ES2345587B1 - Composicion que comprende silibinin y un inhibidor de la via p13k/aktpara el tratamiento del cancer. - Google Patents
Composicion que comprende silibinin y un inhibidor de la via p13k/aktpara el tratamiento del cancer. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2345587B1 ES2345587B1 ES200802800A ES200802800A ES2345587B1 ES 2345587 B1 ES2345587 B1 ES 2345587B1 ES 200802800 A ES200802800 A ES 200802800A ES 200802800 A ES200802800 A ES 200802800A ES 2345587 B1 ES2345587 B1 ES 2345587B1
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- silibinin
- cancer
- baselineskip
- akt
- hif
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn - After Issue
Links
- SEBFKMXJBCUCAI-UHFFFAOYSA-N NSC 227190 Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C2C(OC3=CC=C(C=C3O2)C2C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)CO)=C1 SEBFKMXJBCUCAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 137
- SEBFKMXJBCUCAI-HKTJVKLFSA-N silibinin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2[C@H](OC3=CC=C(C=C3O2)[C@@H]2[C@H](C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)CO)=C1 SEBFKMXJBCUCAI-HKTJVKLFSA-N 0.000 title claims abstract description 137
- 229950000628 silibinin Drugs 0.000 title claims abstract description 136
- 235000014899 silybin Nutrition 0.000 title claims abstract description 136
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 88
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 67
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims abstract description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000003197 protein kinase B inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 16
- 229940126638 Akt inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 13
- 102000010400 1-phosphatidylinositol-3-kinase activity proteins Human genes 0.000 claims abstract 7
- CZQHHVNHHHRRDU-UHFFFAOYSA-N LY294002 Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C=C(N3CCOCC3)OC2=C1C1=CC=CC=C1 CZQHHVNHHHRRDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 9
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 9
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 9
- HOGVTUZUJGHKPL-HTVVRFAVSA-N triciribine Chemical compound C=12C3=NC=NC=1N(C)N=C(N)C2=CN3[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O HOGVTUZUJGHKPL-HTVVRFAVSA-N 0.000 claims description 7
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- -1 TCN Chemical compound 0.000 claims description 5
- QDLHCMPXEPAAMD-QAIWCSMKSA-N wortmannin Chemical compound C1([C@]2(C)C3=C(C4=O)OC=C3C(=O)O[C@@H]2COC)=C4[C@@H]2CCC(=O)[C@@]2(C)C[C@H]1OC(C)=O QDLHCMPXEPAAMD-QAIWCSMKSA-N 0.000 claims description 4
- IWCQHVUQEFDRIW-UHFFFAOYSA-N 3-[1-[[4-(6-phenyl-8H-imidazo[4,5-g]quinoxalin-7-yl)phenyl]methyl]piperidin-4-yl]-1H-benzimidazol-2-one Chemical compound O=c1[nH]c2ccccc2n1C1CCN(Cc2ccc(cc2)-c2[nH]c3cc4ncnc4cc3nc2-c2ccccc2)CC1 IWCQHVUQEFDRIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HOGVTUZUJGHKPL-UHFFFAOYSA-N LSM-1546 Chemical compound C=12C3=NC=NC=1N(C)N=C(N)C2=CN3C1OC(CO)C(O)C1O HOGVTUZUJGHKPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XSYODYDCSYFRRB-KTTODTSBSA-N [(2r)-2-methoxy-3-octadecoxypropyl] (2,3,4-trihydroxycyclohexyl) hydrogen phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCOC[C@@H](OC)COP(O)(=O)OC1CCC(O)C(O)C1O XSYODYDCSYFRRB-KTTODTSBSA-N 0.000 claims description 3
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 229950003873 triciribine Drugs 0.000 claims description 3
- QDLHCMPXEPAAMD-UHFFFAOYSA-N wortmannin Natural products COCC1OC(=O)C2=COC(C3=O)=C2C1(C)C1=C3C2CCC(=O)C2(C)CC1OC(C)=O QDLHCMPXEPAAMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 115
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 69
- 101001046870 Homo sapiens Hypoxia-inducible factor 1-alpha Proteins 0.000 description 67
- 102100022875 Hypoxia-inducible factor 1-alpha Human genes 0.000 description 67
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 51
- 102000013530 TOR Serine-Threonine Kinases Human genes 0.000 description 31
- 108010065917 TOR Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 description 31
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 30
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 30
- 102000003993 Phosphatidylinositol 3-kinases Human genes 0.000 description 29
- 108090000430 Phosphatidylinositol 3-kinases Proteins 0.000 description 29
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 108010028501 Hypoxia-Inducible Factor 1 Proteins 0.000 description 22
- 102000016878 Hypoxia-Inducible Factor 1 Human genes 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 22
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 21
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 18
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 17
- 230000007959 normoxia Effects 0.000 description 16
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 15
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 15
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 14
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 14
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 13
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 108010034782 Ribosomal Protein S6 Kinases Proteins 0.000 description 12
- 102000009738 Ribosomal Protein S6 Kinases Human genes 0.000 description 12
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 12
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 9
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 9
- 102000008968 Eukaryotic translation initiation factor 4E-binding protein 1 Human genes 0.000 description 8
- 108050000946 Eukaryotic translation initiation factor 4E-binding protein 1 Proteins 0.000 description 8
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 8
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 8
- TZYWCYJVHRLUCT-VABKMULXSA-N N-benzyloxycarbonyl-L-leucyl-L-leucyl-L-leucinal Chemical compound CC(C)C[C@@H](C=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 TZYWCYJVHRLUCT-VABKMULXSA-N 0.000 description 7
- 102000004079 Prolyl Hydroxylases Human genes 0.000 description 7
- 108010043005 Prolyl Hydroxylases Proteins 0.000 description 7
- 102000003861 Ribosomal protein S6 Human genes 0.000 description 7
- 108090000221 Ribosomal protein S6 Proteins 0.000 description 7
- 108010002974 benzyloxycarbonylleucyl-leucyl-leucine aldehyde Proteins 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 7
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 description 6
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 6
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 5
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 5
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 5
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- BNJOZDZCRHCODO-UHFFFAOYSA-N dimethyloxalylglycine Chemical compound COC(=O)CNC(=O)C(=O)OC BNJOZDZCRHCODO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 5
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 5
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 5
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 4
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 4
- 229940124302 mTOR inhibitor Drugs 0.000 description 4
- 239000003628 mammalian target of rapamycin inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 4
- 102100030907 Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator Human genes 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 101000793115 Homo sapiens Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator Proteins 0.000 description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 3
- 108010052090 Renilla Luciferases Proteins 0.000 description 3
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 description 3
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- HKSZLNNOFSGOKW-UHFFFAOYSA-N ent-staurosporine Natural products C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1C1CC(NC)C(OC)C4(C)O1 HKSZLNNOFSGOKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 3
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 3
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 3
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- SBPIDKODQVLBGV-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole;pyridine Chemical compound C1=CNC=N1.C1=CC=NC=C1 SBPIDKODQVLBGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 230000007730 Akt signaling Effects 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000000274 Carcinosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 102000005233 Eukaryotic Initiation Factor-4E Human genes 0.000 description 2
- 108060002636 Eukaryotic Initiation Factor-4E Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010034219 Insulin Receptor Substrate Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000009433 Insulin Receptor Substrate Proteins Human genes 0.000 description 2
- 102000004374 Insulin-like growth factor binding protein 3 Human genes 0.000 description 2
- 108090000965 Insulin-like growth factor binding protein 3 Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000046985 LST8 Homolog mTOR Associated Human genes 0.000 description 2
- 241000254158 Lampyridae Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 239000012828 PI3K inhibitor Substances 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 241001506137 Rapa Species 0.000 description 2
- 108010029031 Regulatory-Associated Protein of mTOR Proteins 0.000 description 2
- 102100040969 Regulatory-associated protein of mTOR Human genes 0.000 description 2
- PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N Resazurin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3[N+]([O-])=C21 PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000272459 Silybum marianum Species 0.000 description 2
- 235000010841 Silybum marianum Nutrition 0.000 description 2
- 101710115678 Target of rapamycin complex subunit LST8 Proteins 0.000 description 2
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 2
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 2
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 210000003372 endocrine gland Anatomy 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229940043441 phosphoinositide 3-kinase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 2
- HKSZLNNOFSGOKW-FYTWVXJKSA-N staurosporine Chemical compound C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1[C@H]1C[C@@H](NC)[C@@H](OC)[C@]4(C)O1 HKSZLNNOFSGOKW-FYTWVXJKSA-N 0.000 description 2
- CGPUWJWCVCFERF-UHFFFAOYSA-N staurosporine Natural products C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3CNC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1C1CC(NC)C(OC)C4(OC)O1 CGPUWJWCVCFERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 2
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-L (R)-2-Hydroxy-3-(phosphonooxy)-propanal Natural products O=C[C@H](O)COP([O-])([O-])=O LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-L 0.000 description 1
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDMGQPNVTKUNHV-UHFFFAOYSA-N 3,5,7-trihydroxy-2-[3-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)-2-(hydroxymethyl)-2,3-dihydro-1,4-benzodioxin-6-yl]-2,3-dihydrochromen-4-one Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1C(CO)OC2=CC=C(C3C(C(=O)C4=C(O)C=C(O)C=C4O3)O)C=C2O1 KDMGQPNVTKUNHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- 206010001197 Adenocarcinoma of the cervix Diseases 0.000 description 1
- 208000034246 Adenocarcinoma of the cervix uteri Diseases 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 238000000035 BCA protein assay Methods 0.000 description 1
- 206010060999 Benign neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000008720 Bone Marrow Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 1
- 108090000567 Caspase 7 Proteins 0.000 description 1
- 102100029855 Caspase-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100038902 Caspase-7 Human genes 0.000 description 1
- 201000005262 Chondroma Diseases 0.000 description 1
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-N D-glyceraldehyde 3-phosphate Chemical compound O=C[C@H](O)COP(O)(O)=O LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 1
- 230000010190 G1 phase Effects 0.000 description 1
- 230000010337 G2 phase Effects 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 101001077600 Homo sapiens Insulin receptor substrate 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000808011 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 description 1
- 102100025092 Insulin receptor substrate 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 102000008135 Mechanistic Target of Rapamycin Complex 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010035196 Mechanistic Target of Rapamycin Complex 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000007054 Medullary Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 244000246386 Mentha pulegium Species 0.000 description 1
- 235000016257 Mentha pulegium Nutrition 0.000 description 1
- 235000004357 Mentha x piperita Nutrition 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 101100087591 Mus musculus Rictor gene Proteins 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 208000025618 Paget disease of nipple Diseases 0.000 description 1
- 208000024024 Paget disease of the nipple Diseases 0.000 description 1
- 208000008900 Pancreatic Ductal Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010002747 Pfu DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108010089430 Phosphoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007982 Phosphoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 206010036040 Polychromasia Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- 229940079156 Proteasome inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 102000046941 Rapamycin-Insensitive Companion of mTOR Human genes 0.000 description 1
- 108700019586 Rapamycin-Insensitive Companion of mTOR Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 206010062129 Tongue neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 102000006108 VHL Human genes 0.000 description 1
- 101150046474 Vhl gene Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 229940124650 anti-cancer therapies Drugs 0.000 description 1
- 230000001929 anti-hepatotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000008436 biogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 201000007327 bone benign neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 201000006491 bone marrow cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 1
- 230000004640 cellular pathway Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 201000006662 cervical adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940075614 colloidal silicon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 210000003499 exocrine gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 201000006585 gastric adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 235000001050 hortel pimenta Nutrition 0.000 description 1
- 102000058223 human VEGFA Human genes 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002050 international nonproprietary name Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 210000000088 lip Anatomy 0.000 description 1
- 206010024627 liposarcoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 238000003468 luciferase reporter gene assay Methods 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 208000023356 medullary thyroid gland carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001047 methyl salicylate Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000008481 normal tissue growth Effects 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000008798 osteoma Diseases 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003254 palate Anatomy 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000012111 paraneoplastic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000000849 parathyroid Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000003899 penis Anatomy 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000029279 positive regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003207 proteasome inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- HSSLDCABUXLXKM-UHFFFAOYSA-N resorufin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3N=C21 HSSLDCABUXLXKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 208000011571 secondary malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- SEBFKMXJBCUCAI-DBMPWETRSA-N silybin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(C2C(OC3=CC=C(C=C3O2)[C@@H]2[C@H](C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)CO)=C1 SEBFKMXJBCUCAI-DBMPWETRSA-N 0.000 description 1
- 229960004245 silymarin Drugs 0.000 description 1
- 235000017700 silymarin Nutrition 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 206010042863 synovial sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 208000030829 thyroid gland adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000030901 thyroid gland follicular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 210000002229 urogenital system Anatomy 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 230000006711 vascular endothelial growth factor production Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 102100035070 von Hippel-Lindau disease tumor suppressor Human genes 0.000 description 1
- 210000000216 zygoma Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Composición que comprende silibinin y un
inhibidor de la vía PI3K/Akt para el tratamiento del cáncer.
Uso de una composición que comprende silibinin y
un inhibidor de Akt para la elaboración de un medicamento para el
tratamiento del cáncer, y preparación combinada de, al menos,
silibinin y un inhibidor de la ruta PI3K/Akt para su uso por
separado, simultáneo o secuencial en el tratamiento del cáncer.
Description
Composición que comprende silibinin y un
inhibidor de la vía PI3K/Akt para el tratamiento del cáncer.
La presente invención se encuentra dentro del
campo de la medicina, y refiere a una composición que comprende
silibinin y un inhibidor de Akt para el tratamiento del cáncer.
La hipoxia es una característica común de la
mayoría de los tumores sólidos. A medida que las células tumorales
proliferan, la demanda de nutrientes y oxígeno crece hasta el punto
en el que la difusión de oxígeno desde los vasos sanguíneos se hace
limitante, dando lugar a hipoxia. Las células cancerígenas se
adaptan a este ambiente hipóxico a través de la activación de un
numero de vías celulares que estimulan la glicolisis, la
proliferación, la sobre-regulación de numerosos
factores de supervivencia, y la neovascularización (angiogénesis).
Estos procesos proveen al tumor de energía suficiente y de
suplemento de sangre para permitir el crecimiento bajo condiciones
de hipoxia.
El principal regulador transcripcional de la
respuesta a hipoxia es el HIF-1
(hypoxia-inducible factor 1), que juega un
papel central en el crecimiento tumoral y en la angiogénesis.
HIF-1 es un factor transcripcional heterodimérico
formado por las subunidades HIF-1\alpha y
HIF-1\beta. HIF-1\beta se
expresa constitutivamente y sus niveles no son afectados por cambios
en la pO_{2}. Por el contrario, HIF-1\alpha es
degradado rápida y continuamente por el sistema
ubiquitin-proteasoma tras su unión a la proteína de
von Hippel-Lindau (pVHL), en un proceso que depende
de la hidroxilación de los residuos de prolina 402 y 564 por una
familia de enzimas conocidas como
prolil-4-hidroxilasas que son
dependientes de O_{2}, hierro y oxoglutarato. Bajo condiciones de
hipoxia, la hidroxilación de HIF-1\alpha está
inhibida, lo que conduce a un incremento de la estabilidad de
HIF-1\alpha. Aunque la inhibición de las
prolil-hidroxilasas en hipoxia es reconocido como el
mecanismo primario de la acumulación de
HIF-1\alpha, se hace evidente que la expresión de
HIF-1\alpha también depende de su tasa de síntesis
de novo. Algunos factores de crecimiento, citoquinas, y otras
moléculas señalizadoras pueden estimular la síntesis de proteína de
HIF-1 \alpha a través de la activación de la vía
fosfatidilinositol-3-quinasa
(PI3K)/Akt/mTOR (mammalian target of rapamycin). mTOR regula
la traducción de proteínas a través del incremento de la
fosforilación de sus efectores p70S6K (ribosomal protein S6
kinase) y rpS6 (ribosomal protein S6), lo que da lugar al
incremento de la traducción de mRNAs que contienen secuencias
5'-terminal TOP (oligopyrimidine tract) en
sus 5'-UTR. mTOR también fosforila el factor
4E-BP1 (eukaryotic translation initiation factor
4E-binding protein-1), que
resulta en la activación de elF4E (eukaryotic initiation factor
4E) e induce la traducción cap-dependiente.
Datos recientes sugieren que la actividad de mTOR es necesaria para
la expresión de HIF-1\alpha independientemente de
las condiciones de oxigenación celular.
El silibinin es un flavonoide antioxidante
aislado de Silybum marianum L. Gaertn., que se usa en clínica
por sus propiedades hepatoprotectivas y como agente antihepatotóxico
para el tratamiento de varias enfermedades hepáticas, vendiéndose
también como un suplemento dietético. Recientemente, se han
comprobado sus efectos preventivos, antiproliferativos y
pro-apoptóticos en varias células cancerosas,
fundamentalmente en el cáncer de piel, mama, pulmón, colon, páncreas
y próstata. Se han propuesto varios mecanismos de acción de
silibinin, como la inhibición de la síntesis de ADN, del crecimiento
celular por arresto en la fase G0/G1 ó G2, o mediante un incremento
moderado de la expresión de IGFBP-3
(insulin-like growth factorbinding
protein-3), lo que puede tener un efecto
inhibitorio en la acción mitogénica de IGF-1.
Estudios recientes parecen demostrar que el silibinin inhibe la
angiogénesis a través de la regulación a la baja de la vía Akt y
NF-\kappaB (Mallikarjuna et al., 2004.
Cancer Res. 64: 6349-6356). Sin embargo, no
se conoce con exactitud el mecanismo molecular por el que el
silibinin ejerce sus efectos antitumorales.
Datos recientes han mostrado que la proteína
quinasa mTOR puede formar dos complejos multiproteicos que regulan
diferentes aspectos de la señalización de mTOR: el Complejo mTOR 1
(mTORC1) y el Complejo mTOR 2 (mTORC2).
El complejo mTORC1 se compone de mTOR, raptor
(regulatory-associated protein of mTOR), y
mLST8, y regula el crecimiento y la proliferación celular modulando
procesos tales como la biogénesis ribosomal y la traducción de
proteínas a través de sus efectores p70S6K, rpS6 y
4E-BP1. Notablemente, además de su papel en promover
la traducción de proteínas, se ha visto que p70S6K reprime la vía
PI3K/Akt inhibiendo la expresión IRS1 (insulin receptor
substrate-1) e IRS2 (Manning 2004. J Cell
Biol 167:399-403).
El complejo mTORC2 contiene mTOR, rictor
(rapamycin insensitive companion of mTOR), mLST8, y mSinl
(Guertin & Sabatini 2007. Cáncer Cell
12:9-22), y trabajos recientes han demostrado que
mTORC2 induce la actividad de Akt mediante la fosforilación directa
de la Ser^{473} (Sarbassov et al., 2005. Science
307:1098-10101).
Así pues, la activación de la vía mTORC1
suprimiría la señalización de PI3K/Akt, mientras que la inhibición
mTORC1 activaría Akt mediante el feed-back
negativo producido por p70S6K. Se acepta que la rapamicina y sus
análogos son inhibidores universales de mTORC1 (y de p70S6K),
mientras que son inhibidores de mTORC2 dependiendo del tipo celular,
y así de Akt (Sabatini 2006. Nat Rev Cáncer
6:729-734).
En base a este mecanismo, las células tumorales
en las que la inhibición de mTOR da lugar a la desactivación de Akt
serían aquellas en las que se expresa un complejo mTORC2 sensible a
rapamicina, mientras que las células en las que Akt es activado o no
afectado por los inhibidores de mTOR podrían ser aquellas que
expresan un complejo mTORC2 insensible a rapamicina, como se ha
demostrado en las células HeLa (Sarbassov et al., 2006.
Mol Cell 22:159-68).
La presente invención proporciona un tratamiento
útil para el cáncer, especialmente para aquellos tipos de cáncer en
los que el silibinin activa indirectamente la vía PI3K/Akt, mediante
la administración de silibinin y un inhibidor de la vía
PI3K/Akt.
Los autores de la presente invención han
demostrado que silibinin inhibe la acumulación de
HIF-1\alpha inducida por hipoxia en varias líneas
celulares. Asimismo, los autores describen que silibinin reprime la
actividad de mTOR y de sus efectores p70S6K, rpS6 y
4E-BP1, incrementando la fosforilación de Akt, y que
el empleo combinado de silibinin con inhibidores de la vía PI3K/Akt
tiene un efecto sinérgico en el tratamiento de determinados tipos de
cáncer, al impedir la activación de PI3K/Akt que produce silibinin
en determinados tipos de células.
De esta manera, composiciones farmacéuticas que
comprendan el silibinin y un inhibidor de la vía PI3K/Akt son más
útiles en aquellos tipos de cáncer en los que silibinin produce una
activación de la vía PI3K/Akt.
Así, un primer aspecto de la invención se
refiere a una composición, de ahora en adelante composición de la
invención, que comprende silibinin y un inhibidor de la vía
PI3K/Akt. Otro aspecto de la invención se refiere al uso de la
composición de la invención como medicamento.
El Silibinin (INN International
Nonproprietary Name), también conocido como silibin, es el
constituyente activo principal del silimarin, la mezcla de
flavolignanos extraídos del Silybum marianum. Tienen como
fórmula química IUPAC (International Union of Pure and Applied
Chemistry)
3,5,7-trihydroxi-2-(3-(3-hidroxi-4-metoxifenil)-2-(hidroximetil)-2,3
dihidrobenzo[b]
[1,4]dioxin-6-il)croman-4-ona.
Por silibinin, en esta memoria, se entiende tanto el silibinin en sí
como cualquiera de sus derivados, sales, profármacos, o análogos, o
cualquiera de sus combina-
ciones.
ciones.
La vía PI3K/Akt ha sido ampliamente estudiada y
ha sido reconocida como una diana prometedora para las terapias
anticancerígenas puesto que su activación es un evento celular clave
durante la tumorigénesis. Una vez que las quinasas PI3K y Akt se han
activado bajo el estrés apoptótico, se traducen señales a una serie
de reguladores vías abajo. Entre los inhibidores de PI3K se
encuentran el LY294002 (CAS
154447-36-6) y el Wortmannin (CAS
19545-26-7), y entre los inhibidores
de Akt, el Triciribine (API-2,
NSC-154020, TCN, Akt inhibitor V; CAS
35943-35-2),
A-443654 (imidazole-pyridine
based), KP372-1, Akt Inhibitor II
(SH-5), Akt Inhibitor III (SH-6),
Akt Inhibitor IV (CAS 681281-88-9),
Akt Inhibitor VIII, Isozyme-Selective,
Akti-1/2 (sal hidratada de trifluoroacetato
de1,3-Dihidro-1-(1-((4-(6-fenil-1H-imidazo[4,5-g]quinoxalin-7-il)fenyl)metil)-4-piperidinil)-2H-benzimidazol-2-ona),
Akt Inhibitor X (CAS
925681-41-0).
Por tanto, en una realización preferida de este
aspecto de la invención, el inhibidor de Akt se selecciona de la
lista que comprende: LY294002, Wortmannin, Triciribine
(API-2, NSC-154020, TCN, Akt
inhibitor V), A-443654
(imidazole-pyridine based), KP372-1,
Akt Inhibitor II (SH-5), Akt Inhibitor III
(SH-6), Akt Inhibitor IV, Akt Inhibitor VIII,
Isozyme-Selective, Akti-1/2, Akt
Inhibitor X. En una realización particular de este aspecto de la
invención, el inhibidor de la vía PI3K/Akt es el LY294002.
En la composición de la invención el silibinin
tiene un efecto inhibidor de mTOR, útil en el tratamiento del
cáncer, y a la vez los inhibidores de la activación de la vía
PI3K/Akt son útiles en aquellos tipos de cáncer en los que el
silibinin, al igual que otros inhibidores de mTOR, activan dicha
vía. Tal y como se demuestra en los ejemplos, el empleo combinado
del silibinin con el inhibidor de la vía PI3K/Akt empleado
(LY294002) da lugar a un efecto sinérgico en determinadas líneas
celulares tumorales.
Así pues, otro aspecto de la invención se
refiere al uso de la composición de la invención para la elaboración
de un medicamento para el tratamiento del cáncer.
En una realización preferida de este aspecto de
la invención, los tipos de cáncer se seleccionan de la lista que
comprende: cáncer cervical, cáncer gastrointestinal o cáncer
hepático. En una realización particular de este aspecto de la
invención, el cáncer es cáncer cervical.
Otro aspecto de la invención se refiere a una
preparación combinada de, al menos, silibinin y un inhibidor de la
ruta PI3K/Akt, de ahora en adelante preparación combinada de la
invención, para su uso por separado, simultáneo ó secuencial en el
tratamiento del cáncer.
Los autores de la presente invención han
demostrado que el silibinin actúa como anticancerígeno inhibiendo
mTOR, y puesto que la función de mTOR y su regulación por la vía
PI3K/Akt es tumor específica, el tratamiento del cáncer con
silibinin, en ocasiones, activa la vía PI3K/Akt. La activación de la
vía PI3K/Akt es necesaria para la diferenciación celular, y
probablemente tiene una gran relevancia a nivel fisiológico, puesto
que acopla procesos vitales como son la diferenciación y la
supervivencia celular.
Por tanto, la combinación del silibinin con un
inhibidor de la vía PI3K/Akt incrementa sinérgicamente la respuesta,
como se muestra en los ejemplos de la invención, no representando un
mero agregado de agentes conocidos, sino una nueva combinación que
proporciona un nuevo tratamiento efectivo frente al cáncer.
El silibinin y el inhibidor de PI3K/Akt podrían
administrarse a un paciente por separado, de manera simultánea o
secuencialmente, dependiendo de la pauta de administración más
adecuada a cada caso. Dicha preparación combinada de silibinin y un
inhibidor de la ruta PI3K/Akt por separado, de manera simultánea o
secuencial sería útil en la elaboración de un medicamento para el
tratamiento del cáncer.
Debe enfatizarse que el término "preparación
combinada" o también denominada "yuxtaposición", en esta
memoria, significa que los componentes de la preparación combinada
no necesitan encontrarse presentes como unión, por ejemplo en una
composición, para poder encontrarse disponibles para su aplicación
separada o secuencial. De esta manera, la expresión
"yuxtapuesta" implica que no resulta necesariamente una
combinación verdadera, a la vista de la separación física de los
componentes.
Una realización preferida de este aspecto de la
invención, la preparación combinada de la invención se usa para el
tratamiento de una serie de cánceres que se seleccionan de la lista
que comprende: cáncer cervical, cáncer gastrointestinal y cáncer
hepático. En una realización particular, el cáncer es cáncer
cervical.
En los ejemplos de la presente invención se
recoge como, mientras que la activación de Akt en la línea celular
HeLa aumenta con la dosis de silibinin administrada, en determinadas
líneas celulares (AGS y Hep3B) concentraciones de silibinin
superiores a 250 \muM pueden inhibir la activación de la vía Akt,
y en otras líneas celulares (PC-3) no se produce
nunca la activación de Akt. Además, se ve como en todas las líneas
celulares ensayadas, la inhibición de la producción de VEGF es mayor
a concentraciones de silibinin superiores a 250 \muM y aún mayor a
500 \muM. Y aún más, cuando se ha ensayado la inhibición de la
proliferación celular se ha visto que en todos los casos la
proliferación se inhibe desde concentraciones bajas, pero en el caso
de las líneas celulares de cáncer cervical y gástrico, la inhibición
de la proliferación es notablemente mayor a concentraciones
superiores a 250 \muM.
Por tanto, el tratamiento con silibinin en la
mayoría de los tipos de cáncer (a excepción del cáncer de próstata)
será más efectivo si se administra al paciente dosis elevadas del
mismo, que permitan alcanzar concentraciones en las células
superiores a 250 \muM, y más aún preferiblemente, de 500
\muM.
Así, otro aspecto de la invención se refiere al
uso del silibinin en la proporción necesaria para alcanzar
concentraciones celulares superiores a 250 \muM, para la
elaboración de un medicamento para el tratamiento del cáncer. En una
realización preferida de este aspecto de la invención el cáncer se
selecciona de la lista que comprende: cáncer cervical, cáncer
gastrointestinal y cáncer hepático. En otra realización preferida de
este aspecto de la invención, el silibinin se encuentra en
proporciones que permiten alcanzar concentraciones celulares
superiores a 500 \muM.
La proporción de silibinin necesaria para
alcanzar dichas concentraciones celulares dependerá de la
formulación del medicamento, de los adyuvantes y vehículos
farmacéuticamente aceptados que permitan una liberación adecuada del
silibinin. Métodos de formulación adecuados son conocidos en el
estado de la técnica.
En esta memoria se entiende por "cáncer" un
conjunto de enfermedades en las cuales el organismo produce un
exceso de células malignas (también conocidas como cancerígenas o
cancerosas), con rasgos típicos de comportamiento y crecimiento
descontrolado (crecimiento y división más allá de los límites
normales, invasión del tejido circundante y, a veces, metástasis).
Comprende cualquier enfermedad de un órgano o tejido en un mamífero,
preferiblemente el hombre, caracterizado por una multiplicación
pobremente controlada, o descontrolada, de células normales o
anormales en dicho tejido, y su efecto en la totalidad del cuerpo.
El término cáncer, dentro de esta definición, incluye las neoplasias
benignas, displasias, hiperplasias, así como neoplasias que muestran
metástasis, o cualquier otra transformación como por ejemplo,
leucoplasias que a menudo preceden al brote del cáncer. Las células
y los tejidos son cancerosos cuando crecen y se replican más
rápidamente de lo normal, desplazándose o dispersándose en el tejido
sano circundante o cualquier otro tejido del cuerpo, lo que se
conoce como metástasis, asume formas y tamaños anormales, muestra
cambios en su ratio nucleocitoplasmático, policromasia nuclear, y
finalmente cesa. Células y tejidos cancerosos pueden afectar al
cuerpo como un todo causando síndromes paraneoplásicos, o sí el
cáncer ocurre en un órgano o tejido vital, siendo interrumpida o
dañada su función normal, con posibles resultados fatales. El
resultado final de la evolución de un cáncer que involucra un órgano
vital, ya sea primario o metastático, es la muerte del mamífero
afectado. El cáncer tiende a extenderse, y su grado de extensión se
relaciona normalmente con cambios en la supervivencia a la
enfermedad.
Generalmente se dice que el cáncer se encuentra
en uno de tres estados de crecimiento: temprano o localizado, cuando
el tumor aún se encuentra confinado en el tejido de origen, o en su
localización primaria; extensión directa, cuando las células
cancerígenas del tumor han invadido el tejido adyacente o se ha
extendido únicamente a los nódulos linfáticos regionales; o
metástasis, cuando las células cancerosas han migrado a partes
distantes del cuerpo desde la localización primaria, por medio del
sistema circulatorio o linfático, y se ha establecido en
localizaciones secundarias.
Se dice que un cáncer es maligno por su
tendencia a causar la muerte si no es tratado. Los tumores benignos,
usualmente no causan la muerte, aunque pueden hacerlo si interfieren
con la función normal del cuerpo por sus características o
localización, tamaño o efectos paraneoplásicos. Aquí los tumores
malignos caen dentro de la definición de cáncer dentro del ámbito de
esta definición también. En general, las células cancerosas se
dividen a una tasa mayor que las células normales, pero la
distinción entre el crecimiento de los tejidos cancerosos y normales
no es tanto que la división celular sea mucho más rápido, como la
pérdida parcial o completa de detener su crecimiento y de
diferenciarse en un tejido útil y limitado, del tipo que caracteriza
el equilibrio funcional de crecimiento del tejido normal. El tejido
canceroso puede expresar ciertas moléculas receptoras y
probablemente están influenciadas por la susceptibilidad e
inmunidad, y se sabe que ciertos cánceres de la próstata y de mama,
por ejemplo, dependen de ciertas hormonas. El término "cáncer"
en esta memoria, no se limita simplemente a neoplasias benignas,
sino que comprende también otras neoplasias benignas o malignas
como: 1) Carcinoma, 2) Sarcoma, 3) Carcinosarcoma, 4) Cánceres de
los tejidos formadores de sangre, 5) tumores de tejidos nerviosos,
incluyendo el cerebro, 6) cáncer de células de la piel.
El carcinosarcoma ocurre en los tejidos
epiteliales, que cubren la cara externa del cuerpo (la piel) y las
membranas mucosas y la cavidad interna de la estructura de los
órganos, tales como las mamas, el pulmón, el tracto digestivo y
gastrointestinal, las glándulas endocrinas, y el sistema
genitourinario. Los elementos ductales o glandulares pueden
persistir en los tumores epiteliales, así como en los
adenocarcinomas, como por ejemplo, el adenocarcinoma de tiroides, el
adenocarcinoma gástrico, el adenocarcinoma uterino. Cánceres del
epitelio de células pavimentadas de la piel y de ciertas membranas
mucosas, como por ejemplo, cáncer de lengua, labios, laringe, vejiga
urinaria, cerviz uterina, o pene, puede ser denominado carcinoma
epidermoide o de células escuamosas de los tejidos respectivos, y se
encuentran también dentro de la definición de cáncer en esta
memoria.
El sarcoma se desarrolla en los tejidos
conectivos, incluyendo el tejido fibroso, adiposo, el músculo, los
vasos sanguíneos, hueso, y el cartílago como por ejemplo el sarcoma
osteogénico, liposarcoma, fibrosarcoma, y el sarcoma sinovial.
Los carcionosarcomas se desarrollan tanto en el
tejido epitelial como en el conectivo. El cáncer puede ser primario
o secundario. Primario indica que el cáncer se ha originado en el
tejido que se ha encontrado, en lugar de haberse establecido tras
metástasis desde otra región.
El cáncer y las enfermedades tumorales, pueden
ser también benignos o malignos, y pueden afectar a las estructuras
anatómicas del cuerpo de un mamífero. Por ejemplo, pero sin
limitarnos, pueden ser:
I) cáncer y enfermedades tumorales de la médula
ósea, y de células derivadas de la médula ósea (leucemias),
II) glándulas endocrinas y exocrinas, como por
ejemplo, tiroides, paratiroides, pituitaria, glándulas adrenales,
glándulas salivares, páncreas.
III) de mama, como por ejemplo, tumores benignos
y malignos en las glándulas mamarias tanto de hombres como de
mujeres, los conductos mamarios, adenocarcinoma, carcinoma medular,
comedo carcinoma. La enfermedad de Paget del pezón, el carcinoma
inflamatorio de mujeres jóvenes,...
IV) El pulmón,
V) El estómago,
VI) El hígado y el bazo,
VII) El intestino delgado,
VIII) El colon,
IX) El hueso, y sus tejidos conectivos y de
soporte, como el tumor de huesos maligno o benigno, por ejemplo, el
sarcoma osteogénico maligno, el osteoma benigno, los tumores de
cartílago; como el condrosarcoma maligno o el condroma benigno;
tumores de la médula ósea, como el mieloma maligno, o el granuloma
eosinofílico benigno, así como tumores metastáticos de los tejidos
óseos en otras localizaciones del cuerpo,
X) la boca, cuello, laringe, y el esófago,
XI) La vejiga urinaria y los órganos y
estructuras internas y externas del sistema urogenital masculino y
femenino, como ovario, útero, cerviz del útero, testículos y
glándula prostática,
XII) La próstata,
XIII) El páncreas, como el carcinoma ductal del
páncreas,
XIV) El tejido linfático como linfomas y otros
tumores de origen linfoide,
XV) La piel,
\newpage
XVI) Cáncer y enfermedades tumorales de todas
las estructuras anatómicas pertenecientes al sistema respiratorio,
incluyendo los músculos torácicos y la pleura,
XVII) cáncer primario y secundario de los
nódulos linfáticos,
XVIII) La lengua y las estructuras óseas del
paladar y de los senos,
XIX) La boca, pómulos, cuello y glándulas
salivares,
XX) Los vasos sanguíneos incluyendo el corazón y
sus membranas,
XXI) El músculo liso o esquelético, incluyendo
sus ligamentos y membranas,
XXII) El sistema nervioso periférico, autónomo y
central, incluyendo el cerebelo,
XXIII) El tejido adiposo.
Tanto las composiciones de la presente invención
como la preparación combinada pueden formularse para su
administración a un animal, y más preferiblemente a un mamífero,
incluyendo al hombre, en una variedad de formas conocidas en el
estado de la técnica. Así, pueden estar, sin limitarse, en
disolución acuosa estéril o en fluidos biológicos, tal como suero.
Las disoluciones acuosas pueden estar tamponadas o no tamponadas y
tienen componentes activos o inactivos adicionales. Los componentes
adicionales incluyen sales para modular la fuerza iónica,
conservantes incluyendo, pero sin limitarse a, agentes
antimicrobianos, antioxidantes, quelantes, y similares, y nutrientes
incluyendo glucosa, dextrosa, vitaminas y minerales.
Alternativamente, las composiciones pueden prepararse para su
administración en forma sólida. Las composiciones pueden combinarse
con varios vehículos o excipientes inertes, incluyendo pero sin
limitarse a; aglutinantes tales como celulosa microcristalina, goma
tragacanto, o gelatina; excipientes tales como almidón o lactosa;
agentes dispersantes tales como ácido algínico o almidón de maíz;
lubricantes tales como estearato de magnesio, deslizantes tales como
dióxido de silicio coloidal; agentes edulcorantes tales como
sacarosa o sacarina; o agentes aromatizantes tales como menta o
salicilato de metilo.
Tales composiciones o preparaciones combinadas
y/o sus formulaciones pueden administrarse a un animal, incluyendo
un mamífero y, por tanto, al hombre, en una variedad de formas,
incluyendo, pero sin limitarse a, intraperitoneal, intravenoso,
intramuscular, subcutáneo, intracecal, intraventricular, oral,
enteral, parenteral, intranasal o dérmico.
La dosificación para obtener una cantidad
terapéuticamente efectiva depende de una variedad de factores, como
por ejemplo, la edad, peso, sexo, tolerancia,... del mamífero. En el
sentido utilizado en esta descripción, la expresión "cantidad
terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad de silibinin,
profármacos, derivados o análogos del silibinin que produzcan el
efecto deseado y, en general, vendrá determinada, entre otras
causas, por las características propias de dichos profármacos,
derivados o análogos y el efecto terapéutico a conseguir. Los
adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden ser
utilizados en dichas composiciones son los vehículos conocidos por
los técnicos en la materia.
A lo largo de la descripción y las
reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no
pretenden excluir otras características técnicas, aditivos,
componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos,
ventajas y características de la invención se desprenderán en parte
de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los
siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan a modo de ilustración,
y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
Fig. 1. Silibinin inhibe la acumulación de la
proteína HIF-1\alpha inducida por hipoxia y la
activación transcripcional de HIF-1. A. Las
células tumorales HeLa y Hep3B fueron expuestas a condiciones
hipóxicas (2% de O_{2}) por los tiempos indicados en ausencia o
presencia de silibinin (Sili, 500 \mumol/L). Los niveles de
proteína de HIF-1\alpha,
HIF-1\beta y actina fueron detectados por
inmunoblot a partir de los extractos celulares totales según lo
descrito en materiales y métodos. B, Las células Hep3B fueron
tratadas durante 4 h en normoxia (21% de O_{2}, carril 1), hipoxia
(2% de O_{2}), o con el agente hipoxia-mimético
DMOG (1 mmol/L) en presencia de silibinin en las concentraciones
indicadas, o con el vehículo (0). Las proteínas fueron detectadas
por inmunoblot. C, Células HeLa fueron transfectadas
transitoriamente con el plásmido reportero
p9HIF1-Luc y después fueron incubadas durante 8 h de
manera similar a lo descrito en B. La actividad transcripcional de
HIF-1 fue ensayada midiendo la respuesta a la
hipoxia dependiente de la expresión del gen reportero según se
describe en materiales y métodos. Los experimentos fueron realizados
por duplicado y los resultados mostrados son representativos de tres
análisis independientes. Las barras representan la media \pm SE.
*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001, comparado con sus controles
respectivos sin silibinin. D, Células HeLa fueron expuestas a los
niveles indicados de hipoxia ([O_{2}], 6, 3, 1 y 0.1%) durante 4 h
en ausencia o presencia de silibinin (Sili, 500 \mumol/L). Los
niveles de las proteínas HIF-1\alpha y actina
fueron detectados por inmunoblot como en A.
Fig. 2. Silibinin no afecta a la degradación
de la proteína de HIF-1\alpha o a la expresión del
mRNA de HIF-1\alpha. A, Células HeLa fueron
expuestas a hipoxia (2% de O_{2}) durante 2 h, y silibinin (500
\mumol/L) o el vehículo (control) fueron agregados 15 min antes
del final de la incubación hipóxica. Las células fueron entonces
expuestas a normoxia (reoxigenación) por los períodos indicados, y
los niveles de la proteína HIF-1\alpha fueron
medidos por inmunoblot. El panel inferior muestra la cuantificación
densitométrica de los niveles de HIF-1\alpha, con
los valores expresados como el porcentaje de la expresión antes de
la reoxigenación (tiempo 0). Los valores representan la media \pm
SE de cuatro experimentos independientes. B, Células CHO Ka13.5
deficientes en HIF-1\alpha fueron transfectadas
con el tipo salvaje HIF-1\alpha, el mutante
P402A/P564A-HIF-1\alpha o con el
vector vacío como se describe en Materiales y Métodos. Después de 24
h, las células fueron expuestas a normoxia o a hipoxia (2% de
O_{2}) durante 4 h en presencia de las concentraciones indicadas
de silibinin (Sili), y el HIF-1\alpha recombinante
fue detectado por immunoblot. C, Células HeLa fueron cultivadas bajo
condiciones normóxicas (21% de O_{2}) o hipóxicas (2% de O_{2})
en ausencia o presencia de silibinin (500 \mumol/L) por los
tiempos indicados. El ARN total fue aislado y analizado para la
expresión del mRNA de HIF-1\alpha por
RT-PCR, usando GAPDH como gen control. D, Panel
superior, las células HeLa fueron incubadas durante 2 h bajo
condiciones normóxicas (21% de O_{2}) o hipóxicas (2% de O_{2}).
A continuación, las células fueron tratadas durante una hora
adicional bajo las mismas atmósferas en presencia de MG132 (20
\mumol/L), ciclohexamida (CHX, 100 \mumol/L) o silibinin (500
\mumol/L), seguido por análisis mediante inmunoblot. Panel
inferior, las células HeLa fueron incubadas durante 3 h en hipoxia
(2% de O_{2}). Posteriormente, las células fueron tratadas en
hipoxia por los tiempos adicionales indicados con el vehículo
(control), CHX (100 \mumol/L) o silibinin (500 \mumol/L), y
HIF-1\alpha fue detectado por inmunoblot.
Fig. 3. Silibinin inhibe la señalización de
mTOR y aumenta la fosforilación de Akt en células cancerosas HeLa y
Hep3B. A, Las células fueron incubadas en hipoxia (2% de
O_{2}) durante 3 h en presencia de las concentraciones indicadas
de silibinin (Sili). El carril 1 de cada panel muestra los niveles
basales en normoxia de las proteínas bajo estudio. B, Células HeLa
fueron incubadas durante 4 h en normoxia (21% de O_{2}) o hipoxia
(2% de O_{2}) en presencia de silibinin (500 \mumol/L), LY294002
(LY, 10 \mumol/L), o rapamicina (Rapa, 20 nmol/L) según se indica.
C, Células Hep3B fueron incubadas como en B, y tratadas con las
concentraciones indicadas de silibinin (Sili) en ausencia o
presencia de LY294002 (LY, 10 \mumol/L). Las proteínas en
A-C fueron detectadas por inmunoblot usando los
anticuerpos específicos descritos en Materiales y Métodos.
Fig. 4. Los efectos de silibinin sobre la vía
mTOR, la activación de Akt y la acumulación de
HIF-1\alpha son rápidos y completamente
reversibles. Las células HeLa y Hep3B fueron expuestas a hipoxia
(2% de O_{2}) por 3 h, y silibinin (Sili, 500 \mumol/L) fue
añadido durante los últimos 0 (no tratadas), 10, 20, 30 ó 60 minutos
de incubación hipóxica. Los carriles 7 y 8 de cada panel representan
las células tratadas con silibinin durante los últimos 60 min de
incubación hipóxica, seguidas por dos lavados del medio extracelular
para eliminar el silibinin, y la incubación por un periodo adicional
de 30 ó 60 min bajo hipoxia para estudiar la reversibilidad de los
efectos. El carril 1 de cada panel muestra los niveles basales en
normoxia de las proteínas analizadas, que fueron detectadas por
inmunoblot.
Fig. 5. Silibinin inhibe la liberación de
VEGF inducida por hipoxia en células tumorales HeLa y Hep3B. A,
Las células fueron incubadas durante 12 h en normoxia o hipoxia (2%
de O_{2}) en presencia de la concentración indicada de silibinin,
y el medio extracelular fue recuperado para la determinación de VEGF
por ELISA según lo descrito en Materiales y Métodos. Los valores
representan la media \pm SE a partir de tres experimentos
independientes. **, P<0.01, ***, P<0.001, significativamente
diferente comparado con las células control en hipoxia sin
silibinin. B, VEGF fue determinado en células HeLa tratadas durante
12 h con las drogas y las condiciones indicadas de oxígeno; Hipoxia
(2% de O_{2}), Silibinin250 (250 \mumol/L), Silibinin500 (500
\mumol/L), LY294002 (LY, 10 \mumol/L), rapamicina (Rapa, 20
nmol/L). El gráfico es representativo de tres experimentos con
resultados similares. Las barras representan la media \pm SE. *,
P<0.05, **, P<0.01, ***, P<0.001, significativamente
diferente comparado con las células control en hipoxia sin
silibinin. #, P<0.01, comparado con el tratamiento
Silibinin_{250}.
Fig. 6. Efecto del silibinin sobre la
proliferación y la apoptosis de las células tumorales HeLa y
Hep3B. A, Las células fueron incubadas en hipoxia (2% de
O_{2}) con concentraciones crecientes de silibinin (0, 50, 100,
250 o 500 \mumol/L) por los tiempos indicados. Las células viables
fueron cuantificadas fluorimétricamente mediante la conversión de
resazurin a resorufin, como se describe en Materiales y Métodos. B,
Las células fueron incubadas durante 8 h como en A, y la apoptosis
fue cuantificada midiendo las actividades de
caspase-3 y -7 con un análisis luminescente, usando
staurosporina como control positivo (Staur, 500 nmol/L). Las barras
representan la media \pm SE. *, P<0.05, **, P<0.01, ***,
P<0.001, significativamente diferentes comparadas con el control
no tratado a cada tiempo.
Fig. 7. Efecto de silibinin sobre la
señalización de mTOR y la fosforilación de Akt en la línea celular
AGS de cáncer gastrointestinal. Las células AGS fueron
cultivadas en hipoxia (2% de O_{2}) durante 3 h en presencia de
las concentraciones indicadas de silibinin (Sili). El carril 1
muestra los niveles basales en normoxia de las proteínas bajo
estudio. Las proteínas que se indican fueron detectadas por
inmunoblot usando los anticuerpos específicos descritos en
Materiales y Métodos.
Fig. 8. Efecto de silibinin sobre la
señalización de mTOR y la fosforilación de Akt en la línea celular
PC-3 de cáncer de próstata. Las células
PC-3 fueron cultivadas en hipoxia (1.5% de O_{2})
durante 3 h en presencia de las concentraciones indicadas de
silibinin (Sili). El carril 1 muestra los niveles basales en
normoxia de las proteínas bajo estudio. Las proteínas que se indican
fueron detectadas por inmunoblot usando los anticuerpos específicos
descritos en Materiales y Métodos.
Cultivos celulares y reactivos. Células
humanas de adenocarcinoma cervical (HeLa) y de carcinoma
hepatocelular (Hep3B) se obtuvieron de la Colección Americana de
Cultivos Tipo (ATCC, Barcelona, Spain) y cultivadas en DMEM o MEM
(Sigma, St. Louis, MO), respectivamente. Las células CHO Ka13.5
deficientes en HIF-1\alpha se crecieron en una
mezcla nutritiva Ham's F-12 (Invitrogen, Bacelona,
Spain). Los medios de cultivo fueron suplementados con un 10% de FBS
inactivado (Sigma) y penicilina (100 IU/ml)/estreptomicina (100
\mug/ml), y las células fueron crecidas a 37ºC en un incubador
humificado conteniendo un 5% de CO_{2}. Para la exposición a
hipoxia las células fueron incubadas a 37ºC en una cámara de hipoxia
humificada (COY Labs., Grasslake, MI), insuflada con una mezcla de
5% CO_{2}/95% N_{2} (Air-Liquide, Madrid, Spain)
y equipada con un regulador de O_{2} para obtener la concentración
deseada de O_{2} (21-0.1%). Todos los tratamientos
celulares se llevaron a cabo en un medio de crecimiento conteniendo
3% FBS y sin antibióticos. Silibinin, ciclohexamida, estaurosporina
y
Z-Leu-Leu-Leu-al
(MG132) se compraron a Sigma. Dimetiloxalil glicina (DMOG) se compró
en Alexis Biochemicals (Lausen, Switzerland).
HIF-1\alpha y HIF-1\beta fueron
de BD Transduction Laboratories (BD Biosciences, Madrid, Spain).
LY294002, rapamicina y los anticuerpos contra
fosfo-Akt (Ser473), fosfo-mTOR
(Ser2448), fosfo-p70S6 quinasa (Thr389),
fosfo-proteína ribosomal S6 (Ser235/236) y
fosfo-4E-BP1 (Ser65) fueron de Cell
Signaling Technology (Beverly, MA). Anti-actina se
obtuvo de Sigma.
Extractos celulares e inmunoblotting. Las
células fueron sembradas en placas de cultivo de 60 mm y se las
permitió adherirse por 24 horas. Inmediatamente después de los
tratamientos, las células fueron lavadas con PBS frío y se
recuperaron mediante raspado en 1-ml de PBS frío
suplementado con un cóctel de inhibidores de proteasas (Roche
Diagnostics, Barcelona, Spain). Los pellets celulares fueron
homogeneizados en 50 \mul de buffer de lisis compuesto por un
reactivo de extracción de proteínas CytoBuster™ (Novagen)
suplementado con cocteles de inhibidores de proteasas (Roche) y
fosfatasas (Sigma). Tras la incubación en hielo (15 min), los
lisados fueron agitados y centrifugados (16,000 x g, 10 min, 4ºC), y
los sobrenadantes recolectados como extractos celulares totales. La
concentración de proteínas se determinó por el ensayo de proteínas
de BCA (Pierce). Los extractos celulares (40-80
\mug de proteínas) se separaron por SDS-PAGE y
fueron transferidos a membranas de nitrocelulosa, y el inmunoblot se
llevó acabo como se ha descrito previamente. Cuando se requirió, la
intensidad de las bandas fue cuantificada con el software Quantity
One v4.6 (Bio-Rad, Hercules, CA).
Construcción de los plásmidos. El cDNA
del HIF-1\alpha humano (GenBank accession U22431;
SEQ ID NO: 1) fue obtenido del ATCC
(pCEP4/HIF-1\alpha). Subclonamos la región
codificante completa de HIF-1\alpha dentro del
vector de expresión pcDNA4/HisMax (Invitrogen) por PCR usando Pfu
DNA polimerasa (Stratagene). Los primeros fueron diseñados para
contener los sitios de restricción para BamHI y NotI
en las terminaciones 5'y 3', respectivamente. Se usaron los primers
SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3 El producto de PCR amplificado fue
purificado (QIAquick PCR Purification Kit, Qiagen, Valencia, CA),
digerido con BamHI y NotI, y ligado dentro de
pcDNA4/HisMax previamente digerido con las mismas enzimas de
restricción. La construcción resultante,
pcDNA4/HisMax-HIF-1\alpha, fue
amplificada y purificada (Qiagen). El doble mutante
HIF-1\alpha P402A/P564A fue generado por
mutagénesis dirigida secuencial (QuickChange II, Stratagene) usando
como patrón
pcDNA4/HisMax-HIF-1\alpha. Los
oligonucleótidos mutagénicos fueron, para la mutación P402A SEQ ID
NO: 4 y SEQ ID NO: 5; para la mutación P564A, SEQ ID NO: 6 y SEQ ID
NO: 7). Este mutante de HIF-1\alpha no es
susceptible a la hidroxilación por las
prolil-4-hidroxilasas y a la
subsiguiente degradación. La integridad de las construcciones fue
confirmada por secuenciación del ADN. El plásmido reportero
p9HIF1-Luc, conteniendo nueve copias en tándem del
elemento de respuesta a hipoxia (HRE) del gen promotor humano VEGF
fue donado por el Dr. Manuel O. Landázuri (Servicio de Inmunología,
Hospital de la Princesa, Universidad Autonoma de Madrid, Spain).
Transfección transitoria y ensayo reportero
de luciferasa dependiente de HRE. La transfección transitoria de
las células CHO Ka13.5 se llevó acabo en placas de cultivo de 60 mm
usando Lipofectamine2000 (Invitrogen) y 1 \mug del plásmido de DNA
(HIF-1\alpha tipo silvestre,
P402A/P564A-HIF-1\alpha, o el
vector vacío). Para el ensayo reportero de luciferasa, las células
fueron cultivadas en placas de 24 pocillos y transfectadas con 0,3
\mug por pocillo del plásmido reportero p9HIF1-Luc
usando el agente de transfección FuGENE 6 (Roche) de acuerdo con las
instrucciones del fabricante. Tras 24 horas, el medio fue remplazado
y las células fueron incubadas durante 6-8 horas con
la droga y las concentraciones de O_{2} indicadas. La eficiencia
de transfección fue monitorizada por cotransfección con 0.1 \mug
del plásmido control pRL-TK (Promega) portando el
gen de Renilla luciferasa. Las actividades de firefly y
Renilla luciferasa fueron ensayadas usando el
Dual-Glo Luciferase Assay System (Promega), y la
actividad firefly Iuciferasa fue normalizada a la actividad de
Renilla luciferasa.
Cuantificación de VEGF. La concentración
de VEGF humano en el medio celular condicionado fue medida con un
kit ELISA (Pierce). Las células fueron sembradas en placas de 6
pocillos y cultivadas hasta alcanzar un 80-90% de
confluencia. El medio fue remplazado y los cultivos fueron tratados
como se indica. El VEGF secretado se cuantificó después de 12 h en
el medio extracelular (50 \mul). Los resultados fueron
normalizados respecto a la cantidad de proteína total por
pocillo.
RT-PCR. El RNA total fue aislado
de las células tumorales usando el RNeasy Mini kit (Qiagen) y 0.5
\mug fueron transcritos reversamente con 50 U SuperScriptTM II
reverse transcriptase (Invitrogen), usando un primer oligo-(dT) de
acuerdo con el protocolo del fabricante. El cDNA fue amplificado por
PCR usando los siguientes sets de primers: para
HIF-1 \alpha humano: SEQ ID NO: 8 y SEQ ID NO: 9
(GenBank NM_001530); la
gliceraldehido-3-fosfato
deshidrogenasa humana (GAPDH), SEQ ID NO: 10 y SEQ ID NO: 11
(GenBank NM_002046). Las condiciones de PCR fueron establecidas en
experimentos piloto para asegurar la linearidad de las tasas de
reacción. La GAPDH fue usada como el estandar interno. Los productos
de PCR fueron separados en geles de1,5% de agarosa y visualizados
por tinción con bromuro de etidio. Los geles fueron fotografiados
usando un analizador de imagen Gel DOC 2000
(Bio-Rad).
Proliferación celular y apoptosis. La
proliferación celular fue estudiada con el ensayo fluorimétrico
Cell-Blue® Cell Viability Assay (Promega), que
explota la habilidad del indicador resazurin para medir la capacidad
metabólica, una indicación de la viabilidad celular. Para medir la
apoptosis usamos el ensayo luminiscente Caspase-Glo®
3/7 Assay (Promega), que mide la actividad de
caspasas-3 y -7. Ambos ensayos se llevaron a cabo en
placas de 96 pocillos de acuerdo a las recomendaciones del
fabricante.
Análisis estadístico. Donde se indica,
los datos experimentales fueron analizados usando el software de
Prism™ GraphPad (versión 4.0). Las diferencias significativas fueron
determinadas por la prueba de t de Student (con dos colas) y los
valores de P inferiores a 0.05 fueron considerados
significativos.
A continuación se ilustrará la invención
mediante unos ensayos realizados por los inventores, que pone de
manifiesto la especificidad y efectividad del uso combinado del
silibinin y de inhibidores de la vía PI3K/Akt para el tratamiento
del cáncer, en especial, aquellos tipos de cáncer en los que el
silibinin activa indirectamente la vía PI3K/Akt.
Para examinar el efecto del silibinin sobre la
expresión de las proteínas HIF-1\alpha y
HIF-1\beta, primero se realizaron experimentos de
inmunoblot en función del tiempo. La hipoxia indujo una acumulación
de proteína HIF-1\alpha dependiente del tiempo en
células tumorales HeLa y Hep3B que fue perceptible después de 1 h.
Silibinin inhibió la acumulación de HIF-1\alpha
(Fig. 1A), y esta inhibición fue completa dentro de la primera hora
de tratamiento con silibinin en ambos tipos celulares, y persistió
mientras la droga estuvo presente en el medio (por lo menos hasta 16
h, datos no mostrados). En cambio, el silibinin no alteró los
niveles de proteína de HIF-1\beta (Fig. 1A).
Los experimentos dosis-respuesta
mostraron que la disminución de la expresión de la proteína
HIF-1\alpha producida por silibinin fue
dosis-dependiente (Fig. 1B), demostrando una
potencia comparable en las células HeLa y Hep3B (IC_{50} \sim150
\mumol/L). De manera semejante, el silibinin abrogó totalmente la
acumulación de HIF-1\alpha inducida por el
inhibidor DMOG (Fig. 1B), un agente hipóxico mimético bien
caracterizado. Consistente con la inhibición de la acumulación de
HIF-1\alpha, el silibinin también produjo la
inhibición dosis-dependiente de la actividad
transcripcional de HIF-1 en células expuestas a
hipoxia ó tratadas con DMOG, según se determinó usando una
construcción reportera de la respuesta a hipoxia (Fig. 1C).
Para investigar si el efecto inhibitorio del
silibinin sobre la acumulación de HIF-1\alpha era
dependiente de la severidad de la hipoxia celular, sometimos las
células HeLa y Hep3B a hipoxia cada vez mayor en presencia o
ausencia de silibinin. HIF-1\alpha comenzó a
estabilizarse en concentraciones de O_{2} del 6%, con la
acumulación aumentando marcadamente conforme el O_{2} disminuye
hasta alcanzar una hipoxia severa (0.1% O_{2}). Silibinin previno
la acumulación de HIF-1\alpha en todas las
concentraciones O_{2} probadas, demostrando su capacidad de
inhibir HIF-1\alpha en cualquier grado de hipoxia
celular (Fig. 1D).
HIF-1\alpha se degrada
principalmente mediante el sistema ubiquitin/proteasoma tras la
hidroxilación de las prolinas 402 y 564 por las
prolil-hidroxilasas específicas de
HIF-1\alpha. Para testar la posibilidad de que
silibinin inhiba la acumulación de HIF-1\alpha
promoviendo su degradación y/o reduciendo la vida media de la
proteína, se emplearon diversas estrategias experimentales. Primero
se realizaron experimentos de reoxigenación. Las células fueron
expuestas a hipoxia, y el silibinin o el vehículo fue agregados
durante los últimos 15 minutos de incubación hipóxica. Al final de
la incubación hipóxica (tiempo 0) las células fueron expuestas a
normoxia, e incubadas por períodos crecientes hasta alcanzar los 30
min. Bajo estas condiciones, los niveles de
HIF-1\alpha reflejarían principalmente la tasa de
degradación de HIF-1\alpha. Aunque la acumulación
de HIF-1\alpha fue levemente menor en células
tratadas con silibinin, los índices de degradación de
HIF-1\alpha en células no tratadas y tratadas
fueron muy similares, con valores de vida media de la proteína de
13.5\pm1.2 y 10.5\pm1.0 min, respectivamente (Fig. 2A).
En una segunda aproximación experimental, se
probó el efecto del silibinin sobre la estabilidad del doble mutante
de prolina P402A/P564A de HIF-1\alpha
(P402A/P564A-HIF-1\alpha), que no
puede ser hidroxilado por las prolil-hidroxilasas y
se acumula en las células de manera independiente del O_{2}. Para
evitar la interferencia del HIF-1\alpha endógeno,
las construcciones
P402A/P564A-HIF-1\alpha o
HIF-1\alpha salvaje se expresaron en células
deficientes en HIF-1\alpha CHO Ka13.5. Silibinin
fue igualmente potente en la prevención de la acumulación del
HIF-1\alpha salvaje y del mutante
P402A/P564A-HIF-1\alpha (Fig. 2B),
por lo tanto eliminando la posibilidad de que las
prolil-hidroxilasas de HIF-1 estén
implicada en el efecto del silibinin. Resultados similares fueron
obtenidos en las células HeLa. Juntos, estos resultados demuestran
que el silibinin no afecta a la degradación de la proteína de
HIF-1\alpha.
La carencia de efecto sobre la degradación de
HIF-1\alpha indicó la posibilidad que el silibinin
puede reducir la tasa de producción de
HIF-1\alpha. El análisis por
RT-PCR reveló que los niveles de mRNA de
HIF-1\alpha seguían sin ser afectados por el
tratamiento con el silibinin en normoxia e hipoxia (2 ó 4h) (Fig.
2C), indicando así que el silibinin no afecta a la acumulación del
mRNA de HIF-1\alpha.
Para examinar si la inhibición de la acumulación
de HIF-1\alpha mediada por silibinin fue debida a
la reducción de la síntesis de la proteína
HIF-1\alpha, se empleó el inhibidor del proteasoma
MG132 para prevenir la degradación
ubiquitin-dependiente de
HIF-1\alpha. El tratamiento de células con MG132
dio lugar a una pronunciada acumulación de especies de proteínas de
alto peso molecular de HIF-1\alpha - ubiquitinada,
en normoxia y en hipoxia (el panel superior de la Fig. 2.a, carriles
2 y 6). Por el contrario, la inhibición de la síntesis de proteínas
con ciclohexamida previno totalmente la acumulación de
HIF-1\alpha ubiquitinada en presencia de MG132
(carriles 3 y 7). De manera similar, la adición de silibinin en
presencia de MG132 dio lugar a una reducción substancial de
HIF-1\alpha- ubiquitinada, en normoxia e hipoxia
(carriles 4 y 8), sugiriendo interferencia con la maquinaria de
síntesis de la proteína. Además, el silibinin mimetizó el efecto
inhibitorio de la ciclohexamida sobre la acumulación de
HIF-1\alpha en las células que fueron incubadas
con estas drogas bajo hipoxia por períodos crecientes (el panel
inferior de la Fig. 2.a,). Estos resultados indican que el silibinin
disminuye la traducción de HIF-1\alpha.
\vskip1.000000\baselineskip
La vía PI3K/Akt/mTOR se ha implicado en la
regulación de la expresión de la proteína
HIF-1\alpha, predominantemente a nivel de su
traducción. Por otra parte, evidencias recientes indican que la
hipoxia causa la defosforilización y la represión de mTOR, dando
como resultado una disminución de la tasa de síntesis de
HIF-1\alpha. Para ver si el silibinin inhibe la
síntesis de la proteína HIF-1\alpha en hipoxia a
través de la regulación de la vía
mTOR/p70S6K/4E-BP1, medimos el estado de
fosforilación del mTOR y de sus efectores p70S6K, rpS6 y
4E-BP1, así como el de Akt. El tratamiento de las
células HeLa y Hep3B con silibinin bajo condiciones hipóxicas
produjo una defosforilización dosis-dependiente de
mTOR en la Ser^{2448}, que se correlacionó con la inhibición de la
fosforilación de p70S6K, de rpS6 y de 4E-BP1, y con
la reducción de la acumulación de HIF-1\alpha en
ambos tipos de líneas celulares tumorales
(Fig. 3A).
(Fig. 3A).
También se encontró que de manera concomitante
con la inhibición de la expresión de HIF-1\alpha y
de la vía mTOR en células HeLa y Hep3B, el silibinin produjo la
activación de Akt, como indica el incremento de la fosforilación de
Akt en Ser^{473} (Fig. 3A). Se observó que el inhibidor de mTOR
rapamicina indujo un aumento pronunciado en p-Akt
similar al observado con el silibinin, bajo condiciones normóxicas e
hipóxicas (Fig. 3B). Notablemente, observamos una respuesta
diferenciada entre las células HeLa y Hep3B con respecto al efecto
del silibinin sobre Akt. Mientras en las células HeLa la
fosforilación de Akt aumentó progresivamente con el aumento de la
concentración del silibinin, en células Hep3B la inducción de Akt se
invirtió a la dosis más alta (500 \mumol/L) y la fosforilación de
Akt volvió a los niveles basales (Fig. 3A).
Esta diferencia a dosis elevadas de silibinin no
tuvo ninguna implicación para la inhibición de
HIF-1\alpha, que continuó siendo máxima en ambas
variedades de células. La activación de p-Akt por el
silibinin requirió la actividad de su regulador aguas arriba PI3K,
puesto que el inhibidor LY294002 de PI3K bloqueó la fosforilación de
Akt inducida por silibinin (Fig. 3B, el panel derecho, y Fig. 3C).
Por otra parte, se encontró que LY294002 acentuó la inhibición de la
expresión de HIF-1\alpha mediada por silibinin,
así como la represión de la vía mTOR (reflejado por la pérdida de
p-p70S6K) (Fig. 3C). Para investigar mejor el efecto
del silibinin sobre mTOR y la señalización de Akt en lo referente a
la inhibición de la expresión de HIF-1\alpha, se
expusieron las células HeLa y Hep3B a hipoxia y posteriormente
fueron tratadas con silibinin durante los últimos 10 a 60 minutos de
incubación hipóxica. El silibinin indujo una inhibición rápida y
potente de la acumulación de HIF-1\alpha que
alcanzó el 70-80% en células Hep3B a los 10 min tras
el tratamiento y fue completa tras 60 min (Fig. 4). En células HeLa,
la inhibición del 70-80% se alcanzó a los 20 minutos
de tratamiento y fue también completa hacia el minuto 60. En ambos
tipos de células, la defosforilización de mTOR inducida por
silibinin y sus efectores se detectaron en el plazo de
10-20 minutos del tratamiento bajo condiciones
hipóxicas, y dio lugar a la pérdida total de
p-p70S6K después de 20-30 minutos
(Fig. 4). De manera similar, hubo una reducción paralela de
p-rpS6 que fue casi completa después de 1 h de
tratamiento. Es significativo que la disminución en
p-4E-BP1 fue más rápida y más
pronunciada en células Hep3B que en HeLa, probablemente debido a la
presencia de niveles basales más elevados de
p-4E-BP1 en células HeLa.
Consistente con los experimentos
dosis-respuesta, el nivel de p-Akt
en células HeLa se incrementó tras la exposición durante 20 minutos
al silibinin (500 \mumol/L), mientras que disminuyó por debajo de
niveles basales en células Hep3B. Notablemente, la inhibición de la
acumulación de HIF-1\alpha fue revertida
rápidamente después de dos cambios del medio para eliminar el
silibinin de las células. Esta reversión fue evidente después de 30
minutos y fue completa después de 60 minutos bajo la misma atmósfera
hipóxica (Fig. 4, carriles 7 y 8). Asimismo, tras la eliminación del
silibinin, todas las fosfo-proteínas analizadas
volvieron a sus niveles basales de fosforilación. Estos resultados
sugieren que la reducción de la vía
mTOR/p70S6K/4E-BP1 está implicada en la inhibición
de la traducción de la proteína de HIF-1\alpha por
el silibinin.
Silibinin ha demostrado características
anti-angiogénicas en varios modelos experimentales.
Puesto que HIF-1 es el regulador principal de VEGF
en hipoxia, se analizó el efecto del silibinin sobre la producción
de VEGF in vitro. Comparado con normoxia, la exposición de
las células HeLa o Hep3B a hipoxia durante 12 h produjo un aumento
de 2-3 veces de la secreción de VEGF al medio
extracelular. Silibinin inhibió de manera
dosis-dependiente la liberación de VEGF inducida por
hipoxia en ambas líneas celulares: 250 \mumol/L de silibinin
produjo una inhibición del \sim25% en células HeLa y una
inhibición del \sim40% en células Hep3B, mientras que con 500
\mumol/L la inhibición alcanzó más del 90% en ambos tipos
celulares (Fig. 5A). No se observaron efectos significativos a
concentraciones más bajas (50 y 100 \mumol/L).
También se examinó el efecto del silibinin en la
liberación de VEGF inducida por hipoxia en comparación y en
combinación con inhibidores de PI3K/Akt o de mTOR. El inhibidor de
PI3K/Akt LY294002 (10 \mumol/L) produjo una inhibición de la
liberación de VEGF (el \sim30%) similar a la inducida por una
dosis submáxima de silibinin (250 \mumol/L), mientras que el
inhibidor de mTOR rapamicina (20 nmol/L) produjo una inhibición
débil del \sim15% (Fig. 5B). Interesantemente, el tratamiento
combinado con estas dosis de silibinin y LY294002 dio lugar a un
efecto sinérgico, reduciendo la liberación de VEGF cerca de los
niveles control en normoxia. En cambio, el tratamiento combinado del
silibinin y la rapamicina no produjeron ningún efecto aditivo. A la
dosis máxima de silibinin (500 \mumol/L), la inhibición de la
liberación de VEGF inducida por hipoxia fue superior al 90% con
independencia de la presencia de inhibidores adicionales.
El examen del efecto del silibinin sobre la
proliferación de las células tumorales HeLa y Hep3B reveló una
inhibición dosis-dependiente en ambas líneas
celulares que fue evidente después del tratamiento durante 2 h y
aumentó con el tiempo de incubación (Fig. 6A). Comparado con los
controles, el tratamiento de células HeLa con silibinin durante 2 a
8 h bajo condiciones hipóxicas dio lugar a reducciones en el número
total de células que fue desde el 35% (2 h) hasta el 45% (8 h) con
250 \mumol/L, y de un 60-75% durante el mismo
período con 500 \mumol/L. No hubo diferencias significativas con
50 \mumol/L, y solamente una inhibición débil del \sim10% con
100 \mumol/L tras 8 h. Tras un tratamiento similar de las células
Hep3B se inhibió el crecimiento en un 5-15% con 50
\mumol/L, 15-25% con 100 \mumol/L,
20-45% con 250 \mumol/L, y 40-72%
con 500 \mumol/L. En normoxia, silbinin produjo un efecto
inhibitorio idéntico sobre el crecimiento celular (datos no
mostrados).
<110> Fundación Centro Nacional de
Investigaciones Cardiovasculares Carlos III (CNIC)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Composición que comprende silibinin
y un inhibidor de la vía PI3\kappa/Akt para el tratamiento del
cáncer
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> ES1997.2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn versión 3.4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 3678
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cebador
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 41
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cebador
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cebador (oligonucleótido
mutagénico)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cebador (oligonucleótido
mutagénico)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cebador (oligonucleótido
mutagénico)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 35
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cebador (oligonucleótido
mutagénico)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cebador
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cebador
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cebador
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\hskip1cm
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> cebador
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\hskip1cm
Claims (11)
1. Composición que comprende silibinin y un
inhibidor de la vía PI3K/Akt.
2. Composición según la reivindicación anterior
para su uso como medicamento.
3. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones 1-2, donde el inhibidor de la vía
PI3K/Akt se selecciona de la lista que comprende: LY294002,
Wortmannin, Triciribine (API-2,
NSC-154020, TCN, Akt inhibitor V),
A-443654, KP372-1, Akt Inhibitor II
(SH-5), Akt Inhibitor III (SH-6),
Akt Inhibitor IV, Akt Inhibitor VIII
(Isozyme-Selective, Akti-1/2), Akt
Inhibitor X.
4. Composición según cualquiera de las
reivindicaciones 1-3. donde el inhibidor de la vía
PI3K/Akt es LY294002.
5. Uso de la composición según cualquiera de las
reivindicaciones 1-4, para la elaboración de un
medicamento para el tratamiento del cáncer.
6. Uso de la composición según la reivindicación
anterior donde el cáncer se selecciona de la lista que comprende:
cáncer cervical, cáncer gastrointestinal o cáncer hepático.
7. Uso de la composición según la reivindicación
5 donde el cáncer es cáncer cervical.
8. Preparación combinada de, al menos, silibinin
y un inhibidor de la ruta PI3K/Akt para su uso por separado,
simultáneo ó secuencial en el tratamiento del cáncer.
9. Uso de una preparación combinada de al menos,
silibinin y un inhibidor de la ruta PI3K/Akt por separado, de manera
simultánea o secuencial en la elaboración de un medicamento para el
tratamiento del cáncer.
10. Uso de una preparación según cualquiera de
las reivindicaciones 8-9, donde el cáncer se
selecciona de la lista que comprende: cáncer cervical, cáncer
gastrointestinal o cáncer hepático.
11. Uso de una preparación según la
reivindicación 10, donde el cáncer es cáncer cervical.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES200802800A ES2345587B1 (es) | 2008-10-02 | 2008-10-02 | Composicion que comprende silibinin y un inhibidor de la via p13k/aktpara el tratamiento del cancer. |
PCT/ES2009/070415 WO2010037892A1 (es) | 2008-10-02 | 2009-10-02 | Composición que comprende silibinin a determinadas concentraciones y preparación combinada que comprende silibinin y un inhibidor de la vía pi3k/akt para el tratamiento del cáncer |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES200802800A ES2345587B1 (es) | 2008-10-02 | 2008-10-02 | Composicion que comprende silibinin y un inhibidor de la via p13k/aktpara el tratamiento del cancer. |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2345587A1 ES2345587A1 (es) | 2010-09-27 |
ES2345587B1 true ES2345587B1 (es) | 2011-09-15 |
Family
ID=42073025
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES200802800A Withdrawn - After Issue ES2345587B1 (es) | 2008-10-02 | 2008-10-02 | Composicion que comprende silibinin y un inhibidor de la via p13k/aktpara el tratamiento del cancer. |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
ES (1) | ES2345587B1 (es) |
WO (1) | WO2010037892A1 (es) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102942551A (zh) * | 2012-12-04 | 2013-02-27 | 贵阳医学院 | 含有3-硝基丙酰基的黄烷醇和含其的药物组合物及其在制药中的应用 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6699900B2 (en) * | 2001-04-07 | 2004-03-02 | Jan E. Zielinski | Hydrophilic and lipophilic silibinin pro-forms |
-
2008
- 2008-10-02 ES ES200802800A patent/ES2345587B1/es not_active Withdrawn - After Issue
-
2009
- 2009-10-02 WO PCT/ES2009/070415 patent/WO2010037892A1/es active Application Filing
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
CHEN et al. "{}Silibinin inhibits cell invasion through inactivation of both PI3K-Akt and MAPK signaling pathways"{}. CHEMICO-BIOLOGICAL INTERACTIONS. 20.10.2005. Vol. 156, N$^{o}$ 2-3, páginas 141-150. ISSN 0009-2797. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2345587A1 (es) | 2010-09-27 |
WO2010037892A1 (es) | 2010-04-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2609767T3 (es) | Combinaciones de un inhibidor de PI3K y un inhibidor de MEK | |
Odeh et al. | Synergistic effect of thymoquinone and melatonin against breast cancer implanted in mice | |
Chun et al. | Platycodin D inhibits migration, invasion, and growth of MDA-MB-231 human breast cancer cells via suppression of EGFR-mediated Akt and MAPK pathways | |
Pan et al. | Nitidine chloride inhibits breast cancer cells migration and invasion by suppressing c-Src/FAK associated signaling pathway | |
ES2733929T3 (es) | Una combinación farmacéutica para el tratamiento del melanoma | |
AU2005300727B2 (en) | Use of Pirlindole for the treatment of diseases which are characterized by proliferation of T-lymphocytes and/or hyperproliferation of keratinocytes in particular atopic dermatitis and psoriasis | |
AU2014244053B2 (en) | Treatment of a diastolic cardiac dysfunction with a TRPV2 receptor agonist | |
Xue et al. | Caveolin-1 alleviates lipid accumulation in NAFLD associated with promoting autophagy by inhibiting the Akt/mTOR pathway | |
WO2016173435A1 (zh) | 吡咯喹啉醌、其衍生物和/或盐新的药用用途以及药用组合物 | |
Yu et al. | AMPK activation by ozone therapy inhibits tissue factor-triggered intestinal ischemia and ameliorates chemotherapeutic enteritis | |
WO2021134010A1 (en) | Methods of normalizing aberrant glycolytic metabolism in cancer cells | |
ES2312588T3 (es) | Regulacion de la secrecion del jugo pancreatico que comprende un agente de regulacion del receptor del lpa. | |
Hirasaka et al. | Dietary supplementation with isoflavones prevents muscle wasting in tumor-bearing mice | |
US20190282541A1 (en) | Use of eribulin and histone deacetylase inhibitors in the treatment of cancer | |
ES2345587B1 (es) | Composicion que comprende silibinin y un inhibidor de la via p13k/aktpara el tratamiento del cancer. | |
Gu et al. | Oral administration of pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) inhibits VEGF expression, tumor angiogenesis, and growth of breast cancer in female mice | |
ES2323309T3 (es) | Uso de n-(3-metoxi-5-metilpirazin-2-il)-2-(4-(1,3,4-oxadiazol-2-il)fenil)piridina-3-sulfonamida en el tratamiento de cancer. | |
ES2754034T3 (es) | Combinación para el tratamiento de cáncer | |
JP2016520662A (ja) | Pi3k阻害剤および微小管不安定化剤の医薬組み合わせ | |
WO2001058445A1 (es) | Terapia con cannabinoides para el tratamiento de tumores cerebrales | |
WO2019002542A1 (en) | COMBINATION OF AN INHIBITOR OF MPS1 AND A TAXANE COMPOUND, USES THEREOF AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS COMPRISING SAME | |
Ye et al. | Effect of proteasome inhibitor on NF-κB and MMP-9 expression in synovial tissues of osteoarthritis rats | |
CN104902901A (zh) | 使用cbp/连环蛋白的抑制剂治疗过度增殖性和癌前皮肤病 | |
US11376247B2 (en) | Tyrosine kinase inhibitors regenerate non-cancerous tissue after cancer therapy | |
WO2021053618A1 (en) | Treatment comprising fxr agonists |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
EC2A | Search report published |
Date of ref document: 20100927 Kind code of ref document: A1 |
|
FG2A | Definitive protection |
Ref document number: 2345587 Country of ref document: ES Kind code of ref document: B1 Effective date: 20110915 |
|
FA2A | Application withdrawn |
Effective date: 20120216 |