ES2202406T3 - Vasija de cultivo y conjunto. - Google Patents
Vasija de cultivo y conjunto.Info
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Abstract
SE DESCRIBEN UN ENSAMBLAJE Y COMPONENTES PARA EL MISMO PARA USO EN EL CAMPO DE CULTIVO DE CELULAS Y TEJIDOS. EL ENSAMBLAJE INCLUYE UNA BASE QUE TIENE UNO O MAS RECEPTACULOS, Y UN SEPARADOR DE CULTIVO DE CELULA QUE SE PUEDE MONTAR EN LA BASE DE MODO QUE LA PARED INFERIOR DEL SEPARADOR ESTE SUSPENDIDA DENTRO DEL RECEPTACULO. CADA RECEPTACULO TIENE UNA CONFIGURACION GENERALMENTE RECTANGULAR DE MODO QUE SE DISPONEN ABERTURAS EN CADA ESQUINA DEL RECEPTACULO PARA INTRODUCIR LIQUIDO AL RECEPTACULO. SE DISPONE UNA CUBIERTA PARA PROTEGER EL ENSAMBLAJE Y MANTENER LA POSICION DEL SEPARADOR DE CULTIVO DE CELULA.
Description
Vasija de cultivo y conjunto.
La invención está relacionada con una vasija y un
conjunto para el cultivo de células o tejido in vitro, y más
particularmente con una vasija y un conjunto en la que pueden
suspenderse dentro de un medio nutriente las células o bien otros
materiales biológicos.
Se han desarrollado conjuntos de distintos tipos
para el cultivo de células. Tales conjuntos incluyen con frecuencia
una base que define una o más cavidades, una inserción de cultivo de
células situada en forma desmontable en una cavidad, y una tapa
montada en la base para parcial o totalmente cubrir las cavidades.
Las patentes de los EE.UU. números 4686190, 4871674, 5026649,
5358871 y 5366893 exponen varios conjuntos para el cultivo de
células. Todos estos conjuntos patentados utilizan una inserción de
cultivo de células que tiene un fondo permeable, el cual está
suspendido dentro de una cavidad mediante una brida que se extiende
periféricamente desde la parte superior de la inserción. Otros tipos
de inserciones incluyen patas que soportan la inserción sobre la
superficie inferior de la cavidad, de forma tal que el fondo
permeable de la inserción está suspendido por encima de la
superficie inferior.
La mayoría de los conjuntos de la técnica
anterior expuestos en las patentes anteriormente mencionadas
incluyen cavidades generalmente cilíndricas e inserciones
generalmente cilíndricas o frustocónicas situadas dentro de las
cavidades. El acceso a las cavidades utilizando una pipeta o
similar puede ser en consecuencia relativamente difícil. En algunos
de los conjuntos de la técnica anterior, están provistas aberturas
para las pipetas en las paredes laterales de las inserciones. El
tamaño de dichas aberturas está limitado por la dimensión de las
inserciones. En otros conjuntos, se proporciona un espacio limitado
entre la inserción y la pared lateral de la cavidad. La inserción a
menudo tiene que ser desplazada o extraída totalmente con el fin de
tener acceso a la cavidad.
El documento
EP-A-0590513 expone un conjunto para
el cultivo de células que comprende una base que define una
pluralidad de cavidades para recibir una inserción de cultivo de
células. Las cavidades son cilíndricas y el acceso a las cavidades
se consigue proporcionando al parte superior de la inserción de
cultivo una brida, de forma tal que la inserción de cultivo cuelga
dentro de cada cavidad, dejando un espacio pequeño entre la
inserción y la pared lateral de la cavidad para introducir una
pipeta dentro de la cavidad.
Los conjuntos expuestos anteriormente no están
diseñados óptimamente también para todos los tipos de cultivos de
tejidos. Algunos procedimientos incluyen el cultivo de masas de
tejidos relativamente grandes. Algunos precisan del acceso a la
cavidad mediante un instrumento considerablemente más grande que una
pipeta. Los platos estándar de agrupaciones y las inserciones de
cultivo de células no están diseñados específicamente para dichas
aplicaciones.
Es un objeto de la invención proporcionar un
conjunto a utilizar para el cultivo de células o de tejidos. El
conjunto de acuerdo con la invención incluye una base que define
una cavidad, y una inserción de cultivo de células, la cual está
situada en forma desmontable dentro de la cavidad. La cavidad
incluye una abertura superior que tiene una pluralidad de partes de
esquinas. El acceso a la cavidad está provisto a través de una o
más de las partes de las esquinas de la abertura de la cavidad
cuando la inserción de cultivo de las células se posiciona dentro de
la cavidad.
De acuerdo con una realización preferida de la
invención, la cavidad incluye dos pares de paredes opuestas
generalmente paralelas que definen cuatro partes de esquinas. La
inserción de cultivo de células se coloca dentro de la cavidad, de
forma tal que se define una abertura entre la parte superior de la
inserción y al menos una de las partes de las esquinas. La abertura
proporciona el acceso al fondo de la cavidad. Las aberturas de
acceso están provista preferiblemente en las cuatro partes de las
esquinas de la cavidad.
La inserción de cultivo de las células de acuerdo
con la invención incluye preferiblemente dos pares de paredes
laterales generalmente paralelas, y una membrana permeable
generalmente rectangular que define la pared del fondo. Se extiende
un reborde desde las paredes laterales para suspender la inserción
dentro de la cavidad de una base. El reborde se extiende
preferiblemente desde la parte superior de las paredes laterales, y
puede ser de tipo anular.
Se proporciona también por la invención una base
para soportar la inserción de cultivo de células. La base incluye
una o más cavidades, incluyendo cada cavidad dos pares de paredes
laterales opuestas y una pared inferior. Los salientes se extienden
hacia dentro desde las paredes laterales. Cada saliente incluye una
etapa para soportar el reborde de una inserción de cultivo de
células. Los salientes discretos pueden extenderse hacia arriba
desde la pared inferior de la base. Los salientes son
substancialmente más cortos que las paredes laterales.
La figura 1 es una vista en perspectiva superior
de un conjunto de cultivo de células de acuerdo con la invención,
que incluye una tapa;
la figura 2 es una vista en perspectiva superior
despiezada del mismo;
la figura 3 es una vista en sección del
mismo;
la figura 4 es una vista en planta superior de la
base del mismo;
la figura 5 es una vista en planta superior de la
inserción de cultivo de células;
la figura 6 es una vista en planta inferior de la
tapa del mismo, y
la figura 7 es una vista en planta superior del
conjunto sin la tapa.
En las figuras 1, 2 y 7 se muestra un conjunto
de cultivo de células 10 de acuerdo con la invención. El conjunto
incluye una base 12 y una inserción de cultivo de células 14, tal
como se muestra mejor en la figura 2. La tapa 16 encaja sobre la
base y la inserción.
Las partes del conjunto están termodeformadas
preferiblemente o bien moldeadas a partir de un material plástico
transparente tal como el poliestireno o PETG. Esto permite que
todas las partes del conjunto puedan verse fácilmente, incluso
aunque se utilice la tapa.
La base 12 del conjunto se muestra más claramente
en las figuras 2, 3 y 4. La base incluye dos pares de paredes
laterales opuestas generalmente paralelas 18, una pared del fondo
20, y una brida periférica 24 que incluye una parte horizontal 24A
y una parte que se extiende hacia abajo 24B en relación opuesta a la
pared lateral 18.
Las paredes laterales 18 definen una abertura
substancialmente rectangular en el extremo superior de la base. En
la realización preferida de la invención, las paredes laterales son
iguales en longitud, y en consecuencia definen una abertura
substancialmente cuadrada. Las paredes laterales se unen entre sí en
las esquinas redondeadas.
Las dimensiones de la pared del fondo 20 son
ligeramente menores que las de la abertura superior puesto que las
paredes laterales 18 son cónicas hacia dentro desde la parte
superior a la parte inferior. Las paredes del fondo y laterales
definen una cavidad que es capaz de retener un medio líquido o
sólido.
Cada pared lateral incluye un saliente 26 en la
forma de una columna redondeada que se extiende dentro de la
cavidad. Los salientes están situados substancialmente en el punto
medio de cada pared lateral. Cada saliente está situado
adecuadamente en relación opuesta al saliente que se extiende desde
la pared opuesta.
En la parte superior de cada saliente 26 se
encuentra formado un escalón que incluye una superficie horizontal
28 y una superficie vertical 30. La superficie vertical 30 se
extiende substancialmente en forma paralela a la pared lateral desde
la cual se extiende el saliente.
Cada saliente 26 incluye una superficie interna
redondeada que se extiende entre la pared inferior 20 y la parte
superior de la base. La superficie exterior de cada saliente forma
una depresión alargada correspondiente redondeada dentro de la
superficie exterior de cada pared lateral. Las depresiones 32 y la
brida 24 facilitan la manipulación de la base 12.
Una pluralidad de salientes discretos
frustocónicos 34 se extienden hacia arriba desde la pared inferior
20 de la base. Los salientes son todos substancialmente de la misma
altura, y son substancialmente más cortos que la altura de las
paredes laterales 18. Las configuraciones y posiciones de los
salientes pueden variarse si se desea. Es importante que los
salientes permitan introducir un líquido dentro de la cavidad para
esparcirlo sobre la superficie inferior completa de la cavidad. En
otras palabras, los salientes no deberán conectarse de forma tal que
eviten que el líquido pase dentro de cualquier otro espacio libre
en el fondo de la cavidad.
La inserción de cultivo de células 14 incluye un
cuerpo 36 que tiene dos pares de paredes laterales opuestas 38.
Una membrana permeable 40 se encuentra fijada al extremo inferior
del cuerpo. La membrana puede estar hecha de un material adecuado
para el cultivo o mantenimiento de las células o tejidos en
particular depositadas en la misma. Se encuentran disponibles
comercialmente una amplia variedad de membranas, algunas de las
cuales son más adecuadas para ciertos procedimientos que para otros.
La patente de los EE.UU. número 5366893 expone varios materiales de
membrana. Los filtros microporosos de policarbonato, por ejemplo,
han sido utilizados para los cultivos incluyendo las células
endoteliales.
Las paredes laterales de la inserción de cultivo
de células, son substancialmente igual en longitud, y define unas
aberturas substancialmente rectangulares en los extremos superior e
inferior de la misma. En la forma correspondiente, la membrana 40 es
substancialmente rectangular.
El reborde substancialmente anular 42 se extiende
hacia fuera desde el extremo superior del cuerpo 36. El diámetro del
reborde es ligeramente inferior a la distancia entre las
superficies verticales opuestas 30 de cada par de salientes opuestos
26. El reborde consecuentemente se apoya sobre las superficies
horizontales 28 de los escalones respectivos cuando la inserción se
monta en la base. El borde del reborde se une a las superficies
verticales 30 de cada escalón. La inserción se mantiene en posición
en consecuencia mediante los escalones, con la membrana 40
posicionada ligeramente por encima de las superficies superiores de
los salientes 34. Aunque la inserción podría estar soportada por
patas que se acoplaran a la pared inferior de la cavidad, tal como
se expone en la patente de los EE.UU. número 5366823, se prefiere
el uso de un reborde que se extiende desde el cuerpo de la
inserción. El grosor del reborde es aproximadamente el mismo que la
altura de la superficie vertical 30 de cada escalón. La superficie
superior del reborde es coplanar de acuerdo con lo substancial con
la superficie superior de la base.
Se extienden un par de muescas 44 a través de las
paredes laterales y del reborde de la inserción en las partes de las
esquinas diagonalmente opuestas de las paredes laterales. Cada
muesca incluye una pared inferior y un par de paredes laterales
opuestas, todo ello extendiéndose por debajo del reborde.
El tamaño de la inserción se selecciona de
acuerdo con la prueba en particular o por otro procedimiento a
realizar. En una realización preferida de acuerdo con la invención,
el diámetro máximo de la inserción 14 es aproximadamente de ciento
cincuenta milímetros. La altura es de aproximadamente veinticuatro
milímetros. Suministrando un diámetro de al menos tres veces la
altura de la inserción, se proporciona una vasija relativamente
plana, la cual facilitar ciertos procedimientos de pruebas.
La tapa 16 está diseñada para encajar sobre la
base y la inserción. Con referencia a las figuras 2 y 6, la tapa
incluye una pared superior 46 y una brida 48 que se extiende hacia
abajo. Tal como se muestra en la figura 6, se forma un reborde
periférico 50 en la pared superior 46. El reborde se extiende por
encima del plano de la parte central de la pared superior. Cada
parte de la esquina de la pared superior incluye una depresión 52
generalmente triangular, que tiene un borde interno arqueado 52A.
Estas depresiones ayudar a retener la inserción en posición durante
el envío, para asegurar la integridad de la inserción. Dos pares de
salientes opuestos 54, teniendo cada uno bordes internos arqueados,
se extienden por encima del plano de la pared superior. Cada
saliente 54 está situado en el centro entre cada parte de la
esquina de la tapa 16. Cuatro depresiones circulares pequeñas 56 se
encuentran formadas en las esquinas respectivas de la tapa, justo
fuera del reborde 50.
Cuando la tapa 16 se encuentra montada a la base
12, las pequeñas depresiones circulares 56 se apoyan sobre la parte
horizontal 24A de la brida periférica 24 de la base. Esta
configuración facilita la extracción de la tapa, la cual en la
ausencia de dichas depresiones se pegaría más probablemente a la
base. Los pares opuestos de salientes 54 de la tapa están
posicionados directamente sobre los salientes 26 en forma de
columna de la base. Las depresiones triangulares 52 se extienden
dentro de la cavidad de forma tal que los bordes internos arqueados
de las mismas se unen al borde exterior del reborde 42 de la
inserción 14 de cultivo de células. La tapa consecuentemente impide
el desplazamiento lateral o vertical de la inserción 14 con
respecto a la base. El reborde y las depresiones hacen también que
el conjunto recubierto sea relativamente fácil de manipular.
La brida 48 de la tapa se extiende sobre la parte
24B que se extiende hacia debajo de la brida 24 de la base 12. Cada
brida 48, 24 incluye un pequeño labio que se extiende hacia fuera,
designado mediante los numerales 48A y 24C, respectivamente. Los
labios 48A, 24C están separados por un pequeño espacio cuando la
tapa se encuentra aplicada, tal como se muestra en la figura 3.
Durante la utilización, la cavidad definida por
la base 12 puede llenarse parcialmente con un medio seleccionado.
Esto puede llevarse a cabo con la inserción en posición a través de
las aberturas generalmente triangulares definidas entre el reborde
42 y las partes de las esquinas de la base. Los tejidos o las
células pueden ser depositados en el lado superior de la membrana.
La inserción 14 puede hacerse girar a una posición en la que las
paredes laterales de la inserción sean paralelas a las paredes
laterales de la base. Las muescas 44 facilitan la manipulación de la
inserción dentro de la cavidad.
Aunque se muestra un único conjunto 10 la cavidad
los principios de la invención pueden ser aplicados a un conjunto
multi-cavidad. Proporcionando cavidades que tengan
aberturas superiores no circulares que incluyan una o más partes de
esquinas, puede proporcionarse una abertura o aberturas
relativamente grandes entre una base y los bordes exteriores de una
inserción de cultivo de células. Las aberturas de la cavidad
cuadrada proporcionan un diseño eficiente para las aplicaciones de
una sola cavidad y de las multi-cavidad.
Claims (10)
1. Un conjunto para cultivar células o tejidos
(10), que comprende:
una base (12) que define una cavidad delimitada
por una pared inferior y una pluralidad de paredes laterales (18),
definiendo las mencionadas paredes laterales una abertura de la
cavidad que incluye una pluralidad de partes de esquinas;
una inserción (14) de cultivo de células que se
ensambla en forma desmontable a la mencionada base, incluyendo la
mencionada inserción de cultivo de células una membrana permeable
(40), un cuerpo (36) que tiene un extremo inferior al cual se fija
la mencionada membrana permeable, y una parte superior que define
un extremo abierto que proporciona acceso a la mencionada membrana
permeable, siendo el mencionado cuerpo posicionable dentro de la
mencionada cavidad de forma tal que la mencionada membrana
permeable se posiciona por encima de la mencionada pared inferior de
la mencionada cavidad, y
una abertura definida entre la mencionada parte
superior del mencionado cuerpo y al menos una de las mencionas
partes de esquina de la mencionada abertura de la cavidad, cuando la
mencionada inserción de cultivo de células se monta en la
mencionada base, proporcionando la mencionada abertura el acceso a
la mencionada pared inferior de la mencionada cavidad.
2. Un conjunto según se ha descrito en la
reivindicación 1, en el que el mencionado cuerpo de la mencionada
inserción de cultivo de células incluye dos pares de paredes
laterales opuestas, generalmente paralelas, y la mencionada membrana
permeable es substancialmente rectangular.
3. Un conjunto según la reivindicación 1, que
incluye un reborde (42) que se extiende hacia fuera desde la
mencionada parte superior de la mencionada inserción de cultivo de
células, siendo soportable el mencionado reborde por la mencionada
base.
4. Un conjunto según se describe en la
reivindicación 3, que incluye una pluralidad de salientes (26) que
se extienden hacia dentro de las mencionadas paredes laterales de la
mencionada base, siendo el mencionado reborde soportable por los
mencionados salientes.
5. Un conjunto según se ha descrito en la
reivindicación 4, en el que la mencionada base incluye dos pares de
paredes laterales opuestas que definen una abertura de cavidad
substancialmente rectangular, y en el que cada uno de los
mencionados salientes que se extienden hacia dentro incluye un
escalón definido por una superficie horizontal (28) y una
superficie vertical (30), siendo el mencionado reborde soportable
por las mencionadas superficies horizontales de los mencionados
escalones en una relación de yuxtaposición con las superficies
verticales de los mencionados escalones.
6. Un conjunto según la reivindicación 5, en el
que la mencionada parte superior del mencionado cuerpo de la
mencionada inserción de cultivo de células incluye una primera
muesca (44), que se extiende en el mismo para facilitar el
posicionamiento del mencionado cuerpo con respecto a la mencionada
base.
7. Un conjunto según la reivindicación 6, en el
que la mencionada parte superior del mencionado cuerpo incluye una
segunda muesca (44) que se extiende en el mismo, estando la
mencionada segunda muesca en relación de oposición con respecto a la
mencionada primera muesca.
8. Un conjunto según la reivindicación 3, que
incluye una tapa (16) soportada por la mencionada base, incluyendo
la mencionada tapa una pluralidad de depresiones (32) que se
extienden dentro de la mencionada cavidad, y que se yuxtaponen al
mencionado reborde de la mencionada inserción de cultivo de células
cuando la mencionada inserción de células se monta en la mencionada
base.
9. Un conjunto según la reivindicación 1, que
incluye una pluralidad de salientes discretos que se extienden
hacia arriba desde la mencionada pared inferior de la mencionada
cavidad, siendo la mencionada membrana posicionable por encima de
los mencionados salientes discretos (34) cuando la mencionada
inserción de cultivo de células se monta en la mencionada base.
10. Un conjunto según la reivindicación 1, en el
que están definidas aberturas entre la mencionada parte superior
del mencionado cuerpo y cada una de las mencionadas partes de
esquinas de la mencionada abertura de la cavidad cuando la
mencionada inserción de cultivo de células se encuentra montada en
la mencionada base.
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