ES2712082T3

ES2712082T3 - Compuestos para el tratamiento de la distrofia miotónica

Info

Publication number: ES2712082T3
Application number: ES15797925T
Authority: ES
Inventors: Allepuz Rubén Artero; Boliart Josep Castells; Bilbao José Ignacio Borrell; Troisi Beatriz Llamusi; Schönbrunn Ariadna Bargiela; Piotr Konieczny; Gilabert Marta Pascual; Closa Jordi Teixido; Tejedor Roger Estrada; Gonzalez Alejandro Lopez
Original assignee: Institut Universitari de Ciencia i Tecnologia; Institut Quimic de Sarria CETS Fundacio Privada; Universitat de Valencia
Current assignee: Institut Universitari de Ciencia i Tecnologia; Institut Quimic de Sarria CETS Fundacio Privada; Universitat de Valencia
Priority date: 2014-11-14
Filing date: 2015-11-13
Publication date: 2019-05-09
Anticipated expiration: 2035-11-13
Also published as: WO2016075285A1; US20170312285A1; EP3217985B1; EP3217985A1; US10226467B2; CA2966738A1; EP3020403A1; CA2966738C

Abstract

Compuesto de fórmula (I) **Fórmula** en el que: R1 es hidrógeno o una cadena alquilo opcionalmente sustituida; R2 es hidrógeno; una cadena alquilo opcionalmente sustituida; o un alquenilo opcionalmente sustituido; R3 es hidrógeno; una cadena alquilo opcionalmente sustituida; o un enlazador unido a otro compuesto de fórmula (I) a través de N-7, donde N-7 es el átomo de N unido a R3 en la estructura de fórmula (I), en el que el enlazador se selecciona entre un alquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, o un alquilarilalquilo opcionalmente sustituido; X es O; Y es O; Z es hidrógeno; una cadena alquilo opcionalmente sustituida; o OH; o un derivado de dicho compuesto de formula (I) representado por la fórmula:**Fórmula** siempre que este compuesto de fórmula (I) no sea cafeína, para utilizar en la reducción de la severidad de los síntomas de la distrofia miotónica tipo 1 o tipo 2 en un sujeto que sufre de la distrofia miotónica tipo 1 o tipo 2 mediante el aumento de la cantidad de proteína libre MBNL, dichos síntomas que incluyen las que afectan al corazón, sistema nervioso central, musculatura lisa, sistema hormonal, sistema inmunológico, la visión, el sistema reproductivo y la piel.

Description

DESCRIPCION

Compuestos para el tratamiento de la distrofia miotonica

Campo de la invencion

[0001] La presente invencion se refiere al campo de las enfermedades raras, en particular, la invencion se refiere a la distrofia miotonica. Mas particularmente, la presente invencion se refiere a compuestos y composiciones que comprenden los mismos para uso en el tratamiento de la distrofia miotonica tipo 1 y tipo 2. La presente invencion se refiere ademas a nuevos compuestos.

Antecedentes de la invencion

[0002] La distrofia miotonica (DM) es la forma mas comun de distrofia muscular en adultos e incluye dos enfermedades cllnicamente similares, aunque se originan a partir de mutaciones geneticas distintas. La DM1 (enfermedad de Steinert) corresponde a la mayorla de los casos de DM y deriva de una expansion de la repetition de trinucleotidos CTG (tlpicamente mas de 50 unidades) en la region 3' no traducida (UTR) del gen DMPK, mientras que DM2 se origina de grandes expansiones del tetranucleotido CCTG en el primer intron del gen CNBP. Ambas son enfermedades raras, con una prevalencia combinada global estimada en 12,5 por 100.000, aunque se ha sugerido que podrla ser tres veces mayor (Suominen, T. et al. Population frequency of myotonic dystrophy: higher than expected frequency of myotonic dystrophy type 2 (DM2) mutation in Finland. Eur J Hum Genet. 19(7):776-82, 2011). DM1 es una enfermedad multisistemica que afecta ante todo a la musculatura esqueletica (miotonla, debilidad muscular y degeneration), el corazon y el sistema nervioso central (Gomes-Pereira, M. et al. Myotonic dystrophy mouse models: towards rational therapy development. Trends Mol Med. 17(9):506-17 (2011).

[0003] La gravedad de la enfermedad y la edad de inicio estan relacionadas de manera crltica con el tamano de la expansion. Mientras que en el inicio clasico del adulto el numero aproximado de repeticiones es de 50 a <500, el inicio en la adolescencia es de 500 a <1000, el inicio en la infancia es de 1000 a <1500, y el inicio congenito es igual o superior a 1500. Debido a estas diferencias, actualmente no esta claro si la patogenia de la DM1 congenita (CDM) es similar a la DM1 en adulto. De hecho, factores desconocidos explican las caracterlsticas unicas de CDM, como que no hay un modelo animal de DM1 que produzca un fenotipo tlpico de CDM (Campbell, et al. Congenital Myotonic Dystrophy J. Neurol. Neurophysiol. S7-001, XP055186364, 2012).

[0004] Las celulas que transportan pocas repeticiones CTG muestran un equilibrio funcional entre dos reguladores de corte y empalme (“splicing”) antagonicos: muscleblind tipo 1 (MBNL1) y miembro de la famllia 1 del tipo CUGBP/Elav (CELF1). El equilibrio entre MBNL1 y CELF1 controla el establecimiento de perfiles de corte y empalme para adultos para un subconjunto de los transcritos regulados por el desarrollo. La expansion de la repeticion CTG expresada en una celula de DM1 forma una estructura en tallo-bucle imperfecta de doble cadena que tiene dos consecuencias patogenicas principales: secuestro de MBNL1 por foci de RNA e hiperfosforilacion, estabilizacion y redistribucion subcelular de CELF1 mediada por protelna quinasa C (PKC) y AKT. Como resultado del agotamiento de MBNL1 y la sobreregulacion de CELF1, se altera el equilibrio entre estos dos reguladores de corte y empalme y el empalme alternativo de una serie de transcritos regulados por el desarrollo vuelve a un patron fetal. La expresion anormal de isoformas de corte y empalme en musculo esqueletico, corazon y cerebro adulto probablemente contribuye a los slntomas de la enfermedad DM1. Mientras que MBNL1 parece crltico en fenotipos esqueletico y cardlaco, se ha sugerido que el secuestro del paralogo MBNL2 origina slntomas cerebrales y MBNL3 puede inhibir la diferenciacion muscular. Ademas de una regulacion de empalme alternativo defectuosa, se ha observado que los deficits de traduccion de protelnas, la traduction de ATG no associada a repeticion (traduction RAN) y la transcription bidireccional del gen DMPK, la expresion alterada de microARNs, deficiencias de transcripcion de genes, y la interferencia de ARN, entre otros, contribuyen a alteraciones moleculares tlpicas de DM en diferentes modelos celulares y animales de la enfermedad.

[0005] Una baja expresion de MBNL o una sobreexpresion de CELF1, o una combination de ambas situaciones como existe en humanos con DM1 se manifiesta en una enfermedad multisistemica debido a las modificaciones de los factores de corte y empalme del ARN.

[0006] La DM1 es realmente una enfermedad multisistemica que afecta principalmente al musculo esqueletico (miotonla, debilidad muscular y degeneracion), el corazon y el sistema nervioso central (Gomes-Pereira, M. et al. Myotonic dystrophy mouse models: towards rational therapy development. Trends Mol Med. 17(9):506-17 (2011)). La gran variabilidad de los slntomas de DM1 y la edad de aparicion resultan en tres formas cllnicas principales de la enfermedad: aparicion tardla, aparicion clasica en adultos y DM1 congenita. La DM1 puede aparecer en pacientes de cualquier edad, mientras que la DM2 se presenta tlpicamente en adultos. Tanto los pacientes con DM1 como con DM2 tambien pueden considerarse como una persona que lleva la mutation CTG o CCTG expandida, respectivamente.

[0007] La miotonla (relajacion muscular tardla despues de la contraction inicial) y la perdida progresiva de los musculos distales son caracterlsticas destacadas de la DM1 en el musculo esqueletico. La forma congenita mas grave de DM1 se caracteriza por hipotonla muscular general y dificultad respiratoria al nacer, as! como retraso en el desarrollo motor.

[0008] Una gran proportion de los pacientes con DM1 sufren trastornos de la conduction cardiaca, detectados por electrocardiograma (ECG), y anomallas histologicas cardlacas. Las cardiopatlas progresivas pueden evolucionar a un bloqueo atrioventricular completo o arritmias ventriculares y muerte subita en casi el 30% de los pacientes. En particular, los problemas asociados con el sistema cardiopulmonar representan el 70% de las muertes debidas a DM1.

[0009] Las manifestaciones del SNC son altamente debilitantes y apoyan la opinion de que la DM1 tambien es un trastorno cerebral. La disfuncion neuropsicologica en DM1 se acompana de anomallas histologicas, as! como cambios estructurales cerebrales y alteraciones en el metabolismo.

[0010] El impacto de la DM1 afecta aun mas a una variedad de tejidos y da como resultado cataratas preseniles, tolerancia anormal a la glucosa e hiperinsulinismo, disfuncion gastrointestinal y atrofia testicular. Ver Gomes-Pereira, M. et al. Myotonic dystrophy mouse models: towards rational therapy development. Trends Mol Med. 17(9):506-17 (2011).

[0011] Segun la Fundacion Myotonic Dystrophy Foundation (http://myotonic.org), la sintomatologla de la distrofia Miotonica puede expresarse a traves de los siguientes slntomas:

1. Musculo esqueletico: miotonla, desgaste progresivo y debilidad, dolor, hipotonla general en la DM1 congenita 2. Corazon: defectos de la conduccion cardlaca, intervalos PR prolongados, bloqueo auriculoventricular de primer grado, arritmias

3. Sistema nervioso central: hipersomnolencia, deterioro cognitivo, disfuncion ejecutiva, deficits de memoria visualespacial, cambios neuropsicologicos, retraso mental en la DM1 congenita

4. Musculo liso: complicaciones gastrointestinales, problemas para tragar, dolor abdominal, motilidad anormal, malabsorcion, estrenimiento / diarrea, incontinencia anal

5. Sistema respiratorio: problemas respiratorios en los recien nacidos, infecciones pulmonares frecuentes, aspiracion de alimentos o llquidos en vlas respiratorias, incapacidad para respirar suficiente oxlgeno, apnea del sueno

6. Sistema hormonal: hiperinsulinismo (diabetes), calvicie prefrontal masculina

7. Sistema inmunologico: hipogammaglobulinemia

8. Vision: cataratas subcapsulares iridiscentes prematuras y cataratas multicoloreadas, dano a la retina, parpados caldos (ptosis)

9. Sistema reproductivo: atrofia testicular, testlculos pequenos, fertilidad reducida, bajo conteo de espermatozoides, bajo nivel de testosterona, mayor riesgo de aborto involuntario y muerte fetal, menopausia temprana, problemas con el embarazo y el parto, complicaciones en el recien nacido, mas severo con cada generation ("anticipation")

10. Piel: mayor riesgo de tumor benigno de la piel (pilomatrixoma)

[0012] Las estrategias terapeuticas actuales se basan en farmacos candidatos que se unen a repeticiones CUG, liberando de esta manera protelnas MBNL para regular el corte y empalme de sus dianas pre-mRNA. Se ha demostrado que un aumento en la protelna MBNL1 libre reduce la gravedad de los slntomas en modelos animales de DM1, mientras que en contraste, se observa una disminucion de la protelna MBNL1 libre con expansiones mas largas, que se correlacionan con mayor severidad de la enfermed. El papel patogenico del gen MBNL1 esta aun mas comprobado por el hecho de que las variantes del gen MBNL1 modifican la gravedad de DM1 (Vincent Huin et al. MBNL1 gene variants as modifiers of disease severity in myotonic dystrophy type 1. J Neurol (2013) 260:998-1003). Del mismo modo, se ha demostrado que las protelnas MBNL quedan secuestrados en la DM2, por lo tanto, estrategias dirigidas a aumentar los niveles de estado estable de estas protelnas tiene el potencial de convertirse en tratamientos para la DM2. Por tanto, la estrategia de consenso para revertir las anomallas de corte y empalme observadas en DM1 y DM2, entre otras alteraciones moleculares, se basa en una reduction en los foci nucleares y la reduction concomitante en el secuestro nuclear de protelnas MBNL. Warf y colaboradores (Warf, M., Nakamori, M., Matthys, C. Thornton, C. y Berglund, J. (2009) Pentamidine reverses the splicing defects associated with myotonic dystrophy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 106, 18551-18556. Coonrod, L., et al. (2013) Reducing levels of toxic RNA with small molecules. ACS Chem Biol. 8(11):2528-37) demostraron que la pentamidina facilita un rescate parcial de la patologla de DM1.

[0013] Desde entonces, se han descrito otras terapias, tales como compuestos de oligonucleotidos antisentido (vease, EP 2 560 001A2, US 2011/0269665 A1), analogos de pentamidina (vease, A., Haley, M., Thornton, C. et al. (2013) Reducing levels of toxic RNA with small molecules. ACS chemical biology, 8, 2528-2537; Parkesh, R., Childs-Disney, J., Nakamori, M., Kumar, A., Wang, E., Wang, T., Hoskins, J., Tran, T., Housman, D., Thornton, C. et al. (2012) Design of a Bioactive Small Molecule That Targets the Myotonic Dystrophy Type 1 RNA via an RNA Motif-Ligand Database and Chemical Similarity Searching. Journal of the American Chemical Society, 134, 4731-4742), peptidos (vease, EP 2554 180 A1, Gareiss, P., Sobczak, K., McNaughton, B., Palde, P., Thornton, C. y Miller, B. (2008) Dynamic combinatorial selection of molecules capable of inhibiting the (CUG) repeat RNA-MBNL1 interaction in vitro: discovery of lead compounds targeting myotonic dystrophy (DM1). Journal of the American Chemical Society, 130, 16254-16261; Garcia-Lopez, A., Llamusi, B., Orzaez, M., Perez-Paya, E. y Artero, R. (2011) In vivo discovery of a peptide that prevents CUG-RNA hairpin formation and reverses RNA toxicity in myotonic dystrophy models. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 108, 11866-11871), o candidatos a farmacos qulmicos (vease, US 8.754.084 B2, EP 2742974 A1, US 8.741.572 B1, US 2014/0051709 A1, Jahromi, A.H., Nguyen, L., Fu, Y., Miller, K.A., Baranger, A.M. y Zimmerman, S.C. (2013) A novel CUG(exp). MBNL1 inhibitor with therapeutic potential for myotonic dystrophy type 1. ACS chemical biology, 8, 1037-1043; Wong, C.H., Nguyen, L., Peh, J., Luu, L.M., Sanchez, J.S., Richardson, S.L., Tuccinardi, T., Tsoi, H., Chan, W.Y., Chan, H.Y. et al. (2014) Targeting Toxic RNAs that Cause Myotonic Dystrophy Type 1 (DM1) with a Bisamidinium Inhibitor. Journal of the American Chemical Society, 136, 6355-6361; Childs-Disney, J., Stepniak-Konieczna, E., Tran, T., Yildirim, I., Park, H., Chen, C., Hoskins, J., Southall, N., Marugan, J., Patnaik, S. et al. (2013) Induction and reversal of myotonic dystrophy type 1 pre-mRNA splicing defects by small molecules. Nature communications, 4, 2044; Hoskins, J.W., Ofori, L.O., Chen, C.Z., Kumar, A., Sobczak, K., Nakamori, M., Southall, N., Patnaik, S., Marugan, J.J., Zheng, W. et al. (2014) Lomofungin and dilomofungin: inhibitors of MBNL1-CUG RNA binding with distinct cellular effects. Nucleic acids research, 42, 6591-6602).

[0014] Se ha reportado que el medicamento generico cardiovascular mexiletina, desarrollado inicialmente para tratar las anomallas del ritmo cardlaco, posee cierto potencial para tratar la rigidez muscular y otros slntomas de las miotonlas no distroficas (NDM, por sus siglas en ingles). El bloqueo del canal de sodio inducido por mexiletina redujo la miotonla en estudios pequenos (Stantland, JM, et al. Mexiletine for symptoms and signs of myotonia in nondystrophic myotonia: a randomized controlled trial, JAMA. 2012, 308(13), 1357-1365).

[0015] Por tanto, a pesar de que la DM1 fue descrita por primera vez en 1909, actualmente no existe cura o tratamiento especlfico para la distrofia miotonica. Todos los tratamientos aplicados son paliativos y contribuyen a controlar el desarrollo de un subgrupo de todo el gran grupo de slntomas, y el foco cllnico es el manejo de las complicaciones de la enfermedad, pero en ningun caso para el tratamiento de la enfermedad de una manera definitiva.

[0016] Por lo tanto, existe una necesidad de compuestos y composiciones que puedan tratar la distrofia miotonica, en particular la distrofia miotonica tipo 1 y tipo 2, de una manera mas efectiva.

[0017] Los presentes inventores sorprendentemente han encontrado que los compuestos descritos en este documento cubren esta necesidad existente. Ademas, los compuestos descritos en el presente documento se pueden encontrar de forma ventajosa directamente en los productos naturales o pueden sintetizarse facilmente en unos pocos pasos qulmicos.

[0018] Algunos de los compuestos descritos en este documento son conocidos por los expertos en la tecnica como derivados de xantina (conocidos colectivamente como xantinas o metilxantinas). Las xantinas metiladas (metilxantinas), incluyen la cafelna, aminofilina, IBMX, paraxantina, pentoxifilina, teobromina, y teofilina. Este grupo de alcaloides que actuan principalmente como bloqueadores de los receptores de adenosina, son comunmente utilizados como estimulantes suaves y como broncodilatadores, particularmente en el tratamiento de los slntomas de asma. En contraste con otros estimulantes mas potentes como las aminas simpaticomimeticas, las xantinas actuan principalmente para oponerse a la accion de la adenosina inductora del sueno, y aumentar la vigilancia en el sistema nervioso central. Tambien estimulan el centro respiratorio, y se utilizan para el tratamiento de la apnea infantil y la apnea del prematuro (AOP). AOP es un problema comun que afecta a los bebes prematuros, probablemente debida a un sistema respiratorio inmaduro. El tratamiento con metilxantinas es un pilar del tratamiento de la apnea central mediante la estimulacion del sistema nervioso central y la funcion muscular respiratoria. La causa mas comun de apnea especialmente en los recien nacidos es la prematuridad, a la que los farmacos mas comunes que se utilizan para tratar la apnea son los metilxantinas (Henderson-Smart et al Prophylactic methylxanthine for prevention of apnoea in preterm infants. Cochrane Database Syst Rev. 2010 Dec 8;(12):CD000432. doi: 10.1002/14651858.CD000432.pub2); cafelna (Buk et al, Cafelna Citrate for the Treatment of Apnea of Prematurity, Pediatr Pharm. 2008;14(6)), Teofilina (Scanlon et al. Cafelna or Teofilina for neonatal apnoea? Arch Dis Child. 1992 Apr; 67(4 Spec No): 425-428) y aminofilina (Larsen et al. Aminofilina versus Cafelna citrate for apnea and bradycardia prophylaxis in premature neonates. Acta Paediatr. 1995 Apr;84(4):360-4).

[0019] Queudeville M et al. "Kongenitale myotone Dystrophie mit Zwerchfellparese", Monatsschrift Kinderheilkunde, 2012, vol. 160, No. 12, pp. 1236-1238, revela que la teofilina es capaz de mejorar la contractilidad del diafragma en nino que sufre de distrofia miotonica (DM).

[0020] Syr Lee et al. "Survival of a 30-week baby with congenital myotonic dystrophy initially ventilated for 55 days", Journal of Paediatrics and Child Health, 1999, Vol. 35, No. 3, pp. 313-314, describen el uso de teofilina para mejorar el esfuerzo respiratorio de un nino que sufre de DM.

[0021] M.A. Rutherford et al. “Congenital myotonic dystrophy: respiratory function at birth determines survival”, Archives of Disease in Childhood, 1989, Vol. 64, N°.2, pp.191-195, describe el uso de la aminofilina para mejorar los esfuerzos respiratorios en un nino que sufre de DM.

[0022] Keller C et al. "Congenital myotonic dystrophy requiring prolonged endotracheal and noninvasive assisted ventilation: not a uniformly fatal condition", Pediatrics, 1998, Vol. 101, No. 4, pp. 704-706, describen revela que la cafelna es capaz de mejorar el esfuerzo respiratorio de un nino que sufre de MD.

[0023] Toshio Itahara et al. en Bull. Chem. Soc. Jpn. 1994, 67, pp.203-209, reporta la preparacion y estudio por RMN de 7,7'-alquenilbisteofilinas.

[0024] Los presentes inventores sorprendentemente han encontrado que las xantinas son capaces de aumentar la protelna MBNL1 libre en mioblastos de DM1 humanos. Se ha reportado que un aumento de la protelna MBNL1 libre reduce la gravedad de los slntomas en los modelos animales de DM1, mientras que por el contrario, se observa una disminucion de la protelna MBNL1 libre con expansiones mas largas, lo que se correlaciona con la enfermedad mas grave. El papel patogenico del gen MBNL1 se fundamenta ademas en el hecho de que las variantes del gen MBNL1 modifican la gravedad de DM1 (Vincent Huin et al. MBNL1 gene variants as modifiers of disease severity in myotonic dystrophy type 1. J Neurol (2013) 260: 998-1003). Del mismo modo, se ha demostrado que las protelnas M^bN^lson secuestradas en DM2, por lo tanto, las estrategias destinadas a aumentar los niveles de estado estacionario de estas protelnas tienen el potencial de convertirse en tratamientos para la DM2.

[0025] No se encuentran referencias descritas en la literatura para el uso directo de estos compuestos para los fines aqul descritos.

Descripcion resumida de la invencion

[0026] Un primer aspecto de la presente invencion se refiere a un compuesto de formula (I), siempre que este compuesto no sea cafelna, para su uso en la reduccion de la severidad de los slntomas de la distrofia miotonica tipo 1 o tipo 2 en un sujeto que sufre de la distrofia miotonica tipo 1 o tipo 2 mediante el aumento de la cantidad de protelna libre MBNL, donde dichos slntomas incluyen aquellos que afectan al corazon, sistema nervioso central, musculatura lisa, sistema hormonal, sistema inmunologico, la vision, el sistema reproductivo y la piel.

[0027] Un segundo aspecto de la presente invencion se refiere a composiciones que comprenden el compuesto de formula (I) para el uso tal como se describe en el presente documento.

[0028] Un tercer aspecto de la presente invencion se refiere a nuevos compuestos que son dlmeros de compuestos de formula (I).

Breve descripcion de los dibujos

[0029]

Figura 1. Mediciones de polarizacion relativas a los valores de polarizacion de la sonda FAM (CUG) 23 sin compuesto. Cada uno de los compuestos indicados en el eje x, se probo a concentraciones crecientes (de 0,1 a 100 microM). Valores de polarizacion mas altos indican una mayor capacidad de union a las repeticiones. El grafico de barras muestra las medias ± SEM de tres experimentos independientes con tres repeticiones tecnica cada una.

Figura 2. Las mediciones de polarizacion de la sonda 6-FAM-(CUG)23 en presencia de los compuestos indicados se representan en relacion a las lecturas con la sonda sola. Cada uno de los compuestos en el eje x se ensayo a concentraciones crecientes. Valores de polarizacion mas altos indican una mayor capacidad de union a las repeticiones CUG. En comparacion con un compuesto de control que no se une a repeticiones CUG, las moleculas de teofilina muestran una union a repeticiones CUG que pueden variar desde una union debil a una union muy fuerte en el caso en el que esta presente un enlazador alquilo de nueve carbonos (C9). El grafico de barras muestra los resultados de tres experimentos independientes con cuatro replicas tecnicas de cada uno. Las barras de error son s.e.m.

Figura 3. Porcentaje de supervivencia de fibroblastos DM1 despues de la administracion de diferentes concentraciones de compuestos en el medio. Los valores de supervivencia se normalizan a los fibroblastos DM1 no tratados que tienen 100% de supervivencia. En todos los casos, los compuestos se disolvieron en DMSO, a continuacion, las celulas tratadas unicamente con DMSO se consideran los controles mas apropiados para la comparacion. Grafico de barras que muestra las medias ± SEM de tres experimentos independientes.

Figura 4. Numero promedio de foci ribonucleares por celula en fibroblastos de DM1 expuestos a las concentraciones indicadas de compuestos en el medio de cultivo. La teofilina-C7 y la teofillina-C9 disminuyeron ambas significativamente el numero de focos por celula. ** Indica el valor de p <0,001, *** indica valor de p <0,0001. Los datos provienen de tres experimentos independientes con tres replicas tecnicas de cada uno. La barra DMSO muestra el valor de referencia para los fibroblastos de DM1 expuestos a diluyente solo. Las barras de error son s.e.m.

Figura 5. Efecto de los compuestos sobre el numero de foci por celula en los fibroblastos de DM1. Los graficos de barras muestran la media ± SEM numero foci por nucleos en fibroblastos de DM1 que hablan sido tratados a 100 microM de los compuestos (1-10) o disolvente (DMSO) durante un dla. La llnea roja horizontal marca el valor de referencia de las celulas de control tratadas unicamente con DMSO. * P <0,05 (t - test).

Figura 6. Cuantificacion de la intensidad de expresion de Mbl en los nucleos. Los graficos de barras muestran la media ± SEM de la intensidad de tincion de Mbl en nucleos de mioblastos de DM1 que hablan sido tratados con diferentes concentraciones de compuestos (de 1 microM a 100 microM) o disolvente (DMSO) durante un dla. La llnea roja horizontal marca el valor de referencia de las celulas de control tratadas unicamente con DMSO. En comparacion con la celula tratada con DMSO, todos los compuestos fueron capaces de aumentar significativamente la intensidad de Mbl en los nucleos de los mioblastos de DM1, especialmente los compuestos 6, 7, 8 y 9 en 1microM. * P <0,05 (t-test).

Figura 7. Cuantificacion de agregados de Mbl en foci ribonucleares. Los graficos de barras muestran la media ± SEM de agregados de Mbl formadores de foci en mioblastos de DM1 que hablan sido tratados a una concentracion 1microM de compuestos o disolvente (DMSO) durante un dla. La llnea roja horizontal marca el valor de referencia de las celulas control tratadas unicamente con DMSO. En comparacion con la pentamidina, que se utilizo como control positivo, todos los compuestos disminuyen el numero de foci de Mbl en un grado similar que la pentamidina. * P <0,05 (t-test).

Descripcion detallada de la invencion

[0030] La presente invencion se refiere a un compuesto de formula (I)

en el que:

R1 es hidrogeno o una cadena alquilo opcionalmente sustituida;

R2 es hidrogeno; una cadena alquilo opcionalmente sustituida; o un alquenilo opcionalmente sustituido;

R3 es hidrogeno; una cadena alquilo opcionalmente sustituida; o un enlazador unido a otro compuesto de formula (I) a traves de N-7, donde N-7 es el atomo de N unido a R3 en la estructura de formula (I), en el que el enlazador se selecciona entre un alquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, o un alquilarilalquilo opcionalmente sustituido;

X es O;

Y es O;

Z es hidrogeno; una cadena alquilo opcionalmente sustituida; o OH;

o un derivado de dicho compuesto de formula (I) representado por la formula:

siempre que este compuesto de formula (I) no sea cafelna,

para utilizar en la reduccion de la severidad de los slntomas de la distrofia miotonica tipo 1 o tipo 2 en un sujeto que sufre de la distrofia miotonica tipo 1 o tipo 2 mediante el aumento de la cantidad de protelna libre MBNL, dichos slntomas que incluyen las que afectan al corazon, sistema nervioso central, musculatura lisa, sistema hormonal, sistema inmunologico, la vision, el sistema reproductivo y la piel.

[0031] La cafelna se ha excluido y ha sido objeto de la solicitud copendiente EP14382450 porque se ha observado que este compuesto particular actua a traves de un mecanismo de accion diferente y se encontro adecuado explicar como actua este compuesto en una aplicacion diferente.

[0032] Un experto en la materia reconocera facilmente que, cuando los miembros se agrupan juntos de una manera comun, tal del grupo individualmente y todos los subgrupos posibles del grupo principal. Ademas, a todos los efectos, la invention abarca no solo el grupo principal, sino tambien el grupo principal en ausencia de uno o mas de los miembros del grupo. Por consiguiente, la invencion preve la exclusion expllcita de uno cualquiera o mas de los miembros de un grupo mencionado. En consecuencia, pueden aplicarse condicionantes a cualquiera de las categorlas o realizaciones como en un grupo de Markush, la invencion abarca no solo todo el grupo indicado como un conjunto, sino cada miembro descrito, mediante las cuales se pueden excluir uno o mas de los citados elementos, especies o realizaciones, de dichas categorlas o realizaciones, por ejemplo, tal como se utiliza en una limitation negativa expllcita.

[0033] Ademas, cuando un grupo de sustituyentes se da a conocer en el presente documento, se entiende que todos los miembros individuales de ese grupo y todos los subgrupos, incluyendo cualquier isomero, enantiomero y diastereomero de los miembros del grupo, se describen por separado. Cuando se utiliza un grupo Markush u otra agrupacion en el presente documento, todos los miembros individuales del grupo y todas las combinaciones y subcombinaciones posibles del grupo pretenden ser incluidas individualmente en la description. Cuando se describe en el presente documento un compuesto de tal manera que no se especifica un isomero, enantiomero, o diastereomero determinado del compuesto, por ejemplo, en una formula o un nombre qulmico, la descripcion pretende incluir cada isomero y cada enantiomero del compuesto descrito individualmente o en cualquier combination. Ademas, a menos que se especifique lo contrario, todas las variantes isotopicas de los compuestos descritos en este documento pretenden ser abarcadas por la descripcion.

[0034] Las moleculas descritas en este documento pueden contener uno o mas grupos ionizables (grupos de los que se pueden extraer o anadir o que se pueden cuaternizar (por ejemplo, aminas)). Todas las posibles formas ionicas de dichas moleculas y sales de las mismas pretenden ser incluidas individualmente en la presente descripcion.

[0035] En una realization particular, dicho compuesto esta en forma de tautomero, solvato, hidrato, una sal farmaceuticamente aceptable del mismo o formando oligomeros, preferiblemente dlmeros.

[0036] En una realizacion preferida del compuesto de formula (I), R¹, R², R³son cada uno independientemente entre si H o Me, siempre que este compuesto no sea cafelna (R¹= R²= R³= CH³).

[0037] En otra realizacion preferida del compuesto de formula (I), R³es un enlazador tal como se define anteriormente formando compuestos mostrados a continuation:

en el que el N al que esta unido el enlazador se define como N-7.

[0038] En otra realizacion preferida, dicho compuesto se selecciona del grupo que consiste en teofilina, teobromina, ifilina, xantina, hipoxantina, 1,7-dimetilxantina, 3-isobutil-1-metilxantina, 3-metilxantina, 3-etil-1-propilxantina, 3-alil-1 -etil-8-hidroxixantina, 3,8-dimetil-2-tioxantina, 1 -etil-3-isobutilxantina,

y

[0039] Tal como se utiliza anterior y posteriormente, se aplican las siguientes definiciones a menos que se indique lo contrario.

[0040] El termino halo o halogeno es generico para fluoro, cloro, bromo y yodo.

[0041] El termino "oligomeros", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a moleculas complejas que consisten en varias unidades monomericas, por ejemplo, dlmeros, trlmeros, tetrameros, etc. Los oligomeros pueden estar compuestos de homomonomeros, cuando las dos moleculas son identicas (por ejemplo, A-A) o heteromonomeros cuando no lo son (por ejemplo, A-B). Particularmente preferidos son dlmeros, que consisten en dos unidades monomericas unidas por enlaces covalentes en forma de compuesto (I)-enlazador-compuesto (I), o por interacciones intermoleculares o intramoleculares. Los dlmeros unidos por enlace covalente se unen preferiblemente a traves de su correspondiente N-7.

[0042] El termino "alquilo", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a cualquier hidrocarburo lineal, ramificado o clclico en el que todos los enlaces carbono-carbono son enlaces simples.

[0043] El termino "alquenilo", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a cualquier alquilo lineal, ramificado o clclico con al menos un doble enlace carbono-carbono.

[0044] Ademas, el termino "alquinilo", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a cualquier alquilo o alquenilo lineal, ramificado o clclico con al menos un triple enlace carbono-carbono.

[0045] El termino "cicloalquilo" se refiere a grupos alquilo clclicos que tienen un solo anillo clclico o multiples anillos condensados. El cicloalquilo puede estar no sustituido o sustituido. El grupo cicloalquilo puede incluir opcionalmente uno o mas citas de insaturacion.

[0046] El termino “polihaloC1-6alquilo”, como grupo o parte de un grupo, por ejemplo, en polihaloC1-6alcoxi, se define como C1-6alquilo sustituido con monohalogeno o polihalogeno, en particular Cl-6alquilo sustituido con hasta uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis o mas atomos de halogeno, tales como metilo o etilo con uno o mas atomos de fluor, por ejemplo, difluorometilo, trifluorometilo, trifluoroetilo. Se prefiere trifluorometilo. Tambien se incluyen grupo perfluoroCl-6alquilo, que son grupos C1-6alquil en los que todos los atomos de hidrogeno estan sustituidos por atomos de fluor, por ejemplo, pentafluoroetilo. En el caso en que mas de un atomo de halogeno este unido a un grupo alquilo en la definicion de polihaloC1-6alquilo, los atomos de halogeno pueden ser iguales o diferentes.

[0047] Tal como se utiliza en el presente documento “C1-4alquilo” como un grupo o parte de un grupo define radicales de hidrocarburos saturados de cadena lineal o ramificada que tienen de 1 a 4 atomos de carbono, tales como, por ejemplo, metilo, etilo, 1-propilo, 2-propilo, 1-butilo, 2-butilo, 2-metil-1-propilo; “C1-6alquilo” abarca radicales C1-4alquilo y los homologos superiores de los mismos que tienen 5 o 6 atomos de carbono, tales como, por ejemplo, 1 -pentilo, 2-pentilo, 3-pentilo, 1-hexilo, 2-hexilo, 2-metil-1-butilo, 2-metil-1-pentilo, 2-etil-1-butilo, 3-metil-2-pentilo, y similares. Entre los destacados entre C1-6alquilo esta C1-4alquilo.

[0048] El termino “C2-6alquenilo” como un grupo o parte de un grupo define radicales de hidrocarburos de cadena lineal o ramificada que tienen enlaces carbono-carbono saturados y un doble enlace, y que tienen de 2 a 6 atomos de carbono, tales como, por ejemplo, etenilo (o vinilo), 1-propenilo, 2-propenilo (o alilo), 1 -butenilo, 2-butenilo, 3-butenilo, 2-metil-2-propenilo, 2-pentenilo, 3-pentenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 4-hexenilo, 2-metil-2-butenilo, 2-metil-2-pentenilo y similares.

[0049] C3-7cicloalquilo es generico para ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo.

[0050] C1-6alcoxi significa C1-6alquiloxi en el que C1-6alquil es tal como se define anteriormente.

[0051] El termino "alquilcicloalquilalquilo" significa un grupo alquilo sustituido por un grupo alquilcicloalquilo. "Alquilcicloalquilo" significa un grupo cicloalquilo sustituido con al menos un grupo alquilo.

[0052] El termino "alquilcicloalquenilalquilo" significa un alquilo sustituido por un grupo alquilcicloalquenilo. "Alquilcicloalquenilo" significa un grupo cicloalquilo sustituido con al menos un grupo alquenilo.

[0053] El termino "alquilcicloalquilalquinilo" significa un grupo alquilo sustituido por un grupo alquilcicloalquinilo. "Alquilcicloalquinilo" significa un grupo cicloalquilo sustituido con al menos un grupo alquinilo.

[0054] El termino "alquilcicloalquenilalquilo" significa un grupo alquilo sustituido por un grupo alquenilcicloalquilo. "Alquilcicloalquenilo" significa un grupo cicloalquenilo sustituido con al menos un grupo alquilo.

[0055] El termino "alquilcicloalquenilalquilo" significa un grupo alquilo sustituido por un grupo alquenilcicloalquilo. "Alquilcicloalquenilo" significa un grupo cicloalquenilo sustituido con al menos un grupo alquilo.

[0056] El termino "alquilarilalquilo", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a un grupo alquilarilo unido al resto molecular parental a traves de un grupo alquilo.

[0057] El termino "alquilarilalquenilo" significa un alquilo sustituido por un grupo arilalquenilo. "Arilalquenilo" significa un grupo arilo con un grupo alquenilo.

[0058] El termino "alquilarilalquinilo" significa un alquilo sustituido por un grupo arilalquinilo. "Arilalquinilo" significa un grupo arilo con un grupo alquinilo.

[0059] El termino "alquilheterocicloalquilo," tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a un grupo alquilheterociclo unido al resto molecular parental a traves de un grupo alquenilo. "Heterocicloalquilo" significa un grupo heterociclo con un grupo alquilo.

[0060] El termino "alquilheterocicloalquenilo," tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a un grupo alquilheterociclo unido al resto molecular parental a traves de un grupo alquenilo. "Heterocicloalquenilo" significa un grupo heterociclo con un grupo alquenilo.

[0061] El termino "alquilheterocicloalquinilo," tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a un grupo alquilheterociclo unido al resto molecular parental a traves de un grupo alquenilo. "Heterocicloalquinilo" significa un grupo heterociclo con un grupo alquinilo.

[0062] El termino "arilo" tal como se utiliza en el presente documento se refiere a cualquier grupo hidrocarburo aromatico derivado de la eliminacion de al menos un atomo de hidrogeno de un solo atomo de carbono de un sistema de anillo aromatico parental. El grupo arilo puede tener de 6 a 30 atomos de carbono. El grupo arilo puede tener un solo anillo (por ejemplo fenilo) o multiples anillos condensados (fusionados), en los que al menos un anillo es aromatico. Los grupos arilo tlpicos incluyen, pero sin limitation, radicales derivados de benceno, naftaleno, antraceno, bifenilo, y similares. El arilo puede estar no sustituido u opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados entre halogeno, hidroxilo, nitro, ciano, carboxilo, C1-6alquilo, C1-6alcoxi, C1-6alcoxiC1-6alquilo, C1-6alquilcarbonilo, amino, mono- o diC1-6alquilamino, azido, mercapto, polihaloC1-6alquilo, y polihaloC1-6alcoxi. El termino "alcarilo" se emplea cuando un grupo arilo esta unido covalentemente a un alquilo, alquenilo, o alquinilo.

[0063] El termino "heteroarilo" se refiere a un sistemas de anillos monoclclico, biclclico, o triclclico, que contienen uno, dos, o tres anillos aromaticos y que contiene al menos un atomo de nitrogeno, oxlgeno, o azufre en un anillo aromatico. El heteroarilo puede estar no sustituido o sustituido, por ejemplo, con uno o mas sustituyentes. Un grupo heterociclo puede contener tambien un grupo oxo (=O) o un grupo tioxo (=S) unido al anillo.

[0064] El termino "heterociclo" se refiere a un sistema de anillo saturado o parcialmente insaturado, que contiene al menos un heteroatomo seleccionado del grupo de oxlgeno, nitrogeno, silicio y azufre, y opcionalmente sustituido con uno o mas grupos tal como se definen para el termino "sustituido".

[0065] El termino "enlazador" se refiere a un espaciador de reticulation que se utiliza para unir dos moleculas para conformar un dlmero. Los enlazadores preferidos se seleccionan entre un alquilo opcionalmente sustituido, un alquenilo opcionalmente sustituido, un alquinilo opcionalmente sustituido, un cicloalquilo opcionalmente sustituido, un cicloalquenilo opcionalmente sustituido, un cicloalquinilo opcionalmente sustituido, un alquilcicloalquilalquilo opcionalmente sustituido, un alquilcicloalquilalquenilo opcionalmente sustituido, un alquilcicloalquilalquinilo opcionalmente sustituido, un alquilcicloalquenilalquilo opcionalmente sustituido, un alquilcicloalquinilalquilo opcionalmente sustituido, un arilo opcionalmente sustituido, un alquilarilalquilo opcionalmente sustituido, un alquilarilalquenilo opcionalmente sustituido, un alquilarilalquinilo opcionalmente sustituido, un heterociclo opcionalmente sustituido, un alquilheterocicloalquilo opcionalmente sustituido, un alquilheterocicloalquenilo opcionalmente sustituido, un alquilheterocicloalquinilo opcionalmente sustituido.

[0066] El termino “sustituido” tal como se utiliza en el presente document, se refiere a una sustitucion de un atomo o grupo qulmico (por ejemplo, H, NH2, u OH) por un grupo funcional, el “sustituyente”, y los sustituyentes particularment contemplados incluyen grupos nucleofllicos. El sustituyente puede ser uno de una selection de grupos indicados, o puede ser un grupo adecuado conocido por los expertos en la materia, siempre que supere la valencia normal de los atomos sustituidos, y que la sustitucion de lugar a un compuesto estable. Los grupos de sustituyentes adecuados incluyen, pero sin limitacion, grupos polares (por ejemplo, -NH2, -OH, -SH, -NC, etc.), grupos electrofllicos (por ejemplo, C(O)OR, C(X)OH, etc.), grupos no polares (por ejemplo, arilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, etc.), grupos ionicos (por ejemplo, -NH3+), y halogenos (por ejemplo, -F, -Cl), y todas las combinaciones qulmicamente razonables de los mismos. De este modo, el termino “grupo funcional” y el termino “sustituyente” se utilizan indistintamente en el presente documento y se refieren a grupos nucleofllicos (por ejemplo, -NH2, -OH, -SH, -NC, -CN, etc.), grupos electrofllicos (por ejemplo, C(O)OR, C(X)OH, C(halogeno)OR, etc.), grupos polares (por ejemplo, -OH), grupos no polares (por ejemplo, arilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, etc.), grupos ionicos (por ejemplo, -NH3+), y halogenos.

[0067] Cabe senalar que las posiciones de los radicales en cualquier resto molecular utilizado en las definiciones pueden estar en cualquier lugar de tales restos, siempre que sea qulmicamente estable.

[0068] Los radicales utilizados en las definiciones de las variables incluyen todos los posibles isomeros de position a menos que se indique lo contrario. Por ejemplo, piridilo incluye 2-piridilo, 3-piridilo y 4-piridilo; pentilo incluye 1 -pentilo, 2-pentilo y 3-pentilo.

[0069] Cuando cualquier variable aparece mas de una vez en cualquier constituyente, cada definition es independiente.

[0070] Siempre que se utilice en lo sucesivo, el termino "compuestos de formula (I)", o "los presentes compuestos" o terminos similares, se pretende incluir los compuestos de formula (I), todos y cualquiera de los subgrupos de los mismos, N-oxidos, sales de adicion, aminas cuaternarias, complejos metalicos y formas estereoqulmicamente isomeras.

[0071] Los compuestos de formula (I) pueden tener uno o mas centros de quiralidad y pueden existir como formas estereoqulmicamente isomericas. El termino "formas estereoqulmicamente isomericas" tal como se utiliza en el presente documento define todos los posibles compuestos constituidos por los mismos atomos unidos por la misma secuencia de enlaces pero que tienen diferentes estructuras tridimensionales que no son intercambiables, que los compuestos de formula (I) pueden poseer.

[0072] Con referencia a los casos en los que se utiliza (R) o (S) para designar la configuration absoluta de un atomo quiral dentro de un sustituyente, la designation se realiza teniendo en cuenta todo el compuesto y no el sustituyente aisladamente.

[0073] A menos que se mencione o indique otra cosa, la designacion qulmica de un compuesto abarca la mezcla de todas las posibles formas estereoqulmicamente isomericas que dicho compuesto puede poseer. Dicha mezcla puede contener todos los diastereomeros y/o enantiomeros de la estructura molecular basica de dicho compuesto. Todas las formas estereoquimicamente isomericas de los compuestos de la presente invencion tanto en forma pura o mezclados unos con otros pretenden estar abarcadas dentro del alcance de la presente invencion.

[0074] Las formas estereoisomeras puras de los compuestos y productos intermedios tal como se mencionan en el presente documento se definen como isomeros sustancialmente libres de otras formas enantiomericas o diastereomericas de la misma estructura molecular basica de dichos compuestos o intermedios. En particular, el termino "estereoisomericamente puro" se refiere a compuestos o intermedios que tienen un exceso de estereoisomero de al menos el 80% (es decir, mmimo el 90% de un isomero y maximo el 10% de los otros isomeros posibles) hasta un exceso de estereoisomero de 100% (es decir, 100% de un isomero y nada del otro), mas en particular, compuestos o intermedios que tienen un exceso de estereoisomero de 90% hasta 100%, incluso mas en particular que tienen un exceso de estereoisomero de 94% hasta 100% y mas en particular que tienen un exceso de estereoisomero de 97% hasta 100%. Los terminos "enantiomericamente puro" y "diastereomericamente puro" deben entenderse de manera similar, pero entonces teniendo en cuenta el exceso enantiomerico y el exceso diastereomerico, respectivamente, de la mezcla en cuestion.

[0075] Las formas estereoisomericas puras de los compuestos y compuestos intermedios de esta invencion se pueden obtener mediante la aplicacion de procedimientos conocidos en la tecnica. Por ejemplo, los enantiomeros pueden separarse unos de otros mediante cristalizacion selectiva de sus sales diastereomericas con acidos o bases opticamente activos. Ejemplos de los mismos son acido tartarico, acido dibenzoiltartarico, acido ditoluoiltartarico y acido canfosulfonico. Alternativamente, los enantiomeros pueden separarse mediante tecnicas cromatograficas utilizando fases estacionarias quirales. Dichas formas estereoquimicamente isomericas puras tambien se pueden derivar de las correspondientes formas estereoquimicamente isomericas puras de los materiales de partida apropiados, siempre que la reaccion se produzca de manera estereoespecifica. Preferiblemente, si se desea un estereoisomero especifico, dicho compuesto se sintetizara mediante metodos de preparacion estereoespecificos. Estos metodos utilizaran ventajosamente materiales de partida enantiomericamente puros.

[0076] Los racematos diastereomericos de los compuestos de formula (I) pueden obtenerse por separado mediante metodos convencionales. Los metodos de separacion fisica apropiados que se pueden emplear ventajosamente son, por ejemplo, cristalizacion selectiva y cromatografia, cromatografia en columna.

[0077] Para algunos de los compuestos de formula (I), sus N-oxidos, sales, solvatos, aminas cuaternarias, o complejos metalicos, y los intermedios usados en la preparacion de los mismos, la configuracion estereoquimica absoluta no se determino experimentalmente. Una persona experta en la materia es capaz de determinar la configuracion absoluta de dichos compuestos utilizando metodos conocidos en la tecnica tales como, por ejemplo, difraccion de rayos X.

[0078] La presente invencion tambien pretende incluir todos los isotopos de atomos que aparecen en los presentes compuestos. Los isotopos incluyen aquellos atomos que tienen el mismo numero atomico pero diferentes numeros de masa. A modo de ejemplo general y sin limitacion, los isotopos de hidrogeno incluyen tritio y deuterio. Los isotopos de carbono incluyen C-13 y C-14.

[0079] Algunos de los compuestos de formula (I) pueden existir tambien en su forma tautomera. Tales formas, aunque no se indican explicitamente en la formula anterior, pretenden estar incluidas dentro del alcance de la presente invencion.

[0080] El termino "tautomero" o "forma tautomerica" se refieren al isomero estructural de diferentes energias que son interconvertibles a traves de una barrera de baja energia. Por ejemplo, los tautomeros de proton (tambien conocidos como tautomeros prototropicos) incluyen la interconversion a traves de la migracion de un proton, tales como isomerizaciones ceto-enol e imina-enamina. Los tautomeros de valencia incluyen interconversiones por reorganizacion de algunos de los electrones de enlace.

[0081] La presente descripcion tambien incluye los profarmacos de los compuestos de formula (I).

[0082] El termino "profarmaco" tal como se utiliza en todo este texto significa los derivados farmacologicamente aceptables, tales como esteres, amidas y fosfatos, tales que el producto de biotransformacion resultante in vivo del derivado es el farmaco activo tal como se define en el presente documento (cafeina). La referencia por Goodman y Gilman (The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8a ed, McGraw-Hill, Int. Ed. 1992, "Biotransformation of Drugs", pag. 13-15) que describe profarmacos en general se incorpora en la presente. Los profarmacos tienen preferiblemente una solubilidad acuosa excelente, una mayor biodisponibilidad y se metabolizan facilmente en los inhibidores activos in vivo. Los profarmacos de cafeina se pueden preparar modificando grupos funcionales presentes en el compuesto de tal manera que las modificaciones se escinden, ya sea por manipulacion rutinaria o in vivo, del compuesto parental.

[0083] Se prefieren profarmacos de ester farmaceuticamente aceptables que son hidrolizables in vivo y se derivan de aquellos compuestos de formula (I) que tiene un grupo hidroxilo o carboxilo. Un ester hidrolizable in vivo es un ester, que se hidroliza en el cuerpo humano o animal para producir el acido o alcohol parental.Los esteres farmaceuticamente aceptables adecuados para carboxilo incluyen esteres de C1-6alcoximetilo, por ejemplo, metoximetilo, esteres de C1-6alcanoiloximetilo, por ejemplo pivaloiloximetilo, esteres de ftalidilo, esteres de C3-8cicloalcoxicarboniloxiC1-6alquilo, por ejemplo 1 -ciclohexilcarboniloxietilo; esteres de 1,3-dioxolen-2-onilmetilo, por ejemplo 5-metil-1,3-dioxolen-2-onilmetilo; y esteres de C1-6alcoxicarboniloxietilo, por ejemplo 1-metoxicarbonil-oxietilo, que se pueden formar en cualquier grupo carboxilo en los compuestos de esta invencion.

[0084] Un ester hidrolizable in vivo de un compuesto de la formula (I) que contiene un grupo hidroxilo incluye esteres inorganicos, tales como esteres de fosfato y eteres de a-aciloxialquilo y compuestos relacionados que, como resultado de la hidrolisis in vivo del ester, se rompen para dar el grupo hidroxi parental. Los ejemplos de eteres de a-aciloxialquilo incluyen acetoximetoxi y 2,2-dimetilpropioniloxi-metoxi. Una seleccion de esteres hidrolizables in vivo que forman grupos para hidroxilo incluyen alcanoilo, benzoilo, fenilacetilo y benzoilo y fenilacetilo sustituidos, alcoxicarbonilo (para dar esteres de carbonato de alquilo), dialquilcarbamoilo y N-(dialquilaminoetil)-N-alquilcarbamoilo (para dar carbamatos), dialquilaminoacetilo y carboxiacetilo. Los ejemplos de sustituyentes en el benzoilo incluyen morfolino y piperazino enlazados desde un atomo de nitrogeno anular a traves de un grupo metileno a la posicion 3 o 4 del anillo de benzoilo.

[0085] Para uso terapeutico, las sales de los compuestos de formula (I) son aquellos en los que el contraion es farmaceuticamente aceptable. "Farmaceuticamente aceptable" tal como se utiliza en el presente documento significa que el extracto, la fraccion del mismo, o compuesto del mismo o composicion es adecuada para la administracion a un sujeto para lograr los tratamientos descritos en el presente documento, sin efectos secundarios indebidamente perjudiciales a la luz de la gravedad de la enfermedad y la necesidad del tratamiento. Sin embargo, las sales de acidos y bases que no son farmaceuticamente aceptables tambien pueden utilizarse, por ejemplo, en la preparation o purification de un compuesto farmaceuticamente aceptable. Todas las sales, ya sean farmaceuticamente aceptables o no, estan incluidas dentro del ambito de la presente invention.

[0086] El acido farmaceuticamente aceptable y sales de adicion de base tal como se han mencionado anteriormente pretenden comprender las formas de acido no toxico y de sal de adicion de bases terapeuticamente activos que los compuestos de formula (I) son capaces de formar. Las sales de adicion de acido farmaceuticamente aceptables se pueden obtener convenientemente tratando la forma de base con un acido apropiado. Los acidos apropiados comprenden, por ejemplo, acidos inorganicos tales como hidracidos halogenados, por ejemplo, acido clorhldrico o acido bromhldrico, sulfurico, nltrico, fosforico y acidos similares; o acidos organicos, tales como, por ejemplo, acetico, propanoico, hidroxiacetico, lactico, piruvico, oxalico (es decir etanodioico), malonico, succlnico (es decir, acido butanodioico), maleico, fumarico, malico (es decir, acido hidroxibutanodioico), tartarico, cltrico, metanosulfonico , etanosulfonico, bencenosulfonico, p-toluenosulfonico, ciclamico, salicllico, p-aminosalicllico, pamoico y acidos similares.

[0087] A la inversa, dichas formas de sal pueden convertirse mediante tratamiento con una base apropiada en la forma de base libre.

[0088] Los compuestos de formula (I) que contienen un proton acido tambien se pueden convertir en sus formas de metal no toxico o sales de adicion de amina mediante el tratamiento con bases organicas e inorganicas apropiadas. Las formas de sal de base apropiadas comprenden, por ejemplo, las sales de amonio, las sales de metales alcalinos y alcalinoterreos, por ejemplo, las sales de litio, sodio, potasio, magnesio, calcio y similares, sales con bases organicas, por ejemplo, las sales de benzatina, N-metil-D-glucamina, hidrabamina, y sales con aminoacidos, tales como, por ejemplo, arginina, lisina y similares.

[0089] El termino sal de adicion tal como se utiliza en el presente documento tambien comprende los solvatos que los compuestos de formula (I), as! como las sales de los mismos, son capaces de formar. Dichos solvatos son, por ejemplo, hidratos, alcoholatos y similares.

[0090] El termino "amina cuaternaria", tal como se utiliza en el presente documento, define las sales de amonio cuaternario que los compuestos de formula (I) son capaces de formar por reaction entre un nitrogeno basico de un compuesto de formula (I) y un agente de cuaternizacion apropiado, tal como, por ejemplo, un haluro de alquilo, haluro de arilo o haluro de arilalquilo opcionalmente sustituidos, por ejemplo, yoduro de metilo o yoduro de bencilo. Tambien se pueden utilizar otros reactivos con buenos grupos salientes, tales como trifluorometanosulfonatos de alquilo, metanosulfonatos de alquilo, y p-toluenosulfonatos de alquilo. Una amina cuaternaria tiene un nitrogeno cargado positivamente. Los contraiones farmaceuticamente aceptables incluyen cloro-, bromo-, yodo-, trifluoroacetato y acetato. El contraion de election puede introducirse utilizando resinas de intercambio ionico.

[0091] Las formas de N-oxido de los presentes compuestos pretenden comprender los compuestos de formula (I) en los que uno o varios atomos de nitrogeno estan oxidados al denominado N-oxido.

[0092] Se entendera que los compuestos de formula (I) pueden tener propiedades de union a metal, quelantes, de formation de complejos y por lo tanto pueden existir como complejos metalicos o quelatos metalicos. Dichos derivados metalados de los compuestos de formula (I) pretenden incluirse dentro del alcance de la presente invencion.

[0093] La presente invencion tambien se refiere al compuesto para su uso de acuerdo con el conjunto de reivindicaciones que se incluye en una composicion.

[0094] En una realization particular de dicha composicion, el compuesto de formula (I) comprendido en la composicion esta en forma de tautomero, solvato, hidrato, una sal farmaceuticamente aceptable del mismo o formando oligomeros tal como se define anteriormente.

[0095] En otra realizacion particular de dicha composicion, en el compuesto de formula (I) comprendido en la composicion R¹, R², R³son cada uno independientemente entre si H o Me, siempre que este compuesto no sea cafelna (R¹= R²= R³= CH³).

[0096] En otra realizacion particular de dicha composicion, en el compuesto de formula (I) comprendido en la composicion, R³es un enlazador tal como se define anteriormente formando compuestos mostrados a continuation:

en el que el N al que esta unido el enlazador se define como N-7.

[0097] En una realization preferida, dicha composition comprende cafelna.

[0098] La presente invention tambien se refiere a un metodo de tratamiento de la distrofia miotonica del tipo 1 en un sujeto que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapeuticamente eficaz del compuesto de formula (I) o un tautomero, solvato, hidrato, una sal farmaceuticamente aceptable del mismo o que forma oligomeros tal como se define anteriormente. Preferiblemente, el sujeto es un sujeto humano. Ademas, la presente invencion tambien se refiere a un metodo de tratamiento de la distrofia miotonica del tipo 1 en un sujeto que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion que comprende un compuesto de formula (I) o un tautomero, solvato, hidrato, una sal farmaceuticamente aceptable del mismo o que forma oligomeros tal como se define anteriormente. La frase "cantidad terapeuticamente eficaz" significa la cantidad de una sustancia tal que produce un cierto efecto local o sistemico deseado en una relation beneficio/riesgo razonable aplicable a cualquier tratamiento. La cantidad terapeuticamente eficaz de dicha sustancia variara dependiendo de la condition del sujeto y la enfermedad que se esta tratando, el peso y la edad del sujeto, la gravedad de la condicion de la enfermedad, la forma de administration y similares, que se pueden determinar facilmente por un experto en la materia. Por ejemplo, ciertas composiciones de la presente description se pueden administrar en una cantidad suficiente para producir una relacion beneficio/riesgo razonable aplicable a dicho tratamiento.

[0099] Tal como se utiliza en el presente documento, un paciente o sujeto que padecera distrofia miotoniza del tipo 1 o 2 se define como una persona que porta cualquiera de las mutaciones geneticas indicadas en la section de antecedentes, incluso cuando la enfermedad no se ha desarrollado.

[0100] En una realizacion preferida de dicha composicion, el compuesto de formula (I) se selecciona del grupo que consiste en teofilina, teobromina, aminofilina, xantina, hipoxantina, 1,7-dimetilxantina, 3-isobutil-1-metilxantina, 3-metilxantina, 3-etil-1-propilxantina, 3-alil-1-etil-8-hidroxixantina, 3,8-dimetil-2-tioxantina, 1 -etil-3-isobutilxantina,

y

[0101] En otra realization preferida, la composition para utilizar segun la presente invention se formula como una composition farmaceutica, alimento, ingrediente alimenticio o suplemento alimenticio, composition nutraceutica, aditivo para un producto natural o esta presente en el extracto de un producto natural. Preferiblemente, dicha composition esta en forma de un solido o llquido. Mas preferiblemente, dicha composition esta presente en un producto lacteo, una bebida o cereales. Incluso mas preferiblemente, dicha composition esta presente en un suplemento alimenticio o una composition nutraceutica.

[0102] Una composition de un "alimento" o "ingrediente o suplemento alimenticio" tal como se describe anteriormente, puede tener, en principio, cualquier forma adecuada para el consumo por el hombre o los animales. En una realization, la composition esta en forma de un polvo seco que puede ser suspendido, dispersado, emulsionado o disuelto en un llquido acuoso tal como agua, cafe, te, leche, yogur, caldo o zumo de frutas y bebidas alcoholicas. Para este fin, el polvo puede proporcionarse en forma de dosificacion unitaria. En una realization preferida alternativa se comprime la composition en forma de un polvo seco. Para este fin, se puede proporcionar de manera muy adecuada una composition para un suplemento alimenticio segun la invention con excipientes, tales como celulosa microcristalina (MCC) y manitol, aglutinantes, tales como hidroxipropilcelulosa (HPC), y lubricantes, tales como acido estearico u otros excipientes. Una composition de un alimento o suplemento alimenticio tal como se ha descrito anteriormente tambien se puede proporcionar en forma de una preparation llquida en la que los solidos estan suspendidos, dispersados o emulsionados en un llquido acuoso. Dicha composition se puede mezclar directamente a traves de un alimento o, por ejemplo, se pueden extruir y processar en granos u otras formas. En una realization alternativa, un alimento o suplemento alimenticio pueden tomar la forma de un alimento solido, semisolido o llquido, tal como los cereales, un pan, una barra, una galleta, un bocadillo o una bebida, o para untar, salsa, mantequilla, margarina, productos lacteos, y similares. Preferiblemente, la composition esta incluida en un producto lacteo, como por ejemplo una mantequilla o margarina, natillas, yogur, queso, para untar, bebida, o pudln u otro postre.

[0103] Los nutraceuticos se pueden definir como los productos naturales que se utilizan para complementar la dieta mediante el aumento de la ingesta dietetica total de nutrientes importantes. Esta definition incluye suplementos nutricionales, tales como vitaminas, minerales, extractos de hierbas, antioxidantes, aminoacidos, y los suplementos de protelnas. Los productos nutraceuticos encajan en la categorla de productos de nueva creation de "suplementos dieteticos" segun lo establecido por la FDA en la Ley de Suplementos Dieteticos de 1994. Esta ley definio especlficamente que los suplementos dieteticos incluyen: vitaminas, minerales, hierbas u otros productos botanicos, antioxidantes, aminoacidos, u otras sustancias dieteticas utilizadas para complementar la dieta mediante el aumento de la ingesta diaria total. Una "composition nutraceutica" se define en este documento como una composition alimenticia fortalecida con ingredientes capaces de producir beneficios para la salud. Dicha composition en el contexto de la presente invention tambien puede indicarse como alimentos para reglmenes especiales; alimentos medicos; y suplementos dieteticos. Por ejemplo, el alimento o suplemento pueden ayudar a prevenir o reducir los slntomas asociados con una condition inflamatoria, tal como las alergias (por ejemplo, alergia al polen) y similares. Como con la composition farmaceutica, la cantidad de principio activo en el alimento o aditivo alimenticio dependera de varios factores. El producto alimenticio generalmente comprendera una concentration que es suficiente para proporcionar a un consumidor una cantidad eficaz de ingrediente activo tras el consumo de forma regular (por ejemplo, diariamente) del producto alimenticio. Se entendera por los expertos en la materia que la cantidad optima y el espaciamiento de las dosis individuales para alcanzar los efectos terapeuticos de la composition farmaceutica, alimento o suplemento alimenticio descritos en este documento pueden determinarse facilmente por un experto en la materia.

[0104] Tal como se menciono anteriormente, los compuestos o composiciones descritos en este documento tambien pueden estar presentes en los productos naturales. Por ejemplo, es bien sabido que varias hierbas naturales contienen metilxantinas (teofilina, teobromina). Por consiguiente, puede ser posible utilizar un extracto del producto natural que contiene el ingrediente activo (compuesto de formula (I)) para los fines de la presente invention. El compuesto de formula (I), incluso se puede utilizar como un aditivo para productos naturales para aumentar el efecto intrlnseco de los compuestos de formula (I) ya encontrado en el producto natural.

[0105] En otra realizacion preferida, el compuesto o composition descritos en este documento se administran por via oral, rectal, nasal, topica, vaginal, parenteral, transdermica, intraperitoneal, intrapulmonar e intranasal.

[0106] En otra realizacion preferida, el compuesto o composicion segun la invention se administra a un paciente que tiene una forma no congenita de DM.

[0107] Los intervalos de dosis de las composiciones farmaceuticas se pueden ajustar segun sea necesario para el tratamiento de pacientes individuales y de acuerdo con la afeccion especlfica tratada. Se puede utilizar cualquiera de un conjunto de formulaciones farmaceuticas adecuadas como vehlculo para la administration de las composiciones de la presente invencion y quizas una variedad de vlas de administracion esten disponibles. El modo particular seleccionado dependera, naturalmente, de la formulation particular seleccionada, de la gravedad de la enfermedad, trastorno o afeccion que se esta tratando y de la dosificacion requerida para la eficacia terapeutica. Los metodos de esta invencion, en general, pueden practicarse utilizando cualquier modo de administracion que sea medicamente aceptable, lo que significa cualquier modo que produzca niveles eficaces de los compuestos activos sin causar efectos adversos cllnicamente inaceptables. Dichos modos de administracion incluyen la via oral, rectal, topica, nasal, transdermica o parenteral y similares. Por consiguiente, las formulaciones de la invencion incluyen aquellas adecuadas para la administracion oral, rectal, topica, bucal, sublingual, parenteral (por ejemplo, subcutanea, intramuscular, intradermica, por inhalation o intravenosa) y transdermica, aunque la via mas adecuada en cualquier caso dado dependera de la naturaleza y gravedad de la afeccion que se este tratando y de la naturaleza del producto activo particular utilizado.

[0108] Las formulaciones adecuadas para la administracion oral pueden presentarse en unidades discretas, tales como capsulas, plldoras, pastilles para chupar, gotas, o comprimidos, conteniendo cada uno una cantidad predeterminada del compuesto activo; como un polvo o granulos; como una solution o una suspension en un llquido acuoso o no acuoso; o como una emulsion aceite-en-agua o agua-en-aceite. Dichas formulaciones se pueden preparar mediante cualquier metodo adecuado de farmacia que incluye la etapa asociar el compuesto activo y un portador adecuado (que puede contener uno o mas ingredientes accesorios tal como se senalo anteriormente).

[0109] En general, las formulaciones de la invencion se preparan mezclando uniforme e Intima del compuesto activo con un portador llquido o solido finamente dividido, o ambos, y a continuation, si es necesario, conformando la mezcla resultante. Por ejemplo, un comprimido puede prepararse mediante compresion o moldeo de un polvo o granulos que contienen el compuesto activo, opcionalmente con uno o mas ingredientes accesorios. Los comprimidos comprimides se pueden preparar comprimiendo, en una maquina adecuada, el compuesto en una forma de fluido libre, tal como un polvo o granulos opcionalmente mezclados con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, y/o agente(s) tensioactivo/dispersante. Los comprimidos moldeados pueden fabricarse moldeando, en una maquina adecuada, el compuesto en polvo humedecido con un aglutinante llquido inerte.

[0110] Las formulaciones de la presente invencion adecuadas para administracion parenteral comprenden convenientemente preparaciones acuosas esteriles del compuesto activo, cuyas preparaciones son preferiblemente isotonicas con la sangre del receptor pretendido. Estas preparaciones pueden administrarse mediante inyeccion subcutanea, intravenosa, intramuscular, inhalacion o inyeccion intradermica. Dichas preparaciones pueden prepararse convenientemente mezclando el compuesto con agua o un tampon de glicina y haciendo que la solucion resultante sea esteril e isotonica con la sangre.

[0111] Las formulaciones de las mezclas de la invencion son particularmente adecuadas para la aplicacion topica para la piel y preferiblemente toman la forma de un unguento, crema, locion, pasta, gel, pulverizador, aerosol, o aceite. Los portadores que pueden usarse incluyen vaselina, lanolina, polietilenglicoles, alcoholes, potenciadores transdermicos, y combinaciones de dos o mas de los mismos.

[0112] Las formulaciones adecuadas para administracion transdermica se pueden presentar tambien como vendajes medicados o parches discretos adaptados para permanecer en contacto Intimo con la epidermis del receptor durante un perlodo prolongado de tiempo. Las formulaciones adecuadas para administracion transdermica pueden suministrarse tambien mediante iontoforesis (paso de una pequena corriente electrica para "inyectar" iones electricamente cargados en la piel; tambien denominada administracion electromotriz del farmaco (EMDA)) a traves de la piel.

[0113] La presente invencion tambien se refiere a nuevos compuestos que son dlmeros de los compuestos de formula (I), opcionlamente en forma de tautomero, solvato, hidrato o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo tal como se define anteriormente. Estos compuestos estan representados por la siguiente formula:

y

[0114] El proceso para obtener estos compuestos se describe en la seccion de ejemplos a continuacion.

[0115] La presente invencion se ilustrara adicionalmente a continuacion mediante la referencia a los siguientes ejemplos.

EJEMPLOS

Ejemplo 1: Preparacion del compuesto A (Teofilina-C7): 7,7'-(heptano-1,7-diM)bis(1,3-dimetiMH-purina-2,6(3H,7H)-diona, CAS nr [156234-12-7])

[0116]

[0117] Bajo atmosfera inerte, a una solucion agitada de NaH (62 mg, 1,55 mmol) en 1 ml de DMF anhidro a 0°C, se anadio una solucion de teofilina (140 mg, 0,775 mmol) en 3 ml de DMF anhidro. Despues de 1 h a 0°C, se anadio 1,7-dibromoheptano (65 ml, 0,388 mmol) a la mezcla de reaccion. Esta mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche y una hora adicional a 65°C, y a continuacion se extrajo completamente el disolvente. El producto en bruto se purifico por cromatografla sobre SiO2 usando mezclas en gradiente de hexano/AcOEt y AcOEt/MeOH como eluyente, obteniendose 0,070 g (40%) del producto deseado A.

1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe): 58.06 (s, 2 H), 4.22 (t, J=7.0 Hz, 4 H), 3.42 (s, 6 H), 3.22 (s, 6 H), 1.75 (br. s., 4 H), 1.22 (br. s., 6 H) ppm.

MS (ESI (+)): m/z = 479,2 [M+Na]+

MS (ESI (-): m/z = 455,0 [M-H]-

Ejemplo 2: Preparacion del compuesto B (Teofilina-C9): 7,7'-(nonano-1,9-diM)bis(1,3-dimetM-1H-purma-2,6(3H,7H)-diona, CAS nr [156234-13-8])

[0118]

[0119] Bajo atmosfera inerte, a una solucion agitada de NaH (140 mg, 3,45 mmol) en 2 ml de DMF anhidro a 0°C, se anadio una solucion de teofilina (378 mg, 2,098 mmol) en 10 ml de DMF anhidro. Despues de 2 h a temperatura ambiente, se anadio lentamente 1,9-dibromopentano (142 ml, 1,41 mmol) a la mezcla de reaccion. Esta mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche, y a continuacion se extrajo completamente el disolvente. El producto en bruto se purifico por cromatografla sobre SiO2 usando mezclas en gradiente de AcOEt/MeOH como eluyente, obteniendose 0,108 g (32%) del producto deseado B.

1H RMN (400 MHz, DMSO-da): 58.07 (s, 2 H), 4.22 (t, J=7.0 Hz, 1 H), 3.42 (s, 6 H), 3.22 (s, 6 H), 1.69 - 1.83 (m, 4 H), 1.24 (br. s., 10 H) ppm.

MS (ESI (+)): m/z = 507,2 [M+Na]+

MS (ESI (-): m/z = 483,0 [M-H]-

Ejemplo 3: Preparacion del compuesto C (Teofilina-Bz): 7,7'-(1,4-fenilenbis(metNen))bis(1,3-dimetiMH-purma-2,6(3H,7H)-diona, CAS nr [865099-82-7])

[0120]

[0121] Bajo atmosfera inerte, a una solucion agitada de NaH (152 mg, 3,788 mmol) en 2 ml de DMF anhidro a 0°C, se anadio una solucion de teofilina (410 mg, 2,273 mmol) en 10 ml de DMF anhidro. Despues de 2 h a temperatura ambiente, se anadio lentamente dibromuro de p-xilileno (200 mg, 0,758 mmol) a la mezcla de reaccion. Esta mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche, y a continuacion se extrajo completamente el disolvente. El producto en bruto se purifico por cromatografla sobre SiO2 usando mezclas en gradiente de AcOEt/MeOH como eluyente, obteniendose el producto deseado C.

MS (ESI (+)): m/z = 485,2 [M+Na]+

Ejemplo 4: Preparacion del compuesto D (Teofilina-PG): 7,7'-((propano-1,3-diilbis(oxi))bis(etano-2,1-diN))bis(1,3-dimetil-1H-purina-2,6(3H,7H)-diona)

[0122]

[0123] Etapa 1: A una solucion agitada de 3,7-dioxa-1,9-nonanodiol (0,25 g, 1,523 mmol) en CH²CI²anhidro a 0°C, se anadio 0,63 ml de Et³N anhidro (4,57 mmol, 3 eq). A esta solucion, se anadio MsCI (3,65 mmol, 2,4 eq) y la mezcla se agito durante al menos 2 h a 0°C. A continuacion, el producto bruto se evaporo a sequedad, y se purifico cromatograficamente, obteniendose 316 mg (65%) del intermedio deseado (propano-1,3-diilbis(oxi))bis(etano-2,1-diilo)dimetanosulfonato.

[0124] Etapa 2: Bajo atmosfera inerte, a una solucion agitada de NaH (197 mg, 4,933 mmol) en DMF anhidro a 0°C, se anadio una solucion de teofilina (533 mg, 2,96 mmol) en 20 ml de DMF anhidro. Despues de 1 h a temperatura ambiente, se anadio (propano-1,3-diilbis(oxi))bis(etano-2,1-diilo)dimetanosulfonato de la etapa 1 (316 mg, 0,987 mmol) a la mezcla de reaccion. Esta mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche, y a continuacion a 50°C durante al menos 24 h. La suspension se filtro, y el solido restante se lavo con NaOH 1 N y AcOEt. Despues de filtrar, el solido recuperado se identifica como el producto deseado D.

MS (ESI (+)): m/z = 511,1 [M+Na]⁺

Ejemplo 5: Preparacion del compuesto E (Teofilina-EG): 7,7'-((etano-1,2-diMbis(oxi))bis(etano-2,1-diN))bis(1,3-dimetil-1 H-purina-2,6(3H,7H)-diona)

[0125]

[0126] Bajo atmosfera inerte, a una solucion agitada de NaH (267 mg, 6,682 mmol) en DMF anhidro a 0°C, se anadio una solucion de teofilina (722 mg, 4,01 mmol) en 27 ml de DMF anhidro. Despues de 1 h a temperatura ambiente, se anadio 1,2-bis(2-cloroetoxi)etano (250 mg, 1,336 mmol) a la mezcla de reaccion. Esta mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche, y a continuacion a 50°C durante al menos 4 dlas. La suspension se filtro, y el solido restante se lavo con NaOH 1 N y AcOEt, obteniendose 0,188 g (30%) del producto deseado E.

MS (ESI (+)): m/z = 497,0 [M+Na]+

Ejemplo 6: Preparacion del compuesto F (Teofilina-AM): N,N'-(propano-1,3-diil)bis(2-(1,3-dimetM-2,6-dioxo-2,3-dihidro-1H-purin-7(6H)-il)acetamida)

[0127]

[0128] Etapa 1: Bajo atmosfera inerte, se anade 1,3-diaminopropano (0,25 g, 3,373 mmol) a una solucion agitada de piridina (0,587 g, 7,42 mmol) en acetonitrilo anhidro (3 ml) a temperatura ambiente. A continuacion, se anadio lentamente 0,60 ml de cloruro de cloroacetilo (0,838 mmol, 7,42 mmol) a 0°C. La mezcla se agito durante al menos 2 h. A continuacion, el producto en bruto se evaporo a sequedad y se extrajo con AcOEt, obteniendose 440 mg (57%) del compuesto intermedio deseado N,N'-(propano-1,3-diil)bis(2-cloroacetamida).

[0129] Etapa 2: Bajo atmosfera inerte, a una solucion agitada de NaH (248 mg, 6,20 mmol) en DMF anhidro a 0°C, se anadio una solucion de teofilina (1,05 g, 5,813 mmol) en DMF anhidro. Despues de 2 h a temperatura ambiente, se anadio N,N'-(propano-1,3-diil)bis(2-cloroacetamida) de la etapa 1 (440 mg, 1,938 mmol) a la mezcla de reaccion. Esta mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche, y a continuacion a 50°C durante al menos 4 h. Despues de evaporation del disolvente, el solido restante se lavo con NaOH 1 N y AcOEt, obteniendose 542 mg (54%) del producto deseado F.

MS (ESI (+)): m/z = 537,1 [M+Na]+

Tabla 1

Tabla 2

Las xantinas se unen a expansiones CUG

[0130] Esto se evaluo en experimentos de espectroscopla de polarization de fluorescencia. En estas pruebas, cuando la luz polarizada excita un fluoroforo conjugado a una molecula pequena, se somete a la difusion de rotation mas rapido que el tiempo requerido para la emision de luz se produce, lo que resulta en una disposition al azar de la molecula en el tiempo de emision de fluorescencia (despolarizacion). Sin embargo, la rotation de la molecula se vuelve mas lento dependiendo de la viscosidad del medio o el volumen molecular, el aumento de la polarization de la luz emitida. Por lo tanto, mediante la medicion de cambios en la polarization de un ARN con 23 repeticiones CUG conjugados con la carboxifluorescelna fluoroforo, FAM (CUG) 23, podemos considerar si una molecula candidato se une al ARN. En este ensayo se utilizo como control positivo, pentamidina (Warf et al. 2009), un compuesto que previamente habla mostrado unirse a repeticiones CUG, y como control negativo un compuesto preevaluado para el cual se conocla su incapacidad para unirse a CUGs.

[0131] ARN CUG fluorescente (carboxifluorescelna marcado con (6-FAM)) se incubo con concentraciones crecientes de los compuestos ejemplo. Mientras que las moleculas de RNA 6-FAM-CUG no presentan fluorescencia en nigun eje particular de polarization, la union a una molecula ralentiza el movimiento de rotation de la molecula y aumenta los valores de polarization. Mediante la union al ARN CUG, los compuestos tienen la capacidad de modificar la toxicidad de repeticiones CUG por una serie de mecanismos que incluyen la alteration de la conformation de las estructuras secundarias que estos RNAs tienen en solution o inhibir competitivamente el secuestro de protelnas MBNL.

[0132] Para un compuesto dado, la polarization es sensible a la concentration.

[0133] Vease figura 1 y figura 2.

Materiales y Metodos

Ensayos de polarizacion de fluorescencia

[0134] Se incubo ARN CUG marcado con carboxifluorescelna (6-FAM-CUG 23) a 6 nM con los compuestos a diferentes concentraciones en tampon de union (50 mM Tris-HCl pH 7,0, NaCl 250 mM, 50 pM ZnCl 2, 10% de glicerol, DTT 1 mM) en hielo durante 20 min en la oscuridad. La polarizacion se midio en un lector de Multilabel enVision® utilizando como FP480 filtro de excitation y como FP535 filtro de emision.

Las xantinas no son toxicas para las celulas

[0135] Para evaluar la toxicidad de compuestos en cultivo celulares, se anadieron diferentes concentraciones de compuestos (de 0,1 a 100 microM) a los medios estandar en fibroblastos DM1 y se estudio la supervivencia utilizando el protocolo de ensayo acuoso no radiactivo de proliferacion celular CellTiter 96; ensayo colorimetrico que determina celulas viables.

[0136] Dado que el porcentaje de supervivencia fue siempre superior al 50% en comparacion con celulas no tratadas y por encima de 75% en comparacion con celulas tratadas con DMSO, se continuaron usando todas las concentraciones en los siguientes ensayos de actividad, ya que su toxicidad era muy baja.

[0137] Vease figura 3.

Las xantinas reducen el numero de foci ribonucleares por celula

[0138] Su reduccion se suele utilizar tlpicamente como evidencia de la actividad deseada contra la distrofia miotonica en modelos de cultivo celular porque las protelnas MBNL son secuestradas en foci ribonucleares. Dado que las protelnas MBNL son limitantes en las distrofias miotonicas se espera que un incremento de MBNLs libre sea terapeutico.

• Evidencias a partir de mioblastos humanos

[0139] Vease figura 4.

Materiales y Metodos

Condiciones de cultivo celular

[0140] El modelo celular de la enfermedad (proporcionado por el laboratorio de D. Furling, Institute of Myologie, Paris) consistio en fibroblastos de piel inmortalizados (hTERT) normales y con DM1 (1300 repeticiones CTG) que expresan MyoD condicional. Las celulas de fibroblastos se cultivaron en medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) con 4,5 g/l de glucosa, 1% de penicilina y estreptomicina (P/S) y suero bovino fetal al 10% (fBs ) (Sigma). Los fibroblastos se transdiferenciaran en mioblastos mediante la induccion de la expresion de MyoD. Las celulas se sembraron en medio de diferenciacion muscular (MDM) preparado con DMEM, 4,5 g/l de glucosa con 1% de P/S, 2% de suero de caballo, 1% de apo-transferrina (10 mg/ml), 0,1% de insulina (10 mg/ml) y 0,02% de doxiciclina (10 mg/ml) durante 48 h. Para el analisis de compuestos, los fibroblastos se dividieron en partes allcuotas en placas de 24 pocillos con 3,5 x 10⁴celulas por pocillo y se diferenciaron como antes. Los compuestos se anadieron a una concentracion final de 37,5 pM, 75 pM y 125 pM en medio MDM y las celulas se incubaron durante 48 h.

Deteccion de foci

[0141] Hibridacion in situ con ARN de repetition CUG. Las celulas se fijaron en paraformaldehldo al 4% (PFA) durante 10 min a temperatura ambiente, seguido de varios lavados en PBS 1x. Las celulas fijadas se incubaron en tampon de pre-hibridacion (SSC 2x, 30% de formamida desionizada) durante 10 min a temperatura ambiente, se hibridaron con una sonda marcada con Cy3-(CAG)⁷-Cy3 diluida 1:100 en tampon de hibridacion (formamida al 40%, 2x SSC, BSA al 0,2%, sulfato de dextrano al 10%, 2 mM de complejo de vanadilo, 10% de tRNA (10 mg/ml), esperma de arenque al 10%) durante 2 horas a 37°C, se lavaron dos veces en tampon de prehibridacion durante 15 min a 45°C, se lavaron en PBS 1x durante 15 min a temperatura ambiente y se montaron en Vectashield (Vector) con DAPI 2 pg/ml. Las imagenes fueron tomadas usando un microscopio de fluorescencia Leica DM2500 y los foci se contaron manualmente a partir de al menos 50 celulas por compuesto.

Las xantinas aumentan la protema Muscleblind

• Cuantificacion de la expresion Mbl o localizacion

[0142] Se sembraron fibroblastos inmortalizadas de DM1 transdiferenciadas en una placa de 94 pocillos (8000 celulas / por pocillo) en medio estandar. Para lograr la diferenciacion de los fibroblastos a mioblastos, se indujo la expresion de MyoD cambiando el medio estandar a medio de diferenciacion con doxociclina y sin suero. 24h despues de la induccion, los compuestos se anadieron las celulas a diferentes concentraciones, manteniendo siempre la concentracion del disolvente (DMSO) al 1% en el medio. Cada concentracion del compuesto se probo en tres pocillos diferentes. 24 horas despues de la adicion de los compuestos, las celulas se fijaron con paraformaldehldo al 4% en PBS y la deteccion de Mbl se realizo usando anticuerpo monoclonal anti-MBNLl con contratincion con Hoechst para detectar los nucleos. El lector de placas confocal Incell 200 se uso para la deteccion y cuantificacion de los parametros selccionados y los datos se analizaran mediante el software Graphpad para comparacion estadlstica de los resultados.

[0143] Vease la figura 6 y la figura 7

Cuantificacion de foci

[0144] Se sembraron fibroblastos de DM1 en una placa de 94 pocillos (8000 celulas / por pocillo) en medio estandar un dla antes de la adicion de los compuestos a los medios. Los compuestos se anadieron a las celulas a diferentes concentraciones, manteniendo siempre la concentracion del disolvente (DMSO) al 1% en el medio. Cada concentration del compuesto se probo en tres pocillos diferentes. 24 horas despues de la adicion de los compuestos, las celulas se fijaron con paraformaldehldo al 4% en PBS y FISH para detectar ARN CUG se realizo utilizando una sonda (CAG) 23 marcada con Cy3. Las celulas se contratineron con Hoechst para detectar los nucleos. El lector de placas confocal Incell 200 se uso para la detection y cuantificacion de los parametros selccionados y los datos se analizaran mediante el software Graphpad para comparacion estadlstica de los resultados.

[0145] Vease figura 5.

[0146] Tomados en su conjunto, estos experimentos muestran que las xantinas tienen la capacidad de reducir el numero de foci ribonucleares por celula. Tal interferencia en la formation, la estabilidad o el turnover de foci probablemente deriva de su afinidad por las repeticiones CUG del ARN. Debido a que los foci son una senal tlpica de toxicidad de ARN, su reduction es compatible con el uso terapeutico de xantinas en la distrofia miotonica. Mas aun, las xantinas aumentan MBNL1 en comparacion con la pentamidina como control positivo. Debido a que existe una amplia evidencia de que la actividad de MBNL1 esta limitada en enfermedades DM1 y DM2 debido a secuestro por expansiones de repetition CUG y CCUG, aquellas estrategias destinadas a aumentar la cantidad de MBNL1 libre son terapeuticas en modelos de experimentation celulares y animales. Por lo tanto, las xantinas se proponen para ser utilizadas en el tratamiento de DM1 y DM2 en pacientes.

Las composiciones que comprenden al menos una xantina o derivado de las mismas aumentan MBNL1 en mioblastos humanos de DM1

[0147] Para investigar si las composiciones que comprenden al menos una xantina tenlan un efecto en los niveles de expresion de MBNL1 en celulas humanas, se inmunodetecto MBNL1 en mioblastos normales y en mioblastos control de DM1, y en mioblastos de DM1 cultivados en un rango de combinaciones que comprenden al menos un compuesto de formula (I) (vease la Tabla 3). La expresion de MBNL1 aumenta en el citoplasma y en el nucleo de la celula en comparacion con los mioblastos de DM1 expuestos solamente a DMSO (utilizado como disolvente y control negativo).

Tabla 3

Claims

REIVINDICACIONES

1. Compuesto de formula (I)

en el que:

R1 es hidrogeno o una cadena alquilo opcionalmente sustituida;

X es O;

Y es O;

Z es hidrogeno; una cadena alquilo opcionalmente sustituida; o OH;

o un derivado de dicho compuesto de formula (I) representado por la formula:

siempre que este compuesto de formula (I) no sea cafelna,

2. Compuesto para utilizar, segun la reivindicacion 1, que esta en forma de tautomero, solvato, hidrato, una sal farmaceuticamente aceptable del mismo o formando oligomeros.

3. Compuesto para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en el que R1, R2, R3 son cada uno independientemente entre si, H o Me, siempre que este compuesto no sea cafelna.

4. Compuesto para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que R3 es un enlazador tal como se define segun la reivindicacion 1 o 2, para formar compuestos con la siguiente estructura:

en el que el N al que esta unido el enlazador se define como N-7.

5. Compuesto para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, seleccionado del grupo que consiste en teofilina, teobromina, aminofilina, xantina, hipoxantina, 1,7-dimetilxantina, 3-isobutil-1-metilxantina, 3-metilxantina, 3-etil-1-propilxantina, 3-alil-1 -etil-8-hidroxixantina, 3,8-dimetil-2-tioxantina, 1 -etil-3-isobutilxantina,

y

6. Compuesto para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que esta presente en una composicion.

7. Compuesto para utilizar, segun la reivindicacion 6, en el que dicho compuesto esta presente en una composicion que ademas comprende cafelna.

8. Compuesto para utilizar, segun la reivindicacion 6 o la reivindicacion 7, donde dicho compuesto esta presente en una composition que se formula como una composition farmaceutica, alimento, ingrediente alimenticio o suplemento alimenticio, composicion nutraceutica, aditivo para un producto natural o esta presente en el extracto de un producto natural.

9. Compuesto para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, donde dicho compuesto esta presente en una composicion en forma de solido o llquido.

10. Compuesto para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, donde dicho compuesto esta presente en >osicion que esta presente en un producto lacteo, una bebida, un producto de chocolate o cereales.

11. Compuesto para utilizar segun la reivindicacion 8, donde dicho compuesto esta presente en una composicion en un suplemento alimenticio o composicion nutraceutica.

12. Compuesto para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, que se administra por via oral, rectal, nasal, topica, vaginal, parenteral, transdermica, intraperitoneal, intrapulmonar e intranasal.

13. Compuesto para utilizar, segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, donde dicho compuesto o dicho compuesto presente en una composicion, se administra a un individuo que padece la forma no congenita de DM.

14. Compuesto de formula:

o

15. Compuesto segun la reivindicacion 14, en el que el compuesto esta en forma de tautomero, solvato, hidrato, una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.