ES2197483T3 - Eliminacion de colorantes desinfectantes. - Google Patents
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Abstract
Procedimiento para eliminar el colorante desinfectante de una solución acuosa a la que se ha añadido previamente el colorante desinfectante, que comprende hacer pasar la solución a través de un espesor de copolímero poroso de alcohol polivinílico-acetal suficiente para unirse esencialmente a todo el colorante desinfectante, mientras que permite que la mayoría de la solución pase a través.
Description
Eliminación de colorantes desinfectantes.
La presente invención se refiere al campo médico
de la hematología y, más particularmente, a un dispositivo y un
método mejorados para la eliminación de colorantes desinfectantes,
tales como el azul de metileno de la sangre, las fracciones
sanguíneas u otros líquidos perecederos a los que se han añadido
colorantes con objeto de desinfección.
Actualmente, sólo hay que mencionar la sangre
humana y la transfusión de sangre para provocar ansiedad relacionada
con el temor a contraer de alguna manera el SIDA (Síndrome de
Inmunodeficiencia Adquirida) a partir de sangre contaminada. Aunque
es cierto que varias pruebas basadas en anticuerpos y otras han
hecho posible eliminar la inmensa mayoría de la sangre infectada
por el VIH (Virus de la Inmunodeficiencia Humana, el agente causante
del SIDA) de nuestro suministro de sangre, el estado actual del
SIDA como enfermedad mortal incurable hace que incluso un riesgo
relativamente pequeño sea inaceptable para muchos.
El riesgo de infección puede reducirse además
mediante la mejora de la sensibilidad de las pruebas diagnósticas
aplicadas a la sangre y mediante el desarrollo de métodos para
desinfectar la sangre, de manera que pueda hacerse que la sangre
infectada que elude las pruebas sea sustancialmente inocua. Una
ventaja adicional a la opción de desinfectar la sangre es que hay
muchas otras enfermedades virales de transmisión hemática, además
del SIDA. El público es generalmente consciente de que varios tipos
de hepatitis pueden contraerse a partir de transfusiones de sangre.
Estas enfermedades oscilan desde ser meramente debilitantes hasta
ser mortales, como en el caso de la hepatitis fulminante o el
cáncer de hígado, que está fuertemente relacionado con ciertas
formas de hepatitis. Sin ninguna duda, hay muchos otros patógenos
virales de transmisión hemática que todavía no se han
descubierto.
Un medio de eliminación o supresión de los virus
de la sangre es el uso de la ``fototerapia'' o ``fotodesinfección''.
Se sabe que prácticamente todos los agentes patógenos, con la
posible excepción de los ``priones'' contienen ácidos nucleicos como
material genético. Mientras que los ácidos nucleicos en las células
humanas están empaquetados por proteínas y protegidos por el
citoplasma y la envuelta nuclear, en los virus típicos están más
expuestos. Esto hace posible que se produzca más fácilmente un daño
fotoquímico a los mismos. Los ácidos nucleicos absorben
naturalmente la energía de la luz en el intervalo ultravioleta. De
hecho, la mayor parte de la lesión cutánea producida por la luz del
sol se debe a la lesión fotoquímica producida a los ácidos
nucleicos.
Se han realizado algunos experimentos con el uso
de luz ultravioleta para desinfectar la sangre pero, en general,
estos no han demostrado ser satisfactorios. Los niveles de
radiación ultravioleta que inactivan a los patógenos de transmisión
hemática son difíciles de administrar y pueden producir lesión a los
componentes proteicos y celulares de la sangre. Además, la
radiación ultravioleta puede ser difícil de manejar y puede dañar o
no penetrar en los materiales comúnmente usados en la manipulación
de la sangre.
Es bien conocido que un cromóforo que absorbe la
luz en el espectro visible normal puede usarse para realizar
indirectamente la desinfección. Esencialmente, el cromóforo absorbe
la luz visible y llega a ``excitarse''. Esta energía extra
procedente de la absorción de la luz tiene que ir a alguna parte:
puede convertirse en calor en la forma de vibración molecular
acelerada del cromóforo; puede volver a emitirse como fluorescencia;
o puede consumirse en una reacción fotoquímica. Ciertos cromóforos,
tales como el colorante de tionina, azul de metileno (cloruro de
3,7-bis(dimetilamino)- fenazationio), cuando
se excitan, puede potenciar reacciones químicas en ácido nucleico.
Estas reacciones fotoquímicas alteran la estructura del ácido
nucleico y hacen que no sea funcional. Puesto que las células vivas
generalmente excluyen el azul de metileno, son los ácidos nucleicos
virales los más propensos a la lesión.
Aunque el azul de metileno generalmente se
considera no tóxico, hay cierto temor en añadir este material a la
sangre y a los productos sanguíneos para su uso médico. Es posible
eliminar el azul de metileno con sustancias aglutinantes, tales como
el carbón activado véase el documento
US-A-5639376). Desgraciadamente,
muchas otras sustancias se adhieren al carbón y se eliminan,
alterando así la química clínica y otras pruebas diagnósticas y
dañando potencialmente la calidad de la sangre de transfusión o el
producto sanguíneo. Los lechos biológicos y las resinas de
intercambio iónico también se han usado para eliminar el azul de
metileno (véase el documento
WO-A-9516348), ya que tienen
ligandos hidrófobos (véase el documento
WO-A-9500631).
Además, se sabe que el azul de metileno y un
número de otros colorantes tienen propiedades ``desinfectantes''.
Esto significa que, incluso en ausencia de luz, estos colorantes
pueden inhibir el crecimiento de diversos microbios, especialmente
de las bacterias. La causa de esta propiedad desinfectante no se
conoce completamente. Puesto que muchos de los colorantes
desinfectantes tienen potenciales de
oxidación-reducción (redox) en el intervalo de
muchos componentes del transporte de electrones del metabolismo
oxidativo, parece posible que estos colorantes funcionen provocando
el ``cortocircuito'' de estas rutas de transporte de electrones.
Generalmente, los colorantes muestran actividad diferencial hacia
las bacterias gram negativas frente a las gram positivas, siendo
los colorantes electronegativos los más eficaces sobre las
bacterias gram negativas y siendo los colorantes electropositivos
los más eficaces sobre las bacterias gran positivas.
Las fracciones sanguíneas y la sangre humana
tienen frecuentemente un término de caducidad limitado debido a las
bacterias que accidentalmente se introducen en la sangre procedente
de la piel del donante de sangre, que se multiplican en la sangre y
finalmente la vuelven inutilizable. Hasta ahora, no se ha
desarrollado ninguna forma eficaz de tratar con estos contaminantes
bacterianos. La adición de antibióticos o desinfectantes químicos,
aunque sea eficaz, es indeseable debido al problema de introducir
estos agentes en el paciente, junto con la sangre o la fracción
sanguínea.
Por tanto, es un objeto de la presente invención
proporcionar un medio para eliminar fácilmente los colorantes
desinfectantes de la sangre, los productos sanguíneos y otros
líquidos perecederos a los que se han añadido colorantes para
eliminar la contaminación viral o para evitar la reproducción
bacteriana.
También es un objeto de la invención actual,
proporcionar un material y un método para eliminar los colorantes
desinfectantes sin alterar gravemente la química del producto
sanguíneo o de la sangre tratada; y
Es un objeto adicional de la invención actual
proporcionar un kit para garantizar soluciones que contienen
plaquetas de término de caducidad prolongado.
Estos y otros objetos que serán evidentes para un
experto ordinario en la técnica al leer la siguiente memoria
descriptiva, se proporcionan mediante el uso de un filtro de
copolímero de alcohol polivinílico-acetal. Este
material muestra excepcional avidez por un número de colorantes
desinfectantes, eliminándolos fácilmente de la sangre o de las
fracciones sanguíneas, mientras que tiene efectos limitados sobre el
posterior análisis químico de la sangre tratada. El material de
filtro es generalmente una matriz porosa, que no libera partículas
ni disgregados en el producto tratado y su color blanco indica
fácilmente la captura del colorante. La adición de colorantes
desinfectantes, seguida por su eliminación posterior, proporciona
un método para prolongar la vida útil de las fracciones
plaquetarias purificadas.
Los objetos y características de la presente
invención, que se cree que son novedosos, se explican detalladamente
en las reivindicaciones adjuntas. La presente invención, tanto en
cuanto a su organización como a su forma de funcionamiento, junto
conotros objetos y ventajas, puede entenderse mejor con referencia a
la descripción siguiente, tomada en conjunto con los dibujos
adjuntos:
la figura 1 muestra un diagrama transversal de un
dispositivo de filtro simple usado en la presente invención; y
la figura 2 muestra un aparato para su
utilización en la presente invención para prolongar el término de
caducidad de los concentrados de plaquetas.
La siguiente descripción se facilita para
permitir que cualquier persona experta en la técnica realice y use
la invención, y explica los mejores modos contemplados por el
inventor para llevar a cabo la invención. Sin embargo, varias
modificaciones continuarán siendo fácilmente evidentes para
aquellos expertos en la técnica, puesto que los principios
genéricos de la presente invención se han definido en el presente
documento para proporcionar un método de uso del copolímero de
alcohol polivinílico-acetal para eliminar
colorantes desinfectantes de la sangre y de los productos
sanguíneos.
Por ``colorantes desinfectantes'' se quiere decir
cualquiera de un número de colorantes orgánicos artificiales,
generalmente conocidos como ``colorantes vitales'', incluyendo el
azul de metileno y los colorantes de tionina relacionados
(electronegativos), naranja de acridina, amarillo de acridina y
colorantes de acriflavina (acridina) relacionados
(electropositivos), quinacrina y sus derivados, verde brillante,
violeta de genciana, cristal violeta y los colorantes de trifenil
metano relacionados (electropositivos) y los colorantes de bis
naftaleno, tales como el azul de tripano y el rojo de tripano.
El alcohol polivinílico-acetal
(PVAA), actualmente preferido para su uso en la presente invención,
es un grado médico especial del polímero conocido como MEROCEL®
(marca registrada) fabricado por Merocel Corporation of Mystic, CT.
Este material ya se usa ampliamente como envases y esponjas
quirúrgicas. Tiene un tamaño de poro uniforme y no libera
disgregados ni solutos. Aunque generalmente comparte su avidez por
los colorantes desinfectantes con el PVAA de otras fuentes, no se
conoce que las propiedades de porosidad deseables y la ausencia de
solutos contaminantes estén fácilmente disponibles en materiales de
PVAA alternativos. Aunque el PVAA se usa generalmente en la forma
de almohadillas porosas similares a esponjas, también puede usarse
como un material cortado o granulado. Se conoce el uso de PVAA para
la eliminación de yodo (véase el documento número
WO-A-9822151). Una propiedad inusual
del PVAA es su aparente propiedad para unirse a muchos colorantes
electronegativos, así como a los electropositivos. La mayoría de
los materiales aglutinantes se unen sólo a colorantes negativos o
positivos, y no a ambos.
Prácticamente puede usarse cualquier dispositivo
de cromatografía en columna o soporte de filtro para poner en
práctica la presente invención. La figura 1 muestra un ejemplo de
un dispositivo 10 de filtro o columna para su uso en la presente
invención. El dispositivo 10 de filtro tiene un cuerpo 12 hueco
cilíndrico hecho de plástico de policarbonato, aunque pueden
emplearse materiales acrílicos, de polisulfona o cualquiera de
varios materiales ópticamente transparentes, tales como el vidrio.
El dispositivo 10 de filtro tiene una entrada 14 superior y una
salida 16 inferior. Están equipadas ventajosamente con ajustes de
tipo Luer para acomodar los componentes comúnmente usados en el
tratamiento de la sangre. Sin embargo, podrían sustituirse
fácilmente por cierres Luer, cierres estampados, o cualquiera de
varios tipos de ajustes adicionales (es decir, ajustes para tubos).
Se apreciará fácilmente que un factor clave es que el material del
filtro debe ser visible dentro del dispositivo 10, de manera que
pueda observarse la absorción del colorante y pueda colocarse un
nuevo dispositivo 10 en servicio cuando el dispositivo original
llegue a saturarse con el colorante (tal como se evidencia por la
aproximación del color del colorante a la salida 16 inferior).
En el uso real, una cámara 36 de filtro
generalmente contiene uno o más elementos 20 de filtro de PVAA.
Para garantizar la eliminación completa del colorante
desinfectante, es ventajoso usar una pluralidad de elementos
llenando casi la cámara 36 de filtro. Como los elementos absorben
el colorante, llegan a estar cada vez más coloreados (esto
presupone que el plasma o las fracciones de sangre relativamente
incoloras están siendo tratadas; en el caso de sangre total, el
filtro debe enjuagarse para observar el color). Al seleccionar el
volumen apropiado de PVAA (es decir, el número de elementos de
filtro) se prefiere usar una profundidad suficiente de PVAA para
que cierta cantidad de PVAA totalmente blanco permanezca en el
fondo del compartimento 36 del filtro al final de la filtración.
Esto garantiza que el producto final estará libre de colorante
desinfectante.
Los elementos de filtro de PVAA se soportan
mediante un disco 18 de vidrio poroso o alguna estructura permeable
similar. El disco 18 de vidrio poroso es relativamente fino y está
compuesto de plástico adecuado u otro material inerte,
alternativamente puede estar constituido por una pieza de acero
inoxidable u otro cribador o un disco de metal perforado. El disco
18 está perforado de manera que pueda soportar el elemento de PVAA,
aunque no impide significativamente el flujo del líquido. Como una
alternativa a los elementos de filtro de PVAA, también es posible
llenar el dispositivo 10 de filtro con material de PVAA cortado o
granular. Una ventaja potencial de tal material es que puede
verterse fácilmente en el dispositivo 10 de filtro. Cuando se usa
un material cortado o granular, es especialmente crítico que el
disco 18 de vidrio poroso o su equivalente se seleccione con una
estructura que resista la obstrucción por el PVAA granular.
En su uso normal, una fuente de plasma o de
sangre se une mediante tubos a la entrada 14 superior. A menudo, la
fuente será una sangre 42 que está suspendida por encima del
dispositivo 10, de manera que el líquido fluirá a través de la
entrada 14 por gravedad. Alternativamente, puede usarse una bomba
peristáltica para empujar el líquido a través de la entrada 14. Se
apreciará que un objetivo principal de la invención es permitir que
la sangre se procese sin peligro de contaminación del personal ni
del equipo de laboratorio. Por tanto, es preferible que todos los
componentes sean desechables, por lo que la sangre potencialmente
infectada se mantiene fuera del contacto con el personal o el
equipo de laboratorio permanente.
Una vez que ha pasado el lote completo del
líquido que requiere la eliminación del colorante al interior del
dispositivo 10 y fuera de él a través de la salida 18 hacia el
interior de un vaso receptor, tal como una bolsa de sangre fresca
(no mostrada), puede haber un volumen considerable de líquido
retenido por el PVAA. En el caso de factores sanguíneos
purificados, tales como concentrados de coagulación, este volumen de
líquido retenido puede tener un valor económico considerable. Por
tanto, una vez que todo el líquido ha fluido al interior a través
de la entrada 16, puede hacerse un vacío a través del orificio 18
de salida o puede aplicarse presión de aire positiva a través de la
entrada 16 para extraer este líquido retenido. Alternativamente,
los elementos de PVAA pueden comprimirse mecánicamente para liberar
el líquido unido.
Para probar la capacidad de la presente invención
para eliminar el colorante desinfectante, azul de metileno, de la
sangre humana, se llevó a cavo un experimento usando azul de
metileno para tratar, o bien el plasma humano o bien una solución
acuosa de albúmina sérica humana (HSA). Se usó la albúmina porque es
un componente principal del plasma sanguíneo y se observa su
capacidad para unirse a muchas sustancias diferentes con gran
afinidad. Por tanto, representa una situación del peor caso para la
eliminación del azul de metileno. Por otra parte, el plasma humano,
que comprende una mezcla de muchos componentes, representa un buen
patrón para juzgar si el proceso de filtración elimina cualquier
otra sustancia además del azul de metileno. Se añadió un mililitro
de una solución madre de 4,0 mg/ml de azul de metileno en agua
(concentración final de azul de metileno de 0,08 mg/ml) a 50 ml de
plasma humano y a 50 ml de una solución acuosa al 4% (peso por
volumen) de HAS. Esto representa una concentración más elevada de
azul de metileno de la que se usa comúnmente en los procesos de
fotodesinfección. La solución madre de azul de metileno fue
esencialmente opaca y su adición a 0,08 mg/ml produjo plasma o
solución de albúmina de color azul oscuro.
En ambos casos, el dispositivo 10 de filtro de la
figura 1 se llenó con 25 elementos de CF 150 MEROCEL® (discos de 26
mm de diámetro, Catálogo #820170). Tras hacer pasar la solución de
HSA a su través, los elementos 12 superiores se colorearon
claramente de azul, siendo el elemento superior muy oscuro, mientras
que el elemento duodécimo era prácticamente incoloro. Los elementos
13 inferiores permanecieron incoloros. Resultados similares se
observaron con el plasma humano. En ambos casos, la solución
filtrada fue incolora, lo que indicó la eliminación esencialmente
completa del azul de metileno. Las muestras de plasma humano, tanto
antes como después de la filtración a través de PVAA, se
presentaron para su análisis químico clínico; los resultados se
facilitan en la tabla 1.
\nobreak\vskip.5\baselineskip\centering\begin{tabular}{|l|c|c|}\hline Analito \+ Plasma \+ Plasma tratado con azul de \\ \+ control \+ metileno \\\hline Amilasa (U/l) \+ 64 \+ 67 \\\hline CPK (creatina quinasa) (U/l) \+ 55 \+ 54 \\\hline LDH (lactato deshidrogenasa) (U/l) \+ 111 \+ 120 \\\hline SGOT (aspartato aminotransferasa) (U/l) \+ 17 \+ 16 \\\hline SGPT (alanina aminotransferasa) (U/l) \+ 13 \+ 13 \\\hline Lipasa (U/l) \+ 0 \+ 0 \\\hline Proteína total (g/dl) \+ 5,9 \+ 6,5 \\\hline Albúmina (g/dl) \+ 3,3 \+ 3,6 \\\hline Triglicéridos (mg/dd) \+ 91 \+ 0 \\\hline Colesterol (mg/dl) \+ 139 \+ 152 \\\hline Ácido úrico (mg/dl) \+ 4,3 \+ 3,1 \\\hline BUN (concentración plasmática de urea) (mg/dl) \+ 13 \+ 12 \\\hline Creatitina (mg/dl) \+ 0,8 \+ 0,8 \\\hline Glucosa (mg/dl) \+ 333 \+ 333 \\\hline Bilirrubina total (mg/dl) \+ 0,2 \+ 0,3 \\\hline Bilirrubina indirecta (mg/dl) \+ 0,2 \+ 0,3 \\\hline Bilirrubina directa \+ 0 \+ 0 \\\hline Sodio (mEq/l) \+ 166 \+ 166 \\\hline Potasio (mEq/l) \+ 3,4 \+ 3,4 \\\hline Cloruro (mEq/l) \+ 80 \+ 80 \\\hline CO _{2} (mEq/l) \+ 21 \+ 21 \\\hline Calcio (mg/dl) \+ 7,1 \+ 9 \\\hline Fósforo (mg/dl) \+ 11,2 \+ 11,1 \\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
Con la excepción de los triglicéridos, los
resultados no fueron estadísticamente diferentes, lo que indica que,
aunque el PVAA es un excelente aglutinante del azul de metileno,
tiene poca o ninguna afinidad por otros componentes médicamente
importantes del plasma. Los resultados con los triglicéridos son
extremadamente interesantes y potencialmente útiles. Aparentemente,
el colorante azul de metileno es suficientemente lipófilo para su
partición preferiblemente en triglicéridos. Cuando el azul de
metileno se une a PVAA, también se unen los trligicéridos a PVAA. En
este ejemplo, un peso dado de azul de metileno puede unirse al
menos diez veces su peso a los triglicéridos (es decir, 0,08 mg/ml
de azul de metileno eliminan 0,91 mg/ml de triglicéridos). Esto
proporciona un método único para eliminar los triglicéridos, por
ejemplo, en la preparación de un material de control de química
clínica. También cabe la posibilidad de que este método pueda
usarse para eliminar triglicéridos directamente de la sangre de
pacientes hiperlipidémicos usando un sistema de tipo
``plasmaféresis''. Es decir, un sistema que extraería sangre del
paciente, añadiría azul de metileno, filtraría la sangre con azul de
metileno a través de PVAA para eliminar el azul de metileno y los
triglicéridos y después devolvería la sangre al paciente.
Dado que la albúmina generalmente se une al azul
de metileno con considerable afinidad, el PVAA que se une al azul de
metileno también ofrece una manera conveniente de purificar la
albúmina. Si el PVAA se satura con azul de metileno, digamos
tratándolo con una solución acuosa de azul de metileno al 1%
peso/volumen, seguido por un amplio lavado para eliminar el
colorante unido débilmente, el PVAA azul resultante puede usarse
como un reactivo de purificación de la albúmina o para eliminar la
albúmina de las muestras antes de las pruebas diagnósticas que
pudieran resultar negativamente afectadas por la albúmina. Cuando
las soluciones que contienen albúmina se hacen pasar a través del
PVAA azul, una gran cantidad de albúmina llega a unirse al PVAA. La
albúmina unida puede liberarse cambiando el pH o aplicando otras
condiciones de desnaturalización suaves bien conocidas por los
expertos habituales en la técnica. También debería ser evidente que
la captura de albúmina sólo es apta para un sistema de
``plasmaféresis'', en el que la albúmina puede recogerse
selectivamente de donantes sin extraer realmente de forma
permanente volúmenes significativos de sangre total.
Se realizaron pruebas para determinar la
capacidad del azul de metileno para inhibir Yersinia
enterocolitica, Serratia marcesceus }y Staphylococcus aureus,
bacterias comunes de la superficie de la piel que a menudo
contaminan la sangre usada con objeto de transfusión. Se inocularon
alícuotas de plasma humano con bacterias (una especie de bacterias
para cada alícuota) a una concentración de 100 microorganismos por
milímetro. A continuación, se dividieron las alícuotas en cinco
partes; una parte sirvió como control, una segunda parte se llevó a
azul de metileno 100 \muM, una tercera parte se llevó a azul de
metileno 50 \muM, una cuarta parte se llevó a azul de metileno 10
\muM y una quinta parte se llevó a azul de metileno 5 \muM. Las
alícuotas se incubaron durante la noche a temperatura ambiente, se
filtraron a través de una profundidad suficiente de PVAA para
eliminar todas las trazas visibles de azul de metileno y un
milímetro de cada tratamiento se depositó sobre la superficie de
una placa Petri con agar nutriente. Las placas se sacudieron para
extender la muestra sobre la superficie de agar y después se
incubaron a 37ºC durante 24 horas. Las colonias de bacterias se
contaron entonces; los resultados se muestran en la tabla 2.
\nobreak\vskip.5\baselineskip\centering\begin{tabular}{|l|c|c|c|}\hline \+ Y. enterocolitica \+ S. marcescens \+ S. epidermidis \\\hline 100 \mu M \+ 0 colonias \+ 0 colonias \+ 7 colonias \\\hline 50 \mu M \+ 0 colonias \+ 0 colonias \+ 18 colonias \\\hline 10 \mu M \+ 0 colonias \+ 0 colonias \+ 53 colonias \\\hline 5 \mu M \+ 0 colonias \+ 0 colonias \+ 78 colonias \\\hline 0 \mu M (control) \+ 98 colonias \+ 106 colonias \+ 101 colonias \\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
Estos resultados indican que el tratamiento con
azul de metileno fue extraordinariamente eficaz para eliminar las
bacterias gram negativas Y. enterocolitica y S.
marcescens, incluso en concentraciones muy bajas. Sin embargo,
el colorante fue menos eficaz en la eliminación de la bacteria gram
positiva S. epidermidis, excepto a concentraciones
relativamente elevadas. Es una observación común que los agentes
que afectan a las bacterias gram negativas a menudo son ineficaces
sobre las especies gram positivas. Sin embargo, puesto que la
presente invención permite la eliminación eficaz de incluso
elevadas concentraciones del colorante, puede ser viable para
inhibir eficazmente incluso S. epidermidis.
La capacidad del PVAA de unirse al naranja de
acridina se probó usando una solución de 4,0 mg/ml del colorante en
agua destilada. Un mililitro de esta solución madre se añadió a 50
ml de cada uno de agua destilada, plasma humano y HAS al 4%. Cada
una de estas soluciones se filtró entonces a través de una pila de
25 elementos de CF 150 MEROCEL®. En cada caso se logró la
eliminación completa del colorante, lo que indica que la afinidad
de los PVAA por el naranja de acridina es bastante elevada. Esto
hace posible emplear la adición de naranja de acridina a la sangre o
a los productos sanguíneos como medio para destruir los patógenos
protozoarios, tales como el plasmodio (malaria) o los tripanosomas
(enfermedad del sueño). Las acriflavinas y los colorantes
relacionados son muy eficaces en la eliminación de estos
microorganismos, pero son demasiado tóxicos para usarse en la
sangre o en los productos sanguíneos. La presente invención hace
posible tratar eficazmente la sangre o los productos sanguíneos para
destruir estos parásitos (algunos de los cuales pueden estar en
realidad dentro de los eritrocitos) y luego eliminar el colorante
antes de administrar la sangre o los productos sanguíneos a los
pacientes.
La preocupación acerca de la contaminación
bacteriana ha hecho que las autoridades reduzcan el término de
caducidad permisible de los concentrados de plaquetas desde siete
días hasta cinco días o menos. El uso de concentrados de plaquetas
es vital en el tratamiento de varios estados de enfermedad
importantes, y el suministro inadecuado en la actualidad de los
concentrados de plaquetas podría extenderse volviendo a las fechas
del concentrado de plaquetas de siete días o más. Para este fin, se
inocularon concentrados de plaquetas con contaminantes bacterianos
y se añadió azul de metileno para ver si el colorante desinfectante
puede usarse para prolongar la vida del concentrado de
plaquetas.
Se inocularon concentrados de plaquetas con 100
microorganismos por mililitro de S. marcescens, Y.
enterocolitica o S. epidermidis. Se añadió azul de
metileno a concentraciones de 100 \muM, 50 \muM, 10 \muM o 5
\muM y las muestras se incubaron a temperatura ambiente durante
96 horas. Tras esta incubación, la muestras se sembraron en placa
sobre agar nutriente y se incubaron a 37ºC durante 24 horas. La
tabla 3 muestra los resultados de los recuentos de colonias de las
placas de agar.
\nobreak\vskip.5\baselineskip\centering\begin{tabular}{|l|c|c|c|}\hline Azul de metileno \+ S. marcescens \+ Y. enterocolitica \+ S. epidermidis \\\hline 100 \mu M \+ 0 colonias \+ 0 colonias \+ 12 colonias \\\hline 50 \mu M \+ 0 colonias \+ 0 colonias \+ 24 colonias \\\hline 10 \mu M \+ 0 colonias \+ 0 colonias \+ 76 colonias \\\hline 5 \mu M \+ 0 colonias \+ 0 colonias \+ 91 colonias \\\hline 0 \mu M (control) \+ 70 colonias \+ 50 colonias \+ 100 colonias \\\hline\end{tabular}\par\vskip.5\baselineskip
Estos resultados indican que el azul de metileno
en presencia de plaquetas todavía es muy eficaz en la inhibición de
bacterias gram negativas, incluso a concentraciones bajas de azul
de metileno. Lo que es más importante, la morfología y la función de
las plaquetas no pareció resultar afectada por el azul de metileno,
como se determinó mediante pruebas estándar. Además, la eliminación
del azul de metileno haciendo pasar los concentrados de plaquetas a
través de filtros de PVAA, no afectó negativamente a la función ni a
la morfología de las plaquetas. Por tanto, parece que la adición de
azul de metileno a concentrados de plaquetas de manera regular
puede usarse para retrasar significativamente el crecimiento
bacteriano y, por tanto, prolongar el término de caducidad del
concentrado de plaquetas.
Aunque es posible añadir azul de metileno a
varios puntos durante el procesamiento del concentrado, se prefiere
proporcionar bolsas de plaquetas que ya contienen la cantidad
requerida del colorante como un polvo seco. Cuando las soluciones
que contienen plaquetas se dispensan en la bolsa, el colorante se
disolverá e inmediatamente comenzará a destruir las bacterias.
Inmediatamente antes del uso real del concentrado de plaquetas, la
solución puede hacerse pasar a través de un dispositivo 10 de filtro
que contiene PVAA, similar al de la figura 1. La figura 2 muestra
una bolsa 42 de sangre que ya contiene la cantidad apropiada de
azul de metileno. Cuando se añade una solución que contiene
plaquetas a la bolsa a través de una entrada 44, el azul de metileno
se disuelve e inmediatamente comienza a proteger frente al
crecimiento bacteriano. Cuando las plaquetas han de administrarse a
un paciente, la solución sale de la bolsa 42 a través de una salida
46 y pasa a través de uno de los dispositivos 10 de filtro de PVAA
para eliminar el azul de metileno. La bolsa 42 de sangre y el
filtro 10 pueden configurarse ventajosamente como un kit, tal como
se muestra en la figura 2, proporcionándose el tubo 48 para conducir
la solución desde la bolsa 42 de sangre hasta el filtro 10 y de
allí al paciente.
En vista de la conocida tendencia a utilizar
colorantes desinfectantes ácidos que son eficaces frente a
diferentes microorganismos más que colorantes desinfectantes
básicos, puede ser beneficioso usar mezclas de ambos tipos de
colorantes. Sin embargo, no resultó claro si los dos colorantes con
cargas opuestas pueden eliminarse simultáneamente mediante un
filtro de PVAA. Además, la bibliografía anterior enseña que los
colorantes ácidos son más eficaces a pH ácido, mientras que los
colorantes básicos son más eficaces a pH alcalino. Se llevó a cabo
un experimento en el que se añadió azul de metileno a una solución
de prueba a una concentración de 50 uM. Después, se añadió cristal
violeta hasta llevar la solución a cristal violeta al 0,025%. Cuando
se filtraron rápidamente 50 ml de esta solución a través de 25
elementos de PVAA (elementos de CF 150 MEROCEL®) se eliminaron todas
las trazas visibles de ambos colorantes. Para probar la capacidad
desinfectante de estos colorantes, se mezclaron varias combinaciones
de colorantes con plasma y se inoculó con Pseudomonas
aeruginosa (la bacteria gram negativa más resistente) y/o
Staphyloccoccus epidermidis (la bacteria gram positiva más
resistente) a 100 microorganismos por mililitro. Las pruebas se
llevaron a cabo tal como se describió anteriormente en el ejemplo
2. En el plasma, hubo una eliminación completa de S.
epidermidis mediante cristal violeta y una eliminación completa
de S. epidermidisy P. aeruginosa mediante una mezcla
de los dos colorantes. Además, cuando concentrados de eritrocitos
se inocularon con S. epidermidis, el cristal violeta todavía
dio como resultado una eliminación completa.
Los expertos en la técnica apreciarán que pueden
configurarse varias adaptaciones y modificaciones de la realización
preferida que se acaba de describir, sin apartarse del alcance de
la invención. Por tanto, ha de entenderse que, dentro del alcance de
las reivindicaciones adjuntas, la invención puede ponerse en
práctica de forma distinta a la específicamente descrita en el
presente documento.
Claims (7)
1. Procedimiento para eliminar el colorante
desinfectante de una solución acuosa a la que se ha añadido
previamente el colorante desinfectante, que comprende hacer pasar
la solución a través de un espesor de copolímero poroso de alcohol
polivinílico-acetal suficiente para unirse
esencialmente a todo el colorante desinfectante, mientras que
permite que la mayoría de la solución pase a través.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el
que el colorante desinfectante es azul de metileno, naranja de
acridina, violeta de genciana, verde brillante, amarillo de
acridina, quinacrina, azul de tripano, cristal violeta o rojo de
tripano.
3. Procedimiento según la reivindicación 1, en el
que la solución acuosa es sangre o una fracción derivada de la
sangre y el colorante desinfectante es el azul de metileno.
4. Procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que la solución acuosa contiene
triglicéridos, el colorante desinfectante es el azul de metileno y
los triglicéridos se eliminan junto con el azul de metileno.
5. Procedimiento según la reivindicación 1, que
comprende las etapas de:
añadir el colorante cristal violeta a
eritrocitos;
mezclar los eritrocitos para garantizar una
distribución uniforme del colorante cristal violeta; y
hacer pasar la mezcla de eritrocitos y el
colorante cristal violeta a través del copolímero poroso de alcohol
polivinílico-acetal.
6. Procedimiento según la reivindicación 1, que
comprende las etapas de:
añadir azul de metileno al concentrado de
plaquetas;
almacenar el concentrado de plaquetas hasta que
el concentrado sea necesario; y
hacer pasar el concentrado de plaquetas a través
del copolímero poroso de alcohol
polivinílico-acetal.
7. Kit para garantizar la prolongación del
término de caducidad de las soluciones que contienen plaquetas, que
comprende:
una bolsa de sangre con suficiente colorante azul
de metileno dispuesto dentro para producir una concentración de al
menos 1 \muM de colorante azul de metileno cuando la bolsa se
llena con solución que contiene plaquetas;
dispositivo de filtro que contiene un lecho de
copolímero poroso de alcohol polivinílico-acetal de
espesor suficiente para unirse esencialmente a todo el azul de
metileno cuando el contenido de la bolsa de sangre se haga pasar a
su través; y
medios para conectar la bolsa de sangre al
dispositivo de filtro para permitir que el fluido pase desde el
primero hasta el último..
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