EP2753194A1 - Hydrolysats de protéines de poisson pour leur utilisation dans la prévention et/ou le traitement de troubles métaboliques tels qu'un syndrome métabolique, en particulier associé à l'obésité. - Google Patents

Hydrolysats de protéines de poisson pour leur utilisation dans la prévention et/ou le traitement de troubles métaboliques tels qu'un syndrome métabolique, en particulier associé à l'obésité.

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EP2753194A1
EP2753194A1 EP12756176.9A EP12756176A EP2753194A1 EP 2753194 A1 EP2753194 A1 EP 2753194A1 EP 12756176 A EP12756176 A EP 12756176A EP 2753194 A1 EP2753194 A1 EP 2753194A1
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EP
European Patent Office
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hydrolyzate
fish
protein
metabolic syndrome
diabetes
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Withdrawn
Application number
EP12756176.9A
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Elisa DUCLOS
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PECHES SAINT MALO SANTE CIE
Original Assignee
PECHES SAINT MALO SANTE CIE
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Publication date
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    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • Hydrolyzates of fish proteins for use in the prevention and / or treatment of metabolic disorders such as a metabolic syndrome, particularly associated with obesity.
  • the present invention relates to fish protein hydrolysates for use in the prevention and / or treatment of metabolic disorders such as a metabolic syndrome, particularly associated with obesity.
  • the hydrolysates of fish proteins can be obtained chemically or enzymatically.
  • the hydrolysis of the proteins is carried out using a strong acid or a strong base, under strict conditions of pH. These hydrolysis conditions considerably alter the quality of the hydrolysates obtained.
  • the hydrolysates are obtained by hydrolysis of the proteins using endogenous enzymes or exogenous enzymes. These hydrolysis conditions lead to hydrolysates of better quality, particularly with regard to hydrolysis using heterogeneous enzymes which makes it possible to control the degree of hydrolysis.
  • the metabolic syndrome can be defined as a clinical condition resulting from the presence of several physiological signs among the following: high blood pressure, fasting blood glucose level elevated blood levels of high triglycerides, low blood levels of HDL cholesterol and presence of abdominal obesity.
  • metabolic syndrome varies by country or health organization. For many specialists, there is metabolic syndrome when at least three of the aforementioned risk factors are observed. According to many experts, abdominal obesity is almost always observed in patients with the metabolic syndrome.
  • Insulin is a hormone produced by the pancreas that allows the absorption of glucose and helps regulate blood sugar levels, ie, blood sugar. In case of insulin resistance, glucose uptake into cells no longer occurs. To correct the situation and maintain proper glucose levels in the blood, the pancreas needs to produce more insulin. It follows in time a deregulation of the pancreas that can no longer secrete insulin, and the onset of type 2 diabetes. Insulin resistance is also associated with a higher risk of hypertension and cardiovascular disease, as it is accompanied by an increase in cholesterol and triglyceride levels, which can damage arterial walls. In addition, insulin resistance is strongly related to obesity.
  • Obesity is often associated with chronic systemic inflammation and metabolic dysfunction related to cytokines and hormones synthesized and secreted by adipocytes.
  • adipose tissue is an endocrine organ involved in the regulation of energy balance and lipid and carbohydrate metabolism via insulin, adiponectin, leptin and other secretions.
  • adipocytokines related to inflammation.
  • obesity promotes the appearance of steatosis which is characterized by an infiltration of triglycerides in the liver with abnormal retention of lipids by cells and an abnormality in the synthesis and degradation of triglycerides. This steatosis in the liver causes inflammation of the liver and more generally obesity causes chronic inflammation of the tissues.
  • IL-6 interleukin-6
  • TNFa tumor necrosis factor alpha
  • PAI-1 plasminogen Activator inhibitor-1
  • the release of insulin has the effect of inhibiting the lipase which hydrolyzes triglycerides and releases into the blood of the so-called free fatty acids that can be used as a source of energy.
  • lipase When lipase is inhibited, the body uses amino acids and carbohydrates as a source of energy. This phenomenon is accompanied by an increase in appetite and weight gain.
  • the plaintiff company which has oriented its research on metabolic disorders, including the metabolic syndrome, was able to identify hydrolysates obtained from the enzymatic hydrolysis of a fish protein source having functional properties. interesting in these areas in mammals, particularly humans.
  • the invention thus relates to a fish protein hydrolyzate obtained by enzymatic hydrolysis of at least one protein source chosen from the group consisting of fish Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scombrus scombrus, Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris, fish belonging to the order of the siluriformes, said enzymatic hydrolysis being carried out by an endopeptidase enzyme derived from Bacillus subtilis for the prevention, limitation and / or treatment of metabolic disorders.
  • protein source chosen from the group consisting of fish Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scombrus scombrus, Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus mor
  • such a disorder of metabolism includes hyperinsulinemia, insulin resistance, glucose intolerance, hyperglycemia, dyslipidemia, di abte de type 2, di abtegest at io nn el, hypertriglyceridemia, hypercholesterolemia, hypertension, non-alcoholic fatty liver disease, chronic inflammation and / or metabolic syndrome.
  • a disorder of metabolism is a metabolic syndrome, for example associated with obesity.
  • the invention relates to said hydrolyzate for use in the prevention, limitation and / or treatment of at least two, preferably three, physiological states of a metabolic syndrome selected from the following: hypersinsulinemia, resistance insulin, glucose intolerance, hyperglycemia, obesity, dyslipidemia, type 2 diabetes, gestational diabetes, hypertriglyceridaemia, hypercholesterolemia, hypertension, non-alcoholic fatty liver disease, chronic inflammation.
  • a metabolic syndrome selected from the following: hypersinsulinemia, resistance insulin, glucose intolerance, hyperglycemia, obesity, dyslipidemia, type 2 diabetes, gestational diabetes, hypertriglyceridaemia, hypercholesterolemia, hypertension, non-alcoholic fatty liver disease, chronic inflammation.
  • said hydrolyzate does not induce limitation of food intake or satiety phenomenon.
  • the fish protein hydrolyzate has:
  • lipid content of less than 1%, as a percentage of crude product
  • the source of fish protein comprises the pulp obtained from the fillet of the fish or fish.
  • the fish protein hydrolyzate is obtained by a production process comprising:
  • At least one protein source selected from the group consisting of the fish species Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scombrus scombrus, Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris of fish belonging to the order of siluriformes, in the presence of water, so as to recover the pulp of said fish or fish,
  • said enzymatic hydrolysis is carried out according to an enzyme / protein source ratio of between 0.01 and 2%, preferably equal to 0.75%, and at a hydrolysis temperature equal to 55 ° C.
  • the endopeptidase enzyme derived from Bacillus subtilis is preferably a metalloendopeptidase, or bacillo lysine, belonging to EC class 3.4.24.28 of the EC classification established by the Enzyme Commission and published by the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (IUBMB). ) in 1992.
  • the fish protein hydrolyzate as defined above can thus be used for the manufacture of a food supplement, or a pharmaceutical or nutraceutical composition, intended for the treatment and / or the prevention of metabolic disorders, such as a metabolic syndrome, hyperinsulinemia, insulin resistance, glucose intolerance, hyperglycemia, dyslipidemia, type 2 diabetes, gestational diabetes, hypertriglyceridemia, hypercholesterolemia, hypertension, non-alcoholic fatty liver disease and / or chronic inflammation.
  • metabolic disorders such as a metabolic syndrome, hyperinsulinemia, insulin resistance, glucose intolerance, hyperglycemia, dyslipidemia, type 2 diabetes, gestational diabetes, hypertriglyceridemia, hypercholesterolemia, hypertension, non-alcoholic fatty liver disease and / or chronic inflammation.
  • the fish protein hydrolyzate as defined above can be used for the manufacture of a food supplement, or a pharmaceutical or nutraceutical composition, intended for the prevention and / or treatment of at least two, preferentially three, physiological states of a metabolic syndrome selected from the following: hyperinsulinemia, insulin resistance, glucose intolerance, hyperglycemia, dyslipidemia, type 2 diabetes, gestational diabetes mellitus, hypertriglyceridaemia, hypercholesterolemia, hypertension or chronic inflammation.
  • a metabolic syndrome selected from the following: hyperinsulinemia, insulin resistance, glucose intolerance, hyperglycemia, dyslipidemia, type 2 diabetes, gestational diabetes mellitus, hypertriglyceridaemia, hypercholesterolemia, hypertension or chronic inflammation.
  • the invention also relates to a method for treatment and / or therapeutic prevention in the mammal, in particular in humans, of the abovementioned metabolic disorders, in particular of a metabolic syndrome, more particularly of at least three physiological states. of a metabolic syndrome as described above, the method of orally administering a fish protein hydrolyzate as defined above.
  • Figs. 1, 2 and 3 illustrate insulin dosages versus time in minutes in groups of control mice (normolipid), hyperlipidic diet (Fig 1), control diet (normo lipid) added with a hydrolyzate according to the invention (FIG 2) or a hyperlipidic diet supplemented with a hydrolyzate according to the invention (FIG. Figs.
  • FIG. 4 and 5 illustrate the measurements of blood glucose in mg / dl as a function of time in minutes carried out in groups of mice which have been given a control diet (normolipid), a control diet (normolipidic) supplemented with a hydrolyzate according to the invention (FIG 4), a hyperlipidic diet or a hyperlipidic diet supplemented with a hydrolyzate according to the invention (FIG.
  • FIG. 6 illustrates the determination of plasma cholesterol in g / l carried out in groups of mice that have been given a control diet (normolipid), a hyperlipidic diet, a control diet (normolipid) supplemented with a hydrolyzate according to the invention or a hyperlipidic diet added of a hydrolyzate according to the invention
  • FIG. 7 illustrates the triglyceride assays in g / 1 carried out in groups of mice that have been given a control diet (normolipid), a hyperlipidic diet, a control diet (normolipid) supplemented with a hydrolyzate according to the invention or a hyperlipidic diet supplemented with a hydrolyzate according to the invention.
  • Example 1 Protein hydrolyzate obtained from blue whiting
  • Blue whiting ⁇ Micromesistius poutassou is a sin in the North Atlantic off Newfoundland.
  • the fish are cut into fillets which are then ground to obtain the pulp.
  • This fish pulp is a source of protein for the production of the hydrolyzate.
  • the pulp is stored at -20 ° C until use.
  • the hydrolysis reaction is conducted for 2 hours then the enzyme is inactivated by raising the temperature of the reaction medium to 85 ° C. This temperature is maintained for 15 minutes.
  • the obtained blue whiting protein hydrolyzate hereinafter referred to as H1 is then filtered through a sieve (2mm / 2mm mesh size) so as to remove the solids and then recovered in a container.
  • the fraction recovered in the container is then centrifuged for more or less 5 minutes at a speed between 4000 and 7000 RPM. After removal of the pellet, the supernatant is recovered, lyophilized and stored in a cool and dry place, protected from light. The supernatant can also be atomized.
  • EXAMPLE 3 Physico-chemical analyzes of the protein hydrolysates obtained according to Examples 1 and 2
  • a determination of the molecular weights of the constituent peptides of each protein hydrolyzate H1 to H11 is performed by steric exclusion chromatography (SEC-HPLC).
  • the protein hydrolyzate in powder form after lyophilization is suspended in ultrapure water at a rate of 20 mg / ml, then filtered through a membrane of 0.45 ⁇ and analyzed by gel filtration with a Superdex Peptide HR column. 10/30, marketed by the company Pharmacia.
  • the matrix of the column is composed of a porous gel crosslinked (diameter 13-15 ⁇ ) agarose and dextran with a total volume of 24 mL. Its fractionation domain is between 100 and 7000 Da.
  • the column is mounted on an HPLC chain, marketed by Dionex, which is equipped with a pump (Dionex P680 module). The measurement is performed by a multi-wavelength ultraviolet detector (Dionex UVD 170 U module).
  • the protein hydrolyzate H1 is eluted with a mobile phase containing acetonitrile, water and TFA. The elution lasts approximately 1 hour at a flow rate of 0.5 ml / min.
  • the molecular weight distribution is calculated from the parameters of a calibration line obtained after passing through the column of known molecular weight markers: Cytochrome C (12,400 Da), aprotinin (6,51 Da), gastrin I (2146 Da), substance P (1348 Da), substance P fragment 1-7 (900 Da), glycine (75 Da) and leupeptin (463 Da). Data is collected using Chromeleon software (Dionex). Percentages of molecular weights are calculated using software (GPC Cirrus from Polymer Laboratories). The acquisition wavelength is 214 nm. The distribution of molecular weights according to dW / logM is given by the software. The percentage of the area under the curve corresponds to the percentage of molecules. The distribution of molecular weights by size class is given in Table 1.
  • the amino acid composition of the H1 protein hydrolyzate is given in Table 2 and is obtained by following the indications of the European Directive 98/64 / CE and the standard NF EN ISO 13904-October 2005.
  • the protein content is greater than 80%, as a percentage of crude product (standard NF V I 8-120-March 1997 corrected KJELDAHL).
  • the lipid content is less than 1%, as a percentage of gross product (according to European Directive 98/64 / EC).
  • the energy value of the H1 protein hydrolyzate is about 350 Kcal / 100g.
  • the carbohydrate content is less than 4% (deduced from the protein and carbohydrate contents and the energy value).
  • the H1 protein hydrolyzate has been tested for its activity on the metabolic syndrome.
  • mice of 5 weeks were placed in cages in a room with controlled temperature and humidity, in inverted day-night cycle (night from 8h to 20h) .
  • the animals were subjected to a high-lipid diet for 3 weeks and the weight gain of the animals was measured throughout this experiment (weighing of the mice twice a week).
  • This first experiment was intended to perform a selection of animals.
  • a standard diet was then given to them for 4 weeks.
  • 72 male C3H mice were thus selected and divided into groups:
  • - 3 groups receiving normo-lipid regimens including 0% (control group named C), 50% (group named C 50% or C-50) or 80%> (group named C 80%> or C-80) of Hydrolyzate of fish protein H1, as a percentage of the total energy provided by the proteins.
  • - 3 groups receiving hyper-lipid diets including 0%> (control group named HL), 50% (group named HL 50% or HL-50) or 80% (group named HL 80% or HL-80) of hydrolyzate of fish protein H1, as a percentage of the total energy provided by the proteins.
  • Table 3 Diet composition (g / kg of final diet)
  • mice After 6 hours of fasting, the mice were force-fed with a solution of D-glucose, the amount of which varies according to the weight of the mice (2 mg / kg). 30 ⁇ of blood was taken from the tail of the mice at different times to measure changes in blood glucose (t0, tl5, t30, t60, and tl20) (Figs 4 and 5). The remaining plasmas are recovered after two 10 min centrifugations at 4500 g at 4 ° C to assay plasma insulin in response to ingested glucose (Figs 1, 2 and 3). The insulin dosages performed on the control groups C and HL (Fig. 1) show that ingestion of the hyperlipidic diet (HL) increases insulinemia.
  • HL hyperlipidic diet
  • mice under control diet (C) had the same basal glucose value (Fig. 4).
  • a significant decrease in blood glucose over time was observed in the mice under a diet enriched in H1 hydrolyzate.
  • the curve of mice fed the control HL diet (HL group) is a characteristic curve of diabetic animals (Fig. 5). Indeed, the curve is much more rounded, a sign that glucose is less rapidly used by the body.
  • the HL 80%> diet produces a difference in blood glucose levels from the basal level.
  • the two diets (HL-50 and HL-80) cause a significant decrease in the blood glucose of the mice compared to the control diet HL.
  • the ingestion of the H1 hydrolyzate results in a significant improvement in the glucose tolerance.
  • mice of the different groups were recovered after slaughter. Aliquots were stored at -20 ° C. Enzymatic assays of total cholesterol in serum and plasma were performed using the RTU Cholesterol Kit. Triglyceride assays were performed using the RANDOX ® Kit.
  • Luminex technique was used to assay cytokines involved in inflammation either interleukin-6 (IL-6), tumor necrosis factor alpha (TNFa), leptin and two adipo cytokines: the plasminogen activator inhibitor-1 (PAI- 1) and adiponectin.
  • IL-6 interleukin-6
  • TNFa tumor necrosis factor alpha
  • PAI-1 plasminogen activator inhibitor-1
  • H1 hydrolyzate significantly reduces the concentration of IL-6, leptin and PAI-1, markers of an inflammation reaction.
  • mice hyperlipidic diet caused at least three symptoms characteristic of a metabolic syndrome: blood glucose, insulinemia and triglyceride levels in mice of the HL control group were higher than those of control group C.
  • the mice of the HL group were overweight characteristic of obesity.
  • the addition of the hydrolyzate H1 in the diet has significantly reduced these rates.
  • the hydrolyzate H1 makes it possible to reduce the cholesterol level significantly. It is further noted that the ingestion of hydrolyzate H1 does not modify food intake and does not induce satiety (data published in patent application WO 2010/149778).

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Abstract

La présente invention concerne des hydrolysats de protéines de poisson pour leur utilisation dans la prévention et/ou le traitement de troubles métaboliques tels qu'un syndrome métabolique, en particulier associé à l'obésité. Selon l'invention, les hydrolysats de protéines de poissons sont obtenus par hydrolyse enzymatique d'au moins une source de protéines choisie parmi le groupe composé des poissons Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scomber scombrus, Sardina pilchardus,Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris, des poissons appartenant à l'ordre des siluriformes, ladite hydrolyse enzymatique étant réalisée par une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis.

Description

Hydrolysats de protéines de poisson pour leur utilisation dans la prévention et/ou le traitement de troubles métaboliques tels qu'un syndrome métabolique, en particulier associé à l'obésité.
La présente invention concerne des hydrolysats de protéines de poisson pour leur utilisation dans la prévention et/ou le traitement de troubles métaboliques tels qu'un syndrome métabolique, en particulier associé à l'obésité.
Les hydrolysats de protéines de poisson peuvent être obtenus par voie chimique ou par voie enzymatique. Dans le premier cas, l'hydrolyse des protéines est réalisée à l'aide d'un acide fort ou d'une base forte, dans des conditions strictes de pH. Ces conditions d'hydrolyse altèrent considérablement la qualité des hydrolysats obtenus. Dans le second cas, les hydrolysats sont obtenus par hydrolyse des protéines à l'aide d'enzymes endogènes ou d'enzymes exogènes. Ces conditions d'hydrolyse aboutissent à des hydrolysats de meilleure qualité, notamment en ce qui concerne l'hydrolyse à l'aide d'enzymes hétérogènes qui permet de contrôler le degré d'hydrolyse.
De nombreuses études ont démontré que les hydrolysats issus des coproduits et produits de la pêche obtenus par voie enzymatique présentaient des propriétés nutritionnelles et fonctionnelles intéressantes (Quaglia et al. 1987; Shahidi et al. 1995; Liceaga-Gesualdo et al. 1999; Kristinsson et Rasco 2000; Liaset et al. 2003). En effet, la réaction d'hydrolyse enzymatique permet d'obtenir des peptides de poids moléculaires variés pouvant présenter des propriétés biologiques nouvelles par rapport à la protéine native. Par exemple, des études ont révélé que des hydrolysats de protéines de poissons, de crustacés et de mollusques, présentaient des propriétés anticoagulantes (Rajapakse et al. 2005), antiprolifératives de lignées cellulaires cancéreuses (Picot et al. 2006), réparatrices du tissu épithélial intestinal (Fitzgerald et al. 2005), antioxydantes (Chuang et al. 2000; Suetsuna et al. 2000; Kim et al. 2001 ; Suetsuna 2002; Wu et al. 2003; Jun et al. 2004; Suetsuna et al. 2004; Je et al. 2008; Raghavan et al. 2008), immunomodulatrices (Bogwald et al. 1996; Gildberg et al. 1996; Kotzamanis et al. 2007; Tang et al. 2008), et stimulatrices de la croissance de certaines lignées cellulaires (Ravallec-Plé et al. 2000; Guerard et al. 2001).
C'est ainsi que ces dernières années, de nombreuses industries pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires se sont intéressées aux propriétés fonctionnelles des hydrolysats de protéines de poisson ou de tout autre produit de la mer.
Le syndrome métabolique, ou « syndrome X » ou encore « syndrome de résistance à l'insuline », peut être défini comme un état clinique résultant de la présence de plusieurs signes physiologiques parmi les suivants: pression artérielle élevée, taux sanguin de glucose à jeun élevé, taux sanguin de triglycérides élevés, taux sanguin de cholestérol HDL bas et présence d'une obésité abdominale.
La définition du syndrome métabolique varie selon les pays ou les organismes de santé. Pour de nombreux spécialistes, il y a syndrome métabolique lorsque trois au moins des facteurs de risque précités sont observés. D'après de nombreux spécialistes encore, l'obésité abdominale est presque toujours observée chez les patients souffrant du syndrome métabolique.
Chez presque tous les individus atteints du syndrome métabolique, on note un début de résistance à l'insuline. L'insuline est une hormone produite par le pancréas qui permet l'absorption du glucose et contribue à la régulation du taux de sucre dans le sang, c'est à dire, la glycémie. En cas d'insulino-résistance, l'absorption du glucose dans les cellules ne se produit plus. Pour remédier à la situation et maintenir un taux de glucose dans le sang adéquat, le pancréas doit produire plus d'insuline. Il s'en suit avec le temps une dérégulation du pancréas qui ne peut plus sécréter d'insuline, et l'apparition du diabète de type 2. La résistance à l'insuline est aussi associée à un risque plus élevé d'hypertension et de maladies cardiovasculaires, car elle s'accompagne d'une augmentation des taux de cholestérol et de triglycérides, qui peuvent endommager les parois artérielles. De plus, la résistance à l'insuline est fortement liée à l'obésité. L'obésité est, elle, souvent associée à une inflammation systémique chronique et à des dysfonctionnements métaboliques liés aux cytokines et hormones synthétisées et sécrétées par les adipocytes. En effet, en plus d'être un organe de stockage, le tissu adipeux est un organe endocrinien impliqué dans la régulation de la balance énergétique et du métabolisme lipidique et glucidique via les sécrétions d'insuline, d'adiponectine, de leptine, et autres adipocytokines liées à l'inflammation. En particulier, l'obésité favorise l'apparition de stéatose qui se caractérise par une infiltration de triglycérides au niveau du foie avec une rétention anormale des lipides par les cellules et une anomalie dans la synthèse et la dégradation des triglycérides. Cette stéatose au niveau du foie provoque une inflammation du foie et plus globalement l'obésité entraîne une inflammation chronique des tissus. Ceci favorise la résistance des cellules à l'insuline et l'apparition d'un diabète de type II. En effet, l'inflammation du tissu adipeux provoque une libération des cytokines qui vont se fixer sur les récepteurs de l'insuline à la surface des cellules en bloquant le message normalement transmis par l'insuline. Il en résulte une résistance à l'insuline. Les hormones intervenant dans la résistance à l'insuline sont l'inter leukine-6 (IL-6), le tumor necrosis factor alpha (TNFa), la leptine, le plasminogen Activator inhibitor-1 (PAI-1) et l'adiponectine.
En cas d'hyperinsulinémie, la libération de l'insuline a pour conséquence d'inhiber la lipase qui hydrolyse les triglycérides et libère dans le sang des acides gras dit libres pouvant être utilisés comme source d'énergie. Lorsque la lipase est inhibée, le corps puise dans les réserves en acides aminés et en glucides afin de les utiliser comme source d'énergie. Ce phénomène s'accompagne d'une augmentation de l'appétit et fait prendre du poids.
Dans ce contexte, la société demanderesse, qui a orienté ses recherches sur les troubles du métabolisme, notamment sur le syndrome métabolique, a pu identifier des hydrolysats obtenus à partir de l'hydrolyse enzymatique d'une source de protéines de poissons présentant des propriétés fonctionnelles intéressantes dans ces domaines chez le mammifère, en particulier chez l'homme.
L'invention concerne ainsi un hydrolysat de protéines de poisson obtenu par hydrolyse enzymatique d'au moins une source de protéines choisie parmi le groupe composé des poissons Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scomber scombrus, Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris, des poissons appartenant à l'ordre des siluriformes, ladite hydrolyse enzymatique étant réalisée par une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis, pour la prévention, la limitation et/ou le traitement des troubles du métabolisme.
En particulier, un tel trouble du métabolisme comprend l'hyperinsulinémie, la résistance à l'insuline, l'intolérance au glucose, l'hyperglycémie, la dyslipidémie, le d i ab è t e d e typ e 2 , l e di ab è t e g e s t at i o nn e l , l'hypertriglycéridémie, l'hypercholestérolémie, l'hypertension, la stéatose hépatique non alcoolique, l'inflammation chronique et/ou le syndrome métabolique. Préférentiellement, un tel trouble du métabolisme est un syndrome métabolique, par exemple associé à l'obésité.
Préférentiellement encore, l'invention concerne ledit hydrolysat pour son utilisation dans la prévention, la limitation et/ou le traitement d'au moins deux, préférentiellement trois, états physiologiques d'un syndrome métabolique choisis parmi les suivants : l'hypersinsulinémie, la résistance à l'insuline, l'intolérance au glucose, l'hyperglycémie, l'obésité, la dyslipidémie, le diabète de type 2, le diabète gestationnel, l'hypertriglycéridémie, l'hypercholestérolémie, l'hypertension, la stéatose hépatique non alcoolique, l'inflammation chronique.
Les exemples qui suivent montrent, en effet, qu'un hydrolysat selon l'invention possède une activité significative à la fois sur plusieurs états physiologiques révélant un trouble du métabolisme tel qu'un syndrome métabolique.
Selon une caractéristique de l'invention, ledit hydrolysat n'induit pas de limitation de la prise alimentaire ou de phénomène de satiété.
Selon un mode de réalisation de l'invention, l'hydrolysat de protéines de poisson présente:
- la répartition du profil moléculaire suivant : de 33 à 39 % de molécules de poids moléculaire inférieur à 300 Da, de 34 à 37 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 300 et 1 000 Da, de 21 à 24 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 1 000 et 3 000 Da, de 3 à 4 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 3 000 et 5 000 Da et de 1 à 2 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 5 000 et 10 000 Da,
- une teneur en lipides inférieure à 1 %, en pourcentage de produit brut,
- une teneur en glucides inférieure à 4 %, en pourcentage de produit brut, - une teneur en protéines supérieure à 80 %, en pourcentage de produit brut,
- une teneur en matière minérale comprise entre 5 et 10 %, en pourcentage de produit brut.
Il présente également avantageusement la composition en acides aminés suivante : Acide glutamique 16,9 %, Acide aspartique 11 ,7 %, Lysine 10 %, Leucine 8,2 %, Arginine 6,3 %, Alanine 6,8 %, Valine 4,8 %, Isoleucine 4,4 %, Glycine 5 %, Thréonine 4,5 %, Sérine 4,4 %, Tyrosine 3,2 %, Phénylalanine 3,9 %, Méthionine 2,6 %, Proline 3,4 %, Histidine 2 %, Cystine 1 %, Tryptophane 0,8 %, en pourcentage en poids par rapport au poids total d'acides aminés.
Un tel hydrolysat ainsi que son procédé d'obtention est décrit dans la demande de brevet n° 08 00753 déposée par la société demanderesse, publiée sous le n° FR 2 927 336.
Préférentiellement, la source de protéines de poisson comprend la pulpe obtenue à partir du filet du ou des poissons.
Préférentiellement encore, l'hydrolysat de protéines de poisson est obtenu par un procédé d'obtention comprenant:
- le broyage d'au moins une source de protéines choisie parmi le groupe composé des espèces de poissons Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scomber scombrus, Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris, de poissons appartenant à l'ordre des siluriformes, en présence d'eau, de manière à récupérer la pulpe dudit ou desdits poissons,
- l'hydrolyse enzymatique de ladite source de protéines à une température comprise entre 50 et 75°C, pendant 1 à 5 heures, après l'ajout d'une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis de manière à obtenir un mélange réactionnel,
- l'arrêt de ladite hydrolyse enzymatique par inactivation desdites enzymes après élévation de la température dudit mélange réactionnel à un niveau non inférieur à 70°C, pendant 8 à 20 minutes,
- la séparation de l'hydrolysat de protéines obtenu du reste du mélange réactionnel.
Avantageusement, ladite hydrolyse enzymatique est réalisée selon un ratio enzyme/source de protéines compris entre 0,01 et 2 %, préférentiellement égal à 0,75 %, et à une température d'hydrolyse égale à 55°C. L'enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis est préférentiellement une métalloendopeptidase, ou bacillo lysine, appartenant à la classe EC 3.4.24.28 de la classification EC établie par la Commission des enzymes et publiée par l'Union internationale de biochimie et de biologie moléculaire (IUBMB) en 1992.
L'hydrolysat de protéines de poisson tel que défini précédemment peut ainsi être utilisé pour la fabrication d'un complément alimentaire, ou d'une composition pharmaceutique ou nutraceutique, destiné au traitement et/ou à la prévention des troubles métaboliques, tels qu'un syndrome métabolique, l'hyperinsulinémie, la résistance à l'insuline, l'intolérance au glucose, l'hyperglycémie, la dyslipidémie, le diabète de type 2, le diabète gestationnel, l'hypertriglycéridémie, l'hypercholestérolémie, l'hypertension, la stéatose hépatique non alcoolique et/ou l'inflammation chronique.
Plus particulièrement, l'hydrolysat de protéines de poisson tel que défini précédemment peut être utilisé pour la fabrication d'un complément alimentaire, ou d'une composition pharmaceutique ou nutraceutique, destiné à la prévention et/ou au traitement d'au moins deux, préférentiellement trois, des états physiologiques d'un syndrome métabolique choisis parmi les suivants : l'hyperinsulinémie, la résistance à l'insuline, l'intolérance au glucose, l'hyperglycémie, dyslipidémie, le diabète de type 2, le diabète gestationnel, l'hypertriglycéridémie, l'hypercholestérolémie, l'hypertension ou l'inflammation chronique.
L'invention concerne encore une méthode de traitement et/ou de prévention thérapeutique chez le mammifère, en particulier chez l'homme, des troubles métaboliques précités, en particulier d'un syndrome métabolique, plus particulièrement d'au moins ou trois des états physiologiques d'un syndrome métabolique tel que décris précédemment, la méthode consistant à administrer par voie orale un hydrolysat de protéines de poisson tel que défini précédemment.
Les caractéristiques de l'invention mentionnées ci-dessus, ainsi que d'autres, apparaîtront plus clairement à la lecture de la description suivante d'un exemple de réalisation, ledit exemple se voulant illustratif et non limitatif.
Les Figs. 1 , 2 et 3 illustrent des dosages de l'insuline en en fonction du temps en minutes réalisés chez des groupes de souris ayant reçu un régime contrôle (normolipidique), un régime hyperlipidique (Fig. 1), un régime contrôle (normo lipidique) additionné d'un hydrolysat selon l'invention (Fig. 2) ou un régime hyperlipidique additionné d'un hydrolysat selon l'invention (Fig. 3), Les Figs. 4 et 5 illustrent les mesures de la glycémie en mg/dl en fonction du temps en minutes réalisées chez des groupes de souris ayant reçu un régime contrôle (normolipidique), un régime contrôle (normo lipidique) additionné d'un hydrolysat selon l'invention (Fig. 4), un régime hyperlipidique ou un régime hyperlipidique additionné d'un hydrolysat selon l'invention (Fig. 5),
La Fig. 6 illustre le dosage du cholestérol plasmatique en g/1 réalisé chez des groupes de souris ayant reçu un régime contrôle (normolipidique), un régime hyperlipidique, un régime contrôle (normolipidique) additionné d'un hydrolysat selon l'invention ou un régime hyperlipidique additionné d'un hydrolysat selon l'invention, La Fig. 7 illustre les dosages des triglycérides en g/1 réalisés chez des groupes de souris ayant reçu un régime contrôle (normolipidique), un régime hyperlipidique, un régime contrôle (normolipidique) additionné d'un hydrolysat selon l'invention ou un régime hyperlipidique additionné d'un hydrolysat selon l'invention. Exemple 1: Hydrolysat de protéines obtenu à partir de merlan bleu
Le merlan bleu {Micromesistius poutassou) est péché en Atlantique Nord au large de Terre-Neuve. Les poissons sont débités en filets qui sont ensuite broyés de manière à en obtenir la pulpe. Cette pulpe de poisson constitue une source de protéines pour la production de l'hydrolysat. La pulpe est conservée à -20°C jusqu'à utilisation.
Trois kilos de la pulpe de merlan bleu préalablement décongelée sont mélangés à de l'eau selon un rapport massique de 1. La température est portée à 55°C et une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis, commercialisée sous le nom de Corolase N par la société AB Enzyme (FeldbergstraBe 78, D-64293, Darmstadt, Germany) est alors ajoutée dans le mélange réactionnel selon un ratio enzyme/source de protéines de 0,75 %.
La réaction d'hydrolyse est menée pendant 2 heures puis l'enzyme est inactivée par élévation de la température du milieu réactionnel à 85°C. Cette température est maintenue durant 15 minutes.
L'hydrolysat de protéines de merlan bleu obtenu, dénommé par la suite Hl, est ensuite filtré sur un tamis (grillage de 2mm/2mm) de manière à éliminer les matières solides, puis récupéré dans un récipient. La fraction récupérée dans le récipient est alors centrifugée pendant 30 plus ou moins 5 minutes, à une vitesse comprise entre 4000 et 7000 RPM. Après élimination du culot, le surnageant est récupéré, lyophilisé puis conservé dans un endroit frais et sec, à l'abri de la lumière. Le surnageant peut également être atomisé. Exemple 2: Hydrolysat de protéines obtenu à partir d'autres espèces de poisson selon l'invention
Des hydrolysats de protéines de maquereau (H2) (scomber scombrus), chinchard (H3) (Trachurus spp.), grenadier (H4) (Coryphaenoides rupestris), tacaud (H5) (Trisopterus esmarki), sardine (H6) (Sardina pilchardus), hareng (H7) (Clupea harengus), panga (H8) (poissons appartenant à l'ordre des siluriformes), lieu noir (H 10) {Pollachius virens), cabillaud (H9) (Gadus morhua) et églefin (Hl l) (Melanogrammus aeglefinus) ont été préparés selon le procédé de l'exemple 1. Exemple 3: Analyses physico-chimiques des hydrolysats de protéines obtenus selon les exemples 1 et 2
Une détermination des poids moléculaires des peptides constitutifs de chaque hydrolysat de protéines Hl à Hl l est réalisée par chromato graphie d'exclusion stérique (SEC-HPLC).
L'hydrolysat de protéines sous forme de poudre après lyophilisation est suspendu dans de l'eau ultra pure à raison de 20 mg/mL, puis filtré sur une membrane de 0,45 μιη et analysé par filtration sur gel avec une colonne Superdex Peptide HR 10/30, commercialisée par la société Pharmacia. La matrice de la colonne est composée d'un gel poreux réticulé (diamètre 13-15μιη) d'agarose et de dextrane d'un volume total de 24 mL. Son domaine de fractionnement est compris entre 100 et 7000 Da. La colonne est montée sur une chaîne HPLC, commercialisée par la société Dionex, qui est équipée d'une pompe (module Dionex P680). La mesure est réalisée par un détecteur d'ultra violets multi longueur d'ondes (module Dionex UVD 170 U). L'hydrolysat de protéines Hl est élué par une phase mobile contenant de l'acétonitrile, de l'eau et du TFA. L'élution dure environ 1H à un débit de 0.5mL/min.
La répartition des poids moléculaires est calculée à partir des paramètres d'une droite de calibration obtenue après le passage dans la colonne de marqueurs de poids moléculaires connus suivants: Cytochrome C (12 400 Da), aprotinine (6 51 1 Da), gastrine I (2 126 Da), substance P (1 348 Da), substance P fragment 1-7 (900 Da), glycine (75 Da) et leupeptine (463 Da). Les données sont collectées grâce au logiciel Chromeleon (Dionex). Les pourcentages des poids moléculaires sont calculés à l'aide d'un logiciel (GPC Cirrus de chez Polymer Laboratories). La longueur d'onde d'acquisition est de 214 nm. La répartition des poids moléculaires en fonction dW/logM est donnée par le logiciel. Le pourcentage de l'aire sous la courbe correspond au pourcentage de molécules. La répartition des poids moléculaires par classe de taille est donnée dans le Tableau 1.
La répartition des poids moléculaires par classe de taille est donnée dans le Tableau 1 suivant. Le pourcentage de l'aire sous la courbe correspond au pourcentage de molécules peptidiques.
Tous les hydrolysats montrent un profil de répartition des poids moléculaires identique. Tableau 1
La composition en acides aminés de l'hydrolysat de protéines Hl est donnée dans le Tableau 2 et est obtenue en suivant les indications de la Directive Européenne 98/64/CE et de la norme NF EN ISO 13904-octobre 2005.
Tableau 2
Acide aminé Pourcentage Acide aminé Pourcentage
d'acide aminé d'acide aminé
Acide glutamique 16,9 Glycine 5
Lysine 10 Thréonine 4,5
Acide aspartique 11,7 Serine 4,4
Leucine 8,2 Tyrosine 3,2
Arginine 6,3 Phénylalanine 3,9 Alanine 6,8 Méthionine 2,6
Valine 4,8 Proline 3,4
Isoleucine 4,4 Histidine 2
Cystine 1 Tryptophane 0,8
La teneur en protéines est supérieure à 80 %, en pourcentage de produit brut (norme NF V I 8-120-Mars 1997 corrigée KJELDAHL). La teneur en lipides est inférieure à 1%, en pourcentage de produit brut (selon la directive européenne 98/64/CE). La valeur énergétique de l'hydrolysat de protéines Hl est d'environ 350 Kcal/100g. La teneur en glucides est inférieure à 4 % (déduite à partir des teneurs en protéines et glucides et de la valeur énergétique).
Exemple 4: Activités biologiques d'un hydrolysat de protéines de merlan bleu Hl
L'hydrolysat de protéines Hl a été testé vis-à-vis de son activité sur le syndrome métabolique.
Pour ce faire, 88 souris de 5 semaines, fournies par le centre d'élevage Harlan, ont été placées dans des cages au sein d'une pièce à température et humidité contrôlées, en cycle jour-nuit inversé (nuit de 8h à 20h). Après une période d'adaptation de 10 jours, les animaux ont été soumis à un régime hyper- lipidique pendant 3 semaines et le gain de poids des animaux a été mesuré tout au long de cette expérience (pesée des souris 2 fois par semaine). Cette première expérimentation avait pour but d'effectuer une sélection des animaux. Un régime standard leur a ensuite été donné pendant 4 semaines. 72 souris C3H mâles ont ainsi été sélectionnées et réparties en groupes:
- 3 groupes recevant des régimes normo-lipidiques incluant 0% (groupe contrôle nommé C), 50 % (groupe nommé C 50% ou C-50) ou 80%> (groupe nommé C 80%> ou C-80) d'hydrolysat de protéines de poisson Hl, en pourcentage par rapport à l'énergie totale apportée par les protéines.
- 3 groupes recevant des régimes hyper-lipidiques incluant 0%> (groupe témoin nommé HL), 50% (groupe nommé HL 50% ou HL-50) ou 80% (groupe nommé HL 80% ou HL-80) d'hydrolysat de protéines de poisson Hl, en pourcentage par rapport à l'énergie totale apportée par les protéines. Tableau 3 : composition des régimes (g/Kg de régime final)
Dans ce qui suit, tous les résultats sont exprimés sous la forme de moyenne ± écart- type. Les effets des régimes ont été analysés à l'aide du logiciel SAS. Les différences entre groupes ont été étudiées par ANOVA (Proc GLM, SAS version 6.11, Cary, NC, USA). En cas de signifïcativité du modèle (p<0,05), PANOVA a été suivie par des tests de Tukey (t-test) afin de distinguer les groupes statistiquement différents (marqués par un ou plusieurs symboles *). Dans tous les résultats, les statistiques représentées comparent les groupes nourris aux régimes standards témoins C ou HL aux groupes supplémentés en hydrolysat Hl .
Test oral de tolérance au glucose : mesure de la glycémie et dosage de l'insuline
Après 6h de jeûne, les souris ont été gavées avec une solution de D-glucose dont la quantité varie en fonction du poids des souris (2mg/kg). 30μί de sang ont été prélevés à partir de la queue des souris à différents temps afin de mesurer l'évolution de la glycémie (tO, tl5, t30, t60, et tl20) (Fig. 4 et 5). Les plasmas restants sont récupérés après 2 centrifugations de 10 min à 4500 g à 4°C afin de doser l'insuline plasmatique en réponse au glucose ingéré (Figs. 1, 2 et 3). Les dosages de l'insuline réalisés sur les groupes témoins C et HL (Fig. l) montrent que l'ingestion du régime hyperlipidique (HL) augmente l'insulinémie. Les dosages de l'insuline réalisés sur les groupes ayant reçu l'hydrolysat Hl dans un régime normo lipidique dont 50% ou 80% de la part énergétique protéique est constituée de l'hydrolysat Hl, c'est à dire les groupes C-50, C-80 et HL-50, HL-80 (Figs. 2 et 3), montrent que l'ajout de l'hydrolysat au régime Contrôle C et au régime HL diminue signifïcativement l'insulinémie.
De même, il ressort des Figs 4 et 5 que l'ajout de l'hydolysat Hl dans un régime normo-lipidique (groupe C) et hyperlipidique (groupe HL) diminue de manière significative la glycémie. En effet, les souris sous régime contrôle (C) avaient la même valeur de glycémie basale (Fig. 4). Par contre, une diminution significative de la glycémie au court du temps a été observée chez les souris sous régime enrichi en hydrolysat Hl . La courbe des souris nourries avec le régime HL contrôle (groupe HL) est une courbe caractéristique d'animaux diabétiques (Fig. 5). En effet, la courbe est beaucoup plus arrondie, signe que le glucose est moins rapidement utilisé par l'organisme. Le régime HL 80%> engendre une différence de glycémie dès le niveau basai. Cependant, après 120 min, les deux régimes (HL-50 et HL-80) provoquent une diminution significative de la glycémie des souris par rapport au régime témoin HL. De ce fait, l'ingestion de l'hydrolysat Hl entraîne une amélioration significative de la tolérance au glucose.
Mesure du taux de cholestérol plasmatique et dosage des triglycérides
Le plasma des souris des différents groupes a été récupéré après abattage. Les échantillons sous forme d'aliquots ont été conservés à -20°C. Les dosages enzymatiques du cholestérol total dans le sérum et le plasma ont été réalisés à l'aide du kit Cholestérol RTU ®. Les dosages des triglycérides ont été réalisés à l'aide du Kit RANDOX ®.
L'ajout de l'hydrolysat Hl au régime Contrôle C et au régime HL à la concentration de 80% de l'apport énergétique, diminue signifïcativement la concentration du cholestérol plasmatique (Fig. 6) ainsi que la concentration des triglycérides plasmatiques (Fig. 7). Dosage des cytokines:
La technique du Luminex a été utilisée pour doser des cytokines impliquées dans l'inflammation soit interleukine-6 (IL-6) le tumor necrosis factor alpha (TNFa), la leptine et deux adipo cytokines : le plasminogen Activator inhibitor-1 (PAI-1) et l'adiponectine. Les résultats sont présentés dans le Tableau 4 ci-dessous :
Tableau 4
* P<0,05 (significatif)
On constate que l'ajout de l'hydrolysat Hl au régime HL diminue signifïcativement la concentration en IL-6, leptine et PAI-1, marqueurs d'une réaction d'inflammation.
Conclusions
Les tests précités réalisés chez la souris ont permis de mettre en évidence un effet fonctionnel bénéfique de l'hydrolysat selon l'invention sur le syndrome métabolique. En effet, la prise par les souris d'un régime hyperlipidique a provoqué au moins trois symptômes caractéristiques d'un syndrome métabolique : la glycémie, l'insulinémie ainsi que les taux de triglycérides chez les souris du groupe témoin HL étaient supérieurs à ceux du groupe contrôle C. De plus, les souris du groupe HL présentaient un surpoids caractéristique d'une obésité. L'ajout de l'hydrolysat Hl dans le régime alimentaire a permis de diminuer signifïcativement ces taux. De plus, l'hydrolysat Hl permet de faire diminuer le taux de cholestérol signifïcativement. Il est en outre noté que l'ingestion de l'hydrolysat Hl ne modifie pas la prise alimentaire et n'induit pas de phénomène de satiété (données publiées dans la demande de brevet WO 2010/149778).

Claims

REVENDICATIONS
1) Hydrolysat de protéines de poisson obtenu par hydrolyse enzymatique d'au moins une source de protéines choisie parmi le groupe composé des poissons Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scomber scombrus, Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris, des poissons appartenant à l'ordre des siluriformes, ladite hydrolyse enzymatique étant réalisée par une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis, pour la prévention et/ou le traitement d'un état physiologique d'un syndrome métabolique choisis parmi les suivants : l ' hyperinsulinémie, la résistance à l ' insuline, l ' intolérance au glucose, l'hyperglycémie, la dyslipidémie, le diabète de type 2, le diabète gestationnel, l'hypertriglycéridémie, l'hypercholestérolémie, l'hypertension, la stéatose hépatique non alcoolique et/ou l'inflammation chronique.
2) Hydrolysat selon la revendication 1, pour la prévention et/ou le traitement d'au moins deux, préférentiellement trois, états physiologiques d'un syndrome métabolique choisis parmi les suivants : l'hyperinsulinémie, la résistance à l'insuline, l'intolérance au glucose, l'hyperglycémie, la dyslipidémie, le diabète de type 2, le diabète gestationnel, l'hypertriglycéridémie, l'hypercholestérolémie, l'hypertension, la stéatose hépatique non alcoolique et/ou l'inflammation chronique.
3) Hydrolysat selon l'une des revendications 1 à 2, caractérisé en ce que l'hydrolysat de protéines de poisson présente:
- la répartition du profil moléculaire suivant : de 33 à 39 % de molécules de poids moléculaire inférieur à 300 Da, de 34 à 37 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 300 et 1 000 Da, de 21 à 24 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 1 000 et 3 000 Da, de 3 à 4 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 3 000 et 5 000 Da et de 1 à 2 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 5 000 et 10 000 Da,
- une teneur en lipides inférieure à 1 %, en pourcentage de produit brut,
- une teneur en glucides inférieure à 4 %, en pourcentage de produit brut, - une teneur en protéines supérieure à 80 %, en pourcentage de produit brut,
- une teneur en matière minérale comprise entre 5 et 10 %, en pourcentage de produit brut. 4) Hydrolysat selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'hydrolysat de protéines de poisson est obtenu par un procédé d'obtention comprenant:
- le broyage d'au moins une source de protéines choisie parmi le groupe composé des espèces de poissons Micromesistius poutassou, Clupea harengus,
Scomber scombrus, Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris, de poissons appartenant à l'ordre des siluriformes, en présence d'eau, de manière à récupérer la pulpe dudit ou desdits poissons,
- l'hydrolyse enzymatique de ladite source de protéines à une température comprise entre 50 et 75°C, pendant 1 à 5 heures, après l'ajout d'une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis de manière à obtenir un mélange réactionnel,
- l'arrêt de ladite hydrolyse enzymatique par inactivation desdites enzymes après élévation de la température dudit mélange réactionnel à un niveau non inférieur à
70°C, pendant 8 à 20 minutes,
- la séparation de l'hydrolysat de protéines obtenu du reste du mélange réactionnel.
5) Hydrolysat selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que ladite hydrolyse enzymatique est réalisée selon un ratio enzyme/source de protéines compris entre 0,01 et 2 %, préférentiellement égal à 0,75 %, et à une température d'hydrolyse égale à 55°C.
6) Hydrolysat selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit hydrolysat n'induit pas de limitation de la prise alimentaire ou de phénomène de satiété.
7) Hydrolysat selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit hydrolysat est issu du merlan bleu.
8) Composition comprenant un hydrolysat de protéines de poisson tel que défini dans l'une des revendications 1 à 7 pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'un état physiologique d'un syndrome métabolique choisi parmi les suivants : l'hyperinsulinémie, la résistance à l'insuline, l'intolérance au glucose, l'hyperglycémie, la dyslipidémie, le diabète de type 2, le diabète gestationnel, l'hypertriglycéridémie, l'hypercholestérolémie, l'hypertension, la stéatose hépatique non alcoolique et/ou l'inflammation chronique. 9) Composition selon la revendication 8, pour la prévention et/ou le traitement d'au moins deux, préférentiellement trois, états physiologiques d'un syndrome métabolique choisi parmi les suivants : l'hyperinsulinémie, la résistance à l'insuline, l'intolérance au glucose, l'hyperglycémie, la dyslipidémie, le diabète de type 2, le diabète gestationnel, l'hypertriglycéridémie, rhypercholestérolémie, l'hypertension, la stéatose hépatique non alcoolique et/ou l'inflammation chronique.
10) Composition selon l'une des revendications 8 à 9, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'un complément alimentaire, d'une composition pharmaceutique ou nutraceutique.
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FR2947149B1 (fr) * 2009-06-26 2011-09-09 Cie Des Peches Saint Malo Sante Hydrolysat de proteines de poissons pour son utilisation dans l'inhibition de la prise de poids et/ou la perte de poids

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