ES2879679T3 - Alcaloides de la vinca ultrapotentes: la complejidad molecular añadida altera adicionalmente la superficie de contacto dímero dímero de la tubulina - Google Patents

Abstract

Derivado de 20'-hidroxi-vinca de fórmula estructural A o sal aceptable farmacéuticamente del mismo, **(Ver fórmula)** Vinblastina**(Ver fórmula)** Vincristina**(Ver fórmula)** Vindesina**(Ver fórmula)** en la que R es un sustituyente de fórmula **(Ver fórmula)** en la que N es nitrógeno y uno de W, X, Y y Z también puede ser nitrógeno (N), y cuando no son nitrógeno, W, X, Y y Z son CH o uno de W, X, Y, Z es CR4, y R4 es hidrido o un sustituyente electrodonador, y Rb es F o H.

Description

DESCRIPCIÓN

Alcaloides de la vinca ultrapotentes: la complejidad molecular añadida altera adicionalmente la superficie de contacto dímero-dímero de la tubulina

REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUD RELACIONADA

Esta solicitud reivindica prioridad a la Patente US62/343,490, presentada el 31 de mayo de 2016.

DECLARACIÓN SOBRE INVESTIGACIÓN O DESARROLLO CON PATROCINIO FEDERAL

La presente invención se realizó con apoyo gubernamental bajo CA115526 y CA042056 concedidos por los Institutos Nacionales de Salud. El gobierno tiene determinados derechos en la presente invención.

SECTOR TÉCNICO

La presente invención contempla agentes antineoplásicos de la vinca y su utilización. Más particularmente, la presente invención se refiere a derivados de compuestos derivados de 20’-hidroxi-vinca que muestran una potencia aumentada en, aproximadamente, 100 veces en comparación con la vinblastina, en la inhibición del ensamblaje de la microtubulina y la inhibición in vitro de la proliferación de células cancerosas.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR

Los alcaloides de la vinca, aislados originalmente a partir de la planta vincapervinca de Madagascar [Vinca rosea Linn., ahora Cantharanthus roseus (L.) G. Don], son una familia de compuestos diméricos de indol-indolina que contienen un sistema de cuatro anillos que contiene un indol unido a un sistema de cinco anillos que contiene una indolina. Dos de esos alcaloides naturales, la vinblastina y la vincristina, son agentes clínicos importantes en el tratamiento de leucemias, linfomas y cáncer de testículo. El alcaloide de la vinca semisintético, la vindesina (desacetilvinblastina carboxamida) se utiliza para tratar el cáncer de pulmón y la leucemia aguda, y con menor frecuencia para el melanoma y el cáncer de mama. [Goodman & Gilman’s The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Hardman et al. Eds., 9th ed., McGraw-Hill, 1257-1260, 1996].

Estos tres alcaloides de la vinca incluyen, cada uno, un grupo hidroxilo en 20’ a través del cual cada uno de ellos se puede alterar químicamente para introducir un nuevo grupo sustituyente. Los compuestos contemplados en el presente documento se pueden ver como derivados de estos alcaloides de 20’-hidroxi-vinca y se denominan colectivamente en el presente documento compuestos derivados de 20’-hidroxi-vinca por comodidad. Las fórmulas estructurales para estos tres compuestos se ilustran a continuación.

O

Vindesina -CH3 11 -OH

— ^c - ^nh2

La vinblastina y la vincristina son excelentes fármacos clínicos utilizados satisfactoriamente solos y en terapias de combinación para el tratamiento del cáncer con valores de CI50 para varias vinblastinas sustituidas en 20’ mostradas a continuación. [Para una revisión completa de las aplicaciones en química, química médica, biología y clínicas,

véanse: (a) Kuehne et al., In The Alkaloids; Brossi, A., Suffness, M., Eds.; Academic: San Diego, 1990, 37, 77-131; (b) Borman et al., In The Alkaloids; Brossi, A., Suffness, M., Eds.; Academic: San Diego, 1990, 37, 133-144; (c) Pearce, In The Alkaloids; Brossi, A., Suffness, M., Eds.; Academic: San Diego, 1990, 37, 145-204; (d) Neuss et al., In The Alkaloids; Brossi, A., Suffness, M., Eds.; Academic: San Diego, 1990, 37, 229-240. La vinblastina se utiliza en terapias de primera línea para el tratamiento de enfermedad de Hodgkin, cáncer de testículo, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello y linfoma no Hodgkin, mientras que la vincristina se utiliza en regímenes de tratamiento curativo para leucemia linfocítica infantil y enfermedad de Hodgkin. Aisladas originalmente de las hojas de Catharanthus roseus (L) G. Don (vincapervinca de Madagascar), [(a) Nobel et al., Ann. N.Y. Acad. Sci.

1958, 76, 882; (b) Noble Lloydia 1964, 27, 280; (c) Revisión: Nobel Biochem. Cell Biol. 1990, 68, 1344; y Svoboda et al., J. Am. Pharm. Assoc., Sci. Ed. 1959, 48, 659], la vinblastina y la vincristina se encontraban entre las primeras moléculas pequeñas que mostraban unión a la tubulina e inhibición de la formación y mitosis de microtúbulos, definiendo una diana farmacológica oncológica fundamental para uno de los mecanismos de acción más exitosos que todavía se utiliza en la actualidad. [Revisiones: (a) Timasheff et al., Cellular Pharmacol. 1993, 1, S27; (b) Jordan et al., Nat. Rev. Cancer 2004, 4, 253]. La vindesina también actúa de manera similar en la inhibición del ensamblaje de los microtúbulos y la inhibición de la proliferación celular en cultivo. [Jordan et al., Cancer Res 1985, 45, 2741]. Como resultado, se continúan estudiando extensamente debido al interés en sus estructuras alcaloides diméricas complejas, su papel en el descubrimiento de la tubulina como una diana farmacológica oncológica eficaz y su importancia clínica. [Revisiones: (a) Potier, Nat. Prod. 1980, 43, 72; (b) Kutney, Nat. Prod. Rep. 1990, 7, 85; (c) Fahy, Curr. Pharm. Design 2001, 7, 1181; y (d) Sears et al., Acc. Chem. Res. 2015, 48, 653].

En el desarrollo de una síntesis total de vinblastina y vincristina, el inventor y sus colaboradores introdujeron una oxidación por radicales libres mediada por Fe(III)/NaBH4 del alqueno trisustituido de la anhidrovinblastina para la penúltima instalación del alcohol terciario en C20’ hallado en los productos naturales. [(a) Ishikawa et al., J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 420; (b) Ishikawa et al., J. Am. Chem. Soc. 2009, 131, 4904; y (c) Gotoh et al., J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 13240]. Esta reacción por radicales libres iniciada por transferencia de átomos de hidrógeno (HAT, hydrogen atom transfer), ahora potente, se desarrolló posteriormente para proporcionar un procedimiento general para la funcionalización de alquenos mediante la utilización de una gama más amplia de trampas de radicales libres [a) Leggans et al., Org. Lett. 2012, 14, 1428; y (b) Barker et al., J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 13588] más allá de O2 (aire) y se exploró específicamente con el propósito de proporcionar la preparación divergente de etapa tardía [(a) Boger et al., J. Org. Chem. 1984, 49, 4050; y (b) Mullican et al., J. Org. Chem. 1984, 49, 4033] de análogos de vinblastina que portan funcionalidad en C20’ alternativa en un sitio inaccesible previamente para la exploración sistemática (esquema 1). [(a) Leggans et al., Org. Lett. 2012, 14, 1428; y (b) Barker et al., J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 13588].

Además de las trampas de radicales libres alternativas que se introdujeron, se definió el amplio alcance del sustrato de alqueno, se estableció la exclusiva regioselectividad de la adición de Markovnikov, se reveló la sorprendente tolerancia a los grupos funcionales, se examinaron y utilizaron una gama de sales de Fe(III) y fuentes de hidruro de iniciación, se refinó su mecanismo de reacción por radicales libres único y se introdujeron condiciones de reacción notablemente suaves (0-25 °C, 5-30 minutos, H^O/cosolvente) que son relativamente insensibles a los parámetros de reacción.

Aunque se sabía que el sitio C20’ de la vinblastina y su sustituyente hidroxilo eran importantes, la previa exploración de los efectos del sustituyente en C20’ se había limitado a unas cuantas de reacciones de acilación de alcoholes, la retirada del grupo hidroxilo en C20’ y un conjunto especializado de funcionalizaciones mediadas por superácidos.

[Borman et al., In The Alkaloids; Brossi, A., Suffness, M., Eds.; Academic: San Diego, 1990, 37, 133-144]. Estudios adicionales permitieron cambios sistemáticos en C20’, donde inicialmente se demostró que, aunque la incorporación de una azida en C20’ (5) o su amina reducida (6) proporcionaba compuestos 100 veces menos potentes que la vinblastina, la conversión de la amina (6) en una urea en C20’ (7) proporcionó un compuesto con una actividad de inhibición del crecimiento celular igual a la de la vinblastina (tabla, anteriormente). [(a) Leggans et al., Org. Lett.

2012, 14, 1428; y (b) Barker et al., J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 13588].

Como resultado, en estudios posteriores se identificaron características estructurales clave de estas ureas que contribuyen a su actividad, que incluyen la importancia del sitio donador de enlaces de H en el sustituyente del nitrógeno en C20’. [Leggans et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 628]. Además, se definió una tendencia en la actividad en la que la sustitución del nitrógeno terminal de la urea mejora el diferencial en la actividad de los derivados contra líneas de células tumorales resistentes y sensibles compatibles (NR2 > NHR > NH2), se descubrió una serie de potentes ureas disustituidas en C20’ (por ejemplo, 8 y 9) que presentaban actividad mejorada adicionalmente contra líneas de células tumorales resistentes y se estableció que las ureas en C20’ exigentes estéricamente se toleraban sorprendentemente bien. [Leggans et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 628; y Barker et al., ACS Med. Chem. Lett. 2013, 4, 985].

La diana de la vinblastina es la superficie de contacto dímero-dímero a/p de la tubulina, en la que su unión desestabiliza el ensamblaje de la microtubulina derivado de la unión a tubulina de cabeza a cola repetitiva.

[Revisiones: (a) Timasheff et al., Cellular Pharmacol. 1993, 1, S27; (b) Jordan et al., Nat. Rev. Cancer 2004, 4, 253; y Gigant et al., Nature 2005, 435, 519]. Con frecuencia, esta alteración de una interacción proteína-proteína por la vinblastina se pasa por alto en análisis o revisiones de estas dianas como dianas biológicas candidatas, pero que suponen un reto, para abordar con moléculas pequeñas, quizás porque la identificación de la diana precedió al interés actual. [(a) Arkin et al., Nat. Rev. Drug Discovery 2004, 3, 301; (b) Wells et al., Nature 2007, 450, 1001; (c) Yin, et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44, 4130; d) Meireles et al., Med. Chem. 2011, 11, 248; e) Boger et al., Chem. Int. Ed. 2003, 42, 4138].

En la divulgación que sigue, se notifica el descubrimiento de compuestos modificados en C20’ que ahora son sorprendentemente 100 veces más potentes que la vinblastina y que inicialmente pueden parecer inusuales en su estructura. Se muestra que este aumento de potencia se correlaciona directamente con una afinidad de unión a la tubulina diana potenciada. Significativamente, la notable potencia de los nuevos compuestos (CI50 tan bajas como de 50-75 pM) sugiere que no es probable, ni siquiera posible, que su actividad funcional celular se derive de la ocupación estequiométrica del número relativamente grande de sitios de unión a la tubulina intracelulares, sino que más bien implica una ocupación catalítica o por debajo de la estequiométrica eficaz de sitios de unión candidatos suficiente para alterar la dinámica y el ensamblaje de la tubulina durante la mitosis.

Se sugiere que los sustituyentes de urea en C20’ lineales y rígidos añadidos recientemente en la vinblastina se extienden y crean un canal estrecho adyacente al sitio de unión a la vinblastina, se unen a través de esta zona adyacente de la interacción proteína-proteína definida por la superficie de contacto dímero-dímero de la tubulina, alteran adicionalmente la interacción dímero-dímero de cabeza a cola a/p de la tubulina y se extienden a través de la superficie de contacto proteína-proteína completa que está en contacto con el solvente en el lado distal del sitio de unión. Esta alteración adicional de la interacción proteína-proteína diana por un elemento estructural añadido a un producto natural ya complejo (complejidad molecular añadida) representa un enfoque único y racional para mejorar sustancialmente las propiedades funcionales de estas moléculas y, probablemente, representa un enfoque general para mejorar las propiedades de otros productos naturales que seleccionan como diana interacciones proteína-proteína.

CARACTERÍSTICAS DE LA INVENCIÓN

La presente invención contempla un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca (también denominado a veces en el presente documento 20’-urea), tal como vinblastina, vincristina o vindesina, que está sustituido en la posición 20’ con un grupo urea cuyo átomo de nitrógeno proximal, que está directamente unido al átomo de carbono de la posición 20’, es secundario y cuyo nitrógeno distal es un átomo de anillo de una isoindolina. Estos nitrógenos proximal y distal se ilustran a continuación en la estructura parcial de un compuesto contemplado que muestra los átomos cerca de la posición 20’ y un derivado de urea unido al átomo de carbono en 20’ a través del nitrógeno de urea proximal, con el nitrógeno de urea distal como parte de una estructura de anillo de isoindolina.

Una observación general realizada en estudios de las síntesis totales de vinblastina y productos naturales relacionados es que, aunque la retirada de sustituyentes individuales o características estructurales clave de la vinblastina tiene como resultado normalmente reducciones en la actividad biológica, la adición de características estructurales puede mejorar sustancialmente las propiedades biológicas. [(a) Leggans et al., Org. Lett. 2012, 14, 1428; (b) Barker et al., J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 13588; y Gotoh et al., ACS Med. Chem. Lett. 2011, 2, 948]. Esto incluye no solo la demostración del impacto de la adición de un sustituyente clave en C10’ del indol (10’-fluorovinblasina) [Gotoh et al., ACS Med. Chem. Lett. 2011, 2, 948], sino también el descubrimiento del notable impacto de sustituciones seleccionadas del alcohol en C20’ (C20’-ureas) [(a) Leggans et al., Org. Lett. 2012, 14, 1428; y (b) Barker et al., J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 13588].

En el presente documento, se notifica que el descubrimiento de compuestos en esta última serie muestra una sorprendente potencia 100 veces mayor que la de la vinblastina. Estos compuestos mostraron CI50 de 50-75 pM contra las líneas de células tumorales sensibles a la vinblastina (por ejemplo, HCT116), que representan aumentos de 100 veces en relación con la vinblastina, e incluso una actividad subnanomolar contra una línea de células tumorales resistente (HCT116/VM46, CI50 = 830-880 pM) insensible a la vinblastina en virtud de la sobreexpresión de Pgp observada clínicamente, que representa aumentos de 700 veces en relación con la vinblastina.

En un aspecto, la presente invención contempla un derivado de 20’-hidroxi-vinca de fórmula estructural A,

en la que R es un sustituyente de fórmula

En la fórmula estructural de anillo de 6 miembros inmediatamente anterior, N es nitrógeno y uno de W, X, Y y Z también puede ser nitrógeno (N). Cuando no son nitrógeno, W, X, Y y Z son CH o uno de W, X, Y, Z es CR4, y R4 es hidrido (H) o un sustituyente electrodonador. Rb en la primera fórmula estructural es F o H.

Es preferente que uno de W, X, Y y Z sea nitrógeno. Por tanto, un grupo R aromático de 6 miembros preferente contiene dos átomos de nitrógeno de anillo. Los grupos R ilustrativos tienen una o varias de las fórmulas estructurales mostradas a continuación

Un grupo sustituyente electrodonador R4 preferente se selecciona entre el grupo que consiste en un grupo hidrocarbilo C1-C4, amino, mono-hidrocarbil Cr C4-amino, di-hidrocarbil Cr C4-amino e hidrocarbil Ci-C4-oxilo. Un grupo amino es un grupo sustituyente R4 preferente. En la presente invención también es preferente que Rb sea H (hidrido) y que el derivado de 20’-hidroxi-vinca sea un derivado de vinblastina.

Un derivado de vinblastina preferente particularmente (también denominado a veces en el presente documento urea de vinblastina sustituida en C20’) corresponde en estructura a la fórmula estructural B

en la que R es un sustituyente ilustrado por una o varias de las cinco fórmulas estructurales genéricas anteriores, o más específicamente que tiene una o varias de las fórmulas estructurales específicas mostradas a continuación

Otro aspecto contemplado de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende una cantidad que inhibe la proliferación de células cancerosas de un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca de fórmula estructural A, tal como un compuesto de fórmula estructural B, o una sal aceptable farmacéuticamente de un compuesto de cualquier fórmula disuelto o dispersado en un portador aceptable fisiológicamente.

Un procedimiento para inhibir el crecimiento de células cancerosas es otro aspecto de la invención contemplada. Según este aspecto, se ponen en contacto células cancerosas, tales como células de leucemia o de carcinoma, con una cantidad que inhibe la proliferación de células cancerosas de un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca de fórmula estructural A, tal como un compuesto de fórmula estructural B, o una sal aceptable farmacéuticamente de un compuesto de cualquier fórmula. Esa puesta en contacto se lleva a cabo normalmente una pluralidad de veces. Esa puesta en contacto puede llevarse a cabo in vivo o in vitro.

DEFINICIONES

En el contexto de la presente invención y las reivindicaciones asociadas, los siguientes términos tienen los siguientes significados:

Los artículos “un” y “una” se utilizan en el presente documento para referirse a uno o a más de uno (es decir, a, como mínimo, uno) del objeto gramatical del artículo. A modo de ejemplo, “un elemento” significa un elemento o más de un elemento.

La palabra “hidrocarbilo” se utiliza en el presente documento como un término abreviado para un grupo no aromático que incluye grupos o radicales alifáticos de cadena lineal y ramificada así como alicíclicos que contienen únicamente carbono e hidrógeno. Por tanto, se contemplan los grupos alquilo, alquenilo y alquinilo, mientras que los hidrocarburos aromáticos, tales como los grupos fenilo y naftilo, que estrictamente hablando también son grupos hidrocarbilo, se denominan en el presente documento grupos o radicales arilo, tal como se comenta a continuación en el presente documento.

Cuando se prevé un grupo sustituyente hidrocarbilo alifático específico, se enumera ese grupo; es decir, alquilo C1-C4, metilo o hexenilo. Los grupos hidrocarbilo a modo de ejemplo contienen una cadena de 1 a, aproximadamente, 6 átomos de carbono y, preferentemente, de 1 a, aproximadamente, 4 átomos de carbono.

Un grupo hidrocarbilo preferente particularmente es un grupo alquilo. Como consecuencia, se puede enumerar un sustituyente generalizado, pero más preferente, sustituyendo el descriptor “hidrocarbil” por “alquil” en cualquiera de los grupos sustituyentes enumerados en el presente documento.

Los ejemplos de radicales alquilo incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, iso-amilo, hexilo y similares. Los ejemplos de radicales alquenilo adecuados incluyen etenilo (vinilo), 2-propenilo, 3-propenilo, 1,4-pentadienilo, 1,4-butadienilo, 1 -butenilo, 2-butenilo, 3-butenilo, hexenilo, hexadienilo y similares. Los ejemplos de radicales alquinilo incluyen etinilo, 2-propinilo, 3-propinilo, 1 -butinilo, 2-butinilo, 3-butinilo y similares.

Se sigue la nomenclatura química de sufijos habitual cuando se utiliza la palabra “hidrocarbilo”, excepto que no siempre se sigue la práctica habitual de eliminar el terminal “ilo” y añadir un sufijo apropiado debido a la posible similitud del nombre resultante para uno o varios sustituyentes. Por tanto, un hidrocarbil éter se denomina grupo “hidrocarbil-oxilo” en lugar de grupo “hidrocarboxilo”, ya que posiblemente puede ser más apropiado cuando se siguen las reglas habituales de nomenclatura química. Los grupos hidrocarbil-oxilo ilustrativos incluyen los grupos metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, isopropoxilo, aliloxilo, n-butoxilo, iso-butoxilo, sec-butoxilo, terc-butoxilo, ciclohexeniloxilo y similares.

Un experto entenderá que un sustituyente que no puede existir, tal como un grupo alquenilo C1 , no pretende estar englobado por la palabra “hidrocarbilo”, aunque se prevén estos sustituyentes con dos o más átomos de carbono.

El término “ciclohidrocarbilo” o “carbocíclico”, solo o en combinación, significa un radical hidrocarbilo que contiene de 3 a, aproximadamente, 8 átomos de carbono, preferentemente, de, aproximadamente, 3 a, aproximadamente, 6 átomos de carbono, y es cíclico. Los ejemplos de estos radicales ciclohidrocarbilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentenilo, ciclohexilo, cicloheptinilo y similares.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Los enfoques para mejorar las propiedades de productos naturales implican normalmente esfuerzos para simplificar o editar sus estructuras a través de modificaciones semisintéticas, síntesis total desviada [Wilson et al., J. Org. Chem. 2006, 71, 8329] o funcionalización en etapa tardía [Revisiones: (a) Szpilman et al., Angew. Chem. Int. Ed.

2010, 49, 9592; y (b) Hong, J. Chem. Eur. J. 2014, 20, 10204]. A menudo, estos esfuerzos tratan de identificar el farmacóforo incrustado, retirar o introducir grupos funcionales clave para potenciar la afinidad de unión a la diana, mejorar las propiedades fisicoquímicas, incorporar modificaciones estabilizantes o introducir restricciones conformacionales. Rara vez, si la hay, se considera la adición de complejidad molecular a la estructura central, tal como se ha realizado en el presente documento.

En parte, la reticencia se puede atribuir al reto añadido percibido que puede acompañar a la síntesis de compuestos más elaborados. Los derivados ultrapotentes sintéticamente derivados se ejemplifican por las vinblastinas sustituidas en 20’ que se describen a continuación en el presente documento. Estos derivados de 20’-hidroxi-vinca ultrapotentes son, aproximadamente, 100 veces más activos que el producto natural, representan análogos de 20’-hidroxi-vinca que normalmente son accesibles mediante síntesis química en tres etapas a partir de materiales disponibles en el mercado y relativamente baratos (catarantina, $16/g; y vindolina, $36/g) basándose en la metodología introducida por el inventor y sus colaboradores y, en la actualidad, son inaccesibles mediante derivatización clásica de productos naturales, funcionalización en etapa tardía o procedimientos de biosíntesis.

Probablemente, los compuestos derivados de 20’-hidroxi-vinca ultrapotentes recién descubiertos descritos en el presente documento, que también presentan afinidades de unión a la tubulina mucho mayores, alteran además la interacción dímero-dímero a/p de cabeza a cola de la tubulina diana en virtud de la colocación estratégica de la urea en C20’ rígida y extendida añadida a lo largo de la superficie de contacto proteína-proteína continua adyacente. En casos en los que las propiedades terapéuticas de un producto natural están relacionadas directamente con su aparición en la naturaleza y se ha experimentado una optimización evolutiva mediante selección natural como puede ser el caso de la vinblastina, no se puede someter fácilmente a optimización mediante simplificaciones estructurales. En estos casos, la complejidad molecular añadida se puede utilizar para potenciar la unión a la diana y la actividad biológica funcional, y enfoques tales como el ilustrado en el presente documento que seleccionan como diana una interacción proteína-proteína pueden representar un enfoque atractivo y general para conseguir estos objetivos.

Por tanto, en un aspecto, la presente invención contempla un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca de fórmula estructural A,

en la que R es un sustituyente de fórmula

En la fórmula estructural de la estructura de anillo aromático de 6 miembros del sustituyente R inmediatamente anterior, N es nitrógeno y uno de W, X, Y y Z también puede ser nitrógeno (N). Cuando no son nitrógeno, W, X, Y y Z son CH o uno de W, X, Y, Z es CR4, en la que R4 es hidrido o un sustituyente electrodonador. R en la primera fórmula estructural es F o H. Es preferente que uno de W, X, Y y Z sea nitrógeno de modo que haya dos nitrógenos de anillo en un sustituyente R de anillo de 6 miembros preferente.

Si hay dos nitrógenos de anillo en el sustituyente R de anillo de 6 miembros o únicamente un solo nitrógeno de anillo, el otro de W, X, Y, Z es CR4, cuando R4 es hidrido (H) o un sustituyente electrodonador. Los grupos sustituyentes electrodonadores R4 ilustrativos se seleccionan entre el grupo que consiste en uno o varios de un grupo hidrocarbilo C1-C4, amino, mono-hidrocarbil C rC 4-amino, di-hidrocarbil Cr C4-amino e hidrocarbil Cr C4-oxilo.

Un grupo sustituyente electrodonador tiene normalmente un valor de sigma de Hammett que es inferior a cero, el valor arbitrario establecido para el hidrógeno, y, por tanto, es un número negativo. Los valores de sigma de Hammett se conocen bien en química orgánica, y esos valores para los sustituyentes en la posición para reflejan donación o retirada de electrones mediante un efecto inductivo, pero también se entiende que reflejan un efecto de resonancia.

Cabe señalar que un valor de sigma de posición para se utiliza en el presente documento para definir un grupo sustituyente electrodonador independientemente de la posición real del sustituyente en el anillo aromático. Para valores de sigma de Hammett, véanse, por ejemplo, las Patentes US7,473,477, US5,811,521, US4,746,651 y US4,548,905. Se puede encontrar una lista de valores de sigma de Hammett en J. Hine, Physical Organic Chemistry, 2nd ed., McGraw-Hill Book Co., Inc., New York page 87 (1962) y en la página web: wiredchemist.com/chemistry/data/hammett_sigma_constants.

Al examinar el uno o los dos grupos sustituyentes que contienen nitrógeno de anillo, R, de forma más minuciosa, cabe señalar que, en primer lugar, un nitrógeno está en la posición 2 del anillo aromático de 6 miembros. Un segundo nitrógeno, cuando está presente, puede estar en cualquier otra posición en el anillo, excepto en la posición 1. El anillo del grupo R está unido en su posición 1 al grupo carbonilo de la función amido que une el sustituyente R a la isoindolina. El átomo de nitrógeno del grupo isoindolina es el nitrógeno distal del grupo urea unido en la posición 20’ del compuesto de la vinca. Un sustituyente del grupo R contemplado tiene una fórmula estructural de una o varios de las mostradas a continuación

A continuación se muestran las fórmulas estructurales para los grupos R preferentes particularmente.

Tal como se observa a partir de las fórmulas estructurales anteriores, el amino (-NH2) es un sustituyente R4 preferente particularmente. El valor de sigma de Hammett para un grupo amino en la posición para según el texto de Hine, anteriormente, es de -0.66.

Un compuesto contemplado de fórmula estructural A anterior puede tener un átomo de flúor (F) en la posición 10’ o un grupo hidrido en esa posición (Rb). La preparación de compuestos derivados de 20’-hidroxi-vinca sustituidos con F en 10’ se da a conocer en la Patente US8,940,754 del inventor, cuyas enseñanzas se incorporan como referencia. De forma amplia, la patente da a conocer la reacción de 10-fluorocatarantina (un derivado fluorado en 10 del compuesto 2 que se mostró previamente) que reacciona con vindolina (3) para comenzar la síntesis de un derivado de vinblastina apropiado.

Composición farmacéutica y procedimientos

Un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca contemplado también se puede utilizar en la fabricación de un medicamento (composición farmacéutica) que es útil, como mínimo, para inhibir la proliferación (crecimiento) de células cancerosas hemáticas, tales como células de leucemia o linfoma, así como células de carcinomas, sarcomas, melanomas, neuromas y similares. Un compuesto contemplado, un medicamento o una composición farmacéutica que lo contiene inhibe ese crecimiento poniendo en contacto esas células cancerosas in vitro, o in vivo tal como en un sujeto que lo necesita, cuando es un compuesto alcaloide de la vinca original. Cuando se utiliza de ese modo, están presentes sales, tampones y similares aceptables farmacéuticamente que se denominan colectivamente diluyentes aceptables farmacéuticamente, en comparación con los que pueden estar presentes en una composición que no está destinada a la utilización farmacéutica, tal como en un ensayo in vitro.

Un compuesto de la presente invención se puede proporcionar para su utilización como tal, o como una sal aceptable farmacéuticamente. Los compuestos contemplados son aminas. La vinblastina original ha notificado valores de pKa de 5.4 y 7.4, mientras que la vincristina ha notificado valores de pKa de 6.04 y 7.67. [The Merck Index, 13th ed. Merck & Co., Whitehouse Station, NJ, 2001, pages 1778-1779]. Ambos compuestos son comercializados como sus sales de sulfato. Se notifica que la vindesina tiene valores de pKa de 6.04 y 7.67 [The Merck Index, 12 th ed., Merck y Co., Whitehouse Station, N^j , 1996, page 1704]. La vindesina también está disponible en el mercado como la sal de sulfato.

Las sales a modo de ejemplo útiles para un compuesto contemplado incluyen, sin constituir limitación, las siguientes: sulfato, clorhidrato, bromhidratos, acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, ciclopentanopropionato, dodecilsulfato, etanosulfonato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2 -hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, nicotinato, 2 -naftalenosulfonato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenil-propionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, mesilato y undecanoato.

El lector se remite a Berge, J. Pharm. Sci. 1977 68(1 ):1-19 para listas de ácidos y bases aceptables farmacéuticamente utilizados habitualmente que forman sales aceptables farmacéuticamente con compuestos farmacéuticos.

En algunos casos, las sales también se pueden utilizar como adyuvante en el aislamiento, la purificación o la resolución de los compuestos de la presente invención. En estas utilizaciones, no es necesario que el ácido utilizado ni la sal preparada sean aceptables farmacéuticamente.

Tal como se observa a partir de los datos que siguen, un compuesto contemplado es activo en estudios de ensayos in vitro en cantidades de picomolar a nanomolar. Cuando se utiliza en un ensayo, tal como un ensayo in vitro, un compuesto contemplado está presente en la composición en una cantidad que es suficiente para proporcionar una concentración de, aproximadamente, 0.05 nM a, aproximadamente, 100 nM, preferentemente, de, aproximadamente, 1 nM a, aproximadamente, 50 nM para un contacto con células que se van a someter a ensayo.

Una composición farmacéutica contemplada contiene una cantidad que inhibe la proliferación de células cancerosas de un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca contemplado, o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, disuelto o dispersado en un portador aceptable fisiológicamente (farmacéuticamente). Normalmente, esa cantidad es, aproximadamente, de la misma cantidad a un poco menos de la cantidad de un alcaloide de la vinca original utilizado para tratar el mismo cáncer. Una composición de este tipo se puede administrar a células de mamífero in vitro, tal como en un cultivo celular para poner en contacto esas células, o las células se pueden poner en contacto in vivo, tal como en un mamífero anfitrión vivo que lo necesita.

Más habitualmente, se administran por vía parenteral fármacos antineoplásicos, tales como un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca contemplado en el presente documento, in vivo en una cantidad en peso por metro cuadrado del área de superficie corporal (bsa, body surface area) del receptor. Normalmente, para adultos, esta cantidad es de, aproximadamente, 1 a, aproximadamente, 20 mg/m2 de bsa y, aproximadamente, la mitad de esas cantidades para niños, eligiéndose una cantidad de modo que la cantidad máxima no provoque leucocitopenia. Normalmente, los niños que pesan, aproximadamente, 10 kg o menos se dosifican a, aproximadamente, 0.05 mg/kg.

Por ejemplo, el sulfato de vinblastina se administra normalmente a adultos a 3.7 mg/m2 de bsa para la primera dosis, 5.5 mg/m2 de bsa para la segunda dosis semanalmente, 7.4 mg/m2 de bsa para la tercera dosis semanalmente, 9.25 mg/m2 de bsa para la cuarta dosis semanalmente y 11.1 mg/m2 de bsa para la quinta dosis semanalmente. Normalmente, las dosificaciones no superan los 18.5 mg/m2 de bsa, y no se deben aumentar si el recuento de leucocitos disminuye hasta, aproximadamente, 3000 células/mm3. Las dosificaciones habituales para adultos son de, aproximadamente, 5.5 a 7.4 mg/m2 de bsa. Normalmente, las dosificaciones de un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca contemplado o su sal aceptable farmacéuticamente no superan las del compuesto original y, normalmente, son menores en de, aproximadamente, 10 a, aproximadamente, 100 veces.

Una composición contemplada se administra normalmente in vivo a un sujeto que lo necesita una pluralidad de veces en el plazo de un mes, tal como semanalmente, y se puede administrar a lo largo de un periodo de varios meses a varios años. Más habitualmente, una composición contemplada se administra una pluralidad de veces a lo largo de una tanda de tratamiento.

En la práctica habitual, un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca contemplado se administra para tratar el mismo estado patológico en la misma cantidad, o una cantidad reducida, y en los mismos intervalos que el alcaloide de 20’-hidroxi-vinca original. Un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca contemplado se puede utilizar como primera tanda de tratamiento, y se administra, preferentemente, si existe recidiva después de una primera tanda de tratamiento, o la última, particularmente cuando se muestra o se sospecha de (se indica) resistencia a múltiples fármacos.

Una composición farmacéutica contemplada se puede administrar por vía oral (a través de la boca) o por vía parenteral, lo que es preferente, en una formulación que contiene portadores, adyuvantes y vehículos aceptables farmacéuticamente no tóxicos convencionales, según se desee. El término parenteral, tal como se utiliza en el presente documento, incluye inyecciones subcutáneas, inyección intravenosa (que es la más preferente), intramuscular, intraesternal o técnicas de infusión. La formulación de fármacos se comenta en, por ejemplo, Hoover, John E., Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsilvania; 1975 y Liberman, H.A. y Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980.

Las formas de dosificación sólidas para administración oral pueden incluir cápsulas, comprimidos, pastillas, polvos y gránulos. La cantidad de un compuesto contemplado en una forma de dosificación sólida es tal como se comentó anteriormente, una cantidad suficiente para proporcionar una concentración de, aproximadamente, 0.05 nM a, aproximadamente, 100 nM, preferentemente, de, aproximadamente, 1 nM a, aproximadamente, 50 nM, en el plasma de sangre o suero. Una forma de dosificación sólida también se puede administrar una pluralidad de veces durante un periodo de tiempo de una semana.

En estas formas de dosificación sólidas, un compuesto de la presente invención se combina, por lo general, con uno o varios adyuvantes apropiados para la vía de administración indicada. Si se administran por vía oral, los compuestos se pueden mezclar con lactosa, sacarosa, polvo de almidón, ésteres de celulosa de ácidos alcanoicos, alquil ésteres de celulosa, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de los ácidos fosfórico y sulfúrico, gelatina, goma arábiga, alginato de sodio, polivinilpirrolidona y/o alcohol polivinílico y, a continuación, comprimirse o encapsularse para una administración cómoda. Estas cápsulas o comprimidos pueden contener una formulación de liberación controlada que se puede proporcionar en una dispersión del compuesto activo en hidroxipropilmetilcelulosa. En el caso de cápsulas, comprimidos y pastillas, las formas de dosificación también pueden comprender agentes tamponantes, tales como citrato de sodio, carbonato o bicarbonato de magnesio o calcio. Además, también se pueden preparar comprimidos y pastillas con recubrimientos entéricos.

Una composición farmacéutica contemplada se adapta, preferentemente, para administración parenteral. Por tanto, una composición farmacéutica está, preferentemente, en forma líquida cuando se administra y, de la manera más preferente, el líquido es un líquido acuoso, aunque se contemplan otros líquidos tal como se comenta a continuación, y una composición más preferente en el presente documento es una preparación inyectable.

Por tanto, se pueden formular preparaciones inyectables, por ejemplo, soluciones o suspensiones estériles inyectables, acuosas u oleaginosas, según la técnica conocida, utilizando agentes de dispersión o humectación y agentes de suspensión adecuados. La preparación estéril inyectable también puede ser una solución o suspensión estéril inyectable en un diluyente o solvente aceptable parenteralmente no tóxico, por ejemplo, como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y solventes aceptables que se pueden emplear están el agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio, solución salina tamponada con fosfato.

Otras composiciones farmacéuticas líquidas incluyen, por ejemplo, soluciones adecuadas para administración parenteral. Soluciones acuosas estériles de un componente activo del compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca o una solución estéril del componente activo en solventes que comprenden agua, etanol o propilenglicol son ejemplos de composiciones líquidas adecuadas para administración parenteral. En algunos aspectos, se proporciona un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca contemplado como un polvo seco que se va a disolver en un medio líquido apropiado, tal como cloruro de sodio, para inyección antes de su utilización.

Además, se emplean convencionalmente aceites fijos estériles como un solvente o medio de suspensión. Para este propósito, se puede emplear cualquier aceite fijo insípido que incluya monoglicéridos o diglicéridos sintéticos. Además, ácidos grasos tales como el ácido oleico encuentran utilización en la preparación de una composición inyectable. Se pueden utilizar dimetilacetamida, surfactantes que incluyen detergentes iónicos y no iónicos, polietilenglicoles. También son útiles mezclas de solventes y agentes de humectación, tales como los comentados anteriormente.

Las soluciones estériles se pueden preparar disolviendo el componente activo en el sistema de solventes deseado y, a continuación, haciendo pasar la solución resultante a través de un filtro de membrana para esterilizarla o, alternativamente, disolviendo el compuesto estéril en un solvente esterilizado previamente en condiciones estériles.

Un mamífero que necesita tratamiento (un sujeto) y al que se le administra una composición farmacéutica que contiene un compuesto contemplado puede ser un primate, tal como un ser humano, un simio, tal como un chimpancé o un gorila, un mono, tal como un macaco cangrejero o un macaco, un animal de laboratorio, tal como una rata, un ratón o un conejo, una mascota, tal como un perro, un gato o un caballo, o un animal de producción, tal como una vaca o un buey, una oveja, un cordero, un cerdo, una cabra, una llama o similares.

Cuando se contempla un ensayo in vitro, se puede utilizar una muestra que se va a analizar, tal como células y tejido. Estas composiciones in vitro contienen normalmente agua, cloruro de sodio o potasio y una o varias sales tamponantes, tales como sales de acetato y fosfato, HEPES [ácido N-(2-hidroxietil)piperazin-N’-(2-etanosulfónico)] o similares, un quelante de iones metálicos, tal como EDTA, que se tamponan a un valor de pH deseado, tal como a pH 4.0-8.5, preferentemente, a, aproximadamente, pH 7.2-7.4, dependiendo del ensayo que se va a realizar, tal como se conoce bien.

Preferentemente, la composición farmacéutica está en forma de dosificación unitaria. En esta forma, la composición se divide en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas del compuesto activo. La forma de dosificación unitaria puede ser una preparación envasada, conteniendo el envase cantidades discretas de la preparación, por ejemplo, en viales o ampollas.

En otra realización preferente, un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca contemplado se administra con uno o varios de otros compuestos antineoplásicos. Esta terapia conjunta se conoce bien en la técnica, siendo administrada conjuntamente con otros fármacos, tales como cisplatino, 5-fluorouracilo y similares. Esta administración conjunta consiste habitualmente en administraciones separadas físicamente de cada compuesto que se programan de modo que los dos o más agentes activos pueden actuar de manera concertada.

Resultados y discusión

Se prepararon dos ureas de vinblastina sustituida en C20’, 8 y 9, en estudios iniciales que sirvieron como puntos de partida. La primera de estas es la pirrolidin-urea 8, que mostró una inhibición del crecimiento celular mejorada en relación con la vinblastina. Por tanto, se incorporaron una serie de pirrolidinas funcionalizadas o sustituidas en la C20’-urea a través de una reacción de 20’-aminovinblastina (6), derivada de la reducción del producto de hidroazidación 5, con cloroformiato de p-nitrofenilo (1.5 equiv. de 4-N o2PhOCOCl, 10 equiv. de Et3N, THF, 23 °C, 4 horas) o trifosgeno (0.4 equiv., 2.4 equiv. de Z-P^NEt, CH2Cl2, 0 °C, 15 minutos) seguido de tratamiento con una amina secundaria (R2NH) para proporcionar las C20’-ureas como producto con buenos rendimientos (véase el esquema 2, a continuación). Este último procedimiento que utiliza trifosgeno representa una mejora en las condiciones notificadas originalmente [Leggans et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 628], evitando los retos de la purificación de retirar el p-nitrofenol residual de los productos de reacción. Ambos conjuntos de condiciones crean el mismo C20’-isocianato como producto intermedio, que a su vez reacciona con la amina secundaria añadida para proporcionar una urea como producto.

Para las comparaciones notificadas en el presente documento, se examinaron los compuestos para determinar la inhibición del crecimiento celular contra las líneas de células tumorales L1210 (leucemia de ratón), HCT116 (cáncer de colon humano) y HCT116/VM46 (cáncer de colon humano resistente), la última de la cuales muestra una resistencia (100 veces) a la vinblastina a través de la sobreexpresión relevante clínicamente de P-glicoproteína (Pgp).

En estudios iniciales [Leggans et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 628], se estableció que la naturaleza rica en electrones de la urea era responsable, en parte, de su actividad potenciada en relación con su homólogo de carbamato o amida correspondiente. Como consecuencia, la pirrolidin-urea 8 se investigó sistemáticamente para establecer si los p-sustituyentes en la pirrolidina (10-21) o cambios sistemáticos en su estructura (22-27) podrían tener un impacto sobre su unión a la tubulina y las propiedades de inhibición del crecimiento celular de manera muy similar a su impacto sobre la propia basicidad de la pirrolidina. Casi todas estas pirrolidin-ureas sustituidas fueron menos potentes que la propia pirrolidin-urea 8, la mayoría mostraron poca preferencia por la estereoquímica del sustituyente (R frente a S) y no pareció haber una correlación directa de las propiedades electrónicas del sustituyente con su impacto son la actividad de inhibición del crecimiento celular (tabla 1, a continuación). Las excepciones a estas generalizaciones son el comportamiento de 14, que porta la (R)-3-metoxipirrolidina, y los dos isómeros de la 3-fluoropirrolidin-urea (17 y 18).

Tan interesantes como son estas últimas observaciones, estos compuestos solo se acercan a (14) o sobrepasan ligeramente (17 y 18) la actividad de 8, que no porta ningún sustituyente. Como consecuencia, y en lugar de atribuir papeles productivos a los sustituyentes, parece que la mayoría limitan las propiedades del compuesto 8 original y algunos (14, 17 y 18) constituyen sustituciones benignas.

Tabla 1

L1210 0.70 20 14 6.8 40 0.71 3.5

HCT116 0.72 20 6.2 5.8 8.6 0.71 2.9

HCT116A/M46 50 500 390 210 650 25 40

X = línea celular

L1210 3.3 0.62 0.60 3.1 3.7 5.1 0.53

HCT 116 1.0 0.64 0.61 0.90 1.5 1.8 0.50

HCT116NM46 25 7.2 20 25 60 60 5.7

lo tif ic a d o previamente en Barker et al., ACS Med. Chem. Lett. 2013, 4, 985.

Más significativo fue el impacto de la adición de insaturación (compuesto 22). Mientras que se observaron disminuciones increméntales de la actividad de crecimiento celular con el aumento del tamaño de anillo de la amina cíclica con urea-terminal (8 frente a 23-25, 5 < 6 o 7 < 8) o con la incorporación de la pirrolidina en un azabiciclo[2,2,1]heptano (26), la introducción de n-insaturación en forma de un doble enlace en 3,4 (22) o un anillo de fenilo condensado en 3,4 (27 y 9) proporcionó compuestos que potenciaron la inhibición del crecimiento celular y redujeron adicionalmente el diferencial de actividad entre las líneas celulares HCT116 sensibles y resistentes (tabla 2, a continuación).

Tabla 2

línea celular CI50, nM

L1210 0.70 0.53 5.5 4.3 60 40 0.59 0.51 0.40 0.47

HCT 116 0.72 0.50 3.9 3.1 35 20 0.69 0.60 0.60 0.45

HCT 116/VM46 50 5.7 50 35 330 250 6.2 7.5 10 9.5

aNotificado previamente en Barker et al., ACS Med. Chem. Lett. 2013, 4, 985.

Es posible que esta actividad mejorada se derive, en parte, de las alteraciones en la basicidad de la pirrolidina, las reducciones en las interacciones estéricas desestabilizantes que rodean a la posición 3,4 de la pirrolidina o a través de la adquisición de interacciones estabilizantes adicionales con la tubulina, y lo más probable es que sea el resultado de una combinación diferente de estas características para 22/9 frente a 27.

Finalmente, no solo se permitió la sustitución del benceno condensado en la isoindolina 9 con piridinas condensadas (28 y 29), sino que el cambio proporcionó una pequeña potenciación adicional en la potencia de la inhibición del crecimiento celular. Es especialmente notable que 22, 9, 28 y 29 muestran todos ellos actividad de inhibición del crecimiento celular en las líneas de células tumorales sensibles a la vinblastina con CI50 de 400-600 pM y que su actividad contra la línea de células tumorales resistente a la vinblastina (HCT116/VM46) coindice ahora con la actividad que presenta la vinblastina contra la línea celular HCT116 sensible compatible (CI50 = 6.8 nM).

De estos, se seleccionaron como diana modificaciones adicionales de la isoindolin-urea 9 para un examen sistemático, reconociendo el potencial para alterar adicionalmente la superficie de contacto dímero-dímero de la tubulina (tabla 3, a continuación). La sustitución de la isoindolina se toleró bien, y la serie presentaba una tendencia en la que los sustituyentes electrodonadores (30, 35-39) demostraron ser ligeramente más potentes que los compuestos que portan sustituyentes electroatractores (31-34). Dentro de la primera serie, la alquilación (37-39) o acilación (40-53) adicionales de la anilina 36 se toleró bien. La simple acetilación para proporcionar la acetamida 40 proporcionó un derivado con CI50 de 470-500 pM en las líneas de célula tumorales sensibles a la vinblastina y la W-benzoilación mantuvo esta actividad con 50 que presentaba CI50 de 500-600 pM.

Tabla 3

Compuesto L1210 HCT 116 HCT 116/VM46

9, R = Ha 0.51 0.60 7.5

30, R = Me 0.41 0.44 5.9

31, R = F 0.63 0.52 5.2

32, R = Cl 0.50 0.55 5.7

33, R = Br 0.62 0.56 6.4

34, R = CF3 0.59 0.67 6.2

35, R = OMea 0.48 0.54 8.6

36, R = NH2 0.47 0.42 6.8

37, R = NHMe 0.45 0.43 4.6

38, R = NMe2 0.50 0.62 3.9

39, R = NHPr 0.40 0.31 4.6

40, R = NHCOMe 0.47 0.50 9.4

41, R = NHCOPr 0.46 0.54 7.7

42, R = NHCOc-Pr 0.50 0.56 16

43, R = NHCO/-Bu 0.39 0.49 6.4

44, R = NHCOCMes 0.39 0.47 5.3

45, R = NHCOn-Hex 0.44 0.62 13

46, R = NHCOCH=CH2 0.38 0.30 7.1

47, R = NHCOCH=CHMe 0.42 0.38 5.9

48, R = NHCOCH=CMe2 0.43 0.47 7.4

49, R = NHCOCH=CHPh 0.50 0.70 33

CI50 (nM)

Compuesto L1210 HCT 116 HCT 116/VM46

50, R = NHCOPh 0.54 0.62 13

51, R = NHCOPh-4-Ph 5.9 6.3 75

52, R = NHCOPh-4-OCF3 4.3 5.3 75

53, R = NHCOPh-4-Pr 2.9 4.2 60

54 0.42 0.45 5.2

aNotificado previamente en Barker et al., ACS Med. Chem. Lett. 2013, 4, 985.

El sitio demostró ser notablemente tolerante al volumen estérico con incluso la pivoloil-amida 44 que presenta una potente actividad y demostró ser capaz de acomodar grupos acilo rígidos extendidos (por ejemplo, 49). Solo la sustitución extendida rígida o voluminosa en la posición para de un grupo N-benzoílo (51-53) demostró disminuir la actividad de la serie ahora notablemente potente. Incluso unir un grupo 4-bifenilacilo a la isoindolin-anilina proporcionó un compuesto (51) que, aunque es menos potente que 40 o 50, aun así era ligeramente más potente que la vinblastina a pesar de estar escondido en una zona del sitio de unión a la tubulina que previamente se pensaba que era sensible a las interacciones estéricas. Finalmente, se halló que la disustitución de la isoindolina se toleraba bien para ambas y, en el caso examinado (54), proporcionó un compuesto equipotente con 35 y ligeramente más potente que la isoindolina 9 original.

Se observaron niveles de actividad incluso más impresionantes y mejoras adicionales en la inhibición del crecimiento celular cuando se sustituyó la benzoil-amida de 50 por amidas heteroaromáticas (tabla 4, a continuación). En la serie examinada (55-67) surgió una clara tendencia en la actividad que indicaba con seguridad la funcionalidad responsable de y necesaria para proporcionar las potenciaciones sorprendentes adicionales en la actividad. Aunque todos estos compuestos eran excepcionalmente potentes, aquellos con grupos heteroaromáticos de seis miembros con nitrógeno en la posición 2 en relación con el acilcarbonilo presentaron habitualmente la actividad más potente (por ejemplo, 55 frente a 56; 58, 60 y 61 frente a 59) y aquellos con dos de estos nitrógenos en los que, como mínimo, uno de ellos está en la posición 2 presentaron una potencia sorprendente (58, 60 y 61).

Tabla 4

L1210 0.54 0.37 0.48 0.27 0.062 51 0.059

HCT116 0.62 0.49 0.33 0.28 0.074 60 0.075

HCT116/VM46 13 3.6 6.6 10.4 0.88 8 0.83

línea celular

L1210 0.059 0.69 0.25 0.38 0.29 0.23 0.43

HCT116 0.067 0.64 0.10 0.17 0.19 0.22 0.51

HCT116/VM 40.87 50 5 5 5 4 7.6

Es probable que esta potencia potenciada refleje un enlace de hidrógeno interno entre el nitrógeno heteroaromático en la posición 2 y la NH de amida adyacente que se observa en el 1H-RMN de los compuestos. Esto se ilustra en la fórmula estructural mostrada a continuación.

Complementaria a esta restricción conformacional es la adopción preferencial de la conformación eclipsada por carbonilo de la C20’-urea que fija la orientación preferente de la C20’-urea.

Los compuestos 58, 60 y 61 mostraron CI50 de 50-75 pM contra las líneas de células tumorales sensibles a la vinblastina (L1210 y HCT116), lo que representa aumentos de 100 veces en relación con la vinblastina, y actividad subnanomolar contra la línea de células tumorales resistente a la vinblastina (HCT116/VM46, CI50 = 830-880 pM), lo que representa aumentos de 700 veces en relación con la vinblastina. También son 10 veces más potentes que la C20’-urea 9 que carece de sustituyente.

Debido a su extraordinaria potencia, se funcionalizaron adicionalmente dos amidas heterocíclicas (55 y 60) con una arilamina, lo que permitiría la conjugación covalente con modalidades de dirección que requieren esta actividad ultrapotente (por ejemplo, anticuerpos, folato) para la administración selectiva a tumores (tabla 5). En cada caso, el derivado de anilina mantuvo la actividad del análogo original (69 y 70 frente a 60) o incluso mejoró adicionalmente su potencia (68 frente a 55). Claramente, están disponibles varias oportunidades con impactos sutiles sobre la actividad tanto para el sitio como para la funcionalización apropiada de estos derivados para la preparación de conjugados de dirección a tumores para los que la carga útil de fármaco libre liberado sigue siendo extraordinariamente potente.

Tabla 5

R =

línea celular

L1210 0.08 0.065 0.062

HCT116 0.20 0.075 0.068

HCT 116/VM46 2.6 4.1 0.94

Con los compuestos que mostraban una potencia celular funcional notable, se buscó determinar si las mejoras observadas en la actividad se correlacionaban con la afinidad de unión a la tubulina potenciada. El procedimiento más habitual para evaluar la unión a la tubulina implica la inhibición de la polimerización de tubulina tras la exposición a los compuestos candidatos. Sin embargo, y tal como indicaron otros, este procedimiento es insensible, rara vez se correlaciona con la actividad funcional y carece de resolución para discriminar entre una serie de compuestos. Más precisos son los procedimientos que miden la unión competitiva en el sitio de unión a la tubulina de vinblastina y estos implican, normalmente, la medición del desplazamiento competitivo de sondas de vinblastina radiomarcada o vinblastina marcada con fluorescencia.

El desplazamiento competitivo de 3H-vinblastina se ha utilizado previamente para evaluar la unión a la tubulina de miembros seleccionados de las C20’-ureas de vinblastina. [Leggans et al., J. Med. Chem. 2013, 56, 628; y Barker et al., ACS Med. Chem. Lett. 2013, 4, 985]. Este ensayo implica filtrar soluciones de incubación conjunta a través de discos de filtro DE-81, que secuestran a la tubulina y a sus ligandos unidos de la solución. [(a) Owellen et al., Biochem. Pharmacol. 1977, 26, 1213; y (b) Bhattacharyya et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1976, 73, 2375]. Sin embargo, el ensayo no es ideal debido tanto a los costes asociados con la utilización de 3H-vinblastina como a los retos técnicos de reproducir de manera cuantitativa el ensayo. Esto se complica aún más por el hecho de que ahora se ha interrumpido la fabricación de papel de filtro DE-81.

Como consecuencia, se utilizó la sonda fluorescente de BODIPY-vinblastina disponible en el mercado para evaluar la unión a la tubulina y desarrollar su utilización en un ensayo de unión competitiva directa.15 [(a) Jiang et al., Cancer Res. 1998, 58, 5389; (b) Zhang et al., PloS one 2009, 4, e4881; (c) Raiet al., PloS one 2012, 7, e44311 y (d) Rashid et al., Biochemistry 2015, 54, 2149]. BODIPY-vinblastina muestra un aumento significativo en la intensidad de fluorescencia (IF) tras la unión a la tubulina y, por tanto, permite mediciones sencillas de fluorescencia de soluciones de incubación conjunta para establecer el porcentaje de desplazamiento de la sonda mediante un ligando competitivo del sitio de unión.

Se incubó la tubulina con BODIPY-vinblastina y una gama representativa de ligandos competitivos que incluyeron vinblastina, 10’-fluorovinblastina (71, un análogo de vinblastina notificado previamente con una actividad funcional mejorada en 10 veces [Gotoh et al., ACS Med. Chem. Lett. 2011, 2, 948]), el potente compuesto 28 y tres análogos de C20’-urea ultrapotentes (58, 60 y 61) notificados en el presente documento. A la concentración analizada, la vinblastina desplazó el 31 % de la BODIPY-vinblastina unida a la tubulina (tabla 5). 10’-Fluorovinblastina y 28, que son, aproximadamente, 10 veces más potentes que la vinblastina, mostraron una mayor afinidad por la tubulina, con un desplazamiento del 48-49 % de la BODIPY-vinblastina. Sorprendentemente, las tres vinblastinas ultrapotentes (58, 60 y 61), cada una 100 veces más potente que la vinblastina, desplazaron el 100 % de la BODIPY-vinblastina, lo que indica que estas C20’-ureas ultrapotentes poseen una afinidad de unión por la tubulina mucho más fuerte que la vinblastina, 10 ’-fluorovinblastina y 28.

Tabla 5

comp. % de desplazamiento CI50 (nM, HCT116)

1 31 ± 9% 6.8

71 48 ± 7% 0.8

28 49 ± 15% 0.6

58 105 ± 5% 0.07

60 104 ± 12% 0.07

61 101 ± 4% 0.07

Para llevar a cabo este estudio, se incubó la tubulina (0.1 mg/ml, 0.91 pMI) con BODIPY-vinblastina (BODIPY-VBL, 1.8 pMI) y un análogo de vinblastina (18 pM) a 37 °C en tampón PEM que contenía GTP 850 pMI. Se midió la intensidad de fluorescencia (IF) de BODIPY-VBL (ex: 480 nm, em: 514 nm) de alícuotas de 100 p.l de cada incubación en un lector de microplacas de fluorescencia a 37 °C. Se realizaron estudios de control con BODIPY-VBL (control 1) en ausencia de un ligando competitivo (potenciación máxima de IF debida a la unión a la tubulina) y (control 2) en ausencia de tubulina (sin potenciación de IF debida a la unión a la tubulina). Se calculó el % de desplazamiento de BODIPY-VBL mediante la fórmula (IF de control 2 - IF del experimento)/(IF de control 2 - IF de control 1) x 100. Los valores notificados son el promedio de 4 mediciones ± la desviación estándar.

Aunque no es posible descartar el impacto de otras características o incluso la introducción de un segundo mecanismo de acción no reconocido, esta correlación directa de la actividad de inhibición del crecimiento celular funcional con afinidad de unión a tubulina diana y la magnitud relativa de los efectos sugieren que las propiedades de las C20’-ureas potentes y ultrapotentes se derivan predominantemente, si no exclusivamente, de los efectos de la diana sobre la tubulina.

Cabe señalar que Jordan et al., Cancer Res 1985, 45, 2747 estudiaron la vinepidina, un derivado sintético de vincristina, la vinblastina, la vincristina y la vindesina como inhibidores de la adición de tubulina a los extremos de microtúbulos de cerebro bovino. Hallaron que, en general, los cuatro compuestos tuvieron una potencia similar en cuanto a la inhibición del ensamblaje de los microtúbulos, pero que la vinepidina y la vincristina fueron las más potentes seguidas de la vindesina y la vinblastina. Sin embargo, también hallaron que, en general, la vinblastina y la vindesina eran más potentes que la vincristina y la vindesina en estudios de proliferación celular in vitro. Por tanto, la correlación mostrada en este caso no se mantiene en todos los sistemas de estudio.

A diferencia de las expectativas iniciales basadas en las restricciones estéricas del sitio de unión a la tubulina que rodea al centro C20’ de la vinblastina representado en la estructura de cocristal de rayos X de un complejo unido a tubulina [Gigant et al., Nature 2005, 435, 519], se acomodan derivados de C20’-urea grandes, tales como aquellos detallados en el presente documento, mostrando cierta actividad funcional ultrapotente en ensayos de proliferación basados en células, y una afinidad de unión a la tubulina notable. Esto planteó varias cuestiones clave, que incluyen si hay espacio para estos sustituyentes en el presunto sitio de unión a la vinblastina.

El sitio de unión para la vinblastina es creado por y se encuentra en la superficie de contacto dímero-dímero a/p de cabeza a cola de la tubulina. La vinblastina está esencialmente escondida por completo en el sitio de unión a la proteína, adoptando una conformación unida en forma de T con C3/C4 (parte inferior de la T) que se encuentra en la superficie de contacto del solvente y el sitio C20’ (esquina superior de la T) que se extiende más profundamente en el bolsillo de unión que se encuentra en la otra esquina. Esta unión de la vinblastina desestabiliza la interacción proteína-proteína fundamental para el ensamblaje de la microtubulina.

La inspección de la estructura de rayos X de la vinblastina-tubulina revela que el alcohol en C20’ se extiende hacia un canal estrecho que va desde el sitio C20’ escondido hasta la cara opuesta de la proteína, lo que representa la continuación de la interacción proteína-proteína definida por la superficie de contacto dímero-dímero de la tubulina.

Incluso sin ajustar las proteínas halladas en la estructura de rayos X de la vinblastina, el grupo isoindolina en C20’ modelo de 9 se extiende detrás de un bucle peptídico clave en la p-tubulina que constituye la parte superior del sitio de unión a la vinblastina en este canal estrecho, que continúa a lo largo de la superficie de contacto proteína-proteína de la tubulina y, supuestamente, es responsable de la alteración adicional de la interacción tubulina-tubulina dimérica. Un bucle peptídico en la proteína p-tubulina cubre el lado superior de la subunidad de velbanamina de la vinblastina que incluye C20’ que crea un bolsillo hidrófobo profundo y en gran parte hidrófobo para la unión del ligando. Sin ajustar la proteína hallada en la estructura de rayos X de la vinblastina, el grupo isoindolina de 9 modelo se extiende detrás del bucle peptídico hacia un canal que continúa a lo largo de la superficie de contacto proteína-proteína de la tubulina. Los sustituyentes de arilamida en la isoindolina, tales como aquellos que se encuentran en 50, 55-67, continúan extendiéndose a lo largo de la superficie de contacto proteína-proteína dimérica de la tubulina.

Es probable que la C20’-urea lineal rígida de las vinblastinas ultrapotentes descritas en el presente documento se extienda hacia y expanda este canal estrecho, altere aún más la superficie de contacto dímero-dímero de cabeza a cola a/p de la tubulina y se extienda a través de la superficie de contacto proteína-proteína completa, poniéndose en contacto con el solvente en su lado distal. Por tanto, y aunque la estructura de las C20’-ureas potentes y su optimización pueden parecer inusuales a primera vista, representan adiciones estructurales racionales a un sitio específico en el producto natural con restricciones conformacionales apropiadas necesarias para potenciar adicionalmente la alteración de la interacción proteína-proteína diana.

De manera más provocativa, la actividad de un análogo ultrapotente (CI5050-75 pM) sugiere que no es probable, ni siquiera posible, que su actividad funcional celular se derive de la ocupación estequiométrica del número relativamente grande de sitios de unión a la tubulina intracelulares. En su lugar, su potencia sugiere que una ocupación catalítica o por debajo de la estequiométrica de los sitios de unión candidatos es suficiente para alterar la dinámica y el ensamblaje de la tubulina durante la mitosis. La cuestión que plantean estas vinblastinas ultrapotentes es si la ocupación por debajo de la estequiométrica de los sitios de unión es suficiente para atrapar la microtubulina polimerizante en conformaciones no productoras, o si estos compuestos sirven catalíticamente para desensamblar activamente la microtubulina.

En estudios recientes, el inventor y sus colaboradores notificaron síntesis totales concisas de 12 etapas de la vinblastina y productos naturales relacionados [(a) Ishikawa et al., J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 420; (b) Ishikawa et al., J. Am. Chem. Soc. 2009, 131, 4904; y (c) Gotoh et al., J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 13240] basándose, en parte, en la introducción de un potente acoplamiento de vindolina/catarantina fomentado por Fe(III) diastereoselectivo en dos etapas en un solo recipiente y la posterior oxidación de C20’ por radicales libres iniciada por átomos de hidrógeno mediada por Fe(III)-NaBH4/aire que se extendió para la utilización de trampas de radicales libres alternativas.8 [(a) Leggans et al., Org. Lett. 2012, 14, 1428; y (b) Barker et al., J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 13588]. Esta metodología, inspirada por la estructura de la vinblastina, ha permitido estudios sistemáticos de los efectos de cambios estructurales arraigados dentro de las subunidades de velbanamina derivadas de vindolina inferior o catarantina superior [Sears et al., Acc. Chem. Res. 2015, 48, 653].

Información complementaria

Procedimientos generales

Todos los reactivos comerciales se utilizaron sin purificación adicional, a menos que se indique lo contrario. Todas las reacciones se realizaron en material de vidrio secado en horno (200 °C) y bajo una atmósfera inerte de Ar anhidro, a menos que se indique lo contrario. La cromatografía en columna se realizó sobre gel de sílice 60. La TLC se realizó en placas de vidrio F254 con gel de sílice EMD Millipore (250 pm) y las manchas se visualizaron mediante UV. La PTLC se realizó en placas de vidrio F254 con gel de sílice EMD Millipore (250 y 500 pm).

Las rotaciones ópticas se determinaron en un polarímetro automático a Rudolph Research Analytical Autopol III utilizando la línea D del sodio (X = 589 nm) a temperatura ambiente (23 °C) y se notifican tal como sigue: [a]D23, concentración (c = g/100 ml) y solvente.

La 1H-RMN se registró en espectrómetros Bruker de 500 MHz y 600 MHz. Los desplazamientos químicos se notifican en ppm con respecto a un patrón interno de CHCl3 residual (87.26 para 1H). Los datos químicos de protón se notifican tal como sigue: desplazamiento químico (8), multiplicidad (ovlp. = solapamiento, br = ancho, s = singlete, d = doblete, t = triplete, q = cuartete, m = multiplete), constante de acoplamiento e integración.

Los espectros de masas de alta resolución se obtuvieron en un instrumento Agilent ESI-TOF/MS utilizando mezcla de ajuste de baja concentración Agilent ESI-L como patrones internos de calibración de alta resolución. La pureza de cada compuesto analizado (>95 %) se determinó en un instrumento Agilent 1100 LC/MS utilizando una columna ZORBAX SB-C8 (3.5 mm, 4.6 mm x50 mm, con un caudal de 0.75 ml/minuto, y detección a 220 y 254 nm) con un gradiente del 10-98 % de acetonitrilo/agua/el 0.1 % de ácido fórmico.

Procedimiento general para la síntesis de C20’-ureas de vinblastina

Se enfrió una solución de 20’-aminovinblastina (6, 60 mg, 0.074 mmol) y A/,A/-d¡isoprop¡let¡lam¡na (/-P^NEt, 23 pl, 0.18 mmol) en CH2G 2 anhidro (3 ml) hasta 0 °C y se trató con una solución de trifosgeno (8.7 mg, 0.030 mmol) en CH2Cl2 anhidro (2 ml). Se agitó la mezcla de reacción durante 15 minutos, después de lo cual se recogió la mezcla en una jeringa y se repartió en viales (hasta 6) que contenían aminas secundarias de base libre individuales (2 equiv. con respecto a 6). A continuación, se trató cada vial que contenía el producto intermedio 20’-isocianato de vinblastina con Z-P^NEt (2 equiv. con respecto a 6). Se dejaron avanzar las reacciones durante la noche (aproximadamente 18 horas), después de lo cual se diluyeron las mezclas con EtOAc (10 x volumen de reacción). Se extrajeron las reacciones diluidas con NaHCO3 ac. saturado y NaCl ac. saturado.

Se secaron las fases orgánicas sobre Na2SO4. Se aislaron los productos mediante PTLC utilizando una fase móvil de EtOAc:MeOH:NEt395:5:3. Nota: justo antes de la utilización en formaciones de urea, se desprotegieron las 2-Boc-N-(acil)-5-aminoisoindolinas mediante tratamiento con ácido trifluoroacético al 40 % (TFA) en CH2Cl2. Después de reaccionar durante 20 minutos, se eliminó el solvente con una corriente de nitrógeno y se secaron adicionalmente los residuos a alto vacío. Se utilizaron las isoindolinas desprotegidas sin purificación adicional y se añadieron 5 equiv. de r-P^NEt adicionales a la reacción de formación de urea para neutralizar el TFA residual.

C20’-isocianato de vinblastina

Rendimiento: 26.1 mg (62 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDC^) 89.82 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.52 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.23 - 7.04 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.4, 4.6 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.00 (t, J = 14.2 Hz, 1H), 3.85 - 3.77 (m, 6H), 3.72 (s, 1H), 3.69 - 3.51 (m, 4H), 3.49 - 3.24 (m, 4H), 3.24 - 3.09 (m, 2H), 2.98 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.88 - 2.75 (m, 2H), 2.70 (s, 3H), 2.44 (q, J = 10.2 Hz, 1H), 2.36 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.25 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 2.17 (dt, J = 15.1, 8.3 Hz, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.87 - 1.75 (m, 2H), 1.71 - 1.58 (m, 2H), 1.49 - 1.39 (m, 2H), 1.39 - 1.29 (m, 2H), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.83 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.80 - 0.71 (m, 1H). HRESI-TOF m/z 836.4230 (C47H57N5O9 H+, requerido 836.4229). [a]D23 27 (c 0.7, CHG3).

Compuesto 10

Rendimiento: 5.5 mg (53 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.80 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.50 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.20 - 7.07 (m, 3H), 6.61 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.4, 4.5 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.27 (s, 1H), 3.96 - 3.83 (m, 2H), 3.83 - 3.76 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.68 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.56 - 3.50 (m, 1H), 3.37 (dd, J = 16.2, 5.1 Hz, 2H), 3.33 - 3.10 (m, 6H), 2.82 (d, J = 16.1 Hz, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.60 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.49 - 2.36 (m, 2H), 2.30 (s, 6H), 2.24 - 2.14 (m, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.85 - 1.71 (m, 4H), 1.49 - 1.40 (m, 1H), 1.38 - 1.21 (m, 3H), 0.85 - 0.72 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 950.5385 (C53H71N7O9 H+, requerido 950.5386). [a]D23 -3 (c 0.2, CHG3).

Compuesto 11

Rendimiento: 5.6 mg, (54 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.81 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.50 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.19 - 7.07 (m, 3H), 6.62 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.90 - 5.82 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.98 - 3.84 (m, 3H), 3.82 - 3.79 (m, 6H), 3.78 - 3.75 (m, 1H), 3.74 (s, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.50 - 3.42 (m, 1H), 3.37 (dd, J = 16.3, 4.9 Hz, 2H), 3.33 - 3.12 (m, 6H), 2.83 (d, J = 16.0 Hz, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.67 (s, 1H), 2.59 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 2.49 - 2.38 (m, 2H), 2.32 (s, 6H), 2.18 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.87 - 1.76 (m, 3H), 1.71 - 1.64 (m, 2H), 1.39 - 1.27 (m, 3H), 0.84 - 0.74 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 950.5351 (C53H71N7O9 H+, requerido 950.5386). [a]D23 2 (c 0.2, CHG3).

Compuesto 12

Rendimiento: 5.4 mg (35 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.77 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.50 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.19 - 7.06 (m, 3H), 6.65 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.0, 4.4 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.31 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.46 (s, 1H), 4.29 (s, 1H), 3.94 (t, J = 12.6 Hz, 1H), 3.87 - 3.81 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.75 (s, 1H), 3.70 - 3.62 (m, 1H), 3.59 - 3.53 (m, 5H), 3.46 - 3.35 (m, 3H), 3.31 (td, J = 9.1, 4.3 Hz, 1H), 3.26 - 3.17 (m, 3H), 3.13 - 3.05 (m, 2H), 2.81 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.62 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 2.44 (q, J = 9.2 Hz, 1H), 2.32 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 2.24 - 2.16 (m, 1H), 2.14 - 2.05 (m, 7H), 1.85 - 1.76 (m, 3H), 1.57 - 1.51 (m, 2H), 1.47 - 1.35 (m, 4H), 1.16 - 1.11 (m, 1H), 0.85 - 0.81 (m, 4H), 0.78 (t, J = 6.9 Hz, 3H). HRESI-TOF m/z 923.4909 (C51H66N6O10 H+, requerido 923.4913). [a]D23 -3 (c 0.3, CHG3).

Compuesto 13

Rendimiento: 5.4 mg (35 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.77 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.51 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.23 - 7.05 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.1, 4.2 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.31 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.55 (s, 1H), 4.31 (s, 1H), 3.90 (t, J = 13.2 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.75 (s, 1H), 3.71 - 3.58 (m, 5H), 3.55 (s, 3H), 3.41 - 3.28 (m, 4H), 3.22 (s, 3H), 3.14 - 3.02 (m, 2H), 2.81 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.62 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 2.44 (q, J = 10.0 Hz, 1H), 2.28 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 2.24 - 2.17 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.04 - 2.01 (m, 2H), 1.85 - 1.76 (m, 2H), 1.57 - 1.52 (m, 2H), 1.47 - 1.39 (m, 3H), 1.38 - 1.34 (m, 1H), 0.84 - 0.80 (m, 4H), 0.77 (t, J = 6.8 Hz, 3H). HRESI-TOF m/z 923.4907 (C51H66N6O10 H+, requerido 923.4913). [a]D23 -54 (c 0.3, CHCl3).

Compuesto 14

Rendimiento: 6.9 mg (43 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 89.83 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.23 - 7.04 (m, 3H), 6.62 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 9.5, 3.7 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.23 (s, 1H), 4.01 (s, 1H), 3.96 - 3.91 (m, 1H), 3.84 - 3.77 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.66 - 3.52 (m, 8H), 3.40 - 3.37 (m, 1H), 3.37 - 3.34 (m, 1H), 3.33 - 3.28 (m, 5H), 3.24 - 3.12 (m, 3H), 2.83 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.64 - 2.54 (m, 1H), 2.52 - 2.34 (m, 2H), 2.29 - 2.14 (m, 2H), 2.14 - 2.06 (m, 5H), 1.91 - 1.73 (m, 4H), 1.39 - 1.30 (m, 2H), 1.29 - 1.22 (m, 1H), 0.87 - 0.70 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 937.5067 (C52H68N6O10 H+, requerido 937.5069). [a]D23 5 (c 0.3, CHCl3).

Compuesto 15

Rendimiento: 6.8 mg (43 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 89.83 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.24 - 7.01 (m, 3H), 6.62 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.86 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.25 (s, 1H), 4.02 (s, 1H), 3.95 - 3.88 (m, 1H), 3.83 - 3.77 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.70 - 3.66 (m, 1H), 3.63 - 3.50 (m, 7H), 3.45 - 3.33 (m, 6H), 3.31 - 3.27 (m, 1H), 3.26 - 3.11 (m, 3H), 2.83 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.63 - 2.54 (m, 1H), 2.51 - 2.33 (m, 2H), 2.27 - 2.13 (m, 2H), 2.13 - 2.05 (m, 5H), 1.91 - 1.74 (m, 3H), 1.48 - 1.29 (m, 3H), 1.28 - 1.22 (m, 1H), 0.90 - 0.66 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 937.5064 (C52H68N6O10 H+, requerido 937.5069). [a]D23 9 (c 0.3, CHCl3).

Compuesto 17

Rendimiento 6.7 mg (61 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDC^) 89.81 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.50 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.21 - 7.06 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.2, 4.1 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.38 - 5.21 (m, 2H), 4.27 (s, 1H), 3.96 - 3.84 (m, 2H), 3.80 (d, J = 1.5 Hz, 8H), 3.76 - 3.69 (m, 2H), 3.68 - 3.62 (m, 1H), 3.62 - 3.56 (m, 4H), 3.41 - 3.33 (m, 2H), 3.30 (td, J = 10.1, 9.6, 4.8 Hz, 1H), 3.25 - 3.11 (m, 4H), 2.82 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.60 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.44 (td, J = 10.1, 6.5 Hz, 1H), 2.38 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 2.22 - 2.14 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.87 - 1.69 (m, 4H), 1.46 - 1.40 (m, 1H), 1.37 - 1.31 (m, 1H), 1.28 - 1.25 (m, 1H), 0.84 - 0.74 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 925.4841 ^ ^ F N a O g H+, requerido 925.4870). [a]D23 -0.9 (c 0.2, CHC^).

Compuesto 18

Rendimiento: 6.8 mg, (62 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDC^) 89.80 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.50 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.20 - 7.07 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.3, 4.2 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.39 - 5.17 (m, 2H), 4.30 (s, 1H), 3.93 - 3.82 (m, 2H), 3.81 - 3.72 (m, 10H), 3.71 - 3.61 (m, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.42 - 3.33 (m, 2H), 3.30 (dq, J = 9.3, 4.4 Hz, 1H), 3.26 - 3.10 (m, 4H), 2.82 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.59 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 2.44 (td, J = 10.4, 6.7 Hz, 1H), 2.37 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.24 - 2.16 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.87 - 1.70 (m, 4H), 1.43 (dt, J = 13.7, 7.5 Hz, 1H), 1.34 (dd, J = 14.5, 7.4 Hz, 1H), 1.27 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 0.85 - 0.74 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 925.4843 (C51H65FN6Og H+, requerido 925.4870). [a]D23 1.8 (c 0.5, CHCh).

Compuesto 20

Rendimiento: 5.3 mg (52 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDC^) 89.78 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.50 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.19 - 7.06 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.3, 4.3 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.29 (s, 1H), 3.93 (dd, J = 10.0, 7.4 Hz, 1H), 3.89 - 3.82 (m, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.77 - 3.73 (m, 2H), 3.73 - 3.61 (m, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.38 (dd, J = 16.1, 4.1 Hz, 2H), 3.33 - 3.27 (m, 1H), 3.25 - 3.06 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.60 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.49 - 2.31 (m, 4H), 2.24 - 2.14 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.87 - 1.75 (m, 3H), 1.70 (dt, J = 15.4, 7.1 Hz, 1H), 1.54 - 1.48 (m, 1H), 1.39 - 1.31 (m, 1H), 1.25 - 1.19 (m, 1H), 0.87 - 0.72 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 932.4887 (C52H65N7O9 H+, requerido 932.4916). [a]D23 - 0.7 (c 0.2, CHCl3).

Compuesto 21

Rendimiento: 5.9 mg (58 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDC^) 89.78 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.50 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.20 - 7.07 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.6, 4.3 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.31 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.29 (s, 1H), 4.00 (dd, J = 10.0, 7.8 Hz, 1H), 3.90 - 3.82 (m, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.77 - 3.73 (m, 2H), 3.71 - 3.61 (m, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.38 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 3.33 - 3.27 (m, 1H), 3.25 - 3.05 (m, 5H), 2.82 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.61 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 2.49 - 2.40 (m, 2H), 2.38 - 2.29 (m, 2H), 2.22 - 2.13 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.86 - 1.76 (m, 3H), 1.72 - 1.64 (m, 1H), 1.56 - 1.50 (m, 1H), 1.40 - 1.32 (m, 1H), 1.22 (dd, J = 14.5, 5.6 Hz, 1H), 0.85 - 0.75 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 932.4892 (C52H65N7O9 H+, requerido 932.4916). [a]D23 3 (c 0.4, CHCl3).

Compuesto 22

Rendimiento: 10.1 mg (85 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3) 89.82 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.49 (d, J =

7.8 Hz, 1H), 7.20 - 7.03 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.94 - 5.74 (m, 3H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.40 - 4.25 (m, 4H), 4.24 (s, 1H), 3.90 (d, J = 14.0 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 15.8, 5.1 Hz, 2H), 3.32 - 3.27 (m, 1H), 3.26 - 3.11 (m, 4H), 2.82 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.60

(d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.49 - 2.35 (m, 2H), 2.28 - 2.13 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.90 - 1.75 (m, 3H), 1.72 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 1.39 - 1.21 (m, 4H), 0.84 - 0.74 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 905.4807 (C51H64N6O9 H+, requerido 905.4807).

[a]D23 -0.5 (c 0.3, CHCl3).

Compuesto 24

Rendimiento: 17.5 mg (65 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.84 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.51 (d, J =

7.8 Hz, 1H), 7.20 - 7.03 (m, 3H), 6.62 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.85 (ddd, J = 10.2, 5.0, 1.6 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30

(dt, J = 10.1, 2.0 Hz, 1 ^h ), 4.37 (s, 1H), 4.01 - 3.84 (m, 2H), 3.81 - 3.78 (m, 6H), 3.73 (s, 1H), 3.62 - 3.54 (m, 5H), 3.54 - 3.47 (m, 2H), 3.40 - 3.34 (m, 2H), 3.32 - 3.22 (m, 3H), 3.19 - 3.10 (m, 2H), 2.83 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.58 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.49 - 2.36 (m, 2H), 2.25 - 2.14 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.90 (dd, J = 13.9,

7.4 Hz, 1H), 1.83 (td, J = 11.2, 6.0 Hz, 3H), 1.79 - 1.72 (m, 3H), 1.66 - 1.59 (m, 3H), 1.55 (dt, J = 7.6, 3.8 Hz, 2H), 1.37 - 1.26 (m, 4H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.75 (t, J= 7.4 Hz, 4H). HRESI-TOF m/z 935.5267 (C53H70N6O9 H+, requerido 935.5277). [a]D23 0.7 (c 0.4, CHG3).

Compuesto 25

Rendimiento: 4.9 mg (49 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.82 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.51 (d, J =

7.7 Hz, 1H), 7.19 - 7.07 (m, 3H), 6.62 (s, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.5, 4.4 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 4.37 (s, 1H), 3.89 (t, J = 12.5 Hz, 1H), 3.85 - 3.75 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.55 - 3.49 (m, 3H), 3.40 - 3.33 (m, 2H), 3.33 - 3.21 (m, 3H), 3.20 - 3.11 (m, 2H), 2.83 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.66 (s, 1H), 2.59 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.50 - 2.35 (m, 2H), 2.25 - 2.13 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.92 (dd, J = 13.7, 7.5 Hz, 1H), 1.87 - 1.73 (m, 5H), 1.72 - 1.59 (m, 6H), 1.38 - 1.24 (m, 6H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.76 (t, J = 7.4 Hz, 3H).

HRESI-TOF m/z 949.5416 (C54H72N6O9 H+, requerido 949.5439). [a]D23 6 (c 0.2, CHG3).

Compuesto 26

Rendimiento: 10.7 mg (87 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.83 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.50 (d, J =

7.8 Hz, 1H), 7.18 - 7.07 (m, 3H), 6.61 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.84 (dd, J = 10.4, 4.5 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.29 (s, 2H), 3.88 - 3.78 (m, 8H), 3.73 (s, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.40 - 3.24 (m, 5H), 3.19 - 3.11 (m, 2H), 2.82 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.58 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.48 - 2.35 (m, 2H), 2.25 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.17 (dt, J = 15.0, 8.3 Hz, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.89 (d, J = 7.3 Hz, 4H), 1.87 - 1.73 (m, 4H), 1.68 (d, J = 14.6 Hz, 2H), 1.46 (d, J = 7.4 Hz, 4H), 1.39 - 1.24 (m, 5H), 0.81 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.78 - 0.72 (m, 4H). HRESI-TOF m/z 933.5119 (C53H68N6O9 H+, requerido 933.5120). [a]D23 2 (c 0.4, CHG3).

Compuesto 27

Rendimiento: 11.6 mg (90 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.83 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.49 (d, J =

7.9 Hz, 1H), 7.17 - 7.07 (m, 7H), 6.62 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.5, 4.6 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J =

10.1 Hz, 1H), 4.54 (s, 1H), 3.89 - 3.78 (m, 8H), 3.74 (s, 1H), 3.72 - 3.65 (m, 4H), 3.52 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 16.0,

3.9 Hz, 2H), 3.32 - 3.22 (m, 3H), 3.14 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.10 - 2.99 (m, 4H), 2.82 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.62 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.49 - 2.36 (m, 2H), 2.29 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 2.23 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.87 - 1.75 (m, 4H), 1.35 - 1.25 (m, 4H), 0.82 - 0.77 (m, 4H), 0.75 (t, J = 7.4 Hz, 3H). HRESI-TOF m/z 983.5278 (C57H70N6O9

H+, requerido 983.5277). [a]D23 -0.6 (c 0.4, CHG3).

Compuesto 28

Rendimiento: 10.4 mg (52 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.80 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.52 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.47 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.17 - 7.04 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.4, 4.4 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 5.05 - 4.82 (m, 4H), 4.43 (s, 1H), 3.96 (t,

J = 13.7 Hz, 1H), 3.90 - 3.83 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.75 (s, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.42 - 3.34 (m, 2H), 3.34 - 3.27 (m, 1H), 3.25 - 3.12 (m, 4H), 2.82 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.63 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.50 - 2.43

(m, 1H), 2.40 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.27 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.23 - 2.15 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.89 - 1.73 (m, 4H), 1.50 - 1.40 (m, 1H), 1.39 - 1.26 (m, 3H), 0.84 - 0.76 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 956.4915 (C54H65N7O9 H+, requerido 956.4916). [a]D23 -8 (c 0.4, CHG3).

Compuesto 29

Rendimiento: 11.0 mg (55 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3) 89.83 (s, 1H), 8.49 (dd, J = 4.9, 1.5 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 1H), 7.52 - 7.43 (m, 1H), 7.20 (dd, J = 7.7, 4.9 Hz, 1H), 7.17 - 7.02 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.12 (s, 1 ^h ), 5.92 - 5.78 (m, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 5.01 - 4.84 (m, 4H), 4.45 (s, 1H), 3.99 (t, J = 13.7 Hz, 1H), 3.87 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.53 (s, 3H), 3.42 - 3.35 (m, 2H), 3.30 (td, J = 9.6, 4.4 Hz, 1H), 3.27 - 3.12 (m, 4H), 2.82 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.66 - 2.62 (m, 1H), 2.48 - 2.38 (m, 2H), 2.28 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 2.24 - 2.15 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.85 - 1.78 (m, 4H), 1.45 (dq, J = 14.0, 6.7 Hz, 1H), 1.37 - 1.27 (m, 3H), 0.83 - 0.78 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 956.4915 (C54H65N7O9 H+, requerido 956.4916).

[a]D23 -6 (c 0.4, CHCl3).

Compuesto 30

Rendimiento: 10.4 mg (59 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.91 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.56 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.25 - 7.06 (m, 5H), 6.71 (s, 1H), 6.20 (s, 1H), 5.93 (dd, J = 10.1, 4.4 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.37 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 5.01 - 4.84 (m, 4H), 4.48 (s, 1H), 4.03 (t, J = 13.4 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.82 (s, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.51 - 3.42 (m, 2H), 3.42 - 3.19 (m, 5H), 2.90 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.80 (s, 3H), 2.71 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.57 - 2.46 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.38 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.32 - 2.23 (m, 1H), 2.19 (s, 3H), 1.99 - 1.83 (m, 4H), 1.61 - 1.47 (m, 1H), 1.48 - 1.30 (m, 3H), 0.95 - 0.81 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 969.5119 ^sHaeNaOg H+, requerido 969.5120). [a]D23 -0.7 (c 0.4, CHG3).

Compuesto 31

Rendimiento: 7.4 mg (63 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.82 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.47 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.16 - 7.05 (m, 3H), 7.04 - 6.91 (m, 2H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 9.9, 3.8 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.95 - 4.74 (m, 4H), 4.40 (s, 1H), 3.95 (t, J = 13.9 Hz, 1H), 3.86 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.42 - 3.34 (m, 2H), 3.33 - 3.28 (m, 1H), 3.28 - 3.11 (m, 4H), 2.82 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.63 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.49 - 2.36 (m, 2H), 2.28 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.87 - 1.76 (m, 4H), 1.38 - 1.20 (m, 4H), 0.84 - 0.76 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 973.4869 (C55H65FN6O9 H+, requerido 973.4870). [a]D23 -3 (c 0.4, CHG3).

Compuesto 32

Rendimiento: 9.7 mg, (53 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.82 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.47 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.24 (s, 2H), 7.16 - 7.04 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.2, 4.4 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.94 - 4.77 (m, 4H), 4.40 (s, 1H), 3.95 (t, J = 13.1 Hz, 1H), 3.85 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.43 - 3.34 (m, 2H), 3.34 - 3.26 (m, 1H), 3.25 - 3.11 (m, 4H), 2.82 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.63 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.50 - 2.36 (m, 2H), 2.28 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.23 - 2.15 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.88 - 1.73 (m, 4H), 1.50 - 1.34 (m, 2H), 0.84 - 0.76 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 989.4572 ^ 55^ 5^ 309 H+, requerido 989.4574). [a]D23 - 0.7 (c 0.2, CHG3).

Compuesto 33

Rendimiento: 6.9 mg (56 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.82 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.50 - 7.45 (m, 2H), 7.40 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.16 - 7.04 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 11.0, 4.6 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.33 - 5.26 (m, 1H), 4.95 - 4.72 (m, 4H), 4.40 (s, 1H), 3.95 (t, J = 13.9 Hz, 1H), 3.85 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.43 - 3.34 (m, 2H), 3.32 - 3.27 (m, 1H), 3.26 - 3.11 (m, 4H), 2.82 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.63 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.50 - 2.34 (m, 2H), 2.27 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.24 - 2.15 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.88 - 1.75 (m, 4H), 1.37 - 1.25 (m, 4H), 0.83 - 0.75 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1033.4069 ^ 55^ 58 ^ 09 H+, requerido 1033.4069). [a]D23 -2 (c 0.3, CHG3).

Compuesto 34

Rendimiento: 10.2 mg (55 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.80 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.16 - 7.11 (m, 1H), 7.11 - 7.04 (m, 2H), 6.64 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.0, 3.8 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.02 - 4.80 (m, 4H), 4.43 (s, 1H), 4.02 - 3.91 (m, 1H), 3.86 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.75 (s, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.38 (dd, J = 15.8, 4.9 Hz, 2H), 3.30 (td, J = 8.7, 7.7, 3.8 Hz, 1H), 3.26 - 3.11 (m, 4H), 2.82 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.63 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.49 - 2.37 (m, 2H), 2.28 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.89 - 1.73 (m, 4H), 1.49 - 1.39 (m, 1H), 1.39 - 1.26 (m, 3H), 0.84 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 0.80 (t, J = 7.4 Hz, 6H). HRESI-TOF m/z 1023.4837 (C56H65F3N60g H+, requerido 1023.4838). [a]D23 0.8 (c 0.2, CHG3).

Compuesto 35

Rendimiento: 3.8 mg (37 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3) 89.83 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.48 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.24 - 7.02 (m, 4H), 6.90 - 6.78 (m, 2H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 9.8, 4.0 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.29 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.95 - 4.74 (m, 3H), 4.39 (s, 1H), 4.02 - 3.87 (m, 1H), 3.85 - 3.70 (m, 11H), 3.68 - 3.56 (m, 1H), 3.50 (s, 2H), 3.43 - 3.34 (m, 2H), 3.33 - 3.22 (m, 3H), 3.22 - 3.12 (m, 2H), 2.82 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.68 - 2.60 (m, 2H), 2.49 - 2.37 (m, 2H), 2.29 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.91 - 1.73 (m, 3H), 1.64 (d, J = 12.5 Hz, 4H), 1.49 - 1.40 (m, 1H), 1.39 - 1.26 (m, 4H), 0.83 - 0.73 (m, 6H). HRESI-TOF m/z 985.5068 (C56H68N6O10 H+, requerido 985.5075), [a]D23 1 (c 0.2 , CHG3).

Compuesto 36

Rendimiento: 9.6 mg (82 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.83 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.54 - 7.45 (m, 1H), 7.20 - 7.02 (m, 4H), 6.69 - 6.57 (m, 3H), 6.11 (s, 1H), 5.84 (dd, J = 10.3, 4.5 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.85 - 4.67 (m, 4H), 4.37 (s, 1H), 3.94 (t, J = 13.8 Hz, 1H), 3.84 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.66 (s, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.43 - 3.33 (m, 2H), 3.34 - 3.21 (m, 3H), 3.21 - 3.10 (m, 2H), 2.82 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.62 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.49 - 2.34 (m, 2H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.18 (ddd, J = 14.7, 9.3, 7.3 Hz, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.89 - 1.74 (m, 4H), 1.38 - 1.16 (m, 4H), 0.79 (q, J = 7.4 Hz, 7H). HRESI-TOF m/z 970.5072 (C55H67N7O9 H+, requerido 970.5073). [a]D23 -2 (c 0.3, CHCh).

Compuesto 37

Rendimiento: 7.8 mg (65 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.85 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.48 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.18 - 7.04 (m, 4H), 6.63 (s, 1H), 6.58 - 6.50 (m, 2H), 6.11 (s, 1H), 5.84 (dd, J = 10.1, 3.9 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1 ^h ), 4.98 - 4.64 (m, 4H), 4.38 (s, 1 ^h ), 3.94 (t, J = 13.2 Hz, 1H), 3.86 - 3.77 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.50 (s, 3H), 3.41 - 3.33 (m, 2H), 3.33 - 3.13 (m, 5H), 2.87 - 2.77 (m, 4H), 2.71 (s, 3H), 2.62 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.50 - 2.35 (m, 2H), 2.29 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 2.23 - 2.13 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.90 - 1.73 (m, 4H), 1.36 - 1.24 (m, 3H), 0.85 - 0.75 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 984.5231 ^aH ae^O g H+, requerido 984.5229). [a]D23 3 (c 0.3, CHCl3).

Compuesto 38

Rendimiento: 8.2 mg (68 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.85 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.48 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.18 - 7.11 (m, 2H), 7.11 - 7.05 (m, 2H), 6.73 - 6.61 (m, 3H), 6.11 (s, 1H), 5.84 (dd, J = 10.2, 3.9 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.93 - 4.71 (m, 4H), 4.38 (s, 1H), 3.94 (t, J = 13.6 Hz, 1H), 3.86 - 3.77 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.50 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 16.0, 4.9 Hz, 2H), 3.33 - 3.12 (m, 5H), 2.93 (s, 6H), 2.82 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.62 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.48 - 2.36 (m, 2H), 2.30 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 2.23 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.91 - 1.71 (m, 4H), 1.58 - 1.51 (m, 1H), 1.37 - 1.23 (m, 3H), 0.85 - 0.73 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 998.5386 (C57H71N7O9 H+, requerido 998.5386). [a]D23 2 (c 0.3, CHG3).

Compuesto 39

Se trató una solución de 36 (16 mg, 0.016 mmol) y propionaldehído (1.3 pl, 0.017 mmol) en CH2G 2 (0.5 ml) con triacetoxiborohidruro de sodio (4.4 mg, 0.021 mmol). Después de agitar durante 2 h, se cargó la mezcla de reacción directamente sobre una placa de PTLC con gel de sílice y se reveló con EtOAc/MeOH/Et3N 95:5:3. Se aisló el producto purificado como un sólido blanco: 11.5 mg, 69 %. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.83 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.48 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.21 - 6.94 (m, 4H), 6.63 (s, 1H), 6.54 (s, 2H), 6.22 - 6.01 (m, 1H), 5.84 (dd, J = 10.4, 4.6 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.91 - 4.52 (m, 4H), 4.37 (s, 1H), 4.02 - 3.88 (m, 1H), 3.89 - 3.76 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.50 (s, 3H), 3.43 - 3.34 (m, 2H), 3.31 - 3.11 (m, 5H), 3.11 - 3.01 (m, 2H), 2.82 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.62 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 2.50 - 2.36 (m, 2H), 2.29 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.89 - 1.74 (m, 4H), 1.71 - 1.53 (m, 4H), 1.37 - 1.22 (m, 3H), 1.03 - 0.90 (m, 3H), 0.86 - 0.71 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1012.5542 (C5^bH73N7O9 H+, requerido 1012.5542). [a]D23 -0.5 (c 0.5, CHG3).

Compuesto 40

Se trató el compuesto 36 (16 mg, 0.016 mmol) con Ac2O (800 pl) y HOAc catalítico (4 pl). Se dejó avanzar la reacción durante 1 h y, a continuación, se extinguió mediante la adición lenta de NaHCO3 acuoso saturado. Se extrajo la solución acuosa con CH2G 2 y se combinaron las fases orgánicas y se secaron sobre Na2SO4. Se purificó el producto mediante PTLC (SiO2, fase móvil de EtOAc:MeOH:NEt395:5:3). Se aisló el producto como un sólido blanco: 7.5 mg, (46 %). 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.82 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.47 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 2H), 7.18 - 7.00 (m, 4H), 6.63 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.84 (dd, J = 10.6, 4.6 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.3 Hz, 1 h ), 4.94 - 4.76 (m, 4H), 4.39 (s, 1H), 4.00 - 3.90 (m, 1H), 3.91 - 3.85 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.41 - 3.34 (m, 2H), 3.33 - 3.10 (m, 6H), 2.82 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.63 (d, J = 14.6 Hz, 1H), 2.48 - 2.36 (m, 2H), 2.28 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 2.16 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.89 - 1.73 (m, 4H), 1.48 - 1.39 (m, 1H), 1.36 - 1.25 (m, 3H), 0.84 - 0.75 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1012.5177 (C57H6gN7O10 H+, requerido 1012.5178). [ajo23 -0.9 (c 0.5, CHCI3).

Compuesto 41

Se trató una solución de 36 (0.7 mg, 0.007 mmol) e /-P^NEt (1.5 pl, 0.0086 mmol) en CH2Cl2 (250 pl) con una solución de cloruro de propionilo (0.80 mg, 0.0086 mmol) en CH2Cl2 (250 pl). Se dejó avanzar la reacción durante la noche, después de lo cual se cargó la mezcla directamente sobre una placa de PTLC y se reveló con EtOAc:MeOH:NEt395:5:3. Se aisló el producto como un sólido blanco: 6.1 mg (83 %). 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 8 9.82 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.23 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.20 - 7.04 (m, 4H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.94 - 5.77 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.34 - 5.23 (m, 1H), 5.00 - 4.70 (m, 4H), 4.39 (s, 1H), 3.95 (s, 1H), 3.87 - 3.79 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 15.7, 5.1 Hz, 2H), 3.33 - 3.04 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.66 - 2.59 (m, 1H), 2.52 - 2.34 (m, 4H), 2.28 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 2.23 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.92 - 1.71 (m, 4H), 1.38 - 1.28 (m, 2H), 1.28 - 1.22 (m, 5H), 0.96 - 0.85 (m, 1H), 0.83 - 0.75 (m, 6H). HRESI-TOF m/z 1026.5330 (C58H71N7O10 H+, requerido 1026.5335). [a]D23 -3 (c 0.3, CHCh).

Compuesto 42

Rendimiento: 7.9 mg (54 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.84 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.47 (s, 2H), 7.25 - 7.20 (m, 1H), 7.20 - 7.05 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.94 - 5.80 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.98 - 4.70 (m, 4H), 4.38 (s, 1H), 4.02 - 3.88 (m, 1H), 3.86 - 3.77 (m, 7H), 3.75 (s, 1H), 3.50 (s, 2H), 3.42 - 3.33 (m, 2H), 3.33 - 3.14 (m, 4H), 3.10 (q, J = 7.3 Hz, 1H), 2.82 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.65 - 2.58 (m, 1H), 2.53 - 2.34 (m, 2H), 2.28 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 2.23 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.93 - 1.71 (m, 4H), 1.54 - 1.42 (m, 2H), 1.36 - 1.26 (m, 3H), 1.07 (dt, J = 6.7, 3.5 Hz, 2H), 0.90 - 0.73 (m, 10H). HRESI-TOF m/z 1038.5331 (C59H71N7O10 H+, requerido 1038.5335). [a]D23 -1 (c 0.3, CHG3).

Compuesto 43

Se trató una solución de 36 (0.7 mg, 0.007 mmol) e /-P^NEt (1.5 pl, 0.0086 mmol) en CH2G 2 (250 pl) con una solución de cloruro de /so-butirilo (0.92 mg, 0.0086 mmol) en CH2G 2 (250 pl). Se dejó avanzar la reacción durante la noche, después de lo cual se cargó la mezcla directamente sobre una placa de PTLC y se reveló con EtOAc:MeOH:NSt395:5:3. Se aisló el producto como un sólido blanco: 5.5 mg (74 %). 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 8 9.82 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 7.16 - 7.03 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 9.0, 3.9 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.94 - 4.76 (m, 4H), 4.39 (s, 1H), 4.00 - 3.89 (m, 1H), 3.84 - 3.78 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.50 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 16.1, 5.2 Hz, 2H), 3.31 - 3.14 (m, 4H), 3.09 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 2.82 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.65 - 2.59 (m, 1H), 2.55 - 2.35 (m, 3H), 2.28 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 2.22 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.89 - 1.73 (m, 4H), 1.37 - 1.28 (m, 2H), 1.27 - 1.22 (m, 8H), 0.86 - 0.74 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1040.5489 (C59H73N7O10 H+, requerido 1040.5491). [a]D23 -3 ( c 0.2, CHCh).

Compuesto 44

Se trató una solución de 36 (0.7 mg, 0.007 mmol) e /-P^NEt (1.5 pl, 0.0086 mmol) en CH2G 2 (250 pl) con una solución de cloruro de trimetilacetilo (1.0 mg, 0.0086 mmol) en CH2G 2 (250 pl). Se dejó avanzar la reacción durante la noche, después de lo cual se cargó la mezcla directamente sobre una placa de PTLC y se reveló con EtOAc:MeOH:NEt395:5:3. Se aisló el producto como un sólido blanco: 5.5 mg (73 %). 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 8 9.82 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.47 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.26 - 7.22 (m, 3H), 7.21 - 7.04 (m, 3H), 6.63 (s, 1 ^h ), 6.11 (s, 1 ^h ), 5.92 - 5.80 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.95 - 4.70 (m, 4H), 4.39 (s, 1H), 4.01 - 3.87 (m, 1H), 3.84 - 3.78 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.50 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 17.0, 5.3 Hz, 2H), 3.33 - 3.04 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.66 - 2.59 (m, 1H), 2.54 - 2.36 (m, 2H), 2.28 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 2.23 - 2.13 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.89 - 1.69 (m, 4H), 1.34 - 1.28 (m, 12H), 0.84 - 0.74 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1054.5647 (C60H75N7O10 H+, requerido 1054.5648). [a]D23 -6 (c 0.2, CHG3).

Compuesto 45

Se trató una solución de 36 (0.7 mg, 0.007 mmol) e /-P^NEt (1.5 pl, 0.0086 mmol) en CH2G 2 (250 pl) con una solución de cloruro de n-hexanoílo (1.2 mg, 0.0086 mmol) en CH2G 2 (250 pl). Se dejó avanzar la reacción durante la noche, después de lo cual se cargó la mezcla directamente sobre una placa de PTLC y se reveló con EtOAc:MeOH:NEt395:5:3. Se aisló el producto como un sólido blanco: 5.0 mg (66 %). 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 8 9.82 (s, 1H), 8.01 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.47 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.19 - 6.99 (m, 4H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.95 - 4.67 (m, 4H), 4.39 (s, 1H), 3.94 (t, J = 13.3 Hz, 1H), 3.81 (d, J = 11.3 Hz, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 16.0, 4.7 Hz, 2H), 3.33 - 3.12 (m, 4H), 3.09 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.82 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.63 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 2.50 - 2.24 (m, 4H), 2.18 (dt, J = 14.3, 7.3 Hz, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.88 - 1.67 (m, 5H), 1.50 - 1.27 (m, 8H), 0.90 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 0.79 (t, J = 6.9 Hz, 7H). HRESI-TOF m/z 1068.5801 (C60H75N7O10 H+, requerido 1068.5804). [a]D23 -12 (c 0.2 , CHCl3).

Compuesto 46

Se trató una solución de 36 (0.7 mg, 0.007 mmol) e /-P^NEt (1.5 pl, 0.0086 mmol) en CH2CI2 (250 pl) con una solución de cloruro de acriloílo (0.78 mg, 0.0086 mmol) en CH2Cl2 (250 pl). Se dejó avanzar la reacción durante la noche, después de lo cual se cargó la mezcla directamente sobre una placa de PTLC y se reveló con EtOAc:MeOH:NEt395:5:3. Se aisló el producto como un sólido blanco: 5.2 mg (71 %). 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 8 9.82 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.50 - 7.44 (m, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 2H), 7.25 - 7.04 (m, 4H), 6.63 (s, 1H), 6.42 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 6.24 (dd, J = 16.8, 10.3 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 9.7, 3.8 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.96 - 4.74 (m, 4H), 4.39 (s, 1H), 4.01 - 3.89 (m, 1H), 3.89 - 3.76 (m, 8H), 3.74 (s, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 16.0, 5.3 Hz, 2H), 3.33 - 3.12 (m, 5H), 3.08 (q, J = 7.3 Hz, 1H), 2.82 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.65 - 2.59 (m, 1H), 2.50 - 2.35 (m, 2H), 2.28 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 2.23 - 2.13 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.90 - 1.70 (m, 4H), 1.37 - 1.28 (m, 2H), 0.83 - 0.76 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1024.5173 (C60H75N7O10 H+, requerido 1024.5178). [a]p23 -14 (c 0.2 , CHG3).

Compuesto 47

Rendimiento: 10.2 mg (69 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.84 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.47 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.35 - 7.27 (m, 2H), 7.23 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.20 - 7.04 (m, 3H), 7.03 - 6.93 (m, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.94 (dt, J = 15.1, 1.7 Hz, 1H), 5.89 - 5.80 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.96 - 4.69 (m, 4H), 4.39 (s, 1H), 4.00 - 3.88 (m, 1H), 3.85 - 3.77 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.42 - 3.32 (m, 2H), 3.32 - 3.09 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.64 - 2.55 (m, 1H), 2.51 - 2.35 (m, 2H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 2.23 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.90 (dd, J = 7.0, 1.7 Hz, 3H), 1.87 - 1.72 (m, 4H), 1.49 - 1.41 (m, 1H), 1.37 - 1.26 (m, 3H), 0.83 - 0.75 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1038.5342 (C59H73N7O10 H+, requerido 1038.5335). [a]p23 17 (c 0.5, CHCl3).

Compuesto 48

Rendimiento: 11.3 mg (76 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.84 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.47 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 2H), 7.18 - 7.03 (m, 4H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.92 - 5.78 (m, 1H), 5.75 - 5.64 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (dt, J = 10.1, 2.0 Hz, 1H), 4.92 - 4.75 (m, 4H), 4.38 (s, 1H), 4.00 - 3.89 (m, 1H), 3.85 - 3.78 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.43 - 3.34 (m, 2H), 3.33 - 3.11 (m, 5H), 2.82 (dt, J = 16.1, 2.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.65 - 2.59 (m, 1H), 2.50 - 2.35 (m, 2H), 2.32 - 2.24 (m, 1H), 2.21 (d, J = 1.3 Hz, 3H), 2.20 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.87 - 1.74 (m, 4H), 1.52 - 1.43 (m, 1H), 1.37 - 1.25 (m, 3H), 0.84 - 0.75 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1052.5490 (C60H73N7O10 H+, requerido 1052.5491). [a]D23 9 (c 0.5, CHG3).

Compuesto 49

Rendimiento: 9.4 mg (60 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.84 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.74 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.58 - 7.50 (m, 2H), 7.47 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.43 - 7.32 (m, 4H), 7.26 - 7.23 (m, 1H), 7.20 - 7.03 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.57 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.8, 5.1 Hz, 1H), 5.47 (s, 1 ^h ), 5.29 (dt, J = 10.1, 2.1 Hz, 1H), 4.97 - 4.72 (m, 4H), 4.41 (s, 1H), 3.94 (d, J = 23.2 Hz, 1H), 3.87 - 3.76 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.42 - 3.33 (m, 2H), 3.33 - 3.09 (m, 5H), 2.82 (dt, J = 16.1, 2.1 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.64 - 2.57 (m, 1H), 2.51 - 2.36 (m, 2H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.23 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.90 - 1.71 (m, 4H), 1.50 - 1.40 (m, 1H), 1.35 - 1.24 (m, 3H), 0.85 - 0.75 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1000.5495 (C64H73N7O10 H+, requerido 1000.5491). [a]D23 13 (c 0.4, CHG3).

Compuesto 50

Se trató una solución de 36 (16 mg, 0.016 mmol) en CH2G 2 (0.5 ml) con cloruro de benzoílo (2 pl, 0.018 mmol) y Et3N (2.5 pl, 0.018 mmol). Se dejó avanzar la reacción durante 1 h antes de cargar la mezcla directamente sobre una placa de PTLC (SiO2) y se reveló con EtOAc:MeOH:NEt395:5:3. Se aisló el producto purificado como un sólido blanco: 9.2 mg (54 %). 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.82 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 3H), 7.81 (s, 1H), 7.60 - 7.52 (m, 1H), 7.52 - 7.46 (m, 3H), 7.41 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.16 - 7.03 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.84 (dd, J = 9.2, 3.8 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 5.01 - 4.79 (m, 4H), 4.41 (s, 1 h ), 4.02 - 3.91 (m, 1H), 3.91 - 3.85 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.43 - 3.34 (m, 2H), 3.33 - 3.12 (m, 5H), 2.82 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.62 (s, 1H), 2.50 - 2.36 (m, 2H), 2.30 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 2.24 - 2.15 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.92 - 1.75 (m, 4H), 1.39 - 1.23 (m, 3H), 0.88 - 0.74 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1074.5334 (C62H71N7O10 H+, requerido 1074.5335). [a]D23 -0.3 (c 0.4, CHG3).

Compuesto 51

Rendimiento: 7.0 mg (43 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.84 (s, 1H), 8.04 - 7.82 (m, 5H), 7.77 - 7.68 (m, 2H), 7.68 - 7.59 (m, 2H), 7.55 - 7.37 (m, 5H), 7.31 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.22 - 7.03 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.92 - 5.77 (m, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.30 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 5.02 - 4.74 (m, 4H), 4.42 (s, 1H), 4.05 - 3.88 (m, 1H), 3.87 - 3.77 (m, 7H), 3.75 (s, 1H), 3.53 (s, 3H), 3.43 - 3.33 (m, 2H), 3.33 - 3.08 (m, 5H), 2.83 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.66 - 2.60 (m, 1H), 2.50 - 2.37 (m, 2H), 2.30 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.91 - 1.70 (m, 4H), 1.51 - 1.43 (m, 1H), 1.37 - 1.27 (m, 3H), 0.85 - 0.77 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1150.5638 (C68H75N7O10 H+, requerido 1150.5648). [a]D23 0.8 (c 0.3, CHG3).

Compuesto 52

Rendimiento: 10.5 mg (64 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.83 (s, 1H), 8.08 - 7.85 (m, 4H), 7.79 (s, 1H), 7.54 - 7.37 (m, 2H), 7.34 - 7.28 (m, 3H), 7.20 - 7.03 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.93 - 5.75 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.35 - 5.19 (m, 1H), 4.99 - 4.70 (m, 4H), 4.41 (s, 1H), 4.05 - 3.90 (m, 1H), 3.90 - 3.77 (m, 7H), 3.75 (s, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 16.3, 5.2 Hz, 2H), 3.33 - 3.05 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.63 (d, J = 16.7 Hz, 1H), 2.53 - 2.35 (m, 2H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.96 - 1.68 (m, 4H), 1.52 - 1.41 (m, 1H), 1.35 - 1.22 (m, 3H), 0.89 - 0.72 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1158.5155 (C63H70F3N7O11 H+, requerido 1158.5158). [a]D23 6 (c 0.5, CHG3).

Compuesto 53

Rendimiento: 10.3 mg (65 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.84 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.91 - 7.73 (m, 4H), 7.48 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.35 - 7.32 (m, 2H), 7.29 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.20 - 7.01 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.90 - 5.79 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.33 - 5.25 (m, 1H), 4.97 - 4.76 (m, 4H), 4.40 (s, 1H), 4.04 - 3.89 (m, 1H), 3.87 - 3.76 (m, 7H), 3.75 (s, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.42 - 3.33 (m, 2H), 3.33 - 3.06 (m, 5H), 2.97 (hept, J = 6.9 Hz, 1H), 2.82 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.65 - 2.57 (m, 1H), 2.51 - 2.35 (m, 2H), 2.35 - 2.24 (m, 1H), 2.23 - 2.13 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.93 - 1.70 (m, 4H), 1.46 (s, 1H), 1.37 - 1.25 (m, 9H), 0.87 - 0.73 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1116.5804 (C65H77N7O10 H+, requerido 1116.5804). [a]D23 21 (c 0.5, CHG3).

Compuesto 54

Rendimiento: 7.6 mg (62 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.82 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.48 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.21 - 7.00 (m, 3H), 6.81 (s, 2H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.93 - 5.76 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.82 (q, J = 12.1 Hz, 4H), 4.39 (s, 1H), 3.97 - 3.89 (m, 1H), 3.87 (s, 6H), 3.81 (d, J = 7.2 Hz, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.42 - 3.33 (m, 2H), 3.33 - 3.14 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.68 - 2.60 (m, 2H), 2.49 - 2.36 (m, 2H), 2.30 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 2.20 (dq, J = 15.0, 8.2, 7.7 Hz, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.87 - 1.76 (m, 3H), 1.30 (ddd, J = 26.4, 12.7, 6.3 Hz, 4H), 0.79 (t, J = 7.3 Hz, 7H). HRESI-TOF m/z 1015.5178 (C57H70N6O11 H+, requerido 1015.5175). [a]D23 -3 (c 0.4, CHG3).

Compuesto 55

Rendimiento: 8.6 mg (76 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 810.07 (s, 1H), 9.83 (s, 1H), 8.64 - 8.57 (m, 1H), 8.29 (dt, J = 7.9, 1.1 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.91 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.52 - 7.44 (m, 2H), 7.32 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.18 - 7.03 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.84 (dd, J = 10.2, 4.8 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.99 - 4.76 (m, 4H), 4.41 (s, 1H), 3.96 (t, J = 13.6 Hz, 1H), 3.90 - 3.77 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.43 - 3.33 (m, 2H), 3.34 - 3.08 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.65 - 2.59 (m, 1H), 2.49 - 2.36 (m, 2H), 2.34 - 2.25 (m, 1H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.91 - 1.70 (m, 4H), 1.54 - 1.44 (m, 1H), 1.41 - 1.26 (m, 3H), 0.86 - 0.74 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1075.5281 (C61H70N8O10 H+, requerido 1075.5287). [a]D23 -7 (c 0.3, CHG3).

Compuesto 56

Rendimiento: 5.5 mg (49 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.82 (s, 1H), 9.09 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.77 (dd, J = 4.9, 1.6 Hz, 1H), 8.21 (dt, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.53 - 7.38 (m, 3H), 7.31 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.19 - 7.01 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.4, 4.8 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.99 - 4.79 (m, 4H), 4.41 (s, 1H), 4.06 - 3.91 (m, 1H), 3.90 - 3.77 (m, 7H), 3.75 (s, 1H), 3.53 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 16.4, 5.3 Hz, 2H), 3.33 - 3.07 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.66 - 2.58 (m, 1H), 2.50 - 2.34 (m, 2H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.23 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.97 - 1.71 (m, 4H), 1.51 - 1.44 (m, 1 ^h ), 1.37 - 1.25 (m, 3H), 0.86 - 0.73 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1075.5287 (C61H70N8O10 H+, requerido 1075.5287).

[a]D23 -3 (c 0.2, CHCl3).

Compuesto 57

Rendimiento: 7.2 mg (64 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.81 (s, 1H), 8.80 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 8.01 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.71 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 7.48 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.19 - 7.03 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.90 - 5.78 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.99 - 4.75 (m, 4H), 4.41 (s, 1H), 4.03 - 3.87 (m, 1H), 3.87 - 3.76 (m, 7H), 3.75 (s, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.45 - 3.33 (m, 2H), 3.33 - 3.06 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.65 - 2.59 (m, 1H), 2.52 - 2.35 (m, 2H), 2.29 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.97 - 1.73 (m, 4H), 1.51 - 1.44 (m, 1H), 1.37 - 1.26 (m, 3H), 0.85 - 0.75 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1075.5287 (C61H70N8O10 H+, requerido 1075.5287). [a]D23 -1 (c 0.2, CHG3).

Compuesto 58

Rendimiento: 18.1 mg (93 %), sólido amarillo pálido. 1H-RMN (600 MHz, CDCI3) 89.91 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 9.30 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 9.04 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.21 (dd, J = 5.1, 1.4 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.57 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.18 - 7.03 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.5, 4.8 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 5.00 - 4.80 (m, 4H), 4.42 (s, 1H), 3.96 (t, J = 13.5 Hz, 1H), 3.91 - 3.77 (m, 7H), 3.75 (s, 1H), 3.53 (s, 3H), 3.44 - 3.33 (m, 2H), 3.33 - 3.12 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.64 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 2.50 - 2.35 (m, 2H), 2.30 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.92 - 1.73 (m, 4H), 1.52 - 1.43 (m, 1H), 1.38 - 1.20 (m, 3H), 0.86 - 0.74 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1076.5238 (C60H69N9O10 H+, requerido 1076.5240). [a]D23 -14 (c 0.8, CHG3).

Compuesto 59

Rendimiento: 15.5 mg (80 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.83 (s, 1H), 9.34 (s, 1H), 9.23 (s, 2H), 8.44 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.46 (dd, J = 16.6, 8.1 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.15 - 7.05 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.91 - 5.80 (m, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.97 - 4.78 (m, 4H), 4.42 (s, 1H), 3.96 (t, J = 13.7 Hz, 1H), 3.87 - 3.76 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.42 - 3.33 (m, 2H), 3.32 - 3.11 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.62 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.48 - 2.36 (m, 2H), 2.28 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 2.22 - 2.14 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.89 - 1.71 (m, 4H), 1.50 - 1.42 (m, 1H), 1.37 - 1.24 (m, 3H), 0.89 - 0.74 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1076.5241 (C60H69N9O10 H+, requerido 1076.5240). [a]D23 -24 (c 0.7, CHG3).

Compuesto 60

Rendimiento: 6.7 mg (59 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.82 (s, 1H), 9.70 (s, 1H), 9.51 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.81 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.58 (dd, J = 2.5, 1.5 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.52 - 7.44 (m, 1H), 7.33 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.10 (dq, J = 16.1, 7.9 Hz, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.4, 4.8 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.98 - 4.79 (m, 4H), 4.42 (s, 1H), 4.03 - 3.91 (m, 1H), 3.85 - 3.77 (m, 7H), 3.75 (s, 1H), 3.53 (s, 3H), 3.37 (dd, J = 16.3, 5.7 Hz, 2H), 3.34 - 3.12 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.65 - 2.58 (m, 1H), 2.51 - 2.35 (m, 2H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.24 - 2.13 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.90 - 1.71 (m, 4H), 1.52 - 1.44 (m, 1H), 1.33 (dd, J = 14.5, 7.2 Hz, 3H), 0.82 - 0.79 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1076.5242 (C60H69N9O10 H+, requerido 1076.5240). [a]D23 -10 (c 0.3, CHG3).

Compuesto 61

Rendimiento: 8.2 mg (36 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 810.14 (s, 1H), 9.83 (s, 1H), 9.34 (dd, J = 5.0, 1.7 Hz, 1H), 8.42 (dd, J = 8.4, 1.7 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.74 (dd, J = 8.4, 5.0 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.6 Hz, 1 ^h ), 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.20 - 7.01 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.85 (ddd, J = 10.3, 5.0, 1.6 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.29 (dt, J = 9.8, 2.0 Hz, 1H), 4.99 - 4.79 (m, 4H), 4.42 (s, 1H), 3.97 (t, J = 14.1 Hz, 1H), 3.92 - 3.86 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.75 (s, 1H), 3.54 (s, 3H), 3.43 - 3.34 (m, 2H), 3.34 - 3.06 (m, 5H), 2.83 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.66 - 2.60 (m, 1H), 2.49 - 2.36 (m, 2H), 2.30 (d, J = 15.2 Hz, 1 h ), 2.24 - 2.15 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.89 - 1.73 (m, 5H), 1.38 - 1.27 (m, 3H), 0.85 - 0.71 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1076.5248 (C60H69N9O10 H+, requerido 1076.5240). [a]D23 -10 (c 0.3, CHG3).

Compuesto 62

Rendimiento: 6.6 mg (29 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.83 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 9.37 (dd, J = 5.3, 1.2 Hz, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 8.00 - 7.89 (m, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.57 - 7.43 (m, 2H), 7.30 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.18 - 7.01 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.85 (ddd, J= 10.2, 5.0, 1.6 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.94 - 4.78 (m, 4H), 4.42 (s, 1H), 4.04 - 3.90 (m, 1H), 3.85 - 3.77 (m, 7H), 3.75 (s, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.44 - 3.34 (m, 2H), 3.32 - 3.22 (m, 3H), 3.16 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.05 (q, J = 7.4 Hz, 1H), 2.82 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.63 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.51 - 2.37 (m, 2H), 2.29 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 2.24 - 2.15 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.90 - 1.71 (m, 4H), 1.51 - 1.42 (m, 1H), 1.36 - 1.27 (m, 3H), 0.85 - 0.75 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1076.5242 (C60H69N9O10 H+, requerido 1076.5240). [a]D23 -4 (c 0.3, CHG3).

Compuesto 63

Rendimiento: 9.7 mg (43 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.84 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.48 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.18 - 7.04 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.85 (ddd, J = 10.2, 5.0, 1.6 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.29 (dt, J = 10.1, 2.0 Hz, 1H), 5.02 - 4.76 (m, 4H), 4.41 (s, 1H), 3.96 (t, J = 13.5 Hz, 1H), 3.91 - 3.84 (m, 0H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.75 (s, 1H), 3.53 (s, 3H), 3.41 - 3.34 (m, 2H), 3.34 - 3.26 (m, 1H), 3.27 - 3.20 (m, 2H), 3.17 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 2.82 (dt, J = 16.2, 2.1 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.63 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 2.49 - 2.36 (m, 2H), 2.29 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 2.24 - 2.15 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.89 - 1.73 (m, 2H), 1.50 - 1.41 (m, 1H), 1.37 - 1.24 (m, 2H), 0.83 - 0.73 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1065.5077 (C59H68N8O11, H+, requerido 1065.5080). [a]D23 -6 (c 0.4, CHG3).

Compuesto 64

Rendimiento: 5.4 mg (49 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3) 89.81 (s, 1H), 8.04 - 7.94 (m, 3H), 7.85 (s, 1H), 7.82 - 7.74 (m, 1H), 7.48 - 7.38 (m, 2H), 7.31 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.22 - 7.05 (m, 3H), 6.71 - 6.52 (m, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.89 - 5.83 (m, 1H), 5.50 - 5.40 (m, 1H), 5.30 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.94 - 4.79 (m, 4H), 4.38 (s, 1H), 3.99 - 3.89 (m, 1H), 3.87 - 3.77 (m, 7H), 3.76 (s, 1H), 3.72 - 3.51 (m, 5H), 3.43 - 3.25 (m, 4H), 3.10 (q, J = 7.1, 6.4 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 18.5 Hz, 1H), 2.73 (s, 3H), 2.67 - 2.62 (m, 1H), 2.58 - 2.36 (m, 3H), 2.23 - 2.13 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.91 - 1.71 (m, 4H), 1.51 - 1.44 (m, 1H), 1.38 - 1.25 (m, 3H), 0.92 - 0.74 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1065.5085 (C59H68N8O11, H+, requerido 1065.5080). [a]D23 -10 (c 0.3, CHG3).

Compuesto 65

Rendimiento: 10.4 mg (47 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 89.83 (s, 1H), 7.99 (s, 2H), 7.96 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.48 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.18 - 7.04 (m, 3H), 6.63 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.85 (ddd, J = 10.2, 5.0, 1.6 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 5.29 (dt, J = 10.2, 2.0 Hz, 1H), 4.98 - 4.80 (m, 4H), 4.41 (s, 1H), 3.95 (t, J = 13.7 Hz, 1H), 3.92 - 3.85 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.75 (s, 1H), 3.53 (s, 3H), 3.42 - 3.35 (m, 2H), 3.33 - 3.13 (m, 5H), 2.86 - 2.79 (m, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.64 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 2.48 - 2.38 (m, 2H), 2.30 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.22 - 2.15 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.86 - 1.74 (m, 5H), 1.37 - 1.26 (m, 3H), 0.85 - 0.77 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1065.5100 (C59H68N8O11 H+, requerido 1065.5080). [a]D23 -6 (c 0.4, CHCl3).

Compuesto 66

Rendimiento: 6.3 mg (56 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.89 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.58 - 7.46 (m, 2H), 7.37 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 7.8 Hz, 3H), 6.72 (s, 1H), 6.68 - 6.62 (m, 1H), 6.20 (s, 1H), 6.02 - 5.88 (m, 1H), 5.62 - 5.46 (m, 1H), 5.38 (d, J = 10.3 Hz, 1 ^h ), 5.02 - 4.85 (m, 4H), 4.47 (s, 1H), 4.10 - 3.99 (m, 1H), 3.95 - 3.85 (m, 7H), 3.84 (s, 1H), 3.68 - 3.55 (m, 3H), 3.51 - 3.15 (m, 7H), 2.91 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 2.81 (s, 3H), 2.74 - 2.69 (m, 1H), 2.59 - 2.47 (m, 2H), 2.42 - 2.36 (m, 1H), 2.31 - 2.22 (m, 1H), 2.19 (s, 3H), 1.97 - 1.82 (m, 4H), 1.59 - 1.52 (m, 1H), 1.46 - 1.32 (m, 3H), 1.02 - 0.82 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1064.5133 (Cst^ag^On H+, requerido 1064.5128). [a]D23 -4 (c 0.3, CHCh).

Compuesto 67

Rendimiento: 7.1 mg (64 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.81 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.67 - 7.54 (m, 1H), 7.53 - 7.44 (m, 2H), 7.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.21 - 7.05 (m, 3H), 6.73 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.95 - 5.79 (m, 1H), 5.53 - 5.40 (m, 1H), 5.30 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.93 - 4.75 (m, 4H), 4.39 (s, 1H), 4.00 - 3.90 (m, 1H), 3.87 - 3.77 (m, 7H), 3.75 (s, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.42 - 3.33 (m, 2H), 3.33 - 3.06 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.66 - 2.61 (m, 1H), 2.51 - 2.36 (m, 2H), 2.33 - 2.26 (m, 1H), 2.23 - 2.15 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.89 - 1.74 (m, 4H), 1.49 - 1.44 (m, 1H), 1.37 - 1.27 (m, 3H), 0.92 - 0.75 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1064.5128 ( C a t^ ^ O n H+, requerido 1064.5128). [a]D23 -6 (c 0.3, CHG3).

Compuesto 68

Rendimiento: 7.6 mg (54 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.83 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.90 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.94 - 7.81 (m, 2H), 7.48 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.18 - 7.02 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.4, 4.7 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.88 (p, J = 13.7 Hz, 4H), 4.41 (s, 1H), 3.96 (t, J = 13.7 Hz, 1H), 3.86 - 3.78 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.43 - 3.34 (m, 2H), 3.33 - 3.14 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.62 (s, 1H), 2.43 (dd, J = 22.3, 11.1 Hz, 2H), 2.29 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 2.19 (dt, J = 14.9, 7.7 Hz, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.89 - 1.74 (m, 4H), 1.43 - 1.24 (m, 4H), 0.80 (t, J = 7.3 Hz, 7H). HRESI-TOF m/z 1091.5345 (CaoH7oN1oO1o H+, requerido 1091.5349). [a]D23 -7 (c 0.4, CHG3).

Compuesto 69

Rendimiento: 8.8 mg (58 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.82 (s, 1H), 9.53 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.56 - 7.43 (m, 2H), 7.30 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.18 - 7.02 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.85 (dd, J = 10.4, 4.7 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1 ^h ), 5.00 - 4.81 (m, 4H), 4.78 (s, 2H), 4.41 (s, 1H), 3.96 (t, J = 13.7 Hz, 1H), 3.88 - 3.77 (m, 7H), 3.75 (s, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.44 - 3.34 (m, 2H), 3.34 - 3.12 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.66 - 2.60 (m, 1H), 2.52 - 2.35 (m, 2H), 2.29 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 2.24 - 2.13 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.90 - 1.72 (m, 4H), 1.43 - 1.24 (m, 4H), 0.83 - 0.76 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1091.5345 (CaoH7oN1oO1o H+, requerido 1091.5349). [a]D23 -15 (c 0.4, CHG3).

Compuesto 70

Rendimiento: 10.1 mg (48 %), sólido blanco.1H-RMN (500 MHz, CDG3) 89.91 - 9.74 (m, 2H), 8.05 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.04 - 7.95 (m, 2H), 7.91 (s, 1H), 7.56 - 7.43 (m, 2H), 7.28 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.18 - 7.00 (m, 4H), 6.64 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.90 - 5.78 (m, 1H), 5.48 (s, 1H), 5.29 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.98 - 4.77 (m, 4H), 4.41 (s, 1H), 4.10 (s, 2H), 3.96 (t, J = 13.6 Hz, 1H), 3.89 - 3.76 (m, 7H), 3.74 (s, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.46 - 3.33 (m, 2H), 3.33 - 3.13 (m, 5H), 2.82 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.65 - 2.60 (m, 1H), 2.50 - 2.36 (m, 2H), 2.29 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 2.19 (dt, J = 15.0, 8.2 Hz, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.89 - 1.73 (m, 4H), 1.48 (s, 1H), 1.37 - 1.25 (m, 3H), 0.84 - 0.76 (m, 7H). HRESI-TOF m/z 1090.5378 (C47H57N5O9 H+, requerido 1090.5396). [a]D23 -5 (c 0.8, CHÜ3).

Ensayo de inhibición del crecimiento celular

Se sometieron a prueba los compuestos para determinar su inhibición del crecimiento celular de células L1210 (n.° de ATCC CCL-219, leucemia linfocítica de ratón), células HCT116 (n.° de ATCC CCL-247, carcinoma colorrectal humano) y células HCT116/VM46 (una cepa resistente a la vinblastina de HCT116) en cultivo. Se diluyó una población de células (>1 x 106 células/ml, según se determina con un hemocitómetro) con una cantidad apropiada de medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM, Gibco) que contenía suero bovino fetal al 10 % (FBS, Gibco) hasta una concentración final de 30000 células/ml.

A cada pocillo de una placa de 96 pocillos (Corning Costar) se le añadieron 100 pl de la solución de medio celular con una pipeta multicanales. Se incubaron los cultivos a 37 °C en una atmósfera del 5 % de CO2 y el 95 % de aire humidificado durante 24 horas. Se añadieron los compuestos de prueba a la placa tal como sigue: se diluyeron las sustancias de prueba en DMSO hasta una concentración de 1 mM y se realizaron diluciones en serie de 10 veces en una placa de 96 pocillos independiente. Se añadió medio de cultivo nuevo (100 pl) a cada pocillo de células para constituir 200 pl de medio por pocillo, seguido de 2 |j.l de cada agente de prueba. Se sometieron a prueba los compuestos por duplicado (n = 2-18 veces) a seis concentraciones entre 0-1000 nM o 0-10000 nM. Tras la adición, se incubaron los cultivos durante 72 horas adicionales.

Se utilizó un ensayo de fosfatasa para establecer los valores de CI50 tal como sigue: se retiró el medio en cada célula y se añadieron 100 |j.l de solución de fosfatasa (100 mg de sustrato de fosfatasa en 30 ml de tampón NaOAc 0.1 M, pH 5.5, Triton X-100 al 0.1 %) a cada pocillo. Se incubaron las placas a 37 °C durante 5 minutos (L1210) o 15 minutos (HCT116 y HCT116/VM46). Después del tiempo de incubación dado, se añadieron 50 |jJ de NaOH 0.1 N a cada pocillo y se determinó la absorción a 405 nm utilizando un lector de placas de 96 pocillos. Como la absorción es directamente proporcional al número de células vivas, se calcularon los valores de CI50 y los valores notificados representan el promedio de 4-36 determinaciones (DE ± 10 %).

Ensayo de desplazamiento competitivo de BODIPY-vinblastina/tubulina

Se añadieron 100 |j.l de tubulina 1 mg/ml en PEM y 25 |j.l de BODIPY-VBL 72 |j.M en DMSO a 850 |j.l de tampón (PEM GTP 1 mM). Se incubó la solución a 37 °C durante 15 minutos, después de lo cual se añadieron 25 |j.l de ligando competitivo 720 |j.M en DMSO. Se incubó la solución durante 60 minutos adicionales a 37 °C, después de lo cual se transfirieron alícuotas de 100 |j.l de cada incubación a los pocillos de una placa de 96 pocillos (calentada hasta 37 °C en el lector de placas). Se midió la intensidad de fluorescencia de BODIPY-vinblastina (ex. 480 nm, em.

514 nm, valor de corte 495 nm) a 37 °C. Se realizaron mediciones de control con BODIPY-VBL (control 1) en ausencia de ligando competitivo (potenciación de IF máxima debida a la unión a la tubulina) y (control 2) en ausencia de tubulina (sin potenciación de IF debida a la unión a la tubulina). Se calculó el % de desplazamiento de BODIPY-VBL mediante la fórmula (IF de control 2 - IF de experimento)/(IF de control 2 - IF de control 1) x 100. PEM: PIPES-K 80 mM pH 6.8, MgSO42 mM, EGTA 0.5 mM pH 6.8.

Síntesis de isoindolinas no disponibles en el mercado

5-(Metilamino)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Se añadió 2-Boc-5-aminoisoidolina (50 mg, 0.21 mmol) a una solución de NaOMe en MeOH (4 ml de 0.26 M, 1.05 mmol). A continuación, se combinó esta solución con una solución de paraformaldehído (9.5 mg, 0.32 mmol) en MeOH (2 ml). Se agitó la solución durante la noche (aproximadamente 18 horas) a temperatura ambiente, después de lo cual se añadió NaBH4 (8 mg, 0.21 mmol), y se calentó la mezcla de reacción a reflujo durante 5 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, se extinguió la reacción con la adición de NH4Cl ac. saturado (1 ml), a continuación se diluyó con agua (aproximadamente 20 ml) y se extrajo con CH2Cl2. Se secaron los extractos orgánicos sobre Na2SO4. Después de eliminar el solvente, se purificó el producto mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2, gradiente del 15-45 % de EtOAc/hexanos). Rendimiento: 25.6 mg (52 %), aceite amarillo pálido, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (400 MHz, CDC^) 87.04 y 6.09 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.73 - 6.45 (m, 2H), 4.72 - 4.47 (m, 4H), 3.52 (s, 1H), 1.50 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDCI3) 8148.0, 138.5, 123.6, 123.3, 113.6, 113.5, 107.1, 107.0, 79.7, 52.6, 52.3, 52.0, 51.6, 31.9, 31.8, 28.71, 28.67. HRESI-TOF m/z 249.1597 (C14H20N2O2 H+, requerido 249.1597).

5-(Dimetilamino)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Se trató una solución de 2-Boc-5-aminoisoidolina (50 mg, 0.21 mmol) y paraformaldehído (64 mg, 2.1 mmol) en MeOH (1 ml) y HOAc (1 ml) con NaCNBH3 (72 mg, 1.05 mmol). Se dejó avanzar la reacción durante 6 horas, después de lo cual se diluyó la mezcla con agua (aproximadamente 20 ml). Se ajustó el valor del pH a, aproximadamente, 12 mediante la adición de NaOH ac. concentrado antes de extraer la solución con CH2Cl2. Se combinaron los extractos orgánicos y se secaron sobre Na2SO4. Tras eliminar el solvente, se purificó el producto mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2, el 20 % de EtOAc/hexanos). Rendimiento: 35.6 mg (65 %), aceite amarillo pálido, mezcla de rotámeros. 1H-^r Mⁿ (400 MHz, CDG3) 87.13 y 7.08 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 6.82 - 6.46 (m, 2 H), 4.77 - 4.45 (m, 4H), 3.06 - 2.85 (m, 6H), 1.51 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDG3) 8 154.2, 154.1, 150.0, 138.0, 137.6, 122.7, 122.4, 111.9, 106.1, 79.0, 52.2, 51.8, 51.3, 51.0, 40.6, 28.1. HRESI-TOF m/z 263.1755 (C15H22N2O2 H+, requerido 263.1754).

Procedimiento general para la síntesis de N-(acil)-5-aminoisoindolinas

Se trató una solución de 2-Boc-5-aminoisoindolina (20 mg, 0.085 mmol) y un ácido carboxílico (0.102 mmol) en DMF (1 ml) con hexafluorofosfato de 3-óxido de 1 -[bis(dimetilamino)metilen]-1 H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio (HATU; 39 mg, 0.102 mmol) e Z-P^NEt (17 pl, 0.102 mmol). Se dejó avanzar la reacción durante la noche (aproximadamente 18 horas), después de lo cual se diluyó la solución con EtOAc (aproximadamente 20 ml). Se extrajo la reacción diluida dos veces con NaHCO3 ac. saturado y una vez con NaCl ac. saturado. Se secó la fase orgánica sobre Na2SO4. Se purificaron los productos mediante cromatografía ultrarrápida (SiO2) utilizando un gradiente de solventes de EtOAc/hexanos.

(£)-5-(But-2-enamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 20.1 mg (78 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 87.75 - 7.55 (m, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.42 - 7.22 (m, 1H), 7.17 y 7.14 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.05 - 6.92 (m, 1H), 5.97 y 5.95 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 4.79 - 4.40 (m, 4H), 1.90 (dd, J = 6.9, 1.7 Hz, 3H), 1.51 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDG3) 8164.2, 154.7, 141.8, 137.7, 125.5, 123.2, 123.0, 119.4, 114.5, 79.9, 52.5, 52.2, 52.1, 51.8, 28.7, 18.0. HRESI-TOF m/z 303.1702 (C17H22N2O3 H+, requerido 303.1703).

5-(3-Metilbut-2-enamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 22.7 mg (85 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDG3) 87.76 - 7.57 (m, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.33 - 7.21 (m, 1H), 7.18 y 7.15 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 5.79 - 5.67 (m, 1H), 4.76 - 4.51 (m, 4H), 2.24 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 1.92 (d, J = 1.3 Hz, 3H), 1.53 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDG3) 8165.2, 154.7, 137.8, 123.1, 122.9, 119.2, 118.7, 114.3, 79.9, 52.5, 52.2, 52.1, 51.8, 28.7, 27.6, 20.1. HRESI-TOF m/z 317.1859 (C18H24N2O3 H+, requerido 317.1860).

5-Cinamamidoisoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 24.8 mg (91 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDCI3) 8 7.95 (s, 1H), 7.78 - 7.70 (m, 2H), 7.55 - 7.28 (m, 6H), 7.22 - 7.10 (m, 1H), 6.61 y 6.59 (s, 1H), 4.73 - 4.50 (m, 4H), 1.52 (s, 9H).

13C-RMN (151 MHz, CDCl3) 8164.3, 154.7, 142.5, 137.7, 134.7, 130.1, 129.0, 128.1, 123.2, 121.0, 119.5, 114.6, 79.9, 52.2, 52.1,51.9, 28.7. HRESI-TOF m/z340.1657 (C19H21N3O3 H+, requerido 340.1656).

5-(Ciclopropanocarboxamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 23.2 mg (90 %), sólido blanco mezcla de rotámeros. 1H-RMN (400 MHz, CDC^) 8 7.76 (s, 1H), 7.68 - 7.52 (m, 1H), 7.38 - 7.21 (m, 1H), 7.21 - 7.07 (m, 1H), 4.79 - 4.46 (m, 4H), 1.52 (s, 10H), 1.09 (p, J = 4.2 Hz, 2H), 0.85 (dq, J = 7.3, 4.0 Hz, 2H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8172.2, 154.7, 137.8, 123.1, 123.0, 119.1, 114.4, 79.9, 52.5, 52.2, 52.1,51.8, 28.7, 15.8, 8.1. HRESI-TOF m/z 303.1703 (C17H22N2O3 H+, requerido 303.1703).

5-(4-(Trifluorometoxi)benzamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 32.4 mg (90 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (400 MHz, CDC^) 88.15 (s, 1H), 7.91 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.73 - 7.64 (m, 1H), 7.54 - 7.31 (m, 1H), 7.31 - 7.24 (m, 2H), 7.20 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.62 (s, 4H), 1.51 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8 164.8, 154.6, 151.8, 137.3, 133.4, 129.2, 123.3, 123.2, 120.9, 119.9, 115.1, 80.0,52.5, 52.2, 51.8, 28.7. HRESI-TOF m/z 423.1525 (C21H21F3N2O4 H+, requerido 423.1526).

5-(4-Isopropilbenzamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 27.5 mg (85 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 8 8.00 (s, 1H), 7.82 - 7.77 (m, 2H), 7.77 - 7.62 (m, 1H), 7.49 - 7.33 (m, 1H), 7.34 - 7.29 (m, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 1H), 4.76 - 4.49 (m, 4H), 2.96 (hept, J = 6.9 Hz, 1H), 1.52 (s, 9H), 1.27 (d, J = 6.9 Hz, 6H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8165.9, 154.6, 153.4, 137.7, 132.5, 127.3, 127.0, 123.2, 123.1, 119.7, 119.6, 114.9, 114.8, 79.9, 52.5, 52.2, 52.1, 51.8, 34.3, 28.7, 28.6, 23.8, 23.86. HRESI-TOF m/z 381.2171 (C23H23N2O3 H+, requerido 381.2173).

5-([1,1 ’-Bifenil]-4-carboxamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 32.1 mg (91 %), sólido blanco. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3) 88.04 - 7.85 (m, 3H), 7.81 - 7.72 (m, 1H), 7.71 - 7.67 (m, 2H), 7.66 - 7.58 (m, 2H), 7.52 - 7.44 (m, 2H), 7.44 - 7.38 (m, 1H), 7.23 (s, 1 h ), 4.81 - 4.55 (m, 4H), 1.53 (s, 9H). 13C-RMN (126 MHz, CDC^) 8 165.6, 154.7, 144.9, 140.0, 137.5, 133.6, 129.1, 128.3, 127.7, 127.6, 127.4, 119.7, 114.9, 79.9, 52.5, 52.3, 52.2, 51.9, 28.7. HRESI-TOF m/z 415.2015 (C26H26N2O3 H+, requerido 415.2016).

5-(Picolinamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 25.4 mg (88 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 8 10.05 (s, 1H), 8.74 - 8.45 (m, 1H), 8.29 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.91 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.87 y 7.83 (s, 1H), 7.64 - 7.44 (m, 2H), 7.24 (dd, J = 26.7, 8.1 Hz, 1H), 4.78 - 4.57 (m, 4H), 1.52 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8162.1, 154.6, 149.8, 148.1, 138.6, 138.2, 137.9, 137.3, 133.3, 133.0, 126.6, 123.3, 123.1, 122.5, 119.2, 119.1, 114.2, 114.0, 79.9, 79.8, 52.5, 52.3, 52.2, 51.9, 28.7. HRESI-TOF m/z 340.1657 (C19H21N3O3 H+, requerido 340.1656).

5-(Nicotinamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 27.0 mg (94 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 89.09 (s, 1H), 8.74 (dt, J = 4.8, 2.4 Hz, 1H), 8.51 - 8.33 (m, 1H), 8.21 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.78 - 7.61 (m, 1H), 7.53 - 7.33 (m, 2H), 7.25 - 7.17 (m, 1H), 4.69 - 4.56 (m, 4H), 1.51 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDCh) 8164.2, 154.6, 152.61, 152.59, 148.12, 148.09, 138.60, 138.58, 138.2. 138.13, 137.16, 137.14, 135.5, 134.05, 134.03, 133.67, 133.64, 130.84, 130.81, 123.7, 123.4, 123.2, 120.1, 120.1, 115.3, 115.1, 80.00, 79.98, 52.5, 52.18, 52.14, 51.8, 28.7. HRESI-TOF m/z 340.1655 (C19H21N3O3 H+, requerido 340.1656).

5-(Isonicotinamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 24.1 mg (84 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 88.82 - 8.69 (m, 2H), 8.37 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 7.83 - 7.60 (m, 3H), 7.54 - 7.32 (m, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 1H), 4.69 - 4.55 (m, 4H), 1.51 (d, J = 1.5 Hz, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8164.0, 154.6, 150.8, 142.13, 142.10 , 138.7, 138.2, 137.0, 136.9, 134.3, 133.9, 123.4, 123.2, 121.1, 120.0, 119.9, 115.2, 115.1, 80.1, 80.0, 52.5, 52.2, 52.1, 51.8, 28.7. HRESI-TOF m/z 340.1656 (C19H21N3O3 H+, requerido 340.1656).

5-(Pirazin-2-carboxamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 24.8 mg (86 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 89.69 (s, 1H), 9.51 (s, 1H), 8.81 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.63 - 8.53 (m, 1H), 7.90 - 7.75 (m, 1H), 7.63 - 7.42 (m, 1H), 7.28 - 7.22 (m, 1H), 4.76 - 4.60 (m, 4H), 1.52 (d, J = 2.2 Hz, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDCI3) 8160.8, 154.6, 147.7, 144.8, 144.4, 142.5, 138.7, 138.3, 136.79, 136.76, 133.9, 133.6, 123.5, 123.3, 119.3, 114.4, 114.3, 79.9, 79.9, 52.5, 52.2, 52.1, 51.9, 28.7. HRESI-TOF m/z 341.1606 (C18H20N4O3 H+, requerido 341.1608).

5-(Pi ridazi n-3-carboxam ido)isoindoli n-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 23.7 mg (82 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 810.13 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 8.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.94 - 7.72 (m, 2H), 7.55 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 7.31 - 7.24 (m, 1H) , 4.75 - 4.60 (m, 4H), 1.52 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8160.2, 154.6, 153.2, 136.7, 134.1, 128.4, 126.0, 123.5, 123.3, 119.4, 114.6, 114.3, 79.9, 52.5, 52.3, 52.2, 51.9, 28.7. HRESI-TOF m/z 341.1607 (C18H20N4O3 H+, requerido 341.1608).

5-(Pi ridazi n-4-carboxam ido)isoindoli n-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 21.5 mg (62 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 89.71 (s, 1H), 9.53 - 9.13 (m, 2H), 8.05 (s, 1H), 7.75 y 7.67 (s, 1H), 7.53 y 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 4.84 - 4.42 (m, 4H), 1.50 (s, 9H).

13C-RMN (151 MHz, CDCl3) 8162.1, 154.7, 138.6, 138.1, 136.8, 134.6, 134.2, 123.5, 123.3, 120.4, 120.3, 115.5, 115.4, 80.2, 52.5, 52.2, 51.8, 28.7. HRESI-TOF m/z 341.1607 (C18H20N4O3 H+, requerido 341.1608).

5-(Pirim idin-4-carboxamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 26.2 mg (91 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 89.92 (s, 1H), 9.33 (s, 1H), 9. 07 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.25 (dd, J = 5.0, 1.4 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.67 - 7.45 (m, 1H), 7.28 (s, 1H), 4.75 - 4.65 (m, 4H), 1.54 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8160.2, 159.6, 157.6, 156.4, 154.6, 136.5, 123.4, 119.4, 118.8, 114.4, 80.0, 52.3, 52.0, 28.7. HRESI-TOF m/z 341.1607 (C18H20N4O3 H+, requerido 341.1608).

5-(Pirim idin-5-carboxamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 25.0 mg (87 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 89.35 (s, 1H), 9.30 (s, 2H), 8.70 - 8.55 (m, 1H), 7.75 - 7.60 (m, 1H), 4.51 - 7.39 (m, 1H), 7.25 - 7.16 (m, 1H), 4.76 - 4.51 (m, 4H), 1.51 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8161.8, 160.2, 156.0, 154.7, 138.2, 136.7, 128.7, 123.5, 123.3, 115.3, 80.1, 52.5, 52.2, 51.8, 28.7. HRESI-TOF m/z 341.1608 (C18H20N4O3 H+, requerido 341.1608).

5-(Oxazol-2-carboxamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 17.3 mg (62 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, acetona-cfe) 89.61 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.86 - 7.69 (m, 2H), 7.62 (dt, J = 8.2, 2.3 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 11.4, 8.2 Hz, 1H), 4.70 - 4.38 (m, 4H), 1.45 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, acetona-cfe) 8155.8, 154.7, 153.7, 146.7, 138.6, 131.0, 123.9, 120.6, 115.5, 79.6, 53.0, 52.852.6, 52.4, 38.7, 28.7. HRESI-TOF m/z 352.1266 (C17H19N3O4 Na+, requerido 352.1268).

5-(Oxazol-4-carboxamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 17.0 mg (61 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 88.05 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.75 - 7.60 (m, 1H), 7.51 - 7.31 (m, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 1H), 4.74 - 4.56 (m, 4H), 1.51 (d, J = 1.2 Hz, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8154.7, 154.6, 151.5, 145.5, 138.8, 138.4, 136.28, 136.25, 134.3, 134.0, 131.4, 123.5, 123.3, 119.7, 119.6, 114.9, 114.8, 80.01, 79.98, 52.5, 52.2, 52.1, 51.8, 28.7. HRESI-TOF m/z 330.1449 (C17H19N3O4 H+, requerido 330.1449).

5-(Oxazol-5-carboxamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 26.8 mg (95 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, acetona-cfe) 89.75 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.05 - 7.81 (m, 2H), 7.76 (dt, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 10.9, 8.2 Hz, 1H), 4.87 - 4.54 (m, 4H), 1.59 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, acetona-cfe) 8155.9, 154.8, 153.8, 146.8, 138.6, 131.1, 123.9, 120.6, 115.6, 79.7, 53.0, 52.8, 52.7, 52.4, 38.8, 28.7. HRESI-TOF m/z 352.1270 (C17H19N3O4 Na+, requerido 352.1268).

5-(Furan-2-carboxamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 25.6 mg (94 %), aceite incoloro, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 88.14 (s, 1H), 7.77 - 7.63 (m, 1H), 7.52 - 7.49 (m, 1H), 7.49 - 7.31 (m, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 2H), 6.62 - 6.50 (m, 1H), 4.79 - 4.51 (m, 4H), 1.51 (d, J = 1.8 Hz, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8154.6, 147.8, 144.4, 138.6, 138.2, 136.93, 136.90, 133.6, 133.2, 123.3, 123.2, 119.40, 119.35, 115.5, 114.6, 114.5, 112.8, 79.90, 79.87, 52.5, 52.2, 52.1, 51.8, 28.7. HRESI-TOF m/z 329.1494 (C18H20N2O4 H+, requerido 329.1496).

5-(Furan-3-carboxamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 26.0 mg (92 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDCI3) 88.05 (s, 1H), 7.89 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 7.71 - 7.53 (m, 1H), 7.47 - 7.45 (m, 1H), 7.45 - 7.27 (m, 1H), 7.17 (dd, J = 14.0, 8.2 Hz, 1H), 4.65 - 4.58 (m, 4H), 1.51 (d, J = 1.7 Hz, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8161.0, 154.7, 145.39, 145.37, 144.1, 138.5, 138.0, 137.3, 137.2, 133.5, 133.2, 123.2, 123.10, 123.06, 119.9, 119.8, 115.1, 115.0, 108.6, 79.98, 79.95, 52.5, 52.2, 52.1,51.8, 28.7. HRESI-TOF m/z 329.1498 (C18H20N2O4 H+, requerido 329.1496).

5-(5-Aminopicolinamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 31.8 mg (98 %), sólido blanco, mezcla de rotámeros. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 89.80 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.00 (t, J = 3.2 Hz, 1H), 7.85 y 7.81 (s, 1H), 7.60 - 7.42 (m, 1H), 7.22 (dd, J = 26.9, 8.3 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 8.5, 2.7 Hz, 1H), 4.70 - 4.60 (m, 4H), 4.10 (s, 2H), 1.52 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8162.7, 154.7, 145.4, 140.3, 138.5, 137.8, 135.0, 132.7, 123.7, 123.2, 123.0, 121.4, 118.99, 118.95, 114.0, 113.8, 79.8, 52.6, 52.3, 52.2, 51.9, 28.7. HRESI-TOF m/z 355.1766 (C19H22N4O3 H+, requerido 355.1765).

5-(5-((ferc-Butiloxicarbonil)amino)pirazin-2-carboxamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

El producto precipita a partir de la solución de reacción como un sólido blanco y se aisló mediante filtración, aclarando con EtOAc frío. No fue necesaria la purificación adicional mediante cromatografía ultrarrápida. Rendimiento: 54.6 mg (94 %), sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, CDC^) 89.58 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.18 - 7.97 (m, 1H), 7.82 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 7.59 - 7.45 (m, 1H), 7.22 (s, 1H), 4.85 - 4.53 (m, 4H), 1.59 (s, 9H), 1.52 (s, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8161.0, 154.7, 151.6, 150.8, 142.6, 139.0, 137.1, 132.9, 123.4, 123.2, 119.3, 114.4, 114.2, 82.9, 79.9, 52.5, 52.3, 52.2, 51.9, 28.4. HRESI-TOF m/z 456.2240 (C23H29N3O3 H+, requerido 456.2241).

5-(6-Aminopirazin-2-carboxamido)isoindolin-2-carboxilato de terc-butilo

Rendimiento: 56.2 mg (95 %), sólido blanco. 1H-RMN (600 MHz, CDC^) 89.53 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.90 - 7.69 (m, 1H), 7.62 - 7.37 (m, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 4.84 (s, 2H), 4.74 - 4.57 (m, 4H), 1.52 (d, J = 2.1 Hz, 9H). 13C-RMN (151 MHz, CDC^) 8 161.4, 154.7, 152.5, 141.4, 138.6, 138.2, 137.0, 136.0, 133.7, 133.6, 133.2, 123.3, 123.2, 119.2, 114.3, 114.2, 79.9, 52.5, 52.23, 52.15, 51.9, 28.7. HRESI-TOF m/z 356.1717 (C18H21N5O3 H+, requerido 356.1717).

Se pretende que la descripción y los ejemplos anteriores sean ilustrativos y no deben considerarse como limitativos. Son posibles aún otras variaciones dentro del alcance de la presente invención y se les ocurrirán fácilmente a los expertos en la materia.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Derivado de 20’-hidroxi-vinca de fórmula estructural A o sal aceptable farmacéuticamente del mismo,

R3

en la que R es un sustituyente de fórmula

en la que N es nitrógeno y uno de W, X, Y y Z también puede ser nitrógeno (N), y cuando no son nitrógeno, W, X, Y y Z son CH o uno de W, X, Y, Z es CR4567, y R4 es hidrido o un sustituyente electrodonador, y

Rb es F o H.

2. Derivado de 20’-hidroxi-vinca o sal, según la reivindicación 1, en el que uno de W, X, Y y Z es nitrógeno.

3. Derivado de 20’-hidroxi-vinca o sal, según la reivindicación 1, en el que R tiene una fórmula estructural de una de

4. Derivado de 20’-hidroxi-vinca o sal, según la reivindicación 3, en el que R4 es hidrido o se selecciona entre el grupo que consiste en un grupo hidrocarbilo C1-C4, amino, mono-hidrocarbil C1-C4-amino, di-hidrocarbil Cr C4-amino e hidrocarbil Cr C4-oxilo.

5. Derivado de 20’-hidroxi-vinca o sal, según la reivindicación 1, en el que Rb es H.

6. Derivado de 20’-hidroxi-vinca o sal, según la reivindicación 1, que es un derivado de vinblastina.

7. Compuesto, según la reivindicación 1, que es una vinblastina sustituida en 20’ de fórmula estructural B, o una sal aceptable farmacéuticamente de la misma

en la que R es un sustituyente de fórmula

en la que N es nitrógeno y uno de W, X, Y y Z puede ser nitrógeno (N), y cuando no son nitrógeno, W, X, Y y Z son CH o uno de W, X, Y, Z es CR4, en la que R4 es hidrido o se selecciona entre el grupo que consiste en uno o varios de un grupo hidrocarbilo C1-C4, amino, mono-hidrocarbil C rC 4-amino, di-hidrocarbil Cr C4-amino e hidrocarbil C1-C4-oxilo.

8. Vinblastina sustituida en 20’ o sal, según la reivindicación 7, en la que R4 es amino.

9. Vinblastina sustituida en 20’ o sal, según la reivindicación 7, en la que R tiene una fórmula estructural de una de

10. Composición farmacéutica, que comprende una cantidad que inhibe la proliferación de células cancerosas de un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca, según la reivindicación 1, o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo, disuelto o dispersado en un portador aceptable fisiológicamente, preferentemente en el que a) uno de W, X, Y y Z es nitrógeno, b) R4 es amino y c) Rb es H.

11. Procedimiento para inhibir el crecimiento de células cancerosas, que comprende poner en contacto dichas células cancerosas in vitro con una cantidad que inhibe la proliferación de células cancerosas de un compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca, según la reivindicación 1, o una sal aceptable farmacéuticamente del mismo.

12. Procedimiento, según la reivindicación 11, en el que dichas células cancerosas se ponen en contacto una pluralidad de veces.

13. Compuesto derivado de 20’-hidroxi-vinca, según la reivindicación 1, o sal aceptable farmacéuticamente del mismo, para su utilización en el tratamiento del cáncer.

14. Procedimiento, según las reivindicaciones 11 o 12, en el que dichas células cancerosas son células de leucemia o son células de carcinoma.

15. Procedimiento, según la reivindicación 14, en el que dichas células de carcinoma son resistentes a la vinblastina.

REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCION

Esta lista de referencias citada por el solicitante es únicamente para mayor comodidad del lector. No forman parte del documento de la Patente Europea. Incluso teniendo en cuenta que la compilación de las referencias se ha efectuado con gran cuidado, los errores u omisiones no pueden descartarse; la EPO se exime de toda responsabilidad al respecto.

Documentos de patentes citados en la descripción

♦ US 62343490 • US 5811521 A

♦ CA 115526 • US 4746651 A

♦ CA 042056 • US 4548905 A

♦ US 7473477 B • US 8940754 B

Literatura no patente citada en la descripción

♦ Goodman & Gilman’s The Pharmaceutical Basis of • MULLICAN et al. J. Org. Chem., 1984, vol.49, 4033 Therapeutics. McGraw-Hill, 1996,1257-1260

♦ KUEHNE et al. The Alkaloids. Academic, 1990, vol. • LEGGANS et al. Org. Lett, 2012, vol.4,1428

37, 77-131 • BARKER et al. J. Am. Chem. Soc., 2012, vol. 134, ♦ BORMAN et al. The Alkaloids. Academic, 1990, vol. 13588

37, 133-144 • LEGGANS et al. J. Med. Chem., 2013, vol. 56, 628 ♦ PEARCE. The Alkaloids. Academic, 1990, vol. 37,

145-204 • BARKER et al. A CS Med. Chem. Lett., 2013, vol. 4, ♦ NEUSS et al. The Alkaloids. Academic, 1990, vol. 985

37, 229-240 • GIGANT et al. Nature, 2005, vol. 435, 519 ♦ NOBEL et al. Ann. N. Y. Acad. Sci., 1958, vol. 76, 88

• ARKIN et al. Nat. Rev. Drug Discovery, 2004, vol. 3, ♦ NOBLE. Lloydia, 1964, vol. 27, 280 301

♦ NOBEL. Biochem . Cell Biol., 1990, vol. 68, 1344 • WELLS et al. Nature, 2007, vol. 450, 1001

• YIN. Angew. Chem. Int. Ed., 2005, vol. 4,4130 ♦ SVOBODA et al. J. Am. Pharm. Assoc., Sci. Ed., • MEIRELES et al. Med. Chem., 2011, vol. 11, 248 1959, vol. 48, 659

♦ TIMASHEFF et al. C ellu lar Pharmacol.. 1993, vol. 1, • BOGER et al. Chem. Int. Ed., 2003, vol. 42, 4138 S27

♦ JORDAN et al. N a t Rev. Cáncer, 2004, vol. 4, 253 • GOTOH et al. A CS Med. Chem. Lett., 2011, vol. 2,

948

♦ JORDAN et al. C áncer Res, 1985, vol. 45, 2741 • WILSON et al. J. Org. Chem., 2006, vol. 71, 8329

♦ POTIER. N a t Prod., 1980, vol. 43, 72 • ZPILMAN et al. Angew. Chem. Int. Ed., 2010, vol. ♦ KUTNEY. N a t Prod. Rep., 1990, vol. 7, 85 49, 9592

♦ FAHY. Curr. Pharm. Design, 2001, vol. 7, 1181 • HONG, J. Chem. Eur. J., 2014, vol.20,10204

• J. HIÑE. Physical Organic Chemistry. McGraw-Hill ♦ SEARS et al. Acc. Chem. Res., 2015, vol. 48, 653 BookCo., Inc, 1962, 87

• The Merck Index. Merck & Co, 2001, 1778-1779 ♦ ISHIKAWA et al. J. Am. Chem. Soc., 2008, vol. 130,

420 • The Merck Index. Merck and Co, 1996,1704 ♦ ISHIKAWA et al. J. Am. Chem. Soc., 2009, vol. 131, • BERGE.J. Pharm. Sci., 1977, vol.^{6 8} (1), 1-19

4904 • HOOVER; JOHN E. Remington’s Pharmaceutical ♦ GOTOH et al. J. Am. Chem. Soc., 2012, vol. 134, Sciences. Mack Publishing Co, 1975

13240 • Pharmaceutical Dosage Forms. Marcel Decke, 1980 ♦ LEGGANS et al. Org. Lett., 2012, vol. 14, 1428

• OWELLEN et al. Biochem. Pharmacol., 1977, vol. ♦ BARKER et al. J. Am. Chem. Soc., 2012, vol. 134, 26, 1213

1358 • BHATTACHARYYA et al. Proc. Nati. Acad. Sci. ♦ BOGER et al. J. Org. Chem., 1984, vol. 49, 4050 U.S.A., 1976, vol. 73, 2375

• JIANG et al. C áncer Res., 1998, vol.58, 5389 ZHANG e ta l . P loS one, 2009, vol. 4, e4881 • JORDAN et al. C áncer Res, 1985, vol. 45, 2747 RAIET. PloS one, 2012, vol. 7, e44311

RASHID et al. Biochem istry, 2015, vol. 4, 2149