EA045862B1

EA045862B1 - BICYCLIC PEPTIDE LIGANDS SPECIFIC TO NECTIN-4

Info

Publication number: EA045862B1
Application number: EA202190105
Authority: EA
Inventors: Пол Бесвик; Люхун Чэнь; Джемма Элизабет Мадд; Питер ПАРК; Ритсотен Катерине Ван; Майкл Ригби
Original assignee: Байсиклтэкс Лимитед
Priority date: 2018-06-22
Filing date: 2019-06-21
Publication date: 2024-01-11

Description

Область изобретенияField of invention

Изобретение относится к полипептидам, которые ковалентно связаны с молекулярными каркасами, так что две или более пептидных петли замкнуты между точками присоединения к каркасу. В частности, изобретение относится к пептидам, которые представляют собой высокоаффинные агенты, связывающие нектин-4. Также изобретение относится к конъюгатам лекарственных средств, содержащим указанные пептиды, конъюгированные с одной или несколькими эффекторными и/или функциональными группами, к фармацевтическим композициям, содержащим указанные пептидные лиганды и конъюгаты лекарственных средств, и к применению указанных пептидных лигандов и конъюгатов лекарственных средств для предупреждения, подавления или лечения заболевания или нарушения, опосредуемого нектином-4.The invention relates to polypeptides that are covalently linked to molecular scaffolds such that two or more peptide loops are closed between points of attachment to the scaffold. In particular, the invention relates to peptides that are high affinity nectin-4 binding agents. The invention also relates to drug conjugates containing the specified peptides conjugated with one or more effector and/or functional groups, to pharmaceutical compositions containing the specified peptide ligands and drug conjugates, and to the use of the specified peptide ligands and drug conjugates for the prevention, suppressing or treating a disease or disorder mediated by nectin-4.

Уровень техники, к которому относится изобретениеState of the art to which the invention relates

Циклические пептиды способны связываться с высокой аффинностью и специфичностью с белковыми мишенями и, таким образом, они являются привлекательным классом молекул для разработки терапевтических средств. В действительности, несколько циклических пептидов уже успешно используется в клинике, например, таких как антибактериальный пептид ванкомицин, иммунодепрессивное лекарственное средство циклоспорин или лекарственное средство против злокачественной опухоли октреотид (Driggers et al. (2008), Nat Rev Drug Discov 7 (7), 608-24). Хорошие связывающие свойства являются результатом относительно большой поверхности взаимодействия между пептидом и мишенью, а также сниженной конформационной гибкости циклических структур. Как правило, макроциклы связываются с поверхностями размером несколько сот квадратных ангстрем, как, например, циклический пептидный антагонист CXCR4 CVX15 (400 А2; Wu et al. (2007), Science 330, 1066-71), циклический пептид с мотивом Arg-Gly-Asp, связывающийся с интегрином α¥β3 (355 А2) (Xiong et al. (2002), Science 296 (5565), 151-5) или циклический пептидный ингибитор упаин-1, связывающийся с активатором плазминогена урокиназного типа (603 A2; Zhao et al. (2007), J Struct Biol 160 (1), 1-10).Cyclic peptides are able to bind with high affinity and specificity to protein targets and are thus an attractive class of molecules for the development of therapeutics. In fact, several cyclic peptides are already successfully used in the clinic, such as the antibacterial peptide vancomycin, the immunosuppressive drug cyclosporine, or the anticancer drug octreotide (Driggers et al. (2008), Nat Rev Drug Discov 7 (7), 608 -24). Good binding properties result from the relatively large interaction surface between the peptide and the target, as well as the reduced conformational flexibility of the cyclic structures. Typically, macrocycles bind to surfaces several hundred square angstroms in size, such as the cyclic peptide CXCR4 antagonist CVX15 (400 A2; Wu et al. (2007), Science 330, 1066-71), a cyclic peptide with an Arg-Gly- motif. Asp binding to α¥β3 integrin (355 A2) (Xiong et al. (2002), Science 296 (5565), 151-5) or the cyclic peptide inhibitor upain-1 binding to urokinase-type plasminogen activator (603 A2; Zhao et al (2007), J Struct Biol 160 (1), 1-10).

Вследствие циклической конфигурации, пептидные макроциклы являются менее гибкими, чем линейные пептиды, что приводит к меньшей потере энтропии при связывании с мишенями и обеспечивает более высокую аффинность связывания. Уменьшенная гибкость также приводит к фиксации специфичных к мишени конформаций, повышая специфичность связывания по сравнению с линейными пептидами. Этот эффект проиллюстрирован с помощью мощного и селективного ингибитора матриксной металлопротеиназы 8 (ММР-8), который утрачивал его селективность относительно других ММР, когда его кольцо раскрывали (Cherney et al. (1998), J Med Chem 41 (11), 1749-51). Благоприятные свойства связывания, которые достигались посредством макроциклизации, являются еще более выраженными в полициклических пептидах, имеющих более одного пептидного кольца, как например, в ванкомицине, низине и актиномицине.Due to their cyclic configuration, peptide macrocycles are less flexible than linear peptides, resulting in less entropy loss upon binding to targets and resulting in higher binding affinities. Reduced flexibility also leads to fixation of target-specific conformations, increasing binding specificity compared to linear peptides. This effect is illustrated by the potent and selective inhibitor of matrix metalloproteinase 8 (MMP-8), which lost its selectivity over other MMPs when its ring was opened (Cherney et al. (1998), J Med Chem 41 (11), 1749-51 ). The favorable binding properties achieved through macrocyclization are even more pronounced in polycyclic peptides having more than one peptide ring, such as vancomycin, nisin and actinomycin.

Различные исследовательские команды ранее проводили связывание полипептидов с остатками цистеина с синтетической молекулярной структурой (Kemp and McNamara (1985), J. Org. Chem; Timmerman et al. (2005), ChemBioChem). Meloen и коллеги использовали трис(бромметил)бензол и родственные молекулы для быстрой и количественной кристаллизации множества пептидных петель на синтетических каркасах для структурной имитации белковых поверхностей (Timmerman et al. (2005), ChemBioChem). Описаны способы получения лекарственных соединений-кандидатов, где указанные соединения получают путем связывания цистеинсодержащих полипептидов с молекулярным каркасом, например, таким как ТАТА (1,1',1-(1,3,5-триазинан-1,3,5-триил)трипроп-2-ен-1-он, Heinis et al. Angew Chem, Int Ed. 2014; 53:1602-1606).Various research teams have previously linked polypeptides to cysteine residues with synthetic molecular structures (Kemp and McNamara (1985), J. Org. Chem; Timmerman et al. (2005), ChemBioChem). Meloen and colleagues used tris(bromomethyl)benzene and related molecules to rapidly and quantitatively crystallize multiple peptide loops on synthetic scaffolds to structurally mimic protein surfaces (Timmerman et al. (2005), ChemBioChem). Methods for the preparation of candidate drug compounds are described, wherein said compounds are obtained by coupling cysteine-containing polypeptides to a molecular scaffold, for example, such as TATA (1,1',1-(1,3,5-triazinan-1,3,5-triyl) triprop-2-en-1-one, Heinis et al. Angew Chem, Int Ed. 2014;53:1602-1606).

Были разработаны комбинаторные подходы на основе фагового дисплея для получения и скрининга крупных библиотек бициклических пептидов против представляющих интерес мишеней (Heinis et al. (2009), Nat Chem Biol 5 (7), 502-7 и WO 2009/098450). В кратком изложении, комбинаторные библиотеки линейных пептидов, содержавших три остатка цистеина и две области из шести случайных аминокислот (Cys-(Xaa)₆-Cys-(Xaa)₆-Cys), экспонировали на фаге и подвергали циклизации посредством ковалентного связывания боковых цепей цистеина с низкомолекулярным каркасом.Combinatorial phage display approaches have been developed to generate and screen large libraries of bicyclic peptides against targets of interest (Heinis et al. (2009), Nat Chem Biol 5 (7), 502-7 and WO 2009/098450). Briefly, combinatorial libraries of linear peptides containing three cysteine residues and two regions of six random amino acids (Cys-(Xaa) ₆ -Cys-(Xaa) ₆ -Cys) were displayed on phage and subjected to cyclization by covalently linking cysteine side chains with a low molecular weight framework.

Сущность изобретенияThe essence of the invention

Согласно первому аспекту изобретения предусматривается пептидный лиганд, специфичный к нектину-4, содержащий полипептид, содержащий по меньшей мере три остатка цистеина, разделенных по меньшей мере двумя последовательностями петли, и молекулярный каркас, который образует ковалентные связи с остатками цистеина полипептида, так что на молекулярном каркасе образуется по меньшей мере две полипептидных петли.According to a first aspect of the invention, there is provided a nectin-4-specific peptide ligand comprising a polypeptide containing at least three cysteine residues separated by at least two loop sequences, and a molecular scaffold that forms covalent bonds with the cysteine residues of the polypeptide such that at the molecular At least two polypeptide loops are formed in the framework.

Согласно следующему аспекту изобретения, предусматривается конъюгат лекарственного средства, содержащий пептидный лиганд, как определено в настоящем описании, конъюгированный с одной или несколькими эффекторными и/или функциональными группами.According to a further aspect of the invention, there is provided a drug conjugate comprising a peptide ligand, as defined herein, conjugated to one or more effector and/or functional groups.

Согласно следующему аспекту изобретения, предусматривается фармацевтическая композиция, содержащая пептидный лиганд или конъюгат лекарственного средства, как определено в настоящем описании, в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами.According to a further aspect of the invention, there is provided a pharmaceutical composition comprising a peptide ligand or drug conjugate, as defined herein, in combination with one or more pharmaceutically acceptable excipients.

Согласно следующему аспекту изобретения, предусматривается пептидный лиганд или конъюгат лекарственного средства, как определено в настоящем описании, для применения для предупреждения,According to a further aspect of the invention, there is provided a peptide ligand or drug conjugate, as defined herein, for use in the prevention,

- 1 045862 подавления или лечения заболевания или нарушения, опосредуемого нектином-4.- 1 045862 suppression or treatment of a disease or disorder mediated by nectin-4.

Краткое описание чертежейBrief description of drawings

Когда они присутствуют на чертежах, планки погрешности соответствуют стандартной ошибке среднего значения (SEM).When present in drawings, error bars correspond to the standard error of the mean (SEM).

Фиг. 1-7: кривые объема опухоли после введения BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254 и BCY8255, соответственно, самкам мышей BALB/c nude, имеющим ксенотрансплантат NCI-H292.Fig. 1-7: Tumor volume curves after administration of BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254 and BCY8255, respectively, to female BALB/c nude mice bearing an NCI-H292 xenograft.

Фиг. 8-10: кривые объема опухоли после введения BCY8245, BCY8253 и BCY8255, соответственно, самкам мышей Balb/c nude, имеющим ксенотрансплантат NCI-H292.Fig. 8-10: Tumor volume curves after administration of BCY8245, BCY8253 and BCY8255, respectively, to female Balb/c nude mice bearing an NCI-H292 xenograft.

Фиг. 11-15: кривые объема опухоли после введения BCY7825, BCY8245, BCY8253, BCY8254 и BCY8255, соответственно, самкам мышей CB17-SCID, имеющим ксенотрансплантат НТ-1376.Fig. 11-15: Tumor volume curves after administration of BCY7825, BCY8245, BCY8253, BCY8254 and BCY8255, respectively, to female CB17-SCID mice bearing an HT-1376 xenograft.

Фиг. 16-18: кривые объема опухоли после введения BCY8245, BCY8253 и BCY8255, соответственно, самкам мышей CB17-SCID, имеющим ксенотрансплантат НТ-1376.Fig. 16-18: Tumor volume curves after administration of BCY8245, BCY8253 and BCY8255, respectively, to female CB17-SCID mice bearing an HT-1376 xenograft.

Фиг. 19-21: кривые объема опухоли после введения BCY8245, BCY8253 и BCY8255, соответственно, самкам мышей Balb/c nude, имеющим ксенотрансплантат Panc2.13.Fig. 19-21: Tumor volume curves after administration of BCY8245, BCY8253 and BCY8255, respectively, to female Balb/c nude mice bearing a Panc2.13 xenograft.

Фиг. 22-24: кривые объема опухоли после введения BCY8245, BCY8253 и BCY8255, соответственно, самкам мышей Balb/c nude, имеющим ксенотрансплантат MDA-MB-468.Fig. 22-24: Tumor volume curves after administration of BCY8245, BCY8253 and BCY8255, respectively, to female Balb/c nude mice bearing an MDA-MB-468 xenograft.

Фиг. 25-28: кривые объема опухоли после введения BCY8549, BCY8550, BCY8783 и BCY8784, соответственно (с BCY8245 в качестве контроля) самкам мышей BALB/c nude, имеющим ксенотрансплантат NCI-H292.Fig. 25-28: Tumor volume curves after administration of BCY8549, BCY8550, BCY8783 and BCY8784, respectively (with BCY8245 as control) to female BALB/c nude mice bearing an NCI-H292 xenograft.

Фиг. 29: стратегия гейтирования для нейтина-4 в молочной железе (T-47D и MDA-MB-468).Fig. 29: gating strategy for neotin-4 in mammary gland (T-47D and MDA-MB-468).

Фиг. 30: стратегия гейтирования для нектина-4 в NCI-H292 и NCI-H322.Fig. 30: Gating strategy for nectin-4 in NCI-H292 and NCI-H322.

Фиг. 31 и 32: стратегия гейтирования для нектина-4 в NCI-H526 и НТ1080, соответственно.Fig. 31 and 32: gating strategy for nectin-4 in NCI-H526 and HT1080, respectively.

Фиг. 33-37: стратегия гейтирования для нектина-4 при раке мочевого пузыря (НТ1376; фиг. 33), раке молочной железы (MDA-MB-468; фиг. 34), раке ободочной и прямой кишки (НТ-29; фиг. 35А и НСТ116; фиг. 35В), раке легкого (А549; фиг. 36А, NCI-H292; фиг. 36В, NCI-H358; фиг. 36С и NCI-526; фиг. 36D) и раке поджелудочной железы (Panc02.13; фиг. 37), соответственно.Fig. 33-37: Gating strategy for nectin-4 in bladder cancer (HT1376; FIG. 33), breast cancer (MDA-MB-468; FIG. 34), colorectal cancer (HT-29; FIG. 35A and HCT116; Fig. 35B), lung cancer (A549; Fig. 36A, NCI-H292; Fig. 36B, NCI-H358; Fig. 36C and NCI-526; Fig. 36D) and pancreatic cancer (Panc02.13; Fig. 37), respectively.

Фиг. 38-41: кривые объема опухоли после введения BCY8242, BCY8245, BCY8253 и BCY8255, соответственно, самкам мышей Balb/c nude, имеющим ксенотрансплантат А549.Fig. 38-41: Tumor volume curves after administration of BCY8242, BCY8245, BCY8253 and BCY8255, respectively, to female Balb/c nude mice bearing an A549 xenograft.

Фиг. 42-45: кривые объема опухоли после введения BCY8242, BCY8245, BCY8253 и BCY8255, соответственно, самкам мышей Balb/c nude, имеющим ксенотрансплантат НСТ116.Fig. 42-45: Tumor volume curves after administration of BCY8242, BCY8245, BCY8253 and BCY8255, respectively, to female Balb/c nude mice bearing an HCT116 xenograft.

Фиг. 46-49: кривые объема опухоли после введения BCY8242, BCY8245, BCY8253 и BCY8255, соответственно, самкам мышей CB17-SCID, имеющим ксенотрансплантат НТ-1376.Fig. 46-49: Tumor volume curves after administration of BCY8242, BCY8245, BCY8253 and BCY8255, respectively, to female CB17-SCID mice bearing an HT-1376 xenograft.

Фиг. 50-53: кривые объема опухоли после введения BCY8242, BCY8245, BCY8253 и BCY8255, соответственно, самкам мышей Balb/c nude, имеющим ксенотрансплантат MDA-MB-468.Fig. 50-53: Tumor volume curves after administration of BCY8242, BCY8245, BCY8253 and BCY8255, respectively, to female Balb/c nude mice bearing an MDA-MB-468 xenograft.

Фиг. 54-57: кривые объема опухоли после введения BCY8242, BCY8245, BCY8253 и BCY8255, соответственно, самкам мышей Balb/c nude, имеющим ксенотрансплантат NCI-H292.Fig. 54-57: Tumor volume curves after administration of BCY8242, BCY8245, BCY8253 and BCY8255, respectively, to female Balb/c nude mice bearing an NCI-H292 xenograft.

Фиг. 58-59: кривые объема опухоли после введения BCY8245 и BCY8255, соответственно, самкам мышей Balb/c nude, имеющим ксенотрансплантат NCI-H526.Fig. 58-59: Tumor volume curves after administration of BCY8245 and BCY8255, respectively, to female Balb/c nude mice bearing an NCI-H526 xenograft.

Фиг. 60-63: кривые объема опухоли после введения BCY8242, BCY8245, BCY8253 и BCY8255, соответственно, самкам мышей Balb/c nude, имеющим ксенотрансплантат Panc2.13.Fig. 60-63: Tumor volume curves after administration of BCY8242, BCY8245, BCY8253 and BCY8255, respectively, to female Balb/c nude mice bearing a Panc2.13 xenograft.

Фиг. 64: кривые объема опухоли после введения BCY8245, BCY8781 или BCY8245 в комбинации с BCY8234 самкам мышей BALB/c nude, имеющим ксенотрансплантат MDA-MB-468.Fig. 64: Tumor volume curves after administration of BCY8245, BCY8781, or BCY8245 in combination with BCY8234 to female BALB/c nude mice bearing an MDA-MB-468 xenograft.

Фиг. 65: кривые объема опухоли после введения BCY8245 отдельно или BCY8245 в комбинации с BCY8234 самкам мышей BALB/c nude, имеющим ксенотрансплантат MDA-MB-468.Fig. 65: Tumor volume curves after administration of BCY8245 alone or BCY8245 in combination with BCY8234 to female BALB/c nude mice bearing an MDA-MB-468 xenograft.

Фиг. 66-71: кривые объема опухоли в ксенотрансплантатах Lu-01-0412, LU-01-0007, CTG-1771, CTG-1171, CTG-1106 и CTG-0896 PDX.Fig. 66-71: Tumor volume curves in Lu-01-0412, LU-01-0007, CTG-1771, CTG-1171, CTG-1106 and CTG-0896 PDX xenografts.

Фиг. 72: эффективность ВТ8009 (т.е. BCY8245) коррелирует с экспрессией в ксенотрансплантатах CDX/PDX. Ксенотрансплантаты с малой/отсутствием экспрессии нектина-4 демонстрируют сниженную скорость роста опухоли. Ксенотрансплантаты, экспрессирующие нектин-4, демонстрируют регрессию опухоли. Модели как PDX, так и CDX включены в этот анализ, величины обобщены из различных отчетов.Fig. 72: Efficacy of BT8009 (i.e. BCY8245) correlates with expression in CDX/PDX xenografts. Xenografts with little/no nectin-4 expression exhibit reduced tumor growth rates. Xenografts expressing nectin-4 demonstrate tumor regression. Both PDX and CDX models are included in this analysis, with values summarized from various reports.

Фиг. 73: клетки MDA-MB-468 экспрессируют нектин-4 и демонстрирует пролонгированное удержание ММАЕ в опухоли.Fig. 73: MDA-MB-468 cells express nectin-4 and show prolonged retention of MMAE in the tumor.

Фиг. 74: HCS - анализ данных на клеточной линии MDA-MB-468.Fig. 74: HCS - data analysis on the MDA-MB-468 cell line.

Подробное описание изобретенияDetailed Description of the Invention

В одном варианте осуществления указанные последовательности петель содержат 3, 6, 7, 8 или 9 аминокислот. В следующем варианте осуществления указанные последовательности петель содержат 3, 6, 7 или 9 аминокислот. В следующем варианте осуществления указанные последовательности петель содержат 3 или 9 аминокислот.In one embodiment, said loop sequences comprise 3, 6, 7, 8, or 9 amino acids. In a further embodiment, said loop sequences comprise 3, 6, 7 or 9 amino acids. In a further embodiment, said loop sequences comprise 3 or 9 amino acids.

В следующем варианте осуществления указанные последовательности петель содержат три остатка цистеина, разделенных двумя последовательностями петель, одна из которых состоит из 3 аминокислот,In a further embodiment, said loop sequences comprise three cysteine residues separated by two loop sequences, one of which consists of 3 amino acids,

- 2 045862 а другая из которых состоит из 9 аминокислот.- 2 045862 and the other of which consists of 9 amino acids.

В следующем варианте осуществления указанные последовательности петель содержат три остатка цистеина, разделенных двумя последовательностями петель, одна из которых состоит из 3 аминокислот, а другая из которых состоит из 8 аминокислот.In a further embodiment, said loop sequences comprise three cysteine residues separated by two loop sequences, one of 3 amino acids and the other of 8 amino acids.

В следующем варианте осуществления указанные последовательности петель содержат три остатка цистеина, разделенных двумя последовательностями петель, одна из которых состоит из 7 аминокислот, а другая из которых состоит из 3 аминокислот.In a further embodiment, said loop sequences comprise three cysteine residues separated by two loop sequences, one of 7 amino acids and the other of 3 amino acids.

В следующем варианте осуществления указанные последовательности петель содержат три остатка цистеина, разделенных двумя последовательностями петель, обе из которых состоят из 6 аминокислот.In a further embodiment, said loop sequences comprise three cysteine residues separated by two loop sequences, both of which are 6 amino acids long.

В одном варианте осуществления указанный пептидный лиганд содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn one embodiment, said peptide ligand comprises an amino acid sequence selected from

Ci-P/A/Hyp-F/¥-G/A-Cii-X₁-X2-X3-W/l-Nal/2-Nal-S/A-X₄-P-I/D/A-W/l-Nal/2-Nal-Ciii (SEQ Ш NO: 38);Ci-P/A/Hyp-F/¥-G/A-Cii-X ₁ -X2-X3-W/l-Nal/2-Nal-S/AX ₄ -PI/D/AW/l-Nal/ 2-Nal-Ciii (SEQ Ш NO: 38);

Ci-W/A-P-L-D/S-S/D-Y-W-Cii-X₅-R-I-Ciii (SEQ ID NO: 39);Ci-W/APLD/SS/DYW-Cii-X ₅ -RI-Ciii (SEQ ID NO: 39);

Ci-V-T-T-S-Y-D-Cii-F/W-L/V-H/R/T-L-L/G-G/Q/H-Cin (SEQ Ш NO: 40);Ci-V-T-T-S-Y-D-Cii-F/W-L/V-H/R/T-L-L/G-G/Q/H-Cin (SEQ Ш NO: 40);

С1-Х₆-Х₇-Х₈-Си-Х₉-Х₁₀-Хц-Х12-Х1з-Х14-Х15-Х1б-Х17-Сш (SEQ Ш NO: 41); иС1-Х ₆ -Х ₇ -Х ₈ -Си-Х ₉ -Х ₁₀ -Хц-Х12-Х1з-Х14-Х15-Х1б-Х17-Сш (SEQ Ш NO: 41); And

Ci-W/A/Y-P/A-L-D/S/A-S/D/P/A-Y-W/l-Nal-Cii-Xs-R/HArg/A-I-Ciii (SEQ ID NO: 42);Ci-W/A/Y-P/A-L-D/S/A-S/D/P/A-Y-W/l-Nal-Cii-Xs-R/HArg/A-I-Ciii (SEQ ID NO: 42);

где Х1-Х5 обозначают любой аминокислотный остаток, включая модифицированные и неприродные аминокислоты;where X1-X5 denote any amino acid residue, including modified and unnatural amino acids;

Х₆ обозначает: Gly; Pro или неприродное производное Pro, выбранное из азетидина (Aze), гидроксипролина (НуР), 4-аминопролина (Pro(4NH)), оксазолидин-4-карбоновой кислоты (Оха), октагидроиндолкарбоновой кислоты (Oic) или 4,4-дифторпролина (4,4-DFP); Ala или неприродное производное Ala, выбранное из аминоизомасляной кислоты (Aib), или саркозин (Sar);X ₆ stands for: Gly; Pro or an unnatural derivative of Pro selected from azetidine (Aze), hydroxyproline (HyP), 4-aminoproline (Pro(4NH)), oxazolidine-4-carboxylic acid (Oxa), octahydroindolecarboxylic acid (Oic) or 4,4-difluoroproline ( 4,4-DFP); Ala or a non-natural derivative of Ala selected from aminoisobutyric acid (Aib), or sarcosine (Sar);

Х₇ обозначает: Phe или неприродное производное Phe, выбранное из 3-метилфенилаланина (3MePhe), 4-метилфенилаланина (4MePhe), гомофенилаланина (HPhe), 4,4-бифенилаланина (4,4-ВРА) или 3,4-дигидроксифенилаланина (DOPA); Tyr; или Ala или неприродное производное Ala, выбранное из 1-нафтилаланина (1-Nal), 2-нафтилаланина (2-Nal) или 2-пиридилаланина (2Ра1);X ₇ means: Phe or an unnatural derivative of Phe selected from 3-methylphenylalanine (3MePhe), 4-methylphenylalanine (4MePhe), homophenylalanine (HPhe), 4,4-biphenylalanine (4,4-BPA) or 3,4-dihydroxyphenylalanine ( DOPA); Tyr; or Ala or a non-natural derivative of Ala selected from 1-naphthylalanine (1-Nal), 2-naphthylalanine (2-Nal) or 2-pyridylalanine (2Pa1);

Х₈ обозначает: Gly; Ala; Asp; Lys или неприродное производное Lys, выбранное из ацетиллизина (KAc или Lys(Ac)); Phe; Glu; Gln; Leu; Ser; Arg; или цистеиновую кислоту (Cya);X ₈ stands for: Gly; Ala; Asp; Lys or an unnatural derivative of Lys selected from acetyl lysine (KAc or Lys(Ac)); Ph; Glu; Gln; Leu; Ser; Arg; or cysteic acid (Cya);

X₉ либо отсутствует, либо обозначает: Met или неприродное производное Met, выбранное из метионинсульфона (Met(O₂)); Gln или неприродное производное Gln, выбранное из гомоглутамина (HGln); Leu или неприродное производное Leu, выбранное из гомолейцина (HLeu) или норлейцина (Nle); Lys; Ile; трет-бутилаланин (tBuAla); или гомосерин-метил (HSe(Me));X ₉ is either absent or represents: Met or a non-natural derivative of Met selected from methionine sulfone (Met(O ₂ )); Gln or a non-natural derivative of Gln selected from homoglutamine (HGln); Leu or a non-natural derivative of Leu selected from homoleucine (HLeu) or norleucine (Nle); Lys; Ile; tert-butylalanine (tBuAla); or homoserine-methyl (HSe(Me));

Х₁₀ обозначает: Pro; Lys или неприродное производное Lys, выбранное из ацетиллизина (KAc или Lys(Ac)); Arg или неприродное производное Arg, выбранное из 2-амино-4-гуанидинмасляной кислоты (Agb), гомоаргинина (HArg) или N-метилгомоаргинина; Glu; Ser; Asp; Gln; Ala; гидроксипролин (НуР); или цистеиновую кислоту (Суа);X ₁₀ means: Pro; Lys or an unnatural derivative of Lys selected from acetyl lysine (KAc or Lys(Ac)); Arg or a non-natural derivative of Arg selected from 2-amino-4-guanidinebutyric acid (Agb), homoarginine (HArg) or N-methylhomoarginine; Glu; Ser; Asp; Gln; Ala; hydroxyproline (HuP); or cysteic acid (Cua);

Х11 обозначает: Asn или неприродное производное Asn, выбранное из N-метиласпарагина; Thr; Asp; Gly; Ser; His; Ala или неприродное производное Ala, выбранное из тиенилаланина (Thi), 2-(1,2,4-триазол1-ил)аланина (1,2,4-TriAz) или бета-(4-тиазолил)аланина (4ThiAz); Lys или цистеиновую кислоту (Суа);X11 means: Asn or a non-natural derivative of Asn selected from N-methylasparagine; Thr; Asp; Gly; Ser; His; Ala or a non-natural derivative of Ala selected from thienylalanine (Thi), 2-(1,2,4-triazol1-yl)alanine (1,2,4-TriAz) or beta-(4-thiazolyl)alanine (4ThiAz); Lys or cysteic acid (Cys);

Х₁₂ обозначает: Trp или неприродное производное Trp, выбранное из азатриптофана (AzaTrp), 5фтор^-триптофана (5FTrp) или метилтриптофана (TrpMe); или Ala или неприродное производное Ala, выбранное из 1-найтилаланина (1-Nal) или 2-нафтилаланина (2-Nal);X ₁₂ means: Trp or a non-natural derivative of Trp selected from azatryptophan (AzaTrp), 5fluoro-tryptophan (5FTrp) or methyltryptophan (TrpMe); or Ala or a non-natural derivative of Ala selected from 1-naphthylalanine (1-Nal) or 2-naphthylalanine (2-Nal);

Х₁₃ обозначает: Ser или неприродное производное Ser, выбранное из гомосерина (HSer); Ala; Asp или Thr;X ₁₃ means: Ser or a non-natural derivative of Ser selected from homoserine (HSer); Ala; Asp or Thr;

Х₁₄ обозначает: Trp или неприродное производное Trp, выбранное из азатриптофана (AzaTrp); Ser; Ala или неприродное производное Ala, выбранное из 2-(1,2,4-триазол-1-ил)аланина (1,2,4-TriAz), 1нафтилаланина (1-Nal) или 2-нафтилаланина (2-Nal); Asp; Phe или неприродное производное Phe, выбранное из 3,4-дигидроксифенилаланина (DOPA); Tyr; Thr или неприродное производное Thr, выбранное из N-метилтреонина; тетрагидропиран-4-пропановую кислоту (ТНР(О)); или диоксо-4-тетрагидротиопиранилуксусную кислоту (THP(SO₂));X ₁₄ means: Trp or a non-natural Trp derivative selected from azatryptophan (AzaTrp); Ser; Ala or a non-natural derivative of Ala selected from 2-(1,2,4-triazol-1-yl)alanine (1,2,4-TriAz), 1-naphthylalanine (1-Nal) or 2-naphthylalanine (2-Nal); Asp; Phe or a non-natural derivative of Phe selected from 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA); Tyr; Thr or an unnatural derivative of Thr selected from N-methylthreonine; tetrahydropyran-4-propanoic acid (THP(O)); or dioxo-4-tetrahydrothiopyranoacetic acid (THP(SO ₂ ));

Х₁₅ обозначает Pro или неприродное производное Pro, выбранное из азетидина (Aze), пипеколиновой кислоты (Pip) или оксазолидин-4-карбоновой кислоты (Оха);X ₁₅ denotes Pro or an unnatural derivative of Pro selected from azetidine (Aze), pipecolic acid (Pip) or oxazolidine-4-carboxylic acid (Oxa);

Х16 обозначает: Не или неприродное производное Не, выбранное из N-метилизолейцина (NMeIle); Ala или неприродное производное Ala, выбранное из 3-циклогексилаланина (Cha) или циклопропилаланина (Сра); Pro или неприродное производное Pro, выбранное из гидроксипролина (НуР); Asp; Lys; циклопентилглицин (С5А); тетрагидропиран-4-пропановую кислоту (ТНР(О)); или диоксо-4тетрагидротиопиранилуксусную кислоту (THP(SO₂));X16 means: He or a non-natural derivative of He selected from N-methylisoleucine (NMeIle); Ala or a non-natural derivative of Ala selected from 3-cyclohexylalanine (Cha) or cyclopropylalanine (Cpa); Pro or an unnatural derivative of Pro selected from hydroxyproline (HuP); Asp; Lys; cyclopentylglycine (C5A); tetrahydropyran-4-propanoic acid (THP(O)); or dioxo-4tetrahydrothiopyranoacetic acid (THP(SO ₂ ));

Х₁₇ обозначает: Trp или неприродное производное Trp, выбранное из азатриптофана (AzaTrp) или 5фтор-Е-триптофана (5FTrp); Phe; Tyr; 1-нафтилаланин (1-Nal); или 2-нафтилаланин (2-Nal);X ₁₇ means: Trp or a non-natural derivative of Trp selected from azatryptophan (AzaTrp) or 5fluoro-E-tryptophan (5FTrp); Ph; Tyr; 1-naphthylalanine (1-Nal); or 2-naphthylalanine (2-Nal);

- 3 045862- 3 045862

Hyp обозначает гидроксипролин, 1-Nal обозначает 1-нафтилаланин, 2-Nal обозначает 2-нафтилаланин, HArg обозначает гомоаргинин и Ci, C₁₁ и С₁₁₁ обозначает первый, второй и третий остатки цистеина, соответственно, или их фармацевтически приемлемую соль.Hyp is hydroxyproline, 1-Nal is 1-naphthylalanine, 2-Nal is 2-naphthylalanine, HArg is homoarginine and Ci, C ₁₁ and C ₁₁₁ are the first, second and third cysteine residues, respectively, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

В одном варианте осуществления указанные последовательности петель содержат три остатка цистеина, разделенных двумя последовательностями петель, первая из которых состоит из 3 аминокислот, и вторая из которых состоит из 9 аминокислот, и указанный пептидный лиганд содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn one embodiment, said loop sequences comprise three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which consists of 3 amino acids and the second of which consists of 9 amino acids, and said peptide ligand contains an amino acid sequence selected from

С₁-Х6-Х7-Х8-С₁₁-Х9-Х10-Х11-Х12-Х1з-Х14-Х15-Х16-Х17-С₁₁₁ (SEQ ID NO: 41), где Х₆-Х₁₇ являются такими, как определено в настоящем описании.C ₁ -X6-X7-X8-C ₁₁ -X9-X10-X11-X12-X1z-X14-X15-X16-X17-C ₁₁₁ (SEQ ID NO: 41), where X ₆ -X ₁₇ are such as as defined herein.

В одном варианте осуществления Х₆ обозначает: Pro или неприродное производное Pro, выбранное из азетидина (Aze), гидроксипролина (НуР), 4-аминопролина (Pro(4NH)), оксазолидин-4-карбоновой кислоты (Оха), октагидроиндолкарбоновой кислоты (Oic) или 4,4-дифторпролина (4,4-DFP). В следующем варианте осуществления Х₆ обозначает Pro.In one embodiment, X ₆ is: Pro or an unnatural derivative of Pro selected from azetidine (Aze), hydroxyproline (HyP), 4-aminoproline (Pro(4NH)), oxazolidine-4-carboxylic acid (Oxa), octahydroindolecarboxylic acid (Oic ) or 4,4-difluoroproline (4,4-DFP). In the following embodiment, X ₆ denotes Pro.

В одном варианте осуществления Х₇ обозначает: Phe или неприродное производное Phe, выбранное из 3-метилфенилаланина (3MePhe), 4-метилфенилаланина (4MePhe), гомофенилаланина (HPhe), 4,4бифенилаланина (4,4-ВРА) или 3,4-дигидроксифенилаланина (DOPA); Ala или неприродное производное Ala, выбранное из 1-нафтилаланина (Ι-Nal), 2-нафтилаланина (2-Nal) или 2-пиридилаланина (2Pal). В следующем варианте осуществления Х₇ обозначает Phe или 1-нафтилаланин (Ι-Nal). В следующем варианте осуществления Х₇ обозначает 1-нафтилаланин (1-Nal).In one embodiment, X ₇ is: Phe or an unnatural derivative of Phe selected from 3-methylphenylalanine (3MePhe), 4-methylphenylalanine (4MePhe), homophenylalanine (HPhe), 4,4-biphenylalanine (4,4-BPA) or 3,4- dihydroxyphenylalanine (DOPA); Ala or a non-natural derivative of Ala selected from 1-naphthylalanine (Ι-Nal), 2-naphthylalanine (2-Nal) or 2-pyridylalanine (2Pal). In a further embodiment, X ₇ is Phe or 1-naphthylalanine (Ι-Nal). In a further embodiment, X ₇ is 1-naphthylalanine (1-Nal).

В одном варианте осуществления Х₈ обозначает Asp, Arg, Lys или цистеиновую кислоту (Суа). В следующем варианте осуществления Х8 обозначает D-Asp, D-Arg, D-Lys или D-Cya. В следующем варианте осуществления Х8 обозначает D-Asp.In one embodiment, X ₈ is Asp, Arg, Lys or cysteic acid (Cy). In a further embodiment, X8 is D-Asp, D-Arg, D-Lys or D-Cya. In a further embodiment, X8 is D-Asp.

В одном варианте осуществления Х9 обозначает: Met или неприродное производное Met, выбранное из метионинсульфона (Met(O2)); или Leu или неприродное производное Leu, выбранное из гомолейцина (HLeu) или норлейцина (Nle). В следующем варианте осуществления Х9 обозначает Met или Leu. В следующем варианте осуществления Х9 обозначает Met.In one embodiment, X9 is: Met or a non-natural derivative of Met selected from methionine sulfone (Met(O2)); or Leu or a non-natural derivative of Leu selected from homoleucine (HLeu) or norleucine (Nle). In a further embodiment, X9 is Met or Leu. In a further embodiment, X9 is Met.

В одном варианте осуществления Х₁₀ обозначает Arg или неприродное производное Arg, выбранное из 2-амино-4-гуанидинмасляной кислоты (Agb), гомоаргинина (HArg) или N-метилгомоаргинина; или цистеиновую кислоту (Суа). В следующем варианте осуществления Х₁₀ обозначает гомоаргинин (HArg) или цистеиновую кислоту (Суа) (такую как D-Cya). В следующем варианте осуществления Х₁₀ обозначает гомоаргинин (HArg). В альтернативном варианте осуществления Х₁₀ обозначает лизин.In one embodiment, X ₁₀ is Arg or a non-natural derivative of Arg selected from 2-amino-4-guanidinebutyric acid (Agb), homoarginine (HArg) or N-methylhomoarginine; or cysteic acid (Cys). In a further embodiment, X ₁₀ is homoarginine (HArg) or cysteic acid (Cya) (such as D-Cya). In a further embodiment, X ₁₀ is homoarginine (HArg). In an alternative embodiment, X ₁₀ is lysine.

В одном варианте осуществления Х11 обозначает: Asn или неприродное производное Asn, выбранное из N-метиласпарагина; Asp или His; или цистеиновую кислоту (Суа). В следующем варианте осуществления Х11 обозначает Asn, Asp, His или цистеиновую кислоту (Суа) (такую как D-Cya). В следующем варианте осуществления Х11 обозначает Asp.In one embodiment, X11 is: Asn or a non-natural derivative of Asn selected from N-methylasparagine; Asp or His; or cysteic acid (Cys). In a further embodiment, X11 is Asn, Asp, His, or cysteic acid (Cya) (such as D-Cya). In the following embodiment, X11 denotes Asp.

В одном варианте осуществления Х₁₂ обозначает: Trp или неприродное производное Trp, выбранное из азатриптофана (AzaTrp), 5-(|)тор-Г-триптофана (5FTrp) или метилтриптофана (TrpMe). В следующем варианте осуществления Х₁₂ обозначает Trp.In one embodiment, X ₁₂ is: Trp or a non-natural derivative of Trp selected from azatryptophan (AzaTrp), 5-(|)tor-G-tryptophan (5FTrp) or methyltryptophan (TrpMe). In a further embodiment, X ₁₂ is Trp.

В одном варианте осуществления Х₁₃ обозначает Ser или неприродное производное Ser, выбранное из гомосерина (HSer). В следующем варианте осуществления Х₁₃ обозначает Ser.In one embodiment, X ₁₃ is Ser or a non-natural Ser derivative selected from homoserine (HSer). In a further embodiment, X ₁₃ is Ser.

В одном варианте осуществления Х₁₄ обозначает Thr или неприродное производное Thr, выбранное из N-метилтреонина. В следующем варианте осуществления Х₁₄ обозначает Thr.In one embodiment, X ₁₄ is Thr or an unnatural derivative of Thr selected from N-methylthreonine. In a further embodiment, X ₁₄ is Thr.

В одном варианте осуществления Х₁₅ обозначает Pro.In one embodiment, X ₁₅ denotes Pro.

В одном варианте осуществления Х₁₆ обозначает: Не или неприродное производное Не, выбранное из N-метилизолейцина (NMelle); или Pro или неприродное производное Pro, выбранное из гидроксипролина (НуР). В следующем варианте осуществления Х₁₆ обозначает: Не; или Pro или неприродное производное Pro, выбранное из гидроксипролина (НуР). В следующем варианте осуществления Х₁₆ обозначает Ile, Pro или гидроксипролина (НуР). В следующем варианте осуществления Х₁₆ обозначает гидроксипролин (НуР).In one embodiment, X ₁₆ is: He or a non-natural He derivative selected from N-methylisoleucine (NMelle); or Pro or an unnatural derivative of Pro selected from hydroxyproline (HuP). In the following embodiment, X ₁₆ represents: Not; or Pro or an unnatural derivative of Pro selected from hydroxyproline (HuP). In a further embodiment, X ₁₆ is Ile, Pro or hydroxyproline (HuP). In a further embodiment, X ₁₆ is hydroxyproline (HyP).

В одном варианте осуществления Х₁₇ обозначает Trp или неприродное производное Trp, выбранное из азатриптофана (AzaTrp) или 5-фтор-Ь-триптофана (5FTrp). В следующем варианте осуществления Х₁₇обозначает Trp.In one embodiment, X ₁₇ is Trp or a non-natural derivative of Trp selected from azatryptophan (AzaTrp) or 5-fluoro-b-tryptophan (5FTrp). In a further embodiment, X ₁₇ is Trp.

В следующем варианте осуществления указанные последовательности петель содержат три остатка цистеина, разделенных двумя последовательностями петель, первая из которых состоит из 3 аминокислот и вторая из которых состоит из 9 аминокислот, и указанный пептидный лиганд содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn a further embodiment, said loop sequences comprise three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which consists of 3 amino acids and the second of which consists of 9 amino acids, and said peptide ligand contains an amino acid sequence selected from

Ci-P-X7-X8-C_n-X9-HArg/Lys-Xii-W-S-T-P-Xi6-W-Ciii (SEQ ID NO: 213), где Х₇, Х₈, Х9, Хц и Х₁₆ являются такими, как определено в настоящем описании.Ci-P-X7-X8-C _n -X9-HArg/Lys-Xii-WSTP-Xi6-W-Ciii (SEQ ID NO: 213), where X ₇ , X ₈ , X9, Xt and X ₁₆ are those as defined herein.

- 4 045862- 4 045862

Ci-P-X7-X8-Ci-X9-HAig-Xii-W-S-T-P-Xi6-W-Cm (SEQ ID NO: 204), где Х₇, Х₈, Х₉, Х₁₁ и Х₁₆ являются такими, как определено в настоящем описании.Ci-P-X7-X8-Ci-X9-HAig-Xii-WSTP-Xi6-W-Cm (SEQ ID NO: 204), where X ₇ , X ₈ , X ₉ , X ₁₁ and X ₁₆ are as follows: as defined herein.

C_i-P-F/1-Nal-dD/dR-C_ii-M/L-HArg/Lys-N/H/D-W-S-T-P-I/P/HyP-W-C_iii (SEQ ID NO: 214).C _i -PF/1-Nal-dD/dR-C _ii -M/L-HArg/Lys-N/H/DWSTPI/P/HyP-WC _iii (SEQ ID NO: 214).

C’_l-P-F/1-Nal-dD/dR-C’_ll-M/L-HArg-N/H/D-W-S-T-P-I/P/HyP-\V-C’_lll (SEQ ID NO: 205).C' _l -PF/1-Nal-dD/dR-C' _ll -M/L-HArg-N/H/DWSTPI/P/HyP-\V-C' _lll (SEQ ID NO: 205).

В одном варианте осуществления указанные последовательности петель содержат три остатка цистеина, разделенных двумя последовательностями петель, первая из которых состоит из 3 аминокислот и вторая из которых состоит из 8 аминокислот, и указанный пептидный лиганд содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn one embodiment, said loop sequences comprise three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which consists of 3 amino acids and the second of which consists of 8 amino acids, and said peptide ligand contains an amino acid sequence selected from

С|-Х6-Х7-Х8-С_й-Х10-Х11-Х12-Х1з-Х14-Х15-Х16-Х17-Сш (SEQ ID NO: 206), где Х₆-Х₈ и Х₁₀-Х₁₇ являются такими, как определено в настоящем описании.С|-Х6-Х7-Х8-С _й -Х10-Х11-Х12-Х1з-Х14-Х15-Х16-Х17-Сш (SEQ ID NO: 206), where X ₆ -X ₈ and X ₁₀ -X ₁₇ are as defined herein.

Ci-Р-1-Nal-D/Cya-C_n-M-HArg/Cya-D/Cya-W-S-T-P-HyP-W-C_ш (SEQ ID NO: 207).Ci-P-1-Nal-D/Cya-C _n -M-HArg/Cya-D/Cya-WSTP-HyP-WC _w (SEQ ID NO: 207).

В одном варианте осуществления указанные последовательности петель содержат три остатка цистеина, разделенных двумя последовательностями петель, первая из которых состоит из 3 аминокислот и вторая из которых состоит из 9 аминокислот, и указанный пептидный лиганд содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn one embodiment, said loop sequences comprise three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which consists of 3 amino acids and the second of which consists of 9 amino acids, and said peptide ligand contains an amino acid sequence selected from

C_i-P/A/Hyp-F/Y-G/A-C_ii-X₁-X2-X₃-W/l-Nal/2-Nal-S/A-X₄-P-I/D/A-W/l-Nal/2-Nal-C_iii(SEQ ID NO: 38);C _i -P/A/Hyp-F/YG/AC _ii -X ₁ -X2-X ₃ -W/l-Nal/2-Nal-S/AX ₄ -PI/D/AW/l-Nal/2 -Nal-C _iii (SEQ ID NO: 38);

где Х₁-Х4 обозначает любой аминокислотный остаток, включая модифицированные и неприродные аминокислоты, Hyp обозначает гидроксипролин, 1-Nal обозначает 1-нафтилаланин, 2-Nal обозначает 2нафтилаланин, и C_i, C_ii и C_iii обозначают первый, второй и третий остатки цистеина, соответственно, или их фармацевтически приемлемую соль.where X ₁ -X4 denotes any amino acid residue, including modified and unnatural amino acids, Hyp denotes hydroxyproline, 1-Nal denotes 1-naphthylalanine, 2-Nal denotes 2-naphthylalanine, and C _i , C _ii and C _iii denote the first, second and third residues cysteine, respectively, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

В одном варианте осуществления X₁ выбран из М, Npg, HLeu, I, Q и Me; где Npg представляет собой геопентилглицин, HLeu представляет собой гомолейцин и Nle представляет собой норлейцин.In one embodiment, X ₁ is selected from M, Npg, HLeu, I, Q and Me; where Npg represents geopentylglycine, HLeu represents homoleucine and Nle represents norleucine.

В одном варианте осуществления Х₂ выбран из K, R, S, D, HArg, K(Ac) и А; где HArg представляет собой гомоаргинин, К(Ас) представляет собой N-ацетиллизин, и А присутствует либо в L-, либо в Dизоформе аланина.In one embodiment, X ₂ is selected from K, R, S, D, HArg, K(Ac) and A; where HArg is homoarginine, K(Ac) is N-acetyllysine, and A is present in either the L or D isoform of alanine.

В одном варианте осуществления Х₃ выбран из N, D, Н и А; где А присутствует либо в L-, либо в Dизоформе аланина.In one embodiment, X ₃ is selected from N, D, H and A; where A is present in either the L- or D isoform of alanine.

В одном варианте осуществления Х4 выбран из W, D, Т и А.In one embodiment, X4 is selected from W, D, T and A.

В одном варианте осуществления указанные последовательности петель содержат три остатка цистеина, разделенных двумя последовательностями петель, первая из которых состоит из 7 аминокислот и вторая из которых состоит из 3 аминокислот, и указанный пептидный лиганд содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn one embodiment, said loop sequences comprise three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which consists of 7 amino acids and the second of which consists of 3 amino acids, and said peptide ligand contains an amino acid sequence selected from

Ci-W/A/Y-P/A-L-D/S/A-S/D/P/A-Y-W/1-Nal-C_n-X5-R/HArg/A-I-Ciii (SEQ ID NO: 42), где Х₅ обозначает любой аминокислотный остаток, 1-Nal обозначает 1-нафтилаланин, HArg обозначает гомоаргинин и C_i, C_ii и C_iii обозначают первый, второй и третий остатки цистеина, соответственно, или их фармацевтически приемлемую соль.Ci-W/A/YP/ALD/S/AS/D/P/AYW/1-Nal-C _n -X5-R/HArg/AI-Ciii (SEQ ID NO: 42), where X ₅ denotes any amino acid residue, 1-Nal is 1-naphthylalanine, HArg is homoarginine, and C _i , C _ii and C _iii are the first, second and third cysteine residues, respectively, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

В одном варианте осуществления Х₅ выбран из A, dA, G, dD, N, Е и P.In one embodiment, X ₅ is selected from A, dA, G, dD, N, E and P.

C_i-W/A-P-L-D/S-S/D-Y-W-C_ii-X₅-R-I-C_iii (SEQ ID NO: 39), где Х₅ обозначает любой аминокислотный остаток, и C_i, C_ii и C_iii обозначают первый, второй и третий остатки цистеина, соответственно, или их фармацевтически приемлемую соль.C _i -W/APLD/SS/DYWC _ii -X ₅ -RIC _iii (SEQ ID NO: 39), where X ₅ denotes any amino acid residue, and C _i , C _ii and C _iii denote the first, second and third cysteine residues , respectively, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

В одном варианте осуществления Х₅ выбран из A, G, D и N.In one embodiment, X ₅ is selected from A, G, D, and N.

В одном варианте осуществления указанные последовательности петель содержат три остатка цистеина, разделенных двумя последовательностями петель, обе из которых состоят из 6 аминокислот, и указанный пептидный лиганд содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn one embodiment, said loop sequences comprise three cysteine residues separated by two loop sequences, both of which are 6 amino acids long, and said peptide ligand comprises an amino acid sequence selected from

C_i-V-T-T-S-Y-D-C_ii-F/W-L/V-H/R/T-L-L/G-G/Q/H-C_iii (SEQ ID NO: 40), где C_i, C_ii и C_iii обозначают первый, второй и третий остатки цистеина, соответственно, или их фарC _i -VTTSYDC _ii -F/WL/VH/R/TLL/GG/Q/HC _iii (SEQ ID NO: 40), where C _i , C _ii and C _iii represent the first, second and third cysteine residues, respectively, or their headlights

- 5 045862 мацевтически приемлемую соль.- 5 045862 maceutically acceptable salt.

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд C_i-P/A/Hyp-F/Y-G/A-C_ii-X₁-X₂-X₃-W/1Nal/2-Nal-S/A-X₄-P-I/D/A-W/l-Nal/2-Nal-Ci_ii (SEQ ID NO: 38) содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO: 1-30In a further embodiment, the peptide ligand is C _i -P/A/Hyp-F/YG/AC _ii -X ₁ -X ₂ -X ₃ -W/1Nal/2-Nal-S/AX ₄ -PI/D/AW/ l-Nal/2-Nal-Ci _i i (SEQ ID NO: 38) contains an amino acid sequence selected from any of SEQ ID NO: 1-30

CiPFGCiiMKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 1);CiPFGCiiMKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 1);

CiPFGCiiMRNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 2);CiPFGCiiMRNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 2);

CiPFGCiiiNpgXNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 3);CiPFGCiiiNpgXNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 3);

CiPFGC^HLeuXNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 4);CiPFGC^HLeuXNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 4);

CiPFGCiilKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 5);CiPFGCiilKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 5);

CiPFACiiMKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 6);CiPFACiiMKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 6);

CiPFGCiiQKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 7);CiPFGCiiQKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 7);

CiPFGCiiMKNWSDPIWCiii (SEQ ID NO: 8);CiPFGCiiMKNWSDPIWCiii (SEQ ID NO: 8);

CiPFGCiiMKNWSWPKl-NaQCiii (SEQ ID NO: 9);CiPFGCiiMKNWSWPKl-NaQCiii (SEQ ID NO: 9);

Ci(Hyp)FGCiiMKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 10);Ci(Hyp)FGCiiMKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 10);

CiPYGCiiMKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 11);CiPYGCiiMKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 11);

CiPFGCiiMSNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 12);CiPFGCiiMSNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 12);

CiPFGCiiMDNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 13);CiPFGCiiMDNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 13);

C_iPFGC_iiM(HArg)NWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 14);C _i PFGC _ii M(HArg)NWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 14);

CiPFGCiiMKDWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 15);CiPFGCiiMKDWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 15);

CiPFGCiiMKHWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 16);CiPFGCiiMKHWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 16);

CiPFGCiiMKNQ-NaQSWPIWCiii (SEQ ID NO: 17);CiPFGCiiMKNQ-NaQSWPIWCiii (SEQ ID NO: 17);

C_iPFGC_iiMKN(2-Nal)SWPIWCiii (SEQ ID NO: 18);C _i PFGC _ii MKN(2-Nal)SWPIWCiii (SEQ ID NO: 18);

CiPFGCiiMKNWSTPIWCiii (SEQ ID NO: 19);CiPFGCiiMKNWSTPIWCiii (SEQ ID NO: 19);

CiPFGCiiMKNWSWPDWCiii (SEQ ID NO: 20);CiPFGCiiMKNWSWPDWCiii (SEQ ID NO: 20);

C_iPFGC_iiMKNWSWPI(2-Nal)Ciii (SEQ ID NO: 21);C _i PFGC _ii MKNWSWPI(2-Nal)Ciii (SEQ ID NO: 21);

C_iPFGC_iiM(HArg)NWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 22);C _i PFGC _ii M(HArg)NWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 22);

C_iPFGC_iiM(K(Ac))NWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 23);C _i PFGC _ii M(K(Ac))NWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 23);

CiPFGCiiMKNWSAPIWCiii (SEQ ID NO: 24);CiPFGCiiMKNWSAPIWCiii (SEQ ID NO: 24);

CiPFGCiiMKNWSWPAWCiii (SEQ ID NO: 25);CiPFGCiiMKNWSWPAWCiii (SEQ ID NO: 25);

CiAFGCiiMKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 26);CiAFGCiiMKNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 26);

CiPFGCiiMANWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 27);CiPFGCiiMANWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 27);

CiPFGCiiMKAWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 28);CiPFGCiiMKAWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 28);

CiPFGCiiiNleXNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 29); иCiPFGCiiiNleXNWSWPIWCiii (SEQ ID NO: 29); And

CiPFGCiiMKNWAWPIWCiii (SEQ ID NO: 30);CiPFGCiiMKNWAWPIWCiii (SEQ ID NO: 30);

где Ci, Cii и Ciii обозначают первый, второй и третий остатки цистеина, соответственно, или их фармацевтически приемлемую соль.where Ci, Cii and Ciii represent the first, second and third cysteine residues, respectively, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд C_i-P/A/Hyp-F/Y-G/A-C_ii-X₁-X₂-X₃-W/1Nal/2-Nal-S/A-X4-P-I/D/A-W/l-Nal/2-Nal-C_iii (SEQ ID NO: 38) содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn a further embodiment, the peptide ligand is C _i -P/A/Hyp-F/YG/AC _ii -X ₁ -X ₂ -X ₃ -W/1Nal/2-Nal-S/A-X4-PI/D/AW /l-Nal/2-Nal-C _iii (SEQ ID NO: 38) contains an amino acid sequence selected from

- 6 045862- 6 045862

A-(SEQ Ш NO: 1)-А (далее обозначаемой как 80-09-02-N002 или BCY428);A-(SEQ Ш NO: 1)-А (hereinafter referred to as 80-09-02-N002 or BCY428);

F1-A-(SQ ID NO: 1)-А (далее обозначаемой как 80-09-02-N006);F1-A-(SQ ID NO: 1)-A (hereinafter referred to as 80-09-02-N006);

Ac-(SEQ ID NO: 1) (далее обозначаемой как 80-09-02-N008 или BCY7390);Ac-(SEQ ID NO: 1) (hereinafter referred to as 80-09-02-N008 or BCY7390);

Ac-[dD]-(SEQ ID NO: 1) (далее обозначаемой как BCY7606);Ac-[dD]-(SEQ ID NO: 1) (hereinafter referred to as BCY7606);

A-(SEQ ID NO: 2)-А (далее обозначаемой как 80-09-02-N003 или BCY429);A-(SEQ ID NO: 2)-A (hereinafter referred to as 80-09-02-N003 or BCY429);

(l-Nal)A-(SEQ ID NO: 1)-А (далее обозначаемой как 80-09-02-N009 или BCY7420);(l-Nal)A-(SEQ ID NO: 1)-A (hereinafter referred to as 80-09-02-N009 or BCY7420);

(2-Nal)A-(SEQ ID NO: 1)-А (далее обозначаемой как 80-09-02-N010 или BCY7421);(2-Nal)A-(SEQ ID NO: 1)-A (hereinafter referred to as 80-09-02-N010 or BCY7421);

(33DPA)A-(SEQ Ш NO: 1)-А (далее обозначаемой как 80-09-02-N011 или BCY7422); (44BPA)A-(SEQ ID NO: 1)-А (далее обозначаемой как 80-09-02-N012 или BCY7521); Ac-(SEQ Ш NO: 3) (далее обозначаемой как 80-09-02-N017);(33DPA)A-(SEQ Ш NO: 1)-A (hereinafter referred to as 80-09-02-N011 or BCY7422); (44BPA)A-(SEQ ID NO: 1)-A (hereinafter referred to as 80-09-02-N012 or BCY7521); Ac-(SEQ Ш NO: 3) (hereinafter referred to as 80-09-02-N017);

Ac-(SEQ Ш NO: 4) (далее обозначаемой как 80-09-02-N018);Ac-(SEQ Ш NO: 4) (hereinafter referred to as 80-09-02-N018);

Ac-(SQ ID NO: 5) (далее обозначаемой как 80-09-02-N019 или BCY7537);Ac-(SQ ID NO: 5) (hereinafter referred to as 80-09-02-N019 or BCY7537);

Ac-(SEQ Ш NO: 6) (далее обозначаемой как 80-09-02-N020);Ac-(SEQ Ш NO: 6) (hereinafter referred to as 80-09-02-N020);

Ac-(SEQ Ш NO: 7) (далее обозначаемой как 80-09-02-N021 или BCY7539);Ac-(SEQ Ш NO: 7) (hereinafter referred to as 80-09-02-N021 or BCY7539);

Ac-(SEQ Ш NO: 8) (далее обозначаемой как 80-09-02-N022 или BCY7540);Ac-(SEQ Ш NO: 8) (hereinafter referred to as 80-09-02-N022 or BCY7540);

Ac-(SEQ Ш NO: 9) (далее обозначаемой как 80-09-02-N023);Ac-(SEQ Ш NO: 9) (hereinafter referred to as 80-09-02-N023);

Ac-(pCoF)-(SEQ Ш NO: 1) (далее обозначаемой как 80-09-02-N044);Ac-(pCoF)-(SEQ Ш NO: 1) (hereinafter referred to as 80-09-02-N044);

Ac-(SEQ Ш NO: 10) (далее обозначаемой как 80-09-02-N045);Ac-(SEQ Ш NO: 10) (hereinafter referred to as 80-09-02-N045);

Ac-(SEQ Ш NO: 11) (далее обозначаемой как 80-09-02-N046 или BCY7657);Ac-(SEQ Ш NO: 11) (hereinafter referred to as 80-09-02-N046 or BCY7657);

Ac-(SEQ Ш NO: 12) (далее обозначаемой как 80-09-02-N047 или BCY7658);Ac-(SEQ Ш NO: 12) (hereinafter referred to as 80-09-02-N047 or BCY7658);

Ac-(SEQ Ш NO: 13) (далее обозначаемой как 80-09-02-N048 или BCY7659);Ac-(SEQ Ш NO: 13) (hereinafter referred to as 80-09-02-N048 or BCY7659);

Ac-(SEQ Ш NO: 14) (далее обозначаемой как 80-09-02-N049);Ac-(SEQ Ш NO: 14) (hereinafter referred to as 80-09-02-N049);

Ac-(SEQ Ш NO: 15) (далее обозначаемой как 80-09-02-N050 или BCY7661);Ac-(SEQ Ш NO: 15) (hereinafter referred to as 80-09-02-N050 or BCY7661);

SDN-(SEQ ID NO: 15)-А (далее обозначаемой как BCY3387);SDN-(SEQ ID NO: 15)-A (hereinafter referred to as BCY3387);

Ac-(SEQ Ш NO: 16) (далее обозначаемой как 80-09-02-N051 или BCY7662);Ac-(SEQ Ш NO: 16) (hereinafter referred to as 80-09-02-N051 or BCY7662);

Ac-(SEQ Ш NO: 17) (далее обозначаемой как 80-09-02-N052);Ac-(SEQ Ш NO: 17) (hereinafter referred to as 80-09-02-N052);

Ac-(SEQ Ш NO: 18) (далее обозначаемой как 80-09-02-N053);Ac-(SEQ Ш NO: 18) (hereinafter referred to as 80-09-02-N053);

Ac-(SEQ Ш NO: 19) (далее обозначаемой как 80-09-02-N054 или BCY7665);Ac-(SEQ Ш NO: 19) (hereinafter referred to as 80-09-02-N054 or BCY7665);

Ac-(SEQ Ш NO: 20) (далее обозначаемой как 80-09-02-N055 или BCY7666);Ac-(SEQ Ш NO: 20) (hereinafter referred to as 80-09-02-N055 or BCY7666);

Ac-(SEQ Ш NO: 21) (далее обозначаемой как 80-09-02-N056);Ac-(SEQ Ш NO: 21) (hereinafter referred to as 80-09-02-N056);

A-(SEQ Ш NO: 1)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N001 или BCY3385);A-(SEQ Ш NO: 1)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N001 or BCY3385);

A-(SEQ Ш NO: l)-TN(HArg) (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N003 или BCY7281);A-(SEQ Ш NO: l)-TN(HArg) (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N003 or BCY7281);

A-(SEQ Ш NO: 1)-TN(D-K) (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N004 или BCY7282);A-(SEQ Ш NO: 1)-TN(D-K) (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N004 or BCY7282);

A-(SEQ Ш NO: 22)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N005);A-(SEQ Ш NO: 22)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N005);

A-(SEQ Ш NO: 23)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N006);A-(SEQ Ш NO: 23)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N006);

Ac-(SEQ ID NO: 1)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N011 или BCY7391);Ac-(SEQ ID NO: 1)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N011 or BCY7391);

A-(SEQ ID NO: 24)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N012 или BCY7342);A-(SEQ ID NO: 24)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N012 or BCY7342);

- 7 045862- 7 045862

A-(SEQ ID NO: 25)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N014 или BCY7344);A-(SEQ ID NO: 25)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N014 or BCY7344);

A-(SEQ ID NO: 1)-ANK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N016 или BCY7346);A-(SEQ ID NO: 1)-ANK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N016 or BCY7346);

A-(SEQ ГО NO: l)-[dA]NK (далее обозначаемой как BCY7367);A-(SEQ GO NO: l)-[dA]NK (hereinafter referred to as BCY7367);

A-(SEQ ГО NO: 1)-ТАК (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N017 или BCY7347);A-(SEQ GO NO: 1)-SO (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N017 or BCY7347);

A-(SEQ ГО NO: l)-T[dA]K (далее обозначаемой как BCY7368);A-(SEQ GO NO: l)-T[dA]K (hereinafter referred to as BCY7368);

A-(SEQ ГО NO: 1)-TNA (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N018 или BCY7348);A-(SEQ GO NO: 1)-TNA (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N018 or BCY7348);

A-(SEQ ГО NO: l)-TN[dA] (далее обозначаемой как BCY7369);A-(SEQ GO NO: l)-TN[dA] (hereinafter referred to as BCY7369);

Ac-[pCoPhe]-(SEQ ID NO: 1) (далее обозначаемой как BCY7656);Ac-[pCoPhe]-(SEQ ID NO: 1) (hereinafter referred to as BCY7656);

A-(SEQ ГО NO: 6)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N020 или BCY7354);A-(SEQ GO NO: 6)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N020 or BCY7354);

A-(SEQ ID NO: 26)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N022 или BCY7352);A-(SEQ ID NO: 26)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N022 or BCY7352);

A-(SEQ ID NO: 27)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N026 или BCY7356);A-(SEQ ID NO: 27)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N026 or BCY7356);

A-(SEQ ID NO: 28)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N027 или BCY7357);A-(SEQ ID NO: 28)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N027 or BCY7357);

A-(SEQ ID NO: 29)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N041 или BCY7372);A-(SEQ ID NO: 29)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N041 or BCY7372);

иAnd

A-(SEQ ID NO: 30)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N042 или BCY7424).A-(SEQ ID NO: 30)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N042 or BCY7424).

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд C_i-P/A/Hyp-F/Y-G/A-C_ii-X₁-X₂-X₃-W/1Nal/2-Nal-S/A-X4-P-LD/A-W/1-Nal/2-Nal-Ciii (SEQ ID NO: 38) содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn a further embodiment, the peptide ligand is C _i -P/A/Hyp-F/YG/AC _ii -X ₁ -X ₂ -X ₃ -W/1Nal/2-Nal-S/A-X4-P-LD/AW /1-Nal/2-Nal-Ciii (SEQ ID NO: 38) contains an amino acid sequence selected from

A-(SEQ ID NO: 1)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N001 или BCY3385);A-(SEQ ID NO: 1)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N001 or BCY3385);

Ac-(SEQ ГО NO: 1) (далее обозначаемой как 80-09-02-N008 или BCY7390); иAc-(SEQ GO NO: 1) (hereinafter referred to as 80-09-02-N008 or BCY7390); And

Ac-(SEQ ГО NO: 1)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N011 или BCY7391).Ac-(SEQ GO NO: 1)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N011 or BCY7391).

В настоящем описании в таблице 3 приводятся данные, которые демонстрируют, что пептидные лиганды согласно этому варианту осуществлению демонстрировали хорошие уровни (<100 нМ) связывания с нектином-4 человека, о чем свидетельствуют данные связывания, полученные с использованием SPR.Herein, Table 3 provides data that demonstrates that the peptide ligands of this embodiment exhibited good levels (<100 nM) of binding to human nectin-4 as measured by binding data obtained using SPR.

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд C_i-W/A-P-L-D/S-S/D-Y-W-C_ii-X5-R-I-C_iii(SEQ ID NO: 39) содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO: 31-34: CiWPLDSYWCiiARICiii (SEQ ID NO: 31);In the following embodiment, the peptide ligand C _i -W/APLD/SS/DYWC _ii -X5-RIC _iii (SEQ ID NO: 39) contains an amino acid sequence selected from any of SEQ ID NO: 31-34: CiWPLDSYWCiiARICiii (SEQ ID NO : 31);

CiAPLDDYWCiiGRICiii (SEQ ID NO: 32);CiAPLDDYWCiiGRICiii (SEQ ID NO: 32);

CiAPLDDYWCiiDRTCiii (SEQ ID NO: 33); иCiAPLDDYWCiiDRTCiii (SEQ ID NO: 33); And

CiAPLSDYWCiiNRICiii (SEQ ID NO: 34);CiAPLSDYWCiiNRICiii (SEQ ID NO: 34);

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд C_i-W/A-P-L-D/S-S/D-Y-W-C_ii-X5-R-I-C_iii(SEQ ID NO: 39) содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn a further embodiment, the peptide ligand C _i -W/APLD/SS/DYWC _ii -X5-RIC _iii (SEQ ID NO: 39) contains an amino acid sequence selected from

A-(SEQ ГО NO: 31)-А (далее обозначаемой как 80-10-00 или BCY488);A-(SEQ GO NO: 31)-A (hereinafter referred to as 80-10-00 or BCY488);

A-(SEQ ГО NO: 32)-А (далее обозначаемой как BCY432);A-(SEQ GO NO: 32)-A (hereinafter referred to as BCY432);

DDW-(SEQ ГО NO: 32)-А (далее обозначаемой как 80-10-11-Т01 или BCY433);DDW-(SEQ GO NO: 32)-A (hereinafter referred to as 80-10-11-T01 or BCY433);

VDW-(SEQ ГО NO: 33)-А (далее обозначаемой как 80-10-12-Т01 или BCY462);VDW-(SEQ GO NO: 33)-A (hereinafter referred to as 80-10-12-T01 or BCY462);

- 8 045862- 8 045862

QKW-(SEQ Ш NO: 34)-A (далее обозначаемой как 80-10-13-Т01 или BCY3400);QKW-(SEQ Ш NO: 34)-A (hereinafter referred to as 80-10-13-T01 or BCY3400);

Q[HArg]W-(SEQ ID NO: 34)-A (далее обозначаемой как BCY7278);Q[HArg]W-(SEQ ID NO: 34)-A (hereinafter referred to as BCY7278);

Q[K(Ac)]W-(SEQ ID NO: 34)-A (далее обозначаемой как BCY7280);Q[K(Ac)]W-(SEQ ID NO: 34)-A (hereinafter referred to as BCY7280);

[Ac]QKW-(SEQ ID NO: 34) (далее обозначаемой как BCY7392);[Ac]QKW-(SEQ ID NO: 34) (hereinafter referred to as BCY7392);

Q[dK]W-(SEQ ID NO: 34)-A (далее обозначаемой как BCY7426);Q[dK]W-(SEQ ID NO: 34)-A (hereinafter referred to as BCY7426);

Ac-AKW-(SEQ ID NO: 34) (далее обозначаемой как BCY7622);Ac-AKW-(SEQ ID NO: 34) (hereinafter referred to as BCY7622);

Ac-QAW-(SEQ ID NO: 34) (далее обозначаемой как BCY7623);Ac-QAW-(SEQ ID NO: 34) (hereinafter referred to as BCY7623);

Ac-QKA-(SEQ ID NO: 34) (далее обозначаемой как BCY7624);Ac-QKA-(SEQ ID NO: 34) (hereinafter referred to as BCY7624);

Ac-[dA]KW-(SEQ ID NO: 34) (далее обозначаемой как BCY7634);Ac-[dA]KW-(SEQ ID NO: 34) (hereinafter referred to as BCY7634);

Ac-Q[dA]W-(SEQ ID NO: 34) (далее обозначаемой как BCY7635);Ac-Q[dA]W-(SEQ ID NO: 34) (hereinafter referred to as BCY7635);

Ac-QK[dA]-(SEQ ID NO: 34) (далее обозначаемой как BCY7636);Ac-QK[dA]-(SEQ ID NO: 34) (hereinafter referred to as BCY7636);

Ac-Q[dD]W-(SEQ ID NO: 34) (далее обозначаемой как BCY7993);Ac-Q[dD]W-(SEQ ID NO: 34) (hereinafter referred to as BCY7993);

Ac-QK[lNal]-(SEQ ID NO: 34) (далее обозначаемой как BCY7996);Ac-QK[lNal]-(SEQ ID NO: 34) (hereinafter referred to as BCY7996);

Ac-QK[2Nal]-(SEQ ID NO: 34) (далее обозначаемой как BCY7997); иAc-QK[2Nal]-(SEQ ID NO: 34) (hereinafter referred to as BCY7997); And

Ac-(SEQ ID NO: 34) (далее обозначаемой как BCY8044).Ac-(SEQ ID NO: 34) (hereinafter referred to as BCY8044).

[Ac]QKW-(SEQ ID NO: 34) (далее обозначаемой как BCY7392).[Ac]QKW-(SEQ ID NO: 34) (hereinafter referred to as BCY7392).

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд Ci-W/A/Y-P/A-L-D/S/A-S/D/P/A-Y-W/1Nal-C_ii-X5-R/HArg/A-I-C_iii (SEQ ID NO: 42) содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn a further embodiment, the peptide ligand Ci-W/A/YP/ALD/S/AS/D/P/AYW/1Nal-C _ii -X5-R/HArg/AIC _iii (SEQ ID NO: 42) contains the amino acid sequence, chosen from

CWPLDPYWCGRIC (SEQ ID NO: 43);CWPLDPYWCGRIC(SEQ ID NO: 43);

CYPLSPYWCERIC (SEQ ID NO: 44);CYPLSPYWCERIC (SEQ ID NO: 44);

CWPLDDYWCPRIC (SEQ ID NO: 58);CWPLDDYWCPRIC (SEQ ID NO: 58);

CAPLSDYWCN[HArg]IC (SEQ ID NO: 65);CAPLSDYWCN[HArg]IC (SEQ ID NO: 65);

CAALSDYWCNRIC (SEQ ID NO: 103);CAALSDYWCNRIC (SEQ ID NO: 103);

CAPLADYWCNRIC (SEQ ID NO: 104);CAPLADYWCNRIC (SEQ ID NO: 104);

CAPLSAYWCNRIC (SEQ ID NO: 105);CAPLSAYWCNRIC (SEQ ID NO: 105);

CAPLSDYWCARIC (SEQ ID NO: 106);CAPLSDYWCARIC (SEQ ID NO: 106);

CAPLSDYWCNAIC (SEQ ID NO: 107);CAPLSDYWCNAIC (SEQ ID NO: 107);

CAPL[dA]DYWCNRIC (SEQ ID NO: 108);CAPL[dA]DYWCNRIC (SEQ ID NO: 108);

CAPLS[dA]YWCNRIC (SEQ ID NO: 109);CAPLS[dA]YWCNRIC (SEQ ID NO: 109);

CAPLSDYWC[dA]RIC (SEQ ID NO: 110);CAPLSDYWC[dA]RIC (SEQ ID NO: 110);

CAPLSDY[lNal]CNRIC (SEQ ID NO: 153); иCAPLSDY[lNal]CNRIC (SEQ ID NO: 153); And

CAPLSDYWC[dD]RIC (SEQ ID NO: 154).CAPLSDYWC[dD]RIC (SEQ ID NO: 154).

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд C_i-W/A/Y-P/A-L-D/S/A-S/D/P/A-Y-W/1Nal-C_ii-X₅-R/HArg/A-I-C_iii (SEQ ID NO: 42) содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn a further embodiment, the peptide ligand C _i -W/A/YP/ALD/S/AS/D/P/AYW/1Nal-C _ii -X ₅ -R/HArg/AIC _iii (SEQ ID NO: 42) contains an amino acid sequence chosen from

- 9 045862- 9 045862

A-(SEQ Ш NO: 43)-A (далее обозначаемой как BCY430);A-(SEQ Ш NO: 43)-A (hereinafter referred to as BCY430);

A-(SEQ Ш NO: 44)-А (далее обозначаемой как BCY431);A-(SEQ Ш NO: 44)-A (hereinafter referred to as BCY431);

A-(SEQ Ш NO: 58)-PQA (далее обозначаемой как BCY3401);A-(SEQ Ш NO: 58)-PQA (hereinafter referred to as BCY3401);

QKW-(SEQ Ш NO: 65)-А (далее обозначаемой как BCY7279);QKW-(SEQ Ш NO: 65)-A (hereinafter referred to as BCY7279);

Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 103) (далее обозначаемой как BCY7625);Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 103) (hereinafter referred to as BCY7625);

Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 104) (далее обозначаемой как BCY7627);Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 104) (hereinafter referred to as BCY7627);

Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 105) (далее обозначаемой как BCY7628);Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 105) (hereinafter referred to as BCY7628);

Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 106) (далее обозначаемой как BCY7631);Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 106) (hereinafter referred to as BCY7631);

Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 107) (далее обозначаемой как BCY7632);Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 107) (hereinafter referred to as BCY7632);

Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 108) (далее обозначаемой как BCY7639);Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 108) (hereinafter referred to as BCY7639);

Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 109) (далее обозначаемой как BCY7640);Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 109) (hereinafter referred to as BCY7640);

Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 110) (далее обозначаемой как BCY7643);Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 110) (hereinafter referred to as BCY7643);

Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 153) (далее обозначаемой как BCY7998); иAc-QKW-(SEQ Ш NO: 153) (hereinafter referred to as BCY7998); And

Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 154) (далее обозначаемой как BCY8000).Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 154) (hereinafter referred to as BCY8000).

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд Ci-V-T-T-S-Y-D-Cii-F/W-L/V-H/R/T-LL/G-G/Q/H-Ciii (SEQ ID NO: 40) содержит аминокислотную последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO: 35-37In the following embodiment, the peptide ligand Ci-V-T-T-S-Y-D-Cii-F/W-L/V-H/R/T-LL/G-G/Q/H-Ciii (SEQ ID NO: 40) contains an amino acid sequence selected from any of the SEQ ID NOs: 35-37

CiVTTSYDCiiFLHLLGCiii (SEQ ID NO: 35);CiVTTSYDCiiFLHLLGCiii (SEQ ID NO: 35);

CiVTTSYDCiiWVRLGQCiii (SEQ ID NO: 36); иCiVTTSYDCiiWVRLGQCiii (SEQ ID NO: 36); And

CiVTTSYDCiiWVTLGHCiii (SEQ ID NO: 37);CiVTTSYDCiiWVTLGHCiii (SEQ ID NO: 37);

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд Ci-V-T-T-S-Y-D-Cii-F/W-L/V-H/R/T-LL/G-G/Q/H-Ciii (SEQ ID NO: 40) содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn a further embodiment, the peptide ligand Ci-V-T-T-S-Y-D-Cii-F/W-L/V-H/R/T-LL/G-G/Q/H-Ciii (SEQ ID NO: 40) contains an amino acid sequence selected from

A-(SEQ Ш NO: 35)-А (далее обозначаемой как 80-11-00 или BCY471);A-(SEQ Ш NO: 35)-А (hereinafter referred to as 80-11-00 or BCY471);

A-(SEQ Ш NO: 36)-А (далее обозначаемой как 80-11-01 или BCY472); иA-(SEQ Ш NO: 36)-А (hereinafter referred to as 80-11-01 or BCY472); And

A-(SEQ Ш NO: 37)-SRF (далее обозначаемой как 80-11-08-Т01 или BCY3406).A-(SEQ Ш NO: 37)-SRF (hereinafter referred to as 80-11-08-T01 or BCY3406).

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд C_i-V-T-T-S-Y-D-C_ii-F/W-L/V-H/R/T-LL/G-G/Q/H-C_iii (SEQ ID NO: 40) содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:In the following embodiment, the peptide ligand C _i -VTTSYDC _ii -F/WL/VH/R/T-LL/GG/Q/HC _iii (SEQ ID NO: 40) contains an amino acid sequence selected from:

Ac-(SEQ ID NO: 37)-SRF (далее обозначаемой как BCY7393).Ac-(SEQ ID NO: 37)-SRF (hereinafter referred to as BCY7393).

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд С_гХ₆-Х₇-Х₈-С_й-Х₉-Х₁₀-Хп-Х₁₂-Х₁з-Х₁₄Х1₅-Х16-Х17-Сш (SEQ ID NO: 41) содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn the following embodiment, the peptide ligand C _g X ₆ -X ₇ -X ₈ -C _d -X ₉ -X ₁₀ -Xn-X ₁₂ -X ₁ s-X ₁₄ X1 ₅ -X16-X17-Csh (SEQ ID NO: 41) contains an amino acid sequence selected from

CPFGCMETWSWPIWC (SEQ ID NO: 45);CPFGCMETWSWPIWC (SEQ ID NO: 45);

CPFGCMRGWSWPIWC (SEQ ID NO: 46);CPFGCMRGWSWPIWC (SEQ ID NO: 46);

- 10 045862- 10 045862

CPFGCMSGWSWPIWC (SEQ ID NO: 47);CPFGCMSGWSWPIWC (SEQ ID NO: 47);

CPFGCMEGWSWPIWC (SEQ ID NO: 48);CPFGCMEGWSWPIWC (SEQ ID NO: 48);

CPFGCMEDWSWPIWC (SEQ ID NO: 49);CPFGCMEDWSWPIWC (SEQ ID NO: 49);

CPFGCMPGWSWPIWC (SEQ ID NO: 50);CPFGCMPGWSWPIWC (SEQ ID NO: 50);

CPFGCMKSWSWPIWC (SEQ ID NO: 51);CPFGCMKSWSWPIWC (SEQ ID NO: 51);

CPFGCMKTWSWPIWC (SEQ ID NO: 52);CPFGCMKTWSWPIWC (SEQ ID NO: 52);

CPFGCMKGWSWPIWC (SEQ ID NO: 53);CPFGCMKGWSWPIWC (SEQ ID NO: 53);

CPFGCQEHWSWPIWC (SEQ ID NO: 54);CPFGCQEHWSWPIWC (SEQ ID NO: 54);

CPFGCIKSWSWPIWC (SEQ ID NO: 55);CPFGCIKSWSWPIWC (SEQ ID NO: 55);

CPFGCQEDWSWPIWC (SEQ ID NO: 56);CPFGCQEDWSWPIWC (SEQ ID NO: 56);

CPFGCMSDWSWPIWC (SEQ ID NO: 57);CPFGCMSDWSWPIWC (SEQ ID NO: 57);

CPFGCM[HArg]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 59);CPFGCM[HArg]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 59);

CPFGCM[K(Ac)]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 60);CPFGCM[K(Ac)]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 60);

CPFGCM[K(Ac)]SWSWPIWC (SEQ ID NO: 61);CPFGCM[K(Ac)]SWSWPIWC (SEQ ID NO: 61);

CPFGC[Nle]KSWSWPIWC (SEQ ID NO: 62);CPFGC[Nle]KSWSWPIWC (SEQ ID NO: 62);

CPFGCM[HArg]SWSWPIWC (SEQ ID NO: 63);CPFGCM[HArg]SWSWPIWC (SEQ ID NO: 63);

CPFGCM[dK]SWSWPIWC (SEQ ID NO: 64);CPFGCM[dK]SWSWPIWC (SEQ ID NO: 64);

CP[dA]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 66);CP[dA]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 66);

CPF[dA]CMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 67);CPF[dA]CMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 67);

CPFGCM[dA]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 68);CPFGCM[dA]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 68);

CPFGCMK[dA]WSWPIWC (SEQ ID NO: 69);CPFGCMK[dA]WSWPIWC (SEQ ID NO: 69);

CPFGCMKN[dA]SWPIWC (SEQ ID NO: 70);CPFGCMKN[dA]SWPIWC (SEQ ID NO: 70);

CPFGCMKNWSWP[dA]WC (SEQ ID NO: 71);CPFGCMKNWSWP[dA]WC (SEQ ID NO: 71);

C[dA]FGCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 72);C[dA]FGCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 72);

CPFGC[tBuAla]KNWSWPIWC (SEQ ID NO: 73);CPFGC[tBuAla]KNWSWPIWC (SEQ ID NO: 73);

CPFGC[HLeu]KNWSWPIWC (SEQ ID NO: 74);CPFGC[HLeu]KNWSWPIWC (SEQ ID NO: 74);

CPFGCMKNWSWPI[lNal]C (SEQ ID NO: 75);CPFGCMKNWSWPI[lNal]C (SEQ ID NO: 75);

CPF[dD]CM[HArg]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 76);CPF[dD]CM[HArg]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 76);

CPF[dA]CM[HArg]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 77);CPF[dA]CM[HArg]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 77);

CP[3MePhe]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 78);CP[3MePhe]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 78);

CP[4MePhe]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 79);CP[4MePhe]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 79);

CP[HPhe]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 80);CP[HPhe]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 80);

CPF[dD]CMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 81);CPF[dD]CMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 81);

CPFGC[Hse(Me)]KNWSWPIWC (SEQ ID NO: 82);CPFGC[Hse(Me)]KNWSWPIWC (SEQ ID NO: 82);

CPFGCMKN[AzaTrp]SWPIWC (SEQ ID NO: 83);CPFGCMKN[AzaTrp]SWPIWC (SEQ ID NO: 83);

CPFGCMKNWSFPIWC (SEQ ID NO: 84);CPFGCMKNWSFPIWC (SEQ ID NO: 84);

CPFGCMKNWSYPIWC (SEQ ID NO: 85);CPFGCMKNWSYPIWC (SEQ ID NO: 85);

CPFGCMKNWS[lNal]PIWC (SEQ ID NO: 86);CPFGCMKNWS[lNal]PIWC (SEQ ID NO: 86);

CPFGCMKNWS[2Nal]PIWC (SEQ ID NO: 87);CPFGCMKNWS[2Nal]PIWC (SEQ ID NO: 87);

CPFGCMKNWS[AzaTrp]PIWC (SEQ ID NO: 88);CPFGCMKNWS[AzaTrp]PIWC (SEQ ID NO: 88);

- 11 045862- 11 045862

CPFGCMKNWSW[Aze]IWC (SEQ Ш NO: 89);CPFGCMKNWSW[Aze]IWC (SEQ Ш NO: 89);

CPFGCMKNWSW[Pip]IWC (SEQ Ш NO: 90);CPFGCMKNWSW[Pip]IWC (SEQ Ш NO: 90);

CPFGCMKNWSWPIFC (SEQ ID NO: 91);CPFGCMKNWSWPIFC (SEQ ID NO: 91);

CPFGCMKNWSWPIYC (SEQ ID NO: 92);CPFGCMKNWSWPIYC (SEQ ID NO: 92);

CPFGCMKNWSWPI[AzaTrp]C (SEQ ID NO: 93);CPFGCMKNWSWP[AzaTrp]C (SEQ ID NO: 93);

CGFGCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 94);CGFGCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 94);

C[Aze]FGCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 95);C[Aze]FGCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 95);

CPF[K(Ac)]CMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 96);CPF[K(Ac)]CMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 96);

CPFGCLKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 97);CPFGCLKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 97);

CPFGC[MetO2]KNWSWPIWC (SEQ ID NO: 98);CPFGC[MetO2]KNWSWPIWC (SEQ ID NO: 98);

CPFGCMPNWSWPIWC (SEQ ID NO: 99);CPFGCMPNWSWPIWC (SEQ ID NO: 99);

CPFGCMQNWSWPIWC (SEQ ID NO: 100);CPFGCMQNWSWPIWC (SEQ ID NO: 100);

CPFGCMKNWSWPPWC (SEQ ID NO: 101);CPFGCMKNWSWPPWC (SEQ ID NO: 101);

CP[2Pal]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 102);CP[2Pal]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 102);

CPFGCMKN[lNal]SWPIWC (SEQ ID NO: 111);CPFGCMKN[lNal]SWPIWC (SEQ ID NO: 111);

CPFGCMKN[2Nal]SWPIWC (SEQ ID NO: 112);CPFGCMKN[2Nal]SWPIWC (SEQ ID NO: 112);

CPFGCMKNWSWPI[2Nal]C (SEQ ID NO: 113);CPFGCMKNWSWPI[2Nal]C (SEQ ID NO: 113);

C[HyP]FGCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 114);C[HyP]FGCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 114);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 115);CPF[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 115);

CPF[dD]CM[HArg][dK]WSTPIWC (SEQ ID NO: 116);CPF[dD]CM[HArg][dK]WSTPIWC (SEQ ID NO: 116);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTPKWC (SEQ ID NO: 117);CPF[dD]CM[HArg]NWSTPKWC (SEQ ID NO: 117);

C[Pro(4NH)]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 118);C[Pro(4NH)]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 118);

CPF[dD]CMKNWSTPIWC (SEQ ID NO: 119);CPF[dD]CMKNWSTPIWC (SEQ ID NO: 119);

CPF[dK]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 120);CPF[dK]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 120);

CPF[dD]CK[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 121);CPF[dD]CK[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 121);

CPF[dD]CM[HArg]KWSTPIWC (SEQ ID NO: 122);CPF[dD]CM[HArg]KWSTPIWC (SEQ ID NO: 122);

C[Oxa]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 123);C[Oxa]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 123);

CPF[dD]CM[HArg][Thi]WSTPIWC (SEQ ID NO: 124);CPF[dD]CM[HArg][Thi]WSTPIWC (SEQ ID NO: 124);

CPF[dD]CM[HArg][4ThiAz]WSTPIWC (SEQ ID NO: 125);CPF[dD]CM[HArg][4ThiAz]WSTPIWC (SEQ ID NO: 125);

CPF[dD]CM[HArg][124TriAz]WSTPIWC (SEQ ID NO: 126);CPF[dD]CM[HArg][124TriAz]WSTPIWC (SEQ ID NO: 126);

CPF[dD]CM[HArg]NWS[124TriAz]PIWC (SEQ ID NO: 127);CPF[dD]CM[HArg]NWS[124TriAz]PIWC (SEQ ID NO: 127);

CPF[dD]CM[HArg]NWST[Oxa]IWC (SEQ ID NO: 128);CPF[dD]CM[HArg]NWST[Oxa]IWC (SEQ ID NO: 128);

CP[DOPA][dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 129);CP[DOPA][dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 129);

CPF[dD]CM[HArg]NWS[DOPA]PIWC (SEQ ID NO: 130);CPF[dD]CM[HArg]NWS[DOPA]PIWC (SEQ ID NO: 130);

CPF[dD]CM[HArg]NWS[THP(SO2)]PIWC (SEQ ID NO: 131);CPF[dD]CM[HArg]NWS[THP(SO2)]PIWC (SEQ ID NO: 131);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[THP(SO2)]WC (SEQ ID NO: 132);CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[THP(SO2)]WC (SEQ ID NO: 132);

CPF[dD]CM[HArg]N[5FTrp]STPIWC (SEQ ID NO: 133);CPF[dD]CM[HArg]N[5FTrp]STPIWC (SEQ ID NO: 133);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTPI[5FTrp]C (SEQ ID NO: 134);CPF[dD]CM[HArg]NWSTPI[5FTrp]C (SEQ ID NO: 134);

CPF[dD]CM[HArg]NWS[THP(O)]PIWC (SEQ ID NO: 135);CPF[dD]CM[HArg]NWS[THP(O)]PIWC (SEQ ID NO: 135);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[THP(O)]WC (SEQ ID NO: 136);CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[THP(O)]WC (SEQ ID NO: 136);

- 12 045862- 12 045862

C[44DFP]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 137);C[44DFP]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 137);

C[Oic]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 138);C[Oic]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 138);

CPF[dF]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 139);CPF[dF]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 139);

CPF[dE]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 140);CPF[dE]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 140);

CPF[dQ]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 141);CPF[dQ]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 141);

CPF[dL]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 142);CPF[dL]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 142);

CPF[dS]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 143);CPF[dS]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 143);

CPF[dD]CM[HArg]NW[HSer]TPIWC (SEQ ID NO: 144);CPF[dD]CM[HArg]NW[HSer]TPIWC (SEQ ID NO: 144);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[C5A]WC (SEQ ID NO: 145);CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[C5A]WC (SEQ ID NO: 145);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[Cpa]WC (SEQ ID NO: 146);CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[Cpa]WC (SEQ ID NO: 146);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[Cha]WC (SEQ ID NO: 147);CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[Cha]WC (SEQ ID NO: 147);

CPF[dD]C[HGln][HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 148);CPF[dD]C[HGln][HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 148);

CPF[dD]C[C5A][HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 149);CPF[dD]C[C5A][HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 149);

CPF[dD]CM[HArg]N[Trp(Me)]STPIWC (SEQ ID NO: 150);CPF[dD]CM[HArg]N[Trp(Me)]STPIWC (SEQ ID NO: 150);

CPF[dD][NMeCys]M[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 151);CPF[dD][NMeCys]M[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 151);

CPF[dD]C[HArg]NWS[NMeThr]PIWC (SEQ ID NO: 152);CPF[dD]C[HArg]NWS[NMeThr]PIWC (SEQ ID NO: 152);

CP[lNal][dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 155);CP[lNal][dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 155);

CP[2Nal][dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 156);CP[2Nal][dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 156);

CP[44BPA][dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 157);CP[44BPA][dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 157);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTPPWC (SEQ ID NO: 158);CPF[dD]CM[HArg]NWSTPPWC (SEQ ID NO: 158);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 159);CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 159);

CPF[dD]CL[HArg]NWSTPPWC (SEQ ID NO: 160);CPF[dD]CL[HArg]NWSTPPWC (SEQ ID NO: 160);

CPF[dD]CL[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 161);CPF[dD]CL[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 161);

CPY[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 162);CPY[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 162);

C[Aib]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 163);C[Aib]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 163);

C[Sar]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 164);C[Sar]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 164);

CPF[dR]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 165);CPF[dR]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 165);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTPKWC (SEQ ID NO: 166);CPF[dD]CM[HArg]NWSTPKWC (SEQ ID NO: 166);

CP[lNal][dD]CM[HArg]NWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 167);CP[lNal][dD]CM[HArg]NWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 167);

CP[lNal][dD]CM[HArg]HWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 168):CP[lNal][dD]CM[HArg]HWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 168):

CP[lNal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 169);CP[lNal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 169);

CP[lNal][dD]CM[HArg]DWSTPIWC (SEQ ID NO: 170);CP[lNal][dD]CM[HArg]DWSTPIWC (SEQ ID NO: 170);

CP[lNal][dR]CM[HArg]NWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 171);CP[lNal][dR]CM[HArg]NWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 171);

CP[lNal][dR]CM[HArg]HWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 172);CP[lNal][dR]CM[HArg]HWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 172);

CPF[dD]CM[NMeHArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 173);CPF[dD]CM[NMeHArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 173);

CPF[dD]CM[HArg][NMeAsn]WSTPIWC (SEQ ID NO: 174);CPF[dD]CM[HArg][NMeAsn]WSTPIWC (SEQ ID NO: 174);

CPF[dD]CM[HArg]NWS[NMeThr]PIWC (SEQ ID NO: 175);CPF[dD]CM[HArg]NWS[NMeThr]PIWC (SEQ ID NO: 175);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[NMeIle]WC (SEQ ID NO: 176);CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[NMeIle]WC (SEQ ID NO: 176);

CP[lNal][dD]CM[HArg][Cya]WSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 177);CP[lNal][dD]CM[HArg][Cya]WSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 177);

CP[lNal][dD]CM[Cya]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 178);CP[lNal][dD]CM[Cya]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 178);

- 13 045862- 13 045862

CP[lNal][DCya]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 179);CP[lNal][DCya]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 179);

CP[lNal][dD]CM[HArg]DWDTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 180);CP[lNal][dD]CM[HArg]DWDTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 180);

CP[2Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 181);CP[2Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 181);

CP[lNal][dD]CM[HArg]DWTTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 182);CP[lNal][dD]CM[HArg]DWTTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 182);

CP[lNal][dD]CM[HArg]DW[HSer]TP[HyP]WC (SEQ ID NO: 183);CP[lNal][dD]CM[HArg]DW[HSer]TP[HyP]WC (SEQ ID NO: 183);

CP[lNal][dD]CM[HArg]DW[dS]TP[HyP]WC (SEQ ID NO: 184);CP[lNal][dD]CM[HArg]DW[dS]TP[HyP]WC (SEQ ID NO: 184);

CP[lNal][dD]CM[HArg]DWSSP[HyP]WC (SEQ ID NO: 185);CP[lNal][dD]CM[HArg]DWSSP[HyP]WC (SEQ ID NO: 185);

CP[lNal][dD]CM[Agb]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 186);CP[lNal][dD]CM[Agb]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 186);

CP[lNal][dD]CMPDWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 187);CP[lNal][dD]CMPDWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 187);

CP[lNal][dD]CM[HyP]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 188);CP[lNal][dD]CM[HyP]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 188);

CP[lNal][dR]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 189);CP[lNal][dR]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 189);

CP[lNal][dR]CM[HArg]DWDTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 190);CP[lNal][dR]CM[HArg]DWDTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 190);

CP[2Nal][dR]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 191);CP[2Nal][dR]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 191);

CP[lNal][dR]CM[HArg]DWTTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 192);CP[lNal][dR]CM[HArg]DWTTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 192);

CP[lNal][dR]CM[HArg]DW[HSer]TP[HyP]WC (SEQ ID NO: 193);CP[lNal][dR]CM[HArg]DW[HSer]TP[HyP]WC (SEQ ID NO: 193);

CP[lNal][dR]CM[HArg]DW[dS]TP[HyP]WC (SEQ ID NO: 194);CP[lNal][dR]CM[HArg]DW[dS]TP[HyP]WC (SEQ ID NO: 194);

CP[lNal][dR]CM[HArg]DWSSP[HyP]WC (SEQ ID NO: 195);CP[lNal][dR]CM[HArg]DWSSP[HyP]WC (SEQ ID NO: 195);

CP[lNal][dR]CM[Agb]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 196);CP[lNal][dR]CM[Agb]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 196);

CP[lNal][dR]CMPDWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 197);CP[lNal][dR]CMPDWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 197);

CP[lNal][dR]CM[HyP]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 198);CP[lNal][dR]CM[HyP]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 198);

CP[lNal][dD]CL[HArg]DWSTPIWC (SEQ ID NO: 199);CP[lNal][dD]CL[HArg]DWSTPIWC (SEQ ID NO: 199);

CP[lNal][dD]CL[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 200);CP[lNal][dD]CL[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 200);

CP[lNal][dR]CL[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 201);CP[lNal][dR]CL[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 201);

CP[lNal][dR]CL[HArg]HWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 202);CP[lNal][dR]CL[HArg]HWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 202);

CP[lNal][dR]CM[HArg]DWSTPIWC (SEQ ID NO: 203);CP[lNal][dR]CM[HArg]DWSTPIWC (SEQ ID NO: 203);

CP[lNal][DCya]CM[Cya]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 208);CP[lNal][DCya]CM[Cya]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 208);

CP[lNal][DCya]CM[HArg][Cya]WSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 209);CP[lNal][DCya]CM[HArg][Cya]WSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 209);

CP[lNal][dD]CM[Cya][Cya]WSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 210);CP[lNal][dD]CM[Cya][Cya]WSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 210);

CP[lNal][dK]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 211);CP[lNal][dK]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 211);

CP[lNal][dD]CMKDWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 212);CP[lNal][dD]CMKDWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 212);

CP[lNal][dD]CM[HArg]D[dW]STP[HyP][dW]C (SEQ ID NO: 215); иCP[lNal][dD]CM[HArg]D[dW]STP[HyP][dW]C (SEQ ID NO: 215); And

CPFGCM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 216).CPFGCM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 216).

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд C_i-X₆-X₇-X₈-C_ii-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄X₁₅-X₁₆-X₁₇-C_iii (SEQ ID NO: 41) содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn a further embodiment, the peptide ligand is C _i -X ₆ -X ₇ -X ₈ -C _ii -X ₉ -X ₁₀ -X ₁₁ -X ₁₂ -X ₁₃ -X ₁₄ X ₁₅ -X ₁₆ -X ₁₇ -C _iii ( SEQ ID NO: 41) contains an amino acid sequence selected from

CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 169).CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 169).

В одном варианте осуществления пептидный лиганд по изобретению представляет собой пептидный лиганд, отличный от аминокислотной последовательности CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 169).In one embodiment, the peptide ligand of the invention is a peptide ligand other than the amino acid sequence CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 169).

- 14 045862- 14 045862

DDA-(SEQ Ш NO: 45)-A (далее обозначаемой как BCY3386);DDA-(SEQ Ш NO: 45)-A (hereinafter referred to as BCY3386);

DTA-(SEQ ID NO: 46)-A (далее обозначаемой как BCY3388);DTA-(SEQ ID NO: 46)-A (hereinafter referred to as BCY3388);

DSE-(SEQ ID NO: 47)-A (далее обозначаемой как BCY3389);DSE-(SEQ ID NO: 47)-A (hereinafter referred to as BCY3389);

HDA-(SEQ ID NO: 48)-A (далее обозначаемой как BCY3390);HDA-(SEQ ID NO: 48)-A (hereinafter referred to as BCY3390);

MDT-(SEQ ID NO: 49)-A (далее обозначаемой как BCY3391);MDT-(SEQ ID NO: 49)-A (hereinafter referred to as BCY3391);

DPG-(SEQ ID NO: 50)-A (далее обозначаемой как BCY3392);DPG-(SEQ ID NO: 50)-A (hereinafter referred to as BCY3392);

HDS-(SEQ ID NO: 51)-A (далее обозначаемой как BCY3393); (D-H)DS-(SEQ ID NO: 51)-A (далее обозначаемой как BCY7272);HDS-(SEQ ID NO: 51)-A (hereinafter referred to as BCY3393); (D-H)DS-(SEQ ID NO: 51)-A (hereinafter referred to as BCY7272);

A-(SEQ ID NO: 52)-TDK (далее обозначаемой как BCY3394);A-(SEQ ID NO: 52)-TDK (hereinafter referred to as BCY3394);

A-(SEQ ID NO: 53)-LKD (далее обозначаемой как BCY3395);A-(SEQ ID NO: 53)-LKD (hereinafter referred to as BCY3395);

A-(SEQ ID NO: 54)-TTA (далее обозначаемой как BCY3396);A-(SEQ ID NO: 54)-TTA (hereinafter referred to as BCY3396);

A-(SEQ ID NO: 55)-QME (далее обозначаемой как BCY3397);A-(SEQ ID NO: 55)-QME (hereinafter referred to as BCY3397);

A-(SEQ ID NO: 56)-LSE (далее обозначаемой как BCY3398);A-(SEQ ID NO: 56)-LSE (hereinafter referred to as BCY3398);

A-(SEQ ID NO: 57)-STD (далее обозначаемой как BCY3399);A-(SEQ ID NO: 57)-STD (hereinafter referred to as BCY3399);

A-(SEQ ID NO: 59)-TNK (далее обозначаемой как BCY7265);A-(SEQ ID NO: 59)-TNK (hereinafter referred to as BCY7265);

Ac-(SEQ ID NO: 59) (далее обозначаемой как BCY7660);Ac-(SEQ ID NO: 59) (hereinafter referred to as BCY7660);

A-(SEQ ID NO: 60)-TNK (далее обозначаемой как BCY7266);A-(SEQ ID NO: 60)-TNK (hereinafter referred to as BCY7266);

Ac-(SEQ ID NO: 60) (далее обозначаемой как BCY7616);Ac-(SEQ ID NO: 60) (hereinafter referred to as BCY7616);

HDS-(SEQ ID NO: 61)-A (далее обозначаемой как BCY7273);HDS-(SEQ ID NO: 61)-A (hereinafter referred to as BCY7273);

HDS-(SEQ ID NO: 62)-A (далее обозначаемой как BCY7274);HDS-(SEQ ID NO: 62)-A (hereinafter referred to as BCY7274);

HDS-(SEQ ID NO: 63)-A (далее обозначаемой как BCY7275);HDS-(SEQ ID NO: 63)-A (hereinafter referred to as BCY7275);

HDS-(SEQ ID NO: 64)-A (далее обозначаемой как BCY7276);HDS-(SEQ ID NO: 64)-A (hereinafter referred to as BCY7276);

A-(SEQ ID NO: 66)-TNK (далее обозначаемой как BCY7349);A-(SEQ ID NO: 66)-TNK (hereinafter referred to as BCY7349);

A-(SEQ ID NO: 67)-TNK (далее обозначаемой как BCY7350);A-(SEQ ID NO: 67)-TNK (hereinafter referred to as BCY7350);

Ac-(SEQ ID NO: 67) (далее обозначаемой как BCY7538);Ac-(SEQ ID NO: 67) (hereinafter referred to as BCY7538);

A-(SEQ ID NO: 68)-TNK (далее обозначаемой как BCY7359);A-(SEQ ID NO: 68)-TNK (hereinafter referred to as BCY7359);

A-(SEQ ГО NO: 69)-TNK (далее обозначаемой как BCY7360);A-(SEQ GO NO: 69)-TNK (hereinafter referred to as BCY7360);

A-(SEQ ГО NO: 70)-TNK (далее обозначаемой как BCY7361);A-(SEQ GO NO: 70)-TNK (hereinafter referred to as BCY7361);

A-(SEQ ГО NO: 71)-TNK (далее обозначаемой как BCY7365);A-(SEQ GO NO: 71)-TNK (hereinafter referred to as BCY7365);

A-(SEQ ГО NO: 72)-TNK (далее обозначаемой как BCY7370);A-(SEQ GO NO: 72)-TNK (hereinafter referred to as BCY7370);

Ac-(SEQ ГО NO: 73) (далее обозначаемой как BCY7535);Ac-(SEQ GO NO: 73) (hereinafter referred to as BCY7535);

Ac-(SEQ ГО NO: 74) (далее обозначаемой как BCY7536);Ac-(SEQ GO NO: 74) (hereinafter referred to as BCY7536);

Ac-(SEQ ГО NO: 75) (далее обозначаемой как BCY7541); [B-Ala][Sar₅]-(SEQ ГО NO: 76) (далее обозначаемой как BCY7556);Ac-(SEQ GO NO: 75) (hereinafter referred to as BCY7541); [B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ GO NO: 76) (hereinafter referred to as BCY7556);

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ ГО NO: 76) (далее обозначаемой KaKBCY7558);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ GO NO: 76) (hereinafter referred to as KaKBCY7558);

[B-Ala][Sar₅]-(SEQ ГО NO: 77) (далее обозначаемой как BCY7557); Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ ГО NO: 77) (далее обозначаемой KaKBCY7559); Ac-(SEQ ГО NO: 78) (далее обозначаемой как BCY7580);[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ GO NO: 77) (hereinafter referred to as BCY7557); Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ GO NO: 77) (hereinafter referred to as KaKBCY7559); Ac-(SEQ GO NO: 78) (hereinafter referred to as BCY7580);

- 15 045862- 15 045862

Ac-(SEQ Ш NO: 79) (далее обозначаемой как BCY7581);Ac-(SEQ ID NO: 79) (hereinafter referred to as BCY7581);

Ac-(SEQ Ш NO: 80) (далее обозначаемой как BCY7582);Ac-(SEQ Ш NO: 80) (hereinafter referred to as BCY7582);

Ac-(SEQ ГО NO: 81) (далее обозначаемой как BCY7584);Ac-(SEQ GO NO: 81) (hereinafter referred to as BCY7584);

Ac-(SEQ Ш NO: 82) (далее обозначаемой как BCY7585);Ac-(SEQ Ш NO: 82) (hereinafter referred to as BCY7585);

Ac-(SEQ Ш NO: 83) (далее обозначаемой как BCY7588);Ac-(SEQ Ш NO: 83) (hereinafter referred to as BCY7588);

Ac-(SEQ Ш NO: 84) (далее обозначаемой как BCY7589);Ac-(SEQ Ш NO: 84) (hereinafter referred to as BCY7589);

Ac-(SEQ Ш NO: 85) (далее обозначаемой как BCY7590);Ac-(SEQ Ш NO: 85) (hereinafter referred to as BCY7590);

Ac-(SEQ Ш NO: 86) (далее обозначаемой как BCY7591);Ac-(SEQ Ш NO: 86) (hereinafter referred to as BCY7591);

Ac-(SEQ Ш NO: 87) (далее обозначаемой как BCY7592);Ac-(SEQ ID NO: 87) (hereinafter referred to as BCY7592);

Ac-(SEQ Ш NO: 88) (далее обозначаемой как BCY7593);Ac-(SEQ Ш NO: 88) (hereinafter referred to as BCY7593);

Ac-(SEQ Ш NO: 89) (далее обозначаемой как BCY7594);Ac-(SEQ Ш NO: 89) (hereinafter referred to as BCY7594);

Ac-(SEQ Ш NO: 90) (далее обозначаемой как BCY7595);Ac-(SEQ Ш NO: 90) (hereinafter referred to as BCY7595);

Ac-(SEQ Ш NO: 91) (далее обозначаемой как BCY7596);Ac-(SEQ Ш NO: 91) (hereinafter referred to as BCY7596);

Ac-(SEQ Ш NO: 92) (далее обозначаемой как BCY7597);Ac-(SEQ Ш NO: 92) (hereinafter referred to as BCY7597);

Ac-(SEQ Ш NO: 93) (далее обозначаемой как BCY7598);Ac-(SEQ Ш NO: 93) (hereinafter referred to as BCY7598);

Ac-(SEQ Ш NO: 94) (далее обозначаемой как BCY7607);Ac-(SEQ Ш NO: 94) (hereinafter referred to as BCY7607);

Ac-(SEQ Ш NO: 95) (далее обозначаемой как BCY7608);Ac-(SEQ Ш NO: 95) (hereinafter referred to as BCY7608);

Ac-(SEQ Ш NO: 96) (далее обозначаемой как BCY7611);Ac-(SEQ Ш NO: 96) (hereinafter referred to as BCY7611);

Ac-(SEQ Ш NO: 97) (далее обозначаемой как BCY7612);Ac-(SEQ ID NO: 97) (hereinafter referred to as BCY7612);

Ac-(SEQ Ш NO: 98) (далее обозначаемой как BCY7613);Ac-(SEQ Ш NO: 98) (hereinafter referred to as BCY7613);

Ac-(SEQ Ш NO: 99) (далее обозначаемой как BCY7614);Ac-(SEQ Ш NO: 99) (hereinafter referred to as BCY7614);

Ac-(SEQ Ш NO: 100) (далее обозначаемой как BCY7615);Ac-(SEQ Ш NO: 100) (hereinafter referred to as BCY7615);

Ac-(SEQ Ш NO: 101) (далее обозначаемой как BCY7618);Ac-(SEQ Ш NO: 101) (hereinafter referred to as BCY7618);

Ac-(SEQ Ш NO: 102) (далее обозначаемой как BCY7620);Ac-(SEQ Ш NO: 102) (hereinafter referred to as BCY7620);

Ac-(SEQ Ш NO: 111) (далее обозначаемой как BCY7663);Ac-(SEQ Ш NO: 111) (hereinafter referred to as BCY7663);

Ac-(SEQ Ш NO: 112) (далее обозначаемой как BCY7664);Ac-(SEQ Ш NO: 112) (hereinafter referred to as BCY7664);

Ac-(SEQ ГО NO: 113) (далее обозначаемой как BCY7667);Ac-(SEQ GO NO: 113) (hereinafter referred to as BCY7667);

Ac-(SEQ Ш NO: 114) (далее обозначаемой как BCY7668);Ac-(SEQ ID NO: 114) (hereinafter referred to as BCY7668);

Ac-(SEQ Ш NO: 115) (далее обозначаемой как BCY7765);Ac-(SEQ Ш NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7765);

(SEQ Ш NO: 115) (далее обозначаемой как BCY7793);(SEQ Ш NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7793);

(MeO-dPEG12)(SEQ ID NO: 115) (далее обозначаемой как BCY8087);(MeO-dPEG12)(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8087);

(карбоксифлуоресцеин)(8Е0 ID NO: 115) (далее обозначаемой как BCY8208);(carboxyfluorescein)(8E0 ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8208);

(PEG₃)(PEG₃)(SEQ ГО NO: 115) (далее обозначаемой как BCY7815);(PEG ₃ )(PEG ₃ )(SEQ GO NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7815);

(MeO-dPEG12)(PEG3)(PEG3)(SEQ ID NO: 115) (далее обозначаемой как BCY8094);(MeO-dPEG12)(PEG3)(PEG3)(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8094);

Ac-DDD-(SEQ ГО NO: 115) (далее обозначаемой как BCY8028);Ac-DDD-(SEQ GO NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8028);

Ac-[dD][dD][dD]-(SEQ ГО NO: 115) (далее обозначаемой как BCY8029);Ac-[dD][dD][dD]-(SEQ GO NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8029);

[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 115) (далее обозначаемой как BCY7814);[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7814);

Ac-(SEQ ГО NO: 116) (далее обозначаемой как BCY7816);Ac-(SEQ GO NO: 116) (hereinafter referred to as BCY7816);

Ac-(SEQ ГО NO: 116) (MeO-dPEG12), связанной с D-Lys6 (далее обозначаемой как BCY8084);Ac-(SEQ GO NO: 116) (MeO-dPEG12) bound to D-Lys6 (hereinafter referred to as BCY8084);

- 16 045862- 16 045862

Ac-(SEQ Ш NO: 117) (далее обозначаемой как BCY7817);Ac-(SEQ ID NO: 117) (hereinafter referred to as BCY7817);

Ac-(SEQ Ш NO: 118) (далее обозначаемой как BCY7818;Ac-(SEQ Ш NO: 118) (hereinafter referred to as BCY7818;

Ac-(SEQ ID NO: 118) (MeO-dPEG12), связанной c Pro(4NH)l (далее обозначаемой как BCY8086);Ac-(SEQ ID NO: 118) (MeO-dPEG12) bound to Pro(4NH)l (hereinafter referred to as BCY8086);

Ac-(SEQ Ш NO: 119) (далее обозначаемой как BCY7819;Ac-(SEQ Ш NO: 119) (hereinafter referred to as BCY7819;

Ac-(SEQ ID NO: 119) (MeO-dPEG12), связанной c Lys5 (далее обозначаемой как BCY8088);Ac-(SEQ ID NO: 119) (MeO-dPEG12) linked to Lys5 (hereinafter referred to as BCY8088);

Ac-(SEQ Ш NO: 120) (далее обозначаемой как BCY7820;Ac-(SEQ Ш NO: 120) (hereinafter referred to as BCY7820;

Ac-(SEQ Ш NO: 120) (MeO-dPEG12), связанной с D-Lys3 (далее обозначаемой как BCY8089);Ac-(SEQ Ш NO: 120) (MeO-dPEG12) bound to D-Lys3 (hereinafter referred to as BCY8089);

Ac-(SEQ Ш NO: 121) (далее обозначаемой как BCY7821);Ac-(SEQ Ш NO: 121) (hereinafter referred to as BCY7821);

Ac-(SEQ ID NO: 121) (MeO-dPEG12), связанной c Lys4 (далее обозначаемой как BCY8090);Ac-(SEQ ID NO: 121) (MeO-dPEG12) linked to Lys4 (hereinafter referred to as BCY8090);

Ac-(SEQ Ш NO: 122) (далее обозначаемой как BCY7822);Ac-(SEQ Ш NO: 122) (hereinafter referred to as BCY7822);

Ac-(SEQ ID NO: 122) (MeO-dPEG12), связанной c Lys6 (далее обозначаемой как BCY8091);Ac-(SEQ ID NO: 122) (MeO-dPEG12) linked to Lys6 (hereinafter referred to as BCY8091);

Ac-(SEQ Ш NO: 123) (далее обозначаемой как BCY7876);Ac-(SEQ ID NO: 123) (hereinafter referred to as BCY7876);

Ac-(SEQ Ш NO: 124) (далее обозначаемой как BCY7877);Ac-(SEQ ID NO: 124) (hereinafter referred to as BCY7877);

Ac-(SEQ Ш NO: 125) (далее обозначаемой как BCY7879);Ac-(SEQ Ш NO: 125) (hereinafter referred to as BCY7879);

Ac-(SEQ Ш NO: 126) (далее обозначаемой как BCY7881);Ac-(SEQ ID NO: 126) (hereinafter referred to as BCY7881);

Ac-(SEQ Ш NO: 127) (далее обозначаемой как BCY7883);Ac-(SEQ ID NO: 127) (hereinafter referred to as BCY7883);

Ac-(SEQ Ш NO: 128) (далее обозначаемой как BCY7884);Ac-(SEQ ID NO: 128) (hereinafter referred to as BCY7884);

Ac-(SEQ Ш NO: 129) (далее обозначаемой как BCY7886);Ac-(SEQ ID NO: 129) (hereinafter referred to as BCY7886);

Ac-(SEQ Ш NO: 130) (далее обозначаемой как BCY7887);Ac-(SEQ Ш NO: 130) (hereinafter referred to as BCY7887);

Ac-(SEQ Ш NO: 131) (далее обозначаемой как BCY7889);Ac-(SEQ Ш NO: 131) (hereinafter referred to as BCY7889);

Ac-(SEQ Ш NO: 132) (далее обозначаемой как BCY7890);Ac-(SEQ Ш NO: 132) (hereinafter referred to as BCY7890);

Ac-(SEQ Ш NO: 133) (далее обозначаемой как BCY7891);Ac-(SEQ ID NO: 133) (hereinafter referred to as BCY7891);

Ac-(SEQ Ш NO: 134) (далее обозначаемой как BCY7892);Ac-(SEQ ID NO: 134) (hereinafter referred to as BCY7892);

Ac-(SEQ Ш NO: 135) (далее обозначаемой как BCY7894);Ac-(SEQ Ш NO: 135) (hereinafter referred to as BCY7894);

Ac-(SEQ Ш NO: 136) (далее обозначаемой как BCY7895);Ac-(SEQ ID NO: 136) (hereinafter referred to as BCY7895);

Ac-(SEQ Ш NO: 137) (далее обозначаемой как BCY7896);Ac-(SEQ ID NO: 137) (hereinafter referred to as BCY7896);

Ac-(SEQ Ш NO: 138) (далее обозначаемой как BCY7897);Ac-(SEQ ID NO: 138) (hereinafter referred to as BCY7897);

Ac-(SEQ Ш NO: 139) (далее обозначаемой как BCY7902);Ac-(SEQ ID NO: 139) (hereinafter referred to as BCY7902);

Ac-(SEQ Ш NO: 140) (далее обозначаемой как BCY7903);Ac-(SEQ Ш NO: 140) (hereinafter referred to as BCY7903);

Ac-(SEQ Ш NO: 141) (далее обозначаемой как BCY7904);Ac-(SEQ Ш NO: 141) (hereinafter referred to as BCY7904);

Ac-(SEQ Ш NO: 142) (далее обозначаемой как BCY7906);Ac-(SEQ ID NO: 142) (hereinafter referred to as BCY7906);

Ac-(SEQ Ш NO: 143) (далее обозначаемой как BCY7907);Ac-(SEQ ID NO: 143) (hereinafter referred to as BCY7907);

Ac-(SEQ Ш NO: 144) (далее обозначаемой как BCY7908);Ac-(SEQ ID NO: 144) (hereinafter referred to as BCY7908);

Ac-(SEQ Ш NO: 145) (далее обозначаемой как BCY7911);Ac-(SEQ Ш NO: 145) (hereinafter referred to as BCY7911);

Ac-(SEQ Ш NO: 146) (далее обозначаемой как BCY7912);Ac-(SEQ ID NO: 146) (hereinafter referred to as BCY7912);

- 17 045862- 17 045862

Ac-(SEQ Ш NO: 147) (далее обозначаемой как BCY7913);Ac-(SEQ ID NO: 147) (hereinafter referred to as BCY7913);

Ac-(SEQ Ш NO: 148) (далее обозначаемой как BCY7914);Ac-(SEQ ID NO: 148) (hereinafter referred to as BCY7914);

Ac-(SEQ Ш NO: 149) (далее обозначаемой как BCY7915);Ac-(SEQ ID NO: 149) (hereinafter referred to as BCY7915);

Ac-(SEQ Ш NO: 150) (далее обозначаемой как BCY7916);Ac-(SEQ Ш NO: 150) (hereinafter referred to as BCY7916);

Ac-(SEQ Ш NO: 151) (далее обозначаемой как BCY7973);Ac-(SEQ Ш NO: 151) (hereinafter referred to as BCY7973);

Ac-(SEQ Ш NO: 152) (далее обозначаемой как BCY7979);Ac-(SEQ ID NO: 152) (hereinafter referred to as BCY7979);

Ac-(SEQ Ш NO: 155) (далее обозначаемой как BCY8030);Ac-(SEQ Ш NO: 155) (hereinafter referred to as BCY8030);

Ac-(SEQ Ш NO: 156) (далее обозначаемой как BCY8031);Ac-(SEQ Ш NO: 156) (hereinafter referred to as BCY8031);

Ac-(SEQ Ш NO: 157) (далее обозначаемой как BCY8032);Ac-(SEQ Ш NO: 157) (hereinafter referred to as BCY8032);

Ac-(SEQ Ш NO: 158) (далее обозначаемой как BCY8036);Ac-(SEQ Ш NO: 158) (hereinafter referred to as BCY8036);

Ac-(SEQ Ш NO: 159) (далее обозначаемой как BCY8037);Ac-(SEQ ID NO: 159) (hereinafter referred to as BCY8037);

Ac-(SEQ Ш NO: 160) (далее обозначаемой как BCY8038);Ac-(SEQ Ш NO: 160) (hereinafter referred to as BCY8038);

Ac-(SEQ Ш NO: 161) (далее обозначаемой как BCY8039);Ac-(SEQ Ш NO: 161) (hereinafter referred to as BCY8039);

Ac-(SEQ Ш NO: 162) (далее обозначаемой как BCY8040);Ac-(SEQ Ш NO: 162) (hereinafter referred to as BCY8040);

Ac-(SEQ Ш NO: 163) (далее обозначаемой как BCY8041);Ac-(SEQ Ш NO: 163) (hereinafter referred to as BCY8041);

Ac-(SEQ Ш NO: 164) (далее обозначаемой как BCY8042);Ac-(SEQ Ш NO: 164) (hereinafter referred to as BCY8042);

Ac-(SEQ Ш NO: 165) (далее обозначаемой как BCY8042);Ac-(SEQ Ш NO: 165) (hereinafter referred to as BCY8042);

Ac-(SEQ Ш NO: 166) (далее обозначаемой как BCY8085);Ac-(SEQ Ш NO: 166) (hereinafter referred to as BCY8085);

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ Ш NO: 167) (далее обозначаемой какВСУ8120);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ Ш NO: 167) (hereinafter referred to as VSU8120);

Ac-(SEQ Ш NO: 167) (далее обозначаемой как BCY8124);Ac-(SEQ Ш NO: 167) (hereinafter referred to as BCY8124);

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ Ш NO: 168) (далее обозначаемой какВСУ8121);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ Ш NO: 168) (hereinafter referred to as VSU8121);

Ac-(SEQ Ш NO: 168) (далее обозначаемой как BCY8125);Ac-(SEQ Ш NO: 168) (hereinafter referred to as BCY8125);

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ Ш NO: 169) (далее обозначаемой какВСУ8122);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ Ш NO: 169) (hereinafter referred to as VSU8122);

Ac-(SEQ Ш NO: 169) (далее обозначаемой как BCY8126);Ac-(SEQ Ш NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8126);

(SEQ Ш NO: 169) (далее обозначаемой как BCY8116);(SEQ Ш NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8116);

Флуоресцеин-(8Е(3 Ш NO: 169) (далее обозначаемой как BCY8205);Fluorescein-(8E(3 Ш NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8205);

[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 169) (далее обозначаемой как BCY8234);[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8234);

[PYA][B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 169) (далее обозначаемой как BCY8846);[PYA][B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8846);

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ Ш NO: 170) (далее обозначаемой какВСУ8123);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ Ш NO: 170) (hereinafter referred to as VSU8123);

Ac-(SEQ Ш NO: 170) (далее обозначаемой как BCY8127);Ac-(SEQ Ш NO: 170) (hereinafter referred to as BCY8127);

(SEQ Ш NO: 170) (далее обозначаемой как BCY8206);(SEQ Ш NO: 170) (hereinafter referred to as BCY8206);

Ac-(SEQ Ш NO: 171) (далее обозначаемой как BCY8128);Ac-(SEQ Ш NO: 171) (hereinafter referred to as BCY8128);

(SEQ Ш NO: 171) (далее обозначаемой как BCY8207);(SEQ Ш NO: 171) (hereinafter referred to as BCY8207);

[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 171) (далее обозначаемой как BCY8232);[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 171) (hereinafter referred to as BCY8232);

Ac-(SEQ Ш NO: 172) (далее обозначаемой как BCY8129);Ac-(SEQ Ш NO: 172) (hereinafter referred to as BCY8129);

Ac-(SEQ Ш NO: 173) (далее обозначаемой как BCY8153);Ac-(SEQ Ш NO: 173) (hereinafter referred to as BCY8153);

Ac-(SEQ Ш NO: 174) (далее обозначаемой как BCY8154);Ac-(SEQ Ш NO: 174) (hereinafter referred to as BCY8154);

Ac-(SEQ Ш NO: 175) (далее обозначаемой как BCY8157);Ac-(SEQ Ш NO: 175) (hereinafter referred to as BCY8157);

Ac-(SEQ Ш NO: 176) (далее обозначаемой как BCY8158);Ac-(SEQ ID NO: 176) (hereinafter referred to as BCY8158);

Ac-(SEQ Ш NO: 177) (далее обозначаемой как BCY8161);Ac-(SEQ ID NO: 177) (hereinafter referred to as BCY8161);

- 18 045862- 18 045862

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 177) (далее обозначаемой как BCY8278);Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 177) (hereinafter referred to as BCY8278);

Ac-(SEQ Ш NO: 178) (далее обозначаемой как BCY8162);Ac-(SEQ ID NO: 178) (hereinafter referred to as BCY8162);

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 178) (далее обозначаемой как BCY8277);Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 178) (hereinafter referred to as BCY8277);

Ac-(SEQ Ш NO: 179) (далее обозначаемой как BCY8163);Ac-(SEQ ID NO: 179) (hereinafter referred to as BCY8163);

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 179) (далее обозначаемой как BCY8276);Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 179) (hereinafter referred to as BCY8276);

[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 179) (далее обозначаемой как BCY8269);[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 179) (hereinafter referred to as BCY8269);

Ac-(SEQ Ш NO: 180) (далее обозначаемой как BCY8174);Ac-(SEQ Ш NO: 180) (hereinafter referred to as BCY8174);

Ac-(SEQ Ш NO: 181) (далее обозначаемой как BCY8175);Ac-(SEQ Ш NO: 181) (hereinafter referred to as BCY8175);

Ac-(SEQ Ш NO: 182) (далее обозначаемой как BCY8176);Ac-(SEQ Ш NO: 182) (hereinafter referred to as BCY8176);

Ac-(SEQ Ш NO: 183) (далее обозначаемой как BCY8177);Ac-(SEQ ID NO: 183) (hereinafter referred to as BCY8177);

Ac-(SEQ Ш NO: 184) (далее обозначаемой как BCY8178);Ac-(SEQ Ш NO: 184) (hereinafter referred to as BCY8178);

Ac-(SEQ Ш NO: 185) (далее обозначаемой как BCY8180);Ac-(SEQ Ш NO: 185) (hereinafter referred to as BCY8180);

Ac-(SEQ Ш NO: 186) (далее обозначаемой как BCY8181);Ac-(SEQ Ш NO: 186) (hereinafter referred to as BCY8181);

Ac-(SEQ Ш NO: 187) (далее обозначаемой как BCY8182);Ac-(SEQ ID NO: 187) (hereinafter referred to as BCY8182);

Ac-(SEQ Ш NO: 188) (далее обозначаемой как BCY8183);Ac-(SEQ Ш NO: 188) (hereinafter referred to as BCY8183);

Ac-(SEQ Ш NO: 189) (далее обозначаемой как BCY8184);Ac-(SEQ ID NO: 189) (hereinafter referred to as BCY8184);

[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 189) (далее обозначаемой как BCY8235);[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 189) (hereinafter referred to as BCY8235);

Ac-(SEQ Ш NO: 190) (далее обозначаемой как BCY8185);Ac-(SEQ Ш NO: 190) (hereinafter referred to as BCY8185);

Ac-(SEQ Ш NO: 191) (далее обозначаемой как BCY8186);Ac-(SEQ Ш NO: 191) (hereinafter referred to as BCY8186);

Ac-(SEQ Ш NO: 192) (далее обозначаемой как BCY8187);Ac-(SEQ Ш NO: 192) (hereinafter referred to as BCY8187);

Ac-(SEQ Ш NO: 193) (далее обозначаемой как BCY8188);Ac-(SEQ ID NO: 193) (hereinafter referred to as BCY8188);

Ac-(SEQ Ш NO: 194) (далее обозначаемой как BCY8189);Ac-(SEQ ID NO: 194) (hereinafter referred to as BCY8189);

Ac-(SEQ Ш NO: 195) (далее обозначаемой как BCY8191);Ac-(SEQ Ш NO: 195) (hereinafter referred to as BCY8191);

Ac-(SEQ Ш NO: 196) (далее обозначаемой как BCY8192);Ac-(SEQ ID NO: 196) (hereinafter referred to as BCY8192);

Ac-(SEQ Ш NO: 197) (далее обозначаемой как BCY8193);Ac-(SEQ ID NO: 197) (hereinafter referred to as BCY8193);

Ac-(SEQ Ш NO: 198) (далее обозначаемой как BCY8194);Ac-(SEQ Ш NO: 198) (hereinafter referred to as BCY8194);

Ac-(SEQ Ш NO: 199) (далее обозначаемой как BCY8211);Ac-(SEQ Ш NO: 199) (hereinafter referred to as BCY8211);

Ac-(SEQ Ш NO: 200) (далее обозначаемой как BCY8212);Ac-(SEQ Ш NO: 200) (hereinafter referred to as BCY8212);

Ac-(SEQ Ш NO: 201) (далее обозначаемой как BCY8213);Ac-(SEQ Ш NO: 201) (hereinafter referred to as BCY8213);

Ac-(SEQ Ш NO: 202) (далее обозначаемой как BCY8214);Ac-(SEQ Ш NO: 202) (hereinafter referred to as BCY8214);

[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 202) (далее обозначаемой как BCY8231);[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 202) (hereinafter referred to as BCY8231);

Ac-(SEQ Ш NO: 203) (далее обозначаемой как BCY8215);Ac-(SEQ Ш NO: 203) (hereinafter referred to as BCY8215);

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 208) (далее обозначаемой как BCY8279);Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 208) (hereinafter referred to as BCY8279);

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 209) (далее обозначаемой как BCY8280);Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 209) (hereinafter referred to as BCY8280);

[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 209) (далее обозначаемой как BCY8273);[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 209) (hereinafter referred to as BCY8273);

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 210) (далее обозначаемой как BCY8281);Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 210) (hereinafter referred to as BCY8281);

Ac-(SEQ Ш NO: 211) (далее обозначаемой как BCY8831);Ac-(SEQ Ш NO: 211) (hereinafter referred to as BCY8831);

[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 212) (далее обозначаемой как BCY8238);[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 212) (hereinafter referred to as BCY8238);

(SEQ Ш NO: 215) (далее обозначаемой как BCY11415);(SEQ Ш NO: 215) (hereinafter referred to as BCY11415);

[PYA][B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 215) (далее обозначаемой как BCY11942); и (SEQ Ш NO: 216) (далее обозначаемой как BCY11414).[PYA][B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 215) (hereinafter referred to as BCY11942); and (SEQ ID NO: 216) (hereinafter referred to as BCY11414).

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ Ш NO: 169) (далее обозначаемой KaKBCY8122);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ Ш NO: 169) (hereinafter referred to as KaKBCY8122);

Ac-(SEQ ID NO: 169) (далее обозначаемой как BCY8126);Ac-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8126);

(SEQ ID NO: 169) (далее обозначаемой как BCY8116);(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8116);

Флуоресцеин-(8ЕР Ш NO: 169) (далее обозначаемой как BCY8205); иFluorescein-(8EP Ш NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8205); And

[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 169) (далее обозначаемой как BCY8234).[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8234).

В одном варианте осуществления пептидный лиганд по изобретению представляет собой пептидный лиганд, отличный от аминокислотной последовательностиIn one embodiment, the peptide ligand of the invention is a peptide ligand other than the amino acid sequence

- 19 045862- 19 045862

[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 1) (далее обозначаемой как BCY8234);[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 1) (hereinafter referred to as BCY8234);

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ ID NO: 1) (далее обозначаемой какВСУ8122);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 1) (hereinafter referred to as VSU8122);

Ac-(SEQ ID NO: 1) (далее обозначаемой как BCY8126);Ac-(SEQ ID NO: 1) (hereinafter referred to as BCY8126);

(SEQ ID NO: 1) (далее обозначаемой как BCY8116);(SEQ ID NO: 1) (hereinafter referred to as BCY8116);

Флуоресцеин-(8Е(3 ID NO: 1) (далее обозначаемой как BCY8205); иFluorescein-(8E(3 ID NO: 1) (hereinafter referred to as BCY8205); and

[PYA][B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 1) (далее обозначаемой как BCY8846).[PYA][B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 1) (hereinafter referred to as BCY8846).

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд C_i-X₆-X₇-X₈-C_ii-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄Х₁₅-Х₁₆-Х₁₇-С_ш (SEQ ID NO: 41) содержит аминокислотную последовательность, выбранную из [B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 169) (далее обозначаемой как BCY8234).In the following embodiment, the peptide ligand is C _i -X ₆ -X ₇ -X ₈ -C _ii -X ₉ -X ₁₀ -X ₁₁ -X ₁₂ -X ₁₃ -X ₁₄ X ₁₅ -X ₁₆ -X ₁₇ -C _w ( SEQ ID NO: 41) contains an amino acid sequence selected from [B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8234).

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд СгХ^Х^Х^Сц-Х^Х^-Хп-Х^-Хо-ХнХ1₅-Х1₆-Х1₇-Сш (SEQ ID NO: 41) содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn a further embodiment, the peptide ligand CrX^X^X^Sc-X^X^-Xn-X^-Ho-XnX1 ₅ -X1 ₆ -X1 ₇ -Csh (SEQ ID NO: 41) contains an amino acid sequence selected from

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ Ш NO: 77) (далее обозначаемой какВСУ7559);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ Ш NO: 77) (hereinafter referred to as VSU7559);

Ac-(SEQ ГО NO: 196) (далее обозначаемой как BCY8192);Ac-(SEQ GO NO: 196) (hereinafter referred to as BCY8192);

Ac-(SEQ ГО NO: 197) (далее обозначаемой как BCY8193);Ac-(SEQ GO NO: 197) (hereinafter referred to as BCY8193);

Ac-(SEQ ГО NO: 198) (далее обозначаемой как BCY8194);Ac-(SEQ GO NO: 198) (hereinafter referred to as BCY8194);

Ac-(SEQ ГО NO: 199) (далее обозначаемой как BCY8211);Ac-(SEQ GO NO: 199) (hereinafter referred to as BCY8211);

Ac-(SEQ ГО NO: 200) (далее обозначаемой как BCY8212);Ac-(SEQ GO NO: 200) (hereinafter referred to as BCY8212);

Ac-(SEQ ГО NO: 201) (далее обозначаемой как BCY8213);Ac-(SEQ GO NO: 201) (hereinafter referred to as BCY8213);

Ac-(SEQ ГО NO: 202) (далее обозначаемой как BCY8214);Ac-(SEQ GO NO: 202) (hereinafter referred to as BCY8214);

Ac-(SEQ ГО NO: 203) (далее обозначаемой как BCY8215);Ac-(SEQ GO NO: 203) (hereinafter referred to as BCY8215);

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ ГО NO: 179) (далее обозначаемой как BCY8276);Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ GO NO: 179) (hereinafter referred to as BCY8276);

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ ГО NO: 178) (далее обозначаемой как BCY8277);Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ GO NO: 178) (hereinafter referred to as BCY8277);

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ ГО NO: 177) (далее обозначаемой как BCY8278);Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ GO NO: 177) (hereinafter referred to as BCY8278);

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ ГО NO: 208) (далее обозначаемой как BCY8279);Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ GO NO: 208) (hereinafter referred to as BCY8279);

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ ГО NO: 209) (далее обозначаемой как BCY8280); иAc-[B-Ala][SarlO]-(SEQ GO NO: 209) (hereinafter referred to as BCY8280); And

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ ГО NO: 210) (далее обозначаемой как BCY8281).Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ GO NO: 210) (hereinafter referred to as BCY8281).

В настоящем описании в табл. 3 приводятся данные, которые демонстрируют, что пептидные лиганды согласно этому варианту осуществлению демонстрировали хорошие уровни (<100 нМ) связывания с нектином-4 человека, о чем свидетельствуют данные связывания, полученные с использованием SPR.In the present description in table. 3 provides data that demonstrates that the peptide ligands of this embodiment exhibited good levels (<100 nM) of binding to human nectin-4 as evidenced by binding data obtained using SPR.

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд СгХ^Х^Хз-Сй-Х^Х^-Хп-Хп-Хв-ХмIn the following embodiment, the peptide ligand CrX^X^Xs-Cy-X^X^-Xn-Xn-Xb-Xm

- 20 045862- 20 045862

X₁₅-X₁₆-X₁₇-C_iii (SEQ ID NO: 41) содержит аминокислотную последовательность, выбранную изX ₁₅ -X ₁₆ -X ₁₇ -C _iii (SEQ ID NO: 41) contains an amino acid sequence selected from

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 209) (далее обозначаемой как BCY8280); и Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 210) (далее обозначаемой как BCY8281).Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 209) (hereinafter referred to as BCY8280); and Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 210) (hereinafter referred to as BCY8281).

В настоящем описании в табл. 3 приводятся данные, которые демонстрируют, что пептидные лиганды согласно этому варианту осуществлению демонстрировали хорошие уровни (<10 нМ) связывания с нектином-4 человека, о чем свидетельствуют данные связывания, полученные с использованием SPR.In the present description in table. 3 provides data that demonstrates that the peptide ligands of this embodiment exhibited good levels (<10 nM) of binding to human nectin-4 as evidenced by binding data obtained using SPR.

В одном варианте осуществления пептидный лиганд содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn one embodiment, the peptide ligand contains an amino acid sequence selected from

- 21 045862- 21 045862

- 22 045862- 22 045862

Ac-(SEQ ID NO: 16) (далее обозначаемой как 80-09-02-N051 или BCY7662);Ac-(SEQ ID NO: 16) (hereinafter referred to as 80-09-02-N051 or BCY7662);

A-(SEQ Ш NO: l)-[dA]NK (далее обозначаемой как BCY7367);A-(SEQ Ш NO: l)-[dA]NK (hereinafter referred to as BCY7367);

A-(SEQ Ш NO: 1)-ТАК (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N017 или BCY7347);A-(SEQ Ш NO: 1)-SO (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N017 or BCY7347);

A-(SEQ ID NO: l)-T[dA]K (далее обозначаемой как BCY7368);A-(SEQ ID NO: l)-T[dA]K (hereinafter referred to as BCY7368);

A-(SEQ Ш NO: 1)-TNA (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N018 или BCY7348);A-(SEQ Ш NO: 1)-TNA (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N018 or BCY7348);

A-(SEQ Ш NO: l)-TN[dA] (далее обозначаемой как BCY7369);A-(SEQ Ш NO: l)-TN[dA] (hereinafter referred to as BCY7369);

A-(SEQ Ш NO: 6)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N020 или BCY7354);A-(SEQ Ш NO: 6)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N020 or BCY7354);

A-(SEQ ID NO: 30)-TNK (далее обозначаемой как 80-09-02-T01-N042 или BCY7424);A-(SEQ ID NO: 30)-TNK (hereinafter referred to as 80-09-02-T01-N042 or BCY7424);

A-(SEQ Ш NO: 31)-А (далее обозначаемой как 80-10-00 или BCY488);A-(SEQ Ш NO: 31)-А (hereinafter referred to as 80-10-00 or BCY488);

A-(SEQ Ш NO: 32)-А (далее обозначаемой как BCY432);A-(SEQ Ш NO: 32)-A (hereinafter referred to as BCY432);

DDW-(SEQ Ш NO: 32)-А (далее обозначаемой как 80-10-11-Т01 или BCY433);DDW-(SEQ Ш NO: 32)-А (hereinafter referred to as 80-10-11-T01 or BCY433);

- 23 045862- 23 045862

VDW-(SEQ Ш NO: 33)-A (далее обозначаемой как 80-10-12-Т01 или BCY462);VDW-(SEQ Ш NO: 33)-A (hereinafter referred to as 80-10-12-T01 or BCY462);

QKW-(SEQ Ш NO: 34)-А (далее обозначаемой как 80-10-13-Т01 или BCY3400);QKW-(SEQ Ш NO: 34)-А (hereinafter referred to as 80-10-13-T01 or BCY3400);

Q[HArg]W-(SEQ ID NO: 34)-А (далее обозначаемой как BCY7278);Q[HArg]W-(SEQ ID NO: 34)-A (hereinafter referred to as BCY7278);

Q[K(Ac)]W-(SEQ Ш NO: 34)-А (далее обозначаемой как BCY7280);Q[K(Ac)]W-(SEQ Ш NO: 34)-A (hereinafter referred to as BCY7280);

Q[dK]W-(SEQ ID NO: 34)-А (далее обозначаемой как BCY7426);Q[dK]W-(SEQ ID NO: 34)-A (hereinafter referred to as BCY7426);

Ac-QAW-(SEQ Ш NO: 34) (далее обозначаемой как BCY7623);Ac-QAW-(SEQ Ш NO: 34) (hereinafter referred to as BCY7623);

Ac-QK[2Nal]-(SEQ ID NO: 34) (далее обозначаемой как BCY7997);Ac-QK[2Nal]-(SEQ ID NO: 34) (hereinafter referred to as BCY7997);

Ac-(SEQ Ш NO: 34) (далее обозначаемой как BCY8044);Ac-(SEQ Ш NO: 34) (hereinafter referred to as BCY8044);

A-(SEQ Ш NO: 43)-А (далее обозначаемой как BCY430);A-(SEQ Ш NO: 43)-A (hereinafter referred to as BCY430);

Ac-QKW-(SEQ ID NO: 104) (далее обозначаемой как BCY7627);Ac-QKW-(SEQ ID NO: 104) (hereinafter referred to as BCY7627);

Ac-QKW-(SEQ ID NO: 110) (далее обозначаемой как BCY7643);Ac-QKW-(SEQ ID NO: 110) (hereinafter referred to as BCY7643);

Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 153) (далее обозначаемой как BCY7998);Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 153) (hereinafter referred to as BCY7998);

Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 154) (далее обозначаемой как BCY8000);Ac-QKW-(SEQ Ш NO: 154) (hereinafter referred to as BCY8000);

A-(SEQ Ш NO: 36)-А (далее обозначаемой как 80-11-01 или BCY472);A-(SEQ Ш NO: 36)-А (hereinafter referred to as 80-11-01 or BCY472);

A-(SEQ Ш NO: 37)-SRF (далее обозначаемой как 80-11-08-Т01 или BCY3406);A-(SEQ Ш NO: 37)-SRF (hereinafter referred to as 80-11-08-T01 or BCY3406);

Ac-(SEQ Ш NO: 37)-SRF (далее обозначаемой KaKBCY7393);Ac-(SEQ ID NO: 37)-SRF (hereinafter referred to as KaKBCY7393);

DDA-(SEQ ID NO: 45)-A (далее обозначаемой как BCY3386);DDA-(SEQ ID NO: 45)-A (hereinafter referred to as BCY3386);

- 24 045862- 24 045862

A-(SEQ ID NO: 69)-TNK (далее обозначаемой как BCY7360);A-(SEQ ID NO: 69)-TNK (hereinafter referred to as BCY7360);

A-(SEQ ID NO: 70)-TNK (далее обозначаемой как BCY7361);A-(SEQ ID NO: 70)-TNK (hereinafter referred to as BCY7361);

A-(SEQ ID NO: 71)-TNK (далее обозначаемой как BCY7365);A-(SEQ ID NO: 71)-TNK (hereinafter referred to as BCY7365);

A-(SEQ ID NO: 72)-TNK (далее обозначаемой как BCY7370);A-(SEQ ID NO: 72)-TNK (hereinafter referred to as BCY7370);

Ac-(SEQ ID NO: 73) (далее обозначаемой как BCY7535);Ac-(SEQ ID NO: 73) (hereinafter referred to as BCY7535);

Ac-(SEQ ID NO: 74) (далее обозначаемой как BCY7536);Ac-(SEQ ID NO: 74) (hereinafter referred to as BCY7536);

Ac-(SEQ ID NO: 75) (далее обозначаемой как BCY7541);Ac-(SEQ ID NO: 75) (hereinafter referred to as BCY7541);

[B-Ala][Sar₅]-(SEQ ID NO: 76) (далее обозначаемой как BCY7556);[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 76) (hereinafter referred to as BCY7556);

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ ID NO: 76) (далее обозначаемой какВСУ7558);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 76) (hereinafter referred to as VSU7558);

[B-Ala][Sar₅]-(SEQ ID NO: 77) (далее обозначаемой как BCY7557);[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 77) (hereinafter referred to as BCY7557);

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ ГО NO: 77) (далее обозначаемой какВСУ7559);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ GO NO: 77) (hereinafter referred to as VSU7559);

Ac-(SEQ ГО NO: 78) (далее обозначаемой как BCY7580);Ac-(SEQ GO NO: 78) (hereinafter referred to as BCY7580);

Ac-(SEQ ID NO: 79) (далее обозначаемой как BCY7581);Ac-(SEQ ID NO: 79) (hereinafter referred to as BCY7581);

Ac-(SEQ ГО NO: 80) (далее обозначаемой как BCY7582);Ac-(SEQ GO NO: 80) (hereinafter referred to as BCY7582);

Ac-(SEQ ID NO: 82) (далее обозначаемой как BCY7585);Ac-(SEQ ID NO: 82) (hereinafter referred to as BCY7585);

Ac-(SEQ ГО NO: 83) (далее обозначаемой как BCY7588);Ac-(SEQ GO NO: 83) (hereinafter referred to as BCY7588);

Ac-(SEQ ГО NO: 84) (далее обозначаемой как BCY7589);Ac-(SEQ GO NO: 84) (hereinafter referred to as BCY7589);

Ac-(SEQ ID NO: 85) (далее обозначаемой как BCY7590);Ac-(SEQ ID NO: 85) (hereinafter referred to as BCY7590);

Ac-(SEQ ГО NO: 86) (далее обозначаемой как BCY7591);Ac-(SEQ GO NO: 86) (hereinafter referred to as BCY7591);

- 25 045862- 25 045862

Ac-(SEQ ГО NO: 91) (далее обозначаемой как BCY7596);Ac-(SEQ GO NO: 91) (hereinafter referred to as BCY7596);

Ac-(SEQ ГО NO: 92) (далее обозначаемой как BCY7597);Ac-(SEQ GO NO: 92) (hereinafter referred to as BCY7597);

Ac-(SEQ ГО NO: 93) (далее обозначаемой как BCY7598);Ac-(SEQ GO NO: 93) (hereinafter referred to as BCY7598);

Ac-(SEQ ГО NO: 94) (далее обозначаемой как BCY7607);Ac-(SEQ GO NO: 94) (hereinafter referred to as BCY7607);

Ac-(SEQ ГО NO: 95) (далее обозначаемой как BCY7608);Ac-(SEQ GO NO: 95) (hereinafter referred to as BCY7608);

Ac-(SEQ ГО NO: 96) (далее обозначаемой как BCY7611);Ac-(SEQ GO NO: 96) (hereinafter referred to as BCY7611);

Ac-(SEQ ГО NO: 97) (далее обозначаемой как BCY7612);Ac-(SEQ GO NO: 97) (hereinafter referred to as BCY7612);

Ac-(SEQ ГО NO: 98) (далее обозначаемой как BCY7613);Ac-(SEQ GO NO: 98) (hereinafter referred to as BCY7613);

Ac-(SEQ ГО NO: 99) (далее обозначаемой как BCY7614);Ac-(SEQ GO NO: 99) (hereinafter referred to as BCY7614);

Ac-(SEQ ГО NO: 100) (далее обозначаемой как BCY7615);Ac-(SEQ GO NO: 100) (hereinafter referred to as BCY7615);

Ac-(SEQ ГО NO: 101) (далее обозначаемой как BCY7618);Ac-(SEQ GO NO: 101) (hereinafter referred to as BCY7618);

Ac-(SEQ ГО NO: 102) (далее обозначаемой как BCY7620);Ac-(SEQ GO NO: 102) (hereinafter referred to as BCY7620);

Ac-(SEQ ГО NO: 111) (далее обозначаемой как BCY7663);Ac-(SEQ GO NO: 111) (hereinafter referred to as BCY7663);

Ac-(SEQ ГО NO: 112) (далее обозначаемой как BCY7664);Ac-(SEQ GO NO: 112) (hereinafter referred to as BCY7664);

Ac-(SEQ ГО NO: 114) (далее обозначаемой как BCY7668);Ac-(SEQ GO NO: 114) (hereinafter referred to as BCY7668);

Ac-(SEQ ГО NO: 115) (далее обозначаемой как BCY7765);Ac-(SEQ GO NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7765);

(SEQ ГО NO: 115) (далее обозначаемой как BCY7793);(SEQ GO NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7793);

(Карбоксифлуоресцеин)(8Е(3 ГО NO: 115) (далее обозначаемой как BCY8208);(Carboxyfluorescein)(8E(3 GO NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8208);

Ac-(SEQ ГО NO: 117) (далее обозначаемой как BCY7817);Ac-(SEQ GO NO: 117) (hereinafter referred to as BCY7817);

Ac-(SEQ ГО NO: 118) (далее обозначаемой как BCY7818;Ac-(SEQ GO NO: 118) (hereinafter referred to as BCY7818;

Ac-(SEQ ГО NO: 119) (далее обозначаемой как BCY7819;Ac-(SEQ GO NO: 119) (hereinafter referred to as BCY7819;

Ac-(SEQ ГО NO: 120) (далее обозначаемой как BCY7820;Ac-(SEQ GO NO: 120) (hereinafter referred to as BCY7820;

- 26 045862- 26 045862

Ac-(SEQ Ш NO: 120) (MeO-dPEG12), связанной c D-Lys3 (далее обозначаемой как BCY8089);Ac-(SEQ Ш NO: 120) (MeO-dPEG12) bound to D-Lys3 (hereinafter referred to as BCY8089);

- 27 045862- 27 045862

[PYA][B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 169) (далее обозначаемой как BCY8846 Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ Ш NO: 170) (далее обозначаемой какВСУ8123);[PYA][B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8846 Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ Ш NO: 170) (hereinafter referred to as VSU8123);

[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 171) (далее обозначаемой как BCY8232);[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 171) (hereinafter referred to as BCY8232);

[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 179) (далее обозначаемой как BCY8269);[B-Ala][Sarl0]-(SEQ ID NO: 179) (hereinafter referred to as BCY8269);

- 28 045862- 28 045862

В следующем варианте осуществления пептидный лиганд содержит аминокислотную последовательность, выбранную изIn a further embodiment, the peptide ligand comprises an amino acid sequence selected from

Ac-(SEQ Ш NO: 1) (далее обозначаемой как 80-09-02-N008 или BCY7390);Ac-(SEQ Ш NO: 1) (hereinafter referred to as 80-09-02-N008 or BCY7390);

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ Ш NO: 77) (далее обозначаемой KaKBCY7559);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ Ш NO: 77) (hereinafter referred to as KaKBCY7559);

- 29 045862- 29 045862

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ Ш NO: 167) (далее обозначаемой KaKBCY8120);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ Ш NO: 167) (hereinafter referred to as KaKBCY8120);

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ Ш NO: 168) (далее обозначаемой KaKBCY8121);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ Ш NO: 168) (hereinafter referred to as KaKBCY8121);

Ac-[B-Ala][Sar₅]-(SEQ Ш NO: 170) (далее обозначаемой KaKBCY8123);Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ Ш NO: 170) (hereinafter referred to as KaKBCY8123);

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 209) (далее обозначаемой как BCY8280); иAc-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 209) (hereinafter referred to as BCY8280); And

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 210) (далее обозначаемой как BCY8281).Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ Ш NO: 210) (hereinafter referred to as BCY8281).

- 30 045862- 30 045862

Ac-(SEQ ГО NO: 179) (далее обозначаемой как BCY8163);Ac-(SEQ GO NO: 179) (hereinafter referred to as BCY8163);

Ac-(SEQ ГО NO: 187) (далее обозначаемой как BCY8182);Ac-(SEQ GO NO: 187) (hereinafter referred to as BCY8182);

Ac-(SEQ ГО NO: 188) (далее обозначаемой как BCY8183);Ac-(SEQ GO NO: 188) (hereinafter referred to as BCY8183);

Ac-(SEQ ГО NO: 189) (далее обозначаемой как BCY8184);Ac-(SEQ GO NO: 189) (hereinafter referred to as BCY8184);

Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 178) (далее обозначаемой как BCY8277);Ac-[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 178) (hereinafter referred to as BCY8277);

В альтернативном варианте осуществления пептидный лиганд содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:In an alternative embodiment, the peptide ligand comprises an amino acid sequence selected from:

[B-Ala][Sar₅]-(SEQ ГО NO: 76) (далее обозначаемой как BCY7556);[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ GO NO: 76) (hereinafter referred to as BCY7556);

[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 115) (далее обозначаемой как BCY7814);[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7814);

[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 202) (далее обозначаемой как BCY8231);[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 202) (hereinafter referred to as BCY8231);

Ac-(SEQ ГО NO: 211) (далее обозначаемой как BCY8831);Ac-(SEQ GO NO: 211) (hereinafter referred to as BCY8831);

[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 179) (далее обозначаемой как BCY8269); и[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 179) (hereinafter referred to as BCY8269); And

[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 209) (далее обозначаемой как BCY8273).[B-Ala][SarlO]-(SEQ ID NO: 209) (hereinafter referred to as BCY8273).

В настоящем описании в табл. 4 приводятся данные, которые демонстрируют, что пептидные лиганды согласно этому варианту осуществлению демонстрировали хорошие уровни (<100 нМ) связывания с нектином-4 человека, о чем свидетельствуют данные связывания, полученные с использованием SPR.In the present description in table. 4 provides data that demonstrates that the peptide ligands of this embodiment exhibited good levels (<100 nM) of binding to human nectin-4 as evidenced by binding data obtained using SPR.

- 31 045862- 31 045862

Ac-(SEQ ID NO: 211) (далее обозначаемой как BCY8831);Ac-(SEQ ID NO: 211) (hereinafter referred to as BCY8831);

Если не определено иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, обладают тем же значением, которое обычно подразумевают специалисты в данной области, например, в области пептидной химии, культивирования клеток и фагового дисплея, химии нуклеиновых кислот и биохимии. Используют стандартные технологии молекулярной биологии, способы генетики и биохимические способы (см. Sambrook et al, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., 2001, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology (1999) 4^th ed., John Wiley & Sons, Inc.), которые включены в настоящее описание в качестве ссылок.Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by those skilled in the art, for example, peptide chemistry, cell culture and phage display, nucleic acid chemistry and biochemistry. Standard molecular biology techniques, genetic techniques, and biochemical techniques are used (see Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., 2001, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology (1999) ^4th ed., John Wiley & Sons, Inc.), which are incorporated herein by reference.

Номенклатура.Nomenclature.

Нумерация.Numbering.

При указании на положения аминокислотных остатков в пептидах по изобретению остатки цистеина (Ci, Cii и Ciii) исключены из нумерации, поскольку они являются инвариантными, и, таким образом, нумерация аминокислотных остатков в пептидах по изобретению является такой, как указано ниже:When referring to the positions of amino acid residues in the peptides of the invention, cysteine residues (Ci, Cii and Ciii) are excluded from the numbering since they are invariant, and thus the numbering of amino acid residues in the peptides of the invention is as follows:

Ci-P1-F₂-G3-Cii-M4-K5-N6-W7-S8-W9-P10-I11-W12-Ciii (SEQ ID NO: 1).Ci-P1-F ₂ -G3-Cii-M4-K5-N6-W7-S8-W9-P10-I11-W12-Ciii (SEQ ID NO: 1).

Для целей настоящего описания принимается, что все бициклические пептиды циклизованы с помощью ТВМВ (1,3,5-трис(бромметил)бензол) или 1,1',1-(1,3,5-триазинан-1,3,5-тритил)трипроп-2-ен-1она (ТАТА) с образованием трехзамещенной структуры. Циклизация посредством ТВМВ и ТАТА происходит по C_i, C_ii и C_iii.For the purposes of this description, it is assumed that all bicyclic peptides are cyclized with TBMB (1,3,5-tris(bromomethyl)benzene) or 1,1',1-(1,3,5-triazinan-1,3,5- trityl)triprop-2-en-1one (TATA) to form a trisubstituted structure. Cyclization via TBMV and TATA occurs along C _i , C _ii and C _iii .

Молекулярный формат.Molecular format.

N- или С-концевые удлинения к бициклической центральной последовательности добавлены с левой или с правой стороны от последовательности, отделенные дефисом. Например, N-концевая хвостовая часть eAla-Sar₁₀-Ala обозначается следующим образом:N- or C-terminal extensions to the bicyclic core sequence are added to the left or right side of the sequence, separated by a hyphen. For example, the N-terminal tail of eAla-Sar ₁₀ -Ala is designated as follows:

eAla-Sar₁₀-A-(SEQ ID NO: X).eAla-Sar ₁₀ -A-(SEQ ID NO: X).

Инвертированные пептидные последовательности.Inverted peptide sequences.

С учетом описания в Nair et al (2003) J Immunol 170(3), 1362-1373, предусматривается, что пептидные последовательности, описанные в настоящем описании, также могут быть применимыми в их ретроинвертированной форме. Например, последовательность переворачивается (т.е. N-конец становится Сконцом и наоборот) и их стереохимия аналогично также переворачивается (т.е. D-аминокислоты становятся L-аминокислотами и наоборот).In view of the description in Nair et al (2003) J Immunol 170(3), 1362-1373, it is contemplated that the peptide sequences described herein may also be useful in their retroinverted form. For example, the sequence is reversed (i.e. N-terminus becomes C-terminus and vice versa) and their stereochemistry is likewise reversed (i.e. D-amino acids become L-amino acids and vice versa).

Пептидные лиганды.Peptide ligands.

Пептидный лиганд, как указано в настоящем описании, относится к пептиду, ковалентно связанному с молекулярным каркасом. Как правило, такие пептиды содержит две или более реакционноспособных групп (т.е. остатков цистеина), которые способны образовывать ковалентные связи с каркасом, и последовательность, которая замыкается между указанными реакционноспособными группами, называется последовательностью петли, поскольку она формирует петлю, когда пептид связан с каркасом. В данном случае, пептиды содержат по меньшей мере три остатка цистеина (обозначаемых в настоящем описании как C_i, C_ii и C_iii), и образуют по меньшей мере две петли на каркасе.A peptide ligand, as defined herein, refers to a peptide covalently linked to a molecular scaffold. Typically, such peptides contain two or more reactive groups (i.e., cysteine residues) that are capable of forming covalent bonds with the backbone, and the sequence that closes between these reactive groups is called a loop sequence because it forms a loop when the peptide is bound with frame. Here, the peptides contain at least three cysteine residues (referred to herein as C _i , C _ii and C _iii ) and form at least two loops on the framework.

Преимущества пептидных лигандов.Advantages of peptide ligands.

Определенные бициклические пептиды по настоящему изобретению имеют ряд преимущественных свойств, которые позволяют рассматривать их в качестве подходящих подобных лекарственному средству молекул для инъекционного, ингаляционного, глазного, перорального или местного введения. Такие преимущественные свойства включают следующее.Certain bicyclic peptides of the present invention have a number of advantageous properties that make them suitable drug-like molecules for injection, inhalation, ocular, oral or topical administration. Such advantageous properties include the following.

Видовая перекрестная реактивность. Это является типичным требованием для доклинической фармакодинамики и фармакокинетической оценки;Species cross-reactivity. This is a typical requirement for preclinical pharmacodynamics and pharmacokinetic evaluation;

устойчивость к действию протеаз. Бициклические пептидные лиганды в идеальном случае должны демонстрировать устойчивость к протеазам плазмы, эпителиальным (заякоренным на мембране) протеазам, желудочным и кишечным протеазам, поверхностным протеазам легких, внутриклеточным протеазам и т.п. Стабильность к протеазам должна сохраняться между различными видами, чтобы основные бициклические кандидаты можно было разработать в моделях на животных, а также с уверенностью вводить человеку;resistance to proteases. Bicyclic peptide ligands should ideally demonstrate resistance to plasma proteases, epithelial (membrane-anchored) proteases, gastric and intestinal proteases, lung surface proteases, intracellular proteases, and the like. Stability to proteases must be maintained between different species so that leading bicyclic candidates can be developed in animal models and also confidently administered to humans;

желаемый профиль растворимости. Он является функцией соотношения заряженных и гидрофильdesired solubility profile. It is a function of the ratio of charged and hydrophilic

- 32 045862 ных против гидрофобных остатков и внутри/межмолекулярного образования Н-связей, которое является важным для целей составления и всасывания;- 32 045862 against hydrophobic residues and intra/intermolecular H-bond formation, which is important for formulation and absorption purposes;

оптимальное время полужизни в плазме. В зависимости от клинического показания и режима лечения может потребоваться разработка бициклического пептида для кратковременного воздействия в условиях контроля острого состояния или разработка бициклического пептида с усиленным удержанием в кровотоке и, таким образом, являющегося оптимальным для контроля более хронических болезненных состояний. Другими факторами, определяющими желаемое время полужизни в плазме, являются необходимость в длительной максимальной терапевтической эффективности против сопутствующей токсикологии вследствие длительного воздействия средства; и селективность. Определенные пептидные лиганды по изобретению демонстрируют высокую селективность относительно других нектинов.optimal plasma half-life. Depending on the clinical indication and treatment regimen, it may be necessary to develop a bicyclic peptide for short-term effects in the management of acute conditions, or to develop a bicyclic peptide with enhanced retention in the bloodstream and thus is optimal for the control of more chronic disease states. Other factors that determine the desired plasma half-life include the need for prolonged maximum therapeutic efficacy against associated toxicology due to prolonged exposure to the drug; and selectivity. Certain peptide ligands of the invention exhibit high selectivity relative to other nectins.

Фармацевтически приемлемые соли.Pharmaceutically acceptable salts.

Будет понятно, что солевые формы входят в объем изобретения и указание на пептидные лиганды включает солевые формы указанных лигандов.It will be understood that salt forms are within the scope of the invention and reference to peptide ligands includes salt forms of said ligands.

Соли по настоящему изобретению можно синтезировать из исходного соединения, которое содержит основную или кислотную часть, общепринятыми химическими способами, такими как способы, описанные в Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002. Как правило, такие соли можно получать путем реакции форм свободной кислоты или основания этих соединений с соответствующим основанием или кислотой в воде или органическом растворителе, или в их смеси.The salts of the present invention can be synthesized from a starting compound that contains a basic or acid moiety by conventional chemical methods, such as those described in Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth ( Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002. Typically, such salts can be prepared by reacting the free acid or base forms of these compounds with the corresponding base or acid in water or an organic solvent, or in mixtures of them.

Кислотно-аддитивные соли (моно- или дисоли) могут быть образованы с широким диапазоном кислот, как неорганических, так и органических. Примеры кислотно-аддитивных солей включают моноили дисоли, образованные с кислотой, выбранной из группы, состоящей из уксусной, 2,2дихлоруксусной, адипиновой, альгиновой, аскорбиновой (например, L-аскорбиновой), L-аспарагиновой, бензолсульфоновой, бензойной, 4-ацетамидобензойной, бутановой, (+) камфорной, камфор-сульфоновой, (+)-(^)-камфор-10-сульфоновой, каприновой, капроновой, каприловой, коричной, лимонной, цикламовой, додецилсерной, этан-1,2-дисульфоновой, этансульфоновой, 2-гидроксиэтансульфоновой, муравьиной, фумаровой, галактаровой, гентизиновой, глюкогептоновой, D-глюконовой, глюкуроновой (например, D-глюкуроновой), глутаминовой (например, L-глутаминовой), α-оксоглутаровой, гликолевой, гиппуровой, галогенводородной (например, бромистоводородной, хлористоводородной, йодистоводородной), изотионовой, молочной (например, (+)-Ь-молочной, (±)-DL-молочной), лактобионовой, малеиновой, яблочной, (-)-Ь-яблочной, малоновой, (±)-DL-миндальной, метансульфоновой, нафталин-2сульфоновой, нафталин-1,5-дисульфоновой, 1-гидрокси-2-нафтойной, никотиновой, азотной, олеиновой, оротовой, щавелевой, пальмитиновой, памовой, фосфорной, пропионовой, пировиноградной, Lпироглутаминовой, салициловой, 4-аминосалициловой, себациновой, стеариновой, янтарной, серной, дигалловой, (+)-Ь-виннокаменной, тиоциановой, п-толуолсульфоновой, ундециленовой и валериановой кислот, а также ацилированных аминокислот и катионообменных смол.Acid addition salts (mono- or di-salts) can be formed with a wide range of acids, both inorganic and organic. Examples of acid addition salts include mono or di salts formed with an acid selected from the group consisting of acetic, 2,2dichloroacetic, adipic, alginic, ascorbic (e.g., L-ascorbic), L-aspartic, benzenesulfonic, benzoic, 4-acetamidobenzoic, butane, (+) camphor, camphor-sulfonic, (+)-(^)-camphor-10-sulfonic, capric, capronic, caprylic, cinnamic, citric, cyclamic, dodecylsulfuric, ethane-1,2-disulfonic, ethanesulfonic, 2 -hydroxyethanesulfonic acid, formic acid, fumaric acid, galactaric acid, gentisinic acid, glucoheptonic acid, D-gluconic acid, glucuronic acid (e.g. D-glucuronic acid), glutamic acid (e.g. L-glutamic acid), α-oxoglutaric acid, glycolic acid, hippuric acid, hydrogen halide (e.g. hydrobromic acid, hydrochloric acid , hydroiodic), isothionic, lactic (for example, (+)-L-lactic, (±)-DL-lactic), lactobionic, maleic, malic, (-)-L-malic, malonic, (±)-DL-almond , methanesulfonic, naphthalene-2sulfonic, naphthalene-1,5-disulfonic, 1-hydroxy-2-naphthoic, nicotinic, nitric, oleic, orotic, oxalic, palmitic, pamic, phosphoric, propionic, pyruvic, Lpyroglutamic, salicylic, 4-aminosalicylic , sebacic, stearic, succinic, sulfuric, digallic, (+)-b-tartaric, thiocyanic, p-toluenesulfonic, undecylenic and valeric acids, as well as acylated amino acids and cation exchange resins.

Одна конкретная группа солей состоит из солей, образованных из уксусной, хлористоводородной, йодистоводородной, фосфорной, азотной, серной, лимонной, молочной, янтарной, малеиновой, яблочной, изотионовой, фумаровой, бензолсульфоновой, толуолсульфоновой, серной, метансульфоновой (мезилат), этансульфоновой, нафталинсульфоновой, валериановой, пропионовой, бутановой, малоновой, глюкуроновой и лактобионовой кислот. Одной конкретной солью является гидрохлорид. Другой конкретной солью является ацетат.One particular group of salts consists of salts formed from acetic, hydrochloric, hydroiodic, phosphoric, nitric, sulfuric, citric, lactic, succinic, maleic, malic, isothionic, fumaric, benzenesulfonic, toluenesulfonic, sulfuric, methanesulfonic (mesylate), ethanesulfonic, naphthalene sulfonic , valeric, propionic, butanoic, malonic, glucuronic and lactobionic acids. One particular salt is the hydrochloride. Another specific salt is acetate.

Если соединение является анионным или имеет функциональную группу, которая может быть анионной (например, -СООН может представлять собой -СОО'), тогда соль может быть образована с органическим или неорганическим основанием с образованием подходящего катиона. Примеры подходящих неорганических катионов включают, но не ограничиваются ими, ионы щелочных металлов, такие как Li⁺, Na⁺ и K+, катионы щелочноземельных металлов, такие как Са²⁺ и Mg²⁺, и другие катионы, такие как Al³⁺ или Zn⁺. Примеры походящих органических катионов включают, но не ограничиваются ими, ион аммония (т.е. NH4⁺) и замещенные ионы аммония (например, NH3R⁺, NH2R2+, NHR3⁺, NR+). Примерами некоторых подходящих замещенных ионов аммония являются ионы, образованные из: метиламина, этиламина, диэтиламина, пропиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бутиламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также аминокислоты, такие как лизин и аргинин. Примером распространенного четвертичного иона аммония является N(CH3)₄ ⁺.If the compound is anionic or has a functional group that can be anionic (eg, -COOH can be -COO'), then a salt can be formed with an organic or inorganic base to form a suitable cation. Examples of suitable inorganic cations include, but are not limited to, alkali metal ions such as Li ⁺ , Na ⁺ and K + , alkaline earth metal cations such as Ca ²⁺ and Mg ²⁺ , and other cations such as Al ³⁺ or Zn ⁺ . Examples of suitable organic cations include, but are not limited to, ammonium ion (ie, NH4 ⁺ ) and substituted ammonium ions (eg, NH3R ⁺ , NH2R2+, NHR3 ⁺ , NR+). Examples of some suitable substituted ammonium ions are those formed from: methylamine, ethylamine, diethylamine, propylamine, dicyclohexylamine, triethylamine, butylamine, ethylenediamine, ethanolamine, diethanolamine, piperazine, benzylamine, phenylbenzylamine, choline, meglumine and tromethamine, as well as amino acids such as lysine and arginine. An example of a common quaternary ammonium ion is N(CH3) ₄ ⁺ .

Когда пептиды по изобретению содержат функциональную аминогруппу, они могут образовывать четвертичные соли аммония, например путем реакции с алкилирующим агентом в соответствии со способами, известными специалисту в данной области. Такие четвертичные соединения аммония входят в объем изобретения.When the peptides of the invention contain an amino functional group, they can form quaternary ammonium salts, for example by reaction with an alkylating agent in accordance with methods known to one skilled in the art. Such quaternary ammonium compounds are within the scope of the invention.

Модифицированные производные.Modified derivatives.

Будет понятно, что модифицированные производные пептидных лигандов, как определено в наIt will be understood that modified derivatives of peptide ligands, as defined in

- 33 045862 стоящем описании, входят в объем настоящего изобретения. Примеры таких подходящих модифицированных производных включают одну или несколько модификаций, выбранных из: N-концевых и/или Сконцевых модификаций; замены одного или нескольких аминокислотных остатков одним или несколькими неприродными аминокислотными остатками (такой как замена одного или нескольких полярных аминокислотных остатков одной или несколькими изостерическими или изоэлектронными аминокислотами; замена одного или нескольких неполярных аминокислотных остатков другими неприродными изостерическими или изоэлектронными аминокислотами); присоединения спейсерной группы; замены одного или нескольких подверженных окислению аминокислотных остатков одним или несколькими устойчивыми к окислению аминокислотными остатками; замены одного или нескольких аминокислотных остатков аланином, замены одного или нескольких остатков L-аминокислот одним или несколькими остатками D-аминокислот; N-алкилирования одной или нескольких амидных связей в бициклическом пептидном лиганде; замены одной или нескольких пептидных связей суррогатной связью; модификации длины пептидного остова; замены водорода на альфа-углероде одного или нескольких аминокислотных остатков другой химической группой, модификации аминокислот, таких как цистеин, лизин, глутамат/аспартат и тирозин, подходящим амином, тиолом, карбоновой кислотой и реагирующими с фенолом реагентами для функционализации указанных аминокислот, и внесения или замены на аминокислоты, которые вносят ортогональные реакционно-способные группы, которые пригодны для функционализации, например, содержащие азидные или алкиновые группы аминокислоты, которые позволяют функционализацию посредством содержащих алкин или азид частей, соответственно.- 33 045862 of the present description are included in the scope of the present invention. Examples of such suitable modified derivatives include one or more modifications selected from: N-terminal and/or C-terminal modifications; replacing one or more amino acid residues with one or more unnatural amino acid residues (such as replacing one or more polar amino acid residues with one or more isosteric or isoelectronic amino acids; replacing one or more non-polar amino acid residues with other unnatural isosteric or isoelectronic amino acids); adding a spacer group; replacing one or more oxidation-sensitive amino acid residues with one or more oxidation-resistant amino acid residues; replacing one or more amino acid residues with alanine, replacing one or more L-amino acid residues with one or more D-amino acid residues; N-alkylation of one or more amide bonds in a bicyclic peptide ligand; replacing one or more peptide bonds with a surrogate bond; modifications to the length of the peptide backbone; replacing the hydrogen on the alpha carbon of one or more amino acid residues with another chemical group, modifying amino acids such as cysteine, lysine, glutamate/aspartate and tyrosine with a suitable amine, thiol, carboxylic acid and phenol-reactive reagents to functionalize said amino acids, and introducing or substitutions with amino acids that introduce orthogonal reactive groups that are suitable for functionalization, for example, azide- or alkyne-containing amino acids that allow functionalization through alkyne- or azide-containing moieties, respectively.

В одном варианте осуществления модифицированное производное включает N-концевую и/или Сконцевую модификацию. В следующем варианте осуществления, где модифицированное производное включает N-концевую модификацию с использованием подходящей реагирующей с амино химической группы, и/или С-концевую модификацию с использованием подходящей реагирующей с карбокси химической группы. В следующем варианте осуществления указанная N-концевая или С-концевая модификация включает присоединение эффекторной группы, включая, но не ограничиваясь ими, цитотоксическое средство, радиохелатор или хромофор.In one embodiment, the modified derivative includes an N-terminal and/or C-terminal modification. In a further embodiment, wherein the modified derivative comprises an N-terminal modification using a suitable amino-reactive chemical group, and/or a C-terminal modification using a suitable carboxy-reactive chemical group. In a further embodiment, said N-terminal or C-terminal modification includes the addition of an effector group, including, but not limited to, a cytotoxic agent, a radiochelator, or a chromophore.

В следующем варианте осуществления модифицированное производное содержит N-концевую модификацию. В следующем варианте осуществления N-концевая модификация включает N-концевую ацетильную группу. В этом варианте осуществления N-концевая группа цистеина (группа, обозначаемая в настоящем описании как Ci) кэппируется уксусным ангидридом или другими подходящими реагентами в ходе пептидного синтеза, что приводит к молекуле, которая является ацетилированной на N-конце. Этот вариант осуществления обеспечивает преимущество удаления потенциальной точки распознавания для аминопептидаз и устраняет возможность деградации бициклического пептида.In a further embodiment, the modified derivative contains an N-terminal modification. In a further embodiment, the N-terminal modification includes an N-terminal acetyl group. In this embodiment, the N-terminal cysteine group (a group referred to herein as Ci) is capped with acetic anhydride or other suitable reagents during peptide synthesis, resulting in a molecule that is N-terminally acetylated. This embodiment provides the advantage of removing a potential recognition point for aminopeptidases and eliminates the possibility of degradation of the bicyclic peptide.

В альтернативном варианте осуществления N-концевая модификация включает присоединение молекулярной спейсерной группы, которая облегчает конъюгацию эффекторных групп и сохранение эффективности бициклического пептида в отношении его мишени.In an alternative embodiment, the N-terminal modification involves the addition of a molecular spacer group that facilitates the conjugation of effector groups and maintains the effectiveness of the bicyclic peptide on its target.

В следующем варианте осуществления модифицированное производное содержит С-коневую модификацию. В следующем варианте осуществления С-концевая модификация включает амидную группу. В этом варианте осуществления С-концевую группу цистеина (группа, обозначаемая в настоящем описании как C_iii) синтезируют в качестве амида в ходе пептидного синтеза, что приводит к молекуле с Сконцевым амидированием. Этот вариант осуществления обеспечивает преимущество удаления потенциальной точки распознавания карбоксипептидазой и снижает потенциал к протеолитической деградации бициклического пептида.In a further embodiment, the modified derivative contains a C-terminal modification. In a further embodiment, the C-terminal modification includes an amide group. In this embodiment, the C-terminal cysteine group (a group referred to herein as C _iii ) is synthesized as an amide during peptide synthesis, resulting in a C-terminal amidation molecule. This embodiment provides the advantage of removing a potential carboxypeptidase recognition site and reduces the potential for proteolytic degradation of the bicyclic peptide.

В одном варианте осуществления модифицированное производное содержит замену одного или нескольких аминокислотных остатков на один или несколько неприродных аминокислотных остатков.In one embodiment, the modified derivative comprises replacing one or more amino acid residues with one or more unnatural amino acid residues.

Альтернативно можно использовать неприродные аминокислоты, имеющие ограниченные боковые цепи аминокислот, так что происходит конформационное и пространственное препятствование протеолитическому гидролизу ближайшей пептидной связи. В частности, это касается аналогов пролина, объемных боковых цепей, Са-двухзамещенных производных (например, аминоизомасляная кислота, Ab), и циклоаминокислот, причем простым производным является аминоциклопропилкарбоновая кислота.Alternatively, unnatural amino acids may be used that have restricted amino acid side chains such that proteolytic hydrolysis of the proximal peptide bond is conformationally and spatially inhibited. In particular, this applies to proline analogs, bulky side chains, Ca-disubstituted derivatives (eg aminoisobutyric acid, Ab), and cycloamino acids, with aminocyclopropylcarboxylic acid being a simple derivative.

В одном варианте осуществления модифицированное производное включает присоединение спейсерной группы. В следующем варианте осуществления модифицированное производное включает присоединение спейсерной группы к N-концевому цистеину (Ci) и/или С-концевому цистеину (Ciii).In one embodiment, the modified derivative includes the addition of a spacer group. In a further embodiment, the modified derivative includes the addition of a spacer group to an N-terminal cysteine (Ci) and/or a C-terminal cysteine (Ciii).

В одном варианте осуществления модифицированное производное содержит замену одного или нескольких подверженных окислению аминокислотных остатков на один или несколько устойчивых к окислению аминокислотных остатков. В следующем варианте осуществления модифицированное производное содержит замену остатка триптофана на остаток нафтилаланина или аланина. Этот вариант осуществления обеспечивает преимущество улучшения профиля фармацевтической стабильности полученного бициклического пептидного лиганда.In one embodiment, the modified derivative comprises replacing one or more oxidation-prone amino acid residues with one or more oxidation-stable amino acid residues. In a further embodiment, the modified derivative comprises replacing the tryptophan residue with a naphthylalanine or alanine residue. This embodiment provides the advantage of improving the pharmaceutical stability profile of the resulting bicyclic peptide ligand.

В одном варианте осуществления модифицированное производное содержит замену одного или нескольких заряженных аминокислотных остатков на один или несколько гидрофобных аминокислотных остатков. В альтернативном варианте осуществления модифицированное производное содержит заменуIn one embodiment, the modified derivative comprises replacing one or more charged amino acid residues with one or more hydrophobic amino acid residues. In an alternative embodiment, the modified derivative contains the substitution

- 34 045862 одного или нескольких гидрофобных аминокислотных остатков на один или несколько заряженных аминокислотных остатков. Правильный баланс между заряженными и гидрофобными остатками является важной характеристикой бициклических пептидных лигандов. Например, гидрофобные аминокислотные остатки влияют на степень связывания белками плазмы, и, таким образом, на концентрацию свободной доступной фракции в плазме, в то время как заряженные аминокислотные остатки (в частности, аргинин) могут влиять на взаимодействие пептида с фосфолипидными мембранами на поверхностях клеток. Комбинация этих двух типов может влиять на время полужизни, объем распределения и экспозицию пептидного лекарственного средства, и может быть модифицирована в зависимости от клинического конечного результата. Кроме того, правильное комбинирование и количество заряженных против гидрофобных аминокислотных остатков может снижать раздражение в области инъекции (если пептидное лекарственное средство вводят подкожно).- 34 045862 one or more hydrophobic amino acid residues per one or more charged amino acid residues. The correct balance between charged and hydrophobic residues is an important characteristic of bicyclic peptide ligands. For example, hydrophobic amino acid residues influence the extent of plasma protein binding, and thus the concentration of the free accessible fraction in plasma, while charged amino acid residues (particularly arginine) can influence the interaction of the peptide with phospholipid membranes on cell surfaces. The combination of these two types may affect the half-life, volume of distribution and exposure of the peptide drug, and may be modified depending on the clinical endpoint. In addition, the correct combination and amount of anti-hydrophobic amino acid residues charged can reduce irritation at the injection site (if the peptide drug is administered subcutaneously).

В одном варианте осуществления модифицированное производное содержит замену одного или нескольких остатков L-аминокислот на один или несколько остатков D-аминокислот. Полагают, что этот вариант осуществления увеличит протеолитическую стабильность посредством пространственного препятствования и вследствие склонности D-аминокислот к стабилизации конформаций Р-изгибов (Tugyi et al. (2005) PNAS, 102(2), 413-418).In one embodiment, the modified derivative comprises replacing one or more L-amino acid residues with one or more D-amino acid residues. This embodiment is believed to increase proteolytic stability through steric interference and due to the propensity of D-amino acids to stabilize P-bend conformations (Tugyi et al. (2005) PNAS, 102(2), 413-418).

В одном варианте осуществления модифицированное производное включает удаление каких-либо аминокислотных остатков и замену на аланин. Этот вариант осуществления обеспечивает преимущество устранения потенциального участка(ов) протеолитической атаки.In one embodiment, the modified derivative includes the removal of any amino acid residues and replacement with alanine. This embodiment provides the advantage of eliminating potential proteolytic attack site(s).

Следует отметить, что каждая из вышеупомянутых модификаций служит для намеренного повышения эффективности или стабильности пептида. Дальнейшее повышение эффективности на основе модификаций может быть достигнуто посредством следующих механизмов:It should be noted that each of the above modifications serves to intentionally increase the potency or stability of the peptide. Further improvements in efficiency based on modifications can be achieved through the following mechanisms:

включение гидрофобных частей, которые имеют гидрофобный эффект и обеспечивают более низкие константы скорости диссоциации, так чтобы достигалась более высокая аффинность;inclusion of hydrophobic moieties that have a hydrophobic effect and provide lower dissociation rate constants so that higher affinity is achieved;

включение заряженных групп, которые осуществляют ионные взаимодействия дальнего действия, что приводит к более быстрым константам скорости ассоциации и к более высокой аффинности (см., например, Schreiber et al, Rapid, electrostatically assisted association of proteins (1996), Nature Struct. Biol. 3, 427-31); и включение дополнительного ограничения в пептид, например, посредством надлежащего ограничения боковых цепей аминокислот, так что снижение энтропии является минимальным при связывании мишени, ограничения торсионных углов основной цепи, так что снижение энтропии является минимальным при связывании мишени, и внесения дополнительных циклизаций в молекулу по идентичным причинам (для обзора см. Gentilucci et al, Curr. Pharmaceutical Design, (2010), 16, 3185-203, и Nestor et al, Curr. Medicinal Chem (2009), 16, 4399-418).inclusion of charged groups that perform long-range ionic interactions, resulting in faster association rate constants and higher affinities (see, for example, Schreiber et al, Rapid, electrostatically assisted association of proteins (1996), Nature Struct. Biol. 3, 427-31); and incorporating additional constraint into the peptide, for example, by appropriately constraining amino acid side chains so that the entropy reduction is minimal upon target binding, restricting backbone torsion angles so that the entropy reduction is minimal upon target binding, and introducing additional cyclizations into the molecule along identical reasons (for review, see Gentilucci et al, Curr. Pharmaceutical Design, (2010), 16, 3185-203, and Nestor et al, Curr. Medicinal Chem (2009), 16, 4399-418).

Изотопные варианты.Isotopic options.

Настоящее изобретение относится ко всем фармацевтически приемлемым (радио)изотопно меченным пептидным лигандам по изобретению, где один или несколько атомов заменены атомами, имеющими то же атомное число, но атомную массу или массовое число, отличные от атомной массы или массового числа, встречающихся в природе, и к пептидным лигандам по изобретению, к которым присоединены металл-хелатирующие группы (называемые эффекторными), которые способны удерживать соответствующие (радио)изотопы, и к пептидным лигандам по изобретению, где определенные функциональные группы ковалентно заменены соответствующими (радио)изотопами или изотопно меченными функциональными группами.The present invention relates to all pharmaceutically acceptable (radio)isotopically labeled peptide ligands of the invention, where one or more atoms are replaced by atoms having the same atomic number, but an atomic mass or mass number different from the atomic mass or mass number found in nature, and to peptide ligands of the invention to which are attached metal chelating groups (called effectors) that are capable of retaining the corresponding (radio)isotopes, and to peptide ligands of the invention where certain functional groups are covalently replaced by the corresponding (radio)isotopes or isotopically labeled functional in groups.

Примеры изотопов, пригодных для включения в пептидные лиганды по изобретению, включают изотопы водорода, такие как ²Н (D) и ³Н (Т), углерода, такие как ¹¹C, ¹³C и ¹⁴C, хлора, такие как ³⁶Cl, фтора, такие как 18F, йода, такие как ¹²³I,¹²⁵I и ¹³¹I, азота, такие как ¹³N и ¹⁵N, кислорода, такие как ¹⁵О, ¹⁷О и ¹⁸О, фосфора, такие как ³²Р, серы, такие как ³⁵S, меди, такие как ⁶⁴Cu, галлия, такие как ⁶⁷Ga или ⁶⁸Ga, иттрия, такие как ⁹⁰Y, и лютеция, такие как ¹⁷⁷Lu, и висмута, такие как ²¹³Bi.Examples of isotopes suitable for inclusion in the peptide ligands of the invention include isotopes of hydrogen such as ² H (D) and ³ H (T), carbon such as ¹¹ C, ¹³ C and ¹⁴ C, chlorine such as ³⁶ Cl, fluorine such as 18F, iodine such as ¹²³ I, ¹²⁵ I and ¹³¹ I, nitrogen such as ¹³ N and ¹⁵ N, oxygen such as ¹⁵ O, ¹⁷ O and ¹⁸ O, phosphorus such as ³² P, sulfur , such as ³⁵ S, copper, such as ⁶⁴ Cu, gallium, such as ⁶⁷ Ga or ⁶⁸ Ga, yttrium, such as ⁹⁰ Y, and lutetium, such as ¹⁷⁷ Lu, and bismuth, such as ²¹³ Bi.

Определенные изотопно меченные пептидные лиганды по изобретению, например, пептидные лиганды, включающие радиоактивный изотоп, являются пригодными в исследованиях распределения лекарственных средств и/или субстратов в тканях и для клинической оцени наличия и/или отсутствия мишени нектина-4 на пораженных заболеванием тканях. Пептидные лиганды по изобретению, кроме того, могут иметь ценные диагностические свойства, поскольку их можно использовать для детекции или идентификации образования комплекса между меченым соединением и другими молекулами, пептидами, белками, ферментами или рецепторами. В способах детекции или идентификации могут использоваться соединения, которые мечены агентами для мечения, такими как радиоизотопы, ферменты, флуоресцентные вещества, люминесцентные вещества (например, люминол, производные люминола, люциферин, экворин и люцифераза) и т.д. Особенно пригодными для этой цели являются радиоактивные изотопы тритий, т.е. ³Н (Т), и углерода-14, т.е. ¹⁴С, ввиду их простоты включения и доступных средств детекции.Certain isotopically labeled peptide ligands of the invention, for example, peptide ligands comprising a radioactive isotope, are useful in tissue distribution studies of drugs and/or substrates and for clinical assessment of the presence and/or absence of the nectin-4 target on diseased tissues. The peptide ligands of the invention may also have valuable diagnostic properties because they can be used to detect or identify complex formation between a labeled compound and other molecules, peptides, proteins, enzymes or receptors. Detection or identification methods may use compounds that are labeled with labeling agents such as radioisotopes, enzymes, fluorescent substances, luminescent substances (eg, luminol, luminol derivatives, luciferin, aequorin and luciferase), etc. Particularly suitable for this purpose are the radioactive isotopes tritium, i.e. ³ H (T), and carbon-14, i.e. ¹⁴ C, due to their ease of inclusion and available detection means.

Замена на более тяжелые изотопы, такие как дейтерий, т.е. ²Н (D), может обеспечить определенные терапевтические преимущества в результате большей метаболической стабильности, например увелиReplacement with heavier isotopes such as deuterium, i.e. ^2H (D), may provide certain therapeutic benefits as a result of greater metabolic stability, such as increased

- 35 045862 ченного времени полужизни in vivo или снижения требуемых дозировок, и, таким образом, она может быть предпочтительной в некоторых обстоятельствах.- 35 045862 longer in vivo half-life or reduced dosage requirements, and thus may be preferred in some circumstances.

Замена на позитронно-активные изотопы, такие как C. ¹⁸F, ¹⁵O и ¹³N, может быть полезной в исследованиях с использованием позитронно-эмиссионой томографии (PET) для изучения занятости мишени.Substitution with positron-active isotopes such as C. ¹⁸ F, ¹⁵ O and ¹³ N can be useful in studies using positron emission tomography (PET) to study target occupancy.

Изотопно меченные соединения пептидных лигандов по изобретению, главным образом, можно получать общепринятыми способами, известными специалистам в данной области, или посредством процессов, аналогичных процессам, описанным в прилагаемых примерах, с использованием подходящего изотопно меченного реагента вместо немеченого реагента, используемого ранее.The isotopically labeled peptide ligand compounds of the invention can generally be prepared by conventional methods known to those skilled in the art, or by processes similar to those described in the accompanying examples, using a suitable isotopically labeled reagent in place of the unlabeled reagent used previously.

Молекулярный каркас.Molecular framework.

В одном варианте осуществления молекулярный каркас содержит неароматический молекулярный каркас. Упоминание в настоящем описании неароматического молекулярного каркаса относится к любому молекулярному каркасу, как определено в настоящем описании, который не содержит ароматическую (т.е. ненасыщенную) карбоциклическую или гетероциклическую кольцевую систему.In one embodiment, the molecular framework comprises a non-aromatic molecular framework. Reference herein to a non-aromatic molecular framework refers to any molecular framework, as defined herein, that does not contain an aromatic (ie, unsaturated) carbocyclic or heterocyclic ring system.

Подходящие примеры неароматический молекулярных каркасов описаны в Heinis et al (2014) Angewandte Chemie, International Edition 53(6) 1602-1606.Suitable examples of non-aromatic molecular scaffolds are described in Heinis et al (2014) Angewandte Chemie, International Edition 53(6) 1602-1606.

Как отмечалось в вышеуказанных документах, молекулярный каркас может представлять собой низкомолекулярное соединение, такое как низкомолекулярное органическое соединение.As noted in the above documents, the molecular framework may be a low molecular weight compound, such as a low molecular weight organic compound.

В одном варианте осуществления молекулярный каркас может представлять собой макромолекулу. В одном варианте осуществления молекулярный каркас представляет собой макромолекулу, состоящую из аминокислот, нуклеотидов или углеводов.In one embodiment, the molecular scaffold may be a macromolecule. In one embodiment, the molecular scaffold is a macromolecule composed of amino acids, nucleotides, or carbohydrates.

В одном варианте осуществления молекулярный каркас содержит реакционноспособные группы, которые способны реагировать с функциональной группой(ами) полипептида, образуя ковалентные связи.In one embodiment, the molecular framework contains reactive groups that are capable of reacting with the functional group(s) of the polypeptide to form covalent bonds.

Молекулярный каркас может содержать химические группы, которые образуют связь с пептидом, такие как амины, тиолы, спирты, кетоны, альдегиды, нитрилы, карбоновые кислоты, сложные эфиры, алкены, алкины, азиды, ангидриды, сукцинимиды, малеинимиды, алкилгалогениды и ацилгалогениды.The molecular framework may contain chemical groups that form a bond with the peptide, such as amines, thiols, alcohols, ketones, aldehydes, nitriles, carboxylic acids, esters, alkenes, alkynes, azides, anhydrides, succinimides, maleimides, alkyl halides and acyl halides.

Примером αβ-ненасыщенного карбонилсодержащего соединения является 1,1',1-(1,3,5-триазинан1,3,5-тритил)трипроп-2-ен-1-он (TAtA) (Angewandte Chemie, International Edition (2014), 53(6), 16021606).An example of an αβ-unsaturated carbonyl-containing compound is 1,1',1-(1,3,5-triazinan1,3,5-trityl)triprop-2-en-1-one (TAtA) (Angewandte Chemie, International Edition (2014) , 53(6), 16021606).

Эффекторные и функциональные группы.Effector and functional groups.

В соответствии со следующим аспектом изобретения предусматривается конъюгат лекарственного средства, содержащий пептидный лиганд, как определено в настоящем описании, конъюгированный с одной или несколькими эффекторными и/или функциональными группами.In accordance with a further aspect of the invention, a drug conjugate is provided comprising a peptide ligand, as defined herein, conjugated to one or more effector and/or functional groups.

Эффекторные и/или функциональные группы могут быть присоединены, например, к N- и/или Сконцам полипептида, к аминокислоте в полипептиде или к молекулярному каркасу.Effector and/or functional groups can be attached, for example, to the N- and/or C-termini of the polypeptide, to an amino acid in the polypeptide, or to a molecular framework.

Подходящие эффекторные группы включают антитела и их части или фрагменты. Например, эффекторная группа может включать константную область легкой цепи (CL) антитела, домен СН1 тяжелой цепи антитела, домен СН2 тяжелой цепи антитела, домен СН3 тяжелой цепи антитела или любую их комбинацию, в дополнение к одному или нескольким доменам константной области. Эффекторная группа также может содержать шарнирную область антитела (такую как область, обычно находящаяся между доменами СН1 и СН2 молекулы IgG).Suitable effector groups include antibodies and parts or fragments thereof. For example, an effector group may include an antibody light chain (CL) constant region, an antibody heavy chain CH1 domain, an antibody heavy chain CH2 domain, an antibody heavy chain CH3 domain, or any combination thereof, in addition to one or more constant region domains. The effector group may also comprise an antibody hinge region (such as the region typically found between the CH1 and CH2 domains of an IgG molecule).

В следующем варианте осуществления этого аспекта изобретения эффекторная группа в соответствии с настоящим изобретением представляет собой Fc-область молекулы IgG. Преимущественно, конструкция пептидный лиганд-эффекторная группа в соответствии с настоящим изобретением содержит или состоит из слитой конструкции пептидный лиганд-Fc, имеющей время полужизни te, составляющее сутки или более, двое суток или более, 3 суток или более, 4 суток или более, 5 суток или более, 6 суток или более или 7 суток или более. Наиболее преимущественно, пептидный лиганд в соответствии с настоящим изобретением содержит или состоит из слитой конструкции пептидный лиганд-Fc, имеющей время полужизни, составляющее сутки или более.In a further embodiment of this aspect of the invention, the effector group of the present invention is the Fc region of an IgG molecule. Advantageously, the peptide ligand-effector group construct of the present invention comprises or consists of a peptide ligand-Fc fusion construct having a half-life te of one day or more, two days or more, 3 days or more, 4 days or more, 5 days or more, 6 days or more, or 7 days or more. Most advantageously, the peptide ligand in accordance with the present invention contains or consists of a peptide ligand-Fc fusion construct having a half-life of a day or more.

Функциональные группы включают, главным образом, связывающие группы, лекарственные средства, реакционноспособные группы для присоединения других структур, функциональные группы, которые способствуют захвату макроциклических пептидов в клетки и т.п.Functional groups mainly include linking groups, drugs, reactive groups for attaching other structures, functional groups that promote the uptake of macrocyclic peptides into cells, and the like.

Способность пептидов проникать в клетки позволит пептидам против внутриклеточных мишеней быть эффективными. Мишени, доступные для пептидов, обладающих способностью проникать в клетки, включают факторы транскрипции, внутриклеточные сигнальные молекулы, такие как тирозинкиназы, и молекулы, вовлеченные в апоптотический путь. Функциональные группы, которые позволяют проникновение в клетки, включают пептиды или химические группы, которые могут быть присоединены либо к пептиду, либо к молекулярному каркасу. Пептиды, такие как пептиды, происходящие из VP22, Tat ВИЧ, белка гомеобокса Drosophila (Antennapedia), описаны, например, в Chen and Harrison, Biochemical Society Transactions (2007) Volume 35, part 4, p821; Gupta et al. in Advanced Drug Discovery Reviews (2004) Volume 57 9637. Примеры коротких пептидов, для которых показано, что они являются эффективными в отноThe ability of peptides to penetrate cells will allow peptides against intracellular targets to be effective. Targets available to cell-penetrating peptides include transcription factors, intracellular signaling molecules such as tyrosine kinases, and molecules involved in the apoptotic pathway. Functional groups that allow entry into cells include peptides or chemical groups that can be attached to either a peptide or a molecular scaffold. Peptides, such as those derived from VP22, HIV Tat, Drosophila homeobox protein (Antennapedia), are described, for example, in Chen and Harrison, Biochemical Society Transactions (2007) Volume 35, part 4, p821; Gupta et al. in Advanced Drug Discovery Reviews (2004) Volume 57 9637. Examples of short peptides that have been shown to be effective in

- 36 045862 шении переноса через плазматические мембраны, включают пептид пенетратин из 16 аминокислот из белка Drosophila Antennapedia (Derossi et al (1994) J Biol. Chem. Volume 269 p10444), модельный амфипатический пептид из 18 аминокислот (Oehlke et al (1998) Biochim Biophys Acts Volume 1414 p127) и аргинин-богатые области белка ТАТ ВИЧ. Непептидные подходы включают применение низкомолекулярных миметиков или SMOC, которые могут быть без труда присоединены к биомолекулам (Okuyama et al (2007) Nature Methods Volume 4 p153). Другие химические стратегии для присоединения групп гуанидиния к молекулам также повышают проникновение в клетки (Elson-Scwab et al (2007) J Biol Chem Volume 282 p13585). Низкомолекулярные соединения, такие как стероиды, можно добавлять к молекулярному каркасу для повышения поглощения клетками.- 36 045862 examples of plasma membrane transport include the 16 amino acid peptide penetratin from the Drosophila Antennapedia protein (Derossi et al (1994) J Biol. Chem. Volume 269 p10444), a model 18 amino acid amphipathic peptide (Oehlke et al (1998) Biochim Biophys Acts Volume 1414 p127) and arginine-rich regions of the HIV TAT protein. Non-peptide approaches include the use of small molecule mimetics or SMOCs, which can be readily attached to biomolecules (Okuyama et al (2007) Nature Methods Volume 4 p153). Other chemical strategies for attaching guanidinium groups to molecules also increase cell penetration (Elson-Schwab et al (2007) J Biol Chem Volume 282 p13585). Low molecular weight compounds such as steroids can be added to the molecular scaffold to enhance cellular uptake.

Один из классов функциональных групп, которые могут быть присоединены к пептидным лигандам, включает антитела и их связывающие фрагменты, такие как Fab, Fv или однодоменные фрагменты. В частности, можно использовать антитела, которые связываются с белками, способными увеличивать время полужизни пептидного лиганда in vivo.One class of functional groups that can be attached to peptide ligands includes antibodies and their binding fragments, such as Fab, Fv or single domain fragments. In particular, antibodies that bind to proteins capable of increasing the half-life of the peptide ligand in vivo can be used.

В одном варианте осуществления структура пептидный лиганд-эффекторная группа по изобретению имеет время полужизни te, выбранное из группы, состоящей из: 12 ч или более, 24 ч или более, 2 суток или более, 3 суток или более, 4 суток или более, 5 суток или более, 6 суток или более, 7 суток или более, 8 суток или более, 9 суток или более, 10 суток или более, 11 суток или более, 12 суток или более, 13 суток или более, 14 суток или более, 15 суток или более или 20 суток или более. Преимущественно структура пептидный лиганд-эффекторная группа или композиция по изобретению имеет время полужизни te в диапазоне от 12 до 60 ч. В следующем варианте осуществления она имеет время полужизни te, составляющее сутки или более. В следующем варианте осуществления оно находится в диапазоне от 12 до 26 ч.In one embodiment, the peptide ligand effector group structure of the invention has a half-life te selected from the group consisting of: 12 hours or more, 24 hours or more, 2 days or more, 3 days or more, 4 days or more, 5 days or more, 6 days or more, 7 days or more, 8 days or more, 9 days or more, 10 days or more, 11 days or more, 12 days or more, 13 days or more, 14 days or more, 15 days or more or 20 days or more. Advantageously, the peptide ligand-effector group structure or composition of the invention has a half-life te ranging from 12 to 60 hours. In a further embodiment, it has a half-life te of a day or more. In a further embodiment, it is in the range of 12 to 26 hours.

В одном конкретном варианте осуществления изобретения функциональная группа выбрана из хелатора металлов, который пригоден для образования комплекса с радиоизотопами металлов, имеющими медицинское значение.In one particular embodiment of the invention, the functional group is selected from a metal chelator that is suitable for complexing with metal radioisotopes of medical importance.

Возможные эффекторные группы также включают ферменты, например, такие как карбоксипептидаза G2, для применения в терапии фермент/пролекарство, где пептидный лиганд заменяет антитела в ADEPT.Possible effector groups also include enzymes, such as carboxypeptidase G2, for use in enzyme/prodrug therapy, where a peptide ligand replaces the antibodies in ADEPT.

В одном конкретном варианте осуществления изобретения функциональная группа выбрана из лекарственного средства, такого как цитотоксическое средство для терапии злокачественной опухоли. Подходящие примеры включают: алкилирующие средства, такие как цисплатин и карбоплатин, а также оксалиплатин, мехлорэтамин, циклофосфамид, хлорамбуцил, ифосфамид; антиметаболиты, включая аналоги пуринов азатиоприн и меркаптопурин или аналоги пиримидинов; растительные алкалоиды и терпеноиды, вклчающие алкалоиды барвинка, такие как винкристин, винбластин, винорелбин и виндезин; подофиллотоксин и его производные этопозид и тенипозид; таксаны, включая паклитаксел, первоначально известный как таксол; ингибиторы топоизомеразы, включая камптотецины: иринотекан и топотекан, и ингибиторы типа II, включая амсакрин, этопозид, этопозида фосфат и тенипозид. Следующие средства могут включать противоопухолевые антибиотики, которые включают иммунодепрессант дактиномицин (который используют для трансплантации почек), доксорубицин, эпирубицин, блеомицин, калихеамицины и другие.In one particular embodiment of the invention, the functional group is selected from a drug, such as a cytotoxic agent for cancer therapy. Suitable examples include: alkylating agents such as cisplatin and carboplatin, as well as oxaliplatin, mechlorethamine, cyclophosphamide, chlorambucil, ifosfamide; antimetabolites, including the purine analogs azathioprine and mercaptopurine or pyrimidine analogs; plant alkaloids and terpenoids, including vinca alkaloids such as vincristine, vinblastine, vinorelbine and vindesine; podophyllotoxin and its derivatives etoposide and teniposide; taxanes, including paclitaxel, originally known as taxol; topoisomerase inhibitors, including the camptothecins: irinotecan and topotecan, and type II inhibitors, including amsacrine, etoposide, etoposide phosphate and teniposide. The following agents may include antitumor antibiotics, which include the immunosuppressant dactinomycin (which is used for kidney transplants), doxorubicin, epirubicin, bleomycin, calicheamicins, and others.

В одном конкретном варианте осуществления изобретения цитотоксическое средство выбрано из майтанзиноидов (таких как DM1) или монометилауристатинов (таких как ММАЕ).In one particular embodiment of the invention, the cytotoxic agent is selected from maytansinoids (such as DM1) or monomethyl auristatins (such as MMAE).

DM1 представляет собой цитотоксическое средство, которое представляет собой тиолсодержащее производное майтанзина и имеет следующую структру:DM1 is a cytotoxic agent that is a thiol-containing derivative of maytansine and has the following structure:

В настоящем описании в табл. 4 представлены данные, которые демонстрируют эффекты пептидного лиганда, конъюгированного с токсином, содержащим DM1.In the present description in table. 4 presents data that demonstrates the effects of a peptide ligand conjugated to a DM1-containing toxin.

Монометилауристатин Е (ММАЕ) представляет собой синтетическое антинеопластическое средство и имеет следующую структуру:Monomethyl auristatin E (MMAE) is a synthetic antineoplastic agent and has the following structure:

- 37 045862- 37 045862

В настоящем описании в табл. 4 представлены данные, которые демонстрируют эффекты пептидных лигандов, конъюгированных с токсином, содержащим ММАЕ.In the present description in table. 4 presents data that demonstrates the effects of peptide ligands conjugated to a toxin containing MMAE.

В еще одном дополнительно конкретном варианте осуществления изобретения цитотоксическое средство выбрано из монометилауристатина Е (ММАЕ).In yet another further specific embodiment of the invention, the cytotoxic agent is selected from monomethyl auristatin E (MMAE).

В одном варианте осуществления цитотоксическое средство связано с бициклическим пептидом расщепляемой связью, такой как дисульфидная связь или чувствительная к действию протеаз связь. В следующем варианте осуществления группы, соседние с дисульфидной связью, модифицируют для контроля препятствования дисульфидной связи и посредством этого скорости расщепления и сопутствующего высвобождения цитотоксического средства.In one embodiment, the cytotoxic agent is linked to the bicyclic peptide by a cleavable bond, such as a disulfide bond or a protease-sensitive bond. In a further embodiment, the groups adjacent to the disulfide bond are modified to control interference with the disulfide bond and thereby the rate of degradation and concomitant release of the cytotoxic agent.

В опубликованной работе показана возможность модификации чувствительности дисульфидной связи к восстановлению путем внесения пространственного препятствования с любой стороны дисульфидной связи (Kellogg et al (2011) Bioconjugate Chemistry, 22, 717). Более высокая степень пространственного препятствования снижает скорость восстановления посредством внутриклеточного глутатиона, а также внеклеточных (системных) восстановителей, вследствие чего происходит уменьшение простоты, с которой токсины высвобождается, как внутри, так и снаружи клетки. Таким образом, выбор оптимальной стабильности дисульфида в кровотоке (которая минимизирует нежелательные побочные эффекты токсина) против эффективного высвобождения во внутриклеточной среде (которое максимизирует терапевтический эффект) может быть достигнут путем тщательного выбора степени препятствования с каждой из сторон от дисульфидной связи.Published work has shown that it is possible to modify the sensitivity of a disulfide bond to reduction by introducing steric hindrance on either side of the disulfide bond (Kellogg et al (2011) Bioconjugate Chemistry, 22, 717). A higher degree of steric obstruction reduces the rate of reduction by intracellular glutathione as well as extracellular (systemic) reducing agents, thereby reducing the ease with which toxins are released both inside and outside the cell. Thus, the choice of optimal disulfide stability in the bloodstream (which minimizes unwanted side effects of the toxin) versus efficient release in the intracellular environment (which maximizes therapeutic effect) can be achieved by carefully selecting the degree of interference on each side of the disulfide bond.

Препятствование с любой из сторон дисульфидной связи модулируют посредством внесения одной или нескольких метальных групп либо на нацеливающей структуре (в данном случае, бициклическом пептиде), либо на стороне токсина молекулярной конструкции.Interference on either side of the disulfide bond is modulated by the introduction of one or more methyl groups either on the targeting structure (in this case, a bicyclic peptide) or on the toxin side of the molecular construct.

В одном варианте осуществления цитотоксическое средство и линкер выбраны из любых комбинаций из тех, что описаны в WO 2016/067035 (цитотоксические средства и их линкеры включены в настоящее описание в качестве ссылок).In one embodiment, the cytotoxic agent and linker are selected from any combination of those described in WO 2016/067035 (cytotoxic agents and their linkers are incorporated herein by reference).

В одном варианте осуществления линкер между указанным цитотоксическим средством и указанным бициклическим пептидом содержит один или несколько аминокислотным остатков. Примеры подходящих аминокислотных остатков в качестве подходящих линкеров включают Ala, Cit, Lys, Trp и Val.In one embodiment, the linker between said cytotoxic agent and said bicyclic peptide contains one or more amino acid residues. Examples of suitable amino acid residues as suitable linkers include Ala, Cit, Lys, Trp and Val.

В одном варианте осуществления цитотоксическое средство выбрано из ММАЕ и указанный конъюгат лекарственного средства, кроме того, содержит линкер, выбранный из: -PABC-Cit-Val-глутарилаили -РАВС-циклобутил-Ala-Cit-eAla-, где РАВС означает п-аминобензилкарбамат. Полные детали, касающиеся циклобутилсодержащего линкера, могут быть найдены в Wei et al (2018) J. Med. Chem. 61, 9891000. В следующем варианте осуществления цитотоксическое средство выбрано из ММАЕ и линкер представляет собой -PABC-Cit-Val-глутарил-.In one embodiment, the cytotoxic agent is selected from MMAE and said drug conjugate further comprises a linker selected from: -PABC-Cit-Val-glutaryl or -PABC-cyclobutyl-Ala-Cit-eAla-, where PABC is p-aminobenzylcarbamate . Full details regarding the cyclobutyl-containing linker can be found in Wei et al (2018) J. Med. Chem. 61, 9891000. In a further embodiment, the cytotoxic agent is selected from MMAE and the linker is -PABC-Cit-Val-glutaryl-.

В альтернативном варианте осуществления цитотоксическое средство представляет собой DM1 и указанный конъюгат лекарственного средства, кроме того, содержит линкер, который представляет собой -SPDB-(SO₃H)-, где SPDB означает N-сукцинимидил 3-(2-пиридилдитио)пропионат.In an alternative embodiment, the cytotoxic agent is DM1 and said drug conjugate further comprises a linker that is -SPDB-(SO ₃ H)-, where SPDB is N-succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate.

В одном варианте осуществления цитотоксическое средство представляет собой ММАЕ, бициклический пептид выбран из BCY7556, как определено в настоящем описании, и линкер выбран из -PABCCit-Val-глутарила-. Этот BDC известен в настоящем описании как BCY7683. В настоящем описании приводятся данные, которые демонстрируют превосходное связывание BCY7683 с нектином-4 человека в анализе связывания с использованием SPR, как показано в табл. 4. Этот BDC также продемонстрировал хорошую противоопухолевую активность в модели немелкоклеточного рака легкого, как показано в примере 1.In one embodiment, the cytotoxic agent is MMAE, the bicyclic peptide is selected from BCY7556 as defined herein, and the linker is selected from -PABCCit-Val-glutaryl-. This BDC is known herein as BCY7683. Data reported herein demonstrate superior binding of BCY7683 to human nectin-4 in a SPR binding assay, as shown in Table 1. 4. This BDC also demonstrated good antitumor activity in a non-small cell lung cancer model, as shown in Example 1.

В альтернативном варианте осуществления цитотоксическое средство представляет собой ММАЕ, бициклический пептид выбран из BCY7814, как определено в настоящем описании, и линкер выбран из PABC-Cit-Val-глутарила-. Этот BDC известен в настоящем описании как BCY7825. В настоящем описании приводятся данные, которые демонстрируют превосходное связывание BCY7825 с нектином-4 человека в анализе связывания с использованием SPR, как показано в табл. 4. Этот BDC также продемонстрировал хорошую противоопухолевую активность в модели немелкоклеточного рака легкого, как показано в примере 1, и в модели рака мочевого пузыря, как показано в примере 2.In an alternative embodiment, the cytotoxic agent is MMAE, the bicyclic peptide is selected from BCY7814 as defined herein, and the linker is selected from PABC-Cit-Val-glutaryl-. This BDC is known herein as BCY7825. Data reported herein demonstrate superior binding of BCY7825 to human nectin-4 in a SPR binding assay, as shown in Table 1. 4. This BDC also demonstrated good antitumor activity in a non-small cell lung cancer model as shown in Example 1 and in a bladder cancer model as shown in Example 2.

В альтернативном варианте осуществления цитотоксическое средство представляет собой DM1, бициклический пептид выбран из BCY7814, как определено в настоящем описании, и линкер выбран изIn an alternative embodiment, the cytotoxic agent is DM1, the bicyclic peptide is selected from BCY7814 as defined herein, and the linker is selected from

- 38 045862- 38 045862

SPDB-(SO₃H)-. Этот BDC известен в настоящем описании как BCY7826. В настоящем описании приводятся данные, которые демонстрируют превосходное связывание BCY7826 с нектином-4 человека в анализе связывания с использованием SPR, как показано в табл. 4. Этот BDC также продемонстрировал хорошую противоопухолевую активность в модели немелкоклеточного рака легкого, как показано в примере 1.SPDB-(SO ₃ H)-. This BDC is known herein as BCY7826. Data reported herein demonstrate superior binding of BCY7826 to human nectin-4 in a SPR binding assay, as shown in Table 1. 4. This BDC also demonstrated good antitumor activity in a non-small cell lung cancer model, as shown in Example 1.

В альтернативном варианте осуществления цитотоксическое средство представляет собой ММАЕ, бициклической пептид выбран из BCY8234, как определено в настоящем описании, и линкер выбран из PABC-Cit-Val-глутарила-. Этот BDC известен в настоящем описании как BCY8245 и схематично изображается как:In an alternative embodiment, the cytotoxic agent is MMAE, the bicyclic peptide is selected from BCY8234 as defined herein, and the linker is selected from PABC-Cit-Val-glutaryl-. This BDC is known herein as BCY8245 and is schematically represented as:

HK^J .10 [SEQU/jHK ^J .10[SEQU/j

I |,.Ν-_Ο '.КО 159/I |,.Ν- _Ο '.KO 159/

BCY8245 и также может быть более детально изображен какBCY8245 and can also be depicted in more detail as

BCY8245BCY8245

В настоящем описании представлены данные, которые демонстрируют превосходное связывание BCY8245 с нектином-4 человека в анализе связывания посредством SPR, как показано в табл. 4. Этот BDC также продемонстрировал хорошую противоопухолевую активность в модели немелкоклеточного рака легкого, как показано в примере 1, в модели рака мочевого пузыря, как показано в примере 2, в модели рака поджелудочной железы, как показано в примере 3, и в модели рака молочной железы, как показано в примере 4.Presented herein are data that demonstrate superior binding of BCY8245 to human nectin-4 in a SPR binding assay, as shown in Table 1. 4. This BDC also demonstrated good antitumor activity in a non-small cell lung cancer model as shown in Example 1, a bladder cancer model as shown in Example 2, a pancreatic cancer model as shown in Example 3, and a breast cancer model. glands, as shown in example 4.

В альтернативном варианте осуществления цитотоксическое средство представляет собой ММАЕ, бициклический пептид выбран из BCY8231, как определено в настоящем описании, и линкер выбран из PABC-Cit-Val-глутарила. Этот BDC известен в настоящем описании как BCY8253. В настоящем описании приводятся данные, которые демонстрируют превосходное связывание BCY8253 с нектином-4 человека в анализе связывания с использованием SPR, как показано в табл. 4. Этот BDC также продемонстрировал хорошую противоопухолевую активность в модели немелкоклеточного рака легкого, как показано в примере 1, в модели рака мочевого пузыря, как показано в примере 2, в модели рака поджелудочной железы, как показано в примере 3, и в модели рака молочной железы, как показано в примере 4.In an alternative embodiment, the cytotoxic agent is MMAE, the bicyclic peptide is selected from BCY8231 as defined herein, and the linker is selected from PABC-Cit-Val-glutaryl. This BDC is known herein as BCY8253. Data reported herein demonstrate superior binding of BCY8253 to human nectin-4 in a SPR binding assay, as shown in Table 1. 4. This BDC also demonstrated good antitumor activity in a non-small cell lung cancer model as shown in Example 1, a bladder cancer model as shown in Example 2, a pancreatic cancer model as shown in Example 3, and a breast cancer model. glands, as shown in example 4.

В альтернативном варианте осуществления цитотоксическое средство представляет собой ММАЕ, бициклический пептид выбран из BCY8232, как определено в настоящем описании, и линкер выбран из PABC-Cit-Val-глутарила-. Этот BDC известен в настоящем описании как BCY8254. В настоящем описании приводятся данные, которые демонстрируют превосходное связывание BCY8254 с нектином-4 человека в анализе связывания с использованием SPR, как показано в табл. 4. Этот BDC также продемонстрировал хорошую противоопухолевую активность в модели немелкоклеточного рака легкого, как показано в примере 1, и в модели рака мочевого пузыря, как показано в примере 2.In an alternative embodiment, the cytotoxic agent is MMAE, the bicyclic peptide is selected from BCY8232 as defined herein, and the linker is selected from PABC-Cit-Val-glutaryl-. This BDC is known herein as BCY8254. Data reported herein demonstrate superior binding of BCY8254 to human nectin-4 in a SPR binding assay, as shown in Table 1. 4. This BDC also demonstrated good antitumor activity in a non-small cell lung cancer model as shown in Example 1 and in a bladder cancer model as shown in Example 2.

В альтернативном варианте осуществления цитотоксическое средство представляет собой ММАЕ, бициклический пептид выбран из BCY8235, как определено в настоящем описании, и линкер выбран из PABC-Cit-Val-глутарила. Этот BDC известен в настоящем описании как BCY8255. В настоящем описании приводятся данные, которые демонстрируют превосходное связывание BCY8255 с нектином-4 человека в анализе связывания с использованием SPR, как показано в табл. 4. Этот BDC также продемонстрировал хорошую противоопухолевую активность в модели немелкоклеточного рака легкого, как показано в примере 1, в модели рака мочевого пузыря, как показано в примере 2, в модели рака поджелудочной железы, как показано в примере 3, и в модели рака молочной железы, как показано в примере 4.In an alternative embodiment, the cytotoxic agent is MMAE, the bicyclic peptide is selected from BCY8235 as defined herein, and the linker is selected from PABC-Cit-Val-glutaryl. This BDC is known herein as BCY8255. Data reported herein demonstrate superior binding of BCY8255 to human nectin-4 in a SPR binding assay, as shown in Table 1. 4. This BDC also demonstrated good antitumor activity in a non-small cell lung cancer model as shown in Example 1, a bladder cancer model as shown in Example 2, a pancreatic cancer model as shown in Example 3, and a breast cancer model. glands, as shown in example 4.

В альтернативном варианте осуществления цитотоксическое средство представляет собой ММАЕ, бициклический пептид выбран из BCY8234, как определено в настоящем описании, и линкер выбран из РАВС-циклобутил-(В-А1а)-. Этот BDC известен в настоящем описании как BCY8549. В настоящем опиIn an alternative embodiment, the cytotoxic agent is MMAE, the bicyclic peptide is selected from BCY8234 as defined herein, and the linker is selected from PABC-cyclobutyl-(B-A1a)-. This BDC is known herein as BCY8549. In the present opi

- 39 045862 сании приводятся данные, которые демонстрируют превосходное связывание BCY8549 с нектином-4 человека в анализе связывания с использованием SPR, как показано в табл. 4.- 39 045862 Saniy provides data that demonstrates excellent binding of BCY8549 to human nectin-4 in a binding assay using SPR, as shown in table. 4.

В альтернативном варианте осуществления цитотоксическое средство представляет собой ММАЕ, бициклический пептид выбран из BCY8831, как определено в настоящем описании, и линкер выбран из PABC-Cit-Val-глутарила и линкер-цитотоксическое средство связаны с бициклическим пептидом в положении Lys3. Этот BDC известен в настоящем описании как BCY8550. В настоящем описании приводятся данные, которые демонстрируют превосходное связывание BCY8550 с нектином-4 человека в анализе связывания с использованием SPR, как показано в табл. 4.In an alternative embodiment, the cytotoxic agent is MMAE, the bicyclic peptide is selected from BCY8831 as defined herein, and the linker is selected from PABC-Cit-Val-glutaryl and the linker-cytotoxic agent is linked to the bicyclic peptide at the Lys3 position. This BDC is known herein as BCY8550. Data reported herein demonstrate superior binding of BCY8550 to human nectin-4 in a SPR binding assay, as shown in Table 1. 4.

В альтернативном варианте осуществления цитотоксическое средство представляет собой ММАЕ, бициклический пептид выбран из BCY8269, как определено в настоящем описании, и линкер выбран из PABC-Cit-Val-глутарила-. Этот BDC известен в настоящем описании как BCY8783. В настоящем описании приводятся данные, которые демонстрируют превосходное связывание BCY8783 с нектином-4 человека в анализе связывания с использованием SPR, как показано в табл. 4. Этот BDC также эффективно вызывал регрессию опухолей в модели немелкоклеточного рака легкого, как показано в примере 5.In an alternative embodiment, the cytotoxic agent is MMAE, the bicyclic peptide is selected from BCY8269 as defined herein, and the linker is selected from PABC-Cit-Val-glutaryl-. This BDC is known herein as BCY8783. Data reported herein demonstrate superior binding of BCY8783 to human nectin-4 in a SPR binding assay, as shown in Table 1. 4. This BDC was also effective in causing tumor regression in a non-small cell lung cancer model, as shown in Example 5.

В альтернативном варианте осуществления цитотоксическое средство представляет собой ММАЕ, бициклический пептид выбран из BCY8273, как определено в настоящем описании, и линкер выбран из PABC-Cit-Val-глутарила-. Этот BDC известен в настоящем описании как BCY8784. В настоящем описании приводятся данные, которые демонстрируют превосходное связывание BCY8784 с нектином-4 человека в анализе связывания с использованием SPR, как показано в табл. 4. Этот BDC также эффективно вызывал регрессию опухолей в модели немелкоклеточного рака легкого, как показано в примере 5.In an alternative embodiment, the cytotoxic agent is MMAE, the bicyclic peptide is selected from BCY8273 as defined herein, and the linker is selected from PABC-Cit-Val-glutaryl-. This BDC is known herein as BCY8784. Data reported herein demonstrate superior binding of BCY8784 to human nectin-4 in a SPR binding assay, as shown in Table 1. 4. This BDC was also effective in causing tumor regression in a non-small cell lung cancer model, as shown in Example 5.

В следующем варианте осуществления бициклический конъюгат лекарственного средства выбран из любого из: BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254, BCY8255, BCY8549, BCY8550, BCY8783 и BCY8784. В следующем варианте осуществления бициклический конъюгат лекарственного средства выбран из любого из BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254, BCY8255, BCY8783 и BCY8784. В следующем варианте осуществления бициклический конъюгат лекарственного средства представляет собой BCY8245. Конъюгат лекарственного средства BCY8245 продемонстрировал лучшую дозозависимую противоопухолевую активность, как продемонстрировано в данных, описанных в настоящем описании.In the following embodiment, the bicyclic drug conjugate is selected from any of: BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254, BCY8255, BCY8549, BCY8550, BCY8783 and BCY8784. In a further embodiment, the bicyclic drug conjugate is selected from any of BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254, BCY8255, BCY8783 and BCY8784. In a further embodiment, the bicyclic drug conjugate is BCY8245. The drug conjugate BCY8245 demonstrated superior dose-dependent antitumor activity as demonstrated in the data described herein.

В одном варианте осуществления конъюгат лекарственного средства является отличным от BCY8245 и/или BCY8549.In one embodiment, the drug conjugate is other than BCY8245 and/or BCY8549.

Синтез.Synthesis.

Пептиды по настоящему изобретению можно изготавливать синтетическим путем стандартными способами с последующей реакцией с молекулярным каркасом in vitro. Когда это осуществляют, можно использовать стандартную химию. Это позволяет быстрое крупномасштабное получение растворимого материала для дальнейших экспериментов или подтверждения. Такие способы можно проводить с использованием общепринятой химии, такой как химия, описанная в Timmerman et al (выше).The peptides of the present invention can be produced synthetically by standard methods followed by reaction with the molecular scaffold in vitro. When this is accomplished, standard chemistry can be used. This allows rapid large-scale production of soluble material for further experimentation or confirmation. Such methods can be carried out using conventional chemistry, such as the chemistry described in Timmerman et al (supra).

Таким образом, изобретение также относится к производству полипептидов или конъюгатов, отобранных, как описано в настоящем описании, где производство включает необязательные дополнительные стадии, как объяснено ниже. В одном варианте осуществления эти стадии проводят для конечного полипептида/конъюгата, полученного посредством химического синтеза.Thus, the invention also relates to the production of polypeptides or conjugates selected as described herein, where the production includes optional additional steps, as explained below. In one embodiment, these steps are performed on the final polypeptide/conjugate obtained through chemical synthesis.

Необязательно аминокислотные остатки в представляющем интерес полипептиде можно заменять при получении конъюгата или комплекса.Optionally, amino acid residues in the polypeptide of interest can be replaced when preparing a conjugate or complex.

Пептиды также можно удлинять, например, путем включения, например, другой петли и, таким образом, внесения множественной специфичности.Peptides can also be extended, for example by including, for example, another loop and thus introducing multiple specificities.

Для удлинения пептида его можно просто удлинять химически на его N-конце или С-конце или в петлях с использованием ортогонально выступающих остатков лизина (и аналогов) с помощью стандартной твердофазной химии или химии в фазе раствора. Стандартные способы (био)конъюгации можно использовать для обеспечения активированного или активируемого N- или С-конца. Альтернативно вставки можно вносить путем конденсации фрагментов или нативного химического лигирования, например, как описано в (Dawson et al. 1994. Synthesis of Proteins by Native Chemical Ligation. Science 266:776-779), или посредством ферментов, например с использованием субтилигазы, как описано в (Chang et al Proc Natl Acad Sci USA. 1994 Dec 20; 91(26): 12544-8 или в Hikari et al Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters Volume 18, Issue 22, 15 November 2008, Pages 6000-6003).To extend a peptide, it can simply be extended chemically at its N-terminus or C-terminus or in loops using orthogonally protruding lysine residues (and analogues) using standard solid-phase or solution-phase chemistry. Standard (bio)conjugation techniques can be used to provide an activated or activated N- or C-terminus. Alternatively, inserts can be introduced by fragment condensation or native chemical ligation, for example as described in (Dawson et al. 1994. Synthesis of Proteins by Native Chemical Ligation. Science 266:776-779), or by enzymes, for example using subtiligase, such as described in (Chang et al Proc Natl Acad Sci USA. 1994 Dec 20; 91(26): 12544-8 or in Hikari et al Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters Volume 18, Issue 22, 15 November 2008, Pages 6000-6003).

Альтернативно пептиды можно удлинять или модифицировать путем дальнейшей конъюгации через дисульфидные связи. Это имеет дополнительное преимущество, состоящее в позволении первому и второму пептидам диссоциировать друг от друга после того, как они оказываются в восстанавливающей среде в клетке. В этом случае, молекулярный каркас (например, ТАТА) можно присоединять в ходе химического синтеза первого пептида, чтобы он реагировал с тремя группами цистеина; затем можно присоединять дополнительный цистеин или тиол к N- или С-концу первого пептида, так чтобы этот цистеин или тиол реагировал только со свободным цистеином или тиолом второго пептида, образуя связанный дисульфидной связью конъюгат бициклический пептид-пептид.Alternatively, the peptides can be extended or modified by further conjugation via disulfide bonds. This has the additional advantage of allowing the first and second peptides to dissociate from each other once they are exposed to a reducing environment in the cell. In this case, a molecular scaffold (eg TATA) can be attached during chemical synthesis of the first peptide so that it reacts with the three cysteine groups; an additional cysteine or thiol can then be added to the N- or C-terminus of the first peptide such that the cysteine or thiol reacts only with the free cysteine or thiol of the second peptide, forming a disulfide-linked bicyclic peptide-peptide conjugate.

Сходные способы в равной степени применимы для синтеза/присоединения двух бициклических иSimilar methods are equally applicable for the synthesis/coupling of two bicyclic and

- 40 045862 биспецифических макроциклов, потенциально создавая тетраспецифическую молекулу.- 40 045862 bispecific macrocycles, potentially creating a tetraspecific molecule.

Более того, присоединения других функциональных групп или эффекторных групп можно проводить аналогичным образом с использованием соответствующей химии, осуществляя присоединение на N- или С-конце или посредством боковых цепей. В одном варианте осуществления присоединение проводят так, что не происходит блокирования активности любой из структур.Moreover, additions of other functional groups or effector groups can be accomplished in a similar manner using appropriate chemistry, at the N- or C-terminus or through side chains. In one embodiment, the coupling is carried out such that the activity of either structure is not blocked.

Фармацевтические композиции.Pharmaceutical compositions.

В соответствии со следующим аспектом изобретения предусматривается фармацевтическая композиция, содержащая пептидный лиганд или конъюгат лекарственного средства, как определено в настоящем описании, в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами.In accordance with a further aspect of the invention, there is provided a pharmaceutical composition comprising a peptide ligand or drug conjugate, as defined herein, in combination with one or more pharmaceutically acceptable excipients.

Главным образом, пептидные лиганды по настоящему изобретению могут использоваться в очищенной форме вместе с фармакологически приемлемыми эксципиентами или носителями. Как правило, эти эксципиенты или носители включают водные или спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, включая солевой раствор и/или забуференные среды. Парентеральные носители включают раствор хлорида натрия, раствор декстрозы Рингера, раствор декстрозы и хлорид натрия и лактатный раствор Рингера. Подходящие физиологически-приемлемые адъюванты, если необходимо поддерживать полипептидный комплекс в суспензии, могут быть выбраны из загустителей, таких как карбоксиметилцеллюлоза, поливинилпирролидон, желатин и альгинаты.In general, the peptide ligands of the present invention can be used in purified form together with pharmacologically acceptable excipients or carriers. Typically, these excipients or carriers include aqueous or alcohol/aqueous solutions, emulsions or suspensions, including saline and/or buffered media. Parenteral vehicles include sodium chloride solution, dextrose Ringer's solution, dextrose and sodium chloride solution, and lactated Ringer's solution. Suitable physiologically acceptable adjuvants, if it is necessary to maintain the polypeptide complex in suspension, can be selected from thickening agents such as carboxymethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, gelatin and alginates.

Внутривенные носители включают жидкости и средства для восполнения питательных веществ и восполнения электролитов, такие как средства на основе раствора декстрозы Рингера. Также могут присутствовать консерванты и другие добавки, такие как противомикробные средства, антиоксиданты, хелатирующие агенты и инертные газы (Mack (1982) Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition).Intravenous vehicles include fluids and nutrient and electrolyte replenishment agents, such as dextrose Ringer's solution. Preservatives and other additives such as antimicrobials, antioxidants, chelating agents and inert gases may also be present (Mack (1982) Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition).

Пептидные лиганды по настоящему изобретению можно использовать в качестве вводимых по отдельности композиций или совместно с другими средствами. Они могут включать антитела, фрагменты антител и различные иммунотерапевтические лекарственные средства, такие как циклоспорин, метотрексат, адриамицин или цисплатин, и иммунотоксины. Фармацевтические композиции могут включать коктейли различных цитотоксических или других средств совместно с белковыми лигандами по настоящему изобретению, или даже комбинациями выбранных полипептидов в соответствии с настоящим изобретением, обладающими различной специфичностью, такими как полипептиды, отобранные с использованием различных лигандов-мишеней, и их могут объединять или не объединять перед введением.The peptide ligands of the present invention can be used as separately administered compositions or in combination with other agents. These may include antibodies, antibody fragments and various immunotherapy drugs such as cyclosporine, methotrexate, adriamycin or cisplatin, and immunotoxins. Pharmaceutical compositions may include cocktails of various cytotoxic or other agents together with protein ligands of the present invention, or even combinations of selected polypeptides of the present invention having different specificities, such as polypeptides selected using different target ligands, and these may be combined or do not combine before administration.

Путь введения фармацевтических композиций по изобретению может представлять собой любой из путей, широко известных средним специалистам в данной области. Для терапии пептидные лиганды по изобретению можно вводить любому пациенту в соответствии со стандартными способами. Введение можно проводить посредством любого подходящего пути, в том числе парентерально, внутривенно, внутримышечно, внутрибрюшинно, трансдермально, легочным путем или также в соответствующих случаях путем прямой инфузии с использованием катетера. Предпочтительно, фармацевтические композиции согласно изобретению можно вводить посредством ингаляции. Дозировка и частота введения зависят от возраста, пола и состояния пациента, сопутствующего введения других лекарственных средств, противопоказаний и других параметров, которые должен учитывать клиницист.The route of administration of the pharmaceutical compositions of the invention may be any of the routes generally known to those of ordinary skill in the art. For therapy, the peptide ligands of the invention can be administered to any patient according to standard methods. Administration can be via any suitable route, including parenterally, intravenously, intramuscularly, intraperitoneally, transdermally, pulmonaryly or also, where appropriate, by direct infusion using a catheter. Preferably, the pharmaceutical compositions according to the invention can be administered by inhalation. The dosage and frequency of administration depend on the age, gender and condition of the patient, concomitant administration of other drugs, contraindications and other parameters that the clinician must take into account.

Пептидные лиганды по настоящему изобретению можно лиофилизировать для хранения и восстанавливать в подходящем носителе перед применением. Показано, что этот способ является эффективным, и можно использовать известные в данной области способы лиофилизации и восстановления. Специалистам в данной области будет понятно, что лиофилизация и восстановление могут приводить к различной степени потери активности, и что для компенсации этого уровни могут быть увеличены.The peptide ligands of the present invention can be lyophilized for storage and reconstituted in a suitable vehicle before use. This method has been shown to be effective and lyophilization and reconstitution methods known in the art can be used. Those skilled in the art will appreciate that lyophilization and reconstitution may result in varying degrees of loss of activity, and that levels may be increased to compensate for this.

Композиции, содержащие пептидные лиганды по настоящему изобретению или их коктейль, можно вводить для профилактического и/или терапевтического лечения. В определенных терапевтических применениях достаточное количество для достижения, по меньшей мере, частичного ингибирования, подавления, модулирования, уничтожения или некоторого другого поддающегося определению параметра популяции выбранных клеток определяют как терапевтически-эффективная доза. Количества, требуемые для достижения этой дозировки, зависят от тяжести заболевания и общего состояния собственной иммунной системы пациента, но, как правило, они находятся в диапазоне от 0,005 до 5,0 мг выбранного пептидного лиганда на килограмм массы тела, причем более часто используют дозы от 0,05 до 2,0 мг/кг/доза. Для профилактических применений композиции, содержащие пептидные лиганды по настоящему изобретению или их коктейли, также можно вводить в сходных или несколько более низких дозировках.Compositions containing the peptide ligands of the present invention, or a cocktail thereof, can be administered for prophylactic and/or therapeutic treatment. In certain therapeutic applications, a sufficient amount to achieve at least partial inhibition, suppression, modulation, killing, or some other measurable parameter of the population of selected cells is defined as a therapeutically effective dose. The amounts required to achieve this dosage depend on the severity of the disease and the general condition of the patient's own immune system, but typically range from 0.005 to 5.0 mg of the selected peptide ligand per kilogram of body weight, with doses ranging from 0.05 to 2.0 mg/kg/dose. For prophylactic applications, compositions containing the peptide ligands of the present invention or cocktails thereof can also be administered at similar or slightly lower dosages.

Композицию, содержащую пептидный лиганд в соответствии с настоящим изобретением, можно использовать в профилактических и терапевтических условиях для способствования изменению, инактивации, уничтожению или удалению выбранной популяции клеток-мишеней у млекопитающего. Кроме того, пептидные лиганды, описанные в настоящем описании, можно использовать экстракорпорально или in vitro для селективного уничтожения, истощения или иного эффективного удаления популяции клеток-мишеней из гетерогенной совокупности клеток. Кровь от млекопитающего можно комбинировать экстракорпорально с выбранными пептидными лигандами, и при этом нежелательные клетки убивают или иным образом извлекают из крови для возвращения млекопитающему в соответствии со стандартA composition containing a peptide ligand in accordance with the present invention can be used in prophylactic and therapeutic settings to promote the modification, inactivation, destruction or removal of a selected population of target cells in a mammal. In addition, the peptide ligands described herein can be used in vitro or in vitro to selectively kill, deplete, or otherwise effectively remove a population of target cells from a heterogeneous population of cells. Blood from a mammal can be combined extracorporeally with selected peptide ligands, and unwanted cells are killed or otherwise removed from the blood for return to the mammal according to standard

- 41 045862 ными способами.- 41 045862 in other ways.

Совместное введение с одним или несколькими другими терапевтическими средствами.Coadministration with one or more other therapeutic agents.

В зависимости от конкретного состояния или заболевания, подвергаемого лечению, также в композиции по настоящему изобретению могут присутствовать дополнительные терапевтические средства, которые обычно вводят для лечения этого состояния. Таким образом, в одном варианте осуществления фармацевтическая композиция, кроме того, содержит одно или несколько терапевтических средств. Как используют в рамках изобретения, дополнительные терапевтические средства, которые обычно вводят для лечения конкретного заболевания или состояния, известны как подходящие для заболевания или состояния, подвергаемого лечению.Depending on the particular condition or disease being treated, additional therapeutic agents that are typically administered to treat that condition may also be present in the composition of the present invention. Thus, in one embodiment, the pharmaceutical composition further comprises one or more therapeutic agents. As used herein, additional therapeutic agents that are typically administered to treat a particular disease or condition are known to be suitable for the disease or condition being treated.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения описанного заболевания или состояния, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения, описанного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли, и совместное введение одновременно или последовательно эффективного количества одного или нескольких дополнительных терапевтических средств, таких как средства, описанные в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления способ включает сопутствующее введение одного дополнительного терапевтического средства. В некоторых вариантах осуществления способ включает сопутствующее введение двух дополнительных терапевтические средства. В некоторых вариантах осуществления комбинация описанного соединения и дополнительного терапевтического средства или средств действует синергично.In some embodiments, the present invention provides a method of treating a described disease or condition, comprising administering to a patient in need thereof an effective amount of a compound described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and co-administering simultaneously or sequentially an effective amount of one or more additional therapeutic agents, such as those described herein. In some embodiments, the method includes concomitant administration of one additional therapeutic agent. In some embodiments, the method includes concomitant administration of two additional therapeutic agents. In some embodiments, the combination of the described compound and the additional therapeutic agent or agents acts synergistically.

Соединение по настоящему изобретению также можно использовать в комбинации с известными терапевтическими процессами, например, введением гормонов или лучевой терапией. В определенных вариантах осуществления предусматриваемое соединение используют в качестве радиосенсибилизирующего средства, особенно для лечения опухолей, которые демонстрируют низкую чувствительность к лучевой терапии.The compound of the present invention can also be used in combination with known therapeutic processes, for example, the administration of hormones or radiation therapy. In certain embodiments, the provided compound is used as a radiosensitizing agent, especially for the treatment of tumors that exhibit low sensitivity to radiation therapy.

Соединение по настоящему изобретению можно вводить отдельно или в комбинации с одним или несколькими другими терапевтическими соединениями, и возможная комбинированная терапия принимает форму фиксированных комбинаций, или введение соединения по изобретению и одного или нескольких других терапевтических соединений является поочередным или проводимым независимо друг от друга, или проводят комбинированное введение фиксированных комбинаций и одного или нескольких других терапевтических соединений. Соединение по настоящему изобретению, альтернативно или дополнительно, можно вводить, в частности, для терапии опухоли в комбинации с химиотерапией, лучевой терапией, иммунотерапий, фототерапией, хирургическим вмешательством, или их комбинацией. В равной степени возможна долговременная терапия, также как и адъювантная терапия, в контексте других стратегий лечения, как описано выше. Другими возможными способами лечения являются терапия для поддержания состояния пациента после регрессии опухоли или даже химиопрофилактическая терапия, например, у пациентов, имеющих риск.The compound of the present invention can be administered alone or in combination with one or more other therapeutic compounds, and possible combination therapy takes the form of fixed combinations, or the administration of the compound of the invention and one or more other therapeutic compounds is sequential or carried out independently of each other, or carried out combined administration of fixed combinations and one or more other therapeutic compounds. The compound of the present invention, alternatively or additionally, can be administered, in particular, for tumor therapy in combination with chemotherapy, radiation therapy, immunotherapy, phototherapy, surgery, or a combination thereof. Long-term therapy is equally possible, as is adjuvant therapy in the context of other treatment strategies as described above. Other possible treatments are therapy to maintain the patient's condition after tumor regression or even chemoprophylactic therapy, for example in patients at risk.

Одно или несколько других терапевтических средств можно вводить отдельно от соединения или композиции по изобретению в качестве режима многократного дозирования. Альтернативно одно или несколько других терапевтических средств могут быть частью однократной дозированной формы, смешанной с соединением по настоящему изобретению в единую композицию. При введении в качестве режима многократного дозирования одно или несколько других терапевтических средств и соединений или композиций по изобретению можно вводить одновременно, последовательно или в пределах некоторого периода времени друг от друга, например, в пределах 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 часов друг от друга. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств и соединение или композицию по изобретению вводят в качестве режима многократного дозирования в пределах более 24 ч друг от друга.One or more other therapeutic agents may be administered separately from a compound or composition of the invention as a multiple dosage regimen. Alternatively, one or more other therapeutic agents may be part of a unit dosage form mixed with a compound of the present invention into a single composition. When administered as a multiple dosage regimen, one or more other therapeutic agents and compounds or compositions of the invention may be administered simultaneously, sequentially, or within a period of time of each other, for example, within 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 or 24 hours apart. In some embodiments, one or more other therapeutic agents and a compound or composition of the invention are administered as a multiple dosage regimen within more than 24 hours of each other.

Как используют в рамках изобретения, термин комбинация, комбинированный и сходные термины относятся к одновременному или последовательному введению терапевтических средств в соответствии с настоящим изобретением. Например, соединение по настоящему изобретению можно вводить с одним или несколькими другими терапевтическими средствами одновременно или последовательно в раздельных единичных дозированных формах или вместе в единой единичной дозированной форме. Таким образом, настоящее изобретение относится к единой единичной дозированной форме, содержащей соединение по настоящему изобретению, одно или несколько других терапевтических средств и фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или наполнитель.As used herein, the term combination, combined and similar terms refer to the simultaneous or sequential administration of therapeutic agents in accordance with the present invention. For example, a compound of the present invention may be administered with one or more other therapeutic agents simultaneously or sequentially in separate unit dosage forms or together in a single unit dosage form. Thus, the present invention provides a single unit dosage form containing a compound of the present invention, one or more other therapeutic agents, and a pharmaceutically acceptable carrier, adjuvant, or excipient.

Количество соединения по изобретению и одного или нескольких других терапевтических средств (в композициях, которые содержат дополнительное терапевтическое средство, как описано выше), которые можно комбинировать с материалами носителей для получения единичной дозированной формы, варьируется в зависимости от хозяина, подвергаемого лечению, и конкретного способа введения. Предпочтительно, композиция по изобретению должна быть составлена так, чтобы можно было вводить дозировку 0,01-100 мг/кг массы тела/сутки соединения по изобретению.The amount of a compound of the invention and one or more other therapeutic agents (in compositions that contain an additional therapeutic agent as described above) that can be combined with the carrier materials to form a unit dosage form will vary depending on the host being treated and the particular method. introduction. Preferably, the composition of the invention should be formulated such that a dosage of 0.01-100 mg/kg body weight/day of a compound of the invention can be administered.

В композициях, которые содержат одно или несколько других терапевтических средств, одно или несколько других терапевтических средств и соединение по изобретению могут действовать синергичеIn compositions that contain one or more other therapeutic agents, one or more other therapeutic agents and a compound of the invention may act synergistically.

- 42 045862 ски. Таким образом, количество одного или нескольких других терапевтических средств таких композициях может быть меньшим, чем количество, которое требуется в монотерапии с использованием только этого терапевтического средства. В таких композициях можно вводить дозировку 0,01-1000 мкг/кг массы тела/сутки одного или нескольких других терапевтических средств.- 42 045862 ski. Thus, the amount of one or more other therapeutic agents in such compositions may be less than the amount required in monotherapy using that therapeutic agent alone. In such compositions, a dosage of 0.01-1000 μg/kg body weight/day of one or more other therapeutic agents may be administered.

Количество одного или нескольких других терапевтических средств, присутствующих в композициях по настоящему изобретению, может быть не большим, чем количество, которое обычно бы вводилось в композиции, содержащей это терапевтическое средство в качестве единственного активного вещества. Предпочтительно количество одного или нескольких других терапевтических средств в описанных в настоящем описании композициях находится в диапазоне приблизительно от 50 до 100% от количества, обычно присутствующего в композиции, содержащей это средство в качестве единственного терапевтически активного вещества. В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств вводят в дозировке приблизительно 50%, приблизительно 55%, приблизительно 60%, приблизительно 65%, приблизительно 70%, приблизительно 75%, приблизительно 80%, приблизительно 85%, приблизительно 90% или приблизительно 95% от количества, обычно вводимого для этого средства. Как используют в рамках изобретения, выражение обычно вводимый означает количество одобренного FDA терапевтического средства, предоставляемое для дозирования в соответствии с одобренным FDA вкладышем или ярлыком.The amount of one or more other therapeutic agents present in the compositions of the present invention may be no greater than the amount that would normally be administered in a composition containing that therapeutic agent as the sole active ingredient. Preferably, the amount of one or more other therapeutic agents in the compositions described herein ranges from about 50 to 100% of the amount typically present in a composition containing that agent as the sole therapeutically active agent. In some embodiments, one or more other therapeutic agents is administered at a dosage of about 50%, about 55%, about 60%, about 65%, about 70%, about 75%, about 80%, about 85%, about 90%, or about 95% of the amount usually administered for this purpose. As used herein, the expression generally administered means the amount of an FDA-approved therapeutic agent provided for dosing in accordance with an FDA-approved package insert or label.

Соединения по настоящему изобретению или их фармацевтические композиции также можно включать в композиции для нанесения покрытия на имплантируемое медицинское устройство, такое как протезы, искусственные клапаны, сосудистые трансплантаты, стенты и катетеры. Сосудистые стенты, например, используют для преодоления рестеноза (повторное сужение сосудистой стенки после повреждения). Однако пациенты с использованием стентов или других имплантируемых устройств имеют риск образования тромбов или активации тромбоцитов. Эти нежелательные эффекты можно предупреждать или смягчать путем предварительного покрытия устройства фармацевтически приемлемой композицией, содержащей ингибитор киназы. Другим вариантом осуществления настоящего изобретения являются имплантируемые устройства, покрытые соединением согласно настоящему изобретению.The compounds of the present invention or pharmaceutical compositions thereof can also be included in compositions for coating implantable medical devices such as prostheses, artificial valves, vascular grafts, stents and catheters. Vascular stents, for example, are used to overcome restenosis (re-narrowing of the vascular wall after injury). However, patients using stents or other implantable devices are at risk of developing blood clots or platelet activation. These undesirable effects can be prevented or mitigated by precoating the device with a pharmaceutically acceptable composition containing a kinase inhibitor. Another embodiment of the present invention is implantable devices coated with a compound according to the present invention.

Другие иллюстративные терапевтические средства.Other illustrative therapeutic agents.

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор поли-ADP-рибозополимеразы (PARP). В некоторых вариантах осуществления ингибитор PARP выбран из олапариба (Lynparza®, AstraZeneca); рукапариба (Rubraca®, Clovis Oncology); нирапариба (Zejula®, Tesaro); талазопариба (MDV3800/BMN 673/LT00673, Medivation/Pfizer/Biomarin); велипариба (АВТ-888, AbbVie); и BGB-290 (BeiGene, Inc.).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is a poly-ADP-ribose polymerase (PARP) inhibitor. In some embodiments, the PARP inhibitor is selected from olaparib (Lynparza®, AstraZeneca); rucaparib (Rubraca®, Clovis Oncology); niraparib (Zejula®, Tesaro); talazoparib (MDV3800/BMN 673/LT00673, Medivation/Pfizer/Biomarin); veliparib (AVT-888, AbbVie); and BGB-290 (BeiGene, Inc.).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор деацетилазы гистонов (HDAC). В некоторых вариантах осуществления ингибитор HDAC выбран из вориностата (Zolinza®, Merck); ромидепсина (Istodax®, Celgene); панобиностата (Farydak®, Novartis); белиностата (Beleodaq®, Spectrum Pharmaceuticals); энтиностата (SNDX-275, Syndax Pharmaceuticals) (NCT00866333); и чидамида (Epidaza®, HBI-8000, Chipscreen Biosciences, Китай).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is a histone deacetylase (HDAC) inhibitor. In some embodiments, the HDAC inhibitor is selected from vorinostat (Zolinza®, Merck); romidepsin (Istodax®, Celgene); panobinostat (Farydak®, Novartis); belinostat (Beleodaq®, Spectrum Pharmaceuticals); entinostat (SNDX-275, Syndax Pharmaceuticals) (NCT00866333); and chidamide (Epidaza®, HBI-8000, Chipscreen Biosciences, China).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор CDK, такой как ингибитор CDK4/CDK6. В некоторых вариантах осуществления ингибитор CDK 4/6 выбран из пальбоциклиба (Ibrance®, Pfizer); рибоциклиба (Kisqali®, Novartis); абемациклиба (Ly2835219, Eli Lilly) и трилациклиба (G1T28, G1 Therapeutics).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is a CDK inhibitor, such as a CDK4/CDK6 inhibitor. In some embodiments, the CDK 4/6 inhibitor is selected from palbociclib (Ibrance®, Pfizer); ribociclib (Kisqali®, Novartis); abemaciclib (Ly2835219, Eli Lilly) and trilaciclib (G1T28, G1 Therapeutics).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K). В некоторых вариантах осуществления ингибитор PI3K выбран из иделалисиба (Zydelig®, Gilead), алпелисиба (BYL719, Novartis), таселисиба (GDC-0032, Genentech/Roche); пиктилисиба (GDC-0941, Genentech/Roche); копанлисиба (BAY806946, Bayer); дувелисиба (ранее IPI-145, Infinity Pharmaceuticals); PQR309 (Piqur Therapeutics, Швейцария) и tGr1202 (ранее RP5230, TG Therapeutics).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is a phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitor. In some embodiments, the PI3K inhibitor is selected from idelalisib (Zydelig®, Gilead), alpelisib (BYL719, Novartis), taselisib (GDC-0032, Genentech/Roche); pictilisib (GDC-0941, Genentech/Roche); copanlisib (BAY806946, Bayer); duvelisib (formerly IPI-145, Infinity Pharmaceuticals); PQR309 (Piqur Therapeutics, Switzerland) and tGr1202 (formerly RP5230, TG Therapeutics).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой терапевтические средства на основе платины, также называемые платинами. Платины вызывают сшивание ДНК, так что они ингибируют репарацию ДНК и/или синтез ДНК, в основном в быстро репродуцирующихся клетках. В некоторых вариантах осуществления терапевтическое средство на основе платины выбрано из цисплатина (Platinol®, Bristol-Myers Squibb); карбоплатина (Paraplatin®, Bristol-Myers Squibb; также Teva; Pfizer); оксалиплатина (Eloxitin® Sanofi-Aventis); недаплатина (Aqupla®, Shionogi), пикоплатина (Poniard Pharmaceuticals) и сатраплатина (JM-216, Agennix).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents are platinum-based therapeutic agents, also referred to as platinums. Platinums cause cross-linking of DNA such that they inhibit DNA repair and/or DNA synthesis, mainly in rapidly reproducing cells. In some embodiments, the platinum-based therapeutic agent is selected from cisplatin (Platinol®, Bristol-Myers Squibb); carboplatin (Paraplatin®, Bristol-Myers Squibb; also Teva; Pfizer); oxaliplatin (Eloxitin® Sanofi-Aventis); nedaplatin (Aqupla®, Shionogi), picoplatin (Poniard Pharmaceuticals), and satraplatin (JM-216, Agennix).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой соединение таксана, которое вызывает нарушение микротрубочек, которые необходимы для деления клеток. В некоторых вариантах осуществления соединение таксана выбрано из паклитаксела (Taxol®, Bristol-Myers Squibb), доцетаксела (Taxotere®, Sanofi-Aventis; Docefre®z, Sun Pharmaceutical), связанного с альбумином паклитаксела (Abraxane®; Abraxis/Celgene), кабазитаксела (Jevtana®, SanofiAventis) и SID530 (SK Chemicals, Co.) (NCT00931008).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is a taxane compound that causes disruption of microtubules that are essential for cell division. In some embodiments, the taxane compound is selected from paclitaxel (Taxol®, Bristol-Myers Squibb), docetaxel (Taxotere®, Sanofi-Aventis; Docefre®z, Sun Pharmaceutical), albumin-bound paclitaxel (Abraxane®; Abraxis/Celgene), cabazitaxel (Jevtana®, SanofiAventis) and SID530 (SK Chemicals, Co.) (NCT00931008).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств предIn some embodiments, one or more other therapeutic agents are

- 43 045862 ставляют собой нуклеозидный ингибитор или терапевтическое средство, которое препятствует нормальному синтезу ДНК, синтезу белка, репликации клеток или иным образом ингибирует быстропролиферирующие клетки.- 43 045862 are a nucleoside inhibitor or therapeutic agent that interferes with normal DNA synthesis, protein synthesis, cell replication or otherwise inhibits rapidly proliferating cells.

В некоторых вариантах осуществления нуклеозидный ингибитор выбран из трабектедина (гуанидин-алкилирующее средство, Yondelis®, Janssen Oncology), мехлорэтамина (алкилирующее средство, Valchlor®, Aktelion Pharmaceuticals); винкристина (Oncovin®, Eli Lilly; Vincasar®, Teva Pharmaceuticals; Marqibo®, Talon Therapeutics); темозоломида (пролекарство алкилирующего средства 5-(3-метилтриазен1-ил)-имидазол-4-карбоксамида (MTIC) Temodar®, Merck); инъекционного цитарабина (ara-С, антиметаболический аналог цитидина, Pfizer); ломустина (алкилирующее средство, CeeNU®, Bristol-Myers Squibb; Gleostine®, NextSource Biotechnology); азацитидина (пиримидиннуклеозидный аналог цитидина, Vidaza®, Celgene); омацетаксина мепесукцината (сложный эфир цефалотаксина) (ингибитор синтеза белков, Synribo®; Teva Pharmaceuticals); аспарагиназы Erwinia chrysanthemi (фермент для истощения аспарагина, Elspar®, Lundbeck; Erwinaze®, EUSA Pharma); эрибулина мезилата (ингибитор микротрубочек, антимитотическое средство на основе тубулина, Halaven®, Eisai); кабазитаксела (ингибитор микротрубочек, антимитотическое средство на основе тубулина, Jevtana®, Sanofi-Aventis); капацетрина (ингибитор тимидилатсинтазы, Xeloda®, Genentech); бендамустина (бифункциональное производное мехлорэтамина, предположительно формирующее межцепоченые сшивки ДНК, Treanda®, Cephalon/Teva); иксабепилона (полусинтетический аналог эпотилона В, ингибитор микротрубочек, антимитотическое средство на основе тубулина, Ixempra®, Bristol-Myers Squibb); неларабина (пролекарство аналога дезоксигуанозина, нуклеозидный метаболический ингибитор, Arranon®, Novartis); клорафабина (пролекарство ингибитора рибонуклеотидредуктазы, конкурентный ингибитор дезоксицитидина, Clolar®, Sanofi-Aventis); и трифлуридина и типирацила (нуклеозидный аналог на основе тимидина и ингибитор тимидинфосфорилазы, Lonsurf®, Taiho Oncology).In some embodiments, the nucleoside inhibitor is selected from trabectedine (guanidine alkylating agent, Yondelis®, Janssen Oncology), mechlorethamine (alkylating agent, Valchlor®, Aktelion Pharmaceuticals); vincristine (Oncovin®, Eli Lilly; Vincasar®, Teva Pharmaceuticals; Marqibo®, Talon Therapeutics); temozolomide (a prodrug of the alkylating agent 5-(3-methyltriazen1-yl)-imidazol-4-carboxamide (MTIC) Temodar®, Merck); injectable cytarabine (ara-C, antimetabolic analogue of cytidine, Pfizer); lomustine (alkylating agent, CeeNU®, Bristol-Myers Squibb; Gleostine®, NextSource Biotechnology); azacitidine (pyrimidine nucleoside analogue of cytidine, Vidaza®, Celgene); omacetaxine mepesuccinate (cephalotaxin ester) (protein synthesis inhibitor, Synribo®; Teva Pharmaceuticals); Erwinia chrysanthemi asparaginase (asparagine depletion enzyme, Elspar®, Lundbeck; Erwinaze®, EUSA Pharma); eribulin mesylate (microtubule inhibitor, tubulin-based antimitotic agent, Halaven®, Eisai); cabazitaxel (microtubule inhibitor, tubulin-based antimitotic agent, Jevtana®, Sanofi-Aventis); capacetrin (thymidylate synthase inhibitor, Xeloda®, Genentech); bendamustine (bifunctional derivative of mechlorethamine, presumably forming interstrand DNA cross-links, Treanda®, Cephalon/Teva); ixabepilone (semi-synthetic analogue of epothilone B, microtubule inhibitor, tubulin-based antimitotic agent, Ixempra®, Bristol-Myers Squibb); nelarabine (deoxyguanosine analogue prodrug, nucleoside metabolic inhibitor, Arranon®, Novartis); clorafabin (ribonucleotide reductase inhibitor prodrug, deoxycytidine competitive inhibitor, Clolar®, Sanofi-Aventis); and trifluridine and tipiracil (thymidine-based nucleoside analogue and thymidine phosphorylase inhibitor, Lonsurf®, Taiho Oncology).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор киназы или антагонист VEGF-R. Одобренные ингибиторы VEGF и ингибиторы киназ, пригодные в рамках настоящего изобретения, включают: бевацизумаб (Avastin®, Genentech/Roche), моноклональное антитело против VEGF; рамуцирумаб (Cyramza®, Eli Lilly), антитело против VEGFR-2 и ziv-афлиберцепт, также известный как VEGF Trap (Zaltrap®; Regeneron/Sanofi); ингибиторы VEGFR, такие как регорафениб (Stivarga®, Bayer); вандетаниб (Caprelsa®, AstraZeneca); акситиниб (Inlyta®, Pfizer); и ленватиниб (Lenvima®, Eisai); ингибиторы Raf, такие как сорафениб (Nexavar®, Bayer AG и Onyx); дабрафениб (Tafinlar®, Novartis) и вемурафениб (Zelboraf®, Genentech/Roche); ингибиторы MEK, такие как кобиметаниб (Cotellic®, Exelexis/Genentech/Roche); траметиниб (Mekinist®, Novartis); ингибиторы тирозинкиназы Bcr-Abl, такие как иматиниб (Gleevec®, Novartis); нилотиниб (Tasigna®, Novartis); дасатиниб (Sprycel®, BristolMyersSquibb); босутиниб (Bosulif®, Pfizer); и понатиниб (Inclusig®, Ariad Pharmaceuticals); ингибиторы Her2 и EGFR, такие как гефитиниб (Iressa®, AstraZeneca); эрлотиниб (Tarceeva®, Genentech/Roche/Astellas); лапатиниб (Tykerb®, Novartis); афатиниб (Gilotrif®, Boehringer Ingelheim); осимертиниб (нацеленный на активированный EGFR, Tagrisso®, AstraZeneca); и бригатиниб (Alunbrig®, Ariad Pharmaceuticals); ингибиторы c-Met и VEGFR2, такие как кабозанитиб (Cometriq®, Exelexis); и мультикиназные ингибиторы, такие как сунитиниб (Sutent®, Pfizer); пазопаниб (Votrient®, Novartis); ингибиторы ALK, такие как кризотиниб (Xalkori®, Pfizer); церитиниб (Zykadia®, Novartis); и алектиниб (Alecenza®, Genentech/Roche); ингибиторы тирозинкиназы Брутона, такие как ибрутиниб (Imbruvica®, Pharmacyclics/Janssen); и ингибиторы рецептора Flt3, такие как мидостаурин (Rydapt®, Novartis).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is a kinase inhibitor or a VEGF-R antagonist. Approved VEGF inhibitors and kinase inhibitors useful in the present invention include: bevacizumab (Avastin®, Genentech/Roche), an anti-VEGF monoclonal antibody; ramucirumab (Cyramza®, Eli Lilly), an anti-VEGFR-2 antibody, and ziv-aflibercept, also known as VEGF Trap (Zaltrap®; Regeneron/Sanofi); VEGFR inhibitors such as regorafenib (Stivarga®, Bayer); vandetanib (Caprelsa®, AstraZeneca); axitinib (Inlyta®, Pfizer); and lenvatinib (Lenvima®, Eisai); Raf inhibitors such as sorafenib (Nexavar®, Bayer AG and Onyx); dabrafenib (Tafinlar®, Novartis) and vemurafenib (Zelboraf®, Genentech/Roche); MEK inhibitors such as cobimetanib (Cotellic®, Exelexis/Genentech/Roche); trametinib (Mekinist®, Novartis); Bcr-Abl tyrosine kinase inhibitors such as imatinib (Gleevec®, Novartis); nilotinib (Tasigna®, Novartis); dasatinib (Sprycel®, BristolMyersSquibb); bosutinib (Bosulif®, Pfizer); and ponatinib (Inclusig®, Ariad Pharmaceuticals); Her2 and EGFR inhibitors such as gefitinib (Iressa®, AstraZeneca); erlotinib (Tarceeva®, Genentech/Roche/Astellas); lapatinib (Tykerb®, Novartis); afatinib (Gilotrif®, Boehringer Ingelheim); osimertinib (targeting activated EGFR, Tagrisso®, AstraZeneca); and brigatinib (Alunbrig®, Ariad Pharmaceuticals); c-Met and VEGFR2 inhibitors such as cabozanitib (Cometriq®, Exelexis); and multikinase inhibitors such as sunitinib (Sutent®, Pfizer); pazopanib (Votrient®, Novartis); ALK inhibitors such as crizotinib (Xalkori®, Pfizer); ceritinib (Zykadia®, Novartis); and alectinib (Alecenza®, Genentech/Roche); Bruton's tyrosine kinase inhibitors such as ibrutinib (Imbruvica®, Pharmacyclics/Janssen); and Flt3 receptor inhibitors such as midostaurin (Rydapt®, Novartis).

Другие ингибиторы киназ и антагонисты VEGF-R, которые находятся на стадии разработки и могут использоваться в рамках настоящего изобретения, включают: тивозаниб (AveoPharmaceuticals); ваталаниб (Bayer/Novartis); луцитаниб (Clovis Oncology); довитиниб (TKI258, Novartis); чиауаниб (Chipscreen Biosciences); CEP-11981 (Cephalon); линифаниб (Abbott Laboratories); нератиниб (HKI-272, Puma Biotechnology); радотиниб (Supect®, IY5511, Il-Yang Pharmaceuticals, S. Korea); руксолитиниб (Jakafi®, Incyte Corporation); PTC299 (PTC Therapeutics); CP-547,632 (Pfizer); форетиниб (Exelexis, GlaxoSmithKline); квизартиниб (Daiichi Sankyo) и мотесаниб (Amgen/Takeda).Other kinase inhibitors and VEGF-R antagonists that are under development and may be used within the scope of the present invention include: tivozanib (AveoPharmaceuticals); vatalanib (Bayer/Novartis); lucitanib (Clovis Oncology); dovitinib (TKI258, Novartis); chiauanib (Chipscreen Biosciences); CEP-11981 (Cephalon); linifanib (Abbott Laboratories); neratinib (HKI-272, Puma Biotechnology); radotinib (Supect®, IY5511, Il-Yang Pharmaceuticals, S. Korea); ruxolitinib (Jakafi®, Incyte Corporation); PTC299 (PTC Therapeutics); CP-547,632 (Pfizer); foretinib (Exelexis, GlaxoSmithKline); quizartinib (Daiichi Sankyo) and motesanib (Amgen/Takeda).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор mTOR, которые ингибирует пролиферацию клеток, ангиогенез и захват глюкозы. В некоторых вариантах осуществления ингибитор mTOR представляет собой эверолимус (Afinitor®, Novartis); темсиролимус (Torisel®, Pfizer); и сиролимус (Rapamune®, Pfizer).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is an mTOR inhibitor that inhibits cell proliferation, angiogenesis, and glucose uptake. In some embodiments, the mTOR inhibitor is everolimus (Afinitor®, Novartis); temsirolimus (Torisel®, Pfizer); and sirolimus (Rapamune®, Pfizer).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор протеасом. Одобренные ингибиторы протеасом, пригодные в рамках настоящего изобретения, включают бортезомиб (Velcade®, Takeda); карфилзомиб (Kyprolis®, Amgen); и иксазомиб (Ninlaro®, Takeda).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is a proteasome inhibitor. Approved proteasome inhibitors useful in the present invention include bortezomib (Velcade®, Takeda); carfilzomib (Kyprolis®, Amgen); and ixazomib (Ninlaro®, Takeda).

- 44 045862 ставляют собой антагонист фактора роста, такой как антагонист тромбоцитарного фактора роста (PDGF), или эпидермального фактора роста (EGF) или его рецептора (EGFR). Одобренные антагонисты PDGF, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают оларатумаб (Lartruvo®; Eli Lilly). Одобренные антагонисты EGFR, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают: цетуксимаб (Erbitux®, Eli Lilly); нецитумумаб (Portrazza®, Eli Lilly), панитумумаб (Vectibix®, Amgen); и осимертиниб (нацеленный на активированный EGFR, Tagrisso®, AstraZeneca).- 44 045862 are a growth factor antagonist, such as an antagonist of platelet-derived growth factor (PDGF), or epidermal growth factor (EGF) or its receptor (EGFR). Approved PDGF antagonists that can be used in the present invention include olaratumab (Lartruvo®; Eli Lilly). Approved EGFR antagonists that can be used in the present invention include: cetuximab (Erbitux®, Eli Lilly); necitumumab (Portrazza®, Eli Lilly), panitumumab (Vectibix®, Amgen); and osimertinib (targeting activated EGFR, Tagrisso®, AstraZeneca).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор ароматазы. В некоторых вариантах осуществления ингибитор ароматазы выбран из: экземестана (Aromasin®, Pfizer); анастазола (Arimidex®, AstraZeneca) и лектрозола (Femara®, Novartis).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is an aromatase inhibitor. In some embodiments, the aromatase inhibitor is selected from: exemestane (Aromasin®, Pfizer); anastazole (Arimidex®, AstraZeneca) and lectrozole (Femara®, Novartis).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой антагонист каскада hedgehog. Одобренные ингибиторы каскада hedgehog, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают: сонидегиб (Odomzo®, Sun Pharmaceuticals); и висмодегиб (Erivedge®, Genentech), оба для лечения базально-клеточной карциномы.In some embodiments, the one or more other therapeutic agents are an antagonist of the hedgehog cascade. Approved hedgehog cascade inhibitors that can be used in the present invention include: sonidegib (Odomzo®, Sun Pharmaceuticals); and vismodegib (Erivedge®, Genentech), both for the treatment of basal cell carcinoma.

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор фолиевой кислоты. Одобренные ингибиторы фолиевой кислоты, пригодные в рамках настоящего изобретения, включают пеметрексед (Alimta®, Eli Lilly).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is a folic acid inhibitor. Approved folic acid inhibitors useful in the present invention include pemetrexed (Alimta®, Eli Lilly).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор рецептора 4 СС-хемокинов (CCR4). Находящиеся на стадии исследований ингибиторы CCR4, которые могут быть пригодными в рамках настоящего изобретения, включают могамулизумаб (Poteligeo®, Kyowa Hakko Kirin, Япония).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is a CC chemokine receptor 4 (CCR4) inhibitor. CCR4 inhibitors under investigation that may be useful in the present invention include mogamulizumab (Poteligeo®, Kyowa Hakko Kirin, Japan).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор изоцитратдегидрогеназы (IDH). Находящиеся на стадии исследования ингибиторы IDH, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают: AG120 (Celgene; NCT02677922); AG221 (Celgene, NCT02677922; NCT02577406); BAY1436032 (Bayer, NCT02746081); IDH305 (Novartis, NCT02987010).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is an isocitrate dehydrogenase (IDH) inhibitor. IDH inhibitors under investigation that may be used in the present invention include: AG120 (Celgene; NCT02677922); AG221 (Celgene, NCT02677922; NCT02577406); BAY1436032 (Bayer, NCT02746081); IDH305 (Novartis, NCT02987010).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор аргиназы. Находящиеся на стадии исследований ингибиторы аргиназы, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают: АЕВ1102 (пегилированная рекомбинантная аргиназа, Aeglea Biotherapeutics), который находится в фазе 1 клинических испытаний против острого миелоидного лейкоза и миелодиспластического синдрома (NCT02732184) и солидных опухолей (NCT02561234); и СВ-1158 (Calithera Biosciences).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is an arginase inhibitor. Investigational arginase inhibitors that may be used within the scope of the present invention include: AEB1102 (PEGylated recombinant arginase, Aeglea Biotherapeutics), which is in Phase 1 clinical trials against acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome (NCT02732184) and solid tumors (NCT02561234) ; and SV-1158 (Calithera Biosciences).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор глутаминазы. Находящиеся на стадии испытаний ингибиторы глутаминазы, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают СВ-839 (Calithera Biosciences).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is a glutaminase inhibitor. Glutaminase inhibitors under investigation that may be used in the present invention include CB-839 (Calithera Biosciences).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой антитело, которое связывается с опухолевыми антигенами, т.е. белками, экспрессируемыми на поверхности опухолевых клеток. Одобренные антитела, которые связываются с опухолевыми антигенами, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают: ритуксимаб (Rituxan®, Genentech/BiogenIdec); офатумумаб (антитело против CD20, Arzerra®, GlaxoSmithKline); обинутузумаб (антитело против CD20, Gazyva®, Genentech), ибритумомаб (антитело против CD20 и иттрий-90, Zevalin®, Spectrum Pharmaceuticals); даратумумаб (антитело против CD38, Darzalex®, Janssen Biotech), динутуксимаб (антитело против гликолипида GD2, Unituxin®, United Therapeutics); трастузумаб (антитело против HER2, Herceptin®, Genentech); адотрастузумаб эмтанзин (антитело против HER2, слитое с эмтанзином, Kadcyla®, Genentech); и пертузумаб (антитело против HER2, Perjeta®, Genentech); и брентуксимаб ведотин (конъюгат антитело против CD30-лекарственное средство, Adcetris®, Seattle Genetics).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents are an antibody that binds to tumor antigens, i.e. proteins expressed on the surface of tumor cells. Approved antibodies that bind to tumor antigens that can be used in the present invention include: rituximab (Rituxan®, Genentech/BiogenIdec); ofatumumab (anti-CD20 antibody, Arzerra®, GlaxoSmithKline); obinutuzumab (anti-CD20, Gazyva®, Genentech), ibritumomab (anti-CD20 and yttrium-90, Zevalin®, Spectrum Pharmaceuticals); daratumumab (anti-CD38 antibody, Darzalex®, Janssen Biotech), dinutuximab (anti-glycolipid GD2 antibody, Unituxin®, United Therapeutics); trastuzumab (anti-HER2 antibody, Herceptin®, Genentech); adotrastuzumab emtansine (anti-HER2 antibody fused to emtansine, Kadcyla®, Genentech); and pertuzumab (anti-HER2 antibody, Perjeta®, Genentech); and brentuximab vedotin (anti-CD30 antibody-drug conjugate, Adcetris®, Seattle Genetics).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор топоизомеразы. Одобренные ингибиторы топоизомераз, пригодные в рамках настоящего изобретения, включают: иринотекан (Onivyde®, Merrimack Pharmaceuticals); топотекан (Гикамтин®, GlaxoSmithKline). Находящиеся на стадии испытаний ингибиторы топоизомераз, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают пиксантрон (Pixuvri®, CTI Biopharma).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is a topoisomerase inhibitor. Approved topoisomerase inhibitors useful in the present invention include: irinotecan (Onivyde®, Merrimack Pharmaceuticals); topotecan (Hycamtin®, GlaxoSmithKline). Topoisomerase inhibitors under investigation that may be used in the present invention include pixantrone (Pixuvri®, CTI Biopharma).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор антиапоптотических белков, таких как BCL-2. Одобренные антиапоптотические средства, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают: венетоклакс (Venclexta®, AbbVie/Genentech) и блинатумомаб (Blincyto®, Amgen). Другие терапевтические средства, нацеленные на апоптотические белки, которые прошли клинические испытания и которые могут использоваться в рамках настоящего изобретения, включают навитоклакс (АВТ-263, Abbott), ингибитор BCL-2 (NCT02079740).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is an inhibitor of anti-apoptotic proteins, such as BCL-2. Approved anti-apoptotic agents that can be used within the scope of the present invention include: venetoclax (Venclexta®, AbbVie/Genentech) and blinatumomab (Blincyto®, Amgen). Other therapeutic agents targeting apoptotic proteins that have undergone clinical trials and which may be used within the scope of the present invention include navitoclax (ABT-263, Abbott), a BCL-2 inhibitor (NCT02079740).

- 45 045862 ставляют собой ингибитор рецепторов андрогенов. Одобренные ингибиторы рецепторов андрогенов, пригодные в рамках настоящего изобретения, включают энзалутамид (Xtandi®, Astellas/Medivation); одобренные ингибиторы синтеза андрогенов включают абиратерон (Zytiga®, Centocor/Ortho); одобренный антагонист рецептора гонадотропин-рилизинг гормона (GnRH) (дегараликс, Firmagon®, Ferring Pharmaceuticals).- 45 045862 are an androgen receptor inhibitor. Approved androgen receptor inhibitors useful in the present invention include enzalutamide (Xtandi®, Astellas/Medivation); approved androgen synthesis inhibitors include abiraterone (Zytiga®, Centocor/Ortho); an approved gonadotropin-releasing hormone (GnRH) receptor antagonist (degaralix, Firmagon®, Ferring Pharmaceuticals).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой селективный модулятор рецепторов эстрогена (SERM), который препятствует синтезу или активности эстрогенов. Одобренные SERM, пригодные в рамках настоящего изобретения, включают ралоксифен (Evista®, Eli Lilly).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is a selective estrogen receptor modulator (SERM) that interferes with the synthesis or activity of estrogens. Approved SERMs useful in the present invention include raloxifene (Evista®, Eli Lilly).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор резорбции кости. Одобренное терапевтическое средство, которое ингибирует резорбцию кости, представляет собой деносумаб (Xgeva®, Amgen), антитело, которое связывается с RANKL, препятствуя связыванию с его рецептором RANK, находящимся на поверхности остеокластов, их предшественников, и остеокласт-подобных гигантских клеток, которые опосредуют патологию костей при солидных опухолях с костными метастазами. Другие одобренные терапевтические средства, которые ингибируют резорбцию кости, включают бисфосфонаты, такие как золедроновая кислота (Zometa®, Novartis).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents is a bone resorption inhibitor. An approved therapeutic agent that inhibits bone resorption is denosumab (Xgeva®, Amgen), an antibody that binds to RANKL, interfering with binding to its receptor RANK, found on the surface of osteoclasts, their precursors, and osteoclast-like giant cells that mediate bone pathology in solid tumors with bone metastases. Other approved therapeutic agents that inhibit bone resorption include bisphosphonates such as zoledronic acid (Zometa®, Novartis).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько других терапевтических средств представляют собой ингибитор взаимодействия межу двумя первичными белками-супрессорами р53, MDMX и MDM2. Находящиеся на стадии испытаний ингибиторы белков супрессии р53, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают ALRN-6924 (Aileron), сшитый пептид, который равноэффективно связывает и нарушает взаимодействие MDMX и MDM2 с р53. ALRN-6924 в настоящее время находится на стадии клинических испытаний для лечения AML, развернутого миелодиспластического синдрома (MDS) и периферической Т-клеточной лимфомы (PTCL) (NCT02909972; NCT02264613).In some embodiments, the one or more other therapeutic agents are an inhibitor of the interaction between the two primary p53 suppressor proteins, MDMX and MDM2. Inhibitors of p53 suppression proteins under testing that can be used within the scope of the present invention include ALRN-6924 (Aileron), a cross-linked peptide that equally effectively binds and disrupts the interaction of MDMX and MDM2 with p53. ALRN-6924 is currently in clinical trials for the treatment of AML, advanced myelodysplastic syndrome (MDS), and peripheral T-cell lymphoma (PTCL) (NCT02909972; NCT02264613).

В некоторых вариантах осуществления одно или несколько терапевтических средств представляют собой ингибитор трансформирующего фактора роста-бета (TGF-бета или TGFP). Находящиеся на стадии испытаний ингибиторы белков TGF-бета, которые также можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают NIS793 (Novartis), антитело против TGF-бета, находящееся на стадии испытаний в клинике для лечения различных злокачественных опухолей, включая рак молочной железы, легкого, печеночно-клеточный рак, рак ободочной и прямой кишки, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы и рак почки (NCT 02947165). В некоторых вариантах осуществления ингибитор белков TGFбета представляет собой фрезолимумаб (GC1008; Sanofi-Genzyme), который проходит испытания для лечения меланомы (NCT00923169); почечноклеточного рака (NCT00356460); и немелкоклеточного рака легкого (NCT02581787). Кроме того, в некоторых вариантах осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой ловушку для TGF-бета, как описано в Connolly et al. (2012) Int'l J. Biological Sciences 8:964-978. Одно терапевтическое испытание, в настоящее время проходящее клинические испытания для лечения солидных опухолей, представляет М7824 (Merck KgaA - ранее MSB0011459X), которое представляет собой биспецифическое соединение антитело против PDL1/ловушка для TGFe (NCT02699515); и (NCT02517398). М7824 состоит из полностью человеческого IgG1-антитела против PD-L1, слитого с внеклеточным доменом рецептора II TGF-бета человека, который функционирует как ловушка для TGFe.In some embodiments, the one or more therapeutic agents is a transforming growth factor-beta (TGF-beta or TGFP) inhibitor. Pipeline inhibitors of TGF-beta proteins that may also be used within the scope of the present invention include NIS793 (Novartis), an anti-TGF-beta antibody in clinical trials for the treatment of various malignancies, including breast, lung, hepatocellular carcinoma, colorectal cancer, pancreatic cancer, prostate cancer and kidney cancer (NCT 02947165). In some embodiments, the TGFbeta protein inhibitor is fresolimumab (GC1008; Sanofi-Genzyme), which is being tested for the treatment of melanoma (NCT00923169); renal cell carcinoma (NCT00356460); and non-small cell lung cancer (NCT02581787). Additionally, in some embodiments, the additional therapeutic agent is a TGF-beta decoy, as described in Connolly et al. (2012) Int'l J. Biological Sciences 8:964–978. One therapeutic trial currently in clinical trials for the treatment of solid tumors is M7824 (Merck KgaA - formerly MSB0011459X), which is a bispecific anti-PDL1 antibody/TGFe trap compound (NCT02699515); and (NCT02517398). M7824 consists of a fully human IgG1 antibody against PD-L1 fused to the extracellular domain of human TGF-beta receptor II, which functions as a decoy for TGFe.

В некоторых вариантах осуществления, одно или несколько других терапевтических средств выбраны из глембатумумаб ведотин-монометилауристатина Е (ММАЕ) (Celldex), антитела против гликопротеина NMB (gpNMB) (CR011), сшитого с цитотоксическим MMAE. gpNMB представляет собой белок, сверхэкспрессиремый множеством типов опухолей, который ассоциирован со способностью злокачественных клеток к метастазированию.In some embodiments, one or more other therapeutic agents is selected from glembatumumab vedotin-monomethyl auristatin E (MMAE) (Celldex), an anti-glycoprotein NMB (gpNMB) antibody (CR011) cross-linked to cytotoxic MMAE. gpNMB is a protein overexpressed in a variety of tumor types that is associated with the ability of malignant cells to metastasize.

В некоторых вариантах осуществления, одно или несколько других терапевтических средств представляют собой антипролиферативное соединение. Такие антипролиферативные соединения включают, но не ограничиваются ими: ингибиторы ароматаз; антиэстрогены; ингибиторы топоизомеразы I; ингибиторы топоизомеразы II; активные в отношении микротрубочек соединения; алкилирующие соединения; ингибиторы деацетилазы гистонов; соединения, которые индуцируют процессы клеточной дифференцировки; ингибиторы циклооксигеназы; ингибиторы ММР; ингибиторы mTOR; антинеопластические антиметаболиты; соединения платины; соединения, нацеленные на/снижающие активность киназ белков или липидов и другие антиангиогенные а соединения; соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность фосфатаз белков или липидов; агонисты гонадорелина; антиандрогены; ингибиторы метионинаминопептидазы; ингибиторы матриксной металлопротеиназы; бисфосфонаты; модификаторы биологического ответа; антипролиферативные антитела; ингибиторы гепараназы; ингибиторы онкогенных изоформ Ras; ингибиторы теломеразы; ингибиторы протеасом; соединения, используемые для лечения гематологических злокачественных опухолей; соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность Flt-3; ингибиторы Hsp90, такие как 17-AAG (17-аллиламиногелданамицин, NSC330507), 17-DMAG (17-диметиламиноэтиламино-17-деметокси-гелданамицин, NSC707545), IPI-504,In some embodiments, the one or more other therapeutic agents are an antiproliferative compound. Such antiproliferative compounds include, but are not limited to: aromatase inhibitors; antiestrogens; topoisomerase I inhibitors; topoisomerase II inhibitors; compounds active against microtubules; alkylating compounds; histone deacetylase inhibitors; compounds that induce cell differentiation processes; cyclooxygenase inhibitors; MMP inhibitors; mTOR inhibitors; antineoplastic antimetabolites; platinum compounds; compounds that target/reduce the activity of protein or lipid kinases and other antiangiogenic compounds; compounds that target, reduce or inhibit the activity of protein or lipid phosphatases; gonadorelin agonists; antiandrogens; methionine aminopeptidase inhibitors; matrix metalloproteinase inhibitors; bisphosphonates; biological response modifiers; antiproliferative antibodies; heparanase inhibitors; inhibitors of oncogenic Ras isoforms; telomerase inhibitors; proteasome inhibitors; compounds used for the treatment of hematological malignancies; compounds that target, reduce or inhibit Flt-3 activity; Hsp90 inhibitors such as 17-AAG (17-allylaminogeldanamycin, NSC330507), 17-DMAG (17-dimethylaminoethylamino-17-demethoxy-geldanamycin, NSC707545), IPI-504,

- 46 045862- 46 045862

CNF1010, CNF2024, CNF1010 от Conforma Therapeutics; темозоломид (Temodal®); белковые ингибиторы кинезинов веретена вращения, такие как SB715992 или SB743921 от GlaxoSmithKline, или пентамидин/хлорпромазин от CombinatoRx; ингибиторы MEK, такие как ARRY142886 от Array BioPharma, AZd₆244 от AstraZeneca, PD181461 от Pfizer и лейковорин.CNF1010, CNF2024, CNF1010 from Conforma Therapeutics; temozolomide (Temodal®); spindle kinesin protein inhibitors such as SB715992 or SB743921 from GlaxoSmithKline, or pentamidine/chlorpromazine from CombinatoRx; MEK inhibitors such as ARRY142886 from Array BioPharma, AZd _6,244 from AstraZeneca, PD181461 from Pfizer and leucovorin.

Термин ингибитор ароматазы, как используют в рамках изобретения, относится к соединению, которое ингибирует продуцирование эстрогенов, например конвертирование субстратов андростендиона и тестостерона в эстрон и эстрадиол, соответственно. Термин включает, но не ограничивается ими, стероиды, особенно атаместан, экземестан и форместан и, в частности, нестероиды, особенно аминоглутетимид, роглетимид, пиридоглутетимид, трилостан, тестолактон, кетоконазол, ворозол, фадрозол, анастрозол и лектрозол. Экземестан выпускается в продажу под торговым названием Aromasin™. Форместан выпускается в продажу под торговым названием Lentaron™. Фадрозол выпускается в продажу под торговым названием Afema™. Анастрозол выпускается в продажу под торговым названием Arimidex™. Лектрозол выпускается в продажу под торговыми названиями Femara™ или Femar™. Аминоглутетимид выпускается в продажу под торговым названием Orimeten™. Комбинация по изобретению, содержащая химиотерапевтическое средство, которое представляет собой ингибитор ароматазы, является особенно пригодной для лечения опухолей, положительных по рецепторам гомонов, таких как опухоли молочной железы.The term aromatase inhibitor, as used herein, refers to a compound that inhibits the production of estrogens, eg, the conversion of the substrates androstenedione and testosterone to estrone and estradiol, respectively. The term includes, but is not limited to, steroids, especially atamestane, exemestane and formestane, and in particular non-steroids, especially aminoglutethimide, rogletimide, pyridoglutetimide, trilostane, testolactone, ketoconazole, vorozole, fadrozole, anastrozole and lectrozole. Exemestane is marketed under the trade name Aromasin™. Formestane is marketed under the trade name Lentaron™. Fadrozole is marketed under the trade name Afema™. Anastrozole is marketed under the trade name Arimidex™. Lectrozole is marketed under the trade names Femara™ or Femar™. Aminoglutethimide is marketed under the trade name Orimeten™. The combination of the invention containing a chemotherapeutic agent that is an aromatase inhibitor is particularly useful for the treatment of hormone receptor positive tumors such as breast tumors.

Термин антиэстроген, как используют в рамках изобретения, относится к соединению, которое является антагонистом эффекта эстрогенов на уровне рецепторов эстрогена. Термин включает, но не ограничивается ими, тамоксифен, фулвестрант, ралоксифен и ралоксифена гидрохлорид. Тамоксифен выпускается в продажу под торговым названием Nolvadex™. Ралоксифена гидрохлорид выпускается в продажу под торговым названием Evista™. Фулвестрант может выпускаться под торговым названием Faslodex™. Комбинация по изобретению, содержащая химиотерапевтическое средство, которое представляет собой антиэстроген, является особенно пригодной для лечения положительных по рецепторам эстрогенов опухолей, таких как опухоли молочной железы.The term anti-estrogen, as used herein, refers to a compound that antagonizes the effect of estrogens at the level of the estrogen receptor. The term includes, but is not limited to, tamoxifen, fulvestrant, raloxifene and raloxifene hydrochloride. Tamoxifen is marketed under the trade name Nolvadex™. Raloxifene hydrochloride is marketed under the trade name Evista™. Fulvestrant may be marketed under the trade name Faslodex™. The combination of the invention containing a chemotherapeutic agent that is an antiestrogen is particularly useful for the treatment of estrogen receptor positive tumors such as breast tumors.

Термин антиандроген, как используют в рамках изобретения, относится к любому веществу, которое способно ингибировать биологические эффекты андрогенных гормонов, и включает, но не ограничивается ими, бикалутамид (Casodex™). Термин агонист гонадорелина, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими абареликс, гозерелин и гозерелина ацетат. Гозерелин можно вводить под торговым названием Zoladex™.The term antiandrogen, as used herein, refers to any substance that is capable of inhibiting the biological effects of androgenic hormones, and includes, but is not limited to, bicalutamide (Casodex™). The term gonadorelin agonist as used herein includes, but is not limited to, abarelix, goserelin and goserelin acetate. Goserelin can be administered under the trade name Zoladex™.

Термин ингибитор топоизомеразы I, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, топотекан, гиматекан, иринотекан, камптотецин и его аналоги, 9-нитрокамптотецин и макромолекулярный конъюгат камптотецина PNU-166148. Иринотекан можно вводить, например, в форме, в которой он выпускается в продажу, например, под торговым названием Camptosar™. Топотекан выпускается в продажу под торговым названием Hycamptin™.The term topoisomerase I inhibitor as used herein includes, but is not limited to, topotecan, hymatecan, irinotecan, camptothecin and analogs thereof, 9-nitrocamptothecin and the macromolecular camptothecin conjugate PNU-166148. Irinotecan can be administered, for example, in the form in which it is marketed, for example, under the trade name Camptosar™. Topotecan is marketed under the trade name Hycamptin™.

Термин ингибитор топоизомеразы II, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, антрациклины, такие как доксорубицин (включая липосомальный состав, такой как Caelyx™), даунорубицин, эпирубицин, идарубицин и неморубицин, антрахиноны митоксантрон и лозоксантрон, и подофилотоксины этопозид и тенипозид. Этопозид выпускается в продажу под торговым названием Etopophos™. Тенипозид выпускается в продажу под торговым названием VM 26-Bristol. Доксорубицин выпускается в продажу под торговым названием Acriblastin™ или Adriamycin™ . Эпирубицин выпускается в продажу под торговым названием Farmorubicin™. Идарубицин выпускается в продажу под торговым названием Zavedos™. Митоксантрон выпускается в продажу под торговым названием Novantron.The term topoisomerase II inhibitor as used herein includes, but is not limited to, anthracyclines such as doxorubicin (including a liposomal formulation such as Caelyx™), daunorubicin, epirubicin, idarubicin and nerubicin, the anthraquinones mitoxantrone and losoxantrone, and the podophyllotoxins etoposide and teniposide. Etoposide is marketed under the trade name Etopophos™. Teniposide is marketed under the trade name VM 26-Bristol. Doxorubicin is marketed under the trade names Acriblastin™ or Adriamycin™. Epirubicin is marketed under the trade name Farmorubicin™. Idarubicin is marketed under the trade name Zavedos™. Mitoxantrone is marketed under the trade name Novantron.

Термин активное в отношении микротрубочек средство относится к стабилизирующим микротрубочки соединениями, дестабилизирующим микротрубочки соединениям и ингибиторам полимеризации микротубулина, включающим, но не ограничивающимся ими: таксаны, такие как паклитаксел и доцетаксел; алкалоиды барвинка, такие как винбластин или винбластина сульфат, винкристин или винкристина сульфат, и винорелбин; дискодермолиды; кохицин и эпотилоны и их производные. Паклитаксел выпускается в продажу под торговым названием Taxol™. Доцетаксел выпускается в продажу под торговым названием Taxotere™. Винбластина сульфат выпускается в продажу под торговым названием Vinblastin R.P™. Винкристин сульфат выпускается в продажу под торговым названием Farmistin™.The term microtubule active agent refers to microtubule stabilizing compounds, microtubule destabilizing compounds and microtubulin polymerization inhibitors, including, but not limited to: taxanes such as paclitaxel and docetaxel; vinca alkaloids such as vinblastine or vinblastine sulfate, vincristine or vincristine sulfate, and vinorelbine; discodermolides; cochicine and epothilones and their derivatives. Paclitaxel is marketed under the trade name Taxol™. Docetaxel is marketed under the trade name Taxotere™. Vinblastine sulfate is marketed under the trade name Vinblastin R.P™. Vincristine sulfate is marketed under the trade name Farmistin™.

Термин алкилирующее средство, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, циклофосфамид, ифосфамид, мелфалан или нитрозомочевину (BCNU или Глиадел). Циклофосфамид выпускается в продажу под торговым названием Cyclostin™. Ифосфамид выпускается в продажу под торговым названием Holoxan™ .The term alkylating agent as used herein includes, but is not limited to, cyclophosphamide, ifosfamide, melphalan or nitrosourea (BCNU or Gliadel). Cyclophosphamide is marketed under the trade name Cyclostin™. Ifosfamide is marketed under the trade name Holoxan™.

Термин ингибиторы деацетилазы гистонов или ингибиторы HDAC относится к соединениям, которые ингибируют деацетилазу гистонов и которые обладают антипролиферативной активностью. Они включают, но не ограничивается ими, субероиланилидгидроксамовую кислоту (SAHA).The term histone deacetylase inhibitors or HDAC inhibitors refers to compounds that inhibit histone deacetylase and which have antiproliferative activity. These include, but are not limited to, suberoylanilide hydroxamic acid (SAHA).

Термин антинеопластический антиметаболит включает, но не ограничивается ими, 5-фторурацилThe term antineoplastic antimetabolite includes, but is not limited to, 5-fluorouracil

- 47 045862 или 5-FU, капецитабин, гемцитабин, деметилирующие ДНК соединения, такие как 5-азацитидин и децитабин, метотрексат и эдатрексат, и антагонисты фолиевой кислоты, такие как пеметрексед. Капецитабин выпускается в продажу под торговым названием Xeloda™. Г емцитабин выпускается в продажу под торговым названием Gemzar™.- 47 045862 or 5-FU, capecitabine, gemcitabine, DNA demethylating compounds such as 5-azacytidine and decitabine, methotrexate and edatrexate, and folic acid antagonists such as pemetrexed. Capecitabine is marketed under the trade name Xeloda™. Gemcitabine is marketed under the trade name Gemzar™.

Термин соединение платины, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, карбоплатин, цис-платин, цисплатинум и оксалиплатин. Карбоплатин можно вводить, например, в форме, в которой он выпускается в продажу, например, под торговым названием Carboplat™. Оксалиплатин можно вводить, например, в форме, в которой он выпускается в продажу, например, под торговым названием Eloxatin™.The term platinum compound as used herein includes, but is not limited to, carboplatin, cis-platinum, cisplatinum and oxaliplatin. Carboplatin can be administered, for example, in the form in which it is commercially available, for example, under the trade name Carboplat™. Oxaliplatin can be administered, for example, in the form in which it is commercially available, for example, under the trade name Eloxatin™.

Термин соединения, нацеленные на/снижающие активность киназы белков или липидов; или активность фосфатазы белков или липидов; или дополнительные антиангиогенные соединения, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, ингибиторы протеинтирозинкиназ и/или сериновых и/или треониновых киназ, или ингибиторы киназ липидов, такие как: а) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность рецепторов тромбоцитарного фактора роста (PDGFR), такие как соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность PDGFR, особенно соединения, которые ингибируют рецептор PDGF, такие как производное №фенил-2пиримидинамина, такие как иматиниб, SU101, SU6668 и GFB-111; b) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность рецепторов фибробластного фактора роста (FGFR); с) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность рецептора инсулиноподобного фактора роста I (IGF-IR), такие как соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность IGFIR, особенно соединения, которые ингибируют активность киназы рецептора IGF-I, или антитела, которые нацелены на внеклеточный домен рецептора IGF-I или его факторы роста; d) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность семейства рецепторных тирозинкиназ Trk, или ингибиторы эфрина В4; е) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность семейства рецепторных тирозинкиназ AxI; f) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность рецепторной тирозинкиназы Ret; g) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность рецепторной тирозинкиназы Kit/SCFR, такие как иматиниб; h) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность рецепторных тироззинкиназ С-kit, которые являются частью семейства PDGFR, такие как соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность семейства рецепторных тирозинкиназ c-Kit, особенно соединения, которые ингибируют рецептор c-Kit, такие как иматиниб; i) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность представителей семейства с-Abl, их продукты слияния генов (например, киназа BCR-Abl) и мутанты, такие как соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность представителей семейства с-Abl и их продукты слияния генов, такие как производное №фенил-2-пиримидинамина, такое как иматиниб или нилотиниб (AMN107); PD180970; AG957; NSC 680410; PD173955 от ParkeDavis; или дасатиниб (BMS-354825); j) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность представителей семейств сериновых/треониновых киназ протеинкиназы С (PKC) и Raf, представителей семейств MEK, SRC, JAK/pan-JAK, FAK, PDK1, PKB/Akt, Ras/MAPK, PI3K, SYK, TYK2, BTK и ТЕС, и/или представителей семейства циклин-зависимых киназ (CDK), включая производные стауроспорина, такие как мидостаурин; примеры следующих соединений включают UCN-01, сафингол, BAY 43-9006, бриостатин 1, перифозин; лимофозин; RO 318220 и RO 320432; GO 6976; lsis 3521; LY333531/LY379196; соединения изохинолинов; FTI; PD184352 или QAN697 (ингибитор Р13К) или АТ7519 (ингибитор CDK); k) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность ингибиторов протеинтирозинкиназы, такие как соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность ингибиторов протеинтирозинкиназ, включая иматиниба мезилат (Gleevec™) или тирфостин, такой как Tyrphostin A23/RG50810; AG 99; Tyrphostin AG 213; Tyrphostin AG 1748; Tyrphostin AG 490; Tyrphostin B44; Tyrphostin B44 (+) энантиомер; Tyrphostin AG 555; AG 494; Tyrphostin AG 556, AG957 и адафостин (адамантиловый сложный эфир 4-{[(2,5-дигидроксифенил)метил]амино}бензойной кислоты; NSC 680410, адафостин); 1) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность рецепторных тирозинкиназ семейства эпидермального фактора роста (EGFRi ErbB2, ErbB3, ErbB4 в качестве гомо- или гетеродимеры) и их мутанты, такие как соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность семейства рецепторов эпидермального фактора роста, особенно соединения, белки или антитела, которые ингибируют представителей семейства рецепторных тирозинкиназ EGF, такие как рецептор EGF, ErbB2, ErbB3 и ErbB4 или связываются с EGF или родственными EGF лигандами, СР 358774, ZD 1839, ZM 105180; трастузумаб (Herceptin™), цетуксимаб (Erbitux™), Иресса, Тарцева, OSI-774, Cl-1033, EKB-569, GW-2016, Е1.1, Е2.4, Е2.5, Е6.2, Е6.4, E2.11, Е6.3 или Е7.6.3, и производные 7Н-пирроло-[2,3d]пиримидина; m) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность рецептора cMet, такие как соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность c-Met, особенно соединения, которые ингибируют киназную активность рецептора c-Met, или антитела, которые нацелены на внеклеточный домен c-Met или связываются с HGF, n) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие киназную активность одного или нескольких представителей семейств JAKThe term compounds that target/reduce protein or lipid kinase activity; or protein or lipid phosphatase activity; or additional antiangiogenic compounds as used herein include, but are not limited to, protein tyrosine kinase and/or serine and/or threonine kinase inhibitors, or lipid kinase inhibitors, such as: a) compounds that target, reduce or inhibit receptor activity platelet-derived growth factor (PDGFR), such as compounds that target, reduce or inhibit the activity of PDGFR, especially compounds that inhibit the PDGF receptor, such as N-phenyl-2-pyrimidinamine derivative, such as imatinib, SU101, SU6668 and GFB-111; b) compounds that target, reduce or inhibit the activity of fibroblast growth factor receptors (FGFR); c) compounds that target, reduce or inhibit insulin-like growth factor I receptor (IGF-IR) activity, such as compounds that target, reduce or inhibit IGFIR activity, especially compounds that inhibit IGF-I receptor kinase activity, or antibodies , which target the extracellular domain of the IGF-I receptor or its growth factors; d) compounds that target, reduce or inhibit the activity of the Trk family of receptor tyrosine kinases, or ephrin B4 inhibitors; f) compounds that target, reduce or inhibit the activity of the AxI family of receptor tyrosine kinases; f) compounds that target, reduce or inhibit the activity of the receptor tyrosine kinase Ret; g) compounds that target, reduce or inhibit Kit/SCFR receptor tyrosine kinase activity, such as imatinib; h) compounds that target, reduce or inhibit the activity of the C-kit receptor tyrosine kinases that are part of the PDGFR family, such as compounds that target, reduce or inhibit the activity of the c-Kit family of receptor tyrosine kinases, especially compounds that inhibit the c-Kit receptor Kit such as imatinib; i) compounds that target, reduce or inhibit the activity of members of the c-Abl family, their gene fusion products (for example, BCR-Abl kinase) and mutants, such as compounds that target, reduce or inhibit the activity of members of the c-Abl family and their gene fusion products such as an N-phenyl-2-pyrimidinamine derivative such as imatinib or nilotinib (AMN107); PD180970; AG957; NSC 680410; PD173955 from ParkeDavis; or dasatinib (BMS-354825); j) compounds that target, reduce or inhibit the activity of members of the protein kinase C (PKC) and Raf serine/threonine kinase families, members of the MEK, SRC, JAK/pan-JAK, FAK, PDK1, PKB/Akt, Ras/MAPK, PI3K families , SYK, TYK2, BTK and TEC, and/or members of the cyclin-dependent kinase (CDK) family, including staurosporine derivatives such as midostaurin; examples of the following compounds include UCN-01, safingol, BAY 43-9006, bryostatin 1, perifosine; lymofosin; RO 318220 and RO 320432; GO 6976; lsis 3521; LY333531/LY379196; isoquinoline compounds; FTI; PD184352 or QAN697 (P13K inhibitor) or AT7519 (CDK inhibitor); k) compounds that target, reduce or inhibit the activity of protein tyrosine kinase inhibitors, such as compounds that target, reduce or inhibit the activity of protein tyrosine kinase inhibitors, including imatinib mesylate (Gleevec™) or tyrphostin, such as Tyrphostin A23/RG50810; AG 99; Tyrphostin AG 213; Tyrphostin AG 1748; Tyrphostin AG 490; Tyrphostin B44; Tyrphostin B44 (+) enantiomer; Tyrphostin AG 555; AG 494; Tyrphostin AG 556, AG957 and adaphostin (4-{[(2,5-dihydroxyphenyl)methyl]amino}benzoic acid adamantyl ester; NSC 680410, adaphostin); 1) compounds that target, reduce or inhibit the activity of epidermal growth factor receptor family tyrosine kinases (EGFRi ErbB2, ErbB3, ErbB4 as homo- or heterodimers) and their mutants, such as compounds that target, reduce or inhibit the activity of the epidermal growth factor receptor family growth factors, especially compounds, proteins or antibodies that inhibit members of the EGF receptor tyrosine kinase family, such as EGF receptor, ErbB2, ErbB3 and ErbB4 or bind to EGF or EGF-related ligands, CP 358774, ZD 1839, ZM 105180; trastuzumab (Herceptin™), cetuximab (Erbitux™), Iressa, Tartseva, OSI-774, Cl-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6. 4, E2.11, E6.3 or E7.6.3, and 7H-pyrrolo-[2,3d]pyrimidine derivatives; m) compounds that target, reduce or inhibit the activity of the cMet receptor, such as compounds that target, reduce or inhibit the activity of c-Met, especially compounds that inhibit the kinase activity of the c-Met receptor, or antibodies that target the extracellular domain c-Met or bind to HGF, n) compounds that target, reduce or inhibit the kinase activity of one or more members of the JAK families

- 48 045862 (JAK1/JAK2/JAK3/TYK2 и/или pan-JAK), включая, но не ограничиваясь ими PRT-062070, SB-1578, барицитиниб, пакритиниб, момелотиниб, VX-509, AZD-1480, TG-101348, тофацитиниб, и руксолитиниб; о) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие киназную активность PI3-киназы (PI3K), включая, но не ограничиваясь ими ATU-027, SF-1126, DS-7423, PBI-05204, GSK-2126458, ZSTK-474, бупарлисиб, пиктрелисиб, PF-4691502, BYL-719, дактолисиб, XL-147, XL-765 и иделалисиб; и; и р) соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие сигнальные эффекты каскадов белка hedgehog (Hh) или рецептора smoothened (SMO), включая, но не ограничиваясь ими циклорамин, висмодегиб, итраконазол, эрисмодегиб и IPI-926 (саридегиб).- 48 045862 (JAK1/JAK2/JAK3/TYK2 and/or pan-JAK), including but not limited to PRT-062070, SB-1578, baricitinib, pacritinib, momelotinib, VX-509, AZD-1480, TG-101348 , tofacitinib, and ruxolitinib; o) compounds that target, reduce or inhibit the kinase activity of PI3-kinase (PI3K), including but not limited to ATU-027, SF-1126, DS-7423, PBI-05204, GSK-2126458, ZSTK-474, buparlisib , pictrelisib, PF-4691502, BYL-719, dactolisib, XL-147, XL-765 and idelalisib; And; and p) compounds that target, reduce or inhibit the signaling effects of hedgehog (Hh) or smoothened receptor (SMO) protein cascades, including, but not limited to, cycloramine, vismodegib, itraconazole, erismodegib and IPI-926 (saridegib).

Термин ингибитор PI3K, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, соединения, обладающие ингибиторной активностью против одного или нескольких ферментов семейства фосфатидилинозитол-3-киназы, включая, но не ограничиваясь ими PI3Ka, PI3Ky, PI3I<i5„ PI3Ke, PI3K-C2a, PI3K-C2e, PI3K-C2y, Vps34, р110-а, рПО-β, р110-у, р110-0, р85-а, р85-в, р55-у, р150, р101 и р87. Примеры ингибиторов PI3K, пригодных в раках настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими ATU-027, SF-1126, DS-7423, PBI-05204, GSK-2126458, ZSTK-474, бупарлисиб, пиктрелисиб, PF-4691502, BYL-719, дактолисиб, XL-147, XL-765 и иделалисиб.The term PI3K inhibitor as used herein includes, but is not limited to, compounds having inhibitory activity against one or more enzymes of the phosphatidylinositol 3-kinase family, including, but not limited to, PI3Ka, PI3Ky, PI3I<i5„ PI3Ke, PI3K-C2a, PI3K-C2e, PI3K-C2y, Vps34, p110-a, pPO-β, p110-y, p110-0, p85-a, p85-b, p55-y, p150, p101 and p87. Examples of PI3K inhibitors useful in cancers of the present invention include, but are not limited to ATU-027, SF-1126, DS-7423, PBI-05204, GSK-2126458, ZSTK-474, buparlisib, pictrelisib, PF-4691502, BYL- 719, dactolisib, XL-147, XL-765 and idelalisib.

Термин ингибитор Bcl-2, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, соединения, обладающие активностью ингибирования белка 2 В-клеточной лимфомы (Bcl-2), включая, но не ограничиваясь ими, АВТ-199, АВТ-731, АВТ-737, апогоссипол, общие ингибиторы Bcl-2 от Ascenta, куркумин (и его аналоги), двойные ингибиторы Bcl-2/Bcl-xL (Infinity Pharmaceuticals/Novartis Pharmaceuticals), Генасенс (G3139), HA14-1 (и его аналоги; см. WO 2008/118802), навитоклакс (и его аналоги, см. US 7390799), NH-1 (Shenayng Pharmaceutical University), обатоклакс (и его аналоги, см. WO 2004/106328), S-001 (Gloria Pharmaceuticals), соединения серии TW (Univ. of Michigan) и венетоклакс. В некоторых вариантах осуществления ингибитор Bcl-2 представляет собой низкомолекулярное терапевтическое средство. В некоторых вариантах осуществления ингибитор Bcl-2 представляет собой пептидомиметик.The term Bcl-2 inhibitor as used herein includes, but is not limited to, compounds having B-cell lymphoma protein 2 (Bcl-2) inhibitory activity, including, but not limited to, ABT-199, ABT-731 , ABT-737, apogosipol, generic Bcl-2 inhibitors from Ascenta, curcumin (and its analogues), dual Bcl-2/Bcl-xL inhibitors (Infinity Pharmaceuticals/Novartis Pharmaceuticals), Genasens (G3139), HA14-1 (and its analogs; see WO 2008/118802), navitoclax (and its analogs, see US 7390799), NH-1 (Shenayng Pharmaceutical University), obatoclax (and its analogs, see WO 2004/106328), S-001 (Gloria Pharmaceuticals), TW series compounds (Univ. of Michigan) and venetoclax. In some embodiments, the Bcl-2 inhibitor is a small molecule therapeutic agent. In some embodiments, the Bcl-2 inhibitor is a peptidomimetic.

Термин ингибитор BTK, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, соединения, обладающие ингибиторной активностью против тирозинкиназы Брутона (BTK), включая, но не ограничиваясь ими, AVL-292 и ибрутиниб.The term BTK inhibitor as used herein includes, but is not limited to, compounds having inhibitory activity against Bruton's tyrosine kinase (BTK), including, but not limited to, AVL-292 and ibrutinib.

Термин ингибитор SYK, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, соединения, обладающие ингибиторной активностью против тирозинкиназы селезенки (SYK), включая, но не ограничиваясь ими, PRT-062070, R-343, R-333, Экселлаир, PRT-062607 и фостаматиниб.The term SYK inhibitor as used herein includes, but is not limited to, compounds having inhibitory activity against spleen tyrosine kinase (SYK), including, but not limited to, PRT-062070, R-343, R-333, Excellair, PRT-062607 and fostamatinib.

Дополнительные примеры ингибирующих BTK соединений и состояний, которые можно лечить такими соединениями в комбинации с соединениями по настоящему изобретению, могут быть найдены в WO 2008/039218 и WO 2011/090760, полное содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок.Additional examples of BTK inhibitory compounds and conditions that can be treated with such compounds in combination with the compounds of the present invention can be found in WO 2008/039218 and WO 2011/090760, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

Дополнительные примеры ингибирующих SYK соединений и состояний, которые можно лечить такими соединениями в комбинации с соединениями по настоящему изобретению, могут быть найдены в WO 2003/063794, WO 2005/007623 и WO 2006/078846, полное содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок.Additional examples of SYK inhibitory compounds and conditions that can be treated with such compounds in combination with the compounds of the present invention can be found in WO 2003/063794, WO 2005/007623 and WO 2006/078846, the entire contents of which are incorporated herein by reference. .

Дополнительные примеры ингибирующих PI3K соединений и состояний, которые можно лечить такими соединениями в комбинации с соединениями по настоящему изобретению, могут быть найдены в WO 2004/019973, WO 2004/089925, WO 2007/016176, US 8138347, WO 2002/088112, WO 2007/084786, WO 2007/129161, WO 2006/122806, WO 2005/113554 и WO 2007/044729, полное содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок.Additional examples of PI3K inhibitory compounds and conditions that can be treated with such compounds in combination with the compounds of the present invention can be found in WO 2004/019973, WO 2004/089925, WO 2007/016176, US 8138347, WO 2002/088112, WO 2007 /084786, WO 2007/129161, WO 2006/122806, WO 2005/113554 and WO 2007/044729, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

Дополнительные примеры ингибирующих JAK соединений и состояний, которые можно лечить такими соединениями в комбинации с соединениями по настоящему изобретению, могут быть найдены в WO 2009/114512, WO 2008/109943, WO 2007/053452, WO 2000/142246 и WO 2007/070514, полное содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок.Additional examples of JAK inhibitory compounds and conditions that can be treated with such compounds in combination with the compounds of the present invention can be found in WO 2009/114512, WO 2008/109943, WO 2007/053452, WO 2000/142246 and WO 2007/070514. the entire contents of which are incorporated herein by reference.

Дополнительные антиангиогенные соединения включают соединения, обладающие другим механизмом их активности, например, не связанным с ингибированием киназы белков или липидов, например, талидомид (Thalomid™) и TNP-470.Additional antiangiogenic compounds include compounds that have a different mechanism of activity, such as one other than protein or lipid kinase inhibition, such as Thalomid™ and TNP-470.

Примеры ингибиторов протеасом, пригодных для применения в комбинации с соединениями по изобретению, включают, но не ограничиваются ими, бортезомиб, дисульфирам, эпигаллокатехин-3галлат (EGCG), салиноспорамид А, карфилзомиб, ONX-0912, СЕР-18770 и MLN9708.Examples of proteasome inhibitors suitable for use in combination with the compounds of the invention include, but are not limited to, bortezomib, disulfiram, epigallocatechin-3 gallate (EGCG), salinosporamide A, carfilzomib, ONX-0912, CEP-18770 and MLN9708.

Соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность фосфатаз белков или липидов, представляют собой, например, ингибиторы фосфатазы 1, фосфатазы 2А или CDC25, такие как окадаиковая кислота или ее производное.Compounds that target, reduce or inhibit the activity of protein or lipid phosphatases are, for example, phosphatase 1, phosphatase 2A or CDC25 inhibitors, such as okadaic acid or a derivative thereof.

Соединения, которые индуцируют процессы дифференцировки клеток, включают, но не ограничиваются ими, ретиноевую кислоту, α-, γ- или δ-токоферол или α-, γ- или δ-токотриенол.Compounds that induce cell differentiation processes include, but are not limited to, retinoic acid, α-, γ-, or δ-tocopherol, or α-, γ-, or δ-tocotrienol.

Термин ингибитор циклооксигеназы, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, ингибиторы Сох-2, 5-алкилзамещенную 2-ариламинофенилуксусную кислоту и произThe term cyclooxygenase inhibitor as used herein includes, but is not limited to, Cox-2 inhibitors, 5-alkyl-2-arylaminophenylacetic acid and

- 49 045862 водные, такие как целекоксиб (Celebrex™), рофекоксиб (Vioxx™), эторикоксиб, вальдекоксиб или 5алкил-2-ариламинофенилуксусная кислота, такая как 5-метил-2-(2'-хлор-6'-фтораналино)фенилуксусная кислота, и люмиракоксиб.- 49 045862 aqueous, such as celecoxib (Celebrex™), rofecoxib (Vioxx™), etoricoxib, valdecoxib or 5-alkyl-2-arylaminophenylacetic acid, such as 5-methyl-2-(2'-chloro-6'-fluoroanalino)phenylacetic acid, and lumiracoxib.

Термин бисфосфонаты, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, этридоновую, клодроновую, тилудроновую, памидроновую, алендроновую, ибандроновую, ризедроновую и золедроновую кислоту. Этидроновая кислота выпускается в продажу под торговым названием Didronel™. Клодроновая кислота выпускается в продажу под торговым названием Bonefos™. Тилудроновая кислота выпускается в продажу под торговым названием Skelid™. Памидроновая кислота выпускается в продажу под торговым названием Aredia™. Алендроновая кислота выпускается в продажу под торговым названием Fosamax™. Ибандроновая кислота выпускается в продажу под торговым названием Bondranat™. Ризедроновая кислота выпускается в продажу под торговым названием Actonel™. Золедроновая кислота выпускается в продажу под торговым названием Zometa™. Термин ингибиторы mTOR относится к соединениям, которые ингибируют мишень рапамицина у млекопитающих (mTOR) и которые обладают антипролиферативной активностью, такие как сиролимус (Rapamune®), эверолимус (Certican™), CCI-779 и АВТ578.The term bisphosphonates as used herein includes, but is not limited to, etridonic, clodronic, tiludronic, pamidronic, alendronic, ibandronic, risedronic and zoledronic acid. Etidronic acid is marketed under the trade name Didronel™. Clodronic acid is marketed under the trade name Bonefos™. Tiludronic acid is marketed under the trade name Skelid™. Pamidronic acid is marketed under the trade name Aredia™. Alendronic acid is marketed under the trade name Fosamax™. Ibandronic acid is marketed under the trade name Bondranat™. Risedronic acid is marketed under the trade name Actonel™. Zoledronic acid is marketed under the trade name Zometa™. The term mTOR inhibitors refers to compounds that inhibit mammalian target of rapamycin (mTOR) and which have antiproliferative activity, such as sirolimus (Rapamune®), everolimus (Certican™), CCI-779 and ABT578.

Термин ингибитор гепараназы, как используют в рамках изобретения, относится к соединениям, которые нацелены на, снижают или ингибируют деградацию гепаринсульфата. Термин включает, но не ограничивается ими, PI-88. Термин модификатор биологического ответа, как используют в рамках изобретения, относится к лимфокинам или интерферонам.The term heparanase inhibitor, as used herein, refers to compounds that target, reduce or inhibit the degradation of heparin sulfate. The term includes, but is not limited to, PI-88. The term biological response modifier, as used herein, refers to lymphokines or interferons.

Термин ингибитор онкогенных изоформ Ras, таких как H-Ras, K-Ras или N-Ras, как используют в рамках изобретения, относится к соединениям, которые нацелены на, снижают или ингибируют онкогенную активность Ras; например, ингибитор фарнезилтрансферазы, такой как L-744832, DK8G557 или R115777 (Zarnestra™). Термин ингибитор теломеразы, как используют в рамках изобретения, относится к соединениям, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность теломераз. Соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность теломераз, в частности, представляют собой соединения, которые ингибируют рецептор теломераз, такие как теломестатин.The term inhibitor of oncogenic Ras isoforms, such as H-Ras, K-Ras or N-Ras, as used herein, refers to compounds that target, reduce or inhibit the oncogenic activity of Ras; for example, a farnesyltransferase inhibitor such as L-744832, DK8G557 or R115777 (Zarnestra™). The term telomerase inhibitor, as used herein, refers to compounds that target, reduce or inhibit the activity of telomerase. Compounds that target, reduce or inhibit telomerase activity are particularly compounds that inhibit the telomerase receptor, such as telomestatin.

Термин ингибитор метионинаминопептидазы, как используют в рамках изобретения, относится к соединениям, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность метионинаминопептидазы. Соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность метионинаминопептидазы, включают, но не ограничиваются ими, бенгамид или его производное.The term methionine aminopeptidase inhibitor, as used herein, refers to compounds that target, reduce or inhibit the activity of methionine aminopeptidase. Compounds that target, reduce or inhibit methionine aminopeptidase activity include, but are not limited to, bengamide or a derivative thereof.

Термин ингибитор протеасом, как используют в рамках изобретения, относится к соединениям, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность протеасом. Соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность протеасом, включают, но не ограничиваются ими, бортезомиб (Velcade™) и MLN 341.The term proteasome inhibitor, as used herein, refers to compounds that target, reduce or inhibit proteasome activity. Compounds that target, reduce or inhibit proteasome activity include, but are not limited to, bortezomib (Velcade™) and MLN 341.

Термин ингибитор матриксной металлопротеиназы или (ингибитор ММР), как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, ингибиторы в виде коллагеновых пептидомиметиков и не пептидомиметиков, производные тетрациклина, например, гидроксаматный ингибиторпептидомиметик батимастат и его перорально биодоступный аналог маримастат (ВВ-2516), приномастат (AG3340), метастат (NSC 683551) BMS-279251, BAY 12-9566, ТАА211, MMI270B или AAJ996.The term matrix metalloproteinase inhibitor or (MMP inhibitor) as used herein includes, but is not limited to, collagen peptidomimetic and non-peptidomimetic tetracycline derivative inhibitors, such as the hydroxamate inhibitor peptidomimetic batimastat and its orally bioavailable analog marimastat (BB-2516 ), prinomastat (AG3340), metastat (NSC 683551) BMS-279251, BAY 12-9566, TAA211, MMI270B or AAJ996.

Термин соединения, используемые для лечения гематологических злокачественных опухолей, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, ингибиторы FMS-подобных тирозинкиназ, которые представляют собой соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие активность рецепторов FMS-подобной тирозинкиназы (Flt-3R); интерферон, 1-в-0-арабинофурансилцитозин (ara-с) и бисульфан; и ингибиторы ALK, которые представляют собой соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют каназу анапластической лимфомы.The term compounds used for the treatment of hematological malignancies as used herein includes, but is not limited to, FMS-like tyrosine kinase inhibitors, which are compounds that target, reduce or inhibit the activity of FMS-like tyrosine kinase receptors (Flt-3R ); interferon, 1-in-0-arabinofuransylcytosine (ara-c) and bisulfan; and ALK inhibitors, which are compounds that target, reduce or inhibit anaplastic lymphoma enzyme.

Соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность рецепторов FMS-подобной тирозинкиназы (Flt-3R), в частности, представляют собой соединения, белки или антитела, которые ингибируют представителя семейства рецепторных киназ Flt-3R, такие как PKC412, мидостаурин, производное стауроспорина, SU11248 и MLN518.Compounds that target, reduce or inhibit the activity of FMS-like tyrosine kinase receptors (Flt-3R), in particular, are compounds, proteins or antibodies that inhibit a member of the Flt-3R receptor kinase family, such as PKC412, midostaurin, a staurosporine derivative , SU11248 and MLN518.

Термин ингибиторы HSP90, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие собственную АТР-азную активность HSP90, деградирующую, нацеленную на, снижающую или ингибирующую белки-клиенты HSP90 через убиквитиновый путь протеасом. Соединения, нацеленные на, снижающие или ингибирующие собственную АТР-азную активность HSP90, в частности, представляют собой соединения, белки или антитела, которые ингибируют АТР-азную активность HSP90, такие как 17-аллиламино,17-деметоксигелданамицин (17AAG), производное гелданамицина; другие родственные гелданамицину соединения; радицикол и ингибиторы HDAC.The term HSP90 inhibitors as used herein includes, but is not limited to, compounds that target, reduce or inhibit HSP90's own ATPase activity, degrade, target, reduce or inhibit HSP90 client proteins via the proteasome ubiquitin pathway. Compounds that target, reduce or inhibit the intrinsic ATPase activity of HSP90 are, in particular, compounds, proteins or antibodies that inhibit the ATPase activity of HSP90, such as 17-allylamino,17-demethoxygeldanamycin (17AAG), a derivative of geldanamycin; other geldanamycin-related compounds; radicicol and HDAC inhibitors.

Термин антипролиферативные антитела, как используют в рамках изобретения, включает, но не ограничивается ими, трастузумаб (Herceptin™), Трастузумаб-DM1, эрбитукс, бевацизумаб (Avastin™), ритуксимаб (Rituxan®), PRO64553 (антитело против CD40) и антитело 2С4. Под антителами подразумевают интактные моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела,The term antiproliferative antibodies as used herein include, but are not limited to, trastuzumab (Herceptin™), Trastuzumab-DM1, Erbitux, bevacizumab (Avastin™), rituximab (Rituxan®), PRO64553 (anti-CD40 antibody) and 2C4 antibody . Antibodies include intact monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multispecific antibodies,

- 50 045862 образованные из по меньшей мере 2 интактных антител, и фрагменты антител при условии, что они демонстрируют желаемую биологическую активность.- 50 045862 formed from at least 2 intact antibodies, and antibody fragments, provided that they demonstrate the desired biological activity.

Для лечения острого миелоидного лейкоза (AML) соединения по настоящему изобретению можно использовать в комбинации со стандартными способами терапии лейкоза, особенно в комбинации со способами терапии, используемыми для лечения AML. В частности, соединения по настоящему изобретению можно вводить в комбинации, например, с ингибиторами фарнезилтрансферазы и/или другими лекарственными средствами, пригодными для лечения AML, такими как Даунорубицин, Адриамицин, Ara-С, VP-16, Тенипозид, Митоксантрон, Идарубицин, Карбоплатин и PKC412.For the treatment of acute myeloid leukemia (AML), the compounds of the present invention can be used in combination with standard therapies for leukemia, especially in combination with therapies used for the treatment of AML. In particular, the compounds of the present invention can be administered in combination, for example, with farnesyltransferase inhibitors and/or other drugs useful for the treatment of AML, such as Daunorubicin, Adriamycin, Ara-C, VP-16, Teniposide, Mitoxantrone, Idarubicin, Carboplatin and PKC412.

Другие проливолейкозные соединения включают, например, Ara-С, аналог пиримидина, который представляет собой производное дезоксицитидина с 2'-альфагидроксирибозой (арабинозид). Также включен аналог пурина гипоксантин, 6-меркаптопурин (6-МР) и флударабина фосфат. Соединения, которые нацелены на, снижают или ингибируют активность ингибиторов деацетилазы гистонов (HDAC), такие как бутират натрия и субероиланилидгидроксамовая кислота (SAHA), ингибируют активность ферментов, известных как деацетилазы гистонов. Конкретные ингибиторы HDAC включают MS275, SAHA, FK228 (ранее FR901228), Триихостатин А и соединения, описанные в US 6552065, включая, но не ограничиваясь ими, №гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид, или его фармацевтически приемлемую соль, и Н-гидрокси-3-[4-[(2-гидроксиэтил){2-(1Н-индол3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид, или его фармацевтически приемлемую соль, особенно лактат. Антагонисты рецепторов соматостатина, как используют в рамках изобретения, относятся к соединениям, которые нацелены на, воздействуют на или ингибируют рецептор соматостатина, таким как октреотид, и SOM230. Подходы повреждения опухолевых клеток относятся к таким подходам, как ионизирующее излучение. Термин ионизирующее излучение, упоминаемый выше и далее, означает ионизирующую радиацию, которая встречается в качестве либо электромагнитных лучей (таких как рентгеновские лучи и гамма-лучи), либо частиц (таких как альфа- и бета-частицы). Ионизиующая радиация предусматривается в, но не ограничиваясь ими, лучевой терапии и известна в данной области. См. Hellman, Principles of Radiotherapy, Cancer, Principles and Practice of Oncology, Devita et al, Eds., 4^th Edition, Vol. 1, pp. 248-275 (1993).Other prolivoleukemia compounds include, for example, Ara-C, a pyrimidine analogue, which is a deoxycytidine derivative with 2'-alpha hydroxyribose (arabinoside). Also included are the purine analogue hypoxanthine, 6-mercaptopurine (6-MP) and fludarabine phosphate. Compounds that target, reduce, or inhibit the activity of histone deacetylase (HDAC) inhibitors, such as sodium butyrate and suberoylanilide hydroxamic acid (SAHA), inhibit the activity of enzymes known as histone deacetylases. Specific HDAC inhibitors include MS275, SAHA, FK228 (formerly FR901228), Trichostatin A and the compounds described in US 6552065, including, but not limited to, Nahydroxy-3-[4-[[[2-(2-methyl-1H -indol-3-yl)ethyl]amino]methyl]phenyl]-2E-2-propenamide, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and H-hydroxy-3-[4-[(2-hydroxyethyl){2-(1H- indol3-yl)ethyl]amino]methyl]phenyl]-2E-2-propenamide, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, especially lactate. Somatostatin receptor antagonists, as used herein, refer to compounds that target, act on, or inhibit the somatostatin receptor, such as octreotide, and SOM230. Approaches to damage tumor cells include approaches such as ionizing radiation. The term ionizing radiation, as referred to above and below, means ionizing radiation that occurs as either electromagnetic rays (such as X-rays and gamma rays) or particles (such as alpha and beta particles). Ionizing radiation is contemplated in, but is not limited to, radiation therapy and is known in the art. See Hellman, Principles of Radiotherapy, Cancer, Principles and Practice of Oncology, Devita et al, Eds., ^4th Edition, Vol. 1, pp. 248-275 (1993).

Также включены соединения, связывающие EDG, и рибонуклеотидные ингибиторы редуктаз. Термин соединения, связывающие EDG, как используют в рамках изобретения, относится к классу иммунодепрессантов, которые модулируют рециркуляцию лимфоцитов, таких как FTY720. Термин рибонуклеотидные ингибиторы редуктаз относится к пиримидиновым или пуриновым нуклеозидным аналогам, включая, но не ограничиваясь ими, флударабин и/или цитозинарабинозид (ara-С), 6-тиогуанин, 5фторурацил, кладрибин, 6-меркаптопурин (особенно в комбинации с ara-С против ALL) и/или пентостатин. Рибонуклеотидные ингибиторы редуктаз, в частности, представляют собой гидроксимочевину или производные 2 -гидрокси-1Н-изоиндол-1,3 -диона.Also included are EDG binding compounds and ribonucleotide reductase inhibitors. The term EDG binding compounds, as used herein, refers to a class of immunosuppressants that modulate lymphocyte recycling, such as FTY720. The term ribonucleotide reductase inhibitors refers to pyrimidine or purine nucleoside analogs, including, but not limited to, fludarabine and/or cytosine arabinoside (ara-C), 6-thioguanine, 5-fluorouracil, cladribine, 6-mercaptopurine (especially in combination with ara-C against ALL) and/or pentostatin. Ribonucleotide reductase inhibitors are, in particular, hydroxyurea or 2-hydroxy-1H-isoindole-1,3-dione derivatives.

Также, в частности, включены соединения, белки или моноклональные антитела против VEGF, такие как: 1-(4-хлоранилино)-4-(4-пиридилметил)фталазин или его фармацевтически приемлемая соль, 1(4-хлоранилино)-4-(4-пиридилметил)фталазина сукцинат; Angiostatin™; Endostatin™; амиды антраниловой кислот; ZD4190; Zd₆474; SU5416; SU6668; бевацизумаб; или антитела против VEGF или антитела против рецептора VEGF, такие как rhuMAb и RHUFab, аптамер против VEGF, такой как Макугон; ингибиторы FLT-4, ингибиторы FLT-3, IgGI-антитело против VEGFR-2, ангиозим (RPI 4610) и бевацизумаб (Avastin™).Also particularly included are anti-VEGF compounds, proteins or monoclonal antibodies such as: 1-(4-chloroanilino)-4-(4-pyridylmethyl)phthalazine or a pharmaceutically acceptable salt thereof, 1(4-chloroanilino)-4-( 4-pyridylmethyl)phthalazine succinate; Angiostatin™; Endostatin™; anthranilic acid amides; ZD4190; Zd ₆ 474; SU5416; SU6668; bevacizumab; or anti-VEGF antibodies or anti-VEGF receptor antibodies such as rhuMAb and RHUFab, an anti-VEGF aptamer such as Macugon; FLT-4 inhibitors, FLT-3 inhibitors, anti-VEGFR-2 IgGI antibody, Angiozyme (RPI 4610) and bevacizumab (Avastin™).

Фотодинамическая терапия, как используют в рамках изобретения, относится к терапии, в которой используются определенные химические вещества, известные как фотосенсибилизаторы, для лечения или предупреждения злокачественных опухолей. Примеры фотодинамической терапии включают лечение соединениями, такими как Visudyne™ и порфимер натрий.Photodynamic therapy, as used herein, refers to a therapy that uses certain chemicals known as photosensitizers to treat or prevent cancer. Examples of photodynamic therapy include treatment with compounds such as Visudyne™ and porfimer sodium.

Ангиостатические стероиды, как используют в рамках изобретения, относятся к соединениям, которые блокируют или ингибируют ангиогенез, например, таким как анекортав, триамцинолон, гидрокортизон, 11-а-эпигидрокортизол, кортексолон, 17а-гидроксипрогестерон, кортикостерон, дезоксикортикостерон, тестостерон, эстрон и дексаметазон.Angiostatic steroids, as used herein, refer to compounds that block or inhibit angiogenesis, such as anecortave, triamcinolone, hydrocortisone, 11-a-epihydrocortisol, cortexolone, 17a-hydroxyprogesterone, corticosterone, deoxycorticosterone, testosterone, estrone and dexamethasone. .

Имплантаты, содержащие кортикостероиды, относится к соединениям, таким как флуоцинолон и дексаметазон.Implants containing corticosteroids refer to compounds such as fluocinolone and dexamethasone.

Другие химиотерапевтические соединения включают, но не ограничиваются ими: растительные алкалоиды, гормональные соединения и антагонисты; биологические модификаторы ответа, предпочтительно лимфокины или интерфероны; антисмысловые олигонуклеотиды или олигонуклеотидные производные; кшРНК или миРНК; или прочие соединения или соединения с другим или неизвестным механизмом действия.Other chemotherapeutic compounds include, but are not limited to: plant alkaloids, hormonal compounds and antagonists; biological response modifiers, preferably lymphokines or interferons; antisense oligonucleotides or oligonucleotide derivatives; shRNA or siRNA; or other compounds or compounds with a different or unknown mechanism of action.

Структура активных соединений, идентифицированных посредством номеров кодов, генерических или торговых названий, может быть взята из текущего издания стандартного справочника The Merck Index или из баз данных, например, международных патентов (например, международных публикаций IMS).The structure of active compounds identified by code numbers, generic or trade names can be taken from the current edition of the standard reference book The Merck Index or from databases such as international patents (eg IMS international publications).

- 51 045862- 51 045862

Иллюстративные средства иммуноонкологии.Illustrative means of immuno-oncology.

В некоторых вариантах осуществления, одно или несколько других терапевтических средств представляют собой средство иммуноонкологии. Как используют в рамках изобретения, термин средство иммуноонкологии относится к средству, которое является эффективным для усиления, стимуляции и/или активации иммунных ответов у индивидуумов. В некоторых вариантах осуществления введение средства иммуноонкологии с соединением по изобретению имеет синергический эффект при лечении злокачественной опухоли.In some embodiments, the one or more other therapeutic agents are an immuno-oncology agent. As used herein, the term immuno-oncology agent refers to an agent that is effective for enhancing, stimulating and/or activating immune responses in individuals. In some embodiments, administration of an immuno-oncology agent with a compound of the invention has a synergistic effect in the treatment of cancer.

Средство иммуноонкологии может представлять собой, например, низкомолекулярное лекарственное средство, антитело или биологическое или низкомолекулярное средство. Примеры биологических средств иммуноонкологии включают, но не ограничиваются ими, вакцины против злокачественной опухоли, антитела и цитокины. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело является гуманизированным или человеческим.The immuno-oncology agent may be, for example, a small molecule drug, an antibody, or a biological or small molecule agent. Examples of immuno-oncology biologics include, but are not limited to, cancer vaccines, antibodies, and cytokines. In some embodiments, the antibody is a monoclonal antibody. In some embodiments, the monoclonal antibody is humanized or human.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой (i) агонист стимулирующего (в том числе костимулирующего) рецептора или (ii) антагонист ингибиторного (в том числе коингибиторного) сигнала на Т-клетках, оба из которых приводя к усилению антигенспецифических Т-клеточных ответов.In some embodiments, the immuno-oncology agent is (i) a stimulatory (including co-stimulatory) receptor agonist or (ii) an antagonist of inhibitory (including co-inhibitory) signaling on T cells, both of which result in enhanced antigen-specific T cell responses.

Определенные стимулирующие и ингибиторные молекулы являются представителями суперсемейства иммуноглобулинов (IgSF). Одним важным семейством мембраносвязанных лигандов, которые связываются с костимулирующими или коингибиторными рецепторами, является семейство В7, которое включает В7-1, В7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2), В7-Н2 (ICOS-L), В7-Н3, В7-Н4, В7-Н5 (VISTA) и В7-Н6. Другим семейством мембраносвязанных лигандов, которые связываются с костимулирущими или коингибиторными рецепторами, является семейство молекул TNF, которые связываются с распознаваемыми представителями семейства рецепторов TNF, которое включает CD40 и CD40L, ОХ-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137 (4-1ВВ), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTpR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, лимфотоксин α/TNFe, TNFR2, TNFa, LTeR, лимфотоксин α1β2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY и NGFR.Certain stimulatory and inhibitory molecules are members of the immunoglobulin superfamily (IgSF). One important family of membrane-bound ligands that bind to co-stimulatory or co-inhibitory receptors is the B7 family, which includes B7-1, B7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2), B7-H2 ( ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5 (VISTA) and B7-H6. Another family of membrane-bound ligands that bind to co-stimulatory or co-inhibitory receptors is the TNF family of molecules, which bind to recognized members of the TNF receptor family, which includes CD40 and CD40L, OX-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4 -1BBL, CD137 (4-1ВВ), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTpR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, lymphotoxin α/TNFe, TNFR2, TNFa, LTeR, lymphotoxin α1β2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY and NGFR.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой цитокин, который ингибирует активацию Т-клеток (например, IL-6, IL-10, TGF-β, VEGF и другие иммуносупрессивные цитокины) или цитокин, который стимулирует активацию Т-клеток, для стимуляции иммунного ответа.In some embodiments, the immuno-oncology agent is a cytokine that inhibits T cell activation (e.g., IL-6, IL-10, TGF-β, VEGF, and other immunosuppressive cytokines) or a cytokine that stimulates T cell activation to stimulate immune answer.

В некоторых вариантах осуществления комбинация соединения по изобретению и средства иммуноонкологии может стимулировать Т-клеточные ответы. В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой: (i) антагонист белка, который ингибирует активацию Т-клеток (например, ингибиторы иммунной точки контроля), такой как CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, TIM-3, галектин-9, СЕАСАМ-1, BTLA, CD69, галектин-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1 и TIM-4; или (ii) агонист белка, который стимулирует активацию Т-клеток, такой как В7-1, В7-2, CD28, 4-1ВВ (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, DR3 и CD28H.In some embodiments, the combination of a compound of the invention and an immuno-oncology agent can stimulate T cell responses. In some embodiments, the immuno-oncology agent is: (i) a protein antagonist that inhibits T cell activation (e.g., immune checkpoint inhibitors), such as CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG- 3, TIM-3, galectin-9, SEACAM-1, BTLA, CD69, galectin-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1 and TIM-4; or (ii) a protein agonist that stimulates T cell activation, such as B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL , CD70, CD27, CD40, DR3 and CD28H.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой антагонист ингибиторных рецепторов на NK-клетках или агонист активирующих рецепторов на NK-клетках. В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой антагонист KIR, такой как лирилумаб.In some embodiments, the immuno-oncology agent is an inhibitory receptor antagonist on NK cells or an activating receptor agonist on NK cells. In some embodiments, the immuno-oncology agent is a KIR antagonist, such as lirilumab.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой средство, которое ингибирует или истощает макрофаги или моноциты, включая, но не ограничиваясь ими, антагонисты CSF-1R, такие как антитела-антагонисты CSF-1R, включая RG7155 (WO 2011/70024, WO 2011/107553, WO 2011/131407, WO 2013/87699, WO 2013/119716, WO 2013/132044) или FPA-008 (WO 2011/140249; WO 2013/169264; WO 2014/036357).In some embodiments, the immuno-oncology agent is an agent that inhibits or depletes macrophages or monocytes, including, but not limited to, CSF-1R antagonists, such as CSF-1R antagonist antibodies, including RG7155 (WO 2011/70024, WO 2011/ 107553, WO 2011/131407, WO 2013/87699, WO 2013/119716, WO 2013/132044) or FPA-008 (WO 2011/140249; WO 2013/169264; WO 2014/036357).

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии выбрано из средств-агонистов, которые связывают положительные костимулирующие молекулы, блокирующих средств, которые ослабляют передачу сигнала через ингибиторные рецепторы, антагонистов и одного или нескольких средств, которые системно увеличивают частоту противоопухолевых Т-клеток, которые обходят различные иммуносупрессивные каскады в микроокружении опухоли (например, блокируют связывание ингибиторного рецептора (например, взаимодействия PD-L1/PD-1), истощают или ингибируют Treg (например, с использованием моноклонального антитела против CD25 (например, даклизумаб) или посредством истощения с использованием гранул с антителом против CD25 ex vivo), ингибируют метаболические ферменты, такие как IDO, или обращают вспять/препятствуют истощению энергии Т-клеток) и средств, которые запускают активацию врожденного иммунитета и/или воспаление в областях опухоли.In some embodiments, the immuno-oncology agent is selected from agonists that bind positive co-stimulatory molecules, blocking agents that attenuate signaling through inhibitory receptors, antagonists, and one or more agents that systemically increase the frequency of anti-tumor T cells that bypass various immunosuppressive cascades in the tumor microenvironment (eg, block inhibitory receptor binding (eg, PD-L1/PD-1 interactions), deplete or inhibit Tregs (eg, using an anti-CD25 monoclonal antibody (eg, daclizumab) or through depletion using anti-CD25 beads). CD25 ex vivo), inhibit metabolic enzymes such as IDO, or reverse/prevent T cell energy depletion) and agents that trigger innate immune activation and/or inflammation in tumor areas.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой антагонистIn some embodiments, the immuno-oncology agent is an antagonist

- 52 045862- 52 045862

CTLA-4. В некоторых вариантах осуществления антагонист CTLA-4 представляет собой антителоантагонист CTLA-4. В некоторых вариантах осуществления антитело-антагонист CTLA-4 представляет собой YERVOY (ипилимумаб) или тремелимумаб.CTLA-4. In some embodiments, the CTLA-4 antagonist is a CTLA-4 antibody antagonist. In some embodiments, the CTLA-4 antagonist antibody is YERVOY (ipilimumab) or tremelimumab.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой антагонист PD-1. В некоторых вариантах осуществления антагонист PD-1 вводят посредством инфузии. В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой антитело или его антигенсвязывающую часть, которые специфически связываются с рецептором белка запрограммированной смерти 1 (PD-1) и ингибируют активность PD-1. В некоторых вариантах осуществления антагонист PD-1 представляет собой антитело-антагонист PD-1. В некоторых вариантах осуществления антителоантагонист PD-1 представляет собой OPDIVO (ниволумаб), KEYTRUDA (пембролизумаб) или MEDI0680 (АМР-514; WO 2012/145493). В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии может представлять собой пидилизумаб (СТ-011). В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой рекомбинантный белок, состоящий из внеклеточного домена PD-L2 (B7-DC), слитого с Fc-частью IgG1, называемый АМР-224.In some embodiments, the immuno-oncology agent is a PD-1 antagonist. In some embodiments, the PD-1 antagonist is administered by infusion. In some embodiments, the immuno-oncology agent is an antibody or antigen-binding portion thereof that specifically binds to the programmed death protein 1 (PD-1) receptor and inhibits PD-1 activity. In some embodiments, the PD-1 antagonist is a PD-1 antagonist antibody. In some embodiments, the PD-1 antagonist antibody is OPDIVO (nivolumab), KEYTRUDA (pembrolizumab), or MEDI0680 (AMP-514; WO 2012/145493). In some embodiments, the immuno-oncology agent may be pidilizumab (CT-011). In some embodiments, the immuno-oncology agent is a recombinant protein consisting of a PD-L2 extracellular domain (B7-DC) fused to the Fc portion of IgG1, called AMP-224.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой антагонист PD-L1. В некоторых вариантах осуществления антагонист PD-L1 представляет собой антителоантагонист PD-L1. В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-L1 представляет собой MPDL3280A (RG7446; WO 2010/077634), дурвалумаб (MEDI4736), BMS-936559 (WO 2007/005874) и MSB0010718C (WO 2013/79174).In some embodiments, the immuno-oncology agent is a PD-L1 antagonist. In some embodiments, the PD-L1 antagonist is a PD-L1 antagonist antibody. In some embodiments, the anti-PD-L1 antibody is MPDL3280A (RG7446; WO 2010/077634), durvalumab (MEDI4736), BMS-936559 (WO 2007/005874), and MSB0010718C (WO 2013/79174).

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой антагонист LAG-3. В некоторых вариантах осуществления антагонист LAG-3 представляет собой антителоантагонист LAG-3. В некоторых вариантах осуществления антитело против LAG3 представляет собой BMS-986016 (WO 2010/19570, WO 2014/08218), или IMP-731 или IMP-321 (WO 2008/132601, WO 2009/44273).In some embodiments, the immuno-oncology agent is a LAG-3 antagonist. In some embodiments, the LAG-3 antagonist is a LAG-3 antibody antagonist. In some embodiments, the anti-LAG3 antibody is BMS-986016 (WO 2010/19570, WO 2014/08218), or IMP-731 or IMP-321 (WO 2008/132601, WO 2009/44273).

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой агонист CD137 (4-1BB). В некоторых вариантах осуществления агонист CD137 (4-1ВВ) представляет собой антитело-агонист CD137. В некоторых вариантах осуществления антитело против CD137 представляет собой урелумаб или PF-05082566 (WO 2012/32433).In some embodiments, the immuno-oncology agent is a CD137 agonist (4-1BB). In some embodiments, the CD137 agonist (4-1BB) is a CD137 agonist antibody. In some embodiments, the anti-CD137 antibody is urelumab or PF-05082566 (WO 2012/32433).

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой агонист GITR. В некоторых вариантах осуществления агонист GITR представляет собой антитело-агонист GITR. В некоторых вариантах осуществления антитело против GITR представляет собой BMS-986153, BMS986156, TRX-518 (WO 2006/105021, WO 2009/009116), или MK-4166 (WO 2011/028683).In some embodiments, the immuno-oncology agent is a GITR agonist. In some embodiments, the GITR agonist is a GITR agonist antibody. In some embodiments, the anti-GITR antibody is BMS-986153, BMS986156, TRX-518 (WO 2006/105021, WO 2009/009116), or MK-4166 (WO 2011/028683).

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой антагонист индоламин (2,3)-диоксигеназы (IDO). В некоторых вариантах осуществления антагонист IDO выбран из: эпакадостата (INCB024360, Incyte); индоксимода (NLG-8189, NewLink Genetics Corporation); капманитиба (INC280, Novartis); GDC-0919 (Genentech/Roche); PF-06840003 (Pfizer); BMS:F001287 (Bristol-Myers Squibb); Phy906/KD108 (Phytoceutica); фермента, который разрушает кинуренин (Kynase, Kyn Therapeutics); и NLG-919 (WO 2009/73620, WO 2009/1156652, WO 2011/56652, WO 2012/142237).In some embodiments, the immuno-oncology agent is an indoleamine (2,3)-dioxygenase (IDO) antagonist. In some embodiments, the IDO antagonist is selected from: epacadostat (INCB024360, Incyte); indoximod (NLG-8189, NewLink Genetics Corporation); capmanitib (INC280, Novartis); GDC-0919 (Genentech/Roche); PF-06840003 (Pfizer); BMS:F001287 (Bristol-Myers Squibb); Phy906/KD108 (Phytoceutica); an enzyme that breaks down kynurenine (Kynase, Kyn Therapeutics); and NLG-919 (WO 2009/73620, WO 2009/1156652, WO 2011/56652, WO 2012/142237).

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой агонист ОХ40. В некоторых вариантах осуществления агонист ОХ40 представляет собой антитело-агонист ОХ40. В некоторых вариантах осуществления антитело против ОХ40 представляет собой MEDI-6383 или MEDI-6469.In some embodiments, the immuno-oncology agent is an OX40 agonist. In some embodiments, the OX40 agonist is an OX40 agonist antibody. In some embodiments, the anti-OX40 antibody is MEDI-6383 or MEDI-6469.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой антагонист OX40L. В некоторых вариантах осуществления антагонист OX40L представляет собой антителоантагонист ОХ40. В некоторых вариантах осуществления антагонист OX40L представляет собой RG7888 (WO 2006/029879).In some embodiments, the immuno-oncology agent is an OX40L antagonist. In some embodiments, the OX40L antagonist is an OX40 antagonist antibody. In some embodiments, the OX40L antagonist is RG7888 (WO 2006/029879).

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой агонист CD40. В некоторых вариантах осуществления агонист CD40 представляет собой антитело-агонист CD40. В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой антагонист CD40. В некоторых вариантах осуществления антагонист CD40 представляет собой антитело-антагонист CD40. В некоторых вариантах осуществления антитело против CD40 представляет собой лукатумумаб или дацетузумаб.In some embodiments, the immuno-oncology agent is a CD40 agonist. In some embodiments, the CD40 agonist is a CD40 agonist antibody. In some embodiments, the immuno-oncology agent is a CD40 antagonist. In some embodiments, the CD40 antagonist is a CD40 antagonist antibody. In some embodiments, the anti-CD40 antibody is lucatumumab or dacetuzumab.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой агонист CD27. В некоторых вариантах осуществления агонист CD27 представляет собой антитело-агонист CD27. В некоторых вариантах осуществления антитело против CD27 представляет собой варлилумаб.In some embodiments, the immuno-oncology agent is a CD27 agonist. In some embodiments, the CD27 agonist is a CD27 agonist antibody. In some embodiments, the anti-CD27 antibody is varlilumab.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой MGA271 (против В7НЗ) (WO 2011/109400).In some embodiments, the immuno-oncology agent is MGA271 (anti-B7H3) (WO 2011/109400).

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой абаговомаб, адекатумумаб, афутузумаб, алемтузумаб, анатумомаб мафенатокс, аполизумаб, атезолимаб, авелумаб, бинатумомаб, BMS-936559, катумаксомаб, дурвалумаб, эпикадостат, эпратузумаб, индоксимод, инотузумаб озагомицин, интелумумаб, ипилимумаб, исатуксимаб, ламбролизумаб, MED14736, MPDL3280A, ниволумаб, обинутузумаб, окаратузумаб, офатумумаб, олататумаб, пембролизумаб, пидилизумаб, ритукIn some embodiments, the immuno-oncology agent is abagovomab, adecatumumab, afutuzumab, alemtuzumab, anatumomab mafenatox, apolizumab, atezolimab, avelumab, binatumomab, BMS-936559, catumaxomab, durvalumab, epicadostat, epratuzumab, indoximod, inotuzumab ozagomycin, Intel umumab, ipilimumab, isatuximab, lambrolizumab, MED14736, MPDL3280A, nivolumab, obinutuzumab, ocaratuzumab, ofatumumab, olatatumab, pembrolizumab, pidilizumab, rituk

- 53 045862 симаб, тицилимумаб, самализумаб или тремелимумаб.- 53 045862 simab, ticilimumab, samalizumab or tremelimumab.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой иммуностимулирущее средство. Например, антитела, блокирующие ингибиторную систему PD-1 и PD-L1, могут высвобождать активированные реактивные в отношении опухоли Т-клетки, и в клинических испытаниях было показано, что они индуцируют длительные противоопухолевые ответы во все большем количестве гистологических образцов опухоли, включая некоторые типы опухолей, которые обычно не считаются чувствительными к иммунотерапии. См., например, Okazaki, T. et al. (2013) Nat. Immunol. 14, 1212-1218; Zou et al. (2016) Sci. Transl. Med. 8. Было показано, что антитело против PD-1 ниволумаб (Opdivo®, Bristol-Myers Squibb, также известное как ONO-4538, MDX1106 и BMS-936558), обладает потенциалом к повышению общей выживаемости у пациентов со светлоклеточным раком почки (RCC), у которых произошло прогрессирование заболевания в ходе или после предшествующей антиангиогенной терапии.In some embodiments, the immuno-oncology agent is an immunostimulant agent. For example, antibodies that block the PD-1 and PD-L1 inhibitory system can release activated tumor-reactive T cells and have been shown in clinical trials to induce durable antitumor responses in a growing number of tumor histologies, including some types tumors that are not usually considered sensitive to immunotherapy. See, for example, Okazaki, T. et al. (2013) Nat. Immunol. 14, 1212-1218; Zou et al. (2016) Sci. Transl. Med. 8. The anti-PD-1 antibody nivolumab (Opdivo®, Bristol-Myers Squibb, also known as ONO-4538, MDX1106 and BMS-936558) has been shown to have the potential to improve overall survival in patients with clear cell kidney cancer (RCC) who have had disease progression during or after previous antiangiogenic therapy.

В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее терапевтическое средство специфически индуцирует апоптоз опухолевых клеток. Одобренные иммуномодулирующие терапевтические средства, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают: помалидомид (Pomalyst®, Celgene); леналидомид (Revlimid®, Celgene); ингенол мебутат (Picato®, LEO Pharma).In some embodiments, the immunomodulatory therapeutic agent specifically induces apoptosis of tumor cells. Approved immunomodulatory therapeutic agents that can be used within the scope of the present invention include: pomalidomide (Pomalyst®, Celgene); lenalidomide (Revlimid®, Celgene); ingenol mebutate (Picato®, LEO Pharma).

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой вакцину против злокачественной опухоли. В некоторых вариантах осуществления вакцина против злокачественной опухоли выбрана из: сипулейцела-Т (Provenge®, Dendreon/Valeant Pharmaceuticals), который одобрен для лечения бессимптомного или имеющего минимальные симптомы метастазирующего кастрационнорезистентного (гормон-рефрактерного) рака предстательной железы; и талимоген лагерпарепвек (Imlygic®, BioVex/Amgen, ранее известный как T-VEC), генетически модифицированная онколитическая вирусная терапия, одобренная для лечения нерезектабельной кожной, подкожной меланомы и ее узловых очагов. В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии выбрано из онколитической вирусной терапии, такой как пексастимоген девацирепвек (PexaVec/JX-594, SillaJen/ранее Jennerex Biotherapeutics), вирус осповакцины с дефектом тимидинкиназы- (TK-), модифицированный для экспрессии GM-CSF, против печеночно-клеточной карциномы (NCT02562755) и меланомы (NCT00429312); пелареореп (Reolysin®, Oncolytics Biotech), вариант респираторного кишечного орфанного вируса (реовирус), который не реплицируется в клетках, которые не являются RAS-активированными, против многочисленных злокачественных опухолей, включая рак ободочной и прямой кишки (NCT01622543); рак предстательной железы (NCT01619813); плоскоклеточный рак головы и шеи (NCT01166542); аденокарциному поджелудочной железы (NCT00998322); и немелкоклеточный рак легкого (NSCLC) (NCT 00861627); энаденотуцирев (NG-348, PsiOxus, ранее известный как ColoAd1), аденовирус, модифицированный способами инженерии для экспрессии полноразмерного CD80 и фрагмент антитела, специфичный к белку CD3 Т-клеточного рецептора, против рака яичника (NCT02028117); метастазирующих или развернутых эпителиальных опухолей, таких как рак ободочной и прямой кишки, рак мочевого пузыря, плоскоклеточная карцинома головы и шеи и рак слюнной железы (NCT02636036); ONCOS-102 (Targovax/ранее Oncos), аденовирус, модифицированный для экспрессии GM-CSF, против меланомы (NCT03003676); и перитонеального заболевания, рака ободочной и прямой кишки или рака яичника (NCT02963831); GL0NC1 (GLV-1h68/GLV-1h153, Genelux GmbH), вирусы осповакцины, модифицированные способами инженерии для экспрессии бета-галактозидазы (бета-gal)/бета-глюкуронидазы или бета-gal/симпортера йодида натрия человека (hNIS), соответственно, которые исследовались против перитонеального карциноматоза (NCT01443260); рака фаллопиевой трубы, рака яичника (NCT 02759588); или CG0070 (Cold Genesys), аденовирус, модифицированный для экспрессии GM-CSF, против рака мочевого пузыря (NCT02365818).In some embodiments, the immuno-oncology agent is a cancer vaccine. In some embodiments, the cancer vaccine is selected from: sipuleucel-T (Provenge®, Dendreon/Valeant Pharmaceuticals), which is approved for the treatment of asymptomatic or minimally symptomatic metastatic castration-resistant (hormone-refractory) prostate cancer; and talimogene laherparepvec (Imlygic®, BioVex/Amgen, formerly known as T-VEC), a genetically modified oncolytic viral therapy approved for the treatment of unresectable cutaneous, subcutaneous and nodular melanoma. In some embodiments, the immuno-oncology agent is selected from an oncolytic viral therapy such as pexastimogene devacirepvec (PexaVec/JX-594, SillaJen/formerly Jennerex Biotherapeutics), a thymidine kinase- (TK-)-deficient vaccinia virus modified to express GM-CSF, against hepatic -cell carcinoma (NCT02562755) and melanoma (NCT00429312); pelareorep (Reolysin®, Oncolytics Biotech), a respiratory enteric orphan virus (reovirus) variant that does not replicate in cells that are not RAS-activated, against numerous malignancies, including colorectal cancer (NCT01622543); prostate cancer (NCT01619813); squamous cell carcinoma of the head and neck (NCT01166542); pancreatic adenocarcinoma (NCT00998322); and non-small cell lung cancer (NSCLC) (NCT 00861627); enadenotucirev (NG-348, PsiOxus, formerly known as ColoAd1), an adenovirus engineered to express full-length CD80 and a CD3 T-cell receptor protein-specific antibody fragment against ovarian cancer (NCT02028117); metastatic or advanced epithelial tumors such as colorectal cancer, bladder cancer, head and neck squamous cell carcinoma and salivary gland cancer (NCT02636036); ONCOS-102 (Targovax/formerly Oncos), an adenovirus modified to express GM-CSF, against melanoma (NCT03003676); and peritoneal disease, colorectal cancer or ovarian cancer (NCT02963831); GL0NC1 (GLV-1h68/GLV-1h153, Genelux GmbH), vaccinia viruses engineered to express beta-galactosidase (beta-gal)/beta-glucuronidase or beta-gal/human sodium iodide symporter (hNIS), respectively, which investigated against peritoneal carcinomatosis (NCT01443260); fallopian tube cancer, ovarian cancer (NCT 02759588); or CG0070 (Cold Genesys), an adenovirus modified to express GM-CSF, against bladder cancer (NCT02365818).

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии выбрано из: JX-929 (SillaJen/formerly Jennerex Biotherapeutics), вируса коровьей оспы с дефектом TK и фактора роста коровьей оспы, модифицированного для экспрессии цитозиндезаминазы, которая способна конвертировать пролекарство 5-фторцитозин в цитотоксическое лекарственное средство 5-фторурацил; TG01 и TG02 (Targovax/formerly Oncos), иммунотерапевтических средств на пептидной основе, нацеленных на случаи трудно поддающихся лечению мутаций RAS; и TILT-123 (TILT Biotherapeutics), сконструированного аденовируса, обозначаемого: Ad5/3-E2F-delta24-hTNFa-IRES-hIL20; и вируса везикулярного стоматита (VSV) VSV-GP (ViraTherapeutics), модифицированного для экспрессии гликопротеина (GP) вируса лимфоцитарного хориоменингита (LCMV), который может быть далее модифицирован для экспрессии антигенов, предназначенных для индукции ответа антигенспецифических CD8+ Т-клеток.In some embodiments, the immuno-oncology agent is selected from: JX-929 (SillaJen/formerly Jennerex Biotherapeutics), a TK-deficient vaccinia virus and a vaccinia growth factor modified to express a cytosine deaminase that is capable of converting the prodrug 5-fluorocytosine to the cytotoxic drug 5- fluorouracil; TG01 and TG02 (Targovax/formerly Oncos), peptide-based immunotherapies targeting cases of difficult-to-treat RAS mutations; and TILT-123 (TILT Biotherapeutics), an engineered adenovirus designated: Ad5/3-E2F-delta24-hTNFa-IRES-hIL20; and vesicular stomatitis virus (VSV) VSV-GP (ViraTherapeutics), modified to express lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV) glycoprotein (GP), which can be further modified to express antigens designed to induce an antigen-specific CD8+ T cell response.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой Т-клетку, модифицированную для экспрессии химерного рецептора антигена или CAR. Т-клетки модифицированные для экспрессии такого химерного рецептора антигена, называют CAR-T-клетками.In some embodiments, the immuno-oncology agent is a T cell modified to express a chimeric antigen receptor or CAR. T cells modified to express this chimeric antigen receptor are called CAR-T cells.

CAR конструируют так, чтобы они состояли из связывающих доменов, которые могут происходить из природных лигандов, одноцепочечных вариабельных фрагментов (scFv), происходящих из моноклональных антител, специфичных к антигенам клеточной поверхности, слитых с эндодоменами, которые представляют собой функциональный конец Т-клеточного рецептора (TCR), такими как сигнальный доCARs are designed to consist of binding domains that can be derived from natural ligands, single chain variable fragments (scFvs) derived from monoclonal antibodies specific for cell surface antigens fused to endodomains that represent the functional end of the T cell receptor ( TCR), such as signal to

- 54 045862 мен CD3-3ema из TCR, который способен генерировать сигнал активации в Т-лимфоцитах. При связывании антигена такие CAR сопрягаются с эндогенными каскадами передачи сигнала в эффекторной клетке и генерируют активирующие сигналы, сходные с сигналами, инициируемыми комплексом TCR.- 54 045862 men CD3-3ema from the TCR, which is capable of generating an activation signal in T lymphocytes. Upon antigen binding, such CARs couple to endogenous signal transduction cascades in the effector cell and generate activating signals similar to those initiated by the TCR complex.

Например, в некоторых вариантах осуществления CAR-T-клетка представляет собой одну из клеток, описанных в патенте США 8906682 (включенном в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме), в котором описаны CAR-T-клетки, модифицированные так, чтобы они содержали внеклеточный домен, имеющий антигенсвязывающий домен (такой как домен, который связывается с CD19), слитый с внутриклеточным сигнальным доменом зета-цепи рецепторного комплекса Т-клеточного антигена (таким как CD3-зета). При экспрессии в Т-клетке CAR способен к перенацеливанию распознавания антигена на основе специфичности связывания антигена. В случае CD19 антиген экспрессируется на злокачественных В-клетках. В настоящее время проводят более 200 клинических испытаний с использованием CAR-T при широком диапазоне показаний. [https://clinicatrials.gov/ct2/results?term=chimeric+antigen+receptors&pg=1].For example, in some embodiments, the CAR-T cell is one of the cells described in US Pat. No. 8,906,682 (incorporated herein by reference in its entirety), which discloses CAR-T cells modified to contain an extracellular domain having an antigen binding domain (such as the domain that binds CD19) fused to an intracellular signaling domain of the T cell antigen receptor complex zeta chain (such as CD3 zeta). When expressed in a T cell, CAR is capable of retargeting antigen recognition based on antigen binding specificity. In the case of CD19, the antigen is expressed on malignant B cells. There are currently more than 200 clinical trials using CAR-T in a wide range of indications. [https://clinicatrials.gov/ct2/results?term=chimeric+antigen+receptors&pg=1].

В некоторых вариантах осуществления иммуностимулирующее средство представляет собой активатор орфанного рецептора у, родственного ретиноевой кислоте (ROR/t). RORYt представляет собой фактор транскрипции, имеющий ключевую роль в дифференцировке и поддержании подгрупп эффекторов 17 типа, CD4+ (Th17) и CD8+ (Тс17) Т-клеток, а также в дифференцировке экспрессирующих IL-17 субпопуляций клеток врожденного иммунитета, таких как NK-клетки. В некоторых вариантах осуществления активатор RORyt представляет собой LYC-55716 (Lycera), который в настоящее время проходит оценку в клинических испытаниях для лечения солидных опухолей (NCT02929862).In some embodiments, the immunostimulant agent is an activator of retinoic acid-related orphan receptor γ (ROR/t). RORYt is a transcription factor that has a key role in the differentiation and maintenance of type 17 effector subsets, CD4+ (Th17) and CD8+ (Tc17) T cells, as well as in the differentiation of IL-17-expressing subsets of innate immune cells such as NK cells. In some embodiments, the RORyt activator is LYC-55716 (Lycera), which is currently being evaluated in clinical trials for the treatment of solid tumors (NCT02929862).

В некоторых вариантах осуществления иммуностимулирующее средство представляет собой агонист или активатор toll-подобного рецептора (TLR). Подходящие активаторы TLR включают агонист или активатор TLR9, такой как SD-101 (Dynavax). SD-101 представляет собой иммуностимулирующий CpG, который проходит исследования для В-клеточной, фолликулярной и других лимфом (NCT02254772). Агонисты или активаторы TLR8, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают мотолимод (VTX-2337, VentiRx Pharmaceuticals), который проходит испытания для плоскоклеточного рака головы и шеи (NCT02124850) и рака яичника (NCT02431559).In some embodiments, the immunostimulant agent is a toll-like receptor (TLR) agonist or activator. Suitable TLR activators include a TLR9 agonist or activator such as SD-101 (Dynavax). SD-101 is an immunostimulatory CpG that is being evaluated for B-cell, follicular, and other lymphomas (NCT02254772). TLR8 agonists or activators that can be used within the scope of the present invention include motolimod (VTX-2337, VentiRx Pharmaceuticals), which is being tested for head and neck squamous cell carcinoma (NCT02124850) and ovarian cancer (NCT02431559).

Другие средства иммуноонкологии, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают: урелумаб (BMS-663513, Bristol-Myers Squibb), моноклональное антитело против CD137; варлилумаб (CDX-1127, Celldex Therapeutics), моноклональное антитело против CD27; BMS-986178 (Bristol-Myers Squibb), моноклональное антитело против ОХ40; лирилумаб (IPH2102/BMS-986015, Innate Pharma, Bristol-Myers Squibb), моноклональное антитело против KIR; монализумаб (IPH2201, Innate Pharma, AstraZeneca), моноклональное антитело против NKG2A; андекаликсимаб (GS-5745, Gilead Sciences), антитело против ММР9; и MK-4166 (Merck & Co.), моноклональное антитело против GITR.Other immuno-oncology agents that may be used within the scope of the present invention include: urelumab (BMS-663513, Bristol-Myers Squibb), an anti-CD137 monoclonal antibody; Varlilumab (CDX-1127, Celldex Therapeutics), an anti-CD27 monoclonal antibody; BMS-986178 (Bristol-Myers Squibb), an anti-OX40 monoclonal antibody; lirilumab (IPH2102/BMS-986015, Innate Pharma, Bristol-Myers Squibb), an anti-KIR monoclonal antibody; monalizumab (IPH2201, Innate Pharma, AstraZeneca), a monoclonal antibody against NKG2A; andecaliximab (GS-5745, Gilead Sciences), an anti-MMP9 antibody; and MK-4166 (Merck & Co.), an anti-GITR monoclonal antibody.

В некоторых вариантах осуществления иммуностимулирующее средство выбрано из элотузумаба, мифамуртида, агониста или активатора toll-подобного рецептора и активатора RORyt.In some embodiments, the immunostimulatory agent is selected from elotuzumab, mifamurtide, a toll-like receptor agonist or activator, and a RORyt activator.

В некоторых вариантах осуществления иммуностисмулирующее терапевтическое средство представляет собой рекомбинантный интерлейкин 15 человека (rhIL-15). rhIL-15 тестируется в клинике в качестве терапии меланомы и почечноклеточного рака (NCT01021059 и NCT01369888) и лейкозов (NCT02689453). В некоторых вариантах осуществления иммуностимулирующее средство представляет собой рекомбинантный интерлейкин 12 человека (rhIL-12). В некоторых вариантах осуществления иммунотерапевтическое средство на основе IL-15 представляет собой гетеродимерный IL-15 (hetIL-15, Novartis/Admune), слитый комплекс, состоящий из синтетической формы эндогенного IL-15 в комплексе с растворимым связывающим IL-15 белком альфа-цепью рецептора IL-15 (IL15:sIL-15RA), который проходит тестирование в клинических испытаниях фазы 1 для меланомы, почечноклеточного рака, немелкоклеточного рака легкого и плоскоклеточной карциномы головы и шеи (NCT02452268). В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный интерлейкин 12 человека (rhIL-12) представляет собой NM-IL12 (Neumedicines, Inc.), NCT02544724 или NCT02542124.In some embodiments, the immunostimulatory therapeutic agent is recombinant human interleukin 15 (rhIL-15). rhIL-15 is being tested in the clinic as a therapy for melanoma and renal cell carcinoma (NCT01021059 and NCT01369888) and leukemia (NCT02689453). In some embodiments, the immunostimulatory agent is recombinant human interleukin 12 (rhIL-12). In some embodiments, the IL-15 immunotherapy agent is heterodimeric IL-15 (hetIL-15, Novartis/Admune), a fusion complex consisting of a synthetic form of endogenous IL-15 complexed with a soluble IL-15 alpha chain binding protein IL-15 receptor (IL15:sIL-15RA), which is being tested in a phase 1 clinical trial for melanoma, renal cell carcinoma, non-small cell lung cancer, and head and neck squamous cell carcinoma (NCT02452268). In some embodiments, the recombinant human interleukin 12 (rhIL-12) is NM-IL12 (Neumedicines, Inc.), NCT02544724 or NCT02542124.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии выбрано из средств, описанных в Jerry L. Adams et al., Big opportunities for small molecules in immuno-oncology, Cancer Therapy 2015, Vol. 14, pages 603-622, содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии выбрано из примеров, описанных в табл. 1 Jerry L. Adams et al. В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой низкомолекулярное соединение, нацеленное на мишень иммуноонкологии, выбранную из мишеней, приведенных в табл. 2 Jerry L. Adams et al. В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой низкомолекулярное соединение, выбранное из соединений, приведенных в табл. 2 Jerry L. Adams et al.In some embodiments, the immuno-oncology agent is selected from those described in Jerry L. Adams et al., Great opportunities for small molecules in immuno-oncology, Cancer Therapy 2015, Vol. 14, pages 603-622, the contents of which are incorporated herein by reference in their entirety. In some embodiments, the immuno-oncology agent is selected from the examples described in Table. 1 Jerry L. Adams et al. In some embodiments, the immuno-oncology agent is a small molecule compound that targets an immuno-oncology target selected from the targets listed in Table. 2 Jerry L. Adams et al. In some embodiments, the immuno-oncology agent is a small molecule compound selected from the compounds listed in Table. 2 Jerry L. Adams et al.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии выбрано из низкомолекулярных средств иммуноонкологии, описанных в Peter L. Toogood, Small molecule immuno-oncology therapeutic agents, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2018, Vol. 28, pages 319-329, содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой средство, нацеленное на каскады, описанные в Peter L. Toogood.In some embodiments, the immuno-oncology agent is selected from the small molecule immuno-oncology agents described in Peter L. Toogood, Small molecule immuno-oncology therapeutic agents, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2018, Vol. 28, pages 319-329, the contents of which are incorporated herein by reference in their entirety. In some embodiments, the immuno-oncology agent is an agent that targets the cascades described in Peter L. Toogood.

- 55 045862- 55 045862

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии выбрано из средств, описанных в Sandra L. Ross et al., Bispecific T cell engager (BiTE®) antibody constructs can mediate bystander tumor cell killing, PLoS ONE 12(8): e0183390, содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой конструкцию антитела, представляющую собой биспецифический активатор Т-клеток (BiTE®). В некоторых вариантах осуществления конструкция антитела, представляющая собой биспецифический активатор Т-клеток (BiTE®), представляет собой конструкцию биспецифического антитела CD19/CD3. В некоторых вариантах осуществления конструкция антитела, представляющая собой биспецифический активатор Т-клеток (BiTE®), представляет собой конструкцию биспецифического антитела EGFR/CD3. В некоторых вариантах осуществления конструкция антитела, представляющая собой биспецифический активатор Т-клеток (BiTE®), активирует Т-клетки. В некоторых вариантах осуществления конструкция антитела, представляющая собой биспецифический активатор Т-клеток (BiTE®), активирует Т-клетки, которые высвобождают цитокины, индуцирующие активацию внутриклеточной молекулы адгезии 1 (ICAM-1) и FAS на клетках-свидетелях. В некоторых вариантах осуществления конструкция антитела, представляющая собой биспецифический активатор Т-клеток (BiTE®), активирует Т-клетки, которые вызывают индуцированный лизис клеток-свидетелей. В некоторых вариантах осуществления клетки-свидетели находятся в солидных опухолях. В некоторых вариантах осуществления лизируемые клетки-свидетели находятся вблизи BiTE®-активируемых Т-клеток. В некоторых вариантах осуществления клетки-свидетели включают злокачественные клетки, негативные по опухолеассоциированному антигену (ТАА). В некоторых вариантах осуществления клетки-свидетели включают EGFR-негативные злокачественные клетки. В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой антитело, которое блокирует систему PD-L1/PD1 и/или CTLA4. В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой подвергнутую экспансии ex vivo инфильтрирующую опухоль Т-клетку. В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой конструкцию биспецифического антитела или химерные рецепторы антигенов (CAR), которые прямо связывают Т-клетки с опухолеассоциированными поверхностными антигенами (ТАА).In some embodiments, the immuno-oncology agent is selected from those described in Sandra L. Ross et al., Bispecific T cell engager (BiTE®) antibody constructs can mediate bystander tumor cell killing, PLoS ONE 12(8): e0183390, the contents of which are included in This description is incorporated by reference in its entirety. In some embodiments, the immuno-oncology agent is a bispecific T-cell activator (BiTE®) antibody construct. In some embodiments, the bispecific T cell activator (BiTE®) antibody construct is a CD19/CD3 bispecific antibody construct. In some embodiments, the bispecific T cell activator (BiTE®) antibody construct is an EGFR/CD3 bispecific antibody construct. In some embodiments, a bispecific T cell activator (BiTE®) antibody construct activates T cells. In some embodiments, a bispecific T cell activator (BiTE®) antibody construct activates T cells that release cytokines that induce activation of intracellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) and FAS on bystander cells. In some embodiments, a bispecific T cell activator (BiTE®) antibody construct activates T cells that cause induced lysis of bystander cells. In some embodiments, the bystander cells are located in solid tumors. In some embodiments, the bystander cells to be lysed are in the vicinity of BiTE®-activated T cells. In some embodiments, the bystander cells include tumor-associated antigen (TAA)-negative cancer cells. In some embodiments, the bystander cells include EGFR-negative cancer cells. In some embodiments, the immuno-oncology agent is an antibody that blocks the PD-L1/PD1 and/or CTLA4 system. In some embodiments, the immuno-oncology agent is an ex vivo expanded tumor-infiltrating T cell. In some embodiments, the immuno-oncology agent is a bispecific antibody construct or chimeric antigen receptors (CARs) that directly bind T cells to tumor-associated surface antigens (TAAs).

Иллюстративные ингибиторы иммунной точки контроля.Exemplary immune checkpoint inhibitors.

В некоторых вариантах осуществления средство иммуноонкологии представляет собой ингибитор иммунной точки контроля, как описано в настоящем описании.In some embodiments, the immuno-oncology agent is an immune checkpoint inhibitor, as described herein.

Термин ингибитор точки контроля, как используют в рамках изобретения, относится к средствам, пригодным для предупреждения ускользания злокачественными клетками иммунной системы пациента. Один из основных механизмов нарушения противоопухолевого иммунитета известен как истощение Тклеток, которое является результатом длительного воздействия антигенов, вызывающего активацию ингибиторных рецепторов. Эти ингибиторные рецепторы служат в качестве иммунных точек контроля для предупреждения неконтролируемых иммунных реакций.The term checkpoint inhibitor, as used herein, refers to agents useful for preventing malignant cells from escaping a patient's immune system. One of the main mechanisms of impaired antitumor immunity is known as T cell exhaustion, which results from prolonged exposure to antigens causing activation of inhibitory receptors. These inhibitory receptors serve as immune checkpoints to prevent uncontrolled immune reactions.

PD-1 и коингибиторные рецепторы, такие как антиген 4 цитотоксических Т-лимфоцитов (CTLA-4, В- и Т-лимфоцитарный аттенуатор (BTLA; CD272), домен 3 Т-клеточного иммуноглобулина и муцина 3 (Tim-3), белок гена 3 активации лимфоцитов (Lag-3; CD223) и другие, часто указывают в качестве регуляторов точки контроля. Они выступают в качестве молекулярных стражей, которые позволяют внеклеточной информации определять, должно ли происходить прогрессирование клеточного цикла и других внутриклеточные сигнальные процессы.PD-1 and coinhibitory receptors such as cytotoxic T lymphocyte antigen 4 (CTLA-4, B and T lymphocyte attenuator (BTLA; CD272), T cell immunoglobulin and mucin domain 3 (Tim-3), gene protein Lymphocyte activation 3 (Lag-3; CD223) and others are often cited as checkpoint regulators.They act as molecular sentinels that allow extracellular information to determine whether cell cycle progression and other intracellular signaling processes should occur.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор иммунной точки контроля представляет собой антитело к PD-1. PD-1 связывается с рецептором белка запрограммированной клеточной смерти 1 (PD-1) для предотвращения связывания рецептора с ингибиторным лигандом PDL-1, таким образом, преодолевая способность опухолей подавлять противоопухолевый иммунный ответ хозяина.In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is an anti-PD-1 antibody. PD-1 binds to the programmed cell death protein 1 (PD-1) receptor to prevent the receptor from binding to the inhibitory ligand PDL-1, thereby overcoming the ability of tumors to suppress the host antitumor immune response.

В одном аспекте ингибитор точки контроля представляет собой биологическое терапевтическое средство или низкомолекулярное соединение. В другом аспекте ингибитор точки контроля представляет собой моноклональное антитело, гуманизированное антитело, полностью человеческое антитело, слитый белок или их комбинацию. В следующем аспекте ингибитор точки контроля ингибирует белок точки контроля, выбранный из CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, В7-Н3, В7-Н4, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN-15049, CHK1, CHK2, A2aR, лигандов семейства В-7 или их комбинации. В дополнительном аспекте ингибитор точки контроля взаимодействует с лигандом белка точки контроля, выбранным из CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, В7-НЗ, В7-Н4, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN-15049, CHK1, CHK2, A2aR, лигандов семейства В-7 или их комбинации. В одном аспекте ингибитор точки контроля представляет собой иммуностимулирующее средство, Т-клеточный фактор роста, интерлейкин, антитело, вакцину или их комбинацию. В следующем аспекте интерлейкин представляет собой IL-7 или IL-15. В конкретном аспекте интерлейкин является гликозилированным IL-7. В дополнительном аспекте вакцина представляет собой вакцину на основе дендритных клеток (DC).In one aspect, the checkpoint inhibitor is a biological therapeutic agent or small molecule compound. In another aspect, the checkpoint inhibitor is a monoclonal antibody, a humanized antibody, a fully human antibody, a fusion protein, or a combination thereof. In a further aspect, the checkpoint inhibitor inhibits a checkpoint protein selected from CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN -15049, CHK1, CHK2, A2aR, B-7 family ligands, or combinations thereof. In an additional aspect, the checkpoint inhibitor interacts with a checkpoint protein ligand selected from CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160 , CGEN-15049, CHK1, CHK2, A2aR, B-7 family ligands, or combinations thereof. In one aspect, the checkpoint inhibitor is an immunostimulant, T-cell growth factor, interleukin, antibody, vaccine, or a combination thereof. In a further aspect, the interleukin is IL-7 or IL-15. In a particular aspect, interleukin is glycosylated IL-7. In a further aspect, the vaccine is a dendritic cell (DC) vaccine.

Ингибиторы точки контроля включают любое средство, которое блокирует или ингибирует статистически значимым образом ингибиторные каскады иммунной системы. Такие ингибиторы могут вклюCheckpoint inhibitors include any agent that blocks or inhibits in a statistically significant manner inhibitory cascades of the immune system. Such inhibitors may include

- 56 045862 чать низкомолекулярные ингибиторы или могут включать антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые связывают и блокируют или ингибируют рецепторы иммунной точки контроля, или антитела, которые связывают и блокируют или ингибируют лиганды рецепторов иммунной точки контроля. Иллюстративные молекулы точки контроля, на которые можно проводить нацеливание для блокирования или ингибирования, включают, но не ограничиваются ими, CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, В7-Н3, В7Н4, BTLA, HVEM, GAL9, LAG3, TIM3, VISTA, KIR, 2B4 (принадлежит семейству молекул CD2 и экспрессируется на всех NK, γδ, и CD8⁺(ae) T-клетках памяти), CD160 (также обозначаемый как BY55), CGEN-15049, киназы CHK1 и CHK2, A2aR и различные лиганды семейства В-7. Лиганды семейства В7 включают, но не ограничиваются ими, В7-1, В7-2, B7-DC, В7-Н1, В7-Н2, В7-Н3, В7-Н4, В7-Н5, В7-Н6 и В7-Н7. Ингибиторы точки контроля включают антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, другие связывающие белки, биологические терапевтические средства или низкомолекулярные соединения, которые связывают и блокируют или ингибируют активность одного или нескольких из CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD 160 и CGEN-15049. Иллюстративные ингибиторы иммунной точки контроля включают Тремелимумаб (блокирующее CTLA-4 антитело), моноклональное антитело против ОХ40, PD-L1 (антитело против В7-Н1; MEDI4736), MK-3475 (блокатор PD-1), Ниволумаб (антитело против PD1), СТ-011 (антитело против PD1), моноклональные антитело против BY55, АМР224 (антитело против PDL1), BMS-936559 (антитело против PDL1), MPLDL3280A (антитело против PDL1), MSB0010718C (антитело против PDL1) и ипилимумаб (ингибитор точки контроля против CTLA-4). Лиганды белков точки контроля включают, но не ограничиваются ими PD-L1, PD-L2, В7-Н3, В7-Н4, CD28, CD86 и TIM-3.- 56 045862 small molecule inhibitors or may include antibodies or antigen binding fragments thereof that bind and block or inhibit immune checkpoint receptors, or antibodies that bind and block or inhibit ligands of immune checkpoint receptors. Exemplary checkpoint molecules that can be targeted to block or inhibit include, but are not limited to, CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, B7-H3, B7H4, BTLA, HVEM, GAL9, LAG3, TIM3, VISTA, KIR, 2B4 (belongs to the CD2 family of molecules and is expressed on all NK, γδ, and CD8 ⁺ (ae) memory T cells), CD160 (also referred to as BY55), CGEN-15049, CHK1 and CHK2 kinases, A2aR and various family ligands AT 7. B7 family ligands include, but are not limited to, B7-1, B7-2, B7-DC, B7-H1, B7-H2, B7-H3, B7-H4, B7-H5, B7-H6, and B7-H7. Checkpoint inhibitors include antibodies or antigen-binding fragments thereof, other binding proteins, biological therapeutics, or small molecule compounds that bind to and block or inhibit the activity of one or more of CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD 160 and CGEN-15049. Exemplary immune checkpoint inhibitors include Tremelimumab (CTLA-4 blocking antibody), anti-OX40 monoclonal antibody, PD-L1 (anti-B7-H1 antibody; MEDI4736), MK-3475 (PD-1 blocker), Nivolumab (anti-PD1 antibody), CT-011 (anti-PD1 antibody), monoclonal anti-BY55 antibody, AMP224 (anti-PDL1 antibody), BMS-936559 (anti-PDL1 antibody), MPLDL3280A (anti-PDL1 antibody), MSB0010718C (anti-PDL1 antibody) and ipilimumab (anti-PDL1 antibody) CTLA-4). Checkpoint protein ligands include, but are not limited to, PD-L1, PD-L2, B7-H3, B7-H4, CD28, CD86, and TIM-3.

В определенных вариантах осуществления ингибитор иммунной точки контроля выбран из антагониста PD-1, антагониста PD-L1 и антагониста CTLA-4. В некоторых вариантах осуществления ингибитор точки контроля выбран из группы, состоящей из ниволумаба (Opdivo®), ипилимумаба (Yervoy®) и пембролизумаба (Keytruda®). В некоторых вариантах осуществления ингибитор точки контроля выбран из: ниволумаба (антитела против PD-1, Opdivo®, Bristol-Myers Squibb); пембролизумаба (антитело против PD-1, Keytruda®, Merck); ипилимумаба (антитело против CTLA-4, Yervoy®, Bristol-Myers Squibb); дурвалумаба (антитело против PD-L1, Imfinzi®, AstraZeneca) и атезолизумаба (антитело против PD-L1, Tecentriq®, Genentech).In certain embodiments, the immune checkpoint inhibitor is selected from a PD-1 antagonist, a PD-L1 antagonist, and a CTLA-4 antagonist. In some embodiments, the checkpoint inhibitor is selected from the group consisting of nivolumab (Opdivo®), ipilimumab (Yervoy®), and pembrolizumab (Keytruda®). In some embodiments, the checkpoint inhibitor is selected from: nivolumab (anti-PD-1 antibody, Opdivo®, Bristol-Myers Squibb); pembrolizumab (anti-PD-1 antibody, Keytruda®, Merck); ipilimumab (anti-CTLA-4 antibody, Yervoy®, Bristol-Myers Squibb); durvalumab (anti-PD-L1 antibody, Imfinzi®, AstraZeneca) and atezolizumab (anti-PD-L1 antibody, Tecentriq®, Genentech).

В некоторых вариантах осуществления ингибитор точки контроля выбран из группы, состоящей из ламбролизумаба (MK-3475), ниволумаба (BMS-936558), пидилизумаба (СТ-011), АМР-224, MDX-1105, MEDI4736, MPDL3280A, BMS-936559, ипилимумаба, лирлумаба, IPH2101, пембролизумаба (Keytruda®) и тремелимумаба.In some embodiments, the checkpoint inhibitor is selected from the group consisting of lambrolizumab (MK-3475), nivolumab (BMS-936558), pidilizumab (CT-011), AMP-224, MDX-1105, MEDI4736, MPDL3280A, BMS-936559, ipilimumab, lirlumab, IPH2101, pembrolizumab (Keytruda®) and tremelimumab.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор иммунной точки контроля представляет собой: REGN2810 (Regeneron), антитело против PD-1, протестированное у пациентов с базально-клеточной карциномой (NCT03132636); NSCLC (NCT03088540); кожной плоскоклеточной карциномой (NCT02760498); лимфомой (NCT02651662); и меланомой (NCT03002376); пидилизумаб (CureTech), также известный как СТ-011, антитело, которое связывается с PD-1, проходящее клинические испытания против диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомой и множественной миеломой; авелумаб (Bavencio®, Pfizer/Merck KGaA), также известный как MSB0010718C), полностью человеческое IgG1антитело против PD-L1, проходящее клинические испытания при немелкоклеточном раке легкого, карциноме из клеток Меркеля, мезотелиоме, солидных опухолях, раке почки, раке яичника, рака мочевого пузыря, раке головы и шеи и раке желудка; или PDR001 (Novartis), ингибиторное антитело, которое связывается с PD-1, проходящее клинические испытания при немелкоклеточном раке легкого, меланоме, тройном негативном раке молочной железы и развернутых или метастазирующих солидных опухолях. Тремелимумаб (СР-675,206; Astrazeneca) представляет собой полностью человеческое моноклональное антитело против CTLA-4, которое исследовано в клинических испытаниях при ряде показаний, включая: мезотелиому, рак ободочной и прямой кишки, рак почки, рак молочной железы, рак легкого и немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному протоков поджелудочной железы, рак поджелудочной железы, герминогенный рак, плоскоклеточный рак головы и шеи, печеночно-клеточную карциному, рак предстательной железы, рак эндометрия, метастазирующий рак в печени, рак печени, крупноклеточную Вклеточную лимфому, рак яичника, рак шейки матки, метастазирующий анапластический рак щитовидной железы, рак уротелия, рак фаллопиевой трубы, множественную миелому, рак мочевого пузыря, саркому мягких тканей и меланому. AGEN-1884 (Agenus) представляет собой антитело против CTLA4, которое находится в фазе 1 клинических испытаний для развернутых солидных опухолей (NCT02694822).In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is: REGN2810 (Regeneron), an anti-PD-1 antibody tested in patients with basal cell carcinoma (NCT03132636); NSCLC (NCT03088540); cutaneous squamous cell carcinoma (NCT02760498); lymphoma (NCT02651662); and melanoma (NCT03002376); pidilizumab (CureTech), also known as CT-011, an antibody that binds to PD-1 in clinical trials against diffuse large B-cell lymphoma and multiple myeloma; avelumab (Bavencio®, Pfizer/Merck KGaA), also known as MSB0010718C), a fully human IgG1 anti-PD-L1 antibody in clinical trials for non-small cell lung cancer, Merkel cell carcinoma, mesothelioma, solid tumors, kidney cancer, ovarian cancer, cancer bladder, head and neck cancer and stomach cancer; or PDR001 (Novartis), an inhibitory antibody that binds to PD-1, is in clinical trials in non-small cell lung cancer, melanoma, triple negative breast cancer, and advanced or metastatic solid tumors. Tremelimumab (CP-675,206; Astrazeneca) is a fully human anti-CTLA-4 monoclonal antibody that has been studied in clinical trials for a number of indications including: mesothelioma, colorectal cancer, kidney cancer, breast cancer, lung cancer and non-small cell cancer lung, pancreatic ductal adenocarcinoma, pancreatic cancer, germ cell cancer, squamous cell carcinoma of the head and neck, hepatocellular carcinoma, prostate cancer, endometrial cancer, metastatic liver cancer, liver cancer, large cell lymphoma, ovarian cancer, cervical cancer , metastatic anaplastic thyroid cancer, urothelial cancer, fallopian tube cancer, multiple myeloma, bladder cancer, soft tissue sarcoma and melanoma. AGEN-1884 (Agenus) is an anti-CTLA4 antibody that is in phase 1 clinical trials for advanced solid tumors (NCT02694822).

В некоторых вариантах осуществления ингибитор точки контроля представляет собой ингибитор белка 3, содержащего домен Т-клеточного иммуноглобулина и муцина (TIM-3). Ингибиторы TIM-3, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают TSR-022, LY3321367 и MBG453. TSR-022 (Tesaro) представляет собой антитело против TIM-3, которое проходит испытания при солидных опухолях (NCT02817633). LY3321367 (Eli Lilly) представляет собой антитело против TIM-3, которое проходит испытания при солидных опухолях (NCT03099109). MBG453 (Novartis) представляет собой антитело против TIM-3, которое проходит испытания при развернутых злокачественных опухоляхIn some embodiments, the checkpoint inhibitor is a T-cell immunoglobulin-mucin domain-containing protein 3 (TIM-3) inhibitor. TIM-3 inhibitors that can be used in the present invention include TSR-022, LY3321367 and MBG453. TSR-022 (Tesaro) is an anti-TIM-3 antibody that is being tested in solid tumors (NCT02817633). LY3321367 (Eli Lilly) is an anti-TIM-3 antibody that is being tested in solid tumors (NCT03099109). MBG453 (Novartis) is an anti-TIM-3 antibody that is being tested in advanced cancers

- 57 045862 (NCT02608268).- 57 045862 (NCT02608268).

В некоторых вариантах осуществления ингибитор точки контроля представляет собой ингибитор Тклеточного иммунорецептора с доменами Ig и ITIM, или TIGIT, иммунного рецептора на определенных Т-клетках и NK-клетках. Ингибиторы TIGIT, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают BMS-986207 (Bristol-Myers Squibb), моноклональное антитело против TIGIT (NCT02913313); ОМР-313М32 (Oncomed); и моноклональное антитело против TIGIT (NCT03119428).In some embodiments, the checkpoint inhibitor is an inhibitor of the T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains, or TIGIT, an immune receptor on certain T cells and NK cells. TIGIT inhibitors that can be used in the present invention include BMS-986207 (Bristol-Myers Squibb), an anti-TIGIT monoclonal antibody (NCT02913313); OMR-313M32 (Oncomed); and anti-TIGIT monoclonal antibody (NCT03119428).

В некоторых вариантах осуществления ингибитор точки контроля представляет собой ингибитор белка гена 3 активации лимфоцитов (LAG-3). Ингибиторы LAG-3, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают BMS-986016 и REGN3767 и IMP321. BMS-986016 (Bristol-Myers Squibb), антитело против LAG-3, проходит испытания при глиобластоме и глиосаркоме (NCT02658981). REGN3767 (Regeneron) также представляет собой антитело против LAG-3 и проходит испытания при злокачественных опухолях (NCT03005782). IMP321 (Immutep S.A.) представляет собой слитый белок LAG-3-Ig, который проходит испытания при: меланоме (NCT02676869); аденокарциноме (NCT02614833); и метастазирующем раке молочной железы (NCT00349934).In some embodiments, the checkpoint inhibitor is a lymphocyte activation gene 3 (LAG-3) protein inhibitor. LAG-3 inhibitors that can be used within the scope of the present invention include BMS-986016 and REGN3767 and IMP321. BMS-986016 (Bristol-Myers Squibb), an anti-LAG-3 antibody, is being tested in glioblastoma and gliosarcoma (NCT02658981). REGN3767 (Regeneron) is also an anti-LAG-3 antibody being tested in cancer (NCT03005782). IMP321 (Immutep S.A.) is a LAG-3-Ig fusion protein that is being tested in: melanoma (NCT02676869); adenocarcinoma (NCT02614833); and metastatic breast cancer (NCT00349934).

Ингибиторы точки контроля, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают агонисты ОХ40. Агонисты ОХ40, которые исследуются в клинических испытаниях, включают: PF-04518600/PF-8600 (Pfizer), антитело-агонист ОХ40, при метастазирующем раке почки (NCT03092856) и развернутых злокачественных опухолях и новообразованиях (NCT02554812; NCT05082566); GSK3174998 (Merck), антитело-агонист ОХ40, находящееся в фазе 1 клинических испытаний (NCT02528357); MEDI0562 (Medimmune/AstraZeneca), антитело-агонист ОХ40, при развернутых солидных опухолях (NCT02318394 и NCT02705482); MEDI6469, антитело-агонист ОХ40 (Medimmune/AstraZeneca), у пациентов с раком ободочной и прямой кишки (NCT02559024), раком молочной железы (NCT01862900), раком головы и шеи (NCT02274155) и метастазирующим раком предстательной железы (NCT01303705); и BMS-986178 (Bristol-Myers Squibb) антитело-агонист ОХ40, при развернутых злокачественных опухолях (NCT02737475).Checkpoint inhibitors that can be used within the scope of the present invention include OX40 agonists. OX40 agonists being investigated in clinical trials include: PF-04518600/PF-8600 (Pfizer), an OX40 agonist antibody, in metastatic kidney cancer (NCT03092856) and advanced malignancies (NCT02554812; NCT05082566); GSK3174998 (Merck), an OX40 agonist antibody in phase 1 clinical trials (NCT02528357); MEDI0562 (Medimmune/AstraZeneca), an OX40 agonist antibody, for advanced solid tumors (NCT02318394 and NCT02705482); MEDI6469, an OX40 agonist antibody (Medimmune/AstraZeneca), in patients with colorectal cancer (NCT02559024), breast cancer (NCT01862900), head and neck cancer (NCT02274155), and metastatic prostate cancer (NCT01303705); and BMS-986178 (Bristol-Myers Squibb), an OX40 agonist antibody, for advanced malignancies (NCT02737475).

Ингибиторы точки контроля, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают агонисты CD137 (также называемый 4-1ВВ). Агонисты CD137, которые исследуются в клинических испытаниях, включают: утомилумаб (PF-05082566, Pfizer) антитело-агонист CD137, при диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфоме (NCT02951156) и при развернутых злокачественных опухолях и новообразованиях (NCT02554812 и NCT05082566); урелумаб (BMS-663513, Bristol-Myers Squibb), антитело-агонист CD137, при меланоме и раке кожи (NCT02652455) и глиобластоме и глиосаркоме (NCT02658981).Checkpoint inhibitors that can be used in the present invention include CD137 agonists (also called 4-1BB). CD137 agonists being investigated in clinical trials include: utomilumab (PF-05082566, Pfizer), a CD137 agonist antibody, in diffuse large B-cell lymphoma (NCT02951156) and in advanced malignancies (NCT02554812 and NCT05082566); urelumab (BMS-663513, Bristol-Myers Squibb), a CD137 agonist antibody, in melanoma and skin cancer (NCT02652455) and glioblastoma and gliosarcoma (NCT02658981).

Ингибиторы точки контроля, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают агонисты CD27. Агонисты CD27, которые проходят исследования в клинических испытаниях, включают: варлилумаб (CDX-1127, Celldex Therapeutics), антитело-агонист CD27, при плоскоклеточном раке головы и шеи, карциноме яичника, раке ободочной и прямой кишки, почечно-клеточном раке и глиобластоме (NCT02335918); лимфомах (NCT01460134); и глиоме и астроцитоме (NCT02924038).Checkpoint inhibitors that can be used within the scope of the present invention include CD27 agonists. CD27 agonists being investigated in clinical trials include: Varlilumab (CDX-1127, Celldex Therapeutics), a CD27 agonist antibody, for head and neck squamous cell carcinoma, ovarian carcinoma, colorectal cancer, renal cell carcinoma, and glioblastoma ( NCT02335918); lymphomas (NCT01460134); and glioma and astrocytoma (NCT02924038).

Ингибиторы точки контроля, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают агонисты глюкокортикоид-индуцируемых рецепторов фактора некроза опухоли (GITR). Агонисты GITR, которые проходят исследования в клинических испытаниях, включают: TRX518 (Leap Therapeutics), антитело-агонист GITR, при злокачественной меланоме и других злокачественных солидных опухолях (NCT01239134 и NCT02628574); GWN323 (Novartis), антитело-агонист GITR, при солидных опухолях и лимфоме (NCT02740270); INCAGN01876 (Incyte/Agenus), антитело-агонист GITR, при развернутых злокачественных опухолях (NCT02697591 и NCT03126110); MK-4166 (Merck), антителоагонист GITR, при солидных опухолях (NCT02132754) и MEDI1873 (Medimmune/AstraZeneca), гексамерную молекулу-агонист GITR-лиганда с Fc-доменом IgG1 человека, при развернутых солидных опухолях (NCT02583165).Checkpoint inhibitors that can be used within the scope of the present invention include glucocorticoid-inducible tumor necrosis factor receptor (GITR) agonists. GITR agonists being investigated in clinical trials include: TRX518 (Leap Therapeutics), a GITR agonist antibody, in malignant melanoma and other solid tumor malignancies (NCT01239134 and NCT02628574); GWN323 (Novartis), a GITR agonist antibody, for solid tumors and lymphoma (NCT02740270); INCAGN01876 (Incyte/Agenus), a GITR agonist antibody, in advanced malignancies (NCT02697591 and NCT03126110); MK-4166 (Merck), a GITR antibody agonist, in solid tumors (NCT02132754) and MEDI1873 (Medimmune/AstraZeneca), a hexameric GITR ligand agonist molecule with the human IgG1 Fc domain, in advanced solid tumors (NCT02583165).

Ингибиторы точки контроля, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают агонисты индуцируемого костимулятора Т-клеток (ICOS, также известный как CD278). Агонисты ICOS, которые проходят исследования в клинических испытаниях, включают: MEDI-570 (Medimmune), антитело-агонист ICOS, при лимфомах (NCT02520791); GSK3359609 (Merck), антитело-агонист ICOS, в фазе 1 (NCT02723955); и JTX-2011 (Jounce Therapeutics), антитело-агонист ICOS, в фазе 1 (NCT02904226).Checkpoint inhibitors that can be used within the scope of the present invention include inducible T cell costimulator (ICOS, also known as CD278) agonists. ICOS agonists being investigated in clinical trials include: MEDI-570 (Medimmune), an ICOS agonist antibody for lymphomas (NCT02520791); GSK3359609 (Merck), an ICOS agonist antibody, in phase 1 (NCT02723955); and JTX-2011 (Jounce Therapeutics), an ICOS agonist antibody, in phase 1 (NCT02904226).

Ингибиторы точки контроля, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают ингибиторы IgG-подобных рецепторов киллерных клеток (KIR). Ингибиторы KIR, которые проходят исследования в клинических испытаниях, включают: лирилумаб (IPH2102/BMS-986015, Innate Pharma/Bristol-Myers Squibb), антитело против KIR, при лейкозах (NCT01687387, NCT02399917, NCT02481297, NCT02599649), множественной миеломе (NCT02252263) и лимфоме (NCT01592370); IPH2101 (1-7F9, Innate Pharma) при миеломе (NCT01222286 и NCT01217203); и IPH4102 (Innate Pharma), антитело против KIR, которое связывается с тремя доменами длинной цитоплазматической хвостовой части (KIR3DL2), при лимфоме (NCT02593045).Checkpoint inhibitors that can be used within the scope of the present invention include IgG-like killer cell receptor (KIR) inhibitors. KIR inhibitors being investigated in clinical trials include: lirilumab (IPH2102/BMS-986015, Innate Pharma/Bristol-Myers Squibb), anti-KIR antibody, leukemia (NCT01687387, NCT02399917, NCT02481297, NCT02599649), multiple myeloma (NCT02252 263) and lymphoma (NCT01592370); IPH2101 (1-7F9, Innate Pharma) for myeloma (NCT01222286 and NCT01217203); and IPH4102 (Innate Pharma), an anti-KIR antibody that binds to three long cytoplasmic tail domains (KIR3DL2), in lymphoma (NCT02593045).

Ингибиторы точки контроля, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения,Checkpoint inhibitors that can be used within the scope of the present invention are

- 58 045862 включают ингибиторы CD47, которые ингибируют взаимодействие между CD47 и регулирующим сигнал белком альфа (SIRPa). Ингибиторы CD47/SIRPa, которые проходят исследования в клинических испытаниях, включают: ALX-148 (Alexo Therapeutics), вариант-антагонист (SIRPa), который связывается с CD47 и препятствует опосредуемой CD47/SIRPa передаче сигнала, в фазе 1 (NCT03013218); TTI-621 (SIRPa-Fc, Trillium Therapeutics), растворимый рекомбинантный слитый белок, полученный путем сшивания N-концевого CD47-связывающего домена SIRPa с Fc-доменом IgG1 человека, действующий посредством связывания CD47 человека, и препятствующий доставке его сигнала не поглощать макрофагам, в клинических испытаниях фазы 1 (NCT02890368 и NCT02663518); СС-90002 (Celgene), антитело против CD47, при лейкозах (NCT02641002); и Hu5F9-G4 (Forty Seven, Inc.), при новообразования ободочной и прямой кишки и при солидных опухолях (NCT02953782), остром миелоидном лейкозе (NCT02678338) и лимфоме (NCT02953509).- 58 045862 include CD47 inhibitors that inhibit the interaction between CD47 and signal regulatory protein alpha (SIRPa). CD47/SIRPa inhibitors being investigated in clinical trials include: ALX-148 (Alexo Therapeutics), an antagonist (SIRPa) variant that binds to CD47 and interferes with CD47/SIRPa-mediated signaling, in phase 1 (NCT03013218); TTI-621 (SIRPa-Fc, Trillium Therapeutics), a soluble recombinant fusion protein produced by ligating the N-terminal CD47 binding domain of SIRPa to the Fc domain of human IgG1, acting by binding human CD47 and interfering with the delivery of its do not engulf signal to macrophages, in phase 1 clinical trials (NCT02890368 and NCT02663518); CC-90002 (Celgene), an anti-CD47 antibody, for leukemia (NCT02641002); and Hu5F9-G4 (Forty Seven, Inc.), for colorectal and solid tumors (NCT02953782), acute myeloid leukemia (NCT02678338), and lymphoma (NCT02953509).

Ингибиторы точки контроля, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают ингибиторы CD73. Ингибиторы CD73, которые проходят исследования в клинических испытаниях, включают: MEDI9447 (Medimmune), антитело против CD73, при солидных опухолях (NCT02503774); и BMS-986179 (Bristol-Myers Squibb), антитело против CD73, при солидных опухолях (NCT02754141).Checkpoint inhibitors that can be used within the scope of the present invention include CD73 inhibitors. CD73 inhibitors being investigated in clinical trials include: MEDI9447 (Medimmune), an anti-CD73 antibody, in solid tumors (NCT02503774); and BMS-986179 (Bristol-Myers Squibb), an anti-CD73 antibody, in solid tumors (NCT02754141).

Ингибиторы точки контроля, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают агонисты белка-стимулятора генов интерферонов (STING, также известный как трансмембранный блок 173, или ТМЕМ173). Агонисты STING, которые проходят исследования в клинических испытаниях, включают: MK-1454 (Merck), синтетический циклический динуклеотид, являющийся агонистом, при лимфоме (NCT03010176); и ADU-S100 (MIW815, Aduro Biotech/Novartis), синтетический циклический динуклеотид, являющийся агонистом, в фазе 1 (NCT02675439 и NCT03172936).Checkpoint inhibitors that can be used within the scope of the present invention include agonists of the stimulator of interferon genes (STING, also known as transmembrane box 173, or TMEM173). STING agonists being investigated in clinical trials include: MK-1454 (Merck), a synthetic cyclic dinucleotide agonist for lymphoma (NCT03010176); and ADU-S100 (MIW815, Aduro Biotech/Novartis), a synthetic agonist cyclic dinucleotide in phase 1 (NCT02675439 and NCT03172936).

Ингибиторы точки контроля, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают ингибиторы CSF1R. Ингибиторы CSF1R, которые проходят исследования в клинических испытаниях, включают: пексдартиниб (PLX3397, Plexxikon), низкомолекулярный ингибитор CSF1R, при раке ободочной и прямой кишки, раке поджелудочной железы, метастазирующих и развернутых злокачественных опухолях (NCT02777710) и меланоме, немелкоклеточном раке легкого, плоскоклеточном раке головы и шеи, желудочно-кишечной стромальной опухоли (GIST) и раке яичника (NCT02452424); и IMC-CS4 (LY3022855, Lilly), антитело против CSF-1R, при раке поджелудочной железы (NCT03153410), меланоме (NCT03101254) и солидных опухолях (NCT02718911); и BLZ945 (метиламид 4-[2((1R,2R)-2гидроксициклогексиламино)бензотиазол-6-илокси]пиридин-2-карбоновой кислоты, Novartis), перорально доступный ингибитор CSF1R, при развернутых солидных опухолях (NCT02829723).Checkpoint inhibitors that can be used within the scope of the present invention include CSF1R inhibitors. CSF1R inhibitors being investigated in clinical trials include: pexdartinib (PLX3397, Plexxikon), a small molecule CSF1R inhibitor, in colorectal cancer, pancreatic cancer, metastatic and advanced malignancies (NCT02777710) and melanoma, non-small cell lung cancer, squamous cell head and neck cancer, gastrointestinal stromal tumor (GIST) and ovarian cancer (NCT02452424); and IMC-CS4 (LY3022855, Lilly), an anti-CSF-1R antibody, in pancreatic cancer (NCT03153410), melanoma (NCT03101254), and solid tumors (NCT02718911); and BLZ945 (4-[2((1R,2R)-2hydroxycyclohexylamino)benzothiazol-6-yloxy]pyridin-2-carboxylic acid methylamide, Novartis), an orally available CSF1R inhibitor, in advanced solid tumors (NCT02829723).

Ингибиторы точки контроля, которые можно использовать в рамках настоящего изобретения, включают ингибиторы рецептора NKG2A. Ингибиторы рецептора NKG2A, которые проходят исследования в клинических испытаниях, включают монализумаб (IPH2201, Innate Pharma), антитело против NKG2A, при новообразованиях головы и шеи (NCT02643550) и хроническом лимфоцитарном лейкозе (NCT02557516).Checkpoint inhibitors that can be used within the scope of the present invention include NKG2A receptor inhibitors. NKG2A receptor inhibitors being investigated in clinical trials include monalizumab (IPH2201, Innate Pharma), an anti-NKG2A antibody for head and neck neoplasms (NCT02643550) and chronic lymphocytic leukemia (NCT02557516).

В некоторых вариантах осуществления ингибитор иммунной точки контроля выбран из ниволумаба, пембролизумаба, ипилимумаба, авелумаба, дурвалумаба, атезолизумаба или пидилизумаба.In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is selected from nivolumab, pembrolizumab, ipilimumab, avelumab, durvalumab, atezolizumab, or pidilizumab.

Терапевтические применения.Therapeutic applications.

Бициклическме пептиды по изобретению особенно применимы в качестве связывающих нектин-4 соединений.The bicyclic peptides of the invention are particularly useful as nectin-4 binding compounds.

Нектин-4 представляет собой молекулу поверхности, которая принадлежит семейству белков нектинов, которое включает 4 представителя. Нектины представляют собой молекулы клеточной адгезии, которые играют ключевую роль в различных биологических процессах, таких как полярность, пролиферация, дифференцировка и миграция, для эпителиальных, эндотелиальных, иммунных и нейрональных клеток, в ходе развития и взрослой жизни. Они вовлечены в несколько патологических процессов у человека. Они являются основными рецепторами для полиовируса, вируса простого герпеса и вируса кори. Мутации в генах, кодирующих нектин-1 (PVRL1) или нектин-4 (PVRL4), вызывают синдромы эктодермальной дисплазии, ассоциированные с другими аномалиями. Нектин-4 экспрессируется в ходе эмбрионального развития. Во взрослых тканях его экспрессия более ограничена, чем экспрессия других представителей семейства. Нектин-4 представляет собой ассоциированный с опухолью антиген в 50%, 49% и 86% карцином молочной железы, яичника и легкого, соответственно, в основном на опухолях с плохим прогнозом. Его экспрессия не обнаруживается в соответствующих нормальных тканях. При опухолях молочной железы нектин-4 экспрессируется в основном в тройных негативных и ERBB2+ карциномах. В сыворотке пациентов с этими злокачественными опухолями детекция растворимых форм нектина-4 ассоциирована с плохим прогнозом. Уровни сывороточного нектина-4 возрастают в ходе метастатического прогрессирования и снижаются после лечения. Эти результаты указывают на то, что нектин-4 может быть надежной мишенью для лечения злокачественной опухоли. Таким образом, на уровне техники описано несколько антител против нектина-4. В частности, Энфортумаб ведотин (ASG-22ME) представляет собой конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC), нацеленный на нектин-4 и в настоящее время он проходит клинические испытания для лечения пациентов, страдающих от солидных опухолей.Nectin-4 is a surface molecule that belongs to the nectin family of proteins, which includes 4 members. Nectins are cell adhesion molecules that play key roles in various biological processes such as polarity, proliferation, differentiation and migration for epithelial, endothelial, immune and neuronal cells during development and adult life. They are involved in several pathological processes in humans. They are the main receptors for poliovirus, herpes simplex virus and measles virus. Mutations in the genes encoding nectin-1 (PVRL1) or nectin-4 (PVRL4) cause ectodermal dysplasia syndromes associated with other abnormalities. Nectin-4 is expressed during embryonic development. In adult tissues, its expression is more limited than that of other members of the family. Nectin-4 is a tumor-associated antigen in 50%, 49%, and 86% of breast, ovarian, and lung carcinomas, respectively, mostly in tumors with poor prognosis. Its expression is not detected in corresponding normal tissues. In breast tumors, nectin-4 is expressed mainly in triple negative and ERBB2+ carcinomas. In the serum of patients with these malignancies, detection of soluble forms of nectin-4 is associated with poor prognosis. Serum nectin-4 levels increase during metastatic progression and decrease after treatment. These results indicate that nectin-4 may be a viable target for the treatment of malignant tumors. Thus, several antibodies against nectin-4 have been described in the art. Specifically, Enfortumab vedotin (ASG-22ME) is an antibody-drug conjugate (ADC) targeting nectin-4 and is currently in clinical trials for the treatment of patients suffering from solid tumors.

- 59 045862- 59 045862

Полипептидные лиганды, выбранные в соответствии со способом по настоящему изобретению, можно использовать в терапевтических и профилактических применениях in vivo, диагностических применениях in vitro и in vivo, применениях для анализов и реагентов in vitro, и т.п. Лиганды, имеющие определенные уровни специфичности, являются пригодными в применениях, которые вовлекают тестирование на не являющихся человеком животных, где является желательной перекрестная реактивность, или в диагностических применениях, где перекрестную реактивность в отношении гомологов или паралогов необходимо тщательно контролировать. В некоторых применениях, таких как применения в вакцинах, способность индуцировать иммунный ответ на заданные диапазоны антигенов можно использовать для адаптации вакцины к определенным заболеваниям и патогенам.Polypeptide ligands selected in accordance with the method of the present invention can be used in in vivo therapeutic and prophylactic applications, in vitro and in vivo diagnostic applications, in vitro assay and reagent applications, and the like. Ligands having certain levels of specificity are useful in applications that involve testing in non-human animals where cross-reactivity is desired, or in diagnostic applications where cross-reactivity with homologs or paralogs must be carefully monitored. In some applications, such as vaccine applications, the ability to induce an immune response to specified ranges of antigens can be used to tailor a vaccine to specific diseases and pathogens.

По существу чистые пептидные лиганды с гомогенностью по меньшей мере 90-95% являются предпочтительными для введения млекопитающему, и наиболее предпочтительной для фармацевтических применений является гомогенность 98-99% или более, особенно когда млекопитающим является человек. После очистки частично или до гомогенности при желании выбранные полипептиды можно использовать в диагностических или терапевтических целях (в том числе экстракорпорально) или для разработки и проведения процедур анализа, иммунофлуоресцентного окрашивания и т.п. (Lefkovite and Pernis, (1979 and 1981) Immunological Methods, Volumes I and II, Academic Press, NY).Substantially pure peptide ligands with a homogeneity of at least 90-95% are preferred for administration to a mammal, and a homogeneity of 98-99% or greater is most preferred for pharmaceutical applications, especially when the mammal is a human. Once purified partially or to homogeneity, if desired, the selected polypeptides can be used for diagnostic or therapeutic purposes (including in vitro) or for the development and implementation of assay procedures, immunofluorescence staining, etc. (Lefkovite and Pernis, (1979 and 1981) Immunological Methods, Volumes I and II, Academic Press, NY).

В соответствии со следующим аспектом изобретения предусматривается пептидный лиганд или конъюгат лекарственного средства, как определено в настоящем описании, для применения для предупреждения, подавления или лечения заболевания или нарушения, опосредуемого нектином-4.In accordance with a further aspect of the invention, there is provided a peptide ligand or drug conjugate, as defined herein, for use in the prevention, suppression or treatment of a disease or disorder mediated by nectin-4.

В соответствии со следующим аспектом изобретения предусматривается способ предупреждения, подавления или лечения заболевания или нарушения, опосредуемого нектином-4, который включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, конъюгата эффекторной группы и лекарственного средства пептидного лиганда, как определено в настоящем описании.In accordance with a further aspect of the invention, there is provided a method of preventing, inhibiting or treating a disease or disorder mediated by nectin-4, which comprises administering to a patient in need thereof an effector moiety-drug conjugate of a peptide ligand as defined herein.

В одном варианте осуществления нектин-4 представляет собой нектин-4 млекопитающего. В следующем варианте осуществления нектин-4 млекопитающего представляет собой нектин-4 человека.In one embodiment, nectin-4 is mammalian nectin-4. In a further embodiment, the mammalian nectin-4 is human nectin-4.

В одном варианте осуществления заболевание или нарушение, опосредуемое нектином-4, выбрано из вирусных инфекций, синдромов эктодермальной дисплазии и других аномалий, карциномы молочной железы, яичника и легкого, прогрессирования метастазов и солидных опухолей.In one embodiment, the disease or disorder mediated by nectin-4 is selected from viral infections, ectodermal dysplasia syndromes and other abnormalities, breast, ovarian and lung carcinoma, metastatic progression and solid tumors.

В следующем варианте осуществления заболевание или нарушение, опосредуемое нектином-4, выбрано из злокачественной опухоли.In a further embodiment, the disease or disorder mediated by nectin-4 is selected from a malignant tumor.

Примеры злокачественных опухолей (и их доброкачественных аналогов), которые можно лечить (или ингибировать), включают, но не ограничиваются ими, опухоли эпителиального происхождения (аденомы и карциномы различных типов, включая аденокарциномы, плоскоклеточные карциномы, переходно-клеточные карциномы и другие карциномы), такие как карциномы мочевого пузыря и мочевыводящих путей, молочной железы, желудочно-кишечного тракта (включая пищевод, желудок (гастральная), тонкий кишечник, толстый кишечник, прямую кишку и анус), печени (печеночно-клеточная карцинома), желчного пузыря и желчевыводящей системы, экзокринные карциномы поджелудочной железы, почки, легкого (например, аденокарциномы, мелкоклеточные карциномы легкого, немелкоклеточные карциномы легких, бронхоальвеолярные карциномы и мезотелиомы), головы и шеи (например, злокачественные опухоли языка, ротовой полости, гортани, глотки, носоглотки, миндалевидных желез, слюнных желез, носовой полости и околоносовых пазух), яичника, фаллопиевых труб, брюшины, вагины, вульвы, полового члена, шейки матки, миометрия, эндометрия, щитовидной железы (например, фолликулярная карцинома щитовидной железы), надпочечников, предстательной железы, кожи и смежных органов (например, меланома, базально-клеточная карцинома, плоскоклеточная карцинома, кератоакантома, дисплатический невус); гематологические злокачественные опухоли (т.е. лейкозы, лимфомы) и предзлокачественные гематологические нарушения и нарушения пограничной злокачественности, включая гематологические злокачественные опухоли и родственные состояния лимфоидного происхождения (например, острый лимфоцитарный лейкоз [ALL], хронический лимфоцитарный лейкоз [CLL], В-клеточные лимфомы, такие как диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома [DLBCL], фолликулярная лимфома, лимфома Беркитта, лимфома из клеток мантийной зоны, Т-клеточные лимфомы и лейкозы, лимфомы из натуральных киллеров [NK], лимфома Ходжкина, волосатоклеточный лейкоз, моноклональная гаммапатия неуточненного значения, плазмацитома, множественная миелома и посттрансплантационные лимфопролиферативные нарушения), и гематологические злокачественные опухоли и родственные состояния миелоидного ростка (например, острый миелогенный лейкоз [AML], хронический миелогенный лейкоз [CML], хронический миеломоноцитарный лейкоз [CMML], гиперэозинофильный синдром, миелопролиферативные нарушения, такие как истинная полицитемия, эссенциальная тромбоцитемия и первичный миелофиброз, миелопролиферативный синдром, миелодиспластический синдром и промиелоцитарный лейкоз); опухоли мезенхимного происхождения, например саркомы мягких тканей, костей или хрящей, такие как остеосаркомы, фибросаркомы, хондросаркомы, рабдомиосаркомы, лейомиосаркомы, липосаркомы, ангиосаркомы, саркома Капоши, саркома Юинга, синовиальные саркомы, эпителиоидные саркомы, желудочно-кишечные стромальные опухоли, доброкачественные и злокачественные гистиоцитомы, и возвышающаяся дерматофибросаркома; опухоли центральной или периферической нервной системыExamples of malignant tumors (and their benign counterparts) that can be treated (or inhibited) include, but are not limited to, tumors of epithelial origin (adenomas and carcinomas of various types, including adenocarcinomas, squamous cell carcinomas, transitional cell carcinomas and other carcinomas), such as carcinomas of the bladder and urinary tract, breast, gastrointestinal tract (including esophagus, stomach (gastric), small intestine, colon, rectum and anus), liver (hepatocellular carcinoma), gallbladder and biliary system , exocrine carcinomas of the pancreas, kidney, lung (eg, adenocarcinomas, small cell lung carcinomas, non-small cell lung carcinomas, bronchoalveolar carcinomas, and mesotheliomas), head and neck (eg, malignant tumors of the tongue, oral cavity, larynx, pharynx, nasopharynx, tonsils, salivary glands, nasal cavity and paranasal sinuses), ovary, fallopian tubes, peritoneum, vagina, vulva, penis, cervix, myometrium, endometrium, thyroid (eg, follicular thyroid carcinoma), adrenal glands, prostate, skin and related organs (eg, melanoma, basal cell carcinoma, squamous cell carcinoma, keratoacanthoma, dysplastic nevus); hematologic malignancies (ie, leukemias, lymphomas) and premalignant hematologic disorders and borderline malignancies, including hematologic malignancies and related conditions of lymphoid origin (eg, acute lymphocytic leukemia [ALL], chronic lymphocytic leukemia [CLL], B-cell lymphomas such as diffuse large B-cell lymphoma [DLBCL], follicular lymphoma, Burkitt's lymphoma, mantle cell lymphoma, T-cell lymphomas and leukemias, natural killer [NK] lymphomas, Hodgkin lymphoma, hairy cell leukemia, unspecified monoclonal gammopathy values, plasmacytoma, multiple myeloma, and post-transplant lymphoproliferative disorders), and hematologic malignancies and related myeloid lineage conditions (eg, acute myelogenous leukemia [AML], chronic myelogenous leukemia [CML], chronic myelomonocytic leukemia [CMML], hypereosinophilic syndrome, myeloproliferative disorders such as polycythemia vera, essential thrombocythemia and primary myelofibrosis, myeloproliferative syndrome, myelodysplastic syndrome and promyelocytic leukemia); tumors of mesenchymal origin, such as sarcomas of soft tissue, bone or cartilage, such as osteosarcomas, fibrosarcomas, chondrosarcomas, rhabdomyosarcomas, leiomyosarcomas, liposarcoma, angiosarcomas, Kaposi's sarcoma, Ewing's sarcoma, synovial sarcomas, epithelioid sarcomas, gastrointestinal stromal tumors, benign and malignant s histiocytomas, and elevated dermatofibrosarcoma; tumors of the central or peripheral nervous system

- 60 045862 (например, астроцитомы, глиомы и глиобластомы, менингиомы, эпендимомы, пиниальные опухоли и шванномы); эндокринные опухоли (например, опухоли гипофиза, опухоли надпочечников, опухоли островковых клеток, опухоли паращитовидной железы и медуллярная карцинома щитовидной железы); опухоли глаза и прилежащих тканей (например, ретинобластома); герминогенные и трофобластические опухоли (например, тератомы, семиномы, дисгерминомы, хорионаденомы и хориокарциномы); и педиатрические и эмбриональные опухоли (например, медуллобластома, нейробластома, опухоль Вильмса и примитивные нейроэктодермальные опухоли); или синдромы, врожденные или иные, которые делают пациента предрасположенными к злокачественным опухолям (например, пигментная ксеродерма).- 60 045862 (for example, astrocytomas, gliomas and glioblastomas, meningiomas, ependymomas, pinial tumors and schwannomas); endocrine tumors (eg, pituitary tumors, adrenal tumors, islet cell tumors, parathyroid tumors and medullary thyroid carcinoma); tumors of the eye and adjacent tissues (for example, retinoblastoma); germ cell and trophoblastic tumors (eg, teratomas, seminomas, dysgerminomas, chorioadenomas and choriocarcinomas); and pediatric and embryonal tumors (eg, medulloblastoma, neuroblastoma, Wilms tumor, and primitive neuroectodermal tumors); or syndromes, congenital or otherwise, that predispose the patient to malignancy (eg, xeroderma pigmentosum).

В следующем варианте осуществления злокачественная опухоль выбрана из гемопоэтической злокачественной опухоли, например, выбранной из: неходжскинской лимфомы (NHL), лимфомы Беркитта (BL), множественной миеломы (ММ), хронического В-лимфоцитарного лейкоза (B-CLL), острого В- и Тлимфоцитарного лейкоза (ALL), T-клеточной лимфомы (TCL), острого миелоидного лейкоза (AML), волосатоклеточного лейкоза (HCL), лимфомы Ходжкина (HL) и хронического миелоидного лейкоза (CML).In a further embodiment, the malignancy is selected from a hematopoietic malignancy, for example, selected from: non-Hodgkin's lymphoma (NHL), Burkitt's lymphoma (BL), multiple myeloma (MM), chronic B-lymphocytic leukemia (B-CLL), acute B- and Tlymphocytic leukemia (ALL), T-cell lymphoma (TCL), acute myeloid leukemia (AML), hairy cell leukemia (HCL), Hodgkin lymphoma (HL) and chronic myeloid leukemia (CML).

В следующем варианте осуществления злокачественная опухоль выбрана из рака легкого (например, немелкоклеточный рак легкого), рак мочевого пузыря, рак поджелудочной железы и рак молочной железы. В настоящем описании в примерах 1-5 приводятся данные, которые демонстрируют, что выбранные бициклические конъюгаты лекарственного средства по изобретению демонстрировали противоопухолевую активность в этих моделях злокачественной опухоли.In a further embodiment, the cancer is selected from lung cancer (eg, non-small cell lung cancer), bladder cancer, pancreatic cancer, and breast cancer. Herein, Examples 1-5 provide data that demonstrate that selected bicyclic drug conjugates of the invention exhibited antitumor activity in these cancer models.

Упоминание в настоящем описании термина предупреждение вовлекает введение защитной композиции до индукции заболевания. Подавление относится к введению композиции после индуцирующего события, но до клинического появления заболевания. Лечение вовлекает введение защитной композиции после проявления симптомов заболевания.When used herein, the term prevention involves administration of the protective composition prior to the induction of disease. Suppression refers to the administration of the composition after the inducing event, but before the clinical onset of the disease. Treatment involves administration of the protective composition after the onset of symptoms of the disease.

Модельные системы на животных, которые можно использовать для скрининга эффективности пептидных лигандов в отношении защиты от или лечения заболевания, являются доступными. Настоящее изобретение облегчает использование модельных систем на животных, что позволяет разработку полипептидных лигандов, которые могут перекрестно реагировать с мишенями из человека и животных, для обеспечения возможности применения моделей на животных.Animal model systems that can be used to screen the effectiveness of peptide ligands in protecting against or treating disease are available. The present invention facilitates the use of animal model systems, allowing the development of polypeptide ligands that can cross-react with human and animal targets to enable the use of animal models.

Более того, в настоящем описании представлены данные, которые демонстрируют ассоциацию между варьированием количества копий (CNV) и экспрессией гена нектина-4 из множества типов опухолей. Таким образом, согласно следующему аспекту изобретения, предусматривается способ предупреждения, подавления или лечения злокачественной опухоли, который включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффекторной группы и конъюгата лекарственного средства, представляющего собой пептидный лиганд, как определено в настоящем описании, где указанный пациент идентифицирован как имеющий увеличенное варьирование числа копий (CNV) нектина-4.Moreover, the present description presents data that demonstrate an association between copy number variations (CNVs) and nectin-4 gene expression from multiple tumor types. Thus, according to a further aspect of the invention, there is provided a method of preventing, suppressing or treating cancer, which includes administering to a patient in need thereof an effector moiety and a peptide ligand drug conjugate as defined herein, wherein said patient is identified as having increased copy number variation (CNV) of nectin-4.

В одном варианте осуществления злокачественная опухоль выбрана из злокачественных опухолей, идентифицированных в настоящем описании как имеющие увеличенное CNV нектина-4. В следующем варианте осуществления злокачественная опухоль выбрана из злокачественных опухолей, идентифицированных в настоящем описании как имеющие увеличенное CNV нектина-4, а именно: рака молочной железы, матки, мочевого пузыря, аденокарциномы легкого, плоскоклеточного рака легкого, рака шейки матки, головы и шеи, поджелудочной железы, щитовидной железы, ободочной и прямой кишки, тимомы, саркомы, светлоклеточной карциномы почек (RCC), рака предстательной железы и желудка.In one embodiment, the cancer is selected from those cancers identified herein as having an increased nectin-4 CNV. In a further embodiment, the cancer is selected from those cancers identified herein as having an increased nectin-4 CNV, namely: breast, uterine, bladder, lung adenocarcinoma, squamous cell lung cancer, cervical, head and neck cancer, pancreas, thyroid, colorectal, thymoma, sarcoma, renal clear cell carcinoma (RCC), prostate and gastric cancer.

Изобретение дополнительно описано ниже с помощью следующих примеров.The invention is further described below using the following examples.

ПримерыExamples

Сокращенные обозначенияAbbreviations

1,2,4-TriAz: 3 -(1,2,4-триазол-1-ил)аланин1,2,4-TriAz: 3-(1,2,4-triazol-1-yl)alanine

1Nal: 1-нафтилаланин1Nal: 1-naphthylalanine

2FuAla: 2-фурилаланин2FuAla: 2-furylalanine

2MePhe: 2-метилфенилаланин2MePhe: 2-methylphenylalanine

2Nal: 2-нафтилаланин2Nal: 2-naphthylalanine

2Ра1: 2-пиридилаланин2Pa1: 2-pyridylalanine

3,3-DPA: 3,3-дифенилаланин3,3-DPA: 3,3-diphenylalanine

3MePhe: 3-метилфенилаланин3MePhe: 3-methylphenylalanine

3Pal: 3-пиридилаланин3Pal: 3-pyridylalanine

4,4-ВРА: 4,4-бифенилаланин4,4-BPA: 4,4-biphenylalanine

4,4-DFP: 4,4-дифторпролин4,4-DFP: 4,4-difluoroproline

4MePhe: 4-метилфенилаланин4MePhe: 4-methylphenylalanine

4Ра1: 4-пиридилаланин4Pa1: 4-pyridylalanine

4ThiAz: бета-(4-тиазолил)аланин4ThiAz: beta-(4-thiazolyl)alanine

5FTrp: 5-фторТ-триптофан5FTrp: 5-fluoroT-tryptophan

Agb: 2-амино-4-гуанидиномасляная кислотаAgb: 2-amino-4-guanidinobutyric acid

Aib: аминоизомасляная кислотаAib: aminoisobutyric acid

AzaTrp: азатриптофанAzaTrp: azatryptophan

- 61 045862- 61 045862

Aze: азетидинAze: azetidine

С5А: циклопентилглицинC5A: cyclopentylglycine

Cha: 3-циклогексилаланинCha: 3-cyclohexylalanine

Сра: циклопропилаланинCPA: cyclopropylalanine

Суа: цистеиновая кислотаSua: cysteic acid

DOPA: 3,4-дигидроксифенилаланинDOPA: 3,4-dihydroxyphenylalanine

HArg: гомоаргининHArg: homoarginine

HGln: гомоглутаминHGln: homoglutamine

Hleu: гомолейцинHleu: homoleucine

Hphe: гомофенилаланинHphe: homophenylalanine

Hse(me): гомосерин(Ме)Hse(me): homoserine(Me)

HSer: гомосеринHSer: homoserine

НуР:гидроксипролинNuP:hydroxyproline

Lys(Ac): лизин(ацетил)Lys(Ac): lysine(acetyl)

Met(O₂): метионинсульфонMet(O ₂ ): methionine sulfone

Me: норлейцинMe: norleucine

Oic: октагидроиндолкарбоновая кислотаOic: octahydroindolecarboxylic acid

Оха: оксазолидин-4-карбоновая кислота pCoPhe: пара-карбоксифенилаланинOkha: oxazolidine-4-carboxylic acid pCoPhe: para-carboxyphenylalanine

PheOPhe: 4-феноксифенилаланинPheOPhe: 4-phenoxyphenylalanine

Phg: фенилглицинPhg: phenylglycine

Pip: пипеколиновая кислотаPip: pipecolic acid

Pro(4NH): 4-аминопролин tBuAla: трет-бутилаланинPro(4NH): 4-aminoproline tBuAla: tert-butylalanine

TetraZ: тетразолаланинTetraZ: tetrazoalanine

Thi: тиени-аланинThi: thienie-alanine

ТНР(О): тетрагидропиран-4-пропионовая кислотаTHP(O): tetrahydropyran-4-propionic acid

THP(SO₂): диоксо-4-тетрагидротиопиранилуксусная кислотаTHP(SO ₂ ): dioxo-4-tetrahydrothiopyraniacetic acid

Trp(Ме): метилтриптофанTrp(Me): methyltryptophan

Материалы и способы.Materials and methods.

Синтез пептидов.Peptide synthesis.

Синтез пептидов был основан на химии Fmoc с использованием устройства для синтеза пептидов Symphony, производимого Peptide Instruments, и устройства для синтеза Syro II от MultiSynTech. Использовали стандартные Fmoc-аминокислоты (Sigma, Merck) с подходящими защитными группами боковых цепей: когда это было применимо, в каждом случае использовали стандартные условия присоединения, за которыми следовало удаление защитных групп с использованием стандартной методологии.Peptide synthesis was based on Fmoc chemistry using a Symphony peptide synthesis device from Peptide Instruments and a Syro II synthesis device from MultiSynTech. Standard Fmoc amino acids (Sigma, Merck) with appropriate side chain protecting groups were used: standard coupling conditions were used in each case when applicable, followed by deprotection using standard methodology.

Альтернативно, пептиды очищали с использованием ВЭЖХ и после выделения их модифицировали посредством 1,3,5-триакрилоилгексагидро-1,3,5-триазина (TATA, Sigma). Для этого линейный пептид разбавляли 50:50 посредством MeCN:H2O вплоть до ~35 мл, добавляли ~500 мкл 100 мМ ТАТА в ацетонитриле и реакцию начинали посредством 5 мл 1М NH₄HCO₃ в Н2О. Реакции позволяли протекать в течение ~30-60 мин при к.т. и лиофилизировали после завершения реакции (на основе данных MALDIMS). После завершения 1 мл к реакционной смеси добавляли 1М моногидрат гидрохлорида L-цистеина (Sigma) в Н2О на ~60 мин при к.т. для гашения любого избытка ТАТА.Alternatively, the peptides were purified using HPLC and, after isolation, modified with 1,3,5-triacryloylhexahydro-1,3,5-triazine (TATA, Sigma). To do this, the linear peptide was diluted 50:50 with MeCN:H2O up to ~35 ml, ~500 μl of 100 mM TATA in acetonitrile was added and the reaction was started with 5 ml of 1 M NH ₄ HCO ₃ in H2O. The reaction was allowed to proceed for ~30-60 min at room temperature. and lyophilized after completion of the reaction (based on MALDIMS data). After completion, 1 M L-cysteine hydrochloride monohydrate (Sigma) in H2O was added to the reaction mixture for ~60 min at room temperature. to extinguish any excess TATA.

После лиофилизации модифицированный пептид очищали, как описано выше, заменяя Luna C8 на колонку Gemini C18 (Phenomenex), и заменяя кислоту на 0,1% трифторуксусную кислоту. Очищенные фракции, содержавшие правильный ТАТА-модифицированный материал, объединяли, лиофилизировали и держали при -20°С для хранения.After lyophilization, the modified peptide was purified as described above, replacing the Luna C8 with a Gemini C18 column (Phenomenex), and replacing the acid with 0.1% trifluoroacetic acid. Purified fractions containing the correct TATA-modified material were pooled, lyophilized and kept at -20°C for storage.

Все аминокислоты, если нет иных указаний, использовали в L-конфигурациях.All amino acids, unless otherwise indicated, were used in L configurations.

В некоторых случаях пептиды конвертируют в активированные дисульфиды перед присоединения к свободной тиольной группе токсина с использованием следующего способа; раствор 4-метил(сукцинимидил 4-(2-пиридилтио)пентаноата) (100 мМ) в сухом DMSO (1,25 мол. экв.) добавляли к раствору пептида (20 мМ) в сухом DMSO (1 мол. экв.). Реакционную смесь хорошо перемешивали и добавляли DIPEA (20 мол. экв.). Мониторинг реакции проводили посредством LC/MS до завершения.In some cases, the peptides are converted to activated disulfides before attachment to the free thiol group of the toxin using the following method; a solution of 4-methyl(succinimidyl 4-(2-pyridylthio)pentanoate) (100 mM) in dry DMSO (1.25 mol equiv) was added to a solution of peptide (20 mM) in dry DMSO (1 mol equiv). The reaction mixture was stirred well and DIPEA (20 mol equiv.) was added. The reaction was monitored by LC/MS until completion.

Получение бициклических конъюгатов пептид-лекарственное средство.Preparation of bicyclic peptide-drug conjugates.

Получение BCY7826.Receiving BCY7826.

Условия разделения: фаза А: 0,075% TFA в Н₂О, фаза В: MeCN.Separation conditions: phase A: 0.075% TFA in H ₂ O, phase B: MeCN.

Способ разделения: 18-48-55 мин, RT=53,5 мин.Separation method: 18-48-55 min, RT=53.5 min.

Разделительная колонка: Luna200*25MM 10 мкм, С18, 110А и Gemini 50*30 мм, С18, 5 мкм, 110А, подсоединение, 50°С.Separation column: Luna200*25MM 10 µm, C18, 110A and Gemini 50*30 mm, C18, 5 µm, 110A, connection, 50°C.

Способ растворения: DMF.Dissolution method: DMF.

Чистота разделения: 95%Purity of separation: 95%

- 62 045862- 62 045862

Пептид синтезировали посредством твердофазного синтеза. Использовали 1,11 г амидной смолы Ринка МВНА (sub: 0,45 ммоль/г). К смеси, содержавшей амидную смолу Ринка МВНА (0,5 ммоль, 1,11 г, 0,45 ммоль/г) и Fmoc-Cys(Trt)-OH (0,87 г, 1,5 моль, 3,0 экв.), добавляли DMF (20 мл), затем добавляли DIC (3,0 экв.) и HOAt (3,0 экв.) и перемешивали в течение 1 ч. Для деблокирования использовали 20% пиперидин в DMF. Другие аминокислоты связывали с использованием 3,0 экв. активирующих реагентов, DIC (3,0 экв.) и HOAt (3,0 экв.) в DMF (20 мл). Мониторинг реакции проводили посредством цветной реакции с нингидрином или цветной реакции с тетрахлором. После завершения синтеза пептидную смолу промывали DMFx3, МеОНх3, а затем сушили при барботировании N2 в течение ночи. После этого пептидную смолу обрабатывали 92,5% TFA/2,5% TIS/2,5% EDT/2,5% H2O в течение 3 ч. Пептид преципитировали холодным изопропиловым эфиром (200 мл) и центрифугировали (3 мин при 3000 об/мин). Проводили промывание изопропиловым эфиром два дополнительных раза (200 мл). Неочищенный пептид сушили в вакууме в течение 2 ч. Использовали неочищенный пептид (т.е. после отщепления пептида и преципитации с изопропиловым эфиром, преципитат лиофилизируют для удаления остаточного изопропилового эфира и TFA), растворяли лиофилизированный порошок (0,5 ммоль) в 500 мл ACN/H₂O (50:50), и добавляли 5 мл 100 мМ ТАТА. Добавляли 10 мл бикарбоната аммония в Н₂О (1М) и перемешивали в течение 1 ч. После завершения циклизации реакцию необходимо было гасить 10,0 экв. цистеина относительно ТАТА. К раствору добавляли по меньшей мере 5 мл 1М цистеина, перемешивали и оставляли стоять в течение одного часа. Раствор лиофилизировали для получения неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали препаративной HPLC и лиофилизировали с получением продукта BCY7814 (144,1 мг, чистота 97,1%; выход 9,6%) в виде белого твердого вещества.The peptide was synthesized via solid phase synthesis. 1.11 g of Rinck's MBHA amide resin was used (sub: 0.45 mmol/g). To a mixture containing Rinck amide resin MBHA (0.5 mmol, 1.11 g, 0.45 mmol/g) and Fmoc-Cys(Trt)-OH (0.87 g, 1.5 mol, 3.0 eq. .), DMF (20 ml) was added, then DIC (3.0 eq.) and HOAt (3.0 eq.) were added and stirred for 1 hour. 20% piperidine in DMF was used for deblocking. Other amino acids were coupled using 3.0 eq. activating reagents, DIC (3.0 eq.) and HOAt (3.0 eq.) in DMF (20 ml). The reaction was monitored by the ninhydrin color reaction or the tetrachlore color reaction. After completion of the synthesis, the peptide resin was washed with DMFx3, MeOHx3, and then dried by bubbling N2 overnight. After this, the peptide resin was treated with 92.5% TFA/2.5% TIS/2.5% EDT/2.5% H2O for 3 hours. The peptide was precipitated with cold isopropyl ether (200 ml) and centrifuged (3 minutes at 3000 rpm /min). Wash with isopropyl ether two additional times (200 ml). The crude peptide was dried in vacuum for 2 hours. The crude peptide was used (i.e., after cleavage of the peptide and precipitation with isopropyl ether, the precipitate was lyophilized to remove residual isopropyl ether and TFA), dissolved lyophilized powder (0.5 mmol) in 500 ml ACN/H ₂ O (50:50) and 5 ml of 100 mM TATA was added. 10 ml of ammonium bicarbonate in H ₂ O (1 M) was added and stirred for 1 hour. After completion of the cyclization, the reaction had to be quenched with 10.0 eq. cysteine relative to TATA. At least 5 ml of 1M cysteine was added to the solution, mixed and left to stand for one hour. The solution was lyophilized to obtain the crude product. The crude product was purified by preparative HPLC and lyophilized to give product BCY7814 (144.1 mg, 97.1% purity; 9.6% yield) as a white solid.

(Условия анализа HPLC) Устройство - Agilent 1200 HPLC-BE(1-614) (HPLC Analysis Conditions) Device - Agilent 1200 HPLC-BE(1-614) Градиент Gradient 20-50-20 +3 мин 20-50-20 +3 min Колонка Column Gemini-NX Cl 8 5 мкм 110А 150*4,6 мм Gemini-NX Cl 8 5 microns 110A 150*4.6 mm Подвижная фаза Mobile phase А: Н₂О (0.1%TFA) A: H ₂ O (0.1%TFA) В: CH₃CN B: CH ₃ CN Скорость потока Flow rate 1 mL/Min 1 mL/Min Длина волны Wavelength 220/254 nm 220/254 nm Температура сушильного шкафа Oven temperature 30°С 30°C

- 63 045862- 63 045862

BCY00007826BCY00007826

К раствору BCY7814 (61,80 мг, 21,29 мкмоль, 1,1 экв.) в DMA (4 мл) добавляли DIEA (7,50 мг, 58,05 мкмоль, 10.11 мкл, 3,0 экв.) и DM1-SO3H-SPDB-NHS. Смесь перемешивали при 25°С в течение 16 ч. LC-MS продемонстрировала, что DM1-SO3H-SPDB-NHS израсходовался полностью, и обнаруживался один пик с желаемым m/z. Реакционную смесь прямо очищали посредством препаративной HPLC (условия TFA). Соединение BCY7826 (0,0242 г, 6,31 мкмоль, выход 32,63%, чистота 99,7%) получали в виде белого твердого вещества.To a solution of BCY7814 (61.80 mg, 21.29 µmol, 1.1 eq.) in DMA (4 ml) was added DIEA (7.50 mg, 58.05 µmol, 10.11 µl, 3.0 eq.) and DM1 -SO3H-SPDB-NHS. The mixture was stirred at 25°C for 16 hours. LC-MS demonstrated that DM1-SO3H-SPDB-NHS was completely consumed and one peak was detected at the desired m/z. The reaction mixture was directly purified by preparative HPLC (TFA conditions). Compound BCY7826 (0.0242 g, 6.31 µmol, 32.63% yield, 99.7% purity) was obtained as a white solid.

Время удержания=13,99 мин, выявленная масса=1254,1 (М/3+1).Retention time=13.99 min, detected mass=1254.1 (M/3+1).

Получение BCY8549.Receiving BCY8549.

Условия разделения: фаза А: 0,075%TFA в Н₂О, фаза В : MeCN.Separation conditions: phase A: 0.075% TFA in H ₂ O, phase B: MeCN.

Разделительная колонка: Luna20()*25\i\i 10 мкм, С18, 110А и Gemin150*30 мм, С18, 5 мкм, 110А, подсоединение, 50°С.Separation column: Luna20()*25\i\i 10 µm, C18, 110A and Gemin150*30 mm, C18, 5 µm, 110A, connection, 50°C.

Способ растворения: DMF.Dissolution method: DMF.

Чистота разделения: 95% BCY8234 синтезировали посредством твердофазного синтеза.Purity of separation: 95% BCY8234 was synthesized via solid phase synthesis.

- 64 045862- 64 045862

BCY00008549BCY00008549

- 65 045862- 65 045862

Получение соединения 2.Receiving connection 2.

Пептид синтезировали с использованием стандартной химии Fmoc.The peptide was synthesized using standard Fmoc chemistry.

1) Добавить DCM в емкость, содержащую смолу СТС (5 ммоль, 4,3 г, 1,17 ммоль/г) и Fmoc-Cit-OH (2,0 г, 5 ммоль, 1,0 экв.) при барботировании N2.1) Add DCM to a container containing CTC resin (5 mmol, 4.3 g, 1.17 mmol/g) and Fmoc-Cit-OH (2.0 g, 5 mmol, 1.0 eq.) while bubbling N2 .

2) Капельно добавить DIEA (4,0 экв.) и перемешать в течение 2 ч.2) Add DIEA (4.0 eq.) dropwise and stir for 2 hours.

3) Добавить МеОН (5 мл) и перемешать в течение 30 мин.3) Add MeOH (5 ml) and stir for 30 minutes.

4) Слить и промыть DMF 5 раз.4) Drain and flush DMF 5 times.

5) Добавить 20% пиперидин/DMF и позволять протекать реакции в течение 30 мин.5) Add 20% piperidine/DMF and allow the reaction to proceed for 30 min.

6) Слить и промыть DMF 5 раз.6) Drain and flush DMF 5 times.

7) Добавить раствор Fmoc-аминокислоты и перемешать в течение 30 с, затем добавить буфер для активации при барботировании N₂ в течение приблизительно 1 ч.7) Add Fmoc amino acid solution and stir for 30 seconds, then add activation buffer while bubbling _N2 for approximately 1 hour.

8) Повторить указанные выше стадии 4-7 для присоединения последующих аминокислот.8) Repeat steps 4-7 above to add subsequent amino acids.

ПримечаниеNote

# # Материалы Materials Реагенты для присоединения Reagents for joining 1 1 Fmoc-Cit-OH (1,0 экв.) Fmoc-Cit-OH (1.0 eq.) DIEA (4,0 экв.) DIEA (4.0 eq.) 2 2 1-этоксикарбонилциклобутанкарбоновая кислота (3,0 экв.) 1-Ethoxycarbonylcyclobutanecarboxylic acid (3.0 eq.) HATU (2,85 экв.) и DIEA (6,0 экв.) HATU (2.85 eq) and DIEA (6.0 eq)

20% пиперидин в DMF использовали для удаления защитной группы Fmoc в течение 30 мин. Мониторинг реакции присоединения проводили посредством теста с нингидрином, и смолу промывали DMF 5 раз.20% piperidine in DMF was used to deprotect Fmoc within 30 min. The coupling reaction was monitored by a ninhydrin test and the resin was washed with DMF 5 times.

Расщепление и очистка пептидов.Peptide digestion and purification.

1) Добавить буфер для расщепления (20%TFIP/80%DCM) в колбу, содержащую пептид с защищенной боковой цепью, при комнатной температуре и перемешивать в течение 1 ч два раза.1) Add digestion buffer (20%TFIP/80%DCM) to the flask containing the side chain protected peptide at room temperature and mix for 1 hour twice.

2) Профильтровать и собрать фильтрат.2) Filter and collect the filtrate.

3) Концентрировать для удаления растворителя.3) Concentrate to remove solvent.

4) Неочищенный пептид лиофилизировать с получением конечного продукта (1,4 г, выход 85,0%).4) Lyophilize the crude peptide to obtain the final product (1.4 g, 85.0% yield).

Получение соединения 3.Getting connection 3.

К раствору соединения 2 (1,65 г, 5,01 ммоль, 1,0 экв.) в DCM (30 мл) и МеОН (15 мл) добавляли EEDQ (2,48 г, 10,02 ммоль, 2,0 экв.) и (4-аминофенил)метанол (740,37 мг, 6,01 ммоль, 1,2 экв.). Смесь перемешивали при 15°С в течение 16 ч. LC-MS продемонстрировала, что соединение 2 израсходовалось полностью, и обнаруживался только один основной пик с желаемой величиной m/z. TLC показала, что соединение 2 израсходовалась полностью и образовывалось множество новых пятен. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя с получением остатка. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (ISCO®; 80 SepaFlash® Silica Flash Column, элюент: градиент 0-15 DCM/MeOH при 60 мл/мин). Соединение 3 (1,3 г, 2,99 ммоль, выход 59,72%) получали в виде желтого твердого вещества.To a solution of compound 2 (1.65 g, 5.01 mmol, 1.0 eq.) in DCM (30 ml) and MeOH (15 ml) was added EEDQ (2.48 g, 10.02 mmol, 2.0 eq. .) and (4-aminophenyl)methanol (740.37 mg, 6.01 mmol, 1.2 eq.). The mixture was stirred at 15°C for 16 hours. LC-MS demonstrated that compound 2 was completely consumed and only one major peak was detected at the desired m/z value. TLC showed that compound 2 was completely consumed and many new spots were formed. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove the solvent to obtain a residue. The residue was purified by silica gel flash chromatography (ISCO®; 80 SepaFlash® Silica Flash Column, eluent: 0-15 DCM/MeOH gradient at 60 ml/min). Compound 3 (1.3 g, 2.99 mmol, 59.72% yield) was obtained as a yellow solid.

Получение соединения 4.Getting connection 4.

К раствору соединения 3 (1,3 г, 2,99 ммоль, 1,0 экв.) в DMF (10 мл) добавляли DIEA (2,32 г, 17,95 ммоль, 3,13 мл, 6,0 экв.) и бис(4-нитрофенил)карбонат (3,64 г, 11,97 ммоль, 4,0 экв.). Смесь перемешивали при 15°С в течение 1 ч. LC-MS продемонстрировала, что соединение 3 израсходовалось полностью, и обнаруживался только один основной пик с желаемой величиной m/z. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ (нейтральные условия). Соединение 4 (1,0 г, 1,67 ммоль, выход 55,74%) получали в виде желтого твердого вещества.To a solution of compound 3 (1.3 g, 2.99 mmol, 1.0 eq.) in DMF (10 mL) was added DIEA (2.32 g, 17.95 mmol, 3.13 mL, 6.0 eq. ) and bis(4-nitrophenyl)carbonate (3.64 g, 11.97 mmol, 4.0 eq.). The mixture was stirred at 15°C for 1 hour. LC-MS demonstrated that compound 3 was completely consumed and only one major peak was detected at the desired m/z value. The residue was purified by preparative HPLC (neutral conditions). Compound 4 (1.0 g, 1.67 mmol, 55.74% yield) was obtained as a yellow solid.

Получение соединения 5.Getting connection 5.

К раствору соединения 5 (250,53 мг, 417,84 мколь, 1,5 экв.) в DMF (5 мл) добавляли HOBt (56,46 мг, 417,84 мколь, 1,5 экв.) и DIEA (108,01 мг, 835,68 мколь, 145,56 мкл, 3,0 экв.), ММАЕ (0,200 г, 278,56 мкмоль, 1,0 экв.). Смесь перемешивали при 35°С в течение 12 ч. LC-MS продемонстрировала, что ММАЕ израсходовалось полностью, и обнаруживался только один основной пик с желаемой величиной m/z. Реакционную смесь прямо очищали препаратвной ВЭЖХ (нейтральные условия). Соединение 5 (0,180 г, 152,74 мкмоль, выход 54,83%) получали в виде желтого твердого вещества.To a solution of compound 5 (250.53 mg, 417.84 µcol, 1.5 equiv) in DMF (5 ml) was added HOBt (56.46 mg, 417.84 µcol, 1.5 equiv) and DIEA (108 .01 mg, 835.68 µmol, 145.56 µl, 3.0 eq.), MMAE (0.200 g, 278.56 µmol, 1.0 eq.). The mixture was stirred at 35°C for 12 hours. LC-MS demonstrated that MMAE was completely consumed and only one major peak was detected at the desired m/z value. The reaction mixture was directly purified by preparative HPLC (neutral conditions). Compound 5 (0.180 g, 152.74 µmol, 54.83% yield) was obtained as a yellow solid.

Получение соединения 6.Getting connection 6.

К раствору соединения 5 (0,170 г, 144,26 мкмоль, 1,0 экв.) в THF (5 мл) и Н₂О (5 мл) добавляли LiOH.H2O (12,11 мг, 288,51 мкмоль, 2,0 экв.). Смесь перемешивали при 15°С в течение 1 ч. LC-MS продемонстрировала, что соединение 5 израсходовалось полностью, и обнаруживался только один основной пик с желаемой величиной m/z. Доводили до рН=7 посредством АсОН и THF удаляли при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ (нейтральные условия). Соединение 6 (0,185 г, неочищенный материал) получали в виде желтого твердого вещества.To a solution of compound 5 (0.170 g, 144.26 µmol, 1.0 eq.) in THF (5 ml) and H ₂ O (5 ml) was added LiOH.H2O (12.11 mg, 288.51 µmol, 2. 0 eq.). The mixture was stirred at 15°C for 1 hour. LC-MS demonstrated that compound 5 was completely consumed and only one major peak was detected at the desired m/z value. Adjust to pH=7 with AcOH and remove THF under reduced pressure to leave a residue. The residue was purified by preparative HPLC (neutral conditions). Compound 6 (0.185 g, crude material) was obtained as a yellow solid.

Получение BCY8549.Receiving BCY8549.

К раствору соединения 6 (0,100 г, 86,93 мкмоль, 1,0 экв.) в DMA (4 мл) добавляли HOSu (10,00 мг, 86,93 мкмоль, 1,0 экв.) и EDCI (16,66 мг, 86,93 мкмоль, 1,0 экв.). После образования сложного эфираTo a solution of compound 6 (0.100 g, 86.93 µmol, 1.0 eq) in DMA (4 ml) was added HOSu (10.00 mg, 86.93 µmol, 1.0 eq) and EDCI (16.66 mg, 86.93 µmol, 1.0 eq.). After ester formation

- 66 045862- 66 045862

NHS добавляли e-Ala-BCY8234 (525,98 мг, 173,85 мкмоль, 2,0 экв.) и DIEA (33,70 мг, 260,78 мкмоль, 45,42 мкл, 3,0 экв.). Смесь перемешивали при 15°С в течение 4 ч. LC-MS продемонстрировала, что соединение 6 израсходовалось полностью, и обнаруживался только один основной пик с желаемой величиной m/z. Реакционную смесь прямо очищали посредством препаративной ВЭЖХ (условия TFA). Соединение BCY8549 (0,0528 г, 12,15 мкмоль, выход 13,98%, чистота 95,70%) получали в виде белого твердого вещества. Время удержания=11,48 мин. Обнаруженная масса=1386,4 (М/3+Н).NHS was supplemented with e-Ala-BCY8234 (525.98 mg, 173.85 μmol, 2.0 eq.) and DIEA (33.70 mg, 260.78 μmol, 45.42 μl, 3.0 eq.). The mixture was stirred at 15°C for 4 hours. LC-MS demonstrated that compound 6 was completely consumed and only one major peak was detected at the desired m/z value. The reaction mixture was directly purified by preparative HPLC (TFA conditions). Compound BCY8549 (0.0528 g, 12.15 µmol, 13.98% yield, 95.70% purity) was obtained as a white solid. Hold time=11.48 min. Detected mass=1386.4 (M/3+N).

Получение BCY8245.Receiving BCY8245.

Условия разделения: фаза А: 0,075%TFA в Н₂О, фаза В: MeCN.Separation conditions: phase A: 0.075% TFA in H ₂ O, phase B: MeCN.

Разделительная колонкаХипа 200*25мм 10 мкм, С18, 110А и Gemin150*30 мм, С18, 5 мкм, 110А, подсоединение, 50°С.Separation column Hipa 200*25mm 10 µm, C18, 110A and Gemin150*30 mm, C18, 5 µm, 110A, connection, 50°C.

Способ растворения: DMF.Dissolution method: DMF.

Чистота разделения: 95%.Purity of separation: 95%.

BCY8234 синтезировали посредством твердофазного синтеза.BCY8234 was synthesized via solid-phase synthesis.

Схема реакции BCY8245 представлена ниже:The reaction scheme for BCY8245 is shown below:

- 67 045862- 67 045862

HUBt DIL-AHUBt DIL-A

DI LA DMADI LA DMA

Получение соединения 3.Getting connection 3.

Соединение 3 синтезировали способом твердофазного синтеза.Compound 3 was synthesized by solid-phase synthesis.

Получение соединения 4.Getting connection 4.

К раствору соединения 3 (1,3 г, 3,23 ммоль, 1,0 экв.) в DCM (10 мл) и МеОН (5 мл) добавляли EEDQ (1,60 г, 6,46 ммоль, 2,0 экв.) и (4-аминофенил)метанол (517,16 мг, 4,20 ммоль, 1,3 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 16 ч. LC-MS продемонстрировала, что соединение 3 израсходовалось полностью, и обнаруживался только один основной пик с желаемой величиной m/z. Растворитель удаляTo a solution of compound 3 (1.3 g, 3.23 mmol, 1.0 eq.) in DCM (10 ml) and MeOH (5 ml) was added EEDQ (1.60 g, 6.46 mmol, 2.0 eq. .) and (4-aminophenyl)methanol (517.16 mg, 4.20 mmol, 1.3 eq.). The mixture was stirred at 20°C for 16 hours. LC-MS demonstrated that compound 3 was completely consumed and only one major peak was detected at the desired m/z value. Solvent removal

- 68 045862 ли при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (ISCO®; 40 г SepaFlash® Silica Flash Column, элюент: градиент 0~15 DCM/MeOH при 40 мл/мин). Соединение 4 (0,950 г, 1,87 ммоль, выход 57,94%) получали в виде желтого твердого вещества.- 68 045862 under reduced pressure. The residue was purified by silica gel flash chromatography (ISCO®; 40 g SepaFlash® Silica Flash Column, eluent: 0~15 DCM/MeOH gradient at 40 ml/min). Compound 4 (0.950 g, 1.87 mmol, 57.94% yield) was obtained as a yellow solid.

Получение соединения 5.Getting connection 5.

К раствору соединения 4 (0,950 г, 1,87 ммоль, 1,0 экв.) в DMF (5 мл) добавляли DIEA (1,21 г, 9,36 ммоль, 1,63 мл, 5,0 экв.) и бис(4-нитрофенил)карбонат (2,28 г, 7,49 ммоль, 4,0 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 1 ч. LC-MS продемонстрировала, что соединение 4 израсходовалось полностью, и обнаруживался только один основной пик с желаемой величиной m/z. Реакционную смесь прямо очищали посредством препаративной ВЭЖХ (нейтральные условия). Соединение 5 (0,400 г, 594,64 мкмоль, выход 31,77%) получали в виде белого твердого вещества.To a solution of compound 4 (0.950 g, 1.87 mmol, 1.0 eq.) in DMF (5 mL) was added DIEA (1.21 g, 9.36 mmol, 1.63 mL, 5.0 eq.) and bis(4-nitrophenyl)carbonate (2.28 g, 7.49 mmol, 4.0 eq.). The mixture was stirred at 20°C for 1 hour. LC-MS demonstrated that compound 4 was completely consumed and only one major peak was detected at the desired m/z value. The reaction mixture was directly purified by preparative HPLC (neutral conditions). Compound 5 (0.400 g, 594.64 µmol, 31.77% yield) was obtained as a white solid.

Получение соединения 6.Getting connection 6.

К раствору соединения 5 (0,200 г, 297,32 мкмоль, 1,0 экв.) в DMF (5 мл) добавляли HOBt (52,23 мг, 386,51 мкмоль, 1,3 экв.) и DIEA (115,28 мг, 891,95 мкмоль, 155,36 мкл, 3,0 экв.), ММАЕ (192,12 мг, 267,59 мкмоль, 0,9 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 16 ч. LC-MS продемонстрировала, что соединение 5 израсходовалось полностью, и обнаруживался только один основной пик с желаемой величиной m/z. Реакционную смесь прямо очищали посредством препаративной ВЭЖХ (нейтральные условия). Соединение 6 (0,160 г, 127,84 мкмоль, выход 43,00%) получали в виде белого твердого вещества.To a solution of compound 5 (0.200 g, 297.32 µmol, 1.0 eq) in DMF (5 ml) was added HOBt (52.23 mg, 386.51 µmol, 1.3 eq) and DIEA (115.28 mg, 891.95 µmol, 155.36 µl, 3.0 eq.), MMAE (192.12 mg, 267.59 µmol, 0.9 eq.). The mixture was stirred at 20°C for 16 hours. LC-MS demonstrated that compound 5 was completely consumed and only one major peak was detected at the desired m/z value. The reaction mixture was directly purified by preparative HPLC (neutral conditions). Compound 6 (0.160 g, 127.84 μmol, 43.00% yield) was obtained as a white solid.

Получение соединения 7.Getting connection 7.

К раствору соединения 6 (0,160 г, 127,84 мкмоль, 1,0 экв.) в THF (3 мл) и Н₂О (3 мл) добавляли LiOH.H₂O (26,82 мг, 639,21 мкмоль, 5,0 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 1 ч. LC-MS продемонстрировала, что соединение 6 израсходовалось полностью, и обнаруживался только один основной пик с желаемой величиной m/z. THF удаляли при пониженном давлении и доводили до рН=7 посредством АсОН, смесь лиофилизировали. Соединение 7 (0,130 г, 105,05 мкмоль, выход 82,17%) получали в виде белого твердого вещества. _LiOH.H2O ₍ 26.82 mg, 639.21 µmol, 5.0 eq.). The mixture was stirred at 20°C for 1 hour. LC-MS demonstrated that compound 6 was completely consumed and only one major peak was detected at the desired m/z value. THF was removed under reduced pressure and adjusted to pH=7 with AcOH, and the mixture was lyophilized. Compound 7 (0.130 g, 105.05 μmol, 82.17% yield) was obtained as a white solid.

Получение соединения 8.Getting connection 8.

К раствору соединения 7 (36,27 мг, 315,15 мкмоль, 3,0 экв.) в DMA (6 мл) и DCM (2 мл) добавляли EDCI (60,41 мг, 315,15 мкмоль, 3,0 экв.). Смесь перемешивали при 15°С в течение 3 ч. LC-MS продемонстрировала, что соединение 7 израсходовалось полностью, и обнаруживался только один основной пик с желаемой величиной m/z. DCM удаляли при пониженном давлении. Реакционную смесь прямо очищали посредством препаративной ВЭЖХ (нейтральные условия). Соединение 8 (0,095 г, 71,18 мкмоль, выход 67,76%) получали в виде белого твердого вещества.To a solution of compound 7 (36.27 mg, 315.15 µmol, 3.0 eq.) in DMA (6 ml) and DCM (2 ml) was added EDCI (60.41 mg, 315.15 µmol, 3.0 eq. .). The mixture was stirred at 15°C for 3 hours. LC-MS demonstrated that compound 7 was completely consumed and only one major peak was detected at the desired m/z value. DCM was removed under reduced pressure. The reaction mixture was directly purified by preparative HPLC (neutral conditions). Compound 8 (0.095 g, 71.18 μmol, 67.76% yield) was obtained as a white solid.

Получение BCY8245.Receiving BCY8245.

К раствору BCY8234 (66,41 мг, 22,48 мкмоль, 1,0 экв.) в DMA (4 мл) добавляли DIEA (8,72 мг, 67,44 мкмоль, 11,75 мкл, 3,0 экв.) и соединение 8 (0,030 г, 22,48 мкмоль, 1,0 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 16 ч. LC-MS продемонстрировала, что BCY8234 израсходовался полностью, и обнаруживался только один основной пик с желаемой величиной m/z. Реакционную смесь прямо очищали посредством препаративной ВЭЖХ (условия TFA). Соединение BCY8245 (0,0427 г, 10,16 мкмоль, выход 45,19%, чистота 99,30%) получали в виде белого твердого вещества. Время удержания=11,7 мин. Найденная масса=1043,9 (М/4+Н).To a solution of BCY8234 (66.41 mg, 22.48 µmol, 1.0 eq.) in DMA (4 ml) was added DIEA (8.72 mg, 67.44 µmol, 11.75 µl, 3.0 eq.) and compound 8 (0.030 g, 22.48 µmol, 1.0 eq). The mixture was stirred at 20°C for 16 hours. LC-MS demonstrated that BCY8234 was completely consumed and only one major peak was detected at the desired m/z value. The reaction mixture was directly purified by preparative HPLC (TFA conditions). Compound BCY8245 (0.0427 g, 10.16 µmol, 45.19% yield, 99.30% purity) was obtained as a white solid. Hold time=11.7 min. Found mass=1043.9 (M/4+N).

Следующие бициклические конъюгаты лекарственных средств получали аналогично BCY8245:The following bicyclic drug conjugates were prepared similarly to BCY8245:

BCY № BCY No. Масштаб (количест во используе мого пептида) Scale (amount of peptide used) Использова иное количество ММАЕPABC-vcглутаратNHS Used a different amount of MMAEPABC-vcglutarateNHS Выхо Д (мг) Exit D (mg) Выхо д(%) Exit(%) Чисто та (%) Purity (%) LCMS LCMS Выявленная масса (истинная масса) Revealed mass (true mass) RT (мин) RT (min) BCY7683 BCY7683 60 60 25 25 20,5 20.5 28,39 28.39 99,6 99.6 1285,1=М/3+ Н (3852.58) 1285.1=M/3+ N (3852.58) 14,52 14.52 BCY7825 BCY7825 84 84 35 35 34,1 34.1 31,22 31.22 99,0 99.0 1374,9=М/3+ Н 1374.9=M/3+ N 12,18 12.18

- 69 045862- 69 045862

(4122.85) (4122.85) BCY8253 BCY8253 123 123 50 50 54,1 54.1 33,17 33.17 96,9 96.9 1406,7=M/3+ H (4219.95) 1406.7=M/3+ H (4219.95) 10,34 10.34 BCY8254 BCY8254 76 76 34 34 36,4 36.4 33,70 33.70 99,4 99.4 1405,6=M/3+ H (4214.94) 1405.6=M/3+ H (4214.94) 10,35 10.35 BCY8255 BCY8255 123 123 50 50 42,5 42.5 25,94 25.94 96,4 96.4 1405,7=M/3+ H (4215.93) 1405.7=M/3+ H (4215.93) 10,54 10.54 BCY8550 BCY8550 68 68 30 thirty 50,1 50.1 52,28 52.28 99,2 99.2 1058,0=M/4+ H (4227.1) 1058.0=M/4+ H (4227.1) 12,08 12.08 BCY8783 BCY8783 61 61 30 thirty 47,1 47.1 48,18 48.18 96,8 96.8 1404,l=M/3+ H (4209.89) 1404,l=M/3+ H (4209.89) 12,76 12.76 BCY8784 BCY8784 34 34 20 20 23,1 23.1 34,74 34.74 95,7 95.7 1415,3=M/3+ H (4245.94) 1415.3=M/3+ H (4245.94) 13,50 13.50

Биологические данныеBiological data

Анализ прямого связывания нектина-4.Nectin-4 direct binding assay.

Аффинность пептидов по изобретению в отношении нектина-4 человека (Ki) определяли с использованием флуоресцентного анализа поляризации в соответствии со способами, описанными в WO 2016/067035. Пептиды по изобретению с флуоресцентной меткой (либо флуоресцеин, либо SIGMA, либо Alexa Fluor488™, Fisher Scientific) разбавляли до 2,5 нМ в PBS с 0,01% tween 20 или 50 мМ HEPES с 100 мМ NaCl и 0,01% tween pH 7,4 (оба упоминаются как буфер для анализа). Это комбинировали с титрованием белка в том же буфере для анализа, что и для пептида, с получением 1 нМ пептида в общем объеме 25 мкл в 384-луночных планшетах с черными лунками и дном, низким связыванием и низким объемом, как правило, включающем 5 мкл буфера для анализа, 10 мкл белка, а затем 10 мкл флуоресцентного пептида. Использование серийные разведения один к двум для получения 12 различных концентраций с максимальными концентрациями в диапазоне от 500 нМ для известных высокаффинных связывающих соединений до 10 мкМ для низкоаффинных связывающих соединений и анализа селективности. Измерение проводили на BMG PHERAstar FS, оборудованном оптическим модулем FP 485 520 520 с возбуждением при 485 нм и регистрирующем параллельное и перпендикулярное испускание при 520 нм. PHERAstar FS был установлен на 25°С с 200 промываниями на лунку и задержкой позиционирования, составляющей 0,1 с, причем измерение в каждой лунке проводили с интервалами 5-10 мин в течение 60 мин. Коэффициент усиления, использованный для анализа, определяли для каждой метки в конце 60 мин, когда в лунке не было белка. Данные анализировали с использованием Systat Sigmaplot версии 12.0. Величины mP аппроксимировали к выбираемому произвольно квадратному уравнению для получения величины Kd:The affinity of the peptides of the invention for human nectin-4 (Ki) was determined using a fluorescence polarization assay according to the methods described in WO 2016/067035. Fluorescently tagged peptides of the invention (either fluorescein, SIGMA, or Alexa Fluor488™, Fisher Scientific) were diluted to 2.5 nM in PBS with 0.01% tween 20 or 50 mM HEPES with 100 mM NaCl and 0.01% tween pH 7.4 (both referred to as assay buffer). This was combined with titration of the protein in the same assay buffer as the peptide, yielding 1 nM peptide in a total volume of 25 µl in 384-well plates with black wells and bottoms, low binding and low volume, typically containing 5 µl assay buffer, 10 μl of protein, and then 10 μl of fluorescent peptide. Use serial one-to-two dilutions to obtain 12 different concentrations with maximum concentrations ranging from 500 nM for known high-affinity binders to 10 µM for low-affinity binders and selectivity assays. The measurement was carried out on a BMG PHERAstar FS equipped with an FP 485 520 520 optical module excitation at 485 nm and detecting parallel and perpendicular emission at 520 nm. PHERAstar FS was set at 25°C with 200 washes per well and a positioning delay of 0.1 s, with each well measured at 5-10 min intervals for 60 min. The gain used for the assay was determined for each label at the end of 60 min when there was no protein in the well. Data were analyzed using Systat Sigmaplot version 12.0. The mP values were approximated to an arbitrarily chosen quadratic equation to obtain the Kd value:

f=ymm+(ymax-ymrn)/Lig*((x+Lig+Kd)/2-sqrt((((x+Lig+Kd)/2)^A2)-(Lig*x))).f=ymm+(ymax-ymrn)/Lig*((x+Lig+Kd)/2-sqrt((((x+Lig+Kd)/2) ^A 2)-(Lig*x))).

Lig представляла собой определенную величину концентрации использованной метки.Lig was a specific concentration of the label used.

Конкурентный анализ связывания нектина-4.Competitive nectin-4 binding assay.

Пептиды без флуоресцентной метки тестировали в конкуренции с ACPFGCHTDWSWPIWCA-Sar6K(F1) (SEQ ID NO: 217) и (Kd=5 нМ - определенная с использованием описанного выше протокола), разбавляли до соответствующей концентрации в буфере для анализа, как описано в прямом анализе связывания с максимум 5% DMSO, затем подвергали серийному разведению 1 к 2. В планшет добавляли пять мкл разбавленного пептида, затем 10 мкл нектина-4 человека, а затем добавляли 10 мкл флуоресцентного пептида. Измерения проводили, как для анализа прямого связывания, однако коэффициент усиления определяли до первого измерения. Анализ данных проводили в Systat Sigmaplot версии 12.0, где величины mP аппроксимировали к выбираемому произвольно кубическому уравнению с получением величины Ki:Peptides without a fluorescent tag were tested in competition with ACPFGCHTDWSWPIWCA-Sar6K(F1) (SEQ ID NO: 217) and (Kd=5 nM - determined using the protocol described above), diluted to the appropriate concentration in assay buffer as described in the direct assay binding to a maximum of 5% DMSO, then subjected to a serial dilution of 1 to 2. Five μl of diluted peptide was added to the plate, followed by 10 μl of human nectin-4, and then 10 μl of fluorescent peptide was added. Measurements were performed as for the direct binding assay, but the gain was determined before the first measurement. Data analysis was carried out in Systat Sigmaplot version 12.0, where the mP values were approximated to a randomly selected cubic equation to obtain the Ki value:

f=ymm+(ymax-ymrn)/Lig*((Lig*((2*((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)^A2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+ Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp))^A0,5*COS(ARCCOS((-2*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)^A3+9* (Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp)-27*(-1*Klig* Kcomp *Prot* c))/(2 * ((((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot* c)A2-3 *(Kcomp * (Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot* c)+f=ymm+(ymax-ymrn)/Lig*((Lig*((2*((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c) ^A 2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+ Klig *(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp)) ^A 0.5*COS(ARCCOS((-2*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c) ^A 3+9* (Klig+Kcomp+ Lig+Comp-Prot*c)*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp)-27*(-1*Klig* Kcomp *Prot* c)) /(2 * ((((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot* c)A2-3 *(Kcomp * (Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot* c)+

- 70 045862- 70 045862

Klig*Kcomp))A3)A0,5)))/3))-(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)))/((3*Klig)+((2*((Klig+Kcomp+Lig+CompProt*c)^A2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp))^A0,5*COS(ARCCOS((-2*(Klig+ Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)A3+9*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(CompProt*c)+Klig*Kcomp)-27*(-1*Klig*Kcomp*Prot*c))/(2*((((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)A2-3*(Kcomp* (Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp))A3)A0,5)))/3))-(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)))).Klig*Kcomp))A3)A0,5)))/3))-(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)))/((3*Klig)+((2*((Klig+Kcomp +Lig+CompProt*c) ^A 2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp)) ^A 0.5*COS(ARCCOS((-2 *(Klig+ Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)A3+9*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(CompProt*c)+ Klig*Kcomp)-27*(-1*Klig*Kcomp*Prot*c))/(2*((((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)A2-3*(Kcomp* (Lig- Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp))A3)A0,5)))/3))-(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)))).

Все из Lig, KLig и Prot представляли собой определенные величины, связанные с концентрацией флуоресцентного пептида, Kd флуоресцентного пептида и концентрацией нектина, соответственно.Lig, KLig and Prot were all specific values related to fluorescent peptide concentration, fluorescent peptide Kd and nectin concentration, respectively.

Анализ связывания нектина-4 с использованием Biacore.Nectin-4 binding assay using Biacore.

Эксперименты Biacore проводили для определения величин k_a (M^-1c^-1), kd (с^-1), KD (нМ) мономерных пептидов, связывающихся с белком нектином-4 человека (полученным от Charles River).Biacore experiments were performed to determine the k _a (M ^-1 s ^-1 ), kd (s ^-1 ), KD (nM) values of monomeric peptides binding to human nectin-4 protein (obtained from Charles River).

Нектин-4 человека (остатки Gly32-Ser349; NCBI RefSeq: NP_112178.2) с сигнальной последовательностью gp67 и С-концевой FLAG-меткой клонировали в pFastbac-1 и бакуловирус, полученный с использованием стандартных протоколов Bac-to-Bac™ (Life Technologies). Клетки Sf21 в количестве 1х 10⁶ мл^-1 в среде Excell-420 (Sigma) при 27°С инфицировали при MOI 2 исходным вирусом Р1 и супернатант собирали через 72 ч. Супернатант подвергали связыванию партиями в течение 1 ч при 4°С с аффинной агарозной смолой против FLAG M2 (Sigma), промывали PBS, а затем смолу переносили на колонку и тщательно промывали PBS. Белок элюировали с использованием 100 мг/мл пептида FLAG. Элюированный белок концентрировали до 2 мл и загружали в колонку S-200 Superdex (GE Healthcare) в PBS при 1 мл/мин. Фракции объемом 2 мл собирали и фракции, содержавшие белок нектин-4, концентрировали до 16 мг/мл.Human nectin-4 (residues Gly32-Ser349; NCBI RefSeq: NP_112178.2) with the gp67 signal sequence and a C-terminal FLAG tag was cloned into pFastbac-1 and baculovirus produced using standard Bac-to-Bac™ protocols (Life Technologies ). Sf21 cells in an amount of 1x 10 ⁶ ml ^-1 in Excell-420 medium (Sigma) at 27°C were infected at an MOI of 2 with the original P1 virus and the supernatant was collected after 72 hours. The supernatant was subjected to binding in batches for 1 hour at 4°C with affinity anti-FLAG M2 agarose resin (Sigma), washed with PBS, and then the resin was transferred to the column and washed thoroughly with PBS. The protein was eluted using 100 mg/ml FLAG peptide. The eluted protein was concentrated to 2 mL and loaded onto an S-200 Superdex column (GE Healthcare) in PBS at 1 mL/min. Fractions of 2 ml were collected and fractions containing nectin-4 protein were concentrated to 16 mg/ml.

Белок случайным образом биотинилировали в PBS с использованием реагента сульфо-NHS-LC-LCбиотин EZ-Link™ (Thermo Fisher) в соответствии с протоколом, предложенным изготовителем. Белок тщательно обессоливали для удаления не связанного биотина с использованием центрифужных колонок в PBS.The protein was randomly biotinylated in PBS using EZ-Link™ sulfo-NHS-LC-LCbiotin reagent (Thermo Fisher) according to the protocol suggested by the manufacturer. The protein was thoroughly desalted to remove unbound biotin using spin columns in PBS.

Для анализа связывания пептида использовали устройство Biacore 3000 с чипом СМ5 (GE Healthcare). Стрептавидин иммобилизовывали на чипе с использованием стандартной химии присоединения аминов при 25°С с HBS-N (10 мМ HEPES, 0,15М NaCl, рН 7,4) в качестве подвижного буфера. В кратком изложении поверхность из карбоксиметилдекстрана активировали посредством инжектирования в течение 7 мин соотношения 1:1 0,4М 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид гидрохлорид (EDC)/0,1 M N-гидроксисукцинимид (NHS) при скорости потока 10 мкл/мин. Для улавливания стрептавидина белок разбавляли до 0,2 мг/мл в 10 мМ ацетате натрия (рН 4,5) и улавливали путем инжектирования 120 мкл стрептавидина на активированную поверхность чипа. Остаточные активированные группы блокировали инжектированием в течение 7 мин 1М этаноламина (рН 8,5) и биотинилированного нектина-4, уловленного на уровне 1200-1800 RU. Буфер заменяли на PBS/0,05% Tween 20 и серию разведений пептидов получали в этом буфере с конечной концентрацией DMSO 0,5%. Максимальная концентрация пептида составляла 100 нМ с 6 дополнительными 2-кратными разведениями. Анализ с использованием SPR проводили при 25°С при скорости потока 50 мкл/мин с ассоциацией в течение 60 с и диссоциацией между 400 и 1200 с в зависимости от индивидуального пептида. В данные вносили поправку на эффекты объема после исключения DMSO. Для всех данных проводили двойное сравнение с инжектированием пустых растворов и эталонной поверхностью с использованием стандартных методик обработки, и обработку данных и кинетическую аппроксимацию проводили с использованием программного обеспечения Scrubber, версия 2.0с (BioLogic Software). Данные аппроксимировали с использованием простой модели связывания 1:1, допускающей эффекты переноса масс, когда это целесообразно.A Biacore 3000 with CM5 chip (GE Healthcare) was used for peptide binding analysis. Streptavidin was immobilized on the chip using standard amine addition chemistry at 25°C with HBS-N (10 mM HEPES, 0.15 M NaCl, pH 7.4) as running buffer. Briefly, a carboxymethyldextran surface was activated by injecting a 1:1 ratio of 0.4 M 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride (EDC)/0.1 M N-hydroxysuccinimide (NHS) for 7 min at flow rate 10 µl/min. To capture streptavidin, the protein was diluted to 0.2 mg/mL in 10 mM sodium acetate (pH 4.5) and captured by injecting 120 μL of streptavidin onto the activated chip surface. Residual activated groups were blocked by injecting 1 M ethanolamine (pH 8.5) and biotinylated nectin-4 trapped at 1200-1800 RU for 7 min. The buffer was replaced with PBS/0.05% Tween 20 and a series of peptide dilutions were prepared in this buffer with a final DMSO concentration of 0.5%. The maximum peptide concentration was 100 nM with 6 additional 2-fold dilutions. The SPR assay was performed at 25°C at a flow rate of 50 μl/min with association within 60 s and dissociation between 400 and 1200 s depending on the individual peptide. The data were corrected for volume effects after excluding DMSO. All data were double compared with blank injection and reference surface using standard processing techniques, and data processing and kinetic fitting were performed using Scrubber software, version 2.0c (BioLogic Software). Data were fitted using a simple 1:1 binding model allowing for mass transfer effects where appropriate.

Определенные пептидные лиганды по изобретению тестировали в упомянутых выше анализах связывания нектина-4, и результаты представлены в табл. 1.Certain peptide ligands of the invention were tested in the nectin-4 binding assays mentioned above, and the results are presented in table. 1.

- 71 045862- 71 045862

Таблица 1. Данные о конкурентном связывании для отдельных пептидных лигандов по изобретениюTable 1. Competitive binding data for selected peptide ligands of the invention

Название пептида Peptide name Последовательность Subsequence Молекулярны й каркас Molecular framework Ki (hM) Ki (hM) 80-09-02-N006 80-09-02-N006 F1-A-(SQ Ш NO: 1)-А F1-A-(SQ Ш NO: 1)-А TATA TATA 5,0 5.0 BCY488 (80-10-00) BCY488 (80-10-00) A-(SEQIDNO: 31)-А A-(SEQIDNO: 31)-A TATA TATA 208 208 BCY462 (80-10-12- Т01) BCY462 (80-10-12- T01) VDW-(SEQ ID NO: 33)-А VDW-(SEQ ID NO: 33)-A TATA TATA 269 269 BCY3400 (80-10-13- Т01) BCY3400 (80-10-13- T01) QKW-(SEQ ID NO: 34)-A QKW-(SEQ ID NO: 34)-A TATA TATA 72 72 BCY471 (80-11-00) BCY471 (80-11-00) A-(SEQIDNO: 35)-A A-(SEQIDNO: 35)-A TATA TATA 888 888 BCY472 (80-11-01) BCY472 (80-11-01) A-(SEQ ID NO: 36)-A A-(SEQ ID NO: 36)-A TATA TATA 502 502 BCY3406 (80-11-08- Т01) BCY3406 (80-11-08- T01) A-(SEQ ID NO: 37)-SRF A-(SEQ ID NO: 37)-SRF TATA TATA 30 thirty BCY8208 BCY8208 (Карбоксифлуоресцеин)(8ЕР ID NO: 115) (Carboxyfluorescein)(8EP ID NO: 115) TATA TATA 745 745

где А обозначает L-аланин и а обозначает L-аланин и * относится к среднему значению для 2 экспериментов.where A is L-alanine and a is L-alanine and * refers to the average of 2 experiments.

Таблица 2. Данные конкурентного связывания для отдельных пептидных лигандов по изобретениюTable 2. Competitive binding data for selected peptide ligands of the invention

Бицикл № Bicycle No. К (mkM) K (mkM) Количество экспериментов Number of experiments BCY428 BCY428 0,061 0.061 34 34 BCY429 BCY429 0,0426 0.0426 2 2 BCY430 BCY430 0,3103 0.3103 7 7 BCY431 BCY431 0,412 0.412 2 2 BCY432 BCY432 1,096 1,096 3 3 BCY433 BCY433 0,0694 0.0694 2 2 BCY3385 BCY3385 0,0286 0.0286 13 13 BCY3386 BCY3386 0,0802 0.0802 2 2 BCY3387 BCY3387 0,2343 0.2343 2 2 BCY3388 BCY3388 0,1293 0.1293 2 2 BCY3389 BCY3389 0,0998 0.0998 7 7 BCY3390 BCY3390 0,3019 0.3019 7 7 BCY3391 BCY3391 0,1981 0.1981 2 2 BCY3392 BCY3392 0,0363 0.0363 2 2 BCY3393 BCY3393 0,1729 0.1729 3 3

- 72 045862- 72 045862

BCY3394 BCY3394 0,1016 0.1016 2 2 BCY3395 BCY3395 0,0174 0.0174 2 2 BCY3396 BCY3396 0,1024 0.1024 2 2 BCY3397 BCY3397 0,0332 0.0332 2 2 BCY3398 BCY3398 0,1639 0.1639 2 2 BCY3399 BCY3399 0,4099 0.4099 2 2 BCY3400 BCY3400 0,047 0.047 3 3 BCY3401 BCY3401 0,1536 0.1536 2 2 BCY7265 BCY7265 0,0383 0.0383 2 2 BCY7266 BCY7266 0,041 0.041 2 2 BCY7272 BCY7272 0,041 0.041 2 2 BCY7273 BCY7273 0,084 0.084 2 2 BCY7274 BCY7274 0,0905 0.0905 2 2 BCY7275 BCY7275 0,0433 0.0433 2 2 BCY7276 BCY7276 0,3256 0.3256 2 2 BCY7278 BCY7278 0,069 0.069 2 2 BCY7279 BCY7279 0,0444 0.0444 2 2 BCY7280 BCY7280 0,219 0.219 2 2 BCY7281 BCY7281 0,0229 0.0229 2 2 BCY7282 BCY7282 0,0265 0.0265 2 2 BCY7342 BCY7342 0,3097 0.3097 2 2 BCY7344 BCY7344 0,0398 0.0398 2 2 BCY7346 BCY7346 0,0649 0.0649 2 2 BCY7347 BCY7347 0,0361 0.0361 2 2 BCY7348 BCY7348 0,0206 0.0206 2 2 BCY7350 BCY7350 0,01 0.01 2 2 BCY7352 BCY7352 0,1318 0.1318 2 2 BCY7354 BCY7354 0,884 0.884 1 1 BCY7356 BCY7356 0,0434 0.0434 2 2 BCY7357 BCY7357 0,0452 0.0452 2 2 BCY7359 BCY7359 0,1605 0.1605 2 2 BCY7360 BCY7360 0,0682 0.0682 2 2 BCY7365 BCY7365 0,2819 0.2819 2 2 BCY7367 BCY7367 0,0263 0.0263 2 2

- 73 045862- 73 045862

BCY7368 BCY7368 0,023 0.023 2 2 BCY7369 BCY7369 0,0778 0.0778 2 2 BCY7370 BCY7370 0,1445 0.1445 2 2 BCY7372 BCY7372 0,0726 0.0726 2 2 BCY7390 BCY7390 0,0171 0.0171 20 20 BCY7391 BCY7391 0,0133 0.0133 2 2 BCY7392 BCY7392 0,0272 0.0272 5 5 BCY7393 BCY7393 0,232 0.232 1 1 BCY7420 BCY7420 0,0636 0.0636 2 2 BCY7421 BCY7421 0,0285 0.0285 2 2 BCY7422 BCY7422 0,0579 0.0579 2 2 BCY7424 BCY7424 0,562 0.562 1 1 BCY7426 BCY7426 0,069 0.069 1 1 BCY7521 BCY7521 0,2237 0.2237 2 2 BCY7535 BCY7535 0,064 0.064 2 2 BCY7536 BCY7536 0,069 0.069 2 2 BCY7537 BCY7537 0,0384 0.0384 2 2 BCY7538 BCY7538 0,0085 0.0085 2 2 BCY7539 BCY7539 0,0468 0.0468 2 2 BCY7540 BCY7540 0,3567 0.3567 2 2 BCY7541 BCY7541 0,0765 0.0765 2 2 BCY7556 BCY7556 0,0261 0.0261 2 2 BCY7557 BCY7557 0,0225 0.0225 2 2 BCY7558 BCY7558 0,0219 0.0219 6 6 BCY7559 BCY7559 0,017 0.017 2 2 BCY7580 BCY7580 0,0135 0.0135 2 2 BCY7581 BCY7581 0,0194 0.0194 2 2 BCY7582 BCY7582 0,0379 0.0379 2 2 BCY7584 BCY7584 0,0135 0.0135 2 2 BCY7585 BCY7585 0,0185 0.0185 2 2 BCY7588 BCY7588 0,342 0.342 1 1 BCY7589 BCY7589 0,0345 0.0345 2 2 BCY7590 BCY7590 0,0385 0.0385 2 2 BCY7591 BCY7591 0,18 0.18 1 1

- 74 045862- 74 045862

BCY7592 BCY7592 0,0374 0.0374 2 2 BCY7593 BCY7593 0,028 0.028 2 2 BCY7594 BCY7594 0,073 0.073 2 2 BCY7595 BCY7595 0,2189 0.2189 2 2 BCY7596 BCY7596 0,353 0.353 1 1 BCY7597 BCY7597 0,169 0.169 1 1 BCY7598 BCY7598 0,0749 0.0749 2 2 BCY7606 BCY7606 0,034 0.034 1 1 BCY7607 BCY7607 0,077 0.077 1 1 BCY7608 BCY7608 0,042 0.042 1 1 BCY7611 BCY7611 0,205 0.205 1 1 BCY7612 BCY7612 0,064 0.064 1 1 BCY7613 BCY7613 0,0444 0.0444 2 2 BCY7614 BCY7614 0,021 0.021 1 1 BCY7615 BCY7615 0,0284 0.0284 2 2 BCY7616 BCY7616 0,051 0.051 1 1 BCY7618 BCY7618 0,013 0.013 1 1 BCY7620 BCY7620 0,246 0.246 1 1 BCY7622 BCY7622 0,031 0.031 1 1 BCY7623 BCY7623 0,021 0.021 1 1 BCY7624 BCY7624 0,571 0.571 1 1 BCY7625 BCY7625 0,141 0.141 1 1 BCY7627 BCY7627 0,101 0.101 1 1 BCY7628 BCY7628 0,023 0.023 1 1 BCY7631 BCY7631 0,019 0.019 1 1 BCY7632 BCY7632 0,123 0.123 1 1 BCY7634 BCY7634 0,024 0.024 1 1 BCY7635 BCY7635 0,0152 0.0152 4 4 BCY7636 BCY7636 0,522 0.522 1 1 BCY7639 BCY7639 0,49 0.49 1 1 BCY7640 BCY7640 0,086 0.086 1 1 BCY7643 BCY7643 0,019 0.019 1 1 BCY7656 BCY7656 0,0719 0.0719 2 2 BCY7657 BCY7657 0,0232 0.0232 2 2

- 75 045862- 75 045862

BCY7658 BCY7658 0,0336 0.0336 2 2 BCY7659 BCY7659 0,0779 0.0779 2 2 BCY7660 BCY7660 0,0262 0.0262 2 2 BCY7661 BCY7661 0,0294 0.0294 2 2 BCY7662 BCY7662 0,0148 0.0148 2 2 BCY7663 BCY7663 0,0255 0.0255 2 2 BCY7664 BCY7664 0,07 0.07 2 2 BCY7665 BCY7665 0,0241 0.0241 2 2 BCY7666 BCY7666 0,0814 0.0814 2 2 BCY7667 BCY7667 0,0273 0.0273 2 2 BCY7668 BCY7668 0,4236 0.4236 2 2 BCY7765 BCY7765 0,0087 0.0087 22 22 BCY7793 BCY7793 0,042 0.042 1 1 BCY7815 BCY7815 0,032 0.032 1 1 BCY7816 BCY7816 0,036 0.036 1 1 BCY7817 BCY7817 0,014 0.014 1 1 BCY7819 BCY7819 0,012 0.012 1 1 BCY7820 BCY7820 0,01 0.01 1 1 BCY7821 BCY7821 0,084 0.084 1 1 BCY7822 BCY7822 0,027 0.027 1 1 BCY7876 BCY7876 0,0592 0.0592 2 2 BCY7877 BCY7877 0,0095 0.0095 2 2 BCY7879 BCY7879 0,0125 0.0125 2 2 BCY7881 BCY7881 0,0144 0.0144 2 2 BCY7883 BCY7883 0,1893 0.1893 2 2 BCY7884 BCY7884 0,223 0.223 1 1 BCY7886 BCY7886 0,015 0.015 2 2 BCY7887 BCY7887 0,0214 0.0214 2 2 BCY7889 BCY7889 0,0581 0.0581 3 3 BCY7890 BCY7890 0,0989 0.0989 4 4 BCY7891 BCY7891 0,005 0.005 2 2 BCY7892 BCY7892 0,0095 0.0095 2 2 BCY7894 BCY7894 0,1263 0.1263 2 2 BCY7895 BCY7895 0,0491 0.0491 4 4

- 76 045862- 76 045862

BCY7896 BCY7896 0,044 0.044 2 2 BCY7897 BCY7897 0,166 0.166 1 1 BCY7902 BCY7902 0,004 0.004 1 1 BCY7903 BCY7903 0,041 0.041 1 1 BCY7904 BCY7904 0,008 0.008 1 1 BCY7906 BCY7906 0,006 0.006 1 1 BCY7907 BCY7907 0,01 0.01 1 1 BCY7908 BCY7908 0,02 0.02 1 1 BCY7911 BCY7911 0,013 0.013 1 1 BCY7912 BCY7912 0,009 0.009 1 1 BCY7913 BCY7913 0,016 0.016 1 1 BCY7914 BCY7914 0,062 0.062 1 1 BCY7915 BCY7915 0,02 0.02 1 1 BCY7916 BCY7916 0,045 0.045 3 3 BCY7973 BCY7973 0,004 0.004 1 1 BCY7979 BCY7979 0,191 0.191 1 1 BCY7993 BCY7993 0,038 0.038 1 1 BCY7996 BCY7996 0,021 0.021 1 1 BCY7997 BCY7997 0,022 0.022 1 1 BCY7998 BCY7998 0,135 0.135 1 1 BCY8000 BCY8000 0,06 0.06 1 1 BCY8028 BCY8028 0,0619 0.0619 3 3 BCY8029 BCY8029 0,0778 0.0778 3 3 BCY8030 BCY8030 0,0025 0.0025 7 7 BCY8031 BCY8031 0,0036 0.0036 3 3 BCY8032 BCY8032 1,064 1,064 1 1 BCY8036 BCY8036 0,0075 0.0075 3 3 BCY8037 BCY8037 0,0056 0.0056 3 3 BCY8038 BCY8038 0,008 0.008 5 5 BCY8039 BCY8039 0,0214 0.0214 3 3 BCY8040 BCY8040 0,0108 0.0108 3 3 BCY8041 BCY8041 0,0391 0.0391 3 3 BCY8042 BCY8042 0,0204 0.0204 3 3 BCY8043 BCY8043 0,0088 0.0088 3 3

- 77 045862- 77 045862

BCY8044 BCY8044 0,1698 0.1698 2 2 BCY8084 BCY8084 0,0264 0.0264 2 2 BCY8085 BCY8085 0,0151 0.0151 2 2 BCY8087 BCY8087 0,0179 0.0179 2 2 BCY8088 BCY8088 0,0089 0.0089 2 2 BCY8089 BCY8089 0,008 0.008 2 2 BCY8090 BCY8090 0,057 0.057 1 1 BCY8091 BCY8091 0,023 0.023 2 2 BCY8094 BCY8094 0,0289 0.0289 2 2 BCY8120 BCY8120 0,003 0.003 2 2 BCY8121 BCY8121 0,004 0.004 2 2 BCY8122 BCY8122 0,003 0.003 2 2 BCY8123 BCY8123 0,0045 0.0045 2 2 BCY8124 BCY8124 0,0035 0.0035 4 4 BCY8125 BCY8125 0,0031 0.0031 4 4 BCY8126 BCY8126 0,0027 0.0027 6 6 BCY8127 BCY8127 0,0024 0.0024 4 4 BCY8128 BCY8128 0,0022 0.0022 4 4 BCY8129 BCY8129 0,0031 0.0031 4 4 BCY8153 BCY8153 0,035 0.035 1 1 BCY8154 BCY8154 0,008 0.008 1 1 BCY8157 BCY8157 0,005 0.005 1 1 BCY8158 BCY8158 0,177 0.177 1 1 BCY8161 BCY8161 0,004 0.004 1 1 BCY8162 BCY8162 0,003 0.003 1 1 BCY8163 BCY8163 0,003 0.003 1 1 BCY8174 BCY8174 0,0123 0.0123 2 2 BCY8175 BCY8175 0,0035 0.0035 2 2 BCY8176 BCY8176 0,0035 0.0035 2 2 BCY8177 BCY8177 0,0175 0.0175 2 2 BCY8178 BCY8178 0,083 0.083 1 1 BCY8180 BCY8180 0,003 0.003 2 2 BCY8181 BCY8181 0,0035 0.0035 2 2 BCY8182 BCY8182 0,002 0.002 2 2

- 78 045862- 78 045862

BCY8183 BCY8183 0,002 0.002 2 2 BCY8184 BCY8184 0,0032 0.0032 4 4 BCY8185 BCY8185 0,0261 0.0261 2 2 BCY8186 BCY8186 0,006 0.006 2 2 BCY8187 BCY8187 0,005 0.005 2 2 BCY8188 BCY8188 0,02 0.02 2 2 BCY8189 BCY8189 0,1658 0.1658 2 2 BCY8191 BCY8191 0,0045 0.0045 2 2 BCY8192 BCY8192 0,005 0.005 2 2 BCY8193 BCY8193 0,003 0.003 2 2 BCY8194 BCY8194 0,0035 0.0035 2 2 BCY8211 BCY8211 0,0045 0.0045 2 2 BCY8212 BCY8212 0,003 0.003 2 2 BCY8213 BCY8213 0,0035 0.0035 2 2 BCY8214 BCY8214 0,0063 0.0063 2 2 BCY8215 BCY8215 0,003 0.003 2 2

Определенные бициклические пептиды по изобретению тестировали в упоминаемом выше анализе SPR, и результаты представлены в табл. 3.Certain bicyclic peptides of the invention were tested in the SPR assay mentioned above, and the results are presented in table. 3.

Таблица 3. Данные SPR для отдельных пептидных лигандов по изобретениюTable 3. SPR data for selected peptide ligands of the invention

Бицикл № Bicycle No. Kd согласно SPR для человека (нМ) Kd according to SPR for humans (nM) η η BCY428 BCY428 333,52 333.52 4 4 BCY3385 BCY3385 87,37 87.37 3 3 BCY7390 BCY7390 40,31 40.31 5 5 BCY7391 BCY7391 59,8 59.8 3 3 BCY7392 BCY7392 35,7 35.7 3 3 BCY7393 BCY7393 1383,33 1383.33 3 3 BCY7559 BCY7559 14,9 14.9 2 2 BCY7618 BCY7618 17,6 17.6 1 1 BCY7765 BCY7765 24,94 24.94 15 15 BCY7793 BCY7793 47 47 1 1 BCY8030 BCY8030 1,71 1.71 1 1 BCY8038 BCY8038 44,53 44.53 3 3 BCY8120 BCY8120 0,67 0.67 1 1

- 79 045862- 79 045862

BCY8121 BCY8121 0,53 0.53 1 1 BCY8122 BCY8122 0,89 0.89 1 1 BCY8123 BCY8123 2,66 2.66 1 1 BCY8124 BCY8124 0,69 0.69 1 1 BCY8125 BCY8125 0,52 0.52 1 1 BCY8126 BCY8126 1,07 1.07 4 4 BCY8127 BCY8127 1,84 1.84 3 3 BCY8128 BCY8128 1,06 1.06 3 3 BCY8129 BCY8129 0,87 0.87 3 3 BCY8161 BCY8161 0,94 0.94 1 1 BCY8162 BCY8162 4,3 4.3 1 1 BCY8163 BCY8163 0,61 0.61 1 1 BCY8182 BCY8182 0,96 0.96 1 1 BCY8183 BCY8183 0,56 0.56 1 1 BCY8184 BCY8184 0,56 0.56 1 1 BCY8192 BCY8192 1,81 1.81 1 1 BCY8193 BCY8193 1,3 1.3 1 1 BCY8194 BCY8194 1,9 1.9 1 1 BCY8211 BCY8211 7,32 7.32 1 1 BCY8212 BCY8212 2,42 2.42 1 1 BCY8213 BCY8213 1,95 1.95 1 1 BCY8214 BCY8214 0,54 0.54 1 1 BCY8215 BCY8215 1,62 1.62 1 1 BCY8276 BCY8276 0,86 0.86 1 1 BCY8277 BCY8277 5,99 5.99 1 1 BCY8278 BCY8278 1,92 1.92 1 1 BCY8279 BCY8279 3,31 3.31 1 1 BCY8280 BCY8280 2 2 1 1 BCY8281 BCY8281 6,И 6,I 1 1 BCY8831 BCY8831 2,14 2.14 1 1 BCY8238 BCY8238 3,88 3.88 1 1 BCY8116 BCY8116 0,372 0.372 1 1

п=среднее количество экспериментов.n=average number of experiments.

Определенные бициклические пептиды по изобретению конъюгировали с цитотоксическими средствами и тестировали в описанном выше анализе SPR, и результаты представлены в табл. 4.Certain bicyclic peptides of the invention were conjugated to cytotoxic agents and tested in the SPR assay described above, and the results are presented in table. 4.

- 80 045862- 80 045862

Таблица 4. Данные SPR для отдельных BDC по изобретениюTable 4. SPR data for individual BDCs according to the invention

Бициклический конъюгат лекарственного средства (BDC) № Bicyclic Drug Conjugate (BDC) No. Пептид Peptide Kd согласно SPR для человека (нМ) Kd according to SPR for human (nM) BCY7683 BCY7683 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutapmi-BCY7556 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutapmi-BCY7556 27,10 (n=l) 27.10 (n=l) BCY7825 BCY7825 ММ AE-PABC-Cit-Val-Glutapnn-BC Y7814 MM AE-PABC-Cit-Val-Glutapnn-BC Y7814 ll,60(n=l) ll,60(n=l) BCY7826 BCY7826 DM1-SPDB(SO₃H)-BCY7814 DM1-SPDB(SO ₃ H)-BCY7814 12,10 (n=l) 12.10 (n=l) BCY8245 BCY8245 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutapmi-BCY8234 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutapmi-BCY8234 5,12 (n=4) 5.12 (n=4) BCY8253 BCY8253 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutapmi-BCY8231 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutapmi-BCY8231 6,22 (n=4) 6.22 (n=4) BCY8254 BCY8254 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutapmi-BCY8232 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutapmi-BCY8232 4,11 (n=l) 4.11 (n=l) BCY8255 BCY8255 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutaproi-BCY8235 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutaproi-BCY8235 8,58 (n=4) 8.58 (n=4) BCY8549 BCY8549 ММАЕ-РАВС-циклобутил-(В-А1а)-ВСА8234 MMAE-RABC-cyclobutyl-(B-A1a)-BCA8234 1,44 (n=l) 1.44 (n=l) BCY8550 BCY8550 MMAE-PABC-Cit-Val-Gliitapnn-(Lys3)- BCY8831 MMAE-PABC-Cit-Val-Gliitapnn-(Lys3)- BCY8831 0,27 (n=l) 0.27 (n=l) BCY8783 BCY8783 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutapiui-BCY8269 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutapiui-BCY8269 0,804 (n=l) 0.804 (n=l) BCY8784 BCY8784 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutapmi-BCY8273 MMAE-PABC-Cit-Val-Glutapmi-BCY8273 0,662 (n=l) 0.662 (n=l)

Исследования in vivo.In vivo studies.

В каждом из примеров 1-5 и 9 для каждого исследования использовали следующую методологию.In each of Examples 1-5 and 9, the following methodology was used for each study.

Тестируемые и положительные контрольные образцыTest and Positive Control Samples

Номер Number Физическое описание Physical Description Молекулярная масса Molecular mass Чистота Purity Условия хранения Conditions storage BCY7683 BCY7683 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 3852,59 3852.59 99,6% 99.6% Хранение при -80°С Storage at -80°С BCY7825 BCY7825 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 4122,85 4122.85 98,40% 98.40% Хранение при -80°С Storage at -80°С BCY7826 BCY7826 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 3821,83 3821.83 99,70% 99.70% Хранение при -80°С Storage at -80°С BCY8234 BCY8234 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 2954,34 2954.34 98,1% 98.1% Хранение при -80°С Storage at -80°С BCY8242 BCY8242 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 6346,46 6346.46 97,40% 97.40% Хранение при -80°С Storage at -80°С

- 81 045862- 81 045862

BCY8245 BCY8245 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 4173,85 4173.85 99,60% 99.60% Хранение при -80°С Storage at -80°С BCY8253 BCY8253 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 4218,96 4218.96 97,00% 97.00% Хранение при -80°С Storage at -80°С BCY8254 BCY8254 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 4213,96 4213.96 99,40% 99.40% Хранение при -80°С Storage at -80°С BCY8255 BCY8255 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 4214,97 4214.97 99,40% 99.40% Хранение при -80°С Storage at -80°С BCY8549 BCY8549 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 4157,81 4157.81 95,70% 95.70% Хранение при -80°С Storage at -80°С BCY8550 BCY8550 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 4228,98 4228.98 99,20% 99.20% Хранение при -80°С Storage at -80°С BCY8781 BCY8781 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 4173,85 4173.85 99,0% 99.0% Хранение при -80°С Storage at -80°С BCY8783 BCY8783 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 4209,91 4209.91 96,80% 96.80% Хранение при -80°С Storage at -80°С BCY8784 BCY8784 Лиофилизированный порошок Lyophilized powder 4245,96 4245.96 95,70% 95.70% Хранение при -80°С Storage at -80°С

Экспериментальные способы и методики.Experimental methods and techniques.

(i) Наблюдения.(i) Observations.

Все процедуры, касающиеся содержания животных, ухода и лечения, в испытаниях проводили в соответствии с руководством, одобренным Институциональным комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) WuXi AppTec, в соответствии с руководством Международной ассоциацией оценки и аккредитации лабораторных исследований на животных (AAALAC). В момент стандартного мониторинга животных каждый день проверяли в отношении каких-либо эффектов роста опухоли и лечения на нормальное поведение, такое как двигательная активность, употребление пищи и воды (только посредством осмотра), увеличение/снижение массы тела, потускнение глаз/шерсти и любой другой аномальный эффект, указанный в протоколе. Смерть и наблюдаемые клинические признаки регистрировали на основе количеств животных в каждой подгруппе.All animal husbandry, care, and treatment procedures in the trial were performed in accordance with WuXi AppTec Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC)-approved guidelines in accordance with the International Association for the Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Science (AAALAC) guidelines. During routine monitoring, animals were monitored daily for any effects of tumor growth and treatment on normal behavior such as locomotor activity, food and water intake (by examination only), weight gain/loss, eye/coat dullness, and any other anomalous effect specified in the protocol. Death and observed clinical signs were recorded based on the number of animals in each subgroup.

(ii) Измерение опухоли и конечные результаты.(ii) Tumor measurements and final results.

Основным результатом было наблюдение, может ли быть замедлен рост опухоли, или могут ли мыши быть вылечены. Объем опухоли измеряли три раза в неделю в двух измерениях с использованием толщиномера и объем выражали в мм³ с использованием формулыThe main outcome was to see whether tumor growth could be slowed down, or whether the mice could be cured. Tumor volume was measured three times a week in two dimensions using a thickness gauge and the volume was expressed in mm ³ using the formula

V=0,5 axb², где а и b представляют собой длинный и короткий диаметры опухоли, соответственно. Затем размер опухоли использовали для вычислений величины Т/С. Величина Т/С (в процентах) является признаком противоопухолевой эффективности;V=0.5 axb ² where a and b represent the long and short diameters of the tumor, respectively. Tumor size was then used to calculate the T/C value. The T/C value (in percentage) is a sign of antitumor effectiveness;

Т и С представляют собой средние объемы групп лечения и контроля, соответственно, в данный день.T and C represent the average volumes of the treatment and control groups, respectively, on a given day.

TGI вычисляли для каждой группы с использованием формулыTGI was calculated for each group using the formula

TGI (%)=[1-(Τϊ-Το)Ζ (Vi-V0)]x100;TGI (%)=[1-(Τϊ-Το)Ζ (Vi-V0)]x100;

Ti представляет собой средний объем опухоли в группе лечения в данный день, Т₀ представляет собой средний объем опухоли в группе лечения в день начала лечения, V; представляет собой средний объем опухоли в контрольной группе носителя в той же день с Ti, и V₀ представляет собой средний объем опухоли в группе носителя в день начала лечения.Ti represents the mean tumor volume in the treatment group on a given day, T ₀ represents the mean tumor volume in the treatment group on the day of treatment, V; is the mean tumor volume in the vehicle control group on the same day with Ti, and V ₀ is the mean tumor volume in the vehicle control group on the day of treatment.

(iii) Статистический анализ.(iii) Statistical analysis.

Суммарная статистика, включая среднее значение и стандартную ошибку среднего значения (SEM), предоставлена для объема опухоли в каждой группе в каждый момент времени.Summary statistics, including mean and standard error of the mean (SEM), are provided for tumor volume in each group at each time point.

Статистический анализ различий в объеме опухоли среди групп проводили для данных, полученных в наилучший терапевтический момент времени после последней дозы.Statistical analysis of differences in tumor volume among groups was performed on data obtained at the best therapeutic time point after the last dose.

Односторонний ANOVA проводили для сравнения объема опухоли среди групп, и, когда получали значимую F-статистику (соотношение дисперсии лечения и дисперсии ошибки), сравнения между группами проводили с использованием критерия Геймса-Ховелла. Все данные анализировали с использованием GraphPad Prism 5.0. Статистически значимым считали Р < 0,05.One-way ANOVA was performed to compare tumor volume among groups, and when a significant F statistic (the ratio of treatment variance to error variance) was obtained, comparisons between groups were made using the Games-Howell test. All data were analyzed using GraphPad Prism 5.0. P < 0.05 was considered statistically significant.

- 82 045862- 82 045862

Пример 1. Тест эффективности in vivo BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254 и BCY8255 при лечении мышей BALB/c nude с ксенотрансплантатом NCI-H292 (модель немелкоклеточного рака легкого (NSCLC)).Example 1: In vivo efficacy test of BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254 and BCY8255 in the treatment of BALB/c nude mice with NCI-H292 xenograft (non-small cell lung cancer (NSCLC) model).

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей исследования была оценка противоопухолевой эффективности in vivo BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254 и BCY8255 при лечении модельных мышей BALB/c nude с ксенотрансплантатом NCI-H292.The objective of the study was to evaluate the in vivo antitumor efficacy of BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254, and BCY8255 in the treatment of the NCI-H292 xenograft BALB/c nude mouse model.

2. Схема эксперимента2. Experimental design

Г руппа Group Лечение Treatment η η Доза (мг/кг) Dose (mg/kg) Объем дозирования (мкл/г) Dosing volume (µl/g) Путь дозирования Dosing route Схема Scheme 1 1 Носитель Carrier 3 3 — — 10 10 в/в IV biw biw 2 2 BCY7683 BCY7683 3 3 5/3* 5/3* 10 10 в/в IV biw/qw** biw/qw** 3 3 BCY7825 BCY7825 3 3 1 1 10 10 в/в IV biw biw 4 4 BCY7825 BCY7825 3 3 3 3 10 10 в/в IV biw biw 5 5 BCY7825 BCY7825 3 3 3 3 10 10 в/в IV qw qw 6 6 BCY7826 BCY7826 3 3 1 1 10 10 в/в IV biw biw 7 7 BCY7826 BCY7826 3 3 3 3 10 10 в/в IV biw biw 8 8 BCY7826 BCY7826 3 3 3 3 10 10 в/в IV qw qw 9 9 BCY8245 BCY8245 3 3 1/3/5^а 1/3/5 ^a 10 10 в/в IV qw qw 10 10 BCY8253 BCY8253 3 3 1/3/5а 1/3/5a 10 10 в/в IV qw qw И AND BCY8254 BCY8254 3 3 1/3/5а 1/3/5a 10 10 в/в IV qw qw 12 12 BCY8255 BCY8255 3 3 1/3/5а 1/3/5a 10 10 в/в IV qw qw 13 13 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 14 14 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 15 15 BCY8245 BCY8245 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 16 16 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 17 17 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 18 18 BCY8253 BCY8253 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 19 19 BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 20 20 BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 21 21 BCY8255 BCY8255 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw

Примечание: n: количество животных; объем дозирования: объем дозирования доводили на основе массы тела из расчета 10 мкл/г.Note: n: number of animals; dosing volume: dosing volume was adjusted based on body weight at a rate of 10 μl/g.

*Дозировка BCY7683 была снижена до 3 мг/кг с 7 суток.*BCY7683 dosage was reduced to 3 mg/kg from day 7.

** Схему лечения корректировали, исходя из массы тела в день введения.** The treatment regimen was adjusted based on body weight on the day of administration.

3. Материалы.3. Materials.

3.1. Животные и условия содержания.3.1. Animals and conditions of detention.

3.1.1. Животные.3.1.1. Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: Balb/c nude.Line: Balb/c nude.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22 г.Body weight: 18-22 g.

Количество животных: 12 мышей для тестирования BCY7683, 21 мышь для BCY7825 и BCY7826, 18 мышей для BCY8245, BCY8253, BCY8254 и BCY8255 плюс запасные.Number of animals: 12 mice for testing BCY7683, 21 mice for BCY7825 and BCY7826, 18 mice for BCY8245, BCY8253, BCY8254 and BCY8255 plus spares.

Поставщик животных: Shanghai LC Laboratory Animal Co., LTD.Animal supplier: Shanghai LC Laboratory Animal Co., LTD.

3.1.2. Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

Мышей содержали в индивидуально вентилируемых клетках при постоянной температуре и влажности по 3 животных в каждой клетке.Mice were kept in individually ventilated cages at constant temperature and humidity, 3 animals per cage.

Температура: 20~26°С.Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

Клетки: изготовлены из поликарбоната. Размер составляет 300 ммх180 ммх150 мм. Материалом подстилки были сердцевины кукурузных початков, которые заменяли два раза в неделю.Cages: made of polycarbonate. The size is 300 mm x 180 mm x 150 mm. The bedding material was corn cob cores, which were replaced twice a week.

Рацион: животные имели свободный доступ к стерилизованному облучением сухому гранулированному корму в ходе всего периода исследования.Diet: Animals had free access to irradiation-sterilized dry pelleted food throughout the study period.

Вода: животные имели свободный доступ к питьевой воде.Water: Animals had free access to drinking water.

- 83 045862- 83 045862

Идентификация клеток: идентификационные ярлыки для каждой клетки содержали следующую информацию: количество животных, пол, линия, дата получения, лечение, номер испытания, номер группы и дата начала испытания.Cage identification: ID labels for each cage contained the following information: number of animals, sex, strain, date of receipt, treatment, trial number, group number, and trial start date.

Идентификация животных: животных маркировали кодированием на ушах.Animal identification: Animals were marked by ear coding.

3.2. Тестируемые и положительные контрольные образцы.3.2. Test and positive control samples.

4. Способы и процедуры эксперимента.4. Experimental methods and procedures.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Опухолевые клетки NCI-H292 поддерживают в среде, дополненной 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой, при 37°С в атмосфере 5% СО2 в воздухе. Опухолевые клетки стандартным образом субкультивируют два раза в неделю. Клетки, растущие в экспоненциальной фазе роста, собирают и подсчитывают для инокуляции опухоли.NCI-H292 tumor cells were maintained in medium supplemented with 10% heat-inactivated fetal bovine serum at 37°C in an atmosphere of 5% CO2 in air. Tumor cells are routinely subcultured twice a week. Cells growing in the exponential growth phase are harvested and counted for tumor inoculation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши инокулируют подкожно в правый бок опухолевые клетки NCI-H292 (10x10⁶) в 0,2 мл PBS для развития опухоли. Животных случайным образом распределяют на группы и лечение начинают, когда средний объем опухоли достигает приблизительно 158-406 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в следующей таблице схемы эксперимента.Each mouse was inoculated subcutaneously in the right flank with NCI-H292 tumor cells (10x10 ⁶ ) in 0.2 ml PBS for tumor development. Animals are randomly assigned to groups and treatment begins when the average tumor volume reaches approximately 158-406 mm ³ . The administration of test samples and the number of animals in each group are presented in the following experimental design table.

4.3. Получение состава тестируемого образца4.3. Obtaining the composition of the test sample

Лечение Treatment Доза(мг/мл) Dose(mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 2,5% DMSO, 10% Kolliphor, 50 мМ Hepes, pH 7 2.5% DMSO, 10% Kolliphor, 50 mM Hepes, pH 7 BCY7683 BCY7683 0,5 0.5 Растворить 2,25 мг BCY7683 в 112 мкл DMSO, затем разбавить 22,5 мкл исходного раствора 20 мг/мл BCY7683 посредством 90 мкл Kolliphor, 45 мкл 1 мМ Hepes и 742,5 воды. Dissolve 2.25 mg BCY7683 in 112 µl DMSO, then dilute 22.5 µl 20 mg/ml BCY7683 stock solution with 90 µl Kolliphor, 45 µl 1 mM Hepes and 742.5 water. о,з o, s Разбавить раствор для дозирования 0,5 мг/мл буфером из 2,5% DMSO, 10% Kolliphor и 50 мМ Hepes, pH 7. Dilute the 0.5 mg/mL dosing solution with a buffer of 2.5% DMSO, 10% Kolliphor and 50 mM Hepes, pH 7. Лечение Treatment Доза(мг/мл) Dose(mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, 10% сахароза, рН=7 25 mM histidine, 10% sucrose, pH=7 BCY7825 BCY7825 Буфер для составления Buffer for drawing up 10% Kolliphor,50 мМ Hepes, рН=7 10% Kolliphor, 50 mM Hepes, pH=7 1 1 Растворить 3,2 мг BCY7825 в 3,2 мл буфера для составления Dissolve 3.2 mg BCY7825 in 3.2 ml formulation buffer о,з o, s Разбавить 270 мкл BCY7825 в концентрации 1 мг/мл в 630 мкл буфера для составления Dilute 270 µl BCY7825 at 1 mg/ml in 630 µl formulation buffer 0,1 0.1 Разбавить 90 мкл BCY7825 в концентрации 1 мг/мл в 810 мкл буфера для составления Dilute 90 µl BCY7825 at a concentration of 1 mg/ml in 810 µl formulation buffer BCY7826 BCY7826 Буфер для Buffer for 25 мМ гистидин, 10% сахароза, рН=7 25 mM histidine, 10% sucrose, pH=7

- 84 045862 составления- 84 045862 compilations

Растворить 3,2 мг BCY7826 в 3,2 мл буфера для составленияDissolve 3.2 mg BCY7826 in 3.2 ml formulation buffer

Разбавить 270 мкл BCY7826 в концентрации 1 мг/мл в 630 мкл буфера для составленияDilute 270 µl BCY7826 at a concentration of 1 mg/ml in 630 µl formulation buffer

Разбавить 90 мкл BCY7826 в концентрации 1 мг/мл в 810 мкл буфера для составленияDilute 90 µl BCY7826 at a concentration of 1 mg/ml in 810 µl formulation buffer

Тестируемый образец Test sample Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8245 BCY8245 1 1 Растворить 1,61 mtBCY8245 в 1,604 мл буфера (носитель) Dissolve 1.61 mtBCY8245 in 1.604 ml buffer (vehicle) 0,1 0.1 Разбавить 90 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 810 мкл буфера (носитель) Dilute 90 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 810 µl of buffer (vehicle) о,з o, s Разбавить 270 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 630 мкл буфера (носитель) Dilute 270 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 630 µl of buffer (vehicle) 0,5 0.5 Разбавить 450 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 450 мкл буфера (носитель) Dilute 450 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 450 µl of buffer (vehicle) BCY8253 BCY8253 1 1 Растворить 1,15 mtBCY8253 1,116 мл буфера (носитель) Dissolve 1.15 mtBCY8253 1.116 ml buffer (carrier) 0,1 0.1 Разбавить 90 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 посредством 810 мкл буфера (носитель) Dilute 90 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 810 µl of buffer (vehicle) 0,3 0.3 Разбавить 270 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 посредством 630 мкл буфера (носитель) Dilute 270 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 630 µl of buffer (vehicle) 0,5 0.5 Разбавить 450 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 посредством 450 мкл буфера (носитель) Dilute 450 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 450 µl of buffer (vehicle) BCY8254 BCY8254 1 1 Растворить 1,80 mtBCY8254 1,789 мл буфера (носитель) Dissolve 1.80 mtBCY8254 1.789 ml buffer (carrier) 0,1 0.1 Разбавить 90 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8254 посредством 810 мкл буфера (носитель) Dilute 90 µl of 1 mg/ml BCY8254 stock solution with 810 µl of buffer (vehicle) 0,3 0.3 Разбавить 270 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8254 посредством 630 мкл буфера (носитель) Dilute 270 µl of 1 mg/ml BCY8254 stock solution with 630 µl of buffer (vehicle) 0,5 0.5 Разбавить 450 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8254 посредством 450 мкл буфера (носитель) Dilute 450 µl of 1 mg/ml BCY8254 stock solution with 450 µl of buffer (vehicle) BCY8255 BCY8255 1 1 Растворить 1,30 мг BCY8255 1,192 мл 50 мМ смеси ацетат/уксусная кислота, рН5, с 10% сахарозой Dissolve 1.30 mg BCY8255 1.192 ml 50 mM acetate/acetic acid, pH5, with 10% sucrose

- 85 045862- 85 045862

0,1 0.1 Разбавить 90 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 посредством 810 мкл 50 мМ смеси ацетат/уксусная кислота, рН5, с 10% сахарозой Dilute 90 µl of the 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 810 µl of 50 mM acetate/acetic acid, pH5, with 10% sucrose 0,3 0.3 Разбавить 270 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 посредством 630 мкл 50 мМ смеси ацетат/уксусная кислота, рН5, с 10% сахарозой Dilute 270 µl of the 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 630 µl of 50 mM acetate/acetic acid, pH5, with 10% sucrose 0,5 0.5 Разбавить 450 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 посредством 450 мкл 50 мМ смеси ацетат/уксусная кислота, рН5, с 10% сахарозой Dilute 450 µl of the 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 450 µl of 50 mM acetate/acetic acid, pH5, with 10% sucrose Тестируемый образец Test sample Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8245 BCY8245 1 1 Растворить 10,56 мг BCY8245 в 10,518 мл гистидинового буфера Dissolve 10.56 mg BCY8245 in 10.518 ml histidine buffer BCY8245 BCY8245 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 1 1 Растворить 11,35 мг BCY8253 в 11,010 мл гистидинового буфера Dissolve 11.35 mg BCY8253 in 11.010 ml histidine buffer BCY8253 BCY8253 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл 1 мг/мл исходного раствора BCY8253 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 посредством 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8255 BCY8255 1 1 Растворить 10,78 mtBCY8255 в 10,715 мл ацетатного буфера Dissolve 10.78 mtBCY8255 in 10.715 ml acetate buffer BCY8255 BCY8255 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 посредством 400 мкл ацетатного буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 400 µl acetate buffer BCY8255 BCY8255 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 посредством 560 мкл ацетатного буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 560 µl acetate buffer /. Гистидиновый буфер:25мМ гистидин, рН7, 10% сахароза 2. Ацетатный буфер: 50 мМ ацетат/уксусная кислота, pH 5, 10% сахароза 3. Исходные растворы BCY8245(1 мг/мл), BCY8253(1 мг/мл) и BCY8255(1 мг/мл) распределяли в индивидуальные пробирки и хранили при -80°С /. Histidine buffer: 25mM histidine, pH7, 10% sucrose 2. Acetate buffer: 50 mM acetate/acetic acid, pH 5, 10% sucrose 3. Stock solutions of BCY8245(1 mg/ml), BCY8253(1 mg/ml) and BCY8255(1 mg/ml) were distributed into individual tubes and stored at -80°C

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

В конце исследования проводили взятие плазмы через 5, 15, 30, 60 и 120 мин после последнего дозирования.At the end of the study, plasma was collected 5, 15, 30, 60, and 120 minutes after the last dosing.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Кривые роста опухоли.5.1. Tumor growth curves.

Кривые роста опухоли представлены на фиг. 1-10.Tumor growth curves are shown in Fig. 1-10.

5.2. Регистрация объема опухоли.5.2. Registration of tumor volume.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей Balb/c nude, имеющих ксенотрансплантат NCI-H292, представлен в таблицах ниже.Average tumor volume over time in female Balb/c nude mice bearing the NCI-H292 xenograft is presented in the tables below.

- 86 045862- 86 045862

Таблица 5. Регистрация объема опухоли с течением времени Table 5. Registration of tumor volume over time Лечение Treatment Сутки после начала лечения Days after the start of treatment 0 0 2 2 4 4 7 7 9 9 11 eleven 14 16 14 16 Носитель, Carrier, biw 175±4 biw 175±4 321±28 321±28 407±51 407±51 538±35 538±35 620±27 620±27 712±60 712±60 879±88 - 879±88 - BCY7683, 176±1 5/3 мг/кг, BCY7683, 176±1 5/3 mg/kg, 162±18 162±18 97±16 97±16 88±17 88±17 72±14 72±14 58±16 58±16 47±9 - 47±9 - biw/qw biw/qw 1 1 Таблица 6: Регистрация объема опухоли с течением времени Table 6: Recording tumor volume over time Лечение Treatment Сутки после начала лечения Days after the start of treatment 0 0 2 2 5 5 7 7 9 9 12 12 14 14 Носитель, biw Carrier, biw 158±11 158±11 227±7 227±7 302±25 302±25 398±47 398±47 452±47 452±47 558±46 558±46 718±79 718±79 BCY7825, BCY7825, 1 мг/кг, 1 mg/kg, 156±11 156±11 214±20 214±20 332±31 332±31 444±46 444±46 505±62 505±62 605±52 605±52 754±66 754±66 biw biw BCY7825, BCY7825, 3 мг/кг, 3 mg/kg, 159±28 159±28 195±29 195±29 119±30 119±30 102±35 102±35 103±35 103±35 65±21 65±21 73±24 73±24 biw biw BCY7825, BCY7825, 3 мг/кг, 3 mg/kg, 157±17 157±17 179±22 179±22 162±18 162±18 179±20 179±20 146±23 146±23 109±8 109±8 116±25 116±25

qw qw BCY7826, 1 мг/кг, biw BCY7826, 1 mg/kg, biw 157±15 157±15 223±3 223±3 297±13 297±13 350±10 350±10 449±69 449±69 530±71 530±71 625±111 625±111 BCY7826, 3 мг/кг, biw BCY7826, 3 mg/kg, biw 158±27 158±27 171±32 171±32 121±25 121±25 110±29 110±29 99±22 99±22 87±16 87±16 91±19 91±19 BCY7826, 3 мг/кг, BCY7826, 3 mg/kg, 157±10 157±10 183±14 183±14 215±32 215±32 284±35 284±35 319±33 319±33 247±14 247±14 298±16 298±16

qwqw

- 87 045862- 87 045862

Таблица 7. Регистрация объема опухоли с течением времениTable 7. Registration of tumor volume over time

Лечение Treatment Сутки после начала лечения Days after the start of treatment 16 16 19 19 21 21 Носитель, biw Carrier, biw 895±160 895±160 1026±175 1026±175 1107±210 1107±210 BCY7825, BCY7825, 1 мг/кг, 1 mg/kg, 890±126 890±126 982±133 982±133 1063±139 1063±139 biw biw BCY7825, BCY7825, 3 мг/кг, 3 mg/kg, 87±26 87±26 81±28 81±28 80±29 80±29 biw biw BCY7825, BCY7825, 3 мг/кг, 3 mg/kg, 130±30 130±30 133±28 133±28 177±34 177±34 qw qw BCY7826, BCY7826, 1 мг/кг, 1 mg/kg, 671±109 671±109 731±144 731±144 774±151 774±151 biw biw BCY7826, BCY7826, 3 мг/кг, 3 mg/kg, 88±19 88±19 75±23 75±23 93±33 93±33 biw biw BCY7826, BCY7826, 3 мг/кг, 3 mg/kg, 333±13 333±13 378±19 378±19 425±25 425±25 qw qw

Таблица 8. Регистрация объема опухоли с течением времениTable 8. Registration of tumor volume over time

Лечение Treatment 0 0 2 2 4 4 7 7 9 9 11 eleven 14 14 16 16 Носитель, qw Media, qw 410±77 410±77 516±69 516±69 627±61 627±61 931=1=141 931=1=141 1118±225 1118±225 1208±257 1208±257 1495±365 1495±365 1743±419 1743±419 BCY8245, 1/3/5 мг/кг, qw BCY8245, 1/3/5 mg/kg, qw 404±65 404±65 391±42 391±42 542±14 542±14 721±136 721±136 762±115 762±115 607±95 607±95 614±89 614±89 626±93 626±93 BCY8253 1/3/ мг/кг, qw BCY8253 1/3/ mg/kg, qw 401±15 401±15 420±34 420±34 536±26 536±26 789±71 789±71 713±29 713±29 593±65 593±65 637±13 637±13 708±40 708±40 BCY8254 1/3/5 мг/кг, qw BCY8254 1/3/5 mg/kg, qw 408±65 408±65 442±48 442±48 601±71 601±71 737±76 737±76 747±73 747±73 565±47 565±47 543±53 543±53 599±26 599±26 BCY8255, 1/3/5 мг/кг, qw BCY8255, 1/3/5 mg/kg, qw 408±62 408±62 482±50 482±50 582±39 582±39 750=Ы11 750=Н11 771±96 771±96 698±58 698±58 670±83 670±83 761±59 761±59

Лечение Treatment 18 18 21 21 23 23 25 25 28 28 30 thirty 32 32 35 35 Носитель, qw Media, qw 1950±551 1950±551 2149±639 2149±639 BCY8245, BCY8245, 1/3/5 мг/кг, qw 1/3/5 mg/kg, qw 611±93 611±93 654±152 654±152 732±139 732±139 755±132 755±132 713±114 713±114 762±165 762±165 968±290 968±290 1119±216 1119±216 BCY8253 BCY8253 1/3/5 мг/кг, qw 1/3/5 mg/kg, qw 658±95 658±95 697±140 697±140 685±110 685±110 737±81 737±81 930±100 930±100 965±163 965±163 1029±185 1029±185 1293±26 1293±26 BCY8254 BCY8254 1/3/5 мг/кг, qw 1/3/5 mg/kg, qw 623±43 623±43 684±97 684±97 740±82 740±82 771±158 771±158 840±55 840±55 856±129 856±129 883±89 883±89 1004±171 1004±171 BCY8255, BCY8255, 838±127 838±127 856±163 856±163 1003±170 1003±170 1058±211 1058±211 1103±233 1103±233 1182±258 1182±258 1259±226 1259±226 1320±267 1320±267 1/3/5 мг/кг, qw 1/3/5 mg/kg, qw

- 88 045862- 88 045862

Таблица 9. Регистрация объема опухоли с течением времени Сутки после начала леченияTable 9. Registration of tumor volume over time Days after the start of treatment

ЛечениеTreatment

0 0 2 2 4 4 7 7 9 9 11 eleven 14 14 носитель, qw carrier, qw 161±2 161±2 270±14 270±14 357±14 357±14 448±17 448±17 570±16 570±16 720±36 720±36 948±61 948±61 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 160±5 160±5 220±11 220±11 266±15 266±15 218±23 218±23 167±10 167±10 161±36 161±36 149±43 149±43 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 162±13 162±13 243±19 243±19 211±12 211±12 101±11 101±11 100±8 100±8 87±7 87±7 65±3 65±3 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 160±9 160±9 176±7 176±7 191±3 191±3 105±8 105±8 82±3 82±3 91±14 91±14 83±8 83±8 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 162±7 162±7 187±9 187±9 176±20 176±20 159±15 159±15 147±8 147±8 114=1=13 114=1=13 98±3 98±3 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 162±14 162±14 174±9 174±9 149±7 149±7 70±2 70±2 68±6 68±6 58±2 58±2 49±5 49±5 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 161±10 161±10 161±9 161±9 121±9 121±9 97±3 97±3 79±6 79±6 82±8 82±8 68±9 68±9 BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 162±8 162±8 195±14 195±14 160±5 160±5 123±1 123±1 108±5 108±5 104±3 104±3 100±9 100±9 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 162±15 162±15 204±16 204±16 148±11 148±11 132±16 132±16 102±20 102±20 106±38 106±38 96±35 96±35 BCY8255, BCY8255, 164±8 164±8 171±8 171±8 103±9 103±9 101±5 101±5 89±11 89±11 87±32 87±32 97±44 97±44

мг/кг, qwmg/kg, qw

5.3. Анализ ингибирования роста опухоли.5.3. Tumor growth inhibition assay.

Скорость ингибирования роста опухоли для BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254 и BCY8255 в модели с ксенотрансплантатом NCI-H292 на 14 сутки вычисляли на основе измерения объема опухоли.The rates of tumor growth inhibition for BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254, and BCY8255 in the NCI-H292 xenograft model at day 14 were calculated based on tumor volume measurements.

Таблица 10. Анализ ингибирования роста опухолиTable 10. Tumor growth inhibition assay

Лечение Treatment Объем (мм³)^а Volume (mm ³ ) ^a опухоли Т/С^ь (%) T/ ^C tumors (%) TGI (%) TGI (%) Значение Р сравнению носителем P value comparison carrier по с By With Носитель, biw Carrier, biw 879±88 879±88 — — — — — —

BCY7683,BCY7683,

47±9 47±9 5,3 5.3 118,4 118.4 /?<0,001 /?<0.001 5 мг/кг, biw/qw 5 mg/kg, biw/qw

а. Среднее значение ± SEM.A. Mean ± SEM.

b. Ингибирование роста опухоли вычисляют путем деления среднего по группе объема опухоли для группы лечения на средний по группе объем опухоли для контрольной группы (Т/С).b. Tumor growth inhibition was calculated by dividing the group mean tumor volume for the treatment group by the group mean tumor volume for the control group (T/C).

- 89 045862- 89 045862

Таблица 11. Анализ ингибирования роста опухоли Table 11. Tumor growth inhibition assay Лечение Treatment Объем (мм³)^а Volume (mm ³ ) ^a опухоли Т/С^ь (%) T/ ^C tumors (%) TGI (%) TGI (%) Значение Р P value Носитель, biw Carrier, biw 1107±210 1107±210 — — — — — — BCY7825,! мг/кг, biw BCY7825,! mg/kg, biw 1063±139 1063±139 96,0 96.0 4,3 4.3 /?>0,05 /?>0.05 BCY7825, 3 мг/кг, biw BCY7825, 3 mg/kg, biw 80±29 80±29 7,3 7.3 108,3 108.3 /?<0,001 /?<0.001 BCY7825, 3 мг/кг, qw BCY7825, 3 mg/kg, qw 177±34 177±34 16,0 16.0 97,9 97.9 /?<0,001 /?<0.001 BCY7826, 1 мг/кг, biw BCY7826, 1 mg/kg, biw 774±151 774±151 70,0 70.0 34,9 34.9 /?>0,05 /?>0.05 BCY7826, 3 мг/кг, biw BCY7826, 3 mg/kg, biw 93±33 93±33 8,4 8.4 106,9 106.9 /?<0,001 /?<0.001 BCY7826, 3 мг/кг, qw BCY7826, 3 mg/kg, qw 425±25 425±25 38,4 38.4 71,7 71.7 /?<0,01 /?<0.01

Таблица 12. Анализ ингибирования ростаTable 12. Growth Inhibition Assay

Лечение Treatment Объем опухоли (мм³)^а Tumor volume (mm ³ ) ^a Т/С^ь (%) T/S ^b (%) TGI (%) TGI (%) Значение Р сравнению носителем P value comparison carrier по с By With Носитель, qw Media, qw 2149±639 2149±639 — — — — — — BCY8245, 1/3/5 мг/кг, qw BCY8245, 1/3/5 mg/kg, qw 654±152 654±152 30,4 30.4 85,7 85.7 /?<0,05 /?<0.05 BCY8253 1/3/5 мг/кг. qw BCY8253 1/3/5 mg/kg. qw 697±140 697±140 32,4 32.4 83,0 83.0 /?<0,05 /?<0.05 BCY8254 1/3/5 мг/кг. qw BCY8254 1/3/5 mg/kg. qw 684±97 684±97 31,8 31.8 84,1 84.1 /?<0,05 /?<0.05 BCY8255, 1/3/5 мг/кг, qw BCY8255, 1/3/5 mg/kg, qw 856±163 856±163 39,8 39.8 74,2 74.2 /?<0,05 /?<0.05

а. Среднее значение ± SEM.A. Mean ± SEM.

- 90 045862- 90 045862

Таблица 13. Анализ ингибирования роста опухолиTable 13. Tumor growth inhibition assay

Лечение Treatment Объем (мм³)^а Volume (mm ³ ) ^a опухоли Т/С^ь (%) T/ ^C tumors (%) TGI (%) TGI (%) Значение Р сравнению носителем P value comparison carrier по с By With Носитель, qw Media, qw 948±61 948±61 — — — — — — BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 149±43 149±43 15,8 15.8 101,4 101.4 /?<0,001 /?<0.001 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 65±3 65±3 6,9 6.9 112,2 112.2 /?<0,001 /?<0.001 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 83±8 83±8 8,8 8.8 109,8 109.8 /?<0,001 /?<0.001 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 98±3 98±3 10,4 10.4 108,1 108.1 /?<0,001 /?<0.001 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 49±5 49±5 5,2 5.2 114,3 114.3 /?<0,001 /?<0.001 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 68±9 68±9 7,2 7.2 111,9 111.9 /?<0,001 /?<0.001 BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 100±9 100±9 10,6 10.6 107,9 107.9 /?<0,001 /?<0.001 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 96±35 96±35 10,1 10.1 108,5 108.5 /?<0,001 /?<0.001 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 97±44 97±44 10,2 10.2 108,5 108.5 /?<0,001 /?<0.001

а. Среднее значение ± SEM.A. Mean ± SEM.

6. Обобщение и обсуждение результатов.6. Generalization and discussion of the results.

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254 и BCY8255 в модели с ксенотрансплантатом NCI-H292. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 1-10 и в табл. 5-13.This study evaluated the therapeutic efficacy of BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254, and BCY8255 in the NCI-H292 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 1-10 and in table. 5-13.

Средний размер опухоли у мышей, которым вводили носитель, достигал 879 мм³ на 14 сутки. CY7683 в дозе 5 мг/продемонстрировал быструю регрессию опухоли после лечения, однако лечение индуцировало выраженное снижение массы тела, в результате чего дозирование прекращали на 3 сутки и доводили до 3 мг/кг на 7 сутки. Наконец, BCY7683 (TV=47 мм³, TGI=118,4%, p<0,001) имел очевидную противоопухолевую эффективность и все мыши выжили до конца лечения.The average tumor size in mice treated with vehicle reached 879 ^mm3 on day 14. CY7683 at a dose of 5 mg/kg demonstrated rapid tumor regression after treatment, however, treatment induced significant weight loss, resulting in dosing being stopped on day 3 and increased to 3 mg/kg on day 7. Finally, BCY7683 (TV=47 mm ³ , TGI=118.4%, p<0.001) had obvious antitumor efficacy and all mice survived to the end of treatment.

Средний размер опухоли у мышей, которым вводили носитель, достиг 1107 мм³ на 21 сутки. BCY7825 в дозе 1 мг/кг (TV=1063 мм³, TGI=4,3%, p>0,05) не индуцировал никакой противоопухолевой активности, BCY7825 в дозе 3 мг/кг biw (TV=80 мм³, TGI=108,3%, р<0,001) и 3 мг/кг qw (TV=177 мм³, TGI=97,9%, p<0,001) вызывал регрессию опухоли и продемонстрировал выраженную противоопухолевую активность.The average tumor size in mice treated with vehicle reached 1107 ^mm3 on day 21. BCY7825 at a dose of 1 mg/kg (TV=1063 ^mm3 , TGI=4.3%, p>0.05) did not induce any antitumor activity, BCY7825 at a dose of 3 mg/kg biw (TV=80 ^mm3 , TGI= 108.3%, p<0.001) and 3 mg/kg qw (TV=177 mm ³ , TGI=97.9%, p<0.001) caused tumor regression and demonstrated significant antitumor activity.

BCY7826 в дозе 1 мг/кг (TV=774 мм³, TGI=34,9%, p>0,05) не имел заметной противоопухолевой активности, BCY7826 в дозе 3 мг/кг biw (TV=93 мм³, TGI=106,9%, р<0,001) и 3 мг/кг (TV=425 мм³, TGI=71,7%, p<0,01) qw обеспечивал зависимую от частоты дозирования противоопухолевую активность. Среди них BCY7826 в дозе 3 мг/кг biw индуцировал заметную регрессию опухоли.BCY7826 at a dose of 1 mg/kg (TV=774 ^mm3 , TGI=34.9%, p>0.05) had no significant antitumor activity, BCY7826 at a dose of 3 mg/kg biw (TV=93 ^mm3 , TGI= 106.9%, p<0.001) and 3 mg/kg (TV=425 mm ³ , TGI=71.7%, p<0.01) qw provided dose-frequency-dependent antitumor activity. Among them, BCY7826 at a dose of 3 mg/kg biw induced remarkable tumor regression.

BCY8245, BCY8253, BCY8254 и BCY8255 в дозе 1 мг/кг не обеспечивал значительной противоопухолевой активности, все четыре тестируемых образца продемонстрировали заметную противоопухолевую активность после увеличения дозировки до 3 мг/кг с 7 суток, однако эффективность далее не повышалась после увеличения дозировки до 5 мг/кг на 21 сутки. В этом исследовании все из протестированных животных продемонстрировали неизменное снижение массы тела в ходе режима дозирования, это может быть следствием опухолевой нагрузки и токсичности тестируемых образцов.BCY8245, BCY8253, BCY8254 and BCY8255 at a dose of 1 mg/kg did not provide significant antitumor activity, all four tested samples showed significant antitumor activity after increasing the dosage to 3 mg/kg from day 7, but the effectiveness did not further increase after increasing the dosage to 5 mg /kg for 21 days. In this study, all of the animals tested showed a consistent decrease in body weight over the course of the dosing regimen, which may be a consequence of tumor burden and toxicity of the samples tested.

BCY8245 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=149 мм³, TGI=101,4%, р<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=65 мм³, TGI=112,2%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=83 мм³, TGI=109,8%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8245 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=149 ^mm3 , TGI=101.4%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=65 ^mm3 , TGI=112.2%, p< 0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=83 mm ³ , TGI=109.8%, p<0.001) had significant antitumor activity.

- 91 045862- 91 045862

BCY8253 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=98 mm^{1 * 3}, TGI=108,1%,p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=49 мм³, TGI=114,3%, p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=68 мм³, TGI=111,9%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8253 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=98 mm ^{1 * 3} , TGI=108.1%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=49 mm ³ , TGI=114.3%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=68 mm ³ , TGI=111.9%, p<0.001) had significant antitumor activity.

BCY8255 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=100 мм³, TGI=107,9%, p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=96 мм³, TGI=108,5%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=97 мм³, TGI=108,5%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8255 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=100 mm ³ , TGI=107.9%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=96 mm ³ , TGI=108.5%, p< 0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=97 mm ³ , TGI=108.5%, p<0.001) had significant antitumor activity.

Все из протестированных образцов в дозе 3 мг/кг, qw, 3 мг/кг, biw и 5 мг/кг, qw продемонстрировали сравнимую противоопухолевую активность, эффективность не повышалась далее после увеличения дозировки или частоты дозирования.All of the tested samples at a dose of 3 mg/kg, qw, 3 mg/kg, biw and 5 mg/kg, qw showed comparable antitumor activity, and the effectiveness did not increase further after increasing the dosage or dosing frequency.

В этом исследовании животные, которым вводили BCY8253 в дозе 5 мг/кг, продемонстрировали среднее снижение массы тела более 15% на 9 сутки, у мышей в других группах масса тела сохранялась хорошо.In this study, animals administered BCY8253 at a dose of 5 mg/kg showed an average decrease in body weight of more than 15% on day 9, while mice in other groups maintained body weight well.

Пример 2. Тест эффективности in vivo BCY7825, BCY8245, BCY8253, BCY8254 и BCY8255 при лечении мышей лечение CB17-SCID с ксенотрансплантатом НТ-1376 (модель рака мочевого пузыря).Example 2: In vivo efficacy test of BCY7825, BCY8245, BCY8253, BCY8254 and BCY8255 in treating mice treated with CB17-SCID xenograft HT-1376 (bladder cancer model).

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей исследования является оценка противоопухолевой эффективности in vivo тестируемых образцов при лечении мышей CB17-SCID с ксенотрансплантатом НТ-1376.The objective of the study is to evaluate the in vivo antitumor efficacy of the tested samples in the treatment of CB17-SCID mice with the HT-1376 xenograft.

2. Схема эксперимента2. Experimental design

Г руппа Group Лечение Treatment η η Доза (мг/кг) Dose (mg/kg) Объем дозировани я (мкл/г) Dosing volume (µl/g) Путь дозирован ня The way is dosed nya Схема Scheme 1 1 Носитель Carrier 3 3 — — 10 10 в/в IV qw qw 2 2 BCY7825 BCY7825 3 3 1 мг/кг 1 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 3 3 BCY7825 BCY7825 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 4 4 BCY8245 BCY8245 3 3 1/З^а мг/кг 1/3 ^mg /kg 10 10 в/в IV qw qw 5 5 BCY8253 BCY8253 3 3 1/З^а мг/кг 1/3 ^mg /kg 10 10 в/в IV qw qw 6 6 BCY8254 BCY8254 3 3 1/З^а мг/кг 1/3 ^mg /kg 10 10 в/в IV qw qw 7 7 BCY8255 BCY8255 3 3 1/З^амг/кг 1/3 ^mg /kg 10 10 в/в IV qw qw 8 8 Носитель Carrier 5 5 — — 10 10 в/в IV qw qw 9 9 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 10 10 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw И AND BCY8245 BCY8245 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 12 12 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 13 13 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 14 14 BCY8253 BCY8253 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 15 15 BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 16 16 BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 17 17 BCY8255 BCY8255 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw

мг/кг в течение первой недели и 3 мг/кг в течение последующих 2 недель.mg/kg for the first week and 3 mg/kg for the next 2 weeks.

3. Материалы.3. Materials.

3.1.1. Животные.3.1.1. Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: CB17-SCID.Line: CB17-SCID.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22 г.Body weight: 18-22 g.

Количество животных: 21-41 мышь плюс запасные.Number of animals: 21-41 mice plus spares.

3.1.2. Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

Мышей содержали в индивидуально вентилируемых клетках при постоянной температуре и влажности с 3 или 5 животными в каждой клетке.Mice were housed in individually ventilated cages at constant temperature and humidity with 3 or 5 animals per cage.

Температура: 20~26°С.Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

- 92 045862- 92 045862

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Клетки опухоли НТ-1376 поддерживали in vitro в качестве культуры в виде монослоя в среде ЕМЕМ, дополненной 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой, при 37°С в атмосфере 5% СО2 в воздухе. Опухолевые клетки стандартным образом субкультивировали два раза в неделю посредством обработки трипсином-EDTA. Клетки, растущие в экспоненциальной фазе роста, собирали и подсчитывали для инокуляции опухоли.HT-1376 tumor cells were maintained in vitro as a monolayer culture in EMEM medium supplemented with 10% heat-inactivated fetal calf serum at 37°C in an atmosphere of 5% CO2 in air. Tumor cells were routinely subcultured twice a week by trypsin-EDTA treatment. Cells growing in the exponential growth phase were collected and counted for tumor inoculation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок опухолевые клетки НТ-1376 (5х 10⁶) в 0,2 мл PBS с матригелем (1:1) для формирования опухоли. Животных случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 153-164 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в таблице схемы эксперимента.Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with HT-1376 tumor cells (5x 10 ⁶ ) in 0.2 ml of PBS with Matrigel (1:1) to form a tumor. Animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 153-164 mm ³ . The introduction of test samples and the number of animals in each group are presented in the experimental design table.

Тестируемый образец Test sample Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY7825 BCY7825 ОД OD Разбавить 90 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY7825 посредством 810 мкл 10% Kolliphor, 50 мМ Hepes, pH 7 Dilute 90 µl of 1 mg/ml BCY7825 stock solution with 810 µl 10% Kolliphor, 50 mM Hepes, pH 7 BCY7825 BCY7825 о,з o, s Разбавить 270 мккл исходного раствора 1 мг/мл BCY7825 посредством 630 мкл 10% Kolliphor, 50 мМ Hepes, pH 7 Dilute 270 µl of 1 mg/ml BCY7825 stock solution with 630 µl 10% Kolliphor, 50 mM Hepes, pH 7 BCY8245 BCY8245 0,1 0.1 Разбавить 90 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 810 мкл буфера (носитель) Dilute 90 µl stock solution with 1 mg/ml BCY8245 810 µl buffer (vehicle) BCY8245 BCY8245 о,з o, s Разбавить 270 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 630 мкл буфера (носитель) Dilute 270 µl stock solution with 1 mg/ml BCY8245 630 µl buffer (vehicle) BCY8253 BCY8253 0,1 0.1 Разбавить 90 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 810 мкл буфера (носитель) Dilute 90 µl stock solution with 1 mg/ml BCY8253 810 µl buffer (vehicle) BCY8253 BCY8253 о,з o, s Разбавить 270 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 630 мкл буфера (носитель) Dilute 270 µl stock solution with 1 mg/ml BCY8253 630 µl buffer (vehicle)

- 93 045862- 93 045862

BCY8254 BCY8254 0,3 0.3 Разбавить 270 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8254 630 мкл буфера (носитель) Dilute 270 µl stock solution with 1 mg/ml BCY8254 630 µl buffer (vehicle) BCY8255 BCY8255 0,1 0.1 Разбавить 900 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 810 мкл буфера (носитель) Dilute 900 µl stock solution with 1 mg/ml BCY8255 810 µl buffer (vehicle) BCY8255 BCY8255 0,3 0.3 Разбавить 270 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 630 мкл буфера (носитель) Dilute 270 µl stock solution with 1 mg/ml BCY8255 630 µl buffer (vehicle)

Тестируемый образец Test sample Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8245 BCY8245 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 0,3 0.3 Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 0,3 0.3 Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8255 BCY8255 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 400 мкл ацетатного буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 400 µl acetate buffer BCY8255 BCY8255 0,3 0.3 Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 560 мкл ацетатного буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 560 µl acetate buffer 1. Гистидиновый буфер:25 мМгистидин, рН7, 10% сахароза 2. Ацетатный буфер: 50 мМацетат/уксусная кислота, pH 5, 10% сахароза 1. Histidine buffer: 25 mMhistidine, pH7, 10% sucrose 2. Acetate buffer: 50 mM Acetate/acetic acid, pH 5, 10% sucrose

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

В конце исследования проводили взятие плазмы в группах 3, 4, 5, 6 и 7 через 5, 15, 30, 60 и 120 мин после последнего дозирования. Взятие плазмы в группах 11, 14 и 17 проводили через 5, 15, 30, 60 и 120 мин после последнего доз ирования. Извлечение опухоли в группах 11, 14 и 17 проводили через 2 ч после последнего дозирования. Извлечение опухоли в группах 8, 9, 10, 12, 13, 15 и 16 проводили через 2 ч после последнего дозирования.At the end of the study, plasma was collected in groups 3, 4, 5, 6 and 7 at 5, 15, 30, 60 and 120 minutes after the last dosing. Plasma collection in groups 11, 14 and 17 was carried out 5, 15, 30, 60 and 120 minutes after the last dosing. Tumor retrieval in groups 11, 14 and 17 was performed 2 hours after the last dosing. Tumor retrieval in groups 8, 9, 10, 12, 13, 15 and 16 was performed 2 hours after the last dosing.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Кривые роста опухоли.5.1. Tumor growth curves.

Кривые роста опухоли представлены на фиг. 11-18.Tumor growth curves are shown in Fig. 11-18.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей CB17-SCID, имеющих ксенотрансплантат НТ-1376, представлен в табл. 14 и 15.The average tumor volume over time in female CB17-SCID mice bearing the HT-1376 xenograft is presented in Table 1. 14 and 15.

Таблица 14. Регистрация объема опухоли с течением времениTable 14. Registration of tumor volume over time

Групп Сутки после начала леченияGroup Days after start of treatment

а A 0 0 2 2 4 4 7 7 9 9 11 eleven 14 14 16 16 18 18 21 21 1 1 Носитель, qw Media, qw 168±37 168±37 220±47 220±47 274±56 274±56 391±73 391±73 442±75 442±75 503±82 503±82 576±84 576±84 649±81 649±81 801±84 801±84 884±81 884±81 2 2 BCY7825, 1 мг/кг, qw BCY7825, 1 mg/kg, qw 165±26 165±26 222±42 222±42 280±36 280±36 385±31 385±31 431±21 431±21 478±31 478±31 546±17 546±17 636±37 636±37 603±94 603±94 772±101 772±101 3 3 BCY7825, 3 мг/кг, qw BCY7825, 3 mg/kg, qw 165±23 165±23 195±26 195±26 209±12 209±12 307±24 307±24 365±21 365±21 358±15 358±15 412±13 412±13 423±19 423±19 467±14 467±14 545±9 545±9 4 4 BCY8245, 1/3 мг/кг, qw BCY8245, 1/3 mg/kg, qw 164±16 164±16 184±12 184±12 206±14 206±14 265±21 265±21 291±10 291±10 281±28 281±28 335±16 335±16 354±11 354±11 309±19 309±19 347±14 347±14 5 5 BCY8253, 1/3 мг/кг, qw BCY8253, 1/3 mg/kg, qw 163±37 163±37 201±47 201±47 240±42 240±42 333±49 333±49 358±19 358±19 305±28 305±28 370±33 370±33 386±41 386±41 348±15 348±15 448±19 448±19 6 6 BCY8254, 1/3 мг/кг, qw BCY8254, 1/3 mg/kg, qw 162±17 162±17 156±18 156±18 200±22 200±22 305±28 305±28 338±55 338±55 326±33 326±33 419±36 419±36 429±42 429±42 453±34 453±34 539±75 539±75 7 7 BCY8255, 1/3 мг/кг, qw BCY8255, 1/3 mg/kg, qw 162±28 162±28 198±40 198±40 257±43 257±43 352±49 352±49 375±81 375±81 332±22 332±22 385±45 385±45 440±12 440±12 514±144 514±144 549±149 549±149

- 94 045862- 94 045862

Таблица 9. Регистрация объема опухоли с течением времениTable 9. Registration of tumor volume over time

Сутки после начала леченияDays after the start of treatment

Группа ЛечениеGroup Treatment

0 0 2 2 5 5 7 7 9 9 12 12 14 14 8 8 Носитель, qw Media, qw 153±16 153±16 266±30 266±30 398±41 398±41 529±56 529±56 721±76 721±76 908±91 908±91 1069±90 1069±90 9 9 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 153±26 153±26 254±53 254±53 298±69 298±69 398±61 398±61 468±73 468±73 502±67 502±67 603±76 603±76 10 10 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 154±30 154±30 248±58 248±58 203±15 203±15 273±45 273±45 356±50 356±50 391±53 391±53 407±53 407±53 11 eleven BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 153±15 153±15 237±41 237±41 228±36 228±36 317±31 317±31 394±20 394±20 438±31 438±31 465±33 465±33 12 12 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 153±12 153±12 209±9 209±9 269±8 269±8 343±29 343±29 447±33 447±33 466±25 466±25 533±29 533±29 13 13 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 153±13 153±13 214±33 214±33 246±18 246±18 286±23 286±23 364±41 364±41 400±33 400±33 442±45 442±45 14 14 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 153±15 153±15 217±49 217±49 231±49 231±49 308±36 308±36 360±44 360±44 401±70 401±70 442±62 442±62 15 15 BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 153±22 153±22 233±3 233±3 284±6 284±6 358±27 358±27 476±40 476±40 486±65 486±65 538±59 538±59 16 16 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 153±21 153±21 233±33 233±33 218±23 218±23 298±45 298±45 336±42 336±42 365±31 365±31 390±40 390±40 17 17 BCY8255, BCY8255, 152±17 152±17 233±30 233±30 290±4 290±4 338±10 338±10 406±26 406±26 459±68 459±68 516±64 516±64

мг/кг, qwmg/kg, qw

Скорость ингибирования роста опухоли для тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом НТ-1376 вычисляли на основе измерения объема опухоли на 21 сутки после начала лечения.The rate of tumor growth inhibition for test samples in the NT-1376 xenograft model was calculated based on tumor volume measurements at 21 days after the start of treatment.

Таблица 16. Анализ ингибирования роста опухолиTable 16. Tumor growth inhibition assay

Группа Group Лечение Treatment Объем опухоли (мм³)^а Tumor volume (mm ³ ) ^a Т/С^ь (%) T/S ^b (%) TGI (%) TGI (%) Значение Р по сравнению с носителем P value according to compared to carrier 1 1 Носитель, qw Media, qw 884±81 884±81 - - - - — — 2 2 BCY7825, 1 мг/кг, qw BCY7825, 1 mg/kg, qw 772±101 772±101 87,3 87.3 15,2 15.2 />>0,05 />>0.05 3 3 BCY7825, 3 мг/кг, qw BCY7825, 3 mg/kg, qw 545±9 545±9 61,6 61.6 46,9 46.9 /><0,05 /><0.05 4 4 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 347±14 347±14 39,2 39.2 74,5 74.5 /><0,001 /><0.001 5 5 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 448±19 448±19 50,6 50.6 60,2 60.2 /><0,01 /><0.01 6 6 BCY8254, 3 мг/кг, qw BCY8254, 3 mg/kg, qw 539±75 539±75 60,9 60.9 47,4 47.4 /><0,05 /><0.05 7 7 BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 549±149 549±149 62,1 62.1 45,9 45.9 /><0,05 /><0.05

a. Среднее значение ± SEM.a. Mean ± SEM.

b. Ингибирование роста опухоли вычисляют путем деления среднего по группе объема опухоли для группы лечения на средний по группе объем опухоли для контрольной группы (Т/С).b. Tumor growth inhibition is calculated by dividing the group mean tumor volume for the treatment group by the group mean tumor volume for the control group (T/C).

- 95 045862- 95 045862

Таблица 17. Анализ ингибирования роста опухолиTable 17. Tumor growth inhibition assay

Г руппа Group Лечение Treatment Объем опухоли (мм³)^а Tumor volume (mm ³ ) ^a т/с^ь (%) t/s ^b (%) TGI (%) TGI (%) Значение Р по сравнению с носителем P value compared to vehicle 8 8 Носитель, qw Media, qw 1069±90 1069±90 — — — — — — 9 9 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 603±76 603±76 56,4 56.4 50,9 50.9 /?<0,01 /?<0.01 10 10 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 407±53 407±53 38,1 38.1 72,3 72.3 /?<0,001 /?<0.001 И AND BCY8245, BCY8245, 465±33 465±33 43,5 43.5 66,0 66.0 /?<0,001 /?<0.001 5 мг/кг, qw 5 mg/kg, qw 12 12 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 533±29 533±29 49,8 49.8 58,5 58.5 /?<0,01 /?<0.01 13 13 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 442±45 442±45 41,3 41.3 68,4 68.4 /?<0,001 /?<0.001 14 14 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 442±62 442±62 41,4 41.4 68,5 68.5 р<0,001 p<0.001 15 15 BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 538±59 538±59 50,3 50.3 58,0 58.0 /?<0,01 /?<0.01 16 16 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 390±40 390±40 36,5 36.5 74,1 74.1 /><0,001 /><0.001 17 17 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 516±64 516±64 48,3 48.3 60,3 60.3 /><0,01 /><0.01

а. Среднее значение ± SEM.A. Mean ± SEM.

Группы 1-7.Groups 1-7.

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом НТ-1376. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 11-15 и в табл. 14 и 15.This study evaluated the therapeutic efficacy of test samples in the HT-1376 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 11-15 and in table. 14 and 15.

Средний размер опухоли у мышей, которым вводили носитель, достигал 884 мм³ на 21 сутки. BCY7825 в дозе 1 мг/кг (TV=772 мм³, TGI=15,2%, p>0,05) не имел значительной противоопухолевой активности, BCY7825 в дозе 3 мг/кг (TV=545 мм³, TGI=46,9%, p<0,05) имел значительную противоопухолевую активность.The average tumor size in mice treated with vehicle reached 884 mm ³ on day 21. BCY7825 at a dose of 1 mg/kg (TV=772 mm ³ , TGI=15.2%, p>0.05) had no significant antitumor activity, BCY7825 at a dose of 3 mg/kg (TV=545 mm ³ , TGI=46 .9%, p<0.05) had significant antitumor activity.

BCY8245, BCY8253, BCY8254 и BCY8255 в дозе 1 мг/кг имели значительную противоопухолевую активность, и лучшая эффективность была обнаружена после повышения дозировки до 3 мг/кг с 7 суток.BCY8245, BCY8253, BCY8254 and BCY8255 at a dose of 1 mg/kg had significant antitumor activity, and better efficacy was found after increasing the dosage to 3 mg/kg from 7 days.

В этом исследовании некоторые мыши, которым вводили тестируемые изделия в дозе 3 мг/кг, имели снижение массы тела более 10%, одна мышь, которой вводили BCY8255 в дозе 3 мг/кг, была найдена мертвой на 16 сутки, мыши в группах носителя и 1 мг/кг BCY7825 сохраняли массу тела хорошо.In this study, some mice administered test products at a dose of 3 mg/kg had a decrease in body weight of more than 10%, one mouse administered BCY8255 at a dose of 3 mg/kg was found dead on day 16, mice in the vehicle and 1 mg/kg BCY7825 maintained body weight well.

Группы 8-17.Groups 8-17.

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом НТ-1376. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 16-18 и в табл. 16 и 17.This study evaluated the therapeutic efficacy of test samples in the HT-1376 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 16-18 and in table. 16 and 17.

BCY8245 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=603 мм³, TGI=50,9%,p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=407 мм³, TGI=72,3%, p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=465 мм³, TGI=66,0%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8245 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=603 ^mm3 , TGI=50.9%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=407 ^mm3 , TGI=72.3%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=465 mm ³ , TGI=66.0%, p<0.001) had significant antitumor activity.

BCY8253 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=533 мм³, TGI=58,5%,p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=442 мм³, TGI=68,4%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=442 мм³, TGI=68,5%,p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8253 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=533 ^mm3 , TGI=58.5%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=442 ^mm3 , TGI=68.4%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=442 mm ³ , TGI=68.5%, p<0.001) had significant antitumor activity.

BCY8255 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=538 мм³, TGI=58,0%, p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=390 мм³, TGI=74,1%, p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=516 мм³, TGI=60,3%, p<0,01) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8255 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=538 ^mm3 , TGI=58.0%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=390 ^mm3 , TGI=74.1%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=516 mm ³ , TGI=60.3%, p<0.01) had significant antitumor activity.

- 96 045862- 96 045862

В этом исследовании BCY8245 и BCY8253 в дозе 5 мг/кг qw вызвал снижение массы тела у животных более 10% в ходе режима лечения.In this study, BCY8245 and BCY8253 at a dose of 5 mg/kg qw caused a greater than 10% reduction in animal body weight over the course of the treatment regimen.

Пример 3. Исследование эффективности in vivo BCY8245, BCY8253 и BCY8255 при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом Panc2.13 (модель рака поджелудочной железы).Example 3. In vivo efficacy study of BCY8245, BCY8253 and BCY8255 in the treatment of Balb/c nude mice with a Panc2.13 xenograft (model of pancreatic cancer).

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей исследования является оценка in vivo противоопухолевой эффективности тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом Panc2.13.The objective of the study is to evaluate in vivo the antitumor efficacy of the tested samples in the treatment of Balb/c nude mice with a Panc2.13 xenograft.

2. Схема эксперимента________________________________________________________2. Experimental design______________________________________________________________

Г руппа Group Лечение Treatment η η Доза (мг/кг) Dose (mg/kg) Объем дозировани я (мкл/г) Dosing volume (µl/g) Путь дозирова НИЯ Dosage route Схема Scheme 1 1 Носитель Carrier 5 5 — — 10 10 в/в IV qw qw 2 2 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 3 3 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 4 4 BCY8245 BCY8245 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 5 5 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 6 6 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 7 7 BCY8253 BCY8253 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 8 8 BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 9 9 BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 10 10 BCY8255 BCY8255 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw

3. Материалы.3. Materials.

3.1.1 Животные.3.1.1 Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: Balb/c nude.Line: Balb/c nude.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22 г.Body weight: 18-22 g.

Количество животных: 41 мышь плюс запасные.Number of animals: 41 mice plus spares.

3.1.2 . Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

Температура: 20~26°С.Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Опухолевые клетки Panc2.13 поддерживают в среде RMPI1640, дополненной 15% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой и 10 единиц/мл рекомбинантного инсулина человека, при 37°С в атмосфере 5% СО2 в воздухе. Опухолевые клетки стандартным образом субкультивируют два раза в неделю. Клетки, растущие в экспоненциальной фазе роста, собирают и подсчитывают для инокуляции опухоли.Panc2.13 tumor cells were maintained in RMPI1640 medium supplemented with 15% heat-inactivated fetal bovine serum and 10 units/ml recombinant human insulin at 37°C in an atmosphere of 5% CO2 in air. Tumor cells are routinely subcultured twice a week. Cells growing in the exponential growth phase are harvested and counted for tumor inoculation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок опухолевые клетки Panc2.13 (5х 10⁶) с матригелем (1:1) в 0,2 мл PBS для развития опухоли. 41 животное случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 149 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в таблице схемы эксперимента.Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with Panc2.13 tumor cells (5x 10 ⁶ ) with Matrigel (1:1) in 0.2 ml PBS for tumor development. 41 animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 149 mm ³ . The introduction of test samples and the number of animals in each group are presented in the experimental design table.

- 97 045862- 97 045862

Тестируемый образец Test sample Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8245 BCY8245 BCY8245 BCY8245 0,5 о,з 0.5 o, s Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 400 мкл гистидинового буфера Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 560 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 400 µl histidine buffer Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl stock solution with 1 mg/ml BCY8253400 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl stock solution with 1 mg/ml BCY8253560 µl histidine buffer BCY8255 BCY8255 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 400 мкл ацетатного буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 400 µl acetate buffer BCY8255 BCY8255 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 560 мкл ацетатного буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 560 µl acetate buffer 3. Гистидиновый буфер:25мМ гистидин, рН7, 10% сахароза 4. Ацетатный буфер: 50 мМацетат/уксусная кислота, pH 5, 10% сахароза 3. Histidine buffer: 25mM histidine, pH7, 10% sucrose 4. Acetate buffer: 50 mMacetate/acetic acid, pH 5, 10% sucrose

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

В конце исследования опухоли во всех группах извлекали через 2 ч после последнего дозирования.At the end of the study, tumors in all groups were removed 2 hours after the last dosing.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Кривые роста опухоли.5.1. Tumor growth curves.

Кривые роста опухоли представлена на фиг. 19-21.Tumor growth curves are shown in Fig. 19-21.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей Balb/c nude, имеющих ксенотрансплантат Panc2.13, представлен в табл. 18.The average tumor volume over time in female Balb/c nude mice bearing a Panc2.13 xenograft is presented in Table 1. 18.

Таблица 18. Регистрация объема опухоли с течением времениTable 18. Registration of tumor volume over time

Группа. Group. Лечение Treatment Сутки после начала лечения Days after the start of treatment 0 0 2 2 4 4 7 7 9 9 И AND 14 14 1 1 Носитель, qw Media, qw 149±1 2 149±1 2 202±1 2 202±1 2 240±9 240±9 321±1 7 321±1 7 410±2 7 410±2 7 479±3 2 479±3 2 545±1 7 545±1 7 η η BCY8245, BCY8245, 149±3 149±3 160±3 160±3 191±3 191±3 215±5 215±5 242±6 242±6 259±5 259±5 271±5 271±5 2 2 3 мг/кг, qw 3 mg/kg, qw 4 4 3 3 9 9 3 3 2 2 9 9 4 4 BCY8245, BCY8245, 148±4 148±4 170±3 170±3 204±5 204±5 216±5 216±5 236±5 236±5 241±6 241±6 231±5 231±5 3 мг/кг, biw 3 mg/kg, biw 6 6 8 8 7 7 6 6 9 9 0 0 7 7 Л L BCY8245, BCY8245, 149±1 149±1 180±1 180±1 231±3 231±3 242±3 242±3 248±4 248±4 231±3 231±3 238±4 238±4 4 4 5 мг/кг, qw 5 mg/kg, qw 8 8 1 1 3 3 4 4 0 0 7 7 0 0 с With BCY8253, BCY8253, 149±1 149±1 176±2 176±2 230±2 230±2 253±2 253±2 274±2 274±2 303±1 303±1 324±2 324±2 Э E 3 мг/кг, qw 3 mg/kg, qw 9 9 0 0 5 5 0 0 7 7 8 8 1 1 /Г /G BCY8253, BCY8253, 149±4 149±4 175±3 175±3 217±6 217±6 216±5 216±5 222±6 222±6 213±6 213±6 219±6 219±6 О ABOUT 3 мг/кг, biw 3 mg/kg, biw 2 2 9 9 1 1 9 9 4 4 4 4 8 8 7 7 BCY8253, BCY8253, 148±7 148±7 159±8 159±8 195±5 195±5 190±5 190±5 173±1 173±1 168±1 168±1 170±2 170±2

- 98 045862- 98 045862

5 мг/кг, qw 5 mg/kg, qw 1 1 2 2 3 3 8 8 BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 150±3 5 150±3 5 184±3 9 184±3 9 234±5 2 234±5 2 267±5 2 267±5 2 277±5 4 277±5 4 297±5 5 297±5 5 310±5 8 310±5 8 Q Q BCY8255, BCY8255, 149±4 149±4 186±4 186±4 233±5 233±5 247±5 247±5 256±5 256±5 244±4 244±4 251±4 251±4 3 мг/кг, biw 3 mg/kg, biw 1 1 3 3 2 2 3 3 4 4 4 4 4 4 10 10 BCY8255, BCY8255, 150±2 150±2 180±2 180±2 223±3 223±3 239±3 239±3 224±3 224±3 200±1 200±1 209±1 209±1 5 мг/кг, qw 5 mg/kg, qw 7 7 7 7 7 7 9 9 1 1 8 8 9 9

5.3. Анализ ингибирования роста опухоли. Скорость ингибирования роста опухоли для тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом Panc2.13 вычисляли на основе измерения объема опухоли через 14 суток после начала лечения. Таблица 19. Анализ ингибирования роста опухоли Значение Р но Объем T/C^b TGI Группа Лечение сравнению с опухоли (мм³)^а (%) (%) носителем 5.3. Tumor growth inhibition assay. The rate of tumor growth inhibition for test samples in the Panc2.13 xenograft model was calculated based on tumor volume measurements 14 days after the start of treatment. Table 19. Tumor growth inhibition assay P value but Volume T/C ^b TGI Group Treatment compared with tumor (mm ³ ) ^a (%) (%) vehicle 1 1 Носитель, qw Media, qw 545±17 545±17 — — — — — — 2 2 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 271±54 271±54 49,6 49.6 69,2 69.2 /?<0,01 /?<0.01 3 3 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 231±57 231±57 42,3 42.3 79,1 79.1 /?<0,001 /?<0.001 4 4 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 238±40 238±40 43,6 43.6 77,5 77.5 /?<0,001 /?<0.001 5 5 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 324±21 324±21 59,3 59.3 55,9 55.9 /?<0,01 /?<0.01 6 6 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 219±68 219±68 40,2 40.2 82,2 82.2 /?<0,001 /?<0.001 7 7 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 170±23 170±23 31,1 31.1 94,5 94.5 /?<0,001 /?<0.001 8 8 BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 310±58 310±58 56,8 56.8 59,5 59.5 /?<0,01 /?<0.01 9 9 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 251±44 251±44 46,0 46.0 74,3 74.3 /?<0,001 /?<0.001 10 10 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 209±19 209±19 38,2 38.2 85,1 85.1 /?<0,001 /?<0.001

а. Среднее значение ± SEM.A. Mean ± SEM.

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом Panc2.13. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 19-21 и в табл. 18 и 19.This study evaluated the therapeutic efficacy of test samples in a Panc2.13 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 19-21 and in table. 18 and 19.

BCY8245 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=271 мм³, TGI=69,2%,p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=231 мм³, TGI=79,1%, p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=238 мм³, TGI=77,5%, p<0,001) имел значительную противоопу холевую активность.BCY8245 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=271 mm ³ , TGI=69.2%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=231 mm ³ , TGI=79.1%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=238 ^mm3 , TGI=77.5%, p<0.001) had significant antitumor activity.

BCY8253 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=324 мм³, TGI=59,8%, p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=219 мм³, TGI=82,2%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=170 мм³, TGI=94,5%, p<0,001) имел значителную противоопухолевую активность зависимым от дозы или частоты дозирования образом.BCY8253 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=324 ^mm3 , TGI=59.8%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=219 ^mm3 , TGI=82.2%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=170 mm ³ , TGI=94.5%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- or dosing-frequency-dependent manner.

BCY8255 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=310 мм³, TGI=59,5%, p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=251 мм³, TGI=74,3%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=209 мм³, TGI=85,1%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8255 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=310 mm ³ , TGI=59.5%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=251 mm ³ , TGI=74.3%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=209 mm ³ , TGI=85.1%, p<0.001) had significant antitumor activity.

- 99 045862- 99 045862

В этом исследовании животные во всех группах 5 мг/кг qw теряли в среднем более 15% массы тела, особенно животные в группах BCY8253 и BCY8255 5 мг/кг, которые утрачивали более 20% массы тела в ходе режима лечения.In this study, animals in all 5 mg/kg qw groups lost on average more than 15% of body weight, especially animals in the BCY8253 and BCY8255 5 mg/kg groups, which lost more than 20% of body weight during the treatment regimen.

Пример 4. Исследование эффективности in vivo BCY8245, BCY8253 и BCY8255 при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом MDA-MB-468 (модель рака молочной железы).Example 4. In vivo efficacy study of BCY8245, BCY8253 and BCY8255 in the treatment of Balb/c nude mice with MDA-MB-468 xenograft (breast cancer model).

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей исследования является оценка in vivo противоопухолевой эффективности BCY8245, BCY8253 и BCY8255 при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом MDA-MB-468.The objective of the study is to evaluate the in vivo antitumor efficacy of BCY8245, BCY8253, and BCY8255 in the treatment of Balb/c nude mice bearing the MDA-MB-468 xenograft.

2. Схема эксперимента2. Experimental design

Групп a Group a Лечение Treatment η η Доза (мг/кг) Dose (mg/kg) Объем дозировани я (мкл/г) Dosing volume (µl/g) Путь дозирован ня The way is dosed nya Схема Scheme 1 1 Носитель Carrier 5 5 — — 10 10 в/в IV qw qw 2 2 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 3 3 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 4 4 BCY8245 BCY8245 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 5 5 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 6 6 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 7 7 BCY8253 BCY8253 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 8 8 BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 9 9 BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 10 10 BCY8255 BCY8255 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw

3. Материалы.3. Materials.

3.1.1. Животные.3.1.1. Animals.

Вид: Mus Musculus Линия: Balb/c nude.Species: Mus Musculus Line: Balb/c nude.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22 г.Body weight: 18-22 g.

3.1.2. Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

Температура: 20~26°С.Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Опухолевые клетки поддерживали в среде Лейбовитца L-15, дополненной 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой, при 37°С в атмосфере 5% СО2 в воздухе. Опухолевые клетки стандартным образом субкультивировали два раза в неделю. Клетки, растущие в экспоненциальной фазе роста, собирали и подсчитывали для инокуляции опухоли.Tumor cells were maintained in Leibowitz L-15 medium supplemented with 10% heat-inactivated fetal bovine serum at 37°C in an atmosphere of 5% CO2 in air. Tumor cells were routinely subcultured twice a week. Cells growing in the exponential growth phase were collected and counted for tumor inoculation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок опухолевые клетки MDA-MB-468 (10х 106) в 0,2 мл PBS, дополненной 50% матригелем, для формирования опухоли. 41 животное случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 196 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в таблице схемы эксперимента.Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with MDA-MB-468 tumor cells (10 x 106) in 0.2 ml PBS supplemented with 50% Matrigel to form a tumor. 41 animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 196 mm ³ . The introduction of test samples and the number of animals in each group are presented in the experimental design table.

- 100 045862- 100 045862

4.3. Получение состава тестируемого образца.4.3. Obtaining the composition of the test sample.

Тестируемый образец Test sample Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8245 BCY8245 1 1 Растворить 10,56 мг BCY8245 в 10,518 мл гистидинового буфера Dissolve 10.56 mg BCY8245 in 10.518 ml histidine buffer BCY8245 BCY8245 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 1 1 Растворить 11,35 мг BCY8253 в 11,010 мл гистидинового буфера Dissolve 11.35 mg BCY8253 in 11.010 ml histidine buffer BCY8253 BCY8253 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8255 BCY8255 1 1 Растворить 10,78 мг BCY8255 в 10,715 мл ацетатного буфера Dissolve 10.78 mg BCY8255 in 10.715 ml acetate buffer BCY8255 BCY8255 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 400 мкл ацетатного буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 400 µl acetate buffer BCY8255 BCY8255 0,3 0.3 Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 560 мкл ацетатного буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 560 µl acetate buffer 1. Гистидиновый буфер:25мМ гистидин, рН7, 10% сахароза 2. Ацетатный буфер: 50 мМацетат/уксусная кислота, pH 5, 10% сахароза 3. Исходные растворы BCY8245(1 мг/мл), BCY8253(1 мг мл) и BCY8255 (1 мг мл) распределяли в индивидуальные пробирки и хранили при -80°С 1. Histidine buffer: 25mM histidine, pH7, 10% sucrose 2. Acetate buffer: 50 mM Acetate/acetic acid, pH 5, 10% sucrose 3. Stock solutions of BCY8245 (1 mg/ml), BCY8253 (1 mg ml) and BCY8255 (1 mg ml) were distributed into individual tubes and stored at -80°C

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

На 21 сутки исследования проводили взятие плазмы в группах 2, 5 и 8 через 5 мин, 15 мин, 30 мин, 60 мин и 120 мин после последнего дозирования. Опухоли в группах 1, 3, 6 и 9 извлекали через 2 ч после последнего дозирования. Животных в группе 4, 7 и 10 продолжали содержать в течение 21 суток без какого-либо дозирования и опухоли в этих группах извлекали на 42 сутки.On day 21 of the study, plasma was collected in groups 2, 5 and 8 at 5 minutes, 15 minutes, 30 minutes, 60 minutes and 120 minutes after the last dosing. Tumors in groups 1, 3, 6 and 9 were removed 2 hours after the last dosing. Animals in groups 4, 7 and 10 continued to be housed for 21 days without any dosing and tumors in these groups were removed on day 42.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Кривые роста опухоли.5.1. Tumor growth curves.

Кривые роста опухоли представлены на фиг. 22-24.Tumor growth curves are shown in Fig. 22-24.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей Balb/c nude, имеющих ксенотрансплантат MDA-MB-468, представлен в табл. 20 и 21.The average tumor volume over time in female Balb/c nude mice bearing the MDA-MB-468 xenograft is presented in Table 1. 20 and 21.

- 101 045862- 101 045862

Таблица 20. Регистрация объема опухоли с течением времени (сутки с 0 по 21)Table 20. Registration of tumor volume over time (days 0 to 21)

Группа Group Лечение Treatment Сутки после начала лечения Days after the start of treatment 0 0 2 2 4 4 7 7 9 9 И AND 14 14 16 16 18 18 21 21 1 1 Носитель, qw Media, qw 199±6 199±6 217±9 217±9 235±15 235±15 274±14 274±14 291±14 291±14 314±20 314±20 348±24 348±24 374±33 374±33 398±39 398±39 447±39 447±39 2 2 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 194±12 194±12 192±26 192±26 184±20 184±20 131±20 131±20 113=1=17 113=1=17 104±13 104±13 94±25 94±25 81±23 81±23 87±23 87±23 85±31 85±31 3 3 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 195±33 195±33 193±27 193±27 154±20 154±20 103±20 103±20 83±16 83±16 67±14 67±14 49±11 49±11 45±14 45±14 32±12 32±12 22±4 22±4 4 4 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 199±28 199±28 193±11 193±11 135±4 135±4 98±5 98±5 58±5 58±5 49±5 49±5 47±2 47±2 37±4 37±4 35±3 35±3 29±3 29±3 5 5 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 195±17 195±17 190±24 190±24 162±21 162±21 160±28 160±28 138±33 138±33 139±32 139±32 136±25 136±25 106±24 106±24 104±18 104±18 109±19 109±19 6 6 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 199±34 199±34 198±13 198±13 150±21 150±21 119±11 119±11 102±14 102±14 69±13 69±13 70±5 70±5 46±5 46±5 33±5 33±5 29±7 29±7 7 7 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 198±28 198±28 188±32 188±32 142±32 142±32 150±20 150±20 95±13 95±13 69±13 69±13 67±13 67±13 47±8 47±8 42±5 42±5 40±8 40±8 8 8 BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 198±18 198±18 191±15 191±15 172±24 172±24 148±18 148±18 139=1=13 139=1=13 114±22 114±22 140±13 140±13 128±22 128±22 141=1=18 141=1=18 136±31 136±31 9 9 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 197±36 197±36 190±28 190±28 154±18 154±18 109±11 109±11 90±13 90±13 67±3 67±3 64±7 64±7 51±8 51±8 41±5 41±5 31=1=1 31=1=1 10 10 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 194±29 194±29 156±25 156±25 121±19 121±19 109±14 109±14 75±14 75±14 55±8 55±8 66±5 66±5 43±5 43±5 37±1 37±1 42±2 42±2

Группа Group Таблица 21. Регистрация объема опухоли с течением времени (сутки с 23 по 42) Table 21. Registration of tumor volume over time (days 23 to 42) Лечение Treatment Сутки после начала лечения Days after the start of treatment 23 23 25 25 28 28 32 32 35 35 39 39 42 42 4 4 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 35±5 35±5 48±5 48±5 37±7 37±7 28±6 28±6 24±4 24±4 28±6 28±6 26±6 26±6 7 7 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 45±7 45±7 56±8 56±8 60±19 60±19 45±2 45±2 41±10 41±10 48±15 48±15 50±20 50±20 10 10 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 41±4 41±4 57±7 57±7 48±8 48±8 39±9 39±9 39±6 39±6 38±9 38±9 34±8 34±8

Скорость ингибирования роста опухоли для тестируемых образцов в модели ксенотрансплантата MDA-MB-468 вычисляли на основе измерения объема опухоли на 21 сутки после начала лечения.The rate of tumor growth inhibition for test samples in the MDA-MB-468 xenograft model was calculated based on tumor volume measurements at 21 days after the start of treatment.

Таблица 22. Анализ ингибирования роста опухолиTable 22. Tumor growth inhibition assay

Группа Group Лечение Treatment Объем опухоли (мм³)^а Tumor volume (mm ³ ) ^a Т/С^ь T/S ^b Значиние Р по сравнению с носителем P value compared to vehicle (%) (%) TGI (%) TGI (%) 1 1 Носитель, qw Media, qw 447±39 447±39 -- -- -- -- - - 2 2 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 85±31 85±31 18,9 18.9 144,2 144.2 /?<0,001 /?<0.001 3 3 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 22±4 22±4 4,9 4.9 169,8 169.8 //<0,001 //<0.001 4 4 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 29±3 29±3 6,6 6.6 168,4 168.4 //<0,001 //<0.001 5 5 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 109±19 109±19 24,4 24.4 134,7 134.7 //<0,001 //<0.001 6 6 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 29±7 29±7 6,6 6.6 168,3 168.3 //<0,001 //<0.001 7 7 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 40±8 40±8 8,9 8.9 163,9 163.9 //<0,001 //<0.001 8 8 BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 136±31 136±31 30,4 30.4 125,1 125.1 //<0,001 //<0.001 9 9 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 31±1 31±1 6,9 6.9 166,8 166.8 //<0,001 //<0.001 10 10 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 42±2 42±2 9,5 9.5 161,3 161.3 //<0,001 //<0.001

- 102 045862- 102 045862

а. Среднее значение ± SEM.A. Mean ± SEM.

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом MDA-MB-468. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 22-24 и в табл. 20-22.This study evaluated the therapeutic efficacy of test samples in the MDA-MB-468 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 22-24 and in table. 20-22.

BCY8245 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=85 мм^{3 4}, TGI=144,2%, p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=22 мм³, TGI=169,8%, p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=29 мм³, TGI=168,4%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы или частоты дозы образом.BCY8245 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=85 mm ^{3 4} , TGI=144.2%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=22 mm ³ , TGI=169.8%, p <0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=29 mm ³ , TGI=168.4%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- or dose-frequency-dependent manner.

BCY8253 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=109 мм³, TGI=134,7%, p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=29 мм³, TGI=168,3%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=40 мм³, TGI=163,9%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы или частоты дозы образом.BCY8253 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=109 ^mm3 , TGI=134.7%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=29 ^mm3 , TGI=168.3%, p< 0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=40 mm ³ , TGI=163.9%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- or dose-frequency-dependent manner.

BCY8255 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=136 мм³, TGI=125,1%, p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=31 мм³, TGI=166,8%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=42 мм³, TGI=161,3%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы или частоты дозы образом.BCY8255 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=136 ^mm3 , TGI=125.1%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=31 ^mm3 , TGI=166.8%, p< 0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=42 mm ³ , TGI=161.3%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- or dose-frequency-dependent manner.

Дозирование в группах 5 мг/кг прекращали с 21 суток, опухоли не демонстрировали никакого рецидива в ходе мониторинга в течение дополнительных 3 недель.Dosing in the 5 mg/kg groups was stopped at day 21, and tumors did not show any recurrence when monitored for an additional 3 weeks.

В этом исследовании BCY8253 и BCY8255 5 мг/кг вызывали выраженное снижение массы тела, среди них мышь 10-1 в группе 5 мг/кг BCY8253 была найдена мертвой на 20 сутки.In this study, BCY8253 and BCY8255 5 mg/kg caused a significant decrease in body weight, among them, mouse 10-1 in the BCY8253 5 mg/kg group was found dead on the 20th day.

Пример 5: Тест эффективности BCY8549, BCY8550, BCY8783 и BCY8784 in vivo при лечении мышей BALB/c nude с ксенотрансплантатом NCI-H292 (модель немелкоклеточного рака легкого (NSCLC))Example 5: In Vivo Efficacy Test of BCY8549, BCY8550, BCY8783 and BCY8784 in the Treatment of NCI-H292 Xenograft BALB/c Nude Mice (Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC) Model)

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей исследования является оценка in vivo противоопухолевой эффективности BCY8549 при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом NCI-H292.The objective of the study is to evaluate the in vivo antitumor efficacy of BCY8549 in the treatment of NCI-H292 xenograft Balb/c nude mice.

2. Схема эксперимента__________________________________________________________2. Experimental design__________________________________________________________

Групп а Group A Лечение Treatment η η Доза (мг/кг) Dose (mg/kg) Объем дозиировани я (мкл/г) Dosing volume (µl/g) Путь дозирован ня The way is dosed nya Схема Scheme 1 1 Носитель Carrier 4 4 — — 10 10 в/в IV qw qw 2 2 BCY8549 BCY8549 3 3 3 3 10 10 в/в IV qw qw 3 3 BCY8550 BCY8550 3 3 3 3 10 10 в/в IV qw qw 4 4 BCY8783 BCY8783 3 3 3 3 10 10 в/в IV qw qw 5 5 BCY8784 BCY8784 3 3 3 3 10 10 в/в IV qw qw

3. Материалы.3. Materials.

3.1.1. Животные.3.1.1. Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: Balb/c nude.Line: Balb/c nude.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки Масса тела: 18-22 г.Gender: females Body weight: 18-22 g.

Количество животных: 43 мыши плюс запасные.Number of animals: 43 mice plus spares.

Поставщик животных: Shanghai Lingchang Biotechnology Experimental Animal Co. LtdAnimal supplier: Shanghai Lingchang Biotechnology Experimental Animal Co. Ltd

3.1.2. Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

Мышей содержали в индивидуально вентилируемых клетках при постоянной температуре и влажности с 3 или 4 животными в каждой клетке.Mice were housed in individually ventilated cages at constant temperature and humidity with 3 or 4 animals per cage.

Температура: 20~26°С.Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Опухолевые клетки NCI-H292 поддерживали in vitro в качестве культуры в виде монослоя в средеNCI-H292 tumor cells were maintained in vitro as a monolayer culture in medium

- 103 045862- 103 045862

RPMI-1640, дополненной 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой, при 37°С в атмосфере 5% СО2 в воздухе. Опухолевые клетки стандартным образом субкультивировали два раза в неделю посредством обработки трипсином-EDTA. Клетки, растущие в экспоненциальной фазе роста, собирали и подсчитывали для инокуляции опухоли.RPMI-1640 supplemented with 10% heat-inactivated fetal calf serum at 37°C in an atmosphere of 5% CO2 in air. Tumor cells were routinely subcultured twice a week by trypsin-EDTA treatment. Cells growing in the exponential growth phase were collected and counted for tumor inoculation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок опухолевые клетки NCI-H292 (10х10⁶) в 0,2 мл PBS для развития опухоли. 43 животных случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 168 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в таблице схемы эксперимента.Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with NCI-H292 tumor cells (10 x 10 ⁶ ) in 0.2 ml PBS for tumor development. 43 animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 168 mm ³ . The introduction of test samples and the number of animals in each group are presented in the experimental design table.

Получение состава тестируемого образца_______________________________________Obtaining the composition of the test sample________________________________________________

Лечение Treatment Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Лечение Treatment Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8549 BCY8549 1 1 Растворить 2 мг BCY8549 посредством 1914 мкл буфера для носителя Dissolve 2 mg BCY8549 with 1914 µl vehicle buffer BCY8549 BCY8549 0,3 0.3 Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8549 посредством 560 мкл буфера для носителя Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8549 stock solution with 560 µl of vehicle buffer BCY8550 BCY8550 1 1 Растворить 1,1 mtBCY8550 в 1091 мк 10% Kolliphor, 50 мМ Hepes, pH 7 Dissolve 1.1 mtBCY8550 in 1091 μ 10% Kolliphor, 50 mM Hepes, pH 7 BCY8550 BCY8550 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8550 посредством 560 мкл 10% Kolliphor, 50 мМ Hepes, pH 7 Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8550 stock solution with 560 µl 10% Kolliphor, 50 mM Hepes, pH 7 BCY8783 BCY8783 1 1 Растворить 1 мг BCY8783 в 968 мкл буфера для носителя Dissolve 1 mg BCY8783 in 968 µl vehicle buffer BCY8783 BCY8783 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8783 560 мкл буфера для носителя Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8783 stock solution with 560 µl of vehicle buffer BCY8784 BCY8784 1 1 Растворить 1,2 мг BCY8784 в 1148 мкл буфера для носителя Dissolve 1.2 mg BCY8784 in 1148 µl vehicle buffer BCY8784 BCY8784 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8784 560 мкл буфера для носителя Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8784 stock solution with 560 µl of vehicle buffer

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

В конце исследования проводили взятие плазмы мышей в группах 2 и 3 через 5, 15, 30, 1 и 2 ч после последнего дозирования.At the end of the study, plasma was collected from mice in groups 2 and 3 at 5, 15, 30, 1 and 2 hours after the last dosing.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Кривые роста опухоли.5.1. Tumor growth curves.

Кривые роста опухоли представлены на фиг. 25-28.Tumor growth curves are shown in Fig. 25-28.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей Balb/c nude, имеющих ксенотрансплантат NCI-H292, представлен в табл. 23.The average tumor volume over time in female Balb/c nude mice bearing the NCI-H292 xenograft is presented in Table 1. 23.

Таблица 23. Регистрация объема опухоли с течением времениTable 23. Registration of tumor volume over time

ГруппGroup

а A 0 0 2 2 4 4 7 7 9 9 11 eleven 14 14 Носитель, Carrier, 168±1 168±1 297±4 297±4 362±5 362±5 460±6 460±6 548±6 548±6 697±10 697±10 843±15 843±15 1 1 qw qw 6 6 8 8 8 8 2 2 9 9 2 2 2 2 BCY8549, BCY8549, 168±3 168±3 187±3 187±3 164±3 164±3 205±5 205±5 234±5 234±5 2 2 3 мг/кг, qw 3 mg/kg, qw 0 0 6 6 1 1 0 0 7 7 240±98 240±98 251±66 251±66 BCY8550, BCY8550, 167±1 167±1 208±2 208±2 237±1 237±1 324±3 324±3 421±3 421±3 3 3 3 мг/кг, qw 3 mg/kg, qw 8 8 1 1 6 6 5 5 5 5 489±44 489±44 545±77 545±77 BCY8783, BCY8783, 167±2 167±2 182±2 182±2 161±4 161±4 137±1 137±1 135±2 135±2 4 4 3 мг/кг, qw 3 mg/kg, qw 8 8 7 7 0 0 9 9 2 2 97±20 97±20 97±19 97±19 BCY8784, BCY8784, 167±3 167±3 165±2 165±2 Ш±1 Ш±1 121±1 121±1 5 5 3 мг/кг, qw 3 mg/kg, qw 6 6 8 8 9 9 2 2 123±8 123±8 99±10 99±10 94±7 94±7

- 104 045862- 104 045862

5.3. Анализ ингибирования роста опухоли. Скорость ингибирования роста опухоли для тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом NCI-H292 вычисляли на основе измерения объема опухоли на 14 сутки после начала лечения. Таблица 24. Анализ ингибирования роста опухоли 5.3. Tumor growth inhibition assay. The rate of tumor growth inhibition for test samples in the NCI-H292 xenograft model was calculated based on tumor volume measurements at 14 days after the start of treatment. Table 24. Tumor growth inhibition assay Г руппа Group Лечение Treatment Объем Volume Значение Р P value опухоли (мм³)^а tumors (mm ³ ) ^a Т/С^ь T/S ^b (%) (%) TGI (%) TGI (%) 1 1 Носитель, qw Media, qw 843±152 843±152 - - - - - - 2 2 BCY8549, 3 мг/кг, qw BCY8549, 3 mg/kg, qw 251±66 251±66 29,8 29.8 87,7 87.7 /?<0,05 /?<0.05 3 3 BCY8550, 3 мг/кг, qw BCY8550, 3 mg/kg, qw 545±77 545±77 64,7 64.7 43,9 43.9 /?>0,05 /?>0.05 4 4 BCY8783, 3 мг/кг, qw BCY8783, 3 mg/kg, qw 97±19 97±19 И,5 I.5 110,3 110.3 /?<0,01 /?<0.01 5 5 BCY8784, 3 мг/кг, qw BCY8784, 3 mg/kg, qw 94±7 94±7 И,1 I,1 110,8 110.8 /?<0,01 /?<0.01

а. Среднее значение ± SEM.A. Mean ± SEM.

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность BCY в модели с ксенотрансплантатом NCI-H292. Измеренный объем опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлен на фиг. 25-28 и в табл. 23 и 24.This study evaluated the therapeutic efficacy of BCY in the NCI-H292 xenograft model. The measured tumor volume in all treatment groups at various time points is presented in FIG. 25-28 and in table. 23 and 24.

Средний размер опухоли у мышей, которым вводили носитель, достигал 843 мм³ на 14 сутки. BCY8549 в дозе 3 мг/кг продемонстрировал значительную противоопухолевую активность. В этом исследовании у всех мышей хорошо сохранялась масса тела.The average tumor size in mice treated with vehicle reached 843 ^mm3 on day 14. BCY8549 at a dose of 3 mg/kg demonstrated significant antitumor activity. In this study, all mice maintained good body weight.

Пример 6. Исследование ассоциации между варьированием числа копий (CNV) и экспрессией гена нектина-4 для множества типов опухолей.Example 6: Study of the association between copy number variation (CNV) and nectin-4 gene expression in multiple tumor types.

Способы.Ways.

1. Выбрать все исследования на cBioPortal (http://www.cbioportal.org/) и провести поиск для нектина-4.1. Select all studies on cBioPortal (http://www.cbioportal.org/) and search for nectin-4.

(a) Удалить предварительные исследования.(a) Remove preliminary studies.

(b) Отменить выбор исследований с перекрывающимися образцами для предотвращения смещения выборки (на основе предупреждения cBioPortal) - всегда оставлять исследования PanCancer, если есть такая возможность.(b) Deselect studies with overlapping samples to prevent sample bias (based on cBioPortal warning) - always retain PanCancer studies if possible.

(c) Исследования, отобранные для анализа (табл. 25).(c) Studies selected for analysis (Table 25).

- 105 045862- 105 045862

Таблица 25. Исследования, проанализированные из cBioPortal, и исследуемые элементыTable 25. Studies analyzed from cBioPortal and elements studied

Название исследование Title of the study Элементы Elements Рак молочной железы (METABRIC, Nature 2012 & Nat Commun 2016) Breast Cancer (METABRIC, Nature 2012 & Nat Commun 2016) Экспрессия мРНК (микрочип) mRNA expression (microarray) Инвазивная карцинома молочной железы (TCGA, PanCancer Atlas) Invasive breast carcinoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Карцинома эндометрия тела матки (TCGA, PanCancer Atlas) Endometrial carcinoma of the uterine body (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Карцинома уротелия мочевого пузыря (TCGA, PanCancer Atlas) Urothelial carcinoma of the bladder (TCGA, PanCancer Atlas) RSEM (нормализованная по париям из HiSeq_RNASeqV2) RSEM (normalized to pariahs from HiSeq_RNASeqV2) Аденокарцинома легкого (TCGA, PanCancer Atlas) Lung adenocarcinoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализованная по париям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) mRNA expression, RSEM (normalized to pariahs from Illumina HiSeq_RNASeqV2) Плоскоклеточная карцинома шейки матки (TCGA, PanCancer Atlas) Squamous cell carcinoma of the cervix (TCGA, PanCancer Atlas) RSEM (нормализованная по париям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) RSEM (normalized to pariahs from Illumina HiSeq_RNASeqV2) Плоскоклеточная карцинома легкого (TCGA, PanCancer Atlas) Squamous cell carcinoma of the lung (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Плоскоклеточная карцинома головы и шеи (TCGA, PanCancer Atlas) Squamous cell carcinoma of the head and neck (TCGA, PanCancer Atlas) мРНК Expression, RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) Expression mRNA, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeq_RNASeqV2) Аденокарцинома поджелудочной железы (TCGA, PanCancer Atlas) Pancreatic adenocarcinoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Карцинома щитовидной железы (TCGA, PanCancer Atlas) Thyroid carcinoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Аденокарцинома толстого кишечника (TCGA, PanCancer Atlas) Colon adenocarcinoma (TCGA, PanCancer Atlas) RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) RSEM (batch normalized from Illumina HiSeq_RNASeqV2)

- 106 045862- 106 045862

Тимома (TCGA, PanCancer Atlas) Thymoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Саркома (TCGA, PanCancer Atlas) Sarcoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Аденокарцинома желудка (TCGA, PanCancer Atlas) Adenocarcinoma of the stomach (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Аденокарцинома предстательной железы (TCGA, PanCancer Atlas) Prostate adenocarcinoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) mRNA Expression, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeq_RNASeqV2) Хромофобная аденокарцинома почки (TCGA, PanCancer Atlas) Chromophobe kidney adenocarcinoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) mRNA Expression, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeq_RNASeqV2) Аденокарцинома прямой кишки (TCGA, PanCancer Atlas) Colon adenocarcinoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Метастазирующий рак предстательной железы, SU2C/PCF Dream Team (Robinson et al., Cell 2015) Metastatic prostate cancer, SU2C/PCF Dream Team (Robinson et al., Cell 2015) Экспрессия/улавливание мРНК (RNA Seq RPKM) mRNA expression/capture (RNA Seq RPKM) Феохромацитома и параганглиома (TCGA, PanCancer Atlas) Pheochromatocytoma and paraganglioma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Светлоклеточная карцинома почки (TCGA, PanCancer Atlas) Clear cell carcinoma of the kidney (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) mRNA Expression, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeq_RNASeqV2) Аденокарцинома предстательной железы (Fred Hutchinson CRC, Nat Med 2016) Adenocarcinoma of the prostate (Fred Hutchinson CRC, Nat Med 2016) Экспрессия мРНК mRNA expression Аденокарцинома ободочной и прямой кишки (TCGA, Nature 2012) Colon and rectal adenocarcinoma (TCGA, Nature 2012) RNA Seq RPKM RNA Seq RPKM

- 107 045862- 107 045862

Серозная цистаденокарцинома яичника (TCGA, PanCancer Atlas) Serous cystadenocarcinoma of the ovary (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Папиллярная карцинома почки (TCGA, PanCancer Atlas) Papillary kidney carcinoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) mRNA Expression, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeq_RNASeqV2) Низкодифференцировнная глиома головного мозга (TCGA, PanCancer Atlas) Poorly differentiated glioma brain (TCGA, PanCancer Atlas) RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) RSEM (batch normalized from Illumina HiSeq_RNASeqV2) Аденокарцинома пищевода (TCGA, PanCancer Atlas) Esophageal adenocarcinoma (TCGA, PanCancer Atlas) RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) RSEM (batch normalized from Illumina HiSeq_RNASeqV2) Карцинома надпочечников (TCGA, PanCancer Atlas) Adrenal carcinoma (TCGA, PanCancer Atlas) RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) RSEM (batch normalized from Illumina HiSeq_RNASeqV2) Мультиформная глиобластома (TCGA, PanCancer Atlas) Glioblastoma multiforme (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) mRNA Expression, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeq_RNASeqV2) Аденокарцинома предстательной железы (MSKCC, Cancer Cell 2010) Prostate adenocarcinoma (MSKCC, Cancer Cell 2010) Экспрессия мРНК mRNA expression Карциносаркома матки (TCGA, PanCancer Atlas) Uterine carcinosarcoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Острый миелоидный лейкоз (TCGA, PanCancer Atlas) Acute myeloid leukemia (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) mRNA Expression, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeq_RNASeqV2) Кожная меланома (TCGA, PanCancer Atlas) Cutaneous melanoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Мезотелиома (TCGA, PanCancer Atlas) Mesothelioma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Холангиокарцинома (TCGA, PanCancer Atlas) Cholangiocarcinoma (TCGA, PanCancer Atlas) RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) RSEM (batch normalized from Illumina HiSeq_RNASeqV2)

- 108 045862- 108 045862

Педиатрический острый лимфоидный лейкоз - фаза II (TARGET, 2018) Pediatric acute lymphoid leukemia - phase II (TARGET, 2018) Нектин-4: экспрессия мРНК (RNA-Seq RPKM) Nectin-4: mRNA expression (RNA-Seq RPKM) Диффузная крупноклеточная В- клеточная лимфома (TCGA, PanCancer Atlas) Diffuse large cell B- cellular lymphoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) mRNA Expression, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeq_RNASeqV2) Энциклопедия линий злокачественных клеток (Novartis/Broad, Nature 2012) Encyclopedia of Malignant Cell Lines (Novartis/Broad, Nature 2012) Экспрессия мРНК (микрочип) mRNA expression (microarray) Увеальная меланома (TCGA, PanCancer Atlas) Uveal melanoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Педиатрическая опухоль Вильмса (TARGET, 2018) Pediatric Wilms tumor (TARGET, 2018) Нектин-4: экспрессия мРНК (RNA-Seq RPKM) Nectin-4: mRNA expression (RNA-Seq RPKM) Опухоли мужских половых клеток (TCGA, PanCancer Atlas) Tumors of male germ cells (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализованная по партиям/объединенная из Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 mRNA expression, batch-normalized/pooled from Illumina HiSeq_RNASeqV2 syn4976369 Печеночно-клеточная карцинома печени (TCGA, PanCancer Atlas) Hepatocellular carcinoma of the liver (TCGA, PanCancer Atlas) Нектин-4: экспрессия мРНК, RSEM (нормализованная по партиям из Illumina HiSeq_RNASeqV2) Nectin-4: mRNA expression, RSEM (normalized to batches from Illumina HiSeq_RNASeqV2)

2. Экспортировать CNV и данные экспрессии РНК из cBioPortal.2. Export CNV and RNA expression data from cBioPortal.

3. Протестировать, ассоциированы ли CNV на значимых уровнях с изменениями экспрессии мРНК для нектина-4 (log2 не применялся).3. Test whether CNVs are associated at significant levels with changes in mRNA expression for nectin-4 (log2 was not used).

(а) Провести непараметрический тест Крускала-Уоллиса в GraphPad Prism (7.04) и R/R studio (порог для значимости: р<0,01).(a) Perform a nonparametric Kruskal-Wallis test in GraphPad Prism (7.04) and R/R studio (threshold for significance: p<0.01).

(i) GraphPad Prism: создать таблицу из столбцов, провести непараметрический тест без подбора или формирования пар и не предполагая гауссово распределение.(i) GraphPad Prism: Create a table of columns, run a nonparametric test without fitting or pairing, and without assuming a Gaussian distribution.

(ii) Пакеты программ, используемые в R:(ii) Software packages used in R:

1. XLConnect.1. XLConnect.

2. dplyr.2. dplyr.

3. Критерий суммы рангов Крускала-Уоллиса: критерий Крускала.3. Kruskal-Wallis rank sum test: Kruskal test.

4. Внести поправку на множественные сравнения (включая все возможные сравнения, даже если n=1 в пределах группы) в R/Rstudio с использованием критерия Данна (пороговое значение для значимости: р<0,025).4. Correct for multiple comparisons (including all possible comparisons, even if n=1 within a group) in R/Rstudio using Dunn's test (threshold for significance: p<0.025).

(а) критерий Данна со способом множестванных сравнений = bonferonni.(a) Dunn's test with multiple comparison method = bonferonni.

Результаты.Results.

Результаты представлены в табл. 26 ниже. Среди 41 общедоступного набора данных TCGA, в которых описаны как данные CNV, так и данные экспрессии мРНК нектина-4 для опухолей, существует множество показаний, где были описаны случаи либо прироста числа копий нектина-4 (2-3 копии), либо их амплификации (>3 копий). Кроме того, было продемонстрировано, что отдельные случаи имеют мелкие делеции (< 2 копий) с редкими сообщениями об опухолях, содержащих крупные делеции, соответствующие потере более чем 1 копии или биаллельной потере нектина-4. Сообщения об обнаружении амплификации наиболее часто были для рака молочной железы (10-22%), рака мочевого пузыря (20%), рака легкого (5-7%) и печеночно-клеточной карциномы (8%). Показаниями, где наиболее часто обнаруживалась амплификация, были хромофобная опухоль почек (77%), светлоклеточная карцинома почки (RCC) (6,5%), саркома (10%), рак толстого кишечника (10%), рак головы и шеи (7%) и плосоклеточный рак легкого. Эти данные указывают на то, что существует диапазон CNV в пределах и среди опухолевых показаний и разнообразие паттернов числа копий среди различных опухолей.The results are presented in table. 26 below. Among the 41 publicly available TCGA datasets that describe both CNV and nectin-4 mRNA expression data for tumors, there are many indications where cases of either nectin-4 copy number gain (2-3 copies) or amplification have been described (>3 copies). Additionally, individual cases have been demonstrated to have small deletions (<2 copies), with rare reports of tumors containing large deletions consistent with loss of more than 1 copy or biallelic loss of nectin-4. Amplifications were most frequently reported for breast cancer (10–22%), bladder cancer (20%), lung cancer (5–7%), and hepatocellular carcinoma (8%). The indications where amplification was most frequently detected were chromophobe renal tumor (77%), renal clear cell carcinoma (RCC) (6.5%), sarcoma (10%), colon cancer (10%), and head and neck cancer (7). %) and squamous cell lung cancer. These data indicate that there is a range of CNVs within and among tumor indications and diversity in copy number patterns among different tumors.

В дополнение к CNV в пределах набора данных TCGA срединный уровень экспрессии мРНК нектина-4 на опухоль охватывает диапазон приблизительно 2¹⁰. Таким образом, учитывая диапазон уровней экспрессии мРНК нектина-4 и CNV, наблюдаемые среди и в пределах типов опухолей, проводили статистическое тестирование для идентификации потенциальных ассоциаций между уровнями нектина-4 мРНК и CNV для нектина-4 в пределах индивидуальных наборов данных/показаний TCGA. Опухоли в соответствии с показаниями относили к 1 из 5 классов:In addition to CNVs, within the TCGA dataset, the median nectin-4 mRNA expression level per tumor spanned a range of approximately 2 ¹⁰ . Therefore, given the range of nectin-4 mRNA expression levels and CNVs observed among and within tumor types, statistical testing was performed to identify potential associations between nectin-4 mRNA levels and nectin-4 CNVs within individual datasets/TCGA scores. Tumors, according to indications, were classified into 1 of 5 classes:

a) крупная делеция;a) large deletion;

- 109 045862- 109 045862

b) мелкая делеция;b) small deletion;

c) диплоидная;c) diploid;

d) прирост; илиd) increase; or

e) амплификация.e) amplification.

Затем проводили тест Крускала-Уоллиса для определения того, различались ли распределения величин экспрессии мРНК на класс между классами (Р < 0,01). Для наборов данных TCGA с Р < 0,01 и для идентификации того, какие классы отличались друг от друга, проводили апостериорное тестирование посредством вычисления Z-статистики с вычисленными скорректированными значениями Р (Bonferonni). Для простоты интерпретации рассматривали попарные сравнения против диплоидных на показание (хотя были включены все значения Р для попарных сравнений). 18/41 исследований TCGA удовлетворяли Р <0,01 для теста Крускала-Уоллиса и Р < 0,025 для Бонферрони для сравнений прирост против диплоидного и/или амплификация против диплоидного, указывая на ассоциации увеличенной экспрессии мРНК нектина-4 мРНК с увеличенным количеством копий нектина-4. Эти 18 исследований соответствовали 14 независимым гистологиям опухоли: молочной железы, матки, мочевого пузыря, аденокарциномы легкого, плоскоклеточной карциномы легкого, шейки матки, головы и шеи, поджелудочной железы, ободочной и прямой кишки, тимомы, саркомы, светлоклеточной карциномы почки (RCC) и желудка.The Kruskal-Wallis test was then performed to determine whether the distributions of mRNA expression values per class differed between classes (P < 0.01). For TCGA datasets with P < 0.01 and to identify which classes differed from each other, post hoc testing was performed by calculating the Z statistic with the calculated adjusted P values (Bonferonni). For ease of interpretation, pairwise versus diploid comparisons per indication were considered (although all P values for pairwise comparisons were included). 18/41 TCGA studies met P < 0.01 for the Kruskal-Wallis test and P < 0.025 for Bonferroni for gain versus diploid and/or amplification versus diploid comparisons, indicating associations of increased nectin-4 mRNA expression with increased nectin-4 copy number. 4. These 18 studies corresponded to 14 independent tumor histologies: breast, uterine, bladder, lung adenocarcinoma, lung squamous cell carcinoma, cervical, head and neck, pancreatic, colorectal, thymoma, sarcoma, renal clear cell carcinoma (RCC), and stomach.

Кроме того, 6 исследований имели сниженную экспрессию мРНК, ассоциированную со снижением числа копий. Четыре из этих шести исследований не только продемонстрировали ассоциацию между снижением CNV и сниженной экспрессией, но также сообщили о увеличении CNV, ассоциированным с высокой экспрессией: желудка, плоскоклеточный легкого, толстого кишечника и щитовидной железы.In addition, 6 studies had decreased mRNA expression associated with decreased copy number. Four of these six studies not only demonstrated an association between decreased CNVs and decreased expression, but also reported increased CNVs associated with high expression: gastric, lung squamous, colon, and thyroid.

Между тем, для двух показаний, хромофобный рак почки и рак предстательной железы, описаны только ассоциации со снижением CNV и низким содержанием транскрипта. Кроме того, существовало отдельное исследование рака предстательной железы (метастазирующий рак предстательной железы, SU2C/PCF Dream Team (Robinson et al., Cell 2015)), которое показало прирост числа копий, ассоциированный с высокой экспрессией (относительно диплоидного).Meanwhile, for two indications, chromophobe kidney cancer and prostate cancer, only associations with decreased CNV and low transcript abundance have been described. Additionally, there was a separate study in prostate cancer (metastatic prostate cancer, SU2C/PCF Dream Team (Robinson et al., Cell 2015)) that showed copy number gain associated with high expression (relative to diploid).

Эти наблюдения снижения CNV в опухоли и увеличения уровней экспрессии мРНК могут отражать механизм для экспрессии белка нектина-4 в опухоли при тех показаниях, при которых наблюдались такие ассоциации. Очевидно, существуют показания, где CNV, по-видимому, не влияли на уровни экспрессии мРНК в прогнозируемом паттерне, такие как печеночно-клеточная карцинома. Было продемонстрировано, что доклиническая эффективность in vivo определенных бициклических конъюгатов лекарственного средства против нектина-4 коррелирует с экспрессией белка нектина-4 при определении посредством IHC. Таким образом, если CNV нектина-4 в опухоли ассоциирован с уровнями мРНК и прогнозируемыми уровнями экспрессии белков, формально является возможным, что пациенты с опухолями, содержащими увеличение количества копий (прирост или амплификация), более вероятно могут отвечать на бициклические конъюгаты лекарственного средства против нектина-4 по изобретению. Если бы можно было идентифицировать пациентов с увеличенным CNV нектина-4, тогда эту информацию можно было бы использовать для выбора пациентов для лечения бициклическими конъюгатами лекарственного средства против нектина-4 по изобретению.These observations of decreased tumor CNV and increased mRNA expression levels may reflect a mechanism for tumor nectin-4 protein expression in the indications for which such associations were observed. Clearly, there are indications where CNVs did not appear to influence mRNA expression levels in the predicted pattern, such as hepatocellular carcinoma. The preclinical in vivo efficacy of certain bicyclic anti-nectin-4 drug conjugates has been demonstrated to correlate with nectin-4 protein expression as determined by IHC. Thus, if tumor nectin-4 CNV is associated with mRNA levels and predicted protein expression levels, it is formally possible that patients with tumors containing copy number gain (gain or amplification) may be more likely to respond to bicyclic anti-nectin drug conjugates -4 according to the invention. If patients with an increased nectin-4 CNV could be identified, then this information could be used to select patients for treatment with the bicyclic anti-nectin-4 drug conjugates of the invention.

Таблица 26. Результаты исследования ассоциации между варьированием числа копией (CNV) и экспрессией гена для нектина-4Table 26. Results of an association study between copy number variation (CNV) and gene expression for nectin-4

Количество образцов/группа (п=Х) Number of samples/group (n=X) Критерий КрускалаУоллиса Kruskal-Wallis test Попарное сравнение, Z-статистика (скорректированное значение р), Бонферрони Pairwise comparison, Z-statistic (adjusted p-value), Bonferroni Назван не исследо вания Not named research Элементы Elements Крупн ая делеци я Large deletion Мелк ая делец ня Small businessman Диплоид ный Diploid Прир ост Growth Амплифи кация Amplification Статист ика Крускал аУоллиса Statistician Kruskal and Wallis Значе ние р p value Крупна я делеция диплоид ный I have a large deletion diploid Диплои дный мелкая делеция Diploid small deletion Диплои дный Прирос т Diploid Gain t Ами лиф икац иядипл оидн ый Ami liqac idiploid Рак молочно й железы (МЕТА BRIC, Nature 2012 & Nat Commun 2016) Breast cancer (META BRIC, Nature 2012 & Nat Commun 2016) Экспрессия мРНК (микрочип) mRNA expression (microarray) 0 0 И AND 745 745 706 706 404 404 380,4 380.4 < 2,2е- 16 < 2.2e- 16 N/A N/A 0,568782 (1,0000) 0.568782 (1.0000) 11,89096 (0,0000) * 11.89096 (0.0000) * 18,85 085 (0,00 00)* 18.85 085 (0.00 00)*

- 110 045862- 110 045862

Инвазив ная карцино ма молочно й железы (TCGA, РапСапс er Atlas) Invasive breast carcinoma (TCGA, RapCaps er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 0 0 13 13 244 244 640 640 97 97 219,5 219.5 < 2,2е- 16 < 2.2e- 16 N/A N/A 1,186089 (0,7068) 1.186089 (0.7068) 12,30176 (0,0000) * 12.30176 (0.0000) * 12,07 432 (0,00 00)* 12.07 432 (0.00 00)* Карцино ма эндомет рия тела матки (TCGA, РапСапс er Atlas) Carcinoma of the endometrium of the uterine body (TCGA, RapCaps er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 0 0 5 5 274 274 210 210 18 18 76,392 76,392 < 2,2е- 16 < 2.2e- 16 N/A N/A 1,130854 (0,7743) 1.130854 (0.7743) 7,274308 (0,0000) * 7.274308 (0.0000) * 5,601 260 (0,00 00)* 5.601 260 (0.00 00)* Карцино ма уротели Carcino ma uroteli RSEM (нормализов анная по RSEM (normalized by 0 0 16 16 171 171 145 145 70 70 67,078 67,078 1,80Е- 14 1.80E- 14 N/A N/A 0,060907 (1,0000) 0.060907 (1.0000) 3,323839 (0,0027) 3.323839 (0.0027) 8,054 269 8,054 269 я мочевог о пузыря (TCGA, РапСапс er Atlas) I urinary about bubble (TCGA, RapSaps er Atlas) париям из HiSeqRNA SeqV2) pariahs from HiSeqRNA SeqV2) * * (0,00 00)* (0.00 00)* Аденока рцинома легкого (TCGA, РапСапс er Atlas) Pulmonary adenocarcinoma (TCGA, RapCaps er Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализов анная по париям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) mRNA expression, RSEM (normalized to pariahs from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 0 0 9 9 129 129 332 332 33 33 59,578 59,578 7,24Е- 13 7.24E- 13 N/A N/A 0,237200 (1,0000) 0.237200 (1.0000) 6,244156 (0,0000) * 6.244156 (0.0000) * 6,247 228 (0,00 00)* 6.247 228 (0.00 00)* Плоскок леточна я карцино ма шейки матки (TCGA, Squamous lethal carcinoma of the cervix (TCGA, RSEM (нормализов анная по париям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) RSEM (normalized to pariahs from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 0 0 7 7 115 115 147 147 6 6 51,372 51,372 4,08Е- 11 4.08E- eleven N/A N/A 1,093749 (0,8222) 1.093749 (0.8222) 6,170067 (0,0000) * 6.170067 (0.0000) * 3,815 296 (0,00 04)* 3.815 296 (0.00 04)*

- 111 045862- 111 045862

PanCanc er Atlas) PanCanc er Atlas) Плоскок леточна я карцино ма легкого (TCGA, PanCanc er Atlas) Squamous lung carcinoma (TCGA, PanCanc er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 0 0 22 22 199 199 222 222 23 23 42,128 42.128 3,77Е- 09 3.77E- 09 N/A N/A 2,819759 (0,0144) * 2.819759 (0.0144) * 3,034709 (0,0072) * 3.034709 (0.0072) * 4,860 629 (0,00 00)* 4.860 629 (0.00 00)* Плоскок леточна я карцино ма головы и шеи (TCGA, PanCanc er Atlas) Squamous lethal carcinoma of the head and neck (TCGA, PanCanc er Atlas) мРНК Expression, RSEM (нормализов анная по партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) Expression mRNA, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 0 0 32 32 330 330 122 122 4 4 37,81 37.81 3,10Е- 08 3.10E- 08 N/A N/A 1,736867 (0,2472) 1.736867 (0.2472) 4,848550 (0,0000) * 4.848550 (0.0000) * 3,033 083 (0,00 73)* 3.033 083 (0.00 73)* Аденока рцинома поджелу дочной железы (TCGA, PanCanc er Atlas) Pancreatic adenocarcinoma (TCGA, PanCanc er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 0 0 7 7 105 105 50 50 6 6 36,863 36,863 4,92Е- 08 4.92E- 08 N/A N/A 1,333193 (0,5474) 1.333193 (0.5474) 4,388701 (0,0000) * 4.388701 (0.0000) * 4,166 401 (0,00 01)* 4.166 401 (0.00 01)* Карцино ма щитовид ной железы (TCGA, PanCanc er Atlas) Thyroid carcinoma (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 0 0 3 3 451 451 26 26 0 0 31,882 31,882 1,19Е- 07 1.19E- 07 N/A N/A 2,486724 (0,0193) * 2.486724 (0.0193) * 5,021279 (0,0000) * 5.021279 (0.0000) * N/A N/A Аденока рцинома толстого Adenococcinoma of the colon RSEM (нормализов анная по RSEM (normalized by 0 0 40 40 266 266 80 80 2 2 31,309 31,309 7,32Е- 07 7.32E- 07 N/A N/A 3,811621 (0,0004) 3.811621 (0.0004) 2,987223 (0,0084) 2.987223 (0.0084) 1,759 508 1,759 508

- 112 045862- 112 045862

кишечн ика (TCGA, PanCanc er Atlas) intestines (TCGA, PanCanc er Atlas) партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) batches from Illumina HiSeqRNA SeqV2) * * * * (0,23 55) (0.23 55) Тимома (TCGA, PanCanc er Atlas) Thymoma (TCGA, PanCanc er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 0 0 0 0 95 95 22 22 2 2 26,213 26,213 2,03Е- 06 2.03E- 06 N/A N/A N/A N/A 4,962115 (0,0000) * 4.962115 (0.0000) * 1,567 541 (0,17 55) 1.567 541 (0.17 55) Саркома (TCGA, PanCanc er Atlas) Sarcoma (TCGA, PanCanc er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA 0 0 22 22 120 120 74 74 14 14 26,831 26,831 6,39Е- 06 6.39E- 06 N/A N/A 0,410850 (1,0000) 0.410850 (1.0000) 4,582047 (0,0000) * 4.582047 (0.0000) * 3,106 262 (0,00 57)* 3.106 262 (0.00 57)* SeqV2 syn4976369 SeqV2 syn4976369 Аденока рцинома желудка (TCGA, PanCanc er Atlas) Adenococcinoma of the stomach (TCGA, PanCanc er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 0 0 И AND 253 253 134 134 9 9 19,096 19,096 0,0002 611 0.0002 611 N/A N/A 2,835658 (0,0137) * 2.835658 (0.0137) * 2,921683 (0,0104) * 2.921683 (0.0104) * 0,265 333 (1,00 00) 0.265 333 (1.00 00) Аденока рцинома предстал ельной железы (TCGA, PanCanc er Atlas) Adenocarcinoma of the spruce gland (TCGA, PanCanc er Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализов анная по партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) mRNA expression, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 3 3 15 15 437 437 29 29 3 3 19,125 19.125 0,0007 426 0.0007 426 2,532734 (0,0566) 2.532734 (0.0566) 3,202764 (0,0068) * 3.202764 (0.0068) * 1,351661 (0,8824) 1.351661 (0.8824) 0,509 151 (1,00 00) 0.509 151 (1.00 00)

- 113 045862- 113 045862

Хромоф обная аденока рцинома почки (TCGA, РапСапс er Atlas) Chromophobic adenoid cancer of the kidney (TCGA, RapCaps er Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализов анная по партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) mRNA expression, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 0 0 50 50 14 14 1 1 0 0 13,851 13,851 0,0009 823 0.0009 823 N/A N/A 3,609735 (0,0005) * 3.609735 (0.0005) * 0,058395 (1,0000) 0.058395 (1.0000) N/A N/A Аденока рцинома прямой кишки (TCGA, РапСапс er Atlas) Adenocarcinoma of the rectum (TCGA, RapCaps er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 0 0 И AND 91 91 33 33 1 1 14,056 14,056 0,0028 3 0.0028 3 N/A N/A 1,050760 (0,8801) 1.050760 (0.8801) 2,951363 (0,0095) * 2.951363 (0.0095) * 1,809 506 (0,21 H) 1.809 506 (0.21 H) Метаста зирующ ий рак предстат Metasta prostate cancer Экспрессия/ улавливание мРНК (RNA Expression/trapping of mRNA (RNA 0 0 3 3 75 75 37 37 2 2 12,336 12,336 0,0063 17 0.0063 17 N/A N/A 0,040058 (1,0000) 0.040058 (1.0000) 3,420479 (0,0019) * 3.420479 (0.0019) * 0,362 109 (1,00 0.362 109 (1.00 ельной железы, SU2C/P CF Dream Team (Robinso п et al., Cell 2015) spruce gland, SU2C/P CF Dream Team (Robinso et al., Cell 2015) Seq RPKM) Seq RPKM) 00) 00) Феохро мацитом а и параганг лиома (TCGA, РапСапс er Atlas) Feochro macytom a and paragang lioma (TCGA, RapSaps er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 0 0 14 14 123 123 19 19 5 5 11,573 11,573 0,0089 98 0.0089 98 N/A N/A 1,271308 (0,6109) 1.271308 (0.6109) 2,597791 (0,0281) 2.597791 (0.0281) 2,201 970 (0,08 30) 2.201 970 (0.08 30) Светлок леточна я Svetlok letochna I Экспрессия мРНК, RSEM mRNA expression, RSEM 0 0 22 22 297 297 32 32 1 1 11,314 11,314 0,0101 4 0.0101 4 N/A N/A 0,748380 (1,0000) 0.748380 (1.0000) 2,996852 (0,0082) 2.996852 (0.0082) 1,502 464 1,502 464

- 114 045862- 114 045862

карцино ма почки (TCGA, РапСапс er Atlas) kidney carcinoma (TCGA, RapSaps er Atlas) (нормализов анная ио партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) (normalized io batches from Illumina HiSeqRNA SeqV2) * * (0,39 89) (0.39 89) Аденока рцинома предстат ельной железы (Fred Hutchins on CRC, Nat Med 2016) Adenocarcinoma of the prostate gland (Fred Hutchins on CRC, Nat Med 2016) Экспрессия мРНК mRNA expression 0 0 1 1 59 59 66 66 7 7 9,8842 9.8842 0,0195 8 0.0195 8 N/A N/A 0,677737 (1,0000) 0.677737 (1.0000) 0,409530 (1,0000) 0.409530 (1.0000) 3,028 793 (0,00 74)* 3.028 793 (0.00 74)* Аденока рцинома ободочн ой и прямой кишки (TCGA, Adenococinoma of the colon rectum (TCGA, RNA Seq RPKM RNA Seq RPKM 0 0 4 4 153 153 34 34 2 2 9,4054 9.4054 0,02 0.02 N/A N/A 0,062894 (1,0000) 0.062894 (1.0000) 1,860678 (0,1884) 1.860678 (0.1884) 2,514 653 (0,03 57) 2.514 653 (0.03 57) Nature 2012) Nature 2012) Серозна я цистаде нокарци нома яичника (TCGA, РапСапс er Atlas) Serous cystade nocarcinoma of the ovary (TCGA, RapCaps er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 0 0 7 7 75 75 117 117 2 2 9,3101 9.3101 0,0254 4 0.0254 4 N/A N/A 1,589035 (0,3362) 1.589035 (0.3362) 2,168253 (0,0904) 2.168253 (0.0904) 0,062 706 (1,00 00) 0.062 706 (1.00 00) Паиилля рная карцино ма почки (TCGA, РапСапс er Atlas) Paillary carcinoma of the kidney (TCGA, RapCaps er Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализов анная по партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) mRNA expression, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 1 1 19 19 239 239 15 15 0 0 9,1134 9.1134 0,0278 2 0.0278 2 1,607764 (0,3237) 1.607764 (0.3237) 0,569938 (1,0000) 0.569938 (1.0000) 2,552083 (0,0321) 2.552083 (0.0321) N/A N/A

- 115 045862- 115 045862

Низкоди фференц ировнна я глиома головно го мозга (TCGA, РапСапс er Atlas) Low-grade glioma of the brain (TCGA, RapCaps er Atlas) RSEM (нормализов анная по партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) RSEM (normalized by batches from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 0 0 И AND 462 462 32 32 2 2 4,769 4,769 0,1895 0.1895 N/A N/A 0,462462 (1,0000) 0.462462 (1.0000) 1,718955 (0,2569) 1.718955 (0.2569) 1,261 960 (0,62 09) 1.261 960 (0.62 09) Аденока рцинома пищевод а (TCGA, РапСапс er Atlas) Adenococcinoma of the esophagus (TCGA, RapCaps er Atlas) RSEM (нормализов анная по партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) RSEM (normalized by batches from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 0 0 8 8 78 78 86 86 9 9 4,267 4,267 0,234 0.234 N/A N/A 0,747441 (1,0000) 0.747441 (1.0000) 0,768855 (1,0000) 0.768855 (1.0000) 1,756 911 (0,23 68) 1.756 911 (0.23 68) Карцино ма надиоче чников (TCGA, РапСапс er Atlas) Carcinoma of adrenal glands (TCGA, RapCaps er Atlas) RSEM (нормализов анная по партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) RSEM (normalized by batches from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 0 0 9 9 54 54 И AND 2 2 4,0298 4.0298 0,2583 0.2583 N/A N/A 0,157281 (1,0000) 0.157281 (1.0000) 0,131234 (1,0000) 0.131234 (1.0000) 1,984 800 (0,14 15) 1.984 800 (0.14 15) Мульти формная глиобла стома (TCGA, РапСапс er Atlas) Multiform glioblastoma (TCGA, RapCaps er Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализов анная по партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) mRNA expression, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 0 0 3 3 115 115 27 27 0 0 2,6252 2.6252 0,2691 0.2691 N/A N/A 0,180194 (1,0000) 0.180194 (1.0000) 1,593755 (0,1665) 1.593755 (0.1665) N/A N/A Аденока рцинома предстат ельной железы (MSKC с, Cancer Cell 2010) Adenocarcinoma of the prostate (MSKC c, Cancer Cell 2010) Экспрессия мРНК mRNA expression 0 0 3 3 78 78 4 4 0 0 2,181 2,181 0,3361 0.3361 N/A N/A 1,423206 (0,2320) 1.423206 (0.2320) 0,454433 (0,9743) 0.454433 (0.9743) N/A N/A Карцино саркома матки (TCGA, Carcinoma of the uterus (TCGA, Экспрессия мРНК, нормализов анная по mRNA expression normalized by 0 0 4 4 14 14 37 37 1 1 3,308 3,308 0,3465 0.3465 N/A N/A 0,104285 (1,0000) 0.104285 (1.0000) 0,539065 (1,0000) 0.539065 (1.0000) 1,764 353 (0,23 1,764 353 (0.23

- 116 045862- 116 045862

PanCanc er Atlas) PanCanc er Atlas) партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 batches/combined from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 30) thirty) Острый миелоид ный лейкоз (TCGA, PanCanc er Atlas) Acute myeloid leukemia (TCGA, PanCancer Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализов анная по партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) mRNA expression, RSEM (batch normalized from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 0 0 0 0 163 163 2 2 0 0 0,82638 0.82638 0,3633 0.3633 N/A N/A N/A N/A 0,909052 (0,1817) 0.909052 (0.1817) N/A N/A Кожная меланом a (TCGA, PanCanc er Atlas) Cutaneous melanoma a (TCGA, PanCanc er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA 1 1 19 19 146 146 189 189 8 8 3,6483 3.6483 0,4557 0.4557 0,898187 (1,0000) 0.898187 (1.0000) 1,116994 (1,0000) 1.116994 (1.0000) 1,235317 (1,0000) 1.235317 (1.0000) 0,900 287 (1,00 00) 0.900 287 (1.00 00) SeqV2 syn4976369 SeqV2 syn4976369 Мезотел нома (TCGA, PanCanc er Atlas) Mesotel noma (TCGA, PanCanc er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 0 0 2 2 56 56 23 23 1 1 2,3747 2.3747 0,4984 0.4984 N/A N/A 1,426445 (0,4612) 1.426445 (0.4612) 0,418206 (1,0000) 0.418206 (1.0000) 0,143 440 (1,00 00) 0.143 440 (1.00 00) Холанги окарцин ома (TCGA, PanCanc er Atlas) Cholangi ocarcinoma (TCGA, PanCanc er Atlas) RSEM (нормализов анная по партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) RSEM (normalized by batches from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 0 0 0 0 13 13 18 18 5 5 1,3058 1.3058 0,5205 0.5205 N/A N/A N/A N/A 0,653051 (0,7706) 0.653051 (0.7706) 1,121 055 (0,39 34) 1,121,055 (0.39 34) Педиатр ический острый Pediatric acute Нектин-4: экспрессия мРНК Nectin-4: mRNA expression 0 0 4 4 66 66 10 10 1 1 2,2337 2.2337 0,5253 0.5253 N/A N/A 0,133399 (1,0000) 0.133399 (1.0000) 0,504875 (1,0000) 0.504875 (1.0000) 1,375 728 1.375 728

- 117 045862- 117 045862

лимфои дный лейкоз фаза II (TARGE Т, 2018) lymphoid leukemia phase II (TARGE T, 2018) (RNA-Seq RPKM) (RNA-Seq RPKM) (0,50 67) (0.50 67) Диффуз ная крупнок леточна я В- клеточн ая лимфом а (TCGA, РапСапс er Atlas) Diffuse coarse tap hole B- cellular lymphoma (TCGA, RapCaps er Atlas) Экспрессия мРНК, RSEM (нормализов анная по партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) mRNA expression, RSEM (normalized to batches from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 0 0 2 2 25 25 9 9 1 1 1,4939 1.4939 0,6837 0.6837 N/A N/A 0,374642 (1,0000) 0.374642 (1.0000) 1,170326 (0,7256) 1.170326 (0.7256) 0,405 844 (1,00 00) 0.405 844 (1.00 00) Энцикло педия линий злокачес твенных Encyclopedia of malignant lines Экспрессия мРНК (микрочип) mRNA expression (microarray) 1 1 112 112 396 396 319 319 49 49 1,9013 1.9013 0,7539 0.7539 0,398204 (1,0000) 0.398204 (1.0000) 0,562427 (1,0000) 0.562427 (1.0000) 0,847920 (1,0000) 0.847920 (1.0000) 0,379 251 (1,00 00) 0.379 251 (1.00 00) клеток (Novartis /Broad, Nature 2012) cells (Novartis/Broad, Nature 2012) Увеальн ая меланом а (TCGA, РапСапс er Atlas) Uveal melanoma (TCGA, RapCaps er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 0 0 0 0 72 72 8 8 0 0 0,067914 0.067914 0,7944 0.7944 N/A N/A N/A N/A 0,260603 (0,3972) 0.260603 (0.3972) N/A N/A Педиатр ическая опухоль Вильмса (TARGE Т, 2018) Pediatric Wilms tumor (TARGE T, 2018) Нектин-4: экспрессия мРНК (RNA-Seq RPKM) Nectin-4: mRNA expression (RNA-Seq RPKM) 0 0 1 1 50 50 46 46 4 4 0,78538 0.78538 0,853 0.853 N/A N/A 0,165021 (1,0000) 0.165021 (1.0000) 0,815915 (1,0000) 0.815915 (1.0000) 0,090 701 (1,00 00) 0.090 701 (1.00 00)

- 118 045862- 118 045862

Опухол и мужски половых клеток (TCGA, РапСапс er Atlas) Tumor and masculine germ cells (TCGA, RapCaps er Atlas) Экспрессия мРНК, нормализов анная по партиям/объ единенная из Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 mRNA expression normalized by batch/pooled from Illumina HiSeqRNA SeqV2 syn4976369 0 0 1 1 76 76 67 67 0 0 0,14279 0.14279 0,9311 0.9311 N/A N/A 0,366969 (1,0000) 0.366969 (1.0000) 0,061216 (1,0000) 0.061216 (1.0000) N/A N/A Печеной ноклеточн ая карцино ма печени (TCGA, РапСапс er Atlas) Hepatic nocellular carcinoma of the liver (TCGA, RapCaps er Atlas) Нектин-4: экспрессия мРНК, RSEM (нормализов анная по партиям из Illumina HiSeqRNA SeqV2) Nectin-4: mRNA expression, RSEM (normalized by batches from Illumina HiSeqRNA SeqV2) 0 0 1 1 89 89 224 224 34 34 0,2908 0.2908 0,9618 0.9618 N/A N/A 0,082418 (1,0000) 0.082418 (1.0000) 0,188961 (1,0000) 0.188961 (1.0000) 0,363 341 (1,00 00) 0.363 341 (1.00 00)

Пример 7. Анализ экспрессии нектина-4 в 6 клеточных линиях.Example 7. Analysis of nectin-4 expression in 6 cell lines.

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей исследования была оценка экспрессии нектина-4 в 6 клеточных линиях посредством проточной цитометрии, включая 2 клеточных линии рака молочной железы (T-47D, MDA-MB-468), 3 клеточных линии рака легкого (NCI-H292, NCI-H322, NCI-H526) и 1 клеточную линию фибросаркомы (НТ1080)).The objective of the study was to evaluate the expression of nectin-4 in 6 cell lines by flow cytometry, including 2 breast cancer cell lines (T-47D, MDA-MB-468), 3 lung cancer cell lines (NCI-H292, NCI-H322, NCI -H526) and 1 fibrosarcoma cell line (HT1080)).

2. Схема панели.2. Panel diagram.

Панель для FCM в T-47D, MDA-MB-468, NCI-H292, NCI-H322 и НТ-1080Panel for FCM in T-47D, MDA-MB-468, NCI-H292, NCI-H322 and HT-1080

Флуорохром Fluorochrome Пустой Empty Изотипический Isotypic Панель Panel PE P.E. - - Изотипический контроль Isotype control Нектин-4 Nectin-4

Панель для NCI-H526Panel for NCI-H526

Флуорохром Fluorochrome Пустой Empty Изотипипический Isotypic Панель Panel РЕ RE - - Изотипический контроль Isotypic control Нектин-4 Nectin-4 BV421 BV421 Живые/ погибшие Alive/deceased Живые/погибшие Living/deceased Живые/ погибшие Alive/deceased

3. Материал 3.1.3. Material 3.1.

Образец.Sample.

Перечень клеточных линийList of cell lines

Положени е Position Клеточны е линии Cell lines Тип злокачестве иной опухоли Type of malignancy of another tumor Поставщи к Provider Свойства культуры Properties culture Культуральная среда Cultural environment 1 1 T-47D T-47D Рак молочной железы Mammary cancer АТСС- НТВ-133 ATSS- NTV-133 приклепля ющаяся riveted changing RPMI-1640+0,2 единицы/мл бычьего инсулина+10%FB S RPMI-1640+0.2 units/ml bovine insulin+10%FB S 2 2 MDA-MB- 468 MDA-MB- 468 Рак молочной железы Mammary cancer АТСС- НТВ-132 ATSS- NTV-132 Приклепля ющаяся Prikleplya changing Среда Лейбовитца L-15+10%FBS Leibowitz environment L-15+10%FBS 3 3 NCI-H292 NCI-H292 Легкого Lung 91091815 91091815 Приклепля ющаяся Prikleplya changing RPMI- 1640+10%FBS RPMI- 1640+10%FBS 4 4 NCI-H322 NCI-H322 Легкого Lung 95111734 95111734 Приклепля ющаяся Prikleplya changing RPMI-1640+2 мМ глутамин+10% FB S RPMI-1640+2 mM glutamine+10% FB S 5 5 NCI-H526 NCI-H526 Легкого Lung CRL-5811 CRL-5811 Округлые кластеры в суспензии Round clusters in suspension RPMI- 1640+10%FBS RPMI- 1640+10%FBS

- 119 045862- 119 045862

3.2. Реагенты.3.2. Reagents.

Антитела и набор для проточно-цитометрического анализаAntibodies and flow cytometry kit

Флуоресценция Fluorescence Маркер Marker Каталожный номер Catalog number Поставищик Supplier Комментарий A comment РЕ RE Нектин-4 Nectin-4 FAB2659P FAB2659P R&D R&D АААО0217021 AAAA0217021 РЕ RE Изотипический контрольный IgG2b Isotype control IgG2b IC0041P IC0041P R&D R&D От BICY- 20161117А From BICY- 20161117A

DPBS (Corning-21-031-CV).DPBS (Corning-21-031-CV).

Буфер для окрашивания (eBioscience-00-4222).Staining buffer (eBioscience-00-4222).

Буфер для фиксации (BD-554655).Fixation buffer (BD-554655).

3.3. Устройства.3.3. Devices.

Центрифуга Eppendorf 5810R.Centrifuge Eppendorf 5810R.

Проточный цитометр BD FACS Canto (BD).BD FACS Canto Flow Cytometer (BD).

4.1. Взятие образцов.4.1. Taking samples.

Собрать клеточные линии, растущие в экспоненциальной фазе роста. Подсчитать клетки посредством гемоцитометра с окрашиванием трипановым синим. Центрифугировать клетки при 400xg в течение 5 мин при 4°С, промыть клетки два раза буфером для окрашивания и суспендировать клетки в буфере для окрашивания до 1х10⁷/мл.Collect cell lines growing in exponential growth phase. Count cells using a hemocytometer with trypan blue staining. Centrifuge the cells at 400xg for 5 min at 4°C, wash the cells twice with staining buffer and suspend the cells in staining buffer to 1x10 ⁷ /ml.

4.2. Окрашивание антителом.4.2. Antibody staining.

1) Распределить аликвотами 100 мкл суспензии клеток в каждую лунку 96-луночного V-образного планшета.1) Aliquot 100 µl of the cell suspension into each well of a 96-well V-plate.

2) Добавить изотипический контроль или антитела к суспензии клеток и инкубировать в течение 30 мин при 4°С в темноте.2) Add isotype control or antibodies to the cell suspension and incubate for 30 minutes at 4°C in the dark.

3) Промыть клетки 2х посредством центрифугирования при 400xg в течение 5 мин при 4°С и слить супернатант.3) Wash the cells 2x by centrifugation at 400xg for 5 min at 4°C and discard the supernatant.

4) Ресуспендировать клетки с 100 мкл фиксирующего буфера и инкубировать в течение 30 мин при 4°С в темноте.4) Resuspend cells with 100 μl of fixation buffer and incubate for 30 min at 4°C in the dark.

5) Промыть клетки 2х посредством центрифугирования при 300xg в течение 5 мин при 4°С и удалить супернатант.5) Wash the cells 2x by centrifugation at 300xg for 5 min at 4°C and remove the supernatant.

6) Ресуспендировать клетки в 400 мкл буфера для окрашивания.6) Resuspend the cells in 400 µl of staining buffer.

7) Проанализировать данные FACS с использованием программного обеспечения FlowJo V10.7) Analyze FACS data using FlowJo V10 software.

4.3. Анализ данных.4.3. Data analysis.

Все данные FACS анализировали посредством программного обеспечения Flowjo V10 и Graphpad Prism или программного обеспечения Excel.All FACS data were analyzed using Flowjo V10 and Graphpad Prism software or Excel software.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Стратегия гейтирования для панели.5.1. Gating strategy for the panel.

Стратегия гейтирования для нектина-4 представлена на фиг. 29-32.The gating strategy for nectin-4 is shown in FIG. 29-32.

5.2. Анализ данных.5.2. Data analysis.

5.2.1. Жизнеспособность клеточных линий.5.2.1. Viability of cell lines.

Жизнеспособность клеточных линий была такой, как показано ниже.The viability of the cell lines was as shown below.

- 120 045862- 120 045862

№ No. Клеточная линия Cell line Тип злокачественной опухоли Type of malignant tumor Жизнеспособность Viability Количество жизнеспособных клеток/ миллион Viable cells/million 1 1 T-47D T-47D Молочной железы Mammary gland 98,1 98.1 8,6 8.6 2 2 MDA-MB- 468 MDA-MB- 468 Молочной железы Mammary gland 98,7 98.7 5,3 5.3 3 3 NCI-H292 NCI-H292 Легкого Lung 98,7 98.7 10,4 10.4 4 4 NCI-H322 NCI-H322 Легкого Lung 98,5 98.5 6,6 6.6 5 5 NCI-H526 NCI-H526 Легкого Lung 79,9 79.9 4,0 4.0 6 6 НТ 1080 NT 1080 Фибросаркома Fibrosarcoma 98,0 98.0 14,7 14.7

5.2.2. Положительная экспрессия нектина-4 в клеточных линиях.5.2.2. Positive expression of nectin-4 in cell lines.

Положительная экспрессия и MFI нектина-4 в 6 клеточных линиях соответствовала перечню.Positive expression and MFI of nectin-4 in 6 cell lines were as listed.

№ No. Клеточная линия Cell line Нектин-4 Nectin-4 MFIизотипический MFIisotypic MFI-панель MFI panel 1 1 T-47D T-47D 99,0% 99.0% 132 132 1808 1808 2 2 MDA-MB-468 MDA-MB-468 99,0% 99.0% 184 184 2324 2324 3 3 NCI-H292 NCI-H292 97,9% 97.9% 180 180 729 729 4 4 NCI-H322 NCI-H322 99,1% 99.1% 145 145 1655 1655 5 5 NCI-H526 NCI-H526 0,21% 0.21% 104 104 91,3 91.3 6 6 НТ1080 NT1080 1,53% 1.53% 134 134 134 134

6. Обсуждение.6. Discussion.

Экспрессия нектина-4 была высокой в клетках рака молочной железы T-47D (99,0%), MDA-MB-468 (99,0%) и клетках рака легкого NCI-H292 (97,9%), NCI-H322 (99,1%). В NCI-H526 и НТ-1080, не было обнаружено экспрессии нектина-4.Nectin-4 expression was high in T-47D (99.0%), MDA-MB-468 (99.0%) breast cancer cells and NCI-H292 (97.9%), NCI-H322 ( 99.1%). In NCI-H526 and HT-1080, no nectin-4 expression was detected.

Пример 8. Анализ экспрессии нектина-4 в 9 клеточных линиях CDX посредством проточной цито метрии.Example 8 Analysis of nectin-4 expression in 9 CDX cell lines by flow cytometry.

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей этого проекта является оценка поверхностной экспрессии нектина-4 (PVRL-4) в 9 клеточных линиях, включая 1 клеточную линию рака молочной железы (MDA-MB-468), 4 клеточных линии рака легкого (NCI-H292, NCI-H358, NCI-H526, А549), 1 клеточную линию рака поджелудочной железы (Panc02.13), 2 клеточных линии рака ободочной и прямой кишки (НСТ-116, НТ-29) и 1 клеточную линию рака мочевого пузыря (НТ1376).The objective of this project is to evaluate the surface expression of nectin-4 (PVRL-4) in 9 cell lines, including 1 breast cancer cell line (MDA-MB-468), 4 lung cancer cell lines (NCI-H292, NCI-H358, NCI -H526, A549), 1 pancreatic cancer cell line (Panc02.13), 2 colorectal cancer cell lines (HCT-116, NT-29) and 1 bladder cancer cell line (HT1376).

2. Схема панели.2. Panel diagram.

Панель для FCM в 9 клеточных линияхPanel for FCM in 9 cell lines

Флуорохром Fluorochrome Пустой Empty Изотипический Isotypic Панель Panel РЕ RE - - Изотипический контрольный IgG2b Isotype control IgG2b Нектин-4 Nectin-4 BV421 BV421 Живые/погибшие Living/deceased Живые/погибшие Living/deceased Живые/погибшие Living/deceased

3. Материалы.3. Materials.

3.1. Образцы.3.1. Samples.

- 121 045862- 121 045862

Перечень клеточных линийList of cell lines

Пол оже ние Sex Клеточная линя Cell line Тип злокачес твенной опухоли Type of malignant tumor Поставщик Provider Свойства культуры Properties culture Культуральная среда Cultural environment 1 1 НТ1376 NT1376 Мочевого пузыря Urinary bubble ATCC-CRL- 1472 ATCC-CRL- 1472 Прикрепля ющаяся Attached ЕМЕМ+10% FBS EMEM+10% FBS 2 2 MDA-MB- 468 MDA-MB- 468 Молочно й железы Mammary gland АТСС-НТВ-132 ATSS-NTV-132 Прикрепля ющаяся Attached Лейбовитца L- 15+10%FBS Leibowitz L- 15+10%FBS 3 3 НСТ-116 NST-116 Ободочно й и прямой кишки Colon and rectum ATCC-CCL-247 ATCC-CCL-247 Прикрепля ющаяся Attached RPMI 1640+10% FBS RPMI 1640+10% FBS 4 4 НТ-29 NT-29 Ободочно й и прямой кишки Colon and rectum АТСС-НТВ-38 ATSS-NTV-38 Прикрепля ющаяся Attached МакКоя 5а+10% FBS McCoy 5a+10% FBS 5 5 А549 A549 Легкого Lung ATCC-CCL-185 ATCC-CCL-185 Прикрепля ющаяся Attached F-12K+10%FBS F-12K+10%FBS 6 6 NCI-H292 NCI-H292 Легкого Lung ЕСАСС- ECASS- Суспензио Suspensio RPMI 1640+10% FBS RPMI 1640+10% FBS 91091815 91091815 иная other 7 7 NCI-H358 NCI-H358 Легкого Lung ЕСАСС- 95111733 ECASS- 95111733 Прикрепля ющаяся Attached RPMI 1640+10% FBS RPMI 1640+10% FBS 8 8 NCI-526 NCI-526 Легкого Lung ATCC-CRL- 5811 ATCC-CRL- 5811 Прикрепля ющаяся Attached RPMI 1640+10% FBS RPMI 1640+10% FBS 9 9 Рапс02.13 Rapeseed02.13 Поджелу дочной железы Pancreas ATCC-CRL- 2554 ATCC-CRL- 2554 прикрепля ющаяся attaching changing RPMI-1640+15% FBS+5 мкг/мл инсулина человека RPMI-1640+15% FBS+5 µg/ml insulin person

3.2. Реагенты.3.2. Reagents.

1) DPBS (Corning, 21-031-CV).1) DPBS (Corning, 21-031-CV).

2) Трипсин 0,25% (Invitrogen- 25200072).2) Trypsin 0.25% (Invitrogen-25200072).

3) Буфер для окрашивания (eBioscience, 00-4222).3) Staining buffer (eBioscience, 00-4222).

4) Буфер для фиксации (BD, 554655).4) Fixation buffer (BD, 554655).

5) Антитело.5) Antibody.

Флуоресценция Fluorescence Маркер Marker Каталожны й номер Catalog number Поставщик Provider Комментарий A comment РЕ RE Нектин-4 Nectin-4 FAB2659P FAB2659P R&D R&D АААО0217021 AAAA0217021 РЕ RE IgG2b мыши Mouse IgG2b IC0041P IC0041P R&D R&D BV421 BV421 Живые/ погибшие Alive/deceased L34964 L34964 Invitrogen Invitrogen - -

3.3. Устройства.3.3. Devices.

Центрифуга Eppendorf 5810R.Centrifuge Eppendorf 5810R.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Размораживание клеток.Thawing cells.

1) Очистить замороженные флаконы 70% спиртом и быстро разморозить флаконы на водяной бане при 37°С.1) Clean frozen vials with 70% alcohol and quickly defrost vials in a water bath at 37°C.

2) Центрифугировать суспензию клеток при приблизительно 1000 об/мин в течение 5 мин, удалить супернатант и добавить предварительно нагретую среду во флаконы.2) Centrifuge the cell suspension at approximately 1000 rpm for 5 minutes, remove the supernatant and add prewarmed medium to the vials.

3) Инкубировать культивируемые флаконы в инкубаторе при 37°С, с 5% СО₂.3) Incubate the cultured vials in an incubator at 37°C, with 5% CO ₂ .

Пассирование клеток.Passaging of cells.

1) Нагреть среду и трипсин на водяной бане при 37°С.1) Heat the medium and trypsin in a water bath at 37°C.

2) Удалить культуральную среду и ополоснуть клеточный слой DPBS.2) Remove the culture medium and rinse the cell layer with DPBS.

3) Добавить 5 мл 0,25% раствора трипсина в колбу и разбавить трипсин 5 мл среды.3) Add 5 ml of 0.25% trypsin solution to the flask and dilute the trypsin with 5 ml of medium.

- 122 045862- 122 045862

4) Центрифугировать суспензию клеток при 1000 об/мин в течение 5 мин.4) Centrifuge the cell suspension at 1000 rpm for 5 minutes.

5) Добавить 15 мл свежей среды и ресуспендировать клетки посредством осторожного пипетирования.5) Add 15 ml of fresh medium and resuspend the cells by gentle pipetting.

6) Добавить соответствующую суспензию клеток в новые культуральные флаконы.6) Add the appropriate cell suspension to new culture flasks.

7) Инкубировать культуральные флаконы в инкубаторе при 37°С с 5% СО2.7) Incubate the culture flasks in an incubator at 37°C with 5% CO2.

4.2. Взятие образцов.4.2. Taking samples.

Собрать клеточные линии, растущие в экспоненциальной фазе роста. Подсчитать клетки с окрашиванием трипановым синим. Центрифугировать клетки при 400xg в течение 5 мин при 4°С, промыть клетки два раза буфером для окрашивания и суспендировать клетки в буфере для окрашивания до 5х10⁶/мл.Collect cell lines growing in exponential growth phase. Count cells stained with trypan blue. Centrifuge the cells at 400xg for 5 min at 4°C, wash the cells twice with staining buffer and suspend the cells in staining buffer to 5x10 ⁶ /ml.

4.3. Окрашивание антителом.4.3. Antibody staining.

Распределить аликвотами 100 мкл суспензии клеток в каждую лунку 96-луночного V-образного планшета. Добавить изотипический контроль или антитела к суспензии клеток и инкубировать в течение 30 мин при 4°С в темноте. Промыть клетки 2 раза посредством центрифугирования при 400xg в течение 5 мин при 4°С и слить супернатант. Ресуспендировать клетки в 300 мкл буфера для окрашивания. Проанализировать данные FACS с использованием программного обеспечения Flow Jo V10.Aliquot 100 µl of the cell suspension into each well of a 96-well V-plate. Add isotype control or antibodies to the cell suspension and incubate for 30 min at 4°C in the dark. Wash the cells 2 times by centrifugation at 400xg for 5 min at 4°C and discard the supernatant. Resuspend cells in 300 µl of staining buffer. Analyze FACS data using Flow Jo V10 software.

4.4. Анализ данных.4.4. Data analysis.

Все данные FACS анализировали посредством программного обеспечения Flowjo V10 и Graphpad Prism или программного обеспечения Excel. 5.All FACS data were analyzed using Flowjo V10 and Graphpad Prism software or Excel software. 5.

Результаты.Results.

Стратегия гейтирования для нектина-4 представлена на фиг. 34-37.The gating strategy for nectin-4 is shown in FIG. 34-37.

5.2. Анализ данных.5.2. Data analysis.

Положительная экспрессия и MFI нектина-4 в 9 клеточных линиях соответствовала перечню.Positive expression and MFI of nectin-4 in 9 cell lines were as listed.

№ No. Клеточная линия Cell line Нектин-4 Nectin-4 MFIизотипический MFIisotypic MFI-панель MFI panel 1 1 НТ1376 NT1376 92,4% 92.4% 36,2 36.2 803 803 2 2 MDA-MB-468 MDA-MB-468 97,1% 97.1% 28,9 28.9 460 460 3 3 НСТ-116 NST-116 1,85% 1.85% 14,5 14.5 15,6 15.6 4 4 НТ-29 NT-29 40,0% 40.0% 20,5 20.5 88,3 88.3 5 5 А549 A549 1,07% 1.07% 20,5 20.5 21,6 21.6 6 6 NCI-H292 NCI-H292 71,1% 71.1% 22,9 22.9 149 149 7 7 NCI-H358 NCI-H358 90,1% 90.1% 26,5 26.5 361 361 8 8 NCI-526 NCI-526 1,22% 1.22% 8,33 8.33 12,1 12.1 9 9 Рапс02.13 Rapeseed02.13 51,9% 51.9% 36,2 36.2 128 128

6. Обсуждение.6. Discussion.

Экспрессия нектина-4 была высокой в клеточной линии рака мочевого пузыря НТ-1376 (92,4%), рака молочной железы MDA-MB-468 (97,1%) и рака легкого NCI-H358 (90,1%). Экспрессия нектина-4 была умеренной в клеточных линиях НТ-29 (40,0%), NCI-H292 (71,1%) и Panc02.13 (51,9%). В НСТ-116, А549 и NCI-526 не было обнаружено экспрессии нектина-4. Эти данные также можно использовать в качестве ориентира для выбора модели для исследований эффективности.Nectin-4 expression was high in the bladder cancer cell line HT-1376 (92.4%), breast cancer MDA-MB-468 (97.1%), and lung cancer NCI-H358 (90.1%). Nectin-4 expression was moderate in HT-29 (40.0%), NCI-H292 (71.1%), and Panc02.13 (51.9%) cell lines. No nectin-4 expression was detected in HCT-116, A549, and NCI-526. These data can also be used to guide model selection for effectiveness studies.

Пример 9. Исследования эффективности in vivo.Example 9: In Vivo Efficacy Studies.

Пример 9.1. Исследование эффективности in vivo тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом А549.Example 9.1. Study of the in vivo effectiveness of test samples in the treatment of Balb/c nude mice with an A549 xenograft.

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей исследования является оценка in vivo противоопухолевой эффективности тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом А549.The objective of the study is to evaluate in vivo the antitumor efficacy of the tested samples in the treatment of Balb/c nude mice with the A549 xenograft.

- 123 045862- 123 045862

2. Схема эксперимента2. Experimental design

Групп а Group Лечение Treatment η η Доза (мг/кг) Dose (mg/kg) Объем дозирования (мкл/г) Dosing volume (µl/g) Путь дозирован ня The way is dosed nya Схема Scheme 1 1 Носитель Carrier 5 5 — — 10 10 в/в IV qw qw 2 2 BCY8242 BCY8242 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 3 3 BCY8242 BCY8242 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 4 4 BCY8242 BCY8242 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 5 5 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 6 6 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 7 7 BCY8245 BCY8245 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 8 8 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 9 9 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 10 10 BCY8253 BCY8253 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw И AND BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 12 12 BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 13 13 BCY8255 BCY8255 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw

3. Материалы.3. Materials.

Животные и условия содержания.Animals and conditions of detention.

3.1.1. Животные.3.1.1. Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: Balb/c nude.Line: Balb/c nude.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22 г.Body weight: 18-22 g.

3.1.2. Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

Температура: 20~26°С.Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

Клетки: изготовлены из поликарбоната. Размер составляет 300 ммх180 ммх150 мм.Cages: made of polycarbonate. The size is 300 mm x 180 mm x 150 mm.

Материалом подстилки были сердцевины кукурузных початков, которые заменяли два раза в неделю.The bedding material was corn cob cores, which were replaced twice a week.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Опухолевые клетки А549 поддерживали in vitro в качестве культуры в виде монослоя в среде F12K, дополненной 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой, при 37°С в атмосфере 5% СО2 в воздухе. Опухолевые клетки стандартным образом субкультивировали два раза в неделю посредством обработки трипсином-EDTA. Клетки, растущие в экспоненциальной фазе роста, собирали и подсчитывали для инокуляции опухоли.A549 tumor cells were maintained in vitro as a monolayer culture in F12K medium supplemented with 10% heat-inactivated fetal calf serum at 37°C in an atmosphere of 5% CO2 in air. Tumor cells were routinely subcultured twice a week by trypsin-EDTA treatment. Cells growing in the exponential growth phase were collected and counted for tumor inoculation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок опухолевые клетки А549 (5х10⁶) в 0,2 мл PBS для развития опухоли. 41 животных случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 158 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в таблице схемы эксперимента.Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with A549 tumor cells (5 x 10 ⁶ ) in 0.2 ml PBS for tumor development. 41 animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 158 mm ³ . The introduction of test samples and the number of animals in each group are presented in the experimental design table.

- 124 045862- 124 045862

Тестируемый образец Test sample Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8242 BCY8242 0,5 0.5 Разбавить 510 мкл исходного раствора 20 мг/мл BCY8242 19,886 мл гистидинового буфера Dilute 510 µl of 20 mg/ml BCY8242 stock solution with 19.886 ml histidine buffer BCY8242 BCY8242 о,з o, s Разбавить 480 мкл исходного раствора 0,5 мг/мл BCY8242 320 мкл гистидинового буфера Dilute 480 µl of 0.5 mg/ml BCY8242 stock solution with 320 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8255 BCY8255 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 400 мкл ацетатного буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 400 µl acetate buffer BCY8255 BCY8255 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 560 мкл ацетатного буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 560 µl acetate buffer 1. Гистидиновый буфер:25мМ гистидин, рН7, 10% сахароза 2. Ацетатный буфер: 50 мМацетат/уксусная кислота, pH, 5 10% сахароза 1. Histidine buffer: 25mM histidine, pH7, 10% sucrose 2. Acetate buffer: 50 mM Acetate/acetic acid, pH, 5 10% sucrose

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

В конце исследования опухоли всех групп, кроме групп 2, 3 и 4, извлекали через 2 ч после последнего дозирования. Опухоли в группах 2, 3 и 4 извлекали без какого-либо дозирования.At the end of the study, tumors from all groups except groups 2, 3, and 4 were removed 2 hours after the last dosing. Tumors in groups 2, 3 and 4 were removed without any dosing.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Кривые роста опухоли.5.1. Tumor growth curves.

Кривые роста опухоли представлена на фиг. 38-41.Tumor growth curves are shown in Fig. 38-41.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей Balb/c nude, имеющих ксенотрансплантат А549, представлен в табл. 27.The average tumor volume over time in female Balb/c nude mice bearing the A549 xenograft is presented in Table 1. 27.

- 125 045862- 125 045862

Таблица 27. Регистрация объема опухоли с течением времениTable 27. Registration of tumor volume over time

Групп Group Сутки после начала лечения Days after the start of treatment а A Лечение Treatment 0 0 2 2 5 5 7 7 9 9 12 12 14 14 1 1 Носитель, qw Media, qw 158±13 158±13 235±24 235±24 278±26 278±26 346±39 346±39 387±35 387±35 471±45 471±45 568±49 568±49 2 2 BCY8242, 3 мг/кг, qw BCY8242, 3 mg/kg, qw 157±13 157±13 215±19 215±19 221±12 221±12 257±28 257±28 282±32 282±32 329±6 329±6 356±26 356±26 3 3 BCY8242, 3 мг/кг, biw BCY8242, 3 mg/kg, biw 158±10 158±10 224±29 224±29 189±38 189±38 205±44 205±44 232±55 232±55 239±41 239±41 261±41 261±41 4 4 BCY8242, 5 мг/кг, qw BCY8242, 5 mg/kg, qw 157±16 157±16 189±23 189±23 169±17 169±17 182±30 182±30 191±39 191±39 162±33 162±33 191±29 191±29 5 5 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 157±10 157±10 208±15 208±15 197±25 197±25 257±40 257±40 293±41 293±41 341±54 341±54 356±53 356±53 6 6 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 157±14 157±14 183±27 183±27 158±16 158±16 184±6 184±6 182±8 182±8 190±15 190±15 194±27 194±27 7 7 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 157±14 157±14 179±22 179±22 147±10 147±10 172±23 172±23 173±24 173±24 204±36 204±36 228±33 228±33 8 8 BCY8253, BCY8253, 158±10 158±10 197±9 197±9 177±4 177±4 225±4 225±4 246±5 246±5 268±11 268±11 323±30 323±30 3 мг/кг, qw 3 mg/kg, qw 9 9 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 158±12 158±12 207±9 207±9 168±9 168±9 210±15 210±15 219±17 219±17 234±10 234±10 247±11 247±11 10 10 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 158±7 158±7 203±18 203±18 149±7 149±7 199±20 199±20 187±15 187±15 178±15 178±15 203±6 203±6 И AND BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 158±9 158±9 199±15 199±15 181±10 181±10 243±1 243±1 261±8 261±8 293±4 293±4 337±15 337±15 12 12 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 158±14 158±14 180±17 180±17 155±19 155±19 193±36 193±36 179±28 179±28 199±27 199±27 227±34 227±34 13 13 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 158±14 158±14 177±16 177±16 153±19 153±19 206±25 206±25 201±42 201±42 183±44 183±44 205±32 205±32

Скорость ингибирования роста опухоли для тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом А549 вычисляли на основе измерения объема опухоли на 14 сутки после начала лечения.The rate of tumor growth inhibition for test samples in the A549 xenograft model was calculated based on tumor volume measurements on day 14 after the start of treatment.

- 126 045862- 126 045862

Таблица 28. Анализ ингибирования роста опухолиTable 28. Tumor growth inhibition assay

Группа Group Лечение Treatment Объем опухоли (мм³)^а Tumor volume (mm ³ ) ^a Т/С^ь(%) T/S ^b (%) TGI (%) TGI (%) Значение Р по сравнению с носителем P value vs. carrier 1 1 Носитель, qw Media, qw 568±49 568±49 — — — — — — 2 2 BCY8242, 3 мг/кг, qw BCY8242, 3 mg/kg, qw 356±26 356±26 62,7 62.7 51,6 51.6 /?<0,05 /?<0.05 3 3 BCY8242, 3 мг/кг, biw BCY8242, 3 mg/kg, biw 261±41 261±41 46,0 46.0 74,9 74.9 /?<0,01 /?<0.01 4 4 BCY8242, 5 мг/кг, qw BCY8242, 5 mg/kg, qw 191±29 191±29 33,6 33.6 91,7 91.7 /?<0,001 /?<0.001 5 5 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 356±53 356±53 62,8 62.8 51,4 51.4 /?<0,05 /?<0.05 6 6 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 194±27 194±27 34,2 34.2 90,8 90.8 /?<0,001 /?<0.001 7 7 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 228±33 228±33 40,2 40.2 82,6 82.6 /?<0,001 /?<0.001 8 8 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 323±30 323±30 56,8 56.8 59,8 59.8 /?<0,01 /?<0.01 9 9 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 247±11 247±11 43,4 43.4 78,3 78.3 /?<0,001 /?<0.001 10 10 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 203±6 203±6 35,7 35.7 89,2 89.2 /?<0,001 /?<0.001 И AND BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 337±15 337±15 59,4 59.4 56,4 56.4 /?<0,01 /?<0.01 12 12 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 227±34 227±34 39,9 39.9 83,4 83.4 /?<0,001 /?<0.001 13 13 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 205±32 205±32 36,1 36.1 88,5 88.5 /?<0,001 /?<0.001

а. Среднее значение ± SEM.A. Mean ± SEM.

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом А549. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 38-41 и в табл. 27 и 28.This study evaluated the therapeutic efficacy of test samples in an A549 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 38-41 and in table. 27 and 28.

Средний размер опухоли у мышей, которым вводили носитель, достигал 568 мм³ на 14 сутки. BCY8242 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=356 мм³, TGI=51,6%, p<0,05), BCY8242 в дозе 3 мг/кг biw (TV=261 мм³, TGI=74,9%,p<0,01) и 5 мг/кг, qw (TV=191 мм³, TGI=91,7%,p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы или частоты дозирования образом.The average tumor size in mice treated with vehicle reached 568 ^mm3 on day 14. BCY8242 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=356 ^mm3 , TGI=51.6%, p<0.05), BCY8242 at a dose of 3 mg/kg biw (TV=261 ^mm3 , TGI=74.9 %, p<0.01) and 5 mg/kg, qw (TV=191 mm ³ , TGI=91.7%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- or dosing-frequency-dependent manner.

BCY8245 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=356 мм³, TGI=51,4%,p<0,05), 3 мг/кг, biw (TV=194 мм³, TGI=90,8%, р<0,01) и 5 мг/кг, qw (TV=228 мм³, TGI=82,6%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы или частоты дозирования образом.BCY8245 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=356 ^mm3 , TGI=51.4%, p<0.05), 3 mg/kg, biw (TV=194 ^mm3 , TGI=90.8%, p<0.01) and 5 mg/kg, qw (TV=228 mm ³ , TGI=82.6%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- or dosing-frequency-dependent manner.

BCY8253 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=323 мм³, TGI=59,8%,p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=247 мм³, TGI=78,3%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=203 мм³, TGI=89,2%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы или частоты дозирования образомBCY8253 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=323 mm ³ , TGI=59.8%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=247 mm ³ , TGI=78.3%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=203 mm ³ , TGI=89.2%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- or dosing-frequency-dependent manner

BCY8255 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=337 мм³, TGI=56,4%,p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=227 мм³, TGI=83,4%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=205 мм³, TGI=88,5%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы или частоты дозирования образом.BCY8255 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=337 ^mm3 , TGI=56.4%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=227 ^mm3 , TGI=83.4%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=205 mm ³ , TGI=88.5%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- or dosing-frequency-dependent manner.

В этом исследовании животные, которым вводили BCY8242 в дозе 3 мг/кг biw и 5 мг/кг qw, BCY8253 и BCY8255 в дозе 5 мг/кг qw теряли в среднем более 10% массы тела в ходе режима лечения. Животные в группе BCY8245 хорошо сохраняли массу тела. В этой клеточной линии, которая демонстIn this study, animals treated with BCY8242 at 3 mg/kg biw and 5 mg/kg qw, BCY8253 and BCY8255 at 5 mg/kg qw lost on average more than 10% of their body weight over the course of the treatment regimen. Animals in the BCY8245 group maintained body weight well. In this cell line that demonstrates

- 127 045862 рирует минимальную экспрессию нектина-4 в исследованиях FACS, рост опухоли сдерживался посредством BCY8245, однако не происходила регрессия опухоли, подтверждая, что для оптимальной эффективности требуется опосредование мишенью.- 127 045862 shows minimal nectin-4 expression in FACS studies, tumor growth was inhibited by BCY8245, but tumor regression did not occur, confirming that target mediation is required for optimal efficacy.

Пример 9.2. Исследование эффективности in vivo тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом НСТ116.Example 9.2. Study of the in vivo effectiveness of test samples in the treatment of Balb/c nude mice with an HCT116 xenograft.

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей исследования является оценка противоопухолевой эффективности in vivo тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом НСТ116.The objective of the study is to evaluate the in vivo antitumor efficacy of the tested samples in the treatment of Balb/c nude mice with the HCT116 xenograft.

2. Схема эксперимента2. Experimental design

Групп а Group Лечение Treatment η η Доза (мг/кг) Dose (mg/kg) Объем дозирования (мкл/г) Dosing volume (µl/g) Путь дозирован ня The way is dosed nya Схема Scheme 1 1 Носитель Carrier 5 5 — — 10 10 в/в IV qw qw 2 2 BCY8242 BCY8242 3 3 3 3 10 10 в/в IV qw qw 3 3 BCY8242 BCY8242 3 3 3 3 10 10 в/в IV biw biw 4 4 BCY8242 BCY8242 3 3 5 5 10 10 в/в IV qw qw 5 5 BCY8245 BCY8245 3 3 3 3 10 10 в/в IV qw qw 6 6 BCY8245 BCY8245 3 3 3 3 10 10 в/в IV biw biw 7 7 BCY8245 BCY8245 3 3 5 5 10 10 в/в IV qw qw 8 8 BCY8253 BCY8253 3 3 3 3 10 10 в/в IV qw qw 9 9 BCY8253 BCY8253 3 3 3 3 10 10 в/в IV biw biw 10 10 BCY8253 BCY8253 3 3 5 5 10 10 в/в IV qw qw И AND BCY8255 BCY8255 3 3 3 3 10 10 в/в IV qw qw 12 12 BCY8255 BCY8255 3 3 3 3 10 10 в/в IV biw biw 13 13 BCY8255 BCY8255 3 3 5 5 10 10 в/в IV qw qw 4 4 BCY8245 BCY8245 3 3 5 5 10 10 в/в IV qw qw

3. Материалы.3. Materials.

3.1.1. Животные.3.1.1. Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: Balb/c nude.Line: Balb/c nude.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22 г.Body weight: 18-22 g.

3.1.2. Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

Мышей содержали в индивидуально вентилируемых клетках при постоянной температуре и влажности с 3 или 5 животными в каждой клетке. Температура: 20~26°С.Mice were housed in individually ventilated cages at constant temperature and humidity with 3 or 5 animals per cage. Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

Идентификация клеток: Идентификационные ярлыки для каждой клетки содержали следующую информацию: количество животных, пол, линия, дата получения, лечение, номер испытания, номер группы и дата начала испытания.Cage identification: Identification labels for each cage contained the following information: number of animals, sex, strain, date of receipt, treatment, trial number, group number, and trial start date.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Клетки НСТ116 поддерживали в среде, дополненной 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой, при 37°С в атмосфере 5% СО₂ в воздухе. Опухолевые клетки стандартным образом субкультивировали два раза в неделю. Клетки, растущие в экспоненциальной фазе роста, собирали и подсчитывали для инокуляции опухоли.HCT116 cells were maintained in medium supplemented with 10% heat-inactivated fetal bovine serum at 37°C in an atmosphere of 5% CO ₂ in air. Tumor cells were routinely subcultured twice a week. Cells growing in the exponential growth phase were collected and counted for tumor inoculation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок опухолевые клетки НСТ116 (5,0х10⁶) в 0,2 мл PBS для развития опухоли. 41 животное случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 166 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в таблице схемы эксперимента.Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with HCT116 tumor cells (5.0 x 10 ⁶ ) in 0.2 ml PBS for tumor development. 41 animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 166 mm ³ . The introduction of test samples and the number of animals in each group are presented in the experimental design table.

- 128 045862- 128 045862

Тестируемый образец Test sample Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8242 BCY8242 0,5 0.5 Разбавить 510 мкл исходного раствора 20 мг/мл BCY8242 19,886 мл гистидинового буфера Dilute 510 µl of 20 mg/ml BCY8242 stock solution with 19.886 ml histidine buffer BCY8242 BCY8242 о,з o, s Разбавить 480 мкл исходного раствора 0,5 мг/мл BCY8242 320 мкл гистидинового буфера Dilute 480 µl of 0.5 mg/ml BCY8242 stock solution with 320 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8255 BCY8255 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 400 мкл ацетатного буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 400 µl acetate buffer BCY8255 BCY8255 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 560 мкл ацетатного буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 560 µl acetate buffer 1. Гистидиновый буфер:25 мМгистидин, рН7, 10% сахароза 2. Ацетатный буфер: 50 мМацетат/уксусная кислота, pH 5, 10% сахароза 1. Histidine buffer: 25 mMhistidine, pH7, 10% sucrose 2. Acetate buffer: 50 mM Acetate/acetic acid, pH 5, 10% sucrose

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

В конце исследования на 14 сутки опухоли из групп 1, 2, 5, 8 и 11 извлекали для FFPE. Для групп 4, 7, 10 и 13 проводили взятие плазмы через 5 мин, 15 мин, 30 мин, 60 мин и 120 мин после дозирования. Опухоли также извлекали и хранили при -80°С.At the end of the study on day 14, tumors from groups 1, 2, 5, 8 and 11 were removed for FFPE. For groups 4, 7, 10 and 13, plasma was collected at 5 minutes, 15 minutes, 30 minutes, 60 minutes and 120 minutes after dosing. Tumors were also removed and stored at -80°C.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Кривые роста опухоли.5.1. Tumor growth curves.

Кривые роста опухоли представлены на фиг. 42-45.Tumor growth curves are shown in Fig. 42-45.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей Balb/c nude, имеющих ксенотрансплантат НСТ116, представлен в табл. 29.The average tumor volume over time in female Balb/c nude mice bearing the HCT116 xenograft is presented in Table 1. 29.

Таблица 29. Регистрация объема опухоли с течением времениTable 29. Registration of tumor volume over time

Групп Group Сутки после начала лечения Days after the start of treatment а A Лечение Treatment 0 0 2 2 4 4 7 7 9 9 12 12 14 14 1 1 Носитель, qw Media, qw 166±12 166±12 219±21 219±21 323±29 323±29 397±28 397±28 488±36 488±36 630±49 630±49 769±71 769±71 2 2 BCY8242, 3 мг/кг, qw BCY8242, 3 mg/kg, qw 166±3 166±3 201±16 201±16 219±29 219±29 280±14 280±14 319±17 319±17 375±23 375±23 492±19 492±19 3 3 BCY8242, 3 мг/кг, biw BCY8242, 3 mg/kg, biw 166±16 166±16 212±17 212±17 213±17 213±17 208±30 208±30 202±33 202±33 195±25 195±25 201±28 201±28 4 4 BCY8242, 5 мг/кг, qw BCY8242, 5 mg/kg, qw 167±24 167±24 203±16 203±16 168±10 168±10 186±9 186±9 211±5 211±5 201±8 201±8 206±7 206±7 5 5 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 167=1=11 167=1=11 209±13 209±13 227±17 227±17 269±33 269±33 324±39 324±39 348±27 348±27 425±28 425±28 6 6 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 166±18 166±18 229±40 229±40 215±42 215±42 213±49 213±49 213±48 213±48 206±55 206±55 197±50 197±50 7 7 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 166±35 166±35 201±42 201±42 176±15 176±15 183±17 183±17 170±16 170±16 125±18 125±18 134±12 134±12

- 129 045862- 129 045862

8 8 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 166±10 166±10 210=1=11 210=1=11 254±31 254±31 288±8 288±8 305±3 305±3 316±13 316±13 354±6 354±6 9 9 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 167±15 167±15 200±3 200±3 175=1=11 175=1=11 186±8 186±8 195±8 195±8 197±17 197±17 199±9 199±9 10 10 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 166±37 166±37 179±37 179±37 143±31 143±31 150±41 150±41 115±28 115±28 90±30 90±30 92±29 92±29 И AND BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 166±18 166±18 221±12 221±12 209±14 209±14 294±26 294±26 354±37 354±37 437±51 437±51 498±52 498±52 12 12 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 167±32 167±32 220±52 220±52 182±42 182±42 191±44 191±44 217±46 217±46 221±53 221±53 178±40 178±40 13 13 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 166±35 166±35 183±51 183±51 128±27 128±27 141±27 141±27 142±24 142±24 132±10 132±10 137±5 137±5

Скорость ингибирования роста опухоли для тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом НСТ116 вычисляли на основе измерения объема опухоли на 14 сутки после начала лечения.The rate of tumor growth inhibition for test samples in the HCT116 xenograft model was calculated based on tumor volume measurements on day 14 after the start of treatment.

Таблица 30. Анализ ингибирования роста опухоли Table 30. Tumor growth inhibition assay Группа Group Лечение Treatment Объем опухоли (мм³)^а Tumor volume (mm ³ ) ^a Т/С^ь (%) T/S ^b (%) TGI (%) TGI (%) Значение Р P value 1 1 Носитель, qw Media, qw 769±71 769±71 - - - - - - 2 2 BCY8242, 3 мг/кг, qw BCY8242, 3 mg/kg, qw 492±19 492±19 64,0 64.0 45,9 45.9 /><0,001 /><0.001 3 3 BCY8242, 3 мг/кг, biw BCY8242, 3 mg/kg, biw 201±28 201±28 26,2 26.2 94,1 94.1 /><0,001 /><0.001 4 4 BCY8242, 5 мг/кг, qw BCY8242, 5 mg/kg, qw 206±7 206±7 26,7 26.7 93,5 93.5 /><0,001 /><0.001 5 5 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 425±28 425±28 55,2 55.2 57,1 57.1 /><0,001 /><0.001 6 6 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 197±50 197±50 25,6 25.6 94,9 94.9 /><0,001 /><0.001 7 7 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 134±12 134±12 17,4 17.4 105,2 105.2 /><0,001 /><0.001 8 8 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 354±6 354±6 46,0 46.0 68,8 68.8 /><0,001 /><0.001 9 9 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 199±9 199±9 25,9 25.9 94,7 94.7 /><0,001 /><0.001 10 10 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 92±29 92±29 12,0 12.0 112,2 112.2 /><0,001 /><0.001 И AND BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 498±52 498±52 64,7 64.7 44,9 44.9 /><0,001 /><0.001 12 12 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 178±40 178±40 23,1 23.1 98,3 98.3 /><0,001 /><0.001 13 13 BCY8255, BCY8255, 137±5 137±5 17,8 17.8 104,9 104.9 /><0,001 /><0.001

мг/кг, qwmg/kg, qw

а. Среднее значение ± SEM; b. Ингибирование роста опухоли вычисляют путем деления среднего по группе объема опухоли для группы лечения на средний по группе объем опухоли для контрольнойA. Mean ± SEM; b. Tumor growth inhibition is calculated by dividing the group mean tumor volume for the treatment group by the group mean tumor volume for the control

- 130 045862 группы (Т/С).- 130 045862 groups (T/S).

б. Обобщение и обсуждение результатов.b. Generalization and discussion of the results.

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом НСТ116. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 42-45 и в табл. 29 и 30.This study evaluated the therapeutic efficacy of test samples in a HCT116 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 42-45 and in table. 29 and 30.

Средний размер опухоли мыши, принимавщей лечение достигал 769 мм³ на 14 день после начала лечсения. BCY8242 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=492 мм³, TGI=45,9%,p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=201 мм³, TGI=94,1%, p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=206 мм³, TGI=93,5%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы или частоты дозирования образом.The average tumor size of the treated mouse reached 769 mm ³ on day 14 after the start of treatment. BCY8242 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=492 ^mm3 , TGI=45.9%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=201 ^mm3 , TGI=94.1%, p< 0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=206 mm ³ , TGI=93.5%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- or dosing-frequency-dependent manner.

BCY8245 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=425mm³, TGI=57,1%, p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=197 мм³, TGI=94,9%,p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=134 мм³, TGI=105,2%,p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы или частоты дозирования образом.BCY8245 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=425mm ³ , TGI=57.1%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=197 mm ³ , TGI=94.9%, p<0.001 ) and 5 mg/kg, qw (TV=134 mm ³ , TGI=105.2%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- or dosing-frequency-dependent manner.

BCY8253 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=354 мм³, TGI=68,8%, p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=199 мм³, TGI=94,7%,p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=92 мм³, TGI=112,2%,p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы или частоты дозирования образом.BCY8253 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=354 ^mm3 , TGI=68.8%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=199 ^mm3 , TGI=94.7%, p< 0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=92 mm ³ , TGI=112.2%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- or dosing-frequency-dependent manner.

BCY8255 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=498 мм³, TGI=44,9%, p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=178 мм³, TGI=98,3%,p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=137 мм³, TGI=104,9%,p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы или частоты дозирования образом.BCY8255 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=498 ^mm3 , TGI=44.9%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=178 ^mm3 , TGI=98.3%, p< 0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=137 mm ³ , TGI=104.9%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- or dosing-frequency-dependent manner.

В этом исследовании животные во всех группах 5 мг/кг qw теряли в среднем 10% массы тела, особенно животные в группах BCY8253 и BCY8255 5 мг/кг, которые теряли более 20% массы тела; BCY8253 и BCY8255 3 мг/кг biw также вызвал снижение массы тела 15% в ходе режима лечения.In this study, animals in all 5 mg/kg qw groups lost an average of 10% body weight, especially animals in the BCY8253 and BCY8255 5 mg/kg groups, which lost more than 20% body weight; BCY8253 and BCY8255 3 mg/kg biw also caused a 15% reduction in body weight over the course of the treatment regimen.

В этой клеточной линии, которая демонстрирует минимальную экспрессию нектина-4 в исследованиях FACS, рост опухоли сдерживался посредством BCY8245, однако не происходила регрессия опухоли, подтверждая, что для оптимальной эффективности требуется опосредование мишенью.In this cell line, which exhibits minimal nectin-4 expression in FACS studies, tumor growth was inhibited by BCY8245 but tumor regression did not occur, confirming that target mediation is required for optimal efficacy.

Пример 9.3. Исследование эффективности in vivo тестируемых образцов при лечении мышей CB17SCID с ксенотрансплантатом НТ-1376.Example 9.3. In vivo efficacy study of test samples in the treatment of CB17SCID mice with HT-1376 xenograft.

1. Задача исследования.1. Research objective.

2. Схема эксперимента2. Experimental design

Групп а Group Лечение Treatment η η Доза (мг/кг) Dose (mg/kg) Объем дозирования (мкл/г) Dosing volume (µl/g) Путь дозирован ня The way is dosed nya Схема Scheme 1 1 Носитель Carrier 5 5 — — 10 10 в/в IV qw qw 2 2 BCY8242 BCY8242 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 3 3 BCY8242 BCY8242 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 4 4 BCY8242 BCY8242 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 5 5 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 6 6 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 7 7 BCY8245 BCY8245 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 8 8 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 9 9 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 10 10 BCY8253 BCY8253 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw И AND BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 12 12 BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 13 13 BCY8255 BCY8255 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 4 4 BCY8245 BCY8245 3 3 — — 10 10 в/в IV qw qw

3. Материалы.3. Materials.

3.1.1. Животные.3.1.1. Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: CB17-SCID.Line: CB17-SCID.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22 г.Body weight: 18-22 g.

3.1.2. Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

- 131 045862- 131 045862

Температура: 20~26°С.Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Клетки опухоли НТ-1376 поддерживают в среде ЕМЕМ, дополненной 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой, при 37°С в атмосфере 5% СО2 в воздухе. Опухолевые клетки стандартным образом субкультивируют два раза в неделю. Клетки, растущие в экспоненциальной фазе роста, собирают и подсчитывают для инокуляции опухоли.HT-1376 tumor cells were maintained in EMEM medium supplemented with 10% heat-inactivated fetal bovine serum at 37°C in an atmosphere of 5% CO2 in air. Tumor cells are routinely subcultured twice a week. Cells growing in the exponential growth phase are harvested and counted for tumor inoculation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок опухолевые клетки НТ-1376 (5х 10⁶) с матригелем (1:1) в 0,2 мл PBS для развития опухоли. 41 животное случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 153 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в таблице схемы эксперимента.Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with HT-1376 tumor cells (5x 10 ⁶ ) with Matrigel (1:1) in 0.2 ml PBS for tumor development. 41 animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 153 mm ³ . The introduction of test samples and the number of animals in each group are presented in the experimental design table.

Тестируемый образец Test sample Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8242 BCY8242 0,5 0.5 Разбавить 510 мкл исходного раствора 20 мг/мл BCY8242 19,886 мл гистидинового буфера Dilute 510 µl of 20 mg/ml BCY8242 stock solution with 19.886 ml histidine buffer BCY8242 BCY8242 о,з o, s Разбавить 480 мкл исходного раствора 0,5 мг/мл BCY8242 320 мкл гистидинового буфера Dilute 480 µl of 0.5 mg/ml BCY8242 stock solution with 320 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8255 BCY8255 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 400 мкл ацетатного буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 400 µl acetate buffer BCY8255 BCY8255 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 560 мкл ацетатного буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 560 µl acetate buffer 5. Гистидиновый буфер:25 мМгистидин, рН7, 10% сахароза 6. Ацетатный буфер: 50 мМацетат/уксусная кислота, pH 5, 10% сахароза 5. Histidine buffer: 25 mMhistidine, pH7, 10% sucrose 6. Acetate buffer: 50 m Acetate/acetic acid, pH 5, 10% sucrose

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

В конце исследования проводили взятие плазмы в группах 7, 10 и 13 через 5 мин, 15 мин, 30 мин, 60 мин и 120 мин после последнего дозирования. Опухоль в группах 7, 10 и 13 извлекали через 2 ч после последнего дозирования. Опухоль в группах 1, 5, 6, 8, 9, 11 и 12 извлекали через 2 ч после последнего дозирования. Опухоли в группа 2, 3 и 4 извлекали без какого-либо дозирования.At the end of the study, plasma was collected in groups 7, 10 and 13 at 5 minutes, 15 minutes, 30 minutes, 60 minutes and 120 minutes after the last dosing. Tumors in groups 7, 10, and 13 were removed 2 hours after the last dosing. Tumors in groups 1, 5, 6, 8, 9, 11, and 12 were removed 2 hours after the last dosing. Tumors in groups 2, 3 and 4 were removed without any dosing.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Кривые роста опухоли.5.1. Tumor growth curves.

Кривые роста опухоли представлены на фиг. 46-49.Tumor growth curves are shown in Fig. 46-49.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей CB17-SCID, имеющих ксенотранс- 132 045862 плантат НТ-1376, представлен в табл. 31.The average tumor volume over time in female CB17-SCID mice bearing the HT-1376 xenotransplant is presented in Table. 31.

Таблица 31. Регистрация объема опухоли с течением времениTable 31. Registration of tumor volume over time

Групп а Group A Лечение Treatment Сутки после начала лечения Days after the start of treatment 0 0 2 2 5 5 7 7 9 9 12 12 14 14 153±1 153±1 266±3 266±3 398±4 398±4 529±5 529±5 721±7 721±7 908±9 908±9 1069±9 1069±9 1 1 Носитель, qw Media, qw 6 6 0 0 1 1 6 6 6 6 1 1 0 0 BCY8242, BCY8242, 153±1 153±1 271±2 271±2 376±3 376±3 473±7 473±7 530±8 530±8 2 2 3 мг/кг, qw 3 mg/kg, qw 7 7 231±1 231±1 1 1 1 1 0 0 1 1 570±92 570±92 BCY8242, BCY8242, 153±1 153±1 245±3 245±3 354±3 354±3 378±3 378±3 391±5 391±5 3 3 3 мг/кг, biw 3 mg/kg, biw 5 5 220±8 220±8 7 7 5 5 8 8 2 2 428±66 428±66 BCY8242, BCY8242, 152±1 152±1 202±1 202±1 249±2 249±2 361±5 361±5 372±3 372±3 389±4 389±4 4 4 5 мг/кг, qw 5 mg/kg, qw 3 3 4 4 2 2 4 4 7 7 0 0 459±34 459±34 BCY8245, BCY8245, 153±2 153±2 254±5 254±5 298±6 298±6 398±6 398±6 468±7 468±7 502±6 502±6 5 5 3 мг/кг, qw 3 mg/kg, qw 6 6 3 3 9 9 1 1 3 3 7 7 603±76 603±76 BCY8245, BCY8245, 154±3 154±3 248±5 248±5 203±1 203±1 273±4 273±4 356±5 356±5 391±5 391±5 6 6 3 мг/кг, biw 3 mg/kg, biw 0 0 8 8 5 5 5 5 0 0 3 3 407±53 407±53 BCY8245, BCY8245, 153±1 153±1 237±4 237±4 228±3 228±3 317±3 317±3 394±2 394±2 438±3 438±3 7 7 5 мг/кг, qw 5 mg/kg, qw 5 5 1 1 6 6 1 1 0 0 1 1 465±33 465±33 BCY8253, BCY8253, 153±1 153±1 343±2 343±2 447±3 447±3 466±2 466±2 8 8 3 мг/кг, qw 3 mg/kg, qw 2 2 209±9 209±9 269±8 269±8 9 9 3 3 5 5 533±29 533±29 BCY8253, BCY8253, 153±1 153±1 214±3 214±3 246±1 246±1 286±2 286±2 364±4 364±4 400±3 400±3 9 9 3 мг/кг, biw 3 mg/kg, biw 3 3 3 3 8 8 3 3 1 1 3 3 442±45 442±45 BCY8253, BCY8253, 153±1 153±1 217±4 217±4 231±4 231±4 308±3 308±3 360±4 360±4 401±7 401±7 10 10 5 мг/кг, qw 5 mg/kg, qw 5 5 9 9 9 9 6 6 4 4 0 0 442±62 442±62 BCY8255, BCY8255, 153±2 153±2 358±2 358±2 476±4 476±4 486±6 486±6 И AND 3 мг/кг, qw 3 mg/kg, qw 2 2 233±3 233±3 284±6 284±6 7 7 0 0 5 5 538±59 538±59 BCY8255, BCY8255, 153±2 153±2 233±3 233±3 218±2 218±2 298±4 298±4 336±4 336±4 365±3 365±3 12 12 3 мг/кг, biw 3 mg/kg, biw 1 1 3 3 3 3 5 5 2 2 1 1 390±40 390±40 BCY8255, BCY8255, 152±1 152±1 233±3 233±3 338±1 338±1 406±2 406±2 459±6 459±6 13 13 5 мг/кг, qw 5 mg/kg, qw 7 7 0 0 290±4 290±4 0 0 6 6 8 8 516±64 516±64

Скорость ингибирования роста опухоли для тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом НТ-1376 вычисляли на основе измерения объема опухоли на 14 сутки после начала лечения.The rate of tumor growth inhibition for test samples in the NT-1376 xenograft model was calculated based on tumor volume measurements on day 14 after the start of treatment.

Таблица 32. Анализ ингибирования роста опухолиTable 32. Tumor growth inhibition assay

Г руппа Group Лечение Treatment Объем опухоли (мм³)^а Tumor volume (mm ³ ) ^a Т/С^ь (%) T/S ^b (%) TGI (%) TGI (%) Значение Р по сравнению с носителем P value compared to vehicle 1 1 Носитель, qw Media, qw 1069±90 1069±90 - - - - - - 2 2 BCY8242, 3 мг/кг, qw BCY8242, 3 mg/kg, qw 570±92 570±92 53,3 53.3 54,5 54.5 /<0,01 /<0.01 3 3 BCY8242, 3 мг/кг, biw BCY8242, 3 mg/kg, biw 428±66 428±66 40,1 40.1 70,0 70.0 /<0,001 /<0.001 4 4 BCY8242, 5 мг/кг, qw BCY8242, 5 mg/kg, qw 459±34 459±34 43,0 43.0 66,4 66.4 /?<0,001 /?<0.001 5 5 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 603±76 603±76 56,4 56.4 50,9 50.9 /><0,01 /><0.01 6 6 BCY8245, BCY8245, 407±53 407±53 38,1 38.1 72,3 72.3 /<0,001 /<0.001

- 133 045862- 133 045862

3 мг/кг, biw 3 mg/kg, biw 7 7 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 465±33 465±33 43,5 43.5 66,0 66.0 /?<0,001 /?<0.001 8 8 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 533±29 533±29 49,8 49.8 58,5 58.5 /?<0,01 /?<0.01 9 9 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 442±45 442±45 41,3 41.3 68,4 68.4 /?<0,001 /?<0.001 10 10 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 442±62 442±62 41,4 41.4 68,5 68.5 /?<0,001 /?<0.001 11 eleven BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 538±59 538±59 50,3 50.3 58,0 58.0 /?<0,01 /?<0.01 12 12 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 390±40 390±40 36,5 36.5 74,1 74.1 /?<0,001 /?<0.001 13 13 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 516±64 516±64 48,3 48.3 60,3 60.3 /?<0,01 /?<0.01

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом НТ-1376. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 46-49 и в табл. 31 и 32.This study evaluated the therapeutic efficacy of test samples in the HT-1376 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 46-49 and in table. 31 and 32.

Средний размер опухоли у мышей, которым вводили носитель, достигал 1069 мм³ на 14 сутки. BCY8242 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=570 мм³, TGI=54,5%, p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=428 мм³, TGI=70,0%,p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=459 мм³, TGI=66,4%,p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность.The average tumor size in mice treated with vehicle reached 1069 ^mm3 on day 14. BCY8242 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=570 mm ³ , TGI=54.5%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=428 mm ³ , TGI=70.0%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=459 mm ³ , TGI=66.4%, p<0.001) had significant antitumor activity.

BCY8253 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=533 мм³, TGI=58,5%,p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=442 мм³, TGI=68,4%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=442 мм³, TGI=68,5%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8253 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=533 ^mm3 , TGI=58.5%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=442 ^mm3 , TGI=68.4%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=442 mm ³ , TGI=68.5%, p<0.001) had significant antitumor activity.

BCY8255 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=538 мм³, TGI=58,0%,p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=390 мм³, TGI=74,1%, p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=516 мм³, TGI=60,3%, p<0,01) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8255 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=538 ^mm3 , TGI=58.0%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=390 ^mm3 , TGI=74.1%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=516 mm ³ , TGI=60.3%, p<0.01) had significant antitumor activity.

В этом исследовании BCY8242 в дозе 3 мг/кг biw и 5 мг/кг qw вызывал снижение массы тела более 10% и 20% соответственно, BCY8245 и BCY8253 в дозе 5 мг/кг qw вызывали снижение массы тела животного более 10% в ходе режима лечения.In this study, BCY8242 at a dose of 3 mg/kg biw and 5 mg/kg qw caused a decrease in body weight of more than 10% and 20%, respectively, BCY8245 and BCY8253 at a dose of 5 mg/kg qw caused a decrease in animal body weight of more than 10% during the regimen treatment.

Пример 9.4. Исследование эффективности in vivo тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатами MDA-MB-468.Example 9.4. In vivo efficacy study of test samples in the treatment of Balb/c nude mice with MDA-MB-468 xenografts.

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей исследования является оценка in vivo противоопухолевой эффективности тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом MDA-MB-468.The objective of the study is to evaluate in vivo the antitumor efficacy of the tested samples in the treatment of Balb/c nude mice with the MDA-MB-468 xenograft.

- 134 045862- 134 045862

2. Схема эксперимента2. Experimental design

3. Материалы.3. Materials.

3.1.1. Животные.3.1.1. Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: Balb/c nude.Line: Balb/c nude.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22 г.Body weight: 18-22 g.

3.1.2. Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

Температура: 20~26°С.Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок опухолевые клетки MDA-MB-468 (10х10⁶) в 0,2 мл PBS, дополненном 50% матригелем, для формирования опухоли. 41 животных случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 196 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в таблице схемы эксперимента.Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with MDA-MB-468 tumor cells (10 x 10 ⁶ ) in 0.2 ml PBS supplemented with 50% Matrigel to form a tumor. 41 animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 196 mm ³ . The introduction of test samples and the number of animals in each group are presented in the experimental design table.

- 135 045862- 135 045862

Тестируемый образец Test sample Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8242 BCY8242 0,5 0.5 Разбавить 510 мкл исходного раствора 20 мг/мл BCY8242 19,886 мл гистидинового буфера Dilute 510 µl of 20 mg/ml BCY8242 stock solution with 19.886 ml histidine buffer BCY8242 BCY8242 о,з o, s Разбавить 480 мкл исходного раствора 0,5 мг/мл BCY8242 320 мкл гистидинового буфера Dilute 480 µl of 0.5 mg/ml BCY8242 stock solution with 320 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8255 BCY8255 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 400 мкл ацетатного буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 400 µl acetate buffer BCY8255 BCY8255 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 560 мкл ацетатного буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 560 µl acetate buffer 1. Гистидиновый буфер:25 мМ гистидин, рН7, 10% сахароза 2. Ацетатный буфер: 50 мМ ацетат/уксусная кислота, pH 5, 10% сахароза 3. Исходные растворы BCY8242(0,5 мг/мл), BCY8245 (1 мг/мл), BCY8253 (1 мг/мл) и BCY8255(1 mg/мл) распределяли в индивидуальные пробирки и хранили при -80°С 1. Histidine buffer: 25 mM histidine, pH7, 10% sucrose 2. Acetate buffer: 50 mM acetate/acetic acid, pH 5, 10% sucrose 3. Stock solutions of BCY8242 (0.5 mg/ml), BCY8245 (1 mg/ml), BCY8253 (1 mg/ml) and BCY8255(1 mg/ml) was dispensed into individual tubes and stored at -80°C

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

На 21 сутки исследования проводили взятие плазмы в группах 5, 8 и 11 через 5 мин, 15 мин, 30 мин, 60 мин и 120 мин после последнего дозирования. Опухоли в группах 1, 6, 9 и 12 извлекали через 2 ч после последнего дозирования. Опухоли в группе 3 извлекали без какого-либо дозирования. Мышей в группе 2 умерщвляли. Животных в группах 4, 7, 10 и 13 продолжали содержать в течение дополнительных 21 суток без какого-либо дозирования, и опухоли в этих группах извлекали на 42 сутки.On day 21 of the study, plasma was collected in groups 5, 8 and 11 at 5 minutes, 15 minutes, 30 minutes, 60 minutes and 120 minutes after the last dosing. Tumors in groups 1, 6, 9, and 12 were removed 2 hours after the last dosing. Tumors in group 3 were removed without any dosing. Mice in group 2 were sacrificed. Animals in groups 4, 7, 10 and 13 continued to be housed for an additional 21 days without any dosing, and tumors in these groups were removed on day 42.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Кривые роста опухоли.5.1. Tumor growth curves.

Кривые роста опухоли представлены на фиг. 50-53.Tumor growth curves are shown in Fig. 50-53.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей Balb/c nude, имеющих ксенотрансплантат MDA-MB-468, представлен в табл. 33 и 34.The average tumor volume over time in female Balb/c nude mice bearing the MDA-MB-468 xenograft is presented in Table 1. 33 and 34.

Скорость ингибирования роста опухоли для тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом MDA-MB-468 вычисляли на основе измерения объема опухоли на 21 сутки после начала лечения.The rate of tumor growth inhibition for test samples in the MDA-MB-468 xenograft model was calculated based on tumor volume measurements at 21 days after the start of treatment.

- 136 045862- 136 045862

Таблица 33. Регистрация объема опухоли с течением времени (сутки с 0 по 21)Table 33. Registration of tumor volume over time (days 0 to 21)

Г руппа Group Лечение Treatment Сутки после начала лечения Days after the start of treatment 0 0 2 2 4 4 7 7 9 9 И AND 14 14 16 16 18 18 21 21 1 1 Носитель, qw Media, qw 199±6 199±6 217±9 217±9 235±15 235±15 274±14 274±14 291±14 291±14 314±20 314±20 348±24 348±24 374±33 374±33 398±39 398±39 447±39 447±39 2 2 BCY8242, 3 мг/кг, qw BCY8242, 3 mg/kg, qw 192±11 192±11 188±17 188±17 178±10 178±10 190=1=11 190=1=11 166±13 166±13 144±16 144±16 133±10 133±10 121±11 121±11 114±13 114±13 122±10 122±10 3 3 BCY8242, 3 мг/кг, biw BCY8242, 3 mg/kg, biw 194±29 194±29 192±20 192±20 179±23 179±23 137±12 137±12 94±7 94±7 59±5 59±5 47±7 47±7 37±6 37±6 28±3 28±3 16±3 16±3 4 4 BCY8242, 5 мг/кг, qw BCY8242, 5 mg/kg, qw 193±24 193±24 186±30 186±30 133±20 133±20 112=1=13 112=1=13 80±14 80±14 66±16 66±16 61±17 61±17 45±11 45±11 42±6 42±6 40±5 40±5 5 5 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 194±12 194±12 192±26 192±26 184±20 184±20 131±20 131±20 113=1=17 113=1=17 104±13 104±13 94±25 94±25 81±23 81±23 87±23 87±23 85±31 85±31 6 6 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 195±33 195±33 193±27 193±27 154±20 154±20 103±20 103±20 83±16 83±16 67±14 67±14 49±11 49±11 45±14 45±14 32±12 32±12 22±4 22±4 7 7 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 199±28 199±28 193=1=11 193=1=11 135±4 135±4 98±5 98±5 58±5 58±5 49±5 49±5 47±2 47±2 37±4 37±4 35±3 35±3 29±3 29±3 8 8 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 195±17 195±17 190±24 190±24 162±21 162±21 160±28 160±28 138±33 138±33 139±32 139±32 136±25 136±25 106±24 106±24 104±18 104±18 109±19 109±19 9 9 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 199±34 199±34 198=1=13 198=1=13 150±21 150±21 119=1=11 119=1=11 102±14 102±14 69±13 69±13 70±5 70±5 46±5 46±5 33±5 33±5 29±7 29±7 10 10 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 198±28 198±28 188±32 188±32 142±32 142±32 150±20 150±20 95±13 95±13 69±13 69±13 67±13 67±13 47±8 47±8 42±5 42±5 40±8 40±8 И AND BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 198±18 198±18 191±15 191±15 172±24 172±24 148±18 148±18 139±13 139±13 114±22 114±22 140±13 140±13 128±22 128±22 141±18 141±18 136±31 136±31 12 12 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 197±36 197±36 190±28 190±28 154±18 154±18 109±11 109±11 90±13 90±13 67±3 67±3 64±7 64±7 51±8 51±8 41±5 41±5 31±1 31±1 13 13 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 194±29 194±29 156±25 156±25 121=1=19 121=1=19 109±14 109±14 75±14 75±14 55±8 55±8 66±5 66±5 43±5 43±5 37±1 37±1 42±2 42±2 Группа 4 7 10 Group 4 7 10 Таблица 34. Регистрация объема опухоли с течением времени (сутки с 23 по 42) Сутки после начала лечения Лечение ------------------------------------------------------------------------------------- 23 25 28 32 35 39 42 BCY8242, 43±4 68±10 57±7 52±3 55±2 58±2 55±5 5 мг/кг, qw BCY8245, 35±5 48±5 37±7 28±6 24±4 28±6 26±6 5 мг/кг, qw BCY8253, 45±7 56±8 60±19 45±2 41±10 48±15 50±20 5 мг/кг, qw Table 34. Registration of tumor volume over time (days 23 to 42) Days after the start of treatment Treatment --------------------------------------------- ---------------------------------------- 23 25 28 32 35 39 42 BCY8242, 43±4 68±10 57±7 52±3 55±2 58±2 55±5 5 mg/kg, qw BCY8245, 35±5 48±5 37±7 28±6 24±4 28±6 26±6 5 mg/kg, qw BCY8253, 45±7 56±8 60±19 45±2 41±10 48±15 50±20 5 mg/kg, qw 13 13 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 41±4 41±4 57±7 57±7 48±8 48±8 39±9 39±9 39±6 39±6 38±9 38±9 34±8 34±8

- 137 045862- 137 045862

Таблица 35. Анализ ингибирования роста опухолTable 35. Tumor growth inhibition assay

Г руппа Group Лечение Treatment Объем опухоли (мм³)^а Tumor volume (mm ³ ) ^a Т/С^ь T/S ^b Значение Р по сравнению с носителем P value compared to vehicle (%) (%) TGI (%) TGI (%) 1 1 Носитель, qw Media, qw 447±39 447±39 - - - - - - 2 2 BCY8242, 3 мг/кг, qw BCY8242, 3 mg/kg, qw 122±10 122±10 27,2 27.2 128,2 128.2 /<0,001 /<0.001 3 3 BCY8242, 3 мг/кг, biw BCY8242, 3 mg/kg, biw 16±3 16±3 3,6 3.6 171,8 171.8 /><0,001 /><0.001 4 4 BCY8242, 5 мг/кг, qw BCY8242, 5 mg/kg, qw 40±5 40±5 9,0 9.0 161,5 161.5 /<0,001 /<0.001 5 5 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 85±31 85±31 18,9 18.9 144,2 144.2 /<0,001 /<0.001 6 6 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 22±4 22±4 4,9 4.9 169,8 169.8 /<0,001 /<0.001 7 7 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 29±3 29±3 6,6 6.6 168,4 168.4 /<0,001 /<0.001 8 8 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 109±19 109±19 24,4 24.4 134,7 134.7 /<0,001 /<0.001 9 9 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 29±7 29±7 6,6 6.6 168,3 168.3 /<0,001 /<0.001 10 10 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 40±8 40±8 8,9 8.9 163,9 163.9 /<0,001 /<0.001 И AND BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 136±31 136±31 30,4 30.4 125,1 125.1 /<0,001 /<0.001 12 12 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 31±1 31±1 6,9 6.9 166,8 166.8 /<0,001 /<0.001 13 13 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 42±2 42±2 9,5 9.5 161,3 161.3 /<0,001 /<0.001

а. Среднее значение ± SEM.A. Mean ± SEM.

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом MDA-MB-468. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 50-53 и в табл. 33-35.This study evaluated the therapeutic efficacy of test samples in the MDA-MB-468 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 50-53 and in table. 33-35.

Средний размер опухоли у мышей, которым вводили носитель, достигал 447 мм³ на 21 сутки. BCY8242 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=122 мм³, TGI= 128,2%, р<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=16 мм³, TGI=171,8%,p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=40 мм³, TGI=161,5%,p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от частоты или дозы образом.The average tumor size in mice treated with vehicle reached 447 ^mm3 on day 21. BCY8242 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=122 ^mm3 , TGI=128.2%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=16 ^mm3 , TGI=171.8%, p< 0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=40 mm ³ , TGI=161.5%, p<0.001) had significant antitumor activity in a frequency- or dose-dependent manner.

BCY8245 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=85 мм³, TGI=144,2%,p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=22 мм³, TGI=169,8%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=29 мм³, TGI=168,4%, р<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от частоты или дозы образомBCY8245 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=85 mm ³ , TGI=144.2%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=22 mm ³ , TGI=169.8%, p< 0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=29 mm ³ , TGI=168.4%, p<0.001) had significant antitumor activity in a frequency- or dose-dependent manner

BCY8253 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=109 мм³, TGI=134,7%,p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=29 мм³, TGI=168,3%, p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=40 мм³, TGI=163,9%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от частоты или дозы образомBCY8253 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=109 mm ³ , TGI=134.7%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=29 mm ³ , TGI=168.3%, p< 0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=40 mm ³ , TGI=163.9%, p<0.001) had significant antitumor activity in a frequency- or dose-dependent manner

BCY8255 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=136 мм³, TGI=125,1%,p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=31 мм³, TGI=166,8%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=42 мм³, TGI=161,3%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от частоты или дозы образомBCY8255 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=136 ^mm3 , TGI=125.1%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=31 ^mm3 , TGI=166.8%, p< 0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=42 mm ³ , TGI=161.3%, p<0.001) had significant antitumor activity in a frequency- or dose-dependent manner

В этом исследовании BCY8242, BCY8253 и BCY8255 в дозе 5 мг/кг вызывали выраженное снижение массы тела животного, среди них мышь 10-1 в группе BCY8253 5 мг/кг была найдена мертвой на 20 сутки.In this study, BCY8242, BCY8253 and BCY8255 at a dose of 5 mg/kg caused a pronounced decrease in animal body weight, among them, mouse 10-1 in the BCY8253 5 mg/kg group was found dead on the 20th day.

В этой клеточной линии, которая демонстрирует высокую экспрессию нектина-4 в исследованияхIn this cell line, which shows high expression of nectin-4 in studies

- 138 045862- 138 045862

FACS, BCY8245 вызывает регрессию опухоли, подтверждая определяемую мишенью природу оптимальной эффективности.FACS, BCY8245 induces tumor regression, confirming the target-driven nature of optimal efficacy.

Пример 9.5. Исследование эффективности in vivo тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом NCI-H292.Example 9.5. In vivo efficacy study of test samples in the treatment of Balb/c nude mice with NCI-H292 xenograft.

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей исследования является оценка in vivo протививоопухолевой эффективности тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом NCI-H292.The objective of the study is to evaluate in vivo the antitumor efficacy of the tested samples in the treatment of Balb/c nude mice with an NCI-H292 xenograft.

2. Схема эксперимента2. Experimental design

Групп а Group Лечение Treatment η η Доза (мг/кг) Dose (mg/kg) Объем дозирования (мкл/г) Dosing volume (µl/g) Путь дозирован ня The way is dosed nya Схема Scheme 1 1 Носитель Carrier 5 5 - - 10 10 в/в IV qw qw 2 2 BCY8242 BCY8242 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 3 3 BCY8242 BCY8242 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 4 4 BCY8242 BCY8242 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 5 5 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 6 6 BCY8245 BCY8245 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 7 7 BCY8245 BCY8245 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 8 8 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 9 9 BCY8253 BCY8253 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 10 10 BCY8253 BCY8253 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw И AND BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 12 12 BCY8255 BCY8255 3 3 3 мг/кг 3 mg/kg 10 10 в/в IV biw biw 13 13 BCY8255 BCY8255 3 3 5 мг/кг 5 mg/kg 10 10 в/в IV qw qw 4 4 BCY8245 BCY8245 3 3 — — 10 10 в/в IV qw qw

3. Материалы.3. Materials.

3.1.1. Животные.3.1.1. Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: Balb/c nude.Line: Balb/c nude.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22 г.Body weight: 18-22 g.

3.1.2. Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

Температура: 20~26°С.Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Опухолевые клетки NCI-H292 поддерживали in vitro в качестве культуры в виде монослоя в среде RPMI-1640, дополненной 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой, при 37°С в атмосфере 5% СО2 в воздухе. Опухолевые клетки стандартным образом субкультивировали два раза в неделю посредством обработки трипсином-EDTA. Клетки, растущие в экспоненциальной фазе роста, собирали и подсчитывали для инокуляции опухоли.NCI-H292 tumor cells were maintained in vitro as a monolayer culture in RPMI-1640 medium supplemented with 10% heat-inactivated fetal calf serum at 37°C in an atmosphere of 5% CO2 in air. Tumor cells were routinely subcultured twice a week by trypsin-EDTA treatment. Cells growing in the exponential growth phase were collected and counted for tumor inoculation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок опухолевые клетки NCI-H292.Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with NCI-H292 tumor cells.

(10х10⁶) в 0,2 мл PBS для развития опухоли. 41 животное случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 162 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в таблице схемы эксперимента.(10x10 ⁶ ) in 0.2 ml PBS for tumor development. 41 animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 162 mm ³ . The introduction of test samples and the number of animals in each group are presented in the experimental design table.

- 139 045862- 139 045862

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

В конце исследования опухоль во всех группах, за исключением групп 2, 3 и 4 извлекали через 2 ч после последнего дозирования. Опухоли в группах 2, 3 и 4 извлекали без какого-либо дозирования.At the end of the study, tumors in all groups except groups 2, 3 and 4 were removed 2 hours after the last dosing. Tumors in groups 2, 3 and 4 were removed without any dosing.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Кривые роста опухоли.5.1. Tumor growth curves.

Кривые роста опухоли представлены на фиг. 54-57.Tumor growth curves are shown in Fig. 54-57.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей Balb/c nude, имеющих ксенотрансплантат NCI-H292, представлен на фиг. 36.The average tumor volume over time in female Balb/c nude mice bearing the NCI-H292 xenograft is presented in FIG. 36.

- 140 045862- 140 045862

Таблица 36. Регистрация объема опухоли с течением времениTable 36. Registration of tumor volume over time

Групп а Group Лечение Treatment Сутки после начала лечения Days after the start of treatment 0 0 2 2 4 4 7 7 9 9 И AND 14 14 1 1 Носитель, qw Media, qw 161±2 161±2 270±14 270±14 357±14 357±14 448±17 448±17 570±16 570±16 720±36 720±36 948±61 948±61 2 2 BCY8242, 3 мг/кг, qw BCY8242, 3 mg/kg, qw 160±1 160±1 214±13 214±13 197±15 197±15 159±2 159±2 175±7 175±7 119±8 119±8 92±10 92±10 3 3 BCY8242, 3 мг/кг, biw BCY8242, 3 mg/kg, biw 162±12 162±12 221±9 221±9 176±17 176±17 146±36 146±36 131±49 131±49 79±25 79±25 73±28 73±28 4 4 BCY8242, 5 мг/кг, qw BCY8242, 5 mg/kg, qw 163±8 163±8 185±18 185±18 133±4 133±4 145±18 145±18 131=1=12 131=1=12 91±5 91±5 81±5 81±5 5 5 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 160±5 160±5 220±11 220±11 266±15 266±15 218±23 218±23 167±10 167±10 161±36 161±36 149±43 149±43 6 6 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 162±13 162±13 243±19 243±19 211±12 211±12 101±11 101±11 100±8 100±8 87±7 87±7 65±3 65±3 7 7 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 160±9 160±9 176±7 176±7 191±3 191±3 105±8 105±8 82±3 82±3 91±14 91±14 83±8 83±8 8 8 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 162±7 162±7 187±9 187±9 176±20 176±20 159±15 159±15 147±8 147±8 114±13 114±13 98±3 98±3 9 9 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 162±14 162±14 174±9 174±9 149±7 149±7 70±2 70±2 68±6 68±6 58±2 58±2 49±5 49±5 10 10 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 161=1=10 161=1=10 161±9 161±9 121±9 121±9 97±3 97±3 79±6 79±6 82±8 82±8 68±9 68±9 И AND BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 162±8 162±8 195±14 195±14 160±5 160±5 123±1 123±1 108±5 108±5 104±3 104±3 100±9 100±9 12 12 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 162±15 162±15 204±16 204±16 148=1=11 148=1=11 132±16 132±16 102±20 102±20 106±38 106±38 96±35 96±35 13 13 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 164±8 164±8 171±8 171±8 103±9 103±9 101±5 101±5 89±11 89±11 87±32 87±32 97±44 97±44

Скорость ингибирования роста опухоли для тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом NCI-H292 вычисляли на основе измерения объема опухоли через 14 суток после начала лечения.The rate of tumor growth inhibition for test samples in the NCI-H292 xenograft model was calculated based on tumor volume measurements 14 days after the start of treatment.

- 141 045862- 141 045862

Таблица 37. Анализ ингибирования роста опухоли Table 37. Tumor growth inhibition assay Г руппа Group Лечение Treatment Объем опухоли (мм³)^а Tumor volume (mm ³ ) ^a Т/С^ь (%) T/S ^b (%) TGI (%) TGI (%) Значение Р по сравнению с носителем P value according to compared to the carrier 1 1 Носитель, qw Media, qw 948±61 948±61 - - - - - - 2 2 BCY8242, 3 мг/кг, qw BCY8242, 3 mg/kg, qw 92±10 92±10 9,7 9.7 108,6 108.6 /?<0,001 /?<0.001 3 3 BCY8242, 3 мг/кг, biw BCY8242, 3 mg/kg, biw 73±28 73±28 7,7 7.7 111,4 111.4 /?<0,001 /?<0.001 4 4 BCY8242, 5 мг/кг, qw BCY8242, 5 mg/kg, qw 81±5 81±5 8,6 8.6 110,4 110.4 /?<0,001 /?<0.001 5 5 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 149±43 149±43 15,8 15.8 101,4 101.4 /?<0,001 /?<0.001 6 6 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 65±3 65±3 6,9 6.9 112,2 112.2 /?<0,001 /?<0.001 7 7 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 83±8 83±8 8,8 8.8 109,8 109.8 /?<0,001 /?<0.001 8 8 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 98±3 98±3 10,4 10.4 108,1 108.1 /?<0,001 /?<0.001 9 9 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 49±5 49±5 5,2 5.2 114,3 114.3 /?<0,001 /?<0.001 10 10 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 68±9 68±9 7,2 7.2 111,9 111.9 /?<0,001 /?<0.001 И AND BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 100±9 100±9 10,6 10.6 107,9 107.9 /?<0,001 /?<0.001 12 12 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 96±35 96±35 10,1 10.1 108,5 108.5 /?<0,001 /?<0.001 13 13 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 97±44 97±44 10,2 10.2 108,5 108.5 /?<0,001 /?<0.001

а. Среднее значение ± SEM.A. Mean ± SEM.

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом NCI-H292. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 54-57 и в табл. 36 и 37.This study evaluated the therapeutic efficacy of test samples in the NCI-H292 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 54-57 and in table. 36 and 37.

Средний размер опухоли у мышей, которым вводили носитель, достигал 948 мм³ на 14 сутки. BCY8242 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=92 мм³, TGI=108,6%, р<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=73 мм³, TGI=111,4%, p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=81 мм³, TGI=110,4%,p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность.The average tumor size in mice treated with vehicle reached 948 ^mm3 on day 14. BCY8242 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=92 mm ³ , TGI=108.6%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=73 mm ³ , TGI=111.4%, p< 0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=81 mm ³ , TGI=110.4%, p<0.001) had significant antitumor activity.

BCY8245 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=149 мм³, TGI=101,4%,p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=65 мм³, TGI=112,2%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=83 мм³, TGI=109,8%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8245 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=149 ^mm3 , TGI=101.4%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=65 ^mm3 , TGI=112.2%, p< 0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=83 mm ³ , TGI=109.8%, p<0.001) had significant antitumor activity.

BCY8253 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=98 мм³, TGI=108,l%,/K0,001), 3 мг/кг, biw (TV=49 мм³, TGI=114,3%, p <0,001) и at 5 мг/кг, qw (TV=68 мм³, TGI=111,9%, p <0,001) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8253 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=98 mm ³ , TGI=108.l%,/K0.001), 3 mg/kg, biw (TV=49 mm ³ , TGI=114.3%, p <0.001) and at 5 mg/kg, qw (TV=68 mm ³ , TGI=111.9%, p <0.001) had significant antitumor activity.

BCY8255 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=100 мм³, TGI=107,9%,p<0,001), 3 мг/кг, biw (TV=96 мм³, TGI=108,5%, р<0,001) и at 5 мг/кг, qw (TV=97 мм³, TGI=108,5%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8255 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=100 ^mm3 , TGI=107.9%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=96 ^mm3 , TGI=108.5%, p< 0.001) and at 5 mg/kg, qw (TV=97 mm ³ , TGI=108.5%, p<0.001) had significant antitumor activity.

Все из тестируемых образцов в дозе 3 мг/кг, qw, 3 мг/кг, biw и 5 мг/кг, qw продемонстрировали сравнимую противоопухолевую активность, эффективность далее не повышалась при повышении дозировки или частоты дозирования.All of the samples tested at 3 mg/kg, qw, 3 mg/kg, biw, and 5 mg/kg, qw, demonstrated comparable antitumor activity, and efficacy did not increase further with increasing dosage or dosing frequency.

- 142 045862- 142 045862

В этом исследовании животные, которым вводили BCY8253 в дозе 5 мг/кг, продемонстрировали среднее снижение массы тела 15% на 9 сутки, мыши в других группах хорошо сохраняли массу тела.In this study, animals treated with BCY8253 at a dose of 5 mg/kg showed an average decrease in body weight of 15% on day 9, while mice in other groups maintained body weight well.

В этой клеточной линии, которая демонстрирует высокую экспрессию нектина-4 в исследованиях FACS, BCY8245 вызывает регрессию опухоли, подтверждая определяемую мишенью природу оптимальной эффективности.In this cell line, which exhibits high nectin-4 expression in FACS studies, BCY8245 induced tumor regression, confirming the target-driven nature of optimal efficacy.

Пример 9.6. Исследование эффективности in vivo тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом NCI-H526.Example 9.6. In vivo efficacy study of test samples in the treatment of Balb/c nude mice with NCI-H526 xenograft.

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей исследования является оценка in vivo противоопухолевой эффективности тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом NCI-H526.The objective of the study is to evaluate in vivo the antitumor efficacy of the tested samples in the treatment of Balb/c nude mice with an NCI-H526 xenograft.

2. Схема эксперимента2. Experimental design

Групп а Group A Лечение Treatment η η Доза (мг/кг) Dose (mg/kg) Объем дозирования (мкл/г) Dosing volume (µl/g) Путь дозиров ания Dosing route Схема Scheme 1 1 Vehicle Vehicle 3 3 — — 10 10 iv iv qw qw 2 2 BCY8245 BCY8245 3 3 3 3 10 10 iv iv qw qw 3 3 BCY8245 BCY8245 3 3 3 3 10 10 iv iv biw biw 4 4 BCY8245 BCY8245 3 3 5 5 10 10 iv iv qw qw 5 5 BCY8255 BCY8255 3 3 3 3 10 10 iv iv qw qw 6 6 BCY8255 BCY8255 3 3 3 3 10 10 iv iv biw biw 7 7 BCY8255 BCY8255 3 3 5 5 10 10 iv iv qw qw

3. Материалы.3. Materials.

3.1.1. Животные.3.1.1. Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: Balb/c nude.Line: Balb/c nude.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22 г.Body weight: 18-22 g.

Количество животных: 21 мышь плюс запасные.Number of animals: 21 mice plus spares.

3.1.2. Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

Температура: 20~26°С.Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Клетки NCI-H526 поддерживали в среде, дополненной 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой, при 37°С в атмосфере 5% СО₂ в воздухе. Опухолевые клетки стандартным образом субкультивировали два раза в неделю. Клетки, растущие в экспоненциальной фазе роста, собирали и подсчитывали для инокуляции опухоли.NCI-H526 cells were maintained in medium supplemented with 10% heat-inactivated fetal bovine serum at 37°C in an atmosphere of 5% CO ₂ in air. Tumor cells were routinely subcultured twice a week. Cells growing in the exponential growth phase were collected and counted for tumor inoculation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок опухолевые клетки NCI-H526 (5,0х 10⁶) в 0,2 мл PBS для развития опухоли. 21 животное случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 181 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в таблице схемы эксперимента.Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with NCI-H526 tumor cells (5.0 x 10 ⁶ ) in 0.2 ml PBS for tumor development. 21 animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 181 mm ³ . The introduction of test samples and the number of animals in each group are presented in the experimental design table.

- 143 045862- 143 045862

Тестируемый образец Test sample Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8245 BCY8245 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8255 BCY8255 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 400 мкл ацетатного буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 400 µl acetate buffer BCY8255 BCY8255 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 560 мкл ацетатного буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 560 µl acetate buffer 1. Гистидиновый буфер:25 мМ гистидин, рН7, 10% сахароза 2. Ацетатный буфер: 50 мМ ацетат/уксусная кислота, pH 5, 10% сахароза 1. Histidine buffer: 25 mM histidine, pH7, 10% sucrose 2. Acetate buffer: 50 mM acetate/acetic acid, pH 5, 10% sucrose

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

В конце исследования на 14 сутки все опухоли извлекали для FFPE. 5.At the end of the study on day 14, all tumors were removed for FFPE. 5.

Результаты.Results.

5.1. Кривые роста опухоли.5.1. Tumor growth curves.

Кривые роста опухоли представлены на фиг. 58 и 59.Tumor growth curves are shown in Fig. 58 and 59.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей Balb/c nude, имеющих ксенотрансплантат NCI-H526, представлен в табл. 38.The average tumor volume over time in female Balb/c nude mice bearing the NCI-H526 xenograft is presented in Table 1. 38.

Таблица 38. Регистрация объема опухоли с течением времениTable 38. Registration of tumor volume over time

а A 0 0 2 2 4 4 7 7 9 9 12 12 14 14 1 1 Носитель, qw Media, qw 181+3 2 181+3 2 262+5 6 262+5 6 431 ±9 0 431 ±9 0 563+72 563+72 729+11 5 729+11 5 1076+15 5 1076+15 5 1365+20 8 1365+20 8 2 2 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 180+3 2 180+3 2 256+5 1 256+5 1 403+7 2 403+7 2 545+68 545+68 657+83 657+83 1019+15 5 1019+15 5 1205+79 1205+79 3 3 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 182+4 3 182+4 3 232+4 9 232+4 9 308+7 9 308+7 9 440+11 2 440+11 2 530+12 1 530+12 1 810+197 810+197 1109+25 0 1109+25 0 4 4 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 180+5 2 180+5 2 209+6 6 209+6 6 236+7 2 236+7 2 383+11 9 383+11 9 375+11 5 375+11 5 365+79 365+79 476+103 476+103 5 5 BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 182+3 0 182+3 0 264+6 3 264+6 3 364+8 8 364+8 8 537+97 537+97 610+80 610+80 842+103 842+103 1146+12 5 1146+12 5 6 6 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 181+2 9 181+2 9 264+4 6 264+4 6 313+5 6 313+5 6 393+62 393+62 440+67 440+67 520+76 520+76 715+163 715+163 7 7 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 182+3 5 182+3 5 227+5 7 227+5 7 256+6 256+6 381+90 381+90 395+76 395+76 474+100 474+100 704+101 704+101

Скорость ингибирования роста опухоли для тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом NCI-H526 вычисляли на основе измерения объема опухоли на 14 сутки после начала лечения.The rate of tumor growth inhibition for test samples in the NCI-H526 xenograft model was calculated based on tumor volume measurements at 14 days after the start of treatment.

- 144 045862- 144 045862

Таблица 39. Анализ ингибирования роста опухолиTable 39. Tumor growth inhibition assay

Г руппа Group Лечение Treatment Объем опухоли (мм³)^а Tumor volume (mm ³ ) ^a Т/С^ь (%) T/S ^b (%) TGI (%) TGI (%) Значение Р P value 1 1 Носитель, qw Media, qw 1365±208 1365±208 - - - - - - 2 2 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 1205±79 1205±79 88,3 88.3 13,4 13.4 /?>0,05 /?>0.05 3 3 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 1109±250 1109±250 81,3 81.3 21,6 21.6 /?>0,05 /?>0.05 4 4 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 476±103 476±103 34,9 34.9 75,0 75.0 /?<0,01 /?<0.01 5 5 BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 1146±125 1146±125 84,0 84.0 18,5 18.5 /?>0,05 /?>0.05 6 6 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 715±163 715±163 52,4 52.4 54,9 54.9 /?>0,05 /?>0.05 7 7 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 704±101 704±101 51,5 51.5 55,9 55.9 /?<0,05 /?<0.05

а. Среднее значение ± SEM;A. Mean ± SEM;

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом NCI-H526. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 58 и 59 и в таблицах 38 и 39.This study evaluated the therapeutic efficacy of test samples in the NCI-H526 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 58 and 59 and in tables 38 and 39.

Средний размер опухоли у мышей, которым вводили носитель, достигал 13653 на 14 сутки после начала лечения. BCY8245 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=1205 мм³, TGI=13,4%, p> 0,05) и 3 мг/кг, biw (TV=1109 мм³, TGI=21,6%, p>0,05) продемонстрировал небольшую противоопухолевую активность, BCY8245 в дозе 5 мг/кг, qw (TV=476 мм³, TGI=75,0%, р<0,01) продемонстрировал значительную противоопухолевую активность.The average tumor size in mice treated with vehicle reached 13,653 on day 14 after the start of treatment. BCY8245 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=1205 ^mm3 , TGI=13.4%, p>0.05) and 3 mg/kg, biw (TV=1109 ^mm3 , TGI=21.6%, p>0.05) demonstrated slight antitumor activity, BCY8245 at a dose of 5 mg/kg, qw (TV=476 mm ³ , TGI=75.0%, p<0.01) demonstrated significant antitumor activity.

BCY8255 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=1146 мм³, TGI=18,5%, p>0,05) продемонстрировал небольшую противоопухолевую активность. BCY8255 в дозе 3 мг/кг, biw (TV=715 мм³, TGI=54,9%, p>0,05) имел умеренную противоопухолевую активность, но без статистической значимости. BCY8255 в дозе 5 мг/кг, qw (TV=704 мм³, TGI=55,9%, p<0,05) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8255 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=1146 mm ³ , TGI=18.5%, p>0.05) demonstrated slight antitumor activity. BCY8255 at a dose of 3 mg/kg, biw (TV=715 mm ³ , TGI=54.9%, p>0.05) had moderate antitumor activity, but without statistical significance. BCY8255 at a dose of 5 mg/kg, qw (TV=704 mm ³ , TGI=55.9%, p<0.05) had significant antitumor activity.

В этом исследовании, BCY8245 в дозе 5 мг/кг biw вызывал снижение массы тела животных более 10%, BCY8255 3 мг/кг biw и 5 мг/кг qw вызывали снижение массы тела животных более 15% в ходе режима лечения.In this study, BCY8245 at a dose of 5 mg/kg biw caused a decrease in animal body weight of more than 10%, BCY8255 3 mg/kg biw and 5 mg/kg qw caused a decrease in animal body weight of more than 15% during the treatment regimen.

В этой клеточной линии, которая демонстрирует минимальную экспрессию нектина-4 в исследованиях FACS, рост опухоли сдерживался посредством BCY8245, однако не происходила регрессия опухоли, подтверждая опосредование мишенью оптимальной эффективности.In this cell line, which exhibits minimal nectin-4 expression in FACS studies, tumor growth was inhibited by BCY8245 but tumor regression did not occur, confirming target-mediated optimal efficacy.

Пример 9.7. Исследование эффективности in vivo тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude, с ксенотрансплантатом Panc2.13.Example 9.7. Study of the in vivo effectiveness of test samples in the treatment of Balb/c nude mice with a Panc2.13 xenograft.

1. Задача исследования.1. Research objective.

- 145 045862- 145 045862

2. Схема эксперимента2. Experimental design

3. Материалы.3. Materials.

3.1.1. Животные.3.1.1. Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: Balb/c nude.Line: Balb/c nude.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22 г.Body weight: 18-22 g.

3.1.2. Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

Температура: 20~26°С.Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Опухолевые клетки Panc2.13 поддерживают в среде RMPI1640, дополненной 15% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой, и 10 единиц/мл рекомбинантного инсулина человека при 37°С в атмосфере 5% СО2 в воздухе. Опухолевые клетки стандартным образом субкультивируют два раза в неделю. Клетки, растущие в экспоненциальной фазе роста, собирают и подсчитывают для инокуляции опухоли.Panc2.13 tumor cells were maintained in RMPI1640 medium supplemented with 15% heat-inactivated fetal bovine serum and 10 units/ml recombinant human insulin at 37°C in an atmosphere of 5% CO2 in air. Tumor cells are routinely subcultured twice a week. Cells growing in the exponential growth phase are harvested and counted for tumor inoculation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок опухолевые клетки Рапс2.13 (5х10⁶) с матригелем (1:1) в 0,2 мл PBS для развития опухоли. 41 животное случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 149 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в таблице схемы эксперимента.Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with Raps2.13 tumor cells (5x10 ⁶ ) with Matrigel (1:1) in 0.2 ml PBS for tumor development. 41 animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 149 mm ³ . The introduction of test samples and the number of animals in each group are presented in the experimental design table.

- 146 045862- 146 045862

Тестируемый образец Test sample Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8242 BCY8242 0,5 0.5 Разбавить 510 мкл исходного раствора 20 мг/мл BCY8242 19,886 мл гистидинового буфера Dilute 510 µl of 20 mg/ml BCY8242 stock solution with 19.886 ml histidine buffer BCY8242 BCY8242 о,з o, s Разбавить 480 мкл исходного раствора 0,5 мг/мл BCY8242 320 мкл гистидинового буфера Dilute 480 µl of 0.5 mg/ml BCY8242 stock solution with 320 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8245 BCY8245 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 400 мкл гистидинового буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 400 µl histidine buffer BCY8253 BCY8253 0,3 0.3 Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8253 560 мкл гистидинового буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8253 stock solution with 560 µl histidine buffer BCY8255 BCY8255 0,5 0.5 Разбавить 400 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 400 мкл ацетатного буфера Dilute 400 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 400 µl acetate buffer BCY8255 BCY8255 о,з o, s Разбавить 240 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8255 560 мкл ацетатного буфера Dilute 240 µl of 1 mg/ml BCY8255 stock solution with 560 µl acetate buffer 3. Гистидиновый буфер:25 мМ гистидин, рН7, 10% сахароза 4. Ацетатный буфер: 50 мМ ацетат/уксусная кислота, pH 5, 10% сахароза 3. Histidine buffer: 25 mM histidine, pH7, 10% sucrose 4. Acetate buffer: 50 mM acetate/acetic acid, pH 5, 10% sucrose

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

В конце исследования опухоли во всех группах, за исключением групп 2, 3 и 4, извлекали через 2 ч после последнего дозирования. Опухоли в группах 2, 3 и 4 извлекали без какого-либо дозирования.At the end of the study, tumors in all groups except groups 2, 3, and 4 were removed 2 hours after the last dosing. Tumors in groups 2, 3 and 4 were removed without any dosing.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Кривые роста опухоли.5.1. Tumor growth curves.

Кривые роста опухоли представлены на фиг. 60-63.Tumor growth curves are shown in Fig. 60-63.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей Balb/c nude, имеющих ксенотрансплантат Panc2.13, представлен в табл. 40.The average tumor volume over time in female Balb/c nude mice bearing a Panc2.13 xenograft is presented in Table 1. 40.

Таблица 40. Регистрация объема опухоли с течением времениTable 40. Registration of tumor volume over time

Групп Group Сутки после начала лечения Days after the start of treatment а A Лечение Treatment 0 0 2 2 4 4 7 7 9 9 11 eleven 14 14 1 1 Носитель, qw Media, qw 149±12 149±12 202±12 202±12 240±9 240±9 321±17 321±17 410±27 410±27 479±32 479±32 545±17 545±17 2 2 BCY8242, 3 мг/кг, qw BCY8242, 3 mg/kg, qw 149±31 149±31 172±33 172±33 201±46 201±46 240±40 240±40 275±49 275±49 293±48 293±48 334±49 334±49 3 3 BCY8242, 3 мг/кг, biw BCY8242, 3 mg/kg, biw 148±10 148±10 169±6 169±6 192±1 192±1 226±13 226±13 245±14 245±14 223±11 223±11 227±22 227±22 4 4 BCY8242, 5 мг/кг, qw BCY8242, 5 mg/kg, qw 149±37 149±37 172±32 172±32 190±38 190±38 211±37 211±37 214±37 214±37 199±31 199±31 218±41 218±41 5 5 BCY8245, BCY8245, 149±34 149±34 160±33 160±33 191±39 191±39 215±53 215±53 242±62 242±62 259±59 259±59 271±54 271±54

- 147 045862- 147 045862

3 мг/кг, qw 3 mg/kg, qw 6 6 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 148±46 148±46 170±38 170±38 204±57 204±57 216±56 216±56 236±59 236±59 241±60 241±60 231±57 231±57 7 7 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 149±18 149±18 180±11 180±11 231±33 231±33 242±34 242±34 248±40 248±40 231±37 231±37 238±40 238±40 8 8 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 149±19 149±19 176±20 176±20 230±25 230±25 253±20 253±20 274±27 274±27 303±18 303±18 324±21 324±21 9 9 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 149±42 149±42 175±39 175±39 217±61 217±61 216±59 216±59 222±64 222±64 213±64 213±64 219±68 219±68 10 10 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 148±7 148±7 159±8 159±8 195±5 195±5 190±5 190±5 173=1=11 173=1=11 168±12 168±12 170±23 170±23 11 eleven BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 150±35 150±35 184±39 184±39 234±52 234±52 267±52 267±52 277±54 277±54 297±55 297±55 310±58 310±58 12 12 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 149±41 149±41 186±43 186±43 233±52 233±52 247±53 247±53 256±54 256±54 244±44 244±44 251±44 251±44 13 13 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 150±27 150±27 180±27 180±27 223±37 223±37 239±39 239±39 224±31 224±31 200±18 200±18 209±19 209±19

Скорость ингибирования роста опухоли для тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом Panc2.13 вычисляли на основе измерения объема опухоли через 14 суток после начала лечения.The rate of tumor growth inhibition for test samples in the Panc2.13 xenograft model was calculated based on tumor volume measurements 14 days after the start of treatment.

Таблица 41. Анализ ингибирования роста опухолиTable 41. Tumor growth inhibition assay

Группа Group Лечение Treatment Объем опухоли (мм³)^а Tumor volume (mm ³ ) ^a Т/С^ь (%) T/S ^b (%) TGI (%) TGI (%) Значение Р по сравнению с носителем P value according to compared to the carrier 1 1 Носитель, qw Media, qw 545±17 545±17 - - - - - - 2 2 BCY8242, 3 мг/кг, qw BCY8242, 3 mg/kg, qw 334±49 334±49 61,2 61.2 53,2 53.2 /?<0,01 /?<0.01 3 3 BCY8242, 3 мг/кг, biw BCY8242, 3 mg/kg, biw 227±22 227±22 41,6 41.6 80,0 80.0 /><0,001 /><0.001 4 4 BCY8242, 5 мг/кг, qw BCY8242, 5 mg/kg, qw 218±41 218±41 40,0 40.0 82,4 82.4 /?<0,001 /?<0.001 5 5 BCY8245, 3 мг/кг, qw BCY8245, 3 mg/kg, qw 271±54 271±54 49,6 49.6 69,2 69.2 /?<0,01 /?<0.01

- 148 045862- 148 045862

6 6 BCY8245, 3 мг/кг, biw BCY8245, 3 mg/kg, biw 231±57 231±57 42,3 42.3 79,1 79.1 /?<0,001 /?<0.001 7 7 BCY8245, 5 мг/кг, qw BCY8245, 5 mg/kg, qw 238±40 238±40 43,6 43.6 77,5 77.5 /?<0,001 /?<0.001 8 8 BCY8253, 3 мг/кг, qw BCY8253, 3 mg/kg, qw 324±21 324±21 59,3 59.3 55,9 55.9 /?<0,01 /?<0.01 9 9 BCY8253, 3 мг/кг, biw BCY8253, 3 mg/kg, biw 219±68 219±68 40,2 40.2 82,2 82.2 /?<0,001 /?<0.001 10 10 BCY8253, 5 мг/кг, qw BCY8253, 5 mg/kg, qw 170±23 170±23 31,1 31.1 94,5 94.5 /?<0,001 /?<0.001 11 eleven BCY8255, 3 мг/кг, qw BCY8255, 3 mg/kg, qw 310±58 310±58 56,8 56.8 59,5 59.5 /?<0,01 /?<0.01 12 12 BCY8255, 3 мг/кг, biw BCY8255, 3 mg/kg, biw 251±44 251±44 46,0 46.0 74,3 74.3 /?<0,001 /?<0.001 13 13 BCY8255, 5 мг/кг, qw BCY8255, 5 mg/kg, qw 209±19 209±19 38,2 38.2 85,1 85.1 /?<0,001 /?<0.001

а. Среднее значение ± SEM.A. Mean ± SEM.

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом Panc2.13. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 60-63 и в табл. 40 и 41.This study evaluated the therapeutic efficacy of test samples in a Panc2.13 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 60-63 and in table. 40 and 41.

Средний размер опухоли у мышей, которым вводили носитель, достигал 545 мм³ на 14 сутки. BCY8242 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=334 мм³, TGI=53,2%, p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=227 мм³, TGI=80,0%, p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=218 мм³, TGI=82,4%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы и частоты дозирования образом.The average tumor size in mice treated with vehicle reached 545 ^mm3 on day 14. BCY8242 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=334 ^mm3 , TGI=53.2%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=227 ^mm3 , TGI=80.0%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=218 mm ³ , TGI=82.4%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- and frequency-dependent manner.

BCY8245 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=271 мм³, TGI=69,2%, p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=231 мм³, TGI=79,1%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=238 мм³, TGI=77,5%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8245 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=271 mm ³ , TGI=69.2%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=231 mm ³ , TGI=79.1%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=238 mm ³ , TGI=77.5%, p<0.001) had significant antitumor activity.

BCY8253 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=324 мм³, TGI=59,8%,p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=219 мм³, TGI=82,2%, p<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=170 мм³, TGI=94,5%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы и частоты дозирования образом.BCY8253 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=324 ^mm3 , TGI=59.8%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=219 ^mm3 , TGI=82.2%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=170 mm ³ , TGI=94.5%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose- and frequency-dependent manner.

BCY8255 в дозе 3 мг/кг, qw (TV=310 мм³, TGI=59,5%,p<0,01), 3 мг/кг, biw (TV=251 мм³, TGI=74,3%, р<0,001) и 5 мг/кг, qw (TV=209 мм³, TGI=85,1%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность.BCY8255 at a dose of 3 mg/kg, qw (TV=310 mm ³ , TGI=59.5%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV=251 mm ³ , TGI=74.3%, p<0.001) and 5 mg/kg, qw (TV=209 mm ³ , TGI=85.1%, p<0.001) had significant antitumor activity.

В этом исследовании животные во всех группах 5 мг/кг qw теряли в среднем более 15% массы тела, особенно животные в группах BCY8253 и BCY8255 5 мг/кг, которые теряли более 20% массы тела в ходе режима лечения.In this study, animals in all 5 mg/kg qw groups lost on average more than 15% of body weight, especially animals in the BCY8253 and BCY8255 5 mg/kg groups, which lost more than 20% of body weight during the treatment regimen.

В этой клеточной линии, которая демонстрирует только умеренную экспрессию нектина-4 в исследованиях FACS, рост опухоли сдерживается посредством BCY8245, однако опухоль регрессии опухоли не происходит.In this cell line, which shows only moderate expression of nectin-4 in FACS studies, tumor growth is inhibited by BCY8245, but tumor regression does not occur.

Пример 9.8. Исследование эффективности in vivo тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом MDA-MB-468.Example 9.8. Study of in vivo effectiveness of test samples in the treatment of Balb/c nude mice with MDA-MB-468 xenograft.

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей исследования является оценка in vivo противоопухолевой эффективности BCY8781 и BCY8245 и BCY8234 в комбинации с BCY8234 при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом MDA-MB-468 для определения роли, которую связывание мишени играет в оптимальной эффективности.The objective of the study is to evaluate the in vivo antitumor efficacy of BCY8781 and BCY8245 and BCY8234 in combination with BCY8234 in the treatment of Balb/c nude mice bearing the MDA-MB-468 xenograft to determine the role that target binding plays in optimal efficacy.

- 149 045862- 149 045862

2. Схема эксперимента2. Experimental design

Г руппа Group Лечение Treatment Доза (мг/кг) Dose (mg/kg) N N Путь дозирования Dosing route Схема Scheme 1 1 Носитель Carrier - - 4 4 в/в IV Qw, 3 weeks Qw, 3 weeks 2 2 BCY8245 BCY8245 о,з o, s 4 4 в/в IV Qw, 3 weeks Qw, 3 weeks 3 3 BCY8245 BCY8245 1 1 4 4 в/в IV Qw, 3 weeks Qw, 3 weeks 4 4 BCY8245 BCY8245 з h 4 4 в/в IV Qw, 3 weeks Qw, 3 weeks 5 5 BCY8781 BCY8781 0,3 0.3 4 4 в/в IV Qw, 3 weeks Qw, 3 weeks 6 6 BCY8781 BCY8781 1 1 4 4 в/в IV Qw, 3 weeks Qw, 3 weeks 7 7 BCY8781 BCY8781 з h 4 4 в/в IV Qw, 3 weeks Qw, 3 weeks 8 8 BCY8245+BCY8234 BCY8245+BCY8234 1+300 1+300 4 4 в/в IV Qw, 3 weeks Qw, 3 weeks 9 9 BCY8245+BCY8234 BCY8245+BCY8234 3+300 3+300 4 4 в/в IV Qw, 3 weeks Qw, 3 weeks

Примечание: N, количество животных в каждой группе.Note: N, number of animals in each group.

3. Материалы.3. Materials.

3.1.1. Животные.3.1.1. Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: Balb/c nude.Line: Balb/c nude.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22 г.Body weight: 18-22 g.

Количество животных: 36 мышей плюс запасные.Number of animals: 36 mice plus spares.

3.1.2. Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

Мышей содержали в индивидуально вентилируемых клетках при постоянной температуре и влажности с 4 животными в каждой клетке.Mice were housed in individually ventilated cages at constant temperature and humidity with 4 animals per cage.

Температура: 20~26°С.Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Опухолевые клетки поддерживали в среде Лейбовитца L-15, дополненной 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой, при 37°С в атмосфере 0% СО2 в воздухе. Опухолевые клетки стандартным образом субкультивировали два раза в неделю. Клетки, растущие в экспоненциальной фазе роста, собирали и подсчитывали для инокуляции опухоли.Tumor cells were maintained in Leibowitz L-15 medium supplemented with 10% heat-inactivated fetal bovine serum at 37°C in an atmosphere of 0% CO2 in air. Tumor cells were routinely subcultured twice a week. Cells growing in the exponential growth phase were collected and counted for tumor inoculation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок опухолевые клетки MDA-MB-468 (10х10⁶) в 0,2 мл PBS, дополненном 50% матригелем, для формирования опухоли. 36 животных случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 186 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в таблице схемы эксперимента.Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with MDA-MB-468 tumor cells (10 x 10 ⁶ ) in 0.2 ml PBS supplemented with 50% Matrigel to form a tumor. 36 animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 186 mm ³ . The introduction of test samples and the number of animals in each group are presented in the experimental design table.

- 150 045862- 150 045862

Тестируемы й образец Test sample Чистота Purity Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8245 BCY8245 99,4% 99.4% 1 0,03 0,1 1 0.03 0.1 Растворить 5,0 мг BCY8245 в 4,97 мл гистидинового буфера¹ Разбавить 36 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 1164 мкл гистидинового буфера Разбавить 120 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 1080 мкл гистидинового буфера Dissolve 5.0 mg BCY8245 in 4.97 mL Histidine Buffer ¹ Dilute 36 μL 1 mg/mL BCY8245 stock solution with 1164 μL Histidine Buffer Dilute 120 μL 1 mg/mL BCY8245 stock solution with 1080 μL Histidine Buffer о,з o, s Разбавить 360 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 840 мкл гистидинового буфера Dilute 360 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 840 µl histidine buffer BCY8781 BCY8781 99,0% 99.0% 1 1 Растворить 2,5 мг BCY8781 в 49,5 мкл DMSO, разбавить 2,426 мл гистидинового буфера Dissolve 2.5 mg BCY8781 in 49.5 µl DMSO, dilute with 2.426 ml histidine buffer 0,03 0.03 Разбавить 36 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8781 посредством 1164 мкл гистидинового буфера Dilute 36 µl of 1 mg/ml BCY8781 stock solution with 1164 µl histidine buffer 0,1 0.1 Разбавить 120 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8781 посредством 1080 мкл гистидинового буфера Dilute 120 µl of 1 mg/ml BCY8781 stock solution with 1080 µl histidine buffer 0,3 0.3 Разбавить 360 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8781 посредством 840 мкл гистидинового буфера Dilute 360 µl of 1 mg/ml BCY8781 stock solution with 840 µl histidine buffer BCY8234 BCY8234 98,10% 98.10% 30 thirty Растворить 147 мг BCY8234 в 4,807 мл гистидинового буфера Dissolve 147 mg BCY8234 in 4.807 ml histidine buffer

1. 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза1. 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

На 21 сутки исследования опухоли в группах 5, 6, 7, 8 и 9 извлекали для FFPE. В конце исследования опухоли в группе 3 извлекали для FFPE.On day 21 of the study, tumors in groups 5, 6, 7, 8 and 9 were removed for FFPE. At the end of the study, tumors in group 3 were removed for FFPE.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Кривая роста опухоли.5.1. Tumor growth curve.

Кривая роста опухоли представлена на фиг. 64.The tumor growth curve is shown in Fig. 64.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей Balb/c nude, имеющих ксенотрансплантат MDA-MB-468, представлен в табл. 42-44.The average tumor volume over time in female Balb/c nude mice bearing the MDA-MB-468 xenograft is presented in Table 1. 42-44.

Скорость ингибирования роста опухоли для тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом MDA-MB-468 вычисляли на основе измерения объема опухоли через 21 сутки после начала лечения.The rate of tumor growth inhibition for test samples in the MDA-MB-468 xenograft model was calculated based on tumor volume measurements 21 days after the start of treatment.

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом MDA-MB-468. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 64 и в табл. 42-45.This study evaluated the therapeutic efficacy of test samples in the MDA-MB-468 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 64 and in table. 42-45.

Средний размер опухоли у мышей, которым вводили носитель, достигал 420 мм³ на 21 сутки. BCY8245 в дозе 1 мг/кг, qw (TV=204 мм³, TGI=92,1%, p<0,001), 3 мг/кг, qw (TV=27 мм³, TGI=164,9%, p<0,001) имел значительную зависимую от дозу противоопухолевую активность. BCY8245 в дозе 0,3 мг/кг qw или biw не демонстрировал никакой противоопухолевой активности.The average tumor size in mice treated with vehicle reached 420 mm ³ on day 21. BCY8245 at a dose of 1 mg/kg, qw (TV=204 ^mm3 , TGI=92.1%, p<0.001), 3 mg/kg, qw (TV=27 ^mm3 , TGI=164.9%, p< 0.001) had significant dose-dependent antitumor activity. BCY8245 at a dose of 0.3 mg/kg qw or biw did not demonstrate any antitumor activity.

BCY8781 в дозе 0,3 мг/кг, qw (или biw) (TV=283 мм³, TGI=58,3%,p<0,05), 1 мг/кг, qw (TV=232 мм³, TGI=80,l%,p<0,01), 3 мг/кг, qw (TV=91 мм³, TGI=139,4%,p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы образом.BCY8781 at a dose of 0.3 mg/kg, qw (or biw) (TV=283 mm ³ , TGI=58.3%, p<0.05), 1 mg/kg, qw (TV=232 mm ³ , TGI =80.l%,p<0.01), 3 mg/kg, qw (TV=91 mm ³ , TGI=139.4%, p<0.001) had significant antitumor activity in a dose-dependent manner.

- 151 045862- 151 045862

BCY8245 в дозе 1 мг/кг, qw и 3 мг/кг, qw в комбинации с BCY8234 (свободный от токсина родственный пептид) в дозе 300 мг/кг, qw имели значительную противоопухолевую активность (TV=242 mm³, TGI=75,4%, p<0,01). По сравнению с BCY8245 отдельно, BCY8234 в дозе 300 мг/кг был антагонистом противоопухолевой активности BCY8245 в дозе 3 мг/кг (р<0,001). Это снижение эффективности посредством конкуренции со свободным от токсина пептидом демонстрирует важность связывания мишени для оптимальной эффективности. Ответ в виде эффективности, наблюдаемый для не связывающего ВТС, BCY8781, был сравнимым с ответом, наблюдаемым для BCY8245 в присутствии избытка свободного от токсина связывающего пептида. Это подтверждает преимущества опосредуемого мишенью связывания для оптимальной эффективности.BCY8245 at a dose of 1 mg/kg, qw and 3 mg/kg, qw in combination with BCY8234 (toxin-free related peptide) at a dose of 300 mg/kg, qw had significant antitumor activity (TV=242 mm ³ , TGI=75, 4%, p<0.01). Compared with BCY8245 alone, BCY8234 at a dose of 300 mg/kg was an antagonist of the antitumor activity of BCY8245 at a dose of 3 mg/kg (p < 0.001). This reduction in efficacy through competition with the toxin-free peptide demonstrates the importance of target binding for optimal efficacy. The potency response observed for the non-BTC binding BCY8781 was comparable to the response observed for BCY8245 in the presence of excess toxin-free binding peptide. This confirms the benefits of target-mediated binding for optimal efficacy.

Группу носителя разделяли на две группы на 32 сутки и вводили дозу 5 мг/кг BCY8781 или 5 мг/кг BCY8245, соответственно, опухоли продемонстрировали заметную регрессию после однократной дозы.The vehicle group was divided into two groups on day 32 and dosed with 5 mg/kg BCY8781 or 5 mg/kg BCY8245, respectively, tumors showed marked regression after a single dose.

В ходе последующего мониторинга мыши, которым вводили BCY8245 1 мг/кг qw, продемонстрировали отчетливый рецидив опухоли, в то время мыши, которым вводили BCY8245 3 мг/кг qw, не продемонстрировали никакого рецидива опухоли.During follow-up monitoring, mice administered BCY8245 1 mg/kg qw showed clear tumor recurrence, while mice administered BCY8245 3 mg/kg qw did not demonstrate any tumor recurrence.

Таблица 42. Регистрация объема опухоли с течением времени (сутки с 0 по 21)Table 42. Registration of tumor volume over time (days 0 to 21)

Г руппа Group Лечение Treatment Сутки после начала лечения Days after the start of treatment 0 0 2 2 4 4 7 7 9 9 11 eleven 14 14 16 16 18 18 21 21 1 1 Носитель, qw Media, qw 182+15 182+15 196+18 196+18 217+18 217+18 260+15 260+15 283+19 283+19 302+26 302+26 335+27 335+27 362+28 362+28 386+31 386+31 420+37 420+37 2 2 BCY8245 0,3 мг/кг, qw BCY8245 0.3 mg/kg, qw 188+21 188+21 189+19 189+19 211+21 211+21 235+28 235+28 252+25 252+25 253+33 253+33 275+26 275+26 277+27 277+27 295+26 295+26 300+27 300+27 3 3 BCY8245 1 мг/кг, qw BCY8245 1 mg/kg, qw 185+21 185+21 187+22 187+22 183+22 183+22 190+28 190+28 205+29 205+29 195+27 195+27 201+25 201+25 197+22 197+22 218+24 218+24 204+19 204+19 4 4 BCY8245 3 мг/кг, qw BCY8245 3 mg/kg, qw 181+14 181+14 171+17 171+17 163+10 163+10 141+21 141+21 113+16 113+16 92+5 92+5 66+4 66+4 58+2 58+2 41+2 41+2 27+1 27+1 5 5 BCY8781 0,3 мг/кг, qw BCY8781 0.3 mg/kg, qw 184+14 184+14 187+12 187+12 204+9 204+9 245+17 245+17 262+24 262+24 272+21 272+21 277+24 277+24 290+29 290+29 297+41 297+41 283+23 283+23 6 6 BCY8781 1 мг/кг, qw BCY8781 1 mg/kg, qw 184+12 184+12 175+16 175+16 188+21 188+21 206+25 206+25 223+26 223+26 213+29 213+29 202+31 202+31 200+24 200+24 211+34 211+34 232+32 232+32 7 7 BCY8781 3 мг/кг, qw BCY8781 3 mg/kg, qw 184+15 184+15 179+17 179+17 180+20 180+20 177+27 177+27 170+21 170+21 142+21 142+21 124+13 124+13 108+12 108+12 107+8 107+8 91+7 91+7 8 8 BCY8245+BCY8234 1+300 мг/кг, qw BCY8245+BCY8234 1+300 mg/kg, qw 184+15 184+15 189+22 189+22 194+28 194+28 212+30 212+30 221+34 221+34 221+39 221+39 223+36 223+36 211+38 211+38 221+51 221+51 242+67 242+67 9 9 BCY8245+BCY8234 3+300 мг/кг, qw BCY8245+BCY8234 3+300 mg/kg, qw 184+16 184+16 178+57 178+57 193+36 193+36 197+46 197+46 179+44 179+44 138+41 138+41 137+32 137+32 114+24 114+24 110+24 110+24 99+18 99+18

Таблица 43. Регистрация объема опухоли с течением времени (сутки с 23 по 32)Table 43. Registration of tumor volume over time (days 23 to 32)

Г руппа Group Лечение Treatment Сутки после начала лечения Days after the start of treatment 23 23 25 25 28 28 30 thirty 32 32 1 1 Носитель, qw Media, qw 434+35 434+35 460+38 460+38 504+32 504+32 535+46 535+46 548+51 548+51 2 2 BCY8245 0,3 мг/кг, qw BCY8245 0.3 mg/kg, qw 284+14 284+14 268+10 268+10 254+15 254+15 240+21 240+21 241+32 241+32 3 3 BCY8245 1 мг/кг, qw BCY8245 1 mg/kg, qw 200+16 200+16 199+13 199+13 210+6 210+6 221+14 221+14 239+16 239+16 4 4 BCY8245 BCY8245 22+3 22+3 19+3 19+3 20+3 20+3 15+2 15+2 15+1 15+1

мг/кг, qwmg/kg, qw

- 152 045862- 152 045862

Таблица 44. Регистрация объема опухоли с течением времени (сутки с 35 по 91) Table 44. Registration of tumor volume over time (days 35 to 91) Сутки Day Группа 1, носитель qw, дозированный с BCY8781 5 мг/кг на PG-D32 Group 1, vehicle qw dosed with BCY8781 5 mg/kg on PG-D32 Группа 1, носитель qw, дозированный с BCY8245 5 мг/кг на PG-D32 Group 1, vehicle qw dosed with BCY8245 5 mg/kg at PG-D32 Группа BCY8245, мг/кг, qw Group BCY8245, mg/kg, qw 2, о,з 2, o, z Группа 3 BCY8245, 1 мг/кг, qw Group 3 BCY8245, 1 mg/kg, qw Группа 4, BCY8245, 3 мг/кг, qw Group 4, BCY8245, 3 mg/kg, qw 35 35 389+19 389+19 455+81 455+81 237+33 237+33 255+15 255+15 19+2 19+2 37 37 326+26 326+26 373+92 373+92 246+40 246+40 292+19 292+19 16+2 16+2 39 39 248+18 248+18 247+48 247+48 248+37 248+37 304+36 304+36 14+1 14+1 42 42 149+14 149+14 134+18 134+18 245+48 245+48 314+42 314+42 14+2 14+2 44 44 135+20 135+20 108+3 108+3 251+48 251+48 327+42 327+42 18+4 18+4 46 46 129+8 129+8 79+3 79+3 248+61 248+61 342+55 342+55 19+4 19+4 49 49 120+1 120+1 63+8 63+8 250+65 250+65 356+59 356+59 20+4 20+4 51 51 134+6 134+6 62+5 62+5 264+68 264+68 374+71 374+71 18+5 18+5 53 53 144+2 144+2 53+12 53+12 268+81 268+81 381+87 381+87 22+4 22+4 56 56 161+1 161+1 52+13 52+13 271+87 271+87 416+104 416+104 21+4 21+4 58 58 166+7 166+7 58+0 58+0 267+95 267+95 433+113 433+113 20+5 20+5 60 60 169+10 169+10 61+7 61+7 270+108 270+108 464+119 464+119 18+6 18+6 64 64 176+10 176+10 71+23 71+23 276+132 276+132 532+154 532+154 23+6 23+6 67 67 191+5 191+5 66+14 66+14 269+137 269+137 550+162 550+162 23+5 23+5 71 71 194+18 194+18 73+5 73+5 280+155 280+155 565+170 565+170 24+7 24+7 74 74 186+1 186+1 82+4 82+4 295+167 295+167 594+173 594+173 27+8 27+8 78 78 203+11 203+11 90+8 90+8 313+194 313+194 612+195 612+195 23+6 23+6 81 81 212+20 212+20 104+17 104+17 291+192 291+192 639+206 639+206 27+8 27+8 84 84 224+51 224+51 110+1 110+1 301+194 301+194 695+234 695+234 34+7 34+7 88 88 230+60 230+60 106+7 106+7 277+194 277+194 743+236 743+236 32+7 32+7 91 91 242+75 242+75 110+3 110+3 293+209 293+209 771+240 771+240 26+6 26+6

Таблица 45. Анализ ингибирования роста опухолиTable 45: Tumor Growth Inhibition Assay

Групп а Group Лечение Treatment Объем опухоли (мм³)^а Tumor volume (mm ³ ) ^a Т/С^ь (%) T/S ^b (%) TGI (%) TGI (%) Значение Meaning Р по сравнени ю с носителем R by compared to carrier Комбинаци я по сравнению с BCY8245 Combination by compared to BCY8245 1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5 6 7 Носитель, qw BCY8245 0,3 мг/кг, qw BCY8245 1 мг/кг, qw BCY8245 3 мг/кг, qw BCY8781 0,3 мг/кг, qw BCY8781 1 мг/кг, qw BCY8781 3 мг/кг, qw BCY8245+BCY82 Media, qw BCY8245 0.3 mg/kg, qw BCY8245 1 mg/kg, qw BCY8245 3 mg/kg, qw BCY8781 0.3 mg/kg, qw BCY8781 1 mg/kg, qw BCY8781 3 mg/kg, qw BCY8245+BCY82 420+37 300+27 204+19 27+1 283+23 232+32 91+7 420+37 300+27 204+19 27+1 283+23 232+32 91+7 71,4 48,6 6,5 67,4 55,2 21,6 71.4 48.6 6.5 67.4 55.2 21.6 52,7 92,1 164,9 58,3 80,1 139,4 52.7 92.1 164.9 58.3 80.1 139.4 /?>0,05 /?<0,001 /?<0,001 /?<0,05 /?<0,01 /?<0,001 /?>0.05 /?<0.001 /?<0.001 /?<0.05 /?<0.01 /?<0.001 8 8 34 1+300 мг/кг, qw BCY8245+BCY82 34 1+300 mg/kg, qw BCY8245+BCY82 242+67 242+67 57,8 57.8 75,4 75.4 /?<0,01 /?<0.01 /?>0,05 /?>0.05 9 34 3+300 мг/кг, qw a. Среднее значение ± SEM. 9 34 3+300 mg/kg, qw a. Mean ± SEM. 99+18 99+18 23,5 23.5 135,9 135.9 /?<0,001 /?<0.001 Р<0,001 P<0.001 b. Ингибирование роста опухоли вычисляют путем деления среднего по группе объема опухоли для b. Tumor growth inhibition is calculated by dividing the group mean tumor volume for

- 153 045862 группы лечения на средний по группе объем опухоли для контрольной группы (Т/С).- 153 045862 treatment group per group mean tumor volume for the control group (T/C).

Пример 9.9. Исследование эффективности in vivo тестируемых образцов при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом MDA-MB-468.Example 9.9. Study of in vivo effectiveness of test samples in the treatment of Balb/c nude mice with MDA-MB-468 xenograft.

1. Задача исследования.1. Research objective.

Задачей исследования является оценка in vivo противоопухолевой эффективности BCY8245 отдельно или в комбинации с BCY8234 при лечении мышей Balb/c nude с ксенотрансплантатом MDA-MB-468. 2. Схема экспериментаThe objective of the study is to evaluate the in vivo antitumor efficacy of BCY8245 alone or in combination with BCY8234 in the treatment of Balb/c nude mice bearing an MDA-MB-468 xenograft. 2. Experimental design

Г руппа Group Лечение Treatment Доза (мг/кг) Dose (mg/kg) N N Путь дозирования Dosing route Схема Scheme 1 1 Носитель Carrier — — 5 5 в/в IV Qw, 3 недели Qw, 3 weeks 2 2 BCY8245 BCY8245 1 1 5 5 в/в IV Qw, 3 недели Qw, 3 weeks 3 3 BCY8245 BCY8245 3 3 5 5 в/в IV Qw, 3 недели Qw, 3 weeks 4 4 BCY8245+ BCY8234 BCY8245+ BCY8234 3+300 =300 3+300 =300 5 5 в/в IV Qw, 3 недели Qw, 3 weeks

3. Материалы.3. Materials.

3.1.1. Животные.3.1.1. Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: Balb/c nude.Line: Balb/c nude.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22 г.Body weight: 18-22 g.

Количество животных: 20 мышей плюс запасные.Number of animals: 20 mice plus spares.

3.1.2. Условия содержания.3.1.2. Conditions of detention.

Мышей содержали в индивидуально вентилируемых клетках при постоянной температуре и влажности с 5 животными в каждой клетке.Mice were housed in individually ventilated cages at constant temperature and humidity with 5 animals per cage.

Температура: 20~26°С.Temperature: 20~26°C.

Влажность 40-70%.Humidity 40-70%.

4.1. Культивирование клеток.4.1. Cell cultivation.

Опухолевые клетки поддерживали в среде Лейбовитца L-15, дополненной 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сывороткой, при 37°С в атмосфере 0% СО₂ в воздухе. Опухолевые клетки стандартным образом субкультивировали два раза в неделю. Клетки, растущие в экспоненциальной фазе роста, собирали и подсчитывали для инокуляции опухоли.Tumor cells were maintained in Leibowitz L-15 medium supplemented with 10% heat-inactivated fetal calf serum at 37°C in an atmosphere of 0% CO ₂ in air. Tumor cells were routinely subcultured twice a week. Cells growing in the exponential growth phase were collected and counted for tumor inoculation.

4.2. Инокуляция опухоли.4.2. Tumor inoculation.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок опухолевые клетки MDA-MB-468 (10х 106) в 0,2 мл PBS, дополненном 50% матригелем, для формирования опухоли. 20 животных случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 464 мм³. Введение тестируемых образцов и количества животных в каждой группе представлены в таблице схемы эксперимента.Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with MDA-MB-468 tumor cells (10 x 106) in 0.2 ml PBS supplemented with 50% Matrigel to form a tumor. 20 animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 464 mm ³ . The introduction of test samples and the number of animals in each group are presented in the experimental design table.

- 154 045862- 154 045862

Тестируемы й образец Test sample Чистота Purity Конц. (мг/мл) Conc. (mg/ml) Состав Compound Носитель Carrier - - - - 25 мМ гистидин, pH 7, 10% сахароза 25 mM histidine, pH 7, 10% sucrose BCY8245 BCY8245 99,7% 99.7% 1 1 Растворить 5,0 мг BCY8245 в 4,985 мл гистидинового буфера Dissolve 5.0 mg BCY8245 in 4.985 ml histidine buffer 0,1 0.1 Разбавить 140 мкл 1 исходный раствор мг/мл BCY8245 посредством 1260 мкл гистидинового буфера Dilute 140 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 1260 µl histidine buffer о,з o, s Разбавить 420 мкл исходного раствора 1 мг/мл BCY8245 посредством 980 мкл гистидинового буфера Dilute 420 µl of 1 mg/ml BCY8245 stock solution with 980 µl histidine buffer BCY8234 BCY8234 98,10% 98.10% 30 thirty Растворить 147 мг BCY8234 в 4,807 мл гистидинового буфера Dissolve 147 mg BCY8234 in 4.807 ml histidine buffer

4.4. Взятие образцов.4.4. Taking samples.

В конце исследования опухоли в группе 3 извлекали для FFPE.At the end of the study, tumors in group 3 were removed for FFPE.

5. Результаты.5. Results.

5.1. Кривая роста опухоли.5.1. Tumor growth curve.

Кривая роста опухоли представлена на фиг. 65.The tumor growth curve is shown in Fig. 65.

Средний объем опухоли с течением времени у самок мышей Balb/c nude, имеющих ксенотрансплантат MDA-MB-468 представлен в табл. 46-48.The average tumor volume over time in female Balb/c nude mice bearing the MDA-MB-468 xenograft is presented in Table 1. 46-48.

Скорость ингибирования роста опухоли для тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом MDA-MB-468 вычисляли на основе измерения объема опухоли через 28 суток после начала лечения.The rate of tumor growth inhibition for test samples in the MDA-MB-468 xenograft model was calculated based on tumor volume measurements 28 days after the start of treatment.

В этом исследовании оценивали терапевтическую эффективность тестируемых образцов в модели с ксенотрансплантатом MDA-MB-468. Измеренные объемы опухоли во всех группах лечения в различные моменты времени представлены на фиг. 65 и в табл. 46-49.This study evaluated the therapeutic efficacy of test samples in the MDA-MB-468 xenograft model. Measured tumor volumes in all treatment groups at various time points are presented in FIG. 65 and in table. 46-49.

Первоначальный размер опухоли намеренно был больше, чем использовался раньше для определения того, демонстрирует ли BCY8245 эффективность при этом большем размере. Средний размер опухоли у мышей, которым вводили носитель, достигал 773 мм³ на 28 сутки. BCY8245 в дозе 1 мг/кг, qw (TV=384 мм³, TGI=126,6%,p<0,001) и 3 мг/кг, qw (TV=50 мм³, TGI=234,6%, p<0,001) имел значительную противоопухолевую активность зависимым от дозы образом на 28 сутки. Среди них, мыши, которым вводили BCY8245, доза 3 мг/кг qw продемонстрировала некоторый рецидив опухоли после прекращения лечения, дополнительно дозирование с 76 суток не привело к полной регрессии опухоли.The initial tumor size was intentionally larger than previously used to determine whether BCY8245 demonstrated efficacy at this larger size. The average tumor size in mice treated with vehicle reached 773 ^mm3 on day 28. BCY8245 at a dose of 1 mg/kg, qw (TV=384 mm ³ , TGI=126.6%, p<0.001) and 3 mg/kg, qw (TV=50 mm ³ , TGI=234.6%, p< 0.001) had significant antitumor activity in a dose-dependent manner on day 28. Among them, mice administered BCY8245 at a dose of 3 mg/kg qw showed some tumor relapse after stopping treatment, and additional dosing from day 76 did not result in complete tumor regression.

BCY8245 в дозе 3 мг/кг qw в комбинации с BCY8234 300 мг/кг qw имели значительную противоопухолевую активность (TV=55 мм³, TGI=234,0%, p<0,001) на 28 сутки, и опухоли не продемонстрировали никакого рецидива в ходе всего мониторинга.BCY8245 at a dose of 3 mg/kg qw in combination with BCY8234 300 mg/kg qw had significant antitumor activity (TV=55 mm ³ , TGI=234.0%, p<0.001) on day 28, and tumors did not show any relapse at during the entire monitoring.

Мыши в группе носителя, которым вводили 10 мг/кг ADC против нектина-4 или 5 мг/кг BCY8245 и мыши в группе 2 (BCY8245, 1 мг/кг, qw), которым вводили 5 мг/кг BCY8245 на PG-D28, продемонстрировали эффективную регрессию опухоли в последующие 3 недели, после чего опухоли продемонстрировали повторный рост в последующие 4 недели после прекращения введения лекарственного средства.Mice in the vehicle group that were administered 10 mg/kg anti-nectin-4 ADC or 5 mg/kg BCY8245 and mice in group 2 (BCY8245, 1 mg/kg, qw) that were administered 5 mg/kg BCY8245 on PG-D28. demonstrated effective tumor regression over the next 3 weeks, followed by tumor regrowth over the next 4 weeks after drug cessation.

BCY8245 был способен обеспечить регрессию опухолей приблизительно 450 мм³, а также при введении в группе, в которой ранее вводили носитель, в опухолях с начальным объемом приблизительно 770 мм³.BCY8245 was able to regress tumors of approximately 450 mm ³ and, when administered in the vehicle-pretreated group, tumors with an initial volume of approximately 770 mm ³ .

- 155 045862- 155 045862

Таблица 46. Регистрация объема опухоли с течением времени (Сутки с 0 по 28)Table 46. Registration of tumor volume over time (Days 0 to 28)

Г руппа Group Лечение Treatment Сутки после начала лечения Days after the start of treatment 0 0 2 2 5 5 7 7 9 9 12 12 14 14 16 16 19 19 21 21 23 23 26 26 28 28 529 529 548 548 574 574 602 602 632 632 659 659 686 686 706 706 741 741 769 769 773 773 1 1 Носитель, qw Media, qw 466+89 466+89 494+94 494+94 ±106 ±106 ±109 ±109 ±117 ±117 ±130 ±130 ±133 ±133 ±129 ±129 ±133 ±133 ±145 ±145 ±148 ±148 ±157 ±157 ±155 ±155 BCY8245 BCY8245 453 453 474 474 446 446 461 461 460 460 433 433 412 412 430 430 421 421 382 382 384 384 2 2 1мг/кг, qw 1 mg/kg, qw 466+22 466+22 480+24 480+24 ±29 ±29 ±25 ±25 ±31 ±31 ±34 ±34 ±28 ±28 ±37 ±37 ±32 ±32 ±32 ±32 ±34 ±34 ±37 ±37 ±41 ±41 BCY8245 BCY8245 388 388 333 333 284 284 168 168 129 129 93 93 83 83 71 71 60 60 49 49 50 50 3 3 3 мг/кг, qw 3 mg/kg, qw 464+28 464+28 451+24 451+24 ±25 ±25 ±30 ±30 ±26 ±26 ±24 ±24 ±20 ±20 ±23 ±23 ±17 ±17 ±19 ±19 ±17 ±17 ±17 ±17 ±17 ±17 BCY8245+BCY8234 BCY8245+BCY8234 401 401 389 389 309 309 205 205 150 150 125 125 4 4 (3+300) мг/кг, qw (3+300) mg/kg, qw 467+45 467+45 457+46 457+46 ±47 ±47 ±42 ±42 ±25 ±25 ±9 ±9 ±9 ±9 ±5 ±5 95+3 95+3 90+5 90+5 78+5 78+5 66+4 66+4 55+5 55+5

Таблица 47. Регистрация объема опухоли с течением времени (сутки с 30 по 75)Table 47. Registration of tumor volume over time (days 30 to 75)

Группа Group 2, 2, Группа 1, носитель, Группа 1, носитель, BCY8245, Group 1, carrier, Group 1, carrier, BCY8245, Сутки после 24 hours after Группа 3, Группа 4, Group 3, Group 4, дозированный в дозированный в 1 мг/кг, dosed to dosed at 1 mg/kg, с With начала started BCY8245, 3 BCY8245+BCY8234 BCY8245, 3 BCY8245+BCY8234 количестве 5 мг/кг количестве 5 мг/кг заменой quantity 5 mg/kg quantity 5 mg/kg replacement на on лечения treatment мг/кг, qw 3+300 мг/кг, qw mg/kg, qw 3+300 mg/kg, qw BCY8781 BCY8245 на PG-D28 5мг/кг на BCY8781 BCY8245 on PG-D28 5mg/kg on PG- ⁴ PG- ⁴ На PG-D28 D28 On PG-D28 D28

30 thirty 700+57 700+57 625+27 625+27 351+42 351+42 44+18 44+18 49+8 49+8 33 33 537+88 537+88 477+31 477+31 213+29 213+29 43+20 43+20 33+10 33+10 35 35 443+70 443+70 405+65 405+65 151+18 151+18 44+20 44+20 31+10 31+10 37 37 297+71 297+71 237+36 237+36 98+16 98+16 50+24 50+24 31+10 31+10 40 40 203+64 203+64 148+33 148+33 89+17 89+17 55+29 55+29 36+14 36+14 42 42 161+47 161+47 142+33 142+33 95+16 95+16 66+32 66+32 40+13 40+13 44 44 139+50 139+50 132+69 132+69 103+20 103+20 71+33 71+33 35+11 35+11 48 48 103+35 103+35 146+100 146+100 106+21 106+21 80+36 80+36 43+14 43+14 51 51 114+45 114+45 171+122 171+122 103+21 103+21 91+43 91+43 45+18 45+18 55 55 108+44 108+44 227+166 227+166 104+20 104+20 108+53 108+53 42+13 42+13 56 56 119+50 119+50 264+182 264+182 120+23 120+23 125+58 125+58 43+12 43+12 62 62 118+50 118+50 288+206 288+206 145+29 145+29 146+70 146+70 40+12 40+12 65 65 129+55 129+55 316+212 316+212 163+31 163+31 147+74 147+74 41+14 41+14 68 68 124+51 124+51 347+215 347+215 173+32 173+32 155+81 155+81 46+13 46+13 72 72 142+62 142+62 368+242 368+242 180+36 180+36 170+89 170+89 45+20 45+20 75 75 146+50 146+50 385+245 385+245 196+40 196+40 223+115 223+115 43+19 43+19

Таблица 48. Регистрация объема опухоли с течением времени (сутки с 79 по 103)Table 48. Registration of tumor volume over time (days 79 to 103)

Группа Лечение Group Treatment Сутки после начала лечения 79 82 86 89 93 96 100 103 Days after the start of treatment 79 82 86 89 93 96 100 103 BCY8245 3 3 мг/кг, qw BCY8245 3 3 mg/kg, qw 221+118 198+107 185+105 180+102 155+91 166+95 221+119 250+125 221+118 198+107 185+105 180+102 155+91 166+95 221+119 250+125

Таблица 49. Анализ ингибирования роста опухолиTable 49. Tumor growth inhibition assay

Группа Group Лечение Treatment Объем опухоли (мм³)^а Tumor volume (mm ³ ) ^a Т/С^ь (%) T/S ^b (%) TGI (%) TGI (%) Значение Р по сравнению с носителем P value compared to vehicle 1 1 Носитель, qw Media, qw 773+155 773+155 - - - - - - 2 2 BCY8245 BCY8245 384+41 384+41 49,7 49.7 126,6 126.6 //<0,001 //<0.001 3 3 1 мг/кг, qw BCY8245 1 mg/kg, qw BCY8245 50+17 50+17 6,4 6.4 234,6 234.6 //<0,001 //<0.001 4 4 3 мг/кг, qw BCY8245+BCY8234 3 mg/kg, qw BCY8245+BCY8234 55+5 55+5 7,1 7.1 234,0 234.0 //<0,001 //<0.001 3+300 мг/кг, qw a. Среднее значение ± SEM. 3+300 mg/kg, qw a. Mean ± SEM. — —

- 156 045862- 156 045862

Пример 10. Испытания РК in vivo.Example 10. In vivo tests of PK.

Животным с ксенотрнансплантатом MDA-MB-468 инъецировали BCY8245 (ВТ8009) в дозе 3 мг/кг. В различные моменты времени животных умерщвляли, проводили взятие плазмы и извлечение опухолей и их быстро замораживали. Образцы анализировали в отношении ММАЕ. Уровни в плазме ВТ8009 (BCY8245) взяты из исторических исследовании РК. Концентрации ММАЕ в плазме, ММАЕ в опухоли, и ВТ8009 в плазме представлены на фиг. 73. ММАЕ задерживался в опухоли дольше, чем в плазме, подтверждая гипотезу, что системная экспозиация является значительно меньшей, чем экспозиция в опухоли.Animals with MDA-MB-468 xenografts were injected with BCY8245 (BT8009) at a dose of 3 mg/kg. At various time points, animals were sacrificed, plasma and tumors were collected, and they were quickly frozen. Samples were analyzed for MMAE. Plasma levels of BT8009 (BCY8245) are from historical ROK studies. Plasma MMAE, tumor MMAE, and plasma BT8009 concentrations are presented in FIG. 73. MMAE persisted longer in tumors than in plasma, supporting the hypothesis that systemic exposure is significantly less than tumor exposure.

Пример 11. Анализ HCS.Example 11: HCS Analysis.

Анализ HCS использовали в исследовании связывания BDC против нектина-4. Клетки инкубировали с тестируемым веществом, а затем промывали. Детекцию проводили посредством флуоресцентного антитела к ММАЕ. Клетки MDA-MB-468 демонстрируют умеренную экспрессию нектина-4, причем 20000 клеток давали наилучшие изображения. Клетки NCI-H292 демонстрируют низкую экспрессию в этом анализе, детекция ММАЕ была низкой даже для 20000 клеток.The HCS assay was used in the BDC binding assay against nectin-4. The cells were incubated with the test substance and then washed. Detection was carried out using a fluorescent antibody to MMAE. MDA-MB-468 cells show moderate expression of nectin-4, with 20,000 cells producing the best images. NCI-H292 cells showed low expression in this assay, and MMAE detection was low even for 20,000 cells.

Данные HCS на клеточной линии MDA-MB-468 представлены на фиг. 74 и в табл. 50.HCS data on the MDA-MB-468 cell line are presented in FIG. 74 and in table. 50.

Таблица 50Table 50

Тестируемое вещество Test substance Максимальная интенсивность Maximum intensity Kd (нМ) Kd (nM) Историческая Kd (нМ) Historical Kd (nM) флуоресценции fluorescence ADC против нектина-4 ADC vs. nectina-4 33,63 33.63 0,2 0.2 0,28±0,07 0.28±0.07 BCY8245 BCY8245 13,34 13.34 3,52 3.52 5,18 5.18 BCY8781 BCY8781 3,15 3.15 >10000 >10000 >10000 >10000 ММАЕ MMAE 2,95 2.95 >10000 >10000 >10000 >10000

ADC против нектина-4 и BCY8245 удерживались в клетках и колокализовались с мембранным красителем. BCY8781 и ММАЕ продемонстрировали минимальное удержание. Kd для всех соединений на клеточной линии MDA-MB-468 согласовывались с историческими данными. ADC против нектина-4 продемонстрировал поддающуюся обнаружению аффинность связывания на клеточной линии MDA-MB468. BCY8425 продемонстрировал одноразрядную наномолярную аффинность с Bmax ниже, чем у ADC против нектина-4. Эта сниженная максимальная интенсивность флуоресценции является следствием того, что ADC против нектина-4 имеет соотношение ММАЕ и лекарственного средства 4, в то время как BCY8245 имеет соотношение ММАЕ и лекарственного средства 1. BCY8781 продемонстрировал только очень слабую аффинность связывания на клеточной линии MDA-MB-468, в то время как ММАЕ практически не продемонстрировал поддающейся обнаружению аффинности связывания на клеточной линии MDA-MB-468.ADCs against nectin-4 and BCY8245 were retained in cells and colocalized with the membrane dye. BCY8781 and MMAE showed minimal retention. The Kds for all compounds in the MDA-MB-468 cell line were consistent with historical data. The anti-nectin-4 ADC demonstrated detectable binding affinity in the MDA-MB468 cell line. BCY8425 demonstrated single-digit nanomolar affinity with a Bmax lower than that of the ADC against nectin-4. This reduced maximum fluorescence intensity is a consequence of the anti-nectin-4 ADC having an MMAE to drug ratio of 4, while BCY8245 has an MMAE to drug ratio of 1. BCY8781 showed only very weak binding affinity in the MDA-MB- cell line 468, while MMAE showed virtually no detectable binding affinity in the MDA-MB-468 cell line.

Пример 12. Эффективность in vivo BCY8245 в двух моделях PDX для рака легкого.Example 12: In vivo efficacy of BCY8245 in two PDX models for lung cancer.

Цель.Target.

Оценить эффективность BCY8245 в модели PDX для плоскоклеточного немелкоклеточного рака и аденокарциномы (оба немелкоклеточные карциномы).To evaluate the efficacy of BCY8245 in a PDX model for squamous non-small cell carcinoma and adenocarcinoma (both non-small cell carcinomas).

Животные.Animals.

Вид: Mus Musculus.Species: Mus Musculus.

Линия: Balb/c nude.Line: Balb/c nude.

Возраст: 6-8 недель.Age: 6-8 weeks.

Пол: самки.Gender: females.

Масса тела: 18-22.Body weight: 18-22.

Тестируемые средства.Tested means.

BCY8245 и ADC против нектина-4 или BCY8781.BCY8245 and ADC against nectin-4 or BCY8781.

Животные до исследования.Animals before the study.

Каждой мыши подкожно инокулировали в правый бок фрагмент опухоли LU-01-0007 или LU-010412 (~30 мм³) для формирования опухоли. Животных случайным образом распределяли на группы, когда средний объем опухоли достигал 161 мм³ (LU-01-0007) или 147 мм³ (LU-01-0412).Each mouse was subcutaneously inoculated into the right flank with a tumor fragment of LU-01-0007 or LU-010412 (~30 mm ³ ) to form a tumor. Animals were randomly assigned to groups when the average tumor volume reached 161 mm ³ (LU-01-0007) or 147 mm ³ (LU-01-0412).

Прижизненные измерения и конечные результаты.Intravital measurements and end results.

Животных проверяли каждые сутки в отношении каких-либо эффектов роста опухоли и лечения на нормальное поведение, такое как двигательная активность, употребление пищи и воды (только посредством осмотра), увеличение/снижение массы тела, потускнение глаз/шерсти и любой другой аномальный эффект, указанный в протоколе. Смерть и наблюдаемые клинические признаки регистрировали на основе количеств животных в каждой подгруппе.Animals were monitored every 24 hours for any effects of tumor growth and treatment on normal behavior such as locomotor activity, food and water intake (by examination only), weight gain/loss, dullness of eyes/fur, and any other abnormal effect indicated in the protocol. Death and observed clinical signs were recorded based on the number of animals in each subgroup.

- 157 045862- 157 045862

Основным результатом было наблюдение, может ли быть замедлен рост опухоли или могут ли мыши быть вылечены. Объем опухоли измеряли три раза в неделю в двух измерениях с использованием толщиномера, и объем выражали в мм³ с использованием формулыThe main outcome was to see whether tumor growth could be slowed or whether the mice could be cured. Tumor volume was measured three times a week in two dimensions using a thickness gauge, and the volume was expressed in mm ³ using the formula

V=0,5 axb², где a и b представляют собой длинный и короткий диаметры опухоли, соответственно. Затем размер опухоли использовали для вычислений величины Т/С. Величина Т/С (в процентах) является признаком противоопухолевой эффективности; Т и С представляют собой средние объемы групп лечения и контроля, соответственно, в данный день.V=0.5 axb ² where a and b represent the long and short diameters of the tumor, respectively. Tumor size was then used to calculate the T/C value. The T/C value (in percentage) is a sign of antitumor effectiveness; T and C represent the average volumes of the treatment and control groups, respectively, on a given day.

TGI (%) = Q-(Ti-T0)/(Vi-V0)]x100;TGI (%) = Q-(Ti-T0)/(Vi-V0)]x100;

Ti представляет собой средний объем опухоли в группе лечения в данный день, Т₀ представляет собой средний объем опухоли в группе лечения в день начала лечения, Vi представляет собой средний объем опухоли в контрольной группе носителя в той же день с Ti, и V0 представляет собой средний объем опухоли в группе носителя в день начала лечения.Ti is the mean tumor volume in the treatment group on a given day, T ₀ is the mean tumor volume in the treatment group on the day treatment begins, Vi is the mean tumor volume in the vehicle control group on the same day with Ti, and V0 is the mean tumor volume in the vehicle group on the day of treatment.

Результаты этих испытаний представлены на фиг. 66 и 67.The results of these tests are presented in Fig. 66 and 67.

Lu-01-0412 (фиг. 66): BCY8245 обеспечивал зависимую от дозы эффективность в этой модели PDX со снижением скорости роста опухоли при 1 мг/кг qw, но выраженной регрессией опухоли в дозе 3 мг/кг qw до исходного уровня. После прекращения дозирования (21 сутки) 5/6 животных продемонстрировали отсутствие повторного роста опухоли вплоть до 105 суток после начала исследования. Одно животное, демонстрирующее повторный рост, отвечало на 3 мг/кг BCY8245 и продемонстрировало восстановление регрессии до исходного уровня. Не связывающий BDC BCY8781 обеспечивал стабильное заболевание в дозе 3 мг/кг и при прекращении дозирования опухоль быстро росла с той же скоростью, как и в группе, в которой вводили носитель, подтверждая повышенную эффективность, которую придает этим средствам связывание нектина-4. Большие опухоли (группа, в которой вводили носитель) регрессировали в ответ на однократную дозу BCY8245 или BCY8781.Lu-01-0412 (FIG. 66): BCY8245 provided dose-dependent efficacy in this PDX model with a reduction in tumor growth rate at 1 mg/kg qw but significant tumor regression at 3 mg/kg qw to baseline. After stopping dosing (21 days), 5/6 animals showed no tumor regrowth up to 105 days after the start of the study. One animal showing regrowth responded to 3 mg/kg BCY8245 and showed regression back to baseline. The non-BDC binder BCY8781 produced stable disease at 3 mg/kg and when dosing was stopped, tumors grew rapidly at the same rate as the vehicle group, confirming the increased efficacy that nectin-4 binding imparts to these agents. Large tumors (vehicle group) regressed in response to a single dose of BCY8245 or BCY8781.

LU-01-0007 (фиг. 67): BCY8245 обеспечивал связанную с дозой эффективность, причем 1 мг/кг qw обеспечивала стабильное и 3 мг/кг обеспечивала полную регрессию. Дозирование необходимо было продолжать до 56 суток для достижения полной регрессии (когда дозирование прекращали). Не происходило повторного роста опухоли в этой группе после этого (вплоть до 126 суток после начала исследования). ADC против нектина-4 обеспечил сходную степень эффективности. Группа стабильного заболевания 1 мг/кг отвечала на повышение дозирования (3 и 5 мг/кг), указывая на то, что низкие дозы BCY8245 не приводят к развитию резистентности.LU-01-0007 (FIG. 67): BCY8245 provided dose-related efficacy, with 1 mg/kg qw providing stable and 3 mg/kg providing complete regression. Dosing had to be continued until day 56 to achieve complete regression (when dosing was stopped). There was no re-growth of the tumor in this group after this (up to 126 days after the start of the study). The anti-nectin-4 ADC provided similar degrees of efficacy. The 1 mg/kg stable disease group responded to dose escalations (3 and 5 mg/kg), indicating that low doses of BCY8245 do not lead to the development of resistance.

Пример 13. Оценка in vivo BCY8245 в моделях PDX с низким пассированием у мышей с иммунодефицитом с раком молочной железы, пищевода и мочевого пузыря человека.Example 13 In Vivo Evaluation of BCY8245 in Low Passage PDX Models in Immunodeficient Mice with Human Breast, Esophageal, and Bladder Cancers.

Цель.Target.

Оценить противоопухолевую активность бициклического средства в моделях Low Passage Champions TumorGraft Models у мышей с иммунодефицитом с раком молочной железы, пищевода и мочевого пузыря человека.To evaluate the antitumor activity of a bicyclic agent in Low Passage Champions TumorGraft Models in immunodeficient mice with human breast, esophageal, and bladder cancer.

Тестируемая система.System under test.

Вид: мышь.Type: mouse.

Линия: Athymic Nude-Foxnlnu (с иммунодефицитом).Line: Athymic Nude-Foxnlnu (with immunodeficiency).

Источник: Envigo: Индианаполис, Индиана.Source: Envigo: Indianapolis, Indiana

Пол: самки.Gender: females.

Целевой возраст при начале дозирования: по меньшей мере 6-8 недель.Target age at start of dosing: at least 6-8 weeks.

Целевая масса при начале дозирования: по меньшей мере 18 г.Target weight at start of dosing: at least 18 g.

Период акклиматизации: 3 суток.Acclimatization period: 3 days.

Схема эксперимента.Experimental design.

Животные до исследования: когда достаточное количество животных достигают 1,0-1,5 см³, опухоли извлекают для реимплантации животным до исследования. Животным до исследования проводят одностороннюю имплантацию в левый бок фрагментов опухоли, извлеченных из исходных животных. Каждому животному проводят имплантации из конкретной партии пассирования и документируют.Pre-study animals: When a sufficient number of animals reach 1.0-1.5 cm ³ , tumors are removed for reimplantation into pre-study animals. Before the study, animals undergo unilateral implantation into the left side of tumor fragments extracted from the original animals. Each animal is implanted from a specific passaging batch and documented.

Исследуемые животные: объемы опухолей до исследования регистрируют для каждого эксперимента, начиная через от семи до десяти суток после имплантации. Когда опухоли достигают среднего объема 150-300 мм³, животных будут подбирать по объему опухоли в группы лечения или контроля для применения для дозирования и дозирование начинают на сутки 0.Study animals: pre-study tumor volumes are recorded for each experiment, starting seven to ten days after implantation. When tumors reach an average volume of 150-300 mm ³ , animals will be matched by tumor volume to treatment or control groups for use in dosing and dosing will begin on day 0.

Тестируемые средства.Tested means.

BCY8245 и конъюгат антитело-лекарственное средство против нектина-4 по сравнению с контролем в виде носителя. Может быть включено стандартное средство доцетаксел. Все средства подлежат дозированию qw внутривенным путем, дозы указаны на графиках.BCY8245 and anti-nectin-4 antibody-drug conjugate compared to vehicle control. The standard agent docetaxel may be included. All drugs are subject to dosing qw intravenously, the doses are indicated on the graphs.

Прижизненные измерения.Intravital measurements.

Эффективность в отношении объема опухоли: объемы опухоли измеряют два раза в неделю. КоEfficacy on tumor volume: Tumor volumes are measured twice a week. Co.

- 158 045862 нечный объем опухоли определяют в день окончания исследования. Если возможно, конечный объем опухоли определяют, если животное считают умирающим.- 158 045862 The final tumor volume is determined on the day the study ends. If possible, the final tumor volume is determined if the animal is considered moribund.

Эффективность в отношении массы животного: животных взвешивают два раза в неделю. Конечную массу определяют в день, когда исследование достигает конечного результата, или если животного определяют как умирающее, если возможно. Животным, демонстрирующим снижение массы тела >10% по сравнению с 0 сутками, предоставляют DietGel® без ограничений. Любое животное, демонстрирующее суммарное снижение массы тела >20% в течение 7 суток, или если мышь демонстрирует суммарное снижение массы тела >30% по сравнению с сутками 0, считают умирающим и умерщвляют.Effectiveness in relation to animal weight: animals are weighed twice a week. The final weight is determined on the day the study reaches the endpoint or when the animal is determined to be moribund, if possible. Animals demonstrating a >10% decrease in body weight compared to day 0 are provided with DietGel® ad libitum. Any animal demonstrating a cumulative decrease in body weight of >20% over day 7, or if the mouse exhibits a cumulative decrease in body weight of >30% compared to day 0, is considered moribund and sacrificed.

Анализ данных.Data analysis.

Токсичность средства: начиная на 0 сутки животных наблюдают каждые сутки и взвешивают два раза в неделю с использованием цифровых весов; данные, включающие индивидуальную и среднюю массу в граммах (средняя масса ± SEM) и среднее процентное изменение массы против 0 суток (%vD0) регистрируют для каждой группы и %vD0 наносят на график после завершения исследования. Смерти животных регистрируют каждые сутки и обозначают как связанные с лекарственным средством (D), технические (Т), связанные с опухолью (В), или неизвестные (U), исходя из снижения массы и простого осмотра; группы единственного средства или комбинации со средним значением %vD0 >20% и/или смертности >10% считаются группами доз выше максимально переносимой дозы (MTD) для этого лечения по оцениваемому режиму. Максимальное среднее значение %vD0 (максимальное снижение массы) для каждой группы лечения регистрируют при завершении исследования.Toxicity of the product: starting from day 0, animals are observed every day and weighed twice a week using digital scales; Data including individual and mean weight in grams (mean weight ± SEM) and mean percent change in weight versus day 0 (%vD0) are recorded for each group and %vD0 is plotted at the end of the study. Animal deaths are recorded every 24 hours and designated as drug-related (D), technical (T), tumor-related (B), or unknown (U) based on weight loss and simple examination; Single agent or combination groups with a mean %vD0 >20% and/or mortality >10% are considered dose groups above the maximum tolerated dose (MTD) for that treatment for the regimen being evaluated. The maximum mean %vD0 (maximum weight loss) for each treatment group is recorded at the end of the study.

Эффективность средства.The effectiveness of the product.

Ингибирование роста опухоли. Начиная на 0 сутки, размеры опухолей измеряют два раза в неделю посредством цифрового толщиномера и данные, включающие индивидуальные и средние оцененные объемы опухолей (средний TV ± SEM) регистрируют для каждой группы; объем опухоли вычисляют с использованием формулы (1)Inhibition of tumor growth. Starting on day 0, tumor sizes are measured twice weekly using a digital thickness gauge, and data including individual and mean estimated tumor volumes (mean TV ± SEM) are recorded for each group; tumor volume is calculated using formula (1)

TV=ширина2хдлинах0,52.TV=width2xlength0.52.

После завершения исследования вычисляют процентное ингибирование роста опухоли (%TGI) и регистрируют для каждой группы лечения (Т) против контроля (С) с использованием первоначальных (i) и конечных (f) размеров опухоли по формуле (2) %TGI= 1 -(Tf-Ti)Z(Cf-Ci).After completion of the study, percent tumor growth inhibition (%TGI) is calculated and reported for each treatment group (T) versus control (C) using initial (i) and final (f) tumor sizes using the formula (2) %TGI= 1 -( Tf-Ti)Z(Cf-Ci).

Индивидуальных мышей, для которых зарегистрирован объем опухоли <30% от размера на сутки 0 в течение двух последовательных измерений, считают частично отвечающими (PR). Индивидуальных мышей, лишенных пальпируемых опухолей (0,00 мм³ в течение двух последовательных измерений), классифицируют как полностью отвечающих (CR); CR, которая сохраняется до конца исследования, считается свободным от опухоли выживанием (TFS). Время удвоения опухоли (DT) определяют для групп введения носителя с использованием формулыIndividual mice that recorded tumor volume <30% of day 0 size over two consecutive measurements were considered partial responders (PR). Individual mice free of palpable tumors (0.00 mm ³ for two consecutive measurements) are classified as complete responders (CR); A CR that persists until the end of the study is considered tumor-free survival (TFS). Tumor doubling time (DT) is determined for vehicle groups using the formula

DT=(Df-Di)*log2Z(logTVf-logTVi), где D - сутки и TV - объем опухоли. Все данные, полученные в этом исследовании, обрабатывают в электронной форме и хранят на резервной серверной системе.DT=(Df-Di)*log2Z(logTVf-logTVi), where D is day and TV is tumor volume. All data obtained in this study is processed electronically and stored on a backup server system.

Результаты этих исследований представлены на фиг. 68-71.The results of these studies are presented in Fig. 68-71.

BCY8245 был протестирован в четырех моделях PDX с низким пассированием, соответствующих раку мочевого пузыря (CTG-1771), эстроген- и прогестерон-негативному Нег2-позитивному раку молочной железы (CTG-1171), тройному негативному раку молочной железы (CTG-1106) и раку пищевода (CTG-0896). Во всех из этих моделей BCY8245 продемонстрировал превосходную эффективность, обеспечивающую регрессию опухоли, и в трех из четырех случаев полную регрессию до исходного уровня. Эффективность была сравнимой с ADC во всех случаях и была лучшей или равной доцетакселу SOC. Во всех моделях BCY8245 лучше переносился, чем доцетаксел.BCY8245 was tested in four low-passage PDX models corresponding to bladder cancer (CTG-1771), estrogen- and progesterone-negative Neg2-positive breast cancer (CTG-1171), triple negative breast cancer (CTG-1106), and esophageal cancer (CTG-0896). In all of these models, BCY8245 demonstrated excellent efficacy in achieving tumor regression and complete regression to baseline in three of four cases. Efficacy was comparable to ADC in all cases and was better than or equal to docetaxel SOC. In all models, BCY8245 was better tolerated than docetaxel.

Claims

1. A nectin-4-specific peptide ligand comprising a polypeptide containing at least three cysteine residues separated by at least two loop sequences, and a molecular scaffold that forms covalent bonds with the cysteine residues of the polypeptide such that a at least two polypeptide loops, wherein said peptide ligand contains an amino acid sequence selected from

Ci-PZAZHyp-FZY-GZA-C _ii -X ₁ -X ₂ -X3-WZ1-NalZ2-Nal-SZA-X ₄ -P-IZDZA-WZ1-NalZ2-Nal-C _iii (SEQ ID NO: 38);

Ci-WZA-P-L-DZS-SZD-Y-W-Cii-Xs-R-I-Ciii (SEQ ID NO: 39);

Ci-V-T-T-S-Y-D-Cij-FZW-LZV-HZRZT-L-LZG-GZQZH-Ciij (SEQ ID NO: 40);

Ci-X ₆ -X ₇ -X8-Cii-X ₉ -X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-Ciii (SEQ ID NO: 41); And

C _i -WZAZY-PZA-L-DZSZA-SZDZPZA-Y-WZ1-Nal-C _ii -X ₅ -RZHArgZA-IC _Ui (SEQ ID NO: 42);

where X ₁ -X ₅ denote any amino acid residue, including modified and unnatural amino acids;

X ₆ represents Gly; Pro or an unnatural derivative of Pro selected from azetidine (Aze), hydroxy

- 159 045862 proline (HuP), 4-aminoproline (Pro(4NH)), oxazolidine-4-carboxylic acid (Oxa), octahydroindolecarboxylic acid (Oic) or 4,4-difluoroproline (4,4-DFP); Ala or a non-natural derivative of Ala selected from aminoisobutyric acid (Aib), or sarcosine (Sar);

X7 denotes Phe or an unnatural derivative of Phe selected from 3-methylphenylalanine (3MePhe), 4-methylphenylalanine (4MePhe), homophenylalanine (HPhe), 4,4-biphenylalanine (4,4-BPA) or 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA) ; Tyr; or Ala or a non-natural derivative of Ala selected from 1-naphthylalanine (1-Nal), 2-naphthylalanine (2-Nal) or 2-pyridylalanine (2Pa1);

X ₈ represents Gly; Ala; Asp; Lys or an unnatural derivative of Lys selected from acetyl lysine (KAc or Ly s(Ac)); Ph; Glu; Gln; Leu; Ser; Arg; or cysteic acid (Cya);

X ₉ is either absent or represents Met or a non-natural derivative of Met selected from methionine sulfone (Met(O ₂ )); Gln or a non-natural derivative of Gln selected from homoglutamine (HGln); Leu or a non-natural derivative of Leu selected from homoleucine (HLeu) or norleucine (Nle); Lys; Ile; tert-butylalanine (tBuAla); or homoserine methyl (HSe(Me));

X ₁₀ means Pro; Lys or an unnatural derivative of Lys selected from acetyl lysine (KAc or Lys(Ac)); Arg or a non-natural derivative of Arg selected from 2-amino-4-guanidinebutyric acid (Agb), homoarginine (HArg) or N-methylhomoarginine; Glu; Ser; Asp; Gln; Ala; hydroxyproline (HyP); or cysteic acid (Cua);

X11 represents Asn or a non-natural derivative of Asn selected from N-methylasparagine; Thr; Asp; Gly; Ser; His; Ala or a non-natural derivative of Ala selected from thienylalanine (Thi), 2-(1,2,4-triazol1-yl)alanine (1,2,4-TriAz) or beta-(4-thiazolyl)alanine (4ThiAz); Lys or cysteic acid (Cys);

X ₁₂ is Trp or a non-natural derivative of Trp selected from azatryptophan (AzaTrp), 5fluoro-L-tryptophan (5FTrp) or methyltryptophan (TrpMe); or Ala or a non-natural derivative of Ala selected from 1-naphthylalanine (1-Nal) or 2-naphthylalanine (2-Nal);

X ₁₃ represents Ser or a non-natural derivative of Ser selected from homoserine (HSer); Ala; Asp or Thr;

X ₁₄ is Trp or a non-natural Trp derivative selected from azatryptophan (AzaTrp); Ser; Ala or a non-natural derivative of Ala selected from 2-(1,2,4-triazol-1-yl)alanine (1,2,4-TriAz), 1-naphthylalanine (1-Nal) or 2-naphthylalanine (2-Nal); Asp; Phe or a non-natural derivative of Phe selected from 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA); Tyr; Thr or an unnatural derivative of Thr selected from N-methylthreonine; tetrahydropyran-4-propanoic acid (THP(O)); or dioxo-4tetrahydrothiopyranoacetic acid (THP(SO ₂ ));

X ₁₅ denotes Pro or an unnatural derivative of Pro selected from azetidine (Aze), pipecolic acid (Pip) or oxazolidine-4-carboxylic acid (Oxa);

X ₁₆ represents He or an unnatural derivative of He selected from N-methylisoleucine (NMelle); Ala or a non-natural derivative of Ala selected from 3-cyclohexylalanine (Cha) or cyclopropylalanine (Cpa); Pro or an unnatural derivative of Pro selected from hydroxyproline (HuP); Asp; Lys; cyclopentylglycine (C5A); tetrahydropyran-4-propanoic acid (THP(O)); or dioxo-4tetrahydrothiopyranoacetic acid (THP(SO ₂ ));

X ₁₇ is Trp or a non-natural derivative of Trp selected from azatryptophan (AzaTrp) or 5fluoro-E-tryptophan (5FTrp); Ph; Tyr; 1-naphthylalanine (1-Nal); or 2-naphthylalanine (2-Nal);

Hyp is hydroxyproline, 1-Nal is 1-naphthylalanine, 2-Nal is 2-naphthylalanine, HArg is homoarginine, and Ci, Cii and Ciii are the first, second and third cysteine residues, respectively, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

2. The peptide ligand of claim 1, wherein said loop sequences comprise three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which consists of 3 amino acids and the second of which consists of 9 amino acids, and said peptide ligand contains an amino acid sequence selected from

C1-X6-X7-X8-C11-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-C111 (SEQ ID NO: 41);

where X ₆ -X|- are as defined in paragraph 1.

3. Peptide ligand according to claim 1 or claim 2, where

X ₆ is Pro or an unnatural derivative of Pro selected from azetidine (Aze), hydroxyproline (HyP), 4-aminoproline (Pro(4NH)), oxazolidine-4-carboxylic acid (Oxa), octahydroindolecarboxylic acid (Oic) or 4,4 -difluoroproline (4,4-DFP)m, such as Pro; and/or

X ₇ is Phe or an unnatural derivative of Phe selected from 3-methylphenylalanine (3MePhe), 4-methylphenylalanine (4MePhe), homophenylalanine (HPhe), 4,4-biphenylalanine (4,4-BPA) or 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA ); Ala or an unnatural derivative of Ala selected from 1-naphthylalanine (1-Nal), 2-naphthylalanine (2-Nal) or 2-pyridylalanine (2Pal), such as Phe or 1-naphthylalanine (1-Nal), in particular 1-naphthylalanine (1- Nal); and/or

X8 stands for Asp, Arg, Lys or cysteic acid (Cya), such as D-Asp, D-Arg, D-Lys or DCya, in particular D-Asp; and/or

X ₉ is Met or a non-natural derivative of Met selected from methionine sulfone (Met(O ₂ )); or Leu or a non-natural derivative of Leu selected from homoleucine (HLeu) or norleucine (Nle),

- 160 045862 such as Met or Leu, in particular Met; and/or

X ₁₀ is Arg or a non-natural derivative of Arg selected from 2-amino-4-guanidinobutyric acid (Agb), homoarginine (HArg) or N-methylhomoarginine; or cysteic acid (Cya), such as homoarginine (HArg) or cysteic acid (Cya) (such as D-Cya), in particular homoarginine (HArg); and/or

X11 represents Asn or a non-natural derivative of Asn selected from N-methylasparagine; Asp; or His; or cysteic acid (Cya), such as Asn, Asp, His or cysteic acid (Cya) (such as DCya), in particular Asp; and/or

X ₁₂ is Trp or a non-natural derivative of Trp selected from azatryptophan (AzaTrp), 5fluoro-E-tryptophan (5FTrp) or methyltryptophan (TrpMe), such as Trp; and/or

X ₁₃ denotes Ser or a non-natural derivative of Ser selected from homoserine (HSer), such as Ser; and/or

X ₁₄ is Thr or an unnatural derivative of Thr selected from N-methylthyronine, such as Thr; and/or

X ₁₅ stands for Pro; and/or

X ₁₆ represents Ile or a non-natural derivative of Ile selected from N-methylisoleucine (NMelle); or Pro or an unnatural derivative of Pro selected from hydroxyproline (HuP), such as Ile; or Pro or an unnatural derivative of Pro selected from hydroxyproline (HyP), in particular Ile, Pro or hydroxyproline (HyP), more particularly hydroxyproline (HyP); and/or

X ₁₇ denotes Trp or a non-natural derivative of Trp selected from azatryptophan (AzaTrp) or 5fluoro-E-tryptophan (5FTrp), such as Trp.

4. The peptide ligand according to any one of claims 1 to 3, wherein said loop sequences comprise three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which consists of 3 amino acids and the second of which consists of 9 amino acids, and said peptide ligand contains the amino acid sequence , selected from

Ci-PX ₇ -X ₈ -C _ii -X ₉ -HArg-X ₁₁ -WSTPX ₁₆ -WC _iii (SEQ ID NO: 204);

where X ₇ , X ₈ , X ₉ , X11 and X ₁₆ are as defined in paragraph 1 or 3.

5. The peptide ligand according to any one of claims 1 to 4, wherein said loop sequences comprise three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which consists of 3 amino acids and the second of which consists of 9 amino acids, and said peptide ligand contains the amino acid sequence , selected from

Ci-P-F/1-Nal-dD/dR-Cii-M/L-HArg-N/H/D-W-S-T-P-I/P/HyP-W-Ciii (SEQ ID NO: 205).

6. The peptide ligand according to claim 1, where the peptide ligand ^-^^7^8-^^9^10^11^12^13^14^15-^6X ₁₇ -Ciii (SEQ ID NO: 41) contains an amino acid sequence chosen from

CPFGCMETWSWPIWC (SEQ ID NO: 45);

CPFGCMRGWSWPIWC (SEQ ID NO: 46);

CPFGCMSGWSWPIWC (SEQ ID NO: 47);

CPFGCMEGWSWPIWC (SEQ ID NO: 48);

CPFGCMEDWSWPIWC (SEQ ID NO: 49);

CPFGCMPGWSWPIWC (SEQ ID NO: 50);

CPFGCMKSWSWPIWC (SEQ ID NO: 51);

CPFGCMKTWSWPIWC (SEQ ID NO: 52);

CPFGCMKGWSWPIWC (SEQ ID NO: 53);

CPFGCQEHWSWPIWC (SEQ ID NO: 54);

CPFGCIKSWSWPIWC (SEQ ID NO: 55);

CPFGCQEDWSWPIWC (SEQ ID NO: 56);

CPFGCMSDWSWPIWC (SEQ ID NO: 57);

CPFGCM[HArg]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 59);

CPFGCM[K(Ac)]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 60);

CPFGCM[K(Ac)]SWSWPIWC (SEQ ID NO: 61);

CPFGC[Nle]KSWSWPIWC (SEQ ID NO: 62);

CPFGCM[HArg]SWSWPIWC (SEQ ID NO: 63);

CPFGCM[dK]SWSWPIWC (SEQ ID NO: 64);

CP[dA]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 66);

CPF[dA]CMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 67);

CPFGCM[dA]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 68);

CPFGCMK[dA]WSWPIWC (SEQ ID NO: 69);

CPFGCMKN[dA]SWPIWC (SEQ ID NO: 70);

CPFGCMKNWSWP[dA]WC (SEQ ID NO: 71);

C[dA]FGCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 72);

CPFGC[tBuAla]KNWSWPIWC (SEQ ID NO: 73);

CPFGC[HLeu]KNWSWPIWC (SEQ ID NO: 74);

- 161 045862

CPFGCMKNWSWPI[1Nal]C (SEQ ID NO: 75);

CPF[dD]CM[HArg]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 76);

CPF[dA]CM[HArg]NWSWPIWC (SEQ ID NO: 77);

CP[3MePhe]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 78);

CP[4MePhe]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 79);

CP[HPhe]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 80);

CPF[dD]CMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 81);

CPFGC[Hse(Me)]KNWSWPIWC (SEQ ID NO: 82);

CPFGCMKN[AzaTrp]SWPIWC (SEQ ID NO: 83);

CPFGCMKNWSFPIWC (SEQ ID NO: 84);

CPFGCMKNWSYPIWC (SEQ ID NO: 85);

CPFGCMKNWS[1Nal]PIWC (SEQ ID NO: 86);

CPFGCMKNWS[2Nal]PIWC (SEQ ID NO: 87);

CPFGCMKNWS[AzaTrp]PIWC (SEQ ID NO: 88);

CPFGCMKNWSW[Aze]IWC (SEQ ID NO: 89);

CPFGCMKNWSW[Pip]IWC (SEQ ID NO: 90);

CPFGCMKNWSWPIFC (SEQ ID NO: 91);

CPFGCMKNWSWPIYC (SEQ ID NO: 92);

CPFGCMKNWSWP[AzaTrp]C (SEQ ID NO: 93);

CGFGCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 94);

C[Aze]FGCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 95);

CPF[K(Ac)]CMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 96);

CPFGCLKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 97);

CPFGC[MetO ₃ ]KNWSWPIWC (SEQ ID NO: 98);

CPFGCMPNWSWPIWC (SEQ ID NO: 99);

CPFGCMQNWSWPIWC (SEQ ID NO: 100);

CPFGCMKNWSWPPWC (SEQ ID NO: 101);

CP[2Pal]GCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 102);

CPFGCMKN[1Nal]SWPIWC (SEQ ID NO: 111);

CPFGCMKN[2Nal]SWPIWC (SEQ ID NO: 112);

CPFGCMKNWSWPI[2Nal]C (SEQ ID NO: 113);

C[HyP]FGCMKNWSWPIWC (SEQ ID NO: 114);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 115);

CPF[dD]CM[HArg][dK]WSTPIWC (SEQ ID NO: 116);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTPKWC (SEQ ID NO: 117);

C[Pro(4NH)]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 118);

CPF[dD]CMKNWSTPIWC (SEQ ID NO: 119);

CPF[dK]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 120);

CPF[dD]CK[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 121);

CPF[dD]CM[HArg]KWSTPIWC (SEQ ID NO: 122);

C[Oxa]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 123);

CPF[dD]CM[HArg][Thi]WSTPIWC (SEQ ID NO: 124);

CPF[dD]CM[HArg][4ThiAz]WSTPIWC (SEQ ID NO: 125);

CPF[dD]CM[HArg][124TriAz]WSTPIWC (SEQ ID NO: 126);

CPF[dD]CM[HArg]NWS[124TriAz]PIWC (SEQ ID NO: 127);

CPF[dD]CM[HArg]NWST[Oxa]IWC (SEQ ID NO: 128);

CP[DOPA][dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 129);

CPF[dD]CM[HArg]NWS[DOPA]PIWC (SEQ ID NO: 130);

CPF[dD]CM[HArg]NWS[THP(SO ₂ )]PIWC (SEQ ID NO: 131);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[THP(SO ₂ )]WC (SEQ ID NO: 132);

CPF[dD]CM[HArg]N[5FTrp]STPIWC (SEQ ID NO: 133);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTPI[5FTrp]C (SEQ ID NO: 134);

CPF[dD]CM[HArg]NWS[THP(O)]PIWC (SEQ ID NO: 135);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[THP(O)]WC (SEQ ID NO: 136);

C[44DFP]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 137);

C[Oic]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 138);

CPF[dF]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 139);

CPF[dE]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 140);

CPF[dQ]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 141);

CPF[dL]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 142);

CPF[dS]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 143);

CPF[dD]CM[HArg]NW[HSer]TPIWC (SEQ ID NO: 144);

- 162 045862

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[C5A]WC (SEQ ID NO: 145);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[Cpa]WC (SEQ ID NO: 146);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[Cha]WC (SEQ ID NO: 147);

CPF[dD]C[HGln][HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 148);

CPF[dD]C[C5A][HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 149);

CPF[dD]CM[HArg]N[Trp(Me)]STPIWC (SEQ ID NO: 150);

CPF[dD][NMeCys]M[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 151);

CPF[dD]C[HArg]NWS[NMeThr]PIWC (SEQ ID NO: 152);

CP[1Nal][dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 155);

CP[2Nal][dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 156);

CP[44BPA][dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 157);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTPPWC (SEQ ID NO: 158);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 159);

CPF[dD]CL[HArg]NWSTPPWC (SEQ ID NO: 160);

CPF[dD]CL[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 161);

CPY[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 162);

C[Aib]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 163);

C[Sar]F[dD]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 164);

CPF[dR]CM[HArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 165);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTPKWC (SEQ ID NO: 166);

CP[1Nal][dD]CM[HArg]NWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 167);

CP[1Nal][dD]CM[HArg]HWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 168):

CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 169);

CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWSTPIWC (SEQ ID NO: 170);

CP[1Nal][dR]CM[HArg]NWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 171);

CP[1Nal][dR]CM[HArg]HWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 172);

CPF[dD]CM[NMeHArg]NWSTPIWC (SEQ ID NO: 173);

CPF[dD]CM[HArg][NMeAsn]WSTPIWC (SEQ ID NO: 174);

CPF[dD]CM[HArg]NWS[NMeThr]PIWC (SEQ ID NO: 175);

CPF[dD]CM[HArg]NWSTP[NMeIle]WC (SEQ ID NO: 176);

CP[1Nal][dD]CM[HArg][Cya]WSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 177);

CP[1Nal][dD]CM[Cya]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 178);

CP[1Nal][DCya]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 179);

CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWDTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 180);

CP[2Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 181);

CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWTTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 182);

CP[1Nal][dD]CM[HArg]DW[HSer]TP[HyP]WC (SEQ ID NO: 183);

CP[1Nal][dD]CM[HArg]DW[dS]TP[HyP]WC (SEQ ID NO: 184);

CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWSSP[HyP]WC (SEQ ID NO: 185);

CP[1Nal][dD]CM[Agb]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 186);

CP[1Nal][dD]CMPDWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 187);

CP[1Nal][dD]CM[HyP]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 188);

CP[1Nal][dR]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 189);

CP[1Nal][dR]CM[HArg]DWDTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 190);

CP[2Nal][dR]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 191);

CP[1Nal][dR]CM[HArg]DWTTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 192);

CP[1Nal][dR]CM[HArg]DW[HSer]TP[HyP]WC (SEQ ID NO: 193);

CP[1Nal][dR]CM[HArg]DW[dS]TP[HyP]WC (SEQ ID NO: 194);

CP[1Nal][dR]CM[HArg]DWSSP[HyP]WC (SEQ ID NO: 195);

CP[1Nal][dR]CM[Agb]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 196);

CP[1Nal][dR]CMPDWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 197);

CP[1Nal][dR]CM[HyP]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 198);

CP[1Nal][dD]CL[HArg]DWSTPIWC (SEQ ID NO: 199);

CP[1Nal][dD]CL[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 200);

CP[1Nal][dR]CL[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 201);

CP[1Nal][dR]CL[HArg]HWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 202);

CP[1Nal][dR]CM[HArg]DWSTPIWC (SEQ ID NO: 203);

CP[1Nal][DCya]CM[Cya]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 208);

CP[1Nal][DCya]CM[HArg][Cya]WSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 209);

CP[1Nal][dD]CM[Cya][Cya]WSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 210);

CP[1Nal][dK]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 211);

CP[1Nal][dD]CMKDWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 212);

- 163 045862

CP[1Nal][dD]CM[HArg]D[dW]STP[HyP][dW]C (SEQ ID NO: 215); and CPFGCM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 216);

such as

CP[1Nal][dD]CM[HArg]DWSTP[HyP]WC (SEQ ID NO: 169);

in particular

DDA-(SEQ ID NO: 45)-A (hereinafter referred to as BCY3386);

DTA-(SEQ ID NO: 46)-A (hereinafter referred to as BCY3388);

DSE-(SEQ ID NO: 47)-A (hereinafter referred to as BCY3389);

HDA-(SEQ ID NO: 48)-A (hereinafter referred to as BCY3390);

MDT-(SEQ ID NO: 49)-A (hereinafter referred to as BCY3391);

DPG-(SEQ ID NO: 50)-A (hereinafter referred to as BCY3392);

HDS-(SEQ ID NO: 51)-A (hereinafter referred to as BCY3393); (D-H)DS-(SEQ ID NO: 51)-A (hereinafter referred to as BCY7272);

A-(SEQ ID NO: 52)-TDK (hereinafter referred to as BCY3394);

A-(SEQ ID NO: 53)-LKD (hereinafter referred to as BCY3395);

A-(SEQ ID NO: 54)-TTA (hereinafter referred to as BCY3396);

A-(SEQ ID NO: 55)-QME (hereinafter referred to as BCY3397);

A-(SEQ ID NO: 56)-LSE (hereinafter referred to as BCY3398);

A-(SEQ ID NO: 57)-STD (hereinafter referred to as BCY3399);

A-(SEQ ID NO: 59)-TNK (hereinafter referred to as BCY7265);

Ac-(SEQ ID NO: 59) (hereinafter referred to as BCY7660);

A-(SEQ ID NO: 60)-TNK (hereinafter referred to as BCY7266);

Ac-(SEQ ID NO: 60) (hereinafter referred to as BCY7616);

HDS-(SEQ ID NO: 61)-A (hereinafter referred to as BCY7273);

HDS-(SEQ ID NO: 62)-A (hereinafter referred to as BCY7274);

HDS-(SEQ ID NO: 63)-A (hereinafter referred to as BCY7275);

HDS-(SEQ ID NO: 64)-A (hereinafter referred to as BCY7276);

A-(SEQ ID NO: 66)-TNK (hereinafter referred to as BCY7349);

A-(SEQ ID NO: 67)-TNK (hereinafter referred to as BCY7350);

Ac-(SEQ ID NO: 67) (hereinafter referred to as BCY7538);

A-(SEQ ID NO: 68)-TNK (hereinafter referred to as BCY7359);

A-(SEQ ID NO: 69)-TNK (hereinafter referred to as BCY7360);

A-(SEQ ID NO: 70)-TNK (hereinafter referred to as BCY7361);

A-(SEQ ID NO: 71)-TNK (hereinafter referred to as BCY7365);

A-(SEQ ID NO: 72)-TNK (hereinafter referred to as BCY7370);

Ac-(SEQ ID NO: 73) (hereinafter referred to as BCY7535);

Ac-(SEQ ID NO: 74) (hereinafter referred to as BCY7536);

Ac-(SEQ ID NO: 75) (hereinafter referred to as BCY7541); [B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 76) (hereinafter referred to as BCY7556);

Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 76) (hereinafter referred to as BCY7558);

[B-A1a][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 77) (hereinafter referred to as BCY7557);

Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 77) (hereinafter referred to as BCY7559);

Ac-(SEQ ID NO: 78) (hereinafter referred to as BCY7580);

Ac-(SEQ ID NO: 79) (hereinafter referred to as BCY7581);

Ac-(SEQ ID NO: 80) (hereinafter referred to as BCY7582);

Ac-(SEQ ID NO: 81) (hereinafter referred to as BCY7584);

Ac-(SEQ ID NO: 82) (hereinafter referred to as BCY7585);

Ac-(SEQ ID NO: 83) (hereinafter referred to as BCY7588);

Ac-(SEQ ID NO: 84) (hereinafter referred to as BCY7589);

Ac-(SEQ ID NO: 85) (hereinafter referred to as BCY7590);

Ac-(SEQ ID NO: 86) (hereinafter referred to as BCY7591);

Ac-(SEQ ID NO: 87) (hereinafter referred to as BCY7592);

Ac-(SEQ ID NO: 88) (hereinafter referred to as BCY7593);

Ac-(SEQ ID NO: 89) (hereinafter referred to as BCY7594);

Ac-(SEQ ID NO: 90) (hereinafter referred to as BCY7595);

Ac-(SEQ ID NO: 91) (hereinafter referred to as BCY7596);

Ac-(SEQ ID NO: 92) (hereinafter referred to as BCY7597);

Ac-(SEQ ID NO: 93) (hereinafter referred to as BCY7598);

Ac-(SEQ ID NO: 94) (hereinafter referred to as BCY7607);

Ac-(SEQ ID NO: 95) (hereinafter referred to as BCY7608);

Ac-(SEQ ID NO: 96) (hereinafter referred to as BCY7611);

Ac-(SEQ ID NO: 97) (hereinafter referred to as BCY7612);

- 164 045862

Ac-(SEQ ID NO: 98) (hereinafter referred to as BCY7613);

Ac-(SEQ ID NO: 99) (hereinafter referred to as BCY7614);

Ac-(SEQ ID NO: 100) (hereinafter referred to as BCY7615);

Ac-(SEQ ID NO: 101) (hereinafter referred to as BCY7618);

Ac-(SEQ ID NO: 102) (hereinafter referred to as BCY7620);

Ac-(SEQ ID NO: 111) (hereinafter referred to as BCY7663);

Ac-(SEQ ID NO: 112) (hereinafter referred to as BCY7664);

Ac-(SEQ ID NO: 113) (hereinafter referred to as BCY7667);

Ac-(SEQ ID NO: 114) (hereinafter referred to as BCY7668);

Ac-(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7765);

(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7793);

(MeO-dPEG12)(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8087);

(carboxyfluorescein)(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8208);

(PEG ₃ )(PEG ₃ )(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7815);

(MeO-dPEG12)(PEG3)(PEG3)(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8094);

Ac-DDD-(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8028);

Ac-[dD][dD][dD]-(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8029); [B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7814);

Ac-(SEQ ID NO

116) (hereinafter referred to as BCY7816);

116) (MeO-dPEG12) linked to D-Lys6 (hereinafter referred to as BCY8084);

117) (hereinafter referred to as BCY7817);

118) (hereinafter referred to as BCY7818;

118) (MeO-dPEG12) linked to Pro(4NH)1 (hereinafter referred to as BCY8086);

119) (hereinafter referred to as BCY7819;

119) (MeO-dPEG12) linked to Lys5 (hereinafter referred to as BCY8088);

120) (hereinafter referred to as BCY7820;

120) (MeO-dPEG12) linked to D-Lys3 (hereinafter referred to as BCY8089);

121) (hereinafter referred to as BCY7821);

121) (MeO-dPEG12) linked to Lys4 (hereinafter referred to as BCY8090);

122) (hereinafter referred to as BCY7822);

122) (MeO-dPEG12) linked to Lys6 (hereinafter referred to as BCY8091);

123) (hereinafter referred to as BCY7876);

124) (hereinafter referred to as BCY7877);

125) (hereinafter referred to as BCY7879);

126) (hereinafter referred to as BCY7881);

127) (hereinafter referred to as BCY7883);

128) (hereinafter referred to as BCY7884);

129) (hereinafter referred to as BCY7886);

130) (hereinafter referred to as BCY7887);

131) (hereinafter referred to as BCY7889);

132) (hereinafter referred to as BCY7890);

133) (hereinafter referred to as BCY7891);

134) (hereinafter referred to as BCY7892);

135) (hereinafter referred to as BCY7894);

136) (hereinafter referred to as BCY7895);

137) (hereinafter referred to as BCY7896);

138) (hereinafter referred to as BCY7897);

139) (hereinafter referred to as BCY7902);

140) (hereinafter referred to as BCY7903);

141) (hereinafter referred to as BCY7904);

142) (hereinafter referred to as BCY7906);

143) (hereinafter referred to as BCY7907);

144) (hereinafter referred to as BCY7908);

145) (hereinafter referred to as BCY7911);

146) (hereinafter referred to as BCY7912);

147) (hereinafter referred to as BCY7913);

148) (hereinafter referred to as BCY7914);

149) (hereinafter referred to as BCY7915);

150) (hereinafter referred to as BCY7916);

151) (hereinafter referred to as BCY7973);

152) (hereinafter referred to as BCY7979);

155) (hereinafter referred to as BCY8030);

- 165 045862

Ac-(SEQ ID NO: 156) (hereinafter referred to as BCY8031);

Ac-(SEQ ID NO: 157) (hereinafter referred to as BCY8032);

Ac-(SEQ ID NO: 158) (hereinafter referred to as BCY8036);

Ac-(SEQ ID NO: 159) (hereinafter referred to as BCY8037);

Ac-(SEQ ID NO: 160) (hereinafter referred to as BCY8038);

Ac-(SEQ ID NO: 161) (hereinafter referred to as BCY8039);

Ac-(SEQ ID NO: 162) (hereinafter referred to as BCY8040);

Ac-(SEQ ID NO: 163) (hereinafter referred to as BCY8041);

Ac-(SEQ ID NO: 164) (hereinafter referred to as BCY8042);

Ac-(SEQ ID NO: 165) (hereinafter referred to as BCY8042);

Ac-(SEQ ID NO: 166) (hereinafter referred to as BCY8085);

Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 167) (hereinafter referred to as BCY8120);

Ac-(SEQ ID NO: 167) (hereinafter referred to as BCY8124);

Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 168) (hereinafter referred to as BCY8121);

Ac-(SEQ ID NO: 168) (hereinafter referred to as BCY8125);

Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8122);

Ac-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8126);

(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8116);

fluorescein-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8205);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8234); [PYA][B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8846);

Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 170) (hereinafter referred to as BCY8123);

Ac-(SEQ ID NO: 170) (hereinafter referred to as BCY8127);

(SEQ ID NO: 170) (hereinafter referred to as BCY8206);

Ac-(SEQ ID NO: 171) (hereinafter referred to as BCY8128);

(SeQ ID NO: 171) (hereinafter referred to as BCY8207);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 171) (hereinafter referred to as BCY8232);

Ac-(SEQ ID NO: 172) (hereinafter referred to as BCY8129);

Ac-(SEQ ID NO: 173) (hereinafter referred to as BCY8153);

Ac-(SEQ ID NO: 174) (hereinafter referred to as BCY8154);

Ac-(SEQ ID NO: 175) (hereinafter referred to as BCY8157);

Ac-(SEQ ID NO: 176) (hereinafter referred to as BCY8158);

Ac-(SEQ ID NO: 177) (hereinafter referred to as BCY8161);

Ac-[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 177) (hereinafter referred to as BCY8278);

Ac-(SEQ ID NO: 178) (hereinafter referred to as BCY8162);

Ac-[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 178) (hereinafter referred to as BCY8277);

Ac-(SEQ ID NO: 179) (hereinafter referred to as BCY8163);

Ac-[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 179) (hereinafter referred to as BCY8276);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 179) (hereinafter referred to as BCY8269);

Ac-(SEQ ID NO: 180) (hereinafter referred to as BCY8174);

Ac-(SEQ ID NO: 181) (hereinafter referred to as BCY8175);

Ac-(SEQ ID NO: 182) (hereinafter referred to as BCY8176);

Ac-(SEQ ID NO: 183) (hereinafter referred to as BCY8177);

Ac-(SEQ ID NO: 184) (hereinafter referred to as BCY8178);

Ac-(SEQ ID NO: 185) (hereinafter referred to as BCY8180);

Ac-(SEQ ID NO: 186) (hereinafter referred to as BCY8181);

Ac-(SEQ ID NO: 187) (hereinafter referred to as BCY8182);

Ac-(SEQ ID NO: 188) (hereinafter referred to as BCY8183);

Ac-(SEQ ID NO: 189) (hereinafter referred to as BCY8184);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 189) (hereinafter referred to as BCY8235);

Ac-(SEQ ID NO: 190) (hereinafter referred to as BCY8185);

Ac-(SEQ ID NO: 191) (hereinafter referred to as BCY8186);

Ac-(SEQ ID NO: 192) (hereinafter referred to as BCY8187);

Ac-(SEQ ID NO: 193) (hereinafter referred to as BCY8188);

Ac-(SEQ ID NO: 194) (hereinafter referred to as BCY8189);

Ac-(SEQ ID NO: 195) (hereinafter referred to as BCY8191);

Ac-(SEQ ID NO: 196) (hereinafter referred to as BCY8192);

Ac-(SEQ ID NO: 197) (hereinafter referred to as BCY8193);

Ac-(SEQ ID NO: 198) (hereinafter referred to as BCY8194);

Ac-(SEQ ID NO: 199) (hereinafter referred to as BCY8211);

Ac-(SEQ ID NO: 200) (hereinafter referred to as BCY8212);

Ac-(SEQ ID NO: 201) (hereinafter referred to as BCY8213);

- 166 045862

Ac-(SEQ ID NO: 202) (hereinafter referred to as BCY8214);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 202) (hereinafter referred to as BCY8231);

Ac-(SeQ ID NO: 203) (hereinafter referred to as BCY8215);

Ac-[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 208) (hereinafter referred to as BCY8279);

Ac-[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 209) (hereinafter referred to as BCY8280);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 209) (hereinafter referred to as BCY8273);

Ac-[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 210) (hereinafter referred to as BCY8281);

Ac-(SEQ ID NO: 211) (hereinafter referred to as BCY8831);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 212) (hereinafter referred to as BCY8238);

(SEQ ID NO: 215) (hereinafter referred to as BCY11415);

[PYA][B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 215) (hereinafter referred to as BCY11942); and (SEQ ID NO: 216) (hereinafter referred to as BCY11414);

more specific

Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8122);

Ac-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8126);

(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8116);

Fluorescein-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8205); And

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8234); especially: [B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8234).

7. The peptide ligand according to claim 1, which contains an amino acid sequence selected from A-(SEQ ID NO: 1)-A (referred to as 80-09-02-N002 or BCY428);

F1-A-(SQ ID NO: 1)-A (designated as 80-09-02-N006);

Ac-(SEQ ID NO: 1) (referred to as 80-09-02-N008 or BCY7390);

Ac-[dD]-(SEQ ID NO: 1) (referred to as BCY7606);

A-(SEQ ID NO: 2)-A (designated as 80-09-02-N003 or BCY429);

(1-Nal)A-(SEQ ID NO: 1)-A (referred to as 80-09-02-N009 or BCY7420);

(2-Nal)A-(SEQ ID NO: 1)-A (referred to as 80-09-02-N010 or BCY7421);

(33DPA)A-(SEQ ID NO: 1)-A (referred to as 80-09-02-N011 or BCY7422);

(44BPA)A-(SEQ ID NO: 1)-A (referred to as 80-09-02-N012 or BCY7521);

Ac-(SEQ ID NO: 3) (referred to as 80-09-02-N017);

Ac-(SEQ ID NO: 4) (referred to as 80-09-02-N018);

Ac-(SQ ID NO: 5) (designated as 80-09-02-N019 or BCY7537);

Ac-(SEQ ID NO: 6) (referred to as 80-09-02-N020);

Ac-(SEQ ID NO: 7) (referred to as 80-09-02-N021 or BCY7539);

Ac-(SEQ ID NO: 8) (referred to as 80-09-02-N022 or BCY7540);

Ac-(SEQ ID NO: 9) (referred to as 80-09-02-N023);

Ac-(pCoF)-(SEQ ID NO: 1) (referred to as 80-09-02-N044);

Ac-(SEQ ID NO: 10) (referred to as 80-09-02-N045);

Ac-(SEQ ID NO: 11) (referred to as 80-09-02-N046 or BCY7657);

Ac-(SEQ ID NO: 12) (referred to as 80-09-02-N047 or BCY7658);

Ac-(SEQ ID NO: 13) (referred to as 80-09-02-N048 or BCY7659);

Ac-(SEQ ID NO: 14) (referred to as 80-09-02-N049);

Ac-(SEQ ID NO: 15) (referred to as 80-09-02-N050 or BCY7661);

SDN-(SEQ ID NO: 15)-A (referred to as BCY3387);

Ac-(SEQ ID NO: 16) (referred to as 80-09-02-N051 or BCY7662);

Ac-(SEQ ID NO: 17) (referred to as 80-09-02-N052);

Ac-(SEQ ID NO: 18) (referred to as 80-09-02-N053);

Ac-(SEQ ID NO: 19) (referred to as 80-09-02-N054 or BCY7665);

Ac-(SEQ ID NO: 20) (referred to as 80-09-02-N055 or BCY7666);

Ac-(SEQ ID NO: 21) (referred to as 80-09-02-N056);

A-(SEQ ID NO: 1)-TNK (referred to as 80-09-02-T01-N001 or BCY3385);

A-(SEQ ID NO: l)-TN(HArg) (designated as 80-09-02-T01-N003 or BCY7281);

A-(SEQ ID NO: l)-TN(D-K) (referred to as 80-09-02-T01-N004 or BCY7282);

A-(SEQ ID NO: 22)-TNK (referred to as 80-09-02-T01-N005);

A-(SEQ ID NO: 23)-TNK (referred to as 80-09-02-T01-N006);

Ac-(SEQ ID NO: 1)-TNK (referred to as 80-09-02-T01-N011 or BCY7391);

A-(SEQ ID NO: 24)-TNK (referred to as 80-09-02-T01-N012 or BCY7342);

A-(SEQ ID NO: 25)-TNK (referred to as 80-09-02-T01-N014 or BCY7344);

A-(SEQ ID NO: 1)-ANK (referred to as 80-09-02-T01-N016 or BCY7346);

A-(SEQ ID NO: 1)-[dA]NK (referred to as BCY7367);

A-(SEQ ID NO: 1)-SO (designated as 80-09-02-T01-N017 or BCY7347);

A-(SEQ ID NO: 1)-T[dA]K (referred to as BCY7368);

- 167 045862

A-(SEQ ID NO: 1)-TNA (referred to as 80-09-02-T01-N018 or BCY7348);

A-(SEQ ID NO: l)-TN[dA] (referred to as BCY7369);

Ac-[pCoPhe]-(SEQ ID NO: 1) (referred to as BCY7656);

A-(SEQ ID NO: 6)-TNK (referred to as 80-09-02-T01-N020 or BCY7354);

A-(SEQ ID NO: 26)-TNK (referred to as 80-09-02-T01-N022 or BCY7352);

A-(SEQ ID NO: 27)-TNK (referred to as 80-09-02-T01-N026 or BCY7356);

A-(SEQ ID NO: 28)-TNK (referred to as 80-09-02-T01-N027 or BCY7357);

A-(SEQ ID NO: 29)-TNK (referred to as 80-09-02-T01-N041 or BCY7372);

A-(SEQ ID NO: 30)-TNK (referred to as 80-09-02-T01-N042 or BCY7424);

A-(SEQ ID NO: 31)-A (designated as 80-10-00 or BCY488);

A-(SEQ ID NO: 32)-A (referred to as BCY432);

DDW-(SEQ ID NO: 32)-A (designated as 80-10-11-T01 or BCY433);

VDW-(SEQ ID NO: 33)-A (designated as 80-10-12-T01 or BCY462);

QKW-(SEQ ID NO: 34)-A (designated as 80-10-13-T01 or BCY3400);

Q[HArg]W-(SEQ ID NO: 34)-A (referred to as BCY7278);

Q[K(Ac)]W-(SEQ ID NO: 34)-A (referred to as BCY7280);

[Ac]QKW-(SEQ ID NO: 34) (referred to as BCY7392);

Q[dK]W-(SEQ ID NO: 34)-A (referred to as BCY7426);

Ac-AKW-(SEQ ID NO: 34) (referred to as BCY7622);

Ac-QAW-(SEQ ID NO: 34) (referred to as BCY7623);

Ac-QKA-(SEQ ID NO: 34) (referred to as BCY7624);

Ac-[dA]KW-(SEQ ID NO: 34) (referred to as BCY7634);

Ac-Q[dA]W-(SEQ ID NO: 34) (referred to as BCY7635);

Ac-QK[dA]-(SEQ ID NO: 34) (referred to as BCY7636);

Ac-Q[dD]W-(SEQ ID NO: 34) (referred to as BCY7993);

Ac-QK[1Nal]-(SEQ ID NO: 34) (referred to as BCY7996);

Ac-QK[2Nal]-(SEQ ID NO: 34) (referred to as BCY7997);

Ac-(SEQ ID NO: 34) (referred to as BCY8044);

A-(SEQ ID NO: 43)-A (hereinafter referred to as BCY430);

A-(SEQ ID NO: 44)-A (hereinafter referred to as BCY431);

A-(SEQ ID NO: 58)-PQA (hereinafter referred to as BCY3401);

QKW-(SEQ ID NO: 65)-A (hereinafter referred to as BCY7279);

Ac-QKW-(SEQ ID NO: 103) (hereinafter referred to as BCY7625);

Ac-QKW-(SEQ ID NO: 104) (hereinafter referred to as BCY7627);

Ac-QKW-(SEQ ID NO: 105) (hereinafter referred to as BCY7628);

Ac-QKW-(SEQ ID NO: 106) (hereinafter referred to as BCY7631);

Ac-QKW-(SEQ ID NO: 107) (hereinafter referred to as BCY7632);

Ac-QKW-(SEQ ID NO: 108) (hereinafter referred to as BCY7639);

Ac-QKW-(SEQ ID NO: 109) (hereinafter referred to as BCY7640);

Ac-QKW-(SEQ ID NO: 110) (hereinafter referred to as BCY7643);

Ac-QKW-(SEQ ID NO: 153) (hereinafter referred to as BCY7998);

Ac-QKW-(SEQ ID NO: 154) (hereinafter referred to as BCY8000);

A-(SEQ ID NO: 35)-A (designated as 80-11-00 or BCY471);

A-(SEQ ID NO: 36)-A (designated as 80-11-01 or BCY472);

A-(SEQ ID NO: 37)-SRF (designated as 80-11-08-T01 or BCY3406);

Ac-(SEQ ID NO: 37)-SRF (referred to as BCY7393);

DDA-(SEQ ID NO: 45)-A (hereinafter referred to as BCY3386);

DTA-(SEQ ID NO: 46)-A (hereinafter referred to as BCY3388);

DSE-(SEQ ID NO: 47)-A (hereinafter referred to as BCY3389);

HDA-(SEQ ID NO: 48)-A (hereinafter referred to as BCY3390);

MDT-(SEQ ID NO: 49)-A (hereinafter referred to as BCY3391);

DPG-(SEQ ID NO: 50)-A (hereinafter referred to as BCY3392);

HDS-(SEQ ID NO: 51)-A (hereinafter referred to as BCY3393);

(D-H)DS-(SEQ ID NO: 51)-A (hereinafter referred to as BCY7272);

A-(SEQ ID NO: 52)-TDK (hereinafter referred to as BCY3394);

A-(SEQ ID NO: 53)-LKD (hereinafter referred to as BCY3395);

A-(SEQ ID NO: 54)-TTA (hereinafter referred to as BCY3396);

A-(SEQ ID NO: 55)-QME (hereinafter referred to as BCY3397);

A-(SEQ ID NO: 56)-LSE (hereinafter referred to as BCY3398);

A-(SEQ ID NO: 57)-STD (hereinafter referred to as BCY3399);

A-(SEQ ID NO: 59)-TNK (hereinafter referred to as BCY7265);

Ac-(SEQ ID NO: 59) (hereinafter referred to as BCY7660);

- 168 045862

A-(SEQ ID NO: 60)-TNK (hereinafter referred to as BCY7266);

Ac-(SEQ ID NO: 60) (hereinafter referred to as BCY7616);

HdS-(SEQ ID NO: 61)-A (hereinafter referred to as BCY7273);

HDS-(SEQ ID NO: 62)-A (hereinafter referred to as BCY7274);

HDS-(SEQ ID NO: 63)-A (hereinafter referred to as BCY7275);

HDS-(SEQ ID NO: 64)-A (hereinafter referred to as BCY7276);

A-(SEQ ID NO: 66)-TNK (hereinafter referred to as BCY7349);

A-(SEQ ID NO: 67)-TNK (hereinafter referred to as BCY7350);

Ac-(SEQ ID NO: 67) (hereinafter referred to as BCY7538);

A-(SEQ ID NO: 68)-TNK (hereinafter referred to as BCY7359);

A-(SEQ ID NO: 69)-TNK (hereinafter referred to as BCY7360);

A-(SEQ ID NO: 70)-TNK (hereinafter referred to as BCY7361);

A-(SEQ ID NO: 71)-TNK (hereinafter referred to as BCY7365);

A-(SEQ ID NO: 72)-TNK (hereinafter referred to as BCY7370);

Ac-(SEQ ID NO: 73) (hereinafter referred to as BCY7535);

Ac-(SEQ ID NO: 74) (hereinafter referred to as BCY7536);

Ac-(SEQ ID NO: 75) (hereinafter referred to as BCY7541);

[B-A1a][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 76) (hereinafter referred to as BCY7556);

Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 76) (hereinafter referred to as BCY7558);

[B-A1a][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 77) (hereinafter referred to as BCY7557);

Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 77) (hereinafter referred to as BCY7559);

Ac-(SEQ ID NO: 78) (hereinafter referred to as BCY7580);

Ac-(SEQ ID NO: 79) (hereinafter referred to as BCY7581);

Ac-(SEQ ID NO: 80) (hereinafter referred to as BCY7582);

Ac-(SEQ ID NO: 81) (hereinafter referred to as BCY7584);

Ac-(SEQ ID NO: 82) (hereinafter referred to as BCY7585);

Ac-(SEQ ID NO: 83) (hereinafter referred to as BCY7588);

Ac-(SEQ ID NO: 84) (hereinafter referred to as BCY7589);

Ac-(SEQ ID NO: 85) (hereinafter referred to as BCY7590);

Ac-(SEQ ID NO: 86) (hereinafter referred to as BCY7591);

Ac-(SEQ ID NO: 87) (hereinafter referred to as BCY7592);

Ac-(SEQ ID NO: 88) (hereinafter referred to as BCY7593);

Ac-(SEQ ID NO: 89) (hereinafter referred to as BCY7594);

Ac-(SEQ ID NO: 90) (hereinafter referred to as BCY7595);

Ac-(SEQ ID NO: 91) (hereinafter referred to as BCY7596);

Ac-(SEQ ID NO: 92) (hereinafter referred to as BCY7597);

Ac-(SEQ ID NO: 93) (hereinafter referred to as BCY7598);

Ac-(SEQ ID NO: 94) (hereinafter referred to as BCY7607);

Ac-(SEQ ID NO: 95) (hereinafter referred to as BCY7608);

Ac-(SEQ ID NO: 96) (hereinafter referred to as BCY7611);

Ac-(SEQ ID NO: 97) (hereinafter referred to as BCY7612);

Ac-(SEQ ID NO: 98) (hereinafter referred to as BCY7613);

Ac-(SEQ ID NO: 99) (hereinafter referred to as BCY7614);

Ac-(SEQ ID NO: 100) (hereinafter referred to as BCY7615);

Ac-(SEQ ID NO: 101) (hereinafter referred to as BCY7618);

Ac-(SEQ ID NO: 102) (hereinafter referred to as BCY7620);

Ac-(SEQ ID NO: 111) (hereinafter referred to as BCY7663);

Ac-(SEQ ID NO: 112) (hereinafter referred to as BCY7664);

Ac-(SEQ ID NO: 113) (hereinafter referred to as BCY7667);

Ac-(SEQ ID NO: 114) (hereinafter referred to as BCY7668);

Ac-(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7765);

(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7793);

(MeO-dPEG12)(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8087);

(carboxyfluorescein)(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8208);

(PEGs)(PEGs)(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7815);

(MeO-dPEG12)(PEG3)(PEG3)(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8094);

Ac-DDD-(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8028);

Ac-[dD][dD][dD]-(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY8029);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 115) (hereinafter referred to as BCY7814);

Ac-(SEQ ID NO: 116) (hereinafter referred to as BCY7816);

Ac-(SEQ ID NO: 116) (MeO-dPEG12) linked to D-Lys6 (hereinafter referred to as BCY8084);

Ac-(SEQ ID NO: 117) (hereinafter referred to as BCY7817);

- 169 045862

Ac-(SEQ ID NO

118) (hereinafter referred to as BCY7818;

118) (MeO-dPEG12) bound to Pro(4NH)l (hereinafter referred to as BCY8086);

119) (hereinafter referred to as BCY7819;

119) (MeO-dPEG12) bound to Lys5 (hereinafter referred to as BCY8088);

120) (hereinafter referred to as BCY7820;

120) (MeO-dPEG12) associated with D-Lys3 (hereinafter referred to as BCY8089);

121) (hereinafter referred to as BCY7821);

121) (MeO-dPEG12) bound to Lys4 (hereinafter referred to as BCY8090);

122) (hereinafter referred to as BCY7822);

122) (MeO-dPEG12) bound cLys6 (hereinafter referred to as BCY8091);

123) (hereinafter referred to as BCY7876);

124) (hereinafter referred to as BCY7877);

125) (hereinafter referred to as BCY7879);

126) (hereinafter referred to as BCY7881);

127) (hereinafter referred to as BCY7883);

128) (hereinafter referred to as BCY7884);

129) (hereinafter referred to as BCY7886);

130) (hereinafter referred to as BCY7887);

131) (hereinafter referred to as BCY7889);

132) (hereinafter referred to as BCY7890);

133) (hereinafter referred to as BCY7891);

134) (hereinafter referred to as BCY7892);

135) (hereinafter referred to as BCY7894);

136) (hereinafter referred to as BCY7895);

137) (hereinafter referred to as BCY7896);

138) (hereinafter referred to as BCY7897);

139) (hereinafter referred to as BCY7902);

140) (hereinafter referred to as BCY7903);

141) (hereinafter referred to as BCY7904);

142) (hereinafter referred to as BCY7906);

143) (hereinafter referred to as BCY7907);

144) (hereinafter referred to as BCY7908);

145) (hereinafter referred to as BCY7911);

146) (hereinafter referred to as BCY7912);

147) (hereinafter referred to as BCY7913);

148) (hereinafter referred to as BCY7914);

149) (hereinafter referred to as BCY7915);

150) (hereinafter referred to as BCY7916);

151) (hereinafter referred to as BCY7973);

152) (hereinafter referred to as BCY7979);

155) (hereinafter referred to as BCY8030);

156) (hereinafter referred to as BCY8031);

157) (hereinafter referred to as BCY8032);

158) (hereinafter referred to as BCY8036);

159) (hereinafter referred to as BCY8037);

160) (hereinafter referred to as BCY8038);

161) (hereinafter referred to as BCY8039);

162) (hereinafter referred to as BCY8040);

163) (hereinafter referred to as BCY8041);

164) (hereinafter referred to as BCY8042);

165) (hereinafter referred to as BCY8042);

166) (hereinafter referred to as BCY8085);

Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 167) (hereinafter referred to as BCY8120);

Ac-(SEQ ID NO: 167) (hereinafter referred to as BCY8124);

Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 168) (hereinafter referred to as BCY8121);

Ac-(SEQ ID NO: 168) (hereinafter referred to as BCY8125);

Ac-[B-Ala][Sar ₅ ]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8122);

Ac-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8126);

(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8116);

fluorescein-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8205);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8234);

[PYA][B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 169) (hereinafter referred to as BCY8846);

- 170 045862

Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO: 170) (hereinafter referred to as BCY8123);

Ac-(SEQ ID NO: 170) (hereinafter referred to as BCY8127);

(SeQ ID NO: 170) (hereinafter referred to as BCY8206);

Ac-(SEQ ID NO: 171) (hereinafter referred to as BCY8128);

(SEQ ID NO: 171) (hereinafter referred to as BCY8207);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 171) (hereinafter referred to as BCY8232);

Ac-(SEQ ID NO: 172) (hereinafter referred to as BCY8129);

Ac-(SEQ ID NO: 173) (hereinafter referred to as BCY8153);

Ac-(SEQ ID NO: 174) (hereinafter referred to as BCY8154);

Ac-(SEQ ID NO: 175) (hereinafter referred to as BCY8157);

Ac-(SEQ ID NO: 176) (hereinafter referred to as BCY8158);

Ac-(SEQ ID NO: 177) (hereinafter referred to as BCY8161);

c-[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 177) (hereinafter referred to as BCY8278);

Ac-(SEQ ID NO: 178) (hereinafter referred to as BCY8162);

Ac-[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 178) (hereinafter referred to as BCY8277);

Ac-(SEQ ID NO: 179) (hereinafter referred to as BCY8163);

Ac-[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 179) (hereinafter referred to as BCY8276);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 179) (hereinafter referred to as BCY8269);

Ac-(SEQ ID NO: 180) (hereinafter referred to as BCY8174);

Ac-(SEQ ID NO: 181) (hereinafter referred to as BCY8175);

Ac-(SEQ ID NO: 182) (hereinafter referred to as BCY8176);

Ac-(SEQ ID NO: 183) (hereinafter referred to as BCY8177);

Ac-(SEQ ID NO: 184) (hereinafter referred to as BCY8178);

Ac-(SEQ ID NO: 185) (hereinafter referred to as BCY8180);

Ac-(SEQ ID NO: 186) (hereinafter referred to as BCY8181);

Ac-(SEQ ID NO: 187) (hereinafter referred to as BCY8182);

Ac-(SEQ ID NO: 188) (hereinafter referred to as BCY8183);

Ac-(SEQ ID NO: 189) (hereinafter referred to as BCY8184);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 189) (hereinafter referred to as BCY8235);

Ac-(SEQ ID NO: 190) (hereinafter referred to as BCY8185);

Ac-(SEQ ID NO: 191) (hereinafter referred to as BCY8186);

Ac-(SEQ ID NO: 192) (hereinafter referred to as BCY8187);

Ac-(SEQ ID NO: 193) (hereinafter referred to as BCY8188);

Ac-(SEQ ID NO: 194) (hereinafter referred to as BCY8189);

Ac-(SEQ ID NO: 195) (hereinafter referred to as BCY8191);

Ac-(SEQ ID NO: 196) (hereinafter referred to as BCY8192);

Ac-(SEQ ID NO: 197) (hereinafter referred to as BCY8193);

Ac-(SEQ ID NO: 198) (hereinafter referred to as BCY8194);

Ac-(SEQ ID NO: 199) (hereinafter referred to as BCY8211);

Ac-(SEQ ID NO: 200) (hereinafter referred to as BCY8212);

Ac-(SEQ ID NO: 201) (hereinafter referred to as BCY8213);

Ac-(SEQ ID NO: 202) (hereinafter referred to as BCY8214);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 202) (hereinafter referred to as BCY8231);

Ac-(SEQ ID NO: 203) (hereinafter referred to as BCY8215);

Ac-[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 208) (hereinafter referred to as BCY8279);

Ac-[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 209) (hereinafter referred to as BCY8280);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 209) (hereinafter referred to as BCY8273);

Ac-[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 210) (hereinafter referred to as BCY8281);

Ac-(SEQ ID NO: 211) (hereinafter referred to as BCY8831);

[B-A1a][Sar10]-(SEQ ID NO: 212) (hereinafter referred to as BCY8238);

(SEQ ID NO: 215) (hereinafter referred to as BCY11415);

[PYA][B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 215) (hereinafter referred to as BCY11942); and (SEQ ID NO: 216) (hereinafter referred to as BCY11414).

8. Peptide ligand according to any one of claims 1 to 7, where the molecular framework is selected from 1,1',1-(1,3,5triazinan-1,3,5-triyl)triprop-2-en-1-one ( T AT A).

9. The peptide ligand according to any one of claims 1 to 8, where the pharmaceutically acceptable salt is selected from the free acid or salt of sodium, potassium, calcium, ammonium.

10. The peptide ligand according to any one of claims 1 to 9, wherein nectin-4 is human nectin-4.

11. A drug conjugate containing a peptide ligand according to any one of claims 1 to 10, conjugated to one or more effector and/or functional groups, where one or more effector and/or functional groups is selected from the group consisting of a radiochelator, a chromophore, antibody or fragment thereof, enzyme, reactive group, metal chelator, function

- 171 045862 nal group, which promotes the uptake of the peptide ligand into cells and/or the drug.

12. The drug conjugate according to claim 11, wherein the drug is a cytotoxic agent.

13. The drug conjugate according to claim 12, wherein said cytotoxic agent is selected from MMAE or DM1, in particular MMAE.

14. The drug conjugate according to claim 13, where the cytotoxic agent is MMAE and the specified conjugate further contains a linker selected from: -PABC-Cit-Val-glutaryl or -PABC-cyclobutyl-Ala-Cit-eAla-, such as -PABC-Cit-Val-glutaryl-, where PABC stands for paminobenzylcarbamate.

15. The drug conjugate of claim 13, wherein the cytotoxic agent is DM1 and said conjugate further comprises a linker which is -SPDB-(SO ₃ H)-, where SPDB is N-succinimidyl 3-(2- pyridyldithio)propionate.

16. The drug conjugate according to any one of claims 11 to 15, which is selected from any of: BCY7683, BCY7825, BCY7826, BCY8245, BCY8253, BCY8254, BCY8255, BCY8549, BCY8550, BCY8783 and BCY8784, such as: BCY 7683, BCY7825, BCY7826 , BCY8245, BCY8253, BCY8254, BCY8255, BCY8783 and BCY8784, in particular BCY8245.

17. A pharmaceutical composition which contains a peptide ligand according to any one of claims 1 to 10 or a drug conjugate according to any one of claims 11 to 16 in combination with one or more pharmaceutically acceptable excipients.

18. A pharmaceutical composition which contains a peptide ligand according to any one of claims 1 to 10 or a drug conjugate according to any one of claims 11 to 16 in combination with one or more pharmaceutically acceptable excipients and one or more therapeutic agents.

19. Use of a drug conjugate according to any one of claims 11 to 16 for the prevention, suppression or treatment of a disease or disorder mediated by nectin-4.

20. A method of preventing, suppressing or treating cancer, which includes administering to a patient in need thereof a drug conjugate according to any one of claims 11 to 16, wherein said patient is identified as having an increased copy number variation (CNV) of nectin-4.