EA044244B1 - Средство для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных - Google Patents
Средство для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных Download PDFInfo
- Publication number
- EA044244B1 EA044244B1 EA202090163 EA044244B1 EA 044244 B1 EA044244 B1 EA 044244B1 EA 202090163 EA202090163 EA 202090163 EA 044244 B1 EA044244 B1 EA 044244B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- follicles
- female
- females
- mice
- drugs
- Prior art date
Links
- 208000007984 Female Infertility Diseases 0.000 title claims description 14
- 206010021928 Infertility female Diseases 0.000 title claims description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 title description 57
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title description 53
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title description 14
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 title description 3
- 230000036512 infertility Effects 0.000 title description 3
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 title description 3
- 238000002513 implantation Methods 0.000 claims description 14
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 41
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 27
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 19
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 description 19
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 17
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 description 17
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 description 17
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 15
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 15
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 12
- 230000006870 function Effects 0.000 description 12
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 11
- 238000011161 development Methods 0.000 description 11
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 11
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 10
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 10
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 10
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 9
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 230000034994 death Effects 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 210000004246 corpus luteum Anatomy 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 102000005525 fibrillarin Human genes 0.000 description 6
- 108020002231 fibrillarin Proteins 0.000 description 6
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 6
- 210000002503 granulosa cell Anatomy 0.000 description 6
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 5
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 4
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 4
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 4
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 4
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 3
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 3
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 description 3
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 3
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 3
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 3
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 3
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 3
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 3
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 3
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 3
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 3
- 230000027758 ovulation cycle Effects 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 3
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 3
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 3
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000004451 Pituitary Gonadotropins Human genes 0.000 description 2
- 108010081865 Pituitary Gonadotropins Proteins 0.000 description 2
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical compound C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020003224 Small Nucleolar RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000042773 Small Nucleolar RNA Human genes 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Natural products OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000004420 female germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 235000010855 food raising agent Nutrition 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000008173 hydrogenated soybean oil Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 2
- 230000032696 parturition Effects 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 230000007542 postnatal development Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 2
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940001584 sodium metabisulfite Drugs 0.000 description 2
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 2
- 238000011121 vaginal smear Methods 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 101710159080 Aconitate hydratase A Proteins 0.000 description 1
- 101710159078 Aconitate hydratase B Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 201000005670 Anovulation Diseases 0.000 description 1
- 206010002659 Anovulatory cycle Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 1
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 208000012239 Developmental disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 239000004131 EU approved raising agent Substances 0.000 description 1
- 208000009701 Embryo Loss Diseases 0.000 description 1
- 102000015212 Fas Ligand Protein Human genes 0.000 description 1
- 108010039471 Fas Ligand Protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 235000000177 Indigofera tinctoria Nutrition 0.000 description 1
- 238000001276 Kolmogorov–Smirnov test Methods 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000016397 Methyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 108091081045 Preribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 235000009827 Prunus armeniaca Nutrition 0.000 description 1
- 244000018633 Prunus armeniaca Species 0.000 description 1
- 102000044126 RNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 101710105008 RNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UHFFFAOYSA-N Rohrzucker Natural products OCC1OC(CO)(OC2OC(CO)C(O)C(O)C2O)C(O)C1O CZMRCDWAGMRECN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DPOPAJRDYZGTIR-UHFFFAOYSA-N Tetrazine Chemical compound C1=CN=NN=N1 DPOPAJRDYZGTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- SNAAJJQQZSMGQD-UHFFFAOYSA-N aluminum magnesium Chemical compound [Mg].[Al] SNAAJJQQZSMGQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 231100000552 anovulation Toxicity 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000009503 electrostatic coating Methods 0.000 description 1
- 231100000557 embryo loss Toxicity 0.000 description 1
- 230000008011 embryonic death Effects 0.000 description 1
- 210000005168 endometrial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 210000001733 follicular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003163 gonadal steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 230000001456 gonadotroph Effects 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 description 1
- 229940125697 hormonal agent Drugs 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 229940097275 indigo Drugs 0.000 description 1
- COHYTHOBJLSHDF-UHFFFAOYSA-N indigo powder Natural products N1C2=CC=CC=C2C(=O)C1=C1C(=O)C2=CC=CC=C2N1 COHYTHOBJLSHDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002747 omentum Anatomy 0.000 description 1
- 230000005868 ontogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000034004 oogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 208000015124 ovarian disease Diseases 0.000 description 1
- 201000004535 ovarian dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 231100000543 ovarian dysfunction Toxicity 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000010728 primary follicle stage Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003684 theca cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical class [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
Description
Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к медицинской и ветеринарной гинекологии, и может быть использовано для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных (далее для лечения женского бесплодия).
Примерно в 40% случаев неспособность супружеских пар зачать ребенка обусловлена бесплодием женщины. Основная причина женского бесплодия связана с нарушением фолликулогенеза.
Рост фолликулов в женском организме осуществляется в несколько этапов. В составе яичников по морфологическим признакам выделяют четыре типа фолликулов: примодиальные, первичные (преантральные), вторичные (антральные) третичные (предовуляторные). К периоду достижения половой зрелости основным типом фолликулов являются примордиальные, представляющие собой ооцит, окруженный одним неполным слоем плоских клеток, предшественников гранулезы. Примордиальные фолликулы образуются еще до рождения ребенка. Они формируются в процессе пролиферации первичных зародышевых клеток в зародышевом яичнике на ранней стадии беременности. В течение жизни женщины 400500 примордиальных фолликулов могут дойти до стадии овуляции, остальные из 200-450 тысяч фолликулов подвергаются атрезии. Редуцирование фолликулов посредством апоптоза может начаться на любой стадии их развития (Боярский К.Ю., Гайдуков С.Н. Молекулярные основы фолликулогенеза: от стадии больших антральных фолликулов до овуляции // Проблемы репродукции - 2010 - 5 - стр. 13-22). В процессе фолликулогенеза из примордиального образуется первичный фолликул, который представляет собой ооцит, окруженный одним полным слоем гранулезы. Факторы, обеспечивающие выход фолликулов из примордиального состояния неизвестны, но их рост на этой стадии при отсутствии развитой сети кровеносных сосудов в зоне роста не зависит от циркулирующих в крови гормонов и потому является гормонально-нечувствительным. В этот период рост фолликулов регулируется местными факторами. При этом ооцит играет ведущую роль в регуляции перехода от стадии примордиального фолликула к стадии первичного. Для такого перехода необходима экспрессия ооцитом факторов РФД-9 (ростового фактора дифференцировки 9-го типа (CDF-9) и костного морфогенетического фактора роста 15-го типа КМФ-15 (ВМР-15)).
При переходе примордиальных фолликулов в первичные увеличиваются размеры ооцита, фолликулярные клетки, окружающие ооцит, пролиферируют, увеличивается их число и размеры, однослойный эпителий становится многослойным. Скорость выхода фолликула из примордиального пула в течение жизни изменяется, увеличиваясь в постнатальном онтогенезе.
По мере увеличения растущего фолликула, окружающая его соединительная ткань уплотняется, давая начало образования внешней оболочке, так называемой теке. Эта стадия роста проходит в аваскулярной зоне яичника в условиях отсутствия гипофизарных гонадотропинов.
Переход фолликула в следующую фазу вторичного фолликула характеризуется значительным увеличением размеров ооцита и числа клеток гранулезы. Эта стадия роста фолликулов может проходить только в присутствии базальных уровней гипофизарных гонадотропинов, в первую очередь фолликулостимулирующий гормон (ФСГ). На этой стадии развития фолликула на клетках гранулезы выявляются рецепторы для ФСГ, а на клетках формирующейся теки обнаруживаются рецепторы для лютеинизирующего гормона (ЛГ) (Боярский К.Ю., Гайдуков С.Н., Чинчаладзе А.С. Факторы, определяющие овариальный резерв женщины // Журнал акушерства и женских болезней. - 2009 - т.58 - №2 - стр. 65-71). В стадии вторичного фолликула тека разделяется на внутреннюю и наружную части. В фолликуле образуется полость с фолликулярной жидкостью, которая содержит стероидные гормоны (эстрогены), гипофизарные гонадотропные факторы роста, ферменты, протеогликаны и другие биологически активные вещества, синтезируемые как местно в клетках гранулезы, теке и ооците, так и поступающих из кровотока. Во внутренней теке происходят процессы, обеспечивающие нейротрофику. В многослойном фолликулярном эпителии обособлена область, несущая половую клетку яйценосный бугорок.
Третий период роста фолликулогенеза является гормонально-зависимым. Третичные фолликулы (граафовы пузырьки) достигают своего максимального развития и характеризуются подготовкой фолликула к овуляции. Фолликул приобретает крупные формы, большую полость, заполненную жидкостью. Стенки фолликула истончаются. Клетки фолликулярного эпителия и теки интенсивно синтезируют половые гормоны, главным образом эстрадиол.
Эстрадиол необходим для осуществления процессов овуляции, а также для того, чтобы обеспечить пролиферацию клеток эндометрия. Повышенное содержание эстрадиола стимулирует выброс ЛГ, который и инициирует овуляцию. В стенке фолликула образуется выпячивание, которое разрывается и яйцеклетка выходит из фолликула. После овуляции на месте фолликула из гранулезы образуется желтое тело, вырабатывающее прогестерон.
Нарушение нормального фолликулогенеза может привести к снижению репродуктивного потенциала женщины. Применение гормональных средств влияет только на гормонозависимые стадии фолликулогенеза в то время как на начальные гормононезависимые этапы гормональные препараты не действуют.
Известно, что для стимуляции роста и созревания ооцитов на ранних стадиях предлагается использовать ростовой фактор дифференцировки 9-го типа (РФД-9, CDP-9, патент US 6660717 А61Р 15/08, опубл. 09.12.2003). Применение указанного фактора, как полагают авторы, обеспечивает эффективное
- 1 044244 развитие и созревание фолликулов и ооцитов и получение гамет высокого качества, необходимых для рождения здорового потомства. Помимо фактора РФД-9 предлагаемое средство рекомендуется дополнять гонадотропинами, в частности ФСГ. Недостатком указанного средства является его полипептидная природа. Для получения РДФ-9 требуется использование трудозатратной рекомбинантной технологии.
Кроме того применение гормональных средств может нарушить синтез эндогенных гормонов.
Технической проблемой, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является расширение арсенала средств, предназначенных для лечения женского бесплодия, для увеличения фертильности за счет негормонального стимулирования фолликулогенеза. Технический результат заключается в реализации предлагаемых средств, обеспечивающих лечение женского бесплодия за счет негормонального стимулирования фолликулогенеза, в улучшении качества гамет и появлении жизнестойкого потомства.
Для решения поставленной технической проблемы и достижения максимально возможного результата в настоящем изобретении предлагается применение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена в качестве средства для лечения женского бесплодия, стимулирующего фолликулогенез и способствующего имплантации эмбрионов в эндометрий матки.
Предлагается лекарственный препарат для лечения женского бесплодия, который содержит в качестве активного компонента 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в эффективном количестве или может содержать дополнительно β-циклодекстрин в соотношениях от 1:1 - до 1:10.
Активный компонент лекарственного препарата для лечения женского бесплодия 9-фенил-симмоктагидроселено-ксантен может быть представлен в виде клатратного комплекса с β-циклодекстрином.
Фармацевтическая композиция для лечения женского бесплодия в качестве активного компонента содержит 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен или может дополнительно содержать βциклодекстрин, либо 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен может быть представлен в виде клатратного комплекса с β-циклодекстрином.
Указанная фармацевтическая композиция может применяться в форме таблеток, с содержанием 9фенил-симм-октагидроселено-ксантена от 5 до 30%, а остальное - один или более наполнитель(и). При этом таблетки сформированы посредством прессовки или формовки.
Либо фармацевтическая композиция применяется в форме желатиновых капсул, при следующем соотношении компонентов:
9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен от 1 до 20%;
наполнитель(и) или носитель(и) остальное.
Фармацевтическая композиция может быть выполнена в виде растворов, эмульсий, суспензий и др., с содержанием 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена от 0,25 до 2%; остальное - наполнитель(и) или носитель(и).
Изобретение предлагается использовать в качестве средств для лечения женского бесплодия, увеличивающих фертильность, стимулирующих фолликулогенез, а также способствующих имплантации эмбрионов в эндометрий матки. Предлагаемое средство обеспечивает улучшение качества гамет и появление жизнестойкого потомства.
Сущность изобретения поясняется примерами конкретного выполнения, в которых:
препарат 1 - это фармацевтическая субстанция (ФС) с содержанием соединения 9-фенил-симмоктагидроселено-ксантен выше 99 мас.%;
препарат 2 - смесь соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен с β-циклодекстрином в соотношениях: от 2 до 10 мг 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена и от 188 до 180 мг βциклодекстрина, соответственно;
препарат 3 - клатратный комплекс β-циклодекстрина с 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантеном в соотношении 10:1, полученный стандартным способом (патент RU 2451680, C07D 345/00, опубл. 27.05.2012 г.).
Стимулирование фолликулогенеза у самок мышей линии BALB/c LacY и улучшение их репродуктивных функций под влиянием заявляемых средств для лечения женского бесплодия и увеличения фертильности продемонстрировано в двух независимых экспериментах. В настоящем изобретении, если не указано иное, концентрации представлены в мас.%.
Пример 1. Целью изучения влияния исследуемых препаратов на репродуктивные функции самок млекопитающих (на примере мышей линии BALB/c LacY) является оценка их способности влиять на содержание ранних (примордиальных и первичных) и апоптотических фолликулов в яичниках инбредных мышей линии BALB/c LacY после 4 недель их внутрижелудочного введения.
В работе использовали самок инбредных мышей линии BALB/c LacY, которые отличаются низкой плодовитостью. Дефект репродуктивной функции самок связан с высокой эмбриональной смертностью. Потери эмбрионов до имплантации составляют до 39,5%; общие эмбриональные потери от числа желтых тел - до 49,4%. В связи с этим мыши этой линии являются удобным объектом для оценки способности исследуемых препаратов влиять на репродуктивную функцию самок.
В эксперименте были использованы 20 половозрелых самок мышей с исходной массой 20-22 г. В
- 2 044244 начале эксперимента животные были разделены на 4 группы - контроль и 3 опытных по 5 особей в каждой. Поскольку при клиническом применении предполагается пероральный путь введения исследуемых препаратов, животным опытных групп средства вводили ежедневно интрагастрально в виде суспензии с водой, приготовленной ех tempore. Предлагаемые препараты вводили в течение 4 недель в дозе 0,4 мг на кг массы тела мышей по действующему веществу (9-фенил-симм-октагидроселено-ксантену). Животным контрольной группы в те же сроки ежедневно интрагастрально в виде суспензии с водой вводили соответствующие количества β-циклодекстрина.
В течение опыта ежедневно контролировали состояние животных и в начале и конце экспериментального периода проводили измерение их массы тела. В конце эксперимента мышей подвергали эвтаназии в СО2-камере, проводили аутопсию и выделяли яичники.
Использование замороженных гистологических срезов яичников млекопитающих, в отличие от других методов научного исследования, предоставляет уникальную возможность для изучения функционального состояния и развития женских половых клеток (ооцитов), а также других клеток, участвующих в этом процессе (таких как клетки гранулезы). В отличие от широко используемого пункционного метода выделения ооцитов из яичника, предлагаемый в настоящей работе подход позволяет исследовать женские половые клетки на ранних стадиях развития. Использование же парафиновых гистологических срезов яичников, предварительно обработанных различными видами фиксаторов, не позволяет в полной мере оценить состояние исследуемых клеток из-за эффекта маскирования некоторых антигенов, а также невозможности применения высокоинформативного метода иммунофлуоресценции.
Для извлечения яичников самку умерщвляют, кладут на живот и делают короткий разрез в дорзовентральном направлении слева или справа на 5 мм каудальнее нижних ребер (разрезают кожу и стенку брюшной полости). Пинцетом захватывают подушку сальника и вытаскивают наружу вместе с яичником, яйцеводом и верхним отделом матки. Под контролем стереомикроскопа (бинокуляра), используя микропинцет и маленькие ножницы, отделяют яичник от яйцевода, матки и жировой ткани. Яичник мыши имеет размер порядка 1-2 мм с заметными предовуляторными фолликулами величиной порядка 300500 мкм. Затем извлеченный яичник помещали в специальную форму и заливали в блоки при помощи замораживающего средства Neg-50 Frozen Section Medium (Richard-Allan Scientific, USA), имеющего в своем составе поливиниловый спирт и полиэтиленгликоль, и замораживали при -20°С. Данное средство препятствует образованию кубического льда и помогает замороженной ткани сохранять нативную структуру. Замораживающее средство является водорастворимым и никак не сказывается на фоновом окрашивании препарата. Затем готовые блоки монтировали на предметные столики криотома с использованием того же средства и изготавливали криосрезы.
Для изготовления замороженных срезов использовали специальный прибор микротом-криостат MICROM НМ 525 (Thermo Scientific, Germany), позволяющий получать срезы толщиной в диапазоне от 2 до 500 мкм. Прибор имеет модульную конструкцию с открывающейся наверх рабочей поверхностью и охлаждающую камеру из нержавеющей стали. Температура камеры регулируется от +5 до -30°С. Оптимальная температура для производства срезов зависит от соответствующих свойств ткани, особенно от содержания жира. Учитывая предварительную очистку яичников от жира и тот факт, что яичники являются органами с небольшим его содержанием, нами была выбрана оптимальная температура для производства срезов -20°С.
Замороженный блок закрепляли на держателе образца, с помощью соответствующих кнопок на панели управления выбирали необходимую толщину срезов (5 мкм) и изготавливали срезы путем поворота маховика по часовой стрелке. При этом полученный срез сдвигается в щель между верхней стороной ножа и антироллерной пластиной, откуда, откинув антироллер, срез можно перенести на подготовленное чистое предметное стекло (Superfrost Plus Gold Adhesion Slides, Fisher Scientific, Germany), используя кисточку или производя отпечаток. Электростатическое покрытие этих стекол обеспечивает высокую адгезию замороженных срезов ткани, позволяя сохранить срезы на стеклах в процессе окрашивания препаратов, а также избежать образования артефактов из-за способности данных предметных стекол иммобилизовывать ядерные и цитоплазматические компоненты тканей.
Предметные стекла с прикрепленными срезами хранили при -80°С до момента использования.
Для изучения препаратов криосрезов яичников использовали флуоресцентный микроскоп Axiovert 200 (Carl Zeiss, Germany), используя объектив Plan-NEOFLUAR 40х/0,75 и соответствующие наборы фильтров. Изображения записывали с помощью 13-битной монохромной камеры CoolSnapcf (RoperScientific, USA).
Подсчет фолликулов производили на криосрезах яичников животных контрольной и опытных групп после иммуногистохимического окрашивания. Количество проанализированных криосрезов зависело от индивидуального размера органа и состояния ткани после замораживания. Учитывались только тщательно расправленные срезы, с ровными краями и равномерно прокрашенные по всей площади среза.
Для статистической обработки посчитано среднее количество фолликулов (М) на срез для каждой мыши и затем для каждой группы. Для полученных значений контрольной и опытных групп (из 5 мышей каждая) найдена стандартная ошибка (m). Достоверность различий между группами оценивалась с по
- 3 044244 мощью t-критерия Стьюдента.
Идентификацию ранних фолликулов в яичниках проводили после окрашивания криосрезов хроматиновым красителем DAPI и кроличьими моноклональными антителами к белку фибрилларину. Фибрилларин (34-36 кДа) является основным белковым компонентном U3, U8 и U13 малых ядрышковых рибонуклеопротеиновых гранул (мякРНП) и локализуется в фибриллярном центре и плотном фибриллярном компоненте ядрышка. Фибрилларин обладает высокой степенью эволюционной консервативности и его основные функции связаны с процессингом пре-рибосомальной РНК (пре-рРНК) и ее химическими модификациями. Белок содержит три основных структурных домена, включая GAR домен, обогащенный остатками глицина и аргинина, РНК-связывающий домен и область с доминирующей αспиральной вторичной структурой, обладающей метилтрансферазной активностью. Таким образом, фибрилларин является РНК-связывающим белком ядрышка, участвующим в ранних стадиях процессинга рибосомальной РНК (рРНК).
Показано, что количественное содержание фибрилларина коррелирует с транскрипционной активностью РНК-полимеразы, скоростью клеточного деления и размером ядрышек, что говорит о том, что иммуноцитохимическое выявление этого белка может быть использовано для оценки общего уровня клеточного метаболизма.
Иммуногистохимическое окрашивание ткани яичников является маркерной реакцией, позволяющей выявлять на криосрезах ооциты различной степени зрелости. Размер ядрышек ооцитов, выявляемых антителами к фибрилларину, сильно превышает таковой у гранулезных, стромальных и других окружающих клеток. В ооцитах в составе примордиальных и первичных фолликулов выявляется, как правило, два ядрышка. Их размер приближается к 5 мкм, что в сочетании со специфической морфологией данных типов фолликулов позволяет безошибочно их идентифицировать (фиг. 1 и 2).
Нами было проанализировано от 23 до 58 криосрезов яичников от каждого животного контрольной и опытных групп. Результаты подсчета количества примордиальных и первичных фолликулов представлены в табл. 2 и на фиг. 1, 2. Динамика изменения массы тела подопытных мышей приведена в табл. 1.
Таблица 1
Динамика изменения массы тела мышей при месячном внутрижелудочном введении предлагаемых препаратов
| Группы животных | Периоды наблюдения | |
| До введения препаратов | Через 4 недели (после курса введения препаратов) | |
| Препарат 1 | 20,4±0,12 | 21,9±0,18 |
| Препарат 2 | 20,3 ±0,23 | 22,0±0,19 |
| Препарат 3 | 20,1±0,10 | 22,4±0,20 |
| Контроль | 20,8±0,21 | 21,7±0,19 |
Таблица 2
Количество примордиальных и первичных фолликулов
| Группы | Номера мышей | Количество срезов | Количество фолликулов на срез, М±ш |
| Препарат 1 | 1 | 44 | 8,23±0,35 |
| 2 | 23 | 4,98±0,51 | |
| 3 | 37 | 2,11±0,22 | |
| 4 | 34 | 6,02±0,28 | |
| 5 | 41 | 4,24±0,19 | |
| Всего на группу: | 179 | 5,12±0,20* | |
| Препарат 2 | 6 | 31 | 6,32±0,22 |
| 7 | 49 | 5,61±0,65 | |
| 8 | 36 | 3,41±0,51 | |
| 9 | 35 | 2,52±0,34 | |
| 10 | 40 | 7,05±0,25 | |
| Всего на группу: | 191 | 4,94±0,29* | |
| Препарат 3 | 11 | 48 | 1,25±0,28 |
| 12 | 28 | 5,61±0,65 | |
| 13 | 41 | 8,56±0,51 | |
| 14 | 30 | 6,20±0,39 | |
| 15 | 39 | 2,03±0,19 | |
| Всего на группу: | 186 | 4,76±0,35* | |
| Контроль | 16 | 58 | 2,84±0,30 |
| 17 | 52 | 7,40±0,41 | |
| 18 | 50 | 11,08±0,55 | |
| 19 | 41 | 3,41±0,36 | |
| 20 | 40 | 4,85±0,36 | |
| Всего на группу: | 241 | 5,97±0,27 | |
| Примечание: *Отличия от группы контроля достоверны по t-критерию, р<0,05 |
- 4 044244
Статистическая обработка полученных результатов показала, что количество примордиальных и первичных фолликулов достоверно меньше у мышей, получавших исследуемые препараты по сравнению с контролем. Полученный результат может свидетельствовать о том, что предлагаемые препараты стимулируют фолликулогенез, и к моменту приготовления срезов яичников большая часть созревающих фолликулов уже прошла стадию первичных фолликулов и достигла более поздних стадий развития, не учитываемых в данном эксперименте.
Выявление апоптотических фолликулов на криосрезах яичников.
Идентификацию фолликулов с большим количеством апоптотических клеток в яичниках проводили после окрашивания криосрезов хроматиновым красителем DAPI и кроличьими моноклональными антителами к активной форме каспазы-3.
Каспаза-3 - фермент, индуцируемый прогестероном, является компонентом проведения сигнала рецепторной системы Fas/FasL, которой отводится роль в реализации апоптоза, в частности в клетках ткани яичника. Согласно литературным данным в яичниках позвоночных апоптоз опосредуется именно каспазами, благодаря чему обеспечивается удаление избыточных или нежизнеспособных зародышевых и гранулезных клеток, при этом чрезмерность апоптоза и атрезия фолликулов могут отрицательно влиять на фертильность. Нарушения апоптоза вовлечены также в патогенез хронической ановуляции и овариальной дисфункции. Перспективной задачей научных исследований на сегодняшний день является изучение возможности медикаментозного влияния на апоптоз с целью коррекции патологических изменений в женской половой железе, а также возможности повышения положительных исходов программ ЭКО.
Таким образом, иммуногистохимическое окрашивание криосрезов яичников антителами к каспазе-3 является подходящей маркерной реакцией для выяснения возможного влияния исследуемых препаратов на выживаемость прогениторных клеток яичников.
В ходе эксперимента было проанализировано от 23 до 58 криосрезов яичников от каждого животного контрольного и опытных групп. Результаты подсчета количества апоптотических фолликулов представлены в табл. 3.
Результаты проведенных исследований показали, что количество апоптотических фолликулов достоверно больше у мышей, получавших исследуемые препараты в течение 1 месяца по сравнению с контролем. Увеличение количества апоптотических фолликулов может отражать атрезию излишка фолликулов, приступивших к созреванию в ответ на применение предлагаемых препаратов, поскольку в организме млекопитающих, в том числе, человека и мыши, функционируют естественные механизмы, ограничивающие количество формирующихся зрелых яйцеклеток до физиологической нормы.
Таблица 3
Количество апоптотических фолликулов
| Группы | Номера мышей | Количество срезов | Количество фолликулов на срез, М+ш |
| Препарат 1 | 1 | 44 | 1,68+0,19 |
| 2 | 23 | 4,95+0,18 | |
| 3 | 37 | 4,07+0,29 | |
| 4 | 34 | 4,62+0,29 | |
| 5 | 41 | 1,95+0,13 | |
| Всего на группу: | 179 | 3,52+0,14*# | |
| Препарат 2 | 6 | 31 | 3,01+0,17 |
| 7 | 49 | 2,87+0,16 | |
| 8 | 36 | 3,78+0,25 | |
| 9 | 35 | 4,77+0,32 | |
| 10 | 40 | 5,12+0,10 | |
| Всего на группу: | 191 | 3,88+0,18*# | |
| Препарат 3 | 11 | 48 | 5,23+0,25 |
| 12 | 28 | 3,13+0,20 | |
| 13 | 41 | 4,91+0,32 | |
| 14 | 30 | 4,88+0,24 | |
| 15 | 39 | 3,46+0,15 | |
| Всего на группу: | 186 | 4,39+0,24*# | |
| Контроль | 16 | 58 | 4,28+0,26 |
| 17 | 52 | 3,65+0,31 | |
| 18 | 50 | 1,33+0,09 | |
| 19 | 41 | 2,85+0,22 | |
| 20 | 40 | 2,36+0,15 | |
| Всего на группу: | 241 | 2,91+0,12 | |
| Примечание: * Отличия от группы контроля достоверны по t-критерию, р<0,001 # Отличия достоверны по критерию Колмогорова-Смирнова, р<0,05 |
При применении предлагаемых препаратов в дозе 0,4 мг/кг ежедневно в течение 4 недель, у самок мышей линии BALB/c LacY, характеризующихся низкой плодовитостью, связанной с высокой эмбриональной гибелью потомства, предположительно, из-за плохого качества родительских гамет, в яичниках
- 5 044244 отмечается снижение количества ранних фолликулов (примордиальных и первичных) и увеличение числа фолликулов, претерпевающих атрезию (апоптических фолликулов).
Известно, что с каждым менструальным циклом общее количество фолликулов в яичнике уменьшается, и при их исчезновении наступает менопауза [Richardson S. et al. Follicular depletion during the menopausal transition: evidence for accelerated loss and ultimate exhaustion// Jour.Clin.Endocr.Metab. - 1987.-Vol. 65. - p. 1231 - 1237; Боярский К.Ю., Гайдуков С.Н., Чинчаладзе А.С. Факторы, определяющие овариальный резерв женщины // Журнал акушерства и женских болезней. - 2009 - т.58 -№2 - стр. 65-71]. При этом чем интенсивнее происходит фолликулогенез, тем быстрее истощается овариальный резерв (ОР), отражающий остаточное количество находящихся в яичниках фолликулов (примордиальный пул и растущие фолликулы) (Боярский и др., 2009). Поскольку скорость снижения количества примордиальных и первичных (ранних) фолликулов коррелирует с интенсивностью фолликулогенеза, наблюдаемое в данном эксперименте уменьшение их числа относительно контроля может свидетельствовать об усилении процессов образования фолликулов у животных, получавших предлагаемые препараты. В пользу данного утверждения свидетельствует и выявленное увеличение количества апоптических фолликулов, которое связано с известными, функционирующими в организме естественными механизмами, контролирующими число образующихся яйцеклеток [Боярский К.Ю., Гайдуков С.Н. Молекулярные основы фолликулогенеза: от стадии больших антральных фолликулов до овуляции // Проблемы репродукции - 2010 - 5 стр. 13-22; Зенкина В.Г. Значение апоптоза в яичниках при развитии некоторых заболеваний репродуктивной системы// Фундаментальные исследования №6, 2011, с. 227-230]. Из большого числа активизирующихся примордиальных фолликулов, приступивших к дифференцировке, до овуляции доходит только небольшое количество доминантных фолликулов, количество которых, как и, соответственно, число рождающихся впоследствии детёнышей, отличается у разных видов. Например, у человека обычно созревает по 1 яйцеклетке в каждом цикле, у других млекопитающих количество созревающих яйцеклеток больше (в среднем, около 4-8 яйцеклеток у мыши, около 6 - у кошек и т.д.). Остальные созревающие фолликулы, отстающие в развитии от доминантных, претерпевают атрезию - останавливаются в развитии на разных стадиях и гибнут путем апоптоза [Боярский К.Ю., Гайдуков С.Н. Молекулярные основы фолликулогенеза: от стадии больших антральных фолликулов до овуляции // Проблемы репродукции 2010 - 5 - стр. 13-22; Зенкина В.Г. Значение апоптоза в яичниках при развитии некоторых заболеваний репродуктивной системы// Фундаментальные исследования №6, 2011. с.227-230; Березовкая Е.П. Гормонотерапия в акушерстве и гинекологии: иллюзии и реальность// 2014]. Следовательно, чем больше фолликулов вступают на путь дифференцировки, тем больше их погибнет путем атрезии, при относительно неизменном количестве образующихся зрелых яйцеклеток. Таким образом, увеличение числа апоптических фолликулов в совокупности с общим снижением количества оставшихся ранних фолликулов, наблюдаемое на фоне применения предлагаемых препаратов, может отражать повышение интенсивности фолликулогенеза, связанное с увеличением количества фолликулов, вышедших из состояния покоя и приступивших к созреванию. В этой ситуации, реализация естественных процессов в организме, контролирующих количество образующихся зрелых яйцеклеток, функционирует как фактор их естественного отбора, и образования, впоследствии, наиболее здорового потомства.
Пример 2. Целью данного исследования была оценка влияния исследуемых препаратов на репродуктивную функцию мышей при их введении одному полу (самкам).
Исследования проводили на 60 самцах и 120 самках мышей линии BALB/c LacY с исходной массой тела 20-25 г. Предлагаемые препараты в виде суспензии с водой, приготовленной ex tempore, вводили самкам мышей опытных групп ежедневно интрагастрально в течение 2-х недель в дозе 0,4 мг на кг массы тела. Самок разделили на 4 подгруппы: контрольную (n=30) и 3 опытные группы по 30 особей (n=90). Самкам опытных групп ежедневно в течение 2-х недель (3-4 эстральных циклов) внутрижелудочно вводили предлагаемые препараты, а самкам контрольной группы - β-циклодекстрин 0,4 мг на кг массы тела. Группа самцов, состоящая из 60 животных в течение 6 недель (2-3 цикла созревания сперматозоидов) получали соответствующее количество β-циклодекстрина. Исследуемые препараты вводили в 10 ч 1 раз в сутки. После введения изучаемых препаратов формировали следующие группы животных:
группа А: к 15 контрольным самцам были подсажены 30 контрольных самок (контроль);
группа Б: к 15 контрольным самцам были подсажены 30 опытных самок (препарат 1);
группа В: к 15 контрольным самцам были подсажены 30 опытных самок (препарат 2);
группа Г: к 15 контрольным самцам были подсажены 30 опытных самок (препарат 3).
Во всех исследуемых группах самок в течение двух эстральных циклов просматривали вагинальные мазки, отмечали стадии проэкструс, экструс и диэкструс. Обнаружение в вагинальных мазках сперматозоидов считали первым днем наступления беременности. По истечению 10 суток из самок в каждой из четырех групп формировали по две подгруппы (А1 и А2, Б1 и Б2, В1 и В2, Г1 и Г2). В каждой группе первые подгруппы самок (А1, Б1, В1 и Г1) вскрывали на 20 день беременности, подсчитывали число
- 6 044244 плодов, резорбций, мест имплантаций в полости матки, желтых тел в яичниках. На основании полученных данных по нижеуказанным формулам рассчитывали показатели предимплантационной и постимплантационной гибели и индексов плодовитости и беременности.
тт кол-во оплодотворенных самок
Индекс плодовитости =--100 % кол - во ссаженных самок тт _ кол-во беременныхсамок
Индекс беременности =-----------*--100% кол - во оплодотворенныхсамок π число желтых тел - число мест имплангаци и , ...
Предимплантационная гибель =--100 % число желтых тел π _ числоместимплантацьи - числоживыхплодов
Постимплангационная гибель =--100% число мест имплантации
При осмотре плодов регистрировали патологические изменения (подкожные кровоизлияния и отек подкожной клетчатки, нарушения развития скелета, глазных яблок).
Вторые подгруппы беременных самок оставляли на роды, фиксировали дату родов, количество мышат в помете, массу тела новорожденных мышат. На 21 день со дня родов вычисляли процент выживаемости, отмечали общий и средний вес мышат, оценивали показатель постнатальной смертности.
_ число мышей в помете через 3 недели ........
Постнатальная смертность--------------------------100% число новорождежых в помете
Для статистической обработки данных использовали стандартные методы, приведённые в руководстве В.Ю. Урбаха Биометрические методы и пакетах программ Excel 2003 и SigmaStat 3.0.
Результаты исследований влияния предлагаемых препаратов на плодовитость мышей линии BALB/c LacY свидетельствуют о том, что эти животные в контроле имеют низкую плодовитость и только у 50% оплодотворённых самок наступает беременность (табл. 4, гр. А). Повышение индекса беременности до 67,9% наблюдалось в группах, в которых самки принимали исследуемые препараты (группы Б, В и Г).
Таблица 4
Влияние изучаемых препаратов на показатели плодовитости мышей-самок линии BALB/c LacY
| Исследуемые показатели | Группы мышей-самок | |||
| А | Б | В | Г | |
| Число ссаженных самок в группе | 30 | 30 | 30 | 30 |
| Число оплодотворенных самок в группе | 24 | 25 | 26 | 28 |
| Индекс плодовитости, % | 80 | 83 | 87 | 93 |
| Число беременных самок в группе | 12 | 15 | 16 | 19 |
| Индекс беременности, % | 50,0 | 60,0 | 61,5 | 67,9 |
В табл. 5 приведены данные, полученные при анализе вскрытых на 20-й день беременности самок, по следующим показателям репродуктивной функции: количество желтых тел, мест имплантации и живых плодов. Эти данные позволяют рассчитать по приведенным выше формулам предимплантационный и постимплантационный типы гибели зародышей мышей контрольной и опытных групп.
Полученные результаты (табл. 5) показали, что введение предлагаемых препаратов самкам (группы Б1, В1 и Г1) снижает предимплантационную и постимплантационную гибель зародышей.
Таблица 5
Влияние предлагаемых препаратов на репродуктивную функцию мышей-самок линии BALB/c LacY, вскрытых на 20-й день беременности
| Исследуемые показатели | Группы мышей-самок | |||
| А1 | Б1 | В1 | Г1 | |
| Число анализируемых самок | 12 | 12 | 13 | 14 |
| Число беременных самок | 6 | 7 | 8 | 9 |
| Число желтых тел | 28 | 36 | 39 | 42 |
| Число мест имплантации | 17 | 29 | 33 | 36 |
| Число живых плодов | 11 | 24 | 28 | 32 |
| Число погибших плодов | 6 | 5 | 5 | 4 |
| Предимплантационная гибель, % | 39,3 | 19,4 | 17,9 | 14,3 |
| Постимплантационная гибель, % | 35,3 | 17,2 | 15,2 | п,1 |
Приведенные в табл. 6 данные свидетельствуют о том, что введение мышам-самкам предлагаемых препаратов увеличивает по сравнению с контролем число и процент рожающих самок (табл. 6, группы Б2, В2 и Г2).
Увеличение числа рожающих самок соответствует увеличению числа пометов, что повышает об- 7 044244 щую численность мышат в анализируемых группах. Исследование постнатального развития родившегося потомства мышей линии BALB/c LacY показало, что введение самкам (табл. 7, группы Б2, В2 и Г2) предлагаемых препаратов увеличивает по сравнению с контролем общее число новорожденных мышат, из которых от 85,2 до 90,0% доживают до 3-недельного возраста.
Таблица 6
Влияние предлагаемых препаратов на показатели родовой активности мышей-самок линии BALB/c LacY
| Исследуемые показатели | Группы мышей-самок | |||
| А2 | Б2 | В2 | Г2 | |
| Число самок в группах | 12 | 13 | 13 | 14 |
| Число оплодотворенных самок в группах | 12 | 13 | 13 | 14 |
| Число и процент оплодотворенных самок, принесших потомство | 6 (50,0 %) | 8 (61,5 %) | 8 (61,5 %) | 10 (71,4%) |
Таблица 7
Влияние предлагаемых препаратов на показатели постнатального развития мышат линии BALB/c LacY
| Исследуемые показатели | Группы животных | |||
| А2 | Б2 | В2 | Г2 | |
| Общее число мышат, рожденных самками в анализируемых группах | 36 | 54 | 55 | 70 |
| Среднее число новорожденных мышат в помете | 6,0±0,30 | 6,8±0,24* | 6,9±0,26* | 7,0±0,33* |
| Средняя масса новорожденных мышонка в помете, г | 0,98±0,10 | 1,26±0,13* | 1,35±0,15* | 1,47±0,19* |
| Число и процент мышат, доживших до 3-недельного возраста | 26 (72,2%) | 46 (85,2%) | 48 (87,3%) | 63 (90,0%) |
| Средняя масса одного мышонка через 3 недели после рождения, г | 10,3±0,35 | 12,1±0,47* | 12,8±0,65* | 13,2±0,98* |
* Отличия от группы контроля достоверны по t-критерию, р<0,05.
Также была проведена оценка изменения массы тела новорожденных мышат, родившихся от самок, которым вводили предлагаемые препараты. Полученные результаты показали, что по росту и развитию новорожденные мышата, рожденные от самок опытных групп (табл. 7, группы Б2, В2 и Г2) достоверно опережали своих сверстников из контроля (табл. 7, группа А2).
Проведённые нами исследования показали, что у мышей линии BALB/c LacY имеются некоторые нарушения репродуктивной функции, связанные с деторождением беременных самок и рождением жизнеспособного потомства.
Для повышения репродуктивной способности женских особей предлагаются препараты, представляющие собой 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен, его смесь и клатратный комплекс с βциклодекстрином, которые обеспечивают стимулирование детородной функции, плодовитости самок и жизнеспособности рождённого потомства.
Следует отметить, что в примерах 1 и 2 препарат 2, представляющий смесь соединения 9-фенилсимм-октагидроселено-ксантен с β-циклодекстрином исследовался в соотношении 2 мг к 188 мг βциклодекстрина, соответственно. При этом соотношении 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена с βциклодекстрином отмечено стимулирование детородной функции, плодовитости самок и жизнеспособности рождённого потомства. Аналогичные результаты были получены при введении мышам-самкам препарата 2 в других предложенных соотношениях.
Применение предлагаемых препаратов в дозе 0,4 мг/кг ежедневно в течение 4 недель, у самок мышей линии BALB/c LacY, приводит к увеличению количества апоптических фолликулов (атрезию) в совокупности с уменьшением остаточного количества ранних фолликулов. Полученные результаты примера 1 согласуются с результатами, приведенными в примере 2, об общем положительном влиянии предлагаемых препаратов на репродуктивные показатели самок и качество полученного потомства, и свидетельствуют о более высокой интенсивности фолликулогенеза у животных, получающих изучаемые вещества. При этом предлагаемые препараты не нарушают естественные процессы в организме, контролирующие количество образующихся зрелых яйцеклеток. В данной ситуации, при большем числе фолликулов, вступивших на путь дифференцировки, большее их количество претерпевают атрезию при относительно неизменном числе образующихся зрелых яйцеклеток. Этот комплекс естественных физиологических процессов предполагает, что в оогенезе образуется пул жизнеспособных яйцеклеток, при оплодотворении которых формируется здоровое потомство.
Таким образом, проведенные исследования позволяют сделать вывод о том, что предлагаемые препараты оказывают положительное влияние на репродуктивную функцию женских особей, в значительной мере связанное со стимулированием у них фолликулогенеза.
- 8 044244
Предлагаемые препараты расширяют арсенал средств, предназначенных в гинекологии для лечения женского бесплодия за счет негормонального стимулирования фолликулогенеза.
Примеры твердых лекарственных форм включают, например, таблетки, пилюли, желатиновые капсулы и др.
Примеры жидких лекарственных форм для инъекций и парентерального введения включают растворы, эмульсии, суспензии и др. Композиции, как правило, получают с помощью стандартных процедур, предусматривающих смешение активного соединения с жидким или тонко измельченным твердым носителем.
Композиции согласно изобретению в форме таблеток содержат от 5 до 30 % активного соединения и наполнитель(и) или носитель(и). В качестве таковых для таблеток применяются: а) разбавители: свекловичный сахар, лактоза, глюкоза, натрия хлорид, сорбит, маннит, гликоль, фосфат кальция двузамещенный; б) связующие вещества: магниевый силикат алюминия, крахмальная паста, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза и поливинил пиррол и дон; в) разрыхлители: декстроза, агар, альгиновая кислота или ее соли, крахмал, твин.
Пример
100 мг таблетки, содержащие по 2 мг 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена
| 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен 2 мг | |
| Лактоза | 53,0 мг |
| Альгиновая кислота | 20,0 мг |
| Лимонная кислота | 5,0 мг |
| Трагакант | 20,0 мг |
Таблетка может быть сформирована посредством прессовки или формовки активного ингредиента с одним или более дополнительными ингредиентами. Получение прессованных таблеток осуществляется на специальной установке. Активный ингредиент в свободной форме, такой, как порошок или гранулы, в количестве 20 г (количество вещества, необходимое для получения 10000 таблеток) перемешивается со связующим веществом - трагакантом (200 г), смешивается с разбавителем - лактозой (530 г), в смесь добавляется разрыхляющее вещество - альгиновая кислота (200 г) и отдушка - лимонная кислота (50 г).
Для желатиновых капсул обычно используются дополнительно красители и стабилизаторы. В качестве красителей применяются: тетразин, индиго; в качестве стабилизаторов могут быть представлены: натрия метабисульфит, натрия бензоат. Предлагаемые желатиновые капсулы содержат от 1 до 20% активного ингредиента.
Пример.
капсула 5 мг содержит:
активное вещество:
9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен - 5 мг в пересчете на безводное вещество;
вспомогательные вещества:
бетадекс (β-циклодекстрин) до массы содержимого 190 мг.
Капсулы твердые желатиновые:
желатин;
титана диоксид (Е171).
Активный ингредиент в свободной форме, такой, как порошок или гранулы, в количестве 50 г (количество вещества, необходимое для получения 10000 таблеток) перемешивается с веществом бетадекс (1850 г).
Инъекционные формы композиции предпочтительно представляют собой изотонические и масляные растворы, суспензии. Вышеуказанные формы могут стерилизоваться и содержать добавки, такие как консерванты: натрия метабисульфит, бензойная кислота, натрия бензоат, смесь метилпарабена и пропилпарабена; стабилизаторы: абрикосовая и аравийская камедь, декстрин, крахмальный клейстер, метилцеллюлоза, твин; соли, регулирующие осмотическое давление (хлорид натрия), или буферы. Кроме того, они могут содержать другие терапевтически полезные вещества.
Пример.
мл ампулы, содержащие по 1 мг 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена:
9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен 1,0 мг;
соевое масло гидрированное 2 мл.
Для приготовления инъекционных форм активное соединения (1 г; количество, необходимое для изготовления 1000 ампул) тонко измельчают и смешивают в смесителе с соевым маслом гидрированным (2000 мл). Полученный раствор фасуют в ампулы по 2 мл и стерилизуют паром в течение 30 мин.
Назначаемая для приема доза активного компонента (9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена формулы 1 или его смеси с β-циклодекстрином или клатратного комплекса с β-циклодекстрином) варьирует в зависимости от многих факторов, таких как возраст, пол, масса тела пациента, симптомы и тяжесть заболевания, конкретно назначаемое соединение, способ приема, форма препарата, в виде которой назначается активное соединение. Обычно, общая назначаемая доза составляет от 0,5 до 20 мг в день.
- 9 044244
Общая доза может быть разделена на несколько доз, например, для приема от 1 до 4 раз в день. При оральном назначении интервал общих доз активного вещества составляет от 0,5 до 20 мг в день, предпочтительно, от 1 до 10 мг. При парентеральном приеме интервал назначаемых доз составляет от 0,1 до 5 мг в день, предпочтительно, от 0,5 до 2 мг. Эффективная терапевтическая доза препарата может быть выбрана лечащим врачом.
Claims (1)
- Применение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена в качестве средства для лечения женского бесплодия, стимулирующего фолликулогенез и способствующего имплантации эмбрионов в эндометрий матки.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017122775 | 2017-06-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA044244B1 true EA044244B1 (ru) | 2023-08-04 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kuijsters et al. | Uterine peristalsis and fertility: current knowledge and future perspectives: a review and meta-analysis | |
| Melo et al. | Treatment of infertility in women with polycystic ovary syndrome: approach to clinical practice | |
| Eftekhar et al. | The thin endometrium in assisted reproductive technology: An ongoing challenge | |
| Mouhayar et al. | Modern management of thin lining | |
| JP6858130B2 (ja) | 生殖補助医療を受けている女性における着床及び妊娠のための黄体期のオキシトシン受容体アンタゴニスト療法 | |
| EA031017B1 (ru) | Способ поддержания или замещения фазы жёлтого тела | |
| Ghaffari et al. | Hysteroscopic polypectomy without cycle cancellation in IVF/ICSI cycles: a cross-sectional study | |
| Brasil et al. | Superovulatory and embryo yielding in sheep using increased exposure time to progesterone associated with a GnRH agonist | |
| Xu et al. | Comparison of vaginal progesterone gel combined with oral dydrogesterone versus intramuscular progesterone for luteal support in hormone replacement therapy-frozen embryo transfer cycle | |
| Dunne et al. | Growth hormone supplementation in the luteal phase before microdose GnRH agonist flare protocol for in vitro fertilization | |
| Xie et al. | Artificial cycle with or without a depot gonadotropin-releasing hormone agonist for frozen-thawed embryo transfer: an assessment of infertility type that is most suitable | |
| EP1879572B1 (en) | Use of antagonists of oxytocin and/or vasopressin in assisted reproduction | |
| Khan et al. | Matched-samples comparison of intramuscular versus vaginal progesterone for luteal phase support after in vitro fertilization and embryo transfer | |
| Bandera et al. | Fertility therapy in the setting of a history of invasive epithelial ovarian cancer | |
| Zafardoust et al. | Intraovarian administration of autologous menstrual blood derived-mesenchymal stromal cells in women with premature ovarian failure | |
| CN111655245A (zh) | 提高患有多囊卵巢综合征的雌性受试者的胚胎着床率的方法 | |
| Fukuda et al. | Administering human chorionic gonadotropin injections for triggering follicle maturation could impact fertility during the subsequent menstrual cycle | |
| RU2740922C2 (ru) | Средство для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных | |
| Alper | Treatment options: III. In vitro fertilization | |
| EA044244B1 (ru) | Средство для лечения женского бесплодия и бесплодия самок животных | |
| Mustafa et al. | Physiological and hormonal study of women infertility | |
| Maughan et al. | The acupuncture treatment of female infertility-with particular reference to egg quality and endometrial receptiveness | |
| CN108542907B (zh) | 一种茯苓酸或茯苓酸衍生物用于制备治疗多囊卵巢综合症药物的应用及药物制剂 | |
| Timiadis | Clinical Aspects of Embryo Implantation | |
| Ibrohimovna | Morphofunctional changes of sterno-costal junctions of Experimental Diabetes mellitus |