EA031958B1

EA031958B1 - Состав, предотвращающий некротический энтерит у домашних птиц

Info

Publication number: EA031958B1
Application number: EA201690768A
Authority: EA
Inventors: Филип Ван Иммерсел; Рихард Сигалл; Каролин Ван Дриссе; Рихард Дюкателле; Конрад Герард Шварцер
Original assignee: Персторп АБ
Priority date: 2013-10-14
Filing date: 2014-10-06
Publication date: 2019-03-29
Also published as: WO2015057122A1; EA201690768A1; CN105744844A; EP3057440A4; CN105744844B; EP3057440B1; EP3057440A1

Abstract

Настоящее изобретение касается применения композиции сложных эфиров глицерина по меньшей мере с одной короткоцепочечной жирной кислотой для профилактики и/или облегчения некротического энтерита в желудочно-кишечном тракте домашних птиц. Композиция сложных эфиров глицерина содержит по меньшей мере 75 мас.% глицерилтрипропионата, менее 25 мас.% глицерилдипропионата и менее 8 мас.% глицерилмонопропионата. Настоящее изобретение также касается применения данной композиции для модулирования кишечной флоры у домашних птиц (galloanserans).

Description

Настоящее изобретение касается применения композиции сложных эфиров глицерина по меньшей мере с одной короткоцепочечной жирной кислотой для профилактики и/или облегчения некротического энтерита в желудочно-кишечном тракте домашних птиц. Композиция сложных эфиров глицерина содержит по меньшей мере 75 мас.% глицерилтрипропионата, менее 25 мас.% глицерилдипропионата и менее 8 мас.% глицерилмонопропионата. Настоящее изобретение также касается применения данной композиции для модулирования кишечной флоры у домашних птиц (куро- и гусеобразных, galloanserans).

Уровень техники

Некротический энтерит - острая инфекция, поражающая домашних птиц. Надотряд Galloanserae подразделяется на отряды курообразных (Galliformes), наземных типа кур, индеек, куропаток и фазанов, и гусеобразных (Anseriformes), водоплавающих типа уток, гусей и лебедей. Некротический энтерит стал новой проблемой, особенно среди домашних птиц, и характеризуется тяжелым некрозом слизистой оболочки кишечника. Клинически это заболевание длится очень недолго, и часто единственным признаком является резкое повышение смертности. Однако отмечаются и птицы с депрессией, взъерошенными перьями и поносом. Макроскопические поражения встречаются прежде всего в тонком кишечнике (тощая кишка), который может быть раздутым, рыхлым и содержать дурнопахнущую коричневую жидкость.

Возбудителем являются грамположительные облигатные анаэробные бактерии Clostridium perfringens. Есть два основных типа С. perfringens - А и С, которые связаны с некротическим энтеритом у домашних птиц. Вырабатываемые бактериями токсины вызывают повреждение тонкого кишечника, а также повреждение печени и смертность.

Бактерии С. perfringens встречаются почти повсеместно, особенно в почве, пыли, кале, кормах и использованной подстилке для птиц. Они также являются нормальными обитателями кишечника здоровых домашних птиц. Возникновение некротического энтерита зависит от наличия таких предрасполагающих факторов, как повреждение слизистой оболочки, вызванное кокцидиальными патогенами, и корма с высоким содержанием белка.

Поскольку С. perfringens встречаются почти повсюду, то важно предотвратить кокцидиоз, а также изменения микрофлоры кишечника, способствующие их росту. Раньше это осуществлялось путем регулярного добавления в корм антибиотиков. Однако вследствие запрета стимулирующих рост антибиотиков в Европейском Союзе в 2006 г. некротический энтерит стал восходящим заболеванием, к примеру среди домашней птицы. Существует большая потребность в альтернативных способах борьбы с этим заболеванием или расстройством.

Альтернативой для противодействия вредным бактериям типа С. perfringens посредством антибиотиков является сбалансированность или нормализация кишечной флоры. Кишечная флора состоит из комплекса видов микроорганизмов, обитающих в пищеварительном тракте. В этом контексте кишечная означает в кишечнике, а флора является синонимом микробиоты и микрофлоры. Микроорганизмы выполняют много полезных функций, как то сбраживание неиспользованных энергетических субстратов, тренировка иммунной системы, предотвращение роста вредных, патогенных бактерий, регулирование развития кишечника, выработка витаминов для хозяина и выработка гормонов, направляющих организм на сохранение жиров. Но в определенных условиях некоторые виды вполне способны вызывать заболевания или расстройства, вызывая инфекции или повышая риск возникновения рака у хозяина.

В настоящем изобретении изложено применение композиции сложных эфиров глицерина для предотвращения и/или облегчения некротического энтерита в желудочно-кишечном тракте таких домашних птиц, как куры и индейки. Также изложено применение этой композиции для модулирования кишечной флоры у домашних птиц. Применение композиции по изобретению уравновешивает или нормализует кишечную флору у домашних птиц таким образом, что подавляется рост патогенных видов и предотвращаются такие болезни, как некротический энтерит. Один из механизмов такого эффекта, как полагают в настоящее время, заключается в том, что она способствует росту полезных бактерий и тем самым предотвращает рост патогенных видов путем конкуренции за питание и участки прикрепления к эпителию толстой кишки.

Положительное действие масляной кислоты на здоровье кишечника у домашних птиц и других животных известно уже давно. Также изучались и другие поставочные формы масляной кислоты, в том числе и введение масляной кислоты в виде сложных эфиров глицерина. В последние годы большой интерес был направлен на использование глицерилмонобутирата в качестве кормовой добавки для улучшения здоровья кишечника у животных.

Вне ожидания оказалось, что более эффективным способом предотвращения некротического энтерита у домашних птиц, таких как цыплята-бройлеры, по сравнению с предоставлением животным глицерилмонобутирата, является применение композиции сложных эфиров глицерина, содержащей главным образом глицерилтрипропионат.

Раскрытие сущности изобретения

Настоящее изобретение касается применения композиции, содержащей сложные эфиры глицерина с короткоцепочечной жирной кислотой, которая оказалась эффективным способом предотвращения нек

- 1 031958 ротического энтерита у таких домашних птиц, как цыплята-бройлеры. Композиция сложных эфиров глицерина содержит по меньшей мере 75 мас.% глицерилтрипропионата, менее 25 мас.% глицерилдипропионата и менее 8 мас.% глицерилмонопропионата. В настоящем изобретении показано, что применение композиции по изобретению является более эффективным средством предотвращения и/или облегчения некротического энтерита у домашних птиц, чем использование для этой цели хорошо известного в данной области глицерилмонобутирата.

В соответствии с одним воплощением настоящего изобретения композиция сложных эфиров глицерина содержит по меньшей мере 80 мас.% глицерилтрипропионата, менее 20 мас.% глицерилдипропионата и менее 5 мас.% глицерилмонопропионата.

В соответствии с предпочтительным воплощением настоящего изобретения композиция сложных эфиров глицерина содержит по меньшей мере 85 мас.% глицерилтрипропионата, менее 15 мас.% глицерилдипропионата и менее 4 мас.% глицерилмонопропионата.

В соответствии с более предпочтительным воплощением настоящего изобретения композиция сложных эфиров глицерина содержит по меньшей мере 90 мас.% глицерилтрипропионата, менее 10 мас.% глицерилдипропионата и менее 2,5 мас.% глицерилмонопропионата.

Свободная пропионовая кислота вызывает коррозию и имеет едкий запах, что вызывает проблемы при работе с ней. Этих проблем можно избежать путем обращения пропионовой кислоты в виде сложных эфиров глицерина. В соответствии с одним воплощением настоящего изобретения содержание свободной пропионовой кислоты в композиции сложных эфиров глицерина составляет менее 1, предпочтительно менее 0,5 и наиболее предпочтительно менее 0,2 мас. Уменьшение содержания свободной пропионовой кислоты также гарантирует то, что рН в композиции сложных эфиров глицерина останется на таком уровне, при котором сложные эфиры глицерина не будут подвергаться гидролизу до глицерина и свободной кислоты, следовательно, продукт останется стабильным.

В соответствии с одним воплощением настоящего изобретения композиция сложных эфиров глицерина адсорбирована на инертном носителе типа двуокиси кремния. Это дает возможность поставлять композицию в виде сухого продукта. Такой носитель из двуокиси кремния предпочтительно содержит пористые частицы двуокиси кремния со средним размером частиц 20-70 мкм. В соответствии с одним воплощением настоящего изобретения композиция сложных эфиров глицерина адсорбирована на частицах двуокиси кремния в весовом соотношении 50-80% сложных эфиров глицерина и 20-50% частиц двуокиси кремния.

Композиция сложных эфиров глицерина по настоящему изобретению может добавляться в любые коммерчески доступные корма для домашних птиц. Композицию сложных эфиров глицерина можно непосредственно включать в коммерчески доступные корма или вносить как добавку в коммерчески доступные корма.

В соответствии с одним воплощением настоящего изобретения количество данной композиции сложных эфиров глицерина при кормлении ею домашних птиц составляет от 0,05 до 1,2, предпочтительно от 0,1 до 0,8 и наиболее предпочтительно от 0,2 до 0,6 мас.% суточного рациона корма для домашних птиц.

В соответствии с одним воплощением настоящего изобретения уровень дозировки данной композиции сложных эфиров глицерина начинается с первого высокого уровня, который постепенно снижается на протяжении 1-5 недель до последнего низкого уровня. Первый высокий уровень обычно составляет от 0,4 до 0,7 мас.%, а последний низкий уровень обычно составляет от 0,1 до 0,5 мас.%.

В соответствии с еще одним воплощением настоящего изобретения уровень дозировки снижается с промежутками в 5-10 дней, а снижение его эффективного количества (от одного промежутка к другому) предпочтительно составляет от 10 до 50%.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 представлено количество положительных цыплят в процентах (с показателями макроскопического поражения >2 баллов).

На фиг. 2 представлено количество положительных цыплят в процентах (с показателями макроскопического поражения >2 баллов).

Примеры воплощения.

Пример 1.

Испытание на эффективность глицерилтрипропионата в сравнении с глицерилмонобутиратом in vivo для предотвращения вызванного Clostridium perfringens некротического энтерита.

Бактериальные штаммы и вакцины.

Используемый для заражения штамм при испытаниях in vivo, штамм 56 С. perfringens, был выделен из кишечника цыпленка-бройлера с некротическими поражениями из стаи с проблемами прироста и оказался очень вирулентным ранее при испытаниях in vivo. Штамм был классифицирован как штамм типа A (netB-положительный, бета-2 и энтеротоксин-отрицательный), он вырабатывает умеренное количество альфа-токсина in vitro (Gholamiandehkordi et al., 2006).

Для инокуляции штамм культивировали в течение 24 ч в сердечно-мозговом бульоне (BHI, Oxoid,

- 2 031958

Basingstoke, Англия).

В данном исследовании использовали 10-кратную дозу антикокцидиальной вакцины Paracox®-8 (Schering-Plough Animal Health, Brussels, Бельгия), содержащей живые, ослабленные ооцисты Eimeria (E.) acervulina (две линии), Е. brunetti, E. maxima, E. necatrix, E. praecox, E. mitis и Е. tenella. Вакцину Nobilis Gumboro D 78 (Schering-Plough Animal Health, Brussels, Бельгия) вводили в питьевой воде.

Животные и их размещение.

В этом эксперименте использовали 113 бройлеров Ross разного пола. Их получали в 1-дневном возрасте из коммерческого инкубатора. Перед испытанием все помещения обеззараживали с помощью Metatectyl® (Clim'oMedic) и коммерческого антикокцидиального дезинфектанта (Bi-OO-cyst®; Biolink Ltd, York, UK). Птиц распределяли по 4 клеткам в 1,5 м² на деревянной стружке. Им давали питьевую воду и корм ad libitum. Применяли программу освещение-темнота 23 ч/1 ч.

План экспериментального исследования.

Первые 7 дней цыплят кормили начальной диетой, а с 8-го по 15-й день - ростовой диетой. И начальная, и ростовая диета была на основе смеси пшеница/рожь (43%/7,5%) с соевым шротом в качестве источника белка. Начиная с 17-го дня использовали такую же диету, за исключением того, что в качестве источника белка использовали рыбную муку (30%). Корм поставляли из Института сельскохозяйственных и рыбоводческих исследований (ILVO). Тестируемые препараты примешивали в корм. Вакцину Gumboro вводили в питьевой воде на 16-й день во всех группах. Все группы заражали перорально один раз в день С. perfringens штамма 56 примерно при 4,10⁸ к.о.е. на 17, 18, 19 и 20-й день. На 18-й день всех птиц перорально прививали 10-кратной дозой Рагасох™-8. На 21, 22 и 23-й день по 9 животных из каждой группы подвергали эвтаназии путем внутривенной инъекции пентобарбитала натрия.

Модель.

Таблица 1. Расписание для эксперимента 1

	dl6	dl7	dl8	dl9	d20	d21	d22	d23
Gumboro	X
Корм + рыбная мука		X	X	X	X	X	X	X
Инокуляция С. perfringens		X	X	X	X
Paracox® χ 10			X
Оценка						X	X	X

Исследуемые препараты.

Загон № 1: положительный контроль.

Загон № 2: глицерилмонобутират, адсорбированный на носителе из двуокиси кремния, добавляемый в корм при низкой концентрации.

Загон № 3: глицерилмонобутират, адсорбированный на носителе из двуокиси кремния, добавляемый в корм при высокой концентрации.

Загон № 4: глицерилтрипропионат, адсорбированный на носителе из двуокиси кремния.

Препараты добавляли в корм в концентрациях, приведенных ниже в табл. 2.

Таблица 2. Концентрации препаратов, добавляемых в корм (кг/т)

	Г лицерилмонобутират на носителе из S1O2, низкая концентрация	Г лицерилмонобутират на носителе из S1O2, высокая концентрация	Глицерилтрипропионат на носителе из S1O2
1-я неделя	5	7,5	5
2-я неделя	2,5	6	2,5
3-я неделя	2	5,5	2

Поражения кишечника в тонкой кишке (от двенадцатиперстной до подвздошной кишки) оценивали вслепую следующим образом:

- нет явных повреждений,

- гиперемия слизистой кишечника,

- мелкоочаговый некроз или изъязвление (1-5 очагов),

- очаговый некроз или изъязвление (5-16 очагов),

- очаговый некроз или изъязвление (16 или больше очагов),

- участки некроза длиной 2-3 см,

- диффузный некроз, типичный для полевых случаев.

Поражения в 2 балла и более классифицировали как положительные на некротический энтерит. Статистический анализ.

Для определения значимости различий между группами использовали программное обеспечение GraphPad Prism, Inc. Статистическую значимость определяли по значению р <0,05.

Клинические наблюдения.

Не наблюдалось никаких аномальных клинических явлений.

Во время испытания умерло 3 цыплят: 1 цыпленок в загоне № 1 и 2 цыпленка в загоне № 3.

В табл. 3 представлено количество птиц с очагами некротического энтерита по каждой группе на

- 3 031958

21, 22 и 23-й день. Кроме того, представлено общее количество птиц с очагами поражения по каждой группе.

Таблица 3. Количество птиц с макроскопическими очагами некротического энтерита по трем дням обследования

	Полож. контроль	Г лицерилмонобутират, низкая	Г лицерилмонобутират, высокая	Глицерилтрипропионат
21-й день	9/9	5/9	4/9	2/9
22-й день	4/9	3/9	5/9	3/9
23-й день	4/10	2/10	3/8	1/10
Итого	17/28	10/28	12/26	6/28
Итого (%)	61	36	46	21

Представленные на фиг. 1 результаты свидетельствуют, что добавление в корм глицерилтрипропионата дает значительно лучший результат в отношении профилактики вызванного Clostridium perfringens некротического энтерита у домашних птиц, чем добавление глицерилмонобутирата в любой из двух исследованных концентраций (в общей сложности 21% положительных цыплят для глицерилтрипропионата по сравнению с 36% положительных цыплят для глицерилмонобутирата при низкой концентрации и 46% положительных цыплят для глицерилмонобутирата при высокой концентрации).

Также примечательно, что добавление глицерилмонобутирата при низкой концентрации дает лучший результат, чем добавление его при высокой концентрации (в общей сложности 36% положительных цыплят для глицерилмонобутирата при низкой концентрации по сравнению с 46% положительных цыплят для глицерилмонобутирата при высокой концентрации).

Эти результаты показывают, что применение композиции сложных эфиров глицерина по настоящему изобретению является эффективным способом профилактики вызванного Clostridium perfringens некротического энтерита у домашних птиц.

Пример 2.

Испытание in vivo на эффективность добавления в корм различных концентраций глицерилтрипропионата для контролирования вызванного Clostridium perfringens некротического энтерита.

Повторяли эксперимент 1, но на этот раз в корм для животных добавляли различные концентрации глицерилтрипропионата. В этом эксперименте использовали 169 бройлеров Ross разного пола, а птиц распределяли по 5 клеткам:

загон № 1 - положительный контроль, загоны № 2-4 - глицерилтрипропионат, адсорбированный на носителе из двуокиси кремния, добавляемый в различных концентрациях.

Глицерилтрипропионат добавляли в корм в концентрациях, приведенных ниже в табл. 4.

Таблица 4. Концентрации глицерилтрипропионата, добавляемого в корм (кг/т)

	Глицерилтрипропионат (Triprop) на носителе из SiCh
Triprop 1	Triprop 2	Triprop 3	Triprop 4	Triprop 5
1-я неделя	1	3	5	6	7,5
2-я неделя	0,5	1,5	2,5	4	6
3-я неделя	0,35	1	2	3,5	5,5

Клинические наблюдения.

Во время испытания умерло 3 цыплят, по 1 цыпленку в загонах № 1, 5 и 6.

В табл. 5 представлено количество птиц с очагами некротического энтерита по каждой группе на 21, 22 и 23-й день. Кроме того, представлено общее количество птиц с очагами поражения по каждой группе.

Таблица 5. Количество птиц с макроскопическими очагами некротического энтерита по трем дням обследования

	Полож. контроль	Triprop 1	Triprop 2	Triprop 3	Triprop 4	Triprop 5
21-й день	9/9
22-й день	4/9
23-й день	4/10
Итого	17/28
Итого (%)	61

Как видно из фиг. 2, наиболее эффективными для предотвращения некротического энтерита у цыплят являются концентрации глицерилтрипропионата в корме, названные triprop 3 (начиная с 5 кг/т) и triprop 4 (начиная с 6 кг/т), 14 и 15% положительных цыплят для triprop 3 и triprop 4 соответственно). Эти результаты дают важную информацию о том, как следует вносить глицерилтрипропионат в корм для домашних птиц с тем, чтобы эффективно предотвращать некротический энтерит. Результаты показывают, что ряд оптимальных концентраций находится где-то около triprop 3 и triprop 4, а более низкие и более высокие концентрации, чем эти, дают худшие результаты в отношении предотвращения

- 4 031958 некротического энтерита у домашних птиц.

Примеры воплощений следует воспринимать как иллюстративные, но никоим образом не ограничивающие. К примеру, композиция сложных эфиров глицерина может включать смесь эфиров глицерина с различными короткоцепочечными жирными кислотами типа пропионовой кислоты, масляной кислоты и валериановой кислоты. При этом уровни дозировки нужно рассчитывать в пересчете на общее количество сложных эфиров глицерина.

Также может оказаться, что композицию сложных эфиров глицерина лучше давать домашним птицам в течение меньшего или большего периода времени и экстраполировать уровень дозировки соответственно.

Claims

1. Применение композиции сложных эфиров глицерина, содержащей по меньшей мере 75 мас.% глицерилтрипропионата, менее 25 мас.% глицерилдипропионата и менее 8 мас.% глицерилмонопропионата, для профилактики и/или облегчения симптомов некротического энтерита в желудочно-кишечном тракте домашних птиц (galloanserans), причем указанный некротический энтерит вызван Clostridium perfringens.

2. Применение композиции по п.1, при котором домашние птицы представлены курообразными (Galliformes) типа кур, индеек, куропаток или фазанов.

3. Применение композиции по п.1, при котором домашние птицы представлены гусеобразными (Anseriformes) типа уток, гусей или лебедей.

4. Применение композиции по любому из пп.1-3, при котором композиция содержит по меньшей мере 80 мас.% глицерилтрипропионата, менее 20 мас.% глицерилдипропионата и менее 5 мас.% глицерилмонопропионата.

5. Применение композиции по любому из пп.1-3, при котором композиция содержит по меньшей мере 85 мас.% глицерилтрипропионата, менее 15 мас.% глицерилдипропионата и менее 4 мас.% глицерилмонопропионата.

6. Применение композиции по любому из пп.1-3, при котором композиция содержит по меньшей мере 90 мас.% глицерилтрипропионата, менее 10 мас.% глицерилдипропионата и менее 2,5 мас.% глицерилмонопропионата.

7. Применение композиции по любому из пп. 1-6, при котором в композиции содержание свободной пропионовой кислоты составляет менее 1 мас.%.

8. Применение композиции по любому из пп.1-7, при котором в композиции содержание свободной пропионовой кислоты составляет менее 0,5 мас.%.

9. Применение композиции по любому из пп.1-7, при котором в композиции содержание свободной пропионовой кислоты составляет менее 0,2 мас.%.

10. Применение композиции по любому из пп.1-9, при котором композиция адсорбирована на носителе типа двуокиси кремния, что дает возможность поставлять данную композицию сложных эфиров глицерина в виде сухого продукта.

11. Применение композиции по п.10, при котором носитель содержит пористые частицы двуокиси кремния со средним размером частиц 20-70 мкм.

12. Применение композиции по п.10, при котором композиция адсорбирована на частицах двуокиси кремния в весовом соотношении 50-80% сложных эфиров глицерина и 20-50% частиц двуокиси кремния.

13. Способ профилактики и/или облегчения симптомов некротического энтерита в желудочнокишечном тракте домашних птиц (galloanserans), включающий введение домашним птицам композиции по любому из пп.1-12 в количестве от 0,05 до 1,2 мас.% суточного рациона корма для домашних птиц.

14. Способ по п.13, включающий введение композиции домашним птицам в количестве от 0,1 до 0,8 мас.% суточного рациона корма для домашних птиц.

15. Способ по п.13 или 14, включающий введение композиции домашним птицам в количестве от 0,2 до 0,6% массы суточного рациона корма для домашних птиц.

16. Способ по пп.13-15, включающий введение композиции в заданном количестве на протяжении 5-10 дней, а затем оно снижается на протяжении 1-5 недель.

17. Способ по п.16, включающий введение композиции, при котором уровень дозировки композиции начинается с первого высокого уровня, обычно составляющего от 0,4 до 0,7 мас.%, и постепенно снижается до последнего низкого уровня, обычно составляющего от 0,1 до 0,5 мас.%.