ES2241905T3 - Procedimiento y dispositivo destinados a la preparacion de muestras para el analisis de muestras biologicas. - Google Patents

Procedimiento y dispositivo destinados a la preparacion de muestras para el analisis de muestras biologicas.

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ES2241905T3 ES02001519T ES02001519T ES2241905T3 ES 2241905 T3 ES2241905 T3 ES 2241905T3 ES 02001519 T ES02001519 T ES 02001519T ES 02001519 T ES02001519 T ES 02001519T ES 2241905 T3 ES2241905 T3 ES 2241905T3
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Abstract

Procedimiento destinado a la preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas, que comprende los siguientes pasos: a) colocar la muestra biológica sobre un soporte bidimensional; b) aplicar una primera solución L1, precipitante o desnaturalizante de proteínas, a la muestra biológica o sobre el soporte a una primera temperatura T1 y durante un primer intervalo temporal predeterminado Z1; c1) dejar la primera solución L1, precipitante o desnaturalizante de proteínas, sobre la muestra biológica o sobre el soporte a una segunda temperatura T2 y durante un segundo intervalo temporal predeterminado Z2, siendo T2 inferior a T1 y siendo Z2 superior, igual o inferior a Z1; o c2) volver a aplicar la primera solución L1, precipitante o desnaturalizante de proteínas, o aplicar una segunda solución L2, precipitante o desnaturalizante de proteínas, a la muestra biológica o sobre el soporte a una segunda temperatura T2 y durante un segundo intervalo temporal predeterminado Z2, siendo T2 inferior a T1 y siendo Z2 superior, igual o inferior a Z1; y d) secar la muestra.

Description

Procedimiento y dispositivo destinados a la preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas.
La presente invención se refiere a un procedimiento destinado a la preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas así como a un dispositivo para llevar a cabo el procedimiento destinado a la preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas.
Desde que se logró alcanzar la secuenciación completa del genoma, el análisis cualitativo y cuantitativo de las proteínas existentes en una muestra celular o tisular dada va adquiriendo cada vez más importancia tanto en el campo de la investigación como en el de la industria. Por lo que se refiere a los métodos de análisis químico-proteico, el papel más importante lo desempeñan los llamados estudios proteómicos a gran escala (del inglés large scale proteomics). Estos estudios están basados en la desagregación de una determinada muestra celular o tisular, la extracción y desnaturalización de las proteínas por medio de distintos reactivos posibles y la separación de las proteínas individuales mediante ciertos procedimientos, como por ejemplo la electroforesis bidimensional en geles. Cada una de las proteínas, que se encuentre en la mezcla proteica original en la cantidad y con el tamaño suficientes así como la capacidad suficiente de migración, será comprobado dentro de tales geles como mancha, siendo su lugar característico del tamaño y de la carga neta. En la práctica de la denominada investigación proteómica, pueden separarse de este manera hasta varios miles de proteínas de una muestra. Teóricamente, la comparación de distintos estados de una muestra permite comprobar las diferencias de la expresión proteica mediante la superposición exacta de los distintos geles con la ayuda de un software apropiado. En particular, parece ser posible que la comparación de la localización permite la identificación de proteínas de nueva expresión y de las ya no expresadas o sobreexpresadas. Sin embargo, en la práctica diaria de análisis se presentan una serie de limitaciones importantes con respecto a este objetivo. Así, los procedimientos de análisis conocidos presentan reproducibilidades limitadas, ya que en las distintas fases del análisis se producen importantes imprecisiones debido a la falta de automatización. Así, por ejemplo, las desviaciones resultantes con respecto a la posición de algunas proteínas pueden llegar a alcanzar varios puntos porcentuales. Por lo que se refiere a la cantidad relativa de las proteínas, las desviaciones resultantes pueden ser del orden de hasta un veinte por ciento.
Aparte de las dificultades técnicas para realizar los procedimientos conocidos, la dinámica de estos procedimientos tampoco es suficiente, es decir, las proteínas que aparecen muy raramente no pueden ser visualizadas simultáneamente junto con proteínas de aparición muy frecuente. Debido a estas limitaciones es imposible comparar, de manera automatizada, un elevado número de, por ejemplo, geles mediante un software adecuado, que depende de la reproducibilidad de las posiciones que las distintas proteínas ocupan. El hecho de que las posiciones de las distintas manchas de proteinas difieren ligeramente entre sí, aumenta la inseguridad de los análisis comparativos. En la investigación proteómica, sin embargo, depende de la comparación de grandes cantidades de células o tejidos, de tal manera que las limitaciones indicadas de los procedimientos conocidos no pueden ser toleradas.
Por los documentos WO 93 19207 A y US-B1-6 300 124 se conocen dispositivos para llevar a cabo un procedimiento destinado a la preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas. Estos dispositivos presentan por lo menos una cámara para recibir la muestra biológica, o las muestras biológicas, que está aplicada, o están aplicadas, sobre por lo menos un soporte, así como por lo menos un dispositivo de termorregulación que permite regular y controlar la temperatura existente en el interior de dicha cámara. El documento US-A-5 451 500 revela un dispositivo para la localización automática y el análisis de ácidos nucleicos en muestras biológicas, presentando este dispositivo una cámara de reacción para recibir la muestra, unos conductos de alimentación y de evacuación para los líquidos de análisis, así como un dispositivo para el control del flujo de aire y de la temperatura existente en la cámara de reacción.
Una de las razones esenciales para la variabilidad, o las imprecisiones y reproducibilidades limitadas, de los procedimientos de análisis conocidos consiste sobre todo en la preparación no estandarizada de muestras.
Por consiguiente, el objetivo de la presente invención es desarrollar y poner a disposición un procedimiento destinado a la preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas, que garantice una preparación homogénea y estandarizada y, en su caso, completamente automatizada, de las muestras. Además, la presente invención tiene el objetivo de poner a disposición un dispositivo correspondiente para la realización de este nuevo procedimiento destinado a la preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas, siendo variable el tamaño de cada una de las cámaras para la recepción de las
muestras.
Estos objetivos son alcanzados mediante un procedimiento que presenta las características de la reivindicación 1 y mediante un dispositivo que presenta las características de la reivindicación 11. Las configuraciones ventajosas están definidas en las reivindicaciones dependientes.
Un procedimiento de acuerdo con la presente invención, destinado a la preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas, comprende los siguientes pasos: a) aplicar la muestra biológica sobre un soporte bidimensional; b) aplicar una primera solución L1, precipitante o desnaturalizante de proteínas, sobre la muestra biológica, o sobre el soporte, a una primera temperatura T1 y durante un primer intervalo temporal predeterminado Z1; c1) dejar la primera solución L1, precipitante o desnaturalizante de proteínas, sobre la muestra biológica, o sobre el soporte, a una segunda temperatura T2 y durante un segundo intervalo temporal predeterminado Z2, siendo T2 inferior a T1 y siendo Z2 superior, igual o inferior a Z1; o c2) volver a aplicar la primera solución L1, precipitante o desnaturalizante de proteínas, o aplicar una segunda solución L2, precipitante o desnaturalizante de proteínas, sobre la muestra biológica, o sobre el soporte, a una segunda temperatura T2 y durante un segundo intervalo temporal predeterminado Z2, siendo T2 inferior a T1 y siendo Z2 superior, igual o inferior a Z1; y d) secar la muestra. Por el procedimiento de preparación de muestras realizado de acuerdo con la presente invención, se garantiza una preparación homogénea y altamente estandarizada de muestras, creándose muestras debidamente homogéneas. Por consiguiente, se da la posibilidad de que, debido a la utilización de programas computacionales apropiados, la identificación y cuantificación de las proteínas a analizar y a examinar resulten significativamente mejores. Ha sido demostrado mediante mediciones que la probabilidad de error en la identificación de proteínas disminuye hasta alcanzar la tercera o cuarta parte de su valor. Además, el número de las proteínas automáticamente identificadas aumenta por lo menos en un 16 %. Finalmente, el nuevo procedimiento de preparación de muestras permite una automatización completa de la obtención de muestras, ofreciéndose así la posibilidad de comparar los resultados cuantitativos obtenidos en laboratorios distintos.
En una configuración ventajosa del procedimiento realizado de acuerdo con la presente invención se lleva a cabo un secado de la muestra, como paso a1) realizado entre los pasos a) y b) del procedimiento y/o como paso b1) realizado entre los pasos b) y a) del procedimiento. Ha sido comprobado que esta medida conduce a una homogeneización y concentración adicionales de la muestra biológica a examinar. El secado de acuerdo con los pasos a1), b1) o d) del procedimento puede realizarse mediante un secado al aire o un secado por vacío.
En otra configuración ventajosa del procedimiento de acuerdo con la presente invención se lleva a cabo una congelación de la muestra como paso b2) realizado después de los pasos a) o a1) del procedimiento. Ventajosamente, esta medida también conduce a una concentración más homogénea de las proteínas y a una precipitación más estable de las mismas. La muestra biológica puede ser una muestra de células o de tejido(,) o una mezcla de proteínas o ácidos nucleicos, o una mezcla de macromoléculas constituida por proteínas y/o carbohidratos y/o grasas y/o ácidos nucleicos.
En otra configuración ventajosa del procedimiento de acuerdo con la presente invención, las soluciones L1 y/o L2 son disolventes orgánicos y/o soluciones con valores pH críticos y/o soluciones con concentraciones fónicas críticas y/o soluciones salinas y/o soluciones que contienen iones metálicos. Se ha comprobado que el metanol, el etanol, el butanol y la acetona son disolventes orgánicos particularmente ventajosos para realizar el procedimiento propuesto de preparación de muestras. Las soluciones salinas más utilizadas son las sales disueltas del ácido pícrico, del ácido gálico, del ácido de tungsteno o wolframio, del ácido de molibdeno, del ácido tricloracético, del ácido perclórico y del ácido sulfosalicílico. Así mismo se ha comprobado que un rango ventajoso de temperatura T1 es el rango comprendido entre -10ºC y
60ºC.
En otra configuración ventajosa del procedimiento de acuerdo con la presente invención, las muestras biológicas son sometidas, tras el paso d) del procedimiento, a un procedimiento de determinación de proteínas y/o de ácidos nucleicos y/o a un procedimiento de separación químico-proteico y/o a un procedimiento apropiado para el análisis in situ de estructuras celulares.
Un dispositivo realizado de acuerdo con la presente invención y destinado a llevar a cabo el procedimiento descrito de preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas presenta por lo menos una cámara para recibir la muestra biológica, o las muestras biológicas, que está dispuesta, o están dispuestas, sobre por lo menos un soporte, así como por lo menos un dispositivo de termorregulación que permite regular y controlar la temperatura existente en el interior de dicha cámara. Además, en el interior de la cámara está dispuesta por lo menos uña pared divisora, pudiéndose retirar o desplazar dicha pared manual o automáticamente. Ello garantiza, de una manera ventajosa, que la muestra biológica a preparar es sometida a distintos rangos de temperatura dentro de la cámara. Además, el tamaño de cada una de las cámaras es variable. Ventajosamente, la configuración de varias cámaras permite atribuir a cada una de las cámaras un rango de temperatura u otro rango de reacción correspondientes. De esta manera aumenta la velocidad de preparación de muestras, puesto que no es necesario, por ejemplo, enfriar o calentar cada cámara por separado para obtener rangos diferentes de temperatura.
En otra configuración ventajosa del dispositivo realizado según la invención, varios soportes están dispuestos sobre una o varias gavetas para muestras. Ello también hace que la velocidad de preparación de muestras aumente de manera significativa. En esta configuración, los distintos pasos del procedimiento pueden ser ejecutados y controlados de manera manual, semiautomática o automática mediante el dispositivo preconizado.
Más detalles, características y ventajas de la presente invención se desprenden de los ejemplos de realización descritos y representados en los dibujos adjuntos, en los cuales:
La figura 1 es una representación esquemática de un dispositivo para llevar a cabo la preparación propuesta de muestras para el análisis de muestras biológicas de acuerdo con una primera forma de realización;
La figura 2 es una representación esquemática del dispositivo de acuerdo con la figura 1 y con una gaveta para muestras introducida en una primera cámara, y
La figura 3 es una representación esquemática del dispositivo de acuerdo con la figura 1, estando la gaveta para muestras dentro de una segunda cámara;
La figura 4 es una representación esquemática de un dispositivo para llevar a cabo el procedimiento propuesto, destinado a la preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas de acuerdo con una segunda forma de realización; y
La figura 5 es una representación esquemática del funcionamiento del dispositivo según la figura 4.
La figura 1 muestra, en una representación esquemática, un dispositivo 10 para llevar a cabo un procedimiento destinado a la preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas con una primera cámara 12 y una segunda cámara 20, que se encuentran dentro de una carcasa 22. Una gaveta para muestras 26 con una gran cantidad de soportes 24, sobre los cuales están dispuestas muestras biológicas, puede ser introducida en la primera cámara 12 y en la segunda cámara 20 y extraída de ellas por las guías 28, 30. El movimiento de la gaveta para muestras es efectuado por medio del primer motor 32.
Además, se reconoce que la carcasa 22, o la primera cámara 12, pueden ser cerradas mediante una tapa 36. Además, la primera cámara 12 está provista de una bomba de vacío 16 así como de varias conexiones para la introducción de distintas soluciones L1, L2, Ln, precipitantes o desnaturalizantes de proteínas, estando las conexiones configuradas de tal manera que es posible introducir y evacuar las soluciones de las cámaras 12, 20. Además se puede apreciar que la primera cámara 12 está separada de la segunda cámara 20 por medio de una pared divisora movible 18. El desplazamiento de la pared divisora 18 es controlado a través de un segundo motor 34. Para la regulación de la temperatura dentro de las cámaras 12, 20, está dispuesto un dispositivo de termorregulación 14' en la zona de la segunda cámara 20. Opcionalmente, un dispositivo de termorregulación 14'' correspondiente puede estar dispuesto también en la primera cámara 12. La temperatura existente dentro de las cámaras 12, 20 puede ser ajustada dentro de un rango de temperaturas entre los -10ºC y los 60ºC. Se sobreentiende que, aparte de la posibilidad ya mencionada de retirar la pared divisora 18 de manera automática o motorizada, ello también puede efectuarse de manera manual.
Aparte de ello, también es posible que en lugar de las dos cámaras 12, 20 esté prevista una sola cámara (no representada gráficamente).
A continuación, se explicará con más detalle y con referencia a las figuras 1 a 3 el funcionamiento del primer ejemplo de realización al que dichas figuras hacen referencia.
En el caso de un control completamente automático del dispositivo 10, el primer motor 32 desplaza el cajón corredizo 26 a intervalos temporales programados Z1, Z2 de la primera cámara 12 a la segunda cámara 20 y, de retorno, de la segunda cámara 20 a la primera cámara 12, pudiéndose repetir este proceso indefinidamente. Activando la bomba de vacío 16, puede producirse un vacío o en la cámara 12 o en las dos cámaras 12, 20, dependiendo de la posición de la pared divisora 18. La generación del vacío sirve para el secado de las muestras colocadas sobre los soportes 24, o dicho de otra manera, en la gaveta de muestras 26. La alimentación y aspiración de las soluciones L1, L2, Ln se desarrolla de manera análoga, siendo posible llenar con las correspondientes soluciones L1, L2, Ln y evacuar solamente la primera cámara 12 o, alternativamente, ambas cámaras 12, 20, dependiendo de la posición que tiene la pared divisora
18.
En un primer paso a) del procedimiento, las muestras biológicas son colocadas sobre un soporte bidimensional 24. Las muestras biológicas suelen ser una muestra de células o de tejido, o una mezcla de proteínas o ácidos nucleicos, o una mezcla de macromoléculas constituidas por proteínas y/o carbohidratos y/o grasas y/o ácidos nucleicos. A modo de ejemplo, pueden colocarse células tomadas de una cultura de células disueltas en una sustancia tampón (buffer). La densidad celular es ajustada, por ejemplo, en 3x10^{8} células. Alternativamente, puede emplearse como muestra un corte de tejido obtenido en criostato. La cantidad elegida de células o la cantidad elegida de cortes tisulares dependerá del objetivo que se tenga, es decir, del procedimiento posterior al que las muestras biológicas serán sometidas al terminar la preparación de muestras. Por lo general, puede tratarse de un procedimiento de determinación de proteínas y/o de ácidos nucleicos y/o de un procedimiento de separación químico-proteico y/o de un procedimiento apropiado para el análisis in situ de estructuras celulares. Las células disueltas en la sustancia tampón son aplicadas uniformemente sobre el soporte 24 mediante una pipeta. Alternativamente, uno o varios cortes de tejido son colocados sobre el soporte 24. De este modo pueden colocarse un gran número de soportes 24, en función del tamaño de la gaveta para muestras 26. Antes de introducir la gaveta de muestras 26 en el dispositivo 10, la pared divisora 10 es desplazada hacia el exterior mediante tracción, de tal manera que la segunda cámara 20 resulta accesible desde la primera cámara 12, que está dispuesta por encima de ella. A continuación, la segunda cámara 20 es llenada hasta casi su borde superior con la primera solución L1, precipitante o desnaturalizante de proteínas. En el ejemplo de realización aquí descrito, la primera solución L1 consiste en un disolvente orgánico, como pueden ser el metanol, el etanol, el butanol y la acetona, aunque también es posible que las soluciones L1 y L2 no estén compuestas solamente de disolventes orgánicos, sino también de soluciones con valores pH críticos y/o soluciones cori concentraciones fónicas críticas y/o soluciones salinas y/o soluciones que contienen iones metálicos. Las soluciones salinas pueden ser sales disueltas del ácido pícrico, del ácido gálico, del ácido de tungsteno o wolframio, del ácido de molibdeno, del ácido tricloracético, del ácido perclórico y del ácido sulfosalicílico.
En un siguiente paso del procedimiento, la pared divisora (18) se vuelve a desplazar a su posición original, es decir, a una posición de cierre, mediante la cual la primera cámara 12 queda separada de la segunda cámara 20. A continuación, el cajón corredizo 26 es encajado en las correderas 28, 30 del dispositivo 10 e introducido en la primera cámara 12. Además, se cierra la tapa 36 del dispositivo 10. Ahora, el siguiente paso consiste en generar en la primera cámara 12 un vacío por medio de la bomba de vacío 16. De esta manera, las muestras biológicas son secadas por primera vez, de acuerdo con un paso a1) del procedimiento. Al terminar este proceso de secado a1), el vacío será eliminado de la primera cámara 12. Finalmente, la pared divisora 18 que se encuentra entre la primera cámara 12 y la segunda cámara 20 se vuelve a retirar, bajando a continuación el cajón corredizo 12 a la segunda cámara 20 que ha sido alimentada con la primera solución L1. De este modo, la primera solución L1, precipitante o desnaturalizante de proteínas, es aplicada a las muestras biológicas, o sobre los soportes 24, a una primera temperatura Ti, que en el caso en cuestión representa la temperatura ambiental. Mediante el contacto con el disolvente orgánico L1, se le retira agua a la capa de hidratación de las proteínas contenidas en la muestra. Tras un intervalo temporal Z1 predeterminado, el cual puede ser de 10 segundos, por ejemplo, la gaveta 26 es subida otra vez a la cámara 12. De este modo, el paso b) del procedimiento queda terminado. Debido al corto tiempo de acción del disolvente, solamente se producirá una deshidratación parcial y muy suave, de tal manera que el efecto producido en la estructura tridimensional de las proteínas en las células es nulo o insignificante. De esta manera, las proteínas resultan homogéneamente accesibles a los pasos subsiguientes c1) o c2) del procedimiento. Antes de realizar los pasos c1) o c2) del procedimiento, la pared divisora 18 es reinsertada, de tal modo que vuelve a producirse una separación entre las dos cámaras 10, 20. A continuación, se realiza el secado de la muestra mediante la bomba de vacío 16, de acuerdo con un paso b1) del procedimiento. Finalmente, al haber terminado el proceso de secado y habiéndose eliminado el vacío de la primera cámara 12, se vuelve a retirar la pared divisora 18 entre las cámaras 10,
20.
En el siguiente paso del procedimiento, la temperatura reinante en el interior de las cámaras 10, 20 es reducida a -20ºC y ajustada mediante el dispositivo de termorregulación 14'. Puesto que las muestras biológicas están dispuestas dentro de la fase gaseosa del disolvente orgánico L1 en el interior de la primera cámara 12, éstas son congeladas según un paso b2) del procedimiento. También es posible congelar las muestras mediante la alimentación de nitrógeno líquido. Lo mismo vale, de manera análoga, para la introducción de isopentano líquido a una temperatura de aproximadamente -130ºC. A continuación, estos líquidos tienen que ser eliminados del sistema. En la segunda cámara 20, el disolvente orgánico L1 se encuentra en estado líquido debido a que su punto de congelación es considerablemente inferior. Ello vale particularmente para la utilización de acetona como disolvente orgánico. A continuación, el cajón corredizo 26 con las muestras biológicas es bajado a la segunda cámara 20 de tal manera que, según el paso c2) del procedimiento, la primera solución L1, precipitante o desnaturalizante de proteínas, es aplicada de nuevo a las muestras biológicas, o sobre el soporte, a la segunda temperatura T2. Ahora, las muestras permanecerán en la segunda cámara 20 durante un segundo intervalo temporal Z2 predeterminado, que en el modo de realización descrito puede ser de aproximadamente 10 minutos. Al aplicar la primera solución L1 además a una temperatura baja T2, se producirá una extracción suave de la capa de agua de las proteínas celulares in situ, que asimismo resulta homogénea y completa debido al paso de preparación b) del procedimiento, de tal manera que se conserva, en gran parte, la estructura tridimensional de las proteínas y complejos proteicos contenidos en la muestra biológica sometida al trata-
miento.
A continuación, el cajón corredizo 26 se vuelve a introducir en la primera cámara 12, a la vez que la pared divisora es introducida nuevamente y bloqueada entre las cámaras 12, 20. En un paso final d) del procedimiento, las muestras, ahora completamente preparadas, son secadas. Ello se realiza mediante la bomba de vacío 16, aunque también es posible efectuar el secado mediante un secado al aire.
Sin embargo, la configuración del dispositivo 10 también permite que no sólo se utilice una única solución L1, sino que se alimenten y vuelvan a aspirarse una gran variedad de soluciones distintas L2 a Ln de manera secuencial o simultánea.
Sin embargo, también es posible que en el dispositivo 10 se renuncie a utilizar la pared divisora 18. En este caso, el dispositivo 10 comprende solamente una cámara 12 (sin representación gráfica) y un dispositivo de termorregulación 14', estando la mitad superior de la cámara 12 prevista para la fase gaseosa de las soluciones L1, L2 hasta Ln, que se han de introducir y aspirar, y la mitad inferior para la fase líquida de dichas soluciones. El proceso entero es controlado de manera manual y a intervalos temporales predeterminados. En esta versión del dispositivo 10 se puede renunciar así mismo a la bomba de vacío y a los motores 32, 34.
Variando la altura de las cámaras 12, 20 del dispositivo 10 representado en las figuras 1 a 3, es posible, además, emplear distintos cajones corredizos 26 con capacidad variable con respecto a la cantidad de soportes 24 que puedan recibir. De esta manera, aumenta el número de muestras que se pueden someter al tratamiento descrito. Así, por ejemplo, es posible tratar simultáneamente, en cada uno de los dispositivos 10, entre diez y cincuenta muestras. Además, la operación paralela del dispositivo 10 permite incrementar a gusto del usuario el número de muestras a tratar, pudiéndose conectar, por ejemplo, una sola bomba de vacío 18 a un número elevado de dispositivos 10, mediante unas conexiones correspondientes.
La figura 4 es una representación esquemática de un dispositivo para llevar a cabo un procedimiento de preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas de acuerdo con un segundo ejemplo de realización. Como se puede apreciar, varías cámaras 1, 2, 3 ..., n están dispuestas en serie y una detrás de otra, siendo posible cerrar cada una de las cámaras 1, 2, 3 ..., n con sus correspondientes tapas D1, D2, D3 ..., Dn.
A continuación, la segunda forma de realización representada en la presente memoria se describirá con vistas a su modalidad de funcionamiento. Así, un cajón corredizo A con las muestras contenidas en él o, en su caso, con los soportes provistos de las muestras, es encajado en las correderas B y posicionado encima de la cámara 1. A continuación, el cajón corredizo A es bajado a la cámara 1, y la tapa de la cámara D1 es desplazada por la corredera guía C hasta encontrarse encima de la cámara 1. A continuación, se genera un vacío en el interior de la cámara 1. Habiéndose terminado el proceso de secado al vacío y la admisión de aire en la cámara 1, la tapa D1 vuelve a desplazarse hasta quedar en su posición de origen. A continuación, el cajón corredizo A puede volver a elevarse de la cámara 1 a las correderas B. Después de desplazar el cajón corredizo A hasta encontrarse encima de la cámara 2, éste es bajado a la cámara 2. Otra vez, una tapa D2 cierra la cámara 2. En el interior de la cámara 2 se aplicará la primera solución L1, precipitante o desnaturalizante de proteínas, de acuerdo con el paso b) del procedimiento. Después de retirar la gaveta para muestras A de la cámara 2 e introducir la gaveta para muestras A en la cámara 3 en la forma descrita, las muestras son secadas en la cámara 3 de acuerdo con el paso b1) del procedimiento. La cámara 4 sirve para realizar los pasos c1) o c2) del procedimiento, es decir, para la aplicación adicional de una solución precipitante o desnaturalizante de proteínas a una segunda temperatura T2, que es inferior a la primera temperatura Ti, que en el presente caso reinaba en la cámara 2. La cámara 5 del dispositivo representado sirve como cámara de vacío para el secado posterior de las muestras realizado según el paso d) del procedimiento. Todas las cámaras restantes pueden emplearse para el tratamiento adicional de las muestras. Así, por ejemplo, en la cámara 6 puede aplicarse a las muestras una sustancia tampón o una segunda solución L2. Lo mismo vale, de manera análoga, para las cámaras 7 a 9, con respecto a la posible aplicación de otras sustancias tampón u otras soluciones precipitantes o desnaturalizantes de proteínas. Además, pueden incluirse cámaras para conservar las muestras al terminar un tratamiento precedente. Además, pueden incluirse cámaras que contienen un colector de muestras de tejido o de células (en inglés, cell/tissue sampler), que recoge las muestras tratadas del soporte y las traslada a un tubo de ensayo o a un tubo de centrifugación.

Claims (17)

1. Procedimiento destinado a la preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas, que comprende los siguientes pasos:
a) colocar la muestra biológica sobre un soporte bidimensional;
b) aplicar una primera solución L1, precipitante o desnaturalizante de proteínas, a la muestra biológica o sobre el soporte a una primera temperatura T1 y durante un primer intervalo temporal predeterminado Z1;
c1) dejar la primera solución L1, precipitante o desnaturalizante de proteínas, sobre la muestra biológica o sobre el soporte a una segunda temperatura T2 y durante un segundo intervalo temporal predeterminado Z2, siendo T2 inferior a T1 y siendo Z2 superior, igual o inferior a Z1; o
c2) volver a aplicar la primera solución L1, precipitante o desnaturalizante de proteínas, o aplicar una segunda solución L2, precipitante o desnaturalizante de proteínas, a la muestra biológica o sobre el soporte a una segunda temperatura T2 y durante un segundo intervalo temporal predeterminado Z2, siendo T2 inferior a T1 y siendo Z2 superior, igual o inferior a Z1; y
d) secar la muestra.
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado por el hecho de que
se lleva a cabo un secado de la muestra como paso al) realizado entre los pasos a) y b) del procedimiento y/o como paso b1) realizado entre los pasos b) y c) del procedimiento.
3. Procedimiento según la reivindicación 2,
caracterizado por el hecho de que
el secado de la muestra es realizado mediante un secado al aire o un secado por vacío.
4. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores,
caracterizado por el hecho de que
se lleva a cabo una congelación de la muestra como paso b2) realizado después de los pasos b) o b1) del procedimiento.
5. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores,
caracterizado por el hecho de que
la muestra biológica es una muestra de células o de tejido, o una mezcla de proteínas o ácidos nucleicos, o una mezcla de macromoléculas constituida por proteínas y/o carbohidratos y/o grasas y/o ácidos nucleicos.
6. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores,
caracterizado por el hecho de que
las soluciones L1 y/o L2 son disolventes orgánicos y/o soluciones con valores pH críticos y/o soluciones con concentraciones iónicas críticas y/o soluciones salinas y/o soluciones que contienen iones metálicos.
7. Procedimiento según la reivindicación 6,
caracterizado por el hecho de que
los disolventes orgánicos son metanol y/o etanol y/o butanol y/o acetona.
8. Procedimiento según la reivindicación 6,
caracterizado por el hecho de que
las soluciones salinas contienen sales disueltas del ácido pícrico y/o del ácido gálico y/o del ácido de tungsteno o wolframio y/o del ácido de molibdeno y/o del ácido tricloracético y/o del ácido perclórico y/o del ácido sulfosalicílico.
9. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores,
caracterizado por el hecho de que
T1 comprende un rango de temperaturas entre
-10ºC y 60ºC.
10. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores,
caracterizado por el hecho de que
las muestras biológicas son sometidas, tras el paso d) del procedimiento, a un procedimiento de determinación de proteínas y/o de ácidos nucleicos y/o a un procedimiento de separación químico-proteico y/o a un procedimiento apropiado para el análisis in situ de estructuras celulares.
11. Dispositivo para llevar a cabo un procedimiento destinado a la preparación de muestras para el análisis de muestras biológicas según una de las reivindicaciones anteriores con por lo menos una cámara (12, 20) destinada a recibir la muestra biológica, o las muestras biológicas aplicada o aplicadas sobre por lo menos un soporte (24) y con por lo menos un dispositivo de termorregulación (14', 14'') para regular y controlar la temperatura existente en el interior de la cámara (12, 20),
caracterizado por el hecho de que
en el interior de la cámara (12, 20) está dispuesta por lo menos una pared divisora. (18) y de que la pared divisora (18) puede ser retirada o desplazada de manera manual o automática.
12. Dispositivo según la reivindicación 11,
caracterizado por el hecho de que
la cámara (12) puede ser cerrada mediante una tapa (36).
13. Dispositivo según la reivindicación 11 ó 12, caracterizado por el hecho de que
el dispositivo (10) presenta por lo menos una bomba de vacío (16) destinada a generar un vacío en el interior de la cámara (12, 20).
14. Dispositivo según las reivindicaciones 11 a 13,
caracterizado por el hecho de que
varias cámaras (1, 2, 3 ..., n) están dispuestas en serie y una detrás de otra.
15. Dispositivo según una de las reivindicaciones 11 a 13,
caracterizado por el hecho de que
varias cámaras (12, 20) están dispuestas una encima de otra.
16. Dispositivo según una de las reivindicaciones 11 a 15,
caracterizado por el hecho de que
varios soportes (24) están dispuestos en una o varias gavetas para muestras (26).
17. Dispositivo según una de las reivindicaciones 11 a 16,
caracterizado por el hecho de que
cada uno de los pasos del procedimiento es ejecutado y controlado de manera manual, semiautomática o automática mediante el dispositivo (10).
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