ES2638713B1 - Composición atrayente de la especie diocalandra frumenti, métodos para el seguimiento, y/o control de plaga, y/o la prevención de daños en palmeras - Google Patents

Composición atrayente de la especie diocalandra frumenti, métodos para el seguimiento, y/o control de plaga, y/o la prevención de daños en palmeras Download PDF

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Abstract

Composición atrayente de la especie Diocalandra frumenti, métodos para el seguimiento, y/o control de la plaga, y/o la prevención de daños en palmeras.#La presente invención describe una composición para atraer insectos de la especie Diocalandra frumenti, y que comprende una cantidad eficaz de multistriatin (5-etil-2,4-dimetil-6,8-dioxabiciclo[3.2.1]octano) y que se puede formular sólo o en combinación con otros ingredientes adicionales que se detallan en la presente solicitud; el método para realizar el seguimiento de las poblaciones de insectos de la especie Diocalandra frumenti; el método para controlar las plagas de insectos de la especie Diocalandra frumenti; y el método para prevenir el daño en palmeras producido por esta especie.

Description

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han demostrado que la mezcla diasteroisomérica anterior muestra un gran efecto de atracción para la especie Diocalandra frumenti. Este resultado es sorprendente para cualquier experto en la materia, dado el número de formas esteroisoméricas obtenidas en la síntesis realizada. Es más, en la presente invención la propia mezcla de esteroisómeros resulta atrayente, lo cual no es evidente para el experto en la materia, y sí supone una gran ventaja económica tanto desde el punto de vista industrial (síntesis química) como comercial.
En otra realización preferida de esta invención, la composición atrayente puede comprender el semioquímico multistriatin, preferentemente una cantidad efectiva de una mezcla de cuatro pares de enantiómeros (α, ȕ, Ȗ y β), como atrayente de insectos de la especie Diocalandra frumenti, en combinación con otros componentes adicionales capaces de modificar las propiedades físicas de la composición atrayente y/o proteger la composición de las condiciones climáticas. Ejemplo de componentes adicionales que pueden incorporarse a la composición atrayente encontramos, entre otros, agentes antioxidantes, protectores de radiación ultravioleta (UV), y una combinación cualquiera de los componentes anteriores, siempre que ninguno de los compuestos adicionales incluidos en la composición atrayente cause repelencia de la especie Diocalandra frumenti.
La composición atrayente puede incorporar adicionalmente uno o varios agentes antioxidantes para retardar o prevenir la oxidación de la composición atrayente y/o uno
o más de sus componentes. Preferentemente, agentes antioxidantes que pueden estar incluidos en la composición se seleccionan entre el ácido ascórbico, ácido eritórbico, ascorbato sódico, ascorbato cálcico, butilhidroxianisol (BHA), butilhidroxitolueno (BHT), dióxido de azufre, eritorbato de sodio, estearato de ascorbilo, galato de propilo, galato de octilo, galato de dodecilo, hidrosulfito de sodio, lecticina, palmitato de ascorbilo, tertbutilhidroquinona (TBHQ) y tocoferoles naturales y/o sintéticos y una combinación cualquiera de los antioxidantes anteriores. Incluso más preferentemente ácido ascórbico, BHT y TBHQ y una combinación cualquiera de los anteriores.
En la composición atrayente el agente antioxidante puede estar comprendido entre una proporción 1:1000 y 1:20 en peso con respecto al contenido en peso de multistriatin. Preferentemente el agente antioxidante se encuentra en una proporción
1:100 en peso con respecto al contenido en peso de multistriatin.
La composición atrayente también puede comprender uno o varios protectores de radiación UV. Estos protectores de la radiación UV tienen la finalidad de proteger y preservar la composición atrayente y/o uno o más de sus componentes de la degradación solar. Protectores de radiación UV pueden ser derivados del PABA, salicilatos, cinamatos, benzofenonas, bencimidazoles, antralinatos, derivados terpénicos, óxidos inorgánicos y una combinación cualquiera de los protectores UV anteriores. Preferentemente se incluyen los siguientes protectores UV como ejemplos no limitantes: ácido 4-aminobenzoico, 4-hidroxibenzofenona, 2-etilhexil salicilato, 2ethylhexil trans-4-metoxicinamato, etilhexil 2-ciano-3,3-difenilacrilato, óxido de titanio y/o óxido de zinc y una combinación cualquiera de los protectores UV anteriores. Más preferentemente la composición atrayente de la presente invención comprende 2etilhexil salicilato, basado en estudios experimentales de envejecimiento acelerado mediante irradiación UV, que demuestran que la composición atrayente tiene más durabilidad si contienen este compuesto en comparación con otros fotoprotectores en un mismo periodo de tiempo.
En la composición atrayente el protector de la radiación UV puede estar comprendido entre una proporción 1:200 y 1:20 en peso con respecto al contenido en peso de multistriatin. Preferentemente el protector de la radiación UV se encuentra en una proporción 1:50 en peso con respecto al contenido en peso de multistriatin.
En otra realización de esta invención, la composición comprende multistriatin y un agente de control de insectos.
Por “agente de control de insectos”, la presente invención se refiere a un dispositivo
físico o a una o varias sustancias químicas que provoquen la muerte del insecto. Las sustancias químicas se refieren preferentemente a insecticidas, más preferentemente seleccionados del grupo de los organoclorados, organofosforados, carbamatos, piretroides, neonicotinoides, ácidos tetrámicos, biorracionales y una combinación cualquiera de los insecticidas anteriores.
Adicionalmente, la presente invención se refiere a la combinación de multistriatin con un agente de control de insectos, donde ambos compuestos se sitúan en un mismo objeto, zona o área de atracción.
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En otra realización preferida, la presente invención además se refiere a un método para prevenir los daños producidos en las palmeras por las poblaciones de Diocalandra frumenti, donde el método comprende utilizar multistriatin, preferentemente la composición atrayente descrita en la invención, en combinación con un agente de control de insectos. En este caso, el método de prevención comprende atraer y matar a los insectos de esta especie mediante la utilización de multistriatin en combinación con un agente de control de insectos, que de utilizarse la composición atrayente de la invención, puede encontrarse contenido en la propia composición o puede aplicarse por separado, siempre que se encuentren en una misma área, zona u objeto hacia donde se pretende atraer la plaga.
En los métodos de seguimiento, control o prevención de daños que se describen en la presente solicitud de patente, multistriatin, preferentemente la composición atrayente que comprende multistriatin, puede utilizarse en combinación con uno o más COVs, preferentemente del listado mencionado anteriormente.
Preferentemente, estos métodos comprenden la utilización de multistriatin, preferentemente la composición que comprende multistriatin, con una kairomona de forma que el multistriatin y la kairomona aunque no están presentes en una misma composición, si se encuentran en una misma área, zona u objeto donde se pretende atraer a las hembras y machos de la especie de Diocalandra frumenti.
En los métodos de seguimiento, control o prevención de daños que se describe en la presente solicitud de patente, la composición atrayente que comprende multistriatin se puede utilizar, preferentemente, en combinación con una o más kairomonas, ya que se ha observado un efecto sorprendente en la capacidad de atracción de los gorgojos con respecto a la mera utilización de kairomonas tal y como se ilustra en el ejemplo 3 de la presente solicitud.
Breve descripción de las Figuras
Figura 1: En la figura 1 se representan Detección de multistriatin en muestras de volátiles de individuos de Diocalandra frumenti recolectados en campo. Se muestran:
(A) multistriatin sintético mezcla de isómeros, (B) muestra de volátiles de machos, (C) muestra de volátiles de hembras. Se observa que el pico con tiempo de retención
18.98 min detectado en las muestras de machos (B), no aparece en las muestras de hembras (C), y que coincide con la muestra sintética de multistriatin (A).
Figura 2: En la figura 2 se representan la respuesta de Diocalandra frumenti a multistriatin en olfatómetro Y de doble elección en condiciones de laboratorio: (A) hembras y (B) machos. Porcentajes respecto al total de individuos que mostraron actividad. El control negativo fue el disolvente pentano en todos los casos. Para cada dosis, la presencia de asterisco indica la existencia de diferencias significativas (test χ2, P < 0.05).
Figura 3: En la figura 3 se representa la Media (± error estándar) del número de individuos de Diocalandra frumenti (machos, hembras e individuos totales) capturados por trampa y día en el ensayo de respuesta de atracción en campo a multistriatin. Barras con la misma letra para cada sexo no difieren significativamente (ANOVA, LSD test at P > 0.05).
Ejemplos
La invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos, los cuales no pretenden ser limitativos en su alcance.
Ejemplo 1: Detección del multistriatin en muestras procedentes de machos de Diocalandra frumenti mediante técnicas de captación de volátiles
Metodología Para la captación de volátiles procedentes de Diocalandra frumenti se emplearon individuos salvajes procedentes de ejemplares infestados de palmeras canarias (Phoenix canariensis). Para ello, se instalaron en Gran Canaria diversas trampas cebadas con caña de azúcar y los individuos capturados se llevaron al laboratorio de la Unidad de Entomología del Departamento de protección Vegetal en el Instituto Canario de Investigaciones Agrarias (ICIA). Este laboratorio ha sido habilitado para trabajar únicamente con D. frumenti para evitar contaminaciones con aromas externos, así como permitir la regulación de condiciones de oscuridad y temperatura requeridas en los ensayos. El laboratorio se mantiene en oscuridad, a 23 ± 2ºC y 70-80 % de humedad relativa.
Una vez recibidos en el ICIA, los insectos son mantenidos hasta su uso en la cámara de cría habilitada para D. frumenti en el interior de contenedores de plástico sobre la misma caña con la cual fueron capturados, a 22 ± 2 ºC de temperatura, con una humedad del 80 % y en oscuridad total.
La toma de muestra de los volátiles emitidos por los insectos se realizó mediante la aireación de los individuos y captación de los efluvios en cartuchos de vidrio rellenos con matrices adsorbentes, tales como polidimetilsiloxano/divinilbenceno y Porapak-Q. Se colocaron grupos de individuos de cada sexo en recipientes de vidrio, por los que se hizo pasar una corriente de aire filtrado de 0.2 l/min. Los cartuchos con los volátiles captados en cada sesión se enviaban al laboratorio del Centro de Ecología Química de la Universitat Politècnica de València (UPV). Los volátiles se analizaron mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-EM). El análisis cromatográfico se realizó en un equipo Clarus 600 GC-MS (PerkinElmer), equipado con una columna capilar ZB-5MS (30 m × 0.25 mm i.d. × 0.25 μm; Phenomenex) y el siguiente programa de temperaturas: 40 °C durante 2 min; 5 °C/min hasta 180 °C y después aumentar hasta 280 °C a 10 °C/min, manteniendo a 280 °C durante 1 min. Se empleó helio como gas portador con un flujo de 1 mL/min. La detección se realizó en modo de impacto electrónico (70 eV) y la temperatura de la fuente de ionización fue de 180ºC. El multistriatin se identificó en primer lugar mediante la comparación de su espectro con el disponible en la base de datos de espectros de masas NIST\EPA\NIH mass Spectral Library (version 2.0, build 4/2005) y, posteriormente, con el de una muestra real sintetizada por Ecología y Protección Agrícola (EPA).
Resultado
El análisis cromatográfico reveló un pico que aparecía en las muestras de volátiles emitidos por los machos y no en las de las hembras, como se puede observar en la Figura 1. Este pico correspondía con el multistriatin, identificado tentativamente a partir de la coincidencia con la biblioteca de espectros y confirmado posteriormente mediante muestra sintética.
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opuesto del olfatómetro y se pone en funcionamiento una bomba, de tal forma que el insecto comienza a recibir el flujo de aire filtrado procedente de ambos brazos (0.8 l/min) que arrastra los estímulos ensayados. Entonces, se registra el comportamiento de los individuos hacia las fuentes de estímulo durante 10 min. Una vez finalizado el 5 ensayo el insecto es desechado, de tal forma que cada insecto sea expuesto a los estímulos olfativos una única vez. Cada 5 insectos el olfatómetro es rotado de posición para evitar posibles estímulos dejados por los insectos en su interior. Los ensayos se realizaron con al menos 20 individuos de cada sexo para cada una de las dosis de multistriatin evaluadas (0,001 -0,1 – 10 – 100 µg). Los datos obtenidos se analizaron
10 mediante prueba de Chi cuadrado (χ2 test, P < 0.05).
Resultado
Los resultados que se muestran en la Tabla 1 indican que existe una respuesta significativa tanto de las hembras como de los machos al multistriatin, aunque esta
15 respuesta fue dependiente de la dosis como se muestra en la Figura 2. Las hembras mostraron significativamente preferencia por el multistriatin con las dosis ensayadas de 10 y 0.1 µg (Figura 2A). Sin embargo, los machos tuvieron una respuesta más restringida y solo respondieron significativamente cuando la dosis de multistriatin fue de 10 µg (Figura 2B).
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Ejemplo 3: Ensayos de respuesta de atracción en campo
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Metodología La respuesta de los individuos de Diocalandra frumenti al multistriatin se evaluó en un ensayo de campo realizado en la zona de Campo Internacional Mas Palomas, situado en la localidad de San Bartolomé de Tirajana (Gran Canaria), durante el mes de
30 Febrero de 2016. Se instalaron 3 bloques de 3 trampas en alineaciones de palmeras Phoenix canariensis, siguiendo un sistema de bloques al azar. Cada uno de los bloques incluía: (A) una trampa cebada sólo con caña de azúcar, (B) una trampa cebada con caña de azúcar y un difusor cargado con 1 mg de multistriatin, y (C) una trampa cebada con caña de azúcar y un difusor cargado con 5 mg de multistriatin. Dentro de cada bloque las trampas se situaron a una distancia de 20 m entre sí, mientras que la distancia entre bloques fue de al menos 30 m. Todas las trampas se colocaron encajadas entre el primer y el segundo anillo de hojas, a unos 4 m de altura.
Las trampas utilizadas fueron tipo “Funnel” modificada con agujeros laterales. Todas
las trampas contenían 500 ml de agua y 4 trozos de caña de azúcar resultantes del corte transversal y longitudinal de una pieza de caña de 30 cm. Los difusores cargados con multistriatin fueron de tipo rubber septa y se colocaron colgados de la invaginación superior en el interior de la trampa.
Las capturas obtenidas en cada una de las trampas se revisaron semanalmente y los individuos capturados se llevaron a laboratorio para ser sexados y contados. Cada semana se realizó la rotación de trampas intrabloque y se repuso el agua y la caña de azúcar en todas las trampas para mantener el nivel atrayente.
El número de individuos (machos, hembras y totales) capturados por trampa y día con cada uno los atrayentes se comparó mediante un análisis de la varianza (ANOVA; test LSD de comparación de medias, P < 0.05), previa transformación (ln(x+1)) de los datos con el fin de homogeneizar la varianza.
Resultado
Los resultados muestran que las trampas cebadas con multistriatin y caña de azúcar tienen un poder de atracción significativamente mayor que aquellas cebadas solo con caña, tanto para los machos como para las hembras de D. frumenti, como se muestra en la Figura 3. La carga de multistriatin ensayada no tuvo influencia sobre los resultados y ambas dosis capturaron 6-7 veces más individuos que la caña de azúcar (una media de 23 frente a 3.7 individuos totales capturados por trampa y día, respectivamente). Por lo tanto, los resultados demuestran que el poder atrayente de la caña de azúcar por sí sola es muy bajo y que la adición de multistriatin a las trampas mejora significativamente el sistema de trampeo para D. frumenti.

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