EA044566B1 - METHODS FOR TREATING INFECTIONS USING BACTERIA - Google Patents
METHODS FOR TREATING INFECTIONS USING BACTERIA Download PDFInfo
- Publication number
- EA044566B1 EA044566B1 EA202190546 EA044566B1 EA 044566 B1 EA044566 B1 EA 044566B1 EA 202190546 EA202190546 EA 202190546 EA 044566 B1 EA044566 B1 EA 044566B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- lps
- virus
- bacteria
- gram
- treated
- Prior art date
Links
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims description 104
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 33
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title description 25
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 125
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims description 113
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 59
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 47
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 42
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 41
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 40
- YXPVEXCTPGULBZ-WQYNNSOESA-N entecavir hydrate Chemical compound O.C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)C1=C YXPVEXCTPGULBZ-WQYNNSOESA-N 0.000 claims description 39
- 229960000980 entecavir Drugs 0.000 claims description 38
- -1 ampligen Chemical compound 0.000 claims description 32
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 claims description 24
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 20
- 239000012480 LAL reagent Substances 0.000 claims description 19
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 17
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 15
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 15
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 15
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 14
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 13
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 13
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 claims description 8
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 8
- XQSPYNMVSIKCOC-NTSWFWBYSA-N Emtricitabine Chemical compound C1=C(F)C(N)=NC(=O)N1[C@H]1O[C@@H](CO)SC1 XQSPYNMVSIKCOC-NTSWFWBYSA-N 0.000 claims description 6
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 claims description 6
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 claims description 6
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 claims description 6
- WHBIGIKBNXZKFE-UHFFFAOYSA-N delavirdine Chemical compound CC(C)NC1=CC=CN=C1N1CCN(C(=O)C=2NC3=CC=C(NS(C)(=O)=O)C=C3C=2)CC1 WHBIGIKBNXZKFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- NOPFSRXAKWQILS-UHFFFAOYSA-N docosan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCO NOPFSRXAKWQILS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- NQDJXKOVJZTUJA-UHFFFAOYSA-N nevirapine Chemical compound C12=NC=CC=C2C(=O)NC=2C(C)=CC=NC=2N1C1CC1 NQDJXKOVJZTUJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZJAOAACCNHFJAH-UHFFFAOYSA-N phosphonoformic acid Chemical compound OC(=O)P(O)(O)=O ZJAOAACCNHFJAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N ritonavir Chemical compound N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1SC=NC=1)CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N 0.000 claims description 6
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 6
- LOWWSYWGAKCKLG-UHFFFAOYSA-N 2-(6-methoxynaphthalen-1-yl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC2=CC(OC)=CC=C21 LOWWSYWGAKCKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 claims description 5
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 claims description 5
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 5
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims description 4
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 4
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 4
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims description 4
- 229960001627 lamivudine Drugs 0.000 claims description 4
- JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N lamivudine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1O[C@@H](CO)SC1 JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N 0.000 claims description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 4
- 229960004742 raltegravir Drugs 0.000 claims description 4
- CZFFBEXEKNGXKS-UHFFFAOYSA-N raltegravir Chemical compound O1C(C)=NN=C1C(=O)NC(C)(C)C1=NC(C(=O)NCC=2C=CC(F)=CC=2)=C(O)C(=O)N1C CZFFBEXEKNGXKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960001355 tenofovir disoproxil Drugs 0.000 claims description 4
- JFVZFKDSXNQEJW-CQSZACIVSA-N tenofovir disoproxil Chemical compound N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(=O)(OCOC(=O)OC(C)C)OCOC(=O)OC(C)C)C=NC2=C1N JFVZFKDSXNQEJW-CQSZACIVSA-N 0.000 claims description 4
- RDJGLLICXDHJDY-NSHDSACASA-N (2s)-2-(3-phenoxyphenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)C1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 RDJGLLICXDHJDY-NSHDSACASA-N 0.000 claims description 3
- MDKGKXOCJGEUJW-VIFPVBQESA-N (2s)-2-[4-(thiophene-2-carbonyl)phenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC([C@@H](C(O)=O)C)=CC=C1C(=O)C1=CC=CS1 MDKGKXOCJGEUJW-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 3
- CNPVJJQCETWNEU-CYFREDJKSA-N (4,6-dimethyl-5-pyrimidinyl)-[4-[(3S)-4-[(1R)-2-methoxy-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]ethyl]-3-methyl-1-piperazinyl]-4-methyl-1-piperidinyl]methanone Chemical compound N([C@@H](COC)C=1C=CC(=CC=1)C(F)(F)F)([C@H](C1)C)CCN1C(CC1)(C)CCN1C(=O)C1=C(C)N=CN=C1C CNPVJJQCETWNEU-CYFREDJKSA-N 0.000 claims description 3
- UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 1-(1-adamantyl)ethanamine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XVDXNSRMHBAVAX-UHFFFAOYSA-N 2-(4-methoxyphenyl)-3-propan-2-ylbenzo[e]benzimidazole Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(N1C(C)C)=NC2=C1C=CC1=CC=CC=C21 XVDXNSRMHBAVAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- LFWHFZJPXXOYNR-RQZCQDPDSA-N 2-[(3e)-6-fluoro-2-methyl-3-[(4-methylsulfanylphenyl)methylidene]inden-1-yl]acetic acid Chemical compound C1=CC(SC)=CC=C1\C=C/1C2=CC=C(F)C=C2C(CC(O)=O)=C\1C LFWHFZJPXXOYNR-RQZCQDPDSA-N 0.000 claims description 3
- YLDCUKJMEKGGFI-QCSRICIXSA-N 4-acetamidobenzoic acid;9-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-3h-purin-6-one;1-(dimethylamino)propan-2-ol Chemical compound CC(O)CN(C)C.CC(O)CN(C)C.CC(O)CN(C)C.CC(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1.CC(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1.CC(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1.O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 YLDCUKJMEKGGFI-QCSRICIXSA-N 0.000 claims description 3
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- AXRYRYVKAWYZBR-UHFFFAOYSA-N Atazanavir Natural products C=1C=C(C=2N=CC=CC=2)C=CC=1CN(NC(=O)C(NC(=O)OC)C(C)(C)C)CC(O)C(NC(=O)C(NC(=O)OC)C(C)(C)C)CC1=CC=CC=C1 AXRYRYVKAWYZBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010019625 Atazanavir Sulfate Proteins 0.000 claims description 3
- 239000005528 B01AC05 - Ticlopidine Substances 0.000 claims description 3
- 101000840545 Bacillus thuringiensis L-isoleucine-4-hydroxylase Proteins 0.000 claims description 3
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 claims description 3
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 claims description 3
- 101710185679 CD276 antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 3
- QAGYKUNXZHXKMR-UHFFFAOYSA-N CPD000469186 Natural products CC1=C(O)C=CC=C1C(=O)NC(C(O)CN1C(CC2CCCCC2C1)C(=O)NC(C)(C)C)CSC1=CC=CC=C1 QAGYKUNXZHXKMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 claims description 3
- VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N Cidofovir Chemical compound NC=1C=CN(C[C@@H](CO)OCP(O)(O)=O)C(=O)N=1 VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 3
- BXZVVICBKDXVGW-NKWVEPMBSA-N Didanosine Chemical compound O1[C@H](CO)CC[C@@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 BXZVVICBKDXVGW-NKWVEPMBSA-N 0.000 claims description 3
- XPOQHMRABVBWPR-UHFFFAOYSA-N Efavirenz Natural products O1C(=O)NC2=CC=C(Cl)C=C2C1(C(F)(F)F)C#CC1CC1 XPOQHMRABVBWPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 claims description 3
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 101001037256 Homo sapiens Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101001055145 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit beta Proteins 0.000 claims description 3
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 claims description 3
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000666896 Homo sapiens V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Proteins 0.000 claims description 3
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 3
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102100040061 Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 claims description 3
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 3
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 claims description 3
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 claims description 3
- 102100026879 Interleukin-2 receptor subunit beta Human genes 0.000 claims description 3
- UETNIIAIRMUTSM-UHFFFAOYSA-N Jacareubin Natural products CC1(C)OC2=CC3Oc4c(O)c(O)ccc4C(=O)C3C(=C2C=C1)O UETNIIAIRMUTSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102000002698 KIR Receptors Human genes 0.000 claims description 3
- 108010043610 KIR Receptors Proteins 0.000 claims description 3
- KJHKTHWMRKYKJE-SUGCFTRWSA-N Kaletra Chemical compound N1([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)COC=2C(=CC=CC=2C)C)CC=2C=CC=CC=2)CCCNC1=O KJHKTHWMRKYKJE-SUGCFTRWSA-N 0.000 claims description 3
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 claims description 3
- SBDNJUWAMKYJOX-UHFFFAOYSA-N Meclofenamic Acid Chemical compound CC1=CC=C(Cl)C(NC=2C(=CC=CC=2)C(O)=O)=C1Cl SBDNJUWAMKYJOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZRVUJXDFFKFLMG-UHFFFAOYSA-N Meloxicam Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)N(C)C=1C(=O)NC1=NC=C(C)S1 ZRVUJXDFFKFLMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KJHOZAZQWVKILO-UHFFFAOYSA-N N-(diaminomethylidene)-4-morpholinecarboximidamide Chemical compound NC(N)=NC(=N)N1CCOCC1 KJHOZAZQWVKILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KTDZCOWXCWUPEO-UHFFFAOYSA-N NS-398 Chemical compound CS(=O)(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1OC1CCCCC1 KTDZCOWXCWUPEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- JZFPYUNJRRFVQU-UHFFFAOYSA-N Niflumic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 JZFPYUNJRRFVQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- JNTOCHDNEULJHD-UHFFFAOYSA-N Penciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(CCC(CO)CO)C=N2 JNTOCHDNEULJHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 claims description 3
- QNVSXXGDAPORNA-UHFFFAOYSA-N Resveratrol Natural products OC1=CC=CC(C=CC=2C=C(O)C(O)=CC=2)=C1 QNVSXXGDAPORNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 claims description 3
- NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N Ritonavir Natural products C=1C=CC=CC=1CC(NC(=O)OCC=1SC=NC=1)C(O)CC(CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- JHBIMJKLBUMNAU-UHFFFAOYSA-N SC-58125 Chemical compound C1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1N1C(C=2C=CC(F)=CC=2)=CC(C(F)(F)F)=N1 JHBIMJKLBUMNAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 101001037255 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) Indoleamine 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 claims description 3
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 claims description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 3
- ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M Sodium salicylate Chemical compound [Na+].OC1=CC=CC=C1C([O-])=O ABBQHOQBGMUPJH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- XNKLLVCARDGLGL-JGVFFNPUSA-N Stavudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1C=C[C@@H](CO)O1 XNKLLVCARDGLGL-JGVFFNPUSA-N 0.000 claims description 3
- 101100215487 Sus scrofa ADRA2A gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims description 3
- SUJUHGSWHZTSEU-UHFFFAOYSA-N Tipranavir Natural products C1C(O)=C(C(CC)C=2C=C(NS(=O)(=O)C=3N=CC(=CC=3)C(F)(F)F)C=CC=2)C(=O)OC1(CCC)CCC1=CC=CC=C1 SUJUHGSWHZTSEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- LUKBXSAWLPMMSZ-OWOJBTEDSA-N Trans-resveratrol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1\C=C\C1=CC(O)=CC(O)=C1 LUKBXSAWLPMMSZ-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims description 3
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 claims description 3
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 claims description 3
- 108010079206 V-Set Domain-Containing T-Cell Activation Inhibitor 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100038929 V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100038282 V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Human genes 0.000 claims description 3
- HDOVUKNUBWVHOX-QMMMGPOBSA-N Valacyclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCOC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C=N2 HDOVUKNUBWVHOX-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 3
- WPVFJKSGQUFQAP-GKAPJAKFSA-N Valcyte Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COC(CO)COC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C=N2 WPVFJKSGQUFQAP-GKAPJAKFSA-N 0.000 claims description 3
- OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N Vidarabine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N 0.000 claims description 3
- WREGKURFCTUGRC-POYBYMJQSA-N Zalcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)CC1 WREGKURFCTUGRC-POYBYMJQSA-N 0.000 claims description 3
- DLGSOJOOYHWROO-WQLSENKSSA-N [(z)-(1-methyl-2-oxoindol-3-ylidene)amino]thiourea Chemical compound C1=CC=C2N(C)C(=O)\C(=N/NC(N)=S)C2=C1 DLGSOJOOYHWROO-WQLSENKSSA-N 0.000 claims description 3
- GLWHPRRGGYLLRV-XLPZGREQSA-N [[(2s,3s,5r)-3-azido-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 GLWHPRRGGYLLRV-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004748 abacavir Drugs 0.000 claims description 3
- MCGSCOLBFJQGHM-SCZZXKLOSA-N abacavir Chemical compound C=12N=CN([C@H]3C=C[C@@H](CO)C3)C2=NC(N)=NC=1NC1CC1 MCGSCOLBFJQGHM-SCZZXKLOSA-N 0.000 claims description 3
- YQNQNVDNTFHQSW-UHFFFAOYSA-N acetic acid [2-[[(5-nitro-2-thiazolyl)amino]-oxomethyl]phenyl] ester Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(=O)NC1=NC=C([N+]([O-])=O)S1 YQNQNVDNTFHQSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 229960004150 aciclovir Drugs 0.000 claims description 3
- MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N aciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCO)C=N2 MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001997 adefovir Drugs 0.000 claims description 3
- WOZSCQDILHKSGG-UHFFFAOYSA-N adefovir depivoxil Chemical compound N1=CN=C2N(CCOCP(=O)(OCOC(=O)C(C)(C)C)OCOC(=O)C(C)(C)C)C=NC2=C1N WOZSCQDILHKSGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 claims description 3
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004909 aminosalicylic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 229960001830 amprenavir Drugs 0.000 claims description 3
- YMARZQAQMVYCKC-OEMFJLHTSA-N amprenavir Chemical compound C([C@@H]([C@H](O)CN(CC(C)C)S(=O)(=O)C=1C=CC(N)=CC=1)NC(=O)O[C@@H]1COCC1)C1=CC=CC=C1 YMARZQAQMVYCKC-OEMFJLHTSA-N 0.000 claims description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 3
- 229960003277 atazanavir Drugs 0.000 claims description 3
- AXRYRYVKAWYZBR-GASGPIRDSA-N atazanavir Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)(C)C)[C@@H](O)CN(CC=1C=CC(=CC=1)C=1N=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)(C)C)C1=CC=CC=C1 AXRYRYVKAWYZBR-GASGPIRDSA-N 0.000 claims description 3
- 229940068561 atripla Drugs 0.000 claims description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 claims description 3
- 229960003184 carprofen Drugs 0.000 claims description 3
- IVUMCTKHWDRRMH-UHFFFAOYSA-N carprofen Chemical compound C1=CC(Cl)=C[C]2C3=CC=C(C(C(O)=O)C)C=C3N=C21 IVUMCTKHWDRRMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000590 celecoxib Drugs 0.000 claims description 3
- RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N celecoxib Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C1=CC(C(F)(F)F)=NN1C1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000724 cidofovir Drugs 0.000 claims description 3
- 229940014461 combivir Drugs 0.000 claims description 3
- 229960005107 darunavir Drugs 0.000 claims description 3
- CJBJHOAVZSMMDJ-HEXNFIEUSA-N darunavir Chemical compound C([C@@H]([C@H](O)CN(CC(C)C)S(=O)(=O)C=1C=CC(N)=CC=1)NC(=O)O[C@@H]1[C@@H]2CCO[C@@H]2OC1)C1=CC=CC=C1 CJBJHOAVZSMMDJ-HEXNFIEUSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005319 delavirdine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960001259 diclofenac Drugs 0.000 claims description 3
- DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N diclofenac Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1NC1=C(Cl)C=CC=C1Cl DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002656 didanosine Drugs 0.000 claims description 3
- HUPFGZXOMWLGNK-UHFFFAOYSA-N diflunisal Chemical compound C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(C=2C(=CC(F)=CC=2)F)=C1 HUPFGZXOMWLGNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000616 diflunisal Drugs 0.000 claims description 3
- MUCZHBLJLSDCSD-UHFFFAOYSA-N diisopropyl fluorophosphate Chemical compound CC(C)OP(F)(=O)OC(C)C MUCZHBLJLSDCSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000735 docosanol Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002542 dolutegravir Drugs 0.000 claims description 3
- RHWKPHLQXYSBKR-BMIGLBTASA-N dolutegravir Chemical compound C([C@@H]1OCC[C@H](N1C(=O)C1=C(O)C2=O)C)N1C=C2C(=O)NCC1=CC=C(F)C=C1F RHWKPHLQXYSBKR-BMIGLBTASA-N 0.000 claims description 3
- 229960002030 edoxudine Drugs 0.000 claims description 3
- XACKNLSZYYIACO-DJLDLDEBSA-N edoxudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(CC)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 XACKNLSZYYIACO-DJLDLDEBSA-N 0.000 claims description 3
- XPOQHMRABVBWPR-ZDUSSCGKSA-N efavirenz Chemical compound C([C@]1(C2=CC(Cl)=CC=C2NC(=O)O1)C(F)(F)F)#CC1CC1 XPOQHMRABVBWPR-ZDUSSCGKSA-N 0.000 claims description 3
- 229960003804 efavirenz Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000366 emtricitabine Drugs 0.000 claims description 3
- YJGVMLPVUAXIQN-UHFFFAOYSA-N epipodophyllotoxin Natural products COC1=C(OC)C(OC)=CC(C2C3=CC=4OCOC=4C=C3C(O)C3C2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005293 etodolac Drugs 0.000 claims description 3
- XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N etodolac Chemical compound C1COC(CC)(CC(O)=O)C2=N[C]3C(CC)=CC=CC3=C21 XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004396 famciclovir Drugs 0.000 claims description 3
- GGXKWVWZWMLJEH-UHFFFAOYSA-N famcyclovir Chemical compound N1=C(N)N=C2N(CCC(COC(=O)C)COC(C)=O)C=NC2=C1 GGXKWVWZWMLJEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001419 fenoprofen Drugs 0.000 claims description 3
- 229940067594 flufenamate Drugs 0.000 claims description 3
- LPEPZBJOKDYZAD-UHFFFAOYSA-N flufenamic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 LPEPZBJOKDYZAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005051 fluostigmine Drugs 0.000 claims description 3
- IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N fluquinconazole Chemical compound C=1C=C(Cl)C=C(Cl)C=1N1C(=O)C2=CC(F)=CC=C2N=C1N1C=NC=N1 IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001447 fomivirsen Drugs 0.000 claims description 3
- XCWFZHPEARLXJI-UHFFFAOYSA-N fomivirsen Chemical compound C1C(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC(CO)C1OP(O)(=S)OCC1OC(N(C)C(=O)\N=C(\N)C=C)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC(C(C1)OP(S)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)OC1N1C=C(C)C(=O)NC1=O XCWFZHPEARLXJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960003142 fosamprenavir Drugs 0.000 claims description 3
- MLBVMOWEQCZNCC-OEMFJLHTSA-N fosamprenavir Chemical compound C([C@@H]([C@H](OP(O)(O)=O)CN(CC(C)C)S(=O)(=O)C=1C=CC(N)=CC=1)NC(=O)O[C@@H]1COCC1)C1=CC=CC=C1 MLBVMOWEQCZNCC-OEMFJLHTSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005102 foscarnet Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 claims description 3
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000374 ibacitabine Drugs 0.000 claims description 3
- WEVJJMPVVFNAHZ-RRKCRQDMSA-N ibacitabine Chemical compound C1=C(I)C(N)=NC(=O)N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 WEVJJMPVVFNAHZ-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 claims description 3
- 229960004716 idoxuridine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002751 imiquimod Drugs 0.000 claims description 3
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001936 indinavir Drugs 0.000 claims description 3
- CBVCZFGXHXORBI-PXQQMZJSSA-N indinavir Chemical compound C([C@H](N(CC1)C[C@@H](O)C[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H]2C3=CC=CC=C3C[C@H]2O)C(=O)NC(C)(C)C)N1CC1=CC=CN=C1 CBVCZFGXHXORBI-PXQQMZJSSA-N 0.000 claims description 3
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 claims description 3
- 229940124524 integrase inhibitor Drugs 0.000 claims description 3
- 239000002850 integrase inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 108010018844 interferon type III Proteins 0.000 claims description 3
- DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N ketoprofen Chemical compound OC(=O)C(C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000991 ketoprofen Drugs 0.000 claims description 3
- 229960004752 ketorolac Drugs 0.000 claims description 3
- OZWKMVRBQXNZKK-UHFFFAOYSA-N ketorolac Chemical compound OC(=O)C1CCN2C1=CC=C2C(=O)C1=CC=CC=C1 OZWKMVRBQXNZKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004525 lopinavir Drugs 0.000 claims description 3
- 229960004710 maraviroc Drugs 0.000 claims description 3
- GSNHKUDZZFZSJB-QYOOZWMWSA-N maraviroc Chemical compound CC(C)C1=NN=C(C)N1[C@@H]1C[C@H](N2CC[C@H](NC(=O)C3CCC(F)(F)CC3)C=3C=CC=CC=3)CC[C@H]2C1 GSNHKUDZZFZSJB-QYOOZWMWSA-N 0.000 claims description 3
- 229940013798 meclofenamate Drugs 0.000 claims description 3
- 229960003464 mefenamic acid Drugs 0.000 claims description 3
- HYYBABOKPJLUIN-UHFFFAOYSA-N mefenamic acid Chemical compound CC1=CC=CC(NC=2C(=CC=CC=2)C(O)=O)=C1C HYYBABOKPJLUIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001929 meloxicam Drugs 0.000 claims description 3
- 229960003152 metisazone Drugs 0.000 claims description 3
- 229960005389 moroxydine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 claims description 3
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 3
- 229960000884 nelfinavir Drugs 0.000 claims description 3
- QAGYKUNXZHXKMR-HKWSIXNMSA-N nelfinavir Chemical compound CC1=C(O)C=CC=C1C(=O)N[C@H]([C@H](O)CN1[C@@H](C[C@@H]2CCCC[C@@H]2C1)C(=O)NC(C)(C)C)CSC1=CC=CC=C1 QAGYKUNXZHXKMR-HKWSIXNMSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000689 nevirapine Drugs 0.000 claims description 3
- 229940101771 nexavir Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000916 niflumic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000965 nimesulide Drugs 0.000 claims description 3
- HYWYRSMBCFDLJT-UHFFFAOYSA-N nimesulide Chemical compound CS(=O)(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1OC1=CC=CC=C1 HYWYRSMBCFDLJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002480 nitazoxanide Drugs 0.000 claims description 3
- 229940072250 norvir Drugs 0.000 claims description 3
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 claims description 3
- 229960003752 oseltamivir Drugs 0.000 claims description 3
- VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N oseltamivir Chemical compound CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N 0.000 claims description 3
- PGZUMBJQJWIWGJ-ONAKXNSWSA-N oseltamivir phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 PGZUMBJQJWIWGJ-ONAKXNSWSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 claims description 3
- 229960003930 peginterferon alfa-2a Drugs 0.000 claims description 3
- 108010092853 peginterferon alfa-2a Proteins 0.000 claims description 3
- 229960001179 penciclovir Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 229960001084 peramivir Drugs 0.000 claims description 3
- XRQDFNLINLXZLB-CKIKVBCHSA-N peramivir Chemical compound CCC(CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C(O)=O)C[C@H]1NC(N)=N XRQDFNLINLXZLB-CKIKVBCHSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002702 piroxicam Drugs 0.000 claims description 3
- QYSPLQLAKJAUJT-UHFFFAOYSA-N piroxicam Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)N(C)C=1C(=O)NC1=CC=CC=N1 QYSPLQLAKJAUJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000471 pleconaril Drugs 0.000 claims description 3
- KQOXLKOJHVFTRN-UHFFFAOYSA-N pleconaril Chemical compound O1N=C(C)C=C1CCCOC1=C(C)C=C(C=2N=C(ON=2)C(F)(F)F)C=C1C KQOXLKOJHVFTRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001237 podophyllotoxin Drugs 0.000 claims description 3
- YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N podophyllotoxin Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@H](O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N 0.000 claims description 3
- YVCVYCSAAZQOJI-UHFFFAOYSA-N podophyllotoxin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2C3=CC=4OCOC=4C=C3C(O)C3C2C(OC3)=O)=C1 YVCVYCSAAZQOJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940016667 resveratrol Drugs 0.000 claims description 3
- 235000021283 resveratrol Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 claims description 3
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000888 rimantadine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000311 ritonavir Drugs 0.000 claims description 3
- RZJQGNCSTQAWON-UHFFFAOYSA-N rofecoxib Chemical compound C1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1C1=C(C=2C=CC=CC=2)C(=O)OC1 RZJQGNCSTQAWON-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000371 rofecoxib Drugs 0.000 claims description 3
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 claims description 3
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 claims description 3
- SMQUZDBALVYZAC-UHFFFAOYSA-N salicylaldehyde Chemical compound OC1=CC=CC=C1C=O SMQUZDBALVYZAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001852 saquinavir Drugs 0.000 claims description 3
- QWAXKHKRTORLEM-UGJKXSETSA-N saquinavir Chemical compound C([C@@H]([C@H](O)CN1C[C@H]2CCCC[C@H]2C[C@H]1C(=O)NC(C)(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)C=1N=C2C=CC=CC2=CC=1)C1=CC=CC=C1 QWAXKHKRTORLEM-UGJKXSETSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004025 sodium salicylate Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002063 sofosbuvir Drugs 0.000 claims description 3
- TTZHDVOVKQGIBA-IQWMDFIBSA-N sofosbuvir Chemical compound N1([C@@H]2O[C@@H]([C@H]([C@]2(F)C)O)CO[P@@](=O)(N[C@@H](C)C(=O)OC(C)C)OC=2C=CC=CC=2)C=CC(=O)NC1=O TTZHDVOVKQGIBA-IQWMDFIBSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001203 stavudine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960001940 sulfasalazine Drugs 0.000 claims description 3
- NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N sulfasalazine Chemical compound C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(\N=N\C=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N 0.000 claims description 3
- NCEXYHBECQHGNR-UHFFFAOYSA-N sulfasalazine Natural products C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(N=NC=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000894 sulindac Drugs 0.000 claims description 3
- MLKXDPUZXIRXEP-MFOYZWKCSA-N sulindac Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(F)=CC=C2\C1=C/C1=CC=C(S(C)=O)C=C1 MLKXDPUZXIRXEP-MFOYZWKCSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004492 suprofen Drugs 0.000 claims description 3
- 229940061367 tamiflu Drugs 0.000 claims description 3
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002935 telaprevir Drugs 0.000 claims description 3
- 108010017101 telaprevir Proteins 0.000 claims description 3
- BBAWEDCPNXPBQM-GDEBMMAJSA-N telaprevir Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N1C[C@@H]2CCC[C@@H]2[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC)C(=O)C(=O)NC1CC1)C(C)(C)C)C1CCCCC1)C(=O)C1=CN=CC=N1 BBAWEDCPNXPBQM-GDEBMMAJSA-N 0.000 claims description 3
- 229960003676 tenidap Drugs 0.000 claims description 3
- LXIKEPCNDFVJKC-QXMHVHEDSA-N tenidap Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N(C(=O)N)C(=O)\C1=C(/O)C1=CC=CS1 LXIKEPCNDFVJKC-QXMHVHEDSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004556 tenofovir Drugs 0.000 claims description 3
- SGOIRFVFHAKUTI-ZCFIWIBFSA-N tenofovir (anhydrous) Chemical compound N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(O)(O)=O)C=NC2=C1N SGOIRFVFHAKUTI-ZCFIWIBFSA-N 0.000 claims description 3
- VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N tenofovir disoproxil fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(=O)(OCOC(=O)OC(C)C)OCOC(=O)OC(C)C)C=NC2=C1N VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N 0.000 claims description 3
- PHWBOXQYWZNQIN-UHFFFAOYSA-N ticlopidine Chemical compound ClC1=CC=CC=C1CN1CC(C=CS2)=C2CC1 PHWBOXQYWZNQIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005001 ticlopidine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000838 tipranavir Drugs 0.000 claims description 3
- SUJUHGSWHZTSEU-FYBSXPHGSA-N tipranavir Chemical compound C([C@@]1(CCC)OC(=O)C([C@H](CC)C=2C=C(NS(=O)(=O)C=3N=CC(=CC=3)C(F)(F)F)C=CC=2)=C(O)C1)CC1=CC=CC=C1 SUJUHGSWHZTSEU-FYBSXPHGSA-N 0.000 claims description 3
- 229960001017 tolmetin Drugs 0.000 claims description 3
- UPSPUYADGBWSHF-UHFFFAOYSA-N tolmetin Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(=O)C1=CC=C(CC(O)=O)N1C UPSPUYADGBWSHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960003962 trifluridine Drugs 0.000 claims description 3
- VSQQQLOSPVPRAZ-RRKCRQDMSA-N trifluridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C(F)(F)F)=C1 VSQQQLOSPVPRAZ-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 3
- 229940111527 trizivir Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000832 tromantadine Drugs 0.000 claims description 3
- UXQDWARBDDDTKG-UHFFFAOYSA-N tromantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(NC(=O)COCCN(C)C)C3 UXQDWARBDDDTKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940008349 truvada Drugs 0.000 claims description 3
- 229960004626 umifenovir Drugs 0.000 claims description 3
- KCFYEAOKVJSACF-UHFFFAOYSA-N umifenovir Chemical compound CN1C2=CC(Br)=C(O)C(CN(C)C)=C2C(C(=O)OCC)=C1CSC1=CC=CC=C1 KCFYEAOKVJSACF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940093257 valacyclovir Drugs 0.000 claims description 3
- WJHZBTMHUNVIKC-UHFFFAOYSA-N valerylsalicylic acid Chemical compound CCCCC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O WJHZBTMHUNVIKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002149 valganciclovir Drugs 0.000 claims description 3
- 229950009860 vicriviroc Drugs 0.000 claims description 3
- 229960003636 vidarabine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000523 zalcitabine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960001028 zanamivir Drugs 0.000 claims description 3
- ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N zanamivir Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)C=C(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960003414 zomepirac Drugs 0.000 claims description 3
- ZXVNMYWKKDOREA-UHFFFAOYSA-N zomepirac Chemical compound C1=C(CC(O)=O)N(C)C(C(=O)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1C ZXVNMYWKKDOREA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 229940122204 Cyclooxygenase inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 2
- 101710083479 Hepatitis A virus cellular receptor 2 homolog Proteins 0.000 claims description 2
- BLXXJMDCKKHMKV-UHFFFAOYSA-N Nabumetone Chemical compound C1=C(CCC(C)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 BLXXJMDCKKHMKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940126547 T-cell immunoglobulin mucin-3 Drugs 0.000 claims description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 2
- SYTBZMRGLBWNTM-UHFFFAOYSA-N flurbiprofen Chemical compound FC1=CC(C(C(O)=O)C)=CC=C1C1=CC=CC=C1 SYTBZMRGLBWNTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960004270 nabumetone Drugs 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 239000002599 prostaglandin synthase inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 229950006081 taribavirin Drugs 0.000 claims description 2
- NHKZSTHOYNWEEZ-AFCXAGJDSA-N taribavirin Chemical compound N1=C(C(=N)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NHKZSTHOYNWEEZ-AFCXAGJDSA-N 0.000 claims description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 claims 1
- HDUWKQUHMUSICC-UHFFFAOYSA-N n-[6-(2,4-difluorophenyl)sulfanyl-1-oxo-2,3-dihydroinden-5-yl]methanesulfonamide Chemical compound CS(=O)(=O)NC1=CC=2CCC(=O)C=2C=C1SC1=CC=C(F)C=C1F HDUWKQUHMUSICC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 59
- 230000007893 endotoxin activity Effects 0.000 description 33
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 26
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 26
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 26
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 26
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 25
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 23
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 21
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 21
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 16
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 15
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 14
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 13
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 13
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 12
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 12
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 12
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 12
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 12
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 description 12
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 description 12
- 241000150350 Peribunyaviridae Species 0.000 description 11
- 241000710924 Togaviridae Species 0.000 description 11
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 10
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 9
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 9
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 description 8
- 241000711931 Rhabdoviridae Species 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 8
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 7
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 241000711504 Paramyxoviridae Species 0.000 description 6
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 241000712891 Arenavirus Species 0.000 description 5
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 5
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 5
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 5
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 5
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 5
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 241001631648 Polyomaviridae Species 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 239000003970 toll like receptor agonist Substances 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- 241000712892 Arenaviridae Species 0.000 description 4
- 241000714198 Caliciviridae Species 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 4
- 238000011050 LAL assay Methods 0.000 description 4
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 4
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 4
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 4
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 4
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 4
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- KYQCXUMVJGMDNG-SHUUEZRQSA-N keto-3-deoxy-D-manno-octulosonic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CC(=O)C(O)=O KYQCXUMVJGMDNG-SHUUEZRQSA-N 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 3
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 description 3
- 102000013264 Interleukin-23 Human genes 0.000 description 3
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 3
- 241000713112 Orthobunyavirus Species 0.000 description 3
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 description 3
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 3
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 3
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 3
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 3
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 3
- 229940124829 interleukin-23 Drugs 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 3
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 2
- 241000340974 Alphapapillomavirus Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010078777 Colistin Proteins 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 2
- 241000712471 Dhori virus Species 0.000 description 2
- 108010032976 Enfuvirtide Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000711950 Filoviridae Species 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 description 2
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 2
- 241000701945 Parvoviridae Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 241000713137 Phlebovirus Species 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 102000004005 Prostaglandin-endoperoxide synthases Human genes 0.000 description 2
- 108090000459 Prostaglandin-endoperoxide synthases Proteins 0.000 description 2
- 241000702247 Reoviridae Species 0.000 description 2
- 241000122129 Roseolovirus Species 0.000 description 2
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 2
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000981 basic dye Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 229960002062 enfuvirtide Drugs 0.000 description 2
- PEASPLKKXBYDKL-FXEVSJAOSA-N enfuvirtide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(C)=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CN=CN1 PEASPLKKXBYDKL-FXEVSJAOSA-N 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 208000021045 exocrine pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 2
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- CJPLEFFCVDQQFZ-UHFFFAOYSA-N loviride Chemical compound CC(=O)C1=CC=C(C)C=C1NC(C(N)=O)C1=C(Cl)C=CC=C1Cl CJPLEFFCVDQQFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229950006243 loviride Drugs 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 2
- JORAUNFTUVJTNG-BSTBCYLQSA-N n-[(2s)-4-amino-1-[[(2s,3r)-1-[[(2s)-4-amino-1-oxo-1-[[(3s,6s,9s,12s,15r,18s,21s)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-3-[(1r)-1-hydroxyethyl]-12,15-bis(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino]-3-h Polymers CC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)CN[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCN)NC1=O.CCC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)CN[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCN)NC1=O JORAUNFTUVJTNG-BSTBCYLQSA-N 0.000 description 2
- YKQOSKADJPQZHB-YNWHQGOSSA-N n-[(2s)-4-amino-1-[[(2s,3r)-1-[[(2s)-4-amino-1-oxo-1-[[(3s,6s,9s,12s,15r,18s,21s)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-3-[(1s)-1-hydroxyethyl]-12,15-bis(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino]-3-h Polymers CCC(C)CCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@H]([C@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCN)NC1=O YKQOSKADJPQZHB-YNWHQGOSSA-N 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 2
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- XDJYMJULXQKGMM-UHFFFAOYSA-N polymyxin E1 Natural products CCC(C)CCCCC(=O)NC(CCN)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NC(CCN)C(=O)NC1CCNC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CCN)NC1=O XDJYMJULXQKGMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N (2R,6R)-form-2.6-Diaminoheptanedioic acid Natural products OC(=O)C(N)CCCC(N)C(O)=O GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAOLJGCZESYRFT-ICVWGWAISA-N (2r,5r)-2-[(2r,4r,5r)-2-carboxy-6-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]-5-hydroxy-2-[[(3s,5s,6r)-6-[[(3s,5s,6r)-3-hydroxy-5-[[(3r)-3-hydroxytetradecanoyl]amino]-4-[(3r)-3-hydroxytetradecanoyl]oxy-6-phosphonooxyoxan-2-yl]methoxy]-5-[[(3r)-3-hydroxytetradecanoyl]amino] Chemical compound O[C@H]1C(OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)OC1CO[C@H]1[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)C(OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@H](OP(O)(O)=O)C(CO[C@]2(OC([C@H](O)[C@H](O[C@]3(OC([C@H](O)C(O)C3)[C@H](O)CO)C(O)=O)C2)[C@H](O)CO)C(O)=O)O1 XAOLJGCZESYRFT-ICVWGWAISA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- JALUUBQFLPUJMY-UHFFFAOYSA-N 2-(4-phenylphenyl)propanoic acid Chemical compound C1=CC(C(C(O)=O)C)=CC=C1C1=CC=CC=C1 JALUUBQFLPUJMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013746 3-deoxy-manno-octulosonate cytidyltransferase Proteins 0.000 description 1
- KYQCXUMVJGMDNG-UHFFFAOYSA-N 4,5,6,7,8-pentahydroxy-2-oxooctanoic acid Chemical compound OCC(O)C(O)C(O)C(O)CC(=O)C(O)=O KYQCXUMVJGMDNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 241000701242 Adenoviridae Species 0.000 description 1
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 1
- 241001036151 Aichi virus 1 Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000004176 Alphacoronavirus Species 0.000 description 1
- 241001339993 Anelloviridae Species 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 241001533362 Astroviridae Species 0.000 description 1
- 241000295638 Australian bat lyssavirus Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241001302512 Banna virus Species 0.000 description 1
- 241000008904 Betacoronavirus Species 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 241001493154 Bunyamwera virus Species 0.000 description 1
- AFWTZXXDGQBIKW-UHFFFAOYSA-N C14 surfactin Natural products CCCCCCCCCCCC1CC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CC(O)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)O1 AFWTZXXDGQBIKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241001529572 Chaceon affinis Species 0.000 description 1
- 241001502567 Chikungunya virus Species 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000033566 Cosavirus A Species 0.000 description 1
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 description 1
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 description 1
- 241000150230 Crimean-Congo hemorrhagic fever orthonairovirus Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 241001663879 Deltaretrovirus Species 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000149824 Dugbe orthonairovirus Species 0.000 description 1
- 241001520695 Duvenhage lyssavirus Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000710945 Eastern equine encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 1
- 241001466953 Echovirus Species 0.000 description 1
- 241000710188 Encephalomyocarditis virus Species 0.000 description 1
- 206010014824 Endotoxic shock Diseases 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000146324 Enterovirus D68 Species 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010066919 Epidemic polyarthritis Diseases 0.000 description 1
- 241001520680 European bat lyssavirus Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 241000589601 Francisella Species 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000531123 GB virus C Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- 241000150562 Hantaan orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000893570 Hendra henipavirus Species 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 241000700739 Hepadnaviridae Species 0.000 description 1
- 241000724675 Hepatitis E virus Species 0.000 description 1
- 241000724709 Hepatitis delta virus Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 241001112094 Hepevirus Species 0.000 description 1
- 101001068133 Homo sapiens Hepatitis A virus cellular receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101100151951 Homo sapiens SARS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 241000928771 Horsepox virus Species 0.000 description 1
- 244000309467 Human Coronavirus Species 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 1
- 241001479210 Human astrovirus Species 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 241001502974 Human gammaherpesvirus 8 Species 0.000 description 1
- 241000711920 Human orthopneumovirus Species 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 241000702617 Human parvovirus B19 Species 0.000 description 1
- 241000829111 Human polyomavirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000829106 Human polyomavirus 3 Species 0.000 description 1
- 241000430519 Human rhinovirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000714192 Human spumaretrovirus Species 0.000 description 1
- 241000947839 Human torovirus Species 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- 241001500350 Influenzavirus B Species 0.000 description 1
- 241001500343 Influenzavirus C Species 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 241001109688 Isfahan virus Species 0.000 description 1
- 241000701460 JC polyomavirus Species 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241000712890 Junin mammarenavirus Species 0.000 description 1
- 241000710912 Kunjin virus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241001520693 Lagos bat lyssavirus Species 0.000 description 1
- 241000710770 Langat virus Species 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 1
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000895638 Lepus timidus Species 0.000 description 1
- 241000239218 Limulus Species 0.000 description 1
- 241001635205 Lordsdale virus Species 0.000 description 1
- 241000712899 Lymphocytic choriomeningitis mammarenavirus Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001058043 Mamastrovirus Species 0.000 description 1
- 241000711937 Marburg marburgvirus Species 0.000 description 1
- 241000608292 Mayaro virus Species 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241000710185 Mengo virus Species 0.000 description 1
- 241000579048 Merkel cell polyomavirus Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000025370 Middle East respiratory syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000725171 Mokola lyssavirus Species 0.000 description 1
- 241000700560 Molluscum contagiosum virus Species 0.000 description 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 1
- 241000358374 Mupapillomavirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000710908 Murray Valley encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 241000168432 New York hantavirus Species 0.000 description 1
- 241000526636 Nipah henipavirus Species 0.000 description 1
- 241000714209 Norwalk virus Species 0.000 description 1
- 241000710944 O'nyong-nyong virus Species 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000712910 Pichinde mammarenavirus Species 0.000 description 1
- 241000711904 Pneumoviridae Species 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000014360 Punta Toro phlebovirus Species 0.000 description 1
- 241000150264 Puumala orthohantavirus Species 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 241000713124 Rift Valley fever virus Species 0.000 description 1
- 241000405729 Rosavirus A Species 0.000 description 1
- 241000710942 Ross River virus Species 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241001137860 Rotavirus A Species 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- 241001533467 Rubulavirus Species 0.000 description 1
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 1
- 241000608282 Sagiyama virus Species 0.000 description 1
- 241000701026 Saimiriine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000033084 Salivirus A Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 241000369753 Sapporo virus Species 0.000 description 1
- 241000555745 Sciuridae Species 0.000 description 1
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 1
- 241000150278 Seoul orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000714208 Southampton virus Species 0.000 description 1
- 241000710888 St. Louis encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940123384 Toll-like receptor (TLR) agonist Drugs 0.000 description 1
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 241000288669 Tupaia Species 0.000 description 1
- 241000713152 Uukuniemi virus Species 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 241000710959 Venezuelan equine encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 241000711970 Vesiculovirus Species 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 1
- 241000710951 Western equine encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001536558 Yaba monkey tumor virus Species 0.000 description 1
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 241000907316 Zika virus Species 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 108700010877 adenoviridae proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K aluminium tristearate Chemical compound [Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940063655 aluminum stearate Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 229960005475 antiinfective agent Drugs 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 238000011225 antiretroviral therapy Methods 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 235000001465 calcium Nutrition 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003340 calcium silicate Drugs 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 229940075614 colloidal silicon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 201000003740 cowpox Diseases 0.000 description 1
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- GXGAKHNRMVGRPK-UHFFFAOYSA-N dimagnesium;dioxido-bis[[oxido(oxo)silyl]oxy]silane Chemical compound [Mg+2].[Mg+2].[O-][Si](=O)O[Si]([O-])([O-])O[Si]([O-])=O GXGAKHNRMVGRPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000284 endotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002346 endotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000005454 flavour additive Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 150000002386 heptoses Chemical class 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 238000011577 humanized mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000013388 immunohistochemistry analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 229940102213 injectable suspension Drugs 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007919 intrasynovial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012454 limulus amebocyte lysate test Methods 0.000 description 1
- KVJWZTLXIROHIL-QDORLFPLSA-N lipid IVA Chemical compound O[C@H]1[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O[C@@H]1CO[C@H]1[C@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](CO)O1 KVJWZTLXIROHIL-QDORLFPLSA-N 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000391 magnesium silicate Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099273 magnesium trisilicate Drugs 0.000 description 1
- 235000019793 magnesium trisilicate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000386 magnesium trisilicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N meso-2,6-diaminopimelic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000011294 monotherapeutic Methods 0.000 description 1
- 230000001400 myeloablative effect Effects 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000001821 nucleic acid purification Methods 0.000 description 1
- KDWFDOFTPHDNJL-TUBOTVQJSA-N odn-2006 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(S)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)O)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)N2C(N=C(N)C=C2)=O)O)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)N2C(N=C(N)C=C2)=O)O)[C@@H](O)C1 KDWFDOFTPHDNJL-TUBOTVQJSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000011369 optimal treatment Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 108700010839 phage proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 1
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 1
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- LZFIOSVZIQOVFW-UHFFFAOYSA-N propyl 2-hydroxybenzoate Chemical class CCCOC(=O)C1=CC=CC=C1O LZFIOSVZIQOVFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 231100001251 short-term toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 125000003003 spiro group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- NJGWOFRZMQRKHT-UHFFFAOYSA-N surfactin Natural products CC(C)CCCCCCCCCC1CC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CC(O)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)O1 NJGWOFRZMQRKHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJGWOFRZMQRKHT-WGVNQGGSSA-N surfactin C Chemical compound CC(C)CCCCCCCCC[C@@H]1CC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O1 NJGWOFRZMQRKHT-WGVNQGGSSA-N 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000011885 synergistic combination Substances 0.000 description 1
- 230000009044 synergistic interaction Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- 238000000954 titration curve Methods 0.000 description 1
- 229950007669 tomoxiprole Drugs 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 1
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Description
Данная заявка испрашивает приоритет согласно Кодексу США, раздел 35, §119, на основании предварительной заявки на патент США № 62/737,762, поданной 27 сентября 2018 г., содержание которой полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.This application claims priority under 35 US Code §119 to US Provisional Patent Application No. 62/737,762, filed September 27, 2018, the contents of which are incorporated herein by reference in their entirety.
Уровень техникиState of the art
Для вирусных инфекций, таких как гепатит В (HBV) и вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), существующая терапия может контролировать репликацию вируса, улучшать клиническое состояние у большинства получающих лечение пациентов и приводить к снижению смертности и заболеваемости. Однако противовирусной терапии препятствует возобновление виремии после прекращения лечения и появление мутаций, приводящих к лекарственной устойчивости. Большинство пациентов нуждаются в пожизненном лечении, и излечение от хронической инфекции HBV или ВИЧ достигается редко.For viral infections such as hepatitis B (HBV) and human immunodeficiency virus (HIV), existing therapies can control viral replication, improve clinical status in the majority of treated patients, and lead to reduced mortality and morbidity. However, antiviral therapy is hampered by the resumption of viremia after cessation of treatment and the emergence of mutations leading to drug resistance. Most patients require lifelong treatment, and cure from chronic HBV or HIV infection is rarely achieved.
Известно, что цитокины и хемокины играют важную роль в защите хозяина от широкого спектра вирусных инфекций, включая гепатит и ВИЧ. Интерферон-альфа (IFN-α) одобрен для лечения инфекции гепатита В, и несколько дополнительных цитокинов, включая интерферон-гамма (IFN-γ), интерлейкин12 (IL-12), интерлейкин-23 (IL-23), ГМ-КСФ (гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор) и фактор некроза опухоли-альфа (TNF-α) вовлечены в защиту организма-хозяина от вирусных инфекций, таких как гепатит и ВИЧ, или в их лечение.Cytokines and chemokines are known to play an important role in host defense against a wide range of viral infections, including hepatitis and HIV. Interferon-alpha (IFN-α) is approved for the treatment of hepatitis B infection, and several additional cytokines, including interferon-gamma (IFN-γ), interleukin12 (IL-12), interleukin-23 (IL-23), GM-CSF ( granulocyte-macrophage colony-stimulating factor) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) are involved in host defense against or treatment of viral infections such as hepatitis and HIV.
Профилактическая вакцинация против патогенов требует предоставления антигенной детерминанты из патогена и адъюванта, который обеспечивает сигналы опасности для иммунной системы или их последующие эффекторы, необходимые для активации иммунного ответа против антигена патогена. Терапевтические вакцины, предназначенные для лечения уже существующей инфекции, зависят от распознавания хозяином антигенных детерминант патогена при существующей инфекции, а также требуют адъювантов или их последующих эффекторов для обеспечения опосредованной сигналом опасности иммунной активации. В некоторых случаях возможно усилить терапевтические вакцины путем предоставления антигенов, происходящих из экзогенных патогенов. Иммунные клетки как врожденной, так и адаптивной иммунной системы используют паттерн-распознающие рецепторы (PRR), чтобы воспринимать опасность в виде патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (РАМР). Наиболее известное семейство PRR состоит из толл-подобных рецепторов (TLR), обнаруженных практически на всех иммунных клетках. Эти рецепторы (TLR 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9) реагируют на продукты, обнаруженные во многих различных типах патогенов, включая бактерии и вирусы. Активация рецепторов TLR приводит как к прямой, так и к косвенной активации функции иммунных клеток и иммунных ответов. Прямая активация происходит за счет стимулирования созревания, пролиферации и дифференцировки клеток, тогда как косвенная активация происходит за счет индукции секреции цитокинов и хемокинов. Десятый TLR (TLR10) может действовать как негативный регуляторный эффектор иммунной функции.Prophylactic vaccination against pathogens requires the provision of an antigenic determinant from the pathogen and an adjuvant that provides immune danger signals or their downstream effectors necessary to activate an immune response against the pathogen antigen. Therapeutic vaccines designed to treat a pre-existing infection depend on host recognition of antigenic determinants of the pathogen in an existing infection and also require adjuvants or their downstream effectors to mediate danger signal-mediated immune activation. In some cases, it is possible to enhance therapeutic vaccines by providing antigens derived from exogenous pathogens. Immune cells of both the innate and adaptive immune systems use pattern recognition receptors (PRRs) to perceive danger in the form of pathogen-associated molecular patterns (PAMPs). The best known family of PRRs consists of toll-like receptors (TLRs), found on virtually all immune cells. These receptors (TLR 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, and 9) respond to products found in many different types of pathogens, including bacteria and viruses. Activation of TLR receptors leads to both direct and indirect activation of immune cell function and immune responses. Direct activation occurs by stimulating cell maturation, proliferation, and differentiation, whereas indirect activation occurs by inducing the secretion of cytokines and chemokines. A tenth TLR (TLR10) may act as a negative regulatory effector of immune function.
Из-за роли TLR в опосредованных хозяином иммунных ответах против патогенов были предприняты значительные усилия для получения адъювантов агонистов TLR и терапевтических средств для лечения инфекций. Широкий спектр моноспецифичных, очищенных или синтетических агонистов TLR был получен и протестирован в доклинических и клинических условиях. Агонисты TLR используют в качестве адъювантов в профилактических вакцинах. Однако, хотя активность в отношении патогенов наблюдали в условиях терапевтического применения вакцины, на пути этих усилий встретились значительные проблемы. Возникшие проблемы включали как недостаточную эффективность, так и чрезмерную токсичность, что указывает на необходимость дальнейших улучшений в профилактике и, в частности, лечении существующих инфекций с помощью агонистов TLR.Because of the role of TLRs in host-mediated immune responses against pathogens, significant efforts have been made to develop TLR agonist adjuvants and therapeutics for the treatment of infections. A wide range of monospecific, purified, or synthetic TLR agonists have been prepared and tested in preclinical and clinical settings. TLR agonists are used as adjuvants in prophylactic vaccines. However, although activity against pathogens has been observed in therapeutic vaccine settings, these efforts have encountered significant challenges. Problems encountered included both lack of efficacy and excessive toxicity, indicating the need for further improvements in the prevention and, in particular, treatment of existing infections with TLR agonists.
Краткое описание изобретенияBrief description of the invention
В связи с необходимостью активации как врожденного, так и адаптивного иммунного ответа для оптимальной иммунной защиты, и в связи с тем фактом, что патогены содержат несколько агонистов TLR и другие компоненты, связанные с сигналами опасности, предполагается, что для оптимальной противоинфекционной, в том числе противовирусной, терапии необходим терапевтический подход с использованием нескольких агонистов TLR. Известно, что грамотрицательные бактерии содержат несколько агонистов TLR и вызывают значительные иммунные ответы, связанные с агонистами TLR, включая секрецию цитокинов. Однако грамотрицательные бактерии дикого типа, которые содержат высокие уровни агониста TLR-4 липополисахарида (ЛПС) или эндотоксина, являются высокотоксичными при внутривенном введении, в основном из-за индукции чрезмерной секреции цитокинов иммунными клетками. Грамотрицательные бактерии также содержат агонисты TLR 1/2, 5 и 9, которые могут способствовать как стимуляции иммунной системы, так и системной токсичности.Due to the need to activate both the innate and adaptive immune responses for optimal immune defense, and due to the fact that pathogens contain multiple TLR agonists and other danger signaling components, it is proposed that for optimal anti-infective, including Antiviral therapy requires a therapeutic approach using multiple TLR agonists. Gram-negative bacteria are known to contain several TLR agonists and induce significant TLR agonist-associated immune responses, including cytokine secretion. However, wild-type Gram-negative bacteria that contain high levels of the TLR-4 agonist lipopolysaccharide (LPS) or endotoxin are highly toxic when administered intravenously, mainly due to the induction of excessive cytokine secretion by immune cells. Gram-negative bacteria also contain TLR 1/2, 5, and 9 agonists, which may contribute to both immune system stimulation and systemic toxicity.
В основе настоящего изобретения лежит удивительное и неожиданное обнаружение того, что обработка грамотрицательных бактерий для снижения их активности ЛПС-ассоциированного эндотоксина, например, полимиксином и глутаральдегидом, которая может убить бактерии, сохранять бактерии интактными и значительно снижать уровни ЛПС, может в то же время увеличивать способность бактерий индуцировать секрецию цитокинов иммунными клетками человека. Это неожиданно по меньшей мере потому, что предполагалось, что значительное снижение ЛПС должно также привести к значительному снижению количества каждого из нескольких цитокинов, высвобождаемых иммунными клетками, подвергнутыми воз- 1 044566 действию обработанных бактерий, по сравнению с необработанными бактериями дикого типа.The present invention is based on the surprising and unexpected discovery that treating Gram-negative bacteria to reduce their LPS-associated endotoxin activity, for example with polymyxin and glutaraldehyde, which can kill the bacteria, keep the bacteria intact and significantly reduce LPS levels, can at the same time increase the ability of bacteria to induce the secretion of cytokines by human immune cells. This is surprising, at least because it was expected that a significant reduction in LPS should also lead to a significant reduction in the amount of each of several cytokines released by immune cells exposed to treated bacteria compared with untreated wild-type bacteria.
Неожиданно, как показано в табл. 1, обработанные бактерии индуцировали более высокие уровни 8 из 9 цитокинов, секретируемых иммунными клетками человека, по сравнению с необработанными бактериями дикого типа, при тестировании при тех же концентрациях (необработанных и обработанных) бактерий, несмотря на тот факт, что обработанные бактерии имели только 4,94% от уровня ЛПС, присутствующего в необработанных бактериях. Кроме того, несмотря на значительное снижение ЛПС, обработанные бактерии индуцировали более высокие уровни цитокинов, чем моноспецифичные агонисты TLR (Табл. 2). Снижение активности ЛПС-ассоциированного эндотоксина в результате обработки, которое может составлять приблизительно 75-99% при измерении с помощью анализа с лизатом амебоцитов Limulus (ЛАЛ) in vitro по сравнению с необработанными бактериями дикого типа, может привести к снижению токсичности. Не ограничиваясь какой-либо конкретной теорией, полагают, что интактная структура обработанных бактериальных клеток может помочь предотвратить или минимизировать высвобождение свободного ЛПС в некоторые компартменты субъекта-хозяина. Результаты дают основания полагать, что обработанные бактерии могут вызывать лучший иммунный ответ, чем необработанные бактерии или моноспецифичные агонисты, со сниженной системной токсичностью по сравнению с необработанными бактериями.Unexpectedly, as shown in table. 1, treated bacteria induced higher levels of 8 of 9 cytokines secreted by human immune cells compared to untreated wild-type bacteria when tested at the same concentrations of (untreated and treated) bacteria, despite the fact that treated bacteria only had 4 .94% of the LPS level present in untreated bacteria. Moreover, despite the significant reduction in LPS, treated bacteria induced higher levels of cytokines than monospecific TLR agonists (Table 2). The reduction in LPS-associated endotoxin activity resulting from treatment, which can be approximately 75-99% when measured using the Limulus amebocyte lysate (LAL) assay in vitro compared to untreated wild-type bacteria, may result in reduced toxicity. Without being limited to any particular theory, it is believed that the intact structure of the treated bacterial cells may help prevent or minimize the release of free LPS into certain compartments of the host subject. The results suggest that treated bacteria may elicit a better immune response than untreated bacteria or monospecific agonists, with reduced systemic toxicity compared to untreated bacteria.
Исследования на животных также подтвердили, что такие обработанные бактерии могут ингибировать существующие вирусные инфекции как HBV, так и ВИЧ. Кроме того, по сравнению со стандартом оказания медицинской помощи (например, энтекавиром для HBV) обработанные бактерии проявляли устойчивый и значительный ингибирующий эффект спустя долгое время после прекращения лечения, даже несмотря на то, что проявление первоначального ингибирующего эффекта может занять больше времени. Также интересно, что даже несмотря на то, что лечение НПВП (например, индометацином) по отдельности не показало наблюдаемых противовирусных эффектов, комбинация с НПВП может синергически повысить эффективность обработанных бактерий.Animal studies have also confirmed that such treated bacteria can inhibit existing viral infections of both HBV and HIV. In addition, compared with the standard of care (eg, entecavir for HBV), the treated bacteria exhibited a sustained and significant inhibitory effect long after treatment stopped, even though the initial inhibitory effect may take longer to manifest. It is also interesting that even though treatment with NSAIDs (eg, indomethacin) alone did not show observable antiviral effects, combination with NSAIDs may synergistically increase the effectiveness of the treated bacteria.
Соответственно, в одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ лечения инфекции у нуждающегося в этом пациента, включающий введение указанному пациенту эффективного количества композиции, содержащей множество интактных и по существу нежизнеспособных грамотрицательных бактериальных клеток, которые были обработаны таким образом, чтобы это привело к снижению активности липополисахарид (ЛПС)-ассоциированного эндотоксина по меньшей мере на 75%.Accordingly, in one embodiment of the present invention, there is provided a method of treating an infection in a patient in need thereof, comprising administering to said patient an effective amount of a composition comprising a plurality of intact and substantially nonviable gram-negative bacterial cells that have been treated in a manner that results in decreased activity lipopolysaccharide (LPS)-associated endotoxin by at least 75%.
В еще одном варианте реализации настоящего изобретения предложен способ профилактики инфекции у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение указанному субъекту эффективного количества композиции, содержащей множество интактных и по существу нежизнеспособных грамотрицательных бактериальных клеток, которые были обработаны таким образом, чтобы это привело к снижению активности липополисахарид (ЛПС)-ассоциированного эндотоксина по меньшей мере на 90%, и полученный из патогена или патоген-ассоциированный антиген.In yet another embodiment, the present invention provides a method of preventing infection in a subject in need thereof, comprising administering to said subject an effective amount of a composition comprising a plurality of intact and substantially non-viable gram-negative bacterial cells that have been treated in a manner that results in decreased activity of lipopolysaccharide (LPS). LPS)-associated endotoxin at least 90%, and pathogen-derived or pathogen-associated antigen.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ профилактики или лечения инфекции у нуждающегося в этом пациента. Указанный способ предусматривает введение указанному пациенту эффективного количества композиции, содержащей множество интактных и по существу нежизнеспособных грамотрицательных бактериальных клеток, которые были обработаны таким образом, чтобы это привело к снижению активности липополисахарид (ЛПС)-ассоциированного эндотоксина (активного ЛПС) на приблизительно 75-99% при измерении с помощью анализа с лизатом амебоцитов Limulus (ЛАЛ) по сравнению с необработанными грамотрицательными бактериальными клетками дикого типа.In one embodiment, the present invention provides a method for preventing or treating an infection in a patient in need thereof. The method involves administering to said patient an effective amount of a composition comprising a plurality of intact and substantially non-viable gram-negative bacterial cells that have been treated in such a manner as to result in a reduction in lipopolysaccharide (LPS)-associated endotoxin (active LPS) activity by approximately 75-99% when measured by the Limulus amebocyte lysate (LAL) assay compared with untreated wild-type Gram-negative bacterial cells.
В некоторых вариантах реализации композиция содержит приблизительно от 0,01 до 100 нг активного ЛПС на кг массы тела пациента. В некоторых вариантах реализации композиция содержит приблизительно от 0,02 до 20 нг активного ЛПС на кг массы тела пациента. В некоторых вариантах реализации композиция содержит приблизительно от 0,1 до 10 нг активного ЛПС на кг массы тела пациента.In some embodiments, the composition contains from about 0.01 to 100 ng of active LPS per kg of patient body weight. In some embodiments, the composition contains from about 0.02 to 20 ng of active LPS per kg of patient body weight. In some embodiments, the composition contains from about 0.1 to 10 ng of active LPS per kg of patient body weight.
В некоторых вариантах реализации композиция содержит приблизительно от 2 до 200 нг активного ЛПС на 1х108 клеток. В некоторых вариантах реализации композиция содержит приблизительно от 10 до 120 нг активного ЛПС на 1х108 клеток. В некоторых вариантах реализации композиция содержит приблизительно от 20 до 100 нг активного ЛПС на 1х108 клеток.In some embodiments, the composition contains from about 2 to 200 ng of active LPS per 1x10 8 cells. In some embodiments, the composition contains from about 10 to 120 ng of active LPS per 1x10 8 cells. In some embodiments, the composition contains from about 20 to 100 ng of active LPS per 1x10 8 cells.
В некоторых вариантах реализации интактные и по существу нежизнеспособные грамотрицательные бактериальные клетки были обработаны таким образом, чтобы это привело к снижению уровня ЛПС-ассоциированного эндотоксина на приблизительно 85-98%. В некоторых вариантах реализации интактные и по существу нежизнеспособные грамотрицательные бактериальные клетки были обработаны таким образом, чтобы это привело к снижению уровня ЛПС-ассоциированного эндотоксина на приблизительно 90-98%.In some embodiments, intact and substantially nonviable gram-negative bacterial cells have been treated in a manner that results in a reduction in the level of LPS-associated endotoxin by approximately 85-98%. In some embodiments, intact and substantially nonviable gram-negative bacterial cells have been treated in a manner that results in a reduction in the level of LPS-associated endotoxin by approximately 90-98%.
В некоторых вариантах реализации инфекция представляет собой вирусную инфекцию, например, вызванную вирусом, выбранным из табл. А. В некоторых вариантах реализации вирусная инфекция вызвана вирусом гепатита В (HBV) или вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ).In some embodiments, the infection is a viral infection, for example, caused by a virus selected from table. A. In some embodiments, the viral infection is caused by hepatitis B virus (HBV) or human immunodeficiency virus (HIV).
В одном из вариантов реализации также предложена фармацевтическая дозированная форма, соIn one embodiment, a pharmaceutical dosage form is also provided, with
- 2 044566 держащая множество интактных и по существу нежизнеспособных грамотрицательных бактериальных клеток, которые были обработаны таким образом, чтобы это привело к снижению активности липополисахарид (ЛПС)-ассоциированного эндотоксина на приблизительно 75-99% при измерении с помощью анализа с лизатом амебоцитов Limulus (ЛАЛ) по сравнению с необработанными грамотрицательными бактериальными клетками дикого типа, где общая активность ЛПС-ассоциированного эндотоксина эквивалентна приблизительно от 0,7 нг до 7000 нг активного ЛПС, предпочтительно эквивалентна приблизительно от 7 нг до 1400 нг активного ЛПС.- 2 044566 containing a plurality of intact and substantially non-viable gram-negative bacterial cells that have been treated in a manner that results in a reduction in lipopolysaccharide (LPS)-associated endotoxin activity by approximately 75-99% as measured by the Limulus amebocyte lysate (LAL) assay ) compared to untreated wild-type Gram-negative bacterial cells, where the total LPS-associated endotoxin activity is equivalent to about 0.7 ng to 7000 ng active LPS, preferably equivalent to about 7 ng to 1400 ng active LPS.
В других вариантах реализации также описаны терапевтические композиции, вакцины и содержащие их дозированные формы.Other embodiments also describe therapeutic compositions, vaccines, and dosage forms containing them.
Краткое описание графических материаловBrief description of graphic materials
На фиг. 1A-1D показаны эффекты лечения энтекавиром, обработанными бактериями (бактериямиимитацией) или их комбинацией в отношении ингибирования продукции ДНК HBV in vivo.In fig. 1A-1D show the effects of treatment with entecavir, treated bacteria (mock bacteria), or a combination thereof in inhibiting HBV DNA production in vivo.
На фиг. 2 показано, что бактерии-имитация, но не энтекавир, снижали уровни HBeAg in vivo.In fig. Figure 2 shows that mock bacteria, but not entecavir, reduced HBeAg levels in vivo.
На фиг. 3A-D показаны результаты более длительного исследования ингибирования продукции ДНК HBV in vivo.In fig. 3A-D show the results of a longer-term in vivo HBV DNA production inhibition study.
На фиг. 4A-D представлены результаты ингибирования экспрессии HBsAg in vivo.In fig. 4A-D show the results of inhibition of HBsAg expression in vivo.
На фиг. 5A-D представлены результаты ингибирования экспрессии HBeAg in vivo.In fig. 5A-D show the results of inhibition of HBeAg expression in vivo.
На фиг. 6 показано, что комбинация индометацина и бактерий-имитации (с энтекавиром или без него) ингибировала экспрессию HBeAg в печени мышей через 27 недель после прекращения лечения.In fig. Figure 6 shows that the combination of indomethacin and mock bacteria (with or without entecavir) inhibited HBeAg expression in the liver of mice 27 weeks after cessation of treatment.
На фиг. 7A-F представлен иммуногистохимический анализ экспрессии HBcAg в печени мышей через 27 недель после прекращения лечения.In fig. 7A-F show immunohistochemical analysis of HBcAg expression in the liver of mice 27 weeks after cessation of treatment.
На фиг. 8А-С показано ингибирование уровней ВИЧ в крови с помощью лечения по стандарту оказания медицинской помощи или лечения обработанными бактериями у гуманизированных мышей, инфицированных ВИЧ.In fig. 8A-C show inhibition of HIV blood levels by standard of care treatment or treated bacteria in humanized mice infected with HIV.
Подробное описание изобретенияDetailed Description of the Invention
В нижеследующем описании представлены иллюстративные варианты реализации настоящей технологии. Однако следует понимать, что такое описание не подразумевает ограничительного характера в отношении объема настоящего изобретения, а вместо этого предоставлено в качестве описания иллюстративных вариантов реализации.The following description presents illustrative embodiments of the present technology. However, it should be understood that such description is not intended to be limiting as to the scope of the present invention, but is instead provided as a description of illustrative embodiments.
В контексте настоящей заявки следующие слова, фразы и символы обычно имеют значения, указанные ниже, за исключением случаев, когда из контекста, в котором они используются, следует иное.As used herein, the following words, phrases and symbols generally have the meanings set forth below unless the context in which they are used indicates otherwise.
Композиции и способы стимуляции иммунного ответаCompositions and methods for stimulating an immune response
Экспериментальные примеры настоящего изобретения демонстрируют, что интактные и нежизнеспособные грамотрицательные бактериальные клетки, обработанные для значительного снижения активности ЛПС-ассоциированного эндотоксина, неожиданно обладали повышенной способностью индуцировать секрецию цитокинов иммунными клетками. Таким образом, такие обработанные бактериальные клетки подходят для обеспечения безопасных и эффективных средств для стимуляции иммунного ответа субъекта. Иммунный ответ может быть направлен против бактериальных, грибковых, паразитарных или вирусных инфекций.Experimental examples of the present invention demonstrate that intact and nonviable gram-negative bacterial cells treated to significantly reduce LPS-associated endotoxin activity unexpectedly had an increased ability to induce cytokine secretion by immune cells. Thus, such treated bacterial cells are suitable for providing a safe and effective means for stimulating the immune response of a subject. The immune response may be directed against bacterial, fungal, parasitic or viral infections.
Таким образом, в соответствии с одним из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ стимуляции иммунного ответа у нуждающегося в этом субъекта. В еще одном варианте реализации предложен способ профилактики или лечения инфекции у нуждающегося в этом пациента. В еще одном варианте реализации предложен способ лечения иммунодефицита у нуждающегося в этом пациента. В еще одном варианте реализации предложен способ вакцинации субъекта, подверженного риску инфицирования.Thus, in accordance with one embodiment of the present invention, there is provided a method of stimulating an immune response in a subject in need thereof. In yet another embodiment, a method is provided for preventing or treating an infection in a patient in need thereof. In yet another embodiment, a method is provided for treating immunodeficiency in a patient in need thereof. In yet another embodiment, a method is provided for vaccinating a subject at risk of infection.
В некоторых вариантах реализации указанный способ предусматривает введение указанному субъекту/пациенту эффективного количества композиции, содержащей множество обработанных бактериальных клеток, как раскрыто в настоящей заявке. В некоторых вариантах реализации обработанные бактериальные клетки представляют собой интактные и по существу нежизнеспособные грамотрицательные бактериальные клетки, которые были обработаны для снижения активности липополисахарид (ЛПС)ассоциированного эндотоксина и/или пирогенности.In some embodiments, the method comprises administering to the subject/patient an effective amount of a composition comprising a plurality of treated bacterial cells as disclosed herein. In some embodiments, the treated bacterial cells are intact and substantially nonviable gram-negative bacterial cells that have been treated to reduce lipopolysaccharide (LPS)-associated endotoxin activity and/or pyrogenicity.
Подходящие бактериальные организмы, которые можно применять в способах согласно настоящему изобретению, являются грамотрицательными и получены из организмов, которые обладают активностью ЛПС-ассоциированного эндотоксина, таких как организмы дикого типа. Термин грамотрицательные бактерии относится к бактериям, которые не сохраняют исходное окрашивание основным красителем (например, кристаллическим фиолетовым), которое является частью процедуры, известной как окрашивание по Граму. При типичном окрашивании по Граму клетки сначала фиксируют на предметном стекле под воздействием тепла и окрашивают основным красителем (например, кристаллическим фиолетовым), который поглощается как грамотрицательными, так и грамположительными бактериями. Затем предметные стекла обрабатывают протравой (например, йодом для окрашивания по Граму), которая связывается с основным красителем (например, кристаллическим фиолетовым) и задерживает его в клетке. Затем клетки промывают ацетоном или спиртом, а затем дополнительно окрашивают вторым красителемSuitable bacterial organisms that can be used in the methods of the present invention are gram-negative and are derived from organisms that have LPS-associated endotoxin activity, such as wild-type organisms. The term gram-negative bacteria refers to bacteria that do not retain the original staining with a basic dye (such as crystal violet), which is part of the procedure known as Gram staining. In a typical Gram stain, cells are first fixed on a glass slide under heat and stained with a basic dye (such as crystal violet) that is absorbed by both Gram-negative and Gram-positive bacteria. The slides are then treated with a mordant (such as iodine for Gram stains) that binds to the base dye (such as crystal violet) and traps it in the cell. The cells are then washed with acetone or alcohol and then additionally stained with a second dye.
- 3 044566 другого цвета (например, сафранином). Грамположительные организмы сохраняют исходное фиолетовое окрашивание, в то время как грамотрицательные организмы обесцвечиваются при промывке органическим растворителем и, следовательно, демонстрируют дополнительное окрашивание. Примеры грамотрицательных бактерий включают, не ограничиваются перечисленным, Escherichia spp., Shigella spp., Salmonella spp., Campylobacter spp., Neisseria spp., Haemophilus spp., Aeromonas spp., Francisella spp., Yersinia spp., Klebsiella spp., Bordetella spp., Legionella spp., Corynebacteria spp., dtrobacter spp., Chlamydia spp., Brucella spp., Pseudomonas spp., Helicobacter spp. и Vibrio spp.- 3 044566 of a different color (for example, safranin). Gram-positive organisms retain the original purple coloration, while Gram-negative organisms become discolored when washed with an organic solvent and therefore show additional coloration. Examples of Gram-negative bacteria include, but are not limited to, Escherichia spp., Shigella spp., Salmonella spp., Campylobacter spp., Neisseria spp., Haemophilus spp., Aeromonas spp., Francisella spp., Yersinia spp., Klebsiella spp., Bordetella spp., Legionella spp., Corynebacteria spp., dtrobacter spp., Chlamydia spp., Brucella spp., Pseudomonas spp., Helicobacter spp. and Vibrio spp.
К числу грамотрицательных организмов относятся Enterobacteriaceae -большое семейство, которое наряду со многими безвредными симбионтами включает многие хорошо известные патогены, такие как Salmonella, E. coli, Yersinia pestis, Klebsiella и Shigella, Proteus, Enterobacter, Serratia и Citrobacter. Члены семейства Enterobacteriaceae были названы энтеробактериями, поскольку некоторые его члены живут в кишечнике животных.Gram-negative organisms include Enterobacteriaceae, a large family that, along with many harmless symbionts, includes many well-known pathogens such as Salmonella, E. coli, Yersinia pestis, Klebsiella and Shigella, Proteus, Enterobacter, Serratia and Citrobacter. Members of the family Enterobacteriaceae were named enterobacteriaceae because some of its members live in the intestines of animals.
В одном из вариантов реализации в качестве организма выбрана Е. coli. Одним отдельно взятым рассматриваемым штаммом является штамм Е. coli 2617-143-312, (Migula) Кастеллани (Castellani) и Чалмерс (Chalmers) ((ATCC® 13070™). Дополнительные штаммы is. coli, которые можно применять, включают MG1655 (АТСС® 47076) и KY8284 (АТСС® 21272).In one embodiment, E. coli is selected as the organism. One particular strain under consideration is E. coli strain 2617-143-312, (Migula) Castellani and Chalmers (ATCC® 13070™). Additional is. coli strains that may be used include MG1655 (ATCC ® 47076) and KY8284 (ATCC® 21272).
Грамотрицательные организмы, применяемые в способах согласно настоящему изобретению, не обязательно должны представлять собой рекомбинантные организмы, которые содержат или экспрессируют ДНК, чужеродную для формы организма дикого типа. Однако в некоторых вариантах реализации организмы могут быть модифицированы для экспрессии некоторых ненативных молекул, включая, например, антигены патогенов или иммуностимулирующие белки.The gram-negative organisms used in the methods of the present invention need not be recombinant organisms that contain or express DNA foreign to the wild-type form of the organism. However, in some embodiments, organisms may be modified to express certain non-native molecules, including, for example, pathogen antigens or immunostimulatory proteins.
Термин липополисахарид (ЛПС) относится к крупным молекулам, состоящим из липида и полисахарида (гликофосфолипид), соединенных ковалентной связью. ЛПС содержит три части: 1) О-антиген; 2) центральный олигосахарид и 3) липид А. О-антиген представляет собой повторяющийся гликановый полимер, присоединенный к центральному олигосахариду, и содержит самый дальний домен молекулы ЛПС. Центральный олигосахарид присоединяется непосредственно к липиду А и обычно содержит сахара, такие как гептоза и 3-дезокси-О-маннооктулозоновая кислота (также известная как KDO, кетодезоксиоктулозонат). Липид А представляет собой фосфорилированный глюкозаминовый дисахарид, связанный с несколькими жирными кислотами. Указанные жирные кислоты заякоривают ЛПС в наружной бактериальной мембране, а оставшаяся часть ЛПС выступает из клеточной поверхности.The term lipopolysaccharide (LPS) refers to large molecules consisting of a lipid and a polysaccharide (glycophospholipid) joined by a covalent bond. LPS contains three parts: 1) O-antigen; 2) a central oligosaccharide and 3) lipid A. O-antigen is a repeating glycan polymer attached to a central oligosaccharide and contains the outermost domain of the LPS molecule. The central oligosaccharide attaches directly to lipid A and typically contains sugars such as heptose and 3-deoxy-O-mannooctulosonic acid (also known as KDO, ketodeoxyoctulosonate). Lipid A is a phosphorylated glucosamine disaccharide bound to several fatty acids. These fatty acids anchor LPS in the outer bacterial membrane, and the remaining LPS protrudes from the cell surface.
Активность эндотоксина присуща области домена липида А ЛПС и, таким образом, также называется активностью ЛПС-ассоциированного эндотоксина. Когда бактериальные клетки подвергаются лизису иммунной системой, фрагменты мембраны, содержащие ЛПС и липид А, высвобождаются в кровообращение, вызывая лихорадку (пирогенность) и потенциально смертельный шок (называемый эндотоксическим или септическим шоком). Токсичность ЛПС опосредуется липидом А через взаимодействие с клетками иммунной системы млекопитающего - процесс, приводящий к секреции провоспалительных цитокинов, включая фактор некроза опухоли-альфа (TNFa) и интерлейкин-1-бета (IL-1e), которые могут иметь смертельные последствия для хозяина.Endotoxin activity is inherent to the lipid A domain region of LPS and is thus also referred to as LPS-associated endotoxin activity. When bacterial cells are lysed by the immune system, membrane fragments containing LPS and lipid A are released into the circulation, causing fever (pyrogenicity) and potentially fatal shock (called endotoxic or septic shock). LPS toxicity is mediated by lipid A through interaction with cells of the mammalian immune system, a process leading to the secretion of pro-inflammatory cytokines, including tumor necrosis factor-alpha (TNFa) and interleukin-1-beta (IL-1e), which can have lethal consequences for the host.
Активность ЛПС-ассоциированного эндотоксина может быть измерена способами, хорошо известными в данной области техники, включая, например, анализ с применением лизата амебоцитов Limulus (ЛАЛ), в котором используют кровь мечехвоста и который позволяет детектировать очень низкие уровни ЛПС. Наличие активности эндотоксина будет приводить к свертыванию лизата крови Limulus вследствие амплификации через ферментативный каскад. Коммерчески доступны гель-тромб, турбидиметрические и хромогенные формы анализа ЛАЛ.LPS-associated endotoxin activity can be measured by methods well known in the art, including, for example, the Limulus amebocyte lysate (LAL) assay, which uses horseshoe crab blood and can detect very low levels of LPS. The presence of endotoxin activity will cause Limulus blood lysate to clot due to amplification through an enzymatic cascade. Gel clot, turbidimetric, and chromogenic forms of the LAL assay are commercially available.
Также известны анализы активности эндотоксина на основе твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), такие как EndoLISA® от Hyglos, Мюнхен, Германия. В этом анализе используют ЛПСспецифичный фаговый белок, присоединенный к твердой фазе для захвата ЛПС, и после этапа промывки определяют присутствие ЛПС путем добавления рекомбинантного фактора С, который при активации посредством ЛПС расщепляет соединение, которое затем испускает флуоресценцию. Фактор С, присутствующий в лизате амебоцитов Limulus, обычно существует в виде зимогена и представляет собой праймер каскада свертывания, происходящего в тесте ЛАЛ.Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)-based endotoxin activity assays are also known, such as EndoLISA® from Hyglos, Munich, Germany. This assay uses an LPS-specific phage protein attached to a solid phase to capture LPS and, after a washing step, detects the presence of LPS by adding recombinant factor C which, when activated by LPS, cleaves the compound which then emits fluorescence. Factor C, present in Limulus amebocyte lysate, usually exists as a zymogen and is a primer for the coagulation cascade that occurs in the LAL test.
Пирогенность относится к способности агента вызывать лихорадку у субъекта. Пирогенность может быть измерена по повышению ректальной температуры у кроликов в ответ на внутривенное введение агонистов TLR, организмов или их производных.Pyrogenicity refers to the ability of an agent to cause fever in a subject. Pyrogenicity can be measured by the increase in rectal temperature in rabbits in response to intravenous administration of TLR agonists, organisms, or derivatives thereof.
Доступны различные способы снижения активности эндотоксина и/или пирогенности грамотрицательных организмов. Указанные способы включают обработку организмов агентом, который связывается с ЛПС или нарушает его образование.Various methods are available to reduce endotoxin activity and/or pyrogenicity of gram-negative organisms. These methods involve treating the organisms with an agent that binds to LPS or disrupts its formation.
В одном из вариантов реализации снижение активности эндотоксина или пирогенности достигается путем обработки бактериальных организмов антибиотиком, инактивирующим эндотоксин. Подходящим подобным антибиотиком является полимиксин, включая полимиксин В или полимиксин Е. Специалист в данной области техники способен определить количество антибиотика и условия обработки. В одном изIn one embodiment, reduction of endotoxin activity or pyrogenicity is achieved by treating the bacterial organisms with an endotoxin-inactivating antibiotic. A suitable such antibiotic is a polymyxin, including polymyxin B or polymyxin E. One skilled in the art will be able to determine the amount of antibiotic and the processing conditions. In one of
- 4 044566 вариантов реализации полимиксин, представляющий собой полимиксин В или полимиксин Е, можно применять в концентрации, составляющей приблизительно от 3 микрограмм до 5000 микрограмм на миллилитр. В еще одном варианте реализации концентрация полимиксина может составлять от приблизительно 200 микрограмм до 5000 микрограмм на миллилитр. В одном из вариантов реализации антибиотик применяют к бактериям на протяжении от 10 минут до 4 часов или от приблизительно 30 минут до приблизительно 3 часов.- 4 044566 embodiments The polymyxin, which is polymyxin B or polymyxin E, can be used at a concentration ranging from about 3 micrograms to 5000 micrograms per milliliter. In yet another embodiment, the concentration of polymyxin may be from about 200 micrograms to 5000 micrograms per milliliter. In one embodiment, the antibiotic is applied to the bacteria for 10 minutes to 4 hours, or about 30 minutes to about 3 hours.
В одном из вариантов реализации бактерии выращивают в присутствии магния (Mg) в форме MgCl2. В одном из вариантов реализации бактерии обрабатывают полимиксином в присутствии MgCl2, а также при температуре, подходящей для сохранения целостности бактерий. В одном из вариантов реализации концентрация MgCl2 в питательной среде составляет от приблизительно 0,5 мМ до приблизительно 5,0 мМ или приблизительно 2 мМ, и концентрация MgCl2 в среде для обработки составляет от приблизительно 5,0 мМ до приблизительно 30 мМ или приблизительно 20 мМ. В одном из вариантов реализации температура среды для обработки составляет от приблизительно 2°С до приблизительно 10°С или приблизительно 4°С. Целостность бактерий определяют по эффективности извлечения в хорошо выраженном осадке после центрифугирования при 3000xg в течение 10 минут и путем электронной или оптической микроскопии с окрашиванием по Граму. В предпочтительном варианте реализации извлечение бактерий после обработки и промывки составляет более приблизительно 80%, и бактерии выглядят интактными по данным оптической или электронной микроскопии.In one embodiment, bacteria are grown in the presence of magnesium (Mg) in the form of MgCl 2 . In one embodiment, the bacteria are treated with polymyxin in the presence of MgCl 2 and at a temperature suitable to maintain the integrity of the bacteria. In one embodiment, the MgCl 2 concentration in the growth medium is from about 0.5 mM to about 5.0 mM, or about 2 mM, and the MgCl 2 concentration in the treatment medium is from about 5.0 mM to about 30 mM, or about 20 mM. In one embodiment, the temperature of the treatment environment is from about 2°C to about 10°C or about 4°C. Bacterial integrity is determined by recovery efficiency in a well-defined pellet after centrifugation at 3000xg for 10 minutes and by electron or optical microscopy with Gram staining. In a preferred embodiment, the recovery of bacteria after processing and washing is greater than about 80%, and the bacteria appear intact by optical or electron microscopy.
В еще одном варианте реализации снижение активности эндотоксина достигается путем обработки бактериальных организмов антибиотиком, который, как известно, нарушает биосинтез комплекса KDO2липид IVA. Например, Goldman et al., JIn yet another embodiment, reduction of endotoxin activity is achieved by treating the bacterial organisms with an antibiotic known to interfere with the biosynthesis of the KDO2lipid IVA complex. For example, Goldman et al., J
Bacteriol. 170(5):2185-91, 1988 описывают антибактериальные агенты, включая антибактериальный агент III, которые специфично ингибируют активность СТР:СМР-3-дезокси-О-маннооктулозонатцитидилилтрансферазы и которые подходят для блокирования включения 3-дезокси-Dманнооктулозоната (KDO) в ЛПС грамотрицательных организмов. С прекращением синтеза ЛПС прекращался рост бактерий. Присоединение KDO к предшественникам ЛПС, липидам IVA, представляет собой основной путь образования комплекса липид A-KDO как в S. typhimurium, так и в Е. coli. В одном из вариантов реализации антибиотик представляет собой антибактериальный агент III, и грамотрицательные бактерии обрабатывают подходящим количеством, таким как, например, от 5 микрограмм на миллилитр до 500 микрограмм на миллилитр, в течение подходящего времени, например, от 2 до 8 часов.Bacteriol. 170(5):2185-91, 1988 describe antibacterial agents, including antibacterial agent III, which specifically inhibit the activity of CTP:CMP-3-deoxy-O-mannooctulosonate cytidylyltransferase and which are useful for blocking the incorporation of 3-deoxy-Dmannooctulosonate (KDO) into LPS gram-negative organisms. With the cessation of LPS synthesis, bacterial growth ceased. Attachment of KDO to LPS precursors, lipid IVA, is the main pathway for the formation of the lipid A-KDO complex in both S. typhimurium and E. coli. In one embodiment, the antibiotic is an antibacterial agent III and the gram-negative bacteria are treated with a suitable amount, such as, for example, 5 micrograms per milliliter to 500 micrograms per milliliter, for a suitable time, for example, 2 to 8 hours.
Аналогичным образом известно, что соединение альфа-С-(1,5-ангидро-7-амино-2,7-дидезокси-Оманногептопиранозил)карбоксилат ингибирует 3-дезокси-D-манно-октулозонатцитидилтрансферазу (CMP-KDO синтетаза), цитоплазматический фермент, который активирует 3-дезокси-Оманнооктулозонат (KDO) для включения в ЛПС (Nature. 1987 10-16;329(6135):162-4). Следовательно, обработка организмов этим соединением может также снизить активность ЛПС-ассоциированного эндотоксина.Likewise, the compound alpha-C-(1,5-anhydro-7-amino-2,7-dideoxy-Omannoheptopyranosyl)carboxylate is known to inhibit 3-deoxy-D-manno-octulosonate cytidyltransferase (CMP-KDO synthetase), a cytoplasmic enzyme which activates 3-deoxy-Omannooctulosonate (KDO) for incorporation into LPS (Nature. 1987 10-16;329(6135):162-4). Therefore, treating organisms with this compound may also reduce LPS-associated endotoxin activity.
В еще одном варианте реализации снижение активности эндотоксина достигается путем обработки организмов ингибитором ЛПС. Например, было показано, что бактериальный циклический липопептид сурфактин связывается с липидом А, подавляя его активность (J Antibiot 2006 59(1):35-43).In yet another embodiment, reduction of endotoxin activity is achieved by treating the organisms with an LPS inhibitor. For example, the bacterial cyclic lipopeptide surfactin has been shown to bind to lipid A, inhibiting its activity (J Antibiot 2006 59(1):35-43).
В дополнение к ЛПС-ассоциированному эндотоксину различные другие компоненты грамотрицательных организмов могут индуцировать или вносить вклад в пирогенность и септический шок, в том числе белки наружной мембраны, фимбрии, пили, липопептиды и липопротеины (рассмотрены Jones, M., Int. J. Pharm. Compd., 5(4):259-263, 2001). Пирогенность может быть измерена способом с кроликами, хорошо известным в данной области техники, включающим оценку ректальной температуры после внутривенного введения предполагаемых пирогенов.In addition to LPS-associated endotoxin, various other components of gram-negative organisms may induce or contribute to pyrogenicity and septic shock, including outer membrane proteins, fimbriae, pili, lipopeptides, and lipoproteins (reviewed by Jones, M., Int. J. Pharm. Compd., 5(4):259-263, 2001). Pyrogenicity can be measured in rabbits by a method well known in the art, involving assessment of rectal temperature after intravenous administration of suspected pyrogens.
Было обнаружено, что обработка грамотрицательного организма комбинацией полимиксина В и глутаральдегида приводила к 30-кратному снижению пирогенности согласно измерениям у кроликов. В одном из вариантов реализации использовали 1000 микрограмм на миллилитр (мкг/мл) полимиксина В и 1% глутаральдегида для достижения 30-кратного снижения пирогенности согласно измерениям у кроликов. Пирогенность снижается под действием комбинации реакции полимиксина В с ЛПС и реактивности глутаральдегида с ЛПС и/или другими компонентами бактерий. В этих обстоятельствах глутаральдегид играет двойную роль, также нейтрализуя бактерии.It was found that treatment of a Gram-negative organism with a combination of polymyxin B and glutaraldehyde resulted in a 30-fold reduction in pyrogenicity as measured in rabbits. In one embodiment, 1000 micrograms per milliliter (μg/ml) of polymyxin B and 1% glutaraldehyde was used to achieve a 30-fold reduction in pyrogenicity as measured in rabbits. Pyrogenicity is reduced by a combination of the reaction of polymyxin B with LPS and the reactivity of glutaraldehyde with LPS and/or other bacterial components. In these circumstances, glutaraldehyde plays a dual role by also neutralizing bacteria.
Таким образом, в одном из вариантов реализации предложен способ снижения активности эндотоксина и пирогенности грамотрицательного бактериального микроорганизма, и его нейтрализации путем обработки указанных бактерий комбинацией 1000 мкг/мл полимиксина В и 1% глутаральдегида. В еще одном варианте реализации грамотрицательные бактерии обрабатывают комбинацией полимиксина В в диапазоне доз от приблизительно 3 мкг/мл до приблизительно 1000 мкг/мл и глутаральдегида в диапазоне доз от приблизительно 0,1% до приблизительно 1,0%. В дополнительном варианте реализации диапазон доз полимиксина В составляет от приблизительно 100 мкг/мл до приблизительно 1000 мкг/мл, и глутаральдегид применяют в диапазоне доз от приблизительно 0,5% до приблизительно 1,0%. Кроме того, грамотрицательные бактерии могут быть обработаны, например, диапазоном доз полимиксина В от при- 5 044566 близительно 1000 мкг/мл до приблизительно 3000 мкг/мл, и глутаральдегид применяют в диапазоне доз от приблизительно 0,5% до приблизительно 1,0%. В соответствии с еще одним аспектом грамотрицательные бактерии могут быть обработаны, например, диапазоном доз полимиксина В от приблизительноThus, in one embodiment, a method is proposed for reducing the endotoxin activity and pyrogenicity of a gram-negative bacterial microorganism, and neutralizing it by treating these bacteria with a combination of 1000 μg/ml polymyxin B and 1% glutaraldehyde. In yet another embodiment, gram-negative bacteria are treated with a combination of polymyxin B in a dose range of about 3 μg/ml to about 1000 μg/ml and glutaraldehyde in a dose range of about 0.1% to about 1.0%. In a further embodiment, the dosage range of polymyxin B is from about 100 μg/ml to about 1000 μg/ml, and glutaraldehyde is used in the dosage range from about 0.5% to about 1.0%. In addition, gram-negative bacteria can be treated, for example, with a dose range of polymyxin B from about 1000 μg/ml to about 3000 μg/ml, and glutaraldehyde is used in a dose range of about 0.5% to about 1.0% . In yet another aspect, gram-negative bacteria can be treated, for example, with a dosage range of polymyxin B from about
3000 мкг/мл до приблизительно 5000 мкг/мл, и глутаральдегид применяют в диапазоне доз от приблизительно 0,5% до приблизительно 2,0%.3000 μg/ml to about 5000 μg/ml, and glutaraldehyde is used in a dosage range of about 0.5% to about 2.0%.
В некоторых вариантах реализации интактные и по существу нежизнеспособные грамотрицательные бактериальные клетки характеризуются по меньшей мере приблизительно 70% снижением активности ЛПС-ассоциированного эндотоксина (например, при измерении с помощью анализа ЛАЛ) по сравнению с необработанными бактериями дикого типа. В некоторых вариантах реализации снижение составляет по меньшей мере приблизительно 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,9%, 99,95% или 99,98%. В некоторых вариантах реализации снижение составляет не более чем приблизительно 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,9%, 99,95%, 99,98% или 99,99%. В некоторых вариантах реализации снижение составляет от приблизительно 70% до приблизительно 99,99%, от приблизительно 80% до приблизительно 99,99%, от приблизительно 90% до приблизительно 99,5% или 99%, от приблизительно 91% до приблизительно 99%, от приблизительно 92% до приблизительно 98%, от приблизительно 93% до приблизительно 97%, от приблизительно 94% до приблизительно 96%, от приблизительно 94,5% до приблизительно 95,5%, от приблизительно 94% до приблизительно 97%, от приблизительно 95% до приблизительно 98%, от приблизительно 96% до приблизительно 99%, от приблизительно 97% до приблизительно 99,5% или от приблизительно 98% до приблизительно 99,9%, не ограничиваясь перечисленным.In some embodiments, intact and substantially nonviable gram-negative bacterial cells have at least about a 70% reduction in LPS-associated endotoxin activity (eg, as measured by a LAL assay) compared to untreated wild-type bacteria. In some embodiments, the reduction is at least about 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99 .5%, 99.9%, 99.95% or 99.98%. In some embodiments, the reduction is no more than about 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 99.95%, 99.98%, or 99.99%. In some embodiments, the reduction is from about 70% to about 99.99%, from about 80% to about 99.99%, from about 90% to about 99.5% or 99%, from about 91% to about 99% , from about 92% to about 98%, from about 93% to about 97%, from about 94% to about 96%, from about 94.5% to about 95.5%, from about 94% to about 97%, from about 95% to about 98%, from about 96% to about 99%, from about 97% to about 99.5%, or from about 98% to about 99.9%, without limitation.
В некоторых вариантах реализации предпочтительны определенные остаточные уровни активного ЛПС. Например, в некоторых вариантах реализации в композиции согласно настоящему изобретению содержится приблизительно от 1 до 200 нг активного ЛПС на 1x108 клеток. В некоторых вариантах реализации содержится приблизительно от 2 до 200 нг, приблизительно от 5 до 150 нг, приблизительно от 5 до 120 нг, приблизительно от 10 до 120 нг, приблизительно от 20 до 100 нг, приблизительно от 20 до 50 нг, приблизительно от 10 до 50 нг активного ЛПС на 1x108 клеток.In some embodiments, certain residual levels of active LPS are preferred. For example, in some embodiments, the composition of the present invention contains from about 1 to 200 ng of active LPS per 1x108 cells. In some embodiments, it contains from about 2 to 200 ng, from about 5 to 150 ng, from about 5 to 120 ng, from about 10 to 120 ng, from about 20 to 100 ng, from about 20 to 50 ng, from about 10 up to 50 ng of active LPS per 1x108 cells.
В некоторых вариантах реализации интактные и по существу нежизнеспособные грамотрицательные бактериальные клетки характеризуются по меньшей мере приблизительно 70% снижением пирогенности (например, при измерении с помощью анализа на кроликах in vivo) по сравнению с необработанными бактериями дикого типа. В некоторых вариантах реализации снижение составляет по меньшей мере приблизительно 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,9%, 99,95% или 99,98%. В некоторых вариантах реализации снижение составляет не более чем приблизительно 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,9%, 99,95%, 99,98% или 99,99%. В некоторых вариантах реализации снижение составляет от приблизительно 70% до приблизительно 99,99%, от приблизительно 80% до приблизительно 99,99%, от приблизительно 90% до приблизительно 99,5% или 99%, от приблизительно 91% до приблизительно 99%, от приблизительно 92% до приблизительно 98%, от приблизительно 93% до приблизительно 97%, от приблизительно 94% до приблизительно 96%, от приблизительно 94,5% до приблизительно 95,5%, от приблизительно 94% до приблизительно 97%, от приблизительно 95% до приблизительно 98%, от приблизительно 96% до приблизительно 99%, от приблизительно 97% до приблизительно 99,5% или от приблизительно 98% до приблизительно 99,9%, не ограничиваясь перечисленным.In some embodiments, intact and substantially nonviable gram-negative bacterial cells have at least about a 70% reduction in pyrogenicity (eg, as measured by an in vivo rabbit assay) compared to untreated wild-type bacteria. In some embodiments, the reduction is at least about 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99 .5%, 99.9%, 99.95% or 99.98%. In some embodiments, the reduction is no more than about 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 99.95%, 99.98%, or 99.99%. In some embodiments, the reduction is from about 70% to about 99.99%, from about 80% to about 99.99%, from about 90% to about 99.5% or 99%, from about 91% to about 99% , from about 92% to about 98%, from about 93% to about 97%, from about 94% to about 96%, from about 94.5% to about 95.5%, from about 94% to about 97%, from about 95% to about 98%, from about 96% to about 99%, from about 97% to about 99.5%, or from about 98% to about 99.9%, without limitation.
Как указано выше, в дополнение к ЛПС-ассоциированному эндотоксину различные другие компоненты грамотрицательных организмов также могут индуцировать или вносить вклад в пирогенность, такие как белки наружной мембраны, фимбрии, пили, липопептиды и липопротеины. В некоторых вариантах реализации интактные и по существу нежизнеспособные грамотрицательные бактериальные клетки обрабатывают таким образом, чтобы снижение пирогенности достигалось как за счет снижения активности ЛПС-ассоциированного эндотоксина, так и за счет снижения пирогенности, не связанной с ЛПС, например, путем инактивации, удаления или блокирования белков наружной мембраны, фимбрий, пилей, липопептидов или липопротеинов. В некоторых вариантах реализации снижение не связанной с ЛПС пирогенности составляет по меньшей мере приблизительно 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,9%, 99,95% или 99,98%. В некоторых вариантах реализации снижение составляет не более чем приблизительно 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,9%, 99,95%, 99,98% или 99,99%.As stated above, in addition to LPS-associated endotoxin, various other components of gram-negative organisms can also induce or contribute to pyrogenicity, such as outer membrane proteins, fimbriae, pili, lipopeptides and lipoproteins. In some embodiments, intact and substantially nonviable gram-negative bacterial cells are treated such that reduction in pyrogenicity is achieved by both reducing LPS-associated endotoxin activity and reducing non-LPS-associated pyrogenicity, such as by inactivating, removing, or blocking outer membrane proteins, fimbriae, pili, lipopeptides or lipoproteins. In some embodiments, the reduction in non-LPS pyrogenicity is at least about 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% , 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 99.95% or 99.98%. In some embodiments, the reduction is no more than about 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 %, 99%, 99.5%, 99.9%, 99.95%, 99.98% or 99.99%.
Бактерии для введения в соответствии со способами согласно настоящему изобретению приводят в нежизнеспособное или по существу нежизнеспособное состояние либо перед введением, либо они становятся таковыми после введения. Термин нежизнеспособный означает, что организмы нейтрализуют путем обработки экзогенным агентом, и/или они содержат мутацию, которая приводит к неспособности организмов выживать в организме хозяина-млекопитающего. По существу, нежизнеспособные бактерии представляют собой штаммы, жизнеспособность которых была снижена по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или более.Bacteria to be administered in accordance with the methods of the present invention are rendered nonviable or substantially nonviable either before administration or become so after administration. The term nonviable means that the organisms are neutralized by treatment with an exogenous agent and/or they contain a mutation that results in the inability of the organisms to survive in a mammalian host. Essentially, non-viable bacteria are strains whose viability has been reduced by at least 80%, 85%, 90%, 95%, 99% or more.
Бактерии могут быть приведены в нежизнеспособное состояние путем обработки таким соединени- 6 044566 ем, как полимиксин. Полимиксин связывается с ЛПС и нарушает целостность мембраны по мере деления бактерий, при этом жизнеспособность снижается в результате проницаемости клеточной оболочки. При снижении жизнеспособности с помощью этого метода необходимо предпринимать меры для предотвращения лизиса клеток и сохранения интактного состояния клеток.Bacteria can be rendered nonviable by treatment with a compound such as polymyxin. Polymyxin binds to LPS and disrupts membrane integrity as bacteria divide, with reduced viability as a result of cell membrane permeability. If viability decreases using this method, measures must be taken to prevent cell lysis and maintain the cells intact.
Еще один подход заключается в выращивании бактериальных штаммов с условными мутациями в пути биосинтеза ЛПС, которые подавляются во время роста, а затем переходят в непермиссивные условия, которые активируют мутацию и нарушают биосинтез ЛПС. В каждом случае используемая процедура представляет собой процедуру, приводящую бактерии в нежизнеспособное состояние путем определения в каждой ситуации оптимального времени обработки или дозы соединения, чтобы жизнеспособность по существу утрачивалась с сохранением значительной целостности бактериальной клетки. В случае, когда нежизнеспособность составляет менее 100%, могут быть использованы бактерии, содержащие мутацию, предотвращающую дальнейшую пролиферацию жизнеспособных бактерий у хозяинамлекопитающего (например, ауксотроф с диаминопимелиновой кислотой, описанный Bukhari and Taylor, J. Bacteriol. 105(3):844-854, 1971 и Curtiss et al., Immunol. Invest. 18(l-4):583-596, 1989).Another approach is to grow bacterial strains with conditional mutations in the LPS biosynthetic pathway that are repressed during growth and then undergo nonpermissive conditions that activate the mutation and impair LPS biosynthesis. In each case, the procedure used is one that renders the bacteria nonviable by determining in each situation the optimal treatment time or dose of compound such that viability is substantially lost while maintaining significant integrity of the bacterial cell. In cases where nonviability is less than 100%, bacteria containing a mutation that prevents further proliferation of viable bacteria in the mammalian host can be used (for example, the diaminopimelic acid auxotroph described by Bukhari and Taylor, J. Bacteriol. 105(3):844-854 , 1971 and Curtiss et al., Immunol. Invest. 18(l-4):583-596, 1989).
Заболевания и состоянияDiseases and conditions
Интактные и по существу нежизнеспособные грамотрицательные бактериальные клетки, как раскрыто в настоящей заявке, подходят для усиления иммунной системы субъекта и, таким образом, подходят для профилактики или лечения заболеваний и состояний посредством улучшенного иммунного ответа. Интактные и по существу нежизнеспособные грамотрицательные бактериальные клетки, раскрытые в настоящей заявке, также могут применяться в качестве вакцин или иммунологических адъювантов для субъектов с риском развития таких заболеваний или состояний.Intact and substantially non-viable gram-negative bacterial cells as disclosed herein are useful for enhancing the immune system of a subject and are thus useful for preventing or treating diseases and conditions through an improved immune response. The intact and essentially non-viable gram-negative bacterial cells disclosed herein may also be used as vaccines or immunological adjuvants for subjects at risk of developing such diseases or conditions.
Лечение или осуществление лечения представляет собой подход к получению благоприятных или желаемых результатов, включая клинические результаты. Благоприятные или желаемые клинические результаты могут включать одно или более из следующего: а) ингибирование заболевания или состояния (например, уменьшение одного или более симптомов, возникающих в результате заболевания или состояния, и/или уменьшение степени заболевания или состояния); b) замедление или остановка развития одного или более клинических симптомов, связанных с заболеванием или состоянием (например, стабилизация заболевания или состояния, профилактика или отсрочка ухудшения или прогрессирования заболевания или состояния, и/или профилактика или отсрочка распространения (например, метастазирования) заболевания или состояния); и/или с) облегчение заболевания, то есть регресс клинических симптомов (например, улучшение течения заболевания, обеспечение частичной или полной ремиссии заболевания или состояния, усиление эффекта другого лекарственного средства, замедление прогрессирования заболевания, повышение качества жизни и/или продление выживаемости).Treatment or implementation of treatment is an approach to obtaining favorable or desired results, including clinical results. Beneficial or desired clinical results may include one or more of the following: a) inhibiting a disease or condition (eg, reducing one or more symptoms resulting from a disease or condition and/or reducing the severity of a disease or condition); b) slowing or stopping the development of one or more clinical symptoms associated with a disease or condition (eg, stabilizing a disease or condition, preventing or delaying the worsening or progression of a disease or condition, and/or preventing or delaying the spread (eg, metastasis) of a disease or condition ); and/or c) alleviation of the disease, that is, regression of clinical symptoms (for example, improving the course of the disease, providing partial or complete remission of the disease or condition, enhancing the effect of another drug, slowing the progression of the disease, improving quality of life and/or prolonging survival).
Профилактика или осуществление профилактики означает любое лечение заболевания или состояния, при котором не развиваются клинические симптомы заболевания или состояния. В некоторых вариантах реализации бактериальные клетки могут быть введены субъекту (включая человека), который подвержен риску развития или имеет в семейном анамнезе случаи заболевания или состояния.Prophylaxis or the implementation of prophylaxis means any treatment of a disease or condition that does not produce clinical symptoms of the disease or condition. In some embodiments, the bacterial cells may be administered to a subject (including a human) who is at risk of developing or has a family history of a disease or condition.
Субъект относится к животному, такому как млекопитающее (включая человека), которое было или будет объектом лечения, наблюдения или эксперимента. Описанные в настоящей заявке способы могут быть применимы в терапии человека и/или в ветеринарии. В некоторых вариантах реализации субъект представляет собой млекопитающее, такое как человек, собака, кошка, корова, овца и т. п. В одном из вариантов реализации субъект представляет собой человека.Subject refers to an animal, such as a mammal (including a human), that has been or will be the subject of treatment, observation, or experiment. The methods described in this application may be applicable in human therapy and/or veterinary medicine. In some embodiments, the subject is a mammal, such as a human, dog, cat, cow, sheep, etc. In one embodiment, the subject is a human.
В некоторых вариантах реализации заболевания или состояния, подлежащие лечению, представляют собой инфекционные заболевания. В некоторых вариантах реализации инфекция вызвана бактериями, грибами, паразитами или вирусами. В частности, раскрытые в настоящей заявке бактериальные клетки могут быть уникально подходящими для лечения вирусных инфекций, таких как инфекции, вызванные вирусами, перечисленными в табл. А, необязательно с помощью дополнительного противоинфекционного агента.In some embodiments, the diseases or conditions being treated are infectious diseases. In some embodiments, the infection is caused by bacteria, fungi, parasites, or viruses. In particular, the bacterial cells disclosed herein may be uniquely suited for the treatment of viral infections, such as those caused by the viruses listed in Table 1. And, optionally with the help of an additional anti-infective agent.
- 7 044566- 7 044566
Таблица АTable A
Перечень вирусовList of viruses
- 8 044566- 8 044566
- 9 044566- 9 044566
- 10 044566- 10 044566
В некоторых вариантах реализации заболевание, лечение которого осуществляют, представляет собой инфекцию HBV. В некоторых вариантах реализации заболевание, лечение которого осуществляют, представляет собой инфекцию ВИЧ.In some embodiments, the disease being treated is an HBV infection. In some embodiments, the disease being treated is an HIV infection.
Введение доз и периодичностьDosing and frequency
В некоторых вариантах реализации может быть определен уровень активности ЛПСассоциированного эндотоксина интактных и по существу нежизнеспособных грамотрицательных бактериальных клеток, вводимых субъекту. В одном из вариантов реализации вводимая композиция содержитIn some embodiments, the level of LPS-associated endotoxin activity of intact and substantially nonviable gram-negative bacterial cells administered to a subject may be determined. In one embodiment, the input composition contains
- 11 044566 приблизительно от 0,01 до 200 нг активного ЛПС на кг массы тела субъекта.- 11 044566 approximately 0.01 to 200 ng of active LPS per kg of subject's body weight.
Термин активный ЛПС относится к ЛПС в композиции, которая способна проявлять активность ЛПС-ассоциированного эндотоксина, например, при измерении с помощью анализа ЛАЛ, где 5-9 единиц эндотоксина (ЕЭ) считаются эквивалентными 1 нг активного ЛПС на основе стандартного препарата ЛПС. Количество активного ЛПС в композиции может быть описано как масса неингибированного ЛПС, способная проявлять такой же уровень активности ЛПС-ассоциированного эндотоксина, что и композиция.The term active LPS refers to LPS in a composition that is capable of exhibiting LPS-associated endotoxin activity, for example, as measured by the LAL assay, where 5-9 endotoxin units (EU) are considered equivalent to 1 ng of active LPS based on a standard LPS preparation. The amount of active LPS in a composition can be described as the mass of uninhibited LPS capable of exhibiting the same level of LPS-associated endotoxin activity as the composition.
В некоторых вариантах реализации вводимая композиция (например, композиция, обладающая активностью ЛПС-ассоциированного эндотоксина интактных и по существу нежизнеспособных грамотрицательных бактериальных клеток) содержит приблизительно от 0,01 до 150 нг активного ЛПС на кг массы тела субъекта. В некоторых вариантах реализации вводимая композиция содержит приблизительно от 0,02 до 150 нг, приблизительно от 0,02 до 100 нг, приблизительно от 0,05 до 100 нг, приблизительно от 0,05 до 100 нг, приблизительно от 0,05 до 50 нг, приблизительно от 0,05 до 20 нг, приблизительно от 0,1 до 20 нг, приблизительно от 0,1 до 10 нг, приблизительно от 0,1 до 5 нг, приблизительно от 0,2 до 100 нг, приблизительно от 0,2 до 50 нг, приблизительно от 0,2 до 20 нг, приблизительно от 0,2 до 10 нг, приблизительно от 0,2 до 5 нг, приблизительно от 0,3 до 90 нг, приблизительно от 0,4 до 80 нг, приблизительно от 0,5 до 70 нг, приблизительно от 0,6 до 60 нг, приблизительно от 0,7 до 50 нг, приблизительно от 0,8 до 40 нг, приблизительно от 0,9 до 30 нг, приблизительно от 1 до 20 нг, приблизительно от 2 до 15 нг или приблизительно от 3 до 12 нг активного ЛПС на кг массы тела субъекта.In some embodiments, the administered composition (eg, a composition having LPS-associated endotoxin activity of intact and substantially nonviable gram-negative bacterial cells) contains from about 0.01 to 150 ng of active LPS per kg of subject body weight. In some embodiments, the composition administered contains from about 0.02 to 150 ng, from about 0.02 to 100 ng, from about 0.05 to 100 ng, from about 0.05 to 100 ng, from about 0.05 to 50 ng, about 0.05 to 20 ng, about 0.1 to 20 ng, about 0.1 to 10 ng, about 0.1 to 5 ng, about 0.2 to 100 ng, about 0 .2 to 50 ng, about 0.2 to 20 ng, about 0.2 to 10 ng, about 0.2 to 5 ng, about 0.3 to 90 ng, about 0.4 to 80 ng , about 0.5 to 70 ng, about 0.6 to 60 ng, about 0.7 to 50 ng, about 0.8 to 40 ng, about 0.9 to 30 ng, about 1 to 20 ng, about 2 to 15 ng, or about 3 to 12 ng of active LPS per kg body weight of the subject.
Количество активного ЛПС, вводимого субъекту, может варьироваться в зависимости от типа субъекта и заболевания. Для некоторых животных, таких как мыши, крысы и собаки, может быть эффективно использовано более высокое количество (например, в 250-500 раз более высокое по сравнению с людьми и кроликами) активного ЛПС. Соответственно, в некоторых вариантах реализации вводимая композиция содержит приблизительно от 10 до 100000 нг активного ЛПС на кг массы тела субъекта. В некоторых вариантах реализации вводимая композиция содержит приблизительно от 20 до 50000 нг, приблизительно от 30 до 40000 нг, приблизительно от 40 до 30000 нг, приблизительно от 50 до 20000 нг, приблизительно от 0,7 до 10000 нг, приблизительно от 80 до 8000 нг, приблизительно от 90 до 7000 нг, приблизительно от 100 до 6000 нг, приблизительно от 200 до 5000 нг или приблизительно от 500 до 5000 нг активного ЛПС на кг массы тела субъекта.The amount of active LPS administered to a subject may vary depending on the type of subject and disease. For some animals, such as mice, rats and dogs, higher amounts (eg, 250-500 times higher compared to humans and rabbits) of active LPS can be used effectively. Accordingly, in some embodiments, the composition administered contains from about 10 to 100,000 ng of active LPS per kg of body weight of the subject. In some embodiments, the composition administered contains about 20 to 50,000 ng, about 30 to 40,000 ng, about 40 to 30,000 ng, about 50 to 20,000 ng, about 0.7 to 10,000 ng, about 80 to 8,000 ng , about 90 to 7000 ng, about 100 to 6000 ng, about 200 to 5000 ng, or about 500 to 5000 ng of active LPS per kg body weight of the subject.
Количество бактериальных клеток, вводимое субъекту, может быть определено на основании необходимого количества активного ЛПС и уровня активности эндотоксина бактериальных клеток. Количество также может зависеть от различных факторов, включая возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, питание, время введения, способ введения и скорость выведения, комбинацию лекарственных средств и тяжесть конкретного заболевания у субъекта, проходящего терапию. Например, дозировка может быть выражена как количество бактериальных клеток, описанных в настоящей заявке, на килограмм массы тела субъекта (мг/кг). Могут быть подходящими дозировки приблизительно от 10000 до 100000000 клеток/кг. В некоторых вариантах реализации может быть подходящим приблизительно от 100000 до 10000000 клеток/кг. В других вариантах реализации может быть подходящей дозировка от 1000000 до 5000000 клеток/кг. Нормирование также может быть произведено на основе площади поверхности тела, выраженной в квадратных метрах (м2). В некоторых вариантах реализации могут быть подходящими дозировки приблизительно от 10000 до 100000000 клеток/м2. В некоторых вариантах реализации может быть подходящим приблизительно от 100000 до 10000000 клеток/м2. В других вариантах реализации может быть подходящей дозировка от 1000000 до 5000000 клеток/м2. Нормирование в соответствии с массой тела субъекта является особенно подходящим при корректировке дозировок между субъектами значительно различающегося размера, например, при применении лекарственного средства как у детей, так и у взрослых людей, или при преобразовании эффективной дозировки у субъектов, отличных от человека, таких как собака, в дозировку, подходящую для человека.The number of bacterial cells administered to a subject can be determined based on the required amount of active LPS and the level of endotoxin activity of the bacterial cells. The amount may also depend on various factors, including age, body weight, general health, sex, diet, time of administration, route of administration and rate of elimination, drug combination, and the severity of the particular disease in the subject receiving therapy. For example, the dosage may be expressed as the number of bacterial cells described herein per kilogram of subject body weight (mg/kg). Dosages of approximately 10,000 to 100,000,000 cells/kg may be suitable. In some embodiments, from about 100,000 to 10,000,000 cells/kg may be suitable. In other embodiments, a dosage of 1,000,000 to 5,000,000 cells/kg may be suitable. Standardization can also be made based on body surface area expressed in square meters ( m2 ). In some embodiments, dosages of about 10,000 to 100,000,000 cells/m 2 may be suitable. In some embodiments, from about 100,000 to 10,000,000 cells/m 2 may be suitable. In other embodiments, a dosage of 1,000,000 to 5,000,000 cells/m 2 may be suitable. Rating according to the body weight of the subject is particularly appropriate when adjusting dosages between subjects of significantly different size, for example, when using a drug in both children and adults, or when converting the effective dosage in non-human subjects, such as a dog , in a dosage suitable for humans.
Бактериальные клетки обычно вводят после диагностики заболевания или состояния. В некоторых вариантах реализации введение начинают в течение 24 часов после инфицирования или в течение 2 дней, 3 дней, 4 дней, 5 дней, 6 дней или 7 дней после инфицирования. В некоторых вариантах реализации введение начинают через по меньшей мере 24 часа после инфицирования или через по меньшей мере 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней или 7 дней после инфицирования. В некоторых вариантах реализации введение начинают в любое время до или после инфицирования, и оно может проводиться по мере необходимости.Bacterial cells are usually administered after a disease or condition has been diagnosed. In some embodiments, administration begins within 24 hours of infection, or within 2 days, 3 days, 4 days, 5 days, 6 days, or 7 days of infection. In some embodiments, administration begins at least 24 hours after infection, or at least 2 days, 3 days, 4 days, 5 days, 6 days, or 7 days after infection. In some embodiments, administration begins at any time before or after infection and may be administered as needed.
Введение также может начинаться до фактического инфицирования или до того, как инфекция будет диагностирована, в качестве профилактической вакцины или профилактики.Administration may also begin before actual infection or before infection is diagnosed, as a prophylactic vaccine or prophylaxis.
Комбинированные виды терапииCombination therapies
В одном из вариантов реализации бактериальные клетки, раскрытые в настоящей заявке, могут быть использованы в комбинации с одним или более дополнительными терапевтическими агентами, которые используются и/или разрабатываются для лечения инфекций.In one embodiment, the bacterial cells disclosed herein may be used in combination with one or more additional therapeutic agents that are used and/or developed to treat infections.
В некоторых вариантах реализации один или более дополнительных терапевтических агентов могут представлять собой ингибиторы ферментов циклооксигеназ (СОХ), такие как НПВП, включая 6MNA (6метокси-2 нафтилуксусная кислота), аспирин, карпрофен, диклофенак, фенопрофен, флуфенамат, флуIn some embodiments, one or more additional therapeutic agents may be cyclooxygenase (COX) enzyme inhibitors, such as NSAIDs, including 6MNA (6methoxy-2 naphthylacetic acid), aspirin, carprofen, diclofenac, fenoprofen, flufenamate, flu
- 12 044566 бипрофен, ибупрофен, индометацин, кетопрофен, кеторолак, меклофенамат, мефенаминовая кислота, напроксен, нифлумовая кислота, пироксикам, сульфид сулиндака, супрофен, тенидап, толметин, томоксипрол, зомепирак, целекоксиб, этодолак, мелоксикам, нимесулид, диизопропилфторфосфат, L745,337, NS398, рофекоксиб, SC58125, S-аминосалициловая кислота, ампирон, дифлунизал, набуметон, парацетамол, ресвератрол, салицин, салициловый альдегид, салицилат натрия, сульфасалазин, сулиндак, тамоксифен, тиклопидин и валерил-салицилат.- 12 044566 biprofen, ibuprofen, indomethacin, ketoprofen, ketorolac, meclofenamate, mefenamic acid, naproxen, niflumic acid, piroxicam, sulindac sulfide, suprofen, tenidap, tolmetin, tomoxiprole, zomepirac, celecoxib, etodolac, meloxicam, nimesulide, diisopropyl fluorophosphate, L745, 337, NS398, rofecoxib, SC58125, S-aminosalicylic acid, ampirone, diflunisal, nabumetone, paracetamol, resveratrol, salicin, salicylic aldehyde, sodium salicylate, sulfasalazine, sulindac, tamoxifen, ticlopidine and valeryl salicylate.
В некоторых вариантах реализации один или более дополнительных терапевтических агентов могут быть агонистами стимулирующих иммунных контрольных точек, таких как CD27, CD28, CD40, CD122, CD137, ОХ40, GITR и ICOS, или антагонистами ингибирующих иммунных контрольных точек, таких как A2AR, В7-Н3, В7-Н4, CTLA-4, IDO, KIR, LAG3, PD-1, PD-L1, TIM-3 и VISTA.In some embodiments, one or more additional therapeutic agents may be agonists of stimulatory immune checkpoints, such as CD27, CD28, CD40, CD122, CD137, OX40, GITR, and ICOS, or antagonists of inhibitory immune checkpoints, such as A2AR, B7-H3 , B7-H4, CTLA-4, IDO, KIR, LAG3, PD-1, PD-L1, TIM-3 and VISTA.
Неограничивающие примеры одного или более дополнительных терапевтических агентов также включают абакавир, ацикловир, адефовир, амантадин, ампренавир, амплиген, арбидол, атазанавир, атрипла, балавир, цидофовир, комбивир, долутегравир, дарунавир, делавирдин, диданозин, докозанол, эдоксудин, эфавиренз, эмтрицитабин, энфувиртид, энтекавир, эколивер, фамцикловир, фомивирсен, фосампренавир, фоскарнет, фосфонет, ганцикловир, ибацитабин, имуновир, идоксуридин, имиквимод, индинавир, инозин, ингибитор интегразы, интерферон III типа, интерферон II типа, интерферон I типа, интерферон, ламивудин, лопинавир, ловирид, маравирок, мороксидин, метисазон, нелфинавир, невирапин, нексавир, нитазоксанид, аналоги нуклеозидов, норвир, осельтамивир (Tamiflu®), пегинтерферон альфа-2а, пенцикловир, перамивир, плеконарил, подофиллотоксин, ингибитор протеазы, ралтегравир, рибавирин, римантадин, ритонавир, пирамидин, саквинавир, софосбувир, ставудин, телапревир, тенофовир, тенофовир дизопроксил, типранавир, трифлуридин, тризивир, тромантадин, трувада, валацикловир, валганцикловир, викривирок, видарабин, вирамидин, зальцитабин, занамивир и зидовудин.Non-limiting examples of one or more additional therapeutic agents also include abacavir, acyclovir, adefovir, amantadine, amprenavir, ampligen, arbidol, atazanavir, atripla, balavir, cidofovir, combivir, dolutegravir, darunavir, delavirdine, didanosine, docosanol, edoxudine, efavirenz, emtricitabine, enfuvirtide, entecavir, ecoliver, famciclovir, fomivirsen, fosamprenavir, foscarnet, phosphonet, ganciclovir, ibacitabine, imunovir, idoxuridine, imiquimod, indinavir, inosine, integrase inhibitor, type III interferon, type II interferon, type I interferon, interferon, lamivudine, lopinavir , loviride, maraviroc, moroxidine, metisazone, nelfinavir, nevirapine, nexavir, nitazoxanide, nucleoside analogues, norvir, oseltamivir (Tamiflu®), peginterferon alfa-2a, penciclovir, peramivir, pleconaril, podophyllotoxin, protease inhibitor, raltegravir, ribavirin, rimantadine, ritonavir, pyramidine, saquinavir, sofosbuvir, stavudine, telaprevir, tenofovir, tenofovir disoproxil, tipranavir, trifluridine, trizivir, tromantadine, Truvada, valacyclovir, valganciclovir, vicriviroc, vidarabine, viramidine, zalcitabine, zanamivir and zidovudine.
В одном из вариантов реализации дополнительный терапевтический агент представляет собой интерферон альфа.In one embodiment, the additional therapeutic agent is interferon alpha.
В некоторых вариантах реализации грамотрицательные организмы включают полинуклеотид, кодирующий небактериальный белок, такой как, например, вирусоспецифичные антигены или белки, стимулирующие иммунную систему. В некоторых вариантах реализации грамотрицательные организмы включают полинуклеотид, кодирующий бактериальный антиген, который может происходить из того же или другого бактериального организма, включая грамположительные организмы или другой патоген. В контексте настоящей заявке антиген представляет собой любую молекулу, которая может распознаваться иммунным ответом - антителом либо иммунной клеткой.In some embodiments, the gram-negative organisms include a polynucleotide encoding a nonbacterial protein, such as, for example, virus-specific antigens or immune stimulating proteins. In some embodiments, the gram-negative organisms include a polynucleotide encoding a bacterial antigen, which may be derived from the same or another bacterial organism, including a gram-positive organism or another pathogen. As used herein, an antigen is any molecule that can be recognized by an immune response - an antibody or an immune cell.
Фармацевтические композиции, дозированные формы и способы введенияPharmaceutical compositions, dosage forms and methods of administration
В настоящей заявке описаны различные композиции, подходящие для лечения заболеваний или состояний. В одном из вариантов реализации предложена композиция или дозированная форма, содержащая множество интактных и по существу нежизнеспособных грамотрицательных бактериальных клеток, которые были обработаны таким образом, чтобы это привело к снижению активности липополисахарид (ЛПС)-ассоциированного эндотоксина на приблизительно 90-99% при измерении с помощью анализа с лизатом амебоцитов Limulus (ЛАЛ) по сравнению с необработанными грамотрицательными бактериальными клетками дикого типа, где общая активность ЛПС-ассоциированного эндотоксина эквивалентна приблизительно от 0,7 нг до 7000 нг активного ЛПС, приблизительно от 7 нг до 7000 нг активного ЛПС, приблизительно от 7 нг до 1400 нг активного ЛПС или приблизительно от 70 нг до 1400 нг активного ЛПС.Disclosed herein are various compositions suitable for treating diseases or conditions. In one embodiment, a composition or dosage form is provided comprising a plurality of intact and substantially non-viable gram-negative bacterial cells that have been treated in a manner that results in a reduction in lipopolysaccharide (LPS)-associated endotoxin activity by approximately 90-99% when measured with using the Limulus amebocyte lysate (LAL) assay compared to untreated wild-type Gram-negative bacterial cells, where the total LPS-associated endotoxin activity is equivalent to approximately 0.7 ng to 7000 ng active LPS, approximately 7 ng to 7000 ng active LPS, approximately 7 ng to 1400 ng active LPS or approximately 70 ng to 1400 ng active LPS.
Композиции могут применяться в качестве адъювантов или модификаторов биологического ответа. В контексте настоящей заявки термины адъювант и модификатор биологического ответа относятся к любому веществу, которое усиливает иммунный ответ на антиген. Таким образом, адъювант или модификатор биологического ответа применяют для стимуляции более активного ответа иммунной системы на чужеродный антиген или болезнетворный или связанный с заболеванием организм. Однако в некоторых вариантах реализации для применения в раскрытых способах предусмотрены рекомбинантные формы грамотрицательных бактерий, которые экспрессируют, например, вирусные белки или белки активации иммунной системы человека, такие как цитокины или хемокины. В альтернативном варианте реализации очищенные белки активации иммунной системы, такие как цитокины или хемокины, смешивают с грамотрицательными организмами до введения или вводят до или после грамотрицательных организмов.The compositions can be used as adjuvants or biological response modifiers. As used herein, the terms adjuvant and biological response modifier refer to any substance that enhances the immune response to an antigen. Thus, an adjuvant or biological response modifier is used to stimulate a more active immune system response to a foreign antigen or pathogen or disease-related organism. However, in some embodiments, recombinant forms of gram-negative bacteria that express, for example, viral proteins or human immune system activation proteins, such as cytokines or chemokines, are provided for use in the disclosed methods. In an alternative embodiment, purified immune activation proteins, such as cytokines or chemokines, are mixed with the gram-negative organisms before administration or are administered before or after the gram-negative organisms.
В некоторых вариантах реализации интактные и по существу нежизнеспособные грамотрицательные бактериальные клетки в дозированной форме характеризуются по меньшей мере приблизительно 70% снижением активности ЛПС-ассоциированного эндотоксина (например, при измерении с помощью анализа ЛАЛ) по сравнению с необработанными бактериями дикого типа. В некоторых вариантах реализации снижение составляет по меньшей мере приблизительно 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,9%, 99,95% или 99,98%. В некоторых вариантах реализации снижение составляет не более чем приблизительно 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,9%, 99,95%, 99,98% или 99,99%. В некоторых вариантах реализации снижение составляет от приблизительно 70% до приблизительно 99,99%, от приблизительно 80% до приблизительно 99,99%, от приблизительно 90% до приблизительно 99,5% или 99%, от приблизительно 91% до приблизительно 99%, от приблизительно 92% до приблизительно 98%, от приблизительно 93% до приблизительно 97%, от приблизительно 94% до при- 13 044566 близительно 96%, от приблизительно 94,5% до приблизительно 95,5%, от приблизительно 94% до приблизительно 97%, от приблизительно 95% до приблизительно 98%, от приблизительно 96% до приблизительно 99%, от приблизительно 97% до приблизительно 99,5% или от приблизительно 98% до приблизительно 99,9%, не ограничиваясь перечисленным.In some embodiments, the intact and substantially nonviable gram-negative bacterial cells in the dosage form have at least about a 70% reduction in LPS-associated endotoxin activity (eg, as measured by the LAL assay) compared to untreated wild-type bacteria. In some embodiments, the reduction is at least about 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99 .5%, 99.9%, 99.95% or 99.98%. In some embodiments, the reduction is no more than about 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 99.95%, 99.98%, or 99.99%. In some embodiments, the reduction is from about 70% to about 99.99%, from about 80% to about 99.99%, from about 90% to about 99.5% or 99%, from about 91% to about 99% , from about 92% to about 98%, from about 93% to about 97%, from about 94% to about 96%, from about 94.5% to about 95.5%, from about 94% to about 97%, from about 95% to about 98%, from about 96% to about 99%, from about 97% to about 99.5%, or from about 98% to about 99.9%, without limitation.
В некоторых вариантах реализации интактные и по существу нежизнеспособные грамотрицательные бактериальные клетки в дозированной форме характеризуются по меньшей мере приблизительно 70% снижением пирогенности (например, при измерении с помощью анализа на кроликах in vivo) по сравнению с необработанными бактериями дикого типа. В некоторых вариантах реализации снижение составляет по меньшей мере приблизительно 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,9%, 99,95% или 99,98%. В некоторых вариантах реализации снижение составляет не более чем приблизительно 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,9%, 99,95%, 99,98% или 99,99%. В некоторых вариантах реализации снижение составляет от приблизительно 70% до приблизительно 99,99%, от приблизительно 80% до приблизительно 99,99%, от приблизительно 90% до приблизительно 99,5% или 99%, от приблизительно 91% до приблизительно 99%, от приблизительно 92% до приблизительно 98%, от приблизительно 93% до приблизительно 97%, от приблизительно 94% до приблизительно 96%, от приблизительно 94,5% до приблизительно 95,5%, от приблизительно 94% до приблизительно 97%, от приблизительно 95% до приблизительно 98%, от приблизительно 96% до приблизительно 99%, от приблизительно 97% до приблизительно 99,5% или от приблизительно 98% до приблизительно 99,9%, не ограничиваясь перечисленным.In some embodiments, the intact and substantially nonviable gram-negative bacterial cells in the dosage form have at least about a 70% reduction in pyrogenicity (eg, as measured by an in vivo rabbit assay) compared to untreated wild-type bacteria. In some embodiments, the reduction is at least about 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99 .5%, 99.9%, 99.95% or 99.98%. In some embodiments, the reduction is no more than about 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 99.95%, 99.98%, or 99.99%. In some embodiments, the reduction is from about 70% to about 99.99%, from about 80% to about 99.99%, from about 90% to about 99.5% or 99%, from about 91% to about 99% , from about 92% to about 98%, from about 93% to about 97%, from about 94% to about 96%, from about 94.5% to about 95.5%, from about 94% to about 97%, from about 95% to about 98%, from about 96% to about 99%, from about 97% to about 99.5%, or from about 98% to about 99.9%, without limitation.
В некоторых вариантах реализации снижение не связанной с ЛПС пирогенности составляет по меньшей мере приблизительно 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,9%, 99,95% или 99,98%. В некоторых вариантах реализации снижение составляет не более чем приблизительно 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,9%, 99,95%, 99,98% или 99,99%.In some embodiments, the reduction in non-LPS pyrogenicity is at least about 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% , 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9%, 99.95% or 99.98%. In some embodiments, the reduction is no more than about 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 %, 99%, 99.5%, 99.9%, 99.95%, 99.98% or 99.99%.
В некоторых вариантах реализации жизнеспособность по существу нежизнеспособных бактерий снижена по меньшей мере на 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или более.In some embodiments, the viability of the substantially nonviable bacteria is reduced by at least 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, or more.
В некоторых вариантах реализации дозированная форма включает от приблизительно 10000 до приблизительно 1х1010 таких бактериальных клеток. В некоторых вариантах реализации дозированная форма включает от приблизительно 100000 до приблизительно 1х108 таких бактериальных клеток. В некоторых вариантах реализации дозированная форма включает от приблизительно 1000000 до приблизительно 1х107 таких бактериальных клеток. В некоторых вариантах реализации дозированная форма включает от приблизительно 1х106 до приблизительно 1х108 таких бактериальных клеток.In some embodiments, the dosage form includes from about 10,000 to about 1x10 10 such bacterial cells. In some embodiments, the dosage form includes from about 100,000 to about 1x10 8 such bacterial cells. In some embodiments, the dosage form includes from about 1,000,000 to about 1x10 7 such bacterial cells. In some embodiments, the dosage form includes from about 1x10 6 to about 1x10 8 such bacterial cells.
В некоторых вариантах реализации композиция дополнительно включает второй терапевтический/противовирусный агент. В некоторых вариантах реализации второй терапевтический агент представляет собой НПВП (нестероидный противовоспалительный препарат). В некоторых вариантах реализации второй терапевтический агент представляет собой ингибитор циклооксигеназы, предпочтительно выбранный из группы, состоящей из 6MNA, аспирина, карпрофена, диклофенака, фенопрофена, флуфенамата, флубипрофена, ибупрофена, индометацина, кетопрофена, кеторолака, меклофенамата, мефенаминовой кислоты, напроксена, нифлумовой кислоты, пироксикама, сульфида сулиндака, супрофена, тенидапа, толметина, томоксипрола, зомепирака, целекоксиба, этодолака, мелоксикама, нимесулида, диизопропилфторфосфата, L745, 337, NS398, рофекоксиба, SC58125, S-аминосалициловой кислоты, ампирона, дифлунизала, набуметона, парацетамола, ресвератрола, салицина, салицилового альдегида, салицилата натрия, сульфасалазина, сулиндака, тамоксифена, тиклопидина, валерил-салицилата и их комбинаций.In some embodiments, the composition further includes a second therapeutic/antiviral agent. In some embodiments, the second therapeutic agent is an NSAID (non-steroidal anti-inflammatory drug). In some embodiments, the second therapeutic agent is a cyclooxygenase inhibitor, preferably selected from the group consisting of 6MNA, aspirin, carprofen, diclofenac, fenoprofen, flufenamate, flubiprofen, ibuprofen, indomethacin, ketoprofen, ketorolac, meclofenamate, mefenamic acid, naproxen, niflumic acid , piroxicam, sulindac sulfide, suprofen, tenidap, tolmetin, tomoxiprol, zomepirac, celecoxib, etodolac, meloxicam, nimesulide, diisopropyl fluorophosphate, L745, 337, NS398, rofecoxib, SC58125, S-aminosalicylic acid, ampirone, diflunisal, on bumeton, paracetamol, resveratrol , salicin, salicylic aldehyde, sodium salicylate, sulfasalazine, sulindac, tamoxifen, ticlopidine, valeryl salicylate and combinations thereof.
В некоторых вариантах реализации второй терапевтический агент представляет собой агонист стимулирующей иммунной контрольной точки, предпочтительно выбранной из группы, состоящей из CD27, CD28, CD40, CD122, CD137, ОХ40, GITR и iCoS. В некоторых вариантах реализации второй терапевтический агент представляет собой антагонист ингибирующей иммунной контрольной точки, предпочтительно выбранной из группы, состоящей из A2AR, В7-Н3, В7-Н4, CTLA-4, IDO, KIR, LAG3, PD-1, PDL1, TIM-3 и VISTA.In some embodiments, the second therapeutic agent is a stimulatory immune checkpoint agonist, preferably selected from the group consisting of CD27, CD28, CD40, CD122, CD137, OX40, GITR, and iCoS. In some embodiments, the second therapeutic agent is an inhibitory immune checkpoint antagonist, preferably selected from the group consisting of A2AR, B7-H3, B7-H4, CTLA-4, IDO, KIR, LAG3, PD-1, PDL1, TIM- 3 and VISTA.
В некоторых вариантах реализации второй терапевтический агент выбран из группы, состоящей из абакавира, ацикловира, адефовира, амантадина, ампренавира, амплигена, арбидола, атазанавира, атрипла, балавира, цидофовира, комбивира, долутегравира, дарунавира, делавирдина, диданозина, докозанола, эдоксудина, эфавиренза, эмтрицитабина, энфувиртида, энтекавира, эколивера, фамцикловира, фомивирсена, фосампренавира, фоскарнета, фосфонета, ганцикловира, ибацитабина, имуновира, идоксуридина, имиквимода, индинавира, инозина, ингибитора интегразы, интерферона III типа, интерферона II типа, интерферона I типа, интерферона, ламивудина, лопинавира, ловирида, маравирока, мороксидина, метисазона, нелфинавира, невирапина, нексавира, нитазоксанида, аналогов нуклеозидов, норвира, осельтамивира (Tamiflu®), пегинтерферона альфа-2а, пенцикловира, перамивира, плеконарила, подофиллотоксина, ингибитора протеазы, ралтегравира, рибавирина, римантадина, ритонавира, пирамидина, саквинавира, софосбувира, ставудина, телапревира, тенофовира, тенофовира дизопроксила, типранавира, трифлуридина, тризивира, тромантадина, трувада, валацикловира, валганцикловира, викривирока, видарабина, вира- 14 044566 мидина, зальцитабина, занамивира, зидовудина и их комбинаций.In some embodiments, the second therapeutic agent is selected from the group consisting of abacavir, acyclovir, adefovir, amantadine, amprenavir, ampligen, arbidol, atazanavir, atripla, balavir, cidofovir, combivir, dolutegravir, darunavir, delavirdine, didanosine, docosanol, edoxudine, efavirenz , emtricitabine, enfuvirtide, entecavir, ecoliver, famciclovir, fomivirsen, fosamprenavir, foscarnet, phosphonet, ganciclovir, ibacitabine, imunovir, idoxuridine, imiquimod, indinavir, inosine, integrase inhibitor, type III interferon, type II interferon, type I interferon, interferon , lamivudine, lopinavir, loviride, maraviroc, moroxidine, metisazone, nelfinavir, nevirapine, nexavir, nitazoxanide, nucleoside analogues, norvir, oseltamivir (Tamiflu®), peginterferon alfa-2a, penciclovir, peramivir, pleconaril, podophyllotoxin, protease inhibitor, raltegravir a, ribavirin , rimantadine, ritonavir, pyramidin, saquinavir, sofosbuvir, stavudine, telaprevir, tenofovir, tenofovir disoproxil, tipranavir, trifluridine, trizivir, tromantadine, truvada, valacyclovir, valganciclovir, vicriviroc, vidarabine, vira- 14 044566 midine, zalcitabine, zanamivir, zidovudine and their combinations.
В некоторых вариантах реализации второй терапевтический агент представляет собой интерферон альфа.In some embodiments, the second therapeutic agent is interferon alpha.
Композиции, описанные в настоящей заявке, могут быть приготовлены различными способами для применения в способах, описанных в настоящей заявке. В одном из вариантов реализации композиция содержит организмы, описанные на протяжении всего текста настоящей заявки, и фармацевтически приемлемый носитель.The compositions described herein can be prepared in a variety of ways for use in the methods described herein. In one embodiment, the composition contains the organisms described throughout this application and a pharmaceutically acceptable carrier.
Термин фармацевтически приемлемые носители относится к любым разбавителям, вспомогательным веществам или носителям, которые могут быть использованы в композициях. Фармацевтически приемлемые носители включают ионообменные вещества, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как человеческий сывороточный альбумин, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновую кислоту, сорбат калия, смеси неполных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как сульфат магния, протаминсульфат, гидрофосфат натрия, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, полиакрилаты, воски, полиэтилен-полиоксипропиленовые блок-сополимеры, полиэтиленгликоль, криоконсерванты, такие как трегалоза и маннит, и ланолин. Подходящие фармацевтические носители описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, стандартном справочнике в данной области.The term pharmaceutically acceptable carriers refers to any diluents, excipients or carriers that can be used in the compositions. Pharmaceutically acceptable carriers include ion exchangers, alumina, aluminum stearate, lecithin, whey proteins such as human serum albumin, buffering agents such as phosphates, glycine, sorbic acid, potassium sorbate, mixtures of partial glycerides of saturated vegetable fatty acids, water, salts or electrolytes such as magnesium sulfate, protamine sulfate, sodium hydrogen phosphate, potassium hydrogen phosphate, sodium chloride, zinc salts, colloidal silicon dioxide, magnesium trisilicate, polyvinylpyrrolidone, cellulose-based substances, polyethylene glycol, sodium carboxymethylcellulose, polyacrylates, waxes, polyethylene-polyoxypropylene block copolymers , polyethylene glycol, cryopreservatives such as trehalose and mannitol, and lanolin. Suitable pharmaceutical carriers are described in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, the standard reference in the art.
Композиции изготавливают в форме для фармацевтического введения млекопитающему, предпочтительно человеку. Такие фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть введены различными способами, в том числе парентерально. Термин парентеральный в контексте настоящей заявки включает техники подкожных, внутривенных, внутримышечных, внутрисуставных, внутрисиновиальных, интрастернальных, интратекальных, внутрипеченочных, внутриочаговых и интракраниальных инъекций или инфузий.The compositions are formulated for pharmaceutical administration to a mammal, preferably a human. Such pharmaceutical compositions according to the present invention can be administered by various routes, including parenterally. The term parenteral as used herein includes subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraarticular, intrasynovial, intrasternal, intrathecal, intrahepatic, intralesional, and intracranial injection or infusion techniques.
Стерильные формы композиций для инъекций могут представлять собой водную или масляную суспензию. Данные суспензии могут быть получены в соответствии со способами, известными в данной области техники, с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов. Стерильный препарат для инъекций может также представлять собой стерильный раствор или суспензию для инъекций в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например, раствор в 1,3-бутандиоле. К числу приемлемых носителей и растворителей, которые могут быть использованы, относится вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные нелетучие масла традиционно используют в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели можно применять любое нейтральное нелетучее масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, подходят для получения препаратов для инъекций, также как и природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, особенно в их полиоксиэтилированных вариантах. Данные масляные растворы или суспензии могут также содержать разбавитель или диспергирующий агент, представляющий собой длинноцепочечный спирт, такой как карбоксиметилцеллюлоза или схожие диспергирующие агенты, широко используемые для приготовления фармацевтически приемлемых дозированных форм, включая эмульсии и суспензии. Другие широко используемые поверхностно-активные вещества, такие как Твины, Спаны и другие эмульгаторы или усилители биологической доступности, широко используемые для получения фармацевтически приемлемых твердых, жидких или других дозированных форм, также могут быть использованы для целей получения препарата. Композиции могут быть приготовлены в форме для парентерального введения путем инъекции, например, путем болюсной инъекции или непрерывной инфузии.Sterile injectable forms of the compositions may be an aqueous or oily suspension. These suspensions can be prepared in accordance with methods known in the art, using suitable dispersing or wetting agents and suspending agents. The sterile injectable preparation may also be a sterile injectable solution or suspension in a non-toxic parenterally acceptable diluent or solvent, for example a solution in 1,3-butanediol. Acceptable carriers and solvents that may be used include water, Ringer's solution, and isotonic sodium chloride solution. In addition, sterile fixed oils are traditionally used as a solvent or suspending medium. For this purpose, any neutral, fixed oil can be used, including synthetic mono- or diglycerides. Fatty acids such as oleic acid and its glyceride derivatives are suitable for the preparation of injectable preparations, as are natural pharmaceutically acceptable oils such as olive oil or castor oil, especially in their polyoxyethylated variants. These oily solutions or suspensions may also contain a long-chain alcohol diluent or dispersing agent, such as carboxymethylcellulose or similar dispersing agents commonly used in the preparation of pharmaceutically acceptable dosage forms, including emulsions and suspensions. Other commonly used surfactants such as Tweens, Spans and other emulsifiers or bioavailability enhancers commonly used to prepare pharmaceutically acceptable solid, liquid or other dosage forms may also be used for formulation purposes. The compositions may be formulated for parenteral administration by injection, for example, by bolus injection or continuous infusion.
Фармацевтические композиции могут быть введены либо в одной, либо в многократных дозах. Фармацевтическая композиция может быть введена различными способами, включая, например, ректальный, буккальный, интраназальный и трансдермальный пути. В отдельных вариантах реализации фармацевтическая композиция может быть введена путем внутриартериальной инъекции, внутривенно, внутрибрюшинно, парентерально, внутримышечно или подкожно.Pharmaceutical compositions can be administered in either single or multiple doses. The pharmaceutical composition can be administered by various routes, including, for example, rectal, buccal, intranasal and transdermal routes. In certain embodiments, the pharmaceutical composition may be administered by intra-arterial injection, intravenous, intraperitoneal, parenteral, intramuscular, or subcutaneous.
Одним из способов введения является парентеральный, например, путем инъекции. Формы, в которые фармацевтические композиции, описанные в настоящей заявке, могут быть включены для введения путем инъекции, включают, например, водные или масляные суспензии или эмульсии с кунжутным маслом, кукурузным маслом, хлопковым маслом или арахисовым маслом, а также эликсиры, маннит, декстрозу или стерильный водный раствор и аналогичные фармацевтические носители.One route of administration is parenteral, for example by injection. Forms in which the pharmaceutical compositions described herein may be formulated for injection include, for example, aqueous or oleaginous suspensions or emulsions with sesame oil, corn oil, cottonseed oil or peanut oil, as well as elixirs, mannitol, dextrose or sterile aqueous solution and similar pharmaceutical carriers.
Некоторые примеры подходящих вспомогательных веществ включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, трегалозу, крахмалы, гуммиарабик, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, стерильную воду, сироп и метилцеллюлозу. Препараты могут дополнительно включать смазывающие агенты, такие как тальк, стеарат магния и минеральное масло; смачивающие агенты; эмульгаторы и суспендирующие агенты; консерванты, такие как метил- и пропилгидроксибензоаты; подсластители; и вкусоароматические добавки.Some examples of suitable excipients include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, trehalose, starches, gum arabic, calcium phosphate, alginates, tragacanth, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, sterile water, syrup and methylcellulose. The formulations may further include lubricants such as talc, magnesium stearate and mineral oil; wetting agents; emulsifiers and suspending agents; preservatives such as methyl and propyl hydroxybenzoates; sweeteners; and flavoring additives.
- 15 044566- 15 044566
ПримерыExamples
Следующие ниже примеры включены для демонстрации конкретных вариантов реализации настоящего изобретения. Специалистам в данной области техники должно быть ясно, что методы, раскрытые в приведенных ниже примерах, представляют собой методы, которые хорошо работают при практической реализации настоящего изобретения, и, таким образом, могут рассматриваться как составляющие конкретные варианты его реализации. Однако специалисты в данной области техники в свете настоящего раскрытия должны принять во внимание, что в конкретные раскрытые варианты реализации могут быть внесены многие изменения, и при этом, тем не менее, может быть получен аналогичный или схожий результат, не выходя за рамки сущности и объема настоящего изобретения.The following examples are included to demonstrate specific embodiments of the present invention. It will be clear to those skilled in the art that the methods disclosed in the examples below are methods that work well in the practice of the present invention, and thus may be considered to constitute specific embodiments thereof. However, those skilled in the art in light of the present disclosure should appreciate that many changes may be made to the specific embodiments disclosed and still achieve the same or a similar result without departing from the spirit and scope of the present invention.
Пример 1. Доклиническая характеристика эффективности системно вводимого агониста нескольких толл-подобных рецепторов (TLR).Example 1: Preclinical characterization of the efficacy of a systemically administered multiple toll-like receptor (TLR) agonist.
В этом примере была проверена гипотеза о том, что значительное снижение без полного устранения активности ЛПС в сочетании с нейтрализацией и стабилизацией непатогенных грамотрицательных бактерий может обеспечить продукт с несколькими TLR, который может безопасно и эффективно вызывать противоопухолевые иммунные ответы при внутривенном введении.This example tested the hypothesis that significant reduction without complete elimination of LPS activity, coupled with neutralization and stabilization of non-pathogenic Gram-negative bacteria, could provide a multi-TLR product that could safely and effectively induce antitumor immune responses when administered intravenously.
Непатогенные грамотрицательные Е. coli обрабатывали полимиксином В и глутаральдегидом в условиях, нейтрализующих и стабилизирующих клетки, что приводило к снижению активности эндотоксина ЛПС и пирогенности более чем на 90% (обработанные бактерии, также называемые бактериямиимитацией или просто Имитацией). Активность и пирогенность эндотоксина определяли количественно с использованием лизата амебоцитов Limulus и анализов на кроликах in vivo. Целостность бактерий оценивали с помощью электронной и световой микроскопии. Противоопухолевую активность определяли с использованием стандартных сингенных и ксенотрансплантатных моделей опухолей.Non-pathogenic Gram-negative E. coli were treated with polymyxin B and glutaraldehyde under neutralizing and cell-stabilizing conditions, resulting in a greater than 90% reduction in LPS endotoxin activity and pyrogenicity (treated bacteria, also called mock bacteria or simply Mock bacteria). Endotoxin activity and pyrogenicity were quantified using Limulus amebocyte lysate and in vivo rabbit assays. Bacterial integrity was assessed using electron and light microscopy. Antitumor activity was determined using standard syngeneic and xenograft tumor models.
Обработанные бактерии показали 3-кратное снижение кратковременной токсичности in vivo по сравнению с необработанными бактериями. Индукция секреции противоопухолевых цитокинов мононуклеарными клетками периферической крови (МНПК) мыши и человека не была нарушена по сравнению с необработанными бактериями, что было неожиданным. Лечение обработанными бактериями (в/в) обеспечивало значительную монотерапевтическую противоопухолевую активность против ортотопической колоректальной карциномы у мышей и метастатической карциномы поджелудочной железы у мышей.Treated bacteria showed a 3-fold reduction in short-term toxicity in vivo compared to untreated bacteria. The induction of antitumor cytokine secretion by mouse and human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) was not impaired compared with untreated bacteria, which was unexpected. Treatment with treated bacteria (i.v.) provided significant monotherapeutic antitumor activity against orthotopic colorectal carcinoma in mice and metastatic pancreatic carcinoma in mice.
Синергическая комбинированная активность, включая ликвидацию сформировавшихся опухолей с терапевтическим индексом вплоть до 10, наблюдалась в комбинации с IL-2 или низкодозовым циклофосфамидом (LDC) на моделях колоректальной карциномы у мышей, с LDC подкожно (п/к) на модели неходжкинской лимфомы (NHL) у мышей и с LDC плюс ритуксимаб п/к на модели NHL у людей. Синергическая противоопухолевая активность также наблюдалась в комбинации с низкодозовым нестероидным противовоспалительным препаратом (НПВП) на модели метастатической карциномы поджелудочной железы у мышей. Кроме того, ликвидация опухолей наблюдалась в комбинации с НПВП и усиливалась добавлением терапии против PD1 п/к на модели гепатоцеллюлярной карциномы у мышей. Было показано, что оптимальная (80-100%) ликвидация опухоли была опосредована естественными киллерами (NK), CD4+ и CD8+ Т-клетками. Иммунологическая память (80-100% и частичная), определяемая отторжением последующей провоцирующей стимуляции опухолью, была продемонстрирована как в иммунокомпетентных, так и в только врожденных условиях, соответственно.Synergistic combination activity, including eradication of established tumors with a therapeutic index of up to 10, was observed in combination with IL-2 or low-dose cyclophosphamide (LDC) in mouse models of colorectal carcinoma, with subcutaneous (SC) LDC in a non-Hodgkin lymphoma (NHL) model. in mice and with LDC plus SC rituximab in a human NHL model. Synergistic antitumor activity was also observed in combination with a low-dose nonsteroidal anti-inflammatory drug (NSAID) in a mouse model of metastatic pancreatic carcinoma. Additionally, tumor clearance was observed in combination with NSAIDs and was enhanced by the addition of anti-PD1 therapy SC in a mouse model of hepatocellular carcinoma. Optimal (80–100%) tumor clearance was shown to be mediated by natural killer (NK), CD4+ and CD8+ T cells. Immunological memory (80–100% and partial), defined by rejection of subsequent tumor challenge, has been demonstrated in both immunocompetent and innate-only conditions, respectively.
Пример 2. Индукция секреции цитокинов обработанными бактериями.Example 2: Induction of cytokine secretion by treated bacteria.
В этом примере была изучена способность обработанных бактерий индуцировать секрецию цитокинов мононуклеарными клетками периферической крови человека.In this example, the ability of treated bacteria to induce cytokine secretion from human peripheral blood mononuclear cells was studied.
Непатогенные грамотрицательные Е. coli обрабатывали полимиксином В и глутаральдегидом в условиях, нейтрализующих и стабилизирующих клетки, что приводило к снижению активности эндотоксина ЛПС и пирогенности более чем на 90% (обработанные бактерии, бактерии-имитация или просто Имитация), см.Non-pathogenic Gram-negative E. coli were treated with polymyxin B and glutaraldehyde under neutralizing and cell-stabilizing conditions, resulting in a reduction in LPS endotoxin activity and pyrogenicity by more than 90% (treated bacteria, mock bacteria, or simply Mock bacteria), see
Пример 1 и патент США № 9,265,804 В2. Активность и пирогенность эндотоксина определяли количественно с использованием лизата амебоцитов Limulus и анализов на кроликах in vivo. Целостность бактерий оценивали с помощью световой микроскопии после окрашивания по Граму.Example 1 and US Patent No. 9,265,804 B2. Endotoxin activity and pyrogenicity were quantified using Limulus amebocyte lysate and in vivo rabbit assays. Bacterial integrity was assessed by light microscopy after Gram staining.
От 1x10 до 1x108 необработанных или обработанных бактерий с шагом приращения в 10 раз инкубировали с 2,5x105 мононуклеарных клеток периферической крови (МНПК) человека в культуральной среде RPMI, содержащей 2,5 мМ глутамина, 10% человеческой сыворотки и 1% пенициллина и стрептомицина при 37°С с 5% CO2 в течение 48 часов. Супернатанты собирали центрифугированием планшетов при 1000 об/мин в течение 10 минут и хранили при -80°С. Luminex-анализ уровней цитокинов проводили с использованием панелей Millipore Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead HCYTOMAG-60K и HSTCMAG-28SK. Уровни цитокинов интерполировали по градуировочной кривой с использованием 5точечного нелинейного регрессиионного анализа, где аппроксимация = (A+((B-A)/(1+(((B-E)/(EA))*((x/C)AD))))). Интерполированные данные были нормированы к контролю носителем или нестимулированному контролю и проанализированы. МНПК из свежих нормальных продуктов лейкафереза периферической крови (ALLCells, Аламида, Калифорния) были выделены с использованием градиента фи- 16 044566 колла (Ficoll-Paque PLUS, № по каталогу 17-144-02, плотность 1,077 +/- 0,001 г/мл от GE Healthcare BioSciences, Питтсбург, Пенсильвания). Носителем для бактерий был натрий-фосфатный буфер (PBS) без кальция и с 2 мМ MgCl2.1x10 to 1x108 untreated or treated bacteria in 10-fold increments were incubated with 2.5x105 human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in RPMI culture medium containing 2.5 mM glutamine, 10% human serum, and 1% penicillin and streptomycin at 37°C with 5% CO 2 for 48 hours. Supernatants were collected by centrifuging the plates at 1000 rpm for 10 minutes and stored at -80°C. Luminex analysis of cytokine levels was performed using Millipore Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead HCYTOMAG-60K and HSTCMAG-28SK panels. Cytokine levels were interpolated from the calibration curve using 5-point nonlinear regression analysis, where approximation = (A+((BA)/(1+(((BE)/(EA))*((x/C) A D))))) . Interpolated data were normalized to vehicle control or unstimulated control and analyzed. PBMCs from fresh normal peripheral blood leukapheresis products (ALLCells, Alameda, CA) were isolated using a Ficoll-Paque PLUS gradient (Ficoll-Paque PLUS, catalog no. 17-144-02, density 1.077 +/- 0.001 g/ml from GE Healthcare BioSciences, Pittsburgh, PA). The carrier for bacteria was sodium phosphate buffer (PBS) without calcium and with 2 mM MgCl 2 .
Представленные результаты представляют собой пиковые уровни, определенные для каждого цитокина с использованием одной и той же дозы необработанных или обработанных бактерий. Обработанные бактерии содержали 4,94% ЛПС от уровня необработанных бактерий, в расчете на одну бактерию, как было измерено с помощью анализа с лизатом амебоцитов Limulus (ЛАЛ) in vitro.The results shown are the peak levels determined for each cytokine using the same dose of untreated or treated bacteria. The treated bacteria contained 4.94% LPS of the level of untreated bacteria, per bacterium, as measured by the in vitro Limulus amebocyte lysate (LAL) assay.
Таблица 1Table 1
Уровень цитокинов из МНПК, индуцированных обработанными бактериямиCytokine levels from PBMCs induced by treated bacteria
Представленные результаты представляют собой пиковые уровни, определенные для каждого цитокина, которые наблюдались при одинаковой дозе необработанных и обработанных бактерий, за исключением IFNy, который достиг пика при более низкой дозе для необработанных бактерий и сравнивался с такой же дозой обработанных бактерий.The results presented are the peak levels determined for each cytokine that were observed at the same dose of untreated and treated bacteria, with the exception of IFNy, which peaked at a lower dose for untreated bacteria and was compared with the same dose of treated bacteria.
Активность обработанных бактерий сравнивали с несколькими агонистами толл-подобных рецепторов (TLRa) и выделенным ЛПС. Эксперимент проводили, как описано в табл. 1. Агонисты толлподобных рецепторов (TLRa) были получены от InvivoGen (Сан-Диего, Калифорния) и титрованы в эксперименте следующим образом; CpG ODN 2006 (№ tlrl-2006, от 0,005 до 5 микромоль), поли(1:С) (№ tlrlpic, от 0,001 до 100 микрограмм/мл), R848 (№ tlrl-r848, от 0,1 до 100 микрограмм/мл) и ЛПС Е. coli (№ tlrl-pb5лпс, от 10 до 1 х106 пикограмм/мл). Исходные растворы агонистов TLR были приготовлены в соответствии с рекомендациями производителя в пределах их рекомендуемых пределов растворимости, и результаты представляют собой пиковые уровни цитокинов, определенные для каждого TLRa и обработанных бактерий. Результаты представлены в приведенной ниже табл. 2.The activity of the treated bacteria was compared with several toll-like receptor agonists (TLRa) and isolated LPS. The experiment was carried out as described in table. 1. Toll-like receptor agonists (TLRa) were obtained from InvivoGen (San Diego, CA) and experimentally titrated as follows; CpG ODN 2006 (No. tlrl-2006, from 0.005 to 5 micromol), poly(1:C) (No. tlrlpic, from 0.001 to 100 micrograms/ml), R848 (No. tlrl-r848, from 0.1 to 100 micrograms/ml) ml) and E. coli LPS (No. tlrl-pb5lps, from 10 to 1 x10 6 picograms/ml). TLR agonist stock solutions were prepared according to the manufacturer's recommendations within their recommended solubility limits, and the results represent peak cytokine levels determined for each TLRa and bacteria treated. The results are presented in the table below. 2.
Таблица 2table 2
Индукция цитокинов по сравнению с отдельными агонистами TLRCytokine induction compared to individual TLR agonists
Пример 3. Тестирование лечения вирусной инфекции обработанными бактериями на животных.Example 3: Testing treatment of viral infection with treated bacteria in animals.
В этом примере были протестированы обработанные бактерии, которые могут быть получены, как показано в Примерах 1 и 2, в отношении их активности при лечении вирусных инфекций у животных.In this example, treated bacteria that can be prepared as shown in Examples 1 and 2 were tested for their activity in treating viral infections in animals.
Модели инфекции гепатита В (HBV) на животных, используемые в этом примере, могут представлять собой любые из следующих: модель гидродинамической инъекции, модель на FVB/N, модель с аденовирусной доставкой, модель с аденоассоциированным вирусом, модель инфекции вирусом гепатитаThe animal models of hepatitis B (HBV) infection used in this example can be any of the following: hydrodynamic injection model, FVB/N model, adenoviral delivery model, adeno-associated virus model, hepatitis virus infection model
- 17 044566 сурков, модель на шимпанзе, модель на тупайях, модель HBV-трансгенной мыши, модель на HBVTrimera и химерная модель с печенью человека. Подходящие модели ВИЧ на животных также могут быть использованы для тестирования активности обработанных бактерий в отношении профилактики или лечения инфекции ВИЧ.- 17 044566 marmots, chimpanzee model, tupaia model, HBV transgenic mouse model, HBVTrimera model and chimeric human liver model. Suitable animal models of HIV can also be used to test the activity of treated bacteria in preventing or treating HIV infection.
Препараты обработанных бактерий с общей величиной активности ЛПС согласно измерениям с помощью анализа с лизатом амебоцитов Limulus (ЛАЛ) in vitro в различных диапазонах вводят животным, инфицированным вирусом или экспрессирующим вирусные гены. У некоторых животных в качестве комбинированной терапии будут использованы дополнительные иммуностимулирующие или противовирусные агенты. Животных, не получавших лечения, и животных, получавших другие иммуностимулирующие или противовирусные агенты, использовали в качестве контроля. Предполагается, что обработанные бактерии проявляют эффективную противовирусную активность в этих моделях на животных.Preparations of treated bacteria with total LPS activity as measured by the in vitro Limulus amebocyte lysate (LAL) assay in various ranges are administered to animals infected with the virus or expressing viral genes. In some animals, additional immunostimulating or antiviral agents will be used as combination therapy. Untreated animals and animals treated with other immunostimulating or antiviral agents were used as controls. The treated bacteria are believed to exhibit effective antiviral activity in these animal models.
Пример 4. Ингибирование HBV у мышей.Example 4 Inhibition of HBV in mice.
Аденоассоциированный вирус/вирус гепатита В (AAV/HBV) представляет собой рекомбинантный AAV, несущий реплицируемый геном HBV человека. Используя преимущество высокой гепатотропности AAV генотипа 8, геном HBV человека может быть эффективно доставлен в клетки печени мыши. Инфицирование иммунокомпетентных мышей AAV/HBV может привести к длительной виремии HBV, в том числе высвобождению вирионов HBV человека, HBsAg и HBeAg в кровь, что имитирует хроническую инфекцию HBV у пациентов. Модель AAV/HBV может быть использована для оценки in vivo активности различных типов агентов против HBV. Кроме того, эта модель является подходящей для оценки иммуномодуляторов (см., например, Huang et al., Int. J. Onc. v39 pp1511-1519, 2011).Adeno-associated virus/hepatitis B virus (AAV/HBV) is a recombinant AAV that carries the replicable human HBV genome. Taking advantage of the high hepatotropicity of AAV genotype 8, the human HBV genome can be efficiently delivered into mouse liver cells. Infection of immunocompetent mice with AAV/HBV can lead to prolonged HBV viremia, including the release of human HBV virions, HBsAg, and HBeAg into the blood, mimicking chronic HBV infection in patients. The AAV/HBV model can be used to evaluate the in vivo activity of various types of anti-HBV agents. In addition, this model is suitable for the evaluation of immunomodulators (see, for example, Huang et al., Int. J. Onc. v39 pp1511-1519, 2011).
rAAV8-1.3HBV, генотип D, был приобретен в Пекинском институте молекулярной медицины FivePlus (номер партии А2018092406). Исходный раствор вируса с 1χ10Λ12 вирусных геномов (в.г.)/мл разбавляли до 5χ10Λ11 в.г./мл стерильным натрий-фосфатным буфером (PBS) и 1х10Л11 в.г. AAV/HBV в 200 мкл инъецировали самцам мышей C57BL/6 в возрасте 5 недель за 31 день до начала введения доз (день -31).rAAV8-1.3HBV, genotype D, was purchased from Beijing FivePlus Institute of Molecular Medicine (batch number A2018092406). The virus stock solution with 1χ10Λ12 viral genomes (vg)/ml was diluted to 5χ10Λ11 vg/ml with sterile sodium phosphate buffer (PBS) and 1x10Λ11 vg. AAV/HBV at 200 μl was injected into 5-week-old male C57BL/6 mice 31 days before dosing (day -31).
Образцы крови (-100 мкл) брали в пробирки, покрытые K2-EDTA, через кровотечение из поднижнечелюстной области в дни -17, -7 и -4. Образцы центрифугировали при 7000 g (4°С) в течение 10 минут для сбора плазмы. Готовили по меньшей мере 40 мкл образцов плазмы для определения уровня ДНК HBV с помощью кПЦР и уровней антигена HBs (HBsAg) и антигена НВе (HBeAg) с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). Оставшиеся образцы плазмы хранили при -80°С для анализов после умерщвления. На основании уровней ДНК HBV, HBsAg, HBeAg в плазме и массы тела в дни -17, -7 и -4 были отобраны мыши с подходящими уровнями вирусной инфекции и случайным образом разделены на 7 групп по 5 мышей в каждой группе в день -1. Все мыши были равномерно распределены в каждой группе, чтобы гарантировать отсутствие значительных различий между каждой группой с точки зрения уровня ДНК HBV, HBsAg, HBeAg и массы тела в день -4.Blood samples (-100 μl) were collected in K2-EDTA-coated tubes through submandibular bleeding on days -17, -7 and -4. Samples were centrifuged at 7000 g (4°C) for 10 minutes to collect plasma. At least 40 μl of plasma samples were prepared to determine HBV DNA levels by qPCR and HBs antigen (HBsAg) and HBe antigen (HBeAg) levels by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The remaining plasma samples were stored at -80°C for postmortem analyses. Based on plasma HBV, HBsAg, HBeAg DNA levels and body weight on days -17, -7 and -4, mice with appropriate levels of viral infection were selected and randomly divided into 7 groups with 5 mice in each group on day -1. All mice were evenly distributed in each group to ensure that there were no significant differences between each group in terms of HBV DNA levels, HBsAg, HBeAg and body weight on day -4.
Бактерии-имитацию получали, как описано в Примере 1 и в патенте США № 9,265,804 В2, с диапазоном активности ЛПС-эндотоксина приблизительно от 2000 до 6000 единиц эндотоксина (ЕЭ) или приблизительно от 250 до 750 нг ЛПС на 10Λ9 нейтрализованных бактериальных клеток. Группы животных не получали лечения, получали энтекавир (ETV) в дозе 0,005 мг/кг перорально (п/о) ежедневно в дни 034, Имитацию в дозе 2χ10Λ8 нейтрализованных бактерий на мышь, вводимых в хвостовую вену в/в в дни 1, 2, 8, 9, 15, 16, 22, 23, 29 и 30, или ETV и Имитацию. Образцы плазмы получали еженедельно и анализировали на ДНК HBV, HBsAg и HBeAg, как описано выше. Уровни ДНК HBV (копии), HBsAg и HBeAg у мышей из получавших лечение групп сравнивали с уровнями в группе без лечения в каждой сопоставимой временной точке с помощью непарного, непараметрического статистического анализа МаннаУитни.Mock bacteria were prepared as described in Example 1 and US Pat. No. 9,265,804 B2, with an LPS endotoxin activity range of approximately 2000 to 6000 endotoxin units (EU) or approximately 250 to 750 ng of LPS per 10Λ9 neutralized bacterial cells. Groups of animals received no treatment, received entecavir (ETV) at a dose of 0.005 mg/kg orally (PO) daily on days 034, Sham at a dose of 2χ10Λ8 neutralized bacteria per mouse injected into the tail vein IV on days 1, 2, 8, 9, 15, 16, 22, 23, 29 and 30, or ETV and Imitation. Plasma samples were obtained weekly and analyzed for HBV DNA, HBsAg, and HBeAg as described above. Levels of HBV DNA (copies), HBsAg, and HBeAg in mice from the treated groups were compared with those in the untreated group at each matched time point using unpaired, nonparametric Mann-Whitney statistical analysis.
Фиг. 1 демонстрирует, что терапия по стандарту оказания медицинской помощи (ETV) значительно ингибировала продукцию ДНК HBV в течение 3 дней после начала введения доз, снижая уровень в плазме у 5/5 мышей до нижнего предела количественного определения (120 копий/мкл плазмы) на 28 день ежедневного введения доз (день 59 после инфицирования) (Фиг. 1В). Имитация также значительно ингибировала продукцию ДНК HBV, снижая уровень в плазме у 3/5 мышей до нижнего предела количественного определения на 28 день введения доз дважды в неделю (день 59 после инфицирования) (Фиг. 1С). Ингибирование ДНК HBV посредством ETV + Имитации было аналогично действию ETV в отдельности, что демонстрирует отсутствие антагонистического взаимодействия до этого момента при введении соединения (Фиг. 1D).Fig. 1 demonstrates that standard of care (ETV) therapy significantly inhibited HBV DNA production within 3 days of dosing, reducing plasma levels in 5/5 mice to the lower limit of quantitation (120 copies/μL plasma) by 28 day of daily dosing (day 59 postinfection) (Fig. 1B). Mock also significantly inhibited HBV DNA production, reducing plasma levels in 3/5 mice to the lower limit of quantitation on day 28 of twice-weekly dosing (day 59 postinfection) (Fig. 1C). Inhibition of HBV DNA by ETV + Mock was similar to ETV alone, demonstrating the lack of antagonistic interaction up to this point upon administration of the compound (Fig. 1D).
При введении ETV не наблюдалось ингибирования продукции HBsAg или HBeAg. Однако было обнаружено, что Имитация ингибировала продукцию HBeAg на 28 день введения доз (день 59 после инфицирования) (Фиг. 2).No inhibition of HBsAg or HBeAg production was observed with ETV administration. However, Mock was found to inhibit HBeAg production on day 28 of dosing (day 59 postinfection) (Figure 2).
Таким образом, этот пример демонстрирует, что, как и в случае со стандартом оказания медицинской помощи (ETV), бактерии-имитация также могут значительно ингибировать репликацию HBV, хотя бактериям-имитации требуется больше времени, чтобы проявить ингибирующую активность, что согласуется с иммунологической основой механизма действия Имитации. Однако, в отличие от ETV, которыйIn summary, this example demonstrates that, as with standard of care (ETV), mock bacteria can also significantly inhibit HBV replication, although the mock bacteria take longer to exhibit inhibitory activity, consistent with the immunological basis mechanism of action of Imitation. However, unlike ETV, which
- 18 044566 ингибировал только продукцию ДНК HBV, бактерии-имитация также обладают преимуществом ингибирования продукции антигена НВе.- 18 044566 inhibited only HBV DNA production, mimic bacteria also have the advantage of inhibiting HBe antigen production.
Пример 5. Долгосрочное ингибирование HBV.Example 5: Long-term HBV inhibition.
Этот эксперимент был проведен для того, чтобы определить, может ли нестероидный противовоспалительный препарат (НПВП) усилить противовирусную активность бактерий-имитации, если противовирусная активность Имитации теряется после прекращения лечения, и потенциальные токсические эффекты лечения ETV, Имитацией и ETV + Имитация. Эксперимент проводили, как описано в Примере 4, за исключением того, что вирус AAV/HBV инъецировали в день -29 относительно начала введения доз. Уровни ДНК HBV, HBsAg и HBeAg в плазме определяли в дни -15, -8 и -1 относительно начала введения доз в день 0, и дозу ETV увеличивали до 0,1 мг/кг. Кроме того, всем группам, представленным на фиг. 3, 4, 5 и 6, ежедневно вводили индометацин (НПВП) (10 мкг/мл в питьевой воде). Введение доз осуществляли в течение 5 недель, как в Примере 4, при этом уровни ДНК HBV, HBsAg и HBeAg в плазме определяли еженедельно, а также раз в две недели в течение 27 недель после прекращения лечения. Ингибирующую активность определяли путем сравнения получавших лечение групп в каждой временной точке с контрольной группой (индометацин по отдельности) в той же временной точке с помощью непарного, непараметрического статистического анализа Манна-Уитни.This experiment was conducted to determine whether a nonsteroidal anti-inflammatory drug (NSAID) could enhance the antiviral activity of Mock bacteria if Mock antiviral activity is lost after treatment was stopped, and the potential toxic effects of ETV, Mock, and ETV + Mock treatment. The experiment was performed as described in Example 4, except that the AAV/HBV virus was injected on day -29 relative to the start of dosing. Plasma HBV DNA, HBsAg and HBeAg levels were determined on days -15, -8 and -1 relative to the start of dosing on day 0, and the ETV dose was increased to 0.1 mg/kg. In addition, all groups presented in FIG. 3, 4, 5 and 6, indomethacin (NSAID) (10 μg/ml in drinking water) was administered daily. Dosing was carried out over 5 weeks as in Example 4, with plasma levels of HBV DNA, HBsAg and HBeAg determined weekly and biweekly for 27 weeks after cessation of treatment. Inhibitory activity was determined by comparing the treated groups at each time point with the control group (indomethacin alone) at the same time point using unpaired, nonparametric Mann-Whitney statistical analysis.
По окончании эксперимента печень каждой мыши была разделена на несколько срезов, мгновенно заморожена в жидком азоте сразу же после сбора и хранилась при -80°С. Срезы печени использовали для обнаружения ДНК HBV, a дополнительные срезы печени от каждой мыши фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине (NBF) в течение приблизительно 24 часов, затем переносили для стандартной дегидратации и заливки парафином. Парафиновые блоки были разделены на срезы для окрашивания гематоксилин-эозином (Н&Е) и гистопатологического анализа, а также иммуногистохимического анализа (ИГХ) на HBsAg и HBcAg.At the end of the experiment, the liver of each mouse was divided into several sections, flash frozen in liquid nitrogen immediately after collection, and stored at -80°C. Liver sections were used to detect HBV DNA, and additional liver sections from each mouse were fixed in 10% neutral buffered formalin (NBF) for approximately 24 hours, then transferred for standard dehydration and paraffin embedding. Paraffin blocks were sectioned for hematoxylin-eosin (H&E) staining and histopathological analysis, as well as immunohistochemical (IHC) analysis for HBsAg and HBcAg.
Фиг. 3А демонстрирует, что индометацин по отдельности не ингибировал продукцию ДНК HBV. В то же время, фиг. 3 (В, С и D) демонстрирует, что ETV, Имитация или ETV + Имитация ингибировали продукцию ДНК HBV в присутствии индометацина аналогично тому, как это наблюдалось в отсутствие индометацина (Фиг. 1). При лечении ETV потери массы тела не наблюдалось. Временная потеря массы тела, составившая 6% в течение одного дня, наблюдалась в течение 1 недели лечения Имитацией (±ETV), 1,3% (без ETV) и 3,4% (+ETV) в течение одного дня в течение 2 недели лечения Имитацией, 0,8% (без ETV) и 2,0% (+ETV) в течение одного дня в течение третьей недели лечения, и никакой потери массы тела не наблюдалось в течение четвертой и пятой недель лечения Имитацией (±ETV).Fig. 3A demonstrates that indomethacin alone did not inhibit HBV DNA production. At the same time, FIG. 3 (B, C, and D) demonstrates that ETV, Mock, or ETV + Mock inhibited HBV DNA production in the presence of indomethacin similar to what was observed in the absence of indomethacin (Fig. 1). No weight loss was observed with ETV treatment. Transient body weight loss of 6% per day was observed during 1 week of treatment with Sham (±ETV), 1.3% (without ETV) and 3.4% (+ETV) per day during 2 weeks Sham treatment, 0.8% (no ETV) and 2.0% (+ETV) for one day during the third week of treatment, and no weight loss was observed during the fourth and fifth weeks of Sham treatment (±ETV).
Статистически значимое ингибирование ДНК HBV было утрачено по окончании эксперимента (день 253), через 27 недель после прекращения лечения ETV (Фиг. 3В), но ингибирование оставалось статистически значимым на 253 день в группах, получавших Имитацию (Фиг. 3С) и Имитацию + ETV (Фиг. 3D). Это демонстрирует, что Имитация обладают более продолжительным ингибирующим эффектом в сравнении с ETV.Statistically significant inhibition of HBV DNA was lost at the end of the experiment (day 253), 27 weeks after stopping ETV treatment (Figure 3B), but inhibition remained statistically significant at day 253 in the Sham (Figure 3C) and Sham + ETV groups. (Fig. 3D). This demonstrates that Shams have a longer lasting inhibitory effect compared to ETV.
Индометацин + ETV не ингибировали HBsAg или HBeAg по сравнению с индометацином по отдельности (Фиг. 4А, В и 5А, В). Однако добавление Имитации (т.е. индометацин + Имитация или индометацин + Имитация + ETV) ингибировало продукцию HBsAg и HBeAg по сравнению с индометацином по отдельности (Фиг. 4А, С, D и 5 А С, D). Поскольку ни Имитация по отдельности, ни индометацин по отдельности не ингибировали продукцию HBsAg, эти результаты демонстрируют синергическое взаимодействие между Имитацией и индометацином в отношении ингибирования HBsAg.Indomethacin + ETV did not inhibit HBsAg or HBeAg compared to indomethacin alone (Figures 4A,B and 5A,B). However, addition of Mock (i.e., indomethacin + Mock or indomethacin + Mock + ETV) inhibited the production of HBsAg and HBeAg compared to indomethacin alone (Figures 4 A, C, D and 5 A C, D). Since neither Mock alone nor indomethacin alone inhibited HBsAg production, these results demonstrate a synergistic interaction between Mock and indomethacin in inhibiting HBsAg.
Фиг. 6 демонстрирует, что в присутствии индометацина Имитация или Имитация + ETV, но не ETV, ингибировали экспрессию HBeAg в печени мышей через 27 недель после прекращения лечения. На фиг. 7 представлен ИГХ анализ экспрессии HBcAg в печени мышей, получавших носитель Имитации (т.е. только буфер, использованный в композиции Имитации) и соединение. Комбинация индометацина и Имитации снова снижала экспрессию HBcAg у 2 из 5 мышей по сравнению с индометацином по отдельности, а комбинация индометацина, Имитации и ETV снижала экспрессию HBcAg у 5 из 5 мышей по сравнению с лечением индометацином + ETV или индометацином + Имитация.Fig. 6 demonstrates that in the presence of indomethacin, Sham or Sham + ETV, but not ETV, inhibited HBeAg expression in the liver of mice 27 weeks after cessation of treatment. In fig. 7 shows IHC analysis of HBcAg expression in the liver of mice treated with Mock vehicle (ie, only the buffer used in the Mock composition) and compound. The combination of indomethacin and Sham again reduced HBcAg expression in 2 of 5 mice compared with indomethacin alone, and the combination of indomethacin, Sham, and ETV reduced HBcAg expression in 5 of 5 mice compared with indomethacin + ETV or indomethacin + Sham treatment.
Этот пример демонстрирует, что НПВП, такие как индометацин, неспособны ингибировать HBV, но могут значительно усиливать противовирусную активность бактерий-имитации синергическим образом. По сравнению со стандартом оказания медицинской помощи ETV бактерии-имитация демонстрировали более длительный и устойчивый лечебный эффект. Комбинация Имитации и ETV привела к значительному улучшению по сравнению с каждым лечением в отдельности, в частности, в отношении долгосрочного наблюдения после прекращения лечения.This example demonstrates that NSAIDs such as indomethacin are unable to inhibit HBV but can significantly enhance the antiviral activity of the mimic bacteria in a synergistic manner. Compared with standard of care ETV, the mock bacteria demonstrated a longer-lasting and sustained treatment effect. The combination of Sham and ETV resulted in significant improvements compared with either treatment alone, particularly with regard to long-term follow-up after treatment cessation.
Пример 6. Ингибирование инфекции ВИЧ.Example 6 Inhibition of HIV infection.
Чтобы изучить способность бактерий-имитации ингибировать инфицирование вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) in vivo, иммунная система человека была воспроизведена у NOD/Shi-scid/IL2Rγnull-специфичных самок мышей с иммунодефицитом (NCG) (Charles River) с помощью гемопоэтических стволовых клеток, выделенных из пуповинной крови человека. Мышам приживляли полученные из пуповинной крови CD34+ гематопоэтические стволовые клетки и клетки-предшественники (Француз- 19 044566 ский институт крови) после миелоаблативной химиотерапии (Manfroi et al., Can. Res. v77, pp1097-1107To study the ability of mock bacteria to inhibit human immunodeficiency virus (HIV) infection in vivo, the human immune system was recapitulated in NOD/Shi-scid/IL2Rγnull-specific female immunodeficient (NCG) mice (Charles River) using hematopoietic stem cells isolated from human umbilical cord blood. Mice were engrafted with cord blood-derived CD34+ hematopoietic stem and progenitor cells (French Blood Institute) after myeloablative chemotherapy (Manfroi et al., Can. Res. v77, pp1097-1107
2017). Приживление заключалось во внутривенной инъекции 105 CD34+ клеток. Уровень приживления контролировали с помощью анализа на человеческие CD45+ клетки среди всех лейкоцитов крови методом проточной цитометрии.2017). Engraftment consisted of intravenous injection of 105 CD34+ cells. Engraftment rates were monitored by flow cytometry testing for human CD45+ cells among all blood leukocytes.
Через 14 недель приживления подходящим hu-мышам инокулировали 80 нг ВИЧ-1 (NL4-3 HIV1/Clade В; Х4-тропный вирус) путем в/б инъекции. Виремию плазмы определяли на 5 неделе с помощью кПЦР в реальном времени. Другие методы были такими, как описано в Wenzel et al., J. Virol. Doi:10.1128/JVI.00907-19 (принятая рукопись опубликована онлайн 2 августа 2019 г.). В эксперименте использовали только ВИЧ-мышей с вирусной нагрузкой более 104 копий/мл. На 5 неделе мышей случайным образом разделяли на группы на основе степени их гуманизации, нагрузки ВИЧ и процентного содержания CD4+ Т-клеток в крови.After 14 weeks of engraftment, matched hu mice were inoculated with 80 ng of HIV-1 (NL4-3 HIV1/Clade B; X4-tropic virus) by i.p. injection. Plasma viremia was determined at week 5 using qRT-PCR. Other methods were as described in Wenzel et al., J. Virol. Doi:10.1128/JVI.00907-19 (accepted manuscript published online August 2, 2019). Only HIV mice with a viral load of more than 10 4 copies/ml were used in the experiment. At week 5, mice were randomly assigned to groups based on their degree of humanization, HIV load, and percentage of CD4+ T cells in the blood.
Группы получали носитель Имитации в/в дважды в неделю в течение 5 недель, высокоактивную антиретровирусную терапию (ВААРТ или три-терапия), состоящую из 2,4 мг ламивудина, 2,35 мг тенофовира дизопроксила и 19,2 мг ралтегравира в сутки, добавленных в гранулы корма, в течение 6 недель, или нейтрализованные бактерии-имитацию (полученные, как описано в Примере 4), 6х107 в/в (хвостовая вена) два раза в неделю в течение 5 недель.The groups received Sham vehicle twice weekly for 5 weeks, highly active antiretroviral therapy (HAART or tri-therapy) consisting of 2.4 mg lamivudine, 2.35 mg tenofovir disoproxil and 19.2 mg raltegravir per day, added in feed pellets for 6 weeks, or neutralized mock bacteria (prepared as described in Example 4), 6x10 7 IV (tail vein) twice a week for 5 weeks.
Кровь (100 мкл) брали раз в две недели из ретроорбитального синуса в пробирки, покрытые EDTA. Плазму отделяли от клеток центрифугированием и инкубировали 30 мин при 56°С для инактивации ВИЧ перед замораживанием при -80 °С. Вирусные РНК выделяли из 40 мкл замороженной инактивированной плазмы с использованием автоматического устройства для очистки нуклеиновых кислот (Arrow, NorDiag) и набора для экстракции вирусной РНК (DiaSorin, № 12-08-02). Вирусную нагрузку ВИЧ в плазме определяли с помощью кПЦР в реальном времени с использованием набора Generic HIV Charge Virale (Biocentric, № TR001-440IC, партия 0089/08А). Предел чувствительности был установлен на уровне 1000 копий/мл. Значения ниже этого порога считались необнаруженными. Ингибирующую активность определяли путем сравнения получавших лечение групп в каждой временной точке с группой, получавшей носитель, в той же временной точке с помощью непарного, непараметрического статистического анализа Манна-Уитни. Символы звездочки обозначают статистически значимое ингибирование.Blood (100 μl) was collected biweekly from the retro-orbital sinus into EDTA-coated tubes. Plasma was separated from cells by centrifugation and incubated for 30 min at 56°C to inactivate HIV before freezing at -80°C. Viral RNAs were isolated from 40 μl of frozen inactivated plasma using an automated nucleic acid purification device (Arrow, NorDiag) and a viral RNA extraction kit (DiaSorin, no. 12-08-02). Plasma HIV viral load was determined by qRT-PCR using the Generic HIV Charge Virale kit (Biocentric, no. TR001-440IC, lot 0089/08A). The detection limit was set at 1000 copies/ml. Values below this threshold were considered undetected. Inhibitory activity was determined by comparing the treated groups at each time point with the vehicle group at the same time point using an unpaired, nonparametric Mann-Whitney statistical analysis. Asterisks indicate statistically significant inhibition.
Фиг. 8 демонстрирует, что терапия ВААРТ ингибировала уровни ВИЧ в крови через две недели после начала лечения и в течение трех недель после прекращения лечения (Фиг. 8В). Бактерии-имитация не ингибировали уровни ВИЧ во время лечения, но ингибирование наблюдалось, начиная через четыре недели после прекращения лечения и продолжалось в течение одиннадцати недель, за исключением 19 недели (Фиг. 8С). Отсроченный ингибирующий ответ дает основания полагать, что бактерии-имитация были способны вызывать иммунный ответ против инфекции ВИЧ. По одной смерти мыши было зарегистрировано в группе, получавшей носитель Имитации, и в группе, получавшей лечение ВААРТ. В группе, получавшей лечение Имитацией, смертей не наблюдалось.Fig. 8 demonstrates that HAART therapy inhibited blood levels of HIV two weeks after initiation of treatment and up to three weeks after cessation of treatment (Fig. 8B). Mock bacteria did not inhibit HIV levels during treatment, but inhibition was observed starting four weeks after treatment stopped and lasted for eleven weeks, with the exception of week 19 (Figure 8C). The delayed inhibitory response suggested that the mimic bacteria were capable of inducing an immune response against HIV infection. One mouse death each was recorded in the Sham vehicle-treated group and the HAART-treated group. There were no deaths in the Sham-treated group.
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящей заявке, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в области, к которой относится данное изобретение.Unless otherwise specified, all technical and scientific terms used in this application have the same meaning as commonly understood by one skilled in the art to which this invention relates.
Изобретения, наглядно описанные в настоящей заявке, могут быть подходящим образом реализованы в отсутствие какого-либо элемента или элементов, ограничения или ограничений, конкретно не раскрытых в настоящей заявке. Таким образом, например, термины содержащий, включающий и т. д. следует понимать в широком смысле и без ограничения. Кроме того, употребляемые в настоящей заявке термины и выражения используются в качестве описывающих и не ограничивающих терминов, и использование таких терминов и выражений не подразумевает исключения каких-либо эквивалентов показанных и описанных признаков или их частей, и подразумевается, что различные модификации возможны в пределах объема заявленного изобретения.The inventions clearly described herein may be suitably practiced in the absence of any element or elements, limitation or limitations not specifically disclosed herein. Thus, for example, the terms containing, including, etc. are to be understood in a broad sense and without limitation. Further, the terms and expressions used herein are used as descriptive and non-limiting terms, and the use of such terms and expressions is not intended to exclude any equivalents of the features shown and described or portions thereof, and it is understood that various modifications are possible within the scope claimed invention.
Таким образом, следует понимать, что несмотря на то, что настоящее изобретение было специально описано с помощью предпочтительных вариантов реализации и необязательных признаков, специалист в данной области техники может прибегнуть к модификации, улучшению и вариации изобретений, раскрытых в настоящей заявке, и такие модификации, улучшения и вариации считаются входящими в объем данного изобретения. Материалы, методы и примеры, представленные в настоящей заявке, представляют собой предпочтительные варианты реализации, являются иллюстративными и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.Thus, it should be understood that while the present invention has been specifically described by preferred embodiments and optional features, modifications, improvements, and variations of the inventions disclosed herein may be made by one skilled in the art, and such modifications, improvements and variations are considered to be within the scope of this invention. The materials, methods and examples presented in this application represent preferred embodiments, are illustrative and are not intended to limit the scope of the present invention.
Изобретение было описано в настоящей заявке широко и в общих чертах. Каждый из более узких видовых признаков и подродовых групп признаков, подпадающих под общее раскрытие, также составляет часть настоящего изобретения. Это включает в себя общее описание изобретения с условием или отрицательным ограничением, исключающим любой объект из рода, независимо от того, упомянут ли исключенный признак в настоящей заявке конкретно.The invention has been described herein broadly and in general terms. Each of the more specific generic features and subgeneric groups of features covered by the general disclosure also forms part of the present invention. This includes a general description of the invention with a condition or negative limitation excluding any item of kind, regardless of whether the excluded feature is specifically mentioned in this application.
Кроме того, если признаки или аспекты настоящего изобретения описаны с помощью групп Маркуша, специалистам в данной области техники будет ясно, что настоящего изобретение также таким образом описано с помощью любого отдельного члена или подгруппы членов группы Маркуша.In addition, if features or aspects of the present invention are described in terms of Markush groups, those skilled in the art will appreciate that the present invention is also thus described in terms of any individual member or subset of members of the Markush group.
--
Claims (7)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US62/737,762 | 2018-09-27 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA044566B1 true EA044566B1 (en) | 2023-09-06 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20220031768A1 (en) | Methods of treatment of infections using bacteria | |
Patra et al. | Targeting human TLRs to combat COVID‐19: a solution? | |
Zhang et al. | N-acetyl-l-cystine (NAC) protects against H9N2 swine influenza virus-induced acute lung injury | |
Goulet et al. | Systems analysis of a RIG-I agonist inducing broad spectrum inhibition of virus infectivity | |
Wu et al. | Toll‐like receptor‐mediated control of HBV replication by nonparenchymal liver cells in mice | |
Savva et al. | Targeting toll-like receptors: promising therapeutic strategies for the management of sepsis-associated pathology and infectious diseases | |
Weiss et al. | IFN-γ treatment at early stages of influenza virus infection protects mice from death in a NK cell-dependent manner | |
Kumaki et al. | Prophylactic and therapeutic intranasal administration with an immunomodulator, Hiltonol®(Poly IC: LC), in a lethal SARS-CoV-infected BALB/c mouse model | |
ES2752063T3 (en) | Intrapulmonary administration of toll 9 receptor polynucleotide agonists for the treatment of lung cancer | |
Ho et al. | Activation of invariant NKT cells enhances the innate immune response and improves the disease course in influenza A virus infection | |
JP2023011840A (en) | Novel th1-inducing adjuvant by combining different nucleic acid adjuvant and uses thereof | |
Ross et al. | Single dose combination nanovaccine provides protection against influenza A virus in young and aged mice | |
Zhu et al. | TLR3 signaling in macrophages is indispensable for the protective immunity of invariant natural killer T cells against enterovirus 71 infection | |
JP2015513401A (en) | Method for preparing dendritic cell vaccine | |
Chang et al. | Dengue virus serotype 2 blocks extracellular signal-regulated kinase and nuclear factor-κB activation to downregulate cytokine production | |
Zhang et al. | TIPE2 protein negatively regulates HBV-specific CD8+ T lymphocyte functions in humans | |
Andresen et al. | Kinetics of transcriptional response against poly (I: C) and infectious salmon anemia virus (ISAV) in Atlantic salmon kidney (ASK) cell line | |
Kavaliauskis et al. | Use of poly (I: C) stabilized with chitosan as a vaccine-adjuvant against viral hemorrhagic septicemia virus infection in zebrafish | |
Mohamed et al. | A comprehensive insight into current control of COVID-19: Immunogenicity, vaccination, and treatment. | |
Spera et al. | Brucella alters the immune response in a prpA-dependent manner | |
Sang et al. | Toll-like receptor 3 signaling inhibits simian immunodeficiency virus replication in macrophages from rhesus macaques | |
EA044566B1 (en) | METHODS FOR TREATING INFECTIONS USING BACTERIA | |
JP2017178890A (en) | Adjuvant for mucosal vaccine to activate innate immunity | |
Bıçakçı et al. | Hemophagocytosis in a case with Crimean-Congo hemorrhagic fever and an overview of possible pathogenesis with current evidence | |
Soriano-Torres et al. | Lithium salts as a treatment for COVID-19: Pre-clinical outcomes |