EA014980B1 - A process for enzymatic resolution of racemic 3-aryl-4-aminobutyric acid - Google Patents

A process for enzymatic resolution of racemic 3-aryl-4-aminobutyric acid Download PDF

Info

Publication number
EA014980B1
EA014980B1 EA200801878A EA200801878A EA014980B1 EA 014980 B1 EA014980 B1 EA 014980B1 EA 200801878 A EA200801878 A EA 200801878A EA 200801878 A EA200801878 A EA 200801878A EA 014980 B1 EA014980 B1 EA 014980B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
aryl
aminobutyric acid
extraction
racemic
ester
Prior art date
Application number
EA200801878A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
EA200801878A1 (en
Inventor
Григорий Вейнберг
Максим Ворона
Антонс Лебедевс
Александрс Чернобровыйс
Иварс Калвиньш
Original Assignee
Акционерное Общество "Олайнфарм"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Акционерное Общество "Олайнфарм" filed Critical Акционерное Общество "Олайнфарм"
Publication of EA200801878A1 publication Critical patent/EA200801878A1/en
Publication of EA014980B1 publication Critical patent/EA014980B1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/001—Amines; Imines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/006—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

A process for the enzymatic resolution of racemic 3-aryl-4-aminobutyric acid ester into its R-and S-enantiomers, wherein aryl is represented by phenyl group (Phenybut) or p-chlorophenyl group (Baclofen) and ester group by saturated or unsaturated alkyl containing from 2 to 8 carbon atoms. The disclosed process includes the following steps: (1) selective cyclization of 3(S)-aryl-4-aminobutyric acid ester into 4(S)-aryl-2-pyrrolidinone using racemic 3-aryl-4-aminobutyric acid ester in water solution in the presence of -chymotrypsin; (2) acidification of reaction mixture to pH<2.0 and separation of 4(S)-aryl-2-pyrrolidinone and 3(R)-aryl-4-aminobutyric acid ester by extraction; (3) isolation of 4(S)-aryl-2-pyrrolidinone from organic phase and 3(R)-aryl-4-aminobutyric acid ester from water phase and their conversion into respectively R-and S-isomers of 3-aryl-4-aminobutyric acid by acidic hydrolysis.

Description

Изобретение относится к выделению чистых К- и δ-энантиомеров, входящих в рацемическую 3арил-4-аминомасляную кислоту, методом их энзиматического разделения. Например, этим методом могут быть получены чистые К- и δ-энантиомеры рацемической 3-фенил-4-аминомасляной кислоты (фенибут) или 3-пара-хлорфенил-4-аминомасляной кислоты (баклофен). Известно, что только К-энантиомер фенибута улучшает настроение, а также оказывает транквилизирующее действие (А11ап с1 а1., Тс1га11сбгоп. 1990, 46, Νο7, 2511-2524). Аналогично, только К-энантиомер баклофена обладает антиспастическим действием (Ν. Е. Во^егу, Тгепбк Рйагт. δα., 1982, 31, 411-413). Оптические антиподы этих препаратов: δ-энантиомеры фенибута и баклофена, не только биологически менее активны, но даже антагонистичны своим К-антиподам, и их присутствие в рацемической смеси вынуждает увеличивать дозы препаратов.The invention relates to the isolation of pure K- and δ-enantiomers included in racemic 3aryl-4-aminobutyric acid, by the method of their enzymatic separation. For example, pure K- and δ-enantiomers of racemic 3-phenyl-4-aminobutyric acid (phenibut) or 3-para-chlorophenyl-4-aminobutyric acid (baclofen) can be obtained by this method. It is known that only the K-enantiomer of phenibut improves mood and also has a tranquilizing effect (A11ap c1 a1., Tc1ga11sbgop. 1990, 46, Νο7, 2511-2524). Similarly, only the K-enantiomer of baclofen has an antispasmodic effect (Ν. E. Voigu, Tgepbk Ryag. Δα., 1982, 31, 411-413). The optical antipodes of these drugs: the δ-enantiomers of phenibut and baclofen, are not only biologically less active, but even antagonistic to their K-antipodes, and their presence in the racemic mixture forces increasing doses of the drugs.

Таким образом, разработка эффективного способа оптического разделения рацемических 3-арил-4аминомасляной кислот приведет к существенному улучшению терапевтических свойств фенибута и бак-Thus, the development of an effective method for the optical separation of racemic 3-aryl-4aminobutyric acids will lead to a significant improvement in the therapeutic properties of phenibut and bac

лофена. lofena. Описание известных методов Description of known methods

В литературе описано несколько методов разделения рацемической 3-арил-4-аминомасляной кислоты на К- и δ-энантиомеры. Главным образом, они относятся к хроматографическим методам разделения, включающим технологически сложные стадии защиты функциональных групп соответствующей аминокислоты и последующего удаления защитных групп [I. Вакоуа е1 а1., δυ 1432051 (1986). Ν. Балкой е1. а1. ТеПайебгоп, 1996, 52, Νο 48, 15117-15126. К. Ό. А11ап е! а1., ТеПайебгоп, 1990, 46, Νο 7, 2511-2524. К. Е. 2ейе, δуηίйе8^8, 1991, 1023.]. Описано также колоночное хроматографическое разделение непосредственно 3-арил-4-аминомасляной кислоты с использованием дорогой хиральной стационарной фазы [С. Уассйег, 1. СйготаЮдг. 1991, 542, 502-507]. Несколько методов разделения базируются на технологически сложной дробной кристаллизации диастереоизомерных солей с использованием оптически активных оснований: цинхонидина или Ь-(-)-а-метилбензиламина в качестве метода разделения (М. δοЬο^с^п5ка е1 а1., Ро1. 1. Сйет., 1979, 53, 435-446. А. Г. ^йбегуаиск, е1 а1. (υδ 6051734, 2000). Разделение на оптические антиподы осуществлено также с помощью комбинации химических и энзиматических реакций [К. Сйепеуге!, М. Оеуагбшк, Сап. 1. Сйет., 1994, 72, 2312-2317, К. V. Мигайбйаг, К. К. СЫгитагшПа е1 а1., Меб. Гас. капбЬои\\л\·. ишу. Оеп1, 2001, 66, № 3а, 227-232]. К-Энантиомер баклофена был выделен из рацемической смеси селективным микробиологическим разложением δ-энантиомера, исключающего возможность его последующей утилизации [V. Ьеуабоих е1 а1., Ό. υδ 5483765, 1998].The literature describes several methods for the separation of racemic 3-aryl-4-aminobutyric acid into K- and δ-enantiomers. They mainly relate to chromatographic separation methods, including technologically complex stages of protecting the functional groups of the corresponding amino acid and subsequent removal of the protective groups [I. Wakoua e1 a1., Δυ 1432051 (1986). Ν. Beam e1. a1. TePayebgop, 1996, 52, 48ο 48, 15117-15126. K. Ό. A11ap e! A1., TePayebgop, 1990, 46, 7ο 7, 2511-2524. K. E. 2eye, δуηίйе8 ^ 8, 1991, 1023.]. Column chromatographic separation of directly 3-aryl-4-aminobutyric acid using an expensive chiral stationary phase is also described [C. Wassyeg, 1. SygotaYudg. 1991, 542, 502-507]. Several separation methods are based on the technologically complex fractional crystallization of diastereoisomeric salts using optically active bases: cinchonidine or b - (-) - a-methylbenzylamine as a separation method (M. δοЬο ^ с5п5ка e1 a1., Po1. 1. Sit. 1979, 53, 435-446. A. G. ^ bebuaisk, e1 a1. (Υδ 6051734, 2000). Separation into optical antipodes was also carried out using a combination of chemical and enzymatic reactions [K. Syepeuge, M. Oeuagbšk, Sap 1. Syet., 1994, 72, 2312-2317, K. V. Migaybyag, K.K. Sigitagsha e1 a1., Furniture. Gas. Kapboyi \\ l \ ·. Ishu. Oep1, 2001, 66, No. 3 a, 227-232]. The K-enantiomer of baclofen was isolated from the racemic mixture by selective microbiological decomposition of the δ-enantiomer, which excluded the possibility of its subsequent utilization [V. Lewaboich e1 a1., Ό. υδ 5483765, 1998].

В целом, все перечисленные методы не приспособлены для масштабного производства препаратов в чистой энантиомерной форме, поскольку игнорируют технологические и особенно экономические аспекты, связанные с доступностью и ценой реагентов и матералов.In general, all of the above methods are not suitable for large-scale production of drugs in a pure enantiomeric form, since they ignore the technological and especially economic aspects associated with the availability and price of reagents and materials.

В этой связи целью настоящего изобретения явилась разработка простого и эффективного метода разделения рацемической 3-арил-4-аминомасляной кислоты на К- и δ-энантиомеры.In this regard, the aim of the present invention was to develop a simple and effective method for the separation of racemic 3-aryl-4-aminobutyric acid into K - and δ-enantiomers.

Краткое изложение существа изобретенияSummary of the invention

Предлагаемое изобретение обеспечивает дешевое получение оптически чистых К- и δэнантиомеров 3-арил-4-аминомасляной кислоты. В результате исследования неожиданно обнаружено, что К- и δ-энантиомеры 3-арил-4-аминомасляной кислоты могут быть получены из легкодоступных рацемических эфиров 3-арил-4-аминомасляной кислоты 2 действием на них энзимов из семейства протеаз, катализирующих гидролиз сложноэфирной групп и образование пептидной связи.The present invention provides low-cost production of optically pure K- and δ-enantiomers of 3-aryl-4-aminobutyric acid. As a result of the study, it was unexpectedly discovered that the K- and δ-enantiomers of 3-aryl-4-aminobutyric acid can be obtained from readily available racemic esters of 3-aryl-4-aminobutyric acid 2 by the action of enzymes from the protease family that catalyze the hydrolysis of ester groups and peptide bond formation.

Селективная циклизация δ-энантиомера эфира 3-арил-4-аминомасляной кислоты в присутствии протеазы обеспечивает образование реакционной смеси, состоящей только из двух продуктов 4(Ь)-арил2-пирролидона (δ)-3 и эфира 3-арил-4-аминомасляной кислоты (К)-2 в К-энантиомерной форме. Нами обнаружено, что эти оба вещества могут быть легко отделены друг от друга с помощью традиционной экстракции и затем превращены в целевую 3(К)-арил-4-аминомасляную кислоту (К)-1 и 3(Ь)-арил-4аминомасляную кислоту (δ)-1 гидролизом в кислой среде (схема 1).Selective cyclization of the δ-enantiomer of 3-aryl-4-aminobutyric acid ester in the presence of a protease provides the formation of a reaction mixture consisting of only two products of 4 (b) aryl2-pyrrolidone (δ) -3 and 3-aryl-4-aminobutyric acid ester (K) -2 in the K-enantiomeric form. We found that both of these substances can be easily separated from each other using conventional extraction and then converted to the target 3 (K) -aryl-4-aminobutyric acid (K) -1 and 3 (b) -aryl-4aminobutyric acid ( δ) -1 by hydrolysis in an acidic medium (Scheme 1).

Схема 1Scheme 1

КООС^у^МН2 COOS ^ y ^ MH 2

АгAg

ПОНPON

Э»сE "with

Н ООС^у^ИНгN OOS ^ y ^ ing

АгAg

Подробное описание изобретенияDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

В соответствии с изобретением процесс энзиматического разделения рацемической смеси с формуIn accordance with the invention, the process of enzymatic separation of the racemic mixture with the form

- 1 014980 лой 2, в которой Аг представлен фенилом или пара-галозамещенным фенилом, К - алкильной группой и * обозначает хиральный центр, обеспечивается каталитическим воздействием протеазы в свободной или иммобилизованной форме на рацемическую смесь 2 в водной среде или в смеси вода-органический растворитель. Упомянутые энзимы селективно катализируют превращение только 8-энантиомера эфира 2 в 4(8)-арил-2-пирролидон (8)-3, не взаимодействуя при этом с К-энантиомером эфира 2. Нами обнаружено, что полученные энантиомерные продукты 4(8)-арил-2-пирролидон (8)-3 и эфир 3(К)-арил-4аминомасляной кислоты (К)-2, благодаря различной растворимости в двухфазной системе водаорганический растворитель при низких значениях рН, могут быть эффективно отделены друг от друга экстракцией и затем превращены в энантиомерные (К)-1 и (8)-1 3-арил-4-аминомасляные кислоты с помощью гидролиза в кислой среде.- 1 014980 loy 2, in which Ar is represented by phenyl or para-halosubstituted phenyl, K is an alkyl group and * denotes a chiral center, is provided by the catalytic action of the protease in free or immobilized form on racemic mixture 2 in an aqueous medium or in a water-organic solvent mixture . The mentioned enzymes selectively catalyze the conversion of only the 8-enantiomer of ether 2 to 4 (8) -aryl-2-pyrrolidone (8) -3, without interacting with the K-enantiomer of ether 2. We found that the obtained enantiomeric products 4 (8) -aryl-2-pyrrolidone (8) -3 and 3 (K) -aryl-4aminobutyric acid ester (K) -2, due to the different solubilities in the two-phase system, the water-organic solvent at low pH values can be effectively separated from each other by extraction and then converted to enantiomeric (K) -1 and (8) -1 3-aryl-4-aminobutyric acids using hydrolysis for in an acidic environment.

Предпочтительным для проведения реакции энзиматического разделения рацемических эфиров 3арил-4-аминомасляной кислоты 2 является использование:Preferred for the enzymatic separation reaction of racemic esters of 3aryl-4-aminobutyric acid 2 is the use of:

1) α-химотрипсина в водорастворимом или иммобилизованном состоянии для разделения эфиров 3арил-4-аминомасляной кислоты;1) α-chymotrypsin in a water-soluble or immobilized state for the separation of 3aryl-4-aminobutyric acid esters;

2) насыщенных и ненасыщенных алифатических углеводородов с количеством углеродных атомов от 2 до 8 для получения заместителя К в эфирной группе соединения 2;2) saturated and unsaturated aliphatic hydrocarbons with the number of carbon atoms from 2 to 8 to obtain the substituent K in the ether group of compound 2;

3) водного раствора или смеси вода-органический растворитель с рН в интервале 6,0-7,0 в качестве реакционной смеси;3) an aqueous solution or a water-organic solvent mixture with a pH in the range of 6.0-7.0 as a reaction mixture;

4) тепературного режима реакции в интервале 20-40°С;4) the temperature of the reaction in the range of 20-40 ° C;

5) перемешивания или встряхивания реакционной смеси от 1 до 72 ч.5) stirring or shaking the reaction mixture for 1 to 72 hours

Полученные таким образом смеси оптически активных 4(8)-арил-2-пирролидона (8)-3 и эфира 3(К)арил-4-аминомасляной кислоты (К)-2 могут быть разделены экстракцией. Для этой цели могут быть использованы любые несмешивающиеся с водой органические растворители (углеводороды, например гексан, бензол, толуол; галогенированные углеводороды, например хлороформ, дихлорметан; сложные эфиры, например этилацетат; кетоны, простые эфиры). Продукты реакции (К)-2 и (8)-3 могут быть изолированы из водной и органической фазы по мере необходимости с помощью таких традиционных процедур, как упаривание или кристаллизация. Нами установлено, что легко растворимые в кислой водной среде эфиры 3(К)-арил-4-аминомасляной кислоты (К)-2 могут быть экстрагированы при нейтральном значении рН 7 с последующим выделением из органической фазы по мере необходимости упариванием или кристаллизацией.The mixtures of optically active 4 (8) -aryl-2-pyrrolidone (8) -3 and 3 (K) aryl-4-aminobutyric acid ester (K) -2 thus obtained can be separated by extraction. For this purpose, any water-immiscible organic solvents (hydrocarbons, for example hexane, benzene, toluene; halogenated hydrocarbons, for example chloroform, dichloromethane; esters, for example ethyl acetate; ketones, ethers) can be used. The products of reaction (K) -2 and (8) -3 can be isolated from the aqueous and organic phases, as necessary, using such traditional procedures as evaporation or crystallization. We have found that 3 (K) -aryl-4-aminobutyric acid (K) -2 esters readily soluble in an acidic aqueous medium can be extracted at a neutral pH of 7, followed by isolation from the organic phase by evaporation or crystallization as necessary.

Предпочтительными условиями для выделения чистого оптически активного 4(8)-арил-2пирролидона (8)-3 являются:Preferred conditions for the isolation of pure optically active 4 (8) -aryl-2pyrrolidone (8) -3 are:

1) подкисление реакционной смеси до рН<2,0;1) acidification of the reaction mixture to pH <2.0;

2) экстракция 4(8)-арил-2-пирролидона (8)-3 органическим растворителем предпочтительно этилацетатом, дихлорметаном, толуолом или бензолом с последующим упариванием органической фазы.2) extraction of 4 (8) -aryl-2-pyrrolidone (8) -3 with an organic solvent, preferably ethyl acetate, dichloromethane, toluene or benzene, followed by evaporation of the organic phase.

Для выделения чистого оптически активного эфира 3(К)-арил-4-аминомасляной кислоты (К)-2, после удаления 4(8)-арил-2-пирролидона (8)-3 экстракцией, предпочтительными являются два метода:To isolate the pure optically active 3 (K) -aryl-4-aminobutyric acid (K) -2 ester, after removing the 4 (8) -aryl-2-pyrrolidone (8) -3 by extraction, two methods are preferred:

1) упаривание водной фазы;1) evaporation of the aqueous phase;

2) нейтрализация водной фазы до рН 7,0, экстракция эфира 3(К)-арил-4-аминомасляной кислоты (К)-2 органическим растворителем предпочтительно этилацетатом, дихлорметаном, толуолом или бензолом с последующим упариванием органической фазы.2) neutralization of the aqueous phase to pH 7.0, extraction of the 3 (K) -aryl-4-aminobutyric acid ester (K) -2 with an organic solvent, preferably ethyl acetate, dichloromethane, toluene or benzene, followed by evaporation of the organic phase.

Следущие примеры иллюстрируют, но не ограничивают экспериментальные возможности данного изобретения.The following examples illustrate but do not limit the experimental capabilities of the present invention.

Типовые методы синтеза и энзиматического разделения рацемического эфира 3-арил-4аминомасляной кислоты 2.Typical methods for the synthesis and enzymatic separation of the racemic ester of 3-aryl-4aminobutyric acid 2.

Способ 1.Method 1

A. Хлористый тионил (0,616 мл, 8,4 мМ) добавляют к охлажденному до -16°С смеси 3-арил-4аминомасляной кислоты 1 (5,5 мМ) в 20 мл соответствующего спирта. Полученную смесь кипятят 4 ч и упаривают при пониженном давлении, получая солянокислую соль 3-арил-4-масляной кислоты 2 (98,099,5% чистота согласно анализу ВЭЖХ).A. Thionyl chloride (0.616 ml, 8.4 mmol) is added to a mixture of 3-aryl-4aminobutyric acid 1 (5.5 mmol) in 20 ml of the corresponding alcohol cooled to -16 ° C. The resulting mixture was boiled for 4 hours and evaporated under reduced pressure to obtain the hydrochloric acid salt of 3-aryl-4-butyric acid 2 (98.099.5% purity according to HPLC analysis).

B. Рацемический эфир 3-арил-4-масляной кислоты 2 25 мг растворяют в 5 мл 0,1 М фосфатного буфера с рН 6,0-7,0 в присутствии (отсутствии) добавки 10% органического растворителя (диоксан, ацетон и т.д.). Водорастворимый α-химотрипсин1 в количестве 5 мг (или суспензию, полученную иммобилизацией 25 мг α-химотрипсина на 1 г 8ίΘ2 согласно методу [К. Аа!аиаЬе, 6.Р. Коуег, 1оигиа1 οί Мо1еси1аг Са1а1у515. 1983, 22, 145]) добавляют к реакционной смеси, которую перемешивают при 20-40°С в течение 72 ч. Контроль за протеканием реакции, приводящей к образованию 4(8)-арил-2-пирролидона (8)-3, осуществляют с помощью ВЭЖХ.B. Racemic ester of 3-aryl-4-butyric acid 2 25 mg is dissolved in 5 ml of 0.1 M phosphate buffer with a pH of 6.0-7.0 in the presence (absence) of an additive of 10% organic solvent (dioxane, acetone and t .d.). Water-soluble α-chymotrypsin 1 in an amount of 5 mg (or a suspension obtained by immobilizing 25 mg of α-chymotrypsin per 1 g of 8 [ 2 according to the method [K.Aa! ]) is added to the reaction mixture, which is stirred at 20-40 ° C for 72 hours. Monitoring of the reaction leading to the formation of 4 (8) -aryl-2-pyrrolidone (8) -3 is carried out using HPLC.

C. По завершении энзиматической реакции реакционную смесь подкисляют 2н НС1 до рН <2,0 и 4(8)-арил-2-пирролидон (8)-3 экстрагируют 3x20 мл дихлорметана. После упаривания досуха полученных таким образом органической и водной фазы получают в остатке 4(8)-арил-2-пирролидон (8)-3 и эфир 3(К)-арил-4-аминомасляной кислоты, которые превращают в солянокислые соли 8- и КC. Upon completion of the enzymatic reaction, the reaction mixture is acidified with 2N HCl to pH <2.0 and 4 (8) -aryl-2-pyrrolidone (8) -3 is extracted with 3x20 ml of dichloromethane. After evaporation to dryness of the organic and aqueous phases thus obtained, 4 (8) -aryl-2-pyrrolidone (8) -3 and 3 (K) -aryl-4-aminobutyric acid ester are obtained in the residue, which are converted into hydrochloric salts of 8- TO

- 2 014980 энантиомеров (8)-1 и (В)-1 3-арил-4-аминомасляной кислоты в результате их кипячения в 2н НС1 в течение 20 ч и последующего упаривания реакционной смеси. Их оптическая чистота определялась методом хиральной ВЭЖХ.- 2 014,980 enantiomers of (8) -1 and (B) -1 3-aryl-4-aminobutyric acid as a result of their boiling in 2N HCl for 20 hours and subsequent evaporation of the reaction mixture. Their optical purity was determined by chiral HPLC.

Способ 2.Method 2

Энзиматическое разделение 3-арил-4-аминомасляной кислоты (1) на стадиях А и В реализовано согласно условиям, приведенным в примере 1.The enzymatic separation of 3-aryl-4-aminobutyric acid (1) in steps A and B is realized according to the conditions given in Example 1.

С. По завершении энзиматической реакции2 реакционную смесь подкисляют 2н НС1 до рН <2,0 и 4(8)-арил-2-пирролидон (8)-3 экстрагируют 3x20 мл этилацетата и упаривают досуха, получая в остатке 4(8)-арил-2-пирролидон (8)-3. Водную фазу нейтрализуют 5н ΝΗ4ΟΗ до рН 7 и эфир 3(В)-арил-4аминомасляной кислоты (В)-2 экстрагируют 3x20 мл этилацетата. Полученную таким образом органическую фазу упаривают досуха, получая в остатке эфир 3(В)-арил-4-аминомасляной кислоты (В)-2. Оба энантиомерных продукта превращают в солянокислые соли 8- и В-энантиомеров (8)-1 и (В)-1 3-арил-4аминомасляной кислоты в результате их кипячения в 2н НС1 в течение 20 ч и последующего упаривания реакционной смеси. Их оптическая чистота определялась методом хиральной ВЭЖХ3.C. Upon completion of enzymatic reaction 2, the reaction mixture was acidified with 2N HCl to pH <2.0 and 4 (8) -aryl-2-pyrrolidone (8) -3 was extracted with 3x20 ml ethyl acetate and evaporated to dryness, leaving in residue 4 (8) - aryl-2-pyrrolidone (8) -3. The aqueous phase is neutralized with 5N ΝΗ 4 ΟΗ to pH 7 and 3 (B) -aryl-4-aminobutyric acid ester (B) -2 is extracted with 3x20 ml of ethyl acetate. The organic phase thus obtained was evaporated to dryness, to give the residue 3 (B) -aryl-4-aminobutyric acid (B) -2. Both enantiomeric products are converted into the hydrochloric salts of the 8- and B-enantiomers (8) -1 and (B) -1 of 3-aryl-4aminobutyric acid by boiling in 2N HCl for 20 hours and subsequent evaporation of the reaction mixture. Their optical purity was determined by chiral HPLC 3 .

1 активность α-химотрипсина - 65-85 ед/мг в случае иммобилизованного α-химотрипсина суспензия катализатора после завершения энзиматической реакции отфильтровывается, обмывается дистиллированной водой и при необходимости используется повторно. 1 activity of α-chymotrypsin - 65-85 u / mg in the case of immobilized α-chymotrypsin, the suspension of the catalyst after the completion of the enzymatic reaction is filtered off, washed with distilled water and, if necessary, reused.

3 мобильная фаза - НС1 (рН 1,0); стационарная фаза - СВОА№АК СВ(+)5а 3 mobile phase - HC1 (pH 1.0); stationary phase - СВОА№АК СВ (+) 5а

Эффективность энзиматического разделения и энантиомерный избыток В- и 8-энантиомеров 3арил-4-аминомасляной кислоты, полученных согласно способам 1 и 2, представлена в таблице.The enzymatic separation efficiency and enantiomeric excess of B- and 8-enantiomers of 3aryl-4-aminobutyric acid obtained according to methods 1 and 2 are presented in the table.

Таблица. Условия проведения процесса энзиматического разделения, выходы и энантиомерный избыток В- и 8-энантиомеров ((В)-1 аиб (8)-1) 3-арил-4-аминомасляной кислотыTable. Enzymatic separation process conditions, yields and enantiomeric excess of B- and 8-enantiomers ((B) -1 aib (8) -1) 3-aryl-4-aminobutyric acid

Номер эксперимента (Номер примера) Experiment Number (Example Number) В IN Аг Ag Время (ч) Time (h) 1(°С) 1 (° C) Реакционная среда* ** The reaction medium * ** Выход ** (%) Exit ** (%) Э нантиомерный избыток (%,ее) E nantiomeric excess (%, her) (8)-1 (8) -1 (В)-1 (IN 1 1 (1) eleven) Е1 E1 РЬ Pb 72 72 20-22 20-22 А BUT 66 66 92 92 64 64 2(1) 2 (1) /-Рг / -Rg РЬ Pb 72 72 20-22 20-22 А BUT 54 54 76 76 53 53 3(1) 3 (1) и-Рг i-rg РЬ Pb 72 72 20-22 20-22 А BUT 78 78 96 96 76 76 4(1) 4 (1) А11у1 A11u1 РЬ Pb 24 24 20-22 20-22 А BUT 68 68 74 74 67 67 5(2) 5 (2) А11у1 A11u1 РЬ Pb 72 72 20-22 20-22 А BUT 86 86 96 96 84 84 6(1) 6 (1) и-Ви i-vi РЬ Pb 24 24 20-22 20-22 А BUT 74 74 90 90 72 72 7(2) 7 (2) и-Ви i-vi РЬ Pb 72 72 20-22 20-22 А BUT 98 98 98 98 97 97 8(2) 8 (2) ц-Ос1у1 Ts-Os1u1 РЬ Pb 72 72 20-22 20-22 А BUT 62 62 76 76 60 60 9(1) 9 (1) и-Ви i-vi р-С1РЬ r-C1P 72 72 20-22 20-22 В IN 98 98 >98 > 98 >97 > 97 10(2) 10 (2) ц-Ви c-vi р-С1РЬ r-C1P 72 72 20-22 20-22 С FROM 98 98 >98 > 98 >97 > 97

*А - фосфатный буфер (рН 6,0-7,0); В - фосфатный буфер/диоксан в соотношении 10:1; С - фосфатный буфер/ацетон в соотношении 10:2.* A - phosphate buffer (pH 6.0-7.0); B - phosphate buffer / dioxane in a ratio of 10: 1; C - phosphate buffer / acetone in a ratio of 10: 2.

** выход реакции рассчитывался по уменьшению площади пика эфира 3-арил-4-аминомасляной кислоты 2 на хроматограмме ВЭЖХ.** The reaction yield was calculated by decreasing the peak area of 3-aryl-4-aminobutyric acid 2 ester in an HPLC chromatogram.

Claims (31)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯCLAIM (1) катализируемая протеазой селективная циклизация эфира 3(8)-арил-4-аминомасляной кислоты, входящего в состав рацемического эфира 3-арил-4-аминомасляной кислоты, в 4(8)-арил-2-пирролидинон (8)-3;(1) protease-catalyzed selective cyclization of the 3 (8) aryl-4-aminobutyric acid ester of the 3-aryl-4-aminobutyric acid racemic ester to 4 (8) aryl-2-pyrrolidinone (8) -3 ; 1. Способ разделения рацемической 3-арил-4-аминомасляной кислоты (1) согласно схеме1. The method of separation of racemic 3-aryl-4-aminobutyric acid (1) according to the scheme 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что протеаза представлена α-химотрипсином.2. The method according to claim 1, characterized in that the protease is represented by α-chymotrypsin. (2) подкисление реакционной среды до рН<2,0 и разделение 4(8)-арил-2-пирролидона (8)-3 и эфира 3(К)-арил-4-аминомасляной кислоты (К)-2 экстракцией;(2) acidification of the reaction medium to pH <2.0 and separation of 4 (8) -aryl-2-pyrrolidone (8) -3 and 3 (K) -aryl-4-aminobutyric acid ester (K) -2 by extraction; 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что α-химотрипсин применяется в водорастворимой форме.3. The method according to claim 1, characterized in that α-chymotrypsin is used in a water-soluble form. (3) выделения 4(8)-арил-2-пирролидона (8)-3 из органической фазы и 3(К)-арил-4-аминомасляной кислоты (К)-2 из водной фазы упариванием раствора или кристаллизацией.(3) isolating 4 (8) -aryl-2-pyrrolidone (8) -3 from the organic phase and 3 (K) -aryl-4-aminobutyric acid (K) -2 from the aqueous phase by evaporation of the solution or crystallization. - 3 014980 катализированный протеазой, представленной α-химотрипсином, папаином или субтилизином, где Аг выбран из группы, состоящей из фенила или р-галозамещенного фенила, и К - из насыщенной или ненасыщенной алкильной группы, содержащей от 2 до 8 углеродных атомов, состоит из следующих этапов:- 3 014980 catalyzed by a protease represented by α-chymotrypsin, papain or subtilisin, where Ar is selected from the group consisting of phenyl or p-halosubstituted phenyl, and K is a saturated or unsaturated alkyl group containing from 2 to 8 carbon atoms, consists of the following steps: - 4 014980- 4 014980 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что α-химотрипсин применяется в нерастворимой иммобилизованной форме.4. The method according to claim 1, characterized in that α-chymotrypsin is used in an insoluble immobilized form. 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что для разделения на энантиомеры используется рацемический эфир 3-фенил-4-аминомасляной кислоты.5. The method according to claim 1, characterized in that the racemic ester of 3-phenyl-4-aminobutyric acid is used for separation into enantiomers. 6. Способ по п.1, отличающийся тем, что для разделения на энантиомеры используется рацемический эфир 3-пара-хлорфенил-4-аминомасляной кислоты.6. The method according to claim 1, characterized in that the racemic ester of 3-para-chlorophenyl-4-aminobutyric acid is used for separation into enantiomers. 7. Способ по п.1, отличающийся тем, что для разделения на энантиомеры использут рацемические эфиры 3-арил-4-аминомасляной кислоты, полученные на основе алифатических насыщенных и ненасыщенных спиртов.7. The method according to claim 1, characterized in that 3-aryl-4-aminobutyric acid racemic esters derived from aliphatic saturated and unsaturated alcohols are used for separation into enantiomers. 8. Способ по п.1, отличающийся тем, что для разделения на энантиомеры используют рацемический этиловый эфир 3-арил-4-аминомасляной кислоты.8. The method according to claim 1, characterized in that 3-aryl-4-aminobutyric acid racemic ethyl ester is used for separation into enantiomers. 9. Способ по п.1, отличающийся тем, что для разделения на энантиомеры используют рацемический н-пропиловый эфир 3-арил-4-аминомасляной кислоты.9. The method according to claim 1, characterized in that 3-aryl-4-aminobutyric acid racemic n-propyl ester is used for separation into enantiomers. 10. Способ по п.1, отличающийся тем, что для разделения на энантиомеры используют рацемический изопропиловый эфир 3-арил-4-аминомасляной кислоты.10. The method according to claim 1, characterized in that 3-aryl-4-aminobutyric acid racemic isopropyl ester is used for separation into enantiomers. 11. Способ по п.1, отличающийся тем, что для разделения на энантиомеры используют рацемический н-бутиловый эфир 3-арил-4-аминомасляной кислоты.11. The method according to claim 1, characterized in that for the separation into enantiomers use racemic n-butyl ether of 3-aryl-4-aminobutyric acid. 12. Способ по п.1, отличающийся тем, что для разделения на энантиомеры используют рацемический аллиловый эфир 3-арил-4-аминомасляной кислоты.12. The method according to claim 1, characterized in that 3-aryl-4-aminobutyric acid racemic allyl ester is used to separate into enantiomers. 13. Способ по п.1, отличающийся тем, что для разделения на энантиомеры используют рацемический октиловый эфир 3-арил-4-аминомасляной кислоты.13. The method according to claim 1, characterized in that 3-aryl-4-aminobutyric acid racemic octyl ester is used for separation into enantiomers. 14. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапе (1) в качестве растворителя используется вода.14. The method according to claim 1, characterized in that in step (1), water is used as a solvent. 15. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапе (1) в качестве растворителя используется смесь воды со смешивающимися или несмешивающимися с водой органическими растворителями, которые могут быть алифатическими углеводородами, ароматическими углеводородами, галогеноалканами, эфирами, сложными эфирами, кетонами или их смесями.15. The method according to claim 1, characterized in that in step (1), a mixture of water with water-miscible or water-immiscible organic solvents, which may be aliphatic hydrocarbons, aromatic hydrocarbons, haloalkanes, esters, esters, ketones or their mixtures. 16. Способ по п.1, отличающийся тем, что реакция на этапе (1) проводится при температуре от 20 до 40°С.16. The method according to claim 1, characterized in that the reaction in step (1) is carried out at a temperature of from 20 to 40 ° C. 17. Способ по п.1, отличающийся тем, что реакция на этапе (1) проводится при рН среды от 6 до 7.17. The method according to claim 1, characterized in that the reaction in step (1) is carried out at a pH of from 6 to 7. 18. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапе (3) экстракция эфира 3(К)-арил-4аминомасляной кислоты (К)-2 проводится после нейтрализации водной фазы до рН 7.18. The method according to claim 1, characterized in that in step (3) the extraction of 3 (K) -aryl-4-aminobutyric acid ester (K) -2 is carried out after neutralization of the aqueous phase to pH 7. 19. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапах (2) и (3) для экстракции используют органические растворители, которые могут быть гексаном, бензолом, толуолом, хлороформом, дихлорметаном, дихлорэтаном, этилацетатом, метилацетатом, диэтиловым эфиром или метил-трет-бутиловым эфиром.19. The method according to claim 1, characterized in that in steps (2) and (3) organic solvents are used for extraction, which can be hexane, benzene, toluene, chloroform, dichloromethane, dichloroethane, ethyl acetate, methyl acetate, diethyl ether or methyl tert-butyl ether. 20. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапах (2) и (3) для экстракции используют гексан.20. The method according to claim 1, characterized in that in steps (2) and (3) hexane is used for extraction. 21. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапах (2) и (3) для экстракции используют бензол.21. The method according to claim 1, characterized in that in steps (2) and (3) benzene is used for extraction. 22. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапах (2) и (3) для экстракции используют толуол.22. The method according to claim 1, characterized in that in steps (2) and (3) toluene is used for extraction. 23. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапах (2) и (3) для экстракции используют хлороформ.23. The method according to claim 1, characterized in that in steps (2) and (3) chloroform is used for extraction. 24. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапах (2) и (3) для экстракции используют дихлорметан.24. The method according to claim 1, characterized in that in steps (2) and (3) dichloromethane is used for extraction. 25. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапах (2) и (3) для экстракции используют дихлорэтан.25. The method according to claim 1, characterized in that in steps (2) and (3) dichloroethane is used for extraction. 26. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапах (2) и (3) для экстракции используют этилацетат.26. The method according to claim 1, characterized in that in steps (2) and (3) ethyl acetate is used for extraction. 27. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапах (2) и (3) для экстракции используют метилацетат.27. The method according to claim 1, characterized in that in steps (2) and (3) methyl acetate is used for extraction. 28. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапах (2) и (3) для экстракции используют диэтиловый эфир.28. The method according to claim 1, characterized in that in steps (2) and (3) diethyl ether is used for extraction. 29. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапах (2) и (3) для экстракции используют метилтрет-бутиловый эфир.29. The method according to claim 1, characterized in that in steps (2) and (3) methyl tert-butyl ether is used for extraction. 30. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапе (3) полученный эфир 3(К)-арил-4аминомасляной кислоты (К)-2 с помощью гидролиза в кислой среде превращают в К-энантиомер 3-арил4-аминомасляной кислоты (К)-1.30. The method according to claim 1, characterized in that in step (3) the obtained 3 (K) -aryl-4-aminobutyric acid ester is converted by hydrolysis in an acidic medium into the 3-aryl-4-aminobutyric acid K-enantiomer (K) -1. 31. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапе (3) полученный 4(8)-арил-2-пирролидон (8)-3 с помощью гидролиза в кислой среде превращают в 8-энантиомер 3-арил-4-аминомасляной кислоты (8)-1.31. The method according to claim 1, characterized in that in step (3) the obtained 4 (8) -aryl-2-pyrrolidone (8) -3 is converted by hydrolysis in an acidic medium into the 8-enantiomer 3-aryl-4- aminobutyric acid (8) -1. Евразийская патентная организация, ЕАПВEurasian Patent Organization, EAPO Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2Russia, 109012, Moscow, Maly Cherkassky per., 2
EA200801878A 2006-02-23 2007-02-18 A process for enzymatic resolution of racemic 3-aryl-4-aminobutyric acid EA014980B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
LV060028A LV13635B (en) 2006-02-23 2006-02-23 Enzymatic resolution of racemic 3-aryl-4-aminobutyric acids
PCT/EP2007/051538 WO2007096314A2 (en) 2006-02-23 2007-02-18 Enzymatic resolution of racemic 3-aryl-4-aminobutyric acid

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200801878A1 EA200801878A1 (en) 2009-04-28
EA014980B1 true EA014980B1 (en) 2011-04-29

Family

ID=38375630

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200801878A EA014980B1 (en) 2006-02-23 2007-02-18 A process for enzymatic resolution of racemic 3-aryl-4-aminobutyric acid

Country Status (3)

Country Link
EA (1) EA014980B1 (en)
LV (1) LV13635B (en)
WO (1) WO2007096314A2 (en)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5380743B2 (en) * 2008-06-19 2014-01-08 住友化学株式会社 Process for producing optically active 4-amino-3-substituted phenylbutanoic acid
LV15015B (en) 2013-12-13 2015-12-20 Olainfarm, A/S Salt of 3-carboxy-4-(r)-phenylpyrrolidinone-2 and uses thereof
FR3054218B1 (en) * 2016-07-22 2020-03-06 Universite De Rouen PROCESS FOR SPLITTING BACLOFENE SALTS
CN115282928B (en) * 2022-08-04 2023-08-15 杭州佳嘉乐生物技术有限公司 Novel separation medium and application thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997022578A1 (en) * 1995-12-20 1997-06-26 Farmarc Nederland B.V. A process for the optical resolution of 3-(p-chlorophenyl)-glutaramide
US5843765A (en) * 1997-01-31 1998-12-01 National Research Council Of Canada Streptomyces microorganism useful for the preparation of (R)-baclofen from the racemic mixture

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997022578A1 (en) * 1995-12-20 1997-06-26 Farmarc Nederland B.V. A process for the optical resolution of 3-(p-chlorophenyl)-glutaramide
US5843765A (en) * 1997-01-31 1998-12-01 National Research Council Of Canada Streptomyces microorganism useful for the preparation of (R)-baclofen from the racemic mixture

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHENEVERT R. ET AL.: "CHEMOENZYMATIC ENANTIOSELECTIVE SYNTHESIS OF BACLOFEN", CANADIAN JOURNAL OF CHEMISTRY, vol. 72, no. 11, 1 November 1994 (1994-11-01), pages 2312-2317, XP000644775, ISSN: 0008-4042, cited in the application, the whole document *
CHENEVERT R. ET AL.: "CHEMOENZYMATIC SYNTHESIS OF BOTH ENANTIOMERS OF BACLOFEN", TETRAHEDRON LETTERS, vol. 32, no. 34, 1991, pages 4249-4250, XP002448302, ISSN: 0040-4039, the whole document *
FELLUGA F. ET AL.: "A short and convenient chemoenzymatic synthesis of both enantiomers of 3-phenylGABA and 3-(4-chlorophenyl)GABA (Baclofen)", TETRAHEDRON: ASYMMETRY, vol. 16, no. 7, 4 April 2005 (2005-04-04), pages 1341-1345, XP004807198, ISSN: 0957-4166, the whole document *

Also Published As

Publication number Publication date
EA200801878A1 (en) 2009-04-28
WO2007096314A2 (en) 2007-08-30
LV13635B (en) 2008-01-20
WO2007096314A3 (en) 2007-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA015418B1 (en) Preparation of pregabalin and related compounds
Kiss et al. A New Access Route to Functionalized Cispentacins from Norbornene β‐Amino Acids
Zhou et al. A simple and practical access to enantiopure 2, 3-diamino acid derivatives
CN1754872A (en) Process for recovering statin compounds from a fermentation broth
Dellaria Jr et al. Stereoselective alkylation of chiral glycine enolate synthons. The enantioselective synthesis of α-amino acid derivatives.
EA014980B1 (en) A process for enzymatic resolution of racemic 3-aryl-4-aminobutyric acid
Zheng et al. Landscape of lankacidin biomimetic synthesis: structural revisions and biogenetic implications
EP2360160A1 (en) Intermediates and their use for producing benzoxazine derivative
CA2922350C (en) Method for producing pyrrole derivative, and intermediate thereof
KR100255439B1 (en) Enzymatic process for the enantioselective production of optically active cyanhydrins
CN105969836B (en) Method for splitting abacavir chiral intermediate vinelactone by enzymatic method
KR20110005470A (en) Bifunctional bis-cinchona alkaloid thiourea organo catalysts, preparation method thereof, and method for preparing chiral amino acid from azlactones using the same
MX2007008630A (en) Preparation of chiral propargylic alcohol and ester intermediates of himbacine analogs.
JP2020505952A (en) Enzymatic production of (±) -2- (difluoromethyl) -1- (alkoxycarbonyl) cyclopropanecarboxylic acid and (±) -2- (vinyl) -1- (alkoxycarbonyl) cyclopropanecarboxylic acid
Yamada et al. Optically active cyclohexene derivative as a new antisepsis agent: an efficient synthesis of ethyl (6R)-6-[N-(2-chloro-4-fluorophenyl) sulfamoyl] cyclohex-1-ene-1-carboxylate (TAK-242)
Bull et al. The asymmetric synthesis of (2R, 3R)-and (2R, 3S)-3-methyl-aspartates via an enantiodiscrimination strategy
RU2696099C1 (en) Chemoenzymatic synthesis of 2,5-diketomorfoline derivatives
TWI595093B (en) A process for the enzymatic production of carnitine from β-lactones
AU753021B2 (en) Process for the preparation of HPB esters
US20150087808A1 (en) Process for the manufacture of cyclic undecapeptides
Figadere et al. Determination of the absolute configuration of the sex pheromone of the obscure mealybug by vibrational circular dichroism analysis
Van Hoof et al. Modern Macrolactonization Techniques
EP0241094B1 (en) Process for the separation of l-leucine and l-isoleucine
CA2425882A1 (en) Method of purifying pravastatin or its pharmacologically acceptable salt
JP3704731B2 (en) Process for producing optically active 3-hydroxyhexanoic acids

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): BY KZ RU