CN105744844B - 预防鸡雁小纲动物中坏死性肠炎的制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及至少一种短链脂肪酸的甘油酯组合物用于预防和/或缓解鸡雁小纲动物的胃肠道中的坏死性肠炎的用途。该甘油酯组合物包含至少75%重量的三丙酸甘油酯、低于25%重量的二丙酸甘油酯和低于8%重量的一丙酸甘油酯。本发明还涉及所述组合物用于调节鸡雁小纲动物的肠道菌群的用途。
Description
发明领域
本发明涉及至少一种短链脂肪酸的甘油酯组合物用于预防和/或缓解鸡雁小纲动物(galloanserans)的胃肠道中的坏死性肠炎的用途。该甘油酯组合物包含至少75%重量的三丙酸甘油酯、低于25%重量的二丙酸甘油酯和低于8%重量的一丙酸甘油酯。本发明还涉及该组合物用于调节鸡雁小纲动物的肠道菌群(gut flora)的用途。
发明背景
坏死性肠炎是侵害鸡雁小纲动物的急性感染。鸡雁小纲动物分成如下亚组:鸡形目(陆禽),如鸡、火鸡、松鸡和雉;和雁形目(水禽),如鸭、鹅和天鹅。坏死性肠炎已经成为新出现的问题,尤其是在家禽中,且特征在于肠粘膜的严重性坏死。临床发病通常极短且通常征兆仅为突发的死亡率增加。然而,还可以观察到具有抑郁、竖起的羽毛和腹泻的禽类。肉眼损伤主要见于小肠(空肠),其可以膨胀、脆弱且包含恶臭气味的棕色流体。
病原体是革兰氏阳性专性厌氧菌产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)。存在两种主要的产气荚膜梭菌类型A和C,它们与鸡雁小纲动物的坏死性肠炎相关。由该细菌产生的毒素导致小肠损害,而且导致肝损伤和死亡率。
产气荚膜梭菌是在土壤、粉尘、粪便、饲料和所用的家禽垃圾中易于见到的几乎遍在的细菌。它还是健康鸡雁小纲动物的肠的正常栖居生物。坏死性肠炎的发生取决于存在的倾向因素,例如由球虫病原体导致的粘膜损害和包含高蛋白质水平的饲料。
因为产气荚膜梭菌几乎遍在,所以重要的是预防球虫病和可以促进其生长的肠微生物区系的改变。这在早期通过常规地向饲料中添加抗生素实现。然而,由于欧盟(European Union)于2006年禁止用抗生素促进生长,所以坏死性肠炎已经变成例如家禽中的新出现的疾病。对于抵抗这种疾病或机能障碍的可替代选择方法存在巨大需求。
通过抗生素抵抗有害菌如产气荚膜梭菌的可替代选择方法在于尝试平衡肠道菌群或使其正常化。肠道菌群由生活在消化道中的复杂的微生物种类组成。在本文的上下文中,肠与肠道和区系与微生物区系和微生物菌群是同义词。微生物执行众多的有用的功能,例如发酵无用的能量底物、训练免疫系统、防止有害致病菌的生长、调节肠发育,产生宿主用维生素和产生指导宿主储存脂肪的激素。然而,在一些条件下,认为一些种类能够通过产生宿主感染或增加其癌症风险而导致疾病或机能障碍。
本发明公开了甘油酯组合物用于预防和/或缓解鸡雁小纲动物如鸡和火鸡的胃肠道中的坏死性肠炎的用途。还公开了该组合物用于调节鸡雁小纲动物的肠道菌群的用途。本发明组合物的应用平衡了鸡雁小纲动物中的肠道菌群或使其正常化,按照这种方式,致病菌种类的生长被抑制,且如坏死性肠炎这样的疾病得以预防。目前认为在这种作用后面的一种机制在于有利于有益细菌的生长,且这可以通过竞争结肠上皮的营养和附着位点预防致病菌种类的生长。
长期以来已知丁酸对家禽和其它动物的肠健康的积极作用。还探究了丁酸的不同分配形式,其中有以甘油酯形式的丁酸的分配。近年来,大量关注涉及作为饲料添加剂的一丁酸甘油酯在促进动物肠健康中的用途。
目前令人惊奇地发现主要包含三丙酸甘油酯的甘油酯组合物的应用与给予动物一丁酸甘油酯相比是预防鸡雁小纲动物例如肉鸡的坏死性肠炎的更有效方式。
发明详述
本发明涉及包含短链脂肪酸的甘油酯组合物的用途,已经证实其为预防鸡雁小纲动物例如肉鸡的坏死性肠炎的有效方式。该甘油酯组合物包含至少75%重量的三丙酸甘油酯、低于25%重量的二丙酸甘油酯和低于8%重量的一丙酸甘油酯。本发明显示使用本发明的组合物在预防和/或缓解鸡雁小纲动物的坏死性肠炎方面是比使用用于相同目的的本领域众所周知的一丁酸甘油酯更有效的工具。
根据本发明的一个实施方案,所述甘油酯组合物包含至少80%重量的三丙酸甘油酯、低于20%重量的二丙酸甘油酯和低于5%重量的一丙酸甘油酯。
根据本发明的一个优选的实施方案,所述甘油酯组合物包含至少85%重量的三丙酸甘油酯、低于15%重量的二丙酸甘油酯和低于4%重量的一丙酸甘油酯。
根据本发明的一个更优选的实施方案,所述甘油酯组合物包含至少90%重量的三丙酸甘油酯、低于10%重量的二丙酸甘油酯和低于2.5%重量的一丙酸甘油酯。
游离丙酸是侵蚀性的且具有刺激性气味,其导致处理问题。这些问题可以通过以甘油酯形式分配丙酸来避免。根据本发明的一个实施方案,甘油酯组合物中游离丙酸的量低于1%,优选低于0.5%,且最优选低于0.2%重量。控制游离丙酸的量还确保甘油酯组合物中的pH保持在这样的水平,其中甘油酯不会水解成甘油和游离酸,由此产物保持稳定。
根据本发明的一个实施方案,所述甘油酯组合物被吸附在惰性载体例如二氧化硅载体上。这使得该组合物作为干燥产品被分配。这类二氧化硅载体优选包含具有20-70μm平均粒度的二氧化硅颗粒。根据本发明的一个实施方案,所述甘油酯组合物以50-80%甘油酯与20-50%二氧化硅颗粒的重量比被吸附在二氧化硅颗粒上。
可以将本发明的甘油酯组合物添加到任何用于鸡雁小纲动物的商购饲料中。可以将该甘油酯组合物直接掺入到商购饲料中或作为补充加入商购饲料。
根据本发明的一个实施方案,饲喂给鸡雁小纲动物的甘油酯组合物的量为0.05-1.2%重量、优选0.1-0.8%重量且最优选0.2-0.6%重量的鸡雁小纲动物每日饲料配给量。
根据本发明的一个实施方案,将所述甘油酯组合物的剂量水平从最初的高水平开始,在1-5周期限内逐步减少至最后的低水平。最初的高水平典型地为0.4-0.7%重量且最后的低水平典型地为0.1-0.5%重量。
根据本发明的另一个实施方案,将所述剂量水平在5-10天的时间间隔减少并且给予的有效量减少(从1个间隔到下一个)优选为10-50%。
实施方案实施例
实施例1
三丙酸甘油酯与一丁酸甘油酯对比在预防产气荚膜梭菌-诱发的坏死性肠炎中的效能的体内试验。
菌株和疫苗
用于体内试验的攻击性菌株产气荚膜梭菌菌株56分离自存在体重增加问题的群居的具有坏死性损伤的肉鸡的肠,并且已经在体内试验中证实为早期有高度毒力的。将该菌株分类为A型菌株(netB阳性,β-2和肠毒素阴性)并且在体外产生中等量的α毒素(Gholamiandehkordi等人,2006)。
为了接种,使该菌株在脑心浸液肉汤(BHI,Oxoid,Basingstoke,England)中生长24h。
包含活的减毒堆形艾美耳球虫(Eimeria(E.)acervulina)(2个品系)、布氏艾美耳球虫(E.brunetti)、巨型艾美耳球虫(E.maxima)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、早熟艾美耳球虫(E.praecox)、和缓艾美耳球虫(E.mitis)和柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)的卵囊的10倍剂量的抗球虫疫苗-8(Schering-Plough Animal Health,Brussels,Belgium)用于本研究。
在饮用水中给予Nobilis Gumboro D 78疫苗(Schering-Plough Animal Health,Brussels,Belgium)。
动物和居室
在本实验中,使用113只混合性别的罗斯肉鸡。它们在1日龄时得自商业孵卵所。在试验前,用(Cl im'oMedic)和商品抗球虫消毒剂(Biolink Ltd,York,UK)给全部房间去除污染。将禽类分入4个1,5m2的笼子中,在木屑上。随意给予它们饮用水和饲料。施加23h/1h光照黑暗程序。
实验研究设计:
在前7天,给鸡饲喂起始膳食,并且从第8天到第15天,饲喂生长膳食。起始和生长膳食是基于小麦/黑麦(43%/7.5%)的膳食,并使用大豆粉作为蛋白质来源。从第17天开始,使用相同膳食,除了将鱼粉(30%)用作蛋白质来源之外。饲料由Institute forAgricultural and Fisheries Research(ILVO)提供。将测试产品混入饲料中。在全部组中在第16天时在饮用水中给予Gumboro疫苗。在第17、18、19和20天,每天1次用约4.108cfu产气荚膜梭菌菌株56口服攻击全部组。在第18天时,对于全部禽类口服接种10倍剂量的Paracox-8TM。在第21、22和23天时,通过静脉内戊巴比妥钠注射对每组的9只动物实施安乐死。
模型
表1.用于实验1的时间方案。
测试产品:
·畜舍1:阳性对照
·畜舍2:一丁酸甘油酯(吸附在二氧化硅载体上),以较低浓度加入到饲料中
·畜舍3:一丁酸甘油酯(吸附在二氧化硅载体上),以较高浓度加入到饲料中
·畜舍4:三丙酸甘油酯(吸附在二氧化硅载体上)
将所述产品以下表2中所示的浓度加入到饲料中:
表2.加入到饲料中的产品浓度(kg/吨)
如下以盲式方式给小肠中的肠损伤(十二指肠至回肠)评分:
0:无肉眼损伤
1:充血的肠粘膜
2:小的局灶性坏死或溃疡(1-5个病灶)
3:局灶性坏死或溃疡(5-16个病灶)
4:局灶性坏死或溃疡(16或更多个病灶)
5:2-3cm长的坏死斑
6:以现实病例为典型的弥漫性坏死
将2或以上的损伤评分分类为坏死性肠炎阳性
统计学分析
将GraphPad Prism Software,Inc用于确定各组之间的显著性差异。在P值为<0.05时确定为具有统计学显著性。
临床观察
未观察到异常临床观察结果。
3只鸡在本试验期间死亡。
-1只鸡在禽舍1中死亡。
-2只鸡在禽舍3中死亡。
表3显示在第21天、第22天和第23天时每个组具有坏死性肠炎损伤的禽类的数量。此外,显示了每个组的具有损伤的禽类的总数。
表3.在3个取样天数时具有肉眼可见的坏死性肠炎损伤的禽类数量。
阳性鸡的百分比(具有肉眼可见的损伤评分=2)如图1中所示。
图1:阳性鸡的百分比
图1中的结果表明,将三丙酸甘油酯添加到饲料中在预防鸡雁小纲动物的产气荚膜梭菌-诱发的坏死性肠炎方面得到了明显优于添加两种测试浓度之一的一丁酸甘油酯的结果(对于三丙酸甘油酯的阳性鸡为21%,与之相比,对于较低浓度的一丁酸甘油酯阳性鸡总计为36%,且对于较高浓度的一丁酸甘油酯阳性肉鸡总计为46%)。
另外值得注意的是,添加较低浓度的一丁酸甘油酯得到了比添加较高浓度更好的效果(对于较低浓度的一丁酸甘油酯阳性鸡总计为36%,与之相比,对于较高浓度的一丁酸甘油酯阳性肉鸡总计为46%)。
结果证实使用本发明的甘油酯组合物是预防鸡雁小纲动物的产气荚膜梭菌-诱发的坏死性肠炎的有效方式。
实施例2
将三丙酸甘油酯添加到饲料中在预防产气荚膜梭菌-诱发的坏死性肠炎中的效能的体内试验。
重复实验1,但这次将不同浓度的三丙酸甘油酯添加到动物饲料中。在本实验中,使用169只混合性别的罗斯肉鸡并且将禽类分入5个笼子:
·禽舍1:阳性对照
·禽舍2-6:三丙酸甘油酯(被吸附在二氧化硅载体上),以不同浓度提供
将三丙酸甘油酯以下表4中所示的浓度添加到饲料中:
表4.添加到饲料中的三丙酸甘油酯浓度(kg/吨)
临床观察
未观察到异常临床观察结果。
3只鸡在本试验期间死亡。
-各1只鸡在禽舍1、5和6中死亡。
表3显示在第21天、第22天和第23天时每个组具有坏死性肠炎损伤的禽类的数量。此外,显示了每个组的具有损伤的禽类的总数。
表5.在3个取样天数时具有肉眼可见的坏死性肠炎损伤的禽类数量。
阳性鸡的百分比(具有肉眼可见的损伤评分=2)如图2中所示。
图2:阳性鸡百分比。
图2显示三丙酸甘油酯称作“三丙酸甘油酯3”(从5kg/吨)和“三丙酸甘油酯4”(从6g/吨开始)的饲喂浓度是用于预防鸡的坏死性肠炎的最有效的浓度(对于“三丙酸甘油酯3”和“三丙酸甘油酯4”分别为14%和15%阳性鸡)。这些结果构成了有关三丙酸甘油酯应当如何饲喂给鸡雁小纲动物以便有效地预防坏死性肠炎的重要信息。结果证实最佳浓度系列在一定程度上基本上围绕“三丙酸甘油酯3”和“三丙酸甘油酯4”,且低于和高于它们的浓度在预期预防鸡雁小纲动物的坏死性肠炎时均得到较差的结果。
本实施方案实施例被解释为示例性的,但绝不起限定作用。例如,所述甘油酯组合物可以包含不同的短链脂肪酸例如丙酸、丁酸和戊酸的甘油酯掺合物。然后必须根据甘油酯类的总量计算剂量水平。
可以进一步证实给鸡雁小纲动物饲喂所述甘油酯组合物较短或较长时间期限是有用的且由此可以推断剂量水平。
Claims (18)
1.一种甘油酯组合物在制备用于预防和/或缓解鸡雁小纲动物的胃肠道中的坏死性肠炎的产品中的用途,其中所述甘油酯组合物包含至少75%重量的三丙酸甘油酯、低于25%重量的二丙酸甘油酯和低于8%重量的一丙酸甘油酯,所述坏死性肠炎由产气荚膜梭菌导致。
2.权利要求1的用途,其中所述鸡雁小纲动物是鸡形目。
3.权利要求1的用途,其中所述鸡雁小纲动物是雁形目。
4.权利要求1-3任一项的用途,其中该甘油酯组合物包含至少80%重量的三丙酸甘油酯、低于20%重量的二丙酸甘油酯和低于5%重量的一丙酸甘油酯。
5.权利要求1-3任一项的用途,其中该甘油酯组合物包含至少85%重量的三丙酸甘油酯、低于15%重量的二丙酸甘油酯和低于4%重量的一丙酸甘油酯。
6.权利要求1-3任一项的用途,其中该甘油酯组合物包含至少90%重量的三丙酸甘油酯、低于10%重量的二丙酸甘油酯和低于2.5%重量的一丙酸甘油酯。
7.权利要求1-3任一项的用途,其中该甘油酯组合物中游离丙酸的量低于1%重量。
8.权利要求1-3任一项的用途,其中该甘油酯组合物中游离丙酸的量低于0.5%重量。
9.权利要求1-3任一项的用途,其中该甘油酯组合物中游离丙酸的量低于0.2%重量。
10.权利要求1的用途,其中该甘油酯组合物被吸附在载体上,由此该甘油酯组合物作为干燥产品分配。
11.权利要求10的用途,其中所述载体包含具有20-70μm的平均粒度的多孔二氧化硅颗粒。
12.权利要求11的用途,其中该甘油酯组合物以50-80%的甘油酯组合物与20-50%的二氧化硅颗粒的重量比被吸附在二氧化硅颗粒上。
13.权利要求1的用途,其中将该甘油酯组合物以0.05-1.2%重量的鸡雁小纲动物每日饲料配给量的用量饲喂给所述鸡雁小纲动物。
14.权利要求1的用途,其中将该甘油酯组合物以0.1-0.8%重量的鸡雁小纲动物每日饲料配给量的用量饲喂给所述鸡雁小纲动物。
15.权利要求1的用途,其中将该甘油酯组合物以0.2-0.6%重量的鸡雁小纲动物每日饲料配给量的用量饲喂给所述鸡雁小纲动物。
16.权利要求13的用途,其中在5-10天的时间间隔施用所述用量的所述甘油酯组合物,且其中所述用量在1-5周期限内减少。
17.权利要求16的用途,其中该甘油酯组合物的剂量水平从最初的高水平开始,其为0.4-0.7%重量,且逐步减少至最后的低水平,其为0.1-0.5%重量。
18.权利要求16的用途,其中所述用量的减少为在先间隔期间给予的用量的10-50%。
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Legal Events
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---|---|---|---|
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C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
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