EA044571B1 - СОСТАВЫ ГЛИКОКОНЪЮГАТНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ExPEC - Google Patents
СОСТАВЫ ГЛИКОКОНЪЮГАТНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ExPEC Download PDFInfo
- Publication number
- EA044571B1 EA044571B1 EA201991033 EA044571B1 EA 044571 B1 EA044571 B1 EA 044571B1 EA 201991033 EA201991033 EA 201991033 EA 044571 B1 EA044571 B1 EA 044571B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antigen
- polysaccharide
- coli
- concentration
- immunogenic composition
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 327
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 29
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 229
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 229
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 182
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 169
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 168
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 168
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 117
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 88
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 65
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims description 65
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 59
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 59
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 53
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 claims description 49
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 claims description 49
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 48
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 43
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 43
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 41
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 41
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 41
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 41
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 241001455504 Escherichia coli O2 Species 0.000 claims description 34
- 101900161471 Pseudomonas aeruginosa Exotoxin A Proteins 0.000 claims description 28
- -1 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 claims description 21
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 19
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 17
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 claims description 16
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 15
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 claims description 13
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 13
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 12
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 claims description 10
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 claims description 9
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 claims description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 9
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 8
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 8
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 7
- 229920005644 polyethylene terephthalate glycol copolymer Polymers 0.000 claims description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 claims description 4
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 claims description 2
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 102100038968 WAP four-disulfide core domain protein 1 Human genes 0.000 claims 1
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 claims 1
- 238000009516 primary packaging Methods 0.000 claims 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 claims 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 50
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 47
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 47
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 description 26
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 24
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 22
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 17
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 16
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 16
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 14
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 13
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 12
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 12
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 12
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 11
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 11
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 11
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 10
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 10
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 10
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 7
- 108700033844 Pseudomonas aeruginosa toxA Proteins 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 7
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 6
- 230000008642 heat stress Effects 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 101710082714 Exotoxin A Proteins 0.000 description 5
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 5
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 5
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 5
- 229940093916 potassium phosphate Drugs 0.000 description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L Phosphate ion(2-) Chemical compound OP([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 4
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000006353 environmental stress Effects 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 4
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 4
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 4
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 4
- 229940101027 polysorbate 40 Drugs 0.000 description 4
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001621104 Escherichia coli O6 Species 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N aldehydo-L-rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 3
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 230000005730 ADP ribosylation Effects 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 2
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 2
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YELMWJNXDALKFE-UHFFFAOYSA-N 3h-imidazo[4,5-f]quinoxaline Chemical class N1=CC=NC2=C(NC=N3)C3=CC=C21 YELMWJNXDALKFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010056519 Abdominal infection Diseases 0.000 description 1
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010007882 Cellulitis Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide/propylene oxide copolymer Chemical compound CCCOC(C)COCCO CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108050001049 Extracellular proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 239000004812 Fluorinated ethylene propylene Substances 0.000 description 1
- 208000008745 Healthcare-Associated Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 206010058780 Meningitis neonatal Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010031252 Osteomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010058674 Pelvic Infection Diseases 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 206010034972 Photosensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 206010067268 Post procedural infection Diseases 0.000 description 1
- 206010037596 Pyelonephritis Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010062255 Soft tissue infection Diseases 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004482 WACKER® Polymers 0.000 description 1
- 206010048038 Wound infection Diseases 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003445 biliary tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000005388 borosilicate glass Substances 0.000 description 1
- 229920005557 bromobutyl Polymers 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 1
- 229920005556 chlorobutyl Polymers 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 229940111685 dibasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940061607 dibasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- HQQADJVZYDDRJT-UHFFFAOYSA-N ethene;prop-1-ene Chemical group C=C.CC=C HQQADJVZYDDRJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000840 ethylene tetrafluoroethylene copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 229920002313 fluoropolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004811 fluoropolymer Substances 0.000 description 1
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 244000000058 gram-negative pathogen Species 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 231100000171 higher toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004857 imidazopyridinyl group Chemical class N1C(=NC2=C1C=CC=N2)* 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 150000002730 mercury Chemical class 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940111688 monobasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 229920009441 perflouroethylene propylene Polymers 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 229960005323 phenoxyethanol Drugs 0.000 description 1
- 230000036211 photosensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940031351 tetravalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000011123 type I (borosilicate glass) Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Данное изобретение относится к композициям, вызывающим иммунный ответ против внекишечной патогенной Escherichia coli (ExPEC). В частности, варианты осуществления этого изобретения относятся к поливалентным вакцинам, содержащим конъюгаты полисахаридных антигенов Е. Coli, ковалентно связанных с белком-носителем, которые могут выдерживать многочисленные стрессы, вызванные внешними условиями.
Предпосылки изобретения
Внекишечная патогенная Е. coli (ExPEC) представляет собой наиболее распространенный грамотрицательный патоген у людей и может вызывать различные инфекции вне желудочно-кишечного тракта, которые приводят к разнообразным и серьезным заболеваниям, оканчивающимся значительными осложнениями и смертностью. Увеличивающаяся множественная лекарственная устойчивость среди штаммов ExPEC препятствует лечению и приводит к растущему числу случаев госпитализации и смертей и увеличению затрат, связанных с ExPEC инфекциями, в здравоохранении.
В связи с этим остро стоит вопрос о необходимости вакцины против ExPEC. О-антиген - компонент поверхностного липополисахарида - был идентифицирован в качестве перспективной мишени для вакцин, и используется в качестве антигена в гликоконъюгатной вакцине, в настоящее время находящейся в стадии разработки (см., например, Poolman and Wacker, 2016, J. Infect. Dis. 213: 6-13).
Гликоконъюгатные вакцины против ExPEC, в настоящее время находящиеся в стадии разработки, содержат 0-гликаны, относящиеся к разным серотипам ExPEC, каждый из которых соединен с белкомносителем, таким как внеклеточный белок A Pseudomonas aeruginosa (ЕРА) (см., например, WO 2015/124769 и WO 2017/035181). Такие вакцины, содержащие 0-гликаны E.coli серотипов 025b, О1А, O2 и О6А, находятся, например, в фазе 2 исследования (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT02546960).
Данными изобретателями было обнаружено, что несмотря на то, что существующий состав вакцин против ExPEC (25 мМ Tris pH 7,4, 2,7 мМ KCl, 137 мМ NaCl) пригоден для кратковременного хранения при 2-8°С и имеет приемлемый срок годности после вскрытия упаковки, он не устойчив при замораживании/размораживании и плохо переносит стресс, вызванный перемешиванием. Непреднамеренное замораживание, случайный нагрев и встряхивание (например, в ходе хранения или транспортировки) имеют разрушительное действие на целостность продукта составов против ExPEC. В случае фармацевтических продуктов, предназначенных для использования в больших популяциях, таких как гликоконъюгатная вакцина против ExPEC, желательно, чтобы состав можно было замораживать партиями при низких температурах, а после размораживания и перед использованием можно было хранить при приблизительно 2-8°С (т.е. когда лекарственная субстанция заморожена для длительного хранения в большом объеме, но лекарственный продукт в ходе применения хранится при приблизительно 2-8°С, и, таким образом, продукт обязательно проходит по меньшей мере один цикл замораживания/размораживания). Кроме того, предпочтительно, чтобы состав был совместим с различными материалами так, чтобы продукт (например, гликоконъюгат) можно было хранить в различных формах (например, мешках, бутылках, флаконах, предварительно заполненных шприцах и/или применяемых приспособлениях).
В этой области техники существует потребность в составах вакцин против ExPEC, которые могли бы выдерживать многочисленные стрессы, связанные с внешними условиями (например, замораживание/размораживание, встряхивание, повышенные температуры, воздействие света, воздействие металлов окислителей и т.п.), и которые характеризовались бы более продолжительными стабильностью и сроком хранения композиций, и предпочтительно при обращении с ними были бы совместимы с многочисленными материалами (например, контейнером). Любые варианты разложения в результате стрессов, вызванных внешними условиями, могут вести к пониженной биологической активности, и могут потенциально приводить к образованию побочных продуктов или производных компонентов состава, таким образом приводя к повышению токсичности и/или измененной иммуногенности вакцины против ExPEC. Таким образом, необходим специализированный подход к нахождению устойчивого состава гликоконъюгатных вакцин, обеспечивающего стабильность в разнообразных условиях. Для этого необходимо выбрать тип буфера, pH и специальные формообразующие для составления особым образом и методично оптимизировать таким образом, чтобы обеспечивалась химическая, физическая и биологическая стабильности гликоконъюгатных вакцин. С учетом всех этих изменяющихся факторов, нахождение оптимальных условий составления гликоконъюгатных вакцин против ExPEC связано с преодолением многочисленных препятствий, и композицию хорошего состава невозможно предсказать.
Соответственно, в этой области техники существует потребность в составах гликоконъюгатных вакцин против ExPEC, которые бы позволили композициям вакцин выдерживать многочисленные стрессы, связанные с внешними условиями, и имели бы улучшенную стабильность и более продолжительный срок хранения. Целью настоящего изобретения является получение таких составов.
Краткое описание изобретения
Предложено два новых состава гликоконъюгатных вакцин против ExPEC, которые позволяют получать композиции вакцин с усовершенствованным стабилизирующим действием при замораживании/размораживании, стрессе при встряхивании, тепловом стрессе, вызванном металлом окислительном стрессе, причем дополнительно эти составы при обращении с ними совместимы с различными материа
- 1 044571 лами (например, контейнером). Эти усовершенствованные составы можно применять в ходе хранения или транспортировки как лекарственного продукта, так и лекарственной субстанции, когда (непреднамеренно) могут происходить замораживание или сильное встряхивание, которые могут иметь разрушительное действие на целостность продукта, а вследствие этого - и на его эффективность. Кроме того, новые составы обеспечивают гликоконъюгатным вакцинам против ExPEC улучшенную стабильность при тепловом стрессе и по этой причине могут иметь широкое коммерческое применение, относящееся к хранению лекарственного продукта и лекарственной субстанции, обращению с ними и транспортировке, в широком интервале температур и разнообразных условиях.
В данном документе предложены композиции, содержащие по меньшей мере один Е. coli О антиген-полисахарид, где по меньшей мере один О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; от 3% до 8 вес/об.% сорбита; от 5 до 15 мМ метионина; от 5 до 20 мМ калий/натрий фосфатного буфера с pH от 6,5 до 7,5; и от 0,01% до 0,2% (вес/об.) ПАВ. В предпочтительных вариантах осуществления концентрация сорбита составляет от 4% до 6% (вес/об.). В предпочтительных вариантах осуществления концентрация метионина составляет от 8 до 12 мМ. В предпочтительных вариантах осуществления концентрация калий/натрий фосфатного буфера составляет от 8 до 15 мМ. Предпочтительно, чтобы композиция представляла собой поливалентную иммуногенную композицию, содержащую Е. coli O25B антиген-полисахарид, Е. coli O1A антиген-полисахарид, Е. coli O2 антиген-полисахарид, и Е. coli O6A антиген-полисахарид, где каждый О антиген-полисахарид независимо ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; от 4% до 6 вес/об.% сорбита; от 8 до 12 мМ метионина; от 8 до 15 мМ калий/натрий фосфатного буфера с pH от 6,5 до 7,5; и от 0,01% до 0,2 вес/об.% ПАВ.
В данном документе также предложены композиции, содержащие по меньшей мере один Е. Coli О антиген-полисахарид, где по меньшей мере один О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; от 3% до 12 вес/об.% сахарозы; от 0,1 до 1,5 мМ EDTA; от 5 до 20 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH от 6,5 до 7,5; и от 0,01% до 0,2 вес/об.% ПАВ. В предпочтительных вариантах осуществления концентрация сахарозы составляет от 3% до 10 вес/об.%. В предпочтительных вариантах осуществления концентрация калий/натрий фосфатного буфера составляет от 8 до 15 мМ. Предпочтительно, чтобы композиция представляла собой поливалентную иммуногенную композицию, содержащую Е. coli O25B антиген-полисахарид, Е. coli О1А антигенполисахарид Е. coli O2 антиген-полисахарид и Е. coli O6A антиген-полисахарид, где каждый антигенполисахарид независимо ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белканосителя; от 3% до 10 вес/об.% сахарозы; от 0,1 до 1,5 мМ EDTA; от 8 до 15 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH от 6,5 до 7,5; и от 0,01% до 0,2 вес/об.% ПАВ.
В некоторых вариантах осуществления Е. coli O25B, О1А, O2 и O6A антигены-полисахариды находятся в весовом соотношении 1:1:1:1 или 2:1:1:1.
В определенных вариантах осуществления концентрация сорбита составляет 5 вес/об.%.
В определенных вариантах осуществления концентрация сахарозы составляет 8 вес/об.%.
В предпочтительных вариантах осуществления концентрация метионина составляет 10 мМ.
В определенных вариантах осуществления концентрация EDTA составляет 1 мМ.
В определенном варианте осуществления концентрация калий/натрий фосфатного буфера составляет 10 мМ, а значение pH калий/натрий фосфатного буфера составляет 7,0.
В определенных вариантах осуществления концентрация ПАВ составляет 0,02 вес/об.%. В предпочтительных вариантах осуществления ПАВ состоит из гидрофильной головной части (ОН-группы) и длинной гидрофобной хвостовой части (углеродной цепи, которая может содержать приблизительно 12, 14, 16, 18, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 100, 120, 130 или более атомов углерода в углеродной цепи). В предпочтительных вариантах осуществления ПАВ представляет собой неионогенный ПАВ. В определенных вариантах осуществления ПАВ выбирают из группы, состоящей из F-68, PS20, PS40, PS60 и PS80. В определенных вариантах осуществления ПАВ представляет собой PS80.
В определенных вариантах осуществления предложены композиции, состоящие по сути из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида и Е. coli O6A антигена-полисахарида, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином А Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 5 вес/об.% сорбита; 10 мМ метионина; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80. Также предложены композиции, состоящие из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигенаполисахарида и Е. coli O6A антигена-полисахарида, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 5 вес/об.% сорбита; 10 мМ метионина; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80.
В определенных вариантах осуществления предложены композиции, состоящие по сути из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида, Е. coli O6A антигена-полисахарида и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 других E.coli О антигенов-полисахаридов, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином А Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 5 вес/об.% сорбита; 10 мМ метионина; 10 мМ ка- 2 044571 лий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80. Также предложены композиции, состоящие из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигенаполисахарида, Е. coli O6A антигена-полисахарида и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 других E.coli О антигенов-полисахаридов, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 5 вес/об.% сорбита; 10 мМ метионина; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80.
В определенных вариантах осуществления предложены композиции, состоящие по сути из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида и Е. coli O6A антигена-полисахарида, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином А Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 8 вес/об.% сахарозы; 1 мМ EDTA; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80. Также предложены композиции, состоящие из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli О1А антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида и Е. coli O6A антигена-полисахарида, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 8 вес/об.% сахарозы; 1 мМ EDTA; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80.
В определенных вариантах осуществления предложены композиции, состоящие по сути из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида, Е. coli O6A антигена-полисахарида и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 других E.coli О антигенов-полисахаридов, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином А Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 8 вес/об.% сахарозы; 1 мМ EDTA; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80. Также предложены композиции, состоящие из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигенаполисахарида, Е. coli O6A антигена-полисахарида и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 других E.coli О антигенов-полисахаридов, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 8 вес/об.% сахарозы; 1 мМ EDTA; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80.
Также в данном документе предложены способы получения композиций, которые здесь раскрыты. В определенных вариантах осуществления предложены способы получения композиций, включающие в себя внесение по меньшей мере одного Е. coli О антигена, ковалентно связанного с ЕРА носителем, воды, солей для буферного раствора (т.е. (ди)гидрофосфата натрия и (ди)гидрофосфата калия [т.е. Na2HPO4 и KH2PO4 или NaH2PO4 и K2HPO4]), регулятора тоничности (т.е. сорбита или сахарозы), антиоксиданта (т.е. метионина, если регулятором тоничности является сорбит; EDTA, если регулятором тоничности является сахароза) и ПАВ (например, PS80) в емкость, доведение pH до требуемого значения pH (т.е. от 6,5 до 7,5, например, 7,0) и перемешивание этих ингредиентов, и таким образом получение жидкого состава согласно данному изобретению. В предпочтительном варианте осуществления способы получения композиций включают в себя внесение Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli О1А антигенаполисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида и Е. coli O6A антигена-полисахарида, где каждый антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A of Pseudomonas aeruginosa (ЕРА) белка-носителя; воды; калия фосфата; натрия фосфата; сорбита; метионина; и PS80 в емкость, доведение pH до 6,5-7,5 (например, 7,0), и смешивание каждого ингредиента таким образом, чтобы конечная концентрация калий/натрий фосфатного буфера составляла 5-20 мМ (например, 10 мМ) при pH, равном 6,5-7,5 (например, 7,0), конечная концентрация сорбита составляла 3-8% (например, 5%) (вес/об.), конечная концентрация метионина составляла 5-15 мМ (например, 10 мМ), и конечная концентрация PS80 составляла 0,01-0,08% (например, 0,02%) (вес/об.). В предпочтительном варианте осуществления способы получения композиций включают в себя внесение Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигенаполисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида и Е. coli O6A антигена-полисахарида, где каждый антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A of Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; воды; фосфата калия; фосфата натрия; сахарозы; EDTA; и PS80 в емкость, смешивание каждого ингредиента и доведение pH до 6,5-7,5 (например, 7,0) таким образом, чтобы конечная концентрация сахарозы составляла 3-12% (например, 8%) (вес/об.), конечная концентрация EDTA составляла 0,1-1,5 мМ (например, 1 мМ), конечная концентрация калий/натрий фосфатного буфера составляла 5-20 мМ (например, 10 мМ) при pH, равном 6,5-7,5 (например, 7,0), и PS80 составляет 0,01-0,08% (например, 0,02%) (вес/об.).
В определенных вариантах осуществления данные композиции предложены в виде жидких композиций. Под жидкой композицией подразумевается, что она находится в жидком состоянии при температуре 2-8°С и предпочтительно хранится при 2-8°С.
В определенных вариантах осуществления данные композиции могут храниться и сохраняют стабильность при 2-8°С, при 25°С или при 40°С. В предпочтительном варианте осуществления композиция хранится и сохраняет стабильность при 2-8°С. В определенных вариантах осуществления композиция сохраняет стабильность при 2-8°С в течение не менее чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 или более месяцев. В определенных вариантах осуществления композиция сохраняет стабильность при 25°С в течение не менее чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более месяцев. В определенных вариантах осуществле- 3 044571 ния композиция сохраняет стабильность при 40°С в течение не менее чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6,
7, 8, 9, 10, 11, 12 или более недель.
В определенных вариантах осуществления данные композиции предложены в виде замороженного состава. Под замороженным составом понимают композицию, которая находится в твердом состоянии при хранении при температуре приблизительно -18° или ниже, например, при приблизительно -20°С, -40°С, -60°С, -70°С, -80°С или любой температуре в этом интервале или ниже. В определенных вариантах осуществления данные композиции могут храниться и сохраняют стабильность при -40°С или -60°С в зависимости от регулятора тоничности, присутствующего в композиции. В определенных вариантах осуществления данные композиции могут храниться и сохраняют стабильность при -70°С. В определенных вариантах осуществления композиция содержит сахарозу и сохраняет стабильность при -40°С в течение не менее чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или более месяцев. В определенных вариантах осуществления композиция содержит сорбит и сохраняет стабильность при -60°С в течение не менее чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или более месяцев. В определенных вариантах осуществления композиция содержит сорбит или сахарозу и сохраняет стабильность при -70°С в течение не менее чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более лет.
В предпочтительных вариантах осуществления композиции по настоящему изобретению не содержат хлорид натрия.
В определенных вариантах осуществления концентрация каждого О-антигена-полисахарида в композиции составляет от приблизительно 1 до 200 мкг/мл, например, от приблизительно 2 до 100 мкг/мл, например, от приблизительно 4 до 50 мкг/мл. В определенных вариантах осуществления соотношение полисахарид:белок-носитель составляет от приблизительно 1:10 до приблизительно 1:2, например, от приблизительно 1:5 до 1:2 для каждого О-антигена-полисахарида в композиции.
Краткое описание фигур
Вышеизложенное краткое описание, а также нижеследующее подробное описание предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения будут более понятны при их рассмотрении в сочетании с прилагаемыми графическими материалами. Следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными вариантами осуществления, показанными на графических материалах.
В графических материалах:
на фиг. 1А-1С показано, что PS20, PS80 и F68, но не сорбит, были способны предотвратить вызываемую замораживанием/размораживанием агрегацию ExPEC гликоконъюгата в условиях испытания: PS20, PS80, F68 и сорбит добавляли к ExPEC гликоконъюгатному составу и подвергали воздействию стресса, вызываемого замораживанием/размораживанием, на фиг. 1А показан метод интегрирования хроматограммы эксклюзионной хроматографиивысокоэффективной жидкостной хроматографии (ЭХ-ВЭЖХ);
на фиг. 1В показана хроматограмма ЭХ-ВЭЖХ, демонстрирующая результаты эксперимента до и после замораживания/размораживания; и на фиг. 1С показана диаграмма величины пика примеси 1 в процентах от суммарного интегрального значения пиков;
на фиг. 2 показан график сравнения процентных значений ЭХ-ВЭЖХ хроматографического пика примеси 1 составов 26 и 28 со старым ExPEC гликоконъюгатным составом, после длительного температурного воздействия при 40°С в течение периода 12 недель: были исследованы оба положения флакона, а именно, вертикальное (4) и перевернутое (Т), Составы 26 и 28 продемонстрировали увеличившуюся стабильность по сравнению с ExPEC гликоконъюгатным составом при воздействии теплового стресса (40°С); и на фиг. 3 показаны графики, демонстрирующие поведение пика примеси 1 составов 26 и 28 в сравнении со старым ExPEC гликоконъюгатным составом при воздействии трех разных концентраций вольфрамовой вытяжки (HW, MW, LW) и хранившихся при 40°С в течение 4 недель.
на фиг. 4 показаны хроматограммы ЭХ-ВЭЖХ, демонстрирующие результаты эксперимента до и после стресса, вызванного встряхиванием (Т0 - контрольный образец, т.е. без стресса, вызванного встряхиванием) для составов 26 и 26 в сравнении со старым составом при контакте с материалами пластиков ПЭТГ и ПК.
Подробное описание изобретения
Различные публикации, статьи и патенты цитируются или описываются в разделе Предпосылки изобретения и на протяжении всего описания; при этом каждый из этих литературных источников включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Обсуждение документов, актов, материалов, устройств, изделий и т. п., которое было включено в настоящее описание, предназначено для обеспечения контекста настоящего изобретения. Такое обсуждение не является признанием того, что любые или все из этих материалов являются частью предшествующего уровня техники относительно любых раскрытых или заявленных изобретений.
- 4 044571
Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимает средний специалист в области техники, к которой относится настоящее изобретение. В иных случаях определенные термины, используемые в данном документе, имеют значения, изложенные в описании.
Следует отметить, что используемые в данном документе и в прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают ссылку на множественное число, если из контекста явно не следует иное.
Если не указано иное, любые числовые значения, такие как концентрация или границы интервала концентраций, описанные в данном документе, во всех случаях следует понимать как модифицированные термином приблизительно. Таким образом, числовое значение обычно включает ±10% от указанного значения. Например, концентрация 1 мг/мл включает в себя все значения от 0,9 мг/мл до 1,1 мг/мл. Таким же образом интервал концентраций от 1% до 10 вес/об.% включает в себя значения от 0,9 вес/об.% до 11 вес/об.%. В данном контексте применение числового интервала однозначно включает в себя все возможные подинтервалы, все числовые значения в этом интервале, включая целые числа в таких интервалах и дробные значения, если в контексте явно не указано иное.
В данном контексте подразумевается, что термины содержит, содержащий, включает, включающий, имеет, имеющий или любые другие их формы означают, что они охватывают означенное целое число или группу целых чисел, но не исключают любые другие целые числа или группу целых чисел, и предназначены быть неисключительными или допускающими поправки. Например, композиция, смесь, процесс, метод, изделие или устройство, содержащие перечень элементов не обязательно ограничиваются только этими элементами, но и могут включать другие элементы, явно не указанные или являющиеся неотъемлемой частью такой композиции, смеси, процесса метода, изделия или устройства. Кроме того, если явно не указано иное, или относится к включающему или, а не исключающему или. Например, условию А или В отвечает любое из следующего: А истинно (или в наличии) и В ложно (или отсутствует), А ложно (или отсутствует) и В истинно (или в наличии), и оба А и В истинны (или в наличии).
В данном контексте термин состоит из или варианты, такие как состоят из или состоящий(ие) из во всем описании или формуле изобретения, указывают на включение любого из приведенных элементов или группы элементов, но дополнительные элементы или группа элементов не могут быть добавлены к указанному способу, структуре или композиции.
В данном контексте термин по сути состоит из или варианты, такие как по сути состоят из или по сути состоящий(ие) из во всем описании или формуле изобретения, указывают на включение любого из приведенных элементов или группы элементов и необязательное включение любых приведенных элементов или группы элементов, которые существенным образом не меняют основы новых признаков указанного способа, структуры или композиции.
Термины приблизительно, приблизительно, как правило, в основном и подобные им, используемые в данном контексте в отношении размера или свойства компонента предпочтительного изобретения, следует рассматривать как указывающие на то, что описываемый размер/свойство не представляет собой жесткое ограничение или параметр и не исключает небольшие отклонения от него, которые функционально являются такими же или сходными, как это и будет понятно среднему специалисту в данном уровне техники. Как минимум, ссылки на такие числовые параметры будут включать варианты, которые при использовании математических и промышленных подходов, принятых в области техники (например, округление, ошибки измерения или другие систематические ошибки, допуски при производстве и т.п.), не будут изменять последнюю значащую цифру.
В данном контексте термины О полисахарид, O-антиген, О антиген, О-антигенполисахарид, O-полисахаридный антиген и сокращение OPS - все они относятся к О антигену грамотрицательных бактерий, который является компонентом липополисахарида (ЛПС) и специфичен для каждого серотипа или серо(под)типа грамотрицательных бактерий. О антиген, как правило, содержит повторяющиеся единицы (ПЕ) из двух-семи остатков сахаров. В данном контексте ПЕ принимается равной биологической единице повтора (БЕП). БЕП описывает ПЕ O-антигена в том виде, в котором она синтезируется in vivo.
В данном контексте все термины конъюгат и гликоконъюгат относятся к продукту конъюгации, содержащему О антиген Е. coli,, ковалентно связанный с белком-носителем (например, экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA)). Конъюгат может быть биоконъюгатом, который представляет собой продукт конъюгации, полученный в клетке-хозяине, где механизм клетки-хозяина производит О антиген и белок-носитель и связывает О антиген с белком-носителем, например, с помощью N-связей. Конъюгат также можно получать другими способами, например, с помощью химического связывания белка и остатка сахара антигена.
О антигены Е. coli в вариантах осуществления данного изобретения включают О1А, O2, O6A и 025b, раскрытые в WO 2015/124769 и WO 2017/035181. Каждая из этих ссылок включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Другие О антигены E.coli также можно использовать, например, в дополнение к конкретным О1А, O2, O6A и/или 025В антигенам, и они могут, например, вклю- 5 044571 чать, без ограничения, О ангигены из их серотипов или подсеротипов Е. coli O1, O2, O4, О6, O7, O8, O15,
O16, O18, O21, O25, O73, O75 и O153.
В данном контексте термин лекарственная субстанция относится к нерасфасованному готовому продукту отдельного гликоконъюгата (Е. coli O антигену-полисахариду, ковалентно связанному с ЕРА белка-носителя, например, E.coli O25B O антиген, ковалентно связанный с ЕРА), концентрация которого выше, чем у конечного продукта, который будут вводить субъекту. Лекарственную субстанцию можно получать после завершения процесса ниже по потоку после очистки гликоконъюгата. Лекарственную субстанцию можно, например, хранить в более концентрированной форме в буфере состава данного изобретения, например, в замороженном состоянии, например, при -70°С.
В данном контексте термин лекарственный продукт относится к составу гликоконъюгатов в их конечной форме, предназначенной для введения субъекту. Лекарственный продукт содержит все гликоконъюгаты (E.coli О антигены-полисахариды, связанные с ЕРА белка-носителя, в случае поливалентной вакцины, например, 025b, О1А, O2 и O6A каждый по отдельности связан с ЕРА белка-носителя в случае четырехвалентной вакцины, и, необязательно, больше О антигенов E.coli, связанных с ЕРА белканосителя, если валентность вакцины повышается). Лекарственный продукт обычно можно приготовить смешиванием лекарственных субстанций соответствующих гликоконъюгатов и разведением буфером, используемым в составе, если это необходимо, таким образом, чтобы получить целевую дозу вакцины. Лекарственный продукт согласно данному изобретению можно хранить при 2-8°С, и при этом сохраняется его стабильность при этой температуре в течение по меньшей мере 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 или более месяцев.
Термин приблизительно при использовании в отношении числа, относится к любому числу со значением ±1, ±5 или ±10% указанного числа.
Если О антиген ковалентно связан с белком-носителем, эффективное количество или дозировку О антигена определяют из расчета только на фрагмент О антигена-полисахарида в конъюгате.
Заболевания, связанные с инфекциями ExPEC или ExPEC, включают, без ограничения, инфекции мочевыводящих путей, послеоперационные инфекции, бактериемию, инфекцию брюшного или тазового отдела, пневмонию, внутрибольничную пневмонию, остеомиелит, целлюлит, пиелонефрит, раневую инфекцию, менингит, менингит новорожденных, перитонит, воспаление желчных путей, инфекции мягких тканей, межмышечный абсцесс, гнойный артрит и сепсис.
В данном контексте термин в комбинации при упоминании введения двух и более терапий субъекту относится к применению более чем одной терапии. Использование термина в комбинации не накладывает ограничение на порядок введения этих терапий субъекту. Например, первую терапию (например, описанную здесь композицию) можно вводить субъекту до, одновременно с или после введения второй терапии (например, описанной здесь композиции или другой терапии, например, лечения антибиотиком).
В данном контексте термин субъект относится к животному, предпочтительно млекопитающему, и может включать животных, отличных от приматов (например, свинью, лошадь, козу, овцу, кошку, собаку, кролика, крысу или мышь), и приматов (например, обезьяну, шимпанзе или человека). В определенных вариантах осуществления субъект представляет собой животное, отличное от человека. В другом варианте осуществления субъект представляет собой человека. Термины субъект и пациент могут использоваться взаимозаменяемо. Композиции согласно данному изобретению пригодны для введения субъекту и могут использоваться для формировании иммунного ответа на ExPEC O-антигены, заключающиеся в композиции.
В данном контексте иммунологический ответ или иммунный ответ на антиген или композицию относится к развитию у субъекта гуморального и/или клеточного иммунного ответа на антиген или на антиген, присутствующий в композиции.
Композиции, содержащие E. coli О антигены-полисахариды
В одном своем общем аспекте изобретение относится к поливалентной вакцине, содержащей серотипы О-антигена, которые встречаются в основном среди клинических изолятов Е. coli, которые можно использовать для предоставления активной иммунизации для предотвращения заболевания, вызванного ExPEC, имеющего О-антиген серотипа, содержащегося в вакцине. В одном варианте осуществления изобретение относится к композиции, содержащей по меньшей мере один Е. coli О антиген-полисахарид. В некоторых вариантах осуществления композиция может содержать Е. coli O25B антиген-полисахарид. В других вариантах осуществления композиция содержит Е.coli О1А, O2 и/или O6A антиген-полисахарид. В предпочтительных вариантах осуществления композиция содержит E.coli O1A, O2, O6A и 025В антигены-полисахариды, раскрытые в WO 2015/124769 и WO 2017/035181. Каждая из этих ссылок включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах осуществления в композиции присутствуют другие или дополнительные Е.coli О антигены-полисахариды. Такие E.coli О антигены-полисахариды могут включать, без ограничения, О антигены из (под)серотипов Е. coli 01, 02, 04, О6, 07, 08, 015, 016, 018, 021, 025, 073, 075 и 0153. В зависимости от потребности композиции могут включать более одного дополнительного Е. coli О антигена, например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более дополнительных Е. coli О антигенов, чтобы обеспечить защиту
- 6 044571 от многочисленных серотипов Е. coli.
В некоторых вариантах осуществления композиции и способы могут относиться к Е. coli O25B антигену и одному или нескольким дополнительным Е. coli O антигенам. Примеры Е. coli O антигенов могут включать, без ограничения, Е. coli O25B, О1А, O2 и O6A антигены.
В данном контексте Е. coli O25B антиген относится к O антигену, специфичному для серотипа Е. coli O25B. В одном варианте осуществления Е. coli O25B антиген включает в себя структуру с формулой 025В':
D-GIc
46 ₽ [ * а а 1 —D-GIc---► L-Rha2Ac —D-GIcNAc -4—*-
-ТГ 113 1.з U
L-Rha где n в формуле О25В' является целым числом от 1 до 30, 1 до 20, от 1 до 15, от 1 до 10, от 1 до 5, от 10 до 30, от 15 до 30, от 20 до 30, от 25 до 30, от 5 до 25, от 10 до 25, от 15 до 25, от 20 до 25, от 10 до 20 или от 15 до 20. В одном варианте осуществления данного изобретения n в формуле 025В' является целым числом от 10 до 20.
В данном контексте Е. coli O1A антиген относится к О антигену, специфичному для серотипа Е. coli O1A. В одном варианте осуществления Е. coli O1A антиген включает в себя структуру с формулой О1А':
где n в формуле О1А' является целым числом от 1 до 30, 1 до 20, от 1 до 15, от 1 до 10, от 1 до 5, от 10 до 30, от 15 до 30, от 20 до 30, от 25 до 30, от 5 до 25, от 10 до 25, от 15 до 25, от 20 до 25, от 10 до 20 или от 15 до 20. В одном варианте осуществления n в формуле О1А' является целым числом от 7 до 15.
В данном контексте Е. coli O2 антиген относится к О антигену, специфичному для серотипа Е. coli O2. В одном варианте осуществления Е. coli O2 антиген включает в себя структуру с формулой O2':
а а р
L-Rha----► L-Rha , >·L-Rha —— i V 1,3 1,4
D-GIcNAc п
ΕΊ2
D-Fuc3NAc f
где n в формуле O2' является целым числом от 1 до 30, 1 до 20, от 1 до 15, от 1 до 10, от 1 до 5, от 10 до 30, от 15 до 30, от 20 до 30, от 25 до 30, от 5 до 25, от 10 до 25, от 15 до 25, от 20 до 25, от 10 до 20 или от 15 до 20. В одном варианте осуществления n в формуле O2' является целым числом от 8 до 16.
В данном контексте Е. coli О6 антиген относится к О антигену, специфичному для серотипа Е. coli О6. В одном варианте осуществления Е. coli О6 антиген включает в себя Е. coli O6A.
В данном контексте Е. coli O6A антиген, также обозначаемый как Е. coli O6K2 антигена или Е. coli O6Glc антигена, относится к О антигену, специфичному для серотипа Е. coli O6A. В одном варианте осуществления Е. coli O6A антиген включает в себя структуру с формулой O6A':
где связь β 1, 2 также называется р2-связью, n в формуле O6A' является целым числом от 1 до 30, от 1 до 20, от 1 до 15, от 1 до 10, от 1 до 5, от 10 до 30, от 15 до 30, от 20 до 30, от 25 до 30, от 5 до 25, от 10 до 25, от 15 до 25, от 20 до 25, от 10 до 20 или от 15 до 20. В одном варианте осуществления n в формуле O6A' является целым числом от 8 до 18.
Е. coli О антигены-полисахариды в композициях данного изобретения ковалентно связаны (иногда это обозначено термином конъюгированы) с белком-носителем, причем белком-носителем данного изобретения является экзотоксин А Р. aeruginosa, предпочтительно его обезвреженным вариантом (ЕРА; см., например, Ihssen, et al. (2010) Microbial cell factories 9, 61; WO 2015/124769). Сочетание белканосителя и О антигена-полисахарида обозначается термином гликоконъюгат. Как правило, О антиген из каждого серотипа Е.coli в композиции ковалентно связан с отдельным белком-носителем, т.е. если композиция содержит четыре О антигена-полисахарида, то каждый из них отдельно и независимо связан с ЕРА белка-носителя, и таким образом композиция содержит четыре разных гликоконъюгата. Одним путем изготовления гликоконъюгатов является биоконъюгация, при которой механизм клетки-хозяина производит О антиген и белок-носитель и связывает О антиген с белком-носителем, например, с помо-
- 7 044571 щью N-связей (получение биоконъюгатов E.coli О антигена 025В, О1А, O2 и O6A полисахаридов с ЕРА белка-носителя см., например, в WO 2015/124769). Для ЕРА в литературе были описаны различные обезвреженные варианты белка, и их можно использовать в качестве белков-носителей. Обезвреженный (или нетоксичный) ЕРА обозначает любой экзотоксин A Pseudomonas aeruginosa, который не обладает активностью рибозилирования АДФ. Активность рибозилирования ЕРА дикого типа расположена приблизительно между аминокислотами 400 и 613 в последовательности ЕРА, и, например, удаление аминокислоты глутаминовой кислоты в положении 553 из ЕРА дикого типа или замена гистидина в положении 426 тирозином в ЕРА дикого типа обезвреживает молекулу ЕРА. Можно подвергать модификации другие аминокислоты среди аминокислот 400-613 в ЕРА дикого типа, например, с помощью удаления, вставки или замены аминокислотных остатков, чтобы убрать активность рибозилирования АДФ и благодаря этому - токсичность, как это известно специалисту в данной области. В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения ЕРА белка-носителя представляет собой обезвреженный вариант. В некоторых неограничивающих и иллюстративных вариантах осуществления ЕРА белка-носителя может содержать аминокислотную последовательность, как изложено в SEQ ID NO: 1 (представляет собой вариант осуществления обезвреженного ЕРА), или аминокислотную последовательность, которая не менее чем на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO: 1, или на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислот отличается от SEQ ID NO: 1, любые из них необязательно, дополнительно содержат 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более вставленных рекомбинантно консенсусных последовательностей гликозилирования, как описано ниже. В конкретных вариантах осуществления введение сайтов гликозилирования выполняют путем вставки консенсусных последовательностей гликозилирования (например, Asn-X-Ser(Thr), где X может быть любой аминокислотой кроме Pro; или, предпочтительно, Asp(Glu)-X-Asn-Z-Ser(Thr), где X и Z независимо выбирают из природных аминокислот, за исключением Pro (SEQ ID NO: 2) (см., например, WO 2006/119987 и WO 2015/124769)) в любом месте первичной структуры ЕРА белка. В предпочтительных вариантах осуществления ЕРА белка-носителя содержит один или несколько вставленных рекомбинантно Nсвязанных консенсусных сайтов гликозилирования, имеющих аминокислотную последовательность Asp(Glu)-X-Asn-Z-Ser(Thr), где X и Z независимо выбирают из природных аминокислот, за исключением Pro (SEQ ID NO: 2). В некоторых вариантах осуществления ЕРА белка-носителя содержит один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или более таких вставленных консенсусных последовательностей. В других вариантах осуществления ЕРА не содержит таких вставленных рекомбинантно N-связанных консенсусных сайтов гликозилирования, например, если гликоконъюгат получают с использованием классической химии конъюгирования (см., например, US 5,370,872; Cryz et al., 1990, Infection and Immunity 58: 373-377).
В некоторых вариантах осуществления О-антигены Е. coli ковалентно связаны с белком-носителем в весовом соотношении полисахарида к белку, составляющем от приблизительно 1:20 до 20:1, предпочтительно - от 1:10 до 10:1, например, от 1:10 до 3:1. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления биоконъюгатов соотношение полисахарид/белок находится в пределах от приблизительно 0,1 до 0,5 (т.е. полисахарид:белок равно от приблизительно 1:10 до 1:2, например, приблизительно 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10 или любому промежуточному значению) для каждого биоконъюгата в зависимости от серотипа 0-антигена.
В некоторых неограничивающих вариантах осуществления концентрация Е. coli О антигеновполисахаридов в композиции может составлять от приблизительно 1 до 200 мкг/мл для каждого О антигена-полисахарида, например, от приблизительно 2 до 100 мкг/мл, например, от приблизительно 4 до 50 мкг/мл, например, от приблизительно 4 до 48 мкг/мл, например, от приблизительно 8 до 48 мкг/мл, например, от приблизительно 4 до 32 мкг/мл, например, от приблизительно 8 до 32 мкг/мл, например, 8, 16, 20 или 32 мкг/мл или равно любому другому значению в этом промежутке Предпочтительно, чтобы в композиции из по меньшей мере двух Е. coli О антигенов-полисахаридов каждый О антиген-полисахарид присутствовал в весовых соотношениях от 1:1 до 1:2 или любом промежуточном их значении для каждой комбинации О антигенов-полисахаридов в композиции.
В некоторых неограничивающих вариантах осуществления О-антигены-полисахариды присутствуют в композиции при концентрации всех О-антигенов-полисахаридов, составляющей от приблизительно 4 до 1000 мкг/мл, например, от приблизительно 10 до 500 мкг/мл, например, от приблизительно 20 до 250 мкг/мл, например, от приблизительно 24 до 120 мкг/мл.
В некоторых неограничивающих вариантах осуществления О-антигены-полисахариды присутствуют в композиции при концентрации всех О-антигенов-полисахаридов, составляющей от приблизительно 40 до 2000 мкг/мл, например, от приблизительно 100 до 1500 мкг/мл, например, от приблизительно 200 до 1200 мкг/мл, например, от приблизительно 250 до 600 мкг/мл.
В некоторых вариантах осуществления композиция содержит 025b, О1А, O2 и O6A антигеныполисахариды в весовом соотношении, равном 1:1:1:1, при этом каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с ЕРА белка-носителя. В другом варианте осуществления композиция содержит Е. coli O25B, О1А, O2 и O6A антигены-полисахариды в весовом соотношении, равном 2:1:1:1, при этом каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с ЕРА белка-носителя. В каждом таком варианте осуществле- 8 044571 ния концентрация 025В антигена-полисахарида может, в качестве неограничивающего примера, составлять 8, 16 или 32 мкг/мл.
Композиции, описанные в данном документе, полезны в лечении и предотвращении инфекций у субъектов (например, субъектов-людей) с ExPEC. В некоторых вариантах осуществления в дополнение к содержащимся в композиции Е. coli О антигенам-полисахаридам, ковалентно связанным с ЕРА белканосителя, описываемые в данном документе композиции содержат фармацевтически приемлемый носитель. В данном контексте фармацевтически приемлемый означает одобренный регулирующим органом федерального правительства или правительства штата, или перечисленный в U.S. Pharmacopeia или в другой общепризнанной фармакопее для применения к животным или, более конкретно, к людям. Термин носитель, используемый в контексте фармацевтически приемлемого носителя, относится к разбавителю, вспомогательному средству, формообразующему или носителю, с которым вводят фармацевтическую композицию. Вода в композиции данного изобретения предпочтительно представляет собой воду для инъекций.
Предложенная в данном документе композиция содержит ПАВ. ПАВ, которые используются в данном документе, представляют собой органические амфифильные соединения, что означает, что они содержат как гидрофобные группы (их хвостовые части), так и гидрофильные группы (их головные части). В предпочтительных вариантах осуществления ПАВ состоит из гидрофильной головной части (содержащей ОН-группы) и длинной гидрофобной хвостовой части (углеродной цепи, которая может содержать приблизительно 12, 14, 16, 18, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 100, 120, 130 или более атомов углерода в углеродной цепи). Предпочтительными ПАВ согласно данному изобретению являются неионогенные ПАВ. Примеры ПАВ, пригодных для композиций данного изобретения, включают, без ограничения, полисорбат 20 (PS20), полисорбат 40 (PS40), полисорбат 60 (PS60), полисорбат 80 (PS80) и Pluronic® F-68 (F-68). В предпочтительном варианте осуществления ПАВ представляет собой PS80. IB некоторых вариантах осуществления концентрация ПАВ в композиции составляет от 0,01% (вес/объем (вес/об.)) до 0,2 вес/об.%. В некоторых вариантах осуществления концентрация ПАВ в композиции равна 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09%, 0,1%, 0,11%, 0,12%, 0,13%, 0,14%, 0,15%, 0,16%, 0,17%, 0,18%, 0,19%, 0,2% или любому промежуточному значению. В вариантах осуществления, где ПАВ представляет собой F-68, концентрация предпочтительно составляет от приблизительно 0,05% до приблизительно 0,2%. В вариантах осуществления, где ПАВ представляет собой PS20, PS40, PS60, или PS80, концентрация предпочтительно составляет от приблизительно 0,01% до приблизительно 0,08%, например, приблизительно 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08% или равна любому промежуточному значению.
Предложенные в данном документе композиции дополнительно содержат буфер с определенным pH. Согласно настоящему изобретению композиция содержит калий/натрий фосфатный буфер. Пределы концентраций такого буфера могут быть, например, от приблизительно 5 мМ до приблизительно 20 мМ, от приблизительно 8 мМ до приблизительно 15 мМ, от приблизительно 8 мМ до приблизительно 13 мМ, от приблизительно 9 мМ до приблизительно 11 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация буфера равна 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ, 15 мМ или любому промежуточному значению. В некоторых вариантах осуществления концентрация буфера составляет от приблизительно 8 мМ до приблизительно 15 мМ. В предпочтительном варианте осуществления концентрация буфера в композиции равна 10 мМ. Пределы pH для таких буферов могут составлять от приблизительно pH 6,5 до приблизительно pH 7,5, от приблизительно pH 6,6 до приблизительно pH 7,4, от приблизительно pH 6,7 до приблизительно pH 7,3, от приблизительно pH 6,8 до приблизительно pH 7,2, от приблизительно pH 6,9 до приблизительно pH 7,1. В определенных вариантах осуществления pH может быть равным 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5 или любому другому промежуточному значению. В предпочтительном варианте осуществления pH буфера составляет 7,0. В предпочтительном варианте осуществления композиция содержит калий/натрий фосфатный буфер с концентрацией 10 мМ и при pH, равном 7,0.
Растворы калий/натрий фосфатного буфера могут, например, содержать калий из K2HPO4 (двухосновный) или KH2P4 (одноосновный) и натрий из Na2HPO4 (двухосновный) или NaH2PO4 (одноосновный). В некоторых вариантах осуществления калий/натрий фосфатный буфер содержит одноосновный фосфат калия (KH2P4) и двухосновный фосфат натрия (Na2HPO4). В некоторых вариантах осуществления калий/натрий фосфатный буфер содержит двухосновный фосфат калия (K2HPO4) и одноосновный фосфат натрия (NaH2PO4). Мольное соотношение одноосновных фосфатных частиц и двухосновных фосфатных частиц ([Н2РО4]/[НРО4]2-), вне зависимости от противоиона, изменяется в пределах от 5,13 до 0,52.
Предложенная здесь композиция может дополнительно содержать регулятор тоничности (иногда называемый стабилизатором). Регуляторы тоничности, используемые в композиции данного изобретения, представляют собой либо сахарозу, либо сорбит, в зависимости от других наполнителей, как определено в данном документе. В определенных вариантах осуществления композиция содержит сахарозу. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит сахарозу, концентрация которой находится в пределах от приблизительно 3% до приблизительно 12 вес/об.%, от приблизительно 3% до приблизительно 11 вес/об.%, от приблизительно 3% до приблизительно 10 вес/об.%, от приблизительно 4% до приблизительно 10 вес/об.%, от приблизительно 5% до приблизительно 9 вес/об.%, от приблизительно
- 9 044571
6% до приблизительно 9 вес/об.%. В определенных вариантах осуществления концентрация сахарозы может быть равна 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12% или любому другому промежуточному значению. В предпочтительном варианте осуществления композиция содержит сахарозу, концентрация которой составляет от приблизительно 3% до приблизительно 10%. В предпочтительном варианте осуществления композиция содержит сахарозу, концентрация которой равна 8%. В других предпочтительных вариантах осуществления композиция содержит сорбит. В предпочтительном варианте осуществления композиция содержит сорбит, концентрация которого составляет от приблизительно 3% до приблизительно 8 вес/об.%, от приблизительно 3% до приблизительно 7 вес/об.%, от приблизительно 4% до приблизительно 6 вес/об.%. В предпочтительных вариантах осуществления композиция содержит сорбит, концентрация которого составляет от приблизительно 4% до приблизительно 6 вес/об.%. В определенных вариантах осуществления композиция содержит сорбит, концентрация которого равна 3%, 4%, 5%, 6%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8% или любому другому промежуточному значению. В предпочтительном варианте осуществления композиция содержит сорбит, концентрация которого равна 5%.
Предложенная в данном документе композиция дополнительно содержит антиоксидант. Антиоксидант, используемый в композициях данного изобретения, представляет собой EDTA или метионин в зависимости от других наполнителей, как описано в данном документе. В определенных вариантах осуществления композиция содержит EDTA. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит EDTA, концентрация которого составляет от приблизительно 0,1 мМ до приблизительно 1,5 мМ, от приблизительно 0,2 мМ до приблизительно 1,4 мМ, от приблизительно 0,5 мМ до приблизительно 1,3 мМ, от приблизительно 0,7 мМ до приблизительно 1,2 мМ, от приблизительно 0,8 мМ до приблизительно 1,2 мМ, от приблизительно 0,9 мМ до приблизительно 1,1 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация EDTA в композиции равна 0,1 мМ, 0,2 мМ, 0,3 мМ, 0,4 мМ, 0,5 мМ, 0,6 мМ, 0,7 мМ, 0,8 мМ, 0,9 мМ, 1,0 мМ, 1,1 мМ, 1,2 мМ, 1,3 мМ, 1,4 мМ, 1,5 мМ или любому промежуточному значению. В предпочтительном варианте осуществления композиция содержит EDTA, концентрация которого равна 1,0 мМ. Композиция данного изобретения, содержащая EDTA, также содержит сахарозу. В других вариантах осуществления композиция содержит метионин. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит метионин, концентрация которого составляет от приблизительно 5 мМ до приблизительно 15 мМ, от приблизительно 6 мМ до приблизительно 14 мМ, от приблизительно 7 мМ до приблизительно 13 мМ, от приблизительно 8 мМ до приблизительно 12 мМ, от приблизительно 9 мМ до приблизительно 11 мМ. В предпочтительном варианте осуществления композиция содержит метионин, концентрация которого составляет от приблизительно 8% до приблизительно 12%. В некоторых вариантах осуществления концентрация метионина равна 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ, 15 мМ или любому промежуточному значению. В предпочтительном варианте осуществления композиция содержит метионин, концентрация которого равна 10 мМ. Композиция данного изобретения, содержащая метионин, также содержит сорбит.
Предложены композиции, содержащие Е. coli O25B антиген-полисахарид, Е. coli O1A антигенполисахарид, Е. coli O2 антиген-полисахарид и Е. coli O6A антиген-полисахарид, где каждый О антигенполисахарид ковалентно связан с экзотоксином А Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 5 вес/об.% сорбита; 10 мМ метионина; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80. Также предложены композиции, состоящие в основном из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида и Е. coli O6A антигенаполисахарида, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 5 вес/об.% сорбита; 10 мМ метионина; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80. Также предложены композиции, состоящие из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида и Е. coli O6A антигена-полисахарида, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином А Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 5 вес/об.% сорбита; 10 мМ метионина; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80. Также предложены композиции, содержащие Е. coli O25B антиген-полисахарид, Е. coli O1A антиген-полисахарид, Е. coli O2 антиген-полисахарид, Е. coli O6A антиген-полисахарид и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 других E.coli О антигенов-полисахаридов, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 5 вес/об.% сорбита; 10 мМ метионина; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80. Также предложены композиции, состоящие в основном из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида, Е. coli O6A антигена-полисахарида и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 других E.coli О антигенов-полисахаридов, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином А Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 5 вес/об.% сорбита; 10 мМ метионина; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80. Также предложены композиции, состоящие из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида, Е. coli O6A антигена-полисахарида и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 других E.coli О антигенов-полисахаридов, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 5 вес/об.% сорбита;
- 10 044571 мМ метионина; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80.
Предложены композиции, содержащие Е. coli O25B антиген-полисахарид, Е. coli О1А антигенполисахарид, Е. coli O2 антиген-полисахарид и Е. coli O6A антиген-полисахарид, где каждый О антигенполисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 8 вес/об.% сахарозы; 1 мМ EDTA; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80. Также предложены композиции, состоящие в основном из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида и Е. coli O6A антигена-полисахарида, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 8 вес/об.% сахарозы; 1 мМ EDTA; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80. Также предложены композиции, состоящие из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида и Е. coli O6A антигена-полисахарида, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 8 вес/об.% сахарозы; 1 мМ EDTA; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80. Также предложены композиции, содержащие Е. coli O25B антиген-полисахарид, Е. coli O1A антиген-полисахарид, Е. coli O2 антиген-полисахарид, Е. coli O6A антиген-полисахарид и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 других E. coli О антигенов-полисахаридов, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 8 вес/об.% сахарозы; 1 мМ EDTA; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80. Также предложены композиции, в основном состоящие из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида, Е. coli O6A антигена-полисахарида и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 других E.coli О антигенов-полисахаридов, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; 8 вес/об.% сахарозы; 1 мМ EDTA; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS8 0. Также предложены композиции, состоящие из Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигена-полисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида, E. coli O6A антигена-полисахарида и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 других E.coli О антигенов-полисахаридов, где каждый О антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (ЕРА) белка-носителя; 8 вес/об.% сахарозы; 1 мМ EDTA; 10 мМ калий/натрий фосфатного буфера при pH 7,0; и 0,02% PS80.
Композиции, описанные в данном документе, могут необязательно содержать консервант, такой как производное ртути тиомерсал, феноксиэтанол или парабены. В конкретном варианте осуществления фармацевтические композиции, описанные в данном изобретении, содержат от 0,001% до 0,01% тиомерсала. В других вариантах осуществления фармацевтические композиции, описанные в данном изобретении, не содержат консервант.
В определенных вариантах осуществления композиции, описанные в данном документе (например, иммуногенные композиции), содержат вспомогательное средство или вводятся в сочетании с ним. Вспомогательное средство для введения в сочетании с композицией, описанной в данном документе, можно вводить до введения, одновременно с введением или после введения указанной композиции. В некоторых вариантах осуществления термин вспомогательное средство или адъювант относится к соединению, которое при введении в сочетании с или в качестве составной части описанной в данном документе композиции повышает, усиливает и/или закрепляет иммунный ответ на биоконъюгат, но при введении одного только вспомогательного средства иммунный ответ на биоконъюгат не формируется. Вспомогательные средства усиливают иммунный ответ несколькими механизмами, включая, например, вовлечение лимфоцитов, стимулирование В- и/или Т-клеток, и стимуляцию макрофагов. В определенных вариантах осуществления композиции, описанные в данном документе, не содержат вспомогательное средство помимо биоконъюгатов и формообразующих, и/или его не вводят в сочетании со вспомогательным средством помимо биоконъюгатов и формообразующих (в случае, если биоконъюгаты и формообразующие имеют присущие им свойства адъювантов, это не будет учтено, и дополнительное инородное вспомогательное средство не будет добавлено в этих вариантах осуществления).
Конкретные примеры вспомогательных средств (адъювантов) включают, без ограничения, соли алюминия (квасцы) (такие как гидроксид алюминия, фосфат алюминия и сульфат алюминия), 3 де-Оацилированный монофосфориллипид A (МФЛ) (см. патент Великобритании GB2220211), MF59 (Novartis), AS03 (GlaxoSmithKline), AS04 (GlaxoSmithKline), имидазопиридиновые соединения (см. WO 2007/109812), имидазохиноксалиновые соединения (см. WO 2007/109813) и сапонины, такие как QS21 (см. Kensil et al., in Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach (eds. Powell & Newman, Plenum Press, NY, 1995); патент США № 5057540). Другие вспомогательные средства представляют собой эмульсии типа масло-в-воде (такие как сквален или арахисовое масло), необязательно в комбинации с иммуностимуляторами, такими как монофосфориллипид A (см. Stoute et al., 1997, N. Engl. J. Med. 336, 86-91). Другое вспомогательное средство представляет собой CpG (Bioworld Today, Nov. 15, 1998).
В некоторых вариантах осуществления композиции, описанные в данном документе, составляют так, чтобы они были пригодны для определенного пути введения субъекту. Например, составы, описанные в данном документе, могут быть составлены, например, для внутримышечного, подкожного, парен
- 11 044571 терального, перорального, интраназального, внутрикожного, трансдермального, колоректального, внутрибрюшинного, интратрахеального, местного, ректального или легочного введения. В определенных вариантах осуществления композиции, описанные в данном документе, полезны для введения путем внутримышечной инъекции. В других вариантах осуществления композиции, описанные в данном документе, можно вводить внутрикожно. В других вариантах осуществления композиции, описанные в данном документе, можно вводить через кожу.
В другом аспекте в данном документе также предложены композиции лекарственной субстанции, содержащей по меньшей мере один из четырех конъюгатов, подробно описанных в данном документе (т.е. представляющие собой О-антиген из E.coli серотипов 025b, О1А, O2, или O6A), в составах, описанных в данном документе. Такие композиции, содержащие только один или набор из менее чем четырех конъюгатов, могут быть полезными, например, в случае хранения нерасфасованной партии антигенов, например, в виде лекарственной субстанции, перед смешиванием в конечный лекарственный продукт, и иметь такие же полезные свойства стабильности, которые описаны для композиций лекарственного продукта, содержащего все четыре конъюгата.
Способы/применения
Композиции данного изобретения можно применять, например, в способе, вызывающем иммунный ответ против ExPEC у субъекта, нуждающегося в этом. Предпочтительно, чтобы иммунный ответ был эффективным для предотвращения или лечения заболевания, связанного с ExPEC, у субъекта, нуждающегося в этом. Способ включает в себя введение субъекту композиции согласно данному изобретению.
В некоторых вариантах осуществления предложенные здесь композиции можно хранить в емкостях. Пригодные для этого емкости могут включать, без ограничения, мешки, флаконы, шприцы, бутылки и пробирки. В некоторых вариантах осуществления флаконы с пробками, предназначенными для прокалывания шприцем, содержат любые композиции, описанные в данном документе. Емкости, предложенные в данном документе, могут быть изготовлены из различных материалов, таких как стекло (например, боросиликатное стекло), металл или пластик (например, поликарбонатов). В некоторых вариантах осуществления емкость представляет собой флакон из боросиликатного стекла типа I. В других вариантах осуществления емкость представляет собой стеклянный шприц либо с люэровским наконечником, либо с несъемной иглой. В других вариантах осуществления емкость представляет собой шприц из пластмассового материала, такого как поликарбонат (ПК) или полиэтилентерефталатгликоль (ПЭТФ), причем для этого материала было продемонстрировано, что он совместим с лекарственной субстанцией согласно данному изобретению. Флаконы могут необязательно содержать резиновые пробки, например, из (хлор/бром)бутиловой резины с покрытием из фторполимерной пленки (например, Flurotec [этилентетрафторэтилен (EFTE)] или Teflon [фторированный этиленпропилен (FEP)]). Можно использовать и другие материалы и типы емкостей, а совместимость с составами данного изобретения может быть определена специалистом в данной области на основании настоящего изобретения.
В определенных вариантах осуществления лекарственную субстанцию хранят в поликарбонатных емкостях, например, бутылках. В определенных вариантах осуществления лекарственную субстанцию хранят в полиэтилентерефталатгликольных емкостях, например, бутылках. В определенных вариантах осуществления лекарственный продукт хранят в стеклянных емкостях, например, флаконах.
Предложенные в данном документе составы улучшают стабильность гликоконъюгатов в композициях. Под стабильностью в общем случае подразумевают то, что композиция сохраняет свою физическую стабильность и/или химическую стабильность и/или биологическую активность при хранении. Предпочтительно, композиция в основном сохраняет свою физическую и химическую стабильность и свою биологическую активность при хранении. Специалисты в данной области могут определять физическую стабильность, химическую стабильность и биологическую активность, используя способы, раскрываемые в данном документе, и методы, известные в данной области техники. В данном изобретении композицию считают стабильной (а соответствующий состав считают стабилизирующим), если наблюдается изменение пика примеси в размере 5% или менее при эксклюзионной хроматографии ВЭЖХ (указывающее на агрегацию гликоконъюгата) по сравнению с нулевой временной точкой, как описано в примерах в данном документе. Например, у существующей композиции вакцины против ExPEC (в 25 мМ Tris pH 7,4, 2,7 мМ KCl, 137 мМ NaCl) наблюдается более чем 5% увеличение пика примеси после 8 недель при 40°С, и поэтому она нестабильна на 8 неделе при этой температуре, в то время как композиции данного изобретения демонстрируют увеличение пика примеси менее 5% после 12 недель при 40°С и поэтому являются стабильными в течение не менее чем 12 недель при этой температуре. Композиции данного изобретения сохраняются в стеклянной емкости при 2-8°С в течение не менее чем 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 или более месяцев. Композиции данного изобретения сохраняются в пластмассовых емкостях в течение не менее чем 7 дней при 25°С, позволяя работать с ExPEC гликоконъюгатным продуктом в этих условиях.
В определенных вариантах осуществления данные композиции предложены в виде жидких композиций. Под жидкой композицией подразумевается, что она находится в жидком состоянии при температуре 2-8°С и предпочтительно хранится при 2-8°С. В альтернативном случае жидкую композицию хранят при 25°С или при 40°С, например, с целью ускоренного испытания стабильности в условия теплово
- 12 044571 го стресса.
В определенных вариантах осуществления данные композиции могут храниться и сохраняют стабильность при 2-8°С, при 25°С или при 40°С. В предпочтительном варианте осуществления композиция хранится и сохраняет стабильность при 2-8°С. В определенных вариантах осуществления композиция сохраняет стабильность при 2-8°С в течение не менее чем приблизительно 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 или более месяцев. В определенных вариантах осуществления композиция сохраняет стабильность при 25°С в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более месяцев. В определенных вариантах осуществления композиция сохраняет стабильность при 40°С в течение не менее чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или более недель.
В определенных вариантах осуществления данные композиции предложены в виде замороженной композиции. Под замороженной композицией подразумевается композиция, которая находится в твердом состоянии при хранении при температуре приблизительно -18° или ниже, например, при приблизительно -20°С, -40°С, -60°С, -70°С, -80°С или любой температуре в этом интервале или ниже. В определенных вариантах осуществления данные композиции могут храниться и сохраняют стабильность при -40°С или -60°С в зависимости от регулятора тоничности, присутствующего в композиции. В определенных вариантах осуществления данные композиции могут храниться и сохраняют стабильность при -70°С. В определенных вариантах осуществления композиция содержит сахарозу и сохраняет стабильность при -40°С в течение не менее чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или более месяцев. В определенных вариантах осуществления композиция содержит сорбит и сохраняет стабильность при -60°С в течение не менее чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или более месяцев. В определенных вариантах осуществления композиция содержит сорбит или сахарозу и сохраняет стабильность при -70°С в течение не менее чем приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более лет. Композиции настоящего изобретения разработаны так, чтобы они были более стабильны, чем старые составы композиций, описанные ранее. Стабильность композиции можно определять способами, описанными в данном документе и методами, известными в области техники. При использование этих способов композиции настоящего изобретения будут более стабильными в течение установленного периода времени при заданной температуре по сравнению с композициями старого состава в течение такого же периода времени и при той же температуре.
Также в данном документе предложены способы получения композиций, которые здесь раскрыты. В определенных вариантах осуществления предложены способы получения композиций, включающие в себя внесение по меньшей мере одного Е. coli О антигена, ковалентно связанного с ЕРА носителем, воды, солей для буферного раствора (т.е. (ди)гидрофосфата натрия и (ди)гидрофосфата калия [т.е. Na2HPO4 и KH2P4 или NaH2PO4 и K2HPO4]), регулятора тоничности (т.е. сорбита или сахарозы), антиоксиданта (т.е. метионина, если регулятором тоничности является сорбит; EDTA, если регулятором тоничности является сахароза) и ПАВ (например, PS80) в емкость, доведение pH до требуемого значения pH (т.е. от 6,5 до 7,5, например, 7,0) и перемешивание этих ингредиентов, и таким образом получение жидкого состава согласно данному изобретению. В предпочтительном варианте осуществления способы получения композиций включают в себя внесение Е. coli O25B антигена-полисахарида, Е. coli O1A антигенаполисахарида, Е. coli O2 антигена-полисахарида и Е. coli O6A антигена-полисахарида, где каждый антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A of Pseudomonas aeruginosa (ЕРА) белка-носителя; воды; калия фосфата; натрия фосфата; сорбита; метионина; и PS80 в емкость, доведение pH до 7,0, и смешивание каждого ингредиента таким образом, чтобы конечная концентрация калий/натрий фосфатного буфера составляла 10 мМ при pH, равном 7,0, конечная концентрация сорбита составляла 3-8% (например, 5%) (вес/об.), сорбит составлял 5 вес/об.%, метионин составлял 10 мМ, и PS80 составлял 0,02 вес/об.%. Одним неограничивающим, иллюстративным путем получения состава согласно данному изобретению является следующий: к приблизительно 3,5 л воды добавляют: 3,3696 г KH2P4 (Mw=136,09 г/моль), 2,1635 г Na2HPO4 (Mw=141,96 г/моль), 200 г сорбита, 5,9684 г метионина (Mw=149,21 г/моль), 8 мл 10%-ного (вес/об.) исходного раствора PS80, что дает pH приблизительно 6,73, который затем доводят до целевого pH 7,0, используя 500 мкл 10 N NaOH, и объем доводят добавлением воды до 4 л. Состав, содержащий сахарозу и EDTA вместо сорбита и метионина, можно получать аналогичным образом, понятным специалисту в данной области, обладающему обычными навыками и информацией, предоставленной в данном документе. Одним возможным путем приготовления композиции согласно данному изобретению является замена буфера, например, с использованием проточной фильтрации вдоль потока, фильтрации, диализа, эксклюзионной хроматографии и т.п., для замены состава, приготовленного, как описано выше, на любой буфер, в котором находится гликоконъюгат ExPECt, например, в ходе или после стадии очистки гликоконъюгата ExPEC. Такая стадия замены буфера является обычной для специалиста в данной области при использовании информации, предоставленной в данном документе.
Следующие примеры изобретения дополнительно иллюстрируют характер данного изобретения. Следует понимать, что следующие примеры не ограничивают данное изобретение, объем которого определяется приложенной формулой изобретения.
- 13 044571
Варианты осуществления
Вариант осуществления 1 представляет собой иммуногенную композицию, содержащую Е. coli O25B антиген-полисахарид, Е. coli O1A антиген-полисахарид, Е. coli O2 антиген-полисахарид, и Е. coli O6A антиген-полисахарид, предпочтительно - все четыре Е. coli O25B, О1А, O2 и O6A антигенаполисахарида, где каждый антиген-полисахарид независимо ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; от 3% до 8% (предпочтительно - от 4% до 6%) (вес/об.) сорбита; от 5 до 15 мМ (предпочтительно - от 8 до 12 мМ) метионина; от 5 до 20 мМ (предпочтительно - от 8 до 15 мМ) калий/натрий фосфатного буфера с pH от 6,5 до 7,5; и от 0,01% до 0,2 вес/об.% ПАВ.
Вариант осуществления 2 представляет собой иммуногенную композицию варианта осуществления 1, где Е. coli 025В, O1A, O2 и O6A антигены-полисахариды находятся в весовом соотношении 1:1:1:1 или 2:1:1:1.
Вариант осуществления 3 представляет собой иммуногенную композицию варианта осуществления 1 или 2, где концентрация сорбита составляет 5 вес/об.%.
Вариант осуществления 4 представляет собой иммуногенную композицию вариантов осуществления 1-3, где концентрация метионина составляет 10 мМ.
Вариант осуществления 5 представляет собой иммуногенную композицию любого из вариантов осуществления 1-4, где концентрация калий/натрий фосфатного буфера составляет 10 мМ, и pH калий/натрий фосфатного буфера равен 7,0.
Вариант осуществления 5 представляет собой иммуногенную композицию любого из вариантов осуществления 1-5, где ПАВ содержит гидрофильную головную часть и гидрофобную хвостовую часть, где ПАВ предпочтительно выбирают из группы, состоящей из F-68, PS20 и PS80.
Вариант осуществления 7 представляет собой иммуногенную композицию варианта осуществления 6, где ПАВ представляет собой PS80.
Вариант осуществления 8 представляет собой иммуногенную композицию варианта осуществления 7, где концентрация ПАВ составляет 0,02 вес/об.%.
Вариант осуществления 7 представляет собой иммуногенную композицию, содержащую:
Е . coli O25B антиген-полисахарид, Е. coli O1A антиген-полисахарид, Е. coli 02 антигенполисахарид и Е. coli O6A антиген-полисахарид, где каждый антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя;
вес/об.% сорбита;
мМ метионина;
6,19 мМ KH2P4 и 3,81 мМ Na2HPO4 буфера с pH равным 7,0; и
0,02 вес/об.% PS80.
Вариант осуществления 10 представляет собой иммуногенную композицию, содержащую Е. coli O25B антиген-полисахарид, Е. coli O1A антиген-полисахарид, Е. coli O2 антиген-полисахарид, и Е. coli O6A антиген-полисахарид, предпочтительно - все четыре Е. coli O25B, О1А, 02 и O6A антигенаполисахарида, где каждый антиген-полисахарид независимо ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя; от 3% до 12% (предпочтительно - от 3% до 10%) (вес/об.) сахарозы; от 0,1 до 1,5 мМ EDTA; от 5 до 20 мМ (предпочтительно - от 8 до 15 мМ) калий/натрий фосфатного буфера с pH от 6,5 до 7,5; и от 0,01% до 0,2 вес/об.% ПАВ.
Вариант осуществления 11 представляет собой иммуногенную композицию варианта осуществления 10, где Е. coli 025В, О1А, 02 и O6A антигены-полисахариды находятся в весовом соотношении 1:1:1:1 или 2:1:1:1.
Вариант осуществления 12 представляет собой иммуногенную композицию варианта осуществления 10 или 11, где концентрация сахарозы составляет 8 вес/об.%.
Вариант осуществления 13 представляет собой иммуногенную композицию вариантов осуществления 10-12, где концентрация EDTA составляет 1 мМ.
Вариант осуществления 14 представляет собой иммуногенную композицию любого из вариантов осуществления 10-13, где концентрация калий/натрий фосфатного буфера составляет 10 мМ, и pH калий/натрий фосфатного буфера равен 7,0.
Вариант осуществления 15 представляет собой иммуногенную композицию любого из вариантов осуществления 10-14, где ПАВ содержит гидрофильную головную часть и гидрофобную хвостовую часть, где ПАВ предпочтительно выбирают из группы, состоящей из F-68, PS20 и PS80.
Вариант осуществления 16 представляет собой иммуногенную композицию варианта осуществления 15, где ПАВ представляет собой PS80.
Вариант осуществления 17 представляет собой иммуногенную композицию варианта осуществления 16, где концентрация ПАВ составляет 0,02 вес/об.%.
Вариант осуществления 18 представляет собой иммуногенную композицию, содержащую:
Е. coli O25B антиген-полисахарид, Е. coli O1A антиген-полисахарид, Е. coli O2 антигенполисахарид, Е. coli O6A антиген-полисахарид, где каждый антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя;
вес/об.% сахарозы;
- 14 044571 мМ EDTA;
мМ калий/натрий фосфатного (например, 6,19 мМ KH2P4 и 3,81 мМ Na2HPO4) буфера с pH, равным 7,0; и
0,02 вес/об.% PS80.
Вариант осуществления 19 представляет собой иммуногенную композицию любого одного из вариантов осуществления 1-18, где концентрация каждого О-антигена-полисахарида находится в пределах от приблизительно 1 до 200 мкг/мл, предпочтительно в пределах от 1 до 100 мкг/мл, более предпочтительно в пределах от 2 до 50 мкг/мл, например, в пределах от приблизительно 4 мкг/мл до 32 мкг/мл.
Вариант осуществления 20 представляет собой иммуногенную композицию любого одного из вариантов осуществления 1-19, где соотношение полисахарид:белок-носитель (вес:вес) составляет от приблизительно 1:10 до приблизительно 1:2, например, от приблизительно 1:5 до приблизительно 1:2 для каждого О-антигена-полисахарида.
Вариант осуществления 21 представляет собой иммуногенную композицию любого одного из вариантов осуществления 1-20 в жидкой форме, пригодной для введения путем инъекции или вливания.
Вариант осуществления 22 представляет собой иммуногенную композицию любого одного из вариантов осуществления 1-21, вызывающую иммунный ответ у нуждающегося в этом субъекта.
Вариант осуществления 23 представляет собой применение иммуногенной композиции любого одного из вариантов осуществления 1-21 для производства лекарственного средства, вызывающего иммунный ответ у нуждающегося в этом субъекта.
Вариант осуществления 24 представляет собой композицию любого одного из вариантов осуществления 1-21 в стеклянной емкости.
Вариант осуществления 25 представляет собой композицию любого одного из вариантов осуществления 1-21 в поликарбонатной емкости.
Вариант осуществления 26 представляет собой композицию любого одного из вариантов осуществления 1-21 в полиэтилентерефталатгликолевой емкости.
Вариант осуществления 27 представляет собой композицию любого одного из вариантов осуществления 1-21 во флаконе.
Вариант осуществления 28 представляет собой композицию любого одного из вариантов осуществления 1-21 в шприце.
Вариант осуществления 29 представляет собой композицию любого одного из вариантов осуществления 1-21 или 24-28, которая сохраняет стабильность в течение не менее чем 6 месяцев, предпочтительно - не менее чем 12 месяцев, более предпочтительно - не менее чем 18 месяцев, более предпочтительно не менее чем 24 месяца, более предпочтительно - не менее чем 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 или более месяцев хранения при температуре 2-8°С.
Вариант осуществления 30 представляет собой способ поддержания стабильного состояния жидкой иммуногенной композиции, содержащей Е.coli О антиген, ковалентно связанный с ЕРА белка-носителя, включающий в себя хранение композиции любого одного из вариантов осуществления 1-21 или 24-29 при температруе 2-8°С в течение не менее чем 6 месяцев, предпочтительно - не менее чем 12 месяцев, более предпочтительно - не менее чем 18 месяцев, более предпочтительно - не менее чем 24 месяца, более предпочтительно - не менее чем 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 или более месяцев.
Примеры
Пример 1. Внесение ПАВ предотвращает вызываемую замораживанием/размораживанием агрегацию ExPEC гликоконъюгата
Чтобы определить, какую комбинацию формообразующих можно добавить к Е. coli 025b, О1А, O2, O6A антигенам-сахаридам, каждый из которых независимо ковалентно связан с отдельным (т.е. всего четыре отдельных гликоконъюгата) экзотоксином А Pseudomonas aeruginosa (EPA), здесь и далее называемым ExPEC гликоконъюгатами, чтобы способствовать стабилизации при замораживании/размораживании, встряхивании, тепловом стрессе, вызванном металлом окислительном стрессе, в исходный состав ExPEC гликоконъюгата вводили разные формообразующие (ExPEC гликоконъюгат, 25 мМ Tris, pH 7,4, 137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl) (здесь и далее называемый старым составом, который представляет собой используемый в настоящее время в фазе 2 клинических испытаний состав ExPEC гликоконъюгата, ClinicalTrials.gov Identifier: NCT02546960), и полученный состав исследовали соответствующими методами в отношении повышения стабилизации.
В старом составе (иногда называемом здесь контрольным) ExPEC гликоконъюгат образует агрегаты при стрессе, вызванном замораживанием/размораживанием. Агрегация ExPEC гликоконъюгата наблюдается по пику примеси на кривой эксклюзионной хроматографии-высокоэффективной жидкостной хроматографии (ЭХ-ВЭЖХ) (см., например, фиг. 1А и 1В), в которой пик примеси 1 является показателем нестабильности под воздействием стресса.
Сначала в состав ExPEC гликоконъюгата добавляли криопротектор (например, сорбит) и полученный состав исследовали с целью определения возможного повышения стабильности при воздействии стресса, вызванного замораживанием/размораживанием. Было найдено, что введение сорбита не предохраняет ExPEC гликоконъюгат от агрегации при замораживании/размораживании согласно данным ЭХ- 15 044571
ВЭЖХ (фиг. 1В).
Однако неожиданно введение ПАВ (например, F-68 [также известного как полоксамер 188 или Plutonic F-68], PS20 или PS80) в состав ExPEC гликоконъюгата повысило стабильность ExPEC гликоконъюгата при воздействии стресса, вызванного замораживанием/размораживанием. В частности, ПАВ предотвратил агрегацию ExPEC гликоконъюгата при воздействии стресса, вызванного замораживанием/размораживанием. Добавление 0,01% PS-80, 0,01% PS 20 или 0,1% F-68 (все вес/об.) к ExPEC гликоконъюгату предотвратило вызываемую замораживанием/размораживанием агрегацию, как это было измерено с помощью ЭХ-ВЭЖХ (фиг. 1В и фиг. 1С). Каждое подвергнутое испытанию ПАВ (все ПАВ были неионогенными) состояло из гидрофильной головной части (содержащей ОН-группы) и длинной гидрофобной хвостовой части (углеродной цепи, которая может содержать приблизительно 12, 14, 16, 18, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 100, 120, 130 или более атомов углерода в углеродной цепи). Не прибегая к теоретизированию, было сделано предположение, что эти физические свойства позволяют исследованным ПАВ предотвращать вызываемую замораживанием/размораживанием агрегацию ExPEC гликоконъюгата. В последующей разработке PS80 использовали в качестве формообразующего для предотвращения вызываемой замораживанием/размораживанием агрегации, поскольку именно это ПАВ обладает дополнительными преимуществами в отношении легкости применения на поздних стадиях разработки ExPEC гликоконъюгата.
Пример 2: Оценка состава в отношении буфера, значения pH и регулятора тоничности
После того, как было показано, что ПАВ могут предотвращать вызываемую замораживанием/размораживанием агрегацию ExPEC гликоконъюгата, был произведен поиск подходящих буфера, pH и регулятора тоничности для этого состава. В последующем эксперименте было исследовано несколько составов с разными комбинациями буфера-pH в присутствии NaCl (150 мМ) или 5% сорбита (вес/об.) в качестве регулятора тоничности, причем все составы содержали PS80 (0,01 вес/об.%. Старый состав (25 мМ Tris, pH 7,4, 137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl) использовали в качестве контроля. Исследовали несколько концентраций ExPEC гликоконъюгата (например, 16 или 8 мкг/мл для каждого полисахарида), но эффекта на стабильность исследованных составов от применения разной концентрации нами не наблюдалось (данные не показаны).
Эти составы подвергали действию нескольких стрессов, включая замораживание/размораживание, встряхивание, воздействие света и тепловой стресс при различных температурах (например, 2-8°С, 25°С и 40°С) (табл. 1).
Таблица 1: Стрессовые условия, которым подвергали составленные заново составы ExPEC гликоконъюгатов.
| Стресс | Условия | Временные точки |
| Температура | 5°С | 0, 4, 8, 12 недель |
| 2 5°С | 2, 4, 8 недель | |
| 4 0°С | 1, 2, 4 недель | |
| Взбалтывание | Вихревая мешалка (1000 об/мин при температуре окружающей среды) | 4 часа |
| Замораживание/размораж ивание | -70°С до температуры окружающей среды | 5 последовательных циклов |
| Светочувствительность | Световая экспозиция (ICH Q1B вариант 2) | 2 00 Вт/м2 УФ-А свет (~6 часов) + 1200 клюкс-ч видимый свет (~40 часов) |
Таблица 2: Аналитический набор для анализа составленных заново составов ExPEC гликоконъюгатов
| Метод анализа | Цель |
| Визуальный осмотр | Внешний вид и прозрачность |
| pH | Кислотность и основность образцов |
| Осмоляльность | Осмоляльность |
| ЭХ-ВЭЖХ | Чистота, агрегаты, продукты расщепления |
| Хроматография с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ) | Чистота, химические преобразования |
| Изоэлектрическое фокусирование (ИЭФ) | Чистота, химические преобразования |
| Динамическое рассеяние света (ДРС) | Невидимые частицы |
| FlowCAM | Невидимые частицы |
С использованием набора аналитических методов, описанных в табл. 2, было показано, что составы, содержащие гистидин при pH 7 или фосфат калия при pH 7 были более стабильными по сравнению с другими комбинациями буфер-pH (данные не показаны). Также, при крайних значениях pH (т.е., pH 5,0 и
- 16 044571 pH 8,0) наблюдается более высокий уровень агрегации ExPEC гликоконъюгата. Кроме того, было отмечено, что составы, содержащие сорбит в качестве регулятора тоничности, неожиданно оказались более стабилизирующими, чем составы, содержащие NaCl в качестве регулятора тоничности. Действительно, было отмечено, что составы, содержащие NaCl, не способны стабилизировать ExPEC гликоконъюгат против агрегации в ходе хранения при 40°С. При использовании сорбита в качестве регулятора тоничности, агрегация ExPEC гликоконъюгата не происходила, что свидетельствует о неожиданном стабилизирующем эффекте сорбита. Кроме того, агрегация при крайних значениях pH (т.е., pH 5,0 и pH 8,0) снижается в содержащих сорбит составах по сравнению с составами, содержащими NaCl. Это показывает, что сорбит делает составы более устойчивыми и способен обеспечить ExPEC гликоконъюгату стабилизирующий эффект, даже если в ходе производства происходят изменения pH.
Пример 3: Оценка стабильности состава
Дополнительные составы были разработаны для того, чтобы определить наилучшие составыкандидаты в отношении стабильности ExPEC гликоконъюгата. В случае буферов и pH проводили оценку гистидина при pH равном 6,5 и 7,0, а вместо одного только фосфата калия исследовали калий/натрий фосфатный буфер (KH2PO4/Na2HPO4) при pH 6,5 и 7,0. Сочетание калия и натрия было выбрано на основании первоначальных результатов, оно лучше работает на местном уровне в отношении буферной pH емкости при замораживании/размораживании. При приготовлении буферной системы использовали избыток калия над натрием (например, для 10 мМ фосфатного буфера с pH 7,0, мы использовали 6,19 мМ KH2P4 и 3,81 мМ Na2HPO4). В качестве регуляторов тоничности исследовали сахарозу (8 вес/об.%) и сорбит (5 вес/об.%). Кроме того, оценивали эффект от введения антиоксиданта EDTA (1 мМ) или метионина (10 мМ). Также было исследовано, имеет ли отсутствие NaCl или наличие сорбита защитный эффект, наблюдаемый в примере 2, путем включения состава, который содержал их комбинацию (каждый в половинной концентрации по сравнению со случаем, когда эти компоненты использовались по отдельности, как в примере 2). Все составы содержали PS80 с концентрацией 0,02 вес/об.%.
Различные составы подвергали действию таких же условий стресса, что и в примере 2. На основании комбинирования данных о стабильности осуществляли стадию отбора, где эффективность каждого состава оценивали и исключали на основании следующих критериев: (а) появление дополнительного пика примеси на хроматограмме ОФ-ВЭЖХ по меньшей мере в двух временных точках из трех для каждой температуры; (b) пик примеси 1 был виден/увеличен на хроматограмме ЭХ-ВЭЖХ по меньшей мере в двух временных точках из трех для каждой температуры; (с) появление дополнительного пика примеси на хроматограмме ЭХ-ВЭЖХ после воздействия стресса (например, замораживания/размораживания, встряхивания, воздействия света); и (d) пик примеси 1 был виден/увеличен на хроматограмме ЭХ-ВЭЖХ после воздействия стресса (например, замораживания/размораживания, встряхивания, воздействия света). Было обнаружено, что два определенных состава, названных в данном документе составами 26 и 28, были способны позволить ExPEC гликоконъюгату выдерживать каждое из условий исследуемых стрессов.
Состав 26 содержал 10 мМ Na/K фосфатного буфера pH 7,0, 5 вес/об.% сорбита, 10 мМ метионина, 0,02 вес/об.% PS-80 и ExPEC гликоконъюгат.
Состав 28 содержал 10 мМ Na/K фосфатного буфера pH 7,0, 8% сахарозы, 1 мМ EDTA, 0,02% PS-80 и ExPEC гликоконъюгат.
Неожиданно, определенные комбинации регулятора тоничности и антиоксиданта имели значение, поскольку составы, содержащие либо (i) сорбит с метионином, либо (ii) сахарозу с EDTA, были значительно более эффективными, чем (а) составы, в которых сорбит объединяли с EDTA, а также чем (b) составы, в которых сахарозу объединяли с метионином, и (с) составы без антиоксиданта. Также неожиданно оказалось, что составы ExPEC гликоконъюгата предпочтительно не должны содержать хлорид натрия. Составы 26 и 28 могут варьироваться в определенных пределах, и при этом по-прежнему стабилизировать ExPEC гликоконъюгат. В табл. 3 приведены применимые пределы для pH и концентраций формообразующих для составов 26 и 28.
Таблица 3: Пределы pH и концентраций формообразующих для составов ExPEC . гликоконъюгатов
| Формообразующее | Пределы | |
| pH | 6, 5 | 7,5 |
| K/Na фосфат (мМ) | 5 | 20 |
| Сорбит (%) (вес/об.) | 3 | 8 |
| Сахароза (%) (вес/об.) | 3 | 12 |
| Метионин (мМ) | 5 | 15 |
| EDTA (мМ) | 0, 1 | 1,5 |
| Поверхностноактивное вещество (%): F-68 | 0,05 | 0,2 |
| 0,01 | 0, 08 | |
| 0,01 | 0, 08 |
- 17 044571
PS20
PS80
Составы 26 и 28 дополнительно тестировали в исследовании конформации для сравнения со старым ExPEC гликоконъюгатным составом (ExPEC гликоконъюгат, 25 мМ Tris, pH 7,4, 137 MM NaCl, 2,7 мМ KCl). Были исследованы оба положения флакона - вертикальное и перевернутое - с целью определения влияния контакта с пробкой конечной емкости. Составы 26 и 28 состоят из формообразующих, которые не представляют собой какую-либо опасность в предложенных концентрациях, используются в лицензированных вакцинах и/или находятся в списке разрешенных формообразующих для парентерального введения. Комбинация этих формообразующих для составов 26 и 28 и значения pH буферного раствора вносят свой вклад в усовершенствованный стабилизирующий эффект ExPEC гликоконъюгата по сравнению со старым ExPEC гликоконъюгатным составом. Предложенная комбинация этих формообразующих для составов 26 и 28 оказалась способной сохранять лекарственные субстанции (ДС) и лекарственный продукт (ЛП) гликоконъюгатных вакцин против ExPEC при замораживании/размораживании и тепловом стрессе (например, фиг. 2), при этом соответствуя требованиям к ожидаемой стабильности при хранении при 2-8°С и 25°С (данные не показаны). Концентрация полисахарида, исследованная для ЛП, составляла 20 мкг/мл для каждого штамма (в сумме 80 мкг/мл), а суммарная концентрация белка составляла 300 мкг/мл. В случае ЛС серотипов 025b (т.е. содержащих Е. coli O25B антиген-полисахарид, ковалентно связанный с экзотоксином ЕРА белка-носителя) исследуемая концентрация полисахарида была 200 мкг/мл, и исследуемая концентрация белка была 830 мкг/мл. Такие композиции были стабильны в ходе периода времени.
Таким образом, лекарственный продукт в составах 26 и 28 продемонстрировал стабильность в течение не менее чем 6 месяцев при 2-8°С, не менее чем шесть месяцев при 25°С, и исследование стабильно сти продолжается.
Пример 4: Оценка составов в условиях вызванного металлом окислителвного стресса
Составы 26 и 28 дополнительно исследовали с точки зрения стабилизирующего эффекта на ExPEC гликоконъюгат в присутствии вольфрама в качестве модели вызванного металлом окисления продукта. Остаточные количества вольфрама обычно присутствуют на кончике стеклянных предварительно заполненных шприцев (ПЗШ), что является результатом процесса формирования кончика с использованием вольфрамовой иглы. Осаждение остаточных количеств вольфрама в ПЗШ зависит от процесса производства и может изменяться от производителя к производителю в пределах 250-1250 нанограмм/упаковку. Вольфрам связывают с агрегацией белка в ПЗШ (Jiang et al., J. Pharmaceutical Sci. 98(12):4695-710 (2009); Seidl et al., Pharmaceutical Res. 29:1454-67 (2012)). Так, стабильность составов 26 и 28 и старого состава исследовали при воздействии вольфрама при различных концентрациях, при этом наблюдая за окислительным стрессом и склонностью к агрегации ExPEC гликоконъюгата. В этом исследовании тестировали три уровня содержания вольфрама (высокий (HW), средний (MW) и низкий (LW)) по всему интервалу уровней содержания остаточных количеств вольфрама в ПЗШ, поступающих в настоящее время в продажу. Условия стресса, применявшиеся к составам, сведены в табл. 4.
Таблица 4: Условия стресса, применяемые к вольфрамсодержащим составам____
| Стресс | Условия | Временные точки |
| Температура | 4 0°С | 0, 1, 2 и 4 недели |
| Взбалтывание | Вихревая мешалка (200 об/мин при температуре окружающей среды) | 24 часы |
Было показано, что составы 26 и 28 содержат наименьшее количество агрегатов ExPEC гликоконъюгатов в ходе периода времени, что было установлено с помощью анализа ЭХ-ВЭЖХ (характеризующий стабильность пик примесей 1). Величины пиков примесей в момент времени 4 недели достигли 3,1% по сравнению с 1,0% в момент времени Т-0, даже при воздействии наиболее высоких уровней содержания вольфрама (в среднем 0,5% роста в неделю, фиг. 3).
Таким образом, в изобретении предложены два разных усовершенствованных жидких состава для гликоконъюгатной вакцины против ExPEC. Первая, наиболее предпочтительная композиция содержит ExPEC гликоконъюгат, сорбит, метионин, K/Na-фосфатный буфер с pH 7 и ПАВ. Вторая предпочтительная композиция содержит ExPEC гликоконъюгат, сахарозу, EDTA, K/Na-фосфатный буфер с pH 7 и ПАВ. Преимущество этих композиций над ранее описанной композицией состоит в том, что при хранении при 2-8°С, гликоконъюгатная вакцина против ExPEC демонстрирует улучшенный профиль стабильности в новых составах данного изобретения, в которых предотвращается агрегация и образование продуктов разложения, как следует из анализов, характеризующих стабильность (ЭХ-ВЭЖХ и ОФ-ВЭЖХ). Стабилизирующий эффект обоих изобретенных составов еще более очевиден при воздействии таких стрессов, как замораживание/размораживание, тепло (40°С) и окисляющее действие металлов при анализе с использованием вышеуказанных аналитических методик. Эти признаки позволяют использовать многие варианты хранения и транспортировки, как ЛС, так и ЛП гликоконъюгатоной вакцины против ExPEC. Кроме того, улучшенные свойства выносливости стресса, вызванного окисляющим действием
-
Claims (14)
- металлов, также относятся к долговременному хранению ExPEC вакцины в альтернативных системах первичной упаковки (например, предварительно заполненный шприц и/или приспособления для применения).Пример 5: Исследование совместимости состава с пластмассовыми материалами.Составы 26 и 28 дополнительно исследовали с точки зрения стабилизирующего эффекта на лекарственную субстанцию ExPEC гликоконъюгата (025b конъюгат, исследуемая концентрация полисахарида была 227-242 мкг/мл и белка - 952-1048 мкг/мл) при контакте с различными пластмассовыми материалами, такими как поликарбонат (ПК) и полиэтилентерефталатгликоль (ПЭТФ).Пластмассовые материалы ассоциируются с разрушением белка, например, при стерилизации пластмассового материала облучением. Составы исследовали с точки зрения стабильности в условиях стресса, вызванного интенсивным перемешиванием (24 ч при 200 об/мин при комнатной температуре) в емкостях из ПЭТФ и ПК. Старые составы полностью разлагались в этих условиях в емкости из ПЭТФ. В отличие от этого, как было показано с помощью анализа ЭХ-ВЭЖХ (см. фиг. 4, с использованием пика примесей 1 в качестве показателя нестабильности), составы 26 и 28 остаются стабильными в тех же условиях в исследуемых емкостях из ПЭТФ и ПК. Кроме того, установлена стабильность лекарственной субстанции в этих составах в ходе хранения в течении семи дней в емкостях из ПК и ПЭТФ при 25°С (данные не показаны).ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Иммуногенная композиция, содержащая:по меньшей мере один Е. coli О антиген-полисахарид, где по меньшей мере один О антигенполисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя;от 3% до 8 вес/об.% сорбита;от 5 до 15 мМ метионина;от 5 до 20 мМ калий/натрий фосфатного буфера с pH от 6,5 до 7,5; и от 0,01% до 0,2 вес/об.% ПАВ.
- 2. Иммуногенная композиция по п.1, содержащая Е. coli O25B антиген-полисахарид, Е. coli O1A антиген-полисахарид, Е. coli O2 антиген-полисахарид и Е. coli O6A антиген-полисахарид, где каждый антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином А Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя.
- 3. Иммуногенная композиция по п.1 или 2, где концентрация сорбита составляет 5 вес/об.%.
- 4. Иммуногенная композиция по любому из пп.1-3, где концентрация метионина составляет 10 мМ.
- 5. Иммуногенная композиция по любому из пп.1-4, где концентрация калий/натрий фосфатного буфера составляет 10 мМ, и pH калий/натрий фосфатного буфера равен 7,0.
- 6. Иммуногенная композиция по любому из пп.1-5, где ПАВ представляет собой неионогенный ПАВ, где ПАВ предпочтительно выбран из группы, состоящей из F-68, PS20 и PS80.
- 7. Иммуногенная композиция по п.6, где ПАВ представляет собой PS80, где концентрация PS80 предпочтительно составляет 0,02 вес/об.%.
- 8. Иммуногенная композиция по любому из пп.1-7, содержащая:Е . coli O25B антиген-полисахарид, Е. coli O1A антиген-полисахарид, Е. coli O2 антигенполисахарид и Е. coli O6A антиген-полисахарид, где каждый антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя;5 вес/об.% сорбита;10 мМ метионина;10 мМ KH2PO4/Na2HPO4 буфера с pH, равным 7,0;0,02 вес/об.% PS80; и воду.
- 9. Иммуногенная композиция, содержащая:по меньшей мере один Е. coli О антиген-полисахарид, где по меньшей мере один О антигенполисахарид ковалентно связан с экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя;от 3% до 12 вес/об.% сахарозы;от 0,1 до 1,5 мМ EDTA;от 5 до 20 мМ калий/натрий фосфатного буфера с pH от 6,5 до 7,5; и от 0,01% до 0,2 вес/об.% ПАВ.
- 10. Иммуногенная композиция по п.9, содержащая Е. coli O25B антиген-полисахарид, Е. coli O1A антиген-полисахарид, Е. coli O2 антиген-полисахарид и Е. coli O6A антиген-полисахарид, где каждый антиген-полисахарид ковалентно связан с экзотоксином А Pseudomonas aeruginosa (EPA) белка-носителя.
- 11. Иммуногенная композиция по п.9 или 10, где концентрация сахарозы составляет 8 вес/об.%.
- 12. Иммуногенная композиция по любому из пп.9-11, где концентрация EDTA составляет 1 мМ.
- 13. Иммуногенная композиция по любому из пп.9-12, где концентрация калий/натрий фосфатного буфера составляет 10 мМ, и pH калий/натрий фосфатного буфера равен 7,0.
- 14. Иммуногенная композиция по любому из пп.9-13, где ПАВ представляет собой неионогенный-
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP16195256.9 | 2016-10-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA044571B1 true EA044571B1 (ru) | 2023-09-07 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102576346B1 (ko) | ExPEC 글리코콘쥬게이트 백신 제형 | |
| AU2016312422B2 (en) | Methods and compositions for immune protection against extra-intestinal pathogenic E. coli | |
| ES2716124T3 (es) | Composiciones de vacunas y adyuvantes y métodos para el tratamiento de infecciones del tracto urinario | |
| US10525128B2 (en) | Compositions of vaccines and adjuvants and methods for the treatment of urinary tract infections | |
| AU2020325645A1 (en) | Immunogenic composition | |
| EA044571B1 (ru) | СОСТАВЫ ГЛИКОКОНЪЮГАТНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ExPEC | |
| NZ751736B2 (en) | Expec glycoconjugate vaccine formulations | |
| WO2016149558A2 (en) | Compositions of vaccines and adjuvants and methods for the treatment of urinary tract infections |