EA045588B1 - SAFINAMIDE FOR THE TREATMENT OF MYOTONIA - Google Patents
SAFINAMIDE FOR THE TREATMENT OF MYOTONIA Download PDFInfo
- Publication number
- EA045588B1 EA045588B1 EA202092742 EA045588B1 EA 045588 B1 EA045588 B1 EA 045588B1 EA 202092742 EA202092742 EA 202092742 EA 045588 B1 EA045588 B1 EA 045588B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- myotonia
- safinamide
- myotonic
- muscle
- use according
- Prior art date
Links
- 206010061533 Myotonia Diseases 0.000 title claims description 88
- NEMGRZFTLSKBAP-LBPRGKRZSA-N safinamide Chemical compound C1=CC(CN[C@@H](C)C(N)=O)=CC=C1OCC1=CC=CC(F)=C1 NEMGRZFTLSKBAP-LBPRGKRZSA-N 0.000 title claims description 60
- 229950002652 safinamide Drugs 0.000 title claims description 60
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 24
- 208000010316 Myotonia congenita Diseases 0.000 claims description 33
- 208000012905 Myotonic disease Diseases 0.000 claims description 31
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 23
- 108010052164 Sodium Channels Proteins 0.000 claims description 21
- 230000003274 myotonic effect Effects 0.000 claims description 21
- 208000001618 nondystrophic myotonia Diseases 0.000 claims description 21
- 102000018674 Sodium Channels Human genes 0.000 claims description 20
- 208000035954 Thomsen and Becker disease Diseases 0.000 claims description 20
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 16
- VLPIATFUUWWMKC-SNVBAGLBSA-N (2r)-1-(2,6-dimethylphenoxy)propan-2-amine Chemical compound C[C@@H](N)COC1=C(C)C=CC=C1C VLPIATFUUWWMKC-SNVBAGLBSA-N 0.000 claims description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 15
- 229960003404 mexiletine Drugs 0.000 claims description 15
- 206010052904 Musculoskeletal stiffness Diseases 0.000 claims description 14
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 13
- 108010062745 Chloride Channels Proteins 0.000 claims description 9
- 102000011045 Chloride Channels Human genes 0.000 claims description 9
- 208000029323 Congenital myotonia Diseases 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 claims description 6
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 230000036407 pain Effects 0.000 claims description 4
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000013465 muscle pain Diseases 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- GXHMMDRXHUIUMN-UHFFFAOYSA-N methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O.CS(O)(=O)=O GXHMMDRXHUIUMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 32
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 30
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 21
- 206010001497 Agitation Diseases 0.000 description 18
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 15
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 14
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 10
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 206010068871 Myotonic dystrophy Diseases 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- YKOCHIUQOBQIAC-YDALLXLXSA-N (2s)-2-[[4-[(3-fluorophenyl)methoxy]phenyl]methylamino]propanamide;methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O.C1=CC(CN[C@@H](C)C(N)=O)=CC=C1OCC1=CC=CC(F)=C1 YKOCHIUQOBQIAC-YDALLXLXSA-N 0.000 description 7
- BZKPWHYZMXOIDC-UHFFFAOYSA-N acetazolamide Chemical compound CC(=O)NC1=NN=C(S(N)(=O)=O)S1 BZKPWHYZMXOIDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960000571 acetazolamide Drugs 0.000 description 7
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 7
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 7
- 229950011305 safinamide methanesulfonate Drugs 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- XGWFJBFNAQHLEF-UHFFFAOYSA-N 9-anthroic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C(=O)O)=C(C=CC=C3)C3=CC2=C1 XGWFJBFNAQHLEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100023457 Chloride channel protein 1 Human genes 0.000 description 6
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000035955 Proximal myotonic myopathy Diseases 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 208000037140 Steinert myotonic dystrophy Diseases 0.000 description 6
- 208000033654 autosomal recessive myotonia congenita Diseases 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 201000009340 myotonic dystrophy type 1 Diseases 0.000 description 6
- 201000008709 myotonic dystrophy type 2 Diseases 0.000 description 6
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 6
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 6
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 101710091665 Chloride channel protein 1 Proteins 0.000 description 5
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 238000002567 electromyography Methods 0.000 description 5
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 5
- 210000000518 sarcolemma Anatomy 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- 206010021118 Hypotonia Diseases 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 4
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- 230000036640 muscle relaxation Effects 0.000 description 4
- 208000027838 paramyotonia congenita of Von Eulenburg Diseases 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 208000031976 Channelopathies Diseases 0.000 description 3
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 3
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028311 Muscle hypertrophy Diseases 0.000 description 3
- 101150102686 Scn4a gene Proteins 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000002999 depolarising effect Effects 0.000 description 3
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 3
- 238000010304 firing Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 3
- 230000012042 muscle hypertrophy Effects 0.000 description 3
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 3
- -1 nitric Chemical class 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 208000000415 potassium-aggravated myotonia Diseases 0.000 description 3
- 230000036390 resting membrane potential Effects 0.000 description 3
- 230000028527 righting reflex Effects 0.000 description 3
- 102200107968 rs121908551 Human genes 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010025996 CLC-1 channel Proteins 0.000 description 2
- 101150086792 CLCN1 gene Proteins 0.000 description 2
- 244000304337 Cuminum cyminum Species 0.000 description 2
- 102100028188 Cystatin-F Human genes 0.000 description 2
- 101710169749 Cystatin-F Proteins 0.000 description 2
- 208000007599 Hyperkalemic periodic paralysis Diseases 0.000 description 2
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 2
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 2
- 208000016101 Myotonia fluctuans Diseases 0.000 description 2
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000000386 athletic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 2
- 102200107924 c.3929T>A Human genes 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010061592 cardiac fibrillation Diseases 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 229950007919 egtazic acid Drugs 0.000 description 2
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 2
- 230000002600 fibrillogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 2
- 230000004777 loss-of-function mutation Effects 0.000 description 2
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 2
- 238000001964 muscle biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000007830 nerve conduction Effects 0.000 description 2
- 230000007383 nerve stimulation Effects 0.000 description 2
- 230000037434 nonsense mutation Effects 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 2
- 238000009138 potassium supplementation Methods 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 208000026526 progressive weakness Diseases 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 102220248555 rs1555601448 Human genes 0.000 description 2
- 102220124097 rs886043595 Human genes 0.000 description 2
- 208000013363 skeletal muscle disease Diseases 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 2
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- BUJAGSGYPOAWEI-SECBINFHSA-N (2r)-2-amino-n-(2,6-dimethylphenyl)propanamide Chemical compound C[C@@H](N)C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C BUJAGSGYPOAWEI-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- UNJMDXSTOKGWPK-ILSZIBLNSA-N (2s)-2-[[4-[(3-fluorophenyl)methoxy]phenyl]methylamino]propanamide Chemical group C1=CC(CN[C@@H](C)C(N)=O)=CC=C1OCC1=CC=CC(F)=C1.C1=CC(CN[C@@H](C)C(N)=O)=CC=C1OCC1=CC=CC(F)=C1 UNJMDXSTOKGWPK-ILSZIBLNSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 208000010444 Acidosis Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018424 Chloride channel ClC-1 Human genes 0.000 description 1
- 108050007520 Chloride channel ClC-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010011469 Crying Diseases 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000906651 Homo sapiens Chloride channel protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000693993 Homo sapiens Sodium channel protein type 4 subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000913 Kidney Calculi Diseases 0.000 description 1
- 208000009612 Laryngismus Diseases 0.000 description 1
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010062575 Muscle contracture Diseases 0.000 description 1
- 206010049816 Muscle tightness Diseases 0.000 description 1
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 description 1
- 201000009623 Myopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 206010028933 Neonatal diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 206010029148 Nephrolithiasis Diseases 0.000 description 1
- 208000001300 Perinatal Death Diseases 0.000 description 1
- 101000941277 Rattus norvegicus Endothelial lipase Proteins 0.000 description 1
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 102100027195 Sodium channel protein type 4 subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 208000031339 Split cord malformation Diseases 0.000 description 1
- 206010042440 Sudden infant death syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010053752 Voltage-Gated Sodium Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000016913 Voltage-Gated Sodium Channels Human genes 0.000 description 1
- 230000004308 accommodation Effects 0.000 description 1
- 230000007950 acidosis Effects 0.000 description 1
- 208000026545 acidosis disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037919 acquired disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid group Chemical group C(C1=CC=CC=C1)(=O)O WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000009194 climbing Effects 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 208000006111 contracture Diseases 0.000 description 1
- 238000013211 curve analysis Methods 0.000 description 1
- WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N cyclandelate Chemical compound C1C(C)(C)CC(C)CC1OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 229960003710 dantrolene sodium Drugs 0.000 description 1
- LTWQNYPDAUSXBC-CDJGKPBYSA-L dantrolene sodium hemiheptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1C(O1)=CC=C1\C=N\N1C(=O)[N-]C(=O)C1.C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1C(O1)=CC=C1\C=N\N1C(=O)[N-]C(=O)C1 LTWQNYPDAUSXBC-CDJGKPBYSA-L 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000001667 episodic effect Effects 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 210000001097 facial muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000007941 film coated tablet Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 210000000245 forearm Anatomy 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 235000011167 hydrochloric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012052 hydrophilic carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012051 hydrophobic carrier Substances 0.000 description 1
- 208000018875 hypoxemia Diseases 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 210000000876 intercostal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000004020 intracellular membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000028161 membrane depolarization Effects 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 1
- 230000020763 muscle atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000004118 muscle contraction Effects 0.000 description 1
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 210000004237 neck muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 208000035824 paresthesia Diseases 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 208000029308 periodic paralysis Diseases 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011422 pharmacological therapy Methods 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 150000003870 salicylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000004645 scanning capacitance microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000006190 sub-lingual tablet Substances 0.000 description 1
- 238000013068 supply chain management Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960002872 tocainide Drugs 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000037317 transdermal delivery Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Description
Область техники, к которой относится настоящее изобретениеField of technology to which the present invention relates
Настоящее изобретение относится к сафинамиду или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении миотонии. В частности, настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим сафинамид или его фармацевтически приемлемую соль, для применения в лечении заболевания или состояния, при котором миотония является нежелательным аспектом.The present invention relates to safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of myotonia. In particular, the present invention relates to pharmaceutical compositions containing safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for use in the treatment of a disease or condition in which myotonia is an undesirable aspect.
Уровень техники настоящего изобретенияBACKGROUND OF THE INVENTION
Миотонию можно определить как непроизвольное постоянное сокращение скелетных мышц после активации, которое вызывает скованность и боль.Myotonia can be defined as an involuntary, persistent contraction of skeletal muscles after activation, which causes stiffness and pain.
Миотония возникает из-за аномалии мембраны мышечных волокон (патологическая гипервозбудимость сарколеммы), которая приводит к длительной задержке расслабления мышц после сокращения, может быть болезненной и серьезно мешать повседневной двигательной активности и качеству жизни. Мышца начинает сокращение по команде, но электрическая активность продолжается после окончания нервного сигнала, вызывая жесткость или блокировку мышцы.Myotonia occurs due to an abnormality of the muscle fiber membrane (pathological sarcolemmal hyperexcitability), which results in a prolonged delay in muscle relaxation after contraction, can be painful and seriously interfere with daily motor activity and quality of life. The muscle begins to contract on command, but the electrical activity continues after the end of the nerve signal, causing the muscle to become stiff or locked.
Деструктивное замедленное расслабление мышц, которое испытывают пациенты с миотоническими расстройствами, вызвано непроизвольной активизацией потенциалов действия (ПД). В физиологических условиях потоки хлоридов (опосредованные хлоридным каналом ClC-1), которые составляют от 70 до 80% проводимости мембраны мышц в состоянии покоя, компенсируют деполяризующее влияние накопления K+ в T-трубочках мышц (Adrian and Bryant, J. Physiol. 1974; 240:505-515) и предотвращают открытие потенциалзависимого канала Na+, тем самым предотвращая непроизвольный ПД и повторяющиеся разряды импульсов, наблюдаемые при миотонии.The destructive delayed muscle relaxation experienced by patients with myotonic disorders is caused by involuntary firing of action potentials (APs). Under physiological conditions, chloride currents (mediated by the ClC-1 chloride channel), which account for 70 to 80% of resting muscle membrane conductance, compensate for the depolarizing effect of K+ accumulation in muscle T-tubules (Adrian and Bryant, J. Physiol. 1974; 240 :505-515) and prevent the opening of the voltage-gated Na + channel, thereby preventing the involuntary AP and repetitive firing seen in myotonia.
Мутации в генах, кодирующих хлоридные (CLCN1) и/или натриевые каналы (SCN4A) в скелетных мышцах, приводят к множественным дефектам в воротном механизме ионных каналов, что приводит к гипервозбудимости мышц и миотоническим разрядам (Burge and Hanna, Curr. Neurol. Neurosci. Rep. 2012; 12:62-69).Mutations in the genes encoding chloride (CLCN1) and/or sodium channels (SCN4A) in skeletal muscle lead to multiple defects in ion channel gating, resulting in muscle hyperexcitability and myotonic discharges (Burge and Hanna, Curr. Neurol. Neurosci. Rep. 2012;12:62-69).
Миотония представляет собой характерный симптом различных генетических и приобретенных заболеваний, которые можно классифицировать как миотонические нарушения, такие как недистрофические миотонии и миотонические дистрофии.Myotonia is a characteristic symptom of various genetic and acquired diseases that can be classified as myotonic disorders, such as non-dystrophic myotonias and myotonic dystrophies.
Недистрофические миотонии (НДМ) представляют собой чисто скелетные мышечные заболевания без поражения сердца или мышц пищеварительного тракта. В зависимости от типа и серьезности расстройства миотония может поражать все, от ног, лица, рук, бедер, плеч, ступней, век до способности человека четко говорить, эмоциональные потрясения, холод, калий или упражнения-потенциальные инициаторы миотонии.Non-dystrophic myotonia (NDM) are purely skeletal muscle diseases without damage to the heart or muscles of the digestive tract. Depending on the type and severity of the disorder, myotonia can affect everything from the legs, face, arms, hips, shoulders, feet, eyelids, to a person's ability to speak clearly, emotional shock, cold, potassium, or exercise are potential triggers of myotonia.
В более тяжелых случаях НДМ могут хронически истощать организм из-за боли и жесткости мышц. В очень немногих случаях перинатальной смерти сообщалось как несчастливое осложнение тяжелого миотонического состояния, называемого SNEL (тяжелые неонатальные эпизодические ларингоспазмы) (Gay et al., Am. J. Med. Genet A 2008; 146:380-383; Lion-Francois et al., Neurology, 2010; 75(7):641-645. Portaro et al., Pediatrics, 2016; 137(4); Lehmann-Horn et al., Acta Myologica, 2017; XXXVI:125-134). Совсем недавно миотонические мутации в натриевых каналах были определены как фактор риска СВДС (синдром внезапной детской смерти) (Mannikko et al., Lancet 2018; 391(10129):1483-1492).In more severe cases, NDM can chronically debilitate the body due to pain and muscle stiffness. In very few cases, perinatal death has been reported as an unfortunate complication of a severe myotonic condition called SNEL (severe neonatal episodic laryngospasms) (Gay et al., Am. J. Med. Genet A 2008; 146:380-383; Lion-Francois et al. , Neurology, 2010;75(7):641-645. Portaro et al., Pediatrics, 2016;137(4); Lehmann-Horn et al., Acta Myologica, 2017; XXXVI:125-134). More recently, myotonic mutations in sodium channels have been identified as a risk factor for SIDS (Sudden Infant Death Syndrome) (Mannikko et al., Lancet 2018;391(10129):1483-1492).
НДМ можно классифицировать как нарушения ионных каналов, вызванные типичными точечными мутациями или делециями в генах хлоридных или натриевых каналов с исключительной экспрессией в скелетных мышцах. Известно, что НДМ вызываются мутациями с приобретением функции в гене SCN4A, кодирующем натриевый канал Nav1.4 скелетных мышц (врожденная парамиотония и миотония натриевых каналов), или мутациями с потерей функции в гене CLCN1, кодирующем ClC-1 хлоридный канал скелетных мышц (врожденная миотония).NDM can be classified as ion channel disorders caused by typical point mutations or deletions in chloride or sodium channel genes with exclusive expression in skeletal muscle. NDM is known to be caused by gain-of-function mutations in the SCN4A gene, encoding the Na v 1.4 sodium channel of skeletal muscle (congenital paramyotonia and sodium channel myotonia), or loss-of-function mutations in the CLCN1 gene, encoding the ClC-1 chloride channel of skeletal muscle (congenital myotonia ).
Сниженная активность мутированных хлоридных каналов или повышенная активность мутированных натриевых каналов обусловливает патологическую гипервозбудимость сарколеммы с возникновением высокочастотных импульсных разрядов потенциала действия; последующее затруднение мышечной релаксации является причиной характерной жесткости миотонической мышцы.Reduced activity of mutated chloride channels or increased activity of mutated sodium channels causes pathological hyperexcitability of the sarcolemma with the occurrence of high-frequency pulsed action potential discharges; the subsequent difficulty in muscle relaxation is responsible for the characteristic stiffness of the myotonic muscle.
НДМ включают в себя хлоридные каналопатии, такие как, например, врожденная миотония Томсена и врожденная миотония Беккера; и натриевые каналопатии, как, например, врожденная парамиотония с гиперкалиемическим периодическим параличом или без него и миотония натриевых каналов (SCMs), которые включают, например, флуктуационную миотонию, перманентную миотонию и миотонию, чувствительную к ацетазоламиду, миотонию с отягощением K+ и тяжелые эпизодические неонатальные ларингоспазмы (SNEL). Все формы врожденной миотонии вызываются мутациями, которые приводят к потере функции хлоридного канала ClC-1, который экспрессируется исключительно в мембране скелетных мышц.NDMs include chloride channelopathies, such as, for example, Thomsen's myotonia congenita and Becker's myotonia congenita; and sodium channelopathies, such as paramyotonia congenita with or without hyperkalemic periodic paralysis and sodium channel myotonia (SCMs), which include, for example, fluctuating myotonia, permanent myotonia and acetazolamide-sensitive myotonia, K + -restricted myotonia, and severe episodic neonatal laryngospasms (SNEL). All forms of myotonia congenita are caused by mutations that result in loss of function of the chloride channel ClC-1, which is expressed exclusively in the skeletal muscle membrane.
Следующее клиническое описание и возможные терапевтические варианты для перечисленных выше НСД взяты из обзорной Review Article Myotonic disorders Ami Mankodi, опубликованной в Neurology India, июль-сентябрь 2008 г., том 56, выпуск 3.The following clinical description and possible therapeutic options for the above NSDs are taken from the Review Article Myotonic disorders by Ami Mankodi, published in Neurology India, July-September 2008, Volume 56, Issue 3.
Врожденная миотония Томсена.Thomsen's myotonia congenita.
Название врожденная миотония Томсена происходит от оригинального описания болезни, сде- 1 045588 ланного датским врачом в 1870-х гг. самим себе и членами его семьи с аутосомно-доминантным типом наследования. Симптомы начинаются в младенчестве или детстве. Пациенты сообщают о безболезненной жесткости мышц при активации мышц после отдыха. Миотония может уменьшаться при повторяющихся мышечных усилиях, так называемый феномен разминки. Эмоциональные потрясения, простуда или беременность могут усугубить миотонию. При медицинском обследовании у некоторых пациентов может быть выявлен атлетический вид с гипертрофией мышц конечностей и лицевых мышц. Пациенты демонстрируют миотонию хватки и миотонию век. Пациентам может быть трудно быстро сесть после того, как они пролежали в течение нескольких минут на спине, что отражает миотонию параспинальных и проксимальных мышц конечностей. Сила мышц в норме.The name Thomsen's myotonia congenita comes from the original description of the disease by a Danish physician in the 1870s. himself and his family members with an autosomal dominant type of inheritance. Symptoms begin in infancy or childhood. Patients report painless muscle stiffness with muscle activation after rest. Myotonia may decrease with repeated muscle effort, the so-called warm-up phenomenon. Emotional stress, a cold, or pregnancy can make myotonia worse. Medical examination may reveal an athletic appearance with hypertrophy of the limb and facial muscles in some patients. Patients demonstrate grip myotonia and eyelid myotonia. Patients may have difficulty sitting up quickly after lying supine for several minutes, reflecting myotonia of the paraspinal and proximal limb muscles. Muscle strength is normal.
У большинства пациентов прогноз благоприятный. Пациентам с инвалидизирующей миотонией может быть полезен мексилетин 150 мг внутрь два раза в день с постепенным титрованием до максимальной дозы 300 мг внутрь три раза в день.Most patients have a favorable prognosis. Patients with disabling myotonia may benefit from mexiletine 150 mg orally twice daily, gradually titrated to a maximum dose of 300 mg orally three times daily.
Врожденная миотония Беккера.Becker's myotonia congenita.
Миотония Беккера представляет собой аутосомно-рецессивную миотонию с хлоридным каналом. Название происходит от имени исследователя, описавшего это состояние в 1970-х гг. Клиническая картина включает генерализованную миотонию и гипертрофию мышц, аналогичную миотонии Томсена. Однако есть важные отличия: начало болезни происходит незаметно и позже, в детстве; в начале симптомы часто проявляются в нижних конечностях (так называемая врожденная восходящая миотония); медленно прогрессирующая слабость у некоторых пациентов; преходящие эпизоды слабости проксимальных мышц, продолжающиеся в течение секунд или минут, которые могут быть вызваны просьбой пациента быстро встать после нескольких минут отдыха на спине; и более выраженная гипертрофия мышц нижних конечностей. Воздействие холода, продолжительное мышечное напряжение, беременность, менструация и эмоциональное напряжение могут усугубить миотонию. При медицинском обследовании выявляется атлетический вид с гипертрофией мышц, особенно с вовлечением мышц нижних конечностей и плеч. У некоторых пациентов может наблюдаться атрофия мышц предплечий, кистей рук и передней части шеи. Миотония легко распознается во многих группах мышц, включая жевательные мышцы, мышцы языка и шеи, в дополнение к миотонии сжатия и задержке верхнего века при взгляде вниз. Наиболее характерным признаком является выраженная трудность подъема из положения лежа на спине и подъема по лестнице, которая постепенно улучшается после нескольких шагов, вторичная по отношению к феномену разминки. Считается, что это связано с сочетанием миотонии и мышечной слабости. Большинство пациентов замечают мышечную слабость при физической активности после периода отдыха. У некоторых пациентов может быть устойчивая слабость нижних конечностей, которая может приводить к потере трудоспособности в повседневной жизни. Рефлексы растяжения мышц могут быть подавлены в нижних конечностях. Уровень креатинкиназы (КК) может быть повышен. Повторная стимуляция нервов и короткие тесты с физической нагрузкой могут показать снижение амплитуды смешанного потенциала мышечного действия (СМАР). Длительный тест с физической нагрузкой может выявить небольшой спад, который не характерен для миотонии Томсена. Большинство пациентов наслаждаются хорошим качеством жизни. Симптомы прогрессируют медленно и могут стабилизироваться по достижении пациентом третьего десятилетия. Лечение направлено на изменение активности, устранение активаторов миотонии и слабости. У некоторых пациентов с инвалидизирующей миотонией эффективна фармакологическая терапия, включая мексилетин, токаинид или ацетазоламид.Becker's myotonia is an autosomal recessive chloride channel myotonia. The name comes from the researcher who described this condition in the 1970s. The clinical picture includes generalized myotonia and muscle hypertrophy, similar to Thomsen's myotonia. However, there are important differences: the onset of the disease occurs unnoticed and later, in childhood; at the beginning, symptoms often appear in the lower extremities (so-called congenital ascending myotonia); slowly progressive weakness in some patients; transient episodes of proximal muscle weakness lasting seconds or minutes, which may be caused by asking the patient to quickly stand up after a few minutes of resting on the back; and more pronounced hypertrophy of the muscles of the lower extremities. Exposure to cold, prolonged muscle tension, pregnancy, menstruation, and emotional stress can aggravate myotonia. Physical examination reveals an athletic appearance with muscle hypertrophy, especially involving the muscles of the lower extremities and shoulders. Some patients may experience muscle atrophy in the forearms, hands, and front of the neck. Myotonia is easily recognized in many muscle groups, including the masseter, tongue, and neck muscles, in addition to contraction myotonia and upper eyelid retardation on downward gaze. The most characteristic feature is marked difficulty rising from a supine position and climbing stairs, which gradually improves after a few steps, secondary to a warm-up phenomenon. It is thought to be due to a combination of myotonia and muscle weakness. Most patients notice muscle weakness during physical activity after a period of rest. Some patients may have persistent weakness of the lower extremities, which can lead to disability in activities of daily living. Muscle stretch reflexes may be suppressed in the lower extremities. Creatine kinase (CK) levels may be elevated. Repeated nerve stimulation and short exercise tests may show a decrease in the amplitude of the mixed muscle action potential (CMAP). A long-term exercise test may reveal a slight decline, which is not typical for Thomsen's myotonia. Most patients enjoy a good quality of life. Symptoms progress slowly and may stabilize as the patient reaches their third decade. Treatment is aimed at changing activity, eliminating activators of myotonia and weakness. Some patients with disabling myotonia benefit from pharmacological therapy, including mexiletine, tocainide, or acetazolamide.
Врожденная парамиотония (РМС).Congenital paramyotonia (RMS).
Врожденная парамиотония относится к миотонии, которая усугубляется при физических нагрузках, особенно при низких температурах. Симптомы появляются в младенчестве или детстве. Типичные проявления включают длительное закрытие глаз после плача у младенцев или умывания лица холодной водой и замороженный язык после употребления мороженого. Некоторые пациенты могут сообщать о вялой слабости после физических упражнений при низких температурах. Прием калия, отдых с последующими упражнениями и длительное голодание также могут усугубить парамиотонию. Медицинское обследование выявляет выраженную парамиотонию век, проявляющуюся как неспособность открывать глаза после многократного длительного закрытия глаза или длительного втягивания век после продолжительного взгляда вверх. Помещение пакета со льдом на веки может усугубить парамиотонию. Погружение руки в ледяную воду на 10-15 мин перед упражнением на захват может спровоцировать парамиотонию и последующую слабость. Исследования моторной и сенсорной нервной проводимости в норме. Повторная стимуляция нервов с частотой 5 Гц может привести к снижению амплитуды СМАР. Точно так же короткий тест с физической нагрузкой после воздействия холода также может привести к снижению реакции. Электромиография (ЭМГ) выявляет миотонию во многих мышцах. Потенциалы фибрилляции и положительные резкие волны могут проявиться после воздействия холода. Бесшумная контрактура мышц может возникнуть при экстремальном холоде. Одноволоконная ЭМГ может показывать увеличение флуктуации амплитуды сигнала, а иногда и блокировку. Биопсия мышц противопоказана для диагностики. У большинства пациентов для поддержания хорошего качества жизни достаточно избегать триггерных факторов, таких как упражнения и переохлаждение. Мексилетин можно применять для инвалидизирующей парамиотонии.Congenital paramyotonia refers to myotonia that is aggravated by physical activity, especially at low temperatures. Symptoms begin in infancy or childhood. Typical manifestations include prolonged closing of the eyes after crying in infants or washing the face with cold water, and a frozen tongue after eating ice cream. Some patients may report feeling weak after exercise in cold temperatures. Potassium intake, rest followed by exercise, and prolonged fasting can also aggravate paramyotonia. Physical examination reveals severe paramyotonia of the eyelids, manifested as an inability to open the eyes after repeated prolonged closure of the eye or prolonged retraction of the eyelids after prolonged upward gaze. Placing an ice pack on your eyelids can make paramyotonia worse. Immersing the hand in ice water for 10-15 minutes before a grip exercise can cause paramyotonia and subsequent weakness. Motor and sensory nerve conduction studies were normal. Repeated nerve stimulation at 5 Hz may result in decreased CMAP amplitude. Likewise, a short exercise test after cold exposure may also result in decreased response. Electromyography (EMG) reveals myotonia in many muscles. Fibrillation potentials and positive sharp waves may occur after exposure to cold. Silent muscle contracture can occur in extreme cold. Single-fiber EMG may show increased signal amplitude fluctuations and sometimes blocking. Muscle biopsy is contraindicated for diagnosis. For most patients, avoiding trigger factors such as exercise and exposure to cold is sufficient to maintain a good quality of life. Mexiletine can be used for disabling paramyotonia.
- 2 045588- 2 045588
Калий-чувствительные миотонии.Potassium-sensitive myotonia.
Существует три различных миотонических нарушения натриевых каналов, при которых миотония усугубляется приемом калия. Воздействие холода обычно не усугубляет миотонию, как при врожденной парамиотонии. Слабость не является заметным симптомом.There are three different myotonic sodium channel disorders in which the myotonia is aggravated by potassium supplementation. Exposure to cold does not usually worsen myotonia as it does with congenital paramyotonia. Weakness is not a noticeable symptom.
Флуктуальная миотония характеризуется генерализованной миотонией, вызванной приемом калия или физическими упражнениями. В отличие от парамиотонии, у пациентов может наблюдаться эффект разминки после начальной нагрузки, однако миотония становится более выраженной после второй тренировки после периода отдыха продолжительностью около 20-40 мин. Пациенты сообщают о колебаниях тяжести миотонии с периодами отсутствия явной миотонии, продолжающимися от часов до дней. Мышечная масса и сила в норме. Уровни КК могут быть увеличены в два-три раза. ЭМГ может выявить потенциал миотонии и фибрилляции. Исследования нервной проводимости в норме. Биопсия мышц может выявить легкие аномалии, такие как увеличение внутренних ядер, изменчивость размера волокон и субсарколемматические вакуоли. Большинству пациентов лекарства не требуются. Может быть достаточно простого отказа от продуктов, богатых калием. Мексилетин может помочь уменьшить миотоническую скованность.Fluctuating myotonia is characterized by generalized myotonia induced by potassium intake or exercise. Unlike paramyotonia, patients may experience a warm-up effect after the initial exercise, but myotonia becomes more severe after the second exercise session after a rest period of about 20-40 minutes. Patients report fluctuations in the severity of myotonia, with periods of no apparent myotonia lasting hours to days. Muscle mass and strength are normal. CK levels may be increased two to three times. EMG can reveal the potential for myotonia and fibrillation. Nerve conduction studies are normal. Muscle biopsy may reveal mild abnormalities such as enlarged internal nuclei, variable fiber size, and subsarcolemmatic vacuoles. Most patients do not require medications. Simply avoiding potassium-rich foods may be enough. Mexiletine may help reduce myotonic stiffness.
Перманентная миотония представляет собой редкую и тяжелую форму недистрофической миотонии. Клинические проявления включают начало в возрасте до 10 лет, тяжелую генерализованную миотонию и гипертрофию мышц. Слабость мышц не выражена. Тяжелая миотония с вовлечением межреберных мышц может привести к респираторной недостаточности с гипоксемией и ацидозом. Прием калия и упражнения представляют собой обычные активаторы миотонии. ЭМГ выявляет генерализованную миотонию с нормальным потенциалом двигательных единиц. Мексилетин может частично облегчить миотоническую скованность. Ацетазоламид может помочь уменьшить мышечную жесткость или судороги, вызванные физической нагрузкой.Permanent myotonia is a rare and severe form of non-dystrophic myotonia. Clinical manifestations include onset before age 10 years, severe generalized myotonia, and muscle hypertrophy. Muscle weakness is not expressed. Severe myotonia involving the intercostal muscles can lead to respiratory failure with hypoxemia and acidosis. Potassium intake and exercise are common activators of myotonia. EMG reveals generalized myotonia with normal motor unit potential. Mexiletine may provide some relief from myotonic stiffness. Acetazolamide may help reduce muscle stiffness or cramps caused by exercise.
Миотония, чувствительная к ацетазоламиду, характеризуется генерализованной миотонией, усугубляющейся приемом калия, холодом и голоданием, а также отличным восстановлением после приема ацетазоламида. Пациенты в детстве имеют прогрессирующую генерализованную миотонию, которая легко выявляется при клиническом обследовании и ЭМГ. У некоторых пациентов может наблюдаться парамиотония век. Миотоническая жесткость может быть болезненной. Физические упражнения обычно не оказывают значительного влияния на миотонию. Лечение включает ацетазоламид в начальной дозе 125 мг в сутки с постепенным титрованием до 250 мг 3 раза в сутки при необходимости. Побочные эффекты включают образование камней в почках, парестезию, тошноту, спутанность сознания, раздражительность, депрессию, сыпь и нарушения функции печени. Рекомендуется регулярный контроль общего анализа крови и функции печени. Мексилетин также снимает миотонию.Acetazolamide-sensitive myotonia is characterized by generalized myotonia aggravated by potassium supplementation, cold and fasting, and excellent recovery from acetazolamide. Patients in childhood have progressive generalized myotonia, which is easily detected by clinical examination and EMG. Some patients may experience paramyotonia of the eyelids. Myotonic stiffness can be painful. Exercise usually does not have a significant effect on myotonia. Treatment includes acetazolamide at an initial dose of 125 mg per day, gradually titrated to 250 mg three times daily as needed. Side effects include kidney stones, paresthesia, nausea, confusion, irritability, depression, rash, and liver dysfunction. Regular monitoring of general blood counts and liver function is recommended. Mexiletine also relieves myotonia.
НДМ отличаются от миотонических дистрофий отсутствием прогрессирующей слабости и системных особенностей.NDM differs from myotonic dystrophies in the absence of progressive weakness and systemic features.
Миотонические дистрофии (МД) представляют собой заболевания, характеризующиеся прогрессирующей миопатией, миотонией и поражением многих органов.Myotonic dystrophies (MD) are diseases characterized by progressive myopathy, myotonia, and multi-organ involvement.
Наличие миотонии не является самым инвалидизирующим аспектом МД, но это признанные отличительная черта этого состояния и аспект заболевания, который отличает его от других форм мышечной дистрофии.The presence of myotonia is not the most disabling aspect of MD, but it is a recognized hallmark of the condition and an aspect of the disease that distinguishes it from other forms of muscular dystrophy.
На сегодняшний день идентифицированы две различные формы, вызванные сходными мутациями: миотоническая дистрофия 1 типа (МД1) и миотоническая дистрофия 2 типа (МД2).To date, two distinct forms have been identified, caused by similar mutations: myotonic dystrophy type 1 (MD1) and myotonic dystrophy type 2 (MD2).
В частности, МД1 и МД2 являются наследственными заболеваниями человека из-за увеличения количества нуклеотидных повторов в хромосоме 19 и 3 соответственно (Meola, Acta Myol. 2013; 32(3):154165). Такое изменение приводит к накоплению токсичной РНК в ядре, что влияет на нормальный процессинг белка во многих типах клеток. Таким образом, МД1 и МД2 являются мультисистемными заболеваниями, поражающими, например, ЦНС, сердце и скелетные мышцы. В последнем случае канал ClC-1 является мишенью этого токсичного процесса. Уменьшение количества белка ClC-1 и изменение его сплайсинга являются основной причиной миотонии у пациентов с МД1 и МД2 (Charlet B. et al., Mol. Cell. 2002; 10(1):45-53; Mankodi et al., Mol. Cell. 2002; 10(1):35-44 и Chen et al., J. Mol. Biol. 2007, 368(1):8-17).In particular, MD1 and MD2 are hereditary human diseases due to an increase in the number of nucleotide repeats in chromosome 19 and 3, respectively (Meola, Acta Myol. 2013; 32(3):154165). This change leads to the accumulation of toxic RNA in the nucleus, which interferes with normal protein processing in many cell types. Thus, MD1 and MD2 are multisystem diseases affecting, for example, the central nervous system, heart and skeletal muscles. In the latter case, the ClC-1 channel is the target of this toxic process. A decrease in the amount of ClC-1 protein and changes in its splicing are the main cause of myotonia in patients with MD1 and MD2 (Charlet B. et al., Mol. Cell. 2002; 10(1):45-53; Mankodi et al., Mol. Cell. 2002;10(1):35-44 and Chen et al., J. Mol. Biol. 2007, 368(1):8-17).
В настоящее время препараты от миотонии направлены на снижение патологической гипервозбудимости сарколеммы. Эти лекарства включают мексилетин (Logigian et al., Neurology, 2010; 74(18):14411448).Currently, drugs for myotonia are aimed at reducing the pathological hyperexcitability of the sarcolemma. These medications include mexiletine (Logigian et al., Neurology, 2010;74(18):14411448).
Сущность изобретенияThe essence of the invention
В поисках антимиотонических препаратов, действующих через снижение патологической гипервозбудимости сарколеммы, авторы настоящего изобретения обнаружили, что сафинамид способен восстанавливать возбудимость сарколеммы в изолированных миотонических мышечных волокнах и облегчать миотонические симптомы in vivo на фармакологически индуцированной модели миотонии у крыс. Таким образом, настоящее изобретение основывается на этом открытии и относится к сафинамиду как к антимиотоническому лекарственному средству для лечения пациентов с миотоническими расстройствами, которые в этом нуждаются.In the search for antimyotonic drugs that act by reducing pathological sarcolemmal hyperexcitability, we discovered that safinamide was able to restore sarcolemmal excitability in isolated myotonic muscle fibers and alleviate myotonic symptoms in vivo in a pharmacologically induced rat model of myotonia. Thus, the present invention builds on this discovery and provides safinamide as an antimyotonic drug for the treatment of patients with myotonic disorders who require it.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим сафина- 3 045588 мид или его фармацевтически приемлемую соль в сочетании с подходящими наполнителями, основами или носителями, для применения при миотонических расстройствах.The present invention also relates to pharmaceutical compositions containing safin-3045588 amide or a pharmaceutically acceptable salt thereof in combination with suitable excipients, bases or carriers for use in myotonic disorders.
Краткое описание чертежейBrief description of drawings
На фиг. 1 показано антимиотоническое действие сафинамида in vitro на возбудимость волокон скелетных мышц крыс в миотоническом состоянии, индуцированном 9-антраценкарбоновой кислотой (9-АК). Возбудимость волокон скелетных мышц (максимальное количество спайков, N спайков) измеряли до (контроль, ctrl), после 50 мкМ 9-АК и после одновременного применения сафинамида в шести различных концентрациях (от 0,1 до 30 мкМ). Антимиотонический эффект был обратимым с момента вымывания сафинамида (50 мкМ 9-АК, крайняя правая колонка). Результаты были выражены как среднее значение ± σ (стандартная ошибка); Р<0,05 по сравнению с одним только 9-АК, критерий Бонферрони.In fig. Figure 1 shows the in vitro antimyotonic effect of safinamide on the excitability of rat skeletal muscle fibers in a myotonic state induced by 9-anthracenecarboxylic acid (9-AA). Skeletal muscle fiber excitability (maximum number of spikes, N spikes) was measured before (control, ctrl), after 50 μM 9-AA, and after co-administration of safinamide at six different concentrations (from 0.1 to 30 μM). The antimyotonic effect was reversible once safinamide (50 μM 9-AA, rightmost column) was washed out. Results were expressed as mean ± σ (standard error); P < 0.05 compared with 9-AA alone, Bonferroni test.
На фиг. 2 показан антимиотонический эффект сафинамида in vivo в зависимости от дозы в фармакологически индуцированной моделе врожденной миотонии на крысах. Сафинамид в дозе 0,3, 1, 3, 10 и 30 мг/кг (соответственно: черный треугольник, серый круг, пустой круг, черный круг, серый треугольник; только носитель: пустой квадрат), вводимый перорально, был способен противодействовать 9-антраценкарбоновой кислоте. (9-АК, 30 мг/кг) - индуцированное удлинение времени рефлекса выпрямления (TRR) как признак миотонии у крыс. Результаты выражали как среднее значение ± σ (стандартная ошибка), n=5-7 крыс; Р<0,05 по сравнению с носителем, критерий Бонферрони.In fig. Figure 2 shows the in vivo antimyotonic effect of safinamide in a dose-dependent manner in a pharmacologically induced rat model of congenital myotonia. Safinamide at doses of 0.3, 1, 3, 10 and 30 mg/kg (respectively: black triangle, gray circle, empty circle, black circle, gray triangle; vehicle only: empty square), administered orally, was able to counteract 9- anthracenecarboxylic acid. (9-AA, 30 mg/kg) - induced prolongation of the time of righting reflex (TRR) as a sign of myotonia in rats. Results were expressed as mean ± σ (standard error), n=5-7 rats; P < 0.05 compared with vehicle, Bonferroni test.
Подробное описание предпочтительного варианта осуществленияDetailed Description of the Preferred Embodiment
Таким образом, настоящее изобретение относится к сафинамиду или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении состояния, вызванного патологической гипервозбудимостью сарколеммы, и/или любого другого состояния, при котором восстановление нормальной возбудимости сарколеммы может дать терапевтический эффект или улучшение, где подобное состояние представляет собой миотоническое расстройство. Фактически, до 30% пациентов с миотоническими расстройствами считают мексилетин (эталонный препарат при миотонических расстройствах) неэффективным (Desaphy et al., 2013; Suetterlin et al., JAMA Neurol. 2015 Dec; 72(12):1531-3; Portaro et al., 2016). Для целей настоящего изобретения миотонические расстройства, при которых мексилетин неэффективен, были определены как резистентные к мексилетину, и следующий вариант осуществления настоящего изобретения относится к применению сафинамида для лечения миотонических расстройств, резистентных к мексилетину.Thus, the present invention relates to safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of a condition caused by pathological hyperexcitability of the sarcolemma, and/or any other condition in which restoration of normal excitability of the sarcolemma can provide a therapeutic effect or improvement, where such a condition is myotonic disorder. In fact, up to 30% of patients with myotonic disorders find mexiletine (the reference drug for myotonic disorders) to be ineffective (Desaphy et al., 2013; Suetterlin et al., JAMA Neurol. 2015 Dec; 72(12):1531-3; Portaro et al. ., 2016). For the purposes of the present invention, myotonic disorders for which mexiletine is ineffective have been defined as mexiletine-resistant, and a further embodiment of the present invention relates to the use of safinamide for the treatment of myotonic disorders that are resistant to mexiletine.
Кроме того, настоящее изобретение имеет отношение к сафинамиду или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении миотонического расстройства, при этом миотоническое расстройство предпочтительно представляет собой недистрофическую миотонию (НДМ).Furthermore, the present invention relates to safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of a myotonic disorder, wherein the myotonic disorder is preferably non-dystrophic myotonia (NDM).
Еще более предпочтительно пациенты с НДМ, которым может быть полезен сафинамид, несут бессмысленную мутацию в гене SCN4A. Фактически, без привязки к какой-либо конкретной теории и как более подробно описано в экспериментальной части, было обнаружено, что эффективность сафинамида, измеренная как значения IC50 при мембранном потенциале покоя и после повторяющихся импульсов деполяризации, не снижается по сравнению с не мутантным типом, в клетках, трансфицированных бессмысленными мутациями в канале hNav1.4 (Desaphy et al., 2001, 2003 и 2016). Ожидается, что соединение, способное блокировать натриевые каналы в зависимости от частоты применения, уменьшит аномальную активность, но не повлияет на нормальную активность мышечных волокон.Even more preferably, patients with NDM who may benefit from safinamide carry a nonsense mutation in the SCN4A gene. In fact, without reference to any particular theory and as described in more detail in the experimental section, it was found that the potency of safinamide, measured as IC 50 values at resting membrane potential and after repeated depolarization pulses, was not reduced compared to the non-mutant type. in cells transfected with nonsense mutations in the hNa v 1.4 channel (Desaphy et al., 2001, 2003 and 2016). A compound capable of blocking sodium channels depending on the frequency of application is expected to reduce abnormal activity but not affect normal muscle fiber activity.
Напротив, эффективность мексилетина значительно снижается в клетках, трансфицированных точечными мутациями hNav1.4.In contrast, the effectiveness of mexiletine is significantly reduced in cells transfected with hNa v 1.4 point mutations.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к сафинамиду или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении НДМ, где такой НДМ предпочтительно представляет собой врожденную миотонию, такую как, например, врожденная миотония Томсена или врожденная миотония Беккера, врожденная парамиотония или миотония натриевых или хлоридных каналов; более предпочтительно, указанная миотония натриевых каналов представляет собой каналопатию hNav1.4, и пациент, таким образом, является носителем мутации в гене SCN4A, кодирующем канал hNav1.4.In another embodiment, the present invention relates to safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of NDM, wherein such NDM is preferably a congenital myotonia, such as, for example, Thomsen's myotonia congenita or Becker's myotonia congenita, paramyotonia congenita or sodium or chloride channel myotonia. ; more preferably, said sodium channel myotonia is an hNa v 1.4 channelopathy, and the patient is thus a carrier of a mutation in the SCN4A gene encoding the hNa v 1.4 channel.
В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение имеет отношение к сафинамиду или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении врожденной миотонии, при этом такой врожденной миотонией является врожденная миотония Томсена или врожденная миотония Беккера.In a further embodiment, the present invention relates to safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of myotonia congenita, wherein the myotonia congenita is Thomsen's myotonia congenita or Becker's myotonia congenita.
В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение имеет отношение к сафинамиду или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении врожденной парамиотонии. Кроме того, настоящее изобретение относится к сафинамиду или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении миотонии с натриевыми каналами, где такой миотонией с натриевыми каналами является миотония флуктуационная, миотония перманентная или миотония, чувствительная к ацетазоламиду.In a preferred embodiment, the present invention relates to safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of paramyotonia congenita. Furthermore, the present invention relates to safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of sodium channel myotonia, wherein the sodium channel myotonia is myotonia fluctuate, myotonia permanent or acetazolamide-sensitive myotonia.
Кроме того, настоящее изобретение относится к сафинамиду или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении миотонического расстройства, где такое миотоническое расстройствоFurthermore, the present invention relates to safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of a myotonic disorder, wherein the myotonic disorder
- 4 045588 предпочтительно представляет собой МД.- 4 045588 is preferably MD.
Более того, настоящее изобретение относится к сафинамиду или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении МД, причем такой МД предпочтительно выбирают из МД1 и МД2.Moreover, the present invention relates to safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of MD, which MD is preferably selected from MD1 and MD2.
В предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к сафинамиду или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении врожденной миотонии.In a preferred aspect, the present invention relates to safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the treatment of myotonia congenita.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к сафинамиду или его фармацевтически приемлемой соли для применения для облегчения одного или нескольких миотонических симптомов, связанных с состоянием, как определено выше, где миотонические симптомы включают скованность скелетных мышц, спазмы и боль. Согласно настоящему изобретению сафинамид представляет собой (2S)-2-[[4-[(3фторфенил)метокси]фенил]метиламино]пропанамид формулы:In another aspect, the present invention provides safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in relieving one or more myotonic symptoms associated with a condition as defined above, wherein the myotonic symptoms include skeletal muscle stiffness, spasms and pain. According to the present invention, safinamide is (2S)-2-[[4-[(3fluorophenyl)methoxy]phenyl]methylamino]propanamide of the formula:
Сафинамид предпочтительно находится в форме фармацевтически приемлемой соли. Фармацевтически приемлемые соли сафинамида включают в себя дополнительные соли, образованные неорганическими кислотами, например азотной, соляной, серной, хлористоводородной и фосфорной кислотами, или органическими кислотами, например, уксусной, пропионовой, гликолевой, молочной, щавелевой, малоновой, яблочной, винной, лимонной, бензойной, коричной, миндальной, метансульфоновой и салициловой кислотами; сафинамида метансульфонат (мезилат) является предпочтительной солью.Safinamide is preferably in the form of a pharmaceutically acceptable salt. Pharmaceutically acceptable salts of safinamide include additional salts formed from inorganic acids, such as nitric, hydrochloric, sulfuric, hydrochloric and phosphoric acids, or organic acids, such as acetic, propionic, glycolic, lactic, oxalic, malonic, malic, tartaric, citric, benzoic, cinnamic, mandelic, methanesulfonic and salicylic acids; safinamide methanesulfonate (mesylate) is the preferred salt.
Применяемые в настоящем изобретении термины заболевание, расстройство или состояние применяют взаимозаменяемо.As used herein, the terms disease, disorder or condition are used interchangeably.
Применяемый в настоящем изобретении термин излечение или лечение относится к получению желаемого фармакологического эффекта, включая обращение вспять, облегчение, подавление прогрессирования или предотвращение расстройства, или состояния, к которым применяется такой термин, или одного или нескольких симптомов таких расстройств или состояний.As used herein, the term cure or treatment refers to producing a desired pharmacological effect, including reversing, alleviating, inhibiting the progression of, or preventing the disorder or condition to which such term applies, or one or more symptoms of such disorders or conditions.
Сафинамид или его фармацевтически приемлемая соль обычно включается в фармацевтическую композицию.Safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof is typically included in the pharmaceutical composition.
Фармацевтическая композиция для лечения миотонических нарушений, как определено выше и в соответствии с настоящим изобретением, содержит сафинамид или его фармацевтически приемлемую соль в эффективном количестве, достаточном для обеспечения желаемого терапевтического эффекта или облегчения симптомов миотонических нарушений. Фармацевтическая композиция включает фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.A pharmaceutical composition for the treatment of myotonic disorders, as defined above and in accordance with the present invention, contains safinamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof in an effective amount sufficient to provide the desired therapeutic effect or relief of symptoms of myotonic disorders. The pharmaceutical composition includes a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть введена субъекту/пациенту любым удобным путем введения, системно/периферически или местно (т.е. в месте желаемого действия).The pharmaceutical composition of the present invention may be administered to a subject/patient by any convenient route of administration, systemically/peripherally or locally (ie, at the site of desired action).
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть получена для перорального введения, местного введения, трансдермального введения, парентерального введения и их комбинаций. Предпочтительные композиции предназначены для перорального или парентерального введения. Подходящие формы для перорального введения включают таблетки, прессованные пилюли или пилюли с покрытием, пакет-саше, пастилки, грануляты, твердые или мягкие желатиновые капсулы, сублингвальные таблетки, сиропы, растворы и суспензии; для парентерального введения изобретение предлагает ампулы или флаконы, которые включают водный или неводный раствор или эмульсию; для ректального введения предусмотрены суппозитории с гидрофильными или гидрофобными носителями; и для местного применения в виде мазей и трансдермальной доставки предусмотрены подходящие системы доставки, известные в данной области.The pharmaceutical composition of the present invention can be prepared for oral administration, topical administration, transdermal administration, parenteral administration and combinations thereof. Preferred compositions are for oral or parenteral administration. Suitable forms for oral administration include tablets, compressed or coated pills, sachets, lozenges, granules, hard or soft gelatin capsules, sublingual tablets, syrups, solutions and suspensions; for parenteral administration, the invention provides ampoules or vials that include an aqueous or non-aqueous solution or emulsion; for rectal administration, suppositories with hydrophilic or hydrophobic carriers are provided; and for topical application as ointments and transdermal delivery, suitable delivery systems known in the art are provided.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть получены способами, которые известны per se и знакомы специалисту в данной области.The pharmaceutical compositions of the present invention can be prepared by methods that are known per se and familiar to one skilled in the art.
Режим дозирования сафинамида или его фармацевтически приемлемых солей и/или фармацевтических композиций, содержащих его, основан на множестве факторов, включая тип, возраст, вес, пол и медицинское состояние субъекта, тяжесть состояния и/или миотонические симптомы, связанные с указанным состоянием, и путь введения.The dosage regimen of safinamide or its pharmaceutically acceptable salts and/or pharmaceutical compositions containing it is based on a variety of factors, including the type, age, weight, sex and medical condition of the subject, the severity of the condition and/or myotonic symptoms associated with the condition, and the route introduction.
Таким образом, режим дозирования может широко варьироваться. Уровни дозировки порядка от приблизительно 5 до приблизительно 500 мг в день (вводимые в виде однократной или разделенной дозировки) сафинамида или его фармацевтически приемлемых солей полезны в лечении указанных выше состояний. В одном варианте осуществления общая суточная доза обычно составляет от приблизительно 10 до приблизительно 250 мг. В другом варианте осуществления общая суточная доза обычно составляет от приблизительно 50 до приблизительно 100 мг.Thus, the dosage regimen may vary widely. Dosage levels on the order of about 5 to about 500 mg per day (administered as single or divided dosages) of safinamide or pharmaceutically acceptable salts thereof are useful in the treatment of the above conditions. In one embodiment, the total daily dose is typically from about 10 to about 250 mg. In another embodiment, the total daily dose is typically from about 50 to about 100 mg.
Пероральные таблетки сафинамида метансульфоната, покрытые пленочной оболочкой, в дозировкеSafinamide methanesulfonate oral film-coated tablets, dosage
- 5 045588 и 100 мг в настоящее время находятся на рынке под торговым наименованием Xadago®.- 5045588 and 100 mg are currently on the market under the trade name Xadago®.
В соответствии с настоящим изобретением антимиотоническая активность сафинамида оценивалась с применением экспериментальных протоколов, имитирующих миотонические условия как in vitro (повышенная возбудимость сарколеммы в миотонических мышечных волокнах), так и in vivo (фармакологически индуцированная модель врожденной миотонии на крысах, имитирующая патологическое состояние человека, при котором генетическая потеря проводимости хлорид ионов вызывает нарушение мышечной релаксации и мышечной жесткости; Desaphy et al., Neuropharmacology, 2013, 65:21-7; и Desaphy et al., Exp. Neurol. 2014; 255:96-102).In accordance with the present invention, the antimyotonic activity of safinamide was assessed using experimental protocols mimicking myotonic conditions both in vitro (sarcolemmal hyperexcitability in myotonic muscle fibers) and in vivo (pharmacologically induced rat model of myotonia congenita, mimicking the human pathological condition in which genetic loss of chloride ion conductance causes impairment of muscle relaxation and muscle stiffness; Desaphy et al., Neuropharmacology, 2013, 65:21-7; and Desaphy et al., Exp. Neurol. 2014;255:96-102).
Следующие ниже примеры и сопровождающие их фиг. 1 и 2 иллюстрируют изобретение без ограничения его объема.The following examples and accompanying figs. 1 and 2 illustrate the invention without limiting its scope.
Экспериментальная частьexperimental part
Пример 1. Антимиотоническая активность сафинамида in vitro в волокнах скелетных мышц крыс.Example 1. Antimyotonic activity of safinamide in vitro in skeletal muscle fibers of rats.
Антимиотоническую активность сафинамида оценивали путем регистрации возбудимости сарколеммы в отдельных миофибриллах изолированных мышц длинного разгибателя пальцев (Extensor Digitorum Longus) (EDL) с применением двухмикроэлектродного токового зажима. Модель in vitro врожденной миотонии получали путем инкубации EDL-мышц крысы с 9-антраценкарбоновой кислотой (9-АК) (Conte Camerino et al., Muscle Nerve. 1989; 12(11):898-904. Altamura et al., Br. J. Pharmacol. 2018; 175(10):1770-1780). Повышение возбудимости сарколеммы, вызванное 9-АК через блокаду хлоридных каналов ClC-1 скелетных мышц, имитировало аномальное возбуждение потенциала действия, наблюдаемое у пациентов с врожденной миотонией.The antimyotonic activity of safinamide was assessed by recording sarcolemmal excitability in individual myofibers of isolated Extensor Digitorum Longus (EDL) muscles using a two-microelectrode current clamp. An in vitro model of myotonia congenita was prepared by incubating rat EDL muscles with 9-anthracenecarboxylic acid (9-AA) (Conte Camerino et al., Muscle Nerve. 1989; 12(11):898-904. Altamura et al., Br. J Pharmacol 2018;175(10):1770-1780). The increase in sarcolemmal excitability induced by 9-AA through blockade of skeletal muscle ClC-1 chloride channels mimicked the abnormal action potential firing observed in patients with myotonia congenita.
Мышцы EDL вырезали у самцов крыс Wistar под глубокой анестезией (80 мг/кг кетамина внутрибрюшинно и 10 мг/кг ксилазина внутрибрюшинно). Мышцы помещали в 25-миллилитровую ванну для мышц, поддерживаемую при 30°C, и опрыскивали физиологическим раствором (насыщенным 95% O2 и 5% CO2; рН 7,2-7,3). С помощью стандартной методики с двумя внутриклеточными микроэлектродами измеряли мембранный потенциал покоя и характеристики возбудимости (количество спайков) мышечных волокон в режиме токоизмерительного зажима. Характеристики возбудимости отобранных волокон определяли путем регистрации реакции внутриклеточного мембранного потенциала на прямоугольный импульс постоянного тока (100 мс). В каждом волокне мембранный потенциал был установлен постоянным током до отметки в -80 мВ перед прохождением деполяризующих импульсов. Увеличивая амплитуду импульса, авторы изобретения смогли выявить первый единичный потенциал действия, а путем дальнейшего увеличения интенсивности тока в том же волокне было измерено максимальное количество вызываемых всплесков (N всплесков) (Pierno et al., Br. J. Pharmacol. 2006; 149(7):909-19).EDL muscles were excised from male Wistar rats under deep anesthesia (80 mg/kg ketamine i.p. and 10 mg/kg xylazine i.p.). Muscles were placed in a 25 ml muscle bath maintained at 30°C and sprayed with saline (saturated with 95% O2 and 5% CO2; pH 7.2-7.3). Using a standard technique with two intracellular microelectrodes, the resting membrane potential and excitability characteristics (number of spikes) of muscle fibers were measured in current clamp mode. The excitability characteristics of selected fibers were determined by recording the response of the intracellular membrane potential to a rectangular direct current pulse (100 ms). In each fiber, the membrane potential was adjusted to −80 mV by direct current before depolarizing pulses were applied. By increasing the pulse amplitude, the inventors were able to detect the first single action potential, and by further increasing the current intensity in the same fiber, the maximum number of spikes evoked (N bursts) was measured (Pierno et al., Br. J. Pharmacol. 2006; 149(7) ):909-19).
Нежелательным мышечным сокращениям препятствовал дантролен натрия (2 мг/л). Параметры возбудимости клеток (N спайков) измеряли до (контроль) и после применения только 50 мкМ 9-АК и одновременного применения сафинамида в шести различных концентрациях (от 0,1 до 30 мкМ). В этих экспериментальных условиях применяли сафинамидметансульфонат и растворяли в виде исходного раствора (10 мМ) в дистиллированной воде, затем его разбавляли до конечных концентраций в растворе мышечной ванны. Одно животное применяли для тестирования двух концентраций сафинамида: одной концентрации в каждой мышце EDL.Unwanted muscle contractions were prevented by dantrolene sodium (2 mg/l). Cell excitability parameters (N spikes) were measured before (control) and after application of 50 μM 9-AA alone and co-administration of safinamide at six different concentrations (from 0.1 to 30 μM). In these experimental conditions, safinamide methanesulfonate was used and dissolved as a stock solution (10 mM) in distilled water, which was then diluted to final concentrations in muscle bath solution. One animal was used to test two concentrations of safinamide: one concentration in each EDL muscle.
Как показано на фиг. 1, 9-АК вызывал состояние, подобное миотонии, за счет увеличения N-спайков на 60%. Сафинамид в дозах 1, 5, 10 и 30 мкМ значительно снижал выбросы азота на 22±6, 35±5, 42±5 и 60±6% соответственно (Р<0,05 по сравнению с одним только 9-АК, t-критерий Бонферрони), восстанавливая возбудимость сарколеммы. IC50 (концентрация, способная снижать на 50% эффект 9АК), рассчитанная по подгонке кривой концентрация-ответ, составляла 13,4±2,4 мкМ (± стандартная ошибка подбора). Антимиотонический эффект был обратимым по завершению вымывания сафинамида (9-АК, 50 мкМ).As shown in FIG. 1,9-AA induced a myotonia-like state by increasing N-spikes by 60%. Safinamide at doses of 1, 5, 10 and 30 µM significantly reduced nitrogen emissions by 22±6, 35±5, 42±5 and 60±6%, respectively (P<0.05 compared with 9-AA alone, t- Bonferroni criterion), restoring the excitability of the sarcolemma. The IC 50 (concentration capable of reducing the effect of 9AA by 50%), calculated from fitting the concentration-response curve, was 13.4 ± 2.4 μM (± standard error of fit). The antimyotonic effect was reversible upon completion of washout of safinamide (9-AA, 50 μM).
Следует отметить, что в том же тесте IC50 мексилетина был более чем в три раза выше, что указывает на более низкую эффективность.It should be noted that in the same test, the IC 50 of mexiletine was more than three times higher, indicating lower potency.
Пример 2. Исследование антимиотонической активности сафинамида in vivo на модели врожденной миотонии на крысах.Example 2. Study of the antimyotonic activity of safinamide in vivo using a model of congenital myotonia in rats.
Миотония у крыс вызывалась внутрибрюшинной инъекцией 9-АК, которая является известным блокатором хлоридных каналов ClC-1 скелетных мышц (Conte Camerino et al., Muscle Nerve. 1989; 12(11):898-904. Altamura et al., Br. J. Pharmacol. 2018; 175(10):1770-1780).Myotonia in rats was induced by intraperitoneal injection of 9-AA, which is a known blocker of skeletal muscle ClC-1 chloride channels (Conte Camerino et al., Muscle Nerve. 1989; 12(11):898-904. Altamura et al., Br. J Pharmacol 2018;175(10):1770-1780).
Применяли крыс-самцов линии Wistar (250-300 г). Эксперименты проводили в соответствии с Руководством по уходу и применению лабораторных животных и с разрешения Министерства здравоохранения Италии № 194/2018-ПР. Экспериментаторы были не осведомлены о методах лечения.Male Wistar rats (250-300 g) were used. Experiments were carried out in accordance with the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals and with permission from the Italian Ministry of Health No. 194/2018-PR. The experimenters were blinded to the treatments.
В этой животной модели 9-АК имитирует врожденную миотонию in vivo, заболевание человека, вызванное мутациями потери функции в гене CLCN1, кодирующем каналы ClC-1. После инъекции 9-АК у крыс наблюдалась явная жесткость мышц, особенно в задних конечностях, и трудности с передвижением. Тем не менее животные оставались полностью сознательными и проворными. Дыхание нормальное. Услышав неожиданный шум, животные прыгнули на месте, но им было очень трудно отойти из-заIn this animal model, 9-AA mimics myotonia congenita in vivo, a human disease caused by loss-of-function mutations in the CLCN1 gene encoding ClC-1 channels. After injection of 9-AA, rats exhibited obvious muscle stiffness, especially in the hind limbs, and difficulty in locomotion. Nevertheless, the animals remained fully conscious and agile. Breathing is normal. Hearing the unexpected noise, the animals jumped on the spot, but it was very difficult for them to move away due to
- 6 045588 жесткости мышц. Миотонию оценивали, измеряя время рефлекса выпрямления (TRR, время, необходимое крысе, находящейся в положении лежа на спине, чтобы повернуться обратно на четыре лапы). У крыс до введения 9-АК TRR составлял менее 0,5 с. TRR резко увеличивался приблизительно до 2 с, 10 мин после 9-АК и далее увеличивался приблизительно до 4 с, 30 мин после 9-АК. Затем TRR постепенно уменьшался с течением времени, приближаясь к 1 с, 3 ч после 9-АК. Ожидается, что антимиотонический препарат будет противодействовать индуцированному 9-АК удлинению TRR.- 6 045588 muscle stiffness. Myotonia was assessed by measuring the time of the righting reflex (TRR, the time required for a rat in the supine position to turn back onto all fours). In rats before 9-AA administration, the TRR was less than 0.5 s. TRR increased sharply to approximately 2 s, 10 min after 9-AA and further increased to approximately 4 s, 30 min after 9-AA. The TRR then gradually decreased over time, approaching 1 s, 3 h after 9-AA. The antimyotonic drug is expected to antagonize 9-AA-induced TRR prolongation.
TRR оценивали приблизительно за 10 мин до 9-АК (время 0) и через 10, 37, 67, 127 и 187 мин после 9-АК (30 мг/кг внутрибрюшинно). TRR, измеренный в каждый момент времени, представлял собой среднее значение 7 измерений с интервалом в 1 мин (для ограничения эффекта разминки). Сафинамида метансульфонат (10 и 30 мг/кг в виде свободного основания) или с носителем вводили крысам через зонд через 17 мин после инъекции 9-АК. 9-АК и метансульфонат сафинамида растворяли в бикарбонате и 0,9% растворе NaCl соответственно. Чтобы обеспечить возможность сравнения между крысами, TRR, измеренный в каждый момент времени, был нормализован как функция TRR, измеренный через 10 мин после инъекции 9-АК у той же крысы. Затем были рассчитаны средние данные для каждой дозировки как среднее значение±σ (стандартная ошибка). Статистический анализ проводился с применением одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим специальным t-критерием Бонферрони. Значение Р<0,05 считалось статистически значимым.TRR was assessed approximately 10 min before 9-AA (time 0) and 10, 37, 67, 127, and 187 min after 9-AA (30 mg/kg i.p.). The TRR measured at each time point was the average of 7 measurements at 1-min intervals (to limit the warm-up effect). Safinamide methanesulfonate (10 and 30 mg/kg free base) or with vehicle was gavaged into rats 17 min after 9-AA injection. 9-AA and safinamide methanesulfonate were dissolved in bicarbonate and 0.9% NaCl solution, respectively. To allow comparison between rats, TRR measured at each time point was normalized as a function of TRR measured 10 min after 9-AA injection in the same rat. The mean data for each dosage were then calculated as mean ± σ (standard error). Statistical analysis was performed using one-way analysis of variance (ANOVA) followed by Bonferroni's ad hoc t test. A P value <0.05 was considered statistically significant.
Как показано на фиг. 2, у крыс, получавших носитель, значительное увеличение TRR наблюдалось через 37, 67 и 127 мин после инъекции 9-АК. При максимальном эффекте (37 и 67 мин) сопутствующее лечение сафинамидом дозозависимо и значительно нейтрализовало индуцированное 9-АК удлинение TRR, и эффект продолжался до 120 мин, демонстрируя, что сафинамид in vivo обладает антимиотонической активностью в модели врожденной миотонии с применением крыс.As shown in FIG. 2, in vehicle-treated rats, significant increases in TRR were observed 37, 67, and 127 min after 9-AA injection. At maximal effect (37 and 67 min), concomitant treatment with safinamide dose-dependently and significantly neutralized 9-AA-induced TRR prolongation, and the effect lasted up to 120 min, demonstrating that safinamide in vivo has antimyotonic activity in a rat model of congenital myotonia.
В этой модели in vivo также изучалась кривая доза зависимости для сафинамида метансульфоната в возрастающих дозах (0,3, 1, 3, 10 и 30 мг/кг в виде свободного основания). Чтобы обеспечить возможность сравнения между крысами, TRR, измеренный в каждый момент времени, был нормализован как функция TRR, измеренного через 10 мин после инъекции 9-АК у той же крысы. Затем были рассчитаны средние значения для каждого лекарства/дозировки как среднее ± σ (стандартная ошибка). Статистический анализ будет выполнен с применением одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим специальным t-критерием Бонферрони. Значение Р<0,05 считалось статистически значимым.This in vivo model also examined the dose response curve for safinamide methanesulfonate at increasing doses (0.3, 1, 3, 10, and 30 mg/kg free base). To allow comparison between rats, TRR measured at each time point was normalized as a function of TRR measured 10 min after 9-AA injection in the same rat. Mean values for each drug/dose were then calculated as mean ± σ (standard error). Statistical analysis will be performed using one-way analysis of variance (ANOVA) followed by Bonferroni's ad hoc t test. A P value <0.05 was considered statistically significant.
Результаты показаны на фиг. 2, который показывает, что у крыс, получавших сафинамида метансульфонат с носителем, значительное увеличение TRR наблюдалось через 37, 67 и 127 мин после инъекции 9-АК. Лечение сафинамидом дозозависимо и значительно противодействовало индуцированному 9-АК пролонгации TRR. Фактически, пероральный сафинамид был способен противодействовать индуцированному 9-антраценкарбоновой кислотой (9-АК) удлинению времени рефлекса выпрямления (TRR) как признаку миотонии у крыс.The results are shown in Fig. 2, which shows that in rats treated with safinamide methanesulfonate with vehicle, significant increases in TRR were observed at 37, 67 and 127 min after 9-AA injection. Safinamide treatment dose-dependently and significantly counteracted 9-AA-induced TRR prolongation. In fact, oral safinamide was able to counteract 9-anthracenecarboxylic acid (9-AA)-induced prolongation of the time to righting reflex (TRR) as a sign of myotonia in rats.
В частности, через 37 мин снижение TRR было значительным при дозах 3, 10 и 30 мг/кг сафинамида. Через 67 мин (пиковый эффект 9-АК) ингибирование TRR было значительным также при более низкой дозе сафинамида 1 мг/кг. Через 127 мин только 10 и 30 мг/кг вызвали значительное ингибирование. Анализ кривой доза-ответ через 67 мин показал ED50 (эффективная доза для ингибирования 50% удлинения TRR) 1,2 мг/кг и максимальный эффект 66%, полученный при дозе 10-30 мг/кг, демонстрируя, что in vivo сафинамид обладал значительной антимиотонической активностью на модели врожденной миотонии у крыс.Specifically, at 37 min, the reduction in TRR was significant at doses of 3, 10, and 30 mg/kg safinamide. At 67 min (peak effect of 9-AA), TRR inhibition was significant also at the lower dose of safinamide 1 mg/kg. After 127 min, only 10 and 30 mg/kg caused significant inhibition. Dose-response curve analysis at 67 min showed an ED 50 (effective dose to inhibit 50% TRR prolongation) of 1.2 mg/kg and a maximum effect of 66% obtained at a dose of 10-30 mg/kg, demonstrating that in vivo safinamide had significant antimyotonic activity in a rat model of congenital myotonia.
Следует отметить, что в том же тесте эталонный препарат при миотонии, мексилетин, был приблизительно в 6 раз менее эффективен.It should be noted that in the same test, the reference drug for myotonia, mexiletine, was approximately 6 times less effective.
Пример 3. Влияние сафинамида in vitro на выбранные мутации миотонии Nav1.4 человека в трансфицированных клеточных линиях.Example 3: Effect of safinamide in vitro on selected human myotonia Na v 1.4 mutations in transfected cell lines.
Более 40 различных мутаций hNav1.4 были связаны с несколькими фенотипически разными аутосомно-доминантными наследственными заболеваниями скелетных мышц человека (Cummins & Bendahhou, 2009; Jurkat-Rott et al. 2010).More than 40 different hNa v 1.4 mutations have been associated with several phenotypically distinct autosomal dominant inherited human skeletal muscle diseases (Cummins & Bendahhou 2009; Jurkat-Rott et al. 2010).
Канал Nav1.4 в основном экспрессируется в скелетных мышцах и состоит из α-субъединицы 260 кДа, которая связана с меньшей β-субъединицей в мышце. α-субъединица состоит из четырех гомологичных доменов (I-IV), и каждый домен имеет шесть трансмембранных сегментов (S1-S6) (Noda et al., 1984). Мутации канала Nav1.4, приводящие к периодическому параличу или недистрофической миотонии, были обнаружены во всех областях и сегментах этого канала и могут лежать в основе гипервозбудимости или неуравновешенности мышц за счет изменения кинетики или функции канала, тем самым вызывая изменения в микро- или макроскопических биофизических параметрах свойства канала. Было описано несколько мутаций канала Nav1.4, связанных с миотонией, которые изменяют функцию канала за счет замедления быстрой инактивации, увеличения скорости восстановления после быстрой инактивации, замедления деактивации или смещения потенциалзависимой активации в сторону более отрицательных потенциалов (аккомодация) (Cummins & Bendahhou, 2009).Na v channel 1.4 is primarily expressed in skeletal muscle and consists of a 260 kDa α subunit that is associated with a smaller β subunit in muscle. The α subunit consists of four homologous domains (I-IV), and each domain has six transmembrane segments (S1-S6) (Noda et al., 1984). Mutations of the Na v 1.4 channel, leading to periodic paralysis or nondystrophic myotonia, have been found in all regions and segments of this channel and may underlie muscle hyperexcitability or imbalance by altering the kinetics or function of the channel, thereby causing changes in micro- or macroscopic biophysical channel property parameters. Several myotonia-associated Na v 1.4 channel mutations have been described that alter channel function by slowing rapid inactivation, increasing the rate of recovery from rapid inactivation, slowing inactivation, or shifting voltage-gated activation toward more negative potentials (accommodation) (Cummins & Bendahhou, 2009 ).
Эффект сафинамида оценивали на некоторых точечных мутациях hNav1.4, расположенных в сайтеThe effect of safinamide was assessed on some point mutations hNa v 1.4 located in the site
- 7 045588 инактивации.- 7 045588 inactivation.
p.P1158L: данная мутация была обнаружена у алжирской молодой девушки и связана с тяжелой перманентной миотонией (Desaphy et al., 2016).p.P1158L: This mutation was found in an Algerian young girl and is associated with severe permanent myotonia (Desaphy et al., 2016).
p.V1293I: данная мутация V1293I связана с различными фенотипами, от миотонии натриевого канала до врожденной парамиотонии плюс гиперкалиемического периодического паралича (Koch et al., 1995).p.V1293I: This V1293I mutation is associated with a variety of phenotypes, ranging from sodium channel myotonia to paramyotonia congenita plus hyperkalemic periodic paralysis (Koch et al., 1995).
p.F1298C: данная мутация была обнаружена у 35-летней женщины, поступившей в 32 года с ригидностью мышц лица, верхних и нижних конечностей, в основном после сокращения (Farinato et al., 2019). Симптомы ухудшались при простуде, со слов пациента миотония была болезненной. Пациент заметил легкое улучшение миотонии при физических нагрузках.p.F1298C: This mutation was found in a 35-year-old woman who was admitted at 32 years of age with stiffness of the muscles of the face, upper and lower extremities, mainly after contraction (Farinato et al., 2019). The symptoms worsened with a cold; according to the patient, myotonia was painful. The patient noticed a slight improvement in myotonia with exercise.
p.I1310N: данная мутация была обнаружена у 5 родственников французского происхождения и связана с миотонией натриевых каналов (Farinato et al., 2019).p.I1310N: This mutation was found in 5 relatives of French origin and is associated with sodium channel myotonia (Farinato et al., 2019).
Подтип потенциалзависимых натриевых каналов скелетных мышц человека (hNav1.4), либо немутантный тип, либо миотонический мутантный тип, временно трансфицировали в клетки HEK293T с помощью метода соосаждения с фосфатом кальция. Натриевые токи во всей клетке (INa) регистрировали при комнатной температуре (20-22°C) с применением метода локальной фиксации потенциала Axon (Molecular Devices, США). Протоколы фиксации потенциала и сбор данных выполнялись с помощью программного обеспечения pCLAMP (Axon Instruments). Раствор ванны содержал (мМ) 150 NaCl, 4 KCl, 2 CaCl2, 1 MgCl2, 5 Na-HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота) и 5 глюкозы (рН 7,4). Раствор для пипетки содержал (в мМ) 120 CsF, 10 CsCl, 10 NaCl, 5 EGTA (этиленгликоль-бис(β-аминоэтиловый эфир)-N,N,N',N'-тетрауксусная кислота) и 5 Cs-HEPES (pH 7,2). Пэтч-пипетки, изготовленные из стекла Corning 7052 (King Glass, США), имели сопротивление от 1 до 3 МОм. Частичная компенсация емкостных токов проводилась по схеме усилителя. Для анализа учитывались только данные, полученные для ячеек с последовательными ошибками сопротивления <5 мВ. После прорыва мембранного слоя испытательный импульс длительностью 25 мс до -20 мВ от исходного потенциала (ИП) в 120 мВ подавался на ячейку с низкой частотой до стабилизации амплитуды и кинетики INa (обычно 5 мин). Сафинамид солюбилизировали до конечной концентрации в растворе ванны с добавлением 0,2% ДМСО. Фиксированную клетку подвергали воздействию непрерывного потока контрольного раствора или раствора с добавлением лекарственного средства. В каждой ячейке тестировали максимум две концентрации лекарственного средства, чтобы минимизировать возможное смещение из-за замедления натриевого тока. Из-за известного спонтанного сдвига зависимости потенциала во время экспериментов с целыми клетками, большое внимание было уделено выполнению различных протоколов с соблюдением постоянной последовательности, чтобы можно было проводить сравнение между клетками.The human skeletal muscle voltage-gated sodium channel subtype (hNa v 1.4), either the non-mutant type or the myotonic mutant type, was transiently transfected into HEK293T cells using the calcium phosphate coprecipitation method. Whole-cell sodium currents (INa) were recorded at room temperature (20-22°C) using the Axon local voltage clamp method (Molecular Devices, USA). Voltage clamp protocols and data acquisition were performed using pCLAMP software (Axon Instruments). The bath solution contained (mM) 150 NaCl, 4 KCl, 2 CaCl 2 , 1 MgCl 2 , 5 Na-HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid) and 5 glucose (pH 7.4). The pipetting solution contained (in mM) 120 CsF, 10 CsCl, 10 NaCl, 5 EGTA (ethylene glycol-bis(β-aminoethyl ether)-N,N,N',N'-tetraacetic acid) and 5 Cs-HEPES (pH 7.2). Patch pipettes made of Corning 7052 glass (King Glass, USA) had a resistance of 1 to 3 MΩ. Partial compensation of capacitive currents was carried out using an amplifier circuit. Only data obtained from cells with consistent resistance errors <5 mV were considered for analysis. After breakthrough of the membrane layer, a test pulse with a duration of 25 ms to -20 mV from an initial potential (IP) of 120 mV was applied to the cell at a low frequency until the amplitude and kinetics of INa stabilized (usually 5 min). Safinamide was solubilized to final concentration in a bath solution supplemented with 0.2% DMSO. The fixed cell was exposed to a continuous flow of control or drug-spiked solution. A maximum of two drug concentrations were tested in each cell to minimize possible bias due to slowing sodium current. Because of the known spontaneous shift in potential dependence during whole-cell experiments, great care was taken to perform different protocols in a consistent sequence to allow comparisons between cells.
Ингибирование каналов hNav1.4 сафинамидом оценивали путем измерения снижения INa, вызванного исходным потенциалом (ИП) от -120 до -30 мВ при частотной стимуляции 0,1 и 10 Гц. Кривые концентрация-ответ сафинамида получали путем получения амплитуды пикового тока, измеренной в присутствии лекарства (1ЛКРСТ), нормализованной к амплитуде пикового тока, измеренной в той же ячейке перед нанесением лекарства (ΙΚΗΤΡΛ), как функции от концентрации лекарства [ЛКРСТ]. Кривые концентрация-ответ были адаптированы с применением функции связывания первого порядка:Inhibition of hNa v 1.4 channels by safinamide was assessed by measuring the decrease in INa evoked by a baseline potential (IP) from -120 to -30 mV at stimulation frequencies of 0.1 and 10 Hz. Safinamide concentration-response curves were obtained by taking the peak current amplitude measured in the presence of drug (1LCRST) normalized to the peak current amplitude measured in the same cell before drug application (ΙΚΗΤΡΛ) as a function of drug concentration [LCRST]. The concentration-response curves were fitted using a first-order binding function:
где IC50 - представляет собой половину максимальной ингибирующей концентрации, а nH - угловой коэффициент.where IC 50 represents half the maximum inhibitory concentration, and nH is the slope.
Значения IC50 определяли при мембранном потенциале покоя (тонический блок: -120 мВ при 0,1 Гц) и после повторяющихся деполяризующих импульсов до -20 мВ при 10 Гц (применение и частотнозависимый блок). Ожидается, что соединение, способное блокировать натриевые каналы в зависимости от использования и частоты, уменьшит аномальную активность, но не повлияет на нормальную активность мышечных волокон.IC 50 values were determined at resting membrane potential (tonic block: -120 mV at 0.1 Hz) and after repeated depolarizing pulses to -20 mV at 10 Hz (application and frequency-dependent block). A compound capable of blocking sodium channels depending on use and frequency is expected to reduce abnormal activity but not affect normal muscle fiber activity.
В таблице показаны эффекты сафинамида in vitro на миотонический мутантный тип натриевого канала Nav1.4 человека в трансфицированных клеточных линиях. Результаты были выражены в виде значений IC50 ± стандартная ошибка соответствия (SE).The table shows the in vitro effects of safinamide on the human Na v 1.4 myotonic sodium channel mutant in transfected cell lines. Results were expressed as IC 50 values ± standard error of fit (SE).
Влияние сафинамида на миотонический мутантный тип натриевого канала Nav1.4 человека в линии трансфицированных клетокEffect of safinamide on the myotonic mutant type of human sodium channel Na v 1.4 in a transfected cell line
Результаты, представленные в таблице, демонстрируют, что выбранные мутации не оказали значи- 8 045588 тельного влияния на активность сафинамида (IC50) на обеих частотах (0,1 и 10 Гц), поскольку значенияThe results presented in the table demonstrate that the selected mutations did not have a significant effect on the activity of safinamide ( IC50 ) at both frequencies (0.1 and 10 Hz), since the values
IC50 были того же порядка величины, что и для не мутантного типа. Носители мутаций в канале hNav1.4 могут получить больше преимуществ от сафинамида, чем от препаратов, используемых в настоящее время. Эти результаты открывают путь к терапии миотонических расстройств, основанной на мутациях.IC 50 were of the same order of magnitude as for the non-mutant type. Carriers of mutations in the hNa v 1.4 channel may benefit more from safinamide than from drugs currently used. These results pave the way for mutation-based therapies for myotonic disorders.
Claims (13)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP18000481.4 | 2018-05-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA045588B1 true EA045588B1 (en) | 2023-12-08 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5038892B2 (en) | A new use of peptide compounds to treat essential tremor and other tremor syndromes. | |
| TWI353835B (en) | Novel methods for identifying improved, non-sedati | |
| US20130029989A1 (en) | Topical treatments for pain | |
| RU2756519C2 (en) | Therapeutic agents against neurodegenerative diseases | |
| ES2684351T3 (en) | Pharmacological therapy to prevent or treat glaucoma | |
| EP2214657A1 (en) | Compounds for treating demyelination conditions | |
| Stambolieva et al. | Effect of treatment with betahistine dihydrochloride on the postural stability in patients with different duration of benign paroxysmal positional vertigo. | |
| BR112019020798A2 (en) | methods and compositions for treating age-related damage using ccr3 inhibitors | |
| KR20090004876A (en) | Novel application of topical anesthetics for modulation of neurogenic tremor | |
| JP2012197304A (en) | Use of modafinil for making medicine for correcting disorders affecting vigilance related to myopathies | |
| BRPI0614701A2 (en) | Uses of a Compound to Improve Vigilance and Pharmaceutical Compositions | |
| EA045588B1 (en) | SAFINAMIDE FOR THE TREATMENT OF MYOTONIA | |
| Kadar et al. | Effect on postoperative pain after local application of bupivacaine in the tonsillar fossa; a prospective single blind controlled trial | |
| JP7433247B2 (en) | Safinamide for the treatment of myotonia | |
| US20090054412A1 (en) | Treatment of Sleep Disorders | |
| BR112020016672A2 (en) | LEUCINE, ACETYLE-LEUCINE OR A PHARMACEUTICALLY ACCEPTABLE SALT OF THE SAME AND METHOD OF REDUCING, INHIBITING OR ELIMINATING ONE OR MORE SYMPTOMS OF THE RESTLESS LEGS (RLS) IN AN INDIVIDUAL IN NEED OF THE SAME | |
| KR20190054549A (en) | Use of carbamate compound for prevention or treatment of sodium channelopathy in peripheral nerves | |
| RU2564907C1 (en) | Method of treating patients with lichen planus | |
| US11974992B2 (en) | Use of serotonin 5-HT1A receptor agonists to treat diseases associated with sudden unexpected death in epilepsy | |
| EP2190435B1 (en) | Treatment of sleep disorders | |
| JP2006522061A (en) | Combination of macrolides and local anesthetics for the treatment of skin diseases | |
| WO2023144166A1 (en) | Use of serotonin 5-ht1a receptor agonists to treat diseases associated with sudden unexpected death in epilepsy | |
| Schug et al. | Local anesthetics | |
| JP2022059092A (en) | Pharmaceutical composition for lowering intraocular pressure | |
| JPWO2005072724A1 (en) | Preventive and / or therapeutic agent for chronic cerebral circulatory insufficiency |