ES2796361T3

ES2796361T3 - Uso terapéutico de una solución oftálmica acuosa estéril

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Publication number: ES2796361T3
Application number: ES16787869T
Authority: ES
Inventors: Martin Prinz
Original assignee: Croma Pharma GmbH
Current assignee: Croma Pharma GmbH
Priority date: 2015-10-30
Filing date: 2016-10-27
Publication date: 2020-11-26
Anticipated expiration: 2036-10-27
Also published as: CA3001634C; PL3368007T3; WO2017072236A1; MX2018004779A; US10583152B2; US20180303865A1; IL258785B; CN108348455A; CA3001634A1; JP6817300B2; KR20180066104A; BR112018007686A2; RU2741912C2; EP3368007B1; RU2018119126A; JP2018535962A; EP3368007A1; RU2018119126A3; PT3368007T; IL258785A

Abstract

Una solución oftálmica acuosa estéril que comprende N-(N-acetilcisteinil)quitosano o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una solución portadora, en donde el N-(N-acetilcisteinil)quitosano tiene un contenido de grupos tiol libres en una cantidad de 80 μmol/g de polímero a 280 μmol/g de polímero, para uso en el tratamiento de heridas corneales.

Description

DESCRIPCIÓN

Uso terapéutico de una solución oftálmica acuosa estéril

La presente invención se refiere al uso terapéutico de una solución oftálmica estéril que comprende N-(N-acetilcisteinil)quitosano o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una solución portadora.

Las lesiones corneales mecánicas son las lesiones oftálmicas más comunes. A menudo son causadas por el impacto de fuerzas físicas externas (por ejemplo, ramas, uñas, aplicadores de maquillaje), lo que da como resultado daños en partes pequeñas o grandes de la superficie corneal. Las abrasiones relacionadas con cuerpos extraños generalmente son causadas por trozos de desechos en el aire (tal como trozos de metal, madera, vidrio, etc.) que se han incrustado en la córnea. Después de la eliminación de los cuerpos extraños, quedan defectos en el epitelio corneal. Las abrasiones relacionadas con lentes de contacto son defectos en el epitelio corneal causados por el uso excesivo de lentes de contacto o el uso de lentes de contacto mal ajustadas o mal limpiadas.

Las lesiones corneales químicas son otra razón para el trauma corneal. La exposición a sustancias alcalinas o ácidas puede causar daños extensos a la superficie corneal.

El daño epitelial corneal también ocurre como resultado de una exposición intensa a la luz ultravioleta (fotoqueratitis) debido a la falta de protección ocular adecuada (por ejemplo, ceguera por la nieve). Las heridas corneales también ocurren como consecuencia de la cirugía, tal como la cirugía de cataratas, el trasplante de córnea, la cirugía de filtración de glaucoma y la cirugía ocular refractiva, tal como la queratectomía fotorrefractiva (PRK, por sus siglas en inglés) y la queratomileusis in situ asistida por láser (LASIK, por sus siglas en inglés); o como complicaciones corneales de la cirugía intraocular tal como la vitrectomía (Hammil, M. Bowes, 2011, Mechanical Injury. In Krachmer, Mannis et al. (editors): Cornea [3rd edition] Elsevier Inc.:1169-1185).

Las erosiones corneales recurrentes se caracterizan por episodios repetidos de ruptura epitelial corneal. Pueden ser causados por distrofias corneales tal como la distrofia de la membrana basal epitelial o pueden ser el resultado de un traumatismo corneal menor o abrasión (Steele, Chris, 1999, The role of therapeutic contact lenses in corneal wound healing, Optometry today (October 8): 36-40). La ruptura o pérdida de la capa epitelial conduce a fallos en la integridad de la superficie corneal. Las heridas corneales relacionadas con las erosiones corneales son, por lo tanto, principalmente daños epiteliales. Los defectos epiteliales que no se cicatrizan durante un período de una o dos semanas o que se cicatrizan y se rompen repetidamente son, por ejemplo, defectos epiteliales corneales que no cicatrizan, defectos epiteliales corneales persistentes, defectos epiteliales corneales de cicatrización lenta y defectos epiteliales neuropáticos (neurotróficos).

Otro defecto epitelial con pérdida o daño epitelial corneal punteado fino y disperso típico es una queratitis punteada superficial (SPK, por sus siglas en inglés). Esta inflamación corneal puede ser el resultado de varias causas, tal como conjuntivitis viral (más comúnmente adenovirus), blefaritis, queratoconjuntivitis seca, tracoma, quemaduras químicas, exposición a la luz ultravioleta (UV) (por ejemplo, arcos de soldadura, lámparas solares, reflejos de nieve), llevar mucho lentes de contacto, medicamentos sistémicos (por ejemplo, arabinósido de adenina), toxicidad de fármacos tópicos o de conservantes y parálisis periférica del nervio facial (incluida la parálisis de Bell). Por lo tanto, la SPK puede ser causada por infecciones así como por razones no infecciosas.

El tratamiento de las heridas corneales no infecciosas tiene tres objetivos: el alivio de los síntomas del paciente mediante la administración sistémica y/o tópica de analgésicos; prevención de infecciones (si se considera necesario) mediante la instilación tópica de antibióticos; y protección del epitelio corneal. Los procedimientos quirúrgicos tal como el trasplante de córnea generalmente requieren medicación adicional para la fase postoperatoria; sin embargo, las gotas oculares para la protección y lubricación de la superficie corneal son parte de la terapia.

La protección del epitelio corneal es el objetivo principal del tratamiento después de las lesiones epiteliales corneales para permitir la regeneración epitelial y el restablecimiento de una superficie ocular intacta. Las opciones de tratamiento actuales incluyen el uso de lubricantes oculares, lentes de contacto blandas terapéuticas (lentes de vendaje) o parches en el ojo. Tanto las lentes de contacto como los parches oculares pueden causar molestias oculares al paciente y pueden aumentar el tiempo de cicatrización y el riesgo de queratitis microbiana. En consecuencia, su uso debe ser monitorizado de cerca por un profesional de la salud ocular. En el contexto de los parches oculares también se investiga la ingeniería de tejidos. Se dio a conocer que una membrana de mezcla artificial que incluye, hidroxietil quitosano, gelatina y condroitina sulfato sembrados con células epiteliales corneales y trasplantados en epitelio corneal dañado mecánicamente, reduce el tamaño del área dañada en los días 2 a 4 después de la cirugía en conejos (Liang et al., 2014, Tissue-engineered membrane based on chitosan for repair of mechanically damaged corneal epithelium, Journal of Materials Science: Materials in Medcine (25): 2163-2171). Las formulaciones que contienen ácido hialurónico se utilizan comúnmente como lubricantes oculares. Se dio a conocer que mejoraron la cicatrización del epitelio corneal cuando se aplicaron 4 veces al día durante la fase aguda de la cicatrización (Stiebel-Kalish et al., 1998, A comparison of the effect of hyaluronic acid versus gentamicin on corneal epithelial healing, Eye (12): 829-833). En caso de erosiones corneales recurrentes, la terapia con lubricante debe continuar después de la cicatrización de la abrasión como medida profiláctica durante un mínimo de 6 meses (Steele, Chris, 1999, The role of therapeutic contact lenses in corneal wound healing, Optometry today (October 8): 36-40).

El quitosano ha sido ampliamente utilizado como apósito tópico en el tratamiento de heridas de la piel (Dai, Tanaka et al., 2011, Chitosan preparations for wounds and burns: antimicrobial and woundhealing effects, Expert Rev Anti Infect Ther (9): 857-879). También se propuso el uso de carbohidratos tiolados (incluido el quitosano tiolado) para la preparación de apósitos para heridas (patente europea EP1487508 Johnson&Johnson “Therapeutic compositions comprising modified polysaccharides”).

Se descubrió que las gotas oculares que contenían 1,5% de HCl de quitosano tenían efectos similares a las gotas oculares con factor de crecimiento de fibroblastos bovinos recombinantes en la promoción del método de cicatrización del epitelio corneal en un modelo de conejo. Las gotas oculares aplicadas tres veces al día que contenían 0,5% de HCl de quitosano mostraron estos efectos promocionales en un grado significativamente menor y tuvieron resultados ligeramente mejores que el control negativo (Yonghon Xu et al. 2009, Promotive Effects of CH-HCL Chitosan Solution on Epithelial Corneal Abrasion in Rabbits, Wuhan University Journal Medical Section 30(2): 173-176). Sin embargo, los informes de los efectos del quitosano en la cicatrización de heridas corneales son contradictorios. Una solución al 1% de quitosano no logró mejorar la cicatrización de la herida corneal cuando se aplicó tres veces al día durante 3 semanas en un estudio utilizando un modelo de conejo (Sall, Kreter et al., 1987, The effect of chitosan on corneal wound healing, Ann Ophthalmol (19): 31 -33). Otro grupo de investigación dio a conocer que las soluciones al 0,5% de quitosano estimularon la cicatrización de heridas corneales después de 24 horas de incubación de córneas de conejo en cultivo de órganos (Cui et al., 2014, Chitosan promoted the corneal epithelial wound healing via activation of ERK MAPK Pathway, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 55(13):499).

El documento WO2011/127144 describe el uso de quitosanos modificados para varias aplicaciones diferentes de cicatrización de heridas, que incluye el uso de un polímero de quitosano-arginina para el tratamiento de heridas corneales. En una quemadura alcalina en un modelo de córnea de conejo, la aplicación de 4 veces al día de una formulación que contiene un derivado de quitosano-arginina durante 9 días disminuyó la inflamación y aceleró la cicatrización de heridas. Se dio a conocer que otro polímero mucoadhesivo, el arabinogalactano de alerce, aumenta significativamente la tasa de cicatrización de las heridas corneales en comparación con el vehículo control cuando se aplica como solución al 5% 3 veces al día durante un período de tiempo de 3 días (Burgalassi, Nicosia et al., 2011, Arabinogalactan as active compound in the management of corneal wounds: in vitro toxicity and in vivo investigations on rabbits, Curr Eye Res (36): 21-28).

Se ha descrito que la tiolación de polímeros aumenta aún más sus propiedades mucoadhesivas. La patente europea EP 1126881 B1 describe un polímero mucoadhesivo que comprende al menos un grupo tiol no terminal. El uso de polisacáridos tiolados para preparar un implante para aumento de tejido se describe en el documento WO 2008/077172, en donde dichos polímeros tiolados se caracterizan por la formación de enlaces disulfuro que conducen a una estabilización de la red polimérica. La solicitud prioritaria de los documentos WO 2008/077172, A 2136/2006, describe campos de aplicación adicionales para polímeros tiolados.

Se ha descrito la modificación de quitosano por unión covalente de ligandos que llevan grupos tiol (es decir, tiolación). También se ha descrito que la tiolación aumenta las propiedades mucoadhesivas del quitosano (Kast and Bernkop-Schnurch, 2001, Thiolated polymers—thiomers: development and in vitro evaluation of chitosan-thioglycolic acid conjugates, Biomaterials (22): 2345-2352; Bernkop-Schnurch, Hornof et al., 2004, Thiolated chitosans, Eur J Pharm Biopharm (57): 9-17; Bernkop-Schnurch, 2005, Thiomers: a new generation of mucoadhesive polymers, Adv Drug Deliv Rev (57): 1569-1582; Schmitz, Grabovac et al., 2008, Synthesis and characterization of a chitosan-N-acetyl cysteine conjugate, Int J Pharm (347): 79-85). También se evaluó la eficacia antimicrobiana de algunos quitosanos tiolados (el documento WO2009132226 A1; el documento WO2009132227 A1; el documento WO2009132228 A1; Geisberger, Gyenge et al., 2013, Chitosan-thioglycolic acid as a versatile antimicrobial agent, Biomacromolecules (14): 1010-1017).

N-acetilcisteína (NAC) es un derivado del grupo tiol que lleva el aminoácido L-cisteína. NAC es un agente reductor con actividad antioxidante. También es bien conocida por su capacidad para reducir la viscosidad del moco al reducir los enlaces disulfuro de mucina. Debido a estas propiedades mucolíticas, el NAC se utiliza ampliamente para reducir la viscosidad del moco en los trastornos broncopulmonares con producción excesiva de moco. Las formulaciones oftálmicas tópicas que contienen el agente mucolítico y antioxidante NAC se utilizan para el tratamiento de enfermedades corneales tal como la disfunción de la glándula meibomiana y DES (Lemp, 2008, Management of dry eye disease, Am J Manag Care (14): S88-101; Akyol-Salman, Azizi et al., 2010, Efficacy of topical N-acetylcysteine in the treatment of meibomian gland dysfunction, J Ocul Pharmacol Ther (26): 329-333). La patente europea EP 0551 848 B1 describe una composición farmacéutica oftálmica para el tratamiento de DES que contiene NAC en una concentración entre 3% y 5% (p/v) y alcohol polivinílico. Se ha descrito que la tiolación de quitosano utilizando NAC aumenta su tiempo de residencia ocular en ojos de conejo en comparación con el quitosano no tiolado (Dangl, Hornof et al., 2009, In vivo Evaluation of Ocular Residence Time of 124I-labelled Thiolated Chitosan in Rabbits Using MicroPET Technology, ARVO Meeting Abstracts (50): 3689).

Se ha descrito que el HCl de N-(N-acetilcisteinil)quitosano tiene algún efecto beneficioso sobre la superficie ocular del ojo del ratón en modelos de ratón con ojo seco (Hongyok, Chae et al., 2009, Effect of chitosan-N-acetylcysteine conjugate in a mouse model of botulinum toxin B- induced dry eye, Arch Ophthalmol (127): 525-532; Hornof, Goyal et al., 2009, Thiolated Chitosan for the Treatment of Dry Eye-Evaluation in Mice Using the Controlled-Environment Chamber Model, ARVO Meeting Abstracts (50): 3663; Hoeller et al, 2011, Safety And Tolerability Of Chitosan-Nacetylcysteine Eye Drops In Healthy Young Volunteers, arvo annual meeting abstract search and program planner; Garhofer et al, 2011 Chitosan-N-Acetylcaxteine Eye Drops, Cataract & Refractive Surgery Today Europe, 49-50).

A continuación se enumeran otras publicaciones que revisan y discuten diversos usos de los polímeros tiolados:

Hornof et al, Mucoadhesive ocular insert based on thiolated poly(acrylic acid): development and in vivo evaluation in humans; Journal of Controlled Release 89 (2003) 419-428; Hornof, M., In vitro and in vivo evaluation of novel polymeric excipients in the ophthalmic field, Thesis, University of Vienna, 2003; Bernkop-Schnurch et al, Permeation enhancing polymers in oral delivery of hydrophilic macromolecules: Thiomer/GSH systems, J. Contr. Release 93(2003) 95-103; M. Hornof et al., In Vitro Evaluation of the Permeation Enhancing Effect of Polycarbophil-Cystein Conjugates on the Cornea of Rabbits, J. Pharm. Sci. 91 (12) 2002, 2588-2592; and Clausen et al., The Role of Glutathione in the Permeation Enhancing Effect of Thiolated Polymers, Pharm. Res. 19 (5) 2002, 602-608; Yamashita et al., Synthesis and Evaluation of Thiol Polymers, J. Macromol.Sc. 26 (1989), 9, 1291-1304; Zheng et al., Disulfide Cross-Linked Hyaluronan Hydrogels, Biomacromolecules 3 (6) 2002, 1304-1311; Wang et al., Chitosan-NAC Nanoparticles as a Vehicle for Nasal Absorption Enhancement of Insulin, J. Biomed Mater Res Part B: Appl Biomater 88B: 150-161,2009; el documento WO 2008/094675 A2; el document de patente de EE.UU. 5,412,076 A.

El documento WO 2015/169728 describe una solución oftálmica acuosa estéril que comprende de aproximadamente el 0,05% a aproximadamente el 0,5% (p/p) de N-(N-acetilcisteinil)quitosano o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una solución portadora, en donde el N-(N-acetilcisteinil)quitosano tiene un contenido de grupos tiol libres en una cantidad de 80 pmol/g de polímero a 280 pmol/g de polímero, y el uso de dicha solución para el tratamiento del síndrome del ojo seco.

Es un objeto de la presente invención proporcionar una preparación farmacéutica adecuada para el tratamiento de heridas corneales.

Este objeto se resuelve con una solución oftálmica acuosa estéril que comprende N-(N-acetilcisteinil)quitosano o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una solución portadora, en donde el N-(N-acetilcisteinil)quitosano tiene un contenido de grupos tiol libres en una cantidad de 80 pmol/g de polímero a 280 pmol/g de polímero, para uso en el tratamiento de heridas corneales.

Las realizaciones preferidas de la presente invención se enumeran en las reivindicaciones dependientes.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra los resultados de la evaluación de una solución que contiene 0,1% de N-(N-acetilcisteinil)quitosano en un modelo de cicatrización de heridas corneales.

La Figura 2 muestra los resultados de la microscopía electrónica de barrido de células epiteliales limbocorneales humanas incubadas con 0,1% de HCl-quitosano (B) o 0,1% de N-(N-acetilcisteinil)quitosano (C). Las células control confluentes no tratadas se muestran para la comparación (A).

Descripción detallada de la invención

Sorprendentemente, se ha descubierto que una solución oftálmica acuosa estéril que comprende N-(N-acetilcisteinil)quitosano o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una solución portadora, en donde el N-(N-acetilcisteinil)quitosano tiene un contenido de grupos tiol libres en una cantidad de 80 pmol/g de polímero a 280 pmol/g de polímero, es efectiva en el tratamiento de heridas corneales.

En una realización preferida, dicha herida corneal puede ser una herida no infecciosa.

En otra realización preferida, dicha herida corneal también puede estar relacionada con erosiones corneales.

Las soluciones oftálmicas utilizadas según la presente invención son particularmente adecuadas en el tratamiento de erosiones corneales. Entre otros factores, las erosiones corneales recurrentes pueden ser causadas por distrofias corneales, tal como la distrofia de la membrana basal epitelial (distrofia de Cogan), que afecta la integridad del epitelio corneal.

Además, dicha herida corneal también puede ser un defecto epitelial. Por ejemplo, el defecto epitelial se puede seleccionar del grupo que consiste en defectos epiteliales corneales que no cicatrizan, defectos epiteliales corneales persistentes, defectos epiteliales corneales de cicatrización lenta y defectos epiteliales neuropáticos (neurotróficos).

En otra realización, la herida corneal puede estar relacionada con una queratitis punteada superficial (SPK).

A continuación, el término "quitosano-NAC" significa tanto N-(N-acetilcisteinil)quitosano como sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

Sin desear limitarse a ninguna teoría, el efecto beneficioso del quitosano-NAC se puede deber a sus propiedades mucoadhesivas mejoradas y, en consecuencia, al aumento del tiempo de residencia ocular y a su capacidad para formar un recubrimiento protector en la superficie ocular.

Se ha demostrado que el uso de quitosano-NAC en el tratamiento de la herida corneal tiene el beneficio adicional de requerir aplicaciones menos frecuentes de solo una o dos veces al día.

En una realización preferida de la presente invención, la concentración del N-(N-acetilcisteinil)quitosano o dicha sal farmacéuticamente aceptable del mismo en dicha solución oftálmica es de 0,05 a 0,3% (p/p), preferiblemente de 0,05 a 0,2% (p/p), más preferiblemente 0,08-0,16% (p/p).

Además, dicha sal farmacéuticamente aceptable se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en sales de ácidos orgánicos tales como ácido acético, cítrico, fórmico y tartárico, y sales de ácidos minerales tales como HCl y H²SO⁴.

El N-(N-acetilcisteinil)quitosano tiene preferiblemente un contenido de grupos tiol libres en una cantidad de 105 gmol/g de polímero a 250 gmol/g de polímero, preferiblemente de 110 gmol/g de polímero a 250 gmol/g de polímero, lo más preferiblemente de preferiblemente 140 a 250 gmol/g de polímero.

La cantidad de grupos tiol reticulados en el N-(N-acetilcisteinil)quitosano puede ser 30% o menos del total de grupos tiol en el mismo, preferiblemente 25% o menos, lo más preferiblemente 15% o menos.

El experto en la técnica puede determinar la cantidad de grupos tiol libres inmovilizados en quitosano-NAC en una solución oftálmica acuosa de un modo conocido, tal como a través del reactivo de Ellman.

Además del hecho de que es importante una gran cantidad de grupos tiol libres en el polímero de quitosano-NAC en la solución oftálmica acuosa, también es preferible una baja cantidad de tioles reticulados (disulfuros) en el polímero de quitosano-NAC en la solución de la presente invención. Durante la preparación y el almacenamiento de la solución oftálmica acuosa se puede producir la reticulación de grupos tiol inmovilizados en el quitosano-NAC. Una baja cantidad de tioles reticulados presentes en la formulación es un parámetro preferido de la formulación de polímero de quitosano-NAC de la presente invención.

Por lo tanto, según una realización preferida, la cantidad de grupos tiol reticulados en el N-(N-acetilcisteinil)quitosano es 30% o menos del total de grupos tiol en el mismo, preferiblemente 25% o menos, lo más preferiblemente 15% o menos.

Especialmente, en esta realización preferida, la cantidad de grupos tiol reticulados en el N-(N-acetilcisteinil)quitosano es 30% o menos del total de grupos tiol en el mismo, preferiblemente 25% o menos, lo más preferiblemente 20% o menos después del almacenamiento de la solución durante al menos 12 meses a temperatura ambiente.

Si la cantidad de grupos tiol reticulados presentes en la fórmula fuera demasiado alta, las propiedades de la solución oftálmica acuosa podrían cambiar fuera de los parámetros deseados, por ejemplo, la viscosidad de la solución oftálmica acuosa podría ser demasiado alta para ser adecuada para las gotas oculares.

Como se explica a continuación con más detalle, se ha demostrado que es posible producir un quitosano-NAC cuyos grupos tiol no están o solo están mínimamente reticulados, tal como con una cantidad de grupos tiol reticulados de menos del 5%, preferiblemente 4% o menos del total de grupos tiol. Especialmente si dicho quitosano-NAC se emplea para la fabricación de la solución oftálmica utilizada según la presente invención, los grupos tiol libres tienden a ser estables durante todo el ciclo de vida de la solución:

Por lo tanto, se ha descubierto que al emplear tal quitosano-NAC durante la producción de la formulación, el aumento de grupos tiol reticulados es <10% de la cantidad de grupos tiol libres inicialmente presentes en la materia prima de quitosano-NAC. Además, durante el almacenamiento de la solución durante 12 meses o incluso 18 meses, el aumento de los grupos tiol reticulados es <15% de la cantidad de grupos tiol libres inicialmente presentes en la formulación. Finalmente, incluso si se abre un segundo recipiente de la solución (como se define a continuación) que proporciona una barrera de oxígeno, 30 días después de la apertura, el aumento de los grupos tiol reticulados es <15% de la cantidad de grupos tiol libres inicialmente presentes en la formulación antes de la apertura.

Esencialmente, la formulación oftálmica de quitosano tiolado utilizada según la presente invención se realiza según las siguientes etapas:

1. La quitina se aísla de las conchas de crustáceos, tal como las conchas de camarones o cangrejos de nieve,

2. El quitosano se prepara a partir de quitina a través de un método químico que es bien conocido en la técnica como, por ejemplo, desacetilación alcalina;

3. El quitosano se tiola por la unión covalente de un ligando que contiene tiol, tal como con el uso de N-acetilcisteína como se establece en la presente memoria;

4. El quitosano-NAC se formula después en forma de una solución oftálmica acuosa como se establece en la presente memoria; y

5. La solución oftálmica acuosa que contiene quitosano-NAC se coloca después en un recipiente adecuado que asegure su estabilidad como se establece en la presente memoria.

El quitosano-NAC utilizado en la presente invención necesita ser soluble en agua en el intervalo de concentración útil para la preparación de la solución oftálmica acuosa y las soluciones resultantes deben ser transparentes e incoloras. La formación de sal de quitosano-NAC con ácidos orgánicos o inorgánicos aumenta la solubilidad acuosa del quitosano. Las sales adecuadas de quitosano tiolado de la presente invención incluyen cualquier sal farmacéuticamente aceptable con ácidos orgánicos tales como ácido acético, cítrico, fórmico y tartárico, así como ácidos minerales tales como HCl y H²SO⁴. El uso de una sal de clorhidrato de quitosano-NAC es una realización preferida de la presente invención.

Lo importante es que tales vías de reacción y condiciones de reacción se utilicen para que, después de la síntesis y purificación, esencialmente todos los grupos tiol inmovilizados en la cadena principal de quitosano estén presentes en forma libre y no en forma reticulada como disulfuros, es decir, solo estén mínimamente reticulados. Prácticamente todos los tioles unidos en el quitosano tiolado de la presente invención están en forma de grupos tiol libres, es decir, no están reticulados. Una cantidad mínima de reticulación durante la síntesis solo es aceptable siempre que la viscosidad del quitosano tiolado permanezca dentro de los parámetros establecidos y su solubilidad acuosa sea suficiente para la preparación de una solución oftálmica acuosa.

Se ha descubierto que es posible fabricar quitosano-NAC con un grado de reticulación muy bajo o incluso de cero de los grupos tiol exponiendo el quitosano-NAC a un agente reductor después de su síntesis, por ejemplo después de la hidrólisis alcalina de los restos de tioacetilo. El agente reductor se puede seleccionar del grupo de DTT, TCEP o NaBH4, prefiriéndose NaBH4. Además, se ha demostrado que la etapa de reducción se debe llevar a cabo a temperatura elevada, tal como 30°C o más o preferiblemente 40°C o más. Además, se deben emplear altas cantidades de agentes reductores, tal como con una relación estequiométrica de agente reductor al polímero con cadena principal de quitosano de 2:1 o más.

Los polímeros de quitosano-NAC con un grado de grupos tiol reticulados de menos del 5%, preferiblemente 4% o menos del total de los grupos tiol se pueden sintetizar según esta realización.

La viscosidad en solución acuosa del quitosano-NAC final utilizado según la presente invención preferiblemente se encuentra dentro de un cierto intervalo, y se descubrió que la viscosidad del quitosano-NAC solo se encuentra dentro de este intervalo preferido si durante la producción del quitosano-NAC el quitosano-NAC se procesa bajo ciertas condiciones y dentro de ciertos parámetros, particularmente según las condiciones de reducción indicadas anteriormente, que conducen a polímeros que están mínimamente reticulados. La viscosidad del producto resultante preferiblemente se encuentra dentro de un intervalo aceptable, de modo que el quitosano-NAC será más útil en la formulación de gotas oculares resultantes. Por lo tanto, la viscosidad cinemática (0,5% en agua a una temperatura de 25°C) del polímero de quitosano-NAC está preferiblemente dentro del intervalo de aproximadamente 1 a 15 mm2/s, más preferiblemente dentro del intervalo de aproximadamente 2 a 10 mm2/s. Si la viscosidad es demasiado alta, entonces no se puede preparar una solución de gotas oculares con el intervalo de concentración preferido de quitosano-NAC en la formulación, ya que el polímero permanecerá como una masa viscosa insoluble en el recipiente.

El quitosano-NAC necesita ser purificado para ser útil en la formulación utilizada según la presente invención (tal como después de la etapa # 3 anterior y, especialmente, después del tratamiento del quitosano-NAC con el agente reductor). El quitosano-NAC se debe lavar de tal manera que el producto resultante sea puro. Un método conocido se describe en Kast and Bernkop-Schnurch, 2001, Thiolated polymers-thiomers: development and in vitro evaluation of chitosanthioglycolic acid conjugates, Biomaterials (22): 2345-2352.

Otro método sería lavar el quitosano-NAC con disolventes polares seguido de secado para retirar los disolventes. Un disolvente preferido es el alcohol isopropílico, ya que no es tóxico, está fácilmente disponible y es económico, sin embargo, otros disolventes y otros alcoholes además del alcohol isopropílico podrían funcionar también. Este lavado se puede repetir según sea necesario, dependiendo del volumen de disolvente utilizado cada vez. Preferiblemente, la etapa de lavado y secado se repite al menos una vez.

La etapa de secado se puede realizar a temperatura ambiente y a humedad estándar, pero este método puede llevar mucho tiempo. Por lo tanto, el método de secado se realiza preferiblemente a una temperatura elevada y/o bajo presión reducida. El secado del quitosano-NAC se realiza preferiblemente a una temperatura elevada de al menos aproximadamente 40°C a aproximadamente 70°C y preferiblemente durante al menos aproximadamente cinco horas. Se lleva a cabo un proceso de secado más preferido a temperaturas de al menos aproximadamente 50°C a aproximadamente 60°C durante aproximadamente 10 a 24 horas. Un método de purificación de múltiples etapas preferido sería lavar el polímero de quitosano-NAC tres veces con alcohol isopropílico y recuperar el sólido mediante centrifugación seguido de secado a aproximadamente 60°C durante aproximadamente 15 a 20 horas.

La solución oftálmica acuosa utilizada según la presente invención puede contener al menos un excipiente oftálmico compatible. Se puede emplear cualquier excipiente adecuado, por ejemplo, para ajustar la tonicidad, la viscosidad de la solución o para estabilizar el pH, para aumentar la solubilidad del ingrediente activo, para aumentar la comodidad ocular después de la aplicación, o para estabilizar la formulación en general.

El pH de la solución oftálmica acuosa se ajusta mediante la adición de cualquier ácido, base o tampón que ajuste a un pH aceptable fisiológica y oftálmicamente para tener un pH dentro del intervalo de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 7. Un pH muy por debajo de aproximadamente 5,5 estaría fuera de los parámetros fisiológicos aceptables (la solución causaría una sensación de ardor o escozor intensa en el ojo). A un pH muy superior a 7, es difícil formar una solución estable del quitosano-NAC donde no se precipita fuera de la solución. Por lo tanto, debido a la facilidad de formular una solución estable, se prefiere un pH inferior a 7. El pH preferido de la solución oftálmica acuosa utilizada según la presente invención está entre aproximadamente 5,8 y aproximadamente 6,8, siendo el pH más preferido de 6,0 a 6,6.

Los ejemplos de ácidos adecuados utilizados en la formulación de la presente invención incluyen acético, bórico, cítrico, láctico, fosfórico, clorhídrico y similares, y ejemplos de bases incluyen hidróxido de sodio, fosfato de sodio, borato de sodio, citrato de sodio, acetato de sodio, lactato de sodio, trometamina, THAM (trishidroximetilamino-metano) y similares. Una realización preferida es un sistema de tampón de ácido bórico y borato de sodio, que también contiene un poliol tal como manitol para aumentar la capacidad de tampón en el intervalo de pH más preferido de 6,0 a 6,6.

Los ejemplos de excipientes adecuados utilizados en la formulación para aumentar la estabilidad de la formulación incluyen etilendiaminotetraacetato disódico (Na²-EDTA), metabisulfito de sodio, manitol, polietilenglicol y similares.

La osmolaridad de la formulación oftálmica tópica utilizada en la presente invención es generalmente de aproximadamente 150 a aproximadamente 400 miliosmolar (mOsM), más preferiblemente de aproximadamente 200 a aproximadamente 350 mOsM, siendo la osmolaridad de aproximadamente 250 a aproximadamente 330 mOsM la más preferida. La osmolaridad se puede ajustar utilizando cantidades apropiadas de agentes iónicos o no iónicos aceptables fisiológica y oftálmicamente. El cloruro de sodio es un agente osmótico común. Se pueden utilizar además cantidades equivalentes de una o más sales compuestas de cationes tales como potasio, amonio y similares, y aniones tales como cloruro, citrato, ascorbato, borato, fosfato, bicarbonato, sulfato, tiosulfato, bisulfato y similares o en lugar de cloruro de sodio para lograr la osmoralidad dentro del intervalo indicado anteriormente. Además, los agentes no iónicos tales como manitol, dextrosa, sorbitol, glicerol, glucosa y similares también se pueden utilizar para ajustar la osmolaridad. El cloruro de sodio y el manitol son los agentes preferidos para ajustar la presión osmótica.

La formulación oftálmica puede contener lubricantes para proporcionar un alto nivel de confort ocular adecuado para la aplicación regular necesaria en el tratamiento de DES. Existen muchos tipos de agentes lubricantes tales como polivinilpirrolidona, alcohol polivinílico, polioles líquidos, ácido hialurónico y sus sales farmacéuticamente aceptables, lubricina y derivados de celulosa; sin embargo, los agentes preferidos son polietilenglicol e hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC).

En una realización preferida, la solución oftálmica utilizada según la presente invención contiene los siguientes excipientes además del clorhidrato de N-(N-acetilcisteinil)quitosano:

Ácido bórico en una cantidad de 1,0 a 16,0 mg/ml, preferiblemente de 8 a 16 mg/ml;

Polietilenglicol 400 en una cantidad de 0,01 a 5,0 mg/ml, preferiblemente de 1 a 5 mg/ml;

Na²-EDTA en una cantidad de 0,01 a 0,5 mg/ml;

Manitol en una cantidad de 0,01 a 5,5 mg/ml, preferiblemente de 0,1 a 4 mg/ml;

Cloruro de sodio en una cantidad de 0,01 a 9 mg/ml, preferiblemente de 1 a 3 mg/ml; e

Hidroxipropil metilcelulosa en una cantidad de 0,01 a 20 mg/ml, preferiblemente de 1 a 3 mg/ml.

La solución oftálmica utilizada según la presente invención tiene que ser estéril y se puede esterilizar de cualquier manera adecuada. Un método de esterilización preferido particular es la filtración estéril. La solución oftálmica según la presente invención puede contener conservantes, tal como cloruro de benzalconio, aunque esto es menos preferido.

La solución oftálmica acuosa que contiene quitosano-NAC se puede administrar a los ojos de un paciente por cualquier medio adecuado para la administración tópica. Esto está preferiblemente en forma de una solución de gotas oculares acuosa. Esta solución puede estar en un recipiente de un solo uso que es estéril hasta que se abre y, por lo tanto, no necesita un conservante, o puede estar en forma de un recipiente multiusos que permanece estéril después de abrirse o en un recipiente multiusos con una formulación que contiene un conservante.

Los grupos tiol de los polímeros de quitosano-NAC tienden a formar enlaces disulfuro en soluciones acuosas, reduciendo así las propiedades mucoadhesivas del quitosano-NAC. Se descubrió que esta tendencia depende de la presencia de oxígeno en la solución oftálmica acuosa.

Se ha demostrado que es posible estabilizar los grupos tiol libres del quitosano-NAC empleados según la presente invención en solución acuosa aún más cuando se almacena la solución bajo condiciones sin oxígeno, o bajo condiciones esencialmente sin oxígeno. La atmósfera sin oxígeno puede ser una atmósfera de nitrógeno, una atmósfera de vacío o una atmósfera que consiste en gases nobles.

Por lo tanto, cuando la solución se coloca en un recipiente, se debe de hacer en ausencia de oxígeno. Además, después de que el recipiente se llena con la solución oftálmica acuosa de la presente invención, debe permanecer sin oxígeno. Por lo tanto, la presente invención también contempla el uso de un recipiente que mantiene la solución oftálmica acuosa sin oxígeno durante el almacenamiento.

Por consiguiente, en la presente invención se utiliza preferiblemente un recipiente esencialmente sin oxígeno que contiene la solución oftálmica acuosa. Como "esencialmente sin oxígeno", se debe entender una atmósfera con una cantidad de 1,5% de oxígeno o menos. La concentración de oxígeno disuelto en solución durante la producción de la formulación y el llenado en los envases es inferior a 1,0 mg/L, más preferiblemente inferior a 0,5 mg/L, incluso más preferiblemente en el intervalo de 0,1 mg/L.

En una realización preferida, el recipiente está hecho de un material que es impermeable al oxígeno de modo que después del llenado, la solución oftálmica permanece esencialmente sin oxígeno durante un período prolongado de tiempo. Tales recipientes pueden ser polímeros de vidrio o revestidos de vidrio, polímeros de metal o revestidos de metal. En otra realización preferida, el recipiente está hecho de un polímero que contiene un absorbente de oxígeno que evitaría que el oxígeno ingrese a la solución a través de las paredes del recipiente. Tales absorbedores de oxígeno incluyen sales de hierro, sulfitos, ácido ascórbico, sales de ácidos grasos insaturados, complejos de metal-poliamida o sistemas basados en paladio/H². Por ejemplo, el documento WO 09/32526 describe una película que tiene una capa de barrera de oxígeno activa que comprende una composición secuestrante de oxígeno mezclada con una resina termoplástica que tiene dobles enlaces carbono-carbono sustancialmente en su cadena principal, una sal de metal de transición y un polímero de barrera de oxígeno con propiedades de barrera de oxígeno.

Además, el recipiente en sí se puede fabricar a partir de un material hermético a los gases con un secuestrante de oxígeno incorporado y un sistema de cierre sin aire.

En una realización preferida, se proporciona un primer recipiente que contiene la solución oftálmica y un segundo recipiente que contiene dicho primer recipiente.

Así, por ejemplo, el recipiente que contiene la solución oftálmica de la presente invención está contenido dentro de una bolsita o bolsa hermética a los gases. En particular, una bolsita o bolsa hecha de aluminio o un laminado de aluminio o una composición de aluminio puede contener uno o más subrecipientes (es decir, "primeros recipientes") que contienen la solución oftálmica según la invención. El segundo recipiente, es decir, la bolsita o la bolsa también puede contener un absorbente de oxígeno adicional (por ejemplo, PKT KH-20 Pharmakeep® o Stabilox® secuestrante de oxígeno) como se utiliza en algunos envases estándar. Incluso en el caso de que la bolsita se selle al vacío o en una atmósfera inerte, puede ser necesario añadir un absorbente de oxígeno para eliminar el oxígeno residual del subrecipiente. La bolsita puede contener uno o más recipientes de dosis única o recipientes multidosis, por ejemplo, cinco recipientes de dosis única por bolsita. En el caso del recipiente multidosis, debe conservar la solución oftálmica según la presente invención en una condición estéril y en una condición esencialmente sin oxígeno.

El quitosano-NAC contenido en el recipiente utilizado preferiblemente según la invención tiene preferiblemente un contenido de grupos tiol libres de 80 gmol/g de polímero a 250 gmol/g de polímero, preferiblemente 105 gmol/g de polímero a 250 gmol/g de polímero después del almacenamiento de al menos 12 meses a temperatura ambiente. Esto significa que los grupos tiol libres permanecen en el quitosano-NAC y que la formulación resultante es estable durante un período prolongado de tiempo. Este período de tiempo es preferiblemente al menos aproximadamente 12 meses, más preferiblemente al menos 18 meses e incluso más preferiblemente al menos aproximadamente 24 meses. Esta larga preferencia de estabilidad se debe al hecho de que algunos productos terminan teniendo largos tiempos de almacenamiento y retrasos en la entrega comercial y las cadenas de suministro que podrían dar como resultado que un producto menos estable se encuentre fuera de los parámetros aceptables.

Además, preferiblemente la cantidad de grupos tiol reticulados en el quitosano-NAC contenido en el recipiente es 30% o menos del total de grupos tiol en el mismo, preferiblemente 25% o menos, lo más preferido 20% o menos después de almacenarse durante al menos 12 meses , más preferiblemente al menos 18 meses. Como se mencionó anteriormente, la estabilidad de los grupos tiol libres en la solución es especialmente buena si se emplea un quitosano-NAC con solo un grado mínimo de grupos tiol reticulados para fabricar la solución.

En la realización descrita anteriormente donde hay un segundo recipiente, por ejemplo, una bolsita hermética a los gases, que contiene uno o más primeros recipientes, por ejemplo, recipientes de un solo uso hechos de LDPE, el contenido de grupos tiol libres en la solución permanece preferiblemente dentro del intervalo definido por la presente invención después de abrir el primer recipiente durante al menos 30 días. El tiempo terapéutico necesario para, por ejemplo, 5 recipientes son 5 días, por lo tanto, esta duración de estabilidad es más que suficiente.

Como se mencionó anteriormente, se descubrió que especialmente si se emplea un quitosano-NAC con solo un grado mínimo de grupos tiol reticulados para fabricar la solución oftálmica de la presente invención, los grupos tiol libres permanecieron estables incluso después de que se abrió el segundo recipiente que proporciona la barrera de oxígeno, es decir, se demostró que 30 días después de la apertura del segundo recipiente el aumento de grupos tiol reticulados fue <15% de la cantidad de grupos tiol inicialmente presentes en la solución antes de abrir.

En una realización preferida adicional, la solución oftálmica se aplica a una herida corneal dos o una vez al día.

La presente invención también se refiere a una solución oftálmica acuosa estéril que comprende N-(N-acetilcisteinil)quitosano como se definió anteriormente para uso en el tratamiento de una herida corneal no infecciosa, en donde que la solución se aplica a dicha herida.

Ejemplos

Ejemplo 1: Modelo de cicatrización de heridas corneales

El objetivo de este experimento fue evaluar si una solución oftálmica acuosa que contiene 0,1% de quitosano-NAC (grado de modificación: 209 pM de grupos tiol libres/g de polímero) es capaz de acelerar el proceso de cicatrización de heridas en comparación con una sustancia de control que consiste en tampón fosfato salino (PBS). La solución oftálmica acuosa que contiene 0,1% de quitosano-NAC (p/p) se preparó bajo condiciones inertes disolviendo quitosano-NAC en una solución tampón de ácido bórico que además comprende manitol, polietilenglicol 40 e hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC). El pH final de la solución fue 6,4. Se utilizaron conejos blancos hembra de Nueva Zelanda (Charles River, Ekrath, Alemania) con un peso corporal de 1,7 kg a 2,5 kg para el experimento. Los animales se mantuvieron por parejas en un ambiente controlado: ritmo artificial día-noche 12/12 horas, temperatura ambiente 20°C, 60% de humedad. Se proporcionó agua y comida estándar para conejos ad libitum.

Los animales se estudiaron después de un período de al menos 2 semanas después del parto para permitir la liberación al medio ambiente.

En un total de 16 animales se indujo una lesión corneal definida. El epitelio corneal central se retiró con un bisturí oftálmico, evitando cuidadosamente el daño a la capa de Bowman. El tamaño del defecto estaba dirigido a un diámetro de 6 mm. El tamaño de la lesión corneal se caracterizó por aplicar OCT de ultra alta resolución y fotografía con lámpara de hendidura después de la instilación de fluoresceína. Las mediciones se realizaron al inicio del estudio (antes de la incisión) y 6, 12, 24, 36, 48 y 72 horas después de la inducción de la lesión corneal. La administración de las gotas oculares se realizó cada 12 horas a lo largo de los experimentos. Todos los experimentos se realizaron bajo anestesia, lo que se logró mediante inyección intramuscular de 25 mg/kg de ketamina y 2 mg/kg de xilazina. Como analgésicos se administraron metamizol sódico y 0,025 mg de fentanilo.

Los resultados de este estudio se resumen en la Figura 1, que muestra el curso temporal de la cicatrización de heridas después de la aplicación de quitosano-NAC (marcadores blancos) o PBS (placebo, marcadores negros). En el eje y se muestra el área del defecto. Los datos se evaluaron a partir de la fotografía con lámpara de hendidura después de la tinción con fluoresceína de lesiones corneales (A) o a partir de imágenes OCT (B). Los datos se presentan como medias /- desviación estándar. Se observó una tasa de cicatrización significativamente más rápida con gotas oculares que contienen quitosano N-acetilcisteína versus placebo (p <0,05 cada una, ANOVA de medidas repetidas). Se observó un buen acuerdo entre los datos obtenidos de las dos técnicas diferentes.

Ejemplo 2: Formación de una red polimérica en la superficie ocular.

Las células epiteliales humanas limbocorneales (HCLE, por sus siglas en inglés) se mantuvieron en medio de crecimiento de queratinocitos sin suero (Thermo Fisher Scientific) a una temperatura de 37°C y 5% de CO²y se sembraron a 1x105 células/pocillo en placas de 24 pocillos rellenas con discos de cubreobjetos ACLAR® de 11 mm. Cuando las células habían alcanzado la confluencia, se trataron durante 15 minutos con 0,1% (p/p) de quitosano-HCl o 0,1% (p/p) de quitosano-NAC (grado de modificación: 219 pM de grupos tiol libres/gramo de polímero) diluido en tampón de ácido bórico 100 mM. El tampón de ácido bórico también se aplicó a las células control. A continuación, las soluciones de polímero se retiraron y las células se fijaron inmediatamente para microscopía electrónica de barrido (SEM, por sus siglas en inglés) mediante la adición de 2,5% de glutaraldehído en tampón 0,06XPHEM (el tampón 1xPHEM contiene PIPES 60 mM, HEPES 25 mM, EGTA 10 mM y MgCl²2 mM). Las monocapas celulares se fijaron posteriormente en 1% de tetróxido de osmio acuoso (Agar Scientific, Stansted, Reino Unido), se deshidrataron en acetona graduada, se secaron en el punto crítico de CO²líquido (Leica CPD300, Leica Microsystems GmbH, Viena, Austria), se unieron a portaobjetos de SEM de aluminio de 12 mm con pestañas en C antes de recubrirlas con oro por pulverización catódica (100 ms) con rotación (recubrimiento por pulverización catódica Leica, Leica Microsystems GmbH, Viena, Austria), y se visualizó con un JEOL IT300 SEM a 15 kV. Todas las imágenes fueron tomadas con un detector de electrones secundario con un aumento de 300x.

Los resultados se muestran en la Figura 2 que muestra la microscopía electrónica de barrido de células epiteliales humanas limbocorneales incubadas con 0,1% (p/p) de quitosano-HCl (B) o 0,1% (p/p) de quitosano-NAC (C). Las células de control confluentes no tratadas se muestran para comparar (A). La Figura 2C muestra claramente la formación de una red polimérica en la superficie celular después de la aplicación de soluciones de quitosano-NAC. Este efecto no se observa en las células control (Figura 2A) ni en las células tratadas con quitosano-HCl (Figura 2B).

Ejemplo 3: Estudio de caso

Un paciente varón (57 años) que padecía dermatitis atópica extremadamente grave y queratitis herpética recurrente en múltiples ocasiones tuvo que someterse a una queratoplastia perforante de emergencia debido a una perforación. Desarrolló una infección postquirúrgica del trasplante que podría controlarse con antibióticos. Sin embargo, sufría de un defecto epitelial persistente que no cicatrizó durante meses a pesar de múltiples medicamentos diferentes (medicamentos tópicos: Vigamox 4x/d, Dexa EDO 2x/d y Vismed cada hora; medicamentos orales: Valtrex 1-0-1, Myfortic 360mg 2-0-2, Decortin H 12,5mg/día).

Después de la aplicación ocular adicional de una solución oftálmica acuosa que contiene 0,1% de quitosano-NAC (grado de modificación: 212 pM de grupos tiol libres/g de polímero) una vez al día durante 7 días, el defecto en el epitelio corneal se cicatrizó.

Ejemplo 4: Estudio de caso

Un paciente varón (31 años, portador de lentes de contacto) con ojos rojos y dolor fue diagnosticado con queratitis punteada superficial bilateral (SPK) e inyección ciliar leve. El tratamiento inicial con gotas oculares de levofloxacino condujo a una mejoría de los síntomas durante las siguientes 3 semanas, pero el SPK se mantuvo. Se añadieron a la medicación gotas oculares Predsol 0,5% 3x/día. Los hallazgos clínicos se mantuvieron igual una semana después y se añadieron además a la medicación gotas oculares Celluvisc 0,5% cada 2 horas y 100 mg de doxiciclina. Después de un mes, los hallazgos clínicos aún no mejoraron. Los tratamientos repetidos con gotas oculares Azyter tampoco resultaron en una mejora marcada de la SPK. Después del tratamiento con gotas oculares Celluvisc y aceite de árbol de té para la higiene de los párpados durante un mes, los síntomas del paciente empeoraron nuevamente. Toda la medicación anterior se detuvo.

Después del tratamiento con una solución oftálmica acuosa que contiene 0,1% de quitosano-NAC (grado de modificación: 212 pM de grupos tiol libres/g de polímero) una vez al día durante 5 días, los síntomas del paciente mejoraron notablemente y la SPK restante fue solo mínima.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una solución oftálmica acuosa estéril que comprende N-(N-acetilcisteinil)quitosano o una sal farmacéutica mente aceptable del mismo en una solución portadora, en donde el N-(N-acetilcisteinil)quitosano tiene un contenido de grupos tiol libres en una cantidad de 80 pmol/g de polímero a 280 pmol/g de polímero, para uso en el tratamiento de heridas corneales.

2. Solución oftálmica para uso según la reivindicación 1, en donde la herida corneal que se va a tratar está relacionada con erosiones corneales.

3. Solución oftálmica para uso según la reivindicación 1, en donde la herida corneal que se va a tratar es un defecto epitelial seleccionado del grupo que consiste en defectos epiteliales corneales que no cicatrizan, defectos epiteliales corneales persistentes, defectos epiteliales corneales de cicatrización lenta y defectos epiteliales neuropáticos (neurotróficos).

4. Solución oftálmica para uso según la reivindicación 1, en donde la herida corneal que se va a tratar está relacionada con una queratitis punteada superficial.

5. Solución oftálmica para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la concentración del N-(N-acetilcisteinil)quitosano o dicha sal farmacéuticamente aceptable del mismo en dicha solución es de 0,05 a 0,3% (p/p), preferiblemente de 0,05 a 0,2% (p/p), más preferiblemente de 0,08-0,16% (p/p).

⁶. Solución oftálmica para uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicha sal farmacéuticamente aceptable se selecciona del grupo que consiste en sales de ácidos orgánicos tales como ácido acético, cítrico, fórmico y tartárico, y sales de ácidos minerales tales como HCl y H²SO⁴.

7. Solución oftálmica para uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el N-(N-acetilcisteinil)quitosano tiene un contenido de grupos tiol libres en una cantidad de 105 pmol/g de polímero a 250 pmol/g de polímero, preferiblemente de 110 pmol/g de polímero a 250 pmol/g de polímero, lo más preferiblemente de preferiblemente 140 a 250 pmol/g de polímero.

8. Solución oftálmica para uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la cantidad de grupos tiol reticulados en el N-(N-acetilcisteinil)quitosano es 30% o menos del total de grupos tiol en el mismo, preferiblemente 25% o menos, lo más preferiblemente 15% o menos.

9. Solución oftálmica para uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicha solución se aplica a una herida corneal una o dos veces al día.

10. Solución oftálmica para uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicha herida corneal es una herida no infecciosa.