ES2188320B1 - Metodo inmunoenzimatico (elisa) para cuantificar la deficiencia de hierro en fitoplancton utilizando proteinas fotosinteticas. - Google Patents

Abstract

Método inmunoenzimático cuantitativo para la detección y cuantificación de proteínas redox fotosintéticas, de algas verdes, que se ven afectadas por la disponibilidad de hierro en el medio ambiente. Este método consta de varios pasos: a) depositar un anticuerpo específico anti-proteína fitoplanctónica sobre los pocillos de una placa de poliestireno u otro material capaz de fijar proteínas; b) lavar para eliminar los anticuerpos no fijados en la placa; c) incubar con una solución de una proteína ajena al ensayo y después lavar, d) aplicar a cada pocillo de la placa la muestra de fitoplancton procedente del agua a analizar, o los patrones de concentración conocida, e) lavar para eliminar las proteínas que no han reaccionado con los anticuerpos, f) incubar cada pocillo de la placa con anticuerpos anti-proteína fitoplanctónica (dirigidos contra la misma proteína que la utilizada en el paso "a"), conjugados con peroxidasa o fosfatasa alcalina y diluidas en tampón a temperatura ambiente, g) lavarpara eliminar los anticuerpos que no han reaccionado; h) incubar cada pocillo con un sustrato adecuado a la enzima que se haya utilizado, para su revelado; i) pasado un tiempo medir la absorbencia de cada pocillo. Las proteínas contra las que inducen anticuerpos son la flavoxidasa y la ferredoxina del mismo organismo fitoplanctónico. Tiene aplicación porque la síntesis de estas dos proteínas, que realizan la misma función, depende de la biodisponibilidad de hierro en el medio de cultivo.