EA014433B1 - Egfr-зависимая модуляция экспрессии хемокинов, влияние на терапию и диагностику опухолей и её побочные эффекты - Google Patents

Egfr-зависимая модуляция экспрессии хемокинов, влияние на терапию и диагностику опухолей и её побочные эффекты Download PDF

Info

Publication number
EA014433B1
EA014433B1 EA200800963A EA200800963A EA014433B1 EA 014433 B1 EA014433 B1 EA 014433B1 EA 200800963 A EA200800963 A EA 200800963A EA 200800963 A EA200800963 A EA 200800963A EA 014433 B1 EA014433 B1 EA 014433B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
treatment
receptor
patient
expression
sample
Prior art date
Application number
EA200800963A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200800963A1 (ru
Inventor
Арне Суттер
Джойс Беренс
Original Assignee
Мерк Патент Гмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Мерк Патент Гмбх filed Critical Мерк Патент Гмбх
Publication of EA200800963A1 publication Critical patent/EA200800963A1/ru
Publication of EA014433B1 publication Critical patent/EA014433B1/ru

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
    • G01N33/5023—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects on expression patterns
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/20—Dermatological disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к диагнозу и терапии опухолей, использующих рецептор фактора роста эпидермиса (рецептор EGF), с помощью химических ингибиторов или моноклональных антител. Изобретение относится также к раздражениям кожи, предпочтительно к кожной сыпи, вызванным и связанным с воздействием противораковыми средствами на опухолевые клетки, использующие рецептор EGF. Изобретение направлено также на способы прогнозирования у пациента эффективности противоопухолевой терапии/реакции опухоли, основанные на применении ингибиторов рецептора EGF, в особенности антител к рецептору EGF. Далее изобретение относится к способу определения оптимальной дозы противоракового средства в терапии опухолей, связанных с рецепторами EGF.

Description

Настоящее изобретение относится к диагностике и терапии опухолей, использующих рецептор фактора роста эпидермиса (ер1бегта1 дго\\111 Гас1ог. ЕСР), с помощью химических ингибиторов или моноклональных антител. Изобретение относится также к раздражениям кожи, предпочтительно к кожной сыпи, сопутствующим и связанным с лечением опухолей, использующих рецептор ЕСР, противоопухолевыми средствами. Изобретение также направлено на способы прогнозирования эффективности для пациента противоопухолевой терапии/реакции опухоли при лечении ингибиторами рецептора ЕСР, в особенности антителами к рецептору ЕСР. Далее изобретение относится к способу определения оптимальной дозы противоопухолевого средства при лечении опухолей, связанных с рецептором ЕСР. Изобретение относится и к способам раннего мониторинга эффективности лечения рака, связанного с рецептором ЕСР, ингибиторами рецептора ЕСР и вероятности появления раздражений кожи как сопутствующего побочного заболевания, связанного с указанным лечением. Наконец, изобретение направлено на использование хемокинов, которые регулируются со стимуляцией или с подавлением при лечении рака противораковым средством, как диагностических маркеров или как средства идентификации новых мишеней для лечения опухолей.
Предшествующий уровень техники
Было выяснено, что рецептор ЕСР, кодируемый геном етЬВ1, вовлечен в причинно-следственную связь в опухолевых процессах у человека. В частности, повышенная экспрессия рецептора ЕСР была обнаружена при раке груди, мочевого пузыря, легких, головы, шеи и желудка, а также в глиобластомах. Повышенная экспрессия рецептора ЕСР часто связана с повышенной продукцией теми же опухолевыми клетками лиганда рецептора ЕСР (трансформирующего фактора роста альфа, ТСР-α), что приводит к активации рецептора по аутокринному пути стимуляции (Ваке1да аиб Мепбе15ойп//Рйаттас. Тйет. 1994. т. 64. с. 127).
Рецептор ЕСР - это трансмембранный гликопротеин с молекулярным весом 170000, обнаруженный во многих типах клеток эпителия. В настоящее время известны 7 лигандов рецептора ЕСР, которые, связываясь с рецептором, защищают опухолевые клетки от апоптоза, стимулируют клеточную пролиферацию и инвазивность опухолевых клеток. Эти факторы роста не связываются с другими тремя представителями семейства рецепторов ЕСР (НЕК2, НЕК3 и НЕК4), которые вместе с рецептором ЕСР могут образовывать гетеродимеры (Ктеке апб 81етп//Вюа55ау5. 1998. т. 20. с. 41-48; Косйиригакка1//1. Вю1. Сйет. 2005. т. 280. с. 8503-8512). Сеть рецепторов НЕК может интегрировать не только свою собственную информацию, но и также гетерологичные сигналы, в том числе гормоны, лимфокины, нейротрансмиттеры и индукторы стресса.
Было разработано несколько мышиных и крысиных моноклональных антител к рецепторам ЕСР, была испытана их способность ингибировать рост опухолевых клеток ίη νίίτο и ίη νίνο (Мобфайеб1 апб Эеап//Р Опсо1оду. 1994. т. 4. с. 277). В клинических испытаниях была продемонстрирована эффективность очеловеченных моноклональных антител 425 (ЬМЛЬ 425, патент США № 5558864; патент ЕР 0531472) и химерных моноклональных антител 225 (сМАЬ 225), оба они специфичны к рецептору ЕСР. Было установлено, что антитела С225 (СеШхипаЬ) ингибируют опосредованный ЕСР рост опухолевых клеток 1п У11го и ингибируют образование человеческих опухолей у мышей пибе ш νί\Ό. Эти антитела, как и вообще все антитела к рецепторам ЕСР, действуют по большей части синергидно с определенными химиотерапевтическими средствами (т.е. с доксорубицином, адриамицином, таксолом и цисплатином), уничтожая опухоли человека ш νί\Ό в мышиных моделях с ксенотрансплантатами (см., например, ЕР 0667165). Уе и др. (//Опсодепе. 1999. т. 18. с. 731) установили, что клетки рака яичника человека можно успешно лечить комбинацией химерных антител МАЬ 225 и очеловеченных антител МАЬ 4Ό5, специфичных к рецептору НЕК2.
Кроме антител к рецепторам ЕСР имеется больше число небольших химических молекул, известных как эффективные ингибиторы молекул рецепторов ЕСР, по большей части блокирующие сайты связывания АТФ с рецепторами. Термин антагонист/ингибитор тирозин-киназы относится согласно настоящему изобретению к природным или синтетическим агентам, способным ингибировать или блокировать тирозин-киназы, в том числе через рецепторы тирозин-киназ. Таким образом, этот термин включает как таковые антагонисты/ингибиторы рецепторов ЕСР, как они определены выше. За исключением указанных выше и далее антител к рецепторам ЕСР, наиболее предпочтительными агентамиантагонистами тирозин-киназ по этому определению являются химические соединения, проявляющие эффективность в монолекарственной терапии, например, рака груди и простаты. Подходящими ингибиторами тирозин-киназ типа индолкарбазолов могут быть ингибиторы, полученные на основании информации, содержащейся в таких документах, как патенты США № 5516771, 5654427, 5461146, 5650407. Патенты США № 5475110, 5591855, 5594009 и документ \СО 96/11933 раскрывают применение ингибиторов тирозин-киназ типа пирролокарбазолов при раке простаты. В этом контексте одним из наиболее ранних противораковых средств является гефитиниб (дейбшЬ, 1КЕ88А®, Ак1га 2епеса), для которого отмечена терапевтическая эффективность у пациентов с раком легких, не связанным с малыми клетками (поп-8та11 се11 1ипд сапсег, Ы8СЕС), а также при развитом раке головы и шеи.
- 1 014433
Термин использование или использует в связи с рецептором ЕСР имеет два значения:
(ί) он отражает тот факт, что рецептор вовлечен в процесс передачи сигнала. Экспрессия рецептора ЕСР является необходимым, но недостаточным предварительным условием того, что передача сигнала произойдет. Здесь важны доступность и количество доступных лигандов. В соответствии с этим, степень экспрессии рецептора часто не находится в прямой корреляции с использованием рецептора;
(ίί) он отражает тот факт, что развитие опухоли решающим образом зависит от использования рецептора ЕСР.
Используются или разрабатываются несколько агентов, нацеленных на этот рецептор, в том числе моноклональные антитела (такие, как есШхпиаЬ) и ингибиторы тирозин-киназ (такие, как ег1ойшЬ и деГб1И1Ь). Наиболее обычное побочное действие, общее для ингибиторов рецепторов ЕСР, состоит в появлении угревидной сыпи, обычно на лице и верхней части туловища. Кожная сыпь появляется у 45-100% пациентов, у большинства пациентов быстро возникает, различима приблизительно после 7-10 дней лечения и достигает максимума через 2-3 недели (КоЬей и др.//йапее1 Опсо1. 2005. т. 6. с. 491). Для ряда агентов (включая ееШхпиаЬ и ег1ойшЬ) была установлена прямая зависимость между интенсивностью сыпи и результатом лечения и/или выживаемостью, что делает сыпь потенциальным маркеромзаменителем для тестирования противоопухолевой активности (Регех-8о1ег апб 8а11х//1. С1ш. Опсо1. 2005. т. 23. с. 5235).
Лежащие в основе появления кожной сыпи механизмы неясны. У взрослых рецептор ЕСР первоначально экспрессируется в пролиферирующих, недифференцированных кератиноцитах базального слоя эпидермиса и внешнем слоя корней волосяных фолликул (Ыапиеу и др.//1. 1пуек1. Эегта1о1. 1984. т. 83. с. 385). Изменения в экспрессии и активности рецептора ЕСР связывали с ненормальными ростом и дифференцировкой эпидермиса (МигШак К. и др.//ЕМВО 1. 1995; 81ЬШа М. и др.//Се11. 2000; Кшд Ь.Е. и др.//1. 1пуек1. Эегта1о1. 1990).
Кератиноциты - это слоистые, чешуйчатые клетки эпителия, которые составляют кожу и слизистую, в том числе эпителий ротовой полости, пищевода, роговицы, конъюнктивы и гениталий. Кератиноциты образуют барьер между организмом хозяина и окружающей средой. Они предотвращают проникновение токсических веществ из окружающей среды и потерю важных компонентов из организма. Дифференцировка кератиноцитов происходит, как только они переходят из базального слоя в поверхностный слой кожи. Нормальное время оборота для кератиноцитов составляет около 30 дней, однако оборот эпидермиса может быть ускоренным при некоторых заболеваниях кожи, таких как псориаз.
Патологическими анализами биопсий кожи пациентов было установлено, что блокада рецептора ЕСР приводит к истончению рогового слоя и способствует инфильтрации воспалительных клеток (в том числе нейтрофилов и Т-лимфоцитов) в дермальную ткань, в особенности в волосяные фолликулы (К.оЬей и др.//йапее1 Опсо1. 2005. т. 6. с. 491; Уап Ооот и др.//Вг. 1. Эегта1о1. 2002. т. 147. с. 598). Кроме того, пути передачи сигнала, связанные с рецептором ЕСР, подавлялись в коже, что позволяет предположить, что направленная на подавление рецептора ЕСР терапия прямо воздействует на физиологию эпидермиса. Например, деГШшЬ. небольшое химическое соединение Дгекка®) вызывает регуляцию со стимуляцией маркера подавления роста и созревания в базальном слое эпидермиса. Поэтому возможно, что арест клеточного цикла и созревание кератиноцитов вызывают появление кожной сыпи, поскольку измененная дифференцировка кератиноцитов может приводить к наблюдаемой у пациентов закупорке фолликул (А1Ьапе11 и др.//1. С1ш. Опсо1. 2002. т. 20. с. 110). В качестве альтернативы, предполагается, что развитие кожной сыпи может быть прямым следствием изменения путей экспрессии цитокинов в коже, что аналогично предположению о функциях рецептора ЕСР как регулятора с отрицательной обратной связью, предотвращающего избыточное воспаление в хронически воспаленной коже ш у1уо (Макаа Р. и др.//Ат. 1. Ра1йо1. 2003).
Хемокины представляют собой семейство структурно родственных гликопротеинов с высокой способностью к активации лейкоцитов и/или хемотаксической активностью. Они имеют длину от 70 до 90 аминокислот и молекулярный вес приблизительно от 8 до 10 кДа. Большинство из них попадают в два подсемейства с четырьмя остатками цистеина. Разделение на эти подсемейства зависит от того, непосредственно ли прилегают друг к другу два концевых остатка цистеина или они разделены одной аминокислотой. Хемокины, известные также как хемокины СХС, содержат одну аминокислоту между первым и вторым остатком цистеина; хемокины В или СС имеют прилегающие друг к другу остатки цистеина. Большинство хемокинов СХС являются хемоаттрактантами для нейтрофилов, а хемокины СС в основном привлекают моноциты, лимфоциты, базофилы и эозинофилы. Имеются также 2 другие небольшие подгруппы. Группа С состоит из одного представителя (лимфотактина). У него в четырех-цистеиновом лейтмотиве утрачен один из цистеинов, но его карбоксильный конец гомологичен хемокинам С-С. Хемокин С, по-видимому, является специфичным к лимфоцитам. Четвертая подгруппа - это подгруппа СХ3-С. Хемокин С-Х3-С (фракталкин/нейротактин) содержит между двумя первыми цистеинами три аминокислотных остатка. Он прикреплен непосредственно к клеточной мембране длинным муциновым мостиком и индуцирует и адгезию, и миграцию лейкоцитов.
Изобретение основано на принципиальном обнаружении того, что воздействие на связанные с рецептором ЕСР опухоли противоопухолевыми средствами, предпочтительно ингибиторами рецептора
- 2 014433
ЕСЕ, вызывает специфические модуляции особенности экспрессии хемокинов в ткани кожи, а также в ткани соответствующей опухоли или в сыворотке пациента. Хемокины в указанной ткани или сыворотке могут регулироваться с подавлением или стимуляцией в зависимости от природы и количества использованного в терапии противоопухолевого средства.
К настоящему времени не имеется четких рекомендаций для эффективного устранения сыпи при лечении связанных с рецепторами ЕСЕ опухолей, несмотря на то, что оптимальное устранение важно, особенно если надлежит применять ингибиторы рецепторов ЕСЕ на ранней стадии заболевания, при более высоких дозах и/или в течение более длительных периодов времени. На основании имеющихся результатов было, во-первых, сделано предположение, что модулированные пути экспрессии цитокинов в коже являются полезными маркерами для прогнозирования появления кожной сыпи у пациентов на ранних стадиях противоракового лечения, что позволит врачам нейтрализовать сыпь до ее появления.
Во-вторых, высказано предположение, что модулированные пути экспрессии цитокинов в коже являются более надежными, чем кожная сыпь, маркерами-заменителями для оценки эффективного угнетения мишени (и вследствие этого, по-видимому, и клинического эффекта), поскольку кроме модуляции цитокинов кожная сыпь зависит от состояния индивидуальной иммунной системы пациента. Поэтому пациентов можно обследовать в течение первой недели лечения, чтобы точно указать пациентов с малой вероятностью успеха противоопухолевой терапии и позволить клиницистам перейти на альтернативные способы лечения.
Далее, высказано предположение, что специфические агенты, такие как блокирующие рецепторы хемокинов агенты, которые препятствуют опосредованной хемокинами хемоаттракции, индуцированной блокированием рецепторов ЕСЕ, могут являться новыми терапевтическими средствами для нейтрализации побочных действий в виде заболеваний кожи, связанных с лечением зависящих от рецептора ЕСЕ опухолей. Эти средства следует предпочтительно применять местно, поскольку их действие на кожу может отражаться на опухоли.
Сущность изобретения
В итоге согласно изобретению предложено следующее.
Способ прогнозирования появления и интенсивности раздражения кожи, предпочтительно кожной сыпи, связанной или коррелирующей с противораковой терапией для пациента, причем способ включает:
(ί) определение в первой пробе ткани кожи особенностей экспрессии хемокинов стандартными методами, причем пробу берут у пациента до начала лечения противораковым средством, направленным против опухолевых клеток, которые используют рецептор фактора роста эпидермиса (рецептор ЕСЕ);
(ίί) определение во второй пробе кожи, полученной у указанного пациента (предпочтительно из того же участка кожи), особенностей экспрессии хемокинов, причем эту пробу берут в момент времени после начала лечения указанным противораковым средством (предпочтительно через 1-10 дней, более предпочтительно через 1-7 дней, наиболее предпочтительно через 5-7 дней);
(ΐϊϊ) по усмотрению определение в третьей и последующих пробах кожи особенностей экспрессии хемокинов, причем пробу берут у пациента в более поздний срок, чем соответствующую предыдущую пробу этапа (и);
(ίν) сопоставление соответствующих особенностей экспрессии хемокинов в пробах кожи из этапа (ίί) и, по усмотрению, из этапа (ίίί), с особенностями экспрессии хемокинов в пробе кожи из этапа (ί) и определение того, для каких хемокинов изменились их качество и/или количество в пробах (и) и (ίίί) по сравнению с особенностями хемокинов в референсной пробе (ί) или в соответствующей предшествующей пробе;
(ν) прогнозирование на основании изменений в особенностях экспрессии хемокинов интенсивности и появления на более поздней стадии заболевания кожи, запускаемого лечением противораковым средством.
В том случае, когда изменений в особенностях экспрессии хемокинов нет или эти изменения незначительны в течение периода времени 5-10 дней, предпочтительно 7 дней, тогда, согласно находкам настоящего изобретения, вероятность появления кожных заболеваний, особенно кожной сыпи, вызванных лечением противораковым средством, не очень высока.
Соответствующий способ прогнозирования реакции опухоли у пациента, имеющего рак, на лечение противораковым средством, причем способ включает:
(ί) определение в первой пробе ткани особенностей экспрессии хемокинов стандартными методами, причем пробу берут у пациента до начала лечения противораковым средством, направленным против опухолевых клеток, которые используют/сверхэкспрессируют рецептор фактора роста эпидермиса (рецептор ЕСЕ);
(ίί) определение во второй пробе ткани, полученной у указанного пациента, особенностей экспрессии хемокинов, причем пробу берут в момент времени после начала лечения указанным противораковым средством;
(ΐϊϊ) по усмотрению определение в третьей и последующих пробах ткани особенностей экспрессии хемокинов, причем пробу берут у пациента в более поздний срок, чем соответствующую предыдущую пробу этапа (и);
- 3 014433 (ίν) сопоставление соответствующих особенностей экспрессии хемокинов в пробах ткани из этапа (ίί) и, по усмотрению, из этапа (ίίί), с особенностями экспрессии хемокинов в пробе кожи из этапа (ί) и определение того, для каких хемокинов изменились качество и/или количество в пробах (ίί) и (ίίί) по сравнению с особенностями хемокинов в референсной пробе (ί) или в соответствующей предшествующей пробе;
(ν) прогнозирование на основании изменений в особенностях хемокинов в указанных пробах ткани вероятности и интенсивности реакции опухоли у пациента на лечение указанным противораковым средством.
Согласно настоящему изобретению было неожиданно обнаружено, что тип экспрессии хемокинов и, соответственно, его относительное изменение не только в ткани опухоли, но и в ткани кожи пациента коррелирует с реакцией опухоли.
Способ определения оптимальной дозы противоракового средства для лечения рака у пациента, причем способ включает:
(ί) определение в первой пробе ткани кожи или ткани опухоли особенностей экспрессии хемокинов стандартными методами, причем пробу берут у пациента до начала лечения противораковым средством, направленным против опухолевых клеток, которые используют/сверхэкспрессируют рецептор фактора роста эпидермиса (рецептор ЕСЕ);
(ίί) определение во второй пробе ткани, полученной у указанного пациента, особенностей экспрессии хемокинов, причем пробу берут в момент времени после начала лечения указанным противораковым средством;
(ΐϊϊ) по усмотрению определение в третьей и последующих пробах ткани особенностей экспрессии хемокинов, причем пробу берут у пациента в более поздний срок, чем соответствующую предыдущую пробу этапа (и);
(ίν) сопоставление соответствующих особенностей экспрессии хемокинов в пробах ткани из этапа (ίί) и, по усмотрению, из этапа (ίίί), с особенностями экспрессии хемокинов в пробе ткани из этапа (ί) и определение того, для каких хемокинов изменились качество и/или количество в пробах (ίί) и (ίίί) по сравнению с особенностями хемокинов в референсной пробе (ί) или в соответствующей предшествующей пробе;
(ν) определение дозировки подлежащего введению пациенту противоракового средства в соответствии с изменениями в особенностях экспрессии хемокинов в указанных пробах ткани; и по усмотрению (νί) повторение этапов с (ί) по (ν), чтобы оптимизировать дозировку подлежащего введению пациенту противоракового средства.
В том случае, когда нет модуляции или изменения в особенностях экспрессии хемокинов или эти модуляция или изменения незначительны в пробах, полученных до начала лечения и после 1-10 дней, предпочтительно после 7 дней, либо прекращают дальнейшее лечение противораковым средством, либо, в качестве альтернативы, дозировка может увеличиваться, пока не будут наблюдаться изменения в особенностях экспрессии хемокинов.
Предлагаются также:
соответствующий способ, причем пробу в этапе (ίί) отбирают в пределах 1-10 дней после начала лечения указанным противораковым средством;
соответствующий способ, причем пробу в этапе (ίί) отбирают в пределах 2-7 дней после начала лечения указанным противораковым средством;
соответствующий способ, где противораковым средством является ингибитор рецептора ЕСЕ; соответствующий способ, где ингибитором рецептора ЕСЕ являются антитела к рецептору ЕСЕ; соответствующий способ, где антителами к рецептору ЕСЕ являются антитела МаЬ с225 (сеЮхипаЬ) или МаЬ 11425 (ЕМ072000, таЮхшпаЬ);
соответствующий способ, где лечение противораковым средством вызывает по сравнению с пациентом, не подвергавшимся лечению, повышенную экспрессию хемокинов, таких как ΚΑΝΊΈδ;
соответствующий способ, где лечение противораковым средством вызывает по сравнению с пациентом, не подвергавшимся лечению, сниженную экспрессию хемокинов, таких как 1Ь-8;
соответствующий способ, где участвует по меньшей мере один из следующих хемокинов: 1Ь-8, МСР-1, ΚΑΝΊΈ8 и ΙΡ-10;
способ раннего мониторинга ίη νίΐτο эффективности терапии у пациента рака, использующего/сверхэкспрессирующего рецептор ЕСЕ, путем определения характера экспрессии хемокинов в пробах ткани кожи и/или ткани опухоли и/или в сыворотке пациента с опухолью, взятых перед началом лечения и в течение первых 1-10 дней лечения противораковым средством;
способ раннего мониторинга ίη νίΐτο возникновения раздражения кожи, предпочтительно кожной сыпи, в связи с терапией у пациента рака, который использует/сверхэкспрессирует рецептор ЕСЕ, путем определения характера экспрессии хемокинов в пробах ткани кожи пациента с опухолью, взятых перед началом лечения и в течение первых 1-7 дней лечения противораковым средством, предпочтительно ингибитором рецептора ЕСЕ, более предпочтительно антителами к рецептору ЕСЕ, такими как МаЬ с225 (сеЮхипаЬ) или МаЬ 1425 (ЕМ072000, шаЮ/шпаЬ). причем предпочтительно используется по меньшей
- 4 014433 мере один из следующих хемокинов: 1Ь-8, МСР-1, ΚΆΝΤΕ8 и ΙΡ-10;
использование хемокинов, которые регулируются ίη νίνο со стимуляцией или ингибированием в ходе лечения рака противораковым средством, в качестве диагностического маркера для определения эффективности указанного лечения и/или вероятности появления раздражений кожи, предпочтительно кожной сыпи, сопровождающих указанное лечение, где указанный рак использует/сверхэкспрессирует рецептор ЕСЕ, а указанное противораковое средство представляет собой ингибитор рецептора ЕСЕ, предпочтительно антитела к рецептору ЕСЕ, такие как МаЬ с225 (сеШ.хппаЬ) или МаЬ 11425 (ΕΜΌ72000, таШхшпаЬ);
использование хемокинов, которые регулируются ίη νίνο со стимуляцией или ингибированием в ходе лечения рака противораковым средством, для идентификации мишени, предшествующей указанной экспрессии хемокинов, пригодной для разработки и производства лекарства, нацеленного на указанную мишень, для лечения у пациента рака, который использует/сверхэкспрессирует рецептор ЕСЕ, при использовании лекарства самого по себе или в комбинации с указанным противораковым средством, причем указанное противораковое средство представляет собой ингибитор рецептора ЕСЕ, предпочтительно антитела к рецептору ЕСЕ, такие как МаЬ с225 (сеШ.хппаЬ) или МаЬ 1425 (ΕΜΌ72000, таШхшпаЬ).
Настоящее изобретение в ходе экспериментальной работы показало, что блокирование рецептора ЕСЕ, например, моноклональными антителами, такими как МаЬ с225 (сеШ.хппаЬ) или МаЬ 1425 (таШхитаЬ), или ингибиторами тирозин-киназы (дсГ111П1Ь. 1ге88а®) препятствует осуществлению в первичных кератиноцитах зависящих от рецептора ЕСЕ сигнальных каскадов. В этих опытах кератиноциты обрабатывали различными концентрациями ингибиторов рецептора ЕСЕ с последующей обработкой, или без нее, ТСЕ-α или ΤΝΡ-α в течение приблизительно 24 ч. Действие ингибиторов рецептора ЕСЕ оценивали с помощью вестерн-блотирования.
Как показано на фиг. 1, обработка агентами против рецептора ЕСЕ препятствует фосфорилированию рецептора ЕСЕ и ЕКК1/2, измеряемому с помощью вестерн-блот анализа обработанных кератиноцитов. Как показано на фиг. 2, обработка агентами против рецептора ЕСЕ препятствует индукции белка СОХ-2. Кроме того, после обработки агентами против рецептора ЕСЕ индуцировалось фосфорилирование 8ΤΛΤ3.
В опытах было показано, что обработка первичных кератиноцитов модулирует экспрессию хемокинов ίη νίίτο. Секретируемые хемокины определяли в культуральной среде кератиноцитов, которые были обработаны агентами против рецептора ЕСЕ в течение 24 ч. Измерения проводили с помощью технологии с гранулами Ьитшех. В этих опытах кератиноциты обрабатывали ингибиторами рецептора ЕСЕ, а затем обрабатывали или не обрабатывали ТСЕ-α или ΤΝΡ-α. Из нескольких хемокинов 1Ь-8 неизменно подавлялся в ответ на блокаду рецептора ЕСЕ (фиг. 3), тогда как экспрессия ΚΆΝΤΈ8 и ΙΡ-10 стимулировалась (фиг. 4 и 5).
1Ь-8 является фактором стимуляции ангиогенеза, это позволяет предположить, что ингибирование его экспрессии препятствует образованию кровеносных сосудов в коже. Наоборот, ΚΆΝΙΈ8 и ΙΡ-10 были описаны как факторы хемоаттракции для лейкоцитов. Это позволяет предположить, что их усиленная экспрессия (и, возможно, также и других хемокинов) индуцирует инфильтрацию лейкоцитов в кожу, что вызывает воспаление и, в конечном итоге, кожную сыпь.
Согласно настоящему изобретению, модулированный характер экспрессии хемокинов в ответ на блокаду рецептора ЕСЕ в кератиноцитах и ткани опухоли (с активной сигнальной функцией рецептора ЕСЕ) приводит к миграции/хемоаттракции лейкоцитов, которую можно ингибировать агентами/лекарствами, препятствующими действию этих хемокинов. Опыты включают анализ хемотаксиса, в котором культуральную среду кератиноцитов собирают после обработки в течение 24 ч ингибиторами рецептора ЕСЕ и стимуляции (или отсутствия стимуляции) ΤСЕ-α или ΤΝΡ-α. Культуральную среду помещают в нижний отсек камеры Бойдена (Воубеп), а в верхний отсек камеры Бойдена помещают свежевыделенные клетки РВМС или гранулоциты. Затем определяют хемотаксис клеток крови, измеряя в определенные моменты времени количество клеток РВМС или гранулоцитов в нижнем отсеке. В некоторых опытах клетки РВМС или гранулоциты предварительно активируют ίη νίίτο, чтобы повысить миграционную активность клеток.
Согласно настоящему изобретению можно показать, что хемокины в культуральной среде вызывают хемотаксис клеток РВМС и гранулоцитов и что это является частью биологической реакции, наблюдаемой при кожной сыпи.
Чтобы продемонстрировать, что за явления хемотаксиса ответственны конкретные хемокины, в культуральную среду в нижнем отсеке камеры Бойдена добавляют специфические ингибиторы рецепторов хемокинов и оценивают хемотаксис в сравнении с культуральной средой без добавок.
Более того, было установлено, что хемотаксис индуцируется взаимодействием хемокинов с рецепторами хемокинов и что блокирование этого взаимодействия антагонистами рецепторов хемокинов препятствует хемотаксису клеток крови.
Модуляция экспрессии хемокинов в ответ на блокаду рецепторов ЕСЕ приводит к миграции/хемоаттракции лейкоцитов в кожу мышей. Кроме того, может быть проанализирована инфильтрация
- 5 014433 лейкоцитов и установлена ее корреляция с экспрессией хемокинов. Согласно настоящему изобретению было далее показано, что уровни экспрессии хемокинов в коже мышей модулируются после обработки ингибиторами рецепторов ЕСЕ и что эта модуляция сопровождается инфильтрацией лейкоцитов. Было установлено, что системное введение антагонистов рецепторов хемокинов препятствует инфильтрации лейкоцитов в кожу животных, получавших терапию ингибиторами рецепторов ЕСЕ, и таким путем ослабляет или устраняет развитие кожной сыпи.
Согласно настоящему изобретению индивидуумам можно вводить агенты против рецепторов ЕСЕ, пока не появятся первые признаки токсичности для кожи, и затем можно проводить местное лечение пораженной кожи агентами против рецепторов хемокинов, чтобы предотвратить инфильтрацию лейкоцитов и снизить токсичность для кожи.
Местное нанесение на кожу антагонистов рецепторов хемокинов снижает инфильтрацию лейкоцитов и токсичность для кожи. Предполагается, что эти средства могут применяться в клинической практике для лечения кожной сыпи у пациентов, получающих лечение ингибиторами рецепторов ЕСЕ.
Было установлено, что появление кожной сыпи коррелировало с восприимчивостью пациентов к терапии ингибиторами рецепторов ЕСЕ, поэтому характер экспрессии хемокинов является более подходящим индикатором, чем сама по себе кожная токсичность, и может быть использован как диагностический показатель для оценки восприимчивости пациента к терапии ингибиторами рецепторов ЕСЕ. Это может способствовать точному определению в течение первой недели лечения тех пациентов, для которых можно ожидать успеха в лечении ингибиторами рецепторов ЕСЕ.
Молекулярные изменения в уровнях экспрессии хемокинов в коже пациентов можно проанализировать в течение первой недели или первых 10 дней после начала лечения антагонистами рецепторов ЕСЕ, чтобы определить, подверглась ли модуляции экспрессия хемокинов в ответ на блокаду рецепторов ЕСЕ. Это можно сделать, анализируя биопсии кожи перед лечением и в ходе лечения. Уровни экспрессии хемокинов модулируются в ответ на терапию антагонистами рецепторов ЕСЕ, и степень модуляции может служить диагностическим показателем для прогнозирования того, будет ли пациент восприимчив к лечению. Предполагается, что для пациентов, у которых не обнаруживается или обнаруживается в малой степени модуляция экспрессии хемокинов, лечение проводится неоптимальными дозами антагонистов рецепторов ЕСЕ и что дозы следует повышать до тех пор, пока не проявится модуляция. В качестве альтернативы, если такое решение не принято, пациентам без модуляции экспрессии хемокинов может быть предоставлено другое лечение.
Открытая авторами модуляция играет в данном контексте важную роль в развитии кожной сыпи и поэтому может быть использована как диагностический маркер для прогнозирования на ранних стадиях появления кожной сыпи у пациентов с опухолями;
маркер-заменитель для оценки эффективности ингибирования мишени в опухолях (и поэтому, возможно, также и исхода лечения), особенно для точного отбора на ранних стадиях после начала лечения тех пациентов, для которых маловероятен успех лечения антагонистами рецепторов ЕСЕ;
индикатор для разработки новых способов лечения кожной сыпи с использованием средств местного применения, которые препятствуют хемоаттракции хемокинов, индуцированной блокадой рецепторов ЕСЕ;
средство модуляции хемокинов в окружении опухолей, подавления вызванного опухолями воспаления и роста опухоли ингибиторами рецепторов ЕСЕ (ее1их1таЬ = с225, таШхитаЬ = ЕМ072000 = 11425) и другими средствами.
Не существует биомаркеров, предсказывающих реакцию пациентов с опухолями на терапию антителами се!их1таЬ. Однако при трех симптомах (рак толстой и прямой кишки, рак поджелудочной железы и карцинома чешуйчатых клеток головы) наблюдалась достоверная корреляция между интенсивностью угревидной кожной сыпи, индуцированной лечением се!их1таЬ, и реакцией опухоли. При стандартной лечебной дозе у пациентов либо не наблюдалась сыпь, либо наблюдалась сыпь различной интенсивности (градации Ι-ΙΙΙ), это указывало на то, что интенсивность воспалительного процесса в коже, индуцированного антителами се!их1таЬ, определяется иммунным статусом индивидуальных пациентов и, следовательно, указывает на то, что иммуномодулирующая активность антител сеШхппаЬ является фактором, лежащим в основе наблюдаемых реакций опухолей. Передвижение и клеточный фенотип иммунных клеток регулируются хемокинами, причем определенные наборы хемокинов проявляют специфическую для типов клеток активность.
В настоящем изобретении предполагается, что ингибирование в карциномах процесса передачи сигнала рецепторами ЕСЕ вызывает изменения в окружающих карциному хемокинах и воздействует на воспалительный статус опухоли, приводя вследствие этого к ингибированию роста опухоли. Согласно настоящему изобретению регуляция экспрессии хемокинов в клетках опухоли и первичных кератиноцитах ίη νίΐΓΟ происходит одинаковым образом. Что касается кератиноцитов, были проведены опыты, которые показали, что блокирование рецепторов ЕСЕ моноклональными антителами, такими как се!их1таЬ или ЕМЭ72000, или ингибиторами тирозин-киназы (деЙгшЬ, 1ге55а®) препятствует осуществлению связанных с рецепторами ЕСЕ сигнальных каскадов в различных линиях опухолевых клеток, таких как
- 6 014433
А431, представляющих различные опухолевые симптомы.
В ходе экспериментальной работы было показано, что обработка линий опухолевых клеток (таких, как А431) модулирует экспрессию хемокинов ίη νίίτο. Опухолевые клетки обрабатывали агентами - антагонистами рецепторов БОР, после чего проводилась обработка (или не проводилась) ΤΟΡ-α или ΤΝΡ-α. В культуральной среде опухолевых клеток, отбираемой через 24 ч, определяли секретируемые хемокины. Определения проводили по технологии с гранулами Битшех.
Подобно данным для первичных кератиноцитов, в ответ на блокаду рецепторов БОР в опухолевых клетках наблюдалась модуляции экспрессии некоторых цитокинов. Неизменно наблюдалось ингибирование экспрессии 1Б-8 (фиг. 6), тогда как в опухолевых клетках, обработанных ингибиторами рецепторов БОР, происходила стимуляция экспрессии ΚΑΝΤΕ8 и ΙΡ-10 (фиг. 7 и 8).
Взятые вместе, эти данные позволили предположить, что ингибиторы рецепторов ΕΟΡ модулируют в кератиноцитах и опухолевых клеток одинаковые пути передачи сигналов. Это подкрепляет идею о том, что кожа, кератиноциты и, более точно, уровни экспрессии хемокинов могут быть использованы как индикаторы-заменители для прогнозирования эффективности терапии антагонистами рецепторов ΕΟΡ у раковых пациентов.
Модуляцию уровней экспрессии 1Б-8 оценивали в наборе различных линий опухолевых клеток. Было установлено, что экспрессия неизменно подавлялась в ответ на блокаду рецепторов ΕΟΡ (фиг. 9). Это позволяет предположить, что уровни экспрессии 1Б-8 являются биоиндикатором эффективности терапии антагонистами рецепторов ΕΟΡ. Предполагается оценивать уровни экспрессии 1Б-8 в крови пациентов, получавших лечение антагонистами рецепторов ΕΟΡ, и использовать снижение уровней экспрессии в качестве диагностического показателя для мониторинга фармакодинамического действия агентов - антагонистов рецепторов ΕΟΡ.
Как указано выше, модулированный характер экспрессии хемокинов в ответ на блокаду рецепторов ΕΟΡ в ткани опухоли (с активной сигнальной функцией рецепторов ΕΟΡ) приводит к миграции/хемоаттракции лейкоцитов.
Опыты включали анализ хемотаксиса, где культуральную среду опухолевых клеток собирали после обработки в течение 24 ч ингибиторами рецепторов ΕΟΡ и стимуляции (или без стимуляции) ΤΟΡ-α или ΤΝΡ-α. Культуральную среду помещают в нижний отсек камеры Бойдена, а в верхний отсек помещают свежевыделенные клетки РВМС или гранулоциты. Затем определяют хемотаксис клеток крови, измеряя в определенные моменты времени количество клеток РВМС или гранулоцитов в нижнем отсеке. В некоторых опытах клетки РВМС или гранулоциты предварительно активируют ίη νίίτο, чтобы повысить миграционную активность клеток. Эти опыты показывают, что хемокины в культуральной среде вызывают хемотаксис клеток РВМС и гранулоцитов.
Как один из результатов изобретения, специфические хемокины, ответственные за явления хемотаксиса, специфические ингибиторы рецепторов хемокинов добавляют в культуральную среду в нижнем отсеке камеры Бойдена и оценивают хемотаксис в сравнении с культуральной средой без добавок. Хемотаксис индуцируется взаимодействием хемокинов с рецепторами хемокинов и блокада этого взаимодействия антагонистами рецепторов хемокинов препятствует хемотаксису клеток крови.
Опыты включают исследования ίη νίνο, в которых мышам с опухолями вводили агенты - антагонисты рецепторов ΕΟΡ. Модуляцию уровней экспрессии хемокинов в опухолях анализировали в течение первой недели лечения агентами - антагонистами рецепторов ΕΟΡ. Уровни экспрессии хемокинов модулировались так же, как это наблюдалось ίη νίίτο. Кроме того, в опухолях анализировали инфильтрацию лейкоцитов, и антагонисты рецепторов ΕΟΡ индуцируют инфильтрацию лейкоцитов в опухоль, а также их статус активности/дифференцировки. Мониторинг последнего можно осуществлять по 1НС маркеров клеточной активации/дифференцировки. На основании корреляции между кожной сыпью и реакцией на лечение высказано предположение, что модуляция экспрессии хемокинов имеет место как в коже, так и в опухоли и что это является частью механизма действия агентов - антагонистов рецепторов ΕΟΡ.
Согласно настоящему изобретению предполагается, что широкий мониторинг изменений в профилях экспрессии хемокинов в опухолях после ингибирования и без ингибирования рецепторов ΕΟΡ и сопоставление наблюдаемых изменений с известными специфическими клеточными действиями хемокинов в иммунной системе обеспечивают первые критерии, в соответствии с которыми можно определить, какие внутриопухолевые хемокины и какие лейкоциты могут участвовать в иммунном контроле роста опухоли. На основании этой информации можно идентифицировать другие более ранние терапевтические мишени в метаболических путях, контролирующих помимо рецепторов ΕΟΡ экспрессию хемокинов, которые индуцируют опосредованные иммунной системой противоопухолевые эффекты, не зависящие от ингибирования рецепторов ΕΟΡ, или же с целью усилить противоопухолевой действие терапии с помощью антагонистов рецепторов ΕΟΡ. Таким образом, становится возможным объяснить изменения в характере экспрессии хемокинов в опухолях после ингибирования сигнальной функции рецепторов ΕΟΡ. Наблюдаемые при терапии антагонистами рецепторов ΕΟΡ изменения характера экспрессии хемокинов являются до определенной степени опухолеспецифичными.
- 7 014433
Краткое описание чертежей
Фиг. 1. Ингибирование зависящих от рецептора ЕСЕ путей передачи сигналов в кератиноцитах.
Кератиноциты обрабатывали ингибиторами рецепторов ЕСЕ (Се!их1таЬ, МаШхитаЬ или 1гекка) и стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (ТСЕ-α или ΤΝΕ-α). Через 24 ч клетки лизировали и анализировали методом вестерн-блотирования. Анализами было обнаружено, что обработка ингибиторами рецепторов ЕСЕ приводит к нарушению направляемых рецепторами ЕСЕ сигнальных каскадов, и этот эффект зависит от дозы. Обработка ингибиторами рецепторов ЕСЕ предотвращает фосфорилирование рецептора ЕСЕ (Туг 1068) и ЕКК1/2 (ТЬг 202/204).
Фиг. 2. Ингибирование зависящих от рецептора ЕСЕ путей передачи сигналов в кератиноцитах.
Кератиноциты обрабатывали ингибиторами рецепторов ЕСЕ (Се!их1таЬ, МаШхитаЬ или 1гекка) и стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (ТСЕ-α или Т№-а). Через 24 ч клетки лизировали и анализировали методом вестерн-блотирования. Анализами было обнаружено, что обработка ингибиторами рецепторов ЕСЕ приводит к нарушению направляемых рецепторами ЕСЕ сигнальных каскадов, и этот эффект зависит от дозы. Обработка ингибиторами рецепторов ЕСЕ индуцирует экспрессию СОХ-2 и предотвращает фосфорилирование 8ТАТ3.
Фиг. 3. Модулирование уровней секреции 1Ь-8 в кератиноцитах.
Кератиноциты обрабатывали ингибиторами рецепторов ЕСЕ (Се!их1таЬ, МаШхитаЬ или 1гекка) и стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (ТСЕ-α или Т№-а). Через 24 ч собирали клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии 1Ь-8 с использованием технологии Ьитшех. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов ЕСЕ приводит к подавлению экспрессии 1Ь-8 и этот эффект зависит от дозы.
Фиг. 4. Модулирование уровней секреции КА.№ТЕ8 в кератиноцитах.
Кератиноциты обрабатывали ингибиторами рецепторов ЕСЕ (СеШхппаЬ. МаШхитаЬ или 1гекка) и стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (ТСЕ-α или Т№-а). Через 24 ч собирали клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии КА№ТЕ8 с использованием технологии Ьитшех. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов ЕСЕ приводит к подавлению экспрессии КА№ТЕ§ и этот эффект зависит от дозы.
Фиг. 5. Модулирование уровней секреции ΙΡ-10 в кератиноцитах.
Кератиноциты обрабатывали ингибиторами рецепторов ЕСЕ (Се!их1таЬ, МаШхитаЬ или 1гекка) и стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (ТСЕ-α или Т№-а). Через 24 ч собирали клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии ΙΡ-10 с использованием технологии Ьитшех. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов ЕСЕ приводит к подавлению экспрессии ΙΡ-10 и этот эффект зависит от дозы.
Фиг. 6. Модулирование уровней секреции 1Ь-8 в клетках А431.
Клетки А431 обрабатывали ингибиторами рецепторов ЕСЕ (Се!их1шаЬ, МаШхитаЬ или 1гекка) и стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (ТСЕ-α или Т№-«). Через 24 ч собирали клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии 1Ь-8 с использованием технологии Ьитшех. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов ЕСЕ приводит к подавлению экспрессии 1Ь-8 и этот эффект зависит от дозы.
Фиг. 7. Модулирование уровней секреции КА№ТЕ§ в клетках А431.
Клетки А431 обрабатывали ингибиторами рецепторов ЕСЕ (СеШхшаЬ, МаШхитаЬ или 1гекка) и стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (ТСЕ-α или Т№-«). Через 24 ч собирали клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии КА№ТЕ8 с использованием технологии Ьитшех. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов ЕСЕ приводит к подавлению экспрессии КА№ТЕ§ и этот эффект зависит от дозы.
Фиг. 8. Модулирование уровней секреции ΙΡ-10 в клетках А431.
Клетки А431 обрабатывали ингибиторами рецепторов ЕСЕ (СеШхшаЬ, МаШхитаЬ или 1гекка) и стимулировали (или не стимулировали) различными факторами роста (ТСЕ-α или Т№-«). Через 24 ч собирали клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии ΙΡ-10 с использованием технологии Ьитшех. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов ЕСЕ приводит к подавлению экспрессии ΙΡ-10 и этот эффект зависит от дозы.
Фиг. 9. Модулирование уровней секреции 1Ь-8 в различных линиях опухолевых клеток.
Различные линии опухолевых клеток (И1Е1, НТ29, А431, МСЕ-7, РС-3 и И87МС) обрабатывали ингибиторами рецепторов ЕСЕ (СеШхппаЬ или МаШхитаЬ) и стимулировали ТСЕ-α. Через 24 ч собирали клеточные надосадочные жидкости и количественно определяли в них уровни экспрессии 1Ь-8 с использованием технологии Ьитшех. Результаты анализов показали, что обработка ингибиторами рецепторов ЕСЕ приводит к подавлению экспрессии 1Ь-8 с зависимостью от дозы во всех исследованных линиях опухолевых клеток.
- 8 014433
Уровни экспрессии II--8 в ответ на действие СсШхппаЬ (СшаЬ) или МаШ/итаЬ (МшаЬ)
Опухолевые клетки СтаЬ (% от контроля) МтаЬ (% от контроля)
ϋϊΗ 16 28
ΗΤ29 24 30
А431 13 15
ΜϋΑ МВ 468 1Ьс1 1Ьс1
МСР-7 1 49
РС-3 53 76
ΙΙ87ΜΟ 63 58
Клетки обрабатывали СтаЬ или МтаЬ (100 нг/мл) и стимулировали ТОЕ-α (100 нг/мл).
Число опытов = 1.

Claims (23)

1. Способ прогнозирования у пациента, имеющего раковое заболевание, реакции опухоли на лечение противораковым средством, причем способ включает:
(ΐ) определение в первой пробе ткани особенностей экспрессии хемокинов стандартными методами, причем пробу берут у пациента до начала лечения противораковым средством, направленным против опухолевых клеток, которые используют рецептор фактора роста эпидермиса (рецептор ЕОЕ);
(ΐΐ) определение во второй пробе ткани, полученной у указанного пациента, особенностей экспрессии хемокинов, причем пробу берут в момент времени после начала лечения указанным противораковым средством;
(ϊϊϊ) по усмотрению определение в третьей и последующей пробе ткани особенностей экспрессии хемокинов, причем пробу берут у пациента в более поздний срок, чем соответственную предыдущую пробу этапа (й);
(ΐν) сопоставление соответственных особенностей экспрессии хемокинов в пробах ткани из этапа (ΐΐ) и, по усмотрению, из этапа (ΐΐΐ), с особенностями экспрессии хемокинов в пробе ткани из этапа (ΐ) и определение того, для каких хемокинов изменились качество и/или количество в пробах (и) и (ΐΐΐ) по сравнению с особенностями хемокинов в референсной пробе этапа (ΐ) или в соответственной предшествующей пробе;
(ν) прогнозирование на основании изменений в особенностях экспрессии хемокинов в указанных пробах ткани вероятности и интенсивности реакции опухоли у пациента на лечение указанным противораковым средством.
2. Способ определения оптимальной дозы противоракового средства для лечения рака у пациента, причем способ включает:
(ΐ) определение в первой пробе ткани особенностей экспрессии хемокинов стандартными методами, причем пробу берут у пациента до начала лечения противораковым средством, направленным против опухолевых клеток, которые используют рецептор фактора роста эпидермиса (рецептор ЕОЕ);
(ΐΐ) определение во второй пробе ткани, полученной у указанного пациента, особенностей экспрессии хемокинов, причем эту пробу берут в момент времени после начала лечения указанным противораковым средством;
(ΐΐΐ) по усмотрению определение в третьей и последующей пробе ткани особенностей экспрессии хемокинов, причем пробу берут у пациента в более поздний срок, чем соответственную предыдущую пробу этапа (й);
(ΐν) сопоставление соответственных особенностей экспрессии хемокинов в пробах ткани из этапа (ΐΐ) и, по усмотрению, из этапа (ΐΐΐ), с особенностями экспрессии хемокинов в пробе ткани из этапа (ΐ) и определение того, для каких хемокинов изменились качество и/или количество в пробах (ΐΐ) и (ΐΐΐ) по сравнению с особенностями хемокинов в референсной пробе (ΐ) или в соответственной предшествующей пробе;
(ν) определение дозировки подлежащего введению пациенту противоракового средства в соответствии с изменениями в особенностях экспрессии хемокинов в указанных пробах ткани; и по усмотрению, (νΐ) повторение этапов с (ΐ) по (ν), чтобы оптимизировать дозировку подлежащего введению пациенту противоракового средства.
3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанную пробу получают из ткани опухоли.
4. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанную пробу получают из ткани кожи.
5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что пробу в этапе (ΐΐ) берут в пределах 1-10 дней после начала лечения указанным противораковым средством.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что пробу в этапе (ΐΐ) берут в пределах 5-7 дней после начала лечения указанным противораковым средством.
7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что противораковым средством является ингибитор рецептора ЕОЕ.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что ингибитором рецептора ЕОЕ является антитело к рецеп
- 9 014433 тору БОГ.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что антитело к рецептору ЕОГ представляет собой Май с225 (се!их1шай) или Май Н425 (ЕМБ72000, пШи/итай).
10. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что лечение противораковым средством вызывает повышение экспрессии хемокинов по сравнению с пациентом, не подвергавшимся лечению.
11. Способ по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что лечение противораковым средством вызывает снижение экспрессии хемокинов по сравнению с пациентом, не подвергавшимся лечению.
12. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что участвует по меньшей мере один из следующих хемокинов: ГБ-8, МСР-1, ΚΆΝΤΕ8 и ΙΡ-10.
13. Способ раннего мониторинга ΐη νΐΐΓΟ эффективности лечения у пациента рака, использующего рецептор ЕОГ, путем определения характера экспрессии хемокинов в пробах ткани кожи и/или ткани опухоли, и/или в сыворотке пациента с опухолью до начала и в течение первых 1-10 дней лечения противораковым средством.
14. Способ раннего мониторинга ΐη νΐΐΓΟ появления раздражения кожи, связанного с лечением у пациента рака, использующего рецептор ЕОГ, путем определения характера экспрессии хемокинов в пробах ткани кожи пациента с опухолью до начала и в течение первых 1-7 дней лечения противораковым средством.
15. Способ по п.13 или 14, отличающийся тем, что противораковым средством является ингибитор рецептора ЕОГ.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что ингибитором рецептора ЕОГ является антитело к рецептору ЕОГ.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что антитело к рецептору ЕОГ представляет собой Май с225 (се1их1шаЬ) или Май Н425 (ЕМБ72000, пШи/итай).
18. Способ по любому из пп.13-17, отличающийся тем, что лечение противораковым средством вызывает повышение экспрессии хемокинов по сравнению с пациентом, не подвергавшимся лечению.
19. Способ по любому из пп.13-17, отличающийся тем, что лечение противораковым средством вызывает снижение экспрессии хемокинов по сравнению с пациентом, не подвергавшимся лечению.
20. Способ по любому из пп.13-19, отличающийся тем, что участвует по меньшей мере один из следующих хемокинов: ГБ-8, МСР-1, ΚΑNΤΕ8 и ΙΡ-10.
21. Применение хемокинов, экспрессия которых при лечении рака противораковым средством регулируется ΐη νΐνο со стимуляцией или с подавлением, в качестве диагностического маркера ΐη νΐΐΓΟ для определения эффективности указанного лечения и/или вероятности появления раздражений кожи, связанных с указанным лечением, причем указанный тип рака использует рецептор ЕОГ, а указанное противораковое средство - это ингибитор рецептора ЕОГ.
22. Применение хемокинов, экспрессия которых при лечении рака противораковым средством регулируется ΐη νΐνο со стимуляцией или с подавлением, для идентификации мишени, предшествующей указанной экспрессии хемокинов, пригодной для разработки и производства лекарства, нацеленного на указанную мишень, для лечения у пациента рака, использующего рецепторы ЕОГ, с применением этого лекарства самого по себе или в комбинации с указанным противораковым средством, где указанное противораковое средство - это ингибитор рецептора ЕОГ.
23. Применение по п.21 или 22, где указанным противораковым средством является антитело Май с225 (се!их1шай) или Май Н425 (ЕМБ72000, пШи/итай).
EA200800963A 2005-10-11 2006-10-11 Egfr-зависимая модуляция экспрессии хемокинов, влияние на терапию и диагностику опухолей и её побочные эффекты EA014433B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP05022127 2005-10-11
PCT/EP2006/009837 WO2007042286A1 (en) 2005-10-11 2006-10-11 Egfr dependent modulation of chemokine expression and influence on therapy and diagnosis of tumors and side effects thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200800963A1 EA200800963A1 (ru) 2008-10-30
EA014433B1 true EA014433B1 (ru) 2010-12-30

Family

ID=37460022

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200800963A EA014433B1 (ru) 2005-10-11 2006-10-11 Egfr-зависимая модуляция экспрессии хемокинов, влияние на терапию и диагностику опухолей и её побочные эффекты

Country Status (12)

Country Link
US (2) US20080199850A1 (ru)
EP (2) EP2251688A1 (ru)
JP (1) JP2009511524A (ru)
KR (1) KR20080068848A (ru)
CN (1) CN101283275A (ru)
AU (1) AU2006301518B2 (ru)
BR (1) BRPI0617236A2 (ru)
CA (1) CA2625291A1 (ru)
EA (1) EA014433B1 (ru)
IL (1) IL190537A (ru)
WO (1) WO2007042286A1 (ru)
ZA (1) ZA200804006B (ru)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8668926B1 (en) 2003-09-15 2014-03-11 Shaker A. Mousa Nanoparticle and polymer formulations for thyroid hormone analogs, antagonists, and formulations thereof
WO2005027895A2 (en) 2003-09-15 2005-03-31 Ordway Research Institute Thyroid hormone analogs and methods of use in angiogenesis
US9498536B2 (en) * 2005-09-15 2016-11-22 Nanopharmaceuticals Llc Method and composition of thyroid hormone analogues and nanoformulations thereof for treating anti-inflammatory disorders
US10130686B2 (en) * 2005-09-15 2018-11-20 Nanopharmaceuticals Llc Method and composition of thyroid hormone analogues and nanoformulations thereof for treating inflammatory disorders
EP2390366A1 (en) * 2006-06-02 2011-11-30 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Method for identifying whether a patient will be responder or not to immunotherapy based on the differential expression of the TRAT1 gene
US8498695B2 (en) 2006-12-22 2013-07-30 Novadaq Technologies Inc. Imaging system with a single color image sensor for simultaneous fluorescence and color video endoscopy
US20080269339A1 (en) * 2007-04-26 2008-10-30 Thomas Robert Sutter Combined use of egf pathway inhibitors and differentiation promoting compounds
BRPI0906187A2 (pt) 2008-03-18 2020-07-14 Novadaq Technologies Inc. método e sistema de representação de imagens para aquisição de imagens nir e imagens em cor total
WO2010148007A2 (en) 2009-06-17 2010-12-23 Ordway Research Institute, Inc. Nanoparticle and polymer formulations for thyroid hormone, analogs, antagonists, and formulations and uses thereof
WO2015074050A1 (en) 2013-11-18 2015-05-21 Nanopharmaceuticals Llc Methods for screening patients for resistance to angioinhibition, treatment and prophylaxis thereof
WO2017049237A1 (en) * 2015-09-18 2017-03-23 The General Hospital Corporation Dba Massachusetts General Hospital Personalized approach to dosage of anti-fugetactic agent for treatment of cancer
WO2017127929A1 (en) 2016-01-26 2017-08-03 Novadaq Technologies Inc. Configurable platform
USD916294S1 (en) 2016-04-28 2021-04-13 Stryker European Operations Limited Illumination and imaging device
CN109715551A (zh) 2016-06-07 2019-05-03 纳米药业有限责任公司 与αvβ3整联蛋白甲状腺拮抗剂缀合的不可裂解聚合物
WO2017214730A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Novadaq Technologies Inc. Methods and systems for adaptive imaging for low light signal enhancement in medical visualization
CA3049922A1 (en) 2017-02-10 2018-08-16 Novadaq Technologies ULC Open-field handheld fluorescence imaging systems and methods
CN111601617A (zh) 2017-12-13 2020-08-28 上海岸阔医药科技有限公司 一种用于预防或治疗与egfr 被抑制相关疾病的方法
US11351137B2 (en) 2018-04-11 2022-06-07 Nanopharmaceuticals Llc Composition and method for dual targeting in treatment of neuroendocrine tumors
US10328043B1 (en) 2018-04-11 2019-06-25 Nanopharmaceuticals, Llc. Composition and method for dual targeting in treatment of neuroendocrine tumors
WO2019201195A1 (zh) 2018-04-16 2019-10-24 上海岸阔医药科技有限公司 预防或治疗肿瘤疗法副作用的方法
US10961204B1 (en) 2020-04-29 2021-03-30 Nanopharmaceuticals Llc Composition of scalable thyrointegrin antagonists with improved blood brain barrier penetration and retention into brain tumors
US11723888B2 (en) 2021-12-09 2023-08-15 Nanopharmaceuticals Llc Polymer conjugated thyrointegrin antagonists

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU4128089A (en) 1988-09-15 1990-03-22 Rorer International (Overseas) Inc. Monoclonal antibodies specific to human epidermal growth factor receptor and therapeutic methods employing same
EP1362868A3 (en) 1991-03-06 2004-02-11 MERCK PATENT GmbH Humanized and chimeric monoclonal antibodies that bind epidermal growth factor receptor (EGF-R)
US5461146A (en) 1992-07-24 1995-10-24 Cephalon, Inc. Selected protein kinase inhibitors for the treatment of neurological disorders
ATE165097T1 (de) 1993-05-28 1998-05-15 Cephalon Inc Anwendung von indolocarbazol-derivaten zur behandlung von prostataerkrankungen
US5594009A (en) 1994-10-14 1997-01-14 Cephalon, Inc. Fused pyrrolocarbazoles
US5705511A (en) 1994-10-14 1998-01-06 Cephalon, Inc. Fused pyrrolocarbazoles
US5475110A (en) 1994-10-14 1995-12-12 Cephalon, Inc. Fused Pyrrolocarbazoles
US5591855A (en) 1994-10-14 1997-01-07 Cephalon, Inc. Fused pyrrolocarbazoles
US5650407A (en) 1995-04-05 1997-07-22 Cephalon, Inc. Selected soluble esters of hydroxyl-containing indolocarbazoles

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CABIOGLU, N. ET AL.: "CCR7 and CXCR4 as novel biomarkers predicting axillary lymphnode metastasis in T1 breast cancer", CLIN CANCER RES, vol. 11, no. 16, 15 August 2005 (2005-08-15), pages 5686-5693, XP002410414, page 5686 *
MASCIA, F. ET AL.: "Blockade of the EGF receptor induces a deranged chemokine expression in keratinocytes leading to enhanced skin inflammation", AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY, vol. 163, no. 1, July 2003 (2003-07), pages 303-312, XP002410413, the whole document *
PASTORE, S. ET AL.: "ERK1/2 regulates epidermal chemokine expression and skin inflammation", THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY, vol. 174, 2005, pages 5047-5056, XP002410415, the whole document *

Also Published As

Publication number Publication date
EA200800963A1 (ru) 2008-10-30
KR20080068848A (ko) 2008-07-24
JP2009511524A (ja) 2009-03-19
CN101283275A (zh) 2008-10-08
US20080199850A1 (en) 2008-08-21
IL190537A0 (en) 2008-11-03
IL190537A (en) 2011-04-28
AU2006301518A1 (en) 2007-04-19
CA2625291A1 (en) 2007-04-19
ZA200804006B (en) 2009-03-25
US20110244506A1 (en) 2011-10-06
BRPI0617236A2 (pt) 2011-07-19
EP2251688A1 (en) 2010-11-17
WO2007042286A1 (en) 2007-04-19
EP1934599A1 (en) 2008-06-25
AU2006301518B2 (en) 2012-05-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA014433B1 (ru) Egfr-зависимая модуляция экспрессии хемокинов, влияние на терапию и диагностику опухолей и её побочные эффекты
Moretti et al. β-adrenoceptors are upregulated in human melanoma and their activation releases pro-tumorigenic cytokines and metalloproteases in melanoma cell lines
Liang et al. IL-11 is essential in promoting osteolysis in breast cancer bone metastasis via RANKL-independent activation of osteoclastogenesis
Pickhard et al. Inhibition of radiation induced migration of human head and neck squamous cell carcinoma cells by blocking of EGF receptor pathways
Lemma et al. MDA-MB-231 breast cancer cells fuel osteoclast metabolism and activity: A new rationale for the pathogenesis of osteolytic bone metastases
Nakao et al. Infiltration of COX-2–expressing macrophages is a prerequisite for IL-1β–induced neovascularization and tumor growth
Makino et al. Blockade of PDGF receptors by crenolanib has therapeutic effect in patient fibroblasts and in preclinical models of systemic sclerosis
Li et al. Constitutive expression of growth regulated oncogene (gro) in human colon carcinoma cells with different metastatic potential and its role in regulating their metastatic phenotype
Kamalakar et al. Circulating interleukin-8 levels explain breast cancer osteolysis in mice and humans
Piperi et al. Prognostic significance of IL-8-STAT-3 pathway in astrocytomas: correlation with IL-6, VEGF and microvessel morphometry
Arms et al. Expression and function of CCL2/CCR2 in rat micturition reflexes and somatic sensitivity with urinary bladder inflammation
Nickerson et al. Decreased autocrine EGFR signaling in metastatic breast cancer cells inhibits tumor growth in bone and mammary fat pad
JP4723474B2 (ja) Ｅｇｆレセプターシグナル伝達の調節のためのｔａｃｅまたはアンフィレグリンの阻害
Zhang et al. Transforming growth factor‐β1 mediates psoriasis‐like lesions via a Smad3‐dependent mechanism in mice
Zhang et al. Oral squamous carcinoma cells secrete RANKL directly supporting osteolytic bone loss
Sweeny et al. Evaluation of tyrosine receptor kinases in the interactions of head and neck squamous cell carcinoma cells and fibroblasts
Hong et al. Induced interleukin-8 expression in gliomas by tumor-associated macrophages
Banziger-Tobler et al. Growth hormone promotes lymphangiogenesis
Lama et al. Activated ERK1/2 expression in glioblastoma multiforme and in peritumor tissue
Sherriff-Tadano et al. Antifibrotic effects of hepatocyte growth factor on scleroderma fibroblasts and analysis of its mechanism
KR20170071393A (ko) 방사선 저항성 진단용 조성물 및 이의 용도
Huamani et al. Differential efficacy of combined therapy with radiation and AEE788 in high and low EGFR-expressing androgen-independent prostate tumor models
RU2789099C2 (ru) Способ определения снижения радиационно-индуцированной миграции клеток рака молочной железы человека линии MCF-7
Harman Effects of Exercise Training on Neutrophil Proliferation and Function in Cancer Patients
Sipos et al. Evaluation of Microvascular Density in Glioblastomas in Relation to p53 and Ki67 Immunoexpression

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU