ES2215412T3 - Tratamiento contra la enfermedad de las larvas de las abejas. - Google Patents
Tratamiento contra la enfermedad de las larvas de las abejas.Info
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Abstract
Una composición para el tratamiento o profilaxis de la enfermedad de las abejas, comprendiendo la composición: (a) un inóculo que comprende uno o más microorganismo(s) que produce(n) uno o más antibiótico(s), en el que el (los) microorganismo(s) comprende(n) bacterias; y (b) un vehículo de administración apicultural para administrar el inóculo a una colmena, de forma que se establezca en la misma una microflora curativa y/o protectora.
Description
Tratamiento contra la enfermedad de las larvas de
las abejas.
La presente invención trata de los procedimientos
y composiciones para el tratamiento curativo y la prevención de
enfermedades en abejas melíferas. En particular, la presente
invención trata de procedimientos y composiciones para el control
biológico de la enfermedad de las larvas de las abejas en abejas
melíferas.
Las abejas melíferas (género Apis), y en
particular la abeja melífera europea (Apis mellifera) y la
abeja melífera del este (Apis cerana), han sido aprovechadas
durante mucho tiempo por el hombre como una fuente de miel. A.
mellifera y A. cerana almacenan grandes cantidades de
miel accesible, y pueden ser inducidas a anidar en contenedores
transportables (o "colmenas"). Estas especies han sido
explotadas por tanto en todo el mundo durante miles de años, y ahora
forman la base de una gran y sofisticada industria apicultora. Según
se usa en la presente memoria descriptiva, el término abeja
melífera (o abeja) se refiere a verdaderas abejas
melíferas del género Apis, y particularmente a A.
mellifera y A. cerana.
La cría de abejas (apicultura) es complicada por
el hecho de que las abejas melíferas están sometidas a una amplia
variedad de enfermedades. Estas enfermedades incluyen las causadas
por virus, bacterias, hongos, microsporas, protozoos, artrópodos
parásitos, otros insectos y nematodos. Hay dos enfermedades
bacterianas cosmopolitas y causan una extensa preocupación a los
apicultores y a los reguladores agrícolas: son la enfermedad
americana de las larvas de las abejas y la enfermedad europea de las
larvas de las abejas (denominadas genéricamente enfermedad de las
larvas de las abejas).
La enfermedad americana de las larvas de las
abejas es una enfermedad que afecta a las larvas de las abejas, que
casi siempre las mata en el estado de crisálida; las larvas se
vuelven marrones, se pudren y liberan un desagradable olor a
pescado-pegamento. Está causado por el bacilo
grampositivo formador de esporas Paenibacillus larvae subesp.
larvae. Las esporas pueden permanecer inactivas durante
décadas en equipos de apicultura contaminados sin usar y causar la
enfermedad cuando el equipo se reutiliza o se usa con abejas
visitantes procedentes de colonias infectadas. El bacilo infecta las
larvas oralmente y libera enzimas proteolíticas estables cuando
esporula, causando la muerte y la final disolución de las larvas en
un coloide pegajoso.
La enfermedad europea de las larvas de las abejas
es una enfermedad causada por la bacteria grampositiva no formadora
de esporas Melissococcus pluton. Esta bacteria causa
epidemias esporádicas de la enfermedad europea de las larvas de las
abejas que provoca la muerte de las larvas sin el coloide
pegajoso.
Actualmente hay numerosos procedimientos
disponibles para tratar ambas enfermedades, aunque hay unas
desventajas inherentes asociadas con cada uno. Quizás la forma más
eficaz, a pesar de ser radical, de tratamiento implica la quema
controlada de la colonia de abejas melíferas y del equipo asociado.
Dicha medida destructiva no sería un procedimiento preferible de
tratamiento, por obvias razones económicas, si hubiera disponible
una elección alternativa.
A menudo se ha intentado el zarandeo de abejas
adultas desde una colonia enferma hacia panales nuevos, pero el
procedimiento es poco fiable y laborioso.
Otro procedimiento de tratamiento incluye la
esterilización de las colmenas y sus contenidos usando productos
químicos esterilizantes tales como formalina, cloro y óxido de
etileno. Sin embargo, el uso de tales productos químicos puede hacer
que la miel y el polen de las colmenas sean permanentemente tóxicos
para las abejas o provoque que las colmenas se vuelvan quebradizas.
Además, el uso de dichos productos químicos para tratar las
enfermedades americana y europea es de una eficacia variable.
Una forma de tratamiento alternativa implica el
uso de antibióticos para tratar colonias enfermas. La bacteria que
provoca la enfermedad americana puede controlarse mediante el
antibiótico oxitetraciclina, generalmente en la formulación
patentada Terramycin. Sin embargo, en el Reino Unido, bajo
los términos de la Bee Diseases Order (1982), se confirmó que las
epidemias de la enfermedad americana deben tratarse mediante la
quema. Esta medida, impuesta durante décadas, ha asegurado una baja
incidencia de la enfermedad americana en el Reino Unido, mientras
que en algunos países, tales como los Estados Unidos y Australia, el
uso extendido de tratamientos profilácticos de tetraciclina está
asociado con una diseminación subclínica de la enfermedad que genera
dependencia del antibiótico, y puede aumentar la aparición de
Paenibacillus larvae subesp. larvae resistente a
tetraciclina (lo que produciría un colapso desastroso de las
colonias de abejas melíferas). Además, los antibióticos no tienen
efecto sobre las esporas que contaminan los panales y equipos, y su
uso puede conducir a la diseminación de la infección entre colonias,
y por tanto, a una dependencia creciente de aplicaciones
regulares.
En el Reino Unido, los casos leves de la
enfermedad europea son tratables con tetraciclina, mientras que las
epidemias graves y repetitivas se controlan mediante la quema. El
uso de tetraciclina para la profilaxis o para tratar casos agudos de
la enfermedad europea no es deseable debido al peligro de la
aparición de resistencias y la probabilidad de dependencia.
Otro problema importante asociado con el uso de
tetraciclina para tratar las enfermedades americana y europea es la
resultante aparición de indeseables residuos de tetraciclina en la
miel, siendo la aparición de tales residuos contraria a la imagen
sana y saludable que los defensores de la miel quieren
presentar.
El documento US 3.954.696 describe un
procedimiento para inocular panales con una suspensión líquida que
contiene esporas vivas del moho Penicillium waksmani
zaleski.
Así, permanece una apremiante necesidad de
desarrollar un tratamiento para las enfermedades de las abejas
melíferas en general, y para las enfermedades americana y europea de
las larvas de las abejas en particular, que evite los problemas
asociados con el uso de tetraciclina y los costes financieros
consecuentes de la destrucción mediante la quema.
Ahora se ha descubierto que ciertos
microorganismos bacterianos pueden prevenir la infección por
patógenos de las abejas, así como erradicar infecciones establecidas
en colonias de abejas enfermas. Los microorganismos pueden producir
uno o más antibiótico(s) o pueden competir con el (los)
patógeno(s) de la abeja, previniendo o erradicando así la
infección. Algunos de los microorganismos pueden encontrarse de
forma natural en colmenas y abejas
melíferas.
melíferas.
Así, por primera vez, se ha reconocido que la
enfermedad de las abejas puede ser controlada fácilmente y de forma
segura y biológicamente eficiente, evitando así los problemas
asociados con el uso de preparaciones antibióticas y los costes
financieros consecuentes de la destrucción mediante la quema.
Así, según la presente invención, se prevé una
composición para el tratamiento curativo o la profilaxis de la
enfermedad de la abeja, comprendiendo la composición un inóculo que
comprende uno o más microorganismos bacterianos y un vehículo de
administración apicultural para administrar el inóculo a una
colmena, de forma que se establezca en la misma una microflora
curativa y/o protectora.
En otro aspecto, la invención trata de un
procedimiento para el tratamiento curativo o profilaxis de la
enfermedad de las abejas que comprende inocular una colmena con la
composición anteriormente mencionada para establecer en la misma una
microflora curativa y/o protectora.
Además, las características preferibles de la
invención se citan en las reivindicaciones dependientes anexas.
El término inóculo se usa en la presente
memoria descriptiva en su sentido habitual para definir una
preparación que contiene microorganismos capaces de establecer una
microflora tras la inoculación.
El término inóculo se usa en la presente
memoria descriptiva en su sentido habitual para definir una
preparación que contiene microorganismos capaces de establecer una
microflora tras la inoculación. Así, en la presente invención, el
inóculo comprende uno o más microorganismos vivos en cantidad
suficiente y en un estado metabólico/físico tal que pueden
establecer una microflora tras su administración a una colmena o a
una colonia de abejas.
El término antibiótico se usa en la
presente memoria descriptiva para dar cobertura a cualquier
sustancia (por ejemplo, una bacteriocina o un metabolito secundario)
capaz de eliminar la actividad patógena de una o más abejas
patógenas (por ejemplo, eliminando su crecimiento).
Según se usa en la presente memoria descriptiva,
el término colmena se usa para definir cualquiera de la
amplia variedad de contenedores usados por los apicultores para
contener y manipular la colonia de abejas melíferas y la miel que
produce. Así, el término se usa en la presente memoria descriptiva
para referirse, entro otros, a la tapa, caja, armazón, panales (las
matrices de cera ordenadas construidas por las abejas dentro de los
armazones) o cualquier otro componente de la colmena, tanto
individual como colectivamente.
La colmena puede contener o no una colonia de
abejas. Por ejemplo, en unas circunstancias en las que la invención
se aplica con fines profilácticos, es posible administrar el inóculo
a una colmena vacía. En tales realizaciones, el inóculo puede
permanecer inactivo hasta ser dispersado, y su crecimiento
estimulado por mediación de las abejas colonizantes: aquí, la
microflora se desarrolla junto con la colonia de abejas.
Alternativamente, la microflora puede desarrollarse (al menos
parcialmente) en ausencia de una colonización de abejas mediante la
estimulación del crecimiento de los microorganismos inoculados
dentro de la colmena mediante cualquier técnica adecuada (por
ejemplo, el suministro de los nutrientes y/o sustratos adecuados).
Así, la microflora curativa y/o protectora puede establecerse con o
sin la mediación de una población de abejas colonizadoras.
En la invención puede usarse cualquier vehículo
de administración apicultural, siempre que sea adecuado para la
administración del inóculo a una colmena de una forma tal que
finalmente pueda establecerse en la misma una microflora curativa
y/o protectora (con o sin la mediación de una población de abejas
colonizadoras). Preferiblemente, el vehículo de administración es
tal que actúa en conjunción con la actividad de búsqueda de comida y
alimento de la colonia de abejas anidada, siendo administrado el
inóculo cuando el inóculo (portado por el agente de administración)
es llevado por las abejas y subsecuentemente dispersado por la
colmena y/o colonia mediante la subsiguiente secreción (por ejemplo,
mediante las glándulas hipofaríngeas en el transcurso de la
alimentación de las larvas), excreción o descarga.
El inóculo se puede administrar como una dosis
única, o en varias dosis más pequeñas administradas a intervalos.
Dependiendo del vehículo de administración, el inóculo puede
administrarse a cualquier componente de la colmena (por ejemplo, los
panales desocupados) o al propio grupo de abejas (por ejemplo,
tomando un puñado de abejas y pulverizándolas con el inóculo lejos
de la colmena, y subsecuentemente devolviéndolas a la misma).
El tamaño del inóculo, el régimen de dosificación
adecuado y el tipo de vehículo de administración variarán teniendo
en cuenta, entre otros, el estado nutricional de la colonia de
abejas, el microorganismo a administrar, el tipo de tratamiento
(profiláctico o terapéutico/curativo), la edad de la colonia de
abejas, el tamaño y la estructura de la colmena, las condiciones
geográficas, climáticas y estacionales, la naturaleza de la
enfermedad a tratar o prevenir y la gravedad de la infección. Los
expertos en la materia serán fácilmente capaces de determinar los
parámetros óptimos mediante ensayo y error rutinarios.
Se conoce una variedad de diferentes vehículos de
administración apicultural para su uso en la alimentación de abejas
invernantes y para administrar antibióticos conocidos. Los
preferibles según la invención son pastelillos, jarabes, enjuagues,
polvos o pastas apiculturales.
El término pastelillo apicultural es un
término de la técnica usado para definir cualquiera de una amplia
variedad de comprimidos sólidos o tortas comprendidas principalmente
por azúcar sólido. Para su uso en la invención son particularmente
preferibles los pastelillos de sacarosa o los pastelillos
extendedores que comprenden una mezcla de sacarosa y grasa (por
ejemplo, grasa vegetal).
Los jarabes para su uso en la invención
comprenden preferiblemente azúcar y agua. Son particularmente
preferibles las disoluciones de sacarosa al 50% p/v.
Los polvos comprenden preferiblemente azúcar en
polvo. Pueden aplicarse directamente a los panales, pero también
pueden aplicarse (por ejemplo, con un fuelle) más generalmente a
todas las superficies interiores de la colmena o directamente sobre
el grupo de abejas.
La pasta para su uso en la invención puede ser un
sustituto del polen. El término sustituto del polen es un
término de la técnica que define cualquiera de un gran número de
formulaciones que son funcional y/o químicamente miméticas del polen
(que es usado por las abejas como fuente principal de
proteínas).
El azúcar para su uso el los vehículos de
administración de la invención es preferiblemente sacarosa, pero
puede emplearse cualquier formulación que sea funcional y/o
químicamente mimética del néctar (que es usado por las abejas como
fuente principal de alimento no proteico).
El inóculo para su uso en la invención comprende
uno o más microorganismo(s). El (los)
microorganismo(s) puede(n) prevenir la infección por
patógenos de la abeja, así como erradicar infecciones establecidas
en colonias de abejas enfermas (por ejemplo, produciendo uno o más
antibiótico(s) o compitiendo con el (los) patógeno(s)
de la abeja, previniendo o erradicando así la infección). Algunos de
los microorganismos pueden encontrarse de forma natural en colmenas
y abejas melíferas.
Cuando el (los) microorganismo(s)
produce(n) uno o más antibiótico(s) activos frente a
uno o más patógenos(s) de la abeja, el (los)
antibiótico(s) son preferiblemente activos frente a
Melissococcus pluton y/o Paenibacillus larvae subesp.
larvae. Es (son) preferible(s) el (los)
antibiótico(s) activo(s) frente tanto a
Melissococcus pluton como Paenibacillus larvae subesp.
larvae. Los antibióticos pueden ser bacteriostáticos o
bactericidas, pero preferiblemente son bacteriolíticos.
Son particularmente preferibles los inóculos que
comprenden uno o más microorganismo(s) que produce(n)
el (los) antibiótico(s) anti-Melissococcus pluton y
anti-Paenibacillus larvae subesp. larvae
encontrado(s) en Paenibacillus larvae subesp.
pulvifaciens, u homólogos de los mismos.
Según se usa en la presente memoria descriptiva,
el término homólogo (aplicado a un antibiótico) define un
antibiótico que es funcional y/o químicamente similar a un
antibiótico de referencia producido por Paenibacillus larvae
subesp. pulvifaciens, pero que es producido por un organismo
fuente diferente. Dichos homólogos (y los microorganismos que los
producen) pueden identificarse mediante análisis estructural del
(los) antibiótico(s) de referencia y/o mediante un programa
de cribado basado en detectar la actividad frente a Melissococcus
pluton y/o Paenibacillus larvae subesp.
larvae.
El (los) antibiótico(s)
producido(s) por el (los) microorganismo(s) para su
uso en la invención pueden caracterizarse mediante un perfil de
actividad que incluye la actividad frente a, entre otros,
Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Psedomonas putida,
Pseudomonas aeruginosa, Micrococcus luteus, Bacillus cereus,
Bacillus subtilis, Paenibacillus alvei, Paenibacillus
larvae subesp. larvae, Paenibacillus apiarius, Listeria
monocytogenes, Staphylococcus aureus, Yersinia enterolitica y
Melissococcus pluton.
En las realizaciones preferibles, el (los)
microorganismo(s) comprende(n) bacterias. Son
particularmente preferibles las bacterias productoras de esporas que
producen endosporas, en cuyo caso el inóculo comprende
preferiblemente las endosporas bacterianas (opcionalmente en
combinación con células vegetativas).
Cuando se usan como un inóculo, las endosporas
bacterianas se proporcionan preferiblemente en forma de
preparaciones de esporas lavadas y/o concentradas. Dichas
preparaciones pueden prepararse mediante cualquiera de un amplio
intervalo de técnicas microbiológicas conocidas. Los procedimientos
típicos incluirían el crecimiento de células vegetativas hasta la
fase estacionaria (para inducir la esporulación) en un medio
líquido, seguido de la separación mediante centrifugación desde el
medio agotado. Dichas realizaciones explotan la naturaleza altamente
resistente de las endosporas bacterianas, que dan lugar a
composiciones extremadamente estables, baratas de producir y
fácilmente almacenables.
El inóculo bacteriano comprende preferiblemente
un Paenibacillus spp. o subespecies (según se describe en
Heyndrickx y colaboradores (1996), Int. J. Syst. Bacteriol.
46(4), 988-1003).
Es particularmente preferible una subespecie de
Paenibacillus larvae, por ejemplo, Paenibacillus
larvae subesp. pulvifaciens o una cepa atenuada o no
virulenta de Paenibacillus larvae subesp. larvae.
Otras bacterias adecuadas pueden ser identificadas mediante el
cribado de cepas clínicas naturales para buscar cepas clínicas hasta
ahora no clasificadas de Paenibacillus spp. que muestren la
actividad antibiótica requerida (pero que no sean patógenas).
Paenibacillus larvae subesp.
pulvifaciens produce antibióticos activos frente a
Paenibacillus larvae subesp. larvae, Paenibacillus
alvei, así como Melissococcus pluton patógenos, y por
tanto esta subespecie (o derivados de la misma) puede usarse como
base en composiciones para la prevención y/o el tratamiento curativo
tanto de la enfermedad europea de las larvas de las abejas como de
la americana.
Las cepas atenuadas o no virulentas de
Paenibacillus larvae subesp. larvae producen
antibióticos activos frente a Melissococcus pluton, así como
P. alvei, y por tanto dichas cepas (o derivados de las
mismas) pueden usarse como base en composiciones para la prevención
y/o el tratamiento curativo de, entre otras, la enfermedad europea
de las larvas de las abejas y las enfermedades mediadas por P.
alvei.
Alternativamente, se pueden diseñar genéticamente
otros microorganismos (particularmente bacterias) para que actúen
como hospedadores para expresar el (los) antibiótico(s) según
se definió anteriormente.
Las bacterias para su uso en la invención pueden
ser portadoras de una o más mutaciones que modifiquen la virulencia
y/o la producción de antibiótico, y/o comprendan una cepa atenuada o
no virulenta. Esto es particularmente preferible en las
realizaciones en las que el inóculo es Paenibacillus larvae
subesp. pulvifaciens, dado que algunas cepas de esta bacteria
causan una enfermedad leve conocida como descamación
pulverulenta.
Las cepas atenuadas o no virulentas se pueden
producir fácilmente mediante subcultivo repetido en medio de
laboratorio, mediante técnicas de mutagénesis/cribado o mediante
mutagénesis dirigida de los determinantes de la virulencia.
La enfermedad de las abejas tratada o prevenida
mediante la invención es típicamente un enfermedad mediada por una
infección bacteriana (por ejemplo, una enfermedad mediada por
Paenibacillus larvae subesp. larvae, Paenibacillus
larvae subesp. pulvifaciens, Paenibacillus alvei o
Melissococcus pluton).
En realizaciones particularmente preferibles, la
enfermedad de las abejas es la enfermedad de las larvas de las
abejas (es decir, la enfermedad de las larvas de las abejas
americana o europea). Alternativamente o además, la enfermedad puede
ser la descamación pulverulenta.
En otro aspecto, la invención trata de una cepa
atenuada o no virulenta de Paenibacillus (por ejemplo,
Paenibacillus larvae). Son particularmente preferibles las
cepas atenuadas o no virulentas de Paenibacillus larvae
subesp. pulvifaciens, Paenibacillus larvae subesp.
larvae o Paenibacillus alvei.
Las cepas atenuadas o no virulentas de la
invención, según se ha descrito anteriormente, pueden usarse para el
tratamiento curativo o la profilaxis de una infección en una abeja.
Las cepas encuentran una aplicación en particular como el inóculo de
las composiciones y procedimientos de la invención descritos
anteriormente.
En otro aspecto más, la invención trata del uso
de un inóculo para la elaboración de un medicamento para el
tratamiento o la profilaxis de una infección en una abeja. En este
aspecto de la invención, el medicamento es preferiblemente una
composición según la invención (por ejemplo, según se ha definido
anteriormente).
La invención también trata del (los)
antibiótico(s) per se, aislados a partir de los
microorganismos descritos anteriormente, y del uso de
dicho(s) antibiótico(s) para el tratamiento o
profilaxis de las enfermedades de las abejas descritas
anteriormente. Dichas preparaciones antibióticas pueden
administrarse de la misma forma que los antibióticos ya existentes
(también se discutió anteriormente).
Ahora se ilustrará la invención con referencia a
los siguientes ejemplos no limitantes.
Se llevaron a cabo bioensayos para demostrar la
acción antibiótica de Paenibacillus larvae var.
pulvifaciens sobre una variedad de especies microbianas. Los
ensayos se llevaron a cabo según los procedimientos estándar en una
placa de Petri que contenía un medio de crecimiento inoculado con un
microorganismo a ensayar. En el centro de la placa de Petri se
colocó un disco que contenía Paenibacillus larvae var.
pulvifaciens (PLP), y se midió la extensión del crecimiento
del microorganismo a ensayar. Los tamaños relativos de las zonas
despejadas alrededor de los discos están registrados en la Tabla 1,
a continuación:
| Especie | PLP |
| E. coli E61883/0 (020 H^{-}, orina) | ++ |
| E. coli C600 | ++ |
| Salomonella typhimurium ATCC 1131 | ++ |
| Yersinia enterolitica NCTC 11176 | + |
| Pseudomonas aerugenosa ATCC 9027 | + |
| Pseudomonas putida NCTC 109367 | ++ |
| Pseudomonas putida UWCC1 | ++ |
| Bacillus cereus F462690 | +++ |
| Bacillus subtilis 168 | +++ |
| Paenibacillus alvei | +++ |
| Paenibacillus larvae var. larvae | +++ |
| Paenibacillus larvae subesp. pulvifaciens | - |
| Listeria monocytogenes Scott A | +++ |
| Staphylococcus aureus CRA410 | +++ |
| Micrococcus luteus | + |
| Saccharomyces cerevisiae | - |
Los resultados mostrados en la Tabla ilustran que
Paenibacillus larvae var. pulvifaciens es efectivo
eliminando la cepa patógena Paenibacillus larvae var.
larvae (PLL) implicada en la enfermedad americana de las
larvas de las abejas, así como Paenibacillus alvei, que
también se encuentra en las colmenas infectadas con la enfermedad de
las larvas de las abejas. Los resultados también demuestran la
actividad antibiótica frente a un intervalo de otras bacterias,
siendo la actividad frente a bacterias grampositivas más fuerte que
la actividad frente a bacterias gramnegativas.
Se ensayaron tres cepas de PLP, y se encontró que
cada una eliminaba un amplio intervalo de cepas de PLL de fuentes
geográficas tan diversas como el Reino Unido, Eslovenia, Australia y
Nueva Zelanda. Se encontró que ninguna de las cepas de PLL afectaba
a la PLP.
Los tres patógenos de Paenibacillus
asociados con la abeja producen antibióticos que hasta cierto punto
explican su comportamiento en las abejas. Así, el material infectado
por la enfermedad americana de las larvas de las abejas se presenta
generalmente como un monocultivo. En la enfermedad europea de las
larvas de las abejas, M. pluton es el primer organismo en
presentar grandes agrupaciones de células en el intestino de las
larvas de las abejas. Tras la muerte, las condiciones favorecen
aparentemente a P. alvei, quien toma el control, eliminando a
M. pluton hasta tal punto que puede ser difícil de encontrar
al microscopio en larvas muertas, a pesar de que han sido el grueso
de cultivo dominante durante la parte temprana de la enfermedad. En
términos antibióticos, los ensayos llevados a cabo demuestran que
P. alvei elimina un amplio intervalo de bacterias, incluyendo
M. pluton pero excluyendo P. larvae (tanto PLP como
PLL). PLL elimina a P. alvei, M. pluton y otros grupos
de cepas de ensayo, pero no afecta a PLP. PLP lo elimina todo (en el
contexto relativo a las abejas), aunque para las tres cepas, las
levaduras (S. cerevisiae) y Micrococcus luteus son
relativamente resistentes.
Con objeto de proporcionar una información
adicional sobre el mecanismo de la acción eliminatoria de PLP sobre
PLL, se establecieron experimentos de competición de lado a lado
inoculando un medio rico en PLL y PLP de lado a lado. Ambas cepas
ensayadas crecieron como parches y, después de unos pocos días, la
PLL comenzó a retroceder en el lado más cercano a la PLP. Después de
unos pocos días más, únicamente quedaba un débil cerco de
crecimiento en el lado más alejado de PLP. La observación
microscópica de las células en el borde de retroceso reveló restos,
protoplastos y, aparte de esto, células dañadas; las muestras de la
parte lisada del parche de PLL únicamente mostraron desechos. Así,
los experimentos demostraron que el antibiótico producido por PLP es
probablemente celulolítico y no bacteriostático.
Hemos encontrado que los efectos de la PLP sobre
PLL (bacteria de la enfermedad americana de las larvas de las
abejas) son debidos a una bacteriocina que comienza a formarse
tempranamente en la fase de crecimiento, y continua a lo largo de la
misma. La bacteriocina es bastante específica y bacteriolítica para
PLL. El gran espectro de bacterias enumerado en la Tabla 1 no es
susceptible ante esta bacteriocina, aunque algunas especies, tales
como B. subtilis, aparentemente sí lo son. Hemos
caracterizado la bacteriocina como sensible al calor (2 minutos a
100ºC la destruyen) y sensible a la proteinasa K.
La actividad antibacteriana de amplio espectro
aparece en el inicio de la esporulación. Es insensible al calor en
las mismas condiciones descritas anteriormente. Sin desear ceñirnos
a ninguna teoría, se cree que dicha actividad está causada por la
presencia de compuesto(s) antibiótico(s). El extracto
de antibiótico tratado térmicamente no inhibe la PLL, por lo que se
cree que la bacteriocina aislada es responsable de dicha actividad
inhibitoria en mezclas.
Composición
A
Se forma una composición líquida dispersando un
inóculo de esporas de PLP en un jarabe de azúcar que comprende un
50% de sacarosa en agua. La composición se usa como complemento
alimenticio de la abejas, y puede colocarse en un lugar adecuado
dentro o cerca de la colmena.
Composición
B
Se forma un comprimido o una torta sólida
(conocida en apicultura como pastelillo) comprimiendo azúcar en el
que se ha distribuido un inóculo de PLP.
Composición
C
Se prepara una composición en polvo moliendo
azúcar hasta obtener un polvo fino y mezclando en el polvo un
inóculo de PLP. El polvo puede aplicarse directamente sobre los
panales de la colmena o las superficies interiores de la colmena, o
puede aplicarse directamente sobre un grupo de abejas.
Composición
D
Se forma una composición líquida para pulverizar
dispersando un inóculo de PLP en agua. La composición se puede usar
para pulverizar el interior de la colmena, o los panales, o se puede
usar para pulverizar directamente grupos de abejas.
Los anteriores ejemplos tienen un propósito
meramente ejemplar, y no pretenden limitar la invención en modo
alguno.
Claims (14)
1. Una composición para el tratamiento o
profilaxis de la enfermedad de las abejas, comprendiendo la
composición:
- (a)
- un inóculo que comprende uno o más microorganismo(s) que produce(n) uno o más antibiótico(s), en el que el (los) microorganismo(s) comprende(n) bacterias; y
- (b)
- un vehículo de administración apicultural para administrar el inóculo a una colmena, de forma que se establezca en la misma una microflora curativa y/o protectora.
2. La composición de la reivindicación 1, en la
que el vehículo de administración apicultural es cualquiera
entre:
- (a)
- un pastelillo, preferiblemente un pastelillo de azúcar; o un pastelillo extendedor de azúcar y grasa;
- (b)
- un jarabe, preferiblemente en el que el jarabe comprende azúcar y agua;
- (c)
- un enjuague;
- (d)
- unos polvos, preferiblemente en el que los polvos comprenden azúcar;
- (e)
- una pasta, preferiblemente en el que la pasta es un sustituto del polen.
3. Un procedimiento para el tratamiento o la
profilaxis de la enfermedad de las abejas que comprende inocular una
colmena con la composición bien de la reivindicación 1 o bien de la
reivindicación 2 para establecer en la misma una microflora curativa
y/o protectora.
4. La composición o procedimiento de una
cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la colmena
contiene una colonia de abejas.
5. La composición o procedimiento de una
cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el uno o
más antibiótico(s) son preferiblemente antibióticos
bacteriolíticos, activos frente a uno o más patógeno(s) de
las abejas; opcionalmente, en la que el (los) antibiótico(s)
son activos frente a Melissococcus pluton y Paenibacillus
larvae subesp. larvae.
6. La composición o procedimiento de la
reivindicación 5, en la que el (los) antibiótico(s) son el
(los) antibiótico(s) anti-Melissococcus pluton y/o
anti-Paenibacillus larvae subesp. larvae
encontrado(s) en Paenibacillus larvae subesp.
pulvifaciens, u homólogos de los mismos.
7. La composición o procedimiento de la
reivindicación 5 o la reivindicación 6, en la que el (los)
antibiótico(s) son activos frente a Escherichia coli,
Salmonella typhimurium, Pseudomonas putida, Pseudomonas aerugenosa,
Micrococcus luteus, Bacillus cereus, Bacillus subtilis,
Paenibacillus alvei, Paenibacillus larvae subesp.
larvae, Paenibacillus apiarius, Listeria monocytogenes,
Staphylococcus aureus, Yersinia enterolitica y Melissococcus
pluton.
8. La composición o procedimiento de una
cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en la que el (los)
microorganismo(s) están en forma de endosporas bacterianas;
opcionalmente, en la que las endosporas bacterianas están lavadas
y/o concentradas.
9. La composición o procedimiento de las
reivindicaciones 1-8, en la que las bacterias
comprenden una Paenibacillus spp., preferiblemente en la que
la Paenibacillus spp. es:
- (a)
- una subespecie de Paenibacillus larvae, por ejemplo, Paenibacillus larvae subesp. pulvifaciens, o una cepa atenuada o no virulenta de Paenibacillus larvae subesp. larvae.
- (b)
- P. alvei.
10. La composición o procedimiento de las
reivindicaciones 1-9, en la que las bacterias son
diseñadas genéticamente para expresar el (los) antibiótico(s)
según se define en una cualquiera de las reivindicaciones
5-7.
11. La composición o procedimiento de una
cualquiera de las reivindicaciones 8-10, en la que
las bacterias:
- (a)
- son portadoras de una o más mutaciones que modifican la virulencia y/o la producción de antibiótico; o
- (b)
- comprenden una cepa atenuada o no virulenta.
12. La composición o procedimiento de una
cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la
enfermedad de las abejas está mediada por una infección bacteriana;
preferiblemente en la que la enfermedad de las abejas está mediada
por Paenibacillus larvae subesp. larvae,
Paenibacillus alvei o Melissococcus pluton.
13. La composición o procedimiento de una
cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la
enfermedad de las abejas es la enfermedad de las larvas de las
abejas; preferiblemente, la enfermedad de las larvas de las abejas
americana o europea; o en la que la enfermedad es la descamación
pulverulenta.
14. Uso de un inóculo para la elaboración de un
medicamento para el tratamiento o la profilaxis de una infección en
una abeja; en el que el medicamento es una composición según se
define en una cualquiera de las reivindicaciones
1-13, y en el que el inóculo comprende uno o más
microorganismo(s) que produce(n) uno o más
antibiótico(s), y en el que el (los) microorganismo(s)
comprende(n) bacterias.
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