ES2370072T3 - Procedimiento de extracción intensivo de productos celulares de microorganismos, mediante cultivo y extracción continuos, y dispositivo correspondiente. - Google Patents

Procedimiento de extracción intensivo de productos celulares de microorganismos, mediante cultivo y extracción continuos, y dispositivo correspondiente. Download PDF

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Abstract

Un procedimiento de extracción de compuestos celulares derivados de microorganismos, del tipo que comprende: - una etapa de cultivo de dichos microorganismos; -una etapa de extracción de dichos compuestos celulares derivados de dichos microorganismos, caracterizado porque cada etapa se realiza en continuo, siendo realizada dicha etapa de extracción de forma separada de dicha etapa de cultivo, siendo realizada dicha etapa de extracción por cromatografia de reparto centrifugo y en condiciones de biocompatibilidad con dichos microorganismos con ayuda de un disolvente fuertemente apolar, tal como el decano o el dodecano, y siendo seguida de: - al menos una etapa de recuperación de dichos compuestos celulares; -al menos una etapa de recirculación de dichos microorganismos en dicha etapa de cultivo.

Description

Procedimiento de extracci6n intensivo de productos celulares de microorganismos, mediante cultivo y extracci6n continuos, y dispositivo correspondiente.
El campo de la invenci6n es el de los procedimientos de extracci6n de compuestos celulares.
Se pueden contemplar diferentes aplicaciones de la invenci6n, y especialmente la extracci6n de:
-
moleculas bioactivas (pigmentos, vitaminas.), para los sectores de la farmacia, la cosmetica y el sector agroalimentario;
-
moleculas con alto poder energetico (lipidos) para el campo de la energia.
De forma mas precisa, la invenci6n se refiere a un procedimiento y a un dispositivo de extracci6n intensivo y biocompatible de compuestos intracelulares derivados de microorganismos fotosinteticos.
Uno de los intereses de los microorganismos fotosinteticos tales como las microalgas y las cianobacterias reside en su composici6n original.
La mayor parte de estos compuestos incluyen sin embargo, aplicar condiciones de estres al cultivo con el fin de actuar sobre la flexibilidad metab6lica importante de este tipo de microorganismos para llevar a cabo la biosintesis del compuesto deseado.
Cuando este compuesto es intracelular (como los pigmentos principalmente), es necesario realizar una segunda etapa de extracci6n que en la mayor parte de los casos, provoca dafos irreversibles en el cultivo (rotura por choque termino u osm6tico, desintegraci6n celular.).
Las producciones industriales basadas sobre este principio han recurrido por tanto a producciones discontinuas, alternando sucesivamente fases de producci6n de biomasa, de puesta en condiciones de estres, y despues fases de recogida, extracci6n y purificaci6n.
El mayor inconveniente de las producciones discontinuas esta ligado a la debil velocidad de crecimiento de los microorganismos fotosinteticos (en comparaci6n con los microorganismos heter6trofos tales como las bacterias o las levaduras), que impide las recogidas frecuentes, o por lo menos impone trabajar con varios sistemas de producci6n en paralelo.
Para ciertos compuestos, es posible utilizar una tecnica de extracci6n original, en la que solo se extrae el compuesto, sin alteraci6n importante de la celula (extracci6n biocompatible). Esto permite producir de forma continua el compuesto, evitando completamente la repetici6n de la fase de crecimiento y de estres.
En efecto, si esta tecnica se asocia a una producci6n en continuo de biomasa en un fotobiorreactor, una vez realizada la fase inicial de crecimiento, las condiciones de estres aplicadas a continuaci6n, se pueden mantener en teoria indefinidamente en la medida en que el compuesto producido entonces se extrae de forma continua.
Se produce una ganancia de productividad no despreciable con respecto a los procedimientos discontinuos, siendo evitadas las perdidas ligadas al tiempo de latencia necesario antes de obtener de nuevo una biomasa que presenta la composici6n celular deseada.
Una tecnica de este tipo de producci6n-extracci6n continua ha sido propuesta por Hejazi et Wijffels en 2003 (documento de patente publicada con el numero EP-1.501.937) y se describe con referencia a la figura1.
Este dispositivo se basa igualmente en los trabajos que han puesto en evidencia la existencia de disolventes biocompatibles que permiten la extracci6n de compuestos recuperables, en el caso del �-caroteno derivado de la microalga Dunaliella salina (trabajos de Leon et al. 2003).
Tal como se ilustra en la figura 1, este dispositivo comprende un fotobiorreactor en el que coexisten el cultivo 1 que contiene el compuesto a extraer y el disolvente 2 en el que se extrae progresivamente este compuesto (sistema bifasico).
Aunque operacional, este procedimiento presenta diferentes limitaciones. En efecto, la velocidad de extracci6n es relativamente debil, debido al hecho de la dificultad de poner en contacto las dos fases no miscibles (cultivos en medio acuoso, y disolvente hidr6fobo). Siendo debil la interfase de contacto, se produce una importante limitaci6n de transferencia de materia. La soluci6n consiste en mezclar muy fuertemente el conjunto, lo que alcanza sin embargo rapidamente un limite dado por la fragilidad de las celulas cultivadas.
Otro inconveniente reside en la imposibilidad de imponer condiciones 6ptimas, siendo diferentes los dos procesos (biosintesis y extracci6n). A titulo de ejemplo, al ser fotosensible el �-caroteno extraido, la utilizaci6n de una fuerte iluminaci6n (condici6n de estres necesaria para la biosintesis) para el cultivo impone trasegar regularmente el disolvente cargado de pigmento antes de la degradaci6n.
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La patente ES5110319 divulga un procedimiento de extracci6n de etanol a partir de mostos de fermentaci6n utilizando un disolvente biocompatible, en el que el mosto de fermentaci6n se extrae en una columna de extracci6n contra-corriente con el disolvente de extracci6n. El mosto extraido se recicla entonces hacia el fermentador.
La invenci6n tiene especialmente por objetivo paliar los inconvenientes de la tecnica anterior.
Mas precisamente, la invenci6n tiene por objetivo proponer una tecnica de producci6n-extracci6n continua de compuestos celulares derivados de microorganismos que permiten considerar un aumento de las velocidades de producci6n y de extracci6n con respecto a los metodos de la tecnica anterior.
La invenci6n tiene tambien por objetivo proporcionar una tecnica de tal tipo que incluya la aplicaci6n de condiciones operativas particulares adaptadas a los compuestos extraidos, o para proteger las propiedades despues de la extracci6n, o para mejorar la pureza de los compuestos extraidos, mediante la elecci6n de disolvente selectivo y el control del tiempo de extracci6n.
Otro objetivo de la invenci6n es proporcionar una tecnica de tal tipo que permita la extracci6n tanto de compuestos intracelulares como de compuestos extracelulares. Estos objetivos, asi como otros que apareceran a continuaci6n, se alcanzan gracias a la invenci6n que tiene por objeto un procedimiento de extracci6n de compuestos celulares derivados de microorganismos, del tipo que comprende:
-una etapa de cultivo de dichos microorganismos; -una etapa de extracci6n de dichos compuestos celulares derivados de dichos microorganismos,
caracterizado porque cada etapa se realiza en continuo, siendo realizada dicha etapa de extracci6n de forma separada de dicha etapa de cultivo, siendo realizada dicha etapa de extracci6n por cromatografia de reparto centrifugo y en condiciones de biocompatibilidad con dichos microorganismos con ayuda de un disolvente fuertemente apolar, tal como el decano o el dodecano, y siendo seguida de:
-al menos una etapa de recuperaci6n de dichos compuestos celulares; -al menos una etapa de recirculaci6n de dichos microorganismos en dicha etapa de cultivo.
En la medida en que el procedimiento reposa sobre dos etapas distintas y continuas de cultivo y de extracci6n de compuestos celulares, la invenci6n se aplica tanto a los microorganismos fotosinteticos como a los microorganismos no fotosinteticos (bacterias, levaduras). S6lo la etapa de cultivo difiere, pudiendo ser reemplazado el fotobiorreactor (en el caso de microorganismos fotosinteticos) por cualquier otro biorreactor adecuado para el microorganismo utilizado.
Como cada una de las fases (producci6n mediante cultivo y extracci6n) se basa en principios, tecnologias y parametros muy diferentes, el funcionamiento en dos sub-sistemas segun la invenci6n permite tener un procedimiento global intensificado con posibilidad de control separado e independiente de cada sub-sistema.
Se debe observar que la invenci6n se aplica de forma privilegiada a la extracci6n de un compuesto intracelular. Sin embargo, en ciertos casos, es posible que los microorganismos liberen en el medio un metabolito (metabolito extracelular). La invenci6n se aplica igualmente a este caso, con el mismo principio global de funcionamiento, siendo la unica diferencia que el metabolito se extrae entonces del medio de cultivo por el extractor (extracci6n liquidoliquido), en lugar de ser extraido directamente de la celula (extracci6n s6lido-liquido).
Tanto si el metabolito es intra o extra-celular, el concepto de funcionamiento en bucle de los dos sub-sistemas no es posible sin embargo, mas que si la fase de extracci6n no es destructiva frente al material biol6gico, a fin de que las celulas vivas sean reinyectadas en el sub-sistema de producci6n.
Si este no es el caso, los dos sub-sistemas funcionan en cascada, lo que es un esquema clasico a nivel industrial. La etapa de extracci6n debe evitar por tanto los dafos irreversibles en el cultivo, ya sean mecanicos, termicos o quimicos. Una elecci6n adecuada del sistema de extracci6n permite evitar los dafos mecanicos y los choques termicos.
La originalidad de la invenci6n es por tanto la divisi6n en dos sub-sistemas optimizados, que funcionan de forma acoplada, respondiendo cada uno a las tensiones que permiten finalmente la producci6n-extracci6n continua. Con respecto al sistema existente, se aportan dos mejoras principales:
-
la posibilidad de crecimiento de las transferencias de materia a nivel del extractor (y por lo tanto mejor
rendimiento global); -la posibilidad de aplicar condiciones de extracci6n diferentes de las de producci6n para preservar la integridad
del compuesto intracelular extraido.
En resumen, la invenci6n permite mejoras importantes tanto en lo que concierne a la transferencia de materia, como en lo que concierne a la posibilidad propuesta de aplicar condiciones 6ptimas operativas para las dos etapas (producci6n y extracci6n), esto por la utilizaci6n de dos sub-sistemas dedicados a cada etapa y que funcionan de
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forma acoplada, a saber con una producci6n en continuo y en condiciones de estres del compuesto intracelular, y una parte de la extracci6n biocompatible de este compuesto.
Se observa que, incluso si a priori la complejidad del procedimiento ha aumentado por la utilizaci6n de los dos subsistemas, el acoplamiento se facilita por el funcionamiento en regimen continuo y permanente. Es posible asi optimizar las condiciones de cultivo para mejorar la extracci6n (el mantenimiento de una concentraci6n intracelular constante en el tiempo permite definir mejor las condiciones de extracci6n a aplicar).
Segun una soluci6n ventajosa, la etapa de cultivo mencionada es una etapa de bioproducci6n, que aporta al medio vivo las condiciones necesarias para la sintesis del metabolito buscado.
De forma ventajosa, la etapa de extracci6n mencionada es una etapa de extracci6n liquido-liquido (metabolito extracelular) o s6lido-liquido (metabolito intracelular).
Un modo tal de extracci6n permite asegurar la transferencia del metabolito buscado de la celula (caso de un compuesto intracelular) y/o del medio de cultivo (caso de un compuesto extracelular secretado) a un disolvente recuperado a continuaci6n a la salida del extractor.
La etapa de extracci6n se realiza por cromatografia de reparto centrifugo (CPC).
Asi las fuertes capacidades de transferencia de la CPC permiten disponer de un sistema de extracci6n liquidoliquido de alta resoluci6n.
La utilizaci6n de la CPC implica sin embargo una tensi6n importante, a saber la posibilidad de fuertes tensiones mecanicas sufridas por las celulas vivas despues de haber atravesado el aparato (campo centrifugo, sistema de bombeo del cultivo, cizallamiento entre y en cada celula de separaci6n). El sistema no es por tanto utilizable en continuo mas que si el cultivo es capaz de soportar este tratamiento. Los ensayos han demostrado la posibilidad de aproximaci6n y su potencial (mejores rendimientos con respecto a los publicados), con la condici6n sin embargo de permanecer en una gama operativa de la CPC aceptable para preservar la integridad celular del material biol6gico.
Segun una variante a considerar, la etapa de extracci6n mencionada se realiza en la oscuridad.
Segun otra variante a considerar, la etapa de extracci6n mencionada se realiza en anoxia bajo nitr6geno gaseoso.
Se comprende por tanto que un procedimiento segun la invenci6n permite aplicar facilmente condiciones particulares en el sistema de extracci6n, como el trabajo en la oscuridad si el producto es fotosensible, o en condiciones de anoxia, si el producto se oxida facilmente. Igualmente, el modo de extracci6n aceptado se puede elegir para que ocasione una gran selectividad (elecci6n del disolvente y control del tiempo de extracci6n).
La invenci6n se refiere igualmente a un dispositivo para la realizaci6n de un procedimiento tal como el descrito precedentemente, que comprende:
-
al menos un tanque de cultivo de dichos microorganismos;
-
al menos un tanque de extracci6n por cromatografia de reparto centrifugo de dichos compuestos celulares derivados de dichos microorganismos siendo dicho tanque de extracci6n distinto de dicho tanque de cultivo y conteniendo al menos un disolvente fuertemente apolar, tal como el decano o el dodecano, biocompatible con dichos microorganismos;
-medios de recuperaci6n de dichos compuestos celulares; -medios de recirculaci6n de dichos microorganismos desde dicho tanque de extracci6n a dicho tanque de cultivo.
Se observa que la invenci6n evita en los microorganismos los dafos de origen quimico, mediante la utilizaci6n de un disolvente biocompatible, que extrae el metabolito intracelular, sin alteraci6n irreversible del metabolismo del microorganismo que puede llevar a la muerte celular.
Segun una soluci6n ventajosa, dicho tanque de cultivo es un fotobiorreactor y dicho tanque de extracci6n es un tanque de extracci6n liquido-liquido.
Otras caracteristicas y ventajas de la invenci6n apareceran mas claramente con la lectura de la siguiente descripci6n de un modo de realizaci6n preferente de la invenci6n, dado a titulo de ejemplo ilustrativo y no limitativo, y los dibujos adjuntos entre los cuales:
-
la figura 1 es una representaci6n esquematica de un metodo de producci6n-extracci6n, nuevo segun la tecnica anterior; -la figura 2 es una representaci6n esquematica de un dispositivo para la realizaci6n de un procedimiento segun la invenci6n; -la figura 3 es un grafico que muestra los resultados de extracci6n por CPC del -caroteno intracelular de un cultivo de Dunaliella salina, con ayuda de un procedimiento segun la invenci6n.
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Tal como se ha indicado precedentemente, el principio de la invenci6n reside en el hecho de proponer un procedimiento de producci6n-extracci6n de los compuestos celulares que se basa en la asociaci6n de dos subsistemas que funcionan en bucle, estando cada uno dedicado especificamente a una de las dos fases de producci6n y de extracci6n.
Un dispositivo para la realizaci6n de un procedimiento segun la invenci6n, se describe en referencia a la figura 2.
Un dispositivo de este tipo comprende:
-
un fotobiorreactor 3 que funciona en modo continuo, y que asegura la etapa de cultivo de los microorganismos
fotosinteticos; -un extractor 4 que asegura de forma continua la extracci6n de los compuestos celulares; -medios de transferencia 5 de los microorganismos del fotobiorreactor al extractor 4; -medios de recuperaci6n 41 de los compuestos celulares; -medios de recirculaci6n 6 de los microorganismos del extractor 4 al fotobiorreactor 3.
La fase de biosintesis se realiza asi en uno o varios fotobiorreactores que funcionan en continuo, permitiendo aplicar condiciones ideales y controladas para llevar a una velocidad de biosintesis optimizada del compuesto deseado. Modificando los parametros fisico-quimicos de cultivo (temperatura, pH, medio de cultivo, luz incidente), es asi posible favorecer por inducci6n de un estres fisiol6gico la biosintesis de un metabolito especifico, interviniendo por ejemplo en la protecci6n del microorganismo en este estres (ejemplo del -caroteno en situaci6n de estres luminoso y oxidativo).
El extractor esta constituido por un tanque que contiene un disolvente biocompatible tal como el dodecano o el decano.
Con un disolvente de este tipo, se procede a una extracci6n biocompatible. Es posible entonces extraer en continuo y de forma selectiva ciertos compuestos intracelulares conservando siempre la vitalidad de las celulas.
En el caso de un disolvente debilmente hidr6filo, la puesta en contacto altera de forma irremediable la estructura celular. La extracci6n es entonces muy importante pero no selectiva (se extrae una gran cantidad de compuestos) y no biocompatible.
Por el contrario, si el disolvente se elige suficientemente apolar, es posible preservar la pared celular y las funciones vitales, manteniendo siempre una extracci6n de ciertos compuestos hidr6fobos, y especialmente la clorofila y el caroteno en la Dunaliella salina. Cuanto mas apolar es el disolvente, mas disminuye la capacidad de extracci6n, con una reducci6n mas marcada para la clorofila. Eligiendo un disolvente adecuado, se puede obtener por tanto una extracci6n biocompatible y selectiva del -caroteno.
En comparaci6n con los metodos duros de extracci6n convencionales pero casi completos de los pigmentos intracelulares, la perdida de productividad generada por la utilizaci6n de un disolvente fuertemente apolar a priori menos eficaz puede ser compensada entonces por el mantenimiento de una extracci6n continua de -caroteno directamente derivado de las celulas en cultivo.
Segun el principio de la invenci6n, el disolvente se mantiene en un sistema paralelo dedicado a la extracci6n (el extractor 4, claramente separado fisicamente del fotobiorreactor 3) en el que transita el cultivo antes de volver al fotobiorreactor o los fotobiorreactores de producci6n.
Con un dispositivo de este tipo, y aplicando una percolaci6n importante por ejemplo (la fase dispersa es el cultivo, y la fase continua el disolvente), se produce un aumento importante de las superficies interfaciales entre el medio biol6gico acuoso y el disolvente (fases no miscibles). Aunque esto genere tensiones mecanicas elevadas (estres hidrodinamico), se compensa por un tiempo de pase corto en el sub-sistema de extracci6n, teniendo en cuenta la velocidad elevada de extracci6n.
La etapa de extracci6n se realiza por cromatografia de reparto centrifugo (CPC): comparable a la HPLC (cromatografia de liquidos de alta resoluci6n), sin embargo esta tecnica difiere por la ausencia de soporte s6lido y su importante capacidad de tratamiento.
En la tecnica CPC, la parte util esta constituida por un disco en rotaci6n provisto de una serie de cubetas de separaci6n. Gracias a un importante campo de fuerzas centrifugas, una de las fases, llamada estacionaria, se mantiene en el aparato. La otra fase (m6vil) que circula con un caudal forzado percola entonces a nivel de cada cubeta en la fase estacionaria, con lo que hay una mejora significativa de la puesta en contacto de las dos fases liquidas. La eficacia depende entonces de las condiciones operativas (velocidad de rotaci6n, caudal de la fase m6vil), de las propiedades fisicas de las dos fases y de la forma de cada cubeta de separaci6n (Marchal 2001). Este metodo se aplica usualmente a purificaciones de moleculas derivadas de mezclas complejas: compuestos naturales activos, peptidos, acidos grasos, fosfolipidos, antibi6ticos, extracci6n de aromas, fraccionamiento de productos del petr6leo.
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Siguiendo la aplicaci6n aludida, se contemplara la utilizaci6n de fotobiorreactores de grandes volumenes, de cubetas de cultivo, o de fotobiorreactores de volumenes mas pequefos pero intensificados. El extractor sera un extractor intensificado CPC, en el cual se optimizan las transferencias de materia y la puesta en contacto del medio de cultivo con el disolvente extractor.
Para demostrar la posibilidad de acoplamiento CPC-fotobiorreactor, se han realizado ensayos y se han dedicado especialmente a evaluar la cantidad de -caroteno extraido y las perdidas celulares asociadas, esto en funci6n de diversos parametros operativos de la CPC, utilizando el dodecano y el decano como disolventes. Algunos ejemplos de los resultados se presentan en la figura 3.
Estos resultados ponen de relieve tres de las principales caracteristicas del procedimiento, a saber:
-
el papel primordial de la transferencia de materia durante la extracci6n; -la necesidad de encontrar un compromiso para respetar la integridad celular y; -la influencia de la solubilidad del -caroteno en el disolvente.
El caudal de alimentaci6n en fase m6vil (cultivo) en la CPC desempefa asi un papel importante. Una cantidad mas elevada de -caroteno se extrae con fuerte caudal, pero con una alteraci6n considerable de las celulas vivas (perdida de flagelos, mortalidad).
Debido al hecho de la capacidad del medio vivo a regenerarse, es sin embargo aceptable una perdida pequefa de biomasa. Asi, 48 horas despues del pase en la CPC en condiciones severas, se recupera una gran parte del cultivo (perdidas con respecto a la concentraci6n inicial de 40 % a 20 %).
Esto demuestra la diversidad de los protocolos operativos posibles, ya sea con una extracci6n moderada pero permanente, o ya sea con una extracci6n importante pero secuencial, con tiempos de latencia a definir para regenerar el material vivo entre cada extracci6n.
Se observara que estas diferentes posibilidades de funcionamiento no lo modifican nada y se engloban en el principio global de la invenci6n descrito previamente (funcionamiento en dos sub-sistemas).
Se recuerda que la separaci6n de las dos etapas de producci6n y de extracci6n permite optimizar cada una de las fases (y su acoplamiento).
En lo que concierne a la parte de producci6n, es importante encontrar las condiciones que permiten maximizar la composici6n intracelular en -caroteno. Estas condiciones se deben mantener en regimen continuo. Las condiciones de utilizaci6n de la CPC se puede optimizar entonces mas facilmente.
Debido al hecho de la ruptura aportada por el funcionamiento en dos sub-sistemas, se han realizado diferentes ensayos, con el fin de poner en practica nuevos protocolos especificos.
En efecto, la mayor parte de los protocolos que existen han sido desarrollados sobre la base de un cultivo extensivo y discontinuo.
El funcionamiento en fotobiorreactor continuo aporta un nuevo punto de vista a optimizar.
Asi, la concentraci6n intracelular usualmente alrededor de 15-20 pg por celulas ha sido aumentada a 70.
Esto ha sido obtenido mediante forzamiento fisiol6gico actuando sobre las condiciones operativas clasicas de cultivo en un fotobiorreactor (temperatura, irradiaci6n, pH) y modificando el medio de cultivo. Se han afadido asi dos compuestos al medio de cultivo estandar, a saber el acetato y el hierro (Fe2+), estos dos compuestos permiten favorecer a la vez el crecimiento y la biosintesis del -caroteno. Se debe observar que el funcionamiento en cultivo continuo permite optimizar facilmente la cantidad respectiva de cada uno de los compuestos (cantidad por celula constante en el tiempo).
La asociaci6n de la CPC a un fotobiorreactor rectangular sencillo de 4 litros y 3 cm de camino 6ptico que funciona en continuo y al que han sido aplicadas las condiciones que llevan a la biosintesis de -caroteno, ha permitido obtener los primeros resultados que confirman las diferentes mejoras aportadas por cada sub-sistema. Asi, los estudios de la tecnica anterior dirigidos sobre la extracci6n del -caroteno en reactor sencillo han demostrado que se pueden extraer como maximo 5 a 10 mg/L.
La CPC ha permitido obtener una extracci6n de 148 mg/L de -caroteno en cabeza de la columna, lo que es 30 veces mas que los metodos utilizados segun la tecnica anterior (condiciones de extracci6n por CPC; caudal de alimentaci6n 20 mL/min -velocidad de rotaci6n 1000 tr/min - disolvente decano; condiciones de cultivo: fotobiorreactor rectangular de 4 litros -pH 7,5 -temperatura 30 °C - salinidad 220 g/L - luz incidente 700 IE/m2.s). En total, se han extraido 1,25 mg de -caroteno por 3200 mL de cultivo y 60 mL de disolvente.
En producci6n continua, se espera una productividad del orden de 50 mg de carotenoides por dia y litro de cultivo.
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Claims (8)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un procedimiento de extracci6n de compuestos celulares derivados de microorganismos, del tipo que comprende:
    -una etapa de cultivo de dichos microorganismos; -una etapa de extracci6n de dichos compuestos celulares derivados de dichos microorganismos,
    caracterizado porque cada etapa se realiza en continuo, siendo realizada dicha etapa de extracci6n de forma separada de dicha etapa de cultivo, siendo realizada dicha etapa de extracci6n por cromatografia de reparto centrifugo y en condiciones de biocompatibilidad con dichos microorganismos con ayuda de un disolvente fuertemente apolar, tal como el decano o el dodecano, y siendo seguida de:
    -al menos una etapa de recuperaci6n de dichos compuestos celulares; -al menos una etapa de recirculaci6n de dichos microorganismos en dicha etapa de cultivo.
  2. 2.
    El procedimiento de extracci6n segun la reivindicaci6n 1, caracterizado porque dicha etapa de cultivo es una etapa de producci6n biol6gica.
  3. 3.
    El procedimiento de extracci6n segun una de las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado porque dicha etapa de extracci6n es una etapa de extracci6n liquido-liquido o s6lido-liquido.
  4. 4.
    El procedimiento de extracci6n segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque dicha etapa de extracci6n se realiza en la oscuridad.
  5. 5.
    El procedimiento de extracci6n segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque dicha etapa de extracci6n se realiza en anoxia bajo nitr6geno gas.
  6. 6.
    Un dispositivo para la realizaci6n del procedimiento de extracci6n segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque comprende:
    -
    al menos un tanque 3 de cultivo de dichos microorganismos;
    -
    al menos un tanque de extracci6n 4 por cromatografia de reparto centrifugo de dichos compuestos celulares derivados de dichos microorganismos, siendo dicho tanque de extracci6n 4 distinto de dicho tanque 3 de cultivo y conteniendo al menos un disolvente fuertemente apolar, tal como el decano o el dodecano, biocompatible con dichos microorganismos;
    -
    medios de recuperaci6n 41 de dichos compuestos celulares; -medios de recirculaci6n 6 de dichos microorganismos desde dicho tanque de extracci6n a dicho tanque de cultivo.
  7. 7.
    El dispositivo segun la reivindicaci6n 6, caracterizado porque dicho tanque 3 de cultivo es un biorreactor.
  8. 8.
    El dispositivo segun las reivindicaciones 6 y 7, caracterizado porque dicho tanque de extracci6n 4 es un tanque de extracci6n liquido-liquido o s6lido-liquido.
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