ES2376945B2

ES2376945B2 - Proceso basado en intercambio iónico para la recuperación en corrientes separadas de ácido láctico y carbohidratos oligoméricos a partir de medios fermentativos.

Info

Publication number: ES2376945B2
Application number: ES201000046A
Authority: ES
Inventors: Beatriz Gullón Estévez; José Luis Alonso González; Juan Carlos Parajó Liñares; Martina Martínez Sabajanes; Patricia Gullón Estévez; Gil Garrote Velasco
Original assignee: Universidade de Vigo
Current assignee: Universidade de Vigo
Priority date: 2010-01-15
Filing date: 2010-01-15
Publication date: 2012-10-04
Anticipated expiration: 2030-01-15
Also published as: ES2376945A1

Abstract

La presente invención, titulada ?Proceso basado en intercambio iónico para la recuperación en corrientes separadas de ácido láctico y carbohidratos oligoméricos a partir de medios fermentativos?, reivindica un procedimiento aplicable a la separación de compuestos de interés comercial (ácido láctico y compuestos oligoméricos derivados de pectinas con capacidad prebiótica) a partir de medios obtenidos por hidrólisis y fermentación de bagazo de manzana. La hidrólisis se realiza por medio de enzimas, y la fermentación transcurre por acción de bacterias lácticas. Estas etapas pueden llevarse a cabo sucesiva o simultáneamente. Antes de la fermentación deben añadirse al medio los nutrientes adecuados para permitir el metabolismo de las bacterias lácticas. Los medios fermentados se tratan con resinas de intercambio iónico en ciclos de carga-regeneración, de modo que el ácido láctico se liga selectivamente a la resina durante el ciclo de carga (liberando un efluente enriquecido en compuestos oligoméricos derivados de carbohidratos), mientras que el ciclo de regeneración proporciona un efluente enriquecido en ácido láctico. La capacidad prebiótica de los compuestos oligoméricos derivados de carbohidratos que se obtienen en el proceso se confirma experimentalmente por medio de fermentaciones anaeróbicas en medios inoculados con heces fecales, en los que se observa la producción de ácidos grasos de cadena corta.

Description

Proceso basado en intercambio iónico para la recuperación en corrientes separadas de ácido láctico y carbohidratos oligoméricos a partir de medios fermentativos.

Sector de la técnica

La invención plantea la aplicación de una técnica básica de la Química y de la Ingeniería Química (intercambio iónico) a la separación de componentes de valor comercial (ácido láctico y compuestos oligoméricos con capacidad prebiótica derivados de pectinas) presentes en medios generados por hidrólisis y fermentación de bagazo de manzana (subproducto sólido que se obtiene al exprimir la manzana en la producción de zumo y sidra). Por las aplicaciones alimentarias del producto ﬁnal y por tratarse del desarrollo de un proceso de separación, el objeto de esta patente también está relacionado con áreas de la técnica como la Tecnología de los Alimentos, la Ingeniería de los Alimentos y la Ingeniería de Procesos.

Estado de la técnica

El bagazo de manzana tiene una composición compleja. Entre sus componentes más importantes se incluyen extractos (ricos en monosacáridos y disacáridos), polisacáridos (hemicelulosas, celulosa, almidón y pectinas), lignina, proteínas, componentes inorgánicos y otras fracciones de poca importancia para los ﬁnes de esta invención. Información relevante sobre la composición del bagazo de manzana se ha publicado en el siguiente trabajo: Gullón, B.; Falqué, E.; Alonso, J. L.; Parajó, J. C., Evaluation of apple pomace as a raw material for alternative applications in food industries, Food Technol. Biotechnol. 2007, 45 (4), 426-433.

La abundancia de polisacáridos y de azúcares libres en el bagazo de manzana lo hace atractivo como materia prima para procesos basados en la hidrólisis de los polisacáridos (convirtiéndolos en oligómeros o monómeros de azúcares) y en la fermentación de los productos de hidrólisis (llevada a cabo de forma simultánea o consecutiva a la propia etapa de hidrólisis). La susceptibilidad de los polisacáridos presentes en el bagazo de manzana a la hidrólisis por enzimas con actividades celulásica, celobiásica y amilolítica se comprobó en la referencia de Gullón y colaboradores (2007) citada con anterioridad, trabajo que también proporciona información sobre otros aspectos de interés, como la cinética de las reacciones de hidrólisis y los rendimientos de conversión en glucosa y otros azúcares. A partir de los resultados de la hidrólisis, el mismo trabajo concluía que el bagazo de manzana es una materia prima prometedora para la producción de ácido láctico.

La producción estereoespecíﬁca de ácido láctico por vía fermentativa a partir de bagazo de manzana empleando mezclas de enzimas comerciales (ricas en actividades celulásica y celobiásica) y bacterias lácticas (Lactobacillus rhamnosus CECT-288) se estudió en el siguiente artículo: Gullón, B.; Alonso, J. L.; Parajó, J. C., Experimental evaluation of alternative fermentation media for L-lactic acid production from apple pomace, J. Chem. Technol. Biotechnol. 2008, 83, 609-617. Las etapas de hidrólisis y fermentación se llevaron a cabo simultáneamente, según el modo de operar conocido como Sacariﬁcación y Fermentación Simultáneas. Para permitir la fermentación, los medios se suplementaron con distintos nutrientes, incluyendo medios complejos descritos en la bibliografía (como el Man Rogosa Sharpe), o fuentes complejas como extracto de levadura y licores de procesamiento de maíz por vía húmeda (denominados “Corn Steep Liquor” en la bibliografía). En distintos experimentos de Sacariﬁcación y Fermentación Simultáneas se evaluaron los efectos de tipo y concentración de nutrientes sobre los perﬁles de concentración de los compuestos de interés (incluyendo distintos monosacáridos, ácido láctico y ácido acético), desarrollándose modelos empíricos que proporcionaban una interpretación generalizada de la producción de ácido láctico y permitían una evaluación comparativa del comportamiento del extracto de levadura y de los licores de procesamiento de maíz por vía húmeda como agentes para la aportación de nutrientes.

En un trabajo relacionado con este tema (Gullón. B.; Garrote, G.; Alonso, J. L.; Parajó, J. C., Production of L-lactic acid and oligomeric compounds from apple pomace by Simultaneous Sacchariﬁcation and Fermentation: A response surface methodology assessment, J. Agrie. Food Chem. 2007, 55, 5580-5587) se señalaban las siguientes características ventajosas del bagazo de manzana como materia prima para la producción de ácido láctico: alto contenido en glucosa y fructosa libres, alto contenido en polisacáridos, presencia de otros compuestos (como monosacáridos distintos de la glucosa y de la fructosa, ácido cítrico, ácido málico) que pueden ser metabolizados por las bacterias lácticas, y presencia de iones metálicos que podrían disminuir el coste de la suplementación de los medios fermentativos. Este trabajo demostró la posibilidad de cogenerar ácido láctico y compuestos oligoméricos derivados de polisacáridos procesando bagazo de manzana a través de Sacariﬁcación y Fermentación Simultáneas, proporcionando una evaluación de los efectos de las variables de operación más inﬂuyentes sobre la productividad volumétrica de ácido láctico y sobre las concentraciones de los productos más importantes (ácido láctico y oligómeros derivados de carbohidratos) obtenidos en condiciones seleccionadas. El trabajo concluye que operando en determinadas condiciones de hidrólisisfermentación (45ºC, pH 5-6, 1.7 g células/L, carga de celulasas = 1 Unidad de Papel de Filtro/g bagazo, carga de celobiasa = 0.25 Unidades Internacionales/g bagazo, 10 horas de procesamiento, 12 g líquido/g bagazo) se obtenían medios conteniendo 27.8 g ácido láctico/L. Por otro lado, los balances de materia indicaban que a partir de 100 kg bagazo se podrían producir 36.6 kg de ácido láctico juntamente con 18.3 kg de oligosacáridos (éstos últimos con potencial aplicación como ingredientes para alimentos funcionales). Además, permanecían en el medio fermentativo compuestos formados por ácidos urónicos (también con potencial utilidad en el campo alimentario) en cantidad equivalente a 8 kg/100 kg bagazo procesado.

Como resumen de lo anterior, cabe indicar que la bibliografía muestra la hidrólisis-fermentación de bagazo de manzana puede llevarse a cabo en condiciones que permiten obtener medios conteniendo (entre otros componentes) ácido láctico y compuestos oligoméricos derivados de polisacáridos (celulosa, hemicelulosas y pectinas), en cantidades que dependen de las condiciones de operación.

La recuperación de ácido láctico por intercambio iónico ha sido estudiada en la bibliografía (Moldes, A. B.; Alonso,

J. L.; Parajó, J. C. Recovery of lactic acid from simultaneous sacchariﬁcation and fermentation media using aniónexchange resins. Bioproc. Biosyst. Eng. 2003, 25, 357-363; González, M. I.; Álvarez, S.; Riera, F. A.; Álvarez, R., Puriﬁcation of lactic acid from fermentation broths by ion-exchange resins. Ind. Eng. Chem. Res. 2006, 45 (9), 32433247); pero la separación de oligómeros y ácido láctico por medio de cambio iónico es novedosa, y constituye uno de los focos de la presente invención.

Además, distintos estudios experimentales demuestran la capacidad prebiótica de los compuestos oligoméricos derivados de polisacáridos. En particular, se ha publicado que oligosacáridos procedentes de pectinas (denominados pectooligosacáridos) son prebióticos potenciales. Algunos Trabajos representativos en este campo son: Manderson, K.; Pinart, M.; Tuohy, K. M.; Grace, W. E.; Hotchkiss, A. T.; Widmer, W.; Yadhav, M. P.; Gibson, G. R.; Rastall, R. A., In vitro determination of prebiotic properties of oligosaccharides derived from an orange juice manufacturing byproduct stream, Appl. Environm. Microbiol. 2005, 71 (12), 8383-8389; Olano-Martín, E.; Gibson, G. R.; Rastall, R. A., Comparison of the in vitro biﬁdogenic properties of pectins and pectic-oligosaccharides. J. Appl. Microbiol. 2002, 93, 505-511; Mandalari, G.; Nueno Palop, C.; Tuohy, K.; Gibson, G. R.; Bennet, R. N.; Waldrom, K. W.; Bisignano, G.; Narbad, A.; Faulds, C. B., In vitro evaluation of the prebiotic activity of a pectic oligosaccharide-rich extract enzymatically derived from bergamot peel, Appl. Microbiol. Biotechnol. 2007, 73, 1173-1179. La conﬁrmación de la capacidad prebiótica de los compuestos oligoméricos aislados a partir de los medios fermentativos por medio de cambio iónico es otro de los focos de la presente invención.

Descripción detallada de la invención

El Proceso considerado se reﬁere al tratamiento de los medios que resultan de la hidrólisis-fermentación del bagazo de manzana (obtenidos en condiciones adecuadas para que contengan ácido láctico y compuestos oligoméricos derivados de polisacáridos), e incluye la separación (por ﬁltración, prensado, ultraﬁltración o centrifugación) de las fases sólida y líquida, y el tratamiento de esta última mediante resinas de intercambio aniónico para la obtención de dos corrientes; una enriquecida en ácido láctico y la otra en compuestos oligoméricos derivados de polisacáridos, según se describe a continuación.

El Proceso consta de:

a) una etapa de ﬁltración, prensado, centrifugación o ultraﬁltración de los medios que resultan del proceso de hidrólisis-fermentación del bagazo de manzana, que contienen ácido láctico y compuestos oligoméricos derivados de polisacáridos, de modo que se obtenga una fase líquida exenta de sólidos en suspensión,

b) una etapa de carga, en la que la fase líquida exenta de sólidos en suspensión obtenida en el apartado anterior, conteniendo ácido láctico y compuestos oligoméricos derivados de polisacáridos, se hace circular a través de un lecho que contiene una resina comercial de intercambio aniónico, inicialmente cargada con un anión adecuado (por ejemplo, cloruro), que pueda desplazarse por lactato, de modo que la resina quede cargada de iones lactato. La etapa ﬁnaliza cuando la fase resina se satura, o bien cuando alcanza condiciones cercanas a la saturación. El eﬂuente obtenido en esta etapa contiene una disolución enriquecida en compuestos oligoméricos derivados de polisacáridos, de modo que se facilita su posterior recuperación. Contiene además iones en disolución, debido al propio proceso de intercambio,

c) una etapa de lavado para reemplazar la disolución retenida en la columna que contiene la resina por agua para recuperar los productos retenidos en los espacios intersticiales del lecho y mejorar la pureza del ácido láctico obtenido en la etapa siguiente,

d) una etapa de regeneración, en el que se hace ﬂuir una disolución conteniendo un anión adecuado (por ejemplo, ión cloruro, aportado por ácido clorhídrico) a través del lecho que contiene la resina lavada cargada de lactato que se obtuvo en el paso anterior, de modo que los aniones presentes en la disolución desplazan a los iones lactato, obteniéndose un eﬂuente enriquecido en ácido láctico.

e) Una etapa de desalinización por diaﬁltración o cambio iónico para eliminar el cloruro sódico contenido en la disolución de oligómeros con el objetivo de obtener un producto susceptible de ser usado como ingrediente prebiótico.

Un posible modo de realización del Proceso se describe en el Ejemplo que se incluye a continuación.

Ejemplo

Se parte de bagazo de manzana, que se somete a Sacariﬁcación y Fermentación Simultáneas en modo semicontinuo con alimentación intermitente usando un biorreactor Biostat B de 1.5 litros operando en las siguientes condiciones: temperatura de operación, 45ºC; velocidad de agitación, 150 rpm; relación líquido sólido, 12 g/g; extracto de levadura para aporte de nutrientes, en concentración equivalente a 0.1 g/g azúcares potenciales (deﬁnidos como los azúcares que aparecerían en el medio si se convirtiesen en monosacáridos todos los polisacáridos del bagazo); carga de celulasas, 1 Unidad de Papel de Filtro del preparado comercial “Celluclast 1.5 L” /g bagazo; carga de celobiasa, 0.25 Unidades Internacionales del preparado comercial “Novozym” /g bagazo; agua en la cantidad necesaria para alcanzar la relación líquido sólido deseada; microorganismo empleado en la fermentación láctica, Lactobacillus rhamnosus CECT-288; duración del proceso de hidrólisis-fermentación, 45 horas; número de ciclos de adición de sólidos: 3, con recuperación intermedia de sólidos sin convertir por centrifugación y recirculación de licores para generar nuevos medios de hidrólisis-fermentación aportando bagazo de manzana fresco. El medio resultante ﬁnal se centrifugó para separar la fase líquida de los sólidos en suspensión, y se analizó por los métodos descritos en los artículos de Gullón y colaboradores citados con anterioridad, determinándose la siguiente composición: ácido láctico, 60.5 g/L; monosacáridos, 4.65 g/L; unidades de glucosa formando parte de oligosacáridos, 9.5 g/L; unidades de xilosa formando parte de oligosacáridos,

5.7 g/L; unidades de arabinosa formando parte de oligosacáridos, 6.15 g/L; unidades de ácidos urónicos formando parte de oligosacáridos (medidas como concentración equivalente en ácido galacturónico), 12.5 g/L. Utilizando una bomba peristáltica, se hizo circular esta disolución a través de un lecho formado por resina comercial de intercambio aniónico Amberlite IRA 96 (en forma cloruro), conteniendo inicialmente agua en los espacios intersticiales (lo que provoca un efecto de dilución). Se obtuvieron muestras del eﬂuente de salida del lecho, que se analizaron por los mismos métodos empleados para caracterizar la composición del medio de hidrólisis-fermentación. Operando en condiciones de separación optimizadas, se llegó a un eﬂuente con la siguiente composición: ácido láctico, 2.2 g/L; monosacáridos, menos de 0.1 g/L; unidades de glucosa formando parte de oligosacáridos, 4.7 g/L; unidades de xilosa formando parte de oligosacáridos, 4.1 g/L; unidades de arabinosa formando parte de oligosacáridos, 3.8 g/L; unidades de ácidos uránicos formando parte de oligosacáridos (medidas como concentración equivalente en ácido galacturónico), 5.3 g/L. Después de lavar la resina, se procedió a recuperar el ácido láctico haciendo pasar a través de la columna una disolución 1 N de HCl. El eﬂuente procedente de la etapa de regeneración mostró la siguiente composición: ácido láctico, 30 g/L; monosacáridos, menos de 0.1 g/L; unidades de glucosa formando parte de oligosacáridos, 0.2 g/L; unidades de xilosa formando parte de oligosacáridos, 0.2 g/L; unidades de arabinosa formando parte de oligosacáridos, 0.2 g/L; unidades de ácidos uránicos formando parte de oligosacáridos (medidas como concentración equivalente en ácido galacturónico), 2.1 g/L. Se observa que la disolución obtenida tras la etapa de carga posee una proporción entre ácido láctico y unidades constituyentes de oligómeros de 10:90 g/g, mucho menor el valor que alcanza la misma proporción en la disolución procedente de la etapa de regeneración (92:8 g/g), aspecto indicativo de una separación selectiva de los componentes en función de su naturaleza química.

A ﬁn de conﬁrmar el carácter prebiótico de los productos contenidos en el eﬂuente procedente de la etapa de carga, la disolución se desalinizó mediante diaﬁltración y se lioﬁlizó. Se formularon medios de cultivo conteniendo 10 g de sólidos lioﬁlizados /L, 5 g de extracto de levadura /L y 5 g de peptona /L, que se inocularon con heces fecales humanas y se incubaron a 37ºC sin agitación en condiciones de anaerobiosis. Al inicio de los experimentos y al cabo de 12, 24 y 96 horas se realizaron recuentos de células al microscopio (que conﬁrmaron la viabilidad de las fuentes de carbono empleadas para el crecimiento celular) y se realizaron análisis de las muestras por Cromatografía Líquida de Alta Eﬁcacia, conﬁrmándose el consumo completo de oligosacáridos y la presencia en los medios de ácidos grasos de cadena corta, que conﬁrman la capacidad prebiótica de los sólidos lioﬁlizados obtenidos según el proceso descrito en esta solicitud.

Claims

REIVINDICACIONES

1. El proceso de separación de ácido láctico y compuestos oligoméricos derivados de carbohidratos presentes en medios de hidrólisis-fermentación obtenidos a partir de bagazo de manzana, consistente en: una etapa de ﬁltración, 5 prensado, centrifugación o ultraﬁltración, que permita obtener una fase líquida exenta de sólidos; una etapa de cambio iónico (etapa de carga) en que la fase líquida exenta de sólidos obtenida anteriormente se hace circular a través de un lecho ﬁjo conteniendo una resina intercambiadora de iones (cargada inicialmente con un anión adecuado para ser intercambiado por lactato) hasta que la resina queda saturada de lactato o hasta que el lactato alcanza una concentración en fase resina cercana a la de saturación; una etapa de lavado para reemplazar por agua la disolución retenida en la

10 columna que contiene la resina; y una etapa de regeneración, en el que se hace ﬂuir a través del lecho que contiene la resina lavada cargada de lactato que se obtuvo en el paso anterior una disolución conteniendo un anión adecuado para desplazar a los iones lactato, obteniéndose un eﬂuente enriquecido en este compuesto.
2. La utilización de los productos resultantes de lioﬁlizar el eﬂuente obtenido en la etapa de carga (directamente

15 tal como se obtiene, o tras desalinización) como ingredientes alimentarios con propiedades prebióticas, aplicables a la alimentación humana o animal.

OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPANA

INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA

51 Int. Cl. Ver Hoja Adicional

21 N.O solicitud: 201000046 22 Fecha de presentaci6n de la solicitud: 15.01.2010 32 Fecha de prioridad:

DOCUMENTOS RELEVANTES

Categoria

@ Documentos citados Reivindicaciones afectadas

A

GULLON B et al. Bioresource Technology. Vol. 99, No. 2 , Paginas: 308-319. l-Lactic acid 1,2

production from apple pomace by sequential hydrolysis and fermentation. ISSN 0960-8524,

todo el documento.

A

GULLON, B. et al.: "Evaluation of Apple Pomace as a Raw Material for Alternative Applications in 1,2

Food Industries", Food Technol. Biotechnol. (2007) 45 (4) pp.: 426-433, ISSN 1330-9862,

todo el documento.

A

GULLON, B. et al.: "Production of L-lactic Acid and Oligomeric Compounds from Apple Pomace 1,2

by S imultaneous Saccharification a nd Fermentation: A R esponse S urface Methodology

Assessment" (2007) J. Agric. Food Chem., 55, pp.: 5580-5587, todo el documento.

A

GONZALEZ, M.I. et al.: "Purification of Lactic Acid from Fermentation Broths by Ion-Exchange 1,2

Resins", Ind. Eng. Chem. Res. 2006, 45, pp.: 3243-3247, todo el documento.

A

MEHRLANDER, K. et al: "Structural Characterization of Oligosaccharides and Polysaccharides 1,2

from Apple Juices Produced by Enzymatic Pomace Liquefaction", (2002) J. Agric. Food Chem.,

50, pp.: 1230-1236, todo el documento.

A

GULLON, B. et al.: "Sequential hydrolysis and fermentation of apple pomace to lactic acid", 1,2

The 29th Symposium on Biotechnology for Fuels and Chemicals (Abril 29 - Mayo 2, 2007)

Domingo, Abril 29, 2007 1B-29. -Abstract-.

Categoria de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoria A: refleja el estado de la tecnica O: referido a divulgaci6n no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentaci6n de la solicitud E: documento anterior, pero publicado despues de la fecha de presentaci6n de la solicitud

El presente informe ha sido realizado � para todas las reivindicaciones � para las reivindicaciones nO:

Fecha de realizaci6n del informe 06.03.2012

Examinador A. Maquedano Herrero Pagina 1/4

INFORME DEL ESTADO DE LA TECNICA

NO de solicitud: 201000046

CLASIFICACION OBJETO DE LA SOLICITUD C12F3100 (2006.01)

C12P7156 (2006.01) G01N30102 (2006.01) Documentaci6n minima buscada (sistema de clasificaci6n seguido de los simbolos de clasificaci6n)

C12F, C12P, G01N

Bases de datos electr6nicas consultadas durante la busqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, terminos de busqueda utilizados) INVENES, EPODOC, WPI, XPESP, BIOSIS, CA

Informe del Estado de la Tecnica Pagina 2/4

OPINION ESCRITA

NO de solicitud: 201000046

Fecha de Realizaci6n de la Opini6n Escrita: 06.03.2012

Declaraci6n

Novedad (Art. .1 LP 11/198 )

Reivindicaciones 1, 2 SI

Reivindicaciones

NO

Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/198 )

Reivindicaciones 1, 2 SI

Reivindicaciones

NO

Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicaci6n industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y tecnico de la solicitud (Articulo 31.2 Ley 11/1986).

Base de la Opini6n.-

La presente opini6n se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.

Informe del Estado de la Tecnica Pagina 3/4

OPINION ESCRITA

NO de solicitud: 201000046

1. Documentos considerados.-

A continuaci6n se relacionanlos documentos pertenecientes al estado de la tecnica tomados en consideraci6n para la realizaci6n de esta opini6n.

Documento

Numero Publicaci6n o Identificaci6n Fecha Publicaci6n

D01

GULLON B e t al . B ioresource Technology. V ol. 99 , No. 2 , Paginas: 308-319. l-Lactic acid production from apple pomace by sequential hydrolysis and fermentation. ISSN 0960-8524, todo el documento.

D02

GULLON, B. et al.: "Evaluation of Apple Pomace as a Raw Material f or Alternative A pplications in F ood Industries", F ood Technol. Biotechnol. (2007) 45 (4) pp.: 426-433, ISSN 1330-9862, todo el documento.

D03

GULLON, B. et al.: "Production of L-lactic Acid and Oligomeric Compounds f rom Apple P omace b y S imultaneous Saccharification and F ermentation: A R esponse S urface Methodology Assessment" (2007) J. Agric. Food Chem., 55, pp.: 5580-5587, todo el documento.

D04

GONZALEZ, M.I. et al.: "Purification of Lactic Acid from Fermentation Broths by Ion-Exchange Resins", Ind. Eng. Chem. Res. 2006, 45, pp.: 3243-3247, todo el documento.

D05

MEHRLANDER, K . et al : " Structural C haracterization of Oligosaccharides and Polysaccharides f rom Ap ple Juices Produced by Enzymatic Pomace Liquefaction", (2002) J. Agric. Food Chem., 50, pp.: 1230-1236, todo el documento.

D06

GULLON, B . et al .: " Sequential h ydrolysis and f ermentation of apple pomace t o l actic acid", T he 2 9th S ymposium on Biotechnology for Fuels and Chemicals (Abril 29 -Mayo 2, 2007) Domingo, Abril 29, 2007 1B-29. -Abstract-
2. Declaraci6n motivada segun los articulos 29. y 29.7 del Reglamento de ejecuci6n de la Ley 11/198 , de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaraci6n

La solicitud reivindica un procedimiento para separar acido lactico y oligosacaridos presentes en bagazo de manzana sometido a hidr6lisis y fermentaci6n. El procedimiento incluye etapas de filtraci6n, prensado, centrifugaci6n (o ultrafiltraci6n) para eliminar los s6lidos y, posteriormente, una etapa de intercambio i6nico. Se reivindica, asimismo, el uso de los productos resultantes de este procedimiento (lactato y oligosacaridos) como ingredientes alimentarios con propiedades prebi6ticas en alimentaci6n humana o animal. D01-D06 representan el estado de la tecnica anterior. En ninguno de esos documentos, salvo en D05, se utiliza la tecnica de intercambio i6nico para separar acido lactico y oligosacaridos. En D05 se utiliza dicha tecnica para obtener oligosacaridos de j ugos de manzana n o f ermentados. N o se m enciona el ac ido l actico ni l a f ermentaci6n m icrobiana. E n l os otros documentos D01-D04 y D 06 se m enciona l a e xistencia tanto de aci do l actico c omo de o ligosacaridos en bagazo de manzana hidrolizado y fermentado, pero, en ningun momento, se propone la utilizaci6n del intercambio i6nico como tecnica para la obtenci6n de acido lactico y oligosacaridos. Tampoco parece obvio, a la luz de lo descrito en estos documentos, que un experto en la materia pudiera llegar a realizar la invenci6n descrita en la solicitud. Por todo ello, se considera que las reivindicaciones 1 y 2 de la solicitud cumplen los requisitos de novedad en el sentido del articulo 6.1 de la Ley 11/1986 y de actividad inventiva en el sentido del articulo 8.1 de la Ley 11/1986.

Informe del Estado de la Tecnica Pagina 4/4