en un enlace, R3 puede consistir en isopropileno, X puede consistir en S, y R4 y R5 cada uno puede consistir en metilo.
[0014] También se describe, pero no se reivindica en el presente documento, un compuesto de la fórmula V
Figure imgf000004_0002
en la que
R1 consiste en un alquilo lineal o ramificado que consiste en 1-18 carbonos, un alquenilo o un alquinilo que consiste en 2 a 12 carbonos, o un colesterilo; R2 consiste en un alquilo o un alquenilo lineal o ramificado que consiste en 1 a 18 carbonos; L1 consiste en un alquilo lineal que consiste en 5 a 9 carbonos o, cuando R1 consiste en un colesterilo, entonces, L1 consiste en un alquileno o alquenilo lineal que consiste en 3 a 4 carbonos; X1 consiste en -O-(CO)- o -(CO)-O-; X2 consiste en S u O; L2 consiste en un enlace o un alquileno lineal de 1 a 6 carbonos; R3 consiste en un alquileno lineal o ramificado de 1 a 6 carbonos; y R4 y R5 son el mismo o diferentes, consistiendo cada uno en un alquilo lineal o ramificado de 1 a 6 carbonos;
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
[0015] En el compuesto de la fórmula V, L2 puede consistir en un enlace. En el compuesto de la fórmula V, X2 puede consistir en S. En el compuesto de la fórmula V, X1 puede ser -O-(CO)-. En el compuesto de la fórmula V, R3 puede ser etileno. En el compuesto de la V, R3 puede ser n-propileno o isopropileno. En el compuesto de la fórmula V, R4 y R5 pueden ser por separado metilo, etilo o isopropilo. En el compuesto de la fórmula V, L2 puede consistir en un metileno. En el compuesto de la fórmula V, R1 y R2 cada uno puede consistir en alquilo ramificado. En el compuesto de la fórmula V, R2 puede consistir en un alquilo. En el compuesto de la fórmula V, R1 y R2 cada uno puede consistir en 19 o 20 átomos de carbono. En el compuesto de la fórmula V, R1 y R2 cada uno puede consistir en 13 o 14 átomos de carbono. En el compuesto de la fórmula V, L2 puede consistir en metileno, R3 puede ser etileno, X1 es -O-(CO)-, X2 puede ser S y ambos R4 y R5 pueden ser metilo. En el compuesto de la fórmula V, L2 puede consistir en un enlace, R3 puede ser etileno, X1 puede ser -O-(CO)-, X2 puede ser S y ambos R4 y R5 pueden ser metilo. En el compuesto de la fórmula V, L2 puede consistir en un enlace, R3 puede ser n-propileno, X1 puede ser -O-(CO)-, X2 puede ser S y ambos R4 y R5 pueden ser metilo. En el compuesto de la fórmula V, L2 puede consistir en un enlace, R3 puede ser isopropileno, X1 puede ser -O-(CO)-, X2 puede ser S y ambos R4 y R5 pueden ser metilo.
[0016] Preferiblemente el ácido nucleico tiene actividad de supresión de la expresión de un gen diana. Preferiblemente, el gen diana es un gen asociado a inflamación.
[0017] En el presente documento también se describe, pero no se reivindica, un procedimiento de introducción de un ácido nucleico en una célula de un mamífero utilizando cualquiera de las composiciones mencionadas anteriormente. La célula puede ubicarse en un hígado, pulmón, riñón, cerebro, sangre, bazo o hueso. Preferiblemente, la composición se administra por la vía intravenosa, subcutánea, intraperitoneal o intratecal. Preferiblemente, las composiciones descritas en el presente documento se utilizan en un procedimiento de tratamiento de cáncer o enfermedad inflamatoria. La enfermedad puede ser una seleccionada entre el grupo que consiste en trastorno inmune, cáncer, enfermedad renal, enfermedad fibrótica, anormalidad genética, inflamación y trastorno cardiovascular.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
[0018] Se proporciona la divulgación en relación a los compuestos que no están incluidos en el alcance de la presente invención reivindicada solamente como referencia.
La Figura 1 representa la actividad “knockdown” de ARNpi encapsulado mediante diferentes lípidos catiónicos. Los lípidos incluyen MC3 (0,3 mg/kg), NC1 (0,3 mg/kg), ATX-547 (0,3 mg/kg), ATX-001 (0,3 y 1,0 mg/kg), ATX-002 (0,3 y 1,0 mg/kg), y ATX-003 (0,3 y 1,0 mg/kg). Se muestra el “knockdown” de la cantidad de Factor VII en plasma de ratón después de la administración de la formulación con ARNpi a ratones C57BL6, en comparación con la inyección de vehículo solamente. La cantidad del Factor VII en plasma humano anormal y normal se incluye como un control. Las disminuciones estadísticamente significativas en los niveles del Factor VII (p<0,01) están representadas por un asterisco (*).
La Figura 2 representa una evaluación del efecto de ARNpi de la actividad de Factor VII basada en los resultados mostrados en la Figura 2, y normalizada con relación al “knockdown” en porcentaje en comparación con el vehículo solamente.
La Figura 3 representa la actividad “knockdown” de ARNpi encapsulado mediante diferentes lípidos catiónicos. Los lípidos incluyen MC3 (0,3 y 1,5 mg/kg), NC1 (0,3 mg/kg), AT547 (0,1 y 0,3 mg/kg), AT004 (0,3), AT006 (0,3 y 1,0 mg/kg), ATX-010 (0,3 mg/kg) y AT001 (0,3 y 1,5 mg/kg). Se muestra el “knockdown” de la cantidad de Factor VII en plasma de ratón después de la administración de la formulación con ARNpi a ratones C57BL6, en comparación con la inyección de vehículo solamente. La cantidad del Factor VII en plasma humano anormal y normal se incluye como un control. Las disminuciones estadísticamente significativas en los niveles del Factor VII (p<0,01) están representadas por un asterisco (*).
La Figura 4 representa una evaluación del efecto de ARNpi de la actividad del Factor VII basada en los resultados mostrados en la Figura 2, y normalizada con relación al “knowckdown” en porcentaje en comparación con el vehículo solamente.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
[0019] “Como mínimo uno” significa uno o más (por ejemplo, 1-3, 1-2, o 1).
[0020] “Composición” incluye un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como cualquier producto que proviene, directa o indirectamente, de la combinación de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.
[0021] “En combinación con”, tal como se usa para describir la administración de un compuesto de las fórmulas 1, I y II con otros medicamentos en los procedimientos de tratamiento, significa que los compuestos de las fórmulas 1, I y II y otros medicamentos se administran secuencialmente o simultáneamente en formas de dosificación separadas o se administran simultáneamente en la misma forma de dosificación.
[0022] “Mamífero” significa un humano u otro mamífero o significa un ser humano.
[0023] “Paciente” incluye tanto un ser humano como a otros mamíferos, preferiblemente ser humano.
[0024] “Alquilo” significa una cadena de hidrocarburos lineal o ramificada saturada. En diferentes realizaciones, el grupo alquilo tiene 1-18 átomos de carbono, es decir, es un grupo C1-C18 o es un grupo C1-C12, un grupo C1-C6 o un grupo C1-C4. Independientemente, en diferentes realizaciones, el grupo alquilo posee cero ramificaciones (es decir, es una cadena lineal), una ramificación, dos ramificaciones o más de dos ramificaciones. “Alquenilo” significa un alquilo insaturado que puede tener un doble enlace, dos dobles enlaces, más de dos dobles enlaces. “Alquinilo” significa un alquilo insaturado que puede tener un triple enlace, dos triples enlaces o más de dos triples enlaces. Las cadenas de alquilo pueden sustituirse de manera opcional con 1 sustituyente (es decir, el grupo alquilo es monosustituido) o 1-2 sustituyentes, o 1-3 sustituyentes, o 1-4 sustituyentes, etc. Los sustituyentes pueden seleccionarse entre el grupo que consiste en hidroxi, amino, alquilamino, boronilo, carboxi, nitro, ciano o halo. Cuando el grupo alquilo incorpora uno o más heteroátomos, se hace referencia al grupo alquilo en el presente documento como a un grupo heteroalquilo. Cuando los sustituyentes en un grupo alquilo son hidrocarburos, a continuación, se hace referencia al grupo resultante simplemente como a un alquilo sustituido. En diversos aspectos, el grupo alquilo que incluye sustituyentes tiene menos de 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8 o 7 carbonos.
[0025] “Alquilo inferior” significa un grupo que tiene de uno a seis átomos de carbono en la cadena, cuya cadena puede ser lineal o ramificada. Los ejemplos no limitativos de grupos alquilo adecuados incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, n-pentilo y hexilo.
[0026] “Alcoxi” significa un grupo alquil-O en donde alquilo es tal como se define anteriormente. Los ejemplos no limitativos de grupos alcoxi incluyen: metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi y heptoxi. El enlace con el grupo parental se realiza a través del oxígeno de éter.
[0027] “Alcoxialquilo” significa un grupo alcoxi-alquilo en el que el alcoxi y el alquilo son tal como se describen anteriormente. Un alcoxialquilo preferido comprende un grupo alquilo inferior. El enlace con el grupo parental se realiza a través del alquilo.
[0028] “Alquilarilo” significa un grupo alquil-arilo en el que el alquilo y el arilo son tal como se describen anteriormente. Un alquilarilo preferido comprende un grupo alquilo inferior. El enlace con el grupo parental se realiza a través del arilo.
[0029] “Aminoalquilo” significa un grupo NH2-alquilo, en el que alquilo es tal como se define anteriormente, enlazado con el grupo parental a través del grupo alquilo.
[0030] “Carboxialquilo” significa un grupo HOOC-alquilo, en el que alquilo es tal como se define anteriormente, enlazado con el grupo parental a través del grupo alquilo.
[0031] “Productos químicos disponibles comercialmente” y los productos químicos utilizados en los Ejemplos enunciados en el presente documento pueden obtenerse de fuentes comerciales estándares, donde tales fuentes incluyen, por ejemplo, Acros Organics (Pittsburgh, Pa.), Sigma-Adrich Chemical (Milwaukee, Wis.), Avocado Research (Lancashire, Reino Unido), Bionet (Cornwall, Reino Unido), Boron Molecular (Research Triangle Park, N.C.), Combi-Blocks (San Diego, California), Eastman Organic Chemicals, Eastman Kodak Company (Rochester, N.Y.), Fisher Scientific Co. (Pittsburgh, Pa.), Frontier Scientific (Logan, Utah), ICN Biomedicals, Inc. (Costa Mesa, Calif.), Lancaster Synthesis (Windham, N.H.), Maybridge Chemical Co. (Cornwall, Reino Unido), Pierce Chemical Co. (Rockford, Ill.), Riedel de Haen (Hannover, Alemania), Spectrum Quality Product, Inc. (New Brunswick, NJ.), TCI America (Portland, Oreg.), y Wako Chemicals USA, Inc. (Richmond, Va.).
[0032] “ Compuestos descritos en la bibliografía química” pueden identificarse a través de libros de referencia y bases de datos dirigidos a compuestos químicos y reacciones químicas, tal como se conocen por el experto en la técnica. Los libros y tratados de referencia adecuados que detallan la síntesis de reactivos útiles en la preparación de compuestos divulgados en el presente documento, o proporcionan referencias a artículos que describen la preparación de compuestos divulgados en el presente documento, incluyen, por ejemplo, «Synthetic Organic Chemistry», John Wiley y Sons, Inc. Nueva York; S. R. Sandler et al, «Organic Functional Group Preparations», 2a Edición, Academic Press, Nueva York, 1983; H. O. House, «Modern Synthetic Reactions», 2a Edición, W. A. Benjamin, Inc. Menlo Park, Calif., 1972; T. L. Glichrist, «Heterocyclic Chemistry», 2a Edición John Wiley y Sons, Nueva York, 1992; J. March, «Advanced Organic Chemistry: reactions, Mechanisms and Structure», 5a Edición, Wiley Interscience, Nueva York, 2001. Pueden identificarse también reactivos específicos y análogos a través de los índices de productos químicos conocidos preparados por el Chemical Abstract Service de la American Chemical Society, que están disponibles en la mayoría de las bibliotecas públicas y universitarias, así como a través de bases de datos en línea (por ejemplo, la American Chemical Society, Washington, D.C.). Los productos químicos que se conocen, pero que no están disponibles comercialmente en catálogos pueden prepararse por empresas de síntesis de productos químicos por encargo, donde muchas de las empresas de distribución de productos químicos (tales como aquellas mencionadas anteriormente) prestan servicios de síntesis personalizados.
[0033] “Halo” significa grupos fluoro, cloro, bromo o yodo. Los preferidos son fluoro, cloro o bromo y los más preferidos son flúor y cloro.
[0034] “Halógeno” significa flúor, cloro, bromo o yodo. Los preferidos son flúor, cloro y bromo.
[0035] “Heteroalquilo” es una cadena saturada o insaturada, lineal o ramificada, que contiene carbono y como mínimo un heteroátomo. En varias realizaciones, el grupo heteroalquilo puede tener un heteroátomo o 1-2 heteroátomos o 1-3 heteroátomos, o 1-4 heteroátomos. En un aspecto, la cadena de heteroalquilo contiene de 1 a 18 (es decir, 1-18) átomos miembros (carbono y heteroátomos), y en varias realizaciones, contiene 1-12, o 1-6, o 1-4 átomos miembros. Independientemente, en diferentes realizaciones, el grupo heteroalquilo posee cero ramificaciones (es decir, es una cadena lineal), una ramificación, dos ramificaciones o más de dos ramificaciones. Independientemente, en una realización, el grupo heteroalquilo es saturado. En otra realización, el grupo heteroalquilo es insaturado. En diferentes realizaciones, el heteroalquilo insaturado puede tener un doble enlace, dos dobles enlaces, más de dos dobles enlaces y/o un triple enlace, dos triples enlaces o más de dos triples enlaces. Las cadenas de heteroalquilo pueden ser sustituidas o no sustituidas. En una realización, la cadena de heteroalquilo es no sustituida. En otra realización, la cadena de heteroalquilo es sustituida. Una cadena de heteroalquilo sustituida puede tener 1 sustituyente (es decir, mediante monosustitución), o puede tener, por ejemplo, 1-2 sustituyentes o 1-3 sustituyentes o 1-4 sustituyentes. Los sustituyentes de heteroalquilo de ejemplo incluyen ésteres (-C(O)-O-R) y carbonilos (-C(O)-).
[0036] “Hidroxialquilo” significa un grupo HO-alquilo, en el que alquilo se ha definido previamente. Los hidroxialquilos preferidos contienen alquilo inferior. Los ejemplos no limitativos de grupos hidroxialquilo adecuados incluyen hidroximetilo y 2-hidroxietilo.
[0037] “Hidrato” es un solvato en el que la molécula de disolvente es H2O.
[0038] “Lípido” significa un compuesto orgánico que comprende un éster de ácido graso y se caracteriza por ser insoluble en agua, pero soluble en muchos disolventes orgánicos. Normalmente los lípidos se dividen en como mínimo tres clases: (1) “ lípidos simples”, que incluyen grasas y aceites, así como ceras; (2 ) “ lípidos compuestos”, que incluyen fosfolípidos y glicolípidos; y (3) “ lípidos derivados”, tales como esteroides.
[0039] “Partícula lipídica” significa una formulación de lípidos que se puede utilizar para administrar un ácido nucleico terapéutico (por ejemplo, ARNm) a un sitio diana de interés (por ejemplo, célula, tejido, órgano y similares). Preferiblemente, la partícula lipídica es una partícula de ácido nucleico-lípido, que se forma a partir de un lípido catiónico, un lípido no catiónico (por ejemplo, un fosfolípido), un lípido conjugado que previene la agregación de la partícula (por ejemplo, un PEG-lípido) y, opcionalmente, colesterol. Típicamente, el ácido nucleico terapéutico (por ejemplo, ARNm) se puede encapsular en la parte lipídica de la partícula, protegiéndolo de este modo de la degradación enzimática.
[0040] Típicamente las partículas lipídicas tienen un diámetro medio que oscila entre 30 nm y 150 nm, entre 40 nm y 150 nm, entre 50 nm y 150 nm, entre 60 nm y 130 nm, entre 70 nm y 110 nm, entre 70 nm y 100 run, entre 80 nm y 100 nm, entre 90 nm y 100 nm, entre 70 y 90 nm, entre 80 nm y 90 nm, entre 70 nm y 80 nm, o 30 run, 35 run, 40 nm, 45 nm, 50 nm, 55 nm, 60 nm, 65 nm, 70 nm, 75 nm, 80 nm, 85 nm, 90 nm, 95 nm, 100 nm, 105 nm, 110 nm, 115 nm, 120 nm, 125 nm, 130 nm, 135 nm, 140 nm, 145 nm, o 150 nm, y son sustancialmente no tóxicas. Adicionalmente, los ácidos nucleicos, cuando están presentes en las partículas lipídicas de la presente invención, son resistentes a la degradación con una nucleasa en una solución acuosa.
[0041] “Solvato” significa una asociación física de un compuesto de esta divulgación a una o más moléculas de disolvente. Esta asociación física implica diferentes grados de enlaces iónicos y covalentes, que incluye enlace de hidrógeno. En determinados casos, el solvato será capaz de aislarse, por ejemplo, cuando una o más moléculas de disolvente se incorporan a la red cristalina del sólido cristalino. “Solvato” abarca tanto los solvatos en fase solución como aislables. Los ejemplos no limitativos de solvatos adecuados incluyen etanolatos, metanolatos y similares.
[0042] “Lípido encapsulado” puede significar una partícula lipídica que proporciona un ácido nucleico terapéutico, tal como un ARNm con encapsulación completa, encapsulación parcial o ambas. En una realización preferida, el ácido nucleico (por ejemplo, ARNm) se encapsula completamente en la partícula lipídica.
[0043] “Conjugado de lípido” significa un lípido conjugado que inhibe la agregación de partículas lipídicas. Dichos conjugados de lípidos incluyen, pero no se limitan a, conjugados de PEG-lípido, tales como, por ejemplo, PEG acoplado a dialquiloxipropilos (por ejemplo, conjugados de PEG-DAA), PEG acoplado a diacilgliceroles (por ejemplo, conjugados de PEG-Da G), PEG acoplado a colesterol, PEG acoplado a fosfatidiletanolaminas y PEG conjugado a ceramidas, lípidos catiónicos con p Eg , conjugados de polioxazolina (POZ)-lípido, oligómeros de poliamida (por ejemplo, conjugados de ATTA-lípido) y mezclas de los mismos. PEG o POZ pueden conjugarse directamente con el lípido o pueden enlazarse al lípido a través de un resto enlazador. Se puede utilizar cualquier resto enlazador adecuado para el acoplamiento del PEG o la POZ a un lípido que incluye, por ejemplo, restos enlazadores que no contienen ésteres y restos enlazadores que contienen ésteres. Preferiblemente, se utilizan restos enlazadores que no contienen ésteres, tales como amidas o carbamatos.
[0044] “Lípido anfipático” significa el material en el que la parte hidrófoba del material lipídico se orienta en una fase hidrófoba, mientras que la parte hidrófila se orienta hacia la fase acuosa. Las características hidrófilas derivan de la presencia de grupos polares o cargados, tales como grupos carbohidratos, fosfato, carboxílico, sulfato, amino, sulfhidrilo, nitro, hidroxilo y otros grupos similares. La hidrofobicidad puede otorgarse por la inclusión de grupos apolares que incluyen, pero no se limitan a, grupos de hidrocarburos alifáticos saturados e insaturados de cadena larga y tales grupos se sustituyen por uno o más grupos aromáticos, cicloalifáticos o heterocíclicos. Los ejemplos de compuestos anfipáticos incluyen, pero no se limitan a, fosfolípidos, aminolípidos y esfingolípidos.
[0045] Los ejemplos representativos de fosfolípidos incluyen, pero no se limitan a, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol, ácido fosfatídico, palmitoiloleoil fosfatidilcolina, lisofosfatidilcolina, lisofosfatidiletanolamina, dipalmitoilfosfatidilcolina, dioleoilfosfatidilcolina, diestearoil fosfatidilcolina y dilinoleoilfosfatidilcolina. Otros compuestos que carecen de fósforo, tales como esfingolípido, familias de glicoesfingolípidos, diacilgliceroles y p-aciloxiácidos, están también dentro del grupo denominado como lípidos anfipáticos. Adicionalmente, los lípidos anfipáticos descritos anteriormente pueden mezclarse con otros lípidos que incluyen triglicéridos y esteroles.
[0046] “Lípido neutro” significa una especie de lípido que existe en una forma zwitteriónica no cargada o neutra a un pH seleccionado. A pH fisiológico, tales lípidos incluyen, por ejemplo, diacilfosfatidilcolina, diacilfosfatidiletanolamina, ceramida, esfingomielina, cefalina, colesterol, cerebrósidos y diacilgliceroles.
[0047] “Lípido no catiónico” significa un lípido anfipático o un lípido neutro o un lípido aniónico, y es tal como se describe con más detalle a continuación.
[0048] “Lípido aniónico” significa un lípido que está negativamente cargado a pH fisiológico. Estos lípidos incluyen, pero no se limitan a, fosfatidilgliceroles, cardiolipinas, diacilfosfatidilserinas, ácidos diacilfosfatídicos, N-dodecanoil fosfatidiletanolaminas, N-succinil fosfatidiletanolaminas, N-glutarilfosfatidiletanolaminas, lisilfosfatidilgliceroles, palmitoiloleiolfosfatidilglicerol (POPG), y otros grupos de modificación aniónicos unidos a lípidos neutros.
[0049] El término “ lípido hidrófobo” significa un compuesto que tiene grupos apolares que incluyen, pero no se limitan a, grupos de hidrocarburos alifáticos saturados e insaturados de cadena larga y tales grupos se sustituyen opcionalmente con uno o más grupos aromáticos, cicloalifáticos o heterocíclicos. Los ejemplos adecuados incluyen, pero no se limitan a, diacilglicerol, dialquilglicerol, N-N-dialquilamino, 1,2-diaciloxi-3-aminopropano y 1,2-dialquil-3-aminopropano.
[0050] Los términos “ lípido catiónico” y “aminolípido” se utilizan en el presente documento de manera intercambiable para incluir aquellos lípidos y sales de los mismos que tienen una, dos tres o más cadenas de ácidos grasos o alquilo graso y un grupo de cabeza de amino valorable con el pH (por ejemplo, un grupo de cabeza de alquilamino o dialquilamino). Típicamente el lípido catiónico está protonado (es decir, cargado positivamente) a un pH inferior al pKa del lípido catiónico y es sustancialmente neutro a un pH superior al pKa. Los lípidos catiónicos de la presente invención también se pueden denominar lípidos catiónicos valorables. En algunas realizaciones, los lípidos catiónicos comprenden: un grupo de cabeza de amina terciaria protonable (por ejemplo, valorable con el pH); cadenas de alquilo C18, en donde cada cadena de alquilo posee de manera independiente de 0 a 3 (por ejemplo, 0, 1, 2, o 3) dobles enlaces; y enlaces éter, éster o cetal entre el grupo de cabeza y cadenas de alquilo. Tales lípidos catiónicos incluyen, pero no se limitan a, DSDMA, DODMA, DLinDMA, DLenDMA, y-DLenDMA, DLin-K-DMA, DLin-K-C2-DMA (también conocido como DLin-C2K-DMA, XTC2 y C2K), DLin-K-C3 -DM A, DLin-K-C4-DMA, DLen-C2K-DMA, y-DLen-C2K-DMA, DLin-M-C2-DMA (también conocido como MC2), DLin-M-C3 -DMA (también conocido como MC3) y (DLin-MP-DMA) (también conocido como 1-Bl 1).
[0051] El término “sustituido” significa una sustitución con grupos específicos diferentes a hidrógeno o con uno o más grupos, restos o radicales que pueden ser el mismo o diferentes, cada uno, por ejemplo, siendo seleccionado de manera independiente.
[0052] Por “ácido nucleico antisentido” se entiende una molécula de ácido nucleico no enzimática que se une a ARN diana a través de interacciones de ARN-ARN o ARN-ADN o ARN-ANP (ácido nucleico proteico; Egholm et al., 1993 Nature 365, 566) y altera la actividad del ARN diana (para revisión, véanse Stein y Cheng, 1993 Science 261, 1004 y Woolf et al., Patente de EE. UU. Número 5.849.902). Típicamente, las moléculas antisentido son complementarias para una secuencia diana a lo largo de una secuencia contigua única de la molécula antisentido. Sin embargo, una molécula antisentido puede unirse a un sustrato de tal modo que la molécula de sustrato forma un bucle, y/o una molécula antisentido puede unirse de tal modo que la molécula antisentido forma un bucle. Por tanto, la molécula antisentido puede ser complementaria a dos (o incluso más) secuencias de sustrato no contiguas o dos (o incluso más) partes de secuencia no contiguas de una molécula antisentido pueden ser complementarias a una secuencia diana o ambas. Adicionalmente, el ADN antisentido puede utilizarse para el direccionamiento de ARN a través de interacciones de ADN-ARN, activando de este modo la ARNasa H, que digiere el ARN diana en el duplex. Los oligonucleótidos antisentido pueden comprender una o más regiones de activación de ARNsa H, que es capaz de activar la disociación por ARNsa H de ARN diana. Se puede sintetizar ADN antisentido químicamente o se puede expresar a través del uso de un vector de expresión de ADN monocatenario o un equivalente del mismo. El ARN antisentido es una cadena de ARN que tiene una secuencia complementaria a un ARNm del gen diana. El ARN sentido tiene una secuencia complementaria al ARN antisentido y se aparea con su ARN antisentido complementario para formar ANi. Estos ARN antisentido y sentido han sido sintetizados de manera convencional con un sintetizador de ARN.
[0053] “Ácido nucleico” se refiere a desoxirribonucleótidos o ribonucleótidos y polímeros de los mismos en forma de cadena única o doble. El término abarca ácidos nucleicos que contienen análogos de nucleótidos o residuos de esqueleto modificado o enlazadores conocidos, que son sintéticos, de origen natural y de origen no natural, que poseen propiedades de unión similares como el ácido nucleico de referencia y que se metabolizan de manera similar con los nucleótidos de referencia. Los ejemplos de tales análogos incluyen, sin limitación, fosforotioatos, fosforamidatos, fosfonatos de metilo, fosfonatos de metilo quirales, 2'-O-metil I ribonucleótidos, ácidos peptidonucleicos (APN).
[0054] Por “ARN” se entiende una molécula que comprende como mínimo un residuo de ribonucleótido. Por “ribonucleótido” se entiende un nucleótido con un grupo hidroxilo en la posición 2' de un resto de p-D-ribo-furanosa. Los términos incluyen ARN de cadena doble, ARN de cadena única, ARN aislado, tal como ARN parcialmente purificado, ARN esencialmente puro, ARN sintético, ARN producido de manera recombinante, así como ARN alterado que se diferencia de ARN de origen natural mediante la adición, eliminación, sustitución y/o alteración de uno o más nucleótidos. Tales alteraciones pueden incluir la adición de material no nucleotídico, tal como al extremo o extremos de un ARN de interferencia o de forma interna, por ejemplo, a uno o más nucleótidos del ARN. Los nucleótidos en las moléculas de ARN pueden comprender también nucleótidos no estándares, tales como nucleótidos de origen no natural o nucleótidos sintetizados químicamente o desoxinucleótidos. Se puede hacer referencia a estos ARN alterados como análogos o análogos de ARN de origen natural. Tal como se utilizan en el presente documento, los términos “ácido ribonucleico” y “ARN” se refieren a una molécula que contiene como mínimo un residuo de ribonucleótido, que incluye ARNpi, ARN antisentido, ARN monocatenario, microARN, ARNm, ARN no codificante y ARN multivalente. Un ribonucleótido es un nucleótido con un grupo hidroxilo en la posición 2' de un resto de p-D-ribofuranosa. Estos términos incluyen ARN de cadena doble (ARNbc), ARN de cadena única (ARNmc), ARN aislado, tal como ARN parcialmente purificado, ARN esencialmente puro, ARN sintético, ARN producido de manera recombinante, así como ARN modificado y alterado que se diferencia de ARN de origen natural mediante la adición, eliminación, sustitución y/o alteración de uno o más nucleótidos. Las alteraciones de un ARN pueden incluir la adición de material no nucleotídico, tal como al extremo o extremos de un ARN de interferencia o de forma interna, por ejemplo, a uno o más nucleótidos del ARN. Los nucleótidos en una molécula de ARN incluyen nucleótidos no estándares, tales como nucleótidos de origen no natural o nucleótidos sintetizados químicamente o desoxinucleótidos. Se puede hacer referencia a estos ARN alterados como análogos.
[0055] Por “nucleótido”, tal como se utiliza en el presente documento, se entiende tal como se reconoce en la técnica que incluye bases naturales (estándar) y bases modificadas conocidas en la técnica. Tales bases se localizan generalmente en la posición 1' de un resto de azúcar de nucleótido. Generalmente, los nucleótidos comprenden una base, azúcar y un grupo fosfato. Los nucleótidos pueden ser no modificados y modificados en el resto de azúcar, fosfato y/o base, (a los que se refiere también de manera intercambiable como análogos de nucleótidos, nucleótidos modificados, nucleótidos no naturales, nucleótidos no estándares y otros; véanse, por ejemplo, Usman y McSwiggen, supra; Eckstein, et al., Publicación de PCT internacional número WO 92107065; Usman, et al, Publicación de PCT internacional número WO 93/15187; Uhlman & Peyman, supra).
[0056] Existen varios ejemplos de bases de ácido nucleico modificadas conocidas en la técnica, tal como se recogen en Limbach, et al, Nucleic Acids Res. 22:2183, 1994. Algunos de los ejemplos no limitativos de modificaciones de base que pueden introducirse en moléculas de ácido nucleico incluyen: inosina, purina, piridin-4-ona, piridin-2-ona, fenilo, pseudouracilo, 2,4,6-trimetoxibenceno, 3-metiluracilo, dihidrouridina, naftilo, aminofenilo, 5-alquilcitidinas (por ejemplo, 5-metilcitidina), 5-alquiluridinas (por ejemplo, ribotimidina), 5-halouridina (por ejemplo, 5-bromouridina) o 6-azapirimidinas o 6-alquilpirimidinas (por ejemplo, 6-metiluridina), propino y otras (Burgin, et al., Biochemistry 35:14090, 1996; Uhlman & Peyman, supra). En este aspecto por “bases modificadas” se entienden las bases de nucleótidos distintas a adenina, guanina, citosina y uracilo en la posición 1' o sus equivalentes.
[0057] Tal como se utiliza en el presente documento las bases de nucleótidos complementarias son un par de bases de nucleótidos que forman enlaces de hidrógeno entre sí. La adenina (A) se empareja con timina (T) o con uracilo (U) en el ARN, y la guanina (G) se empareja con citosina (C). Los segmentos o cadenas complementarias de ácido nucleico que hibridan (se unen mediante enlace de hidrógeno) entre sí. Por “complementario” se entiende que un ácido nucleico puede formar un enlace o enlaces de hidrógeno con otra secuencia de ácido nucleico mediante el modo de unión de Watson-Crick tradicional o a través de otro modo de unión no tradicional.
[0058] MicroARNs (ARNmi) son moléculas de ARN de cadena única de 21-23 nucleótidos de longitud, que regulan los ARNmi de la expresión de genes que son codificados por genes que se transcriben a partir de ADN pero no se traducen en proteína (ARN no codificante); en cambio se procesan a partir de las transcripciones primarias conocidas como pri-ARNmi para acortar las estructuras del tipo tallo-bucle denominadas preARNmi y finalmente a ARNmi funcional. Las moléculas de ARNmi maduras son parcialmente complementarias para una o más moléculas de ARN mensajero (ARNm), y su función principal es regular negativamente la expresión de genes.
[0059] Tal como se utiliza en el presente documento el término “ARN pequeño de interferencia (ARNpi)”, a veces conocido como ARN pequeño de interferencia o ARN de silenciamiento, se utiliza para hacer referencia a una clase de moléculas de ARNbc, con 16-40 nucleótidos de longitud, que juegan una variedad de papeles en biología. Especialmente, ARNpi está involucrado en la vía de ARN de interferencia (ARNi), donde interfiere con la expresión de un gen específico. Además de su papel en la vía de ARNi, ARNpi actúan también en las vías relacionadas con ARNi, por ejemplo, como un mecanismo antiviral o en la conformación de la estructura de cromatina de un genoma; la complejidad de estas vías solamente ahora se está dilucidando.
[0060] Tal como se utiliza en el presente documento, el término ARNi se refiere a un proceso de silenciamiento de un gen dependiente de ARN que se controla por el complejo de silenciamiento inducido por ARN (RISC) y es iniciado por moléculas de ARNbc cortos en una célula, donde interaccionan con el componente de RISC catalítico denominado proteína argonauta. Cuando el ARNbc o ANi similar a ARN o ARNpi es exógeno (procede de una infección por un virus con un genoma de ARN o de ANi o ARNpi transfectados), el ARN o ANi se importa de manera directa en el citoplasma y se escinde a fragmentos cortos por una enzima denominada Dicer. El ARNbc iniciador puede ser también endógeno (que se origina en la célula), como en pre-ARNmi que se expresan a partir de genes que codifican ARN en el genoma. Las transcripciones primarias a partir de tales genes se procesan primero para formar la estructura característica de tallo-bucle (“stem-loop”) de pre-ARNmi en el núcleo, a continuación, se exportan al citoplasma para ser escindida por Dicer. Por tanto, las dos vías de ARNbc, exógena e endógena, convergen en el complejo RISC. Los componentes activos de RISC, proteínas argonautas, escinden la cadena de ARNm diana complementaria a su ARNpi o Ani enlazados. Debido a que los fragmentos producidos por Dicer son de cadena doble, en teoría cada uno podría producir un ARNpi o ANi funcionales. Sin embargo, solamente una de las dos cadenas, llamada la cadena guía, se une a la proteína argonauta y dirige el silenciamiento de genes. La otra cadena antiguía o cadena pasajera se degrada durante la activación de RISC.
[0061] En el presente documento se describen los compuestos de la fórmulas I, II, III, IV y V. En el presente documento se describe un compuesto de la Fórmula I
Figure imgf000010_0001
en la que
Ri y R2 ambos consisten en un alquilo lineal que consiste en 1 a 9 carbonos, un alquenilo o alquinilo que consiste en 2 a 11 carbonos;
L1 y L2 ambos consisten en un alquileno o alquenileno lineal que consiste en 5 a 18 carbonos, o que forman un heterociclo con N;
X1 y X3 ambos consisten en -CO-O-;
X2 es S u O;
L3 consiste en un enlace o un alquileno lineal que consiste en 1 a 6 carbonos, o que forma un heterociclo con N; R3 consiste en un alquileno lineal o ramificado que consiste en 1 a 6 carbonos; y
R4 y R5 son el mismo o diferentes, que consisten en un hidrógeno o un alquilo lineal o ramificado que consiste en 1 ha 6 carbonos, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
[0062] En el presente documento también se describe cualquiera de los compuestos enumerados en ATX-001 a ATX-017, ATX-021 a ATX-023 y ATX-026 a ATX-030 enumerados en la Tabla 1, a continuación, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
[0063] En el presente documento se describe también un compuesto de la Fórmula II
Figure imgf000010_0002
en la que
Ri y R2 ambos consisten en un alquilo lineal que consiste en 1 a 12 carbonos, un alquenilo o alquinilo que consiste en 2 a 12 carbonos;
L1 y L2 ambos consisten en un alquileno o alquenileno lineal que consiste en 5 a 18 carbonos, o que forman un heterociclo con N,
X es S,
L3 es un enlace o un alquileno lineal que consiste en 1 a 6 carbonos, o que forma un heterociclo con N;
R3 es un alquileno lineal o ramificado que consiste en 1 a 6 carbonos; y
R4 y R5 son el mismo o diferentes, consistiendo cada uno en un hidrógeno o un alquilo lineal o ramificado que consiste en 1 hasta 6 carbonos; o sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
[0064] En el compuesto de la fórmula II, ambos L1 y L2 pueden consistir en un alquileno lineal que consiste en cinco carbonos. En el compuesto de la fórmula I, R3 es etileno o propileno. En el compuesto de la fórmula I, R4 y R5 pueden ser el mismo o diferentes, cada uno puede ser hidrógeno, metilo o etilo. En el compuesto de la fórmula I, L3 puede ser un enlace. En el compuesto de la fórmula I, ambos R1 y R2 pueden consistir en un alquenilo lineal que consiste en diez carbonos.
[0065] En los compuestos de las fórmulas I y II, el compuesto puede consistir en
un compuesto seleccionado entre cualquiera de los compuestos enumerados en ATX-001 a ATX-017, ATX-021 a ATX-023 y ATX-026 a ATX-030 enumerados en la Tabla 1, a continuación, o fórmulas 1) a 12), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Figure imgf000011_0001
Figure imgf000012_0001
[0066] En el presente documento se describe también un compuesto de la fórmula III o IV
en las que
Figure imgf000012_0002
R1 consiste en un alquilo ramificado con 12 a 20 carbonos,
R2 consiste en un alquilo lineal con 5 a 10 carbonos o un alquilo ramificado con 12 a 20 carbonos, L1 y L2 cada uno consiste en un enlace o un alquilo lineal que tiene de 1 a 3 átomos de carbono, X consiste en S u O,
L3 consiste en un enlace o un alquilo inferior,
R3 consiste en un alquilo inferior, y
R4 y R5 son el mismo o diferentes, consistiendo cada uno en un alquilo inferior;
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
[0067] En el compuesto de la fórmula III o IV, L3 puede consistir en un enlace. En el compuesto de la fórmula III o IV, X puede ser S. En el compuesto de la fórmula III o IV, R3 puede ser etileno. En el compuesto de la III o IV, R3 puede ser n-propileno o isopropileno. En el compuesto de la fórmula III o IV, R4 y R5 pueden ser por separado metilo, etilo o isopropilo. En el compuesto de la fórmula III o IV, ambos L1 y L2 pueden consistir en un enlace. En el compuesto de la fórmula III o IV, ambos L1 y L2 pueden consistir en un metileno. En el compuesto de la fórmula III o IV, ambos R1 y R2 pueden consistir en alquilo ramificado. En el compuesto de la fórmula III o IV, R2 puede consistir en un alquilo. En el compuesto de la fórmula III o IV, ambos R1 y R2 pueden consistir en 19 o 20 átomos de carbono. En el compuesto de la fórmula III o IV, ambos R1 y R2 pueden consistir en 13 o 14 átomos de carbono. En el compuesto de la fórmula III o IV, L3 puede consistir en metileno, R3 consiste en etileno, X2 puede consistir en S y ambos R4 y R5 pueden consistir en metilo. En el compuesto de la fórmula III o IV, en las que L3 consiste en un enlace, R3 puede consistir en etileno, X puede consistir en S y ambos R4 y R5 pueden consistir en metilo. En el compuesto de la fórmula III o IV, L3 puede consistir en un enlace, R3 puede consistir en n-propileno, X puede consistir en S y ambos R4 y R5 pueden consistir en metilo. En el compuesto de la fórmula III o IV, L3 puede consistir en un enlace, R3 puede consistir en isopropileno, X puede consistir en S y ambos R4 y R5 pueden consistir en metilo. Un compuesto de la presente invención reivindicada es un compuesto de fórmula III en la que R1 consiste en un alquilo ramificado de 12 a 20 carbonos; R2 consiste en un alquilo ramificado de 12 a 20 carbonos; L1 y L2 cada uno consiste en un enlace o un alquilo lineal que tiene de 1 a 3 átomos de carbono; X consiste en S u O; L3 consiste en un enlace; R3 se selecciona entre etileno, n-propileno o isopropileno, y R4y R5 son el mismo o diferentes, consistiendo cada uno en un alquilo lineal o ramificado que consiste en 1 a 6 carbonos o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El compuesto de la fórmula III o IV puede seleccionarse entre el grupo que consiste en un compuesto de la fórmula ATX-B-1 a ATX-B-12 tal como se indica a continuación.
Figure imgf000013_0001
Figure imgf000014_0001
Figure imgf000015_0001
[0068] Se describe también un compuesto de fórmula V
Figure imgf000015_0002
en la que
Ri consiste en un alquilo lineal o ramificado que consiste en 1-18 carbonos, un alquenilo o un alquinilo que consiste en 2 a 12 carbonos o un colesterilo;
R2 consiste en un alquilo lineal o ramificado o un alquenilo que consiste en 1 a 18 carbonos;
L1 consiste en un alquilo lineal que consiste en 5 a 9 carbonos o, cuando R1 consiste en un colesterilo, entonces L1 consiste en un alquileno o alquenilo lineal que consiste en 3 a 4 carbonos;
X1 consiste en -O-(CO)- o -(CO)-O-;
X2 consiste en S u O;
L2 consiste en un enlace o un alquileno lineal de 1 a 6 carbonos;
R3 consiste en un alquileno lineal o ramificado con 1 a 6 carbonos; y
R4 y R5 son el mismo o diferentes, consistiendo cada uno en un alquilo lineal o ramificado de 1 a 6 carbonos;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
[0069] En el compuesto de la fórmula V, L2 puede consistir en un enlace. En el compuesto de la fórmula V, X2 puede consistir en S. En el compuesto de la fórmula V, X1 puede ser -O-(CO)--. En el compuesto de la fórmula V, R3 puede consistir en etileno. En el compuesto de la V, R3 puede consistir en n-propileno o isopropileno. En el compuesto de la fórmula V, R4 y R5 cada uno puede consistir en metilo, etilo o isopropilo. En el compuesto de la fórmula V, L2 puede consistir en un metileno. En el compuesto de la fórmula V, R1 y R2 cada uno puede consistir en alquilo ramificado. En el compuesto de la fórmula V, R2 puede consistir en un alquilo. En el compuesto de la fórmula V, R1 y R2 cada uno puede consistir en 19 o 20 átomos de carbono. En el compuesto de la fórmula V, R1 y R2 cada uno puede consistir en 13 o 14 átomos de carbono. En el compuesto de la fórmula V, L2 puede consistir en metileno, R3 puede consistir en etileno, X1 puede consistir en -O-(CO)--, X2 puede consistir en S y ambos R4 y R5 pueden consistir en metilo. En el compuesto de la fórmula V, L2 puede consistir en un enlace, R3 puede ser etileno, X1 puede consistir en -O-(CO)--, X2 puede consistir en S y ambos R4 y R5 pueden consistir en metilo. En el compuesto de la fórmula V, L2 puede consistir en un enlace, R3 puede consistir en n-propileno, X1 puede consistir en -O-(CO)--, X2 puede consistir en S y ambos R4 y R5 pueden consistir en metilo. En el compuesto de la fórmula V, L2 puede consistir en un enlace, R3 puede consistir en isopropileno, X1 puede consistir en -O-(CO)--, X2 puede consistir en S y ambos R4 y R5 pueden consistir en metilo. En el compuesto de la fórmula V, el compuesto puede seleccionarse entre los compuestos de la fórmula ATX-A-1 a ATX-A-22
Figure imgf000015_0003
Figure imgf000016_0001
Figure imgf000017_0001
Figure imgf000018_0001
[0070] Los compuestos de las fórmulas I, II, III, IV y V pueden ser una sal farmacéuticamente aceptable, en una composición de lípidos que comprende una nanopartícula o una bicapa de moléculas lipídicas. Preferiblemente la bicapa lipídica comprende adicionalmente un lípido neutro o un polímero. Preferiblemente, la composición lipídica comprende un medio líquido. Preferiblemente, la composición encapsula adicionalmente un ácido nucleico. Preferiblemente, el ácido nucleico tiene actividad de supresión de la expresión del gen diana utilizando un ARN de interferencia (ARNi). Preferiblemente, la composición lipídica comprende adicionalmente un ácido nucleico y un lípido neutro o un polímero. Preferiblemente la composición lipídica encapsula el ácido nucleico.
[0071] Los compuestos de las fórmulas I, II, III, IV y V forman sales que también se encuentran dentro del alcance de esta divulgación. En el presente documento, la referencia a un compuesto de las fórmulas I, II, III, IV o V se entiende que incluya la referencia a sales del mismo, a menos que se indique lo contrario. El término “sal” o “sales”, tal como se utiliza en el presente documento, significa sales ácidas formadas con ácidos inorgánicos y/u orgánicos, así como sales básicas formadas con bases inorgánicas y/u orgánicas. Adicionalmente, tales sales de un compuesto de las fórmulas I, II, III, IV o V pueden contener un resto básico, tal como, pero no se limitan a, una piridina o imidazol, o un resto ácido, tal como, pero no limitado a, un ácido carboxílico y zwitteriones (“sales internas”). Las sales pueden ser sales farmacéuticamente aceptables (es decir, no tóxicas, fisiológicamente aceptables), aunque otras sales también son útiles. Las sales de los compuestos de las fórmulas I, II, III, IV o V pueden formarse, por ejemplo, haciendo reaccionar un compuesto de las fórmulas I, II, III, IV o V con una cantidad de ácido o base, tal como una cantidad equivalente, en un medio, tal como uno en el que la sal se precipita o en un medio acuoso seguido de liofilización.
[0072] Las sales de adición ácidas de ejemplo incluyen acetatos, adipatos, alginatos, ascorbatos, aspartatos, benzoatos, bencenosulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, alcanforatos, alcanforsulfonatos, ciclopentanopropionatos, digluconatos, dodecilsulfatos, etanosulfonatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, hemisulfatos, heptanoatos, hexanoatos, clorhidratos, bromhidratos, yodhidratos, 2-hidroxietanosulfonatos, lactatos, maleatos, metanosulfonatos, 2-naftalenosulfonatos, nicotinatos, nitratos, oxalatos, pectinatos, persulfatos, 3-fenilpropionatos, fosfatos, picratos, pivalatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos, sulfonatos (tales como aquellos mencionados en el presente documento), tartratos, tiocianatos, toluenosulfonatos (también conocidos como tosilatos), undecanoatos y similares. Adicionalmente, los ácidos que generalmente se consideran adecuados para la formación de sales farmacéuticamente útiles a partir de compuestos farmacéuticos básicos se tratan, por ejemplo, en S. Berge et al, J. Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1)1-19; P. Gould, International J. Pharmaceutics (1986) 33 201-217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, Nueva York; y en The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. en su página web).
[0073] Las sales básicas de ejemplo incluyen sales de amonio, sales de metal alcalino, tales como sales de sodio, litio y potasio, sales de metales alcalinotérreos, tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas), tales como benzatinas, diciclohexilaminas, hidrabaminas (formadas con N,N-bis(deshidroabietil)etilendiamina), N-metil-D-glucaminas, N-metil-D-glucamidas, t-butil aminas, y sales con aminoácidos, tales como arginina o lisina. Los grupos básicos que contienen nitrógeno pueden cuaternizarse con agentes, tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo), sulfatos de dialquilo (por ejemplo, sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo), haluros de cadena larga (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de decilo, lauril, miristilo y estearilo), haluros de arilalquilo (por ejemplo, bromuros de bencilo y fenetilo) y otros.
[0074] Todas de dichas sales ácidas y básicas pretenden ser sales farmacéuticamente aceptables dentro del alcance de la divulgación y todas las sales ácidas y básicas se consideran equivalentes a las formas libres de los compuestos correspondientes de la fórmula I a efectos de la divulgación.
[0075] Los compuestos de las fórmulas I, II, III, IV y V pueden existir en formas no solvatadas y solvatadas, que incluyen formas hidratadas. De manera general, las formas solvatadas, con disolventes farmacéuticamente aceptables, tales como agua, etanol y similares, son equivalentes a las formas no solvatadas a efectos de esta divulgación.
[0076] Los compuestos de las fórmulas I, II, III, IV y V y sales, solvatos de los mismos, pueden existir en su forma tautomérica (por ejemplo, como una amida o imino éter). Todas de dichas formas tautoméricas se contemplan en el presente documento como parte de la presente divulgación.
[0077] También se encuentran dentro del alcance de la presente divulgación los polimorfos de los compuestos de esta divulgación (es decir, polimorfos de los compuestos de la fórmula I están dentro del alcance de esta divulgación).
[0078] Todos los estereoisómeros (por ejemplo, isómeros geométricos, isómeros ópticos y similares) de los presentes compuestos (que incluyen aquellos de las sales, solvatos y profármacos de los compuestos, así como las sales y solvatos de los profármacos), tales como aquellos que pueden existir debido a carbonos asimétricos en diferentes sustituyentes, que incluyen formas enantiméricas (que pueden existir incluso en ausencia de carbonos asimétricos), formas rotaméricas, atropisómeros y formas diastereoméricas, se contemplan dentro del alcance de esta divulgación. Los estereoisómeros individuales de los compuestos de esta divulgación pueden estar, por ejemplo, sustancialmente libres de otros isómeros, o pueden mezclarse, por ejemplo, como racematos o con todos los otros estereoisómeros u otros seleccionados. Los centros quirales de los compuestos del presente documento pueden tener la configuración S o R, tal como se define en las Recomendaciones de la IUPAC de 1974. El uso de los términos “sal”, “solvato” y similares pretende aplicarse igualmente a la sal y el solvato de enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, racematos o profármacos de los compuestos divulgados.
[0079] Las clases de los compuestos que se pueden utilizar como el agente quimioterapéutico (agente antineoplásico) incluyen: agentes alquilantes, antimetabolitos, productos naturales y sus derivados, hormonas y esteroides (incluyendo análogos sintéticos) y sintéticos. Los ejemplos de los compuestos que se encuentran dentro de estas clases se proporcionan a continuación.
Partículas Lipídicas
[0080] La descripción proporciona partículas lipídicas que comprenden una o más moléculas de ARNm terapéuticas encapsuladas dentro de las partículas lipídicas.
[0081] El ARNm puede estar completamente encapsulado en la parte lipídica de la partícula lipídica de tal modo que el ARNm en la partícula lipídica sea resistente en solución acuosa a la degradación por nucleasa. En otras realizaciones, las partículas lipídicas descritas en el presente documento pueden ser sustancialmente no tóxicas para mamíferos, tales como seres humanos. Típicamente, las partículas lipídicas tienen un diámetro promedio que oscila entre 30 nm y 150 nm, entre 40 nm y 150 nm, entre 50 nm y 150 nm, entre 60 nm y 130 nm, entre 70 nm y 110 nm o entre 70 y 90 nm. También típicamente las partículas lipídicas tienen una proporción de lípido:ARN (proporción de masa/masa) que oscila entre 1:1 y 100:1, entre 1:1 y 50:1, entre 2:1 y 25:1, entre 3:1 y 20:1, entre 5:1 y 15:1, o entre 5:1 y 10:1, o entre 10:1 y 14:1, o entre 9:1 y 20:1. Las partículas lipídicas pueden tener una proporción de lípido:ARN (proporción de masa/masa) de 12:1.
[0082] Las partículas lipídicas pueden tener una proporción de lípido:ARNm (proporción de masa/masa) de 13:1.
[0083] Las partículas lipídicas pueden comprender un ARNm, un lípido catiónico (por ejemplo, uno o más lípidos catiónicos o sales de los mismos descritos en el presente documento), un fosfolípido y un lípido conjugado que inhibe la agregación de las partículas (por ejemplo, uno o más conjugados de PEG-lípido). Las partículas lipídicas pueden incluir también colesterol. Las partículas lipídicas pueden comprender como mínimo 1,2, 3, 4, 5, 6 , 7, 8 , 9, 10 o más ARNm que expresan uno o más polipéptidos.
[0084] En las partículas de ácido nucleico-lípido, el ARNm puede estar completamente encapsulado dentro de la parte lipídica de la partícula, protegiendo de ese modo el ácido nucleico de la degradación por nucleasa.
[0085] Una partícula lipídica que comprende un ARNm puede estar completamente encapsulada dentro de la parte lipídica de la partícula, protegiendo de ese modo el ácido nucleico de la degradación por nucleasa. En determinados casos, el ARNm en la partícula lipídica no se degrada de manera sustancial después de la exposición de la partícula a una nucleasa a 37 °C durante como mínimo 20, 30, 45 o 60 minutos. En otros determinados casos, el ARNm en la partícula lipídica no se degrada de manera sustancial después de la incubación de la partícula en suero a 37 °C durante como mínimo 30, 45 o 60 minutos o como mínimo 2, 3, 4, 5, 6 , 7, 8 , 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, o 36 horas. El ARNm puede formar un complejo con la parte lipídica de la partícula. Uno de los beneficios de las formulaciones de la presente divulgación es que las composiciones de ácido nucleico-partículas lipídicas son sustancialmente no tóxicas para mamíferos, tales como seres humanos.
[0086] “Encapsulado completamente” significa que el ácido nucleico (por ejemplo, ARNm) en el ácido nucleicopartícula lipídica no se degrada de manera significativa después de su exposición a suero o un ensayo con nucleasa que degradaría de forma significativa el ARN libre. Cuando está encapsulado completamente, preferiblemente menos del 25 % del ácido nucleico en la partícula se degrada en un tratamiento que normalmente degradaría el 100 % de ácido nucleico libre, más preferiblemente, se degrada menos del 10 % y lo más preferiblemente se degrada menos del 5 % del ácido nucleico en la partícula. “Completamente encapsulado” significa también que los ácido nucleicopartículas lipídicas no se descomponen fácilmente en sus partes integrantes tras ser administradas in vivo.
[0087] En el contexto de ácidos nucleicos, la encapsulación completa puede determinarse realizando un ensayo de exclusión con colorante fluorescente impermeable en membrana, que utiliza un colorante que tiene una fluorescencia aumentada cuando se asocia a ácido nucleico. La encapsulación se determina añadiendo el colorante a una formulación liposomal, midiendo la fluorescencia resultante y comparándola con la fluorescencia observada tras la adición de una pequeña cantidad de detergente no iónico. La alteración mediada por detergente de la bicapa liposomal libera el ácido nucleico encapsulado, facilitando su interacción con el colorante impermeable en membrana. Se puede calcular la encapsulación de ácido nucleico como E = (I0 - I)/Iü, donde/y I0 hace referencia a las intensidades de fluorescencia antes y después de la adición de detergente.
[0088] También se describe una composición de partículas de ácido nucleico-lípido que comprende una pluralidad de partículas de ácido nucleico-lípido.
[0089] La partícula lipídica comprende ARNm que está completamente encapsulado en la parte lipídica de las partículas, de tal modo que entre 30 % y 100 %, entre 40 % y 100 %, entre 50 % y 100 %, entre 60 % y 100 %, entre 70 % y 100 %, entre 80 % y 100 %, entre 90 % y 100 %, entre 30 % y 95 %, entre 40 % y 95 %, entre 50 % y 95 %, entre 60 % y 95 %, entre 70 % y 95 %, entre 80 % y 95 %, entre 85 % y 95 %, entre 90 % y 95 %, entre 30 % y 90 %, entre 40 % y 90 %, entre 50 % y 90 %, entre 60 % y 90 %, entre 70 % y 90 %, entre 80 % y 90 %, o como mínimo 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % (o cualquier fracción de la misma o intervalo de los mismos) de las partículas tienen el ARNm encapsulado en las mismas.
[0090] Dependiendo del uso previsto de las partículas lipídicas, las proporciones de los componentes pueden variar y la eficacia de la administración de una formulación particular puede medirse utilizando los ensayos conocidos en la técnica
Lípidos Catiónicos
[0091] La descripción incluye la síntesis de determinados compuestos de lípidos catiónicos. Los compuestos son particularmente adecuados para la administración de polinucleótidos a células y tejidos, tal como se demuestra en las secciones posteriores. El compuesto lipomacrociclo descrito en el presente documento puede utilizarse con otros fines, así como, por ejemplo, receptores y aditivos.
[0092] Los procedimientos sintéticos de los compuestos de lípidos catiónicos pueden sintetizarse por los expertos la técnica. Los expertos reconocerán otros procedimientos para producir estos compuestos y para producir también otros compuestos de la descripción.
[0093] Los compuestos de lípidos catiónicos pueden combinarse con un agente para formar micropartículas, nanopartículas, liposomas o micelas. El agente que se administra mediante partículas, liposomas o micelas puede estar en forma de un gas, líquido o sólido y el agente puede ser un polinucleótido, proteína, péptido o molécula pequeña. Los compuestos lipomacrocilos con macrociclos pueden combinarse con otros compuestos lipídicos catiónicos, polímeros (sintéticos o naturales), tensioactivos, colesterol, hidratos de carbono, proteínas o lípidos para formar partículas. A continuación, estas partículas pueden combinarse de manera opcional con un excipiente farmacéutico para formar una composición farmacéutica.
[0094] La presente descripción proporciona compuestos lipídicos catiónicos nuevos y sistemas de administración de fármacos basados en el uso de tales compuestos lipídicos catiónicos. El sistema puede utilizarse en las técnicas de administración farmacéutica/de fármacos para administrar polinucleótidos, proteínas, moléculas pequeñas, péptidos, antígeno o fármaco a un paciente, tejido, órgano o célula. Estos compuestos nuevos pueden utilizarse también como materiales para recubrimiento, aditivos, excipientes, materiales o bioingeniería.
[0095] Los compuestos de lípidos catiónicos de la presente descripción proporcionan varios usos diferentes en la técnica de administración de fármacos. El resto que contiene amina de los compuestos de lípidos catiónicos se puede utilizar para polinucleótidos complejos, potenciando de ese modo la administración de polinucleótido y previniendo su degradación. Los compuestos lipídicos catiónicos pueden utilizarse también en la formación de picopartículas, nanopartículas, micropartículas, liposomas y micelas que contienen el agente para su administración. Preferiblemente, los compuestos lipídicos catiónicos son biocompatibles y biodegradables y las partículas formadas también son biodegradables y biocompatibles y pueden utilizarse para proporcionar una liberación controlada, sostenida, del agente para su administración. Estos compuestos y sus partículas correspondientes pueden ser también sensibles a cambios de pH dado que se protonan a un pH inferior. También pueden actuar como esponjas de protones en la administración de un agente a una célula para causar la lisis de endosomas.
[0096] Los compuestos lípidos catiónicos pueden ser relativamente no citotóxicos. Los compuestos lípidos catiónicos pueden ser biocompatibles y biodegradables. El lípido catiónico puede tener un pKa que oscila entre aproximadamente 5,5 y aproximadamente 7,5, más preferiblemente entre aproximadamente 6,0 y aproximadamente 7,0. Puede estar diseñado para tener un pKa deseado entre aproximadamente 3,0 y aproximadamente 9,0, o entre aproximadamente 5,0 y aproximadamente 8,0. Los compuestos lípidos catiónicos descritos en el presente documento son particularmente atractivos para la administración de fármacos por varias razones: contienen grupos amino para su interacción con ADN, ARN, otros polinucleótidos y otros agentes cargados negativamente, para regular el pH, para provocar endo-osmólisis, para proteger el agente que se administra, pueden sintetizarse a partir de materiales iniciales disponibles comercialmente; y/o son sensibles a pH y pueden diseñarse con un pKa deseado.
[0097] Una composición que contiene un compuesto lipídico catiónico puede contener 30-70 % de compuesto lipídico catiónico, 0-60 % de colesterol, 0-30 % de fosfolípido y 1-10 % de polietilenglicol (PEG). Preferiblemente, la composición es 30-40 % de compuesto lipídico catiónico, 40-50 % de colesterol y 10-20 % de PEG. En otras realizaciones preferidas, la composición es 50-75 % de compuesto lipídico catiónico, 20-40 % de colesterol y 5-10 % de fosfolípido y 1-10 % de PEG. La composición puede contener 60-70 % de compuesto lipídico catiónico, 25-35 % de colesterol y 5-10 % de PEG. La composición puede contener hasta 90 % de compuesto lipídico catiónico y 2-15 % de lípido auxiliar.
[0098] La formulación puede ser una formulación con partículas lipídicas, por ejemplo, que contiene 8-30 % de compuesto, 5-30 % de lípido auxiliar y 0-20 % de colesterol; 4-25 % de lípido catiónico, 4-25 % de lípido auxiliar, 2-25 % de colesterol, 10- 35 % de colesterol-PEG y 5 % de colesterol-amina; o 2-30 % de lípido catiónico, 2-30 % de lípido auxiliar, 1-15 % de colesterol, 2- 35 % de colesterol-PEG y 1-20 % de colesterol-amina; o hasta 90 % de lípido catiónico y 2-10 % de lípidos auxiliares o incluso 100 % de lípido catiónico.
Lípidos No Catiónicos
[0099] Los lípidos no catiónicos que se utilizan en partículas lipídicas pueden ser cualquiera de una variedad de lípidos no cargados, zwitteriónicos o aniónicos capaces de generar un complejo estable.
[0100] Los ejemplos no limitativos de lípidos no catiónicos incluyen fosfolípidos, tales como lecitina, fosfatidiletanolamina, lisolecitina, lisofosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol, esfingomielina, esfingomielina de huevo (ESM), cefalina, cardiolipina, ácido fosfatídico, cerebrósidos, dicetilfosfato, diestearoilfosfatidilcolina (DSPC), dioleoilfosfatidilcolina (DOPC), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), dioleoilfosfatidilglicerol (DOPG), dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE), palmitoiloleoil-fosfatidilcolina (POPC), palmitoiloleoil-fosfatidiletanolamina (POPE), palmitoiloleiol-fosfatidilglicerol (POPG), 4-(N-maleimidometil)-ciclohexano-1-carboxilato de dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE-mal), dipalmitoilfosfatidiletanolamina (DPPE), dimiristoil-fosfatidiletanolamina (DMPE), diestearoil-fosfatidiletanolamina (DSPE), monometil-fosfatidiletanolamina, dimetil-fosfatidiletanolamina, dielaidoil-fosfatidiletanolamina (DEPE), estearoiloleoilfosfatidiletanolamina (SOPE), lisofosfatidilcolina, dilinoleoilfosfatidilcolina y mezclas de los mismos. Se pueden utilizar también otros fosfolípidos de diacilfosfatidilcolina y diacilfosfatidiletanolamina. Los grupos acilo en estos lípidos son preferiblemente grupos acilo derivados de ácidos grasos que tienen cadenas de carbono C10-C24, por ejemplo, laurαlo, miristαlo, palmitoílo, estearαlo u oleαlo.
[0101] Los ejemplos adicionales de lípidos no catiónicos incluyen esteroles, tales como colesterol y derivados del mismo. Los ejemplos no limitativos de derivados de colesterol incluyen análogos polares, tales como 5a-colestanol, 5a-coprostanol, éter de colesteril-(2'-hidroxi)-etilo, éter de colesteril-(4'- hidroxi)-butilo y 6-cetocolestanol; análogos no polares, tales como 5a-colestano, colestenona, 5a-colestanona, 5a-colestanona y decanoato de colesterilo; y mezclas de los mismos. En realizaciones preferidas, el derivado de colesterol es un análogo polar, tal como éter de colesteril-(4'-hidroxi)-butilo.
[0102] El lípido no catiónico presente en partículas lipídicas puede comprender o consistir en una mezcla de uno o más fosfolípidos y colesterol o un derivado del mismo.
[0103] El lípido no catiónico presente en partículas lipídicas puede comprender o consistir en uno o más fosfolípidos, por ejemplo, una formulación de partículas lipídicas libres de colesterol.
[0104] El lípido no catiónico presente en partículas lipídicas puede comprender o consistir en colesterol o un derivado del mimo, por ejemplo, una formulación de partículas lipídicas libres de fosfolípidos.
[0105] Otros ejemplos de lípidos no catiónicos incluyen lípidos que no contienen fósforo, tales como, por ejemplo, estearilamina, dodecilamina, hexadecilamina, palmitato de acetilo, ricinoleato de glicerol, estearato de hexadecilo, miristato de isopropilo, polímeros acrílicos anfóteros, lauril sulfato de trietanolamina, amidas de ácidos grasos polietiloxilados de sulfato de alquil-arilo, bromuro de dioctadecildimetil amonio, ceramida y esfingomielina.
[0106] Los lípidos no catiónicos pueden constituir desde 10 % en moles hasta 60 % en moles, desde 20 % en moles hasta 55 % en moles, desde 20 % en moles hasta 45 % en moles, desde 20 % en moles hasta 40 % en moles, desde 25 % en moles hasta 50 % en moles, desde 25 % en moles hasta 45 % en moles, desde 30 % en moles hasta 50 % en moles, desde 30 % en moles hasta 45 % en moles, desde 30 % en moles hasta 40 % en moles, desde 35 % en moles hasta 45 % en moles, desde 37 % en moles hasta 42 % en moles, o 35 % en moles, 36 % en moles, 37 % en moles, 38 % en moles, 39 % en moles, 40 % en moles, 41 % en moles, 42 % en moles, 43 % en moles, 44 % en moles o 45 % en moles (o cualquier fracción de los mismos o intervalo intermedio) del lípido total presente en la partícula.
[0107] Cuando las partículas lipídicas contienen una mezcla de fosfolípido y colesterol o un derivado de colesterol, la mezcla puede constiutir hasta 40 % en moles, 45 % en moles, 50 % en moles, 55 % en moles o 60 % en moles del lípido total presente en la partícula.
[0108] El componente de fosfolípido en la mezcla puede constituir desde 2 % en moles hasta 20 % en moles, desde 2 % en moles hasta 15 % en moles, desde 2 % en moles hasta 12 % en moles, desde 4 % en moles hasta 15 % en moles o desde 4 % en moles hasta 10 % en moles (o cualquier fracción del mismo o intervalo intermedio) del lípido total presente en la partícula. El componente de fosfolípido en la mezcla puede comprender desde 5 % en moles hasta 10 % en moles, desde 5 % en moles hasta 9 % en moles, desde 5 % en moles hasta 8 % en moles, desde 6 % en moles hasta 9 % en moles, desde 6 % en moles hasta 8 % en moles o 5 % en moles, 6 % en moles, 7 % en moles, 8 % en moles, 9 % en moles o 10 % en moles (o cualquier fracción del mismo o intervalo entremedio) del lípido total presente en la partícula.
[0109] El componente de colesterol en la mezcla puede constituir desde 25 % en moles hasta 45 % en moles, desde 25 % en moles hasta 40 % en moles, desde 30 % en moles hasta 45 % en moles, desde 30 % en moles hasta 40 % en moles, desde 27 % en moles hasta 37 % en moles, desde 25 % en moles hasta 30 % en moles o desde 35 % en moles hasta 40 % en moles (o cualquier fracción del mismo o intervalo entremedio) del lípido total presente en la partícula.
[0110] El componente de colesterol en la mezcla puede constituir desde 25 % en moles hasta 35 % en moles, desde 27 % en moles hasta 35 % en moles, desde 29 % en moles hasta 35 % en moles, desde 30 % en moles hasta 35 % en moles, desde 30 % en moles hasta 34 % en moles, desde 31 % en moles hasta 33 % en moles o 30 % en moles, 31 % en moles, 32 % en moles, 33 % en moles, 34 % en moles o 35 % en moles (o cualquier fracción del mismo o intervalo entremedio) del lípido total presente en la partícula.
[0111] Cuando las partículas lipídicas están libres de fosfolípido, el colesterol o el derivado del mismo pueden constituir hasta 25 % en moles, 30 % en moles, 35 % en moles, 40 % en moles, 45 % en moles, 50 % en moles, 55 % en moles o 60 % en moles del lípido total presente en la partícula.
[0112] El colesterol o el derivado del mismo en la formulación con partículas lipídicas libres de fosfolípidos puede constituir desde 25 % en moles hasta 45 % en moles, desde 25 % en moles hasta 40 % en moles, desde 30 % en moles hasta 45 % en moles, desde 30 % en moles hasta 40 % en moles, desde 31 % en moles hasta 39 % en moles, desde 32 % en moles hasta 38 % en moles, desde 33 % en moles hasta 37 % en moles, desde 35 % en moles hasta 45 % en moles, desde 30 % en moles hasta 35 % en moles, desde 35 % en moles hasta 40 % en moles o 30 % en moles, 31 % en moles, 32 % en moles, 33 % en moles, 34 % en moles, 35 % en moles, 36 % en moles, 37 % en moles, 38 % en moles, 39 % en moles o 40 % en moles (o cualquier fracción del mismo o intervalo entremedio) del lípido total presente en la partícula.
[0113] El lípido no catiónico puede constituir desde 5 % en moles hasta 90 % en moles, desde 10 % en moles hasta 85 % en moles, desde 20 % en moles hasta 80 % en moles, 10 % en moles (por ejemplo, fosfolípido solamente) o 60 % en moles (por ejemplo, fosfolípido y colesterol o derivado del mismo) (o cualquier fracción del mismo o intervalo entremedio) del lípido total presente en la partícula.
[0114] El porcentaje de lípido no catiónico presente en las partículas lipídicas es una cantidad objetivo, y la cantidad real de lípido catiónico presente en la formulación puede variar, por ejemplo, en ± 5 % en moles.
Conjugados Lipídicos
[0115] Además de catiónicos, las partículas lipídicas descritas en el presente documento pueden comprender un conjugado lipídico. El conjugado lipídico es útil dado que previene la agregación de partículas. Los lípidos conjugados adecuados incluyen, pero no se limitan a, conjugados de lípido catiónico-polímero y mezclas de los mismos.
[0116] Preferiblemente, el conjugado lipídico es un PEG-lípido. Los ejemplos de PEG-lípidos incluyen, pero no se limitan a, PEG acoplado a dialquiloxipropilos (PEG-DAA), p Eg acoplado a diacilglicerol (PEG-DAG), PEG acoplado a fosfolípidos, tales como fosfatidiletanolamina (PEG-PE), PEG conjugado con ceramidas, PEG conjugado con colesterol o un derivado de los mismos y mezclas de los mismos.
[0117] El PEG es un polímero lineal, soluble en agua de unidades de repetición de etileno con dos grupos hidroxilo terminales. Los PEGs se clasifican según sus pesos moleculares; e incluyen los siguientes: monometoxipolietilenglicol (MePEG-OH), monometoxipolietilenglicol-succinato (MePEG-S), monometoxipolietilenglicol-succinimidil succinato (MePEG-S-NHS), monometoxipolietilenglicol-amina (MePEG-NH2), monometoxipolietilenglicol-tresilato (MePEG-TRES), monometoxipolietilenglicol-imidazolil-carbonilo (MePEG-IM), así como tales compuestos que contienen grupo hidroxilo terminal en lugar de un grupo metoxi terminal (por ejemplo , HO-PEG-S, HO-PEG-S-NHS, HO-PEG-NH2).
[0118] El resto de PEG de los conjugados de PEG-lípido descritos en el presente documento puede comprender un peso molecular promedio que varía de 550 dáltones a 10.000 dáltones. En determinados casos, el resto de PEG tiene un peso molecular promedio de 750 dáltones a 5.000 dáltones (por ejemplo, de 1.000 dáltones a 5.000 dáltones, de 1.500 dáltones a 3.000 dáltones, de 750 dáltones a 3.000 dáltones, de 750 dáltones a 2.000 dáltones). Preferiblemente, el resto de PEG tiene un peso molecular promedio de 2.000 dáltones o 750 dáltones.
[0119] En determinados casos, el PEG puede sustituirse opcionalmente por un grupo alquilo, alcoxi, acilo o arilo. El PEG puede conjugarse directamente con el lípido o puede enlazarse al lípido a través de un resto enlazador. Se puede utilizar cualquier resto enlazador adecuado para el acoplamiento del PEG al lípido que incluye, por ejemplo, restos enlazadores que no contienen ésteres y restos enlazadores que contienen ésteres. En una realización preferida, el resto enlazador es un resto enlazador que no contiene éster. Los restos enlazadores que no contienen ésteres incluyen, pero no se limitan a, amido (-C(O)NH-), amino (-NR-), carbonilo (-C(O)-), carbamato (-NHC(O)O-), urea (-NHC(O)NH-), disulfuro (-S-S-), éter (-O-), succinilo (-O)CCH2CH2C(O)-), succinamidilo (-NHC(O)CH2CH2C(O)NH-), éter, disulfuro, así como las combinaciones de los mismos (tales como un enlazador que contiene tanto un resto enlazador de carbamato como un resto enlazador de amido). Preferiblemente, se utiliza un enlazador de carbamato para acoplar el PEG al lípido.
[0120] Se puede utilizar un resto enlazador que contiene éster para acoplar el PEG al lípido. Los restos enlazadores que contienen éster adecuados incluyen, por ejemplo, ésteres de carbonato (-OC(O)O-), succinαlo, ésteres de fosfato (-O-(O)POH-O-), ésteres de sulfonato y combinaciones de los mismos.
[0121] Las fosfatidiletanolaminas, que tienen una variedad de grupos de cadena de acilo con diferentes longitudes de cadena y niveles de saturación, pueden conjugarse con PEG para formar el conjugado lipídico. Tales fosfatidiletanolaminas están disponibles comercialmente o pueden aislarse o sintetizarse utilizando técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica. Se prefieren fosfatidiletanolaminas que contienen ácidos grasos saturados o insaturados con longitudes de cadena de carbono que varían de C10 a C20. También se pueden utilizar fosfatidiletanolaminas con ácidos grasos monoinsaturados o diinsaturados y mezclas de ácidos grasos insaturados. Las fosfatidiletanolaminas adecuadas incluyen, pero no se limitan a, dimiristoil-fosfatidiletanolamina (DMPE), dipalmitoil-fosfatidiletanolamina (DPPE), dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE) y diestearoilfosfatidiletanolamina (DSPE).
[0122] El término “diacilglicerol” o “DAG” incluye un compuesto que tiene 2 cadenas de acilo graso, R1 y R2, las cuales tienen independientemente entre 2 y 30 carbonos unidos a las posiciones 1 y 2 de glicerol mediante enlaces éster. Los grupos acilo pueden ser saturados o tener diferentes grados de insaturación. Los grupos acilo adecuados incluyen, pero no se limitan a, lauroílo (C12), miristoílo (C14), palmitoílo (C-ia), estearoílo (C-is) e icosoílo (C20). En realizaciones preferidas, R1 y R2 son iguales, es decir, R1 y R2 son ambos miristαlo (es decir, dimiristαlo), R1 y R2 ambos son estearoílo (es decir, diestearαlo).
[0123] El término “dialquiloxipropNo” o “DAA” incluye un compuesto que tiene 2 cadenas de alquilo, R y R , las cuales contienen de manera independiente entre 2 y 30 carbonos. Los grupos alquilo pueden ser saturados o tener diferentes grados de insaturación.
[0124] Preferiblemente, el conjugado de PEG-DAA es un conjugado de PEG-dideciloxipropilo (C10), un conjugado de PEG-dilauriloxipropilo (C12), un conjugado de PEG-dimiristiloxipropilo (C14), un conjugado de PEG-dipalmitiloxipropilo (C16) o un conjugado de PEG-diesteariloxipropilo (C18). Preferiblemente el PEG tiene un peso molecular promedio de 750 o 2.000 dáltones. Preferiblemente, el grupo hidroxi terminal del PEG se sustituye por un grupo metilo.
[0125] Además de lo mencionado anteriormente, pueden utilizarse otros polímeros hidrófilos en lugar de PEG. Los ejemplos de polímeros adecuados que se pueden utilizar en lugar de PEG incluyen, pero no se limitan a, polivinilpirrolidona, polimetiloxazolina, polietiloxazolina, polihidroxipropil metacrilamida, polimetacrilamida y polidimetilacrilamida, ácido poliláctico, ácido poliglicólico y celulosas derivatizadas, tales como hidroximetilcelulosa o hidroxietilcelulosa.
[0126] El conjugado lipídico (por ejemplo, PEG-lípido) puede constituir desde 0,1 % en moles hasta 2 % en moles, desde 0,5 % en moles hasta 2 % en moles, desde 1 % en moles hasta 2 % en moles, desde 0,6 % en moles hasta 1,9 % en moles, desde 0,7 % en moles hasta 1,8 % en moles, desde 0,8 % hasta 1,7 % en moles, desde 0,9 % en moles hasta 1,6 % en moles, desde 0,9 % en moles hasta 1,8 % en moles, desde 1 % en moles hasta 1,8 % en moles, desde 1 % en moles hasta 1,7 % en moles, desde 1,2 % en moles hasta 1,8 % en moles, desde 1,2 % en moles hasta 1,7 % en moles, desde 1,3 % en moles hasta 1,6 % en moles o desde 1,4 % en moles hasta 1,5 % en moles (o cualquier fracción del mismo o intervalo entremedio) del lípido total presente en la partícula. El conjugado lipídico (por ejemplo, PEG-lípido) puede comprender desde 0 % en moles hasta 20 % en moles, desde 0,5 % en moles hasta 20 % en moles, desde 2 % hasta 20 % en moles, desde 1,5 % en moles hasta 18 % en moles, desde 2 % en moles hasta 15 % en moles, desde 4 % en moles hasta 15 % en moles, desde 2 % en moles hasta 12 % en moles, desde 5 % en moles hasta 12 % en moles o 2 % en moles (o cualquier fracción del mismo o intervalo entremedio) del lípido total presente en la partícula.
[0127] El conjugado lipídico (por ejemplo, PEG-lípido) puede constituir desde 4 % en moles hasta 10 % en moles, desde 5 % en moles hasta 10 % en moles, desde 5 % en moles hasta 9 % en moles, desde 5 % en moles hasta 8 % en moles, desde 6 % hasta 9 % en moles, desde 6 % en moles hasta 8 % en moles o 5 % en moles, 6 % en moles, 7 % en moles, 8 % en moles, 9 % en moles o 10 % en moles (o cualquier fracción del mismo o intervalo entremedio) del lípido total presente en la partícula.
[0128] El porcentaje de conjugado lipídico (por ejemplo, PEG-lípido) presente en las partículas lipídicas de la presente invención es una cantidad objetivo, y la cantidad real del conjugado lipídico presente en la formulación puede variar, por ejemplo, en t 2 % en moles. Un experto en la técnica entenderá que la concentración del conjugado lipídico puede variar dependiendo del conjugado lipídico utilizado y de la velocidad a la que la partícula lipídica se vuelve fusogénica.
[0129] Controlando la composición y la concentración del conjugado lipídico, se puede controlar la velocidad a la que el conjugado lipídico intercambia la partícula lipídica y, a su vez, la velocidad a la que la partícula lipídica se vuelve fusogénica. Adicionalmente, se pueden utilizar otras variables que incluyen, por ejemplo, pH, temperatura o fuerza iónica, para variar y/o controlar la velocidad a la que la partícula lipídica se vuelve fusogénica. Serán evidentes para los expertos en la técnica que se pueden utilizar otros procedimientos para controlar la velocidad a la que la partícula lipídica se vuelve fusogénica tras la lectura de esta divulgación. También, mediante el control de la composición y la concentración del conjugado lipídico, se puede controlar el tamaño de partícula lipídica.
Composiciones y Formulaciones para Administración
[0130] Las composiciones de ácido nucleico-lípido de esta divulgación pueden administrarse por vías diferentes, por ejemplo, para realizar la administración sistémica a través de las vías intravenosa, parenteral, intraperitoneal o tópica. Se puede administrar un ARNpi por la vía intracelular, por ejemplo, a células de un tejido diana, tal como pulmón o hígado, o a tejidos inflamados. Esta divulgación proporciona un procedimiento de administración de ARNpi in vivo.
Una composición de ácido nucleico-lípido puede administrarse por la vía intravenosa, subcutánea o intraperitoneal a un sujeto. En algunas realizaciones, la divulgación proporciona procedimientos de administración in vivo de ARN interferente al pulmón de un sujeto mamífero.
[0131] Esta divulgación proporciona un procedimiento de tratamiento de una enfermedad o trastorno en un sujeto mamífero. Se puede administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de esta divulgación que contiene un nucleico, un lípido catiónico, una molécula anfifílica, un fosfolípido, colesterol, y colesterol enlazado con PEG a un sujeto que padece una enfermedad o un trastorno asociado con la expresión o la sobreexpresión de un gen que se puede reducir, disminuir, regular negativamente o silenciar mediante la composición.
[0132] Las composiciones y los procedimientos de la divulgación pueden administrarse a sujetos mediante una variedad de modos de administración a la mucosa, que incluyen administración oral, rectal, vaginal, intranasal, intrapulmonar o transdérmica o dérmica o mediante administración tópica a los ojos, orejas, piel u otras superficies de mucosas. En algunos aspectos de esta divulgación, la capa de tejido de mucosa incluye una capa de células epiteliales. La célula epitelial puede ser pulmonar, traqueal, bronquial, alveolar, nasal, bucal, epidérmica o gastrointestinal. Las composiciones de esta divulgación pueden administrarse utilizando accionadores convencionales, tales como dispositivos de pulverización mecánicos, así como accionadores presurizados, activados eléctricamente u otros tipos de accionadores.
[0133] Las composiciones de esta divulgación pueden administrarse en una solución acuosa como un pulverizador nasal o pulmonar y puede dispensarse en forma de pulverización mediante una variedad de procedimientos conocidos por los expertos en la técnica. La administración pulmonar de una composición de esta divulgación se logra mediante la administración de la composición en forma de gotas, partículas o pulverización, que puede ser, por ejemplo, en aerosol, atomizadas o nebulizadas. Las partículas de la composición, pulverizador o aerosol pueden encontrarse en forma líquida o sólida. Los sistemas preferidos de dispersión de líquidos, tal como un pulverizador nasal, se dan a conocer en la Patente de EE. UU. Número 4.511.069. Tales formulaciones pueden prepararse de manera conveniente disolviendo las composiciones de acuerdo con la presente divulgación en agua para generar una solución acuosa y para hacer dicha solución estéril. Las formulaciones pueden presentarse en recipientes multidosis, por ejemplo, en el sistema de dispensación sellado divulgado en la Patente de EE. UU. Número 4.511.069. Otros sistemas de administración por pulverización nasal adecuados se han descrito en Transdermal Systemic Medication, Y. W. Chien ed., Elsevier Publishers, Nueva York, 1985; y en la Patente de EE. UU. Número 4.778.810. Las formas de administración en aerosol adicionales pueden incluir, por ejemplo, nebulizadores de aire comprimido, de chorro, ultrasónicos y piezoeléctricos, que administran el principio activo biológicamente disuelto o suspendido en un disolvente farmacéutico, por ejemplo, agua, etano o mezclas de los mismos.
[0134] Las soluciones para pulverización nasal y pulmonar de la presente divulgación comprenden típicamente el fármaco o el fármaco para ser administrado, opcionalmente formulado con un principio activo de superficie, tal como un tensioactivo no iónico (por ejemplo, polisorbato-80) y uno o más tampones. En algunas realizaciones de la presente divulgación, la solución para pulverización nasal comprende adicionalmente un proelente. El pH de la solución para pulverización nasal puede oscilar entre pH 6,8 y 7,2. Los disolventes farmacéuticos utilizados pueden ser también un tampón acuoso ligeramente ácido con pH 4-6. Se pueden añadir otros componentes para potenciar o mantener estabilidad química, que incluyen conservantes, tensioactivos, dispersantes o gases.
[0135] En algunas realizaciones, esta divulgación es un producto farmacéutico que incluye una solución que contiene una composición de esta divulgación y un accionador para un pulverizador o aerosol pulmonar, para mucosa o intranasal.
[0136] Una forma de dosificación de la composición de esta divulgación puede ser líquida, en forma de gotas o una emulsión, o en forma de un aerosol.
[0137] Una forma de dosificación de la composición de esta divulgación puede ser sólida, que puede reconstituirse en un líquido antes de su administración. El sólido puede administrarse como un polvo. El sólido puede estar en forma de una cápsula, comprimido o gel.
[0138] Para formular composiciones para la administración pulmonar dentro de la presente divulgación, el principio activo biológicamente puede combinarse con diferentes aditivos farmacéuticamente aceptables, así como con una base o portador para la dispersión del principio o principios activos. Los ejemplos de aditivos incluyen agentes de control de pH, tales como arginina, hidróxido de sodio, glicina, ácido clorhídrico, ácido cítrico y mezclas de los mismos. Otros aditivos incluyen anestésicos locales (por ejemplo, alcohol bencílico), agentes isotonizantes (por ejemplo, cloruro de sodio, manitol, sorbitol), inhibidores de adsorción (por ejemplo, Tween 80), agentes que potencian solubilidad (por ejemplo, ciclodextrinas y derivados de las mismas), estabilizadores (por ejemplo, albúmina de suero) y agentes reductores (por ejemplo, glutatión). Cuando la composición para la administración por mucosa es un líquido, la tonicidad de la formulación, medida en referencia a la tonicidad de la solución salina fisiológica al 0,9 % (p/v) considerada como la unidad, se ajusta típicamente hasta un valor con el que no se induzca ningún daño tisular sustancial, irreversible, en la mucosa en el sitio de administración. De manera general, la tonicidad de la solución se ajusta hasta un valor de 1/3 a 3, más típicamente de 1/2 a 2 y lo más a menudo de 3/4 a 1,7.
[0139] El agente biológicamente activo puede dispersarse en una baso o vehículo, que puede comprender un compuesto hidrófilo que tiene una capacidad de dispersar el principio activo y cualquier aditivo deseado. La base puede seleccionarse entre una amplia variedad de portadores adecuados, que incluyen, pero no se limitan a, copolímeros de ácidos policarboxílicos o sales de los mismos, anhídridos carboxílicos (por ejemplo, anhídrido maleico) con otros monómeros (por ejemplo, (met)acrilato de metilo, ácido acrílico, etc.), polímeros de vinilo hidrófilos, tales como acetato de polivinilo, alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, derivados de celulosa, tales como hidroximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, etc., y polímeros naturales, tales como quitosano, colágeno, alginato de sodio, gelatina, ácido hialurónico y sales de metal no tóxicas de los mismos. A menudo, un polímero biodegradable se selecciona como una base o portador, por ejemplo, ácido poliláctico, copolímero de poli(ácido láctico-ácido glicólico), ácido polihidroxibutírico, copolímero de poli(ácido hidroxibutírico-ácido glicólico) y mezclas de los mismos. De manera alternativa o adicionalmente, los ésteres de ácidos grasos sintéticos, tales como ésteres de ácidos grasos de poliglicerina, ésteres de ácidos grasos de sacarosa, etc. pueden utilizarse como portadores. Los polímeros hidrófilos y otros portadores pueden utilizarse por sí solos o en combinación y se puede aportar una integridad estructural potenciada al portador mediante cristalización parcial, enlazado iónico, reticulación y similares. Se puede suministrar el portador en una variedad de formas, que incluyen fluido o soluciones viscosas, geles, pastas, polvos, microesferas y películas de aplicación directa a la mucosa nasal. El uso de un portador seleccionado en este contexto puede dar lugar a una promoción de absorción del agente activo biológicamente.
[0140] Las formulaciones para la administración por mucosa, nasal o pulmonar pueden contener un compuesto hidrófilo con peso molecular bajo como una base o excipiente. Tales compuestos hidrófilos con peso molecular bajo proporcionan un medio de pase a través del cual un principio activo soluble en agua, tal como un péptido o una proteína activo fisiológicamente, pueden difundirse a través de la base hasta la superficie corporal, donde se absorbe el principio activo. El compuesto hidrófilo con peso molecular bajo absorbe de manera opcional humedad de la mucosa o la atmósfera de administración y disuelve el péptido activo soluble en agua. El peso molecular del compuesto hidrófilo con peso molecular bajo generalmente no supera 10.000 y preferiblemente no es superior a 3.000. Los ejemplos de compuestos hidrófilos con peso molecular bajo incluyen compuestos de poliol, tales como oligosacáridos, disacáridos y monosacáridos, que incluyen sacarosa, manitol, lactosa, L-arabinosa, D-eritrosa, D-ribosa, D-xilosa, D-manosa, D-galactosa, lactulosa, celobiosa, gentibiosa, glicerina, polietilenglicol y mezclas de los mismos. Ejemplos adicionales de compuestos hidrófilos con peso molecular bajo incluyen N-metilpirrolidona, alcoholes (por ejemplo, alcohol oligovinílico, etanol, etilenglicol, propilenglicol, etc.) y mezclas de los mismos.
[0141] Las composiciones de esta divulgación pueden contener de manera alternativa como portadores farmacéuticamente aceptables, según sea necesario, para aproximar condiciones fisiológicas, tales como agentes de ajuste de pH y agentes tamponadores, agentes de ajuste de tonicidad y agentes humectantes, por ejemplo, acetato de sodio, lactato de sodio, cloruro de sodio, cloruro de potasio, cloruro de calcio, monolaurato de sorbitano, oleato de trietanolamina y mezclas de los mismos. Para composiciones sólidas, se pueden utilizar portadores farmacéuticamente aceptables no tóxicos convencionales que incluyen, por ejemplo, grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, talco, celulosa, glucosa, sacarosa, carbonato de magnesio y similares.
[0142] El agente biológicamente activo puede administrarse en una formulación de liberación temporal, por ejemplo, en una composición que incluye un polímero de liberación lenta. El principio activo puede prepararse con portadores que protegerán contra liberación rápida, por ejemplo, un vehículo de liberación controlada, tal como polímero, sistema de administración microencapsulado o gel bioadhesivo. Se puede lograr la administración prolongada del principio activo, en diferentes composiciones de la divulgación incluyendo en la composición agentes que retrasan la absorción, por ejemplo, hidrogeles de monoestearato de aluminio y gelatina.
Ejemplos
Ejemplo 1
[0143] La divulgación de los compuestos que no están incluidos en el alcance de la presente invención reivindicada se proporciona solamente como referencia.
[0144] Los compuestos de ejemplo de la fórmula I se proporcionan en la Tabla 1.
Tabla 1
Figure imgf000026_0001
Figure imgf000027_0001
Figure imgf000028_0001
[0145] La Tabla 1 muestra el nombre y la estructura de cada compuesto, su peso molecular, su pKa y su bioactividad “knockdown” (KD) en un ensayo descrito a continuación en el Ejemplo 19.
[0146] Los compuestos de ejemplo de la fórmula II y III se proporcionan en las Tablas 2 y 3. De nuevo, la divulgación de los compuestos que no están incluidos en el alcance de la presente invención reivindicada se proporciona solamente como referencia.
Figure imgf000029_0001
Figure imgf000030_0001
Figure imgf000031_0001
Figure imgf000032_0001
[0147] Los compuestos de ejemplo de la fórmula V se proporcionan en la Tabla 4. De nuevo, la divulgación de los compuestos que no están incluidos en el alcance de la presente invención reivindicada se proporciona solamente como referencia.
Figure imgf000032_0002
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000034_0002
La Tabla 1 muestra el nombre y la estructura de cada compuesto, su peso molecular, su pKa y su bioactividad “knockdown” (KD) en un ensayo descrito a continuación en el Ejemplo 19.
Ejemplo 2. Síntesis de 8-bromooctanoato de metilo
[0148]
Figure imgf000034_0001
[0149] Bajo atmósfera de N2, se disolvió ácido 8-bromooctanoico en metanol anhidro. Se añadió gota a gota H2SO4 concentrado y la mezcla de reacción se agitó a reflujo durante tres horas.
[0150] La reacción se controló mediante cromatografía en capa fina hasta su finalización. El disolvente se extrajo completamente al vacío. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua. Se volvió a extraer la capa acuosa con acetato de etilo. La capa orgánica total se lavó con una solución saturada de NaHCO3. La capa orgánica se lavó de nuevo con agua y, finalmente, se lavó con solución acuosa saturada de cloruro sódico. El producto se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró.
Ejemplo 3. Síntesis de 8,8'-(benzanediil)dioctanoato de dimetilo
5
Figure imgf000035_0001
[0151]
[0152] Se tomó K2CO3 anhidro y se añadió a dimetilformamida anhidra bajo N2. Se añadió lentamente bencilamina en dimetilformamida. A continuación, se añadió 8-bromooctanoato de metilo disuelto en dimetilformamida a temperatura 10 ambiente. La mezcla de reacción se calentó hasta 80° C y la reacción se mantuvo en agitación durante 36 horas.
[0153] La reacción se controló mediante cromatografía en capa fina hasta su finalización. El producto de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se añadió agua. El compuesto se extrajo con acetato de etilo. Se volvió a extraer la capa acuosa con acetato de etilo. La capa orgánica total se lavó con agua y, finalmente, con solución acuosa 15 saturada de cloruro sódico. El producto se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró.
[0154] El producto de reacción se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice en metanol al 3 % en cloroformo, se recuperaron 44 g producto puro.
20 [0155] Utilizando el sistema de CCF de metanol al 10 % en cloroformo, el producto migró con un Rf: 0,8, visualizado mediante carbonización en ninhidrina. El rendimiento total fue del 82 %. El compuesto era un líquido marrón claro. La estructura se confirmó mediante 1H-RMN.
Ejemplo 4. Síntesis de 8,8'-azanodiildioctanoato de dimetilo
25
[0156]
Figure imgf000035_0002
30 [0157] Se transfirió 8 ,8 '-(benzanediil)dioctanoato de dimetilo a un recipiente de cristal de hidrogenación y se añadió etanol seguido de 10 % de Pd/C. La mezcla de reacción se agitó en un dispositivo de agitación Parr bajo presión atmosférica de H2 de 50 libras por pulgada cuadrada [psi] durante dos horas a temperatura ambiente.
[0158] El producto de reacción se filtró a través de celite y se lavó con acetato de etilo caliente. El filtrado se 35 concentró al vacío.
Ejemplo 5. Síntesis de 8,8'-((terc-butoxicarbonil)azanodil) dioctanoato de dimetilo
[0159]
40
Figure imgf000035_0003
[0160] Se transfirió 8 ,8 '-azanodiildioctanoato de dimetilo a DCM y Et3N a la masa de reacción y se enfrió hasta 0 °C. Se añadió gota a gota anhídrido Boc diluido en DCM a la reacción anterior. Cuando se completó la adición, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante tres horas.
[0161] La reacción se detuvo con agua y la capa de DCM se separó. La fase acuosa se volvió a extraer con DCM y las capas combinadas de DCM se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro sódico y se secaron sobre Na2SÜ4. Después de la concentración, se recogieron 40 g de compuesto en bruto.
[0162] El producto de reacción en bruto se purificó mediante cromatografía en columna utilizando 0-12 % de acetato de etilo en hexano. El rendimiento recuperado fue del 48 %. Un único producto migró mediante cromatografía en capa fina en acetato de etilo al 20 % en hexano con un Rf de 0,5, carbonizando con ninhidrina.
Ejemplo 6. Síntesis de ácido 8,8'-((terc-butoxicarbonil)azanodiil) dioctanoico
[0163]
Figure imgf000036_0001
[0164] Se transfirió 8,8'-((terc-butoxicarbonil)azanodil) dioctanoato de dimetilo a THF. Se añadió una solución de hidróxido de sodio 6 N a temperatura ambiente. La reacción se mantuvo agitándose durante la noche a temperatura ambiente.
[0165] La masa de reacción se evaporó al vacío a 25 °C para extraer el THF. El producto de reacción se acidificó con HCl 5 N. Se añadió acetato de etilo a la capa acuosa. La capa orgánica separada se lavó con agua y la capa acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro sódico y se secaron sobre Na2SÜ4 anhidro. La concentración de la solución produjo 18 g de una masa en bruto.
Ejemplo 7. Síntesis de 8,8'((terc-butoxicarbonil)azanodiil) de di((Z)-non-2-en-1-ilo)
[0166
Figure imgf000036_0002
]
[0167] Se disolvió ácido 8,8'-((terc-butoxicarbonil)azanodiil) dioctanoico en DCM anhidro. Se añadió HATL1 a esta solución. Se añadió lentamente di-isopropil etilamina a la mezcla de reacción a temperatura ambiente. La temperatura interna subió hasta 40 °C y se formó una solución de color amarillo pálido. Se añadió DMAP a la mezcla de reacción, seguido de una solución de cis-2-nonen-1-ol en DCM anhidro. La reacción cambio a color marrón. La reacción se agitó durante cinco horas a temperatura ambiente.
[0168] La reacción se revisó mediante cromatografía en capa fina hasta su finalización. Se añadió agua al producto de reacción, que se extrajo con DCM. La capa de DMC se lavó con agua y seguidamente con solución acuosa saturada de cloruro sódico. La capa orgánica se secó sobre Na2SÜ4 anhidro y se concentró para obtener 35 g del compuesto en bruto.
Ejemplo de Referencia 8. Síntesis de ATX-001
[0169]
Figure imgf000036_0003
[0170] Se disolvió 8,8'((tertbutoxicarbonil)azanodiil) dioctanoato de di((Z)-non-2-en-1-ilo) (0,023 mol, 15 g) en diclorometano anhidro (DCM) (200 ml). Se añadió ácido trifluoroacético (TFA) a 0 °C para iniciar la reacción. Se permitió que la temperatura de reacción aumentara lentamente hasta temperatura ambiente durante 30 minutos con agitación. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se concentró al vacío a 40 °C y el residuo en bruto se diluyó con DCM, y se lavó con una solución de NaHCO3 al 10 %. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El producto en bruto recogido (12 gramos) se disolvió en DCM anhidro (85 ml) bajo gas nitrógeno. Se añadió trifosgeno y la mezcla de reacción se enfrió hasta 0 °C, y se añadió Et3N gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. Se extrajo el disolvente de DCM de la masa de reacción mediante destilación bajo N2. El producto de reacción se enfrió hasta 0 °C, se diluyó con DCM (50 ml), y ácido 2-((2-(dimetil-amino)etil)tio) acético (0,039 mol, 6,4 g) y carbodiimida (EDCHCl) (0,054 mol, 10,4 g). A continuación, la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se diluyó con solución de HCl 0,3 M (75 ml), y se separó la capa orgánica. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa al 10 % de K2CO3 (75 ml) y se secaron sobre Na2SO4 anhidro. La concentración del disolvente produjo una masa en bruto de 10 gramos. El compuesto en bruto se purificó mediante columna en gel de sílice (malla 100-200) utilizando 3 % de MeOH/DCM. El rendimiento fue de 10,5 g (68 %).
Ejemplo de Referencia 9. Síntesis de ATX-002
[0171]
Figure imgf000037_0001
[0172] Se disolvió 8 ,8 '((terc-butoxicarbonil)azanodiil) dioctanoato de di((Z)-non-2-en-1-ilo) (13,85 mmol, 9 gramos) en DCM anhidro (150 ml). Se añadió TFA a 0 °C para iniciar la reacción. Se permitió que la temperatura de reacción aumentara lentamente hasta temperatura ambiente durante 30 minutos con agitación. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se concentró al vacío a 40 °C y el residuo en bruto se diluyó con DCM, y se lavó con una solución de NaHCO3 al 10 %. La capa acuosa restante se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El producto en bruto recogido se disolvió en DCM anhidro (85 ml) bajo gas nitrógeno. Se añadió trifósgeno y la mezcla de reacción se enfrió hasta 0 °C, y se añadió Et3N gota a gota. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El disolvente de DCM se extrajo de la masa de reacción mediante destilación bajo N2. El producto de reacción se enfrió hasta 0 °C, se diluyó con DCM (50 ml), y se añadió 2-(dimetilamino)etanotiol HCl (0,063 mol, 8,3 g), seguido de Et3N (anhidro). A continuación, la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se diluyó con una solución de HCl 0,3 M (75 ml), y se separó la capa orgánica. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa al 10 % de K2CO3 (75 ml) y se secaron sobre Na2SO4 anhidro. La concentración del disolvente generó 10 gramos de masa en bruto. El compuesto en bruto se purificó mediante columna en gel de sílice (malla 100-200) utilizando 3 % de MeOH/DCM. El rendimiento fue de 3,1 gramos.
Ejemplo de Referencia 10. Síntesis de ATX-003
[0173]
Figure imgf000037_0002
[0174] Se disolvió 8 ,8 ((terc-butoxicarbonil)azanodiil) dioctanoato de di((Z)-non-2-en-1-ilo) (0,00337 mol, 2,2 g) en DCM anhidro (20 ml). Se añadió TFA a 0 °C para iniciar la reacción. Se permitió que la temperatura de reacción aumentara lentamente hasta temperatura ambiente durante 30 minutos con agitación. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se concentró al vacío a 40 °C y el residuo en bruto se diluyó con DCM, y se lavó con una solución de NaHCO3 al 10 %. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron bajo presión reducida. El producto en bruto recogido se disolvió en DCM anhidro (10 ml) bajo gas nitrógeno. Se añadió trifósgeno (0,0182 mol, 5,4 g) y la mezcla de reacción se enfrió hasta 0 °C, y se añadió Et3N gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. Se extrajo el disolvente de DMC de la masa de reacción mediante destilación bajo N2. El producto de reacción se enfrió hasta 0 °C, se diluyó con DCM (15 ml), y se añadió 2-(dimetilamino)propanotiolHCl (0,0182 mol, 2,82 g), seguido de Et3N (anhidra). A continuación, la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se diluyó con una solución acuosa de HCl 0,3 M (20 ml), y se separó la capa orgánica. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa de K2CO3 al 10 % (50 ml) y se secaron sobre Na2SO4 anhidro. La concentración del disolvente produjo una masa en bruto de 5 gramos. El compuesto en bruto se purificó mediante columna en gel de sílice (malla 100-200) utilizando 3 % de MeOH/DCM. El rendimiento fue de 0,9 gramos.
Ejemplo de Referencia 11. Síntesis de ATX-004
[0175]
Figure imgf000038_0001
[0176] Se disolvió 8 ,8 '((terc-butoxicarbonil)azanodiil) dioctanoato de di((Z)-non-2-en-1-ilo) (0,023 mol, 15 g) en DCM (200 ml). Se añadió TFA a 0°C para iniciar la reacción. Se permitió que la temperatura de reacción aumentara lentamente hasta temperatura ambiente durante 30 minutos con agitación. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se concentró al vacío a 40 °C y el residuo en bruto se diluyó con DCM, y se lavó con una solución de NaHCO3 al 10 %. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El producto en bruto recogido, 8 ,8 '-azanodiildioctanoato de di((Z)-non-2-en-l-il) (5,853 mmol, 3,2 g), se disolvió en dimetilformamida anhidra (DMF) bajo nitrógeno, y se añadieron ácido 2-((3-(dimetilamino)propil)tio)acético (10,48 mmol, 1,85 g) y EDCHCl (14,56 mmol, 2,78 g). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se detuvo con agua (30 ml) y se diluyó con DCM (30 ml), y se separó la capa orgánica. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa al 10 % de K2CO3 y se secaron sobre Na2SO4 anhidro. El compuesto en bruto se purificó mediante columna en gel de sílice (malla 100-200) utilizando 3 % de MeOH/DCM. El rendimiento fue de 1 gramo (24,2 %).
Ejemplo de Referencia 12. Síntesis de ATX-005
[0177]
Figure imgf000038_0002
[0178] Se disolvió 8 ,8 '((terc-butoxicarbonil)azanodiil) dioctanoato de di((Z)-non-2-en-1-ilo) (0,023 mol, 15 g) en DCM anhidro (200 ml). Se añadió TFA a 0 °C para iniciar la reacción. Se permitió que la temperatura de reacción aumentara lentamente hasta temperatura ambiente durante 30 minutos con agitación. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se concentró al vacío a 40 °C y el residuo en bruto se diluyó con DCM, y se lavó con una solución de NaHCO3 al 10 %. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El producto de reacción en bruto, 8 ,8 '- azanodiildioctanoato de di((Z)-non-2-en-1-ilo) (5,853 mmol, 3,2 g) se disolvió en dimetilformamida (DMF) bajo gas nitrógeno. Se añadieron ácido 2-((3-(dimetilamino)propil)tio)acético (10,48 mmol, 1,85 g) y EDCHCl (14,56 mmol, 2,78 g) y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se detuvo con agua (30 ml) y se diluyó con DCM (30 ml). La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa al 10 % de K2CO3 (75 ml) y se secaron sobre Na2SO4 anhidro. La concentración del disolvente produjo 5 gramos de masa en bruto. El compuesto en bruto se purificó mediante columna en gel de sílice (malla 100-200) utilizando 3 % de MeOH/DCM. El rendimiento fue de 1 gramo (24,2 %).
Ejemplo de Referencia 13. Síntesis de ATX-006
[0179]
Figure imgf000039_0001
[0180] Se disolvió 8,8'((terc-butoxicarbonil)azanodiil) dioctanoato de di((Z)-non-2-en-1-ilo) en DCM anhidro (150 ml). Se añadió TFA a 0 °C para iniciar la reacción. Se permitió que la temperatura de reacción aumentara lentamente hasta temperatura ambiente durante 30 minutos con agitación. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se concentró al vacío a 40 °C y el residuo en bruto se diluyó con DCM, y se lavó con una solución de NaHCO3 al 10 %. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El producto en bruto recogido se disolvió en DCM anhidro (85 ml) bajo gas nitrógeno. Se añadió trifósgeno y la mezcla de reacción se enfrió hasta 0 °C, y se añadió Et3N gota a gota. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción en bruto se disolvió en DMF anhidra bajo atmósfera de nitrógeno y se añadieron ácido 2-((2-(dietilamino)etil)tio)acético (3,93 mmol, 751 mg) y EDCHCl (5,45 mmol, 1,0 g). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se detuvo con agua (3 ml) y se extrajo el exceso de DMF al vacío a 25 °C. El producto de reacción se diluyó con agua y se extrajo la capa acuosa tres veces con DCM (20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro sódico y se secaron sobre Na2SO4 anhidro. La concentración del disolvente produjo una masa en bruto de 2 gramos. Después de purificación mediante columna en gel de sílice (malla 100-200) utilizando 3 % de MeOH/DCM, el rendimiento fue de 1,2 gramos (76 %).
Ejemplo de Referencia 14. Síntesis de ATX-009
[0181]
Figure imgf000039_0002
[0182] Se disolvió 8,8'((terc-butoxicarbonil)azanodiil) dioctanoato de di((Z)-non-2-en-1-ilo) (13,85 mmol, 9 gramos) en DCM anhidro (20 ml). Se añadió TFA a 0°C para iniciar la reacción. Se permitió que la temperatura de reacción aumentara lentamente hasta temperatura ambiente durante 30 minutos con agitación. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se concentró al vacío a 40° C y el residuo en bruto se diluyó con DCM, y se lavó con una solución de NaHCO3 al 10 %. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. Se disolvió 8,8'-azanodiildioctanoato de di((Z)-non-2-en-1-ilo) (0,909 mmol, 500 mg) en DCM anhidro (20 ml) bajo atmósfera de nitrógeno. Se añadió trifósgeno y la mezcla de reacción se enfrió hasta 0 °C, y se añadió Et3N gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El disolvente de DCM se extrajo de la masa de reacción mediante destilación bajo atmósfera de nitrógeno. Se disolvió clorhidrato de 2-(etil(metil)amino)etano-1-tiol (4,575 mmol, 715 mg) en DMF (7 ml) y tetrahidrofurano (THF) (5 ml), y se añadió gota a gota a la suspensión de hidruro de sodio en THF a 0 °C. A continuación, la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se diluyó con acetato de etilo y agua fría. La reacción se neutralizó con HCl al 5 % (9 ml), y se separó la capa orgánica. La capa acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo (EtOAc) (20 ml), se lavó en agua fría y solución acuosa saturada de cloruro sódico, y las capas orgánicas combinadas se lavaron y se secaron sobre Na2SO4 anhidro. La concentración del disolvente produjo 1 gramo de producto en bruto. El compuesto se purificó mediante columna en gel de sílice (malla 100-200) utilizando 3 % de MeOH/DCM para producir 100 mg.
Ejemplo de Referencia 15. Síntesis de ATX-010
[0183]
Figure imgf000040_0001
[0184] Se disolvió 8,8'((terc-butoxicarbonil)azanodiil) dioctanoato de di((Z)-non-2-en-1-ilo) (3,079 mmol, 2 g) en DCM anhidro (20 ml). Se añadió TFA a 0 °C para iniciar la reacción. Se permitió que la temperatura de reacción aumentara lentamente hasta temperatura ambiente durante 30 minutos con agitación. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se concentró al vacío a 40 °C y el residuo en bruto se diluyó con DCM, y se lavó con una solución de NaHCO3 al 10 %. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El producto en bruto recogido se disolvió en DCM anhidro (20 ml) bajo gas nitrógeno. Se añadió trifósgeno (14,55 mmol, 4,32 g) y la mezcla de reacción se enfrió hasta 0 °C, y se añadió Et3N gota a gota. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El disolvente de DCM se extrajo de la masa de reacción mediante destilación bajo N2. El producto de reacción se enfrió hasta 0 °C, se diluyó con DCM (20 ml), y se añadió 2-(dimetilamino)etanotiol HCl (0,063 mol, 8,3 g), seguido de Et3N (seco). A continuación, la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La cromatografía en capa fina mostró que la reacción se completó. El producto de reacción se diluyó con una solución de HCl 0,3 M (20 ml), y se separó la capa orgánica. La capa acuosa se volvió a extraer con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa al 10 % de K2CO3, 20 ml) y se secaron sobre Na2SO4 anhidro. La concentración del disolvente produjo 10 gramos de masa en bruto. El compuesto en bruto se purificó mediante columna en gel de sílice (malla 100-200) utilizando 3 % de MeOH/DCM. El rendimiento fue de 1,4 g (75 %).
Ejemplo de Referencia 16. Síntesis de ATX-A-4 (referido a continuación como ATX-031)
[0185]
Figure imgf000041_0001
Ejemplo 17. Síntesis de ATX-011 a ATX-017, ATX-021 a ATX-023 y ATX-026 a ATX-030 de la Tabla 1, y los compuestos de las Tablas 2, 3 y 4
[0186] La síntesis de ATX-011 a ATX-017, ATX-021 a ATX-023, y ATX-026 a ATX-030, ATX-A-1 a ATX-A- 22 y los compuestos de las Tablas 2, 3 y 4 sigue la síntesis de los Ejemplos 1-15, mediante la sustitución de ingredientes iniciales adecuados por reacciones sintéticas descritas en el presente documento. Se proporciona la divulgación en relación a los compuestos que no están incluidos en el alcance de la presente invención reivindicada solamente como referencia.
Ejemplo 18. Silenciamiento del Factor VII de ratón in vivo
[0187] Utilizando un cribado in vivo dirigido al hígado de bibliotecas de liposomas, se analizaron una serie de compuestos que facilitan niveles altos de silenciamiento génico mediado por ARNpi en hepatocitos, comprendiendo las células el parénquima hepático. El Factor VII, un factor de coagulación de la sangre, es un gen diana adecuado para ensayar la administración de ARNpi funcional al hígado. Dado que este factor se produce de manera específica en hepatocitos, el silenciamiento génico indica administración exitosa al parénquima, al contrario que la administración a las células del sistema reticuloendotelial (por ejemplo, células de Kupffer). Además, el Factor VII es una proteína segregada que se puede medir fácilmente en suero, eludiendo la necesidad de sacrificar los animales. Se puede determinar fácilmente el silenciamiento a nivel de ARNm midiendo niveles de proteína. Esto se debe a la semivida corta de la proteína (2-5 horas). Ratones C57BL/6 (Charles River Labs) recibieron solución salina o ARNpi en formulaciones de liposomas a través de una inyección en vena caudal a un volumen de 0,006 ml/g. 48 horas después de la administración, los animales se anestesiaron mediante inhalación de isofluorano y se recogió sangre en tubos separadores con suero mediante sangrado retro-orbital. Los niveles en suero de la proteína Factor VII se determinaron en muestras utilizando un ensayo cromogénico (Biophen FVII, Aniara Corporation) de acuerdo con los protocolos del fabricante. Se generó una curva estándar utilizando suero recogido de animales tratados con solución salina.
[0188] Las composiciones con ARNpi dirigidas al Factor VIII se formularon con ATX-001, ATX-002, ATX-003 y ATX-547 y muestras de comparación NC1 y MC3 (Alnylam). Estas se inyectaron a animales a una dosis de 0,3 mg/kg y a 1 mg/kg. El ARNpi encapsulado por MC3 (0,3 mg/kg), NC1 (0,3 mg/kg), ATX-547 (0,3 mg/kg), ATX-001 (0,3 y 1,0 mg/kg), ATX-002 (0,3 y 10 mg/kg) y ATX-003 (0,3 y 1,0 mg/kg) se midió para determinar la capacidad de “knockdown” del Factor VII en plasma de ratón después de la administración de la formulación de ARNpi a ratones C57BL6. Los resultados mostraron que ATX-001 y ATX-002 eran los más eficaces a 0,3 mg/kg, en comparación con controles (Figuras 1 y 2).
[0189] El ARNpi encapsulado por MC3 (0,3 y 1,5 mg/kg), NC1 (0,3 mg/kg), ATX-547 (0,1 y 0,3 mg/kg), ATX-004 (0,3), At X-006 (0,3 y 1,0 mg/kg) y At X-010 (0,3 y 1,5 mg/kg) se midió para determinar el “knockdown” del Factor VII en plasma de ratón después de la administración de la formulación de ARNpi a ratones C57BL6. Los resultados mostraron que ATX-001 y ATX-010 eran los más eficaces (Figuras 3 y 4). La actividad “knockdown” de los compuestos de ejemplo se muestra para 0,3 mg/kg o a 0,05 mg/kg para ATX-018, ATX-019 y ATX-020 (Tabla 1). Se proporciona la divulgación que se refiere a los compuestos que no están incluidos en el alcance de la presente invención reivindicada solamente como referencia.

Claims (10)

REIVINDICACIONES
1. Compuesto de fórmula III:
Figure imgf000043_0001
en la que
R1 consiste en un alquilo ramificado de 12 a 20 carbonos;
R2 consiste en un alquilo ramificado de 12 a 20 carbonos;
L1 y L2 cada uno consiste en un enlace o un alquilo lineal que tiene de 1 a 3 átomos de carbono;
X consiste en S u O;
L3 consiste en un enlace;
R3 se selecciona entre etileno, n-propileno o isopropileno, y
R4 y R5 son el mismo o diferentes, consistiendo cada uno en un alquilo lineal o ramificado que consiste en de 1 a 6 carbonos;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que X consiste en S.
3. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que tanto L1 como L2 consisten en un alquilo lineal que tiene de 1 a 3 átomos de carbono.
4. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que R3 es etileno.
5. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que R3 es n-propileno o isopropileno.
6. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que cada uno de R4 y R5 consiste en metilo, etilo o isopropilo.
7. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que tanto L1 como L2 consisten en un enlace.
8. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que tanto L1 como L2 consisten en un metileno.
9. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que tanto R1 como R2 consisten en un alquilo ramificado de 19 o 20 átomos de carbono.
10. Compuesto, según la reivindicación 1, en el que tanto R1 como R2 consisten en un alquilo ramificado de 13 o 14 átomos de carbono.
Figure imgf000044_0001
ES15724466T 2014-11-18 2015-05-11 Lípido catiónico ionizable para la administración de ARN Active ES2946110T3 (es)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14/546,105 US9593077B2 (en) 2013-11-18 2014-11-18 Ionizable cationic lipid for RNA delivery
US14/707,796 US9567296B2 (en) 2013-11-18 2015-05-08 Ionizable cationic lipid for RNA delivery
US14/707,876 US9365610B2 (en) 2013-11-18 2015-05-08 Asymmetric ionizable cationic lipid for RNA delivery
PCT/US2015/030218 WO2016081029A1 (en) 2014-11-18 2015-05-11 Ionizable cationic lipid for rna delivery

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2946110T3 true ES2946110T3 (es) 2023-07-12

Family

ID=56014367

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES15724466T Active ES2946110T3 (es) 2014-11-18 2015-05-11 Lípido catiónico ionizable para la administración de ARN

Country Status (20)

Country Link
EP (1) EP3221293B1 (es)
JP (1) JP6637988B2 (es)
KR (1) KR102380363B1 (es)
CN (1) CN107207428A (es)
AU (1) AU2015350561B2 (es)
CA (1) CA2968060C (es)
DK (1) DK3221293T3 (es)
ES (1) ES2946110T3 (es)
FI (1) FI3221293T3 (es)
HK (1) HK1244479A1 (es)
HR (1) HRP20230342T1 (es)
HU (1) HUE062130T2 (es)
IL (1) IL252291B (es)
LT (1) LT3221293T (es)
NZ (1) NZ732777A (es)
PL (1) PL3221293T3 (es)
PT (1) PT3221293T (es)
RS (1) RS64078B1 (es)
SI (1) SI3221293T1 (es)
WO (1) WO2016081029A1 (es)

Families Citing this family (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9593077B2 (en) 2013-11-18 2017-03-14 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
EP3957735A1 (en) 2014-03-05 2022-02-23 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating usher syndrome and retinitis pigmentosa
US12460231B2 (en) 2014-04-02 2025-11-04 Editas Medicine, Inc. Crispr/CAS-related methods and compositions for treating primary open angle glaucoma
CA3045134A1 (en) 2016-12-14 2018-06-21 Ligandal, Inc. Compositions and methods for nucleic acid and/or protein payload delivery
US10526284B2 (en) 2016-12-21 2020-01-07 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
US10383952B2 (en) * 2016-12-21 2019-08-20 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
WO2018119163A1 (en) * 2016-12-21 2018-06-28 Payne Joseph E Ionizable cationic lipid for rna delivery
EP3600396A4 (en) 2017-03-30 2021-01-13 The Government of the United States of America as represented by the Secretary of the Army NUCLEIC ACID VACCINE COMPOSITION WITH A LIPID FORMULATION AND METHOD FOR INCREASING THE POTENTIAL OF NUCLEIC ACID VACCINE
WO2018222890A1 (en) * 2017-05-31 2018-12-06 Arcturus Therapeutics, Inc. Synthesis and structure of high potency rna therapeutics
EP3773476A1 (en) * 2018-03-30 2021-02-17 Arcturus Therapeutics, Inc. Lipid particles for nucleic acid delivery
EP3784284B1 (en) 2018-04-25 2023-08-02 Ethris GmbH Lipid-based formulations for the delivery of rna
KR20190127277A (ko) * 2018-05-04 2019-11-13 주식회사 삼양바이오팜 mRNA 전달용 고분자 나노입자 조성물 및 그 제조방법
PL3805198T3 (pl) 2018-06-08 2024-02-12 Fujifilm Corporation Związek, jego sól i cząstki lipidowe
CA3122080A1 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treating ornithine transcarbamylase deficiency
BR112021018526A2 (pt) * 2019-03-19 2021-11-23 Arcturus Therapeutics Inc Método de fabricação de nanopartículas de rna encapsuladas em lipídio
EP3981435B1 (en) 2019-06-07 2023-08-16 FUJIFILM Corporation Lipid composition
WO2021067598A1 (en) 2019-10-04 2021-04-08 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Methods for improved therapeutic use of recombinant aav
EP4328309B1 (en) 2019-11-15 2025-07-02 FUJIFILM Corporation Lipid composition
WO2021178510A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
IL296660A (en) 2020-03-24 2022-11-01 Generation Bio Co Non-viral dna vectors and uses thereof for expressing factor ix therapeutics
CA3172591A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Douglas Anthony KERR Non-viral dna vectors and uses thereof for expressing gaucher therapeutics
JP2023530487A (ja) * 2020-06-18 2023-07-18 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッド ポリグルタミン病の治療のためのｕｎａオリゴマー
EP4189098A1 (en) 2020-07-27 2023-06-07 Anjarium Biosciences AG Compositions of dna molecules, methods of making therefor, and methods of use thereof
JP7774615B2 (ja) 2020-09-13 2025-11-21 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッド 大型ｒｎａの脂質ナノ粒子封入
MX2023009345A (es) 2021-02-10 2023-10-24 Oncorus Inc Compuestos, composiciones y metodos de uso de estos.
AU2022260111A1 (en) 2021-04-20 2023-11-30 Anjarium Biosciences Ag Compositions of dna molecules encoding amylo-alpha-1, 6-glucosidase, 4-alpha-glucanotransferase, methods of making thereof, and methods of use thereof
AU2022264509A1 (en) 2021-04-27 2023-12-14 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
EP4329884A1 (en) 2021-04-27 2024-03-06 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
EP4395748A1 (en) 2021-09-03 2024-07-10 CureVac SE Novel lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
US20250027108A1 (en) 2021-10-29 2025-01-23 CureVac SE Improved circular rna for expressing therapeutic proteins
TW202334080A (zh) 2021-11-08 2023-09-01 美商歐納醫療公司 用於遞送環狀聚核苷酸之脂質奈米粒子組合物
WO2023135273A2 (en) 2022-01-14 2023-07-20 Anjarium Biosciences Ag Compositions of dna molecules encoding factor viii, methods of making thereof, and methods of use thereof
EP4469091A1 (en) 2022-01-28 2024-12-04 CureVac SE Nucleic acid encoded transcription factor inhibitors
CN114213295B (zh) * 2022-02-22 2022-05-20 中国科学院基础医学与肿瘤研究所(筹) 一种阳离子化合物、制备方法及其复合物和用途
CN119072330A (zh) 2022-03-14 2024-12-03 世代生物公司 异源初免加强疫苗组合物和使用方法
US20250345407A1 (en) 2022-05-25 2025-11-13 CureVac SE Nucleic acid based vaccine encoding an escherichia coli fimh antigenic polypeptide
AU2023283348A1 (en) 2022-06-07 2025-01-09 Generation Bio Co. Lipid nanoparticle compositions and uses thereof
WO2024040222A1 (en) 2022-08-19 2024-02-22 Generation Bio Co. Cleavable closed-ended dna (cedna) and methods of use thereof
IL319704A (en) 2022-09-23 2025-05-01 Nchroma Bio Inc Compositions and methods for epigenetic regulation of HBV gene expression
US12186389B2 (en) 2022-10-28 2025-01-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Nucleic acid base vaccine against emerging SARS-CoV-2 variants
WO2024102762A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Orna Therapeutics, Inc. Lipids and lipid nanoparticle compositions for delivering polynucleotides
TW202425959A (zh) 2022-11-08 2024-07-01 美商歐納醫療公司 遞送多核苷酸的脂質及奈米顆粒組合物
JP2025537178A (ja) 2022-11-08 2025-11-14 オーナ セラピューティクス， インコーポレイテッド 環状ｒｎａ組成物
EP4626444A2 (en) 2022-12-01 2025-10-08 Generation Bio Co. Lipid nanoparticles comprising nucleic acids, ionizable lipids, sterols, lipid anchored polymers and helper lipids, their uses
IL320873A (en) 2022-12-01 2025-07-01 Generation Bio Co Novel polyglycerol-conjugated lipids and lipid nanoparticle compositions containing them
EP4626402A1 (en) 2022-12-01 2025-10-08 Generation Bio Co. Lipid nanoparticles comprising nucleic acids and lipid-anchored polymers
CN120615013A (zh) 2022-12-01 2025-09-09 世代生物公司 用于细胞靶向的隐形脂质纳米颗粒组合物
AU2024233180A1 (en) 2023-03-08 2025-09-25 CureVac SE Novel lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
WO2024205657A2 (en) 2023-03-29 2024-10-03 Orna Therapeutics, Inc. Lipids and lipid nanoparticle compositions for delivering polynucleotides
AU2024269222A1 (en) 2023-05-05 2025-10-09 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions and methods
WO2024230934A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 CureVac SE Therapeutic nucleic acid for the treatment of ophthalmic diseases
EP4713453A1 (en) 2023-05-15 2026-03-25 nChroma Bio, Inc. Compositions and methods for epigenetic regulation of hbv gene expression
CN116270543B (zh) * 2023-05-19 2023-09-26 清华大学 脂质纳米颗粒在制备通过雾吸或鼻滴给药递送核酸的药物中的用途
CN121666232A (zh) 2023-05-31 2026-03-13 开普斯坦治疗公司 脂质纳米颗粒制剂和组合物
WO2025049690A1 (en) 2023-08-29 2025-03-06 Orna Therapeutics, Inc. Circular polyethylene glycol lipids
WO2025052180A2 (en) 2023-09-07 2025-03-13 Axelyf ehf. Lipids and lipid nanoparticles
WO2025080939A1 (en) 2023-10-13 2025-04-17 Ultragenyx Pharmaceutical, Inc. Compositions and methods for treating conditions associated with cartilage oligomeric matrix protein (comp) mutations
WO2025101501A1 (en) 2023-11-07 2025-05-15 Orna Therapeutics, Inc. Circular rna compositions
WO2025128853A2 (en) 2023-12-13 2025-06-19 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Compositions and methods for treating conditions associated with ube3a overexpression
US20250332281A2 (en) 2023-12-15 2025-10-30 Capstan Therapeutics, Inc. Humanized anti-cd8 antibodies and uses thereof
WO2025166325A1 (en) 2024-02-02 2025-08-07 Editas Medicine, Inc. MODIFIED GUIDE RNAs
US20250381150A1 (en) 2024-03-08 2025-12-18 Genzyme Corporation Lipid nanoparticles
WO2025213138A1 (en) 2024-04-05 2025-10-09 Editas Medicine, Inc. Crispr/rna-guided nuclease related methods and compositions for treating primary open angle glaucoma
WO2026003582A2 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Axelyf ehf. Lipids and lipid nanoparticles
WO2026030375A2 (en) 2024-07-30 2026-02-05 Genzyme Corporation Lipid nanoparticles and methods of manufacture and use thereof

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE21633T1 (de) 1981-06-04 1986-09-15 Pharmasol Corp Druckbehaelter mit abgabepumpe.
US4778810A (en) 1987-01-08 1988-10-18 Nastech Pharmaceutical Co., Inc. Nasal delivery of caffeine
JP3257675B2 (ja) 1990-10-12 2002-02-18 マックス−プランク−ゲゼルシャフト ツール フェルデルング デル ビッセンシャフテン エー．ファウ． 修飾リボザイム
US5652094A (en) 1992-01-31 1997-07-29 University Of Montreal Nucleozymes
US5849902A (en) 1996-09-26 1998-12-15 Oligos Etc. Inc. Three component chimeric antisense oligonucleotides
US9408914B2 (en) * 2010-04-28 2016-08-09 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Cationic lipid
AU2012267467B8 (en) * 2011-06-08 2017-06-15 Nitto Denko Corporation Compounds for targeting drug delivery and enhancing siRNA activity
US20140308304A1 (en) * 2011-12-07 2014-10-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
CA2876148C (en) * 2012-06-08 2021-01-12 Nitto Denko Corporation Lipids for therapeutic agent delivery formulations
US9593077B2 (en) * 2013-11-18 2017-03-14 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery

Also Published As

Publication number Publication date
JP2017535610A (ja) 2017-11-30
KR102380363B1 (ko) 2022-03-29
PT3221293T (pt) 2023-03-16
IL252291B (en) 2021-08-31
DK3221293T3 (da) 2023-04-03
EP3221293B1 (en) 2023-03-01
WO2016081029A1 (en) 2016-05-26
HRP20230342T1 (hr) 2023-06-09
HUE062130T2 (hu) 2023-09-28
NZ732777A (en) 2023-06-30
CA2968060C (en) 2023-06-20
IL252291A0 (en) 2017-07-31
CA2968060A1 (en) 2016-05-26
AU2015350561B2 (en) 2020-01-30
SI3221293T1 (sl) 2023-05-31
HK1244479A1 (zh) 2018-08-10
EP3221293A1 (en) 2017-09-27
JP6637988B2 (ja) 2020-01-29
RS64078B1 (sr) 2023-04-28
KR20170095241A (ko) 2017-08-22
AU2015350561A1 (en) 2017-07-06
CN107207428A (zh) 2017-09-26
LT3221293T (lt) 2023-03-27
FI3221293T3 (fi) 2023-04-05
PL3221293T3 (pl) 2023-07-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2946110T3 (es) Lípido catiónico ionizable para la administración de ARN
JP7641308B2 (ja) Ｒｎａ送達のためのイオン化可能なカチオン性脂質
US9670152B2 (en) Ionizable cationic lipid for RNA delivery
US9580711B2 (en) Lipid particles with asymmetric cationic lipids for RNA delivery
US10233148B2 (en) Aromatic ionizable cationic lipid