EP2099822A2 - Antibody to the epitope grwirtqqhyyerdpkriyylslefymgrtlqntm or ifnqkivngwqveeaddwlrygnpwekarp or glgdvaevrksfnrhlhftlvkdrnvatprdyffa or dsmatlglaaygygiryefg - Google Patents

Antibody to the epitope grwirtqqhyyerdpkriyylslefymgrtlqntm or ifnqkivngwqveeaddwlrygnpwekarp or glgdvaevrksfnrhlhftlvkdrnvatprdyffa or dsmatlglaaygygiryefg

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Publication number
EP2099822A2
EP2099822A2 EP07856316A EP07856316A EP2099822A2 EP 2099822 A2 EP2099822 A2 EP 2099822A2 EP 07856316 A EP07856316 A EP 07856316A EP 07856316 A EP07856316 A EP 07856316A EP 2099822 A2 EP2099822 A2 EP 2099822A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
epitopes
glycogen phosphorylase
ifnqkivngwqveeaddwlrygnpwekarp
grwirtqqhyyerdpkriyylslefymgrtlqntm
glgdvaevrksfnrhlhftlvkdrnvatprdyffa
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP07856316A
Other languages
German (de)
French (fr)
Inventor
Ernest Kapetanovic
Samir Yastas
Andreas Bilstein
Franz Noll
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Diagenics International Corp
Original Assignee
Diagenics International Corp
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Filing date
Publication date
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Publication of EP2099822A2 publication Critical patent/EP2099822A2/en
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
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    • G01N2333/91091—Glycosyltransferases (2.4)
    • G01N2333/91097—Hexosyltransferases (general) (2.4.1)
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    • G01—MEASURING; TESTING
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    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/22—Haematology

Definitions

  • the invention relates to antibodies against the epitopes GRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) or IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) or GLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) or DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4).
  • cardiac troponin T or I and / or the CK mass as biochemical markers of a myocardial cell damage in the diagnosis of acute coronary syndrome have been established.
  • glycogen phosphorylase BB glycogen phosphorylase isoenzyme BB
  • GPBB glycogen phosphorylase isoenzyme BB
  • GPBB is an "ischemic marker" because biochemical changes in the heart muscle cell metabolism are indicated at an early stage During cardiac aortic coronary artery bypass graft surgery, myocardial ischemia was also demonstrated by an increase in GPBB. The earlier diagnostic option is based on the fact that already the Lack of oxygen in the heart can be detected as the first sign of infarction, which leads to the release of GPBB into the blood.
  • the object of the present invention is to provide antibodies for the epitopes mentioned above.
  • the antibodies are derived from the human glycogen phosphorylase isoenzyme BB.
  • mice were immunized with purified enzyme.
  • the spleen cells of these mice were fused after appearance of serum antibodies with mouse myeloma cells of the line Sp 2/0 and the resulting hybridomas were cultured.
  • the antibody-producing hybridomas were recloned and tested for utility for the intended use.
  • the specific hybridoma clones were propagated and stored in liquid nitrogen. The production of the antibodies is carried out using common techniques.
  • the antibodies obtained were examined for their specific binding with the enzyme GPBB. Reactivity testing of monoclonal antibodies (mAbs) with solid phase-insolubilized GP BB and GP MM in ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay)
  • microtiter plates were coated with 3 ⁇ g / ml GP BB or with GP MM.
  • the dilution of the antigen solution was carried out in PBS (phosphate-buffered saline) (pH 7.4, 0.15 M NaCl); The coating was carried out at 4 0 C.
  • the plates were blocked with inert protein, sealed in aluminum bags with desiccant and stored overnight at 4 0 C.
  • the selected monoclonal antibodies were tested in the direct ELISA:
  • 1.1 ⁇ l (corresponding to about 1 ⁇ g) of GP BB or GP MM were dropped onto nitrocellulose strips, dried overnight, then blocked with inert protein for 2 hours at room temperature and then dried again overnight.
  • the parallel monoclonal antibodies 329B6 and 326G5 were tested immediately.
  • the monoclonal antibodies were tested as follows:

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Abstract

Antibody to the epitope GRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) or IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) or GLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) or DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4), from human glycogen phosphorylase isoenzyme BB.

Description

Antikörper gegen die Epitope Antibodies to the epitopes
GRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM oder IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP ODERGRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM or IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP OR
GLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA oder DSMATLGLAAYGYGIRYEFGGLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA or DSMATLGLAAYGYGIRYEFG
Die Erfindung betrifft Antikörper gegen die Epitope GRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) oder IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) oder GLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) oder DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4).The invention relates to antibodies against the epitopes GRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) or IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) or GLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) or DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4).
Stand der TechnikState of the art
Die rasche Erkennung und Risikostratifizierung von Patienten mit dem klinischen Bild eines akuten Koronarsyndroms und akutem Brustschmerz ist von entscheidender Bedeutung, um möglichst frühzeitig therapeutische Entscheidungen treffen und entsprechende Maßnahmen rasch und gezielt einleiten zu können. Neben der typischen klinischen Symptomatik und entsprechenden EKG-Veränderungen haben sich die Bestimmung von kardialem Troponin T oder I und/oder der CK-Masse (Creatin Kinase Myokardtyp) als biochemische Marker eines myokardialen Zellschadens in der Diagnostik des akuten Koronarsyndromes etabliert. Die frühe Diagnose eines Myokardinfarktes ist jedoch vor allem in Abwesenheit von ST- Streckenhebungen problematisch, da die beschriebenen „Nekrosemarker" erst ca. 4 bis 6 Stunden nach Verschluss eines Koronargefäßes in erhöhter Konzentration im Blut nachzuweisen sind. Auch die Etablierung von sogenannten Point-of-Care Assays für Troponin T, Troponin I oder CK-MB (Creatin Kinase Myokardtyp) als bettseitige Schnelltestverfahren hat trotz Reduzierung der Analysezeit und Einsparung des Probentransports noch keine befriedigende Lösung in der frühen Labordiagnostik des akuten Koronarsyndromes gebracht.The rapid detection and risk stratification of patients with the clinical picture of acute coronary syndrome and acute chest pain is crucial to make early therapeutic decisions and take appropriate action quickly and effectively. In addition to the typical clinical symptoms and According to ECG changes, the determination of cardiac troponin T or I and / or the CK mass (creatine kinase myocardium type) as biochemical markers of a myocardial cell damage in the diagnosis of acute coronary syndrome have been established. However, the early diagnosis of a myocardial infarction is problematic, especially in the absence of ST segment elevations, since the described "necrosis markers" can only be detected in blood up to 4 to 6 hours after occlusion of a coronary vessel -Care assays for troponin T, troponin I or CK-MB (creatine kinase myocardium type) as bedside rapid test methods have not yet brought a satisfactory solution in the early laboratory diagnosis of acute coronary syndrome despite reducing the analysis time and saving the sample transport.
Während einer Ischämie der Herzmuskelzellen kommt es zu einer gesteigerten Glykogennolyse und zu einem durch die Glykogenphosphorylase verstärkten Abbau von Glykogen. In diesem Fall wird das Isoenzym BB im Zytoplasma löslich und in den Blutkreislauf freigesetzt. Die Freisetzung von GPBB (Glykogen Phosphorylase Isoenzym BB) ins Blut innerhalb der ersten Stunden nach Myokardischämie ist direkte Folge einer mangelnden Sauerstoffversorgung der Herzmuskelzellen. Klinische Untersuchungen haben im Vergleich mit anderen kardialen Markern bereits eine höhere Sensitivität von Glykogenphosphorylase (GP) innerhalb der ersten 4 Stunden nach Symptombeginn gezeigt.During cardiac ischaemia, increased glycogenolysis and increased glycogen breakdown by glycogen phosphorylase occur. In this case, the isoenzyme BB is soluble in the cytoplasm and released into the bloodstream. The release of GPBB (glycogen phosphorylase isoenzyme BB) into the blood within the first few hours after myocardial ischemia is a direct consequence of a lack of oxygen supply to the heart muscle cells. Clinical studies have already shown a higher sensitivity of glycogen phosphorylase (GP) compared to other cardiac markers within the first 4 hours after symptom onset.
Im Gegensatz zu den sogenannten Nekrosemarkern handelt es sich bei GPBB um einen „Ischämiemarker", da frühzeitig biochemische Veränderungen im Stoffwechsel der Herzmuskelzelle angezeigt werden. Während der Durchführung von aorto-koronaren Bypass Operationen konnte anhand eines Anstiegs von GPBB ebenfalls eine myokardiale Ischämie nachgewiesen werden. Die frühere Diagnosemöglichkeit beruht also darauf, dass bereits der Mangel an Sauerstoff im Herzen als erstes Zeichen des Infarktes nachgewiesen werden kann, welcher zur Ausschüttung von GPBB ins Blut führt.In contrast to the so-called necrosis markers, GPBB is an "ischemic marker" because biochemical changes in the heart muscle cell metabolism are indicated at an early stage During cardiac aortic coronary artery bypass graft surgery, myocardial ischemia was also demonstrated by an increase in GPBB. The earlier diagnostic option is based on the fact that already the Lack of oxygen in the heart can be detected as the first sign of infarction, which leads to the release of GPBB into the blood.
Aufgabetask
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung von Antikörpern für die oben erwähnten Epitope.The object of the present invention is to provide antibodies for the epitopes mentioned above.
Lösung der AufgabeSolution of the task
Zur Lösung der Aufgabe führt, dass die Antikörper aus dem humanen Glykogen Phosphorylase Isoenzym BB abgeleitet sind.To solve this problem, the antibodies are derived from the human glycogen phosphorylase isoenzyme BB.
Es ist bekannt, das Antikörper an das Enzym Glykogen Phosphorylase Isoenzym BB binden können. Diese Bindung ist jedoch meist unspezifisch und es werden ebenfalls die Isoenzyme MM und LL gebunden, welche über eine ähnliche Aminosäuresequenz verfügen. Hieraus entsteht die Notwendigkeit, Antikörper zu nutzen, welche spezifisch die Isoform BB binden um Kreuzreaktionen zu vermeiden und die Testergebnisse zu verbessern.It is known that antibodies can bind to the enzyme glycogen phosphorylase isoenzyme BB. However, this binding is mostly nonspecific and the isoenzymes MM and LL are also linked, which have a similar amino acid sequence. This results in the need to use antibodies that specifically bind the isoform BB to avoid cross-reactions and to improve the test results.
Balb-c-Mäuse wurden mit gereinigtem Enzym immunisiert. Die Milzzellen dieser Mäuse wurden nach Erscheinen von Serumantikörpern mit Maus- Myelomzellen der Linie Sp 2/0 fusioniert und die erhaltenen Hybridome wurden kultiviert. Die antikörperproduzierenden Hybridome wurden rekloniert und auf die Verwendungsfähigkeit für den vorgesehenen Einsatz geprüft. Die spezifischen Hybridomklone wurden vermehrt und in flüssigem Stickstoff gelagert. Die Produktion der Antikörper erfolgt über gängige Techniken.Balb c mice were immunized with purified enzyme. The spleen cells of these mice were fused after appearance of serum antibodies with mouse myeloma cells of the line Sp 2/0 and the resulting hybridomas were cultured. The antibody-producing hybridomas were recloned and tested for utility for the intended use. The specific hybridoma clones were propagated and stored in liquid nitrogen. The production of the antibodies is carried out using common techniques.
Die erhaltenen Antikörper wurden auf ihre spezifische Bindung mit dem Enzym GPBB hin untersucht. Reaktivitätstestung der monoklonalen Antikörper (mAK) mit Fest-Phase- insolubilisierter GP BB und GP MM im ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay)The antibodies obtained were examined for their specific binding with the enzyme GPBB. Reactivity testing of monoclonal antibodies (mAbs) with solid phase-insolubilized GP BB and GP MM in ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay)
In einem parallelen Ansatz wurden Mikrotitrationsplatten mit 3μg/ml GP BB bzw. mit GP MM beschichtet. Die Verdünnung der Antigenlösung erfolgte in PBS (Phosphate- buffered Saline) (pH 7,4; 0,15 MNaCl); die Beschichtung wurde bei 4 0C durchgeführt. Nach 24 stündiger Benetzungszeit wurden die Platten mit Inertprotein blockiert, in Aluminiumbeutel mit Trockenmittel eingeschweißt und über Nacht bei 4 0C gelagert. Unmittelbar danach erfolgte das Testen der ausgewählten monoklonalen Antikörper im direkten ELISA:In a parallel approach, microtiter plates were coated with 3 μg / ml GP BB or with GP MM. The dilution of the antigen solution was carried out in PBS (phosphate-buffered saline) (pH 7.4, 0.15 M NaCl); The coating was carried out at 4 0 C. After 24 hours of wetting, the plates were blocked with inert protein, sealed in aluminum bags with desiccant and stored overnight at 4 0 C. Immediately afterwards, the selected monoclonal antibodies were tested in the direct ELISA:
• Einstellung der Zellkulturüberstände (1C4G1 (A1), 1 H12D9) und der gereinigten mAK ((A11H3(A4), 1E8G9(B2) und 4A5F3(13C3)) auf den gleichen Eiweiß- bzw. IgGGehalt und Titration in einer Verdünnungsplatte von 2 μg/ml bis 0,03 μg/ml.• Adjustment of cell culture supernatants (1C4G1 (A1), 1 H12D9) and the purified mAb ((A11H3 (A4), 1E8G9 (B2) and 4A5F3 (13C3)) to the same protein or IgG content and titration in a dilution plate of 2 μg / ml to 0.03 μg / ml.
• Überführung von jeweils 200 μl der Verdünnungsstufen mittels Mehrkanalpipette in die mit GP BB bzw. GP MM beschichteten Platten. Zur Vermeidung von Zeitdifferenzen wurden für jeden zu untersuchenden Antikörper die mit GP BB und GP MM beschichteten Mikrotiterstreifen auf ein- und derselben Platte zusammengesteckt, so dass eine parallele Abarbeitung möglich war.Transfer of 200 μl each of the dilution stages by means of multichannel pipette into the plates coated with GP BB or GP MM. To avoid time differences, the microtiter strips coated with GP BB and GP MM were put together on one and the same plate for each antibody to be examined, so that a parallel processing was possible.
• Inkubation für 60 min bei 37 0CIncubation for 60 min at 37 ° C.
Nach BF-Trennung (Separation gebundener und ungebundener Komponenten) durch fünfmaliges Waschen Detektion mit anti-Maus IgG-POD (1 μg/ml; 200 μl pro Vertiefung).After BF separation (separation of bound and unbound components) by washing five times. Detection with anti-mouse IgG-POD (1 μg / ml, 200 μl per well).
• Inkubation für 30 min bei 37 0C.Incubation for 30 min at 37 ° C.
Nach BF-Trennung durch fünfmaliges Waschen TMB (Tetramethylbenzidin)/Substratreaktion mit SeramunBlau® fast (200 μl/Vertiefung). Ergebnis:After BF separation by washing TMB (tetramethylbenzidine) five times / substrate reaction with SeramunBlau® fast (200 μl / well). Result:
Keiner der monoklonalen Antikörper zeigte im direkten ELISA eine Reaktivität mitimmobilisierter GP MM. Mit Ausnahme des mAK 2A11 H3(A4) war die Reaktivität dieser Antikörper mit Festphase gebundener GP BB hinsichtlich der Extinktionsausbeute mit vorangegangenen Ansätzen vergleichbar. Die im Parallelansatz mitgeführten mAK 329B6 und 326G5 zeigten im Vergleich zu vorangegangenen Ansätzen reproduzierbare Extinktionsausbeuten mit insolubilisierter GP BB.None of the monoclonal antibodies showed reactivity with immobilized GP MM in the direct ELISA. With the exception of mAb 2A11 H3 (A4), the reactivity of these antibodies with solid phase-bound GP BB was comparable in extinction yield to previous approaches. The mAK 329B6 and 326G5, which were included in the parallel approach, showed reproducible extinction yields with insolubilized GP BB compared to previous approaches.
Reaktivitätstestung der ausgewählten monoklonalen Antikörper mit Membran-insolubilisierter GP BB und GP MM im Dot Blot (Bindung des Analyten an eine Nitrozellulose-Membran mit anschliessender Detektion mittels der Antikörper)Reactivity testing of the selected monoclonal antibodies with membrane-insolubilized GP BB and GP MM in the dot blot (binding of the analyte to a nitrocellulose membrane with subsequent detection by means of the antibodies)
Die für weitere Charakterisierungen ausgewählten monoklonalen Antikörper mit denKurzbezeichnungen A1 , A4, B2, 13C3, D9 , wurden im Dot Blot hinsichtlich ihrer Reaktivität mit GP BB bzw. GP MM untersucht, um eine durch unterschiedliche GP-Konformation in Abhängigkeit vom Trägermaterial im ELISA nicht erkennbare Kreuzreaktivität mit GP MM auszuschließen. Für diese Untersuchungen wurden jeweils 1 ,1 μl (entsprechend etwa 1 μg) GP BB bzw. GP MM auf Nitrozellulose-Streifen aufgetropft, über Nacht getrocknet, anschließend für 2 Stunden bei Raumtemperatur mit Inertprotein geblockt und dann erneut über Nacht getrocknet. Die im Parallelansatz mitgeführten monoklonalen Antikörper 329B6 und 326G5 wurden gleich getestet.The monoclonal antibodies selected for further characterizations with the abbreviations A1, A4, B2, 13C3, D9, were examined in the Dot Blot for their reactivity with GP BB or GP MM, respectively, in order not to be recognized by different GP conformation depending on the carrier material in the ELISA To exclude cross-reactivity with GP MM. For these investigations, in each case 1.1 μl (corresponding to about 1 μg) of GP BB or GP MM were dropped onto nitrocellulose strips, dried overnight, then blocked with inert protein for 2 hours at room temperature and then dried again overnight. The parallel monoclonal antibodies 329B6 and 326G5 were tested immediately.
Die monoklonalen Antikörper wurden wie folgt getestet:The monoclonal antibodies were tested as follows:
• Einstellen auf gleichen Protein- bzw. IgG-Gehalt und Titration von 1000 ng/ml bis 7,8 ng/ml.• Adjust to the same protein or IgG content and titration from 1000 ng / ml to 7.8 ng / ml.
• Überführung von jeweils 1 ml pro Verdünnungsstufe in die Blotwannen mit den entsprechenden Membranstreifen. • Inkubation für 60 min bei Raumtemperatur auf dem Schüttler.Transfer 1 ml per dilution step into the blotters with the corresponding membrane strips. • Incubate for 60 min at room temperature on the shaker.
• 3 x 5 min Waschen mit Waschpuffer.• Wash 3 x 5 min with wash buffer.
• Detektion gebundener Antikörper mit anti-Maus-lgG-POD (1 μg/ml, 1 ml pro Vertiefung). • Inkubation für 60 min bei Raumtemperatur auf dem Schüttler.Detection of bound antibodies with anti-mouse IgG POD (1 μg / ml, 1 ml per well). • Incubate for 60 min at room temperature on the shaker.
• 3 x 5 min Waschen mit Waschpuffer.• Wash 3 x 5 min with wash buffer.
• Substratreaktion mit SeramunBlau® prec. und visuelle Auswertung.Substrate reaction with SeramunBlau® prec. and visual evaluation.
Ergebnis:Result:
Alle sieben monoklonalen Antikörper reagieren mit Nitrocellulose-gebundenerAll seven monoclonal antibodies react with nitrocellulose bound
GP BB.GP BB.
Keiner der sieben ausgewählten monoklonalen Antikörper reagiert dagegen mit der membrangebundenen GP MM. However, none of the seven selected monoclonal antibodies react with the membrane-bound GP MM.

Claims

Patentansprüche:claims:
1. Antikörper gegen die Epitope1. Antibodies to the epitopes
GRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) oder IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) ODERGRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) or IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) OR
GLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) oderGLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) or
DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4),DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4),
dadurch gekennzeichnet,characterized,
dass sie aus der humanen Glykogen Phosphorylase Isoenzym BB abgeleitet sindthat they are derived from the human glycogen phosphorylase isoenzyme BB
2. Antikörper nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass sie an nichtlineare Epitope der Glykogen Phosphorylase Isoenzym BB binden, die sich aus einer Kombination der in Anspruch 1 genannten Epitope ergeben.2. Antibody according to claim 1, characterized in that they bind to non-linear epitopes of the glycogen phosphorylase isoenzyme BB, which result from a combination of the epitopes mentioned in claim 1.
3. Antikörper nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass sie an Teilepitope der beschriebenen Epitope binden.3. Antibody according to claim 1, characterized in that they bind to part epitopes of the described epitopes.
4. Antikörper nach den Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Kombination der Epitope E1 + E2 ; E1 + E3 ; E1 + E4 ; E2 + E34. Antibody according to claims 1 and 2, characterized in that the combination of epitopes E1 + E2; E1 + E3; E1 + E4; E2 + E3
;E2+ E4 oder E3 + E4 sein kann.; E2 + E4 or E3 + E4 can be.
5. Antikörper nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass sie nicht an die Glykogen Phosphorylase Isoenzym LL binden.5. An antibody according to claim 1, characterized in that they do not bind to the glycogen phosphorylase isoenzyme LL.
6. Antikörper nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass sie nicht an die Glykogen Phosphorylase Isoenzym MM binden. 6. An antibody according to claim 1, characterized in that they do not bind to the glycogen phosphorylase isoenzyme MM.
7. Antikörper nach Anspruch 1 oder2, dadurch gekennzeichnet, dass sie von Hybridomen produziert werden, die durch die Fusion von Myelomzellen Sp 2/0 mit Milzzellen aus Balb-c-Mäusen erhältlich sind, wobei die balb-c-Mäuse mit der Glykogen Phosphorylase B immunisiert wurden.Antibodies according to claim 1 or 2, characterized in that they are produced by hybridomas obtainable by the fusion of myeloma cells Sp 2/0 with spleen cells from Balb c mice, the balb c mice bearing the glycogen phosphorylase B were immunized.
8. Antikörper nach einem der Ansprüche 1-7, dadurch gekennzeichnet, dass sie vom einem der Hybridome 326G5 ; 329B6 ; 1 E8G9; ; 1C4G1 ; 4A5F3 1 H12 oder 1A11 H3, hinterlegt in der Deutschen Sammlung für8. An antibody according to any one of claims 1-7, characterized in that it from one of the hybridomas 326G5; 329B6; 1 E8G9; ; 1C4G1; 4A5F3 1 H12 or 1A11 H3, deposited in the Deutsche Sammlung for
Mikroorganismen und Zellkulturen unter den Nr. DSM 00000000 (Datum) produziert werden.Microorganisms and cell cultures are produced under the number DSM 00000000 (date).
9. Verwendung von Antikörpern nach einem der Ansprüche 1-7, dadurch gekennzeichnet, dass sie zum Nachweis von nativer Glycogen9. Use of antibodies according to any one of claims 1-7, characterized in that they are for the detection of native glycogen
Phosphorylase BB in menschlichen Proben eingesetzt werden kann.Phosphorylase BB can be used in human samples.
10. Verwendung von Antikörpern nach einem der Ansprüche 1-7, dadurch gekennzeichnet, dass sie zum Nachweis von nativer Glycogen Phosphorylase BB in menschlichen Proben zur Diagnose von akuten10. Use of antibodies according to one of claims 1-7, characterized in that they are suitable for the detection of native glycogen phosphorylase BB in human samples for the diagnosis of acute
Koronarsyndromen eingesetzt werden kann.Coronary syndromes can be used.
H . Epitope GRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) oder IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) ODER GLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) oderH . Epitopes GRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) or IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) OR GLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) or
DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4), dadurch gekennzeichnet dass sie von Antikörpern erkannt werden, welche spezifisch das Protein Glykogen Phosphorylase Isoenzym BB binden.DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4), characterized in that they are recognized by antibodies which specifically bind the protein glycogen phosphorylase isoenzyme BB.
12. Verwendung von diagnostischen Nachweissystemen, dadurch gekennzeichnet dass sie die Epitope12. Use of diagnostic detection systems, characterized in that they are the epitopes
GRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) oder IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) ODERGRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) or IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) OR
GLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) oderGLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) or
DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4)allein oder in Kombination für den quantitativen Nachweis von Glykogen Phosphorylase Isoenzym BB in humanen Proben nutzen.Use DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4) alone or in combination for the quantitative detection of glycogen phosphorylase isoenzyme BB in human samples.
13. Verwendung diagnostischen Nachweissystemen, dadurch gekennzeichnet dass sie die Epitope GRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) oder IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) ODER13. Use of diagnostic detection systems, characterized in that they have the epitopes GRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) or IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) OR
GLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) oderGLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) or
DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4)allein oder in Kombination für den qualitativen Nachweis von Glykogen Phosphorylase Isoenzym BB in humanen Proben nutzen.DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4) used alone or in combination for the qualitative detection of glycogen phosphorylase isoenzyme BB in human samples.
14. Verwendung von diagnostischen Nachweissystemen, dadurch gekennzeichnet dass sie die Epitope GRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) oder IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) ODER GLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) oder14. Use of diagnostic detection systems, characterized in that they have the epitopes GRWIRTQQHYYERDPKRIYYLSLEFYMGRTLQNTM (E1) or IFNQKIVNGWQVEEADDWLRYGNPWEKARP (E2) OR GLGDVAEVRKSFNRHLHFTLVKDRNVATPRDYFFA (E3) or
DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4) allein oder in Kombination für die Diagnose von akuten Koronar Syndromen nutzen. Use DSMATLGLAAYGYGIRYEFG (E4) alone or in combination for the diagnosis of acute coronary syndromes.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102013106254A1 (en) 2013-06-14 2014-12-18 Diagenics Se biomarkers

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102011051076A1 (en) 2011-06-15 2012-12-20 Diagenics Se Method for determining the ischemic level of a suspected stroke patient
WO2014121252A1 (en) * 2013-02-04 2014-08-07 The General Hospital Corporation Biomarkers for stroke diagnosis
WO2018127564A2 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Diagenics Group Se Detecting agents and epitopes mapping for detecting glycogen phosphorylase isoenzyme bb

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DD242750A1 (en) * 1985-11-19 1987-02-11 Akad Wissenschaften Ddr PROCESS FOR PREPARING MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST HUMAN GLYCOPY PHOSPHORY LASE ISOENZYME
DD274054A1 (en) * 1988-07-12 1989-12-06 Akad Wissenschaften Ddr PROCESS FOR THE PREPARATION OF MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST THE ISOENZYME BB OF HUMAN GLYCOPY PHOSPHORY LASE B

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO2008064903A2 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102013106254A1 (en) 2013-06-14 2014-12-18 Diagenics Se biomarkers

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