EP4263620A1 - Acide hyaluronique modifié comme dopant de polymères de type pedot et/ou pprodot - Google Patents

Acide hyaluronique modifié comme dopant de polymères de type pedot et/ou pprodot

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Publication number
EP4263620A1
EP4263620A1 EP21831320.3A EP21831320A EP4263620A1 EP 4263620 A1 EP4263620 A1 EP 4263620A1 EP 21831320 A EP21831320 A EP 21831320A EP 4263620 A1 EP4263620 A1 EP 4263620A1
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EP
European Patent Office
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hyaluronic acid
functions
hydrogel
polymer
modified
Prior art date
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Pending
Application number
EP21831320.3A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Maxime LEPRINCE
Rachel Auzely
Isabelle Texier-Nogues
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Universite Grenoble Alpes
Commissariat a lEnergie Atomique et aux Energies Alternatives CEA
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Commissariat a lEnergie Atomique CEA
Universite Grenoble Alpes
Commissariat a lEnergie Atomique et aux Energies Alternatives CEA
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Filing date
Publication date
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    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
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    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
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    • C09D11/102—Printing inks based on artificial resins containing macromolecular compounds obtained by reactions other than those only involving unsaturated carbon-to-carbon bonds
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    • C08J2405/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof

Definitions

  • the invention aims to provide a modified polysaccharide, and more precisely derived from hyaluronic acid, as a dopant for a conductive polymer of the PEDOT type ( poly(3,4- ethylenedioxythiophene)) and/or PProDOT (poly(3,4-propylenedioxythiophene)), for the preparation of a biodegradable conductive ink, and innovative materials, combining good properties in terms of conduction, biocompatibility and biodegradability.
  • PEDOT poly(3,4- ethylenedioxythiophene)
  • PProDOT poly(3,4-propylenedioxythiophene
  • inks and materials find particularly advantageous applications for the design of bioelectronic devices or implantable biological sensors, in particular for serving as interfaces with biological tissues.
  • PRIOR ART The development of implantable electronic devices for monitoring or stimulating biological tissues is based on the use of flexible, deformable and stretchable electronic compounds.
  • a first "technological" way to access such devices consists in including conventional conductors, based on copper, iron, gold, in flexible matrices, or by designing them with particular shapes (for example, in the form of wavelets for withstand deformation, kirigami, etc.) [1], [2].
  • conductive polymers offer a “chemical” response more suited to these needs, since the physicochemical properties of polymer-based materials can be more finely tuned, and production costs are lower.
  • conductive polymers have thus been increasingly used in bioelectronics, being particularly suitable for the electrode/biological tissue interface, due to their conductivity which is both ionic and electronic.
  • PEDOT is one of the most suitable conductive polymers for implanted devices, due to its high chemical stability and very good biocompatibility ([3], [4]).
  • PEDOT doped with polystyrene sulfonate has established itself as the material of choice, due to its chemical stability, its biocompatibility and the very wide range of conductivity possible (from 10 -4 to 10 4 S/cm) via chemical modifications or secondary treatments ([8]-(13]).
  • PEDOT:PSS is thus commercially available in the form of an aqueous colloidal suspension, qualified ", for example marketed by Heraeus under the trademark Clevios TM .
  • PEDOT:PSS is for example widely used for the preparation of intracranial electrodes ([5], [6], [7]).
  • PEDOT:PSS n It is not biodegradable, and the conductive tracks based on PEDOT:PSS, once deposited, are still soluble in water, which makes it difficult to use them in a biological environment, which is necessarily humid.
  • silylated crosslinkers for example, 3-glycidoxypropyltriethoxysilane (GOPS)
  • PEDOT polyelectrolytes
  • DNA [14], [15]
  • cellulose [16]
  • pectin [17]
  • guar gum [ 18]
  • ⁇ -carrageenans [19], [20]
  • alginate [21]
  • ulvan sulphated polysaccharide
  • polydopamine [22]
  • sulphated dextran [23].
  • the resulting PEDOT:polyelectrolyte materials exhibit better biocompatibility but are however weakly conductive ( ⁇ 10 -1 S/cm).
  • PEDOT inks glycosaminoglycans (GAGs) have also been proposed.
  • Glycosaminoglycans are natural polysaccharides, made up of sequences of disaccharides, which are naturally present in the human body. GAGs prove to be particularly advantageous as PEDOT dopants for applications for implantable electronic devices. In fact, they advantageously have excellent biocompatibility, allow good interactions with neuronal cells, and their main chain can be hydrolyzed by the body.
  • inks based on PEDOT doped with heparin, chondroitin sulfated or hyaluronic acid have low conductivity (0.001 – 0.075 S/cm), and their degradation by the body has not been studied.
  • the present invention specifically aims to provide a new polyelectrolyte for doping polymers of the PEDOT and/or PProDOT type, making it possible to overcome the aforementioned drawbacks and combining both excellent properties in terms of conductivity, biocompatibility and of biodegradability.
  • the invention relates, according to a first of its aspects, to the use of a polymer of hyaluronic acid, or hyaluronic acid, modified by the grafting onto it of at least functions -SO 3 - and aromatic rings, as a dopant for a polymer formed from one or more monomers chosen from 3,4-ethylenedioxythiophene (EDOT), 3,4-propylenedioxythiophene (ProDOT) and their derivatives, in particular from a polymer of the poly(3,4-ethylenedioxythiophene) (PEDOT) type.
  • EDOT 3,4-ethylenedioxythiophene
  • ProDOT 3,4-propylenedioxythiophene
  • PEDOT poly(3,4-ethylenedioxythiophene)
  • modified hyaluronic acid or “modified HA” according to the invention will more simply denote a polymer of modified hyaluronic acid implemented according to the invention.
  • the -SO 3 -functions and the aromatic nuclei carried by the modified hyaluronic acid according to the invention can be carried on the same group (called "graft"), grafted to the chain of hyaluronic acid or, alternatively, be carried by separate grafts.
  • the modified hyaluronic acid according to the invention may have at least -SO 3 -C + groups, C + being a counter-ion of the anion SO 3 - such as Na + , in particular grafted onto at least some of the hydroxyl functions of the hyaluronic acid polymer and groups having at least one aromatic nucleus, in particular a benzene nucleus, in particular grafted onto at least part of the carboxylic acid functions of the hyaluronic acid polymer.
  • modified hyaluronic acid polymers according to the invention, and of their synthesis, are more particularly described in the remainder of the text.
  • the invention relates, according to another of its aspects, to a hyaluronic acid polymer modified by the grafting thereto of at least -SO 3 -functions and aromatic rings, in which said -SO 3 - and said aromatic rings are carried by distinct groups grafted to the hyaluronic acid chain, said modified hyaluronic acid polymer having at least: - SO 3 -C + groups, C + being a counter-ion of the SO 3 - anion; and - groups having at least one aromatic ring, in particular a benzene ring, said groups being grafted to at least some of the carboxylic acid functions of the hyaluronic acid polymer, via amide bonds.
  • the modified hyaluronic acid according to the invention is further modified by the grafting onto it of at least one crosslinkable function.
  • the term "polymers of the PEDOT and/or PProDOT type” will more simply designate the polymers (homopolymers and copolymers) formed from one or more monomers chosen from EDOT, ProDOT and their derivatives.
  • the complex formed from one or more polymers of the PEDOT and/or PProDOT type, doped(s) with at least one modified hyaluronic acid according to the invention is more particularly designated, in the remainder of the text, under the name “PEDOT/ Modified PProDOT:HA”.
  • the inventors have discovered that the use of a modified hyaluronic acid according to the invention as a dopant of a polymer of the PEDOT type, makes it possible to access particularly advantageous conductive inks, having at properties of high conductivity, biocompatibility but also biodegradability.
  • the invention thus relates, according to another of its aspects, to an aqueous suspension, more commonly called “ink”, comprising at least one polymer of the PEDOT and/or PProDOT type doped with at least one modified hyaluronic acid according to the invention.
  • the ink may be an ink suitable for inkjet printing, for example for printing conductive tracks based on modified PEDOT/PProDOT:HA.
  • the invention also relates to a method for preparing such an ink, implementing the polymerization of monomers of the EDOT and/or ProDOT type in a solution comprising at least one modified hyaluronic acid polymer according to the invention in an aqueous medium.
  • an ink based on a polymer of the PEDOT and/or PProDOT type doped with a modified hyaluronic acid according to the invention, having free carboxylic acid functions and/or and carrying crosslinkable functions is advantageously crosslinkable.
  • the invention also relates, according to another of its aspects, to a material, in particular a hydrogel, based on at least one PEDOT and/or PProDOT type polymer doped with at least one modified hyaluronic acid polymer as defined according to the invention.
  • the modified PEDOT/PProDOT:HA-based hydrogels according to the invention can be swollen in an aqueous medium (also called “wet hydrogels”) or dry. They may for example be in the form of conductive hydrogel films, supported by a substrate or self-supported.
  • the invention also relates to three process variants for the preparation of these modified PEDOT/PProDOT:HA-based hydrogels according to the invention.
  • a hydrogel based on PEDOT/PProDOT:HA modified according to the invention can be prepared from the crosslinking of an ink according to the invention based on polymer(s) of the PEDOT type and/or or PProDOT doped with a modified hyaluronic acid according to the invention and carrying crosslinkable functions.
  • a modified PEDOT/PProDOT:HA-based hydrogel according to the invention can also be obtained, from an already crosslinked hydrogel formed beforehand from at least one hyaluronic acid polymer modified and carrying crosslinkable functions, by carrying out the polymerization of the monomers of the EDOT and/or ProDOT type directly in the hydrogel based on modified HA, swollen in an aqueous medium.
  • a hydrogel based on PEDOT/PProDOT:HA modified according to the invention can be prepared by simultaneously carrying out the polymerization of the monomers of the EDOT and/or ProDOT type and the crosslinking of the said acid polymer modified hyaluronic acid with free carboxylic acid functions.
  • the inks and materials, in particular hydrogels, based on modified PEDOT/PProDOT:HA according to the invention prove to be advantageous in several respects for their application in the biomedical field, in particular for bioelectronic devices or implantable biosensors.
  • they exhibit excellent electrical conductivity, in particular under physiological conditions (pH 7.4 in an aqueous medium), without requiring additional treatment or doping.
  • they may have a conductivity greater than or equal to 0.1 S/cm, in particular greater than or equal to 0.5 S/cm.
  • the ink and the materials based on modified PEDOT/PProDOT:HA according to the invention exhibit excellent biocompatibility or cytocompatibility. Moreover, they are advantageously biodegradable.
  • the biocompatible character of the ink and of the materials based on modified PEDOT/PProDOT:HA according to the invention ensures the possibility of bringing them into contact with biological tissues.
  • Their biodegradable nature allows, after use, their gradual elimination from the human body, without requiring explantation surgeries.
  • the hydrogels formed according to the invention have excellent conformability properties. They thus adapt perfectly to biological tissues.
  • the materials according to the invention, in particular of the hydrogel type can be integrated at the level of electronic devices (bioelectronic devices or biosensors) in contact with biological material (cells, living organisms or organisms implanted in vivo).
  • they can be used in contact with cell cultures or ex vivo tissues, for example for the design of organs on a chip ("Organ-on-Chip" in Anglo-Saxon terminology), be integrated into devices or sensors worn by a patient or implantable, in particular implemented for monitoring or stimulating biological tissues. They can advantageously constitute the interface with the biological tissues. They can thus find particularly advantageous applications for the design of numerous temporary implantable medical devices, such as guides for the reconstruction of tissues (peripheral nerves, muscles), intracranial electrodes, for example in the treatment of Parkinson's disease or epilepsy, or for various implanted biosensors.
  • tissue peripheral nerves, muscles
  • intracranial electrodes for example in the treatment of Parkinson's disease or epilepsy, or for various implanted biosensors.
  • the invention thus relates, according to another of its aspects, to the use of an aqueous suspension or of a material, in particular of a hydrogel, according to the invention, in particular as prepared according to the methods according to invention, in a bioelectronic device or biosensor intended to be brought into contact with biological material, for example for a device in contact with cell cultures or ex vivo tissues, a device or sensor worn by a patient or implantable, such as guides for the reconstruction of tissues, for example peripheral nerves. It also relates to a bioelectronic device or biosensor, intended to be brought into contact with biological material, comprising at least one material, in particular a hydrogel, according to the invention.
  • FIG. 1 schematically shows the formation of a modified PEDOT:HA complex from the polymerization of EDOT monomers in the presence of modified hyaluronic acid chains according to the invention
  • FIG 2 schematically presents the protocol for measuring the conductivity of a film formed from PEDOT ink: HAS 4 -PBA 0.3 in Example 2
  • FIG 3 schematically presents the stages of formation of a crosslinked film of PEDOT: HAS 4 -PBA 0.3 -PEGène 0.16 , on the surface of a non-functionalized glass slide and its immersion in water, as described in Example 5
  • FIG 4 schematically shows the crosslinking of the ink and its grafting to the surface of a glass slide functionalized with thiol functions, as described in Example 5
  • FIG 5 presents the curves of variation of the thickness of the crosslinked hydrogel film and of its conductivity as a function of the number of hydration/drying cycles, as described in Example 5
  • FIG 6 presents the variation curves of the elastic modul
  • the present invention uses a modified hyaluronic acid polymer, carrying at least —SO 3 — functions and aromatic rings.
  • Hyaluronic acids are polymers formed from disaccharide units composed of D-glucuronic acid and N-acetyl-D-glucosamine, as shown schematically below. [Chem 1] It is understood that the term “hyaluronic acid” denotes both hyaluronic acid in the protonated form or in the form of salts.
  • the modified hyaluronic acid according to the invention may be in the form of a salt, in particular an alkali metal salt, for example in the form of sodium hyaluronate.
  • hyaluronic acid polymer By “repeating unit” or even “unit” of the hyaluronic acid polymer, is meant a disaccharide unit as represented above for unmodified hyaluronic acid.
  • the modified hyaluronic acid polymer according to the invention is more particularly obtained from a hyaluronic acid having a mass-average molar mass, denoted Mw, of between 20,000 and 1,000,000 g.mol -1 , in particular between 40,000 and 250000 g.mol -1 .
  • Mw mass-average molar mass
  • the mass-average molar mass can be determined for example by steric exclusion chromatography (SEC).
  • the modified hyaluronic acid polymer according to the invention is formed by grafting one or more grafts bearing -SO 3 - functions and aromatic nuclei, onto a hyaluronic acid of mass-average molar mass as defined above.
  • the -SO 3 - functions and aromatic rings can more particularly be grafted onto some or all of the hydroxyl functions and/or the carboxylic acid function of a repeating unit of hyaluronic acid.
  • One or more —SO 3 — functions and one or more aromatic nuclei can be carried on the same group grafted to the hyaluronic acid polymer, also called “graft” or, alternatively, be carried by separate grafts.
  • a modified hyaluronic acid according to the invention can result from the grafting onto hyaluronic acid of at least: (a) -SO 3 -C + groups, with C + representing a counter-ion of the anion - SO 3 -, in particular chosen from alkali and alkaline-earth cations, for example Na + ; and (b) groups having at least one aromatic ring.
  • the —SO 3 —C + groups can more particularly be grafted onto at least some of the hydroxyl functions of hyaluronic acid.
  • the groups possessing at least one aromatic nucleus may more particularly be groups possessing a single aromatic nucleus.
  • the aromatic rings can be, for example, benzene rings, naphthalene rings, etc. They may also be aromatic rings bearing heteroatoms, for example pyridine or quinoline rings, etc. According to a particular embodiment, the aromatic rings are benzene rings.
  • the groups possessing at least one aromatic nucleus, for example a benzene nucleus can more particularly be grafted onto at least some of the carboxylic acid functions of hyaluronic acid.
  • the groups carrying at least one aromatic nucleus, grafted to the modified hyaluronic acid according to the invention, can more particularly result from the grafting, at the level of the hyaluronic acid, of molecules having at least one aromatic nucleus and carrying at least one function capable of reacting with a carboxylic acid function of a hyaluronic acid unit to form a covalent bond.
  • a function can for example be an amine function capable of reacting with a carboxylic acid function of a unit of hyaluronic acid to form an amide bond.
  • the group carrying at least one aromatic ring can result from the grafting of aminophenylboronic acid (denoted PBA) with a carboxylic acid function of hyaluronic acid.
  • the modified hyaluronic acid polymer according to the invention bears at least (a) -SO 3 -C + groups, with C + being as defined previously, grafted at the level of at least one part of the hydroxyl functions of hyaluronic acid and at least (b) groups having at least one aromatic ring, in particular a benzene ring, grafted onto at least part of the carboxylic acid functions of hyaluronic acid.
  • the invention also relates, according to one of its aspects, to a hyaluronic acid polymer modified by the grafting thereto of at least functions -SO 3 - and aromatic nuclei, said hyaluronic acid polymer modified having at least: - -SO 3 -C + groups, C + being a counter-ion of the anion SO 3 -, chosen in particular from alkaline and alkaline-earth cations, for example Na + , said -SO groups 3 -C + being in particular grafted to at least some of the hydroxyl functions of the hyaluronic acid polymer; and - groups having at least one aromatic ring, in particular a benzene ring, said groups being grafted to at least some of the carboxylic acid functions of the hyaluronic acid polymer, via amide bonds.
  • the modified hyaluronic acid polymer according to the invention may in particular have an average number of -SO 3 - functions, per unit of repetition of hyaluronic acid (corresponding to a disaccharide unit), of between 1 and 4, in particular between 2 and 4, preferably between 3 and 4 and more preferably 4.
  • the SO 3 - functions result from the grafting of -SO 3 - C + groups, at the level of all the functions or of part of the hydroxyl functions of hyaluronic acid, the degree of substitution of the hydroxyl functions by -SO 3 - C + groups, defined as the average number of -SO 3 - C + groups, per unit of repetition of the hyaluronic acid, also called in this case "degree of sulfation" and denoted DS s , being more particularly between 1 and 4, in particular between 2 and 4, preferably between 3 and 4.
  • the degree of sulphation is 4.
  • a modified hyaluronic acid polymer according to the invention may have an average number of aromatic rings per unit of repetition of hyaluronic acid, comprised between 0.05 and 0.5, in particular between 0.10 and 0.40 and more particularly between 0.15 and 0.3.
  • the aromatic rings are carried by groups grafted to at least some of the carboxylic acid functions, the degree of substitution of the carboxylic acid functions by said groups carrying an aromatic ring, in particular a benzene nucleus, denoted DS Ar , defined as the average number of groups possessing an aromatic nucleus per unit of repetition of hyaluronic acid, being more particularly between 0.05 and 0.5, in particular between 0.10 and 0.40 and more particularly between 0.15 and 0.3.
  • the degree of substitution by grafts carrying aromatic rings can be determined by techniques known to those skilled in the art, for example by 1 H NMR analysis, as presented in example 1.
  • the hyaluronic acid modified according to the invention may thus have the following structure (I): [Chem 2] in which: - n represents the degree of polymerization of the hyaluronic acid, in other words the number of repeating units of disaccharide; in particular n is between 45 and 2500, and more particularly between 90 and 700; - the R groups represent, independently of each other, a hydrogen atom (unsubstituted hydroxyl function) or an -SO 3 -C + group, C + being as defined previously, the R groups possibly being different from a repeating unit to another, provided that at least some of the R groups represent -SO 3 -C + groups; - the R′ groups, which are identical or different from one repeat unit to another, represent an OC + group (unsubstituted carboxylic acid function), C + being as defined previously; a group bearing an aromatic, in particular benzene, nucleus, or else a group distinct from the aforementioned groups, provided that at
  • the other grafts R′ can be groups carrying other functions of interest, in particular crosslinkable functions, as detailed more particularly in the remainder of the text.
  • the degree of sulfation, DSS, of the hyaluronic acid polymer of formula (I) is between 1 and 4, in particular between 2 and 4, preferably between 3 and 4 and more preferably 4.
  • the degree of substitution, DS Ar , by said groups bearing an aromatic nucleus is between 0.05 and 0.5, in particular between 0.10 and 0.40 and more particularly between 0.15 and 0.3.
  • the invention also relates to a process for the preparation of a modified hyaluronic acid polymer according to the invention by grafting, onto a chain of hyaluronic acid, groups having SO functions. 3 - and/or aromatic rings.
  • a modified hyaluronic acid polymer according to the invention can be prepared from a hyaluronic acid via at least the following steps: (i) grafting of -SO 3 -C + groups, at the level of at least part of the hydroxyl functions of hyaluronic acid; and (ii) grafting of groups carrying at least one, in particular an aromatic nucleus, for example a benzene nucleus, at the level of at least some of the carboxylic acid functions of hyaluronic acid; the grafting steps (i) and (ii) possibly being carried out in this order or in the reverse order, preferably in this order ((i) then (ii)).
  • the grafting in step (i) of -SO 3 -C + groups at the level of the hydroxyl functions of the hyaluronic acid proceeds according to the following steps: - modification of the carboxylic acid functions of the hyaluronic acid under salified form to allow the solubility of the hyaluronic acid salt in the solvent medium used for the sulfation reaction, for example in the form of a tetrabutylammonium hyaluronate salt; - sulfation, in a solvent medium, of at least some of the hydroxyl functions of hyaluronic acid, and - purification to obtain sulfated hyaluronic acid.
  • the sulfation reaction can be carried out, for example, by reacting hyaluronic acid with sulfur trioxide dimethylformamide (SO 3 DMF) in dimethylformamide (DMF). It is up to a person skilled in the art to adjust the operating conditions, in particular in terms of hyaluronic acid and SO 3 DMF contents, duration and temperature, to carry out the sulphation and obtain the desired degree of sulphation.
  • SO 3 DMF sulfur trioxide dimethylformamide
  • DMF dimethylformamide
  • the grafting in step (ii) of groups carrying at least one aromatic ring, for example a benzene ring, at the level of at least a part of the carboxylic acid functions of hyaluronic acid can more particularly be made by grafting a molecule comprising at least one aromatic nucleus and carrying at least one function capable of reacting with a carboxylic acid function of a unit of hyaluronic acid to form a covalent bond. It may for example be a molecule bearing an amine function capable of reacting with a carboxylic acid function of a unit of hyaluronic acid to form an amide bond.
  • the groups bearing a benzene ring can result from the grafting of aminophenylboronic acid (denoted PBA) with a carboxylic acid function of a disaccharide unit of hyaluronic acid.
  • PBA aminophenylboronic acid
  • a person skilled in the art is able to adjust the operating conditions to lead to the grafting of said molecule.
  • the coupling reaction between an amine function carried by the molecule having at least one aromatic ring and a carboxylic acid function of hyaluronic acid can be carried out in a solvent medium, in the presence of an agent coupling such as DMTMM (4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methyl-morpholinium chloride).
  • an agent coupling such as DMTMM (4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methyl-morpholinium chloride).
  • DMTMM 4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methyl-morpholinium chloride.
  • crosslinkable function is meant a chemical group carried by the chain of the modified hyaluronic acid polymer, capable of allowing, under suitable conditions, for example in the presence of a crosslinking agent, the establishment of bonds between hyaluronic acid chains, and the formation of a cross-linked network.
  • the crosslinkable functions carried by a modified hyaluronic acid polymer according to the invention can be of various natures, provided that they are capable of leading to the formation of a crosslinked network (or matrix), in particular allowing obtaining a hydrogel from an aqueous solution or suspension comprising at least one such modified hyaluronic acid polymer according to the invention, as described more precisely in the following text.
  • Physical crosslinking consists of the establishment of physical bonds (hydrogen, Van der Waals, dipole-dipole, etc.), between the polymer chains, for example via polar functions (alcohols, acids, amines, ethers, esters , etc.).
  • Chemical crosslinking consists of the establishment of covalent or dynamic (reversible) covalent chemical bonds between the polymer chains.
  • a crosslinkable function can be a reactive function X, capable of reacting with another reactive function Y, to form a physical or chemical bond, preferably a covalent chemical bond, the reactive functions X and Y possibly being identical or different depending on the reaction implemented for the crosslinking.
  • the Y functions when they are distinct from the X functions, can be carried by a modified hyaluronic acid polymer, distinct from the modified hyaluronic acid polymer according to the invention carrying the X functions.
  • the crosslinking can be carried out by presence of a crosslinking agent comprising at least two Y functions, in particular from 2 to 4 Y functions, and more particularly two Y functions (bifunctionalized crosslinking agent).
  • the crosslinking agent can be an organic molecule of variable size, carrying at least two Y functions available to react with reactive functions X. They can be organic molecules of low mass molar or of chemically modified oligomers or polymers.
  • the functions X and Y, identical or different, reactive with each other, can be of various natures, depending on the reaction implemented for the crosslinking.
  • the crosslinkable functions can be chosen in particular to allow crosslinking of the hyaluronic acid chains via different physical or chemical routes, already proposed in the context of the preparation of hydrogels ([35]).
  • the functions capable of establishing so-called physical interactions mention may be made, for example, of the dopamine functions; protons and electronegative atoms capable of interacting together to form hydrogen bonds; adamantyl functions capable of interacting with cyclodextrin units according to a so-called “host-guest” chemistry ([36]); cations and anions capable of interacting together to form ionic bonds.
  • the crosslinkable functions are functions allowing crosslinking by establishment of covalent chemical bonds (dynamic or not).
  • the crosslinkable functions can be chosen in particular to allow crosslinking of the hyaluronic acid chains via chemical routes, already proposed in the context of the preparation of hydrogels based on hyaluronic acid ([37]), such as by polymerization radical, by formation of a carbon-nitrogen double bond, by Michael-type addition reaction, by photochemical reaction known as "thiol-ene", by different types of so-called “orthogonal” chemistry, for example by Diels-Alder reaction, by Huisgen cycloaddition reaction, between an azide and an alkyne catalyzed by copper (I) or between an azide and a strained cycloalkynyl in the absence of copper catalyst, by reaction catalyzed by an enzyme, etc.
  • chemical routes already proposed in the context of the preparation of hydrogels based on hyaluronic acid ([37])
  • polymerization radical by formation of a carbon-nitrogen double bond
  • Michael-type addition reaction by photochemical reaction
  • the crosslinkable functions can thus be for example: - double bonds, capable of allowing the crosslinking of the hyaluronic acid chains for the preparation of a hydrogel according to the invention by radical polymerization; - aldehyde or ketone functions; or amine functions, in particular hydroxylamine or hydrazine functions, said aldehyde or ketone and amine functions being capable of reacting together to form imine bonds, in particular oxime or hydrazone bonds; - functions capable of reacting with another function in the context of a Michael-type addition reaction, for example thiol functions (-SH), methacrylate or acrylate functions; - ethylenically unsaturated functions (alkene functions), in particular ethenyl functions, or thiol functions, said functions being capable of reacting together, in particular under photo-irradiation in the presence of a photo-initiator (chemical called “thiol-ene”), to form a covalent bond, as described more
  • the modified hyaluronic acid polymer according to the invention bears at least one alkene function, in particular ethenyl, capable of reacting with a Y function of thiol type to form a covalent bond.
  • said modified hyaluronic acid polymer according to the invention may bear reactive functions X, which can be crosslinked in the presence of a crosslinking agent carrying at least two Y functions, where: - the X function is an alkene function, for example ethenyl; and the Y function is a thiol function, said X and Y functions reacting together according to a so-called “thiol-ene” reaction, in particular by activation under UV radiation (photo-activatable reaction) in the presence of a photo-initiator; - the X function is a ketone function and the Y function is an amine function, in particular hydroxylamine or hydrazine, said X and Y functions reacting together to form an imine bond, in particular an oxime or hydrazone bond; - the X function is a boronic acid function and the Y function is a planar vicinal diol function, said X and Y functions reacting together to form
  • the modified hyaluronic acid polymer according to the invention can bear alkene functions, in particular ethenyl functions.
  • the crosslinking agent used for the crosslinking of the modified hyaluronic acid according to the invention may be an organic molecule having at least two functions, in particular two thiol functions.
  • a modified hyaluronic acid polymer according to the invention may have an average number of grafted crosslinkable functions, in particular of reactive functions X as described above, per unit of repetition of hyaluronic acid, including between 0.05 and 0.50, in particular between 0.07 and 0.50 and more particularly between 0.10 and 0.50.
  • the average number of crosslinkable functions grafted to the modified hyaluronic acid can be determined by techniques known to those skilled in the art, for example by 1 H NMR analysis.
  • the variation in the average number of crosslinkable functions grafted to the level of the modified hyaluronic acid polymer according to the invention makes it possible to modulate the mechanical properties of the hydrogel prepared from the modified hyaluronic acid according to the invention, depending on the intended applications for this hydrogel.
  • a crosslinkable function can be carried by the said group(s) carrying one or more -SO 3 - functions and/or one or more aromatic rings, in particular by at least some of the groups carrying at least one aromatic ring. ; and/or be carried by groups distinct from the group(s) carrying the -SO 3 - function(s) and/or the aromatic nucleus(s).
  • the crosslinkable functions are carried by at least some of the groups carrying at least one aromatic ring, for example a benzene ring, as described previously, grafted to hyaluronic acid modified according to the invention, in particular at the level of at least some of the carboxylic acid functions of hyaluronic acid.
  • the modified hyaluronic acid according to the invention may have groups, grafted to at least some of the carboxylic acid functions of the hyaluronic acid chain, bearing at least one aromatic ring, for example d a benzene ring, and at least one crosslinkable function, in particular a reactive function X as defined above.
  • These groups can more particularly result from the grafting of a molecule comprising at least one aromatic ring, for example a benzene ring, at least one function capable of reacting with the carboxylic acid function of a unit of hyaluronic acid to form a bond covalent, for example an amide bond, and at least a crosslinkable function, in particular a reactive function X as defined above.
  • a molecule comprising at least one aromatic ring, for example a benzene ring, at least one function capable of reacting with the carboxylic acid function of a unit of hyaluronic acid to form a bond covalent, for example an amide bond, and at least a crosslinkable function, in particular a reactive function X as defined above.
  • F represents a function capable of reacting with the carboxylic acid function of a hyaluronic acid unit to form a covalent bond, for example an amine function (-NH 2 );
  • Ar represents an aromatic ring, in particular benzene
  • R 1 represents a crosslinkable function, for example a reactive function X as defined previously, in particular an alkene function such as an ethenyl function.
  • the chain length of the spacer E depends on the nature of this spacer. It is more particularly adjusted to allow good availability and reactivity of the crosslinkable function, in particular of the reactive function X, when the modified hyaluronic acid polymer according to the invention is placed in the presence of a crosslinking agent as described above, without however being detrimental to the solubility of the modified hyaluronic acid according to the invention in an aqueous medium.
  • the spacer E can for example comprise, or even be formed, of a chain of the oligo(ethylene glycol) or poly(ethylene glycol) type, or else of the oligo(ethylene imine) or poly(ethylene imine) type.
  • Said oligo(ethylene glycol) or poly(ethylene glycol), oligo(ethylene imine) or poly(ethylene imine) chains may in particular have a number of ethylene oxide units (respectively ethyleneimine units) ranging from 2 at 20.
  • the spacer E can also comprise, or even be formed, of an oligopeptide composed of hydrophilic amino acids, such as for example glycine, serine, etc.
  • the nature of said spacer E is in no way limited to the aforementioned examples, and other spacers can be envisaged.
  • the grafts carrying at least one aromatic nucleus and a crosslinkable function can for example result from the grafting of a molecule of formula (II'-a) below: [Chem 4]
  • a group carrying at least one aromatic ring and at least one crosslinkable function can result from the grafting of 4-[(pent-4-ene-l-yloxy) methyl] aniline.
  • the crosslinkable functions can be carried by grafts distinct from the group(s) carrying function(s) -SO 3 - and/or aromatic nucleus(s).
  • the modified hyaluronic acid according to the invention may thus comprise, in addition to the groups described previously, in particular SO 3 -C + groups and groups carrying at least one aromatic ring, for example of a benzene nucleus, groups bearing at least one crosslinkable function, in particular a reactive function X as defined previously.
  • a group carrying at least one crosslinkable function can advantageously be grafted onto a carboxylic acid function of hyaluronic acid, for example via an amide bond.
  • F represents a function capable of reacting with the carboxylic acid function of a hyaluronic acid unit to form a covalent bond, for example an amine function (-NH 2 );
  • E represents an organic spacer, for example as defined for the molecules of formula (II-a);
  • R 1 represents a crosslinkable function, for example a reactive function X as defined above, in particular a function with ethylenic unsaturation(s) such as an ethenyl function.
  • E may for example comprise an oligo(alkylene glycol) or poly(alkylene glycol) (PAG) chain formed from 2 to 20 alkylene oxide units, for example ethylene oxide and/or propylene oxide , for example an oligo(ethylene glycol) or poly(ethylene glycol) (PEG) chain.
  • the grafts carrying at least one crosslinkable function can for example result from the grafting of a molecule of formula (II'-b) below: [Chem 6] with E being as previously defined.
  • a group carrying a crosslinkable function can result from the grafting of a molecule of the following formula [Chem 7] with m being an integer between 2 and 20, for example 11.
  • the degree of substitution of the carboxylic acid functions of a modified hyaluronic acid according to the invention by groups bearing a crosslinkable function, in particular a reactive function X as defined above can be between 0.05 and 0.5, in particular between 0.07 and 0.5 and more particularly between 0.1 and 0.5.
  • those skilled in the art are able to implement suitable coupling routes to proceed with the grafting of the desired groups at the level of hyaluronic acid, in particular with the desired degree of substitution.
  • the crosslinkable functions are carried by groups distinct from the grafts having aromatic rings, the grafting of the groups carrying at least one crosslinkable function and the grafting of the groups carrying at least one aromatic ring implement identical coupling reactions.
  • the grafts can be obtained from organic molecules possessing at least one aromatic group and from organic molecules possessing at least one crosslinkable function, as described above, these molecules further comprising at least one same function, for example a function amine, capable of reacting with a carboxylic acid function of hyaluronic acid to form a covalent bond. It is thus possible to proceed simultaneously with the grafting, in particular at the level of the carboxylic acid functions of the hyaluronic acid, of the groups bearing at least one aromatic nucleus, for example of a benzene nucleus, and of the groups bearing at least one least one crosslinkable function.
  • a modified hyaluronic acid polymer according to the invention may be of formula (I) as defined above, in which: - n represents the degree of polymerization of the hyaluronic acid, in other words, the number of repeating disaccharide units, in particular n, is between 45 and 2500, and more particularly between 90 and 700; - the R groups represent, independently of each other, a hydrogen atom or a -SO 3 -C + group, with C + representing a counter-ion of the anion -SO 3 -, for example chosen from cations alkaline and alkaline-earth, for example Na + , the R groups possibly being different from one repeating unit to another, provided that at least some of the R groups represent -SO 3 -C + groups; -
  • the modified hyaluronic acid polymer according to the invention may be of formula (I), in which the degree of sulfation, DS S , is between 1 and 4, in particular between 2 and 4, preferably between 3 and 4 and more preferably 4.
  • the modified hyaluronic acid polymer according to the invention may be of formula (I), in which the degree of substitution, DS Ar , of the carboxylic acid functions by groups carrying an aromatic ring is between 0.05 and 0.50, in particular between 0.10 and 0.40 and more particularly between 0.15 and 0.30.
  • the modified hyaluronic acid polymer according to the invention can be of formula (I), in which the degree of substitution of the carboxylic acid functions by groups carrying at least one crosslinkable function can be between 0.05 and 0.50, in particular between 0.07 and 0.50 and more particularly between 0.10 and 0.50. Examples of modified hyaluronic acid according to the invention, and of their synthesis, are presented in the examples which follow.
  • a modified hyaluronic acid polymer according to the invention can advantageously be implemented as a polyelectrolyte for polydioxythiophene type polymers obtained from one or more monomers chosen from EDOT (3,4-ethylenedioxythiophene), ProDOT (3,4-propylenedioxythiophene), and their derivatives.
  • EDOT 3,4-ethylenedioxythiophene
  • ProDOT 3,4-propylenedioxythiophene
  • the term “polymers of the PEDOT and/or PProDOT type” more simply designates the homopolymers and copolymers of monomers chosen from EDOT, ProDOT and their derivatives.
  • a modified hyaluronic acid polymer according to the invention can more particularly be used as a polyelectrolyte for the doping of polymers of the PEDOT type.
  • polymers of the PEDOT type (respectively of the PProDOT type) according to the invention, is meant the homopolymers and copolymers of monomers chosen from EDOT (respectively ProDOT), and its derivatives.
  • EDOT-type monomers denotes EDOT (respectively ProDOT) and its derivatives.
  • copolymer is meant a polymer obtained from at least two different monomers.
  • EDOT electrospray diffraction-diol
  • the EDOT or ProDOT derivative is functionalized with a hydrophilic group, making it possible to improve the solubility in water of the polymer of PEDOT and/or PProDOT type.
  • the EDOT or ProDOT derivative can be functionalized with a group comprising an oligo(ethylene glycol) or poly(ethylene glycol) chain.
  • EDOT or ProDOT may be an EDOT functionalized with a carboxylic acid group (“carboxy-EDOT”, as described for example in the publication [39]); by a group carrying a sulphonate group, for example an alkoxy-sulphonate group, for example methoxybutane-1-sulphonate (“EDOT-S”, as described for example in publications [40] and [41]); by a group bearing a thiol function, for example a —CH 2 —O—(CH 2 ) 3 —SH group (as described in publication [42]); by groups comprising a polyethylene glycol chain, for example of the —CH 2 —EG n —OH type, with EGn representing a chain formed from 1 to 20 ethylene glycol units (as for example
  • ProDOT derivatives As examples of ProDOT derivatives, mention may be made of a ProDOT functionalized on the carbon atom in the beta position of the oxygen atoms, by two alkenyl groups, for example allyl groups (“ProDOT-diene”), and the derivatives resulting from the reaction of “ProDOT-diene” with compounds bearing a terminal thiol function (R-SH), as described in publication [47].
  • the polymers of the PEDOT and/or PProDOT type according to the invention are more particularly homopolymers and copolymers formed from starting from one or more monomers chosen from the monomers of the EDOT type of formula (M1) below and the monomers of the ProDOT type of formula (M2) below: [Chem 8] in which x is equal to 0 (case of EDOT) or x is an integer between 1 and 4, in particular x is equal to 1 (a single substitution); and R 2 , which are identical or different, are chosen from the substituents as described previously, in particular groups carrying at least one carboxylic acid or eth
  • the modified hyaluronic acid according to the invention is used for the doping of a (co)polymer of the PEDOT type, in particular formed from one or more monomers of the EDOT type of formula (M1) above.
  • the modified hyaluronic acid according to the invention is used for the doping of a (co)polymer of the PProDOT type, in particular formed from one or more monomers of the ProDOT type of formula (M2) mentioned above.
  • the modified hyaluronic acid according to the invention is used for the doping of a copolymer of the PEDOT-PProDOT type, in particular formed from one or more monomers of the EDOT type of formula (M1) above and one or more monomers of the ProDOT type of formula (M2) above.
  • a modified hyaluronic acid according to the invention with a polymer of the PEDOT and/or PProDOT type can be obtained by polymerization of the monomers of the EDOT and/or ProDOT type, in the presence of a polymer of modified hyaluronic acid according to the invention, as described above.
  • the combination of a modified hyaluronic acid according to the invention with a polymer of the PEDOT and/or PProDOT type can be obtained by oxidative polymerization of the monomers of the EDOT and/or ProDOT type, in an aqueous medium comprising at least one modified hyaluronic acid polymer according to the invention.
  • the polymerization can be carried out in a solution of at least one modified hyaluronic acid polymer according to the invention in an aqueous medium.
  • An aqueous suspension of PEDOT/PProDOT:HA modified according to the invention is then obtained.
  • the polymerization can be carried out in a hydrogel swollen in an aqueous medium based on hyaluronic acid modified according to the invention already crosslinked, or even within an aqueous suspension , simultaneously with the crosslinking of the modified hyaluronic acid polymer according to the invention.
  • a hydrogel based on PEDOT/PProDOT:HA modified according to the invention is then obtained.
  • Ink The invention thus relates, according to one of its aspects, to an aqueous suspension comprising at least one polymer of the PEDOT and/or PProDOT type associated with at least one modified hyaluronic acid according to the invention.
  • Such an aqueous suspension is more commonly designated by the name “ink”.
  • the invention also relates, according to another of its aspects, to a method for preparing an ink according to the invention, in which monomers of the EDOT and/or ProDOT type are polymerized in a solution comprising at least one acid polymer modified hyaluronic acid according to the invention in an aqueous medium. It is up to those skilled in the art to adjust the operating conditions for the preparation of an ink according to the invention.
  • the polymerization of EDOT and/or ProDOT type monomers can be carried out, for example, in the presence of an oxidant, for example iron sulphate (Fe 3+ ) and catalyzed by persulphate, as described for the synthesis of poly(3, 4-ethylenedioxythiophene): dextran sulfate (PEDOT: DS) by Harman et al. ([23]).
  • the aqueous medium may for example be formed from a mixture of water and one or more organic solvents, for example a mixture of water and acetonitrile.
  • the EDOT and/or ProDOT type monomers will be linked to the modified hyaluronic acid chain according to the invention. via weak interactions of the electrostatic and hydrophobic type and “ ⁇ - ⁇ stacking” interactions, the polymer of the PEDOT and/or PProDOT type, obtained at the end of the polymerization, thus being bound to the modified hyaluronic acid via these weak interactions .
  • said EDOT and/or ProDOT type monomers and the said modified hyaluronic acid polymer(s) according to the invention are used in a molar ratio between the EDOT and/or ProDOT monomers and the hyaluronic acid units.
  • modified hyaluronic acid between 0.5 and 5, in particular between 1 and 4, more particularly between 1.5 and 4.
  • An ink according to the invention may comprise a mass content of modified PEDOT/PProDOT:HA, in particular in modified PEDOT:HA, between 1 and 6% by mass (10 to 60 g/L), in particular between 2 and 6% by mass (20 to 60 g/L) and more particularly between 3 and 4.5% by mass ( 30 to 45 g/L). It is possible to freeze-dry an ink according to the invention. The freeze-dried ink can then be redispersed in a solvent, for example an aqueous solvent, for its implementation, for example to form hydrogels as described in the following text.
  • a solvent for example an aqueous solvent
  • the ink comprises at least one polymer of the PEDOT and/or PProDOT type, in particular of the PEDOT type, doped with a modified hyaluronic acid according to the invention, carrying crosslinkable functions, in particular reactive functions X as defined previously, for example functions containing ethylenic unsaturation(s) such as ethenyl functions.
  • the ink according to the invention is advantageously crosslinkable. It can thus be implemented for the formation of hydrogels as detailed in the following text.
  • the invention also relates to materials based on at least one polymer of the PEDOT and/or PProDOT type, in particular as defined above, doped with at least one polymer of modified hyaluronic acid according to the invention. It relates more particularly to a hydrogel based on at least one polymer of the PEDOT and/or PProDOT type, in particular as defined above, in particular of the PEDOT type, doped with at least one modified hyaluronic acid polymer, carrying crosslinkable functions. as defined previously and/or having free carboxylic acid functions.
  • a hydrogel is formed from a three-dimensional network based on polymers.
  • a hydrogel swollen in an aqueous medium may comprise a mass content of aqueous liquid phase ranging from 5 to 99% by mass, in particular from 10 to 99% by mass and more particularly from 20 to 99% by mass.
  • a so-called “dry” hydrogel results from the elimination of the aqueous liquid phase of a wet hydrogel.
  • a dry hydrogel can more particularly comprise less than 20% by mass, in particular less than 10% by mass, of liquid phase.
  • a hydrogel according to the invention can be prepared from a crosslinkable ink according to the invention, as described above, based on polymer(s) of the PEDOT and/or PProDOT type, in particular of PEDOT type, doped(s) with at least one hyaluronic acid modified according to the invention and carrying crosslinkable functions and/or having free carboxylic acid functions, preferably carrying crosslinkable functions.
  • a hydrogel based on modified PEDOT/PProDOT:HA according to the invention, in particular based on modified PEDOT:HA, can thus be obtained by carrying out the crosslinking of an ink according to the invention.
  • a modified PEDOT/PProDOT:HA-based hydrogel according to the invention, in particular based on modified PEDOT:HA can be prepared via at least the steps consisting of: (ai) have a crosslinkable ink, comprising at least one polymer of the PEDOT and/or PProDOT type, in particular of the PEDOT type, doped with at least one modified hyaluronic acid polymer according to the invention and carrying crosslinkable functions and/or having free carboxylic acid functions, preferably carrying crosslinkable functions; (a-ii) subjecting said ink to conditions conducive to the cross-linking of said modified hyaluronic acid chains to form a swollen hydrogel in an aqueous medium; and, optionally, (a-iii) subjecting said
  • a hydrogel according to the invention can be prepared by polymerization of monomers of the EDOT and/or ProDOT type, in particular of the EDOT type, in a hydrogel formed beforehand from at least a modified hyaluronic acid polymer carrying crosslinkable functions according to the invention and/or having free carboxylic acid functions, preferably carrying crosslinkable functions.
  • a hydrogel based on modified PEDOT/PProDOT:HA according to the invention in particular based on modified PEDOT:HA, can be prepared via at least the steps consisting of: (bi) have a hydrogel, swollen in an aqueous medium, formed from at least one modified hyaluronic acid polymer according to the invention and carrying crosslinkable functions and/or having free carboxylic acid functions, preferably carrying crosslinkable functions ; (b-ii) proceed with the polymerization of monomers of the EDOT and/or ProDOT type, in particular of the EDOT type, in the said hydrogel, swollen in an aqueous medium, based on modified hyaluronic acid; and eventually (b-iii) subjecting said hydrogel obtained at the end of step (b-ii) to a drying step to obtain a dry hydrogel.
  • the hydrogel based on at least one modified hyaluronic acid according to the invention, implemented in step (bi) of the process of the invention is more particularly obtained beforehand by subjecting a solution of at least one modified hyaluronic acid according to the invention and carrier of at least crosslinkable functions and/or having free carboxylic acid functions, preferably carrier of crosslinkable functions, in an aqueous medium, under conditions favorable to the crosslinking of said modified hyaluronic acid chains for forming a swollen hydrogel in said aqueous medium.
  • the aqueous medium may be as described previously for an ink according to the invention.
  • stage (b-ii) of monomers of the EDOT and/or ProDOT type, in particular of the EDOT type, in a hydrogel based on modified hyaluronic acid can be carried out more particularly by soaking the swollen hydrogel in an aqueous medium based on modified HA according to the invention, of said monomer of EDOT and/or ProDOT type, in particular of EDOT type, then by subjecting said hydrogel based on modified HA soaked with said monomers of EDOT and/or ProDOT type, in particular of EDOT type, under conditions favorable to the polymerization of said monomers of EDOT and/or ProDOT type, in particular of EDOT type.
  • the hydrogel soaked with at least said monomers of the EDOT and/or ProDOT type can be obtained, for example, via the following intermediate steps: - formation, from the hydrogel swollen in an aqueous medium based on modified hyaluronic acid, of a dry hydrogel, for example by bringing the hydrogel under conditions conducive to the gelation of the aqueous medium, followed by the elimination of the aqueous medium by evaporation, by freeze-drying or by supercritical drying; and - immersion of said dry hydrogel in a solution of at least one monomer of EDOT and/or ProDOT type, in particular of EDOT type, in an aqueous medium, for example in a mixture of water and acetonitrile; to obtain said hydrogel swollen in aqueous medium and soaked with said monomers of EDOT and/or ProDOT type, in particular of EDOT type.
  • the polymerization in step (b-ii) of said monomers of the EDOT and/or ProDOT type, in particular of the EDOT type, in the aqueous hydrogel can be carried out under conditions such as previously described for the polymerization, in aqueous solution, of EDOT and/or ProDOT type monomers, in the context of the preparation of an ink according to the invention.
  • the polymerization of monomers of the EDOT and/or ProDOT type, in particular of the EDOT type, in the aqueous hydrogel can for example be carried out in the presence of an oxidant, for example iron sulphate (Fe 3+ ) and catalyzed by persulfate.
  • an oxidant for example iron sulphate (Fe 3+ ) and catalyzed by persulfate.
  • the hydrogel based on modified hyaluronic acid once soaked with said monomers of the EDOT and/or ProDOT type, in particular of the EDOT type, can be immersed in an aqueous solution containing at least the said oxidant and the said catalyst.
  • the hydrogel obtained at the end of step (b-ii) is thus based on modified PEDOT/PProDOT:HA, in particular based on modified PEDOT:HA.
  • crosslinking conditions in particular of a physical or chemical nature, naturally depend on the nature of the crosslinkable functions carried by the modified hyaluronic acid.
  • various crosslinking routes can be envisaged, provided that they make it possible to lead to the formation of a hydrogel.
  • the crosslinking involves the establishment of covalent chemical bonds between the chains of modified hyaluronic acid.
  • a hydrogel is formed from at least two distinct modified hyaluronic acid polymers, said modified hyaluronic acid polymers according to the invention having distinct crosslinkable functions, denoted X and Y, as described above.
  • said crosslinkable functions X and Y may be capable of reacting together to form a covalent bond.
  • the crosslinkable functions X and Y can respectively be an aldehyde or ketone function, and an amine function such as a hydroxylamine or hydrazide function, said X and Y functions being capable of reacting together to form imine bonds, in particular oxime or hydrazone bonds.
  • the crosslinkable functions X and Y can also be, for example, respectively a thiol function and a methacrylate or acrylate function, said X and Y functions being capable of reacting together according to a Michael-type addition reaction.
  • crosslinkable functions X and Y can also be, for example, respectively a flat vicinal diol function and a boronic acid function, for example phenylboronic acid, said X and Y functions being capable of reacting together according to a dynamic covalent coupling reaction.
  • the invention is in no way limited to the aforementioned crosslinking routes, and other crosslinking routes can be envisaged, for example via crosslinkable functions capable of establishing physical interactions, as described previously.
  • a hydrogel is formed from a single polymer of hyaluronic acid modified according to the invention and bearing at least crosslinkable functions .
  • said crosslinkable functions can react with each other, as is the case for example with tyramine functions, said chains of modified hyaluronic acid according to the invention then being capable of self-crosslinking by coupling ( dimerization) oxidizing tyramine functions in the presence of H 2 O 2 and HRP.
  • the crosslinkable functions of said modified hyaluronic acid polymer according to the invention may be X-reactive functions, as defined previously, crosslinkable in the presence of a crosslinking agent.
  • crosslinking agent an organic molecule carrying at least two reactive functions, said molecule being able to allow, for example under the action of an external stimulation, in particular under the action of heat and/or UV radiation, the crosslinking of said modified hyaluronic acid chains according to the invention, by reaction with said crosslinkable functions of said modified hyaluronic acid. It falls within the competence of those skilled in the art to choose a crosslinking agent suitable for allowing the crosslinking of the polymer chains of modified hyaluronic acid according to the invention. The nature of the crosslinking agent is also likely to influence the mechanical properties of the hydrogel formed at the end of the crosslinking.
  • the cross-linking agent is biocompatible, hydrolyzing under physiological conditions.
  • the solution or suspension from which the hydrogel is formed for example the ink based on PEDOT/PProDOT:HA modified in step (a-i) according to the first variant of preparation of a hydrogel based on PEDOT/PProDOT:HA modified according to the invention, is supplemented with at least one crosslinking agent and, optionally , at least one photoinitiator compound.
  • the modified hyaluronic acid according to the invention can be functionalized with X-reactive functions as described above, in particular functions with ethylenic unsaturation(s), for example ethenyl functions.
  • the crosslinking agent may be an organic molecule possessing at least two reactive functions, in particular two to four reactive functions, for example two reactive functions, denoted Y, the functions X and Y being identical or different, each of the functions Y being capable of reacting with a reactive function X of said modified hyaluronic acid polymer according to the invention, to form a physical or chemical bond, preferably a covalent chemical bond, in particular under the action heat and/or UV radiation and, optionally, in the presence of at least one photoinitiator compound.
  • the Y functions can be, for example, thiol functions (-SH), capable of reacting with X functions of the alkene type, in particular ethylene, carried by the modified hyaluronic acid according to the invention, to form covalent bonds (so-called crosslinking "thiol-ene").
  • thiol functions -SH
  • X functions of the alkene type in particular ethylene
  • crosslinking thiol-ene
  • crosslinking agent used according to the invention may be of the following formula (III):
  • the organic spacer group E' can be an aliphatic group, linear or branched, in particular comprising from 2 to 1000 carbon atoms, and optionally comprising one or more unsaturations and/or one or more heteroatoms, and optionally substituted by one or more functions hydroxyl.
  • bifunctional crosslinking agent mention may be made of molecules formed of an oligo or poly(alkylene glycol) (PAG) chain, for example oligo or poly(ethylene glycol), carrying at each of its ends thiols (HS-PAG-HS).
  • the PAG chain of the crosslinking agent can be formed from 2 to 250, in particular from 5 to 100, units of alkylene oxides, in particular ethylene oxide.
  • crosslinking agents carrying two to four thiol functions, of dithiothreitol (DTT), tris(mercaptoacetate)trimethylolpropane, pentaerythritol tetrakis(mercaptoacetate) or else pentaerythritol tetrakis(3-mercaptopropionate).
  • DTT dithiothreitol
  • Said molecule or molecules, used as a crosslinking agent may be commercially available. Alternatively, they can be obtained prior to their implementation in a process according to the invention.
  • the said crosslinking agent or agents are used in an amount such that the molar ratio between the Y functions of the crosslinking agent and the X functions of the modified hyaluronic acid is less than or equal to 1, in particular between 0.5 and 1 and preferably strictly less than 1.
  • the crosslinking can be activated by an external stimulus, for example by heat (thermo-activated crosslinking) and/or under radiation (photo-activated crosslinking). activated).
  • said crosslinking agent can be implemented in the solution or suspension comprising at least said modified hyaluronic acid polymer according to the invention, from which is formed a hydrogel, for example in the ink based on modified PEDOT/PProDOT:HA of step (a-i) according to the abovementioned first variant, together with at least one photoinitiator compound.
  • the “thiol-ene” crosslinking can be photo-activated in the presence of a photo-initiator, such as lithium phenyl-2,4,6-trimethylbenzoylphosphinate.
  • thermo or photo-crosslinking conditions in particular in terms of power and duration of heating or irradiation with UV radiation, to obtain sufficient crosslinking allowing access to the desired hydrogel.
  • the invention is in no way limited to this particular mode of crosslinking by photoactivated "thiol-ene" chemistry.
  • other crosslinking routes can be implemented, as mentioned above.
  • the crosslinking of said modified hyaluronic acid chains according to the invention can be carried out, in the absence of grafting of crosslinkable functions at the level of the modified hyaluronic acid chain, from the carboxylic acid functions free from the modified hyaluronic acid according to the invention.
  • free carboxylic acid function is meant a carboxylic acid function (- C(O)OH), optionally in the form of carboxylate salt -C(O)OC + where C + represents a counterion, in particular chosen from cations alkaline and alkaline-earth, for example Na + .
  • the crosslinking of the modified hyaluronic acid chains according to the invention can be carried out more particularly in the presence of a crosslinking agent having at least two functions of primary amine or hydrazide type, in particular two functions of primary amine or hydrazide type; said functions being capable of interacting with free carboxylic acid functions by a coupling reaction activated using an activating agent, to form amide bonds.
  • a crosslinking agent carrying two hydrazide functions mention may be made of adipic acid dihydrazide (ADH), the latter being particularly advantageous given its biocompatibility.
  • the activating agent for activating the amide coupling reaction can be, for example, N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC).
  • EDC N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride
  • a hydrogel according to the invention can be prepared by carrying out, simultaneously, the polymerization of the monomers of the EDOT and/or ProDOT type, in particular of the EDOT type, and the crosslinking of the said modified hyaluronic acid polymer and carrier of free carboxylic acid functions.
  • a modified PEDOT/PProDOT:HA-based hydrogel according to the invention in particular based on modified PEDOT:HA, can be prepared via at least the steps consisting of: (ci) have an aqueous suspension comprising at least monomers of the EDOT and/or ProDOT type, at least said modified hyaluronic acid polymer having free carboxylic acid functions, at least one catalyst for the polymerization of the monomers of the EDOT and/or ProDOT, especially persulfate; and at least one crosslinking agent; (c-ii) subjecting said suspension to conditions favorable to the polymerization of said EDOT and/or ProDOT type monomers and to the crosslinking of said modified hyaluronic acid chains to form said
  • the crosslinking agent used has at least two functions of primary amine or hydrazide type, in particular two functions of primary amine or hydrazide type, preferably ADH.
  • the crosslinking of said chains in step (c-ii) can be initiated by adding to said suspension an agent for activating the carboxylic acid functions, such as EDC.
  • the aqueous suspension implemented to simultaneously operate the polymerization of said EDOT and/or ProDOT type monomers and the crosslinking of said modified hyaluronic acid chains, preferably has a low pH, for example less than or equal to 5.
  • the formation of the hydrogel swollen in an aqueous medium based on PEDOT/PProDOT:HA modified according to the invention, according to one or the other of the aforementioned variants, can be followed by at least a drying step, total or partial, making it possible to eliminate at least in part the aqueous solvent medium present in the hydrogel.
  • the elimination of the solvent medium is advantageously carried out under conditions making it possible to preserve the structure and the cohesion of the hydrogel obtained at the end of the crosslinking.
  • the hydrogel swollen in an aqueous medium can for example be dried at ambient temperature. “Room temperature” means a temperature of 20°C ⁇ 5°C.
  • the dry hydrogel formed in particular in the form of a film, is able to swell when it is brought into contact with an aqueous medium to reform a swollen hydrogel in an aqueous medium.
  • the solution or suspension comprising at least said modified hyaluronic acid polymer according to the invention, from which a hydrogel is formed, for example the ink based on modified PEDOT/PProDOT:HA of step (ai) according to the aforementioned first variant can be shaped, prior to the crosslinking step, to obtain a hydrogel having the desired shape and dimensions.
  • the modified PEDOT/PProDOT:HA-based hydrogel according to the invention formed at the end of one or other of the process variants described above, optionally after drying, can thus be of varied shape and size, in depending in particular on the application for which it is intended.
  • the solution or suspension based on modified hyaluronic acid polymer(s) according to the invention for example the ink based on modified PEDOT/PProDOT:HA according to the invention, can be crosslinked in a container, “mould”, having the desired shape and dimensions for the final hydrogel.
  • the hydrogel, swollen in an aqueous or dry medium can be in the form of a film.
  • the film can be formed on the surface of a substrate then, optionally separated from said substrate to form a self-supported conductive hydrogel film.
  • the suspension or solution in step (ai), (bi) or (c-i) based on modified hyaluronic acid polymer(s) according to the invention for example the ink based on PEDOT/PProDOT:HA modified according to the aforementioned first variant, can be applied, before crosslinking, to the surface of a substrate, advantageously on determined areas of the surface of a substrate, so as to create the desired pattern and dimensions for the final conductive hydrogel film.
  • the substrate refers to a solid basic structure, on one of the faces of which is deposited the solution or suspension based on modified HA according to the invention, for example a conductive ink according to the invention. It can be of various shapes and dimensions depending on the application for which it is intended. It can for example be in the form of a flat surface, structured or not, or else a 3D object, for example in the form of micropillars, grids, fibers, etc.
  • the substrate can be of varied nature, rigid or flexible. It may be a ceramic support, for example glass, alumina, porcelain; metal, for example stainless steel, copper, aluminum, or even plastic.
  • the process according to the invention can be implemented for rigid or flexible polymer supports.
  • the carrier can be PET (polyethylene terephthalate), PEN (polyethylene naphthalate), polycarbonate, poly(urethane), poly(saccharide) (cellulose, nanocellulose, chitosan films), protein material (fibers collagen, for example).
  • the support can also be a structured 3D material in the form of micropillars, grids, fibers, for example fibers obtained by electrospinning or others (poly(caprolactone), PVA (polyvinyl alcohol), silk fibroins, etc.), cellulose aerogels.
  • the hydrogel based on modified PEDOT/PProDOT:HA according to the invention in particular based on modified PEDOT:HA, can for example be formed, in particular in the form of a film, directly on the surface of the substrate of interest, for example to form a surface coating of an electrode of a bioelectronic device.
  • the modified HA-based solution or suspension according to the invention for example the ink based on modified PEDOT/PProDOT:HA according to the invention, in particular based on modified PEDOT:HA, can be applied by any known technique. of the skilled person.
  • the application of the solution or suspension to the surface of the substrate can be carried out, for example, by coating, by ink-jet printing, by deposition by nebulization (“spray-coating” in English), by screen printing, by immersion, etc. .
  • the thickness of the deposit of the solution or suspension, in particular of the ink based on modified PEDOT/PProDOT:HA, in particular based on modified PEDOT:HA, on the surface of the substrate can be variable. For example, it may be between 0.1 and 500 ⁇ m, in particular between 1 and 300 ⁇ m.
  • the hydrogel, in particular in the form of a film, formed according to the invention on the surface of a substrate can be covalently bonded (or “grafted”) to the surface of the substrate.
  • the surface of the substrate, intended to support the hydrogel according to the invention may have Y functions, in particular as described previously, for example labile hydrogen functions such as thiol functions capable of reacting with crosslinkable functions X, for example alkene functions, carried by the modified hyaluronic acid according to the invention.
  • the hydrogel film can thus be bonded to the surface of the substrate via the establishment of covalent bonds between said crosslinkable functions X carried by the modified hyaluronic acid, and said Y functions present at the surface of the substrate intended to support the hydrogel .
  • the surface of the substrate intended to support the hydrogel according to the invention, can be subjected to a preliminary treatment to generate said Y functions, in particular labile hydrogen functions, for example said thiol functions.
  • the ink and the materials, in particular the hydrogels, formed based on modified PEDOT/PProDOT:HA according to the invention, in particular based on modified PEDOT:HA find particularly interesting applications in the field biomedical, in particular for the design of bioelectronic devices and biosensors intended to be brought into contact with biological material, for example intended to be implanted in vivo, for example for the monitoring or stimulation of biological tissues.
  • the inks and materials, in particular hydrogels, formed according to the invention are advantageously implemented in bioelectronic devices for serve as an interface with biological tissues, for example to provide support for cell adhesion, multiplication and growth.
  • the ink and materials derived from the ink are biocompatible (or cytocompatible).
  • biocompatible it is meant that the ink and the materials derived from the ink, such as hydrogels, are capable of being in contact with biological cells without degrading said cells. They are also advantageously biodegradable.
  • biodegradable is meant, within the meaning of the present application, a material capable of being resorbed, absorbed, and/or degraded by the tissues or leached from the site of implantation and disappearing in vivo after a certain time, which may vary , for example, from a few hours to a few months.
  • the ink and the materials, in particular hydrogels, formed based on modified PEDOT/PProDOT:HA according to the invention advantageously exhibit good electrical conductivity, in particular under physiological conditions (pH 7.4 in an aqueous medium), without requiring additional treatment or doping. They can thus have a conductivity greater than or equal to 0.1 S/cm, in particular greater than or equal to 1 S/cm.
  • the conductivity can be measured according to methods known to those skilled in the art. For example, as described in example 5 which follows, the conductivity of a hydrogel film according to the invention can be deduced from the resistivity measurement of the film, for example by using a 4-point resistivity meter.
  • the hydrogels formed according to the invention based on the complex of polymer(s) of the PEDOT and/or PProDOT type doped(s) with a modified hyaluronic acid according to the invention also exhibit excellent stability in water or in a buffered saline medium.
  • the hydrogels formed according to the invention exhibit excellent mechanical performance, in particular good viscoelastic properties. They can have a high modulus of elasticity, also called Young's modulus. In particular, the modulus of elasticity can be between 100 Pa and 1 MPa, in particular between 300 Pa and 500 kPa.
  • the viscoelastic properties of a hydrogel formed according to the invention can be studied by rheological measurements in dynamic mode (determination of storage (G') and loss (G'') moduli as a function of frequency). Young's modulus can be determined by compression tests. Due to their excellent viscoelastic properties, the hydrogels formed according to the invention are easily conformable, in particular conformable to biological tissues. They can thus form interfaces for bioelectronic devices, for example implants, conformable to biological tissues, in other words being able to take the shape or the geometry of the biological tissue with which it is intended to be brought into contact. Their water-rich nature and their mechanical properties similar to those of biological tissues make the hydrogels according to the invention ideal interfaces with biological tissues for bioelectronic devices.
  • the materials according to the invention thus provide a close interface between the implant and the tissue site. They can for example be implemented as a coating for implanted electrodes, for example intracranial electrodes, or even to form microelectrodes.
  • the invention will now be described by means of the following examples and figures, given of course by way of non-limiting illustration of the invention. Example In the following examples, the following abbreviations are used.
  • HA hyaluronic acid
  • NaHA sodium hyaluronate
  • HA-TBA tetrabutylammonium hyaluronate salt
  • TBA tetrabutylammonium
  • HAS sulfated hyaluronic acid.
  • Example 1 Preparation of a modified hyaluronic acid according to the invention bearing sulphate groups and grafts comprising an aromatic nucleus (HAS 4 -PBA 0.3 ) 1.1.
  • Sulfation of sodium hyaluronate (NaHA) In a first step, the sulfation of NaHA is carried out via the substitution of the hydroxyl functions of the HA by sulfates. Sulfation of HA is carried out according to a protocol adapted from the literature ([24]-[29]); it proceeds in three stages, as shown schematically below: formation of the tetrabutylammonium hyaluronate (HA-TBA) salt, sulfation reaction and purification.
  • HA-TBA tetrabutylammonium hyaluronate
  • HA-TBA 1 g of NaHA was dissolved in 300 mL of water.
  • the NaHA solution was eluted through 50 g of neutralized Amberlite ® IR-120 resin and in the H + form, drop by drop without applying pressure.
  • the resin was rinsed with 100 mL of water.
  • the final pH was verified to be around 2.7-2.9.
  • 2 g of tetrabutylammonium hydroxide (TBA-OH) was diluted in 10 mL of water, and added dropwise to the hyaluronic acid solution until the pH is close to 4.2-4.3.
  • TSA-OH tetrabutylammonium hydroxide
  • the degree of sulfation DS sulfation (also denoted DS s ) of the sample is defined as the average number of sulfate per repeat unit of hyaluronic acid.
  • sulfate replaces the hydroxyl functions of hyaluronic acid
  • the degree of sulfation DSs can range from 0 to 4.
  • barium chloride BaCl 2
  • the calibration curve was established by mixing 40, 60, 80 or 100 ⁇ L of Na 2 SO 4 at 0.59 g/L, adjusting to 100 ⁇ L with 1M HCl if necessary, then adding 700 ⁇ L of a solution of TCA 30 g/L and 200 ⁇ L of a solution of 5 g/L of gelatin+5 g/L of BaCl 2 .
  • the blank was prepared by mixing 100 ⁇ L of 1M HCl + 700 ⁇ L of 30 g/L TCA + 200 ⁇ L of 5 g/L gelatin (without BaCl 2 ).
  • the glucuronic acid mass fraction of the sample was analyzed using a colorimetric method adapted from the literature [31], [32] (Each repeating unit of hyaluronic acid contains one glucuronic acid).
  • the day before the analysis sodium tetraborate (Na 2 B 4 O 7 ) at 25 mM in concentrated sulfuric acid and 7.48 mM of carbazole in anhydrous ethanol were prepared (the carbazole solution is left overnight in the refrigerator, and the tetraborate solution is left overnight in the oven at 40°C). No magnetic bar was introduced to avoid contamination.
  • 0.7-1 mg of sample were dissolved in 1.5 mL of water, then 40 ⁇ L are taken and introduced into a 4 mL vial.
  • the volume was adjusted up to 200 ⁇ L with water.
  • the calibration curve was established by preparing four different vials containing 5, 15, 25 and 40 ⁇ g of NaHA 100 kg/mol in 200 ⁇ L of water. In all the vials (sample and calibration), 800 ⁇ L of Na2B4O7 were added. The vials were vortexed, heated for 10 minutes at 100° C. in an oil bath and cooled in water for 15 minutes. 200 ⁇ L of carbazole solution was added. The vials were vortexed, heated for 10 minutes at 100°C in an oil bath and cooled in water for 15 minutes. Absorbance was measured at 530 nm. The degree of sulfation was calculated using the following equation.
  • HAS sulfated hyaluronic acid
  • the degradation of sulfated hyaluronic acid according to the invention by hyaluronidase, at 37° C. is compared with that of unmodified hyaluronic acid according to the following protocol.
  • the solution is filtered through 0.2 ⁇ m then incubated at 37° C. with stirring.
  • the samples are heated for 10 min at 100°C to denature the enzyme, cooled to room temperature, then diluted to 0.7 g/L by adding a 0.1 M NaNO 3 solution.
  • the samples are then analyzed by size exclusion chromatography (Waters GPC Alliance chromatograph, Parsippany, NJ, USA), equipped with a differential refractometer and a light scattering detector (MALLS) (Wyatt Technology, Goleta, CA , USA).
  • MALLS light scattering detector
  • the samples are injected at 0.7 g/L, eluted at 0.5 mL/min in 0.1 M NaNO 3 /0.005 M NaN 3 .
  • the mobile phase and the samples are first filtered on 0.1 ⁇ m before being injected.
  • the dn/dc value used is 0.1551, which corresponds to the dn/dc value of hyaluronic acid reported in the literature.
  • HAS sulfated hyaluronic acid
  • Molar mass measurement protocol Molar mass distribution and weight average molar mass of sulfated hyaluronic acids were determined by size exclusion chromatography (SEC) using a differential refractometer and a light scattering detector (MALS) (from Wyatt Technology, Santa Barbara, USA). The samples were injected at a concentration of 0.7 mg/mL in 0.1 M NaNO 3 /0.005 M NaN 3 , at a flow rate of 0.5 mL/min and at a column temperature of 30°C. Samples and mobile phases were filtered through 0.1 ⁇ m before being injected into the column.
  • SEC size exclusion chromatography
  • MALS light scattering detector
  • HA alone degrades rapidly in the presence of hyaluronidase at a concentration of 1000 U/mL (MW f /MW i ⁇ 0.025 in 24 hours)
  • HA without hyaluronidase is stable, with 18% degradation in three months (MW f /MW i ⁇ 0.82).
  • all the samples show a degradation of about 40 ⁇ 10% in two weeks (MW f /MW i
  • the medium was dialyzed by ultrafiltration versus reverse osmosis water using of a 10 kDa ultrafiltration membrane, until the conductivity of the filtered water is less than 7-8 ⁇ S/cm.
  • the HSA 4 -PBA 0.3 solution was lyophilized.
  • the analysis of the degree of substitution of PBA (DSPBA) was carried out by 1 H NMR integration: the integration of the peak at 2.09 ppm corresponding to the N-acetyl protons of HA is normalized to 3.
  • the degree of substitution DS PBA calculated according to the following equation, is approximately 0.3.
  • HAS 4 -PBA 0.3 The modified hyaluronic acid thus obtained, denoted “HAS 4 -PBA 0.3 ”, was recovered with a yield greater than 90%, and a total yield from the HA of approximately 50%.
  • HAS 4 -PBA 0.3 PEDOT is formed by oxidative polymerization from EDOT monomers, as shown schematically below.
  • 713.9 mg of ammonium persulfate (APS) (1.33 eq) were dissolved in 16.1 mL of a mixture water:MeCN 9:1 (or 8:2 respectively) v:v degassed and cold, then added dropwise over 1 hour to the medium using a syringe pump.
  • the medium was stirred for 4 hours at 4°C under nitrogen, then at ambient temperature until the end of the polymerization (the polymerization is considered complete when the pH is stable, below or approximately 1.1-1.3 , usually after 18-24 hours).
  • the reaction was stopped by adding 32 mL of water, then the medium was dialyzed against osmosed water with a 6-8 kDa membrane, changing the bath every 4 to 10 hours until the conductivity of water is less than 8 ⁇ S. Then, the pH was adjusted to 7.40, then the reaction medium homogenized at 10,000 rpm for 10 minutes using an IKA Ultra Turrax® disperser. The PEDOT:HAS 4 -PBA 0.3 solution was then lyophilized. The ink was recovered with a yield of between 85 and 90%. Conductivity measurements Deposition of an ink film on glass slides Glass slides were washed with acetone and ethanol, then activated by O 2 plasma (450 sccm, 200 W, 500 s) .
  • the freeze-dried PEDOT:HAS 4 -PBA 0.3 ink was dissolved in water at 13 g/L and then vortexed. No additional processing was applied. This concentration was chosen to correspond to the PEDOT:PSS concentration of the commercial conductive ink CleviosPH1000 ® . 60 ⁇ l of the suspension were deposited on a glass slide inside a silicone ring of 1 cm internal diameter serving as a removable well and dried at ambient temperature. Conductivity Measurements The thickness of the ink film, denoted h, was measured with a Dektak DXT profilometer from Brüker.
  • the resistivity of the film was determined using the 4-point probe marketed by Ossila (Power Cord Type, Sheffield, England), over a wide voltage and current range to certify the ohmic behavior.
  • the conductivity was calculated according to the following equation: [Math 4] with c being the geometric correction coefficient determined by the software.
  • the conductivity was measured in several areas of the film and then averaged.
  • Figure 2 schematizes the steps of the conductivity measurement protocol. Under these conditions, without other modifications, the PEDOT:HAS 4 -PBA 0.3 ink has a conductivity of up to 2.18 S/cm. By way of comparison, CleviosPH1000 ® ink has a conductivity of 0.11 S/cm.
  • Example 3 Preparation of a modified hyaluronic acid according to the invention bearing sulfate groups, grafts comprising an aromatic nucleus and grafts having a crosslinkable function (HSA 4 -PBA 0.3 -PEGène 0.16 ), and PEDOT ink: HSA 4 -PBA 0.3 -PEGene 0.16
  • HSA 4 -PBA 0.3 -PEGene 0.16 Preparation of modified hyaluronic acid HSA 4 -PBA 0.3 -PEGene 0.16 Synthesis of the molecule to be grafted carrying a crosslinkable function
  • the synthesized molecule, of formula (G1) below, is denoted AP-HN-(PEG) 11 -NH 2 and designated more simply hereinafter “PEGene” with reference to the poly(ethylene glycol) chain and to the terminal ethenyl function.
  • the product was purified by ultrafiltration versus osmosed water, using a membrane of ultrafiltration 10 kDa, until the conductivity of the filtered water is less than 7-8 ⁇ S/cm.
  • the “HSA 4 -PBA 0.3 -PEGene 0.16 ” modified hyaluronic acid solution was frozen in liquid nitrogen and freeze-dried.
  • the analysis of the degree of substitution in PEGene molecules was carried out by 1 H NMR integration: the integration of the signal at 2.09 ppm corresponding to the protons of the N-acetyl group of HA is normalized to 3.
  • the degree of substitution DS PEGène calculated according to the equation [Math 5] is about 0.16.
  • the degree of DS PBA substitution is about 0.3.
  • the HSA4-PBA0.3-PEGène 0.16 modified hyaluronic acid was recovered with a yield greater than 90%, and a total yield from the initial HA of approximately 50%.
  • Example 4 Synthesis of a modified hyaluronic acid according to the invention bearing sulphate groups and grafts comprising both an aromatic nucleus and a crosslinkable function (HSA 4 -ArEne 0.30 )
  • HSA 4 -ArEne 0.30 4-[(pent-4-en-1-yloxy)methyl]aniline (denoted ArEne), commercially available, was grafted to sulfated hyaluronic acid prepared in Example 1, HAS 4 , following the same protocol than that for the grafting of 3-aminophenylboric acid (3APBA) to HAS 4 .
  • 3-aminophenylboric acid 3-aminophenylboric acid
  • the product was purified by ultrafiltration versus reverse osmosis water using a 10 kDa ultrafiltration membrane, until the conductivity of the filtered water is less than 7-8 ⁇ S/cm.
  • the HSA 4 -ArEne 0.30 solution was freeze-dried.
  • the grafting reaction is shown schematically below. [Chem 18]
  • the degree of substitution in ArEne (DS ArEne ) cannot be obtained precisely by NMR since the N-acetyl protons of the HA at 2.09 ppm usually used to normalize the integration are superimposed with the two aliphatic protons of ArEne.
  • the degree of DSArEne substitution is estimated by monitoring the kinetics of the grafting reaction, by assaying the remaining primary amines with 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS), which gives an orange final compound (trinitrophenylamine) which absorbs in the UV at 340 nm.
  • the calibration curves of the primary amine (4-[(pent-4-en-1-yloxy)methyl]aniline) were established by preparing different solutions of 1 mL of primary amine at known concentrations (10 at 50 ⁇ g/mL) in a sodium bicarbonate buffer at 100 mM pH 8.5, from a stock solution of amine at 1 g/L in the same buffer.
  • Example 5 Preparation of hydrogel films from the ink PEDOT:HAS 4 -PBA 0.3 -PEGène 0.16
  • the ink synthesized in Example 3, PEDOT:HAS 4 -PBA 0.3 -PEGène 0.16 , was crosslinked using so-called “thiol-ene” chemistry, with a poly(ethylene glycol) (PEG-(SH)2) dithiol of mass-average molar mass Mw 3.5 kg/mol as crosslinking agent, and lithium phenyl-2,4,6-trimethylbenzoylphosphinate as photoinitiator.
  • PEG-(SH)2 poly(ethylene glycol)
  • FIG. 3 schematizes the stages of formation of the crosslinked film of PEDOT:HAS 4 -PBA 0.3 -PEGene 0.16 on the surface of a non-functionalized glass slide and its immersion in water. When deposited on a non-functionalized glass slide, the reticulated ink film could be detached from the glass slide, resulting in a blue disc floating in the water, and which did not redissolve afterwards. 2 weeks in 1X PBS.
  • FIG. 4 schematizes the crosslinking of the ink and its grafting to the surface of a glass slide functionalized by thiol functions.
  • the crosslinked ink film was covalently bonded to the surface of the slide, and could undergo several cycles of hydration/ drying without detaching from the surface and without losing its conductive properties.
  • FIG. 5 represents the curves of variation of the thickness of the crosslinked film and of its conductivity as a function of the number of hydration/drying cycles.
  • Example 6 Preparation of Hydrogel Films from PEDOT:HAS 4 -ArEene 0.5 Ink Hydrogel films were prepared on the surface of glass slides not functionalized by thiol functions, from the ink based on PEDOT:HAS 4 -ArEene 0.5 (Example 4). The protocol for preparing the hydrogel films is the same as that described in Example 5, using two different crosslinking agents, PEG-(SH)2 (3.5 kg/mol) and dithiothreitol DTT (3.
  • Example 7 Preparation of a Thick Conductive Hydrogel according to Another Procedure Synthesis of the Hydrogel from the Modified HA of Example 4
  • PEG-(SH) 2 polyethylene glycol dithiol
  • LAP photoinitiator
  • hydrogels formed are characterized by rheological measurements in dynamic regime using an AR2000EX Rheometer from TA Instruments.
  • PEG-(SH)23.5 kg/mol poly(ethylene glycol) dithiol
  • LAP lithium phenyl-2,4,6-trimethylbenzoylphosphinate
  • the HAS-ArEne 0.5 hydrogel swollen with EDOT is immersed for 48 hours with stirring at room temperature in 2 mL of a water:acetonitrile 6:4 v:v solution containing ammonium persulfate at 135.57 mM and FeSO 4 at 1.36 mM.
  • the supernatant is removed, and the hydrogel of HAS-ArEne loaded with PEDOT is purified by 4 successive washes of 2 hours in water:acetonitrile 8:2 v:v, then in PBS.
  • a thick hydrogel of PEDOT:HAS-ArEne 0.5 is obtained.
  • the modified hyaluronic acid HAS 4 -PBA 0.3 prepared according to the Example 1 was crosslinked using adipic acid dihydrazide (ADH) via an amide coupling reaction using N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide (EDC) hydrochloride as coupling agent, as shown schematically below.
  • ADH is a biocompatible compound, widely used to crosslink water-based emulsions and to design biodegradable hydrogels.
  • the PEDOT:HAS 4 -PBA 0.3 /ADH hydrogel was immersed in three PBS baths successive periods of at least 4 hours to eliminate the by-products of the reactions, to adjust the salt concentration of the matrix, and to neutralize the pH of the hydrogel.
  • the protocol is also applicable when using BisTris and Tris buffers instead of the MES buffer.
  • the swelling rate of the hydrogel was measured. To summarize, after crosslinking, the hydrogel was immersed in PBS to swell until the mass stabilized (2-3
  • the charge storage capacity must be at least greater than 1 mC/cm 2 to be competitive with a conventional stimulation recording electrode [52]; the CIC charge injection capability greater than 100 ⁇ C/cm 2 to exceed the CIC of the Pt electrode in vivo [53]; and the impedance at 1 kHz should be as low as possible to improve recording/pacing quality [54], with an appropriate range between 0.1
  • Electrochemical measurement protocols A homemade cavity electrode was made using a platinum rod 4 cm long and 2 mm in diameter.
  • the Pt rod was inserted into a 2 mm internal diameter PTFE tube, and the space between the rod and the tube sealed with epoxy resin to prevent water leaking along the tube which would alter the reactive surface of the electrode ( Figure 8).
  • the tip of the Pt rod was polished by successive stripping, and the final polishing was carried out using a 1 ⁇ m diamond paste (RadioSpares). Then, it was rinsed with ultra-purified water, ethanol and sonicated for 10 minutes in ethanol.
  • PEDOT:HAS 4 -PBA 0.3 was then electropolymerized on the surface of the platinum, in order to graft the hydrogel to the surface of the platinum during the simultaneous crosslinking of the hydrogel and the polymerization of the EDOT.
  • a solution of 5 mM EDOT and 0.3-10 mM HAS 4 -PBA in DI water was prepared and degassed, and immediately used as the medium for cyclic Pt surface voltammetry.
  • three electrodes were used, the working electrode being the polished Pt rod in a PTFE tube; the reference electrode being a conventional Ag/AgCl electrode ([KCl] 3M) for aqueous measurements; the counter electrode being a sheet of platinum.
  • PEDOT: HAS 4 -PBA 0.3 was electropolymerized by carrying out 10 cycles of potential from -0.6 V to 0.96 V at 25 mV/s.
  • the resulting functionalized surface was slightly blue ( Figure 8b).
  • This surface functionalized by a thin layer of electropolymerized PEDOT:HAS 4 -PBA 0.3 is then able to manufacture the hydrogel which will remain fixed to the surface.
  • the cavity was stacked on the functionalized Pt surface, using a 2 mm internal diameter tube section wedged inside a larger tube. For all electrodes, 6 ⁇ L of the hydrogel precursor mix was poured into the cavity on the functionalized Pt surface, and sealed for 24 hours to prevent water evaporation during gelation.
  • the PEDOT:HAS4-PBA0.3/ADH hydrogels were immersed in three successive PBS baths for at least 4 hours to eliminate the reaction by-products, adjust the salt concentration of the matrix, and neutralize the pH of the hydrogel. All electrochemical measurements were made with the three-electrode cell previously described (the working electrode being the hydrogel electro-grafted onto the Pt rod in a PTFE tube; the reference electrode being the Ag/AgCl electrode classic ([KCl] 3M) for aqueous measurements; the counter-electrode being a sheet of platinum). All experiments were performed in freshly prepared and degassed PBS.
  • CSC Charge Storage Capacity
  • the charge storage capacity (CSC) value is an index of the charge transfer capabilities of an electrode material, and is useful for estimating the amount of charge that an electrode can “store” before being injected into the electrolyte, where redox reactions occur.
  • the CSC is given in mC/cm 2 , because the electro-characterized materials are often considered as two-dimensional. Their active surface is considered equal to the contact surface between the material and the conductive materials. In the case of the test carried out, the electro-active part of the material cannot be considered as two-dimensional. Therefore, the SCC was given in mC/cm 3 . To compare with the values of the literature, they were also calculated in mC/cm 2 , according to the following equations: is the contact area between the gel and the Pt surface (3.14 mm 2 in this test). is the volume of the hydrogel (6 ⁇ L in our case).
  • the cyclic voltammogram of the conductive hydrogel PEDOT: HAS 4 -PBA 0.3 /ADH is displayed after plateau correction of an almost constant anodic and cathodic current, characteristic of a capacitive behavior.
  • CSC Charge injection capacity
  • the charge injection capacity (CIC) of an electrode is defined as the amount of charge the electrode can inject per unit area without causing irreversible electrochemical reactions or tissue damage . This value is important in tissue stimulation because it should never be exceeded.
  • the main risk is to exceed the hydrolysis potential of water which could trigger the local formation of gas bubbles, which can be fatal in the case of a bioelectronic device implanted on the brain for example.
  • the CIC is given in mC/cm 2 (denoted CIC 2D ), but with the bulk conductive hydrogels prepared according to the invention, it was more important to define the volumetric CIC (CIC 3D in mC/cm 3 ).
  • the charge injection capability was determined by pulse experiments. The pulse sequence consisted of a 125 ms cathodic current pulse followed by a 30 ms rest time, then a 250 ms charge compensation anode pulse, followed by a 30 ms rest time. 1 second.
  • the potential of the working electrode was recorded over time.
  • the amplitude of the Apulse current pulses was gradually increased, until an inflection in the potential of the working electrode during the cathodic pulse was observed, indicating the onset of the hydrolysis reaction of the water ( Figure 10).
  • the time between the start of the cathodic pulse and the onset of the inflection was defined as t max .
  • the CIC 2D and CIC 3D surface and volume load injection capabilities have been defined as follows:
  • the PEDOT:HAS 4 -PBA 0.3 /ADH hydrogel displayed 2D CIC values of 2.5 ⁇ 0.2 mC/cm 2 (CIC3D ⁇ 13.1 ⁇ 1.0 mC/cm 3 ).
  • EIS Electrical impedance spectroscopy
  • EIS impedance spectroscopy
  • Bode diagrams were plotted for the PEDOT:HAS 4 -PBA 0.3 /ADH hydrogel and for a platinum electrode for comparison (FIG. 11). The values extracted from the curves are summarized in the following table. Table 5: Impedance properties of the hydrogels (average over the three hydrogels).
  • the PEDOT:HAS 4 -PBA 0.3 /ADH hydrogel displays an impedance at 1 kHz of 412 ⁇ 35 ⁇ with a cutoff frequency f cutoff of 2 ⁇ 1 Hz ( Figure 11a), and a phase of 10 Hz at 1000 Hz close to 0 (-2 ⁇ 1°, average over the three hydrogels), which was in agreement with the average impedance at 1 kHz for the PEDOT-based interpenetrating conductive hydrogels reported in the literature (10 3 -10 5 ⁇ ), but above the impedance reported at 1 kHz for pure PEDOT-based conductive hydrogels (80-300 ⁇ ).
  • the hydrogel comprising the modified HA HAS 4 -PBA 0.3 is slowly degraded in PBS, unlike the PEDOT:HA hydrogel /ADH comprising unmodified HA.
  • the m(t)/m 0 values are reported in Table 6 below.
  • HSA4 - PBA0,3 - PEGène0,17 Modified Hyaluronic Acid was implemented for the synthesis of modified hyaluronic acid HSA 4 -PBA 0.3 -PEGène 0.17.
  • the HAS4 (1 g; 1.23 mmol) was dissolved in 292 mL of water. 203 mL of DMF was slowly added.
  • DMTMM (0.51 g; 1.85 mmol
  • 3APBA 70 mg; 0.37 mmol
  • PEGene 460 mg; 0.74 mmol
  • the HSA 4 -PBA 0.3 -PEGène 0.17 was recovered after lyophilization with a yield of 90%.
  • the preparation reaction of HSA 4 -PBA 0.3 -PEGène 0.17 is shown schematically below.
  • the solution was mixed for 10 minutes at 25,000 rpm using an Ultra Turrax T-10 basic disperser with an S 10 N-8G dispersing tool (Roth, Düsseldorf, Germany). After mixing, the solution was mixed at room temperature under nitrogen, until a stable pH was obtained below 1.4-1.5 (about 18 hours).
  • the medium was dialyzed against deionized water with a 6-8 kDa membrane, changing the bath until the conductivity of the water was below 8 ⁇ S/cm. Then, the pH was adjusted to 7.40 by adding 1 M NaOH. The medium was then successively filtered through 3 ⁇ m cellulose acetate membrane filters; 1.2 ⁇ m and 0.8 ⁇ m if possible, to remove large aggregates.
  • PEDOT:HAS-PBA-PEGene was recovered by lyophilization as a deep blue powder, with a yield of approximately 94%. The formation of PEDOT:HAS-PBA-PEGene is shown schematically below. 9.2. Formulation of an ink for inkjet printing An "S" solution of water containing 2 g/L of dodecylbenzene sulfonic acid (DBSA) and 2.3% by volume of glycerol was prepared.10 mg of HAS 4 -PBA 0.3 -PEGène 0.17 were dissolved in 932.4 ⁇ L of solution S.
  • DBSA dodecylbenzene sulfonic acid
  • the conductive lines with a length of 1-2 cm were printed on thiol functionalized glass or on a PEG/chitosan hydrogel film having alkene groups on their surface fixed on a ribbon substrate.
  • the print parameters are: substrate temperature of 25°C, printhead temperature of 25°C, drip spacing of 25 ⁇ m, 2 print nozzles and an applied potential of approximately 25 V to the print nozzles.
  • the ink is stable for several hours (> 2 hours) by regularly rinsing with water.
  • FIG. 13 presents the microscopic images of the conductive sinusoidal tracks formed on the glass slide functionalized by thiol functions (a) and on the PEG/chitosan hydrogel film (b).
  • References [1] Matsuhisa et al., Chemical Society Reviews 48, 2946-2966 (2019); [2] Liu et al., ACS nano 11, 9614-9635 (2017); [3] Kros et al., Sensors and Actuators B: Chemical 106, 289-295 (2005); [4] Miriani et al., Annu. Int. Conf. IEEE Eng. Med. Biol. Soc., 2008, 1841-1844; [5] Bodart et al. ACS Appl. Mater.

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Abstract

La présente invention concerne l'utilisation d'un polymère d'acide hyaluronique modifié par le greffage sur celui-ci d'au moins des fonctions - SO3 et des noyaux aromatiques comme dopant d'un polymère formé à partir d'un ou plusieurs monomères choisis parmi l'EDOT, le ProDOT et leurs dérivés. Elle concerne également une suspension aqueuse, ou encre, et des matériaux, en particulier des hydrogels, à base d'au moins un polymère de type PEDOT et/ou PProDOT dopé par au moins un polymère d'acide hyaluronique modifié selon l'invention, et leurs procédés de préparation, ainsi que leur mise en œuvre dans des dispositifs bioélectroniques ou biocapteurs.

Description

Description Titre : Acide hyaluronique modifié comme dopant de polymères de type PEDOT et/ou PProDOT Domaine technique L’invention vise à proposer un polysaccharide modifié, et plus précisément dérivé de l’acide hyaluronique, comme dopant d’un polymère conducteur de type PEDOT (poly(3,4- éthylènedioxythiophène)) et/ou PProDOT (poly(3,4-propylènedioxythiophène)), pour la préparation d’une encre conductrice biodégradable, et de matériaux innovants, combinant de bonnes propriétés en termes de conduction, biocompatibilité et biodégradabilité. Ces encres et matériaux trouvent des applications particulièrement avantageuses pour la conception de dispositifs bioélectroniques ou capteurs biologiques implantables, en particulier pour servir d’interfaces avec des tissus biologiques. Technique antérieure Le développement de dispositifs électroniques implantables pour le suivi ou la stimulation de tissus biologiques repose sur l’utilisation de composés électroniques souples, déformables et étirables. Une première voie « technologique » pour accéder à de tels dispositifs consiste à inclure des conducteurs classiques, à base de cuivre, fer, or, dans des matrices souples, ou en les concevant avec des formes particulières (par exemple, sous forme de vaguelettes pour supporter une déformation, de kirigami, etc.) [1], [2]. L’utilisation de polymères conducteurs offre une réponse « chimique » plus adaptée à ces besoins, étant donné que les propriétés physicochimiques des matériaux à base de polymères peuvent être ajustées plus finement, et les coûts de production sont plus faibles. Depuis quelques années, les polymères conducteurs sont ainsi de plus en plus utilisés en bioélectronique, étant particulièrement adaptés à l’interface électrode/tissus biologiques, en raison de leur conductivité à la fois ionique et électronique. Parmi les polymères, le PEDOT est l’un des polymères conducteurs les plus adaptés pour des dispositifs implantés, en raison de sa grande stabilité chimique et de sa très bonne biocompatibilité ([3], [4]). Plus récemment, il a également été proposé de tirer profit de polymères formés à partir du ProDOT (3,4-propylènedioxythiophène), molécule de structure très proche de celle de l’EDOT (3,4-éthylènedioxythiophène) [48]. Pour être bons conducteurs, ces polymères de type polydioxythiophène (PEDOT ou PProDOT) doivent néanmoins être dopés par une autre molécule (dite « dopant »). De ce fait, pour améliorer la stabilité et la mise en œuvre des polydioxythiophènes, en particulier du PEDOT, des polyélectrolytes ont été proposés comme dopants. En particulier, le PEDOT dopé par du polystyrène sulfonate (PSS), noté PEDOT :PSS, s’est imposé comme matériau de choix, en raison de sa stabilité chimique, de sa biocompatibilité et de la très large gamme de conductivité possible (de 10-4 à 104 S/cm) via des modifications chimiques ou des traitements secondaires ([8]-(13]). Le PEDOT :PSS est ainsi disponible commercialement sous la forme d’une suspension colloïdale aqueuse, qualifiée d’« encre », par exemple commercialisée par Heraeus sous la marque CleviosTM. Le PEDOT :PSS est par exemple largement utilisé pour la préparation d’électrodes intracrâniennes ([5], [6], [7]). Toutefois, le PEDOT :PSS n’est pas biodégradable, et les pistes conductrices à base de PEDOT :PSS, une fois déposées, sont encore solubles dans l’eau, ce qui rend délicat leur utilisation en milieu biologique, nécessairement humide. Pour pallier cet inconvénient, il a été proposé d’inclure le PEDOT :PSS entre deux membranes polymères (par exemple, de type PLGA (poly(Lactide-co-Glycolide)) ou polyuréthane, ou encore de le réticuler avec des réticulants silylés (par exemple, le 3-glycidoxypropyltriéthoxysilane (GOPS)) ou de la divinylsulfone, au détriment malheureusement de leur cytocompatibilité. Pour augmenter la cytocompatibilité, d’autres polyélectrolytes naturels ont été proposés pour doper le PEDOT, tels que l’ADN ([14], [15]), la cellulose [16], la pectine [17], la gomme de guar [18], les κ-carraghénanes ([19], [20]), l’alginate [21], l’ulvane (polysaccharide sulfaté) [21], la polydopamine [22] ou le dextrane sulfaté [23]. Les matériaux résultants PEDOT : polyélectrolyte présentent une meilleure biocompatibilité mais sont toutefois faiblement conducteurs (<10-1 S/cm). Il a également été proposé des encres PEDOT :glycosaminoglycanes (GAGs). Les glycosaminoglycanes sont des polysaccharides naturels, constitués d’enchaînement de disaccharides, et qui sont naturellement présents dans le corps humain. Les GAGs s’avèrent particulièrement avantageux comme dopants du PEDOT pour des applications pour des dispositifs électroniques implantables. De fait, ils présentent avantageusement une excellente biocompatibilité, permettent de bonnes interactions avec les cellules neuronales, et leur chaîne principale peut être hydrolysée par le corps. A titre d’exemples, ont été développées des encres à base de PEDOT dopé avec de l’héparine, de la chondroïtine sulfatée ou de l’acide hyaluronique. Toutefois, ces encres présentent une faible conductivité (0,001 – 0,075 S/cm), et leur dégradation par le corps n’a pas été étudiée. Résumé de l’invention La présente invention vise précisément à proposer un nouveau polyélectrolyte pour doper les polymères de type PEDOT et/ou PProDOT, permettant de pallier les inconvénients précités et combinant à la fois d’excellentes propriétés en termes de conductivité, de biocompatibilité et de biodégradabilité. Plus particulièrement, l’invention concerne, selon un premier de ses aspects, l’utilisation d’un polymère d’acide hyaluronique, ou acide hyaluronique, modifié par le greffage sur celui-ci d’au moins des fonctions - SO3- et des noyaux aromatiques, comme dopant d’un polymère formé à partir d’un ou plusieurs monomères choisis parmi le 3,4- éthylènedioxythiophène (EDOT), le 3,4-propylènedioxythiophène (ProDOT) et leurs dérivés, en particulier d’un polymère de type poly(3,4-éthylènedioxythiophène) (PEDOT). Dans la suite du texte, on désignera plus simplement sous l’appellation « acide hyaluronique modifié » ou « HA modifié » selon l’invention, un polymère d’acide hyaluronique modifié mis en œuvre selon l’invention. Les fonctions - SO3- et les noyaux aromatiques portés par l’acide hyaluronique modifié selon l’invention peuvent être portés sur un même groupement (dit « greffon »), greffé à la chaîne d’acide hyaluronique ou, alternativement, être portés par des greffons distincts. Comme détaillé dans la suite du texte, selon un mode de réalisation particulier, l’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut présenter au moins des groupements -SO3-C+, C+ étant un contre-ion de l’anion SO3- tel que Na+, en particulier greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions hydroxyles du polymère d’acide hyaluronique et des groupements possédant au moins un noyau aromatique, notamment un noyau benzénique, en particulier greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions acide carboxylique du polymère d’acide hyaluronique. Des exemples de polymères d’acide hyaluronique modifiés selon l’invention, et de leur synthèse, sont plus particulièrement décrits dans la suite du texte. En particulier, l’invention concerne, selon un autre de ses aspects, un polymère d’acide hyaluronique modifié par le greffage sur celui-ci d’au moins des fonctions - SO3- et des noyaux aromatiques, dans lequel lesdites fonctions - SO3- et lesdits noyaux aromatiques sont portés par des groupements distincts greffés à la chaine d’acide hyaluronique, ledit polymère d’acide hyaluronique modifié présentant au moins : - des groupes - SO3-C+, C+ étant un contre-ion de l’anion SO3- ; et - des groupements possédant au moins un noyau aromatique, notamment un noyau benzénique, lesdits groupements étant greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions acide carboxylique du polymère d’acide hyaluronique, par l’intermédiaire de liaisons amides. Selon une variante de réalisation particulièrement avantageuse, l’acide hyaluronique modifié selon l’invention est en outre modifié par le greffage sur celui-ci d’au moins une fonction réticulable. On désignera plus simplement dans la suite du texte, sous l’appellation « polymères de type PEDOT et/ou PProDOT », les polymères (homopolymères et copolymères) formés à partir d’un ou plusieurs monomères choisis parmi l’EDOT, le ProDOT et leurs dérivés. Le complexe formé d’un ou plusieurs polymères de type PEDOT et/ou PProDOT, dopé(s) par au moins un acide hyaluronique modifié selon l’invention est plus particulièrement désigné, dans la suite du texte, sous l’appellation « PEDOT/PProDOT :HA modifié ». Comme illustré dans les exemples qui suivent, les inventeurs ont découvert que la mise en œuvre d’un acide hyaluronique modifié selon l’invention comme dopant d’un polymère de type PEDOT, permet d’accéder à des encres conductrices particulièrement avantageuses, présentant à la fois des propriétés de conductivité élevée, de biocompatibilité mais aussi de biodégradabilité. L’invention concerne ainsi, selon un autre de ses aspects, une suspension aqueuse, appelée plus couramment « encre », comprenant au moins un polymère de type PEDOT et/ou PProDOT dopé par au moins un acide hyaluronique modifié selon l’invention. De manière avantageuse, l’encre peut être une encre adaptée à une impression par jet d’encre, par exemple pour l’impression de pistes conductrices à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié. L’invention concerne également un procédé de préparation d’une telle encre, mettant en œuvre la polymérisation de monomères de type EDOT et/ou ProDOT dans une solution comprenant au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention dans un milieu aqueux. En particulier, une encre à base d’un polymère de type PEDOT et/ou PProDOT dopé par un acide hyaluronique modifié selon l’invention, présentant des fonctions acides carboxyliques libres et/ou et porteur de fonctions réticulables, est avantageusement réticulable. L’invention concerne également, selon un autre de ses aspects, un matériau, en particulier un hydrogel, à base d’au moins un polymère de type PEDOT et/ou PProDOT dopé par au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié tel que défini selon l’invention. Les hydrogels à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention peuvent être gonflés en milieu aqueux (dits encore « hydrogels humides ») ou secs. Ils peuvent se présenter par exemple sous la forme de films d’hydrogel conducteur, supportés par un substrat ou auto- supportés. L’invention concerne également trois variantes de procédé pour la préparation de ces hydrogels à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention. Selon une première variante de réalisation, un hydrogel à base de PEDOT/PProDOT : HA modifié selon l’invention peut être préparé à partir de la réticulation d’une encre selon l’invention à base de polymère(s) de type PEDOT et/ou PProDOT dopé par un acide hyaluronique modifié selon l’invention et porteur de fonctions réticulables. Selon une autre variante de réalisation, un hydrogel à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention peut encore être obtenu, à partir d’un hydrogel déjà réticulé formé au préalable à partir d’au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié et porteur de fonctions réticulables, en procédant à la polymérisation des monomères de type EDOT et/ou ProDOT directement dans l’hydrogel à base de HA modifié, gonflé en milieu aqueux. Selon encore une autre variante de réalisation, un hydrogel à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention peut être préparé en procédant simultanément à la polymérisation des monomères de type EDOT et/ou ProDOT et à la réticulation dudit polymère d’acide hyaluronique modifié présentant des fonctions acide carboxylique libres. Les encres et matériaux, en particulier hydrogels, à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention, s’avèrent avantageux à plusieurs titres pour leur application dans le domaine biomédical, en particulier pour des dispositifs bioélectroniques ou biocapteurs implantables. Tout d’abord, ils présentent une excellente conductivité électrique, en particulier dans des conditions physiologiques (pH 7,4 en milieu aqueux), sans nécessiter de traitement ou de dopage complémentaire. En particulier, ils peuvent présenter une conductivité supérieure ou égale à 0,1 S/cm, en particulier supérieure ou égale à 0,5 S/cm. Également, l’encre et les matériaux à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention présentent une excellente biocompatibilité ou cytocompatibilité. Qui plus est, ils sont avantageusement biodégradables. Le caractère biocompatible de l’encre et des matériaux à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention assure la possibilité de les mettre au contact des tissus biologiques. Leur caractère biodégradable permet, après usage, leur élimination progressive du corps humain, et ce sans nécessiter de chirurgies explantatoires. De manière avantageuse, les hydrogels formés selon l’invention présentent d’excellentes propriétés de conformabilité. Ils s’adaptent ainsi parfaitement aux tissus biologiques. Les matériaux selon l’invention, notamment de type hydrogel, peuvent être intégrés au niveau de dispositifs électroniques (dispositifs bioélectroniques ou biocapteurs) en contact avec du matériel biologique (cellules, organismes vivants ou implantés in vivo). Par exemple, ils peuvent être utilisés en contact avec des cultures cellulaires ou des tissus ex vivo, par exemple pour la conception d’organes sur puce (« Organ-on-Chip » en terminologie anglo- saxonne), être intégrés dans des dispositifs ou capteurs portés par un patient ou implantables, notamment mis en œuvre pour le suivi ou la stimulation de tissus biologiques. Ils peuvent avantageusement constituer l’interface avec les tissus biologiques. Ils peuvent ainsi trouver des applications particulièrement avantageuses pour la conception de nombreux dispositifs médicaux implantables temporaires, tels que des guides pour la reconstruction de tissus (nerfs périphériques, muscles), des électrodes intracrâniennes, par exemple dans le traitement de la maladie de Parkinson ou de l’épilepsie, ou encore pour divers biocapteurs implantés. L’invention concerne ainsi, selon un autre de ses aspects, l’utilisation d’une suspension aqueuse ou d’un matériau, en particulier d’un hydrogel, selon l’invention, en particulier tels que préparés selon les procédés selon l’invention, dans un dispositif bioélectronique ou biocapteur destiné à être mis en contact avec du matériel biologique, par exemple pour un dispositif en contact avec des cultures cellulaires ou des tissus ex vivo, un dispositif ou capteur porté par un patient ou implantable, tels que des guides pour la reconstruction de tissus, par exemple de nerfs périphériques. Elle concerne encore un dispositif bioélectronique ou biocapteur, destiné à être mis en contact avec du matériel biologique, comprenant au moins un matériau, en particulier un hydrogel, selon l’invention. D’autres caractéristiques, variantes et avantages de l’acide hyaluronique modifié selon l’invention, et de sa mise en œuvre comme dopant d’un polymère de type PEDOT et/ou PProDOT, ressortiront mieux à la lecture de la description et des exemples qui suivent, donnés à titre illustratif et non limitatif de l’invention. Dans la suite du texte, les expressions « compris entre … et … », « allant de … à … » et « variant de … à … » sont équivalentes et entendent signifier que les bornes sont incluses, sauf mention contraire. Brève description des dessins [Fig 1] présente, de manière schématique, la formation d’un complexe PEDOT :HA modifié à partir de la polymérisation de monomères EDOT en présence de chaînes d’acide hyaluronique modifié selon l’invention ; [Fig 2] présente, de manière schématique, le protocole de mesure de la conductivité d’un film formé à partir de l’encre PEDOT : HAS4-PBA0,3 dans l’exemple 2 ; [Fig 3] présente, de manière schématique, les étapes de formation d’un film réticulé de PEDOT : HAS4-PBA0,3-PEGène0,16, à la surface d’une lame de verre non fonctionnalisée et son immersion dans l’eau, comme décrit dans l’exemple 5 ; [Fig 4] présente, de manière schématique, la réticulation de l’encre et son greffage à la surface d’une lame de verre fonctionnalisée par des fonctions thiols, comme décrit en exemple 5 ; [Fig 5] présente les courbes de variation de l’épaisseur du film d’hydrogel réticulé et de sa conductivité en fonction du nombre de cycle d’hydratation/séchage, comme décrit dans l’exemple 5 ; [Fig 6] présente les courbes de variation du module élastique G’ et du module de perte G’’, obtenues par analyse rhéologique en régime dynamique des hydrogels conformes à l’invention à base de HSA4-ArEne0,50, réticulés par le DTT ou le PEG-(SH)2 selon l’exemple 7 ; [Fig 7] présente l’évolution des valeurs de dn/dc de l’acide hyaluronique sulfaté pour différents degrés de sulfatation, dans les conditions de l’essai de dégradabilité décrit en exemple 1.1 ; [Fig 8] présente, de manière schématique, la préparation d’une électrode à cavité incorporant un hydrogel conducteur de PEDOT:HAS4-PBA0,3/ADH, comme décrit en exemple 8 (figure 8a) et une photographie du tube PTFE incorporant l’hydrogel électro-polymérisé à la surface du platine ; [Fig 9] présente les voltammogrammes cycliques, réalisés selon l’exemple 8, pour l’électrode de platine, pour l’électrode pré-fonctionnalisée avec du PEDOT:HAS4-PBA0,3 électropolymérisé ("encre EP") et pour l’électrode finale contenant l’hydrogel conducteur PEDOT : HAS4-PBA0,3/ADH ; [Fig 10] présente les expériences d’impulsions cathodiques réalisées sur les hydrogels PEDOT : HAS4-PBA0,3/ADH selon l’exemple 8 pour étudier son CIC, avec apparition d’un point d’inflexion de potentiel pour une amplitude de courant de -800 µA ; [Fig 11] présente les diagrammes de Bode de l’hydrogel PEDOT : HAS4-PBA0,3/ADH et du platine (Impédance |Z|; phase) ; [Fig 12] présente la perte de poids (m(t)/m0) pendant l’incubation des hydrogels PEDOT:HAS4-PBA0,3/ADH, HAS4-PBA0,3/ADH et PEDOT:HA/ADH en fonction du temps, suivant l’essai de dégradabilité présenté en exemple 8 ; [Fig 13] présente les images au microscope des pistes sinusoïdales conductrices et résistantes à l’eau formées selon l’exemple 9, par impression par jet d’encre d’une suspension aqueuse de PEDOT:HAS4-PBA0,.3-PEGene0,17 /PEG sur une lame verre fonctionnalisée par des fonctions thiol (a) et sur un film d’hydrogel PEG/chitosan (b). Description détaillée ACIDE HYALURONIQUE MODIFIE Comme évoqué précédemment, la présente invention met en œuvre un polymère d’acide hyaluronique modifié, porteur d’au moins des fonctions -SO3- et des noyaux aromatiques. Les acides hyaluroniques sont des polymères formés d’unités de disaccharide composées d’acide D-glucuronique et de N-acétyl-D-glucosamine, comme représenté schématiquement ci-dessous. [Chem 1] Il est entendu que, sous l’appellation « acide hyaluronique », on désigne à la fois l’acide hyaluronique sous forme protonée ou sous forme de sels. En particulier, l’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut se présenter sous la forme d’un sel, notamment un sel de métal alcalin, par exemple sous forme d’hyaluronate de sodium. Par « unité de répétition » ou encore « unité » du polymère d’acide hyaluronique, on entend une unité disaccharide telle que représentée ci-dessus pour l’acide hyaluronique non modifié. Le polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention est plus particulièrement obtenu à partir d’un acide hyaluronique présentant une masse molaire moyenne en masse, notée Mw, comprise entre 20000 et 1000000 g.mol-1, en particulier entre 40 000 et 250000 g.mol-1. La masse molaire moyenne en masse peut être déterminée par exemple par chromatographie d’exclusion stérique (SEC). Selon un mode de réalisation particulier, le polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention est formé par greffage d’un ou plusieurs greffons porteurs de fonctions -SO3- et de noyaux aromatiques, sur un acide hyaluronique de masse molaire moyenne en masse telle que définie ci-dessus. Les fonctions -SO3- et noyaux aromatiques peuvent être plus particulièrement greffés au niveau d’une partie ou de l’ensemble des fonctions hydroxyle et/ou de la fonction acide carboxylique d’une unité de répétition de l’acide hyaluronique. Une ou plusieurs fonctions -SO3- et un ou plusieurs noyaux aromatiques peuvent être portés sur un même groupement greffé au polymère d’acide hyaluronique, également appelé « greffon » ou, alternativement, être portés par des greffons distincts. Selon une variante de réalisation particulière, les fonctions -SO3- et noyaux aromatiques sont portés par des greffons distincts. En particulier, un acide hyaluronique modifié selon l’invention peut résulter du greffage sur l’acide hyaluronique d’au moins : (a) des groupes -SO3- C+, avec C+ représentant un contre-ion de l’anion -SO3-, notamment choisi parmi les cations alcalins et alcalino-terreux, par exemple Na+ ; et (b) des groupements possédant au moins un noyau aromatique. Les groupes -SO3- C+ peuvent être plus particulièrement greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions hydroxyles de l’acide hyaluronique. On parle alors de fonctions sulfate (-OSO3-C+) portées par l’acide hyaluronique modifié selon l’invention. Les groupements possédant au moins un noyau aromatique peuvent être plus particulièrement des groupements possédant un unique noyau aromatique. Les noyaux aromatiques peuvent être par exemple des noyaux benzéniques, naphtaléniques, etc. Il peut également s’agir de noyaux aromatiques porteurs d’hétéroatomes, par exemple de noyaux pyridiniques ou quinoléïques, etc. Selon un mode de réalisation particulier, les noyaux aromatiques sont des noyaux benzéniques. Les groupements possédant au moins un noyau aromatique, par exemple un noyau benzénique, peuvent être plus particulièrement greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions acide carboxylique de l’acide hyaluronique. Ils peuvent être par exemple greffés à l’acide hyaluronique par l’intermédiaire de liaisons amides (-C(O)-NH-). Les groupements porteurs d’au moins un noyau aromatique, greffés à l’acide hyaluronique modifié selon l’invention, peuvent plus particulièrement résulter du greffage, au niveau de l’acide hyaluronique, de molécules possédant au moins un noyau aromatique et porteuses d’au moins une fonction apte à réagir avec une fonction acide carboxylique d’une unité de l’acide hyaluronique pour former une liaison covalente. Une telle fonction peut être par exemple une fonction amine apte à réagir avec une fonction acide carboxylique d’une unité de l’acide hyaluronique pour former une liaison amide. A titre d’exemple, le groupement porteur d’au moins un noyau aromatique peut résulter du greffage de l’acide aminophénylboronique (noté PBA) avec une fonction acide carboxylique de l’acide hyaluronique. Dans un mode de réalisation particulier, le polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention porte au moins (a) des groupes -SO3- C+, avec C+ étant tel que défini précédemment, greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions hydroxyles de l’acide hyaluronique et au moins (b) des groupements possédant au moins un noyau aromatique, en particulier un noyau benzénique, greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions acide carboxylique de l’acide hyaluronique. En particulier, l’invention concerne encore, selon un de ses aspects, un polymère d’acide hyaluronique modifié par le greffage sur celui-ci d’au moins des fonctions - SO3- et des noyaux aromatiques, ledit polymère d’acide hyaluronique modifié présentant au moins : - des groupes -SO3-C+, C+ étant un contre-ion de l’anion SO3-, notamment choisi parmi les cations alcalins et alcalino-terreux, par exemple Na+, lesdits groupes -SO3-C+ étant en particulier greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions hydroxyles du polymère d’acide hyaluronique ; et - des groupements possédant au moins un noyau aromatique, notamment un noyau benzénique, lesdits groupements étant greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions acide carboxylique du polymère d’acide hyaluronique, par l’intermédiaire de liaisons amides. En particulier, le polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut notamment présenter un nombre moyen de fonctions -SO3-, par unité de répétition de l’acide hyaluronique (correspondant à une unité disaccharide), compris entre 1 et 4, en particulier entre 2 et 4, de préférence entre 3 et 4 et plus préférentiellement de 4. Selon un mode de réalisation particulier, les fonctions SO3- résultent du greffage de groupes -SO3- C+, au niveau de toutes les fonctions ou d’une partie des fonctions hydroxyles de l’acide hyaluronique, le degré de substitution des fonctions hydroxyles par des groupes -SO3- C+, défini comme le nombre moyen de groupes -SO3- C+, par unité de répétition de l’acide hyaluronique, dit encore dans ce cas « degré de sulfatation » et noté DSs, étant plus particulièrement compris entre 1 et 4, en particulier entre 2 et 4, de préférence entre 3 et 4. Dans un mode de réalisation particulier, le degré de sulfatation est de 4. Autrement dit, l’ensemble des fonctions hydroxyles de l’acide hyaluronique sont substituées par des fonctions sulfates (-OSO3-). Le degré de substitution par des fonctions -OSO3- peut être déterminé par des techniques connues de l’homme du métier, notamment à partir de la détermination des fractions massiques en sulfate et en acide glucuronique, comme détaillé dans l’exemple 1 qui suit. Un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut présenter un nombre moyen de noyaux aromatiques par unité de répétition de l’acide hyaluronique, compris entre 0,05 et 0,5, en particulier entre 0,10 et 0,40 et plus particulièrement entre 0,15 et 0,3. Selon un mode de réalisation particulier, les noyaux aromatiques sont portés par des groupements greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions acide carboxylique, le degré de substitution des fonctions acide carboxylique par lesdits groupements porteurs d’un noyau aromatique, en particulier d’un noyau benzénique, noté DSAr, défini comme le nombre moyen de groupements possédant un noyau aromatique par unité de répétition de l’acide hyaluronique, étant plus particulièrement compris entre 0,05 et 0,5, en particulier entre 0,10 et 0,40 et plus particulièrement entre 0,15 et 0,3. Le degré de substitution par des greffons porteurs de noyaux aromatiques peut être déterminé par des techniques connues de l’homme du métier, par exemple par analyse RMN 1H, comme présenté en exemple 1. Selon un mode de réalisation particulier, l’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut ainsi présenter la structure (I) suivante : [Chem 2] dans laquelle : - n représente le degré de polymérisation de l’acide hyaluronique, autrement dit le nombre d’unités répétitives de disaccharide ; en particulier n est compris entre 45 et 2500, et plus particulièrement entre 90 et 700 ; - les groupements R représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d’hydrogène (fonction hydroxyle non substituée) ou un groupe -SO3-C+, C+ étant tel que défini précédemment, les groupements R pouvant être différents d’une unité répétitive à l’autre, sous réserve qu’au moins une partie des groupements R représentent des groupes -SO3-C+ ; - les groupements R’, identiques ou différents d’une unité de répétition à l’autre, représentent un groupe O-C+ (fonction acide carboxylique non substituée), C+ étant tel que défini précédemment ; un groupe porteur d’un noyau aromatique, en particulier benzénique, ou encore un groupe distinct des groupes précités, sous réserve qu’au moins une partie des groupements R’ représentent des groupements porteurs d’un noyau aromatique, en particulier benzénique. Les autres greffons R’, distincts des groupements porteurs d’un noyau aromatique, peuvent être des groupements porteurs d’autres fonctions d’intérêt, en particulier de fonctions réticulables, comme détaillé plus particulièrement dans la suite du texte. De préférence, le degré de sulfatation, DSS, du polymère d’acide hyaluronique de formule (I) est compris entre 1 et 4, en particulier entre 2 et 4, de préférence entre 3 et 4 et plus préférentiellement de 4. De préférence, le degré de substitution, DSAr, par lesdits groupements porteurs d’un noyau aromatique est compris entre 0,05 et 0,5, en particulier entre 0,10 et 0,40 et plus particulièrement entre 0,15 et 0,3. Préparation d’un acide hyaluronique modifié selon l’invention L’invention concerne encore un procédé de préparation d’un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention par greffage, sur une chaîne d’acide hyaluronique, de groupements présentant des fonctions SO3- et/ou des noyaux aromatiques. Plus particulièrement, un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut être préparé à partir d’un acide hyaluronique via au moins les étapes suivantes : (i) greffage de groupes -SO3-C+, au niveau d’au moins une partie des fonctions hydroxyles de l’acide hyaluronique ; et (ii) greffage de groupements porteurs d’au moins un, en particulier d’un noyau aromatique, par exemple d’un noyau benzénique, au niveau d’au moins une partie des fonctions acide carboxylique de l’acide hyaluronique ; les étapes de greffages (i) et (ii) pouvant être réalisées dans cet ordre ou dans l’ordre inverse, de préférence dans cet ordre ((i) puis (ii)). Il relève des compétences de l’homme du métier de mettre en œuvre des voies de couplage adaptées pour procéder au greffage des groupements au niveau de la chaîne d’acide hyaluronique, en particulier avec les degrés de substitution souhaités. Des méthodes pour procéder à la sulfatation de l’acide hyaluronique ont par exemple été décrites dans la littérature ([24]-[29]). Selon une voie de synthèse particulière, le greffage en étape (i) de groupes -SO3-C+ au niveau des fonctions hydroxyles de l’acide hyaluronique procède suivant les étapes suivantes : - modification des fonctions acide carboxylique de l’acide hyaluronique sous forme salifiée pour permettre la solubilité du sel d’acide hyaluronique dans le milieu solvant mis en œuvre pour la réaction de sulfatation, par exemple sous la forme d’un sel tétrabutylammonium hyaluronate ; - sulfatation, en milieu solvant, d’au moins une partie des fonctions hydroxyles de l’acide hyaluronique, et - purification pour obtenir l’acide hyaluronique sulfaté. Comme décrit dans les exemples qui suivent, la réaction de sulfatation peut être par exemple opérée par réaction de l’acide hyaluronique avec le diméthylformamide de trioxyde de soufre (SO3DMF) dans le diméthylformamide (DMF). Il appartient à l’homme du métier d’ajuster les conditions opératoires, notamment en termes de teneurs en acide hyaluronique et enSO3DMF, de durée et de température, pour procéder à la sulfatation et obtenir le degré de sulfatation souhaité. Comme indiqué précédemment, le greffage en étape (ii) de groupements porteurs d’au moins un noyau aromatique, par exemple d’un noyau benzénique, au niveau d’au moins une partie des fonctions acide carboxylique de l’acide hyaluronique, peut plus particulièrement être réalisé par greffage d’une molécule comprenant au moins un noyau aromatique et porteuse d’au moins une fonction apte à réagir avec une fonction acide carboxylique d’une unité de l’acide hyaluronique pour former une liaison covalente. Il peut s’agir par exemple d’une molécule porteuse d’une fonction amine apte à réagir avec une fonction acide carboxylique d’une unité de l’acide hyaluronique pour former une liaison amide. A titre d’exemple, comme illustré dans l’exemple 1 qui suit, les groupements porteurs d’un noyau benzénique peuvent résulter du greffage de l’acide aminophénylboronique (noté PBA) avec une fonction acide carboxylique d’une unité disaccharide de l’acide hyaluronique. L’homme du métier est à même d’ajuster les conditions opératoires pour conduire au greffage de ladite molécule. Par exemple, comme illustré dans les exemples, la réaction de couplage entre une fonction amine portée par la molécule possédant au moins un noyau aromatique et une fonction acide carboxylique de l’acide hyaluronique peut être conduite en milieu solvant, en présence d’un agent de couplage tel que DMTMM (chlorure de 4-(4,6- diméthoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-méthyl-morpholinium). Acide hyaluronique modifié porteur de fonctions réticulables Selon une variante de réalisation, l’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut, en outre, être fonctionnalisé par des fonctions réticulables. Par « fonction réticulable », on entend désigner un groupement chimique porté par la chaîne du polymère d’acide hyaluronique modifié, apte à permettre, dans des conditions adéquates, par exemple en présence d’un agent de réticulation, l’établissement de liaisons entre les chaînes d’acide hyaluronique, et la formation d’un réseau réticulé. Les fonctions réticulables portées par un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peuvent être de diverses natures, pour autant qu’elles soient aptes à conduire à la formation d’un réseau (ou matrice) réticulé(e), en particulier permettant l’obtention d’un hydrogel à partir d’une solution ou suspension aqueuse comprenant au moins un tel polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention, comme décrit plus précisément dans la suite du texte. Ainsi, il peut s’agir de fonctions permettant une réticulation mettant en jeu des liaisons physiques (réticulation « physique ») ou des liaisons chimiques (réticulation « chimique »). La réticulation physique consiste en l’établissement de liaisons physiques (hydrogène, Van der Waals, dipôle-dipôle, etc.), entre les chaînes polymères, par exemple par l’intermédiaire de fonctions polaires (alcools, acides, amines, éthers, esters, etc.). La réticulation chimique consiste en l’établissement de liaisons chimiques covalentes ou covalentes dynamiques (réversibles) entre les chaînes polymères. Plus particulièrement, une fonction réticulable peut être une fonction réactive X, apte à réagir avec une autre fonction réactive Y, pour former une liaison physique ou chimique, de préférence une liaison chimique covalente, les fonctions réactives X et Y pouvant être identiques ou différentes selon la réaction mise en œuvre pour la réticulation. Les fonctions Y, lorsqu’elles sont distinctes des fonctions X, peuvent être portées par un polymère d’acide hyaluronique modifié, distinct du polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention porteur des fonctions X. Alternativement, la réticulation peut être opérée en présence d’un agent réticulant comportant au moins deux fonctions Y, en particulier de 2 à 4 fonctions Y, et plus particulièrement deux fonctions Y (agent réticulant bifonctionnalisé). Comme décrit plus précisément dans la suite du texte, l’agent de réticulation peut être une molécule organique de taille variable, portant au moins deux fonctions Y disponibles pour réagir avec des fonctions réactives X. Il peut s’agir de molécules organiques de faible masse molaire ou bien d’oligomères ou de polymères modifiés chimiquement. Les fonctions X et Y, identiques ou différentes, réactives les unes vis-à-vis des autres, peuvent être de diverses natures, suivant la réaction mise en œuvre pour la réticulation. Les fonctions réticulables peuvent être notamment choisies pour permettre une réticulation des chaines d’acide hyaluronique via différentes voies physiques ou chimiques, déjà proposées dans le cadre de la préparation d’hydrogels ([35]). Parmi les fonctions aptes à établir des interactions dites physiques, on peut citer par exemple les fonctions dopamine ; des protons et atomes électronégatifs aptes à interagir ensemble pour former des liaisons hydrogène ; des fonctions adamantyle aptes à interagir avec des unités cyclodextrine selon une chimie dite « hôte-invité » ([36]) ; des cations et anions aptes à interagir ensemble pour former des liaisons ioniques. De préférence, les fonctions réticulables sont des fonctions permettant une réticulation par établissement de liaisons chimiques covalentes (dynamiques ou non). Les fonctions réticulables peuvent être notamment choisies pour permettre une réticulation des chaines d’acide hyaluronique via des voies chimiques, déjà proposées dans le cadre de la préparation d’hydrogels à base d’acide hyaluronique ([37]), comme par exemple par polymérisation radicalaire, par formation de double liaison carbone-azote, par réaction d’addition de type Michael, par réaction photochimique dite « thiol-ène », par différents types de chimie dite « orthogonale », par exemple par réaction de Diels-Alder, par réaction de cycloaddition de Huisgen, entre un azoture et un alcyne catalysée par le cuivre (I) ou entre un azoture et un cycloalcynyle contraint en l’absence de catalyseur de cuivre, par réaction catalysée par une enzyme, etc. Les fonctions réticulables peuvent ainsi être par exemple : - des doubles-liaisons, aptes à permettre la réticulation des chaînes d’acide hyaluronique pour la préparation d’un hydrogel selon l’invention par polymérisation radicalaire ; - des fonctions aldéhydes ou cétones ; ou des fonctions amines, en particulier des fonctions hydroxylamines ou hydrazines, lesdites fonctions aldéhydes ou cétones et amines étant aptes à réagir ensemble pour former des liaisons imines, en particulier des liaisons oxime ou hydrazone ; - des fonctions aptes à réagir avec une autre fonction dans le cadre d’une réaction d’addition de type Michael, par exemple des fonctions thiol (-SH), des fonctions méthacrylate ou acrylate ; - des fonctions à insaturation(s) éthylénique(s) (fonctions alcènes), en particulier des fonctions éthényles, ou des fonctions thiol, lesdites fonctions étant aptes à réagir ensemble, en particulier sous photo-irradiation en présence d’un photo-initiateur (chimie dite « thiol- ène »), pour former une liaison covalente, comme décrit plus précisément dans la suite du texte ; - des fonctions diènes conjuguées, par exemple des fonctions furane, ou des fonctions diénophiles (alcènes) appauvries en électrons, par exemple maléimide, lesdites fonctions étant aptes à réagir ensemble, en particulier par activation thermique, selon une réaction dite de Diels-Alder pour établir des liaisons covalentes dynamiques ; - des fonctions azoture, par exemple des fonctions tétrazine ; ou des fonctions alcyne, en particulier cycloalcyne contraint, lesdites fonctions étant aptes à réagir ensemble selon une réaction de cycloaddition de Huisgen ; - des fonctions tyramine aptes à se dimériser par oxydation catalysée par H2O2 et la peroxidase de Raifort (HRP), comme par exemple décrit dans la publication [38] ; - des fonctions acide boronique ou des fonctions diol vicinal plan, lesdites fonctions étant aptes à réagir ensemble pour former une liaison covalente dynamique de type ester boronate. Selon un mode de réalisation particulier, le polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention est porteur d’au moins une fonction alcène, en particulier éthényle, apte à réagir avec une fonction Y de type thiol pour former une liaison covalente. A titre d’exemples, ledit polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut être porteur de fonctions réactives X, réticulables en présence d’un agent de réticulation porteur d’au moins deux fonctions Y, où : - la fonction X est une fonction alcène, par exemple éthényle ; et la fonction Y est une fonction thiol, lesdites fonctions X et Y réagissant ensemble selon une réaction dite « thiol- ène », en particulier par activation sous rayonnement UV (réaction photo-activable) en présence d’un photo-amorceur ; - la fonction X est une fonction cétone et la fonction Y est une fonction amine, en particulier hydroxylamine ou hydrazine, lesdites fonctions X et Y réagissant ensemble pour former une liaison imine, en particulier une liaison oxime ou hydrazone ; - la fonction X est une fonction acide boronique et la fonction Y est une fonction diol vicinal plan, lesdites fonctions X et Y réagissant ensemble pour former une liaison covalente dynamique de type ester boronate ; - la fonction X est une fonction diène conjuguée et la fonction Y est une fonction alcène, lesdites fonctions X et Y réagissant ensemble selon une réaction de Diels Alder, en particulier par activation par la chaleur (réaction thermo-activable), pour former une liaison covalente dynamique. Selon un mode de réalisation particulier, le polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut être porteur de fonctions alcènes, en particulier de fonctions éthényles. Dans ce cas, l’agent réticulant mis en œuvre pour la réticulation de l’acide hyaluronique modifié selon l’invention, comme décrit plus précisément par la suite pour la réticulation d’une encre selon l’invention, peut-être une molécule organique présentant au moins deux fonctions, en particulier deux fonctions thiols. Selon un mode de réalisation particulier, un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut présenter un nombre moyen de fonctions réticulables greffées, en particulier de fonctions réactives X telles que décrites précédemment, par unité de répétition de l’acide hyaluronique, compris entre 0,05 et 0,50, en particulier entre 0,07 et 0,50 et plus particulièrement entre 0,10 et 0,50. Le nombre moyen de fonctions réticulables greffées à l’acide hyaluronique modifié peut être déterminé par des techniques connues de l’homme du métier, par exemple par analyse RMN 1H. De manière avantageuse, la variation du nombre moyen de fonctions réticulables greffées au niveau du polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention permet de moduler les propriétés mécaniques de l’hydrogel préparé à partir de l’acide hyaluronique modifié selon l’invention, en fonction des applications visées pour cet hydrogel. Une fonction réticulable peut être portée par le ou lesdits groupements porteurs d’une ou plusieurs fonctions -SO3- et/ou d’un ou plusieurs noyaux aromatiques, en particulier par au moins une partie des groupements porteurs d’au moins un noyau aromatique ; et/ou être portée par des groupements distincts du ou des groupements porteurs de fonction(s) -SO3- et/ou de noyau(x) aromatique(s). Selon une première variante de réalisation, les fonctions réticulables sont portées par au moins une partie des groupements porteurs d’au moins un noyau aromatique, par exemple d’un noyau benzénique, tels que décrits précédemment, greffés à l’acide hyaluronique modifié selon l’invention, en particulier au niveau d’au moins une partie des fonctions acide carboxylique de l’acide hyaluronique. Autrement dit, l’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut présenter des groupements, greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions acide carboxylique de la chaîne d’acide hyaluronique, porteurs d’au moins un noyau aromatique, par exemple d’un noyau benzénique, et d’au moins une fonction réticulable, en particulier une fonction réactive X telle que définie précédemment. Ces groupements peuvent plus particulièrement résulter du greffage d’une molécule comportant au moins un noyau aromatique, par exemple un noyau benzénique, au moins une fonction apte à réagir avec la fonction acide carboxylique d’une unité de l’acide hyaluronique pour former une liaison covalente, par exemple une liaison amide, et au moins une fonction réticulable, en particulier une fonction réactive X telle que définie précédemment.
Il peut s’agir par exemple d’une molécule de formule (II- a) suivante :
[Chem 3]
F-Ar-E-R1 (Il-a) dans laquelle :
F représente une fonction apte à réagir avec la fonction acide carboxy lique d’une unité de l’acide hyaluronique pour former une liaison covalente, par exemple une fonction amine (- NH2) ;
Ar représente un noyau aromatique, en particulier benzénique ; E représente un espaceur organique hydrophile, par exemple une chaîne aliphatique, linéaire ou ramifiée, éventuellement interrompue par un ou plusieurs hétéroatomes, en particulier choisis parmi O et N, et/ou par un ou plusieurs groupements oxo (C=O) ;R1 représente une fonction réticulable, par exemple une fonction réactive X telle que définie précédemment, notamment une fonction alcène telle qu’une fonction éthényle.
La longueur de chaîne de l’espaceur E dépend de la nature de cet espaceur. Elle est plus particulièrement ajustée pour permettre une bonne disponibilité et réactivité de la fonction réticulable, notamment de la fonction réactive X, lorsque le polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention est mis en présence d’un agent réticulant tel que décrit précédemment, sans pour autant être préjudiciable à la solubilité de l’acide hyaluronique modifié selon l’invention en milieu aqueux.
L’espaceur E peut par exemple comprendre, voire être formé, d’une chaîne de type oligo(éthylène glycol) ou poly(éthylène glycol), ou encore de type oligo(éthylène imine) ou poly(éthylène imine). Lesdites chaînes oligo(éthylène glycol) ou poly(éthylène glycol), oligo(éthylène imine) ou poly(éthylène imine), peuvent notamment présenter un nombre d’unités d’oxyde d’éthylène (respectivement d’unités éthylèneimine) allant de 2 à 20.
L’espaceur E peut encore comprendre, voire être formé, d’un oligopeptide composé d’acides aminés hydrophiles, comme par exemple la glycine, la sérine, etc.
Bien entendu, la nature dudit espaceur E n’est nullement limitée aux exemples précités, et d’autres espaceurs peuvent être envisagés. Selon un mode de réalisation particulier, les greffons porteurs d’au moins un noyau aromatique et d’une fonction réticulable peuvent par exemple résulter du greffage d’une molécule de formule (II’ -a) suivante : [Chem 4]
E étant tel que défini précédemment.
A titre d’exemple, comme illustré en exemple 4, un groupement porteur d’au moins un noyau aromatique et d’au moins une fonction réticulable peut résulter du greffage de la 4-[(pent-4- ène- l-yloxy)méthyl] aniline.
Selon une autre variante de réalisation, les fonctions réticulables peuvent être portées par des greffons distincts du ou des groupements porteurs de fonction(s) - SO3- et/ou de noyau(x) aromatique(s).
Dans le cadre de cette variante, l’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut ainsi comporter, en plus des groupements décrits précédemment, en particulier des groupes SO3- C+ et des groupements porteurs d’au moins un noyau aromatique, par exemple d’un noyau benzénique, des groupements porteurs d’au moins une fonction réticulable, en particulier d’une fonction réactive X telle que définie précédemment.
Un groupement porteur d’au moins une fonction réticulable peut être avantageusement greffé au niveau d’une fonction acide carboxylique de l’acide hyaluronique, par exemple par l’intermédiaire d’une liaison amide.
Il peut ainsi résulter du greffage d’une molécule organique, porteuse d’au moins une fonction, par exemple une fonction amine, apte à réagir avec la fonction acide carboxylique d’une unité de l’acide hyaluronique pour former une liaison covalente, et d’au moins une fonction réticulable, en particulier une fonction réactive X telle que définie précédemment. Il peut s’agir ppaarr exemple d’une molécule de formule (Il-b) suivante : [Chem 5]
F-E-R1 (Il-b) dans laquelle : F représente une fonction apte à réagir avec la fonction acide carboxylique d’une unité de l’acide hyaluronique pour former une liaison covalente, par exemple une fonction amine (- NH2) ; E représente un espaceur organique, par exemple tel que défini pour les molécules de formule (II-a) ; R1 représente une fonction réticulable, par exemple une fonction réactive X telle que définie précédemment, notamment une fonction à insaturation(s) éthylénique(s) telle qu’une fonction éthényle. E peut par exemple comporter une chaîne oligo(alkylène glycol) ou poly(alkylène glycol) (PAG) formée de 2 à 20 unités d’oxydes d’alkylène, par exemple d’oxyde d’éthylène et/ou d’oxyde de propylène, par exemple une chaîne oligo(éthylène glycol) ou poly(éthylène glycol) (PEG). Les greffons porteurs d’au moins une fonction réticulable peuvent par exemple résulter du greffage d’une molécule de formule (II’-b) suivante : [Chem 6] avec E étant tel que défini précédemment. A titre d’exemple, comme illustré en exemple 3, un groupement porteur d’une fonction réticulable peut résulter du greffage d’une molécule de formule suivante [Chem 7] avec m étant un entier compris entre 2 et 20, par exemple 11. Selon un mode de réalisation particulier, le degré de substitution des fonctions acide carboxylique d’un acide hyaluronique modifié selon l’invention par des groupements porteurs d’une fonction réticulable, en particulier une fonction réactive X telle que définie précédemment, peut être compris entre 0,05 et 0,5, en particulier entre 0,07 et 0,5 et plus particulièrement entre 0,1 et 0,5. Comme évoqué précédemment, l’homme du métier est à même de mettre en œuvre des voies de couplage adaptées pour procéder au greffage des groupements souhaités au niveau de l’acide hyaluronique, en particulier avec le degré de substitution souhaité. De manière avantageuse, lorsque les fonctions réticulables sont portées par des groupements distincts des greffons présentant des noyaux aromatiques, le greffage des groupements porteurs d’au moins une fonction réticulable et le greffage des groupements porteurs d’au moins un noyau aromatique mettent en œuvre des réactions de couplage identiques. Par exemple, les greffons peuvent être obtenus à partir de molécules organiques possédant au moins un groupement aromatique et de molécules organiques possédant au moins une fonction réticulable, telles que décrites précédemment, ces molécules comportant en outre au moins une même fonction, par exemple une fonction amine, apte à réagir avec une fonction acide carboxylique de l’acide hyaluronique pour former une liaison covalente. Il est ainsi possible de procéder simultanément au greffage, en particulier au niveau des fonctions acide carboxylique de l’acide hyaluronique, des groupements porteurs d’au moins un noyau aromatique, par exemple d’un noyau benzénique, et des groupements porteurs d’au moins une fonction réticulable. Il est entendu que les différents modes de réalisation précités, en particulier en termes de nature des groupements greffés au niveau de l’acide hyaluronique modifié selon l’invention, peuvent être combinés, dans la mesure du possible. Ainsi, selon un mode de réalisation particulier, un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut être de formule (I) telle que définie ci-dessus, dans laquelle : - n représente le degré de polymérisation de l’acide hyaluronique, autrement dit le nombre d’unité répétitive de disaccharide, en particulier n est compris entre 45 et 2500, et plus particulièrement entre 90 et 700 ; - les groupements R représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d’hydrogène ou un groupe -SO3-C+, avec C+ représentant un contre-ion de l’anion -SO3-, par exemple choisi parmi les cations alcalins et alcalino-terreux, par exemple Na+ , les groupements R pouvant être différents d’une unité répétitive à l’autre, sous réserve qu’au moins une partie des groupements R représentent des groupes -SO3-C+ ; - les groupements R’, identiques ou différents d’une unité répétitive à l’autre, sont choisis parmi : . un groupement O-C+, C+ étant tel que défini précédemment ; . un groupement porteur d’un noyau aromatique, en particulier d’un noyau benzénique et, éventuellement, d’au moins une fonction réticulable, en particulier d’une fonction réactive X telle que définie précédemment ; et . un groupement porteur d’au moins une fonction réticulable, en particulier d’une fonction réactive X telle que définie précédemment ; sous réserve qu’au moins une partie des groupements R’ représentent des groupements porteurs d’un noyau aromatique, en particulier benzénique. En particulier, le polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut être de formule (I), dans laquelle le degré de sulfatation, DSS, est compris entre 1 et 4, en particulier entre 2 et 4, de préférence entre 3 et 4 et plus préférentiellement de 4. En particulier, le polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut être de formule (I), dans laquelle le degré de substitution, DSAr, des fonctions acide carboxylique par des groupements porteurs d’un noyau aromatique est compris entre 0,05 et 0,50, en particulier entre 0,10 et 0,40 et plus particulièrement entre 0,15 et 0,30. Selon un mode de réalisation particulier, le polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut être de formule (I), dans laquelle le degré de substitution des fonctions acide carboxylique par des groupements porteurs d’au moins une fonction réticulable peut être compris entre 0,05 et 0,50, en particulier entre 0,07 et 0,50 et plus particulièrement entre 0,10 et 0,50. Des exemples d’acide hyaluronique modifié selon l’invention, et de leur synthèse, sont présentés dans les exemples qui suivent. ENCRE ET MATERIAUX A BASE DE PEDOT ET/OU PProDOT, DOPE PAR UN ACIDE HYALURONIQUE MODIFIE Comme évoqué précédemment, un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention, tel que décrit précédemment, peut avantageusement être mis en œuvre comme polyélectrolyte pour le dopage de polymères de type polydioxythiophène obtenus à partir d’un ou plusieurs monomères choisis parmi l’EDOT (3,4-éthylènedioxythiophène), le ProDOT (3,4-propylènedioxythiophène), et leurs dérivés. Comme indiqué précédemment, on désigne plus simplement selon l’invention, sous l’appellation « polymères de type PEDOT et/ou PProDOT », les homopolymères et copolymères de monomères choisis parmi l’EDOT, le ProDOT et leurs dérivés. Un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut être plus particulièrement mis en œuvre comme polyélectrolyte pour le dopage de polymères de type PEDOT. Par « polymères de type PEDOT » (respectivement de type PProDOT) selon l’invention, on entend désigner les homopolymères et copolymères de monomères choisis parmi l’EDOT (respectivement le ProDOT), et ses dérivés. De même, on désigne par « monomères de type EDOT » (respectivement de type ProDOT), l’EDOT (respectivement le ProDOT) et ses dérivés. Par « copolymère », on entend un polymère obtenu à partir d’au moins deux monomères différents. Par « dérivés » d’EDOT (respectivement de ProDOT), on entend désigner les composés présentant la structure de l’EDOT (respectivement du ProDOT) et fonctionnalisés sur au moins le 1er ou le 2ème atome de carbone adjacent aux atomes d’oxygène, par exemple par un substituant porteur d’une ou plusieurs fonctions choisies parmi des fonctions acide carboxylique (-COOH), hydroxyle (-OH), amine, thiol (-SH), éthényle (-CH=CH2), azoture (-N3), sulfonate (-SO3-) ou d’au moins un groupe succinimide, ou encore par un groupement exométhylène (=CH2). De manière avantageuse, le dérivé d’EDOT ou de ProDOT est fonctionnalisé par un groupement hydrophile, permettant d’améliorer la solubilité dans l’eau du polymère de type PEDOT et/ou PProDOT. Les dérivés de l’EDOT ou du ProDOT peuvent être plus particulièrement fonctionnalisés par au moins un groupement aliphatique, en particulier présentant de 1 à 100 atomes de carbone, éventuellement interrompu par un ou plusieurs atomes d’oxygène, d’azote et/ou une ou plusieurs fonction(s) ester (-O-C(O)-), et porteur d’au moins une fonction choisie parmi les fonctions hydroxyle (-OH), acide carboxylique (-COOH), thiol (-SH), amine, éthényle (-CH=CH2), azoture (-N3), sulfonate (-SO3-) ou un groupe succinimide (noté - NHS). En particulier, le dérivé de l’EDOT ou du ProDOT peut être fonctionnalisé par un groupement comportant une chaîne oligo(éthylène glycol) ou poly(éthylène glycol). Des dérivés de l’EDOT ou du ProDOT ont déjà été décrits dans la littérature. A titre d’exemples, il peut s’agir d’un EDOT fonctionnalisé par un groupe acide carboxylique (« carboxy-EDOT », comme décrit par exemple dans la publication [39]) ; par un groupement porteur d’un groupe sulfonate, par exemple un groupement alkoxy-sulfonate, par exemple methoxybutane-1-sulfonate (« EDOT-S », comme décrit par exemple dans les publications [40] et [41]) ; par un groupement porteur d’une fonction thiol, par exemple un groupement -CH2-O-(CH2)3-SH (comme décrit dans la publication [42]) ; par des groupements comportant une chaîne polyéthylène glycol, par exemple de type -CH2-EGn- OH, avec EGn représentant une chaîne formée de 1 à 20 unités d’éthylène glycol (comme par exemple décrit dans la publication [43]) ; par un groupement -CH2-OH (« EDOT-OH »), -CH2-O-CH2-COOH (« C2-EDOT-COOH »), -CH2-O-C(O)-(CH)2-COOH (« C4-EDOT- COOH »), -CH2-O-CH2-C(O)-O-NHS (« C2-EDOT-NHS ») ou -CH2-O-CH2-(CH2-O- CH2)3-CH2-N3 (« EDOT-N3 »), comme décrit dans la publication [44] ; par un groupement de type sulfobétaïne (« EDOT-SB » comme décrit dans la publication [45] ; par un groupement exométhylène (« emEDOT », comme décrit dans la publication [46]). A titre d’exemples de dérivés du ProDOT, on peut citer un ProDOT fonctionnalisé sur l’atome de carbone en position beta des atomes d’oxygène, par deux groupements alcényles, par exemple allyles (« ProDOT-diene »), et les dérivés résultant de la réaction du « ProDOT- diene » avec des composés porteurs d’une fonction thiol terminale (R-SH), tels que décrits dans la publication [47]. Ainsi, les polymères de type PEDOT et/ou PProDOT selon l’invention sont plus particulièrement des homopolymères et copolymères formés à partir d’un ou plusieurs monomères choisis parmi les monomères de type EDOT de formule (M1) suivante et les monomères de type ProDOT de formule (M2) suivante : [Chem 8] dans laquelle x vaut 0 (cas de l’EDOT) ou x est un entier compris entre 1 à 4, en particulier x vaut 1 (une seule substitution) ; et R2, identiques ou différents, sont choisis parmi les substituants tels que décrits précédemment, en particulier des groupements porteurs d’au moins une fonction acide carboxylique ou éthényle, et préférentiellement une fonction acide carboxylique ; [Chem 9] dans laquelle z vaut 0 (cas du ProDOT), 1 ou 2, de préférence z vaut 0 ou 2 ; et R3, identiques ou différents, en particulier identiques, sont choisis parmi les substituants tels que décrits précédemment, en particulier des groupements porteurs d’au moins une fonction acide carboxylique ou éthényle, et préférentiellement une fonction acide carboxylique. En particulier, le ou lesdits substituants R3 peuvent être positionnés en bêta des atomes d’oxygène. Selon un mode de réalisation particulier, l’acide hyaluronique modifié selon l’invention est mis en œuvre pour le dopage d’un (co)polymère de type PEDOT, en particulier formé à partir d’un ou plusieurs monomères de type EDOT de formule (M1) précitée. Selon un autre mode de réalisation particulier, l’acide hyaluronique modifié selon l’invention est mis en œuvre pour le dopage d’un (co)polymère de type PProDOT, en particulier formé à partir d’un ou plusieurs monomères de type ProDOT de formule (M2) précitée. Selon encore un autre mode de réalisation particulier, l’acide hyaluronique modifié selon l’invention est mis en œuvre pour le dopage d’un copolymère de type PEDOT-PProDOT, en particulier formé à partir d’un ou plusieurs monomères de type EDOT de formule (M1) précitée et d’un ou plusieurs monomères de type ProDOT de formule (M2) précitée. D’une manière générale, l’association d’un acide hyaluronique modifié selon l’invention à un polymère de type PEDOT et/ou PProDOT peut être obtenue par polymérisation des monomères de type EDOT et/ou ProDOT, en présence d’un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention, tel que décrit précédemment. Plus particulièrement, l’association d’un acide hyaluronique modifié selon l’invention à un polymère de type PEDOT et/ou PProDOT peut être obtenue par polymérisation oxydative des monomères de type EDOT et/ou ProDOT, dans un milieu aqueux comprenant au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention. En particulier, la polymérisation peut être opérée dans une solution d’au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention dans un milieu aqueux. Une suspension aqueuse de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention est alors obtenue. Comme décrit dans la suite du texte, selon une autre variante de réalisation, la polymérisation peut être opérée dans un hydrogel gonflé en milieu aqueux à base d’acide hyaluronique modifié selon l’invention déjà réticulé, ou encore au sein d’une suspension aqueuse, simultanément à la réticulation du polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention. Un hydrogel à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention est alors obtenu. Encre L’invention concerne ainsi, selon un de ses aspects, une suspension aqueuse comprenant au moins un polymère de type PEDOT et/ou PProDOT associé à au moins un acide hyaluronique modifié selon l’invention. Une telle suspension aqueuse est plus couramment désignée sous l’appellation « encre ». L’invention concerne encore, selon un autre de ses aspects, un procédé de préparation d’une encre selon l’invention, dans lequel des monomères de type EDOT et/ou ProDOT sont polymérisés dans une solution comprenant au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention dans un milieu aqueux. Il appartient à l’homme du métier d’ajuster les conditions opératoires pour la préparation d’une encre selon l’invention. La polymérisation des monomères de type EDOT et/ou ProDOT peut être par exemple réalisée en présence d’un oxydant, par exemple du sulfate de fer (Fe3+) et catalysée par du persulfate, comme décrit pour la synthèse du poly(3,4- éthylènedioxythiophène) : sulfate de dextran (PEDOT : DS) par Harman et al. ([23]). Le milieu aqueux peut être par exemple formé d’un mélange d’eau et d’un ou plusieurs solvants organiques, par exemple un mélange d’eau et d’acétonitrile. Sans vouloir être lié par la théorie, comme représenté schématiquement en figure 1 dans le cas de la mise en œuvre de monomères EDOT, les monomères de type EDOT et/ou ProDOT vont être liés à la chaîne d’acide hyaluronique modifié selon l’invention via des interactions faibles de type électrostatique, hydrophobes et interactions « π-π stacking », le polymère de type PEDOT et/ou PProDOT, obtenu à l’issue de la polymérisation, étant ainsi lié à l’acide hyaluronique modifié via ces interactions faibles. Selon un mode de réalisation particulier, lesdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT et le ou lesdits polymères d’acide hyaluronique modifié selon l’invention sont mis en œuvre dans un rapport molaire entres les monomères EDOT et/ou ProDOT et les unités d’acide hyaluronique modifié, compris entre 0,5 et 5, en particulier entre 1 et 4, plus particulièrement entre 1,5 et 4. Une encre selon l’invention peut comprendre une teneur massique en PEDOT/PProDOT:HA modifié, en particulier en PEDOT :HA modifié, comprise entre 1 et 6 % massique (10 à 60 g/L), en particulier entre 2 et 6 % massique (20 à 60 g/L) et plus particulièrement entre 3 et 4,5% massique (30 à 45 g/L). Il est possible de lyophiliser une encre selon l’invention. L’encre lyophilisée peut ensuite être redispersée dans un solvant, par exemple un solvant aqueux, pour sa mise en œuvre, par exemple pour former des hydrogels comme décrit dans la suite du texte. Selon un mode de réalisation particulier, l’encre comprend au moins un polymère de type PEDOT et/ou PProDOT, en particulier de type PEDOT, dopé par un acide hyaluronique modifié selon l’invention, porteur de fonctions réticulables, en particulier de fonctions réactives X telles que définies précédemment, par exemple des fonctions à insaturation(s) éthylénique(s) telles que des fonctions éthényles. Dans le cadre de ce mode de réalisation, l’encre selon l’invention est avantageusement réticulable. Elle peut ainsi être mise en œuvre pour la formation d’hydrogels comme détaillé dans la suite du texte. Matériaux à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié Comme évoqué précédemment, l’invention concerne encore des matériaux à base d’au moins un polymère de type PEDOT et/ou PProDOT, en particulier tel que défini précédemment, dopé par au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention. Elle concerne plus particulièrement un hydrogel à base d’au moins un polymère de type PEDOT et/ou PProDOT, notamment tel que défini précédemment, en particulier de type PEDOT, dopé par au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié, porteur de fonctions réticulables tel que défini précédemment et/ou présentant des fonctions acide carboxylique libres. Un hydrogel est formé d’un réseau tridimensionnel à base de polymères. Dans le cadre d’un hydrogel gonflé en milieu aqueux, le réseau polymère est gonflé par une phase liquide aqueuse. En particulier, un hydrogel gonflé en milieu aqueux (dit encore hydrogel humide) peut comprendre une teneur massique en phase liquide aqueuse allant de 5 à 99 % massique, en particulier de 10 à 99 % massique et plus particulièrement de 20 à 99 % massique. Un hydrogel dit « sec » résulte de l’élimination de la phase liquide aqueuse d’un hydrogel humide. Un hydrogel sec peut plus particulièrement comprendre moins de 20 % massique, en particulier moins de 10 % massique, de phase liquide. Plusieurs variantes peuvent être mises en œuvre pour la formation d’un hydrogel à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention, en particulier à base de PEDOT : HA modifié. Selon une première variante de réalisation, un hydrogel selon l’invention peut être préparé à partir d’une encre réticulable selon l’invention, telle que décrite précédemment, à base de polymère(s) de type PEDOT et/ou PProDOT, en particulier de type PEDOT, dopé(s) avec au moins un acide hyaluronique modifié selon l’invention et porteur de fonctions réticulables et/ou présentant des fonctions acide carboxylique libres, de préférence porteur de fonctions réticulables. Un hydrogel à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention, en particulier à base de PEDOT : HA modifié, peut ainsi être obtenu en procédant à la réticulation d’une encre selon l’invention. Plus particulièrement, selon une première variante de réalisation, un hydrogel à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention, en particulier à base de PEDOT : HA modifié, peut être préparé via au moins les étapes consistant en : (a-i) disposer d’une encre réticulable, comprenant au moins un polymère de type PEDOT et/ou PProDOT, en particulier de type PEDOT, dopé par au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention et porteur de fonctions réticulables et/ou présentant des fonctions acide carboxylique libres, de préférence porteur de fonctions réticulables ; (a-ii) soumettre ladite encre à des conditions propices à la réticulation desdites chaînes d’acide hyaluronique modifié pour former un hydrogel gonflé en milieu aqueux ; et, éventuellement, (a-iii) soumettre ledit hydrogel gonflé en milieu aqueux à une étape de séchage pour obtenir un hydrogel sec. Selon une autre variante de réalisation, comme évoqué précédemment, un hydrogel selon l’invention peut être préparé par polymérisation des monomères de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier de type EDOT, dans un hydrogel formé au préalable à partir d’au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié et porteur de fonctions réticulables selon l’invention et/ou présentant des fonctions acide carboxylique libres, de préférence porteur de fonctions réticulables. Plus particulièrement, selon une deuxième variante de réalisation, un hydrogel à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention, en particulier à base de PEDOT : HA modifié, peut être préparé via au moins les étapes consistant en : (b-i) disposer d’un hydrogel, gonflé en milieu aqueux, formé à partir d’au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention et porteur de fonctions réticulables et/ou présentant des fonctions acide carboxylique libres, de préférence porteur de fonctions réticulables ; (b-ii) procéder à la polymérisation de monomères de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier de type EDOT, dans ledit hydrogel, gonflé en milieu aqueux, à base d’acide hyaluronique modifié ; et, éventuellement (b-iii) soumettre ledit hydrogel obtenu à l’issue de l’étape (b-ii) à une étape de séchage pour obtenir un hydrogel sec. L’hydrogel à base d’au moins un acide hyaluronique modifié selon l’invention, mis en œuvre en étape (b-i) du procédé de l’invention est plus particulièrement obtenu au préalable en soumettant une solution d’au moins un acide hyaluronique modifié selon l’invention et porteur d’au moins des fonctions réticulables et/ou présentant des fonctions acide carboxylique libres, de préférence porteur de fonctions réticulables, dans un milieu aqueux, à des conditions propices à la réticulation desdites chaînes d’acide hyaluronique modifié pour former un hydrogel gonflé dans ledit milieu aqueux. Le milieu aqueux peut être tel que décrit précédemment pour une encre selon l’invention. Par exemple, il peut être formé d’un mélange d’eau et d’un ou plusieurs solvants organiques, par exemple un mélange d’eau et d’acétonitrile. La polymérisation en étape (b-ii) des monomères de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier de type EDOT, dans un hydrogel à base d’acide hyaluronique modifié, peut être plus particulièrement opérée en imbibant l’hydrogel gonflé en milieu aqueux à base de HA modifié selon l’invention, desdits monomère de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier de type EDOT, puis en soumettant ledit hydrogel à base de HA modifié imbibé desdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier de type EDOT, à des conditions propices à la polymérisation desdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier de type EDOT. L’hydrogel imbibé d’au moins lesdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT peut être par exemple obtenu via les étapes intermédiaires suivantes : - formation, à partir de l’hydrogel gonflé en milieu aqueux à base d’acide hyaluronique modifié, d’un hydrogel sec, par exemple en portant l’hydrogel dans des conditions propices à la gélification du milieu aqueux, suivie de l’élimination du milieu aqueux par évaporation, par lyophilisation ou par séchage supercritique ; et - immersion dudit hydrogel sec dans une solution d’au moins un monomère de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier de type EDOT, en milieu aqueux, par exemple dans un mélange d’eau et d’acétonitrile ; pour obtenir ledit hydrogel gonflé en milieu aqueux et imbibé desdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier de type EDOT. La polymérisation en étape (b-ii) desdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier de type EDOT, dans l’hydrogel aqueux peut être opérée dans des conditions telles que décrites précédemment pour la polymérisation, en solution aqueuse, des monomères de type EDOT et/ou ProDOT, dans le cadre de la préparation d’une encre selon l’invention. La polymérisation des monomères de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier de type EDOT, dans l’hydrogel aqueux peut être par exemple réalisée en présence d’un oxydant, par exemple du sulfate de fer (Fe3+) et catalysée par du persulfate. Dans ce cas, l’hydrogel à base d’acide hyaluronique modifié, une fois imbibé par lesdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier de type EDOT, peut être immergé dans une solution aqueuse contenant au moins ledit oxydant et ledit catalyseur. L’hydrogel obtenu à l’issue de l’étape (b-ii) est ainsi à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié, en particulier à base de PEDOT :HA modifié. Dans le cadre de l’une ou l’autre des variantes décrites précédemment de préparation d’un hydrogel à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention, en particulier à base de PEDOT : HA modifié, il appartient à l’homme du métier de mettre en œuvre des conditions de réticulation adaptées, pour permettre de conduire à une réticulation suffisante des chaînes d’acide hyaluronique modifié, pour accéder à un hydrogel (soit pour accéder en étape (a-ii) à un hydrogel à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon la première variante précitée, soit pour accéder à un hydrogel à base de HA modifié mis en œuvre en étape (b-i) selon la deuxième variante précitée). Les conditions de réticulation, en particulier de nature physique ou chimique, dépendent bien entendu de la nature des fonctions réticulables portées par l’acide hyaluronique modifié. Comme indiqué précédemment, diverses voies de réticulation sont envisageables, pour autant qu’elles permettent de conduire à la formation d’un hydrogel. De préférence, la réticulation met en jeu l’établissement de liaisons chimiques covalentes entre les chaines d’acide hyaluronique modifié. Selon un mode de réalisation particulier, un hydrogel, selon l’une ou l’autre des variantes précitées, est formé à partir d’au moins deux polymères d’acide hyaluronique modifié distincts, lesdits polymères d’acide hyaluronique modifié selon l’invention présentant des fonctions réticulables, notées X et Y, distinctes, telles que décrites précédemment. Dans un mode de réalisation particulier, lesdites fonctions réticulables X et Y peuvent être aptes à réagir ensemble pour former une liaison covalente. A titre d’exemple, les fonctions réticulables X et Y peuvent être respectivement une fonction aldéhyde ou cétone, et une fonction amine telle qu’une fonction hydroxylamine ou hydrazide, lesdites fonctions X et Y étant aptes à réagir ensemble pour former des liaisons imines, en particulier des liaisons oxime ou hydrazone. Les fonctions réticulables X et Y peuvent encore être, par exemple, respectivement une fonction thiol et une fonction méthacrylate ou acrylate, lesdites fonctions X et Y étant aptes à réagir ensemble selon une réaction d’addition de type Michael. Les fonctions réticulables X et Y peuvent encore être, par exemple, respectivement une fonction diol vicinal plan et une fonction acide boronique, par exemple phénylboronique, lesdites fonctions X et Y étant aptes à réagir ensemble selon une réaction de couplage covalent dynamique. Bien entendu, l’invention n’est nullement limitée aux voies de réticulation précitées, et d’autres voies de réticulation peuvent être envisagées, par exemple par l’intermédiaire de fonctions réticulables aptes à établir des interactions physiques, telles que décrites précédemment. Selon un autre mode de réalisation particulier, un hydrogel, selon l’une ou l’autre des variantes précitées, est formé à partir d’un unique polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention et porteur d’au moins des fonctions réticulables. Dans un mode de réalisation particulier, lesdites fonctions réticulables peuvent réagir entre elles, comme c’est le cas par exemple des fonctions tyramine, lesdites chaines d’acide hyaluronique modifié selon l’invention étant alors aptes à s’auto-réticuler par couplage (dimérisation) oxydant des fonctions tyramines en présence de H2O2 et de HRP. Dans un autre mode de réalisation particulier, les fonctions réticulables dudit polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peuvent être des fonctions réactives X, telles que définies précédemment, réticulables en présence d’un agent de réticulation. Par « agent de réticulation », on entend désigner une molécule organique porteuse d’au moins deux fonctions réactives, ladite molécule étant apte à permettre, par exemple sous l’action d’une stimulation extérieure, en particulier sous l’action de la chaleur et/ou d’un rayonnement UV, la réticulation desdites chaînes d’acide hyaluronique modifié selon l’invention, par réaction avec lesdites fonctions réticulables dudit acide hyaluronique modifié. Il relève des compétences de l’homme du métier de choisir un agent de réticulation adapté pour permettre la réticulation des chaînes de polymères d’acide hyaluronique modifié selon l’invention. La nature de l’agent de réticulation est également susceptible d’influer sur les propriétés mécaniques de l’hydrogel formé à l’issue de la réticulation.
De manière avantageuse, l’agent de réticulation est biocompatible, hydroly sable dans des conditions physiologiques.
Dans le cas de la mise en œuvre d’un polymère d’acide hyaluronique porteur de fonctions réticulables en présence d’au moins un agent de réticulation, la solution ou suspension à partir de laquelle est formée l’hydrogel, par exemple l’encre à base de PEDOT/PProDOT : HA modifié en étape (a-i) selon la première variante de préparation d’un hydrogel à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention, est supplémentée par au moins un agent de réticulation et, éventuellement, au moins un composé photo-initiateur.
Comme évoqué précédemment, l’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut être fonctionnalisé avec des fonctions réactives X telles que décrites précédemment, en particulier des fonctions à insaturation(s) éthylénique(s), par exemple des fonctions éthényles.
Dans le cadre de ce mode de réalisation, l’agent de réticulation peut être une molécule organique possédant au moins deux fonctions réactives, en particulier de deux à quatre fonctions réactives, par exemple deux fonctions réactives, notées Y, les fonctions X et Y étant identiques ou différentes, chacune des fonctions Y étant apte à réagir avec une fonction réactive X dudit polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention, pour former une liaison physique ou chimique, de préférence une liaison chimique covalente, en particulier sous l'action de la chaleur et/ou d’un rayonnement UV et, éventuellement, en présence d’au moins un composé photo-initiateur.
Les fonctions Y peuvent être par exemple des fonctions thiols (-SH), aptes à réagir avec des fonctions X de type alcène, en particulier éthylènes, portées par l’acide hyaluronique modifié selon l’invention, pour former des liaisons covalentes (réticulation dite « thiol-ène »).
Selon un mode de réalisation particulier, l’agent de réticulation mis en œuvre selon l’invention peut être de formule (III) suivante :
[Chem 10]
E’(-Y)y (III) dans laquelle : y est un entier allant de 2 à 4, en particulier y vaut 2 (agent de réticulation bifonctionnel) ou 3 (agent de réticulation trifonctionnel) ; Y, identiques ou différents, de préférence identiques, sont des fonctions aptes à réagir, en particulier sous l’action de la chaleur ou d’un rayonnement UV, avec une fonction réactive X, en particulier de type alcène, notamment éthylène, portée par l’acide hyaluronique modifié mis en œuvre selon l’invention ; en particulier Y sont des fonctions thiols (-SH) ; et E’ est un groupe espaceur organique divalent, trivalent ou tétravalent. Le groupe espaceur organique E’ peut être un groupement aliphatique, linéaire ou ramifié, en particulier comprenant de 2 à 1000 atomes de carbone, et comprenant éventuellement une ou plusieurs insaturations et/ou un ou plusieurs hétéroatomes, et éventuellement substitué par une ou plusieurs fonctions hydroxyle. A titre d’exemples d’agent réticulant bifonctionnel, on peut citer des molécules formées d’une chaîne oligo ou poly(alkylène glycol) (PAG), par exemple oligo ou poly(éthylène glycol), porteuse à chacune de ses extrémités de fonctions thiols (HS-PAG-HS). En particulier, la chaîne PAG de l’agent de réticulation peut être formée de 2 à 250, en particulier de 5 à 100, unités d’oxydes d’alkylène, en particulier oxyde d’éthylène. On peut encore citer comme agents de réticulation porteurs de deux à quatre fonctions thiols, le dithiothréitol (DTT), le triméthylolpropane tris(mercaptoacétate), le pentaerythritol tetrakis(mercaptoacétate) ou encore le pentaerythritol tetrakis(3-mercaptopropionate). La ou lesdites molécules, mises en œuvre comme agent de réticulation, peuvent être disponibles dans le commerce. Alternativement, elles peuvent être obtenues préalablement à leur mise en œuvre dans un procédé selon l’invention. Selon un mode de réalisation particulier, le ou lesdits agents de réticulation sont mis en œuvre en une quantité telle que le rapport molaire entre les fonctions Y de l’agent réticulant et les fonctions X de l’acide hyaluronique modifié, est inférieur ou égal à 1, en particulier compris entre 0,5 et 1 et de préférence strictement inférieur à 1. La réticulation peut être activée par un stimulus externe, par exemple par la chaleur (réticulation thermo-activée) et/ou sous un rayonnement (réticulation photo-activée). Dans le cas de la mise en œuvre d’un agent de réticulation photo-activable, ledit agent de réticulation peut être mis en œuvre dans la solution ou suspension comprenant au moins ledit polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention, à partir de laquelle est formé un hydrogel, par exemple dans l’encre à base de PEDOT/PProDOT : HA modifié de l’étape (a- i) selon la première variante précitée, conjointement avec au moins un composé photo- amorceur. A titre d’exemple, la réticulation « thiol-ène » peut être photo-activée en présence d’un photo-amorceur, tel que le phényl-2,4,6-triméthylbenzoylphosphinate de lithium. Il appartient aux compétences de l’homme du métier d’ajuster les conditions de thermo ou photo-réticulation, notamment en termes de puissance et de durée du chauffage ou d’irradiation au rayonnement UV, pour obtenir une réticulation suffisante permettant d’accéder à l’hydrogel souhaité. Bien entendu, l’invention n’est nullement limitée à ce mode particulier de réticulation par une chimie « thiol-ène » photoactivée. Ainsi, d’autres voies de réticulation peuvent être mises en œuvre, telles que citées précédemment. Dans une autre variante de réalisation, la réticulation desdites chaînes d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut être réalisée, en l’absence de greffage de fonctions réticulables au niveau de la chaîne d’acide hyaluronique modifié, à partir des fonctions acide carboxylique libres de l’acide hyaluronique modifié selon l’invention. Par fonction acide carboxylique libre, on entend une fonction acide carboxylique (- C(O)OH), éventuellement sous la forme de sel carboxylate -C(O)O-C+ où C+ représente un contre-ion, en particulier choisi parmi les cations alcalins et alcalino-terreux, par exemple Na+. Dans le cadre de cette variante, la réticulation des chaînes d’acide hyaluronique modifié selon l’invention peut être plus particulièrement opérée en présence d’un agent de réticulation présentant au moins deux fonctions de type amine primaire ou hydrazide, en particulier deux fonctions de type amine primaire ou hydrazide ; lesdites fonctions étant aptes à interagir avec des fonctions acide carboxylique libres par une réaction de couplage activée à l’aide d’un agent d’activation, pour former des liaisons amides. A titre d’exemple d’agent de réticulation porteur de deux fonctions hydrazides, peut être cité le dihydrazide d’acide adipique (ADH), ce dernier étant particulièrement avantageux compte-tenu de sa biocompatibilité. L’agent d’activation pour activer la réaction de couplage amide peut être par exemple l’hydrochlorure de N-(3-diméthylaminopropyl)-N’-éthylcarbodiimide (EDC). Selon une troisième variante de réalisation, un hydrogel selon l’invention peut être préparé en opérant, simultanément, la polymérisation des monomères de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier de type EDOT, et la réticulation dudit polymère d’acide hyaluronique modifié et porteur de fonctions acide carboxylique libres. L’homme du métier est à même d’ajuster les conditions opératoires afin que les conditions mises en œuvre pour la réticulation dudit polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention soient compatibles avec les conditions de polymérisation des monomères de type EDOT et/ou ProDOT. Plus particulièrement, selon une troisième variante de réalisation, un hydrogel à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention, en particulier à base de PEDOT : HA modifié, peut être préparé via au moins les étapes consistant en : (c-i) disposer d’une suspension aqueuse comprenant au moins des monomères de type EDOT et/ou ProDOT, au moins ledit polymère d’acide hyaluronique modifié présentant des fonctions acides carboxyliques libres, au moins un catalyseur de la polymérisation des monomères de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier du persulfate ; et au moins un agent de réticulation ; (c-ii) soumettre ladite suspension à des conditions propices à la polymérisation desdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT et à la réticulation desdites chaînes d’acide hyaluronique modifié pour former ledit hydrogel gonflé en milieu aqueux ; et éventuellement (c-iii) soumettre ledit hydrogel obtenu à l’issue de l’étape (c-ii) à une étape de séchage pour obtenir ledit hydrogel sec. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, l’agent de réticulation mis en œuvre présente au moins deux fonctions de type amine primaire ou hydrazide, en particulier deux fonctions de type amine primaire ou hydrazide, de préférence l’ADH. La réticulation desdits chaînes en étape (c-ii) peut être initiée par ajout à ladite suspension d’un agent d’activation des fonctions acides carboxyliques, tel que l’EDC. Dans le cadre de ce mode de réalisation, la suspension aqueuse, mise en œuvre pour opérer simultanément la polymérisation desdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT et la réticulation desdites chaînes d’acide hyaluronique modifié, présente de préférence un bas pH, par exemple inférieur ou égal à 5. Selon un mode de réalisation particulier, la formation de l’hydrogel gonflé en milieu aqueux à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention, selon l’une ou l’autre des variantes précitées, peut être suivie d’au moins une étape de séchage, total ou partiel, permettant d’éliminer au moins en partie le milieu solvant aqueux présent dans l’hydrogel. L’élimination du milieu solvant est avantageusement opérée dans des conditions permettant de conserver la structure et la cohésion de l’hydrogel obtenu à l’issue de la réticulation. L’hydrogel gonflé en milieu aqueux peut être par exemple séché à température ambiante. Par « température ambiante », on entend une température de 20 °C ± 5°C. L’hydrogel sec formé, en particulier sous forme de film, est apte à gonfler lorsqu’il est mis au contact d’un milieu aqueux pour reformer un hydrogel gonflé en milieu aqueux. La solution ou suspension comprenant au moins ledit polymère d’acide hyaluronique modifié selon l’invention, à partir de laquelle est formé un hydrogel, par exemple l’encre à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié de l’étape (a-i) selon la première variante précitée, peut être mise en forme, préalablement à l’étape de réticulation, pour accéder à un hydrogel présentant la forme et les dimensions souhaitées. L’hydrogel à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention formé à l’issue de l’une ou l’autre des variantes de procédé décrites précédemment, éventuellement après séchage, peut ainsi être de forme et taille variées, en fonction notamment de l’application à laquelle il est destiné. Par exemple, la solution ou suspension à base de polymère(s) d’acide hyaluronique modifié selon l’invention, par exemple l’encre à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention, peut être réticulée dans un récipient, « moule », ayant la forme et les dimensions souhaitées pour l’hydrogel final. Selon un mode de réalisation particulier, l’hydrogel, gonflé en milieu aqueux ou sec, peut se présenter sous la forme d’un film. Le film peut être formé en surface d’un substrat puis, éventuellement désolidarisé dudit substrat pour former un film d’hydrogel conducteur auto- supporté. Dans le cadre de ce mode de réalisation, la suspension ou solution en étape (a-i), (b-i) ou (c- i) à base de polymère(s) d’acide hyaluronique modifié selon l’invention, par exemple l’encre à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié suivant la première variante précitée, peut être appliquée, avant réticulation, à la surface d’un substrat, de manière avantageuse sur des zones déterminées de la surface d’un substrat, de manière à créer le motif et les dimensions souhaités pour le film d’hydrogel conducteur final. Le substrat fait référence à une structure de base solide, sur une des faces duquel est déposée la solution ou suspension à base de HA modifié selon l’invention, par exemple une encre conductrice selon l’invention. Il peut être de forme et de dimensions variées en fonction de l’application à laquelle il est destiné. Il peut se présenter par exemple sous la forme d’une surface plane, structurée ou non, ou encore d’un objet 3D, par exemple sous la forme de micropiliers, de grilles, de fibres, etc. Le substrat peut être de nature variée, rigide ou souple. Il peut s’agir d’un support en céramique, par exemple en verre, alumine, porcelaine ; en métal, par exemple en acier inoxydable, en cuivre, en aluminium, ou encore en matière plastique. Avantageusement, le procédé selon l’invention peut être mis en œuvre pour des supports polymères rigides ou flexibles. Par exemple, le support peut être en PET (polyéthylène téréphtalate), en PEN (polyéthylène naphtalate), en polycarbonate, en poly(uréthane), en poly(saccharide) (cellulose, nanocellulose, films de chitosan), en matériau protéique (fibres de collagène par exemple). Le support peut également être un matériau 3D structuré sous forme de micropiliers, de grilles, de fibres, par exemple des fibres obtenues par électrofilage ou autres (poly(caprolactone), PVA (alcool polyvinylique), des fibroïnes de soie, etc.), des aérogels en cellulose. L’hydrogel à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention, en particulier à base de PEDOT : HA modifié, peut être par exemple formé, en particulier sous la forme d’un film, directement en surface du substrat d’intérêt, par exemple pour former un revêtement en surface d’une électrode d’un dispositif bioélectronique. La solution ou suspension à base de HA modifié selon l’invention, par exemple l’encre à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention, en particulier à base de PEDOT : HA modifié, peut être appliquée par toute technique connue de l’homme du métier. L’application de la solution ou suspension en surface du substrat peut être opérée par exemple par enduction, par impression par jet d’encre, par dépôt par nébulisation (« spray- coating » en langue anglaise), par sérigraphie, par immersion etc.. L’épaisseur du dépôt de la solution ou suspension, en particulier de l’encre à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié, notamment à base de PEDOT : HA modifié, à la surface du substrat peut être variable. Par exemple, elle peut être comprise entre 0,1 et 500 µm, en particulier entre 1 et 300 µm. De manière avantageuse, l’hydrogel, en particulier sous la forme d’un film, formé selon l’invention en surface d’un substrat peut être lié de manière covalente (ou « greffé ») à la surface du substrat. Dans le cadre de cette variante de réalisation, la surface du substrat, destinée à supporter l’hydrogel selon l’invention, peut présenter des fonctions Y, en particulier telles que décrites précédemment, par exemple des fonctions à hydrogène labile telles que des fonctions thiols aptes à réagir avec des fonctions réticulables X, par exemple des fonctions alcènes, portées par l’acide hyaluronique modifié selon l’invention. Le film d’hydrogel peut ainsi être lié à la surface du substrat via l’établissement de liaisons covalentes entre lesdites fonctions réticulables X portées par l’acide hyaluronique modifié, et lesdites fonctions Y présentes à la surface du substrat destinée à supporter l’hydrogel. La surface du substrat, destinée à supporter l’hydrogel selon l’invention, peut être soumise à un traitement préalable pour générer lesdites fonctions Y, en particulier des fonctions à hydrogène labile, par exemple lesdites fonctions thiols. La réticulation des chaînes d’acide hyaluronique modifié, suivant l’une ou l’autre des variantes de procédé selon l’invention pour former un hydrogel, conduit simultanément au greffage des chaînes d’acide hyaluronique modifié en surface du substrat. APPLICATIONS Comme indiqué précédemment, l’encre et les matériaux, en particulier les hydrogels, formés à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention, en particulier à base de PEDOT : HA modifié, trouvent des applications particulièrement intéressantes dans le domaine biomédical, en particulier pour la conception de dispositifs bioélectroniques et biocapteurs destinés à être mis en contact avec du matériau biologique, par exemple destinés à être implantés in vivo, par exemple pour le suivi ou la stimulation des tissus biologiques. Plus particulièrement, les encres et matériaux, notamment hydrogels, formés selon l’invention sont avantageusement mis en œuvre dans des dispositifs bioélectroniques pour servir d’interface avec les tissus biologiques, par exemple pour fournir un support d’adhésion, de multiplication et de croissance cellulaire. De manière avantageuse, l’encre et matériaux dérivés de l’encre sont biocompatibles (ou cytocompatibles). Par « biocompatibles », on entend que l’encre et les matériaux dérivés de l’encre, tels que des hydrogels, sont aptes à être en contact avec des cellules biologiques sans dégrader lesdites cellules. Ils sont également avantageusement biodégradables. Par « biodégradable », on entend, au sens de la présente demande, un matériau apte à être résorbé, absorbé, et/ou dégradé par les tissus ou lessivé du site d’implantation et disparaissant in vivo après un certain temps, qui peut varier, par exemple, de quelques heures à quelques mois. L’encre et les matériaux, en particulier hydrogels, formés à base de PEDOT/PProDOT :HA modifié selon l’invention présentent avantageusement une bonne conductivité électrique, en particulier dans des conditions physiologiques (pH 7,4 en milieu aqueux), sans nécessiter de traitement ou de dopage complémentaire. Ils peuvent ainsi présenter une conductivité supérieure ou égale à 0,1 S/cm, en particulier supérieure ou égale à 1 S/cm. La conductivité peut être mesurée selon des méthodes connues de l’homme du métier. Par exemple, comme décrit dans l’exemple 5 qui suit, la conductivité d’un film d’hydrogel selon l’invention peut être déduite de la mesure de résistivité du film, par exemple en utilisant un résistivimètre 4 pointes. De manière avantageuse, les hydrogels formés selon l’invention à base du complexe de polymère(s) de type PEDOT et/ou PProDOT dopé(s) par un acide hyaluronique modifié selon l’invention présentent également une excellente stabilité dans l’eau ou dans un milieu salin tamponné. Par ailleurs, les hydrogels formés selon l’invention présentent d’excellentes performances mécaniques, notamment de bonnes propriétés de viscoélasticité. Ils peuvent présenter un module d’élasticité, encore appelé module de Young, élevé. En particulier, le module d’élasticité peut être compris entre 100 Pa et 1 MPa, en particulier compris entre 300 Pa et 500 kPa. Les propriétés de viscoélasticité d’un hydrogel formé selon l’invention peuvent être étudiées par des mesures rhéologiques en mode dynamique (détermination des modules de stockage (G’) et de perte (G’’) en fonction de la fréquence). Le module de Young peut être déterminé par des tests de compression. Du fait de leurs excellentes propriétés de viscoélasticité, les hydrogels formés selon l’invention sont aisément conformables, en particulier conformables aux tissus biologiques. Ils peuvent ainsi former des interfaces pour des dispositifs bioélectroniques, par exemple des implants, conformables aux tissus biologiques, autrement dit pouvant prendre la forme ou la géométrie du tissu biologique avec lequel il est destiné à être mis en contact. Leur nature riche en eau et leurs propriétés mécaniques semblables à celles des tissus biologiques, font des hydrogels selon l’invention, des interfaces idéales avec les tissus biologiques pour des dispositifs bioélectroniques. Les matériaux selon l’invention fournissent ainsi une interface étroite entre l’implant et le site tissulaire. Ils peuvent par exemple être mis en œuvre comme revêtement pour des électrodes implantées, par exemple des électrodes intracrâniennes, ou encore pour former des microélectrodes. L’invention va maintenant être décrite au moyen des exemples et figures suivants, donnés bien entendu à titre illustratif et non limitatif de l’invention. Exemple Dans les exemples qui suivent, les abréviations suivantes sont utilisées. HA : acide hyaluronique ; NaHA : hyaluronate de sodium; HA-TBA : sel de hyaluronate de tétrabutylammonium ; TBA: tétrabutylammonium ; HAS : acide hyaluronique sulfaté. Exemple 1 Préparation d’un acide hyaluronique modifié selon l’invention porteur de groupements sulfates et de greffons comportant un noyau aromatique (HAS4-PBA0,3) 1.1. Sulfatation du hyaluronate de sodium (NaHA) Dans une première étape, on procède à la sulfatation du NaHA via la substitution des fonctions hydroxyles du HA par des sulfates. La sulfatation du HA est opérée selon un protocole adapté de la littérature ([24]-[29]) ; elle procède en trois étapes, comme représenté schématiquement ci-dessous : formation du sel tétrabutylammonium hyaluronate (HA-TBA), réaction de sulfatation et purification. [Chem 11] Formation du HA-TBA Régénération de la résine 50 g de résine Amberlite® IR-120 sont insérés dans une colonne (1,5 cm de diamètre interne, 25 cm de hauteur), et rincés avec 300 mL d’eau ultrapure Milli Q 18,2 MΩ (nommée ci- après plus simplement « eau »). Une solution d’hydroxyde de sodium (NaOH) à 0,4 M a été éluée jusqu’à pH basique. L’eau a été éluée jusqu’à pH neutre. Une solution d’acide chlorhydrique (HCl) à 100 g/L a été éluée jusqu’à pH acide, puis la colonne a été bloquée pendant 30 minutes. Le reste de HCl a été élué, puis la résine est lavée par élution à l’eau jusqu’à pH neutre. Pendant tout le processus, la résine n’a jamais été séchée afin d’éviter toute bulle d’air. Formation du HA-TBA 1 g de NaHA a été dissous dans 300 mL d’eau. La solution de NaHA a été éluée à travers 50 g de la résine Amberlite® IR-120 neutralisée et sous forme H+, goutte à goutte sans appliquer de pression. La résine a été rincée avec 100 mL d’eau. Le pH final a été vérifié comme étant d’environ 2,7-2,9. 2 g d’hydroxyde de tétrabutylammonium (TBA-OH) ont été dilués dans 10 mL d’eau, et ajoutés goutte à goutte à la solution d’acide hyaluronique jusqu’à ce que le pH soit proche de 4,2-4,3. La solution de HA-TBA a ensuite été congelée dans de l’azote liquide et lyophilisée. L’analyse du degré de substitution par le TBA, DSTBA, a été réalisée par intégration RMN 1H : l’intégration du signal à 1,99 ppm correspondant aux protons N-acétyle du HA est normalisée à 3. Le degré obtenu de substitution DSTBA, calculé comme suit, est d’environ 1. [Math 1] Le HA-TBA a été obtenu avec un rendement supérieur à 95 %. (RMN 1H (D2O, 353 K) : 4,68-4,36 (2H, dd), 4,25 (HDO peak), 3,95-3,25 (10H, m), 3,18- 3,10 (8Ha, t), 2,10-1,84 (3H, s), 1,70-1,56 (8Hb, quint), 1,42-1,28 (8Hc, hex), 1,00-0,86 (12Hd, t)). Réaction de sulfatation 1 g de HA-TBA (1 équivalent) a été mis en suspension dans 212 mL de diméthylformamide (DMF), agité 5 minutes sous azote. La suspension a été refroidie à 4 °C et agitée sous azote pendant 1h30. Pendant ce temps, 4,94 g de complexe de diméthylformamide-trioxyde de soufre (SO3DMF, 20 équivalents) ont été dissous dans 40 mL de DMF et dégazés par barbotage d’azote pendant 5 minutes. La solution de SO3DMF a été ajoutée immédiatement à la solution de HA-TBA. Le milieu réactionnel a été rapidement purgé à l’azote, puis agité 1 heure à 4°C sous azote. Purification Après 1 heure, le milieu réactionnel a été sorti du réfrigérateur, et la réaction a été stoppée par addition de 667 mL d’une solution de NaOH à 50,8 mM (21 équivalents d’ions OH-), le pH de la solution était d’environ 2,4-2,6. Le pH de la solution a été neutralisé avec une solution de NaOH 2M. 6 g de chlorure de sodium (NaCl) ont été dissous dans 70 mL d’eau et ajoutés au milieu réactionnel pour obtenir une concentration finale en NaCl de 0,5 M. L’acide hyaluronique sulfaté (HAS) a été précipité en ajoutant lentement 1,7 L d’EtOH sous forte agitation. Le milieu a été agité 10 minutes, puis filtré avec un filtre P4 en verre fritté. La poudre blanche a été recueillie et dissoute dans 50 mL d’eau. 475 mL de EtOH ont été lentement ajoutés sous forte agitation. Le milieu a été agité 10 minutes, puis filtré avec un filtre P4 en verre fritté. La poudre blanche a été collectée et dissoute dans 50 mL d’eau. 643 mg de NaCl ont été dissous dans l’eau et ajoutés au milieu réactionnel pour obtenir une concentration finale de NaCl de 0,2 M. Le milieu a été filtré sous filtre 0,8 µm pour éliminer les particules. Le milieu a été dialysé contre de l’eau osmosée avec une membrane de 6 à 8 kDa, en changeant le bain toutes les 4 à 10 heures jusqu’à ce que la conductivité de l’eau soit inférieure à 8 µS/cm. La solution de HAS a ensuite été lyophilisée. Le HAS a été obtenu avec un rendement d’environ 60 %. Analyse Le degré de sulfatation DSsulfatation (noté également DSs) de l’échantillon est défini comme le nombre moyen de sulfate par unité de répétition d’acide hyaluronique. Puisque le sulfate remplace les fonctions hydroxyles de l’acide hyaluronique, le degré de sulfatation DSs peut aller de 0 à 4. Le DSs a été analysé en utilisant deux techniques complémentaires. La fraction massique de sulfate de l’échantillon a été analysée à l’aide d’une méthode turbidimétrique adaptée de la littérature [30]. La veille de l’analyse, de la gélatine à 5 g/L dans l’eau a été préparée. Le jour de l’analyse, du chlorure de baryum (BaCl2) a été ajouté à la solution pour obtenir une suspension gélatine/BaCl2 avec [BaCl2]=5 g/L. La solution a été agitée pendant deux heures. 1,5-2 mg d’échantillon ont été dissous dans HCl 1M pour obtenir [HAS]=1,5 g/L dans un volume de 1000 mL. La suspension a été chauffée pendant 3 heures à 107°C et ensuite refroidie à température ambiante. 25 à 55 µL de suspension ont été transvasés dans un vial, complété jusqu’à 100 µL avec du HCl 1M, ensuite 700 µL d’une solution d’acide trichloroacétique (TCA) à 30 g/L ont été ajoutés, suivis par 200 µL d’une solution de 5 g/L de gélatine + 5 g/L de BaCl2. Le vial a été agité au vortex toutes les cinq minutes pendant 25 minutes, avant de mesurer l’absorbance à 360 nm. La courbe de calibration a été établie en mélangeant 40, 60, 80 ou 100 µL de Na2SO4 à 0,59 g/L, en ajustant à 100 µL avec du HCl 1M si nécessaire, puis en ajoutant 700 µL d’une solution de TCA 30 g/L et 200 µL d’une solution de 5 g/L de gélatine + 5 g/L de BaCl2. Le blanc a été préparé en mélangeant 100 µL de HCl 1M + 700 µL de TCA 30 g/L + 200 µL de gélatine 5 g/L (sans BaCl2). La fraction massique en acide glucuronique de l’échantillon a été analysée en utilisant une méthode colorimétrique adaptée de la littérature [31], [32] (Chaque unité répétitive d’acide hyaluronique contient un acide glucuronique). La veille de l’analyse, du tétraborate de sodium (Na2B4O7) à 25 mM dans l’acide sulfurique concentré et 7,48 mM de carbazole dans l’éthanol anhydre ont été préparés (la solution de carbazole est laissée une nuit au réfrigérateur, et la solution de tétraborate est laissée une nuit dans l’étuve à 40°C). Aucun barreau magnétique n’a été introduit pour éviter la contamination. 0,7-1 mg d’échantillon ont été dissous dans 1,5 mL d’eau, puis 40 µL sont prélevés et introduits dans un vial de 4 mL. Le volume a été ajusté jusqu’à 200 µL avec de l’eau. La courbe de calibration a été établie en préparation quatre vials différents contenant 5, 15, 25 et 40 µg de NaHA 100 kg/mol dans 200 µL d’eau. Dans l’ensemble des vials (échantillon et étalonnage), 800 µL de Na2B4O7 ont été ajoutés. Les vials ont été agités sous vortex, chauffés 10 minutes à 100°C dans un bain d’huile et refroidis dans l’eau pendant 15 minutes. 200 µL de solution de carbazole ont été ajoutés. Les vials ont été soumis à un vortex, chauffés pendant 10 minutes à 100°C dans un bain d’huile et refroidis dans l’eau pendant 15 minutes. L’absorbance a été mesurée à 530 nm. Le degré de sulfatation a été calculé à l’aide de l’équation suivante. [Math 2] avec wSO3Na représentant la fraction massique en sulfate de l’échantillon, wunité répétitive HA la fraction massique en acide glucuronique de l’échantillon ; MSO3Na la masse molaire du SO3Na ; et Munité répétitive HA la masse molaire d’une unité répétitive de HA (=379,31 g/mol). Le degré de sulfatation obtenu est DSs=4. L’acide hyaluronique sulfaté ainsi obtenu avec un degré de sulfatation de 4 est noté HAS4. (1H NMR (D2O, 353 K): 5,08-3,56 (10H + HOD peak at 4,25, m), 2,32-1,94 (3H, s)). Dégradation de l’acide hyaluronique sulfaté (HAS) La dégradation de l’acide hyaluronique sulfaté selon l’invention par de la hyaluronidase, à 37 °C, est comparée à celle de l’acide hyaluronique non modifié selon le protocole suivant. L’acide hyaluronique modifié selon l’invention est dissous à 2,49 mM (= 2,016 g/L) dans un tampon d’acétate d’ammonium à 5 mM, pH 5, contenant de la hyaluronidase de type VIII venant de testicules de bœuf, à 1980 U/mL. La solution est filtrée sur 0,2 µm puis incubée à 37°C sous agitation. Dans le même temps, à titre de comparaison, de l’acide hyaluronique non modifié est dissous à 2,49 mM (= 1,000 g/L) dans les mêmes conditions. Après 56 jours d’incubation, les échantillons sont portés 10 min à 100 °C pour dénaturer l’enzyme, refroidis à température ambiante, puis dilués à 0,7 g/L en ajoutant une solution de NaNO3 à 0,1 M. Les échantillons sont ensuite analysés par chromatographie d’exclusion stérique (Waters GPC Alliance chromatograph, Parsippany, NJ, USA), équipé d’un réfractomètre différentiel et d’un détecteur de diffusion de la lumière (MALLS) (Wyatt Technology, Goleta, CA, USA). Les échantillons sont injectés à 0,7 g/L, élués à 0,5 mL/min dans du 0,1 M NaNO3/0,005 M NaN3. La phase mobile et les échantillons sont préalablement filtrés sur 0,1 µm avant d’être injectés. La valeur de dn/dc utilisée est de 0,1551, qui correspond à la valeur du dn/dc de l’acide hyaluronique reportée dans la littérature. Par mesure de la masse molaire moyenne en masse, il est ainsi obtenu qu’après 56 jours de traitement, l’acide hyaluronique est dégradé à 85%, tandis que le HAS est dégradé à 73 %. Autre essai de dégradabilité de l’acide hyaluronique sulfaté (HAS) Protocole d’incubation du HAS avec la hyaluronidase Des échantillons de HAS ont été incubés à 1 mg/mL à 37°C pendant plusieurs semaines, dans un tampon d’acétate d’ammonium à pH 5, en présence de 1000 U/mL de hyaluronidase provenant de testicules de bœuf. Ensuite, des fractions d’échantillons ont été aliquotés à différents moments et analysés par SEC-MALS pour déterminer la dégradation des chaînes HAS pendant l’incubation. Protocole de mesure des masses molaires La distribution des masses molaires et la masse molaire moyenne en poids des acides hyaluroniques sulfatés ont été déterminées par chromatographie d’exclusion stérique (SEC) en utilisant un réfractomètre différentiel et un détecteur de diffusion de la lumière (MALS) (de Wyatt Technology, Santa Barbara, USA). Les échantillons ont été injectés à une concentration de 0,7 mg/mL dans 0,1 M NaNO3/0,005 M NaN3, à un débit de 0,5 mL/min et à une température de colonne de 30 °C. Les échantillons et les phases mobiles ont été filtrés sur 0,1 µm avant d’être injectés dans la colonne. La variation de l’indice de réfraction en fonction des valeurs de concentration dn/dc de l’acide hyaluronique pur et sulfaté (degré de sulfatation DSS de 2,1 ; 3,3 et 4) a été déterminée avec le même réfractomètre, en utilisant cinq concentrations entre 0,05 et 0,40 g/mol (figure 7). Ces valeurs sont nécessaires pour traiter les courbes obtenues par SEC- MALS. Des solutions mères à 0,5 g/L ont été préparées pour chaque échantillon dans 0,1 M NaNO3/0,005 M NaN3. Des solutions diluées à 80, 60, 40, 20 et 10 % ont été préparées. Résultats de dégradation Différents échantillons de HA ont été incubés avec la hyaluronidase : HA non modifié, HAS avec un degré de sulfatation de 2,2 (HAS2,2), HAS avec un degré de sulfatation de 4 (HAS4). Les valeurs du rapport de la masse molaire du polymère à l’instant t sur la masse molaire initiale du polymère (MWf/MWi) en fonction du nombre de jours d’incubation (jusqu’à 84 jours) sont répertoriées dans le tableau 1 suivant.
u
Tandis que HA seul se dégrade rapidement en présence de hyaluronidase à une concentration de 1000 U/mL (MWf/MWi < 0,025 en 24 heures), HA sans hyaluronidase est stable, avec une dégradation de 18 % en trois mois (MWf/MWi < 0,82).
De manière avantageuse, les HAS de DSs = 4 et DSs = 2,2 montrent un même comportement de dégradation, indépendamment de la concentration en hyaluronidase. Ainsi, tous les échantillons montrent une dégradation d’environ 40 ± 10 % en deux semaines (MWf/MWi
~ 0,6) et d’environ 70 ± 10 % en trois mois (MWf/MWi ~ 0,3).
En comparant la dégradation des HA sulfatés sans hyaluronidase, il apparaît que les HA sulfatés sont moins stables que les HA non modifiés. Concernant le taux de dégradation des
HAS de DSs = 4 et DSs = 2,2 en présence de hyaluronidase, aucune différence significative n’est observée en faisant varier le degré de sulfatation ou la concentration en hyaluronidase, ce qui indique que les HA sulfatés ne sont pas affectés par la présence de l’enzyme. Les HAS sont donc dégradables, mais non biodégradables spécifiquement par l’enzyme, car leur dégradation ne semblait pas liée à l’activité enzymatique.
1.2. Greffage de noyaux aromatiques sur les fonctions carboxyles de l’acide hyaluronique sulfaté (HAS) La seconde étape de la synthèse d’un acide hyaluronique modifié selon l’invention, représentée schématiquement ci-dessous, procède au greffage d’un fragment d’acide 3- aminophénylboronique (PBA) sur la fonction carboxylique du HAS précédemment synthétisé, conduisant à un acide hyaluronique modifié noté « HAS-PBA ». Le protocole est adapté de celui décrit dans la littérature ([33], [34]). [Chem 12] 1 g de HAS4 (1 équivalent) synthétisé comme décrit précédemment a été dissous dans 292 mL d’eau. 200 mL de DMF ont été lentement ajoutés goutte à goutte. Le milieu a été agité pendant une heure à température ambiante. 68,92 mg d’acide 3-aminophénylboronique (3APBA, 0,3 équivalent) ont été dissous dans 4 mL d’eau.341,84 mg de chlorure de 4-(4,6- diméthoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-méthyl-morpholinium (DMTMM) ont été dissous dans 4 mL d’eau. La solution de DMTMM a été ajoutée au milieu réactionnel, puis la solution de 3APBA. Le pH a été ajusté à 6,5 avec du NaOH 2M. Le milieu a été agité pendant 24 heures à température ambiante. 9,29 g de NaCl ont été dissous dans 30 mL d’eau, puis ajoutés au milieu réactionnel pour obtenir [NaCl]final= 0,3 M. Le milieu a été dialysé par ultrafiltration versus de l’eau osmosée à l’aide d’une membrane d’ultrafiltration 10 kDa, jusqu’à ce que la conductivité de l’eau filtrée soit inférieure à 7-8 µS/cm. La solution de HSA4-PBA0,3 a été lyophilisée. L’analyse du degré de substitution de PBA (DSPBA) a été opérée par intégration RMN 1H : l’intégration du pic à 2,09 ppm correspondant aux protons N-acétyle de HA est normalisée à 3. Le degré de substitution DSPBA, calculé suivant l’équation suivante, est d’environ 0,3. [Math 3] L’acide hyaluronique modifié ainsi obtenu, noté « HAS4-PBA0,3 », a été récupéré avec un rendement supérieur à 90 %, et un rendement total depuis le HA d’environ 50 %. (1H NMR (D2O, 353 K): 7,92-7,81 (0,3Ha, s), 7,70-7,53 (0,6Hb+c, dd), 7,50-7,40 (0,3H,d t), 5,08-3,56 (10H + HOD peak at 4,25, m), 2,32-1,94 (3H, s)). Exemple 2 Préparation d’une encre à base de PEDOT : HAS4-PBA0,3 selon l’invention Le PEDOT est formé par polymérisation oxydative à partir des monomères EDOT, comme représenté schématiquement ci-dessous. Le protocole a été adapté de celui décrit par Wallace et al. [23]. [Chem 13] 1 g de HSA4-PBA0,30 (0,5 équivalent), synthétisé précédemment, a été dissous dans 16,11 mL d’un mélange d’eau :acétonitrile (MeCN) 9 :1 (ou 8 : 2) v :v dégazé.252 µL (334,4 mg, 1 éq) d’EDOT ont été ajoutés. Le milieu a été agité pendant une nuit à 4 °C sous azote. 9,8 mg de FeSO4 (0,015 éq) ont été ajoutés. 713,9 mg de persulfate d’ammonium (APS) (1,33 éq) ont été dissous dans 16,1 mL d’un mélange eau :MeCN 9 :1 (ou 8 : 2 respectivement) v :v dégazé et froid, puis ajoutés goutte à goutte en 1 heure au milieu en utilisant un pousse- seringue. Le milieu a été agité 4 heures à 4 °C sous azote, puis à température ambiante jusqu’à la fin de la polymérisation (la polymérisation est considérée terminée lorsque le pH est stable, en-dessous ou environ 1,1-1,3, généralement après 18-24 heures). La réaction a été stoppée en ajoutant 32 mL d’eau, puis le milieu a été dialysé contre l’eau osmosée avec une membrane 6-8 kDa, en changeant le bain toutes les 4 à 10 heures jusqu’à ce que la conductivité de l’eau soit inférieure à 8 µS. Ensuite, le pH a été ajusté à 7,40, puis le milieu réactionnel homogénéisé à 10000 rpm pendant 10 minutes en utilisant un disperseur IKA Ultra Turrax®. La solution de PEDOT :HAS4-PBA0,3 a ensuite été lyophilisée. L’encre a été récupérée avec un rendement compris entre 85 et 90 %. Mesures de conductivité Dépôt d’un film d’encre sur des lames de verre Des lames de verre ont été lavées avec de l’acétone et de l’éthanol, puis activées par plasma O2 (450 sccm, 200 W, 500 s). L’encre PEDOT : HAS4-PBA0,3 lyophilisée a été dissoute dans l’eau à 13 g/L puis agitée au vortex. Aucun traitement additionnel n’a été appliqué. Cette concentration a été choisie pour correspondre à la concentration en PEDOT :PSS de l’encre conductrice commerciale CleviosPH1000®. 60 µL de la suspension ont été déposés sur une lame de verre à l’intérieur d’un anneau de silicone de 1 cm de diamètre interne servant de puits amovible et séchés à température ambiante. Mesures de conductivité L’épaisseur du film d’encre, notée h, a été mesurée avec un profilomètre Dektak DXT de Brüker. La résistivité du film, notée RSheet, a été déterminée en utilisation la sonde à 4 pointes commercialisée par Ossila (Power Cord Type, Sheffield, Angleterre), sur une large plage de tension et de courant pour certifier le comportement ohmique. La conductivité a été calculée suivant l’équation suivante : [Math 4] avec c étant le coefficient correcteur géométrique déterminé par le logiciel. La conductivité a été mesurée dans plusieurs zones du film, puis moyennée. La figure 2 schématise les étapes du protocole de mesure de conductivité. Dans ces conditions, sans autres modifications, l’encre PEDOT :HAS4-PBA0,3 présente une conductivité jusqu’à 2,18 S/cm. A titre comparatif, l’encre CleviosPH1000® présente une conductivité de 0,11 S/cm. Exemple 3 Préparation d’un acide hyaluronique modifié selon l’invention porteur de groupements sulfates, de greffons comportant un noyau aromatique et de greffons présentant une fonction réticulable (HSA4-PBA0,3-PEGène0,16), et de l’encre PEDOT :HSA4-PBA0,3-PEGène0,16 Préparation de l’acide hyaluronique modifié HSA4-PBA0,3-PEGène0,16 Synthèse de la molécule à greffer porteuse d’une fonction réticulable La molécule synthétisée, de formule (G1) suivante, est notée AP-HN-(PEG)11-NH2 et désignée plus simplement par la suite « PEGène » en référence à la chaîne poly(éthylène glycol) et à la fonction éthényle terminale. [Chem 14] La molécule PEGène a été synthétisée, comme décrit ci-dessous, à partir d’un dérivé PEG- bis(amine) protégé à une extrémité par un groupement tert-butoxycarbonyle (Boc), (O-(2- aminoéthyl)-O'-[2-(Boc-amino)éthyl]deca(éthylène glycol), noté H2N-(PEG)11-NH-Boc. L’anhydride penténoïque (AP) a ensuite réagi avec la fonction amine libre, puis l’autre fonction amine est déprotégée pour conduire au composé AP-HN-(PEG)11-NH2, suivant le prototocole détaillé ci-dessous. Réaction de l’amine avec l’anhydride pentènoïque 1 g de l’O-(2-aminoéthyl)-O'-[2-(Boc-amino)éthyl]deca(éthylène glycol) (H2N-(PEG)11- NH-Boc) a été dissous dans 185 mL de DMF. Ensuite, 340,1 µL d’anhydride pentènoïque (AP, 1,2 éq.) et 324,2 µL de N,N-diisopropyléthylamine (1,2 éq.) ont été ajoutés. Le milieu réactionnel a été agité 24 heures à température ambiante. Ensuite, le DMF a été évaporé sous vide, et l’huile résultante a été purifiée sur colonne de chromatographie (gel de silice, dichlorométhane/méthanol 95/5 (v/v)) pour conduire au AP-NH-(PEG)11-NH-Boc sous la forme d’huile jaune (1H NMR (D2O, 298 K): 6,00-5,85 (1H, m), 5,17-5,04 (2H, qq), 4,80 (HOD, s), 3,82-3,67 (40H, d), 3,67-3,60 (4H, td), 3,44-3,39 (2H, t), 3,33-3,27 (2H,t), 2,41- 2,34 (4H, m), 1,53-1,42 (9Hboc,s)). [Chem 15] Hydrolyse du groupe protecteur tert-butoxycarbonyle (Boc) 7,169 mL d’acide trifluoroacétique pur (60 éq) ont été ajoutés goutte à goutte et le milieu agité pendant 5 minutes. 70 mL de NaOH 1M ont été ajoutés lentement à environ 0°C (bain de glace), puis le pH a été ajusté à 4,5. La solution a ensuite été chargée sur une colonne échangeuse d’ions remplie avec la résine AG-MP50® sous forme H+ de BioRad (diamètre interne de 3 cm, hauteur de 30 cm) et rincée avec 100 mL d’eau à pH 4,5, puis 400 mL d’eau. L’amine a été libérée en éluant de l’hydroxyde d’ammonium (NH4OH) à 4 v/v%. L’eau a ensuite été évaporée sous vide, conduisant à la molécule souhaitée PEGène. (1H NMR (D2O, 298 K): 5,95-5,82 (1H, m), 5,17-5,04 (2H, qq), 4,80 (HOD, s), 3,82-3,67 (40H, d), 3,67-3,60 (4H, td), 3,44-3,39 (2H, t), 2,93-2,87 (2H,t), 2,42-2,34 (4H, m)). [Chem 16] Synthèse de l’acide hyaluronique modifié L’acide hyaluronique sulfaté HAS4 synthétisé en exemple 1 a été modifié par greffage de greffons de type acide phénylboronique (PBA) et de molécules PEGène au niveau des fonctions carboxylique, dans les mêmes conditions que le greffage de l’acide 3- aminophénylboronique (3APBA). La réaction de greffage des molécules PEGène sur l’acide hyaluronique sulfaté est représentée schématiquement ci-dessous. [Chem 17] 1 g de HAS4 (1 équivalent) a été dissous dans 288 mL d’eau. 200 mL de DMF ont été lentement ajoutés. Le milieu réactionnel a été agité pendant une heure à température ambiante.68,92 mg d’acide 3-aminophénylboronique (3APBA, 0,3 éq.) ont été dissous dans 4 mL d’eau. 309,7 mg de PEGène (0,4 éq.) ont été dissous dans 4 mL d’eau. 341,84 mg de DMTMM ont été dissous dans 4 mL d’eau. La solution de DMTMM a été ajoutée au milieu réactionnel, puis la solution 3APBA, puis la solution PEGène. Le pH a été ajusté à 6,5 avec 2M NaOH et 2M HCl 1M. Le milieu a été agité pendant 24 heures à température ambiante. 9,29 g de NaCl ont été dissous dans 30 mL d’eau, ensuite ajoutés au milieu réactionnel pour obtenir [NaCl]final=0,3 M. Le produit a été purifié par ultrafiltration versus eau osmosée, en utilisant une membrane d’ultrafiltration 10 kDa, jusqu’à ce que la conductivité de l’eau filtrée soit inférieure à 7-8 µS/cm. La solution de l’acide hyaluronique modifié « HSA4- PBA0,3-PEGène0,16 » a été congelée dans de l’azote liquide et lyophilisée. L’analyse du degré de substitution en molécules PEGène (DSPEGène) a été opérée par intégration RMN 1H : l’intégration du signal à 2,09 ppm correspondant aux protons du groupement N-acétyle de HA est normalisée à 3. Le degré de substitution DSPEGène, calculé suivant l’équation [Math 5] est d’environ 0,16. Le degré de substitution DSPBA, calculé comme décrit précédemment, est d’environ 0,3. L’acide hyaluronique modifié HSA4-PBA0,3-PEGène0,16 a été récupéré avec un rendement supérieur à 90 %, et un rendement total à partir du HA initial d’environ 50 %. (1H NMR (D2O, 353 K): 7,92-7,81 (0,3Ha, s), 7,70-7,53 (0,6Hb+c, dd), 7,50-7,40 (0,3H,d t), 5,95-5,82 (1H1, m), 5,23-3,26 (m + HOD peak at 4,25), 2,40-2,33 (0,64H, s), 2,32-1,94 (3H, s)). Préparation d’une encre à base de PEDOT : HSA4-PBA0,3-PEGène0,16 Une encre est préparée à partir du même protocole que celui décrit précédemment en exemple 3 pour la synthèse de l’encre à base de PEDOT :HAS4-PBA0,3, en mettant en œuvre 0,5 équivalent d’acide hyaluronique modifié par rapport aux monomères EDOT. Exemple 4 Synthèse d’un acide hyaluronique modifié selon l’invention porteur de groupements sulfates et de greffons comportant à la fois un noyau aromatique et une fonction réticulable (HSA4-ArEne0,30) Préparation de l’acide hyaluronique modifiéHSA4-ArEne0,30 La 4-[(pent-4-èn-1-yloxy)méthyl]aniline (notée ArEne), disponible commercialement, a été greffée à l’acide hyaluronique sulfaté préparée en exemple 1, HAS4, suivant le même protocole que celui pour le greffage de l’acide 3-aminophénylborique (3APBA) au HAS4. 1 g de HAS4 (1 équivalent) a été dissous dans 293 mL d’eau.198 mL de DMF ont été ajoutés lentement goutte à goutte. Le milieu a été mélangé pendant 1 heure à température ambiante. 70.9 mg d’ArEne (0,3 eq) ont été dissous dans 4 mL de DMF. 341,84 mg de DMTMM ont été dissous dans 4 mL d’eau. La solution de DMTMM a été ajoutée au milieu réactionnel, puis la solution ArEne. Le pH a été ajusté à 6,5 avec des ajouts soit de 2 M NaOH soit de 2M HCl 1M. Le milieu a été agité pendant 24 heures à température ambiante.9,29 g de NaCl ont été dissous dans 30 mL d’eau, puis ajoutés au milieu réactionnel pour obtenir [NaCl]final=0,3 M. Le produit a été purifié par ultrafiltration versus de l’eau osmosée en utilisant une membrane d’ultrafiltration 10 kDa, jusqu’à ce que la conductivité de l’eau filtrée soit inférieure à 7-8 µS/cm. La solution HSA4-ArEne0,30 a été lyophilisée. La réaction de greffage est représentée schématiquement ci-dessous. [Chem 18] Le degré de substitution en ArEne (DSArEne) ne peut pas être obtenu précisément par RMN puisque les protons N-acétyle du HA à 2,09 ppm habituellement utilisés pour normaliser l’intégration sont superposés avec les deux protons aliphatiques de ArEne. Le degré de substitution DSArEne, est estimé en faisant un suivi cinétique de la réaction de greffage, en dosant les amines primaires restantes par de l’acide 2,4,6- trinitrobenzenesulfonic (TNBS), qui donne un composé final orange (trinitrophénylamine) qui absorbe dans l’UV à 340 nm. Les courbes d’étalonnage de l’amine primaire (4-[(pent-4-èn-1-yloxy)méthyl]aniline) ont été établies en préparant différentes solution d’1 mL d’amine primaire à des concentrations connues (10 à 50 µg/mL) dans un tampon de bicarbonate de sodium à 100 mM pH 8,5, à partir d’une solution mère d’amine à 1g/L dans le même tampon. Différents volumes d’une solution fraichement préparée de TBNS à 0,01% w :v dans le même tampon ont été ajoutés à chaque solution, de telle sorte à avoir un ratio molaire amine/TNBS de 1, puis les échantillons ont été incubés 2 heures à 37°C. Enfin, 150 µL d’HCl ont été ajoutés à chaque solution, puis les spectres de 580 à 280 nm ont été enregistrés. La courbe d’étalonnage est déduite en utilisant l’absorbance maximale. La même procédure a été utilisée pour quantifier les amines en solution durant la réaction de couplage du ArEne avec le HAS : la fraction d’ArEne non réagis durant la réaction de couplage avec le HAS est déduite de la courbe d’étalonnage préalablement établie. Au bout de 24h, il est déterminé que 100% du Arene a réagi avec le HAS, ce qui donne un degré de substitution DSAEne de 0,3. 1H NMR (D2O, 353 K): 7,68-7,53 (0,68H, d), 7,48-7,34 (0,68H, d), 6,00-5,84 (0,34H1, m), 5,17-3,49 (m + HOD peak at 4.25), 2,33-1,92 (3,8H, m), 1,76-1,61 (0,68H, q)). Préparation d’une encre à base de PEDOT : HSA4-ArEne0,30 Une encre est préparée à partir du même protocole que celui décrit précédemment en exemple 3 pour la synthèse de l’encre à base de PEDOT :HAS4-ArEene0,3, en mettant en œuvre 0,5 équivalent d’acide hyaluronique modifié par rapport aux monomères EDOT. Suivant des protocoles similaires, une encre est préparée à base de PEDOT :HAS4- ArEene0,5. Exemple 5 Préparation de films d’hydrogel à partir de l’encre PEDOT :HAS4-PBA0,3-PEGène0,16 L’encre synthétisée en exemple 3, PEDOT :HAS4-PBA0,3-PEGène0,16, a été réticulée en utilisant la chimie dite « thiol-ène », avec un dithiol poly(éthylène glycol) (PEG-(SH)2) de masse molaire moyenne en masse Mw=3,5 kg/mol comme agent réticulant, et du phényl- 2,4,6-triméthylbenzoylphosphinate de lithium comme photo-initiateur. Fonctionnalisation des lames de verre par des fonctions thiols Les lames ont été rincées avec de l’acétone et de l’éthanol, puis activées par un plasma O2 (450 sccm, 200 W, 500 s), et immergées pendant la nuit à 80°C dans 5 mM de 3- mercaptopropyltriméthoxysilane (MPTMS) dans le toluène. Elles ont ensuite été soumises à une sonication pendant 5 minutes dans l’acétone, 5 minutes dans l’éthanol, puis centrifugées 10 minutes à 1000 rpm pour sécher. Elles ont finalement été recuites pendant 3 heures à 110 °C et stockées dans l’obscurité sous argon. Avant utilisation, les lames de verre fonctionnalisés par des fonctions thiols ont été immergées pendant 1 heure dans une solution de dithiothreitol (DTT) à 0,5 g/L à pH 8,3 pour réduire les ponts disulfures à la surface de la lame. Formation d’un film d’hydrogel sur les lames de verre L’encre PEDOT :HAS4-PBA0,3-PEGène0,16 lyophilisée, préparée selon l’exemple 3, a été dissoute dans l’eau avec du polyéthylène glycol dithiol (PEG-(SH)2 (3,5 kg/mol) comme agent réticulant, et un photoamorceur, LAP (phényl-2,4,6-triméthylbenzoylphosphinate de lithium), pour obtenir [PEDOT :HAS4-PBA0,3-PEGène0,16]=60 g/L, à une concentration [LAP]=1 g/L et en vue d’avoir 0,9 fonction thiol par fonction alcène. La suspension a été agitée au vortex pendant 10 minutes. 60 µL de suspension ont été déposés sur les différentes lames de verre (fonctionnalisées par des fonctions thiol ou non) à l’intérieur d’un anneau de silicone de 1 cm de diamètre interne servant de puits amovible et exposés 5 minutes à 405 nm à 90 mW/cm2 pour réticuler. L’encre a ensuite été séchée à température ambiante. Mesures de conductivité L’épaisseur du film d’encre, notée h, a été mesurée avec un profilomètre Dektak DXT de Brüker. La résistivité du film, notée RSheet, a été déterminée en utilisation la sonde à 4 pointes commercialisée par Ossila (Power Cord Type, Sheffield, Angleterre), sur une large plage de tension et de courant pour certifier le comportement ohmique. La conductivité a été calculée suivant l’équation suivante : [Math 6] avec c le coefficient correcteur géométrique déterminé par le logiciel. La conductivité a été mesurée dans plusieurs zones du film, puis moyennée. La figure 3 schématise les étapes de formation du film réticulé de PEDOT :HAS4-PBA0,3- PEGène0,16, à la surface d’une lame de verre non fonctionnalisée et son immersion dans l’eau. Lorsqu’elle a été déposée sur une lame de verre non fonctionnalisée, le film d’encre réticulé a pu être détaché de la lame de verre, résultant en un disque bleu flottant dans l’eau, et qui ne s’est pas redissous après 2 semaines dans le PBS 1X. La figure 4 schématise la réticulation de l’encre et son greffage à la surface d’une lame de verre fonctionnalisée par des fonctions thiols. Lorsqu’elle a été déposée à la surface d’une lame de verre fonctionnalisée avec des fonctions thiols, le film d’encre réticulé a été lié de manière covalente à la surface de la lame, et a pu subir plusieurs cycles d’hydratation/séchage sans se détacher de la surface et sans perdre ses propriétés de conductivité. La figure 5 représente les courbes de variation de l’épaisseur du film réticulé et de sa conductivité en fonction du nombre de cycle d’hydratation/séchage. L’augmentation de la conductivité avec le nombre de cycles peut être attribué à l’élimination au cours de cycles de l’excès de polyélectrolyte, comme en témoigne la diminution lente de l’épaisseur du film, conduisant ainsi à une concentration des domaines de PEDOT. Exemple 6 Préparation de films d’hydrogel à partir de l’encre PEDOT :HAS4-ArEene0,5 Des films d’hydrogel ont été préparés à la surface de lames en verre non fonctionnalisées par des fonctions thiols, à partir de l’encre à base de PEDOT :HAS4-ArEene0,5 (exemple 4). Le protocole de préparation des films d’hydrogel est le même que celui décrit en exemple 5, en mettant en œuvre deux agents réticulants différents, le PEG-(SH)2 (3,5 kg/mol) et le dithiothréitol DTT (3,5 kg/mol), et avec des concentrations des suspensions avant réticulation [PEDOT :HAS4-ArEene0,5]=40 g/L. Les films d’hydrogel ainsi formés ont été détachés des plaques de verre. Exemple 7 Préparation d’un hydrogel conducteur épais selon un autre mode opératoire Synthèse de l’hydrogel à partir du HA modifié de l’exemple 4 Le HA modifié HAS4-ArEne0,5 lyophilisé, préparé selon l’exemple 4, a été dissous dans l’eau avec du polyéthylène glycol dithiol (PEG-(SH)23,5 kg/mol) comme agent réticulant, et un photoamorceur, le LAP (phényl-2,4,6-triméthylbenzoylphosphinate de lithium), pour obtenir [HAS4-ArEne0.5]=20 g/L, [LAP]=0,5 g/L et 1 fonction thiol par fonction alcène. 250 µL sont déposés dans un moule cavité (un bouchon de tube Eppendorf), et la solution est irradiée 10 min à 365 nm à 20 mW/cm², menant à un hydrogel humide à base de HAS- ArEn0.5. Evaluation des propriétés viscoélastiques de l’hydrogel Les hydrogels formés sont caractérisés par des mesures rhéologiques en régime dynamique à l’aide d’un Rhéomètre AR2000EX de TA Instruments. Le HA modifié HAS4-ArEne0,5 lyophilisé, préparé selon l’exemple 4, a été dissous dans l’eau avec du poly(éthylène glycol) dithiol (PEG-(SH)23,5 kg/mol) comme agent réticulant (ou du DTT respectivement), et un photoamorceur, LAP (phényl-2,4,6- triméthylbenzoylphosphinate de lithium), pour obtenir [HAS4-ArEne0,5]=40 g/L, à une concentration [LAP]=1 g/L et en vue d’avoir 1 fonction thiol par fonction alcène. 400 µL de cette solution sont déposés sur le plateau d’un Rhéomètre AR2000EX de TA Instruments’Anton Paar muni d’une cellule UV (λ = 365 nm) et d’une géométrie plan aluminium de 20 mm de diamètre. L’espace entre le plateau et la géométrie et fixée à 1160 µm. La solution est irradiée à 20 mW/cm2 pendant 20 min à la fréquence de 1 Hz sous une déformation de 3,5 %, entrainant sa gélification. Ses modules de perte et d’élasticité sont ensuite mesurés. La figure 6 représente l’évolution, en fonction de la fréquence, du module de conservation, dit encore module élastique, G’ et du module de perte, dit encore module visqueux, G’’ pour les hydrogels à base de HAS4-ArEene0,5, réticulés respectivement par le DTT (courbes en carrés) et par le PEG-(SH)2 (courbes en ronds). On observe de manière constante que le module élastique (G’) pour chacun des hydrogels est supérieur au module de perte (G’’), ce qui permet de mettre en évidence le fait que les matériaux préparés selon l’invention se comportent bien comme des hydrogels et non comme des fluides visqueux. Polymérisation de l’EDOT dans l’hydrogel Ledit hydrogel humide est mis 2 heures à -18°C avant d’être lyophilisé, menant à un aérogel (hydrogel sec) sec de HAS-ArEne0,5 réticulé par le PEG bis(thiol). Ledit aérogel est immergé 15 heures dans 2 mL d’une solution eau : acétonitrile 6 : 4 v :v contenant de l’EDOT à 90,38 mM, à température ambiante sous agitation. Après 15 heures, le surnageant est retiré. L’hydrogel de HAS-ArEne0.5 gonflé d’EDOT est immergé pendant 48 heures sous agitation à température ambiante dans 2 mL d’une solution eau : acétonitrile 6 : 4 v : v contenant de l’ammonium persulfate à 135,57 mM et du FeSO4 à 1,36 mM. Le surnageant est retiré, et l’hydrogel de HAS-ArEne chargé en PEDOT est purifié par 4 lavages successifs de 2 heures dans de l’eau :acétonitrile 8 : 2 v : v, puis dans du PBS. On obtient un hydrogel épais de PEDOT :HAS-ArEne0,5. Exemple 8 8.1. Préparation d’un hydrogel PEDOT :HA modifié selon un autre mode opératoire où la polymérisation de l’EDOT est opérée simultanément à la réticulation de l’hydrogel Pour cet essai, l’acide hyaluronique modifié HAS4-PBA0,3 préparé selon l’exemple 1 a été réticulé en utilisant le dihydrazide d’acide adipique (ADH) via une réaction de couplage amide mettant en œuvre l’hydrochlorure de N-(3-diméthylaminopropyl)-N’- éthylcarbodiimide (EDC) comme agent de couplage, comme représenté schématiquement ci-dessous. L’ADH est un composé biocompatible, largement utilisé pour réticuler des émulsions à base d’eau et permettant de concevoir des hydrogels biodégradables. De plus, le bas pKa de la fonction hydrazide (≈ 3,4) permet des réactions de couplage à bas pH, ce qui est obligatoire pour une réaction de couplage opérée simultanément avec la polymérisation de l’EDOT qui libère des protons. [Chem 19] Protocole pour la préparation du gel Le HAS4-PBA0,3 a été dissous à 40 g/L, dans un tampon MES 0,1 M + NaCl 0,5 M de pH 4,75, avec de l’ADH à 2,2 g/L afin d’avoir un rapport molaire nhydrazide/ncarboxylate = 0,90 ; de l’EDOT afin d’avoir 2 équivalents d’EDOT par rapport à HAS4-PBA0,3, et de l’APS à 217,7 g/L afin d’avoir un rapport molaire de nAPS/nEDOT = 1. Le mélange a été mélangé à 25000 tr/min en utilisant un disperseur basique IKA Ultra Turrax T-10 avec un outil de dispersion S10 N-8G (Roth, Karlsruhe, Allemagne). Ensuite, de l’EDC concentré a été ajouté à l’émulsion afin d’avoir un rapport molaire nEDC/ncarboxylate = 1,5. L’émulsion est mélangée 10 secondes supplémentaires avant d’être versée immédiatement dans le moule souhaité. Après environ 20 heures pour réaliser les deux réactions (gélification (environ 4 heures) et polymérisation de l’EDOT (environ 20 heures)), l’hydrogel PEDOT:HAS4-PBA0,3/ADH a été immergé dans trois bains PBS successifs d’au moins 4 heures pour éliminer les sous- produits des réactions, pour ajuster la concentration en sel de la matrice, et pour neutraliser le pH de l’hydrogel. Le protocole est également applicable en utilisation des tampons BisTris et Tris à la place du tampon MES. Les caractéristiques pour la formation de l’hydrogel en opérant simultanément la réticulation des chaînes d’acide hyaluronique modifié pour former un hydrogel, et la polymérisation du PEDOT à partir de l’EDOT, sont rassemblées dans le tableau 2 suivant. Tableau 2 8.2. Caractérisation de l’hydrogel PEDOT:HAS4-PBA0,3/ADH Tous les essais ont été reproduits sur trois hydrogels PEDOT:HAS4-PBA0,3/ADH. 8.2.1. Caractérisation des propriétés mécaniques de l’hydrogel Pour mesurer les propriétés mécaniques de l’hydrogel, des tests de compression ont été effectués sur trois hydrogels de même nature PEDOT:HAS4-PBA0,3/ADH. Le mélange précurseur d’hydrogel a été coulé dans un moule cylindrique, (Øint = 5 mm, h = 4 mm) et, après réticulation (^ 20 heures), l’hydrogel cylindrique a été démoulé et gonflé dans du PBS pour éliminer les sous-produits de réaction et pour neutraliser son pH. Des essais de compression uniaxiale ont été réalisés à l’aide d’un analyseur de texture EZ- X (Shimadzu, Marne-la-Vallée, France) équipé d’une cellule 5 N. L’hydrogel, sous forme de cylindre (environ 5 mm de diamètre et 4 mm de hauteur initiale), a été placé sur le plateau inférieur de l’analyseur de texture et mis en contact avec le plateau supérieur avec une force de précharge de 0,03 N. Les mesures ont été effectuées à une vitesse de compression de 17 µm/s. Les cycles de compression ont été effectués comme suit : l’échantillon a été comprimé jusqu’à atteindre 10 % de déformation, puis la plaque supérieure a été soulevée jusqu’à l’état de gel détendu (0 % de déformation). Des compressions successives de 20 %, 30 %, 40 % et 50 % de déformation ont ensuite été opérées sur le même échantillon, revenant à chaque fois à l’état de déformation de 0 % entre chaque compression. Les données de charge et de déplacements ont été recueillies au cours de chaque expérience. La contrainte normaleσnominala été calculée comme la force normale divisée par la surface du matériau, tandis que les déplacements mesurés ^ ont été exprimés en tant que rapport d’extension, ^=(^0−^^)/^0, où Δh est le déplacement mesuré et ^0 la hauteur initiale de l’hydrogel. Le module de stockage G' des matériaux peut être calculé comme les pentes de σnominal =(λ−1/λ2) dans la réponse linéaire du gel, comme décrit dans le modèle Neo-Hookean [49]-[51]. L’analyse des données a permis d’obtenir le module de conservation G' de l’hydrogel pour chaque cycle de compression (tableau 3). G' était relativement constant d’un cycle à l’autre, indiquant la réversibilité de la compression. Enfin : G' = 1,6 ± 0,4 kPa. Tableau 3 : Modules de conservation G’ des hydrogels obtenus via des tests de compression uniaxiale successifs 8.2.2. Caractérisation du comportement de gonflement de I’ hydrogel
Le taux de gonflement de l’hydrogel a été mesuré. Pour résumer, après réticulation, l’hydrogel a été immergé dans du PBS pour gonfler jusqu’à stabilisation de la masse (2-3
5 jours). La masse gonflée en PBS (msgonfiée PBS) a été mesurée. Puis l’hydrogel a été immergé dans des bains d’eau successifs pour éliminer tous les sels de PBS ; lyophilisé, et sa masse sèche (msèche) mesurée. L’essai a été fait pour trois hydrogels PEDOT:HAS4-PBAo,3/ADH. Le rapport de gonflement Q de l’hydrogel a été déterminé comme : Q = msgonfiée PBs/msèche= 18 ± 3 (pour les trois hydrogels).
10
8.2.3. Caractérisation des propriétés électrochimiques de l’hydromel PED0T:HAS4-
PBA0,3/ADH
Les propriétés électrochimiques des hydrogels conducteurs PEDOT:HAS4-PBA0,3/ADH ont été étudiées pour évaluer leur application potentielle dans les dispositifs bioélectroniques.
15 En vue de l’application des hydrogels conducteurs développés pour le suivi et/ou la stimulation des tissus biologiques, les valeurs électrochimiques ciblées sont résumées dans le tableau 4 suivant.
Tableau 4 : valeurs cibles visées pour les hydrogels conducteurs
20 En résumé, la capacité de stockage de charge doit être au moins supérieure à 1 mC/cm2 pour être compétitive avec une électrode classique d’enregistrement de stimulation [52] ; la capacité d’injection de charge CIC supérieure à 100 μC/cm 2 pour dépasser la CIC de l’électrode de Pt in vivo [53] ; et l’impédance à 1 kHz doit être aussi faible que possible pour améliorer la qualité d’enregistrement/stimulation [54], avec une plage appropriée entre 0,1
25 et 600 kΩ pour l’enregistrement de signaux neuronaux [55].
Protocoles des mesures électrochimiques Une électrode à cavité artisanale a été réalisée à l’aide d’une tige de platine de 4 cm de long et de 2 mm de diamètre. La tige de Pt a été insérée dans un tube PTFE de 2 mm de diamètre interne, et l’espace entre la tige et le tube scellé avec de la résine époxy pour éviter les fuites d’eau le long du tube qui modifieraient la surface réactive de l’électrode (Figure 8). La pointe de la tige de Pt a été polie par décapages successifs, et le polissage final a été effectué à l’aide d’une pâte diamantée de 1 µm (RadioSpares). Ensuite, il a été rincé avec de l’eau ultra- purifiée, de l’éthanol et soumis à une sonication de 10 minutes dans de l’éthanol. Du PEDOT : HAS4-PBA0,3 a ensuite été électropolymérisé à la surface du platine, afin de greffer l’hydrogel à la surface du platine lors de la réticulation simultanée de l’hydrogel et de la polymérisation de l’EDOT. Une solution d’EDOT à 5 mM et de HAS4-PBA0,3 à 10 mM dans de l’eau DI a été préparée et dégazée, et immédiatement utilisée comme milieu pour la voltammétrie cyclique de la surface du Pt. Une cellule à trois électrodes a été utilisée, l’électrode de travail étant la tige de Pt polie dans un tube en PTFE ; l’électrode de référence étant une électrode Ag/AgCl classique ([KCl] 3M) pour les mesures aqueuses ; la contre- électrode étant une feuille de platine. PEDOT : HAS4-PBA0,3 a été électropolymérisé en effectuant 10 cycles de potentiel de -0,6 V à 0,96 V à 25 mV/s. La surface fonctionnalisée résultante était légèrement bleue (figure 8b). Cette surface fonctionnalisée par une fine couche de PEDOT : HAS4-PBA0,3 électropolymérisé est alors apte à fabriquer l’hydrogel qui restera fixé à la surface. Enfin, la cavité a été empilée sur la surface de Pt fonctionnalisée, en utilisant une section de tube de diamètre interne de 2 mm coincée à l'intérieur d’un tube plus grand. Pour toutes les électrodes, 6 µL du mélange précurseur d’hydrogel ont été versés dans la cavité sur la surface Pt fonctionnalisée, et scellés pendant 24 heures pour empêcher l’évaporation de l’eau pendant la gélification. Avant électro-caractérisation, les hydrogels PEDOT : HAS4- PBA0,3/ADH ont été immergés dans trois bains PBS successifs d’au moins 4 heures pour éliminer les sous-produits des réactions, ajuster la concentration en sel de la matrice, et neutraliser le pH de l’hydrogel. Toutes les mesures électrochimiques ont été faites avec la cellule à trois électrodes précédemment décrite (l’électrode de travail étant l’hydrogel électro-greffé sur la tige de Pt dans un tube PTFE ; l’électrode de référence étant l’électrode Ag/AgCl classique ([KCl] 3M) pour les mesures aqueuses ; la contre-électrode étant une feuille de platine). Toutes les expériences ont été réalisées dans du PBS fraîchement préparé et dégazé. Toutes les mesures électrochimiques ont été réalisées avec un potentiostat SP-200 (BioLogic, Seyssinet-Pariset, France), équipé du logiciel EC-Lab® V11.31. Mesures électrochimiques Capacité de stockage de charge (CSC) La valeur de capacité de stockage de charge (CSC) est un indice des capacités de transfert de charge d’un matériau d’une électrode, et est utile pour estimer la quantité de charge qu’une électrode peut « stocker » avant d’être injectée dans l’électrolyte, où se produisent les réactions redox. Des expériences de cyclovoltammétrie (CV) ont été réalisées à une vitesse de balayage v=50 mV/s de -0,5 à 0,6 V, à partir de 0 V par rapport au potentiel de circuit ouvert (EOC). 10 cycles ont été effectués ; le signal s’est stabilisé autour du 8ème cycle. Dans la littérature, le CSC est donné en mC/cm2, car les matériaux électro-caractérisés sont souvent considérés comme bidimensionnels. Leur surface active est considérée comme égale à la surface de contact entre le matériau et les matériaux conducteurs. Dans le cas de l’essai réalisé, la partie électro-active du matériau ne peut être considérée comme bidimensionnelle. Par conséquent, le CSC a été donné en mC/cm3. Pour comparer aux valeurs de la littérature, ils ont également été calculés en mC/cm2, suivant les équations suivantes : est l’aire de contact entre le gel et la surface de Pt (3,14 mm2 dans cet essai). est le volume de l’hydrogel (6 µL dans notre cas). Pour évaluer la contribution réelle de l’hydrogel conducteur PEDOT : HAS4-PBA0,3/ADH au courant mesuré, le voltammograme cyclique de l’électrode de platine nue initiale ("Pt") et le voltammograme cyclique de l’électrode pré-fonctionnalisée avec du PEDOT:HAS4- PBA0,3 électro-polymérisé ("encre EP") ont également été enregistrés. Le signal de l’hydrogel conducteur PEDOT : HAS4-PBA0,3/ADH a été déduit en soustrayant le signal de l’encre EP + Pt au signal de l’hydrogel. Le 9ème cycle est présenté à la figure 9. Le CSC2D de l’hydrogel 5 a été calculé à 9,6 ± 2,6 mC/cm2. Le voltammogramme cyclique de l’hydrogel conducteur PEDOT : HAS4-PBA0,3/ADH s’affiche après correction en plateau de courant anodique et cathodique quasi constant, caractéristique d’un comportement capacitif. Cette valeur CSC est supérieure à la CSC2D rapportée pour d’autres hydrogels conducteurs à base de PEDOT, tels que les hydrogels PEDOT:PSS/alginate dopés par des nanotubes de carbone multi-parois développés par Wang et al.[56] (CSC2D = 0,5-1,2 mC/cm2). Par rapport à l’électrode dure traditionnelle, la valeur CSC de l’hydrogel 5 est compétitive (CSCfilm d'oxyde d'iridium pulvérisé = 23 mC/cm2 [52], CSCPlatine = 0,550 mC/cm² [56], revêtements CSCrevêtement PEDOT-PSS sur ITO = 3,6 mC/cm2 [57]). Capacité d’injection de charge (CIC) La capacité d’injection de charge (CIC) d’une électrode est définie comme la quantité de charge que l’électrode peut injecter par unité de surface sans provoquer de réactions électrochimiques irréversibles ou de lésions tissulaires. Cette valeur est importante dans la stimulation tissulaire car elle ne doit jamais être dépassée. Le risque principal est de dépasser le potentiel d’hydrolyse de l’eau qui pourrait déclencher la formation locale de bulles de gaz, qui peuvent être mortelles dans le cas d’'un dispositif bioélectronique implanté sur le cerveau par exemple. Comme pour le CSC, le CIC est donné en mC/cm2 (noté CIC2D), mais avec les hydrogels conducteurs en masse préparés selon l’invention, il était plus important de définir le CIC volumétrique (CIC3D en mC/cm3). La capacité d’injection de charge a été déterminée par des expériences d’impulsions. La séquence d’impulsions était composée d’une impulsion de courant cathodique de 125 ms suivie d’un temps de repos de 30 ms, puis d’une impulsion anodique de compensation de charge de 250 ms, suivie d’un temps de repos de 1 seconde. Cette séquence a été répétée 30 fois. Le potentiel de l’électrode de travail a été enregistré au cours du temps. L’amplitude des impulsions de courant Apulse courant a été progressivement augmentée, jusqu'à ce qu’une inflexion du potentiel de l’électrode de travail pendant l’impulsion cathodique soit observée, indiquant le début de la réaction d’hydrolyse de l’eau (figure 10). Le temps entre le début de l’impulsion cathodique et l’apparition de l’’inflexion a été défini comme tmax. Les capacités d’injection de charge surfacique et volumique CIC2D et CIC3D ont été définies comme suit : L’hydrogel PEDOT : HAS4-PBA0,3/ADH a affiché des valeurs CIC2D de 2,5 ± 0,2 mC/cm2 (CIC3D ^ 13,1 ± 1,0 mC/cm3). Ces valeurs de CIC2D sont compétitives avec le CIC2D d’un film PEDOT:PSS électropolymérisé sur lame de verre ITO (3,6 mC/cm2 [57]), et deux ordres de grandeur inférieurs au CIC2D mesuré pour l’hydrogel PEDOT:PSS, dopé par l’éthylène glycol et réticulé par GOPS, rapporté par Fanelli et al. [58] (263,6 ± 247,5 mC/cm2). Néanmoins, les hydrogels développés présentent un CIC2D supérieur à ceux des électrodes PtIr ou Pt traditionnelles utilisées pour la stimulation tissulaire (environ 100 C/cm2 [53] ou 34-54 μC/cm2 [59] respectivement). Ils peuvent donc être utilisés en stimulation tissulaire. Spectroscopie d’impédance Des expériences de spectroscopie d’impédance électrique (EIS) ont été réalisées pour évaluer la réponse électrique de l’hydrogel PEDOT : HAS4-PBA0,3/ADH à une perturbation harmonique en potentiel, typiquement un signal sinusoïdal, sur une large gamme de fréquences (mHz-GHz). En comparant l’amplitude et la phase du signal d’entrée et l’amplitude et la phase du signal de sortie, l’impédance électrochimique Z du système peut être déduite. Pour le suivi tissulaire, une faible impédance d’électrode est cruciale pour acquérir des signaux de haute qualité in vivo [59]. De plus, il faut éviter les réactions faradiques et augmenter le rapport signal sur bruit [60], qui devrait se situer autour de cinq pour des mesures de qualité [52]. Pour la stimulation tissulaire, une faible impédance est également requise pour assurer une injection de charge réversible et sûre [61]. Dans l’enregistrement neuronal, les potentiels de champs locaux varient à des fréquences allant de 1 à 300 Hz, tandis que les potentiels d’action sont déclenchés à 300-3000 Hz [62]. Par conséquent, l’impédance à 1 kHz est généralement rapportée pour estimer la qualité d’enregistrement des électrodes. Les expériences de spectroscopie d’impédance (EIS) ont été réalisées de 100 kHz à 10 mHz en échantillonnant 10 points par décade, en utilisant un signal sinusoïdal à 0 V versus EOC (potentiel en circuit ouvert) d’amplitude RMS 10 mV. Avant l’acquisition de l’EIS, une expérience en circuit ouvert a été réalisée pour évaluer si le potentiel d’hydrogel conducteur était stable. Des diagrammes de Bode ont été tracés pour l’hydrogel PEDOT : HAS4-PBA0,3/ADH et pour une électrode de platine à titre de comparaison (figure 11). Les valeurs extraites des courbes sont résumées dans le tableau suivant. Tableau 5 : Propriétés d’impédance des hydrogels (moyenne sur les trois hydrogels). ^ L’hydrogel PEDOT : HAS4-PBA0,3/ADH affiche une impédance à 1 kHz de 412 ± 35 Ω avec une fréquence de coupure fcoupure de 2 ± 1 Hz (Figure 11a), et une phase de 10 Hz à 1000 Hz proche de 0 (-2 ± 1° , moyenne sur les trois hydrogels), ce qui était en accord avec l’impédance moyenne à 1 kHz pour les hydrogels interpénétrants conducteurs à base de PEDOT rapportés dans la littérature (103-105 Ω), mais au-dessus de l’impédance rapportée à 1 kHz pour les hydrogels conducteurs à base de PEDOT purs (80-300 Ω). Dans tous les cas, cette impédance peut être considérée comme « faible », car elle se situe dans la partie la plus basse de la plage d’impédance acceptable pour la stimulation/suivi des tissus. L’hydrogel PEDOT : HAS4-PBA0,3/ADH est donc prometteur pour la stimulation et/ou le suivi des tissus. 8.2.4. Caractérisation de la dégradabilité de l’hydrogel La dégradabilité de l’hydrogel PEDOT:HAS4-PBA0,3/ADH, de l’hydrogel HAS4- PBA0,3/ADH et l’hydrogel PEDOT:HA/ADH, a été évaluée dans du tampon PBS à 37°C en suivant leur temps de perte de poids pendant l’incubation (figure 12). Conformément à l’étude de dégradabilité des échantillons de HA et HAS-PBA (voir 1.), l’hydrogel comprenant le HA modifié HAS4-PBA0,3 est lentement dégradé dans le PBS, contrairement à l’hydrogel PEDOT:HA/ADH comprenant du HA non modifié. Les valeurs m(t)/m0 sont reportés dans le tableau 6 suivant. Tableau 6 : valeurs de perte de poids (m(t)/m0) des hydrogels en fonction du nombre de jours d’incubation Exemple 9 Préparation d’une encre pour impression par jet d’encre 9.1. Préparation de l’acide hyaluronique modifié HSA4-PBA0,3-PEGène0,17 Le même protocole que celui décrit pour la préparation de l’acide hyaluronique modifié HSA4-PBA0,3-PEGène0,16, décrit en exemple 3, a été mis en œuvre pour la synthèse de l’acide hyaluronique modifié HSA4-PBA0,3-PEGène0,17. Le HAS4 (1 g ; 1,23 mmol) a été dissous dans 292 mL d’eau. 203 mL de DMF ont été lentement ajoutés. Le DMTMM (0,51 g ; 1,85 mmol), le 3APBA (70 mg ; 0,37 mmol) et le PEGène (460 mg ; 0,74 mmol) ont été dissous séparément dans 4 mL d’eau chacun. La solution de DMTMM a été ajoutée au milieu réactionnel, puis la solution 3APBA, puis la solution PEGène. Le pH a été ajusté à 6,5 et le milieu a été agité pendant 24 heures à température ambiante. Après ajout de NaCl pour obtenir [NaCl]final=0,3 M, le produit a été purifié par ultrafiltration versus eau osmosée, en utilisant une membrane d’ultrafiltration 10 kDa. Le HSA4-PBA0,3-PEGène0,17 a été récupéré après lyophilisation avec un rendement de 90 %. Les degrés de substitution de PBA et de PEGène, DSPBA et DSPEGène, ont été calculés comme décrit en exemple 3, par intégration RMN 1H, et sont DSPBA = 0,3 et DSPEGene = 0,17. La réaction de préparation du HSA4-PBA0,3-PEGène0,17 est représentée schématiquement ci- dessous.
Synthèse du PEDOT :HSA4-PBA0,3-PEGène0,17 HAS4-PBA0,3-PEGène0,17 (1 g, 1,03 mmol) a été dessous dans 138 mL d’eau dégazée. L’EDOT (440,5 ^L (586 mg), 4,12 mmol) a été ajouté pour obtenir une concentration [HAS- PBA-PEGene + EDOT] = 20 g/L. FeSO4 (5,7 mg, 0,02 mmol) et APS (1,251 g, 5,48 mmol) ont été dissous dans 10 mL d’eau dégazée et ajoutés en une seule fois à la solution de HAS- PBA-PEGène. Rapidement après, la solution a été mélangée pendant 10 minutes à 25000 rpm en utilisation un disperseur Ultra Turrax T-10 basic avec un outil de dispersion S 10 N- 8G (Roth, Karlsruhe, Germany). Après mélange, la solution a été mélangée à température ambiante sous azote, jusqu’à obtenir un pH stable en dessous de 1,4-1,5 (environ 18 heures). Le milieu a été dialysé contre l’eau déionisée avec une membrane 6-8 kDa, en changeant le bain jusqu’à ce que la conductivité de l’eau soit inférieure à 8 µS/cm. Ensuite, le pH a été ajusté à 7,40 par ajout de NaOH 1 M. Le milieu a ensuite été filtré successivement à travers des filtres de membrane d’acétate de cellulose de 3 µm ; 1,2 µm et 0,8 µm si possible, pour éliminer les gros agrégats. Le PEDOT :HAS-PBA-PEGène a été récupéré par lyophilisation comme une poudre d’un bleu profond, avec un rendement d’environ 94 %. La formation du PEDOT :HAS-PBA-PEGène est représentée schématiquement ci-dessous. 9.2. Formulation d’une encre pour impression par jet d’encre Une solution « S » d’eau contenant 2 g/L d’acide dodécylbenzène sulfonique (DBSA) et 2,3 % volumique de glycérol a été préparée.10 mg de HAS4-PBA0,3-PEGène0,17 ont été dissous dans 932,4 µL de solution S. 17,6 µL d’une solution à 100 g/L de PEG-(SH)2 (Mn = 3.5 kg/mol, commercialisé par Interchim) ont été dissous dans la solution S (thiol/alcène = 0,9), et 50 µL d’une solution à 20 g/L de photoinitiateur LAP dissous dans de l’eau ont été ajoutés à la solution du HAS-PBA-PEGène dissous. Le mélange a été agité au vortex et soumis à une sonication de 30 secondes dans un bain à ultrasons avant impression. 9.3. Essai d’impression par jet d’encre et photo-réticulation des pistes Les interconnexions ont été imprimées en utilisant une imprimante Dimatix Material Printer DMP-2831 de Fujifilm avec des cartouches de taille de gouttes de 10 pL. Après avoir agité l’encre au vortex et 30 secondes de sonication, environ 1 mL d’encre a été ajouté à la cartouche. Les lignes conductrices avec une longueur de 1-2 cm ont été imprimées sur du verre fonctionnalisé par des fonctions thiol ou sur un film d’hydrogel PEG/chitosan présentant des groupes alcènes sur leur surface fixé sur un substrat en ruban. Les paramètres d’impression sont les suivants : température du substrat de 25°C, température de la tête d’impression 25°C, espacement goutte à goutte de 25 µm, 2 buses d’impression et un potentiel appliqué d’environ 25 V aux buses d’impression. Après impression de 20 couches, les pistes sinusoïdales ont été exposées à un rayonnement UV (λ = 405 nm, puissance =75 mW/cm²) pendant 3 minutes et séchées toute la nuit. L’encre est stable pendant plusieurs heures (> 2 heures) en rinçant régulièrement à l’eau. La figure 13 présente les images au microscope des pistes sinusoïdales conductrices formées sur la lame de verre fonctionnalisée par des fonctions thiol (a) et sur le film d’hydrogel PEG/chitosan (b). Références [1] Matsuhisa et al., Chemical Society Reviews 48, 2946-2966 (2019); [2] Liu et al., ACS nano 11, 9614-9635 (2017) ; [3] Kros et al., Sensors and Actuators B: Chemical 106, 289-295 (2005); [4] Miriani et al., Annu. Int. Conf. IEEE Eng. Med. Biol. Soc., 2008, 1841-1844; [5] Bodart et al. ACS Appl. Mater. Interfaces 11, 17226-17233 (2019) ; [6] Proctor et al. Advanced Biosystems 3, 1800270 (2019); [7] Ludwig et al., J. Neural Eng. 8, 014001 (2011) ; [8] Spencer et al., ACS Appl. Mater. 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Claims

Revendications 1. Utilisation d’un polymère d’acide hyaluronique modifié par le greffage sur celui- ci d’au moins des fonctions - SO3- et des noyaux aromatiques, comme dopant d’un polymère formé à partir d’un ou plusieurs monomères choisis parmi le 3,4-éthylènedioxythiophène (EDOT), le 3,4-propylènedioxythiophène (ProDOT) et leurs dérivés, en particulier d’un polymère de type poly(3,4-éthylènedioxythiophène) (PEDOT). 2. Utilisation selon la revendication 1, lesdites fonctions -SO3- et lesdits noyaux aromatiques dudit polymère d’acide hyaluronique modifié étant portés par des groupements distincts greffés à la chaine d’acide hyaluronique, en particulier ledit polymère d’acide hyaluronique modifié présentant au moins : - des groupes -SO3-C+, C+ étant un contre-ion de l’anion SO3-, notamment choisi parmi les cations alcalins et alcalino-terreux, par exemple Na+, lesdits groupes -SO3-C+ étant en particulier greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions hydroxyles du polymère d’acide hyaluronique ; et - des groupements possédant au moins un noyau aromatique, notamment un noyau benzénique, lesdits groupements étant en particulier greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions acide carboxylique du polymère d’acide hyaluronique, notamment par l’intermédiaire de liaisons amides. 3. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, ledit polymère d’acide hyaluronique modifié étant obtenu à partir d’un acide hyaluronique présentant une masse molaire moyenne en masse, notée Mw, comprise entre 20000 et 1000000 g.mol-1, en particulier entre 40000 et 250000 g.mol-1. 4. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, ledit polymère d’acide hyaluronique modifié présentant : - un nombre moyen de fonctions SO3-, par unité de répétition de l’acide hyaluronique, compris entre 1 et 4, en particulier entre 2 et 4, de préférence entre 3 et 4 et plus préférentiellement de 4 ; et/ou - un nombre moyen de noyaux aromatiques par unité de répétition de l’acide hyaluronique, compris entre 0,05 et 0,5, en particulier entre 0,10 et 0,40 et plus particulièrement entre 0,15 et 0,3. 5. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, ledit polymère d’acide hyaluronique modifié étant en outre porteur d’au moins une fonction réticulable, ladite fonction réticulable étant plus particulièrement une fonction réactive X apte à réagir avec une autre fonction réactive Y, identique ou différente, pour former une liaison physique ou chimique, de préférence une liaison chimique covalente, ladite fonction X étant par exemple une fonction alcène, en particulier éthényle, apte à réagir avec une fonction Y de type thiol pour former une liaison covalente. 6. Utilisation selon la revendication précédente, ledit polymère d’acide hyaluronique modifié présentant un nombre moyen de fonctions réticulables greffées, par unité de répétition de l’acide hyaluronique, compris entre 0,05 et 0,50, en particulier entre 0,07 et 0,50 et plus particulièrement entre 0,10 et 0,50. 7. Utilisation selon la revendication 5 ou 6, dans lequel lesdites fonctions réticulables dudit polymère d’acide hyaluronique modifié sont portées par au moins une partie des groupements porteurs d’au moins un noyau aromatique, greffés audit polymère d’acide hyaluronique modifié, en particulier au niveau d’au moins une partie des fonctions acide carboxylique de l’acide hyaluronique, et/ou sont portées par des greffons distincts du ou des groupements porteurs de fonction(s) -SO3- et/ou de noyau(x) aromatique(s). 8. Utilisation selon l’une quelconque des revendications précédentes, ledit polymère d’acide hyaluronique modifié étant de formule (I) suivante : dans laquelle : - n représente le degré de polymérisation de l’acide hyaluronique, en particulier n est compris entre 45 et 2500, et plus particulièrement entre 90 et 700 ; - les groupements R représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d’hydrogène ou un groupe -SO3-C+, avec C+ représentant un contre-ion de l’anion -SO3-, par exemple choisi parmi les cations alcalins et alcalino-terreux, par exemple Na+ , les groupements R pouvant être différents d’une unité répétitive à l’autre, sous réserve qu’au moins une partie des groupements R représentent des groupes -SO3-C+ ; - les groupements R’, identiques ou différents d’une unité répétitive à l’autre, sont choisis parmi :
. un groupement O-C+, C+ étant tel que défini précédemment ; . un groupement porteur d’un noyau aromatique, en particulier d’un noyau benzénique et, éventuellement, d’au moins une fonction réticulable, en particulier telle que définie en revendication 5 ; et . un groupement porteur d’au moins une fonction réticulable, en particulier telle que définie en revendication 5 ; sous réserve qu’au moins une partie des groupements R’ représentent des groupements porteurs d’un noyau aromatique, en particulier benzénique ; le degré de sulfatation, DSS, défini comme le nombre moyen de groupes -SO3- C+, par unité de répétition de l’acide hyaluronique, étant plus particulièrement compris entre 1 et 4, en particulier entre 2 et 4, de préférence entre 3 et 4 et plus préférentiellement de 4 ; le degré de substitution, DSAr, des fonctions acide carboxylique par des groupements porteurs d’un noyau aromatique, défini comme le nombre moyen de groupements possédant un noyau aromatique par unité de répétition de l’acide hyaluronique, étant plus particulièrement compris entre 0,05 et 0,50, en particulier entre 0,10 et 0,40 et plus particulièrement entre 0,15 et 0,30 ; et le degré de substitution des fonctions acide carboxylique par des groupements porteurs d’au moins une fonction réticulable étant plus particulièrement compris entre 0,05 et 0,50, en particulier entre 0,07 et 0,50 et plus particulièrement entre 0,10 et 0,50. 9. Suspension aqueuse, dite encre, comprenant au moins un polymère formé à partir d’un ou plusieurs monomères choisis parmi le 3,4-éthylènedioxythiophène (EDOT), le 3,4- propylènedioxythiophène (ProDOT) et leurs dérivés, ledit polymère étant dopé par au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 8. 10. Procédé de préparation d’une suspension aqueuse, ou encre, telle que définie en revendication 9, par polymérisation d’un ou plusieurs monomères choisis parmi l’EDOT, le ProDOT et leurs dérivés, dans une solution comprenant au moins ledit polymère d’acide hyaluronique modifié dans un milieu aqueux, ladite réaction étant plus particulièrement opérée en présence d’un oxydant, par exemple du sulfate de fer (Fe3+) et catalysée par du persulfate. 11. Procédé selon la revendication précédente, dans lequel lesdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT et le ou lesdits polymères d’acide hyaluronique modifié selon l’invention sont mis en œuvre dans un rapport molaire entre lesdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT et les unités d’acide hyaluronique modifié, compris entre 0,5 et 5, plus particulièrement entre 1 et 4, en particulier entre 1,5 et 4. 12. Matériau à base d’au moins un polymère formé à partir d’un ou plusieurs monomères choisis parmi l’EDOT, le ProDOT et leurs dérivés, ledit polymère étant dopé par au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 8. 13. Matériau selon la revendication 12, ledit matériau étant un hydrogel, en particulier gonflé en milieu aqueux ou sec, formé à partir du ou desdits polymères dopés par au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié porteur de fonctions réticulables tel que défini dans l’une quelconque des revendications 5 à 8 et/ou présentant des fonctions acide carboxylique libres. 14. Procédé de préparation d’un hydrogel tel que défini en revendication 13, comprenant au moins les étapes consistant en : (a-i) disposer d’une suspension aqueuse, dite encre, comprenant au moins un polymère formé à partir d’un ou plusieurs monomères choisis parmi l’EDOT, le ProDOT et leurs dérivés, ledit polymère étant dopé par au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié porteur d’au moins une fonction réticulable, tel que défini dans l’une quelconque des revendications 5 à 8, et/ou présentant des fonctions acide carboxylique libres ; (a-ii) soumettre ladite encre à des conditions propices à la réticulation desdites chaînes d’acide hyaluronique modifié pour former un hydrogel gonflé en milieu aqueux ; et, éventuellement, (a-iii) soumettre ledit hydrogel gonflé en milieu aqueux à une étape de séchage, en particulier à température ambiante, pour obtenir un hydrogel sec. 15. Procédé de préparation d’un hydrogel tel que défini selon la revendication 13, comprenant au moins les étapes consistant en : (b-i) disposer d’un hydrogel, gonflé en milieu aqueux, formé à partir d’au moins un polymère d’acide hyaluronique modifié porteur d’au moins une fonction réticulable tel que défini dans l’une quelconque des revendications 5 à 8, et/ou présentant des fonctions acide carboxylique libres ; ledit hydrogel étant plus particulièrement obtenu en soumettant une solution du ou desdits polymères d’acide hyaluronique modifiés, dans un milieu aqueux, à des conditions propices à la réticulation desdites chaînes d’acide hyaluronique modifié ; (b-ii) procéder à la polymérisation de monomères de type EDOT et/ou ProDOT dans ledit hydrogel gonflé en milieu aqueux ; et, éventuellement (b-iii) soumettre ledit hydrogel obtenu à l’issue de l’étape (b-ii) à une étape de séchage pour obtenir un hydrogel sec. 16. Procédé selon la revendication précédente, dans lequel la polymérisation en étape (b-ii) des monomères de type EDOT et/ou ProDOT est opérée en imbibant l’hydrogel gonflé en milieu aqueux à base d’acide hyaluronique modifié desdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT, puis en soumettant ledit hydrogel imbibé desdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT à des conditions propices à la polymérisation desdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT ; l’hydrogel gonflé en milieu aqueux et imbibé desdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT étant plus particulièrement obtenu via les étapes suivantes : - formation, à partir de l’hydrogel gonflé en milieu aqueux à base d’acide hyaluronique modifié, d’un hydrogel sec, par exemple en portant l’hydrogel dans des conditions propices à la gélification du milieu aqueux, suivie de l’élimination du milieu aqueux par évaporation, par lyophilisation ou par séchage supercritique ; et - immersion dudit hydrogel sec dans une solution d’au moins un monomère de type EDOT et/ou ProDOT en milieu aqueux, par exemple dans un mélange d’eau et d’acétonitrile. 17. Procédé selon l’une quelconque des revendications 14 à 16, dans lequel ledit acide hyaluronique modifié est porteur de fonctions réactives X, la réticulation desdites chaînes d’acide hyaluronique modifié étant opérée en présence d’au moins un agent de réticulation porteur d’au moins deux fonctions réactives Y, en particulier de deux fonctions Y, les fonctions X et Y étant identiques ou différentes, chacune des fonctions Y étant apte à réagir avec une fonction réactive X dudit polymère d’acide hyaluronique modifié, pour former une liaison physique ou chimique, de préférence une liaison chimique covalente, en particulier sous l’action de la chaleur et/ou d’un rayonnement UV et, éventuellement, en présence d’au moins un composé photo-initiateur. 18. Procédé de préparation d’un hydrogel tel que défini selon la revendication 13, comprenant au moins les étapes consistant en : (c-i) disposer d’une suspension aqueuse comprenant au moins des monomères de type EDOT et/ou ProDOT, au moins ledit polymère d’acide hyaluronique modifié présentant des fonctions acide carboxylique libres ; au moins un catalyseur de la polymérisation des monomères de type EDOT et/ou ProDOT, en particulier du persulfate ; et au moins un agent de réticulation ; (c-ii) soumettre ladite suspension à des conditions propices à la polymérisation desdits monomères de type EDOT et/ou ProDOT et à la réticulation desdites chaînes d’acide hyaluronique modifié pour former ledit hydrogel gonflé en milieu aqueux ; et éventuellement (c-iii) soumettre ledit hydrogel obtenu à l’issue de l’étape (c-ii) à une étape de séchage pour obtenir ledit hydrogel sec. 19. Procédé selon la revendication précédente, dans lequel ledit agent de réticulation présente au moins deux fonctions de type amine primaire ou hydrazide, en particulier deux fonctions de type amine primaire ou hydrazide, de préférence ledit agent de réticulation est le dihydrazide d’acide adipique (ADH) ; la réticulation en étape (c-ii) desdites chaînes d’acide hyaluronique modifié étant initiée par ajout à ladite suspension d’un agent d’activation des fonctions acides carboxyliques, tel que l’hydrochlorate de N-(3- diméthylaminopropyl)-N’-éthylcarbodiimide (EDC). 20. Procédé selon l’une quelconque des revendications 14 à 19, dans lequel l’hydrogel se présente sous la forme d’un film, ladite suspension ou solution en étape (a-i), (b-i) ou (c- i) étant appliquée à la surface d’un substrat, avant réticulation des chaines d’acide hyaluronique modifié. 21. Procédé selon la revendication 20, dans lequel le film d’hydrogel est lié de manière covalente à la surface du substrat, en particulier via l’établissement de liaisons covalentes entre des fonctions réticulables X portées par l’acide hyaluronique modifié, par exemple des fonctions alcènes, et des fonctions Y, telles que des fonctions à hydrogène labile, notamment des fonctions thiols, présentes à la surface du substrat destinée à supporter l’hydrogel. 22. Utilisation d’une suspension aqueuse telle que défini en revendication 9 ou préparée selon la revendication 10 ou 11, ou d’un matériau, en particulier d’un hydrogel, tel que défini selon la revendication 12 ou 13 ou préparé par un procédé selon l’une quelconque des revendications 14 à 21, dans un dispositif bioélectronique ou biocapteur destiné à être mis en contact avec du matériel biologique, par exemple pour un dispositif en contact avec des cultures cellulaires ou des tissus ex vivo, un dispositif ou capteur porté par un patient ou implantable, tels que des guides pour la reconstruction de tissus, par exemple de nerfs périphériques. 23. Dispositif bioélectronique ou biocapteur, destiné à être mis en contact avec du matériel biologique, comprenant au moins un matériau, en particulier un hydrogel, tel que défini selon la revendication 12 ou 13, ou préparé par un procédé selon l’une quelconque des revendications 14 à 21. 24. Polymère d’acide hyaluronique modifié par le greffage sur celui-ci d’au moins des fonctions - SO3- et des noyaux aromatiques, dans lequel lesdites fonctions - SO3- et lesdits noyaux aromatiques sont portés par des groupements distincts greffés à la chaine d’acide hyaluronique, ledit polymère d’acide hyaluronique modifié présentant au moins : - des groupes -SO3-C+, C+ étant un contre-ion de l’anion SO3-, notamment choisi parmi les cations alcalins et alcalino-terreux, par exemple Na+, lesdits groupes -SO3-C+ étant en particulier greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions hydroxyles du polymère d’acide hyaluronique ; et - des groupements possédant au moins un noyau aromatique, notamment un noyau benzénique, lesdits groupements étant greffés au niveau d’au moins une partie des fonctions acide carboxylique du polymère d’acide hyaluronique, par l’intermédiaire de liaisons amides. 25. Polymère d’acide hyaluronique modifié selon la revendication précédente, ledit polymère d’acide hyaluronique modifié présentant les caractéristiques telles que définies dans l’une quelconque des revendications 3 à 8.
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