ES2353639T3 - Espiropiperidilrifamicinas para el tratamiento de infecciones micobacterianas. - Google Patents
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Abstract
Los compuestos de fórmula (1), sus sales farmacéuticamente aceptables y sus solvatos, donde R1 es un radical seleccionado entre hidrógeno y alquilo; R2 se selecciona entre hidroxialquilo, fenilo,fenilo mono-sustituido y fenilo di-sustituido en posiciones 3 y4; R3 se selecciona entre fenilo, fenilo mono-sustituido y fenilodi-sustituido en posiciones 3 y 4; siendo los sustituyentes delfenilo de R2 y R3 seleccionados entre halógeno, (C1-C4)-alquilo y(C1-C4)- alcoxilo y R4 se selecciona entre hidrógeno, alquilo, alilo y homoalilo, son útiles para el tratamiento de infecciones micobacterianas, en particular para el tratamiento de infeccionesproducidas por Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium-intracellulare complex, o Mycobacterium kansasii.
Description
Espiropiperidilrifamicinas para el tratamiento
de infecciones micobacterianas.
Esta invención se refiere a nuevos derivados de
rifamicina de la familia de las espiropiperidilrifamicinas, que
exhiben una alta actividad antibiótica, y también a un procedimiento
para su preparación.
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La tuberculosis multirresistente se define como
aquella tuberculosis que está ocasionada por cepas de
Mycobacterium tuberculosis resistentes simultáneamente al
menos a isoniacida y rifampicina. Su incidencia se ha incrementado
en los últimos años de manera alarmante en numerosas regiones a lo
largo del mundo. La importancia de este problema queda patente en
la decisión tomada por la OMS en 1994 de poner en marcha un plan
para el control y vigilancia a nivel mundial de la tuberculosis
multirresistente (cfr. Guidelines for surveillance of drug
resistance in tuberculosis
WHO/TB/2003.320-WHO/CDS/RMD/2003.3). Entre las
estrategias que se han planteado para hacer frente a este grave
problema que amenaza la salud mundial, se encuentra el desarrollo
de nuevos fármacos que permitan combatir con eficacia el tipo de
cepas implicadas.
Los fármacos para el tratamiento de la
tuberculosis se dividen en "fármacos de primera línea" y
"fármacos de segunda línea". Los primeros, de mayor
efectividad, resultan imprescindibles en cualquier régimen
terapéutico para garantizar la curación de esta enfermedad.
Solamente cuatro fármacos integran el primer grupo, a saber:
isoniacida, rifampicina, pirazinamida, y etambutol. El resto de
fármacos actualmente disponibles se engloban dentro de los
"fármacos de segunda línea".
Para el tratamiento de la tuberculosis
multirresistente es necesario usar combinaciones de fármacos
durante largos períodos de tiempo. Actualmente, el tratamiento de
elección tiene una duración de seis meses y contempla la
administración al paciente de la asociación de isoniacida,
rifampicina y pirazinamida durante dos meses, seguido de la
administración de la asociación isoniacida y rifampicina cuatro
meses más. Resulta pues de vital importancia desarrollar nuevos
fármacos que permitan reforzar o mejorar el tratamiento de la
tuberculosis multirre-
sistente.
sistente.
Por otro lado, relacionado con la epidemia del
SIDA y debido al uso generalizado en la medicina moderna de
fármacos antitumorales e inmunosupresores, se han incrementado las
infecciones producidas por las denominadas "micobacterias
atípicas" (también conocidas como "micobacterias ambientales
oportunistas" o como "micobacterias
no-tuberculosas"). Este término engloba a un buen
número de especies diferentes de las que se desconoce tanto su modo
de transmisión como sus mecanismos de resistencia a los
antimicobacterianos. Dichas micobacterias atípicas se comportan
como microorganismos habitualmente resistentes a los fármacos con
actividad antimicobacteriana y suponen una seria amenaza. De las
numerosas especies aisladas destaca por su frecuencia
Mycobacterium avium-intracellulare complex,
que produce serias infecciones diseminadas y que produce patología
pulmonar indistinguible de la que produce M. tuberculosis.
Mycobacterium avium-intracellulare complex se
comporta como multirresistente a fármacos de "primera" y
"segunda línea". En todos los regímenes terapéuticos se
contempla la rifabutina como tratamiento de elección, asociado a un
macrólido y a una quinolona. La elevada toxicidad in vivo de
la rifabutina representa un inconveniente habitual. También destaca
Mycobacterium kansasii que suele tener un patrón de
sensibilidad mucho más variable, si bien suele exhibir resistencia a
isoniacida y etambutol.
Las rifamicinas son unas sustancias químicas
naturales que se aislaron por primera vez en 1959 de cultivos de
Nocardia Mediterranei como una mezcla compleja de rifamicinas
A-E (cfr. P. Sensi et al., Il Fármaco,
Ed. Sc. 1959, vol. 14, pp. 146-147). Pertenecen
a la familia de las ansamicinas, antibióticos de gran interés
frente a bacterias Gram-positivas y micobacterias
como M. tuberculosis. También poseen actividad frente a la
DNA-dependiente RNA polimerasa bacteriana (cfr. C.
Bartolucci et al., Fármaco 1992, vol. 47, p. 1367; C.
Bartolucci et al., Pharm. Pharmacol. Lett, 1993, vol.
3, p. 1).
La estructura de las rifamicinas fue determinada
por degradación química de la rifamicina S y por estudios
espectroscópicos de RMN. Presentan como característica estructural
común una cadena alifática de 17 átomos de carbono, llamada
ansa, que conecta dos posiciones no adyacentes de un núcleo
aromático plano cromóforo de naftohidroquinona unido por un grupo
amida.
La actividad de estos compuestos es consecuencia
de la inhibición específica de la RNA polimerasa bacteriana
mediante la formación de un complejo 1:1 muy estable entre el
fármaco y el enzima, como se ha puesto de manifiesto en una
investigación sobre la rifampicina. Se ha propuesto un modelo en el
que el enzima envuelve al fármaco por la cara hidrófila y por
debajo del núcleo aromático, de tal forma que las posiciones C_{3}
y C_{4} no participan en la unión. Los estudios de relación
estructura-actividad llevados a cabo con distintas
rifamicinas concluyen que para poder mantener la actividad
inhibitoria son necesarios los siguientes elementos estructurales:
grupo hidroxilo o cetona en C_{1} y C_{8}, grupos hidroxilos en
posición C_{21} y C_{23}, una relación espacial determinada
entre los grupos funcionales y un puente ansa (cfr. P. Sensi,
P. Appl. Chem. 1975, vol. 41, pp. 15-29).
\newpage
Se han preparado cientos de rifamicinas
semisintéticas en un intento de obtener sustancias con mejores
actividades biológicas; la mayor parte de ellas presentan
modificaciones en las posiciones C_{4} (rifamida) y C_{3}
(rifampicina). Estos cambios estructurales no afectan a la acción de
las sustancias sobre el enzima de una forma crítica, sino que
modifican otros parámetros importantes como la permeabilidad de las
membranas celulares, las propiedades farmacocinéticas y la
resorción (cfr. S. Lancini et al.,
"Structure-Activity Relationship among the
Semisynthetic Antibiotics". D. Perlmann, Ed., Academic Press,
N.Y. 1977, pp. 531-600).
Las espiropiperidilrifamicinas son una clase de
antibióticos semisintéticos derivados de las rifamicinas en las
cuales los carbonos C_{3} y C_{4} están incorporados a un anillo
de imidazol que, a su vez, posee una piperidina espirocíclica (cfr.
A. Sanfilippo et al., J. Antib. 1980, vol. 33, p.
1193; L. Marsili et al., J. Antib. 1981, vol. 34, p.
1033). El átomo de nitrógeno del anillo de la piperidina puede
poseer diversos sustituyentes (restos alquilo lineales y
ramificados, alquilos funcionalizados, bencilo, acetilo y
etoxicarbonilo) (cfr. US 4.086.225; DE
2.825.445-A). Entre estas
espiropiperidilrifamicinas, la rifabutina se ha empleado con fines
terapéuticos como un multifármaco para el tratamiento de la
tuberculosis y contra las infecciones Mycobacterium
Avium-Mycobacterium intracellulare Complex (MAC)
en pacientes con SIDA (cfr. US. 4.219.478).
De lo que se conoce en la técnica se deriva que
es muy deseable proporcionar nuevos fármacos que posean actividad
biológica no sólo contra la Mycobacterium tuberculosis, sino
también contra las infecciones micobacterianas en general.
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Los inventores han encontrado nuevos derivados
estructurales de espiropiperidilrifamicinas con actividad
antimicobacteriana que es comparable, en muchos casos superior, a la
que presentan los fármacos existentes en la actua-
lidad.
lidad.
Así, según un aspecto de la presente invención
se proporciona un compuesto de fórmula (1), sus sales
farmacéuticamente aceptables y sus solvatos, incluyendo hidratos,
donde: R^{1} es hidrógeno; R^{2} se selecciona entre el grupo
formado por fenilo, fenilo mono-sustituido, y fenilo
di-sustituido en posiciones 3 y 4, siendo los
sustituyentes del fenilo seleccionados entre el grupo formado por
halógeno, (C_{1}-C_{4})-alquilo
y (C_{1}-C_{4})-alcoxilo;
R^{3} se selecciona entre el grupo formado por fenilo, fenilo
mono-sustituido, y fenilo
di-sustituido en posiciones 3 y 4 siendo los
sustituyentes del fenilo seleccionados entre el grupo formado por
halógeno, (C_{1}-C_{4})-alquilo
y (C_{1}-C_{4})-alcoxilo; y
R^{4} se selecciona entre el grupo formado por hidrógeno,
(C_{1}-C_{4})-alquilo, alilo y
homoalilo.
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En una realización preferida, los compuestos de
fórmula (1) son aquéllos donde, cuando R^{2} y R^{3} son fenilo
mono- o di-sustituido, los sustituyentes del fenilo
son independientemente seleccionados entre halógeno y
(C_{1}-C_{4})-alcoxilo. En una
realización más preferida, el sustituyente es el metoxilo.
Los compuestos de fórmula (1) especialmente
preferidos de la presente invención son los indicados en la Tabla
1. Dichos compuestos se han denominado en la presente memoria
indistintamente como compuestos de fórmula (1) o como 1 RFA.
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En la tabla, M significa diastereoisómero
mayoritario y m significa diastereoisómero minoritario.
Según otro aspecto de la presente invención, se
proporciona un procedimiento de preparación del compuesto de
fórmula (1) definido anteriormente, que comprende llevar a cabo una
reacción de condensación entre las 4-piperidonas
sustituidas de fórmula (2) y el intermedio
3-amino-4-iminorifamicina
S de fórmula (3). El procedimiento tiene lugar en condiciones
suaves y con buenos rendimientos. El Esquema 1 ilustra un modo de
realización de dicho procedi-
miento.
miento.
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Esquema
1
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El intermedio de fórmula (3) puede obtenerse a
partir de la Rifamicina S (cfr. US 4.017.481 y DE 2,825,
445-A). Las 4-piperidonas de fórmula
(2) pueden prepararse por procedimientos conocidos (cfr J. Barluenga
et al., J. Org. Chem. 1993, vol. 58, pp. 3391; J.
Barluenga et al., J. Org. Chem. 1998, vol. 63, p.
3918; A-B. García et al., Tetrah.
Letter 2004, vol. 45, p. 4357]. Dichas
4-piperidonas de fórmula (2) pueden estar
disustituidas o trisustituidas. Los compuestos de fórmula (2)
preferidos vienen indicados en la Tabla 2.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
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Preferiblemente, el procedimiento se lleva a
cabo en un disolvente no halogenado, y en presencia de una base.
Más preferiblemente, el disolvente es un éter, y todavía más
preferiblemente el éter es el tetrahidrofurano (THF). También
preferiblemente, la base utilizada es el acetato amónico. La
reacción se lleva a cabo a una temperatura comprendida entre
temperatura ambiente y la temperatura de reflujo del disolvente. Más
preferiblemente a la temperatura de reflujo del disolvente. La
reacción se monitoriza hasta la desaparición del intermedio
3-amino-4-iminorifamicina
S. Dicha monitorización se puede llevar a cabo por HPLC
(Cromatografía Líquida de alta resolución; "High Performance
Liquid Chromatography") y TLC (Cromatografía en capa fina;
"Thin Layer Chromatography").
Los derivados de espiropiperidilrifamicinas
obtenidos se purifican del crudo de reacción y se aíslan mediante
técnicas convencionales como cristalización o liofilización.
La naturaleza básica de los compuestos de
fórmula general (1) permite su aislamiento en forma de sus sales
farmacéuticamente aceptables. Los compuestos de fórmula (1) se
pueden convertir en sus sales y las sales pueden convertirse en los
compuestos libres, mediante métodos convencionales.
Este procedimiento de síntesis de derivados de
espiropiperidilrifamicinas de fórmula (1) da lugar a la formación
de un nuevo centro estereogénico en el átomo de carbono espiránico
C-1'. Constituye el primer ejemplo conocido hasta
el momento en el que se emplean 4-piperidonas
enantioméricamente puras en la reacción de condensación con el
intermedio
3-amino-4-iminorifamicina
S, así como de la utilización de 4-piperidonas
sustituídas en las posiciones 2, 3 o 6 del anillo.
A modo de ejemplo, la reacción de condensación
llevada a cabo con las 4-piperidonas trisustituídas
enantioméricas
(-)-(2R,3S,6S)-2-hidroximetil-3-metil-6-fenil-4-piperidona
(2a) (compuesto de referencia) y (-)-(2R,
3S,6S)-2-hidroximetil-3-metil-6-p-metoxifenil-4-piperidona
(2b) (compuesto de referencia) da lugar a las correspondientes
espiropiperidilrifamicinas de fórmula (1) como una mezcla de
diastereoisómeros (mayoritario (M)/minoritario (m)) respecto al
carbono espiránico C-1'. La proporción de cada uno
de ellos se determina por HPLC. En el Esquema 2 se muestra la
estructura de los diastereoisómeros. La mezcla de diastereoisómeros
se puede separar y aislar mediante TLC preparativa.
Estudios exhaustivos 2D de ^{1}H y
^{13}C-RMN, basado en sus espectros de gHSQC y
gHMBC, han sido necesarios para poder asignar todas las señales de
la molécula, así como la configuración del nuevo centro
estereogénico, el carbono espiránico C-1',
observando un mayor apantallamiento (menores valores de ppm) en la
señal del hidrógeno del NH-3 en el espectro de
^{1}H-RMN del diastereoisómero mayoritario en
relación con el minoritario (entre 0,6 y 1,4 ppm). (Cfr. E. Rubio
et al., Magn. Reson. Chem. 2005, vol.43,
pp.269-282).
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Esquema
2
Estructura de los
diastereoisómeros
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Según otro aspecto de la presente invención se
proporciona una composición farmacéutica para el tratamiento de
infecciones micobacterianas, que comprende una cantidad
terapéuticamente efectiva del compuesto de fórmula (1) definido
anteriormente, juntamente con cantidades adecuadas de excipientes o
portadores farmacéuticamente acepta-
bles.
bles.
Los compuestos de fórmula (1) presentan una
potente actividad biológica. Los Ejemplos 33-34 de
esta memoria muestran los resultados obtenidos en el estudio de
actividad biológica. Los compuestos ensayados presentan in
vitro una potente actividad antimicobacteriana general, incluso
superior a rifampicina-rifabutina en la cepa de
referencia Mycobacterium tuberculosis ATCC 37837. Varios
compuestos de fórmula (1) también se ensayaron frente a cinco cepas
de Mycobacterium avium-intracellulare
complex, siendo las cinco cepas sensibles al menos a tres de
los compuestos de fórmula (1) estudiados. Estas cepas manifestaron
resistencia a rifampicina-rifabutina. Respecto a
las cuatro cepas de Mycobacterium kansasii todos los
compuestos de fórmula (1) estudiados tuvieron un comportamiento
similar a rifampicina-rifabutina.
Así, otro aspecto de la presente invención se
refiere al uso del compuesto de fórmula (1) definido anteriormente,
para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una
infección micobacteriana, preferiblemente para una infección
causada por la bacterias siguientes: Mycobacterium
tuberculosis, Mycobacterium
avium-intracellulare complex o Mycobacterium
kansasii.
A lo largo de la descripción y las
reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no
pretenden excluir otras características técnicas, aditivos,
componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros
objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán
en parte de la descripción y en parte de la práctica de la
invención. Los siguientes ejemplos se proporcionan a modo de
ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente
invención.
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Los espectros de resonancia magnética nuclear y
los estudios de correlación bidimensionales se llevaron a cabo en
un Bruker AV-400 operando a una frecuencia de 400.13
y 100.61 MHz para ^{1}H y ^{13}C respectivamente, empleando una
sonda reversa QXI ^{1}H/^{13}C/^{15}N/^{31}P de 5 mm
incluyendo una bovina de gradiente en el eje Z. Las muestras
preparadas contenían entre 30-50 mg de compuesto, se
empleó benceno deuterado (C_{6}D_{6}), excepto en el caso del
compuesto 1 RFA-1m en el que se ha empleado
cloroformo deuterado (CDCl_{3}) como disolvente. Los
desplazamientos químicos están expresados en ppm (partes por millón)
y están referidos a la señal residual del disolvente (\delta 7,16
para ^{1}H y de 128,39 para ^{13}C).
Los espectros de masas de alta resolución se
llevaron a cabo en un Finnigan-Matt 95, utilizando
procedimientos de impacto electrónico, electro spray positivo (ES
pos.) y FAB+. Los puntos de fusión no han sido corregidos y se
midieron en un aparato Büchi-Tottoli. La
cromatografía de capa fina (TLC) se realizó sobre placas de sílica
gel (Merck 60 G). Para la cromatografía en columna se empleó gel de
sílice 60 (230-240 mesh) como fase estacionaria. La
cromatografía preparativa se llevó a cabo utilizando placas de
vidrio (20 x 20 cm) de gel de sílice (Merck 60 F_{254}).
En el caso de los productos 1
RFA-1 y 1 RFA-2, los crudos de las
reacciones se purificaron mediante HPLC empleando un aparato
Waters LC Module I plus, a temperatura ambiente, utilizando un
detector V-UV Photodiode-Array y
una columna de fase reversa (Kromasil 100 C8 5 \mum 25x 1.0). La
fase móvil empleada fue una mezcla 1:1 de acetonitrilo: tampón de
fosfatos, (NH_{4})H_{2}PO_{4} (0,05 M) a pH 6,8 y flujo
de 5,5 ml/min.
Se disuelven 100 mg de piperidona
(2a-b), en 15 ml de tetrahidrofurano (THF) a
temperatura ambiente, a continuación se adicionan 2 equivalentes de
acetato amónico y un equivalente del intermedio
3-amino-4-iminorifamicina
S (3). La mezcla de reacción se agita a reflujo durante 24 horas.
Transcurrido ese tiempo se deja que alcance la temperatura ambiente
y se adicionan 0.5 equivalentes más del intermedio
3-amino-4-iminorifamicina
S (3) y la mezcla se deja agitar a reflujo durante 24 horas más.
Transcurrido ese tiempo se deja que la mezcla alcance temperatura
ambiente y se adiciona dietil éter (30 ml), se filtra sobre celita y
se lava de nuevo con dietil éter (2 x 15 ml). La fase orgánica se
lava con una disolución tampón (pH 7,6), de
(NH_{4})H_{2}PO_{4} 0.05 M (3 x 15 ml), se seca con
sulfato sódico anhidro y se concentra a sequedad. El sólido obtenido
es una mezcla formada principalmente por el exceso del intermedio
3-amino-4-iminorifamicina
S (3) y los nuevos compuestos de fórmula (1), los cuales al lavar
con ácido acético al 4% (se lava tantas veces como sea necesario, de
modo que por TLC no aparezcan productos violetas) pasan a la fase
acuosa en forma de acetatos mientras que el precursor se mantiene
en la fase etérea. La fase acuosa violeta se extrae con cloroformo,
dejando tiempos de decantación largos. La capa orgánica así
obtenida, se lava con la disolución tampón mencionada anteriormente
(porciones de 30 ml) hasta que las aguas de lavado tengan un pH
neutro. La fase orgánica se seca con sulfato de sodio anhidro y se
filtra. Los disolventes se evaporan a presión reducida y se obtiene
un residuo que corresponde principalmente a la mezcla de
diastereoisómeros (90:10), los cuales se separan mediante HPLC
empleando como eluyente una mezcla tampón fosfatos: acetonitrilo
1:1 a pH 6,8. Los productos se aíslan por extracción con cloroformo
(CHCl_{3}), secado sobre sulfato de sodio anhidro, filtrado y
evaporación de las fracciones cromatográficas seleccionadas. Los
productos se presentan como sólidos violetas. El producto se aísla
por liofilización, extracción y evaporación o cristalización de las
fracciones cromatográficas seleccionadas
Siguiendo este método general se prepararon los
compuestos de los Ejemplos 1 a 4.
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Ejemplo
1
Siguiendo el procedimiento general de RFA
(1-2) a partir del compuesto 2a indicado en la Tabla
2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: HRMS (ESI
pos): 911,4425 [calculado para (M+1)+: 911, 4437]. Anal. elemental:
calculado (%) para C_{50} H_{62}N_{4}O_{12}: C 65,92; H
6,86; N 6,15; encontrado: C 65,81; H 6,92; N 6,19. HPLC: t = 12,1
min (Ø = 1 ml/min; tampón fosfatos: acetonitrilo 1:1 a pH = 6,8).
TLC: Rf: 0,20 (tolueno:metanol: acetato de etilo 6:1:1).
^{1}H-RMN: 9,10 (NH-2); 8,85
(NH-3).
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Ejemplo
2
Siguiendo el procedimiento general de RFA
(1-2) a partir del compuesto 2a indicado en la Tabla
2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
159-62ºC (desc.). HRMS (EI): 910,4388 (calculado
para M+: 910, 4364). Anal. elemental: calculado (%) para C_{50}
H_{62}N_{4}O_{12}: C 65,92; H 6,86; N 6,15;encontrado: C
65,99; H 6,71; N 6,00. HPLC: t = 8,6 min (Ø = 1 ml/min; tampón
fosfatos: acetonitrilo 1:1 a pH = 6,8). TLC: Rf: 0,39
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1).
^{1}H-RMN: 8,98 (NH-2);
8,18
(NH-3).
(NH-3).
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Ejemplo
3
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(1-2) a partir del compuesto 2b indicado en la Tabla
2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
171-74ºC (desc.). HRMS (ESI pos): 941,4546
[calculado para (M+1)+: 941, 4543]. Anal. elemental: calculado (%)
para C_{51}H_{64}N_{4}O_{13}: C 65,09; H 6,85; N 5,95;
encontrado: C 65,22; H 6,79; N 5,82. HPLC: t = 11,9 min (Ø = 1
ml/min; tampón fosfatos: acetonitrilo 1:1 a pH = 6,8). TLC: Rf:
0,33 (tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1).
^{1}H-RMN: 8,99 (NH-2);
8,72
(NH-3).
(NH-3).
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Ejemplo
4
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(1-2) a partir del compuesto 2b indicado en la Tabla
2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
168-72ºC (desc.). HRMS (FAB+): 941,4543 (calculado
para [M+1]+: 941, 4548). Anal. elemental: calculado (%) para
C_{51} H_{64}N_{4}O_{13}: C 65,09; H 6,85; N 5,95;
encontrado: C 65,30; H 6,74; N 5,78. HPLC: t = 9,1 min (Ø = 1
ml/min; tampón fosfatos: acetonitrilo 1:1 a pH = 6,8). TLC: Rf:
0,35 (tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1).
^{1}H-RMN: 8,76 (NH-2);
9,47
(NH-3).
(NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Se disuelven 100 mg de
4-piperidona (2c-p) en 15 ml de THF.
Se adiciona 1 equivalente del intermedio
3-amino-4-iminorifamicina
S (3), seguido de 2 equivalentes de acetato amónico. La reacción se
calienta a reflujo y se monitoriza por TLC y HPLC hasta la
desaparición de los productos de partida (1-6
horas). Se deja que la mezcla alcance temperatura ambiente y se
añaden 30 ml de éter, dejando que la disolución agite 15 min. La
mezcla de reacción se extrae, lavando la capa orgánica tres veces
con una disolución tampón de (NH_{4})H_{2}PO_{4} (pH
7.6). La capa orgánica se seca con Na_{2}SO_{4} anhidro, se
filtra y los disolventes se eliminan a presión reducida
obteniéndose un sólido de color rosa-violeta formado
principalmente por la mezcla de los dos diastereoisómeros buscados,
cuya proporción se obtiene por HPLC (mezclas de
acetonitrilo-agua) en fase reversa. La purificación
de los dos diastereoisómeros se lleva a cabo por TLC preparativa
empleando como eluyentes mezclas de: tolueno:acetato de
etilo:metanol/6:1:1. Los dos diastereoisómeros (compuestos violetas)
separados en la placa se desprenden del soporte de vidrio con la
ayuda de una espátula y se disuelven en cloroformo, la gel de
sílice se filtra y los disolventes se eliminan a presión reducida,
obteniéndose los dos diastereoisómeros (M/m) como sólidos violetas.
En el caso de que los diastereoisómeros no se separen bien es
necesario una segunda purificación por TLC preparativa empleando
como eluyente mezclas de hexano:THF:trietilamina/5:4:1. El producto
se aísla por liofilización, extracción y evaporación o
cristalización de las fracciones cromatográficas seleccionadas.
Siguiendo este método general se prepararon los
compuestos descritos en los Ejemplos 5 a 32.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
5
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(1-2) a partir del compuesto 2c indicado en la Tabla
2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
164-66ºC (desc.). HRMS (ESI pos):943,4469 [calculado
para (M+1)+: 943, 4488]. Anal. Elemental: calculado (%) para
C_{54}H_{62}N_{4}O_{11}: C 68,77; H 6,63; N 5,94;
encontrado: C 68,47; H 6,59; N 6,22.HPLC: t = 11,2 min, (Ø = 1
ml/min; Acetonitrilo:agua/65:35). TLC: Rf: 0,52
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,33
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1)^{1}H-RMN:
8,53 (NH-2); 8,99 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
6
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2c indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
168-70ºC (desc.). HRMS (ESI pos): 943,4469
[calculado para (M+1)+: 943, 4488]. Anal. Elemental: calculado (%)
para C_{54} H_{62}N_{4}O_{11}: C 68,77; H 6,63; N 5,94;
encontrado: C 68,63; H 6,69; N 5,99. HPLC: t = 9,6 min, (Ø = 1
ml/min; Acetonitrilo:agua/65:35). TLC: Rf: 0,56
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,23
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,73
(NH-2); 9,98 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
7
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2d indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
166-68ºC (desc.). HRMS (ESI pos): 1003,4706
[calculado para (M+1)+: 1003,4699]. Anal. Elemental: calculado (%)
para C_{56} H_{66}N_{4}O_{13}: C 67,05; H 6,63; N 5,59;
encontrado: C 66,87; H 6,43; N 5,48. HPLC: t = 8,2 min; (Ø = 1
ml/min; Acetonitrilo:agua/65:35). TLC: Rf: 0,49
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,25
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,56
(NH-2); 9,05 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
8
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2d indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
173-75ºC (desc.). HRMS (ESI pos): 1003,4691
[calculado para (M+1)+: 1003,4699]. Anal. Elemental: calculado (%)
para C_{56}H_{66}N_{4}O_{13}: C 67,05; H 6,63; N 5,59;
encontrado: C 66,92; H 6,71; N 5,20. HPLC: t = 7,2 min; (Ø = 1
ml/min; Acetonitrilo:agua/65:35). TLC: Rf: 0,54
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,18
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,65
(NH-2); 10,12 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
9
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2e indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
172-75ºC (desc.). HRMS (ESI pos): 979,4292
[calculado para (M+1)+: 979,4299]. Anal. Elemental: calculado (%)
para C_{54}H_{60}F_{2}N_{4}O_{11}: C 66,24; H 6,18; N
5,72; encontrado: C 66,15; H 6,16; N 5,47. HPLC: t = 10 min; (Ø = 1
ml/min; Acetonitrilo:agua/65:35). TLC: Rf: 0,55
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,30
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,70
(NH-2); 8,96 (NH-3).
\newpage
\global\parskip0.870000\baselineskip
Ejemplo
10
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2e indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.: 145ºC
(desc.). HRMS (ESI pos): 979,4274 [calculado para (M+1)+:
979,4299]. Anal. Elemental: calculado (%) para
C_{54}H_{60}F_{2}N_{4}O_{11}: C 66,24; H 6,18; N 5,72;
encontrado: C 66,43; H 6,53; N 5,33. HPLC: t = 10,9 min; (Ø = 1
ml/min; Acetonitrilo:agua/65:35). TLC: Rf: 0,59
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,19
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,83
(NH-2); 9,94 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
11
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2f indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
137-39ºC (desc.). HRMS (ESI pos): 1195,2430
[calculado para (M+1)+: 1195,2421]. Anal. elemental: calculado (%)
para C_{54}H_{60}I_{2}N_{4}O_{11}: C 54,28; H 5,06; N
4,69; encontrado: C 54,01; H 5,12; N 4,76. HPLC: t = 20,1 min; (Ø =
1 ml/min; Acetonitrilo:agua/65:35). TLC: Rf: 0,55
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,30
(hexano:THF:trietilamina
5:4:1). ^{1}H-RMN: 9,01 (NH-2); 8,63 (NH-3).
5:4:1). ^{1}H-RMN: 9,01 (NH-2); 8,63 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
12
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2f indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: HPLC: t =
28,7 min; (Ø = 1 ml/min; cetonitrilo:agua/65:35).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
13
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2g indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
175-77ºC (desc.). HRMS (ESI pos): 983,4778
[calculado para (M+1)+: 983,4801]. Anal. elemental: calculado (%)
para C_{57} H_{66}N_{4}O_{11}: C 69,63; H 6,77; N 5,70;
encontrado: C 69,54; H 6,89; N 5,93. HPLC: t = 42,7 min; (Ø = 1
ml/min; acetonitrilo:agua/65:35). TLC: Rf: 0,55
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,32
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,62
(NH-2); 8,89 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
14
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2g indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
169-72ºC (desc.). HRMS (ESI pos): 983.4782
[calculado para (M+1)+: 983,4801]. Anal. elemental: calculado (%)
para C_{57} H_{66}N_{4}O_{11}: C 69,63; H 6,77; N 5,70;
encontrado: C 69,32; H 7,09; N 6,08.). HPLC: t = 45 min; (Ø = 1
ml/min; acetonitrilo:agua/65:35). TLC: Rf: 0,54
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,21 (hexano:THF:
trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,61
(NH-2); 10,28 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
15
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2h indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
158-61ºC (desc.). HRMS (ESI pos):1043.5012
[calculado para (M+1)+: 1043.5012].
Anal. elemental:calculado (%) para C_{59}
H_{70}N_{4}O_{13}: C 67,93; H 6,76; N 5,37; encontrado: C
67,75; H 6,58; N 5,34.). HPLC: t = 9,3 min; (Ø = 1 ml/min;
acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,46 (tolueno:metanol:acetato de
etilo 6:1:1); 0,29 (hexano:THF:trietilamina 5:4:1).
^{1}H-RMN: 8,65 (NH-2).
\global\parskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
16
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2h indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
157-59ºC (desc.). HRMS (ESI pos): 1043.5016
(calculado para [M+1)+: 1043.5012]. Anal. elemental: calculado (%)
para C_{59} H_{70}N_{4}O_{13}: C 67,93; H 6,76; N 5,37;
encontrado: C 68,13; H 6,83; N 5,12. HPLC t = 8,0 min; (Ø = 1
ml/min; acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,49
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,18
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,74
(NH-2); 10,22 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
17
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2i indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: HRMS (ESI
pos): 1103,5229 [calculado para (M+1)+: 1103,5223]. Anal. elemental:
calculado (%) para C_{61}H_{74}N_{4}O_{15}: C 66,41; H
6,76; N 5,08; encontrado: C 66,18; H 6,80; N 5,17. HPLC: t = 4,9
min; (Ø = 1 ml/min; acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,38
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,15
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,45
(NH-2); 8,95 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
18
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2i indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: HRMS (ESI
pos): 1103,5219 [calculado para (M+1)+: 1103,5223]. Anal. elemental:
calculado (%) para C_{61}H_{74}N_{4}O_{15}: C 66,41; H
6,76; N 5,08; encontrado: C 66,25; H 6,91; N 5,10. HPLC: t = 3,2
min; (Ø = 1 ml/min; acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,43
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,08
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,59
(NH-2); 10,46 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
19
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2j indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
139-41ºC (desc.). HRMS (ESI pos):1019.4606
[calculado para (M+1)+: 1019.4612]. Anal. elemental:calculado (%)
para C_{57}H_{64}F_{2}N_{4}O_{11}: C 67,18; H 6,33; N
5,50; encontrado: C 67,00; H 6,44; N 5,71). HPLC: t = 5,7 min; (Ø =
1 ml/min; acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,52
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,30
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,71
(NH-2); 8,82 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
20
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2j indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
132-35ºC (desc.). HRMS (ESI pos): 1019.4591
[calculado para (M+1)+10,15 (NH-3). HPLC: t = 4,9
min; (Ø = 1 ml/min; acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,52
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,15
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1).
\newpage
Ejemplo
21
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2k indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
165-68ºC (desc.). HRMS (ESI pos):1051.4037
[calculado para (M+1)+: 1051.4021].
Anal. elemental:calculado (%) para
C_{57}H_{64}Cl_{2}N_{4}O_{11}: C 65,07; H 6,13; N 5,33;
encontrado: C 65,37; H 6,04; N 5,28. HPLC: t = 8,6 min, (Ø = 1;
acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,52 (tolueno:metanol:acetato de
etilo 6:1:1); 0,33 (hexano:THF:trietilamina 5:4:1).
^{1}H-RMN: 8,55 (NH-2); 8,84
(NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
22
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2k indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
170-72ºC (desc.). HRMS (ESI pos): 1051.4021
[calculado para (M+1)+: 1051.4021]. Anal. elemental: calculado (%)
para C_{57}H_{64}Cl_{2}N_{4}O_{11}: C 65,07; H 6,13; N
5,33; encontrado: C 65,24; H 6,14; N 5,47.HPLC: t = 7,4 min; (Ø = 1
ml/min; acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,54
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,13
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,67
(NH-2); 10,21 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
23
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2l indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
187-89ºC (desc.). HRMS (ESI pos):1139,3022
(calculado para (M+1)+: 1139,3011). Anal. elemental:calculado (%)
para C_{57}H_{64}Br_{2}N_{4}O_{11}: C 60,00; H 5,65; N
4,91; encontrado: C 60,34; H 5,33; N 4,80.HPLC t = 7,8 min; (Ø = 1
ml/min; acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,52
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,26
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,74
(NH-2); 9,99 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
24
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2l indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
182-85ºC (desc.).
HRMS (ESI pos): 1139,2980 [calculado para
(M+1)+: 1139,3011]. Anal. elemental: calculado (%) para
C_{57}H_{64}Br_{2}
N_{4}O_{11}: C 60,00; H 5,65; N 4,91; encontrado: C 60,24; H 5,65; N 4,79.HPLC: t = 8,9 min; (Ø = 1 ml/min; acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,60 (tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,29 (hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,73 (NH-2); 10,08 (NH-3).
N_{4}O_{11}: C 60,00; H 5,65; N 4,91; encontrado: C 60,24; H 5,65; N 4,79.HPLC: t = 8,9 min; (Ø = 1 ml/min; acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,60 (tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,29 (hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,73 (NH-2); 10,08 (NH-3).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
25
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2m indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
132-35ºC (desc.). HRMS (ESI pos): 1139,3015
[calculado para (M+1)+: 1139,3011]. Anal. elemental: calculado (%)
para C_{57}H_{64}Br_{2}N_{4}O_{11}: C 60,00; H 5,65; N
4,91; encontrado: C 60,15; H 5,58; N 4,93. HPLC: t = 11,7 min; (Ø =
1 ml/min; acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,56
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,32
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,57
(NH-2); 8,74 (NH-3).
\newpage
Ejemplo
26
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2m indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
140-42ºC (desc.). HRMS (ESI pos): 1139,3012
[calculado para (M+1)+: 1139,3011]. Anal. elemental:calculado (%)
para C_{57}H_{64}Br_{2}N_{4}O_{11}: C 60,00; H 5,65; N
4,91; encontrado: C 60,05; H 5,79; N 4,68.
^{1}H-RMN: 8,59 (NH-2); 9,01
(NH-3). HPLC t = 9,7 min, (Ø = 1 ml/min;
acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,57 (tolueno:metanol:acetato de
etilo 6:1:1); 0,11 (hexano:THF:trietilamina 5:4:1).
^{1}H-RMN: 8,74 (NH-2); 9,99
(NH-3).
Ejemplo
27
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2n indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
163-64ºC (desc.). HRMS (ESI pos):1235,2716
[calculado para (M+1)+: 1235,2734]. Anal. elemental:calculado (%)
para C57H64I2N4011: C 55,44; H 5,22; N 4,54; encontrado: C 55,05; H
5,19; N 4,15. HPLC: t = 10,0 min; (Ø = 1 ml/min;
acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,53 (tolueno:metanol:acetato de
etilo 6:1:1); 0,28 (hexano:THF:trietilamina 5:4:1).
^{1}H-RMN: 8,74 (NH-2); 8,91
(NH-3).
Ejemplo
28
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2n indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
149-51ºC (desc.). UV (\lambda = 254 nm): 214,5;
280; 320. HRMS (ESI pos): 1235,2701 [calculado para (M+1)+:
1235,2734]. Anal. elemental calculado (%) para C57H64I2N4011: C
55,44; H 5,22; N 4,54; encontrado: C 55,06; H 5,03; N 4,16. HPLC t
= 13,0 min; (Ø = 1 ml/min; acetonitrilo:agua/65:35). TLC: Rf: 0,60
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,32
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,82
(NH-2); 10,34 (NH-3).
Ejemplo
29
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2o indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: HRMS (ESI
pos): 997,4953 [calculado para (M+1)+: 997,4957]. Anal. elemental:
calculado (%) para C_{58}H_{68}N_{4}O_{11}: C 69,86; H
6,87; N 5,62; encontrado: C 69,73; H 6,92; N 5,71.HPLC t = 29,3 min,
(Ø = 1 ml/min; acetonitrilo:agua/65:35). TLC: Rf: 0,56
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,36
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,66
(NH-2); 8,83 (NH-3).
Ejemplo
30
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2o indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: HRMS (ESI
pos): 997.4951 [calculado para (M+1)+: 997,4957]. Anal. elemental:
calculado (%) para C_{58}H_{68}N_{4}O_{11}: C 69,86; H
6,87; N 5,62; encontrado: C 69,99; H 6,89; N 5,43. HPLC t = 27,0
min; (Ø = 1 ml/min; acetonitrilo:agua/65:35). TLC: Rf: 0,59
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,20
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,70
(NH-2)10,26 (NH-3).
Ejemplo
31
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2p indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
160-63ºC (desc.). UV (\lambda = 254 nm): 240, 278,
320. HRMS (ESI pos): 999.5087 [calculado para (M+1)+: 999.5114].
Anal. elemental: calculado (%) para C_{58}H_{70}N_{4}O_{11}:
C 69,72; H 7,06; N 5,61; encontrado: C 69,76; H 7,36; N 5,47. HPLC:
t = 5,3 min, (Ø = 1 ml/min; acetonitrilo:agua/85:15). TLC: Rf: 0,54
(tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,38
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,72
(NH-2) 8,90 (NH-3).
Ejemplo
32
Siguiendo el procedimiento general de 1RFA
(3-16) a partir del compuesto 2p indicado en la
Tabla 2 y del compuesto (3) indicado en el Esquema 1, se obtuvo el
compuesto del título que presenta los siguientes datos: P.f.:
156-58ºC (desc.). UV (\lambda = 254 nm): 239, 278,
320. HRMS (ESI pos): 999.5102 [calculado para (M+1)+: 999.5114].
TLC: Rf: 0,60 (tolueno:metanol:acetato de etilo 6:1:1); 0,20
(hexano:THF:trietilamina 5:4:1). ^{1}H-RMN: 8,63
(NH-2) 10,5 (NH-3).
Ejemplo
33
Los estudios se realizaron utilizando el método
de las proporciones (método de referencia) y siguiendo el protocolo
descrito por el NCCLS (National Comittee for Clinical Laboratory
Standars). El medio de cultivo se preparó usando Middlebrook 7H10
suplementado con 10% de OADC (oleic
acid-albumin-dextroxe-catalase).
Para cada compuesto se testaron 2 inóculos (equivalentes al nº1 de
McFarland y a una dilución 1/100) intentando conseguir un inóculo
ideal que contenga entre 100-200 colonias. Las
placas se incubaron en estufa a 37ºC, en atmósfera de CO_{2}
(5-10%) durante 21 días. En los estudios realizados
destaca el comportamiento de los compuestos analizados que
evidenciaron in vitro una potente actividad
antimicobacteriana general (concentración mínima inhibitoria, CIM
< 0,1 \mug/ml), incluso superior a
rifampicina-rifabutina en la cepa de referencia
Mycobacterium tuberculosis ATCC 37837 que acredita un alto
grado de resistencia a la rifampicina. También destaca el
comportamiento in vitro de los compuestos frente a las 5
cepas de Mycobacterium avium-intracellulare
complex analizadas, siendo las cinco cepas sensibles al menos a
3 de los compuestos de fórmula (1) estudiados. Por el contrario
todas ellas manifestaron resistencia a
rifampicina-rifabutina (CIM >1 \mug/ml). En
cuanto a las 4 cepas de Mycobacterium kansasii todos los
compuestos de fórmula (1) estudiados tuvieron un comportamiento
similar a rifampicina-rifabutina.
La Tabla 3 incluye los resultados obtenidos en
el estudio de actividad biológica de las
espiropiperidinilrifamicinas de fórmula general (1). s
significa sensibles, R significa resistentes y s/R
significa sensibles a unas cepas y resistentes a otras, ya que en
esa misma apartado se han analizado varias cepas, por ejemplo, en la
entrada 11se han ensayado 5 cepas. SM significa estreptomicina.
Si la placa que contiene el antibiótico excede
al 1% del nº de colonias de la placa de control (sin antibiótico),
el microorganismo se considera R, en el caso de ser menor del
1% se considera s.
Las entradas 1-5 muestran los
resultados obtenidos frente a cepas de colección (cada una
resistente a uno de los fármacos comerciales ensayados:
pirazinamida PZ, isoniazida IZ, etambutol EB, rifampicina RI y
ácido 2-tiofeno hidrazo carboxílico TCH), este
último se utiliza como control al ser todos los Mycobacterium
resistentes a él. Las entradas 6-10 muestran los
resultados obtenidos frente a 52 cepas ensayadas, clasificadas en
función de la resistencia observada frente a los fármacos
comerciales. Las entradas 11 y 12 muestran los resultados obtenidos
frente a 9 cepas Mycobacterium atípicas.
Ejemplo
34
Empleando el mismo método experimental que el
descrito en el ejemplo 33, se han realizado ensayos para tratar de
mostrar la efectividad in vitro de los compuestos de fórmula
(1) exclusivamente frente a cepas de Mycobacterium
tuberculosis multirresistentes. Estas cepas han sido
proporcionadas por el Servicio de Microbiología del Hospital
General Universitario "Gregorio Marañón", Madrid; y por el
Laboratorio de Referencia Supranacional de la Organización Mundial
de la Salud (Servicio de Microbiología, Hospital Universitario Vall
d'Hebron, Barcelona). Se han utilizado para ellos los compuestos 1
RFA 3M y 1 RFA 5M, ya que reflejaron una menor CMI en los ensayos
preliminares. Los resultados obtenidos demostraron una alta
actividad antimicobacteriana de los dos compuestos ensayados, muy
superior a rifampicina y a rifabutina. A una concentración > 0,5
\mug/ml inhiben el crecimiento de más del 75% de las cepas
resistentes a IZ y RI (CMI > 256 \mug/ml).
Por otra parte, la rifabutina (RF B), a una
concentración de 1 \mug/ml evidencia un porcentaje de
sensibilidad del 14,3% superior al de la rifampicina pero muy
inferior a 1 RFA 3M y 1 RFA 5M (95,2% y 100% respectivamente). En
la Tabla 4 se recogen los resultados de dichos ensayos de actividad
biológica de los compuestos 1 RFA 3M y 1 RFA 5M. La entrada 1
muestra los resultados obtenidos frente a 4 cepas resistentes a
rifampicina. La entrada 2 muestra los resultados obtenidos frente a
17 cepas multirresistentes (resistentes al menos a isoniacida y
rifampicina).
Esta lista de referencias citadas por el
solicitante únicamente es para comodidad del lector. Dicha lista no
forma parte del documento de patente europea. Aunque se ha tenido
gran cuidado en la recopilación de las referencias, no se pueden
excluir errores u omisiones y la EPO rechaza toda responsabilidad a
este respecto.
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Reson. Chem., 2005, vol. 43, 269-282
[0024]
Claims (28)
1. Compuesto de fórmula (1),
sus sales farmacéuticamente
aceptables y sus solvatos, incluyendo hidratos,
donde:
R^{1} es hidrógeno;
R^{2} se selecciona entre el grupo formado por
fenilo, fenilo mono-sustituido y fenilo
di-sustituido en posiciones 3 y 4, siendo los
sustituyentes seleccionados entre el grupo formado por halógeno,
(C_{1}-C_{4})-alquilo y
(C_{1}-C_{4})-alcoxilo;
R^{3} se selecciona entre el grupo formado por
fenilo, fenilo mono-sustituido y fenilo
di-sustituido en posiciones 3 y 4, siendo los
sustituyentes seleccionados entre el grupo formado por halógeno,
(C_{1}-C_{4})-alquilo y
(C_{1}-C_{4})-alcoxilo; y
R^{4} se selecciona entre el grupo formado por
hidrógeno,
(C_{1}-C_{4})-alquilo; alilo, y
homoalilo.
2. Compuesto según la reivindicación 1 donde,
cuando R^{2} y R^{3} son fenilo mono- o
di-sustituido, los sustituyentes del fenilo son
independientemente seleccionados entre halógeno y
(C_{1}-C_{4})-alcoxilo.
3. Compuesto según la reivindicación 2, donde el
alcoxilo es un metoxilo.
4. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1} y R^{4} son hidrógeno; y R^{2} y R^{3} son
fenilo.
5. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1} y R^{4} son hidrógeno; y R^{2} y R^{3} son
4-metoxifenilo.
6. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1} y R^{4} son hidrógeno; y R^{2} y R^{3} son
4-fluorofenilo.
7. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1} y R^{4} son hidrógeno; y R^{2} y R^{3} son
2-iodofenilo.
8. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1} es hidrógeno; R^{2} y R^{3} son fenilo; y R^{4} es
alilo.
9. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1} es hidrógeno; R^{2} y R^{3} son
4-metoxifenilo; y R^{4} es alilo.
10. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1}es hidrógeno; R^{2} y R^{3} son
3,4-dimetoxifenilo; y R^{4} es alilo.
11. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1}es hidrógeno; R^{2} y R^{3} son
4-fluorofenilo; y R^{4} es alilo.
12. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1} es hidrógeno; R^{2} y R^{3} son
4-clorofenilo; y R^{4} es alilo.
13. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1} es hidrógeno; R^{2} y R^{3} son
2-bromofenilo; y R^{4} es alilo.
14. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1} es hidrógeno; R^{2} y R^{3} son
3-bromofenilo; y R^{4} es alilo.
15. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1} es hidrógeno, R^{2} y R^{3} son
2-iodofenilo; y R^{4} es alilo.
16. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1} es hidrógeno; R^{2} y R^{3} son fenilo; y R^{4} es
homoalilo.
17. Compuesto según la reivindicación 1, donde
R^{1} es hidrógeno; R^{2} y R^{3} son fenilo; y R^{4} es
butilo.
18. Procedimiento de preparación del compuesto
definido en la reivindicación 1, que comprende hacer reaccionar, en
un disolvente adecuado, la
3-amino-4-iminorifamicina
S de fórmula (3) con una 4-piperidona sustituida de
fórmula (2) donde R^{1}_{,} R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen el
mismo significado que en la reivindicación 1.
19. Procedimiento según las reivindicación 18,
donde el disolvente es un éter cíclico.
20. Procedimiento según la reivindicación 19,
donde el éter cíclico es el tetrahidrofurano.
21. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 18-20, donde la reacción se lleva a
cabo en presencia de una base.
22. Procedimiento según la reivindicación 21,
donde la base es acetato amónico.
23. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 18-21, donde la temperatura a la
que se lleva a cabo la reacción es la temperatura de reflujo del
disolvente.
24. Uso del compuesto definido en cualquiera de
las reivindicaciones 1-17 para la preparación de un
medicamento para el tratamiento de una infección
micobacteriana.
25. Uso según la reivindicación 24, donde la
infección micobacteriana es producida por una bacteria seleccionada
entre el grupo formado por Mycobacterium tuberculosis,
Mycobacterium avium-intracellulare complex, y
Mycobacterium kansasii.
26. Composición farmacéutica para el tratamiento
de infecciones micobacterianas, que comprende una cantidad
terapéuticamente efectiva del compuesto definido en cualquiera de
las reivindicaciones 1-17, juntamente con
excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables.
27. Compuesto definido en cualquiera de las
reivindicaciones 1-17, para uso en el tratamiento de
una infección micobacteriana.
28. Compuesto definido en cualquiera de las
reivindicaciones 1-17, para uso según la
reivindicación 27, donde la infección bacteriana se produce por una
bacteria seleccionada del grupo formado por Mycobacterium
tuberculosis, Mycobacterium
avium-intracellulare complex, y Mycobacterium
kansasii.
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