EA021352B1

EA021352B1 - Method of producing quercetin liposome form

Info

Publication number: EA021352B1
Application number: EA201201593A
Authority: EA
Inventors: Дмитрий Львович Шоболов; Юрий Михайлович Краснопольский; Андрей Михайлович Ульянов; Алексей Андреевич Натыкан; Вадим Владимирович Тарасов; Вадим Юрьевич Балабаньян; Виталий Иванович Швец
Original assignee: Общество С Ограниченной Ответственностью "Технология Лекарств"
Priority date: 2012-12-24
Filing date: 2012-12-24
Publication date: 2015-05-29
Also published as: EA201201593A1

Abstract

The invention relates to pharmacology. A method comprises mixing ethanol solutions of phosphatidylcholine and quercetin, drying the mixture in vacuum, emulsification thereof in aqueous solution, emulsion homogenation with adding lactose in the form of aqueous solution, step by step sterilyzing filtration and cool dehumidification. The obtained result provides in standard and stability of the prepared formulation liposomes (their size is presented in a narrow range), comprising quercetin, its high encapsulation in liposomes, liposome stability in a storage shelf life.

Description

Изобретение относится к фармацевтике и касается способа получения липосомального средства, содержащего в составе липосом физиологически активное вещество - кверцетин, который имеет широкий спектр действия: ранозаживляющее, ангиопротекторное, противовоспалительное, антиоксидантное.The invention relates to pharmaceuticals and relates to a method for producing a liposomal agent containing a physiologically active substance quercetin in the composition of liposomes, which has a wide spectrum of action: wound healing, angioprotective, anti-inflammatory, antioxidant.

Хорошо известно использование кверцетина [3] как кардиопротекторного средства, применяемого в комплексной терапии при остром нарушении коронарного кровообращения и инфаркте миокарда, для лечения и профилактики реперфузионного синдрома при хирургическом лечении больных с облитерирующим атеросклерозом брюшной аорты и периферических артерий. Кроме того, кверцетин применяют для профилактики и лечения местных лучевых поражений после рентген - и гамма-лучевой терапии; лечения пародонтоза и эрозивно-язвенных заболеваний слизистой оболочки ротовой полости. Высокая активность отличает кверцетин при приеме в офтальмологии.It is well known that quercetin [3] is used as a cardioprotective agent used in combination therapy for acute disturbance of coronary circulation and myocardial infarction for the treatment and prevention of reperfusion syndrome in the surgical treatment of patients with atherosclerosis of the abdominal aorta and peripheral arteries. In addition, quercetin is used for the prevention and treatment of local radiation injuries after x-ray and gamma-ray therapy; treatment of periodontal disease and erosive and ulcerative diseases of the oral mucosa. High activity distinguishes quercetin when taken in ophthalmology.

Кверцетин представляет собой агликон многих растительных флавоноидных гликозидов следующей структурной формулы:Quercetin is an aglycon of many plant flavonoid glycosides of the following structural formula:

Вместе с тем, применение кверцетина в составе лекарственных препаратов ограничено свойствами кверцетина как продукта практически нерастворимого в водной среде, а, следовательно, и в физиологических жидкостях организма. Этот фактор обусловливает создание в основном пероральных форм выпуска кверцетина - порошков и гранул, что приводит к крайне низкой биодоступности препаратов на его основе.At the same time, the use of quercetin in the composition of drugs is limited by the properties of quercetin as a practically insoluble product in the aquatic environment, and, consequently, in physiological body fluids. This factor leads to the creation of mainly oral forms of release of quercetin - powders and granules, which leads to extremely low bioavailability of drugs based on it.

Известны способы получения инъекционных препаратов кверцетина [5, 6]. В частности, известен способ получения, при котором кверцетин растворяют в водном растворе (при температуре 75-85°С), содержащем натрия тетроборат, трилон Б и поливинилпирролидон в соотношении 1:(0,7-1,0):(5,5-8,0):(0,010-0,015), охлаждают, фильтруют, разливают в ампулы и термически стерилизуют. Известен также способ получения кверцетина для парентерального введения, который предусматривает растворение кверцетина и поливинилпирролидона в этаноле при соотношении 9:1, нейтрализацию, стерилизацию, розлив во флаконы и лиофилизацию. Существенными недостатками этих методов является введение в состав препарата вспомогательных токсичных веществ - трилон Б и поливинилпирролидон, которые ограничено выводятся из организма человека, накапливаясь в печени и почках (поливинилпирролидон). Именно этот факт привел к запрету использования поливинилпирролидона во многих странах.Known methods for producing injectable preparations of quercetin [5, 6]. In particular, a production method is known in which quercetin is dissolved in an aqueous solution (at a temperature of 75-85 ° C) containing sodium tetroborate, trilon B and polyvinylpyrrolidone in a ratio of 1: (0.7-1.0) :( 5.5 -8.0) :( 0.010-0.015), cooled, filtered, poured into ampoules and thermally sterilized. There is also known a method of producing quercetin for parenteral administration, which involves the dissolution of quercetin and polyvinylpyrrolidone in ethanol at a ratio of 9: 1, neutralization, sterilization, bottling and lyophilization. Significant disadvantages of these methods is the introduction of auxiliary toxic substances, Trilon B and polyvinylpyrrolidone, which are limitedly excreted from the human body, accumulating in the liver and kidneys (polyvinylpyrrolidone). It is this fact that led to the prohibition of the use of polyvinylpyrrolidone in many countries.

Указанные недостатки известных способов получения препаратов на основе кверцетина обусловливают снижение биодоступности и безвредности целевых продуктов.These disadvantages of the known methods for producing preparations based on quercetin cause a decrease in the bioavailability and harmlessness of the target products.

Одним из приоритетных направлений развития современных фармацевтических технологий является разработка и создание терапевтических систем направленного действия. Для решения этой задачи с успехом применяются наносомальные носители лекарственных веществ, которые способны увеличивать нацеленность действия и обеспечивают увеличение биодоступности. За последние годы появились сообщения о включении кверцетина в наночастицы из различных полимерных носителей, пегилированные частицы и липосомы из природных и синтетических липидов [1, 2, 4, 8-10].One of the priority areas for the development of modern pharmaceutical technologies is the development and creation of therapeutic systems of directed action. To solve this problem, nanosomal drug carriers are successfully used that can increase the focus of action and provide an increase in bioavailability. In recent years, there have been reports of the inclusion of quercetin in nanoparticles from various polymer carriers, pegylated particles and liposomes from natural and synthetic lipids [1, 2, 4, 8-10].

Перевести кверцетин в водорастворимое состояние возможно, включив его в мембрану липидов [12-14]. В литературе описаны методы преодоления лекарственными составами низкой растворимости фармацевтических субстанций в водных растворителях, в частности кверцетина. В частности, известен лекарственный препарат Липофлавон на основе липосомальной композиции, который представляет собой фосфатидилхолиновые ЛС с инкапсулированным в них биофлавоноидом - кверцетином, применяемый в виде инъекционной формы в кардиологии и в виде глазных капель [11].It is possible to transfer quercetin to a water-soluble state by including it in the lipid membrane [12-14]. The literature describes methods for overcoming the drug's low solubility of pharmaceutical substances in aqueous solvents, in particular quercetin. In particular, the drug Lipoflavon based on the liposomal composition is known, which is phosphatidylcholine drugs with bioflavonoid encapsulated in them - quercetin, used in the form of an injection in cardiology and in the form of eye drops [11].

Известно, что препараты кверцетина существенно уменьшают как гемодинамические нарушения, так и объем некротического повреждения при острой ишемии и реперфузии миокарда. Этот эффект обусловлен мембраностабилизирующим действием кверцетина, о чем свидетельствует резкое торможение деградации мембранных ферментов в ишемизированном миокарде, а также торможение активности липоксигеназ и неферментных прооксидантных реакций. Существует мнение, что важным фактором, определяющим кардиопротекторные свойства кверцетина, является его способность повышать уровень оксида азота в тканях и эндотелии миокарда. Этот эффект был экспериментально доказан в опытах на культуре эндотелиоцитов пупочной вены человека и в экспериментах ίη νίνο с прямым определением уровня оксида азота в миокарде и стенке сосудов кролика и при моделировании процессов ишемии/реперфузии миокарда у собак. Сложность использования кверцетина в клинике прежде всего связана с его гидрофобностью. Создание Липофлавона как липосомальной формы кверцетина позволило решить эту проблему. Эффективность Липофлавона была показана при лечении острого инфаркта, нестабильной стенокардии, а также реперфузионных нарушений при тромболитической терапии. У экспериментальных животных на модели острого инфаркта внутривенное введение Липофлавона приводило к стабилизацииIt is known that quercetin preparations significantly reduce both hemodynamic disturbances and the volume of necrotic damage in acute ischemia and myocardial reperfusion. This effect is due to the membrane-stabilizing effect of quercetin, as evidenced by a sharp inhibition of the degradation of membrane enzymes in the ischemic myocardium, as well as inhibition of the activity of lipoxygenases and non-enzymatic prooxidant reactions. There is an opinion that an important factor determining the cardioprotective properties of quercetin is its ability to increase the level of nitric oxide in tissues and myocardial endothelium. This effect was experimentally proved in experiments on the culture of human umbilical vein endotheliocytes and in experiments ίη νίνο with a direct determination of the level of nitric oxide in the myocardium and the wall of the blood vessels of the rabbit and in modeling the processes of ischemia / reperfusion in dogs. The complexity of using quercetin in a clinic is primarily associated with its hydrophobicity. The creation of lipoflavone as a liposomal form of quercetin allowed to solve this problem. The effectiveness of Lipoflavon has been shown in the treatment of acute heart attack, unstable angina, as well as reperfusion disorders in thrombolytic therapy. In experimental animals on an acute infarction model, intravenous administration of Lipoflavon led to stabilization.

- 1 021352 электрической активности сердца, улучшению коронарного кровообращения и уменьшению зоны некроза в два раза. Препарат производил выраженный противоаритмический эффект. По-видимому, терапевтический эффект Липофлавона обусловлен комплексным действием компонентов препарата и его липосомальной структурой: блокадой липооксигеназного пути метаболизма арахидоновой кислоты за счет присутствия в препарате кверцетина, а также антигипоксическим, антиоксидантным и мембранопротекторным действием фосфатадилхолиновых липосом. Установлена безопасность и отсутствие побочных реакций (аллергических, иммунотоксичных, местно-раздражающего действия) при введении препарата. При исследовании ишемической болезни сердца установлено, что терапия Липофлавоном больных в течение 7 дней приводит к клиническому улучшению течения заболевания: уменьшению тяжести частоты приступов стенокардии, уменьшению объема необходимой поддерживающей терапии, в том числе антигипертензивных препаратов. Липофлавон обладает антиагрегатными, эндотелиопротекторными свойствами, улучшает реологические свойства крови и кровоток в микрососудах. Проведены исследования эффективности Липофлавона в комбинации с другим известным антигипоксантом - ацелизином в условиях экспериментальной хронической сердечной недостаточности. Предметом исследования было изучение влияния приведенной комбинации на состояние энергетических ресурсов, активности ферментов энергетического метаболизма - лактатдегидрогеназы и креатинфосфокиназы. Было показано, что использование липосомальной формы кверцетина в комбинации с ацелизином позволяет на 7 сутки наблюдения существенно снизить в сыворотке крови и миокарде интенсивность свободнорадикального окисления. Лечение позволяет предупредить снижение активности ферментов, таких как супероксидисмутаза и каталаза. Было установлено, что Липофлавон обладает антирадикальными и антиоксидантными свойствами.- 1 021352 electrical activity of the heart, improving coronary circulation and halving the area of necrosis. The drug produced a pronounced antiarrhythmic effect. Apparently, the therapeutic effect of Lipoflavon is due to the complex action of the drug components and its liposomal structure: blockade of the lipoxygenase pathway of arachidonic acid metabolism due to the presence of quercetin in the drug, as well as the antihypoxic, antioxidant and membrane-protective action of phosphatadylcholine liposomes. Safety and the absence of adverse reactions (allergic, immunotoxic, locally irritating) with the introduction of the drug have been established. In the study of coronary heart disease, it was found that treatment of patients with Lipoflavon for 7 days leads to a clinical improvement in the course of the disease: a decrease in the severity of the frequency of angina attacks, a decrease in the amount of necessary maintenance therapy, including antihypertensive drugs. Lipoflavon has antiplatelet, endothelioprotective properties, improves the rheological properties of blood and blood flow in microvessels. Studies of the effectiveness of Lipoflavon in combination with another well-known antihypoxant - acecelisine in experimental chronic heart failure have been conducted. The subject of the study was to study the effect of this combination on the state of energy resources, the activity of energy metabolism enzymes - lactate dehydrogenase and creatine phosphokinase. It was shown that the use of the liposomal form of quercetin in combination with acetaminin allows for 7 days of observation to significantly reduce the free radical oxidation intensity in blood serum and myocardium. Treatment can prevent a decrease in the activity of enzymes such as superoxide dismutase and catalase. It was found that Lipoflavon has antiradical and antioxidant properties.

На основании проведенных исследований в клинике было рекомендовано применение Липофлавона : в комплексной терапии при остром инфаркте миокарда без патологического зубца О и нестабильной стенокардии приводит к более быстрой положительной динамике активности МВ-фракции креатинфосфокиназы в сыворотке крови, препятствует повышению уровня противовоспалительного цитокина интерлейкина-8, способствует электрической стабильности миокарда; при лечении стабильной стенокардии способствует уменьшению тяжести приступов стенокардии, снижению агрегации тромбоцитов, улучшению реологических показателей крови (снижению вязкости крови и агрегации эритроцитов) и микроциркуляции.Based on the studies conducted in the clinic, the use of Lipoflavon was recommended: in complex therapy for acute myocardial infarction without a pathological O wave and unstable angina pectoris, it leads to faster positive dynamics in the activity of the creatine phosphokinase MV fraction in blood serum, prevents the increase in the level of anti-inflammatory cytokine interleukin-8, and promotes myocardial electrical stability; in the treatment of stable angina pectoris, it helps to reduce the severity of angina attacks, decrease platelet aggregation, improve blood rheology (decrease blood viscosity and red blood cell aggregation) and microcirculation.

Известен способ [7] получения липосомальной композиции на основе природного фосфатидилхолина и кверцетина, который обладает фармакологической активностью. Способ [7] выбран наиболее близким аналогом по сумме признаков, а именно: сутью и последовательностью выполнения основных операций и приемов, химической природой фосфофолипида и кверцетина, липосомальной организацией целевого продукта и близостью его фармакотерапевтических проявлений.A known method [7] for producing a liposomal composition based on natural phosphatidylcholine and quercetin, which has pharmacological activity. Method [7] was chosen as the closest analogue in terms of the sum of signs, namely: the essence and sequence of performing basic operations and techniques, the chemical nature of phosphofolipid and quercetin, the liposomal organization of the target product and the proximity of its pharmacotherapeutic manifestations.

Известный способ [7] предусматривает смешивание фосфатидилхолина в этиловом спирте и этанольного раствора кверцетина, который растворяют при температуре 47-53°С, высушивание смеси проводят при температуре 42-50°С, эмульгирование в водной среде, диспергирование эмульсии с добавлением лактозы, поэтапную стерилизующую фильтрацию и лиофильное высушивание при массовом соотношении кверцетин:лактоза 1:24-30.The known method [7] involves mixing phosphatidylcholine in ethanol and ethanol solution of quercetin, which is dissolved at a temperature of 47-53 ° C, the mixture is dried at a temperature of 42-50 ° C, emulsification in an aqueous medium, dispersion of the emulsion with the addition of lactose, phased sterilizing filtration and freeze drying at a mass ratio of quercetin: lactose 1: 24-30.

Однако способ [7] предусматривает операции и методы, которые затрудняют реализацию способа и способствуют снижению качества липосомального продукта. Во-первых, это связано с недостатком в препарате криопротектора - лактозы (при массовом соотношении кверцетин:лактоза 1:24-30), что приводит к завышенным размерам липосом после лиофилизации. Во-вторых, проведение процесса гомогенизации эмульсии при 60 МПа ухудшает стабильность системы и может изменять образующуюся систему липосом, что затрудняет стерилизующую фильтрацию и требует поэтапной и стерилизующей фильтрации. В-третьих, предлагаемая в [7] система добавления лактозы (только по окончании гомогенизации) в липосомы не позволяет криопротектору находиться как внутри липосомы, так и в окружающем водном пространстве, что приводит к нестабильности продукта после лиофилизации.However, the method [7] provides for operations and methods that impede the implementation of the method and contribute to lowering the quality of the liposomal product. Firstly, this is due to a lack of cryoprotectant - lactose in the preparation (with a mass ratio of quercetin: lactose of 1: 24-30), which leads to overestimated size of liposomes after lyophilization. Secondly, carrying out the process of homogenization of the emulsion at 60 MPa impairs the stability of the system and can change the resulting liposome system, which complicates sterilizing filtration and requires phased and sterilizing filtration. Thirdly, the system proposed in [7] for adding lactose (only at the end of homogenization) to liposomes does not allow the cryoprotector to be both inside the liposome and in the surrounding water space, which leads to product instability after lyophilization.

Все это снижает эффективность способа-прототипа в процессе его воспроизводства, а также стабильность целевого продукта как химиотерапевтического средства.All this reduces the effectiveness of the prototype method in the process of its reproduction, as well as the stability of the target product as a chemotherapeutic agent.

Задачей заявленного способа является упрощение процесса получения, повышение качества липосомального препарата по показателям стабильности липосомальной структуры после лиофилизации продукта и преимущественное накопление кверцетина в сердечной мышце, что, в свою очередь, обеспечивает фармакологическую активность. При этом результат, полученный при решении поставленной задачи, состоит в стандартности и стабильности полученного препарата липосом (размер липосом представлен в узком диапазоне), содержащих кверцетин, высокой инкапсуляции кверцетина в липосомы, стабильности липосом в процессе хранения, возможности стерилизующей фильтрации без поэтапной фильтрации.The objective of the claimed method is to simplify the process of obtaining, improving the quality of the liposomal preparation in terms of stability of the liposomal structure after lyophilization of the product and the predominant accumulation of quercetin in the heart muscle, which, in turn, provides pharmacological activity. Moreover, the result obtained in solving this problem consists in the standard and stability of the obtained liposome preparation (the size of the liposomes is presented in a narrow range) containing quercetin, high encapsulation of quercetin in liposomes, the stability of liposomes during storage, and the possibility of sterilizing filtration without phased filtration.

Для достижения поставленного результата предлагается способ получения липосомальной композиции на основе фосфатидилхолина и кверцетина, предполагающий смешивание этанольных растворов фосфатидилхолина и кверцетина, высушивание полученной смеси в вакууме, её эмульгирование в водном растворе, гомогенизацию эмульсии с добавлением лактозы (криопротектора) в виде водного раствора, поэтапную стерилизующую фильтрацию и лиофильное высушивание, при этом гомогенизацию про- 2 021352 водят в два этапа: первоначальный при давлении 500 атм, последующий при давлении 800 атм, лактозу добавляют дробно в два этапа: в начале и в процессе гомогенизации, при этом массовое соотношение компонентов в полученном препарате составляет кверцетин:лактоза 1:(31-76) соответственно.To achieve the result, a method for producing a liposome composition based on phosphatidylcholine and quercetin is proposed, which involves mixing ethanolic solutions of phosphatidylcholine and quercetin, drying the resulting mixture in vacuum, emulsifying it in an aqueous solution, homogenizing the emulsion with the addition of lactose (cryoprotectant) in the form of an aqueous steroid, poet filtration and freeze drying, while the homogenization is carried out in two stages: initial at a pressure of 500 atm, followed by minutes at a pressure of 800 atm, lactose fractionally added in two stages: in the beginning and in the homogenization process, wherein the weight ratio of the components in the resulting preparation is quercetin: lactose of 1: (31-76) respectively.

Практические аспекты реализации способа предусматривают использование яичного фосфатидилхолина и кверцетина в органических растворителях, удаление растворителя упариванием в вакууме, диспергирование полученной массы в водной среде, гомогенизацию многослойных липосом при возрастающем давлении, добавление криопротектора как в начале гомогенизации, так и при достижении размера липосом 150-200 нм, получение липосом размером 80-140 нм, стерилизующую фильтрацию полученной липосомальной эмульсии, розлив во флаконы, лиофилизацию и герметизацию в атмосфере инертного газа (или азота).Practical aspects of the method implementation include the use of egg phosphatidylcholine and quercetin in organic solvents, removal of the solvent by evaporation in a vacuum, dispersion of the resulting mass in an aqueous medium, homogenization of multilayer liposomes with increasing pressure, addition of a cryoprotectant both at the beginning of homogenization and when the liposome size is 150-200-200 nm, obtaining liposomes with a size of 80-140 nm, sterilizing filtration of the obtained liposomal emulsion, filling into bottles, lyophilization and sealing in an inert gas (or nitrogen).

Способ иллюстрируется графиками фармакокинетических профилей кверцетина в печени, мозге, почках и сердце крыс (фиг. 1-4 соответственно).The method is illustrated by graphs of the pharmacokinetic profiles of quercetin in the liver, brain, kidneys and heart of rats (Fig. 1-4, respectively).

Эффективность заявляемого способа по качественной и количественной идентификации в готовом продукте липидного компонента - фосфатидилхолина оценивали методом тонкослойной хроматографии на пластинках по хроматограмме раствора целевого продукта в метанол:хлороформ:метанол - 65:25:4, на которой основное пятно желтого цвета находится на уровне основного пятна раствора стандартного образца фосфатидилхолина; индекс окисленности липидов оценивали УФ-спектроскопией при длинах волн 233 и 215 нм.The effectiveness of the proposed method for qualitative and quantitative identification in the finished product of the lipid component - phosphatidylcholine was evaluated by thin-layer chromatography on plates according to the chromatogram of a solution of the target product in methanol: chloroform: methanol - 65: 25: 4, on which the main yellow spot is at the level of the main spot a solution of a standard sample of phosphatidylcholine; the lipid oxidation index was evaluated by UV spectroscopy at wavelengths of 233 and 215 nm.

Эффективность заявляемого способа по качественной и количественной идентификации в готовом продукте кверцетина оценивали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, которую проводили для количественного определения посторонних примесей и содержания кверцетина в образцах препарата. Использовали хроматограф δΐιίιηαάζιι Ыехега, колонка хроматографическая размером С18 4,6x250 мм, с размером частиц 5 мкм аналогичная, подвижная фаза: 1% раствор уксусной кислоты и раствор метанол:ацетонитрил; скорость подвижной фазы 1 мл/мин; детектирование при длине волны 71 нм; температура колонки 30°С.The effectiveness of the proposed method for qualitative and quantitative identification in the finished product of quercetin was evaluated by high performance liquid chromatography, which was carried out for the quantitative determination of impurities and the content of quercetin in the samples of the drug. We used a δΐιίιηαάζιι Yehega chromatograph, a chromatographic column with a C18 size of 4.6x250 mm, with a particle size of 5 μm, a similar, mobile phase: 1% acetic acid solution and methanol: acetonitrile solution; the speed of the mobile phase 1 ml / min; detection at a wavelength of 71 nm; column temperature 30 ° C.

Физико-химические свойства полученного липосомального препарата оценивали определением величины частиц липосом на наносайзере 2е1а^ег Ναηο Ζδ методом фотонной корреляционной спектроскопии. Размер частиц измеряли при помощи полупроводникового лазера при длине волны 375 нм.The physicochemical properties of the obtained liposomal preparation were evaluated by determining the size of the liposome particles on a 2e1a ^ eΝαηο Ζδ nanosizer using photon correlation spectroscopy. Particle size was measured using a semiconductor laser at a wavelength of 375 nm.

Нижеследующие конкретные примеры иллюстрируют процесс получения липосомальной композиции согласно заявленному способу (примеры 1-7) и способу согласно прототипу (пример 8)The following specific examples illustrate the process of obtaining a liposome composition according to the claimed method (examples 1-7) and the method according to the prototype (example 8)

Пример 1.Example 1

Лактозу в количестве 54,25 г растворяли в фосфатной буферной смеси (рН 6,5-6,8) в объеме 210 мл. Раствор фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Точную навеску кверцетина дигидрата в количестве 1750 мг растворяли в 150 мл этилового спирта. 47,25 г фосфатидилхолина (яичного, соевого, ДПФХ и др.) растворяли в 150 мл этилового спирта и перемешивали. Растворы кверцетина и фосфатидилхолина объединяли и фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Стерильные растворы переносили в колбу ротационного испарителя. Этанол упаривали при 41-45°С до получения тонкой пленки. Пленку обрабатывали газообразным азотом в течение 15-20 мин. Полученную пленку со стенок колбы количественно снимали смесью растворов: 1995 мл стерильного фосфатного буферного раствора (рН 6,5-6,8) и 105 мл стерильного раствора лактозы (27,125 г лактозы). Колбу с раствором перемешивали в течение 2 ч до полного растворения пленки. Проводили контроль эмульсии: концентрация кверцетина в эмульсии (определение методом ВЭЖХ) - 0,83 мг/мл. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,8%.54.25 g of lactose were dissolved in a phosphate buffer mixture (pH 6.5-6.8) in a volume of 210 ml. The solution was filtered through 0.22 μm pore membranes. An accurate weighed portion of quercetin dihydrate in an amount of 1750 mg was dissolved in 150 ml of ethyl alcohol. 47.25 g of phosphatidylcholine (egg, soy, DPPC, etc.) was dissolved in 150 ml of ethyl alcohol and mixed. Quercetin and phosphatidylcholine solutions were combined and filtered through 0.22 μm pore membranes. Sterile solutions were transferred to a flask of a rotary evaporator. Ethanol was evaporated at 41-45 ° C until a thin film was obtained. The film was treated with nitrogen gas for 15-20 minutes. The resulting film from the walls of the flask was quantitatively removed with a mixture of solutions: 1995 ml of sterile phosphate buffer solution (pH 6.5-6.8) and 105 ml of sterile lactose solution (27.125 g of lactose). The flask with the solution was stirred for 2 hours until the film was completely dissolved. The emulsion was monitored: the concentration of quercetin in the emulsion (determined by HPLC) was 0.83 mg / ml. The amount of impurities at the level of the initial substance quercetin did not exceed 2.8%.

Эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 38-44°С. Первоначально создавали давление (3 цикла) 500 атм. Затем продолжали гомогенизацию при 800 атм до размера частиц не более 200 нм. При достижении указанного размера частиц в эмульсию добавляли оставшийся стерильный раствор лактозы 105 мл (27,125 г). Объем эмульсии 2205 мл. Гомогенизацию проводили до размера частиц не более 130-150 нм. Концентрация кверцетина до стерилизующей фильтрации 0,783 мг/мл. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров с финишным фильтром размером пор 0,2 мкм. Объем после стерилизующей фильтрации 1830 мл. Размер частиц после стерилизующей фильтрации 138,2 нм - 87,1%, 57,8 нм - 12,9%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 0,775 мг/мл. Включение кверцетина в липосомы после стерилизующей фильтрации (определение методом ВЭЖХ) - 98,88%. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,62%. Эмульсию разливали во флаконы, лиофилизировали и герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу после лиофилизации, установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы желтоватого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне - 165 нм - 87%; 75 нм - 13%; рН - 6,75. Включение кверцетина в липосомы не менее 96,2%. Соотношение компонентов в препарате: кверцетин:фосфатидилхолин:лактоза - (1:27:31).The emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 38-44 ° C. Initially, a pressure (3 cycles) of 500 atm was created. Then homogenization was continued at 800 atm to a particle size of not more than 200 nm. Upon reaching the indicated particle size, the remaining sterile lactose solution of 105 ml (27.125 g) was added to the emulsion. The volume of the emulsion is 2205 ml. Homogenization was carried out to a particle size of not more than 130-150 nm. The concentration of quercetin before sterilizing filtration 0.783 mg / ml The emulsion was filtered through a cascade of filters with a final filter with a pore size of 0.2 μm. The volume after sterilizing filtration is 1830 ml. The particle size after sterilizing filtration 138.2 nm - 87.1%, 57.8 nm - 12.9%. Concentration after sterilizing filtration 0.775 mg / ml. The inclusion of quercetin in liposomes after sterilizing filtration (determined by HPLC) is 98.88%. The amount of impurities at the level of the initial quercetin substance did not exceed 2.62%. The emulsion was poured into vials, lyophilized and sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of yellowish color with a characteristic odor; particle size stored in the nanoscale - 165 nm - 87%; 75 nm - 13%; pH 6.75. The inclusion of quercetin in liposomes is not less than 96.2%. The ratio of components in the preparation: quercetin: phosphatidylcholine: lactose - (1:27:31).

Пример 2.Example 2

Лактозу в количестве 93,625 г растворяли в фосфатной буферной смеси (рН 6,5-6,8) в объеме 210 мл. Раствор фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Точную навеску кверцетина ди- 3 021352 гидрата в количестве 1750 мг растворяли в 150 мл этилового спирта. 47,25 г фосфатидилхолина (яичного, соевого, ДПФХ и др.) растворяли в 150 мл этилового спирта и перемешивали. Растворы кверцетина и фосфатидилхолина объединяли и фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Стерильные растворы переносили в колбу ротационного испарителя. Этанол упаривали при 41-45°С до получения тонкой пленки. Пленку обрабатывали газообразным азотом в течение 15-20 мин. Полученную пленку со стенок колбы количественно снимали смесью растворов: 1995 мл стерильного фосфатного буферного раствора (рН 6,5-6,8) и 105 мл стерильного раствора лактозы (46,81 г лактозы). Колбу с раствором перемешивали в течение 2 ч до полного растворения пленки. Проводили контроль эмульсии: концентрация кверцетина в эмульсии (определение методом ВЭЖХ) - 0,83 мг/мл. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,8%.93.625 g of lactose was dissolved in a phosphate buffer mixture (pH 6.5-6.8) in a volume of 210 ml. The solution was filtered through 0.22 μm pore membranes. An exact weighed portion of quercetin di-3 021352 hydrate in an amount of 1750 mg was dissolved in 150 ml of ethyl alcohol. 47.25 g of phosphatidylcholine (egg, soy, DPPC, etc.) was dissolved in 150 ml of ethyl alcohol and mixed. Quercetin and phosphatidylcholine solutions were combined and filtered through 0.22 μm pore membranes. Sterile solutions were transferred to a flask of a rotary evaporator. Ethanol was evaporated at 41-45 ° C until a thin film was obtained. The film was treated with nitrogen gas for 15-20 minutes. The resulting film from the walls of the flask was quantitatively removed with a mixture of solutions: 1995 ml of sterile phosphate buffer solution (pH 6.5-6.8) and 105 ml of sterile lactose solution (46.81 g of lactose). The flask with the solution was stirred for 2 hours until the film was completely dissolved. The emulsion was monitored: the concentration of quercetin in the emulsion (determined by HPLC) was 0.83 mg / ml. The amount of impurities at the level of the initial substance quercetin did not exceed 2.8%.

Эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 38-44°С. Первоначально создавали давление (3 цикла) 500 атм. Затем продолжали гомогенизацию при 800 атм до размера частиц не более 200 нм. При достижении указанного размера частиц в эмульсию добавляли оставшийся стерильный раствор лактозы 105 мл (46,81 г). Гомогенизацию проводили до размера частиц не более 130-150 нм. Концентрация кверцетина до стерилизующей фильтрации 0,8 мг/мл. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финишным фильтром размером пор 0,2 мкм. Объем после стерилизующей фильтрации 1830 мл. Размер частиц после стерилизующей фильтрацииThe emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 38-44 ° C. Initially, a pressure (3 cycles) of 500 atm was created. Then homogenization was continued at 800 atm to a particle size of not more than 200 nm. Upon reaching the indicated particle size, the remaining sterile lactose solution of 105 ml (46.81 g) was added to the emulsion. Homogenization was carried out to a particle size of not more than 130-150 nm. The concentration of quercetin before sterilizing filtration is 0.8 mg / ml. The emulsion was filtered through a cascade of filters, with a 0.2 micron finish filter. The volume after sterilizing filtration is 1830 ml. Particle size after sterilizing filtration

148.2 нм - 93,1%; 70,8 нм - 6,9%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 0,775 мг/мл. Включение кверцетина в липосомы после стерилизующей фильтрации (определение методом ВЭЖХ) - 96,88%. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,62%. Эмульсию разливали во флаконы, лиофилизировали и герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу после лиофилизации, установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы желтоватого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне - 154,3 нм - 100%; рН - 6,82. Включение кверцетина в липосомы не менее 97,2%. Соотношение компонентов в препарате: кверцетин:фосфатидилхолин:лактоза - (1:27:51,3).148.2 nm - 93.1%; 70.8 nm - 6.9%. Concentration after sterilizing filtration 0.775 mg / ml. The inclusion of quercetin in liposomes after sterilizing filtration (determined by HPLC) is 96.88%. The amount of impurities at the level of the initial quercetin substance did not exceed 2.62%. The emulsion was poured into vials, lyophilized and sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of yellowish color with a characteristic odor; the particle size is kept in the nanoscale - 154.3 nm - 100%; pH 6.82. The inclusion of quercetin in liposomes is not less than 97.2%. The ratio of components in the preparation: quercetin: phosphatidylcholine: lactose - (1: 27: 51.3).

Пример 3.Example 3

Лактозу в количестве 133,0 г растворяли в фосфатной буферной смеси (рН 6,5-6,8) в объеме 210 мл. Раствор фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Точную навеску кверцетина дигидрата в количестве 1750 мг растворяли в 150 мл этилового спирта. 47,25 г фосфатидилхолина (яичного, соевого) растворяли в 150 мл этилового спирта и перемешивали. Растворы кверцетина и фосфатидилхолина объединяли и фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Стерильные растворы переносили в колбу ротационного испарителя. Этанол упаривали при 41-45°С до получения тонкой пленки. Пленку обрабатывали газообразным азотом в течение 15-20 мин. Полученную пленку со стенок колбы количественно снимали смесью растворов: 1995 мл стерильного фосфатного буферного раствора (рН 6,5-6,8) и 105 мл стерильного раствора лактозы (66,5 г лактозы). Колбу с раствором перемешивали в течение 2 ч до полного растворения пленки. Проводили контроль эмульсии: концентрация кверцетина в эмульсии (определение методом ВЭЖХ) - 0,825 мг/мл. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,8%.Lactose in an amount of 133.0 g was dissolved in a phosphate buffer mixture (pH 6.5-6.8) in a volume of 210 ml. The solution was filtered through 0.22 μm pore membranes. An accurate weighed portion of quercetin dihydrate in an amount of 1750 mg was dissolved in 150 ml of ethyl alcohol. 47.25 g of phosphatidylcholine (egg, soy) was dissolved in 150 ml of ethanol and mixed. Quercetin and phosphatidylcholine solutions were combined and filtered through 0.22 μm pore membranes. Sterile solutions were transferred to a flask of a rotary evaporator. Ethanol was evaporated at 41-45 ° C until a thin film was obtained. The film was treated with nitrogen gas for 15-20 minutes. The resulting film from the walls of the flask was quantitatively removed with a mixture of solutions: 1995 ml of sterile phosphate buffer solution (pH 6.5-6.8) and 105 ml of sterile lactose solution (66.5 g of lactose). The flask with the solution was stirred for 2 hours until the film was completely dissolved. The emulsion was monitored: the concentration of quercetin in the emulsion (determined by HPLC) was 0.825 mg / ml. The amount of impurities at the level of the initial substance quercetin did not exceed 2.8%.

Эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 38-44°С. Первоначально создавали давление (3 цикла) 500 атм. Затем продолжали гомогенизацию при 800 атм до размера частиц не более 200 нм. При достижении указанного размера частиц в эмульсию добавляли оставшийся стерильный раствор лактозы 105 мл (66,5 г). Гомогенизацию проводили до размера частиц не более 130-150 нм. Концентрация кверцетина до стерилизующей фильтрации 0,787 мг/мл. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финишным фильтром размером пор 0,2 мкм. Объем после стерилизующей фильтрации 1830 мл. Размер частиц после стерилизующей фильтрацииThe emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 38-44 ° C. Initially, a pressure (3 cycles) of 500 atm was created. Then homogenization was continued at 800 atm to a particle size of not more than 200 nm. Upon reaching the indicated particle size, the remaining sterile lactose solution of 105 ml (66.5 g) was added to the emulsion. Homogenization was carried out to a particle size of not more than 130-150 nm. The concentration of quercetin before sterilizing filtration 0.787 mg / ml. The emulsion was filtered through a cascade of filters, with a 0.2 micron finish filter. The volume after sterilizing filtration is 1830 ml. Particle size after sterilizing filtration

138.2 нм - 87,1%; 57,8 нм - 12,9%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 0,775 мг/мл. Включение кверцетина в липосомы после стерилизующей фильтрации (определение методом ВЭЖХ) - 96,88%. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,62%. Эмульсию разливали во флаконы, лиофилизировали и герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу после лиофилизации, установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы желтоватого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне - 148 нм - 87,8%; 57,8 нм - 12,2%; рН - 6,6. Включение кверцетина в липосомы не менее 95,12%. Соотношение компонентов в препарате: кверцетин:фосфатидилхолин:лактоза - (1:26:76).138.2 nm - 87.1%; 57.8 nm - 12.9%. Concentration after sterilizing filtration 0.775 mg / ml. The inclusion of quercetin in liposomes after sterilizing filtration (determined by HPLC) is 96.88%. The amount of impurities at the level of the initial quercetin substance did not exceed 2.62%. The emulsion was poured into vials, lyophilized and sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of yellowish color with a characteristic odor; the particle size is kept in the nanoscale - 148 nm - 87.8%; 57.8 nm - 12.2%; pH is 6.6. The inclusion of quercetin in liposomes is not less than 95.12%. The ratio of components in the preparation: quercetin: phosphatidylcholine: lactose - (1:26:76).

Пример 4.Example 4

Лактозу в количестве 54,25 г растворяли в фосфатной буферной смеси (рН 6,5-6,8) в объеме 210 мл. Раствор фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Точную навеску кверцетина дигидрата в количестве 1750 мг растворяли в 150 мл этилового спирта. 47,25 г фосфатидилхолина (яичного, соевого) растворяли в 150 мл этилового спирта и перемешивали. Растворы кверцетина и фосфатидилхолина объединяли и фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Стерильные растворы переносили в колбу ротационного испарителя. Этанол упаривали при 41-45°С до получения тонкой пленки. Пленку обрабатывали газообразным азотом в течение 15-20 мин. Полученную пленку со стенок колбы количест- 4 021352 венно снимали смесью растворов: 1995 мл стерильного фосфатного буферного раствора (рН 6,5-6,8) и 105 мл стерильного раствора лактозы (27,125 г лактозы). Колбу с раствором перемешивали в течение 2 ч до полного растворения пленки. Проводили контроль эмульсии: концентрация кверцетина в эмульсии (определение методом ВЭЖХ) - 0,827 мг/мл. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,8%.54.25 g of lactose were dissolved in a phosphate buffer mixture (pH 6.5-6.8) in a volume of 210 ml. The solution was filtered through 0.22 μm pore membranes. An accurate weighed portion of quercetin dihydrate in an amount of 1750 mg was dissolved in 150 ml of ethyl alcohol. 47.25 g of phosphatidylcholine (egg, soy) was dissolved in 150 ml of ethanol and mixed. Quercetin and phosphatidylcholine solutions were combined and filtered through 0.22 μm pore membranes. Sterile solutions were transferred to a flask of a rotary evaporator. Ethanol was evaporated at 41-45 ° C until a thin film was obtained. The film was treated with nitrogen gas for 15-20 minutes. The obtained film was quantitatively removed from the flask walls with a mixture of solutions: 1995 ml of sterile phosphate buffer solution (pH 6.5-6.8) and 105 ml of sterile lactose solution (27.125 g of lactose). The flask with the solution was stirred for 2 hours until the film was completely dissolved. The emulsion was monitored: the concentration of quercetin in the emulsion (determined by HPLC) was 0.827 mg / ml. The amount of impurities at the level of the initial substance quercetin did not exceed 2.8%.

Эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 38-44°С. Первоначально создавали давление (4 цикла) 500 атм. Затем продолжали гомогенизацию при 800 атм до размера частиц не более 200 нм. При достижении указанного размера частиц в эмульсию добавляли оставшийся стерильный раствор лактозы 105 мл (27,125 г). Гомогенизацию проводили до размера частиц не более 130-150 нм. Концентрация кверцетина до стерилизующей фильтрации 0,784 мг/мл. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров с финишным фильтром размером пор 0,2 мкм. Объем после стерилизующей фильтрации 1830 мл. Размер частиц после стерилизующей фильтрацииThe emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 38-44 ° C. Initially, a pressure (4 cycles) of 500 atm was created. Then homogenization was continued at 800 atm to a particle size of not more than 200 nm. Upon reaching the indicated particle size, the remaining sterile lactose solution of 105 ml (27.125 g) was added to the emulsion. Homogenization was carried out to a particle size of not more than 130-150 nm. The concentration of quercetin before sterilizing filtration 0.784 mg / ml. The emulsion was filtered through a cascade of filters with a final filter with a pore size of 0.2 μm. The volume after sterilizing filtration is 1830 ml. Particle size after sterilizing filtration

148.2 нм - 92,1%; 67,8 нм - 7,9%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 0,775 мг/мл. Включение кверцетина в липосомы после стерилизующей фильтрации (определение методом ВЭЖХ) - 98,85%. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,4%. Эмульсию разливали во флаконы, лиофилизировали и герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу после лиофилизации, установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы желтоватого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне - 139,6 нм - 94,8%; 42 нм - 5,2%; рН - 6,75. Включение кверцетина в липосомы не менее 93,9%. Соотношение компонентов в препарате: кверцетин:фосфатидилхолин:лактоза - (1:27:31). В данном примере диспергирование при 500 атм - проводится 4 цикла.148.2 nm - 92.1%; 67.8 nm - 7.9%. Concentration after sterilizing filtration 0.775 mg / ml. The inclusion of quercetin in liposomes after sterilizing filtration (determined by HPLC) is 98.85%. The amount of impurities at the level of the initial quercetin substance did not exceed 2.4%. The emulsion was poured into vials, lyophilized and sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of yellowish color with a characteristic odor; the particle size is kept in the nanoscale - 139.6 nm - 94.8%; 42 nm - 5.2%; pH 6.75. The inclusion of quercetin in liposomes is not less than 93.9%. The ratio of components in the preparation: quercetin: phosphatidylcholine: lactose - (1:27:31). In this example, dispersion at 500 atm — 4 cycles are carried out.

Пример 5.Example 5

Лактозу в количестве 54,25 г растворяли в фосфатной буферной смеси (рН 6,5-6,8) в объеме 210 мл. Раствор фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Точную навеску кверцетина дигидрата в количестве 1750 мг растворяли в 150 мл этилового спирта. 47,25 г фосфатидилхолина (яичного, соевого) растворяли в 150 мл этилового спирта и перемешивали. Растворы кверцетина и фосфатидилхолина объединяли и фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Стерильные растворы переносили в колбу ротационного испарителя. Этанол упаривали при 41-45°С до получения тонкой пленки. Пленку обрабатывали газообразным азотом в течение 15-20 мин. Полученную пленку со стенок колбы количественно снимали смесью растворов: 1995 мл стерильного фосфатного буферного раствора (рН 6,5-6,8) и 105 мл стерильного раствора лактозы (27,125 г лактозы). Колбу с раствором перемешивали в течение 2 ч до полного растворения пленки. Проводили контроль эмульсии: концентрация кверцетина в эмульсии (определение методом ВЭЖХ) - 0,828 мг/мл. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,6%.54.25 g of lactose were dissolved in a phosphate buffer mixture (pH 6.5-6.8) in a volume of 210 ml. The solution was filtered through 0.22 μm pore membranes. An accurate weighed portion of quercetin dihydrate in an amount of 1750 mg was dissolved in 150 ml of ethyl alcohol. 47.25 g of phosphatidylcholine (egg, soy) was dissolved in 150 ml of ethanol and mixed. Quercetin and phosphatidylcholine solutions were combined and filtered through 0.22 μm pore membranes. Sterile solutions were transferred to a flask of a rotary evaporator. Ethanol was evaporated at 41-45 ° C until a thin film was obtained. The film was treated with nitrogen gas for 15-20 minutes. The resulting film from the walls of the flask was quantitatively removed with a mixture of solutions: 1995 ml of sterile phosphate buffer solution (pH 6.5-6.8) and 105 ml of sterile lactose solution (27.125 g of lactose). The flask with the solution was stirred for 2 hours until the film was completely dissolved. The emulsion was monitored: the concentration of quercetin in the emulsion (determined by HPLC) was 0.828 mg / ml. The amount of impurities at the level of the initial quercetin substance did not exceed 2.6%.

Эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 38-44°С. Первоначально создавали давление (2 цикла) 500 атм. Затем продолжали гомогенизацию при 800 атм до размера частиц не более 200 нм. При достижении указанного размера частиц в эмульсию добавляли оставшийся стерильный раствор лактозы 105 мл (27,125 г). Гомогенизацию проводили до размера частиц не более 130-150 нм. Концентрация кверцетина до стерилизующей фильтрации 0,809 мг/мл. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финишным фильтром размером пор 0,2 мкм. Объем после стерилизующей фильтрации 1830 мл. Размер частиц после стерилизующей фильтрацииThe emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 38-44 ° C. Initially, a pressure (2 cycles) of 500 atm was created. Then homogenization was continued at 800 atm to a particle size of not more than 200 nm. Upon reaching the indicated particle size, the remaining sterile lactose solution of 105 ml (27.125 g) was added to the emulsion. Homogenization was carried out to a particle size of not more than 130-150 nm. The concentration of quercetin before sterilizing filtration 0.809 mg / ml. The emulsion was filtered through a cascade of filters, with a 0.2 micron finish filter. The volume after sterilizing filtration is 1830 ml. Particle size after sterilizing filtration

138.2 нм - 87,1%; 57,8 нм - 10,9%; 36,7 нм - 2% Концентрация после стерилизующей фильтрации 0,775 мг/мл. Включение кверцетина в липосомы после стерилизующей фильтрации (определение методом ВЭЖХ) - 96,88%. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,62%. Эмульсию разливали во флаконы, лиофилизировали и герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу после лиофилизации, установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы желтоватого цвета с характерным запахом; Размер частиц сохранен в нанодиапазоне - 143,0 нм - 85,4%; 61 нм - 11%; 42 нм -4,6%; рН - 6,55. Включение кверцетина в липосомы не менее 91,2%. Соотношение компонентов в препарате: кверцетин:фосфатидилхолин:лактоза - (1:27:31). В данном примере проведено диспергирование при 500 атм - 2 цикла.138.2 nm - 87.1%; 57.8 nm - 10.9%; 36.7 nm - 2% Concentration after sterilizing filtration 0.775 mg / ml. The inclusion of quercetin in liposomes after sterilizing filtration (determined by HPLC) is 96.88%. The amount of impurities at the level of the initial quercetin substance did not exceed 2.62%. The emulsion was poured into vials, lyophilized and sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of yellowish color with a characteristic odor; The particle size is kept in the nanoscale - 143.0 nm - 85.4%; 61 nm - 11%; 42 nm -4.6%; pH 6.55. The inclusion of quercetin in liposomes is not less than 91.2%. The ratio of components in the preparation: quercetin: phosphatidylcholine: lactose - (1:27:31). In this example, dispersion was carried out at 500 atm - 2 cycles.

Пример 6.Example 6

Лактозу в количестве 35,0 г растворяли в фосфатной буферной смеси (рН 6,5-6,8) в объеме 210 мл. Раствор фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Точную навеску кверцетина дигидрата в количестве 1750 мг растворяли в 150 мл этилового спирта. 47,25 г фосфатидилхолина (яичного, соевого) растворяли в 150 мл этилового спирта и перемешивали. Растворы кверцетина и фосфатидилхолина объединяли и фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Стерильные растворы переносили в колбу ротационного испарителя. Этанол упаривали при 41-45°С до получения тонкой пленки. Пленку обрабатывали газообразным азотом в течение 15-20 мин. Полученную пленку со стенок колбы количественно снимали смесью растворов: 1995 мл стерильного фосфатного буферного раствора (рН 6,5-6,8) и 105 мл стерильного раствора лактозы (17,5 г лактозы). Колбу с раствором перемешивали в течение 2 ч до35.0 g of lactose were dissolved in a phosphate buffer mixture (pH 6.5-6.8) in a volume of 210 ml. The solution was filtered through 0.22 μm pore membranes. An accurate weighed portion of quercetin dihydrate in an amount of 1750 mg was dissolved in 150 ml of ethyl alcohol. 47.25 g of phosphatidylcholine (egg, soy) was dissolved in 150 ml of ethanol and mixed. Quercetin and phosphatidylcholine solutions were combined and filtered through 0.22 μm pore membranes. Sterile solutions were transferred to a flask of a rotary evaporator. Ethanol was evaporated at 41-45 ° C until a thin film was obtained. The film was treated with nitrogen gas for 15-20 minutes. The resulting film from the walls of the flask was quantitatively removed with a mixture of solutions: 1995 ml of sterile phosphate buffer solution (pH 6.5-6.8) and 105 ml of sterile lactose solution (17.5 g of lactose). The flask with the solution was stirred for 2 hours until

- 5 021352 полного растворения пленки. Проводили контроль эмульсии: концентрация кверцетина в эмульсии (определение методом ВЭЖХ) 0,825 мг/мл. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,6%.- 5 021352 complete dissolution of the film. The emulsion was monitored: the concentration of quercetin in the emulsion (determined by HPLC) 0.825 mg / ml. The amount of impurities at the level of the initial quercetin substance did not exceed 2.6%.

Эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 38-44°С. Первоначально создавали давление (3 цикла) 500 атм. Затем продолжали гомогенизацию при 800 атм до размера частиц не более 200 нм. При достижении указанного размера частиц в эмульсию добавляли оставшийся стерильный раствор лактозы 105 мл (17,5 г). Гомогенизацию проводили до размера частиц не более 130-150 нм. Концентрация кверцетина до стерилизующей фильтрации 0,787 мг/мл. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финишным фильтром размером пор 0,2 мкм. Объем после стерилизующей фильтрации 1830 мл. Размер частиц после стерилизующей фильтрацииThe emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 38-44 ° C. Initially, a pressure (3 cycles) of 500 atm was created. Then homogenization was continued at 800 atm to a particle size of not more than 200 nm. Upon reaching the indicated particle size, the remaining sterile lactose solution of 105 ml (17.5 g) was added to the emulsion. Homogenization was carried out to a particle size of not more than 130-150 nm. The concentration of quercetin before sterilizing filtration 0.787 mg / ml. The emulsion was filtered through a cascade of filters, with a 0.2 micron finish filter. The volume after sterilizing filtration is 1830 ml. Particle size after sterilizing filtration

148,2 нм - 88,1%; 67,8 нм - 11,9%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 0,775 мг/мл. Включение кверцетина в липосомы после стерилизующей фильтрации (определение методом ВЭЖХ) 96,88%. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,62%. Эмульсию разливали во флаконы, лиофилизировали и герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу после лиофилизации, установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы желтоватого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне - 198 нм - 85,8%; 117,8 нм - 10,2%; 547 нм - 4%; рН - 6,6. Включение кверцетина в липосомы не менее 95,12%. Соотношение компонентов в препарате: кверцетин:фосфатидилхолин:лактоза - (1:27:20). В данном примере проведено использование лактозы с уменьшенным количеством.148.2 nm - 88.1%; 67.8 nm - 11.9%. Concentration after sterilizing filtration 0.775 mg / ml. The inclusion of quercetin in liposomes after sterilizing filtration (determined by HPLC) 96.88%. The amount of impurities at the level of the initial quercetin substance did not exceed 2.62%. The emulsion was poured into vials, lyophilized and sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of yellowish color with a characteristic odor; the particle size is kept in the nanoscale - 198 nm - 85.8%; 117.8 nm - 10.2%; 547 nm - 4%; pH is 6.6. The inclusion of quercetin in liposomes is not less than 95.12%. The ratio of components in the preparation: quercetin: phosphatidylcholine: lactose - (1:27:20). In this example, the use of lactose with a reduced amount.

Пример 7.Example 7

Лактозу в количестве 93,625 г растворяли в фосфатной буферной смеси (рН 6,5-6,8) в объеме 210 мл. Раствор фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Точную навеску кверцетина дигидрата в количестве 1750 мг растворяли в 150 мл этилового спирта. 47,25 г фосфатидилхолина (яичного, соевого, ДПФХ и др.) растворяли в 150 мл этилового спирта и перемешивали. Растворы кверцетина и фосфатидилхолина объединяли и фильтровали через мембраны с размером пор 0,22 мкм. Стерильные растворы переносили в колбу ротационного испарителя. Этанол упаривали при 41-45°С до получения тонкой пленки. Пленку обрабатывали газообразным азотом в течение 15-20 мин. Полученную пленку со стенок колбы количественно снимали смесью растворов: 1995 мл стерильного фосфатного буферного раствора (рН 6,5-6,8) и 210 мл стерильного раствора лактозы (93,625 г лактозы). Колбу с раствором перемешивали в течение 2 ч до полного растворения пленки. Проводили контроль эмульсии: концентрация кверцетина в эмульсии (определение методом ВЭЖХ) 0,783 мг/мл. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,8%.93.625 g of lactose was dissolved in a phosphate buffer mixture (pH 6.5-6.8) in a volume of 210 ml. The solution was filtered through 0.22 μm pore membranes. An accurate weighed portion of quercetin dihydrate in an amount of 1750 mg was dissolved in 150 ml of ethyl alcohol. 47.25 g of phosphatidylcholine (egg, soy, DPPC, etc.) was dissolved in 150 ml of ethyl alcohol and mixed. Quercetin and phosphatidylcholine solutions were combined and filtered through 0.22 μm pore membranes. Sterile solutions were transferred to a flask of a rotary evaporator. Ethanol was evaporated at 41-45 ° C until a thin film was obtained. The film was treated with nitrogen gas for 15-20 minutes. The resulting film from the walls of the flask was quantitatively removed with a mixture of solutions: 1995 ml of sterile phosphate buffer solution (pH 6.5-6.8) and 210 ml of sterile lactose solution (93.625 g of lactose). The flask with the solution was stirred for 2 hours until the film was completely dissolved. The emulsion was monitored: the concentration of quercetin in the emulsion (determined by HPLC) 0.783 mg / ml. The amount of impurities at the level of the initial substance quercetin did not exceed 2.8%.

Эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 38-44°С. Первоначально создавали давление (3 цикла) 500 атм. Затем продолжали гомогенизацию при 800 атм до размера частиц не более 200 нм. При достижении указанного размера частиц в эмульсию добавляли оставшийся стерильный раствор лактозы 105 мл (46,81 г). Гомогенизацию проводили до размера частиц не более 130-150 нм. Концентрация кверцетина до стерилизующей фильтрации 0,780 мг/мл. Эмульсию фильтровали через каскад фильтров, с финишным фильтром размером пор 0,2 мкм. Объем после стерилизующей фильтрации 1830 мл. Размер частиц после стерилизующей фильтрацииThe emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 38-44 ° C. Initially, a pressure (3 cycles) of 500 atm was created. Then homogenization was continued at 800 atm to a particle size of not more than 200 nm. Upon reaching the indicated particle size, the remaining sterile lactose solution of 105 ml (46.81 g) was added to the emulsion. Homogenization was carried out to a particle size of not more than 130-150 nm. Quercetin concentration before sterilizing filtration 0.780 mg / ml. The emulsion was filtered through a cascade of filters, with a 0.2 micron finish filter. The volume after sterilizing filtration is 1830 ml. Particle size after sterilizing filtration

148,2 нм - 93,1%; 70,8 нм - 6,9%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 0,700 мг/мл. Включение кверцетина в липосомы после стерилизующей фильтрации (определение методом ВЭЖХ) 89,74%. Количество примесей на уровне исходной субстанции кверцетина не превышало 2,62%. Эмульсию разливали во флаконы, лиофилизировали и герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу после лиофилизации, установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы желтоватого цвета с характерным запахом; размер частиц сохранен в нанодиапазоне - 134,3 нм - 92,4; 67 нм - 7,6%; рН - 6,82. Включение кверцетина в липосомы не менее 87,2%. Соотношение компонентов в препарате: кверцетин:фосфатидилхолин:лактоза - (1:27:51,3). В данном примере добавление лактозы проводили в начале процесса диспергирования.148.2 nm - 93.1%; 70.8 nm - 6.9%. Concentration after sterilizing filtration 0.700 mg / ml. The inclusion of quercetin in liposomes after sterilizing filtration (determination by HPLC) 89.74%. The amount of impurities at the level of the initial quercetin substance did not exceed 2.62%. The emulsion was poured into vials, lyophilized and sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of yellowish color with a characteristic odor; the particle size is kept in the nanoscale - 134.3 nm - 92.4; 67 nm - 7.6%; pH 6.82. The inclusion of quercetin in liposomes is not less than 87.2%. The ratio of components in the preparation: quercetin: phosphatidylcholine: lactose - (1: 27: 51.3). In this example, the addition of lactose was carried out at the beginning of the dispersion process.

Пример 8 (по способу прототипа).Example 8 (by the method of the prototype).

Точную навеску кверцетина дигидрата в количестве 1000 мг растворяли в 100 мл этилового спирта при температуре 50°С, прибавляли к раствору 40,0 г фосфатидилхолина, растворенного в 100 мл этилового спирта, и перемешивали. Раствор переносили в колбу ротационного испарителя. Этанол упаривали при температуре 42°С до получения тонкой пленки. После окончания процесса высушивания липидную пленку обрабатывали газообразным азотом в течение 5 мин. Полученную пленку со стенок колбы количественно снимали 1380 мл воды для инъекций. Колбу с эмульсией перемешивали в течение 2 ч.An exact weighed portion of quercetin dihydrate in an amount of 1000 mg was dissolved in 100 ml of ethyl alcohol at a temperature of 50 ° C, 40.0 g of phosphatidylcholine dissolved in 100 ml of ethyl alcohol was added to the solution, and mixed. The solution was transferred to a flask of a rotary evaporator. Ethanol was evaporated at a temperature of 42 ° C until a thin film was obtained. After the drying process was completed, the lipid film was treated with nitrogen gas for 5 minutes. The resulting film from the walls of the flask was quantitatively removed 1380 ml of water for injection. The emulsion flask was stirred for 2 hours.

Эмульсию переносили в гомогенизатор высокого давления и проводили гомогенизацию при температуре 40-45°С при давлении 600 атм. При достижении оптической плотности 0,15 (длина волны - 540 нм; толщина слоя поглощения - 0,5 см) к полученной эмульсии прибавляли стерильный раствор лактозы 24 г в 120 мл раствора. Продолжали гомогенизацию при тех же параметрах процесса до оптической плотности не более 0,15 (длина волны - 540 нм; толщина слоя поглощения - 0,5 см). КонцентрацияThe emulsion was transferred to a high pressure homogenizer and homogenized at a temperature of 40-45 ° C at a pressure of 600 atm. Upon reaching an optical density of 0.15 (wavelength - 540 nm; thickness of the absorption layer - 0.5 cm), a sterile solution of lactose 24 g in 120 ml of solution was added to the emulsion obtained. Homogenization was continued at the same process parameters to an optical density of not more than 0.15 (wavelength - 540 nm; absorption layer thickness - 0.5 cm). Concentration

- 6 021352 кверцетина после гомогенизации 0,65 мг/мл. Включение после гомогенизации (определение методом ВЭЖХ) 97%. Полученную эмульсию последовательно фильтровали через фильтры 0,45 и 0,22 мкм, а далее проводили еще одну фильтрацию через 0,22 мкм. Объем после стерилизующей фильтрации 1380 мл. Размер частиц после стерилизующей фильтрации 153 нм - 89,7%; 56,8 нм - 10,3%. Концентрация после стерилизующей фильтрации 0,615 мг/мл. Включение после стерилизующей фильтрации (определение методом ВЭЖХ) - 94,61%. Эмульсию разливали во флаконы, лиофилизировали и герметизировали в атмосфере инертного газа (азота). По результатам контроля продукта, полученного по предлагаемому способу после лиофилизации, установлено, что препарат представлен в виде легкой аморфной массы желтоватого цвета с характерным запахом; размер частиц - 168,5 нм - 82,3%; 56,6 нм - 11,7%; 653 нм - 6%. Включение не менее 93,2%. Соотношение компонентов в препарате: кверцетин:фосфатидилхолин:лактоза - (1:40:24).- 6 021352 quercetin after homogenization of 0.65 mg / ml. Inclusion after homogenization (determination by HPLC) 97%. The resulting emulsion was successively filtered through 0.45 and 0.22 μm filters, and then another filtration was performed through 0.22 μm. The volume after sterilizing filtration is 1380 ml. The particle size after sterilizing filtration of 153 nm is 89.7%; 56.8 nm - 10.3%. Concentration after sterilizing filtration 0.615 mg / ml. Inclusion after sterilizing filtration (determination by HPLC) - 94.61%. The emulsion was poured into vials, lyophilized and sealed in an atmosphere of inert gas (nitrogen). According to the results of the control of the product obtained by the proposed method after lyophilization, it was found that the drug is presented in the form of a light amorphous mass of yellowish color with a characteristic odor; particle size - 168.5 nm - 82.3%; 56.6 nm - 11.7%; 653 nm - 6%. Inclusion of at least 93.2%. The ratio of components in the preparation: quercetin: phosphatidylcholine: lactose - (1:40:24).

Пример 9.Example 9

При исследовании фармакокинетики липосомального и нелипосомального кверцетина при однократном инъекционном введении крысам наблюдается его быстрое выведение из плазмы крови с максимальной концентрацией около 40-70 мкг/мл, что согласуется с данными инструкции по медицинскому применению оригинального препарата кверцетина. Уровни концентраций в плазме липосомального и нелипосомального кверцетина существенно не различались. Наблюдались различия при определении кверцетина в печени крыс. С_тах для липосомальной формы составляла около 5,9 мкг/г (Т_тах - 1 мин), для нелипосомальной - около 15,8 мкг/г (Т_тах - 90 мин). Липосомальный кверцетин практически полностью выводился из печени к 18 ч, в отличие от нелипосомального, который сохраняется в печени к 18 ч после введения на уровне 13 мкг/г.When studying the pharmacokinetics of liposomal and non-liposomal quercetin with a single injection to rats, it is rapidly excreted from blood plasma with a maximum concentration of about 40-70 μg / ml, which is consistent with the instructions for the medical use of the original quercetin preparation. Plasma concentrations of liposomal and non-liposomal quercetin did not differ significantly. Differences were observed in the determination of quercetin in rat liver. The _max for the liposomal form was about 5.9 μg / g (T _max - 1 min), for the non-liposomal form - about 15.8 μg / g (T _max - 90 min). Quercetin liposome was almost completely eliminated from the liver by 18 hours, in contrast to non-liposomal quercetin, which persists in the liver by 18 hours after administration at 13 μg / g.

Также различия наблюдались для мозга - липосомальный кверцетин практически не проникал через ГЭБ и обнаруживался в небольших дозах (до 500 нг/г) не позднее 10 мин после введения. Нелипосомальный кверцетин обнаруживался в мозге крыс даже спустя 18 ч после введения в диапазоне концентраций 120-550 нг/г.Differences were also observed for the brain - liposomal quercetin practically did not penetrate the BBB and was detected in small doses (up to 500 ng / g) no later than 10 min after administration. Non-liposomal quercetin was detected in rat brain even 18 hours after administration in the concentration range of 120-550 ng / g.

Схожие фармакокинетические профили наблюдались для почек: для липосомального кверцетина С_тах составила около 9 мкг/г, для нелипосомального - 7 мкг/г (Т_тах - 1 мин в обоих случаях).Similar pharmacokinetic profiles were observed for the kidneys: for liposomal quercetin, C _max was about 9 μg / g, for non-liposomal quercetin - 7 μg / g (T _max - 1 min in both cases).

Аналогичная, как и для почек, картина наблюдалась и для сердца. Для липосомального кверцетина С_тах составила около 4,2 мкг/г, для нелипосомального - 2,5 мкг/г (Т_тах - 1 мин в обоих случаях).A similar pattern as for the kidneys was observed for the heart. For liposomal quercetin, C _max was about 4.2 μg / g, for non-liposomal quercetin, 2.5 μg / g (T _max - 1 min in both cases).

Таким образом, результаты физико-химических исследований свидетельствуют, что продукт, полученный согласно заявленному способу, - гомогенизация проводится в два этапа: первоначальный при 500 атм и последующий при 800 атм до указанного размера; соотношение компонентов в итоговом препарате: кверцетин:фосфатидилхолин:лактоза - 1:27:31-76 (см. примеры 1-3) обеспечивают стабильность композиции липосом с включенным в них кверцетином. Воспроизведение заявленного способа при изменении параметров (см. примеры 4-6), а также способ согласно прототипу (пример 8) влечет трудности в реализации собственно способа и снижение качества целевого продукта, а именно:Thus, the results of physico-chemical studies indicate that the product obtained according to the claimed method, homogenization is carried out in two stages: initial at 500 atm and subsequent at 800 atm to the specified size; the ratio of components in the final preparation: quercetin: phosphatidylcholine: lactose - 1: 27: 31-76 (see examples 1-3) ensure the stability of the liposome composition with quercetin included in them. Reproduction of the claimed method when changing parameters (see examples 4-6), as well as the method according to the prototype (example 8) entails difficulties in implementing the method itself and reducing the quality of the target product, namely:

увеличение размера и неоднородность дисперсионного состава липосом (примеры 5, 6, 8); уменьшение включения кверцетина в липосомы и нестабильность размеров липосом (примеры 5, 7). Как видно из примеров 1-3, оптимальным является первоначальное проведение гомогенизации приthe increase in size and heterogeneity of the dispersion composition of liposomes (examples 5, 6, 8); a decrease in the inclusion of quercetin in liposomes and instability of liposome sizes (examples 5, 7). As can be seen from examples 1-3, the optimal is the initial homogenization at

500 атм (3 цикла) - гомогенность выше 90%. При проведении диспергирования при 500 атм (2 цикла) обнаруживается гетерогенность размеров липосом, т.е. диаметр липосом находится в широком диапазоне и представлен тремя фракциями (пример 5); при проведении диспергирования при 500 атм (4 цикла) результаты не отличаются от использования трех циклов диспергирования (пример 4).500 atm (3 cycles) - homogeneity above 90%. When conducting dispersion at 500 atm (2 cycles), the heterogeneity of liposome sizes is detected, i.e. the diameter of liposomes is in a wide range and is represented by three fractions (example 5); when conducting dispersion at 500 atm (4 cycles), the results do not differ from the use of three cycles of dispersion (example 4).

Оптимальным является содержание лактозы при соотношении кверцетин:лактоза 1:31 - 1:76. Использование меньшего количества лактозы приводит к нестабильности липосом после лиофилизации, что, в свою очередь, приводит к гетерогенности размеров липосом и их увеличению до фракции с размером 547 нм (пример 6)The optimum is the lactose content with a ratio of quercetin: lactose 1:31 - 1:76. The use of less lactose leads to the instability of liposomes after lyophilization, which, in turn, leads to heterogeneity in the size of liposomes and their increase to a fraction with a size of 547 nm (example 6)

Лактозу добавляют дробно: '/₂ первоначально, а затем после достижения размера липосом 200 нм вторую порцию. В случае добавления всей лактозы одновременно после лиофилизации (недостаток криопротекторного действия) увеличиваются размеры липосом и появляется фракция около более 500 нм (прототип, пример 8). При добавлении всего количества лактозы на начальной стадии обнаруживается снижение включения кверцетина в липосомы (пример 7).Lactose is added fractionally: '/ ₂ initially, and then after reaching the liposome size of 200 nm, a second portion. In the case of the addition of all lactose simultaneously after lyophilization (lack of cryoprotective action), the size of liposomes increases and a fraction of about 500 nm appears (prototype, example 8). When adding the entire amount of lactose at the initial stage, a decrease in the inclusion of quercetin in liposomes is detected (example 7).

- 7 021352- 7 021352

Список литературыList of references

1. Антипова С.В., Шепилов А.В., Рябцева О.Д. Опыт применения Липофлавона для предупреждения развития кардиологических осложнений у больных операбельным раком молочной железы, получавших лечение антрациклинами. Проблеми сучасно1 медично1 науки та осв1ти. 2009. № 2. С. 44-46.1. Antipova S.V., Shepilov A.V., Ryabtseva O.D. The experience of using Lipoflavon to prevent the development of cardiological complications in patients with operable breast cancer who received treatment with anthracyclines. Problems are presently 1 medical science and livelihood. 2009. No. 2. P. 44-46.

2. Кириченко С.В., Тишкж С.М., Соловьйов АЛ. Кверцетин-вм1СН1 лшосоми В1дновляють функщональну активжсть канал1в у гладеньких мюцитах аорти опромжених щур1в. Фармаколопя та Л1карська токсиколопя. 2008. № 1-3. С. 48 - 52.2. Kirichenko S.V., Tishkzh S.M., Solovyov AL. Quercetin-vm1CH1 lsosomi B1 renew the functional activity of channel1v in smooth aortic mucites, which are crushed by schworms1v. Farmakolopya and L1karska toxicolopa. 2008. No. 1-3. S. 48 - 52.

3. Ковалев В.Б., Ковган В.В., Колчина Е.Ю. Механизмы лечебного действия биофлавоноида кверцетина (обзор литературы). Украшський медичний альманах. 1999. Т. 2. № 4. С. 176-184.3. Kovalev VB, Kovgan VV, Kolchina E.YU. The mechanisms of therapeutic action of quercetin bioflavonoid (literature review). Ukrainian medical almanac. 1999.Vol. 2. No. 4. P. 176-184.

4. Манухина Е.Б., Лямина Н.П., Долотовская П.В. Роль оксида азота и кислородных радикалов в патогенезе артериальной гипертензии. Кардиология. 2002. № 11. С. 73-84.4. Manukhina E.B., Lyamina N.P., Dolotovskaya P.V. The role of nitric oxide and oxygen radicals in the pathogenesis of arterial hypertension. Cardiology. 2002. No. 11. S. 73-84.

5. Патент РФ № 2181051, МПК⁷ Ф61КЗЗ/22, А61К9/08, А61К31/79, А61КЗ1/198, 2002.5. RF patent No. 2181051, IPC ⁷ F61KZZ / 22, A61K9 / 08, A61K31 / 79, A61KZ1 / 198, 2002.

6. Патент Украины №38504, МПК⁷ А61К9/14, А61КЗ/79,6. Patent of Ukraine No. 38504, IPC ⁷ A61K9 / 14, A61KZ / 79,

А61К31/455,2001.A61K31 / 455,2001.

7. Стефанов О.В., Григорьева Г.С., Соловйов АЛ. Пасечшкова Н.В., Хромов О.С., Конахович Н.Ф., Краснопольський Ю.М. Спошб отримання лшосомального засобу, що м1стить кверцетин. Патент У кражи № 76393. А61К 9/217, А61К 31/353, А61К 47/44, А61Р 31/00, А61Р 35/00, А61Р 39/06 2006. Прототип.7. Stefanov OV, Grigoryeva G.S., Solovyov AL. Pasechshkova N.V., Khromov O.S., Konakhovich N.F., Krasnopolsky Yu.M. Sposb has removed the lhosomal fever, avenging quercetin. Theft patent No. 76393. A61K 9/217, A61K 31/353, A61K 47/44, A61P 31/00, A61P 35/00, A61P 39/06 2006. Prototype.

8. Чекман 1.С., Савченкова Л.В., Горчакова Н.О. и др. Лшосомальш форми л1карських засоб1в: в1д експерименту до клжики. Журнал АМН Укражи. 2006. Т.12. № 5. С. 653-667.8. Chekman 1.S., Savchenkova L.V., Gorchakova N.O. and others. Lshosomalsh form l1karskih concerns: v1d experiment before klzhiki. Journal of AMS Stolen. 2006.V. 12. No. 5. S. 653-667.

9. А1ехоро1ои Е., Оеог§орои1оз А., Ка§ка<Лз К.А., ОетеСгоз С. РгерагаЛоп апс! СНагас1ег12аЛоп οί 1уорНФ2еЛ Прозотез \νίΦ тсогрогаЮЛ Оиегсйт. 1. оГЫро-зоте КезеагсН. 2006. V. 16. N. 1-2. Р. 17-25.9. A1khero1oi E., Oegogoroi1oz A., Kagka <Lz K.A., OeteSgoz S. RheragaLop aps! СГагас1ег12аЛоп οί 1уорНФ2еЛ Prosthesis | νίΦ тсогроугаЮ Оиегсйт. 1. OGYROZOTE KESEAGSN. 2006. V. 16. N. 1-2. R. 17-25.

10. ОопюХакл М., НаЩаШотои Н., Оппаз К., \Уа§пег М., Оете1гоз С. Епсарзи1аН-оп οί паШгаПу осситп§ Лауопо1Лез ΐηίο Прозотез: РНуз1сосНепнса1 ргорегНез апЛ Ыо1о§1са1 асПуку а§атз! Нитап сапсег се11 Нпез. 1. РНагтасок 2004. V. 56. N. 10. Р. 1217-1224.10. OopyuHakl M., NOWShotoi N., Oppaz K., \ Waegpeg M., Oetezgoz S. Epsarzi1aN-op οί paSpagu ossitpg Lauopo1Lez ΐηίο Prosthesis: RNus1osnepnos1 regnogo noslusnosuosu siuosu Nitap sapseg se11 Npez. 1. RNagtasok 2004. V. 56. N. 10. R. 1217-1224.

11. Оп§огуеуа О.8., 81е1апоу О.У., КопакНоусЬ Ν.Ρ., Кгазпоро1зку Υ.Μ. РазесНт-коуа Ν.ν. РНуз1са1-сНегтса1 §гоипЛз οί Фе тетЬгапе 1гор1с ГасГОгз ίη тесНатзт οί Фе Нрозота1 теЛютез асПоп. 1тегпаПопа1 Нрозоте зос1е!у: Рго^гезз ίη Лги§ апб уассте ЛеПуегу. 2005. ЬопЛоп. Р. 50-54.11. Opgogueua O.8., 81e1apou O.U., KopakNous Ν.Ρ., Kgazporo1zu Υ.Μ. Razesnt-koua Ν.ν. RNuz1sa1-sNegtsa1 §GoIPLz οί Feet Ghape 1gor1s GasGogz ίη tesNatzt οί Fe Nrozota1 teLyutez asopop. 1 tegpaPopa1 Nrozot zos1e! Y: Prgo ^ gezz ίη Lgi§ apb uasste LePuegu. 2005. LopLop. R. 50-54.

12. ЕгЛеп Μ.Ι., КаНгатап А., Ко§кеп Т. ВепеПс!а1 ейес1з οί циегсеПп оп охФаНуе зЧезз тЛисеЛ Ьу икгауЫеГ СПп. Е[р. Оегтаю1. 2001. V. 26. N 5. Р. 536-539.12. Eglep Μ.Ι., Kangatap A., Kögkep T. Vepeps! A1 есί ίί ίί оп оп оп оп ез Л Л Л Л ис ик ик СП СП п п п п п п. E [p. Ogtayu 1. 2001. V. 26. N 5. R. 536-539.

13. МаСзио М., 8азак1 Ν., 5а§а К., Капеко Т. Су1о1охюку οί ЯауошнЛз ЮхуагЛ си1-ШгеЛ погта1 Нитап се11з. ΒίοΙ. РНагт. Ви11. 2005. V. 28. N. 3. Р. 253259.13. MaSzio M., 8azak1 Ν., 5aаa K., Kapeko T. Su1o1ohyuku οίAuhoshLZ YuhuagL si-ShgeL pogta1 Nitap se11z. ΒίοΙ. RNagt. Vi11. 2005. V. 28. N. 3. R. 253259.

- 8 021352- 8 021352

Claims

CLAIM

The method of obtaining a liposomal preparation containing bioflavonoid quercetin by mixing ethanolic solutions of phosphatidylcholine and quercetin, drying the mixture in vacuo, emulsifying it in an aqueous solution, homogenizing the emulsion with the addition of lactose in the form of an aqueous solution, stage-by-stage sterilizing filtration and freeze-drying, which differs by carried out in at least two stages: initial at a pressure of 500 atm, subsequent at a pressure of 800 atm, lactose is added fractionally in two stages at the beginning and in homogenization process with a mass ratio of components in the resulting preparation of quercetin: lactose 1: (31-76), respectively.

Averaged pharmacokinetic profiles of quercetin in rat liver