ES2364733B1

ES2364733B1 - METHOD FOR THE PREPARATION OF AT LEAST ONE COMPOSITE FROM BLOOD, AND EXTRACTION DEVICE TO BE USED IN THE EXECUTION OF SUCH METHOD

Info

Publication number: ES2364733B1
Application number: ES201000306A
Authority: ES
Inventors: Eduardo Anitua Aldecoa
Original assignee: BTI Biotechnology Insttitute
Current assignee: BTI Biotechnology Insttitute
Priority date: 2010-03-10
Filing date: 2010-03-10
Publication date: 2012-08-03
Anticipated expiration: 2030-03-10
Also published as: ES2364733A1

Abstract

Método para la preparación de al menos un compuesto de propiedades biológicas a partir de sangre, donde dicho método se ejecuta en tubos cerrados con presión inferior a la presión atmosférica, reduciéndose o impidiéndose la contaminación bacteriana del compuesto por manipulación. El método comprende entre otros la repetición el número de veces que se desee de los pasos siguientes: conectar un segundo contenedor al vacío a un dispositivo de extracción conectado a su vez a un primer contenedor que contiene sangre separada en fracciones, esperar un tiempo a que se transfiera(n) la(s) fracción(es) deseada(s) y retirar dicho segundo contenedor, pudiendo obtenerse diversos segundos contenedores con diferentes compuestos destinados a diferentes aplicaciones médicas incluyendo terapias biológicas. Los pasos pueden ser ejecutados en un sistema cerrado, sin destapar los contenedores, o bien puede abrirse el primer contenedor antes de la introducción del dispositivo de extracción.Method for the preparation of at least one compound of biological properties from blood, where said method is executed in closed tubes with pressure below atmospheric pressure, reducing or preventing bacterial contamination of the compound by manipulation. The method comprises, among other things, the repetition of the number of times desired in the following steps: connect a second vacuum container to an extraction device connected in turn to a first container containing blood separated into fractions, wait a while for the desired fraction (s) is transferred and said second container can be removed, and various second containers can be obtained with different compounds intended for different medical applications including biological therapies. The steps can be executed in a closed system, without uncovering the containers, or the first container can be opened before the introduction of the extraction device.

Description

Método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, y dispositivo de extracción para ser utilizado en la ejecución de dicho método. Method for the preparation of at least one compound from blood, and extraction device to be used in the execution of said method.

Sector de la técnica Technical sector

La invención se reﬁere a un método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, por ejemplo un compuesto rico en señales celulares. La invención también se reﬁere a un dispositivo para ser utilizado en la ejecución del método. The invention relates to a method for the preparation of at least one compound from blood, for example a compound rich in cellular signals. The invention also refers to a device to be used in the execution of the method.

Estado de la técnica State of the art

La patente US6569204 describe un método para preparar una composición rica en factores de crecimiento a partir de sangre, que ha demostrado con el paso del tiempo presentar unas propiedades biológicas muy interesantes y beneﬁciosas para diversas aplicaciones médicas. Este método, ejecutable en condiciones ambulatorias (sin necesidad de cirugía o complejas instalaciones), básicamente comprende los siguientes pasos: centrifugar un tubo que contiene sangre y anticoagulante durante un tiempo y a una velocidad y temperatura especíﬁcas, obteniéndose la separación de la sangre en diferentes fracciones; extraer la fracción intermedia, localizada encima de los glóbulos rojos (fracción inferior), donde dicha fracción intermedia es un plasma rico en plaquetas; transferir dicho plasma a un segundo tubo al que puede añadirse cloruro de calcio, que ejerce la función de agente coagulante y agente activador del plasma (agente capaz de iniciar el proceso de liberación de factores de crecimiento por parte de las plaquetas); esperar un determinado tiempo para permitir que el plasma se active y coagule hasta conseguir la consistencia determinada en función de la aplicación. Este plasma viene siendo utilizado con resultados muy favorables en diversos campos médicos como son la regeneración ósea (generalmente en implantología y en traumatología), el tratamiento de dolencias articulares, tratamientos de la piel, etc. Algunos de ellos pueden verse descritos en la propia US6569204 o en la solicitud de patente US2009035382. US6569204 describes a method for preparing a composition rich in growth factors from blood, which has shown over time to present very interesting and beneficial biological properties for various medical applications. This method, executable in outpatient conditions (without the need for surgery or complex facilities), basically comprises the following steps: centrifuge a tube containing blood and anticoagulant for a specific time and temperature, obtaining the separation of blood into different fractions ; extracting the intermediate fraction, located above the red blood cells (lower fraction), where said intermediate fraction is a platelet rich plasma; transferring said plasma to a second tube to which calcium chloride can be added, which acts as a clotting agent and plasma activating agent (agent capable of initiating the platelet growth factor release process); wait a certain time to allow the plasma to activate and coagulate until the consistency is determined depending on the application. This plasma has been used with very favorable results in various medical fields such as bone regeneration (usually in implantology and traumatology), the treatment of joint ailments, skin treatments, etc. Some of them can be described in US6569204 itself or in patent application US2009035382.

El método de la patente US6569204 y muchos otros métodos conocidos para la preparación compuestos sanguíneos con propiedades biológicas deseables son métodos que conllevan un cierto riesgo de infección para el paciente receptor del compuesto ﬁnal, ya que no están libres de sufrir una contaminación bacteriana en alguna de sus fases. Dicha contaminación bacteriana puede producirse por diversos motivos: por una septicemia que arroje gérmenes al torrente vascular, por una desinfección insuﬁciente de la piel en el momento de la punción venosa o por la manipulación de la sangre y posteriores compuestos durante la ejecución del método. En lo que se reﬁere a la manipulación, un factor de riesgo de contaminación bacteriana es el hecho de que el método de US6569204 y otros métodos se ejecutan en tubos abiertos, sin estanqueidad o vacío, de manera que el plasma centrifugado y los compuestos que se van obteniendo entran en contacto con el aire circundante (esto es lo que se conoce como circuito abierto). The method of US6569204 and many other known methods for the preparation of blood compounds with desirable biological properties are methods that carry a certain risk of infection for the patient receiving the final compound, since they are not free to suffer bacterial contamination in any of its phases Such bacterial contamination can occur for various reasons: for a septicemia that throws germs into the vascular stream, for an insufficient disinfection of the skin at the time of venous puncture or for the manipulation of blood and subsequent compounds during the execution of the method. With regard to handling, a risk factor for bacterial contamination is the fact that the US6569204 method and other methods are run in open tubes, without sealing or vacuum, so that the centrifuged plasma and the compounds that are They get in contact with the surrounding air (this is what is known as open circuit).

La presente invención tiene como objetivo presentar un procedimiento mejorado de preparación de un compuesto de propiedades biológicas interesantes obtenido a partir de sangre, donde entre otros avances con respecto a los procedimientos conocidos se consiga reducir el riesgo de contaminación bacteriana del compuesto ﬁnal asociado a la manipulación de la sangre y demás sustancias sucesivas durante la ejecución del procedimiento, y se consiga que el producto ﬁnal quede almacenado en un contenedor cerrado y estéril. The present invention aims to present an improved method of preparing a compound of interesting biological properties obtained from blood, where among other advances with respect to known procedures it is possible to reduce the risk of bacterial contamination of the final compound associated with handling of blood and other successive substances during the execution of the procedure, and that the final product is stored in a closed and sterile container.

Descripción breve de la invención Brief Description of the Invention

Es objeto de la invención un método para la preparación de al menos un compuesto de propiedades biológicas deseables a partir de sangre, donde en dicho método se utilizan tubos cerrados al vacío (con presión inferior a la presión atmosférica). En la mayoría del tiempo de ejecución del método, y preferentemente en todo momento, se impide el contacto del plasma o de cualquier otro compuesto involucrado en el método con el aire circundante. El método de acuerdo con la invención permite en mayor medida garantizar la no contaminación del compuesto o los compuestos ﬁnales y sus óptimas condiciones médicas y biológicas. The object of the invention is a method for the preparation of at least one compound of desirable biological properties from blood, where said method uses vacuum closed tubes (with pressure below atmospheric pressure). In most of the method execution time, and preferably at all times, contact of the plasma or of any other compound involved in the method with the surrounding air is prevented. The method according to the invention makes it possible to guarantee the non-contamination of the final compound or compounds and their optimal medical and biological conditions.

El método de acuerdo con la invención comprende los pasos de: disponer de una determinada cantidad de sangre en un primer contenedor cerrado al vacío (con presión menor que la presión atmosférica), con o sin anticoagulante; separar la sangre en una serie de fracciones, una de ellas una fracción de plasma con un gradiente de concentración de plaquetas; introducir un dispositivo de extracción hasta sustancialmente el nivel superior de la fracción más superior contenida en el primer contenedor; conectar un segundo contenedor cerrado al vacío (con presión menor que la presión atmosférica y menor que la del primer contenedor) al primer contenedor y esperar un determinado tiempo hasta que se haya transferido por diferencia de presiones una cantidad deseada de plasma y/o otras fracciones del primer contenedor al segundo contenedor; retirar el segundo contenedor. Los pasos de conectar el segundo contenedor, esperar un tiempo y retirar el segundo contenedor pueden ser repetidos, es decir, realizados más de una vez con el ﬁn de obtener más de un segundo contenedor (siempre ajustando adecuadamente la profundidad de introducción del dispositivo de extracción), cada uno albergando una composición con una concentración plaquetaria u otras características biológicas especíﬁcas para la determinada aplicación médica para la que vaya a ser utilizado. The method according to the invention comprises the steps of: disposing of a certain amount of blood in a first vacuum closed container (with pressure less than atmospheric pressure), with or without anticoagulant; separating the blood into a series of fractions, one of them a plasma fraction with a platelet concentration gradient; introducing an extraction device to substantially the upper level of the uppermost fraction contained in the first container; connect a second vacuum closed container (with pressure less than atmospheric pressure and less than that of the first container) to the first container and wait a certain time until a desired amount of plasma and / or other fractions has been transferred by pressure difference from the first container to the second container; Remove the second container. The steps of connecting the second container, waiting a while and removing the second container can be repeated, that is, performed more than once in order to obtain more than a second container (always properly adjusting the introduction depth of the extraction device ), each housing a composition with a platelet concentration or other specific biological characteristics for the particular medical application for which it will be used.

En un modo de realización, todos los pasos son ejecutados en un sistema cerrado, sin destapar los contenedores o realizar cualquier otra acción que ponga en contacto el interior de los contenedores con el aire circundante. En este caso, puede introducirse opcionalmente un sistema de venteo (sistema que permite la entrada de pequeñas cantidades de aire ﬁltrado) en el primer contenedor antes de conectar el segundo contenedor al primer contenedor. In one embodiment, all the steps are executed in a closed system, without uncovering the containers or performing any other action that brings the interior of the containers into contact with the surrounding air. In this case, a venting system (a system that allows the entry of small amounts of filtered air) into the first container can be optionally introduced before connecting the second container to the first container.

En otro modo de realización, el primer contenedor puede abrirse después de realizar la separación de la sangre en fracciones y antes de introducir el dispositivo de extracción. De esta manera se simpliﬁca la conexión del segundo contenedor y la transferencia de plasma y/o otras fracciones, al no tener que perforar un tapón con septum. Este método puede ser igualmente seguro desde el punto de vista de la posible contaminación bacteriana que pueda sufrir el compuesto cuando se abre el primer contenedor, antes de la transferencia al segundo contenedor, si por ejemplo se realiza en una cámara de ﬂujo laminar, en un ambiente estéril, en quirófano. Sin embargo, en muchos casos la aplicación del compuesto ﬁnal va a realizarse en ambiente abierto (por ejemplo en cirugía oral o tratamiento de úlceras cutáneas), con lo que no es necesario ejecutar el método en un ambiente estéril. In another embodiment, the first container can be opened after separation of the blood into fractions and before introducing the extraction device. This simplifies the connection of the second container and the transfer of plasma and / or other fractions, as it does not have to pierce a plug with a septum. This method can be equally safe from the point of view of the possible bacterial contamination that the compound may suffer when the first container is opened, before the transfer to the second container, if for example it is carried out in a laminar flow chamber, in a sterile environment, in the operating room. However, in many cases the application of the final compound will be carried out in an open environment (for example in oral surgery or treatment of skin ulcers), so it is not necessary to execute the method in a sterile environment.

El procedimiento según la invención presenta numerosos aspectos interesantes o ventajosos frente a los procedimientos convencionales. The process according to the invention has numerous interesting or advantageous aspects compared to conventional procedures.

Por una parte, con el método de la invención no se produce la extracción automática y obligatoria de la fracción de plasma completa o de varias fracciones completas, sino que el método de la invención permite extraer, en condiciones estériles, la cantidad de plasma y/o otra fracción que se desee del primer contenedor, en función de la aplicación. En otras palabras, es posible extraer plasma a medida en función de las características del producto ﬁnal que se pretenda obtener; incluso, como se ha mencionado, a partir de una única muestra de sangre (un único primer contenedor) es posible obtener varios segundos contenedores con diferentes compuestos para diferentes aplicaciones médicas. Es decir, el método permite la personalización de la dosis de plaquetas u otras características biológicas de la fracción o las fracciones extraídas que interesen, de forma que es posible adecuar el o los compuestos ﬁnales a las aplicaciones médicas para las cuales está o están destinados. On the one hand, with the method of the invention there is no automatic and mandatory extraction of the whole plasma fraction or of several complete fractions, but the method of the invention allows the quantity of plasma and / or sterile conditions to be extracted under sterile conditions. or another desired fraction of the first container, depending on the application. In other words, it is possible to extract plasma as a function of the characteristics of the final product to be obtained; even, as mentioned, from a single blood sample (a single first container) it is possible to obtain several second containers with different compounds for different medical applications. That is, the method allows the personalization of the platelet dose or other biological characteristics of the fraction or the extracted fractions that interest, so that it is possible to adapt the final compound (s) to the medical applications for which it is or are intended.

Por otra parte, el producto que queda en el segundo contenedor queda almacenado en un contenedor cerrado y estéril de manera que está preparado para recibir tratamientos posteriores: sucesivas manipulaciones (por ejemplo añadiendo un agente activador, esperando un tiempo, sometiéndolo a una determinada temperatura, otras centrifugaciones, etc.), inﬁltraciones de otras sustancias o productos, almacenaje, congelación, etc. On the other hand, the product that remains in the second container is stored in a closed and sterile container so that it is prepared to receive subsequent treatments: successive manipulations (for example by adding an activating agent, waiting for a time, subjecting it to a certain temperature, other centrifuges, etc.), infiltration of other substances or products, storage, freezing, etc.

El compuesto fabricado de acuerdo con el método de la presente invención puede ser utilizado para diversas aplicaciones, por ejemplo la regeneración ósea y el tratamiento de dolencias o enfermedades articulares degenerativas. The compound manufactured in accordance with the method of the present invention can be used for various applications, for example bone regeneration and the treatment of degenerative joint ailments or diseases.

Descripción breve de las ﬁguras Brief description of the ﬁ gures

Los detalles de la invención se aprecian en las ﬁguras que se acompañan, no pretendiendo éstas ser limitativas del alcance de la invención: The details of the invention can be seen in the accompanying figures, not intended to be limiting of the scope of the invention:

--: Las Figuras 1 y 2 muestran una vista esquemática de un modo de realización de dicho dispositivo de extracción según la invención, en situación de montaje y despiece respectivamente. Figures 1 and 2 show a schematic view of an embodiment of said extraction device according to the invention, in assembly and exploded situation respectively.

--: Las Figuras 3 y 4 muestran respectivamente una perspectiva completa y parcial de la carcasa comprendida en el modo de realización de la Figura 1. Figures 3 and 4 show respectively a complete and partial perspective of the housing included in the embodiment of Figure 1.

Descripción detallada de la invención Detailed description of the invention

De acuerdo con la invención, se deﬁne un método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, que se caracteriza por que comprende los pasos de: In accordance with the invention, a method for the preparation of at least one compound from blood is defined, characterized in that it comprises the steps of:

i) disponer de una determinada cantidad de sangre en un primer contenedor cerrado al vacío, es decir, con una presión menor que la presión atmosférica; i) dispose of a certain amount of blood in a first vacuum closed container, that is, with a pressure lower than atmospheric pressure;

ii) separar la sangre en al menos las fracciones siguientes: una fracción de glóbulos rojos en la parte inferior del primer contenedor, una pequeña fracción que contiene glóbulos blancos y plaquetas por encima de la anterior y una fracción de plasma con un gradiente de concentración de plaquetas por encima de la anterior, siendo dicho gradiente decreciente hacia la parte superior del primer contenedor (e incluso pudiendo comprender el plasma, dependiendo de las condiciones de centrifugado, una parte superior sin plaquetas); ii) separating the blood into at least the following fractions: a fraction of red blood cells in the lower part of the first container, a small fraction containing white blood cells and platelets above the previous one and a plasma fraction with a concentration gradient of platelets above the previous one, said gradient decreasing towards the top of the first container (and even being able to comprise the plasma, depending on the centrifugation conditions, an upper part without platelets);

iii) introducir un dispositivo de extracción (catéter, aguja o similar) hasta sustancialmente el nivel superior de la fracción más superior contenida en el primer contenedor; iii) introducing an extraction device (catheter, needle or the like) to substantially the upper level of the uppermost fraction contained in the first container;

iv) realizar al menos una vez los pasos de conectar al dispositivo de extracción un segundo contenedor cerrado al vacío con una presión menor que la del primer contenedor, esperar un determinado tiempo hasta que se transﬁera, por diferencia de presiones, una cantidad deseada de la fracción de plasma, la fracción de glóbulos blancos y plaquetas y/o la fracción de glóbulos rojos al segundo contenedor, retirar el segundo contenedor y, en caso de que vayan a realizarse más extracciones, ajustar el grado de introducción del dispositivo de extracción para que nuevamente alcance el nivel superior de las fracciones remanentes. iv) perform at least once the steps of connecting a second vacuum closed container to the extraction device with a pressure less than that of the first container, wait a certain time until a desired amount of the pressure is transferred plasma fraction, the fraction of white blood cells and platelets and / or the fraction of red blood cells to the second container, remove the second container and, in case more extractions are to be performed, adjust the degree of introduction of the extraction device so that again reach the upper level of the remaining fractions.

De esta manera, mediante el método de la invención se puede obtener un fraccionamiento selectivo de las diferentes fracciones del plasma obtenidas con el gradiente de concentración ya mencionado anteriormente, o de otras fracciones del primer contenedor. Thus, by means of the method of the invention a selective fractionation of the different plasma fractions obtained with the concentration gradient already mentioned above, or other fractions of the first container can be obtained.

En lo que se reﬁere al primer paso del método, y en particular al primer contenedor en el cual se dispone de una determinada cantidad de sangre como punto de partida del método, dicho primer contenedor puede presentar una serie de particularidades. As regards the first step of the method, and in particular the first container in which a certain amount of blood is available as the starting point of the method, said first container may have a series of particularities.

En un modo de realización, el primer contenedor está cerrado y no se abre en ningún momento, para conseguir un sistema o circuito cerrado en el cual la sangre y demás compuestos obtenidos posteriormente no entren en contacto con el aire ambiental o circundante sin ﬁltrar, reduciéndose el riesgo de contaminación bacteriana por manipulación, asegurándose la esterilidad y no alterándose la bioestabilidad y la bioseguridad del producto ﬁnal resultante. En este modo de realización se puede introducir opcionalmente un sistema de venteo en el primer contenedor, que permitirá la entrada de aire ﬁltrado en el mismo. Además, el dispositivo de extracción está preferentemente provisto de un Septum para mantener el circuito cerrado. In one embodiment, the first container is closed and does not open at any time, to achieve a closed system or circuit in which the blood and other compounds subsequently obtained do not come into contact with the surrounding or unfiltered ambient or surrounding air, reducing the risk of bacterial contamination by manipulation, ensuring sterility and not altering the biostability and biosecurity of the resulting final product. In this embodiment, a venting system can optionally be introduced into the first container, which will allow the entry of filtered air into it. In addition, the extraction device is preferably provided with a Septum to keep the circuit closed.

En otro modo de realización, el primer contenedor se abre una vez realizada la separación de sangre en fracciones y antes de introducir el dispositivo de extracción. In another embodiment, the first container is opened after the separation of blood into fractions and before introducing the extraction device.

El primer contenedor está generalmente fabricado en plástico o vidrio, cerrado o taponado con un tapón roscado The first container is generally made of plastic or glass, closed or plugged with a screw cap

o a presión. Este tapón es perforable para permitir la conexión en cerrado del dispositivo de extracción. Además, el primer contenedor es preferentemente un tubo cilíndrico de entre4y50mlde capacidad. or under pressure This plug is pierceable to allow the closed connection of the extraction device. In addition, the first container is preferably a cylindrical tube of between 4 and 50 ml capacity.

Dicho primer contenedor puede contener o no al menos un agente anticoagulante, dependiendo del uso posterior que desee darse a los compuestos obtenidos mediante el procedimiento. Generalmente se utiliza como agente anticoagulante el citrato sódico debido a que es un componente natural que puede encontrarse en el torrente sanguíneo y que actúa como quelante del catión divalente de Calcio (Ca 2+). Sin embargo, también se contemplan otros anticoagulantes, como por ejemplo el EDTA, que es un anticoagulante artiﬁcial, aunque menos especíﬁco para el catión divalente de Calcio (Ca 2+). Said first container may or may not contain at least one anticoagulant agent, depending on the subsequent use desired to be given to the compounds obtained by the process. Generally, sodium citrate is used as an anticoagulant agent because it is a natural component that can be found in the bloodstream and acts as a chelator of the divalent calcium cation (Ca 2+). However, other anticoagulants are also contemplated, such as EDTA, which is an arti ﬁ cial anticoagulant, although less specific for the divalent calcium cation (Ca 2+).

Ejemplos de primer contenedor First container examples

Dos ejemplos de primer contenedor válido para la presente invención son los tubos denominados TE5 o TE9 PRGF® Collection Tube comercializados por el propio solicitante. Se trata de dos tubos estériles de plástico que comprenden un cuerpo principal y un tapón perforable. Los tubos tienen un volumen, respectivamente, de5y9ml; se utilizará un volumen u otro en función de las necesidades de la aplicación médica concreta. Ambos tubos están etiquetados, comprendiendo dichas etiquetas una regla con indicaciones de volumen en sentido ascendente hacia la parte inferior del tubo. Los tubos contienen citrato sódico al 3.8% en su interior como agente anticoagulante, en cuyo caso presentan las siguientes características: Two examples of the first valid container for the present invention are tubes called TE5 or TE9 PRGF® Collection Tube marketed by the applicant himself. These are two sterile plastic tubes that comprise a main body and a pierceable cap. The tubes have a volume, respectively, of 5 and 9 ml; one volume or another will be used depending on the needs of the specific medical application. Both tubes are labeled, said labels comprising a ruler with volume indications ascending towards the bottom of the tube. The tubes contain 3.8% sodium citrate inside as an anticoagulant agent, in which case they have the following characteristics:

TUBO TE5 TE5 TUBE

Capacidad: Capacity:: 5ml 5ml

Volumen de vacío (presión): Vacuum volume (pressure):: 4,5 ml 4.5 ml

Volumen de citrato sódico: Volume of sodium citrate:: 0,5 ml 0.5 ml

Dimensiones: Dimensions:: 13x75mm 13x75mm

TUBO TE9 Capacidad: 9ml Volumen de vacío (presión): 8,1 ml Volumen de citrato sódico: 0,9 ml Dimensiones: 16 x 100 mm TE9 TUBE Capacity: 9ml Vacuum volume (pressure): 8.1 ml Sodium citrate volume: 0.9 ml Dimensions: 16 x 100 mm

En lo que se reﬁere al segundo paso del método, relativo a la separación de la sangre en diferentes fracciones, esta separación se realiza preferentemente centrifugando el primer contenedor (a una velocidad de centrifugado y durante un tiempo determinado) o colocando el tubo en una gradilla y esperando a que las fracciones se separen por sedimentación. With regard to the second step of the method, related to the separation of blood into different fractions, this separation is preferably performed by centrifuging the first container (at a spin speed and for a certain time) or by placing the tube in a rack and waiting for the fractions to separate by sedimentation.

En caso de que se realice un centrifugado del primer contenedor, dicho centrifugado puede presentar una serie de particularidades. Preferentemente, el primer contenedor se centrifuga a una velocidad de entre 100 y 900 G durante 3 a 12 minutos y a temperatura ambiente o no (es decir, a cualquier temperatura). Dentro de estos rangos y de una forma especialmente ventajosa, el centrifugado se realiza a una velocidad de entre 300 y 800 G y durante un tiempo de entre 5 y 9 minutos. Estos rangos de parámetros de centrifugado permiten obtener una separación más deﬁnida de las diferentes fracciones (plasma con diferentes concentraciones plaquetarias, glóbulos blancos con plaquetas, glóbulos rojos y otras, si las hubiera). In the event that a spin of the first container is performed, said spin may have a series of particularities. Preferably, the first container is centrifuged at a speed of between 100 and 900 G for 3 to 12 minutes and at room temperature or not (ie at any temperature). Within these ranges and in an especially advantageous way, the centrifugation is carried out at a speed of between 300 and 800 G and for a time of between 5 and 9 minutes. These ranges of centrifugal parameters allow to obtain a more defined separation of the different fractions (plasma with different platelet concentrations, white blood cells with platelets, red blood cells and others, if any).

En lo que se reﬁere al paso de introducir un sistema de venteo en el primer contenedor, éste se realiza opcionalmente. En caso de no introducirse, la transferencia de plasma y/o otra fracción se realiza hasta que el personal clínico retira el segundo contenedor o hasta que se igualan las presiones en el primer y segundo contenedor (lo cual depende de la presión del segundo contenedor). En cambio, en caso de introducirse, el sistema de venteo deja entrar aire ﬁltrado en el primer contenedor cerrado por lo que la presión del primer contenedor siempre es mayor que la presión del segundo contenedor; en consecuencia, la extracción únicamente termina cuando el personal clínico retira el segundo contenedor, cuando desplaza el dispositivo de extracción por encima del nivel más superior, o cuando, por supuesto, se ha transferido todo el contenido del primer contenedor al segundo contenedor. As regards the step of introducing a venting system into the first container, it is optionally carried out. If not introduced, the transfer of plasma and / or another fraction is performed until the clinical staff removes the second container or until the pressures in the first and second containers are equalized (which depends on the pressure of the second container) . On the other hand, if introduced, the venting system lets in ﬁ ltered air into the first closed container so that the pressure of the first container is always greater than the pressure of the second container; consequently, the extraction only ends when the clinical staff removes the second container, when it moves the extraction device above the highest level, or when, of course, the entire contents of the first container have been transferred to the second container.

En lo que se reﬁere a los siguientes pasos del método, relativos a la introducción de un dispositivo de extracción, a la conexión de un segundo contenedor, a la extracción de una parte del plasma u otra fracción al segundo contenedor y a la retirada de dicho segundo contenedor, estos pasos y el segundo contenedor pueden presentar una serie de particularidades. With regard to the following steps of the method, relating to the introduction of an extraction device, the connection of a second container, the extraction of a part of the plasma or another fraction to the second container and the removal of said second container, these steps and the second container can present a series of particularities.

En cuanto a la introducción del dispositivo de extracción, ésta se hará sustancialmente hasta el nivel superior de la fracción más superior contenida en el primer contenedor. Si se realiza una extracción sucesiva o secuenciada de diferentes fracciones a una serie de segundos contenedores, la extracción se realiza siempre aspirando la parte superior del líquido remanente. Es decir, el dispositivo de extracción se ajusta siempre al nivel superior de líquido a medida que su nivel va bajando durante la aspiración. Entonces, si para una determinada aplicación médica es necesario por ejemplo extraer la parte inferior del plasma (parte con mayor concentración de plaquetas), se realiza primero la extracción en uno o varios pasos del plasma situado por encima de la parte deseada (pudiendo desechar este plasma con menor concentración de plaquetas o utilizarlo para otras aplicaciones médicas). As for the introduction of the extraction device, it will be made substantially up to the upper level of the uppermost fraction contained in the first container. If a successive or sequential extraction of different fractions is performed to a series of second containers, the extraction is always carried out by aspirating the upper part of the remaining liquid. That is, the extraction device always adjusts to the upper level of liquid as its level decreases during aspiration. Then, if for a certain medical application it is necessary, for example, to extract the lower part of the plasma (part with a higher concentration of platelets), the extraction is first carried out in one or several steps of the plasma located above the desired part (being able to discard plasma with lower platelet concentration or use it for other medical applications).

En cuanto a qué fracciones o combinaciones de fracciones pueden extraerse, la invención contempla un sinfín de posibilidades: puede extraerse únicamente plasma (toda o parte de la fracción, conteniendo una concentración variable de plaquetas e incluso sin plaquetas si el centrifugado se ha realizado a altas velocidades), únicamente glóbulos blancos con plaquetas (toda o parte de la fracción), únicamente glóbulos rojos (toda o parte de la fracción), plasma (toda o parte de la fracción) junto con glóbulos blancos (toda o parte de la fracción), plasma (toda o parte de la fracción) junto con toda la fracción de glóbulos blancos y parte o toda la fracción de glóbulos rojos, o parte o toda la fracción de glóbulos blancos junto con parte o toda la fracción de glóbulos rojos. As to which fractions or combinations of fractions can be extracted, the invention contemplates endless possibilities: only plasma can be extracted (all or part of the fraction, containing a variable concentration of platelets and even without platelets if centrifugation has been performed at high speeds), only white blood cells with platelets (all or part of the fraction), only red blood cells (all or part of the fraction), plasma (all or part of the fraction) along with white blood cells (all or part of the fraction) , plasma (all or part of the fraction) together with the entire fraction of white blood cells and part or all of the fraction of red blood cells, or part or all of the fraction of white blood cells together with part or all of the fraction of red blood cells.

Por otro lado, en lo que se reﬁere al segundo contenedor, éste está cerrado y no se abre al menos hasta la ﬁnalización del procedimiento, para conseguir un sistema o circuito cerrado en el cual el plasma y demás compuestos no entren en contacto con el aire (al igual que el primer contenedor). Generalmente está cerrado o taponado con un tapón roscado On the other hand, as regards the second container, it is closed and does not open at least until the end of the procedure, to achieve a closed system or circuit in which the plasma and other compounds do not come into contact with the air (like the first container). It is usually closed or plugged with a screw cap

o a presión. Este tapón es perforable. Preferentemente, el segundo contenedor es un tubo cilíndrico de entre4y50ml de capacidad. or under pressure This plug is pierceable. Preferably, the second container is a cylindrical tube of between 4 and 50ml capacity.

El segundo contenedor puede o no contener al menos un agente coagulante, procoagulante o activador plaquetario, en función de las necesidades de la aplicación médica concreta para la cual esté destinado el compuesto ﬁnal. Generalmente se utiliza como agente coagulante el cloruro cálcico al 10%, aunque se contemplan otros agentes coagulantes, por ejemplo la trombina bovina, la trombina humana, etc. También se contempla la utilización en el segundo contenedor de agentes acelerantes de la coagulación, como son algunos aditivos especiales inertes favorecedores de la coagulación (sílice, etc.) o como es el hecho de realizar el segundo contenedor en un material acelerante de la coagulación (vidrio). Asimismo se contempla que el segundo contenedor pueda contener cualquier otro biomaterial o agente, si ello es necesario para la aplicación médica para la que deba estar destinado el compuesto contenido en dicho segundo contenedor. The second container may or may not contain at least one coagulating agent, procoagulant or platelet activator, depending on the needs of the specific medical application for which the final compound is intended. Generally, 10% calcium chloride is used as a coagulating agent, although other coagulating agents are contemplated, for example bovine thrombin, human thrombin, etc. The use in the second container of coagulation accelerating agents is also contemplated, such as some special inert coagulation-promoting additives (silica, etc.) or as is the fact of making the second container in a coagulation accelerating material ( glass). It is also contemplated that the second container may contain any other biomaterial or agent, if this is necessary for the medical application for which the compound contained in said second container should be intended.

El agente coagulante, agente procoagulante, agente activador o cualquier otro biomaterial o agente, puede ser añadido al segundo contenedor bien de forma previa a la transferencia desde el primer contenedor (por ejemplo durante la propia fabricación del segundo contenedor), o bien una vez efectuada la transferencia. The coagulating agent, procoagulant agent, activating agent or any other biomaterial or agent, can be added to the second container either prior to the transfer from the first container (for example during the manufacture of the second container), or once made the transference.

El segundo contenedor generalmente está fabricado de plástico o vidrio. El plástico puede ser interesante para determinadas aplicaciones por su capacidad de retardar el proceso de coagulación, hecho que se acentuará más aún si se utiliza un segundo contenedor de plástico sin agente coagulante. The second container is usually made of plastic or glass. Plastic can be interesting for certain applications because of its ability to slow the coagulation process, which will be further accentuated if a second plastic container without a coagulating agent is used.

Ejemplos de segundo contenedor Second container examples

Dos ejemplos de segundo contenedor válido para la presente invención son los tubos denominados TF5-EST o TF9-EST PRGF ® Plasma Fractionation Tube comercializados por el propio solicitante. Se trata de dos tubos estériles de plástico formados por un cuerpo principal y un tapón perforable. Los tubos tienen un volumen, respectivamente, de 5 y 9 ml; se utilizará un volumen u otro en función de las necesidades de la aplicación médica concreta. Ambos tubos están etiquetados, comprendiendo dichas etiquetas una regla con indicaciones de volumen en sentido ascendente hacia la parte superior del tubo. Estos tubos tienen una presión negativa diferente entre sí, y pueden fabricarse con diferentes presiones en función de las necesidades de la técnica. Two examples of a second container valid for the present invention are tubes called TF5-EST or TF9-EST PRGF® Plasma Fractionation Tube marketed by the applicant himself. These are two sterile plastic tubes formed by a main body and a pierceable cap. The tubes have a volume, respectively, of 5 and 9 ml; one volume or another will be used depending on the needs of the specific medical application. Both tubes are labeled, said labels comprising a ruler with volume indications ascending towards the top of the tube. These tubes have a negative pressure different from each other, and can be manufactured with different pressures depending on the needs of the technique.

Por otro lado, en cuanto a la extracción, la invención contempla que pueda realizarse una única vez, para separar una cantidad deseada de al menos una fracción en un segundo contenedor, para una determinada aplicación. La invención también contempla que pueda repetirse este paso más de una vez para separar distintas partes del plasma (con diferente concentración de plaquetas o incluso sin plaquetas) u otras fracciones en distintos segundos contenedores, para diferentes aplicaciones. Por ejemplo, puede extraerse una parte de plasma con menor concentración de plaquetas On the other hand, as regards the extraction, the invention contemplates that it can be performed only once, to separate a desired amount of at least a fraction in a second container, for a given application. The invention also contemplates that this step can be repeated more than once to separate different parts of the plasma (with different concentration of platelets or even without platelets) or other fractions in different second containers, for different applications. For example, a part of plasma with lower platelet concentration can be extracted

o sin plaquetas (parte superior de la fracción superior del tubo) para una aplicación y puede extraerse posteriormente una parte de plasma con más concentración de plaquetas (situada más abajo, más próxima a la fracción de glóbulos blancos) para otra determinada aplicación que requiera de un producto ﬁnal más rico en señales celulares, aprovechando el gradiente de concentración de la fracción de plasma. A continuación se presentan diversos ejemplos de procedimientos que permiten comprender este concepto de extracción de acuerdo con la invención. or without platelets (upper part of the upper fraction of the tube) for an application and a part of plasma with a higher concentration of platelets (located below, closer to the fraction of white blood cells) can be subsequently extracted for another specific application that requires a final product richer in cellular signals, taking advantage of the concentration gradient of the plasma fraction. Below are several examples of procedures that allow us to understand this concept of extraction according to the invention.

Ejemplo de procedimiento 1 Procedure Example 1

Se dispone de sangre en un primer contenedor de plástico sin anticoagulante (al no usar anticoagulante, se elimina la necesidad de usar un coagulante y activador posteriormente). Tras el centrifugado, se extrae toda la fracción de plasma a un segundo contenedor de vidrio, o a un segundo contenedor de plástico con un acelerante de la coagulación, para la obtención de un coágulo retraído. El compuesto ﬁnal presenta una consistencia semisólida, con lo que es utilizable como tapón o membrana de ﬁbrina en aplicaciones como la estabilización de un injerto óseo particulado antes de la sutura de cierre en cirugía oral o máxilofacial, para el tratamiento de un alveolo post-extracción, etc. Blood is available in a first plastic container without anticoagulant (by not using anticoagulant, the need to use a coagulant and activator subsequently is eliminated). After centrifugation, the entire plasma fraction is extracted to a second glass container, or to a second plastic container with a coagulation accelerator, to obtain a retracted clot. The final compound has a semi-solid consistency, making it usable as a plug or de ﬁ brine membrane in applications such as stabilization of a particulate bone graft before the closing suture in oral or maxillofacial surgery, for the treatment of a post-extraction socket , etc.

Ejemplo de procedimiento 2 Procedure Example 2

Se dispone de sangre en un primer contenedor plástico sin anticoagulante (al no usar anticoagulante, se elimina la necesidad de usar un coagulante y activador posteriormente). Tras el centrifugado, se extrae toda la fracción de plasma a un segundo contenedor de plástico sin acelerante de la coagulación, por lo cual se retarda la coagulación del plasma. El compuesto ﬁnal presenta por lo tanto una consistencia líquida, útil para aplicaciones como inﬁltración en regeneración de tejido articular o en inyección intradérmica o intramuscular, o para ser añadido a un biomaterial y obtener un coágulo de dicho biomaterial, etc. Blood is available in a first plastic container without anticoagulant (by not using anticoagulant, the need to use a coagulant and activator subsequently is eliminated). After centrifugation, the entire plasma fraction is extracted to a second plastic container without coagulation accelerator, whereby plasma coagulation is delayed. The final compound therefore has a liquid consistency, useful for applications such as infiltration in joint tissue regeneration or intradermal or intramuscular injection, or to be added to a biomaterial and obtain a clot of said biomaterial, etc.

Ejemplo de procedimiento 3 Procedure Example 3

Se dispone de sangre en un primer contenedor plástico con anticoagulante (por lo cual se retarda o detiene la coagulación). Tras el centrifugado: Blood is available in a first plastic container with anticoagulant (for which coagulation is delayed or stopped). After spinning:

--: Se realiza una primera extracción de una determinada cantidad de la parte superior del plasma (es decir, un plasma con menor concentración de plaquetas o sin plaquetas) a un segundo contenedor de vidrio con cloruro de calcio (agente coagulante y activador). Se forma un compuesto semisólido, utilizable como tapón de ﬁbrina en aplicaciones como las citadas en el ejemplo de procedimiento 1. A first extraction of a certain amount of the upper part of the plasma (that is, a plasma with a lower concentration of platelets or without platelets) is made to a second glass container with calcium chloride (coagulating and activating agent). A semi-solid compound is formed, usable as a ﬁ nal plug in applications such as those mentioned in the example of procedure 1.

--: Se realiza una segunda extracción de la parte superior de plasma que queda en el primer contenedor (es decir, un plasma con mayor concentración de plaquetas con respecto al plasma extraído anteriormente) a otro segundo contenedor de plástico con cloruro de calcio (agente coagulante y activador). El cloruro de calcio también se podría añadir posteriormente. Se forma un compuesto líquido, útil para aplicaciones como la de ser mezclado con hueso particulado autólogo del paciente (del mismo del cual puede provenir la sangre utilizada en el método) en una zona del mismo en la que se vaya a regenerar hueso, para inﬁltración en piel, articular o cualquier otro uso. A second extraction of the upper part of plasma that remains in the first container (that is, a plasma with a higher concentration of platelets with respect to the plasma previously extracted) is carried out to another second plastic container with calcium chloride (coagulating and activating agent ). Calcium chloride could also be added later. A liquid compound is formed, useful for applications such as being mixed with autologous particulate bone of the patient (from which the blood used in the method can come) in an area of the same in which bone is to be regenerated, for infiltration on skin, joint or any other use.

Ejemplo de procedimiento 4 Procedure Example 4

Se dispone de sangre en un primer contenedor plástico con anticoagulante. Tras el centrifugado, se extrae la totalidad de la fracción de plasma a un segundo contenedor de plástico con agente coagulante y activador. Este agente también se podría añadir posteriormente. El compuesto ﬁnal presenta una consistencia líquida, útil para aplicaciones como inﬁltración de tejido articular, inﬁltraciones intradérmicas o intramusculares, etc. Blood is available in a first plastic container with anticoagulant. After centrifugation, the entire plasma fraction is extracted to a second plastic container with coagulating and activating agent. This agent could also be added later. The final compound has a liquid consistency, useful for applications such as joint tissue infiltration, intradermal or intramuscular infiltrations, etc.

Ejemplo de procedimiento 5 Procedure Example 5

Se dispone de sangre en un primer contenedor de plástico sin anticoagulante (al no usar anticoagulante, se elimina la necesidad de usar un coagulante y activador posteriormente). Tras el centrifugado, se abre el primer contenedor y se extrae toda la fracción de plasma a un segundo contenedor de vidrio, o a un segundo contenedor de plástico con un acelerante de la coagulación, para la obtención de un coágulo retraído. El compuesto ﬁnal presenta una consistencia semisólida, con lo que es utilizable como tapón o membrana de ﬁbrina en aplicaciones como la estabilización de un injerto óseo particulado antes de la sutura de cierre en cirugía oral o máxilofacial, para el tratamiento de un alveolo post-extracción, etc. Blood is available in a first plastic container without anticoagulant (by not using anticoagulant, the need to use a coagulant and activator subsequently is eliminated). After centrifugation, the first container is opened and the entire plasma fraction is extracted to a second glass container, or to a second plastic container with a coagulation accelerator, to obtain a retracted clot. The final compound has a semi-solid consistency, making it usable as a plug or de ﬁ brine membrane in applications such as stabilization of a particulate bone graft before the closing suture in oral or maxillofacial surgery, for the treatment of a post-extraction socket , etc.

Es objeto de la invención asimismo un dispositivo de extracción para extraer materia del primer contenedor al segundo contenedor. Las Figuras 1 y 2 muestran una vista esquemática de un modo de realización de dicho dispositivo de extracción según la invención, en situación de montaje y despiece respectivamente. El dispositivo de extracción comprende, principalmente, una primera aguja (2) para ser insertada en el primer contenedor de acuerdo con el método, una segunda aguja (4) para ser insertada en el segundo contenedor de acuerdo con el método, y un medio accionable por un usuario para abrir y cerrar el paso de materia desde la primera aguja (2) hacia la segunda aguja (4). La primera aguja (2) generalmente está dotada de una punta biselada en caso de que el método vaya a ejecutarse en cerrado, es decir, con el primer contenedor cerrado (permitiendo dicha punta biselada perforar el tapón del primer contenedor); en cambio, si el método va a ejecutarse en abierto (abriendo el primer contenedor una vez centrifugado) no es necesario que la primera aguja (2) termine en una punta biselada. Preferentemente, el medio para abrir y cerrar el paso de materia desde la primera aguja (2) hacia la segunda aguja (4) es un conjunto-pulsador (3) provisto de un botón (3a), como se ha representado en las ﬁguras, permitiendo un cómodo y eﬁcaz accionamiento del dispositivo. The object of the invention is also an extraction device for extracting matter from the first container to the second container. Figures 1 and 2 show a schematic view of an embodiment of said extraction device according to the invention, in assembly and exploded situation respectively. The extraction device comprises, mainly, a first needle (2) to be inserted into the first container according to the method, a second needle (4) to be inserted into the second container according to the method, and an actionable means by a user to open and close the passage of matter from the first needle (2) to the second needle (4). The first needle (2) is generally provided with a beveled tip in case the method is to be executed in closed, that is, with the first container closed (allowing said beveled tip to pierce the cap of the first container); on the other hand, if the method is going to be executed in open (opening the first container once centrifuged) it is not necessary that the first needle (2) ends in a beveled tip. Preferably, the means for opening and closing the passage of matter from the first needle (2) to the second needle (4) is a push-button assembly (3) provided with a button (3a), as shown in the figures, allowing a comfortable and efficient operation of the device.

En el modo de realización representado, el sistema comprende un conector (6) para adaptar la conexión macho de la segunda aguja (4) a la conexión macho del conjunto-pulsador (3). Lógicamente este conector (6) no siempre es necesario. In the embodiment shown, the system comprises a connector (6) to adapt the male connection of the second needle (4) to the male connection of the push-button assembly (3). Logically this connector (6) is not always necessary.

Preferentemente, el dispositivo comprende además una carcasa (1) de la cual sobresale la primera aguja (2). La carcasa (1) es tal que permite accionar el medio para abrir y cerrar el paso de materia desde la primera aguja (2) hacia la segunda aguja (4); en el modo de realización representado, por ejemplo, el botón (3a) del conjunto-pulsador (3) sobresale de la carcasa (1) y permite ser accionado fácilmente por el usuario del dispositivo. Preferably, the device further comprises a housing (1) from which the first needle (2) protrudes. The housing (1) is such that it allows the means to open and close the passage of matter from the first needle (2) to the second needle (4); In the embodiment shown, for example, the button (3a) of the push-button assembly (3) protrudes from the housing (1) and allows it to be easily operated by the user of the device.

Preferentemente también, la carcasa (1) comprende una zona de alojamiento (5) destinada a recibir (total o parcialmente) el segundo contenedor de acuerdo con el método. Dicha zona de alojamiento (5) puede observarse asimismo en la Figura 4, que muestra una perspectiva parcial de la carcasa (1) representada en la Figura 1. La Figura 3 muestra una perspectiva de la carcasa (1) completa, donde se observa el oriﬁcio (7) por el cual sobresale el botón (3a) del conjuntopulsador (3) y el oriﬁcio (8) por el cual sobresale la primera aguja (2). Preferably also, the housing (1) comprises a housing area (5) intended to receive (totally or partially) the second container according to the method. Said housing area (5) can also be seen in Figure 4, which shows a partial perspective of the housing (1) represented in Figure 1. Figure 3 shows a perspective of the complete housing (1), where the hole (7) through which the button (3a) of the pusher assembly (3) and the hole (8) over which the first needle (2) protrudes.

La carcasa (1) puede comprender además oriﬁcios para permitir la inserción de un sistema de venteo así como medios de guiado del sistema de venteo hacia el primer contenedor. El sistema de venteo, que permite la entrada de pequeñas cantidades de aire ﬁltrado, es interesante cuando se ejecuta el procedimiento según la invención con el primer contenedor cerrado, en los casos en los que se desee que el paso de materia no se vea interrumpido por igualamiento de presiones entre el primer contenedor y el segundo contenedor. The housing (1) may further comprise holes to allow the insertion of a venting system as well as guiding means of the venting system towards the first container. The venting system, which allows the entry of small amounts of filtered air, is interesting when the process according to the invention is executed with the first container closed, in cases where it is desired that the passage of matter is not interrupted by pressure equalization between the first container and the second container.

El sistema representado se utiliza de la forma siguiente. El segundo contenedor se introduce en la zona de alojamiento (5); presionando lo suﬁciente, se consigue que la segunda aguja (4) perfore el tapón de dicho segundo contenedor. A su vez, la primera aguja (2) se introduce en el primer contenedor (abierto o cerrado). Entonces, se pulsa el botón (3a) del conjunto pulsador (3), activándose la transferencia de materia (según el procedimiento de la invención) del primer contenedor al segundo contenedor por diferencia de presiones. The represented system is used as follows. The second container is introduced into the accommodation area (5); by pressing enough, the second needle (4) is perforated in the cap of said second container. In turn, the first needle (2) is inserted into the first container (open or closed). Then, the button (3a) of the push-button assembly (3) is pressed, activating the transfer of matter (according to the method of the invention) from the first container to the second container due to pressure differences.

Claims

1. Method for the preparation of at least one compound from blood, characterized in that it comprises the steps of:

i) dispose of blood in a first closed container with a pressure lower than atmospheric pressure;

ii) separate the blood into at least the following fractions: a fraction of red blood cells in the lower part of the first container, a fraction of white blood cells and platelets above the previous one and a plasma fraction with a platelet concentration gradient by above the previous one, said gradient decreasing towards the top of the first container;

iii) introducing an extraction device to substantially the upper level of the uppermost fraction contained in the first container;

iv) perform at least once the steps of connecting to the extraction device a second vacuum closed container with a pressure less than that of the first container, wait a certain time until a desired amount of plasma is transferred, by pressure difference , white blood cells with platelets and / or red blood cells to the second container, remove the second container and, if more extractions are to be performed, adjust the degree of introduction of the extraction device so that it again reaches the upper level of the remaining fractions .

2. 2.: Método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que el primer contenedor se abre después de separar la sangre en fracciones y antes de introducir el dispositivo de extracción. Method for the preparation of at least one compound from blood according to claim 1, characterized in that the first container is opened after separating the blood into fractions and before introducing the extraction device.

3. 3.: Método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que todos los pasos se ejecutan de acuerdo con un sistema cerrado. Method for the preparation of at least one compound from blood, according to claim 1, characterized in that all the steps are executed according to a closed system.

4. Four.: Método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, según la reivindicación 3, que se caracteriza por que junto con el dispositivo de extracción se introduce en el primer contenedor un sistema de venteo para permitir la entrada de aire ﬁltrado en el mismo y asegurar que la presión del primer contenedor se mantiene mayor que la del segundo contenedor. Method for the preparation of at least one compound from blood according to claim 3, characterized in that, together with the extraction device, a venting system is introduced into the first container to allow the entry of filtered air therein and ensure that the pressure of the first container is maintained higher than that of the second container.

5. 5.: Método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, según la reivindicación 3, que se caracteriza por que el dispositivo de extracción comprende un Septum para garantizar el circuito cerrado. Method for the preparation of at least one compound from blood, according to claim 3, characterized in that the extraction device comprises a Septum to guarantee the closed circuit.

6. 6.: Método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que el primer contenedor contiene al menos un agente anticoagulante. Method for the preparation of at least one compound from blood according to claim 1, characterized in that the first container contains at least one anticoagulant agent.

7. 7.: Método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que el primer contenedor no contiene un agente anticoagulante. Method for the preparation of at least one compound from blood according to claim 1, characterized in that the first container does not contain an anticoagulant agent.

8. 8.: Método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que el segundo contenedor contiene al menos un agente coagulante, agente procoagulante, agente activador o cualquier otro biomaterial o agente, bien de forma previa a la transferencia desde el primer contenedor, o bien añadido posteriormente. Method for the preparation of at least one compound from blood according to claim 1, characterized in that the second container contains at least one coagulating agent, procoagulant agent, activating agent or any other biomaterial or agent, either previously upon transfer from the first container, or added later.

9. 9.: Método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que el segundo contenedor contiene al menos un agente acelerante de la coagulación. Method for preparing at least one compound from blood, according to claim 1, characterized in that the second container contains at least one coagulation accelerating agent.

10. 10.: Método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que la separación de la sangre en fracciones se realiza por sedimentación. Method for the preparation of at least one compound from blood, according to claim 1, characterized in that the separation of the blood into fractions is carried out by sedimentation.

11. eleven.: Método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, según la reivindicación 1, que se caracteriza por que la separación de la sangre en fracciones se realiza centrifugando el primer contenedor. Method for the preparation of at least one compound from blood, according to claim 1, characterized in that the separation of the blood into fractions is carried out by centrifuging the first container.

12. 12.: Método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, según la reivindicación 11, que se caracteriza por que el primer contenedor se centrifuga a una velocidad de centrifugado de entre 100 y 900 G durante 3 a 12 minutos. Method for the preparation of at least one compound from blood according to claim 11, characterized in that the first container is centrifuged at a spin speed of between 100 and 900 G for 3 to 12 minutes.

13. 13.: Método para la preparación de al menos un compuesto a partir de sangre, según la reivindicación 12, que se caracteriza por que el primer contenedor se centrifuga a una velocidad de centrifugado de entre 300 y 800 G, durante un tiempo de entre5y9 minutos. Method for the preparation of at least one compound from blood according to claim 12, characterized in that the first container is centrifuged at a spin speed of between 300 and 800 G, for a time of between 5 and 9 minutes.

14. 14.: Dispositivo de extracción, para la ejecución de un método de acuerdo con las reivindicaciones anteriores, que se caracteriza por que comprende una primera aguja (2) para ser insertada en el primer contenedor de acuerdo con el método, una segunda aguja (4) para ser insertada en el segundo contenedor de acuerdo con el método, y un medio accionable por un usuario para abrir y cerrar el paso de materia desde la primera aguja (2) hacia la segunda aguja (4). Extraction device, for the execution of a method according to the preceding claims, characterized in that it comprises a first needle (2) to be inserted into the first container according to the method, a second needle (4) to be inserted in the second container according to the method, and a means operable by a user to open and close the passage of matter from the first needle (2) to the second needle (4).

15. fifteen.: Dispositivo, según la reivindicación 14, que se caracteriza por que el medio para abrir y cerrar el paso de materia desde la primera aguja (2) hacia la segunda aguja (4) es un conjunto-pulsador (3) provisto de un botón (3a). Device according to claim 14, characterized in that the means for opening and closing the passage of matter from the first needle (2) to the second needle (4) is a push-button assembly (3) provided with a button (3a ).

16. 16.: Dispositivo, según la reivindicación 14, que se caracteriza por que comprende una carcasa (1) de la cual sobresale la primera aguja (2) y que permite accionar el medio para abrir y cerrar el paso de materia desde la primera aguja (2) hacia la segunda aguja (4). Device according to claim 14, characterized in that it comprises a housing (1) from which the first needle (2) protrudes and which allows the means to open and close the passage of matter from the first needle (2) to the second needle (4).

17. 17.: Dispositivo, según la reivindicación 16, que se caracteriza por que la carcasa (1) comprende una zona de alojamiento (5) destinada a recibir el segundo contenedor de acuerdo con el método. Device according to claim 16, characterized in that the housing (1) comprises a housing area (5) intended to receive the second container according to the method.

18. 18.: Dispositivo, según la reivindicación 14, que se caracteriza por que comprende oriﬁcios para permitir la inserción de un sistema de venteo y medios de guiado del sistema de venteo hacia el primer contenedor. Device according to claim 14, characterized in that it comprises holes for allowing the insertion of a venting system and guiding means of the venting system towards the first container.

SPANISH OFFICE OF THE PATENTS AND BRAND

Application no .: 201000306

SPAIN

Date of submission of the application: 10.03.2010

Priority Date:

REPORT ON THE STATE OF THE TECHNIQUE

51 Int. Cl.: See Additional Sheet

RELEVANT DOCUMENTS

Categoría Category: Documentos citados Reivindicaciones afectadas Documents cited Claims Affected

X X: GB 2461076 A (LOVE JAMES) 23.12.2009, páginas 1-9; figuras 1-12. 1-13 GB 2461076 A (LOVE JAMES) 23.12.2009, pages 1-9; Figures 1-12. 1-13

X X: WO 9948425 A1 (TRINITY COLLEGE DUBLIN; SWEENEY EAMONN C) 30.09.1999, 14-18 WO 9948425 A1 (TRINITY COLLEGE DUBLIN; SWEENEY EAMONN C) 30.09.1999, 14-18

páginas 1-15; figuras 1-10. pages 1-15; Figures 1-10.

X X: ES 2009332 A6 (BRODEN BENGT INGE) 16.09.1989, descripción; figuras. 14-18 ES 2009332 A6 (BRODEN BENGT INGE) 16.09.1989, description; figures. 14-18

X X: ES 265372 U 16.12.1982, descripción; figuras. 14-18 ES 265372 U 16.12.1982, description; figures. 14-18

A TO: EP 0875202 A2 (BECTON DICKINSON CO) 04.11.1998, descripción; figuras. 1-18 EP 0875202 A2 (BECTON DICKINSON CO) 04.11.1998, description; figures. 1-18

A TO: US 2006074394 A1 (BERETTA et al.) 06.04.2006, descripción; figuras. 1-18 US 2006074394 A1 (BERETTA et al.) 06.04.2006, description; figures. 1-18

A TO: US 4886071 A (MEHL et al.) 12.12.1989, descripción; figuras. 1-18 US 4886071 A (MEHL et al.) 12.12.1989, description; figures. 1-18

A TO: US 3837376 A (BROWN et al.) 24.09.1974, descripción; figuras. 1-18 US 3837376 A (BROWN et al.) 24.09.1974, description; figures. 1-18

A TO: US 4861477 A (KIMURA et al.) 29.08.1989, descripción; figuras. 11-13 US 4861477 A (KIMURA et al.) 29.08.1989, description; figures. 11-13

Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud Category of the documents cited X: of particular relevance Y: of particular relevance combined with other / s of the same category A: reflects the state of the art O: refers to unwritten disclosure P: published between the priority date and the date of priority submission of the application E: previous document, but published after the date of submission of the application

El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº: TODAS This report has been produced • for all claims • for claims no: ALL

Fecha de realización del informe 02.11.2010 Date of realization of the report 02.11.2010: Examinador I. Rodríguez Goñi Página 1/5 Examiner I. Rodríguez Goñi Page 1/5

REPORT OF THE STATE OF THE TECHNIQUE

Application number: 201000306

CLASSIFICATION OBJECT OF THE APPLICATION

A61B5 / 15 (2006.01) B01L3 / 14 (2006.01) G01N33 / 49 (2006.01) B01D21 / 26 (2006.01) A61K35 / 14 (2006.01)

Minimum documentation sought (classification system followed by classification symbols)

A61B, A61K, B01D, B01L, G01N

Electronic databases consulted during the search (name of the database and, if possible, search terms used)

INVENTIONS, EPODOC, WPI

State of the Art Report Page 2/5

WRITTEN OPINION

Application number: 201000306

Date of Written Opinion:

Statement

Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986) Novelty (Art. 6.1 LP 11/1986): Reivindicaciones Reivindicaciones 1-13, 18 14-17 SI NO Claims Claims 1-13, 18 14-17 IF NOT

Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986) Inventive activity (Art. 8.1 LP11 / 1986): Reivindicaciones Reivindicaciones 1-18 SI NO Claims Claims 1-18 IF NOT

The application is considered to comply with the industrial application requirement. This requirement was evaluated during the formal and technical examination phase of the application (Article 31.2 Law 11/1986).

Opinion Base.-

This opinion has been made on the basis of the patent application as published.

State of the Art Report Page 3/5

WRITTEN OPINION

Application number: 201000306

1. Documents considered.-

The documents belonging to the state of the art taken into consideration for the realization of this opinion are listed below.

Documento Document: Número Publicación o Identificación Fecha Publicación Publication or Identification Number publication date

D01 D01: GB 2461076 A (LOVE JAMES) 23.12.2009 GB 2461076 A (LOVE JAMES) 23.12.2009

D02 D02: WO 9948425 A1 (TRINITY COLLEGE DUBLIN ; SWEENEY EAMONN C) 30.09.1999 WO 9948425 A1 (TRINITY COLLEGE DUBLIN; SWEENEY EAMONN C) 30.09.1999

D03 D03: US 4861477 A (KIMURA ET AL.) 29.08.1989 US 4861477 A (KIMURA ET AL.) 29.08.1989

2. Statement motivated according to articles 29.6 and 29.7 of the Regulations for the execution of Law 11/1986, of March 20, on Patents on novelty and inventive activity; quotes and explanations in support of this statement

For claim 1, document D01 is considered the closest state of the art. D01 discloses a method for the separation of blood into its different components and their extraction, which includes the following steps:

--: disponer la sangre en un primer contenedor, que entre otras posibilidades, puede tener una presión menor que la atmosférica -separar la sangre en sus diferentes componentes o constituyentes -introducir un dispositivo de extracción hasta el nivel superior de la fracción más superior contenida en el primer contenedor -realizar al menos una vez los pasos de conectar al dispositivo de extracción un segundo contenedor cerrado al vacío con una presión menor que la del primer contenedor, esperar un determinado tiempo hasta que se transfiera, por diferencia de presiones, una cantidad deseada de un componente, y retirar el segundo contenedor dispose of the blood in a first container, which among other possibilities, may have a lower pressure than the atmospheric - separate the blood into its different components or constituents - introduce an extraction device to the upper level of the uppermost fraction contained in the first container -perform at least once the steps of connecting to the extraction device a second vacuum closed container with a pressure lower than that of the first container, wait a certain time until a desired amount of a transfer is transferred, by pressure difference component, and remove the second container

The differences between claim 1 and D01 are:

--: en la reivindicación 1 se dice que el método es para la preparación de al menos un compuesto de sangre. Sin embargo, las características técnicas reivindicadas corresponden a un método para la separación de la sangre en sus distintos componentes y la extracción de los mismos, al igual que el método divulgado en D01 -en la reivindicación 1 se dice que se separa la sangre en al menos las fracciones siguientes; glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas, y una fracción de plasma con un gradiente decreciente de concentración de plaquetas. No se da ninguna característica técnica respecto a cómo se consigue dicha separación. En D01 se dice que se separa la sangre en sus distintos componentes mediante centrifugación. Aunque se mencionan glóbulos rojos, blancos y sérum o plasma como componentes de la sangre, se busca principalmente una separación de la sangre entre las fracciones de glóbulos rojos y sérum o plasma. En el estado de la técnica es conocido que centrifugando un contenedor con sangre, separamos ésta en sus diferentes componentes, que quedan distribuidos, a lo largo de dicho contenedor, en función de su peso o densidad (como también se reconoce en D01). Por tanto, sería evidente para el experto en la materia que centrifugando el contenedor podríamos obtener una separación de la sangre en sus diferentes fracciones, según un gradiente de concentración decreciente hacia la parte superior del contenedor. En definitiva, la separación pretendida en la reivindicación sería evidente para el experto en la materia. -en la reivindicación 1 se dice que una vez realizada la extracción deseada de la fracción superior, puede volver a repetirse el proceso para realizar una extracción de otra fracción, ajustando el grado de introducción del dispositivo de extracción. En D01 se divulga que para proceder a realizar la extracción hay que introducir el dispositivo, ajustando el grado de introducción del mismo, a una cierta profundidad dentro de una fracción. El mero hecho de una vez realizado el proceso para una fracción, volver a repetirlo para la siguiente, no es sino una repetición evidente. in claim 1 it is said that the method is for the preparation of at least one blood compound. However, the claimed technical characteristics correspond to a method for the separation of blood into its different components and the extraction thereof, as well as the method disclosed in D01 - in claim 1 it is said that blood is separated into the minus the following fractions; red blood cells, white blood cells and platelets, and a plasma fraction with a decreasing platelet concentration gradient. There is no technical characteristic regarding how such separation is achieved. In D01 it is said that blood is separated into its different components by centrifugation. Although red, white and serum or plasma cells are mentioned as components of the blood, a separation of the blood between the red cell and serum or plasma fractions is mainly sought. In the state of the art it is known that by centrifuging a container with blood, we separate it into its different components, which are distributed, along said container, according to its weight or density (as also recognized in D01). Therefore, it would be evident to the person skilled in the art that by centrifuging the container we could obtain a separation of the blood in its different fractions, according to a gradient of decreasing concentration towards the top of the container. In short, the separation claimed in the claim would be evident to the person skilled in the art. - in claim 1 it is said that once the desired extraction of the upper fraction has been performed, the process for extracting another fraction can be repeated, adjusting the degree of introduction of the extraction device. In D01 it is disclosed that to proceed with the extraction, the device must be introduced, adjusting the degree of introduction of the device, to a certain depth within a fraction. The mere fact of having completed the process for a fraction, to repeat it again for the next one, is but an obvious repetition.

For all the foregoing, claim 1 would be new (Art. 6.1 LP 11/1986) but would lack inventive activity (Art. 8.1 LP 11/1986).

Dependent claim 2 lacks inventive activity (Art. 8.1 LP 11/1986); The mere fact of opening the first container does not imply any unexpected technical effect.

Dependent claim 3 is evident in the light of document D01 and therefore lacks inventive activity (Art. 8.1 LP 11/1986).

Dependent claim 4 incorporates a venting system to allow the entry of filtered air. Venting systems are known; the mere fact of incorporating one, without more, lacks inventive activity. It is clear that if you want to avoid the risk of bacterial contamination, one of the options is that the air is filtered. Therefore, said claim lacks inventive activity (Art. 8.1 LP 11/1986).

Dependent claim 5 incorporates a septum; the mere fact of incorporating something into a device, without more, and without the occurrence of any unexpected technical effect lacks inventive activity (Art. 8.1 LP 11/1986).

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WRITTEN OPINION

Application number: 201000306

Dependent claims 6 to 9 incorporate or exclude various agents that are widely known and whose use or non-use does not infer any unexpected technical effect. Therefore, said claims lack inventive activity (Art. 8.1 LP 11/1986).

Claims 10 and 11 are evident from the state of the art. Sedimentation and centrifugation to perform separation are widely known. Therefore, said claims lack inventive activity (Art. 8.1 LP 11/1986).

Dependent claims 12 and 13 incorporate selections of time ranges and spin speed. Values included in said ranges are known in the state of the art. In document D02 disclosing a vessel that is subjected to centrifugation to separate components from the blood, the spin speed values of 300 G are chosen for a time of between 5 to 10 minutes. A speed of 300 G would be within the ranges of both claims, and a time range of between 5 to 10 minutes, includes values that would also be within the ranges of both claims. Therefore, said claims lack inventive activity (Art. 8.1 LP 11/1986).

For claim 14, document D03 is considered the closest state of the art. D03 discloses an extraction device comprising: -a first needle to be inserted into a patient's body -a second needle to be inserted in a container -a means operable by a user to open and close the passage of matter from the first needle towards the second needle In claim 14, the first needle of the device is inserted into a container instead of in the body of a patient and said device is used for the execution of a method according to previous claims. The device disclosed in D03, however, is capable of being used to execute the aforementioned method, its first needle can be inserted into a container and its structural characteristics are the same as those claimed. For all the foregoing, claim 14 is not new (Art. 6.1 LP 11/1986).

Dependent claims 15, 16 and 17 are also anticipated by D03, so they also lack novelty (Art. 6.1 LP 11/1986).

Dependent claim 18 incorporates holes in the device. The purpose of said holes is to allow the insertion of a venting system and guiding means of the venting system into the first container. The venting system or the guiding means are not defined nor are technical characteristics given in this regard. The mere fact of providing a device with a hole to insert something into it lacks inventive activity. Therefore, although said claim would be new (Art. 6.1 LP 11/1986) it would lack inventive activity (Art. 8.1 LP 11/1986).

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