EA037142B1

EA037142B1 - Мутированные гены алленоксидсинтазы 2 (aos2)

Info

Publication number: EA037142B1
Application number: EA201591444A
Authority: EA
Inventors: Увини Гунавардена; Грегори Ф.В. Гокал; Питер Р. Битэм; Кейт А. Волкер
Original assignee: Сибас Юс Ллс; Сибас Юроп Б.В.
Priority date: 2013-03-14
Filing date: 2014-03-14
Publication date: 2021-02-10
Also published as: CN105358696A; CN114703210A; AU2014236181A1; EP2971003A2; PE20151922A1; WO2014153178A2; EP2971003A4; WO2014153178A3; US10815495B2; US9790515B2; NZ751567A; CA2905128C; HK1218657A1; EA201591444A1; AU2014236181B2; US20180051296A1; CA2905128A1; NZ711139A; UA119745C2; NZ751568A

Abstract

Предложены композиции и способы, связанные с мутациями генов и/или белков в растениях. Некоторые варианты реализации изобретения относятся к мутациям в гене алленоксидсинтазы 2 (т.е. AOS2). Некоторые варианты реализации изобретения относятся к растениям, которые устойчивы к патогену.

Description

(54) МУТИРОВАННЫЕ ГЕНЫ АЛЛЕНОКСИДСИНТАЗЫ 2 (AOS2) (31) 61/785,059 (32) 2013.03.14 (33) US (43) 2016.03.31 (86) PCT/US2014/029434 (87) WO 2014/153178 2014.09.25 (71)(73) Заявитель и патентовладелец:

СИБАС ЮС ЛЛС (US); СИБАС ЮРОЙ Б.В. (NL) (72) Изобретатель:

Гунавардена Увини, Гокал Грегори Ф.в., Битэм Питер Р., Волкер Кейт А. (US) (74) Представитель:

Нилова М.И. (RU) (56) GenBank Submission ABD15175.1. Allene oxide synthase 2 [Solanum tuberosum], (26 June 2008) [Retrieved from the Internet 10 July 2014: <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ protein/86769479?report=genbank&log $=protalign&blast_rank= I &R ID=VWERVDMJ014>]; in entirety

Pajerowska-Mukhtar et al. Single nucleotide polymorphisms in the allene oxide synthase 2 gene are associated with field resistance to late blight in populations of tetrapioid potato cultivars. Genetics 2009, 181(3):1115-27; abstract, pg. 1125, col. 1

037142 В1 (57) Предложены композиции и способы, связанные с мутациями генов и/или белков в растениях. Некоторые варианты реализации изобретения относятся к мутациям в гене алленоксидсинтазы 2 (т.е. AOS2). Некоторые варианты реализации изобретения относятся к растениям, которые устойчивы к патогену.

037142 Bl

Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки на патент США

61/785059, поданной 14 марта 2013 года, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки.

Область техники

Изобретение относится отчасти к мутациям генов и/или белков в растениях.

Уровень техники

Нижеследующее рассмотрение уровня техники приведено исключительно для облегчения понимания настоящего изобретения и не описывает и не составляет известный уровень техники.

Phytophthora infestans (Pi) представляет собой организм, который принадлежит к типу Oomycota и может вызывать разрушительное заболевание у картофеля (Solanum tuberosum), также известное как фитофтороз. Род Phytophthora вызывает заболевание у других видов растений, таких как томат, соя, перец и табак. С Pi справлялись путем применения химикатов, таких как метилбромид и металаксил.

Существуют данные о связи между геном алленоксидсинтазы Solanum tuberosum (StA0S2) и устойчивостью к фитофторозу. В Pajerowska-Mukhtar et al., Planta 228:293 (2008) описано, что [естественная] изменчивость алленоксидсинтазы 2 картофеля является причиной различных уровней жасмонатов и устойчивости к патогенам у Arabidopsis. В Pajerowska-Mukhtar et al., Genetics 181:1115 (2009) описано, что [основная] взаимосвязь была обнаружена в локусе StA0S2, кодирующем алленоксидсинтазу 2, ключевой фермент в биосинтезе жасмонатов... и [два] SNP в локусе StA0S2 были связаны с наибольшим влиянием на устойчивость. StAOS2_snp691 и StAOS2_snp692_

Краткое описание изобретения

Изобретение относится отчасти к способам и композициям, связанным с мутациями генов и белков в растениях. Некоторые аспекты и варианты реализации настоящего изобретения могут также относиться к композициям и способам для получения устойчивых к патогену растений. Некоторые аспекты и варианты реализации настоящего изобретения могут также относиться к композициям и способам для получения трансгенного или нетрансгенного растения с нормальной или измененной оценкой зрелости. Некоторые аспекты и варианты реализации настоящего изобретения могут также относиться к композициям и способам для получения трансгенного или нетрансгенного растения с повышенными уровнями жасмоновой кислоты. Настоящее изобретение также относится, по меньшей мере отчасти, к композициям и способам, связанным с мутациями в гене (генах)/аллеле (аллелях) алленоксидсинтазы (AOS2). В соответствии с одним из аспектов предложено растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации растение, содержащее растительную клетку, которая содержит мутированный ген AOS2, может быть устойчивым к патогену; например, устойчивым к патогену растений, такому как Phytophthora infestans (Pi). В некоторых вариантах реализации растение, содержащее растительную клетку, которая содержит мутированный ген AOS2, может иметь измененную оценку зрелости. В некоторых вариантах реализации растение, содержащее растительную клетку, которая содержит мутированный ген AOS2, может содержать повышенные уровни жасмоновой кислоты.

В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка может относиться к любому виду двудольного, однодольного или голосеменного растения, включая любой вид древесных растений, который растет в виде дерева или кустарника, любой вид травянистых растений или любой вид, который дает съедобные плоды, семена или овощи, или любой вид, который дает яркие или ароматические цветы. Например, растение или растительная клетка может быть выбрана из вида растения, выбранного из группы, состоящей из картофеля, подсолнечника, сахарной свеклы, кукурузы, хлопчатника, сои, пшеницы, ржи, овса, риса, канолы, фруктов, овощей, табака, баклажана, ячменя, boxthane, сорго, томата, физалиса клейкоплодного, тамарилло, манго, персика, яблока, груши, клубники, банана, дыни, плодов годжи, паслена черного, физалиса пушистого, моркови, латука, лука репчатого, видов сои, сахарного тростника, гороха, конских бобов, тополя, винограда, цитруса, люцерны, ржи, овса, газонных и кормовых трав, тыквы, льна, масличной культуры, огурца, тыквы крупноплодной столовой, тыквы обыкновенной, арбуза, дыни мускусной, ипомеи, бальзамина, перца, сладкого перца, перца красного стручкового, перца чили, паприки, перца гвоздичного, хабанеро, перца кайенского, баклажана, календулы, лотоса, капусты, маргаритки, гвоздики, тюльпана, касатика, лилии и растений, образующих орехи, в той мере, в какой они еще не упомянуты специально. Растение или растительная клетка может также относиться к виду, выбранному из группы, состоящей из Arabidopsis thaliana, Solanum tuberosum, Solanum phureja, Oryza sativa, Amaranthus tuberculatus и Zea mays. В различных вариантах реализации растения, описанные в настоящем документе, могут относиться к любому виду семейства Solanaceae.

В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка может представлять собой картофель любого коммерческого сорта. Например, растение или растительная клетка может быть выбрана из сорта картофеля, выбранного из группы, состоящей из

- 1 037142

Anya, Arran Victory, Atlantic, Belle de Fontenay, BF-15, Bintje,

Cabritas, Camota, Chelina, Chiloe, Cielo, Clavela Blanca, Desiree, Fianna, Fingerling, Flava, Fontana, Golden Wonder, Innovator, Jersey Royal, Kerr's Pink, Kestrel, King Edward, Kipfler, Lady Balfour, Maris Piper, Nicola, Pachacona, Pink Eye, Pink Fir Apple, Primura, Red Norland, Red Pontiac, Rooster, Russet Burbank, Russet Norkotah, Shepody, Spunta, Vivaldi, Yukon Gold, Nyayo, Mukori, Roslin Tana, Kerrs’s Pink/Meru, Golof, Kinongo, Ngure, Kenya Baraka, Maritta, Kihoro, Americar, Roslin Bvumbwe, Njine, Roslin Gucha, Arka, B53 (Roslin Eburu), Kiraya, Kenya Akiba, 9, Original, Gituma, Mukorino, Amin, Pimpernel, Anett, B, Gituru, Feldeslohn, C, Kigeni, Romano, Kenya Ruaka, Purplu, Njae, Suzanna, Cardinal, Kathama, Kinare-Mwene, Kibururu, Karoa-Igura, Muturu, Faraja, Kiamucove, Michiri, Rugano, Njine Giathireko, Meru Mix, Blue Baranja, Patrones, Robijn, Roslin Chania, Urgentia, Mirka и Roslin Sasamua.

В настоящем описании термин ген AOS2 относится к последовательности ДНК, которая способна генерировать полипептид, представляющий собой алленоксидсинтазу 2 (AOS2), который обладает гомологией и/или аминокислотной идентичностью аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, и/или кодирует белок, который демонстрирует активность AOS2. В некоторых вариантах реализации ген AOS2 на 70; 75; 80; 85; 90; 95; 96; 97; 98; 99 или 100% идентичен конкретному гену AOS2; например гену AOS2 Solanum tuberosum, например StA0S2. В некоторых вариантах реализации ген AOS2 на 60; 70; 75; 80; 85; 90; 95; 96; 97; 98; 99 или 100% идентичен последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 и 50. В настоящем описании термин устойчивость к патогену относится к признакам растений, которые уменьшают рост патогена после того, как произошло инфицирование патогенным изолятом.

В настоящем описании термин толерантность к патогену относится к способности растения уменьшать влияние инфекции на приспособляемость растения. В некоторых вариантах реализации устойчивое к патогену растение может демонстрировать некротические поражения, которые ограничены и/или не распространяются неопределенным образом. В некоторых вариантах толерантного к патогену растения наблюдают незначительный некроз или отсутствие некроза, но могут быть насыщенные водой поражения. В некоторых вариантах реализации толерантное к патогену растение может пережить инфекцию с минимальным повреждением или малым снижением собираемого урожая товарной продукции.

В настоящем описании термин мутация относится к изменению по меньшей мере одного нуклеотида в последовательности нуклеиновой кислоты и/или изменению по меньшей мере одной аминокислоты в полипептиде относительно обычной последовательности или последовательности дикого типа, или эталонной последовательности, например SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации термин мутация относится к изменению по меньшей мере одного нуклеотида в последовательности нуклеиновой кислоты и/или изменению по меньшей мере одной аминокислоты в полипептиде относительно нуклеотидной или аминокислотной последовательности белка AOS2, которая не обеспечивает приемлемый уровень устойчивости и/или толерантности к патогену. В некоторых вариантах реализации мутация может включать замену, делецию, инверсию или встраивание. В некоторых вариантах реализации замена, делеция, встраивание или инверсия может включать изменение более одного нуклеотида. В некоторых вариантах реализации замена, делеция, встраивание или инверсия может включать изменения 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 нуклеотидов. В некоторых вариантах реализации замена, делеция, встраивание или инверсия может включать изменение положений 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 аминокислот. Термин нуклеиновая кислота или последовательность нуклеиновой кислоты относится к олигонуклеотиду, нуклеотиду или полинуклеотиду и их фрагментам или частям, которые могут быть одно-или двухцепочечными и представлять собой смысловую или антисмысловую цепь. Нуклеиновая кислота может включать ДНК или РНК и может быть природного или синтетического происхождения. Например, нуклеиновая кислота может включать мРНК или кДНК, или геномную ДНК. Нуклеиновая кислота может включать нуклеиновую кислоту, которая была амплифицирована (например, с использованием полимеразной цепной реакции). Обозначение НТдт ### НТмут используется для указания на мутацию, приводящую к замене нуклеотида дикого типа НТдт в положении ### в нуклеиновой кислоте на мутантный НТмут. Однобуквенное обозначение нуклеотидов является таким, как описано в руководстве Патентного ведомства США по процедуре патентной экспертизы, раздел 2422, табл.1. В этом отношении обозначение нуклеотида R означает пурин, такой как гуанин или аденин, Y означает пиримидин, такой как цитозин или тимин (урацил в случае РНК); М означает аденин или цитозин; K означает гуанин или тимин; и W означает аденин или тимин.

В настоящем описании термин мутированный ген AOS2 относится к гену алленоксидсинтазы 2

- 2 037142 (AOS2), содержащему одну или более мутаций в положениях нуклеотидов относительно эталонной последовательности нуклеиновой кислоты AOS2 (например, SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 и/или 50). В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит одну или более мутаций относительно соответствующей последовательности AOS2 дикого типа. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит одну или более мутаций относительно соответствующей последовательности AOS2, кодирующей белок AOS2, который не обеспечивает приемлемый уровень устойчивости и/или толерантности к патогену. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит одну или более мутаций относительно, например, SEQ ID NO: 2, в гомологичных положениях его паралогов. В некоторых вариантах реализации ген AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере одной мутации. В некоторых вариантах реализации ген AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере двух мутаций. В некоторых вариантах реализации ген AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере трех мутаций. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует один или более мутированных белков AOS2, таких как описаны в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 представляет собой мутированный ген/аллели AOS2 Solanum tuberosum; например StAOS2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 представляет собой мутированный ген/аллель AOS2 Desiree. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 представляет собой мутированный ген/аллель AOS2 Bintje. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 представляет собой мутированный ген/аллель AOS2 Fontana. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 представляет собой мутированный ген/аллели AOS2 Innovator.

В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 691 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит С в положении, соответствующем положению 692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 678 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит Т в положении, соответствующем положению 681 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит С в положении, соответствующем положению 727 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 744 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит С в положении, соответствующем положению 774 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 879 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 900 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит С в положении, соответствующем положению 954 последовательности SEQ ID NO: 2. В настоящем описании термин белок AOS2 относится к белку, который обладает гомологией и/или аминокислотной идентичностью белку AOS2 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49, и/или демонстрирует активность AOS2. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 на 70; 75; 80; 85; 90; 95; 96; 97; 98; 99 или 100% идентичен конкретному белку AOS2 (например, SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49), такому как, например, белок AOS2 Solanum tuberosum. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 представляет собой мутированный белок AOS2 Desiree. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 представляет собой мутированный белок AOS2 Bintje. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 представляет собой мутированный белок AOS2 Fontana. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 представляет собой мутированный белок AOS2 Innovator. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 на 70; 75; 80; 85; 90; 95; 96; 97; 98; 99 или 100% идентичен последовательности, выбранной из последовательностей на фиг. 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49.

В настоящем описании термин мутированный белок AOS2 относится к белку AOS2, содержащему одну или более мутаций в положениях аминокислот относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2 или в гомологичных положениях его паралогов. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, например эталонной аминокислотной последовательности AOS2 с SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, или ее частей. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно соответствующего белка AOS2 дикого типа. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положениям, выбранным из группы, состоящей из 6, 12, 30, 37, 46, 48, 51, 76, 113, 145, 187, 197, 200, 227, 231, 256, 264, 270, 282, 289, 292, 309, 320, 328, 337, 338, 357, 381, 394, 407, 423, 430, 439, 467, 480, 494 и 495 последовательности SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эта

- 3 037142 лонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит F в положении аминокислоты 6. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит R в положении аминокислоты 12. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Р в положении аминокислоты 12. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит А в положении 30. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит I в положении 37. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит F в положении аминокислоты 46. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 46. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит I в положении аминокислоты 48. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 48. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Т в положении аминокислоты 48. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит М в положении аминокислоты 51. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит N в положении аминокислоты 76. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит D в положении аминокислоты 76. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит D в положении 113. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит G в положении 113. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит F в положении аминокислоты 145. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 187. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит D в положении аминокислоты 197. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Е в положении аминокислоты 197. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит K в положении аминокислоты 200. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит А в положении аминокислоты 227. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит I в положении аминокислоты 231. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит G в положении аминокислоты 231. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2

- 4 037142 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Т в положении аминокислоты 231. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 256. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит F в положении аминокислоты 256. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит А в положении аминокислоты 264. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 270. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит S в положении аминокислоты 282. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит F в положении аминокислоты 282. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 289. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит N в положении аминокислоты 289. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит S в положении аминокислоты 289. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 292. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит I в положении аминокислоты 309. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 309. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 320. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит М в положении аминокислоты 320. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит М в положении аминокислоты 328. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 328. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 328. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит D в положении аминокислоты 337. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Е в положении аминокислоты 337. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 338. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 338. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной

- 5 037142 аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит М в положении аминокислоты 357. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит I в положении аминокислоты 357. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 381. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Р в положении аминокислоты 381. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Т в положении аминокислоты 394. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит С в положении аминокислоты 407. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит G в положении аминокислоты 407. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит F в положении аминокислоты 423. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит L в положении аминокислоты 430. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Е в положении 439. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит S в положении аминокислоты 467. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит G в положении аминокислоты 467. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит V в положении аминокислоты 480. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит D в положении аминокислоты 494. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит G в положении аминокислоты 494. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно эталонной аминокислотной последовательности AOS2, при этом указанная эталонная аминокислотная последовательность AOS2 содержит Т в положении аминокислоты 495. В другом варианте реализации мутированный белок AOS2 может состоять из любой комбинации мутаций аминокислот в любых положениях в указанном белке относительно эталонной последовательности (например, SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49). В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно соответствующего белка AOS2, который обеспечивает менее чем приемлемую устойчивость и/или толерантность к патогену (например, устойчивый к Phytophthora infestans). В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью одной или более мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере одной мутации. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере двух мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере трех мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере четырех мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере пяти мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере шести мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере семи мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере восьми мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере девяти мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере десяти мутаций. В некоторых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере одиннадцати мутаций. В неко- 6 037142 торых вариантах реализации белок AOS2 модифицирован с помощью по меньшей мере двенадцати мутаций. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 представляет собой один или более белков AOS2 Solanum tuberosum. В некоторых вариантах реализации термин мутированный белок

AOS2 относится к белку AOS2, который обеспечивает повышенную устойчивость и/или толерантность к одному или более патогенам по сравнению с эталонным белком.

В настоящем описании термин ниже чем приемлемый уровень устойчивости и/или толерантности к патогену означает, что чувствительность растения или сельскохозяйственной культуры к патогену снижает или губит коммерческую рентабельность указанного растения или сельскохозяйственной культуры. В некоторых вариантах реализации ниже чем приемлемый уровень устойчивости и/или толерантности к патогену снижает рентабельность растения или сельскохозяйственной культуры по меньшей мере на 10%; или по меньшей мере на 25%; или по меньшей мере на 50%; или по меньшей мере на 75%; или по меньшей мере на 100% по сравнению с аналогичным растением или сельскохозяйственной культурой, которая является устойчивой и/или толерантной к патогену. Рентабельность сельскохозяйственной культуры или растения с приемлемым уровнем устойчивости и/или толерантности к патогену, напротив, по существу не снижается или не губится вследствие воздействия патогена. В некоторых вариантах реализации рентабельность растения или сельскохозяйственной культуры снижается менее чем на 20%; или менее чем на 15%, или менее чем на 10% в результате воздействия патогена. Рентабельность сельскохозяйственной культуры или растения с уровнем устойчивости и/или толерантности к патогену выше приемлемого снижается менее чем на 10%; или менее чем на 5%, или менее чем на 2% в результате воздействия патогена.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, термин мутация относится к изменению по меньшей мере одного нуклеотида в гене AOS2 или изменению по меньшей мере одной аминокислоты в полипептиде относительно аминокислотной последовательности гена/белка AOS2, которое обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену. В некоторых вариантах реализации термин мутация относится к изменению по меньшей мере одного нуклеотида в гене AOS2 или изменению по меньшей мере одной аминокислоты в полипептиде относительно аминокислотной последовательности белка AOS2, которая не обеспечивает приемлемый уровень устойчивости и/или толерантности к патогену. В некоторых вариантах реализации мутация может включать замену, делецию, инверсию или встраивание в одном или более положениях в гене и/или белке. В некоторых вариантах реализации замена, делеция, встраивание или инверсия может включать изменение в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 или 37 положениях аминокислот. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, одна или более мутаций в мутированном белке AOS2 включает одну или более, две или более, три или более, четыре или более, пять или более, шесть или более, семь или более, восемь или более, девять или более, или десять или более, одиннадцать или более, двенадцать или более, тринадцать или более, четырнадцать или более, пятнадцать или более, шестнадцать или более, семнадцать или более, восемнадцать или более, девятнадцать или более, двадцать или более, двадцать одну или более, двадцать две или более, двадцать три или более, двадцать четыре или более, двадцать пять или более, двадцать шесть или более, двадцать семь или более, двадцать восемь или более, двадцать девять или более, тридцать или более, тридцать одну или более, тридцать две или более, тридцать три или более, тридцать четыре или более, тридцать пять или более, тридцать шесть или более, тридцать семь или более мутаций в положениях, соответствующих положениям, выбранным из группы, состоящей из 6, 12, 30, 37, 46, 48, 51, 76, 113, 145, 187, 197, 200, 227, 231, 256, 264, 270, 282, 289, 292, 309, 320, 328, 337, 338, 357, 381, 394, 407, 423, 430, 439, 467, 480, 494 и 495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, одна или более мутаций в мутированном белке AOS2 включает одну или более, две или более, три или более, четыре или более, пять или более, шесть или более, семь или более, восемь или более, девять или более, или десять или более, одиннадцать или более, двенадцать или более, тринадцать или более, четырнадцать или более, пятнадцать или более, шестнадцать или более, семнадцать или более, восемнадцать или более, девятнадцать или более, двадцать или более, двадцать одну или более, двадцать две или более, двадцать три или более, двадцать четыре или более, двадцать пять или более мутаций в положениях, выбранных из группы, состоящей из S6, Р12, R12, V30, Т37, F46, L46, 148, Т48, 151, D76, D113, G113, Y145, F187, D197, Е197, Т200, Т227, G231, Т231, F256, V256, Т264, F270, F282, S282, N289, S289, А292, I309, L309, L320, М320, L328, V328, D337, Е337, L338, V338, I357, М357, L381, Р381, K394, С407, G407,1423, F430, А439 (где А обозначает делецию), G467, S467, Т480, D494, G494 и K495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 содержит G в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ ID NO: 1, и V в положении, соответствующем положению 328 последова- 7 037142 тельности SEQ ID NO: 1. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, одна или более мутаций в мутированном белке AOS2 включает одну или более мутаций, две или более мутаций, три или более мутаций, четыре или более мутаций, пять или более мутаций, шесть или более мутаций, семь или более мутаций, восемь или более мутаций, девять или более мутаций, или десять или более, одиннадцать или более, двенадцать или более, тринадцать или более, четырнадцать или более, пятнадцать или более, шестнадцать или более, семнадцать или более, восемнадцать или более, девятнадцать или более, двадцать или более, двадцать одну или более, двадцать две или более, двадцать три или более, двадцать четыре или более, двадцать пять или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из F6S, R12P, P12R, A30V, I37T, L46F, F46L, V48T, V48I, T48I, I48T, M51I, D76N, N76D, G113D, D113G, F145Y, L187F, D197E, E197D, К2ООТ, А227Т, I231T, I231G, G231T, T231G, F256V, V256F, А264Т, L270F, F282S, S282F, V289N, V289S, S289N, N289S, V292A, L309I, I309L, M320L, L320M, M328L, M328V, L328V, V328L, E337D, D337E, V338L, L338V, I357M, M357I, P381L, L381P, Т394К, G407C, C407G, F423I, L430F, Е439Δ, G467S, S467G, V480T, G494D, D494G и Т495К. В некоторых вариантах реализации одна или более мутаций в мутированном белке AOS2 включает одну или более мутаций, две или более мутаций, три или более мутаций, четыре или более мутаций, пять или более мутаций, шесть или более мутаций, семь или более мутаций, восемь или более мутаций, девять или более мутаций или десять или более, одиннадцать или более, двенадцать или более, тринадцать или более, четырнадцать или более, пятнадцать или более, шестнадцать или более, семнадцать или более, восемнадцать или более, девятнадцать или более, двадцать или более, двадцать одну или более, двадцать две или более, двадцать три или более, двадцать четыре или более, двадцать пять или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из: мутаций фенилаланин - серин в положении, соответствующем положению 6, аргинин - пролин в положении, соответствующем положению 12, пролин - аргинин в положении, соответствующем положению 12, аланин - валин в положении, соответствующем положению 30, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 37, фенилаланин - лейцин в положении, соответствующем положению 46, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 46, валин - треонин в положении, соответствующем положению 48, валин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 48, треонин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, метионин изолейцин в положении, соответствующем положению 51, аспарагин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - аспарагин в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 113, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 113, фенилаланин - тирозин в положении, соответствующем положению 145, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 187, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 197, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 197, лизин - треонин в положении, соответствующем положению 200, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 227, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 231, изолейцин - глицин в положении, соответствующем положению 231, глицин - треонин в положении, соответствующем положению 231, треонин - глицин в положении, соответствующем положению 231, валин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 256, фенилаланин - валин в положении, соответствующем положению 256, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 264, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 270, серин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 282, фенилаланин - серин в положении, соответствующем положению 282, валин - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, валин - серин в положении, соответствующем положению 289, серин - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, аспарагин - серин в положении, соответствующем положению 289, валин - аланин в положении, соответствующем положению 292, изолейцин - лейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - изолейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - метионин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, метионин - валин в положении, соответствующем положению 328, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 328, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 337, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 337, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 338, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 338, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 357, изолейцин - метионин в положении, соответствующем положению 357, лейцин - пролин в положении, соответствующем положению 381, пролин - лейцин в положении, соответствующем положению 381, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 394, цистеин - глицин в положении, соответствующем положению 407, глицин - цистеин в положении, соответствующем положению 407, фенилаланин - изолейцин в положении, соответствующем положению 423, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 430, серин - глицин в положении, соответствующем положению 467, глицин - серин в положении, соответствующем положению 467, валин - треонин в по- 8 037142 ложении, соответствующем положению 480, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 494, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 494, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, и мутации, представляющей собой делецию глутаминовой кислоты в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 33, 39, 41, 43, 45, 47 или 49.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит SEQ ID NO: 1. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит SEQ ID NO:3.

В соответствии с другим аспектом предложен способ получения растительной клетки. В некоторых вариантах реализации указанная растительная клетка содержит мутированный ген AOS2. В некоторых вариантах реализации указанный мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации растительная клетка могут быть частью устойчивого к патогену растения. Указанный способ может включать введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON); например, с использованием GRON с целевой мутацией, с изменением нуклеотида в гомологичном положении в гене AOS2. В некоторых вариантах реализации растительная клетка, полученная указанным способом, может содержать ген AOS2, способный экспрессировать мутированный белок AOS2. Способ может дополнительно включать идентификацию растительной клетки или растения, содержащего растительную клетку, которая (1) содержит мутированный ген AOS2 и/или (2) демонстрирует нормальный или измененный рост и/или каталитическую активность AOS2, повышенную стабильность фермента AOS2, способность передавать сигнал, и/или (3) демонстрирует более высокую устойчивость и/или толерантность к патогену по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа. Устойчивое к патогену растение, содержащее растительную клетку, такую как описана в настоящем документе, может быть идентифицировано в присутствии патогена. В некоторых вариантах реализации растительная клетка является трансгенной. В некоторых вариантах реализации растительная клетка является нетрансгенной. Растение, содержащее растительную клетку, такую как описана в настоящем документе, может представлять собой нетрансгенное устойчивое/толерантное к патогену растение; например, растение и/или растительная клетка может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение, содержащее растительную клетку, описанную в настоящем документе, может быть получено бесполым способом; например, из одной или более растительных клеток или из растительной ткани, состоящей из одной или более растительных клеток; например, из клубня или части клубня картофеля, имеющего по меньшей мере один или два глазка (спящие почки), часто называемого семенным картофелем. В некоторых вариантах реализации растение, содержащее растительную клетку, такую как описана в настоящем документе, может быть получено половым способом с получением настоящего генетического семени.

В соответствии с другим аспектом предложен способ получения устойчивого и/или толерантного к патогену растения. Указанный способ может включать введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON); например, с использованием GRON с целевой мутацией, с изменением нуклеотида в гомологичном положении в гене AOS2. С помощью указанного способа можно получать растительную клетку с мутированным геном AOS2. Указанный мутированный ген AOS2 может экспрессировать мутированный белок AOS2. Указанный способ может дополнительно включать идентификацию растения, демонстрирующего нормальный или измененный рост, каталитическую активность белка AOS2, стабильность фермента AOS2 и/или способность передавать сигнал по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа. Указанный способ может дополнительно включать регенерацию устойчивого к патогену растения из растительной клетки с мутированным геном AOS2. Растение может быть идентифицировано в присутствии патогенов. В некоторых вариантах реализации растение является трансгенным. В некоторых вариантах реализации растение является нетрансгенным. В некоторых вариантах реализации растение может представлять собой нетрансгенное устойчивое к патогену растение; например, растение может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает повышенную устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с измененной оценкой зрелости. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой поздней зрелости.

В соответствии с другим аспектом предложен способ получения растения с оценкой ранней, средней, среднеранней или поздней зрелости. Указанный способ может включать введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON); например, с использованием GRON с целевой мутацией, с изменением нуклеотида в гомологичном положении в гене AOS2. С помощью указанного способа можно получать растительную клетку с мутированным геном AOS2. Указанный мутированный ген AOS2 может экспрессировать мутированный белок AOS2. Указанный способ может дополнительно включать идентификацию растительной клетки, демонстрирующей нормальный рост и/или каталитиче

- 9 037142 скую активность по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа. Указанный способ может дополнительно включать регенерацию устойчивого к патогену растения из растительной клетки с мутированным геном AOS2. В некоторых вариантах реализации растение является нетрансгенным. Растение может представлять собой нетрансгенное растение с оценкой среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации растение может представлять собой нетрансгенное устойчивое к патогену растение; например, растение может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение является трансгенным. Растение может представлять собой нетрансгенное растение с оценкой среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации растение может представлять собой трансгенное устойчивое к патогену растение; например, растение может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену.

В соответствии с другим аспектом предложен способ повышения уровней жасмоновой кислоты в растении. Указанный способ может включать введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON); например, с использованием GRON с целевой мутацией, с изменением нуклеотида в гомологичном положении в гене AOS2. С помощью указанного способа можно получать растительную клетку с мутированным геном AOS2. Указанный мутированный ген AOS2 может экспрессировать мутированный белок AOS2. Указанный способ может дополнительно включать идентификацию растения, демонстрирующего нормальный или измененный рост, каталитическую активность белка AOS2, стабильность фермента AOS2 и/или способность передавать сигнал по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа. Указанный способ может дополнительно включать регенерацию растения с повышенными уровнями жасмоновой кислоты из растительной клетки с мутированным геном AOS2. Растение может быть идентифицировано в присутствии патогенов. В некоторых вариантах реализации растение является нетрансгенным. В некоторых вариантах реализации растение может представлять собой нетрансгенное устойчивое к патогену растение; например, растение может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с повышенными уровнями жасмоновой кислоты. В некоторых вариантах реализации растение является трансгенным. В некоторых вариантах реализации растение может представлять собой трансгенное устойчивое к патогену растение; например, растение может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с повышенными уровнями жасмоновой кислоты.

В соответствии с другим аспектом предложен способ повышения устойчивости и/или толерантности растения к патогену. Указанный способ может включать введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON); например, с использованием GRON с целевой мутацией, с изменением нуклеотида в гомологичном положении в гене AOS2. С помощью указанного способа можно получать растительную клетку с мутированным геном AOS2. Указанный мутированный ген AOS2 может экспрессировать мутированный белок AOS2. Указанный способ может дополнительно включать идентификацию растения, демонстрирующего нормальный или измененный рост и/или каталитическую активность белка AOS2, и/или стабильность белка AOS2 по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа. Указанный способ может дополнительно включать регенерацию устойчивого к патогену растения из растительной клетки с мутированным геном AOS2. Растение может быть идентифицировано в присутствии патогена. В некоторых вариантах реализации растение является нетрансгенным. В некоторых вариантах реализации растение может представлять собой нетрансгенное устойчивое к патогену растение; например, растение может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой поздней зрелости. В некоторых вариантах реализации растение является трансгенным. В некоторых вариантах реализации растение может представлять собой трансгенное устойчивое к патогену растение; например, растение может содержать мутированный ген AOS2, который обуславливает устойчивость и/или толерантность по меньшей мере к одному патогену. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации растение может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой поздней зрелости.

В соответствии с другим аспектом предложено растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2. В некоторых вариантах реализации указанный мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Desiree. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Bintje. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Fontana. В некоторых вариантах реализации рас- 10 037142 тение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Innovator. В некоторых вариантах реализации растение, содержащее растительную клетку, которая содержит мутированный ген AOS2, может быть устойчивым и/или толерантным к патогену. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка является нетрансгенной. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка является трансгенной.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, композиции и способы могут включать растение или растительную клетку, содержащую множественные гены AOS2, при этом каждый ген имеет два аллеля, в двух или более наборах хромосом. Например, тетраплоидное растение может содержать один, два, три или четыре мутированных аллеля AOS2. В некоторых вариантах реализации множественные гены AOS2 могут содержать одинаковую мутацию или разные мутации. В некоторых вариантах реализации множественные гены AOS2 могут содержать любую комбинацию или перестановку мутаций, например, мутаций AOS2, описанных в настоящем документе.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка может содержать мутации в гене/аллеле/локусе AOS2 в одной или более хромосомах. Растение или растительная клетка может включать растение с различными кратными числами хромосом; например, по меньшей мере одним набором хромосом, по меньшей мере двумя наборами хромосом, по меньшей мере тремя наборами хромосом, по меньшей мере четырьмя наборами хромосом, по меньшей мере пятью наборами хромосом, по меньшей мере шестью наборами хромосом, по меньшей мере семью наборами хромосом, по меньшей мере восьмью наборами хромосом, по меньшей мере девятью наборами хромосом, по меньшей мере десятью наборами хромосом, по меньшей мере одиннадцатью наборами хромосом и по меньшей мере двенадцатью наборами хромосом. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка включает растение с четырьмя наборами хромосом.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 содержит по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, или по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает оценку поздней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, является такой же мутацией, что и по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает оценку поздней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, отличается от по меньшей мере одной мутации, которая обеспечивает оценку поздней зрелости.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 содержит по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, и по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает оценку среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, является такой же мутацией, что и по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает оценку среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, отличается от по меньшей мере одной мутации, которая обеспечивает оценку среднеранней зрелости. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 содержит по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, и по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает оценку ранней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, является такой же мутацией, что и по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает оценку ранней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, отличается от по меньшей мере одной мутации, которая обеспечивает оценку ранней зрелости.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 содержит по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, и по меньшей мере одну мутацию, которая обеспечивает оценку средней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, является такой же мутацией, что и по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает оценку средней зрелости. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна мутация, которая обеспечивает устойчивость и/или толерантность к патогену, отличается от по меньшей мере одной мутации, которая обеспечивает оценку средней зрелости.

В соответствии с другим аспектом предложено семя, содержащее мутированный ген AOS2. В некоторых вариантах реализации указанное семя содержит мутированный ген AOS2. В некоторых вариантах реализации указанный мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2. В некоторых ва- 11 037142 риантах реализации указанный мутированный белок AOS2 может быть устойчивым и/или толерантным к патогену. В некоторых вариантах реализации семя является устойчивым и/или толерантным к патогену. В некоторых вариантах реализации семя может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить устойчивое и/или толерантное к патогену растение. В некоторых вариантах реализации семя является нетрансгенным. В некоторых вариантах реализации семя является трансгенным. В некоторых вариантах реализации семя может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации семя может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой поздней зрелости.

В соответствии с другим аспектом предложен вегетативный растительный материал, который позволяет получить новое растение, включая, но не ограничиваясь ими, клубни или их части, имеющие по меньшей мере один глазок, выращенные in vitro побеги, побеги с корнями или полученный из протопластов каллюс, содержащий по меньшей мере один мутированный аллель AOS2. В некоторых вариантах реализации такой вегетативно размноженный материал содержит мутированный ген AOS2. В некоторых вариантах реализации указанный мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации указанный мутированный белок AOS2 может быть устойчивым и/или толерантным к патогену. В некоторых вариантах реализации вегетативный материал является устойчивым и/или толерантным к патогену. В некоторых вариантах реализации вегетативный материал может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить устойчивое и/или толерантное к патогену растение. В некоторых вариантах реализации вегетативный материал является нетрансгенным. В некоторых вариантах реализации вегетативный материал является трансгенным. В некоторых вариантах реализации вегетативный материал может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой среднеранней зрелости. В некоторых вариантах реализации вегетативный материал может содержать мутированный ген AOS2, который позволяет получить растение с оценкой поздней зрелости.

В соответствии с другим аспектом предложен способ повышения устойчивости и/или толерантности растения к патогену путем: (а) скрещивания первого растения со вторым растением, при котором первое растение содержит мутированный ген AOS2, при этом указанный ген кодирует мутированный белок AOS2; (b) скрининга популяции, полученной в результате скрещивания, на предмет повышенной устойчивости и/или толерантности к патогену; (с) отбора элемента, полученного в результате скрещивания, обладающего повышенной устойчивостью и/или толерантностью к патогену; и (d) получения семян в результате скрещивания. В некоторых вариантах реализации гибридное семя получают любым из вышеуказанных способов. В некоторых вариантах реализации растения выращивают из семян, полученных любым из вышеуказанных способов. В некоторых вариантах реализации растения и/или семена являются нетрансгенными. В некоторых вариантах реализации растения и/или семена являются трансгенными. В некоторых вариантах реализации первое и второе растения представляют собой растения Solanum tuberosum. В некоторых вариантах реализации растения и/или семена имеют оценку ранней, среднеранней, средней или поздней зрелости.

В соответствии с другим аспектом предложена выделенная нуклеиновая кислота мутированного гена AOS2. В некоторых вариантах реализации выделенная нуклеиновая кислота кодирует мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации выделенная нуклеиновая кислота кодирует мутированный белок AOS2, который является устойчивым и/или толерантным к патогену. В некоторых вариантах реализации выделенная нуклеиновая кислота кодирует мутированный белок AOS2, который позволяет получить растение с оценкой ранней, средней, среднеранней или поздней зрелости.

В соответствии с другим аспектом предложен вектор экспрессии, содержащий выделенную нуклеиновую кислоту мутированного гена AOS2. В некоторых вариантах реализации указанный вектор экспрессии содержит выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую белок AOS2.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, способы и композиции, описанные в настоящем документе, включают один или более мутированных генов AOS2, которые кодируют один или более белков AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный хлоропластный целевой ген AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный ген AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный ген AOS2 Solanum tuberosum; например StAOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2-1 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2-6 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2-12 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2-7 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2-8 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB1 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB2 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB3 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутиро

- 12 037142 ванный аллель StAOS2 CB4 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB5 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB6 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB7 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB8 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB9 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB10 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB11 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB12 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB13 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB14 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB15 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB16 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB17 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB18 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB19 гена AOS2. В некоторых вариантах реализации способы и композиции включают мутированный аллель StAOS2 CB20 гена AOS2.

В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере один ген/аллель, содержащий А в положении 691. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере два гена/аллеля, содержащие А в положении 691. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере три гена/аллеля, содержащие А в положении 691. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере четыре гена/аллеля, содержащие А в положении 691. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель Desiree. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель Bintje. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49.

В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере один ген/аллель, содержащий С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере два гена/аллеля, содержащие С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере три гена/аллеля, содержащие С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере четыре гена/аллеля, содержащие С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель Desiree. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель Bintje. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере один ген/аллель, содержащий А в положении 691 и С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере два гена/аллеля, содержащие А в положении 691 и С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере три гена/аллеля, содержащие А в положении 691 и С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая мутированный ген AOS2, содержит по меньшей мере четыре гена/аллеля, содержащие А в положении 691 и С в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель Desiree. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка представляет собой картофель Bintje. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представ- 13 037142 ляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50.

В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка содержит мутированный ген AOS2, содержащий А в положении 691. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка демонстрирует полиплоидию. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 полиплоидного растения содержит А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере пять мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере шесть мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере семь мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере восемь мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере девять мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере десять мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50. В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, картофель или клетка картофеля содержит мутированный ген AOS2, содержащий А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 картофеля или клетки картофеля содержит А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля или клетки картофеля содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля или клетки картофеля содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля или клетки картофеля содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50.

В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, картофель Desiree или клетка картофеля Desiree содержит мутированный ген AOS2, содержащий А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержит А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50.

В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, картофель Bintje или клетка картофеля Bintje содержит мутированный ген AOS2, содержащий А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержит А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержат А в положении 691. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50. В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка содержит мутированный ген AOS2, содержащий А в положении 692. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка демонстрирует полиплоидию. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 полиплоидного

- 14 037142 растения содержит С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере пять мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере шесть мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере семь мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере восемь мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере девять мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере десять мутированных генов/аллелей AOS2 полиплоидного растения содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50. В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, картофель или клетка картофеля содержит мутированный ген AOS2, содержащий С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 картофеля или клетки картофеля содержит С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля или клетки картофеля содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля или клетки картофеля содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля или клетки картофеля содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50.

В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, картофель Desiree или клетка картофеля Desiree содержит мутированный ген AOS2, содержащий С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержит С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Desiree или клетки картофеля Desiree содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50.

В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, картофель Bintje или клетка картофеля Bintje содержит мутированный ген AOS2, содержащий С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один мутированный ген/аллель AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержит С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере два мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере три мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере четыре мутированных гена/аллеля AOS2 картофеля Bintje или клетки картофеля Bintje содержат С в положении 692. В некоторых вариантах реализации указанный ген (гены)/аллель (аллели) не представляет собой трансген (трансгены). В некоторых вариантах реализации ген AOS2 представляет собой SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 или 50. В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка является тетраплоидной. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип АААА/СССС, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAAG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации

- 15 037142 тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAAG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAAG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAAG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAAG/CGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/CGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AGGG/CGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/GGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AGGG/GGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение или растительная клетка содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип GGGG/GGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка является нетрансгенной. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка является трансгенной.

В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка представляет собой картофель или клетку картофеля. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип АААА/СССС, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAAG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации тетраплоидное растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAAG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAAG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/CCCG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAAG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/CCGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2.

- 16 037142

В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAAG/CGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/CGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AGGG/CGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AAGG/GGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип AGGG/GGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации растение, представляющее собой картофель, или клетка картофеля содержит мутации в гене (генах)/аллеле (аллелях) AOS2, которые образуют генотип GGGG/GGGG, в положениях нуклеотидов, соответствующих 691/692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации картофель представляет собой картофель Desiree. В некоторых вариантах реализации картофель представляет собой картофель Bintje. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка является нетрансгенной. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка является трансгенной.

В соответствии с любым из различных аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение или растительная клетка представляет собой картофель или клетку картофеля Solanum tuberosum. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растение, содержащее растительную клетку, которая содержит мутированный ген AOS2, может иметь оценку ранней, средней среднеранней или поздней зрелости. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка является нетрансгенной. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка является трансгенной. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка содержит мутацию в кодирующей последовательности гена AOS2. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка содержит мутацию в некодирующей последовательности гена AOS2. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка содержит мутацию, расположенную выше кодирующей последовательности гена AOS2.

В настоящем описании термин ген относится к последовательности ДНК, которая включает контрольную и кодирующую последовательности, необходимые для образования РНК, которая может выполнять некодирующую функцию (например, рибосомная или транспортная РНК) или которая может включать полипептид или предшественник полипептида. РНК или полипептид может кодироваться полноразмерной кодирующей последовательностью или любой частью указанной кодирующей последовательности, если сохраняется желаемая активность или функция. Термин ген также относится и включает соответствующие аллели культурного сорта растения или линии растения.

Аллель представляет собой одну из нескольких альтернативных форм гена или нуклеотидной последовательности в конкретной вариации в конкретном положении в образце нуклеиновой кислоты. Аллель может быть представлен одним или более изменениями оснований в конкретном локусе (например, SNP). Например, в каждом аутосомном локусе диплоидный индивидуум имеет 2 аллеля: один наследованный по материнской линии, другой - по отцовской.

В настоящем описании термин патоген относится к инфекционному агенту, который вызывает заболевание у хозяина. В некоторых вариантах реализации патоген представляет собой Phytophthora infestans.

В настоящем описании термин кодирующая последовательность относится к последовательности нуклеиновой кислоты или ее комплементарной последовательности, или ее части, которая может транскрибироваться и/или транслироваться с образованием мРНК и/или полипептида, или его фрагмента. Кодирующие последовательности включают экзоны в геномной ДНК или незрелых первичных РНКтранскриптах, которые соединены друг с другом с помощью биохимических механизмов клетки с образованием зрелой мРНК. Антисмысловая цепь комплементарна такой нуклеиновой кислоте, и из нее может быть выведена кодирующая последовательность.

В настоящем описании термин некодирующая последовательность относится к последовательности нуклеиновой кислоты или ее комплементарной последовательности, или ее части, которая не транскрибируется в аминокислоту in vivo, или те области, в которых тРНК не вступает во взаимодействие для переноса или попытки переноса аминокислоты. Некодирующие последовательности включают как последовательности интронов в геномной ДНК или незрелых первичных РНК-транскриптах, так и генассоциированные последовательности, такие как промоторы, энхансеры, сайленсеры и т.д.

Нуклеооснование представляет собой основание, которое в некоторых предпочтительных вариан

- 17 037142 тах реализации представляет собой пурин, пиримидин или их производное, или аналог. Нуклеозиды представляют собой нуклеооснования, которые содержат пентозафуранозильную группу, например, возможно содержащий заместители рибозид или 2'-дезксирибозид. Нуклеозиды могут быть связаны одним из нескольких связывающих фрагментов, которые могут содержать или могут не содержать фосфор. Нуклеозиды, которые связаны не содержащими заместители фосфодиэфирными связями, называются нуклеотидами. В настоящем описании термин нуклеооснование включает пептидные нуклеооснования, субъединицы пептидных нуклеиновых кислот и морфолиновые нуклеооснования, а также нуклеозиды и нуклеотиды.

Олигонуклеооснование представляет собой полимер, содержащий нуклеооснования; предпочтительно по меньшей мере часть которого может гибридизоваться путем спаривания оснований по Уотсону-Крику с ДНК, имеющей комплементарную последовательность. Цепь олигонуклеооснования может иметь один 5'-и 3'-конец, которые представляют собой крайние нуклеооснования полимера. Конкретная цепь олигонуклеооснования может содержать нуклеооснования всех типов. Олигонуклеооснование представляет собой соединение, содержащее одну или более цепей олигонуклеооснований, которые могут быть комплементарными и гибридизоваться путем спаривания оснований по Уотсону-Крику. Нуклеооснования рибо-типа включают нуклеооснования, содержащие пентозафуранозил, где 2' углерод представляет собой метилен, содержащий в качестве заместителей гидроксил, алкилокси или галоген. Нуклеооснования дезоксирибо-типа представляют собой нуклеооснования, отличные от нуклеооснований рибо-типа, и включают все нуклеооснования, которые не содержат пентозафуранозильную группу.

В некоторых вариантах реализации нить олигонуклеооснования может включать как цепи олигонуклеооснований, так и сегменты или области цепей олигонуклеооснований. Нить олигонуклеооснования может иметь 3'-конец и 5'-конец, и когда нить олигонуклеооснования и цепь одинаковы по протяженности, 3'- и 5'-концы нити являются также 3'- и 5'-концами цепи.

В настоящем описании термин олигонуклеооснование репарации генов или GRON относится к олигонуклеооснованиям, включающим смешанные дуплексные олигонуклеотиды, молекулы, содержащие ненуклеотиды, одноцепочечные олигодезоксинуклеотиды и другие молекулы репарации генов.

В настоящем описании термин выделенный применительно к нуклеиновой кислоте (например, олигонуклеотиду, такому как РНК, ДНК или смешанный полимер) относится к нуклеиновой кислоте, которая отделена от значительной части генома, в котором она встречается в природе, и/или по существу отделена от других клеточных компонентов, которые сопровождают такую нуклеиновую кислоту в природе. Например, любая нуклеиновая кислота, которая была получена путем синтеза (например, путем последовательной конденсации оснований), считается выделенной. Подобным образом, нуклеиновые кислоты, рекомбинантно экспрессированные, клонированные, полученные путем реакции удлинения праймера (например, ПНР) или иным образом вырезанные из генома, также считаются выделенными.

В настоящем описании термин аминокислотная последовательность относится к полипептидной или белковой последовательности. Обозначение АКдт###АКмут используется для указания на мутацию, приводящую к замене к замене аминокислоты дикого типа АКдт в положении ### в полипептиде на мутантную АКмут. В настоящем описании термин комплементарная последовательность относится к последовательности, комплементарной нуклеиновой кислоте согласно стандартным правилам спаривания по Уотсону/Крику. Комплементарная последовательность может также представлять собой последовательность РНК, комплементарную последовательности ДНК или ее комплементарной последовательности, и может также представлять собой кДНК.

В описании термин по существу комплементарный относится к двум последовательностям, которые гибридизуются в условиях гибридизации, близких к жестким. Специалисту в данной области техники будет очевидно, что по существу комплементарные последовательности не обязательно гибридизуются по всей длине. В настоящем описании термин кодон относится к последовательности из трех соседних нуклеотидов (либо РНК, либо ДНК), составляющей генетический код, который определяет присоединение конкретной аминокислоты в полипептидной цепи во время синтеза белка или сигнал остановки синтеза белка. Термин кодон также относится к соответствующим (и комплементарным) последовательностям из трех нуклеотидов в матричной РНК, в которую транскрибируется исходная ДНК.

В настоящем описании термин дикий тип относится к гену или генному продукту, который обладает характеристиками данного гена или генного продукта, когда он выделен из встречающегося в природе источника. Ген дикого типа представляет собой ген, который чаще всего наблюдается в популяции и, таким образом, произвольно называется нормальной формой гена или формой гена дикого типа. Термин дикий тип может также относиться к последовательности в конкретном положении или положениях нуклеотидов, или к последовательности в конкретном положении или положениях кодонов, или к последовательности в конкретном положении или положениях аминокислот.

В настоящем описании термин мутантный или модифицированный относится к нуклеиновой кислоте или белку, демонстрирующему модификации последовательности и/или функциональных свойств (т.е. измененные характеристики) по сравнению с геном или генным продуктом дикого типа. Термин мутантный или модифицированный также относится к последовательности в конкретном положении или положениях нуклеотидов, или к последовательности в конкретном положении или поло- 18 037142 жениях кодонов, или к последовательности в конкретном положении или положениях аминокислот, демонстрирующей модификации последовательности и/или функциональных свойств (т.е. измененные характеристики) по сравнению с геном или генным продуктом дикого типа.

В настоящем описании термин гомология относится к сходству последовательностей среди белков и ДНК. Термин гомология или гомологичный относится к степени идентичности. Гомология может быть частичной или полной. Частично гомологичная последовательность представляет собой последовательность, которая обладает менее чем 100% идентичностью последовательности при сравнении с другой последовательностью.

В настоящем описании термин гетерозиготный относится к наличию разных аллелей в одном или более генетических локусах в гомологичных сегментах хромосом. В настоящем описании термин гетерозиготный может также относиться к образцу, клетке, клеточной популяции или организму, в котором могут быть обнаружены разные аллели в одном или более генетических локусах. Гетерозиготные образцы могут быть также определены с помощью способов, известных в данной области техники, таких как, например, секвенирование нуклеиновых кислот. Например, если электрофореграмма секвенирования демонстрирует два пика в одном локусе, и оба пика приблизительно одинакового размера, образец может быть охарактеризован как гетерозиготный. Или, если один пик меньше другого, но составляет по меньшей мере примерно 25% от размера более крупного пика, образец может быть охарактеризован как гетерозиготный. В некоторых вариантах реализации меньший пик составляет по меньшей мере примерно 15% от более крупного пика. В некоторых вариантах реализации меньший пик составляет по меньшей мере примерно 10% от более крупного пика. В некоторых вариантах реализации меньший пик составляет по меньшей мере примерно 5% от более крупного пика. В некоторых вариантах реализации обнаруживают минимальную величину меньшего пика. В настоящем описании термин гомозиготный относится к наличию идентичных аллелей в одном или более генетических локусах в гомологичных сегментах хромосом. Термин гомозиготный может также относиться к образцу, клетке, клеточной популяции или организму, в котором могут быть обнаружены одинаковые аллели в одном или более генетических локусах. Гомозиготные образцы могут быть определены с помощью способов, известных в данной области техники, таких как, например, секвенирование нуклеиновых кислот. Например, если электрофореграмма секвенирования демонстрирует один пик в конкретном локусе, образец может называться гомозиготным в отношении данного локуса.

Термин гемизиготный относится к гену или сегменту гена, присутствующему только один раз в генотипе клетки или организма, поскольку второй аллель подвергнут делеции. В настоящем описании термин гемизиготный может также относиться к образцу, клетке, клеточной популяции или организму, в котором аллель в одном или более генетических локусах может быть обнаружен только один раз в генотипе. В настоящем описании термин состояние зиготности относится к образцу, клеточной популяции или организму, оказывающемуся гетерозиготным, гомозиготным или гемизиготным по результатам способов тестирования, известных в данной области техники и описанных в настоящем документе. Термин состояние зиготности нуклеиновой кислоты означает определение того, является источник нуклеиновой кислоты гетерозиготным, гомозиготным или гемизиготным. Термин состояние зиготности может относиться к отличиям одного нуклеотида в последовательности. В некоторых способах состояние зиготности образца по отношению к одной мутации может быть отнесено к категории: гомозиготный дикого типа, гетерозиготный (т.е. один аллель дикого типа и один мутантный аллель), гомозиготный мутантный или гемизиготный (т.е. одна копия либо аллеля дикого типа, либо мутантного аллеля).

В настоящем описании термин примерно означает в количественном выражении плюс или минус 10%. Например, термин примерно 3% будет включать 2,7-3,3%, и термин примерно 10% будет включать 9-11%. Более того, если термин примерно употребляется в настоящем описании в сочетании с количественным выражением, очевидно, что в дополнение к значению плюс или минус 10% также предполагается и описывается точное значение указанного количественного выражения. Например, термин примерно 3% явным образом предполагает, описывает и включает точно 3%.

Краткое описание фигур

Фиг. 1 представляет собой аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель 1 (SEQ ID NO: 1);

фиг. 2 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель 1 (SEQ ID NO: 2);

фиг. 3 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель 6 (SEQ ID NO: 3);

фиг. 4 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель 6 (SEQ ID NO: 4);

фиг. 5 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель 7 (SEQ ID NO: 5);

фиг. 6 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель 7 (SEQ ID NO: 6);

фиг. 7 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель 8 (SEQ ID

- 19 037142

NO: 7);

фиг. 8 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель 8 (SEQ ID NO: 8);

фиг. 9 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель 12 (SEQ ID NO: 9);

фиг. 10 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель 12 (SEQ ID NO: 10);

фиг. 11 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ 1 (SEQ ID NO: 11);

фиг. 12 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ1 (SEQ ID NO: 12);

фиг. 13 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solarium tuberosum, аллель СВ2 (SEQ ID NO: 13);

фиг. 14 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ2 (SEQ ID NO: 14);

фиг. 15 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solarium tuberosum, аллель СВЗ (SEQ ID NO: 15);

фиг. 16 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВЗ (SEQ ID NO: 16);

фиг. 17 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solarium tuberosum, аллель СВ4 (SEQ ID NO: 17);

фиг. 18 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ4 (SEQ ID NO: 18);

фиг. 19 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solarium tuberosum, аллель СВ5 (SEQ ID NO: 19);

фиг. 20 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ5 (SEQ ID NO: 20);

фиг. 21 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solarium tuberosum, аллель СВ6 (SEQ ID NO: 21);

фиг. 22 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ6 (SEQ ID NO: 22);

фиг. 23 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solarium tuberosum, аллель СВ7 (SEQ ID NO: 23);

фиг. 24 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ7 (SEQ ID NO: 24);

фиг. 25 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solarium tuberosum, аллель СВ8 (SEQ ID NO: 25);

фиг. 26 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ8 (SEQ ID NO: 26);

фиг. 27 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ9 (SEQ ID NO: 27);

фиг. 28 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ9 (SEQ ID NO: 28);

фиг. 29 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ10 (SEQ ID NO: 29);

фиг. 30 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ10 (SEQ ID NO: 30);

фиг. 31 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ11 (SEQ ID NO: 31);

фиг. 32 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ11 (SEQ ID NO: 32);

фиг. 33 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ12 (SEQ ID NO: 33);

фиг. 34 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ12 (SEQ ID NO: 34);

фиг. 35 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ13 (SEQ ID NO: 35);

фиг. 36 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ13 (SEQ ID NO: 36);

фиг. 37 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ14 (SEQ ID NO: 37);

фиг. 38 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ14

- 20 037142 (SEQ ID NO: 38);

фиг. 39 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ15 (SEQ

ID NO: 39);

фиг. 40 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ15 (SEQ ID NO: 40);

фиг. 41 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ16 (SEQ ID NO: 41);

фиг. 42 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ16 (SEQ ID NO: 42);

фиг. 43 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ17 (SEQ ID NO: 43);

фиг. 44 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ17 (SEQ ID NO: 44);

фиг. 45 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solarium tuberosum, аллель СВ18 (SEQ ID NO: 45);

фиг. 46 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ18 (SEQ ID NO: 46);

фиг. 47 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solarium tuberosum, аллель СВ19 (SEQ ID NO: 47);

фиг. 48 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ19 (SEQ ID NO: 48);

фиг. 49 - аминокислотную последовательность белка AOS2 Solarium tuberosum, аллель СВ20 (SEQ ID NO: 49);

фиг. 50 - последовательность нуклеиновой кислоты гена AOS2 Solanum tuberosum, аллель СВ20 (SEQ ID NO: 50).

Подробное описание изобретения

Белки, представляющие собой алленоксидсинтазу.

Белки, представляющие собой алленоксидсинтазу 2 (AOS2), принадлежат к суперсемейству цитохрома Р450 и включают группу CYP74, специализирующуюся на метаболизме гидропероксидов. Данные белки играют роль в пути биосинтеза оксилипинов растений, который имеет важное значение для образования веществ, играющих важную роль в различных стрессовых процессах и в процессах развития растений, включая атаку патогенов/насекомых, а также фертильность растений. Hughes et al., Chembiochem 10:1122 (2009). Данные ферменты кодируются тремя различными генами AOS1, 2 и 3, которые катализируют соответствующее образование альдегидов С6, жасмоновой кислоты (ЖК) и альдегидов С9. AOS1 и AOS2 представляют собой ферменты, локализованные в хлоропластах, тогда как существуют данные о том, что экспрессия AOS3 ограничивается подземными органами картофеля. Stumpe et al., Plant J. 47: 883 (2006). Все три фермента представляют собой необычные белки цитохрома Р450, которые не связывают молекулярный кислород, но используют уже окисленные субстраты, представляющие собой гидропероксиды жирных кислот, в качестве донора кислорода. Schaller and Stintzi, Phytochemistry 70:1532 (2009). Белок AOS2 катализирует окончательный этап образования жасмоновой кислоты (ЖК) в растениях. Жасмоновая кислота хорошо известна своей важной ролью в индукции защиты растения в ответ на повреждение растения и атаку патогена.

Аллели алленоксидсинтазы 2 (AOS2) и SNP, связанные с устойчивостью и/или толерантностью к патогену.

Генный продукт AOS2 известен как алленоксидсинтаза 2 и катализирует превращение гидропероксидов в алленоксид, стадию активации в биосинтезе жасмоновой кислоты (ЖК). Жасмоновая кислота и ее производные, известные под общим названием жасмонаты, представляют собой ключевые сигнальные молекулы, вовлеченные в индукцию защитных реакций растения в ответ на атаку патогена или повреждение. Снижение выработки ЖК или чувствительности к ней приводит к увеличению подверженности растений к заболеваниям - например, мутанты Arabidopsis coil (Feys et al., Plant Cell. 6(5):751-759 (1994)). В картофеле использование ЖК ингибирует прорастание спорангиев и мицелиальный рост Phytophthora infestans (Pi). Ген AOS2 Solanum tuberosum (StAOS2) локализуется в локусе количественной устойчивости (QRL) в хромосоме XI картофеля, которая содержит ген устойчивости R3a, который играет роль в расоспецифической устойчивости к заболеванию Pi. Pajerowska et al., Planta 228:293 (2008). Кроме того, сайленсинг гена AOS2 в картофеле приводил к сильному снижению уровней жасмоновой кислоты в поврежденных растениях и увеличению развития поражения при инфицировании Pi. (Pajerowska-Mukhtar et al., 2008, Planta 228:293 (2008). Ген 5YAOS2 дополнял линию Arabidopsis thaliana с нокаутом гена AOS2, в которой отсутствовала ЖК, и данная дополненная линия растений по сравнению с линией с делецией указанного гена демонстрировала повышенную устойчивость к бактериальному патогену Arabidopsis. (Pajerowska-Mukhtar et al., 2008).

Известны последовательности пяти аллелей AOS2, происходящих из диплоидного картофеля, используемого в популяциях предварительного отбора. Pajerowska et al., (2008); Pajerowska-Mukhtar et al.,

- 21 037142

Genetics 181:1115 (2009). Данные пять различных аллелей распределены по трем группам: устойчивые (SYAOS2-1, SYAOS2-6), нейтральные (SYAOS2-12) и чувствительные (SYAOS2-7, S?AOS2-8). В вышеупомянутых опубликованных исследованиях две популяции потомств F1 гетерозиготных родительских линий были отнесены к категориям: количественные устойчивые, количественные нейтральные и количественные чувствительные в зависимости от развития фитофтороза. Позже данные категории были связаны с конкретными аллелями гена SYAOS2, перечисленными выше. Комплементационные анализы ЖК-дефицитного мутанта Arabidopsis с помощью аллелей StAOS2 приводили к восстановлению выработки ЖК (и 12-оксофитодиеноат (ОРОА)-редуктазы, промежуточного соединения в биосинтезе ЖК). Кроме того, комплементация устойчивыми аллелями приводила к 10-кратному увеличению выработки ЖК по сравнению с уровнями, которые давали чувствительные аллели. Нейтральный аллель демонстрировал промежуточные уровни ЖК и OPDA. Кроме того, анализ данных дополненных линий Arabidopsis на предмет патогена с использованием Erwinia carotovora ssp. carotovora подтвердил характеристики выработки ЖК, продемонстрировав в 10 раз больший рост бактерий в растениях, дополненных чувствительными аллелями, чем в случае устойчивых аллелей.

Сравнение аминокислотной последовательности пяти разных аллелей выявило наличие нескольких отличий аминокислот на протяжении высококонсервативной в остальном последовательности аллелей гена AOS2. Двадцать пять изменений аминокислот и один полиморфизм по типу встраивание/делеция (InDel) присутствуют в пяти аллелях, при этом пять аминокислот (N76D, V289S, V292A, M328L и Т495К) и InDel характерны исключительно для устойчивых аллелей на основе нумерации чувствительного аллеля StAOS2-7 (SEQ ID NO: 5). Изменение аминокислот не было характерно исключительно для чувствительных аллелей. Три замены (Y145F, T231I/G и К394Т) встречались в нейтральном аллеле. Pajerowska et al., Planta 228:293 (2008). Замены аминокислот Т495К и N76D расположены в непосредственной близости от активного сайта. Полиморфизм F256V между StAOS2-1 и StAOS2-6 выдвигается в качестве объяснения несколько меньшей эффективности StAOS2-6 на основе его локализации относительно субстрат-связывающего кармана. Кроме того, Y145F нейтрального аллеля может вносить вклад в промежуточные характеристики активности, поскольку данный остаток расположен рядом с активным сайтом. Pajerowska-Mukhtar et al., Planta 228:293 (2008).

Оценка полевой устойчивости культурных сортов картофеля к Pi показала, что ген AOS2 представляет собой имеющий важное значение локус, который определяет фенотип устойчивости некоторых культурных сортов. Pajerowska-Mukhtar et al., Genetics 181:1115 (2009). Два SNP, StAOS2_SNP691(A) и StAOS2_SNP692(C) коррелируют с полевой устойчивостью (значение rAUDPC 0,15, которое указывает на очень низкое развитие заболевания). В данном исследовании наиболее устойчивым к фитофторозу генотипом был гомозиготный генотип АААА/СССС, и наблюдали положительную корреляцию со степенью отклонения от него и тяжестью развития фитофтороза. Также существуют данные о том, что эти SNP связаны со зрелостью растений (РМ). В целом, существует положительная корреляция между оценкой зрелости картофеля (культурные сорта с ранней зрелостью относительно культурных сортов с поздней зрелостью) и устойчивостью к Pi. Wastie R.L., Adv Plant Pathology 7: 193 (1999). Однако гомозиготные по аллелям А и С индивидуумы относятся к классу среднеранней зрелости, что таким образом отделяет их от крайне нежелательного фенотипа поздней зрелости. Pajerowska-Mukhtar et al., Genetics 181:1115 (2009).

Solanum tuberosum представляет собой полностью гетерозиготный тетраплоид, что затрудняет передачу желаемых признаков между культурными сортами для экспрессии в потомстве. Кроме того, некоторые виды Solanum с природной устойчивостью к насекомым-вредителям и заболеваниям, такие как некоторые, встречающиеся в Перу и Центральной Америке, являются диплоидными и не легко разводятся с тетраплоидным Solanum tuberosum. Аутотетраплоидный геном и бесполое размножение, используемое для разведения картофеля, создает проблемы в разработке новых культурных сортов с желаемыми признаками. Признаки устойчивости, продемонстрированные у диплоидных видов, например Solanum bulbocastanum, недоступны для передачи, поскольку указанный вид имеет балансовое число эндосперма, равное 1, по сравнению с S.Tuberosum, имеющим балансовое число эндосперма, равное 4.

Применение системы быстрой доставки признака (Rapid Trait Development System, RTDS™) в картофеле обладает некоторыми преимуществами трансгенной генетической инженерии перед традиционным разведением. RTDS™ позволяет осуществлять манипуляцию с эндогенными генами AOS2, устраняя необходимость в обратном скрещивании, которое требуется для удаления нежелательных признаков при традиционном разведении. RTDS™ позволяет вводить мутации в генах, обеспечивающие устойчивость и/или толерантность, демонстрируемую другими видами, которые не обладают плоидностью, совместимой с S.tuberosum. Кроме того, RTDS™ обладает преимуществами перед трансгенной генетической инженерией. RTDS™ способна осуществлять манипуляции с эндогенными генами в противоположность введению чужеродного трансгена.

Система быстрой доставки признака (RTDS™).

В соответствии с любым из различных аспектов и вариантов композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутации в генах и белках можно осуществлять с применением, например, техно

- 22 037142 логии на основе системы быстрой доставки признака (RTDS™), разработанной Cibus. В комбинации или отдельно, растения, содержащие любую из мутаций, описанных в настоящем документе, могут служить основой для новых устойчивых и/или толерантных к патогену продуктов. Также предложены семена/растительный материал, полученный из мутированных растений, в котором гены AOS2 являются либо гомозиготными, либо гетерозиготными в отношении мутаций. Мутации, описанные в настоящем документе, могут быть в комбинации с любой другой известной мутацией или мутациями, обнаруживаемыми в дальнейшем.

В некоторых вариантах реализации RTDS™ основана на изменении целевого гена путем использования собственной системы клетки для репарации генов для специфической модификации последовательности гена in situ, а не встраивания чужеродной ДНК и последовательностей, контролирующих экспрессию генов. Данная процедура может производить точное изменение в генетической последовательности, тогда как остальная часть генома остается неизменной. В отличие от традиционных трансгенных ГМО, не происходит интеграция чужеродного генетического материала, а также в растении не остается никакой чужеродный генетический материал. Во многих вариантах реализации изменения в генетической последовательности, вводимые с помощью RTDS™, не являются вносимыми случайным образом. Поскольку затрагиваемые гены остаются в нативной локализации, не наблюдается случайный, неконтролируемый или неблагоприятный профиль экспрессии.

Способ RTDS™ осуществляют с использованием химически синтезированного олигонуклеотида (олигонуклеооснование репарации генов (GRON)), который может состоять как из оснований ДНК, так и модифицированных оснований РНК, а также других химических фрагментов, и предназначен для гибридизации в локализации целевого гена с образованием пары (пар) оснований, спаренных вопреки принципу комплементарности. Данная пара оснований, спаренных вопреки принципу комплементарности, выступает в качестве сигнала для привлечения собственной природной системы клетки для репарации генов в данный участок и коррекции (замены, встраивания или делеции) намеченного нуклеотида (нуклеотидов) в пределах гена. По завершении процесса коррекции молекула GRON распадается, и ныне модифицированный или подвергнутый репарации ген продолжает экспрессироваться в соответствии с обычными для данного гена внутренними механизмами контроля.

Олигонуклеооснования репарации генов (GRON).

Способы и композиции, описанные в настоящем документе, можно применять на практике или получать с помощью олигонуклеооснований репарации генов, например, имеющих конформации и химические структуры, подробно описанные ниже. Олигонуклеооснования репарации генов, предусмотренные настоящим изобретением, были также описаны в опубликованной научной и патентной литературе с использованием других названий, включая рекомбинагенные олигонуклеооснования; химерные РНК/ДНК-олигонуклеотиды; химерные олигонуклеотиды; смешанные дуплексные олигонуклеотиды (MDON); РНК ДНК-олигонуклеотиды (RDO); олигонуклеотиды направленного воздействия на гены; генопласты; одноцепочечные модифицированные олигонуклеотиды; одноцепочечные олигонуклеотидные мутационные векторы (SSOMV); дуплексные мутационные векторы и гетеродуплексные мутационные векторы.

Олигонуклеооснования, имеющие конформации и химические структуры, описанные в патенте США № 5565350 автором Kmiec (Kmiec I) и патенте США № 5731181 автором Kmiec (Kmiec II), содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки, подходят для применения в качестве олигонуклеооснований репарации генов согласно настоящему изобретению. Указанные олигонуклеооснования репарации генов в Kmiec I и/или Kmiec II содержат две комплементарные цепи, одна из которых содержит по меньшей мере один сегмент нуклеотидов РНК-типа (РНК-сегмент), основания которых спарены с нуклеотидами ДНК-типа другой цепи.

В Kmiec II описано, что нуклеотиды могут быть заменены на ненуклеотиды, содержащие пуриновые и пиримидиновые основания. Дополнительные молекулы репарации генов, которые можно использовать для настоящего изобретения, описаны в патентах США № 5756325; 5871984; 5760012; 5888983; 5795972; 5780296; 5945339; 6004804; и 6010907, и в международном патенте № PCT/US00/23457; и в международных публикациях патента № WO 98/49350; WO 99/07865; WO 99/58723; WO 99/58702; и WO 99/40789, полное содержание каждой из которых включено в настоящее описание.

В одном из вариантов реализации олигонуклеооснование репарации генов представляет собой смешанный дуплексный олигонуклеотид (MDON), в котором нуклеотидам РНК-типа указанного смешанного дуплексного олигонуклеотида придают устойчивость к РНКазе путем замены 2'-гидроксила функциональной группой, представляющей собой фтор, хлор или бром, или путем введения заместителя в 2'-О. Подходящие заместители включают заместители, указанные в Kmiec II. Альтернативные заместители включают заместители, указанные в патенте США № 5334711 (Sproat), и заместители, указанные в публикациях патента ЕР 629387 и ЕР 679657 (обобщенно заявки Martin), содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки. В настоящем описании 2'-фтор-, хлор- или бромпроизводное рибонуклеотида или рибонуклеотид, в котором 2'-ОН содержит заместитель, описанный в заявках Martin или у Sproat, называется 2'-содержащим заместители рибонуклеотидом. В настоящем описании термин

- 23 037142 нуклеотид РНК-типа означает 2'-гидроксильный или 2'-содержащий заместители нуклеотид, связанный с другими нуклеотидами смешанного дуплексного олигонуклеотида не содержащей заместителей фосфодиэфирной связью или любой из неприродных связей, указанных в Kmiec I или Kmiec II. В настоящем описании термин нуклеотид дезоксирибо-типа означает нуклеотид, содержащий 2'-Н, который может быть связан с другими нуклеотидами олигонуклеооснования репарации генов не содержащей заместителей фосфодиэфирной связью или любой из неприродных связей, указанных в Kmiec I или Kmiec II.

В конкретном варианте реализации настоящего изобретения олигонуклеооснование репарации генов представляет собой смешанный дуплексный олигонуклеотид (MDON), который связан исключительно не содержащими заместителей фосфодиэфирными связями. В альтернативных вариантах реализации указанная связь осуществляется содержащими заместители фосфодиэфирами, производными фосфодиэфиров и связями не на основе фосфора, указанными в Kmiec II. В другом варианте реализации каждый нуклеотид РНК-типа в смешанном дуплексном олигонуклеотиде представляет собой 2'содержащий заместители нуклеотид. Наиболее предпочтительными вариантами 2'-содержащих заместители рибонуклеотидов являются 2'-фтор-, 2'-метокси-, 2'-пропилокси-, 2'-аллилокси-, 2'-гидроксилэтилокси-, 2'-метоксиэтилокси-, 2'-фторпропилокси- и 2'-трифторпропилоксизамещенные рибонуклеотиды. Более предпочтительными вариантами 2'-содержащих заместители рибонуклеотидов являются 2'фтор-, 2'-метокси-, 2'-метоксиэтилокси- и 2'-аллилоксизамещенные нуклеотиды. В другом варианте реализации смешанный дуплексный олигонуклеотид связан не содержащими заместителей фосфодиэфирными связями.

Хотя смешанные дуплексные олигонуклеотиды (MDON), содержащие только один вид 2'содержащего заместители нуклеотида РНК-типа, удобнее синтезировать, способы согласно настоящему изобретению можно применять на практике с помощью смешанных дуплексных олигонуклеотидов, содержащих два или более видов нуклеотидов РНК-типа. Прерывание, вызванное введением дезоксинуклеотида между двумя тринуклеотидами РНК-типа, может не влиять на функцию РНК-сегмента, соответственно, термин РНК-сегмент включает такие термины, как прерванный РНК-сегмент. Непрерывный РНК-сегмент называется сплошным РНК-сегментом. В альтернативном варианте реализации РНКсегмент может содержать чередующиеся устойчивые к РНКазе нуклеотиды и нуклеотиды с не содержащим заместителей 2'-ОН. Смешанные дуплексные олигонуклеотиды предпочтительно содержат меньше 100 нуклеотидов и более предпочтительно меньше 85 нуклеотидов, но больше 50 нуклеотидов. Основания первой и второй цепей спарены по Уотсону-Крику. В одном из вариантов реализации цепи смешанного дуплексного олигонуклеотида ковалентно связаны линкером, таким как одноцепочечный гекса-, пента- или тетрануклеотид так, что первая и вторая цепи являются сегментами одной олигонуклеотидной цепи, имеющей один 3'- и один 5'-конец. Указанные 3'- и 5'-концы могут быть защищены путем присоединения шпилечного кэпа, при котором 3'- и 5'-концевые нуклеотиды спариваются по Уотсону-Крику с соседними нуклеотидами. Второй шпилечный кэп может быть дополнительно помещен на соединение между первой и второй цепями в отдалении от 3'- и 5'-концов так, чтобы стабилизировать спаривание по Уотсону-Крику между первой и второй цепями.

Первая и вторая цепи содержат две области, гомологичные двум фрагментам целевого гена, т.е. имеют такую же последовательность, что и целевой ген. Гомологичная область содержит нуклеотиды РНК-сегмента и может содержать один или более нуклеотидов ДНК-типа соединяющего ДНК-сегмента, и может также содержать нуклеотиды ДНК-типа, которые не находятся в пределах промежуточного ДНК-сегмента. Две области гомологии отделены и каждая из них прилегает к области, имеющей последовательность, отличную от последовательности целевого гена, называемой гетерологичной областью. Указанная гетерологичная область может содержать один, два или три несовпадающих нуклеотида. Несовпадающие нуклеотиды могут примыкать друг к другу или, в качестве альтернативы, могут быть разделены одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью, семью, восемью, девятью, десятью, одиннадцатью, двенадцатью, тринадцатью, четырнадцатью или пятнадцатью нуклеотидами, гомологичными целевому гену. В качестве альтернативы, гетерологичная область может также содержать вставку из одного, двух, трех или из пяти или менее нуклеотидов. В качестве альтернативы, последовательность смешанного дуплексного олигонуклеотида может отличаться от последовательности целевого гена только делецией одного, двух, трех или пяти, или менее нуклеотидов из смешанного дуплексного олигонуклеотида. В данном случае длиной и положением гетерологичной области считается длина делеции, даже несмотря на то, что в пределах гетерологичной области нет нуклеотидов смешанного дуплексного олигонуклеотида. Расстояние между фрагментами целевого гена, которые комплементарны двум гомологичным областям, идентично длине гетерологичной области, в которой предполагается замена или замены. Когда гетерологичная область содержит встраивание, гомологичные области таким образом расположены в смешанном дуплексном олигонуклеотиде дальше друг от друга, чем их комплементарные гомологичные фрагменты расположены в гене, и обратное утверждение применимо, когда гетерологичная область кодирует делецию.

Каждый из РНК-сегментов смешанных дуплексных олигонуклеотидов является частью гомологичной области, т.е. области, последовательность которой идентична фрагменту целевого гена, при этом указанные сегменты вместе предпочтительно содержат по меньшей мере 13 нуклеотидов РНК-типа и

- 24 037142 предпочтительно от 16 до 25 нуклеотидов РНК-типа или более предпочтительно 18-22 нуклеотида РНКтипа, или наиболее предпочтительно 20 нуклеотидов. В одном из вариантов реализации РНК-сегменты гомологичных областей разделены и прилегают к, т.е. соединены промежуточным ДНК-сегментом. В одном из вариантов реализации каждый нуклеотид гетерологичной области представляет собой нуклеотид промежуточного ДНК-сегмента. Промежуточный ДНК-сегмент, который содержит гетерологичную область смешанного дуплексного олигонуклеотида, называется мутаторным сегментом.

В другом варианте реализации настоящего изобретения олигонуклеооснование репарации генов (GRON) представляет собой одноцепочечный олигодезоксинуклеотидный мутационный вектор (SSOMV), например, такой как описан в международной заявке на патент PCT/US2000/23457; патентах США № 6271360; 6479292; и 7060500, полное содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки. Последовательность SSOMV основана на тех же принципах, что и мутационные векторы, описанные в патентах США № 5756325; 5871984; 5760012; 5888983; 5795972; 5780296; 5945339; 6004804; и 6010907, и в международных публикациях № WO 98/49350; WO 99/07865; WO 99/58723; WO 99/58702; и WO 99/40789. Последовательность SSOMV содержит две области, гомологичные целевой последовательности, разделенные областью, которая содержит желаемое генетическое изменение, называемой мутаторной областью. Мутаторная область может иметь последовательность той же длины, что и последовательность, которая разделяет гомологичные области в целевой последовательности, но отличную от нее последовательность. Такая мутаторная область может обуславливать замену. В качестве альтернативы, гомологичные области в SSOMV могут граничить друг с другом, в то время как области в целевом гене, имеющие такую же последовательность, разделены одним, двумя или более нуклеотидами. Такой SSOMV вызывает делецию нуклеотидов в целевом гене, которые отсутствуют в SSOMV. Наконец, последовательность целевого гена, которая идентична гомологичным областям, может быть смежной в целевом гене, но отделенной одним, двумя или более нуклеотидами в последовательности SSOMV. Такой SSOMV вызывает встраивание в последовательности целевого гена.

Нуклеотиды SSOMV представляют собой дезоксирибонуклеотиды, связанные немодифицированными фосфодиэфирными связями за исключением того, что 3'-концевая и/или 5'-концевая межнуклеотидная связь или, в качестве альтернативы, две 3'-концевые и/или 5'-концевые межнуклеотидные связи могут представлять собой фосфоротиоат или фосфоамидат. В настоящем описании межнуклеотидная связь представляет собой связь между нуклеотидами в SSOMV и не включает связь между 3'-концевым нуклеотидом или 5'-концевым нуклеотидом и блокирующим заместителем. В конкретном варианте реализации длина SSOMV составляет от 21 до 55 дезоксинуклеотидов, и длины областей гомологии составляют, соответственно, общую длину, равную по меньшей мере 20 дезоксинуклеотидам, и каждая из по меньшей мере двух областей гомологии должна иметь длину, равную по меньшей мере 8 дезоксинуклеотидам.

SSOMV может быть разработан таким образом, чтобы он был комплементарен либо кодирующей, либо некодирующей цепи целевого гена. В случае, когда желаемая мутация представляет собой замену одного основания, предпочтительно, чтобы как мутаторный нуклеотид, так и целевой нуклеотид представляли собой пиримидин. В тех случаях, когда это соответствует достижению желаемого функционального результата, предпочтительно, чтобы как мутаторный нуклеотид, так и целевой нуклеотид в комплементарной цепи представляли собой пиримидины. Наиболее предпочтительными являются SSOMV, которые кодируют трансверсии, т.е. мутаторный С или Т нуклеотид спаривается вопреки принципу комплементарности соответственно с С или Т нуклеотидом в комплементарной цепи.

В дополнение к олигодезоксинуклеотиду SSOMV может содержать 5'-блокирующий заместитель, присоединенный к 5'-концевым атомам углерода через линкер. Химическая структура линкера не имеет критического значения в отличие от его длины, которая предпочтительно должна составлять по меньшей мере 6 атомов, и линкер должен быть гибким. Можно использовать различные нетоксичные заместители, такие как биотин, холестерин или другие стероиды, или неинтеркалирующий катионный флуоресцентный краситель. Наиболее предпочтительными реагентами для получения SSOMV являются реагенты, продаваемые под названием Су3™ и Су5™ компанией Glen Research, Стерлинг, Вирджиния (в настоящее время GE Healthcare), которые представляют собой блокированные фосфорамидиты, которые при включении в олигонуклеотид образуют красители, представляющие собой 3,3,3',3'-тетрaметил-N,N'-изопропилзамещенный индомонокарбоцианин и индодикарбоцианин соответственно. Су3™ является наиболее предпочтительным. Когда индокарбоцианин является N-оксиалкилзамещенным, он может быть легко связан с 5'-концом олигодезоксинуклеотида в виде фосфодиэфира с 5'-концевым фосфатом. Химическая структура красителя-линкера между красителем и олигодезоксинуклеотидом не имеет критического значения и выбирается из соображений удобства синтеза. Когда коммерчески доступный фосфорамидит Су3™ используют в соответствии с указаниями, полученная 5'-модификация состоит из блокирующего заместителя и линкера, которые вместе представляют собой N-гидроксипропил, N'-фосфатидилпропил3,3,3',3'-тетраметилиндомонокарбоциацин.

В предпочтительном варианте реализации индокарбоцианиновый краситель является тетразамещенным в 3- и 3'-положениях индольных колец. Без ограничения рамками какой-либо теории, данные

- 25 037142 замещения препятствуют тому, чтобы указанный краситель был интеркалирующим красителем. Идентичность заместителей в данных положениях не имеет критического значения. SSOMV может дополнительно содержать 3'-блокирующий заместитель. Снова химическая структура указанного 3'-блокирующего заместителя не имеет критического значения.

Мутации, описанные в настоящем документе, также могут быть получены путем мутагенеза (случайного, соматического или направленного) и других технологий редактирования или рекомбинации ДНК, включая, но не ограничиваясь ими, направленное воздействие на гены с использованием сайтспецифической гомологичной рекомбинации под действием цинк-пальцевых нуклеаз, мегануклеаз или других нуклеаз.

Доставка олигонуклеооснований репарации генов в растительные клетки.

Для доставки олигонуклеооснований репарации генов можно использовать любой общеизвестный способ, используемый для трансформации растительной клетки. Типичные способы описаны ниже.

Микроносители и микроволокна.

Применение металлических микроносителей (микросфер) для введения крупных фрагментов ДНК в растительные клетки с целлюлозными клеточными стенками путем бомбардирующего проникновения хорошо известно специалисту в соответствующей области техники (далее биолистическая доставка). В патентах США № 4945050; 5100792 и 5204253 описана общая методика выбора микроносителей и устройств для их получения.

Конкретные условия применения микроносителей в способах согласно изобретению описаны в международной публикации WO 99/07865. Согласно типичной методике охлажденные до температуры льда микроносители (60 мг/мл), смешанный дуплексный олигонуклеотид (60 мг/мл), 2,5М CaCl₂ и 0,1М спермидин добавляют в данном порядке; смесь осторожно встряхивают, например, на вортексе в течение 10 мин, а затем оставляют при комнатной температуре на 10 мин, после чего микроносители разводят в 5 объемах этанола, центрифугируют и ресуспендируют в 100% этаноле. Хорошие результаты могут быть получены при концентрации в отвечающем условиям растворе, составляющей 8-10 мкг/мкл микроносителей, 14-17 мкг/мл смешанного дуплексного олигонуклеотида, 1,1-1,4М CaCl₂ и 18-22 мМ спермидин. Оптимальные результаты наблюдали в условиях, представляющих собой 8 мкг/мкл микроносителей, 16,5 мкг/мл смешанного дуплексного олигонуклеотида, 1,3М CaCl₂ и 21 мМ спермидин.

Олигонуклеооснования репарации генов можно также вводить в растительные клетки для практического применения настоящего изобретения с использованием микроволокон для проникновения в клеточную стенку и клеточную мембрану. В патенте США № 5302523 авторов Coffee et al. описано применение 30X0,5 мкм и 10X0,3 мкм карбидокремниевых волокон для облегчения трансформации суспензионных культур кукурузы Black Mexican Sweet. Любой механический способ, который можно использовать для введения ДНК для трансформации растительной клетки с использованием микроволокон, можно применять для доставки олигонуклеооснований репарации генов для трансмутации.

Типичная методика доставки олигонуклеооснования репарации генов с использованием микроволокон заключается в следующем: стерильные микроволокна (2 мкг) суспендируют в 150 мкл растительной культуральной среды, содержащей примерно 10 мкг смешанного дуплексного олигонуклеотида. Суспензионной культуре дают осесть и равные объемы клеточной массы и суспензии стерильного волокна/нуклеотида перемешивают на вортексе в течение 10 мин и высевают. Селективные среды добавляют сразу же или с отсрочкой до примерно 120 ч в зависимости от конкретного признака.

Электропорация протопластов.

В альтернативном варианте реализации олигонуклеооснования репарации генов могут быть доставлены в растительную клетку путем электропорации протопласта, полученного из части растения или суспензии растительных клеток. Протопласты получают путем ферментативной обработки части растения, в частности листа в соответствии с методиками, хорошо известными специалисту в данной области техники. См., например, Gallois et al., 1996, Methods in Molecular Biology 55:89-107, Humana Press, Totowa, N.J.; Kipp et al., 1999, Methods in Molecular Biology 133:213-221, Humana Press, Totowa, N.J. Протопласты не нужно культивировать в питательных средах перед электропорацией. Типичные условия электропорации являются следующими: 3X10 протопластов в общем объеме 0,3 мл с концентрацией олигонуклеооснования репарации генов, составляющей 0,6-4 мкг/мл.

ПЭГ-опосредуемое поглощение ДНК протопластами.

В альтернативном варианте реализации нуклеиновые кислоты поглощаются протопластами растений в присутствии модифицирующего мембрану агента полиэтиленгликоля в соответствии с методиками, хорошо известными специалисту в данной области техники (см., например, Gharti-Chhetri et al., Physiol. Plant. 85:345-351 (1992); Datta et al., Plant Molec. Biol. 20:619-629 (1992)).

Микроинъекция.

В альтернативном варианте реализации олигонуклеооснования репарации генов могут быть доставлены путем введения их с помощью микрокапилляра в растительные клетки или в протопласты (см., например, Miki В. et al., Meth. Cell Science 12:139-144 (1989); Schnorf M. et al., Transgen. Res. 1:23-30 (1991)).

- 26 037142

Трансгенные растения.

В соответствии с любым из различных аспектов и вариантов композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутации в генах и белках могут быть осуществлены с использованием, например, трансгенной технологии. В некоторых вариантах реализации композиции и способы включают растение или растительную клетку, содержащую конструкцию трансформированной нуклеиновой кислоты, включающую промотор, функционально связанный с нуклеотидом AOS2, описанным в настоящем документе. Способы, описанные в настоящем документе, могут включать введение конструкции нуклеиновой кислоты AOS2, описанной в настоящем документе, по меньшей мере в одну растительную клетку и регенерацию трансформированного растения на ее основе. Конструкция нуклеиновой кислоты содержит по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, которая кодирует устойчивый и/или толерантный к патогену белок AOS2, описанный в настоящем документе, в частности, нуклеотидные последовательности, представленные на фиг. 2 и 4, и их фрагменты и варианты. Способы дополнительно включают использование промотора, который способен регулировать экспрессию генов в растительной клетке. В одном из вариантов реализации такой промотор представляет собой конститутивный промотор или тканепредпочтительный промотор. Растение, получаемое данными способами, может обладать повышенной или стабилизированной активностью AOS2, и/или повышенными уровнями жасмоновой кислоты и/или 12-оксофитодиеновой кислоты (OPDA), приводящими к повышенной устойчивости и/или толерантности к патогенам по сравнению с нетрансформированным растением. Таким образом, указанные способы находят применение для усиления или повышения устойчивости и/или толерантности растения по меньшей мере к одному патогену.

В одном из вариантов реализации способы получения устойчивого и/или толерантного к патогену растения включают трансформацию растительной клетки конструкцией нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, функционально связанную с промотором, который регулирует экспрессию в растительной клетке, и регенерацию трансформированного растения из указанной трансформированной растительной клетки. Указанная нуклеотидная последовательность выбрана из тех нуклеотидных последовательностей, которые кодируют устойчивый и/или толерантный к патогену AOS2, описанный в настоящем документе, в частности, нуклеотидных последовательностей, представленных на фиг. 2 и 4, и их фрагментов и вариантов. Устойчивое и/или толерантное к патогену растение, получаемое данным способом, обладает повышенной устойчивостью и/или толерантностью по сравнению с нетрансформированным растением по меньшей мере к одному патогену, например, Phytophthora infestans.

Описанные молекулы нуклеиновой кислоты могут быть использованы в конструкциях нуклеиновых кислот для трансформации растений, например культурных растений, таких как Solanum tuberosum. В одном из вариантов реализации такие конструкции нуклеиновых кислот, содержащие молекулы нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению, можно применять для получения трансгенных растений с обеспечением устойчивости и/или толерантности к патогенам, таким как Phytophthora infestans. Конструкции нуклеиновых кислот можно применять в кассетах экспрессии, векторах экспрессии, трансформационных векторах, плазмидах и т.п. Трансгенные растения, получаемые в результате трансформации такими конструкциями, демонстрируют повышенную устойчивость и/или толерантность к патогенам, таким как, например, Phytophthora infestans.

Конструкции.

Молекулы нуклеиновой кислоты, описанные в настоящем документе (например, мутированные гены AOS2), можно применять для получения рекомбинантных конструкций нуклеиновых кислот. В одном из вариантов реализации молекулы нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению можно применять для получения конструкций нуклеиновых кислот, например кассет экспрессии для экспрессии в представляющем интерес растении.

Кассеты экспрессии могут содержать регуляторные последовательности, функционально связанные с последовательностями нуклеиновых кислот AOS2, описанными в настоящем документе. Кассета может дополнительно содержать по меньшей мере один дополнительный ген для котрансформации в организме. В качестве альтернативы, указанный дополнительный ген (гены) может быть предусмотрен в нескольких кассетах экспрессии.

Конструкции нуклеиновых кислот могут быть снабжены множеством сайтов рестрикции для встраивания последовательности нуклеиновой кислоты AOS2 таким образом, чтобы находиться под регуляцией транскрипции регуляторными областями. Конструкции нуклеиновых кислот могут дополнительно содержать молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие селектируемые маркерные гены.

Для получения конструкций нуклеиновых кислот можно использовать любой промотор. Промотор может быть нативным или схожим, или чужеродным, или гетерологичным по отношению к растениюхозяину и/или по отношению к последовательностям нуклеиновых кислот AOS2, описанным в настоящем документе. Кроме того, промотор может представлять собой природную последовательность или, в качестве альтернативы, синтетическую последовательность. В случае, когда промотор является чужеродным или гетерологичным по отношению к растению-хозяину, предполагается, что указанный промотор не встречается в нативном растении, в который вводят промотор. В случае, когда промотор является чужеродным или гетерологичным по отношению к последовательностям нуклеиновых кислот

- 27 037142

AOS2, описанным в настоящем документе, предполагается, что указанный промотор не является ни нативным, ни встречающимся в природе промотором для функционально связанных последовательностей нуклеиновых кислот AOS2, описанных в настоящем документе. В настоящем описании химерный ген содержит кодирующую последовательность, функционально связанную с областью инициации транскрипции, которая является гетерологичной по отношению к указанной кодирующей последовательности. В некоторых вариантах реализации последовательности нуклеиновых кислот AOS2, описанные в настоящем документе, экспрессируются с использованием гетерологичных промоторов, нативные промоторные последовательности могут быть использованы для получения конструкций. Такие конструкции будут изменять уровни экспрессии белка AOS2 в растении или растительной клетке. Таким образом, изменяется фенотип растения или растительной клетки.

Для получения конструкций можно использовать любой промотор для контроля экспрессии кодирующей последовательности AOS2, такие как конститутивные, тканепредпочтительные, индуцибельные промоторы или другие промоторы для экспрессии в растениях. Конститутивные промоторы включают, например, коровый промотор Rsyn7-промотора и другие конститутивные промоторы, описанные в WO 99/43838 и патенте США № 6072050; коровый промотор CaMV 35S (Odell et al. (1985) Nature 313:810812); промотор актина риса (McElroy et al. (1990) Plant Cell 2:163-171); убиквитина (Christensen et al. (1989) Plant Mol. Biol. 12:619-632 и Christensen et al. (1992) Plant Mol. Biol. 18:675-689); pEMU (Last et al. (1991) Theor. Appl. Genet. 81:581-588); MAS (Velten et al. (1984) EMBO J. 3:2723-2730); промотор ALS (патент США № 5659026) и т.п. Другие конститутивные промоторы включают, например, промоторы из патентов США № 5608149; 5608144; 5604121; 5569597; 5466785; 5399680; 5268463; 5608142 и 6177611. Тканепредпочтительные промоторы можно использовать для регуляции экспрессии AOS2 в конкретной ткани растения. Такие тканепредпочтительные промоторы включают, но не ограничиваются ими, предпочтительные для листа промоторы, предпочтительные для корня промоторы, предпочтительные для семени промоторы и предпочтительные для стебля промоторы. Тканепредпочтительные промоторы включают промоторы, описанные в Yamamoto et al. (1997) Plant J. 12(2):255-265; Kawamata et al. (1997) Plant Cell Physiol. 38(7):792-803; Hansen et al. (1997) Mol. Gen Genet. 254(3):337-343; Russell et al. (1997) Transgenic Res. 6(2):157-168; Rinehart et al. (1996) Plant Physiol. 1 12(3):1331-1341; Van Camp et al. (1996) Plant Physiol. 1 12(2):525-535; Canevascini et al. (1996) Plant Physiol. 112(2): 513-524; Yamamoto et al. (1994) Plant Cell Physiol. 35(5):773-778; Lam (1994) Results Probl. Cell Differ. 20:181-196; Orozco et al. (1993) Plant Mol. Biol. 23(6): 1129-1138; Matsuoka et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(20):95869590; и Guevara-Garcia et al. (1993) Plant J. 4(3):495-505.

Конструкции нуклеиновых кислот могут также содержать области терминации транскрипции. В случае, когда используют области терминации транскрипции, для получения конструкций нуклеиновых кислот можно использовать любую область терминации. Например, область терминации может быть нативной по отношению к области инициации транскрипции, может быть нативной по отношению к функционально связанной представляющей интерес последовательности AOS2, может быть нативной по отношению к растению-хозяину или может быть получена из другого источника (т.е. чужеродная или гетерологичная по отношению к промотору, представляющей интерес молекуле нуклеиновой кислоты AOS2, растению-хозяину или их любой комбинации). Примеры областей терминации, которые доступны для использования в конструкциях согласно настоящему изобретению, включают области терминации из Ti-плазмиды А.tumefaciens, такие как области терминации октопинсинтазы и нопалинсинтазы. См. также Guerineau et al. (1991) Mol. Gen. Genet. 262:141-144; Proudfoot (1991) Cell 64:671-674; Sanfacon et al. (1991) Genes Dev. 5:141-149; Mogen et al. (1990) Plant Cell 2:1261-1272; Munroe et al. (1990) Gene 91:151158; Ballas et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:7891-7903; и Joshi et al. (1987) Nucleic Acid Res. 15:96279639.

В некоторых вариантах реализации нуклеиновые кислоты могут быть оптимизированы для увеличения экспрессии в трансформированном растении. Т.е. нуклеиновые кислоты, кодирующие мутантные белки AOS2, можно синтезировать с использованием предпочтительных для растения кодонов для улучшения экспрессии. См., например, обсуждение предпочтительного для хозяина использования кодонов в Campbell and Gowri (1990) Plant Physiol. 92:1-11. В данной области техники доступны способы синтеза предпочтительных для растения генов. См., например, патенты США № 5380831 и 5436391, и Murray et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:477-498.

Кроме того, могут быть осуществлены другие модификации последовательностей нуклеиновых кислот, описанных в настоящем документе. Например, дополнительные модификации последовательностей усиливают экспрессию генов в клетке-хозяине. Они включают удаление последовательностей, кодирующих ложные сигналы полиаденилирования, сигналы сайтов сплайсинга экзона/интрона, подобные транспозонам повторы и других таких хорошо охарактеризованных последовательностей, которые могут оказывать неблагоприятное воздействие на экспрессию генов. Содержание G-C в последовательности можно также регулировать до уровней, которые являются средними для целевой клетки-хозяина, рассчитанных в соответствии с известными генами, экспрессируемыми в указанной клетке-хозяине. Кроме того, последовательность можно модифицировать для избегания предсказанных вторичных шпилечных структур мРНК.

- 28 037142

Другие последовательности нуклеиновых кислот можно также использовать для получения конструкций согласно настоящему изобретению, например для усиления экспрессии кодирующей последовательности AOS2. Такие последовательности нуклеиновых кислот включают интрон 1 гена Adh1 кукурузы (Callis et al. (1987) Genes and Development 1:1183-1200) и лидерные последовательности (Wпоследовательность) из вируса табачной мозаики (TMV), вируса хлоротической пятнистости кукурузы и вируса мозаики люцерны (Gallie et al., (1987) Nucleic Acid Res. 15:8693-8711 и Skuzeski et al., (1990) Plant Mol. Biol. 15:65-79). Было показано, что первый интрон локуса shrunken-1 кукурузы увеличивает экспрессию генов в химерных генетических конструкциях. В патентах США № 5424412 и 5593874 описано применение конкретных интронов в конструкциях экспрессии генов, и Gallie et al., Plant Physiol. 106:929939 (1994) также показали, что интроны подходят для регуляции экспрессии генов на тканеспецифической основе. Для дополнительного усиления или для оптимизации экспрессии гена AOS2 растительные векторы экспрессии, описанные в настоящем документе, могут также содержать последовательности ДНК, содержащие участки прикрепления к ядерному матриксу (MAR). Растительные клетки, трансформированные такими модифицированными системами экспрессии, в таком случае могут демонстрировать сверхэкспрессию или конститутивную экспрессию нуклеотидной последовательности согласно настоящему изобретению.

Конструкции экспрессии, описанные в настоящем документе, могут также содержать последовательности нуклеиновых кислот, способные направлять экспрессию последовательности AOS2 в хлоропласт. Такие последовательности нуклеиновых кислот включают нацеленную на хлоропласты последовательность, кодирующую транзитный пептид хлоропласта, для направления представляющего интерес генного продукта в хлоропласты растительных клеток. Такие транзитные пептиды известны в данной области техники. В отношении нацеленных на хлоропласты последовательностей термин функционально связанный означает, что последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая транзитный пептид (т.е. нацеленная на хлоропласты последовательность), связана с молекулой нуклеиновой кислоты AOS2 согласно настоящему изобретению так, что две последовательности примыкают друг к другу и находятся в одной и той же рамке считывания. См., например, Von Heijne et al. (1991) Plant Mol. Biol. Rep. 9:104126; Clark et al. (1989) J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965-968; Romer ef al. (1993) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421; и Shah et al. (1986) Science 233:478481. В то время как белки AOS2, описанные в настоящем документе, могут включать нативный транзитный пептид хлоропласта, любой транзитный пептид хлоропласта, известный в данной области техники, может быть слит с аминокислотной последовательностью зрелого белка AOS2 согласно настоящему изобретению путем функционального связывания нацеленной на хлоропласты последовательности с 5'концом нуклеотидной последовательности, кодирующей зрелый белок AOS2 согласно настоящему изобретению.

Нацеленные на хлоропласты последовательности известны в данной области техники и включают малую субъединицу рибулоза-1,5-бисфосфаткарбоксилазы (Rubisco) хлоропластов (de Castro Silva Filho et al. (1996) Plant Mol. Biol. 30:769-780; Schnell et al. (1991) J. Biol. Chem. 266(5):3335-3342); 5(енолпирувил)шикимат-3-фосфатсинтазу (EPSPS) (Archer et al. (1990) J. Bioenerg. Biomemb. 22(6):789810); триптофансинтазу (Zhao et al. (1995) J. Biol. Chem. 270(11):6081-6087); пластоцианин (Lawrence et al. (1997) J. Biol. Chem. 272(33):20357-20363); хоризматсинтазу (Schmidt et al. (1993) J. Biol. Chem. 268(36):27447-27457); и светособирающий хлорофилл a/b-связывающий белок (LHBP) (Lamppa et al. (1988) J. Biol. Chem. 263: 14996-14999). См. также Von Heijne et al. (1991) Plant Mol. Biol. Rep. 9:104-126; Clark et al. (1989) J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965-968; Romer et al. (1993) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421; и Shah et al. (1986) Science 233:478-481.

В другом варианте реализации могут быть получены конструкции нуклеиновых кислот для направления экспрессии мутантной кодирующей последовательности AOS2 из хлоропласта растительной клетки. Способы трансформации хлоропластов известны в данной области техники. См., например, Svab et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8526-8530; Svab and Maliga (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:913917; Svab and Maliga (1993) EMBO J. 12:601-606. Способ основан на доставке ДНК, содержащей селектируемый маркер, с помощью генной пушки, и нацеливании ДНК на геном пластид посредством гомологичной рекомбинации. Кроме того, трансформацию пластид можно осуществлять путем трансактивации молчащего происходящего из пластид трансгена посредством тканепредпочтительной экспрессии кодируемой ядром и направленной на пластиды РНК-полимеразы. Такая система была описана в McBride et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:7301-7305.

Представляющие интерес нуклеиновые кислоты для нацеливания на хлоропласт могут быть оптимизированы для экспрессии в хлоропласте с учетом различий в использовании кодонов между ядром растения и данной органеллой. Таким образом, представляющие интерес нуклеиновые кислоты можно синтезировать с использованием предпочтительных для хлоропластов кодонов. См., например, патент США № 5380831, содержание которого включено в описание посредством ссылки. Конструкции нуклеиновых кислот можно применять для трансформации растительных клеток и регенерации трансгенных растений, содержащих мутантные кодирующие последовательности AOS2. Доступны многочисленные векторы для трансформации растений и способы трансформации растений. См., например, патент

- 29 037142

США № 6753458; An, G. et al. (1986) Plant Physiol., 81:301-305; Fry, J. et al. (1987) Plant

Cell Rep. 6:321-325; Block, M. (1988) Theor. Appl Genet.76:767-774; Hinchee et al. (1990)

Stadler. Genet. Symp.203212.203-212; Cousins et al. (1991) Aust. J. Plant Physiol. 18:481-494;

Chee, P. P. et al. (1992) Gene. 118:255-260; Christou et al. (1992) Trends. Biotechnol. 10:239246; D'Halluin et al. (1992) Bio/Technol. 10:309-3 14; Dhir et al. (1992) Plant Physiol. 99:8188; Casas et al. (1993) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 90:11212-11216; Christou, P. (1993) In Vitro

Cell. Dev. Biol.-Plant; 29P:1 19-124; Davies et al. (1993) Plant Cell Rep. 12:180-183; Dong, J.

A. et al. (1993) Plant Sci. 91:139-148; Franklin, С. I. et al. (1993) Plant. Physiol. 102:167;

Golovkin et al. (1993) Plant Sci. 90:41-52; Guo Chin Sci. Bull. 38:2072-2078; Asano et al.

(1994) Plant Cell Rep. 13; Ayeres, Ν. M. et al. (1994) Crit. Rev. Plant. Sci. 13:219-239; Barcelo et al. (1994) Plant. J. 5:583-592; Becker, et al. (1994) Plant. J. 5:299-307; Borkowska et al.

(1994) Acta. Physiol Plant. 16:225- 230; Christou, P. (1994) Agro. Food. Ind. Hi Tech. 5: 17-27;

Eapen et al. (1994) Plant Cell Rep. 13:582-586; Hartman et al. (1994) Bio-Technology 12:

919923; Ritala et al. (1994) Plant. Mol. Biol. 24:317-325; и Wan, Y. C. et al. (1994) Plant

Physiol. 104:3748.

Указанные конструкции можно также трансформировать в растительные клетки с использованием гомологичной рекомбинации. Описанные конструкции, содержащие последовательности нуклеиновых кислот AOS2, описанные в настоящем документе, можно применять в различных способах для получения трансгенных клеток-хозяев, таких как бактерии, дрожжи, и для трансформации растительных клеток и в некоторых случаях регенерации трансгенных растений. Например, способы получения трансгенного культурного растения, содержащего мутантные белки AOS2, описанные в настоящем документе, в которых экспрессия нуклеиновой кислоты (кислот) в указанном растении обуславливает устойчивость и/или толерантность к патогену по сравнению с растениями дикого типа или с известными мутантными по AOS2 растениями, включают: (а) введение в растительную клетку вектора экспрессии, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую мутантный белок AOS2, и (b) получение из указанной растительной клетки трансгенного растения, которое является устойчивым и/или толерантным к патогену.

Мутации AOS2.

Композиции и способы могут относиться, по меньшей мере отчасти, к мутациям в гене AOS2, например мутациям, которые делают растение устойчивым или толерантным к патогену. В некоторых вариантах реализации композиции и способы также относятся к использованию олигонуклеооснования репарации генов для осуществления желаемой мутации в хромосомных или эписомальных последовательностях растения в гене, кодирующем белок AOS2. Мутированный белок может в некоторых вариантах реализации по существу сохранять каталитическую активность белка дикого типа, что обеспечивает повышенную устойчивость и/или толерантность растения к патогену и, таким образом, в некоторых вариантах реализации обеспечивает по существу нормальный или измененный рост или развитие растения, его органов, тканей или клеток по сравнению с растением дикого типа, независимо от наличия или отсутствия патогена. Композиции и способы также относятся к нетрансгенной растительной клетке, в которой ген AOS2 был подвергнут мутации, нетрансгенному растению, регенерированному из нее, а также растению, полученному в результате скрещивания с использованием регенерированного нетрансгенного растения с растением, содержащим мутацию в другом гене AOS2 или в том же гене AOS2, например. Композиции и способы также относятся к трансгенной растительной клетке, в которой ген AOS2 был подвергнут мутации, трансгенному растению, регенерированному из нее, а также растению, полученному в результате скрещивания с использованием регенерированного трансгенного растения с растением, содержащим мутацию в другом гене AOS2 или в том же гене AOS2, например.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положениям, выбранным из группы, состоящей из 6, 12, 30, 37, 46, 48, 51, 76, 113, 145, 187, 197, 200, 227, 231, 256, 264, 270, 282, 289, 292, 309, 320, 328, 337, 338, 357, 381, 394, 407, 423, 430, 439, 467, 480, 494 и 495 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 6 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 12 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 30 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 37 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный

- 30 037142 белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 46 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 48 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 51 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 76 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 113 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 145 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 187 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 197 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 200 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 227 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 256 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 264 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 270 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 282 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 292 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 309 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 320 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 328 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 337 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 338 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 357 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 381 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 394 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 407 последовательности SEQ ID N0: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 423 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 430 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 467 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 480 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 494 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций в положении, соответствующем положению 495 последовательности SEQ ID NO: 5. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 6 последовательности SEQ ID NO: 7; Р в положении аминокислоты 12 последовательности SEQ ID NO: 5; R в положении аминокис

- 31 037142 лоты 12 последовательности SEQ ID NO: 11; А в положении аминокислоты 30 последовательности SEQ ID NO: 5; I в положении аминокислоты 37 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 5; F в положении аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 3; Т в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 5; I в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 27; V в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 7;М в положении аминокислоты 51 последовательности SEQ ID NO: 5; D в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID NO: 5; N в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID NO: 5; G в положении 113 последовательности SEQ ID NO: 5; D в положении 113 последовательности SEQ ID NO: 49; F в положении аминокислоты 145 последовательности SEQ ID NO: 9; L в положении аминокислоты 187 последовательности SEQ ID NO: 5; Е в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ ID NO: 5; D в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ ID NO: 3; K в положении аминокислоты 200 последовательности SEQ ID NO: 7; А в положении аминокислоты 227 последовательности SEQ ID NO: 5; Т в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 5; I в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 7; G в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 9; F в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ ID NO: 5; V в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ ID NO: 3; А в положении аминокислоты 264 последовательности SEQ ID NO: 7; L в положении аминокислоты 270 последовательности SEQ ID NO: 7; F в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID NO: 5; S в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID NO: 41; V в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 5; S в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 11; N в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 13; V в положении аминокислоты 292 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID NO: 5; I в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID NO: 19;М в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ ID NO: 23;М в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 19; V в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 27; Е в положении аминокислоты 337 последовательности SEQ ID NO: 5; D в положении аминокислоты 337 последовательности SEQ ID NO: 13; V в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ ID NO: 13; I в положении аминокислоты 357 последовательности SEQ ID NO: 5;М в положении аминокислоты 357 последовательности SEQ ID NO: 3; Р в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ ID NO: 35; Т в положении аминокислоты 394 последовательности SEQ ID NO: 9; G в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 5; С в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 13; F в положении аминокислоты 423 последовательности SEQ ID NO: 7; L в положении аминокислоты 430 последовательности SEQ ID NO: 5; делецию аминокислоты Е в положении 439 последовательности SEQ ID NO: 5; G в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 5; S в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 39; V в положении аминокислоты 480 последовательности SEQ ID NO: 5; G в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ ID NO: 5; D в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ ID NO: 21; и/или Т в положении аминокислоты 495 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 6 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Р в положении аминокислоты 12 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей R в положении аминокислоты 12 последовательности SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей А в положении аминокислоты 30 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 37 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности

- 32 037142

AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 51 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей N в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении 113 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении 113 последовательности SEQ ID NO: 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 145 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 187 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Е в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей K в положении аминокислоты 200 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей А в положении аминокислоты 227 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей А в положении аминокислоты 264 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 270 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей S в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей S в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей N в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 292 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну

- 33 037142 или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Е в положении аминокислоты 337 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении аминокислоты 337 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 357 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 357 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Р в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 394 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей С в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 423 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 430 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей делецию аминокислоты Е в положении 439 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей S в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 480 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 495 последовательности SEQ ID NO: 5.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 691 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 со

- 34 037142 держит С в положении, соответствующем положению 692 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 678 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит Т в положении, соответствующем положению 681 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит С в положении, соответствующем положению 727 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 744 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит С в положении, соответствующем положению 774 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 879 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит А в положении, соответствующем положению 900 последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит С в положении, соответствующем положению 954 последовательности SEQ ID NO: 2.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 может кодировать мутированный белок AOS2. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 6 последовательности SEQ ID NO: 7; Р в положении аминокислоты 12 последовательности SEQ ID NO: 5; R в положении аминокислоты 12 последовательности SEQ ID NO: 11; А в положении аминокислоты 30 последовательности SEQ ID NO: 5; I в положении аминокислоты 37 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 5; F в положении аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 3; T в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 5; I в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 27; V в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 7; М в положении аминокислоты 51 последовательности SEQ ID NO: 5; D в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID NO: 5; N в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID NO: 5; G в положении 113 последовательности SEQ ID NO: 5; D в положении 113 последовательности SEQ ID NO: 49; F в положении аминокислоты 145 последовательности SEQ ID NO: 9; L в положении аминокислоты 187 последовательности SEQ ID NO: 5; Е в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ ID NO: 5; D в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ ID NO: 3; K в положении аминокислоты 200 последовательности SEQ ID NO: 7; А в положении аминокислоты 227 последовательности SEQ ID NO: 5; Т в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 5; I в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 7; G в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 9; F в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ ID NO: 5; V в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ ID NO: 3; А в положении аминокислоты 264 последовательности SEQ ID NO: 7; L в положении аминокислоты 270 последовательности SEQ ID NO: 7; F в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID NO: 5; S в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID NO: 41; V в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 5; S в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 11; N в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 13; V в положении аминокислоты 292 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID NO: 5; I в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID NO: 19; М в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ ID NO: 23; М в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 19; V в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 27; Е в положении аминокислоты 337 последовательности SEQ ID NO: 5; D в положении аминокислоты 337 последовательности SEQ ID NO: 13; V в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ ID NO: 13; I в положении аминокислоты 357 последовательности SEQ ID NO: 5; М в положении аминокислоты 357 последовательности SEQ ID NO: 3; Р в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ ID NO: 5; L в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ ID NO: 35; Т в положении аминокислоты 394 последовательности SEQ ID NO: 9; G в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 5; С в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 13; F в положении аминокислоты 423 последовательности SEQ ID NO: 7; L в положении аминокислоты 430 последовательности SEQ ID NO: 5; делецию аминокислоты Е в положении 439 последовательности SEQ ID NO: 5; G в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 5; S в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 39; V в положении аминокислоты 480 последовательности SEQ ID NO: 5, G в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ ID NO: 5; D в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ ID NO: 21; и/или Т в положении аминокислоты 495 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 6 последовательности SEQ ID NO: 7. В

- 35 037142 некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Р в положении аминокислоты 12 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей R в положении аминокислоты 12 последовательности SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей А в положении аминокислоты 30 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 37 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 46 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 48 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 51 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей N в положении аминокислоты 76 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении 113 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении 113 последовательности SEQ ID NO: 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 145 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 187 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Е в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении аминокислоты 197 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей K в положении аминокислоты 200 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей А в положении аминокислоты 227 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 231 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых

- 36 037142 вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 256 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей А в положении аминокислоты 264 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 270 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей S в положении аминокислоты 282 последовательности SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей S в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей N в положении аминокислоты 289 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 292 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 309 последовательности SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 320 последовательности SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 328 последовательности SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Е в положении аминокислоты 337 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении аминокислоты 337 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 338 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей I в положении аминокислоты 357 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей М в положении аминокислоты 357 последователь

- 37 037142 ности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Р в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 381 последовательности SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 394 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей С в положении аминокислоты 407 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей F в положении аминокислоты 423 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей L в положении аминокислоты 430 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей делецию аминокислоты Е в положении 439 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей S в положении аминокислоты 467 последовательности SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей V в положении аминокислоты 480 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей G в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей D в положении аминокислоты 494 последовательности SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций относительно аминокислотной последовательности AOS2, содержащей Т в положении аминокислоты 495 последовательности SEQ ID NO: 5.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит одну или более, две или более, три или более, четыре или более, пять или более, шесть или более, семь или более, восемь или более, девять или более, или десять или более, или одиннадцать или более, или двенадцать или более, тринадцать или более, четырнадцать или более, пятнадцать или более, шестнадцать или более, семнадцать или более, восемнадцать или более, девятнадцать или более, двадцать или более, двадцать одну или более, двадцать две или более, двадцать три или более, двадцать четыре или более, двадцать пять или более мутаций в положениях, выбранных из группы, состоящей из S6, Р12, R12, V30, Т37, F46, L46,I48, Т48, I51, D76, N76, D113, G113, Y145, F187, D197, Е197, Т200, Т227, G231, Т231, F256, V256, Т264, F270, F282, S282, N289, S289, А292, I309, L309, L320, М320, L328, V328, D337, Е337, L338, V338, 1357, М357, L381, Р381, K394, С407, G407, I423, F430, А439 (где А обозначает делецию), G467, S467, Т480, D494, G494 и K495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит две или более мутаций, по меньшей мере одна из которых расположена в положении аминокислоты, соответствующем положению, выбранному из группы, состоящей из S6, Р12, R12, V30, Т37, F46, L46, I48, Т48, I51, D76, D113, G113, Y145, F187, D197, Е197, Т200, Т227, G231, Т231, F256, V256, Т264, F270, F282, S282, N289, S289, А292, I309, L309, L320, М320, L328, V328, D337, Е337, L338, V338, I357, М357, L381, Р381, K394, С407, G407, I423, F430, А439 (где А обозначает делецию), G467, S467, Т480, D494, G494 и K495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 содержит три или более мутаций, по меньшей мере одна из которых расположена в положении аминокислоты, соответствующем положению, выбранному из группы, состоящей из S6, Р12, R12, V30, Т37, F46, L46,I48, Т48, I51, D76, D113, G113, Y145, F187, D197, Е197, Т200, Т227, G231, Т231, F256, V256, Т264, F270, F282, S282, N289, S289,

- 38 037142

А292, I309, L309, L320, М320, L328, V328, D337, Е337, L338, V338, I357, М357, L381, Р381, K394, С407, G407, I423, F430, А439 (где А обозначает делецию), G467, S467, Т480, D494, G494 и K495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и/или 49. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению F6 последовательности SEQ ID NO: 7 или 9. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению R12 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 7, 9, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Р12 последовательности SEQ ID NO: 11. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению А30 последовательности SEQ ID NO: 5. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V30 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению I37 последовательности SEQ ID N0: 5. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению F46 последовательности SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L46 последовательности SEQ ID NO: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению 148 последовательности SEQ ID NO: 27, 47 или 49. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V48 последовательности SEQ ID NO: 7. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Т48 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению М51 последовательности SEQ ID NO: 5. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению N76 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 19, 21, 23, 25, 29, 31 или 43. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению G113 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45 или 47. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению D113 последовательности SEQ ID NO: 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению F145 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L187 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Е197 последовательности SEQ ID N0: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению D197 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению K200 последовательности SEQ ID NO: 7 или 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению А227 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению I231 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению G231 последовательности SEQ ID NO: 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 29, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Т231 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 23, 25,

- 39 037142

27, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению F256 последовательности SEQ ID NO: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V256 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению А264 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L270 последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению F282 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению S282 последовательности SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению N289 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V289 последовательности SEQ ID NO: 5, 7 или 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению S289 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V292 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9 или 13. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L309 последовательности SeQ ID nO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению I309 последовательности SEQ ID NO: 19, 21, 23, 25 или 43. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению М320 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L320 последовательности SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V328 последовательности SEQ ID NO: 27, 33, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению М328 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L328 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Е337 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению D337 последовательности SEQ ID NO: 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V338 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L338 последовательности SEQ ID NO: 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению I357 последовательности SEQ ID NO: 1, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению М357 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Р381 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению L381 последовательности SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Т394 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению С407 последовательности SEQ ID NO: 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению G407 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению F423 последовательности SEQ ID NO: 7, 25, 27, 33, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении ами- 40 037142 нокислоты, соответствующем положению L430 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению S467 последовательности SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению G467 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению V480 последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению D494 последовательности SEQ ID NO: 21, 23, 31 или 43. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению G494 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 25, 27, 29, 33, 35, 37, 39, 41, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит мутацию в положении аминокислоты, соответствующем положению Т495 последовательности SEQ ID NO: 5, 7 или 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит делецию аминокислоты в положении, соответствующем положению Е439 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 33, 39, 41, 43, 45, 47 или 49.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту серин в положении, соответствующем положению 6 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту пролин в положении, соответствующем положению 12 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту аргинин в положении, соответствующем положению 12 последовательности SEQ ID NO: 11. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту валин в положении, соответствующем положению 30 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту треонин в положении, соответствующем положению 37 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лейцин в положении, соответствующем положению 46 последовательности SEQ ID NO: 1. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту фенилаланин в положении, соответствующем положению 46 последовательности SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту изолейцин в положении, соответствующем положению 48 последовательности SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 47 или SEQ ID NO: 49. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту треонин в положении, соответствующем положению 48 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту изолейцин в положении, соответствующем положению 51 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой аспарагиновую кислоту, в положении, соответствующем положению 76 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту аспарагин в положении, соответствующем положению 76 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту глицин в положении, соответствующем положению 113 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой аспарагиновую кислоту, в положении, соответствующем положению 113 последовательности SEQ ID NO: 49. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту тирозин в положении, соответствующем положению 145 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту фенилаланин в положении, соответствующем положению 187 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой глутаминовую кислоту, в положении, со

- 41 037142 ответствующем положению 197 последовательности SEQ ID NO: 1. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой аспарагиновую кислоту, в положении, соответствующем положению 197 последовательности SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту треонин в положении, соответствующем положению 200 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту треонин в положении, соответствующем положению 227 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту треонин в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту глицин в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту фенилаланин в положении, соответствующем положению 256 последовательности SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту валин в положении, соответствующем положению 256 последовательности SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту треонин в положении, соответствующем положению 264 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту фенилаланин в положении, соответствующем положению 270 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту фенилаланин в положении, соответствующем положению 282 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту серин в положении, соответствующем положению 282 последовательности SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту серин в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту аспарагин в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту аланин в положении, соответствующем положению 292 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лейцин в положении, соответствующем положению 309 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту изолейцин в положении, соответствующем положению 309 последовательности SEQ ID NO: 19. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту метионин в положении, соответствующем положению 320 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лейцин в положении, соответствующем положению 320 последовательности SEQ ID NO: 23. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лейцин в положении, соответствующем положению 328 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту валин в положении, соответствующем положению 328 последовательности SEQ ID NO: 27. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой глутаминовую кислоту, в положении, соответствующем положению 337 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой аспарагиновую кислоту, в положении, соответствующем положению 337 последовательности SEQ ID NO: 13 или SEQ ID NO: 15. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту валин в положении, соответствующем положению 338 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лейцин в положении, соответствующем положению 338

- 42 037142 последовательности SEQ ID NO: 13 или SEQ ID NO: 15. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту изолейцин в положении, соответствующем положению 357 последовательности SEQ ID NO: 1. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту метионин в положении, соответствующем положению 357 последовательности SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту пролин в положении, соответствующем положению 381 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лейцин в положении, соответствующем положению 381 последовательности SEQ ID NO: 35. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лизин в положении, соответствующем положению 394 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту глицин в положении, соответствующем положению 407 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту цистеин в положении, соответствующем положению 407 последовательности SEQ ID NO: 13 или SEQ ID NO: 15. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту изолейцин в положении, соответствующем положению 423 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту фенилаланин в положении, соответствующем положению 430 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит делецию аминокислоты, представляющей собой глутаминовую кислоту, в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ ID NO: 5. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту глицин в положении, соответствующем положению 466 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту серин в положении, соответствующем положению 467 последовательности SEQ ID NO: 39. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту треонин в положении, соответствующем положению 479 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту глицин в положении, соответствующем положению 493 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3. В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту, представляющую собой аспарагиновую кислоту, в положении, соответствующем положению 494 последовательности SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах реализации мутированный белок AOS2 содержит аминокислоту лизин в положении, соответствующем положению 494 последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 3.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий одну или более мутаций, две или более мутаций, три или более мутаций, четыре или более мутаций, пять или более мутаций, шесть или более мутаций, семь или более, восемь или более, девять или более, или десять или более, одиннадцать или более, двенадцать или более, тринадцать или более, четырнадцать или более, пятнадцать или более, шестнадцать или более, семнадцать или более, восемнадцать или более, девятнадцать или более, двадцать или более, двадцать одну или более, двадцать две или более, двадцать три или более, двадцать четыре или более, двадцать пять или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из: мутаций фенилаланин - серин в положении, соответствующем положению 6, аргинин - пролин в положении, соответствующем положению 12, пролин - аргинин в положении, соответствующем положению 12, аланин - валин в положении, соответствующем положению 30, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 37, фенилаланин - лейцин в положении, соответствующем положению 46, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 46, валин - треонин в положении, соответствующем положению 48, валин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 48, треонин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 51, аспарагин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - аспарагин в положении, соответствующем положению 76, аспарагиновая кислота - глицин

- 43 037142 в положении, соответствующем положению 113, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 113, фенилаланин - тирозин в положении, соответствующем положению 145, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 187, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 197, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 197, лизин - треонин в положении, соответствующем положению 200, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 227, изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 231, изолейцин - глицин в положении, соответствующем положению 231, глицин - треонин в положении, соответствующем положению 231, треонин - глицин в положении, соответствующем положению 231, валин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 256, фенилаланин - валин в положении, соответствующем положению 256, аланин - треонин в положении, соответствующем положению 264, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 270, серин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 282, фенилаланин серин в положении, соответствующем положению 282, валин - аспарагин в положении, соответствующем положению 289, валин - серин в положении, соответствующем положению 289, серин -аспарагин в положении, соответствующем положению 289, аспарагин - серин в положении, соответствующем положению 289, валин - аланин в положении, соответствующем положению 292, изолейцин - лейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - изолейцин в положении, соответствующем положению 309, лейцин - метионин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 320, метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, метионин - валин в положении, соответствующем положению 328, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 328, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 328, аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 337, глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 337, лейцин - валин в положении, соответствующем положению 338, валин - лейцин в положении, соответствующем положению 338, метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 357, изолейцин - метионин в положении, соответствующем положению 357, лейцин - пролин в положении, соответствующем положению 381, пролин - лейцин в положении, соответствующем положению 381, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 394, цистеин - глицин в положении, соответствующем положению 407, глицин - цистеин в положении, соответствующем положению 407, фенилаланин - изолейцин в положении, соответствующем положению 423, лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 430, серин - глицин в положении, соответствующем положению 467, глицин - серин в положении, соответствующем положению 467, валин - треонин в положении, соответствующем положению 480, аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 494, глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 494, треонин - лизин в положении, соответствующем положению 495 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, и мутации, представляющей собой делецию глутаминовой кислоты в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 33,39, 41, 43, 45, 47 или 49.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты фенилаланин - серин в положении, соответствующем положению 6 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аргинин - пролин в положении, соответствующем положению 12 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты пролин - аргинин в положении, соответствующем положению 12 последовательности SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аланин - валин в положении, соответствующем положению 30 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 37 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты фенилаланин лейцин в положении, соответствующем положению 46 последовательности SEQ ID NO: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 46 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты валин - треонин в положении, соответствующем положению 48 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. В

- 44 037142 некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 48 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты треонин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48 последовательности SEQ ID NO: 27, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты валин - изолейцин в положении, соответствующем положению 48 последовательности SEQ ID NO: 27, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 51 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагин -аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 76 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 13, 15, 17, 27, 33, 35, 37, 39, 41, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагиновая кислота - аспарагин в положении, соответствующем положению 76 последовательности SeQ ID NO: 1, 3, 11, 13, 15, 17, 27, 33, 35, 37, 39, 41, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 113 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45 или 47. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты глицин - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 113 последовательности SEQ ID NO: 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты фенилаланин - тирозин в положении, соответствующем положению 145 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 187 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 197 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагиновая кислота -глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 197 последовательности SEQ ID NO: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лизин -треонин в положении, соответствующем положению 200 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аланин - треонин в положении, соответствующем положению 227 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты изолейцин - треонин в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 23, 25, 27, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты изолейцин - глицин в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ ID NO: 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 29, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты треонин глицин в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ ID NO: 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 29 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты глицин - треонин в положении, соответствующем положению 231 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 23, 25, 27, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты фенилаланин - валин в положении, соответствующем положению 256 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты валин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 256 последовательности SEQ ID NO: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аланин - треонин в положении, соответствующем положению 264 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин

- 45 037142 фенилаланин в положении, соответствующем положению 270 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты фенилаланин - серин в положении, соответствующем положению 282 последовательности SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты серин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 282 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты валин - аспарагин в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты валин серин в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагин серин в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты серин аспарагин в положении, соответствующем положению 289 последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты валин - аланин в положении, соответствующем положению 292 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - изолейцин в положении, соответствующем положению 309 последовательности SEQ ID NO: 19, 21, 23, 25 или 43. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты изолейцин - лейцин в положении, соответствующем положению 309 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - метионин в положении, соответствующем положению 320 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 320 последовательности SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты метионин - валин в положении, соответствующем положению 328 последовательности SEQ ID NO: 27, 33, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты метионин - лейцин в положении, соответствующем положению 328 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - валин в положении, соответствующем положению 328 последовательности SEQ ID NO: 27, 33, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты валин лейцин в положении, соответствующем положению 328 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 29, 31, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагиновая кислота - глутаминовая кислота в положении, соответствующем положению 337 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты глутаминовая кислота - аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 337 последовательности SEQ ID NO: 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - валин в положении, соответствующем положению 338 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты валин - лейцин в положении, соответствующем положению 338 последовательности SEQ ID NO: 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты метионин - изолейцин в положении, соответствующем положению 357 последовательности SEQ ID NO: 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты изолейцин - метионин в положении, соответствующем положению 357 последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - пролин в положении, соответствующем положению 381 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31,

- 46 037142

33, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты пролин - лейцин в положении, соответствующем положению 381 последовательности SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты треонин - лизин в положении, соответствующем положению 394 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты цистеин - глицин в положении, соответствующем положению 407 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты глицин - цистеин в положении, соответствующем положению 407 последовательности SEQ ID NO: 13 или 15. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты фенилаланин - изолейцин в положении, соответствующем положению 423 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 5, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 29, 31, 35, 37, 39, 41, 43 или 45. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты лейцин - фенилаланин в положении, соответствующем положению 430 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты серин - глицин в положении, соответствующем положению 467 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 33, 41, 43, 45, 47 или 49, или положению 466 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 29, 31, 35 или 37. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты глицин - серин в положении, соответствующем положению 467 последовательности SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты валин - треонин в положении, соответствующем положению 480 последовательности SEQ ID NO: 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, или положению 479 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 29, 31, 35 или 37. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты аспарагиновая кислота - глицин в положении, соответствующем положению 494 последовательности SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 25, 27, 29, 33, 35, 37, 39, 41, 45, 47 или 49, или положению 493 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 29, 35 или 37. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты глицин -аспарагиновая кислота в положении, соответствующем положению 494 последовательности SEQ ID NO: 21, 23 или 43, или положению 493 последовательности SEQ ID NO: 31. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты треонин - лизин в положении, соответствующем положению 495 последовательности SEQ ID NO: 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 или 49, или положению 494 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 29, 31, 35 или 37. В некоторых вариантах реализации мутированный ген AOS2 кодирует мутированный белок AOS2, содержащий мутацию аминокислоты, при которой глутаминовая кислота подвергнута делеции в положении, соответствующем положению 439 последовательности SEQ ID NO: 1, 3, 29, 31, 35 или 37.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, мутированный ген AOS2 содержит по меньшей мере одну мутацию, по меньшей мере две мутации, по меньшей мере три мутации, по меньшей мере четыре мутации, по меньшей мере пять мутаций, по меньшей мере шесть мутаций, по меньшей мере семь мутаций, по меньшей мере восемь мутаций, по меньшей мере девять мутаций, по меньшей мере десять мутаций, по меньшей мере одиннадцать мутаций, по меньшей мере двенадцать мутаций, по меньшей мере тринадцать мутаций, по меньшей мере четырнадцать мутаций, по меньшей мере пятнадцать мутаций, по меньшей мере шестнадцать мутаций, по меньшей мере семнадцать мутаций, по меньшей мере восемнадцать мутаций, по меньшей мере девятнадцать мутаций, по меньшей мере двадцать мутаций, по меньшей мере двадцать одну мутацию, по меньшей мере двадцать две мутации, по меньшей мере двадцать три мутации, по меньшей мере двадцать четыре мутации, по меньшей мере двадцать пять мутаций, по меньшей мере двадцать шесть мутаций, по меньшей мере двадцать семь мутаций, по меньшей мере двадцать восемь мутаций, по меньшей мере двадцать девять мутаций, по меньшей мере тридцать мутаций, по меньшей мере тридцать одну мутацию, по меньшей мере тридцать две мутации, по меньшей мере тридцать три мутации, по меньшей мере тридцать четыре мутации, по меньшей мере тридцать пять мутаций, по меньшей мере тридцать шесть мутаций или по меньшей мере тридцать семь мутаций.

Паралоги.

Рассматриваемые мутации в гене AOS2, в целом, описаны в настоящем документе с использованием выбранных генов и белков AOS2 Solanum tuberosum с аминокислотами с указанием на положения в SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47 и 49 и положениям нуклеиновых кислот с указанием на положения в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24,

- 47 037142

26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48 и 50. Композиции и способы также включают мутантные гены и белки AOS2 других культурных сортов картофеля, а также других видов растений (паралоги). Однако вследствие изменений в генах AOS2 разных видов количество изменяемых остатков аминокислот у одного вида может быть другим у другого вида. Тем не менее, специалист в данной области техники может легко определить аналогичное положение с помощью гомологии последовательностей. Таким образом, аналогичные положения в паралогах могут быть идентифицированы и подвергнуты мутации.

Патогены.

Композиции и способы, предложенные согласно настоящему изобретению, включают гены AOS2 и белки AOS2, которые обеспечивают устойчивость и/или толерантность к патогенам. В некоторых вариантах реализации патоген представляет собой патоген Phytophthora. В конкретных вариантах реализации патоген представляет собой Phytophthora infestans. В конкретных вариантах реализации патоген представляет собой вирус, бактерии, нематоды, грибки и т.п. Вирусные патогены включают любой вирус растений, например, вирус табачной мозаики или вирус мозаики огурца, Y-вирус картофеля, вирус кольцевой пятнистости, вирус некроза, вирус карликовой мозаики кукурузы и т.п. Грибковые, оомицетные и вирусные патогены для основных сельскохозяйственных культур включают, но не ограничиваются ими, Phytophthora, Fusarium ssp, Alternaria, Pythium spp., вирус мозаики соевых бобов, вирус кольцевой пятнистости табака, вирус полосатости табака, вирус бронзовости томата, Sclerotinia, Peronospora, Cladosporium, Erysiphe, Aspergillus, Puccinia spp., Botrytis spp., Blumeria spp. и Trichoderma. Бактериальные патогены растений включают любые виды бактерий, которые инфицируют растение, и включают, но не ограничиваются ими, Xanthomonas (например, Xanthomonas axonopodis pv. aurantifolii, Xanthomonas campestris pv. campestris, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria), Pseudomonas (Pseudomonas syringae pv. tomato, Pseudomonas syringae pv. phaseolicola, Pseudomonas syringae pv. syringae), Erwinia (например, Erwinia carotovora subsp. atroseptica), Ralstonia (например, Ralstonia solanacearum), Clavibacter michiganensis и Xylella fastidiosa.

Также предложено трансгенное или нетрансгенное растение или растительная клетка, содержащая одну или более мутаций в гене AOS2, например, таких как описаны в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая одну или более мутаций в гене AOS2, обладает повышенной устойчивостью и/или толерантностью к патогену. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка, содержащая одну или более мутаций в гене AOS2, может демонстрировать по существу нормальный рост или развитие растения, его органов, тканей или клеток по сравнению с соответствующим растением или клеткой дикого типа. В соответствии с конкретными аспектами и вариантами реализации предложены нетрансгенные растения, содержащие мутацию в гене AOS2, например, такую как описана в настоящем документе, которые в некоторых вариантах реализации обладают повышенной устойчивостью и/или толерантностью к Phytophthora infestans. Также предложены способы получения растения, содержащего мутированный ген AOS2, например, содержащий одну или более мутаций, описанных в настоящем документе; предпочтительно указанное растение по существу сохраняет каталитическую активность белка дикого типа, независимо от наличия или отсутствия соответствующего патогена. В некоторых вариантах реализации указанные способы включают введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов с одной или более целевыми мутациями в гене AOS2 (например, такими как описаны в настоящем документе) и идентификацию клетки, семени или растения, содержащего мутированный ген AOS2.

Виды растений.

В некоторых вариантах реализации растения или растительные клетки могут представлять собой

- 48 037142 томат. В некоторых вариантах реализации растения или растительные клетки могут представлять собой баклажан. В некоторых вариантах реализации растения или растительные клетки могут представлять собой перец. В некоторых вариантах реализации растения или растительные клетки могут представлять собой сою. В некоторых вариантах реализации растения или растительные клетки могут представлять собой табак.

В соответствии с любым из аспектов, вариантов реализации, композиций и способов, описанных в настоящем документе, растения могут представлять собой картофель любого коммерческого сорта. Например, растение или растительная клетка может быть выбрана из сорта картофеля, выбранного из группы, состоящей из

Anya, Arran

Victory, Atlantic, Belle de Fontenay, BF-15, Bintje, Cabritas, Camota, Chelina, Chiloe, Cielo, Clavela Blanca, Desiree, Fianna, Fingerling, Fontana, Flava, Golden Wonder, Innovator, Jersey Royal, Kerr's Pink, Kestrel, King Edward, Kipfler, Lady Balfour, Maris Piper, Nicola, Pachacona, Pink Eye, Pink Fir Apple, Primura, Red Norland, Red Pontiac, Rooster, Russet Burbank, Russet Norkotah, Shepody, Spunta, Vivaldi, Yukon Gold, Nyayo, Mukori, Roslin Tana, Kerrs’s Pink/Meru, Golof, Kinongo, Ngure, Kenya Baraka, Maritta, Kihoro, Americar, Roslin Bvumbwe, Njine, Roslin Gucha, Arka, B53 (Roslin Eburu), Kiraya, Kenya Akiba, 9, Original, Gituma, Mukorino, Amin, Pimpernel, Anett, B, Gituru, Feldeslohn, C, Kigeni, Romano, Kenya Ruaka, Purplu, Njae, Suzanna, Cardinal, Kathama, Kinare-Mwene, Kibururu, Karoa-Igura, Muturu, Faraja, Kiamucove, Michiri, Rugano, Njine Giathireko, Meru Mix, Blue

Baranja, Patrones, Robijn, Roslin Chania, Urgentia, Mirka и Roslin Sasamua.

В различных вариантах реализации растения или растительные клетки, описанные в настоящем документе, могут представлять собой картофель любого коммерческого сорта. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Anya. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Arran Victory. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Atlantic. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Belle de Fontenay. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля BF-15. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Bintje. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Cabritas. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Camota. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Chelina. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Chiloe, Cielo. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Clavela Blanca. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Desiree. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Fianna. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Fingerling. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Flava. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Fontana. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Golden Wonder. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Innovator. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Jersey Royal. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kerr's Pink. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kestrel. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля King Edward. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kipfler. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Lady Balfour. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Maris Piper. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Nicola. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Pachacona. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Pink Eye. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Pink Fir Apple. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Primura. В не- 49 037142 которых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Red Norland. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Red Pontiac. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Rooster. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Russet Burbank. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Russet Norkotah. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Shepody. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Spunta. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Vivaldi. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Yukon Gold. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Nyayo. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Mukori. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Roslin Tana. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kerrs's Pink/Meru. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Golof. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kinongo. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Ngure. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kenya Baraka. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Maritta. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kihoro. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Americar. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Roslin Bvumbwe. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Njine. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Roslin Gucha. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Arka. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля В53 (Roslin Eburu). В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kiraya. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kenya Akiba. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля 9. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Original. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Gituma. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Mukorino. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Amin. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Pimpernel. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Anett. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля В. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Gituru. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Feldeslohn. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля С. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kigeni. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Romano. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kenya Ruaka. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Purplu. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Njae. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Suzanna. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Cardinal. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kathama. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kinare-Mwene. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kibururu. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Karoa-Igura. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Muturu. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Faraja. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Kiamucove. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Michiri. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Rugano. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка

- 50 037142 может относиться к сорту картофеля Njine Giathireko. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Meru Mix. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Blue Baranja. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Patrones. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Robijn. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Roslin Chania. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Urgentia. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Mirka. В некоторых вариантах реализации растение или растительная клетка может относиться к сорту картофеля Roslin Sasamua.

Олигонуклеооснование репарации генов может быть введено в растительную клетку с применением любого способа, обычно используемого в данной области техники, включая, но не ограничиваясь ими, микроносители (биолистическая доставка), микроволокна, полиэтиленгликоль (ПЭГ)-опосредуемое поглощение, электропорацию и микроинъекцию.

Также предложены способы и композиции, относящиеся к культуре клеток, мутированных в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, для получения растения, которое дает семена, далее фертильного растения, и получению семян и дополнительных растений из такого фертильного растения.

Также предложены способы и композиции, относящиеся к культуре клеток, мутированных в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, для получения растения, которое образует по существу нормальные клубни с по существу нормальным выходом, благодаря чему по существу нормальные растения образуются из клубня или части клубня картофеля, имеющего по меньшей мере один или два глазка (спящие почки), часто называемого семенным картофелем.

Также предложены мутации в гене AOS2, которые обеспечивают растению устойчивость и/или толерантность к соответствующему патогену, или при которых мутированный ген AOS2 обладает по существу такой же или измененной ферментативной активностью по сравнению с AOS2 дикого типа.

Отбор устойчивых к патогену растений и применение патогенов.

Растения и растительные клетки можно тестировать на предмет устойчивости и/или толерантности к патогену с использованием способов, общеизвестных в данной области техники, например, путем выращивания растения или растительной клетки в присутствии патогена и измерения скорости роста по сравнению со скоростью роста в отсутствии патогена. Заражение патогеном для отбора устойчивых и/или толерантных растений можно осуществлять путем введения либо спорангиев, либо зооспор патогена. Уровни устойчивости растения в случае данных заражений можно оценивать в соответствии с различными способами, такими как определение скорости увеличения ДНК патогена в инфицированном растительном материале, скорости прогрессирования размеров поражения и т.д.

В настоящем описании по существу нормальный рост растения, органа растения, растительной ткани или растительной клетки определяется как скорость роста или скорость деления клеток указанного растения, органа растения, растительной ткани или растительной клетки, которая составляет по меньшей мере 35%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 75% скорости роста или скорости деления клеток в соответствующем растении, органе растения, растительной ткани или растительной клетке, экспрессирующей белок AOS2 дикого типа.

В настоящем описании по существу нормальное развитие растения, органа растения, растительной ткани или растительной клетки определяется как возникновение одного или более явлений развития в указанном растении, органе растения, растительной ткани или растительной клетке, которые по существу совпадают с теми, которые возникают в соответствующем растении, органе растения, растительной ткани или растительной клетке, экспрессирующей белок AOS2 дикого типа.

В некоторых вариантах реализации органы растений, предложенные согласно настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются ими, листья, стебли, корни, вегетативные почки, цветочные почки, меристемы, зародыши, семядоли, эндосперм, чашелистики, лепестки, пестики, плодолистики, тычинки, пыльники, микроспоры, пыльцу, пыльцевые трубки, семяпочки, завязи и плоды или полученные из них срезы, части или диски. Растительные ткани включают, но не ограничиваются ими, каллюсные ткани, основную паренхиму, сосудистые ткани, запасающие ткани, меристематические ткани, ткани листьев, ткани побегов, ткани корней, ткани галлов, ткани опухолей растений и репродуктивные ткани. Растительные клетки включают, но не ограничиваются ими, выделенные клетки с клеточными стенками, их агрегаты различных размеров и протопласты.

Растения являются по существу толерантными к соответствующему патогену, когда они подвергаются его воздействию и обеспечивают кривую доза/ответ, которая смещена вправо по сравнению с кривой, обеспечиваемой подобным нетолерантным растением, подвергнутым аналогичному воздействию. Такие кривые доза/ответ включают дозу, нанесенную на ось X, и процент уничтожения, патогенный эффект и т.д., нанесенный на ось Y. Для конкретного патогенного эффекта толерантным растениям потребуется большее количество патогена, чем подобным нетолерантным растениям. Растения, которые являются по существу устойчивыми к патогену, демонстрируют малое количество (при нали- 51 037142 чии) некротических, литических, хлоротических или других поражений при воздействии патогена в концентрациях и со скоростями, которые типичны для воздействия патогена в природе. Растения, которые устойчивы к патогену, являются также толерантными к указанному патогену.

Методы полимеразной цепной реакции для детектирования и количественного определения патогенов в растениях.

Устойчивость хозяина к патогену может быть определена с использованием способов, уже разработанных и известных специалисту в данной области техники. Как правило, для разных патогенов используют разные способы, но в целом, следующие способы можно применять в отношении грибковых и бактериальных патогенов. Устойчивость и/или толерантность к патогену может быть определена путем мониторинга присутствия и количества патогенспецифической нуклеиновой кислоты в растении. Например, листочки растения инокулируют 10 мкл каплями суспензии спорангиев (30-40 спорангиев/мкл) на обеих сторонах средней жилки. Oberhagemann P. et al. Mol. Breed. Vol. 5, p. 399-415 (1999). Симптомы заболевания могут быть оценены через 7 дней после инфицирования. ДНК экстрагируют из инфицированного растительного материала. Осуществляют мониторинг роста патогена с использованием описанных Phytophthora infestans-рибосомная ДНК-специфических праймеров (типичная последовательность прямого праймера: 5'-GAAAGGCATAGAAGGTAGA-3' и типичная последовательность обратного праймера: 5'-TAACCGACCAAGTAGTAAA-3'). Интенсивность ампликонов Phytophthora infestans калибруют относительно ДНК-полос тубулина картофеля. Интенсивность полос определяют количественно и переводят в произвольные единицы относительно абсолютных значений, полученных у контрольных растений. Judelson H.S. et al. Phytopathology, vol. 90, p. 1112-1119 (2000).

Уровни устойчивости к патогену у представляющих интерес растений, представляющих собой картофель, могут быть оценены путем заражения растений Phytophthora infestans или другим представляющим интерес патогеном. Для Phytophthora infestans листья 6-8-недельных растений отделяют от стебля и помещают абаксиальной стороной вверх в чашки с 4% водным агаром. Листья инокулируют каплей суспензии спорангиев (40000-100000 спорангиев/мл) с использованием пипетки Пастера на абаксиальной стороне листа. Чашки помещают в инкубатор 18°С с 12-часовым фотопериодом.

Развитие заболевания оценивают через 6 дней после инокуляции и при необходимости в соответствии с опубликованными способами, как в Vleeshouwers et al. (2000) Physiol and Mol Plant Pathology, vol. 57, p. 35 - 42; Vleeshouwers et al. (1999) Europ J. of Plant Pathology, vol. 105, p. 241-250; Oberhagemann et al. (1999) Molecular Breeding, vol. 5, p.399-415.

Для анализов грибковой инфекции оценку уровня инфицирования осуществляют в соответствии с опубликованными способами для каждых взаимодействий грибок-хозяин. Источники включают Rogers et al. (1994) Plant Cell, vol. 6, p. 935-945; Valent et al. (1991) Genetics, vol. 127, p. 87- 101; Thomas et al. (1997) Plant Cell, vol. 9, p. 2209-2224. Как правило, для спорообразующего грибка инокуляцию осуществляют с использованием инокулята, содержащего споры представляющего интерес грибка в желаемой концентрации. Данный инокулят наносят распылением на растение на конкретной стадии развития (например: до появления 4-го листа/6-8-недельное и т.д.). Инокулированные растения инкубируют в условиях высокой влажности в течение 24 ч после инокуляции, а затем переносят в желаемые условия роста с циклами дня и ночи, подходящими для роста растения-хозяина. Интенсивность инфицирования оценивают, как правило, через 3-4 дня после инфицирования и проводят оценку в соответствии с разработанными способами для системы хозяин-патоген. Как правило, неспорулирующие поражения оценивают как реакции устойчивости, тогда как спорулирующие поражения считаются реакциями чувствительности. Последние оценивают на предмет тяжести инфекции в соответствии с размером и внешним видом поражений.

Для оценки тяжести заболевания, связанной с бактериальными патогенами, используют опубликованные способы для каждого вида бактерий, упомянутые в Elibox W. et al. (2008) Phytopathology, vol. 98, p. 421-426; Chaudhry et al. (2006) - Pakistan J. of Botany, vol. 38 (1), p. 193-203; Zhao et al. (2005) J. of Bacteriology, vol. 187, p. 8088. Как правило, для бактериальных патогенов бактериальная суспензия с предварительно определенной плотностью (например: 5х10⁴ колониеобразующих единиц) будет проникать в листья растения-хозяина на конкретной стадии развития (например: 3-недельные растения). Инокулированные растения выдерживают при высокой влажности в течение 3-4 дней, и тяжесть инфекции оценивают путем взятия образцов двух-трех листовых дисков, которые измельчают, и полученную надосадочную жидкость высевают в среды для роста бактерий для подсчета колониеобразующих единиц бактерий, образующихся из инфицированного растительного материала.

Тяжесть инфекции преобразованного растения оценивают путем определения количества колониеобразующих единиц, образующихся из инфицированной ткани преобразованного растения, по сравнению с образующимися из инфицированной ткани растений дикого типа.

Для специалиста в данной области техники совершенно очевидно, что настоящее изобретение позволяет реализовать задачи и достичь результатов и преимуществ, упомянутых в настоящем описании, а также присущих ему. Примеры, приведенные в настоящем описании, представляют предпочтительные варианты реализации, являются типичными и не ограничивают объем настоящего изобретения.

- 52 037142

Примеры

Ниже следуют примеры, иллюстрирующие процедуры для практического применения настоящего изобретения. Данные примеры не следует рассматривать как ограничивающие. Все проценты приведены по массе и все пропорции смеси растворителей приведены по объему, если не указано иное.

Пример 1. Повышение устойчивости растения к патогену с применением технологии RTDS™.

Оценка представляющих интерес культурных сортов на предмет генотипа в локусах генов AOS2.

С использованием навыков, известных специалисту в данной области техники, представляющие интерес культурные сорта картофеля подвергали генотипированию следующим образом: геномную ДНК представляющих интерес культурных сортов растения экстрагировали с помощью известных способов и подвергали амплификации гена, опосредуемой полимеразной цепной реакцией (ПЦР), с выделением всех аллелей AOS2, присутствующих в образцах указанных геномной ДНК. Праймеры для ПЦР, используемые для амплификации, были следующими: прямой праймер 5'-CACCTTTGTATCACTAACATTACCC ATCC-3' (SEQ ID NO: 51) и обратный праймер 5'-GCATGTGTTGCTTGTTCTTATAATTTCAG-3' (SEQ ID NO: 52). Амплифицированные фрагменты клонировали в вектор ТОРО 2.1 (Invitrogen Corporation, Карлсбад, Калифорния) и подвергали секвенированию по 12 клонов на амплификацию. Полученные последовательности выравнивали с эталонной последовательностью (SEQ ID NO 2) с использованием пакета программного обеспечения для анализа Vector NTI (Invitrogen Corporation, Карлсбад, Калифорния) и определяли полиморфные сайты. Трансляцию указанных последовательностей нуклеиновых кислот в последовательность, кодирующую белок, осуществляли также с использованием программного обеспечения для анализа последовательностей Vector NTI и полученные последовательности сравнивали с эталонной белковой последовательностью (SEQ ID NO 1) с идентификацией полиморфных аминокислот. Все обнаруженные аминокислотные полиморфизмы и их положения в белковых последовательностях, полученных на сегодняшний день, приведены в табл.1. Положения аминокислот обозначены в соответствии с положениями аминокислот в эталонной белковой последовательности, представленной последовательностью SEQ ID NO 1.

Получение характеристик биохимической активности аллелей AOS2 (in vitro).

Нуклеиновую кислоту идентифицированных аллелей AOS2 амплифицировали методом ПЦР с помощью праймеров, описанных выше, но с добавлением сайтов Xma I и Pst I в прямой и обратный праймеры соответственно с введением сайтов Xma I и Pst I в 5'-и 3'-концы аллелей соответственно для облегчения клонирования амплифицированных продуктов в вектор pQE30 для гетерологичной экспрессии в Е.coli (штамм М15, Qiagen Inc., Валенсия, Калифорния). Амплифицированные методом ПЦР фрагменты расщепляли с помощью рестриктаз Xma I и Pst I, и клонировали в расщепленный подобным образом вектор pQE30b (подвергнутый сайт-направленному мутагенезу со встраиванием нуклеотида 5' в сайт Xma I так, что любой фрагмент гена, клонированный в сайт Xma I, находится в рамке с кодирующей последовательностью вектора pQE30), и отбирали клоны путем трансформации в штамм XL-1 Blue E.coli. Полученные экспрессионные плазмиды экстрагировали из клеток XL-1 Blue и подвергали ПЦР в геле и секвенированию для подтверждения клонирования и отсутствия каких-либо сдвигов рамки считывания. Подтвержденные клоны трансформировали в клетки М15 (Qiagen Inc., Валенсия, Калифорния) и использовали для анализа экспрессии белка.

Для анализов экспрессии белка каждые 500 мкл ночных 5 мл культур представляющих интерес штаммов (например, несущий только вектор штамм, содержащий плазмиду без гена AOS2, и представляющий интерес штамм, содержащий один аллель гена AOS2,) инокулировали в 10 мл среды LB с добавлением карбенициллина (100 мкг/мл) и канамицина (25 мкг/мл). Культуры инкубировали при 37°С со встряхиванием при 250 об/мин пока поглощение при 600 нм (А600) не достигало желаемых единиц оптической плотности (OD) (например, 0,6-0,8 единиц OD). Затем в клетках индуцировали экспрессию белка с помощью 1 мМ изопропилтиогалактозида (IPTG) и инкубировали при желаемой температуре (например, 12°С) со встряхиванием при 100 об/мин в течение желаемого периода времени (например, 3-7 дней). Экспрессию белка контролировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-ПААГ) и путем спектрального анализа на предмет экспрессии белка цитохрома Р450 типа I. Очистку белка AOS2 осуществляли с использованием коммерчески доступных колонок для связывания Ni NTA в соответствии с инструкциями производителя (Thermo Scientific, Рокфорд, Иллинойс).

Биохимический анализ для определения характеристик каталитической активности белков AOS2.

Очищенные белки, экспрессированные в E.coli, использовали для анализа на предмет каталитической активности белков, кодируемых идентифицированными различными аллелями гена AOS2. Анализ проводили в соответствии с опубликованными протоколами (Schreier and Lorenz (1982) Z. Naturforsch, Vol. 37°C, p. 165). Как правило, 13S-гидроперокси-9Z,11Е-октадекадиеновая кислота (13-HPODE) и 13Sгидроперокси-9Z,11E,15Z-октадекатриеновая кислота (HPOTrE) выступают в качестве субстрата для анализа ферментов, а эталонный образец без добавления фермента служит в качестве отрицательного контроля. Для оценки каталитической активности различных белков, кодируемых различными аллелями AOS2, определяли известное количество очищенного белка, нормализованное путем спектрального ана

- 53 037142 лиза или другим способом, с помощью 3-13 мкМ раствора субстрата в 0,1М фосфатном буфере, рН 6,0. Скорость уменьшения поглощения при А234 контролировали с течением времени и полученные кинетические данные использовали для расчета удельной активности каждого из представляющих интерес белков. Ферменты с самыми высокими значениями удельной активности считали представляющими интерес ферментами, и аминокислотные последовательности таких ферментов сравнивали с последовательностями ферментов с более низкими значениями удельной активности с идентификацией конкретных положений аминокислот, которые обеспечивают белкам AOS2 большую каталитическую активность.

Для оценки влияния мутации G231T нуклеотиды (НТ) 691/692 аллелей StAOS2, StAOS2_CB17 и StAOS2_CB18, Bintje превращали из G/G в А/С с использованием сайт-направленного мутагенеза (SDM), что приводило к переходу G231T в соответствующих белках AOS2. Аминокислотные (АК) полиморфизмы, обнаруженные повсеместно в данных белках AOS2, представлены в табл. 2. Данные клоны подвергали биохимическому анализу, описанному выше, и значения удельной активности данных белков и белков с изменением в положении АК 231 приведены в табл. 3.

Таблица 2. Отличия генотипов среди положений аминокислот 48, 76, 231, 328, 423 и 494 аллелей StAOS2 Bintje, подвергнутых анализу биохимической активности

	48	76	231	328	423	494
StAOS2_CB17	T	N	G	L	I	D
StAOS2_CB17_G231T	T	N	Т	L	I	D
StAOS2_CB18	т	D	G	L	I	G
StAOS2_CB18_G231T	т	D	Т	L	I	G

Таблица 3. Значения удельной активности белков, кодируемых аллелями StAOS2, StAOS2_CB18 и StAOS2_CB17, и их производными. Генотип по положениям НТ 691/692 в виде G/G и А/С соответственно соответствует G и Т в АК 231 в кодируемых белках

Название аллеля	Генотип 691/692 (AK231)	Нормализованная удельная активность StAOS2 Исследование 1 (мкМ/мин/мг белка)	Нормализованная удельная активность StAOS2 Исследование 2 (мкМ/мин/мг белка)	Средняя удельная активность StAOS2 (мкМ/мин/мг белка)	Кратность изменения (по сравнению с аллелем дикого типа)	Процент
StA0S2_ СВ18	GG(G)	14,55	9,66	12,11
StAOS2_ CB18_G 23 IT	AC (T)	17,73	13,19	15,46	1,3х	30%
StA0S2_ CB17	GG(G)	7,64*	5,83	6,74
StA0S2_ CB17_G 23 IT	AC (T)	16,88*	12,8	14,84	2,2х	120%

Как показано в табл. 3, при сравнении значений удельной активности изогенных белков, отличающихся только в положении АК 231, превращение генотипа по положениям НТ 691/692 аллелей гена StAOS2 из G/G в А/С приводит к повышению удельной активности кодируемых белков.

Дополнительная оценка влияния аминокислотного профиля в положениях 231 и 328 в белке, кодируемом StAOS2_CB18, показывает, что данная комбинация состава аминокислот в этих двух положениях повышает удельную активность белка AOS2. Данные приведены в табл. 4.

- 54 037142

Таблица 4. Значения удельной активности белков, кодируемых аллелем StAOS2_CB18 и его производными, отличающихся в положениях АК 231 и 328

	AK 231	AK 328	Удельная активностьАО82 Исследование 1 (мкМ/мин/мг)	Удельная активностьАО82 Исследование 2 (мкМ/мин/мг)	Средняя удельная активностьАО82 (мкМ/мин/мг)
StA0S2_CB 18_L328V	G	V	9,147982	9,982926	9,565454
StA0S2_CB 18_G231T_L 328V	T	V	6,738131	6,950514	6,844323
StA0S2_CB 18	G	L	7,355882	9,447077	8,40148
StA0S2_CB 18_G231T	T	L	9,190796	10,25108	9,72094

Изменение аминокислотного (АК) профиля белка AOS2, кодируемого аллелем StAOS2_CB18, в положении АК 328 с L на V (StAOS2_CB 1_L328V) повышало активность в случае комбинации с G в положении АК 231, но снижало активность в случае комбинации с Т в положении АК 231 (StAOS2_CB18_G231_L328V). Эти данные показывают, что переход G231T в случае комбинации с мутацией L328V приводит к снижению удельной активности белка AOS2, и указывают на то, что взаимодействие указанных АК профилей в этих двух положениях влияет на активность белка AOS2. Анализы активности in vitro также использовали для оценки влияния мутации D76N в StAOS2_CB19. StAOS2_CB19 подвергали SDM с получением аллеля StAOS2_CB19_D76N с превращением 76-го остатка в белке AOS2 в аспарагин (N) из аспарагиновой кислоты (D). Их оценивали на предмет различий в удельной активности с использованием способов, описанных выше. Данные, полученные в результате трех независимых исследований, показали, что мутация D76N приводила к приблизительно 30% снижению активности фермента.

Аллели с большей каталитической активностью выбирали для анализов in planta.

Получение характеристик биохимической активности аллелей AOS2 (in vivo).

Для оценки гипотезы, что те белки AOS2, которые обладают большей биохимической активностью in vitro, будут также демонстрировать большую биохимическую активность in planta, аллели AOS2, которые демонстрировали большую удельную активность, клонировали в растительный бинарный вектор под контролем конститутивного или Arabidopsis промотора AOS2. С использованием способа Agrobacterium tumefaciens-опосредуемой трансформации данные конструкции превращали в линию растения CS6149 Arabidopsis thaliana с разрушенным геном AOS2 (TAIR, http://www.arabidopsis.org/) с помощью разработанных способов (Bent et al. (2000) Plant Physiol, vol. 124, p. 1540). Трансформанты идентифицировали путем подходящего отбора (в зависимости от селектируемого маркера, присутствующего в бинарном векторе - т.е. канамицина для гена nptII в качестве селектируемого маркера), с помощью молекулярных способов, а также способности введенных генов AOS2 дополнять AOS2-дефицитный фенотип аномального развития опыления/стручка вследствие мужской стерильности, вызванной отсутствием функционального гена AOS2. Дополненные геном AOS2 линии растения оценивали на предмет уровней ЖК и/или OPDA в основных и индуцирующих условиях с использованием разработанных способов (Chebab et al. (2008), PLoS ONE, vol 3: p.el904; Schmelz et al. (2003) Plant Physiol, vol 133: p 295; Engelberth et al. (2003) Anal. Biochem., vol. 312, p 242). В качестве альтернативы, дополненные линии использовали для анализов заболеваний растений с использованием патогенов для Arabidopsis, таких как Erwinia carotovora или ssp. carotovora, или Hyaloperonospora arabidopsidis, и/или других для проверки гипотезы, что более высокие уровни ЖК или более высокая каталитическая активность AOS2 приводит к повышенной устойчивости и/или толерантности к патогенам.

Для оценки влияния АК полиморфизмов в белке AOS2 на накопление жасмоновой кислоты (ЖК) in planta, два аллеля культурного сорта картофеля Bintje, StAOS2_CB18_G231T, регулируемые промотором AtAOS2 Arabidopsis thaliana, использовали для дополнения нулевого мутантного фенотипа мутантных по aos2 растений A.thaliana. Полученные трансгенные линии развивали до Т3-поколения с получением гомозигот, и полученные растения подвергали исследованиям для количественного определения ЖК в соответствии с описанными способами (Chebab et al. (2008), PLoS ONE, vol 3: p.e1904; Schmelz et al. (2003) Plant Physiol, vol 133: p 295; Engelberth et al. (2003) Anal Biochem, vol. 312, p 242). Результаты представлены в табл. 5.

- 55 037142

Таблица 5. Схема накопления ЖК в трансгенных линиях Arabidopsis thaliana, содержащих аллели StAOS2_CB19 или StAOS2_Cbl8_G231T

Аллель StAOS2	Линия растения	Среднее количество ЖК	Стандартная ошибка
StAOS2_CB19	1001-13-6	32,34	4,25
	1001-14-6	29,94	5,69
	1001-14-7	59,91	1,96
	1001-19-4	107,21	22,59
	1001-4-6	16,04	1,63
	1001-9-1	20,48	7,47

StAOS2_CB18_G231T	1003-10-8	20,90	6,26
	1003-16-6	84,20	24,58
	1003-17-1	97,60	18,37
	1003-17-2	81,08	1,81
	1003-4-4	95,50	3,61
	1003-7-9	67,66	30,93

	aos2	0,16	0,02
	Col-0	74,17	7,53

Показанные средние количества ЖК представляют собой уровни ЖК, присутствующие в ткани листьев Arabidopsis при основных уровнях экспрессии, в нг на грамм массы сырой ткани. Показанные результаты представляют собой средние значения двух повторных образцов, содержащих несколько листьев.

Данные эксперименты показали, что, в целом, трансгенные линии A.thaliana, содержащие StAOS2_CB18_G231T с АК профилем Т и L в положениях АК 231 и 328 соответственно, накапливали более высокий уровень ЖК (в среднем 44,32 нг ЖК/г массы свежей ткани), чем те, которые содержали StAOS2_CB19 с АК профилем Т и V (в среднем 74,45 нг ЖК/г массы свежей ткани) в указанных положениях соответственно. Эти данные согласуются с данными, представленными в табл. 3, что показывает, что взаимодействие между АК 231 и 328 в белке AOS2 играет роль в модуляции активности белка AOS2. Эти данные также подтверждают полученные in vitro данные in planta, описанные в настоящем документе, что указывает на то, что положения 231 и 328 в белке AOS2 играют роль в модуляции уровней ЖК in planta.

Для оценки влияния генотипа StAOS2 и являющегося результатом АК профиля белка AOS2 на толерантность к заболеванию, трансгенные растения A.thaliana, содержащие аллели StAOS2, StAOS2_ CB18_G231T и StAOS2_CB19, культурного сорта картофеля Bintje, инокулировали Erwinia carotovora ssp. carotovora (Ecc) в количестве 5x104 КОЕ/мл в соответствии с разработанными способами (Kariola et al., (2003) Arabidopsis, 16: MPMI, 179-187). В различные моменты времени после инокуляции брали образцы листьев и количественно определяли бактериальный титр. Рост бактерий был значительно меньше в трансгенных растениях A.Thaliana, содержащих аллель StAOS2_CB18_G231T, чем в тех, которые содержали аллель StAOS2_CB19.

Оценка влияния профиля АК 231 на толерантность картофеля к Phytophthora infestans.

Для соотнесения функционального различия с отличиями генотипов в аллелях гена StAOS2 и проверки гипотезы, что аллели гена StAOS2 с А/С в НТ 691/692 обеспечивают повышенную толерантность по сравнению с аллелями, содержащими G/G в данных положениях, два варианта аллеля StAOS2, StAOS2_CB18 и StAOS2_CB18_G231T, с G/G и А/С в положениях НТ 691/692 соответственно, подвергали сверхэкспрессии в картофеле под контролем промотора 35S. Некоторые из полученных линий тестировали на предмет толерантности к Phytophthora infestans с использованием стандартного анализа отделенного от стебля листа. Вкратце, для каждого тестируемого аллеля листья приблизительно шести независимых 4-8-недельных трансгенных растений, представляющих собой картофель, выращенных в почве, отделяли от стебля и инокулировали 300 спорами в 4 местах на абаксиальной стороне листа. Листья выдерживали в темноте в течение 24 ч после инокуляции, а затем инкубировали по 12 ч в темноте и при свете при 18°С в течение 8 дней. Эксперимент повторяли с одинаковыми результатами с использованием независимых анализов отделенных от стебля листьев. Тогда как в листьях растений со сверхэкспрессией StAOS2_CB18 развивались поражения, схожие с поражениями у растений, представляющих собой картофель Bintje, дикого типа, и контрольных трансгенных растений с пустым вектором, листья трансген- 56 037142 ных растений с StAOS2_CB18_G231T демонстрировали заметное снижение развития или отсутствие развития поражений. Следовательно, это подтверждает, что сверхэкспрессия аллеля гена StAOS2 с генотипом А/С в положении НТ 691/692 обуславливает повышенную толерантность к Phytophthora infestans у растений, представляющих собой картофель.

Подобным образом, эти две генетические конструкции также подвергали экспрессии в растениях, представляющих собой картофель, под контролем нативного промотора гена StAOS2. Культурный сорт картофеля Bintje представлял собой родительскую линию для трансгенных растений, тогда как Bintje_pJIHoon представлял собой контрольную трансгенную линию, несущую только вектор. Полученные линии растений также подвергали инфицированию Phytophthora infestans с использованием стандартного анализа отделенного от стебля листа (описанного в настоящем документе). Аналогично результатам, полученными для растений со сверхэкспрессией трансгена, тогда как в листьях растений со сверхэкспрессией StAOS2_CB18 развивались поражения, схожие с поражениями у контрольных трансгенных растений с пустым вектором, листья растений с StAOS2_CB1_G231T демонстрировали заметное снижение развития или отсутствие развития поражений.

Опосредуемое RTDS™ преобразование аллелей AOS2.

Для преобразования представляющих интерес аллелей AOS2 по технологии RTDS™, GRON AOS2 доставляли в протопласты растений (т.е. через ПЭГ-опосредуемое поглощение нуклеиновых кислот, путем электропорации и т.д.), содержащие конкретное изменение в представляющем интерес целевом остатке нуклеиновой кислоты. Например, для осуществления желаемых преобразований А/С в положении 691/692 в гене AOS2 соответственно GRON содержал последовательность, идентичную последовательности, расположенной выше (upstream) и ниже (downstream) положений 691/692 целевого аллеля AOS2, но с АС в положениях 691/692. Клетки, подвергнутые воздействию GRON, превращали в каллюсы с использованием разработанных способов.

Отбор растений/каллюсов с желаемыми изменениями генотипа.

Растения/каллюсы с желаемыми изменениями отбирали путем отбора с использованием заражения патогеном (в патосистеме картофель-фитофтороз заражение патогеном осуществляют путем введения спорангиев или зооспор Phytophthora). В качестве альтернативы, растения/каллюсы с желаемыми изменениями выбирали на основе способов без отбора, таких как секвенирование материала каллюса/растительного материала, например опосредуемая праймером специфическая амплификация желаемых мишеней для идентификации тех, которые обладают желаемыми изменениями.

Оценка и применение нескольких циклов RTDS.

После идентификации растительного материала с желаемыми изменениями в гене AOS2 повторяли генотипический анализ локуса гена AOS2 для полной оценки природы разнообразия аллелей AOS2. Если аллели чувствительного или промежуточного типа по-прежнему имели место, данные растения/каллюсы снова подвергали манипуляциям RTDS™ для получения желаемых изменений в аллеле. При необходимости, такие повторные циклы RTDS™ и отбора повторяли по мере необходимости пока не получали желаемый генотип в локусе/локусах AOS2.

Окончательная оценка культурных сортов с желаемыми изменениями.

После идентификации каллюсов с целевыми изменениями из их регенерировали растения. Такие растения подвергали оценкам с использованием анализов патогенов, оценки уровней ЖК/OPDA, анализов экспрессии белка. Для этого растение дикого типа использовали в качестве контроля для оценки степени предполагаемых изменений, таких как более высокая устойчивость к патогену, более высокие уровни ЖК/OPDA в растениях, содержащих желаемые преобразования.

Пример 2. Идентификация новых мутаций гена AOS2, усиливающих активность AOS2, и функциональный анализ in planta.

Получение новых аллелей гена StAOS2.

Для обнаружения тех аминокислот, которые могут повышать каталитическую активность или стабильность белка AOS2, которые не наблюдаются в природе, или тех аминокислот, которые не обнаруживаются путем таким анализов генотипирования (см. выше), предпринимали попытки проведения неспецифического мутагенеза или более направленные попытки проведения направленного мутагенеза конкретных целевых остатков белка AOS2 с использованием допускающей ошибки ПЦР или сайтнаправленного мутагенеза (SDM). Для сайт-направленного мутагенеза целевые сайты могли представлять собой сайты в гене AOS2, идентифицированные в результате попыток генотипирования, описанного выше и в табл. 1 (например, N76D и Т495К), другие сайты, такие как сайты, которые, по прогнозам, расположены вблизи активного центра фермента, которые могут влиять на связывание субстрата или каталитическую активность, или другие сайты, которые могут влиять на каталитическую активность на расстоянии.

Для этого использовали плазмидную ДНК конструкции, содержащей эталонный ген, такой как представленный последовательностью SEQ ID NO: 2, и подвергали мутагенезу с использованием разработанных способов (набор Diversify Random PCR mutagenesis Kit, Clonetech, Маунтин-Вью, Калифорния; ссылка на допускающую ошибки ПЦР; набор QuikChange XL Site-Directed Mutagenesis Kit; Stratagene,

- 57 037142

Сан-Диего, Калифорния). Мутированные клоны отбирали и подвергали анализу последовательностей с идентификацией мутаций, и те, которые представляли интерес, отбирали для гетерологичной экспрессии белка с использованием системы экспрессии pQE30 от Qiagen Inc., Валенсия, Калифорния (см. ниже).

В качестве альтернативы, библиотеку таких подвергнутых мутагенезу конструкций клонировали в бинарный вектор и трансформировали в протопласты растений, и трансформанты превращали в каллюсы и из них регенерировали растения. Полученные каллюсы подвергали количественному определению уровней ЖК/OPDA с помощью разработанных способов (см., например, Chebab et al., (2008), PLoS ONE, vol 3: p.el904; Schmelz (2003) Plant Physiol, vol 133: p 295; Engelberth et al. (2003) Anal. Biochem, vol. 312, p 242), и толерантность данных линий оценивали с использованием представляющего интерес патогена (например, Phytophthora infestans).

Пример 3. Идентификация новых мутаций гена AOS2, усиливающих активность AOS2, и комплементационный анализ в Arabidopsis.

Варианты генов AOS2, полученные посредством анализов генотипирования или процедур мутагенеза, описанных выше, трансформировали в линию CS6149 Arabidopsis thaliana с мутантным aos2 (TAIR, http://www.arabidopsis.org/), и представляющие интерес аллели AOS2 отбирали по уровням ЖК/OPDA или на основе анализов патогенов, описанных выше.

Хотя настоящее изобретение описано и проиллюстрировано на примерах достаточно подробно, для специалиста в данной области техники очевидны различные альтернативы, модификации и усовершенствования его получения и применения, находящиеся в пределах сущности и объема настоящего изобретения. Примеры, приведенные в настоящем описании, представляют предпочтительные варианты реализации, являются типичными и не ограничивают объем настоящего изобретения. Модификации и другие виды применения будут понятны специалисту в данной области техники. Данные модификации включены в сущность настоящего изобретения и определяются объемом формулы изобретения.

Для специалиста в данной области техники очевидно, что могут быть осуществлены различные изменения и модификации настоящего изобретения, описанного в настоящем документе, в пределах объема и сущности настоящего изобретения. Все патенты и публикации, упомянутые в настоящем описании, указывают на уровень специалиста в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение. Содержание всех патентов и публикаций включено в настоящее описание посредством ссылки так же, как если бы содержание каждой индивидуальной публикации было специально включено отдельно.

Настоящее изобретение, наглядно описанное в настоящем документе, подходящим образом может быть реализовано в отсутствие какого-либо элемента или элементов, ограничения или ограничений, которые, в частности, не указаны в настоящем документе. Таким образом, например, в каждом случае в настоящем описании любой из терминов содержащий, по существу состоящий из и состоящий из может быть заменен на любой из указанных двух других терминов. Употребляемые термины и выражения используются в качестве описывающих и не ограничивающих терминов, и использование таких терминов и выражений не исключает любые эквиваленты показанных и описанных признаков или их частей, и понятно, что различные модификации возможны в пределах объема заявленного изобретения. Таким образом, следует понимать, что несмотря на то, что настоящее изобретение специально описано с помощью предпочтительных вариантов реализации и возможных признаков, специалист в данной области техники может прибегнуть к модификации и вариации концепций, указанных в настоящем описании, и что такие модификации и вариации считаются входящими в объем данного изобретения, определяемый прилагаемой формулой изобретения.

Claims

1. Способ получения нетрансгенной растительной клетки, содержащей мутированный ген AOS2, включающий введение в растительную клетку олигонуклеооснования репарации генов (GRON) с целевой мутацией в гене алленоксидсинтазы (AOS2) с получением растительной клетки, содержащей ген AOS2, который экспрессирует белок AOS2, содержащий замену G/T в положении аминокислоты, соответствующем G231 последовательности SEQ ID NO: 5, причем указанная мутация G/T кодируется кодоном ACT.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная нетрансгенная растительная клетка представляет собой клетку растения, выбранного из группы, состоящей из подсолнечника, сахарной свеклы, кукурузы, хлопчатника, пшеницы, ржи, овса, риса, канолы, фруктов, овощей, ячменя, сорго, манго, персика, яблока, груши, клубники, банана, дыни, моркови, латука, лука репчатого, видов сои, сахарного тростника, гороха, конских бобов, тополя, винограда, цитруса, люцерны, газонных и кормовых трав, льна, масличной культуры, огурца, ипомеи, бальзамина, баклажана, календулы, лотоса, капусты, маргаритки, гвоздики, тюльпана, касатика, лилии и растений, образующих орехи.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что указанная нетрансгенная растительная клетка представляет собой клетку вида растения, выбранного из группы, состоящей из картофеля, томата, сои культурной, перца и табака.

- 58 037142

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что указанная нетрансгенная растительная клетка представляет собой растительную клетку вида Solanum tuberosum.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что указанная нетрансгенная растительная клетка относится к сорту картофеля, выбранному из группы, состоящей из Anya, Arran Victory, Atlantic, Belle de Fontenay, BF-15, Bintje, Cabritas, Camota, Chelina, Chiloe, Cielo, Clavela Blanca, Desiree, Fianna, Fingerling, Flava, Fontana, Golden Wonder, Innovator, Jersey Royal, Kerr's Pink, Kestrel, King Edward, Kipfler, Lady Balfour, Maris Piper, Nicola, Pachacona, Pink Eye, Pink Fir Apple, Primura, Red Norland, Red Pontiac, Rooster, Russet Burbank, Russet Norkotah, Shepody, Spunta, Vivaldi, Yukon Gold, Nyayo, Mukori, RoslinTana, Kerrs's Pink/Meru, Golof, Kinongo, Ngure, Kenya Baraka, Maritta, Kihoro, Americar, Roslin Bvumbwe, Njine, Roslin Gucha, Arka, Anett, Pimpernel, B53 (Roslin Eburu), Patrones, Robijn, Roslin Chania, Urgentia, Feldeslohn, Kenya Akiba, Mirka и Roslin Sasamua.

6. Способ получения нетрансгенного устойчивого к патогену растения, включающий идентификацию растительной клетки, полученной способом по п.1, демонстрирующей по существу нормальный рост и нормальную каталитическую активность AOS2 по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа, в присутствии патогена; и регенерацию нетрансгенного устойчивого к патогену растения, содержащего мутированный ген AOS2, из указанной растительной клетки.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что патоген представляет собой один или более видов, выбранных из группы, состоящей из видов бактерий, грибков, вирусов, прионов и микоплазм.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что вид патогена представляет собой один или более видов, выбранных из группы, состоящей из Phytophthora infestans Fusarium spp., Botrytis spp., Alternaria spp., Pythium spp., Personospora spp., Cladosporim spp., Erysiphe spp., Aspergillus spp., Puccinia spp., Blumeria spp. и/или Trichoderma spp., Xanthomonas (например, Xanthomonas axonopodis pv. aurantifolii, Xanthomonas campestris pv. campestris, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria), Pseudomonas (Pseudomonas syringae pv. tomato, Pseudomonas syringae pv. phaseolicola, Pseudomonas syringae pv. syringae), Erwinia (например, Erwinia carotovora subsp. atroseptica), Ralstonia (например, Ralstonia solanacearum), Clavibacter michiganensis, Xylella fastidiosa, вируса мозаики соевых бобов, вируса кольцевой пятнистости табака, вируса полосатости табака, вируса бронзовости томата и других.

9. Способ по п.7, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение выбрано из группы, состоящей из подсолнечника, сахарной свеклы, кукурузы, хлопчатника, пшеницы, ржи, овса, риса, канолы, фруктов, овощей, ячменя, сорго, манго, персика, яблока, груши, клубники, банана, дыни, моркови, латука, лука репчатого, видов сои, таких как соя культурная, сахарного тростника, гороха, конских бобов, тополя, винограда, цитруса, люцерны, газонных и кормовых трав, льна, масличной культуры, огурца, ипомеи, бальзамина, баклажана, календулы, лотоса, капусты, маргаритки, гвоздики, тюльпана, касатика, лилии, картофеля, томата, перца, табака и растений, образующих орехи.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение представляет собой вид, выбранный из группы, состоящей из картофеля, томата, сои культурной, перца и табака.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение относится к виду Solanum tuberosum.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение относится к сорту картофеля, выбранному из группы, состоящей из Anya, Arran Victory, Atlantic, Belle de Fontenay, BF-15, Bintje, Cabritas, Camota, Chelina, Chiloe, Cielo, Clavela Blanca, Desiree, Fianna, Fingerling, Flava, Fontana, Golden Wonder, Innovator, Jersey Royal, Kerr's Pink, Kestrel, King Edward, Kipfler, Lady Balfour, Maris Piper, Nicola, Pachacona, Pink Eye, Pink Fir Apple, Primura, Red Norland, Red Pontiac, Rooster, Russet Burbank, Russet Norkotah, Shepody, Spunta, Vivaldi, Yukon Gold, Nyayo, Mukori, Roslin Tana, Kerrs's Pink/Meru, Golof, Kinongo, Ngure, Kenya Baraka, Maritta, Kihoro, Americar, Roslin Bvumbwe, Njine, Roslin Gucha, Arka, Anett, Pimpernel, B53 (Roslin Eburu), Patrones, Robijn, Roslin Chania, Urgentia, Feldeslohn, Kenya Akiba, Mirka и Roslin Sasamua.

13. Способ получения нетрансгенного растения с оценкой среднеранней зрелости, включающий идентификацию растительной клетки, полученной способом по п.1, демонстрирующей по существу нормальный рост и нормальную каталитическую активность AOS2 по сравнению с соответствующей растительной клеткой дикого типа растения со среднеранней зрелостью; и регенерацию нетрансгенного растения со среднеранней зрелостью, содержащего мутированный ген AOS2, из указанной растительной клетки.

14. Способ по п.13, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение выбрано из группы, состоящей из подсолнечника, сахарной свеклы, кукурузы, хлопчатника, пшеницы, ржи, овса, риса, канолы, фруктов, овощей, ячменя, сорго, манго, персика, яблока, груши, клубники, банана, дыни, моркови, латука, лука репчатого, видов сои, таких как соя культурная, сахарного тростника, гороха, конских бобов, тополя, винограда, цитруса, люцерны, газонных и кормовых трав, льна, масличной культуры, огурца, ипомеи, бальзамина, баклажана, календулы, лотоса, капусты, маргаритки, гвоздики, тюльпана, касатика, лилии и растений, образующих орехи.

15. Способ по п.14, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение представляет собой вид, выбранный из группы, состоящей из картофеля, томата, сои, перца и табака.

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение относится к виду So

- 59 037142 lanum tuberosum.

17. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанное нетрансгенное растение относится к сорту картофеля, выбранному из группы, состоящей из Anya, Arran Victory, Atlantic, Belle de Fontenay, BF-15, Bintje, Cabritas, Camota, Chelina, Chiloe, Cielo, Clavela Blanca, Desiree, Fianna, Fingerling, Flava, Fontana, Golden Wonder, Innovator, Jersey Royal, Kerr's Pink, Kestrel, King Edward, Kipfler, Lady Balfour, Maris Piper, Nicola, Pachacona, Pink Eye, Pink Fir Apple, Primura, Red Norland, Red Pontiac, Rooster, Russet Burbank, Russet Norkotah, Shepody, Spunta, Vivaldi, Yukon Gold, Nyayo, Mukori, Roslin Tana, Kerrs's Pink/Meru, Golof, Kinongo, Ngure, Kenya Baraka, Maritta, Kihoro, Americar, Roslin Bvumbwe, Njine, Roslin Gucha, Arka, Anett, Pimpernel, B53 (Roslin Eburu), Patrones, Robijn, Roslin Chania, Urgentia, Feldeslohn, Kenya Akiba, Mirka и Roslin Sasamua.

1 MALTSSFSLP LPGLHQQFPS KYSTFRPIIV SLSEKPT7W TQPTKLP7RT IPCDYGLPGI

6. GPWKDRI.DYF YHQGK3RFFE 5RWKYKSTT FRTaMPPGPF TSSKPKV1VL LDGKSFPVLF 121 DVEKVEKKDL FTGrYKPSTE LTGGYRVLSY LDPSEPNHEK LKKLMFFLLS SRREHVIPEF 131 HETYTEFF37 LDKEMAEKGT AGLMSGMDQA AFNFLARGLF GVHPVETKLG TDGPTLIGKW 241 VLLQLHPVLT LGLPKFLDDL ILHTFRLPPF LVKKDYQRLY DFFYTHSASL FAEAEKLGI2 331 KEEACHMLLF AICFHGFGGM К IFFFfJMLKS IAKA3VEVHT RLANE1X3EV K5AGGK1TMG 351 AKEKMPLMK7 WYEALRVDP PVASQYGRAK QDLKIE5HDA VFEVKKGEML FGYQPFATKD 421 PKIFDRPE3F VADRFVGEGE KLLKYVLWS:·! GFETESF7VG KKQCAGKDEV VMVSRLFVTE 4B1 PFT.RYD7FNV DVGKGALGAS ТТТТПТ.ККА

Фиг. 1. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-1 (StAOS2-1) (номер доступа GB ABD15173)

1 A7GSCA7TAA СТТСАТСТГГ ТГСГСГГССТ СТТССТТСТС ТТСАССААСА АТТТССАТСА

61 АААТАС7ССА CATTTCGTCC ТАТГАТТСТТ Т17ТТАТССС ААААСССААС AATCGTCGTA 12: ACCGAACCTA 1ААААТ7АСС TACTAGGACA ATAC7TGGCG A7TATGGGTT GCGGGGTATT 181 SGTCCATGGA AAGATAG3CT TGATTACTTT TACAATCAAG GGAAAGACGA ATTTTTCGAA 241 TCAAGAGTAG TGAAATAGAA ДТСААСТАТА TTCAGAACGA ACATGCCACC GGGACGATTC 331 АТТТСТ7СТА ACCCGAAGGT TATTGTTTTG CTCGACGGCA AGAGTTTCCC AGTCCTTTTC 3-5: GATGTT7CCA AAGTCCAAAA AAACGAGGTC TTCAGCGGAA CTTACATGCC GTCGACTGAA 421 CTCACCGGTG GTTACCGTGT ТСТТТСТТАТ CTTGACCCAT CTGAACCAAA CCA7GAAAAA 4 31 TTGAAAAAA7 TGATGT7CTT CCTTGTTTCT TGTCGTCGTG ATCACGT7AT ACCCAAATTC 541 TATGAAACT7 ATACAGAGTT TTTTGAAACC CTAGATAAGG AAATGGCGGA AAAAGGTATA 631 GCTGGTTTAA ACTCCGGCAA TGATCAAGCT GCGTTTAATT TCTTAGCTAG ATCGTTGTTC 651 GGA&tl'AACC CAGTTGAAAC TAAACTCSGA АСГСАЮПС CGACAT1GAT CGGAAAATGG 721 GTTTTGCTTC AGCtTCATCC TGTACTCACT CTCGGTCTTC CGAAGTI1CT AGACGACTTA /81 A7CTTCCATA GTTTCCGGTT ACCTGCGTTT CTGGTGAAGA AAGATTACGA GAGACTTTAC 841 GATTTC7TT7 ACACCAACTC CGCCAGTTTA TTCGCCGAAG CTGAAAAACT CGGCATITCA 93_ AAAGAAGAAG CTTGTCATAA ТС1Г7ТСТТС GCTACTTGCT TCAATICCTT CGGCGGGATG 961 AAGATT7TC7 TCCCGAATAT GC7GAAATCG ATAGGGAAAG CAGGGGTGGA GGTCCATAGC 1C21 GGTTTAGCAA ACGAGA7CCG ATCGGAAGTA AAATGCGCTG GCGGGAAGAT CACGATCTCG IC81 GCGATGGAGA AAATGCCSTT AA7GAAATCA GTAGTTTATG AAGCTTTGCG AGTTGATCCT 1141 CCGGTAGCT7 CACAATACGG AAGAGCCAAA CAGGACC7TA AGATCGAATC ACACGACGCC 123’. G7TTTCGAGG TGAAAAAAGG TGAAATGGTA TTCGGGTACC AACCATT7GC AACGAAGGAT 1261 CCGAAAATTT TTGACCGGCC GGAASAGTTC GTCGCCGATC GGTTCGTCGG AGAAGGAGAA 13 21 AAGTTA7TGA AATATGCAl'T Al’GGTCTAAT GSACCGGAAA CSGAAAG7CC AACAGTGGGG 1331 AATAAACAG7 GTGCTGGCAA AGATTTTGTA GTGATGG7TT CGAGGTTATT CGTAAGGGAG 144: T7TTTTCTCC GTTACGATAC AT7CAACGTC GACGTTGGTA AGTCGGCGTT GGGGGGTTGA 1531 A7TACTATAA 7TTCTTTGAA AAAAGCTTAG

Фиг. 2. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-1 (StAOS2-1) (номер доступа GB DQ369736)

121

131

331

3 61

421

481

MALTS5FSLP GPWKORLDYF WFEVEKKSL •1ETYTEFF37 VLLQLHPVL7 KEEACHH1LF AKEКНРLИКС PKIFDRPEEF FFLRYDTFNV

LPSLHIQF-G YHQ· F”FF^F FTGTxi'PFTE LDEEIL’.DI GT LGLFI^T LD7L ATCMUh .-^11 WYE^LF* IF VADRF VGEGE DVGKSAEGAS

I xSTFFPII 7F 1rF^TT ^TGCiP L7x rCLIIlG 1DFA ILHTFFLEPF t IFFUltlLl· Έ AOiGFAf KLLKYVLWSH tTTTSLKKA

ILSEIPTZ”” F-- TIPPi ^1·ΡΕΡ 1HE. Г7ПГЫ PS_7 1 irDiijFli ίΜ..-₃.Ε' FI ODLiΙΕ^ΗΟλ GPETESPTVG

T2PTI F-^F T Τ'”! PF’ I L'f L IFFLL7 G Ί1Ε’ ETI LG E'FFiTIlSAGL FLAtEl- L

FE ttGEIJL 1£’.QCAG,4 df V

IFGC xGLPSI T Гн F F- T F

SFFEl·’IF1F TDCFTLIC™ FAEAE1 LGIS I FGLH'lil. FGxOFEhTID VMV 7 F.L F TE

Фиг. 3. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-6 (StAOS2-6) (номер доступа GB ABD15174)

- 60 037142

1 ATGGCATTAA СТТСАТСТГГ ТТСТСТГССТ СТТССТТСТС 'ГГСАССААСА АТГ1ССАТСА

51 ЛЛЛТАСТССА CATTTCGTCC TATTATTGTT TCTTTATCGG AAAAGCCAAC AATCGTGGTA 121 АСССААССТА СДАААТТТСС TACTAGGACA ATACCTGGCG ACTATGGGTT GCCGGGTATT 181 GGTCCATGGA AAGATAGGCT TGATTACTTT TACAATCAAG GGAAAGACGA ATTZTTCGAA 2 41 TCAAGAGTAG TGAAAIACAA ATCAACTATA TTCAGAACGA ACATGCCACC GGGACCATTC 231 ATTTCTTCTA ACCCGAAGGT TATTGTTTTG CTCGACGGCA AGAGTTTCCC AGTCCTTTTC 351 GATGTTCCGA AAGTCGAAAA AAAGGACCTC TTCACCGGAA CTTACATGCC GTCGACTGAA 4 21 C1CACCGGTG GTTACCGTGT TC7TTCTTAT CT7GACCCAT CTGAACCAAA CCATGAAAAA 481 TTGAAAAAAT TGATGT7CTT CCTTCTTTCT TCTCGTCGTG ATCACGT7AT ЛСССЛАЛТТС 541 CATGAAACTT ATACAGAGTT TTTTGAAACC CTAGATAAGG AAATGGCGGA TAAAGGTACA 631 GCTGGTTTAA ACTCCGGCAA TGATCAAGCT GCGTTTAATT TCTTAGCTAG ATCGTTGTTC 651 GGAGTTAACC CAGTTGAAAC TAAACTCGGA ACTGATGGTC CSACATTGAT CGGAAAATGG 721 G1TTTGCTTC AGCTTCATCC TGTACTCACT CTCGSTCTTC CGAAAGTTCT AGACGACTTA 78. A7CCTCCATA CTTTCCGGTT ACCTCCGTTT CTGGTGAAGA AAGATTACCA GAGACTTTAC 841 GATTTC7TT7 ACACCAACTC CGCCAGTTTA TTCGCCGAAG CTGAAAAACT CGGCATTTCA 5 31 AAAGAAGAAG CTTGTCATAA ТСТТСТСПХ GCTACTTGCT TCAATTCCTT CGGCGGGATG 561 AAGATT7TCT TCCCGAATAT GCTGAAATCG ATAGCGAAAG CAGGAGTGGA GGTCCATACC 1021 CCTTTACCAA ACGACA7CCG ATCGGAAGTA AAATCCGCTC CCCCGAAGAT GACCATGTCG 1CS1 GCGATGGAGA AAATGCCGTT AA7GAAATCA GTAGTTTATG AAGCGTTGCG AGT7GATCCT 1141 CCGGTAGCTT CACAATACGG AAGAGCCAAA CAGGACCTTA AGATCGAATC ACACGACGCC 1231 G1TTTCGAGG TGAAAAAAGG TGAAATGCTA TTCC-GGTACC AACCATTTGC AACGAAGGAT 1261 CCGAAAATTT TTGACCGGCC GGAAGAGTTC GTCGCCGATC GGTTCGTCGG AGAAGGAGAA 13 21 AAGTTATTGA AATATG7ATT A1GGTCTAA1 GGACCGGAAA CGGAAAG7CC AACAGTGGGG 1381 AATAAACAGT GTGCTGGCAA AGATTTTGTA GTGATGGTTT CGAGGTTATT CGTAACGGAG 1441 TTTTTTCTCC GTTACGATAC ATTCAACGTC GACGTTGGTA AGTCGGCGTT GGGGGCTTCA 1531 A7TACTATAA CTTCTITGAA AAAAGCTTAG

Фиг. 4. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-6 (StAOS2-6) (номер доступа GB DQ369737)

1 MALTS5FGLF LPGLHQQFP5 КΥΞTFRPIIA SLSEKPIIW TQPTFLF7PT MPCDYGLPGI &1 GPWKDRIiDYF YHQGKNEFFE GRWKYKGTT FRTXMPPGP? TSSKPKV7VL Т.ПСЛ GFFVI,F

121 3VSKVEKK5L FTGTYMPSTE CTGGYRVLSY ЬЭРЕЕРЧНЕК LKKL’-fFELLS 7EECEVIPKF

181 ilETYTELFSG LDKEPIAEEGT AGLNSGHDQA AFNFLARGLF GVHPVEAKLG TDGPTLIGKW

241 VLLQLHPVL7 LGLPKFLDDL ILHTFKLPPF LVKKDYQRLY DFFYTHSAKL Fl'EAEKLGIS

3 31 КЕЕАСНГНЬЕ ATCFNGFGGM КIFFFMMMKl XAKAGVEVET RLAKEmGEV KGAGGK1TM5

3 51 AKEKMPLflKG WYEALRV3P PVA3QYGRAK QDLKIESBDA VFEVKKGEML FGYQPFATKD

4 21 PKIFDRPEEL VADRFVGEEG EKL1K1VLWS NGPETESPTV GWKQCAGKDF WMVSRLFW

4 87 EFFLRYDTFM VDVGTSAT.GA SIT1TSLKKA

Фиг. 5. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2)

Solanum tuberosum, аллель AOS2-7 (StAOS2-7) (номер доступа GB ABD15175)

1 A7GGCA7TAA CTTCAICTTT TTCTGTTGCT CT7CGTTCTC ТТСАССААСА ATT7CGATGA

51 АААТАС7ССА CATI1CGTCC TA1TATTGCT TCGTTATCCG AAAAACCAAT AATCG1GGTA 121 АССGAACСТА СААААТГАСС TACCAGGACA ATGCCCGGCG ACTATGGGTT ACCGGGTATT 181 GGTCCA7GGA AAGATAGGCT TGATTACTTT TACAATCAAG GCAAAAACGA ATT7TTCGAA 241 TCAAGAGTAG TGAAAIACAA ATGAAGTATA TTGAGAACGA AGATGCGAGC C-GGAGGATTC 331 ATTTCTTCTA ACCCGAAGGT TATTGTTTTG CTCGACGGCA AGAGTTTCCC AGTCCTTTTC 361 SATGTTTCGA AAGTCGAAAA AAAGGACC1C TTCACTGGAA CTTACATGCC GTCGACIGAA 421 C7CACCGGTG GTTACCGTGT ТС7ГТСТТАТ CTCGACCCAT CTGAACCAAA CCA7GAAAAA 487 T7GAAAAAA7 TGATGT7CTT CC7TCTTTCT TC7CGTCGTG ATCACGT7AT ACCCAAATTC 541 GATGAAACTT ATACAGAGTT GTTTGAAACC CTAGATAAGG AAATGGCGGA AAAAGGTACA 631 GCTGGTTTAA ACTCCGGCAA TGATCAAGCT GCGTTTAATT TCTTAGCTAG ATCGTTGTTC 661 GGAGTTAACC CAGTTGAAGC TAAACTCGGA AC7GATGGTC CGACATTGAT CGGAAAATGG 721 G7TTTGCTTC AGCTTCATCC TG7GCTTACT CTCC-GTG7TC CGAAGTT7CT AGACGACTTA 781 A7CCTCCATA CTTTCCGGTT ACCTCCGTTT CTGGTGAAAA AAGATTACCA GAGACTTTAC 841 GATTTCTTT7 ACACCA.ATTC CGCCAATTTA TTCGTCGAAG CTGAAAAACT CGGCATTTGT 831 AAAGAAGAAG CTTGTCATAA TC7TCTCTTC GC7ACTTGCT TCAATTCCTT CGGCGGGATG 561 AAGATTTTCT TCCCGAATAT GATGAAATCG ATAGCGAAAG CAGGGGTGGA GGTCCATACC

1C21 CGTTTAGCAA ACGAGATCCG AICG&AAGTA AAATCCGCCG GCGGGAAGAT CACGATGl'CG 1C81 3CGATGGAGA AAATGCCGTT AATGAAATCA GTAGTATATG AAGCTTTACG AGTTGATCCT 1141 CCGGTACCT7 CACAATACCG AAGAGCCAAA CAGGACC7TA AGATCGAATC ACACGACGCC 1231 GTTTTCGAGG TGAAAAAAGG TGAAATGCTA TTCGGGTACC AACCATTTGC AACGAAGGAT 1261 CCGAAAATTT TTGACCGACC GGAAGAGCTC GTCGCCGATC GGTTCGTCGG AGAAGAAGGA 1321 GAAAAGTTAT TGAAATATGT ATTATGGTCT AATGGACCGG AAACGGAAAG TCCGACAGTG 1381 3GGAATAAAC AGTGTGCTGG AAAAGATTTT GTAGTGA7GG TTTCGAGGTT ATTCGTAGTG 1441 аАеГГГГГГС TCCGT1ACGA TACATTCAAC GTCGACGTTG GTACGTCGGC GTTGGGGGCT 1531 TCAATTACTA TAACTTCTTT GAAAAAAGCT TAG

Фиг. 6. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2)

Solanum tuberosum, аллель AOS2-7 (StAOS2-7) (номер доступа GE DQ369738)

- 61 037142

1 MAETSFFSEP LP2LRQQFPS KYSTFRPIIV SESEKPTIW TQPTKLPVRT IPGDYGLPGI б: гтиЕгич.птт· tjiogkurf^e geweykett f^ikmppgp- тег.кркгтгь i.ncKi.F-vi.F 121 5V?FVErF^L FTGTYEPFTE LTGGYPVLSY Α^ΡΓΕΡΊΗΕΙ- L·IL'iFFLLS SFF.DHV1F1F 13_ ΊΕΤίΤΕΓΕΣΣ LDFEMAEKGF AGLUGGZlDrA AFIIFUiEGLE GVHF4ETFLG IDGFTLIGFW 241 TLLjLHPl'LT LGLPFFLDDL ILHAFRLFPL 1/TFDYQFLY DFFYTI1CAEL FVEAEFLGI7 331 .-EEACHIbLK MlCEllJFMl Ht'MUtUJFC I «.i A GV EVE T FLA[ EIF’JEV H.AGGH1I1L 361 AKEbTlFLIli j WYEALPV3F PVASQiGKAI QJLHE1HDA \FEVkfGEHL FGYQPFAThD 421 PKFFDRPESF VADRFVGEEG EKLLKYVLWS NSPETESPTV GNKQCAfiKDF WMVSRLFVT 481 EFFLRYDTFN VDVGTSALGA SITITSLKKA

Фиг. 7. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-8 (StAOS2-8) (номер доступа GB ABD15176)

1 A7GGCTTTAA СТТСАТТТТГ Т1СТСГГССТ СТ1ССТГСТС 'ГГСАССААСА АТ1ТССАТСА

61 АААТАСТСТА CATTTCGTCC TATTATTGTT TC7TTGTCCG АААААССААС AATCGTGGTA 121 АСССААССТА 7AAAAI7ACC TG7CAGGACA ATACCCGGCG AGTAIGGGTT GCCGGGIATT 181 GGTCCATGGA AAGATAGGCT TGATTACTTT TACAATCAAG GGAAAAACGA ATTTTTCGAA 241 TCAAGAGTAG TGAAATA3AA AICAACTATA TTCAGAACTA ACATGCCACC GGGACGATTC 301 А7ТТСТ7СТА ACCCGAAGGT TA7TGITTTG CTCGACGGCA AGAGTTTCCC AGTCCTTTTC 3 6. GATGTTTCGA AAGTEGAAAA AAACGACCTC TTCAGEGGAA CTTACATGGC GTEGAGTGAA 421 17CACCGGTG GTTATCGTGT TC7ITCTTAT CT7GACCCAT CTGAACCAAA CCA7GAAAAA 481 TIGAAAAAAl TGAIGIIETT CC7TGITTCT TG1CGTCGTG ATCACGTIAT АСССЛААТТС 5 41 7ATGAAACT7 ATACAGAGTT TTTTGAAACC CTAGATAAGG AAATGGCGGA AAAAGGTAAA 631 GCTGGTTTAA ACTCTGG7AA TGATCAAGCT GCGTTTAATT TCTTAGCTAG ATCGTTGTTC 661 GGAGTTAACC '.'АЫ LGAAAE TAAAGTCGGA AT1GATGGTC CGACA1TGAT CGGAAAATSG 721 G7TTTGCTTC AGCTTCATCC TGTACTCACT CTCGSTCTTC CGAAGTTTCT AGA7GACTTA 7B1 ATCCTGCATG FTTT^GGTT acctccgctt ctggtgaaga aagattacca GAGACTTTAC 841 GATTTCTTT7 ACACCAACTC CGCCAATTTA TTCGTCGAAG CTGAAAAACT CGGCATTTCT 9 31 AAAGAAGAAG CTTG'rCATAA TC7T7TCTTC Gl'lAGTTGCr TGAATTCCTT CGGCGGGATG 961 AAGATTTTC7 TCCCGAATAT GA7GAAATCG ATAGEGAAAG CAGGGGTGGA GGTCCATAEC 1C21 CGTTTAGCAA ACGAGATGCG ATCGGAAGTA AAATGCGCCG GCGGGAAGAT CACGATGTGG 1CB1 GCGATGGAGA AAATGCCGCT AA7GAAATCA GTAGTATATG AAGCTTTAGG AGT7GATCGT 1141 CCGGTAGCT7 CACAATACGG z’lAG-AGCCAAA CAGGACC7TA AGATCGAATC ACACGACGCC 1231 GTTTTCGAGG TGAAAAAAGG TGAAATGCTA TTCGGGTACC AACCATTTGC AACGAAGGAT 1261 GCGAAA7TT7 TTGACCGGCC GGAAGAGTTC GTCGECGATC GGTTCGTCGG AGAAGAAGGA 13 2_ GAAAAGxlAx 1GAAA1AC.G! AIVAIGGICI' A^LxGGAGCGG AAACGGAAAG '1CCGACAG1G 1381 GGGAATAAAC AGTGTGCTGG AAAAGATTTT GTAGTGA7GG TTTCGAGGTT ATTCGTAACG 1441 GAGTTT7TTC TCCGTT.AGGA TACATTCAAT GTCGACG7TG GTACGTCGGC ATTGGGGGGT 1531 TCAATTACTA TAACTTCTTT GAAAAAAGCT TaA

Фиг. 8. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-8 (StAOS2-8) (номер доступа GB DQ369739)

1 MALTSFFELP LPS1HQQFP.3 KYSTFRPIIV GLGEKPTTW TQPTKLP7RT IPCDYGLPGI

61 GPWKDRI.DYF YHQGKHEFFE GEWKYKSTT FR7XMPPGPF TSENPKV7VL I.nCKSFPVLF 121 3VSKVEKK3L FTGTYEPSTE 1TGGFRVLSY LDPSEPUHEK LKELMFFLLS SRRDHVIFEF 181 ‘lETYTEFFET LDEEHAEKGK AGLNSGHDQA AFNFLARSLF GVHPVEIKLG GDGPILIGKW 241 VLLQLHPVL7 LGLPKFLDDL ILHTFRLPPF LVKKDYQRLY DFFYTHSANL FVEAEKLGI5 331 KEEACHNLLF ATCFNEEGGH К1FEPNMMKS IAKAGVEVET RLAKE1RGEV K5AGGK1TM5 361 AKEКНРLMR7 WYEALRVDP PVA5QYGRAK Q1LTIE5HDA VFEVKKGEML FGYQPFATKD 421 PF.IFDRPESF VADRFVGE3G EKLLKYVLWS NGPETESPTV GNKQCAGKDF WMVSRLFVT 481 ΕΡΓΤ,ΡΥΓιΤΡΝ VDVGTSAEGA Γ,ΤΙΙΤΏΤ,ΚΚΑ

Фиг. 9. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-12 (StAOS2-12) (номер доступа GB ABD15172)

- 62 037142

1 ATGGCTTTAA CTTCATTTTT TTCTCTTCCT СТТССТТСТС ТТСАССААСА АТТТССАТСА 6'. АААТАС7СТА CATTTCGTCC TA7TATTGTT TC7TTGTCCG АААААССААС AATCGTGGTA

121 АСССААССТА СААААТ7АСС TACCAGGACA ATACCCGGCG ACTATGGGTT GCCGGGTATT

181 GGTCCA7GGA AAGATAGGCT TGATTACTTT TACAATCAAG GCAAAAACGA ATT7TTCGAA .141 TCAAGAGTAG TGAAATACAA ATCAACTATA TTCAGAACGA ACATGCCACC GGGACCATTC 3 31 A7TTCT7CTA ACCCGAASGT TA7IGITTTG CTCGACGGCA AGAGTTICCC AGTCCTTTTC 351 GATGTT7CGA AAGTCGAAAA AAAGGACCTC TTCACCGGAA CTTACATGCC GTCGACTGAA

421 C7CACCGGTG GTTTCCGTGT TCTTTCTTAT CT7GACCCAT CTGAACCAAA CCA7GAAAAA 481 T7GAAAAAAT TGATGT7GTT CC7TCTTTCT TC7CGCCGTG ATGACGT7AT ACCCAAATTC

541 CATGAAACT7 ATACAGAGTT TT7TGAAACC CTAGATAAGG AAATGGCGGA AAAAGGTAAA

631 GCTGGTTTAA ACTCCGGCAA TGATCAAGCT GCGTTTAATT TCTTAGC7AG ATCGTTGTTC

661 GGAGTTAACC CAGTTGAAAC TAAACTCGGA GG7GATGGTC CGACATTGAT CGGAAAATGG

721 GTGTTGCTTC AGCTTCATCC TGTGGTTACT CTCGGTCTTC CGAAGTTTCT AGATGACTTA

781 A7CCTCCATA CTTrCCGGn' АССЮТП! CTGGTGAAGA AAGATTACCA GAGACTTTAC

841 GATTTC7TT7 ACACCAACTC CGCCAATTTA TTCGTCGAAG CTGAAAAACT CGGCATTTCA

931 AAAGAAGAAG CTTGTCATAA TC7TCTCTTC GC7ACTTGCT TCAATTCCTT CGGCGGGATG

961 AAGATT7TC7 TCCCGAATAT GA7GAAATCG ATAGGGAAAG CAGGGGIGGA GGTCCAIACC 1C21 CGTTTAGCAA ACGAGA7CCG ATCGGAAGTA AAATCCGCCG GCGGGAAGAT CACGATGTCG 1C81 GCGATGGAGA AAATGCCGTT AATGAAATCA GTAGTATATG AAGCTTTACG AGT7GATCCT 1141 CCGGTAGCT7 CACAAIA1GG AAGAGCCAAA CAGGACC7TA CGATCGAATC ACACGACGCC 1231 G7TTTCGAGG TGAAAAAAGG TGAAATGCTA TTCGGGTACC AACCATT7SC AACGAAGGAT 1261 CCGAAAATTT TTGACCGGCC GGAAGAGTTC GTCGCCG.ATC GGTTCGTCGG jAGAAGAAGSA 1321 GAAAAGTTAT TGAAAIA1GT AT1ATGGTCT AA7GGACCGG AAACGGAAAG TCCGAGAGTG 1381 GGGAATAAAC AGTGTGCTGG AAAAGATTTT GTAGTGA7GG TTTCGAGGTT ATTCGTAAGG 1441 GAGTrilTTC TCCGTTACGA TACATTCAAC GTCGACG7TG GTACGTCGGC GTTGGGGGC! 1501 TCAATTACTA TAACTTCTTT GAAAAAAGCT TAA

Фиг. 10. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, аллель AOS2-12 (StAOS2-12) (номер доступа GB DQ369735)

ИАЬТЗЗРЗЬРЬРЗЬНа0РРЗКУ5ТРа?Г1У5Ь5ЕКРТ1УУТ0РТК1РТКТ1РеСУ6ЬР61еРКК0НЬПУРтаС!йК DEFFESRWKYK^TIFRTNMPPGPFISSK^KVIVL:.DGKSFPVLFDVSKVEKKDL·FTGTYMPSTELTGGYRVL·^Ύ Ь0Р5ЕРННЕКЬККШГГ1ЬЗЗКК0Н¥1РКРНЕТТ7ЕГГЕТ10КЕМАЕКСТАеЬЫЗЗП00ААГК?ЬАК31.ГЗУЛР¥ ЕТКЕ65иСР1'Ы6К«УЬ1ЦЕН?УЬТЬ6ЬРК1’Ьии11Ы1ТККЬРР?1¥ККПУСН1УЭЕГ¥ТНУАаЬКАЕАЕКЬе15 KEEACHHLLFATCFHSFGGXKIFFPUKLKSIAKAGVEVHTRLAH51RSEVKSAGGKIT'4SAMEKMPlMKSt^rVYEA LRVDPPVA5QYGRAKQDl?;iE5nDAVFEVKKGEMLFGYQPFA7KDPKIFDRPSEFVADRFVGE3GEKLLKYVLK5 NGPETESPTVSNKQCAGKDFVVMVSRLFVТЕ FFLRY DT FNVDVGKSALGASITIT SL KKA

Фиг. 11. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CE1

A.TGGCATTAAC7TCATCTT7TTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAfiTT7CCATCAA/LATACTC7ACATTT ССТССТАТ7АТСС-ТТТСТТ7АТССеАЛ7кЛАС<и1АС.^1С5ТСеТАг^,1ССС2ХАСС7ЛСАЛ.’'₁Л1ТЛССТГкСС.г₁.&еЛСЛ ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCC-GGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAA1'1~1'TCGAATCAAGAGTAG1GAAATACAAATCAACTATA7TCAGAACGAACAIGCCACCGGGACGATTC ATTTCTTC_AACCCGAA.GG7CATTGTT7TGCTCGACGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC CAAAAAAAGGACCTCT7CACCGGAACT7ATATCCCGTCCACTGAACTCACCGG7GGTTACCGTCTTCT7TCTTAT CTTGACCCATC7GAACCAAACCATGAAAA«TTGAAAAAATTGATG7TCTTCCT7CTTTCTTCGCGTCG7GATCAC GTTATACCCAAATTCCATGAAACTTATACAGAGTTTTITGAAACCCTAGAZAAGGAAATGGCGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTirAATTTCITAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAGGTGATGGTCCGA1ATTGA7CGGAAAA7GGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTGCTCACT Ct^GGlGlZC7GAAGlinVlAGACGAC14AATCCTCCAlAC174CCGGl^ACCTC7GTrL'ClGGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTTTACGATTTCTTTTACACCAACTCCGCCAGTTTATTCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCA AJAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCTTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGCTGAAATCGATAGCC-AAAGCAGC-GGTGGAGGICCATACCCC-TTTAGCAAACGAGATGCGATCGGAAGTA AAATCCGCCGGCC-GGAAGATCACGATGTCGGCTATGGAGAAAATGCCGTTAATGAAATCAGTAGTATATGAAGCT TTGCGAGT7GA7CCTCCGG7AGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCT7AAGATCGAATCACACGACGCC GTTITCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATCCTATTCGGGTACCAACCAlTTCCAACGAAGGATCCGAAAATirTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAACTTATTGAAATATGTATTATGGTCT AJtTGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTrTGZAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAATTACrATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG

Фиг. 12. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB1

- 63 037142

MALTSSFSLPLRS LEQQFPGKYSTFRPZIVSLSEKPTTWTQPTKLPTRTZPGDYGLPGIGPKKDRLDYF’fNQGK DEFFESRVVKyKSTlFRTHXPPGPFlOGKi’KVIVLLDGKGEPVLFCVGKVEKKCLyTGTYKPGTELTGGYRYLSY LDPSEPNHEKLKKLMFFCLSSRRDHVIPKFHETYCEFFETLDKELLAEKGT.AGLMSGKDQAAFRFLARSLFGVIJPV ETKLGGDGPTLZC-H^LLQLHPVLILGLPKFLDDLILHTFRLPPFLVEKDYQRLYDFFYTHSANLFVEAEKLGIS KEEACHMLLFATCFWSFGGMKIFFPHEMKSIAKAGVDLHTRLANSZRSEWSaGGKITMSAMEKMPLMKSWYEA ЬРУСРР7АайУеРЛК00^К1Е2Н0А7?Е7ККСЕМЕР5УС!РРАТКЭРК1Р0НРЗЕЕУАПНГУеЕ.ЗСЕКЬРКУУЬК5 EXn’EI^PTVGHKQCAGKJFVVMVSRLbVrcEFLRYl/IFWVDVGKGALGAGrilTSLKKA

Фиг. 13. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB2

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCGTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTAT7ATTC-TTTCTT7ATCGGAAAAGCCAACAATCGTGGTAACCCAACC7ACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGA7TACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAATT7TTCGAArCAAGAGTAGlGAAAI'ACAAA'ICAACTATA7TCAGAACGAACATGCCACCGGGACCAI'TC ATTTCTTCTAACCCGAAGGTCATTGTTTTGCTCGACGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTICGATGTTTCGAAAGTC GJiAAAAAAGGACCTCTZCACCGGAACTFATATGCCGTCGACTGAACTCACCGGZGGTTACCGTGTTCTZTCTTAT CTTGAGCCATCZGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATGTTCTTCCTZCTTTCTTCCCGTCGZGATCAC GIIAIAC CCAAAIICCATGAAACIIAlACAGAG17ϊI1TGAAACСCTAGAIAAGGAAAIGGCGGAAAAAG3TACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAATCCAGTT GAAACTAAACTCGGAGGTGATGGTCCGACATTGATCGGAAAATGGGTTTTGCTZCAGCTTCATCCTGTGCTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACT7TACGATT7CTTTTACACCAACTCCGCCAATTTA7TCGTCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCT AAAGAAGAAGC7TGTCATAATCTTCTC7TCGCTACTTGCTTCAAT7CCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGATGAAATCGATAGCGAAAGCAGGGGTGGATCTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA A1CCGCCGGCGGGAAGA x CACGA LG x CGGCGAx GG AGAAAA i GCCG11AA1 GAAAICAG i AG1 I I Ax GAAG: I TTACGAGT7GA7CCTCCGG7AGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCT7AAGATCG.AATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAATGTGAAATGCTATTCGGGTACCAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAAAT7TTTGAC CGGd7GGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGftGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTGT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAAGAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGZAGTGATGGTTTGG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG

Фиг. 14. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB2

MALTSGFSLPLPSLEQOFPGKYSTFRPZIVSLGEKPTIWTQPTKLPTRTZPGCYGLPGIGPKKDRLDYFYNQGK DEFFESRWKYKSTIFRTNVPFGPFISSKPEVIVLLDGESFPVLFDVSKVEK'LDLFTGTYKPSTELTGGYRVLSY LDPSEPHHEKLKKLMFFLLSSRRDHVIPKFHETYZEFFETLDKEMAEKGTAGLNSGHDQAAFEFLARSLFGVMPV ETKT.GGnGPTLZGFanqC.QI.HPVT.rLGbPKFI.Pm.TLHTFRT.PPFI.VKKDYQRI/OFFYTHSASLFAEAEKT.GTS KEEACHNLLFATCFHSFGGVKIFFPm'MKSIAKAGVDLHTRIANEGRSEVKSAGGKITMSAMEKMPLMKSVVYEA LRVCPPVAGQYGRAKQDLriZESIIDAVFEVKKCEMLFGYQPFAFKDPKIFDRPEEFVADRFVGESGEKLLKYVLWS KGPETESPTVGNKQCAGKDFVVMVSRLFVTEFFLRYDTFNVDVGKSALGASITITSLKKA

Фиг. 15. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB3

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCTACATTT CGTCCTATTATCGTTTCTTPATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTGGGCC-GGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTFGARTACTTTTAGAATCAAGGGAAA GACGAATTrTTCGAATCAAGAGTAG’LGAAATAC.AAATCAACTATATTCA.GAACGAACATGCCACCGGGACCATTC A-rTTCTTCTAACCCGAAGGPCATTGTT7TGCTCGZiCGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCG.’^,AAGTC GAAAAAAAGGACCTCTECACCGGAACTCATATGCCGTCGACTGAACTCACCGGCGGTTACCGTGTTCTCTCITAT CrTGACCCATCTGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATSTTCTTCCTYCTTTCTTCCCGTCGTGAICAC GrTATACCCAAATl-CCATGAAACTrATACAGAGTTITTTGAAACCCTAGACAAGGAAATGGCGGAAAAAGSTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTCIAATTTCCTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAGGTGATGGTCCGACATTGACCGGAAAACGGGTTTTGCTCCACCrTCATCCTGTGCTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACCCCCGTTTCTGGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTCTACGATTCCTTTTACACCAACTCCSCCAGTETACTCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATITGA AAAGAAGAAGC7TGTCATAATCTTCTC7TCGCTACTTGCTTCAAT7CCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGATGAAATCGATAGCGAAAGCAGCGGTGGATCTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAA 1CGG CC GGC GGG.AAG A ± C AC GA 1G x CGGCGxA x GGAGAAAA £ GC C G11AA1 GA.AA 1 CAG x AG 11 £ A x GAAGGI TTACGAGT7GA7CCTCCGG7AGCTrCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAATGTxGAAATGCTATTCCGGTACCAACCACTTCCAACGAAGGATCCGAAAATTTTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTGT AATGGACCGGAAACGG.AAAGTCCGACAGTGGGGAAIAAACAGZGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG

Фиг. 16. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB3

- 64 037142

MALTCGFCLPLRSLEQOFPGKYCTFRPZIVCLGEKPTIWTQPTKLPTRTZPGCYGLPGIGPKKDRLDYFYNQSK DEFFESRWKYKGTIFRTNXPPGPFISSKPKVIVLLDGESFPVLFDVSKVEKKDLFTGTYHPGTELTGGYRVLEY LDPSEPnHEKLKKmFFLLSSRRDHVIPKFHETYTEFFETGDKEMAEKGTAGLNSGnDQAAFKFLARSLFGVNPV F.TKI.GGnGPTLTGRnT.LQLHPVT.TLGLPKFT.DDini.HTFRr.FPFT.VKKDYQRI.YOFFY'n'JGASr.FAEAEKI.GTn KEEACHNLLFATCFHSFGGXKIFFPNKLKSIAKAGVEVHTRLANElRSEVKSAGGKimSAMEKMPLMKSVVYEA LRVDPPVA5QYGRAKQDLKTEGIIDAVFEV:<KGEMLFGYQPFATKDPKIFDRPSEFVADRFVGESGEKLLKYVLW3 F7GPETESPTVGNKQCAGKDFVVMV5RLFVTEFFLRYDTFNVDVGKSALGAS ITITGLKKA

Фиг. 17. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB4

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCGTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTATTATTGTTTCTT7ATCC-GAAAAGCCAACAATCSTGGTAACCCAACC7ACAAAAT7ACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGT7GGCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCT7GA7TACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAATTTTTCGAATCAAGAGTAGTGAAATACAAATCAACTATATTCAGAACGAACATGCCACCGGGACCATTC ATTTCTTCTAACCCGAAGGTCATTGTTTTGCTCGACGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACС ТС T CCACC GGAACICA TATG CC GTC GAC TGAACT CA CC GG CG GT TACCGTGT ТС T 7 T СITAT CTTGACCCATC7GAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATG7TCTTCCTTCTTTCTTCCCGTCG7GAICAC GTTArAGCCAAATTCCATGAAACTTATACAGAGTTTTTTGAAACGCTAGATAAGGAAATGGCGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAGCTGATCGTCCGACATTCATCGGAAAATCGGTTTTGCTTCAGCrTCATCCTGTGCTCACT CTCGGTCT7CCGAAGTTTC7AGACGAC7TAATCCTCCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTCTGGTGAAGAAAGAT TACCAGAG.ACTCTACGATTCCTTTTACACCAACTCCGCCAGTCTACTCGCCGAAGCTC-AAAAACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCTTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGCTGAAATCGATAGCGAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA ΐΐΑΑ 1 C^-GCCG - GGAAGA x CACGA1G &*~GGC 1 Ax GxjAGAAAA 1 . 11AA1 GA/kAl CAG x AG1 1Ax GAAG·^-1 TTGCGAGTCGACCCTCCGGTAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTCAAAAAACGTGAAATCCTATTCGGGTACCAACCATTTGCAACGAACGATCCGAAAATTTTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTG7AGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG

Фиг. 18. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB4

MALTSCFSLrLPDLE00F?GEY5TFPPZIVSLGEi:PTIWT0PTKLPTPTZPGDYGLPGIGPKKDRLDYFYNQGK KEFFESRWKYECTIFRTtn<P=GPFIG3I7?KVIVLLDGEGFPVLFCVSKVEK?:DL-TGTYMPSTELTGGYRVLSY LDPSEPHHEKLKKLMFFLLSGRRDHVIPKFHETYCEFFETLbFEMAEEGTAGLNGGMDQAAFKFLARGLFGVNPV ЕТКЬССПОРТЬССП^.АаЕНРУТ.ТЬСЬРгТТ.ПГЛ.ТТ.НТГРТ.РРЕТЛ'ККПТйЗЬУЭГЕТТМЦАЕТ.ЕАЕАЕКТ.СТГ, KEEΛCHHLZFA7CFIlSFGGXKIFFPIl^'LKΞIΛl·ίΛGVEVHTELΛl·132RΞEVKSAGGϊίIT^^5A:iEлMPLMKΞWYEA ЬР¥СРРУЛ52УС1иАЕа0ЕКЕЕ:ЗП0ЛУ?ЕУККеЕМТГЕУ0РГАСЕС|РК1РГР.РЕЕЕ¥ЛТ|ЕГ¥СЕЕСЕКЬТКУУЬКЗ КСРЕТЕЗРСУимКйСАСЕЭРУ¥т^гЗКТГУТЕЕГЬР¥РТГТ1¥Т¥е:<САЬСАС1ТСТСЬК1:А

Фиг. 19. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB5

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCTACATTT CGTCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTCGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCT7GATTACTTTTACAATCAGGGCAAA AACGAATTZTTCGAATCAAGAGTAGTAAAATACAAATCAACTATArTCAGAACGAACATGCCACCGGGACCATTC ATTTCTTCrAACCCGA!^,iGG7TATTGTT7TGCTCGACGGCAAGAGT7TCCCAGTCCTTTrCGATGTTTCG.F_lAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTCCACCGGAACTZACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTZTCTTAT CTTGACCCATC7C-AACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATSZTCTTCCT7CTTTCCICCCGTCGZGATCAC GrrATACCCAAAlTCCATGAAACTTATACAGAGTrTTTTGAAACCCTAGArAAGGAAArGGCGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT C-AAACTAAACTCC-GAGGTGATGGTCCCACATTGACCGGAAAACGGGTTTTGCTCCACCrTC ATCCTGTGCTCACT CTCGGTCT7CCGAAGTTTCTAGACGACTTAATCC7CCATACT7TCCGGTTACCTCCGTTTCTGGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACT7TACGATT7CTTTTACACCAACTCCGCCAGT7TA7TCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGC7TGTCATAATCTTATC7TCGCTACTTGCTTCAAT7CCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGCTGAAATCGATAGCGAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACC-AGA7CCGATCGGAAGTA AAATCCGC7GGCGGGAAGA7CACGATG7GGGCGA7GGAGAAAATGCCGTTAATGAAA1CAG7AGTTTATGAAGCT TTACGAGT7GA7CCTCCGG7AGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCT7AAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATT<~GGGTAt~i:AAC<~A7TTGt7AACGAAGGATCCGAAAAT7TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CRCCGATrGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAA7AGTGTGCTGGCAAAGATITTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGT7TTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGT7GGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAAT TACTATAACTТС TT7GAAAAAAGC TTAG

Фиг. 20. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB5

- 65 037142 maltssfslplpgleqqf?skystfr?:ivslsekptiwtqptklptrt:pgdyglpgigpkkdf.ldyfynqgk KEFFESRWKYKG TIFRTHZPPGPFISSKPKVIVL LDGKSFPVLFDVGKVEKKDLFTC-ΓΥΙ-ίΡΞ TELTGGYRVLGY LDPSEPHHEKLKKLMFFLLE2RRDHVIPKFHETY7EFFETZDKEMAEKGTAGLHSGHDQAAFKFLARSLFGV?5PV ETKI.GGDGPTL7GRWI,:,QI.H?VT,TT,GI,PKFT,nPLTI.HTFRT,PP?I.VKKDYQRI.Y?FFYTN3Ai5T,FAEAEKI.GTG KEEACHHLZFATCFHSFGGZYKIFFPHl-iLKSIAKAGVEVHTRLiinEZRSEVKSAGGKITMSAZ-lEKMPLMKSVVYEA LRVDPPVAGQYGRAKQDLZ<ZESIIDA.VFEVKKGEMLFGYQPFATKDPKIFDRP3EFVADRFVGE3GEKLLKYVLKS r;GPETEEPTVGNKQCAGK3FV\TT_L.^r2RLFVTEFFLRYDTFTr...'DVD:<EALGAZITZTSLiaCb

Фиг. 21. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB6 atggcattaacttcatctttttctcttcctcttccttctcttcaccaacaatttccatcaaaatactctacattt CGTCCTATTATCC-TTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTZGCCGGGIATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAGGGCAAA AACGAATTrT'rCGAATCAAGAGTAGTAAAATACAAATCAACTATATTCAGAACGAACATGCCACCGGGACCATTC ATTICTTCZz4ACCCGA?iGGTTATTGTTZTGCTCGACGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGFiAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTTCACCGGAACTTACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTTTCTTAT CTTGACCCATC7GAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATG7TCTTCCT7CTTTCCTCCCGTCG7GAICAC GTTATACCCAAATTCCATGAAACTTATACAGAGTZTTTTSAAACCCTAGArAAGGAAArGGCSGAAAAAGSTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGIZIAATTTCZTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCC-GAGGTCATGGTCCCACATTGAZCGCAAAATGGGTTTTCCTTCACCrTCATCCTGTCCTCACT CTZGGTCTTCEGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TGCGGTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCASAGACTTTACGATTTCTTTTACACCAACTCCGCCAGTTTATTCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGZTTGTCATAATZTTATCZTCGCTACTTGCTTCAATZCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATAT GC TGAAAT C GA TAGC GAAAGCAGGGG TGGAG GICCATACCCG ТТT AGC AAAC GAGA TС CGATCGGAAG TA

ICLGC jt GGC - GGAAGA _CAC-GA 1G . .·.· J .С:·.. GGAGAAAA £ GCCG11AA1GAAA1CAG --7--11 1A- GAAGC1

TTACGAGTTGATCCTCCGGTAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATGGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATCCTATTCCGaTACCAACCATTTGCAACGAACCATCCGAAAATTTTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCGTCGCCGATCGGTTCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTZGATAAGICGGCGTTGGGGGCT TCAATTACTATAACTТС TTTGAAAAAAG С TTAC

Фиг. 22. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB6

ЖЬТМРДЕРЬРСЬЕООРРСКУОТР^ГТтаЬСЕКРТХ^ТОРТ^РТРТГГССУ^ЬГеЩРКЧОГДР^ГУПОа· NEFFESRWK YKZ TIFRTHXFPGPFIGGNPMVI VL CjDGKGFPVZF СУЗК'/ЕГ:’DLrTGTYIZPZTELTGGYPVLGY LDPSEPMHEKLKKLMFFLLSGRRDHVIPKFHETYTEFFETLDFEHAEKGTAGLIIGGJIDOAAFRFLARGLFGVIP·..· ETKT.GTnGPTL7GKT'n,4,:,QJ.H=VI.Tr,GI,PKFI,riDT.TT.HTFP.r,PPFI.VFKrjYGRI YZIFFYTTISArTFAEAEFT GTS EEEACHIJLZFATCFIJBFGGLKIFFPHKLKSIiYKAGVEVHTRL-AMEZRSEVI.EAGGl IT'ITAMEr tlFAtif SWYEA LRVDPPVASQYGRAKQDLZKZESIIDAVFEVKKGEML-FGYQPFATKDPKIFDRPSEFVADRFVGEEGEKLLKYVLKS ΗαΡΕΤΕ3ΡΤν0ΝΚ2εΑ6Κ0ΓννΤΉ^ΓΞΕΡΡνΤΕΓΓΕΕΥ0ΤΕ№ΏνΠΚ5ΑΕΰΑΞΙΤΖΤΞΕΚΚΑ

Фиг. 23. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB7

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCTACATTT CGTCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACCAGGACA. ATACCCGGCGACTATGGGTZGCCGGGIATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGAZTACTTTTACAATCAAGGCAAA AACGAATrZTTCGAA'rCAAGAGTAGTGAAATACAAATCAAC'rATATTCAGAACGAACATGCCACCGGGACCATTC A.TTTCTTCTAACCCGA.ATGTTATTGTTTTGCTCGiiCGGCAAGZiGTTTCCCitGTCCTTTTCGATGTTTCGJulAGTC GIlAAAAAAGGACCTCTTCACCGGA-ACTZACATGCCGTCGACTGJlACTCACCGGZGGTT.ACCGTGTTCTZTCTTAT CTTGATCCATCTC-AACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATGTTCTTCCTTCTTTCTICTCGACGTGATCAC GITATACCCAAATTCCATGAAACTrAIAGAGAGlCTTICGAAAGGCTAGAZAAGGAAAIGGCGGAAAAAGGTAGA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCEAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCGACATTGA7CGCAAAATGGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTACTCACT C.TGGGTCT7CCGAAGTTTC7AGAC.GACTThATCC7CCATACT7TGCGGTTACC7CZGTTTC7GGTGAAGAAhGAT TACCAGAGACTZTACGATTZCTTTTACACC.rjiCTCCGCCAGTZTAFTCGCCGAAGCTG.TAAAACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGFZTGTCATAATFTTATCTTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGTTGAAGATTTTCTTCCEG AAT AT GC TG АА А Г C G A T AGC t AA AGC AGGGG TG GAG GIС С А ГАС С С С- ТТ T AGC AA AC GAGA T С C GAT CGGAAG TA

AAA 1 COG C j. GGC GGG AAG A _a C AC GA 1G _a CGGCGA ± GG AGAAAAIGC CG11AA1 GAhA 1 GAG 2 AG 11 ΓΑι GAA G C1 TTACGAGTTGATCCTCCGGZAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCG.AATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACCAACCATTTGCAACGAAGGATCCGAAAATTTTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGATAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCA AT ТА C 7 ATАА СТ ТС T TTGAAAAAAGC TTAG

Фиг. 24. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB7

- 66 037142

MALTSSFGLPLPSLEMF?SKYSTFR?:iVGL5EKPTIWTQPTKLPTRT:PGCYGLPGIGPKKDRLDYFYNQGK DEFFESRWKYKSTIFRTNMPPGPFISSNPKVIVLLDGKSFPVLFDVSKVEKKDLFTGTYMPSTELTGGYRVLSY LDPSEPHHEKLKKLMFFLLSSRRDHVIPK7HETYTEFFETLDKEMAEKCTAGLHSGHDQAAFKFLARSLFGV75PV ETKI.GTDGPTb 7GKWVI.7QI.HPVT.TLG I.P ΚΓΤ,ΠΌΤ.Τ Τ.ΗΤΓΡ.Γ.ΡΡΡΤ.νΚΚΠΥζ! 3Ι.¥7>ΓΕΥΤΝ5ΑΞΓιΕΑΕΑΕΚΤ.Π TG KEEACHNLLFATCFHSFGGXKIFFPWiLKSIAKAGVEVHTRLANSTRSEVKSAGGKITMSAMEKMPLMKSWYEA LRVDPWAGQYGRAKQDLKTESIIDAVFEVKKGEMLFGYQPFATKDFEIFDRPEEEVADRFVGEGEKTLKYVLWGN GPETESPTVGNKQCAGKDFWMVSRLFVTEFFLRYDTFSVDVGKSALGASITITSLKKA

Фиг. 25. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB8

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCGTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTrCCATCAAAATACTCTACATTT CGTCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGCAAA AACGAATTrTTCGAATCAAGAGTAGlGAAATACAAATCAACTATArTCAxGAACGAACATGCCACCGGGACCATTC ATTTCTTCTAACCCGAATGTTATTGTTTTGCTCG?iCGGCAAG?iGTTTCCCZiGTCCTTTTCG7iTGTTTCG.AAAGTC G7ulAAAAAGGACCTCTZCACCGGAJiCTZACATGCCGTCGACTG7iACTCACCGG7GGTTACCGTGTTCT7TCTTAT CTTGATCCATCTGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATGTTCTTCCTTCTTTCTTCTCGACGYGATCAC GTTA'rACCCAAATTCGAlGAAACTTATACAGAG'l’rTTTCGAAACfCTAGAEAAGGAAATGGCGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTZTAATTTCYTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCGACATTGACCGGAAAATGGGTTTTGCTTCACCTTCATCCTGTACTCACT CTTGGTCTTCCGAAGTTTCTAGAC.GACTTAATCCTCCATACTTTECGGTTACCTCTGTTTCTGGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTTTACGATTTCTTTTACACCAACTCCGCCAGTTTAZTCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTSTCATAATCTTATCTTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCTG AATATGCTGAAATCGATAGCGAAAGCAGGGGTGGAGGTCSATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAATCCGCIOGCGGGAAGAiCACGATGTCGGCGATGGAGAAAATGCCGriAATGAAAICAGTAGTriATGAAGCT TTACGAGTTGATCCTCCGGTAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACCAACCATTTGCAACGAAGGATCCGAAATTTTTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTGT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGT7TTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAAT TAC TATAA С T ТС T TTGAAAAAAGC TTAG

Фиг. 26. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB8

MALTSGFSLPLPSLEQQFPOKYGTFRPIIVSLSEKPTIVVTQPTKLPIRTIPGDYGLPGIGPWKDRLDYFYHQGK DEFFESRWKYKSTI FRTNXPFGPF ISSKPKVIVLLDGKSFPVLFDV3KVEK:<DL-TGTYMPSTELTGGYRVLSY LDPSEPHHEKLKKLMFFLLSGRRDHVIPKFHETY7EFFETLDKEMAEKGTAGLNGGHDQAAFKFLARSI.FGVNPV ETKT.GTnGPTbTGKWVT AQI.HPVT.TLG ЕРКЕТ.ППТ.Т I iHTFP.T.FPF Τ.νΚΚΌΥβ-ίΙ.ΥΤΕΕΥΤΙ'ΙΠΑΞΕΕΑΕΑΕΚΤ.ιΤΤΓ! KEEACHHLLFATCFKSFGGXKIFFPHMVKSIAKAGVEVHTRUiNSTRSEVKSAGGKITMSAMEKMPLMKSWYEA LRVDPPVASQYGRAKQDLZCTESIID.WFEVKKGEMLFGYQPFATKDPKFFDRPEEFVADRFVGESGEKLLKYVLWS HGPE TES PTVGHKQCAGКDFWMVSRLEV ТЕ F F LRY DTFHVDVGKSALGASIΤΣ ΤΞ LKKA

Фиг. 27. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB9

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTATTATTGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTATCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAArrTl^CGAArcAAC^GlAGlOAAAlACAAATCAAClATATrCAGAACGAACAl'GCC^^

ATTTCTTCTAACCCGjViGGTTATTGTTTTGCTCGACGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC GruAAAAAAGGACCTCTTCACCGGAACTTACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTTTCTTAT CTTGAGCCATSTGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATGTTCTTCCTTCTTTCCICCCGTCGTGAICAC GriATAGCGAAATTCCATGAAACTIATAGAGAGl'TI’l ITGAAAGTCTAGATAAGGAAAI GGCGGAAAAAGGIACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCGACATTGATCGGAAAATGGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTACTCACT CTTGGTCT7CGGAAGTTTC7AGACGACTTAATCC7CGATACT7T7CGGTTACCTC.CGTTTC7GGTGAAGAAAGAT Т.АССА5гАС.АСТТТЛСЕ_АТТТСТТТТ?-2С-АССААСТСС5ССАСТТТАТТСССССЛ?^, ₁&СТЕ_г'₁А^1А_СТССССАТТТСТ AAAGAAGAAGTTTGTCATAATGTTCTCTTCGCTACTTGCTTCAATTCGTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCGG AATATGGTGAAATCGATAGCAAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACGCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAAICCGCCGGCGGGAAGA iCACGALG1CGGCGA1GGAGAAAAIGCCG11AA1GAAA1CAG1AGE1 GAAGC1 TTACGAGTTGATCCTCCAGTAGCTrCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC СТТТТССАСаТСДАААААСаТСДААТССТАТТСССаТАССААССАТТТССААССААССАТСССАААТТТТТТЙАС CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAAEGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG

Фиг. 28. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB9

- 67 037142

МАЬТЗаРЗЬРЬ₽ЙЬЕ(ЮРРЗКУйТЕКР11УЗЬ5ЕКРТ1УУТОРТКЬРТКТ1РСОУ&ЬРС1СРККОКЬОГРУЫОеК raFFESRWKYKSTIFRTNvppGPFISEKPKVIVLLDGKSFPVLFDVSKVEKKDLFTGTYEPSTELTGGYRVLSY LDPSEPnHEKLEKLMFFLLSGRRDHVIPKFHETYTEFFETLDKEMAEEGTAGLNSGIWQAAFNFLARSLFGVNPV F. TKT.GG-TiGFTblGFblVn.QLHPVbTLG ЬРКРЬППТ. T bHTFPLFPFLVF'KrJYQRI.YI'FFYTHGASLF AEAEKT.G ТГ> КЕЕЛСНИЬЬРАТСГЫ5ГССУК1ГРРМКЕК51ЛКАСг'ЕУНТЕЬЛЫ52Р2ЕУКЗАСБК1Т?-15АМЕ:<МРЬМК5г^гУ¥ЕА LRVEPPVASQYGRAKQDLKIESIIDAVFEVKKGEMLFGYQPFATKDPKIFDRPEEFVADRFVGEGEKLLKYVLWSN GPETESPTVGNKQCAGKDFWMVSRLFVTEFFLRYDTFNVDVGKSALGASITITSLKKA

Фиг. 29. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB10

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCTACATTT CGTCCTATIATCC-TTTCTTIATCCGAAAAACCAACAAICGTGGTAACCCAACCIAGAAAATIACCTACCAGGAGA ATACCCGGCGACTATGGGT7GCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGA7TACTTTTACAATCAGGGCAAA AA.CGAATT7TTCGAATCAAGAGTAGTAAAATACAAA.TCAACTATATCA.GAA.CGAACATGCCACCGGGACCArTC ATTTCTTCTAACCCGAA.GG7TATTGTT7TGCTCGTiCGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCG.AAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTTCACCGGAACTTACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTITCTTAT CTTGACCCATCTGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATGTTCTTCCTTCTTTCCTCCCGTCGTGATCAC GrrATACCCAAATl-CCATGAAACTTATACAGAGTrTTTTGAAACCC-rAGAEAACMiAAATGGCSGAAAAAGSTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT gaaactaaactcggaggtgatggtccgacattgatcggaaaatgggttttgcttcagcttcatcctgtgctcact CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCr.GTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT lACCAGAGACTIIACGATTICTTIIACACCAACTCCGCCAGTITATICGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATITCA AAAGAAGAAGCITGTCATAATCTTCTCITCGCTACITGCTTCAATICCTTCGGCGGGArGAAGATTTTCTTCCCG AATAT SC TGAAAT C GA 7 AGC GAAAGCAGGGG TGGAGGTCC ATAC CCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAG TA AAATCCGCrGGCGGGAAGAECACGAl'GECGGCGArGGAGAAAATGCC&XTAATGAAA'rCAGrAGl'TTAGGAAGCl· TTACGAGTTGATCCTCCGGIAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTIAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACGAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAAAT7TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGGTTCGTCGGAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATG7ATTATGGTCTAAT GGACCGGAAACGGAAAGTCCAACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTSATGGTrTCGASG TTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCTTCA AT TAC TATAAC 7 T СT T 7GAAAAAAG С T 7AG

Фиг. 30. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB10

HALT5SFSLPLPSLEQOF?3KY5TFR?7IV3LCEKPTIVVTQPTKLPTRTIPGDYGLPGIGPKKDRLD''FYNQSK KEFFESRWKYKS TI FRTITXPPGPF I SGKPKVI”LLDGKSFPVLFDVSKVEK?'.DLTTGTYi-iPSTELTGGYRVLSY LDPSEPHHEKLKKLMFFLLSGRRDHVIPK7HETY7EFFETLDKEMAEKGTAGLtJGGNDQAAFr:7LAR5LFGV?3P’/ F. TKLGTDGPTLIGKWVbLQLHPVT.TT.C Ι,ΡλΓΙ,ΠΠΙ.Τ LHTFRT.PP7 LVKKDYQRLY7>rFYTT'TSAGLFAEAEKT.GTS KEEACHIJLLFATCFIJSFGGYK ΙΕΕΡΗΤ^ΚΞ lAKAGVEVHTRLAHEIRSEVKSAGGKI ΤΜΞΑ'4ΕΚ.ΜΡΙΜΚΞννΥΕΑ LRVDPPVAGQYGRAKQDLPIIESIIDAVFEVKKGEMLFGYQPFATKDFKIFDRPEEFVADRFVGEGEKLLKYVLWSH GPETESPTVGNKQ CAGKDFWMVSRLFVTEFFLRYDTFMVDVDKS ALGASIT ITSLK KA

Фиг. 31. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB11

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCTACATTT CGTCCTATIATCGTTTCTTIATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACGCAACCIAFAAAAT 7ACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGT7GCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCT7GA7TACTTTTACAATCAGGGCAAA AACGAATTITTCGAATCAAGASTAGTAAAATACAAATCAAC-rATATTCAGAACGAACATGCCACCGGGACCATTC ATTTCTTCTAACCCG^GGTTATTGTTriGCTCGACGGCiWSAGTrTCCCAGTCCTTTrCGATGTTTCGAAAGTC G.AAAAAAAGGACCTCTTCACCGGAACTTACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTTTCTTAT CITGACCCATC7GAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATG7TCTTCCTICTTTCTICTCGTCG7GATCAC GTTATACCCAAATirCATGAAACTTATACAGAGlT-rTTTGAAACGC-rAGATAAGGAAATGGCGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGT7TAATTTC7TAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATGCTCCGACATTGA7CGGAAAA7GGGTTTTGCT7CACCTTCATCCTGTACTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCA&AGACTITACGATTICTTTTACACCAACTCCGCCAGTITAITCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGGITGTCATAATGTTCTCITCGCTACTTGCTTCAATICCTTCGGCGGGArGAAGATTTTCTTCCGG AATATGCTGAAATCGATAGCGAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGArCCGATCGGAAGTA AAA1C-GC± GGCGuGAAGA xCACGA1G xCGGCIA.GGAGAAAAIGCCG11AAJGAAAICAG-AG.1 ГАдGAAGC1 TTACGAGT7GA7CCTCCGG7AGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCT7AAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCCAGGTCAAAAAAGGTGAftATGCTATTCCGCTACCAACCAITTGCAACGAACGATCCGAAAATTTTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATG7ATTATGGTCTAAT GGACCGGAAACGGAAAGTCCAACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGrGATGGTTTCGAGG TTATTCGTAACGGAGTTTTITCTCCGTZACGATACATTCAACGTCGACGT7GA7AAGTCGGCGTTGGGGGCTTCA ATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTIAG

Фиг. 32. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB11

- 68 037142

MALTGGFSLPLPGLEQOFPGKYGTFRPZIVGLGEKPTIWTQPTKLPTRTZPGDYGLPGIGPKKDRLDYFYNQGK DEFFESRVVKYKGTIFRTN?4P?GPFIS5KPKVIVLLDGKSFPVLFDVSKVEK:<CLFTGTYEPSTELTGGYRVLSY LDPSEPmEKLKKLMFFLLSGRRDHVIPKFHETYTEFFETLDKEMAEKCTAGLNGGWDQAAFKFLARSLFGVNPV ΕΤΚΪΌΤΠαΡΤΕΤΟΠ'ΓΛΣ,ΟΙ.ΗΡνΤ,ΤΤ,αΐ,ΡΛΓΤ,ΠηίΛΤ,ΗΤΓΡ.ΤΡΡΡΙΛΤΚΌΥΟΡΙ.’ΟΓΕΥΤΗΕΆίπ,ΕΆΕΑΕΚΤ.αΤβ KEEACHHLLFAECEHSFGGZKIFFPWiVKSIAJCAGVEVHTRLANElRSEVKSAGGKITMSAMEKMPLMKSWYEA LRVDPPVASQYGRAKQDLK7ESIIDAVFEVKKGEML.FGYQPFATKDPKFFDRPSEFVADRFVGESGEKLLKYVLKG NGPETESPTVGNKQCAGKI>FV™VSRLFVTEFFLRYDTFNVDVGKGALGASITITSLKKA

Фиг. 33. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB12

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTATTATTGTTTCTTTATCGGAAAAGCCAACAAICSTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACTAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGT7GCCGGGIATTGGTCCATGGAAAGATAGGCT7GA7TACTTTIACAATCAAGGGAAA GACGAAl'TrTICGAAl'CAAGAG'iAGl'GAAATACAAATCAAClATAE'rCAGAACGAACATGCCACCGGGACCATl’C ATTTCTTCTAACCCGAFiGGETATTGTITTGCTCGACGGCAAGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGFiAAGTC GAAA^YAAGGACCTCT7CACCGGAACT7ACATGCCGTCGACTGAACTGACCGG7GGTTACCGTGTTCT7TCTTAT CTTGAGCCATC7GAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATG7TCTTCCT7GTTTCTTCTCGTCG7GAICAC GTTArACCCAAA-n-CCATGAAACTrATACAGAGirTTTTGAAACCCTAGArAAGGAAATGGCGGAAAAAGSTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCGACATTGA7CGGAAAA7GGGTTTTGCT7CAGCTTCATCCTGTACTCACT CT:2GGTCT7CEGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CGATACTTTECGGTTACC7CGGTTTC7GGTGAAGAAAl~AT TACCAGAGACTTTACGATTTCTTTTACACCAACTCCGCCAGTTTATTCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCETGTCATAATCTTCTCETCGCTACTTGCTTCAATECCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGGTGAAATCGATAGCAAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACGCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAA 1 CCGCCGbCG GGAAGA C AC G A EG xCGGCGA i GGAGAAAA i bCCG 11AA1 САлА 1CAG _ AG 1 1 Ϊ А д G AAGC1 TTACGAGT7GA7CCTCCAGTAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCT7AAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCCGGTACEAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAATT7TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAAIAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTSTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGAIACATTCAACGTCGACGT7GGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT ТСААТTAC7ATAACTTCT TIGAAAAAAGCTTAG

Фиг. 34. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB12

MALISGFSLPLPZJLEQOFPSKYGTFRpriVSLCEKPTIWTQPTKLPTRTlPGCYGLPGIGPKKDRLDYFYMQGK DEFFESRWKYK5TIFRTNvppGPFISSKPKVIVLLDGKSFPVL=DV5KVEKKDLFTGTYKPSTELTGGYRVL5Y LDPEEPMHEKLKKLMFFLLSaRRDHVIPKFHETY7EFFETLDKEMAEKGTAGLM2GHDQAAFK7LAR5LFGV?JPV ETET.GTnGPTI.7GFin4,:,QI.HPVI.TLG LPEFIODT. TT.HTFRT.PPF I.VKKDYQRI.YDFF YTNSAGT.FAEAEKT.GTS KEEACHNLLFACCFMSFGGZKIFFPHKLKSIAKAGVEVHTRLAHE2RSEVK.SAGGKITHSA:4EXMPLMKSWYEA LRVCPLVASQYGRAKQDLKEESIID.WFEVKKGEMLFGYQPFATKD₽KIFDRPEEFVADRFVGEGEKLLKYVLWSN GPETESPTVGNKQCAGKDFWMVSRL-VTEFFLRYDTFMVDVGKSALGASITITSLKKA

Фиг. 35. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB13

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT cgtcctattatygtttctttatcggaaaagccaacaatcgtggtaacccaacctacaaaattacctactaggaea ArACCCGGCGACTATGGGTCGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTCGACTACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAATrrri'CGAAlTjAAGAGlAGTGAPjUACAA.ArCAAClAlAtrCAGAACGAACAIOCCACCGGCEACCATTC /YTTTCTTCFAACCCGA.AGGFTATTGTTETGCTCGZiCSGCAAG.AGTETCCC.AGTCCTTTTCG-ATGTTTCGriAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTTCACCGGAACTEACATGCCGTCGACTGJACTCACCGGTGGTT.ACCGTGTTCTTTCTTAT CTTGACCCATCTGAACCAAACCATGAAAArtTTGAAAAAATTGATGTTCTTCCTTCTTTCTICTCGTCGTGATCAT GTTATACCCAAATl-CCATGAAACTTATACAGAGTriTITGAAACCCTAGAEAAGGAAArGGCGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGETGCGTYTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCGAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCAACATTGA7CGCAAAA7GGGTTTTGCT7CAGCrTCATCCTGTACTCACT CTEGGTCTTCEGAAGTTTCTAGACGACTTAATCCTCGATACTYTECGGTTACCTCEGTTTCTGGTGAAGAAhGAT TACCASAGACTETACGATTECTTTTACAGCAACICCGCCAGIETAETCGCCGAAGCTGAAAJuYCTCGGCATTIGA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTCETCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGCTGAAATCGArAGCGAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAA TCCGC1GGCGGGAAGA iCACGAIGICGGCGATGGAGAAAAIGCCGi1AA1GAAA1CAG1 A-Gl lIAiGAAGC £ TTACGAGTTGATCCTCrGGTAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTEAAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACCAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAAATTTTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATG7ATTATGGTGTAAT GGACCGGAAACGGAAAGTCCAACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGrAGTGATGGTTTCGAGG TTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCTTCA ATTACTATAACTTCTT7GAAAAAAGCTTAG

Фиг. 36. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB13

- 69 037142

HALTGGFSLPLPGLEOCFPGKYGTFPI'riVGLC.EKPTIVVTQPTKLPTRTZPGDYGLPGIGPW’iDRLDYFYHQGK DEFFESRWKYK5TIFRTNXPPGPFISSI;PKVIVLLDGKSFPVLFCVSKVEK:<DLFTGTYMPSTELTGGYRVL3Y LDPGEPHHEKLEKLMFFLLGSRRDHVIPKFHETYTEFFETLDEEMAEKGTAGLWSGHDQAAFNFLARSLFGUNPV ЕТК1.СТПСРТЪ7СК1'Л.^г1.:.01.НРЩ,Т1.а1,Р?ТТ.ППТ.ТТ.НТГЕТ.РРРТЛ'ККПУСЯ1.УЭГГ¥ТТ'тАЯГ.ГАЕАЕК1.СТП КЕЕАСННЕЕРЛ7СГН5ГС6Ж1ГГРЖЬЕ31АЕ JIGV^VHTRLANEIRSEVKSAGGKITMSAMEaMPLMKSVVYEA LRVDPPVASQYGRAKQDLZkZESnDAVFEVKKGEMLFGYQPFATKDPKIFDRPSEFVADRFVGEGEKLLKYVLWSH GPETESPTVGNKQCAGKDFW№.RLF VTSFFLRYDTFNVDVGKSALGA5ITITSLKKA

Фиг. 37. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB14

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTATTATTGTTTCTTTATCGGAAAAGCCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACTAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTCGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTTGATTACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAATTI’TTCGAATCAAGAGTAGTGAAATACAAAICAACTATA7TCAGAACGAACATGCCACCGGGACCATTC ArTTCTTCTAACCCGjVAGGTTATTGTTCTGCTCGACGGCj^GAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC GAAAAAAAGGACCTCTTCACCGGAACTTACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTTTCTTAT CTTGAGCCATCTGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATGZTGTTCCTTCTTTCTTCTCGTCGTGATCAT G11A1 AC CC AAA 11C CA 1 GAAA —1 £ A1A_ AG AG 1 _ 11 11 .jAAAC _7 1 AGA д AAGG/1AA1GGC ^GAAAAAGG1 A^A GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT CAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCAACATTGACCGGAAAA7GGGTTTTGCT7CAGCTTCATCCTGTACTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGACTTAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTCTGGTGAAGAAAGAT TACCj\GAGACTTTACGATTTCTTTTACACCAACTCCGCCAGTTTA7TCGCCGAAGCTC-AAAAACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTCTC7TCGCTACTTGCTTCAAT7CiZTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGCTGAAATCGATAGCGAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAA1CCGCiGGCGGGAAGA _CACGAIGдCGGCGAiGGAGAAAAIGLCGl1AA1GAAA1CAGд A.G111A.GAAGC1 TTACGAGTTGATCCTCCGG7AGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCT7AAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCCAGGTCAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTAGCAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAAAT7TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATG7ATTATGGTCTAAT GGACCGGAAACGGAAAGTCCAACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCGAGG TTATTCGTAACGGAGT7TT7TCTCCGT7ACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCTTCA ATTACTATAAC7TСTT7GAAAAAAGСTZAG

Фиг. 38. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB14

HALTCCFSLPLPSLEQOFPCKYSTFRPZIVSLSEKPTIVYTQPTKLPTRTZPGDYGLPGIGPKKDRLDYFYHQSK DEFFESRWKYK3TIFRTNXPPGPFIS5KPEVIVLLDGKSFPVLFDVSKVEKKDLFTGTYMPSTELTGGYRVLSY LDPSEPNHEKLKKLMFFLLSGRRDHVIPKPHETYTEFFETLDKEMAEKGTAGLNSGHDQAAFNPLARSLFGVNPV F.TEI.GTnGPTT^GH^VI.ZOi.HFVITrGI.PSFT.nnT.IbHTFRLPPPT.VKKDYQRI.’OFFYTMSASbFAEAEET.GTS KEEACHIJLLFATCFiJSFGGVKlFFPHELKSIAKAGVEVHTRLANSZRSEVKSAGGklTMSAMEKMPLMKSVVYEA LRVCPPVASQYGRAKQDLICIESHDAVFEVKKGEMLFGYQPFATKDPKIFDRPSEFVADRFVGESGEKLLKYVLWS KGPETESPWGNKQCASKDFVVMVSRLFVTEFFLRYDTFHVDVGKSALGASITITSLKKA

Фиг. 39. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB15

AIGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTATTATTGTTTCTTTATCGGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACITACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGT7GGCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCT7GA7TACTTTTAGAATCAAGGGAAA GACGAATT 7 T TC GAATC AAGA GTAGTGAAATACAAATCAAC TATA 7 1 GAGAAC GAACA1 LA С AC C tGG AC C A J 1C A.TTTCTTCTAACCCGAAGGTTATTGTT7TGCTCGATGGCAJiGAGTTTCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC G.^ru\AAAAAGGACCTCT7CACCGGA_ACTTACATGCCGTCGACTGJiACTCJkCCGG7GGTTACZGTGTTCTTTGTTAT CTTGAGCCATCTGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATGZTGTTCX T7CTTTCTTCTGGACGTGATFAC G11 AT AC CO AAA Г IC CATGAAAC T TAT AC AG AG T 7 Г TIT GAAAC С СI AGA 7 AAG<.- AAA 1GGC C-GAAAAAG G1 ATA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCGACATTGATCGGAAAAZCGCTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTACTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7ThATCC7CGATACT7TGCGGTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTTTACGATTTCTTTTACACCAACTCCGCCAGTTTATTCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCZTGTCATAATCTTCTCZTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGAIGAAGATTTTCTTCCCG AATATGCTGAAATCGATAGCGAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAA 1C-CG C1GGC GGG AAG A1 CAC G A 1G1C GGC GA 7 GGAG AAAA1 GC CG ί ГАА1 GAAA'l C AG 7 AG 111A 7 GAAGС1 TTACGAGT7GATCCTCCGGTAGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCT7AAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACCAACCA7TTGC:AACGAAGGATCC:GAAAAT7TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCG7CGCC.GATCGG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT A.ATGGACCGGAAACGG.AAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTAGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTCTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTCGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT ТСAATТАС7ATAACTТСTTTGAAAAAAGCTTAG

Фиг. 40. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB15

- 70 037142

MALTSSFSLPLPSLHQiJFPSKYSTFRPI IVSLSEKPTIWTQPTKL.PTRTIPGDYGLPGIGPR’KDRLDYFYHQGK DEFFESRWKYKETIFRTMVPPGPFISSKPKVIVLLDGKGFPVLFDVSKVEKKDLFTGTYMPGTELTGGYRVLSY LDPSEPHHEKLKKWFFLLSSRRDHVIPKFHETYTEFFETLDKEMAEKGTAGLNSGHDQAAFKFLARSLFGVNPV F.TKT.GTnGPTT,7GFlWI₁:,QI.HPVI,TT.GI,PXFT,PDT.TI.HTFRT.PPFI.VKKDYQRI.YDFFYTN5ASr.FAEAEKI.GTS EEEACHHLLFATCFHSFGGKEIFFPWKLESIAKAGVEVHTRLAHEZRSEVKSAGGKITMSAHEKMPLMKSVVYEA LRVDPPVASQYGRAKQDLKZESHDFiVFEVKKGEMLFGYQPFATKDFEIFDRPEEFVADRFVGEEGEKLLKYVLWG HG PE T ES P TVGNKQCAGK DFWMV5 RLFV TE F F LRYDTFNVDVG KSALGASITIT Ξ L KKA

Фиг. 41. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB16

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTAT7AT7ETTTCTTTATCGGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACC7ACAAAAT7ACCTACCAGGACA ArACCCGGCGACTATGGGT7GCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCT7GA7TACTTTTACAATCAAGGGAAA GACGAATr7TTCGAATCAAGAGTAGTGAAATACAAATCAACTATA7TCAGAACGAACATGCGACCGGGACCATTC ATTTCTTC7AACCCGAAGG7TATTGTTTTGCTCGATGGCAAGAGT7TCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCGAAAGTC GJukAAAAAGGACC TCTZ CACCGGAACT7ACATGCCG TC GAC TGAACT CACC GG 7GGTTACCGTGT ТС17 T CITAT CTTGACCCATC7GAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATG7TCTTCCT7CTTTCTTCTCGACG7GATCAC GTTATACCCAAATrcCATGAAACTTATAGAGAGl-rTTTTGAAACGCTAGA7AAGGAAATGGCGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCGACATTGATCGGAAAATCGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTACTCACT CT7GGTCT7'rCGAAGT7TCTAGAC.GAC7THATCC7'CATArT7T7CGGTTA'.'C7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTTTACGATTTCTTTTACACCAACTCCGCCAGTTTATTCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGC7TGTCATAATCTTCTC7TCGCTACTTGCTTCAAT7CCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AAT AT SC TGAAAIS G A 7 AGC tAAAGCAG SGt 7G GAG S T С САТАС 7C11TTAGCAAACGAGA7 ZC GATCGGAAtIA AAA 1CCG C1 GGCG^GAAGA ϊC AC GA 1G1..GGCGA ΐ G^A GAAAA 1хзССШ 1AA1GAAA1CAG1AG1 1 I Ad AS. I TTACGAGT7GA7CCTCCGG7AGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCT7AAGATCGAATCACACGACGCC C-TTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTi'GGGTArCAAC.CA7TTGCAACGAAGC-ATCCr.AAAAT7TTTGA'' rGGCGGGAAGAGTTL'GTCGCl GATCGGTTCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAAIATGTATTATGGTTT AATGGACCGGAAA7GGAAAGT7CGACAGTGGGGAATAAA7AGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGITT7G AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG

Фиг. 42. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB16

MALTGdFGLPLPSLEQOFPGKYSTFRPPIVSLSEKPTIVVTQPTKLPTRTlPGDYGLPGIGPKKDELDYFYt-IQC-K KEFFESRWK YKS TIFRTNKPPGPFIΞ GKPKVIVLLDGKSFPVLF CVSKVEKKCLFTC-TYRPS TELTGGYRVLS Y LDPSEPNHEKLKKLMFFLLSSRRDHVIPKFHETYTEFFETLDKEMAEKGTAGLNSGHDQAAFKFLARSLFGVNPV F.TKI.GGDGPTLTGKlftmLQI.HPVbTI.GbPKFI.nDI.IT.HTFRT.PPFI.VKKDYQRI.Y^FFYTHSAST.FAEAEKI.GT.S EEEACHHLZFATCFHSFGGKEIFFPMKLESIAKAGVEVHTRLriHElRSEVKSAGGKITMSAMEKMPLMKSWYEA LRVDPPVAGQYGRAKQDLZCEESIID.AVFEVKKGEMLFGYQPFATKDFKIFDRPEEFVADRFVGEEGEKLLKYVLWS KGPETESPTVGNKQCAGKOFVVMVSRLFVTEFFLRYDTFNVDVDKSALGASITITSLKKA

Фиг. 43. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB17

AIGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTICCTCTICCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCTACATTT CGTCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAA.CCTACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGT7GCCGGGIATTGGTCCATGGAAAGATAGGCT7GA7TACTTTTACAATCAGGGCAAA Aa..CGAAlUdICGAJVlVAAGAGlAGlAAAAIACAAArCAA.ClAIAZrCAGA».CGAACAT^^

ATTTCTTC7AACCCGAAGGTTATTGTT7TGCTCGACGGCAAGAGTrTCCCAGTCCTTTrCGATGTTTCGAAAGTC GIuAAAAAAGGACCTCTTCACCSGAACITACATGCCGTCGACTGAACTCACCGGZGGTTACCGTGTTCTTICITAT CTTGASCCATCTGAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATGTTCTTCCTTCTTTCCICCCGTCGTGATCAC G11AlAGCCAAAI1CCA1GAAAC1 IA1ACAGAG1_ I 1 1 IGAAACGC1AGAxAhGGhAAIGGCGGAAAAAGG1AGA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAGGTGATGCTCCGACATTCA7CGGAAAA7GGCTTTTGCT7CAGCTTCATCCTGTGCTCACT CTGGGTCTTCCGAAGT7TC7AGAC.GAC7TAATCCTCGATACT7TCCGGTTACC7CEGTTTC7GGTGAAGAAhGAT TACCASAGACTTTACGATTTCTTTTACACCAACTCCGCCAGTTTATTCGCCGAAGCTGJiJUlJlACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGCTTGTCATAATCTTATCTTCGCTACTTGCTTCAATTCCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGCTGAAATCGATAGCGAAAGCAGSGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA AAA1C-GC_GGCGuGAAGfi xCACGA1GxCGGCGAxGuAGAAAAШСCGI 1AA1GAhA1CAG_AC111AxGAAGC L T TAC GAG T TGATCCT CC GGTAGC TTCACAATAC GGAAGAGC CAAACAGGAC С T TAAGAT CGAA TCACAC GAC GCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTx7AAATGCTATTCGGGTACCAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAAAT7TTTGAC GGGCCGGAAGAGTTCGTCRCCGATCRGTTCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATRTATTATGGTCT AATGGACCGGAAACGGAAHGTCCGACAGTGGGGAATAAAtAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGrAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGATAAGTCGGCGTTGGGGGCT ТС AAT ТА С 7 AT AA ст ТС T T 7G AAAAAAG C TT AG

Фиг. 44. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB17

- 71 037142

HALTSSFSLPLPGLHQCFPSKYSTFRPPIVGLSEKPTIVVTQPTKLPTRTPPGDYGLPGIGPKKDRLDYFYNQGK DEFFESRVt'KYKS TI FRTM?<PPGPFI SSNPKVIVLLDGESFPV7F CVSKVEKKCLFTGTYHPSTELTGGYRVLSY LDPSEPHHEKLKKLMFFLLSSRRDHVIPKFHETYTEFFETLDKEMAEKGTACLNSGHDQAAFKFLARSLFGVMPV F.TKI.GGDGPTLTGFT'rcTLQLHPVI.TI.GI.PKFLDDI.TI.HTFRLFPFr.VEKDYQPI.’OFFYTHSASr.FAEAEKI.GTS KEEACHHLLFATCFHSFGGXKlFFPHl-iLKSIAKAGVEVHTRLANElRSEVKSAGGKITMSAMEKMPLMKSVVYEA LRVDPPVASQYGRAKQDLKTESnDAVEEVKKGEMLFGYQPFATK&PKIFDRPEEFVADRFVGEEGEKLLKYVLKS NGPETESPTVGNKQCAGKDFWMVSRLFVTEFFLRYDTFHVDVGKSALGASITZTSLKKA

Фиг. 45. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB18

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCTACATTT CGTCCTATTATCGTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACCTACAAAATTACCTACCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGTTGCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCTCGATTACTTTTACAATCAAGGGAAA b ACGAA11 11 TC GAA ICAAGA G1 AG 1G AAA Г A CAA A1С ААС Г AT A21 TAG AAC GAAC A IGC С A С C C-GG AC С А1Ί C _ЛТТТСТТСТЛЛСС7СААСЙТСАТТОТТ7ТеСТС£ЛСЗОСАДЛЛОТТТ7ССЛСТССТТТТСеЛТОТТТСОАА.АДТС GAAAAAAAGGAC С ТС T 7СЛС CGGAACT TA TATGCC GTC GACTGAACT CACCGGCGGT TACCGTGT ТС17 T СТТЛТ CTTGACClATC7GAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATG7TCTTCCT7CTTTCTICCCGTCG7C.AKAC GUAIAC CCAaAI JCCAIgAAaCI IAIACaGAGU U 11GAAAC.C 1 AGA2AAGL-HAA.1 GgCGGAAAAAGG 1 A.A GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAGGTGATGGTCCGACATTCATCGGAAAATGGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTGCTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7ThATCC7CCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTTTACGATT7CTTTTACFs.CCAACTCCGCCAGTTTATTCGCCGAAGCTGAAAAACTCGGCATTTCA AAAGAAGAAGC7TGTCATAATCTTCTC7TCGCTACTTGCTTCAAT7CCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATATGCTGAAATCGA7AGCC-AAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCGTTTAGCAAACGAGA7CCGATCGGAAGTA AAATCGGCC'GGGGGGAAGATCACGATGCGGGCTATGGAGAAAATGGCGLIAATGAAAICAGTAGTATACGAAGCT TTGCGAGT7GATCCTCCGG7AGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCTTAAGATCGAATCACACGACGCC C-TTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACCAACCA7TTCCAACGAAGGATCCGAAAAT7TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCGTCGCCGATCGGTTCGTCGfiAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTCTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTIGGGGGCT TCAATTACTATAACTTCTT7GAAAAAAGCTTAG

Фиг. 46. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB18

MALT3SF5LPLP3LEQ0F?GKY5TFR?:iVSL5EKPTIWTQPTKLPIRT7rGCYGLrGIGPK:<DFLD7FYII0:-l·· DEFFESR¥CKYKETIFRTWXP?GPFISSKPKVIVLLDGESFPI^TLFDVSKlTr:<DL7TGTYtiPCTELTGGYPVLCT LDPEEPnHEKLKKLMFFLLSERRDHVIPKFHETYTEFFETLDKEMAEKCTAGLnGGnDQAAFtTFLARGLFGt.TlP”' F.TKT.GTnGPTL7GKI'R,4.:,QI.H?VT.TT,GI,PKFLnDT.TI.HTFP.T,PPFI.VEKDYQRI Y^FFYTn.GAGr.FAFAFFI GTS KEEACHHLLFA7CFMSFGGXKIFFPHKVK3IAKAGVEVHTRL.AHE2FLSEVK5AGGKITMSAMEKMPLMKSVVYEA LRVDPPVASQYGRAKQDLKZESIIDAWEVKKGEMLFGYQPFACKDPKFFDRPEEFVADRFVGEEGEKLLKYVLKG KG PE T ES P CA’GNK QCAG К 7F VVMVS RL FVTEFFLRYDT FNVDVG К SA LG AG IT 7 T S L К KA

Фиг. 47. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB19

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTC-TTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTAT7AT7GTTTCTTTATCCGAAAAACCAACAAICGTGGTAACCCAACCCACAAAATTACCTATCAGGACA ATACCCGGCGACTATGGGT7GCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCT7GA7TACTTTTAGAATCAAGGGAAA bACG*AAT‘J'7TTCGAA’rCAJiGA.GTA.GlGAAATACxAAA.TGAAC'rATA71'CA.GAACGAACAJrGGCACGGGGAC:C АГТС ATTTCTTCTAACCCGAAGGTTATTGTT7TGCTCGACGGCAJIGAGT7TGCCAGTCCTTTTCG.ATGTTTCG.AAAGTc GAkAAAAAAGGACCTCTTCACCGG/ViCTTACATGCCGTCGACTGAiACTCACCGGTGGTTACCGTGTTCTYTCTTAT CTTGAGCCATG7GAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATG7TGTTCCT7CTTTCCICCCGTCG7GATCAC GTTATACCCAAATTCCATG.AAACTTATACAGAGTrTTTTSAAACCCTAGATAAGGAAATGGCGGAAAAAGGTACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGT7IAATTTCCTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT CAAACTAAACTCGCAACTGATGGTCCGACATTCATCGGAAAACGGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTCTACTCACT CTCGGTCT7CCGAAGT7TC7AGACGAC7TAATCC7CCATACT7TCCGGTTACC7CCGTTTC7GGTGAAGAAAGAT ТАССГ15АС.АСТ7ТЛСЕ_ДТТ7СТТТТАСГ1СС?1ЛСТСС5ССЛСТ7ТА7ТСССССЛг^,1ССТС.!'кАЛД^, ₁ЛСТСССС-АТТТСТ AAAGAAGAAGC7TGTCATAATCTTCTC7TCGCTACrTGCTTCAAT7CCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCCCG AATAT3GTGAA.ATCGATAGCAAAAGCAGiGGTGGAG5TCCATACCCGTTTAGCAAACGAGA7CCGATCGGAAGTA AAA 1CCGCCGGCGGGAAGA7CACGA I'G Ϊ CGGCGAi GGAGAAAA ПС'7 G11AA1 GAAA'l C AG 1 A.G1' 11 Al GAAGC 1 TTACGAGT7GA7CCTCCAG7AGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCT7AAGATCGAATCACACGACGCC GTTTTCGAGGTGAAAAAAGGTGAAATGCTATTCGGGTACCAACCA7TTGCAACGAAGGATCCGAAATT7TTTGAC CGGCCGGAAGAGTTCfi7CGCCGATCGG7TCGTCGGAGAASAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATSGTCT AATGGACCGGAAACGGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAGTGTGCTGGCAAAGATTTTGTAGTGATGGTTTCG AGGTTATTCGTAACGGAGTTTTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGTTGGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAATTACTATAACTTCTTTGAAAAAAGCTTAG

Фиг. 48. Последовательность нуклеиновой кислоты гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB19

- 72 037142

МАЫ53Р5ЕРЬР5ЬЕООР?2КУСТЕЙ?:1УаЬОЕКРТ17УТОРТКЕР1ЕТ:Р6СУ&ЬР01СРК:<О^СУРУНОСК DEFFESRWKYKSTIFRTHZPPGPFISGKPEVIVLLDDKSFPVL:DVSKVEKKCLFTGrYHPETELTGGYFVLEY LDPSEPNHEKLKKWFFLLEGRRDHVIPKFHETYGEFFETLDKEMAEKCTAGLWSGHDQAAFrFLAFELFGV'lP^ RTFI.GTDGPTT.7C.№VI,:,QI.HPVI.TT.GI,P;<FT.nDI41.HTFRr.PPFI.VKKDYQRLYGFFYTHnAST.FAFAEFI GIF KEEACHMLLFAFCFHSFGGKKIFFPMKVKSIAKAGVEVHTRLAI'EIRSEVKSAGGaITMSAMEXMFLMESVVYEA LRVDPPVA3QYGRAKQDL?;7ESIIDAWEVKKGEMLFSYQPFA7KDPKFFDRP3EFVADRFVGE3GEKLLKYVLKS RGPETESPTVGNKQCAGKDFWMVSRLFVTEFFLRYDTFHVDVGKSALGASITITSLKKA

Фиг. 49. Аминокислотная последовательность для гена алленоксидсинтазы 2 (AOS2) Solanum tuberosum, StAOS2_CB20

ATGGCATTAACTTCATCTTTTTCTCTTCCTCTTCCTTCTCTTCACCAACAATTTCCATCAAAATACTCCACATTT CGTCCTAT7AT7GTTTCTT7ATCCGAAAAACCAACAATCGTGGTAACCCAACC7ACAAAAT7ACCTATCAGGAGA ATACCCGGCGACTATGGGT7GCCGGGTATTGGTCCATGGAAAGATAGGCT7GA7TACTTTTACAATCAAGGGAAA GA.CGAATT7TTCGAArCAAGAGTAGTGAAATACAAATCAACTATA7TCAGAACGAACATGCCACCGGGACCATTC ATTTCTTC7AACCCGAAGG7TATTGTT7TGCTCGACGACAAGAGT7TCCCAGTCCTTTTCGATGTTTCG.AAAGTC GAAAAAAAGGACCTCT7CACCGGAACT7ACATGCCGTCGACTGAACTCACCGG7GGTTACCGTGTTCT7TCTTAT CITGA7CCATC7GAACCAAACCATGAAAAATTGAAAAAATTGATG7TCTTCCT7CTTTCCTC7CGTCG7GAICAC GI ГА 1'AC CCAAAT IC CATGAAACI TAT AC AGAG ГС T IT T GAAAC С C TAGA7AAGGAAATGGC GGAAAAAG G TACA GCTGGTTTAAACTCCGGCAATGATCAAGCTGCGTTTAATTTCTTAGCTAGATCGTTGTTCGGAGTTAACCCAGTT GAAACTAAACTCGGAACTGATGGTCCGACATTGATCGGAAAATGGGTTTTGCTTCAGCTTCATCCTGTACTCACT FTCGGTCTFCGGAAGTFTCTAGACGACTTAATCLiTCXATACTTTCCGGTTACCFCCGTTTCFGGTGAAGAAAGAT TACCAGAGACTGTACGATTGCTTTTACACCAACTCCGCCAGTGTAGTCGCCGAAGCTGAAAAACTrGGCATTTCT AAAGAAGAAGC7TGTCATAATCTTCTC7TCGCTACTTGCTTCAAT7CCTTCGGCGGGATGAAGATTTTCTTCC7G AATATGGTGAAATCGATAGCAAAAGCAGGGGTGGAGGTCCATACCCC-TTTAGCAAACGAGATCCGATCGGAAGTA A_AA 1C.- G С C GtjC GGGAAGA1CACGA1G x ^-GGCGAx GGAGAAAA1 GCC^j 11AA1GAAA1 GAG 1AG11 £ Ai GAAG<-1 TTACGAGT7GA7CCTC:CAG7AGCTTCACAATACGGAAGAGCCAAACAGGACCT7AAGATCGAATC:ACACGACGCC GTTTTCGAGCTGAAAAAAGGTGAAATGC:TATTCGGGTACCAACCA7TTGCAACGAAGGAT€CGAAATT7TTTGAC CGGCl'GGAAGAGTTCl’7CGCCGATCRG7TCGTCGGAGAAGAAGGAGAAAAGTTATTGAAATATGTATTATGGTCT AATGGACCGGAAA7GGAAAGTCCGACAGTGGGGAATAAACAG7GTGCTGGCAAAGATTTTG7AGTGATGGTTT7G AGGTTATTCGTAACGGAGT7TTTTCTCCGTTACGATACATTCAACGTCGACGT7GGTAAGTCGGCGTTGGGGGCT TCAATTACTATAACTTCTT7GAAAAAAGCTTAG