EA019488B1

EA019488B1 - Ингибиторы limk2 и способы их применения

Info

Publication number: EA019488B1
Application number: EA201071224A
Authority: EA
Inventors: Хью Альфред Бергун; Николь Кэтлин Гудвин; Брайс Олден Харрисон; Джейсон Патрик Хили; Ин Лю; Росс Мейбон; Бретт Маринелли; Дэвид Брент Роулинс; Деннис Стюарт Райс; Норрис Эндрю Уитлок
Original assignee: Лексикон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date: 2008-04-21
Filing date: 2009-04-20
Publication date: 2014-04-30
Also published as: AR071833A1; EP2674433A1; JP5575110B2; KR20110008047A; US8193202B2; NZ588353A; CL2009000957A1; AU2009239500A1; IL208483A; CA2721919A1; KR101706391B1; US8450332B2; CO6321266A2; CA2721919C; EA201071224A1; US20090264450A1; IL208483A0; MX2010011450A; AU2009239500B2; EP2297153B1

Abstract

Раскрыты ингибиторы киназы LIM 2 и способами их применения. Отдельные соединения имеют формулу (I)

Description

Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании заявки на патент США № 61/046602, поданной 21 апреля 2008, которая включена в настоящее описание в полном объеме посредством ссылки.

1. Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к ингибиторам киназы, композициям, содержащим их, и способам их применения для лечения различных заболеваний и нарушений.

2. Уровень техники

Протеинкиназы представляют собой класс ферментов, которые катализируют перенос γ-фосфатной группы от АТФ до белка реципиента. Оценивают, что геном человека кодирует более 500 различных протеинкиназ, многие из которых были вовлечены в широкий диапазон заболеваний и нарушений, включая рак и воспаление.

Киназы ЫМ (ЫМК) были связаны с р53 сигнальным путем. См., например, международная заявка номер АО 02/099048. ЫМК принадлежит к небольшому подсемейству киназ с уникальной комбинацией двух Ν-концевых ЫМ фрагментов и С-концевого домена протеинкиназы. Эти фрагменты ЫМ и домены киназы связаны с помощью пролин- и серинобогащенного участка, содержащего несколько предполагаемых киназ казеина и участков узнавания киназы митогенактивируемого белка. Полагают, что киназы ЫМ и их белки сигнальных путей, вносят свой вклад в Кйо-индуцированную реорганизацию актинового цитоскелета. 10. Члены семейства киназ ЫМ включают киназу ЫМ 1 (ЫМК1) и киназу ЫМ 2 (ЫМК2). Обе фосфорилируют кофилин и регулируют 1Ыо семействазависимую актинцитоскелетную перестановку. Ы.

Ингибиторы киназы ЫМ были предложены для лечения рака. 10. Также было предложено, что ингибиторы ЫМК могут быть пригодными при лечении глаукомы, стимулируя деполимеризацию актина в трабекулярных клетках и понижая глазное напряжение. См. международную заявку номер АО 04/047868. Текущие терапии глаукомы действуют с помощью различных механизмов. Аналоги простагландина Р2а (например, латанопрост) действуют на независимое увеличение внутриглазного давления (ВГД) при вытекании жидкости из глаза. Углеродные безводные ингибиторы (например, ацетазоламид), бета-блокаторы (например, тимолол), симпатомиметики (например, пилокарпин) и агонисты альфаадренергических рецепторов (например, бримонидин) уменьшают выработку внутриглазной жидкости.

Огромное число соединений с широким разнообразием хемотипов было заявлено в качестве ингибиторов киназы. Например, были раскрыты фенилзамещенные соединения пиримидина, которые по имеющимся сведениям являются пригодными в качестве ингибиторов ЫМК. См. международную заявку АО 2006/084017. Соединения на основе пиррол[2,3-0]пиримидина были раскрыты в качестве ингибиторов множества различных киназ. См., например, публикацию патента США № 2004/0058922; международную заявку АО 2007/125325; международную заявку АО 2007/125321; международную заявку АО 2006/046024; публикацию патента США номер 2005/0130954; и публикацию патента США номер 2006/0189638.

3. Сущность изобретения

Изобретение относится, в частности, к соединениям формулы

и их фармацевтически приемлемым солям, заместители которых определены в настоящем описании. Определенные соединения представляют собой сильные ингибиторы ЫМК2.

Один вариант осуществления изобретения охватывает способы применения соединений, раскрытых в настоящем описании, для лечения, контроля и предотвращения различных заболеваний и нарушений, связанных с ЫМК2, включая рак, воспалительные заболевания и нарушения и заболевания и нарушения, затрагивающие зрение (например, заболевания и нарушения глаз), такие как глаукома, нейродегенерация и инфекция.

4. Краткое описание чертежей

Фиг. 1 показывает эффект двух соединений при анализе глазной гипертензии, описанный в примерах ниже. Соединение А представляет собой соединение изобретения, дозируемое 3 мкг на глаз. Другое соединение, тимолол, дозировали 15 мкг на глаз. Данные для контрольного наполнителя представляют собой среднее значение восьми экспериментов, используя различные наполнители. Данные для соединения А представляют собой среднее значение восьми экспериментов, используя различные наполнители. Данные для тимолола представляют собой среднее значение двух экспериментов, полученные, используя коммерческий состав.

5. Подробное описание изобретения

Изобретение базируется, в частности, на открытии новых соединений, которые являются ингибиторами киназы ЫМ 2 (ЫМК2). Ингибиторы ЫМК2 могут применять для лечения, контроля и/или предот

- 1 019488 вращения различных заболеваний и нарушений глаза, таких как глаукома. См., например, заявку на патент США номер 12/188515, поданную 8 августа 2008. Предпочтительные соединения настоящего изобретения являются стабильными в растворе и, следовательно, могут быть включены в жидкие формы дозировки, такие как глазные капли. Кроме того, определенные соединения являются водорастворимыми.

5.1. Определения.

Если не указано иначе, термин алкенил означает с прямой цепью, разветвленный и/или циклический углеводород, имеющий от 2 до 20 (например, от 2 до 10 или от 2 до 6) атомов углерода и включающий по меньшей мере одну двойную связь углерод-углерод. Типичные группы алкенила включают винил, аллил, 1-бутенил, 2-бутенил, изобутиленил, 1-пентенил, 2-пентенил, 3-метил-1-бутенил, 2-метил-2бутенил, 2,3-диметил-2-бутенил, 1-гексенил, 2-гексенил, 3-гексенил, 1-гептенил, 2-гептенил, 3-гептенил, 1-октенил, 2-октенил, 3-октенил, 1-ноненил, 2-ноненил, 3-ноненил, 1-деценил, 2-деценил и 3-деценил.

Если не указано иначе, термин алкокси означает -О-алкильную группу. Примеры алкоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -ОСН₃, -ОСН₂СН₃, -О(СН₂)₂СН₃, -О(СН₂)₃СН₃, -О(СН₂)₄СН₃ и -О(СН2)5СН₃.

Если не указано иначе, термин алкил означает с прямой цепью, разветвленный и/или циклический (циклоалкил) углеводород, имеющий от 1 до 20 (например, от 1 до 10 или от 1 до 4) атомов углерода. Алкильные группы, содержащие от 1 до 4 углеродов, называются как низшие алкилы. Примеры алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, третбутил, изобутил, пентил, гексил, изогексил, гептил, 4,4-диметилпентил, октил, 2,2,4-триметилпентил, нонил, децил, ундецил и додецил. Циклоалкильные группы могут быть моноциклическими или полициклическими, и примеры включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и адамантил. Дополнительные примеры алкильных групп имеют линейные, разветвленные и/или циклические части (например, 1-этил-4-метил-циклогексил). Термин алкил включает насыщенные углеводороды, также как алкенильные и алкинильные группы.

Если не указано иначе, термин алкиларил или алкил-арил означает алкильную группу, связанную с арильной группой.

Если не указано иначе, термин алкилгетероарил или алкил-гетероарил означает алкильную группу, связанную с гетероарильной группой.

Если не указано иначе, термин алкилгетероцикл или алкил-гетероцикл означает алкильную группу, связанную с гетероциклической группой.

Если не указано иначе, термин алкинил означает с прямой цепью, разветвленный и/или циклический углеводород, имеющий от 2 до 20 (например, от 2 до 20 или от 2 до 6) атомов углерода и включающий по меньшей мере одну тройную связь углерод-углерод. Типичные алкинильные группы включают ацетиленил, пропинил, 1-бутинил, 2-бутинил, 1-пентинил, 2-пентинил, 3-метил-1-бутинил, 4-пентинил, 1-гексинил, 2-гексинил, 5-гексинил, 1-гептинил, 2-гептинил, 6-гептинил, 1-октинил, 2-октинил, 7октинил, 1-нонинил, 2-нонинил, 8-нонинил, 1-децинил, 2-децинил и 9-децинил.

Если не указано иначе, термин арил означает ароматическое кольцо или ароматическую или частично ароматическую кольцевую систему, составленную из атомов углерода и водорода. Арильная группа может содержать многочисленные кольца, связанные или соединенные вместе. Примеры арильных групп включают, но не ограничиваются ими, антраценил, азуленил, бифенил, флуоренил, индан, инденил, нафтил, фенантренил, фенил, 1,2,3,4-тетрагидронафталин и толил.

Если не указано иначе, термин арилалкил или арил-алкил означает арильную группу, связанную с алкильной группой.

Если не указано иначе, термины галоген и гало охватывают фтор, хлор, бром и иод.

Если не указано иначе, термин гетероалкил относится к алкильной группе (например, линейной, разветвленной или циклической), в которой, по меньшей мере, один из ее атомов углерода замещен гетероатомом (например, Ν, О или 8).

Если не указано иначе, термин гетероалкиларил или гетероалкил-арил относится к гетероалкильной группе, связанной с алкильной группой.

Если не указано иначе, термин гетероалкилгетероцикл или гетероалкил-гетероцикл относится к гетероалкильной группе, связанной с гетероциклической группой.

Если не указано иначе, термин гетероарил означает арильную группу, в которой по меньшей мере один из ее атомов углерода замещен гетероатомом (например, Ν, О или 8). Примеры включают, но не ограничиваются ими, акридинил, бензимидазолил, бензофуранил, бензоизотиазолил, бензоизоксазолил, бензохиназолинил, бензотиазолил, бензоксазолил, фурил, имидазолил, индолил, изотиазолил, изоксазолил, оксадиазолил, оксазолил, фталазинил, пиразинил, пиразолил, пиридазинил, пиридил, пиримидинил, пиримидил, пирролил, хиназолинил, хинолинил, тетразолил, тиазолил и триазинил.

Если не указано иначе, термин гетероарилалкил или гетероарил-алкил означает гетероарильную группу, связанную с алкильной группой.

Если не указано иначе, термин гетероцикл относится к ароматическому, частично ароматическому или неароматическому моноциклическому или полициклическому кольцу или кольцевой системе,

- 2 019488 состоящей из углерода, водорода и по меньшей мере одного гетероатома (например, Ν, О или 8). Гетероцикл может содержать многочисленные (то есть, два или более) кольца, соединенные или связанные вместе. Гетероциклы включают гетероарилы. Примеры включают, но не ограничиваются ими, бензо[1,3] диоксолил, 2,3-дигидробензо[1,4]диоксинил, циннолинил, фуранил, гидантоинил, морфолинил, оксетанил, оксиранил, пиперазинил, пиперидинил, пирролидинонил, пирролидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, тетрагидропиридинил, тетрагидропиримидинил, тетрагидротиофенил, тетрагидротиопиранил и валеролактамил.

Если не указано иначе, термин гетероциклалкил или гетероцикл-алкил относится к гетероциклической группе, связанной с алкильной группой.

Если не указано иначе, термин гетероциклоалкил относится к неароматическому гетероциклу.

Если не указано иначе, термин гетероциклоалкилалкил или гетероциклоалкил-алкил относится к гетероциклоалкильной группе, связанной с алкильной группой.

Если не указано иначе, термин 'ΈΙΜΚ2 1С₅₀ представляет собой 1С₅₀ определяемого соединения, используя ίη νίίτο анализ ингибирования человеческой киназы Ь1М 2, описанный в примерах ниже.

Если не указано иначе, термины контролировать, контролирующий и контроль охватывают предотвращение повторного появления указанного заболевания или нарушения у пациента, который уже имел заболевание или нарушение, и/или удлинение времени, при котором пациент, который пострадал от заболевания или нарушения, остается в ремиссии. Термины охватывают модулирование пороговой величины, развитие и/или протекание заболевания или нарушения, или изменение пути, при котором пациент реагирует на заболевание или нарушение.

Если не указано иначе, термин фармацевтически приемлемые соли относится к солям, полученным из фармацевтически приемлемых нетоксичных кислот или оснований, включая неорганические кислоты и основания и органические кислоты и основания. Подходящие фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли включают, но не ограничиваются ими, соли металлов, полученные из алюминия, кальция, лития, магния, калия, натрия и цинка, или органические соли, полученные из лизина, Ν,Ν'дибензилэтилендиамина, хлоропрокаина, холина, диэтаноламина, этилендиамина, меглумина (Νметилглюкамина) и прокаина. Подходящие нетоксичные кислоты включают, но не ограничиваются ими, неорганические и органические кислоты, такие как уксусная, альгиновая, аминобензойная, бензолсульфоновая, бензойная, камфорсульфоновая, лимонная, этенсульфоновая, муравьиная, фумаровая, фуранкарбоновая, галактуроновая, глюконовая, глюкуроновая, глутаминовая, гликолевая, бромисто-водородная, хлористо-водородная, изэтиновая, молочная, малеиновая, яблочная, миндальная, метансульфоновая, муциновая, азотная, памовая, пантотеновая, фенилуксусная, фосфорная, пропионовая, салициловая, стеариновая, янтарная, сульфаниловая, серная, винная кислота и п-толуолсульфоновая кислота. Определенные нетоксичные кислоты включают хлористо-водородную, бромисто-водородную, фосфорную, серную и метансульфоновую кислоты. Примеры определенных солей, таким образом, включают соли гидрохлорида и мезилата. Другие являются хорошо известными в данной области техники. См., например, Кетίη^ΐοη'δ Рйагтасеибса1 8с1епсе5, 18⁴¹¹ еб. (Маск РиЫщЫпд, ЕахЮп РА: 1990) апб КетшдШп: Тке 8с1епсе апб Ргасбсе οί Ркагтасу. 19⁴¹¹ еб. (Маск РиЫЬЫпд, Еайоп РА: 1995).

Если не указано иначе, сильный ингибитор ЫМК2 представляет собой соединение, которое имеет ЫМК2 1С₅₀ менее чем приблизительно 250 нм.

Если не указано иначе, термины предотвращают, предотвращающий и предотвращение рассматривают действие, которое происходит прежде, чем пациент начинает страдать от указанного заболевания или нарушения, которое ингибирует или сокращает тяжесть заболевания или нарушения. Другими словами, термины охватывают профилактику.

Если не указано иначе, профилактически эффективное количество соединения представляет собой количество, достаточное для предотвращения заболевания или нарушения или одного или более симптомов, связанных с заболеванием или нарушением, или предотвращения его повторного проявления. Профилактически эффективное количество соединения означает количество терапевтического агента, отдельно или в комбинации с другими агентами, которое обеспечивает профилактическое преимущество при предотвращении заболевания. Термин профилактически эффективное количество может охватывать количество, которое улучшает общую профилактику или увеличивает профилактическую эффективность другого профилактического агента.

Если не указано иначе, термин стереоизомерная смесь охватывает рацемические смеси, также как стереоизомерно обогащенные смеси (например, К/8 = 30/70, 35/65, 40/60, 45/55, 55/45, 60/40, 65/35 и 70/30).

Если не указано иначе, термин стереоизомерно чистый означает композицию, которая содержит один стереоизомер соединения и является, по существу, свободной от других стереоизомеров того соединения. Например, стереоизомерно чистая композиция соединения, имеющая один стереоцентр, будет по существу свободной от противоположного стереоизомера соединения. Стереоизомерно чистая композиция соединения, имеющая два стереоцентра, будет, по существу, свободной от других диастереомеров соединения. Типичное стереоизомерно чистое соединение содержит более чем приблизительно 80 вес.% одного стереоизомера соединения и менее чем приблизительно 20 вес.% других стереоизомеров соеди

- 3 019488 нения, более чем приблизительно 90 вес.% одного стереоизомера соединения и менее чем приблизительно 10 вес.% других стереоизомеров соединения, более чем приблизительно 95 вес.% одного стереоизомера соединения и менее чем приблизительно 5 вес.% других стереоизомеров соединения, более чем приблизительно 97 вес.% одного стереоизомера соединения и менее чем приблизительно 3 вес.% других стереоизомеров соединения или более чем приблизительно 99 вес.% одного стереоизомера соединения и менее чем приблизительно 1 вес.% других стереоизомеров соединения.

Если не указано иначе, термин замещенный при использовании для описания химической структуры или группы относится к производному той структуры или группы, в котором один или более его атомов водорода замещены химической группой или функциональной группой, такой как, но не ограничиваясь ими, спирт, альдегид, алкокси, алканоилокси, алкоксикарбонил, алкенил, алкил (например, метил, этил, пропил, трет-бутил), алкинил, алкилкарбонилокси (-ОС(О)алкил), амид (например, С(О)ЯНалкил-, -алкил-NΗС(О)алкил), амидинил (например, С(NΗ)NΗ-алкил-, -ί.'(ΝΚ.)ΝΗ₂). амин (первичный, вторичный и третичный, такой как алкиламино, ариламино, арилалкиламино), ароил, арил, арилокси, азо, карбамоил (например, -ЯНС(О)О-алкил-, -ОС(О)ЯН-алкил), карбамил (например, СОЯН₂, СОЯН-алкил, СОЯН-арил, СОЯН-арилалкил), карбонил, карбоксил, карбоновая кислота, ангидрид карбоновой кислоты, хлорид карбоновой кислоты, циано, сложный эфир, эпоксид, эфир (например, метокси, этокси), гуанидино, гало, галоалкил (например, -СС1₃, -СЕ₃, -С(СЕ₃)₃), гетероалкил, гемиацеталь, имин (первичный и вторичный), изоцианат, изотиоцианат, кетон, нитрил, нитро, оксо, фосфодиэфир, сульфид, сульфонамидо (например, §О₂ЯН₂), сульфон, сульфонил (включая алкилсульфонил, арилсульфонил и арилалкилсульфонил), сульфоксид, тиол (например, сульфгидрил, тиоэфир) и мочевина (например, -ЯНСОЯН-алкил-).

Если не указано иначе, терапевтически эффективное количество соединения представляет собой количество, достаточное для обеспечения терапевтической полезности при лечении или контроле заболевания или состояния, или задержки или минимизирования одного или более симптомов, связанных с заболеванием или состоянием. Терапевтически эффективное количество соединения означает количество терапевтического агента, отдельно или в комбинации с другими терапиями, которое обеспечивает терапевтическую выгоду при лечении или контроле заболевания или состояния. Термин терапевтически эффективное количество может охватить количество, которое улучшает общую терапию, сокращает или уничтожает симптомы или причины заболевания или состояния, или увеличивает терапевтическую эффективность другого терапевтического агента.

Если не указано иначе, термины лечить, лечащий и лечение рассматривают действие, которое происходит в то время, как пациент страдает от указанного заболевания или нарушения, которое уменьшает тяжесть заболевания или нарушения или задерживает или замедляет прогрессирование заболевания или нарушения.

Если не указано иначе, термин включают имеет то же самое значение, как включают, но не ограничиваются ими и термин включает имеет то же самое значение, как включает, но не ограничивается ими. Точно так же термин такой как имеет то же самое значение, как термин такой как, но не ограничиваясь ими.

Если не указано иначе, одно или более прилагательных, непосредственно предшествующих ряду существительных, должно быть рассмотрено как применение к каждому из существительных. Например, фраза необязательно замещенный алкилом, арилом или гетероарилом имеет то же самое значение как необязательно замещенный алкилом, необязательно замещенный арилом или необязательно замещенный гетероарилом.

Следует отметить, что химическая группа, которая образует часть большего соединения, может быть описана в настоящей заявке, используя название, обычно представляющее его, когда оно существует в виде единичной молекулы, или название, обычно представляющее его радикал. Например, термины пиридин и пиридил представляют одинаковое значение при использовании для описания группы, присоединенной к другим химическим группам. Таким образом, две фразы ХОН, в которой X представляет собой пиридил и ХОН, в которой X представляет собой пиридин имеют одинаковое значение и охватывают соединения пиридин-2-ол, пиридин-3-ол и пиридин-4-ол.

Следует также отметить, что, если стереохимия структуры или части структуры не обозначена, например, жирными или пунктирными линиями, структура или часть структуры должна интерпретироваться как охватывающая все ее стереоизомеры. Кроме того, предполагают, что любой атом, показанный на рисунке, с ненасыщенной валентностью, присоединяет достаточно атомов водорода, чтобы соблюдать валентность. Кроме того, химические связи, изображенные с одной жирной линией, параллельной одной пунктирной линии, охватывают и одинарную, и двойную (например, ароматическую) связь, если позволяют валентности.

5.2. Соединения.

Настоящее изобретение охватывает соединения формулы

- 4 019488

и их фармацевтически приемлемые соли, в которой: А представляет собой необязательно замещенный фенил;

К, представляет собой водород, галоген, циано или необязательно замещенный алкил;

К₂ представляет собой водород;

К₃ представляет собой К_3А, ОК_3В или Ν(Β_3Β)₂;

каждый К_3А представляет собой необязательно замещенный алкил, алкилфенил, фенил или гетероалкил;

каждый К_3В представляет собой независимо водород или необязательно замещенный алкил;

каждый Кд представляет собой независимо галоген, ОЕ._1Л. ΘΟ(Θ)Ν(Ε._1Λ)₂. 8О₂Е._1А или необязательно замещенный алкил, гетероалкил или гетероарил;

каждый К_4А представляет собой независимо водород или необязательно замещенный алкил; и η представляет собой 0 или 1;

с условием, что когда К, и К₂ оба представляют собой водород, К₄ не является галогеном.

В определенном варианте осуществления соединение представляет собой такое, что: 1) каждый К_4Апредставляет собой независимо водород или необязательно замещенный алкил; и 2) когда К, и К₂ оба представляют собой водород и А представляет собой фенил, К₄ не является галогеном.

В одном варианте осуществления А представляет собой необязательно замещенный фенил.

В одном варианте осуществления К1 представляет собой водород, галоген, циано или необязательно замещенный низший алкил. В определенном варианте осуществления К, представляет собой водород. В другом К1 представляет собой галоген (например, хлор). В другом К1 представляет собой необязательно замещенный низший алкил (например, метил).

В одном варианте осуществления К₂ представляет собой водород.

В одном варианте осуществления К₃ представляет собой К_3А, ОК_3В, или Ν(Β_3Β)₂. В определенном варианте осуществления К₃ представляет собой К_3А и К_3А представляет собой необязательно замещенный алкил, алкилфенил, фенил или гетероалкил. В определенном варианте осуществления К_3А представляет собой необязательно замещенный алкил. В другом К_3А представляет собой необязательно замещенный алкилфенил. В другом К_3А представляет собой необязательно замещенный гетероалкил. В определенном варианте осуществления К₃ представляет собой ОК_3В или Ν(Β_3Β)₂ и К_3В представляет собой водород или необязательно замещенный алкил. В определенном варианте осуществления К_3В представляет собой водород. В другом К3В представляет собой необязательно замещенный алкил.

В одном варианте осуществления К₄ представляет собой галоген. В другом К₄ представляет собой ОЩО^^К^Ь и по меньшей мере один К_4А представляет собой, например, низший алкил (например, метил).

Определенные соединения изобретения являются сильными ингибиторами ЫМК2. Определенные соединения имеют ЫМК2 1С₅₀ менее чем приблизительно 100, 75, 50, 25 или 10 нМ.

5.3. Способы синтеза.

Соединения изобретения могут получить с помощью способов, известных в данной области техники. См., например, публикации патентов США 2004/0058922 и 2005/0130954.

Пирролопиримидины могут получить с помощью множества способов, известных в данной области техники. См., например, \Уек1 1. Отд. Сйет. 26:4959 (1961); Аопо е! а1., ЕР 0733633-В1. Один подход описан в заявке на патент США № 11/876051, поданной 22 октября 2007 и показанной ниже в схеме 1.

Схема 1

Результирующее соединение 4-гидроксипирроло[2,3-4]пиримидин затем превращают в соответствующее 4-хлор соединение (соединение £ на схеме 2, ниже), используя способы, известные в данной области техники. См., например, \Уек1 1. Огд. Сйет. 26:4959 (1961). Такое соединение затем используют для получения соединений изобретения, как показано ниже на схеме 2.

- 5 019488

Схема 2

и

В способе, представленном на схеме 2, коммерчески доступный 1-трет-бутил-4-этилпиперидин-1,4дикарбоксилат (а) алкилируют с помощью соответствующего основания (например, лития диизопропиламид) и алкилирующего агента (например, алкилбромид или хлорид) с получением соединения Ь. Другие соединения формулы Ь являются коммерчески доступными. Гидролиз соединения Ь с основанием, таким как ЫОН или ΝαΟΗ в водном растворе дает карбоновую кислоту с, которая может быть соединена с аминами формулы ΝΗ₂Α, используя подходящие реагенты (например, НАТИ с диизопропилэтиламином в изопропилацетате) с получением амида б. Обработка соединения б подходящей кислотой (например, НС1 в МеОН или ТГА в СН₂С1₂) удаляет Вос группу с получением амина е. Нагревание амина е и хлорида ί с соответствующим основанием (например, диизопропилэтиламин) в соответствующем растворителе (например, изопропанол, изобутанол) позволяет получить соединение 11. При необходимости могут использовать известные способы для превращения такого соединения в различные другие, охваченные согласно настоящему изобретению.

5.4. Способы применения.

Настоящее изобретение охватывает способ ингибирования ЫМК2, который включает взаимодействие ЫМК2 с сильным ингибитором ЫМК2. Предпочтительные сильные ингибиторы ЫМК2 представляют собой соединения изобретения, (то есть, соединения, раскрытые в настоящем описании).

Определенный вариант осуществления охватывает способ лечения, контроля или предотвращения воспалительного заболевания или нарушения у пациента, который включает введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически или профилактически эффективного количества соединения изобретения.

Другой вариант осуществления охватывает способ лечения, контроля или предотвращения рака у пациента, который включает введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически или профилактически эффективного количества соединения изобретения.

Другой вариант осуществления охватывает способ понижения внутриглазного давления у пациента, который включает ингибирование активности или экспрессии ЫМК2 у пациента, нуждающегося в таком лечении. В одном способе активность ЫМК2 ингибируют с помощью взаимодействия глаза пациента с сильным ингибитором ЫМК2. Определенные сильные ингибиторы ЫМК2 раскрыты в настоящем описании. В другом способе экспрессию ЫМК2 ингибируют с помощью введения в глаз пациента соединения (например, миРНК), которое ингибирует экспрессию ЫМК2.

Другой вариант осуществления охватывает способ лечения, контроля или предотвращения заболевания или нарушения, затрагивающего зрение у пациента, который включает ингибирование активности или экспрессии ЫМК2 у пациента, нуждающегося в таком лечении. В одном способе активность ЫМК2 ингибируют с помощью взаимодействия глаза пациента с сильным ингибитором ЫМК2. Определенные сильные ингибиторы ЫМК2 раскрыты в настоящем описании. Заболевания и нарушения, затрагивающие зрение, включают глаукому, нейродегенеративные заболевания и инфекционные заболевания.

6. Примеры.

Аспекты настоящего изобретения можно понять из следующих примеров, которые не ограничива ют его возможности.

6.1. Пример 1. Синтез 1-(5-хлор-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)-№(3-(4-фторфенокси)фенил)-4метилпиперидин-4-карбоксамида

- 6 019488

A. Получение трет-бутил 4-(3-(4-фторфенокси)фенилкарбамоил)-4-метилпиперидин-1карбоксилата.

1-(трет-бутоксикарбонил)-4-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту (243 мг, 1,0 ммоль), 3-(4фторфенокси)анилин (203 мг, 1,0 ммоль), ДЦК (20 6 мг, 1,0 ммоль) и НОА1 (138 мг, 1,01 ммоль) объединяли в Е1ОАс (50 мл) и ДМФ (5 мл). Реакционную смесь нагревали при 80°С в течение 20 ч. Большую часть Е1ОАс испаряли, приводя к осаждению твердого вещества, которое удаляли с помощью фильтрования. Фильтрат растворяли Е1ОАс, промывали 1н. водн. НС1 и солевым раствором, высушивали и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 429.

B. Получение Ы-(3-(4-фторфенокси)фенил)-4-метилпиперидин-4-карбоксамида.

Трет-бутил 4-(3-(4-фторфенокси)фенилкарбамоил)-4-метилпиперидин-1-карбоксилат из стадии А обрабатывали 4н. НС1 в диоксане в течение 16 ч при комнатной температуре. Продукт выделяли с помощью фильтрования и промывали эфиром для получения указанного в заголовке соединения (206 мг, 56% за две стадии) в виде соли гидрохлорида. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 329.

C. Получение 4,5-дихлор-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидина.

К раствору 4-хлор-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидина (154 мг, 1,0 ммоль) в СН₂С1₂ (6 мл) добавляли ЫС8 (134 мг, 1,0 ммоль). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 18 ч, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения, которое переносили в неочищенном виде. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 189.

Ό. Получение 1-(5-хлор-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)-Ы-(3-(4-фторфенокси)фенил)-4метилпиперидин-4-карбоксамида.

Ы-(3-(4-фторфенокси)фенил)-4-метилпиперидин-4-карбоксамид из стадии В (50 мг, 0,13 ммоль), 4,5-дихлор-7Н-пирроло[2,3-й] пиримидин из стадии С (19 мг, 0,1 ммоль) и триэтиламин (0,04 мл, 0,3 ммоль) объединяли в изопропаноле (1 мл) и нагревали при 130°С в течение 30 мин при микроволновых условиях. Продукт выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения.

Ή ЯМР (СЛзОЛ): δ 8,22 (с, 1Н), 7,30-7,35 (м, 4Н), 7,03-7,14 (м, 4Н), 6,73-6,76 (м, 1Н), 3,96-4,02 (м, 2Н), 3,44-3,51 (м, 2Н), 2,35-2,38 (м, 2Н), 1,74-1,81 (м, 2Н), 1,38 (с, 3Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 480.

6.2. Пример 2. Синтез 1-(5-бром-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)-Ы-(3-(4-фторфенокси)фенил)4-метилпиперидин-4-карбоксамида

A. Получение 5-бром-4-хлор-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидина.

К раствору 4-хлор-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидина (1,2 г, 7,8 ммоль) в СН₂С1₂ (25 мл) добавляли Νбромацетамид (1,2 г, 8,7 ммоль) в СН2С12 (25 мл). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 40 мин, затем концентрировали и промывали холодной водой. Неочищенный продукт перекристаллизовывали из минимального количества изопропанола и высушивали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (82%) в виде светло-серого твердого вещества. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 232.

B. Получение 1-(5-бром-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)-№(3-(4-фторфенокси)фенил)-4-метилпиперидин-4-карбоксамида.

К раствору №(3-(4-фторфенокси)фенил)-4-метилпиперидин-4-карбоксамида из примера 1, стадии В (36 мг, 0,1 ммоль) в изопропаноле (1 мл) добавляли 5-бром-4-хлор-7Н-пирроло[2,3-й] пиримидин из стадии А (24 мг, 0,1 ммоль) и тризтиламин (0,04 мл, 0,3 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 10 мин при микроволновых условиях и затем концентрировали под вакуумом. Продукт выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения.

Ή ЯМР (СЛ₃ОЛ): δ 8,21 (с, 1Н), 7,22-7,35 (м, 4Н), 6,98-7,17 (м, 4Н), 6,72-6,77 (м, 1Н), 3,84-3,95 (м, 2Н), 3,32-3,51 (м, 2Н), 2,30-2,40 (м, 2Н), 1,72-1,85 (м, 2Н), 1,38 (с, 3Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 525.

6.3. Пример 3. Синтез №(3-(4-фторфенокси)фенил)-4-метил-1-(7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4ил)пиперидин-4-карбоксамида.

К раствору №(3-(4-фторфенокси)фенил)-4-метилпиперидин-4-карбоксамида из примера 1, стадии В (20 мг, 0,05 ммоль) в изопропаноле (1 мл) добавляли 4-хлор-7Н-пирроло[2,3-й] пиримидин (15 мг, 0,1

- 7 019488 ммоль) и триэтиламин (0,04 мл, 0,3 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 180°С в течение 30 мин при микроволновых условиях и затем концентрировали под вакуумом. Продукт выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения.

¹Н ЯМР (С1+О1)): δ 8,01 (с, 1Н), 7,18-7,23 (м, 3Н), 6,91-7,16 (м, 5Н), 6,65-6,68 (д, 1Н), 6,51-6,53 (д, 1Н), 4,12-4,25 (м, 2Н), 3,351-3,62 (м, 2Н), 2,13-2,28 (м, 2Н), 1,50-1,60 (м, 2Н), 1,25 (с, 3Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 447.

6.4. Пример 4. Синтез Ы-(3-трет-бутилфенил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)-4фенилпиперидин-4-карбоксамида.

A. Получение 4-фенилпиперидин-4-карбоновой кислоты.

1-(трет-бутоксикарбонил)-4-фенилпиперидин-4-карбоновую кислоту (1,0 г, 3,3 ммоль) обрабатывали с 4н. НС1 в диоксане (20 мл) в течение 2 ч при комнатной температуре. Продукт выделяли с помощью фильтрования с получением указанного в заголовке соединения (0,74 г, 93%) в виде белого твердого вещества. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 206.

B. Получение 1 -(5-метил-4,7-дигидро-3Н-пирроло [2,3-б]пиримидин-4-ил)-4-фенилпиперидин-4карбоновой кислоты.

К раствору 4-фенилпиперидин-4-карбоновой кислоты из стадии А (0,74 г, 3,1 ммоль) в изопропаноле (10 мл) добавляли 4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин (0,52 г, 3,1 ммоль) и триэтиламин (1,0 мл, 9,8 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 180°С в течение 180 мин при микроволновых условиях и затем концентрировали под вакуумом. Осадок растворяли в ледяной воде и нейтрализовали до рН 4 с помощью добавления 1н. водн. НС1. Продукт выделяли с помощью фильтрования и высушивали под вакуумом в течение 3 ч при 65°С с получением указанного в заголовке соединения (62%) в виде коричневого твердого вещества. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 336.

C. Получение Ы-(3-трет-бутилфенил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)-4-фенилпиперидин-4-карбоксамида.

К раствору 1-(5-метил-4,7-дигидро-3Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)-4-фенилпиперидин-4-карбоновой кислоты из стадии В (33 мг, 0,1 ммоль) в ДМФ (2 мл) добавляли 3-трет-бутиланилин (15 мг, 1,0 ммоль), ВОР (50 мг, 0,11 ммоль) и триэтиламин (0,04 мл, 0,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч и продукт амида выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения.

Ή ЯМР (СЭзОЭ): δ 8,20 (с, 1Н), 7,16-7,57 (м, 9Н), 7,01 (с, 1Н), 3,90-3,94 (д, 2Н), 3,45-3,52 (т, 2Н), 2,73-2,78 (д, 2Н), 2,46 (с, 3Н), 2,28-2,35 (т, 2Н), 1,30 (с, 9Н); М8 (Е8+)[М+Н]⁺ = 468.

6.5. Пример 5. Синтез 4-аллил-Ы-(3-хлорфенил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4ил)пиперидин-4-карбоксамида.

С1

A. Получение трет-бутил-4-аллил-4-(3-хлорфенилкарбамоил)пиперидин-1-карбоксилата.

Под атмосферой Ν₂ 4-аллил-1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-карбоновую кислоту (0,158 г, 0,586 ммоль), пиридин (0,189 мл, 2,34 ммоль) и ДМФ (3 капли) растворяли в СН₂С1₂ (10 мл) и охлаждали на ледяной бане. К охлажденному раствору по каплям добавляли оксалилхлорид (0,056 мл, 0,645 ммоль). Реакцию перемешивали в течение 40 мин, после этого времени добавляли 3-хлоранилин (0,061 мл, 0,586 ммоль). Реакцию удаляли из ледяной бани и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Неочищенную реакционную смесь промывали 1н. водн. НС1 и солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (градиент этилацетат/гексан) с получением указанного в заголовке соединения с выходом 51%. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 379.

B. Получение 4-аллил-№(3-хлорфенил) пиперидин-4-карбоксамида.

К раствору трет-бутил-4-аллил-4-(3-хлорфенилкарбамоил)пиперидин-1-карбоксилата из стадии А (0,172 г, 0,453 ммоль) в МеОН (10 мл) добавляли 4М НС1 в диоксане (0,340 мл, 1,36 ммоль). Реакцию нагревали при 50°С в течение 30 мин и затем концентрировали под вакуумом, повторно растворяли в МеОН и повторно концентрировали дважды с получением указанного в заголовке соединения в виде соли гидрохлорида. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 279.

- 8 019488

С. Получение 4-аллил-№(3-хлорфенил)-1 -(5-метил-7Н-пирроло [2,3-0]пиримидин-4-ил)пиперидин4-карбоксамида.

4-Аллил-А-(3-хлорфенил) пиперидин-4-карбоксамид из стадии В (0,142 г, 0,453 ммоль), 4-хлор-5метил-7Н-пирроло[2,3-0] пиримидин (0,075 г, 0,453 ммоль), Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,236 мл, 1,35 ммоль) и изопропанол (5 мл) объединяли и нагревали при 120°С в течение ночи в сосуде под давлением. Неочищенную реакционную смесь растворяли в СН₂С1₂, промывали Н₂О и солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (градиент МеОН:СН₂С1₂) с получением указанного в заголовке соединения с выходом 61%.

¹Н ЯМР (400 МГц, СЭзОЭ) δ м.д. 8,19 (с, 1Н), 7,73 (с, 1Н), 7,48 (д, 1=8 Гц, 1Н), 7,32 (т, 1=8, 16 Гц, 1Н), 7,14 (д, 1=8 Гц, 1Н), 7,00 (с, 1Н), 5,78-5,88 (м, 1Н), 5,11-5,16 (м, 2Н), 3,91 (д, 1=13,6 Гц, 2Н), 3,24-3,30 (м, 2Н), 2,50 (д, 1=7,6 Гц, 2Н), 2,45 (с, 3Н), 2,41 (д, 1=13,6 Гц, 2Н), 1,80-1,86 (м, 2Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 410.

6.6. Пример 6. Синтез №(3-метоксифенил)-4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-4ил)пиперидин-4-карбоксамида.

A. Получение 4-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты.

1-(трет-Бутоксикарбонил)-4-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту (0,500 г, 2,06 ммоль) обрабатывали с 4 М НС1 в диоксане (10 мл) в течение 2 ч при комнатной температуре с получением указанного в заголовке соединения (0,294 г, 100%) в виде соли гидрохлорида. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 144,0.

B. Получение 4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоновой кислоты.

К раствору 4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-0] пиримидина (0,274 г, 1,64 ммоль) в изопропаноле (10 мл) добавляли 4-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту хлористо-водородную кислоту из стадии А (0,294 г, 1,64 ммоль) и триэтиламин (0,654 мл, 4,92 ммоль). Реакцию нагревали при 180°С в течение 1 ч при микроволновых условиях, концентрировали, поглощали ледяной водой и нейтрализовали при рН 3 с помощью 6н. водн. НС1 для осаждения продукта. Продукт собирали с помощью фильтрования и высушивали под вакуумом в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения (0,42 г, 75%) в виде серого твердого вещества. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 275,2.

C. Получение №(3-метоксифенил)-4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-4-ил)пиперидин-4 -карбоксамида.

К раствору 4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбновой кислоты из стадии В (0,020 г, 0,073 ммоль) в ДМФ (1 мл) добавляли реактив ВОР (0,065 г, 0,15 ммоль), триэтиламин (0,019 мл, 0,15 ммоль) и 3-метоксианилин (0,012 мл, 0,11 ммоль). Реакцию перемешивали в течение ночи и затем концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (0,091 г, 33%).

Ή ЯМР (СЭ₃ОЭ): δ 8,07 (1Н, уш.с), 7,00-7,17 (3Н, м), 6,89 (1Н, с), 6,58-6,61 (1Н, с), 3,62-3,72 (5Н, м), 3,22-3,34 (2Н, м), 2,12-2,33 (5Н, м), 1,62-1,71 (2Н, м), 1,29 (3Н, с); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 380,1.

6.7. Пример 7. Синтез 4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-4-ил)-№п-толилпиперидин-4 -карбоксамида.

К раствору 4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоновой кислоты из примера 6, стадии В (0,020 г, 0,073 ммоль) в ДМФ (1 мл) добавляли реактив ВОР (0,065 г, 0,15 ммоль), триэтиламин (0,019 мл, 0,15 ммоль) и 4-метиланилин (0,012 мл, 0,11 ммоль). Реакцию перемешивали в течение ночи и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (0,0133 г, 50%).

Ή ЯМР (СЭ₃ОЭ): δ 8,07 (1Н, уш.с), 7,31 (2Н, 1=8,4 Гц, д), 7,04 (2Н, 1=8,4 Гц, д), 6,89 (1Н, с), 3,683,73 (2Н, м), 3,21-3,44 (2Н, м), 2,21-2,33 (8Н, м), 1,62-1,71 (2Н, м), 1,29 (3Н, с); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 364,2.

6.8. Пример 8.

Синтез N-(3 -изопропилкарбамоил)фенил-4-метил-1 -(5-метил-7Н-пирроло [2,3-0]пиримидин-4-ил) пиперидин-4-карбоксамида.

- 9 019488

К раствору 4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоновой кислоты из примера 6, стадии В (0,030 г, 0,11 ммоль) в ДМФ (1 мл) добавляли НАТИ (0,042 г, 0,11 ммоль), триэтиламин (0,028 мл, 0,22 ммоль) и 3-амино-Ы-изопропилбензамид (0,029 мг, 0,17 ммоль). Реакцию перемешивали при 50°С в течение 48 ч и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (0,023 г, 48%).

Ή ЯМР (СЭзОЭ): δ 8,19 (1Н, с), 7,99 (1Н, м), 7,7-7,72 (1Н, м), 7,56-7,58 (1Н, м), 7,41-7,43 (1Н, 1=8 Гц и 15,6 Гц, дд), 7,00 (1Н, 1=0,8 Гц, д), 4,20-4,23 (1Н, м), 3,79-3,85 (2Н, м), 3,36-3,46 (2Н, м), 2,38-2,44 (5Н, м), 1,76-1,83 (2Н, м), 1,42 (3Н, с), 1,268 (6Н, 1=6,8 Гц, д); Μδ (Εδ+) [М+Н]⁺ = 435.

6.9. Пример 9. Синтез Ы-(3-трет-бутилфенил)-4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4ил)пиперидин-4-карбоксамида

A. Получение трет-бутил-4-(3-трет-бутилфенилкарбамоил)-4-метилпиперидин-1-карбоксилата.

К раствору 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты (0,30 г, 1,2 ммоль), ДМФ (20 капель) и пиридина (0,38 г, 4,8 ммоль) в дихлорэтане (10 мл) добавляли оксалилхлорид (0,15 г, 1,2 ммоль). Смесь перемешивали в течение 40 мин и добавляли 3-трет-бутиланилин. Смесь перемешивали в течение 1 ч, разбавляли дихлорметаном, промывали дважды каждый раз нас. водн. №1НСО₃ и 1,0н. водн. НС1, высушивали над Мд§О₄ и концентрировали. Хроматография на силикагеле (0-2% МеОН:СН₂С1₂) давала указанное в заголовке соединение с выходом 61%. Μδ (Εδ+) [М+Н]⁺ = 375.

B. Получение Ы-(3-трет-бутилфенил)-4-метилпиперидин-4-карбоксамида.

трет-Бутил-4-(3-трет-бутилфенилкарбамоил)-4-метилпиперидин-1-карбоксилат из стадии А (0,4 г, 1,07 ммоль) обрабатывали НС1 (4,0н в диоксане, 1,3 мл, 5,34 ммоль) в метаноле (5,0 мл) при 50°С в течение 30 мин. Смесь концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде соли гидрохлорида с количественным выходом. Μδ (Εδ+) [М+Н] ⁺ = 275.

C. Ы-(3-трет-бутилфенил)-4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамид.

Ы-(3-трет-Бутилфенил)-4-метилпиперидин-4-карбоксамид из стадии В (0,33 г, 1,07 ммоль), 4-хлор5-метил-7Н-пирроло[2,3-б] пиримидин (0,18 г, 1,07 ммоль), Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,69 г, 5,34 ммоль) и изопропанол (7 мл) объединяли в запаянную трубку высокого давления и нагревали при 100°С в течение 18 ч. Смесь концентрировали и поглощали дихлорметаном, из которого собирали осадок (0,18 г). Раствор подвергали хроматографии (ЫО₂. 0-2% МеОН:СН₂С1₂) и материал из колонки (0,15 г) объединяли с осадком и растворяли в метаноле (15 мл) при 60°С. Добавляли воду (5,0 мл) и смесь охлаждали. Результирующий осадок отфильтровывали, промывали водой и высушивали с получением указанного в заголовке соединения с выходом 50%.

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ м.д. 11,51 (с, 1Н), 9,31 (с, 1Н), 8,19 (с, 1Н), 7,62 (с, 1Н), 7,59 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 7,22 (т, 1=8 Гц и 16 Гц, 1Н), 7,08 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 3,63-3,68 (м, 2Н), 3,28-3,33 (м, 2Н), 2,36 (с, 3Н), 2,25-2,29 (м, 2Н), 1,63-1,68 (м, 2Н), 1,31 (с, 3Н), 1,27 (с, 9Н); Μδ (Εδ+) [М+Н]⁺ = 406.

6.10. Пример 10. Синтез 4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)-№(3-(оксазол-5ил)фенил)пиперидин-4-карбоксамида

О ^Ν

А. Получение трет-бутил-4-метил-4-(3-(оксазол-5-ил)фенилкарбамоил)пиперидин-1-карбоксилата.

К раствору 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты (61,3 мг, 0,2 52 ммоль) и пиридина (79,7 мг, 0,08 мл, 1,01 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (2 мл) при 0°С добавляли ДМФ (1-2 капли) с последующим добавлением оксалилхлорида (31,9 мг, 0,022 мл, 0,252 ммоль). Реакцию перемешивали в течение 0,5 ч и добавляли 3-(оксазол-5-ил)анилин (40,4 мг, 0,252 ммоль). Реакцию перемешивали в течение еще 1,5 ч. Смесь разбавляли этилацетатом (10 мл) и органические вещества промывали

- 10 019488

0,1н. НС1 (2x10 мл), солевым раствором (4 мл), высушивали над Мд8О₄, отфильтровывали и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения, которое использовали в следующей стадии без дальнейшей очистки. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 386,2.

B. Получение 4 -метил-Ν-(3 -(оксазол-5 -ил)фенил)пиперидин-4 -карбоксамида.

К раствору трет-бутил-4-метил-4-(3-(оксазол-5-ил)фенилкарбамоил)пиперидин-1-карбоксилата из стадии А (77,7 мг, 0,202 ммоль) в метаноле (3 мл) добавляли НС1 (4,0н. в диоксане, 0,4 мл, 1,6 ммоль). Реакцию перемешивали в течение 15 ч и затем концентрировали досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде соли гидрохлорида. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 286,2.

C. Получение 4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-а]пиримидин-4-ил)-Ы-(3-(оксазол-5-ил)фенил) пиперидин-4-карбоксамида.

В сосуд под давлением загружали раствор 4-метил-Ы-(3-(оксазол-5-ил)фенил)пиперидин-4карбоксамида гидрохлорида из стадии В (51,9 мг, 0,17 ммоль) и изопропанола (3 мл) и к этому раствору добавляли 4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-й] пиримидин (55,0 мг, 0,329 ммоль) и Ν,Νдиизопропилэтиламин (297,9 мг, 0,40 мл, 2,31 ммоль). Сосуд герметизировали и реакцию нагревали до 105°С в течение 15 ч. Реакцию обрабатывали с помощью обычных средств и осадок очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества с желтоватым или сероватым оттенком.

'11 ЯМР (400 МГц) δ м.д. 8,27 (с, 1Н), 8,18 (с, 1Н), 8,03 (т, 1=1,77 Гц, 1Н), 7,58 (ддд, 1=8,08, 2,02, 1,01 Гц, 1Н), 7,52 (с, 1Н), 7,50 (дт, 1=8,08, 1,26 Гц, 1Н), 7,43 (т, 1=7,83 Гц, 1Н), 7,00 (прибл. д, 1=0,76 Гц, 1Н), 3,78-3,86 (м, 2Н), 3,38-3,46 (м, 2Н), 2,44 (д, 1=0,76 Гц, 3Н), 2,36-2,44 (м, 2Н), 1,79 (ддд, 1=13,39, 9,85, 3,54 Гц, 2Н), 1,42 (с, 3Н); М8 (Е8+) [М+Н] ⁺ = 417,2.

6.11. Пример 11. Синтез 4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)-Ы-(3-сульфамоилфенил)пиперидин-4-карбоксамида

A. Получение трет-бутил 4-метил-4-(3-сульфамоилфенилкарбамоил)пиперидин-1-карбоксилата.

К раствору 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты (60 мг, 0,25 ммоль) в дихлорэтане (2,0 мл) добавляли ДМФ (2 капли) и пиридин (78 мг, 0,99 ммоль) с последующим добавлением оксалилхлорида (31 мг, 0,25 ммоль). Смесь перемешивали в течение 40 мин и добавляли 3аминобензолсульфонамид. Смесь нагревали при 50°С в течение 3 ч и охлаждали, разбавляли дихлорметаном, промывали два раза каждый раз нас. водн. №1НС.'О₃ и 1,0н. водн. НС1, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали. Хроматография на силикагеле (2-5% МеОН:СН₂С1₂) давала указанное в заголовке соединение с выходом 40%. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 398.

B. Получение 4-метил-Ы-(3-сульфамоилфенил) пиперидин-4-карбоксамида.

трет-Бутил-4-метил-4-(3-сульфамоилфенилкарбамоил)пиперидин-1-карбоксилат из стадии А (39 мг, 0,098 ммоль) обрабатывали НС1 (4,0н в диоксане, 98 мкл, 0,39 ммоль) в метаноле (1,0 мл) при 50°С в течение 45 мин. Смесь концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде соли гидрохлорида с количественным выходом. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 298.

C. Получение 4-метил-1 -(5-метил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)-Ы-(3-сульфамоилфенил)пиперидин-4-карбоксамида.

4-Метил-Ы-(3-сульфамоилфенил)пиперидин-4-карбоксамид из стадии В (33 мг, 0,098 ммоль), 4хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин (16 мг, 0,098 ммоль), Ν,Ν-диизопропилэтиламин (51 мг, 0,39 ммоль) и изопропанол (1,0 мл) объединяли в запаянную трубку высокого давления и нагревали при 105°С в течение 18 ч. Смесь концентрировали и осадок очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения с выходом 21%.

'11 ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆) δ м.д. 11,52 (с, 1Н), 9,72 (с, 1Н), 8,24 (с, 1Н), 8,19 (с, 1Н), 7,87-7,90 (м, 1Н), 7,50-7,52 (м, 2Н), 7,35 (с, 2Н), 7,06 (с, 1Н), 4,09-4,13 (м, 1Н), 3,66-3,40 (м, 2Н), 3,25-3,31 (м, 2Н), 3,18 (д, 1=4 Гц, 2Н), 2,36 (с, 3Н), 2,27-2,30 (м, 2Н), 1,64-1,70 (м, 2Н), 1,32 (с, 3Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 429.

6.12. Пример 12. Синтез №(3-(1Н-тетразол-5-ил)фенил)-4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-а]пи-

А. Получение трет-бутил 4-(3-(1Н-тетразол-5-ил)фенилкарбамоил)-4-метилпиперидин-1- 11 019488 карбоксилата.

К раствору 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-метилпиперидин-4-карбоновой кислоты (100 мг, 0,41 ммоль) в дихлорэтане (2,0 мл) добавляли ДМФ (2 капли) и пиридин (0,13 г, 1,6 ммоль) с последующим добавлением оксалилхлорида (57 мг, 0,45 ммоль). Смесь перемешивали в течение 40 мин и добавляли 3(1Н-тетразол-5-ил)фениламин. Смесь перемешивали в течение 2 ч и образовывался розовый осадок. Смесь отфильтровывали и фильтрат промывали 1,0н. водн. НС1 и солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения с выходом 70%. М3 (Е8+) [М+Н]⁺ = 387.

B. Получение Ы-(3-(1Н-тетразол-5-ил)фенил)-4-метилпиперидин-4-карбоксамида.

трет-Бутил 4-(3-(1Н-тетразол-5-ил)фенилкарбамоил)-4-метилпиперидин-1-карбоксилат из стадии А (0,11 г, 0,29 ммоль) обрабатывали НС1 (4,0н. в диоксане, 0,36 мл, 1,45 ммоль) в метаноле (2,0 мл) и нагревали при 50°С в течение 30 мин. Смесь концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде гидрохлорида с количественным выходом. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 287.

C. Получение N-(3 -(1Н-тетразол-5-ил)фенил)-4-метил-1 -(5-метил-7Н-пирроло [2,3-б]пиримидин-4ил)пиперидин-4-карбоксамида.

№(3-(1Н-тетразол-5-ил)фенил)-4-метилпиперидин-4-карбоксамид из стадии В (93 мг, 0,29 ммоль), 4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин (49 мг, 0,29 ммоль), Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,19 г, 1,45 ммоль), изопропанол (4,0 мл) и ДМСО (0,5 мл) объединяли в запаянную трубку высокого давления и нагревали при 105°С в течение 18 ч. Смесь концентрировали и осадок очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения с выходом 4,3%.

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ м.д. 11,5 (с, 1Н), 9,56 (с, 1Н), 8,31 (с, 1Н), 8,19 (с, 1Н), 7,77 (д, 1=8 Гц, 1Н), 7,69 (д, 1=8 Гц, 1Н), 7,40 (т, 1=8 и 16 Гц, 1Н), 7,05 (с, 1Н), 3,64-3,72 (м, 2Н), 2,37 (с, 3Н), 2,29-2,33 (м, 2Н), 1,91 (с, 2Н), 1,64-1,70 (м, 2Н), 1,34 (с, 3Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 418.

6.13. Пример 13. Синтез 3-(4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

A. Получение трет-бутил 4-(3-(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)-4-метилпиперидин-1карбоксилата.

1-(трет-Бутоксикарбонил)-4-метилпиперидин-4-карбоновую кислоту (67 мг, 0,28 ммоль), ЕЭС (64 мг, 0,33 ммоль), НОВТ (45 мг, 0,33 ммоль) и дихлорэтан (2,0 мл) объединяли в запаянную трубку высокого давления и перемешивали в течение 45 мин. Добавляли 3-аминофенилдиметилкарбамат (50 мг, 0,28 ммоль) и смесь нагревали при 85°С в течение 18 ч. Смесь концентрировали и подвергали хроматографии (81О₂, 0-2% МеОН:СН₂С1₂) с получением указанного в заголовке соединения с выходом 50%. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 406.

B. Получение 3-(4-метилпиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

трет-Бутил 4-(3 -(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)-4-метилпиперидин-1 -карбоксилат из стадии А (56 мг, 0,138 ммоль) обрабатывали НС1 (4,0н. в диоксане, 0,17 мл, 0,69 ммоль) в метаноле (2,0 мл) при 40°С в течение 3 ч. Смесь концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде соли гидрохлорида с количественным выходом. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 306.

C. Получение 3-(4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

3-(4-метилпиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат из стадии В (47 мг, 0,14 ммоль), 4хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин (23 мг, 0,138 ммоль), Ν,Ν-диизопропилэтиламин (54 мг, 0,41 ммоль), и изопропанол (1,0 мл) объединяли в запаянную трубку высокого давления и нагревали при 100°С в течение 18 ч. Смесь концентрировали и осадок очищали с помощью препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения с выходом 53%.

Ή ЯМР (400 МГц, СЭзОЭ) δ м.д. 8,18 (с, 1Н), 7,50 (с, 1Н), 7,42-7,44 (д, 1=8 Гц, 1Н), 7,34 (т, 1=8 и 16 Гц, 1Н), 7,0 (с, 1Н), 6,87-6,89 (м, 1Н), 3,79-3,85 (м, 2Н), 3,37-3,44 (м, 2Н), 3,14 (с, 1Н), 3,01 (с, 3Н), 2,44 (с, 3Н), 2,36-2,40 (м, 2Н), 1,75-1,81 (м, 2Н), 1,40 (с, 3Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 437.

6.14. Пример 14. Синтез 3-(4-бензил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

- 12 019488

A. Получение трет-бутил-4-бензил-4-(3-(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)пиперидин-1карбоксилата.

Под атмосферой Ν₂ 4-бензил-1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-карбоновую кислоту (0,2 г, 0,626 ммоль), пиридин (0,202 мл, 2,5 ммоль) и ДМФ (3 капли) растворяли в СН₂С1₂ (10 мл) и охлаждали на ледяной бане. К охлажденному раствору по каплям добавляли оксалилхлорид (0,06 мл, 0,688 ммоль). Реакцию затем удаляли из ледяной бани и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакцию повторно охлаждали на ледяной бане и добавляли одну часть 3-аминофенилдиметилкарбамата (0,112 г, 0,626 ммоль). Реакцию перемешивали в течение ночи и затем промывали 1н. водн. НС1 и солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиент этилацетат:гексан) с получением указанного в заголовке соединения с выходом 54%. М8 (Е8+) [Μ+ΝΗ₄]⁺ = 500.

B. Получение 3 -(4-бензилпиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

К раствору трет-бутил-4-бензил-4-(3 -(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)пиперидин-1 карбоксилата из стадии А (0,162 г, 0,336 ммоль) в МеОН (5 мл) добавляли 4М НС1 в диоксане (0,250 мл, 1,00 ммоль). Реакцию нагревали при 50°С в течение 1 ч и затем концентрировали под вакуумом, повторно растворяли в МеОН и повторно дважды концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде соли гидрохлорида. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 382.

C. Получение 3-(4-бензил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

3-(4-бензилпиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат (0,140 г, 0,336 ммоль) из стадии В, 4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин (0,056 г, 0,336 ммоль), Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,175 мл, 1,00 ммоль) и изопропанол (5 мл) объединяли и нагревали при 120°С в течение ночи в сосуде под давлением. Реакцию разбавляли СН₂С1₂, промывали Н₂О и солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали под вакуумом. Осадок поглощали в горячем этаноле/Н2О. После охлаждения продукт, осажденный из раствора, давал указанное в заголовке соединение с выходом 81%.

'|| ЯМР (400 МГц, СО₃ОЭ) δ м.д. 8,18 (с, 1Н), 7,15-7,37 (м, 8Н), 7,00 (с, 1Н), 6,88-6,91 (м, 1Н), 3,97 (д, 1=13,6 Гц, 2Н), 3,25 (т, 1=12,24 Гц, 2Н), 3,14 (с, 3Н), 3,02 (с, 2Н), 2,96 (с, 3Н), 2,40 (с, 3Н), 2,40 (д, 1=14,4 Гц, 2Н), 1,85-1,92 (м, 2Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 513.

6.15. Пример 15. Синтез 3-(4-(бензилоксиметил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

A. Получение 1-трет-бутил-4-этил-4-(бензилоксиметил)пиперидин-1,4-дикарбоксилата.

БЭЛ (2,64 мл, 5,82 ммоль) добавляли к раствору 1-трет-бутил-4-этилпиперидин-1,4-дикарбоксилата (1 г, 3,88 ммоль) в ТГФ (35 мл) при -78°С. Реакцию перемешивали в течение 30 мин и затем добавляли ВОМС1 (0,6 г, 3,88 ммоль). Реакцию оставляли нагреваться до комнатной температуры и затем гасили водн. ΝΉ₄Ο. Водный слой экстрагировали ЕЮАс и органический экстракт промывали солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью флэшхроматографии (80 г 81О₂, 0-10% этилацетат:гексан) с получением указанного в заголовке соединения (0,5 г, 34%). М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 378.

B. Получение 4-(бензилоксиметил)-1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-карбоновой кислоты.

1-трет-Бутил-4-этил-4-(бензилоксиметил)пиперидин-1,4-дикарбоксилат из стадии А (0,500 г, 1,3 ммоль) растворяли в 1н водн. ЫОН (15 мл) и ТГФ (10 мл) и нагревали при 50°С в течение 24 ч. Реакционную смесь подкисляли 1н. НС1 и экстрагировали Е1₂О. Органический экстракт промывали солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (0,3 г, 65%). М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 349.

C. Получение трет-бутил-4-(бензилоксиметил)-4-(3 -(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)пиперидин-1-карбоксилата.

К раствору 4-(бензилоксиметил)-1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-карбоновой кислоты из стадии В (0,3 г, 0,85 ммоль) в изопропилацетате (10 мл) добавляли Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,165 мл, 0,94 ммоль) и НАТО (0,94 ммоль). Реакцию нагревали при 85°С в течение 30 мин и к смеси добавляли 3аминофенилдиметилкарбамат. Реакцию нагревали при 85°С в течение 2 ч, затем обрабатывали с помощью стандартных методик. Продукт выделяли с помощью флэш-хроматографии (40 г 8Ю₂, 0-30% этилацетат:гексан) с получением указанного в заголовке соединения (0,25 г, 57%). М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 512.

Ό. Получение 3-(4-(бензилоксиметил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата. трет-Бутил-4-(бензилоксиметил)-4-(3 -(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)пиперидин-1 карбоксилат из стадии С (0,25 г, 0,49 ммоль) растворяли в изопропаноле, обрабатывали 4н. НС1 и пере

- 13 019488 мешивали в течение двух часов. Реакционную смесь доводили до рН 7-8 с помощью NаΗСΟ₃ и затем экстрагировали ЕьО. Органические экстракты концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (0,2 г, 100%). М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 412.

Е. Получение 3-(4-(бензилоксиметил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

К раствору 3-(4-(бензилоксиметил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата из стадии Ό (0,2 г, 0,49 ммоль) в изопропаноле (5 мл) добавляли Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,167 мл, 0,98 ммоль) и 4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин (0,08 г, 0,49 ммоль). Реакцию нагревали при 85°С в течение ночи, разбавляли ЕЮАс, промывали солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью флэш-хроматографии (40 г 81О₂, 0-80% этилацетат:гексан) с получением указанного в заголовке соединения (0,1 г, 38%).

Ή ЯМР (400 МГц, СЭ₃ОЭ) δ м.д. 10,68 (с, 1Н), 8,78 (с, 1Н), 8,37 (с, 1Н), 7,33-7,44 (м, 6Н), 7,25 (т, 1=8, 16 Гц, 1Н), 7,11 (д, 1=8 Гц, 1Н), 6,91 (с, 1Н), 6,86 (д, 1=8 Гц, 1Н), 4,62 (с, 2Н), 3,65 (с, 2Н), 3,62-3,75 (м, 4Н), 3,09 (с, 3Н), 3,01 (с, 3Н), 2,40 (с, 3Н), 2,27-2,33 (м, 2Н), 1,75-1,82 (м, 2Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺=543.

6.16. Пример 16. Синтез 3-(4-(гидроксиметил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

К раствору 3 -(4-(бензилоксиметил)-1 -(5 -метил-7Н-пирроло [2,3 -б] пиримидин-4 -ил)пиперидин-4 карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата из примера 15, стадии Е (30 мг, 0,055 ммоль) в ТГФ (2 мл) добавляли Рб/С (10%). Реакционную смесь перемешивали под атмосферой Н₂ при 60 фунт/кв. дюйм в течение ночи. Смесь отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (30x250 мм С18 колонка, 10-100% МеС№Н₂О (10 мМ Ν^ΟΑφ, 18 мин, 45 мл/мин) с получением указанного в заголовке соединения (1 мг).

Ή ЯМР (400 МГц, СЭ₃ОЭ) δ м.д. 8,18 (с, 1Н), 7,52 (с, 1Н), 7,40-7,42 (м, 1Н), 7,33 (т, 1=8, 16 Гц, 1Н), 7,00 (с, 1Н), 6,87 (д, 1=8 Гц, 1Н), 3,84-3,89 (м, 2Н), 3,75 (с, 2Н), 3,32-3,44 (м, 2Н), 3,14 (с, 3Н), 3,00 (с, 3Н), 2,45 (с, 3Н), 2,38 (д, 1=12 Гц, 2Н), 1,72-1,81 (м, 2Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 453.

6.17. Пример 17. Синтез 3-(4-(метоксиметил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

A. Получение 1-трет-бутил-4-этил-4-(метоксиметил)пиперидин-1,4-дикарбоксилата.

К раствору 1-трет-бутил-4-этилпиперидин-1,4-дикарбоксилата (1,0 г, 4,07 ммоль) в ТГФ (20 мл) при -78°С под атмосферой азота добавляли по каплям ЬЭА (1,5 М в ТГФ, 4,0 мл, 6,10 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 1 ч при -78°С, после этого добавляли метоксиметилхлорид (0,8 мл, 10,5 ммоль). Систему оставляли нагреваться до комнатной температуры более чем 2 ч. Реакцию гасили водным Ν^Ο и экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Органический слой высушивали над подкладкой из силикагеля и растворитель удаляли под вакуумом. Указанное в заголовке соединение выделяли с помощью хроматографии на силикагеле (5-10% этилацетат:гексан) в виде светлого маслянистого вещества (830 мг, 69% выход). М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 302,4.

B. Получение 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-(метоксиметил)-пиперидин-4-карбоновой кислоты.

К раствору 1-трет-бутил-4-этил-4-(метоксиметил)пиперидин-1,4-дикарбоксилата из стадии А (732 мг, 2,63 ммоль) в 1:2 этанол/вода (9 мл) добавляли лития гидроксид моногидрат (700 мг). Смесь нагревали при 75°С в течение 1 ч. Реакцию охлаждали до комнатной температуры и выливали в 50 мл нас. водн. NаΗ8Ο₄. Водный слой экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде вязкого желтого маслянистого вещества, которое переносили в следующую стадию без дополнительной очистки. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 274,2.

C. Получение трет-бутил-4-(3 -(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)-4-(метоксиметил)пиперидин-1-карбоксилата.

К раствору 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-(метоксиметил)пиперидин-4-карбоновой кислоты из стадии В (718 мг, 2,63 ммоль), пиридина (0,84 мл, 10,52 ммоль) и ДМФ (каталитическое количество, 3 капли) в СН₂С1₂ (13 мл) добавляли по каплям оксалилхлорид (0,25 мл, 2,89 ммоль, осторожно: реакция экзотерми

- 14 019488 ческая). После прекращения выделения газа реакцию перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 мин. К этому раствору добавляли одну часть 3-аминофенилдиметилкарбамата (475 мг, 2,63 ммоль) и перемешивали в течение еще 30 мин. Реакцию гасили насыщенным водным ΝΗ₄Ο и водный слой экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над Мд8О₄, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (50% этилацетат:гексан) давала указанное в заголовке соединение (1,03 г, 90% выход за две стадии). М8 (Е8+) [Μ+ΝΗ]⁺ = 453,3

Ό. Получение 3-(4-(метоксиметил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

К раствору трет-бутил-4-(3 -(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)-4-(метоксиметил)пиперидин-1-карбоксилата из стадии С (1,03 г, 2,37 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляли НС1 (4 М раствор в диоксане, 2 мл). Реакцию нагревали при 50°С в течение 1 ч и затем концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде соли гидрохлорида. М8 (Е8 + ) [М+Н]⁺ = 336,3.

Е. Получение 3-(4-(метоксиметил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-4]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

К раствору 3-(4-(метоксиметил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата из стадии Ό и Ν,Ν-диизопропилэтиламина (2 мл, 11,9 ммоль) в изопропаноле (5 мл) добавляли 4-хлор-5-метил-7Нпирроло[2,3-4]пиримидин (397 мг, 2,37 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 110°С в запаянной виале под высоким давлением в течение 17 ч, в течение этого времени смесь стала гомогенной. Реакцию концентрировали под вакуумом и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (3-5% метанол:СН₂С1₂). Продукт промывали холодным метанолом с получением указанного в заголовке соединения в виде белого с желтоватым или сероватым оттенком твердого вещества (462 мг, 42% выход).

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ м.д. 11,50 (уш.с, 1Н), 9,45 (с, 1Н), 8,18 (с, 1Н), 7,54-7,57 (м, 1Н), 7,47 (д, 1=8,84 Гц, 1Н), 7,29 (т, 1=8,08 Гц, 1Н), 7,04 (с, 1Н), 6,81 (дд, 1=8,08, 2,27 Гц, 1Н), 3,68-3,78 (м, 2Η), 3,56 (с, 2Н), 3,26 (с, 3Н), 3,21 (м, 2Н), 3,04 (с, 3Н), 2,91 (с, 3Н), 2,34 (с, 3Н), 2,22-2,31 (м, 2Н), 1,65-1,78 (м, 2Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 467,3.

6.18. Пример 18. Синтез 3-(4-((2-метоксиэтокси)метил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-4]пиримидин-4ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

A. Получение 1-трет-бутил-4-этил-4-((2-метоксиэтокси)метил)пиперидин-1,4-дикарбоксилата.

К раствору 1-трет-бутил-4-этилпиперидин-1,4-дикарбоксилата (2,0 г, 7,8 ммоль) в ТГФ (70 мл) при 78°С по каплям добавляли ЬОА более чем 8 мин, поддерживая температуру ниже -75°С. Смесь перемешивали при -78°С в течение 1 ч. По каплям добавляли 1-хлорметокси-2-метоксиэтан (0,97 г, 7,8 ммоль), поддерживая температуру ниже -75°С. Смесь перемешивали при -78°С в течение 3 ч и затем медленно нагревали до комнатной температуры в течение ночи. Смесь гасили нас. водн. ΝΗ₄ί4 и экстрагировали 3 раза ЕЮАс. Органические вещества объединяли, промывали солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали. Хроматография на силикагеле (10-20% этилацетат:гексан) давала указанное в заголовке соединение с выходом 67%. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 346.

B. Получение 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-(2-метоксиэтокси)пиперидин-4-карбоновой кислоты.

1-трет-Бутил-4-этил-4-((2-метоксиэтокси)метил)пиперидин-1,4-дикарбоксилат из стадии А (1,78 г, 5,15 ммоль) обрабатывали ЬЮН (0,62 г, 26 ммоль) в этаноле (12 мл) и воде (24 мл) при 80°С в течение 18 ч. Смесь охлаждали, разбавляли дихлорметаном и промывали нас. водн. NаΗ8О₄. Водные фазы снова экстрагировали дихлорметаном (3х) и органические вещества объединяли, промывали солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения с количественным выходом. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 318.

C. Получение трет-бутил-4-(3 -(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)-4-(2-метоксиэтокси)пиперидин-1-карбоксилата.

К раствору 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-(2-метоксиэтокси)пиперидин-4-карбоновой кислоты из стадии В (1,6 г, 5,1 ммоль) в дихлорэтане добавляли пиридин (1,6 г, 20 ммоль) и ДМФ (0,05 мл) с последующим добавлением оксалилхлорида (0,65 г, 5,1 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин и затем добавляли 3-аминофенилдиметилкарбамат (0,91 г, 5,04 ммоль). Смесь перемешивали в течение 18 ч, затем разбавляли дихлорметаном, промывали дважды 1н. водн. НС1 и один раз солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали.

Хроматография на силикагеле (0-5% МеОН:СН₂С1₂) давала указанное в заголовке соединение с выходом 88%. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 480.

Ό. Получение 3-(4-(2-метоксиэтокси)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата. трет-Бутил-4-(3-(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)-4-(2-метоксиэтокси)пиперидин-1

- 15 019488 карбоксилат из стадии С (2,1 г, 4,4 ммоль) обрабатывали НС1 (4,0н. в диоксане, 5,5 мл, 22 ммоль) в метаноле (20 мл) при 50°С в течение 30 мин. Смесь концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде соли гидрохлорида с количественным выходом. Μδ (Εδ+) [М+Н]⁺ = 380.

Е. Получение 3-(4-((2-метоксиэтокси)метил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

3-(4-(2-Метоксиэтокси)пиперидин-4-карбоксамидо)фенил-диметилкарбамат из стадии Ό (1,82 г, 4,38 ммоль), 4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин (0,73 г, 4,4 ммоль), М,Я-диизопропилэтиламин (2,8 г, 22 ммоль) и изопропанол (50 мл) объединяли в запаянную трубку высокого давления и нагревали при 115°С в течение 18 ч. Смесь концентрировали и подвергали хроматографии (81О₂, 0-5% МеОН:СН₂С1₂) с получением указанного в заголовке соединения с выходом 61%.

'|| ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ м.д. 11,48 (с, 1Н), 9,43 (с, 1Н), 8,18 (с, 1Н), 7,52 (с, 1Н), 7,44 (д, 1=8 Гц, 1Н), 7,30 (т, 1=8 и 16 Гц, 1Н), 7,05 (с, 1Н), 6,81 (д, 1=8 Гц, 1Н), 3,68-3,76 (м, 2Н), 3,67 (с, 2Н), 3,55-3,58 (м, 2Н), 3,44-3,47 (м, 2Н), 3,24-3,30 (м, 2Н), 3,23 (с, 3Н), 3,04 (с, 3Н), 2,91 (с, 3Н), 2,35 (с, 3Н), 2,26 (д, 1=16 Гц, 2Н), 1,69-1,76 (м, 2Н); Μδ (Εδ+) [М+Н]⁺ = 511.

6.19. Пример 19: Синтез 3-(4-((бензилоксикарбониламино)метил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

А. Получение 1-трет-бутил-4-метил-4-((бензилоксикарбониламино)метил)пиперидин-1,4дикарбоксилата.

К раствору 1-трет-бутил-4-метил-4-(аминометил)пиперидин-1,4-дикарбоксилата (0,300 г, 1,1 ммоль) и М,Я-диизопропилэтиламина (0,229 мл, 1,32 ммоль) в СН₂С1₂ (5 мл) при 0°С добавляли бензилхлорформиат. Реакцию перемешивали в течение ночи и затем разбавляли СН2С12 и промывали Н2О и солевым раствором, высушивали над ΜдδО₄ и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиент Е1ОАс:гексан) с получением указанного в заголовке соединения с выходом 82%. Μδ (Εδ+) [Μ+Н]⁴ = 407.

4-((бензилоксикарбониламино)метил)-1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4В. Получение карбоновой кислоты.

К раствору

1-трет-бутил-4-метил-4-((бензилоксикарбониламино)метил)пиперидин-1,4дикарбоксилата из стадии А в метаноле (5 мл) добавляли 1н водн. ЯаОН (0,615 мл, 0,615 ммоль). Реакцию нагревали при 50°С в течение ночи, подкисляли до рН 5 с помощью 1н. водн. НС1 и экстрагировали 3хСН₂С1₂. Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, высушивали над Яа₂8О₄ и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения, которое переносили в неочищенном виде. Μδ (Εδ+) [М+Н]⁺ = 393.

С. Получение трет-бутил-4-((бензилоксикарбониламино)метил)-4-(3 -(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)пиперидин-1-карбоксилата.

Под атмосферой Я₂ 4-((бензилоксикарбониламино)метил)-1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4карбоновую кислоту (0,240 г, 0,611 ммоль) из стадии В, пиридин (0,197 мл, 2,44 ммоль) и ДМФ (3 капли) растворяли в СН₂С1₂ (10 мл) и охлаждали на ледяной бане. Оксалилхлорид (0,064 мл, 0,733 ммоль) добавляли по каплям к раствору. Реакцию затем удаляли из ледяной бани и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакцию повторно охлаждали в ледяной бане и добавляли одну часть 3аминофенилдиметилкарбамата (0,110 г, 0,611 ммоль). Реакцию перемешивали в течение ночи и затем промывали 1н. водн. НС1 и солевым раствором, высушивали над М^О₄ и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиент этилацетат:гексан) с получением указанного в заголовке соединения с выходом 72%. Μδ (Εδ+) [М+ЯН₄]⁺ = 573.

Ό. Получение 3-(4-((бензилоксикарбониламино)метил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

К раствору трет-бутил-4-((бензилоксикарбониламино)метил)-4-(3-(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)пиперидин-1-карбоксилата из стадии С (0,245 г, 0,441 ммоль) в МеОН (2 мл) добавляли 4 М НС1 в диоксане (0,331 мл, 1,32 ммоль). Реакцию нагревали при 50°С в течение 1 ч и затем концентрировали под вакуумом, повторно растворяли в МеОН и повторно концентрировали дважды с получением указанного в заголовке соединения в виде соли гидрохлорида. Μδ (Εδ+) [М+Н]⁺ = 455.

Е. Получение 3 -(4-((бензилоксикарбониламино)метил)-1 -(5-метил-7Н-пирроло [2,3-б]пиримидин-4

- 16 019488 ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

3-(4-((Бензилоксикарбониламино)метил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат (0,216 г, 0,441 ммоль) из стадии Ό, 4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин (0,073 г, 0,441 ммоль), Ν,Νдиизопропилэтиламин (0,230 мл, 1,32 ммоль) и изопропанол (5 мл) объединяли и нагревали при 120°С в течение ночи в сосуде под давлением. Неочищенную реакционную смесь разбавляли СН₂С1₂ и промывали Н₂О и солевым раствором, высушивали над Мд§О₄ и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью хроматографии на силикагеле (градиент МеОН:СН₂С1₂) с получением указанного в заголовке соединения с выходом 54%.

Ή ЯМР (400 МГц, С1)_;О1)) δ м.д. 8,18 (с, 1Н), 7,49 (с, 1Н), 7,40 (д, 1=8 Гц, 1Н), 7,26-7,34 (м, 6Н), 7,00 (с, 1Н), 6,89 (д, 1=8 Гц, 1Н), 5,06 (с, 2Н), 3,92 (д, 1=13,2 Гц, 2Н), 3,50 (с, 2Н), 3,28-3,37 (м, 2Н), 3,1 (с, 3Н), 2,99 (с, 3Н), 2,43 (с, 3Н), 2,40 (д, 1=12 Гц, 2Н), 1,79 (т, 1=10,6, 21,2 Гц, 2Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 586.

6.20. Пример 20. Синтез 3-(4-(аминометил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

3-(4-((Бензилоксикарбониламино)метил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-

4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат (0,140 г, 0,239 ммоль) из примера 19, стадии Е, Рб/С (10% Рб/С, Реаг1тап) и метанол (5 мл) объединяли и гидрировали в течение ночи при 1 атмосфере. Реакцию отфильтровывали через целит, концентрировали под вакуумом и очищали с помощью нейтральной фазы препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде соли ацетата с выходом 52%.

Ή ЯМР (400 МГц, Ι+О) δ м.д. 7,90 (с, 1Н), 7,30 (т, 1=8,6 Гц, 1Н), 7,18-7,19 (м, 2Н), 6,84-6,88 (м, 1Н), 3,48 (д, 1=13, 6 Гц, 2Н), 3,20 (с, 2Н), 3,08 (т, 1=10,8, 21,6 Гц, 2Н), 2,96 (с, 3Н), 2,83 (с, 3Н), 2,27 (д, 1=14,4 Гц, 2Н), 2,11 (с, 3Н), 1,72 (т, 1=10, 20 Гц, 2Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 452.

6.21. Пример 21. Синтез 3-(4-(диметиламино)метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

К раствору соли ацетата 3-(4-(аминометил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата из примера 20 (14 мг, 0,027 ммоль), уксусной кислоты (6,2 мкл, 0,11 ммоль) и NаВН₃СN (2,1 мг, 0,034 ммоль) добавляли формальдегид (37% в Н₂О, 48 мкл, 0,064 ммоль). Реакцию перемешивали в течение ночи, затем концентрировали и осадок очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (30х 100 мм С18 колонка, 5-70% МеС№ Н₂О (10 мМ ΝΉ^Αο), 12 мин, 4 5 мл/мин) и лиофилизировали с получением указанного в заголовке соединения (8 мг, 0,014 ммоль, 57%) в виде соли ацетата.

Ή ЯМР (400 МГц, С1)_;О1)) δ м.д. 8,18 (с, 1Н), 7,51 (т, 1=2,02 Гц, 1Н), 7,37-7,42 (м, 1Н), 7,34 (т, 1=8,08 Гц, 1Н), 7,00 (с, 1Н), 6,85-6,91 (м, 1Н), 3,89 (д, 1=13,64 Гц, 2Н), 3,38-3,48 (м, 2Н), 3,14 (с, 3Н), 3,01 (с, 3Н), 2,72 (с, 2Н), 2,36-2,45 (м, 11Н), 1,79 (ддд, 1=13,71, 10,42, 3,41 Гц, 2Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 480.

6.22. Пример 22. Синтез 3-(4-(2-(диметиламино)этил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

А. Получение 1-трет-бутил-4-этил-4-(2-(диметиламино)этил)пиперидин-1,4-дикарбоксилата.

К раствору 1-трет-бутил-4-этил-пиперидин-1,4-дикарбоксилата (514 мг, 2 ммоль) в ТГФ (10 мл) при -78°С добавляли по каплям ЕЭА (1,5 М в циклогексане, 2 мл, 3 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин добавляли 2-бром-^№диметилэтанамин (370 мг, 2,4 ммоль) в ТГФ (3 мл). Реакцию перемешивали в течение 30 мин при -78°С, затем оставляли нагреваться до комнатной температуры, перемешивали в течение 2 ч, затем гасили нас. водн. NаНСО₃, разбавляли ЕЮАс. промывали нас. водн. NаНСО₃ и соле

- 17 019488 вым раствором (с обратной экстракцией), высушивали над Мд8О₄ и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью флэш-хроматографии (40 г 81О₂, 0-15% МеОН:СН₂С1₂) с получением указанного в заголовке соединения (328 мг, 1,0 ммоль, 50%) в виде желтого маслянистого вещества. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 329.

B. Получение 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-(2-(диметиламино)этил)пиперидин-4-карбоновой кислоты.

1-трет-Бутил-4-этил-4-(2-(диметиламино)этил)пиперидин-1,4-дикарбоксилат из стадии А (328 мг, 1,0 ммоль) обрабатывали в течение ночи лития гидроксидом моногидратом (210 мг, 5 ммоль) в 1:1 Е1ОН:Н₂О (5 мл) при 60°С. Реакцию охлаждали до комнатной температуры, нейтрализовали до рН 6 с помощью 1н. водн. НС1 и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью препаративной ВЭЖХ и лиофилизировали дважды с получением указанного в заголовке соединения (191 мг, 64%) в виде белого твердого вещества. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 301.

C. Получение трет-бутил-4-(2-(диметиламино)этил)-4-(3-(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил) пиперидин-1-карбоксилата.

1-(трет-Бутоксикарбонил)-4-(2-(диметиламино)этил)пиперидин-4-карбоновую кислоту из стадии В (100 мг, 0,33 ммоль), НАТИ (175 мг, 0,46 ммоль) и Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,116 мл, 0,67 ммоль) перемешивали в изопропилацетате в течение 10 мин. Добавляли 3-аминофенилдиметилкарбамат (90 мг, 0,5 ммоль) и реакцию перемешивали при 85°С в течение 2 ч, охлаждали до комнатной температуры, перемешивали в течение ночи и затем разбавляли ЕЮАс. промывали нас. водн. №ьС.'О₃ и солевым раствором (с обратной экстракцией), высушивали над Мд8О₄, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде вязкого маслянистого вещества. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 463.

Ό. Получение 3-(4-(2-(диметиламино)этил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

Неочищенный трет-бутил-4-(2-(диметиламино)этил)-4-(3-(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)пиперидин-1-карбоксилат из стадии С обрабатывали 1:1 ТЕА:СН₂С1₂ (1,5 мл) в течение 45 мин. Реакцию концентрировали под вакуумом и осадок очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (30x100 мм С18 колонка, 0-50% МеОН:Н₂О (0,1% ТЕА), 12 мин, 45 мл/мин) и лиофилизировали с получением указанного в заголовке неочищенного соединения (173 мг) в виде соли ТЕА. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 363.

Е. Получение 3 -(4-2-(диметиламино)этил-1 -(5-метил-7Н-пирроло [2,3-0]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

Неочищенный 3 -(4-(2-(диметиламино)этил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат из стадии Ό (173 мг) объединяли с 4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидином (50 мг, 0,30 ммоль) и Ν,Ν-диизопропилэтиламином (0,17 4 мл, 5 ммоль) в изобутаноле (0,4 мл) и нагревали при 110°С в течение 7 ч. Реакцию охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (30x100 мм С18 колонка, 10-70% МеС№Н₂О (10 мМ NН₄ОАс), 12 мин, 45 мл/мин) и лиофилизировали с получением указанного в заголовке соединения (60 мг) в виде соли диацетата.

Ή ЯМР (400 МГц, СЭ₃ОЭ) δ м.д. 8,19 (с, 1Н), 7,52 (т, 1=2,15 Гц, 1Н), 7,44 (д, 1=8,08 Гц, 1Н), 7,35 (т, 1=8,08 Гц, 1Н), 7,01 (с, 1Н), 6,91 (дд, 1=7,58, 1,77 Гц, 1Н), 3,91 (д, 1=13,64 Гц, 2Н), 3,37-3,30 (м, 2Н), 3,14 (с, 3Н), 3,01 (с, 3Н), 2,75-2,82 (м, 2Н), 2,58 (с, 6Н), 2,43-2,47 (м, 5Н), 2,00-2,08 (м, 2Н), 1,79-1,89 (м, 2Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 494.

6.23. Пример 23. Синтез 3-(4-((1Н-имидазол-4-ил)метил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-0] пиримидин4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

А. Получение 1-трет-бутил-4-этил-4-((1-тритил-1Н-имидазол-4-ил)метил)пиперидин-1,4-дикарбоксилата.

К раствору 1-трет-бутил-4-этилпиперидин-1,4-дикарбоксилата (360 мг, 1,39 ммоль) в безводном ТГФ (10 мл) при -78°С добавляли по каплям ЬЭА (1,7 М в ТГФ, 1,07 мл, 1,8 ммоль) более чем 10 мин. Реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 1 ч и медленно добавляли 4-(хлорметил)-1тритил-1Н-имидазол (500 мг, 13,9 ммоль) в ТГФ (5 мл). Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры более чем 1 ч, подавляли нас. водн. ΝΉ₄Ο (10 мл) и экстрагировали ЕЮАс (3x20 мл).

Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, высушивали над №₂8О₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Очистка с помощью хроматографии на силикагеле (1050% ЕЮАс:гексан) обеспечивала указанное в заголовке соединение (403 мг, 51%). М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 580,3.

- 18 019488

B. Получение 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-((1-тритил-1Н-имидазол-4-ил)метил)пиперидин-4карбоновой кислоты.

К раствору 1-трет-бутил-4-этил-4-((1-тритил-1Н-имидазол-4-ил)метил)пиперидин-1,4-дикарбоксилата из стадии А (330 мг, 0,57 ммоль) в 1:1:2 ТГФ:МеОН:Н₂О (10 мл) добавляли ЫОН (136 мг, 5,7 ммоль). Смесь нагревали с обратным холодильником, пока ЖХМС не показала полное превращение продукта, затем концентрировали под вакуумом, растворяли в воде (3 мл), нейтрализовали до рН 5-6 водн. NаНδО₄ и экстрагировали этилацетатом (3x10 мл). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, высушивали над №^О₄ и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (273 мг, 86%). Μδ (Εδ+) [М+Н]⁺ = 552,2.

C. Получение трет-бутил-4-(3 -(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)-4-(( 1 -тритил-1Н- имидазол-4-ил)метил)пиперидин-1-карбоксилата.

К раствору 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-((1-тритил-1Н-имидазол-4-ил)метил)пиперидин-4-карбоновой кислоты из стадии В (270 мг, 0,6 ммоль) в изопропилацетате (5 мл) добавляли НАТИ (273 мг, 0,73 ммоль) и Ν,Ν-диизопропилэтиламин (205 мкл, 1,2 ммоль). Смесь перемешивали в течение 5 мин и добавляли 3-аминофенилдиметилкарбамат (108 мг, 0,6 ммоль). Результирующую смесь нагревали при 90°С в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли ЕЮАс (10 мл), промывали водным NаНСО₃ и солевым раствором, высушивали над №^О₄. отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью хроматографии на силикагеле (10-70% ЕЮАс:гексан) с получением указанного в заголовке соединения (185 мг, 43%). Μδ (Εδ+). [М+Н]⁺ = 714,2.

Ό. Получение 3-(4-((1Н-имидазол-4-ил)метил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

К раствору трет-бутил-4-(3-(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)-4-((1-тритил-1Н-имидазол-4ил)метил)пиперидин-1-карбоксилата из стадии С (180 мг) в МеОН (5 мл) добавляли НС1 (1н. в диоксане, 1 мл). Реакцию нагревали при 60°С в течение 1 ч и затем концентрировали под вакуумом. Осадок растворяли в ΕΐОАс (5 мл), промывали NаНСО₃ и солевым раствором, высушивали над №^О₄, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (84 мг, 93%). Μδ (Εδ+) [М+Н]⁺ = 372,2.

Е. Получение 3-(4-(1Н-имидазол-4-ил)метил)-1-(5-метил-(7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

3-(4-((1Н-имидазол-4-ил)метил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат из стадии Ό (10 мг, 0,027 ммоль), 4-хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин (5 мг, 0,03 ммоль) и Ν,Νдиизопропилэтиламин (23 мкл, 0,135 ммоль) объединяли в изопропаноле (0,5 мл). Результирующую смесь нагревали при 100°С в запаянной трубке высокого давления в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (1095% МеОН:Н₂О с 0,1% НСООН), затем обрабатывали АсОН в Н₂О и лиофилизировали с получением указанного в заголовке соединения (5,7 мг, 42%) в виде соли ацетата.

Ή ЯМР (400 МГц, С1)_;О1)) δ м.д. 8,17 (с, 1Н), 7,61 (с, 1Н), 7,42-7,45 (м, 1Н), 7,31-7,39 (м, 2Н), 6,997,01 (м, 1Н), 6,87-6,91 (м, 1Н), 6,79 (с, 1Н), 3,90-3,98 (м, 2Н), 3,14 (с, 3Н), 3,02 (уш.с, 2Н), 3,01 (с,3Н), 2,44 (д, 1=1,01 Гц, 3Н), 2,36-2,43 (м, 2Н), 1,94 (с, 3Н), 1,83-1,93 (м, 4Н); Μδ (Εδ+) [Μ+Нр = 503,3.

6.24. Пример 24. Синтез 3-(4-(бензилокси)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

A. Получение 1-трет-бутил-4-метил-4-гидроксипиперидин-1,4-дикарбоксилата.

К раствору метил-4-гидроксипиперидин-4-карбоксилата (полученному, как описано в заявке на патент США 2005/0080095 от 2Бепд е! а1., поданной 14 апреля 2005) (792 мг, 4,98 ммоль) и триэтиламина (1,04 мл, 7,47 ммоль) в дихлорметане (25 мл) добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (1,26 мл, 5,48 ммоль).

Протекание реакции проверяли с помощью анализа ТСХ/ΕΕδΌ. После завершения летучие вещества удаляли под вакуумом. Хроматография на силикагеле (0-10% ΜеОН:СН₂С1₂) обеспечивала указанное в заголовке соединение в виде светлого маслянистого вещества (1,25 г, 99% выход). Μδ (Εδ+) [М+Н]⁺ = 250,2.

B. Получение 1-трет-бутил-4-метил-4-(бензилокси)пиперидин-1,4-дикарбоксилата.

К раствору 1-трет-бутил-4-метил-4-гидроксипиперидин-1,4-дикарбоксилата из стадии А (535 мг, 2,06 ммоль) в ДМФ (8,2 мл) осторожно добавляли гидрид натрия (60% дисперсия в минеральном масле, 124 мг, 3,09 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Добавляли бензилбромид (0,29 мл, 2,47 ммоль) и реакцию перемешивали в течение еще 30 мин. После завершения, как проверено с помощью анализа ТСХ, реакцию гасили 50 мл из 1:1 нас. водн. NН₄С1:вода. Водный слой экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над ΜдδО₄ и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (5-10%

- 19 019488 этилацетат:гексан) обеспечивала указанное в заголовке соединение в виде светлого маслянистого вещества (359 мг, 54% выход). М8 (Е8+) [М+Н]⁺ =340,3.

С. Получение 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-(бензилокси)пиперидин-4-карбоновой кислоты.

К раствору 1-трет-бутил-4-метил-4-(бензилокси)пиперидин-1,4-дикарбоксилата из стадии В (350 мг, 1,00 ммоль) в 1:2 метанол/вода (6 мл) добавляли лития гидроксид моногидрат (200 мг). Смесь нагревали до 60°С в течение 30 мин и затем охлаждали до комнатной температуры и выливали в насыщенный водный NаН§О₄ (25 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (3x25 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над Мд§О₄ и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде вязкого маслянистого вещества, которое переносили в следующую стадию без дальнейшей очистки.

Ό. Получение трет-бутил-4-(бензилокси)-4-(3-(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)пиперидин-1-карбоксилата.

К раствору 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-(бензилокси)пиперидин-4-карбоновой кислоты из стадии С (335 мг, 1,00 ммоль), пиридина (0,43 мл, 5,40 ммоль) и ДМФ (каталитическое количество, 3 капли) в СН2С12 (6,8 мл) по каплям добавляли оксалилхлорид (0,13 мл, 1,49 ммоль, осторожно: реакция экзотермическая). После прекращения выделения газа реакцию перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 мин. К этому раствору добавляли одну часть 3-аминофенилдиметилкарбамата (244 мг, 1,35 ммоль), который перемешивали в течение еще 30 мин. Реакцию гасили насыщенным водным ΝΉ₄α и водный слой экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над Мд§О₄, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (40% этилацетат:гексан) обеспечивала указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (406 мг, 82% выход). М8 (Е8 + ) [М+ΝΉΉ = 515,4.

Е. Получение 3 -(4-(бензилокси)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

К раствору трет-бутил-4-(бензилокси)-4-(3-(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)пиперидин-1карбоксилата из стадии Ό (400 мг, 0,804 ммоль) в метаноле (4 мл) добавляли НС1 (4М раствор в диоксане, 0,8 мл). Реакцию нагревали при 50°С в течение 1 ч и затем концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде соли гидрохлорида. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 398,4.

Р. Получение 3-(4-(бензилокси)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

К раствору 3-(4-(бензилокси)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата из стадии Е и Ν,Ν-диизопропилэтиламина (0,7 мл, 4,02 ммоль) в изопропаноле (1,6 мл) добавляли 4-хлор-5-метил-7Нпирроло[2,3-й]пиримидин (135 мг, 0,804 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 110°С в запаянной виале под высоким давлением в течение 17 ч, в течение этого времени смесь становилась гомогенной. Реакцию концентрировали под вакуумом и половину вещества очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (30x100 мм С18 колонка, 20-100% ацетонитрил:вода (10 мМ ацетат аммония), 15 мин, 45 мл/мин) с получением указанного в заголовке соединения (33,4 мг) в виде белого твердого вещества.

Ή ЯМР (400 МГц, СЛ₃ОЛ) δ м.д. 9,71-9,74 (уш.с, 1Н), 8,22 (с, 1Н), 7,51 (прибл. кв, 1=1,85 Гц, 1Н), 7,44-7,49 (м, 2Н), 7,29-7,42 (м, 5Н), 7,03 (д, 1=1,01 Гц, 1Н), 6,89 (ддд, 1=7,83, 2,27, 1,26 Гц, 1Н), 4,54 (с, 2Н), 3,91-3,99 (м, 2Н), 3,45-3,54 (м, 2Н), 3,14 (с, 3Н), 3,01 (с, 3Н), 2,46 (д, 1=1,01 Гц, 3Н), 2,22-2,36 (м, 4Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 529,3.

6.25. Пример 25. Синтез 3-(4-гидрокси-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-

Неочищенный 3-(4-(бензилокси)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат из примера 24, стадии Р (85% чистота, приблизительно 80 мг) поглощали в метаноле (2 мл) и добавляли каталитическое количество катализатора Перлмана. Систему гидрировали при 60 фунт/кв. дюйм в течение 24 ч, после которых наблюдали небольшое количество продукта. Добавляли трифторуксусную кислоту (0,1 мл) и гидрирование продолжали при 60 фунт/кв. дюйм Н2 в течение 3 дней, после которых реакция была приблизительно на одну треть от завершения. Реакцию фильтровали и продукт выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ (30x100 мм С18 колонка, 10-100% ацетонитрил:вода (10 мМ ацетат аммония), 15 мин, 45 мл/мин) с получением указанного в заголовке соединения (9,6 мг) в виде белого твердого вещества.

Ή ЯМР (400 МГц, СЛ₃ОЛ) δ м.д. 8,20 (с, 1Н), 7,55 (т, 1=2,02 Гц, 1Н), 7,44 (ддд, 1=8,08, 2,02, 1,01 Гц, 1Н), 7,33 (т, 1=8,08 Гц, 1Н), 6,99 (прибл. д., 1=1,01 Гц, 1Н), 6,87 (ддд, 1=8,08, 2,27, 0,76 Гц, 1Н), 3,95-4,03 (м, 2Н), 3,73 (с, 3Н), 3,41 (дт, 1=12,63, 2,27 Гц, 2Н), 3,13-3,26 (м, 2Н), 3,12 (с, 3Н), 2,99 (с,3Н), 2,44 (д, 1=0,76 Гц, 3Н), 2,36 (дт, 1=13,39, 4,29 Гц, 2Н), 1,75-1,83 (м, 2Н). М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 439,3.

- 20 019488

6.26. Пример 26. Синтез 3-(4-(2-метоксиэтокси)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-4]пиримидин-4ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

A. Получение 1-трет-бутил-4-метил-4-(2-метоксиэтокси)пиперидин-1,4-дикарбоксилата.

К раствору 1-трет-бутил-4-метил-4-гидроксипиперидин-1,4-дикарбоксилата (360 мг, 1,39 ммоль) в ДМФ (5,6 мл) аккуратно добавляли гидрид натрия (60% дисперсия в минеральном масле, 84 мг, 2,08 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Добавляли 1-хлор-2метоксиэтан (0,38 мл, 4,17 ммоль) и реакцию перемешивали при 60°С в течение 72 ч. Реакцию гасили 25 мл воды. Водный слой экстрагировали этилацетатом (3x25 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (20-35% этилацетат:гексан) давала указанное в заголовке соединение и исходный материал в виде смеси, которую переносили далее (150 мг, 1:2 продукт:исходный материал).

Смесь продуктов из стадии А (150 мг) поглощали в 1:2 метанол:вода (3 мл). Добавляли лития гидроксид моногидрат (150 мг) и смесь нагревали при 60°С в течение 2 ч. Реакцию охлаждали до комнатной температуры и выливали в насыщенный водный ЫаН§О₄ (25 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (3x25 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над Мд8О₄ и концентрировали под вакуумом с получением 2:1 смеси 1-(трет-бутоксикарбонил)-4гидроксипиперидин-4-карбоновой кислоты и 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-(2-метоксиэтокси)пиперидин-

4- карбоновой кислоты, соответственно, в виде вязкого маслянистого вещества, которое переносили в следующую стадию без дальнейшей очистки. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 304,2.

C. Получение трет-бутил-4-(3-(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)-4-(2-метоксиэтокси)пиперидин-1-карбоксилата.

К раствору карбоновых кислот из стадии В, пиридина (0,2 мл, 2,48 ммоль) и ДМФ (каталитическое количество, 2 капли) в СН₂С1₂ (3,1 мл) по каплям добавляли оксалилхлорид (60 мкл, 0,68 ммоль, осторожно: реакция экзотермическая). После прекращения выделения газа реакцию перемешивали при температуре окружающей среды в течение 30 мин. К этому раствору добавляли одну часть 3аминофенилдиметилкарбамата (112 мг, 0,62 ммоль), который перемешивали в течение еще 30 мин. Реакцию гасили насыщенным водным ΝΠ-ιΟΙ и водный слой экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над Мд8О₄, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (80% этилацетат:гексан) обеспечивала указанное в заголовке соединение в виде белого с желтоватым или сероватым оттенком твердого вещества (150 мг). М8 (Е8+) [М+СНзСЫ]⁺ = 529,3.

Ό. Получение 3-(4-(2-метоксиэтокси)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

К раствору трет-бутил-4-(3 -(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)-4-(2-метоксиэтокси)пиперидин-1-карбоксилата из стадии С (150 мг, 0,322 ммоль) в метаноле (2 мл) добавляли НС1 (4 М раствор в диоксане, 0,3 мл). Реакцию нагревали при 50°С в течение 1 ч и затем концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде соли гидрохлорида. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 366,3.

Е. Получение 3-(4-(2-метоксиэтокси)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-4]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

К раствору 3-(4-(2-метоксиэтокси)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата из стадии Ό и Ν,Ν-диизопропилэтиламина (0,28 мл, 1,6 ммоль) в изопропаноле (1,0 мл) добавляли 4-хлор-5-метил7Н-пирроло[2,3-4]пиримидин (55 мг, 0,322 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 110°С в запаянной виале под высоким давлением в течение 17 ч, в течение этого времени смесь стала гомогенной. Реакцию концентрировали под вакуумом и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (30x100 мм С18 колонка,

5- 100% ацетонитрил:вода (ΝΉ^Αο на 10 мм), 15 мин, 45 мл/мин) с получением указанного в заголовке соединения (17,4 мг) в виде белого твердого вещества.

'|| ЯМР (400 МГц, СЭ₃ОЭ) δ м.д. 8,20 (с, 1Н), 7,51 (т, 1=2,02 Гц, 1Н), 7,40 (ддд, 1=8,08, 2,02, 1,01 Гц, 1Н), 7,33 (т, 1=8,08 Гц, 1Н), 6,98-7,02 (м, 1Н), 6,89 (ддд, 1=7,83, 2,27, 1,01 Гц, 1Н), 3,92-4,01 (м, 2Н), 3,69 (уш.с, 4Н), 3,51 (с, 3Н), 3,29-3,38 (м, 2Н), 3,12 (с,3Н), 2,99 (с, 3Н), 2,43 (д, 1=1,01 Гц, 3Н), 2,31 (дт, 1=13,64, 4,29 Гц, 2Н), 1,97-2,07 (м, 2Н). М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 497,3.

6.27. Пример 27. Синтез 3-(4-амино-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-4]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

- 21 019488

A. Получение трет-бутил-4-(трет-бутоксикарбониламино)-4-(3-(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)пиперидин-1 -карбоксилата.

№Вос-амино-(4-Н-Вос-пиперидинил)карбоновую кислоту (0,114 г, 0,33 ммоль), НАТИ (0,151 г, 0,40 ммоль) и Ν,Ν-диизопропилэтиламин (128 мг, 1,0 ммоль) объединяли в изопропилацетате (2,3 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Добавляли 3-аминофенилдиметилкарбамат (0,072 г, 0,40 ммоль) и смесь нагревали при 80°С в течение 1,5 ч. Реакционную смесь охлаждали, разбавляли ЕЮАс, промывали 2н Ν;·ι₂0Ό₃. 1н. НС1 и солевым раствором и затем высушивали над Мд8О₄ и концентрировали. Очистка с помощью хроматографии на силикагеле (60% ЕЮАс/гексан) давала указанное в заголовке соединение (0,075 г, 45%) в виде белого твердого вещества. М8 (Ε8+)[Μ+ΝΗ₄]⁺ = 524.

B. Получение 3-(4-аминопиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

К раствору трет-бутил-4-(трет-бутоксикарбониламино)-4-(3-(диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)пиперидин-1-карбоксилата из стадии А (0,141 г, 0,28 ммоль) в МеОН (2 мл) добавляли НС1 (4н в диоксане, 0,21 мл, 0,84 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 14 ч. Далее добавляли эквиваленты НС1/диоксан в это время и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение дополнительных 24 ч. Растворитель удаляли под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (0,084 г, 98%), которое переносили в неочищенном виде. М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 307.

C. Получение 3 -(4-амино-1 -(5-метил-7Н-пирроло [2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата.

3-(4-аминопиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат из стадии В (0,109 г, 0,36 ммоль), 4хлор-5-метил-7Н-пирроло[2,3-б] пиримидин (0,060 г, 0,36 ммоль) и Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,277 г, 2,14 ммоль) объединяли в изопропаноле (5 мл) и нагревали в запаянной трубке при 120°С в течение 18 ч. Смесь концентрировали и осадок очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-10% МеОН/СН₂С1₂) с получением указанного в заголовке соединения (0,085 г, 55%) в виде белого твердого вещества.

'|| ЯМР (400 МГц, СО₃ОЭ) δ м.д. 8,25 (с, 1Н), 7,61 (м, 1Н), 7,47 (м, 1Н), 7,38 (м, 1Н), 7,05 (д, 1=1,0 Гц, 1Н), 6,91 (м, 1Н), 4,00 (м, 2Н), 2,48 (м, 2Н), 3,18 (с, 3Н), 3,05 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,45 (м, 2Н), 1,72 (м, 2Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 438.

6.28. Пример 28. Синтез 3-(4-(диметиламино)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4ил)пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

3-(4 -амино -1-(5 -метил-7Н-пирроло [2,3-ά] пиримидин-4 -ил) пиперидин-4 карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат из примера 27, стадии С (0,028 г, 0,064 ммоль) растворяли в МеОН (1 мл). Добавляли формальдегид (37 вес.% раствор в Н₂О, 0,15 ммоль, 12 мкл) с последующим добавлением АсОН (0,26 ммоль, 15 мкл) и NаВНзСN (0,008 г, 0,13 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч перед концентрированием под вакуумом. Очистка с помощью препаративной ВЭЖХ обеспечивала указанное в заголовке соединение (0,017 г, 57%) в виде белого твердого вещества.

'|| ЯМР (400 МГц, СО₃ОЭ) δ м.д. 8,21 (с, 1Н), 7,56 (м, 1Н), 7,46 (м, 1Н), 7,37 (м, 1Н), 7,03 (д, 1=1,0 Гц, 1Н), 6,92 (м, 1Н), 4,08 (м, 2Н), 3,47 (м, 2Н), 3,17 (с, 3Н), 3,04 (с, 3Н), 2,48 (с, 3Н), 2,40 (с, 6Н), 2,26 (м, 2Н), 2,09 (м, 2Н); М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 466.

6.29. Пример 29. Синтез 3-(4-((2-(1Н-имидазол-5-ил)ацетамидо)метил)-1-(5-метил-7Н-пирроло [2,3б]пиримидин-4-ил) пиперидин-4-карбоксамидо)фенилдиметилкарбамата

К суспензии 2-(1Н-имидазол-5-ил)уксусной кислоты (0,238 г, 1,47 ммоль) и НАТИ (0,372 г, 0,978 ммоль) в СН₂С1₂ (5 мл) добавляли Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,51 мл, 2,93 ммоль). Результирующий

- 22 019488 раствор перемешивали в течение 20 мин. при комнатной температуре. К этому раствору добавляли соль ацетата 3-(4-(аминометил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)пиперидин-4-карбоксамидо) фенилдиметилкарбамата (из примера 20, 0,500 г, 0,97 8 ммоль) и Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,17 мл) в СН₂С1₂ (5 мл). Реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение б ч и затем разбавляли Н₂О (10 мл) и СН₂С1₂ (20 мл). Смесь экстрагировали СН₂С1₂ (2x10 мл) и объединенные органические вещества промывали NаНСО₃ (10 мл) и солевым раствором (10 мл), высушивали над Мд8О₄ и концентрировали под вакуумом. Осадок очищали с помощью флэш-хроматографии (3-10% МеОН:СН₂С1₂) с получением указанного в заголовке соединения (0,393 г, 72% выход) в виде белого твердого вещества. Это твердое вещество суспендировали в воде и добавляли уксусную кислоту, пока раствор не становился прозрачным. Этот раствор замораживали и лиофилизировали до соли диацетата указанного в заголовке соединения (0,477 г).

'|| ЯМР (400 МГц, МеОЭ-б₆) δ м.д. 8,17 (с, 1Н), 7,57 (д, 1=0,76 Гц, 1Н), 7,47 (т, 1=2,02 Гц, 1Н), 7,37 (ддд, 1=1,01, 1,77, 8,08 Гц, 1Н), 7,30 (т, 1=8,08 Гц, 1Н), 6,98 (д, 1=1,01 Гц, 1Н), 6,92 (с, 1Н), 6,87 (ддд, 1=1,01, 2,27, 8,08 Гц, 1Н), 3,87 (ддд, 1=3,28, 3,28, 14,15 Гц, 2Н), 3,58 (с, 2Н), 3,52 (с, 2Н), 3,32-3,38 (м, 2Н), 3,12 (с, 3Н), 3,00 (с, 3Н), 2,42 (д, 1=0,76 Гц, 3Н), 2,35-2,42 (м, 2Н), 1,96 (с, 6Н), 1,75-1,85 (м, 2Н). М8 (Е8+) [М+Н]⁺ = 560.

6.30. Пример 30. Дополнительные соединения.

Используя методики, описанные в настоящей заявке, и способы, известные в данной области техники, получали дополнительные соединения, перечисленные ниже в табл. 1. Данные ЫМК2 1С₅₀, которые показаны ниже для некоторых из соединений, определяли, используя анализ, описанный в примере 32.

Таблица 1

Соединение	М5 (М+Н) ⁺	ЫМК2 1С_5О
И- (3-(4-фторфенокси)фенил)-4-метил-1-(5метил-7Н-пирроло [2,3 - с?] пиримидин-4- ил)пиперидин-4-карбоксамид	460	< 250 нМ
Ν- (3-бромфенил)-4-метил-1-(5-метил-7Япирроло[2 _г3-сП пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамид	428	< 250 нМ
Ν-(3-бромфенил)-1-(5-хлор-7Д-пирроло[2,3ά] пиримидин-4-ил)-4-метилпиперидин-4карбоксамид	450	< 250 нМ
Ν- (3- (Ν-изопропилсульфамоил) фенил) -4-метил- 1-(5-метил-7Н-пирроло [2,3-сПпиримидин-4- ил)пиперидин-4-карбоксамид	471	< 250 нМ
4-аллил-М- (3-бромфенил)-1-(5-метил-7Ипирроло [2,3 - с!] пиримидин-4-ил) пиперидин-4карбоксамид	455	< 250 нМ
Ν- (4-метоксифенил)-4-метил-1-(5-метил-7Япирроло[2 _г3-сП пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамид	380	< 250 нМ
4-аллил-И- (3-трет-бутилфенил)-1-(5-метил-7Нпирроло [2,3-с?] пиримидин-4-ил) пилеридин-4карбоксамид	432	< 250 нМ
4-метил-1-(5-метил-7Я-пирроло[2, 3- сП пиримидин - 4 - ил) -Ν- {3 - (трифторметил)фенил)пиперидин-4-карбоксамид	418	< 250 нМ
4-аллил-Ν- (3- (4-фторфенокси)фенил)-1-(5метил-7И-пирроло [2,3 - с!] пиримидин-4- ил)пиперидин-4-карбоксамид	чае	< 250 нМ
4-аллил-ЛГ- (3-фторфенил) -1- (5-метил-7Нпирроло[2,3-сП пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамид	394	< 250 нМ
4-аллил-№ (3-метоксифенил)-1-(5-метил-7Япирроло[2,3-сП пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамид	405	< 250 нМ

- 23 019488

3-(4-аллил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3- ¢/] пиримидин-4-ил) пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	463	< 250 нМ
3-(4-изопропил-1-(5-метил-7И-пирроло[2,3й] пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	465	< 250 нМ
4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3й] пиримидин-4-ил) -^фенилпиперидин-4карбоксамид	350	< 250 нМ
3-(1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4 - ил)-4-пропилпиперидин-4- карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	465	< 250 нМ
Ν- (З-бром-4-фторфенил)-4-метил-1-(5-метил7Я-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамид	447	< 250 нМ
4-метил-1-(5-метил-7Я-пирроло[2,3й] пиримидин-4-ил) -N-(3- (морфолиносульфонил)фенил)пилеридин-4карбоксамид	499	< 250 нМ
4-метил-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3- й] пиримидин-4-ил) -27-м-толилпиперидин-4карбоксамид	364	< 250 нМ
М- (3-изобутирамидофенил)-4-метил-1-(5-метил7Я-пирроло[2,3-й] пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамид	435	< 250 нМ
Ν- (3-(2-(диметиламино)-2-оксоэтил)фенил)-4метил-1-(Б-метил-ТЯ-пирроло[2,3-й]пиримидин4-ил)пиперидин-4-карбоксамид	435	< 250 нМ
3- (4-метил-1- (5-метил-7Н'-пирроло [2,3- й]пиримидин-4-ил)пиперидин-4- карбоксамидо)фенилморфолин-4-карбоксилат	479	< 250 нМ
3-(1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4ил)-4-((3-метилуреидо)метил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	509

- 24 019488

3-(4-((2-(диметиламино)этокси)метил)-1-(5метил-7Я-пирроло[2,3-й] пиримидин-4- ил)пиперидин- 4 - карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	524
3-(4-циано-1-(5-метил-7Я-пирроло[2,3й] пиримидин-4-ил} пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	443
3-(4-(ацетамидометил}-1-(5-метил-7Я- пирроло [2,3-с?] пиримидин-4-ил) пиперидин-4- карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	494	< 250 нМ
3-(4-(2-аминоэтиламино)-1-(5-метил-7Нпирроло [2, 3-й] пиримидин-4 - ил) пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	431	< 250 нМ
3-(4-(2-(трет- бутоксикарбониламино) этиламино) -1-(5-метил- 7 Н-пирроло [2,3-й] пиримидин - 4 -ил} пиперидин - 4 - карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	581	< 250 нМ
3-(4-(2-(бензилокси)этиламино)-1-(5-метил7Я-пирроло [2, 3-й] пиримидин-4-ил) пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	572	< 250 нМ
3-(4-Циано-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3й]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	448	< 250 нМ
3-(4-(2-гидроксиэтиламино)-1-(5-метил-7Ипирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	482	< 250 нМ
3-(4-((1-бензил-1Л-тетразол-5-ил)метил)-1- (5-метил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4- ил)пиперидин-4- карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	595	< 250 нМ
3-(4-((1Л-тетразол-5-ил}метил)-1-(5-метил- 7Н-пирроло[2,3-й] пиримидин-4-ил)пиперидин-4- карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	505	< 250 нМ

- 25 019488

3-(1-(5-метил-7Н-пирроло[2,З-ά] пиримидин-4- ил)-4-(метилсульфонамидометил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	530	< 250 нМ
3-(4-((Ν,Ν-диметилсульфамоиламино)метил)-1- (5-метил-7Я-пирролО[2,З-ά] пиримидин-4- ил)пиперидин-4 - карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	559	< 250 нМ
3-(4-((метоксикарбониламинометил)-1-(5метил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4 ил)пиперидин-4 - карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	510	< 250 нМ
3-(4-((1-метил-1Н-пиразол-4карбоксамидо)метил)-1-(5-метил-7Япирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	560	< 250 нМ
3- (1- (5-метил-7Я-пирроло [2, 3-й] пиримидин-4- ил) -4- ( (морфолино- карбоксамидо) метил) пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	565	< 250 нМ
3-(1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4- ил)-4-(уреидометил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	495	< 250 нМ
3-(4-((3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2метилпропанамидо)метил)-1-(5-метил-7Япирроло [2,3-й] пиримидин-4-ил) пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	568	< 250 нМ
3-(4-( (1-третбутоксикарбониламиноциклопропанкарбоксамидо) метил)-1-(5-метил-7Н- пирроло[2,3- Й] пиримидин-4 -ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	635	< 250 нМ
3-(4-((2-аминоацетамидо)метил)-1-(5-метил7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	509	< 250 нМ

- 26 019488

3-(4-((2-(диметиламино)ацетамидо)метил)-1(5-метил-7Я-пирроло [2,3-<ί] пиримидин-4ил)пиперидин-4- карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	537	< 250 нМ
3-(1-(5-метил-7Н-пирроло[2,З-ά]пиримидин-4ил)-4-((сульфамоиламино)метил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	531	< 250 нМ
3-(1-(5-метил-7Н-пирроло[2,З-ά]пиримидин-4- ил)-4-(27Г-тетразол-5-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	491	< 250 нМ
3-(4-((1Н-имидазол-2-ил)метил)-1-(5-метил7Я-пирроло [2,3-с?] пиримидин-4-ил) пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	503	< 250 нМ
3-(4-((1- аминоциклопропанкарбоксамидо)метил)-1-(5метил-7Н- пирроло[2,З-й]пиримидин-4- ил)пиперидин-4 - карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	535	< 250 нМ
(5)-3-(4-((2-амино-З-(1Н-имидазол-4- ил)пропанамидо)метил)-1-(5-метил-7Япирроло[2,3-ά]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	589	< 250 нМ
4-(аминометил)-1- (5-метил-7Я-пирроло[2,3'7] пиримидин-4 - ил) -Ν- (3 - (оксазол-5 - ил)фенил)пиперидин-4-карбоксамид	432	< 250 нМ
3-(1-(5-метил-7Н-пирроло[2,З-ά]пиримидин-4ил)-4-(морфолинометил)пиперидин-4 карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	522	< 250 нМ
(5)-3-(4-((2-амино-Згидроксипропанамидо)метил)-1-(5-метил-7Япирроло [2,3-сГ] пиримидин-4-ил) пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбама т	539	< 250 нМ

- 27 019488

(5)-3-(4-((2,5-диаминопентанамидо)метил)-1- (5-метил-7Н-пирроло [2, 3-сЗ] пиримидин-4- ил)пиперидин-4- карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	566	< 250 нМ
3-(4-(азидометил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3с?] пиримидин-4-ил) пиперидин-4- карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	478	< 250 нМ
4-(аминометил)-Ν- (3-гидроксифенил)-1-(5метил - 7 Н- пирроло [ 2,3 - с/] пиримидин - 4 - ил)пиперидин-4 -карбоксамид	381	< 250 нМ
3-(1-(5-метил-7Н-пирроло(2,З-ά]пиримидин-4ил)-4-(2-мсрфолиноэтил)пиперидин-4 карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	536	< 250 нМ
диметил 1 - ( (4- (3- (диметилкарбамоилокси)фенилкарбамоил)-1-(5метил-7Я- пирроло[2,З-сЗ]пиримидин-4ил)метил)-1Н-1,2,З-триазол-4,5-дикарбоксилат	620	< 250 нМ
3-(4-((5-метил-1Я-пиразол-3карбоксамидо)метил)-1-(5-метил-7Япиррсло [2, 3 - с?] пиримидин-4-ил) пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	560	< 250 нМ
3-(4-((2-(2-метоксиэтокси)ацетамидо)метил)- 1- (5 -метил-7Я-пирроло [2,3-<3] пиримидин-4- ил)пиперидин-4 - карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	568	< 250 нМ
4 -(аминометил)-1-(5-метил-ΊΗ-пирроло[2,3<3]пиримидин-4-ил)-И-м-толилпиперидин-4карбоксамид	379	< 250 нМ
4-(аминометил)-Ν- (3-хлорфенил)-1-(5-метил7Я-пирроло[2,3-с!]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамид	399	< 250 нМ
4-(аминометил)-Ν- (3-метоксифенил) -1-(5метил-7Я-пирроло [2,3-сЗ] пиримидин-4ил)пиперидин-4-карбоксамид	395	< 250 нМ

- 28 019488

4-(аминометил)-Ν- (3-фторфенил)-1-(5-метил- 7Н-пирроло [ 2,3 - с?] пиримидин-4-ил) пиперидин-4 карбоксамид	383	< 250 нМ
4-(аминометил)-Ν-(3- (изопропилкарбамоил)фенил)-1-(5-метил-7Япирроло [ 2,3 - с/] пиримидин - 4-ил)пипе ридин - 4 карбоксамид	450	< 250 нМ
4-(аминометил)-Ν-(3- (диметилкарбамоил)фенил)-1-(5-метил-7Нпирроло[2,З-ά]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамид	436	< 250 нМ
4-(аминометил)-17- (3-(2-(диметиламино)-2оксоэтокси)фенил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3<7] пиримидин-4-ил) пиперидин-4-карбоксамид	466	< 250 нМ
3-(4-((3-метоксипропанамидо)метил)-1-(5метил-7Н-пирроло [2,3 - с1] пиримидин-4 - ил)пиперидин-4- карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	538	< 250 нМ
3-(4-((2-метоксиацетамидо)метил)-1-(5-метил777-пирроло [2, З-с!) пиримидин-4-ил) пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	524	< 250 нМ
4-(аминометил)-Ν- (3-(2-метоксиэтокси)фенил)- 1-(5-метил- 7И-пирроло[2,3 -ά] пиримидин-4 - ил)пиперидин-4-карбоксамид	439	< 250 нМ
4-(аминометил)-1-(5-метил-7Я-пирроло[2,3с(] пиримидин-4-ил) -Ν- (3- (трифторметил)фенил)пиперидин-4-карбоксамид	433	< 250 нМ
4-(аминометил)(3-цианофенил)-1-(5-метил7Я-пирроло[2,3 - ά] пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамид	390	< 250 нМ
3-(4-((2-(2,5-диоксоимидазолидин-4- ил)ацетамидо)метил)-1-(5-метил-7Япирроло [2,3-с(] пиримидин-4-ил) пиперидин-4 карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	592	< 250 нМ

- 29 019488

4-(аминометил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3й] пиримидин-4-ил)-ΛΓ-(2- метиламино) бензо [й] оксазол-6-ил) пиперидин-4карбоксамид	435	< 250 нМ
4-(аминометил)-Ν-(2- (диметиламино) бензо [с?] оксазол-б-ил) -1- (5- метил-7Я-пирроло [2,3 - οί] пиримидин-4- ил)пиперидин-4-карбоксамид	449	< 250 нМ
3-(4-(аминометил)-1-(5-метил-777-пирроло[2,3й] пиримидин-4-ил) пиперидин-4- карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	480	< 250 нМ
3-(4-(аминометил)-1-{5-метил-7Н-пирроло[2,3й] пиримидин-4-ил)пиперидин-4- карбоксамидо)фенилпирролидин-1-карбоксила т	478	< 250 нМ
4-(аминометил)-Ν- (3-бромфенил)-1-(5-метил- 7 Н-пирроло[2,3- с?]пиримидин-4 -ил)пиперидин-4карбоксамид	443	< 250 НМ
4-(аминометил)-Ν- (3-изопропоксифенил)-1-(5ме тил-7 Я-пирр оло[2,3 -й] пиримидин - 4 - ил)пиперидин-4-карбоксамид	423	< 250 нМ
4-(аминометил)-Ν- (3-трет-бутилфенил)-1- (5метил-7Н-пирроло[2,3-ά]пиримидин-4- ил)пиперидин-4-карбоксамид	421	< 250 нМ
(К) -3- (1- (5-метил-7 77-пирроло [2,3й]пиримидин-4-ил)-4-((пирролидин-2карбоксамидо)метил)пиперидин-4 карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	549
3- (1- (5-метил-7Я-пирроло [2,3-сУ] пиримидин-4ил)-4-((метиламино)метил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	46δ
3-(4-(2- (диметиламино) этил) -1- (5-метил-777пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамидо)фенилдиэтилкарбамат	522

- 30 019488

4-(2-(диметиламино)этил)-Ν-(3- изопропоксифенил)-1-(5-метил-7Я-пирроло[2,3й] пиримидин-4-ил) пиперидин-4-карбоксамид	465
Ν-(З-трет-бутилфенил)-4-(2- (диметиламино)этил)-1-(5-метил-7Н- пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамид	463
3- (1- (5-метил-7Я-пирроло [2,3 - с?] пиримидин-4ил)-4-((5-оксопирролидин-2- карбоксамидо)метил)пиперидин-4 - карбоксамидо)фенилдиметилкарбамат	563
Д'-(3-бромфенил)-4-(2-(диметиламино)этил)-1- (5-ме тил-7 Н- пирроло[ 2, 3 - й]пиримидин- 4 - ил)пиперидин-4-карбоксамид	485
4-(2-(диметиламино)этил)-1-(5-метил-7Япирроло[2,3-й] пиримидин-4-ил)-Ν-(3- (трифторметил)фенил)пиперидин-4-карбоксамид	475
3-(4-(аминометил)-1-(5-метил-7Я-пирроло[2,3й] пиримидин-4-ил)пиперидин-4- карбоксамидо)фенилдииэопропилкарбамат	508
4-(аминометил)-Ν- (4-(аминометил}фенил)-1-(5метил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4- ил)пиперидин-4-карбоксамид	394
4-(аминометил)-Ν-(4- ((диметиламино)метил)фенил)-1-(5-метил-7 ίίпирроло [2, 3-й]пиримидин-4-ил)пиперидин-4карбоксамид	422
4-(аыинометил)-Ν- (3-этоксифенил)-1-(5-метил- 7 Д'-пирроло [2, 3-й] пиримидин-4 -ил) пиперидин-4карбоксамид	409
4-(аминометил)-Ν- (3-изобутоксифенил)-1-(5метил-7Я-пирроло[2,3-й]пиримидин-4- ил)пиперидин-4-карбоксамид	437
(Я)-4-(аминометил)-1-(5-метил-7Нпирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)-Ν-(3(тетрагидрофуран-3-илокси)фенил)пиперидин-4карбоксамид	451
4-(аминометил)-Ν- (3-(циклопентилокси)фенил)- 1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4- ил)пиперидин-4-карбоксамид	449
4-(аминометил)-1-(5-метил-7Н-пирроло[2,3й] пиримидин-4-ил)-Ν- (3-(тетрагидро-2Д-пиран4-илокси)фенил)пиперидин-4-карбоксамид	465
4-(аминометил)-Ν- (3- {(ЗВ, 4Я)-4гидрокситетрагидрофуран-3-илокси)фенил)-1(5-метил- 7Я- пирроло[2,3 - й] пиримидин-4 ил)пиперидин-4-карбоксамид	467

- 31 019488

6.31. Экспрессия и очистка ЫМК2.

ЫМК2 экспрессировали, используя бакуловирусную систему экспрессии ВАС-1о-ВАС® (1пуйгодеп). Рекомбинантный бакуловирус получали согласно указаниям изготовителя, как сформулировано в инструкции по применению. Кратко, плазмиды (рРас1Вас1 или рРа81ВасНТ), имеющие вставки ЫМК2, превращали в эффективность МАХ ЭН10Вас компетентную Е.сой, чтобы получить рекомбинантную бакмиду. ЭН10Вас Е. сой штамм хозяина содержит шаттл-вектор бакуловируса (бакмиду) с целевым участком мини-аб:Тп7 и плазмидой помощника и обеспечивает генерацию рекомбинантной бакмиды после транспозиции между элементом мини-Тп7 на вектор рРа&Вас и целевым участком миниаИТп7 на бакмиду. Реакция транспозиции происходит в присутствии белков транспозиции, поставляемых плазмидой помощника. Клетки высевали на чашку Петри, и белые колонии собирали для выделения бакмиды, как описано в инструкции по применению.

Выделенную бакмиду ДНК трансфицировали в клетки 8Р9 для получения рекомбинантного бакуловируса и вирус собирали спустя пять дней после трансфекции. Вирус амплифицировали в кювете Т75 при множественном заражении (МО1) 0,2. Амплифицированный вирус применяли для инфицирования клеток БР9 при МО1 5 для экспрессии белка.

Для легкой очистки структур ЫМК2 применяли 50 мл культуры клеток 8Г9. инфицированных рекомбинантным бакуловирусом. Клетки собирали центрифугированием в течение 5 мин при 500 х д. Затем клетки повторно суспендировали в буфере для лизиса (5 объемов на грамм клеток). Стандартный буфер для лизиса содержит следующие компоненты: 50 мМ НЕРЕ8 (рН 8,0), 300 мМ КС1, 10% глицерин, 1% ΝΡ-40, 15 мМ имидазол, 1 мМ бензамидин и ингибиторы полной протеазы Роша (1 таблетка на 50 мл клеточного лизата). Суспензию клеток лизировали за один перенос через МюгоПшбюк М|сгоПшб|/ег М110Υ при давлении жидкости 14000-20000 фунт/кв. дюйм с последующим центрифугированием лизата при 60000 х д в течение 15 мин при 4°С.

Супернатант загружали непосредственно на хроматографическую матрицу, содержащую ион кобальта, ковалентно связанный с нитрилотриуксусной кислотой НТК. Хроматографическую матрицу уравновешивали в том же самом буфере, как раствор загрузки белка. Ионно-обменная смола обычно имеет связывающую способность, эквивалентную 5-10 мг гистидинмеченому белку на мл упакованной смолы. Количество экстракта, которое может быть загружено в колонку, зависит от количества растворимого гистидин-меченого белка в экстракте. Колонку затем промывают пошаговым способом, вопервых, с: 50 мМ НЕРЕ8 (рН 8,0), 300 мМ КС1, 10% глицерин, 1% ΝΡ-40, 15 мМ имидазол, 1 мМ бензамидин; во-вторых, с 20 мМ НЕРЕ8 (рН 8,0), 500 мМ КС1, 10% глицерин и 20 мМ имидазол; в-третьих, с 20 мМ НЕРЕ8 (рН 8,0), 100 мМ КС1, 10% глицерин и 20 мМ имидазол; с последующим элюированием 250 мМ имидазолом в том же самом буфере. Раствор белка ЫМК2 затем анализировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-ПААГ) и вестерн-блоттинга, используя коммерчески доступные антитела, направленные как к карбоксильному концу, так и к внутренним каталитическим доменам белка. В целях хранения белок диализировали в 50 мМ Трис (рН 7,5), 150 мМ №С1, 0,1% ВМЕ, 0,03% Вгу-35 и 50% глицерине.

Крупномасштабную очистку Ь1МК2 проводили в волновом биореакторе (\7аус Вю1сс11) с 10 л объемами культуры. 10 л клеточной культуры при 2-3х10⁶ жизнеспособных клеток/мл инфицировали при МО1=5 рГи/клетка и собирали через 48 ч после инфицирования.

6.32. Анализ 1п Уйго ингибирования Ь1МК2.

Анализ ίη уйго разработали для идентификации ингибиторов ЫМК2. Аналитическое считывание было включением ³³Р из основания АТФ в иммобилизованный основной миелиновый белок с микропланшетом для радиометрического анализа (Регкш Е1тег Вюкшепсек), который подсчитывали на сцинтилляционном счетчике, оборудованном планшет-ридером (ТорСоип!, Раскагб Вюкшепсе, Мепбеп, СТ). Используя 384 луночные плоские МБР микропланшеты, полный объем анализа был 50 мкл. Программу НТ8 использовали Вютек РХ для разбавления.

Для каждого анализа ингредиенты и условия были следующими: 200 нг фермента инкубировали в буфере для анализа (1Х буфер для анализа содержит 30 мМ НЕРЕ8 (рН 8,0), 5 мМ ЭТТ и 10 мМ МдС1₂), 10 мкМ АТФ, 0,2 цС1 [гамма-³³Р]-АТФ и 10 мкМ потенциального ингибирующего соединения. Реакцию инкубировали при комнатной температуре в течение 60 мин, промывали 3 раза 75 мкл остановка/промывание буфером (1Х остановка/промывание буфер содержит 50 мМ ЕЭТА и 20 мМ Трис (рН 7,4)) и затем планшеты прочитывали на сцинтилляционном счетчике.

Различные концентрации стауроспорина (400 нМ, 200 нМ, 100 нМ и 50 нМ; приобретенного от В1ОМОЬ (Р1утои111 Меебпд, РА)), использовали в качестве контроля на каждом планшете.

6.33. Дексаметазон-индуцированная модель внутриглазной гипертензии.

Мышиные двадцати восьми дней А1хе1 миниосмотические насосы (ЭИКЕСТ Согр., Сирегйпо, СА) наполняли раствором водорастворимого дексаметазона (декс) в РВБ (Б1дта, 8ΐ. Бон® МО) так, чтобы они высвобождали приблизительно 0,1 мг декс в день. Как только насосы были заполнены декс, насосы уравновешивали в РВБ при 37°С в течение 60 ч. Уравновешенные насосы хирургическим путем вводили подкожно в спины гибридов мышей дикого типа С57:129 Р2, весящих между 25 и 35 г. Хирургические

- 32 019488 разрезы зашивали 5-0 плетеной шелковой нитью (ЛОВО2, СаНЬегзЬигд, ΜΌ) и обрабатывали антибиотической мазью повсеместно в течение продолжительности исследования. Хирургические разрезы склеивали Т^88иеΜеηά II (^еЬб!ег Уе1еппагу, Нои81оп, ТХ). Анальгетик (бупренорфин) давали через ΙΡ инъекцию в день операции и спустя 24 ч после операции. Внутриглазное давление (ВГД) измеряли у этих мышей, используя тонометр ТопоЬаЬ (Со1оша1 Μеά^са1 διιρρΚ Со., Ргапсоша, ΝΉ). На мышей мягко воздействовали седативным средством изофлураном и местно обезболивали 0,5% пропаракаином (Акогп, Ви££а1о Сгоуе, 1Ь) до измерения ВГД. Исходный уровень ВГД измеряли за 1 день до имплантации мининасоса. После имплантации мининасоса измерения ВГД проводили 2-3 раза в неделю в течение 4 недель. Фармакологические исследования проводили с потенциальными глазными гипотензивными соединениями между 21 и 28 днями после имплантации.

6.34. Эффекты 1п У1уо.

Соединения изобретения затем проверяли у мышей на модели внутриглазной гипертензии, описанной выше. Эффекты четырех соединений изобретения, введенных местно в глаза мышей, описаны ниже в табл. 2:

Таблица 2

Соединение	Доза³	Состав⁰	Изменения во ВГД (Число исследований)^с
2 часа	4 часа	6 часов
Ά	30	1	-4,4	-1,6	Не проверяли
Ά	3	1	-4,2(7)	-2,6(7)	-1,3(4)
Ά	0,3	1	-2,0(3}	-1,6(3)	-0,1
А	3	2	-4,6	-2,6	-1,4
В	30	2	-4,1	-2,5	-,03
В	3	2	-3,4	-2,2	-0,3
с	3	3	-3,5(2)	-0,9 (2)	-0,5 (2)
О	3	3	-1,8	-0,8	Не проверяли
о	0,3	3	-2,2	-0,4	Не проверяли

^а Микрограмм в глаз.

^Ь Офтальмологически приемлемые эксципиенты использовали для получения различных составов. рН состава 1 был 7,2; рН состава 2 был 7,2; и рН состава 3 был 6,0.

^с Время представляет собой часы после дозирования.

Эффект соединения А сравнивали с эффектом тимолола на гипертензивной модели. Как показано на чертеже, местное введение 3 мкг соединения А в глаз достигало, по существу, эффекта, сравнимого с местным введением в глаз 15 мкг тимолола.

Все публикации (например, патенты и заявки на патент), процитированные выше, включены в настоящее описание в полном объеме посредством ссылки.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы или его фармацевтически приемлемая соль, где

А представляет собой необязательно замещенный фенил;

Л! представляет собой водород, галоген, циано или необязательно замещенный алкил;

Л₂ представляет собой водород;

Л₃ представляет собой Л_3А, ОЛ_3В или Ν(Κ_3Β)₂;

каждый Л_3А представляет собой необязательно замещенный алкил, алкилфенил, фенил или гетероалкил;

каждый Л_3В представляет собой независимо водород или необязательно замещенный алкил;

- 33 019488 каждый Кд представляет собой независимо галоген, ОКд_А, ОС(О)Ы(К4_А)2, 8О2К4А или необязательно замещенный алкил, гетероалкил или гетероарил;

каждый Кда представляет собой независимо водород или необязательно замещенный алкил; и η представляет собой 0 или 1;

с условием, что когда К1 и К2 оба представляют собой водород, Кд не является галогеном, и где алкил означает с прямой цепью или разветвленный углеводород, имеющий от 1 до 4 атомов углерода, гетероалкил относится к Смоалкильной группе, в которой по меньшей мере один из ее атомов углерода замещен Ν, О или 8;

гетероарил означает арильную группу, в которой по меньшей мере один из ее атомов углерода замещен N или О.
2. Соединение по п.1, в котором К1 представляет собой водород.
3. Соединение по п.1, в котором К1 представляет собой галоген.
4. Соединение по п.1, в котором К1 представляет собой необязательно замещенный алкил.
5. Соединение по п.1, в котором К3 представляет собой Кза.
6. Соединение по п.5, в котором Кза представляет собой необязательно замещенный алкил.
7. Соединение по п.1, в котором К3 представляет собой ОКзв или N(^3)2.
8. Соединение по п.7, в котором Кзв представляет собой водород.
9. Соединение по п.7, в котором Кзв представляет собой необязательно замещенный алкил.
10. Соединение по п.1, в котором К4 представляет собой галоген.
11. Соединение по п.1, в котором Кд представляет собой ОС(О^(КдаЬ.
12. Соединение по п.11, в котором по меньшей мере один Кда представляет собой алкил.
13. Соединение по п.1, имеющее формулу
14. Соединение по п.13, в котором К1 представляет собой водород.
15. Соединение по п.13, в котором К] представляет собой галоген.
16. Соединение по п.13, в котором К1 представляет собой необязательно замещенный алкил.
17. Соединение по п.13, в котором К3 представляет собой Кза.
18. Соединение по п.17, в котором Кза представляет собой необязательно замещенный алкил.
19. Соединение по п.13, в котором К3 представляет собой ОКзв или N(^3)2.
20. Соединение по п.19, в котором Кзв представляет собой водород.
21. Соединение по п.19, в котором Кзв представляет собой необязательно замещенный алкил.
22. Соединение по п.13, в котором К4 представляет собой галоген.
23. Соединение по п.13, в котором Кд представляет собой ОС(О^(Кда)2.
24. Соединение по п.23, в котором по меньшей мере один Кда представляет собой алкил.
25. Способ понижения внутриглазного давления у пациента, который включает введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически или профилактически эффективного количества соединения по п.1.
26. Способ лечения, контроля или предотвращения заболевания или нарушения, затрагивающего зрение пациента, который включает введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически или профилактически эффективного количества соединения по п.1.
27. Способ по п.26, в котором заболевание или нарушение, затрагивающее зрение, представляет собой глаукому, нейродегенерацию или инфекцию.