ES2366255B2 - Nanocomposiciones sacarídicas para la liberación de vacunas. - Google Patents
Nanocomposiciones sacarídicas para la liberación de vacunas. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2366255B2 ES2366255B2 ES201131074A ES201131074A ES2366255B2 ES 2366255 B2 ES2366255 B2 ES 2366255B2 ES 201131074 A ES201131074 A ES 201131074A ES 201131074 A ES201131074 A ES 201131074A ES 2366255 B2 ES2366255 B2 ES 2366255B2
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- nanocapsules
- document
- antigen
- virus
- poly
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 35
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 claims abstract description 161
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 81
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 81
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 80
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims abstract description 65
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 46
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 46
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 claims abstract description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 38
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 35
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 29
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 21
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- -1 cationic polysaccharide Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 41
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 35
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 claims description 34
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 33
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 25
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 17
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 17
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 claims description 16
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 claims description 16
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 15
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 15
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 14
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 14
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 12
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 11
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 10
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 10
- 150000003904 phospholipids Chemical group 0.000 claims description 10
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 9
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 7
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 239000007908 nanoemulsion Substances 0.000 claims description 5
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 claims description 4
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 4
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 claims description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 3
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 3
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 claims description 3
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 claims description 3
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 claims description 3
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 claims description 3
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 claims description 3
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims description 3
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 claims description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010284 hepatitis E Diseases 0.000 claims description 3
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 3
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WKQCYNCZDDJXEK-UHFFFAOYSA-N simalikalactone C Natural products C1C(C23C)OC(=O)CC3C(C)C(=O)C(O)C2C2(C)C1C(C)C=C(OC)C2=O WKQCYNCZDDJXEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 claims description 3
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 claims description 2
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 claims description 2
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 claims description 2
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 claims description 2
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 claims description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 claims description 2
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 claims description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 2
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N squalene group Chemical group CC(C)=CCC\C(\C)=C\CC\C(\C)=C\CC\C=C(/C)\CC\C=C(/C)\CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N 0.000 claims description 2
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 claims description 2
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 claims description 2
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 claims description 2
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 claims description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims 2
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 claims 2
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 claims 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims 2
- 238000012382 advanced drug delivery Methods 0.000 claims 2
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 claims 2
- 238000012552 review Methods 0.000 claims 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 206010014596 Encephalitis Japanese B Diseases 0.000 claims 1
- 206010017913 Gastroenteritis rotavirus Diseases 0.000 claims 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 claims 1
- 201000005807 Japanese encephalitis Diseases 0.000 claims 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 claims 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 claims 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims 1
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 claims 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims 1
- 201000006747 infectious mononucleosis Diseases 0.000 claims 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 claims 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 claims 1
- 239000004753 textile Substances 0.000 claims 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 abstract description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 33
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 33
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 229960002751 imiquimod Drugs 0.000 description 23
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 14
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 14
- 150000003421 squalenes Chemical class 0.000 description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000012118 Alexa Fluor 750 Substances 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 8
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 8
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- VYXSBFYARXAAKO-WTKGSRSZSA-N chembl402140 Chemical compound Cl.C1=2C=C(C)C(NCC)=CC=2OC2=C\C(=N/CC)C(C)=CC2=C1C1=CC=CC=C1C(=O)OCC VYXSBFYARXAAKO-WTKGSRSZSA-N 0.000 description 7
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 241000341655 Human papillomavirus type 16 Species 0.000 description 6
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 6
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 5
- RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N Isoprene Chemical group CC(=C)C=C RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 4
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- RHKWIGHJGOEUSM-UHFFFAOYSA-N 3h-imidazo[4,5-h]quinoline Chemical class C1=CN=C2C(N=CN3)=C3C=CC2=C1 RHKWIGHJGOEUSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100209954 Human papillomavirus type 16 L1 gene Proteins 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 3
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N beta-D-glucosamine Chemical compound N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 3
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 2
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 2
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 2
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 2
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 229940038774 squalene oil Drugs 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- XFQPQSJDMJVOBN-UHFFFAOYSA-N 1-[4-amino-2-(ethylaminomethyl)imidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]-2-methylpropan-2-ol;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F.C1=CC=CC2=C(N(C(CNCC)=N3)CC(C)(C)O)C3=C(N)N=C21 XFQPQSJDMJVOBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- 241000239223 Arachnida Species 0.000 description 1
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 101710147327 Calcineurin B homologous protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical class OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- UXDDRFCJKNROTO-UHFFFAOYSA-N Glycerol 1,2-diacetate Chemical compound CC(=O)OCC(CO)OC(C)=O UXDDRFCJKNROTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 208000022120 Jeavons syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010091423 L-Ala-gamma-D-Glu-meso-diaminopimelic acid Proteins 0.000 description 1
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 244000062730 Melissa officinalis Species 0.000 description 1
- 235000010654 Melissa officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 241000581002 Murex Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 108010084333 N-palmitoyl-S-(2,3-bis(palmitoyloxy)propyl)cysteinyl-seryl-lysyl-lysyl-lysyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Chemical class 0.000 description 1
- 108091036414 Polyinosinic:polycytidylic acid Proteins 0.000 description 1
- 101500027983 Rattus norvegicus Octadecaneuropeptide Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067868 Skin mass Diseases 0.000 description 1
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 206010042674 Swelling Diseases 0.000 description 1
- 102000008236 Toll-Like Receptor 7 Human genes 0.000 description 1
- 108010060825 Toll-Like Receptor 7 Proteins 0.000 description 1
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 1
- 101800000385 Transmembrane protein Proteins 0.000 description 1
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 1
- 101710090322 Truncated surface protein Proteins 0.000 description 1
- 241000021375 Xenogenes Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000035587 bioadhesion Effects 0.000 description 1
- 238000012925 biological evaluation Methods 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 108010089807 chitosanase Proteins 0.000 description 1
- OJYGBLRPYBAHRT-IPQSZEQASA-N chloralose Chemical compound O1[C@H](C(Cl)(Cl)Cl)O[C@@H]2[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]21 OJYGBLRPYBAHRT-IPQSZEQASA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- MPRVXUYAJZZBHG-UHFFFAOYSA-K dicarbonoperoxoyloxyalumanyl hydroxy carbonate Chemical compound [Al+3].OOC([O-])=O.OOC([O-])=O.OOC([O-])=O MPRVXUYAJZZBHG-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 229930004069 diterpene Natural products 0.000 description 1
- 125000000567 diterpene group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- QIFGMZZTJRULMA-XLPZGREQSA-N gamma-D-glutamyl-meso-diaminopimelic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC[C@H](C(O)=O)NC(=O)CC[C@@H](N)C(O)=O QIFGMZZTJRULMA-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 229940124670 gardiquimod Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 235000011167 hydrochloric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 102000027411 intracellular receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008582 intracellular receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000865 liniment Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L magnesium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Mg+2] VTHJTEIRLNZDEV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000347 magnesium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001862 magnesium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229930003658 monoterpene Natural products 0.000 description 1
- 150000002773 monoterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000002577 monoterpenes Nutrition 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003014 phosphoric acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Chemical class 0.000 description 1
- 150000003097 polyterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229950010550 resiquimod Drugs 0.000 description 1
- BXNMTOQRYBFHNZ-UHFFFAOYSA-N resiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C(N(C(COCC)=N3)CC(C)(C)O)C3=C(N)N=C21 BXNMTOQRYBFHNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043267 rhodamine b Drugs 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 description 1
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229930002368 sesterterpene Natural products 0.000 description 1
- 150000002653 sesterterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000010686 shark liver oil Substances 0.000 description 1
- 229940069764 shark liver oil Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 150000003535 tetraterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 235000009657 tetraterpenes Nutrition 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000010497 wheat germ oil Substances 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5192—Processes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A61K47/4823—
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
- A61K9/5161—Polysaccharides, e.g. alginate, chitosan, cellulose derivatives; Cyclodextrin
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
- C08B37/0027—2-Acetamido-2-deoxy-beta-glucans; Derivatives thereof
- C08B37/003—Chitin, i.e. 2-acetamido-2-deoxy-(beta-1,4)-D-glucan or N-acetyl-beta-1,4-D-glucosamine; Chitosan, i.e. deacetylated product of chitin or (beta-1,4)-D-glucosamine; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
- C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Nanocomposiciones sacarídicas para la liberación de vacunas. La presente invención se refiere a un sistema para la administración de antígenos, que comprende un sistema de nanocápsulas de un tamaño medio inferior a 1 micrómetro, que comprenden a su vez: a) poli-D-glucosamina; b) al menos un aceite adyuvante seleccionado de entre el grupo constituido por isoprenoides, terpenoides y terpenos; c) al menos un tensioactivo, preferiblemente de tipo aniónico o de tipo no iónico; d) al menos un antígeno, preferiblemente de tipo viral; y opcionalmente e) una molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes o inmunomoduladoras; caracterizadas porque presentan una estructura característica tipo reservorio donde los componentes lipídicos forman un núcleo oleoso que se encuentra recubierto por al menos un polisacárido catiónico. Adicionalmente, la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden dicho sistema de nanocápsulas así como a procedimientos para su preparación y usos del mismo.
Description
Nanocomposiciones sacarídicas para la liberación de vacunas.
Campo técnico
La presente invención se refiere al desarrollo de formulaciones basadas en el diseño de vehículos nanométricos, capaces de inducir o potenciar una repuesta inmunológica frente a un antígeno asociado. Más en concreto, se refiere a nanosistemas de aplicación en el campo de las enfermedades infecciosas. Adicionalmente, la invención se refiere a las composiciones farmacéuticas que los comprenden, así como a procedimientos para su preparación.
Antecedentes
Las vacunas se componen tradicionalmente de microorganismos atenuados o muertos que son capaces de generar protección inmunológica frente a la enfermedad que causan una vez inoculados al organismo. El éxito de este tipo de vacunas reside en que el organismo reconoce dicho patógeno y comienza una respuesta inmunitaria frente al mismo, así como la generación de memoria inmunológica, lo que permite desencadenar una respuesta inmediata cuando el microorganismo patógeno entra en el organismo. Sin embargo, la utilización de este tipo de vacunas puede ir acompañada de cierta problemática relacionada principalmente con (i) la posible reactivación del agente infeccioso como consecuencia de mutaciones en el genoma, (ii) la presencia de agentes tóxicos que pueden acompañar al patógeno como son los lipopolisacáridos (LPS), o (iii) la pérdida de potencia debido a deficiencias en el transporte y almacenamiento en las condiciones de refrigeración requeridas (Plotkin SA. Vaccines: past, present and future. Nat Med 2005;11(4 (suppl)):S5-11).
Para solventar algunos de estos problemas, en los últimos años se han obtenido antígenos subunidad formados por las partes mejor conservadas de los patógenos, o plásmidos ADN codificadores de estos antígenos, para que el organismo pueda reconocerlos como invasores una vez administrados, y que presentan un mejor perfil de seguridad al evitar la inoculación del microorganismo entero. Sin embargo, este aumento en la seguridad de la vacuna suele conllevar una disminución en la inmunogenicidad de la misma, lo que da lugar a una menor potencia de la respuesta inmune generada. Por esta razón, tanto los antígenos subunidad como las vacunas ADN requieren (i) una dosificación múltiple con dosis de recuerdo para asegurar la protección inmunológica, así como (ii) el apoyo de algún tipo de agente adyuvante, de forma que ayude a la inducción y potenciación de la respuesta inmunitaria frente al antígeno/material genético administrado, y por tanto, frente al propio patógeno.
Actualmente, sólo las sales insolubles de aluminio (álum) están aprobadas por las agencias regulatorias de todo el mundo, y las únicas por la FDA (US Food and Drug Administration), para su uso en humanos con este fin. Sin embargo, se han identificado múltiples inconvenientes relacionados con este adyuvante, tales como:
- -
- aparición de síntomas locales tras la inyección como hinchazón, eritemas o nódulos cutáneos (Lindbald EB. Aluminium adjuvants -in retrospect and prospect. Vaccine 2004;22:3658-3668),
- -
- pérdida de potencia por congelación accidental (Zapata MI, Peck GE, Hem SL, White JL, Feldkamp JR. Mechanism of freeze-thaw instability of aluminum hydroxycarbonate and magnesium hydroxide gels. J Pharm Sci 1984;73:3-9),
- -
- inducción de una respuesta inmune únicamente de tipo humoral, lo que lo hace menos adecuado para aquellos microorganismos que requieran una respuesta celular para ser eliminados del organismo (Brewer JM. (How) do alumiun adjuvants work? Immunol Lett 2006;102:10-15),
- -
- aparición de reacciones alérgicas (Brewer JM. (How) do alumiun adjuvants work? Immunol Lett 2006;102:1015),
- -
- necesidad de administrarlo por vía parenteral y en varias dosis para generar protección.
Por lo tanto, se hace necesario el desarrollo de nuevos sistemas que sean menos tóxicos, más tolerables por el paciente, que permitan la potenciación y modulación de las respuestas inmunes frente a una amplia variedad de microorganismos patógenos, así como una reducción en el número de dosis necesaria para alcanzar protección frente a enfermedades infecciosas.
Nuevos sistemas basados en lípidos y tensioactivos (emulsiones) han sido introducidos recientemente en el mercado europeo formando parte de vacunas frente a la gripe pandémica: MF59TM, AS03TM y la AF03TM, desarrollados respectivamente por las empresas farmacéuticas Novartis, GlaxoSmithKline (GSK) y Sanofi Pasteur (EMEA -pandemic influenza vaccines: http://tinyurl.com/5vw5yyn):
MF59TM (Novartis): Aflunov® (H5N1), Focetricia® (H1N1), Foclivia® (H5N1)
AS03TM (GSK): Prepandrix® (H5N1)
AF03 TM (Sanofi Pasteur): Humenza® (H1N1).
Dichas composiciones basadas en emulsiones se han aprobado como vehículos adyuvantes de virus inactivados provenientes de diversas cepas de influenza relacionadas con el brote pandémico. Su aplicación como vehículos adyuvantes de antígenos subunidad no ha sido aprobada por las agencias regulatorias, aunque se encuentra recogida en numerosos documentos (por ejemplo: US2009191226 (A2), US2009304742 (A1), WO 2010125461 (A1), US 2005136073 (A1), WO 2007006939 (A3), WO 0168129 (A2)). Las emulsiones adyuvantes descritas en dichos documentos presentan una composición común consistente en una fase oleosa compuesta por escualeno y una mezcla de distintos tensioactivos no iónicos que le confieren estabilidad al sistema. Dichas emulsiones pueden incluir además agentes antioxidantes como el α-tocoferol (por ejemplo: WO 2006100110 (A1), WO 2009127676, WO 2009127677, US 2010183667 (A1)) u otras moléculas inmunomoduladoras como el CpG (por ejemplo: EP 1572124 (A4)), muramil dipéptidos (por ejemplo: US2003147898 (A1), EP0315153 (A2)), monofosforil lípido A (por ejemplo: WO 9956776 (A2), EP1951298 (A1)) ó también éste último combinado con QS21 (por ejemplo: US 2007196394 (A1), WO 9517210 (A1)).
También se han descrito composiciones constituidas de un núcleo oleoso rodeado de una cubierta polimérica, llamados sistemas nanocapsulares, entre los que cabe mencionar una composición de nanocápsulas polisacarídicas (EP1834635 A1). Este sistema emplea en el núcleo oleoso aceites compuestos por ácidos grasos y sus derivados (ésteres ó amidas) y además requiere la presencia de un compuesto polioxialquilenado para estabilizar el sistema.
Breve descripción de la invención
La presente invención proporciona un sistema al cual es posible asociar antígenos subunidad de forma eficaz que presenta ventajas especialmente relevantes en el campo de las vacunas: está compuesto de materiales considerados biocompatibles y asimilables por el organismo, y permite alcanzar niveles de protección en animales comparables a los que resultan protectores en humanos frente a enfermedades infecciosas, empleando un número de dosis de antígeno más reducido que en el caso de las vacunas que se comercializan actualmente.
Así, en un primer aspecto, la invención se dirige a un sistema para la administración de antígenos que comprende nanocápsulas con un tamaño medio inferior a 1 micrómetro, que comprenden:
a) poli-D-glucosamina;
b) un aceite adyuvante seleccionado de entre el grupo constituido por isoprenoides, terpenoides y terpenos;
c) al menos un agente tensioactivo excluyendo tensioactivos catiónicos; y
d) al menos un antígeno;
caracterizadas por presentar una estructura tipo reservorio, donde el núcleo está compuesto por componentes lipídicos y está recubierto por poli-D-glucosamina.
En otro aspecto, la invención se refiere a un sistema como se ha definido anteriormente que se encuentra en forma liofilizada.
En otro aspecto, la invención se refiere a una vacuna que comprende un sistema como se ha definido anteriormente.
En otro aspecto, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un sistema como se ha definido anteriormente.
En otro aspecto, la invención hace referencia a una composición farmacéutica que comprende un sistema como se ha definido anteriormente para su uso en la prevención de enfermedades infecciosas.
En un aspecto adicional, la invención se dirige a un procedimiento para la preparación de un sistema como se ha definido anteriormente que comprende:
a) preparar una solución acuosa de poli-D-glucosamina;
b) preparar una solución orgánica formada por al menos un aceite adyuvante seleccionado de entre el grupo constituido por isoprenoides, terpenoides y terpenos y al menos un agente tensioactivo;
c) emulsificar las soluciones formadas en a) y b) con la formación espontánea de las nanocápsulas;
d) incubar al menos un antígeno sobre la superficie de las nanocápsulas preformadas.
Alternativamente, el procedimiento para la preparación de un sistema como se ha definido anteriormente comprende:
a) preparar una solución acuosa de poli-D-glucosamina;
b) preparar una solución orgánica formada por al menos un aceite adyuvante seleccionado de entre el grupo constituido por isoprenoides, terpenoides y terpenos y al menos un agente tensioactivo;
c) emulsificar la solución b) en una fase acuosa;
d) incubar la nanoemulsión obtenida en c) con la solución a);
e) incubar al menos un antígeno sobre la superficie de las nanocápsulas preformadas.
La invención hace referencia asimismo al uso de un sistema como se ha definido anteriormente en la preparación de una vacuna. En una realización particular, dicha vacuna es para aplicación en prevención de enfermedades infecciosas. Preferiblemente las enfermedades infecciosas a las que va dirigida la prevención son aquellas causadas por agentes víricos.
Breve descripción de las figuras
Figura 1: Imágenes de microscopio electrónico de transmisión (TEM) donde se puede observar la morfología de las nanocápsulas sin antígeno asociado (rHBsAg). Las nanocápsulas presentan una forma regular esférica y tamaño de partícula nanométrico homogéneo.
Figura 2: Imágenes de fluorescencia in vivo tras la administración intramuscular de nanocápsulas con núcleo de escualeno, elaboradas a partir de poli-D-glucosamina marcada con Alexa Fluor 750 succiminidil éster. Las nanocápsulas son capaces de formar un depot en el lugar de inyección que permanece durante al menos 5 horas tras la inyección.
Figura 3: Imágenes de microscopio electrónico de transmisión (TEM) donde se puede observar la morfología de las nanocápsulas con el rHBsAg asociado a su superficie. Dichas nanocápsulas presentan una forma regular esférica y tamaño de partícula nanométrico homogéneo.
Figura 4: Las nanocápsulas con o sin antígeno asociado (rHBsAg) han sido liofilizadas con diferentes concentraciones de trealosa como agente crioprotector. En esta gráfica se puede apreciar que tras la resuspensión del polvo liofilizado es posible recuperar el tamaño de partícula de la suspensión inicial.
Figura 5: Las nanocápsulas con núcleo de escualeno son capaces de generar una respuesta inmunitaria protectora frente a hepatitis B (comparable a los niveles protectores descritos para humanos) tras la administración de dos (0 y 4 semanas) ó tres dosis (0,4 y 8 semanas) de 10 μg de rHBsAg asociado, por vía nasal. Se puede observar en esta figura la importancia de una tercera dosis por vía mucosa para generar niveles mayores de inmunoglobulinas específicas.
Figura 6: El efecto adyuvante de las nanocápsulas se ha probado tras la administración de dos dosis de 10 μgde rHBsAg asociado por vía intramuscular (0 y 4 semanas). La concentración de anticuerpos frente a este antígeno alcanzada por las distintas formulaciones de nanocápsulas se prolonga durante el tiempo de estudio (6 meses) y en ambos casos se consiguen niveles significativamente mayores con ambos sistemas (nanocápsulas con núcleo de escualeno (_) o núcleo de escualeno e imiquimod (.)) que la formulación de referencia de la vacuna (rHBsAg-alum) (-X-) a la misma dosis. La diferente composición del núcleo da lugar una diferencia en la cinética de inducción de la respuesta inmune de ambos nanosistemas. *Nanocápsulas polisacarídicas vs. rHBsAg-alum p<0.05.
Figura 7: La administración en una dosis única de 10 μg de rHBsAg asociado a las nanocápsulas polisacarídicas (con núcleo de escualeno (_) o núcleo de escualeno e imiquimod (.)) ha generado niveles seroprotectores de IgG (>10 mIU/mL, descritos para humanos: Shouval D. Hepatitis B vaccines. J Hepatol 2003;39: S70-76) que se prolongan durante un largo período de tiempo (6 meses), no siendo éstos estadísticamente diferentes a los generados por rHBsAgalum (-X-) administrado en dos dosis de 10 μg (0 y 4 semanas). En este caso, la composición del núcleo oleoso de las nanocápsulas (escualeno o escualeno e imiquimod) no influye en la magnitud o en la cinética de la respuesta inmune. *Nanocápsulas polisacarídicas vs. rHBsAg-alum p<0.05).
Descripción detallada de la invención
En la presente invención, por el término “nanocápsulas” se hace referencia a estructuras estables y de características homogéneas, reproducibles y modulables perfectamente diferenciables, que se forman como consecuencia de un proceso controlado de interacción electrostática entre el núcleo oleoso dotado de un potencial zeta negativo y una cubierta catiónica. La interacción que resulta entre los diferentes componentes de las nanocápsulas genera entidades físicas características, que son independientes y observables, cuyo tamaño medio es inferior a 1 μm, es decir, un tamaño medio de entre 1 y 999 nm.
Por el término “tamaño medio” se entiende el diámetro promedio de la población de nanocápsulas, que comprende la estructura compuesta por el núcleo hidrofóbico y la cubierta polisacarídica, que se mueve junta en un medio acuoso. El tamaño medio de estos sistemas puede medirse utilizando procedimientos estándar conocidos por un experto en la técnica.
Las nanocápsulas del sistema de la invención tienen un tamaño de partícula medio inferior a 1 μm, es decir, tienen un tamaño medio de entre 1 y 999 nm, preferiblemente de entre 50 y 800 nm. En una realización particular el tamaño medio está comprendido entre 150 nm y 350 nm. El tamaño medio de las nanocápsulas está influido principalmente por su composición y las condiciones de formación.
Por otra parte, las nanocápsulas pueden presentar una carga eléctrica (medida mediante el potencial ξ), cuya magnitud puede tomar valores positivos o negativos dependiendo de la proporción de los diferentes componentes en el sistema. En una realización particular de la invención, las nanocápsulas presentan carga positiva que puede variar entre +1 mV y +75 mV. En una realización particular, la carga está comprendida entre +25 mV y +67 mV.
El potencial ξ de los sistemas de la invención puede medirse utilizando procedimientos estándar conocidos por un experto en la técnica, y que se describen, por ejemplo, en la parte experimental de la presente memoria descriptiva.
Poli-D-glucosamina
La cubierta de poli-D-glucosamina que rodea un núcleo oleoso proporciona ventajas a la presente invención. Por un lado, dicha cubierta ofrece la posibilidad de asociar el antígeno al sistema mediante interacciones electrostáticas. Por otro lado, la cubierta de poli-D-glucosamina también tiene un papel importante en la inducción y potenciación de la respuesta inmune ya que se le han descrito propiedades inmunoadyuvantes (Zaharoff DA, Rogers CJ, Hance KW, Scholm J, Greiner JW. Chitosan solution enhances both humoral and cell-mediated immune responses to subcutaneous vaccination. Vaccine 2007;25:2085-94). Además, las características superficiales dadas por la cubierta de poli-Dglucosamina, junto con el tamaño nanométrico del sistema, ofrecen ventajas para la inmunización a través de vías mucosas, por ejemplo la vía nasal, mejorando el transporte a través de la barrera mucosa de las moléculas bioactivas asociadas.
En la presente invención, se entiende por el término “poli-D-glucosamina” un homopolímero formado por subunidades de D-glucosamina unidas mediante enlaces glicosídicos β-(1-4), así como sus sales, fragmentos o derivados. En términos generales, se obtiene a partir de la quitina que está compuesta por subunidades de N-acetil-D-glucosamina y es uno de los componentes principales de las paredes celulares de los hongos y del exoesqueleto de los artrópodos (arácnidos, crustáceos, insectos). La poli-D-glucosamina que se encuentra disponible comercialmente se obtiene mediante hidrólisis alcalina de la quitina, lo que da lugar a la eliminación de los grupos acetilo de dicha molécula (desacetilación) dejando libres los grupos amino primarios. De esta forma, la desacetilación completa de la quitina da lugar a la obtención del homopolímero poli-D-glucosamina, representado en la figura inferior.
Los grupos amino primarios de los monómeros de D-glucosamina son capaces de protonarse en medio ácido, lo que le confiere a este polisacárido su carácter catiónico y en consecuencia sus características especiales de hidrosolubilidad y bioadhesión. Por otro lado, se trata de un material de indudable interés en el campo farmacéutico y cosmético, por ser biocompatible y biodegradable, cuyos productos de degradación no son tóxicos (Fini A, Orienti I. The role of chitosan in drug delivery. Am J Drug Deliv 2003;1:43).
En el contexto de la presente invención, los derivados de poli-D-glucosamina incluyen derivados que presentan diferentes grados de acetilación (porcentaje de subunidades de D-glucosamina acetiladas), como son los quitosanos. Estos derivados se pueden conseguir mediante la modulación de la reacción de desacetilación de la quitina, de forma que se pueden dejar libres en mayor o menor medida los grupos amino primarios. Otro procedimiento descrito en la literatura se refiere a reacciones de reacetilación de la molécula de poli-D-glucosamina (Lamarque G, Viton C, Domard A. Comparative study of the second and third heterogenous deacetylation of alpha-and beta-chitins in a multistep process. Biomacromolecules 2004;5(5):1899).
Por otro lado, en el contexto de la presente invención, se puede emplear poli-D-glucosamina con un amplio intervalo de pesos moleculares, sin que este parámetro influya significativamente en la formación de las nanocápsulas.
El término poli-D-glucosamina tal y como se utiliza en la presente descripción incluye este polisacárido como base
o como sal ácida, ésta última formada normalmente por ácidos inorgánicos u orgánicos como por ejemplo el ácido clorhídrico, ácido láctico, ácido cítrico ó ácido ascórbico. En una realización preferida de la invención, la sal ácida utilizada es el clorhidrato.
Aceite adyuvante
El empleo de aceites adyuvantes es crítico en los sistemas de la presente invención ya que se liberan de forma simultánea a los antígenos asociados y se consigue un efecto sinérgico sobre las células diana, en este caso células del sistema inmunitario.
Por el término “aceite adyuvante” se entiende cualquier aceite, es decir, líquido graso de diversos orígenes que no se disuelve en el agua y que tiene menor densidad que ésta, caracterizado por presentar propiedades estimulantes sobre las células del sistema inmunitario. De entre los posibles aceites adyuvantes se seleccionan aquellos que poseen una estructura de isoprenoide, terpeno o terpenoide.
El término “terpeno” se refiere a hidrocarburos de origen biológico que tienen un esqueleto carbonado formado por unidades de isopreno (2-metilbuta-1,3-dieno); esta clase de compuestos se subdivide según el número de átomos de carbono en hemiterpenos (C5), monoterpenos (C10), sesquiterpenos (C15), diterpenos (C20), sesterterpenos (C25), triterpenos (C30), tetraterpenos (C40, carotenoides) y politerpenos. El término “isoprenoide” se refiere a compuestos formalmente derivados de unidades de ispopreno que difieren de la estricta adición de unidades de isopreno mediante pérdida, fragmentación, derivatización o modificación química, como por ejemplo metilación o saturación de los dobles enlaces. El término “terpenoide” se refiere a terpenos o isoprenoides que contienen al menos un oxígeno en su estructura, dicho oxígeno puede estar presente por ejemplo en grupos funcionales; esta clase de compuestos se subdivide según el número de átomos de carbono del mismo modo que los terpenos. En las estructuras de terpenos, isoprenoides y terpenoides, el esqueleto de unidades de isopreno pueden ser estructuras lineales o presentar diferentes estructuras cíclicas en alguno de los extremos o en ambos extremos lo cual se indica mediante letras griegas según la nomenclatura de la IUPAC.
En una realización preferida el aceite adyuvante se selecciona de entre el grupo consistente en vitamina A, vitamina E, escualeno y escualano.
En una realización preferida, el aceite es escualeno.
El escualeno es un hidrocarburo poliinsaturado cuya estructura se puede observar en la siguiente figura:
Se encuentra ampliamente distribuido en la naturaleza ya que todos los organismos complejos producen escualeno, incluido los humanos. Se trata del precursor inicial en la ruta de síntesis de colesterol. Para su uso comercial se extrae principalmente del aceite de hígado del tiburón, aunque también puede tener origen vegetal por ejemplo obtenido a partir de aceite de oliva y hojas de olivo, aceite de germen de trigo o aceite arroz.
Agente tensioactivo
Se entiende como “agente tensioactivo” cualquier molécula compuesta de una parte hidrófoba y un resto hidrófilo. Estas moléculas presentan, por tanto, propiedades anfifílicas, lo que hace que en una mezcla agua/aceite, éstas migren hacia la superficie entre el agua y la fase oleosa. Así, la cabeza hidrofílica se mantiene en la fase acuosa y la cola hidrófoba interacciona con el aceite alterando las propiedades superficiales de la interfaz agua/aceite y permitiendo la formación de una emulsión, así como su estabilización.
En una realización particular, el agente tensioactivo puede pertenecer al grupo de los tensioactivos de tipo aniónico o de tipo no iónico. En otra realización particular, el agente tensioactivo puede estar formado por mezclas de tensioactivos de tipo aniónico y/o de tipo no iónico.
En una realización particular, el tensioactivo es de tipo aniónico. En otra realización particular, el tensioactivo aniónico es un compuesto fosfolipídico. Los fosfolípidos son un tipo de lípidos anfipáticos compuestos por una molécula de glicerol, a la que se unen dos ácidos grasos (1,2-diacilglicerol) y un grupo fosfato. El fosfato se une mediante un enlace fosfodiéster a otro grupo de átomos como colina, serina o etanolamina y que habitualmente poseen una carga eléctrica. En una realización particular el compuesto fosfolipídico es lecitina. La lecitina se conoce como una mezcla de distintos fosfolípidos en diversas proporciones. El fosfolípido mayoritario en la lecitina es la fosfatidilcolina, aunque también contiene otros fosfolípidos como la fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol y lisofosfatidilcolina, representados en la figura inferior. La proporción de los diferentes fosfolípidos en la composición de la lecitina depende principalmente de la fuente de obtención, así como del proceso de purificación y separación de los compuestos. Así, la lecitina puede tener un origen animal si se extrae por ejemplo de la yema del huevo, aunque lo más habitual es que el origen sea vegetal, siendo la principal fuente las judías de la planta de soja. Otras fuentes de obtención de lecitinas vegetales son también otras semillas oleosas como las de colza, girasol y maíz. Además, existen también fosfolípidos obtenidos mediante síntesis química. En una realización particular de la invención, el origen de la lecitina utilizada es la planta de la soja.
En otra realización particular, el agente tensioactivo de tipo no iónico se selecciona entre aquellos tensioactivos de este tipo de grado farmacéutico seleccionados del grupo compuesto por derivados hidroxílicos de cadena larga de 8 a 18 átomos de carbono (alcoholes grasos), ácidos carboxílicos etoxilados, amidas etoxiladas, glicéridos etoxilados, ésteres de glicol y derivados, monoglicéridos, poligliceril ésteres, ésteres y éteres de polialcoholes, ésteres de sorbitán/sorbitol, triésteres del ácido fosfórico, derivados etoxilados de los alcoholes grasos y éteres de polietilenglicol.
En una realización particular, el sistema de la invención comprende nanocápsulas con un tamaño medio inferior a 1 micrómetro, que comprenden poli-D-glucosamina, lecitina, escualeno y al menos un antígeno.
Antígeno
Los sistemas de la invención permiten la liberación del antígeno simultáneamente a los componentes adyuvantes que conforman el núcleo oleoso, con la finalidad de ejercer un efecto sinérgico sobre las células diana, en este caso células del sistema inmunitario.
Por el término “antígeno”, se entiende cualquier macromolécula de naturaleza proteica, peptídica, polisacarídica, lipídica o formada por combinaciones de éstas, que forma parte de componentes estructurales de microorganismos patógenos y que son capaces de generar una respuesta inmune adaptada una vez administrados, para dar lugar a una protección inmunológica frente a dicho patógeno.
En una realización particular, el antígeno es un antígeno de origen viral. En otra realización particular, el antígeno de origen viral se selecciona de entre el grupo consistente en antígenos subunidad característicos de virus de la hepatitis A, B, C ó E, virus del papiloma humano, virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (por ejemplo, proteínas gp120, gp41, gp36, p24), virus de la influenza (por ejemplo, proteínas HA, NP, NA, ó M), citomegalovirus, virus del herpes simple, SARS coronavirus, rotavirus, virus sincicial respiratorio, virus de parainfluenza, virus de las paperas, virus del sarampión, virus de la encefalitis japonesa, virus de la rubeola, virus de Epstein-Barr, virus del dengue y virus de la varicela Zoster. En una realización particular, el antígeno seleccionado es un antígeno subunidad característico del virus de la hepatitis B. Concretamente, se trata del antígeno recombinante de superficie de la hepatitis B (rHBsAg).
La proporción de antígeno asociado a las nanocápsulas puede ser de hasta el 95% con respecto al peso total de la poli-D-glucosamina. Aunque, la proporción de antígeno se podrá adecuar a las necesidades del caso particular y teniendo en cuenta la dosis que se precise administrar. En una realización particular, la proporción del antígeno se encuentra entre el1yel50% en peso con respecto a la poli-D-glucosamina. En una realización particular, la proporción del antígeno se encuentra entre el1yel25% en peso con respecto al polisacárido.
Molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes ó inmunomoduladoras
El sistema de la presente invención, compuesto por un núcleo hidrofóbico y una cubierta hidrofílica, permite la incorporación de ingredientes adicionales que contribuyen a potenciar o modular la respuesta inmune. De este modo, además del efecto propio del aceite adyuvante que conforma el núcleo de las nanocápsulas, es posible incorporar un agente inmunoestimulante o inmunomodulador en el núcleo o asociado a la cubierta polisacarídica, de forma que se consigue una liberación simultánea con el antígeno asociado a la superficie del mismo vehículo en las células del sistema inmune, sobre las cuales se va ejercer la acción preventiva. Con esta estrategia se genera un efecto sinérgico de los componentes con propiedades inmunoestimulantes o inmunomoduladores que forman las nanocápsulas una vez capturadas por las células inmunocompetentes, y se potencia y/o modula la respuesta inmune específica frente al antígeno asociado.
Así, en una realización particular, los sistemas de la invención descritos previamente comprenden adicionalmente una molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes o inmunomoduladoras.
Por “molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes ó inmunomoduladoras” se entiende cualquier molécula, con actividad preventiva o terapéutica reconocida, capaz de ejercer una acción estimuladora, moduladora o ambas sobre las células del sistema inmunitario y por tanto capaz de inducir, potenciar o modular una respuesta inmune específica frente al antígeno que acompañan.
En una realización particular, dicha molécula bioactiva puede ser de carácter hidrofílico o hidrofóbico, de forma que pueda asociarse al vehículo sobre la cubierta polisacarídica o en el núcleo oleoso, respectivamente.
En una realización particular, la molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes o inmunomoduladoras de carácter hidrofílico se selecciona del grupo consistente en ARN de doble cadena, ARN de cadena única, flagelina, poly(dT), CpG ODNs, tri-DAP, iE-DAP, IC31, citoquinas y toxinas bacterianas. En una realización particular el ARN de doble cadena es poly-I:C o poly-A:U. En una realización particular el ARN de cadena única se selecciona entre ORN02, ORN06, ssRNA40, ssRNA41, ssRNA-DR y ssPolyU. En una realización particular las citoquinas se seleccionan entre IL-2, IL-12, IL-15 y IFN-γ. En una realización particular las toxinas bacterianas son la toxina colérica (CT) o la enterotoxina LT de Escherichia coli (LTK63).
En una realización particular, la molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes o inmunomoduladores es de carácter hidrofóbico. En otra realización particular, la molécula bioactiva se selecciona de entre el grupo consistente en un compuesto lipopolisacárido (LPS), monofosforil lípido A, imidazoquinolinas, saponinas, muramil-dipeptidos (MDP) y lipopéptidos. En una realización particular, las imidazoquinolinas son resiquimod, gardiquimod o imiquimod. En una realización particular, la saponina es quilaja A o QS21. En una realización particular, el lipopéptido es Pam3Cys.
En una realización particular, la molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes ó inmunomoduladoras es imiquimod, cuya fórmula se representa en la figura inferior.
El imiquimod pertenece al grupo de las imidazoquinolinas y actúa como agente estimulante y modulador de las células del sistema inmune innato por acción agonista directa sobre el receptor intracelular TLR 7 (Toll-like receptor 7), el cual se encuentra asociado a la membrana de endosomas presentes en el citoplasma de las células del sistema inmunitario. Por tanto, la activación de dicho receptor por el imiquimod permite amplificar y modular la respuesta inmune específica frente al antígeno que acompaña.
En una realización particular, el sistema de la invención comprende nanocápsulas con un tamaño medio inferior a 1 micrómetro, que comprenden poli-D-glucosamina, lecitina, escualeno, imiquimod y al menos un antígeno. En otra realización particular, el antígeno es un antígeno subunidad característico del virus de la hepatitis B.
En otra realización particular, el sistema de nanocápsulas de la presente invención comprende, adicionalmente al menos un polímero catiónico.
En otra realización particular, el sistema de nanocápsulas de la presente invención comprende, adicionalmente, al menos un compuesto capaz de facilitar el seguimiento de dichas nanocápsulas tras su aplicación a un ser vivo. En una realización particular, dicho compuesto se selecciona de entre el grupo consistente en un marcador, un agente de seguimiento y un agente de tinción. Son ejemplos de estos compuestos la rodamina B, rodamina 6G, DiD o DiR, que pueden incorporarse al sistema disuelto en el núcleo oleoso, o la trimetilrodamina ó el Alexa Fluor® succiminidil ésteres que pueden unirse covalentemente al polisacárido catiónico y por tanto a la superficie de la nanocápsula.
Todos los compuestos que pueden ser asociados al sistema de nanocápsulas de la invención mencionados anteriormente, se pueden adicionar a la fase orgánica o a la fase acuosa previamente a la formación de las mismas, o bien pueden ser adicionados a las nanocápsulas una vez formadas.
Las composiciones farmacéuticas según la invención, incluyen cualquier composición líquida (es decir, suspensión
o dispersión de las nanocápsulas de la invención) para aplicación por vía oral, bucal, sublingual, tópica, ocular, nasal, pulmonar, ótica, vaginal, intrauterina, rectal, entérica o parenteral, o cualquier composición en forma de gel, pomada, crema o bálsamo para su administración por vía tópica, ocular, nasal, vaginal o rectal.
En una realización particular, la composición se administra por vía parenteral ó vía mucosa, preferentemente nasal.
El procedimiento para preparar los nanosistemas de la invención tiene la ventaja de emplear técnicas sencillas, fácilmente escalables y que permiten la manufacturación en condiciones estériles.
Así en otro aspecto, la presente invención se refiere a un procedimiento para la preparación de un sistema como se ha definido previamente, que comprende:
a) preparar una solución acuosa de poli-D-glucosamina;
b) preparar una solución orgánica formada por al menos un aceite adyuvante seleccionado de entre el grupo constituido por isoprenoides, terpenoides y terpenos y al menos un agente tensioactivo;
c) emulsificar las soluciones formadas en a) y b) con la formación espontánea de las nanocápsulas;
d) incubar el antígeno sobre la superficie de las nanocápsulas preformadas.
Alternativamente, una variante del procedimiento para la preparación de un sistema como se ha definido anteriormente comprende:
a) preparar una solución acuosa de poli-D-glucosamina;
b) preparar una solución orgánica formada por al menos un aceite adyuvante seleccionado de entre el grupo constituido por isoprenoides, terpenoides y terpenos y al menos un agente tensioactivo;
c) emulsificar la solución b) en una fase acuosa;
d) incubar la nanoemulsión obtenida en c) con la solución a);
e) incubar al menos un antígeno sobre la superficie de las nanocápsulas preformadas.
Para realizar la emulsficación es posible emplear técnicas habituales para este fin, ya conocidas por un experto en la materia, y que permitan obtener glóbulos nanométricos de la fase oleosa, como por ejemplo difusión del disolvente, homogenización o sonicación.
En una realización particular la poli-D-glucosamina se ha marcado previamente con un compuesto capaz de facilitar el seguimiento de las nanocápsulas tras su aplicación a un ser vivo.
La incorporación de la poli-D-glucosamina se lleva a cabo mediante la disolución acuosa de la misma a una concentración entre 0,1 y 2 mg/mL, más preferiblemente entre 0,1 y 1 mg/mL, y aún más preferiblemente entre 0,1 y 0,5 mg/mL.
De acuerdo con otra realización particular, el agente tensioactivo se disuelve en un solvente orgánico a una concentración de entre2y8 mg/mL, preferiblemente entre4y6 mg/mL.
En una realización particular, el agente tensioactivo puede estar formado por una mezcla tensioactivos, que pueden ser de tipo aniónico o de tipo no iónico. El uso opcional de una mezcla de tensioactivos se puede realizar con fines estabilizadores del sistema o para mejorar la solubilidad de moléculas hidrofóbicas que se pudiesen incluir en el núcleo oleoso de las nanocápsulas.
En otra realización particular, en la misma fase orgánica donde se encuentra el agente tensioactivo se disuelve el aceite adyuvante a una concentración entre2y25 mg/mL, preferiblemente entre 10 y 25 mg/mL.
La formación de las nanocápsulas objeto de la presente invención es consecuencia de un proceso controlado de emulsificación del aceite y el agente tensioactivo, que se produce por difusión del disolvente orgánico de la fase orgánica a la fase acuosa, por homogenización o por sonicación. Este proceso da lugar a la formación de gotículas de aceite de tamaño nanométrico, estabilizadas por el agente tensioactivo, conformando la nanoemulsión primaria. Al mismo tiempo, se produce una interacción electrostática entre el núcleo oleoso de la nanoemulsión dotado de una carga superficial negativa, con la poli-D-glucosamina disuelta en la fase acuosa, y que pasa a recubrir la superficie de las gotículas que la forman. Fruto de dicho proceso controlado, se obtienen las nanocápsulas de tamaño y carga superficial predeterminados, homogéneos, ajustables y reproducibles, con independencia de que se asocie o no antígeno alguno.
El antígeno se asocia a las nanocápsulas mediante interacción electrostática con la poli-D-glucosamina que forma la cubierta de las nanocápsulas. Se adiciona en una etapa posterior a la formación de las nanocápsulas mediante incubación conjunta de una solución del antígeno con la suspensión acuosa de nanocápsulas. En una realización particular, la relación en masa entre la poli-D-glucosamina y el antígeno es entre 1:0.01 y 1:0.35, preferiblemente entre 1:0.025 y 1:0.25.
Siguiendo el mismo procedimiento de asociación del antígeno se puede incluir al sistema una molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes ó inmunomoduladoras de carácter hidrofílico a la superficie de las nanocápsulas. Así, en una realización particular, el procedimiento descrito previamente comprende adicionalmente la incorporación de una molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes ó inmunomoduladoras de carácter hidrofílico a la superficie de las nanocápsulas una vez formadas mediante interacción electrostática con la poli-D-glucosamina.
En el caso de la incorporación de moléculas hidrofóbicas al núcleo oleoso de las nanocápsulas, como pueden ser la molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes ó inmunomoduladoras, o el compuesto capaz de facilitar el seguimiento de las nanocápsulas tras su aplicación a un ser vivo, éstos se disuelven en la solución orgánica previamente a la formación de las nanocápsulas. Así, en una realización particular, el procedimiento descrito previamente comprende adicionalmente la adición de una molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes ó inmunomoduladores y/o un compuesto capaz de facilitar el seguimiento de las nanocápsulas tras su aplicación a un ser vivo, ambos de carácter hidrofóbico, en la solución orgánica b).
La proporción de estas moléculas en el sistema dependerá de la solubilidad de cada molécula en la solución orgánica, así como de la dosis a administrar en el caso de las moléculas bioactivas con propiedades inmunoestimulantes ó inmunomoduladoras, ó de la intensidad de fluorescencia que se pretenda conseguir en el caso de los marcadores fluorescentes. En una realización particular la proporción en peso de la molécula bioactiva o del compuesto capaz de facilitar el seguimiento de las nanocápsulas con respecto a la poli-D-glucosamina se encuentra entre el 0,5 y el 50%.
El procedimiento de elaboración de las nanocápsulas mencionadas puede incluir una etapa adicional de liofilización, con el fin de preservarlas durante su almacenamiento para que conserven sus características iniciales y se reduzcan los volúmenes de producto que van a manipularse. En una realización particular, el procedimiento descrito previamente comprende adicionalmente una etapa después de la etapa c) ó d), ó alternativamente después de la etapa d) ó e), en la que las nanocápsulas se someten a un proceso de liofilización.
Para la liofilización de las nanocápsulas puede ser únicamente necesaria la adición de pequeñas cantidades de azúcares tales como glucosa, sacarosa o trealosa a una concentración que oscila desde un 1 hasta un 20% u otras moléculas que actúen como crioprotectores y/o lioprotectores. Las nanocápsulas de la invención tienen la ventaja adicional de que el tamaño de partícula antes y después de la liofilización no se modifica de manera significativa una vez regeneradas. El proceso puede adicionalmente comprender una etapa de regeneración de las nanocápsulas liofilizadas. El proceso de regeneración del producto liofilizado consiste en la adición de una solución acuosa para dar lugar de nuevo a la suspensión original de nanocápsulas. Por tanto, las nanocápsulas tienen la ventaja de que pueden liofilizarse y resuspenderse sin ninguna alteración en las características de las mismas.
Debido al elevado potencial de los sistemas coloidales de la presente invención en el campo biomédico, dichos sistemas resultan adecuados para su uso en la formulación de vacunas capaces de modificar las funciones fisiológicas ejerciendo una acción de inducción y potenciación inmunológica directa que dé lugar a la generación de protección inmune específica frente a microorganismos patógenos causantes de enfermedades, así como la modulación de la misma, para finalmente generar una respuesta adecuada frente a cada patógeno y así prevenir enfermedades infecciosas en seres humanos y animales.
En una realización particular, los sistemas de la invención resultan ser adecuados para generar una respuesta inmune específica in vivo frente al antígeno asociado, así como la capacidad para estimular de forma directa células humanas/animales del sistema inmunitario in vitro o ex vivo. En consecuencia, el sistema de nanocápsulas de la invención resulta útil en la preparación de un medicamento destinado a la prevención de enfermedades infecciosas mediante la vacunación.
A continuación, para una mayor comprensión de las características y ventajas de la presente invención, se hará referencia a una serie de ejemplos que de forma explicativa completen la descripción anterior, sin suponer en modo alguno que ésta se vea limitada a los mismos.
Ejemplos
Como procedimiento común a los ejemplos detallados a continuación, se han caracterizado las nanocápsulas desde el punto de vista del tamaño, el potencial ξ (o carga superficial), la morfología y la eficacia de asociación.
Durante la exposición de algunos de los siguientes ejemplos se hace referencia a resultados obtenidos mediante las siguientes técnicas:
El tamaño de partícula ha sido determinado mediante la técnica de espectroscopía de correlación fotónica (PCS) y haciendo uso, para ello, de un ZetaSizer (Zeta Sizer, Nano series, Nano-ZS, Malvern Instruments, UK) obteniendo el tamaño medio de la población y el índice de polidispersión de la misma. Para ello las muestras fueron convenientemente diluidas en agua Milli-Q.
El potencial ξ de las nanocápsulas ha sido determinado mediante la técnica de anemometría por dispersión de láser (LDA) haciendo uso para ello, de un ZetaSizer (Zeta Sizer, Nano series, Nano-ZS, Malvern Instruments, UK). Para ello las muestras fueron convenientemente diluidas en una solución 10 milimolar de KCl.
Para los estudios in vivo de la eficacia de los sistemas de nanocápsulas para inducir una respuesta inmune específica frente a rHBsAg se han utilizado ratones BALB/c. Grupos de 10 ratones se han inmunizado por vía intramuscular e intranasal con 10 μg de rHBsAg asociado a las nanoestructuras, siguiendo diferentes pautas de inmunización. A continuación, se ha realizado una monitorización de los niveles de IgG totales específicos frente a rHBsAg con intervalos de muestreo de 1 mes y una duración total de 6 meses. En todos los estudios se utiliza como control positivo el rHBsAg adsorbido a hidróxido de aluminio (álum, Sigma-Aldrich, España), que es el adyuvante presente en la vacuna comercial, el cual se administra intramuscularmente en dos dosis de 10 μg separadas 4 semanas. Los animales se han mantenido en condiciones de temperatura constante (22ºC) con ciclos de 12 horas de luz/oscuridad y dieta estándar.
La cuantificación de anti-rHBsAg IgG sérico se realiza mediante ELISA. En este caso se utilizan placas Maxisorb (Nunc, Dinamarca) que se recubren con el rHBsAg. Una vez añadidas las diluciones seriadas del suero, se añade el anticuerpo secundario frente a IgG de ratón y conjugado con peroxidasa (Southern Biotech, USA). El revelado se realiza con ABTS (Sigma-Aldrich, España) y los títulos de anticuerpos se transforman a mIU/mL gracias a una recta de calibrado que se hace de forma paralela con anticuerpos de conejo frente a HBsAg (Biokit, España) a concentraciones conocidas y posteriormente reconocidos por anti-IgG de conejo conjugado con peroxidasa (Southern Biotech, USA).
Los siguientes materiales tal y como se utilizan en los siguientes ejemplos, fueron adquiridos a diferentes casas comerciales: Poly-D-glucosamina de diversos pesos moleculares y grados de acetilación (Biosyntech, Canadá y Pronova, Dinamarca), escualeno (Merck, Alemania), lecitina Epikuron 145V (Cargill, España), imiquimod (InVivoGen, USA), rodamina-6G (Sigma-Aldrich, España), tetrametilrodamina y Alexa Fluor 750 succiminidil ésteres (InvitroGen, USA), rHBsAg (Shantha Biotech, India).
Ejemplo 1
Preparación de nanocápsulas polisacarídicas con núcleo de escualeno y diferentes cubiertas poliméricas
Se prepararon nanocápsulas con un núcleo de escualeno según el procedimiento de desplazamiento del disolvente. De este modo se han formado las nanocápsulas utilizando dos tipos de poli-D-glucosamina (polisacárido catiónico) de diferente peso molecular (Pm) y grado de acetilación (GA), descritos la tabla 1.
TABLA 1
Características de los polisacáridos catiónicos (poli-D-glucosamina) utilizados para la obtención de nanocápsulas con núcleo de escualeno
Para ello se preparó una solución acuosa donde el polisácarido se encuentra disuelto a una concentración de 0.025 ó 0.05%, para GL ó CS respectivamente. En el caso del primero, se utiliza una solución acuosa al 0.05% de ácido acético para su disolución. El segundo, al encontrarse en forma de sal clorhidrato, se disuelve en agua Milli-Q.
Por otro lado, se prepara una fase orgánica donde, la lecitina se disuelve en propanol a una concentración de 120 mg/mL ó 80 mg/mL en función de la cubierta polimérica (para GL ó CS respectivamente). En esta solución orgánica se co-disuelve el escualeno a una proporción del 25% con respecto al volumen de propanol. Finalmente la fase orgánica se completa con acetona de forma que el volumen de la mezcla propanol:escualeno representa el 6.25% en el total de la misma. La fase orgánica se añade sobre la fase acuosa bajo agitación magnética formándose espontáneamente las nanocápulas. Se mantiene la agitación durante 5-10 minutos y seguidamente se procede a la evaporación de los solventes orgánicos a vacío hasta conseguir una concentración final del polisacárido que forma parte de las nanocápsulas de 1 mg/mL.
Las relaciones entre el polisacárido y el tensioactivo aniónico (lecitina) se muestran en la tabla 2. Asimismo, dicha tabla muestra el diámetro medio, índice de polidispersión (PdI) y carga eléctrica superficial (potencial ξ)de los sistemas obtenidos. La morfología de las nanocápsulas vista en microscopio electrónico se muestra en la figura 1 donde se puede apreciar que presentan una forma esférica y poblaciones homonogéneas.
TABLA 2
Características físico-químicas de nanocápsulas (NC) elaboradas a partir de dos tipos de poli-D-glucosamina (GL ó CS)
Ejemplo 2
Encapsulación de imiquimod en el núcleo de escualeno de las nanocápsulas
Se prepararon nanocápsulas en cuyo núcleo de escualeno se ha encapsulado una molécula bioactiva con propiedades farmacológicas probadas inmunoestimulantes e inmunomoduladoras (imiquimod). El imiquimod se adiciona a la preparación de nanocápsulas a diversas proporciones con respecto al peso total de los componentes del sistema (indicado en tabla 3). Así, se prepararon nanocápsulas a partir de ambos polisacáridos con diferente grado de desacetilación y peso molecular (tabla 1).
Para ello se preparó una solución acuosa donde el polisacárido se encuentra disuelto a una concentración de 0.025 ó 0.05%, para GL ó CS respectivamente. En el caso del primero, se utiliza una solución acuosa al 0.05% de ácido acético para su disolución. El segundo, al encontrarse en forma de sal clorhidrato, se disuelve en agua Milli-Q.
Para lograr la encapsulación del imiquimod, de carácter altamente hidrofóbico, se disuelve previamente en el aceite (escualeno) a una concentración de 20 mg/mL. Por otro lado, la lecitina se disuelve en propanol a una concentración de 120 mg/mL ó 80 mg/mL en función de la cubierta de cada formulación (para GL ó CS respectivamente). En esta solución orgánica se co-disuelve la solución oleosa de escualeno e imiquimod a una proporción del 25% con respecto al volumen de propanol. Finalmente la fase orgánica se completa con acetona de forma que el volumen de la mezcla propanol:escualeno representa el 6.25% en el total de la misma. La fase orgánica se añade sobre la fase acuosa bajo agitación magnética formándose espontáneamente las nanocápulas polisacarídicas. Se mantiene la agitación durante 5-10 minutos y seguidamente se procede a la evaporación de los solventes orgánicos a vacío hasta conseguir una concentración final del polisacárido que forma parte de las nanocápsulas de 1 mg/mL.
La eficacia de encapsulación del imiquimod se ha determinado de forma indirecta mediante la cuantificación de la molécula libre mediante HPLC (Agilent, USA) tras el aislamiento de las nanocápsulas por ultracentrifugación (42800xg, 1 hora, 15ºC; Beckman-Coulter, UK).
En la tabla 3 se muestran además el diámetro medio, índice de polidispersión (PdI) y carga eléctrica superficial (potencial ξ) de los sistemas obtenidos con diferentes cubiertas polisacarídicas, así como el porcentaje de imiquimod encapsulado en cada sistema.
TABLA 3
Características físico-químicas de nanocápsulas elaboradas a partir de dos tipos de poli-D-glucosamina encapsulando imiquimod
Ejemplo 3
Encapsulación de Rodamina-6G en el núcleo de escualeno de las nanocápsulas
Se prepararon nanocápsulas fluorescentes con cubierta de poli-D-glucosamina (GL -tabla 1) y núcleo oleoso de escualeno. Para este fin se ha encapsulado un marcador fluorescente de carácter hidrofóbico, la rodamina-6G, en el núcleo oleoso de las mismas.
Para ello se preparó una solución acuosa donde el polisacárido se encuentra disuelto a una concentración de 0.025% en una solución acuosa al 0.05% de ácido acético para su disolución.
Para lograr la encapsulación de la rodamina-6G, de carácter altamente hidrofóbico, se disuelve previamente en el aceite (escualeno) a una concentración de 0.25 mg/mL. Por otro lado, la lecitina se disuelve en propanol a una concentración de 120 mg/mL. En esta solución orgánica se co-disuelve la solución oleosa de escualeno y rodamina6G a una proporción del 25% con respecto al volumen de propanol. Finalmente la fase orgánica se completa con acetona de forma que el volumen de la mezcla propanol:escualeno representa el 6.25% en el total de la misma. La fase orgánica se añade sobre la fase acuosa bajo agitación magnética formándose espontáneamente las nanocápulas. Se mantiene la agitación durante 5-10 minutos y seguidamente se procede a la evaporación de los solventes orgánicos a vacío hasta conseguir una concentración final del polisacárido que forma parte de las nanocápsulas de 1 mg/mL.
La eficacia de encapsulación de la rodamina se ha determinado de forma indirecta mediante la cuantificación de la etiqueta fluorescente libre mediante fluoroespectroscopía (λexc=480; λem=555; Perkin-Elmer, USA) tras el aislamiento de las nanocápsulas por ultracentrifugación (42800xg, 1 hora, 15ºC; Beckman-Coulter, UK).
El diámetro medio de las nanocápsulas obtenidas fue de 190 ± 2 nm (índice de polidispersión de 0.14) y su carga eléctrica superficial (potencial ξ)de+60 ± 2 mV con un porcentaje de asociación de la rodamina-6G de 82.5 ± 1.7%.
Ejemplo 4
Preparación de nanocápsulas con núcleo de escualeno formadas a partir de un polisacárido catiónico marcado con una sonda fluorescente
Se prepararon nanocápsulas fluorescentes con cubierta de poli-D-glucosamina (GL -tabla 1), previamente marcada con una sonda fluorescente, y núcleo oleoso de escualeno. Para ello se han utilizado la tetrametilrodamina (TAMRA) (λexc=540; λem= 580) y el Alexa Fluor 750 (λexc=749; λem= 775) succiminidil ésteres.
Para el marcaje del polisacárido con cualquiera de estos dos marcadores fluorescentes, éste se disuelve en una solución acuosa de ácido acético 0.01% a 2 mg/mL. Sobre esta solución se añaden, bajo agitación magnética, 30 μl de una solución de TAMRA ó Alexa Fluor 750 succiminidil éster en DMSO (10 mg/mL) y se deja reaccionar durante 15 minutos. La solución resultante se dializa en agua (Slide-A-Lyzer Dyalisis Cassettes, Thermo Scientific, USA) durante 24 horas. El grado de marcaje de la poli-D-glucosamina con TAMRA y Alexa Fluor 750 succiminidil éster se ha realizado mediante espectrometría UV (λ=280) (Beckman-Coulter, UK), según especificaciones del fabricante.
Finalmente, la poli-D-glucosamina marcada con TAMRA ó Alexa Fluor 750 se utiliza para la elaboración de las nanocápsulas, para lo cual se diluye con agua Milli-Q a una concentración de 0.025%. Por otro lado, se prepara una fase orgánica donde la lecitina se disuelve en propanol a una concentración de 120 mg/mL. En esta solución orgánica se co-disuelve el escualeno a una proporción del 25% con respecto al volumen de propanol. Finalmente la fase orgánica se completa con acetona de forma que el volumen de la mezcla propanol:escualeno representa el 6.25% en el total de la misma. La fase orgánica se añade sobre la fase acuosa bajo agitación magnética formándose espontáneamente las nanocápulas. Se mantiene la agitación durante 5-10 minutos y seguidamente se procede a la evaporación de los solventes orgánicos a vacío hasta conseguir una concentración final del polisacárido que forma parte de las nanocápsulas de 1 mg/mL.
En la tabla 4 se muestran además el diámetro medio, índice de polidispersión (PdI) y carga eléctrica superficial (potencial ξ) de los sistemas obtenidos con ambos marcadores fluorescentes.
TABLA 4
Características físico-químicas de nanocápsulas fluorescentes elaboradas a partir de poli-D-glucosamina previamente marcada con tetrametilrodamina (TAMRA) ó Alexa Fluor 750 succiminidil ésteres
Ejemplo 5
Las nanocápsulas forman un depot en el lugar de inyección
Se ha estudiado el tiempo de residencia en el lugar de inyección de las nanocápsulas de poli-D-glucosamina marcada con Alexa Fluor 750. Para ello, se ha utilizado la técnica de adquisición de imágenes de fluorescencia in vivo, (IVIS Xenogen, USA) realizando un seguimiento a tiempo real de las nanocápsulas fluorescentes una vez administradas a ratones BALB/c por vía intramuscular.
Como podemos apreciar en la figura 2, las nanocápsulas permanecen en el lugar de inyección durante al menos 5 horas tras la inyección de una dosis de 60 μg de poli-D-glucosamina marcada formando parte de la cubierta de las nanocápsulas.
Ejemplo 6
Asociación del antígeno recombinante de superficie de la hepatitis B (rHBsAg) a la superficie polimérica de las nanocápsulas
Se han preparado nanocápsulas capaces de asociar en su superficie el antígeno recombinante de superficie de la hepatitis B (rHBsAg). Para este fin, se han preparado las nanocápsulas polisacarídicas según los procedimientos descritos anteriormente (ejemplos 1 y 2) con diferentes composiciones en su núcleo oleoso (escualeno ó escualeno con imiquimod) ó cubierta polisacarídica (CS ó GL -tabla 1). El rHBsAg se añade posteriormente a la formación de las nanocápsulas mediante incubación a temperatura ambiente de la solución de antígeno (0.5 mg/mL) con la suspensión de la nanocápsulas previamente aisladas y resuspendidas en agua hasta una concentración del polisacárido constituyente de 1 mg/mL. De esta forma se consigue asociar el antígeno a una relación 1:0.25 de polisacárido:rHBsAg (p:p).
La eficacia de asociación del rHBsAg se determinó mediante cuantificación por ELISA tipo sandwich. Para ello, se utilizó un kit para la detección de dicho antígeno (HBsAg Version 3, Murex, UK). Para la correspondiente cuantificación, se prepara una recta de calibrado con concentraciones conocidas del antígeno utilizando como blanco las nanocápsulas blancas o el sobrenadante obtenido tras la centrifugación de las mismas en función del tipo de muestra que se analice. Se ha analizado tanto de forma indirecta cuantificando el antígeno libre tras el aislamiento de las nanocápsulas por ultracentrifugación (42800xg, 1 hora, 15ºC; Beckman Coulter, UK), así como el total liberado tras el tratamiento enzimático de las nanocápsulas con quitosanasa (US Biologicals, USA).
En la tabla 5 se muestran además el diámetro medio, índice de polidispersión (PdI) y carga eléctrica superficial (potencial ξ) de los sistemas obtenidos con las diferentes combinaciones de composición del núcleo y la cubierta después de la incubación de los sistemas con el rHBsAg. La morfología de las nanocápsulas con rHBsAg vista en microscopio electrónico se muestra en la figura 3 donde se pueden apreciar que presentan una forma esférica y poblaciones homonogéneas.
TABLA 5
Características físico-químicas de nanocápsulas que presentan diferente composición en su núcleo (solo escualeno; escualeno e imiquimod (IMQ)), con rHBsAg asociado a las diferentes cubiertas polisacarídicas (CS ó GL) con una
relación polisacárido:rHBsAg 1:0.25 (p:p)
Ejemplo 7
Elaboración de un producto liofilizado a partir de las nanocápsulas polisacarídicas blancas y con el antígeno recombinante de superficie de la hepatitis B (rHBsAg) asociado
Con el objetivo de desarrollar una forma farmacéutica más estable, las nanocápsulas fueron liofilizadas. Para ello, se prepararon las nanocápsulas polisacarídicas con poli-D-glucosamina (GL -tabla 1) como cubierta y núcleo de escualeno, como se ha descrito previamente, así como la posterior asociación de rHBsAg a la superficie de las nanocápsulas preformadas.
Las suspensiones de nanopartículas polisacarídicas con o sin antígeno asociado fueron liofilizadas en presencia de diferentes concentraciones de trehalosa en función de la presencia de rHBsAg en la superficie de las nanoestructuras. De este modo, la liofilización se produce con una concentración final de trehalosa del 5 ó 20%, para nanocápsulas blancas ó para las que llevan asociado rHBsAg, respectivamente. Para ello, las suspensiones (1 mL) de nanocápsulas fueron sometidas a un proceso de congelación a -20oC y subsiguiente liofilización (Virtis Genesis freeze dryer, 25ES, Virtis, NY, USA). Tras la liofilización, los sistemas de nanocápsulas fueron regenerados sin dificultad mediante adición de 1 mL de agua Milli-Q, recuperando la suspensión acuosa de nanocápsulas y, a continuación, se determinó el tamaño medio de las nanopartículas. En la Figura 4 se muestra la conservación del tamaño de partícula tras la resuspensión en agua Milli-Q del polvo liofilizado elaborado a partir de las nanocápsulas con y sin antígeno asociado.
Ejemplo 8
Asociación de dos proteínas antigénicas derivadas de la cápside del virus del papiloma humano tipo 16 (HPV16-L1 y HPV16-GSTL1) a la superficie polimérica de las nanocápsulas
Se han preparado nanocápsulas capaces de asociar en su superficie dos proteínas antigénicas derivadas de la cápside (capsómeros) del virus del papiloma humano tipo 16 (HPV16). Dichas capsómeros se denominan HPV16-L1 y HPV16-GSTL1. Para este fin, se han preparado las nanocápsulas según los procedimientos descritos anteriormente (ejemplos 1) con núcleo oleoso de escualeno y cubierta polisacarídica (GL -tabla 1). Los capsómeros derivadas de HPV16 se añaden posteriormente a la formación de las nanocápsulas mediante incubación a temperatura ambiente de la solución de proteína (0.1 mg/mL) con la suspensión de la nanocápsulas previamente aisladas y resuspendidas en agua a diferentes concentraciones del polisacárido constituyente (0.2; 0.4 y 0.8 mg/mL). De esta forma se consigue asociar cada proteína antigénica a distintas relaciones polisacárido:proteína (p:p): 2:1; 4:1 y 8:1 respectivamente.
La eficacia de asociación de los capsómeros de HPV16 se determinó mediante cuantificación por DOT-BLOT, de forma indirecta cuantificando el antígeno libre tras el aislamiento de las nanocápsulas por centrifugación (20000xg, 1 hora, 15ºC; Hettich Zentrifugen, Alemania). Para ello, la muestra de sobrenadante o las soluciones estándar de proteína, se inoculan directamente sobre una membrana de PVDF. Para la detección de la proteína adherida se utilizó un anticuerpo primario de conejo anti-L1 a una dilución 1:20000 y posteriormente se usó un anticuerpo secundario de mono anti-IgG de conejo conjugado a peroxidasa (abcam, UK) a una dilución 1:5000. Para la correspondiente cuantificación, se prepara una recta de calibrado con concentraciones conocidas del antígeno. Los complejos antígenoanticuerpo se visualizan por quimioluminiscencia utilizando el kit de detección ECL Plus Western Blotting Detection Reagents (Amersham Biosciences, UK). El posterior análisis de la intensidad de los puntos correspondientes a las distintas concentraciones de antígenos se realiza mediante ImageJ.
En la tabla 6 se muestran además el diámetro medio, índice de polidispersión (PdI) y carga eléctrica superficial (potencial ξ) de los sistemas obtenidos después de la incubación de los sistemas con las dos proteínas antigénicas de HPV16 a las distintas proporciones polisacárido:antígeno.
TABLA 6
Características físico-químicas de las nanocápsulas con núcleo de escualeno y cubierta polisacarídica (GL) con los capsómeros HPV16-L1 y HPV16-GSTL1 asociados a distintas proporciones polisacárido:rHBsAg (p:p)
Ejemplo 9
Las nanocápsulas con núcleo de escualeno a las cuales se ha asociado rHBsAg en su superficie, son capaces de generar respuestas inmunológicas protectoras a largo plazo frente a hepatitis B cuando se administran por vía nasal
Las nanocápsulas a base de poli-D-glucosamina (GL -tabla 1) y núcleo de escualeno, a cuya superficie se ha asociado rHBsAg y previamente descritas en los ejemplos1y6,han sido sometidas a evaluación biológica. Para ello se administraron a ratones BALB/c por vía nasal, 10 μg de rHBsAg asociado a las nanocápsulas, en2ó3 dosis separadas 4 semanas entre cada una. Para determinar la respuesta inmune generada tras la inmunización nasal se ha cuantificado la concentración de anticuerpos específicos (IgG) en sangre a los diferentes tiempos de muestreo tal y como se ha descrito previamente. La duración de la monitorización de los niveles plasmáticos de IgG se ha realizado durante 6 meses.
Como se puede apreciar en figura 5 tras la inmunización nasal con las nanocápsulas polisacarídicas se consiguen niveles seroprotectores de IgG frente a hepatitis B (>10 mIU/mL, descritos para humanos: Shouval D. Hepatitis B vaccines. J Hepatol 2003;39: S70-76) prolongados en el tiempo. Sin embargo la concentración de anticuerpos específicos es mayor (>100 mIU/mL) cuando el esquema de inmunización es de 3 dosis de 10 μg de rHBsAg asociado a las nanocápsulas.
Ejemplo 10
La modificación de la composición del núcleo oleoso de las nanocápsulas permite la modulación en la cinética de la respuesta inmune específica generada tras la administración intramuscular de los sistemas a los cuales se ha asociado rHBsAg en su superficie
Se ha evaluado la capacidad adyuvante de las nanocápsulas a base de poli-D-glucosamina (GL -tabla 1) con núcleos oleosos de diferentes composiciones (escualeno ó escualeno+imiquimod), a cuya superficie se ha asociado rHBsAg, previamente descritas en el ejemplo 6.
Para ello se administraron 10 μg de rHBsAg asociado a las nanocápsulas a ratones BALB/c en 2 dosis separadas 4 semanas. Como control positivo se utilizó la vacuna comercial (rHBsAg-álum), administrada siguiendo el mismo esquema de inmunización que para las nanocápsulas. Para determinar la respuesta inmune generada tras la inmunización se ha cuantificado la concentración de anticuerpos específicos (IgG) en sangre a los diferentes tiempos de muestreo tal y como se ha descrito previamente. La duración de la monitorización de los niveles plasmáticos de IgG se ha realizado durante 6 meses.
Como se puede apreciar en figura 6 tras la segunda inmunización por vía intramuscular las nanocápsulas presentan un evidente efecto adyuvante, generando niveles plasmáticos de IgG mayores que los conseguidos con el adyuvante comercial (álum) a la misma dosis, independientemente de la composición de las nanocápsulas. Por otro lado, se observa que las nanocápsulas con núcleo de escualeno dan lugar a una respuesta inmune intensa a tiempos más largos (GLNC). La inclusión del imiquimod (IMQ-GLNC) en el núcleo oleoso da lugar a la inducción de una respuesta específica más temprana que mantiene niveles elevados de anticuerpos en el tiempo.
Ejemplo 11
Las nanocápsulas son capaces de generar niveles seroprotectores frente a la hepatitis B que se prolongan durante largos períodos de tiempo cuando se administran en una dosis única por vía intramuscular
Se ha evaluado la capacidad para generar respuestas inmunes prolongadas tras una única administración intramuscular de las nanocápsulas a base de poli-D-glucosamina (GL -tabla 1) con núcleos oleosos de diferentes composiciones (escualeno ó escualeno+imiquimod), a cuya superficie se ha asociado rHBsAg, previamente descritas en el ejemplo 6.
Para ello se administraron a ratones BALB/c, 10 μg de rHBsAg asociado a las nanocápsulas en una dosis única. Como control positivo se utilizó la vacuna comercial (rHBsAg-alum) administrada en dos dosis de 10 μg separadas 4 semanas. Para determinar la respuesta inmune generada tras la inmunización se ha cuantificado la concentración de anticuerpos específicos (IgG) en sangre a los diferentes tiempos de muestreo tal y como se ha descrito previamente. La duración de la monitorización de los niveles plasmáticos de IgG se ha realizado durante 6 meses.
Como se puede apreciar en figura 7, las nanocápsulas a base de poli-D-glucosamina son capaces de generar niveles seroprotectores (>10 mIU/mL, descritos para humanos: Shouval D. Hepatitis B vaccines. J Hepatol 2003;39: S70-76) de anticuerpos específicos frente a hepatitis B. Además, la respuesta inmune específica generada tras una dosis única con las nanocápsulas a base de poli-D-glucosamina se mantiene en niveles altos de IgG durante un largo período de tiempo (6 meses) independientemente de la composición del núcleo oleoso, no siendo estos niveles significativamente diferentes a aquellos generados por la vacuna comercial administrada en dos dosis.
Claims (24)
- REIVINDICACIONES
- 1.
- Un sistema para la administración de antígenos que comprende nanocápsulas con un tamaño medio inferior a 1 micrómetro, que comprenden: e) poli-D-glucosamina; f) un aceite adyuvante seleccionado de entre el grupo constituido por isoprenoides, terpenoides y terpenos; g) al menos un agente tensioactivo excluyendo tensioactivos catiónicos; y h) al menos un antígeno;
caracterizadas por presentar una estructura tipo reservorio, donde el núcleo está compuesto por componentes lipídicos y está recubierto por poli-D-glucosamina. -
- 2.
- Sistema según la reivindicación 1, donde el aceite adyuvante se selecciona de entre el grupo consistente en vitamina A, vitamina E, escualeno y escualano.
- 3. Sistema según la reivindicación 2, donde el aceite adyuvante es escualeno.
-
- 4.
- Sistema según la reivindicación 1, donde el agente tensioactivo se selecciona entre tensioactivos de tipo aniónico y de tipo no iónico.
-
- 5.
- Sistema según la reivindicación 4, donde el agente tensioactivo es de tipo aniónico.
-
- 6.
- Sistema según la reivindicación 5, donde el agente tensiosactivo aniónico es un fosfolípido.
-
- 7.
- Sistema según la reivindicación 1 donde el antígeno es de origen viral.
-
- 8.
- Sistema según reivindicación 7, donde el antígeno de origen viral se selecciona de entre el grupo consistente en antígenos subunidad característicos de virus de la hepatitis A, B, C ó E, virus del papiloma humano, virus de inmunodeficiencia humana tipo 1, virus de la influenza, citomegalovirus, virus del herpes simple, SARS coronavirus, rotavirus, virus sincicial respiratorio, virus de parainfluenza, virus de las paperas, virus del sarampión, virus de la encefalitis japonesa, virus de la rubeola, virus de Epstein-Barr, virus del dengue, virus de la varicela Zoster.
- 9. Sistema según reivindicación 8, donde el antígeno es un antígeno subunidad característico del virus de la hepatitisB.
-
- 10.
- Sistema según las reivindicaciones anteriores, que adicionalmente comprende una molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes o inmunomoduladoras.
-
- 11.
- Sistema según reivindicación 10, donde la molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes o inmunomoduladoras es de carácter hidrofóbico.
-
- 12.
- Sistema según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde las nanocápsulas se encuentran en forma liofilizada.
- 13. Vacuna que comprende un sistema como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones1a12.
-
- 14.
- Composición farmacéutica que comprende un sistema como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12.
-
- 15.
- Composición farmacéutica, según la reivindicación 14, para su uso en la prevención de enfermedades infecciosas.
-
- 16.
- Un procedimiento para la preparación de un sistema como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, que comprende: a) preparar una solución acuosa de poli_D-glucosamina; b) preparar una solución orgánica formada por al menos un aceite adyuvante seleccionado de entre el grupo constituido por isoprenoides, terpenoides y terpenos y al menos un agente tensioactivo;
c) emulsificar las soluciones formadas en a) y b) con la formación espontánea de las nanocápsulas; d) incubar al menos un antígeno sobre la superficie de las nanocápsulas preformadas. - 17. Un procedimiento para la preparación de un sistema como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 que comprende:a) preparar una solución acuosa de poli-D-glucosamina;b) preparar una solución orgánica formada por un aceite adyuvante seleccionado de entre el grupo constituido por isoprenoides, terpenoides y terpenos y al menos un agente tensioactivo;c) emulsificar la solución b) en una fase acuosa;d) incubar la nanoemulsión obtenida en c) con la solución a);e) incubar al menos un antígeno sobre la superficie de las nanocápsulas preformadas.
-
- 18.
- Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 16 y 17, que comprende además la adición de una molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes ó inmunomoduladoras y/o un compuesto capaz de facilitar el seguimiento de las nanocápsulas tras su aplicación a un ser vivo, ambos de carácter hidrofóbico, en la solución orgánica b).
-
- 19.
- Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 16 y 17, que comprende además la adición de una molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes ó inmunomoduladoras de carácter hidrofílico sobre la superficie de las nanocápsulas una vez formadas.
- 20. Uso de un sistema como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 en la preparación de una vacuna.
-
- 21.
- Uso, según la reivindicación 20, para la preparación de una vacuna para la prevención de enfermedades infecciosas.
- 22. Uso, según la reivindicación 21, para la prevención de enfermedades infecciosas causadas por agentes víricos.
-
- 23.
- Uso, según reivindicación 22, para la prevención de enfermedades infecciosas víricas seleccionadas de entre el grupo consistente en hepatitis A, B, C y E, cáncer cervical causado por el virus del papiloma humano, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), gripe estacional, gripe pandémica, mononucleosis infecciosas por citomegalovirus ó por virus de Epstein-Barr, infección por herpes simple, gastroenteritis por rotavirus, síndrome respiratorio agudo severo (SARS), parainfluenza, neumonía por virus sincicial respiratorio, encefalitis japonesa, dengue, rubeola, paperas, sarampión y varicela Zoster.
OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCASN.º solicitud: 201131074ESPAÑAFecha de presentación de la solicitud: 27.06.2011Fecha de prioridad:INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA51 Int. Cl. : Ver Hoja AdicionalDOCUMENTOS RELEVANTES- Categoría
- Documentos citados Reivindicaciones afectadas
- Y
- US 20090074824 A1 (VILA PENA A. I.) 19.03.2009, 1-8,10-11,13-14,
- resumen; párrafos 1,9,15,17-22,24-25,38,40,53,75,104-109; reivindicaciones 1,14,29.
- 16-18,20-23
- Y
- US 5965144 A (ZONAGEN, INC.) 12.10.1999, 1-8,10-11,13-14,
- columnas 3,4.
- 16-18,20-23
- A
- CSABA N., GARCÍA-FUENTES M., ALONSO M. J. “Nanoparticles for nasal vaccination.” Advanced Drug Delivery Reviews (2009) Vol. 61, páginas 140-157. Todo el documento. 1-23
- A
- PREGO C. et al. “Chitosan-based nanoparticles for improving immunization against hepatitis B infection.” Vaccine (2010) Vol. 28, páginas 2607-2614. Todo el documento. 1-23
- A
- ES 2234723 T3 (COGNIS IBERIA, S.L.) 01.07.2005, página 2, líneas 7-10; página 3, líneas 10-16; página 11, líneas 24-34. 1-23
- Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud
- El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº:
- Fecha de realización del informe 29.09.2011
- Examinador M. J. García Bueno Página 1/5
INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICANº de solicitud: 201131074CLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUDA61K9/51 (2006.01) A61K47/48 (2006.01) A61K39/12 (2006.01) C08B37/08 (2006.01) B82Y5/00 (2011.01)Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación)A61K, C08B, B82YBases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados)INVENES, EPODOC, WPI, TXTE, TXTF, MEDLINE, BIOSIS, NPL, XPESP EMBASE.Informe del Estado de la Técnica Página 2/5OPINIÓN ESCRITANº de solicitud: 201131074Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 29.09.2011Declaración- Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986)
- Reivindicaciones Reivindicaciones 1-23. SI NO
- Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986)
- Reivindicaciones Reivindicaciones 9, 12, 15, 19. 1-8, 10-11, 13-14, 16-18, 20-23. SI NO
Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986).Base de la Opinión.-La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.Informe del Estado de la Técnica Página 3/5OPINIÓN ESCRITANº de solicitud: 2011310741. Documentos considerados.-A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.- Documento
- Número Publicación o Identificación Fecha Publicación
- D01
- US 20090074824 A1 (VILA PENA A. I.) 19.03.2009
- D02
- US 5965144 A (ZONAGEN, INC.) 12.10.1999
- D03
- CSABA N., GARCÍA-FUENTES M., ALONSO M. J. “Nanoparticles for nasal vaccination.” Advanced Drug Delivery Reviews (2009) Vol. 61, páginas 140-157. 2009
- D04
- PREGO C. et al. “Chitosan-based nanoparticles for improving immunization against hepatitis B infection.” Vaccine (2010) Vol. 28, páginas 2607-2614. 2010
- D05
- ES 2234723 T3 (COGNIS IBERIA, S.L.) 01.07.2005
- 2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaraciónLa presente solicitud de invención consiste en un sistema para la administración de antígenos que comprende nanocápsulas compuestas por una cubierta de poli-D-glucosamina, un aceite adyuvante isoprenoide, terpenoide o terpeno en el núcleo, un agente tensioactivo no catiónico y al menos un antígeno (reivindicaciones 1-12).La presente solicitud de invención también consiste en una vacuna que comprende el sistema reivindicado anteriormente (reivindicación 13), una composición farmacéutica que comprende dicho sistema (reivindicación 14-15), un procedimiento para la preparación del sistema (reivindicación 16-19), y el uso del sistema en la preparación de una vacuna para la prevención de enfermedades infecciosas (reivindicaciones 20-23).El documento D01 consiste en un sistema de nanocápsulas que comprende una fase lipófila compuesta por un fosfolípido y una fase hidrófila que comprende chitosan o un derivado.El documento D02 consiste en un método y una composición para potenciar la respuesta inmunológica que comprende chitosan.El documento D03 consiste en un estudio sobre el uso de nanotransportadores para la administración de antígenos por vía nasal (ver todo el documento).El documento D04 consiste en un estudio de las nanopartículas que comprenden polisacáridos, como el chitosan, a modo de estructuras para presentar antígenos, como los antígenos del virus de la hepatitis B (ver todo el documento).El documento D05 consiste en nanocápsulas para su uso en cosmética, industria farmacéutica o industria textil, que comprenden una matriz formada por lecitinas o fosfolípidos, cuerpos de cera y principios activos y una envoltura de quitosanos (ver página 2, líneas 7-10, página 3, líneas 10-16 y página 11, líneas 24-34).NOVEDAD (Art. 6.1 Ley 11/1986).Reivindicaciones 1-23.El documento D01 se considera el estado de la técnica más próximo al objeto de las reivindicaciones 1-23, y muestra un sistema de nanopartículas de tamaño menor a 1µm.El objeto de las reivindicaciones 1-23 difiere del conocido documento D01 en que el aceite adyuvante que comprende la nanopartícula no es del mismo tipo que el reivindicado en la presente solicitud de invención.Por lo tanto el objeto de las reivindicaciones 1-23 es nuevo según el artículo 6.1 Ley 11/1986.Informe del Estado de la Técnica Página 4/5OPINIÓN ESCRITANº de solicitud: 201131074ACTIVIDAD INVENTIVA (Art. 8.1 Ley 11/1986).Reivindicaciones 1-8, 10-11, 13-14, 16-18, 20-23.El documento D01 divulga un sistema de nanocápsulas de tamaño menor a 1µm, que comprende chitosan (poli-Dglucosamina), un aceite adyuvante, un agente tensoactivo aniónico que es un fosfolípido y un antígeno (ver resumen, párrafos 1, 9, 15, 17-22, 25, 38, 40, 53, 75, 109 y reivindicación 1).Dicho sistema comprende adicionalmente una molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes o inmunomoduladoras y de carácter hidrofóbico (ver párrafo 24).El documento D01 también divulga una composición farmacéutica que comprende el sistema anteriormente divulgado (ver reivindicación 14) y un procedimiento para la preparación de dicho sistema que comprende las fases de preparación de la fase acuosa con chitosan, la fase de preparación de la fase orgánica con el aceite adyuvante, con o sin agente tensioactivo, emulsionar ambas soluciones con la formación espontanea de las nanocápsulas e incubar el antígeno sobre la superficie de las nanocápsulas (ver párrafos 104-108 y reivindicación 29).El documento D01 no divulga el uso de isoprenoides, terpenoides o terpenos como aceite adyuvante del sistema de nanocápsulas, sino que utiliza ácidos grasos. Sin embargo, el documento D02 divulga el uso es escualeno junto a chitosan y antígenos de HIV en emulsiones para la fabricación de vacunas para prevenir enfermedades infecciosas, como HIV (ver columna 3 y 4).Por tanto se considera que el aceite adyuvante divulgado en el documento D01 o el divulgado en el documento D02 son posibilidades evidentes que un experto en la materia seleccionaría según las circunstancias para preparar la emulsión con chitosan, sin el ejercicio de actividad inventiva, para la preparación del sistema reivindicado.Por tanto se considera que las reivindicaciones 1-8, 10-11, 13-14, 16-18, 20-23 no implican actividad inventiva en el sentido del artículo 8.1 de la Ley 11/1986.Reivindicaciones 9, 12, 15, 19.La reivindicaciones 9, 12, 15 y 19 implican actividad inventiva en el sentido del articulo 8.1 Ley 11/1986.Informe del Estado de la Técnica Página 5/5
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES201131074A ES2366255B2 (es) | 2011-06-27 | 2011-06-27 | Nanocomposiciones sacarídicas para la liberación de vacunas. |
| PCT/ES2012/070470 WO2013001124A1 (es) | 2011-06-27 | 2012-06-26 | Nanocomposiciones sacarídicas para la liberación de vacunas |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES201131074A ES2366255B2 (es) | 2011-06-27 | 2011-06-27 | Nanocomposiciones sacarídicas para la liberación de vacunas. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2366255A1 ES2366255A1 (es) | 2011-10-18 |
| ES2366255B2 true ES2366255B2 (es) | 2012-08-08 |
Family
ID=44681547
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES201131074A Active ES2366255B2 (es) | 2011-06-27 | 2011-06-27 | Nanocomposiciones sacarídicas para la liberación de vacunas. |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| ES (1) | ES2366255B2 (es) |
| WO (1) | WO2013001124A1 (es) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL229276B1 (pl) | 2015-07-17 | 2018-06-29 | Univ Jagiellonski | Nanokapsuła do przenoszenia związku lipofilowego i sposób jej wytwarzania |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5980912A (en) * | 1997-03-25 | 1999-11-09 | Zonagen, Inc. | Chitosan induced immunopotentiation |
| EP1243323B1 (de) * | 2001-03-22 | 2005-01-05 | Cognis Iberia, S.L. | Nanokapseln |
| PL1834635T3 (pl) * | 2006-03-13 | 2012-01-31 | Advancell Advanced In Vitro Cell Tech S A | Stabilne układy nanokapsułek do podawania cząsteczek aktywnych |
-
2011
- 2011-06-27 ES ES201131074A patent/ES2366255B2/es active Active
-
2012
- 2012-06-26 WO PCT/ES2012/070470 patent/WO2013001124A1/es active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2013001124A1 (es) | 2013-01-03 |
| ES2366255A1 (es) | 2011-10-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Boroumand et al. | Chitosan-based nanoparticles against viral infections | |
| Corthésy et al. | Lipid-based particles: versatile delivery systems for mucosal vaccination against infection | |
| Oberoi et al. | PEG modified liposomes containing CRX-601 adjuvant in combination with methylglycol chitosan enhance the murine sublingual immune response to influenza vaccination | |
| Smith et al. | Nanoparticles as synthetic vaccines | |
| Firdaus et al. | Developments in vaccine adjuvants | |
| EP3015114A1 (en) | Oil-in-water emulsion containing no surfactant and use thereof | |
| Vicente et al. | A polymer/oil based nanovaccine as a single-dose immunization approach | |
| Karandikar et al. | Nanovaccines for oral delivery-formulation strategies and challenges | |
| Chuang et al. | A fucoidan-quaternary chitosan nanoparticle adjuvant for anthrax vaccine as an alternative to CpG oligodeoxynucleotides | |
| CA2596920C (en) | Lipid and nitrous oxide combination as adjuvant for the enhancement of the efficacy of vaccines | |
| US20120003277A1 (en) | Nanoemulsion vaccines | |
| Hendy et al. | Nano/microparticle formulations for universal influenza vaccines | |
| ES2366255B2 (es) | Nanocomposiciones sacarídicas para la liberación de vacunas. | |
| Desai et al. | Nanoadjuvants: promising bioinspired and biomimetic approaches in vaccine innovation | |
| Orosco et al. | Navigating the landscape of adjuvants for subunit vaccines: Recent advances and future perspectives | |
| Wang et al. | Chitosan hydrochloride salt stabilized emulsion as vaccine adjuvant | |
| Barclay et al. | Vaccine adjuvant nanotechnologies | |
| ES1075993U (es) | Unidad de balancín de una máquina de atar con fleje | |
| JP2012502972A (ja) | ワクチンアジュバントの組み合わせ | |
| Dai et al. | Co-delivery of polyinosinic: polycytidylic acid and flagellin by poly (lactic-co-glycolic acid) MPs synergistically enhances immune response elicited by intranasally delivered hepatitis B surface antigen | |
| Wilkhu | Non-ionic surfactant technology for the delivery and administration of sub-unit flu antigens | |
| Taghizadeh et al. | Nasal Administration of M2e/CpG-ODN Encapsulated in N-Trimethyl Chitosan (TMC) Significantly Increases Specific Immune Responses in a Mouse Model | |
| Bennett et al. | Translational modifications to improve vaccine efficacy in an oral influenza vaccine | |
| US11406705B2 (en) | Methods of using low dose volume B-cell epitope compositions for inducing an antibody immune response in human subjects | |
| Sessevmez et al. | Induction of humoral and cell-mediated immunity in mice by chitosan-curdlan composite nanoparticles administered intranasally and subcutaneously |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG2A | Definitive protection |
Ref document number: 2366255 Country of ref document: ES Kind code of ref document: B2 Effective date: 20120808 |