EP3559025A1 - Peptides antimicrobiens et leurs utilisations - Google Patents

Peptides antimicrobiens et leurs utilisations

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Publication number
EP3559025A1
EP3559025A1 EP17838052.3A EP17838052A EP3559025A1 EP 3559025 A1 EP3559025 A1 EP 3559025A1 EP 17838052 A EP17838052 A EP 17838052A EP 3559025 A1 EP3559025 A1 EP 3559025A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
residue
peptide
seq
sequence
inflammatory
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP17838052.3A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Claire LACOMBE
Constance AUVYNET
Yvonne ROSESTEIN
Emmanuelle SACHON
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique
Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale
Sorbonne Université
Université Paris-Saclay
Universidad Nacional Autónoma de México
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique
Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale
Université Paris-Sud
Sorbonne Université
Universidad Nacional Autónoma de México
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre National de la Recherche Scientifique, Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, Université Paris-Sud, Sorbonne Université, Universidad Nacional Autónoma de México filed Critical Centre National de la Recherche Scientifique
Publication of EP3559025A1 publication Critical patent/EP3559025A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/463—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from amphibians
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the invention provides peptides with anti-inflammatory, anti-angiogenic and / or antimicrobial activity and their use in the prevention or treatment of inflammatory and / or angiogenesis-related diseases.
  • Inflammation or inflammatory reaction is a response to an aggression of exogenous origin (infectious, traumatic cause) or endogenous (encounter of an "abnormal” or a large quantity of antigen, immunological cause, ischemi - irreperfusion syndrome). It is involved in natural immunity in response to a danger signal as well as in the induction of the specific immune response and is therefore associated with a very wide variety of pathological situations (infections, systemic diseases, cancers, thromboembolic pathologies ). The inflammatory reaction, initially intended to protect the body against external aggressions, can lead to deleterious effects.
  • the inflammation can affect the structure as well as the function of the affected organ and must be treated.
  • the skin and the mucous membranes are the seat of many pathologies including an inflammatory component.
  • Eczema and psoriasis are examples of dermatoses characterized by an inappropriate, excessive or chronic inflammatory reaction resulting in tissue damage.
  • Atopic dermatitis is a chronic inflammatory disease involving innate alteration of the skin barrier and inflammation involving innate and adaptive immunity, including specific T cells directed against environmental protein allergens (extrinsic AD or allergic) or cutaneous auto-antigens (intrinsic or non-allergic AD).
  • AD atopic dermatitis
  • DA seems correlated with skin colonization by Staphylococcus aureus (Lin et al., 2007 Clinic Rev Allerg Immunol; 33: 167-177).
  • Psoriasis is a chronic inflammatory disease whose precise cause is not known. Several factors would be involved in the onset of the disease, especially genetic and environmental factors. Microorganisms could also be the cause of psoriasis (Munz et al, 2010. Arch Dermatol Res, 302 (7): 495-8). At the cellular level, T lymphocytes seem to play a central role. A frequent complication of inflammatory dermatoses is impetiginisation, that is to say the superinfection of skin lesions initially uninfected, most often by streptococci or staphylococci.
  • Anti-inflammatory drugs include anti-inflammatory steroids (derived from cortisol or cortisone) and non-steroids (e.g., aspirin, ibuprofen), and compounds with immunosuppressive activity.
  • anti-inflammatory steroids derived from cortisol or cortisone
  • non-steroids e.g., aspirin, ibuprofen
  • compounds with immunosuppressive activity e.g., aspirin, ibuprofen
  • the most commonly used anti-inflammatory agents on the skin are topical corticosteroids such as hydrocortisone or betamethasone. There are four groups of topical corticosteroids divided according to the intensity of their activity (power level), from class I (very strong activity) to class IV (weak activity).
  • the choice of activity level and dosage of the local corticosteroid depends on the nature of the lesion, the sensitivity and the age of the patient, and may require various adjustments during treatment.
  • the side effects of topical corticosteroids range from skin atrophy (reversible) to the appearance of skin infections, requiring discontinuation of treatment via contact dermatitis associated with corticosteroids.
  • Anti-inflammatory agents are contraindicated when the skin is infected or if it presents ulcerations (wounds) and are avoided in case of infectious dermatosis or superinfection of a pre-existing dermatosis because of the risk of a low noise evolution of infectious pathology, masked by an apparent favorable clinical effect. Thus, it is often recommended to treat any skin infection prior to the application of topical corticosteroids, which further complicates the treatment.
  • Antimicrobial peptides are defense peptides considered to be one of the key components of the innate immune system, which provides the first line of defense for multicellular organisms against pathogens.
  • the interest aroused by these peptides comes in particular from their broad spectrum of activity. Their mode of action is based on a rapid permeabilization or fragmentation of the membranes of microorganisms, unlikely to generate the appearance of resistance mechanisms.
  • Antimicrobial peptides have been identified in plants, insects, amphibians and mammals. The skin of amphibians is an important source of antimicrobial peptides and each frog species has its own peptide repertoire consisting generally of 10 to 15 PAMs.
  • the Phyllomedusinae subfamily synthesizes and secretes a large diversity of PAMs that have been classified into seven families: dermaseptins (17 peptides), phylloseptins (17 peptides), plasticins (6 peptides), dermatoxins (4 peptides), phylloxins (2 peptides ), hyposines (5 peptides) and 4 orphan peptides (Amiche et al., 2008, Peptides, 29: 2074-2082).
  • the object of the present invention is to provide novel peptides with anti-inflammatory and / or antimicrobial activity, particularly for the treatment of inflammatory diseases, in particular inflammatory diseases due to or associated with an infection.
  • the present invention relates to a peptide having an anti-inflammatory and / or antimicrobial activity having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-ÎC-KVG-X4-X5- X6-G- [CA-9 (SEQ ID NO: 29), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • - ⁇ is X7-L-N-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10, or is absent; and wherein:
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue; and functional derivatives and pharmaceutically acceptable salts of said peptide, with the proviso that the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 4.
  • the peptide having anti-inflammatory and / or antimicrobial activity has a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6. -GKA-X7-LNAVTN-X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 4.
  • the peptide has a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 , SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28 and functional derivatives and pharmaceutically acceptable salts of this peptide.
  • the invention further relates to a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GKA-X7-LNAVT-N-X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides, for use as a medicament.
  • the present invention relates to a medicament comprising a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-
  • G- ⁇ - ⁇ - ⁇ (SEQ ID NO: 29), wherein: -Xi is a residue W or A;
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xg is an M or A residue
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, or a nucleotide sequence coding for at least one such peptide.
  • the drug comprises a peptide having a 29 to 100 amino acid sequence comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-X7-LNAVTN-X8 -ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xe is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the invention also relates to a pharmaceutical composition comprising at least one peptide as described above or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides, and one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • Another subject of the invention is a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-Xi-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-3 ⁇ 4-GKA-9 (SEQ ID NO: 29) , in which :
  • -Xi is a residue W or A
  • -Xi is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -XA is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide has a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1 -TL-Xs-KKVGX-Xs-Xe-GKA-LNAVT-N-X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein: -Xi is a residue W or A;
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xe is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • One aspect of the invention relates to a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-Xi-X2-TL-X3-KKVG-X4-Xs-X6-GKA-9 (SEQ ID NO: 29) , in which :
  • -Xi is a residue W or A; -X2 is a residue K or D;
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • - ⁇ is a residue A, K or D;
  • - ⁇ is X7-LNA, X7-LNAVTN-X8-A, X7-LNAVTN-X8-ANQN-X9-X10, or is absent; and wherein:
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide has a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1 -TL-Xs-KKVGX-Xs-Xe-GKA-Xv-LNAVT-N-X8-ANQN-X9- X10 (SEQ ID NO: 1), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • X is a residue A, K or D
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide, drug or pharmaceutical composition for its use as described above is characterized in that the inflammatory disease is due to infection.
  • One aspect of the invention relates to a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-Xi-X 2 -TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GKA-9 (SEQ ID NO: 29 ), in which :
  • -Xi is a residue W or A
  • -Xi is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -XA is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide has a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1 -TL-Xs-KKVGX-Xs-Xe-GKA-LNAVT-N-X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein: -Xi is a residue W or A;
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xe is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the present invention further relates to the use of a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • - ⁇ is a residue A, K or D;
  • - ⁇ is X7-LNA, X7-LNAVTN-X8-A, X7-LNAVTN-X8-ANQN-X9-X10, or is absent; and wherein:
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, as antifungal or antibacterial agent.
  • the present invention further relates to the use of a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-X7- LNAVTN-X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • X is a residue A, K or D
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the present invention also relates to a kit comprising a peptide, a peptide for its use, a drug, or a pharmaceutical composition as described above, and optionally the instructions for administering the peptide, drug, or pharmaceutical composition to said subject.
  • peptide oligopeptide
  • polypeptide polypeptide or protein
  • peptide bonds irrespective of the number of residues. amino acid constituting this chain.
  • C Cys, cysteine
  • D Asp, aspartic acid
  • E Glu, glutamic acid
  • F Phe, phenylalanine
  • G Gly, glycine
  • H His, histidine
  • I Ile, isoleucine
  • K Lily, lysine
  • L Leu, leucine
  • M Met, methionine
  • N Asn, asparagine
  • P Pro, praline
  • Q Gin, glutamine
  • R Arg, arginine
  • S Ser, serine
  • T Thr, threonine
  • V Val, valine
  • W Trp, tryptophan
  • Y Tyr, tyrosine.
  • microbe or "microbial” as used herein refers to bacteria, fungi, yeasts, viruses and / or parasites.
  • microbial infection refers to an infection due to bacteria, fungi, yeasts, viruses and / or parasites.
  • antibacterial activity refers to antibacterial, antiviral, antifungal and / or antiparasitic activity. This activity can be evaluated by measuring different parameters such as the ICso, the MIC or the CMB.
  • IC 50 or “inhibitory concentration 50” corresponds to the required concentration of a compound to reduce the in vitro growth of a population of microorganisms by 50%.
  • MIC or “mimethal inhibitory concentration” corresponds to the minimum concentration of compound to completely inhibit microbial growth, after 18 hours of incubation, generally at 37 ° C, in the presence of said compound.
  • CMB or “minimum bactericidal concentration” is the minimum concentration of compound that can destroy 99.9% of microorganisms after 18 to 24 hours of contact with said compound.
  • lethal concentration 50 or "LC 50” as used herein refers to the concentration of compound causing the death of 50% of a cell population.
  • LCso is a quantitative indicator of the toxicity of a compound. LCso is used in this document to evaluate the cytotoxicity of PAMs, in particular on immune and erythrocyte cells.
  • CL 50 is the peptide concentration that induces the death of 50% of immune cells.
  • the CL 50 corresponds to the peptide concentration inducing the death of 50% of the erythrocyte cells.
  • anti-inflammatory activity refers to an activity aimed at inhibiting or limiting inflammation. Examples of inflammation include erythema, edema. Inflammation, medically, is defined as the union of the following four phenomena: swelling, redness, heat, and pain.
  • immunosuppressive activity refers to an activity aimed at alleviating or suppressing the immune responses of the body.
  • a pharmaceutically acceptable excipient does not produce any side effect, allergic or other adverse reaction when administered to an animal, preferably a human.
  • the preparations must meet the standard criteria for sterility, pyrogenicity, general safety and purity as required by regulatory authorities, such as the FDA or EM ⁇ .
  • subject refers to an animal, including a human being.
  • a subject may be a patient, namely a person receiving medical care, undergoing or having undergone medical treatment, or monitored as part of the development of a disease.
  • treat or “treatment” refers both to a therapeutic treatment and to prophylactic or preventive measures, in which the objective is to prevent or slow down (decrease) the targeted pathological condition, or the disorder.
  • Those who need treatment include those who already have the disorder and those who are predisposed or likely to have it, or those in whom the disorder is to be prevented.
  • a subject or a mammal is successfully "treated” if, after receiving a therapeutic dose of the peptide according to the present invention, the patient shows an observable and / or measurable reduction or an absence of one or more of the following: reduction of the number of cells pathogenic, reduction in the total percentage of pathogenic cells, and / or some relief of one or more of the symptoms associated with the targeted disease, reduced morbidity and mortality, and improved quality of life.
  • the above parameters for evaluating the success of the treatment and improving the disease situation are easily measurable by routine procedures known to the practitioner.
  • the term "therapeutically effective dose” refers to the dose of therapeutic agent necessary and sufficient to slow or stop the progression, aggravation or deterioration of one or more symptoms of the disease or condition; alleviate the symptoms of the disease or condition; cure the disease or condition.
  • the condition according to the invention is an inflammatory disease, a microbial disease, or an inflammatory disease with an infectious component.
  • the condition according to the invention is a disease related to angiogenesis.
  • the invention firstly relates to a peptide having an anti-inflammatory activity and / or antimicrobial activity having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-ÎC-KVG-X4- X5-X6-G- [CA-9 (SEQ ID NO: 29), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • - ⁇ is X7-LNA (SEQ ID NO: 30), Xv-LNAVTN-Xs-A (SEQ ID NO: 31), Xv- LNAVTN-X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 32), or is absent; and wherein:
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide is not a peptide with the sequence ALWKTLLKKVGKVAGKAVLNAVTNMANQNEQ-OH (SEQ ID NO: 2), ALWKTLLKKVGKVAGKAVLNAVTNMANQNE-OH (SEQ ID NO: 3) or ALWKTLLKKVGKVAGKAVLNAVTNMANQN-OH (SEQ ID NO: 4).
  • the peptide of the invention does not comprise SEQ ID NO: 2. In one embodiment, the peptide of the invention does not include SEQ ID NO: 3. In one embodiment, the peptide of the invention does not comprise SEQ ID NO: 4. According to a mode of the invention, the peptide of the invention is not a peptide of sequence MALViCKSLFLVLFLGLVSLSICEEKRENEDEEEQEDDEQSEEKRALWKTLLKKVG KVAGKAVLNAVTNMANQNEQ (SEQ ID NO: 36).
  • the peptide of the invention does not comprise the sequence SEQ ID NO: 36.
  • p is X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO:
  • X9 and X10 do not represent any residues.
  • p is X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO: 32) and X9 and X10 are no residues.
  • the peptide having anti-inflammatory and / or antimicrobial activity has a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6 -GKA (SEQ ID NO: 33), in which:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 4.
  • the peptide having anti-inflammatory and / or antimicrobial activity has a sequence of 21 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6 -GKA-X7-LNA (SEQ ID NO: 34), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 4.
  • the peptide having anti-inflammatory and / or antimicrobial activity has a sequence of 26 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6. -GKA-X7-LNAVTN-X8-A (SEQ ID NO: 35), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue M or A
  • the peptide having an anti-inflammatory and / or antimicrobial activity has a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-Xs-X6-G-C1-A-X7-LNAVTN -X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • X is a residue A, K or D
  • -Xe is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide of the invention is provided with anti-inflammatory activity, immunosuppressive activity, anti-angiogenic activity and / or antimicrobial activity.
  • the peptide of the invention is provided with antimicrobial activity. In another embodiment of the invention, the peptide of the invention is provided with an anti-inflammatory activity. In another embodiment of the invention, the peptide of the invention is provided with an immunosuppressive effect. In another embodiment of the invention, the peptide of the invention has an anti-angiogenic effect.
  • the peptide of the invention is provided with anti-inflammatory activity and antimicrobial activity. In a preferred embodiment of the invention, the peptide of the invention is endowed with an anti-inflammatory activity and an immunosuppressive activity. In a preferred embodiment of the invention, the peptide of the invention is endowed with anti-inflammatory activity and anti-angiogenic activity.
  • the peptide of the invention is provided with anti-inflammatory activity, immunosuppressive activity and antimicrobial activity. In a preferred embodiment of the invention, the peptide of the invention is provided with anti-inflammatory activity, anti-angiogenic activity and antimicrobial activity. In a preferred embodiment of the invention, the peptide of the invention is provided with anti-inflammatory activity, immunosuppressive activity and anti-angiogenic activity. In a preferred embodiment of the invention, the peptide of the invention is endowed with anti-immunosuppressive activity, anti-angiogenic activity and antimicrobial activity.
  • the peptide of the invention is provided with anti-inflammatory activity, immunosuppressive activity, anti-angiogenic activity and antimicrobial activity.
  • the residue Xi is W in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue X2 is K in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue XJ is L in SEQ IDs. NOs 1 and 29 to 32
  • the residue X4 is K or A in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue Xs is V in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue Xe is A in SEQs ID NOs 1 and 29 to 32
  • / or the residue X7 is V in SEQ ID NOs 1, 29, 31 and 32
  • the residue X9 represents the residue E and the residue Xi 0 represents the residue Q in SEQ ID NO 1.
  • the residue 3 ⁇ 4 does not represent any amino acid in SEQ ID NO 1.
  • the Xio residue does not represent any amino acid in SEQ ID NO.
  • the residue 3 ⁇ 4 is E and the residue Xio is absent in SEQ ID NO 1.
  • the residue 3 ⁇ 4 represents the residue E and the residue Xio does not represent any acid amine in SEQ ID NO: 1.
  • the X> and Xio residues do not represent any amino acid.
  • the peptide of the invention has a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-Xi-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GKA-X7 -LNAVTN-X8-ANQN (SEQ ID NO: 25), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • - ⁇ is a residue A, EC or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 4.
  • the peptide has a size of between 17 and 100 amino acids, preferably between 17 and 50, between 17 and 45, between 17 and 40, between 17 and 35, or between 17 and 30 amino acids. According to another embodiment, the peptide has a size of between 17 and 34, between 17 and 33, between 17 and 32, or between 17 and 31 amino acids. According to one embodiment, the peptide has a size of 17 amino acids.
  • the peptide has a size of between 21 and 100 amino acids, preferably between 21 and 50, between 21 and 45, between 21 and 40, between 21 and 35, or between 21 and 30 amino acids. According to another embodiment, the peptide has a size of between 21 and 34, between 21 and 33, between 21 and 32, or between 21 and 31 amino acids. According to one embodiment, the peptide has a size of 21 amino acids.
  • the peptide has a size of between 26 and 100 amino acids, preferably between 26 and 50, between 26 and 45, between 26 and 40, between 26 and 35, or between 26 and 30 amino acids. According to another embodiment, the peptide has a size of between 26 and 34, between 26 and 33, between 26 and 32, or between 26 and 31 amino acids. According to one embodiment, the peptide has a size of 26 amino acids.
  • the peptide has a size of between 29 and 100 amino acids, preferably between 29 and 50, between 29 and 45, between 29 and 40, between 29 and 35, or between 29 and 30 amino acids. According to another embodiment, the peptide has a size of between 29 and 34, between 29 and 33, between 29 and 32, or between 29 and 31 amino acids.
  • the peptide has a size of 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 or 35. amino acids. In a preferred embodiment of the invention, the peptide is 29 amino acids in size.
  • the amino acids constituting the peptide according to the invention may be of L or D configuration, preferably of L configuration.
  • the peptide according to the invention may contain a combination of amino acids of L configuration and D. configuration
  • the peptide according to the invention may have a post-translational modification and / or chemical modification, in particular glycosylation, amidation, esterification, acylation, acetylation or methylation.
  • protecting groups can be added to the C- and / or N-terminal ends.
  • the protecting group at the N-terminus may be acylation or acetylation and the protective group at the C-terminus may be amidation or esterification.
  • the action of proteases can also be counteracted by the use of amino acids of configuration D, the cyclization of the peptide by formation of disulfide bridges, lactam rings or bonds between the N- and C- ends. terminal.
  • the peptide of the invention may also comprise pseudopeptide bonds replacing the "conventional" CONH peptide bonds and conferring increased resistance to peptidases, such as CHOH-CH 2, NHCO, CH 2 -O, CH 2 CH 2, CO-CH 2, NN, CH, CH2NH, and CH2-S.
  • the peptide according to the invention has an amidation of its C-terminal end.
  • the peptide of the present invention consists of or comprises a sequence selected from the following group:
  • residues preceded by the letter "d” are amino acids of configuration D, and functional derivatives and pharmaceutically acceptable salts of said peptide.
  • the peptide has a sequence comprising or consisting of the sequence SEQ ID NO: 5. In one embodiment, the peptide has a sequence comprising or consisting of the sequence SEQ ID NO: 6. In one embodiment, the peptide has a sequence comprising or consisting of the sequence SEQ ID NO: 7. In one embodiment, the peptide has a sequence comprising or consisting of the sequence SEQ ID NO: 8.
  • the invention also covers the functional derivatives of a peptide according to the invention as described above.
  • the term "functional derivative” as used herein refers to peptides having substantially the same amino acid sequence, substantially the same helical structure and substantially the same anti-inflammatory, anti-angiogenic and / or antimicrobial activity. .
  • the term “functional derivative” as used herein refers to peptides having substantially the same amino acid sequence, substantially the same helical structure, and substantially the same anti-inflammatory and / or antimicrobial activity.
  • These functional derivatives may be resistant to proteolysis by one or more chemical (s) modifications or substantially homologous to one or more conservative (s) substitution (s).
  • These functional derivatives can be, for example, inverso peptides, retro peptides, retro-inverso peptides and peptides whose side chain of one or more of the amino acids is substituted by groups which do not modify the anti-inflammatory activity.
  • -Inflammatory and / or antimicrobial peptide of the invention can be, for example, inverso peptides, retro peptides, retro-inverso peptides and peptides whose side chain of one or more of the amino acids is substituted by groups which do not modify the anti-inflammatory activity.
  • the invention also covers the pharmaceutically acceptable salts of a peptide according to the invention.
  • the pharmaceutically acceptable salts may be, for example, salts with pharmaceutically acceptable mineral acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid and phosphoric acid; salts with pharmaceutically acceptable organic acids such as acetic acid, citric acid, maleic acid, malic acid, succinic acid, ascorbic acid and tartaric acid; salts with pharmaceutically acceptable inorganic bases such as sodium, potassium, calcium, magnesium or ammonium salts; or salts with organic bases which have salifiable nitrogen, commonly used in the pharmaceutical art.
  • the methods for preparing these salts are well known to those skilled in the art.
  • the peptide according to the invention can be obtained by conventional chemical synthesis (in solid phase or in liquid homogeneous phase) or by enzymatic synthesis (Kullman et al., 1987. Enzymatic peptide synthesis, CRC Press, Florida). It can also be obtained by culturing a host cell, as described hereinafter, comprising a transgene encoding the peptide and expressing said peptide, and extracting said peptide from these host cells or from the culture medium. wherein the peptide has been secreted.
  • the peptide is an isolated peptide. In one embodiment, the peptide is a recombinant peptide.
  • a second subject of the invention relates to a nucleic acid encoding a peptide according to the first subject of the invention.
  • nucleic acid means any molecule based on DNA or RNA. It may be synthetic or semisynthetic, recombinant, possibly amplified or cloned in vectors, chemically modified, comprising non-natural bases or modified nucleotides comprising for example a modified bond, a modified purine or pyrirnidic base, or a modified sugar.
  • the nucleic acid according to the invention may be in the form of DNA and / or RNA, single-stranded or double-stranded.
  • the nucleic acid is an isolated DNA molecule, synthesized by recombinant techniques well known to those skilled in the art.
  • the nucleic acid according to the invention can be deduced from the sequence of the peptide according to the invention and the use of the codons can be adapted according to the host cell in which the nucleic acid is to be transcribed. These steps can be performed according to methods well known to those skilled in the art and some of which are described in the reference manual Sambrook et al. (Sambrook et al., In Vitro Cell, Dev Biol., 28P: 97-105).
  • the nucleic acid is the nucleic acid encoding an amino acid sequence selected from the group consisting of or consisting of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ. ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 , and SEQ ID NO: 28.
  • nucleic acid that is selected from the group consisting of or consisting of:
  • SEQ ID NO: 24 coding for peptides of sequence SEQ ID NO: 2 and 5, or any sequence exhibiting at least 75%, preferably at least 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 or 99% identity with one of SEQ ID NOs: 22-24.
  • Two sequences are said to be optimally aligned when the percentage of identity is maximum. Moreover, as will become clear to those skilled in the art, it may be necessary to use additions of gaps (gaps) so as to obtain an optimal alignment between the two sequences.
  • the percentage identity between two nucleic acid sequences can therefore be determined by comparing these two optimally aligned sequences in which the nucleic acid sequence to be compared can comprise additions or deletions with respect to the reference sequence for optimal alignment between these two sequences.
  • the percentage of identity is then calculated by determining the number of identical positions for which the nucleotide is identical between the two sequences, by dividing this number of identical positions by the total number of positions in the comparison window and by multiplying the result obtained. by 100 to get the percentage of identity between these two sequences.
  • the methods of determining the identity are designed to give the greatest possible concordance between the compared sequences.
  • the percentage of identity can be determined by a particular mathematical model or by a computer program (generally referred to as an "algorithm").
  • Methods for calculating identity between nucleotide sequences are well known to those skilled in the art. Non-limiting examples of such methods include those described in the following documents: Arthur M. Lesk, Computational Molecular Biology: Methods and Methods for Sequence Analysis (New York: Oxford University Press, 1988); Douglas W. Smith, Biocomputing: Informatics and Genome Projects (New York: Academy Press, 1993); Hugh G. Griffin and Annette M.
  • GCG software including GAP (Devereux et al., 1984. Nucl Acid Res 12 (1 Pt 1): 387-395; Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, Madison, WI), BLASTP, BLASTN, and FASTA (Altschul et al., 1990. Mol Biol 215 (3): 403-410).
  • the BLASTX program is available from the National Center for Biotechnology Information (NCBI) and other sources (BLAST Manual, Altschul et al., NCB / NLM / NIH Bethesda, Md., 20894, Altschul et al, 1990. Mol Biol 215 (3 ): 403-410).
  • NCBI National Center for Biotechnology Information
  • the Smith-Waterman algorithm which is well known to those skilled in the art, can also be used to determine the percent identity between two sequences.
  • the invention furthermore relates to a vector or a plasmid in which a nucleic acid according to the invention is associated with elements suitable for the control of transcription (in particular a promoter, an amplifier and optionally a terminator) and, optionally, the translation.
  • elements suitable for the control of transcription in particular a promoter, an amplifier and optionally a terminator
  • the vector is a recombinant vector.
  • a nucleic acid according to the invention has been inserted into the vector.
  • the vector may be a cloning vector or an expression vector.
  • the invention also relates to a host cell expressing a peptide of the invention, constitutively or transiently.
  • the host cell has been transformed with at least one of the nucleic acids according to the invention.
  • transformation means the introduction of a "foreign” (ie, extrinsic or extracellular) gene or RNA or DNA sequence (including plasmids and viral vectors) into a host cell. so that the host cell expresses the introduced gene or sequence to produce the desired substance, typically a protein encoded by the gene or sequence.
  • a host cell that receives and expresses the introduced DNA or RNA has been "transformed”.
  • the construction of the vectors according to the invention and the transformation of the host cells can be carried out by conventional molecular biology techniques.
  • the invention also relates to a peptide having an anti-inflammatory activity and / or antimicrobial activity having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-Xi-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5- Xfi-GKA-9 (SEQ ID NO: 29), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -Xi is a residue K or D; -X3 is an L or A residue;
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -3 ⁇ 4 is a residue A, K or D; - (p is X7-LNA (SEQ ID NO: 30), X 7 -LNAVTNX -A 8 (SEQ ID NO: 31), X -
  • -Xe is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2; or a nucleotide sequence encoding at least one of these peptides for use as a medicament.
  • the peptide of the invention does not include SEQ ID NO: 2.
  • the peptide for use as a drug has a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-G-IC-A ( SEQ ID NO: 33), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D; functional derivatives and pharmaceutically acceptable salts of said peptide, with the proviso that the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2; or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides.
  • the peptide for use as a drug has a sequence of 21 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GKA-X7-LNA ( SEQ ID NO: 34), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • - ⁇ is a residue A, EC or D;
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2; or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides.
  • the peptide for use as a medicament has a sequence of 26 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GKA-X7-LNAVTN- X8-A (SEQ ID NO: 35), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • X is a residue A, K or D
  • -X7 is a residue V or P; -Xs is a residue M or A;
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2; or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides.
  • the peptide for use as a medicament has a sequence from 29 to 100 amino acids comprising the sequence G-X1-X2-X3-TL-KKVG- X 4 -Xs-X6-G- [CA- X7-LNAVTN-X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), in which
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, preferably a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 or 8; or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides.
  • the residue Xi is W in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue X2 is K in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue X3 is L in SEQ IDs. NOs 1 and 29 to 32
  • the residue X * is K or A in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue Xs is V in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • Xe is residue A SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • / or the residue X7 is V in SEQ ID NOs 1, 29, 31 and 32.
  • the residue X9 represents the residue E and the residue X10 represents the residue Q in SEQ ID NO 1.
  • the residue 3 ⁇ 4 does not represent any amino acid in SEQ ID NO 1.
  • the Xio residue does not represent any amino acid in SEQ ID NO.
  • the residue 3 ⁇ 4 is E and the residue Xio is absent in SEQ ID NO 1.
  • the residue 3 ⁇ 4 represents the residue E and the residue Xio does not represent any acid amine in SEQ ID NO l.
  • residues X9 and Xtone represent no amino acid.
  • the invention also relates to a medicament comprising at least one peptide having anti-inflammatory activity and / or antimicrobial activity having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG -X4-X5-X6-GK-
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • X is a residue A, K or D
  • - ⁇ is X7-LNA (SEQ ID NO: 30), Xv-LNAVTN-Xs-A (SEQ ID NO: 31), X7-LNAVTN-X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 32), or is absent ; and wherein:
  • -Xa is an M or A residue
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide of the invention does not include SEQ ID NO: 2.
  • the medicament comprises at least one peptide having anti-inflammatory activity and / or anti-microbial activity having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-XI-X2-TL-3 ⁇ 4-KKVGX 4 -X5-X6-GKA (SEQ ID NO: 33), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • the medicament comprises at least one peptide having anti-inflammatory activity and / or antimicrobial activity having a sequence of 21 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1OO-TL-X3-KKVG-X4- X5-X6-GK-A-X7-LNA (SEQ ID NO: 34), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xs is a residue A, K or D;
  • -X7 is a residue V or P; functional derivatives and pharmaceutically acceptable salts of said peptide, with the proviso that the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2; or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides.
  • the medicament comprises at least one peptide having anti-inflammatory activity and / or antimicrobial activity having a sequence of 26 to 100 amino acids comprising the AL-X1 sequence OTL-X3-KKVG-X4-V -X6-GKA-X7-LNAVTN-X8-A (SEQ ID NO: 35), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2; or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides.
  • the medicament comprises at least one peptide having an anti-inflammatory and / or antimicrobial activity having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4 -X5-X6-GKA-X7-LN-AVTN-Xs-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, preferably a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 or 8; or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides.
  • the present invention also relates to a composition comprising at least one peptide having an anti-inflammatory activity and / or antimicrobial activity having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4 -X5-X0-G-
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • -X9 represents no residue or is a residue E
  • -Xio represents no residue or is a Q residue
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2; or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides.
  • the peptide of the invention does not include SEQ ID NO: 2.
  • the composition comprises at least one peptide having anti-inflammatory activity and / or antimicrobial activity having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG- X4-X5-X6-GKA (SEQ ID NO: 33), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2; or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides.
  • the peptide of the invention does not comprise SEQ ID NO: 2.
  • the composition comprises at least one peptide having anti-inflammatory and / or antimicrobial activity having a 21 to 100 amino acid sequence comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-Xfi-LNA (SEQ ID NO: 34), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P
  • -X5 is a residue V or A
  • X is a residue A, K or D
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2; or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides.
  • the peptide of the invention does not include SEQ ID NO: 2.
  • the composition comprises at least one peptide having anti-inflammatory activity and / or antimicrobial activity having a sequence of 26 to 100 amino acids comprising the sequence ALX 1 -X2-TL-X1-KKVG-X4 -XS-X6-GK-A-X7-LNAVTN-X8-A (SEQ ID NO: 35), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • X is a residue A, K or D
  • -Xa is an M or A residue
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2; or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides.
  • the composition comprises at least one peptide comprising a peptide having an anti-inflammatory and / or antimicrobial activity having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3- KKVG-X4-X5-X6-G-KA-X7-LNAVTN-Xs-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), in which:
  • -Xi is a residue W or A; -X2 is a residue K or D;
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, preferably a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7 or 8; or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides.
  • the invention also relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising at least one peptide having an anti-inflammatory and / or antimicrobial activity having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-
  • -Xi is a residue W or A; -X2 is a residue K or D;
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • X is a residue A, K or D
  • - ⁇ is X7-LNA (SEQ ID NO: 30), X7-LNAVTN-X8-A (SEQ ID NO: 31), X7-LNAVTN-X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 32), or is absent ; and wherein:
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide of the invention does not include SEQ ID NO: 2.
  • the composition comprises at least one peptide having anti-inflammatory activity and / or antimicrobial activity having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG- X4-X5-X0-GKA (SEQ ID NO: 33), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • - ⁇ is a residue A, EC or D;
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides, and one or more pharmaceutically acceptable excipients .
  • the pharmaceutical composition comprises at least one peptide having anti-inflammatory activity and / or antimicrobial activity having a sequence of 21 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG -X4-X5-X0-G- KA-X7-LNA (SEQ ID NO: 34), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X. is a residue K or D
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • - ⁇ is a residue A, EC or D;
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides, and one or more pharmaceutically acceptable excipients .
  • the pharmaceutical composition comprises at least one peptide having anti-inflammatory activity and / or antimicrobial activity having a sequence of 26 to 100 amino acids comprising the sequence AL-XI-X 2 -TL-X3- KKVG-X4-X5-xo-G- KAX 7 -LNAVTN-Xs-A (SEQ ID NO: 35), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • the peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, or a sequence nucleotide encoding at least one of these peptides, and one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • the pharmaceutical composition comprises at least one or more peptide comprising a peptide having an anti-inflammatory and / or antimicrobial activity having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-Xi-Xi.
  • TL-Xs-KKVGX ⁇ Xs-Xe-GKA-XT-LNAVT-N-X8-ANQN-X9-X10 SEQ ID NO: 1
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • peptide of sequence SEQ ID NO: 2 preferably a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6 , 7 or 8, or a nucleotide sequence coding for at least one of these peptides, and one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • the invention further relates to a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence A-L-X1 -T-L1-K-K-V-G1-Xs-Xe-G-K-A1 (SEQ ID NO: 29), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -3 ⁇ 4 is a residue A, K or D; - (p is X7-L-N-A (SEQ ID NO: 30), XT-L-N-A-V-T-N-XS-A (SEQ ID NO: 31), X?
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence SEQ ID NO: 29 and functional derivatives and pharmaceutically acceptable salts of said peptide, is intended for use as an anti-inflammatory agent and / or immunosuppressive.
  • the peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence SEQ ID NO: 29 and functional derivatives and pharmaceutically acceptable salts of said peptide, is intended for use as an anti-inflammatory agent and / or anti-angiogenic.
  • the invention relates to a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X0-GKA (SEQ ID NO: 33) , in which :
  • -Xi is a residue W or A
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • the invention relates to a peptide having a 21 to 100 amino acid sequence comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-X7-LNA ( SEQ ID NO: 34), wherein: -Xi is a residue W or A;
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • the invention relates to a peptide having a 26 to 100 amino acid sequence comprising the sequence AL-Xi-X 2 -TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-X7-LNAVTN -X8-A (SEQ ID NO: 35), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue M or A
  • the invention relates to a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-X7-LNAVTN- X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein:
  • -Xi is a residue W or A; -X2 is a residue K or D;
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • - ⁇ is a residue A, EC or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the residue Xi is W in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue X2 is K in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue Xs is L in SEQ IDs. NOs 1 and 29 to 32
  • the residue X * is K or A in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue Xs is V in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue Xe is A in SEQs ID NOs 1 and 29 to 32
  • / or the residue X7 is V in SEQ ID NOs 1, 29, 31 and 32.
  • the residue X9 represents the residue E and the residue X10 represents the residue Q in SEQ ID NO 1.
  • the Xs residue does not represent any amino acid in SEQ ID No. 1.
  • the Xio residue does not represent any amino acid in SEQ ID NO.
  • the residue 3 ⁇ 4 is E and the residue Xio is absent in SEQ ID NO 1.
  • the residue X9 represents the residue E and the residue X10 does not represent any acid amine in SEQ ID NO l.
  • residues X9 and X10 do not represent any amino acid.
  • the peptide for use as an anti-inflammatory, immunosuppressive and / or anti-angiogenic agent is a peptide comprising a sequence selected from the group comprising or consisting of SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • the peptide for use as an anti-inflammatory and / or anti-angiogenic agent is a peptide comprising a sequence selected from the group comprising or consisting of SEQ ID NOs: 2, 3 sequences, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • the peptide as described above is useful as an immunosuppressive agent.
  • the peptide as described above is used as an immunosuppressive agent.
  • the peptide as described above is useful as an anti-inflammatory agent.
  • the peptide as described above is used as an anti-inflammatory agent.
  • the peptide as described above is useful as an anti-angiogenic agent.
  • the peptide as described above is used as an anti-angiogenic agent.
  • the peptide as described above is useful as an anti-inflammatory, immunosuppressive and anti-angiogenic agent, preferentially as an anti-inflammatory and immunosuppressive agent.
  • the peptide as described above is used as an anti-inflammatory agent, immunosuppressant and anti-angiogenic, preferably as an anti-inflammatory and immunosuppressive agent.
  • the invention relates to the peptide as described above for use in the prevention or treatment of an inflammatory disease, preferably a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids including SEQ ID NO: 1, preferably comprising a sequence selected from the group comprising or consisting of SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 sequences.
  • inflammatory disease refers to any disease in which an inflammatory reaction has pathological consequences for the body. Inflammatory diseases affect organs or tissues such as the digestive system, nervous system, skin, mucous membranes or joints, among others. For example, acute inflammatory diseases within the meaning of the invention include sepsis and septic shock.
  • Chronic inflammatory diseases within the meaning of the invention include, but are not limited to, septicemia, septic shock, autoimmune diseases (such as lupus or rheumatoid arthritis), inflammatory heart diseases (carditis, and including endocarditis, pericarditis, myocarditis, especially endocarditis of infectious origin, such as those induced by Staphyfococcus aureus), transplant rejection, trauma, inflammatory joint disease (including various types of arthritis), inflammatory diseases of the gastrointestinal system (including colitis, enteritis, gastritis, gastroenteritis, inflammatory bowel disease (IBD) such as Crohn's disease and ulcerative colitis (UC)), inflammatory skin (including eczema, contact dermatitis, atopic dermatitis, psoriasis, rosacea, dermatoses), inflammatory diseases of the respiratory tract (not asthma, chronic bronchitis), inflammatory diseases of the eye (including conjunctivitis, episcle
  • the inflammatory disease is an inflammatory disease of the skin or mucous membranes, in particular chosen from the group comprising or consisting of:
  • infections of the skin or integuments especially chosen from the group comprising or consisting of folliculitis, furuncle, abscess, impetigo or paronychia;
  • inflammatory dermatoses chosen especially from the group comprising or consisting of eczema, contact dermatitis, atopic dermatitis, rosacea or psoriasis;
  • inflammatory pathologies of the eye and its appendages especially chosen from the group comprising or consisting of conjunctivitis, episcleritis, scleritis, keratitis, uveitis, blepharitis and stye.
  • the inflammatory disease according to the invention is selected from the group consisting of or consisting of rosacea, psoriasis, eczema, contact dermatitis and impetigo.
  • the inflammatory disease is due to or associated with an infection.
  • the inflammatory disease is an inflammatory disease with an infectious component.
  • the inflammatory disease is caused by or associated with at least one Gram + or Gram- type bacterium.
  • the infectious component of the inflammatory disease is due to or associated with at least one bacterium selected from Gram + bacteria belonging to the genus Escherichia, Pseudomonas, Klebsiella, Salmonella, Yersinia, or Vibrio; and Gram-bacteria belonging to the genus Staphylococcus, Listeria, Serratia or Kocuria.
  • the infectious component of the inflammatory disease is due to or associated with a bacterium belonging to the genus Staphylococcus, preferentially Staphylococcus aureus.
  • the inflammatory disease is due to or associated with at least one fungus.
  • the infectious component of the inflammatory disease is due to or associated with a fungus belonging to the genus Candida or Pityriasis.
  • the invention also relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising at least one peptide as described above, and one or more pharmaceutically acceptable excipients, for use in the prevention and / or treatment of an inflammatory disease.
  • the invention also relates to a medicament comprising at least one peptide as described above for use in the prevention and / or treatment of an inflammatory disease.
  • the composition, pharmaceutical composition or medicament of the present invention comprises a therapeutically effective amount of a peptide of the invention.
  • the peptide, composition, pharmaceutical composition or drug of the present invention is used in combination with at least one other therapeutic agent to treat an inflammatory disease.
  • NSAIDs nonsteroidal anti-inflammatory drugs
  • anti-inflammatory steroids such as prednisone, dexamethasone, betamethasone, P hydrocortisone aceponate, clobetasol propionate
  • monoclonal anti-inflammatories such as anti-TNF (eg adalimumab, golumumab).
  • the invention relates to a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence A-L-Xi-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-
  • G- ⁇ - ⁇ - ⁇ (SEQ ID NO: 29), wherein: -Xi is a residue W or A; -X2 is a residue K or D;
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • - ⁇ is X7-LNA (SEQ ID NO: 30), X7-LNAVTN-X8-A (SEQ ID NO: 31), X-LNAVTN-X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 32), or is absent ; and wherein:
  • -X7 is a residue V or P; -Xs is a residue M or A;
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the invention relates to a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-CKVG-X4-X5-X6-G-EC-A (SEQ ID NO: 33), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • the invention relates to a peptide having a 21 to 100 amino acid sequence comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-X7-LNA ( SEQ ID NO: 34), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • the invention relates to a peptide having an anti-inflammatory activity and / or antimicrobial activity having a sequence of 26 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1 -TL-Xa-KKVGX ⁇ Xs- Xe-GKA-Xv-LNAVT-N-Xs-A (SEQ ID NO: 35), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • the invention relates to a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-X7-LNAVTN- X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -Xi is a residue K, A or P
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the peptide as described above is useful for the prevention or treatment of a disease, wherein the prevention or treatment consists in simultaneously obtaining the following effects: i) an antimicrobial action, for example bacteriostatic, bactericidal, fungistatic or fungicidal; and
  • the peptides of the invention when endowed with an antimicrobial and anti-inflammatory activity, have the advantage of being able to be administered to a patient suffering from an inflammatory disease, in particular an inflammatory disease due to or associated with an infection, without risk of masking the signs of the appearance or aggravation of an infection, unlike steroidal or nonsteroidal anti-inflammatory drugs.
  • the invention relates to a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-Xi-X 2 -TL-X3-KKVG-X4-X1-X6-GK-A- (p ( SEQ ID NO: 29), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -3 ⁇ 4 is a residue A, K or D; - (p is X7-L-N-A (SEQ ID NO: 30), XT-L-N-A-V-T-N-XS-A (SEQ ID NO: 31), X?
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the invention relates to a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GKA (SEQ ID NO: 33) , in which :
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • X is a residue A, K or D
  • a peptide having a sequence of 21 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1 -TL-Xa-KKVG1-Xs-Xe-GKA-Xv-LNA (SEQ ID NO: 34), in which :
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • X is a residue A, K or D
  • the invention relates to a peptide having a 26 to 100 amino acid sequence comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-Xv-LNAVTN- Xs-A (SEQ ID NO: 35), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • a microbial infection in particular an infection due to to a microorganism such as a bacterium or a fungus.
  • the invention relates to a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-XI-X2-TL-3 ⁇ 4-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-X7-LNAVTN- X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • X is a residue A, K or D
  • -Xa is an M or A residue
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the residue Xi is W in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue X2 is K in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue X3 is L in SEQ IDs. NOs 1 and 29 to 32
  • the residue Xt is K or A in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue Xs is V in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue Xe is A in SEQ IDs NOs 1 and 29 to 32
  • / or the residue X7 is V in SEQ ID NOs 1, 29, 31 and 32.
  • the residue X9 represents the residue E and the residue X10 represents the Q residue in SEQ ID NO l.
  • the X9 residue does not represent any amino acid in SEQ ID NO 1.
  • the X10 residue does not represent any amino acid in SEQ ID NO.
  • the residue X9 is E and the residue Xio is absent in SEQ ID NO. 1.
  • the residue 3 ⁇ 4 represents the residue E and the residue Xio does not represent any amino acid in SEQ ID NO: 1.
  • residues X9 and Xione represent no amino acid.
  • the peptide for preventing and / or treating a microbial infection is a peptide comprising a sequence selected from the group consisting of or consisting of SEQ ID NOs: 2 to 8.
  • the peptide as described above is useful for the treatment of a bacterial infection due to a bacterium belonging to the genus: Escherichia, Pseudomonas, Klebsiella, Salmonella, Yersinia, Vibrio, Staphylococcus, Bacillus , Listeria, Enterococcus, Kocuria, Serratia, Enterobacter, or Micrococcus.
  • the peptide as described above is useful for the treatment of an infection at least due to a bacterium selected from the group comprising but not limited to, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumoniae Yersinia ruckeri, Staphylococcus epidermidis, Kocuria rhizophila, Bacillus subtilis, Clostridium difficile, Acinetobacter baumanii, Pneumococci, Serratia marcescens, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, and Yersenia pestis.
  • a bacterium selected from the group comprising but not limited to, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumoniae Yersinia ruckeri, Staphylococcus epidermidis, Kocuria rhizophila, Bacillus subtilis, Clo
  • the peptide as described above is also useful for the treatment of a fungal infection due for example to a fungus belonging to the genus Candida, Tricophyton, Microsporum, Epidermophyton, or Aspergillus.
  • the peptide as described above is useful for the treatment of an infection at least due to a fungus selected from groups including but not limited to Candida albicans, Candida glabrata or Pityriasis versicolor.
  • the invention further relates to a medicament or a pharmaceutical composition comprising a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-Xi-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GKA-9 (SEQ ID NO: 29), wherein:
  • -Xi is a residue W or A; -X2 is a residue K or D;
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • p is X7-LNA (SEQ ID NO: 30), XT-LNAVTN-XS-A (SEQ ID NO: 31), X7-LNAVTN-X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 32), or is absent, and in which:
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the invention relates to a drug or pharmaceutical composition
  • a drug or pharmaceutical composition comprising a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GKA (SEQ ID NO: 33), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xe is a residue A, K or D; functional derivatives and pharmaceutically acceptable salts of said peptide, for its use in the prevention and / or treatment of a microbial infection, in particular an infection due to a microorganism such as a bacterium or a fungus.
  • the invention relates to a drug or pharmaceutical composition
  • a drug or pharmaceutical composition comprising a peptide having a sequence of 21 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GKA -X7-LNA (SEQ ID NO: 34), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • the invention relates to a drug or a pharmaceutical composition
  • a drug or a pharmaceutical composition comprising a peptide having a sequence of 26 to 100 amino acids comprising the sequence AL-Xi-Xa-TL-Xa-KKVGX ⁇ Xs-Xe-GKA-Xv -LNAVT-N-Xs-A (SEQ ID NO: 35), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue M or A
  • the invention relates to a medicament or a pharmaceutical composition
  • a medicament or a pharmaceutical composition comprising a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1 -TL-X1-KKVGX-Xs-Xe-GKA-Xv -LNAVT-N-X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • X is a residue A, K or D
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the invention relates to a peptide having an angiogenic activity having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • - ⁇ is X7-L-N-A (SEQ ID NO: 30), Xv-L-N-A-V-T-N-Xs-A (SEQ ID NO: 31), X?
  • -Xe is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the invention relates to a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GKA (SEQ ID NO: 33) , in which :
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, EC or D; functional derivatives and pharmaceutically acceptable salts of said peptide, a pharmaceutical composition or a medicament comprising at least one such peptide, for the prevention and / or treatment of a disease related to angiogenesis.
  • the invention relates to a peptide having a 21 to 100 amino acid sequence comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-X7-LNA ( SEQ ID NO: 34), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • - ⁇ is a residue A, EC or D;
  • the invention relates to a peptide having a 26 to 100 amino acid sequence comprising the sequence AL-XI-X 2 -TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-X7-LNAVTN -X8-A (SEQ ID NO: 35), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • X is a residue A, K or D
  • -X7 is a residue V or P; -Xs is a residue M or A;
  • the invention relates to a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-X7-LNAVTN- X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the invention relates to the peptide as described above for use in the prevention or treatment of a disease related to angiogenesis, preferably a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising SEQ ID NO: 1, preferably comprising a sequence selected from the group consisting of or consisting of SEQ ID Nos: 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 sequences.
  • Angiogenesis is a complex process by which new vessels are formed, typically from the pre-existing vasculature. Angiogenesis plays a key role in some physiological processes such as the healing process of wounds. In addition to healing processes, many pathologies have been described as having a component or stage related to the phenomenon of angiogenesis.
  • angiogenesis-related disease includes cancers, retinopathies-related ophthalmological disorders (including retinopathies and macular degeneration), atherosclerosis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, psoriasis, or pathologies related to delayed healing.
  • the invention relates to a peptide, a pharmaceutical composition or a medicament as described above for the treatment of cancers, in particular for inhibiting tumor growth and / or the formation of metastases in cancer patients.
  • angiogenesis is not only essential for the growth of a tumor but is also involved in the progression of the benign stage to the stage of invasive cancer.
  • the possibility of inhibiting angiogenesis makes it possible to reduce tumor growth and metastatic progression of cancers.
  • cancers include, but are not limited to, colon cancers; lung; pancreas; breast; kidney such as kidney cell carcinomas; skin such as basal cell carcinoma or melanoma; and glioblastoma.
  • the peptide, the pharmaceutical composition or the drug of the invention are used to treat malignant tumors which induce the formation of new blood vessels.
  • the peptide, the pharmaceutical composition or the drug according to the invention can be administered by injection, such as for example an intravenous, intramuscular, subcutaneous or direct injection into the tissue.
  • the peptides of the invention are in an acceptable form for topical, systemic, oral, subcutaneous, intravitreous, intradermal, transdermal, intraperitoneal, intramuscular administration. or by inhalation.
  • the pharmaceutical composition or the drug according to the invention may be in the form of tablets, capsules, capsules, granulates, suspensions, emulsions, solutions, gels, drops, pasta, ointments, creams, plasters, injectables, implants, patches.
  • the pharmaceutical composition or the drug according to the invention may comprise one or more usual pharmaceutically acceptable excipients.
  • the composition, pharmaceutical composition or medicament of the present invention comprises one or more pharmaceutically acceptable carriers for a formulation adapted for topical administration.
  • the pharmaceutically acceptable excipients may in particular be any excipient among those known to those skilled in the art in order to obtain a composition for topical application in the form of a milk, a cream, a balm, d an oil, a lotion, a gel, a foaming gel, an ointment, or a spray.
  • the excipients are chosen from the group consisting of an oil, a fat, an emulsion, a gel, an ointment, an excipient based on nanoparticles or liposomes.
  • the oils may in particular be chosen from silicone oils, mineral oils (paraffin, petroleum jelly, etc.) or vegetable oils and fats.
  • the pharmaceutical composition or the drug according to the invention can be prepared in the form of a water-in-oil (W / O) or oil-in-water (O / W) emulsion, a multiple emulsion, for example a water emulsion. in oil in water (E / HE) or an emulsion oil in water in oil (W / E / H), a microemulsion or in the form of a hydrodispersion or a lipodispersion, a gel or an aerosol.
  • W / O water-in-oil
  • O / W oil-in-water
  • a multiple emulsion for example a water emulsion. in oil in water (E / HE) or an emulsion oil in water in oil (W / E / H), a microemulsion or in the form of a hydrodispersion or a lipodispersion, a gel or an aerosol.
  • the composition, the pharmaceutical composition or the drug according to the invention comprises one or more pharmaceutically acceptable vehicles for a formulation suitable for oral administration.
  • forms suitable for oral administration include, but are not limited to, tablets (including sustained release tablets), capsules, powders, granules, pills (including sugar-coated pills), capsules (including gelatin capsules flexible), oral suspensions, oral solutions, and other similar forms.
  • the composition, pharmaceutical composition or medicament of the present invention comprises one or more pharmaceutically acceptable carriers for a formulation that can be injected.
  • forms suitable for administration by injection include, but are not limited to, solutions aqueous steriles, dispersions, emulsions, suspensions, solid forms suitable for the preparation of solutions or suspensions by the addition of a liquid prior to use, such as, for example, powders.
  • the pharmaceutical composition or the medicament according to the invention may also contain additives and formulation aids, such as emulsifiers, thickeners, gelling agents, water binders, spreading agents, stabilizers, dyes, perfumes and preservatives.
  • additives and formulation aids such as emulsifiers, thickeners, gelling agents, water binders, spreading agents, stabilizers, dyes, perfumes and preservatives.
  • the doses are adjusted according to the desired effect and the targeted pathology.
  • the therapeutically effective amount is from about 1 to 10,000 mg / mL of peptide, composition, pharmaceutical composition, or drug of the invention, preferably from about 5 to about 5000 mg / mL, preferably about At about 2000 mg / mL, preferably from about 20 to about 100 mg / mL of peptide, composition, pharmaceutical composition or drug of the invention.
  • the therapeutically effective amount is from about 1 to 10,000 mg / g of peptide, composition, pharmaceutical composition or drug of the invention, preferably from about 5 to about 5000 mg / g, preferably about At about 2000 mg / g, preferably from about 20 to about 100 mg / g of peptide, composition, pharmaceutical composition or drug of the invention.
  • the therapeutically effective amount is from about 0.001 to 500 ⁇ of peptide, composition, pharmaceutical composition or rinenvention drug, preferably from about 0.01 to about 250 ⁇ , preferably from about 0.1 to about 200 ⁇ . ⁇ , preferably from about 0.5 to about 150 ⁇ , composition, pharmaceutical composition or drug of the invention.
  • the therapeutically effective amount is from about 1 to 1000 ⁇ of peptide, composition, pharmaceutical composition, or drug of the invention, preferably from about 5 to about 500 ⁇ M, preferably from about 10 to about 250 ⁇ M. ⁇ , preferably from about 10 to about 150 ⁇ , composition, pharmaceutical composition or drug of the invention.
  • the therapeutically effective amount is from about 1 to 100 ⁇ peptide, composition, pharmaceutical composition or drug of the invention, preferably from about 5 to about 75 ⁇ , preferably from about 10 to about 50 ⁇ .
  • the therapeutically effective amount is from about 10 to 1000 ⁇ of the peptide, composition, pharmaceutical composition or drug of the invention, preferably from about 50 to about 750 ⁇ , preferably from about 100 to about 500 ⁇ . ⁇ .
  • the total daily use of peptide, the composition, the pharmaceutical composition or the drug of the invention will be adjusted by the attending physician as part of his medical opinion.
  • the therapeutically effective dose specific to each patient will depend on a variety of factors including the disorder being treated and its severity; the activity of the compound used; the specific composition used; age, weight, general health, sex and diet of the patient, duration and mode of administration; the duration of the treatment; drugs used in combination or coinciding with the compound used, and other similar factors known in the medical field. For example, it is common in this field to start with doses of compounds below the recommended doses to achieve the desired therapeutic effect and to gradually increase dosage until the effect is achieved.
  • the daily dosage of the compounds may vary over a wide range from about 1 to about 10,000 mg per adult per day, preferably from about 5 to about 5000, preferably from about 10 to about 2000 mg, plus preferably from about 20 to about 100 mg per adult per day.
  • the composition comprises 1, 10, 20, 50, 100, 250, 500, 1000 and 2000 mg of the active ingredient for the symptomatic adjustment of the dosage to be administered to the patient to be treated.
  • a drug typically contains from about 1 to about 10,000 mg of active ingredient, preferably from 5 to 5000, preferably from 10 to 2000 mg of active ingredient.
  • An effective amount of the drug is ordinarily provided at a dose of from about 0.01 mg / kg to about 100 mg kg of body weight per day, preferably from about 0.05 mg kg to about 40 mg / kg, preferably about 0.1 mg / kg to 20 mg / kg body weight per day, more preferably from about 0.2 to about 1 mg / kg body weight per day.
  • the daily dose of the peptide of the invention, the composition, the pharmaceutical composition or the medicament of the present invention is adjusted as a function of the potential disorders in the organs and systems, such as, for example, renal, hepatic and / or haematological disorders of the subject.
  • the peptide, composition, pharmaceutical composition or drug of the present invention is administered to the subject at least once a day.
  • the peptide, composition, pharmaceutical composition or drug of the invention may be administered once daily, twice or three times daily.
  • the peptide, the composition, the pharmaceutical composition or the drug of the invention is administered once a day.
  • the peptide, composition, pharmaceutical composition or drug of the present invention is administered to the subject at least once a week.
  • the peptide, composition, pharmaceutical composition or drug of the invention may be administered once a week, twice, three times, four times or up to seven times a week.
  • the invention also relates to a method for preventing and / or treating an inflammatory disease in a subject in need thereof, comprising administering an effective therapeutic dose of at least one peptide, drug or pharmaceutical composition according to the invention.
  • the method of the invention for treating an inflammatory disease comprising administering to a therapeutically effective amount of a peptide of the invention as described above, preferably a peptide having a sequence. from 29 to 100 amino acids comprising the sequence SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • the peptide, composition, pharmaceutical composition or drug of the invention is administered to the subject.
  • the peptide, drug or pharmaceutical composition according to the invention is administered to a subject suffering or likely to suffer from an inflammatory disease.
  • the subject is a subject at risk for the occurrence of an inflammatory disease.
  • the subject has not yet been treated with another treatment for the inflammatory disease of the invention. In another embodiment, the subject has already been treated with another treatment for the inflammatory disease of the invention.
  • the invention further relates to a method for preventing and / or treating a microbial infection comprising administering an effective therapeutic dose of at least one peptide, drug or pharmaceutical composition according to the invention.
  • the method of the invention for treating a microbial infection comprising administering to a therapeutically effective amount of a peptide of the invention as described above, preferably a peptide having a sequence of from 29 to 100 amino acids comprising the sequence SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • the microbial infection is a bacterial or fungal infection as described above.
  • the peptide, drug or pharmaceutical composition according to the invention is administered to a subject suffering or likely to suffer from microbial infection.
  • the subject is a subject at risk for the occurrence of a microbial infection.
  • the subject has not yet been treated with another treatment for microbial infection according to the invention. In another embodiment, the subject has already been treated with another treatment for microbial infection according to the invention.
  • the invention further relates to a method for preventing and / or treating a disease related to angiogenesis comprising administering an effective therapeutic dose of at least one peptide, drug or pharmaceutical composition according to the invention .
  • the method of the invention for treating an angiogenesis-related disease comprising administering to a subject a therapeutically effective amount of a peptide of the invention as described above, preferably a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8.
  • the peptide, drug or pharmaceutical composition according to the invention is administered to a subject suffering or likely to suffer from a disease related to angiogenesis.
  • the subject is a subject at risk for the occurrence of a disease related to angiogenesis.
  • the subject has not yet been treated with another treatment for the angiogenesis-related disease of the invention.
  • the subject has already been treated with another treatment for the angiogenesis-related disease of the invention.
  • Another subject of the invention relates to the use of a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • X is a residue A, K or D
  • - ⁇ is ⁇ -L-N-A, XT-L-N-A-V-T-N-XS-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10, or is absent; and wherein:
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, as antifungal or antibacterial agent.
  • the invention relates to a peptide having a sequence of 17 to 100 amino acids comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GKA (SEQ ID NO: 30) , in which : -Xi is a residue W or A;
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, as antifungal or antibacterial agent.
  • a peptide having a 21 to 100 amino acid sequence comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GKA-X7-LNA (SEQ ID NO: 31) , in which :
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • - ⁇ is a residue A, K or D;
  • peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, as antifungal or antibacterial agent.
  • the invention relates to a peptide having a 26 to 100 amino acid sequence comprising the sequence AL-X1-X2-TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-X7-LNAVTN- X8-A (SEQ ID NO: 32), wherein:
  • -Xi is a residue W or A; -X2 is a residue K or D;
  • -X3 is an L or A residue
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • -Xs is a residue V or A
  • -Xe is a residue A, K or D;
  • -Xs is a residue M or A
  • peptide is not a peptide of sequence SEQ ID NO: 2, as antifungal or antibacterial agent.
  • the invention relates to a peptide having a sequence of 29 to 100 amino acids comprising the sequence AL-XI-X 2 -TL-X3-KKVG-X4-X5-X6-GK-A-X7-LNAVTN -X8-ANQN-X9-X10 (SEQ ID NO: 1), wherein:
  • -Xi is a residue W or A
  • -X2 is a residue K or D
  • -X4 is a residue K, A or P;
  • X is a residue A, K or D
  • -Xs is a residue M or A
  • -X10 represents no residue or is a Q residue
  • the residue Xi is W in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue 3 ⁇ 4 is K in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue X3 is L in SEQ IDs.
  • the residue X * is K or A in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue Xs is a residue V in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • the residue Xe is A in SEQ ID NOs 1 and 29 to 32
  • / or the residue X7 is V in SEQ ID NOs 1, 29, 31 and 32.
  • the residue X 9 represents the residue E and the residue X10 represents the Q residue in SEQ ID NO 1.
  • the X9 residue does not represent any amino acid in SEQ ID NO 1.
  • the X10 residue does not represent any amino acid in SEQ ID NO.
  • the residue X9 is E and the residue X10 is absent in SEQ ID NO 1.
  • the residue X9 represents the residue E and the residue X10 does not represent any acid amine in SEQ ID NO l.
  • residues X9 and Xione represent no amino acid.
  • the peptide as described above is used for the preparation of antifungal or antibacterial formulation.
  • the peptide as described above is especially used to disinfect surfaces (for example walls, doors, medical equipment), a liquid (for example water) or a gas (for example a gas). anesthetic).
  • the present invention also relates to a kit comprising a peptide according to the invention, a nucleic acid, a vector, a composition, a pharmaceutical composition or a medicament as described above.
  • the kit also comprises an apparatus for administering the peptide, nucleic acid, vector, composition, pharmaceutical composition or drug to a subject.
  • the kit further comprises the instructions for administering the peptide, nucleic acid, vector, composition, pharmaceutical composition or drug to said subject.
  • the kit comprises an additional therapeutic agent.
  • the additional therapeutic agent is another agent for the treatment of the inflammatory disease according to the invention.
  • the additional therapeutic agent is another agent for the treatment of the microbial infection according to the invention.
  • Figure 1 shows the survival of neutrophils (A), T lymphocytes (B), monocytes (C) and murine and human NK (D) cells in the presence of increasing concentrations of DA2N and DA2NEQ, as a percentage of the number of living cells in the absence of peptide.
  • Figure 2 shows the survival of murine and human non-immune cells (epithelial cells) in the presence of increasing concentrations of DA2N and DA2NEQ peptide, as a percentage of the number of living cells in the absence of peptide.
  • Figure 3 shows the hemolytic activity of DA2N and DA2NEQ at 10 ⁇ and 50 ⁇ , on human erythrocytes, as a percentage relative to the positive control consisting of Triton XI 00 (100%).
  • Figure 4 shows the number of immune cells in the peritoneal cavity 36 hours after 3 regular intraperitoneal (ip) injections of the DA2N peptide (dark gray) or DA2NEQ (light gray) in a mouse model of ip-induced peritonitis. thioglycolate 3%.
  • the negative control with respect to the peptide consists of the injection of 0.15M NaCl in place of the solution containing the peptide (in black).
  • Control of the induction of peritonitis consists of mice not induced for peritonitis (in white); i.p injection of NaCl.
  • Figure 5 shows the protocol used to test the effectiveness of peptides in a model of contact eczema.
  • Figure 6 shows the relative change in ear thickness in a mouse model of DNCB1% induced contact eczema after administration of DA2N (A) or DA2NEQ (B).
  • the control of induction of contact eczema corresponds to mice not treated with the DNCB1% (line with triangle symbol) and the negative control corresponds to mice treated with DNCB1% without peptide (line with square symbol).
  • Figure 7 shows, in a murine model of contact eczema, the effect of DA2N administration on the number of immune cells (A) at the ear, (B) in the general circulation and (C) ) in the spinal cord, after induction of contact eczema by application of DNCB1% (in light gray).
  • the control of induction of contact eczema corresponds to mice not treated with DNCB1% (in white) and the negative control corresponds to mice treated with DNCB1% without peptide (in dark gray).
  • Figure 8 shows representative images of the effect of topical application of DA2N and DA2NEQ peptides in Balb / c mice on psoriatic skin lesions.
  • the images in the left column represent the results on psoriatic skin (skin treated with Imiquimod for 6 days): positive control without peptide application (A), application of the DA2N peptide (B) and application of the DA2NEQ peptide (C).
  • the images in the right column show the results on healthy skin (without Imiquimod treatment): negative control without peptide application (A), application of the DA2N peptide (B) and application of the DA2NEQ peptide (C).
  • Figure 9 shows an enlargement at the treated regions representative of the skin lesions presented in Figure 8.
  • Figure 10 shows representative images of the effect of topical application of the DA2N and DA2NEQ peptides on the angiogenesis conventionally observed in BALB / C mice at the level of psoriatic lesions.
  • the images in the left column represent the results on psoriatic skin (skin treated with Imiquimod for 6 days): positive control without peptide application (A), application of the DA2N peptide (B) and application of the DA2NEQ peptide (C).
  • the images in the right column show the results on healthy skin (without Imiquimod treatment): negative control without peptide application (A), application of the DA2N peptide (B) and application of the DA2NEQ peptide (C).
  • Figure 11 shows representative images of aortic rings and neovascular formation after 3 days of treatment with PBS (A), DA2N (B), DA2NEQ (C).
  • Figure 12 shows the inhibition of neovascular formation over time on mouse aortas after addition of DA2N and DA2NEQ at a concentration of 12.5 ⁇ , in percentage relative to the initial diameter of the aortic rings.
  • Figure 13 shows the survival of mouse bone marrow cells after 2 hours of incubation in the presence of the DA2N, DA2NE, N (D), DA2Na, K12A peptides at a concentration of 12.5 ⁇ or 25 ⁇ , as a percentage of the number of initial living cells.
  • the positive and negative controls consist, respectively, in incubating the cells in the presence of 30% DMSO or PBS.
  • Figure 14 shows the survival of murine non-immune cells (epithelial cells) in the presence of increasing concentrations of DA2N, K12A and DA2Na.
  • DA2N, DA2Na, and K12A induce the death of 50% of murine bone marrow immune cells (LC50) at a concentration of 5 ⁇ , 3.75 ⁇ , and 6.5 ⁇ , respectively.
  • LC50 murine bone marrow immune cells
  • Figure 15 shows the hemolytic activity of the peptides DA2Na and K12A at 10 ⁇ and 50 ⁇ on mouse erythrocytes, in percentage relative to the positive control, consisting of Triton X100 (100%).
  • the peptides used in the examples were synthesized in FMOC / tBu strategy on a solid support by an Activo Pli automatic synthesizer (Activotec). The purification is carried out by HPLC (Waters, Cl 8 column) and the identity of the peptides is verified by MALDI-TOF spectrometry (MS Voyager Applied Biosystems). Due to the presence of a tryptophan residue in the sequence, the concentrations of the solutions are determined by UV spectroscopy (Nanodrop, Labtech.com).
  • cytotoxic effects of DA2N SEQ ID NO: 4
  • DA2NEQ SEQ ID NO: 2
  • mice The immune cells of mice are derived from the bone marrow of C57BL6 mice. Human immune cells were purified from whole blood from healthy donors (blood bank, IMSS, Cuernavaca, Mexico).
  • non-immune cells were removed after sacrifice of C57BL6 mice or in surgery: epithelial cells, adipocytes, hepatocytes.
  • the peptides are incubated at 37 ° C, 5% CO 2 in the presence of 500,000 immune or non-immune cells in RPMI medium at various concentrations and at various times. Cells without peptides serve as a negative control and cells incubated for 5 min at 50 ° C or in the presence of DMSO (30%) serve as a positive control. After incubation, the cells are washed and then labeled with propidium iodide to measure cell viability. Cell viability is analyzed by counting or flow cytometry in the presence of antibodies coupled to fluorochromes corresponding to markers characteristic of each cell population. The CLso is then calculated as the concentration of the DA2N and DA2NEQ peptides inducing the death of 50% of each of the immune cell populations.
  • Cytometry data processing is performed with FlowJo software.
  • Table 1 shows the concentrations of the DA2N and DA2NEQ peptides inducing the death of 50% of murine and human immune cells (CL 50).
  • Table 1 CL50 on immune cells.
  • Escherichia coli ATCC 8739, ATCC ML35p and P7 ESBL
  • Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 and ATCC 27853
  • Klebsiella oxytoca CIP 7932
  • Klebsiella pneumoniae CIP 52.211
  • Sahnonella enterica CIP 8297
  • Yersinia ruckeri ATCC 29473
  • Vibrio parahemolyticus IREMER 01 01/252
  • Staphylococcus aureus ATCC 6538, ST 1065 and MRSA
  • Staphylococcus epidermidis BM 3302
  • Listeria monocytogenes SOR 100
  • Enterococcus faecalis CIP A186, CIP 103015)
  • Kocuria rhizophila ATCC 9341
  • Lactococcus garviae ATCC 43921
  • Bacillus subtilis CIP 52.65).
  • a preculture of 5 ml in LB medium is prepared by seeding of a colony of the bacterial strain of interest.
  • the preculture is incubated at 37 ° C with stirring overnight.
  • the culture is subcultured (30 ⁇ ) in 5 ml.
  • the concentration of the culture is evaluated by measuring the optical density at 620 nm. The concentration is adjusted by dilution so as to obtain a suspension at an OD of 0.05 at 620 nm.
  • the MIC is determined by a growth inhibition test in a liquid medium. MIC is defined as the lowest concentration of peptide capable of inhibiting the growth of the bacterial strain tested after 18 h incubation at 37 ° C. The test was performed in a sterile microtiter plate containing 96 wells. A range of increasing concentrations of each peptide (0.2 to 100 ⁇ l) was previously prepared in sterile MilliQ water. In each well, 10 of peptide were incubated with 90 ⁇ l of bacterial suspension (10 7 cfu / ml) in LB medium without yeast extract. The microplate was incubated at 37 ° C for 18h. Bacterial growth was assessed by measuring the OD at 620 nm using a plate reader.
  • the negative growth inhibition control was obtained by replacing the solution containing the peptide with sterile MilliQ water.
  • the positive control for completely inhibiting the growth of bacterial strains was obtained by replacing the solution containing the peptide with formaldehyde.
  • - OD of the Tioo OD of the growth control (bacterial suspension without test sample, 100% growth),
  • CMB Minimal Bactericidal Concentration
  • CMB is defined as the minimum peptide concentration that does not leave surviving bacteria in the inoculum after incubation at 37 ° C for 24 hours. This test consists in spreading the contents of the wells where the peptide inhibited the bacterial growth on a Petri dish (LB agar), then incubation for 24 hours at 37 ° C. The inhibition is said to be bacteriostatic when the peptide inhibits bacterial growth but does not lyse bacteria and is said to be bacteriolytic when the peptide has completely lysed the bacteria and thus prevents the regrowth of bacteria in the culture medium after transplanting. .
  • Table 2 Antimicrobial Activities of DA2N and DA2NEQ.
  • the haemolytic activity of antimicrobial peptides has been demonstrated using murine or human red blood cells from healthy adult donors.
  • Mouse or donor blood is washed three times in 10 volumes of PBS at 4 ° C by centrifugation at 800 xg for 10 minutes.
  • the blood pellet is finally diluted to 4% (v / v) in PBS buffer.
  • the test was carried out as follows: either 10 ⁇ , 50 ⁇ peptide were added to 100 ⁇ ⁇ suspension of red blood cells.
  • the negative control for this test (0% hemolysis) contains 5 ⁇ l of PBS buffer instead of the solution containing the peptide and the positive control (100% hemolysis) contains 5 ⁇ l of Triton XI 00 1%. instead of the solution containing the peptide.
  • Mouse erythrocytes are derived from the bone marrow of C57BL6 mice.
  • Human erythrocytes were purified from whole blood from healthy donors (blood bank, IMSS, Cuernavaca, Mexico).
  • the peptides are incubated at 37 ° C., 5% CO 2 in the presence of 500,000 erythrocytes in RPMI medium at various concentrations and at various times. Cells without peptides serve as a negative control and cells incubated for 5 min at 50 ° C or in the presence of DMSO (30%) serve as a positive control.
  • the CLso is then calculated as the concentration of the DA2N and DA2NEQ peptides inducing the death of 50% of the erythrocytes.
  • Figure 3 shows the percentage of hemolysis of human erythrocytes by the peptides DA2N and DA2NEQ, relative to the positive control in reference to 100%. The results show that the DA2N and DA2NEQ peptides do not cause haemolysis of human erythrocytes (FIG. 3) or murine erythrocytes (results not shown). Table 3 shows the concentrations of the DA2N and DA2NEQ peptides inducing the death of 50% of human and murine erythrocytes (CL 50).
  • the anti-inflammatory activity of DA2N and DA2NEQ was evaluated in a murine model of non-infectious peritonitis.
  • Non-infectious peritonitis is induced by intraperitoneal injection of 3% thioglycolate.
  • Six hours after the induction of peritonitis three intraperitoneal injections of peptide (90 ⁇ g / injection / mouse) were made at regular intervals (every 6 hours). At 36h, the mice are sacrificed to observe the recruitment of immune cells into the peritoneal cavity.
  • the cells obtained from washing the peritoneal cavity are washed and then labeled with propidium iodide in order to measure cell viability as well as in the presence of antibodies coupled to fluorochromes corresponding to markers characteristic of each population. cellular.
  • the evaluation of the anti-inflammatory potential is based on the measurement of the number of neutrophils, monocytes and macrophages recruited in the murine peritoneal cavity.
  • the negative control with respect to the peptide for this test consists of 50 ⁇ l of 0.15M NaCl by injection in place of the solution containing the peptide.
  • Control of induction of peritonitis consists of mice not induced for peritonitis. Data processing is realized with FlowJo software.
  • Figure 4 shows the number of immune cells in the peritoneal cavity in the murine model of thioglycolate peritonitis, and thus the effect of DA2N and DA2NEQ in a model of inflammatory disease.
  • the results show that, in vivo, the peptides cause a decrease in the recruitment of neutrophils and monocytes / macrophages in the peritoneal cavity after induction of peritonitis.
  • the peptides of the invention therefore have an anti-inflammatory activity.
  • the study is conducted to determine the activity of peptides DA2N (SEQ K> NO: 4) and DA2NEQ (SEQ ID NO: 2) with respect to contact sensitization.
  • Mice are sensitized with 1% DNCB for 5 days.
  • 30 ⁇ l of a mixture of olive oil / acetone (vehicle) 1: 1 in which are dissolved 50 ⁇ g of peptide DA2N or DA2NEQ is applied at the level of the ear.
  • the contact reaction is caused by re-exposure to 1% DNCB at the ear.
  • the intensity of the inflammatory reaction is evaluated locally 24, 48, 72 and 96 hours after re-exposure to DNCB by measuring the thickness of the ear. Moreover, the number of immune cells (dendritic cells, T cells, neutrophils, monocytes, macrophages) is measured 24h after DNCB re-exposure in the ear at the DNCB 1% application site (number of immune cells counted in the 2 ears), in the blood (number of immune cells counted in 50 ⁇ LL of blood) and in the bone marrow (number of immune cells counted in a tibia).
  • the protocol is shown schematically in Figure 5.
  • the ears are digested by addition of collagenase IV and the number of immune cells is determined by flow cytometry using antibodies coupled to fluorochromes corresponding to markers characteristic of each cell population.
  • the negative control of inhibition of the contact reaction was obtained by replacing the solution containing the peptide with the 1: 1 olive oil / acetone solution (indicated as "vehicle” in FIG. 6, and with the symbol "-" in Figure 7).
  • Figure 7 shows a decrease in the number of monocytes, dendritic cells and neutrophils, either at the level of the ear (Figure 7A), in the blood ( Figure 7B) or in the bone marrow ( Figure 7C). mouse after topical application of DA2N.
  • the peptides of the invention therefore have an anti-inflammatory effect in an in vivo model of inflammatory disease.
  • DA2N and DA2NEQ peptides were tested in an Imiquimod-induced psoriasis model described by Van der Fits (Van der Fits et al., Journal of Immunology, 182 (9): 5836-5845) on female Balb / c mice. , 7 to 8 weeks old.
  • 31 mg of commercial cream containing 5% Imiquimod (Aldara, 3M Pharmaceuticals) is applied topically to approximately 2.5 cm of the ventral portion shaved beforehand of the mice for 6 days.
  • the first psoriatic lesions appear on the 3rd day.
  • the peptides resuspended in the cream are applied topically or intravenously (10 ⁇ g) during the first 3 days of treatment with Imiquimod.
  • Mice without Imiquimod treatment and / or without application of the peptides were used as controls.
  • the mice are sacrificed and the skin removed is analyzed by microscopy (cutaneous lesions and angiogenesis). 6.2 Results
  • Figures 8 and 9 show representative images of a topical treatment with DA2N and DA2NEQ at a dose of 10 ⁇ on psoriatic lesions induced by application of Imiquimod for 6 days.
  • DA2N reduces the psoriatic lesions conventionally observed after 6 days of treatment with Irniquimod.
  • DA2N and DA2NEQ have no effect on healthy skin.
  • DA2N and DA2NEQ peptides were tested on the model of the aorta rings which allows to study the influence of various molecules on the formation of new blood vessels.
  • Aortas from C57BL / 6 or Balb / c mice are removed, washed with PBS and then cut into rings.
  • the rings are then deposited in a Matrigel matrix (BD® Matrigel TM) in 24-well plates, incubated for 1 h at 37 ° C., 5% CO 2, before adding 1 ml of DMEM (DMEM Advanced IX, Gibco) supplemented. with 5% fetal calf serum (S VF), 2 ⁇ glutamine, 100 U penicillin and 50 ⁇ g / ml streptomycin.
  • DMEM DMEM Advanced IX, Gibco
  • S VF fetal calf serum
  • the rings are then incubated at 37 ° C, 5% CO2 for 3 days.
  • the medium is then removed and replaced with medium containing or not the peptides at a concentration of 12.5 ⁇ M.
  • the aortic rings are again incubated for 3 days under the same conditions. Photos of the rings are made daily to measure the formation of neo-vessels.
  • the image processing and the measurement of the area formed by the neo-vessels are realized by the software Image J 1.50i.
  • Figure 10 presents representative images of a topical treatment with DA2N and DA2NEQ at a dose of 10 ⁇ g on angiogenesis, conventionally observed after application of Imiquimod for 6 days.
  • DA2N and DA2NEQ appear to decrease neovascular formation after 6 days of Irniquimod treatment.
  • DA3N and DA2NEQ have no effect on angiogenesis on healthy skin.
  • Figure 11 shows representative images showing the formation of neo-vessels (angiogenesis) at 0, J1, J2 and J3 from aortic rings after addition of DA2N or DA2NEQ at 0.
  • the control corresponds to the formation of neovessels, after addition of PBS only.
  • Figure 12 shows the formation of neovessels as a percentage of the initial diameter of the aortic annulus. Compared to the control (PBS), the addition of DA2N or DA2NEQ significantly inhibits the formation of neovessels.
  • Example 8 In vitro study of the immunosuppressive activity of DA2NE, DA2N (D), K12A and DA
  • DA2NE SEQ ID NO: 3
  • D DA2N
  • K12A SEQ ID NO: 11
  • DANa DANa
  • mice The immune cells of mice are derived from the bone marrow of C57BL / 6 or Balb / c mice.
  • the peptides are incubated at 37 ° C., 5% CO 2 in the presence of 500,000 immune cells in RPMI medium at various concentrations for 2 hours. Cells without peptide serve as a negative control and cells in the presence of DMSO (30%) serve as a positive control. After incubation, the cells are washed and then labeled with Trypan blue to measure cell viability by counting under a microscope. The LC 50 is then calculated as the concentration of the peptides DA2N, Kl 2 A and DANa inducing the death of 50% of the immune cells.
  • the survival of immune cells derived from mouse bone marrow in the presence of DA2NE, DA2N (D), K12A and DANa peptides at 12.5 and 25 ⁇ concentrations is shown in Figure 13 and compared to DA2N.
  • the DA2NE, DA2N (D), K12A and DANa peptides appear to induce immune cell death at a concentration of 12.5 ⁇ M with efficacy comparable to DA2N.
  • DA2N, DA2Na and Kl2A induce the death of 50% of murine bone marrow immune cells (CL 50) at a concentration of 5 ⁇ M, 3.75 ⁇ M and 6.5 ⁇ M, respectively.
  • the haemolytic activity of the antimicrobial peptides was measured according to the protocol set out in part 3.1 of Example 3.
  • Figure 15 shows the percentage of hemolysis of mouse erythrocytes after incubation with the peptides for 1 hour, relative to the positive control in reference to 100%. The results show that the DA2Na and K12A peptides do not show significant haemolytic activity (less than 40% haemolysis) at concentrations of 10 and 50 ⁇ ).
  • Example 10 In vitro study of the antimicrobial activity of DA2NE, DA2Na, K4D, L7A, K12A, K12P, V13A, A14D, A14K, M25A, DA2NEQ (D) and DA2N (D)
  • DA2N SEQ ID NO: 4
  • DA2NEQ SEQ ID NO: 2
  • DA2NE SEQ ID NO: 3
  • DA2Na SEQ ID NO: 7
  • K4D SEQ ID NO: 13
  • L7A SEQ ID NO: 14
  • K12A SEQ ID NO: 11
  • K12P SEQ ID NO: 12
  • V13A SEQ ID NO: 17
  • A14D SEQ ID NO: 10
  • A14K SEQ ID NO: 8
  • M25A SEQ ID NO: 16
  • DA2NEQ D
  • SEQ ID NO: 18 DA2N
  • D DA2N
  • ScrL NLGAKNQVAWEKKAATTKGNVNLKLLQMVAV; SEQ ID NO: 37
  • ScrC KGNVLVKAAMLTKVLAKNKGVQNANALTW; SEQ ID NO: 38
  • the MIC and CMB were determined according to the protocol set out in part 2.1 of Example 2.
  • Example 2 Table 2 which demonstrate that DA2N and DA2NEQ exhibit antimicrobial activity on Gram-positive and Gram-negative bacteria.
  • DA2NE, DA2Na, K4D, L7A, K12A, K12P, V13A, A14D, A14K, M25A, DA2NEQ (D) and DA2N (D) is shown in Table 5:
  • Table 5 Antimicrobial Activities of DA2NE, DA2Na, K4D, L7A, K12A, K12P,

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Abstract

La présente invention concerne des peptides dotés d'une activité anti-inflammatoire, anti- angiogénique et/ou activité antimicrobienne, un médicament ou une composition pharmaceutique comprenant de tels peptides, et leur utilisation dans la prévention ou le traitement de maladies inflammatoires, et plus particulièrement des maladies inflammatoires dues ou associées à des infections microbiennes, ou dans la prévention ou le traitement de maladies liées à l'angiogenèse.

Description

PEPTIDES ANTIMICROBIENS ET LEURS UTILISATIONS
DOMAINE DE L'INVENTION
L'invention concerne des peptides dotés d'une activité anti-inflammatoire, anti- angiogénique et/ou antimicrobienne et leur utilisation dans la prévention ou le traitement de maladies inflammatoires et/ou liées à l'angiogenèse.
ÉTAT DE LA TECHNIQUE
L 'inflammation ou réaction inflammatoire est une réponse à une agression d'origine exogène (cause infectieuse, traumatique) ou endogène (rencontre d'un antigène « anormal » ou en grande quantité, cause immunologique, syndrome d'ischémienreperfusion). Elle est impliquée dans l'immunité naturelle en réponse à un signal de danger ainsi que dans l'induction de la réponse immune spécifique et est de ce fait associée à une très grande variété de situations pathologiques (infections, maladies systémiques, cancers, pathologies thromboemboliques). La réaction inflammatoire, initialement destinée à protéger l'organisme contre des agressions extérieures, peut entraîner des effets délétères.
Ainsi, si l'infiammation est inadaptée ou devient chronique, elle peut nuire à la structure ainsi qu'à la fonction de l'organe touché et doit être traitée.
En particulier, la peau et les muqueuses sont le siège de nombreuses pathologies comprenant une composante inflammatoire. L'eczéma et le psoriasis sont des exemples de dermatoses caractérisées par une réaction inflammatoire inadaptée, excessive ou chronique se traduisant par des lésions tissulaires.
Il existe deux grands types d'eczéma. La dermatite de contact (ou eczéma de contact) est due à une sensibilisation à des haptènes (molécules de faible poids moléculaire) de la vie quotidienne ou professionnelle (métaux lourds, solvants, etc.), qui diffusent à travers l'épiderme en contact avec le revêtement cutané, suivie d'une réaction immunitaire intense et inappropriée selon un mécanisme d'hypersensibilité retardée à médiation cellulaire. La dermatite atopique (DA ou eczéma atopique) est une maladie inflammatoire chronique associant une altération innée de la barrière cutanée et une inflammation mettant en jeu l'immunité innée et adaptative, notamment des lymphocytes T spécifiques dirigés contre les allergènes protéiques de environnement (DA extrinsèque ou allergique) ou contre des auto- antigènes cutanés (DA intrinsèque ou non allergique). La DA semble corrélée à une colonisation de la peau par Staphylococcus aureus (Lin et al. 2007. Clinic Rev Allerg Immunol ; 33:167-177).
Le psoriasis est une maladie inflammatoire chronique dont la cause précise n'est pas connue. Plusieurs facteurs seraient impliqués dans l'apparition de la maladie, en particulier des facteurs génétiques et environnementaux. Des micro-organismes pourraient également être à l'origine du psoriasis (Munz et al. 2010. Arch Dermatol Res.; 302(7):495-8). Au niveau cellulaire, les lymphocytes T semblent jouer un rôle central. Une complication fréquente des dermatoses inflammatoires est l'impétiginisation, c'est-à-dire la surinfection de lésions cutanées initialement non infectées, le plus souvent par des streptocoques ou staphylocoques. Le traitement des dermatoses inflammatoires consiste à renforcer la résistance de la peau à l'aide d'émollients et réduire l'inflammation et les démangeaisons (prurit) par l'application topique d'agents anti-inflammatoires. Les anti-inflammatoires comprennent les antiinflammatoires stéroïdiens (dérivés du cortisol ou de la cortisone) et non-stéroïdiens (e.g. aspirine, ibuprofène), et les composés à activité immunosuppressive. Les agents anti- inflammatoires les plus couramment utilisés sur la peau sont les dermocorticoïdes tels que l'hydrocortisone ou la bétaméthasone. Il existe quatre groupes de dermocorticoïdes répartis selon l'intensité de leur activité (niveau de puissance), de la classe I (activité très forte) à la classe IV (activité faible). Le choix du niveau d'activité et de la posologie du corticoïde local se fait en fonction de la nature de la lésion, de la sensibilité et de l'âge du patient, et peut nécessiter divers ajustements en cours de traitement. Utilisés de façon appropriée, les effets secondaires des dermocorticoïdes vont de l'atrophie cutanée (réversible) à l'apparition d'infections cutanées, nécessitant un arrêt du traitement en passant par des dermatites de contact associées aux corticoïdes.
Les agents anti-inflammatoires sont contre-indiqués lorsque la peau est infectée ou si elle présente des ulcérations (plaies) et sont évités en cas de dermatose infectieuse ou de surinfection d'une dermatose préexistante en raison du risque d'une évolution à bas bruit de la pathologie infectieuse, masquée par un effet clinique favorable apparent. Ainsi, il est souvent recommandé de traiter toute infection cutanée préalablement à l'application de dermocorticoïdes, ce qui complique encore le traitement.
Il existe donc un besoin de nouveaux principes actifs pouvant être utilisés efficacement pour la prévention et/ou le traitement de maladies inflammatoires et/ou infectieuses, en particulier de dermatoses inflammatoires, notamment celles dues ou associées à une infection.
Les peptides antimicrobiens (PAMs) sont des peptides de défense considérés comme l'un des éléments clefs du système immunitaire inné, qui assure la première ligne de défense des organismes multicellulaires contre les pathogènes. L'intérêt suscité par ces peptides vient notamment de leur large spectre d'activité. Leur mode d'action repose sur une perméabilisation ou une fragmentation rapide des membranes des microorganismes, peu susceptible de générer l'apparition de mécanismes de résistance. Des peptides antimicrobiens ont été identifiés chez les plantes, les insectes, les batraciens et les mammifères. La peau des batraciens est une source importante de peptides antimicrobiens et chaque espèce de grenouille dispose de son propre répertoire peptidique constitué généralement de 10 à 15 PAMs.
Les Hylidae forment une famille d'amphibiens comprenant environ 51 genres répartis en trois sous-familles : Pelodryadinae, Phyllomedusinae, et Hylinae. La sous-famille des Phyllomedusinae synthétise et sécrète une grande diversité de PAMs qui ont été classés en sept familles : dermaseptines (17 peptides), phylloseptines (17 peptides), plasticines (6 peptides), dermatoxines (4 peptides), phylloxines (2 peptides), les hyposines (5 peptides) et 4 peptides orphelins (Amiche et al. 2008. Peptides ; 29:2074- 2082).
Les inventeurs ont mis en évidence qu'une fraction des sécrétions de Pachymedusa dacnicolor, une rainette de la sous famille de Phyllomedusinae, contient trois formes d'un même peptide qui ne diffèrent entre elles que par la délétion d'un ou deux résidus à partir de l'extrémité C-terminale. La forme longue de ce peptide correspond à la séquence d'une dermaseptine putative PD-2-2 identifiée à partir d'ADNc de grenouille (Wechselberger. 1998. Biocbimica et Biophysica Acta ; 1388:279-283). La demande internationale WO200055337 décrit l'utilisation de PAMs, dont PD-2-2, pour la fabrication de plantes transgéniques résistantes aux pathogènes. La demande internationale WO2007112069 décrit l'utilisation de PAMs, dont PD-2-2, pour réduire la consommation alimentaire, notamment de patients atteints d'obésité.
Dans ce contexte, le but de la présente invention est de fournir de nouveaux peptides dotés d'une activité anti-inflammatoire et/ou antimicrobienne, notamment pour le traitement de maladies inflammatoires, en particulier de maladies inflammatoires dues ou associées à une infection.
RÉSUMÉ
La présente invention porte sur un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-X2-T-L-X3-ÎC-K-V-G-X4-X5-X6-G-[C-A-9 (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-φ est X7-L-N-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9- X10, ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 3 ou SEQ ID NO : 4.
Dans un mode de réalisation, le peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne a une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi- X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-X& est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 3 ou SEQ ID NO : 4.
Dans un mode de réalisation, le peptide a une séquence sélectionnée parmi le groupe comprenant SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6, SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8, SEQ ID NO : 9, SEQ ID NO : 10, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 12, SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 14, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16, SEQ ID NO : 17, SEQ K> NO : 18, SEQ ID NO : 19, SEQ ID NO : 20, SEQ ID NO : 21, SEQ ID NO : 26, SEQ ID NO : 27, SEQ ID NO : 28 et dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables de ce peptide.
L'invention porte en outre sur un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A-X7-L-N-A-V-T- N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, destiné à être utilisé comme médicament.
La présente invention porte sur un médicament comprenant un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-
G-Κ-Α-φ (SEQ K> NO : 29), dans laquelle : -Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
X10, ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xg est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins tel peptide.
Dans un mode de réalisation, le médicament comprend un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K- A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xe est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides. L'invention porte également sur une composition pharmaceutique comprenant au moins un peptide tel que décrit ci-dessus ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, et un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables.
Un autre objet de l'invention est un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-¾-G-K-A-9 (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-Xi est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-XA est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-(p est X7-L-N-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9- X10, ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, un médicament tel que décrit ci- dessus ou composition pharmaceutique telle que décrite ci-dessus, pour une utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire et/ou immunosuppresseur.
Dans un mode de réalisation, le peptide a une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi^-T-L-Xs-K-K-V-G-X^-Xs-Xe-G-K-A^-L-N-A-V-T- N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle : -Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xe est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, un médicament tel que décrit ci- dessus ou composition pharmaceutique telle que décrite ci-dessus, pour une utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire et/ou immunosuppresseur.
Un aspect de l'invention porte sur un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-Xs-X6-G-K-A-9 (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ; -X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-Χό est un résidu A, K ou D ;
-φ est X7-L-N-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9- X10, ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, un médicament tel que décrit ci- dessus ou composition pharmaceutique telle que décrite ci-dessus, pour une utilisation dans la prévention ou le traitement d'une maladie inflammatoire chez un sujet. Dans un mode de réalisation, le peptide a une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi^-T-L-Xs-K-K-V-G-X^-Xs-Xe-G-K-A-Xv-L-N-A-V-T- N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, un médicament tel que décrit ci- dessus ou composition pharmaceutique telle que décrite ci-dessus, pour une utilisation dans la prévention ou le traitement d'une maladie inflammatoire chez un sujet. Dans un mode de réalisation, le peptide, médicament ou composition pharmaceutique pour son utilisation tel que décrit ci-dessus, est caractérisé en ce que la maladie inflammatoire est due à une infection.
Un aspect de l'invention porte sur un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A-9 (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-Xi est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-XA est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-(p est X7-L-N-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9- X10, ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, un médicament tel que décrit ci- dessus ou composition pharmaceutique telle que décrite ci-dessus, pour une utilisation dans la prévention ou le traitement d'une maladie liée à l'angiogenèse chez un sujet.
Dans un mode de réalisation, le peptide a une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi^-T-L-Xs-K-K-V-G-X^-Xs-Xe-G-K-A^-L-N-A-V-T- N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle : -Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xe est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, un médicament tel que décrit ci- dessus ou composition pharmaceutique telle que décrite ci-dessus, pour une utilisation dans la prévention ou le traitement d'une maladie liée à l'angiogenèse chez un sujet.
La présente invention porte en outre sur l'utilisation d'un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-
Α-φ (SEQ ID NO : 29), dans laquelle : -Xi est un résidu W ou A ; -X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-Χό est un résidu A, K ou D ;
-φ est X7-L-N-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9- X10, ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, en tant qu'agent antifongique ou antibactérien.
La présente invention porte en outre sur l'utilisation d'un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K- A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, en tant qu'agent antifongique ou antibactérien. La présente invention porte également sur un kit comprenant un peptide, un peptide pour son utilisation, un médicament, ou une composition pharmaceutique tels que décrits ci-dessus, et optionnellement les instructions pour l'administration du peptide, du médicament, ou de la composition pharmaceutique audit sujet.
DÉFINITIONS Dans la présente invention, les termes « peptide », « oligopeptide », « polypeptide » ou « protéine » sont utilisés indifféremment et se réfèrent à une chaîne d'acides aminés reliés par des liaisons peptidiques, quel que soit le nombre de résidus d'acide aminé constituant cette chaîne. Dans les séquences peptidiques décrites dans ce document, les acides aminés sont représentés par leur code à une lettre ou à trois lettres selon la nomenclature suivante : C : Cys, cystéine ; D : Asp, acide aspartique ; E : Glu, acide glutamique ; F : Phe, phénylalanine ; G : Gly, glycine ; H : His, histidine ; I : Ile, isoleucine ; K : Lys, lysine ; L : Leu, leucine ; M : Met, méthionine ; N : Asn, asparagine ; P : Pro, praline ; Q : Gin, glutamine ; R : Arg, arginine ; S : Ser, serine ; T : Thr, thréonine ; V : Val, valine ; W : Trp, tryptophane et Y : Tyr, tyrosine.
Le terme « microbe » ou « microbien » tel qu'utilisé dans ce document se réfère à des bactéries, des champignons, des levures, des virus et/ou des parasites.
Le terme « infection microbienne » tel qu'utilisé dans ce document se réfère à une infection due à des bactéries, des champignons, des levures, des virus et/ou des parasites.
Le terme « activité antimicrobienne » tel qu'utilisé dans ce document se réfère à une activité antibactérienne, antivirale, antifongique et/ou antiparasitaire. Cette activité peut être évaluée au travers de la mesure de différents paramètres tels que la CIso, la CMI ou encore la CMB. La « CIso » ou « concentration inhibitrice 50 » correspond à la concentration nécessaire d'un composé pour réduire de 50% la croissance in vitro d'une population de microorganismes. La « CMI » ou « concentration mimmale inhibitrice » correspond à la concentration minimale de composé permettant d'inhiber totalement la croissance microbienne, après 18 heures d'incubation, en général à 37°C, en présence dudit composé. La « CMB » ou « concentration minimale bactéricide » est la concentration minimale de composé permettant de détruire 99,9% des microorganismes après 18 à 24 heures de contact avec ledit composé. Le terme « concentration létale 50 » ou « CLso » tel qu'utilisé dans ce document se réfère à la concentration de composé causant la mort de 50 % d'une population cellulaire. La CLso est un indicateur quantitatif de la toxicité d'un composé. La CLso est notamment utilisée dans ce document pour évaluer la cytotoxicité des PAMs, en particulier sur les cellules immunitaires et érythrocytaires. Dans un mode de réalisation, la CLso correspond à la concentration de peptide induisant la mort de 50% des cellules immunitaires. Dans un autre mode de réalisation, la CLso correspond à la concentration de peptide induisant la mort de 50% des cellules érythrocytaires.
Le terme « activité anti-inflammatoire » tel qu'utilisé dans ce document se réfère à une activité visant à inhiber ou limiter une inflammation. On peut citer à titre d'exemple d'inflammation les érythèmes, les œdèmes. L'inflammation, sur le plan médical, se définit comme la réunion des quatre phénomènes suivants : gonflement, rougeur, chaleur et douleur.
Le terme « activité immunosuppressive » tel qu'utilisé dans ce document se réfère à une activité visant à atténuer ou supprimer les réactions immunitaires de l'organisme.
Le terme « pharmaceutiquement acceptable » se réfère uniquement aux ingrédients d'une composition pharmaceutique compatibles entre eux et non délétères pour le patient. Dans un mode de réalisation, un excipient pharmaceutiquement acceptable ne produit pas d'effet secondaire, allergique ou autre réaction indésirable lorsqu'il est administré à un animal, de préférence un humain. Pour une administration humaine, les préparations doivent satisfaire les critères de stérilité, de pyrogénicité, de sécurité générale et de pureté standards tels que requis par les offices de réglementation, comme par exemple la FDA ou l'EMÀ.
Le terme « sujet » fait référence à un animal, y compris un être humain. Au sens de la présente invention, un sujet peut être un patient, à savoir une personne recevant des soins médicaux, subissant ou ayant subi un traitement médical, ou surveillée dans le cadre du développement d'une maladie.
Le terme « traiter » ou « traitement » se réfère à la fois à un traitement thérapeutique et à des mesures prophylactiques ou préventives, dans lesquels l'objectif est de prévenir ou de ralentir (diminuer) la condition pathologique ciblée, ou le trouble. Ceux qui ont besoin d'un traitement inclut ceux qui sont déjà atteints du trouble et ceux qui sont prédisposés ou susceptibles de l'avoir, ou encore ceux chez qui le trouble doit être empêché. Un sujet ou un mammifère est « traité » avec succès si, après avoir reçu une dose thérapeutique du peptide selon la présente invention, le patient montre une réduction observable et/ou mesurable ou une absence de l'un ou plus des éléments suivants : réduction du nombre de cellules pathogéniques, réduction du pourcentage total de cellules pathogéniques, et/ou un certain soulagement de l'un ou plus des symptômes associés avec la maladie ciblée, une morbidité et une mortalité réduite, et une amélioration de la qualité de vie. Les paramètres ci-dessus permettant d'évaluer le succès du traitement et l'amélioration de la situation de la maladie sont facilement mesurables par des procédures de routine connues du praticien.
Le terme « dose thérapeutiquement efficace » se réfère à la dose d'agent thérapeutique nécessaire et suffisante pour ralentir ou stopper la progression, l'aggravation ou la détérioration de l'un ou plusieurs symptômes de la maladie ou de la condition ; atténuer les symptômes de la maladie ou de la condition ; guérir la maladie ou la condition. Dans un mode de réalisation, la condition selon l'invention est une maladie inflammatoire, une maladie microbienne, ou une maladie inflammatoire à composante infectieuse. Dans un mode de réalisation, la condition selon l'invention est une maladie liée à l'angiogenèse.
DESCRIPTION DE L'INVENTION
L'invention a pour premier objet un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-X2-T-L-X3-ÎC-K-V-G-X4-X5-X6-G-[C-A-9 (SEQ 1D NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-φ est X7-L-N-A (SEQ ID NO :30), Xv-L-N-A-V-T-N-Xs-A (SEQ ID NO :31), Xv- L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO :32), ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence ALWKTLLKKVGKVAGKAVLNAVTNMANQNEQ-OH (SEQ ID NO : 2), ALWKTLLKKVGKVAGKAVLNAVTNMANQNE-OH (SEQ ID NO : 3) ou ALWKTLLKKVGKVAGKAVLNAVTNMANQN-OH (SEQ ID NO : 4).
Dans un mode de réalisation, le peptide de l'invention ne comprend pas la SEQ ID NO : 2. Dans un mode de réalisation, le peptide de l'invention ne comprend pas la SEQ ID NO : 3. Dans un mode de réalisation, le peptide de l'invention ne comprend pas la SEQ ID NO : 4. Selon un mode de l'invention, le peptide de l'invention n'est pas un peptide de séquence MALViCKSLFLVLFLGLVSLSICEEKRENEDEEEQEDDEQSEEKRALWKTLLKKVG KVAGKAVLNAVTNMANQNEQ (SEQ ID NO : 36).
Selon un mode de l'invention, le peptide de l'invention ne comprend pas la séquence SEQ ID NO : 36. Dans un mode de réalisation (p est X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO :
32) et/ou X9 et X10 ne représentent aucun résidu. Dans un mode de réalisation (p est X7-L-N- A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 32) et X9 et X10 ne représentent aucun résidu.
Dans un mode de réalisation, le peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne a une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi- X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A (SEQ ID NO : 33), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ; -X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-¾ est un résidu A, K ou D ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, SEQ 1D NO : 3 ou SEQ ID NO : 4.
Dans un mode de réalisation, le peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne a une séquence de 21 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi- X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A-X7-L-N-A (SEQ ID NO : 34), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 3 ou SEQ ID NO : 4.
Dans un mode de réalisation, le peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne a une séquence de 26 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi- X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A (SEQ ID NO : 35), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ; -X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-¾ est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 3 ou SEQ ID NO : 4. Dans un mode de réalisation, le peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne a une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi- X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-Xs-X6-G-ÎC-A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-Xio (SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xe est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, SEQ ID NO : 3 ou SEQ ID NO : 4. Dans un mode préféré de l'invention, le peptide de l'invention est doté d'une activité anti- inflammatoire, d'une activité immunosuppresseur, d'une activité anti-angiogénique et/ou d'une activité antimicrobienne.
Dans un mode de l'invention, le peptide de l'invention est doté d'une activité antimicrobienne. Dans un autre mode de l'invention, le peptide de l'invention est doté d'une activité anti-inflammatoire. Dans un autre mode de l'invention, le peptide de l'invention est doté d'un effet immunosuppresseur. Dans un autre mode de l'invention, le peptide de l'invention est doté d'un effet anti-angiogénique.
Dans un mode préféré de l'invention, le peptide de l'invention est doté d'une activité anti- inflammatoire et d'une activité antimicrobienne. Dans un mode préféré de l'invention, le peptide de l'invention est doté d'une activité anti-inflammatoire et d'une activité immunosuppresseur. Dans un mode préféré de l'invention, le peptide de l'invention est doté d'une activité anti-inflammatoire et d'une activité anti-angiogénique.
Dans un mode préféré de l'invention, le peptide de l'invention est doté d'une activité anti- inflammatoire, d'une activité immunosuppresseur et d'une activité antimicrobienne. Dans un mode préféré de l'invention, le peptide de l'invention est doté d'une activité antiinflammatoire, d'une activité anti-angiogénique et d'une activité antimicrobienne. Dans un mode préféré de l'invention, le peptide de l'invention est doté d'une activité antiinflammatoire, d'une activité immunosuppresseur et d'une activité anti-angiogénique. Dans un mode préféré de l'invention, le peptide de l'invention est doté d'une activité anti- immunosuppresseur, d'une activité anti-angiogénique et d'une activité antimicrobienne.
Dans un mode préféré de l'invention, le peptide de l'invention est doté d'une activité antiinflammatoire, d'une activité immunosuppresseur, d'une activité anti-angiogénique et d'une activité antimicrobienne.
Dans un mode préféré de l'invention, le résidu Xi est W dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu X2 est K dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu XJ est L dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu X4 est K ou A dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu Xs est V dans les séquences SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu Xe est A dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, et/ou le résidu X7 est V dans les SEQ ID NOs 1, 29, 31 et 32.Dans un mode préféré de l'invention, le résidu X9 représente le résidu E et le résidu Xi 0 représente le résidu Q dans la SEQ ID NO 1.
Dans un autre mode préféré de l'invention, le résidu ¾ ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu Xio ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu ¾ est E et le résidu Xio est absent dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu ¾ représente le résidu E et le résidu Xio ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO 1.
Dans un autre mode préféré de l'invention, les résidus X> et Xio ne représentent aucun acide aminé. Ainsi, dans un mode préféré de l'invention, le peptide de l'invention a une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi -X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6- G-K-A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N (SEQ K> NO : 25), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Χβ est un résidu A, EC ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2 ; SEQ ID NO : 3 ou SEQ ID NO : 4.
Selon un mode de réalisation, le peptide a une taille comprise entre 17 et 100 acides aminés, de préférence entre 17 et 50, entre 17 et 45, entre 17 et 40, entre 17 et 35, ou entre 17 et 30 acides aminés. Selon un autre mode de réalisation, le peptide a une taille comprise entre 17 et 34, entre 17 et 33, entre 17 et 32, ou entre 17 et 31 acides aminés. Selon un mode de réalisation, le peptide a une taille de 17 acides aminés.
Selon un mode de réalisation, le peptide a une taille comprise entre 21 et 100 acides aminés, de préférence entre 21 et 50, entre 21 et 45, entre 21 et 40, entre 21 et 35, ou entre 21 et 30 acides aminés. Selon un autre mode de réalisation, le peptide a une taille comprise entre 21 et 34, entre 21 et 33, entre 21 et 32, ou entre 21 et 31 acides aminés. Selon un mode de réalisation, le peptide a une taille de 21 acides aminés.
Selon un mode de réalisation, le peptide a une taille comprise entre 26 et 100 acides aminés, de préférence entre 26 et 50, entre 26 et 45, entre 26 et 40, entre 26 et 35, ou entre 26 et 30 acides aminés. Selon un autre mode de réalisation, le peptide a une taille comprise entre 26 et 34, entre 26 et 33, entre 26 et 32, ou entre 26 et 31 acides aminés. Selon un mode de réalisation, le peptide a une taille de 26 acides aminés.
Selon un mode de réalisation, le peptide a une taille comprise entre 29 et 100 acides aminés, de préférence entre 29 et 50, entre 29 et 45, entre 29 et 40, entre 29 et 35, ou entre 29 et 30 acides aminés. Selon un autre mode de réalisation, le peptide a une taille comprise entre 29 et 34, entre 29 et 33, entre 29 et 32, ou entre 29 et 31 acides aminés.
Selon un autre mode de réalisation, le peptide a une taille de 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 ou 35 acides aminés. Dans un mode préféré de l'invention, le peptide a une taille de 29 acides aminés.
Les acides aminés constituant le peptide selon l'invention peuvent être de configuration L ou D, de préférence de configuration L. Dans un mode de l'invention, le peptide selon l'invention peut contenir une combinaison d'acides aminés de configuration L et de configuration D.
Le peptide selon l'invention peut présenter une modification post-traductionnelle et/ou une modification chimique en particulier une glycosylation, une amidation, une estérification, une acylation, une acétylation ou une méthylation.
En effet, afin d'augmenter la biodisponibilité du peptide en améliorant sa résistance aux peptidases, des groupements protecteurs peuvent être ajoutés aux extrémités C- et/ou N- terrninales. Par exemple, le groupement protecteur à l'extrémité N-terminale peut être une acylation ou une acétylation et le groupement protecteur à l'extrémité C-terminale peut être une amidation ou une estérification. L'action des protéases peut également être contrecarrée par l'utilisation d'acides aminés de configuration D, la cyclisation du peptide par formation de ponts disulfures, d'anneaux lactames ou de liaisons entre les extrémités N- et C- terminales. Le peptide de l'invention peut également comprendre des liaisons pseudo- peptidiques remplaçant les liaisons peptidiques « classiques » CONH et conférant une résistance accrue aux peptidases, telles que CHOH-CH2, NHCO, CH2-O, CH2CH2, CO-CH2, N-N, CH, CH2NH, et CH2-S. De préférence, le peptide selon l'invention présente une amidation de son extrémité C-terminale.
Selon un mode de réalisation, le peptide de la présente invention consiste en ou comprend une séquence sélectionnée parmi le groupe suivant :
dans lequel les résidus précédés de la lettre « d » sont des acides aminés de configuration D, et dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide.
Dans un mode de réalisation, le peptide a une séquence comprenant ou consistant en la séquence SEQ ID NO : 5. Dans un mode de réalisation, le peptide a une séquence comprenant ou consistant en la séquence SEQ ID NO : 6. Dans un mode de réalisation, le peptide a une séquence comprenant ou consistant en la séquence SEQ ID NO : 7. Dans un mode de réalisation, le peptide a une séquence comprenant ou consistant en la séquence SEQ ID NO : 8.
L'invention couvre également les dérivés fonctionnels d'un peptide selon l'invention tel que décrit ci-dessus. Le terme « dérivé fonctionnel » tel qu'utilisé dans ce document, se réfère à des peptides ayant substantiellement la même séquence d'acides aminés, substantiellement la même structure hélicoïdale et substantiellement la même activité anti-inflammatoire, anti- angiogénique et/ou antimicrobienne. Préférentiellement, le terme « dérivé fonctionnel » tel qu'utilisé dans ce document, se réf re à des peptides ayant substantiellement la même séquence d'acides aminés, substantiellement la même structure hélicoïdale et substantiellement la même activité anti-inflammatoire et/ou antimicrobienne. Ces dérivés fonctionnels peuvent être résistants à la protéolyse par une ou plusieurs modifications) chimique(s) ou substantiellement homologues par une ou plusieurs substitution^) conservative(s). Ces dérivés fonctionnels peuvent être, par exemple, des inverso peptides, des rétro peptides, des rétro-inverso peptides et des peptides dont la chaîne latérale d'un ou plusieurs des acides aminés est substituée par des groupements qui ne modifient pas l'activité anti-inflammatoire et/ou antimicrobienne du peptide de l'invention.
L'invention couvre également les sels pharmaceutiquement acceptables d'un peptide selon l'invention. Les sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être, par exemple, les sels avec des acides minéraux pharmaceutiquement acceptables tels que l'acide chlorhydrique, l'acide brornhydrique, l'acide sulfurique et l'acide phosphorique ; les sels avec des acides organiques pharmaceutiquement acceptables tels que l'acide acétique, l'acide citrique, l'acide maléique, l'acide malique, l'acide succinique, l'acide ascorbique et l'acide tartrique ; les sels avec des bases minérales pharmaceutiquement acceptables tels que les sels de sodium, de potassium, de calcium, de magnésium ou d'ammonium ; ou les sels avec des bases organiques qui ont un azote salifïable, couramment utilisés dans la technique pharmaceutique. Les méthodes de préparation de ces sels sont bien connues de l'homme du métier.
Le peptide selon l'invention peut être obtenu par synthèse chimique classique (en phase solide ou en phase homogène liquide) ou par synthèse enzymatique (Kullman et al. 1987. Enzymatic peptide synthesis, CRC Press, Florida). Il peut également être obtenu par la méthode consistant à cultiver une cellule hôte, telle que décrite ci-après, comprenant un transgène codant pour le peptide et exprimant ledit peptide, et à extraire ledit peptide à partir de ces cellules hôtes ou du milieu de culture dans lequel le peptide a été sécrété.
Selon un mode de réalisation, le peptide est un peptide isolé. Dans un mode de réalisation, le peptide est un peptide recombinant.
Un second objet de l'invention porte sur un acide nucléique codant pour un peptide selon le premier objet de l'invention. Au sens de l'invention, on entend par « acide nucléique » toute molécule à base d'ADN ou d'ARN. Il peut s'agir de molécules synthétiques ou semi- synthétiques, recombinantes, éventuellement amplifiées ou clonées dans des vecteurs, modifiées chimiquement, comprenant des bases non-naturelles ou des nucléotides modifiés comprenant par exemple une liaison modifiée, une base purique ou pyrirnidique modifiée, ou un sucre modifié. L'acide nucléique selon l'invention peut être sous la forme d'ADN et/ou d'ARN, simple brin ou double brin. Selon un mode de réalisation préférée, l'acide nucléique est une molécule d'ADN isolée, synthétisée par des techniques recombinantes bien connues de l'homme du métier. L'acide nucléique selon l'invention peut être déduit de la séquence du peptide selon l'invention et l'usage des codons peut être adapté selon la cellule hôte dans laquelle l'acide nucléique doit être transcrit. Ces étapes peuvent être réalisées selon des méthodes bien connues de l'homme du métier et dont certaines sont décrites dans le manuel de référence Sambrook et al. (Sambrook et al. 2001. In Vitro Cell. Dev. Biol. ; 28P:97-105). Dans un mode de réalisation, l'acide nucléique est l'acide nucléique codant pour une séquence d'acides aminés sélectionnée parmi le groupe comprenant ou constitué de SEQ ID NO : 1, SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6, SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8, SEQ ID NO : 9, SEQ ID NO : 10, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 12, SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 14, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16, SEQ ID NO : 17, SEQ ID NO : 18, SEQ ID NO : 19, SEQ ID NO : 20, SEQ ID NO : 21, SEQ ID NO : 26, SEQ ID NO : 27, et SEQ ID NO : 28.
Dans un mode de réalisation, l'acide nuclé que est sélectionné parmi le groupe comprenant ou consistant en les séquences :
- GCG CTG TGG AAA ACC TTA CTG AAG AAA GTG GGC AAG GTT GCG GGT AAA GCC GTG CTG AAC GCA GTT ACC AAT ATG GCG AAC CAG AAT (SEQ ID
NO : 22) codant pour les peptides de séquence SEQ ID NO : 7 et 8 ;
- GCG CTG TGG AAA ACC TTA CTG AAG AAA GTG GGC AAG GTT GCG GGT AAA GCC GTG CTG AAC GCA GTT ACC AAT ATG GCG AAC CAG AAT GAA (SEQ ID NO : 23) codant pour les peptides de séquence SEQ ID NO : 3 et 6 ; et
- GCG CTG TGG AAA ACC TTA CTG AAG AAA GTG GGC AAG GTT GCG GGT AAA GCC GTG CTG AAC GCA GTT ACC AAT ATG GCG AAC CAG AAT GAA CAA
(SEQ ID NO : 24) codant pour les peptides de séquence SEQ ID NO : 2 et 5, ou toute séquence présentant au moins 75%, de préférence au moins 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 ou 99% d'identité avec une des séquences SEQ ID NOs: 22-24.
Au sens de la présente invention, le terme « identité », lorsqu'il est utilisé dans une relation entre les séquences de deux ou plusieurs séquences nucléotidiques, se réfère au degré de parenté entre ces séquences nucléotidiques, tel que déterminé par le nombre de correspondances entre les chaînes de deux bases ou plus. Selon l'invention, l'« identité » correspond ainsi à un pourcentage d'identité entre deux (ou plus de 2) séquences. Ce pourcentage est défini comme le nombre de positions pour lesquelles les bases sont identiques lorsque les séquences sont alignées de manière optimale, divisé par le nombre total de bases de la plus petite des deux séquences. Les différences entre les séquences peuvent être réparties au hasard et sur toutes leurs longueurs.
Deux séquences sont dites alignées de manière optimale lorsque le pourcentage d'identité est maximal. Par ailleurs, comme cela apparaîtra de manière claire à l'homme du métier, il peut être nécessaire de faire appel à des ajouts de positions lacunaires (des « gaps ») de manière à obtenir un alignement optimal entre les deux séquences. Le pourcentage d'identité entre deux séquences d'acides nucléiques peut donc être déterminé en comparant ces deux séquences alignées de manière optimale dans laquelle la séquence d'acides nucléiques à comparer peut comprendre des additions ou des délétions par rapport à la séquence de référence pour un alignement optimal entre ces deux séquences. Le pourcentage d'identité est alors calculé en déterminant le nombre de positions identiques pour lesquelles le nucléotide est identique entre les deux séquences, en divisant ce nombre de positions identiques par le nombre total de positions dans la fenêtre de comparaison et en multipliant le résultat obtenu par 100 pour obtenir le pourcentage d'identité entre ces deux séquences.
Préférentiellement, les méthodes de détermination de l'identité sont conçues pour donner la plus grande concordance possible entre les séquences comparées.
Le pourcentage d'identité peut être déterminé par un modèle mathématique particulier ou par un programme d'ordinateur (généralement désigné par le terme d'« algorithme »). Des méthodes de calcul de l'identité entre des séquences nucléotidiques sont bien connues de l'homme du métier. Des exemples non limitatifs de telles méthodes incluent celles décrites dans les documents suivants : Arthur M. Lesk, Computational Molecular Biology: Sources and Methodsfor Séquence Analysis (New-York: Oxford University Press, 1988) ; Douglas W. Smith, Biocomputing: Informatics and Génome Projects (New-York: Académie Press, 1993) ; Hugh G. Griffïn and Annette M. Griffin, Computer Analysis of Séquence Data, Part 1 (New Jersey: Humana Press, 1994) ; Gunnar von Heinje, Séquence Analysis in Molecular Biology: Treasure Trove or Trivial Pursuit (Académie Press, 1987) ; Michael Gribskov and John Devereux, Séquence Analysis Primer (New York: M. Stockton Press, 1991) ; et Carillo et al., 1988. SIAM J. Appl. Math. 48(5): 1073-1082.
Des méthodes de détermination de l'identité ont été décrites dans des programmes d'ordinateurs accessibles au public. Des exemples préférés de méthodes utilisant des programmes d'ordinateurs incluent, sans y être limités, le progiciel GCG, incluant GAP (Devereux et al., 1984. Nucl Acid. Res. 12(1 Pt l):387-395 ; Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, Madison, Wl), BLASTP, BLASTN, et FASTA (Altschul et al., 1990. /. Mol. Biol. 215(3):403-410). Le programme BLASTX est disponible auprès du National Center for Biotechnology Information (NCBI) et d'autres sources (BLAST Manual, Altschul et al. NCB/NLM/NIH Bethesda, Md. 20894 ; Altschul ét al, 1990. /. Mol. Biol. 215(3):403-410). L'algorithme de Smith- Waterman, qui est bien connu de l'homme du métier, peut également être utilisé pour déterminer le pourcentage d'identité entre deux séquences.
L'invention porte en outre sur un vecteur ou un plasmide dans lequel un acide nucléique selon l'invention est associé à des éléments appropriés pour le contrôle de la transcription (en particulier un promoteur, un amplificateur et optionnellement un terminateur) et, optionnellement de la traduction.
Dans un mode de réalisation, le vecteur est un vecteur recombinant. Dans un mode de réalisation, un acide nucléique selon l'invention a été inséré dans le vecteur. Dans un mode de réalisation, le vecteur peut être un vecteur de clonage ou un vecteur d'expression.
L'invention porte également sur une cellule hôte exprimant un peptide de l'invention, de façon constitutive ou transitoire. Dans un mode de réalisation, la cellule hôte a été transformée par l'un au moins des acides nucléiques selon l'invention.
Tel qu'utilisé ici, le terme « transformation » signifie l'introduction d'un gène, ou d'une séquence ARN ou ADN (incluant les plasmides et les vecteurs viraux) « étranger » (i.e. extrinsèque ou extracellulaire) dans une cellule hôte, de manière à ce que la cellule hôte exprime le gène ou la séquence introduit pour produire la substance désirée, typiquement une protéine codée par le gène ou la séquence. Une cellule hôte qui reçoit et exprime l'ADN ou TARN introduit a été « transformée ».
La construction des vecteurs selon l'invention et la transformation des cellules hôtes peuvent être réalisées par des techniques de biologie moléculaire conventionnelles.
L'invention a également pour objet un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-Xfi-G-K-A-9 (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-Xi est un résidu K ou D ; -X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A
-¾ est un résidu A, K ou D ; -(p est X7-L-N-A (SEQ ID NO :30), X7-L-N-A-V-T-N-X8-A (SEQ ID NO :31), X?-
L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO :32), ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xe est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2 ; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, destiné à être utilisé comme médicament.
Dans un mode de réalisation, le peptide de l'invention ne comprend pas la SEQ ID NO : 2.
Dans un mode de réalisation, le peptide destiné à être utilisé comme médicament a une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G- X4-X5-X6-G-IC-A (SEQ ID NO : 33), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ; dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2 ; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides.
Dans un mode de réalisation, le peptide destiné à être utilisé comme médicament a une séquence de 21 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G- X4-X5-X6-G-K-A-X7-L-N-A (SEQ ID NO : 34), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Χβ est un résidu A, EC ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2 ; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides.
Dans un mode de réalisation, le peptide destiné à être utilisé comme médicament a une séquence de 26 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G- X4-X5-X6-G-K-A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A (SEQ ID NO : 35), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-¾ est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ; -Xs est un résidu M ou A ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2 ; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides.
Dans un mode de réalisation, le peptide destiné à être utilisé comme médicament a une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G- X4-Xs-X6-G-[C-A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-Xio (SEQ ID NO : 1), dans laquelle
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, de préférence un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence SEQ ID NO : 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 ; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides.
Dans un mode préféré de l'invention, le résidu Xi est W dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu X2 est K dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu X3 est L dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu X* est K ou A dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu Xs est V dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, Xe est le résidu A SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, et/ou le résidu X7 est V dans les SEQ ID NOs 1, 29, 31 et 32. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu X9 représente le résidu E et le résidu X10 représente le résidu Q dans la SEQ ID NO 1. Dans un autre mode préféré de l'invention, le résidu ¾ ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu Xio ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu ¾ est E et le résidu Xio est absent dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu ¾ représente le résidu E et le résidu Xio ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO l.
Dans un autre mode préféré de l'invention, les résidus X9 et Xtone représentent aucun acide aminé.
L'invention a également trait à un médicament comprenant au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-
Α-φ (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-φ est X7-L-N-A (SEQ ID NO :30), Xv-L-N-A-V-T-N-Xs-A (SEQ ID NO :31), X7- L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ K> NO :32), ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xa est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides.
Dans un mode de réalisation, le peptide de l'invention ne comprend pas la SEQ ID NO : 2.
Dans un mode de réalisation, le médicament comprend au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antirnicrobienne ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-XI-X2-T-L-¾-K-K-V-G-X4-X5-XÔ-G-K-A (SEQ ID NO : 33), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ H) NO : 2.
Dans un mode de réalisation, le médicament comprend au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 21 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1OO-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K- A-X7-L-N-A (SEQ ID NO : 34), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-¾ est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xs est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ; dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides.
Dans un mode de réalisation, le médicament comprend au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 26 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1 O-T-L-X3-K-K-V-G-X4-V-X6-G-K-A- X7-L-N-A-V-T-N-X8-A (SEQ ID NO : 35), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides.
Dans un mode de réalisation, le médicament comprend au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou antimicrobienne ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A-X7-L-N- A-V-T-N-Xs-A-N-Q-N-X9-Xio(SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ; -Χό est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, de préférence un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence SEQ ID NO : 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 ; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides. La présente invention concerne également une composition comprenant au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X0-G-
Κ-Α-φ (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-(p est X7-L-N-A (SEQ ID NO :30), Xv-L-N-A-V-T-N-Xs-A (SEQ ID NO :31), Xv-
L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO :32), ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ; -Xio ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2 ; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides.
Dans un mode de réalisation, le peptide de l'invention ne comprend pas la SEQ ID NO : 2.
Dans un mode de réalisation, la composition comprend au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A (SEQ ID NO : 33), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2 ; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides.
Dans un mode de réalisation, le peptide de l'invention ne comprend pas la SEQ ID NO : 2. Dans un mode de réalisation, la composition comprend au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 21 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K- A-Xfi-L-N-A (SEQ ID NO : 34), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ; -X5 est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2 ; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides.
Dans un mode de réalisation, le peptide de l'invention ne comprend pas la SEQ ID NO : 2.
Dans un mode de réalisation, la composition comprend au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 26 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-XÎ-K-K-V-G-X4-XS-X6-G-K- A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A (SEQ ID NO : 35), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xa est un résidu M ou A ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2 ; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides.
Dans un mode de réalisation, la composition comprend au moins un peptide comprenant un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou antimicrobienne ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G- K-A-X7-L-N-A-V-T-N-Xs-A-N-Q-N-X9-Xio(SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ; -X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, de préférence un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence SEQ ID NO : 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 ; ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides.
L'invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-
X4-Xs-X6-G-K-A-(p (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ; -X2 est un résidu K ou D ;
-¾ est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-φ est X7-L-N-A (SEQ ID NO :30), X7-L-N-A-V-T-N-X8-A (SEQ ID NO :31), X7- L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ K> NO :32), ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, et un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables. Dans un mode de réalisation, le peptide de l'invention ne comprend pas la SEQ ID NO : 2.
Dans un mode de réalisation, la composition comprend au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X0-G-K-A (SEQ ID NO : 33), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Χβ est un résidu A, EC ou D ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, et un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables.
Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 21 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X0-G- K-A-X7-L-N-A (SEQ ID NO : 34), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X. est un résidu K ou D ;
-¾ est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Χβ est un résidu A, EC ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, et un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables.
Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 26 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-XI-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-XÔ-G- K-A-X7-L-N-A-V-T-N-Xs-A (SEQ ID NO : 35), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, et un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables.
Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend au moins comprenant au moins un peptide comprenant un peptide doté d'une activité anti- inflammatoire et/ou antimicrobienne ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-Xi-T-L-Xs-K-K-V-G-X^Xs-Xe-G-K-A-XT-L-N-A-V-T- N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-X& est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à l'exception du peptide de séquence SEQ ID NO : 2, de préférence un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence SEQ ID NO : 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, et un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables.
L'invention porte en outre sur un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi^-T-L^-K-K-V-G^-Xs-Xe-G-K-A^ (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ; -X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-¾ est un résidu A, K ou D ; -(p est X7-L-N-A (SEQ ID NO :30), XT-L-N-A-V-T-N-XS-A (SEQ ID NO :31), X?-
L-N-A-V-T-N-X7-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO :32), ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, pour une utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire, immunosuppresseur et/ou anti-angiogénique.
Dans un mode de réalisation, le peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence SEQ ID NO : 29 et dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, est destiné pour une utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire et/ou immunosuppresseur.
Dans un mode de réalisation, le peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence SEQ ID NO : 29 et dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, est destiné pour une utilisation en tant qu' agent anti-inflammatoire et/ou anti-angiogénique.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X0-G-K-A (SEQ ID NO : 33), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ; -X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-¾ est un résidu A, K ou D ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, pour une utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire, immunosuppresseur et/ou anti-angiogénique.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 21 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K- A-X7-L-N-A (SEQ ID NO : 34), dans laquelle : -Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, pour une utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire, immunosuppresseur et/ou anti-angiogénique.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 26 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-Xô-G-K- A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A (SEQ ID NO : 35), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ; -Χό est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, pour une utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire, immunosuppresseur et/ou anti-angiogénique.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K- A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ; -X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Χβ est un résidu A, EC ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, pour une utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire, immunosuppresseur et/ou anti-angiogénique.
Dans un mode préféré de l'invention, le résidu Xi est W dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu X2 est K dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu Xs est L dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu X* est K ou A dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu Xs est V dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu Xe est A dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, et/ou le résidu X7 est V dans les SEQ ID NOs 1, 29, 31 et 32. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu X9 représente le résidu E et le résidu X10 représente le résidu Q dans la SEQ ID NO 1. Dans un autre mode préféré de l'invention, le résidu Xs ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu Xio ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu ¾ est E et le résidu Xio est absent dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu X9 représente le résidu E et le résidu X10 ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO l.
Dans un autre mode préféré de l'invention, les résidus X9 et X10 ne représentent aucun acide aminé.
Dans un mode préféré de l'invention, le peptide pour une utilisation en tant qu'agent anti- inflammatoire, immunosuppresseur et/ou anti-angiogénique, est un peptide comprenant une séquence sélectionnée parmi le groupe comprenant ou constitué des séquences SEQ ID Nos : 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8.
Dans un mode préféré de l'invention, le peptide pour une utilisation en tant qu'agent antiinflammatoire et/ou anti-angiogénique, est un peptide comprenant une séquence sélectionnée parmi le groupe comprenant ou constitué des séquences SEQ ID NOs : 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8.
Dans un mode de réalisation, le peptide tel que décrit ci-dessus est utile en tant qu'agent immunosuppresseur. Dans un mode préféré de l'invention, le peptide tel décrit ci-dessus est utilisé en tant qu'agent immunosuppresseur.
Dans un autre mode de réalisation, le peptide tel décrit ci-dessus est utile en tant qu'agent anti-inflammatoire. Dans un mode préféré de l'invention, le peptide tel décrit ci-dessus est utilisé en tant qu'agent anti-inflammatoire.
Dans un autre mode de réalisation, le peptide tel que décrit ci-dessus est utile en tant qu'agent anti-angiogénique. Dans un mode préféré de l'invention, le peptide tel décrit ci-dessus est utilisé en tant qu'agent anti-angiogénique.
Dans un autre mode de réalisation, le peptide tel décrit ci-dessus est utile en tant qu'agent anti-inflammatoire, immunosuppresseur et anti-angiogénique, préférentiellement en tant qu'agent anti-inflammatoire et immunosuppresseur. Dans un mode préféré de l'invention, le peptide tel décrit ci-dessus est utilisé en tant qu'agent anti-inflammatoire, immunosuppresseur et anti-angiogénique, préférentiellement en tant qu'agent anti- inflammatoire et immunosuppresseur.
Dans un mode de réalisation, l'invention porte sur le peptide tel décrit ci-dessus pour une utilisation dans la prévention ou le traitement d'une maladie inflammatoire, de préférence un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la SEQ ID NO : 1, de préférence comprenant une séquence sélectionnée parmi le groupe comprenant ou constitué des séquences SEQ ID NOs : 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8.
Le terme « maladie inflammatoire » tel qu'utilisé dans ce document se réfère à toute maladie dans laquelle une réaction inflammatoire a des conséquences pathologiques pour l'organisme. Les maladies inflammatoires affectent des organes ou tissus tels que le système digestif, le système nerveux, la peau, les muqueuses ou les articulations, entre autres. Les maladies inflammatoires aiguës au sens de l'invention incluent par exemple la septicémie, le choc septique. Les maladies inflammatoires chroniques au sens de l'invention incluent, mais ne sont pas limitées à, la septicémie, le choc septique, les maladies auto-immunes (telle que le lupus ou la polyarthrite rhumatoïde), les maladies inflammatoires cardiaques (cardites, et notamment endocardite, péricardite, myocardite, en particulier les endocardites d'origine infectieuse, telles que celles induites par Staphyfococcus aureus), le rejet de greffe, les traumatismes, les maladies inflammatoires articulaires (notamment les différents types d'arthrite), les maladies inflammatoires du système gastro-intestinal (notamment les colites, entérites, gastrites, gastro-entérites, les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI) telles que la maladie de Crohn et la recto-colite hémorragique (RCH)), les maladies inflammatoires de la peau (notamment eczéma, dermatite de contact, dermatite atopique, psoriasis, rosacée, dermatoses), les maladies inflammatoires des voies respiratoires (notamment asthme, bronchite chronique), les maladies inflammatoires de l'œil (notamment conjonctivite, épisclérite, sclérite, kératite, uvéite, blépharite, orgelet).
Dans un mode avantageux, la maladie inflammatoire est une maladie inflammatoire de la peau ou des muqueuses, notamment choisie dans le groupe comprenant ou constitué par :
-les infections de la peau ou des phanères, notamment choisies dans le groupe comprenant ou constitué par la folliculite, le furoncle, l'abcès, l'impétigo ou le panaris ;
-les dermatoses inflammatoires notamment choisies dans le groupe comprenant ou constitué par l'eczéma, la dermatite de contact, la dermatite atopique, la rosacée ou le psoriasis ;
-les pathologies inflammatoires de l'œil et de ses annexes, notamment choisies dans le groupe comprenant ou constitué par la conjonctivite, épisclérite, la sclérite, la kératite, l'uvéite, la blépharite et l'orgelet.
Dans un mode de réalisation préféré, la maladie inflammatoire selon l'invention est sélectionnée parmi le groupe comprenant ou constitué de la rosacée, le psoriasis, l'eczéma, la dermatite de contact et l'impétigo.
Dans un mode particulier de l'invention, la maladie inflammatoire est due ou associée à une infection. Dans un mode de réalisation, la maladie inflammatoire est une maladie inflammatoire à composante infectieuse.
Dans un mode de réalisation, la maladie inflammatoire est due ou associée à au moins une bactérie de type Gram+ ou Gram-. Dans un mode préféré de l'invention, la composante infectieuse de la maladie inflammatoire est due ou associée à au moins une bactérie choisie parmi les bactéries Gram+ appartenant au genre Escherichia, Pseudomonas, Klebsiella, Salmonella, Yersinia, ou Vibrio ; et les bactéries Gram- appartenant au genre Staphylococcus, Listeria, Serratia ou Kocuria.
Dans un mode préféré, la composante infectieuse de la maladie inflammatoire est due ou associée à une bactérie appartenant au genre Staphylococcus, préférentiellement à Staphylococcus aureus.
Dans un mode de réalisation, la maladie inflammatoire est due ou associée à au moins un champignon. Dans un mode préféré de l'invention, la composante infectieuse de la maladie inflammatoire est due ou associée à un champignon appartenant au genre Candida ou Pityriasis.
L'invention porte aussi sur une composition pharmaceutique comprenant au moins un peptide tel que décrit ci-dessus, et un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables, pour une utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une maladie inflammatoire.
L'invention porte aussi sur un médicament comprenant au moins un peptide tel que décrit ci-dessus pour une utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une maladie inflammatoire.
De préférence, la composition, la composition pharmaceutique ou le médicament de la présente invention comprennent une quantité thérapeutiquement efficace d'un peptide de l'invention.
Dans un mode de réalisation, le peptide, la composition, la composition pharmaceutique ou le médicament selon la présente invention est utilisé en combinaison avec au moins un autre agent thérapeutique pour traiter une maladie inflammatoire.
Des exemples d'autres agents thérapeutiques pour traiter une maladie inflammatoire incluent, mais ne sont pas limités aux, anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) tels que l'aspirine, l'ibuprofene, le diclofénac, naproxene et kétorolac, celecoxib ; aux antiinflammatoires stéroïdiens tels que la prednisone, la dexamethasone, la betamethasone, P hydrocortisone acéponate, la clobetasol propionate ; et aux anti-inflammatoires monoclonaux tels que des anti-TNF (par exemple adalimumab, golumumab).
Dans un mode particulier de réalisation, l'invention porte sur un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi -X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-
G-Κ-Α-φ (SEQ ID NO : 29), dans laquelle : -Xi est un résidu W ou A ; -X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-φ est X7-L-N-A (SEQ ID NO :30), X7-L-N-A-V-T-N-X8-A (SEQ ID NO :31), X?- L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO :32), ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ; -Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, un médicament ou une composition pharmaceutique comprenant un tel peptide, pour son utilisation dans le traitement de brûlures et de plaies, avantageusement de brûlures et de plaies infectées.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3--C-K-V-G-X4-X5-X6-G-EC-A (SEQ ID NO : 33), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, un médicament ou une composition pharmaceutique comprenant un tel peptide, pour son utilisation dans le traitement de brûlures et de plaies, avantageusement de brûlures et de plaies infectées.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 21 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K- A-X7-L-N-A (SEQ ID NO : 34), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ; -Χό est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, un médicament ou une composition pharmaceutique comprenant un tel peptide, pour son utilisation dans le traitement de brûlures et de plaies, avantageusement de brûlures et de plaies infectées.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide doté d'une activité anti- inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 26 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi^-T-L-Xa-K-K-V-G-X^Xs-Xe-G-K-A-Xv-L-N-A-V-T- N-Xs-A (SEQ ID NO : 35), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, un médicament ou une composition pharmaceutique comprenant un tel peptide, pour son utilisation dans le traitement de brûlures et de plaies, avantageusement de brûlures et de plaies infectées.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K- A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ; -Xi est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-¾ est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, un médicament ou une composition pharmaceutique comprenant un tel peptide, pour son utilisation dans le traitement de brûlures et de plaies, avantageusement de brûlures et de plaies infectées.
Selon une forme particulière de l'invention, le peptide tel décrit ci-dessus est utile pour la prévention ou le traitement d'une maladie, dans lequel la prévention ou le traitement consiste à obtenir simultanément les effets suivants : i) une action antimicrobienne, par exemple bactériostatique, bactéricide, fongistatique ou fongicide ; et
ii) une réduction du recrutement de cellules immunitaires sur un site d'inflammation.
Les peptides de l'invention, lorsqu'ils sont dotés d'une activité antimicrobienne et antiinflammatoire, présentent l'avantage de pouvoir être administrés à un patient atteint d'une maladie inflammatoire, notamment une maladie inflammatoire due ou associée à une infection, sans risquer de masquer les signes d'apparition ou d'aggravation d'une infection, contrairement aux anti-inflammatoires de type stéroïdiens ou non stéroïdiens.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-Xj-X6-G-K- A-(p (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ; -X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-¾ est un résidu A, K ou D ; -(p est X7-L-N-A (SEQ ID NO :30), XT-L-N-A-V-T-N-XS-A (SEQ ID NO :31), X?-
L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO :32), ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, pour la prévention et/ou le traitement d'une infection microbienne, notamment d'une infection due à un micro-organisme tel qu'une bactérie ou un champignon.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A (SEQ ID NO : 33), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, pour la prévention et/ou le traitement d'une infection microbienne, notamment d'une infection due à un micro-organisme tel qu'une bactérie ou un champignon. Dans un mode de réalisation, un peptide ayant une séquence de 21 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi^-T-L-Xa-K-K-V-G^-Xs-Xe-G-K-A-Xv-L-N-A (SEQ ID NO : 34), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, pour la prévention et/ou le traitement d'une infection microbienne, notamment d'une infection due à un micro-organisme tel qu'une bactérie ou un champignon.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 26 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K- A-Xv-L-N-A-V-T-N-Xs-A (SEQ ID NO : 35), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, pour la prévention et/ou le traitement d'une infection microbienne, notamment d'une infection due à un micro-organisme tel qu'une bactérie ou un champignon.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-XI-X2-T-L-¾-K-K-V-G-X4-X5-XÔ-G-K- A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xa est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, pour la prévention et/ou le traitement d'une infection microbienne, notamment d'une infection due à un micro-organisme tel qu'une bactérie ou un champignon.
Dans un mode préféré de l'invention, le résidu Xi est W dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu X2 est K dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu X3 est L dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu Xt est K ou A dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu Xs est V dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu Xe est A dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, et/ou le résidu X7 est V dans les SEQ ID NOs 1, 29, 31 et 32. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu X9 représente le résidu E et le résidu X10 représente le résidu Q dans la SEQ ID NO l.
Dans un autre mode préféré de l'invention, le résidu X9 ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu X10 ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu X9 est E et le résidu Xio est absent dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu ¾ représente le résidu E et le résidu Xio ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID N0 1.
Dans un autre mode préféré de l'invention, les résidus X9 et Xione représentent aucun acide aminé.
Dans un mode de réalisation, le peptide pour la prévention et/ou le traitement d'une infection microbienne est un peptide comprenant une séquence sélectionnée parmi le groupe comprenant ou constitué des séquences SEQ ID NOs : 2 à 8.
Dans un mode particulier de l'invention, le peptide tel que décrit ci-dessus est utile pour le traitement d'une infection bactérienne due à une bactérie appartenant au genre : Escherichia, Pseudomonas, Klebsiella, Salmonella, Yersinia, Vibrio, Staphylococcus, Bacillus, Listeria, Enterococcus, Kocuria, Serratia, Enterobacter, ou Micrococcus.
Dans un mode encore plus particulier de l'invention, le peptide tel que décrit ci-dessus est utile pour le traitement d'une infection au moins due à une bactérie sélectionnée parmi le groupe comprenant mais pas limité à, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumoniae Yersinia ruckeri, Staphylococcus epidermidis, Kocuria rhizophila, Bacillus subtilis, Clostridium difficile, Acinetobacter baumanii, Pneumococci, Serratia marcescens, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, et Yersenia pestis.
Le peptide tel que décrit ci-dessus est également utile pour le traitement d'une infection fongique due par exemple à un champignon appartenant au genre Candida, Tricophyton, Microsporum, Epidermophyton, ou Aspergillus.
Dans un mode particulier de l'invention, le peptide tel que décrit ci-dessus est utile pour le traitement d'une infection au moins due à un champignon sélectionné parmi les groupes comprenant mais pas limité à Candida albicans, Candida glabrata ou Pityriasis versicolor. L'invention concerne en outre un médicament ou une composition pharmaceutique comprenant un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A-9 (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ; -X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-(p est X7-L-N-A (SEQ ID NO : 30), XT-L-N-A-V-T-N-XS-A (SEQ ID NO : 31), X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 32), ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, pour la prévention et/ou le traitement d'une infection microbienne, notamment d'une infection due à un micro-organisme tel qu'une bactérie ou un champignon.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un médicament ou une composition pharmaceutique comprenant un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A (SEQ ID NO : 33), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A
-Xe est un résidu A, K ou D ; dérivés fonctionnels et sels phannaceutiquement acceptables dudit peptide, pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une infection microbienne, notamment d'une infection due à un micro-organisme tel qu'une bactérie ou un champignon.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un médicament ou une composition pharmaceutique comprenant un peptide ayant une séquence de 21 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A-X7-L-N-A (SEQ ID NO : 34), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
dérivés fonctionnels et sels phannaceutiquement acceptables dudit peptide, un médicament ou une composition pharmaceutique comprenant un tel peptide, pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une infection microbienne, notamment d'une infection due à un micro-organisme tel qu'une bactérie ou un champignon.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un médicament ou une composition pharmaceutique comprenant un peptide ayant une séquence de 26 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-Xa-T-L-Xa-K-K-V-G-X^Xs-Xe-G-K-A-Xv-L-N-A-V-T- N-Xs-A (SEQ ID NO : 35), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ; -Χό est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, un médicament ou une composition pharmaceutique comprenant un tel peptide, pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une infection microbienne, notamment d'une infection due à un micro-organisme tel qu'une bactérie ou un champignon.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un médicament ou une composition pharmaceutique comprenant un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi^-T-L-Xj-K-K-V-G-X^-Xs-Xe-G-K-A-Xv-L-N-A-V-T- N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-¾ est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une infection microbienne, notamment d'une infection due à un micro-organisme tel qu'une bactérie ou un champignon.
En outre, l'invention porte sur un peptide doté d'une activité angiogénique ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-
X-t-Xs-Xe-G-K-A-Cp (SEQ ID NO : 29), dans laquelle : -Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-φ est X7-L-N-A (SEQ ID NO :30), Xv-L-N-A-V-T-N-Xs-A (SEQ ID NO :31), X?-
L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO :32), ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xe est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pnarrnaceutiquement acceptables dudit peptide, une composition pharmaceutique ou un médicament comprenant au moins un tel peptide, pour la prévention et/ou le traitement d'une maladie liée à l'angiogenèse.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A (SEQ ID NO : 33), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, EC ou D ; dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, une composition pharmaceutique ou un médicament comprenant au moins un tel peptide, pour la prévention et/ou le traitement d'une maladie liée à l'angiogenèse.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 21 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K- A-X7-L-N-A (SEQ ID NO : 34), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Χβ est un résidu A, EC ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, une composition pharmaceutique ou un médicament comprenant au moins un tel peptide, pour la prévention et/ou le traitement d'une maladie liée à l'angiogenèse.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 26 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-XI-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-XÔ-G-K- A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A (SEQ ID NO : 35), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ; -Xs est un résidu M ou A ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, une composition pharmaceutique ou un médicament comprenant au moins un tel peptide, pour la prévention et/ou le traitement d'une maladie liée à l'angiogenèse.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K- A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, une composition pharmaceutique ou un médicament comprenant au moins un tel peptide, pour la prévention et/ou le traitement d'une maladie liée à l'angiogenèse.
La formation de nouveaux vaisseaux sanguins contribue à de nombreux troubles malins, ischémiques, inflammatoires, infectieux et immunitaires. Dans un mode préféré, l'invention porte sur le peptide tel que décrit ci-dessus pour une utilisation dans la prévention ou le traitement d'une maladie liée à l'angiogenèse, de préférence un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant SEQ ID NO : 1, de préférence comprenant une séquence sélectionnée parmi le groupe comprenant ou constitué des séquences SEQ ID Nos : 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8. L'angiogenèse est un processus complexe par lequel de nouveaux vaisseaux sont formés, typiquement à partir du système vasculaire préexistant. L'angiogenèse joue un rôle essentiel dans certains processus physiologiques tels que le processus de cicatrisation des plaies. Outre les processus de cicatrisation, de nombreuses pathologies ont été décrites comme ayant une composante ou un stade lié au phénomène d'angiogenèse.
Le terme « maladie liée à l'angiogenèse » tel qu'utilisé dans ce document inclut les cancers, les troubles ophtalmologiques de type rétinopathies (notamment les rétinopathies et la dégénérescence maculaire), l'athérosclérose, l'arthrose, la polyarthrite rhumatoïde, le psoriasis, ou les pathologies liées à une cicatrisation retardée.
Dans un mode particulier, l'invention porte sur un peptide, une composition pharmaceutique ou un médicament tel que décrit ci-dessus pour le traitement des cancers, notamment pour inhiber la croissance tumorale et/ou la formation de métastases chez les patients atteints de cancer. En effet, il est établi que l'angiogenèse est non seulement essentielle à la croissance d'une tumeur mais est aussi impliquée dans la progression du stade bénin au stade du cancer invasif. La possibilité d'inhiber l'angiogenèse permet de réduire la croissance tumorale et la progression métastatique des cancers. Des exemples de cancers incluent, mais ne sont pas limités, aux cancers du côlon ; du poumon ; du pancréas ; du sein ; du rein tels que les carcinomes des cellules rénales ; de la peau tels que le carcinome basocellulaire ou mélanome ; et glioblastome. Avantageusement, le peptide, la composition pharmaceutique ou le médicament de l'invention sont utilisés pour traiter les tumeurs malignes qui induisent la formation de nouveaux vaisseaux sanguins.
Le peptide, la composition pharmaceutique ou le médicament selon l'invention peuvent être administrés par injection, telle que par exemple une injection intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée, ou directe dans le tissu.
Dans un mode de réalisation, les peptides de l'invention, quel que soit le mode de réalisation, sont sous une forme acceptable pour une administration topique, systémique, orale, sous- cutanée, intra-vitréenne, intradermique, transdermique, intrapéritonéale, intramusculaire ou par inhalation.
La composition pharmaceutique ou le médicament selon l'invention peut être sous forme de comprimés, capsules, gélules, granulats, suspensions, émulsions, solutions, gels, gouttes, pâtes, onguents, crèmes, emplâtres, injectables, implants, patches.
La composition pharmaceutique ou le médicament selon l'invention peut comprendre un ou plusieurs excipients usuels pharmaceutiquement acceptables.
Dans un mode de réalisation, la composition, la composition pharmaceutique ou le médicament de la présente invention comprend un ou des véhicules pharmaceutiquement acceptables pour une formulation adaptée à une administration topique. Les excipients pharmaceutiquement acceptables peuvent notamment être tout excipient parmi ceux connus de l'homme de l'art en vue d'obtenir une composition pour l'application topique sous forme d'un lait, d'une crème, d'un baume, d'une huile, d'une lotion, d'un gel, d'un gel moussant, d'une pommade, ou d'un spray. Dans un mode particulier, les excipients sont choisis parmi le groupe constitué par une huile, une graisse, une émulsion, un gel, une pommade, un excipient à base de nanoparticules ou de liposomes. Les huiles peuvent notamment être choisies parmi les huiles de silicone, les huiles minérales (paraffine, vaseline, etc.) ou les huiles et graisses végétales.
La composition pharmaceutique ou le médicament selon l'invention peut être préparé sous la forme d'une émulsion eau dans huile (E/H) ou huile dans eau (H/E), d'une émulsion multiple comme par exemple, une émulsion eau dans huile dans eau (E/H E) ou une émulsion huile dans eau dans huile (H/E/H), d'une micro-émulsion ou encore sous la forme d'une hydrodispersion ou une lipodispersion, un gel ou un aérosol.
Dans un autre mode de réalisation, la composition, la composition pharmaceutique ou le médicament selon l'invention comprend un ou des véhicules pharmaceutiquement acceptables pour une formulation adaptée à une administration orale. Des exemples de formes adaptées à une administration orale incluent, mais ne sont pas limités aux comprimés (dont les comprimés à libération prolongée), gélules, poudres, granulés, pilules (dont les pilules enrobées de sucre), capsules (dont les capsules de gélatine souple), suspensions orales, solutions buvables, et autres formes similaires.
Dans un mode de réalisation, la composition, la composition pharmaceutique ou le médicament de la présente invention comprend un ou des véhicules pharmaceutiquement acceptables pour une formulation susceptible d'être injectée. Des exemples de formes adaptées à une administration par injection incluent, mais ne sont pas limités aux solutions aqueuses stériles, dispersions, émulsions, suspensions, formes solides appropriées pour la préparation de solutions ou suspensions par addition d'un liquide avant utilisation telles que, par exemple, des poudres.
La composition pharmaceutique ou le médicament selon l'invention peut également contenir des additifs et aides à la formulation, tels que des émulsionnants, des épaississants, des gélifiants, des fixateurs d'eau, des agents d'étalement, des stabilisants, des colorants, des parfums et des conservateurs.
Les doses sont ajustées en fonction de l'effet souhaité et de la pathologie visée.
Dans un mode de réalisation, la quantité thérapeutiquement efficace va d'environ 1 à 10000 mg/mL de peptide, composition, composition pharmaceutique ou médicament de rinvention, de préférence d'environ 5 à environ 5000 mg/mL, de préférence d'environ 10 à environ 2000 mg/mL, de préférence d'environ 20 à environ 100 mg/mL de peptide, composition, composition pharmaceutique ou médicament de l'invention.
Dans un mode de réalisation, la quantité thérapeutiquement efficace va d'environ 1 à 10000 mg/g de peptide, composition, composition pharmaceutique ou médicament de rinvention, de préférence d'environ 5 à environ 5000 mg/g, de préférence d'environ 10 à environ 2000 mg/g, de préférence d'environ 20 à environ 100 mg/g de peptide, composition, composition pharmaceutique ou médicament de l'invention.
Dans un mode de réalisation, la quantité thérapeutiquement efficace va d'environ 0.001 à 500 μΜ de peptide, composition, composition pharmaceutique ou médicament de rinvention, de préférence d'environ 0.01 à environ 250 μΜ, de préférence d'environ 0.1 à environ 200 μΜ, de préférence d'environ 0.5 à environ 150 μΜ, composition, composition pharmaceutique ou médicament de l'invention.
Dans un mode de réalisation, la quantité thérapeutiquement efficace va d'environ 1 à 1000 μΜ de peptide, composition, composition pharmaceutique ou médicament de rinvention, de préférence d'environ 5 à environ 500 uM, de préférence d'environ 10 à environ 250 μΜ, de préférence d'environ 10 à environ 150 μΜ, composition, composition pharmaceutique ou médicament de l'invention.
Dans un mode de réalisation, la quantité thérapeutiquement efficace va d'environ 1 à 100 μΜ de peptide, composition, composition pharmaceutique ou médicament de l'invention, de préférence d'environ 5 à environ 75 μΜ, de préférence d'environ 10 à environ 50 μΜ.
Dans un mode de réalisation, la quantité thérapeutiquement efficace va d'environ 10 à 1000 μΜ de peptide, composition, composition pharmaceutique ou médicament de invention, de préférence d'environ 50 à environ 750 μΜ, de préférence d'environ 100 à environ 500 μ .
Il est entendu que l'usage journalier total de peptide, de la composition, de la composition pharmaceutique ou du médicament de l'invention sera ajusté par le médecin traitant dans le cadre de son avis médical. La dose thérapeutiquement efficace spécifique à chaque patient dépendra d'une variété de facteurs incluant le trouble traité et sa sévérité ; l'activité du composé utilisé ; la composition spécifique utilisée ; l'âge, le poids, l'état de santé général, le sexe et le régime alimentaire du patient, la durée et le mode d'administration ; la durée du traitement ; les médicaments utilisés en combinaison ou coïncidant avec le composé utilisé, et d'autres facteurs similaires connus dans le domaine médical. Par exemple, il est courant dans ce domaine de commencer avec des doses de composés inférieures aux doses recommandées pour atteindre l'effet thérapeutique désiré et de graduellement augmenter le dosage jusqu'à ce que l'effet soit atteint. Cependant, le dosage journalier des composés peut varier sur une vaste plage allant d'environ 1 à environ 10000 mg par adulte et par jour, de préférence d'environ 5 à environ 5000, de préférence d'environ 10 à environ 2000 mg, plus préférentiellement d'environ 20 à environ 100 mg par adulte et par jour. De préférence, la composition comprend 1, 10, 20, 50, 100, 250, 500, 1000 et 2000 mg de l'ingrédient actif pour l'ajustement symptomatique du dosage à administrer au patient à traiter. Un médicament contient typiquement d'environ 1 à environ 10000 mg d'ingrédient actif, de préférence de 5 à 5000, de préférence de 10 à 2000 mg d'ingrédient actif. Une quantité efficace du médicament est ordinairement fournie à une dose allant d'environ 0.01 mg/kg à environ 100 mg kg de poids corporel par jour, de préférence d'environ 0.05 mg kg à environ 40 mg/kg, de préférence d'environ 0.1 mg/kg à 20 mg/kg de poids corporel par jour, plus préférentiellement d'environ 0.2 à environ 1 mg/kg de poids corporel par jour.
Dans un mode de réalisation, la dose journalière du peptide de l'invention, de la composition, de la composition pharmaceutique ou du médicament de la présente invention est ajustée en fonction des potentiels troubles au niveau des organes et systèmes, comme par exemple les troubles rénaux, hépatiques et/ou hématologiques du sujet.
Dans un mode de réalisation, le peptide, la composition, la composition pharmaceutique ou le médicament de la présente invention est administré au sujet au moins une fois par jour. Par exemple, le peptide, la composition, la composition pharmaceutique ou le médicament de l'invention peut être administré une fois par jour, deux fois ou trois fois par jour. De préférence, le peptide, la composition, la composition pharmaceutique ou le médicament de l'invention est administré une fois par jour. Dans un autre mode de réalisation, le peptide, la composition, la composition pharmaceutique ou le médicament de la présente invention est administré au sujet au moins une fois par semaine. Par exemple, le peptide, la composition, la composition pharmaceutique ou le médicament de l'invention peut être administré une fois par semaine, deux fois, trois fois, quatre fois ou jusqu'à sept fois par semaine.
L'invention porte également sur une méthode de prévention et/ou de traitement d'une maladie inflammatoire chez un sujet qui en a besoin, comprenant l'administration d'une dose thérapeutique efficace d'au moins un peptide, médicament ou composition pharmaceutique selon l'invention.
Dans un mode de réalisation, la méthode de l'invention pour traiter une maladie inflammatoire comprenant l'administration au sujet d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un peptide de l'invention comme décrit ci-dessus, de préférence un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence SEQ ID NO : 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8.
Dans un mode de réalisation, le peptide, la composition, la composition pharmaceutique ou le médicament de l'invention est administré au sujet.
Dans un mode de réalisation, le peptide, le médicament ou la composition pharmaceutique selon l'invention est administré à un sujet souffrant ou susceptible de souffrir d'une maladie inflammatoire. Dans un mode de réalisation, le sujet est un sujet à risque pour l'apparition d'une maladie inflammatoire.
Dans un mode de réalisation, le sujet n'a pas encore été traité avec un autre traitement pour la maladie inflammatoire selon l'invention. Dans un autre mode de réalisation, le sujet a déjà été traité avec un autre traitement pour la maladie inflammatoire selon l'invention. L'invention porte en outre sur une méthode de prévention et/ou de traitement d'une infection microbienne comprenant l'administration d'une dose thérapeutique efficace d'au moins un peptide, médicament ou composition pharmaceutique selon l'invention.
Dans un mode de réalisation, la méthode de l'invention pour traiter une infection microbienne comprenant l'administration au sujet d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un peptide de l'invention comme décrit ci-dessus, de préférence un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence la séquence SEQ ID NO : 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8.
Dans un mode de réalisation, l'infection microbienne est une infection bactérienne ou fongique telle que décrite plus haut.
Dans un mode de réalisation, le peptide, le médicament ou la composition pharmaceutique selon l'invention est administré à un sujet souffrant ou susceptible de souffrir d'une infection microbienne. Dans un mode de réalisation, le sujet est un sujet à risque pour l'apparition d'une infection microbienne.
Dans un mode de réalisation, le sujet n'a pas encore été traité avec un autre traitement pour l'infection microbienne selon l'invention. Dans un autre mode de réalisation, le sujet a déjà été traité avec un autre traitement pour l'infection microbienne selon l'invention.
L'invention porte en outre sur une méthode de prévention et/ou de traitement d'une maladie liée à l'angiogenèse comprenant l'administration d'une dose thérapeutique efficace d'au moins un peptide, médicament ou composition pharmaceutique selon l'invention.
Dans un mode de réalisation, la méthode de l'invention pour traiter une maladie liée à l'angiogenèse comprenant l'administration au sujet d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un peptide de l'invention comme décrit ci-dessus, de préférence un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence la séquence SEQ ID NO : 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8.
Dans un mode de réalisation, le peptide, le médicament ou la composition pharmaceutique selon l'invention est administré à un sujet souffrant ou susceptible de souffrir d'une maladie liée à l'angiogenèse. Dans un mode de réalisation, le sujet est un sujet à risque pour l'apparition d'une maladie liée à l'angiogenèse. Dans un mode de réalisation, le sujet n'a pas encore été traité avec un autre traitement pour la maladie liée à Pangiogenèse selon l'invention. Dans un autre mode de réalisation, le sujet a déjà été traité avec un autre traitement pour la maladie liée à Pangiogenèse selon l'invention.
Un autre objet de l'invention porte sur l'utilisation d'un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-
Α-φ (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-¾ est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-φ est Χτ-L-N-A, XT-L-N-A-V-T-N-XS-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9- X10, ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, en tant qu'agent antifongique ou antibactérien.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A (SEQ ID NO : 30), dans laquelle : -Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, en tant qu'agent antifongique ou antibactérien.
Dans un mode de réalisation, un peptide ayant une séquence de 21 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K-A-X7-L-N-A (SEQ ID NO : 31), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-Χό est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, en tant qu'agent antifongique ou antibactérien.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 26 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-X1-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-X6-G-K- A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A (SEQ ID NO : 32), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ; -X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, en tant qu'agent antifongique ou antibactérien.
Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un peptide ayant une séquence de 29 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-XI-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-X5-XÔ-G-K- A-X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 1), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-¾ est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, en tant qu'agent antifongique ou antibactérien. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu Xi est W dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu ¾ est K dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu X3 est L dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu X* est K ou A dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu Xs est un résidu V dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, le résidu Xe est A dans les SEQ ID NOs 1 et 29 à 32, et/ou le résidu X7 est V dans les SEQ ID NOs 1 , 29, 31 et 32.Dans un mode préféré de l'invention, le résidu X9 représente le résidu E et le résidu X10 représente le résidu Q dans la SEQ ID NO 1.
Dans un autre mode préféré de l'invention, le résidu X9 ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu X10 ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu X9 est E et le résidu X10 est absent dans la SEQ ID NO 1. Dans un mode préféré de l'invention, le résidu X9 représente le résidu E et le résidu X10 ne représente aucun acide aminé dans la SEQ ID NO l.
Dans un autre mode préféré de l'invention, les résidus X9 et Xione représentent aucun acide aminé.
Dans un mode de réalisation, le peptide tel que décrit ci-dessus est utilisé pour la préparation d'une formulation antifongique ou antibactérienne.
Dans un mode de réalisation, le peptide tel que décrit ci-dessus est notamment utilisé pour désinfecter des surfaces (par exemple murs, portes, matériel médical), un liquide (par exemple de l'eau) ou un gaz (par exemple un gaz anesthésiant).
La présente invention concerne également un kit comprenant un peptide selon l'invention, un acide nucléique, un vecteur, une composition, une composition pharmaceutique ou un médicament comme décrit ci-dessus.
Selon un mode de réalisation, le kit comprend également un appareil servant à administrer le peptide, l'acide nucléique, le vecteur, la composition, la composition pharmaceutique ou le médicament à un sujet.
Selon un mode de réalisation, le kit comprend en plus les instructions pour Γ administration du peptide, de l'acide nucléique, du vecteur, de la composition, de la composition pharmaceutique ou du médicament audit sujet. Dans un mode de réalisation, le kit comprend un agent thérapeutique additionnel. Selon un mode de réalisation, l'agent thérapeutique additionnel est un autre agent pour le traitement de la maladie inflammatoire selon l'invention. Selon un autre mode de réalisation, l'agent thérapeutique additionnel est un autre agent pour le traitement de l'infection microbienne selon l'invention.
BRÈVE DESCRIPTION DES FIGURES
La Figure 1 présente la survie des polynucléaires neutrophiles (A), lymphocytes T (B), monocytes (C) et cellules NK (D) murins et humains, en présence de concentrations croissantes de DA2N et DA2NEQ, en pourcentage par rapport au nombre de cellules vivantes en absence de peptide.
La Figure 2 présente la survie de cellules non immunitaires murines et humaines (cellules épithéliales) en présence de concentrations croissantes de peptide DA2N et DA2NEQ, en pourcentage par rapport au nombre de cellules vivantes en absence de peptide.
La Figure 3 présente l'activité hémolytique de DA2N et de DA2NEQ à 10 μΜ et 50 μΜ, sur des érythrocytes humains, en pourcentage par rapport au contrôle positif consistant en du Triton XI 00 (100%).
La Figure 4 présente le nombre de cellules immunitaires dans la cavité péritonéale 36 heures après 3 injections intra-péritonéales (i.p) régulières du peptide DA2N (en gris foncé) ou DA2NEQ (en gris clair) dans un modèle murin de péritonite induite par injection i.p de thioglycolate 3%. Le témoin négatif par rapport au peptide consiste en l'injection de NaCl 0.15M à la place de la solution contenant le peptide (en noir). Le contrôle de l'induction de la péritonite consiste en des souris non induites pour la péritonite (en blanc) ; injection i.p de NaCl.
La Figure 5 présente le protocole mis en œuvre pour tester l'efficacité des peptides dans un modèle d'eczéma de contact.
La Figure 6 présente, la variation relative de l'épaisseur de l'oreille dans un modèle murin d'eczéma de contact induit par du DNCB1%, après administration de DA2N (A) ou de DA2NEQ (B). Le contrôle de l'induction de l'eczéma de contact correspond à des souris non traitées avec le DNCB1% (ligne avec symbole triangle) et le contrôle négatif correspond à des souris traitées avec le DNCB1% sans peptide (ligne avec symbole carré).
La Figure 7 présente, dans un modèle murin d'eczéma de contact, l'effet de l'administration de DA2N sur le nombre de cellules immunitaires (A) au niveau de l'oreille, (B) dans la circulation générale et (C) dans la moelle épinière, après induction d'un eczéma de contact par application de DNCB1% (en gris clair). Le contrôle de l'induction de l'eczéma de contact correspond à des souris non traitées avec le DNCB1% (en blanc) et le contrôle négatif correspond à des souris traitées avec le DNCB1% sans peptide (en gris foncé).
La Figure 8 montre des images représentatives de l'effet d'une application topique des peptides DA2N et DA2NEQ chez des souris Balb/c sur des lésions cutanées psoriatiques. Les images de la colonne gauche représentent les résultats sur de la peau psoriatique (peau traitée par Imiquimod pendant 6 jours) : témoin positif sans application de peptides (A), application du peptide DA2N (B) et application du peptide DA2NEQ (C). Les images de la colonne droitereprésentent les résultats sur de la peau saine (sans traitement par Imiquimod) : témoin négatif sans application de peptides (A), application du peptide DA2N (B) et application du peptide DA2NEQ (C).
La Figure 9 représente un agrandissement au niveau des régions traitées représentatif des lésions de la peau présentées à la Figure 8.
La Figure 10 montre des images représentatives de l'effet d'une application topique des peptides DA2N et DA2NEQ sur l'angiogenèse classiquement observée sur des souris balb/c au niveau des lésions psoriatiques. Les images de la colonne gauche représentent les résultats sur de la peau psoriatique (peau traitée par Imiquimod pendant 6 jours) : témoin positif sans application de peptides (A), application du peptide DA2N (B) et application du peptide DA2NEQ (C). Les images de la colonne droitereprésentent les résultats sur de la peau saine (sans traitement par Imiquimod) : témoin négatif sans application de peptides (A), application du peptide DA2N (B) et application du peptide DA2NEQ (C).
La Figure 11 présente des images représentatives d'anneaux aortiques et de la formation de néo-vaisseaux après 3 jours de traitement avec du PBS (A), DA2N (B), DA2NEQ (C).
La Figure 12 présente l'inhibition de la formation de néo-vaisseaux au cours du temps sur des aortes de souris après ajout de DA2N et DA2NEQ à la concentration de 12.5 μΜ, en pourcentage par rapport au diamètre initial des anneaux aortiques.
La Figure 13 présente la survie des cellules de moelle osseuse de souris après 2 heures d'incubation en présence des peptides DA2N, DA2NE, N(D), DA2Na, K12A à une concentration de 12.5 μΜ ou 25 μΜ, en pourcentage par rapport au nombre de cellules vivantes initiales. Les témoins positif et négatif consistent, respectivement, en l'incubation des cellules en présence de DMSO 30% ou de PBS.
La Figure 14 présente la survie de cellules non immunitaires murines (cellules épithéliales) en présence de concentrations croissantes de DA2N, K12A et DA2Na. DA2N, DA2Na et K12A induisent la mort de 50% des cellules immunitaires murines issues de moelle osseuse (CL50) à une concentration de 5 μΜ, 3.75 μΜ et 6.5 μΜ, respectivement.
La Figure 15 présente l'activité hémolytique des peptides DA2Na et K12A à 10 μΜ et 50 μΜ sur des érythrocytes de souris, en pourcentage par rapport au contrôle positif, consistant en du Triton X100 (100%).
EXEMPLES
Synthèse peptidique
Les peptides utilisés dans les exemples ont été synthétisés en stratégie FMOC/tBu sur support solide par un synthétiseur automatique Activo Pli (Activotec). La purification est réalisée par HPLC (Waters, colonne Cl 8) et l'identité des peptides est vérifiée par spectrométrie MALDI-TOF (MS Voyager Applied Biosystems). Du fait de la présence d'un résidu tryptophane dans la séquence, les concentrations des solutions sont déterminées par spectroscopie UV (Nanodrop, Labtech. Com).
Exemple 1 : Etude in vitro de l'activité immunosuppressive de DA2N et DA2NEQ
Les effets cytotoxiques de DA2N (SEQ ID NO : 4) et DA2NEQ (SEQ ID NO : 2) ont été évalués sur des cellules immunitaires murines et humaines. Afin de montrer que les effets cytotoxiques sont spécifiques aux cellules immunitaires, les effets cytotoxiques ont également été évalués sur des cellules non-immunitaires.
1.1 Matériels et méthodes
Les cellules immunitaires de souris sont issues de la moelle osseuse de souris C57BL6. Les cellules immunitaires humaines ont été purifiées à partir de sang total de donneurs sains (banque du sang, IMSS, Cuernavaca, Mexique).
Les cellules non immunitaires suivantes ont été prélevées après sacrifice de souris C57BL6 ou dans le cadre de chirurgie : cellules épithéliales, adipocytes, hépatocytes.
Les peptides sont incubés à 37°C, 5% de C02 en présence de 500 000 cellules immunitaires ou non immunitaires dans du milieu du RPMI à des concentrations variées et à des temps variés. Des cellules sans peptides servent de témoin négatif et des cellules incubées 5 min à 50°C ou en présence de DMSO (30%) servent de témoin positif. Après incubation, les cellules sont lavées puis marquées avec de l'iodure de propidium afin de mesurer la viabilité cellulaire. La viabilité cellulaire est analysée par comptage ou en cytométrie de flux en présence d'anticorps couplés à des fluorochromes correspondant à des marqueurs caractéristiques de chaque population cellulaire. La CLso est alors calculée comme étant la concentration des peptides DA2N et DA2NEQ induisant la mort de 50% de chaque une des populations des cellules immunitaires.
Le traitement des données de cytométrie est réalisé avec le logiciel FlowJo.
1.2 Résultats
La survie des cellules immunitaires murines et humaines en présence de concentrations croissantes de DA2N et DA2NEQ est présentée en Figure 1.
La survie de cellules non immunitaires murines et humaines en présence de concentrations croissantes de DA2N et DA2NEQ est présentée en Figure 2.
En comparant les résultats présentés dans la Figure 1 et dans la Figure 2, les résultats obtenus démontrent que DA2N et DA2NEQ, à des doses de l'ordre du micromolaire, induisent la mort des cellules immunitaires mais pas des cellules non-immunitaires.
Le Tableau 1 présente les concentrations des peptides DA2N et DA2NEQ induisant la mort de 50% des cellules immunitaires murines et humaines (CLso).
Tableau 1 : CLso sur les cellules immunitaires.
Ainsi, ces résultats montrent que les peptides de l'invention sont dotés d'une activité immunosuppressive.
Exemple 2 : Etude in vitro de l'activité antimicrobienne de DA2N et DA2NEQ
2.1 Matériel et méthodes
Mesure de l'activité antibactérienne
Les souches suivantes ont été utilisées pour les tests antibactériens :
Escherichia coli (ATCC 8739, ATCC ML35p et P7 BLSE), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027 et ATCC 27853), Klebsiella oxytoca (CIP 7932), Klebsiella pneumoniae (CIP 52.211), Sahnonella enterica (CIP 8297), Yersinia ruckeri (ATCC 29473), Vibrio parahemolyticus (IFREMER 01 01/252), Staphylococcus aureus (ATCC 6538, ST 1065 et MRSA), Staphylococcus epidermidis (BM 3302), Listeria monocytogenes (SOR 100), Enterococcus faecalis (CIP A186, CIP 103015)), Kocuria rhizophila (ATCC 9341), Lactococcus garviae (ATCC 43921), Bacillus subtilis (CIP 52.65).
Pour chaque souche, une pré-culture de 5 ml en milieu LB est préparée par ensemencement d'une colonie de la souche bactérienne d'intérêt. La pré-culture est incubée à 37°C sous agitation pendant la nuit. La culture est repiquée (30 μί) dans 5 mL. La concentration de la culture est évaluée par mesure de la densité optique à 620 nm. La concentration est ajustée par dilution de façon à obtenir une suspension à une DO de 0.05 à 620 nm. Mesure de la Concentration Minimale inhibitrice (CMI)
La CMI est déterminée par un test d'inhibition de croissance en milieu liquide. La CMI est dé inie comme étant la plus faible concentration de peptide capable d'inhiber la croissance de la souche bactérienne testée, après une incubation de 18h à 37°C. Le test a été effectué dans une plaque de microtitration stérile contenant 96 puits. Une gamme de concentrations croissantes de chaque peptide (0.2 à 100 μΜ) a été préalablement préparée dans de l'eau MilliQ stérile. Dans chaque puits, 10 de peptide ont été incubés avec 90 uL de suspension bactérienne (107 cfu/mL) dans du milieu LB sans extrait de levure. La microplaque a été incubée à 37°C pendant 18h. La croissance bactérienne a été évaluée par mesure de la DO à 620 nm à l'aide d'un lecteur de plaques.
Le témoin négatif d'inhibition de croissance a été obtenu en remplaçant la solution contenant le peptide par de l'eau MilliQ stérile. Le témoin positif permettant d'inhiber totalement la croissance des souches bactériennes a été obtenu en remplaçant la solution contenant le peptide par 10 de formaldéhyde.
Les résultats sont interprétés en calculant le pourcentage de croissance bactérienne dans chaque puits selon la formule :
%Croissance = (DO puits - DO du To)/(DO du Tioo - DO du To)*100 où
- DO du Tioo = DO du témoin de croissance (suspension bactérienne sans échantillon à tester, 100% de croissance),
- DO du To = DO du témoin de stérilité (milieu de culture + bactérie + 10 μϊ-, formaldéhyde, 0% de croissance) et
- DO puits = DO du puits dont on souhaite calculer le pourcentage de croissance (suspension bactérienne + peptide à tester). Mesure de la Concentration Minimale Bactéricide (CMB)
La CMB est définie comme étant la concentration minimale de peptide ne laissant pas de bactéries survivantes de l'inoculum après incubation à 37°C pendant 24 heures. Ce test consiste en l'étalement du contenu des puits où le peptide a inhibé la croissance bactérienne sur une boite de Pétri (LB agar), puis incubation pendant 24h à 37°C. L'inhibition est dite bactériostatique lorsque le peptide inhibe la croissance bactérienne mais qu'il ne lyse pas les bactéries et elle est dite bactériolytique lorsque le peptide a complètement lysé les bactéries et empêche donc la repousse des bactéries dans le milieu de culture après le repiquage.
2.2 Résultats
L'activité antimicrobienne de DA2N et DA2NEQ a été évaluée sur différentes souches bactériennes de référence Gram-positif et Gram-négatif. Les résultats sont présentés dans le Tableau 2 :
Tableau 2 : Activités antimicrobiennes de DA2N et DA2NEQ.
Ces résultats démontrent que DA2N et DA2NEQ présentent une activité antimicrobienne sur des bactéries Gram-positives et Gram-négatives. Ànoter que l'activité antimicrobienne de DA2N est généralement plus importante que celle de DA2NEQ, notamment envers Escherichia coli P7 (BLSE). Ce résultat est particulièrement intéressant étant donné que cette souche est résistante à la plupart des β-lactamases. Exemple 3 : Etude in vitro de l'activité hémolytique de DA2N et DA2NEQ
3.1 Matériel et méthodes
Mesure de l'activité hémolytique
L'activité hémolytique des peptides antimicrobiens a été mise en évidence en utilisant des globules rouges murins ou humains de donneurs adultes sains. Du sang de souris ou de donneur est lavé trois fois dans 10 volumes de PBS à 4°C par centrifugation à 800 g pendant 10 minutes. Le culot sanguin est finalement dilué à 4% (v/v) dans du tampon PBS. Le test a été effectué de la manière suivante : soit 10 μΜ, soit 50 μΜ de peptide ont été ajoutés à 100 μΐ^ de suspension de globules rouges.
Après lh d'incubation à 37°C puis centrifugation (800g, 15 min), l'absorbance du surnageant a été mesurée à 550 nm.
Le témoin négatif pour ce test (0% d'hémolyse) contient 5 μΐ, de tampon PBS à la place de la solution contenant le peptide et le témoin positif (100% d'hémolyse) contient 5 μί, de Triton XI 00 1% à la place de la solution contenant le peptide.
Mesure de la CLso
Les érythrocytes de souris sont issus de la moelle osseuse de souris C57BL6.
Les érythrocytes humains ont été purifiés à partir de sang total de donneurs sains (banque du sang, IMSS, Cuernavaca, Mexique).
Les peptides sont incubés à 37°C, 5% de CO2 en présence de 500 000 érythrocytes dans du milieu du RPMI à des concentrations variées et à des temps variés. Des cellules sans peptides servent de témoin négatif et des cellules incubées 5 min à 50°C ou en présence de DMSO (30%) servent de témoin positif. La CLso est alors calculée comme étant la concentration des peptides DA2N et DA2NEQ induisant la mort de 50% des érythrocytes.
3.2 Résultats
La Figure 3 montre le pourcentage d'hémolyse d' érythrocytes humains par les peptides DA2N et DA2NEQ, par rapport au témoin positif en référence à 100%. Les résultats montrent que les peptides DA2N et DA2NEQ n'entraînent pas l'hémolyse des érythrocytes humains (Figure 3) ou murins (résultats non montrés). Le Tableau 3 présente les concentrations des peptides DA2N et DA2NEQ induisant la mort de 50% des érythrocytes humains et murins (CLso).
Tableau 3 : CLso sur les érythrocytes.
Ainsi, ces résultats montrent que les peptides de l'invention ont une activité hémolytique négligeable.
Exemple 4 : Etude in vivo de l'activité anti-inflammatoire de DA2N et DA2NEQ
4.1 Matériel et méthodes
L'activité anti-inflammatoire de DA2N et DA2NEQ a été évaluée dans un modèle murin de péritonite non infectieuse. Une péritonite non infectieuse est induite par injection intra- péritonéale de thioglycolate 3%. Six heures après l'induction de la péritonite, trois injections intra-péritonéales de peptide (90 μg/injection/souris) ont été effectuées à intervalle régulier (toutes les 6h). A 36h, les souris sont sacrifiées afin d'observer le recrutement des cellules immunitaires dans la cavité péritonéale. Les cellules obtenues à partir d'un lavage de la cavité péritonéale sont lavées puis marquées avec de l'iodure de propidium afin de mesurer la viabilité cellulaire ainsi qu'en présence d'anticorps couplés à des fluorochromes correspondant à des marqueurs caractéristiques de chaque population cellulaire. L'évaluation du potentiel anti-inflammatoire repose sur la mesure du nombre de neutrophiles, monocytes et macrophages recrutés dans la cavité péritonéale murine. Le témoin négatif par rapport au peptide pour ce test consiste en 50 μί de NaCl 0.15M par injection à la place de la solution contenant le peptide. Le contrôle de l'induction de péritonite consiste en des souris non induites pour la péritonite. Le traitement des données est réalisé avec le logiciel FlowJo.
4.2 Résultats
La Figure 4 présente le nombre de cellules immunitaires dans la cavité péritonéale dans le modèle murin de péritonite à thioglycolate, et donc l'effet de DA2N et DA2NEQ dans un modèle de maladie inflammatoire. Les résultats montrent que, in vivo, les peptides entraînent une diminution du recrutement de neutrophiles et monocytes/macrophages dans la cavité péritonéale après induction d'une péritonite. Les peptides de l'invention présentent donc une activité anti-inflammatoire.
Au vu des résultats in vitro, les inventeurs pensent, sans vouloir être lié à une quelconque théorie, que la diminution du recrutement observé est due à la mort des cellules immunitaires sous l'effet des peptides DA2N et DA2NEQ.
Exemple 5 : Etude in vivo de l'activité de DA2N et DA2NEQ dans un modèle d'eczéma de contact
5.1 Matériel et méthodes
L'étude est menée pour déterminer l'activité des peptides DA2N (SEQ K> NO : 4) et DA2NEQ (SEQ ID NO : 2) vis à vis de la sensibilisation de contact. Des souris sont sensibilisées avec du DNCB 1% pendant 5 jours. Après cette phase de sensibilisation, 30 μΐ, d'un mélange d'huile d'olive/acétone (véhicule) 1:1 dans lequel sont dissous 50 μg de peptide DA2N ou DA2NEQ est appliqué au niveau de l'oreille. Cinq heures après application du peptide, la réaction de contact est provoquée par réexposition à du DNCB 1% au niveau de l'oreille. L'intensité de la réaction inflammatoire est évaluée localement 24, 48, 72 et 96 heures après réexposition au DNCB par la mesure de l'épaisseur de l'oreille. Par ailleurs, le nombre de cellules immunitaires (cellules dendritiques, lymphocytes T, neutrophiles, monocytes, macrophages) est mesuré 24h après réexposition au DNCB dans l'oreille au niveau du site d'application du DNCB 1% (nombre de cellules immunitaires comptées dans les 2 oreilles), dans le sang (nombre de cellules immunitaires comptées dans 50 \LL de sang) et dans la moelle osseuse (nombre de cellules immunitaires comptées dans un tibia). Le protocole est représenté schématiquement en Figure 5. Afin de compter le nombre de cellules, les oreilles sont digérées par ajout de collagénase IV et le nombre de cellules immunitaires est déterminé par cytométrie en flux a l'aide d'anticorps couplés à des fluorochromes correspondant à des marqueurs caractéristiques de chaque population cellulaire. Le témoin négatif d'inhibition de la réaction de contact a été obtenu en remplaçant la solution contenant le peptide par la solution d'huile d'olive/acétone 1 : 1 (indiqué comme « véhicule » dans la Figure 6, et avec le symbole « - » dans la Figure 7).
5.2 Résultats
Les résultats montrent une diminution de l'épaisseur de l'oreille (Figure 6A et B) après application topique de DA2N ou DA2NEQ. De plus, la Figure 7 montre une diminution du nombre de monocytes, cellules dendritiques et neutrophiles, que ce soit au niveau de l'oreille (Figure 7A), dans le sang (Figure 7B) ou dans la moelle osseuse (Figure 7C) des souris après application topique de DA2N.
Les peptides de l'invention ont donc un effet anti-inflammatoire dans un modèle in vivo de maladie inflammatoire.
Exemple 6 : Etude in vivo de l'activité de DA2N et DA2NEQ dans un modèle de psoriasis
6.1 Matériel et méthodes
Les peptides DA2N et DA2NEQ ont été testés dans un modèle de psoriasis induit par Imiquimod décrit par Van der Fits (Van der Fits et al. 2009. Journal of immunology. 182(9):5836-5845) sur des souris balb/c femelles, âgées de 7 à 8 semaines.
31 mg de crème commerciale contenant 5% d'Imiquimod (Aldara, 3M Pharmaceuticals) est appliqué de manière topique sur environ 2.5 cm de la partie ventrale préalablement rasée des souris pendant 6 jours. Les premières lésions psoriatiques apparaissent au 3ème jour. Les peptides resuspendus dans la crème sont appliqués de manière topique ou en intra-veineuse (10 μg) pendant les 3 premiers jours de traitement par Imiquimod. Des souris sans traitement par Imiquimod et/ou sans application des peptides ont été utilisées comme témoins. Au 6ème jour, les souris sont sacrifiées et la peau prélevée est analysée par microscopie (lésions cutanées et angiogenèse). 6.2 Résultats
Les Figures 8 et 9 (agrandissement) présentent des images représentatives d'un traitement topique par DA2N et DA2NEQ à une dose de 10 μ§ sur des lésions psoriatiques induites par application d'Imiquimod pendant 6 jours. En comparaison avec le témoin positif, DA2N diminue les lésions psoriatiques classiquement observées après 6 jours de traitement par Irniquimod. DA2N et DA2NEQ n'ont aucun effet sur de la peau saine.
Exemple 7 : Etude de l'activité anti-angiogénique de DA2N et DA2NEQ
7.1 Matériel et méthodes
Les peptides DA2N et DA2NEQ ont été testés sur le modèle des anneaux d'aorte qui permet d'étudier l'influence de diverses molécules sur la formation de nouveaux vaisseaux sanguins. Les aortes de souris C57BL/6 ou Balb/c sont prélevées, lavées avec du PBS puis coupées en anneaux. Les anneaux sont ensuite déposés dans une matrice de Matrigel (BD® Matrigel™) dans des plaques de 24 puits, incubés lh à 37°C, 5% CO2, avant d'ajouter 1 mL de DMEM (DMEM Advanced IX, Gibco) supplémenté avec 5% de sérum de veau fœtal (S VF), 2μΜ de glutamine, 100 U de pénicilline et 50 μg/mL de streptomycine. Les anneaux sont ensuite incubés à 37°C, 5% de CO2 pendant 3 jours. Le milieu est alors retiré et remplacé par du milieu contenant ou non les peptides à une concentration de 12.5 uM. Les anneaux aortiques sont de nouveau incubés pendant 3 jours dans les mêmes conditions. Des photos des anneaux sont réalisées chaque jour afin de mesurer la formation de néo-vaisseaux.
Le traitement des images et la mesure de l'aire formée par les néo-vaisseaux sont réalisés par le logiciel Image J 1.50i.
7.2 Résultats
La Figure 10 présente des images représentatives d'un traitement topique par DA2N et DA2NEQ à une dose de 10 μg sur l'angiogenèse, classiquement observée après application d'Imiquimod pendant 6 jours. En comparaison avec le témoin positif, DA2N et DA2NEQ semblent diminuer la formation de néo-vaisseaux après 6 jours de traitement par Irniquimod. DA3N et DA2NEQ n'ont pas d'effet sur l'angiogenèse sur de la peau saine. La Figure 11 présente des images représentatives montrant la formation de néo-vaisseaux (angiogenèse) à J0, Jl, J2 et J3 à partir d'anneaux aortiques, après addition de DA2N ou DA2NEQ à J0. Le témoin correspond à la formation de néo-vaisseaux, après addition de PBS uniquement. La Figure 12 présente la formation de néo-vaisseaux en pourcentage par rapport au diamètre initial de l'anneau aortique. Comparé au témoin (PBS), l'ajout de DA2N ou DA2NEQ inhibe de manière significative la formation de néo-vaisseaux.
Exemple 8 : Etude in vitro de l'activité immunosuppressive de DA2NE, DA2N (D), K12A et DA a
Les effets cytotoxiques de DA2NE (SEQ ID NO : 3), DA2N (D) (SEQ ID NO : 19), K12A (SEQ ID NO : 11) et DANa (SEQ ID NO : 7) ont été évalués sur des cellules immunitaires issues de la moelle osseuse de souris.
8.1 Matériel et méthodes
Les cellules immunitaires de souris sont issues de la moelle osseuse de souris C57BL/6 ou Balb/c. Les peptides sont incubés à 37°C, 5% de CO2 en présence de 500 000 cellules immunitaires dans du milieu du RPMI à des concentrations variées pendant 2 heures. Des cellules sans peptide servent de témoin négatif et des cellules en présence de DMSO (30%) servent de témoin positif. Après incubation, les cellules sont lavées puis marquées avec du bleu Trypan afin de mesurer la viabilité cellulaire par comptage au microscope. La CLso est alors calculée comme étant la concentration des peptides DA2N, Kl 2 A et DANa induisant la mort de 50% des cellules immunitaires.
8.2 Résultats
La survie des cellules immunitaires issues de moelle osseuse de souris en présence des peptides DA2NE, DA2N (D), K12A et DANa aux concentrations de 12.5 et 25 μΜ est présentée en Figure 13 et comparée à DA2N. Les peptides DA2NE, DA2N (D), K12A et DANa semblent induire la mort des cellules immunitaires à une concentration de 12.5 μΜ avec une efficacité comparable à DA2N.
La survie de cellules non immunitaires murines en présence de concentrations croissantes de DA2N, K12A et DA2Na est présentée en Figure 14. DA2N, DA2Na et Kl 2 A induisent la mort de 50% des cellules irnmunitaires murines issues de moelle osseuse (CLso) à une concentration de 5 μΜ, 3.75 uM et 6.5 μΜ, respectivement.
Exemple 9 : Etude in vitro de l'activité hémolytique de DA2NE, DA2N (D), K12A et DANa
9.1 Matériel et méthodes
Mesure de l'activité hémolytique
L'activité hémolytique des peptides antimicrobiens a été mesurée selon le protocole exposé en partie 3.1 de l'Exemple 3.
9.2 Résultats
La Figure 15 montre le pourcentage d'hémolyse d'érythrocytes de souris après incubation avec les peptides pendant 1 heure, par rapport au témoin positif en référence à 100%. Les résultats montrent que les peptides DA2Na et K12A ne présentent pas d'activité hémolytique significative (inférieure à 40% d'hémolyse) aux concentrations de 10 et 50 μΜ).
Exemple 10 : Etude in vitro de l'activité antimicrobienne de DA2NE, DA2Na, K4D, L7A, K12A, K12P, V13A, A14D, A14K, M25A, DA2NEQ (D) et DA2N (D)
L'activité antimicrobienne de DA2N (SEQ ID NO : 4), DA2NEQ (SEQ ID NO : 2), DA2NE (SEQ ID NO : 3), DA2Na (SEQ ID NO : 7), K4D (SEQ ID NO : 13), L7A (SEQ ID NO : 14), K12A (SEQ ID NO : 11), K12P (SEQ ID NO : 12), V13A (SEQ ID NO : 17), A14D (SEQ ID NO : 10), A14K (SEQ ID NO : 8), M25A (SEQ ID NO : 16) , DA2NEQ (D) (SEQ ID NO : 18) et DA2N (D) (SEQ ID NO : 19) a été évaluée sur différentes souches microbiennes.
ScrL (NLGAKNQVAWEKKAATTKGNVNLKLLQMVAV ; SEQ ID NO :37) et ScrC (KGNVLVKAAMLTKVLAKNKGVQNANALTW ; SEQ ID NO :38) sont des séquences aléatoires des peptides originaux utilisés comme contrôle négatifs.
La Melittine (numéro CAS : 37231-28-0) et la Grarnicidine (numéro CAS : 1405-97-6) sont utilisés comme contrôle positifs. 10.1 Matériels et méthodes
Préparation des suspensions bactériennes.
Une préculture de 10 mL en milieu Muller-Hinton (MH) est préparée par ensemencement d'une colonie de la souche bactérienne d'intérêt. La préculture est incubée à 37°C sous agitation pendant la nuit. La culture est repiquée au 1/100 dans les mêmes conditions. La concentration de la culture est évaluée par mesure de la turbidité à 600 nm (DO600 nm 1,0 = 5 x 108 CFU/mL pour E. coli (bactéries à Gram-négatives) et 1,5 x 108 CFU/mL pour S. aureus (bactéries à Gram-positives). Une fois la phase exponentielle de croissance (DO600 nm = 0,3 - 0,7) atteinte, les cultures sont diluées dans du milieu MH afin d'obtenir 106 CFU/mL (concentration finale de l'inoculum).
Mesure de la CMI et de la CMB
La CMI et la CMB ont été déterminées selon le protocole exposé en partie 2.1 de l'Exemple 2.
10.2 Résultats
L'activité antimicrobienne de DA2N et DA2NEQ est présentée dans le Tableau 4 :
Tableau 4 : Activités antimicrobiennes de DA2N et DA2NEQ (ND : non déterminée)
Ces résultats confirment donc les résultats obtenus dans l'exemple 2 (Tableau 2) qui démontrent que DA2N et DA2NEQ présentent une activité antimicrobienne sur des bactéries Gram-positives et Gram-négatives.
L'activité antimicrobienne de DA2NE, DA2Na, K4D, L7A, K12A, K12P, V13A, A14D, A14K, M25A, DA2NEQ (D) et DA2N (D) est présentée dans le Tableau 5 :
Tableau 5 : Activités antimicrobiennes de DA2NE, DA2Na, K4D, L7A, K12A, K12P,
V13A, A14D, A14K, M25A, DA2NEQ (D) et DA2N (D).
Ces résultats montrent que les peptides DA2NE, DA2Na, IC4D, L7A, K12A, K12P, VI 3A, A14D, A14K, M25A, DA2NEQ (D) et DA2N (D) présentent également une activité antimicrobienne sur des bactéries Gram-positives et Gram-négatives, comparés aux peptides contrôles Scr L, Scr C, Mélittine et Gramicidine.

Claims

REVENDICATIONS
1. Peptide doté d'une activité anti-inflammatoire et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-X2-T-L-X3-K- K-V-G-X4-Xs-X6-G-K-A-9 (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-XÔ est un résidu A, K ou D ;
-(p est X7-L-N-A (SEQ ID NO :30), XT-L-N-A-V-T-N-XS-A (SEQ ID NO :31), X?- L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO :32), ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, SEQ ID
NO : 3 ou SEQ ID NO : 4.
2. Peptide selon la revendication 1, dans lequel (p est X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N- X9-X10 et X9 et Xw ne représentent aucun résidu.
3. Peptide selon la revendication 1 ou 2 ayant une séquence sélectionnée parmi le groupe comprenant SEQ ID NO : 5, SEQ ID NO : 6, SEQ ID NO : 7, SEQ ID NO : 8, SEQ
ID NO : 9, SEQ ID NO : 10, SEQ ID NO : 11, SEQ ID NO : 12, SEQ ID NO : 13, SEQ ID NO : 14, SEQ ID NO : 15, SEQ ID NO : 16, SEQ ID NO : 17, SEQ ID NO : 18, SEQ ID NO : 19, SEQ ID NO : 20, SEQ ID NO : 21, SEQ ID NO : 26, SEQ ID NO : 27, SEQ ID NO : 28 et dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide.
4. Médicament comprenant un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire, anti- angiogénique et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-¾-X6-G-K-A-(p
(SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-Xi est un résidu K ou D ;
-¾ est un résidu L ou A ;
-Xi est un résidu K, A ou P ;
-X5 est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-φ est X7-L-N-A (SEQ ID NO : 30), Xv-L-N-A-V-T-N-Xs-A (SEQ ID NO : 31), X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9-X10 (SEQ ID NO : 32), ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides.
5. Composition pharmaceutique comprenant au moins un peptide doté d'une activité anti-inflammatoire, anti-angiogénique et/ou activité antimicrobienne ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-X2-T-L-X3-K-
K-V-G-X4-Xs-X6-G-K-A-(p (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ; -X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs est un résidu V ou A ;
-Xe est un résidu A, K ou D ;
-φ est X7-L-N-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9- X10, ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, ou une séquence nucléotidique codant pour l'un au moins de ces peptides, et un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables.
6. Peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L- Xi-X2-T-L-X3-K-K-V-G-X4-Xs-X6-G-K-A-9 (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-X2 est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ;
-Xs es un résidu V ou A ;
-Χό est un résidu A, K ou D ;
-Xe est un résidu V ou P ;
-φ est X7-L-N-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9- X10, ou est absent ; et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ; -Xs est un résidu M ou A ;
-¾ ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-Xio ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels et sels pharmaceutiquement acceptables dudit peptide, médicament selon la revendication 4 ou composition pharmaceutique selon la revendication 5, pour une utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire, anti- angiogénique et/ou immunosuppresseur.
7. Peptide, médicament ou composition pharmaceutique selon la revendication 6, médicament selon la revendication 4 ou composition pharmaceutique selon la revendication 5, pour une utilisation dans la prévention ou le traitement d'une maladie inflammatoire chez un sujet.
8. Peptide, médicament ou composition pharmaceutique pour son utilisation selon la revendication 7, caractérisé en ce que la maladie inflammatoire est due à une infection.
9. Peptide, médicament ou composition pharmaceutique selon la revendication 6, médicament selon la revendication 4 ou composition pharmaceutique selon la revendication 5, pour une utilisation dans la prévention ou le traitement d'une maladie liée à l'angiogenèse.
10. Peptide, médicament ou composition pharmaceutique pour son utilisation selon la revendication 9, caractérisé en ce que la maladie liée à l'angiogenèse est choisie parmi les cancers, les troubles ophtalmologiques de type rétinopathies, l'athérosclérose, l'arthrose, la polyarthrite rhumatoïde.
11. Utilisation d'un peptide ayant une séquence de 17 à 100 acides aminés comprenant la séquence A-L-Xi-X2-T-L-X3-K-[C-V-G-X4-X5-X6-G-K-A-9 (SEQ ID NO : 29), dans laquelle :
-Xi est un résidu W ou A ;
-Xi est un résidu K ou D ;
-X3 est un résidu L ou A ;
-X4 est un résidu K, A ou P ; -X5 est un résidu V ou A ;
-¾ est un résidu A, K ou D ;
-(p est X7-L-N-A, XT-L-N-A-V-T-N-XS-A, X7-L-N-A-V-T-N-X8-A-N-Q-N-X9- X10, ou est absent et dans laquelle :
-X7 est un résidu V ou P ;
-Xs est un résidu M ou A ;
-X9 ne représente aucun résidu ou est un résidu E ;
-X10 ne représente aucun résidu ou est un résidu Q ; et
dérivés fonctionnels acceptables dudit peptide, à la condition que le peptide ne soit pas un peptide de séquence SEQ ID NO : 2, en tant qu'agent antifongique ou antibactérien.
12. Kit comprenant un peptide selon l 'une quelconque des revendications 1 à 3, un peptide, un médicament ou une composition pharmaceutique pour son utilisation selon l'une quelconque des revendications 6 à 10, un médicament selon la revendication 4, ou une composition pharmaceutique selon la revendication 5, et optionnellement les instructions pour l'administration du peptide, du médicament, ou de la composition pharmaceutique audit sujet.
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