ES2343881A1 - Bucket, installation and procedure for the measurement of total coliforms and escherichia coli based on optical detection for applications decontrol of water quality (Machine-translation by Google Translate, not legally binding) - Google Patents

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Miquel Pujadas Escorihuela
Jordi Cros Herrero
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    • C12MAPPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00Apparatus for enzymology or microbiology
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    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/01Arrangements or apparatus for facilitating the optical investigation
    • G01N21/03Cuvette constructions

Abstract

Cuvette, installation and procedure for the measurement of total coliforms and escherichia coli based on optical detection for water quality control applications. The invention relates to an installation (100) and method for the measurement of total coliforms and escherichia coli based on optical detection for water quality control applications, using a cuvette (1) provided with agitator means (5) and optical means (7) for measuring physical-chemical parameters of the liquid content to measure the absorbance and fluorescence of a water sample mixed with a liquid reagent and thus determine the concentration of total coliforms and escherichia coli present in the water sample. The procedure also includes steps before and after the disinfection and rinsing measurement of the installation to avoid contamination between measurements. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Description

Cubeta, instalación y procedimiento para la medida de coliformes totales y Escherichia coli basado en detección óptica para aplicaciones de control de calidad de aguas.Cuvette, installation and procedure for measuring total coliforms and Escherichia coli based on optical detection for water quality control applications.

Sector técnico de la invenciónTechnical sector of the invention

La invención tiene por objetivo un dispositivo y un procedimiento para la medida de coliformes totales y Escherichia coli basado en detección óptica para aplicaciones de control de calidad de aguas.The invention aims at a device and a method for measuring total coliforms and Escherichia coli based on optical detection for water quality control applications.

Antecedentes de la invenciónBackground of the invention

La detección de la presencia de coliformes totales y específicamente de Escherichia coli (E. coli) es esencial para el control de aguas, tanto potable como de baño.The detection of the presence of total coliforms and specifically Escherichia coli ( E. coli ) is essential for the control of water, both drinking and bathing.

La Directiva 2006/7/CE clasifica la calidad de las aguas de baño en insuficiente, buena y excelente en función de varios parámetros, adquiriendo especial importancia la determinación de E. coli.Directive 2006/7 / EC classifies the quality of bathing water as insufficient, good and excellent according to several parameters, the determination of E. coli becoming particularly important.

Por otro lado, el RD1620/2007 de reutilización de aguas de baño obliga al control de E. coli definiendo según la concentración de ésta y otros parámetros microbiológicos el uso que se puede dar al agua obtenida.On the other hand, RD1620 / 2007 for the reuse of bathing water requires the control of E. coli, defining according to the concentration of this and other microbiological parameters the use that can be given to the water obtained.

Para efectuar la determinación de la medida de coliformes totales y E. coli, son conocidos medios marcadores que permiten la detección de la presencia o ausencia, tanto de coliformes totales como E. coli, como por ejemplo el descrito en la patente EP1403378. Dicho medio al mezclarse con una muestra líquida que pudiera contener coliformes y/o E. coli permite, tras un periodo de incubación, constatar visualmente la presencia tanto de coliformes totales como de E. coli mediante la observación de cambios en la coloración de la mezcla. La presencia de coliformes totales se constata por un cambio en la coloración de la muestra mientras que la presencia de E. coli se constata por fluorescencia de la muestra al ser excitada mediante luz ultravioleta.To determine the measurement of total coliforms and E. coli , marker means are known that allow the detection of the presence or absence of both total coliforms and E. coli , such as that described in EP1403378. Said medium when mixed with a liquid sample that could contain coliforms and / or E. coli allows, after an incubation period, to visually verify the presence of both total coliforms and E. coli by observing changes in the color of the mixture . The presence of total coliforms is verified by a change in the color of the sample while the presence of E. coli is confirmed by fluorescence of the sample when excited by ultraviolet light.

Es conocido el dispostivo descrito en el documento de patente US5518892 para determinar la presencia de coliformes totales y E. coli mediante el medio descrito en la patente EP1403378. Mediante dicho dispositivo se rellenan diferentes recipientes con una disolución de dicho medio con la muestra de agua a analizar y se dejan incubar a una temperatura alrededor de 35º durante 18 horas. Tras este tiempo se determina manualmente el número de muestras que presenta cambio de coloración y fluorescencia, determinándose estadísticamente la cantidad de coliformes totales como de E. coli.The device described in US5518892 is known to determine the presence of total coliforms and E. coli by means described in EP1403378. By means of said device, different containers are filled with a solution of said medium with the sample of water to be analyzed and allowed to incubate at a temperature around 35 ° for 18 hours. After this time, the number of samples that show a change in color and fluorescence is determined manually, the amount of total coliforms being statistically determined as E. coli .

Son conocidos también instalaciones, como la conocida con el nombre comercial de Colilert 3000, que automatizan el proceso descrito anteriormente para determinar la presencia o ausencia de coliformes totales y de E. coli que permiten, tras la introducción en una cubeta de la mezcla de un medio marcador disuelto con la muestra a analizar, realizar una lectura de la densidad óptica pasadas las 18 horas de incubación para determinar la presencia o ausencia de coliformes totales o de E. coli. Dichos dispositivos alternan etapas de medida con etapas de desinfección para evitar la contaminación entre muestras sucesivas.Installations are also known, such as that known under the trade name of Colilert 3000, which automates the process described above to determine the presence or absence of total coliforms and E. coli that allow, after the introduction into a cuvette of the mixture of a Dissolved marker medium with the sample to be analyzed, read the optical density after 18 hours of incubation to determine the presence or absence of total coliforms or E. coli . These devices alternate measurement stages with disinfection stages to avoid contamination between successive samples.

Es un objeto de la presente invención dar a conocer un procedimiento y un sistema que permiten monitorizar simultáneamente la presencia o ausencia tanto de E. coli como de colifomes totales durante el tiempo de incubación para obtener resultados antes de las 18 horas preestablecidas por el medio descrito en la patente EP1403378 y cuantificar la concentración de los mismos sin necesidad de una posterior operación manual.It is an object of the present invention to disclose a method and system that allow simultaneous monitoring of the presence or absence of both E. coli and total colifomes during the incubation time to obtain results before the 18 hours pre-established by the described means. in patent EP1403378 and quantify their concentration without the need for subsequent manual operation.

Explicación de la invenciónExplanation of the invention.

La cubeta para la medida de coliformes totales y Escherichia coli basado en detección óptica para aplicaciones de control de calidad de aguas de la invención es de las que comprenden una entrada de llenado y una salida de rebose en su parte superior, y una salida de desagüe en su parte inferior, unos medios agitadores de la mezcla líquida contenida, un sensor de temperatura dispuesto en su interior y unos medios ópticos de medición de parámetros físico-químicos del líquido contenido dispuestos en el exterior de dicha cubeta y formados al menos por un elemento emisor óptico y un correspondiente elemento receptor óptico.The cuvette for measuring total coliforms and Escherichia coli based on optical detection for water quality control applications of the invention are those comprising a filling inlet and an overflow outlet in its upper part, and a drain outlet in its lower part, stirring means of the contained liquid mixture, a temperature sensor disposed therein and optical means for measuring physical-chemical parameters of the contained liquid disposed outside said bowl and formed at least by one element optical transmitter and a corresponding optical receiver element.

La cubeta en esencia se caracteriza porque es transparente al menos en la zona adyacente a dichos medios ópticos de medición, su cuerpo está formado de una sola pieza y desprovisto de juntas y porque los medios agitadores del líquido contenido comprenden un elemento tubular de entrada de aire desde el exterior de la cubeta que penetra en su interior, dotado en su embocadura externa superior de un tamiz para filtrar partículas mayores de 0,2 \mum y de una pluralidad de orificios para favorecer la homogenización del líquido contenido por el efecto del aire expulsado a su través, estando además su extremo inferior abierto y dispuesto a un nivel superior al de los medios ópticos, de forma que dicho elemento tubular no interfiera con los medios ópticos de medición.The bucket is essentially characterized in that it is transparent at least in the area adjacent to said optical means measuring, its body is formed in one piece and devoid of of joints and because the stirring media of the contained liquid they comprise a tubular element of air inlet from the outside of the bucket that penetrates inside, endowed with its mouth upper external of a sieve to filter particles larger than 0.2 \ mum and a plurality of holes to favor the homogenization of the liquid contained by the effect of air ejected through it, with its lower end being open and arranged at a higher level than the optical media, so that said tubular element does not interfere with the optical means of measurement.

En una variante de la invención, la embocadura de la entrada de llenado se encuentra a un nivel por encima de la embocadura de la salida de rebose.In a variant of the invention, the mouthpiece of the filling inlet is at a level above the mouth of the overflow outlet.

En otra variante de interés el extremo inferior abierto del elemento tubular está inscrito en un plano de un plano de corte que forma un ángulo de 55º a 65º respecto el eje longitudinal de dicho elemento tubular, favoreciendo la homogenización de la mezcla contenida en la cubeta.In another variant of interest the lower end open the tubular element is inscribed in a plane of a plane of cut that forms an angle of 55º to 65º with respect to the axis longitudinal of said tubular element, favoring the homogenization of the mixture contained in the cuvette.

Según otra característica, el sensor de temperatura está dispuesto en su parte inferior, y genera una señal de información para unos medios calefactores, externos a la cubeta, destinados a mantener el líquido contenido en ésta a una temperatura predeterminada.According to another feature, the sensor temperature is arranged at its bottom, and generates a signal of information for heating means, external to the bucket, intended to keep the liquid contained in it at a temperature default

De acuerdo con otra característica de la invención, los medios ópticos de medición de parámetros físico-químicos comprenden un primer módulo, de medición de la absorbancia, que comprende un primer emisor y un primer receptor; y un segundo módulo, de medición de la fluorescencia, que comprende un segundo emisor y segundo receptor, estando ambos módulos dispuestos en un plano transversal a dicha cubeta.According to another feature of the invention, the optical means of measuring parameters physicochemicals comprise a first module, of absorbance measurement, which comprises a first emitter and a first receiver; and a second module, measuring the fluorescence, which comprises a second emitter and second receiver, both modules being arranged in a transverse plane to said bucket.

De acuerdo con otra característica, el primer receptor y el segundo receptor están dispuestos formando un ángulo de 90º, minimizando la interferencia cruzada que podría haber entre el primer y segundo módulo.According to another feature, the first receiver and the second receiver are arranged at an angle of 90º, minimizing the cross interference that could be between The first and second module.

En una variante de la invención, el primer emisor emite una primera radiación cuya longitud de onda es de 405 nm y el primer receptor está adaptado para la recepción de una radiación con dicha longitud de onda, estando ambos enfrentados y aplicados en lados opuestos de la cubeta y el segundo emisor emite una segunda radiación cuya longitud de onda es de 365 nm y el segundo receptor está adaptado para recibir una radiación de fluorescencia cuya longitud de onda es de 450 nm, estando dicho segundo receptor dispuesto encarado al punto de la cubeta en que incide y se refleja dicha segunda radiación, generándose una fluorescencia debido a la radiación refractada y escapando dicha radiación reflejada a través de una apertura lateral del segundo módulo.In a variant of the invention, the first emitter emits a first radiation whose wavelength is 405 nm and the first receiver is adapted for the reception of a radiation with said wavelength, both facing and applied on opposite sides of the cuvette and the second emitter emits a second radiation whose wavelength is 365 nm and the second receiver is adapted to receive radiation from fluorescence whose wavelength is 450 nm, said being second receiver arranged facing the point of the cuvette in which this second radiation is affected and reflected, generating a fluorescence due to refracted radiation and escaping said radiation reflected through a lateral opening of the second module.

En otra variante, el segundo receptor está provisto de un filtro óptico cuya banda pasante está comprendida entre 430 y 500 nm.In another variant, the second receiver is provided with an optical filter whose through band is comprised between 430 and 500 nm.

Según otra característica de la invención, el segundo emisor está orientado respecto la cubeta de forma que el ángulo que describe la radiación emitida por dicho segundo emisor forma un ángulo de 90º con la radiación reflejada por dicha cubeta.According to another feature of the invention, the second emitter is oriented with respect to the cuvette so that the angle describing the radiation emitted by said second emitter it forms an angle of 90º with the radiation reflected by said bucket.

En otra realización de interés, el primer y segundo módulos están dotados con un respectivo primer y segundo receptores de referencia, orientados para recibir parte de la emisión del primer y segundo emisores a la misma longitud de onda.In another embodiment of interest, the first and second modules are equipped with a respective first and second reference receivers, oriented to receive part of the issuance of the first and second issuers to the same length of wave.

La instalación para la medida de coliformes totales y Escherichia coli basado en detección óptica para aplicaciones de control de calidad de aguas de la invención en esencia se caracteriza porque comprende una cubeta de incubación; un conducto de distribución, conectado por unos medios de unión a la entrada de llenado de la cubeta de incubación y dotado de una pluralidad de conectores; un depósito de desinfectante, conectado a través de una bomba de desinfectante a un conector de desinfectante del conducto de distribución; un depósito de reactivo, conectado a través de una bomba de reactivo a un conector de reactivo del conducto de distribución; una entrada de muestras, conectado a través de una bomba de muestras a un conector de muestras del conducto de distribución; una bomba de desagüe conectada a un conector de desagüe del conducto de distribución; un conducto de desagüe, conectado a la salida de desagüe de la cubeta de incubación; un conducto de rebose, conectado a la salida de rebose de la cubeta de incubación; y unos medios programables de sincronización de los componentes que forman la instala-
ción.
The installation for measuring total coliforms and Escherichia coli based on optical detection for water quality control applications of the invention is essentially characterized in that it comprises an incubation cuvette; a distribution conduit, connected by means of connection to the filling inlet of the incubation tray and provided with a plurality of connectors; a disinfectant tank, connected through a disinfectant pump to a disinfectant connector of the distribution line; a reagent reservoir, connected through a reagent pump to a reagent connector of the distribution line; a sample inlet, connected through a sample pump to a sample connector in the distribution line; a drain pump connected to a drain connector of the distribution line; a drain line, connected to the drain outlet of the incubation tank; an overflow conduit, connected to the overflow outlet of the incubation tray; and programmable means of synchronizing the components that make up the installation
tion.

En una variante de interés, al menos una parte de los medios de unión entre la entrada de llenado de la cubeta y el conducto de distribución está dispuesta a un nivel superior al nivel máximo de llenado de la cubeta, estando dispuesto el conducto de rebose a un nivel superior al nivel máximo de llenado de la cubeta e inferior al de los medios de unión, pudiéndose inyectar una primera cantidad de líquido en el conducto de distribución sin que dicho líquido se trasvase a la cubeta, y tras superar una primera cantidad adicional de líquido correspondiente al volumen de llenado que puede contener la cubeta, que dicho líquido desborde por el conducto de rebose.In a variant of interest, at least one part of the joining means between the filling inlet of the cuvette and the distribution duct is arranged at a level higher than the level maximum filling of the cuvette, the conduit of overflow to a level greater than the maximum level of filling of the bucket e lower than the joining means, being able to inject a first amount of liquid in the distribution line without said liquid is transferred to the bucket, and after exceeding a first amount additional liquid corresponding to the filling volume that can contain the cuvette, which said liquid overflows through the conduit of overflow.

De acuerdo con otra característica, los medios de unión describen un codo en forma de "U" invertida.According to another feature, the media of union describe an inverted "U" shaped elbow.

Según otra característica, la cubeta está contenida en una cámara cuya temperatura está regulada por unos medios calefactores según las mediciones de temperatura del sensor de verificación de temperatura situado en el interior de la cubeta y un sensor de control de la temperatura situado en dicha cámara.According to another feature, the bucket is contained in a chamber whose temperature is regulated by some heating media according to sensor temperature measurements of temperature verification located inside the cuvette and a temperature control sensor located in said chamber.

En otra variante de la invención, el conducto de desagüe se bifurca en dos ramas, dotadas de sendas válvulas de paso conectadas igualmente a los medios programables, que permiten que el líquido evacuado de la cubeta pueda ser dirigido a unos medios de almacenamiento o ser desechado.In another variant of the invention, the conduit of drain forks in two branches, equipped with two way valves also connected to programmable media, which allow the liquid evacuated from the cuvette can be directed to means of Storage or being discarded.

Según otra característica, el conducto de distribución es de cuarzo y comprende unos medios germicidas ópticos dispuestos entre la bomba de reactivo y el conducto de distribución, irradiando dicho conducto de distribución y, en una variante concreta, los medios germicidas comprenden una lámpara ultravioleta.According to another characteristic, the conduit of distribution is quartz and comprises optical germicidal media arranged between the reagent pump and the distribution line, irradiating said distribution conduit and, in a variant concrete, germicidal means comprise a lamp ultraviolet.

El procedimiento para la medida de coliformes totales y Escherichia coli basado en detección óptica para aplicaciones de control de calidad de aguas de la invención se caracteriza porque comprende una operación previa de acondicionamiento de la cubeta, una operación de llenado de la cubeta con mezcla y una operación de medición en la que se somete la mezcla contenida a una temperatura comprendida entre los 30º y 40º, y realizar lecturas de los parámetros físicoquímicos de dicha mezcla contenida en la cubeta con los medios ópticos hasta que dichas lecturas alcanzan un umbral de consigna o hasta que haya transcurrido un tiempo determinado.The method for measuring total coliforms and Escherichia coli based on optical detection for water quality control applications of the invention is characterized in that it comprises a previous operation of conditioning the cuvette, an operation of filling the cuvette with mixing and a measuring operation in which the contained mixture is subjected to a temperature between 30 ° and 40 °, and to read the physicochemical parameters of said mixture contained in the cuvette with the optical means until said readings reach a setpoint threshold or up to that a certain time has elapsed.

Una variante del procedimiento, comprende las operaciones añadidas de vaciar la cubeta; realizar un número predeterminado de aclarados del conducto de distribución y la cubeta con líquido muestra, llenando los con líquido muestra hasta que la cubeta rebose a través de su conducto de rebose, esperar un tiempo predeterminado, y vaciar tanto el conducto de distribución como la cubeta, coadyuvando alternativamente con los medios mezcladores dispuestos en la cubeta; llenar con líquido biocida el conducto de distribución y la cubeta, llenando el conducto de distribución hasta que la cubeta rebose a través de su conducto de rebose y esperar un tiempo predeterminado; y vaciar el líquido biocida del conducto de distribución.A variant of the procedure includes the added operations of emptying the bucket; make a number default rinse of the distribution duct and cuvette with liquid sample, filling them with liquid sample until the bucket overflow through its overflow duct, wait a while predetermined, and empty both the distribution duct and the cuvette, alternately contributing with the mixing means arranged in the bucket; fill the duct with biocidal fluid distribution and the bucket, filling the distribution duct until let the bucket overflow through its overflow conduit and wait for a default time; and empty the biocidal liquid from the duct distribution.

En otra variante, la operación previa de acondicionamiento de la cubeta comprende los pasos de vaciar el líquido biocida dispuesto en la cubeta aclarar con líquido reactivo el conducto de distribución; y realizar un número predeterminado de aclarados del conducto de distribución y la cubeta con líquido muestra, llenándolo con líquido muestra hasta que la cubeta rebose a través de su conducto de rebose, esperar un tiempo predeterminado, y vaciar tanto el conducto de distribución como la cubeta, coadyuvando alternativamente con los medios mezcladores dispuestos en la cubeta.In another variant, the previous operation of conditioning of the cuvette comprises the steps of emptying the biocidal liquid disposed in the cuvette rinse with reactive liquid the distribution duct; and perform a default number of rinse of the distribution duct and the cuvette with liquid sample, filling it with liquid sample until the bucket overflows with through its overflow conduit, wait a predetermined time, and empty both the distribution duct and the cuvette, contributing alternatively with the mixing means arranged in the bucket.

De acuerdo con otra característica, la etapa de lectura de los medios ópticos comprende etapas iterativas de lectura de la absorbancia a una longitud de onda predeterminada y de la fluorescencia a otra longitud de onda predeterminada.According to another feature, the stage of optical media reading comprises iterative stages of reading of absorbance at a predetermined wavelength and of the fluorescence at another predetermined wavelength.

En una variante de interés, entre cada etapa de lectura de la absorbancia y de lectura de la fluorescencia se realiza una agitación de la mezcla contenida en la cubeta.In a variant of interest, between each stage of absorbance reading and fluorescence reading are stir the mixture contained in the cuvette.

De acuerdo con otra característica de la invención, la lectura de la absorbancia se mide a 405 nm y la fluorescencia se mide a 450 nm al excitar dicha mezcla a 365 nm.According to another feature of the invention, the absorbance reading is measured at 405 nm and the Fluorescence is measured at 450 nm by exciting said mixture at 365 nm.

Breve descripción de los dibujosBrief description of the drawings

En los dibujos adjuntos se ilustra, a título de ejemplo no limitativo, una variante de la cubeta e instalación para la medida de coliformes totales y Escherichia coli basado en detección óptica para aplicaciones de control de calidad de aguas según la invención. En concreto:The attached drawings illustrate, by way of non-limiting example, a variant of the cuvette and installation for the measurement of total coliforms and Escherichia coli based on optical detection for water quality control applications according to the invention. Specific:

la Fig. 1, es una vista lateral de una cubeta según la invención;Fig. 1, is a side view of a bucket according to the invention;

las Figs. 2a y 2b, son vistas en sección de la cubeta de la Fig. 1 durante la detección óptica; yFigs. 2a and 2b, are sectional views of the cuvette of Fig. 1 during optical detection; Y

la Fig. 3 es una esquema de una instalación que comprende la cubeta de la Fig. 1.Fig. 3 is a diagram of an installation that it comprises the cuvette of Fig. 1.

Descripción detallada de los dibujosDetailed description of the drawings

La Fig. 1 representa una cubeta 1 para la medida de coliformes totales y Escherichia coli basado en detección óptica para aplicaciones de control de calidad de aguas, que dispone en su parte superior de una entrada de llenado 2 y una salida de rebose 3, de tal modo que si dicha cubeta 1 es llenada mediante su entrada de llenado 2, el líquido introducido rebosará por la salida de rebose 3 al llenarse completamente la cubeta 1. Dicha cubeta 1 dispone además en su parte inferior de una salida de desagüe 4. El cuerpo 42 de la cubeta 1 es de cristal transparente de una sola pieza y sin juntas lo que evita que queden restos que pudieran causar la contaminación de muestras a analizar en mediciones posteriores. Está además dotada de un sensor de verificación de la temperatura 6, adaptado para monitorizar la temperatura del interior de la cubeta 1 y generar una señal de información a unos medios calefactores 15, tal y como se explicará más adelante.Fig. 1 represents a cuvette 1 for the measurement of total coliforms and Escherichia coli based on optical detection for water quality control applications, which has in its upper part a filling inlet 2 and an overflow outlet 3, of such that if said cuvette 1 is filled by means of its filling inlet 2, the introduced liquid will overflow with the overflow outlet 3 when the cuvette 1 is completely filled. Said cuvette 1 also has a drain outlet 4 in its lower part. The body 42 of the cuvette 1 is made of transparent glass in one piece and without seals, which prevents the remaining remains that could cause contamination of samples to be analyzed in subsequent measurements. It is also equipped with a temperature verification sensor 6, adapted to monitor the temperature inside the cuvette 1 and generate an information signal to heating means 15, as will be explained later.

La cubeta 1 comprende unos medios ópticos 7 para la medición de parámetros físico-químicos del líquido contenido, por ejemplo la absorbancia y fluorescencia a longitudes de onda predeterminadas.The cuvette 1 comprises optical means 7 for the measurement of physicochemical parameters of liquid content, for example absorbance and fluorescence at predetermined wavelengths.

La cubeta 1 también comprende unos medios agitadores 5 formados por un elemento tubular 10 de entrada de aire a la cubeta 1, previamente filtrado por un tamiz 12 dispuesto en su embocadura 11 para evitar que puedan entrar partículas de tamaño superior a 0,2 \mum juntamente con el aire inyectado en la cubeta 1, lo que entorpecería las medidas efectuadas por los medios ópticos 7. Para inyectar aire en la embocadura 11, los medios agitadores están dotados de una bomba de aire 39, que inyectan aire a través de un elemento tubular 10 en el interior de la cubeta 1 mediante una pluralidad de orificios 13, estando además su extremo inferior 14 abierto formando un ángulo de 60º respecto del eje longitudinal. Estos medios agitadores 5 son ventajosos en comparación a los elementos mecánicos de agitación conocidos en el estado de la técnica, tales como agitadores de varillas, ya que permiten eliminar puntos de posible depósito de las bacterias que dificultaría la posterior desinfección.The tray 1 also includes means stirrers 5 formed by a tubular air inlet element 10 to the cuvette 1, previously filtered by a sieve 12 arranged in its mouth 11 to prevent particles of size from entering greater than 0.2 µm together with the air injected into the cuvette 1, which would hinder the measurements made by the optical means 7. To inject air into the mouth 11, the stirring means they are equipped with an air pump 39, which inject air through a tubular element 10 inside the cuvette 1 by means of a plurality of holes 13, its lower end being also 14 open forming an angle of 60º with respect to the longitudinal axis. These stirring means 5 are advantageous compared to the mechanical stirring elements known in the state of the technique, such as rod stirrers, since they allow removal points of possible deposition of bacteria that would hinder the subsequent disinfection

La cubeta 1 dispone de unos medios ópticos 7, dispuestos alrededor de la cubeta 1 tal y como se muestra en las Figs. 2a y 2b. En la variante mostrada, los medios ópticos 7 están formados por un primer módulo 16, para la medida de la absorbancia y un segundo módulo 17 para la medida de la fluorescencia.The cuvette 1 has optical means 7, arranged around cuvette 1 as shown in the Figs. 2a and 2b. In the variant shown, the optical means 7 are formed by a first module 16, for the measurement of absorbance and a second module 17 for the measurement of fluorescence.

El primer módulo 16 comprende un elemento emisor 8 óptico formado por el primer emisor 161, que en este caso es un diodo electroluminiscente (led), que emite una primera radiación 164 cuya longitud de onda es de 400 nm, y un elemento receptor 9 óptico formado por el primer receptor 162, adaptado para recibir a la misma longitud de onda, que en este caso es un fotodiodo. Naturalmente, otros elementos emisores y receptores de los ampliamente conocidos en el estado de la técnica, como emisores láser, fototransístores, etc. podrían ser igualmente utilizados. Tal y como se puede observar en las Figs. 2a, el primer módulo comprende también un primer receptor de referencia 163, que recibe parte de dicha primera radiación 165 antes de que la primera radiación 164 atraviese la cubeta 1 hasta el primer receptor 162. De esta manera se consigue obtener un valor del nivel de la emisión, que podrá ser comparado con el nivel recibido por el primer receptor 162 y así determinar cuál es la atenuación que presenta la mezcla contenida en la cubeta 1 a la longitud de onda de 405 nm, que, tal y como se explicará más adelante, será proporcional a la concentración de coliformes totales.The first module 16 comprises an emitting element 8 optical formed by the first emitter 161, which in this case is a electroluminescent diode (led), which emits a first radiation 164 whose wavelength is 400 nm, and an optical receiver element 9 formed by the first receiver 162, adapted to receive it wavelength, which in this case is a photodiode. Naturally, other emitting and receiving elements of the widely known in the state of the art, such as laser emitters, phototransistors, etc. They could be equally used. As you can see in Figs. 2a, the first module also comprises a first reference receiver 163, which receives part of said first radiation 165 before the first radiation 164 passed through the cuvette 1 to the first receiver 162. In this way it is achieved obtain a value of the emission level, which can be compared with the level received by the first receiver 162 and thus determine what is the attenuation of the mixture contained in the cuvette 1 at the wavelength of 405 nm, which, as will be explained more forward, it will be proportional to the concentration of coliforms totals

Análogamente, como se puede observar en la Fig. 2b, el segundo módulo 17 comprende otro emisor 8 óptico formado por el segundo emisor 171 y un otro receptor 9 óptico formado por el segundo receptor 172, aunque en este caso adaptados para medir la fluorescencia de la muestra de la cubeta 1 a 450 nm, por lo que el segundo emisor 171 emite una segunda radiación 175 cuya longitud de onda es de 365 nm y que al incidir sobre la cubeta 1, se divide en radiación refractada 176 al interior de la cubeta y radiación reflejada 177, escapando dicha radiación reflejada por una apertura 18 lateral provista a tal efecto en el segundo módulo óptico 17. Tal y como se puede observar, la segunda radiación 175 formando un ángulo de 90º con la radiación reflejada. El segundo receptor 172 se sitúa a 45º de dichas segunda radiación 175 y radiación reflejada 177 para así evitar que pueda interferir en la lectura de la fluorescen-
cia.
Similarly, as can be seen in Fig. 2b, the second module 17 comprises another optical transmitter 8 formed by the second transmitter 171 and another optical receiver 9 formed by the second receiver 172, although in this case adapted to measure the fluorescence of the sample of the cuvette 1 at 450 nm, whereby the second emitter 171 emits a second radiation 175 whose wavelength is 365 nm and which, upon impacting on the cuvette 1, is divided into refracted radiation 176 inside the cuvette and reflected radiation 177, said radiation reflected escaping through a lateral opening 18 provided for this purpose in the second optical module 17. As can be seen, the second radiation 175 forming an angle of 90 ° with the reflected radiation. The second receiver 172 is located at 45 ° of said second radiation 175 and reflected radiation 177 in order to prevent it from interfering with the reading of the fluorescence.
Inc.

La radiación refractada 176 y transmitida al interior de la cubeta 1 excita los componentes fluorescentes que pudiera contener la cubeta 1, que emiten una radiación de fluorescencia 178 de longitud de onda de 450 nm que, tras el paso por el filtro óptico 174, podrá ser recibida por el segundo receptor 172. Dicha fluorescencia será proporcional a la concentración de E. coli, tal y como se explicará más adelante.The refracted radiation 176 and transmitted inside the cuvette 1 excites the fluorescent components that the cuvette 1 could contain, emitting a fluorescence radiation 178 of wavelength of 450 nm which, after passing through the optical filter 174, may be received by the second receiver 172. Said fluorescence will be proportional to the concentration of E. coli , as will be explained later.

Tanto el primer módulo 16 como el segundo módulo 17 disponen respectivamente de un primer y un segundo receptores de referencia 163,173, para controlar la potencia emitida por el primer y segundo emisores 161,171 y así poder calcular, en función de la potencia recibida en el primer y segundo receptor 162, 172, las concentraciones de coliformes totales y E. coli respectivamente.Both the first module 16 and the second module 17 have respectively a first and a second reference receiver 163,173, to control the power emitted by the first and second emitters 161,171 and thus be able to calculate, depending on the power received in the first and second receptor 162, 172, the concentrations of total coliforms and E. coli respectively.

Para evitar el ruido que pudiera ser generado por otras fuentes de luz que pudieran interferir tanto al primer como al segundo módulo 16,17, se utilizan señales de alimentación moduladas para alimentar el primer y segundo emisores 161, 171 a una frecuencia conocida y que es sintonizada tanto tras ser recibida respectivamente por el primer y segundo receptores 162, 172, así como por el primer y segundo receptores de referencia 163, 173, esta solución es conocida en el estado de la técnica.To avoid the noise that could be generated by other light sources that could interfere so much with the first as with the second module 16.17, power signals are used modulated to feed the first and second emitters 161, 171 to a known frequency and that is tuned both after being received respectively for the first and second receivers 162, 172, as well as per the first and second reference receivers 163, 173, this Solution is known in the state of the art.

La cubeta 1 puede formar parte de una instalación 100 de medición como la mostrada en la Fig. 3, de modo que se pueda automatizar la adición de los diferentes líquidos que desencadenarán los cambios físico-químicos relacionados con la presencia de coliformes y E. coli. En este caso, la instalación dispone de un conducto de distribución 20 de cuarzo transparente, unido con la entrada de llenado 2 de la cubeta mediante unos medios de unión 21. El conducto de distribución 20 dispone de varios conectares 25,28,30,32, que permiten introducir líquidos que serán transportados hasta la cubeta 1. La instalación 100 comprende un depósito de reactivo 26 líquido conectado mediante una bomba de reactivo 27 al conducto de distribución 20, a través del conectar de reactivo 28 de dicho conducto de distribución 20. El reactivo contenido en el depósito de reactivo 26 es de los conocidos en el estado de la técnica y de los que en contacto con una solución de agua que contenga coliformes y/o E. coli cambia los parámetros físico-químicos de la solución, presentando absorbancia a 405 nm en caso de contener coliformes y presentando una fluorescencia a 450 nm al ser excitada la solución a 365 nm en caso de contener E. coli.The cuvette 1 can be part of a measuring installation 100 such as that shown in Fig. 3, so that the addition of the different liquids that will trigger the physical-chemical changes related to the presence of coliforms and E. coli can be automated . In this case, the installation has a transparent quartz distribution conduit 20, connected to the filling inlet 2 of the cuvette by means of connection means 21. The distribution conduit 20 has several connectors 25,28,30,32 , which allow the introduction of liquids that will be transported to the tray 1. The installation 100 comprises a reagent reservoir 26 connected by means of a reagent pump 27 to the distribution line 20, through the reagent connection 28 of said distribution line 20. The reagent contained in reagent reservoir 26 is of those known in the state of the art and of those that in contact with a water solution containing coliforms and / or E. coli changes the physical-chemical parameters of the solution, presenting absorbance at 405 nm in case of containing coliforms and presenting a fluorescence at 450 nm when the solution is excited at 365 nm in case of containing E. coli .

El conducto de distribución 20 está conectado a través de un conectar de desagüe 32 a una bomba de desagüe 31. Dicha bomba de desagüe 31 ha de ser capaz de vaciar el líquido que pueda estar contenido en el interior del conducto de distribución 20. La instalación está además formada por un depósito de desinfectante 23, que está conectado mediante través de una bomba de desinfectante 24 y del conector de desinfectante 25 al conducto de distribución 20. Este desinfectante se utiliza para evitar contaminaciones entre sucesivas utilizaciones del dispositivo, ya que si quedaran restos infectados de coliformes y/o E. coli, podrían generar falsos positivos. Además, el conducto de distribución 20 está también dotado de un conector de muestras 30, al que se conecta una bomba de muestras 29 conectada a una entrada de muestras 41 que permite introducir en el conducto de distribución 20 y por consiguiente en la cubeta 1 muestras de agua a analizar provenientes, por ejemplo, de una piscina.The distribution line 20 is connected through a drain connection 32 to a drain pump 31. Said drain pump 31 must be capable of emptying the liquid that may be contained inside the distribution line 20. The installation It is also formed by a disinfectant tank 23, which is connected through a disinfectant pump 24 and the disinfectant connector 25 to the distribution line 20. This disinfectant is used to avoid contamination between successive uses of the device, since if they remain Infected remains of coliforms and / or E. coli could generate false positives. In addition, the distribution conduit 20 is also provided with a sample connector 30, to which a sample pump 29 connected to a sample inlet 41 is connected, which allows it to be introduced into the distribution conduit 20 and therefore into the cuvette 1 samples of water to analyze from, for example, a swimming pool.

La instalación también comprende unos medios germicidas 36, que en este caso están formados por una lámpara de luz ultravioleta 37 dispuesta en el conducto de distribución 20, adyacente a la salida de la bomba de reactivo 27. De esta manera se evita que la muestra contamine el reactivo durante el funcionamiento de la instalación.The installation also includes some means germicides 36, which in this case are formed by a lamp of ultraviolet light 37 arranged in the distribution conduit 20, adjacent to the outlet of reagent pump 27. This way prevents the sample from contaminating the reagent during operation of the installation.

Tal y como se puede observar en la Fig. 3, el conducto de desagüe 33 de la cubeta 1 pude ser dirigido a una primera rama 33a o a una segunda rama 33b mediante el control de respectivas válvulas de paso 35a, 35b. Ventajosamente, la rama 33b permite vaciar el contenido de la cubeta 1 en unos medios de almacenamiento 40, tales como bidones, que podrán ser posteriormente destruidos, en caso que la muestra contenida en la cubeta 1 esté contaminada o no pueda ser vaciada directamente a un desagüe, al ser por ejemplo un líquido biocida. En caso contrario, la rama 33a permite vaciar el contenido de la cubeta 1 directamente a un desagüe.As can be seen in Fig. 3, the drain duct 33 of bucket 1 could be directed to a first branch 33a or to a second branch 33b by controlling respective valves 35a, 35b. Advantageously, branch 33b it allows to empty the contents of the cuvette 1 in a means of storage 40, such as drums, which may be subsequently destroyed, in case the sample contained in cuvette 1 is contaminated or cannot be emptied directly to a drain, being for example a biocidal liquid. Otherwise, branch 33a It allows emptying the contents of cuvette 1 directly to a drain.

Los medios de unión 21 entre el conducto de distribución 20 y la entrada de llenado 2 de la cubeta 1 forman una "U" invertida cuyo nivel máximo queda por encima de la "U" invertida que forma el conducto de rebose 34 dispuesto en la salida de rebose 3. Esta configuración es ventajosa porque permite, en una primera fase, el llenado del conducto de distribución 20 mediante una cualquiera de las bombas 24,27,29 sin que el líquido se introduzca en el interior de la cubeta 1, en una segunda fase, al continuar inyectando líquido en el conducto de distribución 20, que la cubeta 1 se llene, y en una tercera fase, al llenarse la cubeta 1 completamente, que el líquido contenido en la cubeta 1 empiece a rebosar por la salida de rebose 3 y sea evacuado por el conducto de rebose 34. Al alcanzar esta tercera fase, para vaciar la cubeta 1 y el conducto de distribución 20, debe actuarse: la bomba de desagüe 31 para vaciar el conducto de distribución, y abrirse la primera o segunda válvulas de paso 35a, 35b, según convenga, para vaciar la cubeta 1. Esta configuración será útil para el procedimiento de funcionamiento de la instalación, tal y como se explicará más adelante. Naturalmente, otras configuraciones conocidas en el estado de la técnica y que permitieran llenar y vaciar independientemente el conducto de distribución 20 y la cubeta 1 podrían ser igualmente utilizados, por ejemplo utilizando válvulas de paso, pero se deberían extremarse las precauciones para evitar contaminaciones al quedarse restos de muestra en la instalación 100.The joining means 21 between the conduit of distribution 20 and filling inlet 2 of cuvette 1 form a Inverted "U" whose maximum level is above the "U" inverted forming overflow conduit 34 disposed at the outlet overflow 3. This configuration is advantageous because it allows, in a first phase, the filling of the distribution conduit 20 by any one of the pumps 24,27,29 without the liquid being enter inside the cuvette 1, in a second phase, at continue injecting liquid into distribution conduit 20, which cuvette 1 is filled, and in a third phase, when cuvette 1 is filled completely, that the liquid contained in cuvette 1 begins to overflow through overflow outlet 3 and be evacuated through the duct overflow 34. Upon reaching this third phase, to empty cuvette 1 and the distribution duct 20 must be operated: the drain pump 31 to empty the distribution duct, and open the first or second stop valves 35a, 35b, as appropriate, to empty the cuvette 1. This configuration will be useful for the procedure of operation of the installation, as will be explained more ahead. Naturally, other configurations known in the state of the technique and that allowed to fill and empty independently the distribution conduit 20 and the cuvette 1 could also be used, for example using stop valves, but precautions should be taken to avoid contamination by Remaining sample remains in installation 100.

La cubeta 1 está contenida en una cámara 19 que permite mantenerla a una temperatura constante de incubación. Dicha cámara 19 está dotada de unos medios calefactores 15 y un ventilador 38 que permite la circulación del aire dentro de la cámara 1. Dichos medios calefactores 15 están gobernados por una señal generada por un sensor de control de la temperatura 6' dispuesto la cámara 19 y por un sensor de verificación de la temperatura 6 dispuesto en el interior de la cubeta 1. De este modo el sensor de control de la temperatura 6' permitirá que la cámara 19, y por tanto la cubeta 1, esté a la temperatura adecuada y el sensor de verificación de la temperatura 6 permitirá que, en caso de cambios de la temperatura del interior de la cubeta 1 debido a la entrada y salida de líquidos, se pueda graduar los medios calefactores 15 para conseguir restablecer la temperatura adecuada en el interior de la cubeta 1.The cuvette 1 is contained in a chamber 19 which allows to keep it at a constant incubation temperature. Bliss chamber 19 is provided with heating means 15 and a fan 38 which allows the circulation of air inside the chamber 1. These heating means 15 are governed by a signal generated by a temperature control sensor 6 'arranged the chamber 19 and by a temperature verification sensor 6 provided in the inside the cuvette 1. In this way the control sensor of the 6 'temperature will allow chamber 19, and therefore cuvette 1, is at the right temperature and the sensor for checking the temperature 6 will allow, in case of temperature changes inside the cuvette 1 due to the entry and exit of liquids, the heating means 15 can be adjusted to achieve restore the proper temperature inside the cuvette one.

Como se ha presentado anteriormente, la instalación de la presente invención permite la medida de coliformes totales y E. coli presentes en una muestra de agua, al mezclarse dicha muestra de agua en contacto con un reactivo que varía las características físico-químicas de la mezcla. Se detalla a continuación el procedimiento para realizar la medida.As presented above, the installation of the present invention allows the measurement of total coliforms and E. coli present in a water sample, when said water sample is mixed in contact with a reagent that varies the physicochemical characteristics of the mixture . The procedure to perform the measurement is detailed below.

Partiendo inicialmente de la instalación con la cubeta 1 llena de líquido biocida, se lleva a cabo un proceso de limpieza y aclarado, formado por los pasos de vaciar el líquido biocida dispuesto en la cubeta 1 y aclarar con líquido reactivo el conducto de distribución 20, vaciando posteriormente dicho conducto de distribución 20.Starting initially from the installation with the cuvette 1 filled with biocidal liquid, a process of cleaning and rinsing, formed by the steps of emptying the liquid biocide disposed in cuvette 1 and rinse with reactive liquid the distribution conduit 20, subsequently emptying said conduit of distribution 20.

Posteriormente se realiza un número predeterminado de aclarados, que en la variante descrita son 4, del conducto de distribución 20 y la cubeta 1 con líquido muestra, llenando con dicho líquido muestra el conducto de distribución 20 hasta que la cubeta 1 rebosa a través de su conducto de rebose 34, se espera un tiempo predeterminado, que en la variante descrita son 20 segundos, y se vacía tanto el conducto de distribución 20 como la cubeta 1, coadyuvando alternativamente con los medios agitadores 5 dispuestos en la cubeta.Subsequently a number is made default of rinses, which in the variant described are 4, of distribution duct 20 and cuvette 1 with sample liquid, filling with said liquid shows the distribution conduit 20 until the cuvette 1 overflows through its overflow conduit 34, a predetermined time is expected, which in the variant described are 20 seconds, and both the distribution conduit 20 and the cuvette 1, alternatively contributing with stirring means 5 arranged in the bucket.

Se procede entonces a llenar la cubeta 1 parcialmente con líquido reactivo, es decir, con la dosis recomendada para el volumen de muestra de agua que se analizará, y posteriormente se llena la cubeta 1 con la muestra de agua totalmente hasta su rebose a través de su conducto de rebose 34, quedando la cubeta 1 llena de la mezcla formada por el líquido reactivo con la muestra de agua. Al terminar esta fase se llena el conducto de distribución 20 de líquido biocida, sin que entre en la cubeta 1.Then proceed to fill the bucket 1 partially with reactive liquid, that is, with the dose recommended for the volume of water sample to be analyzed, and subsequently, cuvette 1 is filled with the water sample totally until its overflow through its overflow conduit 34, the tray 1 being filled with the mixture formed by the liquid Reagent with the water sample. At the end of this phase the distribution conduit 20 of biocidal liquid, without entering the bucket 1.

Una vez introducidos en la cubeta 1 la muestra de agua y el líquido reactivo se inicia el tiempo de reacción. A intervalos configurables de tiempo (mínimo 60 segundos) se activan secuencialmente los medios ópticos 7 del primer y segundo módulo 16,17: primero se realiza la lectura de la absorbancia mediante el primer módulo 16 óptico, y después la lectura de la fluorescencia en superficie con el segundo módulo 17 óptico. Este sistema alternado se utiliza para evitar interferencias lumínicas entre los dos módulos ópticos 16, 17.Once the sample has been introduced into cuvette 1 of water and the reactive liquid starts the reaction time. TO configurable time intervals (minimum 60 seconds) are activated sequentially the optical means 7 of the first and second module 16.17: first the absorbance reading is done by first optical module 16, and then the fluorescence reading in surface with the second optical module 17. This alternate system It is used to avoid light interference between the two optical modules 16, 17.

De este modo se va monitorizando la producción de color/fluorescencia cuyo tiempo de detección del incremento, con respecto a los valores iniciales dependerá de la concentración de coliformes totales/E. coli presente en la muestra, y que se habrán calibrado previamente.In this way, the color / fluorescence production is monitored, the detection time of the increase, with respect to the initial values will depend on the concentration of total coliforms / E. coli present in the sample, and which have been previously calibrated.

La instalación podrá finalizar la medida en tres supuestos. En el primero la muestra es positiva para coliformes totales y E. coli, por tanto la lectura óptica tanto de absorbancia como de fluorescencia ha alcanzado los umbrales que han sido predeterminados durante la calibración. El equipo utilizará el tiempo en el que la muestra ha superado el valor de detección configurado y calculará la concentración de coliformes totales y E. coli, expresando el resultado en NMP/100 mL. La segunda situación que puede darse es que la muestra sea negativa para coliformes totales y E. coli, con lo que la lectura óptica de absorbancia y fluorescencia no alcanzará el umbral predeterminado durante la calibración y una vez superado el tiempo máximo de medidas (18 horas) el equipo expresará el resultado de concentración de coliformes totales y E. coli, con el valor mínimo configurado capaz de detectar el método. En un tercer supuesto en que el valor de absorbancia (coliformes totales) llegase al umbral predeterminado y el de fluorescencia no llegase nunca al umbral predeterminado el equipo esperaría las 18 horas predeterminadas, dando como positivo el valor de coliformes totales y como negativo el de E. coli.The installation may complete the measure in three cases. In the first, the sample is positive for total coliforms and E. coli , therefore the optical reading of both absorbance and fluorescence has reached the thresholds that have been predetermined during calibration. The team will use the time in which the sample has exceeded the configured detection value and calculate the concentration of total coliforms and E. coli , expressing the result in NMP / 100 mL. The second situation that can occur is that the sample is negative for total coliforms and E. coli , so that the optical absorbance and fluorescence reading will not reach the predetermined threshold during calibration and once the maximum measurement time has been exceeded (18 hours ) the team will express the result of concentration of total coliforms and E. coli , with the minimum value set capable of detecting the method. In a third case in which the absorbance value (total coliforms) reaches the predetermined threshold and that of fluorescence never reaches the predetermined threshold, the equipment would wait for the predetermined 18 hours, giving the value of total coliforms as positive and as negative that of E coli

Posteriormente a la medida, se vacía la cubeta 1 y se realiza un número predeterminado de aclarados del conducto de distribución 20 y la cubeta 1 con líquido muestra, llenando hasta que la cubeta 1 rebose a través de su conducto de rebose 34 y vaciando tanto el conducto de distribución 20 como la cubeta 1, coadyuvando alternativamente con los medios mezcladores 5 dispuestos en la cubeta.Subsequently, the cuvette 1 is emptied and a predetermined number of rinses of the conduit of distribution 20 and cuvette 1 with sample liquid, filling up that the cuvette 1 overflows through its overflow conduit 34 and emptying both the distribution conduit 20 and the cuvette 1, alternately contributing with the mixing means 5 arranged in the bucket

Finalmente se llena con líquido biocida el conducto de distribución 20 y la cubeta 1, llenando el conducto de distribución 20 hasta que la cubeta rebose a través de su conducto de rebose 34 y se espera un tiempo predeterminado tras el que se vaciar el líquido biocida del conducto de distribución 20.Finally the biocide is filled with the distribution conduit 20 and cuvette 1, filling the conduit of distribution 20 until the bucket overflows through its conduit overflow 34 and a predetermined time is expected after which empty the biocidal liquid from the distribution duct 20.

Claims (24)

1. Cubeta (1) de incubación para la medida de coliformes totales y Escherichia coli basada en detección óptica para aplicaciones de control de calidad de aguas, adaptada para contener una mezcla líquida de una muestra de agua con un reactivo líquido, comprendiendo la cubeta una entrada de llenado (2) y una salida de rebose (3) en su parte superior, y una salida de desagüe (4) en su parte inferior, unos medios agitadores (5) de la mezcla líquida contenida, un sensor de verificación de la temperatura (6) dispuesto en su interior y unos medios ópticos (7) de medición de parámetros físico-químicos del líquido contenido, dispuestos en el exterior de dicha cubeta y formados al menos por un elemento emisor (8) óptico y un correspondiente elemento receptor (9) óptico, caracterizada porque el cuerpo (42) de dicha cubeta es transparente al menos en la zona adyacente a dichos medios ópticos de medición, está formada de una sola pieza y desprovista de juntas, y porque los medios agitadores (5) del líquido contenido comprenden un elemento tubular (10) de entrada de aire desde el exterior de la cubeta que penetra en su interior, dotado en su embocadura (11) externa superior de un tamiz (12) para filtrar partículas mayores de 0,2 \mum y de una pluralidad de orificios (13) para favorecer la homogenización del líquido contenido por el efecto del aire expulsado a su través, estando además su extremo inferior (14) abierto y dispuesto a un nivel superior al de los medios ópticos, de forma que dicho elemento tubular no interfiera con los medios ópticos de medición.1. Incubation tray (1) for the measurement of total coliforms and Escherichia coli based on optical detection for water quality control applications, adapted to contain a liquid mixture of a water sample with a liquid reagent, the cuvette comprising a filling inlet (2) and an overflow outlet (3) in its upper part, and a drain outlet (4) in its lower part, stirring means (5) of the contained liquid mixture, a sensor for checking the temperature (6) disposed inside and optical means (7) for measuring physical-chemical parameters of the contained liquid, arranged outside said cuvette and formed at least by an optical emitting element (8) and a corresponding receiving element (9) optical, characterized in that the body (42) of said cuvette is transparent at least in the area adjacent to said optical measuring means, is formed in one piece and devoid of seals, and because the means stirrers (5) of the contained liquid comprise a tubular element (10) of air inlet from the outside of the bowl that penetrates therein, provided in its upper external mouth (11) with a sieve (12) for filtering larger particles of 0.2 µm and a plurality of holes (13) to favor the homogenization of the liquid contained by the effect of the air expelled therethrough, furthermore its lower end (14) being open and arranged at a level higher than that of the means optical, so that said tubular element does not interfere with the optical measuring means. 2. Cubeta (1) de incubación según la reivindicación anterior, caracterizada porque la embocadura de la entrada de llenado (2) se encuentra a un nivel por encima de la embocadura de la salida de rebose (3).2. Incubation tray (1) according to the preceding claim, characterized in that the mouth of the filling inlet (2) is at a level above the mouth of the overflow outlet (3). 3. Cubeta (1) de incubación según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizada porque el extremo inferior (14) abierto del elemento tubular (10) está inscrito en un plano de un plano de corte que forma un ángulo comprendido entre 55º a 65º respecto del eje longitudinal de dicho elemento tubular (10).3. Incubation tray (1) according to any one of claims 1 to 2, characterized in that the open lower end (14) of the tubular element (10) is inscribed in a plane of a cutting plane that forms an angle between 55 ° at 65 ° with respect to the longitudinal axis of said tubular element (10). 4. Cubeta (1) de incubación según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el sensor de verificación de la temperatura (6) está dispuesto en su parte inferior, y genera una señal de información para unos medios calefactores (15), externos a la cubeta, destinados a mantener el líquido contenido en ésta a una temperatura predeterminada.4. Incubation tray (1) according to any one of the preceding claims, characterized in that the temperature verification sensor (6) is arranged in its lower part, and generates an information signal for external heating means (15) to the cuvette, intended to keep the liquid contained therein at a predetermined temperature. 5. Cubeta (1) de incubación según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque los medios ópticos (7) de medición de parámetros físico-químicos comprenden un primer módulo (16) de medición de la absorbancia, que comprende un primer emisor (161) y un primer receptor (162); y un segundo módulo (17) de medición de la fluorescencia, que comprende un segundo emisor (171) y segundo receptor (172), estando ambos módulos dispuestos en un plano transversal a dicha cubeta.5. Incubation tray (1) according to any one of the preceding claims, characterized in that the optical means (7) for measuring physical-chemical parameters comprise a first absorbance measuring module (16), comprising a first emitter ( 161) and a first receiver (162); and a second fluorescence measurement module (17), comprising a second emitter (171) and second receiver (172), both modules being arranged in a plane transverse to said cuvette. 6. Cubeta (1) de incubación según la reivindicación anterior, caracterizada porque el primer receptor (162) y el segundo receptor (172) están dispuestos formando un ángulo de 90º.6. Incubation tray (1) according to the preceding claim, characterized in that the first receiver (162) and the second receiver (172) are arranged at an angle of 90 °. 7. Cubeta (1) de incubación según las reivindicaciones 5 ó 6, caracterizada porque el primer emisor (161) emite una primera radiación (164) cuya longitud de onda es de 405 nm y porque el primer receptor (162) está adaptado para la recepción de una radiación con dicha longitud de onda, estando ambos enfrentados y aplicados en lados opuestos de la cubeta.7. Incubation tank (1) according to claims 5 or 6, characterized in that the first emitter (161) emits a first radiation (164) whose wavelength is 405 nm and because the first receiver (162) is adapted for reception of a radiation with said wavelength, both facing and applied on opposite sides of the cuvette. 8. Cubeta (1) de incubación según las reivindicaciones 5 ó 6, caracterizada porque el segundo emisor (171) emite una segunda radiación (175) cuya longitud de onda es de 365 nm y el segundo receptor (172) está adaptado para recibir una radiación de fluorescencia (178) cuya longitud de onda de 450 nm, estando dicho segundo receptor dispuesto encarado al punto de la cubeta en que incide y se refleja dicha segunda radiación, escapando la radiación reflejada (177) a través de una apertura (18) lateral del segundo módulo (17).8. Incubation tank (1) according to claims 5 or 6, characterized in that the second emitter (171) emits a second radiation (175) whose wavelength is 365 nm and the second receiver (172) is adapted to receive a fluorescence radiation (178) whose wavelength of 450 nm, said second receiver being arranged facing the point of the cuvette on which said second radiation is affected and reflected, the reflected radiation (177) escaping through an aperture (18) side of the second module (17). 9. Cubeta (1) de incubación según una cualquiera de las reivindicaciones 5, 6 ó 8, caracterizada porque el segundo receptor (172) está provisto de un filtro óptico (174) cuya banda pasante está comprendida entre 430 y 500 nm.9. Incubation tray (1) according to any one of claims 5, 6 or 8, characterized in that the second receiver (172) is provided with an optical filter (174) whose through band is between 430 and 500 nm. 10. Cubeta (1) de incubación según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, caracterizada porque el segundo emisor (175) está orientado respecto la cubeta de forma que el ángulo que describe la radiación emitida por dicho segundo emisor forma un ángulo de 90º con la radiación reflejada (177) por dicha cubeta.10. Incubation tray (1) according to any one of claims 5 to 8, characterized in that the second emitter (175) is oriented relative to the cuvette so that the angle describing the radiation emitted by said second emitter forms an angle of 90 ° with the radiation reflected (177) by said cuvette. 11. Cubeta (1) de incubación según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, caracterizada porque el primer y segundo módulos (16, 17) están dotados de un respectivo primer y segundo receptores de referencia (163,173), orientados para recibir, respectivamente, parte de la primera y segunda radiación (165,179) a la misma longitud de onda.11. Incubation tray (1) according to any one of claims 6 to 10, characterized in that the first and second modules (16, 17) are provided with a respective first and second reference receivers (163,173), oriented to receive, respectively , part of the first and second radiation (165,179) at the same wavelength. 12. Instalación (100) para la medida de coliformes totales y Escherichia coli basada en detección óptica para aplicaciones de control de calidad de aguas caracterizada porque comprende:12. Installation (100) for the measurement of total coliforms and Escherichia coli based on optical detection for water quality control applications characterized in that it comprises:
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una cubeta (1) de incubación según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11;a incubation tray (1) according to any one of the claims 1 to 11;
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un conducto de distribución (20), conectado por unos medios de unión (21) a la entrada de llenado (2) de la cubeta de incubación y dotado de una pluralidad de conectores (25, 28, 30, 32);a distribution duct (20), connected by connecting means (21) to the filling inlet (2) of the incubation tray and equipped of a plurality of connectors (25, 28, 30, 32);
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un depósito de desinfectante (23), conectado a través de una bomba de desinfectante (24) a un conector de desinfectante (25) del conducto de distribución;a disinfectant tank (23), connected through a pump disinfectant (24) to a disinfectant connector (25) of the duct of distribution;
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un depósito de reactivo (26), conectado a través de una bomba de reactivo (27) a un conector de reactivo (27) del conducto de distribución;a reagent tank (26), connected through a pump reagent (27) to a reagent connector (27) of the conduit distribution;
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una entrada de muestras (41), conectado a través de una bomba de muestras (29) a un conector de muestras (30) del conducto de distribución;a sample inlet (41), connected through a pump samples (29) to a sample connector (30) of the conduit distribution;
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una bomba de desagüe (31) conectada a un conector de desagüe (32) del conducto de distribución;a drain pump (31) connected to a drain connector (32) of the distribution duct;
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un conducto de desagüe (33), conectado a la salida de desagüe (4) de la cubeta de incubación;a drain pipe (33), connected to the drain outlet (4) of the incubation tray;
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un conducto de rebose (34), conectado a la salida de rebose (3) de la cubeta de incubación; ya overflow conduit (34), connected to the overflow outlet (3) of the incubation tray; Y
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unos medios programables de sincronización de los componentes que forman la instalación.some programmable means of synchronizing the components that form installation.
13. Instalación (100) según la reivindicación anterior, caracterizada porque al menos una parte de los medios de unión (21) entre la entrada de llenado (2) de la cubeta (1) y el conducto de distribución (20) está dispuesta a un nivel superior al nivel máximo de llenado de la cubeta, estando dispuesto parte del conducto de rebose (34) a un nivel superior al nivel máximo de llenado de la cubeta e inferior al de los medios de unión, pudiéndose inyectar una primera cantidad de líquido en el conducto de distribución sin que dicho líquido se trasvase a la cubeta, y tras superar una primera cantidad adicional de líquido correspondiente al volumen de llenado que puede contener la cubeta, que dicho líquido desborde por el conducto de rebose.13. Installation (100) according to the preceding claim, characterized in that at least a part of the joining means (21) between the filling inlet (2) of the cuvette (1) and the distribution conduit (20) is arranged to a level higher than the maximum level of filling of the cuvette, part of the overflow conduit (34) being arranged at a level greater than the maximum level of filling of the cuvette and lower than that of the joining means, a first quantity of liquid being injected in the distribution conduit without said liquid being transferred to the cuvette, and after exceeding a first additional quantity of liquid corresponding to the filling volume that the cuvette may contain, that said liquid overflows through the overflow conduit. 14. Instalación (100) según la reivindicación anterior, caracterizada porque los medios de unión (21) describen un codo en forma de "U" invertida.14. Installation (100) according to the preceding claim, characterized in that the joining means (21) describe an inverted "U" shaped elbow. 15. Instalación (100) según una cualquier de las reivindicaciones 12 a 14, caracterizada porque la cubeta (1) está contenida en una cámara (19) cuya temperatura está regulada por unos medios calefactores (15) según las mediciones de temperatura del sensor de verificación de la temperatura (6) situado en el interior de la cubeta y un sensor de control de la temperatura (6') situado en dicha cámara.15. Installation (100) according to any one of claims 12 to 14, characterized in that the cuvette (1) is contained in a chamber (19) whose temperature is regulated by heating means (15) according to the temperature measurements of the sensor temperature verification (6) located inside the cuvette and a temperature control sensor (6 ') located in said chamber. 16. Instalación (100) según una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, caracterizada porque el conducto de desagüe (33) se bifurca en dos ramas (33a, 33b), dotadas de sendas válvulas de paso (35a, 35b) conectadas igualmente a los medios programables, que permiten que el líquido evacuado de la cubeta pueda ser dirigido a unos medios de almacenamiento (40) o ser desechado.16. Installation (100) according to any one of claims 12 to 15, characterized in that the drain pipe (33) branches into two branches (33a, 33b), equipped with two bypass valves (35a, 35b) also connected to the programmable means, which allow the liquid evacuated from the cuvette can be directed to storage means (40) or be discarded. 17. Instalación (100) según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el conducto de distribución es de cuarzo y comprende unos medios germicidas (36) ópticos dispuestos entre la bomba de reactivo (27) y el conducto de distribución (20), irradiando dicho conducto de distribución.17. Installation (100) according to any one of the preceding claims, characterized in that the distribution conduit is made of quartz and comprises optical germicidal means (36) arranged between the reagent pump (27) and the distribution conduit (20), irradiating said distribution conduit. 18. Instalación (100) según la reivindicación anterior, caracterizada porque los medios germicidas (36) comprenden una lámpara ultravioleta (37).18. Installation (100) according to the preceding claim, characterized in that the germicidal means (36) comprise an ultraviolet lamp (37). 19. Procedimiento para la medida de coliformes totales y Escherichia coli basada en detección óptica para aplicaciones de control de calidad de aguas, mediante la instalación según una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 18, caracterizado porque comprende una operación previa de acondicionamiento de la cubeta (1), una operación de llenado de la cubeta con mezcla y una operación de medición en la que se somete la mezcla contenida a una temperatura comprendida entre los 30º y 40º, y se realizan lecturas de los parámetros físico-químicos de dicha mezcla contenida en la cubeta con los medios ópticos (7) hasta que dichas lecturas alcanzan un umbral de consigna o hasta que haya transcurrido un tiempo determinado.19. Procedure for measuring total coliforms and Escherichia coli based on optical detection for water quality control applications, by means of the installation according to any one of claims 12 to 18, characterized in that it comprises a previous operation of conditioning the bucket ( 1), a filling operation of the cuvette with mixing and a measuring operation in which the contained mixture is subjected to a temperature between 30 ° and 40 °, and readings of the physical-chemical parameters of said mixture contained in the cuvette with the optical means (7) until said readings reach a setpoint threshold or until a certain time has elapsed. 20. Procedimiento según la reivindicación anterior, caracterizado porque comprende las operaciones añadidas de20. Method according to the preceding claim, characterized in that it comprises the added operations of
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vaciar la cubeta (1);empty the bucket (1);
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realizar un número predeterminado de aclarados del conducto de distribución (20) y la cubeta con líquido muestra, llenándolos con líquido muestra hasta que la cubeta rebose a través de su conducto de rebose (34), esperar un tiempo predeterminado, y vaciar tanto el conducto de distribución como la cubeta, coadyuvando alternativamente con los medios agitadores (5) dispuestos en la cubeta.make a default number of rinse of the distribution duct (20) and the liquid cuvette sample, filling them with liquid sample until the bucket overflows through its overflow duct (34), wait a while predetermined, and empty both the distribution duct and the cuvette, alternately contributing with stirring means (5) arranged in the bucket.
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llenar con líquido biocida el conducto de distribución (20) y la cubeta, llenando el conducto de distribución hasta que la cubeta rebose a través de su conducto de rebose y esperar un tiempo predeterminado; yfill in with biocidal liquid the distribution duct (20) and the cuvette, filling the distribution duct until the bucket overflows with through its overflow conduit and wait a predetermined time; Y
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vaciar el líquido biocida del conducto de distribución.empty the biocidal liquid from the distribution duct.
21. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 19 ó 20, caracterizado porque la operación previa de acondicionamiento de la cubeta 1 comprende los pasos de21. Method according to any one of claims 19 or 20, characterized in that the preconditioning operation of the cuvette 1 comprises the steps of
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vaciar el líquido biocida dispuesto en la cubeta (1);empty the biocidal liquid disposed in the cuvette (1);
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aclarar con líquido reactivo el conducto de distribución (20); yrinse the conduit with reactive liquid distribution (20); Y
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realizar un número predeterminado de aclarados previos del conducto de distribución y la cubeta con líquido muestra, llenándolo con líquido muestra hasta que la cubeta rebose a través de su conducto de rebose (34), esperar un tiempo predeterminado, y vaciar tanto el conducto de distribución como la cubeta, coadyuvando alternativamente con los medios agitadores (5) dispuestos en la cubeta.make a default number of previous rinsing of the distribution duct and the cuvette with liquid sample, filling it with liquid sample until the cuvette overflow through its overflow conduit (34), wait a while predetermined, and empty both the distribution duct and the cuvette, alternately contributing with stirring means (5) arranged in the bucket.
22. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21, caracterizado porque la etapa de lectura de los medios ópticos (7) comprende etapas iterativas de lectura de la absorbancia a una longitud de onda predeterminada y de la fluorescencia a otra longitud de onda predeterminada.22. Method according to any one of claims 19 to 21, characterized in that the step of reading the optical means (7) comprises iterative stages of reading the absorbance at a predetermined wavelength and the fluorescence at another predetermined wavelength . 23. Procedimiento según la reivindicación anterior, caracterizado porque entre cada etapa de lectura de la absorbancia y de lectura de la fluorescencia se realiza una agitación de la mezcla contenida en la cubeta 1.23. Method according to the preceding claim, characterized in that between each stage of absorbance reading and fluorescence reading, stirring of the mixture contained in cuvette 1 is performed. 24. Procedimiento según la reivindicación anterior, caracterizado porque la lectura de la absorbancia se mide a 405 nm y la fluorescencia se mide a 450 nm al excitar dicha mezcla a 365 nm.24. Method according to the preceding claim, characterized in that the absorbance reading is measured at 405 nm and the fluorescence is measured at 450 nm when said mixture is excited at 365 nm.
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