ES2249278T3 - Composicion con efecto estrogeno esteroideo sin aumento de riesgo de cancer de mama. - Google Patents
Composicion con efecto estrogeno esteroideo sin aumento de riesgo de cancer de mama.Info
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Abstract
Uso de una composición que comprende sustancias contenidas en extracto de Cimicifuga Racemosa, que induce un efecto fisiológico de tipo estrogénico sin interaccionar con las células de cáncer de mama, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de síntomas o enfermedades por deficiencia de estrógeno de un mamífero que sufre cáncer de mama o que presenta un riesgo elevado de desarrollarlo.
Description
Composición con efecto estrógeno esteroideo sin
aumento de riesgo de cáncer de mama.
La presente solicitud se refiere al uso de una
composición que comprenda sustancias contenidas en extracto de
Cimifuga Racemosa, para la preparación de un medicamento para
el tratamiento de deficiencia de estrógeno. Esta composición tiene
un efecto de estrógeno esteroideo, aunque no tiene los efectos
secundarios de los estrógenos esteroideos que incrementan el riesgo
de desarrollar, o la tendencia a ello, una recaída de cáncer de
mama.
En las mujeres, el cese de la función ovárica
está asociada con varios trastornos somáticos y psicológicos que se
resumen clínicamente como síntomas menopáusicos. Los síntomas más
característicos y frecuentes son el cese de la menstruación,
sofocos, depresión, nerviosismo e insomnio. Además, muchas mujeres
sufrirán osteoporosis a causa de una producción insuficiente de
estrógeno endógeno. Los síntomas menopáusicos son el resultado de la
reducción sustancial de la producción de esteroides por los ovarios.
Por tanto, una posibilidad para el tratamiento de los síntomas
menopáusicos es el tratamiento sustitutorio con hormonas ováricas.
Los estrógenos esteroideos han sido el tratamiento de elección,
aunque se sabe bien que este tipo de tratamiento puede incrementar
el riesgo de desarrollar cáncer. En particular, para pacientes con
cáncer de mama pasado o presente, se recomienda no usar estrógenos
esteroideos a causa del riesgo de estimular las células cancerosas
latentes.
Una alternativa a los estrógenos esteroideos para
el tratamiento de los síntomas de la menopausia son los estrógenos
vegetales (fitoestrógenos). Entre estos, se ha comunicado que
Cimicifuga Racemosa es un enfoque terapéutico satisfactorio
con efectos beneficiosos sobre los síntomas menopaúsicos (1,
12-15, 21, 21). Sin embargo, en teoría, los
fitoestrógenos se unirían a los receptores de estrógenos en los
tejidos diana, incluidas las células de cáncer de mama, con el fin
de ejercer su actividad estrogénica. Por tanto, cabe esperar que los
fitoestrógenos estimularan el crecimiento de las células de cáncer
de mama sensibles a estrógenos. El estudio realizado por Martin P.
M. y col. avala la existencia de un efecto estimulador del
crecimiento de los estrógenos vegetales sobre las células de cáncer
de mama, ya que en la presente memoria descriptiva se demuestra que
los estrógenos vegetales pueden interaccionar con los receptores de
estrógenos en las células de cáncer de mama humanas en cultivo y, de
este modo, estimulan el crecimiento de las células (16). Por tanto,
no parecería recomendable ofrecer estos compuestos a mujeres con
antecedentes de cáncer de mama o con un riesgo elevado de
desarrollar esta enfermedad.
El extracto de Cimicifuga Racemosa y
ciertas sustancias que se encuentran, entre otros, en el extracto de
Cimicifuga Racemosa, se han sugerido como principios
estrogénicos también en la literatura de patentes, como, por
ejemplo, en la patente de EE.UU. nº 5.830.887, los documentos WO
98/50026 y EP 0847755.
Una gran fracción de mujeres con cáncer de mama
en estadios iniciales (estadio 1 y estadio 2) experimentan curación
de su enfermedad tras el tratamiento quirúrgico inicial. No
obstante, es difícil definir con claridad qué mujeres tienen más
probabilidad de que su enfermedad recurra. Alrededor del 70% de
todos los cánceres de mama primarios expresan receptores
estrogénicos y son, por tanto, potencialmente sensibles y
dependientes de estrógenos, es decir, el crecimiento de las células
de cáncer es estimulado o depende de estrógenos (17, 18). Por tanto,
normalmente se recomienda que estos pacientes no usen compuestos
estrogénicos esteroideos en ningún momento tras la resección
quirúrgica del cáncer de mama primario.
Los estrógenos esteroides disponibles en la
actualidad que se usan con más frecuencia en el tratamiento de
sustitución hormonal, no discriminan entre tipos de tejidos o de
células. Por tanto, los estrógenos esteroideos usados hoy en día en
la práctica clínica pueden, mientras proporcionan un efecto positivo
sobre los síntomas y enfermedades de la deficiencia de estrógenos,
también portar el potencial de aumentar el riesgo de cáncer en
mujeres, ya que pueden estimular la proliferación celular en varios
tipos de tejidos, principalmente en el tejido mamario. Por tanto se
recomienda a las mujeres con antecedentes familiares de cáncer de
mama y, como consecuencia, con un mayor riesgo de desarrollar cáncer
de mama que no usen compuestos estrogénicos esteroideos.
Por tanto, en la actualidad existe una necesidad
no satisfecha de sustancias o composiciones con un efecto
estrogénico diferencial, es decir compuestos que mediante sus
efectos estrogénicos alivien sus síntomas menopáusicos y otros
síntomas relacionados con la deficiencia de estrógenos, pero sin el
efecto estimulador sobre el desarrollo y/o el crecimiento del cáncer
de mama.
La presente invención se refiere a medios para
aliviar o curar los síntomas o las enfermedades causadas por una
deficiencia de estrógenos en mamíferos, en particular mamíferos
hembra, en particular mujeres, que sufren cáncer de mama o que
presentan un riesgo de recurrencia del cáncer de mama o que
presentan un riesgo elevado de desarrollar cáncer de mama.
Por tanto, en un aspecto, la invención se refiere
al uso de una composición que comprenda sustancias contenidas en
extracto de Cimifuga Racemosa, para preparar un medicamento
para usar en un procedimiento para aliviar o curar los síntomas o
enfermedades causados por deficiencia de estrógenos, en un mamífero
que sufre cáncer de mama o que presenta un riesgo de recurrencia del
cáncer de mama o que presenta un riesgo elevado de desarrollar
cáncer de mama. La composición posee un efecto similar al de los
estrógenos, como pone de manifiesto una capacidad de la composición
para inducir efectos fisiológicos estrogénicos conocidos en los
tejidos diana, y está exenta de interacciones con las células de
cáncer de mama, en particular exenta de un efecto estimulador sobre
el cáncer de mama, tratando de este modo el síntoma o la enfermedad
condicionado por la deficiencia de estrógeno sin introducir un
riesgo de provocar el desarrollo de cáncer de mama clínicamente
evidente y/o estimular el crecimiento de las células de cáncer de
mama existentes en el mamífero.
Esto significa que en la actualidad se puede
realizar el tratamiento de los síntomas menopáusicos u otras
enfermedades basadas en deficiencias de estrógenos sin introducir el
riesgo de estimular las células de cáncer de mama asociado con la
administración de estrógenos esteroideos a un mamífero hembra que
sufre cáncer de mama o que presenta un riesgo de recurrencia de
cáncer de mama o que presenta un riesgo elevado de desarrollar
cáncer de
mama.
mama.
La composición es una composición que contiene
sustancias contenidas en el extracto de Cimicifuga Racemosa.
Por tanto, la composición puede ser o puede contener extracto de
Cimicifuga Racemosa (bien en forma líquida o en forma seca).
Las dosis del extracto pueden ser de, por ejemplo, 1 mg a 20 mg
diarios sobre la base del extracto, tal como 2-3 mg
dos veces al día para una mujer, y el experto en la técnica puede
valorar las dosis de otros principios activos distintos al extracto
de Cimicifuga Racemosa descrito en la presente memoria
descriptiva (SPP-001) sobre la base de la actividad
relativa en comparación con el extracto SPP-001 o
sobre la base de los experimentos explicados a continuación.
Otro uso de la invención es combinar la
composición con varios compuestos farmacéuticos para ampliar el
efecto similar al de los estrógenos de estos compuestos sin
interferir en ningún efecto antiestrogénicos simultáneo de los
compuestos sobre las células del cáncer de mama. Un ejemplo es
raloxifeno (metanona,
[6-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)benzo[b]tien-3-il][4-(1-piperidinil)etoxi]fenil]-clorhidrato)
y compuestos asociados. Otros ejemplos son antiestrógenos no
esteroideos tales como tamoxifeno, droloxifen. Además, la
composición también podría combinarse con bifos-
fonatos.
fonatos.
Sobre la base de la siguiente detección
selectiva, se pueden identificar sustancias o composiciones
contenidas en el extracto de Cimicifuga Racemosa que muestren
el valioso efecto estrogénico selectivo de tejidos.
El procedimiento de detección selectiva de
sustancias o composiciones contenidas en el extracto de
Cimicifuga Racemosa con las propiedades descritas comprende
someter a las sustancias o composiciones problema a
- 1)
- pruebas para determinar el posible efecto de tipo estrogénico en el tejido normal mediante la medición de, por ejemplo, el incremento del peso del útero en un roedor hembra adulto ovariectomizado y
- 2)
- pruebas para determinar el posible efecto estrogénico en el cáncer de mama y seleccionar, como candidatos a sustancias o composiciones estrogénicas selectivas de tejido útiles para aliviar o curar los síntomas enfermedades causadas por deficiencia de estrógenos o que se pueden aliviar o curar mediante la administración de estrógenos esteroideos, en mujeres que sufren cáncer de mama o que presentan un riesgo de recurrencia del cáncer de mama o que presentan un riesgo elevado de desarrollar cáncer de mama, sustancias o composiciones que,
- a)
- son capaces de inducir efectos estrogénicos fisiológicos, por ejemplo incrementos en el peso húmedo del útero o cambios en las gonadotropinas o cambios en la densidad mineral ósea, en un roedor hembra adulta ovariectomizada, y al mismo tiempo
- b)
- no ejercen ningún efecto sobre el crecimiento de las células de cáncer negativas al receptor estrogénico y ningún efecto sobre células de cáncer positivas al receptor estrogénico a las dosis a las que inducen efectos estrogénicos fisiológicos, por ejemplo no se unen al receptor estrogénico en las células de cáncer de mama.
Este aspecto de la invención también se explica
con mayor detalle a continuación, ya que son protocolos de trabajo
clínico.
En el ejemplo 1, se describe el efecto
estrogénico del SPP-001 sobre tejido uterino de
ratón. La dosis seleccionada se basó sobre la ingesta diaria
recomendada de SPP-001 en mujeres, que es de 2,4
mg/kg dos veces al día.
El incremento en el peso del útero inducido por
SPP-001 corresponde al obtenido tras el tratamiento
con estradiol. Por tanto, se puede concluir que el
SPP-001 tiene un efecto de tipo estrogénico sobre el
tejido uterino murino y que la administración y dosis aplicadas de
SPP-001 basta para inducir este efecto.
El ejemplo 2 describe el efecto del
SPP-001 sobre el desarrollo y crecimiento tumoral de
un cáncer de mama humano negativo para el receptor estrogénico
inducido en ratones desnudos. Utilizando la misma dosis de
SPP-001 que indujo el incremento en el peso del
útero, no se observó efecto alguno sobre el xenoinjerto de cáncer de
mama humano.
En el ejemplo 3, en ratones desnudos se inoculó
la línea celular de cáncer de mama humano positiva para los
receptores estrogénicos MCF-7 (ATCC
HTB-22) y se trataron con estradiol o
SPP-001. La dosis de SPP-001 fue la
misma que se usó en los Ejemplos 1 y 2 o una dosis 10 veces mayor.
El cáncer de mama humano MCF-7 sólo forma tumores en
ratones hembra desnudos ovariectomizados o intactos en presencia de
estrógeno complementario. De acuerdo con esto, la administración
complementaria de estrógeno tuvo como resultado el desarrollo de
tumores en crecimiento, mientras que los ratones sin tratar no
desarrollaron ningún tumor. El tratamiento con
SPP-001 en ambos grupos de dosis no tuvo como
resultado el crecimiento tumoral en ninguno de los ratones
estudiados. Estos resultados sugieren que el SPP-001
no tiene ningún efecto estrogénico sobre las células de cáncer de
mama positivas para el receptor estrogénico.
El ejemplo 4 describe el efecto de
SPP-001 administrado por vía oral y de estradiol
administrado por vía subcutánea sobre el desarrollo de tumores y el
crecimiento de tumores del xenoinjerto de cáncer de mama humano
MCF-7 positivo para receptor estrogénico y
dependiente de estrógeno. La dosis de SPP-001 fue
100 veces mayor que la dosis diaria recomendada para seres humanos.
El tratamiento con SPP-001 y estradiol se administró
solo y combinado. El SPP-001 no tuvo ningún efecto
de refuerzo del crecimiento ni ningún efecto inhibidor del
crecimiento, ni administrado solo ni combinado con E2, lo que
sugiere que el SPP-001 no tiene ningún efecto
potenciador ni inhibidor sobre las células de cáncer de mama
sensibles a estrógenos. Los resultados además implican que el
SPP-001 no se une a los receptores de estrógenos de
las células MCF-7, no antagonizan el efecto
estimulador del crecimiento del estradiol.
El ejemplo 5 describe un sistema modelo
experimental para las pruebas de las composiciones o compuestos
("fármacos") con efectos de tipo estrogénico putativos
diferenciales en tejidos normales y en cáncer de mama. Los posibles
efectos de tipo estrogénico en los tejidos normales se analizan
mediante, por ejemplo, la medición del incremento en el peso uterino
de ratón como criterio de valoración, mientras que el posible efecto
estrogénico en el cáncer de mama se analiza midiendo el efecto de
refuerzo del crecimiento en el xenoinjerto de cáncer de mama
MCF-7 sensible a estrógenos como criterio de
valoración. Las pruebas se pueden realizar en los mismos ratones o
en ratones
idénticos.
idénticos.
El ejemplo 6 describe un protocolo clínico para
estudios de seguridad del tratamiento con SPP-001 en
mujeres con cáncer de mama en estado avanzado. Los pacientes se
aleatorizan al tratamiento con SPP-001 o placebo y
se realizará un seguimiento hasta el fallecimiento. Se construirán
curvas de supervivencia para cada grupo con el fin de determinar el
posible efecto del SPP-001 en esta población de
pacientes. Debe entenderse que este protocolo se puede adaptar para
usar en estudios de seguridad del tratamiento con cualquier
composición basada en CR que satisfaga los criterios para ser útiles
en el procedimiento según la invención.
El ejemplo 7 describe un protocolo clínico para
estudios de seguridad del tratamiento con SPP-001 en
mujeres con cáncer de mama en estado avanzado y que hayan obtenido
una respuesta completa o parcial tras un tratamiento antineoplásico
convencional. Las pacientes se aleatorizan al tratamiento con
SPP-001 o placebo y se realizará un seguimiento
hasta el fallecimiento. Se determinará el tiempo transcurrido hasta
la progresión en cada grupo de tratamiento y se comparará con el fin
de establecer si el SPP-001 ejerce algún efecto
sobre la progresión del cáncer en esta población de pacientes. De
nuevo, debe entenderse que este protocolo se puede adaptar para usar
en estudios de seguridad del tratamiento con cualquier composición
basada en CR que satisfaga los criterios para ser útiles en el
procedimiento según la invención.
En el ejemplo 8 se describe un protocolo clínico
para estudios de seguridad del tratamiento con
SPP-001 en mujeres con un diagnóstico previo de
cáncer de mama y sin dignos de recurrencia. Las pacientes se
aleatorizan al tratamiento con SPP-001 o placebo y
se realizará un seguimiento durante 5 años. Se construirán curvas de
supervivencia global y libres de recurrencia univariables y se
compararán con el fin de establecer si el SPP-001
ejerce algún efecto sobre estos dos parámetros. Asimismo, este
protocolo se puede adaptar para usar en estudios de seguridad del
tratamiento con cualquier composición basada en CR que satisfaga los
criterios para ser útiles en el procedimiento según la
invención.
invención.
El ejemplo 9 describe el tratamiento clínico con
SPP-001 de trastornos de deficiencia de estrógenos
distintas a los síntomas menopáusicos en mujeres con cáncer de mama
presente, con un diagnóstico previo de cáncer de mama y con un mayor
riesgo de desarrollar cáncer de mama. Entre las enfermedades se
incluyen osteoporosis, osteocondrosis, hiperlipidemia,
hipercolesterolemia, arterioesclerosis y otros trastornos que se
pueden curar o aliviar mediante tratamiento de sustitución de
estrógenos.
Por tanto, un aspecto amplio de la presente
invención se refiere al uso de composiciones o sustancias contenidas
en extracto de Cimicifuga Racemosa capaces de inducir un
efecto fisiológico de tipo estrogénico sin interaccionar con las
células de cáncer de mama para la preparación de un medicamento para
el tratamiento de síntomas o enfermedades de deficiencia de
estrógenos de un mamífero que sufra un tumor dependiente de
estrógenos o que presenta un riesgo elevado de desarrollarlo.
La presente invención se basa en investigaciones
in vivo realizadas sobre xenoinjertos de cáncer de mama
humano en ratones desnudos con inmunodeficiencia. En numerosos
estudios se ha demostrado que las respuestas de estos xenoinjertos
de cáncer de mama al tratamiento endocrino, es decir tratamiento
ablativo, inhibidor, aditivo y competitivo son comparables a las
obtenidas con estas modalidades terapéuticas en pacientes con cáncer
de mama (2, 6-10). Por tanto, esta justificado
suponer que la respuesta al SPP-001 del cáncer de
mama in situ es comparable a la respuesta obtenida en los
xenoinjertos.
El estrógeno posee muchos efectos fisiológicos,
ya que se requiere estrógeno para la maduración normal de las
hembras, por ejemplo al estimular el desarrollo de la vagina, el
útero y las trompas (TUBES) uterinas, así como los caracteres
sexuales secundarios. El estrógeno estimula el desarrollo estromal y
el crecimiento ductal de las mamas y es responsable de la fase de
crecimiento acelerado y el cierre de as epífisis de los huesos
largos que se produce en la pubertad. El estrógeno contribuye al
crecimiento del vello axilar y púbico y alterara la distribución de
la grasa corporal de forma que se produzcan los típicos contornos
del cuerpo femenino. Cantidades grandes de estrógeno también
estimulan el desarrollo de la pigmentación en la piel más acusada en
la región de los pezones y las areolas en la región genital. El
estrógeno también desempeña un papel importante en el desarrollo del
revestimiento endometrial. Asimismo, el estrógeno tiene una serie de
efectos metabólicos importantes. Es responsable del mantenimiento de
la estructura normal de la piel y los vasos sanguíneos en mujeres.
El estrógeno reduce la tasa de resorción ósea mediante el
antagonismo del efecto de la hormona paratiroidea sobre los huesos,
pero no estimula la formación de hueso. En el hígado, el estrógeno
altera el metabolismo, de forma que existe un mayor nivel circulante
de proteínas tales como transcortina (CBG), globulina de unión a la
tiroxina (TBG), globulina de unión a hormona sexual (SHBG),
transferrina, sustrato de renina y fibrinógeno. Estos conduce al
incremento en los niveles circulantes de, por ejemplo, tiroxina,
estrógeno, testosterona, hierro y cobre. Los efectos fisiológicos
preferidos usados como una medida de la consecuencia del tratamiento
con la sustancia son estimulación de células vaginales en, por
ejemplo, el frotis vaginal de un animal de prueba y al medir los
cambios en las gonadotropinas, por ejemplo FSH y LH.
Para el experto en la técnica será obvio usar uno
de los efectos estrogénicos fisiológicos mencionados anteriormente
como una medida del efecto de tipo estrogénico para una sustancia.
En la presente instrucción técnica (ejemplos 1-4) se
ha escogido uno de estos efectos estrogénicos fisiológicos, la
estimulación del crecimiento uterino. Por tanto, en una forma de
realización preferida de la invención, el efecto fisiológico de tipo
estrogénico es el crecimiento uterino determinado por un incremento
en el peso del útero en comparación con los controles, tras la
administración de la sustancia contenida en extracto de
Cimicifuga Racemosa a ratones hembra desnudos atímicos
ovariectomizados. Es decir, un efecto fisiológico de tipo
estrogénico es el crecimiento uterino determinado por un incremento
en el peso medio útero en comparación con los controles de al menos
0,10 g tras la administración de la sustancia a ratones desnudos
atímicos NMRI ovariectomizados durante 8 días.
El efecto de tipo estrogénico poseído por la
composición usada según la invención se manifiesta en la composición
capaz de inducir un incremento en el peso uterino en ratones hembra
adultos desnudos atímicos NMRI ovariectomizados y, para
composiciones preferidas, el incremento del peso uterino tras una
dosis comparable a una dosis normal para el mamífero que se va a
tratar puede corresponder a un incremento en el peso uterino
observado en el mismo animal de prueba tras el tratamiento con
estradiol, que a menudo será sustancialmente el máximo incremento de
peso uterino obtenible en el mismo animal de prueba mediante
tratamiento con estrógenos.
Es un aspecto importante de la invención que la
sustancia contenida en el extracto de Cimifuga Racemosa es
una que sustancialmente no ejerce efecto alguno sobre el crecimiento
de las células de cáncer de mama, ni un efecto agonista, positivo ni
un efecto antagonista negativo, y que esto se aplica tanto a células
de cáncer de mama negativas para el receptor estrogénico (y también
incluye ausencia de efecto indirecto) como para células de cáncer de
mama positivas para el receptor estrogénico. La ausencia preferida
de un efecto antagonista de la sustancia contenida en el extracto de
Cimifuga Racemosa se basa en informes experimentales que
demuestran estimulación de crecimiento de células de cáncer de mama
y de endometrio tras el tratamiento antiestrogénico de células
propagadas en cultivo o en ratones desnudos atímicos (22) y a
habitual respuesta "eritema" observada a los antiestrógenos. Se
prefiere que la sustancia contenida en el extracto de Cimifuga
Racemosa no estimula las células de cáncer que son positivas al
receptor estrogénico. Asimismo, se prefiere que dicha sustancia no
estimula las células de cáncer que son negativas para el receptor
estrogénico. Además, la sustancia no debería poseer un efecto
considerable sobre la capacidad de las células de cáncer de mama
para producir metástasis o adhesión.
En una forma de realización, la ausencia de
estimulación de las células de cáncer de mama está determinada por
la ausencia de efecto de la sustancia contenida en el extracto de
Cimifuga Racemosa sobre el crecimiento de la línea celular de
cáncer de mama humano MDA-MB-231
(ATCC HTB-26) negativa para los receptores de
estrógeno y progesterona inoculada en ratones hembra desnudos
atímicos de seis semanas de edad en comparación con un control en el
que los tumores muestran un incremento de tamaño durante al menos
seis registros de crecimiento consecutivos. Tal procedimiento
también se describe con detalle en el ejemplo 2.
En otra forma de realización, la ausencia de
estimulación de las células de cáncer de mama está determinada por
la ausencia de efecto de la sustancia contenida en el extracto de
Cimifuga Racemosa sobre el crecimiento de la línea celular de
cáncer de mama humano MCF-7 positiva para los
receptores de estrógeno y dependientes de estrógeno inoculada en
ratones hembra desnudos atímicos de seis semanas de edad en
comparación con un control en el que los tumores muestran un
incremento de tamaño durante al menos seis registros de crecimiento
consecutivos. Tal procedimiento también se describe con detalle en
el ejemplo 3.
En una tercera forma de realización, la ausencia
de estimulación de las células de cáncer de mama está determinada
por la ausencia de efecto de la sustancia contenida en el extracto
de Cimifuga Racemosa cuando se administra en combinación con
estradiol sobre el crecimiento de la línea celular de cáncer de mama
humano MCF-7 positiva para los receptores de
estrógeno y dependientes de estrógeno inoculada en ratones hembra
desnudos atímicos de seis semanas de edad en comparación con un
control en el que los tumores muestran un incremento de tamaño
durante al menos seis registros de crecimiento consecutivos. Tal
procedimiento también se describe con detalle en el ejemplo 4.
Los roedores ovariectomizados son modelos
animales adecuados para el estudio de los efectos estrogénicos (2,
6-11). La administración de estrógenos esteroideos u
otros compuestos estrogénicos tendrá como resultado un mayor peso de
tejido uterino. Mediante el uso de roedores inmunodeficientes se
pueden estudiar los efectos de los estrógenos esteroideos y otros
compuestos estrogénicos de forma simultánea en tejido uterino y en
tumores humanos con xenoinjerto.
La incidencia del cáncer de mama es muy
extendida. Las mujeres curadas de cáncer de mama todavía presentan
riesgo de recurrencia del cáncer de mama, es decir, recaen.
Bastantes mujeres tienen antecedentes familiares de cáncer de mama
y, por tanto, presentan riesgo de desarrollar cáncer de mama.
Mientras que otras mujeres se encuentran en una posición en la que
preferirían minimizar su incomodidad durante la menopausia sin que
aumente su riesgo de presentar cáncer de mama. Aunque los grupos de
riesgo y de riesgo elevado se pueden identificar mediante estudios
poblacionales estadísticos, la agrupación estadística podría no ser
relevante para el paciente enfrentado con la elección de minimizar
la incomodidad durante la menopausia mediante el tratamiento
tradicional con estrógenos frente al mayor riesgo de cáncer de mama.
Las presentes sustancias no colocarán a la población femenina en tal
dilema poco ético.
Por tanto, sobre la base de los hallazgos según
la invención, las mujeres que sufren cáncer de mama, o mujeres que
han sufrido cáncer de mama, y que además sufren síntomas
menopáusicos, pueden, a causa de la ausencia de efectos estrogénicos
sobre las células de cáncer de mama, escoger usar una composición
CR, por ejemplo SPP-001, para aliviar sus síntomas.
Asimismo, las mujeres que presentan un riesgo elevado de desarrollar
cáncer de mama porque poseen antecedentes familiares de cáncer de
mama y/o por la presencia de lesiones de carcinoma in situ en
su tejido mamario, pueden escoger usar una composición CR, por
ejemplo SPP-001, para aliviar sus síntomas
menopáusicos.
Por tanto, sobre la base de los hallazgos según
la invención, las mujeres que sufren cáncer de mama, o mujeres que
han sufrido cáncer de mama, y que además sufren síntomas
menopáusicos, pueden, a causa de la ausencia de efectos estrogénicos
sobre las células de cáncer de mama, escoger usar una composición
CR, por ejemplo SPP-001, para aliviar sus síntomas.
Asimismo, las mujeres que presentan un riesgo elevado de desarrollar
cáncer de mama porque poseen antecedentes familiares de cáncer de
mama, presentan alteraciones genéticas relacionadas con un
incremento del cáncer de mama, son nulíparas, están en las primeras
etapas de la menarquia, están en las últimas etapas de la
menopausia, son obesas, han usado antes estrógenos esteroideos y
presentan lesiones de carcinoma in situ en su tejido mamario,
pueden escoger usar una composición CR, por ejemplo
SPP-001, para aliviar sus síntomas
menopáusicos.
menopáusicos.
En este contexto "riesgo elevado" se define
como un riesgo de desarrollar cáncer de mama que es superior al 10%
en comparación con el normal, es decir un cociente de riesgos
superior a 1,1, que es comparable al mayor riesgo de desarrollar
cáncer de mama cuando se toman píldoras anticonceptivas
convencionales (cociente de riesgos de 1,1-1,2).
Aunque el grupo de pacientes más importante con
mucho que recibirá el tratamiento estará constituido por mujeres,
está contemplado que el uso de la invención también puede ser útil
en varones humanos, ya que también se sabe que los varones pueden
sufrir cáncer de mama y al mismo tiempo síntomas o enfermedades que
se pueden tratar con estrógeno.
Como se ha mencionado anteriormente, el estrógeno
posee una plétora de efectos fisiológicos. Por tanto, los síntoma de
deficiencia estrogénicas variarán. En consecuencia, la sustancia
contenida en el extracto de Cimifuga Racemosa aliviará los
síntomas o enfermedades condicionados por deficiencia estrogénica
seleccionados del grupo compuesto por síntomas menopáusicos;
trastornos dermatológicos tales como envejecimiento de la piel,
arrugas, sequedad de boca y otros trastornos dermatológicos
relacionados con la deficiencia de estrógenos; sequedad de las
membranas mucosas (p. ej., de la vagina y el intestino);
enfermedades relacionadas con el cerebro, como la enfermedad de
Alzheimer, incluidos otros tipos de demencia; enfermedades
relacionadas con los huesos y las articulaciones, tales como
osteoporosis, osteocondrosis, osteoartritis, artritis reumatoide,
cicatrización de fracturas óseas y reducción de fracturas del
esqueleto; deficiencia de estrógenos en la vagina, como sequedad
vaginal y dispaurenia; cardiopatías coronarias tales como
arteriosclerosis; y enfermedades tales como hiperlipidemia e
hipercolesterolemia.
Dado que los más frecuentes de estos son los
síntomas menopáusicos, se prefiere el tratamiento de ellos.
Como se ilustra en los ejemplos, una sustancia
contenida en el extracto de Cimifuga Racemosa que sea capaz
de inducir un efecto fisiológico de tipo estrogénico sin estimular
el crecimiento de células de cáncer de mama es el extracto de
Cimicifuga Racemosa (CR). Por tanto, una sustancia preferida
para usar según la invención es una composición que contenga las
sustancias contenidas en el extracto de Cimicifuga Racemosa.
Preferentemente, un extracto SPP-001 de
Cimicifuga Racemosa.
Por tanto, la invención se basa específicamente
en el nuevo hallazgo de que un extracto específico de CR
(Cimicifuga racemosa) da lugar a una composición específica
(SPP-001) que muestra una combinación única de un
efecto estrogénico muy pronunciado, valorado mediante soporte del
crecimiento uterino y, a dosis que proporcionan un incremento máximo
del crecimiento uterino, comparable a los mejores incrementos
obtenibles mediante tratamiento con estradiol, muestra una ausencia
de efectos estrogénicos de SPP-001 sobre células de
cáncer de mama humano, células de cáncer de mama sensibles y
dependientes de hormonas así como resistentes e independientes de
hormonas. En la actualidad, no se sabe si esta combinación tan
beneficiosa se puede atribuir a una sustancia entre las sustancias
contenidas en el extracto (algunas de las cuales se han
identificado, tales como la formononetina, la acteína, la
27-doxoacteína), aunque parece probable que el
efecto sea el efecto de combinaciones de varias sustancias en el
extracto, aunque no se puede descartar que será posible, utilizando
los principios para detección selectiva etc. que constituyen un
aspecto de la presente invención, identificar un único compuesto
conocido o nuevo capaz de ejercer el valioso ejemplo estrogénico
selectivo de tejidos.
En un aspecto, el tratamiento según la invención
se basa en extractos de Cimicifuga Racemosa (CR), que poseen
efectos beneficiosos sobre los problemas menopáusicos en las mujeres
(1, 12-15, 20, 21). Tales extractos pueden ser
hidrosolubles y/o sustancialmente solubles en sistemas de
disolventes orgánicos, por ejemplo mediante extracción en alcohol de
material de Cimicifuga Racemosa, en particular tal como
tronco de raíces. El efecto de tipo estrogénico de CR se documenta
también mediante los cambios esperados en las gonadotropinas tras el
tratamiento con CR
(12, 14).
(12, 14).
La composición también puede ser una composición
que comprenda partes de la plana de Cimicifuga Racemosa, o
puede ser una composición que contenga uno o más compuestos químicos
contenidos en el extracto de Cimicifuga Racemosa.
La composición también se puede usar en
combinación con un fármaco que posee una actividad moduladora
selectiva receptor estrogénico (SERM). Tales fármacos con actividad
SERM pueden ser raloxifeno (metanona,
[6-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)benzo[b]tien-3-il][4-(1-piperidinil)etoxi]fenil]-clorhidrato)
y compuestos asociados. Otros ejemplos son antiestrógenos no
esteroideos tales como tamoxifeno, droloxifeno. Además, la
composición también podría combinarse con bifosfonatos.
La composición que se va a usar según la
invención puede ser una composición oral o una composición adecuada
para cualquier otra vía de administración adecuada y se pueden
encontrar ejemplos de preparaciones farmacéuticas adecuadas en, por
ejemplo, la literatura, incluida la literatura de patentes
mencionada anteriormente.
Como se ha indicado antes, los hallazgos según
la invención y los modelos desarrollados por los inventores para
valorar la idoneidad de una composición o un compuesto contenido en
el extracto de Cimifuga Racemosa como sustancia estrogénica
selectiva de tejidos abren la posibilidad de hallar sustancias,
composiciones o compuestos químicos que incluyan el valioso efecto
estrogénico selectivo de tejidos. Por tanto, se emplea un
procedimiento para seleccionar sustancias o composiciones contenidas
en el extracto de Cimifuga Racemosa que sean capaces de
inducir un efecto fisiológico de tipo estrogénico sin interaccionar
con as células de cáncer de mama, en el que dicho procedimiento
comprende someter a las sustancias o composiciones de prueba a
- 1)
- pruebas para determinar el posible efecto de tipo estrogénico en el tejido normal mediante la medición del incremento del peso uterino, los cambios en las gonadotropinas, los cambios en la citología vaginal y/o la presencia de síntomas posmenopáusicos en un mamífero hembra adulto y
- 2)
- pruebas para determinar el posible efecto estrogénico en el cáncer de mama y seleccionar, como candidatos a sustancias o composiciones estrogénicas selectivas de tejido útiles para aliviar o curar los síntomas o enfermedades causadas por deficiencia de estrógenos o que se pueden aliviar o curar mediante la administración de estrógenos esteroideos, en un mamífero que sufre cáncer de mama o que presenta un riesgo de recurrencia del cáncer de mama o que presenta un riesgo elevado de desarrollar cáncer de mama, sustancias o composiciones que
- a)
- son capaces de inducir efectos estrogénicos fisiológicos en mamíferos hembras y al mismo tiempo
- b)
- no ejercen ningún efecto sobre el crecimiento de las células de cáncer negativas al receptor estrogénico y ningún efecto sobre células de cáncer positivas al receptor estrogénico a las dosis a las que inducen efectos estrogénicos fisiológicos.
Se prefiere que la capacidad de la sustancia o
composición contenida en el extracto de Cimifuga Racemosa
para inducir efectos estrogénicos fisiológicos, por ejemplo se
analiza el crecimiento uterino en mamíferos hembra mediante el
análisis de la capacidad de la sustancia o composición para
incrementar el peso uterino en ratones hembra desnudos atímicos NMRI
ovariectomizados, la ausencia de efecto de la sustancia o
composición sobre el crecimiento de las células de cáncer negativas
para el receptor estrogénico se valora como la ausencia de capacidad
de la sustancia o composición para mantener el crecimiento de
xenoinjertos MDA-MB231 en ratones hembra desnudos
atímicos NMRI y la ausencia de efecto de la sustancia o composición
sobre el crecimiento de células de cáncer positivas para el receptor
estrogénico se valora como la ausencia de capacidad de dicha
sustancia o composición para mantener el crecimiento de xenoinjertos
MCF-7 en ratones hembra desnudos atímicos NMRI.
Además, dicha sustancia o compuesto no debería mantener el
crecimiento de las células de cáncer aunque se combine con estradiol
e incluso si el compuesto o sustancia se administre a dosis 10 o
incluso 100 veces superiores a una dosis que, en la misma cepa de
ratones desnudos, induzca un incremento máximo del peso uterino.
Este ejemplo describe la medida de efectos
estrogénicos fisiológicos del SPP-001 administrado
por vía oral en ratones. Se facilitan como efecto ejemplo del
SPP-001 administrado por vía oral sobre el peso
uterino en ratones hembra adultos desnudos atímicos NMRI
ovariectomizadas.
Tras su aclimatación, los animales se
ovariectomizaron y aleatorizaron a dos grupos de tratamiento y un
grupo de controles sin tratar (véase más adelante). Los animales y
las jaulas se marcaron como corresponde.
Los ratones (ratones NMRI de 10 semanas de edad)
se ovariectomizaron y aleatorizaron el día 0. Un grupo de ratones
sirvió como controles sin tratar (n= 5) y a un grupo de ratones (n=
5) se le administró estradiol desde el día 1 al 8 mediante inserción
de una pastilla de E2 subcutánea de 0,72 mg. En el último grupo, a
los ratones (n= 6) se les administró SPP-001 por vía
orad dos veces al día desde el día 1 al 8.
Los animales se sometieron a observación
diariamente durante el periodo experimental de 8 días.
Para la extracción se usó un material de CR
normalizado como, por ejemplo, el proporcionado por Finzelberg AG,
Alemania (catálogo número 0472 312 ó 0472 340).
La solución de extracción deseada se preparó a
partir de 100 mg de material CR y 1660 ml de agua estéril, se agitó
con vórtex y después se mantuvo a temperatura ambiente durante 30
minutos. Esta composición CR final se denominó
SPP-001. El SPP-001 se preparó
reciente para cada día del experimento y siempre se guardó a +4ºC
durante un máximo de 24 horas. El procedimiento descrito
anteriormente se repitió para cada día de experi-
mento.
mento.
La dosificación se realizó por vía oral con un
volumen de dosificación de 0,1 ml de SPP-001 a cada
ratón dos veces al día. Cada ratón del grupo de
SPP-001 recibió aproximadamente
0,40-0,60 mg de material
SPP-001/kg/día.
Un día después de la ovariectomía, con un trócar
se inoculó una pastilla de liberación lenta de 0,72 mg de estradiol
(Innovative Research, Toledo, EE.UU., nº cat.
SE-121) por vía subcutánea en el cuello de los
ratones.
El experimento se concluyó el día 8 después de la
ovariectomía. Todos los animales fueron sacrificados mediante
luxación cervical y se determinaron los pesos de los úteros de los
ratones.
Los pesos uterinos medios calculados y los
correspondientes intervalos fueron 0,08 g
[0,05-0,11], 0,13 [0,11-0,15] y 0,14
[0,11-0,21] en los grupos control, de tratamiento
con estradiol y de tratamiento con SPP-001,
respectivamente (Tabla 1 y Figura 1).
| Pesos uterinos individuales (g) | ||
| Controles sin tratar | Estradiol (E_{2}) | Composición CR |
| 0,09 | 0,11 | 0,14 |
| 0,11 | 0,15 | 0,11 |
| 0,08 | 0,14 | 0,13 |
| 0,06 | 0,12 | 0,21 |
| 0,05 | 0,15 | 0,11 |
| 0,12 | ||
| \begin{minipage}[t]{145mm} Efecto de la composición de CR sobre el peso uterino de ratones adultos hembra desnudos atímicos ovariectomizados NMRI/Born^{TM} \end{minipage} |
La composición de CR se administró por vía oral,
0,24 mg/kg/ dos veces al día, el tratamiento con E_{2} mediante
inoculación de una pastilla de liberación lenta de 0,72 mg
(Innovative Research) por vía subcutánea en el cuello.
La dosis de SPP-001 se escogió de
modo que simulara la dosis diaria recomendada.
El SPP-001 tuvo un efecto in
vivo sobre el peso uterino del ratón, que fue comparable al
observado tras el tratamiento con E2. Otros procedimientos para
determinar la actividad fisiológica estrogénica, tales como cambios
en las gonadotropinas (disminución) y cambios en la citología de las
células vaginales (mantenimiento del perfil histológico normal) se
pueden usar, además de o como alternativa.
Este ejemplo describe el efecto de
SPP-001 administrado por vía oral sobre el
desarrollo tumoral y el crecimiento tumoral del xenoinjerto de
cáncer de mama humano negativo para el receptor estrogénico e
independiente y resistente al estrógeno
MDA-MB-231 en ratones desnudos
(4).
Se usó la línea de células de cáncer de mama
humano MDA-MB-231 (ATCC
HTB-26).
Las células casi confluentes cultivadas in
vitro se recolectaron utilizando un rastrillo de células. Tras
la centrifugación, una alícuota de las células se tiñó con azul
tripán y se contó. Las células se resuspendieron en medio reciente
hasta una concentración final de 1 x 10^{6} células viables por
inóculo (0,2 ml).
El experimento se realizó en un total de 21
ratones hembra desnudos atímicos META/Born™ de seis semanas de edad.
Se permitió un periodo de aclimatación de una semana con el fin de
excluir los animales en malas condiciones.
Los ratones se mantuvieron en condiciones
estériles en galerías limpias de flujo de aire laminar. Se usaron
jaulas Macrolon de tipo III (42 x 26 x 15 cm) con cinco animales en
cada jaula. Se permitió a los ratones acceso libre a agua estéril y
a pellas de alimento.
Las jaulas y los lechos se cambiaron una vez a la
semana. La temperatura ambiente era de 25 \pm 2ºC y la humedad
relativa de 55 \pm 5%. La habitación estaba iluminada 24 horas al
día.
Tras la aclimatación, los animales se
aleatorizaron a un grupo de 11 animales tratados y un grupo de 10
ratones control. Cada animal se identificó mediante marcas en la
oreja y cada jaula se marcó para identificar el grupo y las marcas
en la oreja de los animales.
El día 0 se inoculó a los animales (n= 21)
células tumorales por vía subcutánea en ambos flancos.
A continuación, los ratones se aleatorizaron a un
tratamiento con SPP-001 (ejemplo 1) o a un
tratamiento con agua estéril. A los ratones del grupo de tratamiento
con SPP-001 se les administró
SPP-001 por vía oral (0,1 ml) dos veces al día desde
el día de la inoculación de las células hasta el final del
experimento. Los ratones control recibieron agua dos veces al
día.
Como se ha descrito en el ejemplo 1.
Los animales se sometieron a observación
diariamente durante el periodo experimental de 38 días.
Cuando los tumores se pudieron medir, se midieron
en dos dimensiones tres veces a la semana usando un calibrador
deslizante. Se construyeron curvas de crecimiento tumoral y se
calcularon los parámetros de la curva de crecimiento (19).
Los tumores que no crecieron durante todo el
periodo experimental y los inóculos tumorales no usados se
excluyeron del análisis.
El experimento finalizó cuando los tumores
tratados mostraron un incremento de tamaño durante al menos seis
registros de crecimiento consecutivos. Al finalizar el experimento,
los animales fueron sacrificados mediante luxación cervical.
No se observaron signos visibles de toxicidad en
los animales a los que se administró SPP-001.
Cuando este experimento concluyó, había un total
de 31 tumores evaluables en 17 ratones, se desarrollaron 15 tumores
en los ratones control y se desarrollaron 16 tumores en los ratones
tratados. La Figura 2 muestra las curvas de crecimiento medio del
área tumoral construidas a partir de las medidas de cada tumor
individual. Los parámetros calculados de la curva de crecimiento
tumoral se enumeran en la Tabla 2.
La tasa de crecimiento específica, \alpha
(Tabla 2) de los tumores tratados fue 0,0144 en comparación con
0,0165 de los tumores control tratados con vehículo y, como
consecuencia, los tiempos de duplicación del volumen tumoral (TD)
calculados fueron 14,9 días y 13,0 días de los tumores tratados y
control, respectivamente.
| Grupo | Análisis de la curva de crecimiento | ||||
| Nº de tumores ^{1)} | Parámetros de la curva de crecimiento Gompertz^{2)} | TD^{3)}, días | |||
| \alpha x 10^{3} | \beta x 10^{3} | r | |||
| Controles | 15 | 16,5 | 96,3 | 0,992 | 13,0 |
| Composición CR | 16 | 14,4 | 80,3 | 0,994 | 14,9 |
| \begin{minipage}[t]{160mm} Análisis del crecimiento de xenoinjertos de carcinoma de mama humano MDA-MB-231 cultivados en ratones control hembra META/Born^{TM} desnudos atímicos tratados con composición CR y sin tratar. \end{minipage} | |||||
| {}\hskip0,5cm^{1)} Número de tumores evaluables; los inóculos sin crecimiento fueron excluidos | |||||
| {}\hskip0,5cm^{2)} \begin{minipage}[t]{150mm} Los datos del área tumoral (producto de dos medidas perpendiculares) se describieron conforme a una función Gompertz \end{minipage} | |||||
A(t)=
A(0)exp{(1--exp))\beta/\alpha}
A(0) es el área tumoral en el momento de
la inoculación de las células tumorales, A(t) es el área
tumoral en el momento t tras la inoculación, y \alpha y \beta
son constantes que determinan el curso de las curvas de
crecimiento.
Los datos se ajustaron a una transformación en
línea recta de la función Gompertz mediante regresión lineal.
ln[lnA(max)-lnA(t)]=
ln(\beta/\alpha)-
\alphat
A(max) es el área tumoral máxima teórica,
\alpha representa la pendiente y r es el coeficiente de
correlación.
El tiempo de duplicación del volumen tumoral,
T_{D}, se calculó a partir de los parámetros Gormpertz. El volumen
tumoral se calculó a partir de
V(t)= \pi/6A^{3/2}
k,
donde A es el área tumoral y k es
una constante previamente establecida de la relación entre las dos
medidas obtenidas y la tercera dimensión de los
tumores.
Los resultados del análisis de la curva del
crecimiento indican que la dosis aplicada de SPP-001
no tuvo ningún efecto sobre el crecimiento de la línea de células de
cáncer de mama humano
MDA-MB-231negativa para el receptor
estrogénico y de progesterona. Se pueden realizar experimentos
similares a los descritos en este ejemplo usando otras líneas de
células de cáncer de mama humano negativa para el receptor
estrogénico, por ejemplo MDA-MB-435S
(ATCC HTB 129).
Este ejemplo describe el efecto de
SPP-001 administrado por vía oral sobre el
desarrollo tumoral y el crecimiento tumoral del xenoinjerto de
cáncer de mama humano positivo para el receptor estrogénico y
dependiente de estrógeno MCF-7 en ratones desnudos
(4).
Se usó la línea de células de cáncer de mama
humano positiva para el receptor estrogénico y de progesterona
MCF-7 (ATCC HTB-22).
Las células casi confluentes cultivadas in
vitro se recolectaron utilizando un rastrillo de células. Tras
la centrifugación, una alícuota de las células se tiñó con azul
tripán y se contó para determinar la fracción de células viables.
Las células se resuspendieron en medio reciente hasta una
concentración final de 10^{6} - 10^{7} células viables por
inóculo (0,1-0,2 ml). Las células se inocularon por
vía subcutánea en ambos flancos de ratones hembra desnudos intactos
u ovariectomizados.
En experimentos distintos, los tumores
xenoinjertados en ratones hembra desnudos intactos se usaron como la
fuente para los experimentos, se prepararon bloques de
1-2 mm de diámetro y se inocularon en el flanco
derecho de los ratones receptores.
El experimento se realizó en un total de 80
ratones hembra desnudos atímicos NMRI/Born™ de seis semanas de edad.
Se permitió un periodo de aclimatación de una semana con el fin de
excluir los animales en malas condiciones.
Tras la aclimatación, algunos de los animales se
sometieron a una ovariectomía con anestesia general y usando
procedimientos normalizados. El trasplante de los tumores y la
inoculación de células se realizaron después de al menos una semana
para garantizar la recuperación completa tras la ovariectomía.
Los ratones se mantuvieron en condiciones
estériles en galerías limpias de flujo de aire laminar. Se usaron
jaulas Macrolon de tipo III (42 x 26 x 15 cm) con cinco animales en
cada jaula. Se permitió a los ratones acceso libre a agua estéril y
a pellas de alimento.
Las jaulas y los lechos se cambiaron una vez a la
semana. La temperatura ambiente era de 25 \pm 2ºC y la humedad
relativa de 55 \pm 5%. La habitación estaba iluminada 24 horas al
día.
Tras la inoculación de células o de bloques
tumorales, los animales de aleatorizaron a grupos de tratamiento
según el diseño del estudio. Cada animal se identificó mediante
marcas en la oreja t cada jaula se marcó para identificar el grupo y
las marcas en los animales.
Se realizaron tres series de experimentos.
Estudio
1
A cuarenta animales ovariectomizados se
inocularon 10^{6} células MCF-7 y los ratones se
aleatorizaron a cuatro grupos de tratamiento: controles sin tratar,
0,40-0,60 mg/kg/día de SPP-001,
4-6 mg/kg/día de SPP-001 y 0,72 mg
de una pastilla de liberación lenta de estradiol (Innovative
Research).
Estudio
2
A veinte animales hembra desnudos intactos se
inocularon 10^{7} células MCF-7 y los ratones se
aleatorizaron a dos grupos de tratamiento: 4-6
mg/kg/día de SPP-001 y 0,72 mg de una pastilla de
liberación lenta de estradiol (Innovative Research).
Estudio
3
A veinte ratones hembra desnudos intactos se
inocularon bloques tumorales de xenoinjertos MCF-7
en el flanco derecho de los ratones receptores y los ratones se
aleatorizaron a dos grupos de tratamiento: 4-6
mg/kg/día de SPP-001 y 0,72 mg de una pastilla de
liberación lenta de estradiol (Innovative Research),
respectivamente.
Estudio 1, se administraron 0,1 ml de
SPP-001 dos veces al día (como se administraron en
el ejemplo 1).
Estudio 2-3, se administraron 0,1
ml dos veces al día de SPP-001 concentrado (se usó
un volumen de 1/10 de agua como se ha descrito en el ejemplo 1).
El día de la inoculación de células o de bloques
tumorales, usando un trócar se inocularon por vía subcutánea en el
cuello de los ratones una pastilla de liberación lenta de 0,72 mg de
estradiol (Innovative Research).
Los animales se sometieron a observación
diariamente durante los periodos experimentales. Cuando los tumores
se pudieron medir, se midieron en dos dimensiones tres veces a la
semana usando un calibrador deslizante. Se construyeron curvas de
crecimiento tumoral y se calcularon los parámetros de la curva de
crecimiento (19).
El experimento finalizó cuando los tumores en
crecimiento mostraron un incremento de tamaño durante al menos seis
registros de crecimiento consecutivos. Al finalizar el experimento,
los animales fueron sacrificados mediante luxación cervical.
En ninguno de los tres estudios se observó
toxicidad.
Estudio
1
El experimento se concluyó 27 días después de su
inicio a causa de una tasa de formación de tumores muy baja. Ni en
el grupo de los controles sin tratar ni en ninguno de los dos grupos
de tratamiento se desarrollaron tumores. Sin embargo, sólo en uno de
los 10 ratones tratados con E2 apareció un tumor en crecimiento.
Estudio
2
En este experimento seis de 9 ratones evaluables
tratados con E2 desarrollaron un total de 10 tumores
MCF-7 en crecimiento. En contraste con ello, en 10
de 10 animales evaluables tratados con SPP-001 no se
desarrollaron tumores.
Estudio
3
Cuando este experimento finalizó 52 días tras el
trasplante, se habían desarrollado tumores en 7 de 10 ratones en el
grupo de tratamiento con E2. No se detectaron tumores en 10 ratones
tratados con el SPP-001.
La Figura 3 muestra la curva de crecimiento medio
del área tumoral construida a partir de las medidas tumorales
individuales de los tumores tratados con E2, y la ausencia de
crecimiento tumoral en los ratones tratados con
SPP-001 está indicada en la figura. Los parámetros
de la curva de crecimiento tumoral calculada se enumeran en la Tabla
3.
| Grupo | Análisis de la curva de crecimiento | ||||
| Nº de tumores | Parámetros de la curva de crecimiento Gompertz | T_{D}, días | |||
| \alpha x 10^{3} | \beta x 10^{3} | R | |||
| Estradiol | 7/10 | 7,6 | 34,6 | 0,903 | 28,3 |
| Estradiol (E_{2}) | |||||
| Composición CR | 0/10 | - | - | - | - |
| \begin{minipage}[t]{160mm} Análisis del crecimiento de xenoinjertos de carcinoma de mama humano MCF-7 cultivados en ratones hembra NMRI/Born^{TM} desnudos atímicos tratados con composición CR y con E_{2}. \end{minipage} |
Las series de experimentos presentadas mostraron
que el SPP-001 aplicado no ejerció ningún efecto
estimulador de tumores en los xenoinjertos de carcinoma de mama
humano MCF-7 dependiente de estrógeno. En contraste
con ello, el tratamiento con E2 mantuvo el crecimiento de este
tumor, lo que confirma la capacidad de MCF-7 para
formar tumores en ratones desnudos con la sustitución hormonal
adecuada. Se pueden realizar experimentos similares a los descritos
en este ejemplo usando otras líneas de células de cáncer de mama
humano positivas para el receptor estrogénico, Por ejemplo T47D y
ZR75-1 (5).
Los resultados de los estudios 2 y 3 fueron
idénticos en el crecimiento tumoral observado, a pesar de la
diferencia en el procedimiento de establecimiento tumoral es decir
cultivadas in vitro suspensiones de células únicas frente a
bloques de tumores sólidos.
Aunque el crecimiento tumoral sólo se observó en
el grupo de tratamiento con E2 del Estudio 1, los resultados de este
experimento no fueron concluyentes debido a la baja tasa de
formación de tumores. Probablemente esto se debió a una dosis
celular relativamente baja de los inóculos (10^{6} células). Por
tanto, la dosis celular se incrementó a 10^{7} células/inóculo en
el Estudio 2, lo que tuvo como resultado una tasa de formación de
tumores comparable a la obtenida con el trasplante de bloques de
tumores en el Estudio 3.
La dosis de SPP-001 de
0,40-0,60 mg/kg/día se escogió para simular la
ingesta diaria recomendada de CR. Los resultados mostraron que
incluso un incremento de 10 veces la dosis de
SPP-001 no mantuvo el crecimiento de
MCF-7.
El carcinoma de mama MCF-7 en
ratones desnudos en un tumor de crecimiento lento (3). La tasa de
crecimiento específico, \alpha= 0,0076 (Tabla 3) corresponde a un
tiempo de duplicación del volumen tumoral (TD) de 28,3 días.
Este ejemplo describe el efecto de
SPP-001 administrado por vía oral y de estrógeno
administrado por vía subcutánea sobre el desarrollo tumoral y el
crecimiento tumoral del xenoinjerto de cáncer de mama humano
positivo para el receptor estrogénico y dependiente de estrógeno
MCF-7 (ATCC HTB-22) en ratones
desnudos (4).
Se usó la línea de células de cáncer de mama
humano positiva para el receptor estrogénico y de progesterona
MCF-7.
Las células casi confluentes cultivadas in
vitro se recolectaron utilizando un rastrillo de células. Tras
la centrifugación, una alícuota de las células se tiñó con azul
tripán y se contó para determinar la fracción de células viables.
Las células se resuspendieron en medio reciente hasta una
concentración final de 10^{6} x 10^{7} células viables por
inóculo (0,1-0,2 ml). Las células se inocularon por
vía subcutánea en ambos flancos de ratones hembra desnudos intactos.
Un tumor MCF-7 resultante se usó para el trasplante
seriado en todos los ratones de este estudio.
El experimento se realizó en un total de 32
ratones hembra desnudos atímicos NMRI/Born™ de seis semanas de edad.
Se permitió un periodo de aclimatación de una semana con el fin de
excluir los animales en malas con-
diciones.
diciones.
Los ratones se mantuvieron en condiciones
estériles en galerías limpias de flujo de aire laminar. Se permitió
a los ratones acceso libre a agua estéril y a pellas de alimento.
Las jaulas y los lechos se cambiaron una vez a la semana. La
temperatura ambiente era de 25 \pm 2ºC y la humedad relativa de 55
\pm 5%.
Tras la inoculación de bloques tumorales, los
animales se aleatorizaron a grupos de tratamiento según el diseño
del estudio. Cada animal se identificó mediante marcas en la oreja t
cada jaula se marcó para identificar el grupo y las marcas en los
animales.
En treinta y dos ratones hembra desnudos intactas
se realizó el trasplante de bloques de tumores MCF-7
de un diámetro de aproximadamente 1 mm en ambos flancos de los
ratones receptores y los ratones se aleatorizaron a cuatro grupos de
tratamiento:
- 1:
- 40-60 mg/kg/día de SPP-001 por vía oral.
- 2:
- pastillas de liberación lenta de 0,72 mg de estradiol por vía subcutánea (Innovative Research).
- 3:
- 40-60 mg/kg/día de SPP-001 y pastillas de liberación lenta de 0,72 g de estradiol (Innovative Research).
- 4:
- Agua estéril por vía oral dos veces al día.
Como se describe en el ejemplo 1, a excepción de
que se usó una dosis 100X.
El día de la inoculación de los bloques tumorales
se inoculó usando un trócar una pastilla de liberación lenta de 0,72
mg de estradiol (Innovative Research) por vía subcutánea en el
cuello de los ratones.
Los animales se sometieron a observación
diariamente durante el periodo experimental. Cuando los tumores se
pudieron medir, se midieron en dos dimensiones tres veces a la
semana usando un calibrador deslizante. Se construyeron curvas de
crecimiento tumoral y se calcularon los parámetros de la curva de
crecimiento (19).
El experimento finalizó cuando los tumores en
crecimiento mostraron un incremento de tamaño durante al menos seis
registros de crecimiento consecutivos. Al finalizar el experimento,
los animales fueron sacrificados mediante luxación cervical.
No se observó toxicidad.
Como se esperaba, los tumores control sin tratar
no mostraron un crecimiento significativo. El día 20 después del
trasplante se encontraban evaluables 10 inóculos tumorales
persistentes (Figura 4). El tratamiento con SPP-001
no mantuvo el crecimiento del tumor MCF-7. El área
tumoral media de 5 inóculos de tumores evaluables a los 20 días del
trasplante fue la misma que en el grupo control.
El tratamiento con E2 no ejerció ningún efecto de
refuerzo del crecimiento sobre el xenoinjerto tumoral
MCF-7. En este grupo, 8 tumores mostraron
crecimiento y el día 20 los tumores habían alcanzado un área tumoral
media de 39 mm^{2} (Figura 4). La adición del
SPP-001 al E2 no influyó sobre el crecimiento del
tumor. A los 20 días del trasplante, el área tumoral media de 11
tumores evaluables en el grupo de tratamiento combinado fue la misma
que la del grupo E2.
Este estudio muestra que incluso un incremento de
100 veces el SPP-001 no indujo tumores en ratones en
los que se inocularon células de cáncer de mama humano positivas
para el receptor hormona. En contraste con ello, el tratamiento de
control positivo con E2 ejerce el efecto esperado de refuerzo del
crecimiento sobre el xenoinjerto de cáncer de mama
MCF-7 sensible y dependiente de estrógeno.
En el grupo en el que los ratones recibieron
tratamiento con SPP-001 y estrógeno no se observaron
diferencias en comparación con el tratamiento con sólo estrógeno.
Esto sugiere que el SPP-001 no tiene efecto ni
potenciador ni inhibidor (antagonista) sobre los tumores de mama
sensibles a estrógeno. La observación también implica que este
SP-01 no se une a los receptores de estrógeno en las
células MCF-7.
Este ejemplo describe un sistema de modelo
experimental para la investigación de fármacos o combinaciones de
fármacos con efectos estrogénicos diferenciales putativos en tejidos
normales y en cáncer de mama.
Los posibles efectos de tipo estrogénico en los
tejidos normales se analizan mediante el uso del incremento en el
peso uterino como criterio de valoración. Como alternativa se
podrían usar los cambios en las gonadotropinas ni en la citología
vaginal.
La investigación incluye un grupo de tratamiento
con estradiol que sirve como control funcional del sistema de
estudio.
Muestra: frotis, recogido de la cámara vaginal o
de la pared lateral, se extiende en portaobjetos de vidrio
previamente marcados y enseguida se pulverizan o se fijan mediante
humedad.
Procedimiento: tinción de Papanicolaou y
microscopia.
Aplicación: investigación de la hemorragia o la
secreción vaginal; frotis de seguimiento tras displasia cervical o
endometrial previa o después de una histerectomía a causa de una
neoplasia maligna. La evaluación cito-hormonal en
ocasiones es útil para valorar el estado hormonal.
Interpretación: la exploración citológica
detectará displasia, neoplasia y algunas infecciones, por ejemplo
infección con Trichomonas vaginales o Candida
albicans.
Se usaron ratones hembra NMRI/Born™ desnudos
atímicos (nu/nu) de seis-ocho semanas de edad. Tras
la aclimatación, los ratones se sometieron a una ovariectomía con el
fin de evitar la influencia del estrógeno endógeno. Los ratones se
aleatorizan en grupos de tratamiento y un grupo de controles sin
tratar.
Los experimentos descritos en este ejemplo se
pueden realizar con otras cepas de ratones.
Los ratones se ovariectomizaron y aleatorizaron
el día 0. Un grupo sirve como controles sin tratar (n=
5-10) y a un grupo (n= 5-10) se le
administró estradiol (E2) desde el día 1 mediante inserción con un
trócar de una pastilla de liberación lenta de 0,72 mg de E2
(Innovative Research) por vía subcutánea en el cuello de los
ratones.
El o los últimos grupos (n= 5-10
en cada grupo) se tratan con la o las composiciones/fármacos de
prueba usando dosis y calendarios relevantes.
Los animales se sometieron a observación
diariamente durante el periodo experimental de 8 días. Los animales
que murieron antes de la finalización del experimento se excluyen
del análisis.
La o las composiciones del o los fármacos se
preparar usando procedimientos adecuados de extracción,
purificación, solubilización y sistemas de transporte. El
tratamiento se administra por la vía de administración más
conveniente (dérmica, oral, intraperitoneal o intravenosa) y con el
o los volúmenes de dosificación adecuados.
La o las dosis del o los fármacos se seleccionan
en intervalos de dosis relevantes y se seleccionan los calendarios
con una mayor eficacia esperada.
El experimento se concluyó el día 8 después de la
ovariectomía. Todos los animales fueron sacrificados mediante
luxación cervical y se determinaron los pesos de los úteros de los
ratones.
Los datos de los pesos uterinos de los ratones se
usan para calcular los pesos uterinos medios de los animales
control, tratados con estradiol y de prueba, respectivamente.
Un incremento significativo en el peso uterino
medio del grupo E2 en comparación con los controles sirve como
control funcional del sistema del estudio.
Un incremento significativo en el peso uterino
medio del o los grupos de tratamiento con el o los fármacos de
prueba E2 se consideran pruebas del efecto estrogénico sobre tejidos
normales.
La comparación del incremento del peso uterino
medio y el grupo E2 y el o los grupos de prueba se usan para
semicuantificar el efecto estrogénicos del o los fármacos,
investigados, la o las dosis y el o los calendarios.
Los posibles efectos estrogénicos sobre las
células de cáncer de mama se analizan usando estimulación del
crecimiento de un xenoinjerto de cáncer de mama humano sensible a
estrógenos como criterio de valoración.
La investigación se realiza en dos xenoinjertos
de cáncer de mama humano usando ratones desnudos idénticos a los
usados para la investigación del peso uterino. Un tumor,
MDA-MB-231, es negativo para el
receptor de progesterona y estrógeno y, por tanto, resistente e
independiente de estrógenos (4). El otro tumor,
MCF-7, es positivo para el receptor de progesterona
y estrógeno y sensible y dependiente de estrógenos (4). La razón
para la inclusión del xenoinjerto de cáncer de mama negativo para el
receptor en el sistema de prueba es identificar los posibles efectos
inespecíficos, es decir los efectos no estrogénicos que son
independientes de la unión del o los fármacos a los receptores de
estrógeno de las células tumorales.
La investigación incluye el tratamiento con
estradiol de los xenoinjertos del tumor MCF-7
sensible a estrógeno, que sirve como control funcional del sistema
de estudio.
Se usan las líneas celulares de cáncer de mama
humano MDA-MB-231 (ATCC
HTB-26) y MCF-7
(HTB-22). Las células casi confluentes cultivadas
in vitro se recolectaron utilizando un rastrillo de células.
Tras la centrifugación, una alícuota de las células se tiñó con azul
tripán y se contó para determinar la fracción de células viables.
Las células se resuspenden en medio reciente hasta una concentración
final de 10^{6} - 10^{7} células viables por inóculo
(0,1-0,2 ml). Las células se inoculan por vía
subcutánea en ambos flancos de ratones hembra desnudos intactos u
ovariectomizados.
Se usan ratones hembra desnudos (nu/nu)
atímicos NMRI/Born™ de seis semanas de edad. Se permite un periodo
de aclimatación de una semana con el fin de excluir los animales en
malas condiciones. Los experimentos descritos en este ejemplo se
pueden realizar con otras cepas de ratones.
La ovariectomía se realiza con anestesia general
y usando procedimientos normalizados tras la aclimatación de los
animales.
La inoculación de las células tumorales en los
ratones ovariectomizados se realiza después de al menos una semana
para garantizar la recuperación completa tras la ovariectomía.
Tras la inoculación de las células, los animales
se aleatorizan a grupos de tratamiento según el diseño del
estudio.
Los ratones se mantienen en condiciones estériles
en galerías limpias de flujo de aire laminar. Se permite a los
ratones acceso libre a agua estéril y a pellas de alimento. La
temperatura ambiente es de 25 \pm 2ºC y la humedad relativa de 55
\pm 5%.
Los experimentos de crecimiento con los dos
tumores se llevan a cabo en series distintas usando un diseño del
estudio similar.
El día 0 se inocula a los animales células
tumorales por vía subcutánea en ambos flancos. A continuación, los
ratones se aleatorizan a un grupo de controles (n= 10) sin tratar
(vehículo) y un grupo (n= 10) de tratamiento con E2 desde el día 1
mediante inserción por vía subcutánea de una pastilla de liberación
lenta de E2 de 0,72 mg (Innovative Research) en el cuello de los
ratones usando un trócar. Un tercer grupo(s) (n= 10 en cada
grupo) se trata con el o los fármacos de prueba usando una o varias
dosis y calendarios relevantes. El grupo de tratamiento con E2 sólo
se incluye en el tratamiento del xenoinjerto
MCF-7.
Los procedimientos de dosificación se programan
como se ha descrito en el apartado del peso uterino.
Los animales se someten a observación diariamente
durante el periodo experimental. Cuando los tumores se pueden medir,
se miden en dos dimensiones tres veces a la semana usando un
calibrador deslizante. Se construyen curvas de crecimiento tumoral y
se calculan los parámetros de la curva de crecimiento (19).
El experimento finaliza cuando los tumores en
crecimiento muestran un incremento de tamaño durante al menos seis
registros de crecimiento consecutivos. Al finalizar el experimento,
los animales se sacrifican mediante luxación cervical.
Usando un programa informático según Rygaard y
col. (19), se usan las medidas del tumor para construir curvas de
crecimiento medio y calcular los parámetros de la curva de
crecimiento del tumor (19).
El efecto estimulador de E2 sobre los
xenoinjertos de MCF-7 sirve como control funcional
del sistema de estudio.
Un efecto de mantenimiento del crecimiento del o
los fármacos en el xenoinjerto MCF-7 indica un
efecto de tipo estrogénico mediado por los receptores de estrógeno
de las células cancerosas. Si en el xenoinjerto
MDA-MB-231 también se encuentra un
efecto de mantenimiento del crecimiento del o los fármacos, se
considera una prueba de que el efecto observado no está mediado por
los receptores de estrógeno de las células tumorales. Sin embargo,
con el fin de se escogida como candidata para una sustancia o
composición útil en el procedimiento de la invención, la sustancia o
composición no debe exhibir efecto de mantenimiento del crecimiento
en el xenoinjerto MCF-7 ni efecto de mantenimiento
del crecimiento (que sería un efecto de mantenimiento de crecimiento
indirecto) en el xenoinjerto
MDA-MB-231.
La comparación del efecto de mantenimiento del
crecimiento en el grupo tratado con E2 y el o los grupos de prueba
se usa para semicuantificar el efecto estrogénico del o los fármacos
investigados, la o las dosis y el o los calendarios según Rygaard y
col. (19).
Se pueden realizar experimentos similares a los
descritos en este ejemplo usando otras líneas de células de cáncer
de mama humano positivas y negativas para el receptor estrogénico,
por ejemplo T47D, ZR75-1 y
MDA-MB-435S (5).
Este ejemplo describe un protocolo clínico para
estudios de seguridad de SPP-001 en mujeres con
cáncer de mama en estado avanzado.
Se incluirán pacientes de cáncer de mama en
estado avanzado con enfermedad detectable. Los pacientes deberán
sufrir síntomas menopáusicos. No se deberá administrar quimioterapia
o tratamiento endocrino de forma concomitante al tratamiento con
SPP-001. Deberá determinarse el estado del receptor
estrogénico (RE) sobre las células cancerosas.
El SPP-001 deberá administrarse
por vía oral dos veces al día a una dosis correspondiente de
0,40-0,60 mg de SPP-001/kg. El
periodo de tratamiento deberá ser de 3 meses.
Los pacientes se aleatorizarán a un tratamiento
con SPP-001 o con placebo. Se realizará un
seguimiento de los pacientes de ambos grupos de tratamiento hasta su
fallecimiento.
Se pueden usar una o varias dosis mayores y/o
menores y/o calendarios de administración que impliquen una o
múltiples dosis de varios intervalos de tiempo.
Las lesiones detectables (de una a tres lesiones)
deberán definirse y medirse antes del inicio del tratamiento con
SPP-001. Se registrará el efecto de CR sobre los
síntomas menopáusicos. Se registrarán todos los efectos secundarios
asociados con el tratamiento con SPP-001. Además,
durante el periodo de tratamiento se monitorizarán los niveles de
s-FSH y de s-LH. Además, se puede
aplicar una PCR cuantitativa o similar para determinar los posibles
efectos sobre los genes regulados por estrógeno, tal como el gen del
receptor de la progesterona y el gen pS2.
Al final del experimento, se evaluarán las
lesiones detectables y se anotarán todos los efectos de conformidad
con los criterios de la OMS.
Se construirán curvas de supervivencia para cada
grupo y se determinará si el SPP-001 ejerce algún
efecto sobre la supervivencia en esta población de pacientes.
Este ejemplo describe un protocolo clínico para
estudios de seguridad del tratamiento con SPP-001 en
mujeres con cáncer de mama en estado avanzado.
Se incluirán pacientes de cáncer de mama en
estado avanzado que hayan obtenido una respuesta completa o parcial
al tratamiento antineoplásico convencional. Los pacientes deberán
sufrir síntomas menopáusicos. No se deberá administrar quimioterapia
o tratamiento endocrino de forma concomitante al tratamiento con
SPP-001. Deberá determinarse el estado del receptor
estrogénico (RE) sobre las células cancerosas.
El SPP-001 deberá administrarse
por vía oral dos veces al día a una dosis correspondiente de
0,40-0,60 mg de SPP-001/kg. El
periodo de tratamiento deberá ser de 3 meses.
Los pacientes se aleatorizarán a un tratamiento
con SPP-001 o con placebo y se les realizará un
seguimiento hasta su fallecimiento.
Se podrán realizar modificaciones de la o las
dosis y los calendarios.
Se usará el tiempo de progresión de la enfermedad
usando los criterios disponibles de la OMS. Se registrará el efecto
del SPP-001 sobre los síntomas menopáusicos y las
gonadotropinas. Se registrarán todos los efectos secundarios
asociados con el tratamiento de la composición de
SPP-001.
Se determinará el tiempo hasta la progresión en
cada grupo de tratamiento y se comparará entre grupos con el fin de
determinar si el SPP-001 ejerce algún efecto sobre
la progresión del cáncer en esta población de pacientes.
Este ejemplo describe un protocolo clínico para
estudios de seguridad del SPP-001 en mujeres con un
diagnóstico previo de cáncer de mama y sin indicaciones de
recurrencia.
Se incluirán mujeres con un diagnóstico previo de
cáncer de mama y que sufren síntomas menopáusicos. Las pacientes no
deben presentar signos de recurrencia de la enfermedad. No se deberá
administrar ningún tratamiento antineoplásico de forma concomitante
al tratamiento con SPP-001. Se deberá determinar el
estado del RE sobre las células cancerosas.
El SPP-001 deberá administrarse
por vía oral dos veces al día a una dosis correspondiente de
0,40-0,60 mg de SPP-001/kg. El
periodo de tratamiento deberá ser de 1 año.
Las pacientes se aleatorizarán a un tratamiento
con SPP-001 o con placebo. Se realizará un
seguimiento de las pacientes de ambos grupos durante 5 años.
Se podrán realizar modificaciones de la o las
dosis y los calendarios.
Se determinará el tiempo transcurrido hasta la
recurrencia de la enfermedad. Se registrará el efecto del
SPP-001 sobre los síntomas menopáusicos y las
gonadotropinas. Se registrarán todos los efectos secundarios
asociados con el tratamiento con SPP-001.
Se construirán curvas univariables de
supervivencia global y de supervivencia sin recurrencia Se
determinará el tiempo hasta la progresión en cada grupo de
tratamiento para ambos grupos de tratamiento y se compararán con el
fin de establecer si el tratamiento ejerce algún efecto sobre estos
dos parámetros.
Este ejemplo describe el tratamiento con
SPP-001 de trastornos de deficiencia de estrógeno,
incluidos trastornos dermatológicos tales como envejecimiento de la
piel, sequedad de las membranas mucosas (por ejemplo de la vagina y
el intestino), enfermedades relacionadas con el cerebro como la
enfermedad de Alzheimer, incluidos otros tipos de demencia,
enfermedades relacionadas con los huesos y las articulaciones tales
como osteoporosis, osteocondrosis, artritis reumatoide,
cicatrización de fracturas óseas y reducción de fracturas del
esqueleto, y enfermedades tales como hiperlipidemia,
hipercolesterolemia, arteriosclerosis, etc., en el subgrupo de
mujeres que en la actualidad presentan cáncer de mama, con
antecedentes de cáncer de mama o mujeres con un mayor riesgo de
desarrollar cáncer de mama.
Las candidatas al tratamiento serán mujeres
pertenecientes a uno de los grupos relacionados de cáncer de mama
mencionados anteriormente y que padezcan deficiencia de estrógeno.
Entre las enfermedades relacionadas con la deficiencia de estrógeno
se incluyen las mencionadas anteriormente.
Además, en este estudio del tratamiento se pueden
incluir mujeres pertenecientes a uno de los tres grupos de cáncer de
mama mencionados anteriormente y que padezcan enfermedades que se
puedan curar o aliviar con tratamiento de sustitución de
estrógenos.
El SPP-001 deberá administrarse
por vía oral dos veces al día a una dosis correspondiente de
0,40-0,60 mg de SPP-001/kg.
Se podrán realizar modificaciones de la o las
dosis y los calendarios.
Este ejemplo describe procedimientos para
determinar los efectos fisiológicos estrogénicos del
SPP-001 y composiciones similares en la mujer que
padezca deficiencias de estrógeno.
Mujeres con niveles elevados de FSH y/o niveles
elevados de LH como reacción a la deficiencia de estrógeno.
Los niveles séricos de FSH y LH se determinarán
antes del tratamiento y al mes y a los 2 meses de tratamiento. Se
usarán ensayos comerciales estándar. Se realizarán frotis vaginales
antes y después del tratamiento durante 60 días. La densidad mineral
ósea se determinará antes del tratamiento y 2 meses después del
tratamiento. Se usará un ensayo DXA estándar.
Seres humanos con, por ejemplo, arrugas, piel
seca y otros trastornos relacionados con deficiencia de
estrógeno.
Los individuos con los trastornos en cuestión se
tratan diariamente con SPP-001 o similar con el
alivio de los trastornos como criterio de valoración. El periodo de
tratamiento típico es de 1-2 meses. Preferentemente,
la vía de administración es la aplicación directa en la piel, pero
también puede ser oral o parenteral.
Mujeres con síntomas de deficiencia vaginal de
estrógeno tal como sequedad y dispareunia.
Se administra una dosis adecuada de
SPP-001 para aliviar los síntomas vaginales mediante
aplicación directa a la membrana mucosa o mediante administración
oral o parenteral. Se usa cuando es necesario.
Los estrógenos se han considerado en general como
protectores cardíacos en la población femenina. El
SPP-001 y similares se pueden usar por su actividad
estrogénica beneficiosa, pero sin sus aspectos negativos no
deseados, para el tratamiento y alivio de síntomas de enfermedades
arteriales y venosas, incluyendo las que afectan al corazón y al
cerebro.
Seres humanos con, por ejemplo,
arteriosclerosis.
Los individuos con los trastornos en cuestión se
tratan diariamente con SPP-001 o similar con una
disminución de los niveles de colesterol o de los fallecimientos por
enfermedad cardíaca como criterio de valoración. Los periodos de
tratamiento típicos son de 2 meses a 5 años. Preferentemente, la vía
de administración es oral, aunque también puede ser oral o
parenteral.
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Claims (28)
1. Uso de una composición que comprende
sustancias contenidas en extracto de Cimicifuga Racemosa, que
induce un efecto fisiológico de tipo estrogénico sin interaccionar
con las células de cáncer de mama, para la preparación de un
medicamento para el tratamiento de síntomas o enfermedades por
deficiencia de estrógeno de un mamífero que sufre cáncer de mama o
que presenta un riesgo elevado de desarrollarlo.
2. Uso según la reivindicación 1, en el que la
composición induce un efecto fisiológico de tipo estrogénico sin
estimular células de cáncer de mama.
3. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que el efecto fisiológico de tipo estrogénico es
crecimiento uterino determinado por un incremento del peso uterino
en comparación con los controles tras la administración de la
composición a ratones hembra desnudos atímicos ovariectomizados.
4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que el efecto fisiológico de tipo estrogénico es
crecimiento uterino determinado por un incremento del peso uterino
medio en comparación con controles de al menos 0,10 g tras la
administración de la composición a ratones hembra desnudos atímicos
NMRI durante 8 días.
5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que el efecto fisiológico de tipo estrogénico es
un cambio en las gonadotropinas (FSH y/o LH) determinado mediante
técnicas disponibles de radioinmunoensayo validadas.
6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que el efecto fisiológico de tipo estrogénico es
un cambio en la citología de las células vaginales determinado por
recuentos citológicos.
7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que la composición no interacciona, en particular
no estimula, las células cancerosas que son negativas para el
receptor estrogénico.
8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que la ausencia de estimulación de las células de
cáncer de mama está determinada por la ausencia de efectos de la
composición en comparación con un control sobre el crecimiento de la
línea celular de cáncer de mama humano
MDA-MB-231 (ATCC
HTB-26) negativa para el receptor estrogénico y de
progesterona inoculada en ratones hembra desnudos atímicos de seis
semanas de edad, determinado cuando los tumores control muestran un
incremento del tamaño durante al menos seis registros de crecimiento
consecutivos.
9. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que la composición no interacciona, en particular
no estimula, las células cancerosas que son positivas para el
receptor estrogénico.
10. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que la composición es una que no posee efectos
sustancialmente agonistas ni efectos sustancialmente antagonistas
sobre el efecto del estrógeno tal como estradiol sobre las células
de cáncer de mama, incluso cuando se haya documentado que las
células de cáncer de mama son positivas para el receptor
estrogénico.
11. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que la composición es una que sustancialmente no
se une a receptores de estrógeno de las células de cáncer.
12. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que la ausencia de estimulación de células de
cáncer de mama está determinada por una ausencia de efecto de la
composición en comparación con un control sobre el crecimiento de la
línea celular de cáncer de mama humano MCF-7 (ATCC
HTB-22) dependiente de estrógeno y positiva para el
receptor estrogénico inoculada en ratones hembra desnudos atímicos
de seis semanas de edad, determinada cuando los tumores control
muestran un incremento del tamaño durante al menos seis registros de
crecimiento consecutivos.
13. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que la ausencia de estimulación de células de
cáncer de mama está determinada por una ausencia de efecto de la
composición cuando se administra combinada con estradiol en
comparación con un control sobre el crecimiento de la línea celular
de cáncer de mama humano MCF-7 (ATCC
HTB-22) dependiente de estrógeno y positiva para el
receptor estrogénico inoculada en ratones hembra desnudos atímicos
de seis semanas de edad, determinada cuando los tumores control
muestran un incremento del tamaño durante al menos seis registros de
crecimiento consecutivos.
14. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
15 ó 16, en el que la ausencia de estimulación de células de cáncer
de mama está determinada por una ausencia de efecto de la
composición, incluso cuando la composición se administra a una dosis
que es 10 veces, o incluso 100 veces, mayor a una dosis que en la
misma cepa de ratones desnudos induce un incremento máximo del peso
uterino.
15. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes para el tratamiento de los síntomas o enfermedades de
deficiencia estrogénica en mujeres que presentan cáncer de mama, que
presentan un riesgo elevado de recurrencia del cáncer de mama o que
presentan riesgo (tal como un riesgo elevado) de desarrollar cáncer
de mama.
16. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que los síntomas condicionados por deficiencia de
estrógeno son síntomas menopáusicos.
17. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes para el tratamiento de trastornos dermatológicos tales
como envejecimiento de la piel, arrugas, piel seca y otros
trastornos dermatológicos relacionados con la deficiencia de
estrógeno en mujeres que presentan cáncer de mama, que presentan un
riesgo elevado de recurrencia del cáncer de mama o que presentan
riesgo (tal como un riesgo elevado) de desarrollar cáncer de
mama.
18. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes para el tratamiento de la sequedad de membranas mucosas,
por ejemplo de la vagina y del intestino, en mujeres que presentan
cáncer de mama, que presentan un riesgo elevado de recurrencia del
cáncer de mama o que presentan riesgo (tal como un riesgo elevado)
de desarrollar cáncer de mama.
19. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes para el tratamiento de una enfermedad relacionada con el
cerebro, tal como la enfermedad de Alzheimer, incluidos otros tipos
de demencia, en mujeres que presentan cáncer de mama, que presentan
un riesgo elevado de recurrencia del cáncer de mama o que presentan
riesgo (tal como un riesgo elevado) de desarrollar cáncer de
mama.
20. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes para el tratamiento de enfermedades relacionadas con los
huesos y las articulaciones, tales como osteoporosis,
osteocondrosis, osteoartritis, artritis reumatoide, cicatrización de
fracturas óseas y reducción de fracturas del esqueleto en mujeres
que presentan cáncer de mama, que presentan un riesgo elevado de
recurrencia del cáncer de mama o que presentan riesgo (tal como un
riesgo elevado) de desarrollar cáncer de mama.
21. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes para el tratamiento de la deficiencia vaginal de
estrógenos, tal como sequedad vaginal y dispareunia en mujeres que
presentan cáncer de mama, que presentan un riesgo elevado de
recurrencia del cáncer de mama o que presentan riesgo (tal como un
riesgo elevado) de desarrollar cáncer de mama.
22. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes para el tratamiento de cardiopatías coronarias, tales
como arteriosclerosis en mujeres que presentan cáncer de mama, que
presentan un riesgo elevado de recurrencia del cáncer de mama o que
presentan riesgo (tal como un riesgo elevado) de desarrollar cáncer
de mama.
23. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes para el tratamiento de enfermedades condicionadas por
una deficiencia de estrógeno, tal como hiperlipidemia e
hipercolesterolemia en mujeres que presentan cáncer de mama, que
presentan un riesgo elevado de recurrencia del cáncer de mama o que
presentan riesgo (tal como un riesgo elevado) de desarrollar cáncer
de mama.
24. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que la composición es extracto de Cimicifuga
Racemosa.
25. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que la composición es una composición que
comprende partes de la planta de Cimicifuga Racemosa.
26. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que la composición es una composición que
comprende SPP-001.
27. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que la composición es una composición que
contiene uno o más compuestos químicos contenidos en el extracto de
Cimicifuga Racemosa.
28. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en el que la composición se combina con un fármaco que
posee actividad de modulador selectivo de los receptores
estrogénicos (SERM).
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