ES2888999T3

ES2888999T3 - Uso de una composición bacteriana para tratar infecciones del pie en los ungulados

Info

Publication number: ES2888999T3
Application number: ES17816937T
Authority: ES
Inventors: Michel Layus; Alexandre Brame
Original assignee: Nolivade SARL
Current assignee: Nolivade SARL
Priority date: 2016-11-30
Filing date: 2017-11-30
Publication date: 2022-01-10
Anticipated expiration: 2037-11-30
Also published as: FR3059237B1; BR112019010792A2; MX2019006086A; US20200179465A1; PL3548052T3; FR3059237A1; BR112019010792A8; CN110248670B; CA3044013A1; CN110248670A; US11052121B2; DK3548052T3; WO2018100292A1; EP3548052B1; EP3548052A1

Abstract

Composición que comprende una mezcla bacteriana, para su uso en el contexto de la prevención y la mejora del estado de los ungulados afectados por patologías que implican una infección parasitaria o bacteriana del pie, comprendiendo dicha composición: - al menos una de las cuatro cepas de Bacillus subtilis siguientes: NOL01, NOL02, NOL03 y NOL04, estando dichas cepas depositadas respectivamente en la CNCM con el número CNCM I-4606, CNCM I-5043, CNCM I-4607, CNCM I - y CNCM I-4608, y - al menos una bacteria del ácido láctico elegida entre las siguientes bacterias del ácido láctico: Lactococcus lactis spp lactis 1 cepa NOL11 y Pediococcus pentosaceus 2 cepa NOL12, estando dichas cepas depositadas respectivamente en la CNCM con el número CNCM I-4609 y CNCM I-4610.

Description

DESCRIPCIÓN

Uso de una composición bacteriana para tratar infecciones del pie en los ungulados

La invención se refiere al uso de una composición para tratar las patologías animales.

En ganaderías bovinas, caprinas y ovinas modernas, las cojeras son frecuentes y suponen un tercio de las visitas del veterinario. Las enfermedades podales, responsables o no de la cojera, son cada vez más frecuentes en el contexto actual de la ganadería intensiva. Tienen diversas etiologías y su localización en el sistema musculoesquelético es variable. El ambiente sucio y abrasivo a nivel de los pies es un factor frecuentemente incriminado como favorecedor de la aparición de enfermedades cuya consecuencia es la cojera del animal. En efecto, los suelos húmedos, sucios, y los hormigones abrasivos, facilitan y sustentan las inflamaciones de la piel que son la causa de las cojeras observadas y de la fuerte recurrencia de las enfermedades.

Todos estos factores estresantes que contribuyen a inducir sufrimiento y cojera en los animales se denominan "estrés abiótico". Este estrés abiótico induce una abrasión del espacio interdigital o de los propios dedos en el origen de las reacciones inflamatorias que favorecen la entrada de las bacterias, o de otros parásitos, responsables de pododermatitis y cojeras. En particular, debilita la barrera cutánea y genera un espacio favorable para la instalación y el mantenimiento de las enfermedades podales.

Productos antibióticos, como la oxitetraciclina, así como productos desinfectantes para la aplicación en pediluvio, están disponibles en el mercado, pero los ritmos y los tiempos de administración no están estandarizados. No se indica si deben utilizarse en función del número de casos detectados y estos pediluvios no son siempre muy prácticos de establecer. Entre los productos de tratamiento, algunos son conocidos por su eficacia (formol, sulfato de cobre), pero puede que pronto se prohíba su uso, ya que representan un riesgo tóxico para los seres humanos o el medio ambiente. Además, también se critica y restringe el uso de los antibióticos por el riesgo de aparición de resistencia.

Asistimos, por tanto, a una limitación de los medios disponibles para controlar la enfermedad mientras que las medidas implantadas ya eran poco adecuadas para limitar la propagación de patologías, cuya consecuencia es la aparición de animales cojos.

Asimismo, existe la necesidad de proporcionar tratamientos eficaces para tratar a los animales y preservar su salud, respetando a la vez el medio ambiente.

Se han utilizado varios enfoques para intentar reducir la cojera de los ungulados. Por ejemplo, la solicitud francesa FR3026643A1 describe el uso de extractos de plantas aromáticas en combinación con minerales para tratar la enfermedad de Mortellaro en vacas. Los animales son tratados ingiriendo un complemento alimenticio que comprende dichos extractos, lo que tiene el efecto de estimular sus defensas inmunitarias. Otro ejemplo es la solicitud internacional WO1998047374 que describe el uso de probióticos para la prevención de infecciones bacterianas, fúngicas o víricas, siendo los probióticos cepas de Bacillus elegidas entre: Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, Bacillus laterosporus y Bacillus laevolacticus. Estos probióticos se utilizan para el tratamiento de la dermatitis y la dermatitis de contacto. Los probióticos en cuestión se aplican directamente sobre la piel o las membranas mucosas que se van a tratar. Sin embargo, no se ha demostrado ninguna demostración formal de la eficacia.

Asimismo, estos métodos no parecen ser los más eficaces y no muestran una solución más general a los problemas de cojera en los ungulados.

Asimismo, la invención tiene como objetivo paliar estos inconvenientes.

Uno de los objetivos de la invención es proponer un medio para mejorar la calidad de vida de los animales que padecen cojera.

Otro objetivo de la invención es proporcionar una composición que cumpla estas propiedades.

A continuación, se describe una composición que comprende una mezcla bacteriana, para su uso en el contexto de la prevención y la mejora del estado de los ungulados afectados por patologías que implican una infección parasitaria o bacteriana del pie, comprendiendo dicha composición:

- al menos una cepa de bacterias del género Bacillus, en particular al menos un Bacillus subtilis,

- y al menos una cepa de bacterias del ácido láctico, en particular al menos un Lactococcus lactis y/o al menos Pediococcus pentosaceus. [Página 2bis]

La invención se refiere a una composición que comprende una mezcla bacteriana, para su uso en el contexto de la prevención y la mejora del estado de los ungulados afectados por patologías que implican una infección parasitaria o bacteriana del pie, comprendiendo dicha composición:

- al menos una de las cuatro cepas de Bacillus subtilis siguientes: NOL01, NOL02, NOL03 y NOL04, estando dichas cepas depositadas respectivamente en la CNCM (Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos) con el número CNCM I-4606, CNCM I-5043, CNCM I-4607 y CNCM I-4608, y

- al menos una bacteria del ácido láctico elegida entre las siguientes bacterias del ácido láctico: Lactococcus lactis spp lactis 1 cepa NOL11 y Pediococcus pentosaceus 2 cepa NOL12, estando dichas cepas depositadas respectivamente en la CNCM con el número CNCM I-4609 y CNCM I-4610.

La invención se basa en el sorprendente hallazgo de los inventores de que la combinación de bacterias del género Bacillus y de bacterias del ácido láctico, mejora significativamente el estado de los ungulados que padecen cojera provocada por una infección parasitaria o bacteriana del pie.

En la invención, por patologías que implican una infección parasitaria o bacteriana del pie, se entiende que es una patología cuyos síntomas están relacionados con una bacteria, pero también con un virus, un parásito (tal como un ácaro o un artrópodo).

En la invención, así como en zootecnia, por "pie" se entiende que es la parte terminal de los cuatro miembros. Cada pie incluye dos dedos funcionales; el dedo III, externo o lateral, y el dedo IV, interno o medial, así como dos dedos accesorios, no funcionales, situados en la cara palmar del pie, frente a la segunda falange. Se denominan espolones y son los restos de los dedos II para el interno y V para el externo. En este caso, en el diagnóstico diferencial de las enfermedades del pie de los bovinos solo se tendrán en cuenta las estructuras anatómicas comprendidas entre la articulación metacarpofalángica y la extremidad de los miembros posteriores y anteriores. También se puede hablar de una región digital.

En la invención, se entiende por ungulados los animales que poseen uno o más cascos al final de sus miembros. El casco es entonces una formación córnea muy desarrollada, que envuelve el dedo o los dedos que se apoyan en el suelo al caminar. Los ungulados cubiertos por la presente invención son en particular ungulados domésticos y especialmente de ganadería tales como los porcinos, los bovinos, los caprinos, los ovinos. Los ungulados preferidos son los cerdos, las vacas y los terneros, las cabras y las ovejas, y en menor medida los caballos.

Las bacterias del género Bacillus utilizadas en la invención son bacterias grampositivas pertenecientes a la familia de las baciláceas (Bacillaceae), al orden de los bacillales (Bacillales), a la clase de los bacilos (Bacillis), al filo de los firmicutes (Firmicutes).

Las bacterias del ácido láctico de la invención son bacterias grampositivas.

Los inventores han demostrado que el uso de una combinación de al menos un Bacillus con al menos una bacteria del ácido láctico, tuvo el efecto de mejorar las condiciones de vida de los ungulados que presentaban cojera debido a una infección podal.

Las diferentes cepas de la invención, referenciadas por su número de depósito, se han depositado en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos, en el Institut Pasteur, de París (25,28 rue du Docteur Roux 75724 París CEDEX 15) según el tratado de Budapest:

- La cepa NOL01 se depositó con el número CNCM I-4606 el 14 de marzo de 2012,

- La cepa NOL02 se depositó con el número CNCM I-5043, el 21 de enero de 2016,

- La cepa NOL03 se depositó con el número CNCM I-4607 el 14 de marzo de 2012,

- La cepa NOL04 se depositó con el número CNCM I-4608 el 14 de marzo de 2012,

- La cepa NOL11 se depositó con el número CNCM I-4609 el 14 de marzo de 2012 y

- La cepa NOL12 se depositó con el número CNCM I-4610 el 14 de marzo de 2012.

La invención se refiere al uso de al menos una cepa elegida entre las cepas NOL01, NOL02, NOL03 y NOL04, y al menos una cepa elegida entre las cepas NOL11 y Nol12. Asimismo, la invención abarca las 45 combinaciones siguientes:

- NOL01 y NOL11,

- NOL01 y NOL 12,

- NOL01, NOL11 y NOL 12,

- NOL02 y NOL11,

- NOL02 y NOL 12,

- NOL02, NOL11 y NOL 12,

- NOL03 y NOL11,

- NOL03 y NOL 12,

- NOL03, NOL11 y NOL 12,

- NOL04 y NOL11,

- NOL04 y NOL 12,

- NOL04, NOL11 y NOL 12,

- NOL01, NOL02 y NOL11,

- NOL01, NOL02 y NOL12,

- NOL01, NOL02, NOL11 y NOL12,

- NOL01, NOL03 y NOL11,

- NOL01, NOL03 y NOL12,

- NOL01, NOL03, NOL11 y NOL12,

- NOL01, NOL04 y NOL11,

- NOL01, NOL04 y NOL12,

- NOL01, NOL04, NOL11 y NOL12,

- NOL02, NOL03 y NOL11,

- NOL02, NOL03 y NOL12,

- NOL02, NOL03, NOL11 y NOL12,

- NOL02, NOL04 y NOL11,

- NOL02, NOL04 y NOL12,

- NOL02, NOL04, NOL11 y NOL12,

- NOL03, NOL04 y NOL11,

- NOL03, NOL04 y NOL12,

- NOL03, NOL04, NOL11 y NOL12,

- NOL01, NOL02, NOL03 y NOL11,

- NOL01, NOL02, NOL03 y NOL12,

- NOL01, NOL02, NOL03, NOL11 y NOL12,

- NOL01, NOL02, NOL04 y NOL11,

- NOL01, NOL02, NOL04 y NOL12,

- NOL01, NOL02, NOL04, NOL11 y NOL12,

- NOL01, NOL03, NOL04 y NOL11,

- NOL01, NOL03, NOL04 y NOL12,

- NOL01, NOL03, NOL04, NOL11 y NOL12,

- NOL02, NOL03, NOL04 y NOL11,

- NOL02, NOL03, NOL04 y NOL12,

- NOL02, NOL03, NOL04, NOL11 y NOL12,

- NOL01, NOL02, NOL03, NOL04 y NOL11,

- NOL01, NOL02, NOL03, NOL04 y NOL12, y

- NOL01, NOL02, NOL03, NOL04, NOL11 y NOL12

De manera ventajosa, la invención se refiere a una composición para su uso como se define anteriormente, comprendiendo dicha composición de 105 a 1011 colonias bacterianas de Bacillus y de 105 a 1011 colonias bacterianas de bacterias del ácido láctico, siendo las colonias bacterianas por ml o g de composición.

En la invención, de 105 a 1011 colonias bacterianas significa: alrededor de 105, alrededor de 5.105, alrededor de 106, alrededor de 5.106, alrededor de 107, alrededor de 5.107, alrededor de 108, alrededor de 5.108, alrededor de 109, alrededor de 5.109, alrededor de 1010, alrededor de 5.1010 o alrededor de 1011 colonias bacterianas por ml de cultivo bacteriano.

El experto en la materia sabe cómo determinar fácilmente este número de bacterias, en particular, contando manualmente (usando un portaobjetos de Malassez) o usando un contador celular automático, o por dilución y posterior siembra en agar y recuento de las colonias.

De manera aún más ventajosa, la invención se refiere a una composición para su uso definido anteriormente, en donde dicha al menos una cepa de Bacillus está en forma esporulada y/o en forma vegetativa.

En particular, es particularmente ventajoso que las bacterias del género Bacillus, y en particular las cepas NOL01, NOL02, NOL03 y NOL04 definidas anteriormente, estén en forma esporulada y que las cepas de bacterias del ácido láctico estén en forma vegetativa.

De manera aún más ventajosa, la invención se refiere a una composición para su uso mencionado anteriormente, en la que dichas patologías que implican una infección parasitaria o bacteriana del pie de los ungulados, se eligen entre las enfermedades de Mortellaro o de Fourchet o incluso Tiloma, los panadizos o la laminitis, o incluso el pietín, la erosión del bulbo, la necrosis de la pinza y la pododermatitis.

La enfermedad de Mortellaro, o dermatitis digital, fue descrita por primera vez en Milán en 1974 por Cheli y Mortellaro. Salió a la luz en Francia en la década de 1980. Esta enfermedad parece ser cada vez más frecuente en las ganaderías francesas y plantea muchas preguntas sobre su gestión a largo plazo. Se considera que es la 3a infección podal en cuanto a frecuencia después de la erosión del talón (fourchet) y las hemorragias de la planta (Bleimes). La enfermedad de Mortellaro está provocada por Treponema y potencialmente por Fusobacterium necrophorum. Una vez introducida en una ganadería, rara vez se erradica y reaparece en forma de brotes sucesivos. La dermatitis digital es una afección contagiosa caracterizada por una inflamación superficial circunscrita de la piel de la corona, que conduce a la cojera.

Afecta particularmente a los bovinos. La enfermedad de Mortellaro se reconoce por un pie hinchado y una necrosis interdigital.

La enfermedad de Fourchet, también denominada El Fourchet, es una infección bacteriana. Es causada por una bacteria (provocada por Dichelobacternodosus y Fusobacterium necrophorum) a la que le agrada particularmente un ambiente cálido y húmedo. El Fourchet, o dermatitis interdigital, comienza con una inflamación húmeda y maloliente de la piel interdigital y se extiende a la estructura córnea del talón donde afecta a la producción de estrato córneo. La estructura córnea producida es de mala calidad y aparecen grietas a nivel del bulbo del talón. Estas grietas provocan una irritación de la pododermis que reacciona produciendo más estructura córnea. A partir de esta fase, la situación solo empeora.

El tiloma, o babosa, es una reacción inflamatoria proliferativa de la piel entre las pezuñas pero es común tener lesiones de Mortellaro en ellas. Por tanto, la patología es consecutiva a infecciones por Treponema y Fusobacterium necrophorum.

El panadizo o flemones interdigitales son inflamaciones agudas de los tejidos blandos caracterizadas por una pata hinchada y rosada. Estas enfermedades son causadas por bacterias, especialmente Arcanobacterium pyogenes y Fusobacterium necrophorum.

La laminitis o pododermatitis aséptica difusa es una lesión a nivel de la planta, lo que le da una coloración amarilla/roja que puede ir hasta azul, que puede convertirse en una úlcera.

El pietín es una enfermedad bacteriana transmitida por los pastos, los lechos, los caminos contaminados por animales infectados. Esta enfermedad se caracteriza por un enrojecimiento inicial del espacio interdigital y después los animales cojean y muestran lesiones supurantes de olor desagradable. A continuación, la estructura córnea comienza a descomponerse, algunas partes de la pezuña se necrosan y se separan del pie del animal.

La erosión del bulbo se define como la pérdida irregular de la estructura córnea del bulbo a nivel del talón, a menudo en forma de profundos surcos oblicuos. Esta infección bacteriana provoca una descomposición a nivel de los talones. La necrosis de la pinza es una lesión del extremo distal del pie de los bovinos responsable de cojeras a veces graves.

La pododermatitis es una infección bacteriana de la piel que suele localizarse a nivel de las uñas o los cascos de las patas. En los ungulados son recurrentes las siguientes patologías: pododermatitis aséptica (Pododermatitis aseptica acuta, Pododermatitis aseptica chronica), la pododermatitis purulenta (Pododermatitis purulenta), el chancro o pododermatitis crónica verrugosa (Pododermatitis chronica verrucosa), ciertas formas de gangrena (Pododermatitis gangraenosa), la pododermatitis necrotizante (Pododermatitis necrotica), la pododermatitis infecciosa (Pododermatitis infectiosa) y la pododermatitis hiperplásica crónica (Pododermatitis chronica hyperplastica).

Por lo tanto, la composición mencionada anteriormente se puede usar como se describió anteriormente para mejorar las condiciones de vida de los animales que padecen cojera causada por las enfermedades mencionadas anteriormente. En efecto, la mezcla bacteriana de la invención tendrá un efecto limitante de la progresión de las bacterias responsables de dichas patologías.

La mezcla bacteriana también tendrá un efecto preventivo, limitando la proliferación de bacterias patógenas y evitando así la cojera resultante.

Ventajosamente, la invención se refiere a una composición para su uso como se define anteriormente, estando dicha composición en forma líquida destinada a pulverizarse o a utilizarse en una cubeta.

La composición según la invención se presenta en particular en forma de polvo, pero también se puede ofrecer en forma líquida para que se aplique más fácilmente en el pie de los ungulados. Esta aplicación en forma líquida podrá realizarse mediante pulverización o nebulización directamente en pies ya infectados, o simplemente como profilaxis en pies sanos. También es posible aportar composiciones en forma líquida colocadas en pediluvios por donde pasarán los animales, que pondrá la composición de la invención en contacto con el pie de los ungulados.

De manera más ventajosa, la invención también se refiere a una composición para su uso mencionado anteriormente, en donde dicha composición se diluye en al menos 1 litro de líquido pero no más de 5 litros de líquido para 50 a 60 animales.

Es ventajoso, en el contexto de la invención, que la composición bacteriana antes mencionada se diluya en un volumen líquido de 1 a 5 litros para tratar de 50 a 60 animales por pulverización.

Por "al menos 1 litro de líquido pero no más de 5 litros" o "al menos 1 litro de líquido pero no más de 5 litros" se define en la invención que la composición se puede diluir en 1 l, 1,5 l, 2 l, 2,5 l, 3 l, 3,5 l, 4 l, 4,5 l o 5 l, cuando el número de animales a tratarse sea de 50 a 60 (es decir, de 100 a 120 pies traseros, que son los pies más afectados).

Los volúmenes de aproximadamente 1 l son particularmente ventajosos para una aplicación, en particular, por pulverización en el pie. Los volúmenes más grandes, y en particular 5 l, son más adecuados para los pediluvios. Sin embargo, se pueden utilizar volúmenes más grandes en pulverización o nebulización.

Para 100 animales, también es posible duplicar proporcionalmente los volúmenes antes mencionados, el experto en la materia sabrá cómo realizar las conversiones apropiadas.

La composición según la invención, cuando se diluye como se ha mencionado anteriormente, es particularmente así en un líquido que es o bien agua, o bien agua salina (suero fisiológico al 0,9 % en peso de sal con respecto al volumen total) o cualquier otro líquido fisiológicamente aceptable para una aplicación cutánea o en la estructura córnea de los cascos de los animales.

El líquido utilizado también puede contener aditivos fisiológicamente aceptables, y en particular tiosulfato cuando el líquido es agua. El tiosulfato permite neutralizar el cloro contenido en el agua corriente suministrada por las distintas compañías de agua. El líquido también puede contener sales y/o colorantes. Es importante que los aditivos no influyan en la vitalidad de las bacterias contenidas en la composición de la invención.

Ventajosamente, la invención se refiere a una composición para su uso mencionado anteriormente, en donde dicha composición se aplica en el pie de los ungulados desde 1 vez cada 3 días hasta 1 vez cada 15 días.

La posología adecuada para prevenir la cojera de los animales o mejorar sus condiciones de vida es una vez cada 3 días a una vez cada dos semanas.

Por "de 1 vez cada 3 días a 1 vez cada 15 días" se entiende en la invención una vez cada 3 días, una vez cada 4 días, una vez cada 5 días, una vez cada 6 días, una vez cada 7 días, una vez cada 8 días, una vez cada 9 días, una vez cada 10 días, una vez cada 11 días, una vez cada 12 días, una vez cada 13 días, una vez cada 14 días o una vez cada 15 días.

Es ventajoso tratar de forma permanente las ganaderías afectadas por las patologías mencionadas anteriormente. Sin embargo, el tratamiento se puede reducir según las estaciones y la actividad de los animales (en particular, si el animal está pastando).

La invención también se refiere a una composición como se ha definido anteriormente, en combinación con al menos un desinfectante, para su uso en el contexto del tratamiento de patologías que implican una infección parasitaria o bacteriana del pie de los ungulados, usándose dicho al menos un desinfectante al menos 48 h antes del uso de dicha composición.

En la invención, antes de usar las composiciones mencionadas anteriormente, es posible tratar los pies de los ungulados con desinfectantes. Es entonces obligatorio que el desinfectante se detenga al menos 48 h antes del uso de la composición según la invención, para no destruir las bacterias que contenga.

Los desinfectantes utilizados pueden ser los habitualmente utilizados por un experto en la materia, a saber, antibióticos (por ejemplo, oxitetraciclina para las vacas), formol, sulfato de Zn o de Cu o incluso cal. Pueden usarse otros desinfectantes conocidos por el experto en la materia.

La invención se comprenderá mejor a la luz de los cuatro ejemplos y las 11 figuras siguientes:

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 es un gráfico que muestra la evolución en la puntuación media del estado de las patas de las vacas de referencia en las distintas fechas de tratamiento con la composición según la invención.

La Figura 2 es un histograma que muestra la evolución en la puntuación media de cojera de las vacas mencionadas en las distintas fechas de tratamiento con la composición según la invención.

Las Figuras 3A y 3B son diagramas circulares que muestran la reparación de las 4 categorías de cojera en las vacas de referencia. Las diferentes categorías son las siguientes: en negro: categoría 0, en blanco: categoría 1, en gris categoría 2 y rayado: categoría 3.

La figura 3A muestra las proporciones al inicio del ensayo.

La figura 3B muestra las proporciones al final del ensayo.

La Figura 4 es un gráfico que muestra la evolución en la puntuación media del estado de las patas de las vacas de referencia en las distintas fechas de tratamiento con la composición según la invención.

La Figura 5 es un histograma que muestra la evolución en la puntuación media de cojera de las vacas mencionadas en las distintas fechas de tratamiento con la composición según la invención.

Las Figuras 6A y 6B son diagramas circulares que muestran la reparación de las 4 categorías de cojera en las vacas de referencia. Las diferentes categorías son las siguientes: en blanco: categoría 0, en gris: categoría 1, rayado: categoría 2 y negro: categoría 3.

La figura 6A muestra las proporciones al inicio del ensayo.

La figura 6B muestra las proporciones al final del ensayo.

La Figura 7 es un gráfico que muestra la evolución en la puntuación media del estado de las patas de las vacas de referencia en las distintas fechas de tratamiento con la composición según la invención.

La Figura 8 es un gráfico que muestra la evolución en la puntuación media del estado de las patas de las vacas del rebaño en las distintas fechas de tratamiento con la composición según la invención.

La Figura 9 es un gráfico que muestra la evolución en la puntuación media del estado de las patas de las vacas del rebaño en las distintas fechas de tratamiento con la composición según la invención.

La Figura 10 es un gráfico que muestra la evolución en la puntuación media del estado de las patas de las vacas del rebaño en las distintas fechas de tratamiento con la composición según la invención.

La Figura 11 es un gráfico que muestra la evolución de la puntuación media del estado de las patas de las vacas de referencia (curva con triángulos) y de las vacas del rebaño (curva con cuadrados) en las distintas fechas de tratamiento con la composición según la invención.

Las Figuras 12A a 12D representan gráficos que muestran las proporciones de patas sanas (gris claro) y de patas con problemas (gris oscuro) para cada una de las cuatro patas de las ovejas, cada mes después del comienzo del tratamiento.

La Figura 12A muestra los resultados de la pata delantera izquierda: columna 1: enero - saludables 80,1 %, problema: 19.9 %; columna 2: febrero - saludables 81,4 %, problema: 18,6 %; columna 3: marzo - saludables 93,1 %, problema: 6.9 %; columna 1: abril - saludables 92,9 %, problema: 7,1 %.

La Figura 12B muestra los resultados de la pata delantera derecha: columna 1: enero - saludables 80,1%, problema: 19.9 %; columna 2: febrero - saludables 81,4 %, problema: 18,6 %; columna 3: marzo - saludables 90,3 %, problema: 9.7 %; columna 1: abril - saludables 91,5 %, problema: 8,5 %.

La Figura 12C muestra los resultados de la pata trasera izquierda: columna 1: enero - saludables 82,6 %, problema: 17,4 %; columna 2: febrero - saludables 81,1 %, problema: 18,9 %; columna 3: marzo - saludables 91 %, problema: 9 %; columna 1: abril - saludables 88,5 %, problema: 11,5 %.

La figura 12D muestra los resultados de la pata trasera derecha: columna 1: enero - saludables 82,9 %, problema: 17,1 %; columna 2: febrero - saludables 81,1 %, problema: 18,9 %; columna 3: marzo - saludables 91,3 %, problema: 8.7 %; columna 1: abril - saludables 87,8 %, problema: 12,2 %.

Ejemplos:

Ejemplo 1: preparación de mezclas bacterianas

En el contexto de la invención, los inventores han preparado previamente frascos que contienen las siguientes preparaciones:

Preparación 1 = frasco de 20 ml

- mezcla de 4 Bacillus NOL01, NOL02, NOL03 y NOL04, en forma esporulada, a una concentración de 105 a 1011 colonias/ml, para cada cepa bacteriana. Las cuatro cepas se mezclan por igual, en proporciones respectivas 25:25:25:25.

- La mezcla se conservó a una temperatura que variaba de -21 °C a -80 °C.

Preparación 2 = frasco de 20 ml

- bacterias del ácido láctico NOL11 a una concentración de 105 a 1011 colonias/ml. Las bacterias se conservaron a una temperatura que variaba de -21 °C a -80 °C.

A continuación, los inventores prepararon la composición utilizada para el resto de los experimentos:

- mezcla: 1 frasco de preparación 1 1 frasco de preparación 2.

Ejemplo 2: Estudio del impacto de una aplicación de la composición según la invención en una ganadería bovina lechera afectada por Mortellaro

Este ensayo sigue al ensayo previo que había demostrado una disminución de los casos de Mortellaro en una ganadería tras una aplicación de la composición de la invención en las patas traseras de las vacas. El objetivo de este nuevo ensayo es:

- confirmar los resultados en 4 nuevas ganaderías para determinar el efecto de la composición de la invención sobre el problema de Mortellaro

- comparar el efecto de la composición con los tratamientos preventivos ya presentes en las ganaderías

- medir cuantitativamente la eficacia de este tratamiento

El ensayo se llevó a cabo en 5 ganaderías de vacas Holstein donde se pulverizó el producto sobre las patas traseras de los animales. El efecto de la composición de la invención se midió mediante un seguimiento sanitario del rebaño (enumeración y evolución de los casos de Mortellaro, tratamientos veterinarios).

I- Características de las ganaderías

Ganadería 1: Normandía (Calvados; Francia) interés

Ganadería 2: Normandía (Calvados; Francia)

Ganadería 3: Normandía (Seine Maritime; Francia)

Ganadería 4: Normandía (Calvados; Francia) interés

Ganadería 5: Normandía (Calvados; Francia)

II- Producto utilizado y material

A partir de dos frascos distintos de 20 ml, se preparó una dosis de la composición según la invención:

• El frasco 1 contenía los Bacillus NOL01, NOL02, NOL03 y NOL04,

• El frasco 2 contenía los Lactococcus NOL11, como los descritos en el ejemplo 1.

Los frascos contenían las bacterias vivas en su medio de cultivo. Se llevaron congelados a la ganadería y deben conservarse en el congelador una vez recibidos. El producto se descongeló y se diluyó en agua antes de la nebulización y después se pulverizó mediante nebulización. El agua utilizada durante la nebulización, no debe contener cloro, por tanto, puede ser necesario un tratamiento preliminar del agua con tiosulfato de sodio.

El ensayo duró 2 meses, realizándose un tratamiento una vez a la semana.

Los tratamientos de las patas realizados por los ganaderos con los compuestos antibióticos, o incompatibles con las bacterias de la composición según la invención, se interrumpieron al menos 3 días antes de la primera aplicación de la composición según la invención (fin de semana 00). La primera aplicación del producto se realizará en la primera semana (principios de febrero).

Se realizó un análisis del estado de salud del rebaño antes del inicio del ensayo con el ganadero. Este informe representa el punto de partida, referencia a partir de la cual se evalúan las evoluciones. El estado de salud del rebaño se estabilizó, en la mayoría de las ganaderías del ensayo, mediante un tratamiento antibiótico o de otro tipo, esto se detiene al comienzo del ensayo.

El ganadero proporciona información sobre el estado de salud del rebaño y el técnico realizará anotaciones cualitativas durante sus desplazamientos. Las aplicaciones del producto finalizarán en la 9a semana.

III- Tratamiento

Modo de empleo: para aplicar en forma líquida. Se requiere una dosis de producto (constituida por los frascos B y L) para cada tratamiento semanal.

El tratamiento se basa en una dosis diluida en 5 l de agua para tratar las patas traseras de las vacas. La cantidad de producto pulverizado es del orden de 25 ml (es decir, aproximadamente 3 segundos de pulverización) por pata, es decir, aproximadamente 5 l de producto para tratar las patas traseras de 100 vacas lecheras.

Procedimiento de preparación de la solución:

• Dejar descongelar el producto a temperatura ambiente entre 15 y 25 °C hasta su completa licuefacción (aprox. 1 h ± 15 minutos)

• Preparar 5 l de agua en el tanque del nebulizador y añadir 80 mg de tiosulfato de sodio o 10 ml si la solución es líquida (si el agua se trata con peróxido de hidrógeno, utilizar obligatoriamente agua mineral o agua sin tratar).

• Retirar la cápsula y retirar la tapa de los frascos

• Verter los dos frascos del producto en el agua tratada y añadir aproximadamente 10 ml de colorante E 133 (colorante azul brillante de calidad alimentaria).

• Mezclar para homogeneizar el producto y dejar reposar durante 15 minutos

• Pulverizar las patas traseras de las vacas del orden de 25 ml por pata

• Este tratamiento se repetirá todas las semanas del ensayo (9 tratamientos en total).

Para la ganadería 5, se prepara una solución de una dosis diluida en 5 l normalmente destinada a 100 vacas, pero solo se utiliza la mitad para la aplicación, el resto se desecha.

IV- Descripción de las mediciones y de los análisis

1- Mediciones comunes para todas las ganaderías

Calificación del estado de cada vaca de referencia:

El primer día del ensayo, unas diez vacas identificadas por el ganadero como muy afectadas o particularmente vulnerables al problema de Mortellaro, serán objeto de un seguimiento más estrecho. El ganadero dará una calificación indicativa del estado de cada vaca en una escala de 0 a 10: representando 0 una vaca sana y 10 una vaca gravemente afectada.

2- Calificación global del estado del rebaño:

El ganadero también dará una puntuación global del estado de su rebaño en una escala de 0 a 10 con: 0 para un rebaño completamente sano y 10 para el 100 % de los animales afectados.

3- Fotografías de las patas de las vacas, aplicación:

Se tomarán fotografías de las patas traseras de las vacas para dar una visión de las posibles observaciones en la ganadería y los signos clínicos de los casos de Mortellaro sin levantar las patas. También se tomarán fotografías de la preparación y de la aplicación.

4- Calificación de cojera de las vacas de referencia:

Se realiza una calificación de cojera en las vacas de referencia de acuerdo con la siguiente escala:

0: Buena movilidad: Marcha con una distribución uniforme del peso y el ritmo a cuatro patas con el lomo plano. La vaca puede dar zancadas largas y fluidas.

1: Movilidad imperfecta: Marcha no homogénea (en la distribución del peso o el ritmo) o reducida; afecta a una o más patas, difícilmente identificable.

2: Movilidad reducida: Marcha no homogénea sobre una pata fácilmente identificable y/o zancadas claramente reducidas (en general asociada a un lomo arqueado).

3: Movilidad gravemente reducida: no puede caminar a una velocidad tan rápida como la de una persona (no puede seguir el ritmo de un rebaño saludable) y muestra signos de la puntuación 2 anterior.

5- Medición específica para la ganadería 2

Calificación de la reacción de las vacas durante el lavado:

Se realizará una calificación de la reacción de las vacas durante el lavado de las patas. Las lesiones presentes durante una fase aguda de Mortellaro son muy sensibles, el chorro de agua durante el lavado de las patas afectadas, provoca a menudo una reacción de las vacas que levantan o mueven sus patas. Por lo tanto, esta reacción se anotará para cada una de las patas traseras mediante la siguiente calificación:

Sin reacción - Reacción débil - Reacción fuerte

6- Medición específica para la ganadería 5

Fotografías de las patas traseras de todas las vacas:

En esta ganadería, todo el rebaño pasará a una jaula de recorte (alquilada o con la intervención de un recortador) y se tomará una fotografía de cada pata trasera. Usando estas fotografías, se realizará una calificación de cada pata según la siguiente escala de calificaciones:

M0: sana. Vaca sana sin lesión de dermatitis digital

M1: fase inicial. Lesión bien circunscrita, aspecto de "piel de fresa", rosa o gris, inferior a 2 cm. Generalmente dolorosa.

M2: etapa aguda. Lesiones que hacen cojear a las vacas porque son hipersensibles y dolorosas. Úlceras de la piel localizadas en el borde de la estructura córnea del casco (1) o alrededor de las pezuñas (2). Evolución: inflamación crónica y proliferación de la piel en pequeños nódulos elevados (3) o en filamentos (pelos gigantes) (4). A menudo cubiertas de pus maloliente.

M3: fase de cicatrización. Aparece después de un tratamiento eficaz, la lesión se recubre con una costra negra y se vuelve insensible. La curación puede ser total (regreso a la fase M0) o parcial (fase M4)

M4: reservorio de la enfermedad. Lesión crónica inactiva, seca y poco sensible. Piel gruesa con proliferación de pelos gigantes

M4-1: Forma M1 activa en la lesión M4, a menudo sin bordes nítidos.

7- Anotaciones realizadas por el ganadero

Si el ganadero ya realiza anotaciones sobre problemas de cojera de forma regular, se recopilarán y utilizarán para evaluar el efecto del producto (por ejemplo, número de vacas cojas, tratamiento individual, reforma de la vaca para esta causa...).

También se anotan las sensaciones del ganadero sobre el efecto general del tratamiento y cualquier observación o comentario.

Del mismo modo, si el ganadero tiene un historial de frecuencias de Mortellaro/cojeras o tratamientos veterinarios, estos datos se utilizan para tener un punto de comparación con el período del ensayo.

V- Resultados

Ganadería 2

Resultado para la ganadería 2: calificación del estado de la pata

Se observa una mejora media de 2,7 puntos en las vacas con problemas, disminuyendo la cojera 16 vacas de las 18. Las otras 2 tienen un estado estabilizado

En la Figura 1 se muestra la evolución de la puntuación media durante el ensayo.

Resultados de la cojera: calificación de la cojera

continuación

Al final el ensayo, 11 de las 18 vacas disminuyeron de categoría la cojera y no se observó ningún empeoramiento en las vacas objeto de seguimiento. Los resultados se muestran en las Figuras 2 y 3A a 3B.

Los resultados de esta ganadería son muy favorables.

Antes del tratamiento con la composición según la invención, las vacas recibieron el siguiente tratamiento una vez por semana:

1. Lavado de las patas de las vacas en la sala de ordeño

2. Pediluvios de formol, sulfato de Cu y sulfato de Zn con cambio de pediluvio entre los 2 lotes

Durante el ensayo, los animales se trataron de la siguiente manera una vez a la semana:

1- Lavado de las patas de las vacas en la sala de ordeño (solo la 1a mitad del ensayo)

2- Aplicación de la composición según la invención en sala de ordeño con pulverizador.

El tratamiento según la invención permitió pasar de 7 a 8 tratamientos con oxitetraciclina por semana a 1 o tres durante el mismo período. Aunque el olor a infección de las vacas estaba muy presente antes del ensayo, este olor disminuyó considerablemente.

Según el ganadero, sin el lavado de las patas en la sala de ordeño, la aplicación de flora con el material utilizado es menos restrictiva que el sistema de pediluvio

En cuanto al recorte, todo el rebaño se sometió a un recorte 2 semanas antes de finalizar el ensayo sin informar a los recortadores del ensayo. Los recortadores concluyeron que este fue el primer año en el que no mencionaron ningún problema de dermatitis (contaminación del rebaño < al 5 %).

Ganadería 3

Resultado para la ganadería 3: calificación del estado de la pata

continuación

Se observa una mejora media de 2,9 puntos en las vacas con problemas. 11 de cada 14 vacas han mejorado el estado de sus patas excepto en las 2 últimas semanas. En efecto, las dos últimas semanas, un problema con el raspador provocó un deterioro en la limpieza de las áreas habitables, lo que probablemente aumentó la presión bacteriana circundante y repercutió en el estado de 2 vacas de referencia.

En la Figura 4 se representa la evolución de la puntuación media durante el ensayo.

Resultados de la cojera: calificación de la cojera

Al final el ensayo, 9 de cada 14 vacas tuvieron mejor movilidad, 3 no cambiaron y 2 se deterioraron. Sin embargo, se puntúa una mejora de una categoría en todas las vacas de referencia. Los resultados se muestran en las Figuras 5 y 6A a 6B.

Los resultados de esta ganadería también son muy favorables.

Antes del tratamiento con la composición según la invención, las vacas recibieron pediluvios de formol como tratamiento.

Durante el ensayo, los animales se trataron de la siguiente manera una vez a la semana en cornadiza aplicando la composición según la invención con un pulverizador.

Según el ganadero, antes del tratamiento, aparecían con regularidad muchos casos de cojera. Después del tratamiento, solo 2 a 3 vacas presentaron problemas y solo unas pocas no respondieron bien a la composición. El ganadero está convencido de la efectividad de la composición aunque se mostró escéptico antes del ensayo. Ganadería 5

Resultado para la ganadería 5: calificación del estado de la pata

Se observa una mejora media de 4,2 puntos en las vacas con problemas, mejorando 15 de las 16 vacas el estado de sus patas. Solo una vaca quedó en mal estado.

La evolución de la puntuación media durante el ensayo está representada por la Figura 7.

Los resultados de esta ganadería son de nuevo muy favorables.

Antes del tratamiento con la composición según la invención, las vacas recibieron una aplicación robótica de desinfectantes (4Hooves).

Durante el ensayo, los animales se trataron en cornadiza de la siguiente manera una vez a la semana aplicando la composición según la invención con un pulverizador.

Antes del tratamiento, las vacas significativamente afectadas se trataron individualmente con oxitetraciclina. Ninguno de estos tratamientos fue necesario después de la aplicación de la composición según la invención.

Según el ganadero, hay una buena mejora en el rebaño y hay que acompañar a muchas menos vacas a la sala de ordeño.

Ganadería 1: el ganadero quería interrumpir el ensayo, porque tuvo que dejar sus antiguas prácticas (desinfección diaria alternando cada semana entre peróxido y lejía) y vio un deterioro en el estado de su rebaño después de tan solo una semana.

Ganadería 3: el ensayo se interrumpió porque los inventores se dieron cuenta de que el ganadero había cambiado el agente secante de sus establos, pasando de un agente secante convencional a cal apagada aplicada por la mañana y por la noche. Como la cal apagada tiene propiedades desinfectantes, se ha planteado una incompatibilidad con la composición de la invención. El ganadero optó por interrumpir el ensayo en lugar de la cal.

Las Figuras 8 a 10 muestran la evolución global de los rebaños en las 3 ganaderías.

Estos resultados, tras una aplicación de la composición según la invención, no son visibles hasta aproximadamente 3 semanas después de la primera aplicación, tiempo necesario para la implantación de las bacterias contenidas en la composición según la invención.

La interrupción de un tratamiento regular anterior que estabilizaba el estado del rebaño puede conducir a un deterioro durante las 2 primeras semanas de tratamiento con la composición según la invención. En ese caso, puede ser necesario un tratamiento individual de cada vaca.

Ejemplo 3: Prueba de reducción de la frecuencia de aplicación

Los inventores querían probar si una disminución en la frecuencia de aplicación a 1 vez cada 2 semanas permitía mantener una situación estabilizada después de 2 meses de aplicación semanal.

Para llevar esto a cabo, el protocolo descrito en el ejemplo anterior se ha modificado ligeramente. Para la ganadería 2, a partir del 30/03/2016, el ganadero cambió a una aplicación cada 2 semanas con una dosis equivalente (2 dosis por 100 vacas utilizadas para las 190 vacas del rebaño).

Para la ganadería 5, a partir del 15/04/2016, el ganadero cambió a una aplicación cada 2 semanas con una dosis equivalente (1 dosis por 100 vacas para las 55 vacas del rebaño).

Ganadería 3:

El estado de las vacas de referencia sigue mejorando y después de reducir el tratamiento se estabiliza a un buen estado de las patas. Además, el estado general del rebaño se estabiliza a un buen estado de las patas.

A partir del mes de abril, las vacas salen a pastar.

El cambio de una aplicación semanal a una aplicación quincenal estabiliza la situación general del rebaño a un buen estado con respecto al problema de las patas. No se observó ninguna degradación.

Los resultados se ilustran en la Figura 11.

La siguiente tabla muestra los valores obtenidos:

Para la ganadería 1:

Tras una fase de transición que requirió tratamientos antibióticos seguidos de un protocolo de aplicación reforzado de la composición de la invención (patas instalación), el estado general del rebaño ha mejorado considerablemente. El ganadero, según sus declaraciones, encontró una situación que no conocía desde hacía año y medio. Intentó espaciar un poco las aplicaciones pasando a 10/12 días, pero observó que no se debía ir más allá de los 12 días, porque las patas comenzaban a "sonrosarse", signo de reaparición de los síntomas.

Para la ganadería 5:

Hay un marcado deterioro del estado de salud de la ganadería debido a un mal mantenimiento de la estabulación, como resultado de un error humano.

Se retomó la ganadería y se realizó una aplicación reforzada de las aplicaciones en las patas y el medio durante 1 mes con la composición según la invención, para restablecer el estado de salud del rebaño

El estado actual de la ganadería es mejor y el recorte del rebaño ha comenzado.

En un período en el que las vacas tienen acceso a los pastos, la presión de los agentes patógenos es menor (se frecuentan menos las zonas contaminadas), una aplicación cada 2 semanas o más no conlleva un deterioro del estado de las patas del rebaño.

Ejemplo 4: Estudio del impacto de una aplicación de la composición según la invención en una ganadería ovina

En este ejemplo, los inventores querían probar la eficacia de la composición según la invención para el tratamiento o la mejora de la cojera en ovejas, en el contexto del pietín.

El ensayo se llevó a cabo en una ganadería de 300 ovejas de la raza Lacaune en una ganadería en los Pirineos Atlánticos.

Las ovejas se trataron con la composición según la invención aplicando la flora 1 vez por semana durante 12 semanas utilizando una esterilla para pediluvio. Durante cada día de aplicación, las ovejas pasan 2 veces sobre la esterilla (1 vez por ordeño).

Las bacterias que constituyen la composición según la invención se utilizan a razón de una dosis que representa 40 ml de la composición como se describe en el Ejemplo 1, en 30 l de agua con colorante azul brillante E133 y tiosulfato, después, la solución se vierte en el pediluvio.

Resultados

Los resultados globales se presentan en la tabla siguiente:

Se puede observar que las proporciones son las siguientes:

continuación

Prueba de chi cuadrado entre las fechas de 2 en 2 sobre la distribución de ovejas por número de patas con problema:

Las distribuciones son significativamente diferentes entre las fechas, excepto entre marzo y abril

Casi todas las ovejas con problema en el primer día del ensayo mejoraron en su número de patas con problema. Sin embargo, es posible un deterioro en las primeras semanas después de la interrupción de un tratamiento anterior. Entre el inicio y el final del ensayo, de las 82 ovejas con problema presentes durante todo el ensayo, 79 disminuyeron de categoría. Las ovejas con problema al final del ensayo son ovejas nuevas

En las Figuras 12A a 12D se muestran los resultados de cada una de las patas.

Estos resultados muestran que el 96 % de las ovejas con problema al inicio del ensayo y presentes a lo largo del mismo, tenían al menos 1 pata menos con problema después del tratamiento.

Además, al final del ensayo, no hay ovejas con 2 o más patas con problema.

En su conjunto, estos resultados muestran la eficacia de la composición según la invención sobre el problema de la cojera.

La invención no se limita a las realizaciones presentadas y otras realizaciones resultarán evidentes para el experto en la materia.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Composición que comprende una mezcla bacteriana, para su uso en el contexto de la prevención y la mejora del estado de los ungulados afectados por patologías que implican una infección parasitaria o bacteriana del pie, comprendiendo dicha composición:

- al menos una de las cuatro cepas de Bacillus subtilis siguientes: NOL01, NOL02, NOL03 y NOL04, estando dichas cepas depositadas respectivamente en la CNCM con el número CNCM I-4606, CNc M I-5043, CNCM I-4607, CNCM I - y CNCM I-4608, y

2. Composición para su uso según la reivindicación 1, comprendiendo dicha composición de 105 a 108 *11 colonias bacterianas de Bacillus y de 105 a 1011 colonias bacterianas de bacterias del ácido láctico, siendo las colonias bacterianas por ml o g de composición.

3. Composición para su uso según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde dicha al menos una cepa de Bacillus está en forma esporulada y/o en forma vegetativa.

4. Composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que dichas patologías que implican una infección parasitaria o bacteriana del pie de los ungulados, se eligen entre las enfermedades de Mortellaro o de Fourchet o incluso Tiloma, los panadizos o la laminitis, o incluso el pietín, la erosión del bulbo, la necrosis de la pinza y la pododermatitis.

5. Composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, estando dicha composición en forma líquida destinada a pulverizarse o a utilizarse en una cubeta.

6. Composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde dicha composición se diluye en al menos 1 litro hasta como máximo 5 litros de líquido para 50 a 60 animales.

7. Composición para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde dicha composición se aplica en el pie de los ungulados desde 1 vez cada 3 días hasta 1 vez cada 15 días.

8. Composición tal como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en combinación con al menos un desinfectante, para su uso en el contexto del tratamiento de patologías que implican una infección parasitaria o bacteriana del pie de los ungulados,

usándose dicho al menos un desinfectante al menos 48 h antes del uso de dicha composición.