EA046339B1 - Радиоактивная метка, связывающая psma двумя способами, и терапевтическое средство - Google Patents
Радиоактивная метка, связывающая psma двумя способами, и терапевтическое средство Download PDFInfo
- Publication number
- EA046339B1 EA046339B1 EA202191691 EA046339B1 EA 046339 B1 EA046339 B1 EA 046339B1 EA 202191691 EA202191691 EA 202191691 EA 046339 B1 EA046339 B1 EA 046339B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- οοεοοο
- rhpsma
- minus
- dmf
- cancer
- Prior art date
Links
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 title claims description 51
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 title claims description 48
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 title claims 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 title description 29
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 title description 28
- 239000003814 drug Substances 0.000 title description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 title 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 80
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 69
- BWZVCCNYKMEVEX-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-Trimethylpyridine Chemical compound CC1=CC(C)=NC(C)=C1 BWZVCCNYKMEVEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 31
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 claims description 25
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 22
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 22
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 22
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 20
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 15
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 11
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 10
- AUHZEENZYGFFBQ-UHFFFAOYSA-N 1,3,5-Me3C6H3 Natural products CC1=CC(C)=CC(C)=C1 AUHZEENZYGFFBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N sym-collidine Natural products CC1=CN=C(C)C(C)=C1 GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine hydrochloride Chemical compound Cl.ON WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 7
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 5
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 claims description 4
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 claims description 3
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 claims description 3
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 claims description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 2
- 229910052733 gallium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- CHPZKNULDCNCBW-UHFFFAOYSA-N gallium nitrate Inorganic materials [Ga+3].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O CHPZKNULDCNCBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 74
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 52
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 48
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 46
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 41
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 39
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 38
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 37
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 36
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 36
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 36
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 35
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 33
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 33
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 33
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 32
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 31
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 30
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 25
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 23
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 23
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 21
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 20
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 17
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 17
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 16
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 16
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 15
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 15
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 14
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 14
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 14
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N caprylic alcohol Natural products CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 12
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 11
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 11
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 11
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 11
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 10
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 10
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 10
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 10
- ABTOQLMXBSRXSM-UHFFFAOYSA-N silicon tetrafluoride Chemical compound F[Si](F)(F)F ABTOQLMXBSRXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- -1 zinc(II) ions Chemical class 0.000 description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 9
- 238000004980 dosimetry Methods 0.000 description 9
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 9
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 8
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 8
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N tenofovir disoproxil fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(=O)(OCOC(=O)OC(C)C)OCOC(=O)OC(C)C)C=NC2=C1N VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N 0.000 description 8
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 8
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 7
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 7
- 238000009206 nuclear medicine Methods 0.000 description 7
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N palladium Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 7
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 7
- OLWVRJUNLXQDSP-RYUDHWBXSA-N (2s)-2-[[(1s)-1-carboxy-5-[(6-fluoropyridine-3-carbonyl)amino]pentyl]carbamoylamino]pentanedioic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCNC(=O)C1=CC=C(F)N=C1 OLWVRJUNLXQDSP-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 6
- OISVCGZHLKNMSJ-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethylpyridine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=N1 OISVCGZHLKNMSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010083158 PSMA-1007 Proteins 0.000 description 6
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 6
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 6
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 6
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 6
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 6
- 238000002600 positron emission tomography Methods 0.000 description 6
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 6
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 6
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 6
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 6
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 6
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 5
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 5
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 5
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 5
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 5
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 5
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 5
- 210000003681 parotid gland Anatomy 0.000 description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 5
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 210000001913 submandibular gland Anatomy 0.000 description 5
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 5
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052691 Erbium Inorganic materials 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 4
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 4
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 4
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N n-Octanol Natural products CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 4
- 210000005009 osteogenic cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- LEHBURLTIWGHEM-UHFFFAOYSA-N pyridinium chlorochromate Chemical compound [O-][Cr](Cl)(=O)=O.C1=CC=[NH+]C=C1 LEHBURLTIWGHEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 4
- 239000002287 radioligand Substances 0.000 description 4
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 4
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 4
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 4
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 4
- SUAUFMLRKFUOID-AREMUKBSSA-N (4r)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxo-4-[4,7,10-tris[2-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-2-oxoethyl]-1,4,7,10-tetrazacyclododec-1-yl]pentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)CN1CCN(CC(=O)OC(C)(C)C)CCN([C@H](CCC(O)=O)C(=O)OC(C)(C)C)CCN(CC(=O)OC(C)(C)C)CC1 SUAUFMLRKFUOID-AREMUKBSSA-N 0.000 description 3
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DJVUUNAPIIORNL-UHFFFAOYSA-N 4-[ditert-butyl(fluoro)silyl]benzaldehyde Chemical compound CC(C)(C)[Si](F)(C(C)(C)C)C1=CC=C(C=O)C=C1 DJVUUNAPIIORNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- OIBURYWSZMTUQZ-UHFFFAOYSA-N CC(C)(C)[Si](F)(c1ccc(cc1)C(O)=O)C(C)(C)C Chemical compound CC(C)(C)[Si](F)(c1ccc(cc1)C(O)=O)C(C)(C)C OIBURYWSZMTUQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052771 Terbium Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052776 Thorium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 3
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- AEBYHKKMCWUMKX-LNTZDJBBSA-K gallium (68Ga) gozetotide Chemical compound [68Ga+3].OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCNC(=O)CCCCCNC(=O)CCC1=CC=C(O)C(CN(CCN(CC([O-])=O)CC=2C(=CC=C(CCC([O-])=O)C=2)O)CC([O-])=O)=C1 AEBYHKKMCWUMKX-LNTZDJBBSA-K 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl benzene Natural products OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052745 lead Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 3
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 3
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 3
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 3
- HGASFNYMVGEKTF-UHFFFAOYSA-N octan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CCCCCCCCO HGASFNYMVGEKTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 3
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 229910052702 rhenium Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N thiophenol Chemical compound SC1=CC=CC=C1 RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N triphenylmethyl chloride Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(Cl)C1=CC=CC=C1 JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VXGGBPQPMISJCA-STQMWFEESA-N (2s)-2-[[(2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 VXGGBPQPMISJCA-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- OURCJXVOBHLREF-UHFFFAOYSA-N (4-bromophenyl)methoxy-tert-butyl-dimethylsilane Chemical compound CC(C)(C)[Si](C)(C)OCC1=CC=C(Br)C=C1 OURCJXVOBHLREF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 101710183768 Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 238000012879 PET imaging Methods 0.000 description 2
- 108010037516 PSMA-617 Proteins 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFSLWBXXFJQRDL-UHFFFAOYSA-N Peracetic acid Chemical compound CC(=O)OO KFSLWBXXFJQRDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 2
- 206010046555 Urinary retention Diseases 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000002793 bombesin derivative Substances 0.000 description 2
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- WGAZDTADWBWCGU-UHFFFAOYSA-N ditert-butyl(difluoro)silane Chemical compound CC(C)(C)[Si](F)(F)C(C)(C)C WGAZDTADWBWCGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ADDUWCIPBPRNKM-UHFFFAOYSA-N ditert-butyl-[4-[[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxymethyl]phenyl]-fluorosilane Chemical compound C(C)(C)(C)[Si](F)(C1=CC=C(C=C1)CO[Si](C)(C)C(C)(C)C)C(C)(C)C ADDUWCIPBPRNKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine hydrate Chemical compound O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012216 imaging agent Substances 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- UBJFKNSINUCEAL-UHFFFAOYSA-N lithium;2-methylpropane Chemical compound [Li+].C[C-](C)C UBJFKNSINUCEAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 208000010658 metastatic prostate carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- TYFQFVWCELRYAO-UHFFFAOYSA-N suberic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCC(O)=O TYFQFVWCELRYAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- BCNZYOJHNLTNEZ-UHFFFAOYSA-N tert-butyldimethylsilyl chloride Chemical compound CC(C)(C)[Si](C)(C)Cl BCNZYOJHNLTNEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 2
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- JBHPLHATEXGMQR-LFWIOBPJSA-N vipivotide tetraxetan Chemical compound OC(=O)CC[C@H](NC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)[C@H](CC1=CC=C2C=CC=CC2=C1)NC(=O)[C@H]1CC[C@H](CNC(=O)CN2CCN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC2)CC1)C(O)=O)C(O)=O JBHPLHATEXGMQR-LFWIOBPJSA-N 0.000 description 2
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 2
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 1,1'-Carbonyldiimidazole Substances C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- XBJPSVQFCQFGDC-WSCOIBMGSA-K 2-[4-[2-[[(2R)-1-[[(4R,7S,10S,13R,16S,19R)-10-(4-aminobutyl)-4-[[(1S,2R)-1-carboxy-2-hydroxypropyl]carbamoyl]-7-[(1R)-1-hydroxyethyl]-16-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-13-(1H-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicos-19-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]-7,10-bis(carboxylatomethyl)-1,4,7,10-tetrazacyclododec-1-yl]acetate gallium-68(3+) Chemical compound [68Ga+3].C[C@@H](O)[C@H](NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H](Cc2ccccc2)NC(=O)CN2CCN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC2)C(=O)N[C@@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@H](Cc2c[nH]c3ccccc23)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1)C(O)=O XBJPSVQFCQFGDC-WSCOIBMGSA-K 0.000 description 1
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PECYZEOJVXMISF-UWTATZPHSA-N 3-amino-D-alanine Chemical compound NC[C@@H](N)C(O)=O PECYZEOJVXMISF-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 125000003974 3-carbamimidamidopropyl group Chemical group C(N)(=N)NCCC* 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TYMIFYJJOPYXBG-UHFFFAOYSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl piperidine-1-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N1CCCCC1 TYMIFYJJOPYXBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000819038 Chichester Species 0.000 description 1
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GYHNNYVSQQEPJS-UHFFFAOYSA-N Gallium Chemical compound [Ga] GYHNNYVSQQEPJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100036519 Gastrin-releasing peptide Human genes 0.000 description 1
- 108090000369 Glutamate Carboxypeptidase II Proteins 0.000 description 1
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 description 1
- 101000610640 Homo sapiens U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229910052765 Lutetium Inorganic materials 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OTCCIMWXFLJLIA-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-DL-aspartic acid Natural products CC(=O)NC(C(O)=O)CC(O)=O OTCCIMWXFLJLIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OTCCIMWXFLJLIA-BYPYZUCNSA-N N-acetyl-L-aspartic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O OTCCIMWXFLJLIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 235000003339 Nyssa sylvatica Nutrition 0.000 description 1
- 244000018764 Nyssa sylvatica Species 0.000 description 1
- RFFFFGRYVZESLB-CXODGJKXSA-N OC(=O)CC[C@H](NC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)[C@H](Cc1ccc2ccccc2c1)NC(=O)c1ccc(CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)c2ccc([18F])nc2)cc1)C(O)=O)C(O)=O Chemical compound OC(=O)CC[C@H](NC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)[C@H](Cc1ccc2ccccc2c1)NC(=O)c1ccc(CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)c2ccc([18F])nc2)cc1)C(O)=O)C(O)=O RFFFFGRYVZESLB-CXODGJKXSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001110823 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-A Proteins 0.000 description 1
- 101000712176 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-B Proteins 0.000 description 1
- 229910008051 Si-OH Inorganic materials 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical group [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910006358 Si—OH Inorganic materials 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108050001286 Somatostatin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000011096 Somatostatin receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 102100040374 U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Human genes 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000007825 activation reagent Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010976 amide bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002344 aminooxy group Chemical group [H]N([H])O[*] 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000000498 ball milling Methods 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- DNDCVAGJPBKION-DOPDSADYSA-N bombesin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1NC2=CC=CC=C2C=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CN=CN1 DNDCVAGJPBKION-DOPDSADYSA-N 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N carbamazepine Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2N(C(=O)N)C2=CC=CC=C21 FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000623 carbamazepine Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000001627 cerebral artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000000205 computational method Methods 0.000 description 1
- 230000002153 concerted effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000000119 electrospray ionisation mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- UYAHIZSMUZPPFV-UHFFFAOYSA-N erbium Chemical compound [Er] UYAHIZSMUZPPFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229960004580 glibenclamide Drugs 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L glutamate group Chemical group N[C@@H](CCC(=O)[O-])C(=O)[O-] WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L 0.000 description 1
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-L glutarate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCC([O-])=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- ZNNLBTZKUZBEKO-UHFFFAOYSA-N glyburide Chemical compound COC1=CC=C(Cl)C=C1C(=O)NCCC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(=O)NC2CCCCC2)C=C1 ZNNLBTZKUZBEKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010224 hepatic metabolism Effects 0.000 description 1
- 208000029824 high grade glioma Diseases 0.000 description 1
- 208000018821 hormone-resistant prostate carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002433 hydrophilic molecules Chemical class 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010921 in-depth analysis Methods 0.000 description 1
- VBCVPMMZEGZULK-NRFANRHFSA-N indoxacarb Chemical compound C([C@@]1(OC2)C(=O)OC)C3=CC(Cl)=CC=C3C1=NN2C(=O)N(C(=O)OC)C1=CC=C(OC(F)(F)F)C=C1 VBCVPMMZEGZULK-NRFANRHFSA-N 0.000 description 1
- 238000013383 initial experiment Methods 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 150000002634 lipophilic molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- OHSVLFRHMCKCQY-UHFFFAOYSA-N lutetium atom Chemical compound [Lu] OHSVLFRHMCKCQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 201000011614 malignant glioma Diseases 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- BCVXHSPFUWZLGQ-UHFFFAOYSA-N mecn acetonitrile Chemical compound CC#N.CC#N BCVXHSPFUWZLGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008155 medical solution Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000027939 micturition Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- VEDDBHYQWFOITD-UHFFFAOYSA-N para-bromobenzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=C(Br)C=C1 VEDDBHYQWFOITD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 description 1
- RLZZZVKAURTHCP-UHFFFAOYSA-N phenanthrene-3,4-diol Chemical compound C1=CC=C2C3=C(O)C(O)=CC=C3C=CC2=C1 RLZZZVKAURTHCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- ACVYVLVWPXVTIT-UHFFFAOYSA-M phosphinate Chemical compound [O-][PH2]=O ACVYVLVWPXVTIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 238000012636 positron electron tomography Methods 0.000 description 1
- 238000012809 post-inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- DBABZHXKTCFAPX-UHFFFAOYSA-N probenecid Chemical compound CCCN(CCC)S(=O)(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 DBABZHXKTCFAPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003081 probenecid Drugs 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000003439 radiotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005316 response function Methods 0.000 description 1
- 229910052706 scandium Inorganic materials 0.000 description 1
- SIXSYDAISGFNSX-UHFFFAOYSA-N scandium atom Chemical compound [Sc] SIXSYDAISGFNSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940127044 therapeutic radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000036326 tumor accumulation Effects 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 239000003039 volatile agent Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 1
- VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N yttrium atom Chemical compound [Y] VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004572 zinc-binding Effects 0.000 description 1
Description
Настоящее изобретение относится к соединению формулы (V)
или его фармацевтически приемлемой соли, включающему либо хелатный радиоактивный катион, либо где F необязательно представляет собой 18F. Настоящее изобретение также относится к способу синтеза соединения, которое предотвращает рацемизацию во время синтеза.
В данном описании цитируется ряд документов, включая заявки на патенты и руководства производителей. Раскрытие этих документов, хоть и не считается релевантным для патентоспособности настоящего изобретения, полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки. Более конкретно, все упомянутые документы включены посредством ссылки в том же объеме, как если бы каждый отдельный документ был специально и индивидуально указан для включения посредством ссылки.
Рак предстательной железы
Рак предстательной железы (РПЖ) в течение последних десятилетий остается самым распространенным злокачественным заболеванием среди мужчин с высокой частотой заболеваемости и низкой выживаемостью. Благодаря сверхэкспрессии при раке предстательной железы свою пригодность в качестве отличной мишени для разработки высокочувствительных радиоактивно меченных агентов для эндолучевой терапии и визуализации РПЖ обеспечили простат-специфический мембранный антиген (PSMA) или глутаматкарбоксипептидаза II (GCP II). Простат-специфический мембранный антиген представляет собой внеклеточную гидролазу, каталитический центр которой состоит из двух ионов цинка (II) с мостиковым гидроксидолигандом. Он сильно повышен в метастатических и гормонорезистентных карциномах предстательной железы, но также сообщалось о его физиологической экспрессии в почках, слюнных железах, тонком кишечнике, головном мозге и, в меньшей степени, также в здоровой ткани простаты. В кишечнике PSMA способствует всасыванию фолиевой кислоты за счет преобразования птероилполи-γглутамата в птероилглутамат (фолат). В головном мозге он гидролизует ^ацетил-ласпартил^-глутамат (NAAG) до ^ацетил^-аспартата и глутамата.
Простат-специфический мембранный антиген (PSMA)
Простат-специфический мембранный антиген (PSMA) представляет собой трансмембранный гликопротеин типа II, который высоко сверхэкспрессируется на эпителиальных клетках рака предстательной железы. Несмотря на свое название, PSMA также в разной степени выражен в неоваскулярной сети широкого спектра раков, не относящихся к раку предстательной железы. Среди наиболее распространенных видов рака, не связанных с предстательной железой, экспрессия PSMA наблюдается при раке молочной железы, раке легких, колоректальном раке и при почечно-клеточной карциноме.
Общие необходимые структуры молекул, нацеленных на PSMA, включают связывающую единицу, которая включает цинк-связывающую группу (такую как мочевина, фосфинат или фосфорамидат), связанную с глутаматным фрагментом Р1', которая гарантирует высокое сродство и специфичность к PSMA и обычно дополнительно связана с эффекторной функциональностью. Эффекторная часть более гибкая и в некоторой степени толерантна к структурным модификациям. Входная воронка вмещает две другие важные структурные особенности, которые важны для связывания лиганда. Первой является аргининовый патч, положительно заряженная область на стенке входной воронки и механистическое объяснение предпочтения отрицательно заряженных функциональных групп в позиции P1 PSMA. Это, по-видимому, является причиной предпочтительного включения отрицательно заряженных остатков в лиганд-каркас. Насколько нам известно, углубленный анализ влияния положительных зарядов на лиганды PSMA до сих пор не проводился. При связывании согласованная перестановка боковых цепей аргинина может привести к открытию гидрофобного дополнительного кармана S1, второй важной структуры, которая, как было показано, вмещает йод-бензильную группу нескольких ингибиторов на основе мочевины, что способствует их высокому сродству к PSMA.
Zhang et al. обнаружили удаленный сайт связывания PSMA, который можно применять для бидентатного режима связывания (Zhang et al., Journal of the American Chemical Society 132, 12711-12716 (2010)). Так называемый арен-связывающий сайт представляет собой простой структурный мотив, образованный боковыми цепями Arg463, Arg511 и Trp541, и является частью входной крышки GCPII. Вовлечение сайта связывания арена дистальным мотивом ингибитора может привести к значительному увеличению сродства ингибитора к PSMA из-за эффектов авидности. PSMA I&T был разработан с намерением взаимодействовать таким образом с PSMA, хотя анализ кристаллической структуры схемы связывания отсутствует. Необходимой особенностью согласно Zhang et al. является линкер (субериновая кислота в случае PSMA I&T), который способствует открытой конформации входной крышки GCPII и тем самым
- 1 046339 обеспечивает доступность арен-связывающего сайта. Кроме того, было показано, что структурный состав линкера оказывает значительное влияние на нацеливание на опухоль и биологическую активность, а также на контрастность визуализации и фармакокинетику (Liu et al., Bioorganic & medicinal chemistry letters 21, 7013-7016 (2011)), свойства, которые имеют решающее значение как для высокого качества визуализации, так и для эффективной направленной эндорадиотерапии.
В настоящее время в клинических условиях применяются две категории целевых ингибиторов PSMA. С одной стороны, есть индикаторы с хелатирующими единицами для комплексообразования радионуклидов, такими как PSMA I&T или родственные соединения. С другой стороны, есть малые молекулы, включающие нацеливающую единицу, и эффекторные молекулы.
Наиболее часто применяемыми агентами для селективной визуализации PSMA являются PSMA HBED-CC, PSMA-617 и PSMA I&T, которые преимущественно помечены 68Ga (88,9% β+, Ер+, max = 1,89 МэВ, t1/2 = 68 мин). Среди них 68Ga-PSMA-HBED-CC (также известный как 68Ga-PSMA-11) до сих пор считается золотым стандартом ПЭТ-визуализации (позитронно-эмиссионная томография) РПЖ.
18F мечение
В последнее время несколько групп сосредоточились на разработке новых ингибиторов на основе мочевины, меченных 18F, для диагностики РПЖ. В отличие от радиометалла 68Ga, который можно получить из коммерчески распространенных генераторов радионуклидов 68Ge/68Ga (68Ge; t1/2=270,8 сут), радиоизотоп 18Г-фторид (96,7% β+, Ер+, max = 634 кэВ) требует наличия циклотрона на месте для его получения. Несмотря на это ограничение, 18F, благодаря более длительному периоду полураспада (t1/2 = 109,8 мин) и более низкой энергии позитронов, имеет значительные преимущества с точки зрения рутинной обработки и качества визуализации. Кроме того, существует возможность крупномасштабного производства на циклотроне, что было бы полезно для увеличения пропускной способности пациентов и снижения производственных затрат. Меченый 18F ингибитор PSMA на основе мочевины 18F-DCFPy1 продемонстрировал многообещающие результаты в выявлении первичного и метастатического РПЖ (Rowe et al, Molecular Imaging and Biology, 1-9 (2016)) и превосходство над 68Ga-PSMA-HBED-CC в сравнительном исследовании (Dietlein et al., Molecular Imaging and Biology 17, 575-584 (2015)). На основе структуры PSMA-617 недавно был разработан ^-меченный аналог PSMA-1007, который показал сопоставимое соотношение опухоль/орган (Cardinale et al., Journal of nuclear medicine: official publication, Society of Nuclear Medicine 58, 425-431 (2017); Giesel et al., European journal of nuclear medicine and molecular imaging 43, 1929-1930 (2016)). Сравнительное исследование с 68Ga-PSMA-HBED-CC показало схожую диагностическую точность обоих индикаторов и снижение мочевого клиренса 18F-PSMA-1007, что позволило лучше оценить предстательную железу (Giesel et al., European journal of nuclear medicine and molecular imaging 44, 678-688 (2017)).
Приемлемым подходом для введения меток 18F является применение акцепторов фторида кремния (SIFA). Акцепторы фторида кремния описаны, например, в Lindner et al., Bioconjugate Chemistry 25, 738749 (2014). Для того, чтобы сохранить связь кремний-фторид, применение акцепторов фторида кремния включает необходимость создания стерически сложных групп вокруг атома кремния. Это, в свою очередь, делает акцепторы фторида кремния очень гидрофобными. Что касается связывания с молекулоймишенью, в частности с молекулой-мишенью, которой является PSMA, гидрофобный фрагмент, обеспечиваемый акцептором фторида кремния, может быть применен для установления взаимодействий радиодиагностического или терапевтического соединения с гидрофобным карманом, как описано в Zhang et al., Journal of the American Chemical Society 132, 12711-12716 (2010). Однако, до связывания, более высокая степень липофильности, введенная в молекулу, представляет серьезную проблему в отношении разработки радиофармацевтических препаратов с подходящим биораспределением in vivo, т.е. низким неспецифическим связыванием в нецелевых тканях.
Неспособность решить проблему гидрофобности
Несмотря на многочисленные попытки, проблема гидрофобности, вызванная акцепторами фторида кремния, не была удовлетворительно решена в предшествующем уровне техники.
Для дальнейшего объяснения Schirrmacher E. et al. (Bioconjugate Chem. 2007, 18, 2085-2089) синтезировали различные ^-меченные пептиды с применением высокоэффективного меченного синтон п(ди-трет-бутилфторсилил) бензальдегида ([18F] SIFA-А), который является одним из примеров акцептора фторида кремния. Способ SIFA привел к неожиданно эффективному изотопному обмену 19F-18F и позволил получить 18F-cuhtoh с почти количественным выходом при высокой удельной активности от 225 до 680 ГБк/мкмоль (6081-18 378 Ки/ммоль) без применения очистки HPLC (высокоэффективная жидкостная хроматография). [18F] SIFA-бензальдегид, наконец, был применен для мечения N-концевых аминоокси (N-AO) дериватизированных пептидов АО-Tyr3-октреотата (АО-ТАТЕ), цикло(fK(АО-N)RGD) и N-AOPEG2-[D-Tyr-Gln-Trp-Ala-Val-Ala-His-Thi-Nle-NH2] (AO-BZH3, производное бомбезина) с высоким радиохимическим выходом. Тем не менее, меченые пептиды обладают высокой липофильностью (что можно определить по времени удерживания при HPLC при применении условий, описанных в настоящей заявке), и поэтому они не подходят для дальнейшей оценки на животных моделях или на людях.
В работе Wangler С. et al. (Bioconjugate Chem., 2009, 20 (2), pp 317-321) было описано первое ра
- 2 046339 диофторирование белка (сывороточного альбумина крысы, RSA) с помощью набора на основе SIFA. В качестве меченого агента был получен 4-(ди-терт-бутил[18Б|фторсилил)бензенетиол (Si[18F]FA-SH) путем простого изотопного обмена с радиохимическим выходом (РХВ) 40-60% и соединен непосредственно с малеимидным дериватизированным сывороточным альбумином с общим РХВ 12% в течение 20-30 мин. Технически простая процедура мечения не требует каких-либо сложных процедур очистки и является простым примером успешного применения химии Si-18F для визуализации in vivo с помощью ПЭТ. Кривые время/активность и визуализация μΡΕΤ мышей показали, что большая часть активности была локализована в печени, тем самым демонстрируя, что маркирующий агент является слишком липофильным и направляет зонд in vivo на гепатобилиарную экскрецию и экстенсивный печеночный метаболизм.
Wangler С. et al. (см. Bioconjug Chem. 2010 Dec 15;21(12):2289-96) впоследствии попытались преодолеть главный недостаток технологии SIFA, которым является высокая липофильность получаемых радиофармацевтических препаратов, путем синтеза и оценки новых аналогов SIFA-октреотата (SIFAТугЗ-октреотат, SIFA-Asn(AcNH-β-Glc)-Tyr3-октреотат и SIFA-Asn(AcNH-β-Glc)-PEG-Tyr3-окΊреотат). В этих соединениях между пептидом и фрагментом SIFA были введены гидрофильные линкеры и фармакокинетические модификаторы, т.е. углевод и ПЭГ-линкер плюс углевод. В качестве меры липофильности конъюгатов был определен log P(ow), который составил 0,96 для SIFA-Asn(AcNH-e-Glc)-PEGТуг3-октреотата и 1,23 для SIFA-Asn(AcNH-β-Glc)-Tyr3-октреотата. Эти результаты показывают, что высокая липофильность фрагмента SIFA может быть лишь незначительно компенсирована применением гидрофильных соединений. Первое исследование визуализации продемонстрировало чрезмерный печеночный клиренс/накопление печенью и поэтому не было перенесено в первое исследование на человеке.
Bernard-Gauthier et al. (Biomed Res Int. 2014;2014:454503) рассматривали большое количество различных фрагментов SIFA, о которых сообщалось в литературе, начиная от небольших простетических групп и других соединений с низкой молекулярной массой до меченых пептидов и совсем недавних молекул аффител. На основании этих данных проблема липофильности простетических групп на основе SIFA до сих пор не решена; т.е. не описана методика, которая снижает общую липофильность конъюгированного с SIFA пептида до log D ниже, чем приблизительно минус 2,0.
В работе Lindner S. et al. (Bioconjug Chem. 2014 Apr 16; 25 (4): 738-49) описано, что производные пегилированного бомбезина (PESIN) в качестве специфических лигандов рецептора GRP и пептиды RGD (однобуквенные коды для аргинин-глицин-аспарагиновой кислоты) в качестве специфических связывающих ave3 были синтезированы и помечены фрагментом акцептора фторида кремния (SIFA). Для компенсации высокой липофильности фрагмента SIFA были введены различные гидрофильные модификации структуры, которые привели к снижению значений logD. SIFA-Asn(AcNH-e-Glc)-PESIN, SIFASer(e-Lac)-PESIN, SIFA-Cya-PESIN, SIFA-LysMe3-PESIN, SIFA-γ-карбокси-d-Glu-PESIN, SIFA-Cya2PESIN, SIFA-LysMe3-γ-карбокси-d-Glu-PESIN, SIFA-(γ-карбокси-d-Glu)2-PESIN, SIFA-RGD, SIFA-γкарбокси-d-Glu-RGD, SIFA-(γ-карбокси-d-Glu)2-RGD, SIFA-LysMe3-Y-carboxy-d-Glu-RGD. Все эти пептиды представляют собой уже улучшенные и дериватизированные с целью снижения липофильности пептиды, которые показали значение logD в диапазоне от 2 до минус 1,22.
В работе Niedermoser S. et al. (J Nucl Med. 2015 Jul;56(7):1100-5), недавно разработанные производные 18F-SIFA- и 18F-SIFAlin-(SIFA=акцептор фторида кремния) и модифицированные ТАТЕ сравнивались с текущим клиническим золотым стандартом 68Ga-DOTATATE для высококачественной визуализации опухолей, несущих рецепторы соматостатина. Для этой цели были разработаны 18F-SIFA-TATE и два довольно сложных аналога, 18F-SIFA-Glc-PEG1-TATE, 18F-SIFAlin-Glc-Asp2-PEG1-TATE. Ни один из агентов не показал logD менее менус 1,5.
С учетом вышеизложенного, техническая задача, лежащая в основе настоящего изобретения, заключается в создании радиодиагностических и радиотерапевтических препаратов, включающих силиконовый фторидный акцептор и в то же время характеризующихся благоприятными свойствами in vivo.
Как станет ясно из дальнейшего, в настоящем изобретении была проведена экспериментальная проверка с применением специфических конъюгатов, которые с высоким сродством связываются с простатспецифическим антигеном (PSMA) в качестве мишени. Соответственно, еще одна техническая задача, лежащая в основе настоящего изобретения, заключается в обеспечении улучшенных радиотерапевтических и диагностических средств для медицинских показаний, которыми является рак, предпочтительно рак предстательной железы.
В РСТ/ЕР 2018/070533 раскрыт род соединений, связывающих PSMA. В настоящей заявке раскрыта более выгодная подгруппа соединений из предыдущей заявки. Настоящая заявка представляет собой подборку преимущественных признаков, не оцененных изобретателями на момент подачи РСТ/ЕР 2018/070533.
Эти технические проблемы решаются предметом формулы изобретения. Соответственно, в некоторых аспектах настоящее изобретение относится к соединению формулы (V):
- 3 046339
или его фармацевтически приемлемой соли, включающему хелатный радиоактивный катион, или, где F необязательно представляет собой 18F.
Раскрытые соединения могут находиться в форме солей. Настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (Va)
(Va)
или его фармацевтически приемлемой соли, где каждый X независимо является ОН или О-;
М представляет собой хелатный радиоактивный катион или отсутствует и F необязательно представляет собой 18F.
Кроме того, сочетание применения хелатора и изотопного обмена на SIFA с помощью 18Р-фторида также приводит к получению парных диагностических индикаторов, которые могут применяться в качестве индикаторов [^П^ион] в центрах с собственным циклотроном или центрах, получающих 18Fфторид путем отгрузки из циклотронных центров, тогда как в центрах, не имеющих доступа к 18Fфториду, но имеющих доступ к радиоизотопным генераторам, таким как генератор Ge-68/Ga-68, могут быть применены соответствующие версии, например, индикаторы [natF][68Ga].
Важно отметить, что в обоих случаях вводится химически идентичный радиофармацевтический препарат, и поэтому не ожидается никаких различий в поведении in vivo. Принимая во внимание, что в настоящее время из-за химических различий клинические данные меченного 18F соединения, предоставленные группой пациентов в одном учреждении, нельзя напрямую сравнивать с клиническими данными аналога 68Ga, предоставленного другой группой в другом учреждении, радиофармацевтические препараты и/или диагностика согласно изобретению могут быть напрямую сравнены, что позволит связать такие данные (например, данные из центра в Европе, работающего с F-18, и другого центра в Индии, работающего с Ga-68).
Кроме того, при соответствующем подборе хелат может быть применен для маркировки терапевтическим изотопом, таким как бета-излучающие изотопы Lu-177, Y-90 или альфа-излучающий изотоп Ас225, что позволяет расширить понятие парных индикаторов для объединения диагностических ([18F][natLu] индикаторы) и терапевтических радиофармпрепаратов ([natF][177Lu]).
Еще одним преимуществом соединений, особенно соединений, нацеленных на PSMA, по настоящему изобретению является их неожиданно низкое накопление в почках мышей по сравнению с другими радиофармацевтическими препаратами, нацеленными на PSMA, такими как PSMA I&T. Не желая ограничиваться какой-либо конкретной теорией, можно сказать, что эта комбинация структурного элемента SIFA с хелатором обеспечивает неожиданное снижение накопления в почках.
Что касается липофильности/гидрофильности, значение logP (иногда также называемое значением logD) является признанной мерой.
Термин липофильность относится к способности растворяться или абсорбироваться в липидных растворах, или адсорбироваться на липидоподобной поверхности или матрице. Это означает предпочтение липидов (буквальное значение) или органических или неполярных жидкостей, или жидкостей, растворов или поверхностей с небольшим дипольным моментом по сравнению с водой. Термин гидрофобность применяется в настоящем изобретении в эквивалентном значении. Прилагательные липофильный и гидрофобный применяются в значении, соответствующем описанным выше веществам.
Массовый поток молекулы на границе раздела двух несмешивающихся или по существу несмешиваемых растворителей определяется ее липофильностью. Чем более липофильна молекула, тем больше
- 4 046339 она растворима в липофильной органической фазе. Коэффициент распределения молекулы, который наблюдается между водой и н-октанолом, был принят в качестве стандартной меры липофильности. Коэффициент разделения Р разновидности А определяется как отношение Р=[А]п-октанол/[А]вода. Обычно указывается значение logP, которое является логарифмом коэффициента разделения. В случае, если молекула является ионизируемой, множество различных микрочастиц (ионизированные и неионизированные формы молекулы) в принципе будут присутствовать в обеих фазах. Величина, описывающая общую липофильность ионизируемого вещества, представляет собой коэффициент распределения D, определяемый как отношение D=[сумма концентраций всех микрочастиц]н-октанол/[сумма концентраций всех микрочастиц]вода. Как и в случае с logP, часто указывается логарифм коэффициента распределения, logD. Часто буферная система, такая как забуференный фосфатом физиологический раствор, применяется в качестве альтернативы воде в вышеописанном определении logP.
Если необходимо оценить и/или количественно определить липофильный характер заместителя в первой молекуле, можно оценить вторую молекулу, соответствующую этому заместителю, причем указанная вторая молекула получена, например, путем разрыва связи, соединяющей этот заместитель с остальной частью первой молекулы, и присоединения (полученных таким образом) свободных валентностей к водороду (водородам).
В качестве альтернативы можно определить вклад заместителя в logP молекулы. Вклад nX x заместителя X в logP молекулы R-X определяется как nX x=logPR-X-logPR-H, где R-H представляет собой незамещенное исходное соединение.
Значения P и D больше единицы, а также значения logP, logD и nX x больше нуля указывают на липофильный/гидрофобный характер, тогда как значения P и D меньше единицы, а также значения logP, logD и nX x меньше нуля указывают на гидрофильный характер соответствующих молекул или заместителей.
Вышеописанные параметры, характеризующие липофильность липофильной группы или всей молекулы согласно изобретению, могут быть определены экспериментальными средствами и/или предсказаны вычислительными способами, известными в данной области техники (см., например, Sangster, Octanol-water Partition Coefficients: fundamentals and physical chemistry, John Wiley & Sons, Chichester. (1997)).
В предпочтительном варианте осуществления значение logP соединений по изобретению составляет от -5 до -1,5. Особенно предпочтительно, чтобы значение logP составляло от -3,5 до -2,0.
В предпочтительном воплощении хелатирующая группа включает хелатный катион, который является радиоактивным. Более предпочтительным является хелатный изотоп радиоактивного металла.
Предпочтительными примерами катионов, которые могут быть хелатированы хелатирующей группой, являются катионы 43Sc, 44Sc, 47Sc, 51Cr, 52mMn, 58Co, 52Fe, 56Ni, 57Ni, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 66Ga, 67Ga 68Ga, 89Zr, 90Y, 89Y, менее Тс, 99mTc, 97Ru, 105Rh, 109Pd, 111Ag, 110mIn, 111In, 113mIn, 114mIn, 117mSn, 121Sn, 127Te, 142Pr, 143Pr, 149Pm, 151Pm, 149Tb, 152Tb, 155Tb, 161Tb, 153Sm, 157Gd, 161Tb, 166Ho, 165Dy, 169Er, 169Yb, 175Yb, 172Tm, 177Lu, 186Re, 188Re, 191Pt, 197Hg, 198Au, 199Au, 212Pb, 203Pb, 211At, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 227Th, катионная молекула, включающая 18F или катион, такой как 18F-[AlF]2+; более предпочтительно катионы 44Sc, 47Sc, 64Cu, 67Cu, 68Ga, 90Y, 111In, 161Tb, 166Ho, 177Lu, 188Re, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 225Ac и 227Th или катионную молекулу, включающую F. Катионы могут быть выбраны из Lu-177, Y-90 или Ас-225.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, включающую или состоящую из одного или более соединений по изобретению, как раскрыто в настоящей заявке выше.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение обеспечивает диагностическую композицию, включающую или состоящую из одного или более соединений по изобретению, как раскрыто в настоящей заявке выше.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение обеспечивает терапевтическую композицию, включающую или состоящую из одного или более соединений по изобретению, как раскрыто в настоящей заявке выше.
Фармацевтическая композиция может дополнительно включать фармацевтически приемлемые носители, наполнители и/или разбавители. Примеры подходящих фармацевтических носителей, наполнителей и/или разбавителей хорошо известны в данной области техники и включают фосфатно-солевые растворы, воду, эмульсии, такие как эмульсии масло/вода, различные типы смачивающих агентов, стерильные растворы и т.д. Композиции, включающие такие носители, могут быть составлены хорошо известными традиционными способами. Эти фармацевтические композиции можно вводить субъекту в подходящей дозе. Введение подходящих композиций может осуществляться различными способами, например, путем внутривенного, внутрибрюшинного, подкожного, внутримышечного, местного, внутрикожного, интраназального или внутрибронхиального введения. Особенно предпочтительно, чтобы указанное введение осуществляли путем инъекции и/или доставки, например, в участок поджелудочной железы, или в мозговую артерию, или непосредственно в ткань мозга. Композиции также можно вводить непосредственно в целевой участок, например, путем биологической доставки к внешнему или внутрен
- 5 046339 нему целевому участку, например, поджелудочной железе или мозгу. Режим дозирования будет определяться лечащим врачом и клиническими факторами. Как хорошо известно в области медицины, дозировки для любого пациента зависят от многих факторов, включая размер пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретное вводимое соединение, пол, время и способ введения, общее состояние здоровья и другие препараты, вводимые одновременно. Фармацевтически активное вещество может присутствовать в количестве от 0,1 нг до 10 мг/кг веса тела на дозу; однако предусмотрены дозы ниже или выше этого примерного диапазона, особенно с учетом вышеупомянутых факторов.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение обеспечивает одно или более соединений изобретения, раскрытым в настоящей заявке выше, для их применения в медицине.
Предпочтительным применением в медицине является ядерная медицина, такая как ядерная диагностическая визуализация, также называемая ядерно-молекулярной визуализацией, и/или таргетная лучевая терапия заболеваний, связанных со сверхэкспрессией, предпочтительно PSMA на пораженной ткани.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение обеспечивает соединение изобретения, как определено в настоящей заявке выше, для применения в способе диагностики и/или для определения стадии рака, предпочтительно рака предстательной железы. Рак предстательной железы является не единственным видом рака, который экспрессирует PSMA. Известно, что виды рака, не связанные с раком предстательной железы, демонстрируют экспрессию PSMA, включая рак молочной железы, рак легких, колоректальный рак и почечно-клеточная карцинома. Таким образом, любое описанное в настоящей заявке соединение, включающее PSMA-связывающий фрагмент, можно применять в диагностике, визуализации или лечении рака, имеющего экспрессию PSMA.
Предпочтительными показаниями являются обнаружение или определение стадии рака, такого как, помимо прочего, глиома высокой степени злокачественности, рак легких и особенно рак предстательной железы и метастазирующий рак предстательной железы, выявление метастатического заболевания у пациентов с первичным раком предстательной железы от промежуточного риска до высокого риска, и обнаружение метастатических участков даже при низких значениях ПСА в сыворотке у пациентов с биохимически рецидивирующим раком предстательной железы. Другим предпочтительным показанием является томографирование и визуализация неоангиогенеза.
С точки зрения медицинских показаний к лечению, особенно лучевой терапии, предпочтительным показанием является рак. Рак предстательной железы является особенно предпочтительным показанием.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение обеспечивает соединение изобретения, как определено в настоящей заявке выше, для применения в способе диагностики и/или для определения стадии рака, предпочтительно рака предстательной железы.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к следующим пунктам.
Соединение формулы (V)
или его фармацевтически приемлемая соль, включающее хелатный радиоактивный катион, или где F необязательно представляет собой 18F.
Соединение может включать хелатный катион, выбранный из катионов Sc, Cu, Ga, Y, In, Tb, Но, Lu, Re, Pb, Bi, Ac, Er и Th. Хелатный катион может быть радиоактивным. Хелатный радиоактивный катион может быть любым радиоактивным изотопом(ами) галлия, эрбия, меди, скандия, лютеция или иттрия.
Соединение формулы (Va)
(Va)
- 6 046339 или его фармацевтически приемлемая соль, где каждый X независимо представляет собой ОН или О;
М представляет собой хелатный радиоактивный катион или отсутствует и
F необязательно представляет собой 18F.
В соединении формулы (Va) X может быть ОН. X может быть О-. Одна или более групп X могут быть хелатированы с М, когда М присутствует.
В соединении формулы (Va) М может быть хелатным радиоактивным катионом. М может отсутствовать. М может быть радиоактивным катионом, хелатированным с одной или более Х-группами. М может быть радиоактивным катионом, хелатированным с одним или более атомами азота. М может быть радиоактивным катионом, хелатированным с одним или более атомами N или одной или более группами X. М может быть радиоактивным катионом, хелатированным с одним или более атомами N и одной или более группами X.
В соединении формулы (V) или (Va) F может быть 18F. F может быть 19F.
В соединении формулы (V) или (Va) хелатный радиоактивный катион может быть выбран из катионов 43Sc, 44Sc, 47Sc, 51Cr, 52mMn, 58Co, 52Fe, 56Ni, 57Ni, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 66Ga, 67Ga 68Ga, 89Zr, 90Y, 89Y, менее Тс, 99mTc, 97Ru, 105Rh, 109Pd, 111Ag, 110mIn, mIn, 113mIn, 114mIn, 117mSn, 121Sn, 127Te, 142Pr, 143Pr, 149Pm, 151Pm, 149Tb, 152Tb, 155Tb, 161Tb, 153Sm, 157Gd, 161Tb, 166Ho, 165Dy, 169Er, 169Yb, 175Yb, 172Tm, 177Lu, 186Re, 188Re, 191Pt, 197Hg, 198Au, 199Au, 212Pb, 203Pb, 211At, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 227Th, катионной молекулы, включающей 18F, или катиона, такого как 18F-[AlF]2+; более предпочтительно катионов 44Sc, 47Sc, 64Cu, 67Cu, 68Ga, 90Y, n1In, 161Tb, 166Ho, 177Lu, 188Re, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 225Ac и 227Th или катионной молекулы, включающей F. Хелатный радиоактивный катион может быть выбран из катионов Sc, Cu, Ga, Y, In, Tb, Но, Lu, Re, Pb, Bi, Ac, Er и Th. Хелатный радиоактивный катион может быть Ga. Хелатный радиоактивный катион может быть Lu-177, Y-90 или Ас-225.
В соединении формулы (Va) M может быть выбран из катионов 43Sc, 44Sc, 47Sc, 51Cr, 52mMn, 58Co, 52Fe, 56Ni, 57Ni, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 66Ga, 67Ga 68Ga, 89Zr, 90Y, 89Y, менее Тс, 99mTc, 97Ru, 105Rh, 109Pd, 111Ag, 110mIn, 111In, 113mIn, 114mIn, 117mSn, 121Sn, 127Te, 142Pr, 143Pr, 149Pm, 151Pm, 149Tb, 152Tb, 155Tb, 161Tb, 153Sm, 157Gd, 161Tb, 166Ho, 165Dy, 169Er, 169Yb, 175Yb, 172Tm, 177Lu, 186Re, 188Re, 191Pt, 197Hg, 198Au, 199Au, 212Pb, 203Pb, 211At, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 227Th, катионной молекулы, включающей 18F, или катиона, такого как 18F-[AlF]2+; более предпочтительно катионов 44Sc, 47Sc, 64Cu, 67Cu, 68Ga, 90Y, 111In, 161Tb, 166Но, 177Lu, 188Re, 212Pb, 212Bi, 213Bi, 225Ac и 227Th или катионной молекулы, включающей 18F. М может быть выбран из катионов Sc, Cu, Ga, Y, In, Tb, Но, Lu, Re, Pb, Bi, Ac, Er и Th. M может быть Ga. M может быть Lu-177, Y-90 или Ас-225.
Выгодно синтезировать соединения с минимальным количеством изомеров. Хотя изомеры можно разделить, in-vivo применяется только один изомер, и, следовательно, неправильный изомер просто выбрасывается и не применяется. Таким образом, в идеале избегают условий, которые минимизируют рацемизацию или инверсию любого из определенных хиральных центров.
Также описан способ получения соединения, включающий стадии:
а) реакции соединения формулы (I)
он о (I) с соединением формулы (II) н ?
pg2 у он
L ,PG3
Η (Π) с образованием соединения формулы (III)
PG3 (III), где PG1 представляет собой tBu, PG2 представляет собой Fmoc и PG3 представляет собой Dde;
- 7 046339 и условия реакции включают применение основания, где основание представляет собой 2,4,6коллидин или 2,6-диметилпиридин;
b) реакции соединения формулы (III) в условиях, подходящих для образования соединения формулы (IV)
(IV) и
с) реакции соединения формулы (IV) в условиях, подходящих для образования соединения (V)
Согласно способу соединение (II) предварительно активируется реакцией с 2-(1Н-бензотриазол-1ил)-1,1,3,3-тетраметиламиний тетрафторборатом (TBTU), 1-гидрокси-7-азабензотриазолом (HOAt) и 2,4,6-коллидином перед реакцией с соединением (I). Предварительная активация длится 5 мин или меньше.
Применение 2,4,6-коллидина или 2,6-диметилпиридина в качестве основания наряду с коротким временем активации помогает минимизировать рацемизацию активированного хирального соединения (II) по сравнению с другими азотистыми основаниями, такими как DIPEA. Более стерически затрудненное основание не извлекает кислотный протон на хиральном центре кислоты, следовательно, снижает рацемизацию перед связыванием с амином.
В настоящей заявке раскрыто соединение формулы (VI)
(VI) или его фармацевтически приемлемая соль.
Там, где показан хелатный металл, кислотные группы, с которыми он хелатирован, просто условно показаны как СОО-, эквивалентная четвертая кислота также может быть частично хелатной и, следовательно, не может буквально быть СООН.
В настоящей заявке раскрыто соединение формулы (VII).
- 8 046339
(VII) или его фармацевтически приемлемая соль.
В настоящей заявке раскрыта фармацевтическая или диагностическая композиция, включающая соединение формулы (V) или (VI). Конъюгат, соединение или композиция могут применяться в качестве средства диагностики рака или визуализации.
Раскрыт способ визуализации и/или диагностики рака, включающий введение конъюгата, соединения или композиции в соответствии с формулой (V) или (VI) нуждающемуся в этом пациенту.
Раскрыт конъюгат, соединение или композиция формулы (V) или (VI) для применения в лечении рака.
Раскрыт конъюгат, соединение или композиция формулы (V) или (VI) для применения в диагностике, визуализации или профилактике неоангиогенеза/ангиогенеза.
Раскрыт конъюгат, соединение или композиция в соответствии с формулой (V) или (VI) для применения в качестве средства диагностики рака или визуализации или для применения в лечении рака, при котором рак представляет собой рак предстательной железы, рак молочной железы, рак легких, колоректальный рак или почечно-клеточная карцинома.
Чертежи иллюстрируют:
Фиг. 1: Примерная корреляция при определении девяти эталонных веществ в OriginPro 2016G.
Фиг. 2а: Контроль качества [19F][natGa]-rhPSMA7-rac([19F][natGa] D/L-Dap-R/S-DOTAGA-rhPSMA-7rac), (партия 10, прекурсор для производства ([18F][natGa] D/L-Dap-R/S-DOTAGA-rhPSMA-7 в отделении ядерной медицины, TUM). Условия HPLC: растворитель А: Н2О+0,1% TFA (трифторуксусная кислота); растворитель В: MeCN+0,1% (MeCN - ацетонитрил). TFA. Градиент: 25-35% В 0-40 мин, 95-95% В 40-45 мин, 35-35% В 45-50 мин; поток: 1 мл/мин, колонка: Nucleosil 100-5 С18, 125x4,6 мм. Образец: 1 мМ (ДМСО (диметилсульфоксид)), 10 мкл.
Фиг. 2b: Распределение пиков: D-Dap-R-DOTAGA-rhPSMA-7.1; rhPSM7-rac с фиг. 2а вводили совместно с энантиочистым D-Dap-R-DOTAGA-rhPSMA-7.1. Условия для HPLC: Растворитель А: Н2О+0,1% TFA; Растворитель В: MeCN+0,1% TFA. Градиент: 25-35% В 0-40 мин, 95-95% В 40-45 мин, 35-35% В 45-50 мин; поток: 1 мл/мин, колонка: Nucleosil 100-5 С18, 125x4,6 мм, образец: 1 мМ (ДМСО), 10 мкл.
Фиг. 2с: Профиль HPLC D-Dap-R-DOTAGA-rhPSMA-7.1; Условия для HPLC: Растворитель А: Н2О+0,1% TFA; Растворитель В: MeCN+0,1% TFA. Градиент: 25-35% В 0-40 мин, 95-95% В 40-45 мин, 35-35% В 45-50 мин; поток: 1 мл/мин, колонка: Nucleosil 100-5 С18, 125x4,6 мм, образец: 1 мМ (ДМСО), 10 мкл.
Фиг. 3а: Распределение пиков: L-Dap-R-DOTAGA-rhPSMA-7.2; rhPSM7-rac с фиг. 2а вводили совместно с энантиочистым L-Dap-R-DOTAGA-rhPSMA-7.2. Условия для HPLC: Растворитель А: Н2О+0,1% TFA; Растворитель В: MeCN+0,1% TFA. Градиент: 25-35% В 0-40 мин, 95-95% В 40-45 мин, 35-35% В 45-50 мин; поток: 1 мл/мин, колонка: Nucleosil 100-5 С18, 125x4,6 мм, образец: 1 мМ (ДМСО), 10 мкл.
Фиг. 3b: Профиль HPLC L-Dap-R-DOTAGA-rhPSMA-7.2; Условия для HPLC: Растворитель А: Н2О+0,1% TFA; Растворитель В: MeCN+0,1% TFA. Градиент: 25-35% В 0-40 мин, 95-95% В 40-45 мин, 35-35% В 45-50 мин; поток: 1 мл/мин, колонка: Nucleosil 100-5 С18, 125x4,6 мм, образец: 1 мМ (ДМСО), 10 мкл.
Фиг. 4а: Распределение пиков: D-Dap-S-DOTAGA-rhPSMA-7.3; rhPSM7-rac с фиг. 2а вводили совместно с энантиочистым D-Dap-S-DOTAGA-rhPSMA-7.3. Условия для HPLC: Растворитель А: Н2О+0,1% TFA; Растворитель В: MeCN+0,1% TFA. Градиент: 25-35% В 0-40 мин, 95-95% В 40-45 мин, 35-35% В 45-50 мин; поток: 1 мл/мин, колонка: Nucleosil 100-5 С18, 125x4,6 мм, образец: 1 мМ (ДМСО), 10 мкл.
Фиг. 4b: Профиль HPLC D-Dap-D-DOTAGA-rhPSMA-7.3; Условия для HPLC: Растворитель А: Н2О+0,1% TFA; Растворитель В: MeCN+0,1% TFA. Градиент: 25-35% В 0-40 мин, 95-95% В 40-45 мин, 35-35% В 45-50 мин; поток: 1 мл/мин, колонка: Nucleosil 100-5 С18, 125x4,6 мм, образец: 1 мМ (ДМСО), 10 мкл.
Фиг. 5а: Распределение пиков: L-Dap-S-DOTAGA-rhPSMA-7,4; rhPSM7-rac с фиг. 2а вводили совместно с энантиочистым D-Dap-S-DOTAGA-rhPSMA-7.3. Условия для HPLC: Растворитель А:
- 9 046339
Н2О+0,1% TFA; Растворитель В: MeCN+0,1% TFA. Градиент: 25-35% В 0-40 мин, 95-95% В 40-45 мин, 35-35% В 45-50 мин; поток: 1 мл/мин, колонка: Nucleosil 100-5 С18, 125x4,6 мм, образец: 1 мМ (ДМСО), 10 мкл.
Фиг. 5b: Профиль HPLC L-Dap-D-DOTAGA-rhPSMA-7,4; Условия для HPLC: Растворитель А: Н2О+0,1% TFA; Растворитель В: MeCN+0,1% TFA. Градиент: 25-35% В 0-40 мин, 95-95% В 40-45 мин, 35-35% В 45-50 мин; поток: 1 мл/мин, колонка: Nucleosil 100-5 С18, 125x4,6 мм, образец: 1 мМ(ДМСО), 10 мкл.
Фиг. 6а: Сродство связывания (IC50 [нМ]) rhPSMA7.1 и 7.2 с PSMA. Сродство определяли с применением клеток LNCaP (150000 клеток/лунку) и ((4-[125I] иодбензоил) KuE ([125I]IB-KuE; с=0,2 нМ) в качестве радиолиганда (1 ч, 4°С, HBSS+1% BSA). Данные выражены как среднее ± стандартное отклонение (SD) (n=3, в трех различных экспериментах).
Фиг. 6b: Определение сродства связывания [нМ] изомеров rhPSMA7 с PSMA. Каждый из четырех столбцов показывает индивидуальные измерения сродства для rhPSAM7.1 (слева) к rhPSMA7.4 (справа). Условия описаны в легенде к фиг. 6а.
Фиг. 7: Изображение отдельных измерений IC50 [нМ] показано на фиг. 6а и 6b. Значение № 5 из rhPSMA7.1 было удалено. Условия, описанные в легенде к фиг. 6а.
Фиг. 8: Изображение индивидуальных измерений интернализации [% от [125I] IB-KuE]. Интернализованная активность (с=0,5 нМ) через 1 ч в% от контрольного лиганда ([125I] I-BA) KuE (с=0,2 нМ), определенная на клетках LNCaP (37°C, DMEM F12 + 5% BSA, 125000 клеток/лунка). Данные скорректированы на неспецифическое связывание (10 мкмоль РМРА) и выражены как среднее ± стандартное отклонение (n=3).
Фиг. 9: Изображение индивидуальных измерений logP изомеров rhPSMA.
Фиг. 10: Биораспределение (в% ID/г (вводимая доза/г)) меченых 18F маркеров rhPSMA через 1 ч p.i у мышей SCID с опухолью LNCaP. Данные выражены как среднее ± стандартное отклонение (n=4 для rhPSMA7.1, n=5 для 7.2, n=4 для 7.3, n=5 для 7.4 и n=3 для 7-rac).
Фиг. 11: Биораспределение [% ID/г] 18F-rhPSMAs, вводимых совместно с РМРА (8 мг/кг) через 1 ч p.i у мышей SCID с опухолью LNCaP. Данные выражены как среднее ± стандартное отклонение (n=3).
Фиг. 12: Возможные частицы, образованные метаболическим расщеплением амидных связей. iL: при расщеплении образуется частица с повышенной липофильностью; DF: дефторирование; nd: не обнаруживается, т.к. не радиоактивен.
Фиг. 13: Слева: графический анализ перекрывающихся пиков 1 (rhPSMA7.2) и 2 (rhPSMA7.3); справа: деконволюция и интеграция профилей пиков с помощью Systat PeakFit Software); вверху: экспериментальные данные подогнаны, внизу: отдельные пики после деконволюции.
Фиг. 14а: Количественная оценка относительных изменений (в% изменения введенной рацемической смеси) для оценки воспроизводимости классической интеграции (с помощью программы FIPLC) и деконволюции (с помощью PeakFit) пика 4 (rhPSMA7.1). Оба способа демонстрируют одинаковую производительность для этого пика.
Фиг. 14b: Количественная оценка относительных изменений (в% изменения введенной рацемической смеси) для оценки воспроизводимости классической интеграции (с помощью программы FIPLC) и деконволюции (с помощью PeakFit) пика 3 (rhPSMA7.4). Оба способа демонстрируют одинаковую производительность для этого пика.
Фиг. 15: Процентное изменение каждого изомера rhPSAM7.1-7.4 в крови, печени, почках, опухолях и моче относительно его доли во введенном растворе ([18F] [natGa] rhPSMA7-rac. Данные выражены в виде средних значений ± стандартное отклонение (n=4; см. также фиг. 16).
Фиг. 16: Процентное изменение каждого изомера rhPSAM7.1-7.4 для каждого образца и эксперимента) в крови, печени, почках, опухоли и моче по отношению к его доле во введенном растворе ([18F] [natGa] rhPSMA7-rac). Анализы проводились с помощью Systat PeakFit.
Фиг. 17: Слева: профиль сканера TLC (тонкослойная хроматография) для пластины для TLC с образцом печени (30.07.2018, общее количество cts: 142 cts). Из-за их плохой статистики и ограниченной достоверности датасеты с cts менее 200 были удалены. Справа: фотоизображение пластинки для TLC с образцом печени: длинный хвост движущегося индикатора.
Фиг. 18: Слева: профиль сканера TLC для пластинки для TLC с образцом контроля качества (01.08.2018, общее количество cts: 384). Справа: примерное фотоизображение пластинки для TLC с образцом мочи, почек, печени, опухоли, крови и QK.
Фиг. 19: Радио-TLC [F-18] rhPSMA7-rac (30.07.2018) в рамках контроля качества в отделении ядерной медицины перед клиническим применением индикатора. Обратите внимание, что след индикатора наблюдается даже в сформулированном буфере (и, следовательно, в отсутствие белков).
Фиг. 20: Количественное определение свободного р-18]фторида и интактного [F-18]rhPSMA7-rac способом радио-TLC в образце мочи (30.07.2018).
Фиг. 21: Слева: Радио-HPLC анализ мочи, собранной и объединенной от 4 нормальных мышей, которым вводили соответствующий индикатор [F-18]rhPSAM-7.x. Справа: Радио-HPLC анализ холодной
- 10 046339 мочи, пропитанной соответствующим индикатором [F-18]rhPSAM-7.x в течение 1 ч (7.1., 7.2.), 0,5 ч (7.3.) и 2 ч (7.4.). Условия HPLC: Растворитель А: H2O+0,1% TFA; Растворитель В: MeCN+0,1% TFA; градиент: 5% изократический 0-3 мин, 25-35% В 3-43 мин, 95-95% В 43-48 мин; поток: 1 мл/мин, колонка: Nucleosil 100-5 С18, 125x4,6 мм.
Фиг. 22: Разделение радиоактивных частиц в моче с помощью фиксации картриджа и FIPLC. Вверху: Радио-HPLC анализ мочи через 30 мин после введения [F-18]rhPSMA7.3 мышам, показывающий небольшую долю на 1,6 минуте и интактный индикатор на ок. 34,5 мин. Внизу (слева): моча мышей, через 30 мин после введения [F-18]rhPSMA7.3, была разбавлена и подвергнута фиксации на картридже STRATA-X. Картридж был промыт и элюирован MeCN/водой (60/40 в/в +1% TFA); был обнаружен только интактный индикатор. Внизу (справа): как прорыв после фиксации картриджа (не удерживаемые компоненты), так и фракция, окончательно элюированная MeCN/водой с картриджа, были проанализированы методом TLC (внизу, справа). Если в элюате картриджа было обнаружено 96,1% [F-18]rhPSMA7.3 и только 3,9% р-18]фторида, то в прорыве картриджа было обнаружено обратное соотношение (3,4% [F18]rhPSMA7.3 и только 96,6% р-18]фторида).
Фиг. 23: К свежей и нерадиоактивной моче мышей добавляли [F-18] rhPSMA7.3, а затем 0,5 мкмоль холодного F-19-фторида; инкубация в течение 2ч. Радиоактивность была полностью (98,5%) преобразована в очень гидрофильную фракцию, представляющую [F-18] фторид (пик на 1,6 мин). Примечание: пик на 1,6 мин впоследствии был иммобилизован на картридже QMA и элюирован NaCl (1M) (= фторид).
Фиг. 24: Клиническое биораспределение и накопление в опухолевых поражениях 18F-rhPSMA-7 (слева) и 18F-rhPSMA-7.3 (справа), как продемонстрировано с помощью SUVMaKC (SUV - стандартизированное значение накопления). Данные выражены как среднее ± стандартное отклонение.
Фиг. 25: Клиническое биораспределение и накопление в опухолевых поражениях 18F-rhPSMA-7 (слева) и 18F-rhPSMA-7.3 (справа), как показано с помощью SUVсреднее. Данные выражены как среднее ± стандартное отклонение.
Фиг. 26: Клиническое биораспределение и накопление в опухолевых поражениях 18F-rhPSMA-7 (слева) и 18F-rhPSMA-7.3 (справа), что продемонстрировано отношением БИУмакс к фону. Данные выражены как среднее ± стандартное отклонение.
Фиг. 27: Клиническое биораспределение и накопление в опухолевых поражениях 18F-rhPSMA-7 (слева) и 18F-rhPSMA-7.3 (справа), как продемонстрировано отношением SUVсреднее к фону. Данные выражены как среднее ± стандартное отклонение.
Фиг. 28: Два клинических примера ПЭТ-визуализации 18F-rhPSMA-7.3.
Примеры иллюстрируют изобретение.
Пример 1. Материалы и методы
Fmoc-(9-флуоренилметоксикарбонил-) и все другие защищенные аналоги аминокислот были приобретены у Bachem (Бубендорф, Швейцария) или Iris Biotech (Марктредвиц, Германия). Полистирол на основе тритилхлорида (TCP) был получен от PepChem (Тюбинген, Германия). Chematech (Дижон, Франция) поставил хелаторы DOTAGA-ангидрид, (R)-DOTA-GA (tBu) 4 и (S)-DOTA-GA (tBu) 4. Все необходимые растворители и другие органические реагенты были приобретены у компаний Alfa Aesar (Карлсруэ, Германия), Sigma-Aldrich (Мюнхен, Германия) или VWR (Дармштадт, Германия). Твердофазный синтез пептидов проводили вручную с применением устройства для встряхивания шприцев Intelli-Mixer (Neolab, Heidelberg, Германия). Аналитическую и препаративную обращенно-фазовую хроматографию высокого давления (RP-HPLC) выполняли с применением градиентных систем Shimadzu (Shimadzu Deutschland GmbH, Neufahrn, Германия), каждая из которых оснащена детектором SPD-2OA UV/Vis (220 нм, 254 нм). Колонку Nucleosil 100 С18 (125x4,6 мм, размер частиц 5 мкм) (CS GmbH, Langerwehe, Германия) применяли для аналитических измерений при скорости потока 1 мл/мин. В тексте цитируются как конкретные градиенты, так и соответствующие времена удерживания tR. Очистку препаративной HPLC проводили на колонке Multospher 100 RP 18 (250x10 мм, размер частиц 5 мкм) (CS GmbH, Langerwehe, Германия) при постоянной скорости потока 5 мл/мин. Аналитическую и препаративную радио-RP-HPLC выполняли с применением колонки Nucleosil 100 С18 (5 мкм, 125x4,0 мм) (CS GmbH, Langerwehe, Германия). Элюентами для всех операций HPLC служили вода (растворитель А) и ацетонитрил (растворитель В), оба включали 0,1% трифторуксусной кислоты. Масс-спектры с ионизацией электрораспылением для характеристики веществ получали на масс-спектрометре ExpressL CMS (Advion Ltd., Харлоу, Великобритания). Спектры ЯМР регистрировали на спектрометрах Bruker AVHD-300 или AVHD-400 при 300 К. Значения рН измеряли с помощью рН-метра SevenEasy (Mettler Toledo, Gieβen, Германия).
Протоколы синтеза
1) Твердофазный синтез пептидов по Fmoc-стратегии
Загрузка TCP-смолы (GP1)
Загрузка тритилхлоридной полистирольной (TCP) смолы с Fmoc-защищенной аминокислотой (АА) осуществлялась путем перемешивания раствора ТСР-смолы (1,95 ммоль/г) и Fmoc-AA-OH (1,5 экв.) в безводной DCM с DIPEA (4,5 экв.) при комнатной температуре в течение 2 ч. Оставшийся тритилхлорид блокировали добавлением метанола (2 мл/г смолы) в течение 15 мин. Затем смолу фильтровали и промы
- 11 046339 вали DCM (2x5 мл/г смолы), DMF (2x5 мл/г смолы), метанолом (5 мл/г смолы) и сушили в вакууме. Конечная загрузка 1 Fmoc-AA-OH определялась по следующему уравнению:
I гммоль-1 (тп2 — mj X 1000 m2 = масса загруженной смолы [г];
m1 = масса выгруженной смолы [г];
MW = молекулярная масса АА [г/моль];
MHci = молекулярная масса HCl [г/моль]
Образование амидной связи на смоле (GP2)
Для конъюгации строительного блока со связанным со смолой пептидом смесь TBTU и НОВТ применялась для предварительной активации DIPEA или 2,4,6-триметилпиридином в качестве основания в DMF (10 мл/г смолы) в течение 5 мин. Точная стехиометрия и время реакции для каждой стадии конъюгации указаны в протоколе синтеза. После реакции смолу промывали DMF (6x5 мл/г смолы).
Снятие защиты с Fmoc на смоле (GP3)
Связанный со смолой Fmoc-пептид обрабатывали 20% пиперидином в DMF (об/об, 8 мл/г смолы) в течение 5 мин, а затем в течение 15 мин. После этого смолу тщательно промывали DMF (8x5 мл/г смолы).
Снятие защиты Dde на смоле (GP4)
Dde-защищенный пептид (1,0 экв.) растворяли в растворе 2% моногидрата гидразина в DMF (об/об, 5 мл/г смолы) и встряхивали в течение 20 мин (GP4a). В случае присутствующих Fmoc-групп снятие защиты с Dde проводили путем добавления раствора имидазола (0,92 г/г смолы), гидрохлорида гидроксиламина (1,26 г/г) в NMP (5,0 мл) и DMF (1,0 мл) в течение 3 ч при комнатной температуре (GP4b). После снятия защиты смолу промывали DMF (8x5 мл/г смолы).
Отщепление пептида от смолы с одновременным снятием защиты с кислотолабильных защитных групп (GP5)
Полностью защищенный связанный со смолой пептид растворяли в смеси TFA/TIPS/вода (об/об/об; 95/2,5/2,5) и встряхивали в течение 30 мин. Раствор отфильтровывали и смолу обрабатывали таким же образом еще 30 мин. Оба фильтрата объединяли, перемешивали еще 5 ч и концентрировали в токе азота. После растворения остатка в смеси трет-бутанола и воды с последующей лиофилизацией получали неочищенный пептид.
natGa- комплексообразование (GP6)
Для образования комплекса с natGa пептид (1,0 экв.) растворяли в смеси 3:1 (об/об) TBuOH в Н2О и добавляли водный раствор Ga(NO)3)3 (3,5 экв.). После нагревания полученной смеси в течение 30 мин при 75 °С пептид очищали с помощью RP-HPLC.
Синтез связывающего мотива PSMA Glu-мочевина-Glu((tBuO)EuE(OtBu)2)
tBu-защищенный связывающий мотив Glu-мочевина-Glu (EuE) синтезировали в соответствии с ранее опубликованной процедурой (схема 1) для tBu-защищенного Glu-мочевины-Lys (EuK).
Ди-трет-бутил (1Н-имидазол-1-карбонил)^-глутамат (i):
Раствор DCM, включающий 2,0 г (7,71 ммоль, 1,0 экв.) 1-ди-трет-бутил-Ь-глутамат HCl, охлаждали на льду в течение 30 мин, а затем обрабатывали 2,69 мл TEA (19,28 ммоль, 2,5 экв.) и 3,3 мг (0,3 ммоль, 0,04 экв.) DMAP. После дополнительного перемешивания в течение 5 мин медленно добавляли 1,38 г (8,84 ммоль, 1,1 экв.) 1,1'-карбонилдиимидазола (CDI), растворенного в DCM, в течение 30 мин. Реакционную смесь дополнительно перемешивали в течение ночи и давали ей нагреться до КТ. Реакцию останавливали, применяя 8 мл насыщенного NaHCO3, с сопутствующими стадиями промывки водой (2х) и соляным раствором (2х) и сушили над Na2SO4. Оставшийся растворитель удаляли в вакууме, и неочищенный продукт ^)-ди-трет-бутил 2-(1Н-имидазол-1-карбоксамидо)пентандиоат (i) применяли без дополнительной очистки.
5-бензил-1-(трет-бутил)((^)-1,5-ди-трет-бутокси-1,5-диоксопентан-2-ил)карбамоил)-Ь-глутамат (ii):
2,72 г (7,71 ммоль, 1,0 экв.) неочищенного продукта ^)-Ди-трет-бутил-2-(1Н-имидазол-1карбоксамидо) пентандиоата (i) растворяли в 1,2-дихлорэтане (DCE) и охлаждали на льду в течение 30 мин. К этому раствору добавляли 2,15 мл (15,42 ммоль, 2,0 экв.) TEA и 2,54 г (7,71 ммоль, 1,0 экв.) H-LGlu (OBzl)-OtBu HCl, и перемешивали раствор в течение ночи при 40°С. Оставшийся растворитель выпаривали и неочищенный продукт очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле со смесью элюентов, включающей этилацетат/гексан/ТЭА (500:500: 0,8; об/об/об). После удаления растворителя 5бензил-1-(трет-бутил)-((^)-1,5-ди-трет-бутокси-1,5-диоксопентан-2-ил)карбамоил)^-глутамат (ii) полу
- 12 046339 чали в виде бесцветного масла.
(tBuO)EuE(OtBu)2 (iii):
Чтобы синтезировать (tBuO) EuE (OtBu) 2, 3,17 г (5,47 ммоль, 1,0 экв.) 5-бензил-1-(трет-бутил)((^)-1,5-ди-трет-бутокси-1,5-диоксопентан-2-ил) карбамоил)^-глутамат (ii) растворяли в 75 мл EtOH, и в этот раствор добавляли 0,34 г (0,57 ммоль, 0,1 экв.) палладия на активированном угле (10%). Колбу, включающую реакционную смесь, сначала продували Н2, и раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и легком давлении Н2 (баллон). Неочищенный продукт очищали через целит и растворитель упаривали в вакууме. Продукт (iii) получали в виде гигроскопичного твердого вещества (84%). HPLC (от 10% до 90% В за 15 мин): tR=11,3 мин. Расчетная моноизотопная масса (C23H49N2O9): 488,3; найдено: m/z=489,4 [М+Н]+, 516,4 [M+Na]+.
ί ii iii
Схема 1. Синтез (tBuO) EuE (OtBu)2:
a) DCI, TEA, DMAP (DCM);
b) H-L-Glu(OBzl)-OtBu HCl, TEA (DCE);
c) Pd/C (10%), H2 (EtOH).
Синтез акцептора фторида кремния. 4-(ди-трет-бутилфторсилил) бензойная кислота (SiFA-BA)
SiFA-BA синтезировали по ранее опубликованной методике (схема 2). Все реакции проводили в высушенных реакционных сосудах в атмосфере аргона с применением вакуумного газового коллектора.
((4-Бромбензил)окси)(трет-бутил)диметилсилан (i):
К перемешиваемому раствору 4-бромбензилового спирта (4,68 г, 25,0 ммоль, 1,0 экв.) в безводном DMF (70 мл) добавляли имидазол (2,04 г, 30,0 ммоль, 1,2 экв.) и TBDMSCl (4,52 г, 30,0 ммоль, 1,2 экв.), и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем смесь выливали в ледяную Н2О (250 мл) и экстрагировали Et2O (5x50 мл). Объединенные органические фракции промывали нас. водн. NaHCO3 (2x100 мл) и солевым раствором (100 мл), сушили, фильтровали и концентрировали в вакууме, получая неочищенный продукт, который очищали колоночной флэш-хроматографией (диоксид кремния, 5% EtOAc/бензин), получая i в виде бесцветного масла (7,18 г, 95%). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ [ppm] (млн-1)=0,10 (6Н, s, SiMe2t-Bu), 0,95 (9Н, s, SiMe2tBu), 4,69 (2Н, s, CH2OSi), 7,21 (2H, d), 7,46 (2H, ). HPLC (от 50 до 100% В за 15 мин): tR=15 мин.
Ди-трет-бутил {4-[(трет-бутилдиметилсилилокси)метил]фенил}фторсилан (ii):
При -78°С на магнитной мешалке раствор tBuLi в пентане (7,29 мл, 1,7 моль/л, 12,4 ммоль, 2,4 экв.) добавляли к раствору ((4-бромбензил)окси)(трет-бутил)диметилсилана (i) (1,56 г, 5,18 ммоль, 1,0 экв.) в сухом TFIF (15 мл). После перемешивания реакционной смеси в течение 30 мин при -78°С полученную суспензию по каплям в течение 30 мин добавляли к охлажденному (минус 78°С) раствору ди-третбутилдифторсилана (1,12 г, 6,23 ммоль. 1,2 экв.) в сухом THF (10 мл). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры в течение 12 ч, а затем гидролизовали насыщенным водным раствором NaCl (100 мл). Органический слой отделяли, а водный слой экстрагировали диэтиловым эфиром (3x50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, получая II в виде желтоватого масла (1,88 г, 95%). Его применяли для последующих реакций без дополнительной очистки. Спектры ЯМР соответствуют литературным данным[2]. HPLC (от 50 до 100% В за 20 мин): tR=19 мин.
4-(ди-трет-Бутилфторсиланил)бензиловый спирт (iii):
Каталитическое количество концентрированной водной HCl (0,5 мл) добавляли к суспензии ii (1,88 г, 4,92 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (50 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре, а затем растворитель и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток повторно растворяли в диэтиловом эфире (40 мл) и раствор промывали насыщенным водным раствором NaHCO3. Водный слой экстрагировали диэтиловым эфиром (3x50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, получая ш в виде желтоватого масла (1,29 г, 98%), которое затвердело. Продукт применяли без дополнительной очистки. Спектры ЯМР соответствуют литературным данным[2]. HPLC (от 50 до 100% В за 15 мин): tR=8,2 мин.
4-(ди-трет-бутилфторсилил)бензальдегид (iv):
- 13 046339
Раствор спирта ш (1,37 г, 5,10 ммоль, 1,0 экв.) в сухом дихлорметане (20 мл) добавляли по каплям к перемешиваемой охлажденной льдом суспензии хлорхромата пиридиния (2,75 г, 12,8 ммоль, 2,5 экв.) в сухом растворе дихлорметана (60 мл). После перемешивания реакционной смеси в течение 30 мин при 0°С и в течение 2,5 ч при комнатной температуре добавляли безводный диэтиловый эфир (40 мл) и надосадочный раствор декантировали с черного смолистого материала. Нерастворимый материал тщательно промывали диэтиловым эфиром, и объединенные органические фазы пропускали через короткий слой силикагеля (10 см на г сырого продукта) для фильтрации. Растворители удаляли в вакууме, получая альдегид iv в виде желтоватого масла (1,31 г, 96%). Спектры ЯМР соответствовали литературным данным[2]. HPLC (от 50 до 100% В за 15 мин): tR=10,5 мин.
4-(ди-трет-Бутилфторсилил)бензойная кислота (v):
При комнатной температуре 1М водный KMnO4 (30 мл) добавляли к смеси iv (1,31 г, 4,92 ммоль, 1,0 экв.), трет-бутанола (30 мл), дихлорметана (3,3 мл) и 1,25 М NaH2PO4 буфер Н2О (20 мл) при рН 4,04,5. После перемешивания смеси в течение 25 мин ее охлаждали до 5°С, после чего добавляли избыток KMn4 (0,78 г, 4,92 ммоль, 1,0 экв.). Затем реакцию гасили добавлением насыщенного водного раствора Na2SO3 (50 мл). При добавлении 2М водной HCl весь MnO2 растворялся. Полученный раствор экстрагировали диэтиловым эфиром (3x100 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaHCO3, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением белого твердого вещества, которое очищали перекристаллизацией из Et2O/н-гексана (1:3, в течение 12 ч), чтобы получить v (0,84 г, 60%). Спектры ЯМР соответствовали литературным данным[2]. HPLC (от 50 до 100% В за 15 мин): tR=8,5 мин.
Схема 2 Синтез SiFA-BA:
a) TBDMSCl, имидазол (DMF);
б) tBuLi, ди-трет-бутилдифторсилан (THF);
в) HCl (МеОН);
г) хлорхромат пиридиния (DCM);
д) KMnO4 (DCM, трет-бутанол, буфер NaH2PO4).
Синтез rhPSMA-7.1-7.4
Первые стадии синтеза для получения четырех различных изомеров rhPSMA-7 идентичны и выполняются вместе с применением стандартного протокола Fmoc-SPPS, описанного выше, начиная с Fmoc-DOrn(Dde)-OH, связанного со смолой. После расщепления группы Fmoc 20% пиперидином в DMF (GP3), (tBuO) EuE (OtBu)2 (2,0 экв.) конъюгировали с HOAt (2,0 экв.), TBTU (2,0 экв.) и DIPEA (6,0 экв.) в DMF в течение 4,5 ч. После отщепления Dde-группы смесью 2% гидразина в DMF (GP4a) добавляли раствор янтарного ангидрида (7,0 экв.) и DIPEA (7,0 экв.) в DMF и оставляли для реакции на 2,5 ч. Конъюгирование Fmoc-D-Lys (OtBu) HCl (2,0 экв.) достигалось добавлением к смоле смеси HOAt (2,0 экв.), TBTU (2,0 экв.) и DIPEA (6,0 экв.) в DMF. После предварительной активации в течение 5 мин добавляли Fmoc-DLys (OtBu) HCl (2,0 экв.), растворенный в DMF, и оставляли для реакции на 2,5 ч (GP2). Последующее расщепление Fmoc-группы проводили путем добавления смеси 20% пиперидина в DMF (GP3). Наконец, смолу расщепили для синтеза rhPSMA-7.1-7.4 (схема 3).
rhPSMA-7.1 (D-Dap-(R)-DOTA-GA):
Fmoc-D-Dap(Dde)-OH (2,0 экв.) предварительно активировали в смеси HOAt (2,0 экв.), TBTU (2,0 экв.) и 2,4,6-триметилпиридина (6,7 экв.) в DMF и добавляли к связанному со смолой пептиду на 2,5 ч. Последующую депротекцию ортогонального Dde проводили с применением имидазола и гидрохлорида гидроксиламина, растворенных в смеси NMP и DMF в течение 3 ч. SiFA-BA (1,5 экв.) реагировал со свободным амином боковой цепи с HOAt (1,5 экв.), TBTU (1,5 экв.) и DIPEA (4,5 экв.) в качестве реагентов активации в DMF в течение 2 ч. После снятия защиты с Fmoc пиперидином (GP3), (R)-DOTA-GA(tBu)4
- 14 046339 (2,0 экв.) конъюгировали с НОАТ (2,0 экв.), TBTU (2,0 экв.) и 2,4,6-триметилпиридином (6,7 экв.) в DMF в течение 2,5 ч. Очистку от смолы с одновременной депротекцией кислотно-лабильных защитных групп проводили в TFA, согласно GP5. natGa-комплексообразование пептида проводили, как описано в GP6.
rhPSMA-7.2 (L-Dap-(R)-DOTA-GA):
Fmoc-L-Dap(Dde)-OH (2,0 экв.) предварительно активировали в смеси HOAt (2,0 экв.), TBTU (2,0 экв.) и 2,4,6-триметилпиридина (6,7 экв.) в DMF в течение 2,5 ч. После ортогональной депротекции Dde, конъюгацию SiFA-BA и Fmoc-расщепление проводили, как описано для rhPSMA-7.1. (R)-DOTAGA(tBu)4 (2,0 экв.) конъюгировали с НОАТ (2,0 экв.), TBTU (2,0 экв.) и 2,4,6-триметилпиридином (6,7 экв.) в DMF в течение 2,5 ч. Очистку от смолы с одновременной депротекцией кислотно-лабильных защитных групп проводили в TFA согласно GP5. natGa-комnлексообразование пептида проводили, как описано в GP6.
rhPSMA-7.3 (D-Dap-(S)-DOTA-GA):
Fmoc-D-Dap(Dde)-OH (2,0 экв.) предварительно активировали в смеси HOAt (2,0 экв.), TBTU (2,0 экв.) и 2,4,6-триметилпиридина (6,7 экв.) в DMF в течение 2,5 ч. После ортогональной депротекции Dde, конъюгацию SiFA-BA и Fmoc-расщепление проводили, как описано для rhPSMA-7.1. (S)-DOTAGA(tBu)4 (2,0 экв.) конъюгировали с HOAT (2,0 экв.), TBTU (2,0 экв.) и 2,4,6-триметилпиридином (6,7 экв.) в DMF в течение 2,5 ч. Очистку от смолы с одновременной депротекцией кислотно-лабильных защитных групп проводили в TFA согласно GP5. natGa-комnлексообразование пептида проводили, как описано в GP6.
rhPSMA-7.4 (L-Dap-(S)-DOTA-GA):
Fmoc-L-Dap(Dde)-OH (2,0 экв.) предварительно активировали в смеси HOAt (2,0 экв.), TBTU (2,0 экв.) и 2,4,6-триметилпиридина (6,7 экв.) в DMF в течение 2,5 ч. После ортогональной депротекции Dde, конъюгацию SiFA-BA и Fmoc-расщепление проводили, как описано для rhPSMA-7.1. (S)-DOTAGA(tBu)4 (2,0 экв.) конъюгировали с HOAT (2,0 экв.), TBTU (2,0 экв.) и 2,4,6-триметилпиридином (6,7 экв.) в DMF в течение 2,5 ч. Очистку от смолы с одновременной депротекцией кислотно-лабильных защитных групп проводили в TFA согласно GP5. natGa-комnлексообразование пептида проводили, как описано в GP6.
- 15 046339 rhPSMA-7.1:
HPLC (от 10 до 70% В за 15 мин): tR = 10,5 мин.
HPLC (от 25 до 35% В за 40 мин): tR = 31,4 мин. rhPSMA-7.2:
HPLC (от 10 до 70% В за 15 мин): tR = 10,4 мин.
HPLC (от 25 до 35% В за 40 мин): tR = 27,9 мин. rhPSMA-7.3:
HPLC (от 10 до 70% В за 15 мин): tR = 10,4 мин.
HPLC (от 25 до 35% В за 40 мин): tR = 28,1 мин.
rhPSMA-7.4:
HPLC (от 10 до 70% В за 15 мин): tR = 10,5 мин.
HPLC (от 25 до 35% В за 40 мин): tR = 29,1 мин.
rhPSMA-7.1-7.4:
Расчетная моноизотопная масса (C63H96FGaN12O25Si): 1536.6 найдено: m/z = 1539.4 [М+Н]+, 770.3 [М+2Н]2+.
I rhPSMA-7.3 I I rhPSMA-7.4 |
Схема 3. Синтез rhPSMA-7.1-7.4: а) 20% пиперидин, (DMF); b) (tBuO)EuE(OtBu)2, HOAt, TBTU, DIPEA, (DMF); с) 2% гидразин (DMF); d) янтарный ангидрид, DIPEA, (DMF); e) Fmoc-D-Lys(OtBu)-HCl, HOAt, TBTU, DIPEA, (DMF); f1) Fmoc-D-Dap(Dde)-OH, HOAt, TBTU, 2,4,6-коллидин, (DMF); f2) Fmoc-LDap(Dde)-OH, HOAt, TBTU, 2,4,6-коллидин, (DMF); g) имидазол, гидроксиламин гидрохлорид, (NMP, DMF); h) SiFA-BA, HOAt, TBTU, DIPEA (DMF); i1) (R)-DOTA-GA(tBu)4, HOAt, TBTU, 2,4,6-коллидин (DMF); i2) (S)-DOTA-GA(tBu)4, HOAt, TBTU, 2,4,6-коллидин (DMF); j) очистка и депротекция: TFA, TIPS, H2O; k) Ga(NO3)3, (tBuOH, H2O). ^-мечение
Для ^-мечения применялась ранее опубликованная процедура, которая была немного изменена. Вкратце, водный F пропускали через картридж SAX (Sep-Pak Accell Plus QMA Carbonate light), который предварительно кондиционировали 10 мл воды. После сушки 10 мл воздуха воду удаляли, промывая картридж 10 мл безводного ацетонитрила, а затем 20 мл воздуха. 18F элюировали 100 мкмоль [К+с2.2.2]ОН-, растворенного в 500 мкл безводного ацетонитрила. Перед мечением добавляли 30 мкмоль щавелевой кислоты в безводном ацетонитриле (1 М, 30 мкл). Эту смесь применяли целиком или аликвоту для фторирования 10-25 нмоль PSMA-SiFA (1 мМ в безводном ДМСО). Полученную реакционную смесь инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре. Для очистки индикатора применяли легкий картридж Sep-Pak С18, предварительно кондиционированный 10 мл EtOH, затем 10 мл Н2О. Меченую смесь разбавляли 9 мл PBS (рН 3) и пропускали через картридж, затем 10 мл Н2О. Пептид вымывался 500 мкл смеси 4:1 (v/v) EtOH в воде. Радиохимическую чистоту меченого соединения определяли методом радио
- 16 046339
RP-HPLC и радио-TLC (силикагель 60 RP-18 F254S, подвижная фаза: 3:2 смесь (v/v) MeCN в Н2О, дополненная 10% 2 М водного NaOAc и 1% TFA).
|25[-мечение:
Эталонный лиганд для исследований in vitro ([125I] I-BA) KuE получали в соответствии с ранее опубликованной процедурой. Вкратце, 0,1 мг станнилированного предшественника (SnBu3BA)(OtBu)KuE(OtBu)2 растворяли в растворе, включающем 20 мкл перуксусной кислоты, 5,0 мкл (21 МБк) [125I]NaI (74 ТБк/ммоль, 3,1 ГБк./мл, 40 мМ NaOH, Hartmann Analytic, Брауншвейг, Германия), 20 мкл MeCN и 10 мкл уксусной кислоты. Реакционный раствор инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре, загружали в картридж и промывали 10 мл воды (картридж С18 Sep Pak Plus, предварительно обработанный 10 мл МеОН и 10 мл воды). После элюирования 2,0 мл смеси 1:1 (об/об) EtOH/MeCN радиоактивный раствор упаривали досуха в слабом потоке азота и обрабатывали 200 мкл TFA в течение 30 мин с последующим выпариванием TFA. Неочищенный продукт ([125I]I-BA) KuE очищали с помощью RP-HPLC (от 20% до 40% В за 20 мин): tR = 13,0 мин.
Эксперименты in vitro Определение IC50
PSMA-позитивные клетки LNCaP выращивали в среде Игла, модифицированной Дублекко/питательной смеси F-12 с глутамаксом-1 (1:1) (Invitrigon), с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки и поддерживали при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% СО2. Для определения сродства PSMA (IC50) клетки собирали за 24±2 ч до эксперимента и высевали в 24-луночные планшеты (1,5x10 клеток в 1 мл/лунку). После удаления культуральной среды клетки обрабатывали один раз 500 мкл HBSS (сбалансированный солевой раствор Хэнка, Biochrom, Берлин, Германия, с добавлением 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA)) и оставляли на 15 мин на льду для уравновешивания в 200 мкл HBSS (1% BSA). Затем добавляли 25 мкл на лунку растворов, включающих либо HBSS (1% BSA, контроль), либо соответствующий лиганд в возрастающей концентрации (10-10-10-4 М в HBSS, с последующим добавлением 25 мкл ([125I]I-BA) KuE (2,0 нМ) В HBSS (1% BSA). Все эксперименты проводили не менее трех раз для каждой концентрации. После 60 мин инкубации на льду эксперимент завершали удалением среды и последовательным промыванием 200 мкл HBSS. Среды обеих стадий объединяли в одну фракцию и представляли количество свободного радиолиганда. После этого клетки лизировали 250 мкл 1 М NaOH и объединяли с 200 мкл HBSS на следующем этапе промывки. Количественное определение связанного и свободного радиолиганда проводилось в γ-счетчике.
Интернализация
Для исследований интернализации клетки LNCaP собирали за 24±2 ч до эксперимента и высевали в 24-луночные планшеты (1,25x105 клеток в 1 мл/лунку). После удаления культуральной среды клетки промывали один раз 500 мкл DMEM-F12 (5% BSA) и оставляли для уравновешивания не менее 15 мин при 37°С в 200 мкл DMEM-F12 (5% BSA). Каждую лунку обрабатывали или 25 мкл DMEM-F12 (5% BSA), или 100 мкМ раствора РМРА для блокировки. Затем добавляли 25 мкл меченного 68Ga/18F ингибитора PSMA (5,0 нМ) и клетки инкубировали при 37°С в течение 60 мин. Эксперимент заканчивали, помещая 24-луночный планшет на лед на 3 мин и последовательно удаляя среду. Каждую лунку промывали 250 мкл HBSS и фракции из этих первых двух этапов объединяли, представляя количество свободного радиолиганда. Удаление поверхностно связанной активности осуществляли путем инкубации клеток с 250 мкл ледяного раствора РМРА (10 мкМ в PBS) в течение 5 мин и снова промывали еще 250 мкл ледяного PBS. Интернализованную активность определяли путем инкубации клеток в 250 мкл 1 М NaOH и комбинации с фракцией последующей стадии промывки с 250 мкл 1,0 М NaOH. Каждый эксперимент (контроль и блокировка) проводили в трех повторностях. Свободную, поверхностно-связанную и интернализованную активность количественно определяли с помощью γ-счетчика. Все исследования интернализации сопровождались эталонными исследованиями с применением ([125I]I-BA) KuE (с=0,2 нМ), которые выполнялись аналогично. Данные были скорректированы на неспецифическую интернализацию и нормализованы к специфической интернализации, наблюдаемой для радиоактивного йодированного эталонного соединения.
Коэффициент разделения октанол-вода
Приблизительно 1 МБк меченого индикатора растворяли в 1 мл смеси 1: 1 (по объемам) фосфатносолевого буфера (PBS, рН 7,4) и н-октанола в пробирке Эппендорфа. После энергичного перемешивания суспензии в течение 3 мин при комнатной температуре флакон центрифугировали при 15000 g в течение 3 мин (Biofuge 15, Heraus Sepatech, Osterode, Германия) и аликвоты по 100 мкл обоих слоев измеряли на гамма-счетчике. Эксперимент повторяли не менее шести раз.
Связывание с HSA
Для определения связывания HSA применяли колонку Chiralpak HSA (50x3 мм, 5 мкм, Н13Н-2433) при постоянной скорости потока 0,5 мл/мин. Подвижная фаза (А: NH4OAC, 50 мМ в воде, рН 7 и В: изопропанол) готовили непосредственно для каждого эксперимента и примяли только в течение одного дня. Колонку хранили при комнатной температуре, и каждый цикл останавливали после обнаружения сигнала, чтобы сократить время сбора данных. Все вещества растворяли в концентрации 0,5 мг/мл в 50% 2
- 17 046339 пропанола и 50% 50 мМ ацетатного буфера аммония рН 6,9. Выбранные эталонные вещества демонстрировали диапазон связывания HSA от 13 до 99%, поскольку предполагалось большое разнообразие связывания альбумина в отношении пептидов. Все девять эталонных веществ вводили последовательно, чтобы установить нелинейную регрессию с OriginPro 2016G.
Таблица 1. Эталонные вещества, применяемые для калибровки колонки с HSA
| Эталон | tR | LogtR | Лит. HSA% | Log К HSA |
| п-бензиловый спирт | 2,40 | 0,38 | 13,15 | минус 0,82 |
| Анилин | 2,72 | 0,43 | 14,06 | минус 0,79 |
| Фенол | 3,28 | 0,52 | 20,69 | минус 0,59 |
| Бензойная кислота | 4,08 | 0,61 | 34,27 | минус 0,29 |
| Карбамазепин | 4,15 | 0,62 | 75,00 | 0,46 |
| п-нитрофенол | 5,62 | 0,75 | 77,65 | 0,52 |
| Эстрадиол | 8,15 | 0,91 | 94,81 | 1,19 |
| Пробенецид | 8,84 | 0,95 | 95,00 | 1,20 |
| Г либенкламид | 29,18 | 1,47 | 99,00 | 1,69 |
Время удерживания показано в качестве примера для проведенного эксперимента; время удерживания tR.; Лит. Литературное значение HSA связывания человеческого сывороточного альбумина в [%]; Log K HSA логарифмический K связывания человеческого сывороточного альбумина.
Эксперименты in vivo
Все эксперименты на животных проводились в соответствии с общими правилами защиты животных в Германии и институциональными рекомендациями по уходу и применению животных. Для создания ксенотрансплантатов опухоли клетки LNCaP (107клеток/200 мкл) суспендировали в смеси 1:1 (об/об) модифицированной Дульбекко среды Игла/питательной смеси F-12 с глутамаксом-1 (1:1) и матригелем (BD Biosciences, Германия) и подкожно прививали на правое плечо 6-8-недельным мышам CB17-SCID (Charles River, Sulzfeld, Германия). Мышей использовали, когда опухоли выросли до диаметра 5-8 мм (34 недели после инокуляции).
Биораспределение
Примерно 1-2 МБк (менее 0,2 нмоль) ^-меченного ингибитора PSMA вводили в хвостовую вену самцов мышей SCID СВ-17 с опухолью LNCaP и умерщвляли через 1 ч после инъекции (n=4-5). Выбранные органы удаляли, взвешивали и измеряли на γ-счетчике.
Исследования метаболизма
a) Аналитическая установка
Аналитическую обращенно-фазовую хроматографию высокого давления (RP-HPLC) выполняли с применением градиентных систем Shimadzu (Shimadzu Deutschland GmbH, Neufahrn, Германия), оснащенных детектором SPD-20A UV/Vis (220 нм, 254 нм). Колонку Multospher 100 RP18 (125x4,6 мм, размер частиц 5 мкм) (CS GmbH, Langerwehe, Германия) применяли для аналитических измерений при скорости потока 1 мл/мин. Элюентами для всех операций HPLC были вода (растворитель А) и ацетонитрил (растворитель В), оба включали 0,1% трифторуксусной кислоты. Радиоактивность регистрировали путем подключения выхода УФ-фотометра к детектору HERM LB 500 (Berthold Technologies GmbH, БадВильдбад, Германия). Градиент для всех операций HPLC составлял: 5% В изократический 0-3 мин, 2535% В 3-43 мин, 95-95% В 43-48 мин.
Для радиотонкослойной хроматографии применялись алюминиевые листы, покрытые силикагелем 60 RP-18 F254 с подвижной фазой, состоящей из смеси 3:2 (об/об) MeCN в Н2О с добавлением 10% 2 М водного NaOAc. и 1% TFA. Анализ выполняли с применением радио-TLC детектора Scan-RAM (LabLogic Systems Ltd., Шеффилд, Великобритания) или фосфорного сканера CR 35 BIO (Duerr Medical GmbH, Битигхайм-Биссинген, Германия).
b) Определение метаболической стабильности rhPSMA-7.1-7.4.
Для исследований микрометаболизма in vivo 8-12 МБк (менее 0,6 нмоль) соответствующего 18Fмеченного лиганда (rhPSMA-7,1-7,4) вводили в хвостовую вену самок здоровых мышей CB17-SCID (n=4). Мышей оставляли под анестезией на 30 минут и собирали мочу с помощью катетера мочевого пузыря. Образцы мочи объединяли и центрифугировали в течение 5 минут при 9000 об/мин для удаления взвешенных твердых частиц. Супернатант непосредственно применяли для анализа радио-HPLC в вышеупомянутых условиях. Чтобы продемонстрировать, что изотопный обмен F на связанный с пептидом F имеет место в моче, каждое соединение инкубировали в течение определенных интервалов времени с образцами мочи здоровых самок мышей СВ-17-SCID, которые анализировали с помощью радио-HPLC и/или радио-TLC. Кроме того, этот эксперимент проводили с добавлением избытка Na19F (0,5 мкмоль) и инкубацией в течение 2 ч с меченным 18F rhPSMA-7.3.
- 18 046339
с) Определение распределения rhPSMA-7.1-7.4 in vivo
Для количественной оценки относительного поглощения каждого изомера (rhPSMA-7.1-7.4) самцу мыши CB-17-SCID с опухолью вводили рацемическую смесь rhPSMA-7 (180-280 МБк, SA = 247-349 ГБк/мкмоль, произведено в Klinikum rechts der Isar по полностью автоматизированной процедуре). Животное оставляли под анестезией на 30 мин и умерщвляли. Мочу, кровь, печень, почки и опухоль собирали и обрабатывали в соответствии с описанными ниже процедурами. Образец мочи центрифугировали в течение 5 минут при 9000 об/мин, чтобы получить прозрачный раствор, и непосредственно подвергали анализу с помощью радио-HPLC. Кровь разбавляли до 1 мл Н2О и дважды центрифугировали при 13000 g в течение 5 мин. Супернатант собирали и загружали в картридж Strata X (33 мкм полимерная обращенная фаза, 500 мг, предварительно кондиционированные 5 мл МеОН, а затем 5 мл Н2О). После промывки 5 мл Н2О картридж элюировали смесью 6:4 (об/об) MeCN в Н2О с добавлением 1% TFA. Элюат разбавляли водой и анализировали радио-HPLC. Опухоль, почки и печень гомогенизировали с применением измельчителя тканей Potter-Elvehjem (Kontes Glass Co, Vineland, США) или шаровой мельницы ММ-400 (Retsch GmbH, Haan, Германия).
I) Измельчитель тканей Potter-Elvehj em
Опухоль и почки отдельно гомогенизировали в гомогенизаторе тканей с 1 мл буфера для экстракции (850 мкл 1 М HEPES рН 7,4, 100 мкл 20 мМ РМРА и 100 мкл 1 М NaCl) в течение 30 мин. Полученный гомогенат собирали и центрифугировали при 13000 g в течение 5 мин. Впоследствии супернатант собирали, снова центрифугировали (13000 g, 5 мин) и загружали в картридж Strata X (полимерная обращенная фаза 33 мкм, 500 мг, предварительно кондиционированные 5 мл МеОН, а затем 5 мл Н2О). После промывки 5 мл Н2О картридж элюировали смесью 6:4 (об/об) MeCN в Н2О с добавлением 1% TFA. Элюат каждого органа разбавляли водой и анализировали радио-HPLC.
II) Шаровая мельница ММ-400
Органы (опухоль, почка, печень) отдельно гомогенизировали в 2 мл пробирке вместе с 3 мелющими шарами (диаметром 3 мм) и 1 мл буфера для экстракции (850 мкл 1 М HEPES рН 7,4, 100 мкл 20 мМ РМРА и 100 мкл 20 мМ РМРА и 100 мкл 1М NaCl) в течение 10 мин при 30 Гц. Гомогенат центрифугировали при 13000 g в течение 5 мин и собирали супернатант. Затем осадок суспендировали в 1 мл буфера для экстракции и снова гомогенизировали с помощью шаровой мельницы в течение 10 мин при 30 Гц. После центрифугирования (13000 g, 5 мин) оба супернатанта объединяли и загружали в картридж Strata X (33 мкм полимерная обращенная фаза, 500 мг, предварительно кондиционированные 5 мл МеОН, а затем 5 мл Н2О). После промывки 5 мл Н2О картридж элюировали смесью 6:4 (об/об) MeCN в Н2О с добавлением 1% TFA. Элюат каждого органа разбавляли водой и анализировали радио-HPLC. Чтобы продемонстрировать, что прорыв во время загрузки картриджа не является результатом несвязанного F-18, супернатант также исследовали с помощью радио-TLC после центрифугирования.
Наконец, соотношения индивидуальных изомеров определяли из профилей HPLC экстрагированных образцов и сравнивали с соотношениями изомеров из контроля качества рацемической смеси rhPSMA-7. Эффективность экстракции и загрузки картриджа с поправкой на распад, а также общая экстракционная активность исследованных образцов приведены в табл. 2. Эффективность элюирования картриджа была более 99% для всех экспериментов.
Пример 2. Результаты
Распределение пиков хроматографии
Распределение хроматографических пиков проводилось путем сравнения УФ-профилей
а) смеси rhPSMA7-rac со
б) смесью rhPSMA7-rac, вводимой совместно с каждым энантиочистым соединением rhPSMA7.
Для различных изомеров применялись следующие названия:
rhPSMA-rac: [19F][natGa]D/L-Dap-R/S-DOTAGA-rhPSMA7 rhPSMA-7-1: [19F][natGa]D-Dap-R-DOTAGA-rhPSMA7 rhPSMA-7-2: [19F][natGa]L-Dap-R-DOTAGA-rhPSMA7 rhPSMA-7-3: [19F][natGa]D-Dap-S-DOTAGA-rhPSMA7 rhPSMA-7-4: [19F][natGa]L-Dap-S-DOTAGA-rhPSMA7
- 19 046339
Таблица 2. Назначение различных изомеров, наименования, типичные времена удерживания (условия HPLC приведены на фиг. 2а-4К а также процентное включение каждого изомера в типичной смеси rhPSAM7-rac. Точное количество может варьироваться для каждого изомера.
| Лиганд | Наименование | tR [мин] | Типичный процент от всей смеси |
| [19F] [^GaJD-Dap-R-DOT AGA-rhP SM A7 | rhPSMA-7-1 | 31,6 | 21 |
| [^FJ^GaJL-Dap-R-DOTAGA-rhPSMAT | rhPSMA-7-2 | 28,3 | 22 |
| [19F][natGa]D-Dap-S-DOTAGA-rhPSMA7 | rhPSMA-7-3 | 28,9 | 37 |
| [iyF][mtGa]L-Dap-S-DOTAGA-rhPSMA7 | rhPSMA-7-4 | 30,1 | 20 |
Сродство к связыванию
Первый набор значений (rhPSMA-7.1 и rhPSMA-7.2; фиг. 6а) определяли, применяя для серии разведении раствор, непосредственно полученный после natGa-комплексообразования соответствующего лиганда. Во втором наборе данных (Фиг. 6б) комплексообразованные лиганды очищали способом RPHPLC для отделения некомплексообразованных солей natGa. Поскольку существенных различий не наблюдалось, обе серии были объединяли и применяли для расчета средних значений (±SD).
Таблица 3. Изображение отдельных измерений IC50 [нМ] (как показано на фиг. 6а и 6b).
Условия описаны в описании к фиг. 6 а.
| № | rhPSMA7.1 | rhPSMA7.2 | rhPSMA7.3 | rhPSMA7.4 |
| 1 | 8,74 | 3,17 | нд | нд |
| 2 | 6,91 | 2,97 | НД | нд |
| 3 | 7,27 | 3,36 | НД | нд |
| 4 | 5,04 | 2,64 | 3,17 | 3,4 |
| 5 | 1,21 (*) | 2,76 | 2,91 | 3,56 |
| 6 | 7,И | 3,94 | 5,35 | 2,79 |
| 7 | 8,31 | 5,8 | 5,74 | 4,57 |
| 8 | 4,97 | 4,31 | 4,59 | 3,78 |
| 9 | 6,44 | 4,32 | 4,45 | нд |
| Среднее | 6,85 | 3,70 | 4,37 | 3,62 |
| SD | 1,36 | ι,οι | 1,14 | 0,65 |
* Значение № 5 серии rhPSMA7.1 было удалено (статистический выброс).
Таблица 4. Сродство к связыванию (IC50 [нМ]) других выбранных ингибиторов PSMA (*).
| № | Ингибитор | 1С50 [нМ] |
| 1 | (I-BA)KuE | 7,1 ±2,4 нМ |
| 2 | DCFPyL | 12,3 ± 1,2 нМ |
| 3 | DKFZ1007 | 4,2 ± 0,5 нМ |
*проведено в нашей лаборатории с применением идентичного анализа связывания (Robu et al. EJNMMI Research 2018; 8:30).
Исследования интернализации
Таблица 5. Изображение индивидуальных уровней интернализации [% от [125I] IB-KuE].
| rhPSMA7.1 | rhPSMA7.2 | rhPSMA7.3 | rhPSMA7.4 | |
| 1 | 61,8 | 188,7 | 156,6 | 209,6 |
| 1 | 70,6 | 182,7 | 156,0 | 202,6 |
| 1 | 68,0 | 169,5 | 171,7 | 209,8 |
| 1 | 67,9 | 205,3 | - | - |
| 1 | 71,5 | 212,6 | - | - |
| 1 | 77,5 | 192,3 | - | - |
| Среднее | 69,55 | 191,83 | 161,41 | 207,33 |
| SD | 5,19 | 15,54 | 8,88 | 4,06 |
- 20 046339
Таблица 6. Значения интернализации [% [125I]IB-KuE] других выбранных ингибиторов PSMA (*).
| № | Ингибитор | Интернализация [%] |
| 1 | PSMA-1007 | 118±4 |
| 2 | DCFPyL | 118± 5 |
проведено в нашей лаборатории с применением идентичного анализа связывания (Robu et al. EJNMMI Research 2018; 8:30).
Липофильность (коэффициент распределения октанол-вода)
Определение значений logP проводили в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS, рН 7,4) и н-октаноле (= logPoct/PBS).
Таблица 7. Индивидуальные измерения log P для изомеров 7,1-7,4 rhPSMA7, определенные в смесях октанол/PBS7,4
| rhPSMA7.1 | rhPSMA7.2 | rhPSMA7.3 | rhPSMA7.4 | rhPSMA7гас | |
| 1 | минус 2,79 | минус 3,00 | минус 3,03 | минус 3,09 | минус 3,23 |
| 2 | минус 2,82 | минус 3,01 | минус 3,08 | минус 3,12 | минус 3,15 |
| 3 | минус 2,80 | минус 3,00 | минус 3,07 | минус 3,06 | минус 3,17 |
| 4 | минус 2,84 | минус 3,00 | минус 3,02 | минус 3,07 | минус 3,10 |
| 5 | минус 2,88 | минус 3,03 | минус 3,06 | минус 3,10 | минус 3,17 |
| 6 | минус 2,90 | минус 2,96 | минус 3,07 | минус 3,04 | минус 3,24 |
| 7 | минус 2,85 | минус 2,94 | минус 3,06 | минус 2,99 | минус 3,80 |
| 8 | минус 2,86 | минус 2,89 | минус 2,86 | минус 2,97 | минус 3,60 |
| 9 | минус 3,14 | минус 3,02 | минус 3,39 | минус 3,37 | минус 3,87 |
| 10 | минус 3,29 | минус 3,02 | минус 3,33 | минус 3,43 | минус 3,61 |
| И | минус 3,26 | минус 3,06 | минус 3,34 | минус 3,29 | минус 3,76 |
| 12 | минус 3,02 | минус 3,02 | минус 3,34 | минус 3,48 | минус 3,65 |
| 13 | минус 3,15 | минус 2,99 | минус 3,20 | минус 3,52 | минус 3,67 |
| 14 | минус 3,57 | минус 3,02 | минус 3,39 | минус 3,50 | - |
| 15 | минус 3,40 | минус 3,06 | минус 3,40 | минус 3,44 | - |
| 16 | минус 3,32 | минус 3,14 | минус 3,41 | минус 3,41 | - |
| 17 | минус 3,64 | минус 3,40 | минус 3,48 | минус 3,56 | - |
- 21 046339
| 18 | минус 3,92 | минус 3,50 | минус 3,49 | минус 3,61 | - |
| 19 | - | минус 3,45 | минус 3,32 | минус 3,58 | - |
| 20 | - | минус 3,45 | минус 3,45 | минус 3,54 | - |
| 21 | - | минус 3,53 | минус 3,53 | минус 3,42 | - |
| 22 | - | минус | минус 3,43 | минус 3,57 | - |
| 23 | - | - | минус 3,56 | минус 3,67 | - |
| Среднее | минус 3,14 | минус 3,13 | минус 3,26 | минус 3,33 | минус 3,46 |
| SD | 0,34 | 0,22 | 0,19 | 0,22 | 0,29 |
Таблица 8. Значения log P изомеров PSMA-1007, DCFPYL, rhPSMA7-rac и rhPSAM7.1-7.4; (n=6), октанол/PBS7.4.
| Ингибитор | logP |
| PSMA-1007 | минус 1,6 |
| DCFPyL | минус 3,4 |
| natGa-18F-rhPSMA7-rac, | минус 3,46±0,29 |
| 6XGa-natF-rhPSMA7-rac | |
| natGa-18F-rhPSMA7.1 | минус 3,14±0,34 |
| na,Ga-lxF-rhPSMA7.2 | минус 3,13+0,22 |
| natGa-18F-rhPSMA7.3 | минус 3,26+0-19 |
| a,Ga-lxF-rhPSMA7.4 | минус 3,33+0022 |
Связывание ингибиторов PSMA с белком плазмы человека (HSA)
Таблица 9. Связывание HSA изомеров PSMA-1007, DCFPYL, rhPSMA7-rac и rhPSAM7.1-7.4; (n=6).
Определено на колонке Chiralpak HSA (50x3 мм, 5 мкм, Н13Н-2433)
| Ингибитор | Связывание HSA [%] |
| PSMA-1007 | 97,8 |
| DCFPyL | 14,3 |
| 6SGa-natF-rhPSMA7-rac | 96,7 |
| alGa-lxF-rhPSMA7.l | 97,7 |
| natGa-18F-rhPSMA7.2 | 97,8 |
| mtGa-1!iF-rhPSMA.3 | 96,9 |
natGa-18F-rhPSMA7.4 96А
- 22 046339
Биораспределение [18F][natGa] rhPSMA7.1-7.4 через 1 ч после введения
Таблица 10. Биораспределение (в% ID/г) 18F-rhPSMA через 1 ч после введения мышам SCID с опухолью LNCaP. Данные выражены как среднеехстандартное отклонение (n=4 для rhPSMA7.1, n=5 для 7.2, n=4 для 7.3, n=5 для 7.4 и n=3 для 7-rac).
| [18F][m‘Ga]rhPSMA-71 | [18F][mtGa]rhPSMA-7-2 | [18Р][т‘Оа]rhPSMA-7-З | [18F][m‘Ga]rhPSMA-7- 4 | [18Р][т‘Оа]rhPSMA-rac | |
| Кровь | 0,53±0,13 | 0,56±0,20 | 0,96±0,24 | 1,15±0,30 | 1,1±0,03 |
| Сердце | 0,53±0,03 | 0,32±0,13 | 0,87±0,17 | 0,71±0,26 | 0,69±0,07 |
| Легкое | 1,1±0,21 | 0,89±0,38 | 2,2±0,35 | 1,59±0,61 | 1,4±0,17 |
| Печень | 0,75±0,62 | 0,35±0,08 | 0,69±0,13 | 0,69±0,20 | 0,67±0,07 |
| Селезенка | 20,0±4,2 | 10,1±6,3 | 16,6±2,6 | 18,4±9,77 | 11,1±2,3 |
| Поджелуд. железа | 0,45±0,12 | 0,21±0,08 | 0,63±0,44 | 0,50±0,30 | 0,60±0,10 |
| Желудок | 0,28±0,17 | 0,19±0,08 | 0,44±0,23 | 0,25±0,06 | 0,49±0,07 |
| Кишечник | 0,30±0,16 | 0,18±0,07 | 0,35±0,07 | 0,37±0,09 | 0,60±0,27 |
| Почки | 220±24,8 | 87,6±28,8 | 292±45,1 | 153±80,3 | 71,3±13,3 |
| Надпочечни ки | 2,0±0,25 | 1,3±0,8 | 2,2±0,83 | 3,57±2,38 | 3,0±0,45 |
| Мышцы | 0,32±0,30 | 0,13±0,07 | 0,33±0,15 | 0,31±0,08 | 0,36±0,06 |
| Кость | 0,50±0,31 | 0,31±0,24 | 0,38±0,32 | 0,62±0,30 | 0,91±0,11 |
| Опухоль | 14,1±4,1 | 6,5±2,3 | 18,3±7,2 | 18,9±3,27 | 10,4±0,67 |
Биораспределение [18F][natGa]rhPSMA7.1-7.4 через 1 ч после введения с конкуренцией
Таблица 11. Биораспределение [%ГО/г] меченых 18F индикаторов rhPSMA, совместно введенных с
РМРА (8 мг/кг) через 1 ч после введения мышам SCID с опухолью LNCaP.
Данные выражены как среднее±стандартное отклонение (n=3).
| [18F][natGa]- rhPSMA-7-l | [^FH^Ga]- rhPSMA-7-2 | rhPSMA-7-З | [^Fit^Ga]- rhPSMA-7-4 | |
| Кровь | 0,86±0,40 | 1,1±0,31 | 0,55±0,14 | 0,82±0,17 |
| Сердце | 0,37±0,16 | 0,47±0,09 | 0,26±0,04 | 0,37±0,05 |
| Легкое | 0,85±0,29 | 1,1±0,32 | 0,69±0,10 | 0,74±0,14 |
| Печень | 0,43±0,07 | 0,46±0,07 | 0,46±0,14 | 0,48±0,14 |
| Селезенка | 0,21±0,08 | 0,26±0,07 | 0,35±0,02 | 0,28±0,15 |
| Поджелуд. железа | 0,16±0,10 | 0,12±0,05 | 0,11±0,02 | 0,18±0,09 |
| Желудок | 0,97±0,81 | 0,21±0,06 | 0,76±0,74 | 0,20±0,07 |
| Кишечник | 0,66±0,32 | О,33±О,1О | 0,94±0,97 | 0,36±0,08 |
| Почки | 10,9±2,5 | 10,9±1,0 | 15,5±2,2 | 7,2±2,4 |
| Надпочечники | 0,003±0,004 | 0,07±0,10 | 0,07±0,09 | 0,03±0,04 |
| Мышцы | 0,17±0,15 | 0,09±0,03 | 0,09±0,02 | 0,20±0,05 |
| Кость | 0,33±0,24 | 0,57±0,39 | 0,34±0,22 | 1,0±0,8 |
| Опухоль | 0,94±0,22 | 1,0±0,13 | 1,5±0,4 | 0,99±0,19 |
Количественная оценка относительных изменений количества каждого изомера rhPSMA 7.x в крови, почке, печени, моче и опухоли после применения [18F] rhPSMA 7-rac
С целью количественной оценки относительных изменений каждого изомера rhPSMA7 в крови, печени, почках, моче и опухоли через 30 мин после инъекции [18F]rhPSMA7-rac мышам, несущим опухоль LNCaP, применяются два разных способа гомогенизации (измельчения и шаровой мельницы) для извлечения индикатора из ткани почек, печени и опухоли (см. Материалы и методы).
В табл. 12 обобщены наблюдаемые эффективности обоих способов гомогенизации и эффективность последующей процедуры твердофазной экстракции (для отделения индикатора от белковой фракции).
- 23 046339
Таблица 12. Определение скорректированных по распаду экстрагированных активностей из исследуемых образцов ткани с помощью измельчителя тканей Potter-Elvehjem (n=1) и шаровой мельницы ММ-400 (n=3).
| Измельчитель тканей Potter-Elvehjem (η = 1): | |||
| Эффективность [%] | |||
| Экстракция образца | Загрузка картриджа SPE | Обобщение | |
| Кровь | 93 | 93 | 86 |
| Почка | 91 | 66 | 60 |
| Опухоль | 90 | 59 | 53 |
| Шаровая мельница ММ-400 (п = 3): | |||
| Эффективность [%] | |||
| Экстракция образца | Загрузка картриджа SPE | Обобщение | |
| Кровь | 98±2 | 94±2 | 92±3 |
| Печень | 97 | 89±2 | 86±2 |
| Почка | 63±5 | 68±8 | 43±8 |
| Опухоль | 64±18 | 65±3 | 42±14 |
В то время как извлечение активности из образцов с помощью измельчителя тканей было довольно эффективным, применение шаровой мельницы разочаровало. Тем не менее, даже с шаровой мельницей была достигнута эффективность извлечения более 60%.
Принимая во внимание возможные частицы, которые могут образовываться в результате метаболического расщепления амидных связей rhPSMA7, вероятными представляются только а) частицы со значительно увеличенной липофильностью б) F^^topur. Таким образом, в принципе кажется возможным, что частицы iL, изображенные на фиг. 12, не извлекаются из образца ткани (водная экстракция) и, таким образом, не появляются в окончательном анализе.
Однако следует отметить, что такие частицы могут появляться in vivo в печени и кишечнике (гепатобилиарная экскреция липофильных соединений) или должны связываться с белками плазмы (что приводит к высоким уровням активности в крови, которые, с другой стороны, показывают отличную эффективность при Фигкции).
Для количественного определения каждого изомера в рацемической смеси и особенно для плохо разделенных первого и второго пиков (rhPSMA 7.2 и rhPSMA7.3) первоначально применялось графическое приближенное значение. Этот подход был основан на предположении, что а) каждый изомер элюируется из колонки для HPLC с идентичной формой пика и б) разные высоты пиков могут применяться в качестве первого приближения для расчета с помощью линейных факторов за вычетом отдельных пиков (т. Е. RhPSMA 7.2 и rhPSMA7.3).
Основываясь на этих предположениях, первый анализ выполняли с применением одной мыши с опухолью LNCaP, которой одновременно вводили [18F][natGa]rhPSMA7-rac. С целью подтверждения этих экспериментов с помощью трех дополнительных экспериментов и улучшения графического анализа с помощью более достоверной процедуры применяли программный пакет Systat PeakFit. PeakFit позволяет автоматизировать нелинейное разделение, анализ и количественную оценку профилей элюирования с помощью процедур деконволюции, применяющих гауссову функцию отклика с алгоритмом деконволюции/фильтрации Фурье (https://systatsoftware.com/products/peakfit/).
Сравнение графического анализа первых экспериментов показало, что графический анализ переоценил второй пик (rhPSMA7.3), тогда как первый пик был недооценен. Следовательно, все наборы данных повторно проанализировали и количественно оценили с помощью PeakFit.
HPLC-анализ 4 независимых экспериментов на мышах с опухолями через 30 мин после введения
Оценка пиков 3 и 4 (rhPSMA7.4 и rhPSMA 7.1) с помощью радио-HPLC
Сначала проверили, показывает ли способ деконволюции аналогичные данные для двух последних пиков (rhPSMA7.4 и 7.1), которые имеют хорошее разделение (хотя они не разделены по базовой линии).
Оценка всех пиков (rhPSMA7.1, 7.2, 7.3 и 7.4) с помощью радио-HPLC.
- 24 046339
Фиг. 14а и 14b обобщают процентное изменение каждого изомера rhPSAM7.n в данном образце по отношению к его процентному включению во введенном растворе ([18F][natGa]rhPSMA7-rac); результаты для отдельного эксперимента показаны на фиг. 14. Долю каждого изомера определяли количественно путем анализа профиля элюции FIPLC с помощью Systat PeakFit'. Затем рассчитывали процентное изменение каждого изомера в данном образце по отношению к его процентному включению во введенный раствор.
Обсуждение данных FIPLC
Радио-HPLC анализ радиоактивности, экстрагированной из гомогенизированных (почка, печень, опухоль) или разбавленных (кровь) тканей и впоследствии иммобилизованной на картридже для твердофазной экстракции и элюированной из нее, не показали никаких признаков метаболической нестабильности. Таким образом, липофильных метаболических фрагментов не наблюдалось. Следует отметить, что F-18-фторид не может быть точно обнаружен с помощью FIPLC в условиях, применяемых для пробоподготовки (см. анализ TLC).
Хотя существует четкая тенденция к применению rhPSMA7.1 и 7.3, производных от D-Dap, общие изменения незначительны (максимум 15%). В этом контексте также важно подчеркнуть, что на фиг. 15 и 16 показаны относительные изменения без учета абсолютных значений поглощения.
Хотя rhPSMA7.1 имеет самое слабое сродство и интернализацию из всех соединений rhPSMA7, он показывает наибольшее положительное процентное изменение в крови печени, почки и опухоли.
Хотя причина этого результата неясна, можно предположить, что гомогенизация образцов ткани, даже с помощью шаровой мельницы, не привела к количественному разрушению клеток. Таким образом, индикаторы rhPSMA7 с наибольшей интернализацией (rhPSMA7.2: 191,83% ± 15,54%, rhPSMA7.4: 207,33 ± 4,06% и rhPSMA7.3: 161,41% ± 8,88%) могли быть извлечены менее эффективно, тогда как rhPSMA7.1 с его низкой интернализацией, составляющей всего 69,55% ± 5,29%, эффективно экстрагировался и, следовательно, был завышен при анализе HPLC.
Кроме того, кажется, что соединения rhPSMA 7.2 и 7.4 выводятся несколько быстрее (см. Значения для мочи). Эти соединения показывают в целом отрицательные изменения в твердых тканях и крови, хотя оба соединения демонстрируют более высокое сродство и скорость интернализации по сравнению с rhPSMA7.1. Может ли это быть вызвано метаболической деградацией 7,2 и 7,4 (оба являются производными L-Dap), неясно, поскольку метаболитов, то есть лиофильных метаболитов, обнаружено не было. Однако возможно, что такие метаболиты (см. фиг. 11) из-за их высокого значения logP не экстрагируются водными буферными растворами. В этом случае они должны появиться в печени (см. Биораспределение) и, возможно, в образцах крови (высокая вероятность высокого связывания с белками сыворотки). Поскольку в ходе исследований биораспределения в ткани печени не наблюдалось повышенной активности накопления, а активность выведения из крови было высокоэффективным (см. табл. 3), мы предполагаем, что не произошло значительного разложения rhPSMA7.2 и 7.4. Это предположение подтверждается подозрительными значениями SUV для ткани печени (желчный пузырь, кишечник) в контексте клинического применения [18F]rhpsma-rac у людей.
TLC-анализ у мышей с опухолями через 30 мин после введения. Радио-TLC анализ проводился: а) на образцах мочи путем прямого нанесения небольшого объема на полосу TLC, б) путем анализа небольшого объема неиммобилизованной активности в процессе SPE ('прорывная фракция') и в) путем анализа небольшого объема элюатов картриджа.
- 25 046339
Таблица 13. TLC анализ крови, органов и мочи
| Дата | Образец | TLC Сканнер | Фосфоримиджер | Комментарий * | ||
| Нетронут ый индикато Р [%] | 18Fфторид [%] | Нетронуты й индикатор [%] | 18Fфторид [%] | Интенсивность сигнала TLC [cts] (в целом очень низкая) | ||
| 30.07. 2018 | QK | |||||
| Кровь | g5 gg | 14 0 /| | Методологические проблемы | 57 | ||
| Печень | 3Q 99 | 19 01 | 442 | |||
| Почка | 94,04 | 5,96 | 369 | |||
| Моча | 82,51 | 17,49 | 726 | |||
| Опухоль | 94Д9 | ум | 472 | |||
| 01.08. 2018 | QK | 94,27 | 5,73 | 96,02 | 3,98 | 384 |
| Кровь | 9Q 2-4 | 9^76 | 44 | |||
| Печень | 92Д9 | 7у54 | 93,92# | 6,08# | 473 | |
| Почка | 94,58 | 5,42 | 572 | |||
| Моча | 96,2 | 3,80 | 98,55 | 1,55 | 395 | |
| Опухоль | 90 5з | 9Д7 | 490 | |||
| 02.08. 2016 | QK | Уровень активности слишком низкий для TLC | 97,43 | 2,57 | ||
| Кровь | 96,80 | 3,20 | ||||
| Печень | 74,15# | 25,85# | ||||
| Почка | 96,48 | 3,52 | ||||
| Моча | 95,85 | 4,15 | ||||
| Опухоль | 96,47 | 4Д5 |
(*) из-за низкого уровня активности были исключены измерения TLC с интенсивностью сигнала менее 200 cts.
Обсуждение данных TLC
Поскольку очень трудно обнаружить н.к.а. 1^-фторид с помощью RP-18 хроматографии (из-за свободных групп Si-OH матрицы, которые взаимодействуют с н.к.а. фторидом), для количественного определения F-18-фторида в экстрагированных растворах проводили тонкослойную хроматографию.
Поскольку ни один из реагентов и солей, обычно применяемых для осаждения белков, не тестируется на холодный фторид, и чтобы избежать возможного высвобождения F-18-фторида из индикатора путем изотопного обмена, осаждение белков в процессе пробоподготовки не проводилось, хотя такая белковая нагрузка часто приводит к ограниченному разделению пиков, появлению хвостов у пиков и активности, которая остается на линии старта. Растворы, полученные после экстракции тканей (или центрифугирования крови), непосредственно применялись для TLC-анализа.
Хотя активность, доступная для анализа, была довольно низкой во всех образцах, результаты TLC показывают, что общее включение F-18-флуорида было ниже примерно 6% в исследованных тканях, за исключением образца мочи от 30 июля 2018 г. (свободный фторид 17,49%), образца печени от 02 августа 2018 г. (свободный фторид 25,85%).
В то время как анализ мочи с помощью TLC считается достоверным результатом (см. профиль на фиг. 20), результат, полученный с образцом печени, обусловлен появлением значительного хвоста у пика, представляющего интактный индикатор (см. фиг. 18). Кроме того, можно сделать вывод, что вышеупомянутые макс. 6% свободного фторида представляют собой завышенное значение, так как хвостовая часть пика, даже полученная во время QK и высвобождения [F-18]rhPSMA7-rac в PBS (фиг. 18) для клинического применения, показывают хвост пика продукта. Как показывают фосфоизображения, этот хвост наблюдается почти в каждом анализе TLC и вносит свой вклад в интегральную площадь F-18-фторида.
Следует отметить, что ни исследования биораспределения, ни клинические ПЭТ-сканирования у людей (по состоянию на июль 2018 г: около 1400 сканирований с [F-18]rhPSMA7-rac) не привели к како- 26 046339 му-либо подозрительному или идентифицируемому накоплению F-18 в костях высвобожденным фторидом F-18. Для дальнейшего изучения высвобождения фторида F-18 из [F-18]rhPSMA7-rac (наблюдаемого в одном образце мочи) авторы заявки исследовали наличие F-18-фторида в других образцах мочи (нормальные мыши) с помощью HPLC RP-18 (новая колонка с закрытыми концами RP-18) и TLC.
Радио-TLC-анализ образования F-18-фторида у нормальных мышей через 30 мин после введения
Для этого использовали нормальных мышей. Образцы мочи собирали с помощью катетера в течение 30 минут. Мочу центрифугировали и непосредственно подвергали HPLC и TLC.
Как показано на фиг. 21, левая колонка, свободный F-18-фторид обнаружили в образцах мочи всех изомеров и также он образовался, когда свежая моча инкубировалась с [F-18]rhPSMA7.4. (правая колонка). Идентификацию F-18-фторида проводили путем демонстрации того, что: а) эта частица удерживается на картриджах QMA (данные не показаны), b) элюируется в мертвом объеме колонок RP-18 и с) не может быть удержан или мобилизован на колонках RP-18 или пластинах RP-18 TLC, соответственно, независимо от применяемых подвижных фаз.
В связи с тем, что такие высокие количества фторида F-18 не обнаруживались в анализах HPLC крови или органов, таких как почки, опухоль, печень и др, в исследованиях биораспределения у мышей не наблюдалось повышенной активности накопления в костях, а также не наблюдалось повышенной активности накопления в костях во время клинических ПЭТ-сканирований с [F-18]rhPSMA7-rac, поскольку [F-18]rhPSMA7-rac создавали для клинического сканирования в конце 2017 г. в TUM (состояние на конец июля 2018 года: прибл. 1400 ПЭТ-сканирований у пациентов с раком предстательной железы), мы пришли к выводу, что [Р-18|фторид может образовываться в дальнейшем в результате клубочковой фильтрации индикатора, что приводит к образованию и последующему выведению [Р-18|фторида БЕЗ обнаруживаемого накопления F-18-фторида в крови, органах или костях.
Это предположение подтверждается литературными данными по токсикологии фторида, в которых описывается соответствующее количество фторида в почках и моче. Нормальный уровень фторида в моче 0,3 ppm наблюдался у мышей (Bouaziz H et al., Fluoride 2005;38(1):23-31). В другой публикации среднюю концентрацию фторида в моче нормальных мышей определили на уровне 0,13-0,14 мкг/мл (Poesina ND et al. Rom J Morphol Embryol 2014, 55(2):343-349), a Inkielewicz I. et al. обнаружили, что включение фторида в сыворотке крови крыс составляет около 5% от концентрации фторида в почках (сыворотка: 0,051 мкг/мл, почки: 0,942 мкг/мл) (фторид; 36 (4); 263-266). Принимая во внимание, что большая часть индикатора специфически всасывается и физиологически очищается почками, повышенный уровень фторида в почках в сочетании с температурой тела 36,6°С может привести к непрерывному выведению F-18-фторида из rhPSMA-соединений в почках.
Соответственно, свежие и нерадиоактивные образцы мочи, собранные у нормальных мышей, инкубировались с [F-18]rhPSMA7.x в течение различных периодов времени (см. легенду к фиг. 21). Фиг. 22, правая колонка, ясно показывает, что инкубация мочи с [F-18]rhPSMA7.x EX VIVO приводит к образованию свободного [Р-18|фторида на различных уровнях, чему способствуют различные концентрации холодного F-19-фторида в образцах мочи и его увеличение с течением времени.
Для дальнейшего подтверждения гипотезы к свежей и нерадиоактивной моче мышей добавляли 500 нмоль холодного F-19-фторида, затем добавляли [F-18]rhPSMA7.3 и инкубировали в течение 2 часов. Согласно гипотезе, высокая концентрация [Р-19|фторида должна привести к образованию значительного количества [Р-18|фторида. На фиг. 23 показано, что в этих условиях происходит обмен 98,5 % радиоактивности и образование [F-18]фторид в течение 2 ч (фиг. 23).
Поскольку скорость изотопного обмена зависит от концентрации четырех соответствующих частиц в равновесии ([Е-18|фторид. [Е-19|фторид. [F-18|rhPSMA7.3 и [F-19|rhPSMA7. 3), также исследовали, приведет ли добавление [Р-18|фторида к свежей и радиоактивной моче (20,6% р-18|фторида, 79,4% [F18|rhpsma7.3) с последующим добавлением холодного индикатора [F-19|rhPSMA7.3 к маркировке радиофармацевтического препарата [F-18|rhPSMA7-3. Неожиданно, даже небольшое количество 5 нмоль [F-19|rhPSMA7-3 в вышеуказанной моче привело к увеличению [F-18|rhPSMA7.3 с 79,4% до 85,8% (F18|фторид снизился с 20,6% до 14,2%) при комнатной температуре.
Результаты, полученные путем изотопного обмена в моче, считаются репрезентативными для всех индикаторов, конъюгированных с 4-(ди-трет-бутил [(18^|фторсилил)бензил)оксигруппой и, следовательно, для всех изомеров rhPSAM7.
Доклиническая дозиметрия, биораспределение у человека и поглощение в опухолевых поражениях
Обратите внимание, что в дальнейшем 18F-rhPSMA-7 обозначает natGa-18F-rhPSMA7-rac, a 18FrhPSMA-7.3 обозначает natGa-18F-rhPSMA7.3.
А) Доклиническая дозиметрия 18F-rhPSMA-7 и 18F-rhPSMA-7.3 у мышей
Цель заключалась в оценке распределения и выведения 18F-rhPSMA-7 и 18F-rhPSMA-7.3 в различных временных точках до 300 мин после однократного внутривенного введения мышам и проведении расчетов для внутренней дозиметрии.
- 27 046339
Способы
3-5 мышам вводили инъекции в каждый момент времени в среднем 25,6±3,6 МБк 18F-rhPSMA-7 и 28,5±4,8 МБк 18F-rhPSMA-7.3, соответственно. Для экспериментов использовали мышей с тяжелым комбинированным иммунодефицитом (SCID). Все эксперименты на животных проводились в соответствии с общими правилами содержания животных в Германии и институциональным руководством по уходу и применению животных.
Мышей умерщвляли в следующие моменты времени:
18F-rhPSMA -7: через 10, 20, 40, 60, 120 и 180 мин после введения.
18F-rhPSMA -7.3: 10, 60, 120, 180 и 300 мин после введения.
Обратите внимание, что на основании начальных экспериментов, демонстрирующих пролонгированное поглощение почками 18F-rhPSMA-7.3, для заключительных экспериментов применялась поздняя временная точка (300 мин).
Дальнейший сбор тканей/жидкостей:
Моча, кровь, сердце, легкие, селезенка, поджелудочная железа, печень, желудок (опорожненный), тонкий кишечник (опорожненный), толстый кишечник (опорожненный), почки, мочевой пузырь, яичко, жир, мышцы (частичные, бедренные), бедренная кость, хвост и головной мозг. Мочу собирали пипеткой в камере с СО2. При отсутствии мочеиспускания в камере мочевой пузырь отсасывали инсулиновым шприцем. Кровь брали сразу после умерщвления инсулиновым шприцем из сердца. Все остальные ткани и органы были рассечены и перенесены непосредственно в пластиковые контейнеры.
Вес образцов в пластиковых контейнерах измерялся с помощью электронных весов. Вес пустых и предварительно промаркированных пластиковых контейнеров для выделенных образцов измеряли заранее. Собственный вес пластиковых контейнеров вычитали из веса образца для измерений с пластиковым контейнером. Рассчитанный таким образом вес обозначали как вес образца для измерения.
Пластиковые контейнеры, включающие образцы для измерения, помещали в специальные стойки автоматического гамма-счетчика (PerkinElmer - Wallac, Waltham, USA) для измерения скорости счета в течение 60 с (количество импульсов в минуту = имп/мин). Кроме того, вместе с образцами измеряли 1% (об/об) стандарт (n=5) с известным количеством радиоактивности для преобразования скорости счета образцов органов в активность.
Анализ данных
Скорость счета измерительных образцов автоматически корректировалась с учетом распада. Коэффициенты распределения радиоактивности (единица измерения: процент от введенной дозы (%ID)) в измеряемых образцах определялись по приведенному ниже уравнению. Сумма скоростей счета всех измеряемых образцов, полученных от одной мыши, определяли как скорость счета для введенной радиоактивности.
Процент от введенной дозы (%ПУ) скорость счета для измеряемого образца = --------------------------------------------------------*100 сумма скоростей счета для всех измеряемых образцов от одной мыши
Коэффициент распределения радиоактивности на единицу веса образца для измерения (единица измерения: %ГО/г), исключая образцы мочи и кала, определялся с помощью приведенного ниже уравнения. Вес образца для измерения определяли путем вычитания веса пустого контейнера для измерения из веса контейнера, включающего образец.
Процент введенной дозы (%ID)
Процент введенной дозы (tyhlD/r) = -----------------------——
Вес измеряемого образца (г)
Дозиметрический анализ
Для согласованности статистических расчетов для каждого радиотерапевтического средства применялось одинаковое количество временных точек для 18F-rhPSMA-7 и 18F-rhPSMA-7.3. Таким образом, для 18F-rhPSMA-7 временные точки 10 и 20 мин объединяли, в результате чего конечная точка составила 15 мин.
Интеграл по времени активности для накопления в важных исходных органах (AUC) был получен как с численным интегрированием, так и с физическим распадом согласно J Juan et al, Journal of Pharmaceutical Sciences, 1993, 82: 762-763.
Kirshner et al. разработали способ, который применяет линейное масштабирование процента введенной животному дозы по соотношению веса органов и общего веса тела фантомов обоих частиц.
Kirschner AS, Ice RD, Beierwaltes WH. Radiation Dosimetry of 1311-19-Iodocholesterol. JNuclMed. 1973 Sep l;14(9):713-7.
Kirschner A, Ice R, Beierwaltes W. Letters to the editor. J Nucl Med. (1975):248-9. Вкратце, для расчета дозиметрии человека по биораспределению у мышей потребовалась экстраполяция, чтобы учесть различия между животными и людьми. Нормальные дозы облучения органов оценили для анатомической модели Standard Adult с массой тела 70 кг с применением зависящих от времени концентраций активности органов (в процентах от введенной дозы на грамм,% ID/г) и активности всего тела, измеренной в исследованиях биораспределения на мышах.
- 28 046339
Концентрации активности в тканях мышей преобразовали в фракционные активности тканей 70килограммового стандартного взрослого, применяя относительные фракционные массы органов стандартного взрослого и стандартной 25-граммовой мыши. Зависимую от времени общую активность тела подгоняли под экспоненциальную функцию и предполагали, что разница между введенной активностью и общей активностью тела выводится с мочой, поскольку концентрации активности в печени и ЖКТ были низкими во всех исследуемых временных точках.
Время пребывания в органе рассчитывали путем численного интегрирования с применением правила трапеций, а время пребывания в остальном теле 18F рассчитывали как разность между временем пребывания во всем теле и суммой времен пребывания в органе и в моче. Время пребывания содержимого мочевого пузыря оценивали с применением модели динамического мочеиспускания в дозиметрической программе OLINDA/EXM 1.0. Наконец, с помощью OLINDA/EXM 1.0 рассчитывали эквиваленты стандартной средней дозы на орган для взрослых (в мЗв/МБк) и эффективную дозу (также в мЗв/МБк).
Окончательный расчет поглощенной дозы радиации и дозиметрия по биораспределению у мышей: тканями или органами, в которых происходит значительное накопление радиоактивных частиц (то есть исходный орган), были почки, селезенка, легкие, печень и сердце. Что касается активности накопления и выведения, обнаружили быстрое выведение из крови и выведение с мочой, но относительно медленное накопление в почках.
Результаты
Таблица 14. Результаты дозиметрии для 18F-rhPSMA-7 с применением интервала опорожнения мочевого пузыря 3,5 ч
| Орган-мишень | Альфа | Бета | Фотон | Общее | EDE Cont. | ED Cont. |
| Надпочечники | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 5,85Ε-03 | 7,80Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 3,90Ε-05 |
| Мозг | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 2,54Ε-03 | 4,49Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 2,24Ε-05 |
| Молочные железы | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 2,29Ε-03 | 4,24Ε-03 | 6,36Ε-04 | 2Д2Е-04 |
| Стенка желчного пузыря | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 5,54Ε-03 | 7,49Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Стенка LLI (нижний отдел | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 1,41Ε-02 | 1,61Ε-02 | 9,66Ε-04 | 1,93Ε-03 |
- 29 046339
| толстого кишечника) | ||||||
| Тонкий кишечник | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 8,40Ε-03 | 1,04Ε-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 5Д8Е-05 |
| Стенка желудка | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 5,05Ε-03 | 7,00Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 8,40Ε-04 |
| Стенка ULI (верхний отдел толстого кишечника) | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 7,31Ε-03 | 9,26Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 4,63Ε-05 |
| Стенка сердца | 000Е000 | 8,82Ε-04 | 3,54Ε-03 | 4,42Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Почки | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 4,70Ε-02 | 1,80Ε-02 | 6,51Ε-02 | 3,91Ε-03 | 3,25Ε-04 |
| Печень | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 6,35Ε-04 | 3,63Ε-03 | 4,27Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 2ДЗЕ-04 |
| Легкие | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,25Ε-03 | 3,04Ε-03 | 4,30Ε-03 | 5,16Ε-04 | 5Д6Е-04 |
| Мышцы | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 5,73Ε-03 | 7,68Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 3,84Ε-05 |
| Яичники | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 1,35Ε-02 | 1,55Ε-02 | 3,87Ε-03 | 3,09Ε-03 |
| Поджелудочная железа | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 6ДЗЕ-ОЗ | 8,08Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 4,04Ε-05 |
| Красный костный мозг | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 5,41Ε-03 | 6,80Ε-03 | 8,16Ε-04 | 8Д6Е-04 |
| Остеогенные клетки | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 4Д8Е-03 | 4,75Ε-03 | 8,93Ε-03 | 2,68Ε-04 | 8,93Ε-05 |
| Кожа | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 2,98Ε-03 | 4,93Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 4,93Ε-05 |
| Селезенка | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,59Ε-02 | 1,01Ε-02 | 2,61Ε-02 | 1,56Ε-03 | 1,30Ε-04 |
| Семенники | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 9,69Ε-03 | 1Д6Е-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Тимус | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 3,24Ε-03 | 5,18Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 2,59Ε-05 |
| Щитовидная железа | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 3,23Ε-03 | 5,18Ε-03 | 1,55Ε-04 | 2,59Ε-04 |
| Стенка мочевого пузыря | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 2,45Ε-01 | 1,08Ε-01 | 3,54Ε-01 | 2Д2Е-02 | 1,77Ε-02 |
| Матка | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 2,61Ε-02 | 2,80Ε-02 | 1,68Ε-03 | 1,40Ε-04 |
| Все тело | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 2,37Ε-03 | 5,39Ε-03 | 7,77Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Эквивалент эффективной дозы (мЗв/МБк) | 3,56Е-02 |
| Эффективная доза (мЗв/МБк) | 2,66Е-02 |
- 30 046339
Таблица 15. Результаты дозиметрии для 18F-rhPSMA-7 с применением интервала опорожнения мочевого пузыря 1 ч
| Орган-мишень | Альфа | Бета | Фотон | Общее | EDE Cont. | ED Cont. |
| Надпочечники | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 5,64Ε-03 | 7,59Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 3,79Ε-05 |
| Мозг | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 2,54Ε-03 | 4,49Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 2,24Ε-05 |
| Молочные железы | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 2,25Ε-03 | 4,20Ε-03 | 6,30Ε-04 | 2,10Ε-04 |
| Стенка желчного пузыря | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 4,96Ε-03 | 6,91Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Стенка LLI | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 7,25Ε-03 | 9,20Ε-03 | 5,52Ε-04 | Ι,ΙΟΕ-03 |
| Тонкий кишечник | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 5,79Ε-03 | 7,73Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 3,87Ε-05 |
| Стенка желудка | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 4,70Ε-03 | 6,65Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 7,98Ε-04 |
| Стенка ULI | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 5,33Ε-03 | 7,27Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 3,64Ε-05 |
| Стенка сердца | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 8,82Ε-04 | 3,48Ε-03 | 4,36Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Почки | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 4,70Ε-02 | 1,76Ε-02 | 6,47Ε-02 | 3,88Ε-03 | 3,23Ε-04 |
| Печень | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 6,35Ε-04 | 3,39Ε-03 | 4,02Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 2,01Ε-04 |
| Легкие | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,25Ε-03 | 3,01Ε-03 | 4,26Ε-03 | 5Д1Е-04 | 5Д1Е-04 |
| Мышцы | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 4,01Ε-03 | 5,96Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 2,98Ε-05 |
| Яичники | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 7,21Ε-03 | 9Д6Е-03 | 2,29Ε-03 | 1,83Ε-03 |
| Поджелудочная железа | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 5,86Ε-03 | 7,80Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 3,90Ε-05 |
| Красный костный мозг | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,39Ε-03 | 4,29Ε-03 | 5,68Ε-03 | 6,82Ε-04 | 6,82Ε-04 |
| Остеогенные клетки | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 4,18Ε-03 | 4,09Ε-03 | 8,27Ε-03 | 2,48Ε-04 | 8,27Ε-05 |
| Кожа | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 2,38Ε-03 | 4,32Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 4,32Ε-05 |
| Селезенка | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,59Ε-02 | 9,90Ε-03 | 2,58Ε-02 | 1,55Ε-Ο3 | 1,29Ε-04 |
| Семенники | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 5,09Ε-03 | 7,03Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Тимус | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 3,20Ε-03 | 5Д5Е-ОЗ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 2,57Ε-05 |
| Щитовидная железа | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 3,23Ε-03 | 5Д7Е-03 | 1,55Ε-04 | 2,59Ε-04 |
| Стенка мочевого пузыря | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 7,87Ε-02 | 3,66Ε-02 | 1,15 Ε-01 | 6,92Ε-03 | 5,76Ε-03 |
| Матка | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 1Д2Е-02 | 1,31Ε-02 | 7,87Ε-04 | 6,56Ε-05 |
| Все тело | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 2,27Ε-03 | 3,93Ε-03 | 6Д9Е-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Эквивалент эффективной дозы (мЗв/МБк) | 1,82Е-02 |
| Эффективная доза (мЗв/МБк) | 1,22Е-02 |
- 31 046339
Таблица 16. Результаты дозиметрии для 18F-rhPSMA-7.3 с применением интервала опорожнения мочевого пузыря 3,5 ч
| Орган-мишень | Альфа | Бета | Фотон | Общее | EDE Cont. | ED Cont. |
| Надпочечники | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 7,93Ε-03 | Ι,ΙΟΕ-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 5,52Ε-05 |
| Мозг | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 4,07Ε-03 | 7Д9Е-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 3,59Ε-05 |
| Молочные железы | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 3,55Ε-03 | 6,67Ε-03 | 1,00Ε-03 | 3,34Ε-04 |
| Стенка желчного пузыря | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 7,46Ε-03 | 1,06Ε-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Стенка LLI | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 1,28Ε-02 | 1,59Ε-02 | 9,53Ε-04 | 1,91Ε-03 |
| Тонкий кишечник | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 9,42Ε-03 | 1,25Ε-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 6,27Ε-05 |
| Стенка желудка | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 7,02Ε-03 | 1,01Ε-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,22Ε-03 |
| Стенка ULI | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 8,57Ε-03 | 1Д7Е-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 5,85Ε-05 |
| Стенка сердца | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,32Ε-03 | 5,39Ε-03 | 6,71Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Почки | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 5Д1Е-02 | 2,07Ε-02 | 7Д8Е-02 | 4,31Ε-03 | 3,59Ε-04 |
| Печень | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 9,70Ε-04 | 5,02Ε-03 | 5,99Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 3,00Ε-04 |
| Легкие | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 4,66Ε-03 | 6,61Ε-03 | 7,93Ε-04 | 7,93Ε-04 |
| Мышцы | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 6,55Ε-03 | 9,67Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 4,83Ε-05 |
| Яичники | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 1,26Ε-02 | 1,57Ε-02 | 3,92Ε-03 | ЗД4Е-ОЗ |
| Поджелудочная железа | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 8,29Ε-03 | 1Д4Е-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 5,70Ε-05 |
| Красный костный мозг | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 2,22Ε-03 | 6,79Ε-03 | 9,01Ε-03 | 1,08Ε-03 | 1,08Ε-03 |
| Остеогенные клетки | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 6,70Ε-03 | 6,52Ε-03 | 1,32Ε-02 | 3,97Ε-04 | 1,32Ε-04 |
| Кожа | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 3,83Ε-03 | 6,95Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 6,95Ε-05 |
| Селезенка | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,52Ε-02 | 1Д5Е-02 | 2,67Ε-02 | 1,60Ε-03 | 1,34Ε-04 |
| Семенники | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 8,96Ε-03 | 1,21Ε-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Тимус | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 5,08Ε-03 | 8,20Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 4,10Ε-05 |
| Щитовидная железа | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 5Д5Е-03 | 8,27Ε-03 | 2,48Ε-04 | 4Д4Е-04 |
| Стенка мочевого пузыря | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,56Ε-01 | 7Д4Е-02 | 2,27Ε-01 | 1,36Ε-02 | 1Д4Е-02 |
| Матка | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 2,04Ε-02 | 2,36Ε-02 | 1,41Ε-03 | 1Д8Е-04 |
| Все тело | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 3,52Ε-03 | 6,33Ε-03 | 9,86Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Эквивалент эффективной дозы (мЗв/МБк) | 2,94Ε-02 | |||||
| Эффективная доза (мЗв/МБк) | 2Д7Е-02 |
- 32 046339
Таблица 17. Результаты дозиметрии для 18F-rhPSMA-7.3 с применением интервала опорожнения мочевого пузыря 1 ч
| Орган-мишень | Альфа | Бета | Фотон | Общее | EDE Cont. | ED Cont. |
| Надпочечники | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 7,79Ε-03 | 1,09Ε-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 5,46Ε-05 |
| Мозг | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 4,06Ε-03 | 7Д8Е-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 3,59Ε-05 |
| Молочные железы | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 3,53Ε-03 | 6,65Ε-03 | 9,97Ε-04 | 3,32Ε-04 |
| Стенка желчного пузыря | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 7Д1Е-03 | 1,02Ε-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Стенка LLI | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 8,45Ε-03 | Ц16Е-02 | 6,94Ε-04 | Ц39Е-03 |
| Тонкий кишечник | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 3,12Ε-03 | 7,78Ε-03 | Ц09Е-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 5,45Ε-05 |
| Стенка желудка | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 6,80Ε-03 | 9,92Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1Д9Е-03 |
| Стенка ULI | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 7,33Ε-03 | 1,05Ε-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 5,23Ε-05 |
| Стенка сердца | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,32Ε-03 | 5,36Ε-03 | 6,68Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Почки | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 5Д1Е-02 | 2,04Ε-02 | 7Д6Е-02 | 4,29Ε-03 | 3,58Ε-04 |
| Печень | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 9,70Ε-04 | 4,87Ε-03 | 5,84Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 2,92Ε-04 |
| Легкие | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,95Ε-03 | 4,63Ε-03 | 6,58Ε-03 | 7,90Ε-04 | 7,90Ε-04 |
| Мышцы | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 5,47Ε-03 | 8,59Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 4,30Ε-05 |
| Яичники | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 8,61Ε-03 | 1Д7Е-02 | 2,93Ε-03 | 2,35Ε-03 |
| Поджелудочная железа | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 8Д2Е-03 | 1Д2Е-02 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 5,62Ε-05 |
| Красный костный мозг | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 2,22Ε-03 | 6,09Ε-03 | 8,31Ε-03 | 9,97Ε-04 | 9,97Ε-04 |
| Остеогенные клетки | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 6,70Ε-03 | 6,11Ε-03 | Ц28Е-02 | 3,84Ε-04 | Ц28Е-04 |
| Кожа | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 3,45Ε-03 | 6,57Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 6,57Ε-05 |
| Селезенка | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 1,52Ε-02 | 1Д4Е-02 | 2,66Ε-02 | 1,59Ε-03 | 1,33Ε-04 |
| Семенники | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 6,08Ε-03 | 9,20Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
| Тимус | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 5,06Ε-03 | 8Д8Е-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 4,09Ε-05 |
| Щитовидная железа | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | 5Д5Е-03 | 8,27Ε-03 | 2,48Ε-04 | 4ДЗЕ-04 |
| Стенка мочевого пузыря | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 5Д8Е-02 | 2,66Ε-02 | 7,84Ε-02 | 4,70Ε-03 | 3,92Ε-03 |
| Матка | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | ЗД2Е-ОЗ | Ι,ΙΙΕ-02 | 1,43Ε-02 | 8,55Ε-04 | 7ДЗЕ-05 |
| Все тело | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | 3,45Ε-03 | 5,42Ε-03 | 8,87Ε-03 | Ο,ΟΟΕΟΟΟ | Ο,ΟΟΕΟΟΟ |
Эквивалент эффективной дозы (мЗв/МБк) 1,85Е-02
Эффективная доза (мЗв/МБк) 1,28Е-02
Заключение
Коэффициенты распределения радиоактивности были самыми высокими в почках после введения 18F-rhPSMA-7 и * * 18F-rhPSMA-7.3 во всех исследуемых временных точках у мышей. Более того, он был высоким в селезенке и мочевом пузыре для обоих радиоиндикаторов по сравнению со всеми другими оцениваемыми тканями, где отношения активности были ниже 8% ID/г.
Поскольку большая часть 18F-rhPSMA-7/18F-rhPSMA-7.3 увеличивает активность в почках и выведение через мочевой пузырь демонстрирует высокую активность, основной путь выведения определяется через почки и мочевыводящую систему.
При интервале опорожнения мочевого пузыря 3,5 и 1 ч экстраполированные общие эффективные
- 33 046339 дозы составили 2,66Е-02 и 1,22Е-02 мЗв/МБк для 18F-rhPSMA-7 и 2,17Е-02 и 1,28Е-02 мЗв/МБк для 18FrhPSMA-7.3 соответственно. Инъекция до 370 МБк (10 мКи) для клинического сканирования приведет к благоприятному радиационному облучению менее 5 мЗв для обоих агентов при условии 1-часового интервала между опорожнениями.
Различия, которые стоит упомянуть между обоими радиоактивными индикаторами, очевидны только в отношении поглощения почками, поскольку 18F-rhPSMA-7.3 имеет тенденцию накапливаться более постепенно с более длительным удерживанием. Тем не менее, облучение обоих агентов сравнимо.
В) Биораспределение и поглощение 18F-rhPSMA-7 и 18F-rhPSMA-7.3 у человека в опухолевых поражениях
В следующих разделах описывается биораспределение 18F-rhPSMA-7 и 18F-rhPSMA-7.3. Оценка доказательства концепции была проведена в рамках программы сочувственного применения на безнадежных больных. Агент был применен в соответствии с Законом о лекарственных средствах Германии, AMG §13 2b, и в соответствии с полномочиями регулирующего органа (правительство Обербайерна).
Всех пациентов обследовали на мКТ-сканере Biograph (Siemens Medical Solutions, Эрланген, Германия). Все сканы ПЭТ получали в 3D-режиме со временем сбора данных 2-4 мин в положении лежа на кровати. Эмиссионные данные корректировались в расчете на случайность, мертвое время, рассеяние и затухание и восстанавливались итеративно с помощью алгоритма максимизации ожиданий упорядоченных подмножеств (четыре итерации, восемь подмножеств) с последующим сглаживающим фильтром Гаусса после реконструкции (полная ширина 5 мм на половине максимум).
Способы
Биораспределение у человека оценивалось путем анализа клинических исследований 18F-rhPSMA-7и 18F-rhPSMA-7.3-ПЭТ/КТ у 47 и 32 пациентов соответственно. Средняя введенная активность составляла 324 (диапазон 236-424) МБк по сравнению с 345 (диапазон 235-420) МБк, а время поглощения составляло 84 (диапазон 42-166) мин и 76 (диапазон 59-122) мин для 18F-rhPSMA-7 по сравнению с 18FrhPSMA-7.3 соответственно.
Среднее и максимальное стандартизованные значения накопления (SUVсреднее/SUVмакс) определяли для фона (ягодичная мышца), нормальных органов (слюнных желез, пула крови, легких, печени, селезенки, поджелудочной железы, двенадцатиперстной кишки, почки, мочевого пузыря, кости) и трех репрезентативных опухолевых поражений. Накопление опухолью анализировали в 89 очагах поражения (26 первичных опухолей/местные рецидивы, 23 костей, 38 лимфатических узлов и 2 висцеральных метастаза) и 63 очагах поражения (14 первичных опухолей/местные рецидивы, 30 костей, 18 лимфатических узлов и 1 висцеральные метастазы) для 18F-rhPSMA-7 и 18F-rhPSMA-7.3 соответственно.
Для расчета SUV круговые области интереса рисовали вокруг областей с фокусным повышенным поглощением в трансаксиальных срезах и автоматически адаптировали к трехмерному интересующему объему (VOI) при изоконтуре 50%. Рассчитывали отношения орган-фон и опухоль-фон.
Результаты
Биораспределение 18F-rhPSMA-7 и 18F-rhPSMA-7.3 у человека показало типичную картину, известную для других лигандов PSMA. Параметры накопления 18F-rhPSMA-7 и 18F-rhPSMA-7.3 были очень схожи с более низким сохранением активности в мочевом пузыре и более высоким поглощением в опухолевых поражениях для 18F-rhPSMA-7.3: SUVсреднее для 18F-rhPSMA-7 по сравнению с 18F-rhPSMA-7,3 было 16,9 и 16,0 (околоушная железа), 19,6 и 19,6 (поднижнечелюстная железа), 2,0 и 1,9 (пул крови), 0,7 и 0,7 (легкие), 7,0 и 7,3 (печень), 9,1 и 8,5 (селезенка), 32,4 и 35,5 (почка), 2,5 и 2,8 (поджелудочная железа), 10,9 и 11,0 (двенадцатиперстная кишка), 1,1 и 1,3 (здоровая кость) и 10,2 и 2,0 (мочевой пузырь) для 18F-rhPSMA-7 и 18F-rhPSMA-7.3 соответственно. В частности, значения накопления 18F-rhPSMA-7.3 по сравнению с 18F-rhPSMA-7 были значительно ниже для удержания в мочевом пузыре (2,0±0,8 против 6,3±21,2, р<0,05) и значительно выше для опухолевых поражений (32,5±42,7 против 20,0±20,2, р<0,05).
Таблица 18. SUVмакс и SUVсреднее нормальных органов и опухолевых поражений с применением 18F-rhPSMA-7. Данные показаны как среднее, минимальное и максимальное
| SUVmhkc | ЗиУсреднее | |||||
| Среднее | Мин | Макс | Среднее | Мин | Макс | |
| Фон | 1,0 | 0,6 | 1,8 | 0,6 | 0,4 | 1,2 |
- 34 046339
| Околоушная железа | 23,8 | 8,2 | 42,3 | 16,9 | 5,5 | 32,7 |
| Поднижнечелюстная железа | 27,0 | Ю,1 | 43,8 | 19,6 | 7,0 | 29,7 |
| Пул крови | 2,4 | 1,6 | 3,9 | 2,0 | 1,1 | 17,0 |
| Легкие | 1,1 | 0,5 | 3,1 | 0,7 | 0,3 | 2,0 |
| Печень | 9,5 | 4,5 | 25,2 | 7,0 | 3,2 | 17,7 |
| Селезенка | И,8 | 4,7 | 21,0 | 9,1 | 3,4 | 17,1 |
| Почки | 44,8 | 19,1 | 75,2 | 32,4 | 13,2 | 54,7 |
| Поджелудочная железа | 3,7 | 1,8 | 7,9 | 2,5 | 1,3 | 5,5 |
| Двенадцатиперстная кишка | 14,8 | 2,8 | 32,7 | 10,9 | 1,9 | 23,9 |
| Кость | 1,7 | 0,8 | 3,1 | 1,1 | 0,6 | 2,1 |
| Мочевой пузырь | 8,5 | 0,5 | 112,0 | 6,3 | о,з | 85,7 |
| Опухоль | 27,6 | 3,1 | 167,2 | 20,0 | 2,1 | 115,7 |
Таблица 19. SUVMakC и SUVcpegHee нормальных органов и опухолевых поражений с применением 18F-rhPSMA-7.3. Данные показаны как среднее, минимальное и максимальное.
| SUYmbkc | ЗиУсреднее | |||||
| Среднее | Мин | Макс | Среднее | Мин | Макс | |
| Фон | 1,0 | 0,6 | 1,7 | 0,7 | 0,4 | 1,1 |
| Околоушная железа | 24,6 | И,2 | 38,3 | 16,0 | 8,2 | 25,0 |
| Поднижнечелюстная железа | 28,4 | 14,6 | 47,4 | 19,6 | 10,4 | 33,4 |
| Пул крови | 2,8 | 1,9 | 3,9 | 1,8 | 1,3 | 2,5 |
| Легкие | 1,1 | 0,7 | 1,9 | 0,7 | 0,4 | 1,1 |
| Печень | 9,7 | 4,6 | 15,4 | 7,3 | 3,2 | 12,3 |
| Селезенка | И,4 | 5,0 | 22,5 | 8,5 | 3,7 | 17,9 |
| Почки | 51,9 | 30,9 | 99,9 | 35,5 | 20,7 | 70,6 |
| Поджелудочная железа | 4,2 | 2,4 | 7,8 | 2,8 | 1,6 | 5,2 |
| Двенадцатиперстная кишка | 16,4 | 6,1 | 32,2 | и,о | 3,0 | 23,0 |
| Кость | 2,1 | 1,1 | 3,4 | 1,3 | 0,7 | 2,2 |
| Мочевой пузырь | 3,1 | 1,1 | 6,0 | 2,0 | 0,7 | 4,1 |
| Опухоль | 44,0 | 2,4 | 316,0 | 32,5 | 1,6 | 224,1 |
- 35 046339
Таблица 20. Отношение SUVMaKC и SUVcpegHee к фону нормальных органов и опухолевых поражений с применением 18F-rhPSMA-7. Данные показаны как среднее, минимальное и максимальное.
| Отношение SUYmbkc | Отношение ЗПУсреднее | |||||
| Среднее | Мин | Макс | Среднее | Мин | Макс | |
| Околоушная железа | 25,2 | 8,2 | 45,3 | 28,3 | 9,2 | 54,5 |
| Поднижнечелюстная железа | 28,7 | Ю,1 | 54,7 | 33,3 | И,7 | 61,8 |
| Пул крови | 2,5 | 1,3 | 4,8 | 3,2 | 1,6 | 21,3 |
| Легкие | 1,1 | 0,4 | з,з | 1,1 | 0,4 | 4,0 |
| Печень | 10,4 | 4,7 | 42,0 | 11,9 | 4,6 | 44,3 |
| Селезенка | 12,5 | 4,7 | 35,0 | 15,1 | 5,7 | 39,5 |
| Почки | 48,1 | 18,2 | 98,7 | 55,2 | 19,8 | 109,3 |
| Поджелудочная железа | 3,9 | 1,5 | и,з | 4,3 | 1,9 | 10,8 |
| Двенадцатиперстная кишка | 15,7 | 2,8 | 31,3 | 18,4 | 3,2 | 35,3 |
| Кость | 1,7 | 0,9 | 2,9 | 1,8 | 1,0 | 3,2 |
| Мочевой пузырь | 8,7 | 0,6 | 112,0 | 10,2 | 0,5 | 142,8 |
| Опухоль | 32,0 | 3,1 | 278,6 | 36,0 | 3,5 | 289,3 |
Таблица 21. Отношение SUVмакс и SUVсреднее к фону нормальных органов и опухолевых поражений с применением 18F-rhPSMA-7.3. Данные показаны как среднее, минимальное и максимальное.
| Отношение ЗЦУмакс | Отношение ЗПУсреднее | |||||
| Среднее | Мин | Макс | Среднее | Мин | Макс | |
| Околоушная железа | 24,7 | И,9 | 46,2 | 25,2 | 12,4 | 44,6 |
| Поднижнечелюстная железа | 28,2 | 14,0 | 62,1 | 30,6 | 15,7 | 62,3 |
| Пул крови | 2,8 | 1,5 | 5,2 | 2,9 | 1,7 | 4,9 |
| Легкие | 1,0 | 0,6 | 1,8 | 1,0 | 0,6 | 1,8 |
| Печень | 9,7 | 4,0 | 19,0 | И,4 | 4,1 | 20,7 |
| Селезенка | И,4 | 3,6 | 22,4 | 13,3 | 3,9 | 28,6 |
| Почки | 51,8 | 25,7 | 93,0 | 55,6 | 27,6 | 95,5 |
| Поджелудочная железа | 4,1 | 2,2 | 6,9 | 4,4 | 2,3 | 7,8 |
| Двенадцатиперстная кишка | 16,2 | 6,9 | 34,3 | 17,1 | 4,7 | 39,4 |
| Кость | 2,0 | 1,1 | 3,2 | 2,1 | 1,0 | 3,6 |
| Мочевой пузырь | 3,1 | 0,9 | 5,5 | 3,1 | 0,9 | 6,8 |
| Опухоль | 43,6 | 1,7 | 321,2 | 50,8 | 1,8 | 356,4 |
Заключение
Биораспределение у человека схоже между 18F-rhPSMA-7 и 18F-rhPSMA-7.3 для большинства нормальных органов. Однако удерживание индикатора в мочевом пузыре значительно ниже, а накопление в опухолевых очагах значительно выше для 18F-rhPSMA-7.3, что дает явное преимущество для клинической визуализации. Примеры визуализации с благоприятным биораспределением у человека и высоким поглощением опухолевыми поражениями 18F-rhPSMA-7.3 показаны на фиг. 28.
-
Claims (12)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Соединениеили его фармацевтически приемлемая соль.
- 2. Соединение по п.1, в котором F представляет собой 18F.
- 3. Соединение по п.1, в котором F представляет собой 19F.
- 4. Соединение по любому из пп.1-3, в котором Ga3+ представляет собой natGa3+.
- 5. Соединение по п.1, в котором F представляет собой 18F и Ga3+ представляет собой natGa3+.
- 6. Способ получения соединения по п.1, который включает стадиигде процедуры, обозначенные а, b, с, d, e, f1, g, h, i2, j и k представляют собой следующее:a) 20% пиперидин, (DMF);b) (tBuO)EuE(OtBu)2, HOAt, TBTU, DIPEA, (DMF);c) 2% гидразин (DMF);d) янтарный ангидрид, DIPEA, (DMF);e) Fmoc-D-Lys(OtBu)-HCl, HOAt, TBTU, DIPEA, (DMF);f1) Fmoc-D-Dap(Dde)-OH, HOAt, TBTU, 2,4,6-коллидин, (DMF);g) имидазол, гидроксиламин гидрохлорид, (NMP, DMF);h) SiFA-BA, HOAt, TBTU, DIPEA (DMF);i2) (S)-DOTA-GA(tBu)4, HOAt, TBTU, 2,4,6-коллидин (DMF);j) очистка и депротекция: TFA, TIPS, H2O;k) Ga(NO3)3, (tBuOH, HO).
- 7. Способ по п.6, дополнительно включающий последующую стадию ^F-мечения.
- 8. Применение соединения по любому из пп.1-5 в качестве средства для диагностики или визуализации рака, где рак связан со сверхэкспрессией PSMA.
- 9. Способ визуализации и/или диагностики рака, включающий введение соединения по любому из пп. 1-5 нуждающемуся в этом пациенту.
- 10. Применение соединения по любому из пп.1-5 в лечении рака, где рак связан со сверхэкспрессией PSMA.
- 11. Применение соединения по любому из пп.1-5 для диагностики, визуализации или предотвращения неоангиогенеза /ангиогенеза.
- 12. Применение по п.8 или 10, где рак представляет собой рак предстательной железы, рак молочной железы, рак легких, колоректальный рак или почечно-клеточную карциному.-
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP19154500.3 | 2019-01-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA046339B1 true EA046339B1 (ru) | 2024-03-01 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2018308699B2 (en) | Dual mode radiotracer and -therapeutics | |
| EP3917626B1 (en) | Psma binding dual mode radiotracer and therapeutic | |
| CN113573743B (zh) | 癌症诊断成像剂 | |
| EP2680889A1 (en) | Radiolabelled octreotate analogues as pet tracers | |
| Meckel et al. | A DOTA based bisphosphonate with an albumin binding moiety for delayed body clearance for bone targeting | |
| Wu et al. | New 68Ga-PhenA bisphosphonates as potential bone imaging agents | |
| WO2017105565A2 (en) | Compositions for therapeutics, targeted pet imaging and methods of their use | |
| Keeling et al. | [68Ga] Ga-THP-Pam: A bisphosphonate PET tracer with facile radiolabeling and broad calcium mineral affinity | |
| Kostelnik et al. | Rapid Thermodynamically Stable Complex Formation of [nat/111In] In3+,[nat/90Y] Y3+, and [nat/177Lu] Lu3+ with H6dappa | |
| EA046339B1 (ru) | Радиоактивная метка, связывающая psma двумя способами, и терапевтическое средство | |
| Wurzer | Novel Structural Concepts for the Development of complex-based Radiopharmaceuticals and Ligand Systems | |
| Batanete | Bimodal Probes for Imaging of Prostate Cancer | |
| EA046402B1 (ru) | Двухрежимная радиоактивная метка и радиотерапевтическое средство | |
| Mitra et al. | Effect of ethanol in BET Assay performed by kinetic chromogenic method for [18F] Radiopharmaceuticals other than [18F] FDG | |
| Mitra et al. | Effect of ethanol in BET Assay performed by kinetic chromogenic method for [18F] Radiopharmaceuticals other than [18F] FDG |