ES2318992A1 - Procedimiento para la preparacion de luteina esencialmente pura a partir de extractos de marigold. - Google Patents
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Abstract
Procedimiento para la preparación de luteína esencialmente pura a partir de extractos de marigold. Se describe un procedimiento para la preparación de luteína esencialmente pura a partir de extractos de marigold (Tagetes erecta L.) caracterizado por las siguientes etapas: a) tratamiento del extracto con un éster de un ácido orgánico de cadena corta y, por tanto, de bajo punto de ebullición, seleccionado entre el acetato de metilo, de etilo o de propilo, o bien, formiato de metilo, de etilo o de propilo o una mezcla de ellos, b) saponificación del producto así obtenido por acción de reactivos alcalinos, tales como los óxidos y/o hidróxidos de metales alcalinos y alcalino térreos, en medio orgánico o acuoso-orgánico y en presencia de agentes antioxidantes, c) neutralización parcial por adición de ácidos orgánicos, o inorgánicos y posterior tratamiento con disolventes apolares, tipo alcanos, cicloalcanos o similares, d) eliminación de los disolventes y secado, con lo que se obtiene luteína con una pureza entre el 88% y el 97% e incluso superior apta para el consumo humano. El producto obtenido es útil como aditivo en la alimentación.
Description
Procedimiento para la preparación de luteína
esencialmente pura a partir de extractos de marigold.
Se describe un procedimiento para la preparación
de luteína esencialmente pura a partir de extractos de marigold
(Tagetes erecta) caracterizado por las siguientes
etapas:
- a)
- tratamiento del extracto con un éster de un ácido orgánico de cadena corta y, por tanto, de bajo punto de ebullición, seleccionado entre el acetato de metilo, de etilo o de propilo, o bien, formiato de metilo, de etilo o de propilo o una mezcla de ellos, con el objeto de disminuir la proporción de la zeaxantina, y de eliminar parcial o totalmente los isómeros de la luteína, los epoxicarotenoides y los otros carotenoides junto con los lípidos diversos presentes en los extractos mencionados,
- b)
- saponificación del producto así obtenido por acción de reactivos alcalinos, tales como los óxidos y/o hidróxidos de metales alcalinos y alcalino térreos, en medio orgánico o acuoso-orgánico y en presencia de agentes antioxidantes,
- c)
- neutralización parcial por adición de ácidos orgánicos, tales como acético o fórmico, o inorgánicos tales como clorhídrico o sulfúrico, y posterior tratamiento con disolventes apolares, tipo alcanos, cicloalcanos o similares,
- d)
- eliminación de los disolventes y secado.
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Con ello se obtiene luteína con una pureza entre
el 88% y el 97% e incluso superior, apta para el consumo
humano.
Sin duda, la presencia de los carotenoides en
nuestra vida cotidiana se ilumina con el colorido de gran
diversidad de flores y plantas en general, como el brillante
amarillo de la luteína del marigold, el naranja que proporciona el
\beta-caroteno a la zanahoria, el rojo que el
licopeno da a los tomates, etc. Sabido es que justamente en las
plantas y en las algas, es donde principalmente se encuentran los
carotenoides además de en algunos microorganismos, cumpliendo
fundamentalmente funciones de protección contra la luz y el oxígeno
(Britton, et al).
Kathrein ya había logrado obtener carotenoides a
partir de algas y utilizarlos también para el consumo humano desde
hace varias décadas (US 2949700), al igual que posteriormente hizo
Moore en el caso específico de la luteína (US 3280502) y
posteriormente Hills, reivindicando inclusive aplicaciones
medicinales (US 4851339). Más recientemente Shimada ha aplicado
tecnologías enzimáticas para retirar los ácidos grasos de los
extractos que contienen carotenoides, como los del alga
Haematococcus para la obtención de astaxantina (US
2004/0115758).
Los animales no son capaces de sintetizar estas
moléculas, tampoco el hombre. Pero pueden depositarlos en su
organismo, como los salmónidos con la astaxantina y la cantaxantina
y los pollos que depositan la luteína y la zeaxantina en su piel,
las gallinas en la yema de los huevos, etc. Tradicionalmente
algunas de estas moléculas, como la luteína y la zeaxantina,
obtenidas principalmente del marigold, la alfalfa o el maíz
amarillo, han sido ya utilizadas en la industria avícola para la
pigmentación de tejidos y yemas de los huevos (Poultry Sci.,
62:1205-10). Además, en años recientes este trabajo
se ha convertido en referencia obligada tratándose de procesos para
purificar la luteína del marigold, ya que el producto obtenido es lo
suficientemente puro como para ser utilizado como reactivo patrón o
bien en fórmulas para el consumo humano. Trabajos esenciales (Food
Rev Intr., 20:33), particularmente con los extractos de marigold,
para obtener fórmulas útiles para la pigmentación en avicultura (US
3539686, US 3997679) y procedimientos para la obtención de
concentrados de luteína, además de para el consumo humano, fueron
reportados por Granty-Hawks hace más de treinta
años (US 3523138 y US 3535426).
La creciente utilización de diversos
carotenoides en la alimentación y la salud humana ha detonado el
interés en estos compuestos durante los últimos años. En este
sentido es conveniente acentuar que ya desde antes de 1956
Bauernfied desarrollaba formulaciones de carotenoides naturales
para incluirse en aplicaciones para el consumo humano y preveía la
sustitución de los análogos sintéticos (US 2861891) en esa época
existentes, posteriormente este tipo de esfuerzos fueron continuados
por Klaui (US 3206316), Emodi (US 3886294) y después por Antoshkiw
(US 3998753).
En su forma purificada también se han empleado
con fines analíticos, como reactivo patrón (Poultry Sci.,
70:651-4, Phytoplankton pigments in oceanography,
UNESCO). En esta última referencia Repeta hace una brillante
revisión y aportación de tecnología para la preparación de diversos
carotenoides altamente purificados.
En lo que se refiere a los extractos de marigold
parcialmente purificados como el que describe Philip (US 4048203)
tratando de enriquecer los ésteres de luteína contenidos en los
extractos de marigold se puede decir que representa una aportación
relevante en los inicios de la búsqueda de la obtención de luteína
útil para los humanos en su forma esterificada. En este mismo campo
se han reportado variantes a este proceso como el de Levy (US
6191293) que utiliza alcoholes para precipitar los ésteres desde el
extracto o Kumar (US 6737535) que hace lo propio con disolventes
cetónicos y más recientemente Rao (US 2004/0267033) que los obtiene
bajo condiciones supercríticas.
Sin embargo, se debe reconocer que Burdick logró
preparar cristales de luteína al 100% de pureza desde hace muchos
años teniendo en mente un producto enfocado en el consumo humano
(US 3248301). También Prebluda describe la manera de obtener
cristales de luteína para el consumo humano o bien para la
pigmentación en la avicultura (US 3333962).
Aunque la preparación de cristales de
carotenoides diversos, como la luteína, y su aplicación en el
consumo humano es un asunto reivindicado recurrentemente en
patentes de hace varias décadas, no fue sino hasta hace unos cuantos
años que carotenoides naturales altamente purificados como la
luteína, la zeaxantina, el licopeno y la astaxantina, entre otros,
han tenido una real demanda comercial. Es así que han proliferado
las metodologías que intentan obtener la mejor versión de un
carotenoide de alta pureza.
Por ejemplo, Khachik (US 5382714) reporta un
proceso de purificación en el que dice obtener y además reivindica,
la (3R, 3'R, 6'R)
\beta,\varepsilon-carotene-3,3'-diol
(trans-luteína) esencialmente pura, libre de impurezas
químicas (sin mencionar exactamente que componentes) y otros
carotenoides. Sin embargo el proceso descrito no permite separar
los isómeros geométricos de la luteína de una manera simple y
económica sino que tiene que recurrirse a una serie de procesos de
recristalización caros, tediosos y toxicológicamente cuestionables,
inclusive hasta el día de hoy este tema sigue siendo complicado
utilizando aún procesos cromatográficos, poco atractivos, también,
económicamente.
Conviene apuntar que en gran cantidad de
vegetales verdes y algunas flores y frutas la luteína y la
zeaxantina frecuentemente van juntas en determinada proporción y
que para la luteína se han detectado (Anal. Chem.,
73:667-74, J Agric Food Chem.,
1322-27) por lo menos 5 estereoisómeros principales
(all-E, 13-Z, 13'Z, 9-Z y 9'Z) y
3 para la zeaxantina (all-E, 13-Z y 9-Z).
Khachik también ignora totalmente el hecho de que la luteína pura
ya había sido reportada décadas atrás, probablemente con los mismos
u otros defectos analíticos, y su uso en el consumo humano también
y de manera reiterada. Además, el uso de disolventes organoclorados
para su proceso de recristalización es bastante cuestionable.
Más tarde Ausich (US 5648564) desarrolló un
proceso para purificar carotenoides saponificando los extractos
grasos de diversos vegetales en glicoles y separando los cristales
del producto de interés por centrifugación. Posteriormente Khachik
hace una disertación acertada (US 6262284) en cuanto a los
inconvenientes del proceso de Ausich, principalmente en cuanto a la
presencia de hexano en los extractos utilizados y al prolongado
procesamiento que conduce a la inevitable presencia de otros
productos de degradación en un producto final de pureza limitada.
También hace lo mismo con su propio trabajo anterior (US 5382714),
lo cual apoya de manera definitiva nuestros comentarios previos en
cuanto a los inconvenientes de tales procedimientos.
Mención aparte merece el reconocimiento de
Khachik en el sentido de que ya antes que él lo hiciera, se había
reportado un procedimiento útil para preparar luteína de alta
pureza para el consumo humano (Poult. Sci., 70:651), que en su
patente inmediata anterior había omitido discutir (US 5382714) y
que antes como ahora se trata de un proceso del dominio
público.
Montoya trata de reivindicar procedimientos de
refinación genéricos para los extractos vegetales como la
neutralización de ácidos grasos libres y el desgomado de los
extractos vegetales grasos con posterior centrifugación, desde hace
décadas del dominio público (US 6504067). Además el proceso que
describe corresponde a una adaptación, lamentablemente, bastante
cercana al procedimiento descrito por Prebluda (US 3333962) que
igualmente no conduce a la obtención de carotenoides de alta pureza
sin utilizar disolventes de toxicidad cuestionable.
Más recientemente Madhavi (US 6380442) reportó
un procedimiento que parece ser una adaptación del trabajo
reportado por Ausich en el cual se sustituye el propilenglicol por
un alcohol de cadena corta en la etapa de saponificación aduciendo
un proceso más corto y por lo tanto generando menos subproductos.
Rodríguez (US 6329557) hace uso de disolventes polares y no polares
para eliminar eficientemente clorofilas de sus muy particulares
extractos de marigold ricos en material verde, aunque finalmente
logra concentrados de luteína aptos para el consumo humano. Kumar
(US 6743953) saponifica extractos de marigold en medio alcohólico,
después de eliminar el alcohol, diluye el jabón residual con agua y
haciendo uso de una mezcla de disolventes, polar y no polar, extrae
las xantofilas de interés en su forma libre. Aunque el uso del
acetato de etilo parece adecuado en el proceso de saponificación,
la utilización además de alcoholes y cetonas vuelven al proceso
global un tanto lento y con mayor presencia de disolventes
residuales. Socia (US 2005/0153002) precipita los ácidos grasos de
los extractos de marigold saponificados utilizando sales de metales
pesados y posteriormente extrae el material colorante utilizando
disolventes polares. El concentrado de luteína obtenido parece ser
apto para el consumo humano.
Como se puede observar los procedimientos para
obtener carotenoides de alta pureza se han venido multiplicando en
años recientes, particularmente en el caso de la luteína y
zeaxantina obtenidas a partir de los extractos de marigold,
principalmente.
Sin embargo, particularmente en el caso de los
extractos de marigold, ninguno de los procedimientos mencionados
logra eliminar rápida, eficiente y económicamente la zeaxantina
presente y los isómeros geométricos de la luteína. Esta es la razón
por la que la pureza de luteína en los productos comerciales alcanza
valores máximos entre el 90 y el 93%.
\newpage
Por otra parte, en los últimos años se ha venido
obteniendo evidencia experimental suficiente (Annu. Rev. Nutr.
23:171) que demuestra el papel activo que los carotenoides en la
protección contra diversas enfermedades que aquejan al ser humano,
como son diversos tipo de cáncer, SIDA, enfermedades
cardiovasculares, degeneración macular asociada a la edad, entre
otras. (Pure & Appl Chem., 71:2213). Mucha de la investigación
que se ha llevado a cabo está relacionada con el papel de los
carotenoides como agentes antioxidantes, que por tanto, protegen
eficientemente contra la oxidación y demás procesos destructivos
que involucran radicales libres (Carotenoids Vol. 1A) y que
desencadenan procesos degenerativos con el perjuicio directo a la
salud.
Por lo tanto, un objetivo primordial de esta
invención es el de obtener luteína de alta pureza, con contenidos
que van desde el 88% hasta el 97% del ingrediente activo, e incluso
superiores, para su utilización en el consumo humano, mediante un
procedimiento sencillo que permite la disminución de la proporción
de la zeaxantina y la eliminación parcial o total de los isómeros
de la luteína, de los epoxicarotenoides y del resto de
carotenoides, tales como la \beta-criptroxantina y
el \beta-caroteno entre otros, que están
presentes en el extracto de marigold.
\vskip1.000000\baselineskip
En esta invención se describe un nuevo
procedimiento para preparación de luteína esencialmente pura a
partir de extractos de marigold.
La luteína y la zeaxantina están presentes
simultáneamente en los extractos de marigold. La proporción más
frecuente de luteína (L) frente a zeaxantina (Z) observada en los
extractos u oleorresinas de marigold es de 77-80%
(L):4-6%(Z), mientras que en los extractos
saponificados la proporción varía ligeramente hasta alcanzar
valores del orden de 80-85%(L):
4-6%(Z). Prácticamente en todos los procedimientos
citados anteriormente en la descripción del estado de la técnica,
para la purificación de luteína se obtiene una proporción de
90-93%(L): 4-6%(Z). Aunque hay
algunos autores que describen la obtención de luteína de pureza
superior, el hecho es que los productos comerciales presentan como
valores máximos de riqueza los ya mencionados del 90 al 93%.
Frente a los procedimientos descritos en la
bibliografía, el que aquí se describe permite preparar concentrados
de luteína con purezas muy elevadas, que pueden alcanzar el 97%, e
incluso superiores, mediante un proceso sencillo que consta de las
siguientes etapas:
- a)
- tratamiento del extracto de la flor de marigold con un éster de bajo punto de ebullición que permite obtener un concentrado de xantofilas esterificadas que es útil por sí mismo, para el consumo humano,
- b)
- saponificación por acción de un reactivo alcalino del extracto parcialmente purificado,
- c)
- neutralización por adición de ácidos orgánicos o inorgánicos y extracción con disolventes apolares,
- d)
- eliminación de disolventes y secado.
Es importante recalcar que en el caso específico
de los pigmentos contenidos en la flor de marigold se logra una
separación más eficaz entre la luteína y la zeaxantina en su forma
esterificada. Este aspecto supone una gran diferencia respecto de
todas las tecnologías anteriormente discutidas. De hecho, al ser
tan similares en sus propiedades físico-químicas es
ampliamente conocido el problema de que ambas moléculas en su forma
libre poseen solubilidades en cualquier disolvente sumamente
parecidas (J Agric. Food Chem., 40:431-4, US
2004/0018279). Por esta razón, cuando la técnica se fundamenta en
los habituales procesos extractivos sobre las referidas formas
libres, siempre se mantiene una proporción en los purificados
aproximadamente de 90:5 entre la luteína y la zeaxantina.
En cuanto a las formas esterificadas de estas
xantofilas las solubilidades resultan un poco más diferenciadas,
sobre todo en el caso particular de los disolventes utilizados en
el procedimiento que aquí se describe, lo que permite alcanzar
valores superiores al 97% para la luteína en el producto final
cristalizado.
Un aspecto de gran interés sobre todo a nivel
industrial y que supone una ventaja importante frente a lo
descrito, es la sencillez técnica de todas las etapas que
constituyen el presente procedimiento. Esto simplifica
considerablemente el equipamiento necesario para llevar a cabo la
producción industrial con el consecuente aumento de productividad y
la disminución de costes de producción.
Dado que el producto final de este procedimiento
es el resultado de diferentes procesos de reacción y purificación,
una ventaja adicional es la completa eliminación de posibles
pesticidas residuales, lo cual resulta altamente conveniente para su
aplicación final en la industria alimentaria y farmacológica.
Se incluye en la presente memoria un
procedimiento para incrementar la estabilidad de la luteína una vez
purificada, que consiste en someterlo a un proceso de
microencapsulación utilizando los excipientes habituales. Se
consigue, de esta manera, disminuir la superficie de contacto de la
luteína con el oxígeno atmosférica, reduciendo considerablemente
los mecanismo de oxidación y, por tanto, incrementado la
estabilidad del producto.
El extracto u oleorresina de flor de marigold
que constituye el producto de partida para la preparación de
luteína esencialmente pura, es un producto de origen natural que
presenta, tal como se ha citado anteriormente, una elevada
proporción de xantofilas cuyos grupos hidroxilo están esterificados
con ácidos grasos.
La primera etapa del procedimiento que aquí se
describe consiste en el tratamiento del referido extracto con un
disolvente constituido por un éster de un ácido orgánico de cadena
corta y, por tanto, de bajo punto de ebullición.
Entre los ésteres utilizados se incluyen los del
ácido acético y los del ácido fórmico principalmente, los acetatos
de metilo, etilo, n-propilo e isopropilo, y los
formiatos de metilo, etilo, n-propilo e isopropilo,
por separado o en forma de mezcla de dos o más de ellos. Los
mejores resultados se han obtenido con el acetato de etilo, siendo,
por tanto este disolvente la mejor opción para llevar a cabo la
primera etapa.
El objetivo de la primera etapa es el de
disminuir en la mayor medida posible la proporción de la
zeaxantina, los isómeros de la luteína, los epoxicarotenoides y los
demás carotenoides. Dada la similitud estructural de estos
compuestos con la luteína, la eliminación total de todos ellos es
muy difícil. Por ello, para conseguir elevados niveles de pureza se
requiere con frecuencia la repetición de esta primera etapa un
número variable de veces. El tratamiento con el disolvente permite,
por otra parte, la eliminación de los diversos lípidos presentes en
el extracto de partida.
La utilización de disolventes de bajo punto de
ebullición presenta una ventaja adicional de gran interés a nivel
industrial, su fácil recuperación y reciclaje por los métodos
habituales de evaporación y destilación, ampliamente conocidos.
La cantidad de disolvente utilizada depende en
cierta medida de la naturaleza del extracto de marigold utilizado y
del disolvente considerado. Los mejores resultados se han obtenido
manteniendo una proporción entre el disolvente y el extracto de
entre 0.1 y 3.0 partes, preferentemente entre 0.5 y 1.0, de
disolvente por cada parte del extracto.
Los parámetros de temperatura, tiempo y
agitación para llevar a cabo la primera etapa del procedimiento han
resultado influir considerablemente en el resultado. Si bien se han
obtenido buenos resultados con temperaturas entre 10ºC y 60ºC, los
mejores resultados se han obtenido manteniendo la temperatura en el
orden de los 25ºC a 30ºC.
Durante el tratamiento se debe mantener una
agitación muy vigorosa que garantice un buen contacto entre la fase
grasa del extracto de marigold y el disolvente orgánico. Por otra
parte, el tiempo de tratamiento está íntimamente ligado a la
temperatura y a la naturaleza del disolvente considerado. En
general, tiempos entre 15 minutos y 2 horas permiten la obtención
de buenos resultados, siendo suficientes valores en el entorno de
los 30 minutos.
Una vez terminado el tratamiento con el
disolvente, la masa se mantiene en reposo durante el tiempo
necesario para obtener una buena decantación, normalmente entre 15
y 30 minutos, y se procede a la eliminación de la mayor parte de la
fase líquida mediante filtración, centrifugación o un método
similar. Con ello se separa el disolvente con gran parte de la
zeaxantina, los isómeros de la luteína, los lípidos y otros
componentes menores.
Esta operación se puede repetir entre 2 y 5
veces hasta obtener un concentrado de xantofilas esterificadas en
el cual más del 97% corresponde a los ésteres de luteína,
frecuentemente estearatos, miristatos y palmitatos (J Agric. Food
Chem., 50:66-70).
La eliminación del resto de disolvente del
producto obtenido en esta etapa y su posterior secado a vacío
permite la obtención de un polvo de color naranja que puede tener
utilidad en el consumo humano, tanto como aditivo alimentario como
en tratamientos de salud.
La segunda etapa del procedimiento que aquí se
describe consiste en la obtención de las xantofilas libres a partir
de las formas esterificadas purificadas en la etapa anterior
mediante un proceso de saponificación.
La saponificación se puede llevar a cabo por
acción de reactivos básicos tipo óxidos e hidróxidos de metales
alcalinos o alcalinotérreos. Los mejores resultados se han obtenido
con los hidróxidos de sodio ó de potasio, o bien una mezcla de
ellos, en una proporción de entre 0.2 a 0.5 partes de reactivo
alcalino por cada parte de concentrado de ésteres de
xantofilas.
El medio de reacción puede ser acuoso, orgánico
o acuoso-orgánico, preferentemente, alcohólico o
hidroalcohólico, y se lleva a cabo en presencia de agentes
antioxidantes que ayuden a evitar la degradación de estos compuestos
durante el proceso global. El ácido ascórbico y sus ésteres, el
galato de propilo, los tocoferoles, el butilhidroxitolueno (BHT) y
el butilhidroxianisol (BHA) o mezclas de ellos, son los
antioxidantes que han dado los mejores resultados. La proporción de
antioxidante utilizada está entre el 0,05% y el 2%, obteniéndose
buenos resultados utilizando entre el 0.1% y el 1%, en peso
respecto del contenido en xantofilas esterificadas.
La saponificación se puede llevar a cabo bajo
condiciones de proceso convencionales, manteniendo la temperatura
entre 70ºC y 100ºC y el tiempo de reacción entre 30 minutos y 5
horas. Aunque la reacción se puede llevar a cabo en condiciones
atmosféricas es más conveniente utilizar una atmósfera inerte, con
lo que se garantiza una mejor conservación de las xantofilas.
Una vez concluida la saponificación se lleva a
cabo la tercera etapa, el proceso de neutralización. Para ello se
trata la masa de reacción con un ácido orgánico, principalmente
fórmico, acético, cítrico o una mezcla de ellos, o bien, un ácido
inorgánico, principalmente clorhídrico, sulfúrico, fosfórico o una
mezcla de ellos.
Si bien todos los ácidos ensayados permiten una
buena decantación, el que mejores resultados ha dado es el ácido
clorhídrico, preferentemente diluido en agua, con valores de
concentración entre el 5% y el 10%.
La neutralización se lleva a cabo adicionando
entre 1 y 20 partes en peso, preferentemente entre 3 y 10, del
ácido clorhídrico diluido de concentración entre 5 y 10%, por cada
parte de producto obtenido en la etapa b).
La adición del ácido se lleva a cabo lentamente
y manteniendo fuerte agitación y una temperatura entre 70ºC y 90ºC,
con lo que se consigue separar la fracción grasa y descartar las
sales disueltas en el agua y otras impurezas solubles. En estas
condiciones y manteniendo la temperatura en el citado intervalo, se
procede a la filtración o centrifugación obteniendo el extracto
residual esencialmente seco.
La tercera etapa se completa con el tratamiento
del producto con disolventes apolares, preferentemente
hidrocarbonados, tipo alcanos, cicloalcanos o similares, tales como
éter de petróleo, ciclohexano, hexano, heptano o mezcla de ellos.
Entre todos los mejores resultados se han obtenido con el
ciclohexano.
Para ello se utilizan entre 2 y 100 partes de
ciclohexano por cada parte de extracto, preferentemente entre 5 y
50 partes. La mezcla se calienta suavemente hasta alcanzar una
temperatura entre 30ºC y 40ºC y se agita entonces vigorosamente
hasta alcanzar una masa homogénea. Se deja reposar hasta completar
la precipitación.
La cuarta etapa del procedimiento consiste en la
eliminación de los disolventes utilizados y secado del producto
sólido resultante. Así, del concentrado de xantofila se elimina el
disolvente por filtración o centrifugación. El secado de sólido
residual a vacío y temperatura entre 25ºC y 30ºC permite aislar la
luteína en forma de polvo violáceo.
El disolvente separado en esta última etapa se
puede someter a destilación para recuperar el ciclohexano. El
residuo de esta destilación, rico en pigmentos residuales, una vez
libre de disolvente, puede ser formulado para su utilización en la
industria avícola, principalmente para la pigmentación de la piel
de pollo y la yema del huevo.
Por otra parte, los cristales de luteína pueden
ser sometidos a un lavado con alcohol para eliminar impurezas
residuales solubles y posteriormente con agua. Se obtiene de esta
manera un producto final con purezas entre el 88% y 97% en luteína
e incluso superiores. Los niveles más elevados de pureza de luteína
se obtienen cuando la primera etapa del procedimiento (etapa a)) se
repite entre 2 y 5 veces, tal como se ha descrito
anteriormente.
Es aconsejable estabilizar este producto
adicionando nuevamente agentes antioxidantes preferentemente
liposolubles tales como el BHT, BHA, tocoferol, ácido ascórbico y
sus ésteres, galato de propilo, ya que dichos pigmentos son muy
sensibles a procesos degradativos en presencia de la luz, el calor o
el oxígeno.
El producto, debido a sus características de
pureza puede emplearse como reactivo patrón con fines analíticos,
también en fórmulas farmacológicas y nutracéuticas para el
tratamiento de diversos problemas de salud como algunos tipos de
cáncer, enfermedades cardiovasculares, degeneración macular asociada
a la edad (J. Nutr., 133:992), padecimientos dermatológicos,
fortalecimiento del sistema inmunológico, entre otras ampliamente
documentadas (Nutr Rev., 57:201). La luteína se utiliza también
como colorante de diversos alimentos como cereales, dulces,
derivados lácteos, bebidas refrescantes y energizantes, aderezos y
postres, pan y pasteles, pastas, salsas, etc. También se formula
con bastante éxito en alimentos para mascotas.
Además su uso se ha hecho intensivo en diversos
cosméticos que van desde las cremas antienvejecimiento hasta los
bloqueadores solares para la piel, jabón y champú, maquillajes,
entre otras muchas.
A continuación se exponen unos ejemplos del
procedimiento descrito, sin que se deba atribuir a los mismos un
carácter limitativo.
Ejemplo
1
Alrededor de 23 Kg de oleorresina de marigold
son tratados con 5 Kg de acetato de etilo a temperatura ambiente.
La mezcla se agita durante 30 min y se centrifuga para obtener un
producto enriquecido en ésteres de xantofilas. El proceso se repite
dos veces más manteniendo igual proporción de disolvente y
sustrato.
El producto obtenido se introduce en un reactor
previamente calentado y se añaden 0.2 Kg de BHT. Se agregan
lentamente 12 Kg de una disolución alcalina compuesta por un 23.5%
NaOH, un 23.5% agua y un 53% etanol.
La mezcla se mantiene en agitación constante a
70ºC durante 2 h. A continuación se añaden 20 litros de una
solución acuosa que contiene 8 litros de ácido clorhídrico
concentrado, se deja separar las dos fases y se decanta la fase
acuosa. A la fase orgánica se añaden 460 litros de éter de petróleo
en agitación a 55ºC durante 45 min. Se enfría entonces a 15ºC
formándose un precipitado rico en xantofilas que se filtra, seca y
tamiza, dando lugar a un polvo marrón de brillo metálico que
contiene más de 880 mg de luteína/gramo de polvo.
La fase orgánica se destila para recuperación de
los disolventes. El residuo de destilación contiene una pequeña
proporción de luteína y puede usarse también como fuente
pigmentante.
El producto enriquecido se estabiliza mediante
la adición de un antioxidante como por ejemplo galato de propilo y
se microencapsula siguiendo los métodos habituales.
Ejemplo
2
En un reactor se introducen 50 Kg de un extracto
de marigold a la temperatura ambiente. Se adicionan 25 Kg de
acetato de etilo y se agita durante 30 minutos hasta completa
homogenización. La mezcla se centrifuga con lo que se obtiene un
sólido enriquecido en ésteres de xantofilas y una fracción líquida
enriquecida en lípidos, epoxicarotenoides y
cis-carotenoides, entre otros. Se repite el
tratamiento un total de tres veces más, manteniendo la proporción
sólido:disolvente.
Con ello se obtienen 18 Kg de un sólido naranja
que contiene alrededor de 400 g de carotenoides por kilogramo de
producto, de los cuales el 97% corresponde a los ésteres de
luteína. Dadas sus características de pureza, después de eliminar
totalmente el disolvente residual, este producto podría ser
utilizado para el consumo humano.
Sin embargo, se somete al resto de etapas del
proceso de purificación. Así, siguiendo un procedimiento tal como
se describe en el Ejemplo 1 se obtienen alrededor de 6 Kg de un
polvo violáceo con un contenido superior al 90% de carotenoides
totales, de los cuales el 96% es luteína. El producto se utiliza
como tal o se formula de acuerdo con la aplica-
ción a la que se vaya a dirigir, tal como, la microencapsulación utilizando palmitato de ascorbilo como antioxidante.
ción a la que se vaya a dirigir, tal como, la microencapsulación utilizando palmitato de ascorbilo como antioxidante.
Ejemplo
3
Se lleva a cabo el procedimiento descrito en el
Ejemplo 2 utilizando ciclohexano en lugar del éter de petróleo. Las
xantofilas precipitan y el disolvente se elimina mediante succión.
El producto así obtenido se lava una vez más con ciclohexano
repitiendo la operación, aunque en esta ocasión las xantofilas
precipitadas se recogen filtrando la disolución del
ciclohexano.
Sobre el concentrado de xantofilas se efectúa un
lavado con etanol hasta que por el fondo del filtro se observa la
salida de una disolución transparente. Finalmente se eliminan las
sales residuales por lavado con agua desmineralizada y el producto
final se seca al vacío.
Se obtiene un polvo con una concentración
superior al 95% en carotenoides totales de los cuales el 97% es
luteína. El pigmento se estabiliza utilizando una mezcla de galato
de propilo y tocoferoles para su utilización en el consumo
humano.
Ejemplo
4
El extracto de marigold descrito en el Ejemplo 2
se trata con 25 Kg de una mezcla de acetato de etilo:acetato de
isopropilo:formiato de etilo en la proporción 50:30:20
correspondiente a porcentajes en peso de los disolventes
mencionados, a 20ºC, durante 45 minutos con agitación moderada.
Se centrifuga la mezcla para obtener un
concentrado de marigold que contiene alrededor de 200 gramos de
xantofilas por cada kilogramo de extracto. La operación se repite
una vez más pero utilizando solo 15 Kg de la mezcla de disolventes y
manteniendo iguales el resto de condiciones de proceso. De esta
manera se obtiene un concentrado de xantofilas que contiene
alrededor de 300 gramos de carotenoides por cada kilogramo de
extracto de los cuales el 91% son ésteres de luteína.
Se elimina el disolvente y se saponifica y
purifica de acuerdo con las condiciones descritas en el Ejemplo 1,
con lo que se obtiene un polvo violeta que contiene más de 950
gramos de xantofilas por cada kilogramo de polvo y de los cuales el
91% es luteína libre y menos del 2% corresponde a la zeaxantina.
Ejemplo
5
500 g de oleorresina de marigold que contienen
56 g de esteres de luteína se mezclan con 250 g de formiato de
etilo a la temperatura ambiente durante 30 minutos. Una vez que la
mezcla es completamente homogénea se procede a centrifugarla para
separar la fase orgánica que contiene el disolvente y el
concentrado que se ha enriquecido en ésteres de xantofilas. Esta
operación se repite una vez más para obtener un concentrado de
xantofilas que contiene más de 400 gramos de carotenoides por cada
kilogramo de concentrado de los cuales más del 95% corresponden a
los ésteres de luteína.
Se elimina el disolvente mediante procedimientos
convencionales y, posteriormente, se seca a vacío. El producto así
obtenido está libre de disolventes y puede ser utilizado para el
consumo humano.
Por otra parte, el disolvente ha sido
apropiadamente recuperado para su reciclaje y los pigmentos
residuales obtenidos se destinan a la pigmentación de piel de pollo
y yema de huevo.
El concentrado de ésteres de xantofilas, así
preparado, puede someterse a un proceso de saponificación en
atmósfera inerte utilizando 0.4 partes de NaOH por cada parte de
extracto parcialmente purificado además de 0.6 partes de etanol. La
masa de reacción se calienta y se mantiene la temperatura alrededor
de los 70ºC.
Una vez concluida la reacción se agregan 10
partes de agua, 2 partes de ácido fosfórico concentrado y 0.5
partes de ácido cítrico en relación al peso total. Este proceso se
lleva a cabo también a 70ºC y hasta completa separación de una capa
grasa. Este material lipídico se separa y se trata con 20 partes de
ciclohexano a 35ºC y agitación vigorosa hasta completa
precipitación de los cristales de luteína.
Se separa el disolvente y los cristales se secan
a vacío para obtener un producto con un contenido en luteína del
95%.
Ejemplo
6
10 g del concentrado de ésteres de luteína
obtenidos en el Ejemplo 5 se saponifican mezclando el pigmento con
una disolución acuosa que contiene 5 gramos de KOH, agitando
durante 3 horas a 80ºC en atmósfera inerte y utilizando una mezcla
de BHA y BHT como antioxidantes.
Una vez concluida la saponificación se agrega
una mezcla de 10 ml de HC1 y 40 ml de agua. Se continúa agitando
hasta completa separación de una fase acuosa turbia y una capa
aceitosa homogénea. La fase acuosa se descarta y el aceite residual
se mezcla con 200 ml de hexano, 50 ml de etanol y 0.5 ml de HC1.
Después de agitar vigorosamente manteniendo la temperatura de la
mezcla a 40ºC, se deja en reposo mientras se completa la
precipitación de las xantofilas. El sólido se separa y la fase
líquida que contiene los disolventes se almacena para su
recuperación.
Los cristales de luteína finalmente se lavan con
agua y posteriormente se secan a vacío para obtener 7 gramos de un
polvo violáceo que contiene más de un 90% de carotenoides, de los
cuales más del 97% es luteína.
Claims (12)
1. Un procedimiento para la preparación de
luteína esencialmente pura a partir de extractos de marigold
(Tagetes erecta) caracterizado por las siguientes
etapas:
- a)
- tratamiento del extracto con un éster de un ácido orgánico de cadena corta y, por tanto, de bajo punto de ebullición, seleccionado entre el acetato de metilo, de etilo o de propilo, o bien, formiato de metilo, de etilo o de propilo o una mezcla de ellos, con el objeto de disminuir la proporción de la zeaxantina, y de eliminar parcial o totalmente los isómeros de la luteína, los epoxicarotenoides y los otros carotenoides junto con los lípidos diversos presentes en los extractos mencionados,
- b)
- saponificación del producto así obtenido por acción de reactivos alcalinos, tales como los óxidos y/o hidróxidos de metales alcalinos y alcalino térreos, en medio orgánico o acuoso-orgánico y en presencia de agentes antioxidantes,
- c)
- neutralización parcial por adición de ácidos orgánicos, tales como acético o fórmico, o inorgánicos tales como clorhídrico o sulfúrico, y posterior tratamiento con disolventes apolares, tipo alcanos, cicloalcanos o similares,
- d)
- eliminación de los disolventes y secado,
con lo que se obtiene luteína con
una pureza entre el 88% y el 97% e incluso superior, apta para el
consumo
humano.
2. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 1 caracterizado porque la etapa a) se lleva a
cabo utilizando acetato de etilo como disolvente en una proporción
entre 0.1 y 3.0 partes de acetato de etilo, preferentemente entre
0.5 y 1.0, por cada parte del extracto, pudiéndose repetir
opcionalmente este tratamiento.
3. Un procedimiento de acuerdo con las
reivindicaciones 1 y 2 caracterizado porque la etapa a) se
lleva a cabo manteniendo la temperatura entre 10ºC y 60ºC,
preferentemente entre 25ºC y 30ºC.
4. Un procedimiento de acuerdo con las
reivindicaciones 1 y 3 caracterizado porque en la etapa a)
se utiliza como disolvente otros ésteres de bajo punto de
ebullición, tales como el formiato de metilo, el formiato de etilo,
el acetato de metilo, o una mezcla de algunos o de todos ellos.
5. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 1 caracterizado porque en la etapa b) la
saponificación se lleva a cabo en un medio hidroalcohólico, en
atmósfera inerte y por acción de hidróxido sódico o potásico o una
mezcla de ellos, en una proporción de entre 0.2 y 0.5 partes de
reactivo alcalino por cada parte de concentrado de ésteres de
xantofilas.
6. Un procedimiento de acuerdo con las
reivindicaciones 1 y 5 caracterizado porque la etapa b) se
lleva a cabo utilizando como antioxidante el tocoferol, el ácido
ascórbico o sus ésteres, el BHA, el BHT, el galato de propilo o una
mezcla de dos o más de ellos, en una proporción del 0,05% al 2% de
antioxidante, preferentemente del 0,1% al 1%, respecto del
contenido en xantofilas esterificadas.
7. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 1 caracterizado porque en la etapa c) la
neutralización se lleva a cabo adicionando entre 1 y 20 partes en
peso, preferentemente entre 3 y 10, de ácido clorhídrico diluido de
concentración entre 5% y 10%, por cada parte de producto obtenido
en la etapa b).
8. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicaciones 1 y 7 caracterizado porque el disolvente
apolar que se utiliza en la etapa c) es el ciclohexano, el éter de
petróleo, el hexano, el heptano o una mezcla de dos o más de
ellos.
9. Un procedimiento de acuerdo con las
reivindicaciones 1 y 8 caracterizado porque en la etapa c)
la proporción del disolvente no polar utilizado está entre 2 y 100
partes de disolvente, preferentemente entre 5 y 50, por cada parte
de producto neutralizado.
10. Un procedimiento de acuerdo con la
reivindicación 1 caracterizado porque en la etapa d) la
eliminación de los disolventes se lleva a cabo por centrifugación y
el secado se realiza a vacío y a una temperatura entre 25ºC y 30ºC,
lo que permite obtener luteína con más de un 88% de pureza.
11. Un procedimiento de acuerdo con las
reivindicación 1 caracterizada porque la etapa a) se repite
entre 2 y 5 veces, preferentemente 3 veces, antes de pasar a la
etapa b), con lo que es posible obtener luteína con pureza superior
al 97% y adecuada para el consumo humano.
12. Un procedimiento según las reivindicaciones
1 y 11 en el cual del producto resultante en la etapa a) se elimina
el disolvente por centrifugación y el sólido separado se seca a
vacío para obtener concentrados de marigold con un contenido en
ésteres de luteína superiores al 88%.
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2006
- 2006-09-18 ES ES200602391A patent/ES2318992B1/es not_active Expired - Fee Related
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