EP1594486A2 - Uses of acylated aminopropanediols and sulphur and nitrogen analogues of same - Google Patents

Uses of acylated aminopropanediols and sulphur and nitrogen analogues of same

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EP1594486A2
EP1594486A2 EP04710413A EP04710413A EP1594486A2 EP 1594486 A2 EP1594486 A2 EP 1594486A2 EP 04710413 A EP04710413 A EP 04710413A EP 04710413 A EP04710413 A EP 04710413A EP 1594486 A2 EP1594486 A2 EP 1594486A2
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EP
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group
compound
formula
atom
compounds
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EP04710413A
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Jamila Najib
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Genfit SA
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Publication date
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    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers

Definitions

  • the present invention relates to the use of acylated aminopropanediol derivatives and their nitrogen and sulfur analogues, pharmaceutical and cosmetic compositions comprising them, their therapeutic applications, in particular for preventing or treating cardiovascular diseases, syndrome X, restenosis, diabetes, obesity, hypertension, certain cancers, dermatological diseases as well as in the cosmetic field, to prevent or treat the effects of skin aging, in particular the appearance of wrinkles, etc.
  • the compounds of the invention notably have advantageous antioxidant and anti-inflammatory pharmacological properties.
  • the invention also describes the methods of therapeutic treatment using these compounds and pharmaceutical and cosmetic compositions containing them.
  • Atherosclerosis and its cardiovascular complications are the main cause of morbidity and mortality in highly industrialized countries. Atherosclerosis and its complications are also an important consequence of type II diabetes. A strict cause and effect link has been demonstrated between dyslipidemia and cardiovascular disease. A high circulating LDL-cholesterol level is unfavorable. The risk caused by a high level of LDL-cholesterol is amplified by an increase in the level of triglycerides. The importance of the stability of atherosclerotic lesions in the occurrence of cardiovascular accidents has also been highlighted. The role of LDL oxidation in the development of atherosclerotic plaque and its embrittlement is better understood.
  • Drug treatments for atherosclerosis aim to reduce circulating cholesterol or triglyceride levels, increase plaque stability atherosclerosis, to reduce the mechanical stresses to which the vessels are subjected (reduction in blood pressure) and to reduce the associated risk factors such as diabetes.
  • Among the drugs currently used in the treatment of dyslipidemia are fibrates and statins. Metformin, sulfonylurea, thiazolidinediones are used in the treatment of type II diabetes.
  • Fibrates are widely used for the treatment of hypertriglyceridemia. They also have favorable effects on the level of hypercholesterolemia. They are generally well tolerated but have a number of side effects: skin reactions, neurological effects, muscular and gastrointestinal effects. Toxic effects are rare (kidneys, muscles, joint, skin, hepatitis, etc.). As for the incidence on cancer risk, it is significant in rodents even if it has not been demonstrated in humans.
  • Statins are widely used for the treatment of high cholesterol. Treating patients who have had a first stroke has been shown to significantly reduce the risk of recurrence.
  • Thiazolidinediones have recently been introduced for the treatment of insulin resistance. Therefore, the hindsight necessary for an objective estimate of all the adverse effects of these molecules is not sufficient. In this context, the observation of an increase in the frequency of colonic tumors in an animal model predisposed to colon cancer (Min mice carrying a mutation of the APC gene) is unfavorable.
  • a thiazolidinedione (troglitazone) has moreover been recently withdrawn from the market for reasons of hepatic toxicity.
  • the main molecules used in the drug treatment of atherosclerosis (fibrates, statins) have a spectrum of pleiotropic action.
  • Fibrates activate a class of nuclear receptors (PPAR ⁇ , PPAR ⁇ , etc.) involved in the coordination of the expression of proteins responsible for the transport or metabolism of lipids.
  • the pleiotropic nature of the action spectrum of fibrates lies in the diversity of target genes for PPARs.
  • Statins decrease the de novo synthesis of cholesterol by inhibiting the activity of HMG-CoA reductase.
  • the present invention relates to the use as a medicament of a family of compounds having advantageous pharmacological properties and usable for the curative or preventive treatment of various pathologies.
  • G2 and G3 independently represent an oxygen atom, a sulfur atom or an N-R4 group, G2 and G3 cannot simultaneously represent an N-R4 group,
  • R and R4 independently represent a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group, saturated or not, optionally substituted, containing from 1 to 5 carbon atoms, R1, R2 and R3, identical or different, represent a hydrogen atom, a CO-R5 group or a group of formula CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6, at least one of the groups R1, R2 and R3 being a group of formula CO- (CH 2 ) 2n + .- X-R6,
  • R5 is a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, optionally comprising a cyclic group, the main chain of which contains from 1 to 25 carbon atoms,
  • X is a sulfur atom, a selenium atom, an SO group or an S0 2 group,
  • n is an integer between 0 and 11
  • R6 is a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, optionally comprising a cyclic group, the main chain of which contains from 3 to 23 carbon atoms, preferably 10 to 23 carbon atoms and optionally one or more heterogroups , chosen from an oxygen atom, a sulfur atom, a selenium atom, an SO group and an SQ 2 group.
  • the group or groups R5, identical or different preferably represent a linear or branched, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted alkyl group, the main chain of which comprises from 1 to 20 carbon atoms, even more preferably from 7 to 17 carbon atoms, even more preferably 14 to 17.
  • the group or groups R5, identical or different may also represent a lower alkyl group containing from 1 to 6 carbon atoms, such as in particular the radical methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, tert-butyl, pentyl or hexyl.
  • the group or groups R6, which are identical or different, preferably represent a linear or branched, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted alkyl group, the main chain of which comprises from 3 to 23 carbon atoms, preferably from 13 to 20 carbon atoms, even more preferably from 14 to 17 carbon atoms, and even more preferably 14 carbon atoms.
  • saturated long chain alkyl groups for R5 or R6 are in particular the groups C H15, C10H21, C11H23, C13H27, C14H29, C15H31-C16H33. C17H 35 .
  • unsaturated long chain alkyl groups for R5 or R6 are in particular the groups C14H27, C14H25, C15H29, C17H29, C17H31-.
  • the alkyl groups R5 or R6 may optionally include a cyclic group.
  • cyclic groups are especially cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl and cyclohexyl.
  • the alkyl groups R5 or R6 may be optionally substituted by one or more substituents, identical or different.
  • the present invention also relates to the use of the optical and geometric isomers of these compounds, their racemates, their salts, their hydrates and their mixtures.
  • the present invention relates to the use of compounds of formula (I) in which the groups G2R2 and G3R3 do not simultaneously represent hydroxyl groups. .
  • the compounds of formula (la) are the compounds of formula (I) according to the invention in which only one of the groups R1, R2 or R3 represents a hydrogen atom.
  • the compounds of formula (Ib) are the compounds of formula (I) according to the invention in which two of the groups R1, R2 or R3 represent a hydrogen atom.
  • the present invention also relates to the use of prodrugs of the compounds of formula (I) or of compositions containing them, which, after administration in a subject, will be transformed into compounds of formula (I) which exhibit therapeutic activities comparable to compounds of formula
  • X most preferably represents a sulfur or selenium atom and advantageously a sulfur atom. Furthermore, in the group CO- (CH 2 ) 2n + X-R6. n is preferably between 0 and 3, more specifically between 0 and 2 and is in particular equal to 0.
  • R6 may comprise one or more heterogroups, preferably 0, 1 or 2, more preferably 0 or 1, chosen from an oxygen atom, a sulfur atom, a selenium atom, an SO group and an S0 2 group.
  • a specific example of a CO- (CH2) 2n + X-R6 group according to the invention is the group CO-CH2-S-C14H29.
  • Preferred compounds within the meaning of the invention are therefore compounds of general formula (I) above in which at least one of the groups R1, R2 and R3 represents a group CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 in which X represents a sulfur or selenium atom and preferably a sulfur atom and or R6 is a saturated and linear alkyl group comprising from 3 to 23 carbon atoms, preferably 13 to 20 carbon atoms, preferably 14 to 17, more preferably 14 to 16, and even more preferably 14 carbon atoms.
  • R1, R2 and R3 are GO- (GH2) 2n + .
  • X-R6 groups identical or different, in which X represents a sulfur atom or selenium and preferably a sulfur atom.
  • Particular compounds according to the invention are those in which G2 represents an oxygen or sulfur atom, and preferably an oxygen atom.
  • R2 advantageously represents a group of formula CO- (CH 2 ) 2n + ⁇ -X-R6 as defined above.
  • Particularly preferred compounds are the compounds of general formula (I) above in which:
  • G3 is an N-R4 group in which R4 is a hydrogen atom or a methyl group, and G2 is an oxygen atom; and / or • R2 represents a CO- (CH 2 ) 2 n + rX-R6 group as defined above.
  • - X-R6 such as defined above, in which X represents a sulfur or selenium atom and preferably a sulfur atom and or R6 is a saturated and linear alkyl group comprising from 13 to 17 carbon atoms, preferably 14 to 17, also more preferably 14 carbon atoms, in which n is preferably between 0 and 3, and in particular equal to 0.
  • preferred compounds are the compounds of general formula (I) in which R1, R2 and R3 represent GO-GH2-S-G14H29 groups.
  • a subject of the invention is therefore the use of at least one compound as described above for the preparation of pharmaceutical compositions intended for the treatment of various pathologies, in particular pathologies involving deregulation of the metabolism of lipids and / or carbohydrates , pathologies linked to inflammation, and / or pathologies linked to proliferation and / or cell differentiation.
  • the pathologies linked to lipid and / or carbohydrate metabolism disorders treated according to the invention are in particular chosen from metabolic syndrome (syndrome X), diabetes, atherosclerosis and obesity.
  • the pathologies linked to the inflammation treated according to the invention are chosen more particularly from atherosclerosis, an allergy, asthma, eczema, psoriasis and itching.
  • the pathologies linked to proliferation and / or cell differentiation treated according to the invention are in particular chosen from - carcinogenesis, psoriasis and atherosclerosis.
  • a more particular subject of the present invention is the use of compounds of formula (I) as defined above in the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment or prophylaxis of cardiovascular diseases, syndrome X, restenosis, type I or II, preferably type II diabetes, obesity, hypertension, in particular hypertension, cancers, in particular cancer of the anus, rectum, colon, intestine, duodenum, stomach, prostate, testes, bladder, kidney, pancreas, liver, larynx, breast, lungs, leukemia and melanomas, and diseases dermatological. It also relates to their use in cosmetic compositions or for the preparation of cosmetic compositions, for preventing or treating the effects of aging.
  • the compounds of formula (I) have both PPAR activator, antioxidant and anti-inflammatory properties.
  • the present invention also relates to a pharmaceutical or cosmetic composition
  • a pharmaceutical or cosmetic composition comprising, in a. carrier acceptable from the pharmaceutical or cosmetic point of view, a compound of general formula (I) as described above, optionally in combination with another therapeutic active agent, intended for the preventive or curative treatment of the pathologies and disorders mentioned above .
  • the subject of the invention is also a method of treatment of the pathologies or disorders mentioned above, comprising the administration to a subject, in particular animal or in particular human, of an effective dose of a compound of formula (I) or of a pharmaceutical composition as defined above.
  • treatment is meant both curative and preventive treatment.
  • compositions according to the invention advantageously comprise one or more excipients or vehicles, acceptable from the pharmaceutical or cosmetic point of view. Mention may be made, for example, of saline, physiological, isotonic, buffered solutions, etc., compatible with pharmaceutical or cosmetic use and known to those skilled in the art.
  • the compositions may contain one or more agents or vehicles chosen from dispersants, solubilizers, stabilizers, surfactants, preservatives, etc.
  • Agents or vehicles that can be used in formulations are in particular methylcellulose, hydroxymethylcellulose, carboxymethylcellulose, polysorbate 80, mannitol, gelatin, lactose, vegetable oils, acacia, etc.
  • compositions may be formulated in the form of an injectable suspension, gels, oils, tablets, suppositories, powders, capsules, capsules, etc., optionally by means of dosage forms or devices ensuring sustained and / or delayed release.
  • an agent such as cellulose, carbonates or starches is advantageously used.
  • the compounds or compositions according to the invention can be administered in different ways and in different forms.
  • they can for example be administered systemically, orally, parenterally, by inhalation or by injection, such as for example by intravenous, intramuscular, subcutaneous, trans-dermal, intra-arterial, etc.
  • the compounds are generally packaged in the form of liquid suspensions, which can be injected using syringes or infusions, for example.
  • the compounds are generally dissolved in saline, physiological, isotonic, buffered solutions, etc., compatible with pharmaceutical use and known to those skilled in the art.
  • compositions can contain one or more agents or vehicles chosen from dispersants, solubilizers, emulsifiers, stabilizers, surfactants, preservatives, buffers, etc.
  • agents or vehicles chosen from dispersants, solubilizers, emulsifiers, stabilizers, surfactants, preservatives, buffers, etc.
  • Agents or vehicles that can be used in liquid and / or injectable formulations are in particular methylcellulose, hydroxymethylcellulose, carboxymethylcellulos ⁇ , polysorbate 80, mannitol, gelatin, lactose, vegetable oils, acacia, liposomes, etc. .
  • the compounds can thus be administered in the form of gels, oils, tablets, suppositories, powders, capsules, capsules, aerosols, etc., optionally by means of dosage forms or devices ensuring sustained and / or delayed release.
  • an agent such as cellulose, carbonates or starches is advantageously used.
  • the compounds can be administered orally in which case the agents or vehicles used are preferably chosen from water, gelatin, gums, lactose, starch, magnesium stearate, talc, oil, polyalkylene glycol, etc.
  • the compounds are preferably administered in the form of solutions, suspensions or emulsions with in particular water, oil or polyalkylene glycols to which it is possible to add, in addition to preservatives, stabilizers, emulsifiers , etc., salts to adjust the osmotic pressure, buffers, etc.
  • the compounds of the invention can be administered in any form usual in cosmetics, in particular cream, such as for example care creams, sun creams, oils, gels, lotions, etc.
  • the flow rate and / or the dose injected can be adapted by a person skilled in the art depending on the patient, the pathology concerned, the mode of administration, etc.
  • the compounds are administered in doses which can vary between 1 ⁇ g and 2 g per administration, preferably from 0.1 mg to 1 g per administration.
  • the administrations can be daily or repeated several times a day, if necessary.
  • the compositions according to the invention can also comprise other agents or active principles.
  • the invention also relates to processes for the preparation of the compounds as defined above.
  • the compounds of the invention can be prepared from commercial products, using a combination of chemical reactions known to those skilled in the art.
  • - X-R6 are obtained from a compound of formula (I) in which (i) G2 or G3 are oxygen or sulfur atoms or an NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a CO- group R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6, and of a compound of formula A1-LG in which A1 represents the group R or, where appropriate, R4 and LG a
  • the compounds of formula (I) in which (i) G2 and G3 are oxygen or sulfur atoms or an NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3, identical, represent a group CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6, are obtained from a compound of formula (I) in which (i) G2 or G3 are oxygen atoms, sulfur or an NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3 are hydrogen atoms and of a compound of formula A ° -GO-A in which A is a group reagent chosen for example from OH, Cl, 0-CO-A ° and 0-R7, R7 being an alkyl group, and A ° is the CHa -R ⁇ group, optionally in the presence of coupling agents or activators known from the skilled person.
  • the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms or an NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3 are hydrogen atoms or represent a CO-R5 or GO- (GH 2 ) 2n + ⁇ -X-R6 group can be obtained according to different methods which allow the synthesis of compounds in which the groups carried by the same heteroatom (nitrogen or oxygen) have the same meaning.
  • a molecule of 1-aminoglycerol, 1, 3-diaminoglycerol or 1, 2-diaminoglycerol (obtained by adapting the protocol described by (Morris, Atassi et al. 1997) is reacted with a compound of formula A ° -CO-A1 in which A1 is a reactive group chosen, for example, from OH, Cl and OR7, R7 being an alkyl group, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + .- X-R6 in the optional presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
  • R1, R2 and R3, identical or different, represent a group GO-R5 or GO-
  • (CH 2 ) 2n -. ⁇ -X-R6 can be obtained from a compound of formula (lla-c) and a compound of formula ⁇ ° -GO-A2 in which A2 is a chosen reactive group for example between OH and CI, and A ° is the group R5 or the group (GH 2 ) 2n + .- X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
  • This reaction allows the synthesis of compounds in which the groups carried by the same heteroatom (nitrogen or oxygen), respectively (R1 and R2), (R1 and R3), or (R2 and R3) have the same meaning.
  • the compounds of formula (I) in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms or a NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + . -X-R6. can be obtained in the following steps:
  • reaction of 1-aminoglycerol, 1, 3-diaminoglycerol or diaminoglycerol 1,2 with a compound (PG) 2 0 wherein PG is a protecting group to give a compound of general formula (IIIa-c).
  • the reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Nazih, Cordier et al. 2000) and (Kotsovolou, Chiou et al. 2001) in which (PG) 0 represents di-tert-butyl dicarbonate;
  • a compound of formula (I) according to the invention is reacted, in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R and R2 are hydrogen atoms and (iii ) R1, R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + ⁇ -X-R6, with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen by example between OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + ⁇ -X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
  • (CH 2 ) 2n + -R6 can be obtained from a compound of formula (IIa) as defined above with a compound of formula A ° -CO- ⁇ 2 in which A2 is a reactive group chosen for example between OH and CI, and A ° is the group R5 or the group (GH2) 2n + X-R6. optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
  • the compounds of formula (I) in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6, can be obtained from a compound of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R, R2 and R3 represent a hydrogen atom and (iii) R1 is a CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 group (compound of formula ( lia)) according to the following steps (diagram 2): a) reaction of the compound of formula (Ha) with a compound PG-E in which PG is a protective group and E is a reactive group chosen, for example, from OH or a halogen, to give a compound of general formula (V) in which R
  • reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1988; Gaffney and Reese 1997) in which PG-E can represent the chloride of triphenylmethyl or 9-phenylxanthene-9-ol or also 9-chloro-9-phenylxanthene;
  • a ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + .- X-R6, in the presence optionally coupling agents or activators known to those skilled in the art.
  • - X-R6 group are obtained by reaction of a compound of formula (I) in which (i) one of the groups G2R2 or G3R3 represents a hydroxyl group and the other group G2R2 or G3R3 respectively represents a group NR4R2 or NR4R3 with R2 or R3 representing a group CO-R5 or a group CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6.
  • R and R4 independently represent a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, containing from 1 to 5 carbon atoms and
  • R1 represents a group CO-R5 or a group CO- (CH 2 ) 2n + .- X-R6.
  • A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + ⁇ -X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
  • reaction may advantageously be implemented by adapting the protocols described by (Nazih, Cordier et al., 2000) and (Kotsovolou, Chiou et al., 2001) wherein (PG) 2 0 represents the di-tert-butyl dicarbonate;
  • the reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Pjantadosi et al. 1988) and (Gaffney and Reese 1997) in which PG'-E can represent triphenylmethyl chloride or 9-phenylxanthene-9- ol or also 9-chloro-9-phenylxanthene;
  • CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + rX-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art for obtaining a compound of formula (XV) in which R and R4 independently represent linear or branched alkyl groups, saturated or unsaturated, optionally substituted, comprising from 1 to 5 carbon atoms, R2 represents a group CO-R5 or a group CO- (CH 2 ) 2 n + ⁇ -X-R6, PG and PG 'are protective groups;
  • A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl
  • a ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + rX-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art for obtaining a compound of formula (XV) in which R and R4 independently represent linear or branched
  • R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3 are atoms hydrogen or represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + .
  • - X-R6, R1, R2 and / or R3 having the same meaning if they are carried by the same heteroatom (sulfur or nitrogen), can be obtained as follows (diagram 5B):
  • LG in which LG a reactive group chosen, for example, from iodine, bromine, etc., in the presence of possible activators known to a person skilled in the art to give a compound of general formula (XVId-f);
  • - X-R6 can be prepared from the compounds of formula (IIIa-c) by a process comprising (diagram 6):
  • R1 are hydrogen atoms and (iii) R2 and R3 represent a hydrogen atom, a CO-R5 or CO- (CH) 2 n + rX-R6 group with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen for example between OH and CI, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + .- X- R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known from l tradesman.
  • the compounds of general formula (I) in which (i) the groups G2 and G3 represent a sulfur atom or an N-R4 group, (ii) R and R4 independently represent groups as defined above, (iii) R1 is a hydrogen atom and (iv) R2 and R3, identical or different, represent a CO-R5 group or a GO- (GH 2 ) 2n + .- X-R6 group, can be obtained according to the following methods:
  • R and R4 independently represent different linear or branched alkyl groups, saturated or unsaturated, optionally substituted, having from 1 to 5 carbon atoms, (iv) R1 is a hydrogen atom and (v) R2 and R3, identical or different, represent a CO-R5 group or a CO- (CH 2 ) 2n + 1-X-R6 group are obtained in the following manner (diagram 7): a) reaction of a compound of formula (XI) with a compound of formula LG-E in which E represents a halogen and LG a reactive group chosen for example from mesyl, tosyle, etc., to give a compound of general formula ( XXII) in which PG represents a protective group;
  • R6 optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of general formula (XXV) in which R2 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6;
  • LG-E in which E represents a halogen and LG a reactive group chosen for example from mesyl, tosyie, etc., to give a compound of general formula (XXVII) in which PG represents a protective group;
  • This reaction can advantageously be carried out by adapting the protocol described by (Gronowitz, Herslôf et al. 1978);
  • the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 is a sulfur atom, (ii) G3 is an oxygen atom, (iii) R is an atom hydrogen, (iv) R1 and R2 represent a group CO-R5 or GO- (CH2) 2n + .- X-R6 and (v) R3 is a hydrogen atom or represents a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + .- X-R6, can be prepared from the compounds of formula (V) by the following process (scheme 9B):
  • LG a reactive group chosen, for example, from iodine, bromine, etc., to give a compound of general formula (XXXI la) in which PG represents a protective group; b) reaction of a compound of formula (XXXIIa) with a compound of formula HS " B + in which B is a counterion chosen for example from sodium or potassium, preferably sodium to give a compound of general formula ( XXXIV);
  • the reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1988) and (Gaffney and Reese 1997) in which PG-E can represent triphenylmethyl chloride or 9-phenylxanthene-9-ol or 9-chloro-9-phenylxanthene;
  • reaction can advantageously be carried out implemented by adapting the protocols described by (. Nazih, Cordier et al 2000) and (. Kotsovolou, Chiou et al 2001) wherein (PG) 2 0 represents the di-tert-butyl dicarbonate;
  • the reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1,88) and (Gaffney and Reese 1997), in which PG-E can represent triphenylmethyl chloride or 9-phenylxanthene-9 -ol or the
  • the reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1988) and (Gaffney and Reese 1997) in which PG'-E can represent triphenylmethyl chloride or 9-phenylxanthene-9- ol or the
  • the reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Nazih, Cordier et al. 2000) and (otsovolou, Chiou et al. 2001) in which (PG) 2 ⁇ represents di-tert-butyl dicarbonate;
  • R2 and R3, identical, are hydrogen atoms or represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + .
  • - X-R6 and (v) R1 represents a group CO-R5 or CO- (CH2) 2n + -R6, can be prepared from the compounds of formula (Illa) according to the following process (diagram 13):
  • Figure 1 Structure of particular compounds according to the invention, the preparation of which is described in Examples 2, 4, 5, 6, 8, 10 to 14, 16, 18, 19, 21 and 23, noted in Figure 1A.2 respectively , 1A.4, 1A.5, 1A.6, 1A.8, 1A.10, 1A.11, 1A.12, 1A.13, 1A.14, 1A.16, 1A.18, 1A.19, 1A .21 and 1A.23.
  • Figure 2 Evaluation of the properties of PPAR ⁇ agonists of compounds according to the invention with the Gal4 / PPAR ⁇ transactivation system.
  • Figure 3 Evaluation of the effects of a compound according to the invention (Example 11) on the metabolism of cholesterol and plasma triglycerides in the Zucker rat.
  • Figure 4 Evaluation of the antioxidant properties of compounds according to the invention on the oxidation of LDL by copper (Cu).
  • Figure 4 ⁇ formation of conjugated dienes as a function of time or Lag-Phase.
  • Example 2 the compounds according to the invention used in the examples for measuring or evaluating activity will be abbreviated as "Ex 2" to denote the compound according to the invention, the preparation of which is described in example 2.
  • Thin layer chromatographies TLC were carried out on MERCOF 6OF254 silica gel plates 0.2 mm thick.
  • Rf is used to denote the retention factor.
  • the column chromatographies were carried out on silica gel 60 with a particle size 40-63 ⁇ m (reference 9385-5000 MERCK).
  • the melting points (PF) were measured using a BUCHI B 540 device by the capillary method.
  • IR infrared
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • Mass spectra were performed on a PERKIN- ELMER SGIEX API 1 spectrometer (ESI-MS for Electrospray lonization Mass Spectrometry) or on an APPLIED BIOSYSTEMS Voyager DE-STR spectrometer of MALDI-TOF type (Matrix-Assisted Laser Desorption / lonization - Time Of Flight).
  • EXAMPLE 3 3- (palmitoylamino) propane-1.2-diol This compound is synthesized according to the procedure previously described (example 2) from 3-aminopropane-1, 2-diol and palmitic acid. Efficiency: 86% Rf (dichloromethane-methanol 9-1): 0.50
  • the oleic acid (5.698 g; 0.020 mol) and the 1,3-diaminopropan-2-ol (1 g; 0.011 mol) are placed in a flask and heated at 190 ° C for 2 hours.
  • the reaction medium is brought to ambient temperature then taken up in chloroform and washed with water.
  • the aqueous phase is extracted with chloroform and the organic phases are grouped, dried over magnesium sulphate then filtered and evaporated to dryness to give a black oily residue (6.64 g) which is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane-methanol 99-1).
  • the product obtained is then washed with ether and filtered. Yield: 23%
  • This compound is synthesized according to the procedure previously described (Example 7) from 1, 3-diaminopropan-2-ol and stearic acid.
  • Methyl 2,3-diaminopropanoate dihydrochloride (example 13a) (0.500 g; 2.62 mmol) and tetradecylthioacetic acid (example 1) (1.51 g; 5.23 mmol) are dissolved in dichloromethane (80 ml) at 0 ° C before adding triethylamine (0.79 ml), dicyclohexylcarbodiimide (1.62 g; 7.85 mmol) and hydroxybenzotriazole (0.707 g; 5.23 mmol).
  • the reaction medium is left stirring at 0 ° C for 1 hour and then brought to room temperature for 48 hours.
  • EXAMPLE 16 Preparation of 1.3-ditetradecylthioacetyla ino-2- (tetradecylthioacetylthio) propane 1,3-diamino-2-tetradecylthioacetylthiopropane dihydrochloride (example 15) (100 mg; 0.225 mmol) and tetradecylthioacetic acid (example 1) mg; 0.450 mmol) are dissolved in dichloromethane (30 ml) at 0 ° C before adding triethylamine (68 ⁇ l), dicyclohexylcarbodiimide (139 mg; 0.675 mmol) and hydroxybenzotriazole (61 mg; 0.450 mmol).
  • 1-amino-2,3-ditetradecylthioacetylthiopropane hydrochloride (example 17) (100 mg; 0.140 mmol) and tetradecylthioacetic acid (example 1) (62 mg; 0.210 mmol) are dissolved in dichloromethane (40 ml) at 0 ° C before adding triethylamine (43ml), dicyclohexylcarbodiimide (59 mg; 0.28 mmol) and hydroxybenzotriazole (29 mg; 0.210 mmol).
  • the reaction medium is left stirring at 0 ° C for 1 hour and then at room temperature for 24 hours.
  • the medium is then heated at slight reflux for 48 hours and then brought to dryness.
  • the residue obtained (310 mg) is purified by chromatography on gel of silica (eluent dichloromethane-cyclohexane 8-2) and makes it possible to obtain the desired compound in the form of a white powder.
  • 3-tetradecylthioacetylamino-1-triphenylmethyloxypropan-2-ol (2 g; 3.31 mmol) is dissolved in toluene (100 ml) before adding imidazole (0.564 g; 8.28 mmol), triphenylphosphine (2.171 g; 8.28 mmol) and iodine (1.681 g; 6.62 mmol) in this order.
  • the reaction medium is left under stirring at room temperature for 20 hours.
  • a saturated solution of sodium bisulfite is added until complete discoloration of the reaction medium.
  • the phases are separated; the aqueous phase is extracted with toluene, the organic phases are grouped, washed with a saturated solution of sodium chloride, dried over magnesium sulfate and then filtered. After evaporation of the solvent, the residue obtained (4.65 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichlromethane) and allows the desired compound to be obtained
  • hydrous sodium hydrogen sulphate 38 mg; 0.68 mmol
  • ethanol 20 ml
  • 2-iodo-3-tetradecylthioacetylamino-1-triphenylmethyloxypropane (example 20b) (200 mg; 0.28 mmol).
  • the reaction medium is heated to 70 ° C. 238 mg of hydrated sodium hydrogen sulfate are added over several days. After 6.5 days, the solvent
  • reaction medium is left under stirring at room temperature for 17 hours and 0.5 equivalents of imidazole, triphenylphosphine and iodine are added. After 21 hours of reaction, a saturated solution of sodium sulfite is added until complete discoloration of the reaction medium.
  • the phases are decanted and the aqueous phase is extracted twice with toluene. The combined organic phases are washed with a saturated aqueous sodium chloride solution, dried over magnesium sulfate, filtered and the solvent evaporated.
  • the compounds according to the invention were prepared in the form of an emulsion as described below.
  • the emulsion comprising a compound according to the invention and phosphatidylcholine (PC) is prepared according to the protocol of Spooner et al. (Spooner, Clark et al. 1988).
  • the compound according to the invention is mixed with the PC in a 4: 1 ratio (w / w) in chloroform, the mixture is dried under nitrogen, then evaporated overnight under vacuum, the resulting powder is taken up by 0 , 16 M of potassium chloride containing 0.01 M of EDTA then the lipid particles are dispersed by ultrasound for 30 minutes at 37 ° C.
  • the liposomes formed are then separated by ultracentrifugation (ultracentrifuge XL 80, Beckman Goulter, Viliepinte, France) at 25,000 rpm for 45 minutes to recover liposomes whose size is greater than 100 nm and approaches that of chylomicrons.
  • Liposomes consisting solely of PC are prepared in parallel to serve as a negative control.
  • the composition of the liposomes in compounds according to the invention is estimated using the enzymocolorimetric assay kit for triglycerides. The assay is performed against a standard range, prepared using the CFAS lipid calibrator (Ref. No. 759350, Boehringer Mannheim GmbH, Germany).
  • liposomes containing the compounds according to the invention, thus prepared are used in the in vitro experiments described in the following examples.
  • the compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
  • the nuclear receptors members of the PPAR subfamily which are activated by two major classes of pharmaceutical compounds, fibrates and glitazones, which are widely used in human clinics for the treatment of dyslipidemias and diabetes, play an important role in homeostasis. lipid and carbohydrate.
  • the following experimental data show that the compounds according to the invention activate PPAR ⁇ in vitro.
  • PPARs The activation of PPARs is evaluated in vitro in lines of fibroblastic type RK13 or in a hepatocyte line HepG2, by measuring the transcriptional activity of chimeras consisting of the DNA binding domain of the yeast transcription factor Gal4 and of the ligand binding domain of the different PPARs.
  • the example presented below is given for HepG2 cells.
  • HepG2 cells come from ECACC (Porton Down, UK) and are cultured in DMEM medium supplemented with 10% vol / vol calf serum fetal, 100 U / ml penicillin (Gibco, Paisley, UK) and 2 mM L-Glutamine (Gibco, Paisley, UK).
  • the culture medium is changed every two days.
  • the cells are stored at 37 ° C. in a humid atmosphere containing 5% of CO 2 and 95% of air.
  • the plasmids pG5TkpGL3, pRL-CMV, pGal4-hPPAR ⁇ , pGal4-hPPAR ⁇ and pGal4-f have been described by Rascourt et al. (Raspe, Madsen et al. 1999).
  • the constructions pGal4-mPPAR ⁇ and pGal4-hPPAR ⁇ are obtained by cloning into the vector pGal4-f DNA fragments amplified by PCR corresponding to the DEF domains of the nuclear receptors PPAR ⁇ from mice and PPAR ⁇ human respectively.
  • the HepG2 cells are seeded in 24-well culture dishes at the rate of 5 ⁇ 10 4 cells / well, are transfected for 2 hours with the reporter plasmid pG5TkpGL3 (50 ng / well), the expression vectors pGal4- f pGal4-mPPAR ⁇ , pGal4-hPPAR ⁇ , pGal4-hPPAR ⁇ or pGal4-hPPAR ⁇ (100 ng / well) and the transfection efficiency control vector pRL-CMV (1 ng / well) according to the protocol described previously (Raspe, Madsen et al. 1999) and incubated for 36 hours with the test compounds.
  • the cells are lysed (Gibco, Paisley, UK) and the luciferase activities are determined using the Dual-Luciferase TM Reporter Assay System assay kit (Promega, Madison, Wl, USA) according to the supplier's instructions.
  • the protein content of the cell extracts is then evaluated using the Bio-Rad Protein Assay assay kit (Bio-Rad, Kunststoff, Germany) according to the supplier's instructions.
  • the inventors demonstrate an increase in luciferase activity in cells treated with the compounds according to the invention and transfected with the plasmid pGal4-hPPAR ⁇ . This induction of luciferase activity indicates that the compounds according to the invention are activators of PPAR ⁇ .
  • FIG. 2 A example of results obtained with compounds according to the invention is presented in FIG. 2.
  • FIG. 2 HepG2 cells, transfected with the plasmids of the Gal4 / PPAR ⁇ system, are incubated with different concentrations (5, 15, 50 and 100 ⁇ M) of the compounds according to the invention (Ex 2, Ex 4, Ex 5, Ex 6, Ex 11) for 24 hours as well as with different vehicle concentrations (PC) noted 1, 2, 3, 4 as controls respectively for the concentrations 5, 15, 50 and 100 ⁇ M of the compounds according to the invention (according to the 4: 1 w / w ratio described in Example 24) (Method for preparing the compounds according to the invention).
  • the results are represented by the induction factor (luminescent signal of the treated cells divided by the luminescent signal of the untreated cells) according to the different treatments.
  • the compound according to the invention Ex 5 also induces an increase in the induction factor with a dose effect of 10.5 to 100 ⁇ M, 7 to 50 ⁇ M, 2.5 to 15 ⁇ M and 1, 2 at 5 ⁇ M.
  • the compound according to the invention Ex 6 also induces an increase in the luminescent signal, revealing an activity on the nuclear receptor PPAR.
  • the induction factors for compound Ex 6 are 14.5 to 100 ⁇ M, 9.6 to 50 ⁇ M, 2.2 to 15 ⁇ M and 1.1 to 5 ⁇ M.
  • the vehicle PG liposome
  • the messenger RNAs are extracted from the HepG2 cells using the reagents of the Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene, France) according to the supplier's instructions, assayed by spectrophotometry and quantified by semi-quantitative or quantitative RT-PCR at 1 using the Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green I kit (Hoffman-La Roche, Basel, Switzerland) on a Light device Cycler System (Hoffman-La Roche, Basel, Switzerland). Pairs of primers specific to the ACO and Apo A1 genes, targets of PPAR ⁇ are used as probes. Pairs of specific primers of the 36B4, beta-actin and GAPDH genes are used as control probes (see table I below).
  • the compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
  • Fibrates abundantly used in human clinics for the treatment of dyslipidemias involved in the development of atherosclerosis, one of the main causes of mortality and morbidity in Western societies, are powerful activators of the nuclear receptor PPAR ⁇ . This regulates the expression of genes involved in transport (apolipoproteins such as Apo Al, ApoAII and ApoC-III, membrane transporters such as FAT (Fatty Acid Tansporter)) or lipid catabolism (ACO (Acyl CoA Oxydase), CPT-I or CPT-II (Carnitine Palmitoyl Transferase I and II)). Treatment with PPAR ⁇ activators therefore results in rodents by a decrease in circulating cholesterol and triglyceride levels.
  • apolipoproteins such as Apo Al, ApoAII and ApoC-III, membrane transporters such as FAT (Fatty Acid Tansporter)
  • ACO Acyl CoA Oxydase
  • CPT-I or CPT-II C
  • Sprague-Dawley rats weighing 200 to 230 g (Charles River, L'ArbresIe, France) are maintained under a 12 hour light / dark cycle at a constant temperature of 20 ⁇ 3 ° C. After a week's acclimatization, the rats are weighed and grouped into groups of 8 animals selected so that the distribution of plasma cholesterol and triglyceride levels are uniform. The test compounds are suspended in a vehicle (0.5% carboxymethylcellulose (CMC) and 0.1% Tween) and administered by intragastric gavage, once a day for 15 days at the doses indicated. Animals have free access to water and food. At the end of the experiment, the animals are weighed and sacrificed under anesthesia after a 5 hour fast.
  • CMC carboxymethylcellulose
  • the plasma is prepared by centrifugation at 3000 rpm for 20 minutes. Liver samples are taken and stored frozen in liquid nitrogen for further analysis.
  • the carboxymethylcellulose used is a sodium salt of carbojmethylcellulose of medium viscosity (R f. C4888, Sigma-aldrich, France).
  • the Tween used is Polyoxyethylenesorbitan Monooleate (Tween 80, Ref. P8074, Sigma-aldrich, France)
  • the plasma lipid concentrations are measured by colorimetric determination (Bio-Mérieux, Marcy l'Etoile, France) according to the supplier's instructions.
  • the plasma concentrations of the apolipoproteins Ail, Al and OUI are measured according to the methods described above (Raspe, Madsen et al. 1999) and (Asset, Staels et al. 1999).
  • FIG. 3A shows the effects of the treatment of Sprague-Dawley rats with the compound according to the invention of Example 11 (300 mg / kg / day) on the plasma level of total cholesterol.
  • Fig. 3A shows that the total plasma cholesterol level is reduced by treating the animals with the compound according to the invention of Example 11.
  • FIG. 3B shows the effects of the treatment of Sprague-Dawley rats with the compound according to the invention of Example 11 (300 mg / kg / day) on the plasma triglyceride level.
  • FIG. 3B shows that the plasma triglyceride level is reduced by treating the animals with the compound according to the invention of example 11.
  • RNA is isolated from the liver fragments by extraction using the guanidine thiocyanate / acid phenol / chloroform mixture according to the protocol described above (Raspe, Madsen et al. 1999).
  • the messenger RNAs are quantified by semi-quantitative or quantitative RT-PCR using the Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green I kit (Hoffman-La Roche, Basel, Switzerland) on a Light Cycler System device (Hoffman-La Roche, Basel, Switzerland).
  • Primer pairs specific to the ACO, Apo OUI, Apo Al, CPT-I and CPT-II genes are used as probes. Pairs of specific primers of the 36B4, D-actin and GAPDH genes are used as control probes.
  • the inventors thus show that the expression of the genes involved in the transport or catabolism of lipids increases, which confirms the results obtained previously (activation of PPARs and decrease in plasma cholesterol and triglyceride levels).
  • LDL oxidation is an important modification and plays a major role in the establishment and development of atherosclerosis
  • the LDLs are prepared according to the method described by Lebeau et al. (Lebeau, Furman et al. 2000).
  • the solutions of test compounds are prepared at 10 "2 M in ethanol and diluted in PBS to have final concentrations ranging from 0.1 to 100 ⁇ M for a total ethanol concentration of 1% (v / v ).
  • EDTA is removed from the LDL preparation by dialysis.
  • the oxidation then takes place at 30 ° C. by adding 100 ⁇ l of a solution with 16.6 ⁇ M of copper sulphate to 800 ⁇ L of LDL (125 ⁇ g of proteins / ml) and 100 ⁇ l of a solution of the compound to test.
  • the formation of dienes, the species to be observed, is measured by optical density at 234 nm in the samples treated with the compounds in the presence or absence of copper.
  • the measurement of the optical density at 234 nm is carried out every 10 minutes for 8 hours using a thermostated spectrophotometer (Kontron Uvikon 930). The analyzes are carried out in triplicate.
  • FIG. 4 shows that the compounds according to the invention, Ex 2, 4, 5, 6 and 11, have intrinsic antioxidant properties and also promote the slowing down of the rate of oxidation of LDL by copper. In fact, they induce a lag in the phase lag, this lag being delayed during the treatment of the cells with the compounds according to the invention from 13.4% for example 2 to 34.3% for example 4 (see Figure 4A).
  • the compounds according to the invention do not seem to modify the oxidation rate (see FIG. 4B) or the quantity of dienes formed (see FIG. 4C).
  • LDL oxidation is measured by the TBARS (Thiobarbituric Acid Reactive Substances) method.
  • the LDLs are oxidized with copper sulphate and the lipid peroxidation is determined as follows:
  • TBARS are measured using a spectrophotometric method
  • lipid hydroperoxidation is measured using peroxide-lipid oxidation dependent on iodide to iodine.
  • MDA malonodialdehyde
  • hydroperoxide per mg of proteins The results obtained by measuring the inhibition of the formation of conjugated dienes are confirmed by the experiments for measuring lipid peroxidation of LDL.
  • the compounds according to the invention also effectively protect LDL against lipid peroxidation induced by copper (oxidizing agent).
  • the cell lines used for this type of experiment are of the neuronal, neuroblastoma (human) and PC12 (rat) cells type.
  • PC12 cells were prepared from a rat pheochromoeytome and are characterized by Greene and Tischler (Greene and Tischler 1976). These cells are commonly used for studies of neuronal differentiation, signal transduction and neuronal death.
  • the PC12 cells are cultured as previously described (Farinelli, Park et al. 1996), in complete RPMI medium (Invitrogen) supplemented with 10% horse serum and 5% fetal calf serum. (Primary) cultures of endothelial cells and smooth muscles are also used.
  • the cells are ordered from Promocell (Promocell GmBH, Heidelberg) and are cultured according to the supplier's instructions. The cells are treated with different doses of compounds according to the invention from 5 to 100 ⁇ M for 24 hours. The cells are then recovered and the increase in the expression of the genes of interest is evaluated by quantitative PCR.
  • the mRNAs are extracted from cells in culture treated or not with the compounds according to the invention.
  • the extraction is carried out using reagents from the Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene, France) according to the supplier's instructions.
  • the mRNAs are then assayed by spectrometry and quantified by quantitative RT-PCR using the Light Cycler Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche) on a Light Cycler System device (Roche, France).
  • SOD Super Oxide Dismutase
  • GPx Glutathione Peroxidase
  • pairs of primers specific for the ⁇ -actin and cyclophilin genes are used as control probes.
  • the antioxidant properties of the compounds are also evaluated using a fluorescent indicator, the oxidation of which is followed by the appearance of a fluorescent signal.
  • the decrease in intensity of the fluorescent signal emitted is measured in the cells treated with the compounds in the following manner: the cells PC12 cultured as previously described (black plate 96 wells transparent fund, Falcon) are incubated with increasing doses of hydrogen peroxide (0.25 mM - 1 mM) in medium without serum for 2 and 24 hours.
  • DCFDA dichlorodihydrofluorescein diacetate
  • PBS Molecular Probes, Eu imperative, USA
  • the cells are then rinsed with PBS.
  • the detection of the fluorescence emitted by the oxidation indicator is measured using a fluorimeter (Tecan Ultra 384) at an excitation wavelength of 495 nm and an emission wavelength 535 nm. The results are expressed as a percentage of protection relative to the oxidized control.
  • the fluorescence intensity is lower in the cells incubated with the compounds according to the invention than in the untreated cells.
  • the different cell lines (cell models mentioned above) as well as the cells in primary culture are treated as above.
  • the cell supernatant is recovered after the treatment and the cells are lysed and recovered for the determination of the protein concentration.
  • the detection of lipid peroxidation is determined as follows: lipid peroxidation is measured using thiobarbituric acid (TBA) which reacts with lipoperoxidation of aldehydes such as malonodialdehyde (MDA).
  • TSA thiobarbituric acid
  • MDA malonodialdehyde
  • the cell supernatant is collected (900 ⁇ l) and 90 ⁇ l of butylated hydroxytoluene are added thereto (Moriiere, Moysan et al. 1991).
  • the compounds according to the invention advantageously have intrinsic antioxidant properties which make it possible to slow down and / or inhibit the effects of oxidative stress.
  • the inventors also show that the compounds according to the invention are capable of inducing the expression of the genes of antioxidant enzymes. These particular characteristics of the compounds according to the invention allow the cells to fight more effectively against oxidative stress and therefore to be protected from damage induced by free radicals.
  • E3 E-MPLE 28 Evaluation of the effects on the oppression of enzymes involved in mid-peroxisomal ⁇ -o ydation
  • the compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
  • Fatty acids are an essential reserve of energy.
  • the miterochondrial and peroxisomal ⁇ -oxidation of fatty acids are the main pathways of catabolism of fatty acids responsible for the mobilization of this energy. These two processes therefore play a key role in controlling serum free fatty acid levels as well as in regulating the synthesis of triglycerides.
  • the enzyme that determines the speed of peroxisomal ⁇ -oxidation is ACO.
  • the miterochondrial ⁇ -oxidation is limited by the transport of acids fatty within the mitochondria. This depends on the activity of the enzymes CPT-I and CPT-II.
  • the regulation of the expression of the enzymes ACO, CPT-I and CPT-II plays a crucial role in the control of peroxisomal and miterochondrial ⁇ -oxidation, respectively.
  • the compounds according to the invention induce the expression of ACO, CPT-I and CPT-II. This activity was highlighted as follows:
  • the rat hepatocytes are isolated by infusion of male Wistar OFA rat livers (Charles River, L'ArbresIe, France) whose body weight is between 175 and 225 g using a mixture of collagenase and thermolysin ( Blendzyme 3, Roche, Basel, Switzerland).
  • the liver of rats anesthetized with pentobarbital is perfused via the portal vein, first with 100 ml of a washing buffer (Liver perfusion medium, Gibco, Paisley, UK) and then with 200 ml of the following digestion medium: HBSS free calcium chloride and magnesium sulfate (Sigma, S 1 Louis, Ml, USA) supplemented with 10 mM Hepes, pH 7.6, 4 mM calcium chloride and 7 mg of Blendzyme 3 according to a modification of the protocol described (Raspe, Madsen et al. 1999).
  • HBSS free calcium chloride and magnesium sulfate Sigma, S 1 Louis, Ml, USA
  • the hepatocytes are spread in 6-well culture dishes at a rate of 10 5 cells / cm 2 for the messenger RNA quantification experiments.
  • the cells are seeded and incubated for 4 hours in a Williams E culture medium supplemented with 100 U / ml penicillin (Gibco, Paisley, UK), 2 mM L-Glutamine (Gibco, Paisley, UK), 2% vol / vol UltroSER SF (Biosepra, Gergy St-Christophe, France), 0.2% mass / vol bovine serum albumin (Sigma, St Louis, Ml, USA), 1 ⁇ M Dexamethasone (Sigma, St Louis, Ml, USA) and 100 nM T3 (Sigma, St Louis, Ml, USA).
  • RNA is isolated from the liver fragments by extraction using the guanidine thiocyanate / acid phenol / chloroform mixture according to the protocol described above (Raspe, Madsen et al. 1999). The messenger RNAs are quantified by semi-quantitative or quantitative RT-PCR using the Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green I kit (Hoffman-La Roche, Basel, Switzerland) on a Light Cycler System device (Hoffman-La Roche, Basel, Switzerland).
  • Primer pairs specific to the ACO, Apo OUI, Apo Al, CPT-I and CPT-II genes are used as probes. Pairs of specific primers of the 36B4, beta-actin and GAPDH genes are used as control probes (see Table I).
  • RNA isolated from hepatocytes in primary culture described above or from fragments of liver taken from rats treated with the test compounds are quantified by semi-quantitative or quantitative RT-PCR as described in Examples 25 and 26 to using specific primer pairs of the ACO, GPT-I and CPT-II genes. . .
  • the compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
  • the oxidation capacities of fatty acids determine the serum levels of free fatty acids as well as the possibility of synthesis of triglycerides. An accumulation of free fatty acids in the blood or triglycerides outside the adipose tissue promote insulin resistance. On the other hand, an increase in plasma triglyceride levels is currently considered a risk factor for cardiovascular disease. An increase in the oxidation capacities of fatty acids is therefore of therapeutic interest.
  • the compounds according to the invention activate the oxidation of fatty acids by mitochondria and peroxisomes. This ability was highlighted as follows: The mitochondrial CPT-I and CPT-II activities are tested according to the protocol described by Madsel et al. (Madsen et al, 1999).
  • the ACO activity is tested according to the protocol described by Asiedu et al. (Asiedu et al,
  • the compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
  • RGT reverse cholesterol transport
  • the efflux of cholesterol from macrophages is therefore a critical phase for the prevention of the formation of foam cells and, therefore, has a protective effect against atherosclerosis.
  • the crucial step in RGT is the transfer of excess cholesterol and phospholipids from cell membranes to nascent HDL.
  • the transporter ABCA1 ATP binding cassette A1 plays a key role in this process and its expression is correlated with the reduction in the development of atherosclerotic plaque by stimulating the efflux of cholesterol in macrophages.
  • ABCA1 is a target gene for the nuclear receptor LXR ⁇ , itself a target gene for the receptors PPAR ⁇ and PPAR ⁇ .
  • the compounds according to the invention induce the expression of LXR ⁇ and ABCAl and stimulate the efflux of cholesterol in 2 in vitro models of THP1 and primary macrophages.
  • THP-1 monocytes (ATCC, Rockville, Maryland) are spread in 6-well culture dishes in the presence of PMA (Phorbol Myristate Acetate) and fetal calf serum and incubated at 37 ° C for 6 days, which allows their differentiation into macrophages.
  • PMA Phorbol Myristate Acetate
  • the mononuclear cells are isolated from human blood as previously described (Chinetti et al. 2001) and are spread on 6-well plates and cultured for 10 days in the presence of human serum to allow the adhesion and differentiation of primary monocytes into macrophages.
  • the treatment using the various compounds is carried out for 48 hours in a medium without human or fetal calf serum but supplemented with Nutridoma HU (Boehringer) serum at 1%.
  • RNAs are extracted from macrophages treated using the RNeasy mini kit (QIAGEN, Hilden, Germany) according to the supplier's instructions, measured by spectrometry and quantified by quantitative RT-PCR using the Light Cycler Fast DNA Master kit Green I (Hoffman-La Riche, Basel, Switzerland) on a Light Cycler System (Hoffman-La Riche, Basel, Switzerland). Pairs of primers specific for the ABCA1 & LXR a genes are used as probes. 2 / Measurement of cholesterol efflux:
  • the macrophages are pretreated for 24 h with the compounds, but also every 24 h for the duration of the experiment. They are loaded with cholesterol during a 48h incubation in the presence of acetylated LDL (50 ⁇ g / ml containing cholesterol labeled with Tritium) in RPMI 1640 medium supplemented with 1% Nutidoma HU (Boehringer). After this step, the cells are washed twice with PBS and incubated for 24 hours in RPMI medium without Nutridoma with or without apolipoprotein A1.
  • the medium is recovered and the intracellular lipids are extracted in a hexane mixture / isopropanol, and dried under nitrogen.
  • the efflux is quantified using a scintillation Tri-Carb 2100 TR ® reader (Packard, Meriden, CT, USA) by dividing the number of strokes counted in the medium by the total number of strokes counted in the middle and in cells.
  • the compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
  • Insulin resistance is the basis of the metabolic syndrome characterized by glucose intolerance, hyperinsulinemia, dyslipidemia and hypertension.
  • the combination of several cardiovascular risk factors, which results in an increased risk of cardiovascular diseases consecutive to Atherosclerosis is responsible for the majority of the mortality and morbidity associated with type II diabetes.
  • the main target of drug treatments for metabolic syndrome is insulin resistance.
  • the compounds according to the invention reduce the manifestations of the metabolic syndrome (Syndrome X) such as the elevation of free fatty acids, hyperinsulinemia, hyperglycemia and the insulinemic response to glucose (glucose tolerance test) and diabetes, in two animal models which exhibit insulin resistance at the origin of the metabolic syndrome, the C57BL / 6 mice maintained on a high-fat diet, and the obese Zucker rat (fa / fa).
  • Syndrome X such as the elevation of free fatty acids, hyperinsulinemia, hyperglycemia and the insulinemic response to glucose (glucose tolerance test) and diabetes
  • mice G57BL / 6 mice (Gharies River, L'ArbresIe, France) male 6 weeks old at the start of the experiment were randomly grouped into groups of 6 animals selected so that the distribution of their body weight was uniform.
  • the mice received a low-fat diet (UAR ⁇ 04), a fat-enriched diet (coconut oil 29% w / w) or the same enriched diet supplemented with the compounds studied.
  • CMC carboxymethylcellulose
  • Levels of free fatty acids are variable in diabetic rats.
  • concentration of free fatty acids in serum or plasma is measured by WAKO “NEFA / FFA” colorimetric enzymatic reaction (Labo immuno Systems, Neuss, Germany) on serum or plasma.
  • the plasma lipid concentrations (total cholesterol and triglycerides) are measured by colorimetric determination (Bio-Mérieux, Marcy l'Etoile, France) according to the supplier's instructions.
  • the blood sugar measurement is carried out by a colorimetric enzymatic reaction (Sigma Aldrich, St Louis, MO).
  • the insulin levels are measured using the radioactive assay kit (Mercodia, Uppsala, Sweden). Insulinemia is determined on sera or plasmas collected on EDTA.
  • the compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
  • Obesity is associated with increased insulin resistance, type II diabetes, and increased cardiovascular and cancer risk. It therefore plays a central role in several pathologies typical of Western societies and therefore represents an important pharmacological challenge.
  • the compounds according to the invention reduce weight gain in two animal models which show obesity, the G57BL / 6 mice maintained on a diet rich in fats and the obese Zucker rat (fa / fa). These properties are highlighted as follows:
  • mice (Iffa Credo, L'ArbresIe, France) male, 6 weeks old at the start of the experiment, were randomly grouped into groups of 6 animals selected so that the distribution of their body weight was uniform.
  • the mice received a diet low in fat (UAR A04), a diet enriched in fat (coconut oil 29% w / w) or the same enriched diet supplemented with the compounds studied.
  • the animals are kept under a 12 hour light / dark cycle at a constant temperature of 20 ⁇ 3 ° C. Animals have free access to water and food. Food gain and weight gain are recorded. At the end of the experiment, the animals are weighed and sacrificed under anesthesia. The plasma is prepared by centrifugation at 3000 revolutions / minute for 20 minutes. Liver and adipose tissue samples are taken, weighed and stored frozen in liquid nitrogen for further analysis.
  • Leptin a marker for the development of obesity, is measured using the “Rat Leptin assay” assay kit from Linco Research (St Charles, Ml, USA).
  • the compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
  • the compounds according to the invention decrease the growth of tumor cells.
  • the compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
  • the proliferation of smooth muscle cells is one of the main components of atherogenesis, restenosis and hypertension associated with cardiovascular disease.
  • the identification of inhibitors of this proliferation therefore represents an interesting pharmacological challenge.
  • the compounds according to the invention decrease the growth of vascular smooth muscle cells in vitro and reduce restenosis in vivo in the model of balloon coronary angioplasty in rats.
  • Coronary artery or aorta smooth muscle cells come from Promocell (Heidelberg, Germany) and are cultured according to the supplier's instructions in a culture medium selected for smooth muscle cells in the presence of 10% fetal calf serum. The cells cultured at 50% confluence are made quiescent by omitting serum for 24 hours. The cells are then treated for 3 to 6 days in the presence of mitogens (10% serum, 20 ng / ml bFGF or 2 U / ml D-thrombin) and of compounds according to the invention. At the end of the experiment, the cells are trypsinized and counted with a hemocytometer.
  • mitogens (10% serum, 20 ng / ml bFGF or 2 U / ml D-thrombin
  • the compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
  • High blood pressure is an important risk factor for cardiovascular disease and represents a major pharmacological challenge.
  • the compounds according to the invention lower the blood pressure in vivo when they are administered to spontaneously hypertensive rats (SHR rat) used as a model of hypertension.
  • Rats weighing 200 to 300 g are maintained under a light / dark cycle of 12 hours at a constant temperature of 20 ⁇ 3 ° G. After a week's acclimatization, the rats are weighed and grouped into groups of 6 animals selected so that the distribution of their body weight is uniform.
  • the compounds according to the invention are suspended in a vehicle (0.5% carboxymethylcellulose (CMC) and 0.1% Tween) and administered by intragastric gavage, once a day for 7 days at different doses. Animals have free access to water and food.
  • CMC carboxymethylcellulose
  • the compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
  • Normal human keratinocyte cultures are produced from skin samples. The sample is first rinsed 4 times in PBS (Phosphate Buffered Saline - Invitrogen, France). It is then decontaminated by soaking it in two successive baths of 70% ethanol for 30 seconds. We then cut strips 3 mm wide, taking care to remove a maximum of adipose tissue and dermis. The strips are then placed for 4 h at 37 ° C. in a 0.25% trypsin solution (Invitrogen, France).
  • PBS Phosphate Buffered Saline - Invitrogen, France
  • 70% ethanol 70% ethanol
  • the epidermal preparation is filtered and centrifuged for 5 minutes at 1000 rpm.
  • the pellet is taken up with KHN-D medium (DMEM + 10% fetal calf serum (SVF) + hydrocortisone 0.4 ⁇ g / ml + EGF 10 ng / ml + cholera toxin 10 ⁇ 9 M, (Sigma, St Quentin, France)).
  • DMEM fetal calf serum
  • hydrocortisone 0.4 ⁇ g / ml + EGF 10 ng / ml + cholera toxin 10 ⁇ 9 M, (Sigma, St Quentin, France)).
  • the cells are counted and then seeded at 10 ⁇ 10 6 cells / 75 cm 2 .
  • the medium After 24 hours of culture, the medium is changed, the cells are rinsed with PBS and the culture medium K-SFM (Invitrogen, France) is used for the following culture. The cells are then seeded at the desired density. The medium of the cells is changed every 48 hours and they are cultured at 37 ° C. with 5% CO 2 .
  • the treatment of the cells with or without the compounds according to the invention is carried out before confluence (70-80%), the compounds are added at concentrations varying from 1 to 100 ⁇ M directly in the culture medium. b) Obtaining and culture of human fibroblasts
  • Normal human fibroblast cultures are made from a skin sample. The sample is first rinsed 4 times in PBS (Invitrogen, France). It is then decontaminated by soaking it in two successive baths of 70% ethanol for 30 seconds. Dermis pieces with an area of approximately 5 mm 2 are placed at the bottom of a Petri dish. Once the pieces have adhered to the support (about 5 min), they are covered with 4 ml of DMEM 20% FCS. The medium is renewed every two days. The cells leave the explant after a week and then colonize the Petri dish. When the cells have colonized the support, they are trypsinized, reseeded and cultivated in DMEM 10% FCS culture medium at 37 ° C. and 5% carbon dioxide (Invitrogen, France). The cells are treated at the confluence of these, the compounds according to the invention are added at concentrations varying from 1 to 100 ⁇ M directly in the culture medium.
  • the mRNAs are extracted from keratinocytes and normal human fibroblasts in culture treated or not with the compounds according to the invention.
  • the extraction is carried out using reagents from the Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene, France) according to the supplier's instructions.
  • the mRNAs are then assayed by spectrometry and quantified by quantitative RT-PCR using the Light Cycler Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche, France) on a Light Cycler System device (Roche, France).
  • Primer pairs specific to the Super Oxide Dismutase (SOD) and Glutathione Peroxidase (GPx) genes, antioxidant enzymes, are used as probes. Pairs of specific primers of the 36B4, ⁇ -actin and GAPDH genes are used as control probes (see table I).
  • the activity of Glutathione peroxidase is determined from protein extracts of cells (keratinocytes, fibroblasts) treated or not with the compounds according to the invention at concentrations varying from 1 to 100 ⁇ M.
  • the measurement of the activity of GPx is also carried out under stressful conditions for the cells (0.5 mM paraquat or 0.6 mM H 2 0 2 (inducers of reactive oxygenated species).
  • the measurement of the activity of the extracts Proteins are made using the Glutathione Peroxidase Cellular Activity Assay Kit (Sigma) according to the supplier's instructions.
  • the indirect measurement is based on the oxidation of glutathione to oxidized glutathione catalyzed by glutathione peroxidase.
  • NADPH ⁇ -nicotinamide Adenine Dinucleotide Phophate
  • the reagents come from Sigma (St Quentin, France) except when mentioned otherwise.
  • Lipid peroxidation is measured by assaying malonodialdehyde (MDA) with thiobarbituric acid (TBA). After the treatments, the cell supernatant is collected (900 ⁇ l) and 90 ⁇ l of butylated hydroxytoluene are added thereto.
  • MDA malonodialdehyde
  • TSA thiobarbituric acid
  • TBARS are expressed in MDA equivalents using as standard tetraethoxypropane. The results are normalized in relation to the protein content of the cells.
  • the induction of lipid peroxidation is obtained by treating the cells with 0.5 mM paraquat (inducer of reactive oxygen species) or with 0.6 mM hydrogen peroxide for 4 h. Protection anti-free radical of the compounds according to the invention at concentrations varying from 1 to 100 ⁇ M is evaluated by a 24 hour pre-treatment, before the induction of lipid peroxidation.
  • the treatment of cells (keratinocytes and fibroblasts) with the compounds according to the invention promotes the increase in the expression of the mRNA of the antioxidant enzymes, SOD and GPx. This increase in transcriptional activity also results in an increase in the activity of the enzymes concerned.
  • the incubation of the cells with the compounds according to the invention reduces the lipid peroxidation induced by an antioxidant agent.
  • the reconstructed epidermis are supplied by the company SkinEthic (Nice, France).
  • the epidermis was used at 1 rd day (0.63 cm 2) when the stratum corneum is present and that the ultra structure of the epithelium is similar to that of the human epidermis in vivo.
  • the reconstructed epidermis is maintained in culture according to the supplier's instructions.
  • the doses of compounds according to the invention used for the treatment of reconstructed epidermis vary between 2 and
  • the compounds according to the invention which have been tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
  • a) Measurement of the anti-inflammatory properties The reconstructed epidermis are preincubated with the compounds according to the invention at concentrations varying from 2 to 10 mg / cm 2 for 24 h, then treated for 6 h with 0.4% SDS or 1 ⁇ g of TPA (12-0-tetradecanoyl phorbol-13-acetate).
  • the anti-inflammatory potential of the compounds is assessed using the ELISA technique.
  • the culture media (underlying) of the control or treated epidermis are collected and frozen at -20 ° C.
  • the quantification of interleukin 1- ⁇ (IL1- ⁇ ) is carried out using the ELISA detection kit IL1- ⁇ Kit (R&D System, UK) according to the supplier's instructions.
  • the mRNAs are extracted from the reconstructed epidermis treated with or without the compounds according to the invention under the same conditions as above.
  • the extraction is carried out using reagents from the Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene) according to the supplier's instructions.
  • the mRNAs are then assayed by spectrometry and quantified by quantitative RT-PCR using the Light Cycler kit.
  • Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche) on a Light Cycler System device (Roche).
  • Primer pairs specific for the IL1 (interleukin 1) and IL6 genes are used as probes. Pairs specific for the 36B4, ⁇ -actin and GAPDH genes are used as control probes (see table I).
  • the application of the compounds according to the invention to the reconstructed epidermis significantly limits the secretion of the inflammatory cytokine, interleukin 1, after inflammatory stress. This decrease in secretion is correlated with the decrease in the expression of mRNAs of this cytokine measured by quantitative RT-PCR. These results indicate that the treatment of reconstructed epidermis with the compounds according to the invention have anti-inflammatory properties.
  • the compounds according to the invention which have been tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
  • the reconstructed epidermis are supplied by the company SkinEthic (Nice, France). The skins are used to the 17 th day (0.63 cm 2) when the stratum corneum is present and that the ultra structure of the epithelium is similar to that of the human epidermis in vivo.
  • the reconstructed epidermis is maintained in culture according to the supplier's instructions.
  • the doses of compounds according to the invention used for the treatment of reconstructed epidermis vary between 2 and 10 mg / cm 2 for 24 and 72 hours.
  • RNAs are extracted from keratinocytes (originating from reconstructed epidermis treated with or without the compounds according to the invention). The extraction is carried out using reagents from the Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene) according to the supplier's instructions. The mRNAs are then assayed by spectrometry and quantified by quantitative RT-PGR using the Light Cycler kit. Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche) on a Light Cycler System device (Roche). Primer pairs specific to the Super Oxide Dismutase (SOD) and Glutathione Peroxidase (GPx) genes, antioxidant enzymes, are used as probes. Pairs of specific primers of the 36B4, ⁇ -actin and GAPDH genes are used as control probes (see Table I).
  • SOD Super Oxide Dismutase
  • GPx Glutathione Peroxidase
  • the activity of Glutathione peroxidase is determined from protein extracts from reconstructed epidermis whether or not treated with the compounds according to the invention (2 to 10 mg / cm 2 ).
  • the measurement of GPx activity is also carried out under stressful conditions for the cells (0.5 mM paraquat (inducer of reactive oxygenated species)).
  • the activity of the protein extracts is measured using the Glutathione Peroxidase Cellular Activity Assay Kit (Sigma) according to the supplier's instructions.
  • the indirect measurement is based on the oxidation of glutathione to oxidized glutathione catalyzed by glutathione peroxidase.
  • the return to the non-oxidized form is catalyzed by glutathione reductase and NADPH ( ⁇ -nicotinamide Adenine Dinucleotide Phophate).
  • NADPH ⁇ -nicotinamide Adenine Dinucleotide Phophate.
  • the decrease in absorbance of NADPH is measured at 340 nm at using a Shimazu 1501 spectrofluorimeter (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan) and reflects the activity of GPx, since GPx is the limiting factor for this reaction.
  • EXAMPLE E 41 Cosmetic composition: emulsion-gel for visaqc., Anti-wrinkle

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Abstract

The invention relates to the use of molecules, particularly in the fields of human and animal health and cosmetics. More specifically, the invention relates to compounds, and the sulphur and nitrogen analogues thereof, which are acylated aminopropanediols and which have advantageous cosmetic and pharmacological properties. The inventive compounds can be used, for example, to prevent and/or treat dyslipemia, cardiovascular diseases, syndrome X, restenosis, diabetes, obesity, hypertension, some cancers and dermatological diseases, and, in the field of cosmetics, to combat skin ageing and the effects of same, such as the appearance of wrinkles, etc.

Description

UTILISATIONS D'AMINOPROPANEDIOLS ACYLES ET DE LEURS ANALOGUES AZOTES ET SULFURES USES OF ACYLATED AMINOPROPANEDIOLS AND THEIR NITROGEN AND SULPHIDE ANALOGS
La présente invention concerne l'utilisation de dérivés d'aminopropanediols acylés et leurs analogues azotés et sulfurés, des compositions pharmaceutiques et cosmétiques les comprenant, leurs applications en thérapeutique, notamment pour prévenir ou traiter les maladies cardiovasculaires, le syndrome X, la resténose, le diabète, l'obésité, l'hypertension, certains cancers, les maladies dermatologiques ainsi que dans le domaine cosmétique, pour prévenir ou traiter les effets du vieillissement cutané, notamment l'apparition de rides, etc.The present invention relates to the use of acylated aminopropanediol derivatives and their nitrogen and sulfur analogues, pharmaceutical and cosmetic compositions comprising them, their therapeutic applications, in particular for preventing or treating cardiovascular diseases, syndrome X, restenosis, diabetes, obesity, hypertension, certain cancers, dermatological diseases as well as in the cosmetic field, to prevent or treat the effects of skin aging, in particular the appearance of wrinkles, etc.
Les composés de l'invention possèdent notamment des propriétés pharmacologiques anti-oxydantes et anti-inflammatoires avantageuses. L'invention décrit également les procédés de traitement thérapeutique utilisant ces composés et des compositions pharmaceutiques et cosmétiques les contenant.The compounds of the invention notably have advantageous antioxidant and anti-inflammatory pharmacological properties. The invention also describes the methods of therapeutic treatment using these compounds and pharmaceutical and cosmetic compositions containing them.
L'athérosclérose et ses complications cardiovasculaires sont la principale cause de morbidité et de mortalité dans les pays fortement industrialisés. L'athérosclérose et ses complications sont également une conséquence importante du diabète de type II. Un lien strict de cause à effet a été démontré entre les dyslipidémies et les maladies cardiovasculaires. Un taux circulant élevé de LDL-cholestérol est défavorable. Le risque occasionné par un taux élevé de LDL-cholestérol est amplifié par une élévation du taux de triglycérides. L'importance de la stabilité des lésions athérosclérotiques dans la survenue d'accidents cardiovasculaires a en outre été mise en évidence. Le rôle de l'oxydation des LDL dans le développement de la plaque d'athérosclérose et de sa fragilisation est mieux compris.Atherosclerosis and its cardiovascular complications are the main cause of morbidity and mortality in highly industrialized countries. Atherosclerosis and its complications are also an important consequence of type II diabetes. A strict cause and effect link has been demonstrated between dyslipidemia and cardiovascular disease. A high circulating LDL-cholesterol level is unfavorable. The risk caused by a high level of LDL-cholesterol is amplified by an increase in the level of triglycerides. The importance of the stability of atherosclerotic lesions in the occurrence of cardiovascular accidents has also been highlighted. The role of LDL oxidation in the development of atherosclerotic plaque and its embrittlement is better understood.
Les traitements médicamenteux de l'athérosclérose visent à réduire les taux circulants de cholestérol ou de triglycérides, à augmenter la stabilité des plaques d'athérosclérose, à réduire les contraintes mécaniques auxquelles sont soumis les vaisseaux (réduction de la tension artérielle) et à réduire les facteurs de risques annexes tels que le diabète.Drug treatments for atherosclerosis aim to reduce circulating cholesterol or triglyceride levels, increase plaque stability atherosclerosis, to reduce the mechanical stresses to which the vessels are subjected (reduction in blood pressure) and to reduce the associated risk factors such as diabetes.
Parmi les médicaments actuellement utilisés dans le traitement des dyslipidémies, on trouve les fibrates et les statines. La metformine, la sulfonylurée, les thiazolidinediones sont utilisées dans le traitement du diabète de type II.Among the drugs currently used in the treatment of dyslipidemia are fibrates and statins. Metformin, sulfonylurea, thiazolidinediones are used in the treatment of type II diabetes.
Les fibrates sont largement utilisés pour le traitement des hypertriglycéridémies. Ils ont également des effets favorables au niveau de l'hypercholestérolemie. Ils sont généralement bien tolérés mais présentent un certain nombre d'effets secondaires : réactions cutanées, effets neurologiques, effets musculaires et gastro-intestinaux. Les effets toxiques sont rares (reins, muscles, articulation, peau, hépatite, etc.). Quant à l'incidence sur le risque cancéreux, elle est importante chez le rongeur même si elle n'a pas été démontrée chez l'homme.Fibrates are widely used for the treatment of hypertriglyceridemia. They also have favorable effects on the level of hypercholesterolemia. They are generally well tolerated but have a number of side effects: skin reactions, neurological effects, muscular and gastrointestinal effects. Toxic effects are rare (kidneys, muscles, joint, skin, hepatitis, etc.). As for the incidence on cancer risk, it is significant in rodents even if it has not been demonstrated in humans.
Les statines sont largement utilisées pour le traitement de l'hypercholestérolemie. Il a été démontré que le traitement de patients ayant subi un premier accident vasculaire réduit considérablement le risque de récidive.Statins are widely used for the treatment of high cholesterol. Treating patients who have had a first stroke has been shown to significantly reduce the risk of recurrence.
Des signes occasionnels ou des symptômes d'hépatites ou de myopathie ont par ailleurs été décrits.Occasional signs or symptoms of hepatitis or myopathy have also been described.
Les thiazolidinediones (troglitazone) ont récemment été introduites pour le traitement de la résistance à l'insuline. De ce fait, le recul nécessaire à une estimation objective de l'ensemble des effets adverses de ces molécules n'est pas suffisant. Dans ce contexte, l'observation d'une augmentation de la fréquence de tumeurs coliques dans un modèle animal prédisposé au cancer du colon (souris Min portant une mutation du gène APC) est défavorable. Une thiazolidinedione (troglitazone) a d'ailleurs été tout récemment retirée du marché pour des questions de toxicité hépatique. Les principales molécules utilisées dans le traitement médicamenteux de l'athérosclérose (fibrates, statines) ont un spectre d'action pléiotropique. Les fibrates activent une classe de récepteurs nucléaires (PPARα, PPARγ, etc.) impliqués dans la coordination de l'expression de protéines responsables du transport ou du métabolisme des lipides. Le caractère pléiotropique du spectre d'action des fibrates réside dans la diversité des gènes cibles des PPARs. Les statines diminuent la synthèse de novo du cholestérol en inhibant l'activité de l'HMG-CoA réductase.Thiazolidinediones (troglitazone) have recently been introduced for the treatment of insulin resistance. Therefore, the hindsight necessary for an objective estimate of all the adverse effects of these molecules is not sufficient. In this context, the observation of an increase in the frequency of colonic tumors in an animal model predisposed to colon cancer (Min mice carrying a mutation of the APC gene) is unfavorable. A thiazolidinedione (troglitazone) has moreover been recently withdrawn from the market for reasons of hepatic toxicity. The main molecules used in the drug treatment of atherosclerosis (fibrates, statins) have a spectrum of pleiotropic action. Fibrates activate a class of nuclear receptors (PPARα, PPARγ, etc.) involved in the coordination of the expression of proteins responsible for the transport or metabolism of lipids. The pleiotropic nature of the action spectrum of fibrates lies in the diversity of target genes for PPARs. Statins decrease the de novo synthesis of cholesterol by inhibiting the activity of HMG-CoA reductase.
La présente invention concerne l'utilisation comme médicament d'une famille de composés possédant des propriétés pharmacologiques avantageuses et utilisables pour le traitement curatif ou préventif de diverses pathologies.The present invention relates to the use as a medicament of a family of compounds having advantageous pharmacological properties and usable for the curative or preventive treatment of various pathologies.
Les composés de l'invention répondent à la formule générale (I) :The compounds of the invention correspond to the general formula (I):
(I)(I)
dans laquelle :in which :
• G2 et G3 représentent indépendamment un atome d'oxygène, un atome de soufre ou un groupe N-R4, G2 et G3 ne pouvant représenter de façon simultanée un groupe N-R4,G2 and G3 independently represent an oxygen atom, a sulfur atom or an N-R4 group, G2 and G3 cannot simultaneously represent an N-R4 group,
• R et R4 représentent indépendamment un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbone, R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe CO-R5 ou un groupe de formule CO- (CH2)2n+rX-R6, l'un au moins des groupes R1, R2 et R3 étant un groupe de formule CO-(CH2)2n+.-X-R6,R and R4 independently represent a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group, saturated or not, optionally substituted, containing from 1 to 5 carbon atoms, R1, R2 and R3, identical or different, represent a hydrogen atom, a CO-R5 group or a group of formula CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6, at least one of the groups R1, R2 and R3 being a group of formula CO- (CH 2 ) 2n + .- X-R6,
R5 est un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comprenant éventuellement un groupement cyclique, dont la chaîne principale comporte de 1 à 25 atomes de carbone,R5 is a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, optionally comprising a cyclic group, the main chain of which contains from 1 to 25 carbon atoms,
X est un atome de soufre, un atome de sélénium, un groupe SO ou un groupe S02,X is a sulfur atom, a selenium atom, an SO group or an S0 2 group,
n est un nombre entier compris entre 0 et 11 ,n is an integer between 0 and 11,
• R6 est un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comprenant éventuellement un groupe cyclique, dont la chaîne principale comporte de 3 à 23 atomes de carbone, de préférence 10 à 23 atomes de carbone et éventuellement un ou plusieurs hétérogroupes, choisis parmi un atome d'oxygène, un atome de soufre, un atome de sélénium, un groupe SO et un groupe SQ2.• R6 is a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, optionally comprising a cyclic group, the main chain of which contains from 3 to 23 carbon atoms, preferably 10 to 23 carbon atoms and optionally one or more heterogroups , chosen from an oxygen atom, a sulfur atom, a selenium atom, an SO group and an SQ 2 group.
Dans les composés de formule générale (I) selon l'invention, le ou les groupes R5, identiques ou différents, représentent preferentiellement un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, substitué ou non, dont la chaîne principale comporte de 1 à 20 atomes de carbone, encore plus preferentiellement de 7 à 17 atomes de carbone, encore plus preferentiellement 14 à 17. Dans les composés de formule générale (I) selon l'invention, le ou les groupes R5, identiques ou différents, peuvent aussi représenter un groupe alkyle inférieur comportant de 1 à 6 atomes de carbone, tel que notamment le radical méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, tertiobutyle, pentyle ou hexyle.In the compounds of general formula (I) according to the invention, the group or groups R5, identical or different, preferably represent a linear or branched, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted alkyl group, the main chain of which comprises from 1 to 20 carbon atoms, even more preferably from 7 to 17 carbon atoms, even more preferably 14 to 17. In the compounds of general formula (I) according to the invention, the group or groups R5, identical or different, may also represent a lower alkyl group containing from 1 to 6 carbon atoms, such as in particular the radical methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, tert-butyl, pentyl or hexyl.
Dans les composés de formule générale (I) selon l'invention, le ou les groupes R6, identiques ou différents, représentent preferentiellement un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou insaturé, substitué ou non, dont la chaîne principale comporte de 3 à 23 atomes de carbone, preferentiellement de 13 à 20 atomes de carbone, encore plus preferentiellement de 14 à 17 atomes de carbone, et encore plus preferentiellement 14 atomes de carbone.In the compounds of general formula (I) according to the invention, the group or groups R6, which are identical or different, preferably represent a linear or branched, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted alkyl group, the main chain of which comprises from 3 to 23 carbon atoms, preferably from 13 to 20 carbon atoms, even more preferably from 14 to 17 carbon atoms, and even more preferably 14 carbon atoms.
Des exemples particuliers de groupes alkyle à chaîne longue saturée pour R5 ou R6 sont notamment les groupes C H15, C10H21, C11H23, C13H27, C14H29, C15H31- C16H33. C17H35. Des exemples particuliers de groupes alkyle à chaîne longue insaturée pour R5 ou R6 sont notamment les groupes C14H27, C14H25, C15H29, C17H29, Ç17H31-. C17H33, C19H29, C19H31, C21H31, C21H35, C21H37, C21H39, C23H45 ou les chaînes alkyle des acides eicosapentaènoïque (EPA) G20.5 (5, 8, 11, 14, 17) et docosahexaènoïque (DHA) C22:6 (4, 7, 10, 13, 16, 19).Particular examples of saturated long chain alkyl groups for R5 or R6 are in particular the groups C H15, C10H21, C11H23, C13H27, C14H29, C15H31-C16H33. C17H 35 . Particular examples of unsaturated long chain alkyl groups for R5 or R6 are in particular the groups C14H27, C14H25, C15H29, C17H29, C17H31-. C17H33, C19H 29 , C 1 9H 31 , C 21 H 31 , C 21 H35, C21H37, C21H39, C23H45 or the alkyl chains of eicosapentaenoic acids (EPA) G 20.5 (5, 8, 11, 14, 17) and docosahexaenoic (DHA) C 22: 6 (4, 7, 10, 13, 16, 19).
Des exemples de groupes alkyle à chaîne longue ramifiée sont notamment les groupes (CH2)n'-CH(CH3)C2H5, (GH=G(CH3)-(CH2)2)-.'-G ï=e(CH3)2 ou (CH2)2 + C(CH3)2-(CH2)n"-CH3 (x étant un nombre entier égal à ou compris entre 1 et 11 , n' étant un nombre entier égal à ou compris entre 1 et 22, n" étant un nombre entier égal à ou compris entre 1 et 5, n'" étant un nombre entier égal à ou compris entre 0 et 22, et (2x+n'") étant inférieur ou égal à 22, de préférence inférieur ou égal à 20).Examples of branched long chain alkyl groups are in particular the groups (CH 2 ) n'-CH (CH3) C 2 H5, (GH = G (CH 3 ) - (CH2) 2) -.'- G ï = e (CH 3 ) 2 or (CH2) 2 + C (CH3) 2- (CH 2 ) n "-CH 3 (x being an integer equal to or between 1 and 11, n 'being an integer equal to or between 1 and 22, n "being an integer equal to or between 1 and 5, n '" being an integer equal to or between 0 and 22, and (2x + n'") being less than or equal to 22, preferably less than or equal to 20).
Comme indiqué ci-avant, les groupes alkyle R5 ou R6 peuvent éventuellement comprendre un groupe cyclique. Des exemples de groupes cycliques sont notamment le cyclopropyle, le cyclobutyle, le cyclopentyle et le cyclohexyle. Comme indiqué ci-avant, les groupes alkyle R5 ou R6 peuvent être éventuellement substitués par un ou plusieurs substituants, identiques ou différents. Les substituants sont choisis de préférence parmi un atome d'halogène (iode, chlore, fluor, brome) et un groupe -OH, =0, -NO2, -NH2, -CN, -O-CH3, -CH2-OH, -CH2OCH3, -CF3 et -COOZ (Z étant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle, de préférence comportant de 1 à 5 atomes de carbone).As indicated above, the alkyl groups R5 or R6 may optionally include a cyclic group. Examples of cyclic groups are especially cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl and cyclohexyl. As indicated above, the alkyl groups R5 or R6 may be optionally substituted by one or more substituents, identical or different. The substituents are preferably chosen from a halogen atom (iodine, chlorine, fluorine, bromine) and a group -OH, = 0, -NO 2 , -NH2, -CN, -O-CH3, -CH 2 -OH , -CH 2 OCH3, -CF 3 and -COOZ (Z being a hydrogen atom or an alkyl group, preferably containing from 1 to 5 carbon atoms).
La présente invention a également pour objet l'utilisation des isomères optiques et géométriques de ces composés, leurs racémates, leurs sels, leurs hydrates et leurs mélanges.The present invention also relates to the use of the optical and geometric isomers of these compounds, their racemates, their salts, their hydrates and their mixtures.
De préférence, la présente invention concerne l'utilisation de composés de formule (I) dans laquelle les groupes G2R2 et G3R3 ne représentent pas simultanément des groupes hydroxyle. . Preferably, the present invention relates to the use of compounds of formula (I) in which the groups G2R2 and G3R3 do not simultaneously represent hydroxyl groups. .
Les composés de formule (la) sont les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle un seul des groupes R1 , R2 ou R3 représente un atome d'hydrogène.The compounds of formula (la) are the compounds of formula (I) according to the invention in which only one of the groups R1, R2 or R3 represents a hydrogen atom.
Les composés de formule (Ib) sont les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle deux des groupes R1 , R2 ou R3 représentent un atome d'hydrogène.The compounds of formula (Ib) are the compounds of formula (I) according to the invention in which two of the groups R1, R2 or R3 represent a hydrogen atom.
La présente invention a également pour objet l'utilisation de prodrogues des composés de formule (I) ou de compositions les contenant, qui, après administration chez un sujet, vont se transformer en composés de formule (I) qui présentent des activités thérapeutiques comparables aux composés de formuleThe present invention also relates to the use of prodrugs of the compounds of formula (I) or of compositions containing them, which, after administration in a subject, will be transformed into compounds of formula (I) which exhibit therapeutic activities comparable to compounds of formula
(I).(I).
Par ailleurs, dans le groupe CO-(CH2)2n+rX-R6, X représente tout preferentiellement un atome de soufre ou de sélénium et avantageusement un atome de soufre. Par ailleurs, dans le groupe CO-(CH2)2n+ X-R6. n est de préférence compris entre 0 et 3, plus spécifiquement compris entre 0 et 2 et est en particulier égal à 0.Furthermore, in the group CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6, X most preferably represents a sulfur or selenium atom and advantageously a sulfur atom. Furthermore, in the group CO- (CH 2 ) 2n + X-R6. n is preferably between 0 and 3, more specifically between 0 and 2 and is in particular equal to 0.
Dans les composés de formule générale (I) selon l'invention, R6 peut comporter un ou plusieurs hétérogroupes, de préférence 0, 1 ou 2, plus preferentiellement 0 ou 1, choisis parmi un atome d'oxygène, un atome de soufre, un atome de sélénium, un groupe SO et un groupe S02.In the compounds of general formula (I) according to the invention, R6 may comprise one or more heterogroups, preferably 0, 1 or 2, more preferably 0 or 1, chosen from an oxygen atom, a sulfur atom, a selenium atom, an SO group and an S0 2 group.
Un exemple spécifique de groupe CO-(CH2)2n+ X-R6 selon l'invention est le groupe CO-CH2-S-C14H29.A specific example of a CO- (CH2) 2n + X-R6 group according to the invention is the group CO-CH2-S-C14H29.
Des composés préférés au sens de l'invention sont donc des composés de formule générale (I) ci-dessus dans laquelle au moins un des groupes R1 , R2 et R3 représente un groupe CO-(CH2)2n+rX-R6 dans lequel X représente un atome de soufre ou de sélénium et de préférence un atome de soufre et ou R6 est un groupe alkyle saturé et linéaire comprenant de 3 à 23 atomes de carbone, preferentiellement 13 à 20 atomes de carbone, de préférence 14 à 17, plus preferentiellement 14 à 16, et encore plus preferentiellement 14 atomes de carbone.Preferred compounds within the meaning of the invention are therefore compounds of general formula (I) above in which at least one of the groups R1, R2 and R3 represents a group CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 in which X represents a sulfur or selenium atom and preferably a sulfur atom and or R6 is a saturated and linear alkyl group comprising from 3 to 23 carbon atoms, preferably 13 to 20 carbon atoms, preferably 14 to 17, more preferably 14 to 16, and even more preferably 14 carbon atoms.
D'autres composés particuliers selon l'invention sont ceux dans lesquels au moins deux des groupes R1, R2 et R3 sont des groupes GO-(GH2)2n+.-X-R6, identiques ou différents, dans lesquels X représente un atome de soufre ou de sélénium et de préférence un atome de soufre.Other particular compounds according to the invention are those in which at least two of the groups R1, R2 and R3 are GO- (GH2) 2n + .- X-R6 groups, identical or different, in which X represents a sulfur atom or selenium and preferably a sulfur atom.
Des composés particuliers selon l'invention sont ceux dans lesquels G2 représente un atome d'oxygène ou de soufre, et de préférence un atome d'oxygène. Dans ces composés, R2 représente avantageusement un groupe de formule CO-(CH2)2n+ι-X-R6 tel que défini ci-avant. Des composés particulièrement préférés sont les composés de formule générale (I) ci-dessus dans laquelle :Particular compounds according to the invention are those in which G2 represents an oxygen or sulfur atom, and preferably an oxygen atom. In these compounds, R2 advantageously represents a group of formula CO- (CH 2 ) 2n + ι-X-R6 as defined above. Particularly preferred compounds are the compounds of general formula (I) above in which:
• G3 est un groupe N-R4 dans lequel R4 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, et G2 est un atome d'oxygène ; et/ou • R2 représente un groupe CO-(CH2)2n+rX-R6 tel que défini ci-avant.• G3 is an N-R4 group in which R4 is a hydrogen atom or a methyl group, and G2 is an oxygen atom; and / or • R2 represents a CO- (CH 2 ) 2 n + rX-R6 group as defined above.
D'autres composés préférés sont les composés de formule générale (I) ci- dessus dans laquelle R1, R2 et R3, identiques ou différents, de préférence identiques, représentent un groupe CO-(CH2)2n+.-X-R6 tel que défini ci-avant, dans lesquels X représente un atome de soufre ou de sélénium et de préférence un atome de soufre et ou R6 est un groupe alkyle saturé et linéaire comprenant de 13 à 17 atomes de carbone, de préférence 14 à 17, encore plus preferentiellement 14 atomes de carbone, dans lesquels n est de préférence compris entre 0 et 3, et en particulier égal à 0. De manière plus spécifique, des composés préférés sont les composés de formule générale (I) dans laquelle R1, R2 et R3 représentent des groupes GO-GH2-S-G14H29.Other preferred compounds are the compounds of general formula (I) above in which R1, R2 and R3, identical or different, preferably identical, represent a group CO- (CH 2 ) 2n + .- X-R6 such as defined above, in which X represents a sulfur or selenium atom and preferably a sulfur atom and or R6 is a saturated and linear alkyl group comprising from 13 to 17 carbon atoms, preferably 14 to 17, also more preferably 14 carbon atoms, in which n is preferably between 0 and 3, and in particular equal to 0. More specifically, preferred compounds are the compounds of general formula (I) in which R1, R2 and R3 represent GO-GH2-S-G14H29 groups.
Des exemples de composés préférés selon l'invention sont représentés sur la Figure 1.Examples of preferred compounds according to the invention are shown in Figure 1.
Ainsi, la présente invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation de composés de formule (I) choisis parmi :Thus, a more particular subject of the present invention is the use of compounds of formula (I) chosen from:
- 3-(tétradécylthioacétylamino)propane-1 ,2-diol ;- 3- (tetradecylthioacetylamino) propane-1,2-diol;
- 1-tétradécylthioacétylamino-2,3-(dipalmitoyloxy)propane ; - 3-tétradécylthioacétylamino-1,2-(ditétradécylthioacétyloxy)propane ;- 1-tetradecylthioacetylamino-2,3- (dipalmitoyloxy) propane; - 3-tetradecylthioacetylamino-1,2- (ditétradécylthioacétyloxy) propane;
- 3-palmitoylamino-1 ,2-(ditétradécylthioacétyloxy)propane ;- 3-palmitoylamino-1, 2- (ditétradécylthioacétyloxy) propane;
- 1,3-di(tétradécylthioacétylamino)propan-2-ol ;- 1,3-di (tetradecylthioacetylamino) propan-2-ol;
- 1 ,3-diamino-2-(tétradécylthioacétyloxy)propane;- 1,3-diamino-2- (tetradecylthioacetyloxy) propane;
- 1 ,3-ditétradécylthioacétylamino-2-(tétradécylthioacétyloxy)propàne ; - 1 ,3-dioléoylamino-2-(tétradécylthioacétyloxy)propane ;- 1, 3-ditétradécylthioacétylamino-2- (tétradécylthioacétyloxy) propaine; - 1,3-dioleoylamino-2- (tetradecylthioacetyloxy) propane;
- 1 ,3-ditétradécylthioacétylamino-2-(tétradécylthioacétylthio)propane ; et- 1, 3-ditétradécylthioacétylamino-2- (tétradécylthioacétylthio) propane; and
- 1-tétradécylthioacétylamino-2,3-di(tétradécylthioacétylthio)propane. L'invention a ainsi pour objet l'utilisation d'au moins un composé tel que décrit ci-dessus pour la préparation de compositions pharmaceutiques destinées au traitement de diverses pathologies, notamment de pathologies impliquant une dérégulation du métabolisme des lipides et/ou des glucides, des pathologies liées à l'inflammation, et/ou des pathologies liées à la prolifération et/ou à la différentiation cellulaire.- 1-tetradecylthioacetylamino-2,3-di (tetradecylthioacetylthio) propane. A subject of the invention is therefore the use of at least one compound as described above for the preparation of pharmaceutical compositions intended for the treatment of various pathologies, in particular pathologies involving deregulation of the metabolism of lipids and / or carbohydrates , pathologies linked to inflammation, and / or pathologies linked to proliferation and / or cell differentiation.
Les pathologies liées aux dérèglements du métabolisme lipidique et/ou glucidique traitées selon l'invention sont en particulier choisies parmi le syndrome métabolique (syndrome X), le diabète, l'athérosclérose et l'obésité.The pathologies linked to lipid and / or carbohydrate metabolism disorders treated according to the invention are in particular chosen from metabolic syndrome (syndrome X), diabetes, atherosclerosis and obesity.
Les pathologie liées à l'inflammation traitées selon l'invention sont choisies plus particulièrement parmi l'athérosclérose, une allergie, l'asthme, l'eczéma, le psoriasis et les démangeaisons.The pathologies linked to the inflammation treated according to the invention are chosen more particularly from atherosclerosis, an allergy, asthma, eczema, psoriasis and itching.
Les pathologies liées à la prolifération et/ou à la différentiation cellulaire traitées selon l'invention sont en particulier choisies parmi la - carcinogenèse, le psoriasis et l'athérosclérose.The pathologies linked to proliferation and / or cell differentiation treated according to the invention are in particular chosen from - carcinogenesis, psoriasis and atherosclerosis.
La présente invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation de composés de formule (I) tels que définis ci-avant dans la préparation d'une composition pharmaceutique pour le traitement ou la prophylaxie des maladies cardiovasculaires, du syndrome X, de la resténose, du diabète de type I ou II, de préférence de type II, de l'obésité, de l'hypertension, en particulier l'hypertension artérielle, de cancers, en particulier le cancer de l'anus, du rectum, du colon, de l'intestin, du duodénum, de l'estomac, de la prostate, des testicules, de la vessie, du rein, du pancréas, du foie, du larynx, du sein, des poumons, la leucémie et les mélanomes, et des maladies dermatologiques. Elle a également trait à leur utilisation dans des compositions cosmétiques ou pour la préparation de compositions cosmétiques, pour prévenir ou traiter les effets du vieillissement intrinsèque ou extrinsèque (notamment dû aux rayonnements solaires) cutané, qui se caractérise notamment par l'apparition de rides, de taches cutanées, etc. Il a en effet été trouvé de manière surprenante que les composés de formule (I) possèdent à la fois des propriétés d'activateurs PPAR, d'antioxydants et d'anti- inflammatoires.A more particular subject of the present invention is the use of compounds of formula (I) as defined above in the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment or prophylaxis of cardiovascular diseases, syndrome X, restenosis, type I or II, preferably type II diabetes, obesity, hypertension, in particular hypertension, cancers, in particular cancer of the anus, rectum, colon, intestine, duodenum, stomach, prostate, testes, bladder, kidney, pancreas, liver, larynx, breast, lungs, leukemia and melanomas, and diseases dermatological. It also relates to their use in cosmetic compositions or for the preparation of cosmetic compositions, for preventing or treating the effects of aging. intrinsic or extrinsic (especially due to solar radiation) of the skin, which is characterized in particular by the appearance of wrinkles, skin spots, etc. It has indeed been surprisingly found that the compounds of formula (I) have both PPAR activator, antioxidant and anti-inflammatory properties.
La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique ou cosmétique comprenant, dans un. support acceptable sur le plan pharmaceutique ou cosmétique, un composé de formule générale (I) tel que décrit ci-dessus, éventuellement en association avec un autre actif thérapeutique, destinée à traiter de manière préventive ou curative les pathologies et les désordres mentionnés ci-dessus.The present invention also relates to a pharmaceutical or cosmetic composition comprising, in a. carrier acceptable from the pharmaceutical or cosmetic point of view, a compound of general formula (I) as described above, optionally in combination with another therapeutic active agent, intended for the preventive or curative treatment of the pathologies and disorders mentioned above .
L'invention a également pour objet une méthode de traitement des pathologies ou des désordres cités ci-avant, comprenant l'administration à un sujet, notamment animal ou en particulier humain, d'une dose efficace d'un composé de formule (I) ou d'une composition pharmaceutique tels que définis ci- avant. Par traitement, on entend aussi bien le traitement curatif que préventif.The subject of the invention is also a method of treatment of the pathologies or disorders mentioned above, comprising the administration to a subject, in particular animal or in particular human, of an effective dose of a compound of formula (I) or of a pharmaceutical composition as defined above. By treatment is meant both curative and preventive treatment.
Avantageusement, les composés de formule (I) utilisés sont tels que définis ci-dessus.Advantageously, the compounds of formula (I) used are as defined above.
Les compositions pharmaceutiques ou cosmétiques selon l'invention comprennent avantageusement un ou plusieurs excipients ou véhicules, acceptables sur le plan pharmaceutique ou cosmétique. On peut citer par exemple des solutions salines, physiologiques, isotoniques, tamponnées, etc., compatibles avec un usage pharmaceutique ou cosmétique et connues de l'homme du métier. Les compositions peuvent contenir un ou plusieurs agents ou véhicules choisis parmi les dispersants, solubilisants, stabilisants, surfactants, conservateurs, etc. Des agents ou véhicules utilisables dans des formulations (liquides et/ou injectables et/ou solides) sont notamment la méthylcellulose, l'hydroxyméthylcellulose, la carboxyméthylcellulose, le polysorbate 80, le mannitol, la gélatine, le lactose, les huiles végétales, l'acacia, etc. Les compositions peuvent être formulées sous forme de suspension injectable, de gels, huiles, comprimés, suppositoires, poudres, gélules, capsules, etc., éventuellement au moyen de formes galéniques ou de dispositifs assurant une libération prolongée et/ou retardée. Pour ce type de formulation, on utilise avantageusement un agent tel que la cellulose, des carbonates pu des amidons.The pharmaceutical or cosmetic compositions according to the invention advantageously comprise one or more excipients or vehicles, acceptable from the pharmaceutical or cosmetic point of view. Mention may be made, for example, of saline, physiological, isotonic, buffered solutions, etc., compatible with pharmaceutical or cosmetic use and known to those skilled in the art. The compositions may contain one or more agents or vehicles chosen from dispersants, solubilizers, stabilizers, surfactants, preservatives, etc. Agents or vehicles that can be used in formulations (liquids and / or injectables and / or solids) are in particular methylcellulose, hydroxymethylcellulose, carboxymethylcellulose, polysorbate 80, mannitol, gelatin, lactose, vegetable oils, acacia, etc. The compositions may be formulated in the form of an injectable suspension, gels, oils, tablets, suppositories, powders, capsules, capsules, etc., optionally by means of dosage forms or devices ensuring sustained and / or delayed release. For this type of formulation, an agent such as cellulose, carbonates or starches is advantageously used.
Les composés ou compositions selon l'invention peuvent être administrés de différentes manières et sous différentes formes. Ainsi, ils peuvent être par exemple administrés de manière systémique, par voie orale, parenterale, par inhalation ou par injection, comme par exemple par voie intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée, trans-dermique, intra-artérielle, etc. Pour les injections, les composés sont généralement conditionnés sous forme de suspensions liquides, qui peuvent être injectées au moyen de seringues ou de perfusions, par exemple. A cet égard, les composés sont généralement dissous dans des solutions salines, physiologiques, isotoniques, tamponnées, etc., compatibles avec un usage pharmaceutique et connues de l'homme du métier. Ainsi, les compositions peuvent contenir un ou plusieurs agents ou véhicules choisis parmi les dispersants, solubilisants, émulsifiants, stabilisants, surîactants, conservateurs, tampons, etc. Des agents ou véhicules utilisables dans des formulations liquides et/ou injectables sont notamment la méthylcellulose, l'hydroxyméthylcellulose, la carboxyméthylcellulosβ, le polysorbate 80, le mannitol, la gélatine, le lactose, les huiles végétales, l'acacia, les liposomes, etc.The compounds or compositions according to the invention can be administered in different ways and in different forms. Thus, they can for example be administered systemically, orally, parenterally, by inhalation or by injection, such as for example by intravenous, intramuscular, subcutaneous, trans-dermal, intra-arterial, etc. For injections, the compounds are generally packaged in the form of liquid suspensions, which can be injected using syringes or infusions, for example. In this regard, the compounds are generally dissolved in saline, physiological, isotonic, buffered solutions, etc., compatible with pharmaceutical use and known to those skilled in the art. Thus, the compositions can contain one or more agents or vehicles chosen from dispersants, solubilizers, emulsifiers, stabilizers, surfactants, preservatives, buffers, etc. Agents or vehicles that can be used in liquid and / or injectable formulations are in particular methylcellulose, hydroxymethylcellulose, carboxymethylcellulosβ, polysorbate 80, mannitol, gelatin, lactose, vegetable oils, acacia, liposomes, etc. .
Les composés peuvent ainsi être administrés sous forme de gels, huiles, comprimés, suppositoires, poudres, gélules, capsules, aérosols, etc., éventuellement au moyen de formes galéniques ou de dispositifs assurant une libération prolongée et/ou retardée. Pour ce type de formulation, on utilise avantageusement un agent tel que la cellulose, des carbonates ou des amidons.The compounds can thus be administered in the form of gels, oils, tablets, suppositories, powders, capsules, capsules, aerosols, etc., optionally by means of dosage forms or devices ensuring sustained and / or delayed release. For this type of formulation, an agent such as cellulose, carbonates or starches is advantageously used.
Les composés peuvent être administrés oralement auquel cas les agents ou véhicules utilisés sont choisis preferentiellement parmi l'eau, la gélatine, les gommes, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le talc, une huile, le polyalkylène glycol, etc.The compounds can be administered orally in which case the agents or vehicles used are preferably chosen from water, gelatin, gums, lactose, starch, magnesium stearate, talc, oil, polyalkylene glycol, etc.
Pour une administration parenterale, les composés sont preferentiellement administrés sous la forme de solutions, suspensions ou émulsions avec notamment de l'eau, de l'huile ou des polyalkylène glycpls auxquels il est possible d'ajouter, outre des agents conservateurs, stabilisants, émulsifiants, etc., des sels permettant d'ajuster la pression osmotique, des tampons, etc.For parenteral administration, the compounds are preferably administered in the form of solutions, suspensions or emulsions with in particular water, oil or polyalkylene glycols to which it is possible to add, in addition to preservatives, stabilizers, emulsifiers , etc., salts to adjust the osmotic pressure, buffers, etc.
Pour un usage cosmétique, les composés de l'invention peuvent être administrés sous toute forme habituelle en cosmétique, notamment crème, comme par exemple des crèmes de soin, des crèmes solaires, des huiles, des gels, des lotions, etc..For cosmetic use, the compounds of the invention can be administered in any form usual in cosmetics, in particular cream, such as for example care creams, sun creams, oils, gels, lotions, etc.
II est entendu que le débit et/ou la dose injectée peuvent être adaptés par l'homme du métier en fonction du patient, de la pathologie concernée, du mode d'administration, etc. Typiquement, les composés sont administrés à des doses pouvant varier entre 1 μg et 2 g par administration, preferentiellement de 0,1 mg à 1 g par administration. Les administrations peuvent être quotidiennes ou répétées plusieurs fois par jour, le cas échéant. D'autre part, les compositions selon l'invention peuvent comprendre, en outre, d'autres agents ou principes actifs.It is understood that the flow rate and / or the dose injected can be adapted by a person skilled in the art depending on the patient, the pathology concerned, the mode of administration, etc. Typically, the compounds are administered in doses which can vary between 1 μg and 2 g per administration, preferably from 0.1 mg to 1 g per administration. The administrations can be daily or repeated several times a day, if necessary. On the other hand, the compositions according to the invention can also comprise other agents or active principles.
L'invention a également pour objet des procédés de préparation des composés tels que définis ci-avant. Les composés de l'invention peuvent être préparés à partir de produits du commerce, en mettant en œuvre une combinaison de réactions chimiques connues de l'homme du métier.The invention also relates to processes for the preparation of the compounds as defined above. The compounds of the invention can be prepared from commercial products, using a combination of chemical reactions known to those skilled in the art.
Selon un procédé de l'invention, les composés dé formule (I) dans lesquels (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, de soufre ou un groupe N-R4, (ii) R et, le cas échéant R4, représentent de façon identique, un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et (iii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+.-X-R6, sont obtenus à partir d'un composé de formule (I) dans laquelle (i) G2 ou G3 sont des atomes d'oxygène, de soufre ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1, R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6, et d'un composé de formule A1-LG dans laquelle A1 représente le groupe R ou, le cas échéant, R4 et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi Cl, Br, mésyl, tosyl, etc., en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.According to a process of the invention, the compounds of formula (I) in which (i) G2 and G3 are oxygen, sulfur atoms or an N-R4 group, (ii) R and, where appropriate R4, represent in an identical manner, a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, containing from 1 to 5 atoms of carbons and (iii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or a group CO- (CH2) 2n + .- X-R6, are obtained from a compound of formula (I) in which (i) G2 or G3 are oxygen or sulfur atoms or an NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a CO- group R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6, and of a compound of formula A1-LG in which A1 represents the group R or, where appropriate, R4 and LG a reactive group chosen for example from Cl, Br , mesyl, tosyl, etc., optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
Selon un premier mode, les composés de formule (I) dans lesquels (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, de soufre ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1, R2 et R3, identiques, représentent un groupe CO- (CH2)2n+rX-R6, sont obtenus à partir d'un composé de formule (I) dans laquelle (i) G2 ou G3 sont des atomes d'oxygène, de soufre ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1 , R2 et R3 sont des atomes d'hydrogène et d'un composé de formule A°-GO-A dans laquelle A est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH, Cl, 0-CO-A° et 0-R7, R7 étant un groupe alkyle, et A° est le groupe CHa -Rδ, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.According to a first mode, the compounds of formula (I) in which (i) G2 and G3 are oxygen or sulfur atoms or an NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3, identical, represent a group CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6, are obtained from a compound of formula (I) in which (i) G2 or G3 are oxygen atoms, sulfur or an NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3 are hydrogen atoms and of a compound of formula A ° -GO-A in which A is a group reagent chosen for example from OH, Cl, 0-CO-A ° and 0-R7, R7 being an alkyl group, and A ° is the CHa -Rδ group, optionally in the presence of coupling agents or activators known from the skilled person.
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1 , R2 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou GO-(GH2)2n+ι-X-R6 peuvent être obtenus selon différentes méthodes qui permettent la synthèse de composés dans lesquels les groupes portés par un même hétéroatome (azote ou oxygène) ont la même signification.The compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms or an NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3 are hydrogen atoms or represent a CO-R5 or GO- (GH 2 ) 2n + ι-X-R6 group can be obtained according to different methods which allow the synthesis of compounds in which the groups carried by the same heteroatom (nitrogen or oxygen) have the same meaning.
Selon un premier mode, on fait réagir une molécule dé 1-aminoglycérol, de 1 ,3-diaminoglycérol ou de 1 ,2-diaminoglycérol (obtenu en adaptant le protocole décrit par (Morris, Atassi et al. 1997) avec un composé de formule A°-CO-A1 dans laquelle A1 est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH, Cl et OR7, R7 étant un groupe alkyle, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+.-X-R6 en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier. Cette réaction permet l'obtention respective de formes particulières de composés de formule (I), nommées composés (lla-c), et peut être mise en œuvre en adaptant des protocoles décrits par (Urakami and Kakeda 1953); (Shealy, Frye et al. 1984); (Marx, Piantadosi et al. 1988); (Rahman, Ziering et al. 1988) et (Nazih, Cordier et al. 1999). Dans les composés (llb-c), les groupements portés par un même hétéroatome, respectivement, (R1 et R3) et (R1 et R2) ont la même signification.According to a first mode, a molecule of 1-aminoglycerol, 1, 3-diaminoglycerol or 1, 2-diaminoglycerol (obtained by adapting the protocol described by (Morris, Atassi et al. 1997) is reacted with a compound of formula A ° -CO-A1 in which A1 is a reactive group chosen, for example, from OH, Cl and OR7, R7 being an alkyl group, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + .- X-R6 in the optional presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art. This reaction makes it possible to obtain respective particular forms of compounds of formula (I), called compounds (11a-c), and can be implemented by adapting the protocols described by (Urakami and Kakeda 1953); (Shealy, Frye et al. 1984); (Marx, Piantadosi et al. 1988); (Rahman, Ziering et al. 1988) and (Nazih, Cordier et al. 1999). In the compounds (llb-c), the groups carried by the same heteroatom, respectively, (R1 and R3) and (R1 and R2) have the same meaning.
(Ha) (Ilb) (Ile)(Ha) (Ilb) (Ile)
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii)The compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms or an NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii)
R1, R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe GO-R5 ou GO-R1, R2 and R3, identical or different, represent a group GO-R5 or GO-
(CH2)2n-.ι-X-R6, peuvent être obtenus à partir d'un composé de formule (lla-c) et d'un composé de formule °-GO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et CI, et A° est le groupe R5 ou le groupe (GH2)2n+.-X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier. Cette réaction permet la synthèse de composés dans lesquels les groupements portés par un même hétéroatome (azote ou oxygène), respectivement (R1 et R2), (R1 et R3), ou (R2 et R3) ont la même signification.(CH 2 ) 2n -.ι-X-R6, can be obtained from a compound of formula (lla-c) and a compound of formula  ° -GO-A2 in which A2 is a chosen reactive group for example between OH and CI, and A ° is the group R5 or the group (GH 2 ) 2n + .- X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art. This reaction allows the synthesis of compounds in which the groups carried by the same heteroatom (nitrogen or oxygen), respectively (R1 and R2), (R1 and R3), or (R2 and R3) have the same meaning.
Cette réaction est avantageusement réalisée selon le protocole décrit par exemple dans (Urakami and Kakeda 1953) et (Nazih, Cordier et al. 1999).This reaction is advantageously carried out according to the protocol described for example in (Urakami and Kakeda 1953) and (Nazih, Cordier et al. 1999).
Selon un autre procédé particulier de l'invention (schéma 1 ), les composés de formule (I) dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+.-X-R6. peuvent être obtenus selon les étapes suivantes :According to another particular process of the invention (scheme 1), the compounds of formula (I) in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms or a NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + . -X-R6. can be obtained in the following steps:
a) réaction du 1-aminoglycérol, du 1 ,3-diaminoglycérol ou du 1,2- diaminoglycérol avec un composé (PG)20 dans lequel PG est un groupement protecteur pour donner un composé de formule générale (llla-c). La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Nazih, Cordier et al. 2000) et (Kotsovolou, Chiou et al. 2001) dans lesquels (PG) 0 représente le dicarbonate de di-tert-butyle ;a) reaction of 1-aminoglycerol, 1, 3-diaminoglycerol or diaminoglycerol 1,2 with a compound (PG) 2 0 wherein PG is a protecting group to give a compound of general formula (IIIa-c). The reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Nazih, Cordier et al. 2000) and (Kotsovolou, Chiou et al. 2001) in which (PG) 0 represents di-tert-butyl dicarbonate;
b) réaction du composé de formule (llla-c) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et CI, et A° est le groupe R5 ou le groupe (GH2)2n+ - R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (IVa-c), dans laquelle R2 et R3 représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+.-X-R6 et PG est un groupement protecteur ;b) reaction of the compound of formula (IIIa-c) with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, between OH and CI, and A ° is the group R5 or the group (GH2 ) 2n + - R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to a person skilled in the art to give a compound of general formula (IVa-c), in which R2 and R3 represent a group CO-R5 or CO - (CH2) 2n + .- X-R6 and PG is a protective group;
c) déprotection du composé (IVa-c), selon des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 représente un atomes d'oxygène ou un groupe NH, (ii) R et R1 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R2 et R3 représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6 ;c) deprotection of the compound (IVa-c), according to conventional conditions known to those skilled in the art, to give a compound of general formula (I) in which (i) G2 and G3 represents an oxygen atom or a group NH, (ii) R and R1 are hydrogen atoms and (iii) R2 and R3 represent a CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + ι-X-R6 group;
d) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 représentent un atome d'oxygène ou un groupe NH, (ii) R et R1 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R2 et R3 représentent un groupe CO- R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6 avec un composé dé formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupé réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.d) reaction of a compound of general formula (I) in which (i) G2 and G3 represent an oxygen atom or an NH group, (ii) R and R1 are hydrogen atoms and (iii) R2 and R3 represent a group CO- R5 or CO- (CH 2 ) 2n + ι-X-R6 with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen for example between OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + ι-X-R6, in the presence optionally coupling agents or activators known to those skilled in the art.
(Illa) (Illb) (IIIc) b(Illa) (Illb) (IIIc) b
a. protection ; b. acylation ; c. déprotection ; d. amidification schéma 1 Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+--X-R6. peuvent être obtenus de différentes façons.at. protection; b. acylation; vs. protection ; d. amidification diagram 1 The compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + - X-R6. can be obtained in different ways.
Selon une première méthode, on fait réagir un composé de formule (I) selon l'invention, dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R et R2 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R1 , R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6, avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.According to a first method, a compound of formula (I) according to the invention is reacted, in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R and R2 are hydrogen atoms and (iii ) R1, R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + ι-X-R6, with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen by example between OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + ι-X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
Selon ce mode de préparation, les composés de formule (I) dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R et R2 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R1 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-According to this mode of preparation, the compounds of formula (I) in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R and R2 are hydrogen atoms and (iii) R1 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO-
(CH2)2n+ -R6, peuvent être obtenus à partir d'un composé de formule (lia) tel que défini ci-avant avec un composé de formule A°-CO-Â2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et CI, et A° est le groupe R5 ou le groupe (GH2)2n+ X-R6. en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.(CH 2 ) 2n + -R6, can be obtained from a compound of formula (IIa) as defined above with a compound of formula A ° -CO-Â2 in which A2 is a reactive group chosen for example between OH and CI, and A ° is the group R5 or the group (GH2) 2n + X-R6. optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
Selon un autre procédé particulier de l'invention, les composés de formule (I) dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1, R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6, peuvent être obtenus à partir d'un composé de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R, R2 et R3 représentent un atome d'hydrogène et (iii) R1 est un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 (composé de formule (lia)) selon les étapes suivantes (schéma 2) : a) réaction du composé de formule (Ha) avec un composé PG-E dans lequel PG est un groupement protecteur et E est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH ou un halogène, pour donner un composé de formule générale (V) dans laquelle R1 est un groupe CO-R5 ou CO-According to another particular process of the invention, the compounds of formula (I) in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6, can be obtained from a compound of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R, R2 and R3 represent a hydrogen atom and (iii) R1 is a CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 group (compound of formula ( lia)) according to the following steps (diagram 2): a) reaction of the compound of formula (Ha) with a compound PG-E in which PG is a protective group and E is a reactive group chosen, for example, from OH or a halogen, to give a compound of general formula (V) in which R1 is a group CO-R5 or CO-
(CH2)2n+ι-X-R6- La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Marx, Piantadosi et al. 1988; Gaffney and Reese 1997) dans lesquels PG-E peut représenter le chlorure de triphénylméthyle ou le 9-phénylxanthène-9-ol ou encore le 9-chloro-9- phénylxanthène ;(CH 2 ) 2n + ι-X-R6- The reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1988; Gaffney and Reese 1997) in which PG-E can represent the chloride of triphenylmethyl or 9-phenylxanthene-9-ol or also 9-chloro-9-phenylxanthene;
b) réaction du composé de formule (V) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et CI, et A° est le groupe R5 ou le groupe (GH2)2n+.- -R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (VI), dans laquelle R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe GO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 et PG est un groupement protecteur ;b) reaction of the compound of formula (V) with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, between OH and CI, and A ° is the group R5 or the group (GH 2 ) 2n + . - -R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to give a compound of general formula (VI), in which R1 and R2, identical or different, represent a group GO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 and PG is a protective group;
c) déprotection du composé (VI), dans des conditions connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R et R3 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX- 6 ;c) deprotection of the compound (VI), under conditions known to a person skilled in the art, to give a compound of general formula (I) in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R and R3 are hydrogen atoms and (iii) R1 and R2, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX- 6;
d) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes d'oxygène, (ii) R et R3 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6 avec un composé de formule A°- CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entred) reaction of a compound of general formula (I) in which (i) G2 and G3 are oxygen atoms, (ii) R and R3 are hydrogen atoms and (iii) R1 and R2, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2 n + ι-X-R6 with a compound of formula A ° - CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen for example from
OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+.-X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + .- X-R6, in the presence optionally coupling agents or activators known to those skilled in the art.
a : protection ; b : estérification ; c : déprotection ; d : estérification schéma 2 a: protection; b: esterification; c: deprotection; d: esterification diagram 2
Les étapes ci-dessus peuvent être réalisées avantageusement selon les protocoles décrits par (Marx, Piantadosi et al. 1988).The above steps can advantageously be carried out according to the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1988).
Selon un autre procédé de l'invention, les composés de formule (I) dans lesquels (i) G2 ou G3 représentent un atome d'oxygène ou un groupe N-R4, (ii) au moins un des groupes Θ2 ou G3 représente un groupe N-R4, (iii) R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et (iv) R1, R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe GO-R5 ou un groupe CO-(GH2)2n+.-X-R6, sont obtenus par réaction d'un composé de formule (I) dans laquelle (i) l'un des groupes G2R2 ou G3R3 représente un groupe hydroxyle et l'autre groupe G2R2 ou G3R3 représente respectivement un groupe NR4R2 ou NR4R3 avec R2 ou R3 représentant un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+rX-R6. (ϋ) R et R4 représentent indépendamment un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et (iii) R1 représente un groupe CO-R5 ou un groupe CO- (CH2)2n+.-X-R6. avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.According to another process of the invention, the compounds of formula (I) in which (i) G2 or G3 represent an oxygen atom or an N-R4 group, (ii) at least one of the groups Θ2 or G3 represents a group N-R4, (iii) R and R4 independently represent linear or branched alkyl groups, saturated or unsaturated, optionally substituted, having from 1 to 5 carbon atoms and (iv) R1, R2 and R3, identical or different, represent a GO-R5 group or a CO- (GH2) 2 n + .- X-R6 group are obtained by reaction of a compound of formula (I) in which (i) one of the groups G2R2 or G3R3 represents a hydroxyl group and the other group G2R2 or G3R3 respectively represents a group NR4R2 or NR4R3 with R2 or R3 representing a group CO-R5 or a group CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6. (ϋ) R and R4 independently represent a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, containing from 1 to 5 carbon atoms and (iii) R1 represents a group CO-R5 or a group CO- (CH 2 ) 2n + .- X-R6. with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + ι-X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) l'un des groupes G2R2 ou G3R3 représente un groupe hydroxyle et l'autre groupe G2R2 ou G3R3 représente respectivement un groupe NR4R2 ou NR4R3 avec R2 ou R3 représentant un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+.-X-R6, (ii) R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et (iii) R1 représente un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+ X- 6 sont obtenus à partir d'un composé de formule (I) selon l'invention dans laquelle l'un des groupes G2R2 ou G3R3 représente un groupe hydroxyle et l'autre groupe G2R2 ou G3R3 représente respectivement un groupe NR4R2 ou NR4R3 avec R2 ou R3 représentant un groupe GO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+r -R6, (ii) R et R4 représentent indépendamment un groupe tel que défini ci-avant et (iii) R1 est un atome d'hydrogène avec un composé de formule A°-GO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et CI, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+.-X-R6. en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.The compounds of formula (I) according to the invention in which (i) one of the groups G2R2 or G3R3 represents a hydroxyl group and the other group G2R2 or G3R3 respectively represents a group NR4R2 or NR4R3 with R2 or R3 representing a group CO-R5 or a group CO- (CH 2 ) 2 n + .- X-R6, (ii) R and R4 independently represent linear or branched alkyl groups, saturated or unsaturated, optionally substituted, containing from 1 to 5 carbon atoms and (iii) R1 represents a CO-R5 group or a CO- (CH2) 2n + X- 6 group are obtained from a compound of formula (I) according to the invention in which one of the groups G2R2 or G3R3 represents a hydroxyl group and the other group G2R2 or G3R3 respectively represents a group NR4R2 or NR4R3 with R2 or R3 representing a group GO-R5 or a group CO- (CH 2 ) 2 n + r -R6, (ii) R and R4 independently represent a group as defined above and (iii) R1 is a hydrogen atom with a compound of formula A ° -GO-A2 in which A2 is a reactive group chosen for example between OH and CI, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2 n + . -X-R6. optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
Dans un premier mode, les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome d'oxygène, (ii) G3 représente un groupe N-R4, (iii) R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés différents, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, (iv) R1 et R2 sont des atomes d'hydrogène et (v) R3 représente un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+ X-R6 sont obtenus de la façon suivante (schéma 3) :In a first embodiment, the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 is an oxygen atom, (ii) G3 represents an N-R4 group, (iii) R and R4 independently represent groups different linear or branched alkyls, saturated or unsaturated, optionally substituted, comprising from 1 to 5 carbon atoms, (iv) R1 and R2 are hydrogen atoms and (v) R3 represents a CO-R5 group or a CO- group (CH2) 2n + X-R6 are obtained in the following way (diagram 3):
a) réaction du 1-aminoglycérol avec un composé de formule R-CHO dans laquelle R représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et CHO est la fonction aldéhyde en présence d'agents réducteurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule (VII) dans laquelle R est un groupe tel que défini plus avant. Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Antoniadou-Vyzas, Foscolos et al. 1986) ;a) reaction of 1-aminoglycerol with a compound of formula R-CHO in which R represents a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, comprising from 1 to 5 carbon atoms and CHO is the aldehyde function in the presence of agents reducing agents known to those skilled in the art for obtaining a compound of formula (VII) in which R is a group as defined above. This reaction can advantageously be implemented by adapting the protocols described by (Antoniadou-Vyzas, Foscolos et al. 1986);
b) réaction d'un composé de formule (VII) avec un composé (PG)20 dans lequel PG est un groupement protecteur pour donner un composé de formule générale (VIII). La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Nazih, Cordier et al. 2000) et (Kotsovolou, Chiou et al. 2001) dans lesquels (PG)20 représente le dicarbonate de di-tert-butyle ;b) reacting a compound of formula (VII) with a compound (PG) 2 0 wherein PG is a protecting group to give a compound of general formula (VIII). The reaction may advantageously be implemented by adapting the protocols described by (Nazih, Cordier et al., 2000) and (Kotsovolou, Chiou et al., 2001) wherein (PG) 2 0 represents the di-tert-butyl dicarbonate;
c) réaction d'un composé de formule (VIII) avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (IX) en adaptant la procédure décrite par (Kitchin, Bethell et al. 1994) ;c) reaction of a compound of formula (VIII) with a compound of formula LG-E in which E represents a halogen and LG a reactive group chosen, for example, from mesyl, tosyle, etc., to give a compound of general formula ( IX) by adapting the procedure described by (Kitchin, Bethell et al. 1994);
d) réaction d'un composé composé de formule (IX) avec un composé de formule R4-WH2 dans laquelle R4 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et NH2 représente la fonction aminé, selon la méthode décrite par (Ramalingan, Raju et al. 1995), pour obtenir un composé de formule (X) dans laquelle R et R4, éventuellement différents, sont tels que définis ci-avant ;d) reaction of a compound composed of formula (IX) with a compound of formula R4-WH 2 in which R4 represents a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, containing from 1 to 5 carbon atoms and NH 2 represents the amino function, according to the method described by (Ramalingan, Raju et al. 1995), to obtain a compound of formula (X) in which R and R4, optionally different, are as defined above;
e) réaction d'un composé de formule (X) avec un composé de formule A°- CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule (XI) dans laquelle R et R4 représentent des groupes alkyle linéaires ou ramifiés différents, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, R3 représente le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X-R6 et PG est un groupement protecteur ;e) reaction of a compound of formula (X) with a compound of formula A ° - CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2 n + ι-X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of formula (XI) in which R and R4 represent linear alkyl groups or different branched, saturated or unsaturated, optionally substituted, comprising from 1 to 5 carbon atoms, R3 represents the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + ι-X-R6 and PG is a protective group;
f) déprotection du composé (XI) selon des conditions connues de l'homme de métier.f) deprotection of the compound (XI) according to conditions known to those skilled in the art.
(VII) (VIII)(VII) (VIII)
(DO 00(DO 00
0α)0α)
a. amination réductrice ; b. protection ; c. activation ; d. substitution ; e. amidification ; f. déprotectionat. reductive amination; b. protection; vs. activation; d. substitution ; e. amidification; f. protection
Schéma 3Diagram 3
Selon un second mode, les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G3 est un atome d'oxygène, (ii) G2 représente un groupe N-R4, (iii) R et R4 représentent des groupes alkyle linéaires ou ramifiés différents, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant .de 1 à 5 atomes de carbones, (iv) R1 et R3 sont des atomes d'hydrogène et (v) R2 représente un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+ι-X-R6 sont obtenus de la façon suivante (schéma 4) :According to a second mode, the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G3 is an oxygen atom, (ii) G2 represents an N-R4 group, (iii) R and R4 represent alkyl groups linear or branched different, saturated or unsaturated, optionally substituted, comprising. from 1 to 5 carbon atoms, (iv) R1 and R3 are hydrogen atoms and (v) R2 represents a CO-R5 group or a CO- group (CH 2 ) 2n + ι-X-R6 are obtained in the following way (diagram 4):
a) réaction d'un composé de formule (VIII) avec un composé PG'-E dans lequel PG' est un groupement protecteur et E est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH ou un halogène, pour donner un composé de formule générale (XII) dans laquelle R représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et PG un autre groupement protecteur tel que défini plus avant. La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Marx, Pjantadosi et al. 1988) et (Gaffney and Reese 1997) dans lesquels PG'-E peut représenter le chlorure de triphénylméthyle ou le 9-phénylxanthène-9-ol ou encore le 9-chloro-9-phénylxanthène ;a) reaction of a compound of formula (VIII) with a PG'-E compound in which PG 'is a protective group and E is a chosen reactive group for example from OH or a halogen, to give a compound of general formula (XII) in which R represents a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, containing from 1 to 5 carbon atoms and PG another protective group as further defined. The reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Pjantadosi et al. 1988) and (Gaffney and Reese 1997) in which PG'-E can represent triphenylmethyl chloride or 9-phenylxanthene-9- ol or also 9-chloro-9-phenylxanthene;
b) réaction d'un composé de formule (XII) tel que défini ci-avant avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XIII) dans laquelle R représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et PG et PG' sont des groupements protecteurs, en adaptant la procédure décrite par (Kitchin, Bethell et al. 1994) ;b) reaction of a compound of formula (XII) as defined above with a compound of formula LG-E in which E represents a halogen and LG a reactive group chosen for example from mesyl, tosyle, etc., to give a compound of general formula (XIII) in which R represents a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, comprising from 1 to 5 carbon atoms and PG and PG ′ are protective groups, by adapting the procedure described by (Kitchin, Bethell et al. 1994);
c) réaction d'un composé de formule (XIII) tel que défini ci-avant avec un composé de formule R4-NH2 dans laquelle R4 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et NH2 représente la fonction aminé, selon la méthode décrite par (Ramalingan, Raju et al. 1995), pour obtenir un composé de formule (XIV) dans laquelle R et R4 sont indépendamment tels que définis ci-avant ;c) reaction of a compound of formula (XIII) as defined above with a compound of formula R4-NH 2 in which R4 represents a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, comprising from 1 to 5 carbon atoms and NH 2 represents the amino function, according to the method described by (Ramalingan, Raju et al. 1995), to obtain a compound of formula (XIV) in which R and R4 are independently as defined above;
d) réaction d'un composé de formule (XIV) avec un composé de formule A°-d) reaction of a compound of formula (XIV) with a compound of formula A ° -
CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule (XV) dans laquelle R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, R2 représente un groupe CO-R5 ou un groupe CO- (CH2)2n+ι-X-R6, PG et PG' sont des groupements protecteurs ;CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + rX-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art for obtaining a compound of formula (XV) in which R and R4 independently represent linear or branched alkyl groups, saturated or unsaturated, optionally substituted, comprising from 1 to 5 carbon atoms, R2 represents a group CO-R5 or a group CO- (CH 2 ) 2 n + ι-X-R6, PG and PG 'are protective groups;
e) déprotection d'un composé de formule (XV) dans des conditions classiques connues de l'homme du métier pour obtenir un composé de formule générale (I) selon l'invention dans laquelle (i) R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, (ii) R1 et R3 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R2 représente un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+rX-R6.e) deprotection of a compound of formula (XV) under conventional conditions known to a person skilled in the art to obtain a compound of general formula (I) according to the invention in which (i) R and R4 independently represent alkyl groups linear or branched, saturated or unsaturated, optionally substituted, comprising from 1 to 5 carbon atoms, (ii) R1 and R3 are hydrogen atoms and (iii) R2 represents a CO-R5 group or a CO- (CH2 group) ) 2n + rX-R6.
(VIII) (XII) (XIII)(VIII) (XII) (XIII)
(XIV) (XV)(XIV) (XV)
a. protection ; b. activation ; c. substitution ; d. amidification ; e. déprotection Schéma 4at. protection; b. activation; vs. substitution ; d. amidification; e. deprotection Diagram 4
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes de soufre ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1 , R2 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 peuvent être obtenus selon différents procédés. Selon un premier mode, les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes de soufre ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1, R2 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6, R1 , R2 et ou R3 ayant la même signification s'ils sont portés par un même hétéroatome (soufre ou azote), peuvent être obtenus de la façon suivante (schéma 5A) :The compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are sulfur atoms or an NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3 are hydrogen atoms or represent a CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2 n + rX-R6 group can be obtained according to different processes. According to a first embodiment, the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are sulfur atoms or an NH group, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3 are hydrogen atoms or represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2 n + ι-X-R6, R1, R2 and or R3 having the same meaning if they are carried by the same heteroatom (sulfur or nitrogen), can be obtained as follows (diagram 5A):
a) réaction d'un composé de formule (lla-c) avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XVIa-c) ;a) reaction of a compound of formula (11a-c) with a compound of formula LG-E in which E represents a halogen and LG a reactive group chosen for example from mesyl, tosyle, etc., to give a compound of formula general (XVIa-c);
b) réaction d'un composé de formule (XVIa-c) avec un composé de formule Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, preferentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, preferentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XVIIa-c). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowit∑, Herslôf et al. 1 78) ;b) reaction of a compound of formula (XVIa-c) with a compound of formula Ac-S " B + in which Ac represents a short acyl group, preferably the acetyl group, and B is a counterion chosen for example from sodium or potassium, preferably potassium to give the compound of general formula (XVIIa-c) This reaction can advantageously be carried out by adapting the protocol described by (Gronowit∑, Herslôf et al. 178);
c) déprotection d'un composé de formule (XVIIa-c), dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, et par exemple en milieu basique, pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 représentent un atome de soufre ou un groupe NH et (ii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ;c) deprotection of a compound of formula (XVIIa-c), under conventional conditions known to those skilled in the art, and for example in basic medium, to give a compound of general formula (I) in which (i) G2 and G3 represent a sulfur atom or an NH group and (ii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a hydrogen atom or a CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2 n + rX-R6 group ;
d) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 représentent un atome de soufre ou un groupe NH et (ii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6, avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH )2n+.-X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier. d) reaction of a compound of general formula (I) in which (i) G2 and G3 represent a sulfur atom or an NH group and (ii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a hydrogen atom or a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2 n + rX-R6, with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH) 2n + .- X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known from l tradesman.
(lia) (Ilb) (Ile)(lia) (Ilb) (Ile)
(XVIa) (XVIb) (XVIc)(XVIa) (XVIb) (XVIc)
(XVIIa) (XVIIb) (XVIIc)(XVIIa) (XVIIb) (XVIIc)
a. activation ; b. substitution ; c. dépr otecϋon ; d. acylation schéma 5Aat. activation; b. substitution ; vs. deprotection; d. acylation diagram 5A
Selon un mode de synthèse similaire, les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes de soufre ou un groupeAccording to a similar synthesis mode, the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are sulfur atoms or a group
NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1, R2 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+.-X-R6, R1, R2 et/ou R3 ayant la même signification s'ils sont portés par un même hétéroatome (soufre ou azote), peuvent être obtenus de la façon suivante (schéma 5B) :NH, (ii) R is a hydrogen atom and (iii) R1, R2 and R3 are atoms hydrogen or represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + .- X-R6, R1, R2 and / or R3 having the same meaning if they are carried by the same heteroatom (sulfur or nitrogen), can be obtained as follows (diagram 5B):
a) réaction d'un composé de formule (lla-c) avec un composé de formulea) reaction of a compound of formula (11a-c) with a compound of formula
(LG)2 dans laquelle LG un groupe réactif choisi par exemple parmi iode, brome, etc., en présence d'éventuels activateurs connus de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (XVId-f) ;(LG) 2 in which LG a reactive group chosen, for example, from iodine, bromine, etc., in the presence of possible activators known to a person skilled in the art to give a compound of general formula (XVId-f);
b) réaction d'un composé de formule (XVId-f) avec un composé de formuleb) reaction of a compound of formula (XVId-f) with a compound of formula
HS"B+ dans laquelle B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, preferentiellement le sodium pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 représentent un atome de soufre ou un groupe NH et (ii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupe GO-R5 ouHS " B + in which B is a counterion chosen for example from sodium or potassium, preferentially sodium to give a compound of general formula (I) in which (i) G2 and G3 represent a sulfur atom or a NH group and (ii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a hydrogen atom or a GO-R5 group or
CO-(GH2)2n+rX-R6 ;CO- (GH 2 ) 2n + rX-R6;
c) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 et G3 représentent un atome de soufre ou un groupe NH et (ii) R1, R2 et R3, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou un groupec) reaction of a compound of general formula (I) in which (i) G2 and G3 represent a sulfur atom or an NH group and (ii) R1, R2 and R3, identical or different, represent a hydrogen atom or a group
GO-R5 ou GO-(GH2)2n+ι-X-R6, avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (GH2)2n+ X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier. (lia) (Ilb) (Ile) aGO-R5 or GO- (GH 2 ) 2 n + ι-X-R6, with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, between OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (GH 2 ) 2n + X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art. (lia) (Ilb) (Ile) a
(XVId) (XVIe) (XVIf) b b(XVId) (XVIe) (XVIf) b b
a. activa-ion ; b. substitution ; c. acylation schéma 5Bat. activation; b. substitution ; vs. acylation diagram 5B
Ce schéma réactionnel permet la synthèse de composés de formule généraleThis reaction scheme allows the synthesis of compounds of general formula
(I) dans laquelle les groupements portés par un même hétéroatome (azote ou soufre) respectivement (R2 et R3), (R1 et R3) et (R1 et R2) ont la même signification.(I) in which the groups carried by the same heteroatom (nitrogen or sulfur) respectively (R2 and R3), (R1 and R3) and (R1 and R2) have the same meaning.
Les étapes ci-dessus peuvent être réalisées avantageusement selon lés protocoles décrits par (Adams, Doyle et al. 1960) et (Gronowitz, Herslôf et al. 1978). Selon un autre procédé de l'invention , les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes de soufre ou un groupe NH, (ii) R est un atome d'hydrogène et (iii) R1 , R2 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH )2n+.-X-R6 peuvent être préparés à partir des composés de formule (llla-c) par un procédé comprenant (schéma 6) :The above steps can advantageously be carried out according to the protocols described by (Adams, Doyle et al. 1960) and (Gronowitz, Herslôf et al. 1978). According to another process of the invention, the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are sulfur atoms or an NH group, (ii) R is a hydrogen atom and ( iii) R1, R2 and R3 are hydrogen atoms or represent a group CO-R5 or CO- (CH) 2n + .- X-R6 can be prepared from the compounds of formula (IIIa-c) by a process comprising (diagram 6):
a) la réaction d'un composé de formule (llla-c) avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XVI lla-c) dans laquelle PG représente un groupement protecteur ;a) the reaction of a compound of formula (IIIa-c) with a compound of formula LG-E in which E represents a halogen and LG a reactive group chosen, for example, from mesyl, tosyl, etc., to give a compound of general formula (XVI lla-c) in which PG represents a protective group;
b) la réaction d'un composé de formule (XVIIIa-c) avec un composé de formule Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, preferentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, preferentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XIXa-c). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf et al. 1978) ;b) the reaction of a compound of formula (XVIIIa-c) with a compound of formula Ac-S " B + in which Ac represents a short acyl group, preferably the acetyl group, and B is a counterion chosen for example among sodium or potassium, preferably potassium to give the compound of general formula (XIXa-c) This reaction can advantageously be carried out by adapting the protocol described by (Gronowitz, Herslôf et al. 1978);
c) la déprotection de l'atome de soufre d'un composé (XIXa-c) dans des conditions connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (XXa-c) ;c) deprotecting the sulfur atom of a compound (XIXa-c) under conditions known to those skilled in the art, to give a compound of general formula (XXa-c);
d) la réaction d'un composé de formule générale (XXa-c) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XXIa-c) dans laquelle R2 et R3 représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ .-X-R6 ; e) la déprotection d'Un composé de formule (XXIa-c) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour obtenir un composé de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes de soufre ou un groupe NH, (ii) R et R1 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R2 et R3 représentent un atome d'hydrogèηe, un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6.d) the reaction of a compound of general formula (XXa-c) with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2 n + X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of general formula (XXIa-c) in which R2 and R3 represent a CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2 n + group. -X-R6; e) deprotection of a compound of formula (XXIa-c) under conventional conditions known to those skilled in the art, to obtain a compound of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are sulfur atoms or an NH group, (ii) R and R1 are hydrogen atoms and (iii) R2 and R3 represent a hydrogen atom, a CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX- group R6.
f) la réaction d'un composé de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 et G3 sont des atomes de soufre ou un groupe NH, (ii) R etf) the reaction of a compound of formula (I) according to the invention in which (i) G2 and G3 are sulfur atoms or an NH group, (ii) R and
R1 sont des atomes d'hydrogène et (iii) R2 et R3 représentent un atome d'hydrogène, un groupe CO-R5 ou CO-(CH )2n+rX-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et CI, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+.-X- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.R1 are hydrogen atoms and (iii) R2 and R3 represent a hydrogen atom, a CO-R5 or CO- (CH) 2 n + rX-R6 group with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen for example between OH and CI, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + .- X- R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known from l tradesman.
Ce schéma reactionnel permet la synthèse de composés de formule généraleThis reaction scheme allows the synthesis of compounds of general formula
(1) dans laquelle les groupements portés par un même hétéroatome (azote ou soufre) respectivement (R2 et R3), (R1 et R3) et (R1 et R2) ont la même signification.(1) in which the groups carried by the same heteroatom (nitrogen or sulfur) respectively (R2 and R3), (R1 and R3) and (R1 and R2) have the same meaning.
Les étapes ci-dessus peuvent être réalisées avantageusement selon les protocoles décrits par (Adams, Doyle et al. 1960); (Gronowitz, Herslôf et al.The above steps can advantageously be carried out according to the protocols described by (Adams, Doyle et al. 1960); (Gronowitz, Herslôf et al.
1978); (Bhatia and Hajdu 1987) et (Murata, Ikoma et al. 1991). 1978); (Bhatia and Hajdu 1987) and (Murata, Ikoma et al. 1991).
b b b bbb
1 f < f 1 f <f
c c c ccc
d d d ddd
e e e eee
' 1 '' 1 '
f f f fff
a. activation ; b. substitution ; c. déprotection ; d. acylation ; e. déprotection ; f. amidification schéma 6 Les composés de formule générale (I) dans lesquels (i) G2 et G3 représentent des atomes de soufre ou un groupe N-R4, (ii) R et R4 représentent indépendamment un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, (iii) R1 , R2 et R3, identiques ou différents, représentent μn groupe CO-R5 ou un groupe CO- (CH2)2n+ι-X-R6, sont obtenus par réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) les groupes G2 ou G3 représentent un atome de soufre ou un groupe N-R4, (ii) R et R4 représentent indépendamment des groupes tels que définis ci-avant, (iii) R1 est un atome d'hydrogène et (iv) R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+rX-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier. at. activation; b. substitution ; vs. protection ; d. acylation; e. protection ; f. amidification diagram 6 The compounds of general formula (I) in which (i) G2 and G3 represent sulfur atoms or an N-R4 group, (ii) R and R4 independently represent a linear or branched alkyl group, optionally substituted, having from 1 to 5 carbon atoms, (iii) R1, R2 and R3, identical or different, represent μn group CO-R5 or a group CO- (CH2) 2n + ι-X-R6, are obtained by reaction of a compound of general formula (I) in which (i) the groups G2 or G3 represent a sulfur atom or an N-R4 group, (ii) R and R4 independently represent groups as defined above, (iii) R1 is a hydrogen atom and (iv) R2 and R3, identical or different, represent a CO-R5 group or a CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 group with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, between OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + ι-X-R6, optionally in the presence of c agents or range or activators known to those skilled in the art.
Les composés de formule générale (I) dans laquelle (i) les groupes G2 et G3 représentent un atome de soufre ou un groupe N-R4, (ii) R et R4 représentent indépendamment des groupes tels que définis ci-avant, (iii) R1 est un atome d'hydrogène et (iv) R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou un groupe GO-(GH2)2n+.-X-R6, peuvent être obtenus selon les méthodes suivantes :The compounds of general formula (I) in which (i) the groups G2 and G3 represent a sulfur atom or an N-R4 group, (ii) R and R4 independently represent groups as defined above, (iii) R1 is a hydrogen atom and (iv) R2 and R3, identical or different, represent a CO-R5 group or a GO- (GH 2 ) 2n + .- X-R6 group, can be obtained according to the following methods:
Dans un premier mode, les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) le groupe G2 est un atome de soufre, (ii) G3 représente un groupeIn a first embodiment, the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) the group G2 is a sulfur atom, (ii) G3 represents a group
N-R4, (iii) R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés différents, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, (iv) R1 est un atome d'hydrogène et (v) R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou un groupe CO-(CH2)2n+ 1-X-R6 sont obtenus de la façon suivante (schéma 7) : a) réaction d'un composé de formule (XI) avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XXII) dans laquelle PG représente un groupement protecteur ;N-R4, (iii) R and R4 independently represent different linear or branched alkyl groups, saturated or unsaturated, optionally substituted, having from 1 to 5 carbon atoms, (iv) R1 is a hydrogen atom and (v) R2 and R3, identical or different, represent a CO-R5 group or a CO- (CH 2 ) 2n + 1-X-R6 group are obtained in the following manner (diagram 7): a) reaction of a compound of formula (XI) with a compound of formula LG-E in which E represents a halogen and LG a reactive group chosen for example from mesyl, tosyle, etc., to give a compound of general formula ( XXII) in which PG represents a protective group;
b) réaction d'un composé de formule (XXII) avec un composé de formule Ac- S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, preferentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, preferentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XXIII). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf ét al. 1978) ;b) reaction of a compound of formula (XXII) with a compound of formula Ac- S " B + in which Ac represents a short acyl group, preferably the acetyl group, and B is a counterion chosen for example from sodium or potassium, preferably potassium to give the compound of general formula (XXIII) This reaction can advantageously be carried out by adapting the protocol described by (Gronowitz, Herslôf et al. 1978);
c) déprotection de l'atome de soufre d'un composé de formule (XXIII) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (XXIV) ;c) deprotection of the sulfur atom of a compound of formula (XXIII) under conventional conditions known to those skilled in the art to give a compound of general formula (XXIV);
d) réaction d'un composé de formule générale (XXIV) avec un composé de formule A°-CO-Â2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et CI, et A° est le groupe R5 ou le groupe (GHa n+ X-d) reaction of a compound of general formula (XXIV) with a compound of formula A ° -CO-Â2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, between OH and CI, and A ° is the group R5 or the group ( GHa n + X-
R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XXV) dans laquelle R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ;R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of general formula (XXV) in which R2 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6;
e) déprotection du composé de formule (XXV) dans des conditions connues de l'homme de métier. e) deprotection of the compound of formula (XXV) under conditions known to those skilled in the art.
(XI)(XI)
(XXII) Ooαii)(XXII) Ooαii)
(XXIV)(XXIV)
(XXV) a. activation ; b. substitution ; c. déprotection ; d. acylation ; e. déprotection schéma 7(XXV) a. activation; b. substitution ; vs. protection ; d. acylation; e. deprotection diagram 7
Selon une autre méthode, les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 représente un groupe N-R4, (ii) G3 est un atome de soufre, (iii) R et R4 représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés différents, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbones, (iv) R1 est un atome d'hydrogène et (v) R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe GO-R5 ou un groupe GO-(GH2)2n+.-X-R6 sont obtenus de la façon suivante (schéma 8) :According to another method, the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 represents an N-R4 group, (ii) G3 is a sulfur atom, (iii) R and R4 independently represent alkyl groups linear or branched different, saturated or unsaturated, optionally substituted, comprising from 1 to 5 carbon atoms, (iv) R1 is a hydrogen atom and (v) R2 and R3, identical or different, represent a GO-R5 group or a group GO- (GH 2 ) 2n + .- X-R6 are obtained in the following way (diagram 8):
a) réaction du composé de formule (IX) avec un composé de formule Ac-S" B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, preferentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, preferentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XXVI). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf et al. 1978) ;a) reaction of the compound of formula (IX) with a compound of formula Ac-S " B + in which Ac represents a short acyl group, preferably the acetyl group, and B is a counterion chosen for example from sodium or potassium, preferably potassium to give the compound of general formula (XXVI) This reaction can advantageously be carried out by adapting the protocol described by (Gronowitz, Herslôf et al. 1978);
b) réaction d'un composé de formule (XXVI) avec un composé de formuleb) reaction of a compound of formula (XXVI) with a compound of formula
LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyie, etc., pour donner un composé de formule générale (XXVII) dans laquelle PG représente un groupement protecteur ;LG-E in which E represents a halogen and LG a reactive group chosen for example from mesyl, tosyie, etc., to give a compound of general formula (XXVII) in which PG represents a protective group;
c) réaction du composé (XXVII) avec un composé de formule R4-NH2 dans laquelle R4 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbones et NH2 représente la fonction aminé, selon la méthode décrite par (Ramalingan, Raju et al. 1995), pour obtenir un composé de formule (XXVIII) dans laquelle R et R4, représentent indépendamment des groupes alkyle linéaires ou ramifiés différents, saturés ou non, éventuellement substitués, comportant de 1 à 5 atomes de carbone ;c) reaction of the compound (XXVII) with a compound of formula R4-NH 2 in which R4 represents a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, containing from 1 to 5 carbon atoms and NH 2 represents the amino function , according to the method described by (Ramalingan, Raju et al. 1995), to obtain a compound of formula (XXVIII) in which R and R4 independently represent different linear or branched alkyl groups, saturated or unsaturated, optionally substituted, comprising 1 to 5 carbon atoms;
d) réaction d'un composé de formule générale (XXVIII) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX-d) reaction of a compound of general formula (XXVIII) with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group ( CH 2 ) 2 n + rX-
R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XXIX) ;R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of general formula (XXIX);
e) deprotection de l'atome de soufre d'un composé de formule (XXIX) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (XXX) ;e) deprotection of the sulfur atom of a compound of formula (XXIX) under conventional conditions known to a person skilled in the art to give a compound of general formula (XXX);
f) réaction d'un composé de formule générale (XXX) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+.-X- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XXXI) dans laquelle R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ; g) déprotection d'un composé de formule (XXXI) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier.f) reaction of a compound of general formula (XXX) with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group ( CH 2 ) 2n + .- X- R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of general formula (XXXI) in which R2 and R3, identical or different, represent a CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 group; g) deprotection of a compound of formula (XXXI) under conventional conditions known to those skilled in the art.
(IX) (XXVI) ( xvii)(IX) (XXVI) (xvii)
(XXVIII) (XXIX)(XXVIII) (XXIX)
(XXX) (XXXI) a. substitution ; b. activation ; c. substitution ; d. amidification ; e. deprotection ; f. acylation ; g. déprotection schéma 8 (XXX) (XXXI) a. substitution ; b. activation; vs. substitution ; d. amidification; e. protection ; f. acylation; g. deprotection diagram 8
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome de soufre, (ii) G3 est un atome d'oxygène, (iii) R est un atome d'hydrogène, (iv) R1 et R2 représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6 et (v) R3 est un atome d'hydrogène ou représente un groupe CO-R5 ou CO- (CH2)2n+ι-X-R6, peuvent être préparés à partir des composés de formule (V) par le procédé suivant (schéma 9A):The compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 is a sulfur atom, (ii) G3 is an oxygen atom, (iii) R is a hydrogen atom, (iv) R1 and R2 represent a group CO-R5 or CO- (CH2) 2n + ι-X-R6 and (v) R3 is a hydrogen atom or represents a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2 n + ι- X-R6, can be prepared from the compounds of formula (V) by the following process (scheme 9A):
a) réaction du composé (V) avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XXXII) dans laquelle PG représente un groupement protecteur ; b) réaction d'un composé de formule (XXXII) avec un composé de formule Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, preferentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, preferentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XXXIII). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf et al. 1978) ;a) reaction of the compound (V) with a compound of formula LG-E in which E represents a halogen and LG a reactive group chosen for example from mesyl, tosyl, etc., to give a compound of general formula (XXXII) in which PG represents a protective group; b) reaction of a compound of formula (XXXII) with a compound of formula Ac-S " B + in which Ac represents a short acyl group, preferably the acetyl group, and B is a counterion chosen for example from sodium or potassium, preferably potassium to give the compound of general formula (XXXIII) This reaction can advantageously be carried out by adapting the protocol described by (Gronowitz, Herslôf et al. 1978);
c) déprotection de l'atome de soufre d'un composé (XXXIII), dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (XXXIV) ;c) deprotection of the sulfur atom of a compound (XXXIII), under conventional conditions known to those skilled in the art, to give a compound of general formula (XXXIV);
d) réaction d'un composé de formule générale (XXXIV) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XXXV) dans laquelle R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou GO-(GH2)2n+.-X-R6 ;d) reaction of a compound of general formula (XXXIV) with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group ( CH 2 ) 2n + X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of general formula (XXXV) in which R1 and R2, identical or different, represent a CO-R5 or GO- (GH 2 ) 2n + group . -X-R6;
e) déprotection d'un composé (XXXV) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome de soufre, G3 est un atome d'oxygène, R et R3 sont des atomes d'hydrogène et R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ X-R6 ;e) deprotection of a compound (XXXV) under conventional conditions known to a person skilled in the art to give a compound of general formula (I) in which G2 is a sulfur atom, G3 is an oxygen atom, R and R3 are hydrogen atoms and R1 and R2, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH2) 2 n + X-R6;
f) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 est un atome de soufre, (ii) G3 est un atome d'oxygène, (iii) R et R3 sont des atomes d'hydrogène et (iv) R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH )2n+.-X-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.f) reaction of a compound of general formula (I) in which (i) G2 is a sulfur atom, (ii) G3 is an oxygen atom, (iii) R and R3 are hydrogen atoms and ( iv) R1 and R2, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH) 2n + .- X-R6 with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen by example between OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2 n + rX- R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
(XXXIV) (XXXV)(XXXIV) (XXXV)
a. activation ; b. substitution ; c. déprotection ; d. acylation ; e. déprotection ; f. acylation schéma 9Âat. activation; b. substitution ; vs. protection ; d. acylation; e. protection ; f. acylation diagram 9Â
Selon une méthode de synthèse similaire, les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome de soufre, (ii) G3 est un atome d'oxygène, (iii) R est un atome d'hydrogène, (iv) R1 et R2 représentent un groupe CO-R5 ou GO-(CH2)2n+.-X-R6 et (v) R3 est un atome d'hydrogène ou représente un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+.-X-R6, peuvent être préparés à partir des composés de formule (V) par le procédé suivant (schéma 9B):According to a similar synthetic method, the compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 is a sulfur atom, (ii) G3 is an oxygen atom, (iii) R is an atom hydrogen, (iv) R1 and R2 represent a group CO-R5 or GO- (CH2) 2n + .- X-R6 and (v) R3 is a hydrogen atom or represents a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + .- X-R6, can be prepared from the compounds of formula (V) by the following process (scheme 9B):
a) réaction du composé (V) avec un composé de formule (LG)2 dans laquellea) reaction of the compound (V) with a compound of formula (LG) 2 in which
LG un groupe réactif choisi par exemple parmi iode, brome, etc., pour donner un composé de formule générale (XXXI la) dans laquelle PG représente un groupement protecteur ; b) réaction d'un composé de formule (XXXIIa) avec un composé de formule HS"B+ dans laquelle B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, preferentiellement le sodium pour donner un composé de formule générale (XXXIV) ;LG a reactive group chosen, for example, from iodine, bromine, etc., to give a compound of general formula (XXXI la) in which PG represents a protective group; b) reaction of a compound of formula (XXXIIa) with a compound of formula HS " B + in which B is a counterion chosen for example from sodium or potassium, preferably sodium to give a compound of general formula ( XXXIV);
c) réaction d'un composé de formule générale (XXXIV) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ X- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XXXV) dans laquelle R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ;c) reaction of a compound of general formula (XXXIV) with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group ( CH2) 2n + X- R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of general formula (XXXV) in which R1 and R2, identical or different, represent a group CO -R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6;
d) déprotection d'un composé (XXXV) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome de soufre, G3 est un atome d'oxygène, R et R3 sont des atomes d'hydrogène et R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ;d) deprotection of a compound (XXXV) under conventional conditions known to a person skilled in the art to give a compound of general formula (I) in which G2 is a sulfur atom, G3 is an oxygen atom, R and R3 are hydrogen atoms and R1 and R2, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6;
e) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle (i) G2 est un atome de soufre, (ii) G3 est un atome d'oxygène, (iii) R et R3 sont des atomes d'hydrogène et (iv) R1 et R2, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX-e) reaction of a compound of general formula (I) in which (i) G2 is a sulfur atom, (ii) G3 is an oxygen atom, (iii) R and R3 are hydrogen atoms and ( iv) R1 and R2, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen for example from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + rX-
R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier. R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
a. activation ; b. substitution ; c. acylation ; d. déprotection ; e. acylationat. activation; b. substitution ; vs. acylation; d. protection ; e. acylation
schéma 9Bfigure 9B
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome de soufre, (ii) G3 est un atome d'oxygène, (iii) R est un atome d'hydrogène, (iv) R1 et R3 représentent un atome d'hydrogène ou un groupe GO-R5 ou GO-(CH2)2n+rX-R6, identiques ou différents, et (v) R2 représente un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6, peuvent être préparés à partir des composés de formule (Illa) par le procédé suivant (schéma 10):The compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 is a sulfur atom, (ii) G3 is an oxygen atom, (iii) R is a hydrogen atom, (iv) R1 and R3 represent a hydrogen atom or a GO-R5 or GO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 group, identical or different, and (v) R2 represents a CO-R5 or CO- (CH2) 2n + rX group -R6, can be prepared from the compounds of formula (IIIa) by the following process (scheme 10):
a) réaction d'un composé de formule (Illa) avec un composé PG'-E dans lequel PG' est un groupement protecteur et E est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH ou un halogène, pour donner un composé de formule générale (XXXVI) dans laquelle PG est un autre groupe protecteur tel que défini plus avant. La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Marx, Piantadosi et al. 1988) et (Gaffney and Reese 1997) dans lesquels PG-E peut représenter le chlorure de triphénylméthyle ou le 9-phénylxanthène- 9-ol ou encore le 9-chloro-9-phénylxanthène ;a) reaction of a compound of formula (IIIa) with a compound PG'-E in which PG 'is a protective group and E is a reactive group chosen, for example, from OH or a halogen, to give a compound of general formula ( XXXVI) in which PG is another protective group as defined further. The reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1988) and (Gaffney and Reese 1997) in which PG-E can represent triphenylmethyl chloride or 9-phenylxanthene-9-ol or 9-chloro-9-phenylxanthene;
b) réaction du composé (XXXVI) avec un composé de formule LG-E dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XXXVII) dans laquelle PG et PG' représentent des groupements protecteurs judicieusement choisis tels que définis plus avant ;b) reaction of the compound (XXXVI) with a compound of formula LG-E in which E represents a halogen and LG a reactive group chosen, for example, from mesyl, tosyle, etc., to give a compound of formula general (XXXVII) in which PG and PG 'represent judiciously chosen protective groups as defined above;
c) réaction d'un composé de formule (XXXVII) avec un composé de formule Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, preferentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, preferentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XXXVIII). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf et al. 1978) ;c) reaction of a compound of formula (XXXVII) with a compound of formula Ac-S " B + in which Ac represents a short acyl group, preferably the acetyl group, and B is a counterion chosen for example from sodium or potassium, preferably potassium to give the compound of general formula (XXXVIII) This reaction can advantageously be carried out by adapting the protocol described by (Gronowitz, Herslôf et al. 1978);
d) déprotection de l'atome de soufre d'un composé (XXXVIII), dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (XXXIX) ;d) deprotection of the sulfur atom of a compound (XXXVIII), under conventional conditions known to those skilled in the art, to give a compound of general formula (XXXIX);
e) réaction d'un composé de formule générale (XXXIX) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ X- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XL) dans laquelle R2 représente un groupe GO-R5 ou GO- e) reaction of a compound of general formula (XXXIX) with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group ( CH2) 2n + X- R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of general formula (XL) in which R2 represents a group GO-R5 or GO-
f) déprotection d'un composé (XL) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome de soufre, G3 est un atome d'oxygène, R, R1 et R3 sont des atomes d'hydrogène et R2 représente un groupe CO- R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 (composé XLI) ;f) deprotection of a compound (XL) under conventional conditions known to a person skilled in the art to give a compound of general formula (I) in which G2 is a sulfur atom, G3 is an oxygen atom, R, R1 and R3 are hydrogen atoms and R2 represents a group CO- R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 (compound XLI);
g) réaction d'un composé de formule (XLI) avec un composé (PG)20 dans lequel PG est un groupement protecteur pour donner un composé de formule générale (XLII). La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Nazih, Cordier et al. 2000) et (Kotsovolou, Chiou et al. 2001) dans lesquels (PG)20 représente le dicarbonate de di-tert-butyle ;g) reacting a compound of formula (XLI) with a compound (PG) 2 0 wherein PG is a protecting group to give a compound of general formula (XLII). The reaction can advantageously be carried out implemented by adapting the protocols described by (. Nazih, Cordier et al 2000) and (. Kotsovolou, Chiou et al 2001) wherein (PG) 2 0 represents the di-tert-butyl dicarbonate;
h) réaction d'un composé de formule générale (XLII) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ X- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule (XLIII) ;h) reaction of a compound of general formula (XLII) with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group ( CH 2 ) 2n + X- R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of formula (XLIII);
i) déprotection d'un composé (XLIII) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome de soufre, G3 est un atome d'oxygène, R et R1 sont des atomes d'hydrogène et R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe GO-R5 ou GO-(GH2)2n+ X- ;i) deprotection of a compound (XLIII) under conventional conditions known to a person skilled in the art to give a compound of general formula (I) in which G2 is a sulfur atom, G3 is an oxygen atom, R and R1 are hydrogen atoms and R2 and R3, identical or different, represent a group GO-R5 or GO- (GH 2 ) 2 n + X-;
j) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome de soufre, G3 est un atome d'oxygène, R et R1 sont des atomes d'hydrogène et R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupej) reaction of a compound of general formula (I) in which G2 is a sulfur atom, G3 is an oxygen atom, R and R1 are hydrogen atoms and R2 and R3, identical or different, represent a group
GO-R5 ou GO-(CH2)2n+rX-R6 avec un composé de formule A°-GO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ X-R , en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier. GO-R5 or GO- (CH 2 ) 2 n + rX-R6 with a compound of formula A ° -GO-A2 in which A2 is a reactive group chosen for example from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH2) 2n + XR, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
(πia) (XXXVI) (XXXVII)( πia ) (XXXVI) (XXXVII)
(xxxviii) Pooαx) W(xxxviii) Pooαx) W
a. protection ; b. activation ; c. subsitution ; d. déprotection ; e. acylation ; f. déprotection ; g : protection ; h : acylation ; i : déprotection ; j : amidification schéma 10 at. protection; b. activation; vs. substitution; d. protection ; e. acylation; f. protection ; g: protection; h: acylation; i: deprotection; j: amidification diagram 10
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome d'oxygène, (ii) G3 est un atome de soufre, (iii) R est un atome d'hydrogène, (iv) R1 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou GO-(CH2)2n+ι-X-R6 et (v) R2 représente un atome d'hydrogène ou un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+ι-X-R6, peuvent être préparés à partir des composés de formule (lia) selon le procédé suivant (schéma 11) :The compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 is an oxygen atom, (ii) G3 is a sulfur atom, (iii) R is a hydrogen atom, (iv) R1 and R3 are hydrogen atoms or represent a CO-R5 or GO- (CH 2 ) 2n + ι-X-R6 group and (v) R2 represents a hydrogen atom or a CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2 n + ι-X-R6, can be prepared from the compounds of formula (IIa) according to the following process (scheme 11):
a) réaction d'un composé de formule (lia) tel que défini ci-avant, avec un composé de formule LG-E (en quantité stoechiométrique) dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule généralea) reaction of a compound of formula (IIa) as defined above, with a compound of formula LG-E (in stoichiometric amount) in which E represents a halogen and LG a reactive group chosen for example from mesyl, tosyl , etc., to give a compound of general formula
(XLIV) ; b) réaction d'un composé de formule (XLIV) avec un composé de formule Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, preferentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, preferentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (XLV). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf et al. 1978) ;(XLIV); b) reaction of a compound of formula (XLIV) with a compound of formula Ac-S " B + in which Ac represents a short acyl group, preferably the acetyl group, and B is a counterion chosen for example from sodium or potassium, preferably potassium to give the compound of general formula (XLV). This reaction can advantageously be carried out by adapting the protocol described by (Gronowitz, Herslôf et al. 1978);
c) réaction d'un composé de formule (XLV) avec un composé PG-E dans lequel PG est un groupement protecteur et E est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH ou un halogène, pour donner un composé de formule générale (XLVI). La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Marx, Piantadosi et al. 1 88) et (Gaffney and Reese 1997), dans lesquels PG-E peut représenter le chlorure de triphénylméthyle ou le 9-phénylxanthène-9-ol ou encore lec) reaction of a compound of formula (XLV) with a compound PG-E in which PG is a protective group and E is a reactive group chosen, for example, from OH or a halogen, to give a compound of general formula (XLVI) . The reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1,88) and (Gaffney and Reese 1997), in which PG-E can represent triphenylmethyl chloride or 9-phenylxanthene-9 -ol or the
9-chloro-9-phénylxanthène ;9-chloro-9-phenylxanthene;
d) déprotection de l'atome de soufre d'un composé (XLVI), dans des conditions connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (XLVII) ;d) deprotection of the sulfur atom of a compound (XLVI), under conditions known to a person skilled in the art, to give a compound of general formula (XLVII);
e) réaction d'un composé de formule générale (XLVII) avec un composé de formule A°-GO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ι-X- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (XLVIII) dans laquelle R1 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ;e) reaction of a compound of general formula (XLVII) with a compound of formula A ° -GO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group ( CH 2 ) 2n + ι-X- R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of general formula (XLVIII) in which R1 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6;
f) déprotection d'un composé de formule (XLVIII), dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome d'oxygène, G3 est un atome de soufre, R et R2 sont des atomes d'hydrogène et R1 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+.- X-R6 ;f) deprotection of a compound of formula (XLVIII), under conventional conditions known to those skilled in the art, to give a compound of general formula (I) in which G2 is an oxygen atom, G3 is a sulfur atom, R and R2 are hydrogen atoms and R1 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + .- X-R6;
g) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome d'oxygène, G3 est un atome de soufre, R et R2 sont des atomes d'hydrogène et R1 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+.-X-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.g) reaction of a compound of general formula (I) in which G2 is an oxygen atom, G3 is a sulfur atom, R and R2 are hydrogen atoms and R1 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + .- X-R6 with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen for example between OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
(Ha) (XLIV) (XLV) (Ha) (XLIV) (XLV)
(XLVI) (XLVII)(XLVI) (XLVII)
(XLVIII)(XLVIII)
a. activation ; b. substitution ; c. protection ; d. déprotection sélective ; e. acylation ; f. deprotection ; g. acylation schéma 11at. activation; b. substitution ; vs. protection; d. selective deprotection; e. acylation; f. protection ; g. acylation diagram 11
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome d'oxygène, (ii) G3 est un atome de soufre, (iii) R est un atome d'hydrogène, (iv) R1 et R3 sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH )2n+rX-R6, identiques ou différents, et (v) R3 représente un groupe CO- R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6. peuvent être préparés à partir des composés de formule (Illa) selon le procédé suivant (schéma 12) :The compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 is an oxygen atom, (ii) G3 is a sulfur atom, (iii) R is a hydrogen atom, (iv) R1 and R3 are hydrogen atoms or represent a CO-R5 group or CO- (CH) 2n + rX-R6, identical or different, and (v) R3 represents a group CO- R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6. can be prepared from the compounds of formula (IIIa) according to the following process (scheme 12):
a) réaction d'un composé de formule (Illa) tel que défini ci-avant, avec un composé de formule LG-E (en quantité stoechiométrique) dans laquelle E représente un halogène et LG un groupe réactif choisi par exemple parmi mésyle, tosyle, etc., pour donner un composé de formule générale (XLIX) ;a) reaction of a compound of formula (IIIa) as defined above, with a compound of formula LG-E (in stoichiometric amount) in which E represents a halogen and LG a reactive group chosen for example from mesyl, tosyl , etc., to give a compound of general formula (XLIX);
b) réaction d'un composé de formule (XLIX) avec un composé de formule Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyle court, preferentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, preferentiellement le potassium pour donner le composé de formul générale (L). Cette réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant le protocole décrit par (Gronowitz, Herslôf et al. 1978) ;b) reaction of a compound of formula (XLIX) with a compound of formula Ac-S " B + in which Ac represents a short acyl group, preferably the acetyl group, and B is a counterion chosen for example from sodium or potassium, preferably potassium to give the compound of general formula (L). This reaction can advantageously be carried out by adapting the protocol described by (Gronowitz, Herslôf et al. 1978);
c) réaction d'un composé de formule (L) avec un composé PG'-E dans lequel PG' est un groupement protecteur et E est un groupe réactif choisi par exemple parmi OH ou un halogène, pour donner un composé de formule générale (Ll). La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Marx, Piantadosi et al. 1988) et (Gaffney and Reese 1997) dans lesquels PG'-E peut représenter le chlorure de triphénylméthyle ou le 9-phénylxanthène-9-ol ou encore lec) reaction of a compound of formula (L) with a compound PG'-E in which PG 'is a protective group and E is a reactive group chosen, for example, from OH or a halogen, to give a compound of general formula ( ll). The reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Marx, Piantadosi et al. 1988) and (Gaffney and Reese 1997) in which PG'-E can represent triphenylmethyl chloride or 9-phenylxanthene-9- ol or the
9-chloro-9-phénylxanthène ;9-chloro-9-phenylxanthene;
d) déprotection de l'atome de soufre d'un composé (Ll), dans des conditions connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (LU) ; e) réaction d'un composé de formule générale (LU) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (LUI) dans laquelle R3 représente un groupe CO-R5 ou CO- d) deprotection of the sulfur atom of a compound (L1), under conditions known to those skilled in the art, to give a compound of general formula (LU); e) reaction of a compound of general formula (LU) with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group ( CH 2 ) 2n + rX- R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of general formula (LUI) in which R3 represents a CO-R5 or CO- group
f) déprotection d'un composé de formule (LUI), dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome d'oxygène, G3 est un atome de soufre, R et R2 sont des atomes d'hydrogène et R3 représente un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 (composé LIV) ;f) deprotection of a compound of formula (LUI), under conventional conditions known to those skilled in the art, to give a compound of general formula (I) in which G2 is an oxygen atom, G3 is an atom sulfur, R and R2 are hydrogen atoms and R3 represents a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2 n + rX-R6 (compound LIV);
g) réaction d'un composé de formule (LIV) avec un composé (P )2θ dans lequel PG est un groupement protecteur pour donner un composé de formule générale (LV). La réaction peut avantageusement être mise en œuvre en adaptant les protocoles décrits par (Nazih, Cordier et al. 2000) et ( otsovolou, Chiou et al. 2001) dans lesquels (PG)2θ représente le dicarbonate de di-tert-butyle ;g) reaction of a compound of formula (LIV) with a compound (P) 2 θ in which PG is a protective group to give a compound of general formula (LV). The reaction can advantageously be carried out by adapting the protocols described by (Nazih, Cordier et al. 2000) and (otsovolou, Chiou et al. 2001) in which (PG) 2 θ represents di-tert-butyl dicarbonate;
h) réaction d'un composé de formule générale (LV) avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule (LVI) ;h) reaction of a compound of general formula (LV) with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group ( CH 2 ) 2n + rX- R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of formula (LVI);
i) déprotection d'un composé (LVI) dans des conditions classiques connues de l'homme de métier pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G3 est un atome de soufre, G2 est un atome d'oxygène, R et R1 sont des atomes d'hydrogène et R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ; j) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle G3 est un atome de soufre, G2 est un atome d'oxygène, R et R1 sont des atomes d'hydrogène et R2 et R3, identiques ou différents, représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple. entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+ X-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.i) deprotection of a compound (LVI) under conventional conditions known to those skilled in the art to give a compound of general formula (I) in which G3 is a sulfur atom, G2 is an oxygen atom, R and R1 are hydrogen atoms and R2 and R3, identical or different, represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2 n + rX-R6; j) reaction of a compound of general formula (I) in which G3 is a sulfur atom, G2 is an oxygen atom, R and R1 are hydrogen atoms and R2 and R3, identical or different, represent a CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 group with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example. between OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2 n + X-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
(Illa) (XI X) (L)(Illa) (XI X) (L)
(Ll) (LII) (LUI)(Ll) (LII) (HIM)
(LW) (LV)(LW) (LV)
a. activation ; b. substitution ; c. protection ; d. déprotection ; e. acylation ; f. déprotection ; g : protection ; h : acylation ; i : déprotection ; j : amidification schéma 12 at. activation; b. substitution ; vs. protection; d. protection ; e. acylation; f. protection ; g: protection; h: acylation; i: deprotection; j: amidification diagram 12
Les composés de formule (I) selon l'invention dans laquelle (i) G2 est un atome d'oxygène, (ii) G3 est un atome de soufre, (iii) R est un atome d'hydrogène, (iv)The compounds of formula (I) according to the invention in which (i) G2 is an oxygen atom, (ii) G3 is a sulfur atom, (iii) R is a hydrogen atom, (iv)
R2 et R3, identiques, sont des atomes d'hydrogène ou représentent un groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+.-X-R6 et (v) R1 représente un groupe CO-R5 ou CO- (CH2)2n+ -R6, peuvent être préparés à partir des composés de formule (Illa) selon le procédé suivant (schéma 13) :R2 and R3, identical, are hydrogen atoms or represent a group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + .- X-R6 and (v) R1 represents a group CO-R5 or CO- (CH2) 2n + -R6, can be prepared from the compounds of formula (Illa) according to the following process (diagram 13):
a) réaction d'un composé de formule (Illa) tel que défini ci-avant, avec un composé de formule (LG)2 (en quantité stoechiométrique) dans laquelle LG un groupe réactif choisi par exemple parmi iode, brome, etc., pour donner un composé de formule générale (XLIXa) ;a) reaction of a compound of formula (IIIa) as defined above, with a compound of formula (LG) 2 (in stoichiometric amount) in which LG a reactive group chosen for example from iodine, bromine, etc., to give a compound of general formula (XLIXa);
b) réaction d'un composé de formule (XLIXa) avec un composé de formuleb) reaction of a compound of formula (XLIXa) with a compound of formula
Ac-S"B+ dans laquelle Ac représente un groupe acyie court, preferentiellement le groupe acétyle, et B est un contre-ion choisi par exemple parmi le sodium ou le potassium, preferentiellement le potassium pour donner le composé de formule générale (L) ;Ac-S " B + in which Ac represents a short acyly group, preferably the acetyl group, and B is a counterion chosen for example from sodium or potassium, preferentially potassium to give the compound of general formula (L) ;
c) déprotection de l'atome de soufre d'un composé (L), dans des conditions connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (LVII) ;c) deprotection of the sulfur atom of a compound (L), under conditions known to those skilled in the art, to give a compound of general formula (LVII);
d) réaction d'un composé de formule générale (LVII) avec un composé de formule A°-GO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX- R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier pour obtenir un composé de formule générale (LVI) dans laquelle R2 et R3 représentent un même groupe CO-d) reaction of a compound of general formula (LVII) with a compound of formula A ° -GO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH and Cl, and A ° is the group R5 or the group ( CH 2 ) 2 n + rX- R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art to obtain a compound of general formula (LVI) in which R2 and R3 represent the same group CO-
R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ;R5 or CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6;
e) déprotection d'un composé de formule (LVI), dans des conditions classiques connues de l'homme de métier, pour donner un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome d'oxygène, G3 est un atome de soufre, R et R2 sont des atomes d'hydrogène et R2 et R3 représentent un même groupe CO-R5 ou CO-(CH2)2n+rX-R6 ; f) réaction d'un composé de formule générale (I) dans laquelle G2 est un atome d'oxygène, G3 est un atome de soufre, R et R2 sont des atomes d'hydrogène et R2 et R3 représentent un même groupe CO-R5 ou CO- (CH2)2n+ 1-X-R6 avec un composé de formule A°-CO-A2 dans laquelle A2 est un groupe réactif choisi par exemple entre OH. et Cl, et A° est le groupe R5 ou le groupe (CH2)2n+rX-R6, en présence éventuellement d'agents de couplage ou d'activateurs connus de l'homme de métier.e) deprotection of a compound of formula (LVI), under conventional conditions known to those skilled in the art, to give a compound of general formula (I) in which G2 is an oxygen atom, G3 is an atom sulfur, R and R2 are hydrogen atoms and R2 and R3 represent the same group CO-R5 or CO- (CH2) 2n + rX-R6; f) reaction of a compound of general formula (I) in which G2 is an oxygen atom, G3 is a sulfur atom, R and R2 are hydrogen atoms and R2 and R3 represent the same group CO-R5 or CO- (CH 2 ) 2n + 1 -X-R6 with a compound of formula A ° -CO-A2 in which A2 is a reactive group chosen, for example, from OH. and Cl, and A ° is the group R5 or the group (CH 2 ) 2n + rX-R6, optionally in the presence of coupling agents or activators known to those skilled in the art.
a. activation ; b. substitution ; c. déprotection ; d. acylation ; e. déprotection ; f : amidificationat. activation; b. substitution ; vs. protection ; d. acylation; e. protection ; f: amidification
schéma 13figure 13
La faisabilité, la réalisation et d'autres avantages de l'invention sont illustrés plus en détails dans les exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. LEGENDE DES FIGURES :The feasibility, implementation and other advantages of the invention are illustrated in more detail in the examples which follow, which should be considered as illustrative and not limiting. LEGEND OF THE FIGURES:
Figure 1 : Structure de composés particuliers selon l'invention dont la préparation est décrite aux exemples 2, 4, 5, 6, 8, 10 à 14, 16, 18, 19, 21 et 23, notés sur la figure respectivement 1A.2, 1A.4, 1A.5, 1A.6, 1A.8, 1A.10, 1A.11, 1A.12, 1A.13, 1A.14, 1A.16, 1A.18, 1A.19, 1A.21 et 1A.23.Figure 1: Structure of particular compounds according to the invention, the preparation of which is described in Examples 2, 4, 5, 6, 8, 10 to 14, 16, 18, 19, 21 and 23, noted in Figure 1A.2 respectively , 1A.4, 1A.5, 1A.6, 1A.8, 1A.10, 1A.11, 1A.12, 1A.13, 1A.14, 1A.16, 1A.18, 1A.19, 1A .21 and 1A.23.
Figure 2 : Evaluation des propriétés d'agonistes PPAR α de composés selon l'invention avec le système de transactivation Gal4/PPAR α.Figure 2: Evaluation of the properties of PPAR α agonists of compounds according to the invention with the Gal4 / PPAR α transactivation system.
Figure 3 : Evaluation des effets d'un composé selon l'invention (exemple 11 ) sur le métabolisme du cholestérol et des triglycérides plasmatiques chez le rat Zucker.Figure 3: Evaluation of the effects of a compound according to the invention (Example 11) on the metabolism of cholesterol and plasma triglycerides in the Zucker rat.
• Figure 3Â : dosage du cholestérol total plasmatique à J0, J7 et J14 chez les animaux contrôles et les animaux traités avec le composé Ex 11.• Figure 3A: determination of total plasma cholesterol on D0, D7 and D14 in control animals and animals treated with compound Ex 11.
• Figure 3B : dosage des triglycérides plasmatiques à J0, J7 et J14 chez les animaux contrôles et les animaux traités avec le composé Ex 11.• Figure 3B: determination of plasma triglycerides on D0, D7 and D14 in control animals and animals treated with compound Ex 11.
Figure 4 : Evaluation des propriétés antioxydantes de composés selon l'invention sur l'oxydation des LDL par le cuivre (Cu). β Figure 4Â : formation de diènes conjugués en fonction du temps ou Lag-Phase.Figure 4: Evaluation of the antioxidant properties of compounds according to the invention on the oxidation of LDL by copper (Cu). β Figure 4Â: formation of conjugated dienes as a function of time or Lag-Phase.
• Figure 4B : vitesse d'oxydation des LDL.• Figure 4B: LDL oxidation rate.
• Figure 4C : quantité maximum de diènes conjugués formés.• Figure 4C: maximum quantity of conjugated dienes formed.
EXEMPLES :EXAMPLES:
Pour faciliter la lecture du texte, les composés selon l'invention utilisés dans les exemples de mesure ou d'évaluation d'activité seront notés de manière abrégée telle que « Ex 2 » pour désigner le composé selon l'invention dont la préparation est décrite à l'exemple 2. Les chromatographies sur couche mince (CCM) ont été effectuées sur des plaques de gel de silice 6OF254 MERCK d'épaisseur 0.2 mm. On utilise l'abréviation Rf pour désigner le facteur de rétention (rétention factor). Les chromatographies sur colonne ont été réalisées sur gel de silice 60 de granulométrie 40-63 μm (référence 9385-5000 MERCK).To make the text easier to read, the compounds according to the invention used in the examples for measuring or evaluating activity will be abbreviated as "Ex 2" to denote the compound according to the invention, the preparation of which is described in example 2. Thin layer chromatographies (TLC) were carried out on MERCOF 6OF254 silica gel plates 0.2 mm thick. The abbreviation Rf is used to denote the retention factor. The column chromatographies were carried out on silica gel 60 with a particle size 40-63 μm (reference 9385-5000 MERCK).
Les points de fusion (PF) ont été mesurés à l'aide d'un appareil BUCHI B 540 par la méthode des capillaires.The melting points (PF) were measured using a BUCHI B 540 device by the capillary method.
Les spectres infra-rouge (IR) ont été réalisés sur un spectromètre à transformée de Fourier BRUKER (Vector 22). Les spectres de résonance magnétique nucléaire (RMN) ont été enregistrés sur un spectromètre BRUKER AG 300 (300 MHz). Chaque signal est repéré par son déplacement chimique, son intensité, sa multiplicité (notée s pour singulet, si pour singulet large, d pour doublet, dd pour doublet dédoublé, t pour triplet, td pour triplet dédoublé, quint pour quintuplet et m pour multiplet) et sa constante de couplage (J).The infrared (IR) spectra were performed on a Fourier transform spectrometer BRUKER (Vector 22). The nuclear magnetic resonance (NMR) spectra were recorded on a BRUKER AG 300 spectrometer (300 MHz). Each signal is identified by its chemical displacement, its intensity, its multiplicity (noted s for singlet, if for broad singlet, d for doublet, dd for split doublet, t for triplet, td for split triplet, quint for quintuplet and m for multiplet ) and its coupling constant (J).
Les spectres de masse (SM) ont été réalisés sur un spectromètre PERKIN- ELMER SGIEX API 1 (ESI-MS pour Electrospray lonization Mass Spectrometry) ou sur un spectromètre APPLIED BIOSYSTEMS Voyager DE-STR de type MALDI-TOF (Matrix-Assisted Laser Desorption/lonization - Time Of Flight).Mass spectra (SM) were performed on a PERKIN- ELMER SGIEX API 1 spectrometer (ESI-MS for Electrospray lonization Mass Spectrometry) or on an APPLIED BIOSYSTEMS Voyager DE-STR spectrometer of MALDI-TOF type (Matrix-Assisted Laser Desorption / lonization - Time Of Flight).
EXEMPLE 1 : Préparation de l'acide tétra écylthioacéfciqueEXAMPLE 1 Preparation of tetraecylthioacefcic acid
L'hydroxyde de potassium (34.30 g, 0.611 mol), l'acide mercaptoacétique (20.9 ml, 0.294 mol) et le 1-bromotétradécane (50 ml, 0.184 mol) sont ajoutés dans l'ordre au méthanol (400 ml). Ce mélange est placé sous agitation pendant une nuit à température ambiante. Au mélange reactionnel précédent est alors ajoutée une solution d'acide chlorhydrique concentré (60 ml) dissous dans l'eau (800 ml). L'acide tétradécylthioacétique précipite. Le mélange est laissé sous agitation une nuit à température ambiante. Le précipité est ensuite filtré, lavé cinq fois à l'eau puis séché au dessiccateur. Le produit est recristallisé dans le méthanol.Potassium hydroxide (34.30 g, 0.611 mol), mercaptoacetic acid (20.9 ml, 0.294 mol) and 1-bromotetradecane (50 ml, 0.184 mol) are added in order to methanol (400 ml). This mixture is stirred overnight at room temperature. To the above reaction mixture is then added a solution of concentrated hydrochloric acid (60 ml) dissolved in water (800 ml). Tetradecylthioacetic acid precipitates. The mixture is left stirring overnight at room temperature. The precipitate is then filtered, washed five times with water and then dried in a desiccator. The product is recrystallized from methanol.
Rendement : 94%.Yield: 94%.
Rf (dichlorométhane-méthanol 9-1) : 0.60 PF : 67-68°CRf (dichloromethane-methanol 9-1): 0.60 Mp: 67-68 ° C
IR : vCO acide 1726 et 1684 cm'1 IR: vCO acid 1726 and 1684 cm '1
RMN (1H, CDCI3) : 0.84-0.95 (t, 3H, -CH3, J=6.5Hz) ; 1.20-1.45 (massif, 22H, -NMR (1 H, CDCl 3): 0.84-0.95 (t, 3H, -CH 3, J = 6.5Hz); 1.20-1.45 (massive, 22H, -
CH2-) ; 1.55-1.69 (quint, 2H, -CH2-CH2-S-, J=6.5Hz) ; 2.63-2.72 (t, 2H, CH2-CH2-CH 2 -); 1.55-1.69 (quint, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-, J = 6.5Hz); 2.63-2.72 (t, 2H, CH 2 -CH 2 -
S-, J=7.3Hz) ; 3.27 (s, 2H, S-CH2-COOH)S-, J = 7.3Hz); 3.27 (s, 2H, S-CH 2 -COOH)
SM (ESI-MS) : M-1 = 287SM (ESI-MS): M-1 = 287
EXEMPLE 2 : Préparation du 3-.tétradécylthioacétylamino)propane-1.2-diol L'acide tétradécylthioacétique (exemple 1) (14.393 g ; 50 mmol) et le 3-amino- propane-1 ,2-diol (5 g ; 55 mmol) sont placés dans un ballon et chauffés à 190°C pendant 1 heure. Le mélange reactionnel est ramené à température ambiante puis repris par du chloroforme et lavé une fois à l'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et portée à sec. Le résidu est placé sous agitation dans l'éther. Le produit est isolé parfiltration.EXAMPLE 2 Preparation of 3-.tetradecylthioacetylamino) propane-1.2-diol Tetradecylthioacetic acid (example 1) (14.393 g; 50 mmol) and 3-amino-propane-1, 2-diol (5 g; 55 mmol) are placed in a flask and heated at 190 ° C for 1 hour. The reaction mixture is brought to ambient temperature then taken up in chloroform and washed once with water. The organic phase is dried over magnesium sulfate, filtered and brought to dryness. The residue is placed under stirring in ether. The product is isolated by filtration.
Rendement : 22%.Yield: 22%.
Rf (dichlorométhane-méthanol 9-1) : 0.60Rf (dichloromethane-methanol 9-1): 0.60
PF : 89-92°CMp: 89-92 ° C
IR : vNH et OH 3282 cm"1 ; vGO amide 1640 cm"1 RMN (1H, GDCI3) : 0.89 (t, 3H, -GH3, J=6.5Hz) ; 1.26 (massif, 22H, -GH2-) ; 1.57IR: vNH and OH 3282 cm "1 ; vGO amide 1640 cm " 1 NMR ( 1 H, GDCI3): 0.89 (t, 3H, -GH 3 , J = 6.5Hz); 1.26 (solid, 22H, -GH 2 -); 1.57
(m, 2H, -CH2-GH2-S-) ; 2.54 (t, 2H, -GH2-CH -S, J=7.6H∑) ; 3.27 (s, 2H, S-CH2-(m, 2H, -CH 2 -GH 2 -S-); 2.54 (t, 2H, -GH 2 -CH -S, J = 7.6H∑); 3.27 (s, 2H, S-CH 2 -
CONH-) ; 3.47 (m, 2H, -CONH-CH2-GHOH-CH2OH) ; 3.58 (m, 1H, -GONH-CH2-CONH-); 3.47 (m, 2H, -CONH-CH 2 -GHOH-CH 2 OH); 3.58 (m, 1H, -GONH-CH 2 -
CHOH-CH2OH) ;3.81 (m, 2H, -CONH-CH2-CHOH-CH2OH) ; 7.33 (si, 1H, -CHOH-CH 2 OH); 3.81 (m, 2H, -CONH-CH 2 -CHOH-CH 2 OH); 7.33 (if, 1H, -
CONH-). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 362 (M+H) ; M+23 = 385 (M+Na+) ; M+39 = 400-CONH-). MS (MALDI-TOF): M + 1 = 362 (M + H); M + 23 = 385 (M + Na + ); M + 39 = 400
(M+K+)(M + K + )
EXEMPLE 3 : 3-(palmitoylamino)propane-1.2-diol Ce composé est synthétisé selon la procédure précédemment décrite (exemple 2) à partir du 3-aminopropane-1 ,2-diol et de l'acide palmitique. Rendement : 86% Rf (dichlorométhane-méthanol 9-1) : 0.50EXAMPLE 3 3- (palmitoylamino) propane-1.2-diol This compound is synthesized according to the procedure previously described (example 2) from 3-aminopropane-1, 2-diol and palmitic acid. Efficiency: 86% Rf (dichloromethane-methanol 9-1): 0.50
IR : vNH et OH 3312 cm"1 ; vCO amide 1633 cm"1 IR: vNH and OH 3312 cm "1 ; vCO amide 1633 cm " 1
PF : 104-108°CMp: 104-108 ° C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 3H, -CH3, J=6.5Hz) ; 1.28 (massif, 24H, -CH2-) ; 1.64NMR (1 H, CDCl 3): 0.89 (t, 3H, -CH 3, J = 6.5Hz); 1.28 (solid, 24H, -CH 2 -); 1.64
(m, 2H, -CH2-CH2-CO-) ; 2.24 (m, 2H, -CH2-CH2-CO-) ; 3.43 (m, 2H, -CONH-(m, 2H, -CH 2 -CH 2 -CO-); 2.24 (m, 2H, -CH 2 -CH 2 -CO-); 3.43 (m, 2H, -CONH-
CH2-CHOH-CH2OH) ; 3.55 (m, 2H, -CONH-CH2-CHOH-CH2OH) ; 3.78 (m, 1 H, -CH 2 -CHOH-CH 2 OH); 3.55 (m, 2H, -CONH-CH 2 -CHOH-CH 2 OH); 3.78 (m, 1 H, -
CONH-CH2-CHOH-CH2OH) ; 5.82 (si, 1 H, -CONH-).CONH-CH 2 -CHOH-CH 2 OH); 5.82 (si, 1 H, -CONH-).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 330 (M+H)SM (MALDI-TOF): M + 1 = 330 (M + H)
EXEMPLE 4_j Préparation du 1.2-(dipalmitoyloxy -3- tétradécylthioacétylaminopropaneEXAMPLE 4_j Preparation of 1.2- (dipalmitoyloxy -3- tetradecylthioacetylaminopropane
Le 3-(tétradécylthioacétylamino)propane-1 ,2-diol (1 g ; 2.77 mmol) (exemple 2) est dissous dans le dichlorométhane (200 ml) puis la dicyclohexylcarbodiimide (1.426 g ; 6.91 mmol), la dimethylaminopyridine (0.845 g ; 6.91 mmol) et l'acide palmitique (1.773 g ; 6.91 mmol) sont ajoutés. Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante pendant 48 heures. Le précipité de dicyclohexylurée est filtré et lavé au dichlorométhane. Le filtrat est évaporé sous vide. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-cyclohexane 6-4) (rendement : 28%). Rf (dichlorométhane-cyclohexane 7-3) : 0.28 PF : 73-75°C3- (tetradecylthioacetylamino) propane-1,2-diol (1 g; 2.77 mmol) (example 2) is dissolved in dichloromethane (200 ml) then dicyclohexylcarbodiimide (1.426 g; 6.91 mmol), dimethylaminopyridine (0.845 g; 6.91 mmol) and palmitic acid (1.773 g; 6.91 mmol) are added. The mixture is left stirring at room temperature for 48 hours. The precipitate of dicyclohexylurea is filtered and washed with dichloromethane. The filtrate is evaporated in vacuo. The residue obtained is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane-cyclohexane 6-4) (yield: 28%). Rf (dichloromethane-cyclohexane 7-3): 0.28 PF: 73-75 ° C
IR : vNH 3295 cm"1 ; vCO ester 1730 cm"1 ; vCO amide 1663 cm"1 RMN (1H, GDCI3) : 0.89 (t, 9H, -CH3, J=6.5Hz) ; 1.26 (massif, 70H, -CH2-) ; 1.57 (massif, 6H, -GH2-CH2-S- et OCOCH2-CH2) ; 2.33 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7.3Hz) ; 2.51 (t, 2H, CH2-CH2-S-, J=7.3Hz) ; 3.22 (s, 2H, S-CH2-CONH-) ; 3.47 (m, 1H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd-) ; 3.62 (m, 1 H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd- ) ; 4.12 (dd, 1H, -CHaHb-CH-CHcHd-, J=12.1 Hz et J=5.7Hz) ; 4.36 (dd, 1 H, - CHaHb-CH-CHcHd-, J=12.1Hz et J=4.4Hz) ; 5.15 (m, 1 H, -CHaHb-CH-CHaHb- ) ; 7.20 (m, 1H. -NHCO-).IR: vNH 3295 cm "1 ; vCO ester 1730 cm "1; vCO amide 1663 cm "1 NMR ( 1 H, GDCI 3 ): 0.89 (t, 9H, -CH 3 , J = 6.5Hz); 1.26 (solid, 70H, -CH 2 -); 1.57 (solid, 6H, - GH 2 -CH 2 -S- and OCOCH 2 -CH 2 ); 2.33 (t, 4H, OCOCH 2 -CH 2 -, J = 7.3Hz); 2.51 (t, 2H, CH 2 -CH 2 -S-, J = 7.3Hz); 3.22 (s, 2H, S-CH 2 -CONH-); 3.47 (m, 1H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd-); 3.62 (m, 1H, -CONH-CHaHb- CH-CHcHd-); 4.12 (dd, 1H, -CHaHb-CH-CHcHd-, J = 12.1 Hz and J = 5.7Hz); 4.36 (dd, 1 H, - CHaHb-CH-CHcHd-, J = 12.1Hz and J = 4.4Hz); 5.15 (m, 1H, -CHaHb-CH-CHaHb-); 7.20 (m, 1H. -NHCO-).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 838 (M+H) ; M+23 = 860 (M+Na+) ; M+39 = 876 (M+K+) EXEMPLE 5 : Préparation du 1.2--ditétradécylthioacétyloxyY-3- tétradécylthioacétylaminopropaneMS (MALDI-TOF): M + 1 = 838 (M + H); M + 23 = 860 (M + Na + ); M + 39 = 876 (M + K + ) EXAMPLE 5 Preparation of 1.2 - ditetradecylthioacetyloxyY-3-tetradecylthioacetylaminopropane
Ce composé est synthétisé selon la procédure précédemment décrite (exempleThis compound is synthesized according to the procedure previously described (example
4) à partir du 3-(tétradécylthioacétylamino)propane-1 ,2-diol (exemple 2) et de l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1 ).4) from 3- (tetradecylthioacetylamino) propane-1,2-diol (example 2) and tetradecylthioacetic acid (example 1).
Rendement : 41 %Yield: 41%
Rf (dichlorométhane) : 0.23Rf (dichloromethane): 0.23
IR : vNH 3308 cm"1 ; vCO ester 1722 et 1730 cm"1 ; vCO amide 1672 cm"1 IR: vNH 3308 cm "1 ; vCO ester 1722 and 1730 cm "1; vCO amide 1672 cm "1
PF : 65-67°C RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, -CH3, J=6.4Hz) ; 1.26 (massif, 66H, -CH2-) ; 1.59Mp: 65-67 ° C NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 0.89 (t, 9H, -CH 3 , J = 6.4Hz); 1.26 (solid, 66H, -CH 2 -); 1.59
(massif, 6H, -CH2-CH2-S-) ; 2.53 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7.3Hz) ;(solid, 6H, -CH 2 -CH 2 -S-); 2.53 (t, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CONH-, J = 7.3Hz);
2.64 (t, 4H, CH2-CH2- S-CH2-COO-, J=7.3Hz) ; 3.23 (s, 4H, S-CH2-COO-) ; 3.242.64 (t, 4H, CH 2 -CH 2 - S-CH 2 -COO-, J = 7.3Hz); 3.23 (s, 4H, S-CH 2 -COO-); 3.24
(s, 2H, S-CHz-CONH-) ; 3.52 (m, 1H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd-) ; 3.67 (m, 1H,(s, 2H, S-CHz-CONH-); 3.52 (m, 1H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd-); 3.67 (m, 1H,
-CONH-GHaHfo-GH-GHcHd-) ; 4.22 (dd, 1H, -GHaHb-GH-GHcHd-, J=12.2Hz et J=5.4Hz) ; 4.36 (dd, 1H, -GHaHb-GH-GHcHd-, J=12.2Hz et J=3.9Hz) ; 5.19 (m,-CONH-GHaHfo-GH-GHcHd-); 4.22 (dd, 1H, -GHaHb-GH-GHcHd-, J = 12.2Hz and J = 5.4Hz); 4.36 (dd, 1H, -GHaHb-GH-GHcHd-, J = 12.2Hz and J = 3.9Hz); 5.19 (m,
1H, -GHaHb-GH-GHaHb-) ; 7.18 (m, 1H, -NHGO-).1H, -GHaHb-GH-GHaHb-); 7.18 (m, 1H, -NHGO-).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 902 (M+H) ; M+23 = 924 (M+Na+) ; M+39 = 940MS (MALDI-TOF): M + 1 = 902 (M + H); M + 23 = 924 (M + Na + ); M + 39 = 940
(M+K+)(M + K + )
EXEMPLE © : Préparation du 1.24dltétradécv-thloacétv-oxy)-3- palmitoylaminopropaneEXAMPLE ©: Preparation of 1.24dltétradécv-thloacétv-oxy) -3- palmitoylaminopropane
Ce composé est synthétisé selon la procédure précédemment décrite (exempleThis compound is synthesized according to the procedure previously described (example
4) à partir du 3-(palmitoylamino)propane-1,2-diol (exemple 3) et de l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1 ).4) from 3- (palmitoylamino) propane-1,2-diol (example 3) and tetradecylthioacetic acid (example 1).
Rendement : 8%Yield: 8%
Rf (acétate d'éthyle-cyclohexane 2-8) : 0.33Rf (ethyl acetate-cyclohexane 2-8): 0.33
IR : vNH 3319 cm"1 ; vCO ester 1735 cm"1 ; vCO amide 1649 cm"1 IR: vNH 3319 cm "1 ; vCO ester 1735 cm "1; vCO amide 1649 cm "1
PF : 82-83°C RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, -CH3, J=6.4Hz) ; 1.26 (massif, 68H, -CH2-) ; 1.60Mp: 82-83 ° C NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 0.89 (t, 9H, -CH 3 , J = 6.4Hz); 1.26 (solid, 68H, -CH 2 -); 1.60
(massif, 6H, -CH2-CH2-S- et -CH2-CH2-CONH-) ; 2.18 (t, 2H, -CH2-CH2-CONH-,(solid, 6H, -CH 2 -CH 2 -S- and -CH 2 -CH 2 -CONH-); 2.18 (t, 2H, -CH 2 -CH 2 -CONH-,
J=6.8Hz) ; 2.64 (massif, 4H, CH2-CH2- S-CH2-COO-) ; 3.22 (s, 2H, -S-CH2-COO- ) ; 3.24 (s, 2H, -S-CH2-COO-) ; 3.47 (m, 1H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd-) ; 3.62 (m, 1H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd-) ; 4.23 (dd, 1 H, -CHaHb-CH-CHcHd-, J=11.9Hz et J=5.6Hz) ; 4.36 (dd, 1 H, -CHaHb-CH-CHcHd-, J=12.2Hz et J=4Hz) ; 5.15 (m, 1H, -CHaHb-CH-CHaHb-) ; 5.85 (m, 1H, -NHCO-). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 870 (M+H)J = 6.8Hz); 2.64 (solid, 4H, CH 2 -CH 2 - S-CH 2 -COO-); 3.22 (s, 2H, -S-CH 2 -COO- ); 3.24 (s, 2H, -S-CH 2 -COO-); 3.47 (m, 1H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd-); 3.62 (m, 1H, -CONH-CHaHb-CH-CHcHd-); 4.23 (dd, 1H, -CHaHb-CH-CHcHd-, J = 11.9Hz and J = 5.6Hz); 4.36 (dd, 1H, -CHaHb-CH-CHcHd-, J = 12.2Hz and J = 4Hz); 5.15 (m, 1H, -CHaHb-CH-CHaHb-); 5.85 (m, 1H, -NHCO-). SM (MALDI-TOF): M + 1 = 870 (M + H)
EXEMPLE 7 : Préparation du 1.3-di(oléoylamino)propan-2-olEXAMPLE 7 Preparation of 1.3-di (oleoylamino) propan-2-ol
L'acide oléique (5.698 g ; 0.020 mol) et le 1 ,3-diaminopropan-2-ol (1 g ; 0.011 mol) sont placés dans un ballon et chauffés à 190°C pendant 2 heures. Le milieu reactionnel est ramené à température ambiante puis repris par du chloroforme et lavé par de l'eau. La phase aqueuse est extraite par du chloroforme et les phases organiques sont groupées, séchées sur sulfate de magnésium puis filtrées et évaporées à sec pour fournir un résidu huileux noir (6.64 g) qui est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-méthanol 99-1). Le produit obtenu est ensuite lavé par de l'éther et filtré. Rendement : 23%The oleic acid (5.698 g; 0.020 mol) and the 1,3-diaminopropan-2-ol (1 g; 0.011 mol) are placed in a flask and heated at 190 ° C for 2 hours. The reaction medium is brought to ambient temperature then taken up in chloroform and washed with water. The aqueous phase is extracted with chloroform and the organic phases are grouped, dried over magnesium sulphate then filtered and evaporated to dryness to give a black oily residue (6.64 g) which is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane-methanol 99-1). The product obtained is then washed with ether and filtered. Yield: 23%
Rf (dichlorométhane-méthanol 95-5) : 0.43 IR : vNH 3306 cm"1 ; vCO amide 1646 et 1630 cm"1 PF : 88-92XRf (dichloromethane-methanol 95-5): 0.43 IR: vNH 3306 cm "1 ; vCO amide 1646 and 1630 cm " 1 PF: 88-92X
RMN (1H, GDGI3) : 0.89 (t, 6H, -GH3, J=6.2Hz) ; 1.28 (massif, 68H, -GH2-) ; 1.61- 1.66 (massif, 4H, -CH2-CH2-CONH-) ; 1.98-2.02 (massif, 8H, -CH2-CH=CH-CH2-) ; 2.23 (t, 4H, -GH2-CH2-CONH-, J=7.0 Hz) ; 3.25-3.42 (massif, 4H, -CONH-CH2- CH-CH2-) ; 3.73-3.80 (m, 1H, -CONH-CH2-CH-CH2-) ; 5.30-5.41 (massif, 4H, - CH2-CH=CH-CH2-) ; 6.36 (massif, 2H, -NHCO-).NMR (1H, GDGI 3): 0.89 (t, 6H, 3 -GH, J = 6.2Hz); 1.28 (solid, 68H, -GH 2 -); 1.61-1.66 (solid, 4H, -CH 2 -CH 2 -CONH-); 1.98-2.02 (solid, 8H, -CH 2 -CH = CH-CH 2 -); 2.23 (t, 4H, -GH 2 -CH 2 -CONH-, J = 7.0 Hz); 3.25-3.42 (solid, 4H, -CONH-CH 2 - CH-CH 2 -); 3.73-3.80 (m, 1H, -CONH-CH 2 -CH-CH 2 -); 5.30-5.41 (solid, 4H, - CH 2 -CH = CH-CH 2 -); 6.36 (massif, 2H, -NHCO-).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 619 (M+H+) ; M+23 = 641 (M+Na+) ; M+39 = 657 (M+K+) EXEMPLE 8 : Préparation du 1.3-diftétradécylthioacétylamino)propan-2-olMS (MALDI-TOF): M + 1 = 619 (M + H + ); M + 23 = 641 (M + Na + ); M + 39 = 657 (M + K + ) EXAMPLE 8 Preparation of 1,3-diftetradecylthioacetylamino) propan-2-ol
Ce composé est synthétisé selon la procédure précédemment décrite (exempleThis compound is synthesized according to the procedure previously described (example
7) à partir du 1 ,3-diaminopropan-2-ol et de l'acide tétradécylthioacétique7) from 1, 3-diaminopropan-2-ol and tetradecylthioacetic acid
(exemple 1 ). Rendement : 94%(example 1). Efficiency: 94%
Rf (dichlorométhane-méthanol 95-5) : 0.44Rf (dichloromethane-methanol 95-5): 0.44
IR : vNH 3275 cm"1 ; vCO amide 1660 et 1633 cm"1 IR: vNH 3275 cm "1 ; vCO amide 1660 and 1633 cm " 1
PF : 101-104°CMp: 101-104 ° C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 6H, -CH3, J=6.3Hz) ; 1.28 (massif, 44H, -CH2-) ; 1.57- 1.62 (massif, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-) ; 2.55 (t, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-NMR (1 H, CDCl 3): 0.89 (t, 6H, -CH 3, J = 6.3Hz); 1.28 (solid, 44H, -CH 2 -); 1.57-1.62 (solid, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CONH-); 2.55 (t, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -
CONH-, J=7.2Hz) ; 3.26 (s, 4H,-S-CH2-CONH-) , 3.32-3.36 (massif, 2H, -CONH-CONH-, J = 7.2Hz); 3.26 (s, 4H, -S-CH 2 -CONH-), 3.32-3.36 (solid, 2H, -CONH-
CHaHb-CH-CHaHb-NHCO-) ; 3.43-3.49 (massif, 2H, -CONH-CHaHb-CH- CHaHb-CHaH b -CH-CHaH b -NHCO-); 3.43-3.49 (solid, 2H, -CONH-CH a H b -CH- CH a H b -
NHCO-) ; 3.82-3.84 (m, 1H, -CONH-CH2-CH-CH2-NHCO-) ; 7.44 (si, 2H, -NHCO-); 3.82-3.84 (m, 1H, -CONH-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO-); 7.44 (if, 2H, -
NHGO-). SM (MALDI-TOF) : -M+23 = 653 (M+Na+) ; M+39 = 669 (M+K+)NHGO-). MS (MALDI-TOF): -M + 23 = 653 (M + Na + ); M + 39 = 669 (M + K + )
EXEMPLE 9 : Préparation du 1.3-di(stéaroviamino)propan-2-olEXAMPLE 9 Preparation of 1.3-di (stearoviamino) propan-2-ol
Ce composé est synthétisé selon la procédure précédemment décrite (exemple 7) à partir du 1 ,3-diaminopropan-2-ol et de l'acide stéarique.This compound is synthesized according to the procedure previously described (Example 7) from 1, 3-diaminopropan-2-ol and stearic acid.
Rendement : 73%Yield: 73%
Rf (dichlorométhane-méthanol 95-5) : 0.28Rf (dichloromethane-methanol 95-5): 0.28
IR : vNH 3306 cm"1 ; vCO amide 1647 et 1630 cm"1 IR: vNH 3306 cm "1 ; vCO amide 1647 and 1630 cm " 1
PF : 123-130°C SM (MALDI-TOF) : M+23 = 645 (M+Na+)Mp: 123-130 ° C MS (MALDI-TOF): M + 23 = 645 (M + Na + )
EXEMPLE 10 : Préparation du dichlorhvdrate de 1.3-diamino-2- (tétradécylthioacétyloxy.propaneEXAMPLE 10 Preparation of 1.3-diamino-2- dichlorhydrate (tetradecylthioacetyloxy.propane
Préparation du 1,3-di(tert-butyloxycarbonylamino)Dropan-2-ol (exemple 10a) Le 1 ,3-diaminopropan-2-ol (3 g ; 0.033 mol) est dissous dans du méthanol (300 ml) avant d'ajouter la triéthylamine (33 ml et goutte à goutte) et le dicarbonate de di-tert-butyle [(BOC)20] où BOC correspond à tertbutyloxycarbonyl (21.793 g ; 0.100 mol). Le milieu reactionnel est chauffé à 40-50°C pendant 20 min puis laissé sous agitation à température ambiante pendant une heure. Après évaporation du solvant, l'huile incolore résiduelle est purifiée par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-méthanol 95-5). Le produit est obtenu sous forme d'huile incolore qui cristallise lentement. Rendement : quantitatif Rf (dichlorométhane-méthanol 95-5) : 0.70 IR : vNH 3368 cm"1 ; vCO carbamate 1690 cm"1 PF : 98-100°CPreparation of 1,3-di (tert-butyloxycarbonylamino) Dropan-2-ol (example 10a) 1, 3-diaminopropan-2-ol (3 g; 0.033 mol) is dissolved in methanol (300 ml) before adding triethylamine (33 ml and drop by drop) and di-tert-butyl dicarbonate [ (BOC) 2 0] where BOC corresponds to tertbutyloxycarbonyl (21,793 g; 0.100 mol). The reaction medium is heated to 40-50 ° C for 20 min and then left with stirring at room temperature for one hour. After evaporation of the solvent, the residual colorless oil is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane-methanol 95-5). The product is obtained in the form of a colorless oil which crystallizes slowly. Yield: quantitative Rf (dichloromethane-methanol 95-5): 0.70 IR: vNH 3368 cm "1 ; vCO carbamate 1690 cm " 1 PF: 98-100 ° C
RMN (1H, CDCI3) : 1.45 (massif, 18H, -CH3- (BOC)) ; 3.02 (si, 1H, OH) ; 3.15- 3.29 (massif, 4H, BOGNH-CH2-GH-CH2-NHBOC) ; 3.75 (m, 1H, BOGNH-GH2- CH-CH2-NHBOG) ; .5.16 (massif, 2H, -NHBOG).NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 1.45 (solid, 18H, -CH 3 - (BOC)); 3.02 (si, 1H, OH); 3.15-3.29 (solid, 4H, BOGNH-CH 2 -GH-CH 2 -NHBOC); 3.75 (m, 1H, BOGNH-GH 2 - CH-CH 2 -NHBOG); 5.16 (massive, 2H, -NHBOG).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 291 (M+H+) ; M+23 = 313 (M+Na+) ; M+39 = 329 (M+K+)MS (MALDI-TOF): M + 1 = 291 (M + H + ); M + 23 = 313 (M + Na + ); M + 39 = 329 (M + K + )
Préparation du 1.3-di(iert-butyloxycaώonyla ino)-2-(têfradêcylthioacêMoxy)- propane (exemple 10b)Preparation of 1.3-di (iert-butyloxycaώonyla ino) -2- (têfradêcylthioacêMoxy) - propane (example 10b)
Le 1 ,3-(di-fetf-butoxycarbonylamino)-propan-2-ol (exemple 10a) (1 g ; 3.45 mmol), l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1) (0.991 g ; 3.45 mmol) et la dimethylaminopyridine (0.042 g ; 0.34 mmol) sont dissous dans le dichlorométhane (40 ml) à 0°C avant d'ajouter goutte à goutte la dicyclohexylcarbodiimide (0.709 g ; 3.45 mmol), diluée dans le dichlorométhane. Le milieu reactionnel est laissé sous agitation à 0°C pendant 30 min puis ramené à température ambiante. Après 20 heures de réaction, le précipité de dicyclohexylurée est filtré. Le filtrat est porté à sec. Le résidu huileux est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-cyclohexane 5-5 puis dichlorométhane-acétate déthyle 98-2). Rendement : 52% Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5) : 0.43Le 1, 3- (di-fetf-butoxycarbonylamino) -propan-2-ol (example 10a) (1 g; 3.45 mmol), tetradecylthioacetic acid (example 1) (0.991 g; 3.45 mmol) and dimethylaminopyridine (0.042 g; 0.34 mmol) are dissolved in dichloromethane (40 ml) at 0 ° C before adding dropwise the dicyclohexylcarbodiimide (0.709 g; 3.45 mmol), diluted in dichloromethane. The reaction medium is left stirring at 0 ° C for 30 min and then brought to room temperature. After 20 hours of reaction, the precipitate of dicyclohexylurea is filtered. The filtrate is brought to dryness. The oily residue is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane-cyclohexane 5-5 then dichloromethane-ethyl acetate 98-2). Yield: 52% Rf (dichloromethane-ethyl acetate 95-5): 0.43
IR : vNH 3369 cm'1 ; vCO carbamate 1690 cm"1; vCO ester 1719 cm"1 IR: vNH 3369 cm -1 ; vCO carbamate 1690 cm "1 ; vCO ester 1719 cm " 1
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 3H, CH3, J=6.3Hz) ; 1.26 (massif, 22 H, -CH2-) ; 1.45NMR ( 1 H, CDCI3): 0.89 (t, 3H, CH 3 , J = 6.3 Hz); 1.26 (massive, 22 H, -CH 2 -); 1.45
(massif, 18H, -CH3- (BOC)) ; 1.56-1.66 (m, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CO) ; 2.64 (t,(solid, 18H, -CH 3 - (BOC)); 1.56-1.66 (m, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CO); 2.64 (t,
2H, -CH2-CH2-S-CH2-CO, J=7.5Hz) ; 3.20 (s, 2H, CH -S-CH2-CO ) ; 3.352H, -CH2-CH2-S-CH2-CO, J = 7.5Hz); 3.20 (s, 2H, CH -S-CH 2 -CO); 3.35
(massif, 4H, BOCNH-CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 4.89 (m, 1 H, BOCNH-CH2-CH-(solid, 4H, BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -NHBOC); 4.89 (m, 1 H, BOCNH-CH 2 -CH-
CH2-NHBOC) ; 5.04 (massif, 2H, -NHBOC).CH 2 -NHBOC); 5.04 (massive, 2H, -NHBOC).
SM (MALDI-TOF) : M+23 = 583 (M+Na+) ; M+39 = 599 (M+K+)MS (MALDI-TOF): M + 23 = 583 (M + Na + ); M + 39 = 599 (M + K + )
Préparation du dichlorhvdrate de 1.3-diamino-2-(tétradécylthioacétyloxy)propanePreparation of 1,3-diamino-2- (tetradecylthioacetyloxy) propane dichlorhydrate
(exemple 10)(example 10)
Le 1 ,3-(ditett-butoxycarbonylamino)-2-tétradécylthioacétyloxypropane (exempleLe 1, 3- (ditett-butoxycarbonylamino) -2-tetradecylthioacetyloxypropane (example
10b) (0.800 g ; 1.43 mmol) est dissous dans de l'éther diéthylique (50 ml) saturé en acide chlorhydrique gaz. Le milieu reactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le précipité formé est ensuite filtré et lavé par de l'éther. Le produit est obtenu sous forme de dichlorhydrate.10b) (0.800 g; 1.43 mmol) is dissolved in diethyl ether (50 ml) saturated with hydrochloric acid gas. The reaction medium is left under stirring at room temperature for 20 hours. The precipitate formed is then filtered and washed with ether. The product is obtained in the form of dihydrochloride.
Rendement : 88%Efficiency: 88%
Rf (dichlorométhane-méthanol 7-3) : 0.37 IR : vNH2 3049 et 3099 cm"1; vCO ester 1724 cm"1 Rf (dichloromethane-methanol 7-3): 0.37 IR: vNH 2 3049 and 3099 cm "1 ; vCO ester 1724 cm " 1
PF : 224°C (décomposition)Mp: 224 ° C (decomposition)
RMN (1H, CDGI3) : 0.86 (t, 3H, CH3, J=6.3Hz) ; 1.24 (massif, 22 H, -GH2-) ; 1.48-NMR (1H, CDGI 3): 0.86 (t, 3H, CH 3, J = 6.3Hz); 1.24 (solid, 22 H, -GH 2 -); 1.48-
1.55 (m, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CO) ; 2.57 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CO, J=7.2Hz) ;1.55 (m, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CO); 2.57 (t, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CO, J = 7.2Hz);
3.16 (massif, 4H, BOGNH-CH2-CH-CH2-NH) ; 3.56 (s, 2H, CH2-S-CH2-CO) ; 5.16 (m, 1 H, BOCNH-CH2-GH-CH2-NH) ; 8.43 (massif, 6H, -NH2.HCI).3.16 (solid, 4H, BOGNH-CH 2 -CH-CH 2 -NH); 3.56 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -CO); 5.16 (m, 1H, BOCNH-CH 2 -GH-CH 2 -NH); 8.43 (massive, 6H, -NH 2 .HCI).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 361 (M+H+) ; M+23 = 383 (M+Na+) ; M+39 = 399MS (MALDI-TOF): M + 1 = 361 (M + H + ); M + 23 = 383 (M + Na + ); M + 39 = 399
(M+K+) EXEMPLE 11 : Préparation du 1.3-ditétradécylthioacétylamino-2- (tétradécylthioacétyloxy-propane(M + K + ) EXAMPLE 11 Preparation of 1,3-ditétradécylthioacétylamino-2- (tétradécylthioacétyloxy-propane
Le dichlorhydrate de 1,3-diamino-2-tétradécylthioacétyloxypropane (exemple 10) (0.400 g ; 0.92 mmol) et l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1) (0.532 g ; 1.84 mmol) sont dissous dans le dichlorométhane (50 ml) à 0°C avant d'ajouter la triéthylamine (0.3 ml ; 2.1 mmol), la dicyclohexylcarbodiimide (0.571 g ; 2.77 mmol) et l'hydroxybenzotriazole (HOBT) (0.249 g ; 1.84 mmol). Le milieu reactionnel est laissé sous agitation à 0°C pendant 1 heure puis à température ambiante pendant 48 heures. Le précipité de dicyclohexylurée est filtré et rincé par du dichlorométhane. Le filtrat est évaporé sous vide. Le résidu obtenu (1.40 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane puis dichlorométhane-acétate d'éthyle 9-1 ). Rendement : 74% Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 8-2) : 0.25 IR : vNH 3279, 3325 cm"1 ; vCO ester 1731 cm"1 ; vCO amide 1647, 1624 cm"1 PF : 87-89°GThe 1,3-diamino-2-tetradecylthioacetyloxypropane dihydrochloride (example 10) (0.400 g; 0.92 mmol) and tetradecylthioacetic acid (example 1) (0.532 g; 1.84 mmol) are dissolved in dichloromethane (50 ml) at 0 ° C before adding triethylamine (0.3 ml; 2.1 mmol), dicyclohexylcarbodiimide (0.571 g; 2.77 mmol) and hydroxybenzotriazole (HOBT) (0.249 g; 1.84 mmol). The reaction medium is left under stirring at 0 ° C for 1 hour and then at room temperature for 48 hours. The precipitate of dicyclohexylurea is filtered and rinsed with dichloromethane. The filtrate is evaporated in vacuo. The residue obtained (1.40 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane then dichloromethane-ethyl acetate 9-1). Yield: 74% Rf (dichloromethane-ethyl acetate 8-2): 0.25 IR: vNH 3279, 3325 cm "1 ; vCO ester 1731 cm "1; vCO amide 1647, 1624 cm "1 MP: 87-89 ° G
RMN (1H, CDCI3) : 089 (t, 9H, CH3, J=6.6Hz) ; 1.26 (massif, 66H, -CH2-) ; 1.55- 1.60 (massif, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CO) ; 2.55 (t, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7.2H∑) ; 2.65 (t, 2H, -CH2-CH2-S-GH2-GOO-, J=7.2Hz) ; 3.21 (s, 2H, -GH2-S- CH2-GOO-) ; 3.25 (s, 4H, -CH2-S-C-M2-CONH-) ; 3.40-3.49 (m, 2H, -GONH- GHaHb-GH-GHaHb-NHCO-) ; 3.52-3.61 (m, 2H, -GONH-GHaHb-GH-CHa---b- NHCO-) ; 4.96 (m, 1 H, -CONH-CH2-CH-CH2-NHCO-) ; 7.42 (massif, 2H, -NHCO-). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 901 (M+H+) ; M+23 = 923 (M+Na+) ; M+39 = 939 (M+K+)NMR (1H, CDCl3): 089 (t, 9H, CH 3, J = 6.6Hz); 1.26 (solid, 66H, -CH 2 -); 1.55-1.60 (solid, 6H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CO); 2.55 (t, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CONH-, J = 7.2H∑); 2.65 (t, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-GH 2 -GOO-, J = 7.2Hz); 3.21 (s, 2H, -GH 2 -S- CH 2 -GOO-); 3.25 (s, 4H, -CH 2 -SCM 2 -CONH-); 3.40-3.49 (m, 2H, -GONH- GH to Hb-GH-GHaHb-NHCO-); 3.52-3.61 (m, 2H, -GONH-GH a H b -GH-CH a --- b- NHCO-); 4.96 (m, 1H, -CONH-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO-); 7.42 (massif, 2H, -NHCO-). MS (MALDI-TOF): M + 1 = 901 (M + H + ); M + 23 = 923 (M + Na + ); M + 39 = 939 (M + K + )
EXEMPLE 12 Préparation du 1.3-dioléoylamino-2-EXAMPLE 12 Preparation of 1,3-dioleoylamino-2-
(tétradécylthioacétyloxy.propane Le produit est obtenu selon la procédure décrite exemple 11 à partir du dichlorhydrate de 1 ,3-diamino-2-tétradécylthioacétyioxypropane (exemple 10) et de l'acide oléique. Rendement : 15%(tetradecylthioacetyloxy.propane The product is obtained according to the procedure described in Example 11 from 1,3-diamino-2-tetradecylthioacetyoxyxypropane dihydrochloride (Example 10) and oleic acid. Yield: 15%
Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 8-2) : 0.38 IR : vNH 3325 cm"1 ; vCO ester 1729 cm"1 ; vCO amide 1640 et 1624 cm"1 PF : 57-59°C RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, CH3, J=6.6Hz) ; 1.26 (massif, 62H, -CH2-) ; 1.59- 1.74 (massif, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CO) ; 1.92-2.03 (massif, 8H, -CH2-CH=CH- CH2-) ; 2.22 (t, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7.2Hz) ; 2.65 (t, 2H, -CH2-CH2-S- CH2-COO-, J=7.4Hz) ; 3.19 (s, 2H, -CH2-S-CH2-COO-) ; 3.25-3.34 (m, 2H, - CONH-CHaHb-CH-CHaHb-NHCO-) ; 3.56-3.65 (m, 2H, -CONH-CHaHb-CH- CHaHb-NHCO-) ; 4.87 (m, 1 H, -CONH-CH2-CH-CH2-NHCO-) ; 5.34 (massif, 4H, - CH2-CH=CH-CH2-) ; 6.27 (massif, 2H, -NHCO-). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 889 (M+H+) ; M+23 = 912 (M+Na+)Rf (dichloromethane-ethyl acetate 8-2): 0.38 IR: vNH 3325 cm "1 ; vCO ester 1729 cm "1; vCO amide 1640 and 1624 cm "1 MP: 57-59 ° C NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 0.89 (t, 9H, CH 3 , J = 6.6Hz); 1.26 (solid, 62H, -CH 2 -) ; 1.59- 1.74 (solid, 6H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CO); 1.92-2.03 (solid, 8H, -CH 2 -CH = CH- CH 2 -); 2.22 (t, 4H , -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CONH-, J = 7.2Hz); 2.65 (t, 2H, -CH 2 -CH 2 -S- CH 2 -COO-, J = 7.4Hz); 3.19 (s, 2H, -CH 2 -S-CH 2 -COO-); 3.25-3.34 (m, 2H, - CONH-CHaH b -CH-CHaH b -NHCO-); 3.56-3.65 (m, 2H, - CONH-CH a H b -CH- CH a H b -NHCO-); 4.87 (m, 1 H, -CONH-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO-); 5.34 (solid, 4H, - CH 2 - CH = CH-CH 2 -); 6.27 (solid, 2H, -NHCO-). SM (MALDI-TOF): M + 1 = 889 (M + H + ); M + 23 = 912 (M + Na + )
EXEMPLE 13 : Préparation du 2.3-ditétradécylthioacé--ylaminopropan-1-olEXAMPLE 13 Preparation of 2,3-ditétradécylthioacé - ylaminopropan-1-ol
Préparation du dichlorhydrate de 2.3-diaminopropanoate de éthyle (exemplePreparation of ethyl 2,3-diaminopropanoate dihydrochloride (example
13a)13a)
Le chlorhydrate d'acide 2,3-diaminopropionique (1g ; 7 mmol) est dissous dans le méthanol (40 ml). Le milieu est refroidi par un bain de glace avant d'ajouter goutte à goutte le chlorure de thionyle (2.08 ml ; 28 mmol). Le milieu est ramené à température ambiante puis porté à reflux pendant 20 heures. Le solvant est évaporé et le résidu est trituré dans de l'heptane. Le précipité résultant est filtré, rincé et séché pour donner un solide blanc-jaune. Rendement : 94%The 2,3-diaminopropionic acid hydrochloride (1 g; 7 mmol) is dissolved in methanol (40 ml). The medium is cooled by an ice bath before adding dropwise the thionyl chloride (2.08 ml; 28 mmol). The medium is brought to room temperature and then brought to reflux for 20 hours. The solvent is evaporated and the residue is triturated in heptane. The resulting precipitate is filtered, rinsed and dried to give a white-yellow solid. Efficiency: 94%
Rf : (dichlorométhane-méthanol 9-1 ) : 0.03Rf: (dichloromethane-methanol 9-1): 0.03
IR : vNH2 2811 cm"1 ; vCO ester 1756 cm"1 IR: vNH 2 2811 cm "1 ; vCO ester 1756 cm " 1
PF : 170-180°C (décomp.)Mp: 170-180 ° C (decomp.)
RMN (1H, CDCI3) : 3.78 (s, 3H, -CH3) ; 4.33 (m, 3H, -CH2^ et -CH-) ; 8.77 (m, 3H, -NH2.HCI) ; 9.12 (m, 3H, -NH2.HCI) Préparation du 2.3-ditétradécylthioacétylaminopropanoate de méthyle (exempleNMR (1 H, CDCl 3): 3.78 (s, 3H, -CH 3); 4.33 (m, 3H, -CH 2 ^ and -CH-); 8.77 (m, 3H, -NH 2 .HCI); 9.12 (m, 3H, -NH 2 .HCI) Preparation of methyl 2,3-ditétradécylthioacétylaminopropanoate (example
Le dichlorhydrate de 2,3-diaminopropanoate de méthyle (exemple 13a) (0.500 g ; 2.62 mmol) et l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1 ) (1.51 g ; 5.23 mmol) sont dissous dans le dichlorométhane (80 ml) à 0°C avant d'ajouter la triéthylamine (0.79 ml), la dicyclohexylcarbodiimide (1.62 g ; 7.85 mmol) et l'hydroxybenzotriazole (0.707 g ; 5.23 mmol). Le milieu reactionnel est laissé sous agitation à 0°C pendant 1 heure puis ramené à température ambiante pendant 48 heures. Le précipité de dicyclohexylurée est filtré et rincé par du dichlorométhane et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (3.68 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5) pour fournir le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 96% Rf : (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.63 IR : vNH amide 3276 cm"1 ; vGO ester 1745 cm"1 ; vCO amide 1649 cm"1 PF : 81.5-82.5°GMethyl 2,3-diaminopropanoate dihydrochloride (example 13a) (0.500 g; 2.62 mmol) and tetradecylthioacetic acid (example 1) (1.51 g; 5.23 mmol) are dissolved in dichloromethane (80 ml) at 0 ° C before adding triethylamine (0.79 ml), dicyclohexylcarbodiimide (1.62 g; 7.85 mmol) and hydroxybenzotriazole (0.707 g; 5.23 mmol). The reaction medium is left stirring at 0 ° C for 1 hour and then brought to room temperature for 48 hours. The precipitate of dicyclohexylurea is filtered and rinsed with dichloromethane and the filtrate is evaporated. The residue obtained (3.68 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane-ethyl acetate 95-5) to provide the desired compound in the form of white powder. Yield: 96% Rf: (dichloromethane-methanol 98-2): 0.63 IR: vNH amide 3276 cm "1 ; vGO ester 1745 cm "1; vCO amide 1649 cm "1 PF: 81.5-82.5 ° G
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 6H, CH3, J=6.6Hz) ; 1.26-1.37 (massif, 44H, -CH2-) ; 1.56-1.61 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH) ; 2.50-2,60 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2- GONH-) ; 3.22 (s, 2H, -CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.25 (s, 2H, -GH2-S-CH2-CONH-) ; 3.74 (m, 2H, H3CO(CO)-CH-CHrNHCO-) ; 3.79 (s, 3H, -COO H3) ; 4.64-4.70 (m, 1 H, H3GO(CO)-CH-GH2-NHGO-) ; 7.79 (d, 2H, -NHCO-, J=7.3Hz). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 659 (M+H+) ; M+23 = 681 (M+Na+) ; M+39 = 697 (M+K+)NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 0.89 (t, 6H, CH 3 , J = 6.6 Hz); 1.26-1.37 (massif, 44H, -CH 2 -); 1.56-1.61 (m, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CONH); 2.50-2.60 (m, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 - GONH-); 3.22 (s, 2H, -CH 2 -S-CH 2 -CONH-); 3.25 (s, 2H, -GH 2 -S-CH 2 -CONH-); 3.74 (m, 2H, H 3 CO (CO) -CH-CHrNHCO-); 3.79 (s, 3H, -COO H 3 ); 4.64-4.70 (m, 1 H, H 3 GO (CO) -CH-GH 2 -NHGO-); 7.79 (d, 2H, -NHCO-, J = 7.3Hz). MS (MALDI-TOF): M + 1 = 659 (M + H + ); M + 23 = 681 (M + Na + ); M + 39 = 697 (M + K + )
Préparation du 2.3-ditétradécylthioacétylaminopropan-1-ol (exemple 13)Preparation of 2.3-ditetradecylthioacetylaminopropan-1-ol (Example 13)
Le borohydrure de sodium (316 mg ; 8.4 mmol) est dissous dans le tétrahydrofurane (40 ml). Le mélange reactionnel est refroidi dans un bain de glace avant d'ajouter le 2,3-ditétradécylthioacétylaminopropanoate de méthyle (exemple 13b) (500 mg ; 0.76 mmol) par petites portions. Le milieu reactionnel est ramené à température ambiante et laissé sous agitation. Après 4 jours de réaction, 20 ml d'eau sont ajoutés. Le produit, qui précipite, est filtré, rincé par de l'eau puis séché au dessiccateur pour fournir une poudre blanche. Rendement : 76%Sodium borohydride (316 mg; 8.4 mmol) is dissolved in tetrahydrofuran (40 ml). The reaction mixture is cooled in an ice bath before adding the methyl 2,3-ditetradecylthioacetylaminopropanoate (example 13b) (500 mg; 0.76 mmol) in small portions. The reaction medium is brought to room temperature and left under stirring. After 4 days of reaction, 20 ml of water are added. The product, which precipitates, is filtered, rinsed with water and then dried in a desiccator to provide a white powder. Efficiency: 76%
Rf : (dichlorométhane-méthanol 95-5) : 0.53Rf: (dichloromethane-methanol 95-5): 0.53
IR : vOH alcool 3436 cm"1 ; vNH amide 3313 et 3273 cm"1 ; vCO amide 1648 et 1622 cm"1 PF : 100.2 à 102.2°CIR: vOH alcohol 3436 cm "1 ; vNH amide 3313 and 3273 cm "1; vCO amide 1648 and 1622 cm "1 PF: 100.2 to 102.2 ° C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 6H, CH3, J=6.2Hz) ; 1.26 (massif, 44H, -CH -) ; 1.59 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH) ; 2.50-2.56 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH?-CONH-) ; 3.23 (s, 2H, -CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.27 (s, 2H, -CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.50-3.91 (massif, 5H, -OCO-CH2-CH-CH2-NHCO-) ; 7.38 (d, 2H, -NHCO-, J=7.1Hz). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 631 (M+H+) ; M+23 = 653 (M+Na+) ; M+39 = 669 (M+K+)NMR (1 H, CDCl 3): 0.89 (t, 6H, CH 3, J = 6.2Hz); 1.26 (massif, 44H, -CH -); 1.59 (m, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CONH); 2.50-2.56 (m, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH ? -CONH-); 3.23 (s, 2H, -CH 2 -S-CH 2 -CONH-); 3.27 (s, 2H, -CH 2 -S-CH 2 -CONH-); 3.50-3.91 (solid, 5H, -OCO-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO-); 7.38 (d, 2H, -NHCO-, J = 7.1Hz). MS (MALDI-TOF): M + 1 = 631 (M + H + ); M + 23 = 653 (M + Na + ); M + 39 = 669 (M + K + )
EXEMPLE 14 : Préparation du 2.3-ditétradécylthioacétylamino-1- tétradécylthioacétyloxypropane Le 2,3-ditétradécylthioacétylaminopropan-1-ol (exemple 13) (0.200 g ; 0.32 mmol) est dissous dans le tétrahydrofuranne (40 ml) avant d'ajouter la dicyclohexylcarbodiimide (65 mg ; 0.32 mmol), la dimethylaminopyridine (39 mg ; 0.32 mmol) et l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1) (91 mg ; 0.32 mmol). Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le précipité de dicyclohexylurée est filtré, rincé au tétrahydrofuranne et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (1 g) est purifié par flash chromatographie (éluant dichlorométhane) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 59% Rf : (dichlorométhane-acétate d'éthyle 8-2) : 0.49EXAMPLE 14 Preparation of 2,3-ditetradecylthioacetylamino-1-tetradecylthioacetyloxypropane mg; 0.32 mmol), dimethylaminopyridine (39 mg; 0.32 mmol) and tetradecylthioacetic acid (Example 1) (91 mg; 0.32 mmol). The mixture is left stirring at room temperature for 20 hours. The precipitate of dicyclohexylurea is filtered, rinsed with tetrahydrofuran and the filtrate is evaporated. The residue obtained (1 g) is purified by flash chromatography (eluent dichloromethane) and makes it possible to obtain the desired compound in the form of a white powder. Yield: 59% Rf: (dichloromethane-ethyl acetate 8-2): 0.49
IR : vNH amide 3281 cm"1 ; vCO ester 1736 cm"1 ; vCO amide 1641 cm"1 IR: vNH amide 3281 cm "1 ; vCO ester 1736 cm "1; vCO amide 1641 cm "1
PF : 95.4 à 97.3°CPF: 95.4 to 97.3 ° C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, CH3, J=6.4Hz) ; 1.27-1.34 (massif, 66H, -CH2-) ;NMR (1 H, CDCl 3): 0.89 (t, 9H, CH 3, J = 6.4Hz); 1.27-1.34 (solid, 66H, -CH 2 -);
1.54-163 (m, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 2.53 (t, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7.2Hz) ; 2.65 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-COO-, J=7.2Hz) ; 3.21 (s, 2H, -CH2-S- CH2-CONH-) ; 3.23 (s, 2H, -CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.25 (s, 2H, -CH2-S-CH2-COO- ) ; 3.46-3.56 (m, 2H, -OCO-CH2-CH-CH2-NHCO-) ; 4.22-4.25 (m, 2H, -OCO-CH2- CH-CH2-NHCO-) ; 4.29-4.39 (m, 1H, -OCO-CH2-CH-CH2-NHCO-) ; 7.29 (t, 1H, NHCO-) ; 7.38 (d, 1H, -NHCO-, J=7.6Hz). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 901 (M+H+)1.54-163 (m, 6H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CO-); 2.53 (t, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CONH-, J = 7.2Hz); 2.65 (t, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -COO-, J = 7.2Hz); 3.21 (s, 2H, -CH 2 -S- CH 2 -CONH-); 3.23 (s, 2H, -CH 2 -S-CH 2 -CONH-); 3.25 (s, 2H, -CH 2 -S-CH 2 -COO-); 3.46-3.56 (m, 2H, -OCO-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO-); 4.22-4.25 (m, 2H, -OCO-CH 2 - CH-CH2-NHCO-); 4.29-4.39 (m, 1H, -OCO-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO-); 7.29 (t, 1H, NHCO-); 7.38 (d, 1H, -NHCO-, J = 7.6Hz). SM (MALDI-TOF): M + 1 = 901 (M + H + )
EXEMPLE 15: Préparation du dichlorhydrate de 1.3-diamino-2- (tétradécylthioacétylthio)propaneEXAMPLE 15 Preparation of 1,3-diamino-2- (tetradecylthioacetylthio) propane dihydrochloride
Préparation du 1,3-di(tert-butyloxycarbonylamino)-2-(p-toluènesulfonyloxy) propane (exemple 15a)Preparation of 1,3-di (tert-butyloxycarbonylamino) -2- (p-toluenesulfonyloxy) propane (example 15a)
Le 1,3-di(tert-butyloxycarbonylamino)propan-2-ol (exemple 10a) (2.89 g ;1,3-di (tert-butyloxycarbonylamino) propan-2-ol (Example 10a) (2.89 g;
10 mmol) et la triéthylamine (2.22 ml ; 16 mmol) sont dissous dans du dichlorométhane anhydre (100 ml). Le mélange reactionnel est refroidi dans un bain de glace avant d'ajouter goutte à goutte le chlorure de tosyle (2.272 g ; 12 mmol) dissous dans du dichlorométhane (30 ml). Après addition, le milieu reactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 72 heures.10 mmol) and triethylamine (2.22 ml; 16 mmol) are dissolved in anhydrous dichloromethane (100 ml). The reaction mixture is cooled in an ice bath before adding dropwise tosyl chloride (2.272 g; 12 mmol) dissolved in dichloromethane (30 ml). After addition, the reaction medium is left stirring at room temperature for 72 hours.
1 équivalent de chlorure et 1.6 de triéthylamine sont ajoutés au bout de 48 heures. De l'eau est ajoutée pour stopper la réaction et le milieu est décanté. Le phase organique est lavée plusieurs fois à l'eau. Les phases aqueuses sont groupées et réextraites par du dichlorométhane. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et le solvant évaporé. Le résidu obtenu (6.44 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane puis dichlrométhane-méthanol 99-1) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de solide blanc. Rendement : 48%1 equivalent of chloride and 1.6 of triethylamine are added after 48 hours. Water is added to stop the reaction and the medium is decanted. The organic phase is washed several times with water. The aqueous phases are grouped and re-extracted with dichloromethane. The organic phase is dried over magnesium sulfate, filtered and the solvent evaporated. The residue obtained (6.44 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane then dichlromethane-methanol 99-1) and allows the desired compound to be obtained in the form of a white solid. Yield: 48%
Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.70Rf (dichloromethane-methanol 98-2): 0.70
IR : vNH 3400 cm"1 ; vCO ester 1716 cm"1 ; vCO carbamate 1689 cm'1 IR: vNH 3400 cm "1 ; vCO ester 1716 cm "1; vCO carbamate 1689 cm '1
PF : 104-111°CMp: 104-111 ° C
RMN (1H, CDCI3) : 1.42 (s, 18H, CH3 (BOC)) ; 2.46 (s, 3H, CH3 ) ; 3.22 et 3.41 (massif, 4H, BOCNH-CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 4.56 (m, 1 H, BOCNH-CH2-CH-NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 1.42 (s, 18H, CH 3 (BOC)); 2.46 (s, 3H, CH 3 ); 3.22 and 3.41 (solid, 4H, BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -NHBOC); 4.56 (m, 1 H, BOCNH-CH 2 -CH-
CH2-NHBOC) ; 5.04-5.11 (massif, 2H, -NHBOC) ; 7.36 (d, 2H, aromatiques,CH 2 -NHBOC); 5.04-5.11 (solid, 2H, -NHBOC); 7.36 (d, 2H, aromatic,
J=8.5Hz) ; 7.36 (d, 2H, aromatiques, J=8.5Hz).J = 8.5Hz); 7.36 (d, 2H, aromatics, J = 8.5Hz).
SM (MALDI-TOF) : M+23 = 467 (M+Na+) ; M+39 = 483 (M+K+) Préparation du 1.3-di(tert-butyloxycarbonylamino)-2-acétylthioprooane (exemple 15b)MS (MALDI-TOF): M + 23 = 467 (M + Na + ); M + 39 = 483 (M + K + ) Preparation of 1.3-di (tert-butyloxycarbonylamino) -2-acetylthioprooane (example 15b)
Le 1 ,3-(dite/-f-butoxycarbonylamino)-2-(p-toluènesulfonyloxy)propane (exemple 15a) (0.500 g ; 1.12 mmol) et le thioacétate de potassium (0.161 g ; 1.41 mmol) sont dissous dans l'acétone et le milieu est porté à reflux pendant 48 heures. Un équivalent de thioacétate de potassium est ajouté après 24 heures de reflux. La réaction est ramenée à température ambiante puis le solvant est évaporé. Le résidu est repris par de l'éther diéthylique et filtré sur Célite®. Le filtrat est évaporé. Le produit obtenu (0.48 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-acétate d'éthyle 98-2) ce qui permet d'obtenir le produit souhaité sous forme de solide ocre. Rendement : 84%1, 3- (called / -f-butoxycarbonylamino) -2- (p-toluenesulfonyloxy) propane (example 15a) (0.500 g; 1.12 mmol) and potassium thioacetate (0.161 g; 1.41 mmol) are dissolved in the acetone and the medium is brought to reflux for 48 hours. An equivalent of potassium thioacetate is added after 24 hours of reflux. The reaction is brought to room temperature and then the solvent is evaporated. The residue is taken up in diethyl ether and filtered through Celite ®. The filtrate is evaporated. The product obtained (0.48 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane-ethyl acetate 98-2) which allows the desired product to be obtained in the form of an ocher solid. Efficiency: 84%
Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.45 IR : vNH 3350 cm"1 ; vCO ester 1719 cm"1 ; vCO carbamate 1691 cm"1 PF : 93-96°GRf (dichloromethane-methanol 98-2): 0.45 IR: vNH 3350 cm "1 ; vCO ester 1719 cm "1; vCO carbamate 1691 cm "1 PF: 93-96 ° G
RMN (1H, GDCIs) : 1.45 (s, 18H, GH3 (BOC)) ; 2.34 (s, 3H, GH3 ) ; 3.23-3.32 (m, 2H, BOCNH-CHaHb-CH-CHaHb-NHBOC) ; 3.38-3.43 (m, 2H, BOCNH-CHaHb-CH- CHaHb-NHBOC) ; 3.58-3.66 (m, 1 H, BOCNH-CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 5.22 (massif, 2H, -NHBOC). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 371 (M+Na+)NMR (1H, GDCIs): 1.45 (s, 18H, GH 3 (BOC)); 2.34 (s, 3H, GH 3 ); 3.23-3.32 (m, 2H, BOCNH-CH a H b -CH-CH a H b -NHBOC); 3.38-3.43 (m, 2H, BOCNH-CH a H b -CH- CHaH b -NHBOC); 3.58-3.66 (m, 1H, BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -NHBOC); 5.22 (massif, 2H, -NHBOC). MS (MALDI-TOF): M + 23 = 371 (M + Na + )
Préparation du 1.3-di(tert-butyloxycarbonylamino)-2-mercaptopropane (exemplePreparation of 1.3-di (tert-butyloxycarbonylamino) -2-mercaptopropane (example
15c)15c)
A une solution de potasse à 20% dans le méthanol (2.14 ml ; 12.4 mmol), désoxygénée par un courant d'azote, est ajouté le 1 ,3-di(fef- butoxycarbonylamino)-2-(acétylthio)propane (exemple 15b) (0.380 g ; 1.2 mmol) dilué dans du méthanol (10 ml). Le mélange reactionnel est maintenu sous azote et sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le milieu est alors acidifié (pH=6) par de l'acide acétique, puis les solvants sont évaporés sous vide. Le résidu est repris par de l'eau et extrait par du chloroforme. Les phases organiques sont groupées, séchées sur sulfate de magnésium puis filtrées et évaporées pour donner le produit souhaité sous forme de solide blanc qui est rapidement remis en réaction. Rendement : 90%To the 20% potassium solution in methanol (2.14 ml; 12.4 mmol), deoxygenated by a stream of nitrogen, is added 1, 3-di (fef-butoxycarbonylamino) -2- (acetylthio) propane (example 15b ) (0.380 g; 1.2 mmol) diluted in methanol (10 ml). The reaction mixture is kept under nitrogen and with stirring at room temperature for 20 hours. The medium is then acidified (pH = 6) with acetic acid, then the solvents are evaporated in vacuo. The residue is taken up in water and extracted with chloroform. The organic phases are grouped, dried over magnesium sulfate and then filtered and evaporated to give the desired product as a white solid which is quickly reacted. Efficiency: 90%
Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.56 IR : vNH 3370 cm"1 ; vCO carbamate 1680 cm"1 Rf (dichloromethane-methanol 98-2): 0.56 IR: vNH 3370 cm "1 ; vCO carbamate 1680 cm " 1
RMN (1H, CDCI3) : 1.46 (s, 18H, CH3 (BOC)) ; 2.98-3.12 (massif, 3H, BOCNH- CHaHb-CH-CHaHb-NHBOC et BOCNH-CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 3.46-3.50 (m, 2H, BOCNH-CHaHb-CH-CHaHb-NHBOC) ; 5.27 (massif, 2H, -NHBOC).NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 1.46 (s, 18H, CH 3 (BOC)); 2.98-3.12 (solid, 3H, BOCNH-CHaH b -CH-CHaH b -NHBOC and BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -NHBOC); 3.46-3.50 (m, 2H, BOCNH-CH a H b -CH-CH a H b -NHBOC); 5.27 (massif, 2H, -NHBOC).
Préparation du 1.3-di(tert-butyloxycarbonylamino)-2-(tétradécylthioacétylthio) propane (exemple 15d)Preparation of 1.3-di (tert-butyloxycarbonylamino) -2- (tetradecylthioacetylthio) propane (example 15d)
Le 1,3-[di(fert-butoxycarbonylamino)]-2-mercaptopropane (exemple 15c) (0.295 g ; 0.963 mmol) est dissous dans le dichlorométhane (40 ml) avant d'ajouter la dieyelohexylcarbodiim.de (0.199 g ; 0.963 mmol), la dimethylaminopyridine (0.118 g ; 0.963 mmol) et l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1 ) (0.278 g ; 0.963 mmol). Le mélange reactionnel est laissé sous agitation à température ambiante et l'évolution de la réaction est suivie par chromatographie sur couche mince. Après 20 heures de réaction, le précipité de dicyclohexylurée est filtré, rincé au dichlorométhane et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (0.73 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de poudre blanche.The 1,3- [di (fert-butoxycarbonylamino)] - 2-mercaptopropane (example 15c) (0.295 g; 0.963 mmol) is dissolved in dichloromethane (40 ml) before adding the dieyelohexylcarbodiim.de (0.199 g; 0.963 mmol), dimethylaminopyridine (0.118 g; 0.963 mmol) and tetradecylthioacetic acid (Example 1) (0.278 g; 0.963 mmol). The reaction mixture is left under stirring at ambient temperature and the progress of the reaction is followed by thin layer chromatography. After 20 hours of reaction, the precipitate of dicyclohexylurea is filtered, rinsed with dichloromethane and the filtrate is evaporated. The residue obtained (0.73 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane) and allows the desired compound to be obtained in the form of white powder.
Rendement : 72% Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5) : 0.29 IR : vNH 3328 cm"1 1; vCO thioester 1717 cm"1 ; vCO carbamate 1687 cm"1 PF : 47-51 °CYield: 72% Rf (dichloromethane-ethyl acetate 95-5): 0.29 IR: vNH 3328 cm "1 1 ; vCO thioester 1717 cm "1; vCO carbamate 1687 cm "1 PF: 47-51 ° C
RMN (1H, CDCI3) : 0.88 (t, 9H, CH3, J=6.1Hz) ; 1.26 (massif, 22H, -CH2-) ; 1.44 (s, 18H, CH3 (BOC)) ; 1.53-1.65 (m, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CO) ; 2.59 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-, J=7.8Hz) ; 3.21-3.30 (m, 2H, BOCNri-CHaHb-CH- CHaHb-NHBOC) ; 3.40 (s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.42-3.49 (m, 2H, BOCNH- CHaHb-CH-CHaHb-NHBOC) ; 3.62-3.65 (m, 1H, BOCNH-CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 5.24 (massif, 2H, -NHBOC). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 599 (M+Na+) ; M+39 = 615 (M+K+)NMR (1 H, CDCl 3): 0.88 (t, 9H, CH 3, J = 6.1Hz); 1.26 (solid, 22H, -CH 2 -); 1.44 (s, 18H, CH 3 (BOC)); 1.53-1.65 (m, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CO); 2.59 (t, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -COS-, J = 7.8Hz); 3.21-3.30 (m, 2H, BOCNri-CH a H b -CH- CH a H b -NHBOC); 3.40 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -COS-); 3.42-3.49 (m, 2H, BOCNH-CHaH b -CH-CHaH b -NHBOC); 3.62-3.65 (m, 1H, BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -NHBOC); 5.24 (massif, 2H, -NHBOC). MS (MALDI-TOF): M + 23 = 599 (M + Na + ); M + 39 = 615 (M + K + )
Préparation du dichlorhydrate de 1.3-diamino-2-(tétradécylthioacétylthio)oropane (exemple 15) Le 1,3-[di(tert-butoxycarbonylamino)]-2-tétradécylthioacétylthiopropane (exemple 15d) (0.300 g ; 0.52 mmol) est dissous dans l'éther saturé en acide chlorhydrique gaz (55 ml). Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante. Après 96 heures de réaction, le précipité formé est filtré, rincé plusieurs fois à l'éther diéthylique et séché pour donner le composé souhaité sous forme de dichlorhydrate (poudre blanche). Rendement : 59%Preparation of 1,3-diamino-2- dihydrochloride (tetradecylthioacetylthio) oropane (example 15) 1,3- [di (tert-butoxycarbonylamino)] - 2-tetradecylthioacetylthiopropane (example 15d) (0.300 g; 0.52 mmol) is dissolved in l ether saturated with hydrochloric acid gas (55 ml). The mixture is left stirring at room temperature. After 96 hours of reaction, the precipitate formed is filtered, rinsed several times with diethyl ether and dried to give the desired compound in the form of dihydrochloride (white powder). Efficiency: 59%
Rf (dichlorométhane-méthanol 9-1) : 0.11 IR : vNH.HCI 2700-3250 cm"1 ; vCO thioester 1701 cm"1 PF : 181°G (décomposition) RMN (1H, GDGIs) : 0.86 (t, 3H, CH3, J=6Hz) ; 1.24 (massif, 22H, -CH2-) ; 1.49- 1.54 (m, 2H, -CH2-GH2-S-GH2-GO) ; 2.59 (m, 2H, -GH2-CH2-S-GH2-GOS-) ; 2.80-2.84 (m, 1H, BOCNH-CHaHb-CH-CHaHb-NHBOC) ; 3.03-3.09 (m, 1H, BOCNH-CHaHb-CH-CHaHb-NHBOC) ; 3.14 (s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.27-3.38 (m, 2H, BOCNH-CHaHιτCH-CHaHιrNHBOC) ; 3.86-3.90 (m, 1H, BOCNH-CHy CH-GH2-NHBOC) ; 8.21 et 8.52 (2m, 2H+ H, NH2.HGI).Rf (dichloromethane-methanol 9-1): 0.11 IR: vNH.HCI 2700-3250 cm "1 ; vCO thioester 1701 cm " 1 PF: 181 ° G (decomposition) NMR ( 1 H, GDGIs): 0.86 (t, 3H , CH 3 , J = 6 Hz); 1.24 (solid, 22H, -CH 2 -); 1.49-1.54 (m, 2H, -CH 2 -GH 2 -S-GH 2 -GO); 2.59 (m, 2H, -GH 2 -CH 2 -S-GH 2 -GOS-); 2.80-2.84 (m, 1H, BOCNH-CH a H b -CH-CH a H b -NHBOC); 3.03-3.09 (m, 1H, BOCNH-CH a H b -CH-CH a H b -NHBOC); 3.14 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -COS-); 3.27-3.38 (m, 2H, BOCNH-CH to HιτCH-CHaHιrNHBOC); 3.86-3.90 (m, 1H, BOCNH-CHy CH-GH 2 -NHBOC); 8.21 and 8.52 (2m, 2H + H, NH 2 .HGI).
EXEMPLE 16 : Préparation du 1.3-ditétradécylthioacétyla ino-2- (tétradécylthioacétylthio)propane Le dichlorhydrate de 1,3-diamino-2-tétradécylthioacétylthiopropane (exemple 15) (100 mg ; 0.225 mmol) et l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1) (130 mg ; 0.450 mmol) sont dissous dans le dichlorométhane (30 ml) à 0°C avant d'ajouter la triéthylamine (68 μl), la dicyclohexylcarbodiimide (139 mg ; 0.675 mmol) et hydroxybenzotriazole (61 mg ; 0.450 mmol). Le milieu reactionnel est laissé sous agitation à 0°C pendant 1 heure puis à température ambiante pendant 48 heures. Le précipité de dicyclohexylurée est filtré et rincé par du dichlorométhane et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (430 mg) est purifié 2004/073593EXAMPLE 16 Preparation of 1.3-ditetradecylthioacetyla ino-2- (tetradecylthioacetylthio) propane 1,3-diamino-2-tetradecylthioacetylthiopropane dihydrochloride (example 15) (100 mg; 0.225 mmol) and tetradecylthioacetic acid (example 1) mg; 0.450 mmol) are dissolved in dichloromethane (30 ml) at 0 ° C before adding triethylamine (68 μl), dicyclohexylcarbodiimide (139 mg; 0.675 mmol) and hydroxybenzotriazole (61 mg; 0.450 mmol). The reaction medium is left under stirring at 0 ° C for 1 hour and then at room temperature for 48 hours. The precipitate of dicyclohexylurea is filtered and rinsed with dichloromethane and the filtrate is evaporated. The residue obtained (430 mg) is purified 2004/073593
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par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 82%by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane-ethyl acetate 95-5) and makes it possible to obtain the desired compound in the form of a white powder. Efficiency: 82%
Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.54 IR: vCO thioester 1660 cm'1 ; vCO amide 1651 cm'1 PF : 83-85°CRf (dichloromethane-methanol 98-2): 0.54 IR: vCO thioester 1660 cm -1 ; vCO amide 1651 cm '1 MP: 83-85 ° C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, CH3, J=6.6Hz) ; 1.26 (massif, 66H, -CH2-) ; 1.56- 1.62 (massif, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CO) ; 2.56 (t, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7.5Hz) ; 2.61 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-, J=7Hz) ; 3.26 (s, 4H, CH2-S-CH2- CONH-) ; 3.42 (s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.44-3.49 (m, 2H, -CONH-CHaHb-CH- CHaHb-NH-CO) ; 3.55-3.61 (m, 2H, -CONH-CHaHb-CH-CHaHb-NHCO-) ; 3.70- 3.71 (m, 1H, BOCNH-CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 7.58-7.62 (m, 2H, NHCO). SM (MALDI-TOF) : M+1 = 917 (M+H+) ; M+23 = 939 (M+Na+)NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 0.89 (t, 9H, CH 3 , J = 6.6 Hz); 1.26 (solid, 66H, -CH 2 -); 1.56-1.62 (solid, 6H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CO); 2.56 (t, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CONH-, J = 7.5Hz); 2.61 (t, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -COS-, J = 7Hz); 3.26 (s, 4H, CH 2 -S-CH 2 - CONH-); 3.42 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -COS-); 3.44-3.49 (m, 2H, -CONH-CH a H b -CH- CH a H b -NH-CO); 3.55-3.61 (m, 2H, -CONH-CH a H b -CH-CH a H b -NHCO-); 3.70-3.71 (m, 1H, BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -NHBOC); 7.58-7.62 (m, 2H, NHCO). MS (MALDI-TOF): M + 1 = 917 (M + H + ); M + 23 = 939 (M + Na + )
EXEMPLE 17: Préparation du chlorhydrate de 1-amino-2,3- di(tétradécv-thioacétv-thio)propaneEXAMPLE 17 Preparation of 1-amino-2,3-di hydrochloride (tetradecv-thioacétv-thio) propane
Préparation du 1-(tθrt-butyloxycarbonylamino)Drooane-2.3-diol (exemple 17a) Le 1-aminopropane-2,3-diol (5 g ; 55 mmol) est dissous dans le méthanol (200 ml) avant d'ajouter goutte à goutte la triéthylamine (0.5 ml par mmol d'aminé) et le dicarbonate de di-tert-butyle [(BOG)20] où BOC correspond à tertbutyloxycarbonyle (17.97 g ; 82 mmol). Le milieu reactionnel est chauffé à 40-50°G pendant 20 min puis laissé sous agitation à température ambiante pendant une heure. Après évaporation du solvant, l'huile incolore résiduelle est purifiée par chromatographie sur gel de silice avec l'éluant dichlorométhane- méthanol 95-5 et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme d'huile incolore qui cristallise lentement. Rendement : 99% Rf (dichlorométhane-méthanol 9-1) : 0.39Preparation of 1- (tθrt-butyloxycarbonylamino) Drooane-2.3-diol (example 17a) The 1-aminopropane-2,3-diol (5 g; 55 mmol) is dissolved in methanol (200 ml) before adding drop to drop drop the triethylamine (0.5 ml per mmol of amine) and the di-tert-butyl dicarbonate [(BOG) 20] where BOC corresponds to tert-butyloxycarbonyl (17.97 g; 82 mmol). The reaction medium is heated to 40-50 ° G for 20 min and then left with stirring at room temperature for one hour. After evaporation of the solvent, the residual colorless oil is purified by chromatography on silica gel with the eluent dichloromethane-methanol 95-5 and makes it possible to obtain the desired compound in the form of a colorless oil which crystallizes slowly. Yield: 99% Rf (dichloromethane-methanol 9-1): 0.39
IR : vNH 3350 cm"1 ; vCO ester 1746 cm'1 ; vCO amide 1682 cm"1 PF < 15°C RMN (1H, CDCI3) : 1.44 (s, 9H, CH3 (BOC)) ; 3.16-3.31 (m, 2H, BOCNH-CH2-IR: vNH 3350 cm "1 ; vCO ester 1746 cm '1 ; vCO amide 1682 cm " 1 PF <15 ° C NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 1.44 (s, 9H, CH 3 (BOC)); 3.16-3.31 (m, 2H, BOCNH-CH 2 -
CH-CH2-OH) ; 3.44 (massif, 2H, OH) ; 3.16-3.31 (m, 2H, BOCNH-CH2-CH-CH2-CH-CH2-OH); 3.44 (clump, 2H, OH); 3.16-3.31 (m, 2H, BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -
OH) ; 3.71-3.78 (m, 1H, BOCNH-CH2-CH-CH2-OH) ; 5.24 (m, 1H, -NHBOC).OH) ; 3.71-3.78 (m, 1H, BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -OH); 5.24 (m, 1H, -NHBOC).
SM (MALDI-TOF) : M+23 = 214 (M+Na+)MS (MALDI-TOF): M + 23 = 214 (M + Na + )
Préparation du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-2.3-di(p-toluènesulfonyloχy) propane (exemple 17b)Preparation of 1- (tert-butyloxycarbonylamino) -2.3-di (p-toluenesulfonyloχy) propane (example 17b)
Ce composé est obtenu selon la procédure précédemment décrite (exempleThis compound is obtained according to the procedure previously described (example
15a) à partir du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-propane-2,3-diol (exemple 17a) et du chlorure de p-toluènesulfonyle. Le produit est obtenu sous forme d'une poudre blanche.15a) from 1- (tert-butyloxycarbonylamino) -propane-2,3-diol (example 17a) and p-toluenesulfonyl chloride. The product is obtained in the form of a white powder.
Rendement : 45%Yield: 45%
Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.49Rf (dichloromethane-methanol 98-2): 0.49
IR : vNH 3430 cm"1 ; vGO ester et carbamate 1709 cm"1 PF : .112-116°GIR: vNH 3430 cm "1 ; vGO ester and carbamate 1709 cm " 1 PF: .112-116 ° G
RMN (1H, GDCI3) : 1.40 (s, 9H, GH3 (BOG)) ; 2.46 (s, 6H, GH3) ; 3.26-3.45 (m,NMR ( 1 H, GDCI 3 ): 1.40 (s, 9H, GH 3 (BOG)); 2.46 (s, 6H, GH 3 ); 3.26-3.45 (m,
2H, BOCNH-CH2-CH-CH2-OTs) ; 4.04-4.14 (m, 2H, BOCNH-CH2-CH-CH2-OTs) ;2H, BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -OTs); 4.04-4.14 (m, 2H, BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -OTs);
4.68 (m, 1H, BOCNH-CH2-CH-CH2-OTs) ; 4.71 (s, 1H, -NHBOC) ; 7.34 (d, 4H, aromatiques, J=8.5H∑) ; 7.69 (d, 2H, aromatiques, J=8.1H∑) ; 7.76 (d, 2H, aromatiques, J=8.1 Hz).4.68 (m, 1H, BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -OTs); 4.71 (s, 1H, -NHBOC); 7.34 (d, 4H, aromatics, J = 8.5H∑); 7.69 (d, 2H, aromatics, J = 8.1H∑); 7.76 (d, 2H, aromatics, J = 8.1 Hz).
SM (MALDI-TOF) : M+23 = 522 (M+Na+) ; M+39 = 538 (M+K+)MS (MALDI-TOF): M + 23 = 522 (M + Na + ); M + 39 = 538 (M + K + )
Préparation du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-2,3-di(acétylthio)propanePreparation of 1- (tert-butyloxycarbonylamino) -2,3-di (acetylthio) propane
(exemple 17c) Ge composé est obtenu selon la procédure précédemment décrite (exemple(example 17c) Ge compound is obtained according to the procedure previously described (example
15b) à partir du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-2,3-di(p-toluènesulfonyloxy)- propane (exemple 17b) et du thioacétate de potassium. Le produit est obtenu sous forme d'un solide blanc.15b) from 1- (tert-butyloxycarbonylamino) -2,3-di (p-toluenesulfonyloxy) -propane (example 17b) and potassium thioacetate. The product is obtained in the form of a white solid.
Rendement : 59% Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5) : 0.55Yield: 59% Rf (dichloromethane-ethyl acetate 95-5): 0.55
IR : vNH 3430 cm'1 ; vCO thioester 1718 cm"1 ; vCO carbamate 1690 cm"1 IR: vNH 3430 cm -1 ; vCO thioester 1718 cm "1 ; vCO carbamate 1690 cm " 1
PF : 62-63°C RMN (1H, CDCI3) : 1.45 (s, 9H, CH3 (BOC)) ; 2.35 (s, 3H, CH3) ; 2.37 (s, 3H,Mp: 62-63 ° C NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 1.45 (s, 9H, CH 3 (BOC)); 2.35 (s, 3H, CH 3 ); 2.37 (s, 3H,
CH3) ; 3.12-3.38 (massif, 4H, BOCNH-CH2-CH-CH2-SCO-) ; 3.69-3.78 (m, 1H,CH 3 ); 3.12-3.38 (solid, 4H, BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -SCO-); 3.69-3.78 (m, 1H,
BOCNH-CH2-CH-CH2-SCO-) ; 5.02 (s, 1 H, -NHBOC).BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -SCO-); 5.02 (s, 1 H, -NHBOC).
SM (MALDI-TOF) : M+23 = 330 (M+Na+)MS (MALDI-TOF): M + 23 = 330 (M + Na + )
Préparation du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-2.3-dimercaptopropane (exemplePreparation of 1- (tert-butyloxycarbonylamino) -2.3-dimercaptopropane (example
17 d)17 d)
Ce composé est obtenu selon la procédure précédemment décrite (exempleThis compound is obtained according to the procedure previously described (example
15c) par saponification du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-2,3-di(acétylthio)- propane (exemple 17c). Le produit est obtenu sous forme d'un solide blanc qui est rapidement remis en réaction.15c) by saponification of 1- (tert-butyloxycarbonylamino) -2,3-di (acetylthio) - propane (example 17c). The product is obtained in the form of a white solid which is rapidly reacted.
Rendement : 95%Yield: 95%
Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5) : 0.45Rf (dichloromethane-ethyl acetate 95-5): 0.45
IR : v H 3368 cm"1 ; vCO carbamate 1688 cm"1 PF.: 62-63°CIR: v H 3368 cm "1 ; vCO carbamate 1688 cm " 1 PF: 62-63 ° C
RMN (1H, GDGI3) : 1.46 (s, 9H, GH3 (BOC)) ; 3.04-3.11 (m, 1H, BOCNH-GH2-NMR (1H, GDGI 3): 1.46 (s, 9H, GH 3 (BOC)); 3.04-3.11 (m, 1H, BOCNH-GH 2 -
CHSH-CH2-SH) ; 3.26-3.35 (m, 2H, BOCNH-CH2-CHSH-CH2-SH) ; 3.43-3.52 (m,CHSH-CH 2 -SH); 3.26-3.35 (m, 2H, BOCNH-CH 2 -CHSH-CH 2 -SH); 3.43-3.52 (m,
2H, BOCNH-CH2-CH-CH2-SH) ; 4.91 (m, 2H, SH) ; 5.08 (s, 1H, -NHBOC).2H, BOCNH-CH 2 -CH-CH 2 -SH); 4.91 (m, 2H, SH); 5.08 (s, 1H, -NHBOC).
Préparation du 1-(iert-butylox\fcarbonylamino)-2.3-di(féîradécylthioacéiylthio) propane (exemple 17e)Preparation of 1- (iert-butylox \ fcarbonylamino) -2.3-di (féîradécylthioacéiylthio) propane (example 17e)
Ce composé est obtenu selon la procédure précédemment décrite (exempleThis compound is obtained according to the procedure previously described (example
15d) à partir du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-2,3-dimercaptopropane (exemple15d) from 1- (tert-butyloxycarbonylamino) -2,3-dimercaptopropane (example
17d) et de l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1 ). Le produit est obtenu sous forme d'un solide blanc.17d) and tetradecylthioacetic acid (Example 1). The product is obtained in the form of a white solid.
Rendement : 50%Yield: 50%
Rf (dichlorométhane) : 0.38Rf (dichloromethane): 0.38
IR : vNH 3421 cm"1 ; vCO thioester 1721 cm"1 ; vCO carbamate 1683 cm"1 IR: vNH 3421 cm "1 ; vCO thioester 1721 cm "1; vCO carbamate 1683 cm "1
PF : 60-62°C RMN (1H, CDCI3) : 0.87 (t, 6H, CH3, J=6.3Hz) ; 1.26 (massif, 44H, -CH2-) ; 1.45Mp: 60-62 ° C NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 0.87 (t, 6H, CH 3 , J = 6.3Hz); 1.26 (solid, 44H, -CH 2 -); 1.45
(s, 9H, CH3 (BOC)) ; 1.57-1.62 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-) ; 2.60 (t, 4H,(s, 9H, CH 3 (BOC)); 1.57-1.62 (m, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -COS-); 2.60 (t, 4H,
-CH2-CH2-S-CH2-COS-, J=6.9Hz) ; 3.17-3.29 (m, 2H, BOCNH-CHaHb-CH- CHaHb-NHBOC) ; 3.29-3.38 (m, 2H, BOCNH-CHaHb-CH-CHaHb-NHBOC) ; 3.41-CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -COS-, J = 6.9 Hz); 3.17-3.29 (m, 2H, BOCNH-CH a H b -CH- CHaHb-NHBOC); 3.29-3.38 (m, 2H, BOCNH-CH a H b -CH-CH a H b -NHBOC); 3.41
(s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.43 (s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.76-3.80 (m, 1H,(s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -COS-); 3.43 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -COS-); 3.76-3.80 (m, 1H,
BOCNH-CH2-CH-CH2-NHBOC) ; 5.03 (s, 1H, -NHBOC).BOCNH-CH2-CH-CH 2 -NHBOC); 5.03 (s, 1H, -NHBOC).
SM (MALDI-TOF) : M+23 = 786 (M+Na+)MS (MALDI-TOF): M + 23 = 786 (M + Na + )
Préparation du chlorhydrate de 1-amino-2.3-di(tétradécylthioacétylthio)propanePreparation of 1-amino-2.3-di (tetradecylthioacetylthio) propane hydrochloride
(exemple 17)(example 17)
Ce composé est obtenu selon la procédure précédemment décrite (exemple 15) à partir du 1-(tert-butyloxycarbonylamino)-2,3-ditétradécylthioacétyl-thiopropane (exemple 17e). Le produit est obtenu sous forme de chlorhydrate (solide blanc).This compound is obtained according to the procedure previously described (Example 15) from 1- (tert-butyloxycarbonylamino) -2,3-ditétradécylthioacétyl-thiopropane (example 17e). The product is obtained in the form of the hydrochloride (white solid).
Rendement : 43%Yield: 43%
Rf (dichlorométhane) : 0.19Rf (dichloromethane): 0.19
IR : vNH.HCI 2700-3250 cm"1 ; vCO thioester 1701 et 1676 cm"1 IR: vNH.HCI 2700-3250 cm "1 ; vCO thioester 1701 and 1676 cm " 1
PF : 117-128°G RMN (1H, GDGI3) : 0.86 (t, 6H, CH3, J=6Hz) ; 1.24 (massif, 44H, -CH2) ; 1.51 (m,Mp 117-128 ° G NMR (1H, GDGI 3): 0.86 (t, 6H, CH 3, J = 6Hz); 1.24 (solid, 44H, -CH 2 ); 1.51 (m,
4H, -CH2-CH2-S-GH2-COS-) ; 2.61 (m, 4H, -GH2-CH2-S-GH2-GOS-) ; 2.93-3.044H, -CH 2 -CH 2 -S-GH 2 -COS-); 2.61 (m, 4H, -GH 2 -CH 2 -S-GH 2 -GOS-); 2.93-3.04
(m, 2H, S-CHaHb-CH-CHaHb-NH2.HCI) ; 3.11-3.20 (m, 2H, S-CHaHb-CH-CHaHb-(m, 2H, S-CHaH b -CH-CHaH b -NH 2 .HCI); 3.11-3.20 (m, 2H, S-CH a H b -CH-CH a H b -
NH2.HCI) ; 3.59-3.63 (massif, 4H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.72-3.84 (m, 1H, S-CH2-NH 2 .HCI); 3.59-3.63 (solid, 4H, CH 2 -S-CH 2 -COS-); 3.72-3.84 (m, 1H, S-CH 2 -
CH-GH2-NH2.HGI) ; 8.12 (m, 3H, NH2.HCI).CH-GH 2 -NH2.HGI); 8.12 (m, 3H, NH 2 .HCI).
EXEMPLE 18: Préparation du 1-tétradécylthioacétylamino-2.3- di(tétradécyIthioacétylthio)propaneEXAMPLE 18 Preparation of 1-tetradecylthioacetylamino-2.3-di (tetradecylthioacetylthio) propane
Le chlorhydrate de 1-amino-2,3-ditétradécylthioacétylthiopropane (exemple 17) (100 mg ; 0.140 mmol) et l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1) (62 mg ; 0.210 mmol) sont dissous dans le dichlorométhane (40 ml) à 0°C avant d'ajouter la triéthylamine (43ml), la dicyclohexylcarbodiimide (59 mg ; 0.28 mmol) et l'hydroxybenzotriazole (29 mg ; 0.210 mmol). Le milieu reactionnel est laissé sous agitation à 0°C pendant 1 heure puis à température ambiante pendant 24 heures. Le milieu est ensuite chauffé à reflux léger pendant 48 heures puis porté à sec. Le résidu obtenu (310 mg) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-cyclohexane 8-2) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de poudre blanche.1-amino-2,3-ditetradecylthioacetylthiopropane hydrochloride (example 17) (100 mg; 0.140 mmol) and tetradecylthioacetic acid (example 1) (62 mg; 0.210 mmol) are dissolved in dichloromethane (40 ml) at 0 ° C before adding triethylamine (43ml), dicyclohexylcarbodiimide (59 mg; 0.28 mmol) and hydroxybenzotriazole (29 mg; 0.210 mmol). The reaction medium is left stirring at 0 ° C for 1 hour and then at room temperature for 24 hours. The medium is then heated at slight reflux for 48 hours and then brought to dryness. The residue obtained (310 mg) is purified by chromatography on gel of silica (eluent dichloromethane-cyclohexane 8-2) and makes it possible to obtain the desired compound in the form of a white powder.
Rendement : 96%Efficiency: 96%
Rf (dichlorométhane) : 0.20 IR : vNH amide 3306 cm"1 ; vCO thioester 1674 cm"1 ; vCO amide 1648 cm"1 Rf (dichloromethane): 0.20 IR: vNH amide 3306 cm "1 ; vCO thioester 1674 cm "1; vCO amide 1648 cm "1
PF : 78-80°CMp: 78-80 ° C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, CH3, J=6.6Hz) ; 1.26 (massif, 66H, -CH2) ; 1.58-NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 0.89 (t, 9H, CH 3 , J = 6.6 Hz); 1.26 (solid, 66H, -CH 2 ); 1.58-
1.62 (massif, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-) ; 2.56 (t, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-,1.62 (solid, 6H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -COS-); 2.56 (t, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -COS-,
J=7.5Hz) ; 2.61 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-( J=7Hz) ; 3.26 (s, 4H, CH2-S- CH2-COS-) ; 3.42 (s, 2H, CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.44-3.49 (m, 2H, S-CHaHb-CH-J = 7.5Hz); 2.61 (t, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CONH- ( J = 7Hz); 3.26 (s, 4H, CH 2 -S- CH 2 -COS-); 3.42 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -CONH-); 3.44-3.49 (m, 2H, S-CH a H b -CH-
CHaHb-NHCO-) ; 3.55-3.61 (m, 2H, -S-CHaHb-CH-CHaHb-NHCO-) ; 3.70-3.71 (m,CHaH b -NHCO-); 3.55-3.61 (m, 2H, -S-CH a H b -CH-CH a H b -NHCO-); 3.70-3.71 (m,
1H, -S-CH2-CH-CH2-NHCO-) ; 7.58-7.62 (m, 1H, NHCO).1H, -S-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO-); 7.58-7.62 (m, 1H, NHCO).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 934 (M+H+) ; M+23 = 956 (M+Na+) ; M+39 = 972MS (MALDI-TOF): M + 1 = 934 (M + H + ); M + 23 = 956 (M + Na + ); M + 39 = 972
(M+K+ )(M + K + )
EXEMPLE 19 : Préparation du 1-tétradécylthioaeétvithio-2,3- di(tétradécylthîoacétylamino)propaneEXAMPLE 19 Preparation of 1-tetradecylthioaeétvithio-2,3-di (tétradécylthîoacétylamino) propane
Préparation du 2.3-di(iêtradêcyllhioacét¥lamino)-1-iodopropane (exemple 19a) Le 2,3-ditétradécylfhioacétylaminopropan-1-ol (exemple 13) (0.200 g ; 0.317 mmol) est dissous dans le toluène (30 ml) avant d'ajouter l'imidazole (0.054 g ; 0.792 mmol), la triphénylphosphine (0.208 g ; 0.792 mmol) et l'iode (0.161 g ; 0.634 mmol) dans cet ordre. Le milieu reactionnel est laissé sous agitation et chauffé à 75-80°G. Après 6 heures de réaction, le solvant est évaporé et le produit résiduel obtenu est utilisé sans autre purification. Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.55Preparation of 2.3-di (iêtradêcyllhioacét ¥ lamino) -1-iodopropane (example 19a) 2,3-ditétradécylfhioacétylaminopropan-1-ol (example 13) (0.200 g; 0.317 mmol) is dissolved in toluene (30 ml) before d '' add imidazole (0.054 g; 0.792 mmol), triphenylphosphine (0.208 g; 0.792 mmol) and iodine (0.161 g; 0.634 mmol) in this order. The reaction medium is left under stirring and heated to 75-80 ° G. After 6 hours of reaction, the solvent is evaporated and the residual product obtained is used without further purification. Rf (dichloromethane-methanol 98-2): 0.55
Préparation du 2.3-di(tétradécylthioacétylamino)-1-mercaptopropane (exemple 19b)Preparation of 2.3-di (tetradecylthioacetylamino) -1-mercaptopropane (example 19b)
L'hydrogénosulfure de sodium (0.089 g ; 1.59 mmol) est ajouté au 2,3- ditétradécylthioacétylamino-1-iodopropane (exemple 19a) (0.235 g ; 0.32 mmol) dissous dans de l'acétone (80 ml). Le milieu reactionnel est porté à 70°C pendant 16 heures. Le solvant est évaporé et le résidu est repris par de l'eau et extrait par du chloroforme. La phase aqueuse est acidifiée à pH6 par de l'acide acétique puis réextraite par du chloroforme. Les phases organiques sont séchées sur sulfate de magnésium puis filtrées et le solvant est évaporé. Le résidu obtenu est utilisé sans autre purificationSodium hydrogen sulfide (0.089 g; 1.59 mmol) is added to 2,3-ditetradecylthioacetylamino-1-iodopropane (example 19a) (0.235 g; 0.32 mmol) dissolved in acetone (80 ml). The reaction medium is brought to 70 ° C. for 16 hours. The solvent is evaporated off and the residue is taken up in water and extracted with chloroform. The aqueous phase is acidified to pH6 with acetic acid and then reextracted with chloroform. The organic phases are dried over magnesium sulphate then filtered and the solvent is evaporated. The residue obtained is used without further purification
Préparation du 1-tétradécylthioacétylthio-2,3-di(tétradécylthioacétylamino) propane (exemple 19)Preparation of 1-tetradecylthioacetylthio-2,3-di (tetradecylthioacetylamino) propane (example 19)
Le 2,3-ditétradécylthioacétylamino-1-mercaptopropane (exemple 19b) (0.205 g ; 0.32 mmol) est dissous dans le tétrahydrofuranne (50 ml) avant d'ajouter la dicyclohexylcarbodiim.de (98 mg ; 0.47 mmol), la dimethylaminopyridine (58 mg ;2,3-ditetradecylthioacetylamino-1-mercaptopropane (example 19b) (0.205 g; 0.32 mmol) is dissolved in tetrahydrofuran (50 ml) before adding dicyclohexylcarbodiim.de (98 mg; 0.47 mmol), dimethylaminopyridine (58 mg;
0.47 mmol) et l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1) (137 mg ; 0.47 mmol).0.47 mmol) and tetradecylthioacetic acid (Example 1) (137 mg; 0.47 mmol).
Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le précipité de dicyclohexylurée est filtré, rincé au tétrahydrofuranne et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (1.14 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane) pour obtenir le composé souhaité sous forme de poudre ocre.The mixture is left stirring at room temperature for 20 hours. The precipitate of dicyclohexylurea is filtered, rinsed with tetrahydrofuran and the filtrate is evaporated. The residue obtained (1.14 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane) to obtain the desired compound in the form of an ocher powder.
Rendement : 10%Yield: 10%
Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 98-2) : 0.19 IR : vCO thioester 1 11-1 45 cm"1 ; vCO amide 1651 cm"1 Rf (dichloromethane-ethyl acetate 98-2): 0.19 IR: vCO thioester 1 11-1 45 cm "1 ; vCO amide 1651 cm " 1
PF : 48.8 à 49.8°GPF: 48.8 to 49.8 ° G
RMN (1H, GDGI3) : 0.89 (t, 9H, CH3, J=6.3Hz) ; 1.26 (massif, 66H, -CH2) ; 1.58NMR (1H, GDGI 3): 0.89 (t, 9H, CH 3, J = 6.3Hz); 1.26 (solid, 66H, -CH 2 ); 1.58
(m, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-) ; 2.46-55 (m, 4H, -CH2-CH2-S-GH2-CONH) ;(m, 6H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -COS-); 2.46-55 (m, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-GH 2 -CONH);
2.65 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-COS-, J=7.4Hz) ; 3.24 (s, 2H, CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.26 (s, 2H, CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.66 (t, 2H, -COS-CH2-CH-CH2-NHGO) ; 3.792.65 (t, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -COS-, J = 7.4Hz); 3.24 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -CONH-); 3.26 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -CONH-); 3.66 (t, 2H, -COS-CH 2 -CH-CH 2 -NHGO); 3.79
(t, 2H, CH2-S-CH2-COS-, J=6.3Hz) ; 4.31-4.41 (m, 2H, -COS-CH2-CH-CH2-(t, 2H, CH 2 -S-CH 2 -COS-, J = 6.3Hz); 4.31-4.41 (m, 2H, -COS-CH 2 -CH-CH 2 -
NHCO) ; 5.00-5.05 (m, 1H, -COS-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 7.33 (si, 1H, NHCO) ;NHCO); 5.00-5.05 (m, 1H, -COS-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO); 7.33 (si, 1H, NHCO);
9.27 (d, 1H, NHCO, J=8.6Hz).9.27 (d, 1H, NHCO, J = 8.6Hz).
SM (MALDI-TOF) : M+1 = 917 (M+H+) ; M+23 = 939 (M+Na+) ; M+39 = 955 (M+K+ ) EXEMPLE 20 : Préparation de 3-tétradécylthioacétylamino-2- tétradécylthioacétylthiopropan-1-olMS (MALDI-TOF): M + 1 = 917 (M + H + ); M + 23 = 939 (M + Na + ); M + 39 = 955 (M + K + ) EXAMPLE 20 Preparation of 3-tetradecylthioacetylamino-2-tetradecylthioacetylthiopropan-1-ol
Préparation du 3-tétradécylthioacétylamino-1-triphénylméthyloχypropan-2-ol (exemple 20a)Preparation of 3-tetradecylthioacetylamino-1-triphenylmethyloχypropan-2-ol (example 20a)
Le chlorotriphénylméthane (2.833 g ; 10.16 mmol) est ajouté à une solution de 3- tétradécylthioacétylaminopropane-1 ,2-diol (exemple 2) (3 g ; 8.30 mmol) dans la pyridine (2.5 ml). Le milieu reactionnel est laissé sous agitation à 50°C pendant 24 heures. Le solvant est évaporé sous vide. Le résidu obtenu est repris par de l'eau et extrait par du dichlorométhane. La phase organique est lavée par une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 N puis par une solution aqueuse d'eau saturée en chlorure de sodium. Elle est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et le solvant est évaporé. Le résidu obtenu (6.36 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlrométhan-acétate d'éthyle 98-2) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 69%Chlorotriphenylmethane (2,833 g; 10.16 mmol) is added to a solution of 3-tetradecylthioacetylaminopropane-1,2-diol (example 2) (3 g; 8.30 mmol) in pyridine (2.5 ml). The reaction medium is left under stirring at 50 ° C for 24 hours. The solvent is evaporated in vacuo. The residue obtained is taken up in water and extracted with dichloromethane. The organic phase is washed with a 1N aqueous hydrochloric acid solution and then with an aqueous solution of water saturated with sodium chloride. It is dried over magnesium sulfate, filtered and the solvent is evaporated. The residue obtained (6.36 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichlromethan-ethyl acetate 98-2) and allows the desired compound to be obtained in the form of white powder. Yield: 69%
Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 8-2 ) : 0.61 IR : vNH amide 3225 cm"1 ; vCO amide1654 cm"1 PF : 62.6 à 65.4°C RMN (1H, GDGIs) : 0.89 (t, 3H, GH3, J=6.7Hz) ; 1.26 (massif, 22H, -GH2) ; 1.50- 1.57 (m, 2H, -CH2-CH2-S-GH2-GONH-) ; 2.48 (t, 2H, -CH2-CH2-S-GH2-GONH, J=7.2Hz) ; 3.01 (m, 1 H, OH) ; 3.17 (s, 2H, CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.19 (m, 2H, -O- GH2-GH-GH2-NHCO ou trityl-0-CH2-CH-GH2-NHGO) ; 3.27-3.36 (m, 1H, -0-CH2- CH-CH2-NHCO ou trityl-0-CH2-CH-GH2-NHGO) ; 3.54-3.62 (m, 1H, -0-GH2-CH- CH2-NHCO ou trityl-0-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 3.93 (m, 1H, -O-CH2-CH-CH2- NHCO) ; 7.16 (t, 1H, NHCO, J=5.7Hz) ; 7.23-7.35 (massif, 9H, H aromatiques) ; 7.41-7.45 (massif, 6H, H aromatiques). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 626 (M+Na+)Rf (dichloromethane-ethyl acetate 8-2): 0.61 IR: vNH amide 3225 cm "1 ; vCO amide 1654 cm " 1 PF: 62.6 at 65.4 ° C NMR ( 1 H, GDGIs): 0.89 (t, 3H, GH 3 , J = 6.7 Hz); 1.26 (solid, 22H, -GH 2 ); 1.50-1.57 (m, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-GH 2 -GONH-); 2.48 (t, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-GH 2 -GONH, J = 7.2Hz); 3.01 (m, 1H, OH); 3.17 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -CONH-); 3.19 (m, 2H, -O- GH 2 -GH-GH 2 -NHCO or trityl-0-CH 2 -CH-GH 2 -NHGO); 3.27-3.36 (m, 1H, -0-CH 2 - CH-CH 2 -NHCO or trityl-0-CH 2 -CH-GH 2 -NHGO); 3.54-3.62 (m, 1H, -0-GH 2 -CH-CH2-NHCO or trityl-0-CH 2 -CH-CH2-NHCO); 3.93 (m, 1H, -O-CH2-CH-CH 2 - NHCO); 7.16 (t, 1H, NHCO, J = 5.7Hz); 7.23-7.35 (solid, 9H, aromatic H); 7.41-7.45 (solid, 6H, aromatic H). MS (MALDI-TOF): M + 23 = 626 (M + Na + )
Préparation du 2-iodo-3-tétradécylthioacétylamino-1-triphénylméthyloχypropane (exemple 20b)Preparation of 2-iodo-3-tetradecylthioacetylamino-1-triphenylmethyloχypropane (example 20b)
Le 3-tétradécylthioacétylamino-1-triphénylméthyloxypropan-2-ol (exemple 20a) (2 g ; 3.31 mmol) est dissous dans le toluène (100 ml) avant d'ajouter l'imidazole (0.564 g ; 8.28 mmol), la triphénylphosphine (2.171 g ; 8.28 mmol) et l'iode (1.681 g ; 6.62 mmol) dans cet ordre. Le milieu reactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Une solution saturée en bisulfite de sodium est ajoutée jusqu'à décoloration complète du milieu 5 reactionnel. Les phases sont séparées ; la phase aqueuse est extraite par du toluène, les phases organiques sont groupées, lavées par une solution saturée en chlorure de sodium, séchées sur sulfate de magnésium puis filtrées. Après évaporation du solvant, le résidu obtenu (4.65 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlrométhane) et permet d'obtenir le composé souhaité3-tetradecylthioacetylamino-1-triphenylmethyloxypropan-2-ol (example 20a) (2 g; 3.31 mmol) is dissolved in toluene (100 ml) before adding imidazole (0.564 g; 8.28 mmol), triphenylphosphine (2.171 g; 8.28 mmol) and iodine (1.681 g; 6.62 mmol) in this order. The reaction medium is left under stirring at room temperature for 20 hours. A saturated solution of sodium bisulfite is added until complete discoloration of the reaction medium. The phases are separated; the aqueous phase is extracted with toluene, the organic phases are grouped, washed with a saturated solution of sodium chloride, dried over magnesium sulfate and then filtered. After evaporation of the solvent, the residue obtained (4.65 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichlromethane) and allows the desired compound to be obtained
10 sous forme d'huile jaune. Rendement : 21%10 in the form of a yellow oil. Yield: 21%
Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5 ) : 0.58 IR : vCO amide 1668 cm"1 ; vCHarom. monosubstitué 748 et 698 cm"1 RMN (1H, GDGIs) : 0.89 (t, 3H, GH3, J=6.5Hz) ; 1.26 (massif, 20H, -CH2) ; 1.53-Rf (dichloromethane-ethyl acetate 95-5): 0.58 IR: vCO amide 1668 cm "1 ; vCHarom. Monosubstituted 748 and 698 cm " 1 NMR ( 1 H, GDGIs): 0.89 (t, 3H, GH 3 , J = 6.5Hz); 1.26 (solid, 20H, -CH 2 ); 1.53-
15. 1.63 (m, 2H, -CH2-GH2-GH2-S-CH2-GONH-) ; 2.63 (m, 2H, -CH2-CH2-GH2-S-GH2- GONH) ; 3.13-3.30 (m, 2H, -GH2-CH2-S-GH2-GONH) ; 3.34 (s, 2H, GH2-S-CH2- CONH-) ; 3.67-3.71 (m, 2H, -0-CH2-CH-CH2-NHCO ou trityl-0-CH2-CH-CH2- NHCO) ; 3.88-3.94 (m, 2H, -0-CH2-CH-CH2-NHGO ou trityl-0-CH2-CH-CH2- NHCO) ; 4.76 (m, 1H, -0-GH2-CH-GH2-NHG0) ; 7.25-7.36 (massif, 9H, H15. 1.63 (m, 2H, -CH 2 -GH2-GH2-S-CH 2 -GONH-); 2.63 (m, 2H, -CH2-CH2-GH2-S-GH2-GONH); 3.13-3.30 (m, 2H, -GH2-CH2-S-GH 2 -GONH); 3.34 (s, 2H, GH 2 -S-CH 2 - CONH-); 3.67-3.71 (m, 2H, -0-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO or trityl-0-CH 2 -CH-CH 2 - NHCO); 3.88-3.94 (m, 2H, -0-CH 2 -CH-CH 2 -NHGO or trityl-0-CH 2 -CH-CH 2 - NHCO); 4.76 (m, 1H, -0-GH 2 -CH-GH 2 -NHG0); 7.25-7.36 (massive, 9H, H
20 aromatiques) ; 7.45-7.49 (massif, 6H, H aromatiques). SM (MALDI-TOF) : M-127 = 586 (M-l)20 aromatics); 7.45-7.49 (solid, 6H, aromatic H). SM (MALDI-TOF): M-127 = 586 (M-l)
Préparation du 2-mercapto-3-tétradécylthioacétylamino-1- t phénylméthyloxypropane (exemple 20c)Preparation of 2-mercapto-3-tetradecylthioacetylamino-1- t phenylmethyloxypropane (example 20c)
25 L'hydrogenosulfate de sodium hydraté (38 mg ; 0.68 mmol) est mis en suspension dans l'éthanol (20 ml) avant d'ajouter le 2-iodo-3- tétradécylthioacétylamino-1-triphénylméthyloxypropane (exemple 20b) (200 mg ; 0.28 mmol). Le milieu reactionnel est chauffé à 70°C. 238 mg d'hydrogénosulfate de sodium hydraté sont ajoutés sur plusieurs jours. Après 6.5 jours, le solvantThe hydrous sodium hydrogen sulphate (38 mg; 0.68 mmol) is suspended in ethanol (20 ml) before adding 2-iodo-3-tetradecylthioacetylamino-1-triphenylmethyloxypropane (example 20b) (200 mg; 0.28 mmol). The reaction medium is heated to 70 ° C. 238 mg of hydrated sodium hydrogen sulfate are added over several days. After 6.5 days, the solvent
30 est évaporé, le résidu repris dans du dichlorométhane et lavé par de l'eau. La phase aqueuse est réextraite et les phases organiques regroupées sont lavées par une solution d'acide chlorhydrique 0.5N puis par une solution saturée en chlorure de sodium, séchées sur sulfate de magnésium. Le sel est filtré et le solvant évaporé. Le résidu obtenu est utilisé sans autre purification. Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5 ) : 0.3330 is evaporated, the residue taken up in dichloromethane and washed with water. The aqueous phase is reextracted and the combined organic phases are washed with a 0.5N hydrochloric acid solution and then with a saturated solution in sodium chloride, dried over magnesium sulfate. The salt is filtered and the solvent evaporated. The residue obtained is used without further purification. Rf (dichloromethane-ethyl acetate 95-5): 0.33
Préparation du 3-tétradécylthioacétylamino-2-tétradécylthioacétylthio-1- triphénylméthyloxy-propane (exemple 20d)Preparation of 3-tetradecylthioacetylamino-2-tetradecylthioacetylthio-1- triphenylmethyloxy-propane (example 20d)
Le 2-mercapto-3-tétradécylthioacétylamino-1-triphénylméthyloxypropane2-mercapto-3-tetradecylthioacetylamino-1-triphenylmethyloxypropane
(exemple 20c) (174 mg ; 0.28 mmol) est dissous dans le tétrahydrofuranne (20 ml) avant d'ajouter la dicyclohexylcarbodiimide (88 mg ; 0.42 mmol), la dimethylaminopyridine (51 mg ; 0.42 mmol) et l'acide tétradécylthioacétique (121 mg ; 0.42 mmol). Le mélange reactionnel est laissé sous agitation à température ambiante. Après 20 heures de réaction, le solvant est évaporé. Le résidu obtenu (450 mg) est purifié par flash chromatographie (éluant dichlorométhane- cyclohexane 3-7 à 5-5) et permet d'obtenir le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 76% Rf (dichlorométhane) : 0.39 IR : vCO thioester et amide 1745 à 1640 cm"1 PF : 48.5 à 51.9βC RMN (1H, GDGIs) : 0.89 (t, 6H, GH3, J=6.3Hz) ; 1.26 (massif, 44H, -CH2) ; 1.62 (m, 4H, -CH2-GH2-S-GH2-GO-) ; 2.42 (t, 2H, -GH2-CH2-S-GH2-GO H-, J=7.5Hz) ; 2.68 (t, 2H, -GH2-CH2-S-CH2-COS-, J=7.5Hz) ; 3.14 (s, 2H, CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.25 (s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 3.50-3.59 (m, 1H, -0-GH2-CH-CH2-NHGO ou trityl-0-CH2-GH-CH2-NHCO) ; 3.66-3.72 (m, 1H, -0-CH2-CH-CH2-NHCO ou trityl- 0-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 3.96 (m, 1H, -O-CH2-CH-CH2-NHCO ou trityl-0-CH2- CH-CH2-NHCO) ; 3.54-3.62 (m, 1 H, -0-CH2-CH-CH2-NHCO ou trityl-0-GH2-CH- CH2-NHCO) ; 5.16 (m, 1 H, -O-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 7.04 (m, 1H, NHCO, J=5.7Hz) ; 7.25-7.34 (massif, 9H, H aromatiques) ; 7.42-7.45 (massif, 9H, H aromatiques). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 889 (M+Na+) Préparation du 3-tétradécylthioacétylamino-2-tétradécylthioacétylthiopropan-1-ol (exemple 20)(example 20c) (174 mg; 0.28 mmol) is dissolved in tetrahydrofuran (20 ml) before adding dicyclohexylcarbodiimide (88 mg; 0.42 mmol), dimethylaminopyridine (51 mg; 0.42 mmol) and tetradecylthioacetic acid (121 mg; 0.42 mmol). The reaction mixture is left stirring at room temperature. After 20 hours of reaction, the solvent is evaporated. The residue obtained (450 mg) is purified by flash chromatography (eluent dichloromethane-cyclohexane 3-7 to 5-5) and allows the desired compound to be obtained in the form of white powder. Yield: 76% Rf (dichloromethane): 0.39 IR: vCO thioester and amide 1745 to 1640 cm "1 PF: 48.5 to 51.9 β C NMR ( 1 H, GDGIs): 0.89 (t, 6H, GH 3 , J = 6.3Hz ); 1.26 (solid, 44H, -CH 2 ); 1.62 (m, 4H, -CH 2 -GH 2 -S-GH 2 -GO-); 2.42 (t, 2H, -GH 2 -CH 2 -S- GH 2 -GO H-, J = 7.5Hz); 2.68 (t, 2H, -GH 2 -CH 2 -S-CH 2 -COS-, J = 7.5Hz); 3.14 (s, 2H, CH 2 -S -CH 2 -CONH-); 3.25 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -COS-); 3.50-3.59 (m, 1H, -0-GH 2 -CH-CH 2 -NHGO or trityl-0 -CH 2 -GH-CH 2 -NHCO); 3.66-3.72 (m, 1H, -0-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO or trityl- 0-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO); 3.96 ( m, 1H, -O-CH 2 -CH-CH2-NHCO or trityl-0-CH 2 - CH-CH 2 -NHCO); 3.54-3.62 (m, 1 H, -0-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO or trityl-0-GH 2 -CH- CH 2 -NHCO); 5.16 (m, 1 H, -O-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO); 7.04 (m, 1H, NHCO, J = 5.7 Hz); 7.25-7.34 (solid, 9H, aromatic H); 7.42-7.45 (solid, 9H, aromatic H). SM (MALDI-TOF): M + 23 = 889 (M + Na + ) Preparation of 3-tetradecylthioacetylamino-2-tetradecylthioacetylthiopropan-1-ol (Example 20)
Le 3-tétradécylthioacétylamino-2-tétradécylthioacétylthio-1 -triphénylméthyloxy- propane (exemple 20d) (187 mg ; 0.21 mmol) est dissous dans l'éther saturé en acide chirohydrique gaz (12 ml). Le milieu reactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le précipité formé est filtré et rincé par de l'éther diéthylique pour donner le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 52% Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2 ) : 0.48The 3-tetradecylthioacetylamino-2-tetradecylthioacetylthio-1 -triphenylmethyloxypropane (example 20d) (187 mg; 0.21 mmol) is dissolved in ether saturated with hydrochloric acid gas (12 ml). The reaction medium is left under stirring at room temperature for 20 hours. The precipitate formed is filtered and rinsed with diethyl ether to give the desired compound in the form of a white powder. Yield: 52% Rf (dichloromethane-methanol 98-2): 0.48
IR : vCO thioester 1704 ; vCO amide 1646 cm"1 IR: vCO thioester 1704; vCO amide 1646 cm "1
PF : 88.4 à 94.1°CPF: 88.4 to 94.1 ° C
RMN (1H, CDCIs) : 0.89 (t, 6H, CH3, J=6.4Hz) ; 1.26-1.37 (massif, 44H, -CH2) ;NMR (1 H, CDCl): 0.89 (t, 6H, CH 3, J = 6.4Hz); 1.26-1.37 (massif, 44H, -CH 2 );
1.55-1.61 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-GO-) ; 2.55 (t, 2H, -GH2-CH2-S-CH2-GO H-, J=7Hz) ; 2.65 (t, 2H,, -GH2-GH2-S-GH2-GOS-, J=7Hz) ; 3.26 (s, 2H, GH2-S-CH2- GONH-) ; 3.27 (s, 2H, GH2-S-CH2-GOS-) ; 3.36-3.38 (m, 1 H, -0-CH2-CH-CH2- NHCO) ; 3.58-3.64 (m, 1H, -O-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 4.02 (m, 1H, -0-CH2-CH- CH2-NHCO) ; 4.11-4.25 (m, 2H, HO-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 7.34 (m, 1H, NHCO). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 670 (M+Na+)1.55-1.61 (m, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -GO-); 2.55 (t, 2H, -GH 2 -CH 2 -S-CH 2 -GO H-, J = 7Hz); 2.65 (t, 2H ,, -GH 2 -GH 2 -S-GH 2 -GOS-, J = 7Hz); 3.26 (s, 2H, GH 2 -S-CH 2 - GONH-); 3.27 (s, 2H, GH 2 -S-CH 2 -GOS-); 3.36-3.38 (m, 1H, -0-CH 2 -CH-CH 2 - NHCO); 3.58-3.64 (m, 1H, -O-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO); 4.02 (m, 1H, -0-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO); 4.11-4.25 (m, 2H, HO-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO); 7.34 (m, 1H, NHCO). MS (MALDI-TOF): M + 23 = 670 (M + Na + )
EXEMPLE 21 : Préparation de 3-tétradécylthioacé--v--amino-1- tétradécylthiacétyloχy-2-tétradécylthioacétyithiopropaneEXAMPLE 21 Preparation of 3-tetradecylthioaceous - v - amino-1- tetradecylthiacétyloχy-2-tétradécylthioacétyithiopropane
Le 3-fétradécylthioacétylamino-2-tétradécylthioacétylthiopropan-1 -ol (exemple3-fetradecylthioacetylamino-2-tetradecylthioacetylthiopropan-1 -ol (example
20) (64 mg ; 0.10 mmol) est dissous dans le tétrahydrofuranne (7 ml) avant d'ajouter la dicyclohexylcarbodiimide (31 mg ; 0.15 mmol), la dimethylaminopyridine (18 mg ; 0.15 mmol) et l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1) (43 mg ; 0.15 mmol). Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le précipité de dicyclohexylurée est filtré et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (140 mg) est purifié par flash chromatographie (éluant dichlorométhane) pour donner le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 17% Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 98-2 ) : 0.2320) (64 mg; 0.10 mmol) is dissolved in tetrahydrofuran (7 ml) before adding dicyclohexylcarbodiimide (31 mg; 0.15 mmol), dimethylaminopyridine (18 mg; 0.15 mmol) and tetradecylthioacetic acid (Example 1) (43 mg; 0.15 mmol). The mixture is left stirring at room temperature for 20 hours. The precipitate of dicyclohexylurea is filtered and the filtrate is evaporated. The residue obtained (140 mg) is purified by flash chromatography (eluent dichloromethane) to give the desired compound in the form of a white powder. Yield: 17% Rf (dichloromethane-ethyl acetate 98-2): 0.23
IR : vCO ester 1730 cm'1 ; vCO thioester 1671 cm"1 ; vCO amide 1645 cm"1 PF : 59.0 à 63.4°CIR: vCO ester 1730 cm '1 ; vCO thioester 1671 cm "1 ; vCO amide 1645 cm " 1 PF: 59.0 at 63.4 ° C
RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, CH3, J=6.5Hz) ; 1.26-1.37 (massif, 66H, -CH2) ; 1.58-1.63 (m, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 2.53 (t, 2H, -CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7.6Hz) ; 2.61-2.67 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-COS- et -CH2-CH2-S-CH2-COO-) ; 3.23 (s, 4H, CH2-S-CH2-CONH- et CH2-S-CH2-COO-) ; 3.24 (s, 2H, CH2-S-CH2- COS-) ; 3.50-3.57 (m, 1H, -0-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 3.63-3.72 (m, 1H, -0-CH2- CH-CH2-NHCO) ; 4.19-4.25 (m, 1 H, -0-CH2-CH-CH2-OCO) ; 3.63-3.72 (m, 1 H, - 0-CH2-CH-CH2-OCO) ; 5.19 (m, 1H, -0-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 7.20 (m, 1H, NHCO). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 940 (M+Na+)NMR (1 H, CDCl 3): 0.89 (t, 9H, CH 3, J = 6.5Hz); 1.26-1.37 (solid, 66H, -CH 2 ); 1.58-1.63 (m, 6H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CO-); 2.53 (t, 2H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CONH-, J = 7.6Hz); 2.61-2.67 (m, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -COS- and -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -COO-); 3.23 (s, 4H, CH 2 -S-CH 2 -CONH- and CH 2 -S-CH 2 -COO-); 3.24 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 - COS-); 3.50-3.57 (m, 1H, -0-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO); 3.63-3.72 (m, 1H, -0-CH 2 - CH-CH 2 -NHCO); 4.19-4.25 (m, 1H, -0-CH 2 -CH-CH 2 -OCO); 3.63-3.72 (m, 1H, - 0-CH 2 -CH-CH 2 -OCO); 5.19 (m, 1H, -0-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO); 7.20 (m, 1H, NHCO). MS (MALDI-TOF): M + 23 = 940 (M + Na + )
EXEMPLE 22 : Préparation du chlorhydrate .de 3-amino-2- tétradécylthioacétyloxy-1-tétradécylthioacé--ylthiopropaneEXAMPLE 22 Preparation of 3-amino-2-tetradecylthioacetyloxy-1-tetradecylthioaceous hydrochloride - ylthiopropane
Préparation du 1-tert-butyloxycarbonylamino-3-iodopropan-2-ol (exemple 22a) Le 1-[(fef£-butyloxycarbonyl)amino]propane-2,3-diol (exemple 17a) (3.88 g ; 20 mmol) est dissous dans le toluène (250 ml) avant d'ajouter Pimida∑ole (1.73 g ; 25 mmol), la triphénylphosphine (6.65 g ; 25 mmol) et l'iode (5.15 g ; 20 mmol) dans cet ordre. Le milieu reactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 17 heures et 0.5 équivalents d'imidazole, de triphénylphosphine et d'iode sont ajoutés. Après 21 heures de réaction, une solution saturée en sulfite de sodium est ajoutée jusqu'à décoloration totale du milieu reactionnel. Les phases sont décantées et la phase aqueuse est extraite 2 fois par du toluène. Les phases organiques regroupées sont lavées par une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées et le solvant évaporé. Le résidu obtenu (11.02 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5) pour donner le composé souhaité sous forme de pâte jaune qui est rapidement remis en réaction. Rendement : 41% Rf (dichlorométhane-méthanol 98-2) : 0.24Preparation of 1-tert-butyloxycarbonylamino-3-iodopropan-2-ol (example 22a) Le 1 - [(fef £ -butyloxycarbonyl) amino] propane-2,3-diol (example 17a) (3.88 g; 20 mmol) is dissolved in toluene (250 ml) before adding Pimida∑ole (1.73 g; 25 mmol), triphenylphosphine (6.65 g; 25 mmol) and iodine (5.15 g; 20 mmol) in this order. The reaction medium is left under stirring at room temperature for 17 hours and 0.5 equivalents of imidazole, triphenylphosphine and iodine are added. After 21 hours of reaction, a saturated solution of sodium sulfite is added until complete discoloration of the reaction medium. The phases are decanted and the aqueous phase is extracted twice with toluene. The combined organic phases are washed with a saturated aqueous sodium chloride solution, dried over magnesium sulfate, filtered and the solvent evaporated. The residue obtained (11.02 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane-ethyl acetate 95-5) to give the desired compound in the form of a yellow paste which is rapidly reacted. Yield: 41% Rf (dichloromethane-methanol 98-2): 0.24
IR : vNH amide 3387 cm"1 ; vCO carbamate 1678 cm"1 IR: vNH amide 3387 cm "1 ; vCO carbamate 1678 cm " 1
Préparation du 3-acétylthio-1-tert-butyloxycarbonylaminoprooan-2-ol (exemple 2MPreparation of 3-acetylthio-1-tert-butyloxycarbonylaminoprooan-2-ol (example 2M
Le 1-(fert-butyloxycarbonylamino)-3-iodopropan-2-ol (exemple 22a) (2 g ; 6.64 mmol) et le thioacétate de potassium (0.948 g ; 8.30 mmol) sont dissous dans l'acétone (30 ml) et le milieu est porté à reflux pendant 16 heures. Le solvant est évaporé sous vide. Le résidu obtenu est repris par de l'éther diéthylique puis filtré sur Célite® et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (1.69 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane-acétate d'éthyle 98-2) puis repurifié par flash chromatographie (éluant dichlorométhane) pour donner le composé souhaité sous forme d'huile jaune. Rendement : 27% Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5 ) : 0.311- (fert-butyloxycarbonylamino) -3-iodopropan-2-ol (example 22a) (2 g; 6.64 mmol) and potassium thioacetate (0.948 g; 8.30 mmol) are dissolved in acetone (30 ml) and the medium is brought to reflux for 16 hours. The solvent is evaporated in vacuo. The residue obtained is taken up in diethyl ether and then filtered through Celite ® and the filtrate was evaporated. The residue obtained (1.69 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane-ethyl acetate 98-2) then repurified by flash chromatography (eluent dichloromethane) to give the desired compound in the form of a yellow oil. Yield: 27% Rf (dichloromethane-ethyl acetate 95-5): 0.31
IR : vNH amide 3367 cm'1 ; vCO thioester 1744 cm"1 ; vCO carbamate 1697 cm"1 RMN (1H, CDCI3) : 1.26 (m, 9H, CH3 (boc)) ; 2.37 (s, 3H, COCH3) ; 3.04 (m, 1H, - NH-CH2-CH-CH2-S- ou -NHCH2-CH-CH2-S-) ; 3.24 (m, 1H, -NH-CH2-CH-CH2-S- ou -NHCH2-CH-CH2-S-) ; 3.30-3.41 (m, 2H, -NH-CH2-CH-CH2-S- ou -NHGH2- CH-GH2-S-) ; 4.86 (si, 1 H, OH) ; 4.96 (m, 1 H, -NH-GH2-GH-CH2-S-).IR: vNH amide 3367 cm -1 ; vCO thioester 1744 cm "1 ; vCO carbamate 1697 cm " 1 NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 1.26 (m, 9H, CH 3 (boc)); 2.37 (s, 3H, COCH 3 ); 3.04 (m, 1H, - NH-CH 2 -CH-CH 2 -S- or -NHCH 2 -CH-CH 2 -S-); 3.24 (m, 1H, -NH-CH 2 -CH-CH 2 -S- or -NHCH2-CH-CH2-S-); 3.30-3.41 (m, 2H, -NH-CH2-CH-CH2-S- or -NHGH 2 - CH-GH 2 -S-); 4.86 (si, 1H, OH); 4.96 (m, 1H, -NH-GH 2 -GH-CH 2 -S-).
Préparation du 1-tert-butyloxycarbonylamino-3-mercaptopropan-2-ol (exemplePreparation of 1-tert-butyloxycarbonylamino-3-mercaptopropan-2-ol (example
22c)22c)
A une solution de potasse à 20% (3.49 ml ; 12.31 mmol) dans le méthanol, désoxygénée par un courant d'azote, est ajouté le 3-acétylthio-1 -tert- butyloxycarbonylaminopropan-2-ol (exemple 22b) (0.307 g ; 1.23 mmol) dilué dans un minimum de méthanol (7 ml). Le milieu est maintenu sous azote et laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le milieu reactionnel est acidifié à pH6 par de l'acide acétique puis concentré à sec. Le résidu obtenu est repris par de l'eau est extrait par du dichlorométhane puis la phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et concentrée. Le résidu huileux obtenu est utilisé sans autre purification et immédiatement remis en réaction. Rendement : 78%To a 20% potassium solution (3.49 ml; 12.31 mmol) in methanol, deoxygenated by a stream of nitrogen, is added 3-acetylthio-1 -tert- butyloxycarbonylaminopropan-2-ol (example 22b) (0.307 g ; 1.23 mmol) diluted in a minimum of methanol (7 ml). The medium is kept under nitrogen and left stirring at room temperature for 20 hours. The reaction medium is acidified to pH6 with acetic acid and then concentrated to dryness. The residue obtained is taken up in water, extracted with dichloromethane and then the organic phase is dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated. The The oily residue obtained is used without further purification and immediately reacted. Yield: 78%
Rf (dichlorométhane-actétate d'éthyle) : 0.07Rf (dichloromethane-ethyl acetate): 0.07
Préparation du 1-tert-butyloxycarbonylamino-2-tétradécylthioacétyloxy-3- tétradécylthioacétylthiopropane (exemple 22d)Preparation of 1-tert-butyloxycarbonylamino-2-tetradecylthioacetyloxy-3-tetradecylthioacetylthiopropane (example 22d)
Le 1-(ferf-butyloxycarbonylamino)-3-mercaptopropan-2-ol (exemple 22c) (0.200 g ; 96 mmol) est dissous dans le dichlorométhane (50 ml) avant d'ajouter la dicyclohexylcarbodiimide (0.398 g ; 1.93 mmol), la dimethylaminopyridine (0.236 g ; 1.93 mmol) et l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1) (0.557 g ; 1.93 mmol). Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante pendant 20 heures. Le précipité de dicyclohexylurée est filtré, rincé au dichlorométhane et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (1.2 g) est purifié par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane) pour donner le composé souhaité sous forme de pâte blanche. Rendement : 47% Rf (dichlorométhane) : 0.26 IR : vNH amide 3314 cm"1 ; vGO ester, amide et thioester 1682 à 1744 cm"1 RMN (1H, GDGIs) : 0.89 (t, 6H, GH3, J=6.5Hz) ; 1.27 (massif, 40H, GH2) ; 1.45 (massif, 9H, GH3 (BOC)) ; 1.56-1.63 (m, 4H, -CH2-GH2-GH2-S-GH2-GO-) ; 2.65 (m, 4H, -CH2-GH2-S-GH2-CO-) ; 2.92 (s, 4H, -CH2-S-CH2-CO-) ; 2.96 (m, 4H, - CH2-S-CH2-CO-) ; 3.24-3.40 (m, 2H, -NH-CH2-GH-CH2-S- ou -NHCH2-CH-CH2- S-) ; 3.44-3.51 (m, 2H, -NH-CH2-CH-CH2-S- ou -NHCH2-CH-CH2-S-) ; 4.91 (m, 1H, -NH-CH2-CH-CH2-S-) ; 5.19 (m, 1 H, NHCO). SM (MALDI-TOF) : M+23 = 770 (M+Na+)1- (ferf-butyloxycarbonylamino) -3-mercaptopropan-2-ol (example 22c) (0.200 g; 96 mmol) is dissolved in dichloromethane (50 ml) before adding dicyclohexylcarbodiimide (0.398 g; 1.93 mmol), dimethylaminopyridine (0.236 g; 1.93 mmol) and tetradecylthioacetic acid (example 1) (0.557 g; 1.93 mmol). The mixture is left stirring at room temperature for 20 hours. The precipitate of dicyclohexylurea is filtered, rinsed with dichloromethane and the filtrate is evaporated. The residue obtained (1.2 g) is purified by chromatography on silica gel (eluent dichloromethane) to give the desired compound in the form of a white paste. Yield: 47% Rf (dichloromethane): 0.26 IR: vNH amide 3314 cm "1 ; vGO ester, amide and thioester 1682 to 1744 cm " 1 NMR ( 1 H, GDGIs): 0.89 (t, 6H, GH 3 , J = 6.5Hz); 1.27 (solid, 40H, GH 2 ); 1.45 (massif, 9H, GH 3 (BOC)); 1.56-1.63 (m, 4H, -CH 2 -GH 2 -GH 2 -S-GH 2 -GO-); 2.65 (m, 4H, -CH 2 -GH 2 -S-GH 2 -CO-); 2.92 (s, 4H, -CH 2 -S-CH 2 -CO-); 2.96 (m, 4H, - CH 2 -S-CH 2 -CO-); 3.24-3.40 (m, 2H, -NH-CH 2 -GH-CH 2 -S- or -NHCH 2 -CH-CH 2 - S-); 3.44-3.51 (m, 2H, -NH-CH 2 -CH-CH 2 -S- or -NHCH 2 -CH-CH 2 -S-); 4.91 (m, 1H, -NH-CH 2 -CH-CH 2 -S-); 5.19 (m, 1H, NHCO). MS (MALDI-TOF): M + 23 = 770 (M + Na + )
Préparation du chlorhydrate de 1-amino-2-tétradécylthioacétyloxy-3- tétradécylthioacétylthiopropane (exemple 22) Le 1 -(fert-butoxycarbonylamino)-2-tétradécylthioacétyloxy-3-tétradécylthioacétyl- thiopropane (exemple 22d) (300 mg ; 0.40 mmol) est dissous dans de l'éther diéthylique saturé en acide chlorhydrique gaz (70 ml) et le milieu reactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 72 heures. Le précipité formé est filtré, rincé par de l'éther diéthylique puis séché pour fournir le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 42% IR : vCO ester 1733 cm"1 ; vCO thioester 1692 cm"1 PF : 82°C (décomp)Preparation of 1-amino-2-tetradecylthioacetyloxy-3-tetradecylthioacetylthiopropane hydrochloride (example 22) Le 1 - (fert-butoxycarbonylamino) -2-tetradecylthioacetyloxy-3-tetradecylthioacetyl-thiopropane (example 22d) (300 mg; 0.4 mg); in diethyl ether saturated with hydrochloric acid gas (70 ml) and the reaction medium is left stirring at room temperature for 72 hours. The precipitate formed is filtered, rinsed with diethyl ether and then dried to provide the desired compound in the form of a white powder. Yield: 42% IR: vCO ester 1733 cm "1 ; vCO thioester 1692 cm " 1 PF: 82 ° C (decomp)
RMN (1H, CDCI3) : 0.86 (t, 6H, CH3, J=6.6Hz) ; 1.24 (massif, 44H, -CH2) ; 1.52 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 2.52-2.62 (m, 4H, -CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 3.07- 3.15 (massif, 4H, -S-CH2-CH-CH2-NH2) ; 3.40 (s, 2H, CH2-S-CH2-COO-) ; 3.61 (s, 2H, CH2-S-CH2-COS-) ; 5.12 (m, 1H, -S-CH2-CH-CH2-NH2) ; 8.01 (m, 3H, - NH2.HCI)NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 0.86 (t, 6H, CH 3 , J = 6.6 Hz); 1.24 (solid, 44H, -CH 2 ); 1.52 (m, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CO-); 2.52-2.62 (m, 4H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CO-); 3.07-3.15 (solid, 4H, -S-CH 2 -CH-CH 2 -NH 2 ); 3.40 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -COO-); 3.61 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -COS-); 5.12 (m, 1H, -S-CH 2 -CH-CH 2 -NH 2 ); 8.01 (m, 3H, - NH 2 .HCI)
EXEMPLE 23 : Préparation de 1-tétradécylthioacétylamino-2- tétradécylthiacétyloxy-3-tétradécylthioacétylthiopropane Le chlorhydrate de 1-amino-2-tétradécylthioacétyloxy-3-tétradéçylthioacétyl- thiopropane (exemple 22) (100 mg ; 0.15 mmol) et l'acide tétradécylthioacétique (exemple 1 ) (63 mg ; 0.22 mmol) sont dissous dans le dichlorométhane (30 ml) à 0°C avant d'ajouter la triéthylamine (0.044 ml), la dicyclohexylcarbodiimide (60 mg ; 0.29 mmol) et l'hydroxybenzotriazole (30 rng ; 0.22 mmol). Le milieu reactionnel est laissé sous agitation à 0°C pendant 1 heure puis ramené à température ambiante pendant 48 heures. Le précipité de dicyclohexylurée est filtré et rincé par du dichlorométhane et le filtrat est évaporé. Le résidu obtenu (263 mg) est purifié par flash chromatographie (éluant dichlorométhane-acétate d'éthyle 98-2) pour donner le composé souhaité sous forme de poudre blanche. Rendement : 98%EXAMPLE 23 Preparation of 1-tetradecylthioacetylamino-2-tetradecylthiacetyloxy-3-tetradecylthioacetylthiopropane 1) (63 mg; 0.22 mmol) are dissolved in dichloromethane (30 ml) at 0 ° C before adding triethylamine (0.044 ml), dicyclohexylcarbodiimide (60 mg; 0.29 mmol) and hydroxybenzotriazole (30 rng; 0.22 mmol). The reaction medium is left stirring at 0 ° C for 1 hour and then brought to room temperature for 48 hours. The precipitate of dicyclohexylurea is filtered and rinsed with dichloromethane and the filtrate is evaporated. The residue obtained (263 mg) is purified by flash chromatography (eluent dichloromethane-ethyl acetate 98-2) to give the desired compound in the form of a white powder. Yield: 98%
Rf (dichlorométhane-acétate d'éthyle 95-5 ) : 0.38Rf (dichloromethane-ethyl acetate 95-5): 0.38
IR : vNH amide 3340 cm"1 ; vCO ester 1727 cm"1 ; vCO amide et thioester 1655 et 1669 cm"1 IR: vNH amide 3340 cm "1 ; vCO ester 1727 cm "1; vCO amide and thioester 1655 and 1669 cm "1
PF : 63.9 à 67.1°C RMN (1H, CDCI3) : 0.89 (t, 9H, CH3, J=6.2Hz) ; 1.26 (massif, 66H, -CH2) ; 1.54- 1.66 (m, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 2.52-2.67 (m, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CO-) ; 3.08 (m, 1 H, -S-CH2-CH-CH2-NHCO ou -S-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 3.21 (s, 2H, CH2-S-CH2-CONH-) ; 3.23 (s, 2H, CH2-S-CH2-COO-) ; 3.27 (m, 1 H, -S-CH2-CH- CH2-NHCO ou -S-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 3.43 (s, 2H, CH2-S-CH -COS-) ; 3.50 (m, 1H, -S-CH2-CH-CH2-NHCO ou -S-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 3.62 (m, 1 H, -S- CH2-CH-CH2-NHCO ou -S-CH2-CH-CH2-NHCO) ; 5.06 (m, 1 H, -COS-CH2-CH- CH2-NHCO) ; 7.24 (t, 1H, -NHCO, J=6.7Hz) SM (MALDI-TOF) : M+1 = 918 (M+H+) ; M+23 = 940 (M+Na+)MP: 63.9 at 67.1 ° C NMR ( 1 H, CDCI 3 ): 0.89 (t, 9H, CH 3 , J = 6.2Hz); 1.26 (solid, 66H, -CH 2 ); 1.54-1.66 (m, 6H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CO-); 2.52-2.67 (m, 6H, -CH 2 -CH 2 -S-CH 2 -CO-); 3.08 (m, 1H, -S-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO or -S-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO); 3.21 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -CONH-); 3.23 (s, 2H, CH 2 -S-CH 2 -COO-); 3.27 (m, 1H, -S-CH 2 -CH- CH 2 -NHCO or -S-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO); 3.43 (s, 2H, CH 2 -S-CH -COS-); 3.50 (m, 1H, -S-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO or -S-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO); 3.62 (m, 1H, -S- CH 2 -CH-CH 2 -NHCO or -S-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO); 5.06 (m, 1H, -COS-CH 2 -CH-CH 2 -NHCO); 7.24 (t, 1H, -NHCO, J = 6.7Hz) SM (MALDI-TOF): M + 1 = 918 (M + H + ); M + 23 = 940 (M + Na + )
EXEMPLE 24 : Méthode de préparation des composés selon l'invention.EXAMPLE 24 Method of preparing the compounds according to the invention.
Pour conduire les expériences in vitro décrites dans les exemples suivants, les composés selon l'invention ont été préparés sous forme d'une émulsion telle que décrite ci-après.To carry out the in vitro experiments described in the following examples, the compounds according to the invention were prepared in the form of an emulsion as described below.
L'émulsion comprenant un composé selon l'invention et de la phosphatidylcholine (PC) est préparée selon le protocole de Spooner et al. (Spooner, Clark et al. 1988). Le composé selon l'invention est mélangé à la PC selon un rapport 4:1 (w/w) dans du chloroforme, la mixture est séchée sous azote, puis évaporée toute la nuit sous vide, la poudre qui en résulte est reprise par 0,16 M de chlorure de potassium contenant 0,01 M d'EDTA puis les particules lipidiques sont dispersées par ultra-sons pendant 30 minutes à 37°C. Les liposomes formés sont ensuite séparés par ultracentrifugation (ultracentrifugeuse XL 80, Beckman Goulter, Viliepinte, France) à 25000 tr/m pendant 45 minutes pour récupérer les liposomes dont la taille est supérieure à 100 nm et se rapproche de celle des chylomicrons. Des liposomes constitués uniquement de PC sont préparés en parallèle pour servir de témoin négatif. La composition des liposomes en composés selon l'invention est estimée en utilisant le kit de dosage enzymocolorimétrique des triglycérides. Le dosage est effectué contre une gamme standard, préparée grâce au calibrateur des lipides CFAS (Réf. N° 759350, Boehringer Mannheim GmbH, Allemagne). La gamme standard a été construite de 16 à 500 μg/ml. 100 μl de chaque dilution d'échantillon ou de gamme étalon sont déposés par puits d'une plaque de titration (96 puits). Ensuite 200 μl de réactifs triglycérides (Réf. 701912, Boehringer Mannheim GmbH, Allemagne) sont rajoutés dans chaque puits, et l'ensemble de la plaque est incubé pendant 30 min. à 37°C. La lecture des Densités Optiques (DO) est effectuée à 492 nm sur le spectrophotomètre. Les concentrations en triglycérides de chaque échantillon sont calculées après construction de la courbe étalon selon une fonction linéaire y=ax+b, où y représente les DO et x les concentrations en triglycérides.The emulsion comprising a compound according to the invention and phosphatidylcholine (PC) is prepared according to the protocol of Spooner et al. (Spooner, Clark et al. 1988). The compound according to the invention is mixed with the PC in a 4: 1 ratio (w / w) in chloroform, the mixture is dried under nitrogen, then evaporated overnight under vacuum, the resulting powder is taken up by 0 , 16 M of potassium chloride containing 0.01 M of EDTA then the lipid particles are dispersed by ultrasound for 30 minutes at 37 ° C. The liposomes formed are then separated by ultracentrifugation (ultracentrifuge XL 80, Beckman Goulter, Viliepinte, France) at 25,000 rpm for 45 minutes to recover liposomes whose size is greater than 100 nm and approaches that of chylomicrons. Liposomes consisting solely of PC are prepared in parallel to serve as a negative control. The composition of the liposomes in compounds according to the invention is estimated using the enzymocolorimetric assay kit for triglycerides. The assay is performed against a standard range, prepared using the CFAS lipid calibrator (Ref. No. 759350, Boehringer Mannheim GmbH, Germany). The standard range was built from 16 to 500 μg / ml. 100 μl of each dilution of sample or standard range are deposited per well of a plate of titration (96 wells). Then 200 μl of triglyceride reagents (Ref. 701912, Boehringer Mannheim GmbH, Germany) are added to each well, and the entire plate is incubated for 30 min. at 37 ° C. The optical densities (OD) are read at 492 nm on the spectrophotometer. The triglyceride concentrations of each sample are calculated after construction of the standard curve according to a linear function y = ax + b, where y represents the OD and x the triglyceride concentrations.
Les liposomes contenant les composés selon l'invention, ainsi préparés sont utilisés dans les expériences in vitro décrites dans les exemples suivants.The liposomes containing the compounds according to the invention, thus prepared are used in the in vitro experiments described in the following examples.
EXEMPLE 25 : Evaluation de l'activation des PPARs in vitroEXAMPLE 25 Evaluation of the activation of PPARs in vitro
Les composés selon l'invention testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23 ci-dessus.The compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
Les récepteurs nucléaires membres de la sous-famille des PPARs qui sont activés par deux classes majeures de composés pharmaceutiques, les fibrates et les glitazones, abondamment utilisées en clinique humaine pour le traitement des dyslipidemies et du diabète, jouent un rôle important dans l'homeostasie lipidique et glucidique. Les données expérimentales suivantes montrent que les composés selon l'invention activent PPAR α in vitro.The nuclear receptors members of the PPAR subfamily which are activated by two major classes of pharmaceutical compounds, fibrates and glitazones, which are widely used in human clinics for the treatment of dyslipidemias and diabetes, play an important role in homeostasis. lipid and carbohydrate. The following experimental data show that the compounds according to the invention activate PPAR α in vitro.
L'activation des PPARs est évaluée in vitro dans des lignées de type fibroblastique RK13 ou dans une lignée hépatocytaire HepG2, par la mesure de l'activité transcriptionnelle de chimères constituées du domaine de liaison à l'ADN du facteur de transcription Gal4 de levure et du domaine de liaison du ligand des différents PPARs. L'exemple présenté ci-dessous est donné pour les cellules HepG2.The activation of PPARs is evaluated in vitro in lines of fibroblastic type RK13 or in a hepatocyte line HepG2, by measuring the transcriptional activity of chimeras consisting of the DNA binding domain of the yeast transcription factor Gal4 and of the ligand binding domain of the different PPARs. The example presented below is given for HepG2 cells.
A-/Protocoles de cultureA- / Culture protocols
Les cellules HepG2 proviennent de l'ECACC (Porton Down, UK) et sont cultivées dans du milieu DMEM supplémenté de 10% vol/vol sérum de veau foetal, 100 U/ml pénicilline (Gibco, Paisley, UK) et 2 mM L-Glutamine (Gibco, Paisley, UK). Le milieu de culture est changé tous les deux jours. Les cellules sont conservées à 37°C dans une atmosphère humide contenant 5% de C02 et 95% d'air.HepG2 cells come from ECACC (Porton Down, UK) and are cultured in DMEM medium supplemented with 10% vol / vol calf serum fetal, 100 U / ml penicillin (Gibco, Paisley, UK) and 2 mM L-Glutamine (Gibco, Paisley, UK). The culture medium is changed every two days. The cells are stored at 37 ° C. in a humid atmosphere containing 5% of CO 2 and 95% of air.
B-/Description des plasmides utilisés en transfectionB- / Description of the plasmids used in transfection
Les plasmides pG5TkpGL3, pRL-CMV, pGal4-hPPAR α, pGal4-hPPAR γ et pGal4-f ont été décrits par Raspé et al. (Raspe, Madsen et al. 1999). Les constructions pGal4-mPPAR α et pGal4-hPPAR β sont obtenues par clonage dans le vecteur pGal4-f de fragments d'ADN amplifiés par PCR correspondants aux domaines DEF des récepteurs nucléaires PPAR α de souris et PPAR αhumain respectivement.The plasmids pG5TkpGL3, pRL-CMV, pGal4-hPPAR α, pGal4-hPPAR γ and pGal4-f have been described by Raspé et al. (Raspe, Madsen et al. 1999). The constructions pGal4-mPPAR α and pGal4-hPPAR β are obtained by cloning into the vector pGal4-f DNA fragments amplified by PCR corresponding to the DEF domains of the nuclear receptors PPAR α from mice and PPAR α human respectively.
G-/Transfection Les cellules HepG2 sont ensemencées dans des boîtes de culture de 24 puits à raison de 5x104 cellules/puits, sont transfectées pendant 2 heures avec le plasmide rapporteur pG5TkpGL3 (50 ng/puits), les vecteurs d'expression pGal4-f pGal4-mPPAR α, pGal4-hPPAR α, pGal4-hPPAR γ ou pGal4-hPPAR β (100 ng/puits) et le vecteur de contrôle de l'efficacité de transfection pRL-CMV (1 ng/puits) suivant le protocole décrit précédemment (Raspe, Madsen et al. 1999) et incubées pendant 36 heures avec les composés testés. A l'issue de l'expérience, les cellules sont lysées (Gibco, Paisley, UK) et les activités luciférase sont déterminées à l'aide du kit de dosage Dual-Luciferase™ Reporter Assay System (Promega, Madison, Wl, USA) selon la notice du fournisseur. Le contenu en protéines des extraits cellulaires est ensuite évalué à l'aide du kit de dosage Bio-Rad Protein Assay (Bio-Rad, Munich, Allemagne) selon la notice du fournisseur.G- / Transfection The HepG2 cells are seeded in 24-well culture dishes at the rate of 5 × 10 4 cells / well, are transfected for 2 hours with the reporter plasmid pG5TkpGL3 (50 ng / well), the expression vectors pGal4- f pGal4-mPPAR α, pGal4-hPPAR α, pGal4-hPPAR γ or pGal4-hPPAR β (100 ng / well) and the transfection efficiency control vector pRL-CMV (1 ng / well) according to the protocol described previously (Raspe, Madsen et al. 1999) and incubated for 36 hours with the test compounds. At the end of the experiment, the cells are lysed (Gibco, Paisley, UK) and the luciferase activities are determined using the Dual-Luciferase ™ Reporter Assay System assay kit (Promega, Madison, Wl, USA) according to the supplier's instructions. The protein content of the cell extracts is then evaluated using the Bio-Rad Protein Assay assay kit (Bio-Rad, Munich, Germany) according to the supplier's instructions.
Les inventeurs mettent en évidence une augmentation de l'activité luciférase dans les cellules traitées avec les composés selon l'invention et transfectées avec le plasmide pGal4-hPPAR α. Cette induction de l'activité luciférase indique que les composés selon l'invention, sont des activateurs de PPAR α. Un exemple de résultats obtenus avec des composés selon l'invention est présenté dans la figure 2.The inventors demonstrate an increase in luciferase activity in cells treated with the compounds according to the invention and transfected with the plasmid pGal4-hPPAR α. This induction of luciferase activity indicates that the compounds according to the invention are activators of PPAR α. A example of results obtained with compounds according to the invention is presented in FIG. 2.
Figure 2 : les cellules HepG2, transfectées avec les plasmides du système Gal4/PPAR α, sont incubées avec différentes concentrations (5, 15, 50 et 100 μM) des composés selon l'invention (Ex 2, Ex 4, Ex 5, Ex 6, Ex 11 ) pendant 24h ainsi qu'avec différentes concentrations de véhicule (PC) notées 1 , 2, 3, 4 à titre de contrôles respectivement pour les concentrations 5, 15, 50 et 100 μM des composés selon l'invention (suivant le rapport 4 :1 w/w décrit dans l'exemple 24) (Méthode de préparation des composés selon l'invention). Les résultats sont représentés par le facteur d'induction (signal luminescent des cellules traitées divisé par le signal luminescent des cellules non traitées) en fonction des différents traitements. Plus le facteur d'induction est élevé, meilleure est la propriété d'agoniste pour PPAR α. Les résultats montrent que le composé selon l'invention Ex 2 favorise l'induction du signal luminescent d'un facteur maximal de 19,8 à 50 μM, de 19,2 à 100 μM, de 7,7 à 15 μM et de 1,5 à 5 μM, Le composé selon l'invention Ex 5 induit également une augmentation du facteur d'induction avec un effet dose de 10,5 à 100 μM, 7 à 50 μM, 2,5 à 15 μM et 1 ,2 à 5 μM. Le composé selon l'invention Ex 6 induit aussi une augmentation du signal luminescent, révélateur d'une activité sur le récepteur nucléaire PPAR . Les facteurs d'induction pour le composé Ex 6 sont de 14,5 à 100 μM, 9,6 à 50 μM, 2,2 à 15 μM et 1,1 à 5 μM. En revanche lorsque les cellules sont incubées avec le véhicule (liposome de PG) aucune induction significative n'est observée. Ces résultats montrent que les composés selon l'invention testés possèdent, de manière significative, la propriété de ligand vis-à-vis de PPAR αet permettent aussi son activation au niveau transcriptionnel.Figure 2: HepG2 cells, transfected with the plasmids of the Gal4 / PPAR α system, are incubated with different concentrations (5, 15, 50 and 100 μM) of the compounds according to the invention (Ex 2, Ex 4, Ex 5, Ex 6, Ex 11) for 24 hours as well as with different vehicle concentrations (PC) noted 1, 2, 3, 4 as controls respectively for the concentrations 5, 15, 50 and 100 μM of the compounds according to the invention (according to the 4: 1 w / w ratio described in Example 24) (Method for preparing the compounds according to the invention). The results are represented by the induction factor (luminescent signal of the treated cells divided by the luminescent signal of the untreated cells) according to the different treatments. The higher the induction factor, the better the agonist property for PPAR α. The results show that the compound according to the invention Ex 2 promotes the induction of the luminescent signal by a maximum factor of 19.8 to 50 μM, from 19.2 to 100 μM, from 7.7 to 15 μM and from 1 , 5 to 5 μM, The compound according to the invention Ex 5 also induces an increase in the induction factor with a dose effect of 10.5 to 100 μM, 7 to 50 μM, 2.5 to 15 μM and 1, 2 at 5 μM. The compound according to the invention Ex 6 also induces an increase in the luminescent signal, revealing an activity on the nuclear receptor PPAR. The induction factors for compound Ex 6 are 14.5 to 100 μM, 9.6 to 50 μM, 2.2 to 15 μM and 1.1 to 5 μM. On the other hand, when the cells are incubated with the vehicle (PG liposome), no significant induction is observed. These results show that the compounds according to the invention tested possess, significantly, the property of ligand with respect to PPAR α and also allow its activation at the transcriptional level.
D-/ Analyse des ARND- / RNA analysis
Les ARN messagers sont extraits des cellules HepG2 à l'aide des réactifs du kit Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene, France) suivant les instructions du fournisseur, dosés par spectrophotometrie et quantifiés par RT- PCR semi-quantitative ou quantitative à l'aide du kit Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green I kit (Hoffman-La Roche, Bâle, Suisse) sur un appareil Light Cycler System (Hoffman-La Roche, Bâle, Suisse). Des paires d'amorces spécifiques des gènes ACO et Apo Al, cibles de PPAR α sont utilisées comme sondes. Des paires d'amorces spécifiques des gènes 36B4, beta-actine et GAPDH sont utilisées comme sondes témoins (Cf. tableau I ci-dessous).The messenger RNAs are extracted from the HepG2 cells using the reagents of the Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene, France) according to the supplier's instructions, assayed by spectrophotometry and quantified by semi-quantitative or quantitative RT-PCR at 1 using the Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green I kit (Hoffman-La Roche, Basel, Switzerland) on a Light device Cycler System (Hoffman-La Roche, Basel, Switzerland). Pairs of primers specific to the ACO and Apo A1 genes, targets of PPAR α are used as probes. Pairs of specific primers of the 36B4, beta-actin and GAPDH genes are used as control probes (see table I below).
Les résultats obtenus confirment que les composés testés sont capables d'activer très fortement le récepteur nucléaire PPAR et (résultats non montrés).The results obtained confirm that the compounds tested are capable of very strongly activating the nuclear receptor PPAR and (results not shown).
EXEMPLE 26 : Evaluation des effets sur le métabolisme lipidique in vivoEXAMPLE 26 Evaluation of the Effects on Lipid Metabolism in Vivo
Les composés selon l'invention testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23 ci-dessus.The compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
Les fibrates, abondamment utilisés en clinique humaine pour le traitement des dyslipidemies impliquées dans le développement de l'athérosclérose, une des principales causes de mortalité et de morbidité dans les sociétés occidentales, sont de puissants activateurs du récepteur nucléaire PPARα. Celui-ci régule l'expression de gènes impliqués dans le transport (apolipoprotéines telles que Apo Al, ApoAII et ApoC-lll, transporteurs membranaires tels que FAT (Fatty Acid Tansporter)) ou le catabolisme des lipides (ACO (Acyl CoA Oxydase), CPT-I ou CPT-II (Carnitine Palmitoyl Transferase I et II)). Un traitement par les activateurs de PPARα se traduit donc chez le rongeur par une diminution des taux circulants de cholestérol et de triglycérides.Fibrates, abundantly used in human clinics for the treatment of dyslipidemias involved in the development of atherosclerosis, one of the main causes of mortality and morbidity in Western societies, are powerful activators of the nuclear receptor PPARα. This regulates the expression of genes involved in transport (apolipoproteins such as Apo Al, ApoAII and ApoC-III, membrane transporters such as FAT (Fatty Acid Tansporter)) or lipid catabolism (ACO (Acyl CoA Oxydase), CPT-I or CPT-II (Carnitine Palmitoyl Transferase I and II)). Treatment with PPARα activators therefore results in rodents by a decrease in circulating cholesterol and triglyceride levels.
Les protocoles suivants permettent de mettre en évidence une baisse du taux de triglycérides et du taux de cholestérol circulant, ainsi que l'intérêt des composés selon l'invention dans le cadre de la prévention et/ou du traitement des maladies cardio-vasculaires.The following protocols make it possible to demonstrate a drop in the triglyceride level and in the circulating cholesterol level, as well as the advantage of the compounds according to the invention in the context of the prevention and / or treatment of cardiovascular diseases.
1 ) Traitement des animaux1) Treatment of animals
Des rats Sprague-Dawley de 200 à 230 g (Charles River, L'ArbresIe, France) sont maintenus sous un cycle lumière/obscurité de 12 heures à une température constante de 20 ± 3°C. Après une acclimatation d'une semaine, les rats sont pesés et rassemblés par groupes de 8 animaux sélectionnés de telle sorte que la distribution de taux plasmatiques de cholestérol et de triglycérides soient uniformes. Les composés testés sont suspendus dans un véhicule (carboxyméthylcellulose 0,5% (CMC) et Tween 0,1%) et administrés par gavage intra-gastrique, à raison d'une fois par jour pendant 15 jours aux doses indiquées. Les animaux ont un accès libre à l'eau et à la nourriture. A l'issue de l'expérience les animaux sont pesés et sacrifiés sous anesthésie après un jeûne de 5 heures. Le sang est collecté sur EDTA. Le plasma est préparé par centrifugation à 3000 tours/minutes pendant 20 minutes. Des échantillons de foie sont prélevés et conservés congelés dans l'azote liquide pour analyse ultérieure. La carboxyméthylcellulose utilisée est un sel de sodium de carboj yméthylcellulose de viscosité moyenne (R f. C4888, Sigma-aldrich, France). Le Tween utilisé est le Polyoxyethylenesorbitan Monooleate (Tween 80, Réf. P8074, Sigma-aldrich, France)Sprague-Dawley rats weighing 200 to 230 g (Charles River, L'ArbresIe, France) are maintained under a 12 hour light / dark cycle at a constant temperature of 20 ± 3 ° C. After a week's acclimatization, the rats are weighed and grouped into groups of 8 animals selected so that the distribution of plasma cholesterol and triglyceride levels are uniform. The test compounds are suspended in a vehicle (0.5% carboxymethylcellulose (CMC) and 0.1% Tween) and administered by intragastric gavage, once a day for 15 days at the doses indicated. Animals have free access to water and food. At the end of the experiment, the animals are weighed and sacrificed under anesthesia after a 5 hour fast. Blood is collected on EDTA. The plasma is prepared by centrifugation at 3000 rpm for 20 minutes. Liver samples are taken and stored frozen in liquid nitrogen for further analysis. The carboxymethylcellulose used is a sodium salt of carbojmethylcellulose of medium viscosity (R f. C4888, Sigma-aldrich, France). The Tween used is Polyoxyethylenesorbitan Monooleate (Tween 80, Ref. P8074, Sigma-aldrich, France)
2) Mesure des lipides et apolipoprotéines sériques2) Measurement of serum lipids and apolipoproteins
Les concentrations plasmatiques des lipides (cholestérol total et triglycérides) sont mesurées par dosage colorimétrique (Bio-Mérieux, Marcy l'Etoile, France) selon les indications du fournisseur. Les concentrations plasmatiques des apolipoprotéines Ail, Al et OUI sont mesurées selon les méthodes décrites précédemment (Raspe, Madsen et al. 1999) et (Asset, Staels et al. 1999).The plasma lipid concentrations (total cholesterol and triglycerides) are measured by colorimetric determination (Bio-Mérieux, Marcy l'Etoile, France) according to the supplier's instructions. The plasma concentrations of the apolipoproteins Ail, Al and OUI are measured according to the methods described above (Raspe, Madsen et al. 1999) and (Asset, Staels et al. 1999).
Pour séparer les lipoprotéines selon leur taille, 300 μL de plasma sont injectés sur une colonne Sepharose 6HR 10/30 (Pharmacia, Uppsala, Suède) et élues à flux constant (0,2 ml/minute) avec du PBS (pH 7,2). La densité optique de l'effluent est enregistrée à 280 nm. L'effluent est collecté par fraction de 0,3 ml. Les concentrations de lipides dans les différentes fractions sont mesurées par dosage colorimétrique (Bio-Mérieux, Marcy l'Etoile, France) selon les indications du fournisseur.To separate the lipoproteins according to their size, 300 μL of plasma are injected into a Sepharose 6HR 10/30 column (Pharmacia, Uppsala, Sweden) and eluted at constant flow (0.2 ml / minute) with PBS (pH 7.2). The optical density of the effluent is recorded at 280 nm. The effluent is collected in 0.3 ml fraction. The lipid concentrations in the different fractions are measured by colorimetric assay (Bio-Mérieux, Marcy l'Etoile, France) according to the supplier's instructions.
Les résultats obtenus sont présentés dans les figures 3A et 3B. Sur la figure 3A sont représentés les effets du traitement de rats Sprague- Dawley avec le composé selon l'invention de l'exemple 11 (300 mg/kg/j) sur le taux plasmatique de cholestérol total. La figue 3A montre que le taux de cholestérol total plasmatique est diminué par le traitement des animaux avec le composé selon l'invention de l'exemple 11.The results obtained are presented in Figures 3A and 3B. In FIG. 3A are shown the effects of the treatment of Sprague-Dawley rats with the compound according to the invention of Example 11 (300 mg / kg / day) on the plasma level of total cholesterol. Fig. 3A shows that the total plasma cholesterol level is reduced by treating the animals with the compound according to the invention of Example 11.
Sur la figure 3B sont représentés les effets du traitement de rats Sprague- Dawley avec le composé selon l'invention de l'exemple 11 (300 mg/kg/j) sur le taux plasmatique de triglycérides. La figure 3B montre que le taux de triglycérides plasmatiques est diminué par le traitement des animaux avec le composé selon l'invention de l'exemple 11.In FIG. 3B are shown the effects of the treatment of Sprague-Dawley rats with the compound according to the invention of Example 11 (300 mg / kg / day) on the plasma triglyceride level. FIG. 3B shows that the plasma triglyceride level is reduced by treating the animals with the compound according to the invention of example 11.
Pour séparer les lipoprotéines selon leur taille, 300 μL de plasma sont injectés sur une colonne Sepharose 6HR 10/30 (Pharmacia, Uppsala, Suède) et élues à flux constant (0,2 ml/minute) avec du PBS (pH 7,2). La densité optique de l'effluent est enregistrée à 280 nm. L'effluent est collecté par fraction de 0,3 ml. Les concentrations de lipides dans les différentes fractions sont mesurées par dosage colorimétrique (Bio-Mérieux, Marcy l'Etoile, France) selon les indications du fournisseur. Les résultats obtenus confirment les effets in vivo des composés selon l'invention. En outre, on observe une diminution du cholestérol dans les différentes classes de lipoparticules particulièrement les particules de grande taille (VLDL) et les particules de petite taille (HDL). On observe de plus une distribution typique des triglycérides principalement localisés dans une population de lipoparticules de grande taille. La concentration en triglycérides y est nettement diminuée. Cette diminution est caractéristique des effets des activateurs de PPAR α. 3) Analyse des ARNTo separate the lipoproteins according to their size, 300 μL of plasma are injected into a Sepharose 6HR 10/30 column (Pharmacia, Uppsala, Sweden) and eluted at constant flow (0.2 ml / minute) with PBS (pH 7.2 ). The optical density of the effluent is recorded at 280 nm. The effluent is collected in 0.3 ml fraction. The lipid concentrations in the different fractions are measured by colorimetric assay (Bio-Mérieux, Marcy l'Etoile, France) according to the supplier's instructions. The results obtained confirm the in vivo effects of the compounds according to the invention. In addition, a decrease in cholesterol is observed in the different classes of lipoparticles, in particular large particles (VLDL) and small particles (HDL). We also observe a typical distribution of triglycerides mainly located in a population of large lipoparticles. The triglyceride concentration is clearly reduced there. This decrease is characteristic of the effects of activators of PPAR α. 3) Analysis of RNAs
L'ARN total est isolé des fragments de foie par extraction à l'aide du mélange thiocyanate de guanidine/phénol acide/chloroforme suivant le protocole décrit précédemment (Raspe, Madsen et al. 1999). Les ARN messagers sont quantifiés par RT-PCR semi-quantitative ou quantitative à l'aide du kit Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green I kit (Hoffman-La Roche, Bâle, Suisse) sur un appareil Light Cycler System (Hoffman-La Roche, Bâle, Suisse). Des paires d'amorces spécifiques des gènes ACO, Apo OUI, Apo Al, CPT-I et CPT-II sont utilisées comme sondes. Des paires d'amorces spécifiques des gènes 36B4, D-actine et GAPDH sont utilisées comme sondes témoins.Total RNA is isolated from the liver fragments by extraction using the guanidine thiocyanate / acid phenol / chloroform mixture according to the protocol described above (Raspe, Madsen et al. 1999). The messenger RNAs are quantified by semi-quantitative or quantitative RT-PCR using the Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green I kit (Hoffman-La Roche, Basel, Switzerland) on a Light Cycler System device (Hoffman-La Roche, Basel, Switzerland). Primer pairs specific to the ACO, Apo OUI, Apo Al, CPT-I and CPT-II genes are used as probes. Pairs of specific primers of the 36B4, D-actin and GAPDH genes are used as control probes.
Les inventeurs montrent ainsi que l'expression des gènes impliqués dans le transport ou le catabolisme des lipides augmente, ce qui confirme les résultats obtenus précédemment (activation des PPARs et diminution des taux plasmatiques de cholestérol et de triglycérides).The inventors thus show that the expression of the genes involved in the transport or catabolism of lipids increases, which confirms the results obtained previously (activation of PPARs and decrease in plasma cholesterol and triglyceride levels).
selon l'invention according to the invention
A-/Protection de l'oxydation des LDL par le cuivre :A- / Protection of LDL oxidation by copper:
L'oxydation des LDL est une modification importante et joue un rôle prépondérant dans la mise en place et le développement de l'athéroscléroseLDL oxidation is an important modification and plays a major role in the establishment and development of atherosclerosis
(Jurgens, Hoff et al. 1987). Le protocole suivant permet la mise en évidence des propriétés antioxydantes des composés. Sauf mention différente, les réactifs proviennent de chez Sigma (St Quentin, France).(Jurgens, Hoff et al. 1987). The following protocol makes it possible to demonstrate the antioxidant properties of the compounds. Unless otherwise stated, the reagents come from Sigma (St Quentin, France).
Les LDL sont préparés suivant la méthode décrite par Lebeau et al. (Lebeau, Furman et al. 2000). Les solutions de composés à tester sont préparées à 10"2 M dans de l'éthanol et diluées dans du PBS pour avoir des concentrations finales allant de 0,1 à 100 μM pour une concentration totale d'éthanol de 1% (v/v).The LDLs are prepared according to the method described by Lebeau et al. (Lebeau, Furman et al. 2000). The solutions of test compounds are prepared at 10 "2 M in ethanol and diluted in PBS to have final concentrations ranging from 0.1 to 100 μM for a total ethanol concentration of 1% (v / v ).
Avant l'oxydation, l'EDTA est retiré de la préparation de LDL par dialyse. L'oxydation a ensuite lieu à 30°C en ajoutant 100 μl d'une solution à 16,6 μM de sulfate de cuivre à 800 μL de LDL (125 μg de protéines/ml) et 100 μl d'une solution du composé à tester. La formation de diènes, l'espèce à observer, se mesure par densité optique à 234 nm dans les échantillons traités avec les composés en présence ou en absence de cuivre . La mesure de la densité optique à 234 nm est réalisée toutes les 10 minutes pendant 8 heures à l'aide d'un spectrophotomètre thermostaté (Kontron Uvikon 930). Les analyses sont réalisées en triplicata. Nous considérons que les composés ont une activité antioxydante lorsqu'ils induisent un décalage de phase par rapport à l'échantillon témoin. Les inventeurs mettent en évidence que les composés selon l'invention retardent l'oxydation des LDL (induite par le cuivre), ceci indiquant que les composés selon l'invention possèdent un caractère antioxydant intrinsèque. Un exemple de résultats obtenus avec des composés selon l'invention est présenté dans la figure 4.Before oxidation, EDTA is removed from the LDL preparation by dialysis. The oxidation then takes place at 30 ° C. by adding 100 μl of a solution with 16.6 μM of copper sulphate to 800 μL of LDL (125 μg of proteins / ml) and 100 μl of a solution of the compound to test. The formation of dienes, the species to be observed, is measured by optical density at 234 nm in the samples treated with the compounds in the presence or absence of copper. The measurement of the optical density at 234 nm is carried out every 10 minutes for 8 hours using a thermostated spectrophotometer (Kontron Uvikon 930). The analyzes are carried out in triplicate. We consider that the compounds have antioxidant activity when they induce a phase shift compared to the control sample. The inventors demonstrate that the compounds according to the invention delay the oxidation of LDL (induced by copper), this indicating that the compounds according to the invention have an intrinsic antioxidant character. An example of results obtained with compounds according to the invention is presented in FIG. 4.
La figure 4 montre que les composés selon l'invention, Ex 2, 4, 5, 6 et 11 , possèdent des propriétés antioxydantes intrinsèques et favorisent également le ralentissement de la vitesse d'oxydation des LDL par le cuivre. En effet, ils induisent un décalage de la lag phase, celle-ci étant retardée lors du traitement des cellules par les composés selon l'invention de 13,4% pour l'exemple 2 jusqu'à 34,3% pour l'exemple 4 (voir figure 4A). Les composés selon l'invention ne semblent pas modifier la vitesse d'oxydation (voir figure 4B) ni la quantité de diènes formés (voir figure 4C).FIG. 4 shows that the compounds according to the invention, Ex 2, 4, 5, 6 and 11, have intrinsic antioxidant properties and also promote the slowing down of the rate of oxidation of LDL by copper. In fact, they induce a lag in the phase lag, this lag being delayed during the treatment of the cells with the compounds according to the invention from 13.4% for example 2 to 34.3% for example 4 (see Figure 4A). The compounds according to the invention do not seem to modify the oxidation rate (see FIG. 4B) or the quantity of dienes formed (see FIG. 4C).
B-/Evaluation de la protection conférée par les composés selon l'invention vis-à-vis de la peroxydation lipidique : La mesure de l'oxydation des LDL est réalisée par la méthode des TBARS (Thiobarbituric Acid Reactive Substances).B- / Evaluation of the protection conferred by the compounds according to the invention with respect to lipid peroxidation: LDL oxidation is measured by the TBARS (Thiobarbituric Acid Reactive Substances) method.
Selon le même principe que celui décrit précédemment, les LDL sont oxydés avec du sulfate de cuivre et la peroxydation lipidique est déterminée de la manière suivante :According to the same principle as that described above, the LDLs are oxidized with copper sulphate and the lipid peroxidation is determined as follows:
Les TBARS sont mesurés à l'aide d'une méthode spectrophotométrique, l'hydroperoxydation lipidique est mesurée en utilisant l'oxydation peroxyde-lipide dépendante de l'iodide en iodine. Les résultats sont exprimés en nmol de malonodialdehyde (MDA) ou en nmol d'hydroperoxyde par mg de protéines. Les résultats obtenus en mesurant l'inhibition de la formation de diènes conjugués, sont confirmés par les expériences de mesure de peroxydation lipidique des LDL. Les composés selon l'invention protègent également de manière efficace les LDL contre la peroxydation lipidique induite par le cuivre (agent oxydant).TBARS are measured using a spectrophotometric method, lipid hydroperoxidation is measured using peroxide-lipid oxidation dependent on iodide to iodine. The results are expressed in nmol of malonodialdehyde (MDA) or in nmol of hydroperoxide per mg of proteins. The results obtained by measuring the inhibition of the formation of conjugated dienes are confirmed by the experiments for measuring lipid peroxidation of LDL. The compounds according to the invention also effectively protect LDL against lipid peroxidation induced by copper (oxidizing agent).
Exemple 28 : Mesure des propriétés antioxydantes des composés selon l'invention sur des cultures de cellulesExample 28 Measurement of the Antioxidant Properties of the Compounds According to the Invention on Cell Cultures
A-/Protocole de culture :A- / Culture protocol:
Les lignées cellulaires utilisées pour ce type d'expériences sont de type neuronales, neuroblastomes (humains) et cellules PC12 (rat). Les cellules PC12 ont été préparées à partir d'un pheochromoeytome de rat et sont caractérisées par Greene et Tischler (Greene and Tischler 1976). Ces cellules sont couramment utilisées pour des études de différenciation neuronale, transduction du signal et mort neuronale. Les cellules PC12 sont cultivées comme précédemment décrit (Farinelli, Park et al. 1996), dans du milieu complet RPMI (Invitrogen) complémenté avec 10% de sérum de cheval et 5% de sérum de veau fœtal. Des cultures (primaires) de cellules endothéliales et de muscles lisses sont également utilisées. Les cellules sont commandées chez Promocell (Promocell GmBH, Heidelberg) et sont cultivées selon les indications du fournisseur. Les cellules sont traitées avec différentes doses de composés selon l'invention de 5 à 100 μM pendant 24 heures. Les cellules sont alors récupérées et l'augmentation de l'expression des gènes d'intérêt est évaluée par PCR quantitative.The cell lines used for this type of experiment are of the neuronal, neuroblastoma (human) and PC12 (rat) cells type. PC12 cells were prepared from a rat pheochromoeytome and are characterized by Greene and Tischler (Greene and Tischler 1976). These cells are commonly used for studies of neuronal differentiation, signal transduction and neuronal death. The PC12 cells are cultured as previously described (Farinelli, Park et al. 1996), in complete RPMI medium (Invitrogen) supplemented with 10% horse serum and 5% fetal calf serum. (Primary) cultures of endothelial cells and smooth muscles are also used. The cells are ordered from Promocell (Promocell GmBH, Heidelberg) and are cultured according to the supplier's instructions. The cells are treated with different doses of compounds according to the invention from 5 to 100 μM for 24 hours. The cells are then recovered and the increase in the expression of the genes of interest is evaluated by quantitative PCR.
B-/Mesure des ARMm :B- / Measurement of ARMm:
Les ARNm sont extraits des cellules en culture traitées ou non avec les composés selon l'invention. L'extraction est réalisée à l'aide des réactifs du kit Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene, France) selon les indications du fournisseur. Les ARNm sont ensuite dosés par spectrométrie et quantifiés par RT-PCR quantitative à l'aide du kit Light Cycler Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche) sur un appareil Light Cycler System (Roche, France). Des paires d'amorces spécifiques des gènes de la Super Oxyde Dismutase (SOD), de la Catalase et de la Glutathion Peroxydase (GPx), enzymes anti-oxydantes, sont utilisées comme sondes. Des paires d'amorces spécifiques des gènes β- actine et cyclophiline sont utilisées comme sondes témoin.The mRNAs are extracted from cells in culture treated or not with the compounds according to the invention. The extraction is carried out using reagents from the Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene, France) according to the supplier's instructions. The mRNAs are then assayed by spectrometry and quantified by quantitative RT-PCR using the Light Cycler Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche) on a Light Cycler System device (Roche, France). Primer pairs specific for Super Oxide Dismutase (SOD), Catalase and Glutathione Peroxidase (GPx) genes, antioxidant enzymes, are used as probes. Pairs of primers specific for the β-actin and cyclophilin genes are used as control probes.
L'augmentation de l'expression des ARNm, mesurée par RT-PCR quantitative, des gènes des enzymes antioxydantes est mise en évidence dans les différents types cellulaires utilisés, lorsque les cellules sont traitées avec les composés selon l'invention.The increase in the expression of mRNAs, measured by quantitative RT-PCR, of the genes of the antioxidant enzymes is demonstrated in the different cell types used, when the cells are treated with the compounds according to the invention.
C-/Contrôle du stress oxydatif :C- / Oxidative stress control:
Mesure des espèces oxydantes dans les cellules en culture : Les propriétés antioxydantes des composés sont également évaluées à l'aide d'un indicateur fluorescent dont l'oxydation est suivie par l'apparition d'un signal fluorescent. La diminution d'intensité du signal fluorescent émis est mesurée dans les cellules traitées avec les composés de la manière suivante : les cellules PC12 cultivées comme précédemment décrit (plaque noire 96 puits fonds transparent, Falcon) sont incubées avec des doses croissantes de peroxyde d'hydrogène (0,25 mM - 1 mM) dans du milieu sans sérum pendant 2 et 24 heures. Après l'incubation le milieu est enlevé et les cellules sont incubées avec une solution de diacétate de dichlorodihydrofluorescéine (DCFDA, Molecular Probes, Eugène, USA) 10 μM dans du PBS pendant 30 min à 37°C et dans une atmosphère contenant 5% de gaz carbonique. Les cellules so t ensuite rincées avec du PBS. La détection de la fluorescence émise par l'indicateur de l'oxydation est mesurée à l'aide d'un fluorimètre (Tecan Ultra 384) à une longueur d'onde d'excitation de 495 nm et une longueur d'onde d'émission de 535 nm. Les résultats sont exprimés en pourcentage de protection par rapport au témoin oxydé.Measurement of oxidizing species in cultured cells: The antioxidant properties of the compounds are also evaluated using a fluorescent indicator, the oxidation of which is followed by the appearance of a fluorescent signal. The decrease in intensity of the fluorescent signal emitted is measured in the cells treated with the compounds in the following manner: the cells PC12 cultured as previously described (black plate 96 wells transparent fund, Falcon) are incubated with increasing doses of hydrogen peroxide (0.25 mM - 1 mM) in medium without serum for 2 and 24 hours. After the incubation, the medium is removed and the cells are incubated with a solution of dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFDA, Molecular Probes, Eugène, USA) 10 μM in PBS for 30 min at 37 ° C. and in an atmosphere containing 5% of carbon dioxide. The cells are then rinsed with PBS. The detection of the fluorescence emitted by the oxidation indicator is measured using a fluorimeter (Tecan Ultra 384) at an excitation wavelength of 495 nm and an emission wavelength 535 nm. The results are expressed as a percentage of protection relative to the oxidized control.
L'intensité de fluorescence est plus faible dans les cellules incubées avec les composés selon l'invention que dans les cellules non traitées. Ces résultats indiquent que les composés selon l'invention favorisent l'inhibition de la production d'espèces oxydantes dans des cellules soumises à un stress oxydatif. Les propriétés antioxydantes décrites précédemment sont également efficaces pour induire une protection antiradicalaire dans des cellules en culture.The fluorescence intensity is lower in the cells incubated with the compounds according to the invention than in the untreated cells. These results indicate that the compounds according to the invention promote the inhibition of the production of oxidizing species in cells subjected to oxidative stress. The antioxidant properties described above are also effective in inducing free radical protection in cultured cells.
D-/Mesure de la peroxydation lipidique :D- / Measurement of lipid peroxidation:
Les différentes lignées cellulaires (modèles cellulaires cités précédemment) ainsi que les cellules en culture primaire sont traitées comme précédemment. Le surnageant des cellules est récupéré après le traitement et les cellules sont lysées et récupérées pour la détermination de la concentration proteique. La détection de la peroxydation lipidique est déterminée de la manière suivante : la peroxydation lipidique est mesurée à l'aide d'acide thiobarbiturique (TBA) qui réagit avec la lipoperoxydation des aldéhydes tel que le malonodialdéhyde (MDA). Après les traitements, le surnageant des cellules est collecté (900 μl) et 90 μl d'hydroxytoluène butylé y sont ajoutés (Moriiere, Moysan et al. 1991). 1 ml d'une solution de TBA à 0,375% dans l'acide chlorhydrique 0,25M contenant 15% d'acide trichloroacétique est également ajouté aux milieux réactionnels. Le mélange est chauffé à 80°C pendant 15 min, refroidi sur glace et la phase organique est extraite avec du butanol. L'analyse de la phase organique se fait par spectrofluorométrie (?exc=515 nm et ?em=550 nm) à l'aide du spectrofluorimètre Shimazu 1501 (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japon). Les TBARS sont exprimés en équivalents MDA en utilisant comme standard le tétraéthoxypropane. Les résultats sont normalisés par rapport au contenu en protéines.The different cell lines (cell models mentioned above) as well as the cells in primary culture are treated as above. The cell supernatant is recovered after the treatment and the cells are lysed and recovered for the determination of the protein concentration. The detection of lipid peroxidation is determined as follows: lipid peroxidation is measured using thiobarbituric acid (TBA) which reacts with lipoperoxidation of aldehydes such as malonodialdehyde (MDA). After the treatments, the cell supernatant is collected (900 μl) and 90 μl of butylated hydroxytoluene are added thereto (Moriiere, Moysan et al. 1991). 1 ml of a 0.375% TBA solution in 0.25M hydrochloric acid containing 15% trichloroacetic acid is also added to the reaction media. The mixture is heated at 80 ° C for 15 min, cooled on ice and the organic phase is extracted with butanol. The analysis of the organic phase is done by spectrofluorometry (? Exc = 515 nm and? Em = 550 nm) using the Shimazu 1501 spectrofluorimeter (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan). TBARS are expressed in MDA equivalents using standard tetraethoxypropane. The results are normalized with respect to the protein content.
La diminution de la peroxydation lipidique observée dans les cellules traitées avec les composés selon l'invention confirme les résultats obtenus précédemment.The reduction in lipid peroxidation observed in cells treated with the compounds according to the invention confirms the results obtained previously.
Les composés selon l'invention présentent avantageusement des propriétés antioxydantes intrinsèques qui permettent de ralentir et/ou d'inhiber es effets d'un stress oxydatif. Les inventeurs montrent également que les composés selon l'invention sont capables d'induirent l'expression des gènes d'enzymes antioxydantes. Ces caractéristiques particulières des composés selon l'invention permettent aux cellules de lutter plus efficacement contre le stress oxydatif et donc d'être protégées vis à vis des dommages induits par les radicaux libres.The compounds according to the invention advantageously have intrinsic antioxidant properties which make it possible to slow down and / or inhibit the effects of oxidative stress. The inventors also show that the compounds according to the invention are capable of inducing the expression of the genes of antioxidant enzymes. These particular characteristics of the compounds according to the invention allow the cells to fight more effectively against oxidative stress and therefore to be protected from damage induced by free radicals.
E3 E-MPLE 28 : Evaluation des effets sur l'oppression d'enzymes impliquées dans la β-o ydation mîtochondriale et peroxysomaleE3 E-MPLE 28: Evaluation of the effects on the oppression of enzymes involved in mid-peroxisomal β-o ydation
Les composés selon l'invention testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23 ci-dessus.The compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
Les acides gras constituent une réserve essentielle d'énergie. La β-oxydation mîtochondriale et peroxysomale des acides gras sont les principales voies de catabolisme des acides gras responsables de la mobilisation de cette énergie. Ces deux processus jouent donc un rôle primordial dans le contrôle des taux sériques d'acide gras libres ainsi que dans la régulation de la synthèse des triglycérides. L'enzyme qui détermine la vitesse de la β-oxydation peroxysomale est l'ACO. La β-oxydation mîtochondriale est limitée par le transport des acides gras au sein de la mitochondrie. Celui-ci dépend de l'activité des enzymes CPT-I et CPT-II. La régulation de l'expression des enzymes ACO, CPT-I et CPT-II joue un rôle primordial dans le contrôle de la β-oxydation peroxysomale et mîtochondriale, respectivement.Fatty acids are an essential reserve of energy. The miterochondrial and peroxisomal β-oxidation of fatty acids are the main pathways of catabolism of fatty acids responsible for the mobilization of this energy. These two processes therefore play a key role in controlling serum free fatty acid levels as well as in regulating the synthesis of triglycerides. The enzyme that determines the speed of peroxisomal β-oxidation is ACO. The miterochondrial β-oxidation is limited by the transport of acids fatty within the mitochondria. This depends on the activity of the enzymes CPT-I and CPT-II. The regulation of the expression of the enzymes ACO, CPT-I and CPT-II plays a crucial role in the control of peroxisomal and miterochondrial β-oxidation, respectively.
Les composés selon l'invention induisent l'expression de l'ACO, de CPT-I et de CPT-II. Cette activité a été mise en évidence de la manière suivante :The compounds according to the invention induce the expression of ACO, CPT-I and CPT-II. This activity was highlighted as follows:
Les hépatocytes de rats sont isolés par perfusion de foies de rat Wistar OFA mâles (Charles River, L'ArbresIe, France) dont le poids corporel est compris entre 175 et 225 g à l'aide d'un mélange de collagénase et de thermolysin (Blendzyme 3, Roche, Bâle, Suisse). Le foie de rats anesthésiés au pentobarbital est perfusé via la veine porte, d'abord par 100 ml d'un tampon de lavage (Liver perfusion médium, Gibco, Paisley, UK) et ensuite par 200 ml du milieu de digestion suivant : HBSS dépourvu de chlorure de calcium et de sulfate de magnésium (Sigma, S1 Louis, Ml, USA) supplémenté de 10 mM Hepes, pH 7,6, de 4 mM chlorure de calcium et de 7 mg de Blendzyme 3 suivant une modification du protocole décrit (Raspe, Madsen et al. 1999). Lorsque la viabilité des cellules, déterminée par test au Bleu Trypan (Sigma, St Louis, Ml, USA), excède 80%, les hépatocytes sont étalés dans des boîtes de culture à 6 puits à raison de 105 cellules/cm2 pour les expériences de quantification des ARN messagers. Les cellules sont ensemencées et incubées pendant 4 heures dans un milieu de culture Williams E supplémenté de 100 U/ml penicillin (Gibco, Paisley, UK), 2 mM L-Glutamine (Gibco, Paisley, UK), 2 % vol/vol UltroSER SF (Biosepra, Gergy St-Christophe, France), 0,2% masse/vol albumine sérique bovine (Sigma, St Louis, Ml, USA), 1 μM Dexamethasone (Sigma, St Louis, Ml, USA) et 100 nM T3 (Sigma, St Louis, Ml, USA). L'expérience est ensuite poursuivie dans le même milieu de culture dépourvu d'Ultroser. Les composés testés sont ajoutés à la concentration indiquée directement dans le milieu de culture. L'ARN total est isolé des fragments de foie par extraction à l'aide du mélange thiocyanate de guanidine/phénol acide/chloroforme suivant le protocole décrit précédemment (Raspe, Madsen et al. 1999). Les ARN messagers sont quantifiés par RT-PCR semi-quantitative ou quantitative à l'aide du kit Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green I kit (Hoffman-La Roche, Bâle, Suisse) sur un appareil Light Cycler System (Hoffman-La Roche, Bâle, Suisse). Des paires d'amorces spécifiques des gènes ACO, Apo OUI, Apo Al, CPT-I et CPT-II sont utilisées comme sondes. Des paires d'amorces spécifiques des gènes 36B4, beta-actine et GAPDH sont utilisées comme sondes témoins (Cf. tableau I).The rat hepatocytes are isolated by infusion of male Wistar OFA rat livers (Charles River, L'ArbresIe, France) whose body weight is between 175 and 225 g using a mixture of collagenase and thermolysin ( Blendzyme 3, Roche, Basel, Switzerland). The liver of rats anesthetized with pentobarbital is perfused via the portal vein, first with 100 ml of a washing buffer (Liver perfusion medium, Gibco, Paisley, UK) and then with 200 ml of the following digestion medium: HBSS free calcium chloride and magnesium sulfate (Sigma, S 1 Louis, Ml, USA) supplemented with 10 mM Hepes, pH 7.6, 4 mM calcium chloride and 7 mg of Blendzyme 3 according to a modification of the protocol described (Raspe, Madsen et al. 1999). When the cell viability, determined by Trypan Blue test (Sigma, St Louis, Ml, USA), exceeds 80%, the hepatocytes are spread in 6-well culture dishes at a rate of 10 5 cells / cm 2 for the messenger RNA quantification experiments. The cells are seeded and incubated for 4 hours in a Williams E culture medium supplemented with 100 U / ml penicillin (Gibco, Paisley, UK), 2 mM L-Glutamine (Gibco, Paisley, UK), 2% vol / vol UltroSER SF (Biosepra, Gergy St-Christophe, France), 0.2% mass / vol bovine serum albumin (Sigma, St Louis, Ml, USA), 1 μM Dexamethasone (Sigma, St Louis, Ml, USA) and 100 nM T3 (Sigma, St Louis, Ml, USA). The experiment is then continued in the same culture medium devoid of Ultroser. The compounds tested are added to the concentration indicated directly in the culture medium. Total RNA is isolated from the liver fragments by extraction using the guanidine thiocyanate / acid phenol / chloroform mixture according to the protocol described above (Raspe, Madsen et al. 1999). The messenger RNAs are quantified by semi-quantitative or quantitative RT-PCR using the Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green I kit (Hoffman-La Roche, Basel, Switzerland) on a Light Cycler System device (Hoffman-La Roche, Basel, Switzerland). Primer pairs specific to the ACO, Apo OUI, Apo Al, CPT-I and CPT-II genes are used as probes. Pairs of specific primers of the 36B4, beta-actin and GAPDH genes are used as control probes (see Table I).
L'ARN isolé d'hépatocytes en culture primaire décrits ci-dessus ou de fragments de foie prélevé sur des rats traités avec les composés testés sont quantifiés par RT-PCR semi-quantitative ou quantitative comme décrit dans les exemples 25 et 26 à l'aide de paires d'amorces spécifiques des gènes ACO, GPT-I et CPT-II. . .The RNA isolated from hepatocytes in primary culture described above or from fragments of liver taken from rats treated with the test compounds are quantified by semi-quantitative or quantitative RT-PCR as described in Examples 25 and 26 to using specific primer pairs of the ACO, GPT-I and CPT-II genes. . .
EXEMPLE 30 : Evaluation des capacités d'oxydation des acides grasEXAMPLE 30: Evaluation of the oxidation capacities of fatty acids
Les composés selon l'invention testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23 ci-dessus.The compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
Les capacités d'oxydation des acides gras déterminent les taux sériques d'acides gras libres ainsi que la possibilité de synthèse des triglycérides. Une accumulation d'acide gras libres dans le sang ou de triglycérides en dehors du tissu adipeux favorisent la résistance à l'insuline. D'autre part, une élévation des taux plasmatiques de triglycérides est actuellement considérée comme un facteur de risque des maladies cardiovasculaires. Une augmentation des capacités d'oxydation des acides gras présente donc un intérêt thérapeutique.The oxidation capacities of fatty acids determine the serum levels of free fatty acids as well as the possibility of synthesis of triglycerides. An accumulation of free fatty acids in the blood or triglycerides outside the adipose tissue promote insulin resistance. On the other hand, an increase in plasma triglyceride levels is currently considered a risk factor for cardiovascular disease. An increase in the oxidation capacities of fatty acids is therefore of therapeutic interest.
Les composés selon l'invention activent l'oxydation des acides gras par les mitochondries et les peroxysomes. Cette capacité a été mise en évidence de la manière suivante : On teste les activités CPT-I et CPT-II mitochondriales selon le protocole décrit par Madsel et al. (Madsen et al, 1999).The compounds according to the invention activate the oxidation of fatty acids by mitochondria and peroxisomes. This ability was highlighted as follows: The mitochondrial CPT-I and CPT-II activities are tested according to the protocol described by Madsel et al. (Madsen et al, 1999).
On teste l'activité ACO selon le protocole décrit par Asiedu et al. (Asiedu et al,The ACO activity is tested according to the protocol described by Asiedu et al. (Asiedu et al,
1995).1995).
On teste la β-oxydation mitochondriale et peroxysomale des acides gras selon le protocole décrit par Hovik et al. (Hovik et al, 1990).The mitochondrial and peroxisomal β-oxidation of fatty acids is tested according to the protocol described by Hovik et al. (Hovik et al, 1990).
EXEMPLE 31 : Evaluation des effets sur le transport inverse du cholestérolEXAMPLE 31 Evaluation of the Effects on the Reverse Transport of Cholesterol
Les composés selon l'invention testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23 ci-dessus.The compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
La corrélation négative entre le taux d'HDL-cholestérol et les maladies cardiovasculaires est aujourd'hui bien connue. La capacité d'un composé à augmenter le transport inverse du cholestérol (RGT) est considérée comme un mécanisme par lequel les HDL protègent de l'athérosclérose. Le RGT est un processus qui permet au cholestérol, en excès dans les tissus extra-hépatiques, d'être récupéré et exporté vers le foie ou il est converti en acides biliaires avant d'être excrété dans la bile. La présence de cellules spumeuses dérivées de macrophages est une des caractéristiques des premières étapes de la formation de la lésion d'athérosclérose.The negative correlation between HDL-cholesterol levels and cardiovascular disease is now well known. The ability of a compound to increase reverse cholesterol transport (RGT) is believed to be a mechanism by which HDL protects against atherosclerosis. RGT is a process that allows excess cholesterol in extrahepatic tissue to be recovered and exported to the liver where it is converted to bile acids before being excreted in bile. The presence of foam cells derived from macrophages is one of the characteristics of the first stages of the formation of the atherosclerotic lesion.
L'efflux du cholestérol des macrophages est donc une phase critique pour la prévention de la formation des cellules spumeuses et, par conséquent, présente un effet protecteur vis-à-vis de l'athérosclérose. L'étape cruciale du RGT est le transfert du cholestérol en excès et des phospholipides des membranes cellulaires aux HDL naissantes. A ce titre, le transporteur ABCA1 (ATP binding cassette A1 ) joue un rôle clef dans ce processus et son expression est corrélée avec la réduction du développement de la plaque d'athérosclérose en stimulant l'efflux de cholestérol dans les macrophages. D'autre part, il a récemment été démontré que ABCA1 est un gène cible du récepteur nucléaire LXR α, lui même gène cible des récepteurs PPAR α et PPAR α.The efflux of cholesterol from macrophages is therefore a critical phase for the prevention of the formation of foam cells and, therefore, has a protective effect against atherosclerosis. The crucial step in RGT is the transfer of excess cholesterol and phospholipids from cell membranes to nascent HDL. As such, the transporter ABCA1 (ATP binding cassette A1) plays a key role in this process and its expression is correlated with the reduction in the development of atherosclerotic plaque by stimulating the efflux of cholesterol in macrophages. On the other hand, it has recently been demonstrated that ABCA1 is a target gene for the nuclear receptor LXR α, itself a target gene for the receptors PPAR α and PPAR α.
Les composés selon l'invention induisent l'expression de LXRα et d'ABCAl et stimulent l'efflux du cholestérol dans 2 modèles in vitro de macrophages THP1 et primaires.The compounds according to the invention induce the expression of LXRα and ABCAl and stimulate the efflux of cholesterol in 2 in vitro models of THP1 and primary macrophages.
1/ mesure de l'expression d'ABCAl et de LXR α:1 / measurement of the expression of ABCAl and of LXR α:
a/ Différentiation et traitement des macrophages humains THP-1 et primaires Des monocytes THP-1 (ATCC, Rockville, Maryland) sont étalés dans des boîtes de culture à 6 puits en présence de PMA (Phorbol Myristate Acétate) et de sérum de veau fœtal et incubés à 37°C pendant 6 jours, ce qui permet leur différenciation en macrophages.a / Differentiation and treatment of human THP-1 and primary macrophages THP-1 monocytes (ATCC, Rockville, Maryland) are spread in 6-well culture dishes in the presence of PMA (Phorbol Myristate Acetate) and fetal calf serum and incubated at 37 ° C for 6 days, which allows their differentiation into macrophages.
En ce qui concerne les macrophages primaires, les cellules mononuclées sont isolées à partir de sang humain comme précédemment décrit (Chinetti et al. 2001) et sont étalées sur des plaques 6 puits et cultivées pendant 10 jours en présence de sérum humain pour permettre l'adhérence et la différenciation des monocytes primaires en macrophages.As regards the primary macrophages, the mononuclear cells are isolated from human blood as previously described (Chinetti et al. 2001) and are spread on 6-well plates and cultured for 10 days in the presence of human serum to allow the adhesion and differentiation of primary monocytes into macrophages.
Le traitement à l'aide des différents composés est réalisé pendant 48h dans un milieu sans sérum humain ou de veau fœtal mais supplémenté avec du sérum Nutridoma HU (Boehringer) à 1%.The treatment using the various compounds is carried out for 48 hours in a medium without human or fetal calf serum but supplemented with Nutridoma HU (Boehringer) serum at 1%.
b/ Mesure des ARN messagers :b / Measurement of messenger RNAs:
Les ARN totaux sont extraits des macrophages traités à l'aide du kit RNeasy mini (QIAGEN, Hilden, Allemagne) suivant les instructions du fournisseur, dosés par spectrométrie et quantifiés par RT-PCR quantitative à l'aide du kit Light Cycler Fast DNA Master Green I (Hoffman-La Riche, Bâle, Suisse) sur un appareil Light Cycler System (Hoffman-La Riche, Bâle, Suisse). Des paires d'amorces spécifiques des gènes ABCA1 & LXR a sont utilisées comme sondés. 2/ Mesure de l'efflux de cholestérol:Total RNAs are extracted from macrophages treated using the RNeasy mini kit (QIAGEN, Hilden, Germany) according to the supplier's instructions, measured by spectrometry and quantified by quantitative RT-PCR using the Light Cycler Fast DNA Master kit Green I (Hoffman-La Riche, Basel, Switzerland) on a Light Cycler System (Hoffman-La Riche, Basel, Switzerland). Pairs of primers specific for the ABCA1 & LXR a genes are used as probes. 2 / Measurement of cholesterol efflux:
a/ Différentiation et traitement des macrophages humains THP-1 et primaires Les macrophages sont différenciés à partir de monocytes THP-1 ou primaires comme dans l'expérience précédente (1/ mesure de l'expression d'ABCAl et de LXRα)a / Differentiation and treatment of human THP-1 and primary macrophages Macrophages are differentiated from THP-1 or primary monocytes as in the previous experiment (1 / measurement of the expression of ABCAl and LXRα)
b/ Chargement des macrophages en cholestérol et mesure de l'efflux Les macrophages sont pré-traités pendant 24 h avec les composés, mais aussi chaque 24h pendant toute la durée de l'expérience. Ils sont chargés en cholestérol lors d'une incubation de 48h en présence de LDL acétylées (50 μg/ml contenant du cholestérol marqué au Tritium) dans un milieu RPMI 1640 supplémenté avec 1% de Nutidoma HU (Boehringer). Après cette étape, les cellules sont lavées 2 fois avec du PBS et incubées pendant 24h dans du milieu RPMI sans Nutridoma avec ou sans apolipoprotéine A-l. A la fin de cette étape, le milieu est récupéré et les lipides intracellulaires sont extraits dans un mélange hexane / isopropanol, et séchés sous azote. L'efflux est quantifié à l'aide d'un lecteur à scintillation Tri-Carb® 2100 TR (Packard, Meriden, CT, USA) en divisant le nombre de coups comptés dans le milieu par le nombre de coups total comptés dans le milieu et dans les cellules.b / Loading of macrophages in cholesterol and measurement of efflux The macrophages are pretreated for 24 h with the compounds, but also every 24 h for the duration of the experiment. They are loaded with cholesterol during a 48h incubation in the presence of acetylated LDL (50 μg / ml containing cholesterol labeled with Tritium) in RPMI 1640 medium supplemented with 1% Nutidoma HU (Boehringer). After this step, the cells are washed twice with PBS and incubated for 24 hours in RPMI medium without Nutridoma with or without apolipoprotein A1. At the end of this step, the medium is recovered and the intracellular lipids are extracted in a hexane mixture / isopropanol, and dried under nitrogen. The efflux is quantified using a scintillation Tri-Carb 2100 TR ® reader (Packard, Meriden, CT, USA) by dividing the number of strokes counted in the medium by the total number of strokes counted in the middle and in cells.
EXEMPLE 32 : Evaluation des effets sur le syndrome métabolique (syndrome X) et le diabèteEXAMPLE 32 Evaluation of the Effects on Metabolic Syndrome (Syndrome X) and Diabetes
Les composés selon l'invention testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23 ci-dessus.The compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
La résistance à l'insuline est à la base du syndrome métabolique caractérisé par une intolérance au glucose, une hyperinsulinemie, une dyslipidémie et l'hypertension. La combinaison de plusieurs facteurs de risque cardiovasculaire qui se traduit par un risque accru de maladies cardiovasculaires consécutives à l'athérosclérose est responsable de la majorité de la mortalité et de la morbidité liées au diabète de type II. Les traitements médicamenteux du syndrome métabolique ont donc pour principale cible la résistance à l'insuline.Insulin resistance is the basis of the metabolic syndrome characterized by glucose intolerance, hyperinsulinemia, dyslipidemia and hypertension. The combination of several cardiovascular risk factors, which results in an increased risk of cardiovascular diseases consecutive to Atherosclerosis is responsible for the majority of the mortality and morbidity associated with type II diabetes. The main target of drug treatments for metabolic syndrome is insulin resistance.
Les composés selon l'invention réduisent les manifestations du syndrome métabolique (Syndrome X) telles que l'élévation des acides gras libres, l'hyperinsulinémie, l'hyperglycémie et la réponse insulinémique au glucose (test de tolérance au glucose) et le diabète, dans deux modèles animaux qui présentent une résistance à l'insuline à l'origine du syndrome métabolique, les souris C57BL/6 maintenues sous régime riche en graisses, et le rat Zucker obèse (fa/fa). Ces propriétés sont mises en évidence de la manière suivante :The compounds according to the invention reduce the manifestations of the metabolic syndrome (Syndrome X) such as the elevation of free fatty acids, hyperinsulinemia, hyperglycemia and the insulinemic response to glucose (glucose tolerance test) and diabetes, in two animal models which exhibit insulin resistance at the origin of the metabolic syndrome, the C57BL / 6 mice maintained on a high-fat diet, and the obese Zucker rat (fa / fa). These properties are highlighted as follows:
1 ) Traitement des animaux1) Treatment of animals
Des souris G57BL/6 (Gharies River, L'ArbresIe, France) mâles âgées de 6 semaines au début de l'expérience ont été aléatoirement rassemblées par groupes de 6 animaux sélectionnés de telle sorte que la distribution de leur poids corporel soit uniforme. Les souris ont reçu un régime pauvre en graisse (UAR Â04), un régime enrichi en graisse (huile de coco 29% poids/poids) ou le même régime enrichi complété avec les composés étudiés. Des rats ∑ucker mâles obèses (fa/fa) ou non obèses (fa /+), âgés de 5 semaines ou de 21 semaines (Gharies River, L'ArbresIe, France) et rassemblés par groupes de 8 animaux sélectionnés de telle sorte que la distribution des taux plasmatiques de cholestérol et de triglycérides soient uniformes ; sont maintenus sous régime standard. Les animaux sont maintenus sous un cycle lumière/obscurité de 12 heures à une température constante de 20 ± 3°C. Les animaux ont un accès libre à l'eau et à la nourriture. La prise de nourriture et la prise de poids sont enregistrées. Les composés testés sont suspendus dans un véhicule (carboxyméthylcellulose 0,5% (CMC) et Tween 0,1%) et administrés par gavage intra-gastrique, à raison d'une fois par jour pendant 15 jours aux doses indiquées. A l'issue du traitement, certains animaux subissent un test de tolérance au glucose comme décrit ci-dessous. A l'issue de l'expérience les autres animaux sont pesés et sacrifiés sous anesthésie après un jeûne de 5 heures. Le sang est collecté sur EDTA. Le plasma est préparé par centrifugation à 3000 tours/minutes pendant 20 minutes. Des échantillons de foie sont prélevés et conservés congelés dans l'azote liquide pour analyses ultérieures.G57BL / 6 mice (Gharies River, L'ArbresIe, France) male 6 weeks old at the start of the experiment were randomly grouped into groups of 6 animals selected so that the distribution of their body weight was uniform. The mice received a low-fat diet (UAR Â04), a fat-enriched diet (coconut oil 29% w / w) or the same enriched diet supplemented with the compounds studied. Obese (fa / fa) or non-obese (fa / +) ∑ucker male rats, 5 weeks or 21 weeks old (Gharies River, L'ArbresIe, France) and gathered in groups of 8 animals selected so that the distribution of plasma cholesterol and triglyceride levels is uniform; are kept under standard diet. The animals are kept under a 12 hour light / dark cycle at a constant temperature of 20 ± 3 ° C. Animals have free access to water and food. Food gain and weight gain are recorded. The test compounds are suspended in a vehicle (0.5% carboxymethylcellulose (CMC) and 0.1% Tween) and administered by intragastric gavage, once a day for 15 days at the doses indicated. At the end of the treatment, some animals undergo a glucose tolerance test as described below. At the end of the experiment the other animals are weighed and sacrificed under anesthesia after a 5 hour fast. Blood is collected on EDTA. The plasma is prepared by centrifugation at 3000 rpm for 20 minutes. Liver samples are taken and stored frozen in liquid nitrogen for further analysis.
2) Dosage des acides gras libres et des lipides2) Determination of free fatty acids and lipids
Les taux d'acides gras libres sont variables chez les rats diabétiques. La concentration en acides gras libres dans le sérum ou le plasma, est mesurée par réaction enzymatique colorimétrique « NEFA/FFA » WAKO (Labo immuno Systems, Neuss, Allemagne) sur du sérum ou du plasma. Les concentrations plasmatiques des lipides (cholestérol total et triglycérides) sont mesurées par dosage colorimétrique (Bio-Mérieux, Marcy l'Etoile, France) selon les indications du fournisseur.Levels of free fatty acids are variable in diabetic rats. The concentration of free fatty acids in serum or plasma is measured by WAKO “NEFA / FFA” colorimetric enzymatic reaction (Labo immuno Systems, Neuss, Germany) on serum or plasma. The plasma lipid concentrations (total cholesterol and triglycerides) are measured by colorimetric determination (Bio-Mérieux, Marcy l'Etoile, France) according to the supplier's instructions.
3) Dosage de la glycémie3) Determination of blood sugar
La mesure de la glycémie s'effectue par une réaction enzymatique colorimétrique (Sigma Aldrich, St Louis, MO).The blood sugar measurement is carried out by a colorimetric enzymatic reaction (Sigma Aldrich, St Louis, MO).
4) Dosage de l'insuline4) Insulin dosage
Afin de mettre en évidence une hyperinsulinemie, les taux d'insuline sont dosés en utilisant le kit de dosage radioactif (Mercodia, Uppsala, Suède). L'insulinémie est déterminée sur des sérums ou des plasmas récoltés sur EDTA.In order to demonstrate hyperinsulinemia, the insulin levels are measured using the radioactive assay kit (Mercodia, Uppsala, Sweden). Insulinemia is determined on sera or plasmas collected on EDTA.
5) Test de tolérance au glucose5) Glucose tolerance test
Les animaux ont été anesthésiés après un jeûne de 8 h par injection intrapéritonéale de pentobarbital sodique (50 mg/kg). Pour initier le test de tolérance au glucose, une injection de glucose (1 g/kg) est réalisée dans la cavité , „„_„„ 2004/073593The animals were anesthetized after an 8 hour fast by intraperitoneal injection of sodium pentobarbital (50 mg / kg). To initiate the glucose tolerance test, an injection of glucose (1 g / kg) is made into the cavity , „„ _ „„ 2004/073593
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intrapéritonéale avant de collecter des échantillons de sang au niveau de la veine caudale sur des tubes héparinés 0, 15, 30, 45, et 60 minutes après la charge en glucose. Les échantillons sont conservés sur glace, le plasma isolé et conservé à -20°C avant analyse.intraperitoneally before collecting blood samples from the tail vein on heparinized tubes 0, 15, 30, 45, and 60 minutes after the glucose load. The samples are stored on ice, the plasma isolated and stored at -20 ° C before analysis.
EXEMPLE 33 : Evaluation des effets sur l'obésitéEXAMPLE 33: Evaluation of the effects on obesity
Les composés selon l'invention testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23 ci-dessus.The compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
L'obésité est associée à une augmentation de la résistance à l'insuline, au diabète de type II et à une augmentation du risque cardiovasculaire et de cancer. Elle joue donc un rôle central dans plusieurs pathologies typiques des sociétés occidentales et de ce fait représente un défi pharmacologique important.Obesity is associated with increased insulin resistance, type II diabetes, and increased cardiovascular and cancer risk. It therefore plays a central role in several pathologies typical of Western societies and therefore represents an important pharmacological challenge.
Les composés selon l'invention réduisent la prise de poids dans deux modèles animaux qui présentent une obésité, les souris G57BL/6 maintenues sous régime riche en graisses et le rat Zucker obèse (fa/fa). Ces propriétés sont mises en évidence de la manière suivante :The compounds according to the invention reduce weight gain in two animal models which show obesity, the G57BL / 6 mice maintained on a diet rich in fats and the obese Zucker rat (fa / fa). These properties are highlighted as follows:
1 ) Traitement des animaux1) Treatment of animals
Des souris C57BLJ6 (Iffa Credo, L'ArbresIe, France) mâles, âgées de 6 semaines au début de l'expérience, ont été aléatoirement rassemblées par groupes de 6 animaux sélectionnés de telle sorte que la distribution de leur poids corporel soit uniforme. Les souris ont reçu un régime pauvre en graisse (UAR A04), un régime enrichi en graisse (huile de coco 29% poids/poids) ou le même régime enrichi complété avec les composés étudiés. Des rats Zucker mâles obèses (fa/fa), âgés de 5 semaines (Iffa Credo, L'ArbresIe, France) et rassemblés par groupes de 8 animaux sélectionnés de telle sorte que la distribution des taux plasmatiques de cholestérol et de triglycérides soit uniforme, sont maintenus sous régime standard complété avec les composés étudiés pendant 15 jours. Les animaux sont maintenus sous un cycle lumière/obscurité de 12 heures à une température constante de 20 ± 3°C. Les animaux ont un accès libre à l'eau et à la nourriture. La prise de nourriture et la prise de poids sont enregistrées. A l'issue de l'expérience les animaux sont pesés et sacrifiés sous anesthésie. Le plasma est préparé par centrifugation à 3000 tours/minutes pendant 20 minutes.- Des échantillons de foie et de tissu adipeux sont prélevés, pesés et conservés congelés dans l'azote liquide pour analyses ultérieures.C57BLJ6 mice (Iffa Credo, L'ArbresIe, France) male, 6 weeks old at the start of the experiment, were randomly grouped into groups of 6 animals selected so that the distribution of their body weight was uniform. The mice received a diet low in fat (UAR A04), a diet enriched in fat (coconut oil 29% w / w) or the same enriched diet supplemented with the compounds studied. Obese male Zucker rats (fa / fa), 5 weeks old (Iffa Credo, L'ArbresIe, France) and grouped into groups of 8 animals selected so that the distribution of plasma cholesterol and triglyceride levels is uniform, are maintained under a standard diet supplemented with the compounds studied for 15 days. The animals are kept under a 12 hour light / dark cycle at a constant temperature of 20 ± 3 ° C. Animals have free access to water and food. Food gain and weight gain are recorded. At the end of the experiment, the animals are weighed and sacrificed under anesthesia. The plasma is prepared by centrifugation at 3000 revolutions / minute for 20 minutes. Liver and adipose tissue samples are taken, weighed and stored frozen in liquid nitrogen for further analysis.
2) Dosage de la leptine2) Determination of leptin
La leptine, un marqueur de développement de l'obésité, est mesurée à l'aide du kit de dosage « Rat Leptin assay » de Linco Research (St Charles, Ml, USA).Leptin, a marker for the development of obesity, is measured using the “Rat Leptin assay” assay kit from Linco Research (St Charles, Ml, USA).
EXEMPLE 34 : Evaluation des effets sur la croissance cellulaireEXAMPLE 34 Evaluation of the Effects on Cell Growth
Les composés selon l'invention testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23 ci-dessus.The compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
Les composés selon l'invention diminuent la croissance des cellules tumorales.The compounds according to the invention decrease the growth of tumor cells.
Cette activité est constatée en utilisant le protocole décrit par Hvattum et al. (Hvattum et al. 1993).This activity is observed using the protocol described by Hvattum et al. (Hvattum et al. 1993).
EXEMPLE 35 : Evaluation des effets des composés sur la resténoseEXAMPLE 35 Evaluation of the Effects of the Compounds on Restenosis
Les composés selon l'invention testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23 ci-dessus.The compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
La prolifération des cellules musculaires lisses est une des principales composantes de l'athérogenèse, de la resténose et de l'hypertension associées aux maladies cardiovasculaires. L'identification d'inhibiteurs de cette prolifération représente donc un défi pharmacologique intéressant. Les composés selon l'invention diminuent la croissance des cellules musculaires lisses vasculaires in vitro et réduisent la resténose in vivo dans ie modèle d'angioplastie coronarienne au ballonnet chez le rat. Ces propriétés ont été mises en évidence de la manière suivante :The proliferation of smooth muscle cells is one of the main components of atherogenesis, restenosis and hypertension associated with cardiovascular disease. The identification of inhibitors of this proliferation therefore represents an interesting pharmacological challenge. The compounds according to the invention decrease the growth of vascular smooth muscle cells in vitro and reduce restenosis in vivo in the model of balloon coronary angioplasty in rats. These properties have been highlighted as follows:
1) Mesure de la prolifération des cellules musculaires lisses.1) Measuring the proliferation of smooth muscle cells.
Les cellules musculaires lisses d'artère coronaire ou d'aorte proviennent de Promocell (Heidelberg, Allemagne) et sont cultivées selon les indications du fournisseur dans un milieu de culture sélectionné pour les cellules musculaires lisses en présence de 10% de sérum de veau fœtal. Les cellules cultivées à 50% de confluence sont rendues quiescentes par omission de sérum pendant 24 heures. Les cellules sont ensuite traitées pendant 3 à 6 jours en présence de mitogènes (10% sérum, 20 ng/ml bFGF ou 2 U /ml D-thrombine) et des composés selon l'invention. A l'issue de l'expérience, les cellules sont trypsinées et comptées à l'hémocytomètre.Coronary artery or aorta smooth muscle cells come from Promocell (Heidelberg, Germany) and are cultured according to the supplier's instructions in a culture medium selected for smooth muscle cells in the presence of 10% fetal calf serum. The cells cultured at 50% confluence are made quiescent by omitting serum for 24 hours. The cells are then treated for 3 to 6 days in the presence of mitogens (10% serum, 20 ng / ml bFGF or 2 U / ml D-thrombin) and of compounds according to the invention. At the end of the experiment, the cells are trypsinized and counted with a hemocytometer.
2) Mesure de la resténose dans le modèle d'angioplastie coronarienne au ballonnet chez le rat.2) Measurement of restenosis in the model of balloon coronary angioplasty in rats.
Des rats Sprague-Dawley adultes de 200 à 300 g (Iffa Credo, L'ArbresIe, France) sont maintenus sous un cycle lumière/obscurité de 12 heures à une température constante de 20 ± 3°C. Après une acclimatation d'une semaine, les rats sont pesés et rassemblés par groupes de 6 animaux sélectionnés de telle sorte que la distribution de leur poids corporel soit uniforme. L'artère coronaire interne gauche est blessée à l'aide d'un ballonnet comme décrit précédemment (Ruef et al. 2000). Les composés selon l'invention sont suspendus dans un véhicule (carboxyméthylcellulose 0,5% (CMC) et Tween 0,1%) et administrés par gavage intra-gastrique, à raison d'une fois par jour pendant 4, 10 et 21 jours à différentes doses. Le traitement débute un jour avant l'intervention au ballonnet. Les animaux ont un accès libre à l'eau et à la nourriture. Les animaux sont ensuite sacrifiés et les artères coronaires sont fixées et analysées comme décrit précédemment (Ruef et al. 2000).Adult Sprague-Dawley rats weighing 200 to 300 g (Iffa Credo, L'ArbresIe, France) are maintained under a 12 hour light / dark cycle at a constant temperature of 20 ± 3 ° C. After a week's acclimatization, the rats are weighed and grouped into groups of 6 animals selected so that the distribution of their body weight is uniform. The left internal coronary artery is injured using a balloon as previously described (Ruef et al. 2000). The compounds according to the invention are suspended in a vehicle (0.5% carboxymethylcellulose (CMC) and 0.1% Tween) and administered by intragastric gavage, once a day for 4, 10 and 21 days at different doses. Treatment begins one day before the balloon procedure. Animals have free access to water and food. The animals are then sacrificed and the coronary arteries are fixed and analyzed as described above (Ruef et al. 2000).
EXEMPLE 36 : Evaluation des effets des composés sur l'hypertensionEXAMPLE 36 Evaluation of the Effects of the Compounds on Hypertension
Les composés selon l'invention testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23 ci-dessus.The compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
L'hypertension artérielle est un facteur de risque important de maladies cardiovasculaires et représente un défi pharmacologique important.High blood pressure is an important risk factor for cardiovascular disease and represents a major pharmacological challenge.
Les composés selon l'invention diminuent la pression sanguine in vivo quand ils sont administrés à des rats spontanément hypertendus (rat SHR) utilisés comme modèle d'hypertension. Ces propriétés ont été mises en évidence de la manière suivante :The compounds according to the invention lower the blood pressure in vivo when they are administered to spontaneously hypertensive rats (SHR rat) used as a model of hypertension. These properties have been highlighted as follows:
1 ) Traitement des animaux.1) Treatment of animals.
Des rats SHR adultes de 200 à 300 g (Harlan France, Gannat, France) sont maintenus sous un cycle lumière/obscurité de 12 heures à une température constante de 20 ± 3°G. Après une acclimatation d'une semaine, les rats sont pesés et rassemblés par groupes de 6 animaux sélectionnés de telle sorte que la distribution de leur poids corporel soit uniforme. Les composés selon l'invention sont suspendus dans un véhicule (carboxyméthylcellulose 0,5% (CMC) et Tween 0,1%) et administrés par gavage intra-gastrique, à raison d'une fois par jour pendant 7 jours à différentes doses. Les animaux ont un accès libre à l'eau et à la nourriture.Adult SHR rats weighing 200 to 300 g (Harlan France, Gannat, France) are maintained under a light / dark cycle of 12 hours at a constant temperature of 20 ± 3 ° G. After a week's acclimatization, the rats are weighed and grouped into groups of 6 animals selected so that the distribution of their body weight is uniform. The compounds according to the invention are suspended in a vehicle (0.5% carboxymethylcellulose (CMC) and 0.1% Tween) and administered by intragastric gavage, once a day for 7 days at different doses. Animals have free access to water and food.
2) Mesure de la pression sanguine.2) Measurement of blood pressure.
La pression sanguine est mesurée selon le protocole décrit précédemment (Siragy et Carey 1997). EXEMPLE 37 : Evaluation des propriétés antioxydantes sur des cultures de cellulesBlood pressure is measured according to the protocol described above (Siragy and Carey 1997). EXAMPLE 37 Evaluation of the antioxidant properties on cell cultures
Les composés selon l'invention testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23 ci-dessus.The compounds according to the invention tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
a) Obtention et culture des kératinocvtes humains normauxa) Obtaining and culture of normal human keratinocytes
Les cultures de kératinocvtes humains normaux (KHN) sont réalisées à partir de prélèvements de peau. Le prélèvement est dans un premier temps rincé 4 fois dans du PBS (Phosphate Buffered Saline - Invitrogen, France). II est ensuite décontaminé en le trempant dans deux bains successifs d'éthanol à 70% pendant 30 secondes. On découpe alors des bandelettes de 3 mm de largeur en prenant soin d'éliminer un maximum de tissu adipeux et de derme. Les bandelettes sont alors placées pendant 4h à 37°C dans une solution de trypsine à 0,25% (Invitrogen, France).Normal human keratinocyte cultures (KHN) are produced from skin samples. The sample is first rinsed 4 times in PBS (Phosphate Buffered Saline - Invitrogen, France). It is then decontaminated by soaking it in two successive baths of 70% ethanol for 30 seconds. We then cut strips 3 mm wide, taking care to remove a maximum of adipose tissue and dermis. The strips are then placed for 4 h at 37 ° C. in a 0.25% trypsin solution (Invitrogen, France).
Après séparation de l'épiderme du derme, la préparation épidermique est filtrée et centrifugée pendant 5 minutes à 1000 tours/min. Le culot est repris avec du milieu KHN-D (DMEM + 10% sérum de veau fœtal (SVF) + hydrocortisone 0,4 μg/ml + EGF 10 ng/ml + toxine cholérique 10~9M, (Sigma, St Quentin, France)). Les cellules sont comptées puis ensemencées à 10x106 cellules/75 cm2.After separation of the epidermis from the dermis, the epidermal preparation is filtered and centrifuged for 5 minutes at 1000 rpm. The pellet is taken up with KHN-D medium (DMEM + 10% fetal calf serum (SVF) + hydrocortisone 0.4 μg / ml + EGF 10 ng / ml + cholera toxin 10 ~ 9 M, (Sigma, St Quentin, France)). The cells are counted and then seeded at 10 × 10 6 cells / 75 cm 2 .
Après 24h de culture, le milieu est changé, les cellules sont rincées avec du PBS et on utilise pour la suite de la culture du milieu de prolifération K-SFM (Invitrogen, France). Les cellules sont ensuite ensemencées à la densité voulue. Le milieu des cellules est changé toutes les 48h et elles sont cultivées à 37°C avec 5% C02. Le traitement des cellules avec ou sans les composés selon l'invention est effectué avant la confluence (70-80%), les composés sont ajoutés à des concentrations variant de 1 à 100μM directement dans le milieu de culture. b) Obtention et culture des fibroblastes humainsAfter 24 hours of culture, the medium is changed, the cells are rinsed with PBS and the culture medium K-SFM (Invitrogen, France) is used for the following culture. The cells are then seeded at the desired density. The medium of the cells is changed every 48 hours and they are cultured at 37 ° C. with 5% CO 2 . The treatment of the cells with or without the compounds according to the invention is carried out before confluence (70-80%), the compounds are added at concentrations varying from 1 to 100 μM directly in the culture medium. b) Obtaining and culture of human fibroblasts
Les cultures de fibroblastes humains normaux sont réalisées à partir d'un prélèvement de peau. Le prélèvement est dans un premier temps rincé 4 fois dans du PBS (Invitrogen, France). II est ensuite décontaminé en le trempant dans deux bains successifs d'éthanol à 70% pendant 30 secondes. Des morceaux de derme d'une surface d'environ 5 mm2 sont déposés au fond d'une boite de Pétri. Une fois que les morceaux ont adhères au support (environ 5 min), ils sont recouverts de 4 ml de DMEM 20 % de SVF. Le milieu est renouvelé tous les deux jours. Les cellules sortent de l'expiant au bout d'une semaine et colonisent alors la boite de Pétri. Lorsque les cellules ont colonisé le support, elles sont trypsinées, réensemencées et cultivées dans du milieu de culture DMEM 10% SVF à 37°C et 5% de gaz carbonique (Invitrogen, France). Le traitement des cellules est effectué à la confluence de celles-ci, les composés selon l'invention sont ajoutés à des concentrations variant de 1 à 100 μM directement dans le milieu de culture.Normal human fibroblast cultures are made from a skin sample. The sample is first rinsed 4 times in PBS (Invitrogen, France). It is then decontaminated by soaking it in two successive baths of 70% ethanol for 30 seconds. Dermis pieces with an area of approximately 5 mm 2 are placed at the bottom of a Petri dish. Once the pieces have adhered to the support (about 5 min), they are covered with 4 ml of DMEM 20% FCS. The medium is renewed every two days. The cells leave the explant after a week and then colonize the Petri dish. When the cells have colonized the support, they are trypsinized, reseeded and cultivated in DMEM 10% FCS culture medium at 37 ° C. and 5% carbon dioxide (Invitrogen, France). The cells are treated at the confluence of these, the compounds according to the invention are added at concentrations varying from 1 to 100 μM directly in the culture medium.
c) Mesure des ARN messagersc) Measurement of messenger RNAs
Les ARNm sont extraits des kératinocvtes et des fibroblastes humains normaux en culture traités ou non avec les composés selon l'invention. L'extraction est réalisée à l'aide des réactifs du kit Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene, France) selon les indications du fournisseur. Les ARNm sont ensuite dosés par spectrométrie et quantifiés par RT-PCR quantitative à l'aide du kit Light Cycler Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche, France) sur un appareil Light Cycler System (Roche, France). Des paires d'amorces spécifiques des gènes de la Super Oxyde Dismutase (SOD) et de la Glutathion Peroxydase (GPx), enzymes anti-oxydantes, sont utilisées comme sondes. Des paires d'amorces spécifiques des gènes 36B4, β-actine et GAPDH sont utilisées comme sondes témoins (Cf. tableau I).The mRNAs are extracted from keratinocytes and normal human fibroblasts in culture treated or not with the compounds according to the invention. The extraction is carried out using reagents from the Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene, France) according to the supplier's instructions. The mRNAs are then assayed by spectrometry and quantified by quantitative RT-PCR using the Light Cycler Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche, France) on a Light Cycler System device (Roche, France). Primer pairs specific to the Super Oxide Dismutase (SOD) and Glutathione Peroxidase (GPx) genes, antioxidant enzymes, are used as probes. Pairs of specific primers of the 36B4, β-actin and GAPDH genes are used as control probes (see table I).
d) Mesure de l'activité de la glutathion peroxydase (GPx,d) Measurement of the activity of glutathione peroxidase (GPx,
L'activité de la Glutathion peroxydase est déterminée à partir d'extraits protéiques de cellules (kératinocytes, fibroblastes) traitées ou non avec les composés selon l'invention à des concentrations variant de 1 à 100μM. La mesure de l'activité de la GPx est également réalisée dans des conditions stressantes pour les cellules (0,5 mM paraquat ou 0,6 mM H202 (inducteurs des espèces oxygénées réactives ). La mesure de l'activité des extraits protéiques se fait à l'aide du kit Glutathione Peroxidase Cellular Activity Assay Kit (Sigma) selon les indications du fournisseur. La mesure indirecte est basée sur l'oxydation du glutathion en glutathion oxydé catalysé par la glutathion peroxydase. Le retour à la forme non oxydée est catalysé par la glutathion réductase et le NADPH (β-nicotinamide Adenine Dinucléotide Phophate). La diminution de l'absorbance du NADPH est mesurée à 340 nm à l'aide d'un spectrofluorimètre Shimazu 1501 (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japon) et reflète l'activité de la GPx, puisque la GPx est le facteur limitant de cette réaction.The activity of Glutathione peroxidase is determined from protein extracts of cells (keratinocytes, fibroblasts) treated or not with the compounds according to the invention at concentrations varying from 1 to 100 μM. The measurement of the activity of GPx is also carried out under stressful conditions for the cells (0.5 mM paraquat or 0.6 mM H 2 0 2 (inducers of reactive oxygenated species). The measurement of the activity of the extracts Proteins are made using the Glutathione Peroxidase Cellular Activity Assay Kit (Sigma) according to the supplier's instructions. The indirect measurement is based on the oxidation of glutathione to oxidized glutathione catalyzed by glutathione peroxidase. oxidized is catalyzed by glutathione reductase and NADPH (β-nicotinamide Adenine Dinucleotide Phophate) The decrease in absorbance of NADPH is measured at 340 nm using a Shimazu 1501 spectrofluorimeter (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan) and reflects the activity of GPx, since GPx is the limiting factor for this reaction.
e) Mesure de la peroxydation lipidiquee) Measurement of lipid peroxidation
Les réactifs proviennent de chez Sigma (St Quentin, France) sauf lorsque mentionné autrement.The reagents come from Sigma (St Quentin, France) except when mentioned otherwise.
La peroxydation lipidique est mesurée par dosage du malonodialdéhyde (MDA) par l'acide thiobarbiturique (TBA). Après les traitements, le surnageant des cellules est collecté (900 μl) et 90 μl d'hydroxytoluène butylé y sont ajoutésLipid peroxidation is measured by assaying malonodialdehyde (MDA) with thiobarbituric acid (TBA). After the treatments, the cell supernatant is collected (900 μl) and 90 μl of butylated hydroxytoluene are added thereto.
(Moriiere P. et al. 1991). 1 ml d'une solution de TBA à 0,375% dans 0,25M HGI contenant 15% d'acide trichloroacétique est également ajouté au surnageant. Le mélange est chauffé à 80°C pendant 15 min, refroidi sur glace et la phase organique est extraite avec du butanol. L'analyse de la phase organique se fait par spectrofluorométrie (λexc =515 nm et λem=550 nm), en utilisant un spectrofluorimètre Shimazu 1501 (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japon). Les(Moriiere P. et al. 1991). 1 ml of a 0.375% TBA solution in 0.25M HGI containing 15% trichloroacetic acid is also added to the supernatant. The mixture is heated at 80 ° C for 15 min, cooled on ice and the organic phase is extracted with butanol. The analysis of the organic phase is done by spectrofluorometry (λexc = 515 nm and λem = 550 nm), using a Shimazu 1501 spectrofluorimeter (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan). The
TBARS sont exprimés en équivalents MDA en utilisant comme standard le tétra- éthoxypropane. Les résultats sont normalises par rapport au contenu en protéines des cellules. L'induction de la peroxydation lipidique est obtenue en traitant les cellules avec du paraquat 0,5 mM (inducteur des espèces oxygénées réactives) ou avec du peroxyde d'hydrogène 0,6 mM pendant 4h. La protection anti-radicalaire des composés selon l'invention à des concentrations variant de 1 à 100 μM est évaluée par un pré-traitement de 24h, avant l'induction de la peroxydation lipidique.TBARS are expressed in MDA equivalents using as standard tetraethoxypropane. The results are normalized in relation to the protein content of the cells. The induction of lipid peroxidation is obtained by treating the cells with 0.5 mM paraquat (inducer of reactive oxygen species) or with 0.6 mM hydrogen peroxide for 4 h. Protection anti-free radical of the compounds according to the invention at concentrations varying from 1 to 100 μM is evaluated by a 24 hour pre-treatment, before the induction of lipid peroxidation.
Le traitement des cellules (keratinocytes et fibroblastes) avec les composés selon l'invention favorise l'augmentation de l'expression des ARNm des enzymes antioxydantes, SOD et GPx. Cette augmentation d'activité transcriptionnelle se traduit également par une augmentation de l'activité des enzymes concernées. L'incubation des cellules avec les composés selon l'invention réduit la peroxydation lipidique induite par un agent antioxydant.The treatment of cells (keratinocytes and fibroblasts) with the compounds according to the invention promotes the increase in the expression of the mRNA of the antioxidant enzymes, SOD and GPx. This increase in transcriptional activity also results in an increase in the activity of the enzymes concerned. The incubation of the cells with the compounds according to the invention reduces the lipid peroxidation induced by an antioxidant agent.
Les propriétés antioxydantes des composés selon l'invention sur des cultures de cellules sont ainsi démontrées.The antioxidant properties of the compounds according to the invention on cell cultures are thus demonstrated.
EXEMPLE 38 : Evaluation des propriétés anti-inflammatoires sur des epidermes reconstruitsEXAMPLE 38 Evaluation of the Anti-Inflammatory Properties on Reconstructed Skin
Les epidermes reconstruits sont fournis par la société SkinEthic (Nice, France).The reconstructed epidermis are supplied by the company SkinEthic (Nice, France).
Les epidermes sont utilisés au 1 eme jour (0,63 cm2) lorsque la couche cornée est présente et que l'ultra structure de l'épithélium se rapproche de celle de l'épiderme humain in vivo. Les epidermes reconstruits sont maintenus en culture selon les indications du fournisseur. Les doses de composés selon l'invention employées pour le traitement des epidermes reconstruits varient entre 2 etThe epidermis was used at 1 rd day (0.63 cm 2) when the stratum corneum is present and that the ultra structure of the epithelium is similar to that of the human epidermis in vivo. The reconstructed epidermis is maintained in culture according to the supplier's instructions. The doses of compounds according to the invention used for the treatment of reconstructed epidermis vary between 2 and
10 mg/cm2 pendant 24 et 72h.10 mg / cm 2 for 24 and 72 hours.
Les composés selon l'invention qui ont été testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23 ci-dessus.The compounds according to the invention which have been tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above.
a) Mesure des propriétés anti-inflammatoires Les epidermes reconstruits sont préincubés avec les composés selon l'invention à des concentrations variant de 2 à 10 mg/cm2 pendant 24h, puis traités pendant 6h avec du SDS 0,4% ou 1μg de TPA (12-0-tétradécanoylphorbol-13-acétate). Le potentiel anti-inflammatoire des composés est évalué à l'aide de la technique ELISA. Les milieux de culture (sous-jacents) des epidermes contrôles ou traités sont collectés et congelés à -20°C. La quantification de l'interleukine 1-α (IL1-α) est réalisée à l'aide du kit de détection ELISA IL1-α Kit (R&D System, UK) selon les indications du fournisseur.a) Measurement of the anti-inflammatory properties The reconstructed epidermis are preincubated with the compounds according to the invention at concentrations varying from 2 to 10 mg / cm 2 for 24 h, then treated for 6 h with 0.4% SDS or 1 μg of TPA (12-0-tetradecanoyl phorbol-13-acetate). The anti-inflammatory potential of the compounds is assessed using the ELISA technique. The culture media (underlying) of the control or treated epidermis are collected and frozen at -20 ° C. The quantification of interleukin 1-α (IL1-α) is carried out using the ELISA detection kit IL1-α Kit (R&D System, UK) according to the supplier's instructions.
b) Mesure des ARN messagersb) Measurement of messenger RNAs
Les ARNm sont extraits des epidermes reconstruits traités avec ou sans les composés selon l'invention dans les mêmes conditions que précédemment. L'extraction est réalisée à l'aide des réactifs du kit Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene) selon les indications du fournisseur Les ARNm sont ensuite dosés par spectrométrie et quantifiés par RT-PCR quantitative à l'aide du kit Light Cycler Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche) sur un appareil Light Cycler System (Roche). Des paires d'amorces spécifiques des gènes IL1 (interleukine 1) et IL6 sont utilisées comme sondes.. Des paires d'amorces spécifiques des gènes 36B4, β-actine et GAPDH sont utilisées comme sondes témoins (Cf. tableau I).The mRNAs are extracted from the reconstructed epidermis treated with or without the compounds according to the invention under the same conditions as above. The extraction is carried out using reagents from the Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene) according to the supplier's instructions. The mRNAs are then assayed by spectrometry and quantified by quantitative RT-PCR using the Light Cycler kit. Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche) on a Light Cycler System device (Roche). Primer pairs specific for the IL1 (interleukin 1) and IL6 genes are used as probes. Pairs specific for the 36B4, β-actin and GAPDH genes are used as control probes (see table I).
L'application des composés selon l'invention sur les epidermes reconstruits limite de manière significative la sécrétion de la cytokine inflammatoire, interleukine 1 , après un stress inflammatoire. Cette diminution de la sécrétion est corrélée à la diminution de l'expression des ARNm de cette cytokine mesurée par RT-PCR quantitative. Ces résultats indiquent que le traitement des epidermes reconstruits avec les composés selon l'invention possèdent des propriétés anti- inflammatoires.The application of the compounds according to the invention to the reconstructed epidermis significantly limits the secretion of the inflammatory cytokine, interleukin 1, after inflammatory stress. This decrease in secretion is correlated with the decrease in the expression of mRNAs of this cytokine measured by quantitative RT-PCR. These results indicate that the treatment of reconstructed epidermis with the compounds according to the invention have anti-inflammatory properties.
EXEMPLE 39 : Evaluation des propriétés anti-oxydantes sur des epidermes reconstruitsEXAMPLE 39 Evaluation of the antioxidant properties on reconstructed epidermis
Les composés selon l'invention qui ont été testés sont les composés dont la préparation est décrite dans les exemples 2 à 23 ci-dessus. Les epidermes reconstruits sont fournis par la société SkinEthic (Nice, France). Les epidermes sont utilisés au 17eme jour (0,63 cm2) lorsque la couche cornée est présente et que l'ultra structure de l'épithélium se rapproche de celle de l'épiderme humain in vivo. Les epidermes reconstruits sont maintenus en culture selon les indications du fournisseur. Les doses de composés selon l'invention employées pour le traitement des epidermes reconstruits varient entre 2 et 10 mg/cm2 pendant 24 et 72h.The compounds according to the invention which have been tested are the compounds whose preparation is described in Examples 2 to 23 above. The reconstructed epidermis are supplied by the company SkinEthic (Nice, France). The skins are used to the 17 th day (0.63 cm 2) when the stratum corneum is present and that the ultra structure of the epithelium is similar to that of the human epidermis in vivo. The reconstructed epidermis is maintained in culture according to the supplier's instructions. The doses of compounds according to the invention used for the treatment of reconstructed epidermis vary between 2 and 10 mg / cm 2 for 24 and 72 hours.
a) Mesure des ARN messagers Les ARNm sont extraits des keratinocytes (provenant des epidermes reconstruits traités avec ou sans les composés selon l'invention). L'extraction est réalisée à l'aide des réactifs du kit Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene) selon les indications du fournisseur Les ARNm sont ensuite dosés par spectrométrie et quantifiés par RT-PGR quantitative à l'aide du kit Light Cycler Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche) sur un appareil Light Cycler System (Roche). Des paires d'amorces spécifiques des gènes de la Super Oxyde Dismutase (SOD) et de la Glutathion Peroxydase (GPx), enzymes anti-oxydantes, sont utilisées comme sondes. Des paires d'amorces spécifiques des gènes 36B4, β- actine et GAPDH sont utilisées comme sondes témoins (Cf. tableau I).a) Measurement of messenger RNAs The mRNAs are extracted from keratinocytes (originating from reconstructed epidermis treated with or without the compounds according to the invention). The extraction is carried out using reagents from the Absolutely RNA RT-PCR miniprep Kit (Stratagene) according to the supplier's instructions. The mRNAs are then assayed by spectrometry and quantified by quantitative RT-PGR using the Light Cycler kit. Fast start DNA Master Sybr Green I kit (Roche) on a Light Cycler System device (Roche). Primer pairs specific to the Super Oxide Dismutase (SOD) and Glutathione Peroxidase (GPx) genes, antioxidant enzymes, are used as probes. Pairs of specific primers of the 36B4, β-actin and GAPDH genes are used as control probes (see Table I).
b) Mesure de l'activité de la glutathion peroxydase (GPx)b) Measuring the activity of glutathione peroxidase (GPx)
L'activité de la Glutathion peroxydase est déterminée à partir d'extraits protéiques d'épidermes reconstruits traités ou non avec les composés selon l'invention (2 à 10 mg/cm2). La mesure de l'activité de la GPx est également réalisée dans des conditions stressantes pour les cellules (0,5 mM paraquat (inducteur des espèces oxygénées réactives)). La mesure de l'activité des extraits protéiques se fait à l'aide du kit Glutathione Peroxidase Cellular Activity Assay Kit (Sigma) selon les indications du fournisseur. La mesure indirecte est basée sur l'oxydation du glutathion en glutathion oxydé catalysée par la glutathion peroxydase. Le retour à la forme non oxydée est catalysé par la glutathion réductase et le NADPH (β-nicotinamide Adenine Dinucléotide Phophate). La diminution de l'absorbance du NADPH est mesurée à 340 nm à l'aide d'un spectrofluorimètre Shimazu 1501 (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japon) et reflète l'activité de la GPx, puisque la GPx est le facteur limitant de cette réaction.The activity of Glutathione peroxidase is determined from protein extracts from reconstructed epidermis whether or not treated with the compounds according to the invention (2 to 10 mg / cm 2 ). The measurement of GPx activity is also carried out under stressful conditions for the cells (0.5 mM paraquat (inducer of reactive oxygenated species)). The activity of the protein extracts is measured using the Glutathione Peroxidase Cellular Activity Assay Kit (Sigma) according to the supplier's instructions. The indirect measurement is based on the oxidation of glutathione to oxidized glutathione catalyzed by glutathione peroxidase. The return to the non-oxidized form is catalyzed by glutathione reductase and NADPH (β-nicotinamide Adenine Dinucleotide Phophate). The decrease in absorbance of NADPH is measured at 340 nm at using a Shimazu 1501 spectrofluorimeter (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan) and reflects the activity of GPx, since GPx is the limiting factor for this reaction.
L'analyse par RT-PCR quantitative montre que l'expression des gènes des enzymes anti-oxydantes (SOD et GPx) est augmentée de manière significative. L'augmentation de la quantité des ARNm de la GPx peut être corrélée à l'augmentation de l'activité de cette enzyme anti-oxydante dans les epidermes reconstruits. Ces résultats soulignent les propriétés anti-oxydantes des composés selon l'invention.Analysis by quantitative RT-PCR shows that the expression of the genes of the antioxidant enzymes (SOD and GPx) is significantly increased. The increase in the amount of GPx mRNA can be correlated with the increase in the activity of this antioxidant enzyme in reconstructed epidermis. These results emphasize the antioxidant properties of the compounds according to the invention.
EXEMPLE 40 : Composition cosmétique : crème de iour pour le visaqe, anti-âqeEXAMPLE 40 Cosmetic Composition: Day Cream for Visa, Anti-Age
EXEMPL E 41 : Composition cosmétique : émulsion-gel pour le visaqc ., anti- ridesEXAMPLE E 41: Cosmetic composition: emulsion-gel for visaqc., Anti-wrinkle
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUESBIBLIOGRAPHICAL REFERENCES
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Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement d'une pathologie impliquant une dérégulation du métabolisme des lipides et/ou des glucides, d'une pathologie liée à l'inflammation, et/ou d'une pathologie liée à la prolifération et/ou à la différentiation cellulaire, d'au moins un composé de l'invention répondant à la formule générale (I) :1. Use for the preparation of a pharmaceutical composition intended for the treatment of a pathology involving a deregulation of the metabolism of lipids and / or carbohydrates, of a pathology related to inflammation, and / or of a pathology related to proliferation and / or cell differentiation, of at least one compound of the invention corresponding to the general formula (I):
(ï)(I)
dans laquellein which
o G2 et G3 représentent indépendamment un atome d'oxygène, un atome de soufre ou un groupe N-R4, G2 et G3 ne pouvant représenter de façon simultanée un groupe N-R4,o G2 and G3 independently represent an oxygen atom, a sulfur atom or an N-R4 group, G2 and G3 cannot simultaneously represent an N-R4 group,
• R et R4 représentent indépendamment un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comportant de 1 à 5 atomes de carbone,R and R4 independently represent a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group, saturated or not, optionally substituted, containing from 1 to 5 carbon atoms,
• R1, R2 et R3, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe CO-R5 ou un groupe de formule CO- (CH2)2n+ι-X-R6, l'un au moins des groupes R1, R2 et R3 étant un groupe de formule CO-(CH2)2n+rX-R6, • R5 est un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comprenant éventuellement un groupement cyclique, dont la chaîne principale comporte de 1 à 25 atomes de carbone,• R1, R2 and R3, identical or different, represent a hydrogen atom, a CO-R5 group or a group of formula CO- (CH 2 ) 2n + ι-X-R6, at least one of the groups R1 , R2 and R3 being a group of formula CO- (CH 2 ) 2 n + rX-R6, R5 is a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, optionally comprising a cyclic group, the main chain of which contains from 1 to 25 carbon atoms,
• X est un atome de soufre, un atome de sélénium, un groupe SO ou un groupe S02,X is a sulfur atom, a selenium atom, an SO group or an S0 2 group,
• n est un nombre entier compris entre 0 et 11 ,• n is an integer between 0 and 11,
• R6 est un groupe alkyle linéaire ou ramifié, saturé ou non, éventuellement substitué, comprenant éventuellement un groupe cyclique, dont la chaîne principale comporte de 3 à 23 atomes de carbone, de préférence 10 à 23 atomes de carbone et éventuellement un ou plusieurs hétérogroupes, choisis parmi un atome d'oxygène, un atome de soufre, un atome de sélénium, un groupe SO et un groupe S02.,• R6 is a linear or branched alkyl group, saturated or unsaturated, optionally substituted, optionally comprising a cyclic group, the main chain of which contains from 3 to 23 carbon atoms, preferably 10 to 23 carbon atoms and optionally one or more heterogroups , chosen from an oxygen atom, a sulfur atom, a selenium atom, an SO group and an S0 2 group.,
ses isomères optiques et géométriques, ses racémates, ses sels, ses hydrates et leurs mélanges.its optical and geometric isomers, its racemates, its salts, its hydrates and their mixtures.
2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce qu' un seul des groupes R1, R2 ou R3 représente un atome d'hydrogène.2. Use according to claim 1, characterized in that only one of the groups R1, R2 or R3 represents a hydrogen atom.
3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que, dans le groupe CO-(CH2)2n+.-X-R6, X représente un atome de soufre ou de sélénium et avantageusement un atome de soufre.3. Use according to claim 1 or 2, characterized in that, in the group CO- (CH2) 2 n + .- X-R6, X represents a sulfur or selenium atom and advantageously a sulfur atom.
4. Utilisation selon la revendication 1 , 2 ou 3; caractérisée en ce que, dans le groupe CO-(CH2)2n+.-X-R6, n est compris entre 0 et 3, plus spécifiquement compris entre 0 et 2 et est en particulier égal à 0. 4. Use according to claim 1, 2 or 3; characterized in that, in the group CO- (CH2) 2n + .- X-R6, n is between 0 and 3, more specifically between 0 and 2 and is in particular equal to 0.
5. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que R6 comporte un ou plusieurs hétérogroupes, de préférence 0, 1 ou 2, plus preferentiellement 0 ou 1, choisis parmi un atome d'oxygène, un atome de soufre, un atome de sélénium, un groupe SO et un groupe SO2.5. Use according to one of the preceding claims, characterized in that R6 comprises one or more heterogroups, preferably 0, 1 or 2, more preferably 0 or 1, chosen from an oxygen atom, a sulfur atom, a selenium atom, an SO group and an SO 2 group.
6. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le groupe de formule CO-(CH2)2n+rX-R6 est le groupe CO-CH2-S-C14H29.6. Use according to one of the preceding claims, characterized in that the group of formula CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 is the group CO-CH2-S-C14H29.
7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'au moins un des groupes R1, R2 et R3 représente un groupe CO-(CH2)2n+rX-R6 dans lequel X représente un atome de soufre ou de sélénium et de préférence un atome de soufre et/ou R6 est un groupe alkyle saturé et linéaire comprenant de 3 à 23 atomes de carbone, preferentiellement 13 à 20 atomes de carbone, de préférence 14 à 17, plus preferentiellement 14 à 16, et encore plus preferentiellement 14 atomes de carbone.7. Use according to any one of the preceding claims, characterized in that at least one of the groups R1, R2 and R3 represents a group CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6 in which X represents a sulfur atom or selenium and preferably a sulfur atom and / or R6 is a saturated and linear alkyl group comprising from 3 to 23 carbon atoms, preferably 13 to 20 carbon atoms, preferably 14 to 17, more preferably 14 to 16, and even more preferably 14 carbon atoms.
8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'au moins deux des groupes R1, R2 et R3 sont des groupes GO-(GH2)2n+.-X-R6, identiques ou différents, dans lesquels X représente un atome de soufre ou de sélénium et de préférence un atome de soufre.8. Use according to any one of the preceding claims, characterized in that at least two of the groups R1, R2 and R3 are groups GO- (GH 2 ) 2 n + .- X-R6, identical or different, in which X represents a sulfur or selenium atom and preferably a sulfur atom.
9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que G2 représente un atome d'oxygène ou de soufre, et de préférence un atome d'oxygène.9. Use according to any one of the preceding claims, characterized in that G2 represents an oxygen or sulfur atom, and preferably an oxygen atom.
10. Utilisation selon la revendication précédente, caractérisée en ce que R2 représente un groupe de formule CO-(CH2)2n+rX-R6.10. Use according to the preceding claim, characterized in that R2 represents a group of formula CO- (CH 2 ) 2n + rX-R6.
11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes 1-8, caractérisée en ce que :11. Use according to any one of the preceding claims 1-8, characterized in that:
• G3 est un groupe N-R4 dans lequel R4 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, et G2 est un atome d'oxygène ; et/ou • R2 représente un groupe CO-(CH2)2n+.-X-R6.• G3 is an N-R4 group in which R4 is a hydrogen atom or a methyl group, and G2 is an oxygen atom; and or • R2 represents a group CO- (CH2) 2n + .- X-R6.
12. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que R1 , R2 et R3, identiques ou différents, de préférence identiques, représentent un groupe CO-(CH2)2n+.-X-R6, dans lesquels X représente un atome de soufre ou de sélénium et de préférence un atome de soufre et/ou R6 est un groupe alkyle saturé et linéaire comprenant de 13 à 17 atomes de carbone, de préférence 14 à 17, encore plus preferentiellement 14 atomes de carbone, dans lesquels n est de préférence compris entre 0 et 3, et en particulier égal à 0, plus spécifiquement, R1, R2 et R3, identiques ou différents, représentant des groupes CO-CH2-S-C14H29.12. Use according to any one of the preceding claims, characterized in that R1, R2 and R3, identical or different, preferably identical, represent a group CO- (CH 2 ) 2n + .- X-R6, in which X represents a sulfur or selenium atom and preferably a sulfur atom and / or R6 is a saturated and linear alkyl group comprising from 13 to 17 carbon atoms, preferably 14 to 17, even more preferably 14 carbon atoms, in which n is preferably between 0 and 3, and in particular equal to 0, more specifically, R1, R2 and R3, identical or different, representing groups CO-CH2-S-C14H 29 .
13. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en que le composé de formule (I) est choisi parmi : - 3-(tétradécylthioacétylamino)propane-1,2-diol ;13. Use according to claim 1, characterized in that the compound of formula (I) is chosen from: - 3- (tetradecylthioacetylamino) propane-1,2-diol;
- 1-tétradécylthioacétylamino-2,3-(dipalmitoyloxy)propane ;- 1-tetradecylthioacetylamino-2,3- (dipalmitoyloxy) propane;
- 3-téfradécylthioacétylamino-1 ,2-(ditétradécylthioacétyloxy)propane ;- 3-tefradecylthioacetylamino-1, 2- (ditétradécylthioacétyloxy) propane;
- 3-palmitoylamino-1 ,2-(ditétradécylthioacétyloxy)propane ;- 3-palmitoylamino-1, 2- (ditétradécylthioacétyloxy) propane;
1 ,3-d l(tétradécylthioacétylamino)propan-2-ol ;1, 3-d 1 (tetradecylthioacetylamino) propan-2-ol;
1,3-d ιamino-2-(tétradécylthioacétylo y) propane; tétradêcylthioacétylamino-2-(tétradécylthioacétyloxy)propane ;1,3-d ιamino-2- (tétradécylthioacétylo y) propane; tetradecylthioacetylamino-2- (tetradecylthioacetyloxy) propane;
1 ,3-d oléoylamino-2-(tétradécylthioacétyloxy)propane ; 1,3-d tétradécylthioacétylamino-2-(tétradécylthioacétylthio)propane ; et1,3-d oleoylamino-2- (tetradecylthioacetyloxy) propane; 1,3-d tetradecylthioacetylamino-2- (tetradecylthioacetylthio) propane; and
- 1-tétradécylthioacétylamino-2,3-di(tétradécylthioacétylthio)propane.- 1-tetradecylthioacetylamino-2,3-di (tetradecylthioacetylthio) propane.
14. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la pathologie liée aux dérèglements du métabolisme lipidique et/ou glucidique est choisie parmi le syndrome X, le diabète, l'athérosclérose et l'obésité.14. Use according to any one of the preceding claims, characterized in that the pathology linked to dysregulations of the lipid and / or carbohydrate metabolism is chosen from syndrome X, diabetes, atherosclerosis and obesity.
15. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes 1 à 13, caractérisée en ce que la pathologie liée à l'inflammation est choisie parmi l'athérosclérose, une allergie, l'asthme, l'eczéma, le psoriasis et les démangeaisons.15. Use according to any one of the preceding claims 1 to 13, characterized in that the pathology linked to the inflammation is chosen among atherosclerosis, an allergy, asthma, eczema, psoriasis and itching.
16. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes 1 à 13, caractérisée en ce que la pathologie liée à la prolifération et/ou à la différentiation cellulaire est choisie parmi la carcinogenèse, le psoriasis et l'athérosclérose.16. Use according to any one of the preceding claims 1 to 13, characterized in that the pathology linked to proliferation and / or cell differentiation is chosen from carcinogenesis, psoriasis and atherosclerosis.
17. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes 1 à 13, caractérisée en ce que la pathologie est choisie parmi les maladies cardiovasculaires, le syndrome X, la resténose, le diabète de type I ou II, de préférence de type II, l'obésité, l'hypertension, en particulier l'hypertension artérielle, des cancers, en particulier le cancer de l'anus, du rectum, du colon, de l'intestin, du duodénum, de l'estomac, de la prostate, des testicules, de la vessie, du rein, du pancréas, du foie, du larynx, du sein, des poumons, la leucémie et les mélanomes, et des maladies dermatologiques.17. Use according to any one of the preceding claims 1 to 13, characterized in that the pathology is chosen from cardiovascular diseases, syndrome X, restenosis, type I or II diabetes, preferably type II, l obesity, hypertension, in particular high blood pressure, cancers, in particular cancer of the anus, rectum, colon, intestine, duodenum, stomach, prostate, testes, bladder, kidney, pancreas, liver, larynx, breast, lungs, leukemia and melanomas, and dermatological diseases.
18. Utilisation d'au moins un composé selon l'une des revendications 1 à 13, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition cosmétique, pour prévenir ou traiter les effets du vieillissement intrinsèque ou extrinsèque cutané. 18. Use of at least one compound according to one of claims 1 to 13, in a cosmetic composition or for the preparation of a cosmetic composition, for preventing or treating the effects of intrinsic or extrinsic skin aging.
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