EA042129B1 - Применение ингибиторов ил-8 в лечении периферической нейропатии, вызванной химиотерапией - Google Patents

Description

Область техники

Данное изобретение касается применения ингибиторов ИЛ-8 в профилактике или лечении вызванной химиотерапией периферической нейропатии и в особенности связанной с этим аллодинии.

Предпосылки изобретения

Химиотерапию часто связывают с нейротоксическими побочными эффектами, которые составляют главные дозолимитирующие факторы для этого лечения. В частности, химиотерапия, как установлено, вызывает периферическую нейропатию, а также глазные осложнения, как, например, оптическую нейропатию.

Постхимиотерапевтическая периферическая нейропатия (ПХПН) указывает на дозолимитирующий нейротоксический эффект, который химиотерапия оказывает на периферические нервы. Множество различных симптомов связаны с ПХПН: гипералгезия, аллодиния, спонтанные ощущения, такие как жар, боль, нечувствительность, спазм и зуд. В частности, несмотря на то, что проявление некоторых симптомов, вызванных нейротоксичностью химиотерапевтических агентов, отличается у разных пациентов, общее сенсорное расстройство, приводящее к болезненной парестезии, характерно для состояния всех пациентов.

ПХПН встречается у примерно 60% онкопациентов (Windebank et al., J Peripher Nerv Syst 2008; 13:27-46) и может привести к появлению дозолимитирующего эффекта и даже к прекращению лечения, оказывая, таким образом, решающее влияние на выживаемость пациентов (Mielke et al., Eur J Cancer 2006; 42:24-30). Широкий спектр офтальмологических осложнений, вызванных цитостатической химиотерапией, включает обратимые и необратимые острые и хронические заболевания. Данные глазные осложнения, от легких до средней тяжести, очень распространены и обратимы после прекращения противораковой терапии. Некоторые основные глазные токсические эффекты могут потребовать сокращения дозы или прекращения цитостатической химиотерапии, чтобы предотвратить потерю зрения. Среди глазных осложнений постхимиотерапевтическая оптическая нейропатия наблюдается совместно с повышенным внутричерепным давлением из-за предшествующей ишемической оптической нейропатии, связанной с использованием некоторых химиотерапевтических агентов.

В частности, химиотерапевтические агенты, которые обычно связывают с началом развития нейропатии, включают препараты платины, например цисплатин, карбоплатин и оксалиплатин; таксаны, например паклитаксел, кабазитаксел и доцетаксел; эпотилоны, например иксабепилон; растительные алкалоиды, например винбластин, винкристин, винорелбин и этопозид; талидомид, леналидомид и помалидомид; карфилзомиб и бортезомиб; эрибулин (Brewer et al., Gynecologic Oncology 2016; 140:176-83). Несмотря на то, что множество подходов в нейропротекторном лечении было исследовано как в экспериментальных исследованиях, так и в клинических испытаниях, на данный момент отсутствует какая-либо доступная профилактическая стратегия или программа эффективного лечения ПХПН или постхимиотерапевтической оптической нейропатии, также поскольку их этиология еще не полностью выяснена.

Были предложены множественные механизмы, лежащие в основе начала и развития нейропатии.

Некоторые данные свидетельствуют о том, что воспалительные цитокины/хемокины и, в особенности TNF-α, IL-1e, IL-6 и CCL2 могут играть роль в проявлении постхимиотерапевтических болевых симптомов ПХПН (Wang et al., Cytokine 2012; 59 (1): 3-9). Однако убедительные данные также свидетельствуют о прямом влиянии химиотерапевтических препаратов на сенсорные нейроны (Argyriou et al, Crit Rev Onol Hematol 2012; 82(1): 51-77, Boyette-Davis et al., Pain, 2011; 152: 308-13; Pachman et al., Clin Pharmacol Ther 2011; 90: 377-387). В частности, было установлено, что большинство химиотерапевтических препаратов может легко проникнуть через барьер нерв-кровь (БНК) и связываться с дорсальными корешковыми ганглиями (ДКГ) и периферическими аксонами (Wang et al., см. выше). Есть также доказательства, что эти препараты непосредственно повреждают структуру клеток ДКГ и периферических нервов с последующей дегенерацией сенсорных волокон и утерей тонких нервных волокон в составе эпидермального слоя (Argyriou et al., Cancer Manag Res. 2014; 6: 135-147).

На клеточном уровне нейротоксические химиотерапевтические агенты повреждают микроканальцы, вмешиваются в основанный на микроканальцах аксональный транспорт (LaPointe et al., Neurotoxicology 2013; 37: 231-9), затрагивают динамику микроканальцев, вызывая ацетилирование α-тубулина, нарушают митохондриальную функцию, или целенаправленно поражают ДНК. Биопсии нерва от экспериментальных животных и пациентов, принимавших паклитаксел, оксалиплатин или винкристин, показывают идентичные морфологические изменения, предполагая наличие в основе общего патогенетического механизма.

Интерлейкин 8 (ИЛ-8; CXCL8), считается главным посредником мобилизации ПМНН, PMN (Полиморфнонуклеарные Нейтрофилы) и участвует в развитии некоторых патологий, включая псориаз, ревматоидный артрит, хронической обструктивной болезни легких и реперфузионных повреждений пересаженных органов (Griffin et al., Arch Dermatol 1988, 124: 216; Fincham et al., J Immunol 1988, 140: 4294; Takematsu et al., Arch Dermatol 1993, 129: 74; Liu et al., 1997, 100:1256; Jeffery, Thorax 1998, 53: 129; Pesci et al., Eur Respir J. 1998, 12: 380; Lafer et al., Br J Pharmacol. 1991, 103: 1153; Romson et al., Circulation 1993, 67: 1016; Welbourn et al., Br J Surg. 1991, 78: 651; Sekido et al., Nature 1993, 365, 654). Биологическая

- 1 042129 активность Интерлейкина 8 опосредована взаимодействием с двумя рецепторами, CXCR1 и CXCR2, принадлежащими семье 7TM-GPCR, которые экспрессированы на поверхности человеческого ПМНК. В то время, как человеческий CXCR1 является достаточно селективным, связывая с высокой аффинностью только два хемокина, CXCL6 и IL-8, и показывающий намного более высокую аффинность к IL-8 (Wolf et al., Eur J Immunol 1998, 28: 164), человеческий CXCR2 является более разнородным рецептором, связывающим много различных цитокинов и хемокинов. Таким образом, CXCR2 опосредует активность целого ряда различных биологических молекул.

Краткое изложение сущности изобретения

Авторами было неожиданно обнаружено, что ингибирование ИЛ-8 может уменьшить или предотвратить проявление симптомов, связанных с токсичностью системной противораковой химиотерапии, приводящей к периферической нейропатии.

Соответственно, первой целью данного изобретения является ингибитор ИЛ-8 для применения в профилактике или лечении вызванных химиотерапией периферических нейропатий. Второй целью данного изобретения является применение упомянутого ингибитора ИЛ-8, как определено выше, для приготовления лекарственного препарата для лечения или профилактики вызванной химиотерапией нейропатии.

Третьей целью данного изобретения является способ профилактики или лечения вызванной химиотерапией нейропатии в этапе, включающем введение пациентам терапевтически эффективного количества упомянутого ингибитора ИЛ-8.

Четвертой целью данного изобретения является фармацевтическая композиция для применения в профилактикеили лечении вызванной химиотерапией нейропатии, содержащая вышеупомянутый ингибитор ИЛ-8 и фармацевтически приемлемые эксципиенты и/или растворители.

Описание чертежей

Фиг. 1 представляет порог отдергивания лапы, показывая индукцию аллодинии механическими воздействиями, измеренную в граммах (г), у животных без какого-либо лечения паклитакселом и/или носителем/препаратом (Имитация), с введением паклитаксела и носителя (Контроль) или паклитаксела и DF2726A (ВВЕДЕНИЕ DF2726A), до (день-1), или после (дни 5, 7, 10, 14) введения паклитаксела в группах Контроль и DF2726A. Данные приведены как средние значения ± SEM в группах по 10 животных в каждой. *** представляет Р<0.001 в сравнении с группой Имитация; ### представляет Р<0.001 и # представляет Р<0.05 в сравнении с группой Контроль.

Фиг. 2 представляет количество отдергиваний лапы, показывая индукцию аллодинии холодовым воздействием, измеренное как количество ответов в виде отдергиваний лап после нанесения ацетона на тыльную поверхность лап с интервалом 5 мин, протестированное на животных без введения паклитаксела и/или носителя/препарата (Имитация), с введением паклитаксела и носителя (Контроль) или паклитаксела и DF2726A (ВВЕДЕНИЕ DF2726A), до (день-1), или после (дни 5, 7, 10, 14) введения паклитаксела в группах Контроль и DF2726A. Данные приведены как средние значения ± SEM в группах по 10 животных в каждой. *** представляет Р<0.001 в сравнении с группой Имитация; ### представляет Р<0.001 и # представляет Р<0.05 в сравнении с группой Контроль.

Фиг. 3 представляет порог отдергивания лапы, показывая индукцию аллодинии механическими воздействиями, измеренную в граммах (г), у животных без какого-либо лечения паклитакселом и/или носителем/препаратом (Имитация), с введением паклитаксела и носителя (Контроль) или паклитаксела и DF1681B (ВВЕДЕНИЕ DF1681B), до (день-1), или после (дни 5, 7, 10, 14) введения паклитаксела в группах Контроль и Препарат (ВВЕДЕНИЕ). Данные приведены как средние значения ± SEM в группах по 10 животных в каждой. *** представляет Р<0.001 в сравнении с группой Имитация ** представляет Р<0.01 в сравнении с группой Имитация; ### представляет Р<0.001 в сравнении с группой Контроль и ## представляет Р<0.01 в сравнении с группой Контроль.

Фиг. 4 представляет количество отдергиваний лапы, показывая индукцию аллодинии холодовым воздействием, измеренное как количество ответов в виде отдергиваний лап после нанесения ацетона на тыльную поверхность лап с интервалом 5 мин, протестированное на животных без введения паклитаксела и/или носителя/препарата (Имитация), с введением паклитаксела и носителя (Контроль) или паклитаксела и DF1681B (ВВЕДЕНИЕ DF1681B) до (день-1), или после (дни 5, 7, 10, 14) введения паклитаксела в группах Контроль и Препарат (ВВЕДЕНИЕ). Данные приведены как средние значения ± SEM в группах по 10 животных в каждой. *** представляет Р<0.001 в сравнении с группой Имитация; ### представляет Р<0.001 и ## представляет Р<0.01 в сравнении с группой Контроль.

Фиг. 5 и 6 представляют эффект действия репариксина, растворенного в водном растворе лизина для образования соли in situ (DF1681B), на вызванную оксалиплатином аллодинию. Холодовую (фиг. 5) и механическую (фиг. 6) аллодинию оценили на 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21 день. Данные приведены как средние значения ± SEM в группах по 10 животных в каждой. *** представляет Р<0.001, ** представляет Р<0.01 и * представляет Р<0.05 в сравнении с группой Имитация; ### представляет Р<0.001, и ## представляет Р<0.01 в сравнении с группой Контроль.

Фиг. 7 и 8 представляют эффект перорального введения DF2726A на вызванную оксалиплатином

- 2 042129 аллодинию. Холодовую (фиг. 7) и механическую (фиг. 8) аллодинию оценили на 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21 день, один час после перорального введения. Данные приведены как средние значения ± SEM в группах по 10 животных в каждой. *** представляет Р<0.001, ** представляет Р<0.01 и * представляет Р<0.05 в сравнении с группой Имитация; ### представляет Р<0.001, ## представляет Р<0.01 и # представляет Р<0.05 в сравнении с группой Контроль.

Подробное описание изобретения

В соответствии с подробным представлением в экспериментальном разделе данного описания ингибитор активности ИЛ-8, показывает терапевтическую эффективность на животных моделях нейропатической боли, вызванной различными химиотерапевтическими агентами. Кроме того, авторы данного изобретения также обнаружили, что ингибирование ИЛ-8 в состоянии противодействовать влиянию химиотерапевтических агентов на компоненты цитоскелета и структуры, которая способствует их нейротоксическим эффектам.

Соответственно, первой целью данного изобретения является ингибитор ИЛ-8 для применения в лечении или профилактике вызванных химиотерапией периферических нейропатий.

Предпочтительно упомянутый ингибитор ИЛ-8 предназначен для применения в профилактике или лечении вызванной химиотерапией нейропатии.

Согласно более предпочтительному воплощению упомянутый ингибитор ИЛ-8 предназначен для применения в профилактике или лечении аллодинии, связанной с вызванной химиотерапией нейропатией.

Термин ингибитор ИЛ-8, в соответствии с заявленным изобретением, относится к любому соединению, обладающему способностью ингибировать, полностью либо частично, биологическую активность ИЛ-8. Такое соединение может действовать путем понижения экспрессии или активности ИЛ-8 или путем ингибирования запуска межклеточных сигналов при помощи активации рецепторов ИЛ-8. Предпочтительно, упомянутый ингибитор ИЛ-8 обладает свойством ингибировать как минимум 50%, более предпочтительно, как минимум 60% хемотаксиса, вызванного ИЛ-8 в ПМНК с концентрацией, равной или ниже 500 нМ, предпочтительно ниже 100 нМ.

Второй целью данного изобретения является применение ингибитора ИЛ-8 для приготовления лекарственного препарата для лечения или профилактики вызванных химиотерапией нейропатий.

Предпочтительно упомянутый ингибитор ИЛ-8 применяют для лечения или профилактики вызванной химиотерапией периферической нейропатии.

В соответствии с одним из предпочтительных вариантов воплощения заявленного изобретения упомянутый лекарственный препарат предназначен для лечения и/или профилактики аллодинии, связанной с вызванной химиотерапией периферической нейропатией.

Третьей целью данного изобретения является способ лечения или профилактики вызванной химиотерапией нейропатии, включающий этап введения пациентам терапевтически эффективного количества упомянутого ингибитора ИЛ-8.

Предпочтительно упомянутый способ применяют в профилактике или лечении вызванной химиотерапией периферической нейропатии.

В соответствии с одним из предпочтительных вариантов воплощения заявленного изобретения упомянутый способ предназначен для лечения или профилактики аллодинии, связанной с вызванной химиотерапией периферической нейропатией.

Как используется в данном описании, термин терапевтически эффективное количество относится к количеству, достаточному для достижения эффективного лечения или профилактики заболевания. Методика определения эффективных количеств достаточно хорошо известно специалистам в данной области техники, и основана на достижении желаемого эффекта. Эффективное количество зависит от некоторых факторов, включая, но, не ограничиваясь, вес пациента и/или степени развития заболевания, от которого страдает пациент. Термины лечение и профилактика, как используются в данном описании, относятся к уничтожению/улучшению или предотвращению/задержке в начальном развитии, соответственно, заболевания или симптомов, связанных с ним, несмотря на текущее состояние пациента с основной патологией. Четвертой целью заявленного изобретения является применение фармацевтической композиции, содержащей ингибитор ИЛ-8, в лечении или профилактике вызванных химиотерапией нейропатий, совместно с фармацевтически приемлемыми эксципиентами.

Предпочтительно упомянутая фармацевтическая композиция предназначена для профилактики или лечения вызванной химиотерапией периферической нейропатии.

В соответствии с одним из предпочтительных вариантов воплощения заявленного изобретения упомянутая фармацевтическая композиция предназначена для лечения или профилактики аллодинии, связанной с вызванной химиотерапией периферической нейропатией.

Согласно одному из вариантов предпочтительного воплощения заявленного изобретения ингибитор ИЛ-8 во всех целях заявленного изобретения ингибирует активность ИЛ-8, опосредованной взаимодействием обоими рецепторами CXCR1 и CXCR2.

Предпочтительно, согласно данному воплощению упомянутый ингибитор ИЛ-8 является или алло

- 3 042129 стерическим ингибитором, или ортостерическим антагонистом рецептора CXCR1 или обоих рецепторов CXCR1 и CXCR2.

Предпочтительно упомянутый ингибитор ИЛ-8 селективен в отношении рецептора CXCR1 или в равной степени активен в отношении рецепторов CXCR1 и CXCR2.

Термин селективен в отношении рецептора CXCR1 в заявленном описании означает соединение, которое показывает значение IC₅₀ на как минимум 2, предпочтительно 3, деления логарифмической шкалы выше в отношении CXCR1, чем в отношении CXCR2. (Bertini R. et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA (2004), 101 (32), pp. 11791-11796).

Термин в равной степени активен в отношении рецепторов CXCR1 и CXCR2 в заявленном описании означает соединение, которое показывает значение IC₅₀ в пределах 10 пикомоляр (10^-11М) - 1 микромоляр (10^-6М) в отношении CXCR1 и CXCR2. (Bertini R. et al., Br. J. Pharm. (2012), 165, pp. 436-454).

Более предпочтительно упомянутый ингибитор IL-8 согласно данному изобретению имеет значение IC₅₀ в отношении рецептора CXCR1 в диапазоне низких наномолярных единиц, предпочтительно в диапазоне 0,02-5 наномоляр.

В технике известны ингибиторы ИЛ-8 в соответствии с вышеуказанным определением, обладают свойством ингибировать активность ИЛ-8, опосредованного взаимодействием обоими рецепторами CXCR1 и CXCR2.

Из вышеупомянутых соединений производное 1,3-тиазол-2-иламинофенилпропановой кислоты предпочтительно представляет собой соединение с формулой (I) или его фармацевтически приемлемую соль, в которой

R¹ является водородом или СН₃;

R² является водородом или линейным С1-С₄-алкилом;

Y является гетероатомом, выбираемым из S, О и N;

Z выбирают из галогена, линейного или разветвленного С1-С₄-алкила, С₂-С₄-алкенила, С₂-С₄алкинила, С1-С₄-алкокси, гидроксила, карбоксила, С1-С₄-ацилоксила, фенокси, циано, нитро, амино, С1С₄-ациламино, гало C₁-C₃-алкила, гало C₁-C₃-алкокси, бензойл, линейного или разветвленного C1-C8алкансульфоната, линейного или разветвленного C₁-C₈-алкансульфонамида, линейного или разветвленного C₁-C₈-алкилсульфонилметила, предпочтительно трифторметила;

X является ОН или остатком с формулой NHR³; в которой R³ выбирают из водорода, гидроксила, линейного или разветвленного C₁-C₆-алкила, C₃-C₆-циклоалкила, C₂-C₆алкенила, С1-С₅-алкокси, или C₁-C₆-фенилалкила, в которой указанный алкил, циклоалкил или алкенил необязательно заменены остатком СООН, остатка с формулой SO2R⁴, в которой R⁴ является С1-С₂-алкилом, С₃-С₆-циклоалкилом, С₁-С₃галоалкилом.

Из вышеупомянутых соединений, в особенности предпочтительными являются соединения упомянутой формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли, в которых

R² является водородом, и/или Y является S, и/или Z является трифторметилом.

Из вышеупомянутых соединений, в особенности предпочтительными являются соединения упомянутой формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли, в которых

R¹ является водородом или CH₃;

X является ОН;

R² является водородом или линейным С1-С₄-алкилом,

Y является гетероатомом, выбираемым из S, О и N;

Z выбирают из линейного или разветвленного С1-С₄-алкила, линейного или разветвленного С1-С4алкокси, гало С1-С₃-алкила и гало С1-С₃-алкокси.

Особенно предпочтительные соединения формулы (I) согласно заявленному изобретению выбирают из 2-метил-2-(4-{[4-(трифторметил)-1,3-тиазол-2-ил]амино}фенил)пропановой кислоты (далее обозначенной как DF2726Y) и ее фармацевтически приемлемых солей, предпочтительно ее натриевой соли (далее обозначенной как DF2726A) и 2-(4-{[4-(трифторметил)-1,3-тиазол-2-ил]амино}фенил)пропановой кислоты и ее фармацевтически приемлемых солей, предпочтительно (28)-2-(4-{[4-(трифторметил)-1,3тиазол-2-ил]амино}фенил)пропановой кислоты (далее обозначенной как DF2755Y) и ее натриевой соли, также обозначенной как DF2755A.

Соединения формулы (I) раскрыты в WO 2010/031835, который также раскрывает метод их синтеза, их активность как ингибиторов ИЛ-8, а также их использование в лечении ИЛ-8-зависимых патологий, таких как транзиторная ишемическая атака, буллезный пемфигоид, ревматоидный артрит, идиопатический фиброз, гломерулонефрит и нарушения, вызванные ишемией и реперфузией.

- 4 042129

Из упомянутых ИЛ-8 ингибиторов упомянутое производное 2-фенилпропановой кислоты представляет собой соединение формулы (II)

(II) или его фармацевтически приемлемую соль, в которой R⁴ является линейным или разветвленным C₁-C₆-алкилом, бензоилом, фенокси, трифторметансульфонилокси; предпочтительно выбирают из бензоила, изобутила и трифторметансульфонилокси;

R⁵ является Н или линейным или разветвленным C₁-C₃-алкилом, предпочтительно Н;

R⁶ является линейным или разветвленным C₁-C₆-алкилом или трифторметилом; предпочтительно является линейным или разветвленным C₁-C₆-алкилом, более предпочтительно СН₃.

В особенности предпочтительные соединения с формулой (II) согласно заявленному изобретению выбирают из К-(-)-2-(4-изобутилфенил)пропионил метансульфонамид (также известен как Репариксин) и его фармацевтически приемлемые соли. Предпочтительно упомянутое соединение - образуемая in situ лизиновая соль R(-)-2-(4-изобутилфенил)пропионил метансульфонамида (далее обозначено как DF1681B). Дополнительными, в особенности предпочтительными соединениями с формулой (II) согласно заявленному изобретению являются 2-(4-трифторметансульфонилокси)фенил]-N-метансульфонил пропионамид и их фармацевтически приемлемые соли, предпочтительно его натриевая соль, предпочтительно R(-)-2-(4-трифторметансульфонилокси)фенил]-N-метансульфонил пропионамид (также известен как DF2156Y) его натриевая соль (также известен как Ладариксин или DF2156A).

ИЛ-8 ингибиторы с формулами (II) раскрыты в WO 0024710 и WO 2005/090295, которые также раскрывают метод их синтеза, их активность как ингибиторов ИЛ-8, а также их использование в качестве ингибиторов хемотаксиса и дегрануляции нейтрофилов, вызванных ИЛ-8, и лечении ИЛ-8-зависимых патологий, таких как псориаз, неспецифический язвенный колит, меланома, хронические обструктивные заболевания легких (ХОЗЛ), буллезный пемфигоид, ревматоидный артрит, идиопатический фиброз, гломерулонефрит и повреждения, вызванные ишемией и реперфузией.

Согласно заявленному изобретению, вызванная химиотерапией периферическая нейропатия может быть индуцирована любым химиотерапевтическим агентом с нейротоксичными побочными эффектами.

Предпочтительно упомянутый химиотерапевтический агент выбирают из следующего перечня: препараты платины, таксаны, эпотилоны, растительные алкалоиды, талидомид, леналидомид и помалидомид; карфилзомиб, бортезомиб и эрибулин.

Согласно варианту предпочтительного воплощения заявленного изобретения вызванная химиотерапией периферическая нейропатия индуцированапаклитакселом и оксалиплатином.

Примеры Способы

Модель индуцирования нейропатии паклитакселом или оксалиплатином

Крысы-самцы Wistar (200-250 г, Harlan Italy) содержались в помещении с контролируемой температурой (22±1°C), влажностью (60±10%) и световым освещением (12 ч в день); еда и питьевая вода - в свободном доступе.

Крысам вводили:

1- четыре, по одному разу в день, внутрибрюшинные (и.п.) инъекции либо паклитаксела (Tocris, Italy) (2 мг/кг/день и.п.; кумулятивная доза 8 мг/кг и.п.), либо носителя (солевой раствор, 1 мл/кг/день и.п.), вводимые через день (дни 0, 2, 4, и 6), как описано в Polomano et al., Pain 2001, 94: 293-294. Поведенческое тестирование провели до введения паклитаксела/носителя (день-1) и повторно на 5-7-10-14 дни, поле введения паклитаксела/носителя; или

2- оксалиплатин (2,4 мг/кг) растворили в 5% растворе глюкозы, вводили внутрибрюшинно (и.п.) из расчета 0,5 мл/крысу, в течение 5 последовательных дней, каждую неделю в течение 3 недель, как описано в Cavaletti et al., Eur. J. Cancer, 2001 37, 2457-63. Поведенческое тестирование провели до введения паклитаксела/носителя (день-1) и повторно на 3-5-7-10-14-21 дни, после введения паклитаксела/носителя.

Лечение препаратами в вышеописанных моделях

1. Введение DF2726A и DF1681B в модели с паклитакселом

В двух различных исследованиях, натриевую соль (2-метил-2-(4-{[4-(трифторметил)-1,3-тиазол-2ил]амино}фенил)пропановой кислоты (обозначенную далее также как DF2726A) или R-(-)-2-(4изобутилфенил)пропионил метансульфонамид (Репариксин, DF1681Y), растворенные в водном растворе лизина с образованием соли in situ (обозначенную далее DF1681B), вводили согласно описанию ниже.

DF2726A (30 мг/кг) (5 мг/1 мл; 0,5 мл/ос/крысу) растворили в 10% SOLUTOL-HS15 и Nметилпирролидона (NMP) (SOLUTOL: NMP 2:1 по весу) и 90% раствора фосфатно-солевого буфера PBS

- 5 042129

1X, и вводили один раз в день, с 3 по 11 дни после введения паклитаксела. Антиаллодинический эффект изучили на 5, 7, 10 и 14 дни после введения паклитаксела. Контрольным животным вводили носитель (10% SOLUTOL-NMP 2:1 по весу и 90% PBS, 5 мг/1 мл; 0.5 мл/ос/крысу).

DF1681B вводили непрерывной подкожной инфузией с использованием осмотических насосов ALZET Model 2ML2 (Charles River). В деталях, DF1681B (9,37 г) растворили в стерильном солевом растворе (25 мл) при концентрации 375 мг/мл и встряхивали в течение 10 мин. Осмотические насосы установили под анестезией (100 мг/кг кетамина и 10 мг/кг ксилазина и.п.) через хирургический разрез между лопатками. Насосы имплантировали за 3 дня до первой инъекции паклитаксела (день -3). Ведение препарата осуществляли непрерывно до +11 дня. Контрольным животным вводили носитель (стерильный солевый раствор).

2. Введение DF2726A и DF1681B в модели оксалиплатина

В двух различных исследованиях натриевую соль (2-метил-2-(4-{[4-(трифторметил)-1,3-тиазол-2ил]амино}фенил)пропановой кислоты (обозначенную далее также как DF2726A) или R-(-)-2-(4изобутилфенил)пропионил метансульфонамид (Репариксин, DF1681Y), растворенные в водном растворе лизина с образованием соли in situ (обозначенную далее DF1681B), вводили согласно описанию ниже.

DF2726A (30 мг/кг/ос) растворили в PBS и вводили в течение 24 последовательных дней, начиная за 3 дня до введения оксалиплатина и продолжая в течение последующих 21 дней после первого введения оксалиплатина. В течение этого периода, соединение вводили через 2 ч после введения оксалиплатина. Поскольку DF2726A является натриевой солью, его растворили при концентрации 16 мг/мл, чтобы получить дозу активного препарата 30 мг/кг.

DF1681B вводили непрерывным подкожным вливанием с использованием осмотических насосов ALZET Model 2ML2 (Charles River). Для получения скорости вливания 8 мг/ч/кг, как описано Cavalieri et al. Int J Immunopathol Pharmacol, 2005, 18: 475-86, DF1681B (9,37 г) растворили в стерильном соляном растворе (25 мл) при концентрации 375 мг/мл и встряхивали в течение 10 мин. Осмотические насосы установили под анестезией (100 мг/кг кетамина и 10 мг/кг ксилазина и.п.). Насосы подготовили согласно инструкциям по эксплуатации изготовителя Alzet. В деталях, насосы заполнили 2 мл раствора DF1681B или носителя, с использованием стерильного шприца. Наконец, насосы хранили в водяной ванне в течение ночи в шкафу при 37°С.

Осмотический насос (Alzet model 2ML2; Charles River) установили через хирургический разрез на спине. Кратко, небольшой разрез был сделан в коже между лопатками, с формированием кармана, путем раздвигания подкожных соединительных тканей, наконец разрезы были зашиты и закрыты швами. Насосы установили за 3 дня до инъекции оксалиплатина (день -3) и заменены новыми на 14 день после установки.

Исследование механической аллодинии

Для оценки развития механической аллодинии, измерили чувствительность к осязательной стимуляции, используя Динамический Подошвенный Эстезиометр (DPA, Ugo Basile, Italy). Животных поместили в клетку с полом из металлической сетки, покрытым пластмассовым куполом, который позволил животным свободно передвигаться, без прыжков. Механический стимул затем осуществили в середине подошвенной кожи задней лапы. Сокращение было зафиксировано на уровне 50 г. Тестирование было выполнено на обеих лапах до (день -1) и затем в дни 5, 7, 10 и 14 после применения паклитаксела/носителя или в дни 0, 3, 5, 7, 10, 14 и 21 после применения паклитаксела/носителя.

Исследование холодовой аллодинии

Холодовую аллодинию измерили как количество отдергиваний лапы после нанесения ацетона на тыльную поверхность лапы (2). Каплю ацетона нанесли на тыльную поверхность лап при помощи шприца, соединенного с тонкой полиэтиленовой трубкой, в то время, когда крысы стояли на металлической сетке. Оживленную реакцию в форме отдергивания лапы, после растекания ацетона по дорсальной поверхности лапы, расценили как симптом холодовой аллодинии. Холодовые ответы были измерены на обеих лапах до (день -1) и затем на 5, 7 после применения паклитаксела/носителя или на 10 и 14 дней 0, 3, 5, 7, 10, 14 и 21 день после применения паклитаксела/носителя.

Статистический анализ

Все данные приведены как средние значения ± SEM. Значимость различий между группами определили при помощи двойственного дисперсионного анализа (ANOVA), с последующим ретроспективным анализом для множественности сравнений по Бонферрони. Уровень значимости установили Р<0.05.

Пример 1. Эффект DF2726A на индуцированную паклитакселом механическую и холодовую аллодинию

Механическую и холодовую аллодинии исследовали в трех группах животных:

Имитация, которым не вводили паклитаксел, ни любое другое лечение, Контроль, которым вводили паклитаксел и носитель, и DF2726A-ВВЕДЕНИЕ, которым вводили паклитаксел и DF2726A. Применение препаратов было выполнено согласно протоколу, описанному в методике выше.

После введения паклитаксела животные в группах Контроль и DF2726A-ВВЕДЕНИЕ показали признаки явного наличия механической и холодовой аллодинии, в сравнении с группой Имитация (фиг. 1 и

- 6 042129 фиг. 2).

В частности, в группе Контроль, в эксперименте с использованием Динамического Подошвенного Эстезиометра, полученный порог отдергивания лапы значительно снизился на 5, 7, 10 и 14 дни, признак начала развития нейропатии (фиг. 1, столбцы, помеченные черным).

В этой же группе в эксперименте на холодовую аллодинию полученный порог отдергивания лапы значительно снизился на 5, 7, 10 и 14 дни, признак начала развития нейропатии (фиг. 2, столбцы, помеченные черным).

Животные, которым постоянно вводили DF2726A (группа DF2726А-введение) показали значительное снижение механической аллодинии на 5 (Р<0.05), 7 (Р<0.001) и 10 (Р<0.001) дни, в сравнении с животными, которым вводили носитель. На 14 день не регистрировали какого-либо значительного антиаллодинического эффекта (фиг. 1).

Аналогично, животные из группы DF2726A-ВВЕДЕНИЕ показали значительное снижение холодовой аллодинии на 5 (Р<0.05), 7 (Р<0.001) и 10 (Р<0.001) дни, в сравнении с животными, которым вводили носитель. На 14 день не регистрировали какого-либо значительного антиаллодинического эффекта (фиг. 2).

Полученные результаты явственно доказывают, что постоянное пероральное введение DF2726A в течение 14 дней (с -3 по 11 день) приводит к значительному снижению механической и холодовой аллодинии на 5, 7 и 10 дни после введения паклитаксела.

С +12 по +14 день после введения паклитаксела крысы не получали фармакологическое лечение. Как показано на фиг. 1 и 2, на 14 день не регистрировали какого-либо значительного антиаллодинического эффекта в группе DF2726A-ВВЕДЕНИЕ, подтверждая тот факт, что антиаллодиническая активность напрямую связана с введением соединения.

Пример 2. Эффект DF1681B на индуцированную паклитакселом механическую и холодовую аллодинию

Механическую и холодовую аллодинии исследовали в трех группах животных: Имитация, которым не вводили паклитаксел, ни любое другое лечение, Контроль, которым вводили паклитаксел и носитель, и DF1681B-ВВЕДЕНИЕ, которым вводили паклитаксел и DF1681B. Применение препаратов было выполнено согласно протоколу, описанному в методике выше. После введения паклитаксела животные в группах Контроль и DF1681B-ВВЕДЕНИЕ показали явную механическую и холодовую аллодинии, в сравнении с группой Имитация (фиг. 3 и 4). В частности, в группе Контроль, в эксперименте с использованием Динамического Подошвенного Эстезиометра полученный порог отдергивания лапы значительно снизился на 5, 7, 10 и 14 дни, признак нейропатии (фиг. 3).

Животные, которым вводили DF1681B, показали значительное снижение механической аллодинии на 5 (Р<0.01), 7 (Р<0.001) и 10 (Р<0.001) дни, в сравнении с животными, которым вводили носитель. На 14 день не регистрировали какого-либо значительного антиаллодинического эффекта (фиг. 4). В экспериментах с холодовой аллодинией в группе Контроль животные показали значительное увеличение количества (порога) отдергиваний лапы на 5, 7, 10 и 14 дни, признак нейропатии (фиг. 3). Животные, которым вводили DF1681B, показали значительное снижение холодовой аллодинии на 5 (Р<0.01), 7 (Р<0.001) и 10 (Р<0.001) дни, в сравнении с животными, которым вводили носитель. На 14 день не регистрировали какого-либо значительного антиаллодинического эффекта (фиг. 4). Полученные результаты явственно свидетельствуют, что введение DF1681B приводит к значительному снижению механической и холодовой аллодинии на 5, 7 и 10 дни после введения паклитаксела. Имплантация насосов на -3 день до введения паклитаксела приводит к значительной активности вплоть до 10 дня.

На 14 день, три дня спустя прекращения введения DF1681B, не регистрировали какого-либо значительного эффекта, что является доказательством того, что антиаллодиническая активность напрямую зависит от введения препарата.

Пример 3. Эффект DF1681B на индуцированную оксалиплатином механическую и холодовую аллодинию

Механическую и холодовую аллодинии исследовали в трех группах животных:

Имитация, которым не вводили оксалиплатин, ни любое другое лечение, Контроль, которым вводили оксалиплатин и носитель, и DF1681B-ВВЕДЕНИЕ, которым вводили оксалиплатин и DF1681B. Применение препаратов было выполнено согласно протоколу, описанному в методике выше.

Введение DF1681B не проявило антиаллодинического эффекта на 3 день (фиг. 5), в то время как в дни 5, 7, 10, 14, 21 показало значительное уменьшение холодовой аллодинии (фиг. 5). В экспериментах с холодовой аллодинией животные показали много отдергиваний лапы, со значительным увеличением во всех экспериментальных временных точках (3, 5, 7, 10, 14, 21 день) из-за невропатии (фиг. 5).

В экспериментах с механической аллодинией порог отдергивания лапы значительно снизился только в дни 14 и 21 (фиг. 6); DF1681B в эти дни показал значительный антиаллодинический эффект (фиг. 6).

Пример 4. Эффект DF2726A на индуцированную оксалиплатином механическую и холодовую аллодинию

Механическую и холодовую аллодинии исследовали в трех группах животных:

- 7 042129

Имитация, которым не вводили оксалиплатин, ни любое другое лечение, Контроль, которым вводили оксалиплатин и носитель, и DF2726A-ВВЕДЕНИЕ, которым вводили оксалиплатин и DF2726A. Применение препаратов было выполнено согласно протоколу, описанному в методике выше.

В экспериментах с холодовой аллодинией животные, которым вводили носитель, показали много отдергиваний лапы, значительное увеличение во всех экспериментальных временных точках (3, 5, 7, 10, 14, 21 день) из-за невропатии (фиг. 7). Введение DF2726A не проявило антиаллодинического эффекта на 3 день, в то время как в дни 5, 7, 10, 14, 21 показало значительное уменьшение холодовой аллодинии (фиг. 7). В экспериментах с механической аллодинией порог отдергивания лапы значительно снизился только в дни 14 и 21 (фиг. 8); DF2726A в эти дни показал значительный антиаллодинический эффект (фиг. 8).

Пример 5. Эффект репариксина на модификации индуцированного паклитакселом цитоскелета

В данном исследовании изучали эффект паклитаксела, который вводили отдельно или в сочетании с репариксином (DF1681Y; R-(-)-2-(4-изобутилфенил)пропионил метансульфонамид), растворенный в водном растворе лизина для образования соли in situ, на компоненты цитоскелета и структуры. В качестве экспериментальной модели использовали клеточную линию F-11, продукт гибридизации мышиной клеточной линии нейробластом N18TG-2 с сенсорными нейронами дорсальных корешковых ганглий эмбриона крысы. Эти клетки были выбраны из-за присутствия нейронных маркеров и свойств, которые уникальны для сенсорных нейронов родительской крысы. Клеточная культура и обработка

Клетки F11 (ЕСАСС, Salisbury, UK) культивировали в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (DMEM) (Euroclone, Ml, Italy) с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки производства США (Sigma-Aldrich St. Louis, СО, USA), 1% пенициллина/стрептомицина (Euroclone) и 1% глутамина (Euroclone). После этого клетки дифференцировали с мышиным фактором роста нервной ткани (mNGF), растворенным в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла с 1% пенициллина/стрептомицина и 1% глутамина (без эмбриональной бычьей сыворотки) при конечной концентрации 50 нг/мл. Замену среды проводили каждые 3 дня, до окончательной дифференциации спустя 7 дней. Нейроны не обработали (контроль) или обработали в течение 24 ч с репариксином [10 мкМ конечная концентрация], паклитакселом (Sigma-Aldrich) [10 нМ конечная концентрация] и комбинацией двух молекул.

Иммунофлюоресценция

Клетки зафиксировали в 4% параформальдегиде в фосфатно-солевом буферном растворе в течение 20 мин при комнатной температуре и пермеабилизировали в метаноле в течение 5 мин при -20°С. Клетки затем заблокировали в фосфатно солевом буферном растворе, содержащем 4%-й бычий сывороточный альбумин, в течение 30 мин, и инкубировали с первичными антителами, растворенными в растворе для блокирования в течение ночи в 4°С: кроличий α-тубулин (Abcam, Кембридж, Великобритания) 1:500; мышиный α-тубулин (Abcam) 1:200 и ацетилированный мышиный α-тубулин (Abeam) 1:1000. Клетки затем промыли в фосфатно-солевом буферном растворе несколько раз перед инкубированием со вторичными антителами, коза анти-кролик, конъюгированные с Alexafluor 633 (1:2000) и коза анти-мышь, конъюгированные с Alexafluor 488 (1:2000), (Life Technologies, Калифорния, США) в течение 30 мин при комнатной температуре. После обильного промывания, установили покровные стекла с использованием средства Vectashield с DAPI (Vector Laboratories Burlingame, Калифорния, США) и затем наблюдали в софокусном лазерном микроскопе.

Результаты

В нейронах контроля, исследованных для антиацетилированного α-тубулина (маркер стабильных микроканальцев), ацетилированный тубулин подавал признаки умеренного присутсвия. Тот же самый маркер был оценен в обработанных паклитакселом нейронах. В соответствии с известными источниками в данной области техники паклитаксел увеличил содержание ацетилированного α-тубулина, затронув динамику микроканальцев и вызвав стабилизацию и созревание дендритных шипиков. На самом деле интенсивность флюоресценции в невритах кажется более интенсивной и также очевидны увеличение диаметра невритов и укрепление структуры цитоскелета. В эксперименте, используя комбинацию паклитаксела и репариксина, ацетилированный α-тубулин проявляется схожим с контролем, таким образом указывая, что присутствие репариксина противодействует эффектам паклитаксела, что вызывает повышение стабильности микроканальцев путем увеличения ацетилирования α-тубулина и толщины невритов. Затем клетки исследовали с анти-α-тубулином и анти-β-тубулином как в контроле, так и группах с лечением и провели двойную и одинарную иммунофлюоресценцию. Когда нейроны обрабатывали паклитакселом, наблюдалось уменьшение интенсивности флюоресценции β-тубулина. Также в этом эксперименте с α- и β-тубулином комбинация паклитаксела и репариксина смогла противодействовать эффекту одного только паклитаксела на формирование димеров, и клетки казались более схожими с клетками контроля. Результаты демонстрируют, что ингибирование IL-8 в состоянии предотвратить побочный эффект химиотерапии в форме аллодинии (как механической, так и холодовой) на моделях крыс, а также противодействовать воздействию паклитаксела на стабильность микроканальцев и структуру цитоскелета в химерной нейронной клеточной линии.

-

Claims (6)

1. Совокупность полученных новаторских результатов доказывает, что провоспалительные цитокины и хемокины участвуют в патогенезе острой и хронической периферической боли [Wang XM et al., Cytokine 2012; 59:3-9; Ramesh G. 2014; Inflamm Cell Signal 1(3)]. В ответ на вызванное химиотерапией повреждение инфильтрация макрофага приводит к последующему образованию множества посредников, среди которых провоспалительные цитокины (TNF-α, IL-1e, IL-6, IL-8) играют существенную роль в инициировании и прогрессии ПХПН. Прежде всего, хемокин ИЛ-8 участвовал в непосредственном содействии дегенерации мотонейрона [De Paola M et al., Neuroimmunomodulation 2007; 14(6):310-6].

   Относительно механизмов ослабления вызванной химиотерапией периферической нейропатии ингибиторами ИЛ-8 лабораторные исследования показывают, что репариксин смог противодействовать воздействию на компоненты цитоскелета и структуры, вызванные паклитакселом. В частности, соединение остановило индукцию ацетилирования тубулина, маркера стабильности микроканальцев и увеличенную толщину невритов, вызванные лечением паклитакселом, способствуя восстановлению физиологической динамики микроканальцев.

   ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Применение ингибитора ИЛ-8 в профилактике или лечении вызванной химиотерапией периферической нейропатии, где указанный ингибитор ИЛ-8 является соединением с формулой (I)

   где

   R¹ является водородом или CH3;

   R² является водородом или линейным С1-С₄-алкилом;

   Y является гетероатомом, выбираемым из S, О и N;

   Z выбирают из галогена, линейного или разветвленного С1-С₄-алкила, С₂-С₄-алкенила, С₂-С₄алкинила, С1-С₄-алкокси, гидроксила, карбоксила, С1-С₄-ацилоксила, фенокси, циано, нитро, амино, C1С₄-ациламино, гало C₁-C₃-алкила, гало C₁-C₃-алкокси, бензоила, линейного или разветвленного C1-C8алкансульфоната, линейного или разветвленного C₁-C₈-αлкансульфонамида, линейного или разветвленного C₁-C₈-алкилсульфонилметила;

   X является ОН или остатком с формулой NHR³;

   при этом R³ выбирают из водорода, гидроксила, линейного или разветвленного C₁-C₆-алкила, C₃-C₆-циkлоалкила, Q-Qалкенила, C₁-C₅-алкокси или C₁-C₆-фенилалкила, в которой указанный алкил, циклоалкил или алкенил необязательно заменены остатком СООН или остатка с формулой SO2R⁴, в которой R⁴ является С1-С₂-алкилом, C₃-C₆-циклоалкилом, C1-C3галоалкилом; или соединением с формулой (II) сн₃ ^R X⁶ (II) или фармацевтически приемлемой солью, где

   R⁴ является линейным или разветвленным C₁-C₆-алкилом, бензоилом фенокси, трифторметансульфонилокси;

   R⁵ является Н или линейным или разветвленным C₁-G₃-алкилом;

   R⁶ является линейным или разветвленным C₁-C₆-алкилом или трифторметилом.
2. 2. Применение по п.1 в профилактике и/или лечении аллодинии, связанной с вызванной химиотерапией периферической нейропатией.
3. 3. Применение по любому из пп.1 или 2, при котором указанный ингибитор ИЛ-8 является ингибитором активности ИЛ-8, опосредованной взаимодействием обоими рецепторами CXCR1 и CXCR2.
4. 4. Применение по любому из пп.1-3, при котором указанный ингибитор ИЛ-8 является соединением с формулой (I), где R² является водородом, и/или Y является S, и/или Z является трифторметилом.
5. 5. Применение по любому из пп.1-3, при котором указанный ингибитор ИЛ-8 является соединением с формулой (II), где R⁴ выбран из бензоила, изобутила и трифторметансульфонилокси, и/или R⁵ является Н, и/или R⁶ является линейным или разветвленным C₁-C₆-алкилом, и/или R⁶ является CH3.
6. 6. Применение по любому из пп.1-3, при котором указанный ингибитор ИЛ-8 является соединением с формулой (I), где

   R¹ является водородом или CH3;

   X является ОН;

   -