ES2375618T3 - Secuencia de adn y preparación recombinante de alérgeno del polen de gram�?neas lol p 4. - Google Patents
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Abstract
Una molécula de ADN que codifica para un alérgeno con las propiedades de Lol p 4, correspondiente a una secuencia de nucleótidos seleccionada entre una de las secuencias según SEC ID Nº 1 y 3.
Description
Secuencia de ADN y preparación recombinante del alérgeno del polen de gramíneas lol p 4
Antecedentes de la invención
La presente invención se refiere a la preparación de una secuencia de ADN del alérgeno mayor de polen de gramíneas Lol p 4. La invención incluye también fragmentos y nuevas combinaciones de secuencias parciales. Las moléculas de ADN recombinante y los polipéptidos derivados, fragmentos y nuevas combinaciones de secuencias parciales se pueden utilizar para la terapia de enfermedades de alergia al polen. Las proteínas recombinantes preparadas se pueden emplear para el diagnóstico in vitro e in vivo de alergias al polen.
Las alergias del tipo 1 tienen importancia en todo el mundo. Hasta un 20% de la población de los países industrializados sufre de dolencias como rinitis alérgica, conjuntivitis o asma bronquial. Estas alergias son provocadas por alérgenos presentes en el aire (aeroalérgenos), que son liberados por fuentes de diferente procedencia, como polen de plantas, ácaros, gatos o perros. Hasta el 40% de estos alérgicos de tipo 1 muestran además reactividad IgE específica con alérgenos del polen de gramíneas (Freidhoff y col., 1986, J. Allergy Clin. Immunol. 78, 1190-2001).
Las sustancias desencadenantes de las alergias de tipo 1 son proteínas, glicoproteínas o polipéptidos. En personas sensibilizadas, tras la absorción a través de las mucosas estos alérgenos reaccionan con las moléculas IgE que están unidas a la superficie de los mastocitos. Cuando dos moléculas de IgE se enlazan a través de un alérgeno se produce la liberación de mediadores (p. ej., histamina, prostaglandinas) y citoquinas mediante las células efectoras y con ello se desencadenan los correspondientes síntomas clínicos.
Dependiendo de la frecuencia relativa con la que las moléculas de alérgeno individuales reaccionan con los anticuerpos IgE de los alérgicos, se diferencia entre alérgenos mayores y menores.
Para el ballico (Lolium perenne) se identificó Lol p 1 como un alérgeno mayor (Freidhoff y col., 1986, J. Allergy Clin. 78:1190-1201) y se resolvió su estructura primaria (Perez y col., 1990, J. Biol. Chem. 265:16210-16215). Otro alérgeno mayor es Lol p 2 (Freidhoff y col., 1986, J. Allergy Clin. 78:1190-1201) cuya estructura primaria se describió en 1993 (Ansari y col., 1989, J. Biol. Chem.: 264:11181-11185). Otro alérgeno mayor del ballico es Lol p 5 (Mattiesen y Löwenstein 1991, Clin. Exp. Allergy 21: 297-307). La estructura primaria de Lol p 5 también es conocida (Ong y col., 1993, Gene 134:235-240).
El ballico contiene además los alérgenos mayores de los grupos 4 (Fahlbusch y col. 1998, Clin. Exp. Allergy 28: 799807) y 13 (Petersen y col., 2001, J. Allergy Clin. Imm. 107:856-862).
Lol p 4 es una glicoproteína típica básica (Jaggi y col, 1989, Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 89:342-348, Jaggi y col., 1989, J. Allergy Clin. Immunol. 83:845-852) y en lo referente a la actividad cruzada con anticuerpos IgE específicos se compara con las bien conocidas Phl p 4, Cyn d 4 y Dac g 4 (Haavik y col., 1985, Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 78:260-268; Su y col., 1991, Clin. Exp. Allergy 21:449-455; Leduc-Brodard y col., 1996, J. Allergy Clin. Immunol. 98:1065-1072; 14-17).
Estas moléculas homólogas de Poaceae forman el grupo 4 de alérgenos, cuyas moléculas presentan entre sí una alta reactividad inmunológica cruzada, tanto con anticuerpos monoclonales de ratón como con anticuerpos IgE humanos (Fahlbusch y col., 1993 Clin. Exp. Allergy 23:51-60; Leduc-Brodard y col., 1996, J. Allergy Clin. Immunol. 98:1065-1072; Su y col., 1996, J. Allergy Clin. Immunol. 97:210; Fahlbusch y col., 1998, Clin. Exp. Allergy 28:799-807; Gavrovic-Jankulovic y col., 2000, Invest. Allergol. Clin. Immunol. 10 (6):361-367; Stumvoll y col. 2002, Biol. Chem. 383:1383-1396; Grote y col., 2002, Biol. Chem. 383:1441-1445; Andersson y Lidholm, 2003, Int. Arch. Allergy Immunol. 130:87-107; Mari, 2003, Clin. Exp. Allergy, 33 (1):43-51).
Al contrario de los alérgenos mayores mencionados previamente Lol p 1, Lol p 2, Lol p 5 de Lolium perenne, la estructura primaria de Lol p 4 aún no está resuelta.
De los alérgenos del grupo 4 de Dactylus glomerata hasta ahora solamente se han obtenido por degradación enzimática y se han secuenciado los péptidos:
DIYNYMEPYVSK (SEC ID Nº 7),
VDPTDYFGNEQ (SEC ID Nº 8),
ARTAWVDSGAQLGELSY (SEC ID Nº 9),
2 5
y GVLFNIQYVNYWFAP (SEC ID Nº 10, Leduc-Brodard y col., 1996, J. Allergy Clin. Immunol. 98: 1065-1072).
También se han obtenido por proteólisis y se han secuenciado péptidos de los alérgenos del grupo 4 de la gramínea
subtropical Bermuda (Cynodon dactylon):
KTVKPLYIITP (SEC ID Nº 11),
KQVERDFLTSLTKDIPQLYLKS (SEC ID Nº 12),
TVKPLYIITPITAAMI (SEC ID Nº 13),
LRKYGTAADNVIDAKVVDAQGRLL (SEC ID Nº 14),
KWQTVAPALPDPNM (SEC ID Nº 15),
VTWIESVPYIPMGDK (SEC ID Nº 16),
GTVRDLLXRTSNIKAFGKY (SEC ID Nº 17),
TSNIKAFGKYKSDYVLEPIPKKS (SEC ID Nº 18),
YRDLDLGVNQVVG (SEC ID Nº 19),
SATPPTHRSGVLFNI (SEC ID Nº 20),
y AAAALPTQVTRDIYAFMTPYVSKNPRQAYVNYRDLD (SEC ID Nº 21, Liaw y col., 2001, Biochem. Biophys. Research
Communication 280: 738-743).
Para Lolium perenne se describieron fragmentos de péptidos de alérgenos básicos del grupo 4 con las secuencias
siguientes: FLEPVLGLIFPAGV (SEC ID Nº 22) y GLIEFPAGV (SEC ID Nº 23, Jaggi y col., 1989, Int. Arch. Allergy Appl.
Immunol. 89: 342-348).
Sin embargo, estas secuencias peptídicas descritas para Lolium perenne y otros alérgenos del grupo 4 no han
conducido hasta ahora a la resolución de la estructura primaria del alérgeno Lol p 4.
Como primera secuencia de un alérgeno del grupo 4 se ha resuelto por parte del inventor de la presente solicitud de
patente la secuencia aún no publicada de Phl p 4 de Phleum pratense y se ha descrito en la solicitud internacional WO 04/000881. El objetivo en el que se basa la presente invención consiste por tanto en la preparación de una secuencia de ADN del
gen Lol p 4 que codifica para un alérgeno con las propiedades inmunológicas de Lol p 4, así como un ADN recombinante correspondiente, sobre cuya base el alérgeno se exprese como proteína y se pueda hacer disponible un uso farmacológico significativo como tal o en forma modificada. La secuencia de Phl p 4 fue el punto de partida para la presente invención.
�?ndice de secuencias según la invención -Secuencia de ADN del gen Lol p 4 (SEC ID Nº 1).
- -
- Secuencia de proteína (SEC ID Nº 2) derivada de la secuencia de ADN según SEC ID Nº 1.
- -
- Secuencia de ADN (SEC ID Nº 3), compuesta por los nucleótidos 1-200 de Phl p 4 (según SEC ID Nº 5), 201-1472 de Lol p 4 (según SEC ID Nº 1) así como 1473-1503 de Phl p 4 (según SEC ID Nº 5).
- -
- Secuencia de proteínas (SEC ID Nº 4), compuesta por los aminoácidos 1-67 de Phl p 4 (según SEC ID Nº 6), 68-490 de Lol p 4 (según SEC ID Nº 2) así como 491-500 de Phl p 4 (según SEC ID Nº 6) con las propiedades, en particular las propiedades inmunológicas de Lol p 4, codificada por la secuencia de ADN según SEC ID Nº 3.
- -
- Secuencia de ADN de Phl p 4 (SEC ID Nº 5) según SEC ID Nº 5 del documento WO 04/000881.
- -
- Secuencia de proteínas de Phl p 4 (SEC ID Nº 6) según SEC ID Nº 6 del documento WO 04/000881.
Descripción de la invención
Con la presente invención se proporciona por primera vez una secuencia de ADN del alérgeno mayor del polen de gramíneas Lol p 4 (SEC ID Nº 1) que codifica para un alérgeno con las propiedades inmunológicas de Lol p 4.
Por consiguiente, es objeto de la presente invención una molécula de ADN que codifica para un alérgeno con las propiedades de Lol p 4, correspondiente a una secuencia de nucleótidos según SEC ID Nº 1.
Además, es objeto de la invención una molécula de ADN que codifica para un alérgeno con las propiedades de Lol p 4, correspondiente a una secuencia de nucleótidos SEC ID Nº 3, compuesto por los nucleótidos 1-201 de Phl p 4 (según SEC ID Nº 5), 202-1470 de Lol p 4 (según SEC ID Nº 1) así como 1471-1500 de Phl p 4.
Con el conocimiento de la secuencia de ADN de los alérgenos que existen en la naturaleza ahora sólo es posible preparar estos alérgenos como proteínas recombinantes, que se pueden emplear en el diagnóstico y la terapia de enfermedades alérgicas (Scheiner y Kraft, 1995, Allergy 50: 384-391).
La inmunoterapia específica o hiposensibilización representa una aproximación clásica al tratamiento terapéutico eficaz de las alergias (Fiebig, 1995, Allergo J. 4 (6): 336-339, Bousquet y col., 1998, J. Allergy Clin. Immunol. 102(4): 558-562). Así, se inyectan de forma subcutánea a los pacientes extractos de alérgenos naturales en dosis crecientes. No obstante, con este método existe el peligro de reacciones alérgicas o incluso de un choque anafiláctico. Para minimizar estos riesgos se emplean preparados innovadores en forma de alergoides. Se trata de extractos de alérgenos modificados químicamente que presentan una reactividad IgE claramente reducida, aunque presentan idéntica reactividad frente a células T en comparación con el extracto no tratado (Fiebig, 1995, Allergo J. 4 (7): 377-382).
Sería posible una optimización aún más amplia de la terapia con alérgenos preparados de forma recombinante. Cócteles definidos, dado el caso basados en el patrón de sensibilización individual del paciente, de alérgenos recombinantes de elevada pureza podrían reemplazar a los extractos de fuentes de alérgenos naturales, ya que éstos, aparte de los diferentes alérgenos, contienen una gran cantidad de proteínas acompañantes inmunogénicas pero no alergénicas.
Perspectivas realistas, que podrían conducir a una hiposensibilización segura con productos de expresión, ofrecen alérgenos recombinantes mutados dirigidos en los cuales se han eliminado de forma específica epítopos IgE, sin perjudicar a los epítopos de células T esenciales para la terapia (Schramm y col., 1999, J. Immunol. 162: 2406-2414).
Otra posibilidad de influir terapéuticamente en el equilibrio alterado de las células TH en los alérgicos es la vacunación inmunoterapéutica con ADN. Se trata de un tratamiento con ADN con capacidad de expresión que codifica para los alérgenos relevantes. Las primeras pruebas experimentales de la influencia alergenoespecífica de la respuesta inmune se obtuvieron en roedores mediante la inyección de ADN codificante de alérgeno (Hsu y col., 1996, Nature Medicine 2 (5): 540-544).
Por consiguiente, también es objeto de la presente invención una molécula de ADN descrita previamente o a continuación, o un vector de expresión recombinante correspondiente como medicamento.
Las correspondientes proteínas preparadas de forma recombinante se pueden emplear para la terapia y para el diagnóstico in vitro e in vivo de alergias al polen.
Para la preparación del alérgeno recombinante, el ácido nucleico clonado se liga a un vector de expresión y esta construcción se expresa en un organismo huésped apropiado. Tras la purificación bioquímica, se obtiene este alérgeno recombinante para la detección de anticuerpos IgE en procedimientos establecidos.
Por consiguiente, también es objeto de la presente invención un vector de expresión recombinante que contiene una molécula de ADN descrita previamente o a continuación, unida funcionalmente con una secuencia control de expresión y un organismo huésped, transformado con la molécula de ADN indicada o el vector de expresión indicado.
Asimismo, es objeto de la invención el uso de al menos una molécula de ADN descrita anteriormente o al menos un vector de expresión descrito anteriormente para la preparación de un medicamento para la vacunación inmunoterapéutica con ADN de pacientes con alergias en cuya activación están implicados alérgenos del grupo 4 de Poaceae, en particular Lol p 4, y/o para la prevención de dichas alergias.
Como ya se ha mencionado la invención se puede emplear como un componente esencial en un preparado que contiene alérgenos o ácidos nucleicos recombinantes para la inmunoterapia específica. Así, se presentan varias posibilidades. Por un lado, la proteína no modificada en la estructura primaria puede formar parte del preparado. Por otro lado, mediante la deleción dirigida de epítopos IgE de la molécula completa o mediante la preparación de fragmentos individuales que codifican para epítopos de células T, se emplea para la terapia según la invención una forma
(alergoide) hipoalergénica para evitar efectos secundarios no deseados. Finalmente, mediante el propio ácido nucleico, cuando éste se liga con un vector de expresión eucariótico, se consigue un preparado que aplicado directamente modifica el estado inmune alérgico en el sentido terapéutico.
Además, la presente invención trata de polipéptidos que codifican para una o varias de las moléculas de ADN descritas anteriormente, preferentemente en su calidad como medicamentos.
Los polipéptidos son una proteína correspondiente a una secuencia de aminoácidos según SEC ID Nº 2 o una proteína que contiene esta secuencia de aminoácidos o una parte de esta secuencia, con las propiedades, en particular las propiedades inmunológicas de Lol p 4, así como una proteína correspondiente a una secuencia de aminoácidos según SEC ID Nº 4 con las propiedades, en particular las propiedades inmunológicas de Lol p 4.
Además, la invención se refiere también a un procedimiento para la preparación de dichos polipéptidos mediante el cultivo de un organismo huésped y la obtención de los correspondientes polipéptidos a partir del cultivo.
También según la invención se emplea al menos un polipéptido o proteína descritos anteriormente para la preparación de un medicamento para el diagnóstico y/o tratamiento de alergias en cuya activación están implicados alérgenos del grupo 4 de Poaceae, en particular Lol p 4, así como para la prevención de dichas alergias.
Para la determinación de las secuencias de proteínas y ADN de Lol p 4 según la invención se procedió como sigue:
La secuencia de ADN de Lol p 4 según la invención según SEC ID Nº 1 se amplificó, clonó y secuenció mediante PCR con cebadores específicos (Tab. 1), derivados de la secuencia Phl p 4, según SEC ID Nº 5, como se describe en el documento WO 04/000881. En total se analizaron 7 clones. El análisis de los clones dio como resultado una secuencia unitaria. Se obtuvieron tres secuencias de ADN de Lol p 4 mediante PCR con los cebadores #87 y #83. La secuencia de ADN de Lol p 4 amplificada con estos cebadores codifica para los correspondientes aminoácidos 68-401, referidos a la numeración de Phl p 4 madura según SEC ID Nº 6. Se obtuvieron otros dos clones mediante PCR con los cebadores #87 y #189. La secuencia de ADN de Lol p 4 amplificada con estos cebadores codifica también para los correspondientes aminoácidos 68-490 (numeración correspondiente a la secuencia de Phl p 4). Dos clones se obtuvieron mediante PCR con los cebadores #87 y #131. La secuencia de ADN de Lol p 4 amplificada codifica también para los correspondientes aminoácidos 68-490 (numeración correspondiente a la secuencia de Phl p 4). Los cebadores #131 y #189 corresponden a los codones para los últimos 10 aminoácidos de la proteína Phl p 4 y sobrepasan el codón de parada.
La secuencia de ADN según la invención según SEC ID Nº 3 se obtuvo por métodos conocidos (técnica de PCR con cebadores solapados).
Para la preparación de los alérgenos recombinantes según la invención se construyeron secuencias de ADN según SEC ID Nº 1 o 3 en vectores de expresión (p. ej., pProEx, pSE 380). Para los aminoácidos N-terminales conocidos a partir de la secuenciación de la proteína se emplearon codones optimizados de E. coli.
Tras la transformación en E. coli, la expresión y la purificación del alér-geno recombinante según la invención mediante diferentes técnicas de separación, la proteína obtenida se sometió a un proceso de replegado.
Ambos alérgenos se pueden emplear para el diagnóstico altamente específico de alergias al polen de gramíneas. Este diagnóstico se puede realizar in vitro mediante la detección de anticuerpos específicos (IgE, IgG1 -4, IgA) y la reacción con células efectoras cargadas con IgE (p. ej., basófilos de la sangre) o in vivo mediante reacciones de ensayos en la piel y provocación en el órgano de reacción.
La reacción de los alérgenos según la invención con linfocitos T de alérgicos al polen de gramíneas se puede comprobar mediante la estimulación alergenoespecífica de los linfocitos T para la proliferación y síntesis de citoquina, tanto con células T en linfocitos sanguíneos de preparación reciente como en líneas y clones de células T establecidas reactivas frente a nLol p 4.
Mediante mutagénesis dirigida al sitio se modificaron los tripletes codificantes para la cisteína, de manera que codifican para otros aminoácidos, preferentemente serina. Se prepararon variantes, tanto en las que se reemplazaron cisteínas individuales como aquellas en las que se modificaron diferentes combinaciones de 2 restos cisteína o todas las cisteínas. Las proteínas expresadas de estos mutantes puntuales de cisteína presentan una reactividad fuertemente reducida o inexistente con anticuerpos IgE de alérgicos, aunque reaccionan con los linfocitos T de estos pacientes.
Por consiguiente, también es objeto de la presente invención una molécula de ADN descrita previamente o a continuación, en la que mediante mutagénesis dirigida al sitio, varios o todos los restos cisteína del polipéptido correspondiente se intercambiaron por otro aminoácido.
5 5
La actividad inmunomoduladora de los fragmentos hipoalergénicos que corresponden a polipéptidos con epítopos de células T, así como la de los intercambios de cisteína hipoalergénicos, se puede comprobar mediante su reacción con las células T de los alérgicos al polen de gramíneas.
Dichos fragmentos o mutaciones puntuales de cisteína hipoalergénicos se pueden emplear como preparados para la hiposensibilización de alérgicos, ya que reaccionan con la misma eficacia con las células T, aunque a causa de la reducida o inexistente reactividad IgE ocasionan pocos efectos secundarios producidos por IgE.
Si los ácidos nucleicos que codifican para las variantes de alérgenos hipoalergénicos según la invención o las moléculas de ADN no modificadas según la invención se ligan con un vector de expresión humano, estas construcciones se pueden emplear también como preparados para una terapia inmune (vacunación con ADN).
Finalmente, son objeto de la presente invención las preparaciones farmacéuticas que contienen al menos una molécula de ADN descrita anteriormente o al menos un vector de expresión descrito anteriormente y dado el caso otros principios activos y/o coadyuvantes para la vacunación inmunoterapéutica con ADN de pacientes con alergias, en cuya activación están implicados alérgenos del grupo 4 de Poaceae, en particular Lol p 4, y/o para la prevención de dichas alergias.
Otro grupo de preparaciones farmacéuticas según la invención, en lugar de ADN contiene al menos un polipéptido descrito anteriormente y es adecuado para el diagnóstico y/o tratamiento de las alergias indicadas.
Las preparaciones farmacéuticas en el sentido de la presente invención contienen como principio activo un polipéptido según la invención o un vector de expresión y/o sus respectivos derivados de uso farmacéutico, incluidas sus mezclas en todas las proporciones. Así, los principios activos según la invención pueden mezclarse con al menos un excipiente o coadyuvante sólido, líquido y/o semilíquido y, dado el caso, combinarse con uno o varios principios activos diferentes en una forma de dosificación adecuada.
Como coadyuvantes son particularmente apropiados el ADN inmunoestimulante u oligonucleótidos con motivos CpG.
Estas preparaciones se pueden emplear como agentes terapéuticos o diagnósticos en medicina humana o veterinaria. Como excipientes entran en consideración sustancias orgánicas o inorgánicas apropiadas para la aplicación parenteral y que no influyen negativamente en el efecto del principio activo según la invención. Para la aplicación parenteral se emplean en particular soluciones, preferiblemente soluciones oleosas o acuosas, otras suspensiones, emulsiones o implantes. El principio activo según la invención también se puede liofilizar y los liofilizados obtenidos se pueden emplear, por ejemplo, para la preparación de preparados inyectables. Las preparaciones indicadas se pueden esterilizar y/o pueden contener coadyuvantes como conservantes, estabilizantes y/o humectantes, emulsionantes, sales para influir en la presión osmótica, sustancias tampón y/o varios principios activos distintos.
Además, mediante la formulación correspondiente del principio activo según la invención se pueden obtener preparados de depósito, por ejemplo mediante adsorción en hidróxido de aluminio.
Por tanto, la invención también sirve para mejorar el diagnóstico in vitro en el marco de una identificación de componentes alérgenos activadores del espectro de sensibilización específico de los pacientes. La invención sirve también para la preparación de preparados claramente mejorados para la inmunoterapia específica de alergias al polen de gramíneas.
Tabla 1 Cebadores empleados
- Cebador nº
- SEC ID Nº Secuencia
- #83
- 24 GGCTCCCGGGGCGAACCAGTAG
- #87
- 25 ACCAACGCCTCCCACATCCAGTC
- #131
- 26 GATAAGCTTGAATTCTGATTAGTACTTTTTGATCAGC GGCGGGATGCTC
- #189
- 27 GATAAGCTTCTCGAGTGATTAGTACTTTTTGATCAGC GGCGGGATGCTC
Claims (12)
- REIVINDICACIONES
- 1.
- Una molécula de ADN que codifica para un alérgeno con las propiedades de Lol p 4, correspondiente a una secuencia de nucleótidos seleccionada entre una de las secuencias según SEC ID Nº 1 y 3.
-
- 2.
- Una molécula de ADN, correspondiente a una secuencia parcial de la molécula de ADN según la reivindicación 1, la cual codifica para un fragmento de Lol p 4 inmunomodulador, reactivo frente a células T.
-
- 3.
- Una molécula de ADN, correspondiente a una combinación de secuencias parciales de la molécula de ADN según la reivindicación 1, la cual codifica para un fragmento de Lol p 4 inmunomodulador, reactivo frente a células T.
-
- 4.
- Una molécula de ADN, correspondiente a una secuencia de nucleótidos según una o varias de las reivindicaciones de la 1 a la 3, caracterizada porque una mutación conduce al intercambio de una, varias o todas las cisteínas del polipéptido correspondiente por otro aminoácido.
-
- 5.
- Un vector de expresión de ADN recombinante o un sistema de clonación que contiene una molécula de ADN según una o varias de las reivindicaciones de la 1 a la 4, unido funcionalmente con una secuencia control de expresión.
-
- 6.
- Un organismo huésped, transformado con una molécula de ADN según una o varias de las reivindicaciones de la 1 a la 4 o un vector de expresión según la reivindicación 5.
-
- 7.
- Un procedimiento para la preparación de un polipéptido, codificado mediante una secuencia de ADN según una o varias de las reivindicaciones de la 1 a la 4, mediante cultivo de un organismo huésped según la reivindicación 6 y obtención del correspondiente polipéptido a partir del cultivo.
-
- 8.
- Un polipéptido recombinante que codifica para una secuencia de ADN según una o varias de las reivindicaciones de la 1 a la 4.
-
- 9.
- Un polipéptido según la reivindicación 8 como medicamento.
-
- 10.
- Una preparación farmacéutica que contiene al menos un polipéptido según la reivindicación 9 y dado el caso otros principios activos y/o coadyuvantes para el diagnóstico y/o tratamiento de alergias en cuya activación están implicados alérgenos del grupo 4 de Poaceae.
-
- 11.
- Uso de al menos un polipéptido según la reivindicación 9 para la preparación de un medicamento para el diagnóstico y/o tratamiento de alergias en cuya activación están implicados alérgenos del grupo 4 de Poaceae y/o para la prevención de dichas alergias.
-
- 12.
- Una molécula de ADN según una o varias de las reivindicaciones de la 1 a la 4 como medicamento.
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