ES2763349B2

ES2763349B2 - Myticin peptide and its use in cell regeneration

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Publication number: ES2763349B2
Application number: ES201831154A
Authority: ES
Inventors: Huerta Antonio Figueras; Vega María Gasset; García Beatriz Novoa; Campos Magalí Rey; Marín Ricardo Mallavía; GALI Regla María MEDINA; Lopez Alicia Martinez
Original assignee: Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC; Universidad Miguel Hernandez de Elche UMH
Current assignee: Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC; Universidad Miguel Hernandez de Elche UMH
Priority date: 2018-11-28
Filing date: 2018-11-28
Publication date: 2021-12-28
Anticipated expiration: 2038-11-28
Also published as: ES2763349A1; WO2020109642A1

Description

DESCRIPCIÓNDESCRIPTION

Péptido de miticina y su uso en regeneración celularMyticin peptide and its use in cell regeneration

La presente invención se refiere a unos péptidos que comprende la secuencia SEQ ID NO: 2 y sus usos terapéuticos, concretamente en la regeneración celular y/o tisular.The present invention relates to peptides comprising the sequence SEQ ID NO: 2 and their therapeutic uses, specifically in cell and/or tissue regeneration.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓNBACKGROUND OF THE INVENTION

Los péptidos antimicrobianos (AMP) son efectores inmunes innatos y tienen una amplia gama de acciones contra muchos microorganismos. En invertebrados marinos, que viven en ambientes con una abundancia de microorganismos potencialmente patógenos, los AMP son los elementos principales de la respuesta inmune. Por ejemplo, en Mejillones mediterráneos (Mytilus galloprovincialis), se han descrito varios tipos de AMP, entre ellos la miticina C.Antimicrobial peptides (AMPs) are innate immune effectors and have a wide range of actions against many microorganisms. In marine invertebrates, which live in environments with an abundance of potentially pathogenic microorganisms, AMPs are the main elements of the immune response. For example, in Mediterranean mussels ( Mytilus galloprovincialis), several types of AMP have been described, including myticin C.

La miticina C (Myt-C) es un péptido antimicrobiano rico en cisteínas aislado de hemocitos del mejillón Mytilus galloprovincialis cuya actividad antibacteriana y quimiotáctica ha sido probada in vitro (Martinez-Lopez et al., Mar Drugs. 11(7): 2328 46 (2013)). También se ha demostrado su efecto antiviral no solo frente a virus de moluscos, como es el caso del herpervirus de la ostra OsHV-1, sino también frente a herpes simplex de humanos (HSV-1 y HSV-2) (Novoa B., et al., J Virol. 90(17):7692-702 (2016)) y frente a rhabdovirus patógenos de peces (Balseiro P. et al., PLoS One.Myticin C (Myt-C) is a cysteine-rich antimicrobial peptide isolated from hemocytes of the mussel Mytilus galloprovincialis whose antibacterial and chemotactic activity has been proven in vitro (Martinez-Lopez et al., Mar Drugs. 11(7): 2328 46 (2013)). Its antiviral effect has also been demonstrated not only against mollusc viruses, such as the oyster herpervirus OsHV-1, but also against human herpes simplex (HSV-1 and HSV-2) (Novoa B., et al., J Virol. 90(17):7692-702 (2016)) and against fish pathogenic rhabdoviruses (Balseiro P. et al., PLoS One.

6(8):e23140 (2011)).6(8):e23140 (2011)).

Durante la vida de cualquier ser animal, se producen inevitablemente heridas, y pueden ser consecuencia de una amplia diversidad de sucesos, tales como el contacto con objetos afilados o calientes, o aparecer en ciertos trastornos clínicos, tales como la diabetes. Otro ejemplo clínico importante es el desarrollo de úlceras de decúbito, es decir, lesiones provocadas por una presión no mitigada sobre cualquier parte del cuerpo, en especial de porciones sobre áreas óseas o cartilaginosas. Aunque son completamente tratables si se descubren en una fase temprana, las úlceras de decúbito, sin atención médica, como cualquier otra herida, pueden llegar a ser mortales. En el caso de un estado de salud general reducida, el cierre (cicatrización) de las heridas puede retrasarse, y puede provocar otros problemas, tales como infecciones, inflamación, necrosis de tejidos, y el cierre ineficaz de una herida vuelve a ser, de nuevo, potencialmente mortal.During the life of any animal, injuries inevitably occur, and can result from a wide variety of events, such as contact with sharp or hot objects, or appear in certain clinical disorders, such as diabetes. Another important clinical example is the development of decubitus ulcers, that is, injuries caused by unmitigated pressure on any part of the body, especially portions of bone or cartilaginous areas. Although fully treatable if discovered early, pressure ulcers, like any other wound, can be fatal without medical care. In the case of poor general health, the closure (healing) of wounds may be delayed, and may lead to other problems, such as Infections, inflammation, tissue necrosis, and ineffective wound closure are once again life-threatening.

Las heridas se producen generalmente en la piel. La piel es un órgano vital que cumple múltiples funciones, tales como funciones sensitivas, funciones protectoras frente a agresiones externas, así como funciones inmunológicas, metabólicas o termorreguladoras. Estos papeles son posibles debido a la compleja estructura que asocia diversos tejidos. La piel consiste en tres capas diferenciadas superpuestas: la epidermis, la dermis y la hipodermis. La epidermis es un epitelio de revestimiento, que constituye la estructura externa de la piel y proporciona su función de protección. Esta función es proporcionada por la cohesión de las células epiteliales y por la producción de una proteína filamentosa y resistente, la queratina.The wounds usually occur on the skin. The skin is a vital organ that performs multiple functions, such as sensitive functions, protective functions against external aggressions, as well as immunological, metabolic or thermoregulatory functions. These roles are possible due to the complex structure that associates various tissues. The skin consists of three distinct overlapping layers: the epidermis, the dermis, and the hypodermis. The epidermis is a lining epithelium, which constitutes the external structure of the skin and provides its protective function. This function is provided by the cohesion of the epithelial cells and by the production of a tough, filamentous protein, keratin.

En general, la cicatrización de heridas se describe como consistente en tres fases, concretamente, la fase inflamatoria, la fase proliferativa, y la fase de maduración (denominadas fase inflamatoria aguda, síntesis de matriz extracelular y de colágeno, y remodelación). La secuencia del proceso de cicatrización se inicia durante una fase inflamatoria aguda con el depósito de tejido provisional. A esto le sigue una reepitalización, la síntesis y depósito de colágeno, la proliferación de fibroblastos, y una neovascularización, todo lo cual define en última instancia la fase de remodelación.In general, wound healing is described as consisting of three phases, namely, the inflammatory phase, the proliferative phase, and the maturation phase (referred to as the acute inflammatory phase, collagen and extracellular matrix synthesis, and remodeling). The healing process sequence begins during an acute inflammatory phase with provisional tissue deposition. This is followed by re-epithelialization, collagen synthesis and deposition, fibroblast proliferation, and neovascularization, all of which ultimately define the remodeling phase.

La fase inflamatoria se caracteriza por una hemostasis e inflamación. El colágeno expuesto durante la formación de la herida activa la cascada de la coagulación (tanto la vía intrínseca como la extrínseca), iniciando la fase inflamatoria. Las plaquetas, la primera célula de respuesta, liberan múltiples quimioquinas que ayudan a estabilizar a la herida mediante la formación del coágulo. Estos mediadores actúan para controlar el sangrado y limitar el alcance de la lesión. La segunda célula de respuesta que migra hacia la herida, los neutrófilos, son responsables de la captación de residuos, la opsonización mediada por el complemento de bacterias, y la destrucción de bacterias mediante mecanismos de estallido oxidativo (es decir, formación de superóxido y peróxido de hidrógeno). Los macrófagos son fundamentales para la cicatrización de las heridas. Numerosas enzimas y citoquinas son segregadas por los macrófagos, lo cual marca la transición al proceso de reconstrucción del tejido, es decir, la fase proliferativa. The inflammatory phase is characterized by hemostasis and inflammation. Collagen exposed during wound formation activates the coagulation cascade (both the intrinsic and extrinsic pathways), initiating the inflammatory phase. Platelets, the first responder cell, release multiple chemokines that help stabilize the wound through clot formation. These mediators act to control bleeding and limit the extent of injury. The second responsive cell to migrate into the wound, neutrophils, are responsible for debris uptake, complement-mediated opsonization of bacteria, and bacterial destruction via oxidative burst mechanisms (i.e., superoxide and peroxide formation). of hydrogen). Macrophages are essential for wound healing. Numerous enzymes and cytokines are secreted by macrophages, which marks the transition to the process of tissue reconstruction, that is, the proliferative phase.

Durante la fase proliferativa, la epitelización, la angiogénesis, la formación de tejido de granulación y el depósito de colágeno son las etapas principales en la cicatrización de heridas. La epitelización aparece en una fase temprana de la reparación de heridas. La angiogénesis, estimulada, por ejemplo, por TNF-alfa, se advierte por la migración de células endoteliales y la formación de capilares. Los nuevos capilares transportan nutrientes hacia la herida y ayudan a mantener el lecho del tejido de granulación. La parte final de la fase proliferativa es la formación de tejido granulación. Los fibroblastos se diferencian y producen sustancia basal y después colágeno. La sustancia basal se deposita en el lecho de la herida; después, el colágeno se deposita a medida que la herida se somete a la fase final de reparación. Muchas citoquinas diferentes, que incluyen PDGF, el factor del crecimiento de tipo insulínico (IGF) y EGF, están implicadas en la fase proliferativa de la reparación de heridas. Durante la fase de maduración, la herida sufre una contracción que da como resultado, en último término, que se aprecie una cantidad menor de tejido cicatricial.During the proliferative phase, epithelialization, angiogenesis, granulation tissue formation, and collagen deposition are the main steps in wound healing. Epithelialization appears at an early stage of wound repair. Angiogenesis, stimulated, for example, by TNF-alpha, is noted by endothelial cell migration and capillary formation. The new capillaries transport nutrients to the wound and help maintain the granulation tissue bed. The final part of the proliferative phase is the formation of granulation tissue. Fibroblasts differentiate and produce ground substance and then collagen. Basal substance is deposited in the wound bed; collagen is then deposited as the wound undergoes the final phase of repair. Many different cytokines, including PDGF, insulin-like growth factor (IGF), and EGF, are involved in the proliferative phase of wound repair. During the maturation phase, the wound undergoes contraction which ultimately results in less scar tissue being seen.

A partir de lo anterior, resulta obvio que la cicatrización adecuada de una herida implica una interacción compleja de células y sustancias, tales como citoquinas, que actúan en concierto. Basándose en la investigación básica, se han propuesto muchos fármacos, sustancias y procedimientos de tratamiento para estimular la cicatrización de heridas.From the foregoing, it is obvious that proper wound healing involves a complex interaction of cells and substances, such as cytokines, acting in concert. Based on basic research, many drugs, substances, and treatment methods have been proposed to promote wound healing.

Muchas de estas sustancias proporcionan al paciente alivio parcial de heridas, necesitan largo tiempo de curación y no consiguen mostrar la respuesta óptima al tratamiento. Por ejemplo, la patente EP0575484 divulga una composición farmacéutica para la regeneración y la reparación de tejidos de mamífero, que incluye PDGF y dexametasona.Many of these substances provide the patient with partial relief from wounds, require a long healing time and fail to show the optimal response to treatment. For example, patent EP0575484 discloses a pharmaceutical composition for the regeneration and repair of mammalian tissues, which includes PDGF and dexamethasone.

Por tanto, se hace necesario proporcionar nuevas sustancias y composiciones con un alto poder en la regeneración celular, dando lugar a una cicatrización y reparando el daño tisular de manera efectiva.Therefore, it is necessary to provide new substances and compositions with a high power in cell regeneration, leading to healing and repairing tissue damage effectively.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓNDESCRIPTION OF THE INVENTION

Los inventores de la presente invención han observado que la miticina-C (QSVACRSYYCSKFCGSAGCSLYGCYLLHPGKICYCLHCSR, SEQ ID NO: 1) se expresa en respuesta a heridas o daños en los tejidos, potenciando así la regeneración celular y la reparación del tejido tras el daño. El papel de la miticina-C en la regeneración celular se demostró mediante un ensayo in vitro utilizando células de queratinocitos humanos (línea HaCat), y mediante un ensayo in vivo empleando larvas de pez cebra (Danio rerio). En ambos casos se vió que la herida cicatrizaba más rápido en presencia de miticina-C que, en su ausencia, promoviendo así la cicatrización y reparando el daño tisular (ver Ejemplo 1, Figuras 1 y 2).The inventors of the present invention have observed that myticin-C (QSVACRSYYCSKFCGSAGCSLYGCYLLHPGKICYCLHCSR, SEQ ID NO: 1) is expressed in response to wounds or tissue damage, thus enhancing cell regeneration and tissue repair after damage. The role of myticin-C in cell regeneration was demonstrated by an in vitro assay using human keratinocyte cells (HaCat line), and by an in vivo assay using zebrafish ( Danio rerio) larvae. In both cases, the wound healed faster in the presence of myticin-C than in its absence, thus promoting healing and repairing tissue damage (see Example 1, Figures 1 and 2).

A continuación, los inventores diseñaron una librería de péptidos pequeños cortos solapantes a partir de la secuencia de aminoácidos de la miticina-C (ver Tabla 1), con la finalidad de identificar aquella secuencia mínima necesaria para que la miticina-C pueda ejercer su papel en la regeneración celular y/o tisular. Así, mediante ensayos in vitro e in vivo, los inventores observaron que algunos péptidos denominados P1 a P4 eran capaces de reparar la herida o daño generado. Estos péptidos presentan la secuencia consenso SYYCSK (SEQ ID NO: 2), siendo ésta por tanto la secuencia de aminoácidos responsable de llevar a cabo las mejores tasas de regeneración a las 48 horas. Particularmente si se añaden los aminoácidos F y C en el extremo carboxilo terminal, presentan una mejora en la cicatrización total de la herida a las 72 h, SYYCSKFC (SEQ ID NO: 3), como se puede ver en la Figura 3 con los péptidos denominados P2b, P3 y P4.Next, the inventors designed a library of overlapping short small peptides from the amino acid sequence of miticin-C (see Table 1), in order to identify the minimum sequence necessary for miticin-C to play its role. in cell and/or tissue regeneration. Thus, through in vitro and in vivo tests, the inventors observed that some peptides called P1 to P4 were capable of repairing the wound or damage generated. These peptides have the consensus sequence SYYCSK (SEQ ID NO: 2), this being therefore the amino acid sequence responsible for carrying out the best regeneration rates at 48 hours. Particularly if amino acids F and C are added to the carboxyl terminus, they show an improvement in total wound healing at 72 h, SYYCSKFC (SEQ ID NO: 3), as can be seen in Figure 3 with the peptides called P2b, P3 and P4.

Así, en un aspecto, la presente invención se refiere a un péptido que comprende al menos un 80% de identidad con la secuencia SYYCSK (SEQ ID NO: 2), que presenta preferiblemente un tamaño de entre 6 a 99 aminoácidos, y que no es la miticina-C con secuencia SEQ ID NO: 1, preferiblemente el péptido comprende al menos un 80% de identidad con la secuencia SYYCSKFC (SEQ ID NO: 3), que presenta preferiblemente un tamaño de entre 6 a 99 aminoácidos, y que no es la miticina-C con secuencia SEQ ID NO: 1. De aquí en adelante, este péptido será denominado "péptido de la invención”.Thus, in one aspect, the present invention refers to a peptide that comprises at least 80% identity with the sequence SYYCSK (SEQ ID NO: 2), which preferably has a size between 6 to 99 amino acids, and which does not is myticin-C with sequence SEQ ID NO: 1, preferably the peptide comprises at least 80% identity with the sequence SYYCSKFC (SEQ ID NO: 3), which preferably has a size between 6 to 99 amino acids, and which it is not myticin-C with sequence SEQ ID NO: 1. Hereinafter, this peptide will be called "peptide of the invention".

El término "péptido”, como se usa en el presente documento, se refiere a una molécula formada por la unión, en un orden definido, de alfa-aminoácidos mediante un enlace peptídico. Se entenderá que los términos "enlace peptídico", "péptido", "polipéptido" y proteína son conocidos por los expertos en la materia. De aquí en adelante, "péptido" y "polipéptido" se utilizarán indistintamente. The term "peptide", as used herein, refers to a molecule formed by the union, in a defined order, of alpha-amino acids by means of a peptide bond. It will be understood that the terms "peptide bond", "peptide ", "polypeptide" and protein are known to those skilled in the art. Hereinafter, "peptide" and "polypeptide" will be used interchangeably.

El péptido de la invención puede obtenerse por técnicas ampliamente conocidas en el estado de la técnica, tales como síntesis química, recombinación genética, expresión del polinucleótido que codifica el polipéptido de la invención, etc. Todas estas técnicas son práctica de rutina para el experto en la materia.The peptide of the invention can be obtained by techniques widely known in the state of the art, such as chemical synthesis, genetic recombination, expression of the polynucleotide that encodes the polypeptide of the invention, etc. All of these techniques are routine practice for those skilled in the art.

Adicionalmente, los extremos carboxilo y amino terminal del péptido de la invención pueden estar protegidos contra la proteólisis. Por ejemplo, el extremo amino terminal puede estar en forma de grupo acetilo (Ac) y/o el extremo carboxilo terminal puede estar en forma de grupo amida (Am). También cabe la posibilidad de llevar a cabo modificaciones internas de los péptidos para que sean resistentes a la proteólisis. Ejemplos de estas modificaciones internas incluyen, sin limitar a, modificaciones en las que al menos un puente peptídico -CONH- se modifica y se reemplaza por un enlace reducido (CH2NH), un enlace retroinverso (NHCO), un enlace oximetileno (CH2-O), un enlace tiometileno (CH2-S), un enlace cetometileno (CO-CH2), un enlace hidroxietileno (CHOH-CH2), un enlace (N-N), un enlace E-alceno o un enlace -CH=CH-. Los péptidos también pueden estabilizarse por cruzamiento intramolecular, por ejemplo, mediante la modificación al menos de dos residuos de aminoácidos con cadenas laterales de oleofina, preferiblemente, cadenas alquenilo C3-C8, preferiblemente, cadenas pentel-2-il, seguidas de un entrecruzamiento de las cadenas tal como se describe en la tecnología denominada “staple” (Walensky et al., 2004, Science 205: 1466-1470). Todos estos péptidos modificados de forma química para resistir a la proteólisis, también están contemplados dentro de la presente invención.Additionally, the carboxyl and amino termini of the peptide of the invention may be protected against proteolysis. For example, the amino terminus may be in the form of an acetyl group (Ac) and/or the carboxyl terminus may be in the form of an amide group (Am). It is also possible to carry out internal modifications of the peptides so that they are resistant to proteolysis. Examples of these internal modifications include, but are not limited to, modifications in which at least one -CONH- peptide bridge is modified and replaced by a reduced bond (CH2NH), a retroinverse bond (NHCO), an oxymethylene bond (CH2-O ), a thiomethylene bond (CH2-S), a ketomethylene bond (CO-CH2), a hydroxyethylene bond (CHOH-CH2), an (NN) bond, an E-alcene bond, or a -CH=CH- bond. Peptides can also be stabilized by intramolecular crosslinking, for example, by modification of at least two amino acid residues with olefin side chains, preferably C3-C8 alkenyl chains, preferably pentel-2-yl chains, followed by crosslinking. chains as described in the so-called "staple" technology (Walensky et al., 2004, Science 205: 1466-1470). All of these chemically modified peptides to resist proteolysis are also contemplated within the present invention.

Modificaciones adicionales al péptido de la invención comprenden la unión covalente a una molécula de polietilenglicol (PEG) por su extremo carboxilo terminal o a un residuo de lisina, con la finalidad de disminuir su eliminación urinaria y la dosis terapéutica, y de incrementar la vida media del péptido en el plasma sanguíneo. La vida media del péptido también puede incrementarse mediante la inclusión del péptido en un material polimérico biodegradable y biocompatible para formar microesferas que son empleadas como un sistema de administración de fármacos. Polímeros y copolímeros incluyen, sin limitar a, poli (D, L-láctido-co-glicólico) o PLGA. Las técnicas y procedimientos de cómo fabricar microesferas o nanocápsulas lipídicas para su empleo en la administración de fármacos son ampliamente conocidas por el experto en la materia. Additional modifications to the peptide of the invention include covalent bonding to a polyethylene glycol (PEG) molecule at its terminal carboxyl end or to a lysine residue, in order to reduce its urinary elimination and therapeutic dose, and to increase the half-life of the peptide. peptide in blood plasma. The half-life of the peptide can also be increased by embedding the peptide in a biodegradable and biocompatible polymeric material to form microspheres that are used as a drug delivery system. Polymers and copolymers include, without limitation, poly(D,L-lactide-co-glycolic) or PLGA. The techniques and procedures for how to manufacture lipid microspheres or nanocapsules for use in the administration of drugs are widely known to those skilled in the art.

El péptido de la invención comprende al menos un 80% de identidad con la secuencia SEQ ID NO: 2, preferiblemente al menos un 80% de identidad con la secuencia SEQ ID NO: 3. En la presente invención, se entiende por "identidad” o "identidad de secuencia” al grado de similitud entre dos secuencias de nucleótidos o aminoácidos obtenido mediante el alineamiento de las dos secuencias. Dependiendo del número de residuos comunes entre las secuencias alineadas, se obtendrá un grado de identidad expresado en tanto por ciento. El grado de identidad entre dos secuencias de aminoácidos puede determinarse por métodos convencionales, por ejemplo, mediante algoritmos estándar de alineamiento de secuencias conocidos en el estado de la técnica, como por ejemplo BLAST. Los programas BLAST, por ejemplo, BLASTN, BLASTX, and TBLASTX, BLASTP and TBLASTN, son de dominio público en la página web de The National Center for Biotechonology Information (NCBI). En una realización particular, el péptido de la invención comprende una identidad de, al menos, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ó 99% con la secuencia SEQ ID NO: 2 o la SEQ ID NO: 3. En otra realización todavía más particular, el péptido de la invención comprende una identidad de secuencia del 100% con la secuencia SEQ ID NO: 2 o de la SEQ ID NO: 3. Como entiende el experto en la materia, todos los péptidos que presentan una identidad de, al menos, un 80% con la secuencia SEQ ID NO: 2 o de la SEQ ID NO: 3, y que presentan la misma función que el péptido SEQ ID NO: 2 o de la SEQ ID NO: 3, es decir, tienen capacidad de potenciar la regeneración tisular y la reparación del daño tisular, son variantes funcionalmente equivalentes del péptido de la invención. Ensayos para identificar péptidos funcionalmente equivalentes al péptido de la invención se pueden encontrar en el Ejemplo de la presente descripción.The peptide of the invention comprises at least 80% identity with the sequence SEQ ID NO: 2, preferably at least 80% identity with the sequence SEQ ID NO: 3. In the present invention, "identity" is understood as or "sequence identity" to the degree of similarity between two nucleotide or amino acid sequences obtained by aligning the two sequences. Depending on the number of common residues between the aligned sequences, a degree of identity expressed as a percentage will be obtained. The degree of identity between two amino acid sequences can be determined by conventional methods, for example, by standard sequence alignment algorithms known in the art, such as BLAST. BLAST programs, eg, BLASTN, BLASTX, and TBLASTX, BLASTP and TBLASTN, are in the public domain at The National Center for Biotechnology Information (NCBI) website. In a particular embodiment, the peptide of the invention comprises an identity of at least 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 or 99% with the sequence SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3. In another even more particular embodiment, the peptide of the invention comprises a sequence identity of 100% with the sequence SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3. As understood by those skilled in the art, all peptides that have an identity of at least 80% with the sequence SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3, and that have the same function as the peptide SEQ ID NO: 2 or SEQ ID NO: 3, that is, they have the ability to enhance tissue regeneration and repair of tissue damage, are functionally equivalent variants of the peptide of the invention. Assays to identify peptides functionally equivalent to the peptide of the invention can be found in the Example of the present description.

Así, en una realización particular, el péptido de la invención se refiere a un péptido que comprende la secuencia SEQ ID NO: 2, preferiblemente la SEQ ID NO: 3, que puede presentar un tamaño de entre 6 a 99 aminoácidos, y que no es miticina-C con la secuencia SEQ ID NO: 1.Thus, in a particular embodiment, the peptide of the invention refers to a peptide that comprises the sequence SEQ ID NO: 2, preferably SEQ ID NO: 3, which can have a size between 6 to 99 amino acids, and which does not is myticin-C with the sequence SEQ ID NO: 1.

Otra característica del péptido de la invención es que presenta un tamaño de entre 6 y 99 aminoácidos, preferiblemente entre 6 y 50, más preferiblemente entre 6 y 40. En una realización más particular, presenta un tamaño de entre 6 y 25 aminoácidos, y en otra realización todavía más particular, de entre 6 y 20 aminoácidos o de entre 6 y 15 aminoácidos. En otra realización aún más particular, el péptido de la invención presenta un tamaño de 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 aminoácidos.Another characteristic of the peptide of the invention is that it has a size between 6 and 99 amino acids, preferably between 6 and 50, more preferably between 6 and 40. In a more particular embodiment, it has a size between 6 and 25 amino acids, and in another even more particular embodiment, between 6 and 20 amino acids or between 6 and 15 amino acids. In another even more particular embodiment, the peptide of the invention It is 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or 15 amino acids in size.

En otra realización particular, el péptido de la invención se refiere a un péptido que comprende la secuencia QSVACRSYYCSK (SEQ ID NO: 4), VACRSYYCSKFC (SEQ ID NO: 5), CRSYYCSKFCGS (SEQ ID NO: 6) o SYYCSKFCGSAG (SEQ ID NO: 7). En otra realización todavía más particular, el péptido de la invención se refiere a un péptido que consiste en la secuencia SYYCSK (SEQ ID NO: 2), SYYCSKFC (SEQ ID NO: 3), QSVACRSYYCSK (SEQ ID NO: 4), VACRSYYCSKFC (SEQ ID NO: 5), CRSYYCSKFCGS (SEQ ID NO: 6) o SYYCSKFCGSAG (SEQ ID NO: 7). Más preferiblemente el péptido consiste en la secuencia VACRSYYCSKFC (SEQ ID NO: 5), CRSYYCSKFCGS (SEQ ID NO: 6) o SYYCSKFCGSAG (SEQ ID NO: 7). Cómo se ha comentado anteriormente, los péptidos de la invención pueden estar protegidos contra la proteólisis, particularmente el péptido de la invención se refiere a un péptido que comprende la secuencia SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 o SEQ ID NO: 12.In another particular embodiment, the peptide of the invention refers to a peptide comprising the sequence QSVACRSYYCSK (SEQ ID NO: 4), VACRSYYCSKFC (SEQ ID NO: 5), CRSYYCSKFCGS (SEQ ID NO: 6) or SYYCSKFCGSAG (SEQ ID NO: 7). In another even more particular embodiment, the peptide of the invention refers to a peptide consisting of the sequence SYYCSK (SEQ ID NO: 2), SYYCSKFC (SEQ ID NO: 3), QSVACRSYYCSK (SEQ ID NO: 4), VACRSYYCSKFC (SEQ ID NO: 5), CRSYYCSKFCGS (SEQ ID NO: 6) or SYYCSKFCGSAG (SEQ ID NO: 7). More preferably the peptide consists of the sequence VACRSYYCSKFC (SEQ ID NO: 5), CRSYYCSKFCGS (SEQ ID NO: 6) or SYYCSKFCGSAG (SEQ ID NO: 7). As mentioned above, the peptides of the invention may be protected against proteolysis, particularly the peptide of the invention refers to a peptide comprising the sequence SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 , SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 12.

El péptido de la invención puede estar unido a otras secuencias de aminoácidos para dar lugar a una proteína de fusión. Por lo tanto, en otro aspecto, la presente invención se refiere a una proteína de fusión que comprende el péptido de la invención, de aquí en adelante, “proteína de fusión de la invención”.The peptide of the invention can be linked to other amino acid sequences to give rise to a fusion protein. Therefore, in another aspect, the present invention relates to a fusion protein comprising the peptide of the invention, hereinafter "fusion protein of the invention".

El término “proteína de fusión”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una cadena polipeptídica diseñada artificialmente que comprende dos o más secuencias de aminoácidos de diferentes orígenes, naturales y/o artificiales. La proteína de fusión, por definición, nunca se encuentra en la naturaleza como tal.The term "fusion protein", as used herein, refers to an artificially designed polypeptide chain comprising two or more amino acid sequences of different origins, natural and/or artificial. The fusion protein, by definition, is never found in nature as such.

La proteína de fusión de la invención se puede obtener mediante cualquier técnica adecuada que permita obtener péptidos en una sola cadena de polinucleótido. Dichas técnicas incluyen técnicas recombinantes, donde se introduce una construcción génica que codifica la proteína de fusión en un vector adecuado para la expresión en un sistema de expresión adecuado, y técnicas de ligación de proteínas que involucran la formación de un enlace peptídico entre dos polipéptidos, como la ligación química nativa o ligación de proteínas expresadas.The fusion protein of the invention can be obtained by any suitable technique that allows peptides to be obtained in a single polynucleotide chain. Such techniques include recombinant techniques, where a gene construct encoding the fusion protein is introduced into a suitable vector for expression in a suitable expression system, and protein ligation techniques involving the formation of a peptide bond between two polypeptides, such as native chemical ligation or ligation of expressed proteins.

La proteína de fusión de la invención puede comprender adicionalmente un dominio peptídico señal N-terminal, que permite el procesamiento, por ejemplo, secreción extracelular, en una célula hospedadora adecuada. Preferiblemente, el dominio peptídico señal N-terminal comprende una proteasa, por ejemplo, un sitio de escisión por peptidasa señal, y por tanto puede retirarse después de o durante la expresión para obtener la proteína madura.The fusion protein of the invention may additionally comprise a domain N-terminal signal peptide, which allows processing, eg, extracellular secretion, in a suitable host cell. Preferably, the N-terminal signal peptide domain comprises a protease, eg, a signal peptidase cleavage site, and thus may be removed after or during expression to obtain the mature protein.

Adicionalmente, la proteína de fusión puede comprender un dominio de reconocimiento/purificación, por ejemplo, un dominio de marca Estrep y/o un dominio poli-His, que pueden estar localizados en el extremo N-terminal o en el extremo C-terminal. Asimismo, la proteína de fusión de la invención puede comprender adicionalmente un elemento flexible C-terminal, que tiene una longitud de, por ejemplo, 1-50, preferiblemente 10-30 aminoácidos que pueden incluir y/o conectarse a un dominio de reconocimiento/purificación como se describe en este documento.Additionally, the fusion protein may comprise a recognition/purification domain, eg, a Strep tag domain and/or a poly-His domain, which may be located at the N-terminus or the C-terminus. Likewise, the fusion protein of the invention may additionally comprise a C-terminal flexible element, which has a length of, for example, 1-50, preferably 10-30 amino acids that may include and/or connect to a recognition domain/ purification as described herein.

El péptido de la invención puede ir unido a otras secuencias de aminoácidos a través de un espaciador (linker), el cual, puede ser flexible.The peptide of the invention can be linked to other amino acid sequences through a spacer (linker), which can be flexible.

Tanto el péptido como la proteína de la invención pueden estar contenidos en una nanopartícula para su mejor administración, conservación, etc. Así, en otro aspecto, la presente invención se refiere a una nanopartícula que comprende el péptido o la proteína de fusión de la invención.Both the peptide and the protein of the invention can be contained in a nanoparticle for better administration, conservation, etc. Thus, in another aspect, the present invention relates to a nanoparticle comprising the peptide or fusion protein of the invention.

El término "nanopartícula", como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier material que tenga dimensiones en el rango de entre 1 y 1.000 nm. En algunas realizaciones, las nanopartículas tienen dimensiones en el rango de 2-200 nm, preferiblemente en el rango de 2-150 nm, e incluso más preferiblemente en el rango de 2-100 nm. Las nanopartículas pueden contribuir a preservar la integridad del péptido o de la proteína de fusión en los fluidos biológicos hasta que alcance el órgano objetivo. Por último, las nanopartículas también pueden modificarse para dirigir la nanopartícula a un órgano de interés, mediante la adición de ligandos sin comprometer la capacidad de las nanopartículas para entregar sus cargas útiles de péptidos. Se contempla que esto permitirá el suministro a células, tejidos y órganos específicos. La especificidad de direccionamiento de los sistemas de administración basados en ligandos se basa en la distribución de los receptores de ligandos en diferentes tipos de células. El ligando de direccionamiento puede estar asociado de forma no covalente o covalente con una nanopartícula, y puede conjugarse con las nanopartículas mediante una variedad de métodos.The term "nanoparticle", as used herein, refers to any material having dimensions in the range between 1 and 1,000 nm. In some embodiments, the nanoparticles have dimensions in the range of 2-200nm, preferably in the range of 2-150nm, and even more preferably in the range of 2-100nm. Nanoparticles can help preserve the integrity of the peptide or fusion protein in biological fluids until it reaches the target organ. Lastly, the nanoparticles can also be modified to target the nanoparticle to an organ of interest, by adding ligands without compromising the ability of the nanoparticles to deliver their peptide payloads. It is contemplated that this will allow delivery to specific cells, tissues and organs. The targeting specificity of ligand-based delivery systems is based on the distribution of ligand receptors in different cell types. The targeting ligand may be non-covalently associated or covalently with a nanoparticle, and can be conjugated to the nanoparticles by a variety of methods.

Las nanopartículas adecuadas que pueden usarse en el contexto de la presente invención incluyen materiales a nanoescala como una nanopartícula basada en lípidos, una nanopartícula superparamagnética, una nanohélice, un nanocristal semiconductor, un punto cuántico, una nanopartícula basada en polímero, una nanopartícula basada en silicona, una nanopartícula a base de sílice, una nanopartícula a base de metal, un fullereno y un nanotubo.Suitable nanoparticles that can be used in the context of the present invention include nanoscale materials such as lipid-based nanoparticle, superparamagnetic nanoparticle, nanohelix, semiconductor nanocrystal, quantum dot, polymer-based nanoparticle, silicone-based nanoparticle , a silica-based nanoparticle, a metal-based nanoparticle, a fullerene, and a nanotube.

Como entiende el experto en la materia, el péptido de la invención o la proteína de la invención también puede estar contenido dentro de una partícula. Por lo tanto, en otro aspecto, la invención se refiere a una partícula similar a virus que comprende el péptido o la proteína de fusión.As the person skilled in the art understands, the peptide of the invention or the protein of the invention can also be contained within a particle. Therefore, in another aspect, the invention relates to a virus-like particle comprising the peptide or fusion protein.

El término "partícula similar a un virus", también denominado "VLP", se refiere a partículas no infecciosas que se parecen a los virus que no contienen ningún material genético viral. Las VLP son el resultado de la expresión de proteínas estructurales virales, como las proteínas de la cápside y su autoensamblaje.The term "virus-like particle", also referred to as "VLP", refers to non-infectious virus-like particles that do not contain any viral genetic material. VLPs are the result of the expression of viral structural proteins, such as capsid proteins, and their self-assembly.

En una realización particular, la VLP puede comprender, o alternativamente consistir en, proteínas estructurales de Parvovirus, Rotavirus; proteínas estructurales del virus de Norwalk; proteínas estructurales del alfavirus; proteínas estructurales del virus de la fiebre aftosa; proteínas estructurales del virus del sarampión, proteínas estructurales del virus Sindbis, proteínas estructurales de las proteínas estructurales del retrovirus del virus de la Hepatitis B (por ejemplo, un HBcAg); proteínas estructurales del virus del mosaico del tabaco; proteínas estructurales del virus FlockHouse; proteínas estructurales del virus del papiloma humano; proteínas estructurales del virus del polioma; proteínas estructurales de bacteriófagos, proteínas estructurales de fagos de ARN.In a particular embodiment, the VLP may comprise, or alternatively consist of, structural proteins from Parvovirus, Rotavirus; Norwalk virus structural proteins; alphavirus structural proteins; structural proteins of foot-and-mouth disease virus; measles virus structural proteins, Sindbis virus structural proteins, Hepatitis B virus retrovirus structural proteins (eg, an HBcAg); structural proteins of tobacco mosaic virus; FlockHouse virus structural proteins; structural proteins of human papillomavirus; structural proteins of polyoma virus; bacteriophage structural proteins, RNA phage structural proteins.

En una realización particular, el péptido o la proteína de fusión de la invención se acopla o se une a la cápside de la partícula similar a virus. La unión del péptido o proteína de fusión a la cápside puede ser por un enlace covalente o no covalente. In a particular embodiment, the peptide or fusion protein of the invention is coupled or bound to the capsid of the virus-like particle. The attachment of the peptide or fusion protein to the capsid may be by a covalent or non-covalent bond.

El péptido de la invención puede obtenerse por técnicas ampliamente conocidas en el estado de la técnica, como la expresión en una célula del polinucleótido que codifica el polipéptido de la invención, o la proteína de la invención, y su posterior aislamiento. Por lo tanto, en otro aspecto, la invención se refiere a un polinucleótido, de aquí en adelante “polinucleótido de la invención”, que codifica el péptido de la invención o la proteína de fusión de la invención.The peptide of the invention can be obtained by techniques widely known in the state of the art, such as the expression in a cell of the polynucleotide that encodes the polypeptide of the invention, or the protein of the invention, and its subsequent isolation. Therefore, in another aspect, the invention relates to a polynucleotide, hereinafter "polynucleotide of the invention", that encodes the peptide of the invention or the fusion protein of the invention.

Los términos "polinucleótido", "ácido nucleico" y "molécula de ácido nucleico" se usan indistintamente para referirse a formas poliméricas de nucleótidos de cualquier longitud. Los polinucleótidos pueden contener desoxirribonucleótidos, ribonucleótidos y/o sus análogos. Los nucleótidos pueden tener cualquier estructura tridimensional y pueden realizar cualquier función, conocida o desconocida. El término "polinucleótido" incluye, por ejemplo, moléculas monocatenarias, bicatenarias y de triple hélice, un gen o fragmento de gen, exones, intrones, ARNm, ARNt, ARNr, ribozimas, ADNc, polinucleótidos recombinantes, polinucleótidos ramificados, plásmidos, vectores, ADN aislado de cualquier secuencia, ARN aislado de cualquier secuencia, sondas de ácido nucleico y cebadores. Además de una molécula de ácido nucleico nativa, una molécula de ácido nucleico de la presente invención también puede comprender moléculas de ácido nucleico modificadas. Como se usa en este documento, ARNm se refiere a un ARN que puede traducirse en una célula.The terms "polynucleotide", "nucleic acid" and "nucleic acid molecule" are used interchangeably to refer to polymeric forms of nucleotides of any length. The polynucleotides may contain deoxyribonucleotides, ribonucleotides, and/or their analogs. Nucleotides can have any three-dimensional structure and can perform any function, known or unknown. The term "polynucleotide" includes, for example, single-stranded, double-stranded, and triplex molecules, a gene or gene fragment, exons, introns, mRNA, tRNA, rRNA, ribozymes, cDNA, recombinant polynucleotides, branched polynucleotides, plasmids, vectors, isolated DNA of any sequence, isolated RNA of any sequence, nucleic acid probes and primers. In addition to a native nucleic acid molecule, a nucleic acid molecule of the present invention may also comprise modified nucleic acid molecules. As used herein, mRNA refers to an RNA that can be translated in a cell.

En una realización preferida, el polinucleótido de la invención es un ARNm. El ARNm puede sintetizarse químicamente, puede obtenerse mediante transcripción in vitro o puede sintetizarse in vivo en la célula diana. Las secuencias de nucleótidos que forman el ácido nucleico que codifica el conjugado o la proteína de fusión de la invención están en el mismo marco de lectura correcto para la expresión de los mismos.In a preferred embodiment, the polynucleotide of the invention is an mRNA. The mRNA can be chemically synthesized, can be obtained by in vitro transcription, or can be synthesized in vivo in the target cell. The nucleotide sequences that form the nucleic acid encoding the conjugate or fusion protein of the invention are in the same correct reading frame for expression thereof.

El polinucleótido que codifica el péptido o la proteína de fusión de la invención puede tener diversas modificaciones efectuadas en la región codificante en la medida que no cambien la secuencia de aminoácidos, del péptido o de la proteína de fusión, debido a la degeneración de los codones, o tomando en consideración los codones preferidos por el organismo en el que se van a expresar y pueden introducirse diversas modificaciones o alteraciones incluso en regiones distintas de la región codificante, en tanto que no tengan influencia sobre la expresión del gen. The polynucleotide encoding the peptide or fusion protein of the invention may have various modifications made to the coding region as long as the amino acid sequence of the peptide or fusion protein does not change due to codon degeneracy. , or taking into consideration the codons preferred by the organism in which they are to be expressed, and various modifications or alterations may be introduced even in regions other than the coding region, as long as they have no influence on the expression of the gene.

Como entiende el experto en la materia, el polinucleótido que codifica el péptido de la invención o la proteína de fusión de la invención, pueden estar incluidos dentro de una construcción génica o dentro de un vector de expresión. En general, un vector de expresión comprende, además del polinucleótido que codifica el péptido de la invención o la proteína de fusión de la invención, un promotor que dirige su transcripción (por ejemplo, pT7, plac, ptrc, ptac, pBAD, ret, etc.), al que está operativamente enlazado, y otras secuencias necesarias o apropiadas que controlan y regulan dicha transcripción y, en su caso, la traducción del producto de interés, por ejemplo, señales de inicio y terminación de transcripción (tlt2, etc.), señal de poliadenilación, origen de replicación, secuencias de unión a ribosomas (RBS), secuencias codificantes de reguladores transcripcionales, potenciadores (enhancers), silenciadores transcripcionales (silencers), represores, etc. Ejemplos de vectores de expresión apropiados pueden seleccionarse de acuerdo con las condiciones y necesidades de cada caso concreto entre plásmidos de expresión, vectores virales (ADN o ARN), cósmidos, cromosomas artificiales, etc. que pueden contener, además, marcadores utilizables para seleccionar las células transfectadas o transformadas con el gen o genes de interés. La elección del vector dependerá de la célula huésped y del tipo de uso que se quiera realizar. Por ejemplo, dicho vector puede ser un vector viral (adenovirus, virus asociados a los adenovirus así como retrovirus y, en particular, lentivirus) o no viral (pcDNA3, pHCMV/Zeo, pCR3.1, pEFl/His, pIND/GS, pRc/HCMV2, pSV40/Zeo2, pTRACER-HCMV, pUB6/V5-His, pVAXl, pZeoSV2, pCI, pSVL and pKSV-10, pBPV-1, pML2d y pTDTl). Dichos vectores pueden ser administrados directamente al sujeto por métodos convencionales. Alternativamente, dichos vectores pueden ser utilizados para transformar, transfectar o infectar células, por ejemplo, células de mamíferos, ex vivo, y, posteriormente implantarlas en el cuerpo animal para obtener el efecto terapéutico deseado. Para su administración al sujeto receptor dichas células se formularán en un medio adecuado que no afecte adversamente a la viabilidad de dichas células. La obtención de dicho vector puede realizarse por métodos convencionales conocidos por los técnicos en la materia al igual que para la transformación de microorganismos y células eucariotas se pueden utilizar diferentes métodos ampliamente conocidos.As the person skilled in the art understands, the polynucleotide encoding the peptide of the invention or the fusion protein of the invention may be included within a gene construct or within an expression vector. In general, an expression vector comprises, in addition to the polynucleotide encoding the peptide of the invention or the fusion protein of the invention, a promoter that directs its transcription (for example, pT7, plac, ptrc, ptac, pBAD, ret, etc.), to which it is operatively linked, and other necessary or appropriate sequences that control and regulate said transcription and, where appropriate, the translation of the product of interest, for example, transcription start and termination signals (tlt2, etc. ), polyadenylation signal, origin of replication, ribosome binding sequences (RBS), coding sequences for transcriptional regulators, enhancers, transcriptional silencers (silencers), repressors, etc. Examples of appropriate expression vectors can be selected according to the conditions and needs of each specific case among expression plasmids, viral vectors (DNA or RNA), cosmids, artificial chromosomes, etc. which may also contain markers that can be used to select the cells transfected or transformed with the gene or genes of interest. The choice of vector will depend on the host cell and the type of use to be made. For example, said vector may be a viral vector (adenoviruses, adenovirus-associated viruses as well as retroviruses and, in particular, lentiviruses) or a non-viral vector (pcDNA3, pHCMV/Zeo, pCR3.1, pEFl/His, pIND/GS, pRc/HCMV2, pSV40/Zeo2, pTRACER-HCMV, pUB6/V5-His, pVAXl, pZeoSV2, pCI, pSVL and pKSV-10, pBPV-1, pML2d and pTDTl). Said vectors can be administered directly to the subject by conventional methods. Alternatively, said vectors can be used to transform, transfect or infect cells, for example mammalian cells, ex vivo, and subsequently implant them in the animal body to obtain the desired therapeutic effect. For administration to the receiving subject, said cells will be formulated in a suitable medium that does not adversely affect the viability of said cells. Obtaining said vector can be carried out by conventional methods known to those skilled in the art, just as for the transformation of microorganisms and eukaryotic cells, different widely known methods can be used.

En otro aspecto, la invención se refiere a una construcción génica, de aquí en adelante “construcción génica de la invención”, que comprende el polinucleótido de la invención. In another aspect, the invention relates to a gene construct, hereinafter "gene construct of the invention", comprising the polynucleotide of the invention.

Preferiblemente, la construcción génica de la invención comprende el polinucleótido de la invención operativamente unido a secuencias reguladoras de la expresión del polinucleótido de la invención. En principio, cualquier promotor puede ser utilizado en las construcciones génicas de la presente invención, siempre que dicho promotor sea compatible con las células en las que se desea expresar el polinucleótido.Preferably, the gene construct of the invention comprises the polynucleotide of the invention operably linked to expression-regulating sequences of the polynucleotide of the invention. In principle, any promoter can be used in the gene constructs of the present invention, as long as said promoter is compatible with the cells in which it is desired to express the polynucleotide.

Un promotor, o región promotora, es una secuencia de nucleótidos que controla la transcripción de un gen determinado (secuencias nucleotídicas). En la presente invención se refiere a una secuencia de nucleótidos que controla la transcripción del polinucleótido de la invención. Las secuencias promotoras pueden ser unidireccionales o bidireccionales. Un promotor unidireccional es aquel que controla la transcripción de un gen o de más genes que se sitúan en tándem con el primero. "En tándem” se refiere a que el extremo 3’ del primer gen va seguido, bien consecutivamente o separados por una determinada secuencia nucleotídica, por el extremo 5’ del segundo gen. Un promotor bidireccional se refiere a la región promotora que controla la transcripción en dos direcciones opuestas, es decir, que un promotor bidireccional dirige la transcripción de dos genes situados de manera divergente, es decir en sentido opuesto, estando el extremo 5’ de ambas secuencias nucleotídicas más cercano entre sí que el extremo 3’. En la presente invención se utilizan los términos “promotor” y "región promotora” indistintamente. Además, los promotores en la presente invención pueden ser constitutivos o inducibles. El término “inducible”, tal y como se emplea en la presente descripción, se refiere a la posibilidad de que el promotor tenga un elemento de control que permita activar o desactivar (reprimir) la transcripción del gen que regula, en presencia de un factor externo al promotor.A promoter, or promoter region, is a nucleotide sequence that controls the transcription of a given gene (nucleotide sequences). In the present invention it refers to a nucleotide sequence that controls the transcription of the polynucleotide of the invention. Promoter sequences can be unidirectional or bidirectional. A unidirectional promoter is one that controls the transcription of one gene or more genes that are located in tandem with the first. "In tandem" refers to the 3' end of the first gene being followed, either consecutively or separated by a certain nucleotide sequence, by the 5' end of the second gene. A bidirectional promoter refers to the promoter region that controls transcription. in two opposite directions, that is, a bidirectional promoter directs the transcription of two divergently located genes, that is, in opposite directions, the 5' end of both nucleotide sequences being closer to each other than the 3' end. In the present invention, the terms "promoter" and "promoter region" are used interchangeably. Furthermore, the promoters in the present invention may be constitutive or inducible. The term "inducible", as used in the present description, refers to the possibility that the promoter has a control element that allows activating or deactivating (repressing) the transcription of the gene that it regulates, in the presence of a factor. external to the promoter.

Adicionalmente, la construcción génica de la invención puede contener marcadores o etiquetas que permiten el aislamiento del péptido de la invención una vez que es sintetizado en la célula.Additionally, the gene construct of the invention may contain markers or labels that allow the isolation of the peptide of the invention once it is synthesized in the cell.

Por otro lado, el polinucleótido o la construcción génica de la invención pueden estar formando parte de un vector. Así, en otro aspecto, la invención se relaciona con un vector, de aquí en adelante “vector de la invención”, que comprende el polinucleótido o la construcción génica de la invención. On the other hand, the polynucleotide or the gene construct of the invention may be part of a vector. Thus, in another aspect, the invention relates to a vector, hereinafter "vector of the invention", comprising the polynucleotide or gene construct of the invention.

El término "vector", como se usa en el presente documento, se refiere a una secuencia de ácido nucleico que comprende las secuencias necesarias de modo que después de transcribir y traducir dichas secuencias en una célula se genera un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la invención. Dicha secuencia está operativamente vinculada a segmentos adicionales que proporcionan su replicación autónoma en una célula huésped de interés. Preferiblemente, el vector es un vector de expresión, que se define como un vector que, además de las regiones de la replicación autónoma en una célula huésped, contiene regiones operativamente unidas al ácido nucleico de la invención y que son capaces de mejorar la expresión de los productos del ácido nucleico según la invención. Los vectores de la invención se pueden obtener por medio de técnicas ampliamente conocidas en el estado de la técnica.The term "vector", as used herein, refers to a nucleic acid sequence comprising the necessary sequences such that after transcribing and translating said sequences in a cell a polypeptide encoded by the nucleic acid of the invention. Said sequence is operably linked to additional segments that provide for its autonomous replication in a host cell of interest. Preferably, the vector is an expression vector, which is defined as a vector which, in addition to regions of autonomous replication in a host cell, contains regions operably linked to the nucleic acid of the invention and which are capable of enhancing the expression of the nucleic acid products according to the invention. The vectors of the invention can be obtained by means of techniques widely known in the state of the art.

El experto en la materia apreciará que no existe limitación en cuanto al tipo de vector que puede ser utilizado, ya que dicho vector puede ser un vector de clonaje adecuado para la propagación o un vector de expresión. Así, vectores adecuados de acuerdo a la presente invención incluyen, sin limitar a, (i) vectores de expresión en procariotas tales como pUC18, pUC19, Bluescript y sus derivados, mp18, mp19, pBR322, pMB9, CoIEl, pCRl, RP4, fagos y vectores "shuttle" tales como pSA3 and pAT28, (ii) vectores de expresión en levaduras tales como vectores del tipo de plásmidos de 2 micras, plásmidos de integración, vectores YEP, plásmidos centroméricos y similares, (iii) vectores de expresión en células de insectos tales como los vectores de la serie pAC y de la serie pVL, (iv) vectores de expresión en plantas tales como vectores de la serie pIBI, pEarleyGate, pAVA, pCAMBIA, pGSA, pGWB, pMDC, pMY, pORE y similares y (v) vectores de expresión en células eucariotas superiores bien basados en vectores virales, entre los que se incluyen, sin limitar a, adenovirus, virus asociados a los adenovirus así como retrovirus y lentivirus, así como vectores no virales entre los que se incluyen, sin limitar a, pSilencer 4.1-CMV (Ambion), pcDNA3, pcDNA3.1/hygpHCMV/Zeo, pCR3.1, pEFVHis, pIND/GS, pRc/HCMV2, pSV40/Ze02, pTRACER HCMV, pUB6N5-His, pVAXl, pZeoSV2, pCl, pSVL and pKSV-10, pBPV-1, pML2d y pTDTl.The person skilled in the art will appreciate that there is no limitation as to the type of vector that can be used, since said vector can be a cloning vector suitable for propagation or an expression vector. Thus, suitable vectors according to the present invention include, without limitation, (i) prokaryotic expression vectors such as pUC18, pUC19, Bluescript and its derivatives, mp18, mp19, pBR322, pMB9, CoIEl, pCRl, RP4, phage and shuttle vectors such as pSA3 and pAT28, (ii) yeast expression vectors such as 2 micron plasmid-like vectors, integrating plasmids, YEP vectors, centromeric plasmids and the like, (iii) cell expression vectors insect vectors such as pAC-series and pVL-series vectors, (iv) plant expression vectors such as pIBI-series vectors, pEarleyGate, pAVA, pCAMBIA, pGSA, pGWB, pMDC, pMY, pORE and the like and (v) higher eukaryotic cell expression vectors either based on viral vectors, including but not limited to adenoviruses, adenovirus-associated viruses as well as retroviruses and lentiviruses, as well as non-viral vectors including, not limited to, pSilencer 4 .1-CMV (Ambion), pcDNA3, pcDNA3.1/hygpHCMV/Zeo, pCR3.1, pEFVHis, pIND/GS, pRc/HCMV2, pSV40/Ze02, pTRACER HCMV, pUB6N5-His, pVAXl, pZeoSV2, pCl, pSVL and pKSV-10, pBPV-1, pML2d and pTDTl.

El vector de la invención puede ser utilizado para transformar, transfectar o infectar células susceptibles de ser transformadas, transfectadas o infectadas por dicho vector.The vector of the invention can be used to transform, transfect or infect cells capable of being transformed, transfected or infected by said vector.

Dichas células pueden ser procariotas o eucariotas. A modo de ejemplo, el vector donde se introduce dicha secuencia de ADN puede ser un plásmido o un vector que, cuando se introduce en una célula hospedadora, se integra en el genoma de dicha célula y se replica junto con el cromosoma/s en el/los que se ha integrado. La obtención de dicho vector puede realizarse por métodos convencionales conocidos por los técnicos en la materia.Said cells can be prokaryotic or eukaryotic. As an example, the vector where said DNA sequence is introduced can be a plasmid or a vector that, when introduced into a host cell, integrates into the genome of said cell and replicates together with the chromosome(s) into which it has been integrated. Obtaining said vector can be carried out by conventional methods known to those skilled in the art.

Por lo tanto, en otro aspecto, la invención se refiere a una célula, de aquí en adelante "célula de la invención”, que comprende un péptido, una proteína de fusión, un polinucleótido, una construcción génica o un vector según la presente invención, para lo cual dicha célula ha podido ser transformada, transfectada o infectada con la construcción o el vector proporcionados por esta invención. Células transformadas, transfectadas o infectadas pueden ser obtenidas por métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia, que incluyen, sin limitarse a, electroporación, fusión de protoplastos, coprecipitación con fosfato de calcio (CaPO4) y precipitación con cloruro de calcio (CaCl2).Therefore, in another aspect, the invention relates to a cell, hereinafter "cell of the invention", comprising a peptide, a fusion protein, a polynucleotide, a gene construct or a vector according to the present invention , for which said cell could have been transformed, transfected or infected with the construction or the vector provided by this invention Transformed, transfected or infected cells can be obtained by conventional methods known to those skilled in the art, including, without limitation a, electroporation, protoplast fusion, coprecipitation with calcium phosphate (CaPO4) and precipitation with calcium chloride (CaCl2).

En una realización particular, dicha célula hospedadora es una célula animal, preferentemente una célula de mamífero y más preferentemente una célula humana, transfectada o infectada con un vector apropiado.In a particular embodiment, said host cell is an animal cell, preferably a mammalian cell and more preferably a human cell, transfected or infected with an appropriate vector.

Células huésped adecuadas para la expresión del polipéptido de la invención incluyen, sin limitar a, células de mamíferos, células de plantas, células de insectos, células de hongos y células bacterianas. Células de mamíferos adecuadas para en la presente invención incluyen líneas celulares epiteliales (porcinas, humanas, etc.), líneas celulares de osteosarcoma (humanas, etc.), líneas celulares de neuroblastoma (humanas, etc.), carcinomas epiteliales (humanos, etc.), células gliales (murinas, humanas, etc.), líneas celulares hepáticas (de mono, etc.), células CHO (ChineseHamsterOvary), células COS, células BHK, células HeLa, 911, ATI080, A549, 293 o PER.C6, células ECCs humana 5 NTERA-2, células D3 de la línea de mESCs, células troncales embrionarias humanas tales como HS293 y BGV01, SHEF1, SHEF2 y HS181, células NIH3T3, 293T, REH Y MCF-7 y células hMSCs (human mesenchymalstemcells), y células GliNS2 (células madre de glioma).Suitable host cells for expression of the polypeptide of the invention include, without limitation, mammalian cells, plant cells, insect cells, fungal cells, and bacterial cells. Mammalian cells suitable for use in the present invention include epithelial cell lines (porcine, human, etc.), osteosarcoma cell lines (human, etc.), neuroblastoma cell lines (human, etc.), epithelial carcinomas (human, etc. .), glial cells (murine, human, etc.), liver cell lines (monkey, etc.), CHO (ChineseHamsterOvary) cells, COS cells, BHK cells, HeLa cells, 911, ATI080, A549, 293 or PER. C6, human ECCs 5 NTERA-2 cells, D3 cells of the mESC line, human embryonic stem cells such as HS293 and BGV01, SHEF1, SHEF2 and HS181, NIH3T3, 293T, REH and MCF-7 cells and hMSCs (human mesenchymalstemcells ), and GliNS2 cells (glioma stem cells).

En otro aspecto, la invención se refiere a una composición, preferiblemente una composición farmacéutica o cosmética, que comprende una cantidad terapéuticamente o cosméticamente eficaz del péptido, proteína de fusión, nanopartícula, partícula similar a virus, polinucleótido, construcción génica, vector o célula de la invención, y opcionalmente un excipiente o vehículo farmacéuticamente o cosméticamente aceptable.In another aspect, the invention relates to a composition, preferably a pharmaceutical or cosmetic composition, comprising an amount therapeutically or cosmetically effective peptide, fusion protein, nanoparticle, virus-like particle, polynucleotide, gene construct, vector or cell of the invention, and optionally a pharmaceutically or cosmetically acceptable carrier or excipient.

El péptido, la proteína de fusión, la nanopartícula, la partícula similar a un virus, el polinucleótido, la construcción génica, el vector y la célula de la invención se han definido previamente.The peptide, fusion protein, nanoparticle, virus-like particle, polynucleotide, gene construct, vector and cell of the invention have been previously defined.

Como se usa en la presente invención, la expresión "composición farmacéutica" se refiere a una formulación que se ha adaptado para administrar una dosis predeterminada de uno o varios agentes terapéuticos útiles a una célula, un grupo de células, un órgano, un tejido o un animal en el que existe daño o herida y requiere regeneración tisular y/o celular.As used herein, the term "pharmaceutical composition" refers to a formulation that has been adapted to deliver a predetermined dose of one or more useful therapeutic agents to a cell, group of cells, organ, tissue, or an animal in which there is damage or injury and requires tissue and/or cell regeneration.

Como se usa en la presente invención, la expresión "composición cosmética” se refiere a una formulación que se ha adaptado para administrar una dosis predeterminada de uno o varios agentes cosméticos útiles a una célula, un grupo de células, un órgano, un tejido o un animal en el que existe daño estético o herida y requiere regeneración tisular y/o celular.As used herein, the term "cosmetic composition" refers to a formulation that has been adapted to deliver a predetermined dose of one or more useful cosmetic agents to a cell, group of cells, organ, tissue, or an animal in which there is cosmetic damage or injury and requires tissue and/or cell regeneration.

La expresión "cantidad terapéuticamente o cosméticamente eficaz", como se usa en este documento, se entiende como una cantidad capaz de proporcionar un efecto terapéutico o cosmético, y que puede ser determinada por el experto en la materia por los medios comúnmente utilizados. La cantidad de péptido, proteína de fusión, nanopartícula, partícula similar a un virus, polinucleótido, construcción génica, vector o célula de la invención que puede incluirse en las composiciones farmacéuticas o cosméticas según la invención variará dependiendo del sujeto y del modo particular de la administración.The expression "therapeutically or cosmetically effective amount", as used in this document, is understood as an amount capable of providing a therapeutic or cosmetic effect, and that can be determined by those skilled in the art by commonly used means. The amount of peptide, fusion protein, nanoparticle, virus-like particle, polynucleotide, gene construct, vector or cell of the invention that can be included in the pharmaceutical or cosmetic compositions according to the invention will vary depending on the subject and the particular mode of application. management.

La dosis adecuada del principio o principios activos dentro de la composición farmacéutica o cosmética dependerá del tipo de daño tisular a tratar, la gravedad y el curso de la enfermedad o daño, si la composición se administra con fines cosméticos, preventivos o terapéuticos, terapia previa, historia clínica del paciente y la respuesta al péptido o polipéptido, y la discreción del médico tratante. La cantidad de péptido, proteína de fusión, nanopartícula, partícula similar a un virus, polinucleótido, construcción génica, vector o célula de la invención se administra adecuadamente al paciente o sujeto en un momento o durante una serie de tratamientos. Dependiendo del tipo y la gravedad de la enfermedad o daño, un nivel de dosis apropiado generalmente será de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg / kg; más preferiblemente de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 5 mg / kg, incluso más preferiblemente de aproximadamente 0,75 a aproximadamente 2,5 mg / kg, aún más preferiblemente de aproximadamente 1 mg / kg, que puede administrarse en dosis únicas o múltiples. Los compuestos pueden administrarse en un régimen de 1 a varias veces por día o por dos, tres, cuatro, cinco, seis o siete días, preferiblemente una vez cada dos días. La composición farmacéutica o cosmética se puede administrar durante al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 21, 28 o más días, preferiblemente durante 14 días. La composición farmacéutica o cosmética se puede administrar preferiblemente una vez cada dos días durante 14 días.The adequate dose of the active principle or principles within the pharmaceutical or cosmetic composition will depend on the type of tissue damage to be treated, the severity and course of the disease or damage, if the composition is administered for cosmetic, preventive or therapeutic purposes, previous therapy , patient medical history and response to the peptide or polypeptide, and the discretion of the treating physician. The amount of peptide, fusion protein, nanoparticle, virus-like particle, polynucleotide, gene construct, vector or cell of the invention is suitably administered to the patient or subject at one time or over a series of treatments. Depending on the type and severity of the disease or injury, an appropriate dose level will generally be from about 0.1 to about 10 mg/kg; more preferably from about 0.5 to about 5 mg/kg, even more preferably from about 0.75 to about 2.5 mg/kg, even more preferably from about 1 mg/kg, which may be administered in single or multiple doses. The compounds can be administered in a regimen of 1 to several times per day or for two, three, four, five, six or seven days, preferably once every other day. The pharmaceutical or cosmetic composition can be administered for at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 21, 28 or more days, preferably for 14 days. The pharmaceutical or cosmetic composition can preferably be administered once every other day for 14 days.

Las composiciones farmacéuticas de la invención también contienen uno o varios excipientes farmacéuticamente aceptables adicionales. Por "excipiente farmacéuticamente aceptable" se entiende una sustancia terapéuticamente inactiva que se utiliza para incorporar el ingrediente activo y que es aceptable para el paciente desde un punto de vista farmacológico/toxicológico y para el químico farmacéutico que lo fabrica desde un punto físico/químico con respecto a la composición, formulación, estabilidad, aceptación del paciente y biodisponibilidad. El excipiente o vehículo también incluye cualquier sustancia que sirva para mejorar el suministro y la eficacia del principio activo dentro de la composición farmacéutica. Los ejemplos de vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen uno o más de la lista que comprende: agua, solución salina, solución salina tamponada con fosfato, dextrosa, glicerol, etanol y similares, así como combinaciones de los mismos. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol o cloruro de sodio en la composición. Los vehículos farmacéuticamente aceptables pueden comprender además cantidades menores de sustancias auxiliares, tales como agentes humectantes o emulsionantes, conservantes o tampones, que mejoran la vida útil o la eficacia de la proteína de fusión o de las composiciones que forman parte de las composiciones farmacéuticas. Ejemplos de vehículos adecuados son bien conocidos en la literatura. Ejemplos de vehículos sin limitación son una serie de sacáridos tales como lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, xilitol, eritritol y maltitol; una serie de almidones como almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz y almidón de patata; una serie de celulosa tal como celulosa, metil celulosa, carboximetil celulosa sódica e hidroxipropilmetil celulosa; y una serie de relleno como la gelatina y la polivinilpirrolidona. En algunos casos, se puede agregar un desintegrante como polivinilpirrolidona reticulada, agar, ácido algínico o alginato de sodio.The pharmaceutical compositions of the invention also contain one or more additional pharmaceutically acceptable excipients. By "pharmaceutically acceptable excipient" is meant a therapeutically inactive substance that is used to incorporate the active ingredient and that is acceptable to the patient from a pharmacological/toxicological point of view and to the pharmaceutical chemist who manufactures it from a physical/chemical point of view. regarding composition, formulation, stability, patient acceptance and bioavailability. Carrier or carrier also includes any substance that serves to enhance the delivery and efficacy of the active ingredient within the pharmaceutical composition. Examples of pharmaceutically acceptable carriers include one or more from the list comprising: water, saline, phosphate buffered saline, dextrose, glycerol, ethanol, and the like, as well as combinations thereof. In many cases it will be preferable to include isotonic agents, eg sugars, polyols such as mannitol, sorbitol or sodium chloride in the composition. Pharmaceutically acceptable carriers may further comprise minor amounts of auxiliary substances, such as wetting or emulsifying agents, preservatives, or buffers, that enhance the shelf life or efficacy of the fusion protein or compositions that form part of pharmaceutical compositions. Examples of suitable carriers are well known in the literature. Examples of carriers without limitation are a series of saccharides such as lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol and maltitol; a number of starches such as corn starch, wheat starch, rice starch and potato starch; a series of cellulose such as cellulose, methyl cellulose, sodium carboxymethyl cellulose and hydroxypropylmethyl cellulose; and a series of fillers such as gelatin and polyvinylpyrrolidone. In some cases, a disintegrant such as cross-linked polyvinylpyrrolidone, agar, alginic acid, or sodium alginate may be added.

La composición cosmética además puede comprender adyuvantes, excipientes y otros aditivos habituales en el campo cosmético y dermatológico, tales como por ejemplo y sin sentido limitativo, estabilizantes, conservantes, antioxidantes, disolventes, perfumes, agentes quelantes, absorbentes de olor, filtros químicos o minerales, pigmentos minerales, solventes orgánicos, siliconas, espesantes, suavizantes, emulsionantes, agentes antiespumantes, hidratantes, fragancias, tensioactivos, polímeros aniónicos, catiónicos, no iónicos o anfóteros o sus mezclas, agentes secuestrantes, propulsores, agentes acidificantes o basificantes, tintes, colorantes, pigmentos o nanopigmentos, o cualquier otro ingrediente normalmente usado en productos y composiciones cosméticas.The cosmetic composition may also comprise adjuvants, excipients and other usual additives in the cosmetic and dermatological field, such as, for example and without limitation, stabilizers, preservatives, antioxidants, solvents, perfumes, chelating agents, odor absorbers, chemical or mineral filters. , mineral pigments, organic solvents, silicones, thickeners, softeners, emulsifiers, antifoaming agents, moisturizers, fragrances, surfactants, anionic, cationic, nonionic or amphoteric polymers or mixtures thereof, sequestering agents, propellants, acidifying or basifying agents, dyes, colorants , pigments or nanopigments, or any other ingredient normally used in cosmetic products and compositions.

La composición de la invención puede comprender, además, cualquier sustancia que pueda administrarse a una herida, lesión de tejido o sitio de inflamación. Por ejemplo, la composición divulgada puede comprender además una o más clases de antibióticos (por ejemplo aminoglucósidos, cefalosporinas, cloramfenicol, clindamicina, eritromicinas, fluoroquinolonas, macrolidos, azolidos, metronidazol, penicilinas, tetraciclinas, trimetoprima-sulfametoxazol, vancomicina), esteroides (por ejemplo andranos (por ejemplo testosterona), colestanos (por ejemplo colesterol), ácidos colicos (por ejemplo ácido colico), corticosteroides (por ejemplo dexametasona), estraenos (por ejemplo estradiol), pregnanos (por ejemplo progesterona), analgesicos narcoticos y no narcoticos (por ejemplo morfina, codema, heroma, hidromorfona, levorfanol, meperidina, metadona, oxicodona, propoxifeno, fentanilo, metadona, naloxona, buprenorfina, butorfanol, nalbufina, pentazocina), quimioterapia (por ejemplo farmacos anticancengenos tales como, pero sin limitarse a, altretamina, asparaginasa, bleomicina, busulfano, carboplatino, carmustina, clorambucilo, cisplatino, cladribina, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, dietilestilbesterol, etinilestradiol, etoposido, floxuridina, fludarabina, fluorouracilo, flutamida, goserelina, hidroxiurea, idarubicina, ifosfamida, leuprolida, levamisol, lomustina, mecloretamina, medroxiprogesterona, megestrol, melfalan, mercaptopurina, metotrexato, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, paclitaxel, pentostatina, pipobroman, plicamicina, prednisona, procarbazina, estreptozocina, tamoxifeno, teniposido, vinblastina, vincristina), agentes antiinflamatorios (por ejemplo alclofenaco; alclometasona dipropionato; algestona acetonida; alfa amilasa; amcinafal; amcinafida; amfenaco sodico; clorhidrato de amiprilosa; anakinra; anirolaco; anitrazafeno; apazona; balsalazida disodica; bendazaco; benoxaprofeno; clorhidrato de bencidamina; bromelamas; broperamol; budesonida; carprofeno; cicloprofeno; cintazona; cliprofeno; propionato de clobetasol; butirato de clobetasona; clopiraco; propionato de cloticasona; acetato de cormetasona; cortodoxona; decanoato; deflazacort; delatestrilo; depo-testosterona; desonida; desoximetasona; dipropionato de dexametasona; diclofenaco potasico; diclofenaco sodico; diacetato de diflorasona; diflumidona sodica; diflunisal; difluprednato; diftalona; dimetilsulfoxido; drocinonida; endrisona; enlimomab; enolicam sodico; epirizol; etodolaco; etofenamato; felbinaco; fenamol; fenbufeno; fenclofenaco; fencloraco; fendosal; fenpipalona; fentiazaco; flazalona; fluazacort; ácido flufenamico; flumizol; acetato de flunisolida; flunixina; flunixina meglumina; fluocortibutilo; acetato de fluorometolona; flucuazona; flurbiprofeno; fluretofeno; propionato de fluticasona; furaprofeno; furobufeno; halcinonida; propionato de halobetasol; acetato de halopredona; ibufenaco; ibuprofeno; ibuprofeno aluminio; ibuprofeno piconol; ilonidap; indometacina; indometacina sodica; indoprofeno; indoxol; intrazol; acetato de isoflupredona; isoxepaco; isoxicam; ketoprofeno; clorhidrato de lofemizol; lomoxicam; etabonato de loteprednol; meclofenamato sodico; ácido meclofenamico; dibutirato de meclorisona; ácido mefenamico; mesalamina; meseclazona; mesterolona; metandrostenolona; metenolona; acetato de metenolona; suleptanato de metilprednisolona; momiflumato; nabumetona; nandrolona; naproxeno; naproxeno sodico; naproxol; nimazona; olsalazina sodica; orgotema; orpanoxina; oxandrolona; oxaprozina; oxifenbutazona; oximetolona; clorhidrato de paranilina; polisulfato de pentosano sodico; glicerato de fenbutazona sodico; pirfenidona; piroxicam; cinamato de piroxicam; piroxicam olamina; pirprofeno; prednazato; prifelona; acido prodolico; provuazona; proxazol; citrato de proxazol; rimexolona; romazarit; salcolex; salnacedina; salsalato; cloruro de sanguinario; seclazona; sermetacina; estanozolol; sudoxicam; sulindaco; suprofeno; talmetacina; talniflumato; talosalato; tebufelona; tenidap; tenidap sodico; tenoxicam; tesicam; tesimida; testosterona; combinaciones de testosterona; tetridamina; tiopinaco; tixocortol pivalato; tolmetina; tolmetina sodica; triclonida; triflumidato; zidometacina; zomepiraco sodico), o agentes antihistammicos (por ejemplo etanolaminas (como difenhidramina carbinoxamina), etilendiamina (como tripelenamina pirilamina), alquilamina (como clorfeniramina, dexclorfeniramina, bromfeniramina, triprolidina), otras antihistaminas como astemizol, loratadina, fexofenadina, brofeniramina, clemastina, acetaminofeno, pseudoefedrina, triprolidina).The composition of the invention may further comprise any substance that can be delivered to a wound, tissue injury or site of inflammation. For example, the disclosed composition may further comprise one or more classes of antibiotics (eg aminoglycosides, cephalosporins, chloramphenicol, clindamycin, erythromycins, fluoroquinolones, macrolides, azolides, metronidazole, penicillins, tetracyclines, trimethoprim-sulfamethoxazole, vancomycin), steroids (eg andranes (eg testosterone), cholestanes (eg cholesterol), cholic acids (eg cholic acid), corticosteroids (eg dexamethasone), estranes (eg estradiol), pregnanes (eg progesterone), narcotic and non-narcotic analgesics (for example morphine, codema, heroma, hydromorphone, levorphanol, meperidine, methadone, oxycodone, propoxyphene, fentanyl, methadone, naloxone, buprenorphine, butorphanol, nalbuphine, pentazocine), chemotherapy (for example anticancer drugs such as, but not limited to, altretamine, asparaginase, bleomycin, busulfan, carboplatin, carmustine, chlorambucil, cisplatin, cladribine, cyclophosphamide, cytarabine, dacarbazine, diethylstilbesterol, ethinyl estradiol, etoposide, floxuridine, fludarabine, fluorouracil, flutamide, goserelin, hydroxyurea, idarubicin, ifosfamide, leuprolide, levamisole, lomustine, mechlorethamine, medroxyprogesterone, megestrol, melphalan, mercaptopurine, methotrexate, mitomycin, mitotane, mitoxantrone, paclitaxel, pentostatin, pipobroman, plicamycin, prednisone, procarbazine, streptozocin, tamoxifen, teniposide, vinblastine, vincristine), anti-inflammatory agents (eg alclofenac; alclometasone dipropionate; algestone acetonide; alpha amylase; amcinafal; amcinafide; amfenac sodium; amiprilose hydrochloride; anakinra; anirolac; anitrazafen; apazone; balsalazide disodium; bendazac; benoxaprofen; benzydamine hydrochloride; bromelam; broperamol; budesonide; carprofen; cycloprofen; Cintazone; clipprofen; clobetasol propionate ; clobetasone butyrate; clopirac; cloticasone propionate; cormetasone acetate; Cortodoxone; decanoate; deflazacort; delatestril; depo-testosterone; desonide; desoxymetasone; dexamethasone dipropionate; diclofenac potassium; diclofenac sodium; diflorasone diacetate; diflumidone sodium; diflunisal; difluprednate, diphthalone, dimethylsulfoxide; drocinonide; endrysone; enlimomab; sodium enolicam; epirizole; etodolac; etofenamate; felbinac; fenomol; fenbufen; Fenclofenac; fenchlorac; fendosal; fenpipalone; fentiazaco; flazalone; fluazacort; flufenamic acid; flumizole; flunisolide acetate; flunixin; flunixin meglumine; fluocortibutyl; fluorometholone acetate; flucuazone; flurbiprofen; fluretofen; Fluticasone Propionate; furaprofen; furobufen; halcinonide; Halobetasol Propionate; Halopredone Acetate; ibufenac; ibuprofen; aluminum ibuprofen; ibuprofen piconol; ilonidap; indomethacin; indomethacin sodium; indoprofen; indoxol; intrazole; Isoflupredone Acetate; isoxepac; isoxicam; ketoprofen; Lofemizole Hydrochloride; lomoxicam; loteprednol etabonate; sodium meclofenamate; meclofenamic acid; mechlorisone dibutyrate; mefenamic acid; mesalamine; meseclazone; mesterolone; methandrostenolone; methenolone; methenolone acetate; Methylprednisolone Suleptanate; momiflumate; nabumetone; nandrolone; naproxen; sodium naproxen; naproxol; nimazone; olsalazine sodium; orgothem; orpanoxine; Oxandrolone; oxaprozin; oxyphenbutazone; oxymetholone; paraniline hydrochloride; sodium pentosan polysulfate; sodium fenbutazone glycerate; pirfenidone; piroxicam; Piroxicam Cinnamate; piroxicam olamine; pirprofen; prednazate; prifelone; prodolic acid; provuazone; proxazole; Proxazole Citrate; rimexolone; romazarite; salcolex; salnacedin; salsalate; bloodroot chloride; seclazone; sermethacin; Stanozolol; sudoxicam; sulindac; suprofen; talmethacin; talniflumate; talosalate; tebufelone; hadp; sodium tendap; tenoxicam; tesicam; tesimide; testosterone; testosterone combinations; tetridamine; thiopinac; tixocortol pivalate; tolmetin; tolmetin sodium; triclonide; triflumidate; zidomethacin; zomepirac sodium), or antihistamine agents (for example, ethanolamines (such as diphenhydramine carbinoxamine), ethylenediamine (such as tripelenamine pyrilamine), alkylamine (such as chlorpheniramine, dexchlorpheniramine, brompheniramine, triprolidine), other antihistamines such as astemizole, loratadine, fexofenadine, bropheniramine, clemastine, acetaminophen, pseudoephedrine, triprolidine).

Las composiciones farmacéuticas o cosméticas de la invención pueden administrarse por cualquier tipo de vía adecuada, tal como por vía oral, nasal, ocular, tópica, intradérmica, intracraneal o intravenosa. La vía de administración preferida de dichas composiciones farmacéuticas es la vía oral, nasal, ocular, tópica, intracraneal o intradérmica.The pharmaceutical or cosmetic compositions of the invention can be administered by any type of suitable route, such as orally, nasally, ocularly, topically, intradermally, intracranially, or intravenously. The preferred route of administration of said pharmaceutical compositions is the oral, nasal, ocular, topical, intracranial or intradermal route.

"Vía oral" se entiende como la composición farmacéutica incorporada en el organismo después de la deglución."Oral route" is understood as the pharmaceutical composition incorporated into the body after swallowing.

Se entiende por "vía nasal" la administración de la composición farmacéutica insuflada por la nariz.By "nasal route" is meant the administration of the pharmaceutical composition insufflated through the nose.

"Vía ocular" se entiende como la administración tópica de la composición farmacéutica por instilación directamente en el ojo."Ocular route" is understood as the topical administration of the pharmaceutical composition by instillation directly into the eye.

La "vía tópica” se entiende como la aplicación en el exterior del cuerpo, como, por ejemplo, la piel, el cuero cabelludo y las uñas; y también la aplicación a mucosas tales como, sin limitación, mucosa bucal, nasal o rectal.The "topical route" is understood as the application to the exterior of the body, such as, for example, the skin, the scalp and the nails; and also the application to mucous membranes such as, without limitation, buccal, nasal or rectal mucosa.

"Vía intradérmica" se entiende como la administración de la composición farmacéutica mediante la inyección en la dermis."Intradermal route" is understood as the administration of the pharmaceutical composition by injection into the dermis.

"Vía intracraneal" se entiende como la administración de la composición farmacéutica dentro del cráneo."Intracranial route" is understood as the administration of the pharmaceutical composition within the skull.

"Vía intravenosa" se entiende como la administración de la composición farmacéutica mediante la inyección en el flujo sanguíneo."Intravenous route" is understood as the administration of the pharmaceutical composition by injection into the blood stream.

Preferiblemente, la composición cosmética de la presente invención, puede presentarse, por ejemplo y sin sentido limitativo, en forma de una disolución acuosa, hidroalcohólica u oleosa, una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite, o múltiple, de un gel acuoso u oleoso, de un producto anhidro líquido, de una dispersión de aceite en una fase acuosa con la ayuda de esferoides (como por ejemplo nanoesferas, nanocápsulas y vesículas lipídicas), emulsiones de silicona en agua, microemulsiones, pastas, leches, bálsamos, espumas, lociones, cremas, jabones, soluciones hidroalcóholicas, soluciones hidroglicólicas, linimentos, sueros, serums, films de polisacáridos, ungüentos, ungüentos grasos, mousses, pomadas, geles, geles crema, geles de espuma, emulsión-geles y soluciones.Preferably, the cosmetic composition of the present invention can be presented, for example and without limitation, in the form of an aqueous, hydroalcoholic or oily solution, an emulsion of oil in water or water in oil, or multiple, of an aqueous or oily gel, of an anhydrous liquid product, of a dispersion of oil in an aqueous phase with the aid of spheroids (such as nanospheres, nanocapsules and lipid vesicles), silicone emulsions in water, microemulsions, pastes , milks, balms, foams, lotions, creams, soaps, hydroalcoholic solutions, hydroglycolic solutions, liniments, sera, serums, polysaccharide films, ointments, fatty ointments, mousses, ointments, gels, cream gels, foam gels, emulsion-gels and solutions.

En la presente invención también se contemplan materiales que comprenden las composiciones divulgadas en el presente documento (por ejemplo, péptidos, proteínas de fusión, ácidos nucleicos, vectores, células, polinucleótidos, etc.). Por ejemplo, se divulgan materiales usados para tratar heridas, en los que los materiales están recubiertos con el péptido, proteína de fusión, nanopartícula, la partícula similar a un virus, polinucleótido, vector, célula o composición de la invención. Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de materiales usados para tratar heridas incluyen vendajes, cinta quirúrgica, suturas, grapas o injertos (por ejemplo, injertos de piel).Materials comprising the compositions disclosed herein (eg, peptides, fusion proteins, nucleic acids, vectors, cells, polynucleotides, etc.) are also contemplated by the present invention. For example, materials used to treat wounds are disclosed, where the materials are coated with the peptide, fusion protein, nanoparticle, virus-like particle, polynucleotide, vector, cell, or composition of the invention. Illustrative, non-limiting examples of materials used to treat wounds include dressings, surgical tape, sutures, staples, or grafts (eg, skin grafts).

Por ejemplo, el material (vendaje, cinta quirúrgica, sutura, grapa, injerto) puede remojarse en el péptido divulgado a una concentración adecuada. El material puede secarse entonces y sellarse en un recipiente estéril. El péptido también puede incorporarse en un sistema de hidrogel reticulable, tal como el poli(ácido láctico-coglicólico) (PLGA) o poliuretano, que puede entonces diseñarse como materiales para tratar heridas (por ejemplo, vendaje, cinta quirúrgica, sutura, grapa, injerto). Por tanto, se divulgan materiales compuestos de hidrogel-péptido.For example, the material (bandage, surgical tape, suture, staple, graft) can be soaked in the disclosed peptide at a suitable concentration. The material can then be dried and sealed in a sterile container. The peptide can also be incorporated into a crosslinkable hydrogel system, such as poly(lactic-coglycolic acid) (PLGA) or polyurethane, which can then be designed as wound care materials (eg, bandage, surgical tape, suture, staple, etc.). graft). Thus, hydrogel-peptide composites are disclosed.

También se divulgan implantes médicos recubiertos con el péptido de la invención antes de su implantación en un sujeto. Por ejemplo, un problema común en tales cirugías de implante es la formación de una cápsula de contracción alrededor del implante a partir de la formación de tejido cicatricial que conduce a un endurecimiento indebido, contracción y finalmente deformación del tejido de interés. El uso de los presentes polipéptidos en o sobre el implante puede reducir o evitar esta deformación. Ejemplos no limitativos de implantes médicos incluyen: prótesis de extremidades, implantes de mama, implantes de pene, implantes testiculares, ojos artificiales, implantes faciales, articulaciones artificiales, prótesis de válvulas cardiacas, prótesis vasculares, prótesis dentales, prótesis faciales, válvula de disco inclinado, válvula de bola enjaulada, prótesis de oído, prótesis de nariz, marcapasos, implantes cocleares y sustitutos de la piel (por ejemplo, heteroinjerto porcino/piel de cerdo, BIOBRANE, queratinocitos cultivados).Medical implants coated with the peptide of the invention prior to implantation in a subject are also disclosed. For example, a common problem in such implant surgeries is the formation of a contraction capsule around the implant from the formation of scar tissue leading to undue hardening, shrinkage, and ultimately deformation of the tissue of interest. The use of the present polypeptides in or on the implant can reduce or prevent this distortion. Non-limiting examples of medical implants include: limb prostheses, breast implants, penile implants, testicular implants, artificial eyes, facial implants, artificial joints, heart valve prostheses, vascular prostheses, dental prostheses, facial prostheses, tilted disc valve , valve caged ball, hearing aids, prosthetic noses, pacemakers, cochlear implants, and skin substitutes (eg, porcine/pigskin heterograft, BIOBRANE, cultured keratinocytes).

El péptido según la invención se recubre sobre un implante médico o material de tratamiento de heridas. Por tanto, otro aspecto de la invención se refiere a un material o implante que comprende el péptido, la proteína de fusión, la nanopartícula, la partícula similar a un virus, el polinucleótido, la construcción génica, el vector, la célula o la composición descritos en la presente invención.The peptide according to the invention is coated on a medical implant or wound treatment material. Therefore, another aspect of the invention relates to a material or implant comprising the peptide, the fusion protein, the nanoparticle, the virus-like particle, the polynucleotide, the gene construct, the vector, the cell or the composition. described in the present invention.

Otro aspecto de la presente invención se refiere al péptido, a la proteína de fusión, la nanopartícula, la partícula similar a un virus, el polinucleótido, la construcción génica, el vector, la célula, la composición, el material o el implante de la presente invención para su uso como medicamento. Alternativamente, este aspecto de la invención se refiere al uso del péptido, a la proteína de fusión, la nanopartícula, la partícula similar a un virus, el polinucleótido, la construcción génica, el vector, la célula, la composición, el material o el implante para la fabricación de un medicamento.Another aspect of the present invention relates to the peptide, fusion protein, nanoparticle, virus-like particle, polynucleotide, gene construct, vector, cell, composition, material or implant of the present invention for use as a medicament. Alternatively, this aspect of the invention relates to the use of the peptide, fusion protein, nanoparticle, virus-like particle, polynucleotide, gene construct, vector, cell, composition, material or method. implant for the manufacture of a drug.

La presente invención además proporciona un método de promoción de la cicatrización de heridas tras la lesión tisular en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una o más de las composiciones de la presente invención (por ejemplo, péptidos, polinucléotidos o vectores) en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Además se divulga un método de tratamiento de un sujeto con lesión tisular, que comprende administrar al sujeto una o más de las composiciones divulgadas en el presente documento (por ejemplo, péptidos, polinucléotidos o vectores) en un vehículo farmacéuticamente aceptable.The present invention further provides a method of promoting wound healing following tissue injury in a subject, comprising administering to the subject one or more of the compositions of the present invention (eg, peptides, polynucleotides, or vectors) in a vehicle. pharmaceutically acceptable. Further disclosed is a method of treating a subject with tissue injury, comprising administering to the subject one or more of the compositions disclosed herein (eg, peptides, polynucleotides, or vectors) in a pharmaceutically acceptable carrier.

"Promover,” "promoción” y "que promueve” se refieren a un aumento en una actividad, respuesta, estado, enfermedad u otro parámetro biológico. Esto puede incluir pero no se limita al inicio de la actividad, respuesta, estado o enfermedad. Esto puede incluir también, por ejemplo, un aumento del 10% en la actividad, respuesta, estado o enfermedad en comparación con el nivel nativo o de control. Por tanto, el aumento puede ser del 10, el 20, el 30, el 40, el 50, el 60, el 70, el 80, el 90, el 100%, o cualquier cantidad de aumento entre medias en comparación con los niveles nativos o de control. "Promoting,""promoting," and "promoting" refer to an increase in an activity, response, condition, disease, or other biological parameter. This may include but is not limited to the onset of the activity, response, condition, or disease. This may also include, for example, a 10% increase in activity, response, condition, or disease compared to native or control, thus the increase may be 10, 20, 30, 40 , 50, 60, 70, 80, 90, 100%, or any amount of increase in between compared to native or control levels.

Por "tratar” o "tratamiento” se entiende un método de reducción de los efectos de una enfermedad o estado. Tratamiento puede referirse también a un método de reducción de la causa subyacente de la enfermedad o estado en sí, más que solo los síntomas. El tratamiento puede ser cualquier reducción de los niveles nativos y puede ser pero no se limita a la supresión completa de la enfermedad, estado o los síntomas de la enfermedad o estado. Por ejemplo, un método divulgado para promover la cicatrización de heridas se considera un tratamiento si hay una reducción del 10% en uno o más síntomas de la enfermedad en un sujeto con la enfermedad en comparación con niveles nativos en el mismo sujeto o sujetos de control. Por tanto, la reducción puede ser del 10, el 20, el 30, el 40, el 50, el 60, el 70, el 80, el 90, el 100%, o cualquier cantidad de reducción entre medias en comparación con niveles nativos o de control.By "treating" or "treatment" is meant a method of reducing the effects of a disease or condition. Treatment can also refer to a method of reducing the underlying cause of the disease or condition itself, rather than just the symptoms. Treatment may be any reduction in native levels and may be but is not limited to complete suppression of the disease, condition or symptoms of the disease or condition. For example, a disclosed method of promoting wound healing is considered a treatment if there is a 10% reduction in one or more symptoms of the disease in a subject with the disease compared to native levels in the same subject or control subjects. . Thus, the reduction can be 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100%, or any amount of reduction in between compared to native levels. or control.

Tal como se usa en el presente documento, "sujeto” incluye, pero no se limita a, animales o plantas. El sujeto puede ser un vertebrado, más específicamente un mamífero (por ejemplo, un humano, caballo, cerdo, conejo, perro, oveja, cabra, primate no humano, vaca, gato, cobaya o roedor), un pez, un pájaro o un reptil o un anfibio. El sujeto puede ser un invertebrado, más específicamente un artrópodo (por ejemplo, insectos y crustáceos). El término no indica una edad o sexo particular. Por tanto, se pretende que se cubran sujetos adultos y recién nacidos, así como fetos, tanto machos como hembras.As used herein, "subject" includes, but is not limited to, animals or plants. The subject may be a vertebrate, more specifically a mammal (eg, a human, horse, pig, rabbit, dog, etc.). sheep, goat, non-human primate, cow, cat, guinea pig, or rodent), a fish, a bird, or a reptile or amphibian. The subject may be an invertebrate, more specifically an arthropod (eg, insects and crustaceans). The term does not indicate a particular age or sex, therefore, adult and newborn subjects, as well as fetuses, both male and female, are intended to be covered.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a la proteína de fusión, la nanopartícula, la partícula similar a un virus, el polinucleótido, la construcción génica, el vector, la célula, la composición, el material o el implante de la presente invención para su uso en la regeneración celular y/o tisular, en particular para su uso en el tratamiento de una herida, preferiblemente la herida es seleccionada del grupo que consiste en una herida de la piel, una úlcera de decúbito y/o una herida externa o interna.Another aspect of the present invention relates to the fusion protein, nanoparticle, virus-like particle, polynucleotide, gene construct, vector, cell, composition, material or implant of the present invention for its use in cell and/or tissue regeneration, in particular for its use in the treatment of a wound, preferably the wound is selected from the group consisting of a skin wound, a decubitus ulcer and/or an external wound or internal.

Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso cosmético a la proteína de fusión, la nanopartícula, la partícula similar a un virus, el polinucleótido, la construcción génica, el vector, la célula, la composición, el material o el implante de la presente invención como agente cicatrizante y/o reparador de la piel, preferiblemente, el uso sería en tratamientos dermocosméticos como agente cicatrizante y reparador de la piel o en composiciones dermocosméticas de aplicación tópica.Another aspect of the present invention relates to the cosmetic use of the fusion protein, nanoparticle, virus-like particle, polynucleotide, gene construct, vector, cell, composition, material or implant of the fusion protein. present invention as a skin healing and/or repairing agent, preferably the use it would be in dermocosmetic treatments as a healing and repairing agent for the skin or in dermocosmetic compositions for topical application.

Otro aspecto de la invención se refiere a un péptido que comprende la secuencia SEQ ID NO: 2, para su uso en la regeneración celular, en particular para su uso en el tratamiento de una herida, preferiblemente la herida es seleccionada del grupo que consiste en una herida de la piel, una úlcera de decúbito y/o una herida externa o interna. Más preferiblemente el péptido comprende la secuencia SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 o SEQ ID NO: 7. En una realización más preferida el péptido consiste en la secuencia SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 o SEQ ID NO: 7, más preferible el péptido consiste en la secuencia SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 o SEQ ID NO: 7.Another aspect of the invention relates to a peptide comprising the sequence SEQ ID NO: 2, for use in cell regeneration, in particular for use in the treatment of a wound, preferably the wound is selected from the group consisting of a skin wound, a decubitus ulcer and/or an external or internal wound. More preferably, the peptide comprises the sequence SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 7. In a more preferred embodiment, the peptide consists of the sequence SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 7, more preferably the peptide consists of the sequence SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 7.

En la presente invención, el término “regeneración” se refiere al proceso por el que se recupera la estructura y la función de órganos o partes del cuerpo dañados. El proceso de regeneración puede ocurrir en múltiples estados, niveles de la organización biológica y la habilidad de los diferentes organismos para regenerar partes faltantes es altamente variable. La regeneración puede darse a nivel celular (regeneración celular), de tejido (regeneración tisular), de órgano, estructura e incluso del cuerpo entero.In the present invention, the term "regeneration" refers to the process by which the structure and function of damaged organs or body parts are restored. The regeneration process can occur at multiple states, levels of biological organization, and the ability of different organisms to regenerate missing parts is highly variable. Regeneration can occur at the cellular level (cellular regeneration), tissue (tissue regeneration), organ, structure and even the entire body.

Los ejemplos no limitantes de heridas son:Non-limiting examples of injuries are:

- una herida de quemadura, que es la lesión que resulta de la exposición al calor, electricidad, radiación (por ejemplo, quemaduras solares y cirugía con láser), o productos químicos cáusticos,- a burn wound, which is injury resulting from exposure to heat, electricity, radiation (for example, sunburn and laser surgery), or caustic chemicals,

- úlceras,- ulcers,

- heridas en la diabetes mellitus, que generalmente son lesiones en los pies debido al entumecimiento provocado por daños en nervios (neuropatía diabética) y un menor flujo sanguíneo hacia las piernas y los pies. La lesión más grave es una úlcera en el pie. Las úlceras diabéticas en pies tienen un riesgo muy alto de ser infectadas, y a veces no se pueden curar. Las úlceras en pies que no se han curado son una causa frecuente de amputación en personas con diabetes, - wounds in diabetes mellitus, which are usually foot injuries due to numbness caused by nerve damage (diabetic neuropathy) and decreased blood flow to the legs and feet. The most serious injury is a foot ulcer. Diabetic foot ulcers have a very high risk of becoming infected, and sometimes cannot be cured. Foot ulcers that have not healed are a common cause of amputation in people with diabetes,

- heridas de decúbito, es decir, lesiones provocadas por una presión no mitigada sobre cualquier parte del cuerpo, en especial de porciones sobre áreas óseas o cartilaginosas,- decubitus wounds, that is, injuries caused by unmitigated pressure on any part of the body, especially portions on bone or cartilaginous areas,

- heridas debidas a una fuerza externa que daña al tejido,- wounds due to an external force that damages the tissue,

- heridas en la piel debido al envejecimiento o al entorno. Esto incluye, por ejemplo, grietas, piel seca, aspereza de la piel y similares.- skin wounds due to aging or the environment. This includes, for example, cracks, dry skin, rough skin, and the like.

Las heridas pueden ser una herida interna, una herida oral, una herida cutánea, una herida externa, una úlcera y/o una úlcera de decúbito, daño al ojo, una herida en el ojo, por ejemplo, conjuntiva. Otras afecciones que pueden tratarse con los péptidos según la divulgación incluyen úlceras orales, lesiones aftosas orales, glosodinia, lengua ardiente, psoriasis, eccema y pérdida de pelo.The wounds may be an internal wound, an oral wound, a skin wound, an external wound, an ulcer and/or a decubitus ulcer, damage to the eye, an eye injury, eg, conjunctiva. Other conditions that can be treated with the peptides according to the disclosure include oral ulcers, oral aphthous lesions, glossodynia, burning tongue, psoriasis, eczema, and hair loss.

Estos tipos de daños y lesiones cutáneos son conocidos por los expertos en la materia. Una herida interna es una herida presente en el cuerpo, por ejemplo, debido a una incisión quirúrgica. Una herida oral es una herida presente en la cavidad oral. Una herida cutánea es una herida presente en la piel. Una herida externa debe entenderse como una herida que es visible y accesible desde fuera del cuerpo. Una úlcera es una lesión en la superficie de la piel o una superficie mucosa. Una úlcera de decúbito es una herida o úlcera provocada por presión prolongada en la piel y tejidos cuando se está en una posición durante un periodo de tiempo largo, tal como tumbado en cama. Las áreas óseas del cuerpo son los sitios más frecuentemente afectados, que se vuelven isquémicos bajo presión sostenida y constante. El envejecimiento de la piel es el cambio en la apariencia de la piel debido al tiempo o exposición al ambiente o el estado de salud de un individuo. La celulitis es la definición usada en cosmética en relación con una apariencia flácida u ondulada de la piel (piel de naranja en holandés).These types of skin damage and lesions are known to those skilled in the art. An internal wound is a wound present in the body, for example due to a surgical incision. An oral wound is a wound present in the oral cavity. A skin wound is a wound present on the skin. An external wound should be understood as a wound that is visible and accessible from outside the body. An ulcer is a lesion on the surface of the skin or a mucosal surface. A pressure ulcer is a wound or ulcer caused by prolonged pressure on the skin and tissues when you are in one position for a long period of time, such as lying in bed. The bony areas of the body are the most frequently affected sites, which become ischemic under sustained and constant pressure. Skin aging is the change in the appearance of the skin due to time or exposure to the environment or the health status of an individual. Cellulite is the definition used in cosmetics in relation to a sagging or wavy appearance of the skin (orange peel in Dutch).

En una realización particular de la invención, el péptido de la invención se usa para el tratamiento de una herida cutánea. Las heridas cutáneas pueden ser heridas en la epidermis o la dermis de la piel. Hay varios tipos de heridas en las que la piel o el tejido pueden necesitar reparación: abrasiones, laceraciones, incisiones, perforaciones y avulsiones y quemaduras. El uso de un péptido de acuerdo con la invención puede mejorar el estado de salud general de la piel. En otra realización particular de la invención, el método se usa para el tratamiento de una herida oral. Las heridas orales son heridas en cualquier parte de la cavidad oral en la que la mucosa oral está dañada. En otra realización particular de la invención, el péptido de la invención se usa para el tratamiento de una herida interna. Las heridas internas son heridas en las que se dañan capas celulares de origen endodérmico o mesodérmico. Son ejemplo heridas en arterias o venas, peritoneo o pericardio.In a particular embodiment of the invention, the peptide of the invention is used for the treatment of a skin wound. Cutaneous wounds can be wounds in the epidermis or the dermis of the skin. There are several types of wounds where the skin or tissue may need repair: abrasions, lacerations, incisions, perforations and avulsions, and burns. The use of a peptide according to the invention can improve the general health condition of the skin. In another particular embodiment of the invention, the method is used for the treatment of an oral wound. Oral wounds are wounds anywhere in the oral cavity in which the oral mucosa is damaged. In another particular embodiment of the invention, the peptide of the invention is used for the treatment of an internal wound. Internal wounds are wounds in which cell layers of endodermal or mesodermal origin are damaged. Examples are injuries to arteries or veins, peritoneum or pericardium.

Dentro de la presente invención, también se contempla el uso terapéutico o cosmético de todas aquellas realizaciones que, directa o indirectamente, comprenden el péptido que comprende la secuencia SEQ ID NO: 2, para el tratamiento de una herida cutánea tal como se ha definido previamente en la presente descripción. Ejemplos de dichas realizaciones se refieren a la proteína de fusión, la nanopartícula, la partícula similar a un virus, el polinucleótido, la construcción génica, el vector, la célula, la composición, el material o el implante que comprende el péptido que comprende la secuencia SEQ ID NO: 2. Todos estos términos también han sido definidos previamente en la presente descripción.Within the present invention, the therapeutic or cosmetic use of all those embodiments that, directly or indirectly, comprise the peptide comprising the sequence SEQ ID NO: 2, for the treatment of a skin wound as previously defined is also contemplated in the present description. Examples of said embodiments refer to the fusion protein, the nanoparticle, the virus-like particle, the polynucleotide, the gene construct, the vector, the cell, the composition, the material or the implant that comprises the peptide that comprises the sequence SEQ ID NO: 2. All these terms have also been previously defined in the present description.

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.Throughout the description and claims the word "comprise" and its variants are not intended to exclude other technical characteristics, additives, components or steps. Other objects, advantages and features of the invention will be apparent to those skilled in the art in part from the description and in part from the practice of the invention. The following examples and figures are provided by way of illustration, and are not intended to be limiting of the present invention.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURASBRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

Figura 1 (A y B) Efecto del péptido entero de la miticina C en la cicatrización de la herida en células HaCat.Figure 1 (A and B) Effect of the entire myticin C peptide on wound healing in HaCat cells.

Figura 2. (A) Aspecto de la cola de larvas de pez cebra con la cola intacta. (B) Pez después de seccionar un trozo de cola. (C) Evolución en el tiempo de la regeneración tisular de la cola. (D) Comparación de la regeneración tisular en peces tratados y no tratados con miticina después de 4 días.Figure 2. (A) Appearance of the tail of zebrafish larvae with the tail intact. (B) Fish after sectioning off a piece of tail. (C) Time course of tail tissue regeneration. (D) Comparison of tissue regeneration in myticin-treated and untreated fish after 4 days.

Figura 3. Evolución de la cicatrización de la herida en células HaCat tratadas con los péptidos de la miticina-C.Figure 3. Evolution of wound healing in HaCat cells treated with the myticin-C peptides.

Figura 4. Efecto del péptido completo de la miticina en la proliferación de células de queratinocitos humanos (HaCat).Figure 4. Effect of the complete peptide of myticin on the proliferation of human keratinocyte cells (HaCat).

Figura 5. Efecto de los péptidos en la viabilidad celular de células HaCat.Figure 5. Effect of peptides on cell viability of HaCat cells.

Figura 6. Comparación de la regeneración en peces tratados y no tratados con los péptidos de miticina-C después de 4 días.Figure 6. Comparison of regeneration in fish treated and untreated with myticin-C peptides after 4 days.

EJEMPLOSEXAMPLES

A continuación, se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que pone de manifiesto la efectividad del producto de la invención.Next, the invention will be illustrated by tests carried out by the inventors, which reveal the effectiveness of the product of the invention.

Ejemplo 1: Péptidos y su síntesisExample 1: Peptides and their synthesis

La cadena madura de la miticina-C (Myt-C), compuesta por 40 aminoácidos con la secuencia QSVACRSYYCSKFCGSAGCSLYGCYLLHPGKICYCLHCSR (SEQ ID NO: 1) se tomó como modelo para la síntesis de 14 dodecapéptidos con un desplazamiento de secuencia de dos residuos de amino ácidos y amidados en el carboxilo terminal y acetilados en el amino. La cadena completa y los péptidos así diseñados fueron sintetizados y purificados mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) en el servicio de Proteómica del Centro Nacional de Biotecnología del CSIC con una pureza >95%. Sus secuencias fueron verificadas mediante espectrometría de masas.The mature chain of myticin-C (Myt-C), composed of 40 amino acids with the sequence QSVACRSYYCSKFCGSAGCSLYGCYLLHPGKICYCLHCSR (SEQ ID NO: 1), was taken as a model for the synthesis of 14 dodecapeptides with a sequence shift of two amino acid residues and amidated at the carboxyl terminus and acetylated at the amino. The complete chain and the peptides thus designed were synthesized and purified by high performance liquid chromatography (HPLC) in the Proteomics service of the National Center for Biotechnology of the CSIC with >95% purity. Their sequences were verified by mass spectrometry.

Las posibles trazas de de ácido trifluoroacético (TFA) del proceso de síntesis, se eliminaro con tres ciclos de congelación-liofilización usando como disolvente HCl 10 mM. El contenido del vial (3 mg de cada péptido) fue disuelto en 1 mL de medio de cultivo acuoso DMEM sin suero suplementado con gentamicina y un cóctel de inhibidores de proteasas comercial (Protease Inhibitor Tablets, Thermo Scientific, Ref.Possible traces of trifluoroacetic acid (TFA) from the synthesis process were eliminated with three freeze-lyophilization cycles using 10 mM HCl as solvent. The content of the vial (3 mg of each peptide) was dissolved in 1 mL of serum-free DMEM aqueous culture medium supplemented with gentamicin and a commercial protease inhibitor cocktail (Protease Inhibitor Tablets, Thermo Scientific, Ref.

88265) quedando una concentración final de la solución madre de 3 mg/mL (676,8 pM) que se conservó a -80°C antes de su uso. 88265) leaving a final concentration of the stock solution of 3 mg/mL (676.8 pM) which was stored at -80°C before use.

Tabla 1: Péptidos sintéticos diseñados a partir de la secuencia de la miticina-C con su peso molecular (P.M.).Table 1: Synthetic peptides designed from the myticin-C sequence with their molecular weight (M.W.).

Ejemplo 2: Determinación de la citotoxicidad de la Miticina C in vitro. Example 2: Determination of the cytotoxicity of Myticin C in vitro.

La determinación de la citotoxicidad in vitro de la cadena madura de miticina C (SEQ ID NO: 1) y de sus fragmentos (Tabla 1) se evaluó en la línea HaCat de queratinocitos humanos, mediante el ensayo de MTT en el intervalo de concentración 0-40 pM (Figuras 4 y 5). Tal como se observa en las Figuras 4 y 5, el tratamiento con los péptidos no afectó a la viabilidad de las células HaCat.The determination of the in vitro cytotoxicity of the mature chain of miticin C (SEQ ID NO: 1) and its fragments (Table 1) was evaluated in the HaCat line of keratinocytes humans, by the MTT assay in the concentration range 0-40 pM (Figures 4 and 5). As seen in Figures 4 and 5, the treatment with the peptides did not affect the viability of the HaCat cells.

Ejemplo 3: Determinación de la actividad de reparación de heridas de la Miticina C in vitro. Example 3: Determination of the wound repair activity of Myticin C in vitro.

La determinación de la actividad de reparación de heridas in vitro, se llevó a cabo empleando monocapas de la línea HaCat de queratinocitos humanos-.The determination of the in vitro wound repair activity was carried out using monolayers of the HaCat line of human keratinocytes-.

Se realizó una "herida” que se fotografió a distintos tiempos para determinar el grado de cierre de la misma, en presencia y en ausencia de péptidos de miticina C. En primer lugar, se confirmó la capacidad del péptido de la miticina C (SEQ ID NO: 1) de estimular la cicatrización de una herida en queratinocitos in vitro (Figura 1). Las células tratadas con una concentración de 5 pM mostraron una cicatrización de la herida más rápida que las células control. A las 48 h el cierre de la herida era significativamente mayor en las células tratadas y a 72 h la herida estaba totalmente reparada a diferencia de las células control.A "wound" was made and photographed at different times to determine its degree of closure, in the presence and absence of myticin C peptides. First, the ability of the myticin C peptide (SEQ ID NO: 1) to stimulate wound healing in keratinocytes in vitro (Figure 1). Cells treated with a concentration of 5 pM showed faster wound healing than control cells. At 48 h the closure of the The wound was significantly larger in the treated cells and at 72 h the wound was fully repaired unlike the control cells.

Este ensayo se volvió a repetir con los péptidos solapantes basados en la cadena madura de la miticina C de la tabla 1. Tal como se observa en la Figura 3, los péptidos P1, P2a, P2b, P3 y P4 inducían una proliferación celular. Cuando a las células se les originó una herida, se observó una cicatrización significativamente mayor en aquellas que habían sido tratadas con los péptidos P1, P2a, P2b, P3 y P4. A las 48 h del tratamiento se observa, tal como se muestra en la Figura 3, que los péptidos P1, P2a, P2b, P3 y P4, a diferencia del control, presentan menor porcentaje de apertura de la herida y, por tanto, presentan una mayor cicatrización de la herida y reparación del daño. A las 72 horas, los péptidos P2b, P3 y P4 habían conseguido cerrar completamente la herida (Figura 3). Los péptidos P6, P7 y P9 debido a problemas en el proceso de síntesis presentaron una escasa solubilidad, y no se tuvieron en cuenta en los ensayos.This assay was repeated with the overlapping peptides based on the mature chain of myticin C from Table 1. As seen in Figure 3, peptides P1, P2a, P2b, P3 and P4 induced cell proliferation. When cells were wounded, significantly greater healing was observed in those that had been treated with peptides P1, P2a, P2b, P3 and P4. At 48 h of treatment, it is observed, as shown in Figure 3, that peptides P1, P2a, P2b, P3 and P4, unlike the control, present a lower percentage of wound opening and, therefore, present increased wound healing and damage repair. At 72 hours, peptides P2b, P3 and P4 had managed to completely close the wound (Figure 3). Due to problems in the synthesis process, peptides P6, P7 and P9 showed poor solubility and were not taken into account in the tests.

Ejemplo 4: Determinación de la actividad de reparación de heridas de la Miticina C in vivo. Example 4: Determination of the wound repair activity of Myticin C in vivo.

Una vez realizados los experimentos en la línea HaCat de queratinocitos humanos, se diseñó un ensayo in vivo empleando larvas de pez cebra (Danio renio). Se emplearon larvas de 3 días post-fertilización y se les realizó un corte de la cola. Posteriormente, se estudió la regeneración tisular en larvas tratadas con los péptidos de la Tabla 1 de la miticina C y en las larvas no tratadas con miticina C, mediante fotografías bajo la lupa y análisis de imagen usando el programa imageJ. En las Figuras 2 y 6 se muestran los resultados que muestran una regeneración tisular significativamente mayor de la cola en aquellas larvas tratadas con el péptido completo de la miticina C y con los péptidos P2a, P2b, P3 y P4 solapantes del péptido maduro de la miticina C. Se evaluó la presencia de neutrófilos en la zona de la herida empleando para esto la línea de peces transgénicos Tg(Mpx:GFP)i114, que tienen los neutrófilos marcados con GFP. De esta forma se determinó la capacidad de la miticina C en la resolución de la inflamación asociada a la herida. Once the experiments were carried out on the HaCat line of human keratinocytes, an in vivo assay was designed using zebrafish larvae ( Danio rhenio ). Larvae 3 days post-fertilization were used and their tails were cut. Subsequently, tissue regeneration was studied in larvae treated with the peptides of Table 1 of myticin C and in larvae not treated with myticin C, by means of photographs under magnification and image analysis using the imageJ program. Figures 2 and 6 show the results that show a significantly greater tissue regeneration of the tail in those larvae treated with the complete peptide of myticin C and with the peptides P2a, P2b, P3 and P4 overlapping the mature peptide of myticin. C. The presence of neutrophils in the wound area was evaluated using the transgenic fish line Tg(Mpx:GFP)i114, which have GFP-labeled neutrophils. In this way, the capacity of myticin C in the resolution of inflammation associated with the wound was determined.

Claims

1. A peptide comprising the sequence SEQ ID NO: 2 characterized in that it comprises the sequence selected from the list consisting of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 7, and which is not myticin-C with sequence SEQ ID NO: 1.

2. The peptide according to claim 1, wherein the peptide is between 6 and 40 amino acids in size.

3. A peptide consisting of the sequence SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 7.

4. The peptide according to claim 3, consisting of the sequence SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 7

5. A fusion protein comprising the peptide according to any of claims 1 to 4.

6. A nanoparticle comprising the peptide according to any of claims 1 to 4, or the fusion protein according to claim 5.

7. A virus-like particle comprising the peptide according to any one of claims 1 to 4, or the fusion protein according to claim 5.

8. A polynucleotide encoding the peptide according to any one of claims 1 to 4, or the fusion protein according to claim 5.

9. A gene construct comprising the polynucleotide according to claim 8.

10. A vector comprising the polynucleotide according to claim 8 or the gene construct according to claim 9.

11. A cell comprising the peptide according to any of claims 1 to 4, the fusion protein according to claim 5, the polynucleotide according to claim 8, the gene construct according to claim 9, or the vector according to claim 10.

12. A composition comprising the peptide according to any of claims 1 to 4, the fusion protein according to claim 5, the nanoparticle according to claim 6, the virus-like particle according to claim 7, the polynucleotide according to claim 8, the gene construct according to claim 9, the vector according to claim 10, or the cell according to claim 11.

13. The composition according to claim 12, wherein the composition is a pharmaceutical composition or cosmetic composition.

14. The composition according to claim 13, further comprising a pharmaceutically or cosmetically acceptable excipient or vehicle.

15. Material comprising the peptide according to any of claims 1 to 4, the fusion protein according to claim 5, the nanoparticle according to claim 6, the virus-like particle according to claim 7, the polynucleotide according to claim 8, the gene construction according to claim 9, the vector according to claim 10, the cell according to claim 11 or the composition according to any of claims 12 to 14.

16. A fusion protein according to claim 5, a nanoparticle according to claim 6, a virus-like particle according to claim 7, a polynucleotide according to claim 8, a gene construct according to claim 9, a vector according to claim 10, a cell according to claim 11, a composition according to any of claims 12 to 14 or a material according to claim 15, for use as a medicament.

17. A fusion protein according to claim 5, a nanoparticle according to claim 6, a virus-like particle according to claim 7, a polynucleotide according to claim 8, a gene construct according to claim 9, a vector according to claim 10, a cell according to claim 11, a composition according to any of claims 12 to 14 or a material according to claim 15, for use in the treatment of wounds.

18. A fusion protein according to claim 5, a nanoparticle according to claim 6, a virus-like particle according to claim 7, a polynucleotide according to claim 8, a gene construct according to claim 9, a vector according to claim 10, a cell according to claim 11, a composition according to any of claims 12 to 14 or a material according to claim 15, for use according to claim 17, wherein the wound is selected from the group consisting of a skin wound, a decubitus ulcer and/or or an external or internal wound.

19. Cosmetic use of a fusion protein according to claim 5, a nanoparticle according to claim 6, a virus-like particle according to claim 7, a polynucleotide according to claim 8, a gene construct according to claim 9, a vector according to claim 10, a cell according to claim 11, a composition according to any of claims 12 to 14 or a material according to claim 15, as a skin healing and/or repairing agent.

20. Peptide comprising the sequence SEQ ID NO: 2, for use in the treatment of a wound.

21. Peptide for use according to claim 20, wherein the wound is selected from the group consisting of a skin wound, a decubitus ulcer and/or an external or internal wound.

22. Peptide for use according to claim 21, comprising the sequence SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 7.

23. Peptide for use according to claim 22, consisting of the sequence SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, or SEQ ID NO: 7.

24. Cosmetic use of the peptide comprising the sequence SEQ ID NO: 2 as a skin healing and/or repairing agent.

25. Use according to claim 24, wherein the peptide comprises the sequence SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 7.

26.

Use according to claim 25, where the peptide consists of the sequence SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, or SEQ ID NO: 7