EP0328859A1 - Device for washing a test tube and/or the outer surface of a bead - Google Patents
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Definitions
- the invention relates to a device according to the preamble of claim 1.
- a device was previously used which allows the liquid to be sucked out of the reaction vessel through a tube and also makes it possible to introduce a washing liquid into the reagent vessel via a supply channel after suction, the amount of washing liquid flowing in via electrodes connected to a liquid level sensor connected, can be regulated automatically.
- the lower end of the tube the opening width of which corresponds to the diameter of the tube, served as the suction mouth of the device.
- the previously used device was pressed against the bottom of the reaction vessel by a spring attached to the upper end of the device. So that the liquid could be sucked off when the tube was placed on the floor, the lower end of the tube, which acts as a suction mouth, was notched in two opposite positions.
- test tubes containing reagent spheres with reagent-coated inner walls are also possible.
- the previously used devices for suction and washing are not well suited, since their suction mouth rests on the top of the reagent sphere and as soon as the liquid level drops below the height of the suction mouth, suction the liquid surrounding the reagent ball body is not possible.
- the object of the invention is therefore to provide a device according to the preamble of claim 1, which enables complete removal of the liquid and thorough washing of the surfaces in the same automatic analyzer both for reaction vessels with reagent-coated inner surfaces and also for reaction vessels which contain a reagent spherical body .
- the tube of the device according to the invention is shortened by comparison with that of a device according to the prior art at its suction-mouth end by the diameter of the reagent ball body and has a funnel-shaped suction mouth, the diameter of which is preferably at least as large as the diameter of the reagent ball body.
- the device according to the invention is introduced into the reaction vessel before or after the addition of a sample dissolved in a liquid and, if present, is applied to the reagent ball body via the spring. If the reaction vessel does not contain a reagent ball body, the device is immersed approximately as deep into the tube as if a reagent ball body were present, i.e. the suction mouth of the device is not seated on the bottom of the reaction vessel. After a reaction time, the liquid is sucked off via the suction mouth of the tube and the washing liquid is then filled into the tube via the feed channel. The addition of washing liquid is interrupted as soon as the liquid level in the tube touches the two electrodes.
- the device according to the invention is preferably designed according to claim 2 and particularly preferably according to claim 3.
- the funnel shape of the suction mouth is by an outdoors Attachment attached to the end of the tube. This is preferably attached to the free end of the tube according to claim 5.
- an embodiment according to claim 6 is preferably provided.
- the device according to the exemplary embodiment has a suction mouth 2, the inner surface 18 of which is concavely curved in the axial section and is delimited by an attachment 22 plugged onto the free end 20 of the tube 6.
- the outer surface of the tube 6 and a jacket 8 enclosing the tube 6 at an axial distance from its suction opening 2 with a radial distance delimit a washing liquid supply channel 10 which opens into an interior 26 of a head part 24.
- the tube 6 passes through this interior space 26.
- the interior space 26 of the head part 24 can be connected to a washing liquid supply device via a further tube 28.
- In the end of the jacket 8 facing the suction mouth 2 there are holes 12 through which the washing liquid emerges from the washing liquid supply channel 10.
- Two electrodes 14 and 16 guided through the head part 24 can be connected to an electrical liquid level sensor. Up to exposed end sections 30, 32, they are surrounded by insulating material jackets 34, 36. A spring 4 enclosing the upper end of the tube 6 presses the head part 24 towards the bottom of a reaction vessel.
- a spherical body coated with bovine serum albumin and a conjugate of CEA (carcino embryonic antigen) and peroxidase was placed in a reaction vessel which was also coated with bovine serum albumin and CEA peroxidase.
- CEA carcino embryonic antigen
- the color reaction is carried out in such a way that 500 ml of a reagent consisting of ABTS (2,2'-azino-di- [3-ethylbenzthiazolinesulfonic acid (6)] - diammonium salt and sodium perborate) are added, and after 45 minutes the absorbance at 422 nm was determined.
- a reagent consisting of ABTS (2,2'-azino-di- [3-ethylbenzthiazolinesulfonic acid (6)] - diammonium salt and sodium perborate
- TSH-Enzymuntest® TSH thyroid stimulating hormone
- the tube wall being coated.
- the tube contained no reagent spheres.
- the solutions, coated tubes and standards used come from the Enzyme Test @ TSH (Boehringer Mannheim GmbH, order number 736083). The determination is carried out in accordance with the manufacturer's instructions.
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Abstract
Description
Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung nach dem Oberbegriff des Anspruchs 1.The invention relates to a device according to the preamble of claim 1.
Bei chemischen Bindungs-Reaktionen, vor allem bei immunologischen Tests, bei denen Reaktionsgefäße verwendet werden, deren Innenwände mit einem spezifisch bindefähigen Reagenz beschichtet sind, ist es nötig, nach Zugabe der in einer Flüssigkeit gelöst vorliegenden, zu bindenden Probe oder einer zu analysierenden flüssigen Probe nach einer Reaktionszeit die Flüssigkeit aus dem Röhrchen zu entfernen und dann die an die Innenwand des Reagenzgefäßes gebundene Schicht aus Reagenz und spezifisch bindenden Probenbestandteilen zu waschen, so daß nicht spezifisch gebundene Probenbestandteile entfernt werden.In chemical binding reactions, especially in immunological tests, in which reaction vessels are used whose inner walls are coated with a specifically bindable reagent, it is necessary, after adding the sample to be bound, which is dissolved in a liquid, or a liquid sample to be analyzed after a reaction time, remove the liquid from the tube and then wash the layer of reagent and specifically binding sample components bound to the inner wall of the reagent vessel, so that non-specifically bound sample components are removed.
Hierzu wurde bisher eine Vorrichtung verwendet, die das Absaugen der Flüssigkeit aus dem Reaktionsgefäß durch ein Röhrchen erlaubt und es außerdem ermöglicht, nach dem Absaugen über einen Zuführungskanal eine Waschflüssigkeit in das Reagenzgefäß einzubringen, wobei die zufließende Menge an Waschflüssigkeit über Elektroden, die an einen Flüssigkeitspegelfühler angeschlossen sind, automatisch reguliert werden kann. Als Ansaugmündung der Vorrichtung diente hierbei das untere Ende des Röhrchens, dessen Öffnungsbreite dem Durchmesser des Röhrchens entspricht. Um die Flüssigkeit aus dem Reaktionsgefäß möglichst vollständig abzusaugen und so eine gründliche Waschung der beschichteten Wände des Reaktionsgefäßes zu erreichen, wurde die bisher verwendete Vorrichtung durch eine am oberen Ende der Vorrichtung angebrachten Feder gegen den Boden des Reaktionsgefäßes gedrückt. Damit auch bei Auflage des Röhrchens auf den Boden die Flüssigkeit abgesaugt werden konnte, war das als Ansaugmündung fungierende untere Ende des Röhrchens an zwei gegenüberliegenden Stellen eingekerbt.For this purpose, a device was previously used which allows the liquid to be sucked out of the reaction vessel through a tube and also makes it possible to introduce a washing liquid into the reagent vessel via a supply channel after suction, the amount of washing liquid flowing in via electrodes connected to a liquid level sensor connected, can be regulated automatically. The lower end of the tube, the opening width of which corresponds to the diameter of the tube, served as the suction mouth of the device. In order to aspirate the liquid from the reaction vessel as completely as possible and thus achieve a thorough washing of the coated walls of the reaction vessel, the previously used device was pressed against the bottom of the reaction vessel by a spring attached to the upper end of the device. So that the liquid could be sucked off when the tube was placed on the floor, the lower end of the tube, which acts as a suction mouth, was notched in two opposite positions.
Chemische Bindungsreaktionen und immunologische Tests werden aber heute oft automatisiert durchgeführt, wobei abwechselnd sowohl Reaktionsgefäße, mit Reagenz-beschichteten Innenwänden, als auch Reaktionsgefäße, welche Reagenz-beschichtete Reagenzkugelkörper (sogenannte "beads") enthalten, verwendet werden. Auch die Verwendung von Reagenzkugelkörpern enthaltenden Reaktionsgefäßen mit Reagenz-beschichteten Innenwänden ist möglich. Zum Entfernen der Probenflüssigkeit und zum Waschen von Reaktionsgefäßen, welche Reagenzkugelkörper enthalten, sind jedoch die bisher verwendeten Vorrichtungen zum Absaugen und Waschen nicht gut geeignet, da ihre Ansaugmündung oben an dem Reagenzkugeikörper aufliegt und sobald der Flüssigkeitspegel unter die Höhe der Ansaugmündung absinkt, ein Absaugen der den Reagenzkugelkörper umgebenden Flüssigkeit nicht möglich ist. Aufgabe der Erfindung ist es daher, eine Vorrichtung nach dem Oberbegriff des Anspruchs 1 anzugeben, die im gleichen Analysenautomaten sowohl bei Reaktionsgefäßen mit reagenzbeschichteten Innenflächen, als auch bei Reaktionsgefäßen, welche einen Reagenzkugelkörper enthalten, ein vollständiges Entfemen'der Flüssigkeit und gründliches Waschen der Flächen ermöglicht.However, chemical binding reactions and immunological tests are often carried out in an automated manner today, with both reaction vessels with reagent-coated inner walls and reaction vessels which contain reagent-coated reagent spheres (so-called "beads") being used alternately. The use of test tubes containing reagent spheres with reagent-coated inner walls is also possible. For the removal of the sample liquid and for the washing of reaction vessels which contain reagent spheres, however, the previously used devices for suction and washing are not well suited, since their suction mouth rests on the top of the reagent sphere and as soon as the liquid level drops below the height of the suction mouth, suction the liquid surrounding the reagent ball body is not possible. The object of the invention is therefore to provide a device according to the preamble of claim 1, which enables complete removal of the liquid and thorough washing of the surfaces in the same automatic analyzer both for reaction vessels with reagent-coated inner surfaces and also for reaction vessels which contain a reagent spherical body .
Diese Aufgabe wird gelöst durch eine Vorrichtung gemäß Anspruch 1.This object is achieved by a device according to claim 1.
Das Röhrchen der erfindungsgemäßen Vorrichtung ist gegenüber dem einer Vorrichtung nach dem Stand der Technik an seinem ansaugmündungsseitigen Ende um den Durchmesser des Reagenzkugelkörpers verkürzt und weist eine trichterförmige Ansaugmündung auf, deren Durchmesser vorzugsweise mindestens so groß ist wie der Durchmesser des Reagenzkugelkörpers.The tube of the device according to the invention is shortened by comparison with that of a device according to the prior art at its suction-mouth end by the diameter of the reagent ball body and has a funnel-shaped suction mouth, the diameter of which is preferably at least as large as the diameter of the reagent ball body.
Die erfindungsgemäße Vorrichtung wird in das Reaktionsgefäß vor oder nach Zugabe einer in einer Flüssigkeit gelost vorliegenden Probe eingebracht und über die Feder an den Reagenzkugelkörper, falls vorhanden, angelegt. Enthält das Reaktionsgefäß keinen Reagenzkugelkörper, so wird die Vorrichtung etwa ebenso tief in das Röhrchen eingetaucht, als wenn ein Reagenzkugelkörper vorhanden wäre, d.h. die Ansaugmündung der Vorrichtung sitzt nicht auf dem Boden des Reaktionsgefäßes auf. Über die Ansaugmündung des Röhrchens wird nach einer Reaktionszeit die Flüssigkeit abgesaugt und danach die Waschflüssigkeit über den Zuführungskanal in das Röhrchen gefüllt. Hierbei wird die Zugabe an Waschflüssigkeit unterbrochen, sobald der Flüssigkeitspegel in dem Röhrchen die beiden Elektroden berührt. Dies geschieht automatisch über einen Anschluß der Elektroden an einen elektrischen Flüssigkeitspregelfühler und einen damit verbundenen Schließmechanismus an der Waschflüssigkeit-Zuführungseinrichtung. Die Waschflüssigkeit wird dann, wie bereits für die Probenflüssigkeit beschrieben, entfernt. Durch die Trichterform der Ansaugmündung wird hierbei eine Verletzung der Reagenzschicht auf einem Reagenzkugelkörper vermieden und ein vollständiges Absaugen auch der einen Reagenzkugelkörper umgebenden Flüssigkeit ermöglicht. Mit der erfindungsgemäßen Vorrichtung gelingt das Absaugen von Flüssigkeit und Waschen bei Reaktionsgefäßen mit Reagenzkugelkörper besser und überraschenderweise auch bei Reaktionsgefäßen ohne Reagenzkugelkörper genauso gut wie mit einer bekannten Vorrichtung (Beispiele 1 und 2).The device according to the invention is introduced into the reaction vessel before or after the addition of a sample dissolved in a liquid and, if present, is applied to the reagent ball body via the spring. If the reaction vessel does not contain a reagent ball body, the device is immersed approximately as deep into the tube as if a reagent ball body were present, i.e. the suction mouth of the device is not seated on the bottom of the reaction vessel. After a reaction time, the liquid is sucked off via the suction mouth of the tube and the washing liquid is then filled into the tube via the feed channel. The addition of washing liquid is interrupted as soon as the liquid level in the tube touches the two electrodes. This is done automatically via a connection of the electrodes to an electrical liquid control sensor and a closing mechanism connected to it on the washing liquid supply device. The washing liquid is then removed, as already described for the sample liquid. The funnel shape of the suction mouth prevents damage to the reagent layer on a reagent ball body and enables the liquid surrounding a reagent ball body to be completely sucked off. With the device according to the invention, the suctioning off of liquid and washing in reaction vessels with a test ball body succeeds better and surprisingly also in reaction vessels without a test ball body as well as with a known device (Examples 1 and 2).
Um die Ansaugmündung besonders gut an den Reagenzkugelkörper anlegen zu können, wird die erfindungsgemäße Vorrichtung bevorzugt gemäß Anspruch 2 und besonders bevorzugt gemäß Anspruch 3 ausgebildet.In order to be able to place the suction mouth particularly well on the reagent ball body, the device according to the invention is preferably designed according to
Eine weitere bevorzugte Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung ist im Anspruch 4 dargestellt. In dieser Ausführungsform wird die Trichterform der Ansaugmündung durch einen am freien Ende des Röhrchens befestigten Aufsatz gebildet. Dieser ist nach Anspruch 5 bevorzugt auf das freie Ende des Röhrchens aufgesteckt. Um verschiedene Größen von Aufsätzen mit verschiedenen trichterförmigen, bevorzugt konkav hohlkugelig gewölbten Innenflächen der Aufsätze an dem freien Ende des Röhrchens befestigen zu können und daher die Ansaugmündung der Vorrichtung an die jeweils verwendete Größe der Reagenzkugelkörpoer anzupassen, wird vorzugsweise eine Ausbildung gemäß Anspruch 6 vorgesehen.Another preferred embodiment of the device according to the invention is shown in claim 4. In this embodiment, the funnel shape of the suction mouth is by an outdoors Attachment attached to the end of the tube. This is preferably attached to the free end of the tube according to claim 5. In order to be able to attach different sizes of attachments with different funnel-shaped, preferably concave, hollow spherical inner surfaces of the attachments to the free end of the tube and therefore to adapt the suction mouth of the device to the size of the reagent ball body used in each case, an embodiment according to claim 6 is preferably provided.
Ein Ausführungsbeispiel der Vorrichtung wird im folgenden unter Hinweis auf die beigefügten Zeichnungen beschrieben:
- Fig. 1 zeigt einen Vertikalschnitt durch die Vorrichtung;
- Fig. 2 zeigt eine Ansicht der Vorrichtung um ihre Vertikalachse gegenüber der Darstellung in Figur 1 um 90 verdreht.
- Fig. 1 shows a vertical section through the device;
- FIG. 2 shows a view of the device rotated by 90 about its vertical axis in relation to the illustration in FIG. 1.
Die Vorrichtung nach dem Ausführungsbeispiel weist eine Ansaugmündung 2 auf, deren Innenfläche 18 im Achsschnitt konkav gewölbt und durch einen auf das freie Ende 20 des Röhrchens 6 gesteckten Aufsatz 22 begrenzt ist. Die Außenfläche des Röhrchens 6 und ein das Röhrchen 6 in axialem Abstand von seiner Ansaugmündung 2 mit radialem Abstand umschließender Mantel 8 begrenzen einen Waschflüssigkeits-Zuführkanal 10, der in einem Innenraum 26 eines Kopfteil 24 mündet. Das Röhrchen 6 durchsetzt diesen Innenraum 26. Der Innenraum 26 des Kopfteils 24 ist über ein weiteres Röhrchen 28 an eine Waschflüssigkeitszuführeinrichtung anschließbar. In dem der Ansaugmündung 2 zugewandten Ende des Mantels 8 befinden sich Löcher 12, durch die die Waschflüssigkeit aus dem Waschflüssigkeits-Zuführkanal 10 austritt.The device according to the exemplary embodiment has a
Zwei durch das Kopfteil 24 geführte Elektroden 14 und 16 sind an einen elektrischen Flüssigkeitspegelfühler anschließbar. Bis zu freiliegenden Endabschnitten 30, 32 sind sie von Isolierstoffmänteln 34, 36 umschlossen. Eine das obere Ende des Röhrchens 6 umschließende Feder 4 drückt das Kopfteil 24 in Richtung zum Boden eines Reaktionsgefäßes.Two
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung weiter.The following examples further illustrate the invention.
Die Effektivität der Waschung mit der erfindungsgemäßen Vorrichtung im Vergleich mit einer um den Durchmesser des Reagenzkugelkörpers verkürzten, bekannten Vorrichtung wurde in einem einen Reagenzkugelkörper ("bead", Polystyrolkugel mit Durchmesser 6,3 mm) enthaltenden Reaktionsgefäß überprüft.The effectiveness of the washing with the device according to the invention in comparison with a known device shortened by the diameter of the test ball body was checked in a reaction vessel containing a test ball body (“bead”, polystyrene ball with a diameter of 6.3 mm).
Dazu wurde ein mit Rinderserumalbumin und einem Konjugat aus CEA (Carcino-embryonales Antigen) und Peroxidase beschichteter Kugelkörper in ein ebenfalls mit Rinderserumalbumin und CEA-Peroxidase beschichtetes Reaktionsgefäß gegeben. Je effektiver die Waschung ist, um so mehr des adsorptiv gebundenen CEA-Konjugats müßte abgelöst werden. Damit müßte, wenn gut gewaschen wurde, in einer nachfolgenden Farbreaktion ein möglichst geringer Meßwert erhalten werden.For this purpose, a spherical body coated with bovine serum albumin and a conjugate of CEA (carcino embryonic antigen) and peroxidase was placed in a reaction vessel which was also coated with bovine serum albumin and CEA peroxidase. The more effective the washing, the more of the adsorptively bound CEA conjugate would have to be removed. This means that if washing was done well, the lowest possible measured value would have to be obtained in a subsequent color reaction.
Die Farbreaktion erfolgt in der Weise, daß 500 ml eines Reagenzes, bestehend aus ABTS (2,2'-Azino- di-[3-ethylbenzthiazolinsulfonsäure (6)]-diammoniumsalz und Natriumperborat), zugegeben wurden und nach 45 min die Extinktion bei 422 nm bestimmt wurde.The color reaction is carried out in such a way that 500 ml of a reagent consisting of ABTS (2,2'-azino-di- [3-ethylbenzthiazolinesulfonic acid (6)] - diammonium salt and sodium perborate) are added, and after 45 minutes the absorbance at 422 nm was determined.
Das Ergebnis zeigt Tabelle I. Dort sind die Anzahl der Waschschritte sowie die Größe des Meßsignals bei 422 nm in mE angegeben. Es zeigte sich, daß mit einer erfindungsgemäßen Vorrichtung, deren Ansaugmündung als Kunststoffaufsatz auf das freie Ende des Röhrchens ausgebildet war, wesentlich geringere Meßsignale und damit eine bessere Waschung erreicht wurde. Außerdem war der Variationskoeffizient (VK), welcher ein Maß für die Genauigkeit darstellt, mit der erfindungsgemäßen Vorrichtung kleiner.
Es wurde ein TSH-Enzymuntest® TSH (Thyroid-stimulierendes Hormon) mit einer erfindungsgemäßen Vorrichtung im Vergleich mit einer bekannten Vorrichtung durchgeführt, wobei die Röhrchenwand beschichtet war. Das Röhrchen enthielt keine Reagenzkugelkörper. Die verwendeten Lösungen, beschichteten Röhrchen und Standards entstammen dem Enzymuntest@ TSH (Boehringer Mannheim GmbH, Bestellnummer 736083). Die Durchführung der Bestimmung erfolgt analog der Vorschrift des Herstellers.A TSH-Enzymuntest® TSH (thyroid stimulating hormone) was carried out with a device according to the invention in comparison with a known device, the tube wall being coated. The tube contained no reagent spheres. The solutions, coated tubes and standards used come from the Enzyme Test @ TSH (Boehringer Mannheim GmbH, order number 736083). The determination is carried out in accordance with the manufacturer's instructions.
In mit Anti-TSH-Antikörpern beschichtete Röhrchen wurde 1 ml Lösung 1:
und 200µl TSH-Standard gegeben und 60 Minuten bei 20 bis 25°C inkubiert. Nach 6-maligem Aussaugen und Spülen (?) wird 1 ml einer Lösung aus 40 U/1 Anti-TSH-Peroxidase-Konjugat in obengenannten Puffer zugegeben und 60 Minuten bei 20 bis 25 C inkubiert. Die Röhrchen wurden 6-mal ausgesaugt und gespült. Danach wurde 1 ml einer Lösung, bestehend aus
zugegeben und 45 Minuten bei 20 bis 25 °C inkubiert. Danach wurde gegen letztgenannte Lösung als Leerwert eine photometrische Bestimmung bei λ= 22 nm durchgeführt. Tabelle 11 zeigt die mit verschiedenen Standards erhaltenen Meßergebnisse. Daraus ergibt sich, daß mit der erfindungsgemäßen Vorrichtung vergleichbar gute Ergebnisse wie mit einer bekannten Vorrichtung für wandbeschichtete Immunoassays erhalten werden können.
and 200µl TSH standard and incubated at 20 to 25 ° C for 60 minutes. After sucking and rinsing 6 times (?), 1 ml of a solution of 40 U / 1 anti-TSH-peroxidase conjugate in the abovementioned buffer is added and incubated at 20 to 25 C for 60 minutes. The tubes were sucked out 6 times and rinsed. Then 1 ml of a solution consisting of
added and incubated at 20 to 25 ° C for 45 minutes. A photometric determination was then carried out at λ = 22 nm against the latter solution as a blank. Table 11 shows the measurement results obtained with various standards. It follows from this that results which are comparable with the device according to the invention can be obtained as with a known device for wall-coated immunoassays.
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