EA045443B1 - Tcr и пептиды - Google Patents
Tcr и пептиды Download PDFInfo
- Publication number
- EA045443B1 EA045443B1 EA201992536 EA045443B1 EA 045443 B1 EA045443 B1 EA 045443B1 EA 201992536 EA201992536 EA 201992536 EA 045443 B1 EA045443 B1 EA 045443B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- tcr
- acid sequence
- variant
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 308
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 88
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 849
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims description 406
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims description 361
- 102100022748 Wilms tumor protein Human genes 0.000 claims description 338
- 101710127857 Wilms tumor protein Proteins 0.000 claims description 327
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 313
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 222
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 130
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 claims description 116
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 claims description 114
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 103
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 87
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 82
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 82
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 82
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 76
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims description 54
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 46
- 108010088729 HLA-A*02:01 antigen Proteins 0.000 claims description 38
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 34
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 33
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 33
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 29
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 28
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 28
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 20
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 19
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 17
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 17
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 claims description 16
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 claims description 16
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 claims description 14
- 230000003405 preventing effect Effects 0.000 claims description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 13
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 13
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- 230000002688 persistence Effects 0.000 claims description 11
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 10
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims description 10
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims description 10
- 230000010354 integration Effects 0.000 claims description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 9
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 9
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 8
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 claims description 6
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 claims description 5
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 5
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 5
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 5
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 5
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 claims description 5
- 230000032683 aging Effects 0.000 claims description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 4
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 claims description 4
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims description 4
- 230000026683 transduction Effects 0.000 claims description 4
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 claims description 3
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 claims description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 claims description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 2
- 230000033458 reproduction Effects 0.000 claims 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 365
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 355
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 354
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 354
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 352
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 352
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 138
- 208000026448 Wilms tumor 1 Diseases 0.000 description 137
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 42
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 42
- 102100037272 T cell receptor beta constant 1 Human genes 0.000 description 41
- 101000662909 Homo sapiens T cell receptor beta constant 1 Proteins 0.000 description 40
- 101000662902 Homo sapiens T cell receptor beta constant 2 Proteins 0.000 description 40
- 102100037298 T cell receptor beta constant 2 Human genes 0.000 description 40
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 39
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 38
- 101710153660 Nuclear receptor corepressor 2 Proteins 0.000 description 38
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 37
- 102100030569 Nuclear receptor corepressor 2 Human genes 0.000 description 36
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 32
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 32
- 102100021454 Histone deacetylase 4 Human genes 0.000 description 29
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 27
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 24
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 24
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 23
- 101001023379 Homo sapiens Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Proteins 0.000 description 22
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 22
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 22
- 102100035133 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Human genes 0.000 description 22
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 22
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 22
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 21
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 description 21
- 102000040856 WT1 Human genes 0.000 description 21
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 20
- 102100021453 Histone deacetylase 5 Human genes 0.000 description 18
- 102100039388 Polyamine deacetylase HDAC10 Human genes 0.000 description 18
- 101710107444 Polyamine deacetylase HDAC10 Proteins 0.000 description 18
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 17
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 16
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 16
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 16
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 15
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 13
- 102100022537 Histone deacetylase 6 Human genes 0.000 description 12
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 10
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 10
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 10
- 108020004707 nucleic acids Chemical group 0.000 description 10
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 10
- PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N Cocarcinogen A1 Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1C(C)C2(O)C3C=C(C)C(=O)C3(O)CC(CO)=CC2C2C1(OC(C)=O)C2(C)C PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 9
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 9
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 9
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 9
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 8
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 8
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 8
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 8
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 8
- 238000010459 TALEN Methods 0.000 description 8
- 108010043645 Transcription Activator-Like Effector Nucleases Proteins 0.000 description 8
- 108010017070 Zinc Finger Nucleases Proteins 0.000 description 8
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 8
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 8
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 7
- 102000016200 MART-1 Antigen Human genes 0.000 description 7
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 7
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 6
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 6
- 101001094545 Homo sapiens Retrotransposon-like protein 1 Proteins 0.000 description 6
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 6
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 5
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 5
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 5
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 5
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 5
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 5
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000010453 CRISPR/Cas method Methods 0.000 description 4
- 102100028971 HLA class I histocompatibility antigen, C alpha chain Human genes 0.000 description 4
- 108010052199 HLA-C Antigens Proteins 0.000 description 4
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 4
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 4
- 108010081208 RMFPNAPYL Proteins 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 4
- 201000003076 Angiosarcoma Diseases 0.000 description 3
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 101710149863 C-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 3
- 102100028990 C-X-C chemokine receptor type 3 Human genes 0.000 description 3
- 102100032976 CCR4-NOT transcription complex subunit 6 Human genes 0.000 description 3
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 208000001258 Hemangiosarcoma Diseases 0.000 description 3
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 3
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 3
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 3
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 3
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 101000916050 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 3 Proteins 0.000 description 3
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 3
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 3
- 101001043809 Homo sapiens Interleukin-7 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 3
- 102100021593 Interleukin-7 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 3
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 3
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 3
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 3
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 3
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 3
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 3
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000000068 Th17 cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 3
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 3
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 3
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 3
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 210000003515 double negative t cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000005782 double-strand break Effects 0.000 description 3
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 3
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 3
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 3
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 3
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010042863 synovial sarcoma Diseases 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 3
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 241000714175 Abelson murine leukemia virus Species 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 2
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000713730 Equine infectious anemia virus Species 0.000 description 2
- 208000010006 Fraser Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 241000714475 Fujinami sarcoma virus Species 0.000 description 2
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102210024302 HLA-B*0702 Human genes 0.000 description 2
- 108010078301 HLA-B*07:02 antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 101710095395 Histidine decarboxylase proenzyme Proteins 0.000 description 2
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 description 2
- 101001068133 Homo sapiens Hepatitis A virus cellular receptor 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000971533 Homo sapiens Killer cell lectin-like receptor subfamily G member 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 description 2
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000652359 Homo sapiens Spermatogenesis-associated protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102100021457 Killer cell lectin-like receptor subfamily G member 1 Human genes 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 2
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 2
- 241000713862 Moloney murine sarcoma virus Species 0.000 description 2
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 2
- 101001067830 Mus musculus Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A Proteins 0.000 description 2
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 TGFbR Proteins 0.000 description 2
- 101150053558 TRBC1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150117561 TRBC2 gene Proteins 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 208000006038 Urogenital Abnormalities Diseases 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 2
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 2
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011134 hematopoietic stem cell transplantation Methods 0.000 description 2
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 230000006780 non-homologous end joining Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 108020002663 Aldehyde Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101100365087 Arabidopsis thaliana SCRA gene Proteins 0.000 description 1
- 241000945470 Arcturus Species 0.000 description 1
- 241000713840 Avian erythroblastosis virus Species 0.000 description 1
- 241000713834 Avian myelocytomatosis virus 29 Species 0.000 description 1
- 102100021631 B-cell lymphoma 6 protein Human genes 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 1
- 101100180402 Caenorhabditis elegans jun-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102100035167 Coiled-coil domain-containing protein 54 Human genes 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000713859 FBR murine osteosarcoma virus Species 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 102210024054 HLA-C*03:04 Human genes 0.000 description 1
- 102210009886 HLA-C*04:01 Human genes 0.000 description 1
- 102210042928 HLA-C*05:01 Human genes 0.000 description 1
- 102210009879 HLA-C*06:02 Human genes 0.000 description 1
- 102210009882 HLA-C*07:02 Human genes 0.000 description 1
- 108010062347 HLA-DQ Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000971234 Homo sapiens B-cell lymphoma 6 protein Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000737052 Homo sapiens Coiled-coil domain-containing protein 54 Proteins 0.000 description 1
- 101100333868 Homo sapiens EVA1A gene Proteins 0.000 description 1
- 101100395311 Homo sapiens HLA-B gene Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101001008874 Homo sapiens Mast/stem cell growth factor receptor Kit Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 101000824971 Homo sapiens Sperm surface protein Sp17 Proteins 0.000 description 1
- 101000939859 Homo sapiens T cell receptor beta variable 12-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000939742 Homo sapiens T cell receptor beta variable 20-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000606206 Homo sapiens T cell receptor beta variable 4-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000621309 Homo sapiens Wilms tumor protein Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102100030704 Interleukin-21 Human genes 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 102100027754 Mast/stem cell growth factor receptor Kit Human genes 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 208000036626 Mental retardation Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 101150076359 Mhc gene Proteins 0.000 description 1
- 102100035971 Molybdopterin molybdenumtransferase Human genes 0.000 description 1
- 101710119577 Molybdopterin molybdenumtransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 101100096028 Mus musculus Smok1 gene Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007019 Oxalis corniculata Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031798 Protein eva-1 homolog A Human genes 0.000 description 1
- 108020005067 RNA Splice Sites Proteins 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100029696 T cell receptor beta variable 12-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100029659 T cell receptor beta variable 20-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039757 T cell receptor beta variable 4-3 Human genes 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 1
- 101100310674 Tenebrio molitor SP23 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100438139 Vulpes vulpes CABYR gene Proteins 0.000 description 1
- 201000007960 WAGR syndrome Diseases 0.000 description 1
- 101150084041 WT1 gene Proteins 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000007801 affinity label Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 208000008303 aniridia Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000003995 blood forming stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000003197 gene knockdown Methods 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 1
- 238000010363 gene targeting Methods 0.000 description 1
- 230000030414 genetic transfer Effects 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000000156 high-resolution energy loss spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012165 high-throughput sequencing Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000003738 lymphoid progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000004318 naive thymus-derived CD4-positive, alpha-beta T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000009580 stem-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 101150113941 trt1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к Т-клеточным рецепторам (TCR), которые связываются с пептидами, полученными из белка опухоли Вильмса 1 (WT1), когда они презентированы главным комплексом гистосовместимости. В этом отношении данное изобретение относится определяющим комплементарность областям (CDR-областям), которые специфично распознают пептиды WT1. Настоящее изобретение также относится к иммуногенным пептидам, полученным из WT1.
Уровень техники
Генотерапия с применением Т-клеточных рецепторов (TCR) основана на генетическом переносе генов высокоавидных опухолеспецифичных TCR в Т-лимфоциты, что позволяет направленно связывать требуемые опухолеассоциированные антигены и приводит к менее токсичной и более специфичной и эффективной терапии. Этот подход показал многообещающие результаты в клинических исследованиях. Одним из основных препятствий, ограничивающих применение TCR генотерапии для клинического лечения рака, является отсутствие опухолеспецифичных Т-клеток и соответствующих TCR. Таким образом, низкая доступность опухолеспецифичных TCR все еще остается открытой проблемой, ограничивающей широкое применение иммунотерапевтических подходов на основе TCR.
Большинство опухолеассоциированных антигенов (ОАА) являются аутоантигенами, поэтому Тклетки, специфичные в отношении таких молекул, либо разрушаются, либо подвергаются анергизации в результате центральной и периферической толерантности. Несмотря на это, природные опухолеспецифичные Т-клетки наблюдали у здоровых доноров и пациентов, особенно у пациентов, пораженных гемобластозами, после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК), где частота опухолеспецифических лимфоцитов коррелировала с регрессией заболевания (Kapp, М. et al. Bone Marrow Transplantation 43,399-410 (2009); и Tyler, E.M. et al. Blood 121,308-317 (2013)).
Выбор опухолевого антигена, который будет являться мишенью иммунотерапевтических методов, все еще остается предметом обсуждений. В идеальном случае ОАА экспрессируются в опухолевых клетках на высоком уровне при минимальной экспрессии в здоровых тканях.
Белок опухоли Вильмса 1 (WT1) - внутриклеточный белок, кодирующий фактор транскрипции с доменами цинковых пальцев, который играет важную роль в росте и дифференцировке клеток (Yang, L. et al. Leukemia 21, 868-876 (2007)). WT1 широко экспрессируется на различных гемобластных и солидных опухолях, демонстрируя при этом ограниченную экспрессию в различных здоровых тканях (например, гонадах, матке, почке, мезотелии, клетках-предшественниках в различных тканях). Последние данные свидетельствуют о роли WT1 в лейкемогенезе и онкогенезе.
Некоторые продолжающиеся клинические исследования основаны на получении ответов цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) при вакцинации пептидами WT1. Однако, несмотря на признание того, что WT1 можно применять в иммунотерапии, малое количество эпитопов WT1, которые ограничены небольшим числом аллелей HLA, используются в настоящее время в целях вакцинации (Di Stasi, A. et al. Front. Immunol. (2015)). Одним из таких эпитопов является эпитоп WT1 126-134 (RMFPNAPYL; SEQ ID NO: 255), который презентируется МНС, кодируемым аллелем HLA-A*0201 (то есть эпитоп является HLA-A*020 1 -рестриктированным).
HLA-А*0201-рестриктированные эпитопы и соответствующие TCR представляют интерес, поскольку главный комплекс гистосовместимости (МНС), имеющий гаплотип HLA-A*0201, экспрессируется у подавляющего большинства (60%) представителей европеоидной расы. Таким образом, TCR рецепторы, которые взаимодействуют с HLA-А*0201-рестриктированными эпитопами WT1, особенно предпочтительны, поскольку иммунотерапия с использованием таких TCR, может широко применяться.
Эпитоп WT1 126-134 широко изучали в нескольких исследованиях, отдельно или в комбинации с дополнительными опухолевыми антигенами. Тем не менее, недавние сообщения выдвинули на первый план серьезную озабоченность в отношении процессинга этого конкретного эпитопа, что может осложнить его применение в целях иммунотерапии. Примечательно то, что эпитоп WT1 126-134 более эффективно процессируется иммунопротеасомой по сравнению со стандартными протеасомами (Jaigirdar, A. et al. J Immunother. 39(3): 105-16 (2016)), что приводит к плохому распознаванию многих HLA-A*0201 опухолевых клеточных линий или первичных лейкозных клеток, которые эндогенно экспрессируют WT1.
Таким образом, остается потребность в новых эпитопах WT1, особенно в эпитопах WT1, презентируемых МНС с распространенными HLA гаплотипами (например, HLA-A*0201).
Одним природно процессируемым HLA-А*0201-рестриктированным эпитопом, который был идентифицирован, является WT1 37-45, который имеет аминокислотную последовательность VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157, см., например, Smithgall et al 2001; Blood 98 (11 Part 1): 121a). Однако было описано малое число аминокислотных последовательностей TCR, особенно CDR-последовательностей, специфичных в отношении этой пептидной последовательности (Schmitt, T.M. et al. (2017) Nat Biotechnol 35: 1188-1195).
Таким образом, остается потребность в новых эпитопах WT1, особенно таких, которые рестриктированы распространенными аллелями HLA, и потребность в новых TCR, способных связываться с эпитопами WT1.
- 1 045443
Сущность изобретения
В настоящем изобретении идентифицировали новые TCR, которые связываются с пептидами WT1, презентированными МНС. Кроме того, были определены аминокислотные последовательности TCR, включающие аминокислотные последовательности их CDR-областей, которые ответственны за специфичность связывания с WT1. Кроме того, было продемонстрировано, что Т-клетки, экспрессирующие TCR-рецепторы согласно настоящему изобретению, специфично взаимодействуют и убивают клетки, которые повышенно экспрессируют белок WT1. Кроме того, было показано, что TCR-рецепторы согласно настоящему изобретению рестриктированы МНС, кодируемым аллелями HLA класса 1 и 2, распространенными среди европеоидной расы, такими как HLA-A*0201 и HLA-B*3501 или HLA-B*3502.
Таким образом, в первом аспекте настоящего изобретения предложен Т-клеточный рецептор (TCR), который связывается с пептидом белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR:
(i) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CGTAWINDYKLSF (SEQ ID NO: 3) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASRKTGGYSNQPQHF (SEQ ID NO: 8) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(ii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CVVNLLSNQGGKLIF (SEQ ID NO: 36) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSQDYLVSNEKLFF (SEQ ID NO: 41) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(iii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRLSGSARQLTF (SEQ ID NO: 14) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLLGDEQYF (SEQ ID NO: 24) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(iv) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRLSGSARQLTF (SEQ ID NO: 14) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLVALQGAGEQYF (SEQ ID NO: 30) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(v) включает CDR3 α, включающую аминокислотную последовательность
CAYRSLKYGNKLVF (SEQ ID NO: 19) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLLGDEQYF (SEQ ID NO: 24) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(vi) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAYRSLKYGNKLVF (SEQ ID NO: 19) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLVALQGAGEQYF (SEQ ID NO: 30) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(vii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDAYSGNTPLVF (SEQ ID NO: 47) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASRAAGLDTEAFF (SEQ ID NO: 57) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;.
(viii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDAYSGNTPLVF (SEQ ID NO: 47) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASTQTPYEQYF (SEQ ID NO: 63) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(ix) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
- 2 045443
CATDAYSGNTPLVF (SEQ ID NO: 47) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSTVGGEDYGYTF (SEQ ID NO: 69) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(х) включает CDR3 α, включающую аминокислотную последовательность
CAVRAEIYNQGGKLIF (SEQ ID NO: 52) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASRAAGLDTEAFF (ID NO:57 SEQ) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xi) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRAEIYNQGGKLIF (SEQ ID NO: 52) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASTQTPYEQYF (SEQ ID NO: 63) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRAEIYNQGGKLIF (SEQ ID NO: 52) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSTVGGEDYGYTF (SEQ ID NO: 69) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xiii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASMAGAGSYQLTF (SEQ ID NO: 75) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CAISVGQGALYEQYF (SEQ ID NO: 80) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xiv) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASMAGAGSYQLTF (SEQ ID NO: 75) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSVARDRRNYGYTF (SEQ ID NO: 86) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xv) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAANNARLMF (SEQ ID NO: 92) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSDTRAREQFF (SEQ ID NO: 97) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xvi) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xvii) включает CDR3 α, включающую аминокислотную последовательность
CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSVGGSGSYNEQFF (SEQ ID NO: 169) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xviii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVEATDSWGKLQF (SEQ ID NO: 108) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xix) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
- 3 045443
CAVEATDSWGKLQF (SEQ ID NO: 108) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSVGGSGSYNEQFF (SEQ ID NO: 169) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(хх) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRTSYDKVIF (SEQ ID NO: 113) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxi) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRTSYDKVIF (SEQ ID NO: 113) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSVGGSGSYNEQFF (SEQ ID NO: 169) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxii) включает CDR3 α, включающую аминокислотную последовательность
CAVTVGNKLVF (SEQ ID NO: 175) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASRGWREQFF (SEQ ID NO: 180) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxiii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAARSYNTDKLIF (SEQ ID NO: 186) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSWGYQETQYF (SEQ ID NO: 196) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxiv) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAARSYNTDKLIF (SEQ ID NO: 186) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSPTGGEYYGYTF (SEQ ID NO: 202) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxv) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAARSYNTDKLIF (SEQ ID NO: 186) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSSYPLRTGRYNSYNSPLHF (SEQ ID NO: 208) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxvi) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASYNNARLMF (SEQ ID NO: 191) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSWGYQETQYF (SEQ ID NO: 196) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxvii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASYNNARLMF (SEQ ID NO: 191) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSPTGGEYYGYTF (SEQ ID NO: 202) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxviii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASYNNARLMF (SEQ ID NO: 191) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSSYPLRTGRYNSYNSPLHF (SEQ ID NO: 208) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxix) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
- 4 045443
CAASGGRDDKIIF (SEQ ID NO: 214) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSYSRTESTDTQYF (SEQ ID NO: 219) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(ххх) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAANNARLMF (SEQ ID NO: 92) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSPGQHGELFF (SEQ ID NO: 271) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxi) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASATGNQFYF (SEQ ID NO: 266) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSDTRAREQFF (SEQ ID NO: 97) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASATGNQFYF (SEQ ID NO: 266) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSPGQHGELFF (SEQ ID NO: 271) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxiii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxiv) включает CDR3 α, включающую аминокислотную последовательность
CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSVGGSGSYNEQFF (SEQ ID NO: 169) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxv) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxvi) включает CDR3 α, включающую аминокислотную последовательность
CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLGLSISQETQYF (SEQ ID NO: 288) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxvii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLGLSISQETQYF (SEQ ID NO: 288) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxviii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVEATDSWGKLQF (SEQ ID NO: 108) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLGLSISQETQYF (SEQ ID NO: 288) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxix) включает CDR3 α, включающую аминокислотную последовательность
- 5 045443
CAVRTSYDKVIF (SEQ ID NO: 113) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLGLSISQETQYF (SEQ ID NO: 288) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(хххх) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxxi) включает CDR3 α, включающую аминокислотную последовательность
CAVEATDSWGKLQF (SEQ ID NO: 108) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций; или (xxxxii) включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRTSYDKVIF (SEQ ID NO: 113) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и
CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен TCR настоящего изобретения, включающий следующие CDR-последовательности:
(i) CDR1a - KALYS (SEQ ID NO: 1),
CDR2a - LLKGGEQ (SEQ ID NO: 2),
CDR3a - CGTAWINDYKLSF (SEQ ID NO: 3),
CDR1e - SGHDY (SEQ ID NO: 6),
CDR2e - FNNNVP (SEQ ID NO: 7), и
CDR3e - CASRKTGGYSNQPQHF (SEQ ID NO: 8), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(ii) CDR1a - NSASQS (SEQ ID NO: 34),
CDR2a - VYSSGN (SEQ ID NO: 35),
CDR3a - CVVNLLSNQGGKLIF (SEQ ID NO: 36),
CDR1e - LGHNA (SEQ ID NO: 39),
CDR2e - YSLEER (SEQ ID NO: 40), и
CDR3e - CASSQDYLVSNEKLFF (SEQ ID NO: 41), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(iii) CDR1a - SSVPPY (SEQ ID NO: 12),
CDR2a - YTSAATLV (SEQ ID NO: 13),
CDR3a - CAVRLSGSARQLTF (SEQ ID NO: 14),
CDR1e - SGHAT (SEQ ID NO: 22),
CDR2e - FQNNGV (SEQ ID NO: 23), и
CDR3e - CASSLLGDEQYF (SEQ ID NO: 24), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(iv) CDR1a - SSVPPY (SEQ ID NO: 12),
CDR2a - YTSAATLV (SEQ ID NO: 13),
CDR3a - CAVRLSGSARQLTF (SEQ ID NO: 14),
CDR1e - SGHTA (SEQ ID NO: 28),
CDR2e - FQGNSA (SEQ ID NO: 29), и
CDR3e - CASSLVALQGAGEQYF (SEQ ID NO: 30), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(v) CDR1a - TSESDYY (SEQ ID NO: 17),
CDR2a - QEAYKQQN (SEQ ID NO: 18),
CDR3a - CAYRSLKYGNKLVF (ID NO: 19 SEQ),
CDR1e - SGHAT (SEQ ID NO: 22),
CDR2e - FQNNGV (SEQ ID NO: 23), и
CDR3e - CASSLLGDEQYF (SEQ ID NO: 24), или их варианты, каждый из которых содержит до
- 6 045443 трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(vi) CDR1a - TSESDYY (SEQ ID NO: 17),
CDR2a - QEAYKQQN (SEQ ID NO: 18),
CDR3a - CAYRSLKYGNKLVF (ID NO: 19 SEQ),
CDR1e - SGHTA (SEQ ID NO: 28),
CDR2e - FQGNSA (SEQ ID NO: 29), и
CDR3e - CASSLVALQGAGEQYF (SEQ ID NO: 30), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(vii) CDR1a - TSINN (SEQ ID NO: 45),
CDR2a - IRSNERE (SEQ ID NO: 46),
CDR3a - CATDAYSGNTPLVF (SEQ ID NO: 47),
CDR1e - MNHNS (SEQ ID NO: 55),
CDR2e - SASEGT (SEQ ID NO: 56), и
CDR3e - CASRAAGLDTEAFF (SEQ ID NO: 57), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(viii) CDR1a - TSINN (SEQ ID NO: 45),
CDR2a - IRSNERE (SEQ ID NO: 46),
CDR3a - CATDAYSGNTPLVF (SEQ ID NO: 47),
CDR1e - MNHNY (SEQ ID NO: 61),
CDR2e - SVGAGI (SEQ ID NO: 62), и
CDR3e - CASTQTPYEQYF (SEQ ID NO: 63), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(ix) CDR1a - TSINN (SEQ ID NO: 45),
CDR2a - IRSNERE (SEQ ID NO: 46),
CDR3a - CATDAYSGNTPLVF (SEQ ID NO: 47),
CDR1e - SGHNS (SEQ ID NO: 67),
CDR2e - FNNNVP (SEQ ID NO: 68), и
CDR3e - CASSTVGGEDYGYTF (SEQ ID NO: 69), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(х) CDR1a - DSAIYN (SEQ ID NO: 50),
CDR2a - IQSSQRE (SEQ ID NO: 51),
CDR3a - CAVRAEIYNQGGKLIF (SEQ ID NO: 52),
CDR1e - MNHNS (SEQ ID NO: 55),
CDR2e - SASEGT (SEQ ID NO: 56), и
CDR3e - CASRAAGLDTEAFF (SEQ ID NO: 57), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xi) CDR1a - DSAIYN (SEQ ID NO: 50),
CDR2a - IQSSQRE (SEQ ID NO: 51),
CDR3a - CAVRAEIYNQGGKLIF (SEQ ID NO: 52),
CDR1e - MNHNY (SEQ ID NO: 61),
CDR2e - SVGAGI (SEQ ID NO: 62), и
CDR3e - CASTQTPYEQYF (SEQ ID NO: 63), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xii) CDR1a - DSAIYN (SEQ ID NO: 50),
CDR2a - IQSSQRE (SEQ ID NO: 51),
CDR3a - CAVRAEIYNQGGKLIF (SEQ ID NO: 52),
CDR1e - SGHNS (SEQ ID NO: 67),
CDR2e - FNNNVP (SEQ ID NO: 68), и
CDR3e - CASSTVGGEDYGYTF (SEQ ID NO: 69), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xiii) CDR1a - DSASNY (SEQ ID NO: 73),
CDR2a - IRSNVGE (SEQ ID NO: 74),
CDR3a - CAASMAGAGSYQLTF (SEQ ID NO: 75),
CDR1e - ENHRY (SEQ ID NO: 78),
CDR2e - SYGVKD (SEQ ID NO: 79), и
CDR3e - CAISVGQGALYEQYF (SEQ ID NO: 80), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xiv) CDR1a - DSASNY (SEQ ID NO: 73),
- 7 045443
CDR2a - IRSNVGE (SEQ ID NO: 74),
CDR3a - CAASMAGAGSYQLTF (SEQ ID NO: 75),
CDRie - SGDLS (SEQ ID NO: 84),
CDR2e - YYNGEE (SEQ ID NO: 85), и
CDR3e - CASSVARDRRNYGYTF (SEQ ID NO: 86), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xv) CDR1a - NSMFDY (SEQ ID NO: 90),
CDR2a - ISSIKDK (SEQ ID NO: 91),
CDR3a - CAANNARLMF (SEQ ID NO: 92),
CDR1e - SGHNS (SEQ ID NO: 95),
CDR2e - FNNNVP (SEQ ID NO: 96), и
CDR3e - CASSDTRAREQFF (SEQ ID NO: 97), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xvi) CDR1a - DSSSTY (SEQ ID NO: 101),
CDR2a - IFSNMDM (SEQ ID NO: 102),
CDR3a - CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103),
CDR1e - DFQATT (SEQ ID NO: 161),
CDR2e - SNEGSKA (SEQ ID NO: 162), и
CDR3e - CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xvii) CDR1a - DSSSTY (SEQ ID NO: 101),
CDR2a - IFSNMDM (SEQ ID NO: 102),
CDR3a - CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103),
CDR1e - SQVTM (SEQ ID NO: 167),
CDR2e - ANQGSEA (SEQ ID NO: 168), и
CDR3e - CSVGGSGSYNEQFF (SEQ ID NO: 169), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xviii) CDR1a - DSVNN (ID NO: 106 SEQ),
CDR2a - IPSGT (SEQ ID NO: 107),
CDR3a - CAVEATDSWGKLQF (SEQ ID NO: 108),
CDR1e - DFQATT (SEQ ID NO: 161),
CDR2e - SNEGSKA (SEQ ID NO: 162), и
CDR3e - CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xix) CDR1a - DSVNN (ID NO: 106 SEQ),
CDR2a - IPSGT (SEQ ID NO: 107),
CDR3a - CAVEATDSWGKLQF (SEQ ID NO: 108),
CDR1e - SQVTM (SEQ ID NO: 167),
CDR2e - ANQGSEA (SEQ ID NO: 168), и
CDR3e - CSVGGSGSYNEQFF (SEQ ID NO: 169), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(хх) CDR1a - DSASNY (SEQ ID NO: 111),
CDR2a - IRSNVGE (SEQ ID NO: 112),
CDR3a - CAVRTSYDKVIF (SEQ ID NO: 113),
CDR1e - DFQATT (SEQ ID NO: 161),
CDR2e - SNEGSKA (SEQ ID NO: 162), и
CDR3e - CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxi) CDR1a - DSASNY (SEQ ID NO: 111),
CDR2a - IRSNVGE (SEQ ID NO: 112),
CDR3a - CAVRTSYDKVIF (SEQ ID NO: 113),
CDR1e - SQVTM (SEQ ID NO: 167),
CDR2e - ANQGSEA (SEQ ID NO: 168), и
CDR3e - CSVGGSGSYNEQFF (SEQ ID NO: 169), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxii) CDR1a - VGISA (SEQ ID NO: 173),
CDR2a - LSSGK (SEQ ID NO: 174),
CDR3a - CAVTVGNKLVF (SEQ ID NO: 175),
- 8 045443
CDRie - MNHNS (SEQ ID NO: 178),
CDR2e - SASEGT (SEQ ID NO: 179), и
CDR3e - CASRGWREQFF (SEQ ID NO: 180), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxiii) CDR1a - VGISA (SEQ ID NO: 184),
CDR2a - LSSGK (SEQ ID NO: 185),
CDR3a - CAARSYNTDKLIF (SEQ ID NO: 186),
CDR1e - SGHTS (SEQ ID NO: 194),
CDR2e - YDEGEE (SEQ ID NO: 195), и
CDR3e - CASSWGYQETQYF (SEQ ID NO: 196), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxiv) CDR1a - VGISA (SEQ ID NO: 184),
CDR2a - LSSGK (SEQ ID NO: 185),
CDR3a - CAARSYNTDKLIF (SEQ ID NO: 186),
CDR1e - KGHSH (SEQ ID NO: 200),
CDR2e - LQKENI (SEQ ID NO: 201), и
CDR3e - CASSPTGGEYYGYTF (SEQ ID NO: 202), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxv) CDR1a - VGISA (SEQ ID NO: 184),
CDR2a - LSSGK (SEQ ID NO: 185),
CDR3a - CAARSYNTDKLIF (SEQ ID NO: 186),
CDR1e - MNHEY (SEQ ID NO: 206),
CDR2e - SVGAGI (SEQ ID NO: 207), и
CDR3e - CASSSYPLRTGRYNSYNSPLHF (SEQ ID NO: 208), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxvi) CDR1a - NSMFDY (SEQ ID NO: 189),
CDR2a - ISSIKDK (SEQ ID NO: 190),
CDR3a - CAASYNNARLMF (SEQ ID NO: 191),
CDR1e - SGHTS (SEQ ID NO: 194),
CDR2e - YDEGEE (SEQ ID NO: 195), и
CDR3e - CASSWGYQETQYF (SEQ ID NO: 196), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxvii) CDR1a - NSMFDY (SEQ ID NO: 189),
CDR2a - ISSIKDK (SEQ ID NO: 190),
CDR3a - CAASYNNARLMF (SEQ ID NO: 191),
CDR1e - KGHSH (SEQ ID NO: 200),
CDR2e - LQKENI (SEQ ID NO: 201), и
CDR3e - CASSPTGGEYYGYTF (SEQ ID NO: 202), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxviii) CDR1a - NSMFDY (SEQ ID NO: 189),
CDR2a - ISSIKDK (SEQ ID NO: 190),
CDR3a - CAASYNNARLMF (SEQ ID NO: 191),
CDR1e - MNHEY (SEQ ID NO: 206),
CDR2e - SVGAGI (SEQ ID NO: 207), и
CDR3e - CASSSYPLRTGRYNSYNSPLHF (SEQ ID NO: 208), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxix) CDR1a - NSMFDY (SEQ ID NO: 212),
CDR2a - ISSIKDK (SEQ ID NO: 213),
CDR3a - CAASGGRDDKIIF (SEQ ID NO: 214),
CDR1e - MNHEY (SEQ ID NO: 217),
CDR2e - SVGAGI (SEQ ID NO: 218), и
CDR3e - CASSYSRTESTDTQYF (SEQ ID NO: 219), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(ххх) CDR1a - NSMFDY (SEQ ID NO: 90),
CDR2a - ISSIKDK (SEQ ID NO: 91),
CDR3a - CAANNARLMF (SEQ ID NO: 92),
CDR1e - SGHRS (SEQ ID NO: 269),
CDR2e - YFSETQ (SEQ ID NO: 270), и
- 9 045443
CDR3e - CASSPGQHGELFF (SEQ ID NO: 271), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxi) CDR1a - NSMFDY (SEQ ID NO: 264),
CDR2a - ISSIKDK (SEQ ID NO: 265),
CDR3a - CAASATGNQFYF (SEQ ID NO: 266),
CDR1e - SGHNS (SEQ ID NO: 95),
CDR2e - FNNNVP (SEQ ID NO: 96), и
CDR3e - CASSDTRAREQFF (SEQ ID NO: 97), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxii) CDR1a - NSMFDY (SEQ ID NO: 264),
CDR2a - ISSIKDK (SEQ ID NO: 265),
CDR3a - CAASATGNQFYF (SEQ ID NO: 266),
CDR1e - SGHRS (SEQ ID NO: 269),
CDR2e - YFSETQ (SEQ ID NO: 270), и
CDR3e - CASSPGQHGELFF (SEQ ID NO: 271), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxiii) CDR1a - TSINN (SEQ ID NO: 275),
CDR2a - IRSNERE (SEQ ID NO: 276),
CDR3a - CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277),
CDR1e - DFQATT (SEQ ID NO: 161),
CDR2e - SNEGSKA (SEQ ID NO: 162), и
CDR3e - CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxiv) CDR1a - TSINN (SEQ ID NO: 275),
CDR2a - IRSNERE (SEQ ID NO: 276),
CDR3a - CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277),
CDR1e - SQVTM (SEQ ID NO: 167),
CDR2e - ANQGSEA (SEQ ID NO: 168), и
CDR3e - CSVGGSGSYNEQFF (SEQ ID NO: 169), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxv) CDR1a - TSINN (SEQ ID NO: 275),
CDR2a - IRSNERE (SEQ ID NO: 276),
CDR3a - CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277),
CDR1e - DFQATT (SEQ ID NO: 280),
CDR2e - SNEGSKA (SEQ ID NO: 281), и
CDR3e - CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxvi) CDR1a - TSINN (SEQ ID NO: 275),
CDR2a - IRSNERE (SEQ ID NO: 276),
CDR3a - CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277),
CDR1e - SGHDY (SEQ ID NO: 286),
CDR2e - FNNNVP (SEQ ID NO: 287), и
CDR3e - CASSLGLSISQETQYF (SEQ ID NO: 288), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxvii) CDR1a - DSSSTY (SEQ ID NO: 101),
CDR2a - IFSNMDM (SEQ ID NO: 102),
CDR3a - CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103),
CDR1e - SGHDY (SEQ ID NO: 286),
CDR2e - FNNNVP (SEQ ID NO: 287), и
CDR3e - CASSLGLSISQETQYF (SEQ ID NO: 288), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxviii) CDR1a - DSVNN (SEQ ID NO: 106),
CDR2a - IPSGT (SEQ ID NO: 107),
CDR3a - CAVEATDSWGKLQF (SEQ ID NO: 108),
CDR1e - SGHDY (SEQ ID NO: 286),
CDR2e - FNNNVP (SEQ ID NO: 287), и
CDR3e - CASSLGLSISQETQYF (SEQ ID NO: 288), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
- 10 045443 (xxxix) CDR1a - DSASNY (SEQ ID NO: 111),
CDR2a - IRSNVGE (SEQ ID NO: 112),
CDR3a - CAVRTSYDKVIF (SEQ ID NO: 113),
CDR1e - SGHDY (SEQ ID NO: 286),
CDR2e - FNNNVP (SEQ ID NO: 287), и
CDR3e - CASSLGLSISQETQYF (SEQ ID NO: 288), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(хххх) CDR1a - DSSSTY (SEQ ID NO: 101),
CDR2a - IFSNMDM (SEQ ID NO: 102),
CDR3a - CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103),
CDR1e - DFQATT (SEQ ID NO: 280),
CDR2e - SNEGSKA (SEQ ID NO: 281), и
CDR3e - CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
(xxxxi) CDR1a - DSVNN (SEQ ID NO: 106),
CDR2a - IPSGT (SEQ ID NO: 107),
CDR3a - CAVEATDSWGKLQF (SEQ ID NO: 108),
CDR1e - DFQATT (SEQ ID NO: 280),
CDR2e - SNEGSKA (SEQ ID NO: 281), и
CDR3e - CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций; или (xxxxii) CDR1a - DSASNY (SEQ ID NO: 111),
CDR2a - IRSNVGE (SEQ ID NO: 112),
CDR3a - CAVRTSYDKVIF (SEQ ID NO: 113),
CDR1e - DFQATT (SEQ ID NO: 280),
CDR2e - SNEGSKA (SEQ ID NO: 281), и
CDR3e - CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282), или их варианты, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен TCR настоящего изобретения, включающий:
(i) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(ii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(iii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(iv) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей
- 11 045443 мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(v) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(vi) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(vii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(viii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(ix) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(х) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 53 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xi) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 53
- 12 045443 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 53 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xiii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xiv) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 87 или вариант этого по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xv) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 93 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xvi) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xvii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 170 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентично
- 13 045443 стью последовательности с ней;
(xviii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xix) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 170 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(хх) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxi) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 170 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 176 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 181 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxiii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 187 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 197 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxiv) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 187 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 203 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей
- 14 045443 мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxv) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 187 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 209 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxvi) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 192 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 197 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxvii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 192 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 203 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxviii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 192 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 209 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; или (xxix) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 215 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 220 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(ххх) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 93 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 272 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxxi) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 267 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последова-
- 15 045443 тельности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность
SEQ ID NO: 98 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxxii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 267 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 272 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxxiii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 278 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxxiv) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 278 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 170 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxxv) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 278 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 283 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxxvi) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 278 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 289 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxxvii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 289 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxxviii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере
- 16 045443
85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 289 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxxix) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 289 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(ххх х) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 283 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней;
(xxxxi) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 283 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; или (xxxxii) вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 283 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен TCR настоящего изобретения, включающий:
(i) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и вариантов SEQ ID NO: 10 и 11, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(ii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44 и вариантов SEQ ID NO: 43 и 44, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%,
- 17 045443 по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(iii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 и вариантов SEQ ID NO: 26 и 27, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(iv) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 и вариантов SEQ ID NO: 32 и 33, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(v) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 и вариантов SEQ ID NO: 26 и 27, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(vi) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 и вариантов SEQ ID NO: 32 и 33, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(vii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60 и вариантов SEQ ID NO: 59 и 60, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(viii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66 и вариантов SEQ ID NO: 65 и 66, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(ix) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID
- 18 045443
NO: 71, SEQ ID NO: 72 и вариантов SEQ ID NO: 71 и 72, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(х) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60 и вариантов SEQ ID NO: 59 и 60, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xi) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66 и вариантов SEQ ID NO: 65 и 66, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72 и вариантов SEQ ID NO: 71 и 72, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xiii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83 и вариантов SEQ ID NO: 82 и 83, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xiv) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89 и вариантов SEQ ID NO: 88 и 89, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xv) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100 и вариантов SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xvi) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по
- 19 045443 меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 166 и вариантов SEQ ID NO: 165 и 166, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xvii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 171, SEQ ID NO: 172 и вариантов SEQ ID NO: 171 и 172, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xviii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 166 и вариантов SEQ ID NO: 165 и 166, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xix) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 171, SEQ ID NO: 172 и вариантов SEQ ID NO: 171 и 172, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(хх) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 166 и вариантов SEQ ID NO: 165 и 166, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxi) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 171, SEQ ID NO: 172 и вариантов SEQ ID NO: 171 и 172, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 177 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 182, SEQ ID NO: 183 и вариантов SEQ ID NO: 182 и 183, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxiii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188 или ее вариант,
- 20 045443 обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 199 и вариантов SEQ ID NO: 198 и 199, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxiv) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205 и вариантов SEQ ID NO: 204 и 205, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxv) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 210, SEQ ID NO: 211 и вариантов SEQ ID NO: 210 и 211, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxvi) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 193 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 199 и вариантов SEQ ID NO: 198 и 199, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxvii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 193 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205 и вариантов SEQ ID NO: 204 и 205, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxviii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 193 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 210, SEQ ID NO: 211 и вариантов SEQ ID NO: 210 и 211, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxix) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 216 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 221, SEQ ID NO: 222 и вариантов SEQ ID NO: 221 и 222, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по
- 21 045443 меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(ххх) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 273, SEQ ID NO: 274 и вариантов SEQ ID NO: 273 и 274, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxxi) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 268 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100 и вариантов SEQ ID NO: 99 и 100, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxxii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 268 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 273, SEQ ID NO: 274 и вариантов SEQ ID NO: 273 и 274, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxxiii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 279 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 166 и вариантов SEQ ID NO: 165 и 166, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxxiv) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 279 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 171, SEQ ID NO: 172 и вариантов SEQ ID NO: 171 и 172, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxxv) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 279 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 284, SEQ ID NO: 285 и вариантов SEQ ID NO: 284 и 285, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxxvi) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 279 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 290, SEQ ID NO: 291 и вариантов SEQ ID NO: 290 и 291 наличие по меньшей мере 75%, по меньшей
- 22 045443 мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxxvii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 290, SEQ ID NO: 291 и вариантов SEQ ID NO: 290 и 291 наличие по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxxviii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 290, SEQ ID NO: 291 и вариантов SEQ ID NO: 290 и 291 наличие по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxxix) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 290, SEQ ID NO: 291 и вариантов SEQ ID NO: 290 и 291 наличие по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(ххх х) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 284, SEQ ID NO: 285 и вариантов SEQ ID NO: 284 и 285, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними;
(xxxxi) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 284, SEQ ID NO: 285 и вариантов SEQ ID NO: 284 и 285, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними; или (xxxxii) α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 284, SEQ ID NO: 285 и вариантов SEQ ID NO: 284 и 285, обладающих по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен TCR настоящего изобретения, включающий α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 257 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%
- 23 045443 или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 259 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен TCR настоящего изобретения, включающий α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 261 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 263 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней.
TCR настоящего изобретения может связываться с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
EPASQHTLRSG (SEQ ID NO: 123),
YESDNHTTPIL (SEQ ID NO: 126),
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 127),
QCLSAFTVHFSGQFT (SEQ ID NO: 118),
EDPMGQQGSLGEQQY (SEQ ID NO: 119),
SQLECMTWNQMNLGA (SEQ ID NO: 120),
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117),
NQMNLGATLKG (SEQ ID NO: 250),
DPGGIWAKLGAAEAS (SEQ ID NO: 251),
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 252),
KRHQRRHTGVKPFQC (SEQ ID NO: 253),
PSCQKKFARSDELVR (SEQ ID NO: 254) и их вариантов, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен Т-клеточный рецептор (TCR), который связывается с пептидом белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
EPASQHTLRSG (SEQ ID NO: 123),
YESDNHTTPIL (SEQ ID NO: 126),
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 127),
QCLSAFTVHFSGQFT (SEQ ID NO: 118),
EDPMGQQGSLGEQQY (SEQ ID NO: 119),
SQLECMTWNQMNLGA (SEQ ID NO: 120),
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117),
NQMNLGATLKG (SEQ ID NO: 250),
DPGGIWAKLGAAEAS (SEQ ID NO: 251),
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 252),
KRHQRRHTGVKPFQC (SEQ ID NO: 253),
PSCQKKFARSDELVR (SEQ ID NO: 254) и их вариантов, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В одном варианте осуществления TCR настоящего изобретения связывается с пептидным комплексом МНС I и/или МНС П.
В одном варианте осуществления TCR настоящего изобретения рестриктирован аллелем человеческого лейкоцитарного антигена (HLA). В одном варианте осуществления TCR настоящего изобретения рестриктирован аллелем HLA-A или HLA-B. В одном варианте осуществления TCR настоящего изобретения рестриктирован аллелем HLA-A, выбранным из группы, состоящей из HLA-A*0201, HLA-A*0101, HLA-A*2402 и HLA-A*0301, или аллелем HLA-B, выбранным из группы, состоящей из HLA-B*0702, HLA-B*35O1 и HLA-B*35O2.
В одном варианте осуществления TCR настоящего изобретения рестриктирован HLA-A*0201.
В одном варианте осуществления TCR настоящего изобретения рестриктирован HLA-B*3502.
В одном варианте осуществления TCR настоящего изобретения рестриктирован HLA-B*3501.
В одном варианте осуществления TCR настоящего изобретения рестриктирован аллелем HLA-C. В одном варианте осуществления TCR настоящего изобретения рестриктирован аллелем HLA-C, выбранным из группы, состоящей из HLA-C*O7:O1, HLA-C*03:04, HLA-C*04:01, HLA-C*05:01, HLA-C*06:02 и HLA-C*07:02.
- 24 045443
В одном варианте осуществления TCR настоящего изобретения включает одну или более мутаций в области соединения α-цепи/β-цепи, такие, что, когда α-цепь и β-цепь экспрессируются в Т-клетке, частота ошибочного спаривания между указанными цепями и α и β-цепями эндогенного TCR снижена.
В одном варианте осуществления TCR настоящего изобретения включает одну или более мутаций в области соединения α-цепи/β-цепи, такие, что, когда α-цепь и β-цепь экспрессируются в Т-клетке, уровень экспрессии α и β цепи TCR повышен.
В одном варианте осуществления одна или более мутаций вводят остаток цистеина в домен константной области каждой α-цепи и β-цепи, где остатки цистеина способны образовывать дисульфидную связь между α-цепью и β-цепью.
TCR настоящего изобретения может включать муринизированную константную область.
В одном варианте осуществления TCR изобретения является растворимым TCR.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен выделенный полинуклеотид, кодирующий αцепь Т-клеточного рецептора (TCR) настоящего изобретения и/или β-цепь TCR настоящего изобретения.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен выделенный полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 256 и/или нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 258, или их варианты, обладающие по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с ними.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен выделенный полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 260 и/или нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 262, или их варианты, обладающие по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с ними.
В одном варианте осуществления выделенный полинуклеотид кодирует α-цепь, связанную с βцепью. В одном варианте осуществления выделенный полинуклеотид кодирует одну или более последовательностей коротких интеферирующих РНК (миРНК) и/или одно или более других средств, способных снижать или блокировать экспрессию одного или более эндогенных генов TCR.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен вектор, включающий полинуклеотид настоящего изобретения. В одном варианте осуществления вектор включает полинуклеотид, который кодирует одну или более цепей CD3, CD8, суицидальный ген и/или селективный маркер.
В другом аспекте настоящего изобретения предложена клетка, включающая TCR настоящего изобретения, полинуклеотид настоящего изобретения или вектор настоящего изобретения.
В одном варианте осуществления клетка дополнительно включает вектор, который кодирует одну или более цепей CD3, CD8, суицидальный ген и/или селективный маркер.
В одном варианте осуществления клетка является Т-клеткой, лимфоцитом или стволовой клеткой, такой как гемопоэтические стволовые клетки или индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (иПС). Т-клетка, лимфоцит или стволовая клетка могут быть выбраны из группы, состоящей из CD4 клеток, CD8 клеток, Th0 клеток, Тс0 клеток, Th1 клеток, Tc1 клеток, Th2 клеток, Тс2 клеток, Th17 клеток, Th22 клеток, гамма/дельта Т-клеток, естественных киллерных клеток (NK), естественных киллерных Тклеток (NKT), двойных отрицательных Т-клеток, наивных Т-клеток, стволовых Т-клеток памяти, Тклеток центральной памяти, эффекторных Т-клеток памяти, эффекторный Т-клеток, гемопоэтических стволовых клеток и плюрипотентных стволовых клеток.
В одном варианте осуществления клетка является Т-клеткой, которая была выделена у субъекта.
В одном варианте осуществления эндогенный ген, кодирующий α-цепь TCR, и/или эндогенный ген, кодирующий β-цепь TCR, в клетке прерван, предпочтительно таким образом, что эндогенный ген, кодирующий α-цепь TCR, и/или эндогенный ген, кодирующий β-цепь TCR, не экспрессируется. В одном варианте осуществления эндогенный ген, кодирующий α-цепь TCR и/или эндогенный ген, кодирующий βцепь TCR, прерван в результате вставки кассеты экспрессии, включающей полинуклеотидную последовательность, кодирующую TCR настоящего изобретения. В одном варианте осуществления один или более эндогенных генов, кодирующих МНС, в клетке прерваны, где клетка предпочтительно является неаллореактивной универсальной Т-клеткой. В одном варианте осуществления эндогенный ген, участвующий в персистировании, размножении, активности, устойчивости к сигналам истощения/старения/ингибирования, хоуминг-способности или других функциях Т-клеток в клетке, прерван, где эндогенный ген, участвующий в персистировании, размножении, активности, устойчивости к сигналам истощения/старения/ингибирования, хоуминг-способности или других функциях Т-клеток, предпочтительно выбран из группы, состоящей из PD1, TIM3, LAG3, 2В4, KLRG1, TGFbR, CD160 и CTLA4. В одном варианте осуществления эндогенный ген, участвующий в персистировании, размножении, активности, устойчивости к сигналам истощения/старения/ингибирования, хоуминг-способности или других функциях Т-клеток, прерван в результате интеграции кассеты экспрессии, где кассета экспрессии вклю- 25 045443 чает полинуклеотидную последовательность, кодирующую TCR настоящего изобретения.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ получения клетки, который включает этап введения вектора изобретения в клетку in vitro, ex vivo или in vivo, например, путем трансфекции или трансдукции.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ получения клетки, который включает этап трансдукции клетки in vitro, ex vivo или in vivo одним или более векторами настоящего изобретения.
В одном варианте осуществления клетка, которая подлежит трансдукции одним или более векторами, выбрана из группы, состоящей из Т-клеток, лимфоцитов или стволовых клеток, таких как гемопоэтические стволовые клетки или индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (иПС), необязательно Т-клетка, лимфоцит или стволовая клетка могут быть выбраны из группы, состоящей из CD4 клеток, CD8 клеток, Th0 клеток, Тс0 клеток, Th1 клеток, Tc1 клеток, Th2 клеток, Тс2 клеток, Th17 клеток, Th22 клеток, гамма/дельта Т-клеток, естественных киллерных клеток (NK), естественных киллерных Т-клеток (NKT), двойных отрицательных Т-клеток, наивных Т-клеток, стволовых Т-клеток памяти, Т-клеток центральной памяти, эффекторных Т-клеток памяти, эффекторных Т-клеток, гемопоэтических стволовых клеток и плюрипотентных стволовых клеток.
В одном варианте осуществления способ включает этап редактирования Т-клеток, который включает прерывание эндогенного гена, например, эндогенного гена, кодирующего α-цепь TCR, и/или эндогенного гена, кодирующего β-цепь TCR, с помощью искусственной нуклеазы, где искусственная нуклеаза предпочтительно выбрана из группы, состоящей из цинк-пальцевых нуклеаз (ZFN), подобных активаторам транскрипции эффекторных нуклеаз (TALEN) и системы CRISPR/Cas.
В одном варианте осуществления способ включает этап редактирования Т-клеток, который включает прерывание эндогенного гена, кодирующего α-цепь TCR, и/или эндогенного гена, кодирующего βцепь TCR, с помощью искусственной нуклеазы, где искусственная нуклеаза предпочтительно выбрана из группы, состоящей из цинк-пальцевых нуклеаз (ZFN), подобных активаторам транскрипции эффекторных нуклеаз (TALEN) и системы CRISPR/Cas.
В одном варианте осуществления способ включает этап направленной интеграции кассеты экспрессии в эндогенный ген, кодирующий ген α-цепи TCR, и/или эндогенный ген, кодирующий β-цепь TCR, прерванный с помощью искусственной нуклеазы, где кассета экспрессии включает полинуклеотид, кодирующий TCR настоящего изобретения или полинуклеотидную последовательность настоящего изобретения.
В одном варианте осуществления способ включает этап прерывания одного или более эндогенных генов, кодирующих МНС, где клетка, полученная с применением данного способа, предпочтительно является неаллореактивной универсальной Т-клеткой.
В одном варианте осуществления способ включает этап прерывания одного или более эндогенных генов МНС, где клетка, полученная с применением данного способа, предпочтительно является неаллореактивной универсальной Т-клеткой.
В одном варианте осуществления способ включает этап прерывания одного или более эндогенных генов с целью модификации персистирования, размножения, активности, устойчивости к сигналам истощения/старения/ингибирования, хоуминг-способности или других функций Т-клеток, где способ предпочтительно включает этап направленной интеграции кассеты экспрессии в эндогенный ген, участвующий в персистировании, размножении, активности, устойчивости к сигналам истощения/старения/ингибирования, хоуминг-способности или других функциях Т-клеток, прерванный с помощью искусственной нуклеазы, где кассета экспрессии включает полинуклеотидную последовательность, кодирующую TCR настоящего изобретения, где эндогенный ген предпочтительно выбран из группы, состоящей из PD1, TIM3, LAG3, 2В4, KLRG1, TGFbR, CD160 и CTLA4.
В другом аспекте настоящего изобретения предложена клетка настоящего изобретения или клетка, полученная способом настоящего изобретения, для применения в адоптивном переносе клетки, предпочтительно адоптивном переносе Т-клетки, при этом, необязательно, адоптивный перенос Т-клетки может быть адоптивным переносом аллогенной Т-клетки, переносом универсальной неаллореактивной Тклетки или адоптивным переносом аутологичной Т-клетки.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR настоящего изобретения, выделенный полинуклеотид настоящего изобретения, вектор настоящего изобретения, клетка настоящего изобретения, клетка, полученная способом настоящего изобретения, или химерная молекула настоящего изобретения для применения в терапии.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR настоящего изобретения, выделенный полинуклеотид настоящего изобретения, вектор настоящего изобретения, клетка настоящего изобретения, клетка, полученная способом настоящего изобретения, для применения в лечении и/или предотвращении заболевания, связанного с экспрессией WT1.
В другом аспекте настоящего изобретения предложена Т-клетка, генетически модифицированная (генетически отредактированная) с целью модификации персистирования, размножения, активности, устойчивости к сигналам истощения/старения/ингибирования, хоуминг-способности или других функ- 26 045443 ций Т-клеток, где Т-клетка экспрессирует α-цепь TCR настоящего изобретения и/или β-цепь TCR настоящего изобретения.
В другом аспекте настоящего изобретения предложена Т-клетка, генетически модифицированная (генетически отредактированная) с помощью методики, которая включает этап направленной интеграции кассеты экспрессии в эндогенный ген, участвующий в персистировании, размножении, активности, устойчивости к сигналам истощения/старения/ингибирования, хоуминг-способности или других функциях Т-клеток, прерванный с помощью искусственной нуклеазы, где кассета экспрессии включает полинуклеотидную последовательность, кодирующую α-цепь TCR настоящего изобретения и/или β-цепь TCR настоящего изобретения.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения и/или предотвращения заболевания, связанного с экспрессией WT1, который включает этап введения TCR настоящего изобретения, выделенного полинуклеотида настоящего изобретения, вектора настоящего изобретения, клетки настоящего изобретения, клетки, полученной с применением данного способа настоящего изобретения, или химерной молекулы настоящего изобретения нуждающемуся в этом субъекту.
Заболевание, связанное с экспрессией WT1, может быть пролиферативным нарушением. Предпочтительно пролиферативное нарушение может быть выбрано из группы, состоящей из гемобластозов, таких как острый миелоидный лейкоз (ОМЛ), хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ), лимфообластный лейкоз, миелодиспластические синдромы, множественная миелома, неходжкинская лимфома, лимфома Ходжкина. Пролиферативное нарушение может быть выбрано из группы солидных опухолей, таких как рак легкого, рак молочной железы, рак пищевода, рак желудка, рак толстой кишки, холангиокарцинома, рак поджелудочной железы, рак яичника, рак головы и шеи, синовиальная саркома, ангиосаркома, остеогенная саркома, рак щитовидной железы, рак эндометрия, нейробластома, рабдомиосаркома, рак печени, меланома, рак предстательной железы, рак почки, саркома мягких тканей, уротелиальный рак, рак желчных протоков, глиобластома, мезотелиома, рак шейки матки и рак толстой и прямой кишки.
В предпочтительном варианте осуществления заболевание, связанное с экспрессией WT1, является острым миелоидным лейкозом (ОМЛ).
В другом предпочтительном варианте осуществления заболевание, связанное с экспрессией WT1, является хроническим миелоидным лейкозом (ХМЛ).
В другом аспекте настоящего изобретения предложен выделенный иммуногенный пептид WT1, включающий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
EPASQHTLRSG (SEQ ID NO: 123),
YESDNHTTPIL (SEQ ID NO: 126),
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 127),
QCLSAFTVHFSGQFT (SEQ ID NO: 118),
EDPMGQQGSLGEQQY (SEQ ID NO: 119),
SQLECMTWNQMNLGA (SEQ ID NO: 120),
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117),
NQMNLGATLKG (SEQ ID NO: 250),
DPGGIWAKLGAAEAS (SEQ ID NO: 251),
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 252),
KRHQRRHTGVKPFQC (SEQ ID NO: 253),
PSCQKKFARSDELVR (SEQ ID NO: 254) и их вариантов, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
Описание чертежей
Фиг. 1. Графики, на которых показаны результаты in vitro размножения функциональных WT-1специфичных Т-клеток из периферической крови десяти здоровых доноров.
Мононуклеарные клетки периферической крови десяти здоровых доноров (HD) стимулировали пулами перекрывающихся 15-мерных пептидов WT1 в течение 26-30 ч, обогащали CD137+ клетками и размножали в течение 9-19 дней. Размноженные Т-клетки повторно стимулировали в течение 6 часов с аутологичными антигенпрезентирующими клетками (АПК), нагруженными пулом нерелевантных пептидов или пулом пептидов WT1. Кроме того, отрицательный (нестимулированные Т-клетки) и положительный (Т-клетки, культивируемые в присутствии ФМА и иономицина) контроли были включены в условия эксперимента (не показаны). На точечных диаграммах показаны результаты внутриклеточного окрашивания на продукцию IFNy и экспонирование CD107а на поверхности клеток. После нескольких повторных стимуляций аутологичными АПК, нагруженными пулами пептидов WT1, специфичность Тклеток исследовали с помощью внутриклеточного окрашивания, как описано ранее. Результаты показали обогащение WT1-специфичных Т-клеток в категории CD8 Т-клеток на HD1 (а), HD3 (с), HD4 (d), HD5 (е), HD6 (f), HD7 (g) и HD10 (j) и в категории CD4 Т-клеток на HD2 (b), HD8 (h) и HD9 (i). WT1, белок опухоли Вильмса 1; ФМА, форбол-12-миристат 13-ацетат; IFNy, интерферон-у; S, стимуляция.
Фиг. 2. Таблица и диаграммы, на которых показана идентификация WT1-иммуногенных пептидов с применением стратегии сетки картирования.
- 27 045443
Эпитопы, распознаваемые Т-клетками, стимулированными in vitro при повторной стимуляции пулом перекрывающихся пептидов WT1, идентифицировали с помощью внутриклеточного окрашивания. В частности, оценивали процент специфичных Т-клеток, отвечающих на сетку картирования субпулов пентадекапептидов WT1, нагруженных на АПК. Кроме того, отрицательный (нестимулированные Т-клетки и Т-клеткии, совместно культивируемые с АПК, нагруженными пулом нерелевантных пептидов) и положительный (Т-клетки, культивируемые в присутствии ФМА и иономицина) контроли включали в условия эксперимента (нестимулированные Т-клетки и условия ФМА/ионо не показаны).
(а) Сетка деконволюции указывает процент Т-клеток, экспрессирующих IFNy и CD107а после сокультивирования с АПК, нагруженными различными субпулами (обозначенные SP1-24). Значения IFNy и CD107a, выделенные жирным шрифтом, обозначают субпулы, которые содержат эпитоп WT1, распознаваемый Т-клетками. Представлены репрезентативные точечные диаграммы для сокультуры Т-клеток с АПК, нагруженными положительными субпулами, и показывающие экспрессию IFNy и CD107а. Доминантные ответы наблюдали для: субпулов 4, 5, 16 у HD1 (b), HD3 (d), HD6 (g), HD7 (h), HD10 (k); субпулов 6, 16, 17, 20, 23 у HD2 (с); субпулов 4, 5, 6, 14, 18, 21 у HD4 (е); субпулов 5, 11, 12, 21, 22 у HD5 (f); субпулов 12, 14 у HD8 (i); субпулов 5, 13, 21 у HD9 (j). Для HD7 также наблюдали повышенную секрецию IFNy и экспрессию CD107а в ответ на субпулы 7, 8, 20, хотя и с более низкими процентами по сравнению с ответом, наблюдаемым с субпулами 4, 5, 16. SP, субпулы; WT1, белок опухоли Вильмса 1; АПК, антигенпрезентирующие клетки; ФМА, форбол-12-миристат-13-ацетат; IFNy, интерферон-y.
Фиг. 3. Эпитопная специфичность WT1-специфичных Т-клеток, полученных при сенсибилизации пулами пептидов.
Для проверки WT1 иммуногенных пептидов Т-клетки, размноженные от каждого HD, совместно культивировали в течение 6 часов в присутствии АПК, нагруженных пептидами, идентифицированными после деконволюции сетки картирования, и по меньшей мере одним нерелевантным пептидом в качестве отрицательного контроля. Кроме того, отрицательный (нестимулированные Т-клетки) и положительный (Т-клетки, культивируемые в присутствии ФМА и иономицина) контроли включали в условия эксперимента (не показаны). На точечных диаграммах для каждого HD показаны результаты внутриклеточного окрашивания на IFNy и/или поверхностный CD107а. Обогащение CD107а и/или IFNy-положительными клетками, соответственно, наблюдали для Т-клеток, совместно культивированных с пептидами 40 и 41, у HD1 (а), но не с пептидами 42 и 43 (нерелевантные пептиды); пептидами 54, 77, 90 у HD2 (b), но не с пептидами 42 и 138 (нерелевантные пептиды); пептидом VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157, VLD, который является нонамером пептида, представленного SEQ ID NO: 117 (обозначен как 11-мер на фиг. 3с)) у HD3 (с) и низкий ответ с пептидами PVLDFAPPG (SEQ ID NO: 158, PVL, который является другим нонамером пептида, представленного SEQ ID NO: 117), и LDFAPPGAS (SEQ ID NO: 159, LDF, который является нонамером пептида, представленного SEQ ID NO: 116, ранее описанного как иммуногенный пептид (Doubrovina, E. et al. (2012) Blood 120: 1633-1646)); пептидами 17, 18, 99, 100 у HD4 (d, e), а не для нерелевантных пептидов (15, 16, 63-66, 101, 102 и 132); пептид 101 для HD5 (f), но не с нерелевантными пептидами (63, 107, 108, 113, 119 и 120); пептидом VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157, VLD, который является нонамером пептида, представленного SEQ ID NO: 117 (обозначанного как 11-мер на фиг. 3с)) у HD6 (g) и пептидом PVLDFAPPG (SEQ ID NO: 158, PVL, который является другим неамером пептида, представленного SEQ ID NO: 117), но не с пептидом LDFAPPGAS (SEQ ID NO: 159, LDF, который является нонамером пептида, представленного SEQ ID NO: 116, ранее описанного как иммуногенный пептид (Doubrovina, E. et al. (2012) Blood 120: 1633-1646)); пептидами 101, 125, 137 у HD9 (h); пептидом VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157, VLD, который является нонамером пептида, представленного SEQ ID NO: 117 (обозначенного как 11-мер на фиг. 3с)) у HD10 (i), но не с нерелевантным пептидом. У HD7 и HD8 из-за недостаточного соответствия Т-клеток было невозможно выполнить функциональные тесты для проверки пептида, предсказанного при деконволюции сетки картирования, т.е. пептидов 40, 41, 91, 92 у HD7 и пептида 24 у HD8.
Для определения HLA-рестрикции эпитопов WT1, идентифицированных для HD4, HD5 и HD10 Тклеток, ДНК доноров секвенировали для определения HLA-типирования. После этого WT1специфичные Т-клетки совместно культивировали с различными антигенпрезентирующими клеточными линиями EBV-BLCL, каждая из которых несет специфический HLA аллель, представляющий интерес, который идентифицировали путем секвенирования ДНК HD4, HD5 или HD10. Клетки EBV-BLCL сенсибилизировали пептидом 17 для HD4, пептидом 101 для HD5 и пептидом VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157) или нерелевантным контрольным пептидом. После совместного культивирования в течение 6 часов наблюдали значимый ответ на WT1 WT1-специфичных Т-клеток, которые совместно культивировали с клетками EBV-BLCL, экспрессирующими аллель HLA-B*3502 и сенсибилизированными пептидом 17 для HD4 (j), клетками EBV-BLCL, экспрессирующими аллель HLA-B*3501 и сенсибилизированными пептидом 101 для HD5 (k), и клетками EBV-BLCL, экспрессирующими аллель HLA-A*0201 и сенсибилизированными пептидом VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157) для HD10 (l). (m) Таблица, в которой показаны пептиды, распознаваемые размноженными Т-клетками от HD1-HD10. Для HD3, HD6 и HD10 показаны специфические нонамерные перекрывающиеся пептиды 40 и 41, вызывающие иммунный ответ. WT1,
- 28 045443 белок опухоли Вильмса 1; АПК, антигенпрезентирующие клетки; ФМА, 2, форбол-12-миристат-13ацетат; IFNy, интерферон-γ; S, стимуляция.
Фиг. 4. Графики и диаграммы, на которых показано, что размноженные Т-клетки HD1, HD3 и HD4 распознают природно процессированный эпитоп WT1 (a) График, на котором показана экспрессия CD107 CD8+ Т-клетками, размноженными от HD1 после совместного культивирования с клетками Т2, сенсибилизированными пулом WT1, клетками K562, генетически модифицированными для экспрессии аллеля HLA-A*0201 и оверэкспрессии белка WT1, или клетками Т2, сенсибилизированными неспецифичным контрольным пулом MelanA/MART1 в качестве отрицательного контроля.
(b) График, на котором показаны результаты экспериментов по определению способности HD3 размножившихся Т-клеток направленно взаимодействовать с WT1-экспрессирующими клетками. Результаты представлены как индекс элиминации, который вычисляли как общее количество клеток-мишеней, оставшихся в культуре после совместно культивирования с WT1-специфичными Т-клетками, деленное на общее количество клеток-мишеней в отдельности. Т-клетки HD3 совместно культивировали с клетками Т2, сенсибилизированными субпулом 16 (SP16), содержащим иммуногенный пептид, вызывающий иммунный ответ; клетками Т2, сенсибилизированными пулом MelanA/MART1 (Melan А) в качестве отрицательного контроля; клетками K562 дикого типа (K562) или генетически модифицированными для экспрессии аллеля HLA-A*0201 и оверэкспрессии белка WT1 (K562 A2+WT1+).
(с) Диаграммы, на которых представлены результаты экспериментов по определению способности WT1-специфичных Т-клеток от HD4 элиминировать клетки-мишени. Т-клетки HD4 совместно культивировали с первичными CD33+ бластами, полученными от HLA-B*3502 пациента в соотношении 10:1, или, в качестве контроля, с лейкозными клетками пациента, не несущего аллель HLA-B*3502. После 3 дней сокультивирования результаты показывают почти полное устранение CD33+ HLA-B*35O2 бластов при посеве с WT1-специфичными Т-клетками (CD3+ клетками). Е, эффектор; Т, мишень.
Фиг. 5. График, на котором показаны результаты Ve профилирования WT1-специфичных Т-клеток WT1-специфичные Т-клетки, полученные от разных HD после нескольких стимуляций пулом WT1, окрашивали с помощью набора для Ve иммунопрофилирования, для определения клональности популяции. В частности, экспрессию генов вариабельных доменов (V) β-цепи определяли с помощью FACS анализа. Результаты указывают на экспрессию высокодоминантного гена Ve у HD1 (TRBV12-3; 12-4), HD2 (TRBV11-2), HD3 (TRBV4-3), HD5 (TRBV20-1), тогда как у HD4, HD6, HD10 четкого обогащения определенными Ve не было обнаружено. SP14 HD4 указывает на Т-клетки, стимулированные субпулом 14, который содержит пептиды 17-18, вызывающие наиболее сильный иммунный ответ; SP18+21 HD4 указывает на Т-клетки, стимулированные субпулами 18 и 21, которые содержат пептиды 63-64-65-66 и 99-100-101-102, соответственно, вызывающие минимальный иммунный ответ, как показано на фиг. 3. Для HD7, HD8 и HD9 не удалось выполнить анализ Ve иммунопрофилирования из-за недостаточного качества клеток.
Фиг. 6. Графики, на которых показаны результаты секвенирования TCR обогащенных WT1специфичных Т-клеток в зависимости от времени Т-клетки, полученные от каждого здорового донора, включенного в условия эксперимента, исследовали путем секвенирования αβ TCR после нескольких стимуляций пулом WT1. Результаты секвенирования показали присутствие преобладающих клонотипов для HD1 (a), HD2 (b) и HD3 (с), HD4 (d), HD5 (е), HD6 (f), HD7 (g), HD8 (h), HD9 (i), HD10 (j). На гистограммах показаны десять преобладающих аминокислотных последовательностей CDR3, идентифицированных в каждой точке времени (например, S9 соответствует результатам секвенирования, полученным после 9-го раунда стимуляции). Для каждого столбца, от оси X, нижний сегмент представляет наиболее преобладающую CDR-последовательность. Следующие девять наиболее преобладающих последовательностей расположены над нижним сегментом и упорядочены по уменьшению частоты снизу вверх. Остальные последовательности сгруппированы в верхнем сегменте. WT1, белок опухоли Вильмса 1; CDR3, определяющая комплементарность область 3; S, стимуляция.
Фиг. 7. Функциональная активность генетически модифицированных Т-лимфоцитов.
Т-клетки, выделенные из МКПК здоровых лиц, трансдуцировали двунаправленным лентивирусным вектором, кодирующим α и β-цепь TCR-рецепторов, выделенных у HD1 и HD3. В качестве контроля трансдуцировали Т-клетки с ранее опубликованным TCR, распознающим пептид 126-134 WT1 (RMFPNAPYL; SEQ ID NO: 255), презентированный аллелем HLA-A*0201. Т-лимфоциты для переноса (TR) совместно культивировали в течение 3 дней с (а) клетками Т2, сенсибилизированными или не сенсибилизированными пептидом WT1 126-134 или пептидом VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157) (соотношение эффектор:мишень=1:1); (b) клетками K562 дикого типа (K562) или генетически модифицированными для экспрессии аллеля HLA-A*0201 (соотношение эффектор:мишень=1:1); (с) 3 различными первичными ОМЛ бластами, отобранными по экспрессии аллеля HLA-A*0201 и антигена WT1 (соотношение эффектор:мишень=5:1). В качестве контроля для совместного культивирования с линиями клеток Т2 и K562 включали нетрансдуцированные Т-клетки. Результаты продемонстрировали способность каждого TCR распознавать пептид-мишень, презентированный аллелем HLA-A*0201 (фиг. 7а) и более высокий
- 29 045443 потенциал HD1 TCR-трансдуцированных Т-клеток в опосредовании специфичной и почти полной элиминации клеток K562, несущих аллель HLA*A0201 по сравнению с HD3-TR Т-клетками. Следует отметить, что не наблюдали никакого значимого киллинга клеток-мишеней при совместном культивировании клеток K562 HLA*A0201 с WT1 126-134 TR Т-клетками (фиг. 7b). Эти результаты также подтверждались данными, полученными в эксперименте по совместному культивированию, который проводили при использовании в качестве клеток-мишеней первичных ОМЛ бластов, полученных от 3 различных пациентов с ОМЛ (бласты pAML1: WT1-/HLA-A*0201+; бласты pAML2 и pAML3: WT1+/HLA-A*0201+). В этом эксперименте каждую отдельную популяцию Т-клеток сортировали с определенными декстрамерами перед совместным культивированием с мишенями с целью обогащения чистоты эффекторных клеток. Наблюдали более сильную элиминацию обоих pAML бластов, несущих аллель HLA-A*0201, при совместном культивировании с HD1 TR T-клетками, тогда как HD3 Т и WT1 126-134 Т-клетки распознавали только бласты pAML3. UT, нетрансдуцированный, pAML, первичный острый миелоидный лейкоз; TR, перенос; Dx, декстрамер.
Подробное описание
Термины включающий, включает и включает в себя при использовании в настоящем документе синонимичны терминам содержащий или содержит и являются включительными или открытым и не исключают дополнительные, неуказанные элементы или этапы. Термины включающий, включает и включает в себя также включают термин состоящий из.
Т-клеточный рецептор.
В ходе процессинга антигенов антигены расщепляются в клетках и затем переносятся на поверхность клеток молекулами главного комплекса гистосовместимости (МНС). Т-клетки способны распознавать такой комплекс петида:МНС на поверхности антигенпрезентирующей клетки. Существует два разных класса молекул МНС: МНС I и МНС II, каждый класс доставляет пептиды из различных клеточных компартментов на поверхность клеток.
Т-клеточный рецептор (TCR) представляет собой молекулу, которая может быть обнаружена на поверхности Т-клеток и отвечает за распознавание антигенов, связанных с молекулами МНС. Природный гетеродимер TCR состоит из альфа (α) и бета (β) цепи приблизительно у 95% Т-клеток, тогда как приблизительно 5% Т-клеток имеют TCR-рецепторы, состоящие из гамма (γ) и дельта (δ) цепи.
Связывание TCR с антигеном и МНС приводит к активации Т-лимфоцита, на котором экспрессирован TCR, посредством последовательности биохимических событий, опосредуемых соответствующими ферментами, корецепторами и специализированными вспомогательными молекулами.
Каждая цепь природного TCR является членом супер семейства иммуноглобулинов и обладает одним N-концевым иммуноглобулиновым (Ig)-варибельным (V) доменом, одним Ig-константным (С) доменом, трансмембранной/проходящей через клеточную мембрану областью и коротким цитоплазматическим хвостом на С-конце.
Варибельный домен и α-цепи и β-цепи TCR содержит три гиперварибельных или определяющих комплементарность области (CDRs). α-Цепь или β-цепь TCR, например, включает CDR1, CDR2 и CDR3 в порядке от N-конца к С-концу. Как правило, CDR3 является главной CDR, которая отвечает за распознавание процессированного антигена, хотя CDR1 альфа-цепи, как было также показано, взаимодействует с N-концевой частью антигенного пептида, тогда как CDR1 бета-цепи взаимодействует с С-концевой частью пептида. Предполагают, что CDR2 распознает молекулу МНС.
Константный домен TCR может состоять из коротких соединительных последовательностей, в которых остаток цистеина образует дисульфидную связь, соединяя две цепи.
α-Цепь TCR настоящего изобретения может иметь константный домен, кодируемый геном TRAC. Примерная аминокислотная последовательность константного домена α-цепи, кодируемая геном TRAC, показана ниже:
IQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSM DFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLS VIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS (SEQ ID NO: 128)
TCR настоящего изобретения может включать α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 128 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с ней, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней.
β-Цепь TCR настоящего изобретения может иметь константный домен, кодируемый геном TRBC1 или TRBC2. Примерная аминокислотная последовательность константного домена β-цепи, кодируемая геном TRBC1, показана ниже:
DLNKVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSG VSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDR AKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAM
- 30 045443
VKRKDF (SEQ ID NO: 129)
Примерная аминокислотная последовательность константного домена β-цепи, кодируемая геном TRBC2, показана ниже:
DLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSG
VSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDR AKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAM VKRKDSRG (SEQ ID NO: 130)
TCR настоящего изобретения может включать β-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130 или варианты SEQ ID NO: 129 и 130, обладающие по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с ними, предпочтительно по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними.
TCR настоящего изобретения может иметь один или более дополнительных остатков цистеина в каждой из α и β-цепей, в результате чего TCR может включать две или более дисульфидных связи в константных доменах.
Структура позволяет TCR связываться с другими молекулами, такими как CD3, которые обладают тремя разными цепями (γ, δ и ε) у млекопитающих и ζ-цепью. Эти вспомогательные молекулы имеют отрицательно заряженные трансмембранные области и жизненно важны для передачи сигнала от TCR в клетку. CD3- и ζ-цепи вместе с TCR, образуют комплекс, известный как комплекс Т-клеточного рецептора.
Сигнал от Т-клеточного комплекса усиливается при одновременном связывании молекул МНС специфичным корецептором. У Т-хелперов этим корецептором является CD4 (специфический для МНС класса II); тогда как у цитотоксических Т-клеток этим корецептором является CD8 (специфический для МНС класса I). Корецептор обеспечивает более длительное связывание между антигенпрезентирующей клеткой и Т-клеткой и рекрутирует необходимые молекулы (например, LCK) в клетке, участвующие в передаче сигналов активированного Т-лимфоцита.
Таким образом, при использовании в настоящем документе термин Т-клеточный рецептор (TCR) относится к молекуле, способной к распознаванию пептида, презентированного молекулой МНС. Молекула может быть гетеродимером из двух α и β-цепей (или, необязательно, γ и δ), или она может быть одноцепочечной TCR конструкцией. TCR настоящего изобретения может быть растворимым TCR, например, не содержащим или содержащим измененные один или более константных доменов. TCR настоящего изобретения может включать константный домен.
В настоящем изобретении также предложена α-цепь или β-цепь из такого Т-клеточного рецептора.
TCR настоящего изобретения может быть гибридным TCR, включающим последовательности, полученные больше чем из одного биологического вида. Например, было неожиданно обнаружено, что мышиные TCR-рецепторы более эффективно экспрессируются в человеческих Т-клетках, чем человеческие TCR-рецепторы. Таким образом, TCR может включать человеческую вариабельную область и мышиные последовательности в константной области.
Недостаток этого подхода заключается в том, что мышиные константные последовательности могут вызывать иммунный ответ, который приводит к отторжению Т-клеток после их переноса. Однако схемы кондиционирования, используемые для подготовки пациентов к адоптивной Т-клеточной терапии, могут приводить к достаточной иммуносупрессии, что дает возможность приживления Т-клеток, экспрессирующих мышиные последовательности.
Определяющие комплементарность (CDR) области.
Фрагмент TCR, который формирует большую часть контактов с антигенным пептидом, связанным с главным комплексом гистосовместимости (МНС), является определяющей комплементарность областью 3 (CDR3), которая уникальна для каждого Т-клеточного клона. Область CDR3 образуется в ходе событий соматической перестройки, происходящих в тимусе, в которых участвуют несмежные гены, принадлежащие к вариабельным (V), формирующим разнообразие (D, для β и δ цепей) и соединительным (J) генам. Кроме того, случайные нуклеотиды, вставленные/удаленные в перестраиваемых локусах гена каждой цепи TCR, значительно увеличивают разнообразие высоковариабельной последовательности CDR3. Таким образом, частота специфической последовательности CDR3 в биологическом образце указывает на представленность определенной популяции Т-клеток. Большое разнообразие репертуара TCR у здоровых людей обеспечивает защиту широкого спектра против различных чужеродных антигенов, презентируемых молекулами МНС на поверхности антигенпрезентирующих клеток. В этом отношении следует отметить, что теоретически в тимусе может образовываться до 1015 различных TCR-рецепторов.
Разнообразие Т-клеточных рецепторов основано на CDR3, и эта область главным образом ответственна за распознавание антигена.
Последовательности CDR3 областей TCR настоящего изобретения могут быть выбраны из последо- 31 045443 вательностей, приведенных в табл. 1 ниже. TCR может включать CDR-области, которые включают или состоят из пары CDR3a и CDR3e, описанной ниже.
CDR-области могут, например, включать одну, две или три замены, вставки или делеции в данной последовательности, при условии, что TCR сохраняет возможность связывать пептид WT1, презентированный молекулой МНС.
При использовании в настоящем документе термин белок включает одноцепочечные полипептидные молекулы, а также комплексы из множества полипептидов, где отдельные полипептиды, входящие в их состав, связаны ковалентными или нековалентными способами. При использовании в настоящем документе термин полипептид относится к полимеру, в котором мономерами являются аминокислоты, соединенные дисульфидными или пептидными связями.
Варианты, производные, аналоги, гомологи и фрагменты.
В дополнение к конкретным белкам и полинуклеотидам, указанным в настоящем документе, настоящее изобретение также охватывает применение их вариантов, производных, аналогов, гомологов и фрагментов.
В рамках настоящего изобретения вариант любой последовательности является последовательностью, в которой определенная последовательность остатков (аминокислотных остатков или остатков нуклеиновых кислот) была изменена таким образом, что рассматриваемый полипептид или полинуклеотид по существу сохраняет по меньшей мере одну из своих эндогенных функций. Вариантная последовательность может быть получена в результате вставки, делеции, замены, модификации и/или изменения по меньшей мере одного остатка, присутствующего в природном белке.
Вариантная аминокислотная последовательность настоящего изобретения, указанная как имеющая до трех аминокислотных замен, вставок или делеции, может иметь, например, одну, две или три аминокислотных замены, вставки или делеции.
Термин производное при использовании в настоящем документе в отношении белков или полипептидов настоящего изобретения включает любую замену, изменение, модификацию, делецию и/или добавление одного (или более) аминокислотного остатка в или из последовательности при условии, что получаемый в результате белок или полипептид по существу сохраняет по меньшей мере одну из своих эндогенных функций.
Термин аналог при использовании в настоящем документе в отношении полипептидов или полинуклеотидов включает любой миметик, то есть химическое соединение, которое обладает по меньшей мере одной из эндогенных функций полипептидов или полинуклеотидов, аналогом которых он является.
Белки, используемые в настоящем изобретении, также могут иметь делеции, вставки или замены аминокислотных остатков, которые вызывают молчащее изменение и приводят к функционально эквивалентному белку. Преднамеренные аминокислотные замены могут быть сделаны на основе подобия полярности, заряда, растворимости, гидрофобности, гидрофильности и/или амфипатической природы остатков при условии сохранения эндогенной функции. Например, отрицательно заряженные аминокислоты включают аспарагиновую кислоту и глутаминовую кислоту; положительно заряженные аминокислоты включают лизин и аргинин; и аминокислоты с незаряженными полярными концевыми группами, имеющими подобные значения гидрофильности, включают аспарагин, глутамин, серин, треонин и тирозин.
Замена может включать замену аминокислоты подобной аминокислотой (консервативную замену). Подобная аминокислота является аминокислотой, которая имеет боковую цепь со сходными свойствами, которые можно объединить в группы, например, как показано ниже:
(i) основные боковые цепи: лизин (K), аргинин (R), гистидин (Н);
(ii) кислотные боковые цепи: аспарагиновая кислота (D) и глутаминовая кислота (Е);
(iii) незаряженные полярные боковые цепи: аспарагин (N), глутамин (Q), серии (S), треонин (Т) и тирозин (Y); или (iv) неполярные боковые цепи: глицин (G), аланин (А), валин (V), лейцин (L), изолейцин (I), пролин (Р), фенилаланин (F), метионин (М), триптофан (W) и цистеин (С).
Любые изменения аминокислот должны сохранять возможность TCR связывать пептид WT1, презентированный молекулами МНС.
Вариантные последовательности могут включать аминокислотные замены, дополнения, делеции и/или вставки. Вариация может быть сконцентрирована в одной или более областях, таких как константные области, линкер или каркасные области α или β-цепей, или они могут быть распределены по всей молекуле TCR.
Консервативные замены, дополнения или делеции могут быть сделаны, например, согласно приведенной ниже таблице. Аминокислоты в одном блоке во втором столбце и предпочтительно в одной строке третьего столбца можно заменить друг другом:
- 32 045443
| АЛИФАТИЧЕСКИЕ | Неполярные | GAP |
| ILV | ||
| Полярные - незаряженные | CSTM | |
| NQ | ||
| Полярные - заряженные | DE | |
| KR | ||
| АРОМАТИЧЕСКИЕ | HFW Y |
Настоящее изобретение также охватывает гомологичную замену (замена и замещение используются в настоящем документе для обозначения обмена существующего аминокислотного остатка на альтернативный остаток), например, равноценную замену, такую как основная на основную, кислотная на кислотную, полярная на полярную и т.д. Негомологичная замена также может присутствовать, например, остатка из одного класса другим или, альтернативно, включающая введение неприродных аминокислот, таких как орнитин.
Термин вариантный при использовании в настоящем документе может означать единицу, обладающую некоторой гомологией с аминокислотной последовательностью дикого типа или нуклеотидной последовательностью дикого типа. Термин гомология может быть приравнен к идентичности.
Вариантная последовательность может включать аминокислотную последовательность, которая может быть по меньшей мере на 50%, 55%, 65%, 75%, 85% или 90% идентичной, предпочтительно по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97% или по меньшей мере на 99% идентичной рассматриваемой последовательности. Как правило, варианты будут включать такие же активные сайты и т.д., как и рассматриваемая аминокислотная последовательность. Хотя гомологию также можно рассматривать с точки зрения подобия (т.е. аминокислотные остатки, обладающие подобными химическими свойствами/функциями), в рамках настоящего изобретения предпочтительно выражать гомологию с точки зрения идентичности последовательности.
Вариантная последовательность может включать нуклеотидную последовательность, которая может быть по меньшей мере на 40%, 45%, 50%, 55%, 65%, 75%, 85% или на 90% идентичной, предпочтительно по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97% или по меньшей мере на 99% идентичной рассматриваемой последовательности. Хотя гомологию также можно рассматривать с точки зрения подобия, в рамках настоящего изобретения предпочтительно выражать гомологию с точки зрения идентичности последовательности.
Предпочтительно, ссылка на последовательность, которая обладает некоторым процентном идентичности с любой из SEQ ID NO, подробно описанных в настоящем документе, относится к последовательности, которая обладает указанным процентом идентичности по всей протяженности указанной SEQ ID NO.
Сравнения идентичности можно проводить визуально или, как обычно практикуют, при помощи доступных программ сравнения последовательностей. Такие коммерчески доступные компьютерные программы могут вычислять процент гомологии или идентичности между двумя или более последовательностями.
Процент гомологии может быть вычислен для непрерывных последовательностей, т.е. одну последовательность выравнивают с другой последовательностью и каждую аминокислоту в одной последовательности непосредственно сравнивают с соответствующей аминокислотой в другой последовательности, один остаток в каждый отдельно взятый момент. Это называют несодержащим пропуски выравниванием. Как правило, такие выравнивания без пропусков выполняют только для относительно небольшого количества остатков.
Хотя это очень простой и надежный метод, он не учитывает, например, что в другой идентичной паре последовательностей одна вставка или делеция в нуклеотидной последовательности может привести к тому, что следующие кодоны выпадут из выравнивания, что потенциально может привести к значительному снижению процента гомологии при глобальном выравнивании. Следовательно, большинство методов сравнения последовательностей предназначены для получения оптимальных выравниваний, учитывающих возможные вставки и делеции, без введения необоснованных штрафов в общий показатель гомологии. Это достигается путем вставки пропусков в выравнивание последовательностей для получения максимально высокой локальной гомологии.
Однако эти более сложные методы назначают штрафы за пропуски для каждого пропуска, возникающего при выравнивании, в результате чего при одинаковом количестве идентичных аминокислот выравнивание последовательностей с как можно меньшим количеством пропусков, отражающее более высокое родство между двумя сравниваемыми последовательностями, будет получать более высокую оценку, чем выравнивание, в котором много пропусков. Обычно используются суммируемые штрафы за пропуск, которые накладывают относительно высокий штраф за присутствие пропуска и меньший штраф за каждый последующий остаток в пропуске. Это наиболее часто используемая система оценки пропусков. Высокие штрафы за пропуски, конечно, приведут к оптимизированным выравниваниям с
- 33 045443 меньшим количеством пропусков. Большинство программ выравнивания позволяют изменять штрафы за пропуски. Однако предпочтительно использовать значения по умолчанию при использовании таких программ для сравнения последовательностей. Например, при использовании пакета GCG Wisconsin Bestfit штраф за пропуск по умолчанию для аминокислотных последовательностей составляет -12 за пропуск и 4 за каждое продолжение пропуска.
Поэтому расчет максимального процента гомологии, во-первых, требует получения оптимального выравнивания с учетом штрафов за пропуски. Подходящей компьютерной программой для проведения такого выравнивания является пакет GCG Wisconsin Bestfit (University of Wisconsin, U.S.A.; Devereux et al. (1984) Nucleic Acids Res. 12: 387). Примеры других программ, которые могут выполнять сравнение последовательностей, включают, без ограничения перечисленным, пакет BLAST (см. Ausubel et al. (1999), там же - Гл. 18), FASTA (Atschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 403-410) и пакет инструментов сравнения GENEWORKS. BLAST и FASTA доступны для поиска в режиме офлайн и онлайн (см. Ausubel et al. (1999), там же, страницы с 7-58 по 7-60). Однако для некоторых приложений предпочтительно использовать программу GCG Bestfit. Другое средство, называемое BLAST 2 Sequence, также доступно для сравнения белковых и нуклеотидных последовательностей (см. FEMS Microbiol. Lett. (1999) 174: 247-50; FEMS Microbiol. Lett. (1999) 177: 187-8).
Хотя конечный процент гомологии может быть измерен в выражении идентичности, сам процесс выравнивания обычно не основан на сравнении пар по принципу все или ничего. Вместо этого обычно используется масштабированная оценочная матрица подобия, которая присваивает баллы каждому парному сравнению на основе химического сходства или эволюционного расстояния. Примером такой широко используемой матрицы является матрица BLOSUM62 - матрица по умолчанию для пакета программ BLAST. В программах GCG Wisconsin обычно используются либо общедоступные значения по умолчанию, либо специализированная таблица сравнения символов, если таковая имеется (см. руководство пользователя для получения дополнительной информации). Для некоторых приложений предпочтительно использовать общедоступные значения по умолчанию для пакета GCG или, в случае другого программного обеспечения, матрицу по умолчанию, такую как BLOSUM62.
После получения программой оптимального выравнивания может быть вычислен процент гомологии, предпочтительно процент идентичности последовательности. Программа обычно выполняет это как часть сравнения последовательностей и генерирует числовой результат.
Фрагменты также являются вариантами, при этом данный термин, как правило, относится к выбранной области полипептида или полинуклеотида, которая представляет интерес функционально или, например, в анализе. Фрагмент, таким образом, относится к аминокислотной последовательности или последовательности нуклеиновой кислоты, которая является частью полноразмерного полипептида или полинуклеотида.
Такие варианты могут быть получены при использовании стандартных технологий рекомбинантных ДНК, таких как сайт-направленный мутагенез. В случае, когда требуется сделать вставки, может быть получена синтетическая ДНК, кодирующая вставку вместе с 5' и 3' фланкирующими областями, соответствующими природной последовательности с любой стороны от участка вставки. Фланкирующие области содержат удобные сайты рестрикции, соответствующие сайтам в природной последовательности, чтобы последовательность можно было разрезать подходящим ферментом(ами) и лигировать синтетическую ДНК в разрез. Затем ДНК экспрессируется в соответствии с изобретением, с получением кодируемого белка. Эти способы являются лишь иллюстративными примерами многочисленных стандартных методик, известных в области манипуляции последовательностями ДНК, и также могут использоваться другие известные методики.
Молекулы главного комплекса гистосовместимости (МНС).
Как правило, TCR-рецепторы связываются с пептидами в качестве части комплекса пептида:МНС.
Молекула МНС может быть молекулой МНС класса I или II. Комплекс может находиться на поверхности антигенпрезентирующей клетки, такой как дендритная клетка или В-клетка или любая другая клетка, включая раковые клетки, или он может быть иммобилизирован, например, путем покрытия сферы или планшета.
Система лейкоцитарных антигенов человека (HLA) является названием комплекса генов, который кодирует главный комплекс гистосовместимости (МНС) у людей и включает антигены HLA I класса (А, В и С) и антигены HLA II класса (DP, DQ и DR).
Аллели HLA А, В и С представляют собой пептиды, получаемые, главным образом, из внутриклеточных белков, например, белков, экспрессируемых в клетке. Это имеет особое значение, так как WT1 является внутриклеточным белком.
В ходе развития Т-клеток in vivo, Т-клетки проходят этап положительного отбора, гарантирующего распознавание своих МНС, с последующим этапом отрицательного отбора для удаления Т-клеток, которые слишком сильно связываются с МНС, которые представляют аутоантигены. В результате некоторые Т-клетки и TCR-рецепторы, которые они экспрессируют, распознают только пептиды, представленные некоторыми типами молекул МНС, т.е. пептиды, кодируемые определенными аллелями HLA. Это известно как HLA рестрикция.
- 34 045443
Одним из представляющих интерес аллелей HLA является HLA-A*0201, который экспрессируется у подавляющего большинства (>50%) представителей европеоидной расы. Соответственно, TCRрецепторы, которые связывают пептиды WT1, презентированные МНС, кодируемыми HLA-A*0201 (т.е.
HLA-A*0201 рестриктированными), предпочтительны, так как иммунотерапия с применением таких
TCR-рецепторов, будет подходить для лечения значительной доли представителей европеоидной расы.
Другими представляющими интерес аллелями HLA-A являются HLA-A*0101, HLA-A*2402, и HLA-A*0301.
Широко экспресирующимися аллелями HLA-B, представляющими интерес, являются HLA-B*3501, HLA-B*0702 и HLA-B*3502.
TCR настоящего изобретения может быть HLA-А*0201-рестриктированным.
В одном аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CGTAWINDYKLSF (SEQ ID NO: 3) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASRKTGGYSNQPQHF (SEQ ID NO: 8) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-A*020 1 -рестриктированным.
В другом аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CVVNLLSNQGGKLIF (SEQ ID NO: 36) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSQDYLVSNEKLFF (SEQ ID NO: 41) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-A*0201 -рестриктированным.
В другом аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAANNARLMF (SEQ ID NO: 92) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSDTRAREQFF (SEQ ID NO: 97) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-A*0201 -рестриктированным.
В другом аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-A*0201 -рестриктированным.
В другом аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASGGRDDKIIF (SEQ ID NO: 214) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSYSRTESTDTQYF (SEQ ID NO: 219) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-A*0201 -рестриктированным.
В другом аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAANNARLMF (SEQ ID NO: 92) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSPGQHGELFF (SEQ ID NO: 271) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-A*0201 -рестриктированным.
В другом аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASATGNQFYF (SEQ ID NO: 266)
- 35 045443 или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSDTRAREQFF (SEQ ID NO: 97) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является
HLA-A*020 1 -рестриктированным.
В другом аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASATGNQFYF (SEQ ID NO: 266) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSPGQHGELFF (SEQ ID NO: 271) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-A*0201 -рестриктированным.
В другом аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-A*0201 -рестриктированным.
В другом аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-A*0201 -рестриктированным.
В другом аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-A*0201 -рестриктированным.
В одном варианте осуществления TCR настоящего изобретения, который является HLA-A*0201рестриктированным, связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В одном аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CGTAWINDYKLSF (SEQ ID NO: 3) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASRKTGGYSNQPQHF (SEQ ID NO: 8) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-А*0201-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CVVNLLSNQGGKLIF (SEQ ID NO: 36) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSQDYLVSNEKLFF (SEQ ID NO: 41) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-А*0201-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
- 36 045443
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAANNARLMF (SEQ ID NO: 92) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSDTRAREQFF (SEQ ID NO: 97) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-A*0201-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-А*0201-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASGGRDDKIIF (SEQ ID NO: 214) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSYSRTESTDTQYF (SEQ ID NO: 219) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-А*0201-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAANNARLMF (SEQ ID NO: 92) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSPGQHGELFF (SEQ ID NO: 271) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-A*0201-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASATGNQFYF (SEQ ID NO: 266) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSDTRAREQFF (SEQ ID NO: 97) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-А*0201-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASATGNQFYF (SEQ ID NO: 266)
- 37 045443 или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSPGQHGELFF (SEQ ID NO: 271) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-А*0201-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-А*0201-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-А*0201-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-А*0201-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
Другим широко экспрессируемым аллелем HLA, представляющим интерес, является HLA-B*3501. TCR настоящего изобретения может быть HLA-B*3501-рестриктированным.
В одном аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASMAGAGSYQLTF (SEQ ID NO: 75) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CAISVGQGALYEQYF (SEQ ID NO: 80) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-В*3501-рестриктированным.
Таким образом, в другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASMAGAGSYQLTF (SEQ ID NO: 75) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CAISVGQGALYEQYF (SEQ ID NO: 80) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-В*3501-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 127) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
- 38 045443
В одном аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASMAGAGSYQLTF (SEQ ID NO: 75) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSVARDRRNYGYTF (SEQ ID NO: 86) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-В*3501-рестриктированным.
Таким образом, в другом аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASMAGAGSYQLTF (SEQ ID NO: 75) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSVARDRRNYGYTF (SEQ ID NO: 86) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-В*3501-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 127) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
Другим широко экспрессируемым аллелем HLA, представляющим интерес, является HLA-B*3502. TCR настоящего изобретения может быть HLA-B*3502-рестриктированным.
В одном аспекте, где TCR настоящего изобретения включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDAYSGNTPLVF (SEQ ID NO: 47) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASRAAGLDTEAFF (SEQ ID NO: 57) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-В*3502-рестриктированным.
Таким образом, в одном аспекте настоящего изобретения предложен TCR, который связывает пептид белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR включает CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDAYSGNTPLVF (SEQ ID NO: 47) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASRAAGLDTEAFF (SEQ ID NO: 57) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, где TCR является HLA-В*3502-рестриктированным, и где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность
EPASQHTLRSG (SEQ ID NO: 123) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
Было продемонстрировано, что Т-клетки, экспрессирующие TCR-рецепторы настоящего изобретения, которые связываются с пептидами WT1, включающими аминокислотную последовательность
EPASQHTLRSG (SEQ ID NO: 123), способны селективно элиминировать опухолевые (ОМЛ) клетки, экспрессирующие аллель HLAВ*3502, см. Пример 4 и фиг. 4с.
В одном аспекте, где TCR настоящего изобретения связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
EPASQHTLRSG (SEQ ID NO: 123) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-В*3502-рестриктированным.
В одном варианте осуществления, где TCR настоящего изобретения связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-A*020 1 -рестриктированным.
В одном варианте осуществления, где TCR настоящего изобретения связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 127) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, TCR является HLA-В*3501-рестриктированным.
Белок опухоли Вильмса 1 (WT1).
- 39 045443
Белок опухоли Вильмса 1 (WT1) - внутриклеточный белок, кодирующий фактор транскрипции с цинк-пальцевым доменом, который играет важную роль в росте и дифференцировке клеток (Yang, L. et al. Leukemia 21, 868-876 (2007)). Он широко экспрессируется на различных гемобластных и солидных опухолях, но при этом демонстрирует ограниченную экспрессию на других тканях (гонады, матка, почка, мезотелий, клетки-предшественники в различных тканях). Последние данные свидетельствуют, что WT1 играет роль в лейкемогенезе и онкогенезе.
WT1 имеет несколько изоформ, некоторые из которых образуются в результате альтернативного сплайсинга мРНК транскриптов, кодирующих WT1. Полная аминокислотная последовательность изоформы WT1 была опубликована ранее (Gessler, М. et al. Nature; 343(6260):774-778; (1990)). Эта конкретная изоформа состоит из 575 аминокислот и включает первые 126 аминокислот на N-конце, которые отсутствуют в экзон 5+ и KTS+ изоформах WT1.
Примерный белок WT1 имеет аминокислотную последовательность, представленную в UniProt J3KNN9.
Другой примерный белок WT1 имеет аминокислотную последовательность, представленную ниже:
SRQRPHPGAI.RNPTACI’LPHFPPSEPPTHSPTHPPRAGTAAQAPGPRRLI.AAII.DF
LLLQDPASTCVPEPASQ1 1TLRSGPGCLQQPEQQGVRDPGGIWAKLGAAEASAERLQGRR SRGASGSEPQQMGSDVRDLNALLPAVPSLGGGGGCALPVSGAAQWAPVLDFAPPGASA YGSLGGPAPPPAPPPPPPPPPHSHKQEPSWGGAEPHEEQCLS AH VH FSGQF I GTAGACR YGPFGPPPPSQASSGQARMFPNAPYLPSCLESQPAlRNQGYSTVTFDGTPSYGHTPSIinA AQFPNHSFKHEDPMGQQGSLGEQQYSVPPPVYGCHTPTDSCTGSQALLLRTFYSSDNLY QMTSQLECMTWNQMNLGATLKGVAAGSSSSVKWTEGQSNHSTGYESDNIITTPILCGA QYR1HTHGVFRG1QDVRRVPGVAPTLVRSASETSEKRPFMCAYPGCNKRYFKLSHLQMH SRKHTGEKPYQCDFKDCERRFSRSDQLKRHQRRH TGVKPFQCKTCQRKFSRSDHLK TH TRT1 1TGKTSEKPFSCRWPSCQKKFARSDELVRU1 IN Ml IQRNMTKLQLAL (SEQ ID NO: 131)
Пептиды WT1.
При использовании в настоящем документе термин пептид относится к множеству аминокислотных остатков, связанных пептидными связями. Как определено в настоящем документе, пептид может состоять из меньше чем приблизительно 30, меньше чем приблизительно 25, меньше чем приблизительно 20, меньше чем 19, меньше чем 18, меньше чем 17, меньше чем 16, меньше чем 15, меньше чем 14, меньше чем 13, меньше чем 12, меньше чем 11, меньше чем 10, меньше чем 9, меньше чем 8, меньше чем 7, меньше чем 6 или меньше чем 5 аминокислотных остатков. Предпочтительно пептид имеет длину приблизительно 5-20 аминокислот, более предпочтительно пептид имеет длину приблизительно 8-15 аминокислотных остатков.
TCR-рецепторы настоящего изобретения связываются с пептидом WT1, когда пептид WT1 презентирован МНС. При использовании в настоящем документе, термин пептид WT1 следует понимать как пептид, включающий аминокислотную последовательность, полученную из белка WT1.
Например, пептид WT1 может включать по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20 или по меньшей мере 25 непрерывных аминокислотных остатков аминокислотной последовательности белка WT1.
Пептид WT1 может включать или состоять из аминокислотной последовательности
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций. Примерами пептидов WT1, включающих аминокислотную последовательность, являются
AAQWAPVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 115) и
APVLDFAPPGASAYG (SEQ ID NO: 116).
Пептид WT1 может включать или состоять из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
QCLSAFTVHFSGQFT (SEQ ID NO: 118),
EDPMGQQGSLGEQQY (SEQ ID NO: 119),
SQLECMTWNQMNLGA (SEQ ID NO: 120) и вариантов SEQ ID NO: 118-120, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
Пептид WT1 может включать или состоять из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
EPASQHTLRSG (SEQ ID NO: 123),
YESDNHTTPIL (SEQ ID NO: 126)
- 40 045443 и вариантов SEQ ID NO: 123 и 126, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций. Примерные пептиды WT1 могут иметь аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
TCVPEPASQHTLRSG (SEQ ID NO: 121),
EPASQHTLRSGPGCL (SEQ ID NO: 122),
HSTGYESDNHTTPIL (SEQ ID NO: 124) и
YESDNHTTPILCGAQ (SEQ ID NO: 125).
Пептид WT1 может включать или состоять из аминокислотной последовательности NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 127) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
Пептид WT1 может включать или состоять из аминокислотной последовательности
NQMNLGATLKG (SEQ ID NO: 250) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций. Примерные пептиды WT1 могут иметь аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
CMTWNQMNLGATLKG (SEQ ID NO: 248) и
NQMNLGATLKGVAAG (SEQ ID NO: 249).
Пептид WT1 может включать или состоять из аминокислотной последовательности
DPGGIWAKLGAAEAS (SEQ ID NO: 251) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
Пептид WT1 может включать или состоять из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 252),
KRHQRRHTGVKPFQC (SEQ ID NO: 253),
PSCQKKFARSDELVR (SEQ ID NO: 254) и вариантов SEQ ID NO: 252, 253 и 254, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
В некоторых вариантах осуществления, для пептидов WT1, которые связываются с молекулами МНС, кодируемыми аллелем HLA-A*0201, может быть предпочтительно, что аминокислоты в положении 2 пептида (т.е. вторая аминокислота от N-конца) являются лейцином или метионином, хотя также могут быть предпочтительными изолейцин, валин, аланин и треонин. Также может быть предпочтительно, что аминокислотой в положении 9 или 10 является валин, лейцин или изолейцин, хотя также могут быть предпочтительными аланин, метионин и треонин. Предпочтительные МНС-связывающие мотивы других аллелей HLA раскрыты в Celis et al. (Molecular Immunology, Vol. 31,8, December 1994, стр. 1423-1430).
В настоящем изобретении предусмотрены различные применения пептидов WT1, описанных в настоящем документе. Например, пептиды WT1, описанные в настоящем документе, можно вводить субъекту, например, человеку, участвующему в исследовании. Введение пептидов WT1 настоящего изобретения может вызывать иммунный ответ против клеток, экспрессирующих или повышенно экспрессирующих белок WT1, т.е. пептиды WT1 являются иммуногенными пептидами WT1.
Таким образом, в другом аспекте настоящего изобретения предложен выделенный иммуногенный пептид WT1, включающий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
EPASQHTLRSG (SEQ ID NO: 123),
YESDNHTTPIL (SEQ ID NO: 126),
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 127),
QCLSAFTVHFSGQFT (SEQ ID NO: 118),
EDPMGQQGSLGEQQY (SEQ ID NO: 119),
SQLECMTWNQMNLGA (SEQ ID NO: 120),
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117),
NQMNLGATLKG (SEQ ID NO: 250),
DPGGIWAKLGAAEAS (SEQ ID NO: 251),
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 252),
KRHQRRHTGVKPFQC (SEQ ID NO: 253),
PSCQKKFARSDELVR (SEQ ID NO: 254) и их вариантов, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
Пептиды WT1, описанные в настоящем документе, например, пептиды WT1, включающие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
EPASQHTLRSG (SEQ ID NO: 123) и
YESDNHTTPIL (SEQ ID NO: 126),
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 127),
QCLSAFTVHFSGQFT (SEQ ID NO: 118),
EDPMGQQGSLGEQQY (SEQ ID NO: 119),
SQLECMTWNQMNLGA (SEQ ID NO: 120),
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117),
NQMNLGATLKG (SEQ ID NO: 250),
- 41 045443
DPGGIWAKLGAAEAS (SEQ ID NO: 251),
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 252),
KRHQRRHTGVKPFQC (SEQ ID NO: 253),
PSCQKKFARSDELVR (SEQ ID NO: 254) и их вариантов, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, могут применяться для скрининга на и/или идентификации новых последовательностей TCR, которые связываются с клетками WT1. Например, клетки Т2 можно сенсибилизировать пептидом WT1, указанным в настоящем изобретении, и инкубировать с популяцией Т-клеток, выделенных у донора. В данном подходе экспрессия цитокинов, например, CD107а и IFNy, может указывать на Т-клетки, которые распознают пептиды WT1.
Таким образом, в одном аспекте настоящего изобретения предложен Т-клеточный рецептор (TCR), который связывается с пептидом белка опухоли Вильмса 1 (WT1), презентированный главным комплексом гистосовместимости (МНС), где пептид WT1 включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
EPASQHTLRSG (SEQ ID NO: 123),
YESDNHTTPIL (SEQ ID NO: 126),
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 127),
QCLSAFTVHFSGQFT (SEQ ID NO: 118),
EDPMGQQGSLGEQQY (SEQ ID NO: 119),
SQLECMTWNQMNLGA (SEQ ID NO: 120),
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117),
NQMNLGATLKG (SEQ ID NO: 250),
DPGGIWAKLGAAEAS (SEQ ID NO: 251),
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 252),
KRHQRRHTGVKPFQC (SEQ ID NO: 253),
PSCQKKFARSDELVR (SEQ ID NO: 254) и их вариантов, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
Последовательности TCR.
Были определены аминокислотные последовательности TCR-рецепторов, которые связываются с пептидами WT1, описанными в настоящем документе. В частности были определены аминокислотные последовательности CDR-областей TCR, которые важны для распознавания и связывания пептида WT1.
Таким образом, в одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CGTAWINDYKLSF (SEQ ID NO: 3) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASRKTGGYSNQPQHF (SEQ ID NO: 8) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
Таким образом, в одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CVVNLLSNQGGKLIF (SEQ ID NO: 36) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSQDYLVSNEKLFF (SEQ ID NO: 41) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
Таким образом, в одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAANNARLMF (SEQ ID NO: 92) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSDTRAREQFF (SEQ ID NO: 97) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
- 42 045443
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид
WT1 презентирован МНС.
Таким образом, в одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVEATDSWGKLQF (SEQ ID NO: 108) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSVGGSGSYNEQFF (SEQ ID NO: 169) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
NQMNLGATLKG (SEQ ID NO: 250) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRTSYDKVIF (SEQ ID NO: 113) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSVGGSGSYNEQFF (SEQ ID NO: 169) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
NQMNLGATLKG (SEQ ID NO: 250) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
Таким образом, в одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASGGRDDKIIF (SEQ ID NO: 214) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSYSRTESTDTQYF (SEQ ID NO: 219) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
В настоящем изобретении также предложен TCR, включающий:
CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRLSGSARQLTF (SEQ ID NO: 14) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLLGDEQYF (SEQ ID NO: 24) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRLSGSARQLTF (SEQ ID NO: 14) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLVALQGAGEQYF (SEQ ID NO: 30) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
- 43 045443
CAYRSLKYGNKLVF (SEQ ID NO: 19) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLLGDEQYF (SEQ ID NO: 24) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций; или
CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAYRSLKYGNKLVF (SEQ ID NO: 19) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLVALQGAGEQYF (SEQ ID NO: 30) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций;
где TCR связывается с презентированным МНС пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из
QCLSAFTVHFSGQFT (SEQ ID NO: 118),
EDPMGQQGSLGEQQY (SEQ ID NO: 119) и
SQLECMTWNQMNLGA (SEQ ID NO: 120) или их вариантов, каждый из которых содержит до трех аминокислотных замен, вставок или делеций.
Таким образом, в одном варианте осуществления предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRLSGSARQLTF (SEQ ID NO: 14) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLLGDEQYF (SEQ ID NO: 24) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
QCLSAFTVHFSGQFT (SEQ ID NO: 118) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
В одном варианте осуществления предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRLSGSARQLTF (SEQ ID NO: 14) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLLGDEQYF (SEQ ID NO: 24) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
EDPMGQQGSLGEQQY (SEQ ID NO: 119) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
В одном варианте осуществления предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRLSGSARQLTF (SEQ ID NO: 14) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLLGDEQYF (SEQ ID NO: 24) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
SQLECMTWNQMNLGA (SEQ ID NO: 120) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
В одном варианте осуществления предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRLSGSARQLTF (SEQ ID NO: 14) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLVALQGAGEQYF (SEQ ID NO: 30) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
QCLSAFTVHFSGQFT (SEQ ID NO: 118) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
- 44 045443
В одном варианте осуществления предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRLSGSARQLTF (SEQ ID NO: 14) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLVALQGAGEQYF (SEQ ID NO: 30) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из
EDPMGQQGSLGEQQY (SEQ ID NO: 119) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
В одном варианте осуществления предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRLSGSARQLTF (SEQ ID NO: 14) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLVALQGAGEQYF (SEQ ID NO: 30) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
SQLECMTWNQMNLGA (SEQ ID NO: 120) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
В одном варианте осуществления предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAYRSLKYGNKLVF (SEQ ID NO: 19) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLLGDEQYF (SEQ ID NO: 24) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
QCLSAFTVHFSGQFT (SEQ ID NO: 118) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
В одном варианте осуществления предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAYRSLKYGNKLVF (SEQ ID NO: 19) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLLGDEQYF (SEQ ID NO: 24) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
EDPMGQQGSLGEQQY (SEQ ID NO: 119) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
В одном варианте осуществления предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAYRSLKYGNKLVF (SEQ ID NO: 19) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLLGDEQYF (SEQ ID NO: 24) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
SQLECMTWNQMNLGA (SEQ ID NO: 120) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
В одном варианте осуществления предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAYRSLKYGNKLVF (SEQ ID NO: 19) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLVALQGAGEQYF (SEQ ID NO: 30)
- 45 045443 или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
QCLSAFTVHFSGQFT (SEQ ID NO: 118) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид
WT1 презентирован МНС.
В одном варианте осуществления предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAYRSLKYGNKLVF (SEQ ID NO: 19) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLVALQGAGEQYF (SEQ ID NO: 30) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
EDPMGQQGSLGEQQY (SEQ ID NO: 119) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
В одном варианте осуществления предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAYRSLKYGNKLVF (SEQ ID NO: 19) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLVALQGAGEQYF (SEQ ID NO: 30) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
SQLECMTWNQMNLGA (SEQ ID NO: 120) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDAYSGNTPLVF (SEQ ID NO: 47) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASRAAGLDTEAFF (SEQ ID NO: 57) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
EPASQHTLRSG (SEQ ID NO: 123) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRAEIYNQGGKLIF (SEQ ID NO: 52) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASTQTPYEQYF (SEQ ID NO: 63) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
YESDNHTTPIL (SEQ ID NO: 126) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRAEIYNQGGKLIF (SEQ ID NO: 52) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSTVGGEDYGYTF (SEQ ID NO: 69) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим или состоящим из аминокислотной последовательности
YESDNHTTPIL (SEQ ID NO: 126) или ее варианта, содержащего до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую амино- 46 045443 кислотную последовательность
CAASMAGAGSYQLTF (SEQ ID NO: 75) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CAISVGQGALYEQYF (SEQ ID NO: 80) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 127) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован MHC.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASMAGAGSYQLTF (SEQ ID NO: 75) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSVARDRRNYGYTF (SEQ ID NO: 86) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 127) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован MHC.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVTVGNKLVF (SEQ ID NO: 175) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASRGWREQFF (SEQ ID NO: 180) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
DPGGIWAKLGAAEAS (SEQ ID NO: 251) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAARSYNTDKLIF (SEQ ID NO: 186) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSWGYQETQYF (SEQ ID NO: 196) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
NHTTPILCGAQYRIH (SEQ ID NO: 252) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASYNNARLMF (SEQ ID NO: 191) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSPTGGEYYGYTF (SEQ ID NO: 202) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
KRHQRRHTGVKPFQC (SEQ ID NO: 253) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASYNNARLMF (SEQ ID NO: 191) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSSYPLRTGRYNSYNSPLHF (SEQ ID NO: 208) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связы- 47 045443 вается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
PSCQKKFARSDELVR (SEQ ID NO: 254) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид
WT1 презентирован МНС.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAANNARLMF (SEQ ID NO: 92) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSPGQHGELFF (SEQ ID NO: 271) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASATGNQFYF (SEQ ID NO: 266) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSDTRAREQFF (SEQ ID NO: 97) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAASATGNQFYF (SEQ ID NO: 266) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSPGQHGELFF (SEQ ID NO: 271) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован МНС.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован MHC.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован MHC.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
- 48 045443
CAVEATDSWGKLQF (SEQ ID NO: 108) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLGLSISQETQYF (SEQ ID NO: 288) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
NQMNLGATLKG (SEQ ID NO: 250) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован MHC.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAVRTSYDKVIF (SEQ ID NO: 113) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CASSLGLSISQETQYF (SEQ ID NO: 288) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
NQMNLGATLKG (SEQ ID NO: 250) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован MHC.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CAERLNTDKLIF (SEQ ID NO: 103) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован MHC.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDSVSGNTIYF (SEQ ID NO: 163) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован MHC.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR, включающий CDR3a, включающую аминокислотную последовательность
CATDGDSSYKLIF (SEQ ID NO: 277) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, и CDR3e, включающую аминокислотную последовательность
CSARDVLTGDYGYTF (SEQ ID NO: 282) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, который связывается с пептидом WT1, включающим аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) или ее вариант, содержащий до трех аминокислотных замен, вставок или делеций, когда пептид WT1 презентирован MHC.
Примеры аминокислотных последовательностей TCR настоящего изобретения приведены в табл. 1.
- 49 045443
Таблица 1
| Цепь Альфа (а) | Область CDRla CDR2a CDR3a Вариабельная Полноразмерная - с константным доменом TRAC | Донор: HD1 Аминокислотная последовательность KALYS LLKGGEQ CGTAWINDYKLSF METLLKVLSGTLLWQLTWVRSQQPVQS PQAVILREGEDAVINCSSSKALYSVHWY RQKHGEAPVFLMILLKGGEQKGHEKISA SFNEKKQQSSLYLTASQLSYSGTYFCGT AWINDYKLSFGAGTTVTVRAN METLLKVLSGTLLWQLTWVRSQQPVQS PQAVILREGEDAVINCSSSKALYSVHWY RQKHGEAPVFLMILLKGGEQKGHEKISA SFNEKKQQSSLYLTASQLSYSGTYFCGT AWINDYKLSFGAGTTVTVRANIQNPDPA VYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQ SKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAV AWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPE SSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFR ILLLKVAGFNLLMTLRLWSS | SEQ ID NO SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 5 |
| Бета (β) | CDRip | SGHDY | SEQ ID NO: 6 |
| CDR2P | FNNNVP | SEQ ID NO: 7 | |
| CDR3P | CASRKTGGYSNQPQHF | SEQ ID NO: 8 | |
| Вариабельная | MGSWTLCCVSLCILVAKHTDAGVIQSPR HEVTEMGQEVTLRCKPISGHDYLFWYR QTMMRGLELLIYFNNNVPIDDSGMPEDR FSAKMPNASFSTLKIQPSEPRDSAVYFCA SRKTGGYSNQPQHFGDGTRLSILE | SEQ ID NO: 9 | |
| Полноразмерная - с константным доменом TRBC1 | MGSWTLCCVSLCILVAKHTDAGVIQSPR HEVTEMGQEVTLRCKPISGHDYLFWYR QTMMRGLELLIYFNNNVPIDDSGMPEDR FSAKMPNASFSTLKIQPSEPRDSAVYFCA SRKTGGYSNQPQHFGDGTRLSILEDLNK VFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLAT GFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQ PLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQN PRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKP VTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLS ATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMV KRKDF | SEQ ID NO: 10 | |
| Полноразмерная - с константным доменом TRBC2 | MGSWTLCCVSLCILVAKHTDAGVIQSPR HEVTEMGQEVTLRCKPISGHDYLFWYR QTMMRGLELLIYFNNNVPIDDSGMPEDR FSAKMPNASFSTLKIQPSEPRDSAVYFCA SRKTGGYSNQPQHFGDGTRLSILEDLKN VFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLAT GFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQ PLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQN PRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKP VTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLS ATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMV KRKDSRG | SEQ ID NO: 11 |
Донор: HD2
| Клонотип | Цепь | Область | Последовательность | SEQ ID NO |
| HD2-1 | Альфа (a) | CDRla | SSVPPY | SEQ ID NO: 12 |
| CDR2a | YTSAATLV | SEQ ID NO: 13 | ||
| CDR3a | CAVRLSGSARQLTF | SEQ ID NO: 14 | ||
| Вариабельный домен | MLLLLVPVLEVIFTLGGTRAQSVT QLGSHVSVSEGALVLLRCNYSSS VPPYLFWYVQYPNQGLQLLLKYT SAATLVKGINGFEAEFKKSETSFH LTKPSAHMSDAAEYFCAVRLSGS ARQLTFGSGTQLTVLPD | SEQ ID NO: 15 |
- 50 045443
| Полноразмерная - с константным доменом TRAC | MLLLLVPVLEVIFTLGGTRAQSVT QLGSHVSVSEGALVLLRCNYSSS VPPYLFWYVQYPNQGLQLLLKYT SAATLVKGINGFEAEFKKSETSFH LTKPSAHMSDAAEYFCAVRLSGS ARQLTFGSGTQLTVLPDIQNPDPA VYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQT NVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSM DFKSNSAVAWSNKSDFACANAFN NSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSF ETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVA GFNLLMTLRLWSS | SEQ ID NO: 16 | ||
| HD2-2 | Альфа (α) | CDRla | TSESDYY | SEQ ID NO: 17 |
| CDR2« | QEAYKQQN | SEQ ID NO: 18 | ||
| CDR3a | CAYRSLKYGNKLVF | SEQ ID NO: 19 | ||
| Вариабельный домен | MACPGFLWALVISTCLEFSMAQT VTQSQPEMSVQEAETVTLSCTYD TSESDYYLFWYKQPPSRQMILVIR QEAYKQQNATENRFSVNFQKAA KSFSLKISDSQLGDAAMYFCAYRS LKYGNKLVFGAGTILRVKSY | SEQ ID NO: 20 | ||
| Полноразмерная - с константным доменом TRAC | MACPGFLWALVISTCLEFSMAQT VTQSQPEMSVQEAETVTLSCTYD TSESDYYLFWYKQPPSRQMILVIR QEAYKQQNATENRFSVNFQKAA KSFSLKISDSQLGDAAMYFCAYRS LKYGNKLVFGAGTILRVKSYIQNP DPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDF DSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLD MRSMDFKSNSAVAWSNKSDFAC ANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVK LVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRIL LLKVAGFNLLMTLRLWSS | SEQ ID NO: 21 | ||
| Ηϋ2-1β | Бета (β) | CDRip | SGHAT | SEQ ID NO: 22 |
| CDR2p | FQNNGV | SEQ ID NO: 23 | ||
| CDR3P | CASSLLGDEQYF | SEQ ID NO: 24 | ||
| Вариабельный домен | MGTRLLCWAALCLLGAELTEAG VAQSPRYKIIEKRQSVAFWCNPIS GHATLYWYQQILGQGPKLLIQFQ NNGVVDDSQLPKDRFSAERLKGV DSTLKIQPAKLEDSAVYLCASSLL GDEQYFGPGTRLTVTE | SEQ ID NO: 25 |
- 51 045443
| Полноразмерная - с константным доменом TRBC1 | MGTRLLCWAALCLLGAELTEAG VAQSPRYKIIEKRQSVAFWCNPIS GHATLYWYQQILGQGPKLLIQFQ NNGVVDDSQLPKDRFSAERLKGV DSTLKIQPAKLEDSAVYLCASSLL GDEQYFGPGTRLTVTEDLNKVFP PEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCL ATGFFPDHVELSWWVNGKEVHS GVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSS RLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFY GLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAE AWGRADCGFTSVSYQQGVLSATI LYEILLGKATLYAVLVSALVLMA MVKRKDF | SEQ ID NO: 26 | ||
| Полноразмерная - с константным доменом TRBC2 | MGTRLLCWAALCLLGAELTEAG VAQSPRYKIIEKRQSVAFWCNPIS GHATLYWYQQILGQGPKLLIQFQ NNGVVDDSQLPKDRFSAERLKGV DSTLKIQPAKLEDSAVYLCASSLL GDEQYFGPGTRLTVTEDLKNVFP PEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCL ATGFYPDHVELSWWVNGKEVHS GVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSS RLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFY GLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAE AWGRADCGFTSESYQQGVLSATI LYEILLGKATLYAVLVSALVLMA MVKRKDSRG | SEQ ID NO: 27 | ||
| Ηϋ2-2β | Бета (β) | CDRip | SGHTA | SEQ ID NO: 28 |
| CDR2P | FQGNSA | SEQ ID NO: 29 | ||
| CDR3p | CASSLVALQGAGEQYF | SEQ ID NO: 30 | ||
| Вариабельный домен | MGTRLLFWVAFCLLGADHTGAG VSQSPSNKVTEKGKDVELRCDPIS GHTALYWYRQSLGQGLEFLIYFQ GNSAPDKSGLPSDRFSAERTGGSV STLTIQRTQQEDSAVYLCASSLVA LQGAGEQYFGPGTRLTVTE | SEQ ID NO: 31 |
| Полноразмерная - с константным доменом TRBC1 | MGTRLLFWVAFCLLGADHTGAG VSQSPSNKVTEKGKDVELRCDPIS GHTALYWYRQSLGQGLEFLIYFQ GNSAPDKSGLPSDRFSAERTGGSV STLTIQRTQQEDSAVYLCASSLVA LQGAGEQYFGPGTRLTVTEDLNK VFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATL VCLATGFFPDHVELSWWVNGKE VHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRY CLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQ VQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQI VSAEAWGRADCGFTSVSYQQGV LSATILYEILLGKATLYAVLVSAL VLMAMVKRKDF | SEQ ID NO: 32 | ||
| Полноразмерная - с константным доменом TRBC2 | MGTRLLFWVAFCLLGADHTGAG VSQSPSNKVTEKGKDVELRCDPIS GHTALYWYRQSLGQGLEFLIYFQ GNSAPDKSGLPSDRFSAERTGGSV STLTIQRTQQEDSAVYLCASSLVA LQGAGEQYFGPGTRLTVTEDLKN VFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATL VCLATGFYPDHVELSWWVNGKE VHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRY CLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQ VQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQI VSAEAWGRADCGFTSESYQQGVL SATILYEILLGKATLYAVLVSALV LMAMVKRKDSRG | SEQ ID NO: 33 |
- 52 045443
Донор: HD3
| Цепь | Тип | Последовательность | SEQ ID NO |
| Альфа («) | CDRla | NSASQS | SEQ ID NO: 34 |
| CDR2a | VYSSGN | SEQ ID NO: 35 | |
| CDR3a | CVVNLLSNQGGKLIF | SEQ ID NO: 36 | |
| Вариабельный домен | MISLRVLLVILWLQLSWVWSQRKEVEQDPG PFNVPEGATVAFNCTYSNSASQSFFWYRQD CRKEPKLLMSVYSSGNEDGRFTAQLNRASQ YISLLIRDSKLSDSATYLCVVNLLSNQGGKLI FGQGTELSVKPN | SEQ ID NO: 37 | |
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRAC | MISLRVLLVILWLQLSWVWSQRKEVEQDPG PFNVPEGATVAFNCTYSNSASQSFFWYRQD CRKEPKLLMSVYSSGNEDGRFTAQLNRASQ YISLLIRDSKLSDSATYLCVVNLLSNQGGKLI FGQGTELSVKPNIQNPDPAVYQLRDSKSSDK SVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLD MRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSI IPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQ NLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS | SEQ ID NO: 38 | |
| Бета (β) | CDRip | LGHNA | SEQ ID NO: 39 |
| CDR2P | YSLEER | SEQ ID NO: 40 | |
| CDR3P | CASSQDYLVSNEKLFF | SEQ ID NO: 41 | |
| Вариабельный домен | MGCRLLCCAVLCLLGAGELVPMETGVTQTP RHLVMGMTNKKSLKCEQHLGHNAMYWYK QSAKKPLELMFVYSLEERVENNSVPSRFSPE CPNSSHLFLHLHTLQPEDSALYLCASSQDYL VSNEKLFFGSGTQLSVLE | SEQ ID NO: 42 | |
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MGCRLLCCAVLCLLGAGELVPMETGVTQTP RHLVMGMTNKKSLKCEQHLGHNAMYWYK QSAKKPLELMFVYSLEERVENNSVPSRFSPE CPNSSHLFLHLHTLQPEDSALYLCASSQDYL VSNEKLFFGSGTQLSVLEDLNKVFPPEVAVF EPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSW WVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYC LSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSE NDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTS VSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSAL VLMAMVKRKDF | SEQ ID NO: 43 | |
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MGCRLLCCAVLCLLGAGELVPMETGVTQTP RHLVMGMTNKKSLKCEQHLGHNAMYWYK QSAKKPLELMFVYSLEERVENNSVPSRFSPE CPNSSHLFLHLHTLQPEDSALYLCASSQDYL VSNEKLFFGSGTQLSVLEDLKNVFPPEVAVF EPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSW WVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYC LSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSE NDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTS ESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSAL VLMAMVKRKDSRG | SEQ ID NO: 44 |
- 53 045443
Донор: HD4
| Клоноти п | Цепь | Область | Последовательность | SEQ ID NO |
| HD-K1 | Alpha (а) | CDRla | TSINN | SEQ ID NO: 45 |
| CDR2a | IRSNERE | SEQ ID NO: 46 | ||
| CDR3a | CATDAYSGNTPLVF | SEQ ID NO: 47 | ||
| Вариабельный домен | METLLGVSLVILWLQLARVNSQQ GEEDPQALSIQEGENATMNCSYKT SINNLQWYRQNSGRGLVHLILIRS NEREKHSGRLRVTLDTSKKSSSLLI TASRAADTASYFCATDAYSGNTPL VFGKGTRLSVIAN | SEQ ID NO: 48 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRAC | METLLGVSLVILWLQLARVNSQQ GEEDPQALSIQEGENATMNCSYKT SINNLQW YRQNS GRGLVHLILIRS NEREKHSGRLRVTLDTSKKSSSLLI TASRAADTASYFCATDAYSGNTPL VFGKGTRLSVIANIQNPDPAVYQL RDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQ SKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKS NSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIP EDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDT NLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLL MTLRLWSS | SEQ ID NO: 49 | ||
| HD-C2 | Альфа («) | CDRla | DSAIYN | SEQ ID NO: 50 |
| CDR2a | IQSSQRE | SEQ ID NO: 51 | ||
| CDR3a | CAVRAEIYNQGGKLIF | SEQ ID NO: 52 | ||
| Вариабельный домен | METLLGLLILWLQLQWVSSKQEV TQIPAALSVPEGENLVLNCSFTDSA IYNLQWFRQDPGKGLTSLLLIQS S QREQTSGRLNASLDKSSGRSTLYI AASQPGDSATYLCAVRAEIYNQG GKLIFGQGTELSVKPN | SEQ ID NO: 53 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRAC | METLLGLLILWLQLQWVSSKQEV TQIPAALSVPEGENLVLNCSFTDSA IYNLQWFRQDPGKGLTSLLLIQS S QREQTSGRLNASLDKSSGRSTLYI AASQPGDSATYLCAVRAEIYNQG GKLIFGQGTELSVKPNIQNPDPAV YQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTN VSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMD FKSNSAVAWSNKSDFACANAFNN SIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFE TDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGF NLLMTLRLWSS | SEQ ID NO: 54 | ||
| HD-K1 | Бета (β) | CDRip | MNHNS | SEQ ID NO: 55 |
| CDR2p | SASEGT | SEQ ID NO: 56 | ||
| CDR3P | CASRAAGLDTEAFF | SEQ ID NO: 57 | ||
| Вариабельный домен | MSIGLLCCVAFSLLWASPVNAGVT QTPKFQVLKTGQSMTLQCAQDMN HNSMYWYRQDPGMGLRLIYYSAS EGTTDKGEVPNGYNVSRLNKREFS LRLESAAPSQTSVYFCASRAAGLD TEAFFGQGTRLTVVE | SEQ ID NO: 58 |
- 54 045443
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MSIGLLCCVAFSLLWASPVNAGVT QTPKFQVLKTGQSMTLQCAQDMN HNSMYWYRQDPGMGLRLIYYSAS EGTTDKGEVPNGYNVSRLNKREFS LRLESAAPSQTSVYFCASRAAGLD TEAFFGQGTRLTVVEDLNKVFPPE VAVFEPSEAEISHTQKATLVCLAT GFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVS TDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLR VSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLS ENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWG RADCGFTSVSYQQGVLSATILYEIL LGKATLYAVLVSALVLMAMVKR KDF | SEQ ID NO: 59 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MSIGLLCCVAFSLLWASPVNAGVT QTPKFQVLKTGQSMTLQCAQDMN HNSMYWYRQDPGMGLRLIYYSAS EGTTDKGEVPNGYNVSRLNKREFS LRLESAAPSQTSVYFCASRAAGLD TEAFFGQGTRLTVVEDLKNVFPPE VAVFEPSEAEISHTQKATLVCLAT GFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVS TDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLR VSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLS ENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWG RADCGFTSESYQQGVLSATILYEIL LGKATLYAVLVSALVLMAMVKR KDSRG | SEQ ID NO: 60 | ||
| HD4—2 | Бета (β) | CDRip | MNHNY | SEQ ID NO: 61 |
| CDR2P | SVGAGI | SEQ ID NO: 62 | ||
| CDR3P | CASTQTPYEQYF | SEQ ID NO: 63 | ||
| Вариабельный домен | MSISLLCCAAFPLLWAGPVNAGVT QTPKFRILKIGQSMTLQCTQDMNH NYMYWYRQDPGMGLKLIYYSVG AGITDKGEVPNGYNVSRSTTEDFP LRLELAAPSQTSVYFCASTQTPYE QYFGPGTRLTVTE | SEQ ID NO: 64 |
- 55 045443
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MSISLLCCAAFPLLWAGPVNAGVT QTPKFRILKIGQSMTLQCTQDMNH NYMYWYRQDPGMGLKLIYYSVG AGITDKGEVPNGYNVSRSTTEDFP LRLELAAPSQTSVYFCASTQTPYE QYFGPGTRLTVTEDLNKVFPPEVA VFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFF PDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDP QPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSA TFWQNPRNHFRCQVQFYGLSEND EWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRAD CGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGK ATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF | SEQ ID NO: 65 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MSISLLCCAAFPLLWAGPVNAGVT QTPKFRILKIGQSMTLQCTQDMNH NYMYWYRQDPGMGLKLIYYSVG AGITDKGEVPNGYNVSRSTTEDFP LRLELAAPSQTSVYFCASTQTPYE QYFGPGTRLTVTEDLKNVFPPEVA VFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFY PDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDP QPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSA TFWQNPRNHFRCQVQFYGLSEND EWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRAD CGFTSESYQQGVLSATILYEILLGK ATLYAVLVSALVLMAMVKRKDS RG | SEQ ID NO: 66 |
| HD4—3 | Бета (β) | CDRip | SGHNS | SEQ ID NO: 67 |
| CDRip | FNNNVP | SEQ ID NO: 68 | ||
| CDR3P | CASSTVGGEDYGYTF | SEQ ID NO: 69 | ||
| Вариабельный домен | MDSWTFCCVSLCILVAKHTDAGVI QSPRHEVTEMGQEVTLRCKPISGH NSLFWYRQTMMRGLELLIYFNNN VPIDDSGMPEDRFSAKMPNASFST LKIQPSEPRDSAVYFCASSTVGGE DYGYTFGSGTRLTVVE | SEQ ID NO: 70 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MDSWTFCCVSLCILVAKHTDAGVI QSPRHEVTEMGQEVTLRCKPISGH NSLFWYRQTMMRGLELLIYFNNN VPIDDSGMPEDRFSAKMPNASFST LKIQPSEPRDSAVYFCASSTVGGE DYGYTFGSGTRLTVVEDLNKVFPP EVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLA TGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGV STDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRL RVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGL SENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAW GRADCGFTSVSYQQGVLSATILYE ILLGKATLYAVLVSALVLMAMVK RKDF | SEQ ID NO: 71 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MDSWTFCCVSLCILVAKHTDAGVI QSPRHEVTEMGQEVTLRCKPISGH NSLFWYRQTMMRGLELLIYFNNN VPIDDSGMPEDRFSAKMPNASFST LKIQPSEPRDSAVYFCASSTVGGE DYGYTFGSGTRLTVVEDLKNVFPP EVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLA TGFYPDHVELSWWVNGKEVHSG VSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSR LRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYG LSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEA WGRADCGFTSESYQQGVLSATILY EILLGKATLYAVLVSALVLMAMV KRKDSRG | SEQ ID NO: 72 |
- 56 045443
Донор: HD5
| Клоноти п | Цепь | Область | Последовательность | SEQ ID NO |
| HD5-1 | Альфа (а) | CDRla | DSASNY | SEQ ID NO: 73 |
| CDR2a | IRSNVGE | SEQ ID NO: 74 | ||
| CDR3a | CAASMAGAGSYQLTF | SEQ ID NO: 75 | ||
| Вариабельный домен | MTSIRAVFIFLWLQLDLVNGENVE QHPSTLSVQEGDSAVIKCTYSDSA SNYFPWYKQELGKRPQLIIDIRSNV GEKKDQRIAVTLNKTAKHFSLHIT ETQPEDSAVYFCAASMAGAGSYQ LTFGKGTKLSVIPN | SEQ ID NO: 76 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRAC | MTSIRAVFIFLWLQLDLVNGENVE QHPSTLSVQEGDSAVIKCTYSDSA SNYFPWYKQELGKRPQLIIDIRSNV GEKKDQRIAVTLNKTAKHFSLHIT ETQPEDSAVYFCAASMAGAGSYQ LTFGKGTKLSVIPNIQNPDPAVYQL RDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQ SKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKS NSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIP EDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDT NLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLL MTLRLWSS | SEQ ID NO: 77 | ||
| HD5-1 | Бета (β) | CDRip | ENHRY | SEQ ID NO: 78 |
| CDR2P | SYGVKD | SEQ ID NO: 79 | ||
| CDR3P | CAISVGQGALYEQYF | SEQ ID NO: 80 | ||
| Вариабельный домен | MGTRLFFYVALCLLWTGHMDAGI TQSPRHKVTETGTPVTLRCHQTEN HRYMYWYRQDPGHGLRLIHYSYG VKDTDKGEVSDGYSVSRSKTEDFL LTLESATSSQTSVYFCAISVGQGAL YEQYFGPGTRLTVTE | SEQ ID NO: 81 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MGTRLFFYVALCLLWTGHMDAGI TQSPRHKVTETGTPVTLRCHQTEN HRYMYWYRQDPGHGLRLIHYSYG VKDTDKGEVSDGYSVSRSKTEDFL LTLESATSSQTSVYFCAISVGQGAL YEQYFGPGTRLTVTEDLNKVFPPE VAVFEPSEAEISHTQKATLVCLAT GFFPDH VELS WW VNGKE VHS GVS TDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLR VSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLS ENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWG RADCGFTSVSYQQGVLSATILYEIL LGKATLYAVLVSALVLMAMVKR KDF | SEQ ID NO: 82 |
- 57 045443
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MGTRLFFYVALCLLWTGHMDAGI TQSPRHKVTETGTPVTLRCHQTEN HRYMYWYRQDPGHGLRLIHYSYG VKDTDKGEVSDGYSVSRSKTEDFL LTLESATSSQTSVYFCAISVGQGAL YEQYFGPGTRLTVTEDLKNVFPPE VAVFEPSEAEISHTQKATLVCLAT GFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVS TDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLR VSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLS ENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWG RADCGFTSESYQQGVLSATILYEIL LGKATLYAVLVSALVLMAMVKR KDSRG | SEQ ID NO: 83 | ||
| HD5-2 | Бета (β) | CDRip | SGDLS | SEQ ID NO: 84 |
| CDR2P | YYNGEE | SEQ ID NO: 85 | ||
| CDR3P | CASSVARDRRNYGYTF | SEQ ID NO: 86 | ||
| Вариабельный домен | MGFRLLCCVAFCLLGAGPVDSGV TQTPKHLITATGQRVTLRCSPRSG DLSVYWYQQSLDQGLQFLIQYYN GEERAKGNILERFSAQQFPDLHSE LNLSSLELGDSALYFCASSVARDR RNYGYTFGSGTRLTVVE | SEQ ID NO: 87 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MGFRLLCCVAFCLLGAGPVDSGV TQTPKHLITATGQRVTLRCSPRSG DLSVYWYQQSLDQGLQFLIQYYN GEERAKGNILERFSAQQFPDLHSE LNLSSLELGDSALYFCASSVARDR RNYGYTFGSGTRLTVVEDLNKVFP PEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLA TGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGV STDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRL RVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGL SENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAW GRADCGFTSVSYQQGVLSATILYE ILLGKATLYAVLVSALVLMAMVK RKDF | SEQ ID NO: 88 |
| Полноразмерн ая - c константным доменом TRBC2 | MGFRLLCCVAFCLLGAGPVDSGV TQTPKHLITATGQRVTLRCSPRSG DLSVYWYQQSLDQGLQFLIQYYN GEERAKGNILERFSAQQFPDLHSE LNLSSLELGDSALYFCASSVARDR RNYGYTFGSGTRLTVVEDLKNVFP PEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLA TGFYPDHVELSWWVNGKEVHSG VSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSR LRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYG LSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEA WGRADCGFTSESYQQGVLSATILY EILLGKATLYAVLVSALVLMAMV KRKDSRG | SEQ ID NO: 89 |
- 58 045443
Донор: HD6
| Клоноти п | Цепь | Область | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO |
| HD6-1 | Альфа («) | CDRla | NSMFDY | SEQ ID NO: 90 |
| CDR2a | ISSIKDK | SEQ ID NO: 91 | ||
| CDR3a | CAANNARLMF | SEQ ID NO: 92 | ||
| Вариабельный домен | MAMLLGASVLILWLQPDWVNSQ QKNDDQQVKQNSPSLSVQEGRIS ILNCDYTNSMFDYFLWYKKYPA EGPTFLISISSIKDKNEDGRFTVFL NKSAKHLSLHIVPSQPGDSAVYF CAANNARLMFGDGTQLVVKPN | SEQ ID NO: 93 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRAC | MAMLLGASVLILWLQPDWVNSQ QKNDDQQVKQNSPSLSVQEGRIS ILNCDYTNSMFDYFLWYKKYPA EGPTFLIS IS SIKDKNEDGRFTVFL NKSAKHLSLHIVPSQPGDSAVYF CAANNARLMFGDGTQLVVKPNI QNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLF TDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKT VLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSD FACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSC DVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVI GFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS | SEQ ID NO: 94 | ||
| HD6-2 | Альфа («) | CDRla | NSMFDY | SEQ ID NO: 264 |
| CDR2a | ISSIKDK | SEQ ID NO: 265 | ||
| CDR3a | CAASATGNQFYF | SEQ ID NO: 266 | ||
| Вариабельный домен | MAMLLGASVLILWLQPDWVNSQ QKNDDQQVKQNSPSLSVQEGRIS ILNCDYTNSMFDYFLWYKKYPA EGPTFLISISSIKDKNEDGRFTVFL NKSAKHLSLHIVPSQPGDSAVYF CAASATGNQFYFGTGTSLTVIPN | SEQ ID NO: 267 |
- 59 045443
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRAC | MAMLLGASVLILWLQPDWVNSQ QKNDDQQVKQNSPSLSVQEGRIS ILNCDYTNSMFDYFLWYKKYPA EGPTFLISISSIKDKNEDGRFTVFL NKSAKHLSLHIVPSQPGDSAVYF CAASATGNQFYFGTGTSLTVIPNI QNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLF TDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKT VLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSD FACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSC DVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVI GFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS | SEQ ID NO: 268 | ||
| HD6-1 | Бета (β) | CDRip | SGHNS | SEQ ID NO: 95 |
| CDR2P | FNNNVP | SEQ ID NO: 96 | ||
| CDR3P | CASSDTRAREQFF | SEQ ID NO: 97 | ||
| Вариабельный домен | MDSWTFCCVSLCILVAKHTDAG VIQSPRHEVTEMGQEVTLRCKPIS GHNSLFWYRQTMMRGLELLIYF NNNVPIDDSGMPEDRFSAKMPNA SFSTLKIQPSEPRDSAVYFCASSD TRAREQFFGPGTRLTVLE | SEQ ID NO: 98 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MDSWTFCCVSLCILVAKHTDAG VIQSPRHEVTEMGQEVTLRCKPIS GHNSLFWYRQTMMRGLELLIYF NNNVPIDDSGMPEDRFSAKMPNA SFSTLKIQPSEPRDSAVYFCASSD TRAREQFFGPGTRLTVLEDLNKV FPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLV CLATGFFPDHVELSWWVNGKEV HSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYC LSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQV QFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIV SAEAWGRADCGFTSVSYQQGVL SATILYEILLGKATLYAVLVSALV LMAMVKRKDF | SEQ ID NO: 99 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MDSWTFCCVSLCILVAKHTDAG VIQSPRHEVTEMGQEVTLRCKPIS GHNSLFWYRQTMMRGLELLIYF NNNVPIDDSGMPEDRFSAKMPNA SFSTLKIQPSEPRDSAVYFCASSD TRAREQFFGPGTRLTVLEDLKNV FPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLV CLATGFYPDHVELSWWVNGKEV HSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYC LSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQV QFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIV SAEAWGRADCGFTSESYQQGVL SATILYEILLGKATLYAVLVSALV LMAMVKRKDSRG | SEQ ID NO: 100 | ||
- 60 045443
| HD6-2 | Бета (β) | CDRip | SGHRS | SEQ ID NO: 269 |
| CDR2P | YFSETQ | SEQ ID NO: 270 | ||
| CDR3P | CASSPGQHGELFF | SEQ ID NO: 271 | ||
| Вариабельный домен | MGSRLLCWVLLCLLGAGPVKAG VTQTPRYLIKTRGQQVTLSCSPIS GHRSVSWYQQTPGQGLQFLFEYF SETQRNKGNFPGRFSGRQFSNSRS EMNVSTLELGDSALYLCASSPGQ HGELFFGEGSRLTVLE | SEQ ID NO: 272 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MGSRLLCWVLLCLLGAGPVKAG VTQTPRYLIKTRGQQVTLSCSPIS GHRSVSWYQQTPGQGLQFLFEYF SETQRNKGNFPGRFSGRQFSNSRS EMNVSTLELGDSALYLCASSPGQ HGELFFGEGSRLTVLEDLNKVFPP EVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLA TGFFPDHVELSWWVNGKEVHSG VSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSS RLRVSATFWQNPRNHFRCQVQF YGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSA EAWGRADCGFTSVSYQQGVLSA TILYEILLGKATLYAVLVSALVL MAMVKRKDF | SEQ ID NO: 273 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MGSRLLCWVLLCLLGAGPVKAG VTQTPRYLIKTRGQQVTLSCSPIS GHRSVSWYQQTPGQGLQFLFEYF SETQRNKGNFPGRFSGRQFSNSRS EMNVSTLELGDSALYLCASSPGQ HGELFFGEGSRLTVLEDLKNVFPP EVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLA TGFYPDHVELSWWVNGKEVHSG VSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSS RLRVSATFWQNPRNHFRCQVQF YGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSA EAWGRADCGFTSESYQQGVLSA TILYEILLGKATLYAVLVSALVL MAMVKRKDSRG | SEQ ID NO: 274 |
Донор: HD7
| Клоноти π | Цепь | Область | Последовательность | SEQ ID NO |
| HD7-1 | Альфа («) | CDRla | DSSSTY | SEQ ID NO: 101 |
| CDR2a | IFSNMDM | SEQ ID NO: 102 | ||
| CDR3a | CAERLNTDKLIF | SEQ ID NO: 103 |
- 61 045443
| Вариабельный домен | MKTFAGFSFLFLWLQLDCMSRGE DVEQSLFLSVREGDSSVINCTYTD SSSTYLYWYKQEPGAGLQLLTYI FSNMDMKQDQRLTVLLNKKDKH LSLRIADTQTGDSAIYFCAERLNT DKLIFGTGTRLQVFPN | SEQ ID NO: 104 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRAC | MKTFAGFSFLFLWLQLDCMSRGE DVEQSLFLSVREGDSSVINCTYTD S S S T YLYW YKQEPG AGLQLLT YI FSNMDMKQDQRLTVLLNKKDKH LSLRIADTQTGDSAIYFCAERLNT DKLIFGTGTRLQVFPNIQNPDPAV YQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQT NVSQSKDSDVYITDKTVLDMRS MDFKSNSAVAWSNKSDFACANA FNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVE KSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLL KVAGFNLLMTLRLWSS | SEQ ID NO: 105 | ||
| HD7-2 | Альфа (α) | CDRla | DSVNN | SEQ ID NO: 106 |
| CDR2a | IPSGT | SEQ ID NO: 107 | ||
| CDR3a | CAVEATDSWGKLQF | SEQ ID NO: 108 | ||
| Вариабельный домен | MKRILGALLGLLSAQVCCVRGIQ VEQSPPDLILQEGANSTLRCNFSD SVNNLQWFHQNPWGQLINLFYIP SGTKQNGRLSATTVATERYSLLY ISSSQTTDSGVYFCAVEATDSWG KLQFGAGTQVVVTPD | SEQ ID NO: 109 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRAC | MKRILGALLGLLSAQVCCVRGIQ VEQSPPDLILQEGANSTLRCNFSD SVNNLQWFHQNPWGQLINLFYIP SGTKQNGRLSATTVATERYSLLY ISSSQTTDSGVYFCAVEATDSWG KLQFGAGTQVVVTPDIQNPDPAV YQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQT NVSQSKDSDVYITDKTVLDMRS MDFKSNSAVAWSNKSDFACANA FNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVE KSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLL KVAGFNLLMTLRLWS S | SEQ ID NO: 110 | ||
| HD7-3 | Альфа («) | CDRla | DSASNY | SEQ ID NO: 111 |
| CDR2a | IRSNVGE | SEQ ID NO: 112 | ||
| CDR3a | CAVRTSYDKVIF | SEQ ID NO: 113 |
- 62 045443
| Вариабельный домен | MTSIRAVFIFLWLQLDLVNGENV EQHPSTLSVQEGDSAVIKCTYSDS ASNYFPWYKQELGKRPQLIIDIRS NVGEKKDQRIAVTLNKTAKHFSL HITETQPEDSAVYFCAVRTSYDK VIFGPGTSLSVIPN | SEQ ID NO: 114 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRAC | MTSIRAVFIFLWLQLDLVNGENV EQHPSTLSVQEGDSAVIKCTYSDS ASNYFPWYKQELGKRPQLIIDIRS NVGEKKDQRIAVTLNKTAKHFSL HITETQPEDSAVYFCAVRTSYDK VIFGPGTSLSVIPNIQNPDPAVYQL RDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVS QSKDSDVYITDKTVLDMRSMDF KSNSAVAWSNKSDFACANAFNN SIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSF ETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVA GFNLLMTLRLWSS | SEQ ID NO: 160 | ||
| HD7-4 | Альфа («) | CDRla | TSINN | SEQ ID NO: 275 |
| CDR2a | IRSNERE | SEQ ID NO: 276 | ||
| CDR3a | CATDGDSSYKLIF | SEQ ID NO: 277 | ||
| Вариабельный домен | METLLGVSLVILWLQLARVNSQQ GEEDPQALSIQEGENATMNCSYK TSINNLQWYRQNSGRGLVHLILIR SNEREKHSGRLRVTLDTSKKSSSL LITASRAADTASYFCATDGDSSY KLIFGSGTRLLVRPD | SEQ ID NO: 278 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRAC | METLLGVSLVILWLQLARVNSQQ GEEDPQALSIQEGENATMNCSYK TSINNLQW YRQNS GRGLVHLILIR SNEREKHSGRLRVTLDTSKKSSSL LITASRAADTASYFCATDGDSSY KLIFGSGTRLLVRPDIQNPDPAVY QLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTN VSQSKDSDVYITDKTVLDMRSM DFKSNSAVAWSNKSDFACANAF NNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEK SFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLK VAGFNLLMTLRLWSS | SEQ ID NO: 279 | ||
| HD7-1 | Бета (β) | CDRip | DFQATT | SEQ ID NO: 161 |
| CDR2p | SNEGSKA | SEQ ID NO: 162 | ||
| CDR3P | CSARDSVSGNTIYF | SEQ ID NO: 163 |
- 63 045443
| Вариабельный домен | MLLLLLLLGPGISLLLPGSLAGSG LGAVVSQHPSWVICKSGTSVKIE CRSLDFQATTMFWYRQFPKQSL MLMATSNEGSKATYEQGVEKDK FLINHASLTLSTLTVTSAHPEDSSF YICSARDSVSGNTIYFGEGSWLTV VE | SEQ ID NO: 164 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MLLLLLLLGPGISLLLPGSLAGSG LGAVVSQHPSWVICKSGTSVKIE CRSLDFQATTMFWYRQFPKQSL MLMATSNEGSKATYEQGVEKDK FLINHASLTLSTLTVTSAHPEDSSF YICSARDSVSGNTIYFGEGSWLTV VEDLNKVFPPEVAVFEPSEAEISH TQKATLVCLATGFFPDHVELSW WVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQP ALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNP RNHFRCQVQFYGLSENDEWTQD RAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTS VSYQQGVLSATILYEILLGKATLY AVLVSALVLMAMVKRKDF | SEQ ID NO: 165 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MLLLLLLLGPGISLLLPGSLAGSG LGAVVSQHPSWVICKSGTSVKIE CRSLDFQATTMFWYRQFPKQSL MLMATSNEGSKATYEQGVEKDK FLINHASLTLSTLTVTSAHPEDSSF YICSARDSVSGNTIYFGEGSWLTV VEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISH TQKATLVCLATGFYPDHVELSW WVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQP ALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNP RNHFRCQVQFYGLSENDEWTQD RAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTS ESYQQGVLSATILYEILLGKATLY AVLVSALVLMAMVKRKDSRG | SEQ ID NO: 166 | ||
| HD7-2 | Бета (β) | CDRip | SQVTM | SEQ ID NO: 167 |
| CDR2P | ANQGSEA | SEQ ID NO: 168 | ||
| CDR3P | CSVGGSGSYNEQFF | SEQ ID NO: 169 | ||
| Вариабельный домен | MLSLLLLLLGLGSVFSAVISQKPS RDICQRGTSLTIQCQVDSQVTMM FWYRQQPGQSLTLIAT ANQGSEA TYESGFVIDKFPISRPNLTFSTLTV SNMSPEDSSIYLCSVGGSGSYNEQ FFGPGTRLTVLE | SEQ ID NO: 170 |
- 64 045443
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MLSLLLLLLGLGSVFSAVISQKPS RDICQRGTSLTIQCQVDSQVTMM FWYRQQPGQSLTLIATANQGSEA TYESGFVIDKFPISRPNLTFSTLTV SNMSPEDSSIYLCSVGGSGSYNEQ FFGPGTRLTVLEDLNKVFPPEVA VFEPSEAEISHTQKATLVCLATGF FPDHVELSWWVNGKEVHSGVST DPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLR VSATFWQNPRNHFRCQVQFYGL SENDEWTQDRAKPVTQIVSAEA WGRADCGFTSVSYQQGVLSATIL YEILLGKATLYAVLVSALVLMA MVKRKDF | SEQ ID NO: 171 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MLSLLLLLLGLGSVFSAVISQKPS RDICQRGTSLTIQCQVDSQVTMM FWYRQQPGQSLTLIATANQGSEA TYESGFVIDKFPISRPNLTFSTLTV SNMSPEDSSIYLCSVGGSGSYNEQ FFGPGTRLTVLEDLKNVFPPEVA VFEPSEAEISHTQKATLVCLATGF YPDHVELSWWVNGKEVHSGVST DPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLR VSATFWQNPRNHFRCQVQFYGL SENDEWTQDRAKPVTQIVSAEA WGRADCGFTSESYQQGVLSATIL YEILLGKATLYAVLVSALVLMA MVKRKDSRG | SEQ ID NO: 172 | ||
| HD7-3 | Бета (β) | CDRip | DFQATT | SEQ ID NO: 280 |
| CDR2p | SNEGSKA | SEQ ID NO: 281 | ||
| CDR3P | CSARDVLTGDYGYTF | SEQ ID NO: 282 | ||
| Вариабельный домен | MLLLLLLLGPGISLLLPGSLAGSG LGAVVSQHPSWVICKSGTSVKIE CRSLDFQATTMFWYRQFPKQSL MLMATSNEGSKATYEQGVEKDK FLINHASLTLSTLTVTSAHPEDSSF YICSARDVLTGDYGYTFGSGTRL TVV | SEQ ID NO: 283 |
- 65 045443
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MLLLLLLLGPGISLLLPGSLAGSG LGAVVSQHPSWVICKSGTSVKIE CRSLDFQATTMFWYRQFPKQSL MLMATSNEGSKATYEQGVEKDK FLINHASLTLSTLTVTSAHPEDSSF YICSARDVLTGDYGYTFGSGTRL TVVEDLNKVFPPEVAVFEPSEAEI SHTQKATLVCLATGFFPDHVELS WWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQ PALNDSRYCLSSRLRVSATFWQN PRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQ DRAKPVTQIVSAEAWGRADCGF TSVSYQQGVLSATILYEILLGKAT LYAVLVSALVLMAMVKRKDF | SEQ ID NO: 284 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MLLLLLLLGPGISLLLPGSLAGSG LGAVVSQHPSWVICKSGTSVKIE CRSLDFQATTMFWYRQFPKQSL MLMATSNEGSKATYEQGVEKDK FLINHASLTLSTLTVTSAHPEDSSF YICSARDVLTGDYGYTFGSGTRL TVVEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEI SHTQKATLVCLATGFYPDHVELS WWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQ PALNDSRYCLSSRLRVSATFWQN PRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQ DRAKPVTQIVSAEAWGRADCGF TSES YQQGVLSATILYEILLG KAT LYAVLVSALVLMAMVKRKDSRG | SEQ ID NO: 285 | ||
| HD7-4 | Бета (β) | CDRip | SGHDY | SEQ ID NO: 286 |
| CDR2p | FNNNVP | SEQ ID NO: 287 | ||
| CDR3P | CASSLGLSISQETQYF | SEQ ID NO: 288 | ||
| Вариабельный домен | MGSWTLCCVSLCILVAKHTDAG VIQSPRHEVTEMGQEVTLRCKPIS GHDYLFWYRQTMMRGLELLIYF NNNVPIDDSGMPEDRFSAKMPNA SFSTLKIQPSEPRDSAVYFCASSL GLSISQETQYFGPGTRLLVLE | SEQ ID NO: 289 |
| Полноразмерн ая - c константным доменом TRBC1 | MGSWTLCCVSLCILVAKHTDAG VIQSPRHEVTEMGQEVTLRCKPIS GHDYLFWYRQTMMRGLELLIYF NNNVPIDDSGMPEDRFSAKMPNA SFSTLKIQPSEPRDSAVYFCASSL GLSISQETQYFGPGTRLLVLEDLN KVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKAT LVCLATGFFPDHVELSWWVNGK EVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSR YCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRC QVQFYGLSENDEWTQDRAKPVT QIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQ GVLSATILYEILLGKATLYAVLVS ALVLMAMVKRKDF | SEQ ID NO: 290 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MGSWTLCCVSLCILVAKHTDAG VIQSPRHEVTEMGQEVTLRCKPIS GHDYLFWYRQTMMRGLELLIYF NNNVPIDDSGMPEDRFSAKMPNA SFSTLKIQPSEPRDSAVYFCASSL GLSISQETQYFGPGTRLLVLEDLK NVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKAT LVCLATGFYPDHVELSWWVNGK EVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSR YCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRC QVQFYGLSENDEWTQDRAKPVT QIVSAEAWGRADCGFTSESYQQG VLSATILYEILLGKATLYAVLVSA LVLMAMVKRKDSRG | SEQ ID NO: 291 |
- 66 045443
Донор: HD8
| Цепь | Область | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO |
| Альфа («) | CDRla | VGISA | SEQ ID NO: 173 |
| CDR2a | LSSGK | SEQ ID NO: 174 | |
| CDR3a | CAVTVGNKLVF | SEQ ID NO: 175 | |
| Вариабельный домен | MVKIRQFLLAILWLQLSCVSAAKNEVEQSP QNLTAQEGEFITINCSYSVGISALHWLQQHP GGGIVSLFMLSSGKKKHGRLIATINIQEKHS SLHITASHPRDSAVYICAVTVGNKLVFGAG TILRVKSY | SEQ ID NO: 176 | |
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRAC | MVKIRQFLLAILWLQLSCVSAAKNEVEQSP QNLTAQEGEFITINCSYSVGISALHWLQQHP GGGIVSLFMLSSGKKKHGRLIATINIQEKHS SLHITASHPRDSAVYICAVTVGNKLVFGAG TILRVKSYIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCL FTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRS MDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPE DTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNL SVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS | SEQ ID NO: 177 | |
| Бета (β) | CDRip | MNHNS | SEQ ID NO: 178 |
| CDR2P | SASEGT | SEQ ID NO: 179 | |
| CDR3P | CASRGWREQFF | SEQ ID NO: 180 | |
| Вариабельный домен | MSIGLLCCVAFSLLWASPVNAGVTQTPKFQ VLKTGQSMTLQCAQDMNHNSMYWYRQDP GMGLRLIYYSASEGTTDKGEVPNGYNVSRL NKREFSLRLESAAPSQTSVYFCASRGWREQ FFGPGTRLTVLE | SEQ ID NO: 181 | |
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MSIGLLCCVAFSLLWASPVNAGVTQTPKFQ VLKTGQSMTLQCAQDMNHNSMYWYRQDP GMGLRLIYYSASEGTTDKGEVPNGYNVSRL NKREFSLRLESAAPSQTSVYFCASRGWREQ FFGPGTRLTVLEDLNKVFPPEVAVFEPSEAE ISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNG KEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSR LRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDE WTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVS YQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALV LMAMVKRKDF | SEQ ID NO: 182 | |
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MSIGLLCCVAFSLLWASPVNAGVTQTPKFQ VLKTGQSMTLQCAQDMNHNSMYWYRQDP GMGLRLIYYSASEGTTDKGEVPNGYNVSRL NKREFSLRLESAAPSQTSVYFCASRGWREQ FFGPGTRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAE ISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNG KEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSR LRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDE WTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSES YQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALV LMAMVKRKDSRG | SEQ ID NO: 183 |
Донор: HD9
| Клоноти π | Цепь | Область | Последовательность | SEQ ID NO |
| HD9-1 | Альфа (a) | CDRla | VGISA | SEQ ID NO: 184 |
| CDR2a | LSSGK | SEQ ID NO: 185 | ||
| CDR3a | CAARSYNTDKLIF | SEQ ID NO: 186 | ||
| Вариабельный домен | MVKIRQFLLAILWLQLSCVSAA KNEVEQSPQNLTAQEGEFITINC SYSVGISALHWLQQHPGGGIVSL FMLSSGKKKHGRLIATINIQEKH SSLHITASHPRDSAVYICAARSY NTDKLIFGTGTRLQVFPN | SEQ ID NO: 187 |
- 67 045443
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRAC | MVKIRQFLLAILWLQLSCVSAA KNEVEQSPQNLTAQEGEFITINC SYSVGISALHWLQQHPGGGIVSL FMLSSGKKKHGRLIATINIQEKH SSLHITASHPRDSAVYICAARSY NTDKLIFGTGTRLQVFPNIQNPD PAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDF DSQTNVSQSKDSDVYITDKTVL DMRSMDFKSNSAVAWSNKSDF ACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSC DVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVI GFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS | SEQ ID NO: 188 | ||
| HD9-2 | Альфа («) | CDRla | NSMFDY | SEQ ID NO: 189 |
| CDR2a | ISSIKDK | SEQ ID NO: 190 | ||
| CDR3a | CAASYNNARLMF | SEQ ID NO: 191 | ||
| Вариабельный домен | MAMLLGASVLILWLQPDWVNS QQKNDDQQVKQNSPSLSVQEGR ISILNCDYTNSMFDYFLWYKKY PAEGPTFLISISSIKDKNEDGRFT VFLNKSAKHLSLHIVPSQPGDSA VYFCAASYNNARLMFGDGTQL VVKPN | SEQ ID NO: 192 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRAC | MAMLLGASVLILWLQPDWVNS QQKNDDQQVKQNSPSLSVQEGR ISILNCDYTNSMFDYFLWYKKY PAEGPTFLISISSIKDKNEDGRFT VFLNKSAKHLSLHIVPSQPGDSA VYFCAASYNNARLMFGDGTQL VVKPNIQNPDPAVYQLRDSKSS DKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDS DVYITDKTVLDMRSMDFKSNSA VAWSNKSDFACANAFNNSIIPED TFFPSPESSCDVKLVEKSFETDT NLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFN LLMTLRLWSS | SEQ ID NO: 193 | ||
| HD9-1 | Бета (β) | CDRlβ | SGHTS | SEQ ID NO: 194 |
| ΟϋΚ2β | YDEGEE | SEQ ID NO: 195 | ||
| CDRЗβ | CASSWGYQETQYF | SEQ ID NO: 196 | ||
| Вариабельный домен | MGPRLLFWALLCLLGTGPVEAG VTQSPTHLIKTRGQQATLRCSPIS GHTSVYWYQQALGLGLQFLLW YDEGEERNRGNFPPRFSGRQFPN YSSELNVNALELEDSALYLCASS WGYQETQYFGPGTRLLVLE | SEQ ID NO: 197 |
- 68 045443
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MGPRLLFWALLCLLGTGPVEAG VTQSPTHLIKTRGQQATLRCSPIS GHTSVYWYQQALGLGLQFLLW YDEGEERNRGNFPPRFSGRQFPN YSSELNVNALELEDSALYLCASS WGYQETQYFGPGTRLLVLEDLN KVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKA TLVCLATGFFPDHVELSWWVNG KEVHSGVSTDPQPLKEQPALND SRYCLSSRLRVSATFWQNPRNH FRCQVQFYGLSENDEWTQDRA KPVTQIVSAEAWGRADCGFTSV SYQQGVLSATILYEILLGKATLY AVLVSALVLMAMVKRKDF | SEQ ID NO: 198 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MGPRLLFWALLCLLGTGPVEAG VTQSPTHLIKTRGQQATLRCSPIS GHTSVYWYQQALGLGLQFLLW YDEGEERNRGNFPPRFSGRQFPN YSSELNVNALELEDSALYLCASS WGYQETQYFGPGTRLLVLEDLK NVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKA TLVCLATGFYPDHVELSWWVN GKEVHSGVSTDPQPLKEQPALN DSRYCLSSRLRVSATFWQNPRN HFRCQVQFYGLSENDEWTQDR AKPVTQIVSAEAWGRADCGFTS ESYQQGVLSATILYEILLGKATL YAVLVSALVLMAMVKRKDSRG | SEQ ID NO: 199 | ||
| HD9-2 | Бета (β) | CDR^ | KGHSH | SEQ ID NO: 200 |
| €ϋΗ2β | LQKENI | SEQ ID NO: 201 | ||
| ΟϋΗ3β | CASSPTGGEYYGYTF | SEQ ID NO: 202 | ||
| Вариабельный домен | MDTRVLCCAVICLLGAGLSNAG VMQNPRHLVRRRGQEARLRCSP MKGHSHVYWYRQLPEEGLKFM VYLQKENIIDESGMPKERFSAEF PKEGPSILRIQQVVRGDSAAYFC ASSPTGGEYYGYTFGSGTRLTV VE | SEQ ID NO: 203 |
- 69 045443
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC1 | MDTRVLCCAVICLLGAGLSNAG VMQNPRHLVRRRGQEARLRCSP MKGHSHVYWYRQLPEEGLKFM VYLQKENIIDESGMPKERFSAEF PKEGPSILRIQQVVRGDSAAYFC ASSPTGGEYYGYTFGSGTRLTV VEDLNKVFPPEVAVFEPSEAEIS HTQKATLVCLATGFFPDHVELS WWVNGKEVHSGVSTDPQPLKE QPALNDSRYCLSSRLRVSATFW QNPRNHFRCQVQFYGLSENDEW TQDRAKPVTQIVSAEAWGRADC GFTSVSYQQGVLSATILYEILLG KATLYAVLVSALVLMAMVKRK DF | SEQ ID NO: 204 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MDTRVLCCAVICLLGAGLSNAG VMQNPRHLVRRRGQEARLRCSP MKGHSHVYWYRQLPEEGLKFM VYLQKENIIDESGMPKERFSAEF PKEGPSILRIQQVVRGDSAAYFC ASSPTGGEYYGYTFGSGTRLTV VEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEIS HTQKATLVCLATGFYPDHVELS WWVNGKEVHSGVSTDPQPLKE QPALNDSRYCLSSRLRVSATFW QNPRNHFRCQVQFYGLSENDEW TQDRAKPVTQIVSAEAWGRADC GFTSESYQQGVLSATILYEILLG KATLYAVLVSALVLMAMVKRK DSRG | SEQ ID NO: 205 | ||
| HD9-3 | Бета (β) | CDRip | MNHEY | SEQ ID NO: 206 |
| CDR2P | SVGAGI | SEQ ID NO: 207 | ||
| CDR3P | CASSSYPLRTGRYNSYNSPLHF | SEQ ID NO: 208 | ||
| Вариабельный домен | MSIGLLCCAALSLLWAGPVNAG VTQTPKFQVLKTGQSMTLQCAQ DMNHEYMSWYRQDPGMGLRLI HYSVGAGITDQGEVPNGYNVSR STTEDFPLRLLSAAPSQTSVYFC ASSSYPLRTGRYNSYNSPLHFGN GTRLTVTE | SEQ ID NO: 209 |
- 70 045443
| Полноразмерн ая- с константным доменом TRBC1 | MSIGLLCCAALSLLWAGPVNAG VTQTPKFQVLKTGQSMTLQCAQ DMNHEYMSWYRQDPGMGLRLI HYSVGAGITDQGEVPNGYNVSR STTEDFPLRLLSAAPSQTSVYFC ASSSYPLRTGRYNSYNSPLHFGN GTRLTVTEDLNKVFPPEVAVFEP SEAEISHTQKATLVCLATGFFPD HVELSWWVNGKEVHSGVSTDP QPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVS ATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSE NDEWTQDRAKPVTQIVSAEAW GRADCGFTSVSYQQGVLSATIL YEILLGKATLYAVLVSALVLMA MVKRKDF | SEQ ID NO: 210 | ||
| Полноразмерн ая - с константным доменом TRBC2 | MSIGLLCCAALSLLWAGPVNAG VTQTPKFQVLKTGQSMTLQCAQ DMNHEYMSWYRQDPGMGLRLI HYSVGAGITDQGEVPNGYNVSR STTEDFPLRLLSAAPSQTSVYFC ASSSYPLRTGRYNSYNSPLHFGN GTRLTVTEDLKNVFPPEVAVFEP SEAEISHTQKATLVCLATGFYPD HVELSWWVNGKEVHSGVSTDP QPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVS ATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSE NDEWTQDRAKPVTQIVSAEAW GRADCGFTSESYQQGVLSATILY EILLGKATLYAVLVSALVLMAM VKRKDSRG | SEQ ID NO: 211 |
Донор: HD10
| Цепь | Область | Аминокислотная последовательность | SEQ ID NO |
| Альфа (α) | CDRla | NSMFDY | SEQ ID NO: 212 |
| CDR2a | ISSIKDK | SEQ ID NO: 213 | |
| CDR3a | CAASGGRDDKIIF | SEQ ЮНО: 214 | |
| Вариабельный домен | MAMLLGASVLILWLQPDWVNSQQKNDD QQVKQNSPSLSVQEGRISILNCDYTNSMF DYFLWYKKYPAEGPTFLISISSIKDKNEDG RFTVFLNKSAKHLSLHIVPSQPGDSAVYF CAASGGRDDKIIFGKGTRLHILPN | SEQ ЮНО: 215 | |
| Полноразмерна я - с константным доменом TRAC | MAMLLGASVLILWLQPDWVNSQQKNDD QQVKQNSPSLSVQEGRISILNCDYTNSMF DYFLWYKKYPAEGPTFLISISSIKDKNEDG RFTVFLNKSAKHLSLHIVPSQPGDSAVYF C AAS GGRDDKIIFGKGTRLHILPNIQNPDP AVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQ SKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVA WSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESS CDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILL LKVAGFNLLMTLRLWSS | SEQ ЮНО: 216 | |
- 71 045443
| Бета (β) | CDRip | MNHEY | SEQ ID NO: 217 |
| CDR2P | SVGAGI | SEQ ID NO: 218 | |
| CDR3P | CASSYSRTESTDTQYF | SEQ ID NO: 219 | |
| Вариабельный домен | MSIGLLCCAALSLLWAGPVNAGVTQTPK FQVLKTGQSMTLQCAQDMNHEYMSWYR QDPGMGLRLIHYSVGAGITDQGEVPNGY NVSRSTTEDFPLRLLSAAPSQTSVYFCASS YSRTESTDTQYFGPGTRLTVLE | SEQ ID NO: 220 | |
| Полноразмерна я - с константным доменом TRBC1 | MSIGLLCCAALSLLWAGPVNAGVTQTPK FQVLKTGQSMTLQCAQDMNHEYMSWYR QDPGMGLRLIHYSVGAGITDQGEVPNGY NVSRSTTEDFPLRLLSAAPSQTSVYFCASS YSRTESTDTQYFGPGTRLTVLEDLNKVFP PEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFP DHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQ PALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFR CQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSA EAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEIL LGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF | SEQ ID NO: 221 | |
| Полноразмерна я - с константным доменом TRBC2 | MSIGLLCCAALSLLWAGPVNAGVTQTPK FQVLKTGQSMTLQCAQDMNHEYMSWYR QDPGMGLRLIHYSVGAGITDQGEVPNGY NVSRSTTEDFPLRLLSAAPSQTSVYFCASS YSRTESTDTQYFGPGTRLTVLEDLKNVFP PEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYP DHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQ PALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFR CQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSA EAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEIL LGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRG | SEQ ID NO: 222 |
Таким образом, в настоящем изобретении предложены выделенные полипептиды, включающие одну или более аминокислотных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1114 и 160-222, их фрагменты, варианты и гомологи.
В одном аспекте изобретения предложен TCR, включающий последовательность альфа-цепи TCR, выбранные из группы, состоящей из последовательностей альфа-цепи HD1-HD10 в табл. 1, и последовательность бета-цепи TCR, независимо выбранную из группы, состоящей из последовательностей бетацепи HD1-HD10 в табл. 1.
Уменьшение ошибочного спаривания и повышение экспрессии TCR.
TCR согласно изобретению может экспрессироваться в Т-клетке с изменением антигенной специфичности Т-клетки. TCR-трансдуцированные Т-клетки могут экспрессировать по меньшей мере две альфа-цепи TCR и две бета-цепи TCR. Хотя эндогенные альфа/бета-цепи TCR формируют рецептор, который является аутотолерантным, введенные альфы/бета-цепи TCR формируют рецептор с определенной специфичностью в отношении данного антигена-мишени.
Однако TCR-генотерапия требует достаточной экспрессии перенесенных TCR-рецепторов. Перенесенный TCR может быть разбавлен присутствием эндогенного TCR, что приводит к недостаточной экспрессии опухолеспецифичного TCR. Кроме того, может происходить ошибочное спаривание между эндогенными и введенными цепями с образованием новых рецепторов, которые могут проявлять неожиданную специфичность в отношении аутоантигенов и вызывать аутоиммунное повреждение при переносе пациентам.
Следовательно, исследовали несколько стратегий для снижения риска ошибочного спаривания между эндогенными и введенными цепями TCR. Мутации в альфа/бета-интерфейсе TCR являются одной из стратегий, используемых в настоящее время для уменьшения нежелательного ошибочного спаривания. Например, введение цистеина в константные домены альфа и бета-цепи позволяет образовывать дисульфидную связь и улучшает спаривание введенных цепей, уменьшая при этом ошибочное спаривание с цепями дикого типа.
Таким образом, TCR-рецепторы настоящего изобретения могут включать одну или более мутаций в области соединения α-цепи/β-цепи, такие, что при экспрессии α-цепи и β-цепи в Т-клетке частота ошибочного спаривания между указанными цепями и эндогенными α и β-цепями TCR снижается. В одном варианте осуществления одна или более мутаций вводят остаток цистеина в домен константной области каждой α-цепи и β-цепи, где остатки цистеина способны образовывать дисульфидную связь между αцепью и β-цепью.
Другая стратегия уменьшения ошибочного спаривания основана на введении полинуклеотидных последовательностей, кодирующих миРНК, добавляемых к генам, кодирующим опухолеспецифичные α и или β-цепи TCR, и созданных с возможностью ограничивать экспрессию эндогенных генов TCR (Okamoto S. Cancer research 69, 9003-9011,2009).
- 72 045443
Таким образом, вектор или полинуклеотид, кодирующий TCR-рецепторы настоящего изобретения, может включать один или более миРНК или других средств, направленных на ограничение или устранение экспрессии эндогенных генов TCR.
Также можно комбинировать искусственные нуклеазы, такие как цинк-пальцевые нуклеазы (ZFN), подобные активаторам транскрипции эффекторные нуклеазы (TALEN) или CRISPR/Cas системы, предназначенные для адресного воздействия на константные области эндогенных генов, например генов TCR (TRAC и/или TRBC), с получением постоянного прерывания эндогенных генов альфа и/или бета-цепи TCR, обеспечивая в результате полную экспрессию опухолеспецифичного TCR и, таким образом, уменьшая или устраняя риск ошибочного спаривания TCR. Этот процесс, известный как редактирование гена TCR, превзошел перенос гена TCR in vitro и in vivo (Provasi E., Genovese P., Nature Medicine May; 18(5):807-15; 2012).
Таким образом, TCR-рецепторы настоящего изобретения могут применяться для редактирования специфичности Т-клеток путем прерывания TCR и генетического введения опухолеспецифичного TCR.
Кроме того, технология редактирования генома обеспечивает возможность направленной интеграции кассеты экспрессии, содержащей полинуклеотид, кодирующий TCR настоящего изобретения, и, необязательно, одну или более промоторных областей и/или другие последовательности контроля экспрессии, в эндогенный ген, прерванный с помощью искусственных нуклеаз (Lombardo A., Nature biotechnology 25, 1298-1306; 2007).
Таким образом, TCR-рецепторы настоящего изобретения могут применяться для редактирования специфичности Т-клеток путем направленной интеграции полинуклеотида, кодирующего TCR настоящего изобретения, в геномную область. Интеграция может направляться искусственной нуклеазой.
Другая стратегия, разработанная для повышения экспрессии перенесенного TCR и уменьшения ошибочного спаривания TCR, заключается в муринизации, при которой заменяют человеческие TCR α и TCR β константные области (например, области TRAC, TRBC1 и TRBC2) их мышиными аналогами. Муринизация константных областей TCR описана, например, в публикации Sommermeyer and Uckert, J Immunol; 2010 (184:6223-6231). Таким образом, TCR-рецепторы настоящего изобретения могут быть муринизированными.
Выделенный полинуклеотид.
Настоящее изобретение относится к выделенному полинуклеотиду, кодирующему TCR рецептор изобретения или его часть, такую как α-цепь и/или β-цепь, вариабельный домен или его часть.
Выделенный полинуклеотид может быть двухцепочечным или одноцепочечным и может быть РНК или ДНК.
Специалисту будет очевидно, что множество различных полинуклеотидов могут кодировать один и тот же полипептид в результате вырожденности генетического кода. Кроме того, следует понимать, что специалист при использовании стандартных методов сумеет сделать замены, вставки или делеции нуклеотидов, которые не повлияют на полипептидную последовательность, кодируемую полинуклеотидами согласно изобретению, отражая использование кодонов какого-либо конкретного организма-хозяина, в котором требуется экспрессировать полипептиды согласно изобретению.
Полинуклеотиды, описанные в настоящем документе, могут быть модифицированы с помощью любого способа, доступного в уровне техники. Такие модификации могут быть выполнены с целью повышения активности in vivo или продолжительность действия полинуклеотидов изобретения.
Полинуклеотиды, такие как ДНК полинуклеотиды, могут быть получены рекомбинантно, искусственно или любыми способами, доступными специалистам в данной области. Они могут быть также клонированы стандартными методами.
Более протяженные полинуклеотиды обычно получают с применением рекомбинантных способов, например, при использовании технологий клонирования методом полимеразной цепной реакции (PCR). Это включает получение пары праймеров (например, длиной приблизительно 15-30 нуклеотидов), фланкирующих целевую последовательность, которую требуется клонировать, приведение праймеров в контакт с мРНК или кДНК полученной из клетки животного или клетки человека, проведение полимеразной цепной реакции при условиях, которые вызывают амплификацию нужной области, выделение амплифицированного фрагмента (например, путем очистки реакционной смеси из агарозного геля) и получение амплифицированной ДНК. Могут быть созданы праймеры, содержащие подходящие сайты рестрикции, чтобы амплифицированную ДНК можно было клонировать в подходящий вектор.
Примеры нуклеотидных последовательностей, кодирующих TCR-рецепторы согласно настоящему изобретению, приведены в табл. 2.
- 73 045443
Таблица 2
| Донор | Цепь | Нуклеотидная последовательность | SEQ ID NO |
| HD1 | а (с TRAC) | ATGGAGACTCTCCTGAAAGTGCTTTCAGGCA CCTTGTTGTGGCAGTTGACCTGGGTGAGAAG CCAACAACCAGTGCAGAGTCCTCAAGCCGTG ATCCTCCGAGAAGGGGAAGATGCTGTCATCA ACTGCAGTTCCTCCAAGGCTTTATATTCTGTA CACTGGTACAGGCAGAAGCATGGTGAAGCAC CCGTCTTCCTGATGATATTACTGAAGGGTGGA GAACAGAAGGGTCATGAAAAAATATCTGCTT CATTTAATGAAAAAAAGCAGCAAAGCTCCCT GTACCTTACGGCCTCCCAGCTCAGTTACTCAG GAACCTACTTCTGCGGCACAGCTTGGATTAA CGACTACAAGCTCAGCTTTGGAGCCGGAACC ACAGTAACTGTAAGAGCAAATATCCAGAACC CTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTC TAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCA CCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAA AGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACA AAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTT CAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAAC AAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAA CAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCC CCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCT GGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAAC CTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTT CCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTA ATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGC | SEQ ID NO: 132 |
| β (с TRBC1) | ATGGGCTCCTGGACCCTCTGCTGTGTGTCCCT TTGCATCCTGGTAGCAAAGCACACAGATGCT GGAGTTATCCAGTCACCCCGGCACGAGGTGA CAGAGATGGGACAAGAAGTGACTCTGAGATG TAAACCAATTTCAGGACACGACTACCTTTTCT GGTACAGACAGACCATGATGCGGGGACTGGA GTTGCTCATTTACTTTAACAACAACGTTCCGA TAGATGATTCAGGGATGCCCGAGGATCGATT CTCAGCTAAGATGCCTAATGCATCATTCTCCA CTCTGAAGATCCAGCCCTCAGAACCCAGGGA CTCAGCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAGAAAA ACCGGGGGATATAGCAATCAGCCCCAGCATT TTGGTGATGGGACTCGACTCTCCATCCTAGAG GACCTGAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCG CTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTC | SEQ ID NO: 133 |
- 74 045443
| CCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTG GCCACAGGCTTCTTCCCCGACCACGTGGAGC TGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCA CAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTC AAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGAT ACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGC CACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCC GCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGA GAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAA ACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCC TGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGG TGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACC ATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCA CCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTG TTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTC | |||
| β (c TRBC2) | ATGGGCTCCTGGACCCTCTGCTGTGTGTCCCT TTGCATCCTGGTAGCAAAGCACACAGATGCT GGAGTTATCCAGTCACCCCGGCACGAGGTGA CAGAGATGGGACAAGAAGTGACTCTGAGATG TAAACCAATTTCAGGACACGACTACCTTTTCT GGTACAGACAGACCATGATGCGGGGACTGGA GTTGCTCATTTACTTTAACAACAACGTTCCGA TAGATGATTCAGGGATGCCCGAGGATCGATT CTCAGCTAAGATGCCTAATGCATCATTCTCCA CTCTGAAGATCCAGCCCTCAGAACCCAGGGA CTCAGCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAGAAAA ACCGGGGGATATAGCAATCAGCCCCAGCATT TTGGTGATGGGACTCGACTCTCCATCCTAGAG GACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCG CTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTC CCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTG GCCACAGGCTTCTACCCCGACCACGTGGAGC TGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCA CAGTGGGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTC AAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGAT ACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGC CACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCC GCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGA GAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAA ACCTGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCC TGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTCACCTCCG AGTCTTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCAC CATCCTCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCC ACCTTGTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGT GCTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTCC AGAGGC | SEQ ID NO: 134 | |
| HD2 1 | а (с TRAC) | ATGCTCCTGCTGCTCGTCCCAGTGCTCGAGGT GATTTTTACCCTGGGAGGAACCAGAGCCCAG TCGGTGACCCAGCTTGGCAGCCACGTCTCTGT CTCTGAAGGAGCCCTGGTTCTGCTGAGGTGC AACTACTCATCGTCTGTTCCACCATATCTCTT | SEQ ID NO: 135 |
- 75 045443
| CTGGTATGTGCAATACCCCAACCAAGGACTC CAGCTTCTCCTGAAGTACACATCAGCGGCCA CCCTGGTTAAAGGCATCAACGGTTTTGAGGC TGAATTTAAGAAGAGTGAAACCTCCTTCCAC CTGACGAAACCCTCAGCCCATATGAGCGACG CGGCTGAGTACTTCTGTGCTGTGAGATTATCT GGTTCTGCAAGGCAACTGACCTTTGGATCTG GGACACAATTGACTGTTTTACCTGATATCCAG AACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAG ACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTA TTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTC ACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACA GACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGG ACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAG CAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCC TTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCT TCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTC AAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATA CGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATT GGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCG GGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGG TCCAGC | |||
| β (c TRBC1) | ATGGGCACCAGGCTCCTCTGCTGGGCGGCCC TCTGTCTCCTGGGAGCAGAACTCACAGAAGC TGGAGTTGCCCAGTCTCCCAGATATAAGATT ATAGAGAAAAGGCAGAGTGTGGCTTTTTGGT GCAATCCTATATCTGGCCATGCTACCCTTTAC TGGTACCAGCAGATCCTGGGACAGGGCCCAA AGCTTCTGATTCAGTTTCAGAATAACGGTGTA GTGGATGATTCACAGTTGCCTAAGGATCGAT TTTCTGCAGAGAGGCTCAAAGGAGTAGACTC CACTCTCAAGATCCAGCCTGCAAAGCTTGAG GACTCGGCCGTGTATCTCTGTGCCAGCAGCTT ACTGGGAGACGAGCAGTACTTCGGGCCGGGC ACCAGGCTCACGGTCACAGAGGACCTGAACA AGGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAG CCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAA AGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTT CTTCCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGG GTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCA GCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCC CGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGC AGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGC AGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGT CCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAG TGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCC AGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGC AGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGC AAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAG ATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTG TGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATG GTCAAGAGAAAGGATTTC | SEQ ID NO: 136 |
- 76 045443
| β (c TRBC2) | ATGGGCACCAGGCTCCTCTGCTGGGCGGCCC TCTGTCTCCTGGGAGCAGAACTCACAGAAGC TGGAGTTGCCCAGTCTCCCAGATATAAGATT ATAGAGAAAAGGCAGAGTGTGGCTTTTTGGT GCAATCCTATATCTGGCCATGCTACCCTTTAC TGGTACCAGCAGATCCTGGGACAGGGCCCAA AGCTTCTGATTCAGTTTCAGAATAACGGTGTA GTGGATGATTCACAGTTGCCTAAGGATCGAT TTTCTGCAGAGAGGCTCAAAGGAGTAGACTC CACTCTCAAGATCCAGCCTGCAAAGCTTGAG GACTCGGCCGTGTATCTCTGTGCCAGCAGCTT ACTGGGAGACGAGCAGTACTTCGGGCCGGGC ACCAGGCTCACGGTCACAGAGGACCTGAAAA ACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAG CCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAA AGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTT CTACCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGG GTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCA GCACAGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCC CGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGC AGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGC AGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGT CCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAG TGGACCCAGGATAGGGCCAAACCTGTCACCC AGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGC AGACTGTGGCTTCACCTCCGAGTCTTACCAGC AAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAG ATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTGTATGCCGT GCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGATGGCCATG GTCAAGAGAAAGGATTCCAGAGGC | SEQ ID NO: 137 | |
| Η 1)2 2 | а (с TRAC) | ATGGCATGCCCTGGCTTCCTGTGGGCACTTGT GATCTCCACCTGTCTTGAATTTAGCATGGCTC AGACAGTCACTCAGTCTCAACCAGAGATGTC TGTGCAGGAGGCAGAGACCGTGACCCTGAGC TGCACATATGACACCAGTGAGAGTGATTATT ATTTATTCTGGTACAAGCAGCCTCCCAGCAG GCAGATGATTCTCGTTATTCGCCAAGAAGCTT ATAAGCAACAGAATGCAACAGAGAATCGTTT CTCTGTGAACTTCCAGAAAGCAGCCAAATCC TTCAGTCTCAAGATCTCAGACTCACAGCTGG GGGATGCCGCGATGTATTTCTGTGCTTATAGG AGTCTAAAATATGGAAACAAACTGGTCTTTG GCGCAGGAACCATTCTGAGAGTCAAGTCCTA TATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAG CTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTG TCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACA AATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGT ATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAG GTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTG GCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTG CAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGA | SEQ ID NO: 138 |
- 77 045443
| AGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCT GTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGA AACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTG TCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAA AGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGC GGCTGTGGTCCAGC | |||
| β (c TRBC1) | ATGGGCACCAGGCTCCTCTTCTGGGTGGCCTT CTGTCTCCTGGGGGCAGATCACACAGGAGCT GGAGTCTCCCAGTCCCCCAGTAACAAGGTCA CAGAGAAGGGAAAGGATGTAGAGCTCAGGT GTGATCCAATTTCAGGTCATACTGCCCTTTAC TGGTACCGACAGAGCCTGGGGCAGGGCCTGG AGTTTTTAATTTACTTCCAAGGCAACAGTGCA CCAGACAAATCAGGGCTGCCCAGTGATCGCT TCTCTGCAGAGAGGACTGGGGGATCCGTCTC CACTCTGACGATCCAGCGCACACAGCAGGAG GACTCGGCCGTGTATCTCTGTGCCAGCAGCTT GGTAGCTTTACAGGGTGCGGGCGAGCAGTAC TTCGGGCCGGGCACCAGGCTCACGGTCACAG AGGACCTGAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGT CGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATC TCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCC TGGCCACAGGCTTCTTCCCCGACCACGTGGA GCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTG CACAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCC TCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAG ATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCG GCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACT TCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCG GAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCC AAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGG CCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTC GGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCC ACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGG CCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTT GTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATT TC | SEQ ID NO: 139 | |
| β (c TRBC2) | ATGGGCACCAGGCTCCTCTTCTGGGTGGCCTT CTGTCTCCTGGGGGCAGATCACACAGGAGCT GGAGTCTCCCAGTCCCCCAGTAACAAGGTCA CAGAGAAGGGAAAGGATGTAGAGCTCAGGT GTGATCCAATTTCAGGTCATACTGCCCTTTAC TGGTACCGACAGAGCCTGGGGCAGGGCCTGG AGTTTTTAATTTACTTCCAAGGCAACAGTGCA CCAGACAAATCAGGGCTGCCCAGTGATCGCT TCTCTGCAGAGAGGACTGGGGGATCCGTCTC CACTCTGACGATCCAGCGCACACAGCAGGAG GACTCGGCCGTGTATCTCTGTGCCAGCAGCTT GGTAGCTTTACAGGGTGCGGGCGAGCAGTAC TTCGGGCCGGGCACCAGGCTCACGGTCACAG AGGACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGT CGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATC | SEQ ID NO: 140 |
- 78 045443
| TCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCC TGGCCACAGGCTTCTACCCCGACCACGTGGA GCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTG CACAGTGGGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCC TCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAG ATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCG GCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACT TCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCG GAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCC AAACCTGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGG CCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTCACCTC CGAGTCTTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCC ACCATCCTCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGG CCACCTTGTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTC GTGCTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATT CCAGAGGC | |||
| HD3 | a (c TRAC) | ATGATATCCTTGAGAGTTTTACTGGTGATCCT GTGGCTTCAGTTAAGCTGGGTTTGGAGCCAA CGGAAGGAGGTGGAGCAGGATCCTGGACCCT TCAATGTTCCAGAGGGAGCCACTGTCGCTTTC AACTGTACTTACAGCAACAGTGCTTCTCAGTC TTTCTTCTGGTACAGACAGGATTGCAGGAAA GAACCTAAGTTGCTGATGTCCGTATACTCCAG TGGTAATGAAGATGGAAGGTTTACAGCACAG CTCAATAGAGCCAGCCAGTATATTTCCCTGCT CATCAGAGACTCCAAGCTCAGTGATTCAGCC ACCTACCTCTGTGTGGTGAACCTCCTGTCTAA CCAGGGAGGAAAGCTTATCTTCGGACAGGGA ACGGAGTTATCTGTGAAACCCAATATCCAGA ACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGA CTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTAT TCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCA CAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAG ACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGA CTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGC AACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTT CAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTC TTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAA GCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACG AACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTG GGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGG GTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGT CCAGC | SEQ ID NO: 141 |
| β (c TRBC1) | ATGGGCTGCAGGCTGCTCTGCTGTGCGGTTCT CTGTCTCCTGGGAGCGGGTGAGTTGGTCCCC ATGGAAACGGGAGTTACGCAGACACCAAGAC ACCTGGTCATGGGAATGACAAATAAGAAGTC TTTGAAATGTGAACAACATCTGGGTCATAAC GCTATGTATTGGTACAAGCAAAGTGCTAAGA AGCCACTGGAGCTCATGTTTGTCTACAGTCTT GAAGAACGGGTTGAAAACAACAGTGTGCCAA | SEQ ID NO: 142 |
- 79 045443
| GTCGCTTCTCACCTGAATGCCCCAACAGCTCT CACTTATTCCTTCACCTACACACCCTGCAGCC AGAAGACTCGGCCCTGTATCTCTGCGCCAGC AGCCAAGATTACTTGGTTTCTAATGAAAAAC TGTTTTTTGGCAGTGGAACCCAGCTCTCTGTC TTGGAGGACCTGAACAAGGTGTTCCCACCCG AGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGA GATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTG TGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCCCGACCACGT GGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGA GGTGCACAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAG CCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACT CCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGT CTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAAC CACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCT CTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGG GCCAAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCG AGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTAC CTCGGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTG CCACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAA GGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCC TTGTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGA TTTC | |||
| β (c TRBC2) | ATGGGCTGCAGGCTGCTCTGCTGTGCGGTTCT CTGTCTCCTGGGAGCGGGTGAGTTGGTCCCC ATGGAAACGGGAGTTACGCAGACACCAAGAC ACCTGGTCATGGGAATGACAAATAAGAAGTC TTTGAAATGTGAACAACATCTGGGTCATAAC GCTATGTATTGGTACAAGCAAAGTGCTAAGA AGCCACTGGAGCTCATGTTTGTCTACAGTCTT GAAGAACGGGTTGAAAACAACAGTGTGCCAA GTCGCTTCTCACCTGAATGCCCCAACAGCTCT CACTTATTCCTTCACCTACACACCCTGCAGCC AGAAGACTCGGCCCTGTATCTCTGCGCCAGC AGCCAAGATTACTTGGTTTCTAATGAAAAAC TGTTTTTTGGCAGTGGAACCCAGCTCTCTGTC TTGGAGGACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCG AGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGA GATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTG TGCCTGGCCACAGGCTTCTACCCCGACCACGT GGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGA GGTGCACAGTGGGGTCAGCACAGACCCGCAG CCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACT CCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGT CTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAAC CACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCT CTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGG GCCAAACCTGTCACCCAGATCGTCAGCGCCG AGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTCAC CTCCGAGTCTTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTG CCACCATCCTCTATGAGATCTTGCTAGGGAA GGCCACCTTGTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCC | SEQ ID NO: 143 |
- 80 045443
| TCGTGCTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGA TTCCAGAGGC | |||
| HD41 | al (c TRAC) | ATGGAAACTCTCCTGGGAGTGTCTTTGGTGAT TCTATGGCTTCAACTGGCTAGGGTGAACAGT CAACAGGGAGAAGAGGATCCTCAGGCCTTGA GCATCCAGGAGGGTGAAAATGCCACCATGAA CTGCAGTTACAAAACTAGTATAAACAATTTA CAGTGGTATAGACAAAATTCAGGTAGAGGCC TTGTCCACCTAATTTTAATACGTTCAAATGAA AGAGAGAAACACAGTGGAAGATTAAGAGTC ACGCTTGACACTTCCAAGAAAAGCAGTTCCT TGTTGATCACGGCTTCCCGGGCAGCAGACAC TGCTTCTTACTTCTGTGCTACGGACGCGTATT CAGGAAACACACCTCTTGTCTTTGGAAAGGG CACAAGACTTTCTGTGATTGCAAATATCCAG AACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAG ACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTA TTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTC ACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACA GACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGG ACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAG CAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCC TTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCT TCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTC AAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATA CGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATT GGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCG GGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGG TCCAGC | SEQ ID NO: 144 |
| βΐ (c TRBC1) | ATGAGCATCGGGCTCCTGTGCTGTGTGGCCTT TTCTCTCCTGTGGGCAAGTCCAGTGAATGCTG GTGTCACTCAGACCCCAAAATTCCAGGTCCT GAAGACAGGACAGAGCATGACACTGCAGTGT GCCCAGGATATGAACCATAACTCCATGTACT GGTATCGACAAGACCCAGGCATGGGACTGAG GCTGATTTATTACTCAGCTTCTGAGGGTACCA CTGACAAAGGAGAAGTCCCCAATGGCTACAA TGTCTCCAGATTAAACAAACGGGAGTTCTCG CTCAGGCTGGAGTCGGCTGCTCCCTCCCAGA CATCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAGGGCAGC AGGGTTGGACACTGAAGCTTTCTTTGGACAA GGCACCAGACTCACAGTTGTAGAGGACCTGA ACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTT GAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCC AAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGG CTTCTTCCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGT GGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGG TCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCA GCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTG AGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCT GGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCA | SEQ ID NO: 145 |
- 81 045443
| AGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGAC GAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCA CCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAG AGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACC AGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTAT GAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATG CTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCC ATGGTCAAGAGAAAGGATTTC | |||
| βΐ (c TRBC2) | ATGAGCATCGGGCTCCTGTGCTGTGTGGCCTT TTCTCTCCTGTGGGCAAGTCCAGTGAATGCTG GTGTCACTCAGACCCCAAAATTCCAGGTCCT GAAGACAGGACAGAGCATGACACTGCAGTGT GCCCAGGATATGAACCATAACTCCATGTACT GGTATCGACAAGACCCAGGCATGGGACTGAG GCTGATTTATTACTCAGCTTCTGAGGGTACCA CTGACAAAGGAGAAGTCCCCAATGGCTACAA TGTCTCCAGATTAAACAAACGGGAGTTCTCG CTCAGGCTGGAGTCGGCTGCTCCCTCCCAGA CATCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAGGGCAGC AGGGTTGGACACTGAAGCTTTCTTTGGACAA GGCACCAGACTCACAGTTGTAGAGGACCTGA AAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTT GAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCC AAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGG CTTCTACCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGG TGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGG GTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGC AGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCT GAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTC TGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTC AAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGA CGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCTGTC ACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTA GAGCAGACTGTGGCTTCACCTCCGAGTCTTAC CAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTA TGAGATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTGTAT GCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGATGGC CATGGTCAAGAGAAAGGATTCCAGAGGC | SEQ ID NO: 146 | |
| HD-K 2 | «2 (с TRAC) | ATGGAGACCCTCTTGGGCCTGCTTATCCTTTG GCTGCAGCTGCAATGGGTGAGCAGCAAACAG GAGGTGACGCAGATTCCTGCAGCTCTGAGTG TCCCAGAAGGAGAAAACTTGGTTCTCAACTG CAGTTTCACTGATAGCGCTATTTACAACCTCC AGTGGTTTAGGCAGGACCCTGGGAAAGGTCT CACATCTCTGTTGCTTATTCAGTCAAGTCAGA GAGAGCAAACAAGTGGAAGACTTAATGCCTC GCTGGATAAATCATCAGGACGTAGTACTTTA TACATTGCAGCTTCTCAGCCTGGTGACTCAGC CACCTACCTCTGTGCTGTCCGGGCAGAGATTT ATAACCAGGGAGGAAAGCTTATCTTCGGACA GGGAACGGAGTTATCTGTGAAACCCAATATC CAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGA | SEQ ID NO: 147 |
- 82 045443
| GAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTG CCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATG TGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATC ACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTA TGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTG GAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAAC GCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACA CCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGAT GTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAG ATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGT GATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGG CCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTG TGGTCCAGC | |||
| β2 (c TRBC1) | ATGAGCATCAGCCTCCTGTGCTGTGCAGCCTT TCCTCTCCTGTGGGCAGGTCCAGTGAATGCTG GTGTCACTCAGACCCCAAAATTCCGCATCCTG AAGATAGGACAGAGCATGACACTGCAGTGTA CCCAGGATATGAACCATAACTACATGTACTG GTATCGACAAGACCCAGGCATGGGGCTGAAG CTGATTTATTATTCAGTTGGTGCTGGTATCAC TGATAAAGGAGAAGTCCCGAATGGCTACAAC GTCTCCAGATCAACCACAGAGGATTTCCCGC TCAGGCTGGAGTTGGCTGCTCCCTCCCAGAC ATCTGTGTACTTCTGTGCCAGTACCCAAACTC CCTACGAGCAGTACTTCGGGCCGGGCACCAG GCTCACGGTCACAGAGGACCTGAACAAGGTG TTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATC AGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCC ACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCC CGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAAT GGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACG GACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCC TCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCG CCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAAC CCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTT CTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACC CAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCAGATCG TCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTG TGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCAAGGG GTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCCT GCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTG GTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGGTCAA GAGAAAGGATTTC | SEQ ID NO: 148 | |
| β2 (c TRBC2) | ATGAGCATCAGCCTCCTGTGCTGTGCAGCCTT TCCTCTCCTGTGGGCAGGTCCAGTGAATGCTG GTGTCACTCAGACCCCAAAATTCCGCATCCTG AAGATAGGACAGAGCATGACACTGCAGTGTA CCCAGGATATGAACCATAACTACATGTACTG GTATCGACAAGACCCAGGCATGGGGCTGAAG CTGATTTATTATTCAGTTGGTGCTGGTATCAC TGATAAAGGAGAAGTCCCGAATGGCTACAAC GTCTCCAGATCAACCACAGAGGATTTCCCGC | SEQ ID NO: 149 |
- 83 045443
| TCAGGCTGGAGTTGGCTGCTCCCTCCCAGAC ATCTGTGTACTTCTGTGCCAGTACCCAAACTC CCTACGAGCAGTACTTCGGGCCGGGCACCAG GCTCACGGTCACAGAGGACCTGAAAAACGTG TTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATC AGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCC ACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTACCC CGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAAT GGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACA GACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCC TCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCG CCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAAC CCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTT CTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACC CAGGATAGGGCCAAACCTGTCACCCAGATCG TCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTG TGGCTTCACCTCCGAGTCTTACCAGCAAGGG GTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCTT GCTAGGGAAGGCCACCTTGTATGCCGTGCTG GTCAGTGCCCTCGTGCTGATGGCCATGGTCA AGAGAAAGGATTCCAGAGGC | |||
| β3 (c TRBC1) | ATGGACTCCTGGACCTTCTGCTGTGTGTCCCT TTGCATCCTGGTAGCGAAGCATACAGATGCT GGAGTTATCCAGTCACCCCGCCATGAGGTGA CAGAGATGGGACAAGAAGTGACTCTGAGATG TAAACCAATTTCAGGCCACAACTCCCTTTTCT GGTACAGACAGACCATGATGCGGGGACTGGA GTTGCTCATTTACTTTAACAACAACGTTCCGA TAGATGATTCAGGGATGCCCGAGGATCGATT CTCAGCTAAGATGCCTAATGCATCATTCTCCA CTCTGAAGATCCAGCCCTCAGAACCCAGGGA CTCAGCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAGCACAG TGGGAGGGGAGGATTATGGCTACACCTTCGG TTCGGGGACCAGGTTAACCGTTGTAGAGGAC CTGAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTG TGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCA CACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCC ACAGGCTTCTTCCCCGACCACGTGGAGCTGA GCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAG TGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAG GAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACT GCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCAC CTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCT GTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAA TGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCC GTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGG GTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCC TACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCT CTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTG TATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGAT GGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTC | SEQ ID NO: 150 | |
| β3 (c TRBC2) | ATGGACTCCTGGACCTTCTGCTGTGTGTCCCT | SEQ ID NO: 151 |
- 84 045443
| TTGCATCCTGGTAGCGAAGCATACAGATGCT GGAGTTATCCAGTCACCCCGCCATGAGGTGA CAGAGATGGGACAAGAAGTGACTCTGAGATG TAAACCAATTTCAGGCCACAACTCCCTTTTCT GGTACAGACAGACCATGATGCGGGGACTGGA GTTGCTCATTTACTTTAACAACAACGTTCCGA TAGATGATTCAGGGATGCCCGAGGATCGATT CTCAGCTAAGATGCCTAATGCATCATTCTCCA CTCTGAAGATCCAGCCCTCAGAACCCAGGGA CTCAGCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAGCACAG TGGGAGGGGAGGATTATGGCTACACCTTCGG TTCGGGGACCAGGTTAACCGTTGTAGAGGAC CTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTG TGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCA CACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCC ACAGGCTTCTACCCCGACCACGTGGAGCTGA GCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAG TGGGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTCAAG GAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACT GCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCAC CTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCT GTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAA TGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCT GTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGG GTAGAGCAGACTGTGGCTTCACCTCCGAGTC TTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCC TCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTT GTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGA TGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTCCAGAGG C | |||
| HD5 | a (c TRAC) | ATGACATCCATTCGAGCTGTATTTATATTCCT GTGGCTGCAGCTGGACTTGGTGAATGGAGAG AATGTGGAGCAGCATCCTTCAACCCTGAGTG TCCAGGAGGGAGACAGCGCTGTTATCAAGTG TACTTATTCAGACAGTGCCTCAAACTACTTCC CTTGGTATAAGCAAGAACTTGGAAAAAGACC TCAGCTTATTATAGACATTCGTTCAAATGTGG GCGAAAAGAAAGACCAACGAATTGCTGTTAC ATTGAACAAGACAGCCAAACATTTCTCCCTG CACATCACAGAGACCCAACCTGAAGACTCGG CTGTCTACTTCTGTGCAGCAAGTATGGCTGGG GCTGGGAGTTACCAACTCACTTTCGGGAAGG GGACCAAACTCTCGGTCATACCAAATATCCA GAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGA GACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCT ATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGT CACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCAC AGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATG GACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGA GCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGC CTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACC | SEQ ID NO: 152 |
- 85 045443
| TTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGT CAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGAT ACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGA TTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCC GGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTG GTCCAGC | |||
| βΐ (c TRBC1) | ATGGGCACAAGGTTGTTCTTCTATGTGGCCCT TTGTCTCCTGTGGACAGGACACATGGATGCT GGAATCACCCAGAGCCCAAGACACAAGGTCA CAGAGACAGGAACACCAGTGACTCTGAGATG TCACCAGACTGAGAACCACCGCTATATGTAC TGGTATCGACAAGACCCGGGGCATGGGCTGA GGCTGATCCATTACTCATATGGTGTTAAAGAT ACTGACAAAGGAGAAGTCTCAGATGGCTATA GTGTCTCTAGATCAAAGACAGAGGATTTCCT CCTCACTCTGGAGTCCGCTACCAGCTCCCAGA CATCTGTGTACTTCTGTGCCATCTCGGTGGGA CAGGGGGCCCTCTACGAGCAGTACTTCGGGC CGGGCACCAGGCTCACGGTCACAGAGGACCT GAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTG TTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACA CCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCAC AGGCTTCTTCCCCGACCACGTGGAGCTGAGC TGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTG GGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGA GCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGC CTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCT TCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGT CAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATG ACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGT CACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGT AGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTA CCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCT ATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTA TGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGG CCATGGTCAAGAGAAAGGATTTC | SEQ ID NO: 153 | |
| βΐ (c TRBC2) | ATGGGCACAAGGTTGTTCTTCTATGTGGCCCT TTGTCTCCTGTGGACAGGACACATGGATGCT GGAATCACCCAGAGCCCAAGACACAAGGTCA CAGAGACAGGAACACCAGTGACTCTGAGATG TCACCAGACTGAGAACCACCGCTATATGTAC TGGTATCGACAAGACCCGGGGCATGGGCTGA GGCTGATCCATTACTCATATGGTGTTAAAGAT ACTGACAAAGGAGAAGTCTCAGATGGCTATA GTGTCTCTAGATCAAAGACAGAGGATTTCCT CCTCACTCTGGAGTCCGCTACCAGCTCCCAGA CATCTGTGTACTTCTGTGCCATCTCGGTGGGA CAGGGGGCCCTCTACGAGCAGTACTTCGGGC CGGGCACCAGGCTCACGGTCACAGAGGACCT GAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTG TTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACA CCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCAC | SEQ ID NO: 154 |
- 86 045443
| AGGCTTCTACCCCGACCACGTGGAGCTGAGC TGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTG GGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTCAAGGA GCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGC CTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCT TCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGT CAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATG ACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCTGT CACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGT AGAGCAGACTGTGGCTTCACCTCCGAGTCTT ACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCT CTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTG TATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGAT GGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTCCAGAGGC | |||
| β2 (c TRBC1) | ATGGGCTTCAGGCTCCTCTGCTGTGTGGCCTT TTGTCTCCTGGGAGCAGGCCCAGTGGATTCTG GAGTCACACAAACCCCAAAGCACCTGATCAC AGCAACTGGACAGCGAGTGACGCTGAGATGC TCCCCTAGGTCTGGAGACCTCTCTGTGTACTG GTACCAACAGAGCCTGGACCAGGGCCTCCAG TTCCTCATTCAGTATTATAATGGAGAAGAGA GAGCAAAAGGAAACATTCTTGAACGATTCTC CGCACAACAGTTCCCTGACTTGCACTCTGAAC TAAACCTGAGCTCTCTGGAGCTGGGGGACTC AGCTTTGTATTTCTGTGCCAGCAGCGTAGCTC GGGACAGGCGGAACTATGGCTACACCTTCGG TTCGGGGACCAGGTTAACCGTTGTAGAGGAC CTGAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTG TGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCA CACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCC ACAGGCTTCTTCCCCGACCACGTGGAGCTGA GCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAG TGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAG GAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACT GCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCAC CTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCT GTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAA TGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCC GTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGG GTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCC TACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCT CTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTG TATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGAT GGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTC | SEQ ID NO: 155 | |
| β2 (c TRBC2) | ATGGGCTTCAGGCTCCTCTGCTGTGTGGCCTT TTGTCTCCTGGGAGCAGGCCCAGTGGATTCTG GAGTCACACAAACCCCAAAGCACCTGATCAC AGCAACTGGACAGCGAGTGACGCTGAGATGC TCCCCTAGGTCTGGAGACCTCTCTGTGTACTG GTACCAACAGAGCCTGGACCAGGGCCTCCAG TTCCTCATTCAGTATTATAATGGAGAAGAGA GAGCAAAAGGAAACATTCTTGAACGATTCTC | SEQ ID NO: 156 |
- 87 045443
| CGCACAACAGTTCCCTGACTTGCACTCTGAAC TAAACCTGAGCTCTCTGGAGCTGGGGGACTC AGCTTTGTATTTCTGTGCCAGCAGCGTAGCTC GGGACAGGCGGAACTATGGCTACACCTTCGG TTCGGGGACCAGGTTAACCGTTGTAGAGGAC CTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTG TGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCA CACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCC ACAGGCTTCTACCCCGACCACGTGGAGCTGA GCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAG TGGGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTCAAG GAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACT GCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCAC CTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCT GTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAA TGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCT GTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGG GTAGAGCAGACTGTGGCTTCACCTCCGAGTC TTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCC TCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCCACCTT GTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGA TGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTCCAGAGG C | |||
| HD6 | al (c TRAC) | atggccatgctcctgggggcatcagtgctgattctgtggcttcagccagact gggtaaacagtcaacagaagaatgatgaccagcaagttaagcaaaattca ccatccctgagcgtccaggaaggaagaatttctattctgaactgtgactata ctaacagcatgtttgattatttcctatggtacaaaaaataccctgctgaaggtc ctacattcctgatatctataagttccattaaggataaaaatgaagatggaaga ttcactgtcttcttaaacaaaagtgccaagcacctctctctgcacattgtgccc tcccagcctggagactctgcagtgtacttctgtgcagcaaacaatgccaga ctcatgtttggagatggaactcagctggtggtgaagcccaatatccagaac cctgaccctgccgtgtaccagctgagagactctaaatccagtgacaagtct gtctgcctattcaccgattttgattctcaaacaaatgtgtcacaaagtaaggat tctgatgtgtatatcacagacaaaactgtgctagacatgaggtctatggactt caagagcaacagtgctgtggcctggagcaacaaatctgactttgcatgtgc aaacgccttcaacaacagcattattccagaagacaccttcttccccagccca gaaagttcctgtgatgtcaagctggtcgagaaaagctttgaaacagatacg aacctaaactttcaaaacctgtcagtgattgggttccgaatcctcctcctgaa agtggccgggtttaatctgctcatgacgctgcggctgtggtccagc | SEQ ID NO: 223 |
| «2 (c TRAC) | ATGGCCATGCTCCTGGGGGCATCAGTGCTGA TTCTGTGGCTTCAGCCAGACTGGGTAAACAG TCAACAGAAGAATGATGACCAGCAAGTTAAG CAAAATTCACCATCCCTGAGCGTCCAGGAAG GAAGAATTTCTATTCTGAACTGTGACTATACT AACAGCATGTTTGATTATTTCCTATGGTACAA AAAATACCCTGCTGAAGGTCCTACATTCCTG ATATCTATAAGTTCCATTAAGGATAAAAATG AAGATGGAAGATTCACTGTCTTCTTAAACAA AAGTGCCAAGCACCTCTCTCTGCACATTGTGC CCTCCCAGCCTGGAGACTCTGCAGTGTACTTC TGTGCAGCAAGCGCTACCGGTAACCAGTTCT | SEQ ID NO: 292 |
- 88 045443
| ATTTTGGGACAGGGACAAGTTTGACGGTCAT TCCAAATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGT ACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAA GTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTC AAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGA TGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGAC ATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTG CTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGC ATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATT CCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAA GTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAG CTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAA AACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCT CCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATG ACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA | |||
| βΐ (c TRBC1) | atggactcctggaccttctgctgtgtgtccctttgcatcctggtagcgaagca tacagatgctggagttatccagtcaccccgccatgaggtgacagagatgg gacaagaagtgactctgagatgtaaaccaatttcaggccacaactccctttt ctggtacagacagaccatgatgcggggactggagttgctcatttactttaac aacaacgttccgatagatgattcagggatgcccgaggatcgattctcagct aagatgcctaatgcatcattctccactctgaagatccagccctcagaaccca gggactcagctgtgtacttctgtgccagcagtgataccagggcccgggag cagttcttcgggccagggacacggctcaccgtgctagaggacctgaacaa ggtgttcccacccgaggtcgctgtgtttgagccatcagaagcagagatctc ccacacccaaaaggccacactggtgtgcctggccacaggcttcttccccg accacgtggagctgagctggtgggtgaatgggaaggaggtgcacagtg gggtcagcacggacccgcagcccctcaaggagcagcccgccctcaatg actccagatactgcctgagcagccgcctgagggtctcggccaccttctgg cagaacccccgcaaccacttccgctgtcaagtccagttctacgggctctcg gagaatgacgagtggacccaggatagggccaaacccgtcacccagatc gtcagcgccgaggcctggggtagagcagactgtggctttacctcggtgtc ctaccagcaaggggtcctgtctgccaccatcctctatgagatcctgctagg gaaggccaccctgtatgctgtgctggtcagcgcccttgtgttgatggccat ggtcaagagaaaggatttc | SEQ ID NO: 224 | |
| βΐ (c TRBC2) | atggactcctggaccttctgctgtgtgtccctttgcatcctggtagcgaagca tacagatgctggagttatccagtcaccccgccatgaggtgacagagatgg gacaagaagtgactctgagatgtaaaccaatttcaggccacaactccctttt ctggtacagacagaccatgatgcggggactggagttgctcatttactttaac aacaacgttccgatagatgattcagggatgcccgaggatcgattctcagct aagatgcctaatgcatcattctccactctgaagatccagccctcagaaccca gggactcagctgtgtacttctgtgccagcagtgataccagggcccgggag cagttcttcgggccagggacacggctcaccgtgctagaggacctgaaaaa cgtgttcccacccgaggtcgctgtgtttgagccatcagaagcagagatctc ccacacccaaaaggccacactggtgtgcctggccacaggcttctaccccg accacgtggagctgagctggtgggtgaatgggaaggaggtgcacagtg gggtcagcacagacccgcagcccctcaaggagcagcccgccctcaatg actccagatactgcctgagcagccgcctgagggtctcggccaccttctgg cagaacccccgcaaccacttccgctgtcaagtccagttctacgggctctcg gagaatgacgagtggacccaggatagggccaaacctgtcacccagatcg tcagcgccgaggcctggggtagagcagactgtggcttcacctccgagtct taccagcaaggggtcctgtctgccaccatcctctatgagatcttgctaggga aggccaccttgtatgccgtgctggtcagtgccctcgtgctgatggccatgg | SEQ ID NO: 225 |
- 89 045443
| tcaagagaaaggattccagaggc | |||
| β2 (c TRBC1) | ATGGGCTCCAGGCTGCTCTGTTGGGTGCTGCT TTGTCTCCTGGGAGCAGGCCCAGTAAAGGCT GGAGTCACTCAAACTCCAAGATATCTGATCA AAACGAGAGGACAGCAAGTGACACTGAGCT GCTCCCCTATCTCTGGGCATAGGAGTGTATCC TGGTACCAACAGACCCCAGGACAGGGCCTTC AGTTCCTCTTTGAATACTTCAGTGAGACACAG AGAAACAAAGGAAACTTCCCTGGTCGATTCT CAGGGCGCCAGTTCTCTAACTCTCGCTCTGAG ATGAATGTGAGCACCTTGGAGCTGGGGGACT CGGCCCTTTATCTTTGCGCCAGCAGCCCTGGA CAGCACGGGGAGCTGTTTTTTGGAGAAGGCT CTAGGCTGACCGTACTGGAGGACCTGAACAA GGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGC CATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAA GGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTC TTCCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGG TGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAG CACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCC GCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCA GCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCA GAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTC CAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGT GGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCA GATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCA GACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCA AGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGA TCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGT GCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGG TCAAGAGAAAGGATTTC | SEQ ID NO: 293 | |
| β2 (c TRBC2) | ATGGGCTCCAGGCTGCTCTGTTGGGTGCTGCT TTGTCTCCTGGGAGCAGGCCCAGTAAAGGCT GGAGTCACTCAAACTCCAAGATATCTGATCA AAACGAGAGGACAGCAAGTGACACTGAGCT GCTCCCCTATCTCTGGGCATAGGAGTGTATCC TGGTACCAACAGACCCCAGGACAGGGCCTTC AGTTCCTCTTTGAATACTTCAGTGAGACACAG AGAAACAAAGGAAACTTCCCTGGTCGATTCT CAGGGCGCCAGTTCTCTAACTCTCGCTCTGAG ATGAATGTGAGCACCTTGGAGCTGGGGGACT CGGCCCTTTATCTTTGCGCCAGCAGCCCTGGA CAGCACGGGGAGCTGTTTTTTGGAGAAGGCT CTAGGCTGACCGTACTGGAGGACCTGAAAAA CGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGC CATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAA GGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTC TACCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGG TGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAG CACAGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCC GCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCA GCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCA | SEQ ID NO: 294 |
- 90 045443
| GAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTC CAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGT GGACCCAGGATAGGGCCAAACCTGTCACCCA GATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCA GACTGTGGCTTCACCTCCGAGTCTTACCAGCA AGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGA TCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTGTATGCCGTG CTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGATGGCCATGGT CAAGAGAAAGGATTCCAGAGGC | |||
| HD7 | al (c TRAC) | atgaagacatttgctggattttcgttcctgtttttgtggctgcagctggactgta tgagtagaggagaggatgtggagcagagtcttttcctgagtgtccgagag ggagacagctccgttataaactgcacttacacagacagctcctccacctact tatactggtataagcaagaacctggagcaggtctccagttgctgacgtatat tttttcaaatatggacatgaaacaagaccaaagactcactgttctattgaataa aaaggataaacatctgtctctgcgcattgcagacacccagactggggactc agctatctacttctgtgcagagaggcttaacaccgacaagctcatctttggg actgggaccagattacaagtctttccaaatatccagaaccctgaccctgcc gtgtaccagctgagagactctaaatccagtgacaagtctgtctgcctattca ccgattttgattctcaaacaaatgtgtcacaaagtaaggattctgatgtgtata tcacagacaaaactgtgctagacatgaggtctatggacttcaagagcaaca gtgctgtggcctggagcaacaaatctgactttgcatgtgcaaacgccttcaa caacagcattattccagaagacaccttcttccccagcccagaaagttcctgt gatgtcaagctggtcgagaaaagctttgaaacagatacgaacctaaactttc aaaacctgtcagtgattgggttccgaatcctcctcctgaaagtggccgggtt taatctgctcatgacgctgcggctgtggtccagc | SEQ ID NO: 226 |
| «2 (c TRAC) | atgaagaggatattgggagctctgctggggctcttgagtgcccaggtttgct gtgtgagaggaatacaagtggagcagagtcctccagacctgattctccag gagggagccaattccacgctgcggtgcaatttttctgactctgtgaacaattt gcagtggtttcatcaaaacccttggggacagctcatcaacctgttttacattc cctcagggacaaaacagaatggaagattaagcgccacgactgtcgctac ggaacgctacagcttattgtacatttcctcttcccagaccacagactcaggc gtttatttctgtgctgtggaggcaactgacagctgggggaaattgcagtttg gagcagggacccaggttgtggtcaccccagatatccagaaccctgaccct gccgtgtaccagctgagagactctaaatccagtgacaagtctgtctgcctat tcaccgattttgattctcaaacaaatgtgtcacaaagtaaggattctgatgtgt atatcacagacaaaactgtgctagacatgaggtctatggacttcaagagca acagtgctgtggcctggagcaacaaatctgactttgcatgtgcaaacgcctt caacaacagcattattccagaagacaccttcttccccagcccagaaagttc ctgtgatgtcaagctggtcgagaaaagctttgaaacagatacgaacctaaa ctttcaaaacctgtcagtgattgggttccgaatcctcctcctgaaagtggccg ggtttaatctgctcatgacgctgcggctgtggtccagc | SEQ ID NO: 227 | |
| «3 (c TRAC) | atgacatccattcgagctgtatttatattcctgtggctgcagctggacttggtg aatggagagaatgtggagcagcatccUcaaccctgagtgtccaggaggg agacagcgctgttatcaagtgtacttattcagacagtgcctcaaactacttcc cttggtataagcaagaacttggaaaaagacctcagcttattatagacattcgt tcaaatgtgggcgaaaagaaagaccaacgaattgctgttacattgaacaag acagccaaacatttctccctgcacatcacagagacccaacctgaagactcg gctgtctacttctgtgcagtacgaacctcctacgacaaggtgatatttgggc cagggacaagcttatcagtcattccaaatatccagaaccctgaccctgccg tgtaccagctgagagactctaaatccagtgacaagtctgtctgcctattcac cgattttgattctcaaacaaatgtgtcacaaagtaaggattctgatgtgtatat | SEQ ID NO: 228 |
- 91 045443
| cacagacaaaactgtgctagacatgaggtctatggacttcaagagcaaca gtgctgtggcctggagcaacaaatctgactttgcatgtgcaaacgccttcaa caacagcattattccagaagacaccttcttccccagcccagaaagttcctgt gatgtcaagctggtcgagaaaagctttgaaacagatacgaacctaaactttc aaaacctgtcagtgattgggttccgaatcctcctcctgaaagtggccgggtt taatctgctcatgacgctgcggctgtggtccagc | |||
| α-4 (c TRAC) | ATGGAAACTCTCCTGGGAGTGTCTTTGGTGAT TCTATGGCTTCAACTGGCTAGGGTGAACAGT CAACAGGGAGAAGAGGATCCTCAGGCCTTGA GCATCCAGGAGGGTGAAAATGCCACCATGAA CTGCAGTTACAAAACTAGTATAAACAATTTA CAGTGGTATAGACAAAATTCAGGTAGAGGCC TTGTCCACCTAATTTTAATACGTTCAAATGAA AGAGAGAAACACAGTGGAAGATTAAGAGTC ACGCTTGACACTTCCAAGAAAAGCAGTTCCT TGTTGATCACGGCTTCCCGGGCAGCAGACAC TGCTTCTTACTTCTGTGCTACGGACGGGGATA GCAGCTATAAATTGATCTTCGGGAGTGGGAC CAGACTGCTGGTCAGGCCTGATATCCAGAAC CCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACT CTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTC ACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACA AAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGAC AAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACT TCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAA CAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCA ACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTC CCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGC TGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAA CCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGT TCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTT AATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCA GC | SEQ ID NO: 295 | |
| βΐ (c TRBC1) | atgctgctgcttctgctgcttctggggccaggtataagcctccttctacctgg gagcttggcaggctccgggcttggtgctgtcgtctctcaacatccgagctg ggttatctgtaagagtggaacctctgtgaagatcgagtgccgttccctggac tttcaggccacaactatgttttggtatcgtcagttcccgaaacagagtctcat gctgatggcaacttccaatgagggctccaaggccacatacgagcaaggc gtcgagaaggacaagtttctcatcaaccatgcaagcctgaccttgtccactc tgacagtgaccagtgcccatcctgaagacagcagcttctacatctgcagtg ctagggacagtgtgtctggaaacaccatatattttggagagggaagttggc tcactgttgtagaggacctgaacaaggtgttcccacccgaggtcgctgtgtt tgagccatcagaagcagagatctcccacacccaaaaggccacactggtgt gcctggccacaggcttcttccccgaccacgtggagctgagctggtgggtg aatgggaaggaggtgcacagtggggtcagcacggacccgcagcccctc aaggagcagcccgccctcaatgactccagatactgcctgagcagccgcct gagggtctcggccaccttctggcagaacccccgcaaccacttccgctgtc aagtccagttctacgggctctcggagaatgacgagtggacccaggatagg gccaaacccgtcacccagatcgtcagcgccgaggcctggggtagagca gactgtggctttacctcggtgtcctaccagcaaggggtcctgtctgccacca tcctctatgagatcctgctagggaaggccaccctgtatgctgtgctggtcag cgcccttgtgttgatggccatggtcaagagaaaggatttc | SEQ ID NO: 229 |
- 92 045443
| βΐ (c TRBC2) | atgctgctgcttctgctgcttctggggccaggtataagcctccttctacctgg gagcttggcaggctccgggcttggtgctgtcgtctctcaacatccgagctg ggttatctgtaagagtggaacctctgtgaagatcgagtgccgttccctggac tttcaggccacaactatgttttggtatcgtcagttcccgaaacagagtctcat gctgatggcaacttccaatgagggctccaaggccacatacgagcaaggc gtcgagaaggacaagtttctcatcaaccatgcaagcctgaccttgtccactc tgacagtgaccagtgcccatcctgaagacagcagcttctacatctgcagtg ctagggacagtgtgtctggaaacaccatatattttggagagggaagttggc tcactgttgtagaggacctgaaaaacgtgttcccacccgaggtcgctgtgtt tgagccatcagaagcagagatctcccacacccaaaaggccacactggtgt gcctggccacaggcttctaccccgaccacgtggagctgagctggtgggt gaatgggaaggaggtgcacagtggggtcagcacagacccgcagcccct caaggagcagcccgccctcaatgactccagatactgcctgagcagccgc ctgagggtctcggccaccttctggcagaacccccgcaaccacttccgctgt caagtccagttctacgggctctcggagaatgacgagtggacccaggatag ggccaaacctgtcacccagatcgtcagcgccgaggcctggggtagagca gactgtggcttcacctccgagtcttaccagcaaggggtcctgtctgccacc atcctctatgagatcttgctagggaaggccaccttgtatgccgtgctggtca gtgccctcgtgctgatggccatggtcaagagaaaggattccagaggc | SEQ ID NO: 230 | |
| β2 (c TRBC1) | atgctgagtcttctgctccttctcctgggactaggctctgtgttcagtgctgtc atctctcaaaagccaagcagggatatctgtcaacgtggaacctccctgacg atccagtgtcaagtcgatagccaagtcaccatgatgttctggtaccgtcagc aacctggacagagcctgacactgatcgcaactgcaaatcagggctctgag gccacatatgagagtggatttgtcattgacaagtttcccatcagccgcccaa acctaacattctcaactctgactgtgagcaacatgagccctgaagacagca gcatatatctctgcagcgttgggggtagcgggagttacaatgagcagttctt cgggccagggacacggctcaccgtgctagaggacctgaacaaggtgttc ccacccgaggtcgctgtgtttgagccatcagaagcagagatctcccacac ccaaaaggccacactggtgtgcctggccacaggcttcttccccgaccacg tggagctgagctggtgggtgaatgggaaggaggtgcacagtggggtcag cacggacccgcagcccctcaaggagcagcccgccctcaatgactccaga tactgcctgagcagccgcctgagggtctcggccaccttctggcagaaccc ccgcaaccacttccgctgtcaagtccagttctacgggctctcggagaatga cgagtggacccaggatagggccaaacccgtcacccagatcgtcagcgcc gaggcctggggtagagcagactgtggctttacctcggtgtcctaccagca aggggtcctgtctgccaccatcctctatgagatcctgctagggaaggccac cctgtatgctgtgctggtcagcgcccttgtgttgatggccatggtcaagaga aaggatttc | SEQ ID NO: 231 | |
| β2 (c TRBC2) | atgctgagtcttctgctccttctcctgggactaggctctgtgttcagtgctgtc atctctcaaaagccaagcagggatatctgtcaacgtggaacctccctgacg atccagtgtcaagtcgatagccaagtcaccatgatgttctggtaccgtcagc aacctggacagagcctgacactgatcgcaactgcaaatcagggctctgag gccacatatgagagtggatttgtcattgacaagtttcccatcagccgcccaa acctaacattctcaactctgactgtgagcaacatgagccctgaagacagca gcatatatctctgcagcgttgggggtagcgggagttacaatgagcagttctt cgggccagggacacggctcaccgtgctagaggacctgaaaaacgtgttc ccacccgaggtcgctgtgtttgagccatcagaagcagagatctcccacac ccaaaaggccacactggtgtgcctggccacaggcttctaccccgaccacg tggagctgagctggtgggtgaatgggaaggaggtgcacagtggggtcag cacagacccgcagcccctcaaggagcagcccgccctcaatgactccaga tactgcctgagcagccgcctgagggtctcggccaccttctggcagaaccc ccgcaaccacttccgctgtcaagtccagttctacgggctctcggagaatga | SEQ ID NO: 232 |
- 93 045443
| cgagtggacccaggatagggccaaacctgtcacccagatcgtcagcgcc gaggcctggggtagagcagactgtggcttcacctccgagtcttaccagca aggggtcctgtctgccaccatcctctatgagatcttgctagggaaggccac cttgtatgccgtgctggtcagtgccctcgtgctgatggccatggtcaagag aaaggattccagaggc | |||
| P-3(c TRBC1) | ATGCTGCTGCTTCTGCTGCTTCTGGGGCCAGG TATAAGCCTCCTTCTACCTGGGAGCTTGGCAG GCTCCGGGCTTGGTGCTGTCGTCTCTCAACAT CCGAGCTGGGTTATCTGTAAGAGTGGAACCT CTGTGAAGATCGAGTGCCGTTCCCTGGACTTT CAGGCCACAACTATGTTTTGGTATCGTCAGTT CCCGAAACAGAGTCTCATGCTGATGGCAACT TCCAATGAGGGCTCCAAGGCCACATACGAGC AAGGCGTCGAGAAGGACAAGTTTCTCATCAA CCATGCAAGCCTGACCTTGTCCACTCTGACAG TGACCAGTGCCCATCCTGAAGACAGCAGCTT CTACATCTGCAGTGCTAGAGACGTACTGACA GGGGACTATGGCTACACCTTCGGTTCGGGGA CCAGGTTAACCGTTGTAGAGGACCTGAACAA GGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGC CATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAA GGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTC TTCCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGG TGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAG CACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCC GCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCA GCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCA GAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTC CAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGT GGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCA GATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCA GACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCA AGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGA TCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGT GCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGG TCAAGAGAAAGGATTTC | SEQ ID NO: 296 | |
| P-3(c TRBC2) | ATGCTGCTGCTTCTGCTGCTTCTGGGGCCAGG TATAAGCCTCCTTCTACCTGGGAGCTTGGCAG GCTCCGGGCTTGGTGCTGTCGTCTCTCAACAT CCGAGCTGGGTTATCTGTAAGAGTGGAACCT CTGTGAAGATCGAGTGCCGTTCCCTGGACTTT CAGGCCACAACTATGTTTTGGTATCGTCAGTT CCCGAAACAGAGTCTCATGCTGATGGCAACT TCCAATGAGGGCTCCAAGGCCACATACGAGC AAGGCGTCGAGAAGGACAAGTTTCTCATCAA CCATGCAAGCCTGACCTTGTCCACTCTGACAG TGACCAGTGCCCATCCTGAAGACAGCAGCTT CTACATCTGCAGTGCTAGAGACGTACTGACA GGGGACTATGGCTACACCTTCGGTTCGGGGA CCAGGTTAACCGTTGTAGAGGACCTGAAAAA CGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGC CATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAA | SEQ ID NO: 297 |
- 94 045443
| GGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTC TACCCCGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGG TGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAG CACAGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCC GCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCA GCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCA GAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTC CAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGT GGACCCAGGATAGGGCCAAACCTGTCACCCA GATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCA GACTGTGGCTTCACCTCCGAGTCTTACCAGCA AGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGA TCTTGCTAGGGAAGGCCACCTTGTATGCCGTG CTGGTCAGTGCCCTCGTGCTGATGGCCATGGT CAAGAGAAAGGATTCCAGAGGC | |||
| β-4 (с TRBC1) | ATGGGCTCCTGGACCCTCTGCTGTGTGTCCCT TTGCATCCTGGTAGCAAAGCACACAGATGCT GGAGTTATCCAGTCACCCCGGCACGAGGTGA CAGAGATGGGACAAGAAGTGACTCTGAGATG TAAACCAATTTCAGGACACGACTACCTTTTCT GGTACAGACAGACCATGATGCGGGGACTGGA GTTGCTCATTTACTTTAACAACAACGTTCCGA TAGATGATTCAGGGATGCCCGAGGATCGATT CTCAGCTAAGATGCCTAATGCATCATTCTCCA CTCTGAAGATCCAGCCCTCAGAACCCAGGGA CTCAGCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAGTTTAG GACTGAGCATTTCCCAAGAGACCCAGTACTT CGGGCCAGGCACGCGGCTCCTGGTGCTCGAG GACCTGAACAAGGTGTTCCCACCCGAGGTCG CTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTC CCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTG GCCACAGGCTTCTTCCCCGACCACGTGGAGC TGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCA CAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTC AAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGAT ACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGC CACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCC GCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGA GAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAA ACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCC TGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGG TGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACC ATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCA CCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTG TTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTC | SEQ ID NO: 298 | |
| β-4 (с TRBC2) | ATGGGCTCCTGGACCCTCTGCTGTGTGTCCCT TTGCATCCTGGTAGCAAAGCACACAGATGCT GGAGTTATCCAGTCACCCCGGCACGAGGTGA CAGAGATGGGACAAGAAGTGACTCTGAGATG TAAACCAATTTCAGGACACGACTACCTTTTCT GGTACAGACAGACCATGATGCGGGGACTGGA GTTGCTCATTTACTTTAACAACAACGTTCCGA | SEQ ID NO: 299 |
- 95 045443
| TAGATGATTCAGGGATGCCCGAGGATCGATT CTCAGCTAAGATGCCTAATGCATCATTCTCCA CTCTGAAGATCCAGCCCTCAGAACCCAGGGA CTCAGCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAGTTTAG GACTGAGCATTTCCCAAGAGACCCAGTACTT CGGGCCAGGCACGCGGCTCCTGGTGCTCGAG GACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCG CTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTC CCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTG GCCACAGGCTTCTACCCCGACCACGTGGAGC TGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCA CAGTGGGGTCAGCACAGACCCGCAGCCCCTC AAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGAT ACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGC CACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCC GCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGA GAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAA ACCTGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCC TGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTCACCTCCG AGTCTTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCAC CATCCTCTATGAGATCTTGCTAGGGAAGGCC ACCTTGTATGCCGTGCTGGTCAGTGCCCTCGT GCTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTCC AGAGGC | |||
| HD8 | a (c TRAC) | atggtgaagatccggcaatttttgttggctattttgtggcttcagctaagctgt gtaagtgccgccaaaaatgaagtggagcagagtcctcagaacctgactgc ccaggaaggagaatttatcacaatcaactgcagttactcggtaggaataag tgccttacactggctgcaacagcatccaggaggaggcattgtttccttgttta tgctgagctcagggaagaagaagcatggaagattaattgccacaataaac atacaggaaaagcacagctccctgcacatcacagcctcccatcccagaga ctctgccgtctacatctgtgctgtcacagtcggaaacaaactggtctttggc gcaggaaccattctgagagtcaagtcctatatccagaaccctgaccctgcc gtgtaccagctgagagactctaaatccagtgacaagtctgtctgcctattca ccgattttgattctcaaacaaatgtgtcacaaagtaaggattctgatgtgtata tcacagacaaaactgtgctagacatgaggtctatggacttcaagagcaaca gtgctgtggcctggagcaacaaatctgactttgcatgtgcaaacgccttcaa caacagcattattccagaagacaccttcttccccagcccagaaagttcctgt gatgtcaagctggtcgagaaaagctttgaaacagatacgaacctaaactttc aaaacctgtcagtgattgggttccgaatcctcctcctgaaagtggccgggtt taatctgctcatgacgctgcggctgtggtccagc | SEQ ID NO: 233 |
| β (c TRBC1) | atgagcatcgggctcctgtgctgtgtggccttttctctcctgtgggcaagtcc agtgaatgctggtgtcactcagaccccaaaattccaggtcctgaagacagg acagagcatgacactgcagtgtgcccaggatatgaaccataactccatgta ctggtatcgacaagacccaggcatgggactgaggctgatttattactcagct tctgagggtaccactgacaaaggagaagtccccaatggctacaatgtctcc agattaaacaaacgggagttctcgctcaggctggagtcggctgctccctcc cagacatctgtgtacttctgtgccagcagggggtggcgtgagcagttcttc gggccagggacacggctcaccgtgctagaggacctgaacaaggtgttcc cacccgaggtcgctgtgtttgagccatcagaagcagagatctcccacacc caaaaggccacactggtgtgcctggccacaggcttcttccccgaccacgt ggagctgagctggtgggtgaatgggaaggaggtgcacagtggggtcag | SEQ ID NO: 234 |
- 96 045443
| cacggacccgcagcccctcaaggagcagcccgccctcaatgactccaga tactgcctgagcagccgcctgagggtctcggccaccttctggcagaaccc ccgcaaccacttccgctgtcaagtccagttctacgggctctcggagaatga cgagtggacccaggatagggccaaacccgtcacccagatcgtcagcgcc gaggcctggggtagagcagactgtggctttacctcggtgtcctaccagca aggggtcctgtctgccaccatcctctatgagatcctgctagggaaggccac cctgtatgctgtgctggtcagcgcccttgtgttgatggccatggtcaagaga aaggatttc | |||
| β (c TRBC2) | atgagcatcgggctcctgtgctgtgtggccttttctctcctgtgggcaagtcc agtgaatgctggtgtcactcagaccccaaaattccaggtcctgaagacagg acagagcatgacactgcagtgtgcccaggatatgaaccataactccatgta ctggtatcgacaagacccaggcatgggactgaggctgatttattactcagct tctgagggtaccactgacaaaggagaagtccccaatggctacaatgtctcc agattaaacaaacgggagttctcgctcaggctggagtcggctgctccctcc cagacatctgtgtacttctgtgccagcagggggtggcgtgagcagttcttc gggccagggacacggctcaccgtgctagaggacctgaaaaacgtgttcc cacccgaggtcgctgtgtttgagccatcagaagcagagatctcccacacc caaaaggccacactggtgtgcctggccacaggcttctaccccgaccacgt ggagctgagctggtgggtgaatgggaaggaggtgcacagtggggtcag cacagacccgcagcccctcaaggagcagcccgccctcaatgactccaga tactgcctgagcagccgcctgagggtctcggccaccttctggcagaaccc ccgcaaccacttccgctgtcaagtccagttctacgggctctcggagaatga cgagtggacccaggatagggccaaacctgtcacccagatcgtcagcgcc gaggcctggggtagagcagactgtggcttcacctccgagtcttaccagca aggggtcctgtctgccaccatcctctatgagatcttgctagggaaggccac cttgtatgccgtgctggtcagtgccctcgtgctgatggccatggtcaagag aaaggattccagaggc | SEQ ID NO: 235 | |
| HD9 | al (c TRAC) | atggtgaagatccggcaatttttgttggctattttgtggcttcagctaagctgt gtaagtgccgccaaaaatgaagtggagcagagtcctcagaacctgactgc ccaggaaggagaatttatcacaatcaactgcagttactcggtaggaataag tgccttacactggctgcaacagcatccaggaggaggcattgtttccttgttta tgctgagctcagggaagaagaagcatggaagattaattgccacaataaac atacaggaaaagcacagctccctgcacatcacagcctcccatcccagaga ctctgccgtctacatctgtgctgcccgatcttataacaccgacaagctcatct ttgggactgggaccagattacaagtctttccaaatatccagaaccctgaccc tgccgtgtaccagctgagagactctaaatccagtgacaagtctgtctgccta ttcaccgattttgattctcaaacaaatgtgtcacaaagtaaggattctgatgtg tatatcacagacaaaactgtgctagacatgaggtctatggacttcaagagca acagtgctgtggcctggagcaacaaatctgactttgcatgtgcaaacgcctt caacaacagcattattccagaagacaccttcttccccagcccagaaagttc ctgtgatgtcaagctggtcgagaaaagctttgaaacagatacgaacctaaa ctttcaaaacctgtcagtgattgggttccgaatcctcctcctgaaagtggccg ggtttaatctgctcatgacgctgcggctgtggtccagc | SEQ ID NO: 236 |
| «2 (c TRAC) | atggccatgctcctgggggcatcagtgctgattctgtggcttcagccagact gggtaaacagtcaacagaagaatgatgaccagcaagttaagcaaaattca ccatccctgagcgtccaggaaggaagaatttctattctgaactgtgactata ctaacagcatgtttgattatttcctatggtacaaaaaataccctgctgaaggtc ctacattcctgatatctataagttccattaaggataaaaatgaagatggaaga ttcactgtcttcttaaacaaaagtgccaagcacctctctctgcacattgtgccc tcccagcctggagactctgcagtgtacttctgtgcagcaagttacaacaatg ccagactcatgtttggagatggaactcagctggtggtgaagcccaatatcc | SEQ ID NO: 237 |
- 97 045443
| agaaccctgaccctgccgtgtaccagctgagagactctaaatccagtgac aagtctgtctgcctattcaccgattttgattctcaaacaaatgtgtcacaaagt aaggattctgatgtgtatatcacagacaaaactgtgctagacatgaggtctat ggacttcaagagcaacagtgctgtggcctggagcaacaaatctgactttgc atgtgcaaacgccttcaacaacagcattattccagaagacaccttcttcccc agcccagaaagttcctgtgatgtcaagctggtcgagaaaagctttgaaaca gatacgaacctaaactttcaaaacctgtcagtgattgggttccgaatcctcct cctgaaagtggccgggtttaatctgctcatgacgctgcggctgtggtccag c | |||
| «3 (с TRAC) | atggccatgctcctgggggcatcagtgctgattctgtggcttcagccagact gggtaaacagtcaacagaagaatgatgaccagcaagttaagcaaaattca ccatccctgagcgtccaggaaggaagaatttctattctgaactgtgactata ctaacagcatgtttgattatttcctatggtacaaaaaataccctgctgaaggtc ctacattcctgatatctataagttccattaaggataaaaatgaagatggaaga ttcactgtcttcttaaacaaaagtgccaagcacctctctctgcacattgtgccc tcccagcctggagactctgcagtgtacttctgtgcagcaagttacaacaatg ccagactcatgtttggagatggaactcagctggtggtgaagcccaatatcc agaaccctgaccctgccgtgtaccagctgagagactctaaatccagtgac aagtctgtctgcctattcaccgattttgattctcaaacaaatgtgtcacaaagt aaggattctgatgtgtatatcacagacaaaactgtgctagacatgaggtctat ggacttcaagagcaacagtgctgtggcctggagcaacaaatctgactttgc atgtgcaaacgccttcaacaacagcattattccagaagacaccttcttcccc agcccagaaagttcctgtgatgtcaagctggtcgagaaaagctttgaaaca gatacgaacctaaactttcaaaacctgtcagtgattgggttccgaatcctcct cctgaaagtggccgggtttaatctgctcatgacgctgcggctgtggtccag c | SEQ ID NO: 238 | |
| βΐ (с TRBC1) | atgggacccaggctcctcttctgggcactgctttgtctcctcggaacaggcc cagtggaggctggagtcacacaaagtcccacacacctgatcaaaacgag aggacagcaagcgactctgagatgctctcctatctctgggcacaccagtgt gtactggtaccaacaggccctgggtctgggcctccagttcctcctttggtat gacgagggtgaagagagaaacagaggaaacttccctcctagattttcagg tcgccagttccctaattatagctctgagctgaatgtgaacgccttggagctg gaggactcggccctgtatctctgtgccagcagctgggggtaccaagagac ccagtacttcgggccaggcacgcggctcctggtgctcgaggacctgaac aaggtgttcccacccgaggtcgctgtgtttgagccatcagaagcagagatc tcccacacccaaaaggccacactggtgtgcctggccacaggcttcttcccc gaccacgtggagctgagctggtgggtgaatgggaaggaggtgcacagt ggggtcagcacggacccgcagcccctcaaggagcagcccgccctcaat gactccagatactgcctgagcagccgcctgagggtctcggccaccttctg gcagaacccccgcaaccacttccgctgtcaagtccagttctacgggctctc ggagaatgacgagtggacccaggatagggccaaacccgtcacccagat cgtcagcgccgaggcctggggtagagcagactgtggctttacctcggtgt cctaccagcaaggggtcctgtctgccaccatcctctatgagatcctgctag ggaaggccaccctgtatgctgtgctggtcagcgcccttgtgttgatggcca tggtcaagagaaaggatttc | SEQ ID NO: 239 | |
| βΐ (c TRBC2) | atgggacccaggctcctcttctgggcactgctttgtctcctcggaacaggcc cagtggaggctggagtcacacaaagtcccacacacctgatcaaaacgag aggacagcaagcgactctgagatgctctcctatctctgggcacaccagtgt gtactggtaccaacaggccctgggtctgggcctccagttcctcctttggtat gacgagggtgaagagagaaacagaggaaacttccctcctagattttcagg tcgccagttccctaattatagctctgagctgaatgtgaacgccttggagctg gaggactcggccctgtatctctgtgccagcagctgggggtaccaagagac | SEQ ID NO: 240 |
- 98 045443
| ccagtacttcgggccaggcacgcggctcctggtgctcgaggacctgaaa aacgtgttcccacccgaggtcgctgtgtttgagccatcagaagcagagatc tcccacacccaaaaggccacactggtgtgcctggccacaggcttctaccc cgaccacgtggagctgagctggtgggtgaatgggaaggaggtgcacagt ggggtcagcacagacccgcagcccctcaaggagcagcccgccctcaat gactccagatactgcctgagcagccgcctgagggtctcggccaccttctg gcagaacccccgcaaccacttccgctgtcaagtccagttctacgggctctc ggagaatgacgagtggacccaggatagggccaaacctgtcacccagatc gtcagcgccgaggcctggggtagagcagactgtggcttcacctccgagt cttaccagcaaggggtcctgtctgccaccatcctctatgagatcttgctagg gaaggccaccttgtatgccgtgctggtcagtgccctcgtgctgatggccat ggtcaagagaaaggattccagaggc | |||
| β2 (c TRBC1) | atggacaccagagtactctgctgtgcggtcatctgtcttctgggggcaggt ctctcaaatgccggcgtcatgcagaacccaagacacctggtcaggagga ggggacaggaggcaagactgagatgcagcccaatgaaaggacacagtc atgtttactggtatcggcagctcccagaggaaggtctgaaattcatggtttat ctccagaaagaaaatatcatagatgagtcaggaatgccaaaggaacgattt tctgctgaatttcccaaagagggccccagcatcctgaggatccagcaggta gtgcgaggagattcggcagcttatttctgtgccagctcaccgacaggtggc gagtactatggctacaccttcggttcggggaccaggttaaccgttgtagag gacctgaacaaggtgttcccacccgaggtcgctgtgtttgagccatcagaa gcagagatctcccacacccaaaaggccacactggtgtgcctggccacag gcttcttccccgaccacgtggagctgagctggtgggtgaatgggaaggag gtgcacagtggggtcagcacggacccgcagcccctcaaggagcagccc gccctcaatgactccagatactgcctgagcagccgcctgagggtctcggc caccttctggcagaacccccgcaaccacttccgctgtcaagtccagttctac gggctctcggagaatgacgagtggacccaggatagggccaaacccgtca cccagatcgtcagcgccgaggcctggggtagagcagactgtggctttacc tcggtgtcctaccagcaaggggtcctgtctgccaccatcctctatgagatcc tgctagggaaggccaccctgtatgctgtgctggtcagcgcccttgtgttgat ggccatggtcaagagaaaggatttc | SEQ ID NO: 241 | |
| β2 (c TRBC2) | atggacaccagagtactctgctgtgcggtcatctgtcttctgggggcaggt ctctcaaatgccggcgtcatgcagaacccaagacacctggtcaggagga ggggacaggaggcaagactgagatgcagcccaatgaaaggacacagtc atgtttactggtatcggcagctcccagaggaaggtctgaaattcatggtttat ctccagaaagaaaatatcatagatgagtcaggaatgccaaaggaacgattt tctgctgaatttcccaaagagggccccagcatcctgaggatccagcaggta gtgcgaggagattcggcagcttatttctgtgccagctcaccgacaggtggc gagtactatggctacaccttcggttcggggaccaggttaaccgttgtagag gacctgaaaaacgtgttcccacccgaggtcgctgtgtttgagccatcagaa gcagagatctcccacacccaaaaggccacactggtgtgcctggccacag gcttctaccccgaccacgtggagctgagctggtgggtgaatgggaagga ggtgcacagtggggtcagcacagacccgcagcccctcaaggagcagcc cgccctcaatgactccagatactgcctgagcagccgcctgagggtctcgg ccaccttctggcagaacccccgcaaccacttccgctgtcaagtccagttcta cgggctctcggagaatgacgagtggacccaggatagggccaaacctgtc acccagatcgtcagcgccgaggcctggggtagagcagactgtggcttca cctccgagtcttaccagcaaggggtcctgtctgccaccatcctctatgagat cttgctagggaaggccaccttgtatgccgtgctggtcagtgccctcgtgct gatggccatggtcaagagaaaggattccagaggc | SEQ ID NO: 242 | |
| β3 (с TRBC1) | atgagcatcggcctcctgtgctgtgcagccttgtctctcctgtgggcaggtc cagtgaatgctggtgtcactcagaccccaaaattccaggtcctgaagacag | SEQ ID NO: 243 |
- 99 045443
| gacagagcatgacactgcagtgtgcccaggatatgaaccatgaatacatgt cctggtatcgacaagacccaggcatggggctgaggctgattcattactcag ttggtgctggtatcactgaccaaggagaagtccccaatggctacaatgtctc cagatcaaccacagaggatttcccgctcaggctgctgtcggctgctccctc ccagacatctgtgtacttctgtgccagcagttcatacccccttcggacaggg cgatacaactcctataattcacccctccactttgggaacgggaccaggctc actgtgacagaggacctgaacaaggtgttcccacccgaggtcgctgtgttt gagccatcagaagcagagatctcccacacccaaaaggccacactggtgt gcctggccacaggcttcttccccgaccacgtggagctgagctggtgggtg aatgggaaggaggtgcacagtggggtcagcacggacccgcagcccctc aaggagcagcccgccctcaatgactccagatactgcctgagcagccgcct gagggtctcggccaccttctggcagaacccccgcaaccacttccgctgtc aagtccagttctacgggctctcggagaatgacgagtggacccaggatagg gccaaacccgtcacccagatcgtcagcgccgaggcctggggtagagca gactgtggctttacctcggtgtcctaccagcaaggggtcctgtctgccacca tcctctatgagatcctgctagggaaggccaccctgtatgctgtgctggtcag cgcccttgtgttgatggccatggtcaagagaaaggatttctga | |||
| β3 (c TRBC2) | atgagcatcggcctcctgtgctgtgcagccUgtctctcctgtgggcaggtc cagtgaatgctggtgtcactcagaccccaaaattccaggtcctgaagacag gacagagcatgacactgcagtgtgcccaggatatgaaccatgaatacatgt cctggtatcgacaagacccaggcatggggctgaggctgattcattactcag ttggtgctggtatcactgaccaaggagaagtccccaatggctacaatgtctc cagatcaaccacagaggatttcccgctcaggctgctgtcggctgctccctc ccagacatctgtgtacttctgtgccagcagttcatacccccttcggacaggg cgatacaactcctataattcacccctccactttgggaacgggaccaggctc actgtgacagaggacctgaaaaacgtgttcccacccgaggtcgctgtgttt gagccatcagaagcagagatctcccacacccaaaaggccacactggtgt gcctggccacaggcttctaccccgaccacgtggagctgagctggtgggt gaatgggaaggaggtgcacagtggggtcagcacagacccgcagcccct caaggagcagcccgccctcaatgactccagatactgcctgagcagccgc ctgagggtctcggccaccttctggcagaacccccgcaaccacttccgctgt caagtccagttctacgggctctcggagaatgacgagtggacccaggatag ggccaaacctgtcacccagatcgtcagcgccgaggcctggggtagagca gactgtggcttcacctccgagtcttaccagcaaggggtcctgtctgccacc atcctctatgagatcttgctagggaaggccaccttgtatgccgtgctggtca gtgccctcgtgctgatggccatggtcaagagaaaggattccagaggc | SEQ ID NO: 244 | |
| HD10 | а (с TRAC) | atggccatgctcctgggggcatcagtgctgattctgtggcttcagccagact gggtaaacagtcaacagaagaatgatgaccagcaagttaagcaaaattca ccatccctgagcgtccaggaaggaagaatttctattctgaactgtgactata ctaacagcatgtttgattatttcctatggtacaaaaaataccctgctgaaggtc ctacattcctgatatctataagttccattaaggataaaaatgaagatggaaga ttcactgtcttcttaaacaaaagtgccaagcacctctctctgcacattgtgccc tcccagcctggagactctgcagtgtacttctgtgcagcaagcggaggaag agatgacaagatcatctttggaaaagggacacgacttcatattctccccaat atccagaaccctgaccctgccgtgtaccagctgagagactctaaatccagt gacaagtctgtctgcctattcaccgattttgattctcaaacaaatgtgtcacaa agtaaggattctgatgtgtatatcacagacaaaactgtgctagacatgaggt ctatggacttcaagagcaacagtgctgtggcctggagcaacaaatctgact ttgcatgtgcaaacgccttcaacaacagcattattccagaagacaccttcttc cccagcccagaaagttcctgtgatgtcaagctggtcgagaaaagctttgaa acagatacgaacctaaactttcaaaacctgtcagtgattgggttccgaatcct | SEQ ID NO: 245 |
- 100 045443
| cctcctgaaagtggccgggtttaatctgctcatgacgctgcggctgtggtcc age | |||
| β (с TRBC1) | atgagcatcggcctcctgtgctgtgcagccttgtctctcctgtgggcaggtc cagtgaatgctggtgtcactcagaccccaaaattccaggtcctgaagacag gacagagcatgacactgcagtgtgcccaggatatgaaccatgaatacatgt cctggtatcgacaagacccaggcatggggctgaggctgattcattactcag ttggtgctggtatcactgaccaaggagaagtccccaatggctacaatgtctc cagatcaaccacagaggatttcccgctcaggctgctgtcggctgctccctc ccagacatctgtgtacttctgtgccagcagctactcccggacagagagcac agatacgcagtattttggcccaggcacccggctgacagtgctcgaggacc tgaacaaggtgttcccacccgaggtcgctgtgtttgagccatcagaagcag agatctcccacacccaaaaggccacactggtgtgcctggccacaggcttc ttccccgaccacgtggagctgagctggtgggtgaatgggaaggaggtgc acagtggggtcagcacggacccgcagcccctcaaggagcagcccgccc tcaatgactccagatactgcctgagcagccgcctgagggtctcggccacct tctggcagaacccccgcaaccacttccgctgtcaagtccagttctacgggc tctcggagaatgacgagtggacccaggatagggccaaacccgtcaccca gatcgtcagcgccgaggcctggggtagagcagactgtggctttacctcgg tgtcctaccagcaaggggtcctgtctgccaccatcctctatgagatcctgct agggaaggccaccctgtatgctgtgctggtcagcgcccttgtgttgatggc catggtcaagagaaaggatttc | SEQ ID NO: 246 | |
| β (с TRBC2) | atgagcatcggcctcctgtgctgtgcagccttgtctctcctgtgggcaggtc cagtgaatgctggtgtcactcagaccccaaaattccaggtcctgaagacag gacagagcatgacactgcagtgtgcccaggatatgaaccatgaatacatgt cctggtatcgacaagacccaggcatggggctgaggctgattcattactcag ttggtgctggtatcactgaccaaggagaagtccccaatggctacaatgtctc cagatcaaccacagaggatttcccgctcaggctgctgtcggctgctccctc ccagacatctgtgtacttctgtgccagcagctactcccggacagagagcac agatacgcagtattttggcccaggcacccggctgacagtgctcgaggacc tgaaaaacgtgttcccacccgaggtcgctgtgtttgagccatcagaagcag agatctcccacacccaaaaggccacactggtgtgcctggccacaggcttc taccccgaccacgtggagctgagctggtgggtgaatgggaaggaggtgc acagtggggtcagcacagacccgcagcccctcaaggagcagcccgccc tcaatgactccagatactgcctgagcagccgcctgagggtctcggccacct tctggcagaacccccgcaaccacttccgctgtcaagtccagttctacgggc tctcggagaatgacgagtggacccaggatagggccaaacctgtcaccca gatcgtcagcgccgaggcctggggtagagcagactgtggcttcacctcc gagtcttaccagcaaggggtcctgtctgccaccatcctctatgagatcttgct agggaaggccaccttgtatgccgtgctggtcagtgccctcgtgctgatggc catggtcaagagaaaggattccagaggc | SEQ ID NO: 247 |
Таким образом, в настоящем изобретении предложен выделенный полинуклеотид, включающий одну или более нуклеотидных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 132-156, 223-247 и 292-299 или их вариантов, обладающих по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с ними.
В настоящем изобретении также предложен TCR, включающий α-цепь, кодируемую нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 132, 135, 138, 141, 144, 147, 152, 223, 226, 227, 228, 233, 236, 237, 238, 245, 292, 295 и их вариантов, обладающих по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с ними.
В настоящем изобретении также предложен TCR, включающий β-цепь, кодируемую нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 133, 134, 136, 137, 139, 140, 142, 143, 145, 146, 148, 149, 150, 151, 153, 154, 155, 156, 224, 225, 229, 230, 231, 232, 234, 235, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 246, 247, 293, 294, 296-299 и их вариантов, обладающих по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности с ними.
Кроме того, в настоящем изобретении предложены выделенные полинуклеотидные последовательности, полученные из последовательностей, представленных в табл. 2. Например, в настоящем изобретении предложен выделенный полинуклеотид, кодирующий вариабельную область TCR согласно настоящему изобретению, где выделенный полинуклеотид включает фрагмент нуклеотидов любой из последовательностей SEQ ID NO: 132-156, 223-247 и 292-299.
Вариантные последовательности могут иметь вставки, делеции или замены одного или более осно- 101 045443 ваний. Если вариация включает вставку(и) или делецию(и), она может происходить по тройкам или может быть сбалансирована (т.е. вставкой на каждую делецию), чтобы вариация не вызывала сдвиг рамки считывания при трансляции остальной части последовательности.
Некоторые или все вариации могут быть молчащими в том смысле, что они не оказывают влияния на последовательность кодируемого белка вследствие вырожденности генетического кода.
Некоторые или все вариации могут давать консервативные аминокислотные замены, вставки или делеции, как объяснено выше. Вариация может быть сконцентрирована в одной или более областях, таких как области, кодирующие константные области, линкер или каркасные области α или β-цепей, или они могут быть распределены по всей протяженности молекулы.
Вариантная последовательность должна сохранять возможность кодировать всю или часть аминокислотной последовательности TCR, которая связывается с пептидом WT1.
Оптимизация кодонов.
Полинуклеотиды, используемые в настоящем изобретении, могут быть кодон-оптимизированными. Оптимизация кодона была ранее описана в WO 1999/41397 и WO 2001/79518. Различные клетки отличаются по своему использованию конкретных кодонов. Такое предпочтение кодонов соответствует различиям в относительной представленности конкретных тРНК в клетке определенного типа. Путем изменения кодонов в последовательности таким образом, чтобы они соответствовали относительной представленности соответствующих тРНК, можно повысить экспрессию. Подобным способом можно снизить экспрессию, специально подбирая такие кодоны, которым, как известно, соответствуют редкие в конкретном типе клетки тРНК. Таким образом, доступна дополнительная степень трансляционного контроля.
Многие вирусы, включая ВИЧ и другие лентивирусы, используют большое количество редких кодонов, и, путем их изменения в соответствии с обычно используемыми у млекопитающих кодонами, может быть достигнута повышенная экспрессия пакующих компонентов в клетках-продуцентах млекопитающих. В уровне теники известны таблицы использования кодонов в клетках млекопитающих, а также во множестве других организмов.
Оптимизация кодонов также может включать удаление мотивов нестабильности мРНК и скрытых сайтов сплайсинга.
Вектор.
В настоящем изобретении предложен вектор, включающий полинуклеотид, описанный в настоящем документе.
Вектор представляет собой инструмент, который обеспечивает или облегчает перенос единицы из одного окружения в другое. В соответствии с настоящим изобретением, и в качестве примера, некоторые векторы, используемые в технологиях рекомбинантных нуклеиновых кислот, позволяют осуществлять перенос таких единиц, как сегмент нуклеиновой кислоты (например, сегмент гетерологичной ДНК, такой как сегмент гетерологичной кДНК), в клетку-мишень. Вектор может служить для поддержания гетерологичной нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) в клетке, облегчения репликации вектора, включающего сегмент нуклеиновой кислоты, или облегчения экспрессии белка, кодируемого сегментом нуклеиновой кислоты. Векторы могут быть невирусными или вирусными. Примеры векторов, используемых в технологиях рекомбинантных нуклеиновых кислот, включают, без ограничения перечисленными, плазмиды, хромосомы, искусственные хромосомы и вирусы. Вектор может быть одноцепочечным или двухцепочечным. Он может быть линейным, и, необязательно, вектор включает одно или более плеч гомологии. Вектор также может быть, например, голой нуклеиновой кислотой (например, ДНК). В своей простейшей форме сам вектор может быть представляющим интерес нуклеотидом.
Векторы, используемые в изобретении, могут быть, например, плазмидными или вирусными векторами и могут включать промотор для экспрессии полинуклеотида и, необязательно, регулятор промотора.
Векторы, включающие полинуклеотиды, используемые в изобретении, могут быть введены в клетки при использовании различных способов, известных в уровне техники, таких как трансформация, трансфекция и трансдукция. Несколько методов известны в уровне техники, например, трансдукция рекомбинантными вирусными векторами, такими как ретровирусные, лентивирусные, аденовирусные, на основе аденоассоциированного вируса, бакуловирусные и векторы на основе вируса простого герпеса, векторы с транспозоном Спящая красавица; прямая инъекция нуклеиновых кислот и биолистическая трансформация.
Невирусные системы доставки включают, без ограничения перечисленными, способы трансфекции ДНК. В настоящем документе, трансфекция включает процесс с использованием невирусного вектора для доставки гена в клетку-мишень. Типичные методы трансфекции включают электропорацию, ДНК биолистику, липид-опосредованную трансфекцию, трансфекция уплотненной ДНК, липосомы, иммунолипосомы, липофектин, трансфекцию с использованием катионных соединений, катионные поверхностные амфифилы (CFA) (Nature Biotechnology 1996 14; 556) и их комбинации.
Следует понимать, что термин трансфекция охватывает доставку полинуклеотидов в клетки путем вирусной и невирусной доставки.
Кроме того, в изобретении могут использоваться методики таргетинга генов, например, доставка ДНК-модифицирующих средств.
- 102 045443
Термин вектор включает вектор экспрессии, т.е. конструкцию, способную к экспрессии in vivo или in vitro/ex vivo. Экспрессию может регулировать векторная последовательность, или, например, в случае вставки в целевой сайт, экспрессию может регулировать последовательность-мишень. Вектор может быть интегрирован в ДНК клетки или связан с ней.
Вирусные системы доставки включают, без ограничения перечисленными, аденовирусный вектор, вектор на основе адено-ассоциированного вируса (AAV), вектор на основе вируса герпеса, ретровирусный вектор, лентивирусный вектор и бакуловирусный вектор.
Ретровирусы представляют собой РНК-вирусы, жизненный цикл которых отличается от жизненного цикла литических вирусов. В этом отношении ретровирус является инфекционной еденицей, которая реплицируется через промежуточную ДНК. Когда ретровирус заражает клетку, его геном превращается в ДНК-форму под действием фермента обратной транскриптазы. ДНК-копия служит матрицей для синтеза новых РНК-геномов и кодируемых вирусом белков, необходимых для сборки инфекционных вирусных частиц.
Существует множество ретровирусов, например, вирус лейкоза мышей (MLV), вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирус инфекционной анемии лошадей (EIAV), вирус опухоли молочной железы мышей (MMTV), вирус саркомы Рауса (RSV), вирус саркомы Фудзинами (FuSV), вирус лейкоза мышей Молони (Mo-MLV), вирус остеосаркомы FBR мышей (FBR MSV), вирус саркомы мышей Молони (MoMSV), вирус лейкоза мышей Абельсона (A-MLV), вирус миелоцитоматоза птиц 29 (МС29) и вирус эритробластоза птиц (AEV), а также другие ретровирусы, включая лентивирусы.
Подробный список ретровирусов можно найти в публикации Coffin et al. (Retroviruses 1997 Cold Spring Harbour Laboratory Press Eds: JM Coffin, SM Hughes, HE Varmus pp 758-763).
Лентивирусы также принадлежат к семейству ретровирусов, но они могут инфицировать делящиеся и неделящиеся клетки (Lewis et al (1992) EMBO J. 3053-3058).
Вектор может быть способен к переносу нуклеотидной последовательности, кодирующей WT1специфичный TCR, описанный в настоящем документе, в клетку, такую как Т-клетка, в результате чего клетка экспрессирует WT1-специфичный TCR. Предпочтительно вектор будет способен к длительной высокой экспрессии в Т-клетках, при этом введенный TCR может успешно конкурировать с эндогенным TCR за ограниченный пул молекул CD3.
Увеличение доступности молекул CD3 может повышать экспрессию TCR, например, в клетке, которая была модифицирована для экспрессии TCR настоящего изобретения. Таким образом, вектор согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать один или более генов, кодирующих CD3-гамма, CD3-дельта, CD3-эпсилон и/или CD3-дзета. В одном варианте осуществления вектор согласно настоящему изобретению содержит ген, кодирующий CD3-дзета. Вектор может содержать ген, кодирующий CD8. Вектор может кодировать селективный маркер или суицидальный ген для повышения профиля безопасности генетически модифицированной клетки, например, клетки согласно настоящему изобретению или клетки, которая была модифицирована для экспрессии TCR настоящего изобретения (Bonini, Science 1997, Ciceri, Bonini Lancet Oncol. 2009, Oliveira et al., STM 2015). Гены, содержащиеся в векторе согласно настоящему изобретению, могут быть соединены с помощью саморасщепляющихся последовательностей, таких как саморасщепляющаяся последовательность 2А.
В альтернативе один или более отдельных векторов, кодирующих ген CD3, могут быть предоставлены для совместного переноса в клетку одновременно, последовательно или раздельно с одним или более векторами согласно настоящему изобретению, например, одним или более векторами, кодирующими TCR-рецепторы настоящего изобретения.
Клетка.
Настоящее изобретение относится к клетке, включающей полинуклеотид или вектор согласно настоящему изобретению.
Клетка может быть Т-клеткой, лимфоцитом или стволовой клеткой. Т-клетка, лимфоцит или стволовая клетка могут быть выбраны из группы, состоящей из CD4 клеток, CD8 клеток, наивных Т-клеток, стволовых Т-клеток памяти, Т-клеток центральной памяти, двойных отрицательных Т-клеток, эффекторных Т-клеток памяти, эффекторных Т-клеток, клеток Th0, клеток Тс0, клеток Th1, клеток Tc1, клеток Th2, клеток Тс2, клеток Th17, клеток Th22, гамма/дельта Т-клеток, естественных киллерных клеток (NK), естественных киллерных Т-клеток (NKT), гемопоэтических стволовых клеток и плюрипотентных стволовых клеток.
Тип клетки может быть выбран с возможностью обеспечивать требуемое и предпочтительное персистирование in vivo и обеспечивать требуемые и предпочтительные функции и свойства клеток настоящего изобретения.
Клетка может быть выделена у субъекта.
Клетка согласно настоящему изобретению может быть предложена для применения в адоптивном переносе клеток. При использовании в настоящем документе термин адоптивный перенос клеток относится к введению популяции клеток пациенту. Как правило, такие клетки являются Т-клетками, которые выделяют у субъекта, а затем генетически модифицируют и культивируют in vitro с целью экспрессии TCR настоящего изобретения, после чего вводят пациенту.
- 103 045443
Адоптивный перенос клеток может быть аллогенным или аутологичным.
Под аутологичным переносом клеток следует понимать, что исходную популяцию клеток (которые затем трансдуцируют согласно способу изобретения или трансдуцируют вектором согласно настоящему изобретению) получают у того же субъекта, которому затем вводят популяцию трансдуцированных Т-клеток. Аутологичный перенос обладает преимуществами, поскольку он лишен недостатков, связанных с иммунологической несовместимостью, и доступен субъекта независимо от доступности генетически совместимого донора.
Под аллогенным переносом клеток следует понимать, что исходную популяцию клеток (которые затем трансдуцируют согласно способу изобретения или трансдуцируют вектором согласно настоящему изобретению) получают у субъекта, отличного от субъекта, которому затем вводят популяцию трансдуцированных клеток. Предпочтительно донор будет генетически совместим с субъектом, которому вводят клетки, чтобы свести к минимуму риск иммунологической несовместимости. В альтернативе донор может быть несовместимым и не являться родственником пациента.
Подходящие дозы популяций трансдуцированных клеток являются такими, которые являются терапевтически и/или профилактически эффективными. Вводимая доза может зависеть от субъекта и состояния, подвергаемого лечению, и может быть с легкостью определена специалистом.
Клетка может быть получена из Т-клетки, выделенной у субъекта. Т-клетка может быть частью смешанной популяции клеток, выделенной у субъекта, такой как популяция лимфоцитов периферической крови (ЛПК). Т-клетки в популяции ЛПК могут быть активированы с помощью способов, известных в уровне техники, например, при использовании антител против CD3 и/или против CD28, или совпадающих по размеру с клетками сфер, конъюгированных с антителами против CD3 и/или против CD28.
Т-клетка может быть CD4+ Т-хелпером или CD8+ цитотоксической Т-клеткой. Клетка может присутствовать в смешанной популяции CD4+ Т-хелперов/CD8+ цитотоксических Т-клеток. Поликлональная активация, например, с применением антител против CD3, необязательно в комбинации с антителами против CD28, будет вызывать пролиферацию CD4+ и CD8+ Т-клеток.
Клетка может быть выделена у субъекта, которому затем адоптивно переносят генетически модифицированную клетку. В этом отношении клетка может быть получена путем выделения Т-клетки у субъекта, необязательной активации Т-клетки, переноса гена TCR в клетку ex vivo. Последующую иммунотерапию субъекта можно затем осуществлять путем адоптивного переноса TCR-трансдуцированных клеток. При использовании в настоящем документе этот процесс относится к аутологичному переносу Тклеток, то есть TCR-трансдуцированные клетки вводят тому же субъекту, у которого Т-клетки были первоначально получены.
В альтернативе Т-клетка может быть выделена у другого субъекта, таким образом, она является аллогенной. Т-клетка может быть выделена у субъекта-донора. Например, если субъект подвергается аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) или трансплантации паренхиматозных органов, или трансплантации клеток, или терапии стволовыми клетками, клетка может быть получена от донора, от которого получены органы, ткани или клетки. Донор и субъект, подвергающиеся лечению, могут быть прямыми родственниками.
В альтернативе клетка может быть, или может быть получена из стволовой клетки, такой как гемопоэтическая стволовая клетка (ГСК). Перенос генов в ГСК не приводит к экспрессии TCR на поверхности клеток, поскольку стволовые клетки не экспрессируют молекулы CD3. Однако когда стволовые клетки дифференцируются в лимфоидные клетки-предшественники, которые мигрируют в тимус, инициация экспрессии CD3 приводит к поверхностной экспрессии введенного TCR в тимоцитах.
Преимущество данного подхода состоит в том, что после своего формирования зрелые Т-клетки экспрессируют только введенный TCR и либо малые уровни эндогенных цепей TCR, либо не экспрессируют их, потому что экспрессия введенных цепей TCR подавляет перестройку эндогенных сегментов генов TCR с образованием функциональных альфа и бета-генов TCR. Дополнительное преимущество состоит в том, что генетически модифицированные стволовые клетки являются непрерывным источником зрелых Т-клеток с требуемой антигенной специфичностью. Таким образом, клетка может быть генетически модифицированной стволовой клеткой, предпочтительно генетически модифицированной гемопоэтической стволовой клеткой, которая после дифференцировки образует Т-клетку, экспрессирующую TCR согласно изобретению.
Другие методы, известные в уровне техники, могут использоваться для уменьшения, ограничения, предотвращения, сайленсинга или блокирования экспрессии эндогенных генов в клетках согласно настоящему изобретению или в клетках, полученных способами настоящего изобретения.
При использовании в настоящем документе термин прерывание относится к снижению, ограничению, предотвращению, сайленсингу или блокированию экспрессии гена. Специалист в данной области способен применить любой способ, известный в уровне техники, для прерывания эндогенного гена, например, любой подходящий способ редактирования генома, сайленсинга гена, нокдауна гена или нокаута гена.
Например, эндогенный ген может быть прерван искусственной нуклеазой. Искусственная нуклеаза, например, искусственная рестриктаза, сконструированная для направленного селективного воздействия
- 104 045443 на определенную полинуклеотидную последовательность (например, кодирующую целевой ген) и создающая двухцепочечный разрыв в указанной полинуклеотидной последовательности. Как правило, двухцепочечный разрыв (DSB) восстанавливается в процессе допускающего ошибки негомологичного соединения концов (NHEJ), в результате чего образуется нефункциональная полинуклеотидная последовательность, которая может быть неспособна экспрессировать эндогенный ген.
В некоторых вариантах осуществления искусственная нуклеаза выбрана из группы, состоящей из цинк-пальцевых нуклеаз (ZFN), подобных активаторам транскрипции эффекторных нуклеаз (TALEN) и CRISPR/Cas (например, CRISPR/Cas9).
Способы получения клетки (например, Т-клетки) согласно настоящему изобретению могут включать этап направленной интеграции кассеты экспрессии в эндогенный ген (например, эндогенный ген αцепи TCR и/или эндогенный ген β-цепи TCR). При использовании в настоящем документе термин кассета экспрессии относится к полинуклеотидной последовательности (например, ДНК полинуклеотидной последовательности), включающей одну или более полинуклеотидных последовательностей, кодирующих один или более генов, представляющих интерес, таким образом, указанные представляющие интерес гены способны экспрессироваться. Эндогенные последовательности могут способствовать экспрессии кассеты экспрессии, и/или транскрипция контрольных последовательностей в кассете экспрессии может способствовать экспрессии. Например, кассета экспрессии может содержать полинуклеотидную последовательность согласно настоящему изобретению или полинуклеотидную последовательность, кодирующую TCR согласно настоящему изобретению, функционально связанную с последовательностью регуляции экспрессии, например, промоторной или энхансерной последовательностью. Один или более генов, представляющих интерес, могут быть расположены между одним или более наборами сайтов рестрикции. Предпочтительно сайты рестрикции могут облегчать интеграцию кассеты экспрессии, например, в вектор, плазмиду или геномную ДНК (например, геномную ДНК клетки-хозяина).
Например, кассета экспрессии настоящего изобретения может быть перенесена из первой полинуклеотидной последовательности, например, в векторе, в другую путем 'разреза', например вырезания, кассеты экспрессии с использованием одной или нескольких подходящих рестриктаз и 'вставки', например интеграции, кассеты экспрессии во вторую полинуклеотидную последовательность.
Кассета экспрессии может включать полинуклеотид настоящего изобретения. Кассета экспрессии может включать полинуклеотид, кодирующий один или более TCR-рецепторов настоящего изобретения. Кассета экспрессии может дополнительно включать ген устойчивости к антибиотикам или другой селективный маркерный ген, который позволяет идентифицировать клетки, которые успешно интегрировали кассету экспрессии в свою ДНК. Полинуклеотидные последовательности, содержащиеся в кассете экспрессии, могут быть функционально связаны с последовательностями регуляции экспрессии, например, подходящей промоторной или энхансерной последовательностью. Специалист в данной области сумеет выбрать подходящие последовательности регуляции экспрессии.
В настоящем изобретении также предусмотрена клетка, экспрессирующая TCR настоящего изобретения, которая была генетически модифицирована с целью прерывания одного или более эндогенных генов МНС. Прерывание эндогенного гена МНС может снижать или предотвращать экспрессию МНС на поверхности генетически модифицированных клеток. Таким образом, такая генетически модифицированная клетка со сниженной или отсутствующей экспрессией МНС будеть обладать ограниченной или не будет обладать способностью презентировать антигены на своей клеточной поверхности. Такая клетка особенно предпочтительна для адоптивного переноса клеток, поскольку такая клетка не будет аллореактивной, например, клетка не будет презентировать антигены, которые могут распознаваться иммунной системой субъекта, получающего адоптивно переносимую клетку. В результате перенесенная клетка не будет распознаваться как 'чужая', и можно будет избежать нежелательного иммунного ответа против клетки. Такую клетку называют 'универсальной клеткой', так как она подходит для адоптивного переноса во множество различных хозяев независимо от типа HLA.
Таким образом, в настоящем изобретении предложен способ получения неаллореактивной универсальной Т-клетки, которая экспрессирует TCR настоящего изобретения. Кроме того, в настоящем изобретении предложена неаллореактивная универсальная Т-клетка, которая экспрессирует TCR настоящего изобретения.
В настоящем изобретении также предусмотрены клетки, которые были генетически модифицированы с целью прерывания еще одного из эндогенных генов для модификации клетки с целью улучшения выгодных свойств, характеристик или функций клетки и/или уменьшения нежелательных свойств, характеристик или функций. Например, путем прерывания эндогенного гена клетки можно изменять персистирование, размножение, активность, устойчивость к сигналам истощения/старения/ингибирования, хоуминг-способность или другие функции клетки. При использовании в данном контексте термин 'модифицировать' относится к изменению одной или более характеристик по сравнению с эквивалентной немодифицированной клеткой, например, клеткой, в которой не был прерван эндогенный ген. Например, изменение может быть увеличением, улучшением или введением характеристики или функции клетки по сравнению с эквивалентной немодифицированной клеткой. В альтернативе изменение может быть
- 105 045443 уменьшением, супрессией или устранением характеристики или функции клетки по сравнению с эквивалентной немодифицированной клеткой.
Полинуклеотиды и векторы настоящего изобретения можно переносить в определенные субпопуляции Т-клеток, включающие CD4 и/или CD8, наивные, стволовые Т-клетки памяти, центральной памяти, эффекторные клетки памяти или эффекторные клетки, или в другие клеточные субпопуляции, например, с получением другой продолжительности персистирования in vivo и функции в клетках настоящего изобретения.
Полинуклеотиды и векторы настоящего изобретения также можно переносить в субпопуляции Тклеток, такие как наивные, стволовые Т-клетки памяти, клетки центральной памяти, эффекторные клетки памяти, эффекторы.
Полинуклеотиды и векторы настоящего изобретения также можно переносить в субпопуляции Т-клеток с разной поляризацией, такие как Th0/Tc0, Th1/Tc1, Th2/Tc2, Th17, Th22 или другие, в зависимости от цитокинового фона, наиболее подходящего для направленного воздействия на опухоль конкретного типа.
Кроме того, полинуклеотиды и векторы настоящего изобретения, кодирующие антигенспецифичные области TCR-рецепторов настоящего изобретения, можно переносить в другие клеточные субпопуляции, в том числе гамма/дельта Т-клетки, NK-клетки, NKT-клетки, гемопоэтические стволовые клетки или другие клетки с целью получения терапевтического эффекта.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен способ получения клетки, который включает этап трансдукции клетки in vitro или ex vivo вектором настоящего изобретения. Различные способы трансдукции клетки вектором известны в уровне техники (см., например, Sambrook et al.).
В настоящем изобретении также предложен способ получения Т-клетки, экспрессирующей TCR согласно изобретению, посредством индукции дифференцировки стволовой клетки, которая включает полинуклеотид или вектор настоящего изобретения.
Популяция клеток может быть селективно очищена с обогащением клетками, которые демонстрируют определенный фенотип или характеристику, и очищена от других клеток, которые не демонстрируют такой фенотип или характеристику, или демонстрируют его в меньшей степени. Например, популяция клеток, которая экспрессирует специфический маркер (например, CD3, CD4, CD8, CD25, CD127, CD152, CXCR3 или CCR4), может быть очищена из исходной популяции клеток. Альтернативно или дополнительно популяция клеток, которая не экспрессирует другой маркер, может быть очищена.
Под обогащением популяции клеток клетками определенного типа следует понимать, что концентрация клеток такого типа в популяции увеличивается. Концентрация других типов клеток может одновременно с этим уменьшаться.
Очистка или обогащение могут привести к получению популяции клеток, по существу не содержащей других типов клеток.
Очистка или обогащение популяции клеток, экспрессирующих специфический маркер (например, CD3, CD4, CD8, CD25, CD127, CD152, CXCR3 или CCR4), может быть выполнена при использовании средства, которое связывается с таким маркером, предпочтительно по существу специфично связывается с таким маркером. Средство, которое связывается с клеточным маркером, может быть антителом, например, антителом, которое связывается с CD3, CD4, CD8, CD25, CD127, CD152, CXCR3 или CCR4.
Термин антитело относится к полным антителам или фрагментам антител, способным связываться с выбранной мишенью и включающим Fv, ScFv, F(ab') и F(ab')2, моноклональные и поликлональные антитела, рекомбинантные антитела, включая химерные, CDR-перивитые и гуманизированные антитела, а также искусственно отобранные антитела, полученные с применением фагового дисплея или альтернативных методов.
Кроме того, в изобретении также могут применяться альтернативы природным антителам, например авитела, авимеры, антикалины, нанотела и дарпины.
Средства, которые связываются со специфическими маркерами, могут быть помечены с возможностью идентификации с использованием любого из различных способов, известных в уровне техники. Средство может изначально содержать метку или может быть модифицировано путем конъюгирования метки с ним. Под конъюгированием следует понимать, что средство и метка функционально связаны. Это означает, что средство и метка соединены таким способом, который позволяет им выполнять свою функцию (например, связывание с маркером, обеспечение возможности флуоресцентной идентификации или разделения при помещении в магнитное поле) по существу беспрепятственно. Подходящие способы конъюгирования известны в данной области и могут быть с легкостью определены специалистом.
Метка может позволять детектировать и/или очищать из своего окружения, например, меченое средство и любую клетку, с которой оно связано (например, средство может быть помечено магнитной сферой или аффинной меткой, такой как авидин). Детектируемые маркеры, подходящие для применения в качестве метки, включают флуорофоры (например, зеленый, mCherry, голубой и оранжевый флуоресцентные белки) и пептидные метки (например, His-метки, Мус-метки, FLAG-метки и НА-метки).
В уровне техники известен ряд методик для разделения популяции клеток, экспрессирующих специфический маркер. К ним относятся технологии разделения на основе магнитных сфер (например, раз- 106 045443 деление на основе магнитных сфер с замкнутым циклом), проточная цитометрия, сортировка клеток с активированной флуоресценцией (FACS), очистка с использованием аффинной метки (например, с использованием аффинных колонок или сфер, таких как биотиновые колонки, для разделения меченных авидином средств) и способы на основе микроскопии.
Также можно проводить разделение при использовании комбинации различных методов, таких как этап разделения на основе магнитных сфер с последующей сортировкой полученной популяции клеток на один или более дополнительных (положительных или отрицательных) маркеров с помощью проточной цитометрии.
Разделение для клинического применения может быть выполнено, например, при использовании системы CliniMACS® (Miltenyi). Она является примером технологии разделения на основе магнитных сфер с замкнутым циклом.
Также предусмотрено, что свойства вытеснения красителя (например, боковая популяция или мечение родамином) или ферментативная активность (например, активность ALDH) могут использоваться для обогащения ГСК.
Химерные молекулы
В другом аспекте настоящего изобретения предложена химерная молекула, включающая TCR настоящего изобретения, TCR, кодируемый полинуклеотидом настоящего изобретения или его частью, конъюгированная с неклеточным субстратом. Конъюгирование может быть ковалентным или нековалентным.
Неклеточный субстрат может быть наночастицей, экзосомой или любым неклеточным субстратом, известным в уровне техники.
Химерная молекула настоящего изобретения может быть растворимой.
В другом аспекте настоящего изобретения предложена химерная молекула, включающая TCR настоящего изобретения, TCR, кодируемый полинуклеотидом настоящего изобретения или его частью, конъюгированная с токсином или антителом.
Токсин или антитело могут быть цитотоксическими. Токсин может быть цитотоксической молекулой или соединением, например, радиоактивной молекулой или соединением. Компонент TCR химерной молекулы может придавать способность распознавать клетки, экспрессирующие белок или пептиды WT1. Таким образом, химерная молекула может специфично распознавать и/или связываться с WT1экспрессирующими опухолевыми клетками. Таким образом, химерные молекулы настоящего изобретения могут обеспечивать WT1-направленную доставку цитотоксических токсинов, антител и/или соединений.
WT1-ассоциированные заболевания.
WT1 широко экспрессируется на различных гемобластных и солидных опухолях и при этом демонстрирует ограниченную экспрессию на различных здоровых тканях (например, гонадах, матке, почке, мезотелии, клетках-предшественниках в различных тканях). Авторы настоящего изобретения идентифицировали и определили аминокислотные последовательности TCR-рецепторов, которые распознают пептиды WT1. Кроме того, продемонстрировали, что Т-клетки, экспрессирующие TCR-рецепторы согласно настоящему изобретению, направленно воздействуют и убивают клетки, которые презентируют пептид WT1 или экспрессируют белок WT1 на повышенных уровнях.
Таким образом, в настоящем изобретении предложен способ лечения и/или предотвращения заболевания, связанного с экспрессией WT1, который включает этап введения TCR, выделенного полинуклеотида, вектора или клетки согласно настоящему изобретению субъекту, нуждающемуся в этом. В настоящем изобретении также предложен способ лечения и/или предотвращения заболевания, связанного с экспрессией WT1, который включает этап введения клетки, полученной с применением способа настоящего изобретения, нуждающемуся в этом субъекту.
Кроме того, в настоящем изобретении предложен TCR настоящего изобретения, выделенный полинуклеотид настоящего изобретения, вектор настоящего изобретения, клетка согласно настоящему изобретению или клетка, полученная с применением способа настоящего изобретения, для применения в лечении и/или предотвращении заболевания, связанного с экспрессией WT1.
Термин 'предотвращение' служит для обозначения предупреждения, задержки, воспрепятствования или торможения развития заболевания. Лечение, например, может предотвратить или уменьшить вероятность развития или возникновения заболевания, связанного с экспрессией WT1.
'Лечение' при использовании в настоящем документе относится к уходу за больным субъектом с целью уменьшения тяжести, устранения или уменьшения симптомов заболевания, или для снижения, остановки или задержки развития заболевания.
Субъектом может быть человек, участвующий в исследовании. Участвующий в исследовании человек может быть ребенком. Например, возраст ребенка может составлять меньше 10 лет, меньше 9 лет, меньше 8 лет, меньше 7 лет, меньше 6 лет, меньше 5 лет, меньше 4 лет, меньше 3 лет или меньше 2 лет. Участвующий в исследовании человек может быть грудным ребенком.
Ранее могли определить, что субъект нуждается в TCR, выделенном полинуклеотиде, векторе или клетке согласно настоящему изобретению или клетке, полученной способом согласно настоящему изо- 107 045443 бретению на основе экспрессии WT1. Например, субъект может иметь популяцию клеток, которая демонстрирует повышенную экспрессию WT1 по сравнению с популяцией здоровых контрольных клеток. Различные методы, известные в уровне техники, могут использоваться для определения экспрессии WT1, например, количественная ОТ-ПЦР может применяться для определения количества РНК-транскрипта WT1, которое указывает на экспрессию белка WT1. Специалисту в данной области также будет очевидно, что экспрессия белка WT1 может быть определена путем проведения вестерн-блоттинга с использованием доступных в продаже антител, специфичных к WT1.
У субъекта также может быть ранее выявлено наличие изменения (например, мутации или делеции) в гене WT1. Такое изменение может быть наследственным. Таким образом, заболевание, связанное с экспрессией WT1, может быть наследственным заболеванием. Примеры наследственных заболеваний, связанных с экспрессией WT1, включают, без ограничения перечисленными, синдром WAGR (опухоль Вильмса, аниридия, аномалии мочеполовой системы, задержка умственного развития), синдром ДенисаДраша (DDS), синдром Фрейзера (FS), синдром аномалий мочеполовой системы (аномалии репродуктивной функции и мочевыделительной системы).
Субъекты с наследственными заболеваниями, связанными с экспрессией WT1, могут подвергаться более высокому риску развития пролиферативного нарушения (например, рака).
Заболевание, связанное с экспрессией WT1, может быть пролиферативным нарушением.
Пролиферативное нарушение может быть гемобластозом или солидной опухолью. Гемобластоз может быть выбран из группы, состоящей из острого миелоидного лейкоза (ОМЛ), хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ), лимфообластного лейкоза, миелодиспластических синдромов, лимфомы, множественной миеломы, неходжкинской лимфомы и лимфомы Ходжкина.
Солидная опухоль может быть выбрана из группы, состоящей из рака легкого, рака молочной железы, рака пищевода, рака желудка, рака толстой кишки, холангиокарциномы, рака поджелудочной железы, рака яичника, злокачественных опухолей головы и шеи, синовиальной саркомы, ангиосаркомы, остеогенной саркомы, рака щитовидной железы, рака эндометрия, нейробластомы, рабдомиосаркомы, рака печени, меланомы, рака предстательной железы, рака почки, саркомы мягких тканей, уротелиального рака, рака желчных протоков, глиобластомы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака толстой и прямой кишки.
Заболевание, связанное с экспрессией WT1, может быть выбрано из группы, состоящей из острого миелоидного лейкоза (ОМЛ), хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ), лимф областного лейкоза, миелодиспластических синдромов, лимфомы, множественной миеломы, неходжкинской лимфомы и лимфомы Ходжкина, рака легкого, рака молочной железы, рака пищевода, рака желудка, рака толстой кишки, холангиокарциномы, рака поджелудочной железы, рака яичника, злокачественных опухолей головы и шеи, синовиальной саркомы, ангиосаркомы, остеогенной саркомы, рака щитовидной железы, рака эндометрия, нейробластомы, рабдомиосаркомы, рака печени, меланомы, рака предстательной железы, рака почки, саркомы мягких тканей, уротелиального рака, рака желчных протоков, глиобластомы, мезотелиомы, рака шейки матки и рака толстой и прямой кишки.
Фармацевтическая композиция.
TCR-рецепторы настоящего изобретения, полинуклеотиды настоящего изобретения, векторы настоящего изобретения, клетки настоящего изобретения, клетки, полученные способами настоящего изобретения, химерные молекулы настоящего изобретения и смешанная популяция клеток настоящего изобретения могут быть включены в лекарственную форму для введения субъектам с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или вспомогательным веществом. Подходящие носители и разбавители включают изотонические физиологические растворы, например фосфатно-солевой буферный раствор, и могут содержать человеческий сывороточный альбумин.
Обращение с продуктами для клеточной терапии предпочтительно осуществляют в соответствии с Международными стандартами FACT-JACIE для клеточной терапии.
Способ лечения.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения и/или предотвращения заболевания, связанного с экспрессией WT1, который включает этап введения TCR настоящего изобретения, выделенного полинуклеотида настоящего изобретения, вектора настоящего изобретения, клетки настоящего изобретения, клетки, полученной с применением способа настоящего изобретения, химерной молекулы настоящего изобретения или смешанной популяции клеток настоящего изобретения нуждающемуся в этом субъекту.
Субъект может быть человеком, участвующим в исследовании. Субъект может быть не относящимся к человеку подопытным животным.
Субъект может иметь заболевание, связанное с экспрессией WT1. Субъект может подвергаться риску развития заболеваний, связанных с экспрессией WT1. Ранее могло быть определено, что субъект подвергается риску развития заболевания, связанного с экспрессией WT1. Субъект может иметь повышенный риск развития заболевания, связанного с WT1.
Повышенный риск может быть определен с помощью генетического исследования и/или изучения семейного анамнеза субъекта. У субъекта могут экспрессироваться генетические маркеры, указывающие
- 108 045443 на повышенный риск развития заболевания, связанного с экспрессией WT1.
Таким образом, специалист в данной области будет осведомлен о генетических факторах риска (например, генетических маркерах), связанных с повышенным риском развития заболевания, связанного с WT1. Специалист сумеет применить любой подходящий способ или методику, известные в уровне техники, для определения, подвергается ли субъект повышенному риску развития заболевания, связанного с экспрессией WT1.
Субъект мог ранее проходить лечение от заболевания, связанного с экспрессией WT1. Субъект может находиться в состоянии ремиссии. Субъект может быть резистентным к химиотерапии. Субъект может быть резистентным к терапии антителами против WT1.
В одном варианте осуществления способ лечения и/или предотвращения заболевания, связанного с экспрессией WT1, включает этап введения субъекту химиотерапевтического средства. Химиотерапевтическое средство могут вводить субъекту одновременно, последовательно или отдельно с TCR настоящего изобретения, выделенным полинуклеотидом настоящего изобретения, вектором настоящего изобретения, клеткой согласно настоящему изобретению, клеткой, полученной способом настоящего изобретения, или химерной молекулой настоящего изобретения.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения и/или предотвращения заболевания, связанного с экспрессией WT1, который включает этап введения смешанной популяции клеток, где смешанная популяция клеток включает множество популяций клеток, каждая из которых экспрессирует разные TCR согласно настоящему изобретению.
В другом аспекте настоящего изобретения предложена смешанная популяция клеток, включающая множество популяций клеток, каждая из которых экспрессирует разные TCR согласно настоящему изобретению.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ получения смешанной популяции клеток, включающей множество популяций клеток, каждая из которых экспрессирует разные TCR согласно настоящему изобретению, где способ включает этап трансдукции клетки in vitro или ex vivo вектором настоящего изобретения.
В другом аспекте настоящего изобретения предложена смешанная популяция клеток для применения в лечении и/или предотвращении заболевания, связанного с экспрессией WT1, где смешанная популяция клеток включает множество популяций клеток, каждая из которых экспрессирует разные TCR согласно настоящему изобретению.
Например, смешанная популяция клеток может включать первую популяцию клеток, экспрессирующую первый TCR настоящего изобретения, и вторую популяцию клеток, экспрессирующую второй TCR настоящего изобретения. Например, смешанная популяция клеток может включать первую популяцию клеток, экспрессирующую первый TCR настоящего изобретения, вторую популяцию клеток, экспрессирующую второй TCR настоящего изобретения, и третью популяцию клеток, экспрессирующую третий TCR настоящего изобретения, и так далее.
Каждая популяция клеток смешанной популяции клеток может, например, экспрессировать только один TCR настоящего изобретения. Эндогенные гены TCR популяций клеток в смешанной популяции клеток могут быть прерваны или делетированы. Экспрессия эндогенных генов TCR клеток в смешанной популяции клеток может быть прервана, например, с помощью редактирования генов искусственной нуклеазой.
В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение TCR настоящего изобретения, выделенного полинуклеотида настоящего изобретения, вектора настоящего изобретения, клетки настоящего изобретения, клетки, полученной с применением способа настоящего изобретения, химерной молекулы настоящего изобретения или смешанной популяции клетки настоящего изобретения для производства лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с экспрессией WT1.
Лечение человека, как и ветеринарное лечение, входят в объем настоящего изобретения.
Если не указано иное, при практическом осуществлении настоящего изобретения будут использоваться стандартные методики клеточной биологии, молекулярной биологии, гистологии, иммунологии, онкологии, которые находятся в рамках квалификации специалиста в данной области. Такие методики описаны в литературе.
См., например, Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, Т. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Ausubel, F.M. et al. (1995 and periodic supplements) Current Protocols in Molecular Biology, Ch. 9, 13 and 16, John Wiley & Sons; Roe, В., Crabtree, J. and Kahn, A. (1996) DNA Isolation and Sequencing: Essential Techniques, John Wiley & Sons; Polak, J.M. and McGee, J.O'D. (1990) In Situ Hybridization: Principles and Practice, Oxford University Press; Gait, M.J. (1984)
Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; и Lilley, D.M. and Dahlberg, J.E. (1992) Methods in Enzymology: DNA Structures Part A: Synthesis and Physical Analysis of DNA, Academic Press. Каждый из этих общих текстов включен в настоящий документ посредством отсылки.
Различные предпочтительные признаки и варианты осуществления настоящего изобретения будут описаны далее посредством неограничивающих примеров.
- 109 045443
Примеры
Пример 1. Получение функциональных WTl-специфичных цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) от здоровых доноров (HD).
Для идентификации новых TCR-рецепторов, специфичных к эпитопам WT1, рестриктированным различными аллелями HLA, мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) десяти разных ЗД стимулировали пулом пентадекапептидов (15-меров) с перекрывающимся участком из 11 аминокислот, охватывающих полную последовательность белка WT1 (см. материалы и методы). Такой дизайн пептидов обеспечивает оптимальную стимуляцию как CD4+, так и CD8+ Т-клеток.
После 26-30 ч стимуляции обогащали Т-клетки, экспрессирующие CD137. CD137 является молекулой, апрегулируемой при связывании Т-клеточного рецептора, и ранее было показано, что она является надежным маркером для быстрой идентификации, выделения и размножения in vitro антигенспецифичных CD4+ и CD8+ Т-клеток памяти и наивных Т-клеток. Затем из CD137-отрицательной фракции удаляли фракцию CD3, затем облуча при 30 Гр и использовали в качестве антигенпрезентирующих клеток (АПК) для фракции CD137+. Сортированные CD137+ клетки размножали in vitro в течение ~9 дней и повторно стимулировали аутологичными АПК, представленными CD3-элиминированными клетками, или иммортализованными аутологичными В-клетками, нагруженными пулом пептидов, каждые 7-14 дней. Эта процедура привела к обогащению WT1-специфических Т-лимфоцитов, как показывают результаты цитофлуориметрического анализа, представленные на фиг. 1 (a-j). Функциональное исследование Т-клеток проводили в различные моменты времени. Более конкретно, Т-клетки совместно культивировали с аутологичными АПК, нагруженными пулом пептидов, и после 6 часов совместного культивирования экспрессию CD107а и IFNy в популяции Т-клеток определяли путем внутриклеточного окрашивания. Экспрессия CD107а после контакта с антигеном указывает на антиген-индуцированную дегрануляцию и литический потенциал.
В качестве отрицательного контроля клетки стимулировали пулом нерелевантных пептидов. Контрольная стимуляция приводила к минимальной секреции IFNy и CD107а Т-клетками, полученными от каждого здорового донора.
Пример 2. Картирование эпитопов WT1, вызывающих Т-клеточный ответ.
Для идентификации эпитопа WT1, распознаваемого Т-клетками, секрецию IFNy определяли количественно после 6 часов совместного культивирования in vitro WT1-стимулированных/обогащенных Тклеток с аутологичными АПК, нагруженными субпулами пептидов, каждый из которых содержал до 12 пептидов согласно сетке картирования. Сетка картирования состоит из 24 субпулов, причем каждый пептид содержится исключительно в двух пересекающихся субпулах (Doubrovina, E. et al. Blood 120, 16331646 (2012)). Результаты приведены на фиг. 2а.
FACS анализ показал значимую экспрессию IFNy и CD107а Т-клетками, полученными от HD1, HD3, HD6, HD7, HD10, после стимуляции субпулами 4, 5 и 16 (Фиг. 2b, d, g, h, k). Значимую экспрессию IFNy наблюдали в случае Т-клеток, полученных от HD2, стимулированных субпулами 6, 16, 17 и 20 (фиг. 2с), тогда как субпулы 4, 5, 6, 14, 18, 21 стимулировали экспрессию IFNy и CD107a в Т-клетках, полученных от HD4 (фиг. 2е), и субпулы 5, 11, 12, 21, 22 стимулировали экспрессию IFNy в HD5 (фиг. 2f). Что касается HD7, дополнительно наблюдали повышенную экспрессию IFNy и CD107а, хотя и на более низком уровне по сравнению с уровнем, наблюдаемым для субпулов 4, 5 и 16, после стимуляции субпулами 7, 8, 20 (фиг. 2h). Кроме того, наблюдали повышенную экспрессию IFNy и CD107а после стимуляции Тклеток, полученных от HD8, субпулами 12 и 14 (Фиг. 2i), и Т-клеток, полученных от HD9, субпулами 5, 13, 21 (фиг. 2j).
После этого полученные от HD Т-клетки стимулировали в течение 6 часов АПК, сенсибилизированными одиночными пентадекапептидами, общими для субпулов, вызывающих самый сильный иммунный ответ, и по меньшей мере одним нерелевантным 15-мером. FACS анализ показал повышенную экспрессию CD107a и/или IFNy для пептидов 40 и 41 в Т-клетках HD1 (Фиг. 3а), пептидов 54, 77, 90 для Тклеток HD2 (фиг. 3b), пептида VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157; который является нонамером пептида, представленного в SEQ ID NO: 117) для Т-клеток HD3 (Фиг. 3с), пептидов 17, 18, 99, 100 для HD4 (фиг. 3d, е), пептида 101 для HD5 (фиг. 3f), пептида VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157; который является нонамером пептида, представленного в SEQ ID NO: 117) для Т-клеток HD6 (фиг. 3g), пептидов 101, 125 и 137 для Т-клеток HD9 (фиг. 3h), пептида VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157; который является нонамером пептида, представленного в SEQ ID NO: 117) для Т-клеток HD10 (фиг. 3i). Таким образом, идентифицировали доминантные иммуногенные последовательности. Никаких релевантных иммунных ответов (т.е. повышенной экспрессии CD107а и/или IFNy) после совместного культивирования с нерелевантными контрольными пептидами не наблюдали. Для HD7 и HD8 из-за сниженного качества клеток было невозможно провести эксперименты по культивированию для идентификации иммуногенных пептидов. Тем не менее, можно было бы предсказать распознаваемый пептид путем деконволюции сетки картирования. Идентифицировали перекрывающуюся последовательность пептидов 41 и 42 (полученных из SP4, 5, 16) и перекрывающуюся последовательность пептидов 91 и 92 (полученных из SP7, 8, 20) для HD7 и пептида 24 для HD8.
- 110 045443
Для определения HLA-рестрикции иммуногенного пептида WT1, распознаваемого Т-клетками, размноженными от HD4, HD5 и HD10, Т-клетки из них совместно культивировали в течение 6 часов с панелью различных клеток-мишеней EBV-BLCL, каждая из которых экспрессировала разный аллель
HLA-A или HLA-B, которые сенсибилизировали соответствующим пептидом (пептидом 17 для HD4;
пептидом 101 для HD5; пептидом
VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157) для HD10) или нерелевантным контрольным пептидом. Результаты этого эксперимента показали, что пептид 17 презентирован аллелем HLA-B*3502 и распознается Т-клетками, полученными от HD4 (фиг. 3j), пептид 101 презентирован HLA-B*3501 и распознается Т-клетками, полученными от HD5 (фиг. 3 k); пептид
VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157) презентирован HLA-A*0201 и распознается Т-клетками, полученными от HD10 (фиг. 3l).
Последовательности пептидов WT1, распознаваемых WT1-специфичными Т-клетками, размноженными от HD1-HD10, показаны в табл. 3 ниже.
Таблица 3
| Донор связывающего TCR | Пептид | Последовательность | SEQ ID NO |
| HD1/HD3/HD6/HD7/HD10 | 40 | AAQWAPVLDFAPPG А | SEQ ID NO: 115 |
| 41 | APVLDFAPPGAS AYG | SEQ ID NO: 116 | |
| Перекрывающаяся последовательность (11-мер на Фигуре Зс) | АР VLDFAPPGA | SEQ ID NO: 117 | |
| HD2 | 54 | QCLSAFTVHFSGQFT | SEQ ID NO: 118 |
| 77 | EDPMGQQGSLGEQQ Y | SEQ ID NO: 119 | |
| 90 | SQLECMTWNQMNL GA | SEQ ID NO: 120 | |
| HD4 | 17 | TCVPEPASQHTLRSG | SEQ ID NO: 121 |
| 18 | EPASQHTLRSGPGCL | SEQ ID NO: 122 | |
| Перекрывающаяся последовательность | EPASQHTLRSG | SEQ ID NO: 123 | |
| 99 | HSTGYESDNHTTPIL | SEQ ID NO: 124 | |
| 100 | YESDNHTTPILCGAQ | SEQ ID NO: 125 | |
| Перекрывающаяся последовательность | YESDNHTTPIL | SEQ ID NO: 126 | |
| HD5 | 101 INHTTPILCGAQYRIH |SEQ ID NO: 127 | ||
| HD7 HD8 | 91 | CMTWNQMNLGATL KG | SEQ ID NO: 248 |
| 92 | NQMNLGATLKGVAA G | SEQ ID NO: 249 | |
| Перекрывающаяс я последовательност ь 24 | NQMNLGATLKG DPGGIWAKLGAAEA S | SEQ ID NO: 250 SEQ ID NO: 251 | |
| HD9 | 101 | NHTTPILCGAQYRI H | SEQ ID NO: 252 |
| 125 | KRHQRRHTGVKPFQ C | SEQ ID NO: 253 | |
| 137 | PSCQKKFARSDELVR | SEQ ID NO: 254 |
Пример 3. WT1-специфичные Т-клетки селективно элиминируют клетки, экспрессирующие WT1
Для определения HLA рестрикции WT1-специфичных Т-клеток и их способности элиминировать WT1-экспрессирующие клетки, Т-клетки совместно культивировали с различными клетками-мишенями.
- 111 045443
T-клетки, полученные от HD1.
Зная, что HD1 несет аллель HLA-A*0201, обогащенные WTl-специфичные Т-клетки культивировали совместно с различными клетками-мишенями: клетками Т2, сенсибилизированными пулом перекрывающихся пептидов, содержащим пептиды 40 и 41 (см. табл. 3); клетками Т2, сенсибилизированными пулом MelanA/MART1 в качестве отрицательного контроля (пулом Т2 MelanA/MART1); или клетками K562, генетически модифицированными для экспрессии аллеля HLA-A*0201 и оверэкспрессией белка WT1 (K562 HLA-A*0201 WT1).
После 6 часов совместного культивирования экспрессию CD107а определяли с помощью FACS. Результаты для HD1 указывают на экспрессию CD107а в >60% CD8+ T-клеток после совместного культивирования с клетками Т2, сенсибилизированными пулом WT1 (фиг. 4а). Аналогичным образом, совместное культивирование WT1-специфичных Т-клеток с генетически модифицированными клетками K562 (экспрессиующими аллель HLA-A*0201 и белок WT1) привело к экспрессии CD107a >60% CD8+ Тклетками (фиг. 4а).
С другой стороны, экспрессия CD107a CD8+ Т-клетками, совместно культивируемыми с клетками Т2, сенсибилизированными пулом отрицательного контроля MelanA/MARTl, была минимальной (фиг. 4а).
Эти результаты демонстрируют, что выделенные Т-клетки, полученные от HD1, специфично распознают пептид WT1, включающий последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117), когда он презентирован молекулами МНС, кодируемыми аллелем HLA-A*0201. Кроме того, результаты показывают, что полученные от HD1 Т-клетки способны специфично взаимодействовать с клетками-мишенями, повышенно экспрессирующими белок WT1. Таким образом, эти экспериментальные данные демонстрируют, что TCR-рецепторы, экспрессируемые полученными от HD1 Т-клетками, специфично связываются с пептидами, включающими аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117), и что такие TCR-рецепторы HLA-А*0201-рестриктированы.
T-клетки, полученные от HD3.
Зная, что HD3 несет аллель HLA-A*0201, обогащенные WT1-специфичные Т-клетки культивировали совместно с различными клетками-мишенями: клетками Т2, сенсибилизированными субпулом 16, который, как было ранее определено, содержал иммуногенный пептид, вызывающий иммунный ответ (T2-SP16); клетками Т2, сенсибилизированными пулом MelanA/MART1 в качестве отрицательного контроля (Т2-Melan А); клетками K562 дикого типа (K562) в качестве отрицательного контроля; или клетками K562, генетически модифицированными для экспрессии аллеля HLA-A*0201 и оверэкспрессии белка WT1 (K562 A2+WT1 +).
После 4 дней совместного культивирования способность полученных от HD3 Т-клеток убивать клетки-мишени выражали в виде индекса элиминации, вычисленного как общее количество клетокмишеней, оставшихся после совместного культивирования с WT1-специфичными Т-клетками, деленное на общее количество отдельных клеток-мишеней.
Результаты демонстрируют способность WT1-специфичных Т-лимфоцитов элиминировать клеткимишени, экспрессирующие идентифицированный WT1-специфичный эпитоп (Фиг. 4b). В частности, Тклетки, полученные от HD3, элиминировали приблизительно 95% клеток Т2, сенсибилизированных пептидами WT1, включающими аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117) (субпул 16; SP16). Кроме того, полученные от HD3 Т-клетки элиминировали приблизительно 78% клеток K562, экспрессирующих молекулы МНС, кодируемые аллелем HLA-A*0201, и повышенно экспрессирующих белок WT1. С другой стороны, ни одна из сенсибилизированных пулом отрицательного контроля MelanA/MART1 клеток Т2 не была элиминирована полученными от HD3 Т-клетками. Аналогичным образом, было отмечена минимальная элиминация контрольных клеток дикого типа K562 (фиг. 4b).
Эти результаты демонстрируют, что выделенные Т-клетки, полученные от HD3, специфично распознают пептид WT1, включающий аминокислотную последовательность
APVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 117).
Кроме того, результаты показывают, что полученные от HD3 Т-клетки способны специфично взаимодействовать и убивать клетки, повышенно экспрессирующие белок WT1 посредством презентации пептида кодируемым HLA-A*0201 МНС. Таким образом, эти экспериментальные данные демонстрируют специфичность к пептиду WT1 TCR-рецепторов, экспрессируемых полученными от HD3 Т-клетками, и что полученные от HD3 TCR-рецепторы являются HLA-A*0201-рестриктированными.
T-клетки, полученные от HD4.
Способность полученных от HD4 Т-клеток элиминировать клетки-мишени оценивали при совместном культивировании Т-клеток с первичными лейкозными бластами (CD33+ клетками), выделенными у пациента с острым миелодным лейкозом (ОМЛ), который был отобран по высокой экспрессии антигена WT1 и HLA-типированию (HLA-B*3502). В качестве отрицательного контроля Т-клетки, полученные от HD4, совместно культивировали с лейкозными бластами пациента с ОМЛ, у которого не экспрессировался аллель HLA-B*3502.
- 112 045443
После трех дней совместного культивирования при соотношении эффектора:мишени 10 к 1, FACS анализ показал почти полный клиренс лейкозных бластов (CD33+), полученных у пациента с ОМЛ, экспрессирующего аллель HLA-B*3502, после совместно культивирования с WT1-специфичными Тклетками HD4 (CD3+ клетками) (фиг. 4с, верхняя панель). Фактически только 0,54% оставшейся полной популяции клеток были положительными на экспрессию CD33.
С другой стороны, не наблюдали клиренса CD33+ клеток после совместного культивирования WT1специфичных Т-клеток с нерелевантными контрольными ОМЛ бластами (Фиг. 4с, нижняя панель). Фактически в контрольном образце 7,9% полной популяции клеток были положительными на экспрессию CD33 после совместного культивирования с полученными от HD4 WT1-специфичными Т-клетками.
Важно отметить, что эти результаты демонстрируют способность WT1-специфичных Т-клеток, полученных от HD4, специфично воздействовать и убивать лейкозные бласты (раковые клетки ОМЛ) с оверэкспрессией WT1 и кодируемый HLA-B*35O2 МНС. Таким образом, TCR-рецепторы, полученные от HD4, способны специфично воздействовать и HLA-В*3502-рестриктированно убивать раковые клетки.
Пример 4. Иммунопрофилирование последовательностей Ve для WT1-специфичных Т-клеток.
Для лучшей идентификации TCR-рецепторов, участвующих в антигенном распознавании WT1специфичными Т-клетками от HD1-6 и 10 (для HD7, HD8 и HD9 анализ Ve иммунопрофилирования было невозможно выполнить из-за сниженного качества клеток) сначала проводили мультипараметрический FACS анализ с целью количественного определения репертуар TCR Ve. Таким образом, с целью определения клональности размножившихся WT1-специфичных Т-клеток использовали набор 10 Test Beta Mark TCR V beta для определения V-бета репертуара согласно рекомендациям производителя. Этот набор позволяет обнаруживать экспрессию 24 различных V-бета генов в восьми отдельных пробирках. В частности, данный метод гарантирует охват 75% полного репертуара V-бета. Результаты FACS окрашивания показали преобладание специфических Ve для HD1, HD2, HD3, HD5, см. фиг. 5. Для HD4, HD6 и HD10 полное определение преобладающих Ve было невозможным, вероятно из-за внутреннего ограничения набора, который включает антитела, охватывающие 75% существующих белков Ve.
Пример 5. Высокопроизводительное секвенирование TCR α- и β-цепей, выделенных из WT1специфичных Т-клеток.
WT1-специфичные Т-клетки собирали в различные моменты времени в течение периода совместного культивирования и выделяли их РНК при использовании набора Arcturus Pico Pure для выделения РНК. Последовательности CDR3 WT1-специфичных Т-клеток амплифицировали при использовании модифицированного метода RACE, в который включали магнитный захват после синтеза кДНК для повышения специфичности реакции и удаления нежелательных матриц (Ruggiero et al. Nat. Commun. 6, 8081 (2015)). Образцы секвенировали при помощи секвенатора Illumina MiSeq и определяли клонотипы CDR3 при использовании программы MiXTCR (Bolotin, DA et al. Nature Methods 12, 380-381 (2015)). Кроме того, также определяли CDR1, CDR2 и CDR3 при использовании средства IMGT V-quest (Brochet, X. et al., Nucl. Acids Res. 36, W503-508 (2008). PMID: 18503082; Giudicelli, V., Brochet, X., Lefranc, M.-P., Cold Spring Harb Protoc. 2011 Jun 1; 2011(6). pii: pdb.prot5633. doi: 10.1101/pdb.prot5633. PMID: 21632778. Также см. реферат в буклете IMGT с подробным представлением из протокола Cold Spring Harbor (CSH)).
Результаты секвенирования продемонстрировали растущее в динамике преобладание специфического CDR3 клонотипа в популяции WT1-специфичных Т-клеток для обеих цепей TCR у HD1-10. Преобладающие генотипы α и β-цепей и последовательности CDR3 представлены на фиг. 6.
Кроме того, определяли полноразмерные аминокислотные последовательности α и β-цепи TCRрецепторов, полученных от HD1-10, см. табл. 1. Также определяли соответствующие нуклеотидные последовательности, см. табл. 2.
Пример 6. Функциональная проверка недавно идентифицированных TCR-рецепторов.
α и β последовательности TCR-рецепторов, выделенных у HD1 и HD3 и распознающих пептид WT1
VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157), презентированный аллелем HLA-A*0201, клонировали в лентивирусный вектор под контролем двунаправленного промотора для получения стабильной и скоординированной экспрессии обеих цепей TCR в трансдуцированных лимфоцитах. Т-клетки здорового донора трансдуцировали вирусным вектором, кодирующим TCR HD1 или TCR HD3. В качестве контроля клетки также трансдуцировали WT1 126-134 TCR. Трансдуцированные Т-клетки функционально проверяли при совместном культивировании с различными клетками-мишенями, представленными клетками Т2, сенсибилизированными одним из 2 распознаваемых пептидов (VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157) для TCR HD1 и HD3;
RMFPNAPYL (SEQ ID NO: 255) для WT1 126-134 TCR) (фиг. 7а), клетками K562 дикого типа или генетически модифицированными для экспрессии аллеля HLA-A*0201 (фиг. 7b), первичными бластами ОМЛ, полученными у 3 пациентов с ОМЛ и отобранными по экспрессии аллеля HLA-A*0201 и экспрессии WT1 (фиг. 7с). После 3 дней со- 113 045443 вместного культивирования наблюдали способность каждой популяции трансдуцированных Т-клеток специфично распознавать пептид-мишень, презентированный аллелем HLA-A*0201 (фиг. 7а), и более высокий потенциал Т-клеток HD1 при опосредовании почти полной элиминации генетически модифицированных клеток K562. Более высокая способность TCR HD1 распознавать антиген-мишень также подтверждали результатами совместно культивирования с Paml бластами. В данном случае наблюдали более полную элиминацию обоих бластов pAML, несущих аллель HLA-A*0201, при совместном культивированием с Т-клетками TR HD1 по сравнению с условиями, при которых HD3 TR и WT1 126-134 TR Тлимфоциты использовали в качестве эффекторных клеток.
Материалы и методы
Последовательность белка WT1, ранее опубликованную Гесслером с соавт. (Gessler, M. et al. (1990) Nature 343: 774-778), использовали для получения пептидов, используемых для стимуляции и выделения WT1-специфичных Т-клеток. Эта последовательность содержит 575 аминокислот и включает на N-конце первые 126 аминокислот, отсутствующие в изоформе WT1 (экзон 5+, KTS+). Создавали 141 пентадекапептид, охватывающий полную последовательность белка WT1, каждый из которых перекрывается с 11 аминокислотами следующего петида.
Пептиды синтезировали с помощью PRIMM согласно спецификациям подтвержденной последовательности, с 70% чистотой, стерильностью и отсутствием эндотоксина. Эти пептиды смешивали в равных количествах в пул WT1 при концентрации 1 мкг/мл каждого пептида. Кроме того, получали 24 субпула, каждый из которых содержал до 12 пептидов (4,17 мкг/мл каждого пептида) согласно определенной матрице картирования, чтобы каждый пептид был включен только в два перекрывающихся субпула, как показано в табл. 4 (см. стратегию с использованием сетки картирования в публикации Doubrovina, E. et al. Blood 120, 1633-1646 (2012)).
Таблица 4
SPl SP2 SP3 SP4 SP5 SP6 SP7 SP8 SP9 SP10 SP11 SP12
| SP13 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
| SP14 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 |
| SP15 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 |
| SP16 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 |
| SP17 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 |
| SP18 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 |
| SP19 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 |
| SP20 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92 | 93 | 94 | 95 | 96 |
| SP21 | 97 | 98 | 99 | 100 | 101 | 102 | 103 | 104 | 105 | 106 | 107 | 108 |
| SP22 | 109 | 110 | 111 | 112 | 113 | 114 | 115 | 116 | 117 | 118 | 119 | 120 |
| SP23 | 121 | 122 | 123 | 124 | 125 | 126 | 127 | 128 | 129 | 130 | 131 | 132 |
| SP24 | 133 | 134 | 135 | 136 | 137 | 138 | 139 | 140 | 141 |
Выделение мононуклеарных клеток периферической крови.
Периферическую кровь забирали у десяти здоровых доноров в клинике Сан-Раффаэле при получении информированного согласия. Мононуклеарные клетки периферической крови выделяли с помощью центрифугирования в градиенте плотности фиколл-гипака.
Иммортализованные В клетки.
Аутологичные В-клетки выделяли из МКПК здоровых доноров при использовании микросфер CD19 (Miltenyi Biotech). Клетки трансдуцировали лентивирусным вектором, несущим трансген BCL6/BCL-XL (Kwakkenbos, M. J. et al. Nat. Med.16, 123 (2009)) и псевдотип H/F (Levy, C. et al. Molecular Therapy20 9, 1699-1712, (2012)), и культивировали в IMDM с добавкой 10% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS), пенициллин-стрептомицина и 10 нг/мл IL21 (Miltenyi Biotech). В-клетки повторно стимулировали каждые 5 дней при совместном культивировании с облученными (50 Гр) мышиными Lфибробластами, экспрессирующими CD40L (3T3-CD40L), при соотношении В-клетки:3Т3-CD40L 10:1.
Клеточные линии.
Клеточные линии Т2 и K562 культивировали в 1640 RPMI (GIB CO-БАРРЕЛЬ) с добавкой пенициллина, стрептомицина, глутамина и 10% FBS (BioWhittaker).
Лейкозные клетки.
Первичные клетки ОМЛ были получены из биобанка лейкоза клиники Сан-Раффаэле (OSR) и отобраны по экспрессии WT1 с помощью количественной PCR и HLA типированию. Все EBV-BLCL и первичные лейкозные клетки типировали по аллелям HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DR и HLA-DQ в высоком разрешении в HLA лаборатории OSR.
Проточная цитометрия.
Использовали конъюгированные с ФИТЦ, ФЭ, PerCP, АФЦ, ФЭ-CyChrome 7, АФЦ-CyChrome 7Pacific Blue и Brillant Violet антитела к CD3, CD4, CD8, CD107a, IFNy, TNFa, CD33, CD117, CD34, CD14, Ve21.3, Ve8, Ve7.2 и HLA-A2 человека. Флуоресцентно меченный АФЦ WT1
VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157) и флуоресцентно меченный ФЭ WT1
RMFPNAPYL (SEQ ID NO: 255) декстрамеры использовали согласно инструкциям производителя. Клетки инкубировали с антите- 114 045443 лами в течение 15 минут при 4°С и промывали фосфатно-солевым буферным раствором, содержащим
1% FBS. Образцы вводили в проточный цитофлуориметр для сортировки клеток с активированной флуоресценцией (FACS) Canto II (BD Biosciences) и анализировали полученные данные с помощью программы Flow Jo (Tree star Inc). Для внутриклеточной оценки секреции цитокинов и экспрессии маркеров дегрануляции использовали набор Fix/Perm buffer set (Biolegend) согласно инструкциям производителя.
Стимуляция, выделение и размножение WT1-специфичных Т клеток
Свежие выделенные МКПК ресуспендировали в X-VIVO с добавкой 5% АВ человеческой сыворотки, 2 мМ глутамина и 1 мкг/мл моноклонального антитела к CD28, сеяли при плотности 107 клеток/мл и стимулировали пулом перекрывающихся пептидов WT1, каждый пептид присутствовал в концентрации 1 мкг/мл.
Антигенспецифичные Т-клетки выделяли через 26-30 ч по экспрессии CD137. В частности, клетки окрашивали ФЭ-конъюгированным антителом к CD137 и сортировали с использованим микросфер против ФЭ (Miltenyi Biotech). Из фракции CD137- клеток CD3 клетки элиминировали при использовании CD3-микросфер (Miltenyi Biotech), облучали при 30 Гр и использовали в качестве нагруженных пептидами АПК при сокультуре с CD137+ фракцией в соотношении 100:1 по возможности, или по меньшей мере 20:1, и конечной плотности 5x10 клеток/мл. В качестве среды использовали X-VIVO с добавкой 5% АВ человеческой сыворотки, 5 нг/мл IL7, 5 нг/мл IL15 и 10 нг/мл IL21. Среды, содержащие цитокины, меняли каждые 2-3 дня.
Повторная стимуляция размноженных антигенспецифичных T-клеток.
Клетки повторно стимулировали каждые 7-14 дней WT1-сенсибилизированными аутологичными АПК (МКПК без CD3-клеток; иммортализованные В-клетки). При первых рестимуляциях клетки промывали, и через 2 дня сеяли в среду без цитокинов. АПК облучали при 30 Гр, сенсибилизировали пулом пептидов в течение ночи и совместно культивировали с эффекторными клетками в Х-VIVO с добавкой 5% АВ человеческой сывороткой, 1 мкг/мл моноклонального антитела к CD28 и IL7 (5 нг/мл), IL15 (5 нг/мл), IL21 (10 нг/мл).
Оценка T-клеточного ответа.
Процент Т-клеток, отвечающих на пул пептидов WT1, измеряли путем 6-часового совместного культивирования эффекторных клеток с аутологичными АПК (при соотношении по меньшей мере 1:1), сенсибилизироваными нужным антигеном (пул пептидов WT1, субпулы WT1, отдельные пептиды WT1, нерелевантный пул пептидов в качестве контроля). Сокультуры сеяли в X-VIVO с добавкой 5% АВ человеческой сыворотки и моноклонального антитела к CD28 (1 мкг/мл), Golgi Stop (BD) и ФИТЦ-антитела к CD107а для оценки дегрануляции. Затем клетки фиксировали, пермеабилизировали и окрашивали внутриклеточно для определения процента CD3+CD8+или CD3+CD4+ клеток, экспрессирующих IFNy и CD 107а.
Картирование иммуногенных пептидов.
Т-клетки, стимулированные пулом WT1, сеяли в разные лунки и совместно культивировали с аутологичными АПК, нагруженными одним из каждого субпула WT1 в соотношении по меньшей мере 1:1. Тклеточные ответы против каждого субпула измеряли, как описано ранее, с помощью FACS анализа. Деконволюция сетки картирования была крайне важна для определения, какие из общих пептидов вызывали Т-клеточный ответ. После определения иммуногенных пептидов, Т-клетки дополнительно стимулировали АПК, нагруженными отдельными пептидами, чтобы подтвердить их иммуногенность.
Оценка способности Т-клеток распознавать WT1-экспрессирующие клетки.
WT1-специфичность и HLA-рестриктированную способность Т-клеток распознавать клеткимишени измеряли с помощью различных экспериментальных процедур. Для Т-клеток, полученных от HD1, секрецию CD107а определяли с помощью FACS анализа после 6 часов совместного культивирования с клетками-мишенями; для Т-клеток, полученных от HD3, вычисляли индекс элиминации как общее количество клеток-мишеней, оставшихся после 4 дней совместного культивирования с WT1специфичными Т-клетками, деленное на общее количество отдельных клеток-мишеней; для Т-клеток, полученных от HD4, процент CD33+ клеток-мишеней (первичные клетки ОМЛ, несущие представляющие интерес аллели HLA, и, в качестве контроля, первичные клетки ОМЛ, не несущие специфический аллель HLA), оставшихся после 3 дней совместного культивирования с CD3+ WT1-специфичными Тклетками, оценивали с помощью цитофлуориметрического анализа.
Оценка клональности Т-клеток.
Для определения клональности размноженных WT1-специфичных Т-клеток использовали набор IO Test Beta Mark TCR V beta repertoire согласно рекомендациям производителя.
Секвенирование репертуара TCR.
WT1-специфичные Т-клетки собирали в различные точки времени в течение периода совместного культивирования и выделяли РНК с помощью набора для выделения РНК Arcturus PicoPure. Последовательности определяющей комплементарность области (CDR) 3 WT1-специфичных Т-клеток амплифицировали с помощью модифицированного метода RACE (Ruggiero, E. et al. Nat. Commun. 6,8081 (2015)). Образцы секвенировали при использовании секвенатора IlluminaMiSeq и определяли клонотипы CDR3 при использовании программы MiXCR (Bolotin, DA et al. Nature Methods 12, 380-381 (2015)).
- 115 045443
Лентивирусные векторы.
Гены α- и β-цепи TCR, выделенные от HD1 и HD3, оптимизировали по кодонам, модифицировали остатками цистеина и клонировали в лентивирусный вектор (LV) под контролем двунаправленного промотора. Аминокислотные (ак) и нуклеотидные (нт) последовательности являлись следующими:
| SEQ ID NO: | ||
| HD1 α-цепь - нт посл-ть | ATGGAAACCCTGCTGAAGGTGCTGAGCGGCACACTGCTGTGGC AGCTGACATGGGTCCGATCTCAGCAGCCTGTGCAGTCTCCTCA GGCCGTGATTCTGAGAGAAGGCGAGGACGCCGTGATCAACTG CAGCAGCTCTAAGGCCCTGTACAGCGTGCACTGGTACAGACAG AAGCACGGCGAGGCCCCTGTGTTCCTGATGATCCTGCTGAAAG GCGGCGAGCAGAAGGGCCACGAGAAGATCAGCGCCAGCTTCA ACGAGAAGAAGCAGCAGTCCAGCCTGTACCTGACAGCCAGCC AGCTGAGCTACAGCGGCACCTACTTTTGTGGCACCGCCTGGAT CAACGACTACAAGCTGTCTTTCGGAGCCGGCACCACAGTGACA GTGCGGGCCAATATTCAGAACCCCGATCCTGCCGTGTACCAGC TGAGAGACAGCAAGAGCAGCGACAAGAGCGTGTGCCTGTTCA CCGACTTCGACAGCCAGACCAACGTGTCCCAGAGCAAGGACA GCGACGTGTACATCACCGATAAGTGCGTGCTGGACATGCGGAG CATGGACTTCAAGAGCAACAGCGCCGTGGCCTGGTCCAACAA GAGCGATTTCGCCTGCGCCAACGCCTTCAACAACAGCATTATC CCCGAGGACACATTCTTCCCAAGTCCTGAGAGCAGCTGCGACG TGAAGCTGGTGGAAAAGAGCTTCGAGACAGACACCAACCTGA ACTTCCAGAACCTGAGCGTGATCGGCTTCAGAATCCTGCTGCT CAAGGTGGCCGGCTTCAACCTGCTGATGACCCTGAGACTGTGG TCCAGC | 256 |
| HD1 а-цепь - ак посл-ть | METLLKVLSGTLLWQLTWVRSQQPVQSPQAVILREGEDAVINCSS SKALYSVHWYRQKHGEAPVFLMILLKGGEQKGHEKISASFNEKK QQSSLYLTASQLSYSGTYFCGTAWINDYKLSFGAGTTVTVRANIQ NPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKC VLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESS CDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLW | 257 |
- 116 045443
| SS | ||
| HD1 β-цепь - нт посл-ть | ATGGGATCTTGGACACTGTGTTGCGTGTCCCTGTGCATCCTGGT GGCCAAGCACACAGATGCCGGCGTGATCCAGTCTCCTAGACAC GAAGTGACCGAGATGGGCCAAGAAGTGACCCTGCGCTGCAAG CCTATCAGCGGCCACGATTACCTGTTCTGGTACAGACAGACCA TGATGAGAGGCCTGGAACTGCTGATCTACTTCAACAACAACGT GCCCATCGACGACAGCGGCATGCCCGAGGATAGATTCAGCGC CAAGATGCCCAACGCCAGCTTCAGCACCCTGAAGATCCAGCCT AGCGAGCCCAGAGATAGCGCCGTGTACTTCTGCGCCAGCAGA AAGACAGGCGGCTACAGCAATCAGCCCCAGCACTTTGGAGAT GGCACCCGGCTGAGCATCCTGGAAGATCTGAAGAACGTGTTCC CACCTGAGGTGGCCGTGTTCGAGCCTTCTGAGGCCGAGATCAG CCACACACAGAAAGCCACACTCGTGTGTCTGGCCACCGGCTTC TATCCCGATCACGTGGAACTGTCTTGGTGGGTCAACGGCAAAG AGGTGCACAGCGGCGTCTGTACCGATCCTCAGCCTCTGAAAGA GCAGCCCGCTCTGAACGACAGCAGATACTGCCTGAGCAGCAG ACTGAGAGTGTCCGCCACCTTCTGGCAGAACCCCAGAAACCAC TTCAGATGCCAGGTGCAGTTCTACGGCCTGAGCGAGAACGATG AGTGGACCCAGGATAGAGCCAAGCCTGTGACACAGATCGTGT CTGCCGAAGCCTGGGGCAGAGCCGATTGTGGCTTTACCAGCGA GAGCTACCAGCAGGGCGTGCTGTCTGCCACAATCCTGTACGAG ATCCTGCTGGGCAAAGCCACTCTGTACGCCGTGCTGGTGTCTG CCCTGGTGCTGATGGCCATGGTCAAGCGGAAGGATAGCAGGG GC | 258 |
| HD1 β-цепь - ак посл-ть | MGSWTLCCVSLCILVAKHTDAGVIQSPRHEVTEMGQEVTLRCKPI SGHDYLFWYRQTMMRGLELLIYFNNNVPIDDSGMPEDRFSAKMP NASFSTLKIQPSEPRDSAVYFCASRKTGGYSNQPQHFGDGTRLSIL EDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSW WVNGKEVHSGVCTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQN PRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCG FTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDS RG | 259 |
| HD3 α-цепь - нт посл-ть | ATGATCAGCCTGAGAGTGCTGCTGGTCATCCTGTGGCTGCAGC TGTCTTGGGTCTGGTCCCAGCGGAAAGAGGTGGAACAGGACCC CGGACCTTTCAATGTGCCTGAAGGCGCCACCGTGGCCTTCAAC TGCACCTACAGCAATAGCGCCAGCCAGAGCTTCTTCTGGTACA GACAGGACTGCCGGAAAGAACCCAAGCTGCTGATGAGCGTGT ACAGCAGCGGCAACGAGGACGGCAGATTCACAGCCCAGCTGA ACAGAGCCAGCCAGTACATCAGCCTGCTGATCCGGGATAGCA AGCTGAGCGATAGCGCCACCTACCTGTGCGTGGTCAACCTGCT GTCTAATCAAGGCGGCAAGCTGATCTTCGGCCAGGGCACAGA GCTGAGCGTGAAGCCCAACATTCAGAACCCCGATCCTGCCGTG TACCAGCTGAGAGACAGCAAGAGCAGCGACAAGAGCGTGTGC CTGTTCACCGACTTCGACAGCCAGACCAACGTGTCCCAGAGCA AGGACAGCGACGTGTACATCACCGATAAGTGCGTGCTGGACAT GCGGAGCATGGACTTCAAGAGCAACAGCGCCGTGGCCTGGTC CAACAAGAGCGATTTCGCCTGCGCCAACGCCTTCAACAACAGC | 260 |
- 117 045443
| ATTATCCCCGAGGACACATTCTTCCCAAGTCCTGAGAGCAGCT GCGACGTGAAGCTGGTGGAAAAGAGCTTCGAGACAGACACCA ACCTGAACTTCCAGAACCTGTCCGTGATCGGCTTCCGGATCCT GCTGCTGAAAGTGGCCGGCTTCAACCTCCTGATGACCCTGAGA CTGTGGTCCAGC | ||
| HD3 α-цепь - ак посл-ть | MISLRVLLVILWLQLSWVWSQRKEVEQDPGPFNVPEGATVAFNC TYSNSASQSFFWYRQDCRKEPKLLMSVYSSGNEDGRFTAQLNRA SQYISLLIRDSKLSDSATYLCVVNLLSNQGGKLIFGQGTELSVKPNI QNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDK CVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPE SSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRL WSS | 261 |
| HD3 β-цепь - нт посл-ть | ATGGGATGTAGACTTCTGTGTTGCGCCGTGCTGTGTCTGCTTGG AGCTGGCGAACTGGTGCCTATGGAAACCGGCGTGACCCAGAC ACCTAGACACCTGGTCATGGGCATGACAAACAAGAAAAGCCT GAAGTGCGAGCAGCACCTGGGCCACAATGCCATGTACTGGTAC AAGCAGAGCGCCAAGAAACCCCTGGAACTGATGTTCGTGTAC AGCCTGGAAGAGAGGGTCGAGAACAACAGCGTGCCCAGCAGA TTCAGCCCTGAGTGCCCTAATAGCAGCCACCTGTTTCTGCATCT GCACACCCTGCAGCCTGAGGACTCTGCCCTGTATCTGTGTGCC AGCAGCCAGGACTACCTGGTGTCCAACGAGAAGCTGTTCTTCG GCAGCGGCACACAGCTGAGCGTGCTGGAAGATCTGAAGAACG TGTTCCCACCTGAGGTGGCCGTGTTCGAGCCTTCTGAGGCCGA GATCAGCCACACACAGAAAGCCACACTCGTGTGTCTGGCCACC GGCTTCTATCCCGATCACGTGGAACTGTCTTGGTGGGTCAACG GCAAAGAGGTGCACAGCGGCGTCTGTACCGATCCTCAGCCTCT GAAAGAGCAGCCCGCTCTGAACGACAGCAGATACTGCCTGAG CAGCAGACTGAGAGTGTCCGCCACCTTCTGGCAGAACCCCAGA AACCACTTCAGATGCCAGGTGCAGTTCTACGGCCTGAGCGAGA ACGATGAGTGGACCCAGGATAGAGCCAAGCCTGTGACACAGA TCGTGTCTGCCGAAGCCTGGGGCAGAGCCGATTGTGGCTTTAC CAGCGAGAGCTACCAGCAGGGCGTGCTGTCTGCCACAATCCTG TACGAGATCCTGCTGGGAAAAGCCACTCTGTACGCTGTGCTGG TGTCCGCTCTGGTGCTGATGGCCATGGTCAAGCGGAAGGATAG CAGGGGC | 262 |
| HD3 β-цепь - ак посл-ть | MGCRLLCCAVLCLLGAGELVPMETGVTQTPRHLVMGMTNKKSL KCEQHLGHNAMYWYKQSAKKPLELMFVYSLEERVENNSVPSRF SPECPNSSHLFLHLHTLQPEDSALYLCASSQDYLVSNEKLFFGSGT QLSVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDH VELSWWVNGKEVHSGVCTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSA TFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWG RADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAM VKRKDSRG | 263 |
LV векторы упаковывали при использовании интеграза-компетентной конструкции третьего поколения и псевдотипировали с помощью оболочки вируса везикулярного стоматита (VSV). В качестве контроля включали LV, кодирующий WT1 126-134 TCR, распознающий пептид
RMFPNAPYL (SEQ ID NO: 255).
Векторные трансдукции.
Для трансдукции WT1-TCR лентивирусным вектором Т-клетки, выделенные у здорового лица, активировали и сортировали с использованием магнитных сфер, конъюгированных с антителами к CD3 и CD28 (ClinExVivo CD3/CD28; Invitrogen), согласно инструкциям производителя и культивировали в среде Дульбекко в модификации Искова (IMDM) (GIBCO-BRL) с добавкой пенициллина, стрептомицина, 10% FBS и по 5 нг/мл IL-7 и IL-15 (PeproTech). Для трансдукции Т-клетки сеяли при плотности 2,5х106 клеток/мл и заражали LV в течение 24 ч. Затем Т-клетки культивировали при плотности 106 клеток/мл и размножали. Эффективность трансдукции определяли путем измерения процента CD3 Т-клеток, экспрессирующих определенные декстрамеры. Клетки сортировали при использовании флуоресцентно меченного АФЦ или ФЭ HLA-A*0201 декстрамера, специфичного к пептиду
VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157) или
RMFPNAPYL (SEQ ID NO: 255) (Immudex) при использовании микросфер против АФЦ или против ФЭ (Miltenyi Biotec) согласно инструкциям производителя.
- 118 -
Claims (36)
- Функциональные тесты.Способность Т-клеток после переноса TCR HD1, HD3 и WT1 126-134 распознавать WT1экспрессирующие клетки-мишени измеряли при совместном культивировании с: (а) клетками Т2, сенсибилизированными пептидом WT1 126-134 или пептидомVLDFAPPGA (SEQ ID NO: 157) (соотношение эффектор:мишень=1:1); (b) клетками K562 дикого типа (K562) или генетически модифицированными для экспрессии аллеля HLA-A*0201 (соотношение эффектор:мишень=1:1); (с) 3 разными первичными бластами ОМЛ, отобранными по экспрессии аллеля HLA-A*0201 и антигена WT1 (соотношение эффектор:мишень=5:1). Для совместного культивирования с клеточными линиями Т2 и K562 в качестве контроля включали нетрансдуцированные Т-клетки. После 3 дней культивирования процент клеток-мишеней оценивали с помощью цитофлуориметрического анализа. Индекс элиминации вычисляли следующим образом: 1-(общее количество клеток-мишеней, оставшихся после 3 дней совместного культивирования с WT1-специфичными Т-клетками/общее количество отдельных клетокмишеней).Все публикации, указанные в представленном выше описании, включены в него посредством отсылки. Различные модификации и вариации описанного настоящего изобретения будут очевидны для специалистов в данной области техники без отступления от объема и сущности настоящего изобретения. Хотя настоящее изобретение было описано в отношении конкретных предпочтительных вариантов осуществления, следует понимать, что заявленное изобретение не должно быть ненадлежащим образом ограничено такими конкретными вариантами осуществления. Фактически различные модификации описанных способов осуществления изобретения, которые очевидны для специалистов в области клеточной биологии, иммунологии, иммунотерапии, молекулярной биологии, онкологии или в смежных областях, предназначены для включения в объем следующей формулы изобретения.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Т-клеточный рецептор (TCR), который связывается с пептидом белка опухоли Вильмса 1 (WT1), когда он презентирован главным комплексом гистосовместимости (МНС), где TCR содержит следующие CDR-последовательности:CDR1α - KALYS (SEQ ID NO: 1),CDR2α - LLKGGEQ (SEQ ID NO: 2),CDR3α - CGTAWINDYKLSF (SEQ ID NO: 3),CDR1β - SGHDY (SEQ ID NO: 6),CDR2β - FNNNVP (SEQ ID NO: 7), иCDR3β - CASRKTGGYSNQPQHF (SEQ ID NO: 8).
- 2. TCR по п.1, содержащий вариабельный домен α-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и вариабельный домен β-цепи, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней.
- 3. TCR по п.1 или 2, содержащий α-цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 или ее вариант, обладающий по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ней; и β-цепь, включающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и вариантов SEQ ID NO: 10 и 11, обладающих по меньшей мере 75% идентичностью последовательности с ними.
- 4. TCR по любому из предыдущих пунктов, который связывается с пептидным комплексом МНС I.
- 5. TCR по любому из предыдущих пунктов, который рестриктирован аллелем лейкоцитарного антигена человека (HLA).
- 6. TCR по любому из предыдущих пунктов, где TCR рестриктирован аллелем HLA-A*0201.
- 7. TCR по любому из предыдущих пунктов, включающий одну или более мутаций в области соединения α-цепи/в-цепи, в результате чего при экспрессии такой α-цепи и β-цепи в Т-клетке частота ошибочного спаривания между указанными цепями и α и β-цепями эндогенного TCR снижается.
- 8. TCR по п.7, где одна или более мутаций вводят один или более остатков цистеина в домен константной области каждой из α-цепи и β-цепи, где один или более остатков цистеина способны образовывать дисульфидную связь между α-цепью и β-цепью.
- 9. TCR по любому из предыдущих пунктов, который включает муринизированную константную область.
- 10. TCR по любому из предыдущих пунктов, где TCR является растворимым TCR.
- 11. Выделенный полинуклеотид, кодирующий α-цепь Т-клеточного рецептора (TCR) по любому из предыдущих пунктов и β-цепь TCR по любому из предыдущих пунктов.
- 12. Выделенный полинуклеотид по п.11, где полинуклеотид кодирует α-цепь, связанную с β-цепью.
- 13. Выделенный полинуклеотид по п.11 или 12, который дополнительно кодирует одну или более- 119 045443 коротких интерферирующих РНК (миРНК) или другие средства, способные снижать или предотвращать экспрессию одного или более эндогенных генов TCR.
- 14. Вектор, включающий полинуклеотид по любому из пп. 11-13.
- 15. Вектор по п.14, включающий полинуклеотид, который кодирует одну или более цепей CD3,CD8, суицидальный ген и/или селективный маркер.
- 16. Клетка, включающая TCR по любому из пп.1-9, полинуклеотид по любому из пп.11-13 или вектор по п.14 или 15.
- 17. Клетка по п.16, где клетка является Т-клеткой, лимфоцитом или стволовой клеткой.
- 18. Клетка по п.17, где клетка является Т-клеткой, которая была выделена у субъекта.
- 19. Клетка по любому из пп.16-18, где эндогенный ген в клетке, кодирующий α-цепь TCR, и/или эндогенный ген в клетке, кодирующий β-цепь TCR, прерван.
- 20. Способ получения клетки, который включает этап введения вектора по п.14 и/или 15 в клетку in vitro, ex vivo или in vivo, например, с помощью трансфекции или трансдукции.
- 21. Способ получения клетки по п.20, где клетка является Т-клеткой и где способ дополнительно включает этап редактирования Т-клетки, который включает прерывание эндогенного гена в Т-клетке, кодирующего α-цепь TCR, и/или эндогенного гена в Т-клетке, кодирующего β-цепь TCR, искусственной нуклеазой.
- 22. Способ получения клетки по п.21, который дополнительно включает этап направленной интеграции кассеты экспрессии в эндогенный ген, кодирующий α-цепь TCR, и/или эндогенный ген, кодирующий β-цепь TCR, прерванный искусственной нуклеазой, где кассета экспрессии включает полинуклеотидную последовательность, кодирующую TCR по любому из пп.1-11.
- 23. Способ получения клетки по любому из пп.20-22, который дополнительно включает этап прерывания одного или более эндогенных генов в клетке, кодирующих MHC.
- 24. Способ получения клетки по любому из пп.20-23, который дополнительно включает этап прерывания одного или более эндогенных генов в клетке с целью изменения персистирования, размножения, активности, устойчивости к сигналам истощения/старения/ингибирования, хоуминг-способности или других Т-клеточных функций.
- 25. Применение клетки по любому из пп.16-19 или клетки, полученной способом по любому из пп.20-24, для адоптивного переноса клеток.
- 26. Химерная молекула, включающая TCR по любому из пп.1-9, конъюгированная с неклеточным субстратом, токсином и/или антителом, где неклеточный субстрат выбран из группы, состоящей из наночастиц и экзосом.
- 27. Применение TCR по любому из пп.1-9, выделенного полинуклеотида по любому из пп.11-13, вектора по п.14 или 15, клетки по любому из пп.16-19, клетки, полученной способом по любому из пп.20-24, или химерной молекулы по п.26 для лечения или предотвращения заболевания, связанного с экспрессией WT1.
- 28. Способ лечения или предотвращения заболевания, связанного с экспрессией WT1, который включает этап введения TCR по любому из пп.1-9, выделенного полинуклеотида по любому из пп.11-13, вектора по п.14 или 15, клетки по любому из пп.16-19, клетки, полученной способом по любому из пп.20-24, или химерной молекулы по п.26 нуждающемуся в этом субъекту.
- 29. Применение по п.27, где заболевание, связанное с экспрессией WT1, является пролиферативным нарушением.
- 30. Применение по п.29, где пролиферативное нарушение является гемобластной или солидной опухолью.
- 31. Применение по п.30, где гемобластная опухоль является острым миелоидным лейкозом.
- 32. Применение по п.30, где пролиферативное нарушение является солидной опухолью.
- 33. Способ по п.28, где заболевание, связанное с экспрессией WT1, является пролиферативным нарушением.
- 34. Способ по п.33, где пролиферативное нарушение является гемобластной или солидной опухолью.
- 35. Способ по п.34, где гемобластная опухоль является острым миелоидным лейкозом.
- 36. Способ по п.34, где пролиферативное нарушение является солидной опухолью.- 120 -
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US62/489,226 | 2017-04-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA045443B1 true EA045443B1 (ru) | 2023-11-27 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20240132569A1 (en) | Tcr and peptides | |
| JP7451858B2 (ja) | クローディン６特異的免疫受容体およびｔ細胞エピトープ | |
| KR102457504B1 (ko) | 암에 대한 면역요법에서의 사용을 위하여 형질주입된 t 세포 및 t 세포 수용체 | |
| CN109476726B (zh) | 在治疗HvG病中使用的融合蛋白 | |
| US11713346B2 (en) | Claudin-18.2-specific immunoreceptors and T cell epitopes | |
| US10538572B2 (en) | T cell immunotherapy specific for WT-1 | |
| US20230041030A1 (en) | Antigen-binding proteins targeting shared neoantigens | |
| JP7491532B2 (ja) | ＨｖＧ疾患の処置における使用のためのＣＡＲ | |
| AU2017205637A1 (en) | Compositions and libraries comprising recombinant T-cell receptors and methods of using recombinant T-cell receptors | |
| US20220119477A1 (en) | Tcr and peptides | |
| Davari et al. | Development of a CD8 co-receptor independent T-cell receptor specific for tumor-associated antigen MAGE-A4 for next generation T-cell-based immunotherapy | |
| EA045443B1 (ru) | Tcr и пептиды |