EA014292B1

EA014292B1 - Medico-prophylactic agent having antibacterial and spermicidal activity

Info

Publication number: EA014292B1
Application number: EA200800361A
Authority: EA
Inventors: Людмила Владимировна Жукова; Роман Владимирович ИВАНОВ; Светлана Валерьевна Салтанова; Светлана Александровна Еремкина; Ольга Юрьевна Валькова; Ольга Владимировна Степанова
Original assignee: Открытое Акционерное Общество "Нижегородский Химико-Фармацевтический Завод" (Оао "Нижфарм")
Priority date: 2008-02-18
Filing date: 2008-02-18
Publication date: 2010-10-29
Also published as: EA200800361A1

Abstract

The invention relates to medicine and pharmacological industry, in particular to manufacturing new medico-prophylactic agents, having antibacterial and spermicidal activity applicable in gynecology. The proposedmedic0-prophylactic agent having antibacterial and spermicidal activity is produced as a tablet for intravaginal administration and comprises chlorhexidine or a salt thereof and a base which comprises lactose and other pharmaceutically-acceptable auxiliary substances as a main compound with the following component ratio, % wt:The preparation can further comprise a regenerating substance, in particular dexpantenol or methyluracil or hippophaes oleum. The experiments have proved that the inventive agent in the form of vaginal tablets is an effective antibacterial and spermicidal agent suitable in use.

Description

Средство дополнительно может содержать регенерирующее вещество, в частности декспантенол или метилурацил либо масло облепиховое. Как показали проведенные исследования, предлагаемое средство в виде вагинальных таблеток является эффективным антибактериальным и спермицидным средством, удобным в применении.The agent may additionally contain a regenerating substance, in particular dexpanthenol or methyluracil or sea buckthorn oil. As studies have shown, the proposed tool in the form of vaginal tablets is an effective antibacterial and spermicidal agent, convenient to use.

Изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности, в частности к созданию нового лечебно-профилактического средства, обладающего антибактериальным и спермицидным действием, которое может быть использовано в гинекологии.The invention relates to medicine and the pharmaceutical industry, in particular to the creation of a new therapeutic and prophylactic agent with antibacterial and spermicidal action, which can be used in gynecology.

В настоящее время распространение гинекологических заболеваний и заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП), имеет тенденцию к увеличению и приобретает все возрастающую социальную значимость.Currently, the spread of gynecological diseases and sexually transmitted diseases (STDs) has a tendency to increase and is gaining increasing social significance.

Для лечения и профилактики гинекологических заболеваний широко используются лекарственные средства, обладающие антибактериальным и антисептическим действием в виде дозированных форм, содержащих хлоргексидин.For the treatment and prevention of gynecological diseases, drugs are widely used that have antibacterial and antiseptic effects in the form of dosage forms containing chlorhexidine.

Хлоргексидин является одним из наиболее активных антибактериальных и антисептических средств. Он оказывает быстрое и сильное бактерицидное влияние на грамположительные и грамотрицательные бактерии. Также известно, что хлоргексидин обладает спермицидной активностью. Поэтому он может применяться не только в качестве агента, предотвращающего ЗППП, но и в качестве спермицидного средства.Chlorhexidine is one of the most active antibacterial and antiseptic agents. It has a quick and strong bactericidal effect on gram-positive and gram-negative bacteria. It is also known that chlorhexidine has spermicidal activity. Therefore, it can be used not only as an agent for preventing STDs, but also as a spermicidal agent.

Так известен женский тампон с пролонгированным лечебно-профилактическим действием, выполненный из адсорбирующего материала и имеющий лечебную оболочку, которая представляет собой композицию из биосовместимых гелеобразующих полимеров и лекарственных препаратов антисептического и антимикробного действия, в частности хлоргексидина (патент РФ № 2178312 Тампон женский с пролонгированным лечебно-профилактическим действием).So known is a female swab with a prolonged therapeutic and prophylactic effect, made of an absorbent material and having a treatment shell, which is a composition of biocompatible gelling polymers and antiseptic and antimicrobial drugs, in particular chlorhexidine (RF patent No. 2178312 Female swab with a prolonged therapeutic preventive action).

Данный тампон обеспечивает пролонгированное лечебное и/или профилактическое действие для лечения гинекологических заболеваний и профилактики ЗППП. Однако применение тампона ведет к уменьшению снабжения слизистой влагалища кислородом, что приводит к нарушению естественного баланса влагалищной микрофлоры и, как следствие, развитию вагинозов, а также при содержании в препарате хлоргексидина ~55% увеличивается риск возникновения побочных эффектов.This swab provides a prolonged therapeutic and / or prophylactic effect for the treatment of gynecological diseases and the prevention of STDs. However, the use of a tampon leads to a decrease in the supply of oxygen to the vaginal mucosa, which leads to an imbalance in the natural balance of the vaginal microflora and, as a result, the development of vaginosis, as well as when the content of chlorhexidine in the preparation is ~ 55%, the risk of side effects increases.

Известен химический состав для нанесения на тампон, обладающий спермицидной, бактерицидной и вируцидной активностью, содержащий хлоргексидин и/или оксид полиэтилена и ноноксинол-9 (заявка РСТ № 0003682 Химическая композиция, обладающая спермицидной, бактерицидной и вируцидной активностью и препарат для ввода в вагинальный канал).Known chemical composition for application to a tampon having spermicidal, bactericidal and virucidal activity, containing chlorhexidine and / or polyethylene oxide and nonoxynol-9 (PCT application No. 0003682 Chemical composition having spermicidal, bactericidal and virucidal activity and a drug for insertion into the vaginal canal) .

Данный состав обладает спермицидной, бактерицидной и вируцидной активностью для внутривагинального применения в качестве контрацептивного, а также предотвращающего передачу ЗППП средства. Однако применение в составе двух действующих веществ антибактериального действия приводит к повреждению клеток слизистой влагалища.This composition has spermicidal, bactericidal and virucidal activity for intravaginal use as a contraceptive, as well as preventing the transmission of STDs. However, the use of antibacterial action in the composition of the two active substances leads to damage to the cells of the vaginal mucosa.

Известна фармакологическая композиция пролонгированного действия для лечения различных воспалительных заболеваний, в частности в дерматовенерологии, выполненная в виде геля или пленки, содержащая хлоргексидин, димексид и стабилизирующий агент (патент РФ № 2201219 Фармакологическая композиция пролонгированного действия).Known pharmacological composition of prolonged action for the treatment of various inflammatory diseases, in particular in dermatology, made in the form of a gel or film containing chlorhexidine, dimexide and a stabilizing agent (RF patent No. 2201219 Pharmacological composition of prolonged action).

Данная фармацевтическая композиция обеспечивает пролонгированное воздействие лекарственного вещества - хлоргексидина - для лечения воспалительных заболеваний различной этиологии. Однако недостатком данной композиции, выполненной в виде геля или пленки, является неудобство применения для лечения воспалительных заболеваний в дерматовенерологии, а также использование димексида ведет к ожогам слизистой влагалища.This pharmaceutical composition provides a prolonged effect of a medicinal substance - chlorhexidine - for the treatment of inflammatory diseases of various etiologies. However, the disadvantage of this composition, made in the form of a gel or film, is the inconvenience of use for the treatment of inflammatory diseases in dermatovenerology, as well as the use of dimexide leads to burns of the vaginal mucosa.

Известно вагинальное средство, выполненное в виде суппозитория, содержащее эффективное количество по меньшей мере одного антимикробного агента местного применения, выбранного из группы, содержащей, в частности, хлоргексидин глюконат и жизнеспособную колонию микрокапсулированных молочно-кислых бактерий (патент РФ № 2147431 Вироцидный, бактерицидный и сперматоцидный суппозиторий).A vaginal agent in the form of a suppository is known containing an effective amount of at least one topical antimicrobial agent selected from the group consisting of, in particular, chlorhexidine gluconate and a viable colony of microencapsulated lactic acid bacteria (RF patent No. 2147431 Virocidic, bactericidal and spermatocidal suppository).

Данный вагинальный суппозиторий высокоэффективен для предотвращения заражения практически всеми заболеваниями, передающимися половым путем, и одновременно является противозачаточным средством, а также делает его пользователей невосприимчивыми к дрожжевым инфекциям. Однако известно, что совместное применение антибактериальных агентов и бактерий нежелательно, а также содержание хлоргексидина в количестве от 10 до 2000 мг на суппозиторий увеличивает риск возникновения побочных эффектов.This vaginal suppository is highly effective in preventing infection by almost all sexually transmitted diseases, and at the same time it is a contraceptive and also makes its users immune to yeast infections. However, it is known that the combined use of antibacterial agents and bacteria is undesirable, and the content of chlorhexidine in an amount of 10 to 2000 mg per suppository increases the risk of side effects.

Наиболее близким к заявляемому средству по совокупности существенных признаков является лечебно-профилактическое средство Гексикон, обладающее антибактериальным и антисептическим действием (патент РФ № 2166314 Лечебно-профилактическое средство Гексикон, обладающее антибактериальным и антисептическим действием).The closest to the claimed tool in terms of essential features is the therapeutic and prophylactic Hexicon, which has antibacterial and antiseptic effects (RF patent No. 2166314 Therapeutic and prophylactic Hexicon, which has antibacterial and antiseptic effects).

Известное средство, выполненное в виде суппозитория для интравагинального введения, содержащее хлоргексидина биглюконат и гидрофильную основу, широко применяется для лечения таких заболеваний, как сифилис, гонорея и трихомоназ.The known agent, made in the form of a suppository for intravaginal administration, containing chlorhexidine bigluconate and a hydrophilic base, is widely used to treat diseases such as syphilis, gonorrhea and trichomonasis.

Однако недостатком данного суппозитория является то, что при применении суппозитория эффект достигается не в полном объеме за счет снижения биодоступности хлоргексидина, обусловленного тем, что вагинальные инфекции связаны с обильными влагалищными выделениями, которые приводят к сниHowever, the disadvantage of this suppository is that when using the suppository the effect is not achieved in full due to a decrease in the bioavailability of chlorhexidine, due to the fact that vaginal infections are associated with abundant vaginal discharge, which lead to lower

- 1 014292 жению высвобождения хлоргексидина из данной основы.- 1 014292 release of chlorhexidine from this base.

В то же время применение данного средства приводит и к угнетению роста нормальной микрофлоры влагалища, что повышает риск развития вагинального дисбактериоза. Из практики также известно, что при применении данного средства иногда наблюдается негативное влияние основы на слизистую влагалища, которое проявляется в виде ожога.At the same time, the use of this drug leads to inhibition of the growth of normal microflora of the vagina, which increases the risk of developing vaginal dysbiosis. From practice, it is also known that when using this tool, a negative effect of the base on the vaginal mucosa is sometimes observed, which manifests itself in the form of a burn.

Кроме того, вытекание основы суппозитория создает у потребителей чувство дискомфорта.In addition, leakage of the suppository base creates a feeling of discomfort for consumers.

Задачей изобретения является создание лечебно-профилактического средства, выполненного в твердой дозированной форме - в виде таблетки для интравагинального применения, содержащего хлоргексидин или его соль, обладающего высоким терапевтическим эффектом за счет повышения биологической доступности, с хорошими потребительскими свойствами и способностью стимулировать рост нормальной микрофлоры, и, кроме того, расширяющего арсенал средств с хлоргексидином для интравагинального введения, обладающих антибактериальным и спермицидным действием.The objective of the invention is to provide a therapeutic and prophylactic agent in solid dosage form — in the form of an intravaginal tablet containing chlorhexidine or its salt, which has a high therapeutic effect due to increased bioavailability, with good consumer properties and the ability to stimulate the growth of normal microflora, and In addition, an expanding arsenal of chlorhexidine-containing agents for intravaginal administration with antibacterial and spermicidal action tviem.

Поставленная задача достигается предлагаемым средством, обладающим антибактериальным и спермицидным действием, содержащим хлоргексидин или его соль и основу, выполненным в дозированной форме для интравагинального введения, согласно изобретению средство выполнено в виде таблетки, основа которой в качестве главной составляющей содержит лактозу, а также другие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества при следующем соотношении компонентов, мас.%:The problem is achieved by the proposed tool with antibacterial and spermicidal action, containing chlorhexidine or its salt and a base, made in a dosage form for intravaginal administration, according to the invention, the tool is made in the form of a tablet, the base of which contains lactose as the main component, as well as other pharmaceutically acceptable excipients in the following ratio of components, wt.%:

Хлоргексидин или соль 1,0-4,0Chlorhexidine or salt 1.0-4.0

Основа:The basis:

Лактоза 60,0 - 95,0Lactose 60.0 - 95.0

Другие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества до 1 θθOther pharmaceutically acceptable excipients up to 1 θθ

Предпочтительно, что в качестве соли хлоргексидина используют биглюконат, или ацетат, или дигидрохлорид.It is preferred that a bigluconate or acetate or dihydrochloride salt is used as the chlorhexidine salt.

Предпочтительно, что средство дополнительно может содержать регенерирующее вещество, выбранное из декспантенола, метилурацила, масла облепихового в количестве 0,5-10 мас.%.Preferably, the agent may further comprise a regenerating agent selected from dexpanthenol, methyluracil, sea buckthorn oil in an amount of 0.5-10 wt.%.

Технический результат предлагаемого состава заключается в создании лечебно-профилактического средства в виде таблетки, позволяющей повысить эффективность за счет повышения биодоступности хлоргексидина; стимулировать после применения средства рост нормальной микрофлоры; улучшить потребительские свойства.The technical result of the proposed structure is to create a therapeutic and prophylactic agent in the form of a tablet, which allows to increase efficiency by increasing the bioavailability of chlorhexidine; stimulate the growth of normal microflora after application of the drug; improve consumer properties.

То, что предлагаемое средство с хлоргексидином обладает высокой терапевтической эффективностью и хорошими потребительскими свойствами, обусловлено тем, что средство выполнено в виде дозированной формы для интравагинального введения - в виде таблетки, содержащей лактозу в качестве главной составляющей основы, которая способствует полному высвобождению хлоргексидина из основы, что позволяет повысить его биодоступность и, как следствие, повысить его антибактериальное и спермицидное действие. Полное высвобождение хлоргексидина из основы обусловлено введением лактозы в качестве главного составляющего компонента основы (при ее содержании 60,0-95,0 мас.%) и позволяет равномерно распределить хлоргексидин по таблеточной массе (см. табл. 1), что приводит к равномерному распределению хлоргексидина в слизистой влагалища.The fact that the proposed product with chlorhexidine has high therapeutic efficacy and good consumer properties, due to the fact that the tool is made in the form of a dosage form for intravaginal administration - in the form of a tablet containing lactose as the main component of the base, which contributes to the complete release of chlorhexidine from the base, which allows to increase its bioavailability and, as a result, to increase its antibacterial and spermicidal effect. The complete release of chlorhexidine from the base is due to the introduction of lactose as the main constituent component of the base (with its content of 60.0-95.0 wt.%) And allows you to evenly distribute chlorhexidine in the tablet mass (see table 1), which leads to a uniform distribution chlorhexidine in the vaginal mucosa.

Кроме того, лактоза стимулирует рост нормальной микрофлоры влагалища, что приводит к уменьшению риска развития дисбактериоза влагалища на фоне использования предлагаемого средства.In addition, lactose stimulates the growth of normal microflora of the vagina, which reduces the risk of developing vaginal dysbiosis against the background of the use of the proposed tool.

То, что предлагаемое средство выполнено в виде таблетки приводит к отсутствию вытекания основы и, как следствие, отсутствию чувства дискомфорта.The fact that the proposed tool is made in the form of a tablet leads to the absence of leakage of the base and, as a consequence, the absence of a feeling of discomfort.

Дополнительное введение в состав регенерирующих веществ, способных стимулировать восстановление тканей, поврежденных в результате развития инфекции, приводит к быстрому восстановлению клеток слизистой влагалища и снижает риск вторичного инфицирования, что нивелирует негативное действие хлоргексидина на слизистую влагалища.An additional introduction to the composition of regenerating substances that can stimulate the restoration of tissues damaged as a result of infection leads to the rapid restoration of vaginal mucosa cells and reduces the risk of secondary infection, which eliminates the negative effect of chlorhexidine on the vaginal mucosa.

Таблица 1 Равномерность распределения хлоргексидина по таблеточной массеTable 1 Uniform distribution of chlorhexidine by tablet mass

№ серии Series No. Содержание хлоргексидина Chlorhexidine Content Среднее отклонение от номи- нала The average deviation from the nom nala Ш1П SH1P шах check тш tsh тах tah 490606 490606 95,0 (1,9) 95.0 (1.9) 99,6 (2,7) 99.6 (2.7) 2,1 2.1 2,6 2.6 500606 500606 93,6 (2,6) 93.6 (2.6) 98,9 (2,7) 98.9 (2.7) 510606 510606 99,7 (2,4) 99.7 (2.4) 104,2 (2,0) 104.2 (2.0) 520606 520606 95,3 (1,6) 95.3 (1.6) 99,7 (2,9) 99.7 (2.9)

Таким образом, предлагаемое средство является эффективным как при лечении бактериального воспаления, так и при его использовании как спермицидного препарата, при минимальном риске развития вагинального дисбактериоза. Кроме того, предлагаемое средство обладает улучшенными потребиThus, the proposed tool is effective both in the treatment of bacterial inflammation, and when it is used as a spermicidal drug, with minimal risk of developing vaginal dysbiosis. In addition, the proposed tool has improved consumption.

- 2 014292 тельскими свойствами.- 2 014292 properties.

Содержание компонентов в предлагаемом средстве установлено экспериментально.The content of the components in the proposed tool is established experimentally.

Содержание хлоргексидина или его солей менее 1 мас.% не обеспечивает требуемого антибактериального и спермицидного действия.The content of chlorhexidine or its salts of less than 1 wt.% Does not provide the required antibacterial and spermicidal action.

Содержание хлоргексидина или его соли более 4 мас.% увеличивает риск возникновения побочных эффектов.A content of chlorhexidine or its salt of more than 4 wt.% Increases the risk of side effects.

Содержание лактозы менее 60,0 мас.% не обеспечивает равномерного распределения хлоргексидина, а значит достижения максимального уровня биодоступности хлоргексидина, а также не обеспечивает достаточной стимуляции роста нормальной микрофлоры влагалища.A lactose content of less than 60.0 wt.% Does not provide a uniform distribution of chlorhexidine, which means achieving the maximum bioavailability of chlorhexidine, and also does not provide sufficient stimulation of the growth of normal vaginal microflora.

Содержание лактозы более 95,0 мас.% не позволяет получить таблетку с соответствующими к таблеткам требованиями.The lactose content of more than 95.0 wt.% Does not allow you to get a tablet with the appropriate tablet requirements.

В качестве других фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ используют антифрикционное вещество или смесь антифрикционных веществ, наполнители, связующие, дезинтеграторы, буферные агенты, позволяющие получить таблетку.As other pharmaceutically acceptable excipients, an antifriction substance or a mixture of antifriction substances, excipients, binders, disintegrants, buffering agents to produce a tablet are used.

В качестве антифрикционного вещества предлагаемое средство может содержать, в частности, стеариновую кислоту или ее соли, тальк, аэросил.As an anti-friction substance, the proposed tool may contain, in particular, stearic acid or its salts, talc, aerosil.

В качестве солей стеариновой кислоты предлагаемое средство может содержать, в частности, магниевую и/или кальциевую соли.As salts of stearic acid, the proposed tool may contain, in particular, magnesium and / or calcium salts.

В качестве наполнителя предлагаемое средство может содержать, в частности, крахмал, микрокристаллическую целлюлозу (МКЦ), магния карбонат.As a filler, the proposed tool may contain, in particular, starch, microcrystalline cellulose (MCC), magnesium carbonate.

В качестве связующего предлагаемое средство может содержать, в частности, поливинилпирролидон, оксипропилметилцеллюлозу, желатин, натрия альгинат.As a binder, the proposed tool may contain, in particular, polyvinylpyrrolidone, hydroxypropyl methylcellulose, gelatin, sodium alginate.

В качестве дезинтегратора средство может содержать, в частности, твин-80, кросповидон.As a disintegrant, the agent may contain, in particular, tween-80, crospovidone.

В качестве буферного агента средство может содержать, в частности, кислоту адипиновую или молочную.As a buffering agent, the agent may contain, in particular, adipic or lactic acid.

Способ получения предлагаемого средства.The method of obtaining the proposed tool.

Расчетное количество раствора хлоргексидина или его соли, лактозы и других фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ смешивают. Полученную массу высушивают, калибруют, после чего опудривают антифрикционным веществом или смесью антифрикционных веществ либо смесью антифрикционного вещества и наполнителя и затем таблетируют.The calculated amount of a solution of chlorhexidine or its salt, lactose and other pharmaceutically acceptable excipients are mixed. The resulting mass is dried, calibrated, and then dusted with an anti-friction substance or a mixture of anti-friction substances or a mixture of an anti-friction substance and a filler, and then tableted.

Ниже приведены примеры изготовления предлагаемого средства в виде вагинальных таблеток. Пример 1.The following are examples of the manufacture of the proposed funds in the form of vaginal tablets. Example 1

В раствор, содержащий 10,0 г хлоргексидина (в пересчете на сухое вещество), вводят 30,0 г метилцеллюлозы. В полученную смесь добавляют 950,0 г лактозы, массу перемешивают, высушивают, калибруют, опудривают 10,0 г аэросила и таблетируют.To a solution containing 10.0 g of chlorhexidine (in terms of dry matter), 30.0 g of methylcellulose is added. 950.0 g of lactose are added to the resulting mixture, the mass is stirred, dried, calibrated, dusted with 10.0 g of aerosil and tableted.

Получают таблеточную массу, имеющую следующий состав, мас.%:Get a tablet mass having the following composition, wt.%:

Хлоргексидин Chlorhexidine 1,0 1,0 Лактоза Lactose 95,0 95.0 Аэросил Aerosil 1,0 1,0 Метилцеллюлоза Cellulose 3,0 3.0

Пример 2.Example 2

В раствор, содержащий 40,0 г хлоргексидина (в пересчете на сухое вещество), вводят 9,0 г молочной кислоты. В полученную смесь добавляют 950,0 г лактозы, массу перемешивают, высушивают, калибруют, опудривают 1,0 г стеариновой кислоты и таблетируют.To a solution containing 40.0 g of chlorhexidine (in terms of dry matter), 9.0 g of lactic acid is added. 950.0 g of lactose are added to the resulting mixture, the mass is stirred, dried, calibrated, 1.0 g of stearic acid is dusted and tabletted.

Хлоргексидин Chlorhexidine 4,0 4.0 Молочная кислота Lactic acid 0,9 0.9 Лактоза Lactose 95,0 95.0 Стеариновая кислота Stearic acid 0,1 0.1

Пример 3.Example 3

В раствор, содержащий 10,0 г хлоргексидина (в пересчете на сухое вещество), вводят 50,0 г поливинилпирролидона, 30,0 г твина-80, 20,0 г кислоты молочной. В полученную смесь добавляют 600,0 г лактозы и 289,1 г крахмала, массу перемешивают, высушивают, калибруют, опудривают 0,9 г кальция стеарата и таблетируют.To a solution containing 10.0 g of chlorhexidine (in terms of dry matter), 50.0 g of polyvinylpyrrolidone, 30.0 g of tween-80, 20.0 g of lactic acid are added. 600.0 g of lactose and 289.1 g of starch are added to the resulting mixture, the mass is mixed, dried, calibrated, 0.9 g of calcium stearate is dusted and tabletted.

Хлоргексидин Chlorhexidine 1,0 1,0 Лактоза Lactose 60,0 60.0 Кальция стеарат Calcium stearate 0,09 0.09 Поливинилпирролидон Polyvinylpyrrolidone 5,0 5,0 Твин-80 Twin 80 3,0 3.0 Кислота молочная Lactic acid 2,0 2.0 Крахмал Starch до 100 up to 100

- 3 014292- 3 014292

Пример 4.Example 4

В раствор, содержащий 40,0 г хлоргексидина (в пересчете на сухое вещество), вводят 20,0 г желатина. В полученную смесь добавляют 20,0 г кросповидона, 309,1 г МКЦ и 600,0 г лактозы, массу перемешивают, высушивают, калибруют, опудривают 0,9 г талька и 10,0 г кислоты адипиновой, таблетируют.In a solution containing 40.0 g of chlorhexidine (in terms of dry matter), 20.0 g of gelatin is added. 20.0 g of crospovidone, 309.1 g of MCC and 600.0 g of lactose are added to the resulting mixture, the mass is stirred, dried, calibrated, dusted with 0.9 g of talc and 10.0 g of adipic acid, and tabletted.

Хлоргексидин Chlorhexidine 4,0 4.0 Лактоза Lactose 60,0 60.0 Тальк Talc 0,09 0.09 Желатин Gelatin 2,0 2.0 Кросповидон Crospovidone 2,0 2.0 Кислота адипиновая Adipic acid 1,6 1,6 МКЦ MCC до 100 up to 100

Примеры 5-8.Examples 5-8.

Проводят аналогично примерам 1-4, но в качестве действующего вещества используют хлоргексидина биглюконат.Carried out analogously to examples 1-4, but as the active substance, chlorhexidine bigluconate is used.

Примеры 9-12.Examples 9-12.

Проведены аналогично примерам 1-4, но в качестве действующего вещества используют хлоргексидина ацетат.Carried out analogously to examples 1-4, but as the active substance, chlorhexidine acetate is used.

Примеры 13-16.Examples 13-16.

Проведены аналогично примерам 1-4, но в качестве действующего вещества используют хлоргексидина дигидрохлорид.Carried out analogously to examples 1-4, but as the active substance, chlorhexidine dihydrochloride is used.

Пример 17.Example 17

В раствор, содержащий 10,0 г хлоргексидина (в пересчете на сухое вещество), вводят 5,0 г декспантенола, 10,0 г натрия альгината, 10,0 г твина-80. В полученную смесь добавляют 14,1 г крахмала и 950,0 г лактозы, массу перемешивают, высушивают, калибруют, опудривают 0,9 г магния стеарата и таблетируют.5.0 g of dexpanthenol, 10.0 g of sodium alginate, 10.0 g of tween-80 are added to a solution containing 10.0 g of chlorhexidine (in terms of dry matter). 14.1 g of starch and 950.0 g of lactose are added to the resulting mixture, the mass is mixed, dried, calibrated, 0.9 g of magnesium stearate is dusted and tabletted.

Хлоргексидин Chlorhexidine 1,0 1,0 Декспантенол Dexpanthenol 0,5 0.5 Лактоза Lactose 95,0 95.0 Магния стеарат Magnesium stearate 0,09 0.09 Натрия альгинат Sodium Alginate 1,0 1,0 Твин-80 Twin 80 1,0 1,0 Крахмал Starch до 100 up to 100

Пример 18.Example 18

В раствор, содержащий 40,0 г хлоргексидина (в пересчете на сухое вещество), вводят 5,0 г декспантенола. В полученную смесь добавляют 4,1 г МКЦ и 950,0 г лактозы, массу перемешивают, высушивают, калибруют, опудривают 0,9 г стеариновой кислоты и таблетируют.5.0 g of dexpanthenol are introduced into a solution containing 40.0 g of chlorhexidine (in terms of dry matter). 4.1 g of MCC and 950.0 g of lactose are added to the resulting mixture, the mass is stirred, dried, calibrated, dusted with 0.9 g of stearic acid and tabletted.

Хлоргексидин Chlorhexidine 4,0 4.0 Декспантенол Dexpanthenol 0,5 0.5 Лактоза Lactose 95,0 95.0 Стеариновая кислота Stearic acid 0,09 0.09 МКЦ MCC до 100 up to 100

Пример 19.Example 19

В раствор, содержащий 10,0 г хлоргексидина (в пересчете на сухое вещество), вводят 10,0 г желатина и 5,0 г декспантенола. В полученную смесь добавляют 5,0 г кросповидона, 349,0 г МКЦ и 600,0 г лактозы, массу перемешивают, высушивают, калибруют, опудривают 20,0 г кислоты адипиновой и 1,0 г смеси стеарата магния и стеарата кальция (в соотношении 1:1) и таблетируют.10.0 g of gelatin and 5.0 g of dexpanthenol are introduced into a solution containing 10.0 g of chlorhexidine (in terms of dry matter). 5.0 g of crospovidone, 349.0 g of MCC and 600.0 g of lactose are added to the resulting mixture, the mass is mixed, dried, calibrated, dusted with 20.0 g of adipic acid and 1.0 g of a mixture of magnesium stearate and calcium stearate (in the ratio 1: 1) and tabletted.

Хлоргексидин Chlorhexidine 1,0 1,0 Декспантенол Dexpanthenol 0,5 0.5 Лактоза Lactose 60,0 60.0 Стеарат магния/стеарат кальция Magnesium Stearate / Calcium Stearate 0,1 0.1 Желатин Gelatin 1,0 1,0 Кросповидон Crospovidone 0,5 0.5 Кислота адипиновая Adipic acid 2,0 2.0 МКЦ MCC до 100 up to 100

Пример 20.Example 20

В раствор, содержащий 40,0 г хлоргексидина (в пересчете на сухое вещество), вводят 50,0 г поливинилпирролидона, 15,0 г твина-80, 5,0 г декспантенола. В полученную смесь добавляют 600,0 г лактозыTo a solution containing 40.0 g of chlorhexidine (in terms of dry matter), 50.0 g of polyvinylpyrrolidone, 15.0 g of tween-80, 5.0 g of dexpanthenol are introduced. 600.0 g of lactose are added to the resulting mixture.

- 4 014292 и 265,0 г магния карбоната, массу перемешивают, высушивают, калибруют, опудривают 10,0 г аэросила и 15,0 г кислоты адипиновой, таблетируют.- 4 014292 and 265.0 g of magnesium carbonate, the mass is stirred, dried, calibrated, dusted with 10.0 g of Aerosil and 15.0 g of adipic acid, and tabletted.

Хлоргексидин Chlorhexidine 4,0 4.0 Декспантенол Dexpanthenol 0,5 0.5 Лактоза Lactose 60,0 60.0 Аэросил Aerosil 1,0 1,0 Поливинилпирролидон Polyvinylpyrrolidone 5,0 5,0 Твин-80 Twin 80 1,5 1,5 Кислота адипиновая Adipic acid 1,5 1,5 Магния карбонат Magnesium carbonate до 100 up to 100

Пример 21.Example 21

В раствор, содержащий 10,0 г хлоргексидина (в пересчете на сухое вещество), вводят 100,0 г декспантенола. В полученную смесь добавляют 880,0 г лактозы, массу перемешивают, высушивают, калибруют, опудривают 10,0 г талька и таблетируют.To a solution containing 10.0 g of chlorhexidine (in terms of dry matter), 100.0 g of dexpanthenol is introduced. 880.0 g of lactose are added to the resulting mixture, the mass is stirred, dried, calibrated, 10.0 g of talcum powder is dusted and tabletted.

Хлоргексидин Chlorhexidine 1,0 1,0 Декспантенол Dexpanthenol 10,0 10.0 Лактоза Lactose 88,0 88.0 Тальк Talc 1,0 1,0

Пример 22.Example 22

В раствор, содержащий 40,0 г хлоргексидина (в пересчете на сухое вещество), вводят 100,0 г декспантенола. В полученную смесь добавляют 850,0 г лактозы, массу перемешивают, высушивают, калибруют, опудривают 10,0 г стеарата кальция и таблетируют.To a solution containing 40.0 g of chlorhexidine (in terms of dry matter), 100.0 g of dexpanthenol is introduced. 850.0 g of lactose are added to the resulting mixture, the mass is stirred, dried, calibrated, 10.0 g of calcium stearate is dusted and tabletted.

Хлоргексидин Chlorhexidine 4,0 4.0 Декспантенол Dexpanthenol 10,0 10.0 Лактоза Lactose 85,0 85.0 Кальция стеарат Calcium stearate 1,0 1,0

Пример 23.Example 23

В раствор, содержащий 10,0 г хлоргексидина (в пересчете на сухое вещество), вводят 100,0 г декспантенола, 10,0 г поливинилпирролидона, 5,0 г твина-80, 10,0 г кислоты молочной. В полученную смесь добавляют 600,0 г лактозы и 264,0 г крахмала, массу перемешивают, высушивают, калибруют, опудривают 1,0 г стеарата магния и таблетируют.To a solution containing 10.0 g of chlorhexidine (in terms of dry matter), 100.0 g of dexpanthenol, 10.0 g of polyvinylpyrrolidone, 5.0 g of tween-80, 10.0 g of lactic acid are added. 600.0 g of lactose and 264.0 g of starch are added to the resulting mixture, the mass is stirred, dried, calibrated, 1.0 g of magnesium stearate is dusted and tabletted.

Хлоргексидин Chlorhexidine 1,0 1,0 Декспантенол Dexpanthenol 10,0 10.0 Лактоза Lactose 60,0 60.0 Стеарат магния Magnesium stearate 0,1 0.1 Поливинилпирролидон Polyvinylpyrrolidone 1,0 1,0 Твин-80 Twin 80 0,5 0.5 Кислота молочная Lactic acid 1,0 1,0 Крахмал Starch до 100 up to 100

Пример 24.Example 24

В раствор, содержащий 40,0 г хлоргексидина (в пересчете на сухое вещество), вводят 100,0 г декспантенола, 40,0 г оксипропилметилцеллюлозы и 30,0 г твина-80. В полученную смесь добавляют 600,0 г лактозы и 184,0 г МКЦ, массу перемешивают, высушивают, калибруют, опудривают 5,0 г кислоты адипиновой и 1,0 г смеси стеарата кальция и стеарата магния (в соотношении 1:1), таблетируют.100.0 g of dexpanthenol, 40.0 g of hydroxypropyl methylcellulose and 30.0 g of tween-80 are added to a solution containing 40.0 g of chlorhexidine (in terms of dry matter). 600.0 g of lactose and 184.0 g of MCC are added to the resulting mixture, the mass is mixed, dried, calibrated, dusted with 5.0 g of adipic acid and 1.0 g of a mixture of calcium stearate and magnesium stearate (1: 1 ratio), tabletted .

Хлоргексидин Chlorhexidine 4,0 4.0 Декспантенол Dexpanthenol 10,0 10.0 Лактоза Lactose 60,0 60.0 Стеарат кальция/стеарат магния Calcium Stearate / Magnesium Stearate 0,1 0.1 Оксипропилметилцеллюлоза Hydroxypropyl methylcellulose 4,0 4.0 Твин-80 Twin 80 3,0 3.0 Кислота адипиновая Adipic acid 0,5 0.5 МКЦ MCC до 100 up to 100

Примеры 25-28.Examples 25-28.

Проведены аналогично примерам 17-20, но в качестве регенерирующего вещества используют метилурацил.Carried out analogously to examples 17-20, but as a regenerating substance, methyluracil is used.

Примеры 29-32.Examples 29-32.

Проведены аналогично примерам 17-20, но в качестве регенерирующего вещества используют масCarried out analogously to examples 17-20, but as a regenerating substance used wt

- 5 014292 ло облепиховое.- 5 014292 lo sea buckthorn.

Примеры 33-36.Examples 33-36.

Проведены аналогично примерам 21-24, но в качестве регенерирующего вещества используют метилурацил.Carried out analogously to examples 21-24, but as a regenerating substance, methyluracil is used.

Примеры 37-40.Examples 37-40.

Проведены аналогично примерам 21-24, но в качестве регенерирующего вещества используют масло облепиховое.Conducted similarly to examples 21-24, but as a regenerating substance, sea buckthorn oil is used.

Количественное определение хлоргексидина или его соли в таблетках осуществляют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на жидкостном хроматографе фирмы Аа!ег8 (или аналогичном) со спектрофотометрическим детектором.Chlorhexidine or its salt in tablets is quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) on an Aa! Eg8 liquid chromatograph (or similar) with a spectrophotometric detector.

Испытание на микробиологическую чистоту таблеток проводят в соответствии с требованиями ГФ XI, вып. 2, с. 193 и Изменения № 3 (категория 2). Полученные результаты соответствуют нормативным требованиям.The test for microbiological purity of the tablets is carried out in accordance with the requirements of Global Fund XI, issue. 2, p. 193 and Amendment No. 3 (category 2). The results obtained comply with regulatory requirements.

Полученные таблетки по внешнему виду соответствуют требованиям ГФ XI, вып. 2, с. 154.The resulting tablets in appearance meet the requirements of the Global Fund XI, no. 2, p. 154.

Ниже приведены результаты доклинических исследований предлагаемого средства, состоящие из двух частей.The following are the results of preclinical studies of the proposed tool, consisting of two parts.

С целью определения общетоксического действия и доказательства эффективности предлагаемого средства и его спермицидной активности были проведены его доклинические испытания на базе центральной научно-исследовательской лаборатории Нижегородской государственной медицинской академии.In order to determine the general toxic effect and evidence of the effectiveness of the proposed drug and its spermicidal activity, its preclinical trials were conducted at the central research laboratory of the Nizhny Novgorod State Medical Academy.

Результаты экспериментов были обработаны на ΙΒΜ РС/АТ с помощью пакетов прикладных программ 81а11811еа 5.5. Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (М) и среднеквадратичное отклонение (81)), парные внутригрупповые и межгрупповые сравнения средних определяли по критериям Уилкоксона. Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05.The experimental results were processed on ΙΒΜ PC / AT using the software packages 81-11811ea 5.5. For all quantitative data, the arithmetic group mean (M) and standard deviation (81) were calculated, paired intragroup and intergroup mean comparisons were determined according to Wilcoxon criteria. Differences were considered significant at a significance level of p <0.05.

1. В данной части отчета представлены результаты по доклиническому исследованию предлагаемого средства на основе хлоргексидина, таблетки вагинальные, разработанные ОАО Нижфарм (Россия), по параметрам бактерицидного действия, гистологии слизистой влагалища, рН вагинальной слизи при моделировании бактериального вагинита у крыс. Содержание компонентов представлено в табл. 2.1. This part of the report presents the results of a preclinical study of the proposed chlorhexidine-based agent, vaginal tablets developed by Nizhpharm OJSC (Russia), according to the parameters of bactericidal action, histology of the vaginal mucosa, and pH of vaginal mucus when modeling bacterial vaginitis in rats. The content of the components is presented in table. 2.

Таблица 2 Состав предлагаемого средства (содержание на одну таблетку)Table 2 The composition of the proposed funds (content per tablet)

Компоненты Components Варианты составов (мае. %) Formulation Options (May.%) 1 one 2 2 3 3 Хлоргексидин Chlorhexidine 2,9 2.9 2,9 2.9 0 0 Твин 80 Twin 80 0,50 0.50 0,50 0.50 0,50 0.50 Декспантенол Dexpanthenol 0 0 10 10 0 0 пвп pvp 2 2 2 2 2 2 мкц mcc 5 5 5 5 5 5 Стеарат кальция Calcium stearate 1 one 1 one 1 one Молочная кислота Lactic acid 0 0 1 one 0 0 Лактоза Lactose * до 100 * up to 100 до 100 up to 100 до 100 up to 100

Токсикологические исследования проводили в соответствии с методическими рекомендациями Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, 2000.Toxicological studies were carried out in accordance with the methodological recommendations of the Guide to the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances, 2000.

В экспериментах было использовано 70 половозрелых крыс самок Ш181аг, массой 220±3,2 г.In the experiments, 70 sexually mature rats of female Sh181ag, weighing 220 ± 3.2 g, were used

Животных распределяли по группам случайным образом, используя в качестве критерия массу тела так, чтобы индивидуальная масса животных не отличалась более чем на 20% от средней массы животных одного пола.Animals were randomly assigned to groups using body weight as a criterion so that the individual animal weight did not differ by more than 20% from the average weight of animals of the same sex.

Каждому животному был присвоен индивидуальный номер, в соответствии с которым животному ставилась метка либо проколом ушной раковины, либо окраской красителями (эозин и метиленовый синий) поверхности хвоста по разработанным схемам. На этикетке клетки определенного цвета указывали группу, номер животного, метку, код исследования, руководителя.Each animal was assigned an individual number, according to which the animal was labeled with either a puncture of the auricle or coloring with dyes (eosin and methylene blue) of the tail surface according to the developed schemes. On the label of a cell of a certain color, the group, animal number, label, study code, leader were indicated.

Основные правила содержания и ухода соответствовали нормативам, данным в руководстве ОшОе Гог саге апО и§е оГ 1аЬога!огу ашшаИ. 1ЬАК риЬИсаЦоп, 1996, №1юпа1 АсаОету Рге§8. Все процедуры по рутинному уходу за животными выполняли в соответствии с СОП лаборатории.The basic rules for the maintenance and care were in accordance with the standards given in the manual of OshO Gogag sagu apO and GG OG 1aBoga! 1LAK RIISATSOP, 1996, No. 1, 1, AsaOetu Rge§8. All procedures for routine animal care were performed in accordance with the SOP laboratory.

Животных содержали в поликарбонатных клетках по 5-7 животных на клетку на подстиле. Клетки оборудованы стальными решетчатыми крышками с кормовым углублением.Animals were kept in polycarbonate cages, 5-7 animals per cage on the bedding. The cages are equipped with steel grid covers with a feed recess.

В качестве подстилки использовались опилки деревьев нехвойных пород.Sawdust of non-coniferous trees was used as litter.

Комбикорм полнорационный для лабораторных животных давался а0 ИЬЛиш в кормовое углубление крышки клетки.Complete feed for laboratory animals was given a0 ILish in the feed recess of the cell lid.

Профильтрованная водопроводная вода давалась в стандартных автоклавированных питьевых бутылочках.Filtered tap water was supplied in standard autoclaved drinking bottles.

Не было контаминации подстилки, корма и воды, способной повлиять на результаты исследования.There was no contamination of bedding, feed and water that could affect the results of the study.

- 6 014292- 6 014292

В лаборатории проводится периодический анализ воды, подстилки и корма на микробиологическую контаминацию.The laboratory conducts periodic analysis of water, litter and feed for microbiological contamination.

Для оценки эффективности изучено действие предлагаемого средства при интравагинальном применении.To evaluate the effectiveness, the effect of the proposed agent on intravaginal use was studied.

Расчет доз исходил из учета массы и поверхности тела животных, рекомендации заказчика по применению препарата.The calculation of doses was based on taking into account the mass and surface of the animal’s body, customer recommendations on the use of the drug.

Расчетная суточная доза хлоргексидина для человека составила 0,46 мг/кг с использованием коэффициента для площади поверхности тела для крыс 2,6 мг/кг. На крысу массой 200 г - 0,54 мг/сутки, учитывая 2-разовое применение (табл. 3).The calculated daily dose of chlorhexidine for humans was 0.46 mg / kg using a coefficient of 2.6 mg / kg for rat body surface area. On a rat weighing 200 g - 0.54 mg / day, taking into account 2 single use (table. 3).

Предлагаемое средство применялось 2 раза в сутки в течение 10 дней. Использовались таблетки массой 0,1 г, содержание хлоргексидина в которой составило 2,6 мг. Для разового введения таблетку делили на части и инвагинально вводили часть таблетки.The proposed tool was used 2 times a day for 10 days. Used tablets weighing 0.1 g, the content of chlorhexidine in which was 2.6 mg. For a single administration, the tablet was divided into parts and a portion of the tablet was intravaginally administered.

Для человека: тах ТД=0,46 мг/кг (две таблетки)/сутки. Для крыс при пересчете доз с учетом поверхности тела: тах ТД=0,46 мг/кгх 39/7=2,6 мг/кг.For humans: TD max = 0.46 mg / kg (two tablets) / day. For rats, when recalculating doses, taking into account the surface of the body: max TD = 0.46 mg / kgx 39/7 = 2.6 mg / kg.

Таблица 3Table 3

Коэффициенты пересчета доз (в мг/кг на мг/м²) для крысы и человека в зависимости от веса тела (Рге1ге1сй ЕЛ., 1966; Уланова . И.П. с соавт., 1968)Dose conversion factors (in mg / kg per mg / m ² ) for rats and humans, depending on body weight (Rge1ge1sy EL., 1966; Ulanova. I.P. et al., 1968)

Вид животного Kind of animal Вес тела (кг) Body weight (kg) Коэффициент пересчета Conversion factor Крыса Rat 0,200 0,200 6,5 6.5 Человек Man 70 70 39 39

Животным группы плацебо интравагинально вводились аналогичные по размеру частички таблетки, состоящие из основы таблеток.Placebo animals were intravaginally administered similarly sized tablet particles consisting of a pill base.

Специфическое фармакологическое действие препарата изучено при моделировании бактериального вагинита.The specific pharmacological effect of the drug was studied in modeling bacterial vaginitis.

Для испытания предлагаемого средства использовали типовые штаммы 81арйу1ососси8 аигеиз штамм 7М (ННИЭМ, Н. Новгород) и клинический изолят ЕзйепсЫа сой штамм 782-2, для выращивания стафилококков и кишечной палочки - мясопептонный агар (МПА).To test the proposed drug, we used typical strains 81aryu1ossoss8 aigeis strain 7M (NNIEM, N. Novgorod) and clinical isolate Ezepepsysoi strain 782-2, for the cultivation of staphylococci and Escherichia coli - meat-peptone agar (MPA).

Суспензию микроорганизмов, содержащую 10⁷ микробных тел в 1 мл (начальная концентрация) готовили путем смыва забуференным физиологическим раствором (рН 7,2-7,4) 18-часовой агаровой культуры. Стандартизация микробной взвеси проводилась по стандарту мутности Государственного контрольного института медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича для бактерий и спектрофотометрически - для кандид.A suspension of microorganisms containing 10 ⁷ microbial bodies in 1 ml (initial concentration) was prepared by washing with buffered saline (pH 7.2-7.4) 18-hour agar culture. The standardization of microbial suspension was carried out according to the turbidity standard of the State Control Institute of Medical Biological Preparations named after L.A. Tarasevich for bacteria and spectrophotometrically for candid.

Крыс инфицировали интравагинально введением по 0,025 мл 8.аигеи§ и 0,025 мл Е.сой. Через сутки после инфицирования начинали введение предлагаемого средства в течение 10 суток.Rats were infected intravaginally with the administration of 0.025 ml of 8. igee§ and 0.025 ml of E. soi. A day after infection, the introduction of the proposed funds within 10 days.

Через 10 дней после применения предлагаемого средства делали высевы из вагинальной полости для обнаружения 81арйу1ососси§ аигеиз, ЕзйепсЫа сой, для чего стерильным тампоном отбирали материал из вагинальной полости, помещали в 1 мл стерильного физиологического раствора и тщательно ресуспендировали, разводили 1 к 10 в стерильном физиологическом растворе. Полученную суспензию (0,1 мл) помещали на селективные плотные среды для обнаружения соответствующих микроорганизмов. Для культивирования стафилококков использовали желточно-солевой агар (ЖСА), для культивирования кишечной палочки - среду Эндо. Материал на чашках Петри растирали шпателем, инкубировали в термостате (37°С, 24-48 ч).10 days after the application of the proposed agent, inoculations were made from the vaginal cavity to detect 81aryuososigas erythemae, Eziepsysoi, for which material was removed from the vaginal cavity with a sterile swab, placed in 1 ml of sterile physiological saline and carefully resuspended, diluted 1 to 10 in sterile physiological saline . The resulting suspension (0.1 ml) was placed on selective solid media to detect the corresponding microorganisms. For the cultivation of staphylococci, yolk-salt agar (LCA) was used; for the cultivation of Escherichia coli, Endo medium was used. The material on Petri dishes was triturated with a spatula, incubated in a thermostat (37 ° C, 24-48 h).

Подсчитывали количество характерных для данных микроорганизмов колониеобразующих единиц (КОЕ) на чашках Петри с селективными средами. Все посевы проводили в 2-х повторах.The number of colony forming units (CFU) characteristic of these microorganisms was calculated on Petri dishes with selective media. All crops were carried out in 2 repetitions.

Через 15 мин после применения предлагаемого средства, а также через 6 и 12 ч проводили исследование рН интравагинальной слизи. Подобный режим измерения вызван 2-кратным введением предлагаемого средства в сутки.15 minutes after the application of the proposed drug, as well as after 6 and 12 hours, a pH study of intravaginal mucus was performed. A similar measurement mode is caused by a 2-fold introduction of the proposed funds per day.

Перед экспериментом крыс самок отбирали с одинаковым по времени астральным циклом по тесту цитология влагалищного мазка таким образом, чтобы крысы до инфицирования и в период забора гистологических анализов находились на стадии проэструс. В течение эксперимента ежедневно брали влагалищный мазок для цитологических исследований. На 10-е сутки эксперимента забирали образцы слизистой влагалища для гистологического исследования. Экспериментальный материал фиксировали в 10% нейтральном формалине, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин. Парафиновые срезы толщиной 5-7 мкм получали на микротоме Ее1са 8М 2000К, окрашивали гематоксилином и эозином и рассматривали с помощью микроскопа йеюа ΌΜΕ8. Видеоизображения получали на видеосистеме с помощью ССО-камеры.Before the experiment, female rats were selected with the same astral cycle according to the cytology test of the vaginal smear so that the rats were at the stage of proestrus before infection and during the collection of histological analyzes. During the experiment, a vaginal smear was taken daily for cytological studies. On the 10th day of the experiment, samples of the vaginal mucosa were taken for histological examination. The experimental material was fixed in 10% neutral formalin, dehydrated in ascending alcohols, and embedded in paraffin. Paraffin sections with a thickness of 5–7 μm were obtained on an E1ca 8M 2000K microtome, stained with hematoxylin and eosin and examined using a Yeu-8 microscope. Video images were obtained on a video system using a CCO camera.

Бактерицидная активность предлагаемого средства.Bactericidal activity of the proposed tool.

В течение всего периода наблюдений септических явлений не обнаружено, масса животных достоверно не снижалась. У ряда крыс разных групп наблюдались влагалищные выделения. За весь период наблюдения животные оставались подвижными, внешне выглядели здоровыми. Данные клинического осмотра свидетельствуют об отсутствии генерализованной системной реакции организма при интравагинальном инфицировании.During the entire period of observation, septic phenomena were not detected, the mass of animals did not significantly decrease. In a number of rats of different groups, vaginal discharge was observed. Over the entire observation period, the animals remained mobile, looked healthy outwardly. Clinical examination data indicate the absence of a generalized systemic reaction of the body with intravaginal infection.

- 7 014292- 7 014292

После лечения наблюдали снижение количества КОЕ в некоторых группах (табл. 4, 5).After treatment, a decrease in the number of CFU was observed in some groups (Tables 4, 5).

Таблица 4Table 4

Сравнительное количество З.аигеиз штамм 7М в вагинальной полости крыс после интравагинального применения различных вариантов состава предлагаемого средства (М±8Р)The comparative amount of Z. aigeis strain 7M in the vaginal cavity of rats after intravaginal use of various options for the composition of the proposed funds (M ± 8P)

Группы животных (серии препаратов)Groups of animals (series of drugs)

Количество 8. аигеиз штамм 7М (КОЕ, М ±8Р)Number 8. aigeis strain 7M (CFU, M ± 8P)

Предлагаемое средство, вариант № 1_____________________The proposed tool, option No. 1_____________________

Предлагаемое средство, вариант №2_______________The proposed tool, option No. 2 _______________

Предлагаемое средство, вариант № 3 (плацебо)______________*The proposed tool, option No. 3 (placebo) ______________ *

Контроль (вагинит без лечения)Control (vaginitis without treatment)

Нативный материалNative material

69,7 ±21,9*69.7 ± 21.9 *

Разведение 1:50Breeding 1:50

0,2 ±0,1*0.2 ± 0.1 *

302,5 ± 85,6302.5 ± 85.6

314,2 ±94,3314.2 ± 94.3

75,3 ± 14,2 * достоверное снижение относительно контроля (плацебо) (р<0,05).75.3 ± 14.2 * significant decrease relative to control (placebo) (p <0.05).

Таблица 5Table 5

Сравнительное количество Е.соН штамм 782-2 (КОЕ) в вагинальной полости крыс после интравагиналь· ного применения различных вариантов состава предлагаемого средства (Μ±8Ό)A comparative amount of E. coN strain 782-2 (CFU) in the vaginal cavity of rats after intravaginal use of various options for the composition of the proposed funds (Μ ± 8Ό)

Группы животных (серии препаратов) Groups of animals (series of drugs) Количество Е. соП штамм 782-2 number E. CoP strain 782-2 Нативный материал Native material Разведение 1:50 Breeding 1:50 Предлагаемое средство, вариант № 1 - The proposed tool, option No. 1 - 8,3 ±4,5* 8.3 ± 4.5 * 1,2 ±0,9* 1.2 ± 0.9 * Предлагаемое средство, вариант №2 The proposed tool, option No. 2 3,5 ± 1,2* 3.5 ± 1.2 * 0,2 ±0,1* 0.2 ± 0.1 * Предлагаемое средство, вариант № 3(плацебо) The proposed tool, option No. 3 (placebo) 333,3 ±94,1 333.3 ± 94.1 70,2 ± 34,9 70.2 ± 34.9 Контроль (вагинит без лечения) Control (vaginitis without treatment) 345,6 ±83,5 345.6 ± 83.5 95,2 ±28,5 95.2 ± 28.5

* достоверное снижение относительно контроля (плацебо) (р<0,05).* significant decrease relative to control (placebo) (p <0.05).

Наблюдали снижение количества КОЕ как З.аигеиз, так и Е.соН в группах вариант состава № 1 и 2 по сравнению с группой плацебо. Наиболее выраженное снижение микробной обсемененности было отмечено в группе с применением серии № 2 (табл. 4, 5).A decrease in the number of CFU was observed for both Z. aigeis and E. coN in the group composition variant No. 1 and 2 compared with the placebo group. The most pronounced decrease in microbial contamination was observed in the group using series No. 2 (Tables 4, 5).

Таким образом, наблюдалось достоверное снижение количества 81арйу1ососси8 аигеиз и ЕзЬепсЫа сой наблюдали только в группах с применением предлагаемого средства варианта № 1 и варианта № 2. При этом наиболее выраженный бактерицидный эффект характерен для группы вариант № 2.Thus, there was a significant decrease in the number of 81 arylosossiidae and Ebepsia soya was observed only in groups using the proposed remedy of option No. 1 and option No. 2. Moreover, the most pronounced bactericidal effect was characteristic of group No. 2.

Влияние предлагаемого средства на реакцию среды вагинальной слизи.The effect of the proposed tool on the reaction of the vaginal mucus.

Данные по измерению рН вагинальной слизи представлены в табл. 6.Data on measuring the pH of vaginal mucus are presented in table. 6.

Таблица 6Table 6

Изменение рН среды после интравагинального применения предлагаемого средства (Μ±8Ό)Change in pH after intravaginal use of the proposed tool (Μ ± 8Ό)

Группы животных (серии препаратов) Groups of animals (series of drugs) Р Н R N До Before Через 15 мин After 15 min Через 6 часов In 6 hours Через 12 часов After 12 hours Предлагаемое средство, вариант № 1 The proposed tool, option No. 1 7,00 ± 0,2 7.00 ± 0.2 5,5 ± 0,22* 5.5 ± 0.22 * 6,00 ±0,30 6.00 ± 0.30 7,0 ±0,28 7.0 ± 0.28 Предлагаемое средство, вариант №2 The proposed tool, option No. 2 7,20 ± 0,22 7.20 ± 0.22 8,5 ± 0,22* 8.5 ± 0.22 * 8,2 ± 0,20 8.2 ± 0.20 7,5 ± 0,26 7.5 ± 0.26 Предлагаемое средство, вариант № 3(плацебо) The proposed tool, option No. 3 (placebo) 7,20 ± 0,20 7.20 ± 0.20 6,0 ±0,30* 6.0 ± 0.30 * 7,0 ± 0,24 7.0 ± 0.24 7,5 ± 0,28 7.5 ± 0.28 Контроль (вагинит без лечения) Control (vaginitis without treatment) 7,00 ± 0,20 7.00 ± 0.20 7,0 ±0,28 7.0 ± 0.28 7,2 ± 0,20 7.2 ± 0.20 7,0 ± 0,28 7.0 ± 0.28

Следует отметить, что в норме рН влагалищной слизи у крыс колеблется в пределах 7,0-7,2. В течение всего периода лечения и в контроле не было выявлено значимых отличий.It should be noted that the normal pH of vaginal mucus in rats ranges from 7.0-7.2. During the entire treatment period and in the control, no significant differences were revealed.

Влияние препаратов на структуру слизистой влагалища.The effect of drugs on the structure of the vaginal mucosa.

В контрольной серии экспериментов и плацебо на 10-е сутки отмечался выраженный воспалительный инфильтрат, распределяющийся диффузно в собственной пластинке слизистой оболочки, что проиллюстрировано на фиг. 1. В толще эпителиального пласта наблюдались скопления лейкоцитов.In the control series of experiments and placebo, a pronounced inflammatory infiltrate was observed on the 10th day, which was diffusely distributed in its own plate of the mucous membrane, as illustrated in FIG. 1. In the thickness of the epithelial layer, accumulations of leukocytes were observed.

На фиг. 1 изображена структура влагалища в стадии проэструс на 11 сутки моделирования бактериального вагинита в контрольной серии без применения предлагаемого средства (окрашивание гематоксилин и эозин; увеличение х200).In FIG. 1 shows the structure of the vagina in the stage of proestrus on day 11 of modeling of bacterial vaginitis in the control series without the use of the proposed tool (staining hematoxylin and eosin; magnification x200).

- 8 014292- 8 014292

При лечении животных предлагаемым средством, вариант № 1 и вариант № 2, не отмечалось какихлибо патологических изменений в структуре влагалища: слизистая оболочка покрыта многослойным плоским эпителием кожного типа, в котором различаются три слоя - базальный, промежуточный и поверхностный. Основу собственной пластинки слизистой оболочки составляет рыхлая неоформленная соединительная ткань. Подслизистая основа во влагалище не выражена, и собственная пластинка слизистой непосредственно переходит в мышечную оболочку, которая в основном состоит из продольно идущих пучков гладких мышечных клеток, что проиллюстрировано на фиг. 2. Определяются кровеносные сосуды, имеющие открытый просвет.When treating animals with the proposed agent, option No. 1 and option No. 2, there were no pathological changes in the structure of the vagina: the mucous membrane is covered with a multilayer flat epithelium of the skin type, in which three layers are distinguished - basal, intermediate and superficial. The basis of its own plate of the mucous membrane is a loose unformed connective tissue. The submucosa in the vagina is not expressed, and the mucosal plate itself directly passes into the muscularis, which mainly consists of longitudinally extending bundles of smooth muscle cells, as illustrated in FIG. 2. Blood vessels having an open lumen are determined.

На фиг. 2 изображена структура влагалища в стадии проэструс при лечении животных предлагаемым средством: а - вариант № 1 - отсутствие структурных нарушений в слизистой оболочке; б - вариант № 2 - отсутствие воспалительных проявлений в структуре слизистой оболочки (окрашивание гематоксилин и эозин; увеличение х200).In FIG. 2 shows the structure of the vagina in the stage of proestrus in the treatment of animals with the proposed tool: a - option No. 1 - the absence of structural disorders in the mucous membrane; b - option No. 2 - the absence of inflammatory manifestations in the structure of the mucous membrane (hematoxylin and eosin staining; increase x200).

Таким образом, при гистологическом исследовании влагалища выявлена нормализация структуры при лечении животных предлагаемым средством, варианты № 1 и 2.Thus, a histological examination of the vagina revealed normalization of the structure in the treatment of animals with the proposed tool, options No. 1 and 2.

Заключение.Conclusion

По степени выраженности бактерицидного действия варианты составов предлагаемого средства по сравнению с контролем располагались в следующем порядке: № 2-1-3.According to the degree of severity of the bactericidal action, the variants of the compositions of the proposed product compared to the control were located in the following order: No. 2-1-3.

На доклиническое изучение разработчиком предоставлены различные варианты предлагаемого средства на основе хлоргексидина в виде вагинальных таблеток, разработанных ОАО Нижфарм, Россия.For preclinical studies, the developer provided various options for the proposed chlorhexidine-based agent in the form of vaginal tablets developed by Nizhpharm OJSC, Russia.

Данное исследование было проведено с целью изучения специфического фармакологического действия препаратов при интравагинальном применении.This study was conducted to study the specific pharmacological action of drugs with intravaginal use.

Тестируемое вещество (как лекарственное средство) применяли в эквитерапевтической дозе. В качестве контрольного вещества применяли основу таблетки.The test substance (as a medicine) was used in an equitherapeutic dose. As a control substance, a tablet base was used.

Эффективность препаратов оценивали по параметрам бактерицидного действия, гистологии слизистой влагалища, рН вагинальной слизи при моделировании бактериального вагинита у крыс.The effectiveness of the preparations was evaluated by the parameters of bactericidal action, histology of the vaginal mucosa, and pH of vaginal mucus when modeling bacterial vaginitis in rats.

Показано, что достоверное снижение количества 8!арйу1ососси5 аитеик и ЕкйепсЫа со11 наблюдали в группах с предлагаемым средством, вариант № 1 и 2. При этом наиболее выраженный бактерицидный эффект характерен для варианта № 2.It was shown that a significant decrease in the amount of 8! Aryu1ossoss5 aiteik and Ekiepsyso11 was observed in groups with the proposed drug, option No. 1 and 2. Moreover, the most pronounced bactericidal effect is characteristic for option No. 2.

При гистологическом исследовании влагалища выявлена нормализация структуры при лечении животных предлагаемым средством, вариант № 1 и 2.A histological examination of the vagina revealed normalization of the structure in the treatment of animals with the proposed tool, option No. 1 and 2.

По степени выраженности бактерицидного действия предлагаемого средства по сравнению с контролем варианты располагались в следующем порядке: № 2-1-3.According to the degree of severity of the bactericidal action of the proposed funds compared with the control options were located in the following order: No. 2-1-3.

2. В данной части отчета представлены данные по доклиническому исследованию таблеток вагинальных, разработанных ОАО Нижфарм (Россия), по параметрам спермицидной активности предлагаемого средства. Содержание компонентов представлено в табл. 2.2. This part of the report presents data on the preclinical study of vaginal tablets developed by Nizhpharm OJSC (Russia), according to the parameters of the spermicidal activity of the proposed drug. The content of the components is presented in table. 2.

В исследовании использовался эякулят здоровых мужчин возраста 18-20 лет.The study used ejaculate healthy men aged 18-20 years.

Процедура введения вещества.The procedure for introducing the substance.

Для оценки эффективности изучено действие исследуемого средства ίη νίίτο в эякуляте.To evaluate the effectiveness, the effect of the studied agent ίη νίίτο in the ejaculate was studied.

Доза применения предлагаемого средства в тестовой системе составляла 1 таблетка на порцию эякулята донора (3,5 мл).The dose of the proposed drug in the test system was 1 tablet per serving of donor ejaculate (3.5 ml).

Изучение спермицидного действия ίη νίίτο. Методика получения и оценки эякулята.The study of the spermicidal effect of ίη νίίτο. The method of obtaining and evaluating ejaculate.

Эякулят для анализа получали после 4 дней воздержания, отказа от курения и алкоголя от молодых мужчин в возрасте 19-20 лет. Перед взятием эякулята каждым обследуемым заполнялась форма информированного согласия.Ejaculate for analysis was obtained after 4 days of abstinence, smoking cessation and alcohol from young men aged 19-20 years. Before taking the ejaculate, each subject filled out an informed consent form.

Эякулят собирали в чистую стеклянную градуированную емкость с широким горлышком в специальном помещении лаборатории непосредственно перед анализом. На контейнере указывают фамилию донора, дату и время получения эякулята. Эякулят представляет собой взвесь сперматозоидов в секрете яичек и их придатков, которая к моменту эякуляции смешивается с секретом предстательной железы, семенных пузырьков и луковично-уретальных желез. В целом эякулят представляет собой вязкую жидкость.The ejaculate was collected in a clean glass graduated container with a wide neck in a special laboratory room immediately before analysis. On the container indicate the name of the donor, date and time of receipt of the ejaculate. The ejaculate is a suspension of sperm in the secret of the testicles and their appendages, which at the time of ejaculation is mixed with the secretion of the prostate gland, seminal vesicles and onion-urethral glands. In general, ejaculate is a viscous liquid.

При работе с эякулятом в лаборатории соблюдались правила безопасности, общепринятые в лабораторной практике (ВОЗ, 1983).When working with ejaculate in the laboratory, the safety rules generally accepted in laboratory practice were observed (WHO, 1983).

Первоначальная макроскопическая оценка эякулята.Initial macroscopic evaluation of the ejaculate.

Оценка эякулята осуществлялась сразу после разжижения. В норме при комнатной температуре образец эякулята разжижается в течение 15-30 мин.Ejaculate was evaluated immediately after liquefaction. Normally, at room temperature, the ejaculate sample liquefies within 15-30 minutes.

Образец был перемещен в том же контейнере, в котором он был получен. Так как оценку подвижности сперматозоидов проводили при температуре 37°С, то во время разжижения и помешивания образец постепенно доводили до этой температуры.The sample was moved in the same container in which it was received. Since sperm motility was evaluated at a temperature of 37 ° C, the sample was gradually brought to this temperature during liquefaction and stirring.

Объем эякулята измеряли с помощью градуированной конической пробирки.The volume of ejaculate was measured using a graduated conical tube.

Приготовление препарата для рутинной спермограммы.Preparation of the drug for a routine spermogram.

Объем наносимого на предметное стекло эякулята и размеры покровного стекла были стандартныThe volume of ejaculate applied to the slide and the size of the coverslip were standard

- 9 014292 ми. Фиксированный объем эякулята наносили на чистое предметное стекло и накрывали покровным стеклом (22x22мм), следя за тем, чтобы между стеклами не было пузырьков воздуха.- 9 014292 mi. A fixed volume of ejaculate was applied to a clean slide and covered with a coverslip (22x22mm), making sure that there were no air bubbles between the glasses.

Свежеприготовленный препарат оставляли приблизительно на одну минуту для стабилизации. Оценку подвижности сперматозоидов проводили при температуре 37°С на предметном столике с подогревом, так как температура сильно влияет на подвижность и скорость движения сперматозоидов.Freshly prepared preparation was left for approximately one minute to stabilize. Sperm motility was evaluated at a temperature of 37 ° C on a heated stage, since temperature strongly affects sperm motility and speed.

Препарат исследовали под микроскопом сначала при 100-кратном совокупном увеличении, при этом получали общее представление о формировании нитей слизи, агрегации и равномерности распределения сперматозоидов на стекле. Затем препарат исследовали при 400-кратном совокупном увеличении.The drug was examined under a microscope at first at a 100-fold cumulative increase, while obtaining a general idea of the formation of mucus filaments, aggregation and uniform distribution of sperm on the glass. Then the drug was investigated at a 400-fold cumulative increase.

Оценку концентрации сперматозоидов проводили с помощью гемоцитометра при разведении эякулята 1:20. Концентрацию сперматозоидов выражали в 1х10⁶/мл.Assessment of sperm concentration was carried out using a hemocytometer when diluting the ejaculate 1:20. Sperm concentration was expressed in 1x10 ⁶ / ml.

Оценку подвижности сперматозоидов осуществляли после последовательного просмотра 200 сперматозоидов не менее чем в 5 полях зрения микроскопа. Подвижность каждого сперматозоида классифицируют по категориям (а), (Ь) и (с), используя следующие критерии:Sperm motility was evaluated after sequential viewing of 200 sperm in at least 5 fields of view of the microscope. The motility of each sperm is classified into categories (a), (b) and (c) using the following criteria:

a) быстрое поступательное движение (т.е. > 25 мкм/с при 37°С, 25 мкм приблизительно соответствует длине 5 головок или половине длины хвоста сперматозоида);a) rapid translational movement (i.e.> 25 μm / s at 37 ° C, 25 μm approximately corresponds to the length of 5 heads or half the length of the tail of the sperm);

b) колебательное (медленное и вялопоступательное движение) и непоступательное движение;b) oscillatory (slow and sluggish movement) and inaccessible movement;

c) неподвижные сперматозоиды.c) immobile sperm.

Вторичная макроскопическая оценка эякулята. Окрашивание препарата для оценки жизнеспособности сперматозоидов.Secondary macroscopic evaluation of the ejaculate. Staining the drug to assess sperm viability.

Под жизнеспособностью подразумевали долю (в процентах) живых сперматозоидов, которые определялись либо по исключению красителя, либо по гипоосмотическому набуханию. Пропорцию живых и мертвых сперматозоидов определяли с помощью методов окрашивания препарата, основанных на принципе поглощения мертвыми клетками с поврежденными плазматическими мембранами определенных красителей. В световом микроскопе производили подсчет 200 сперматозоидов, дифференцируя живые (неокрашенные) и мертвые (окрашенные) сперматозоиды.Viability meant the percentage (in percent) of live sperm, which was determined either by exclusion of the dye, or by hypoosmotic swelling. The proportion of living and dead spermatozoa was determined using staining methods based on the principle of uptake of dead cells with damaged plasma membranes by dead cells. Using a light microscope, 200 spermatozoa were counted, differentiating live (unpainted) and dead (stained) spermatozoa.

Оценка морфологии сперматозоидов. Приготовление мазка.Assessment of sperm morphology. Cooking smear.

Приготавливали не менее двух мазков из образца свежего эякулята для двукратной оценки и на случай проблем при окрашивании. На поверхность чистого, обезжиренного, сухого стекла наносили небольшую каплю эякулята. При концентрации сперматозоидов более 20х10⁶/мл достаточно 5 мкм эякулята. Для приготовления мазков для неразведенного эякулята использовали метод размазывания стеклом.At least two smears were prepared from a sample of fresh ejaculate for a double assessment and in case of problems with staining. A small drop of ejaculate was applied to the surface of a clean, fat-free, dry glass. With a sperm concentration of more than 20x10 ⁶ / ml, 5 microns of ejaculate is enough. Glass smears were used to prepare smears for undiluted ejaculate.

Метод окрашивания.Staining method.

Препараты окрашивали по Папаниколау. Головка сперматозоида в акросомной области окрашивалась в бледно-синий, а в постакросомной - в темно-синий цвет. Средняя часть сперматозоида окрашивалась в красный цвет. Хвост также окрашивался в синий или красноватый оттенки.The preparations were stained according to Papanicolaou. The head of the sperm in the acrosomal region was stained pale blue, and in the postacrosomal region, it was dark blue. The middle part of the sperm stained red. The tail was also painted blue or reddish.

Морфологическая классификация сперматозоидов.Morphological classification of sperm.

Размеры головок сперматозоидов в окрашенных препаратах слегка меньше, чем размеры головок живых сперматозоидов в эякуляте, однако их форма существенно не меняется. Для определения понятия морфологической нормы сперматозоида применяли строгие критерии.The sizes of sperm heads in stained preparations are slightly smaller than the sizes of live sperm heads in ejaculate, but their shape does not change significantly. Strict criteria were used to define the concept of sperm morphological norm.

Сперматозоид рассматривали, как нормальный, если его головка, шейка, средняя часть и хвост являлись нормальными, т. е. морфологическое описание соответствовало следующим критериям.A sperm was considered normal if its head, neck, middle part and tail were normal, i.e., the morphological description met the following criteria.

1) Головка сперматозоида овальной формы, длина головки сперматозоида 4,0-5,5 мкм, ширина - 2,53,5 мкм, отношение длины к ширине от 1,50 до 1,75. Длину и ширину сперматозоидов измеряли при помощи окуляр-микрометра.1) The head of the sperm is oval, the length of the sperm head is 4.0-5.5 microns, width is 2.53.5 microns, the ratio of length to width is from 1.50 to 1.75. Sperm length and width were measured using an eyepiece micrometer.

2. Хорошо очерченная акросомная область, составляющая 40-70% площади головки.2. A well-defined acrosomal region, comprising 40-70% of the head area.

3. Средняя часть (шейка) - тонкая, менее 1 мкм в ширину, составляет 1,5 длины головки и прикрепляется к головке вдоль ее оси.3. The middle part (neck) is thin, less than 1 μm wide, is 1.5 times the length of the head and is attached to the head along its axis.

4. Хвост сперматозоида прямой, одинаковой толщины на всем протяжении, меньше по ширине средней части, не закрученный, длиной около 45 мкм.4. The tail of the sperm is straight, of equal thickness throughout, smaller in width of the middle part, not twisted, about 45 microns long.

Сперматозоид рассматривали, как патологический, если его головка, шейка, средняя часть и хвост имели нарушения.The sperm was considered as pathological if its head, neck, middle part and tail had abnormalities.

1. Дефекты головки, а именно большие, маленькие, конические, грушевидные, круглые и аморфные головки, головки с вакуолями (>20 % площади головки заполнена неокрашенными вакуолями), головки с маленькой акросомной областью (<40 % площади головки) и с двойными головками, или любая их комбинация.1. Head defects, namely large, small, conical, pear-shaped, round and amorphous heads, heads with vacuoles (> 20% of the head area is filled with unpainted vacuoles), heads with a small acrosome region (<40% of the head area) and with double heads , or any combination thereof.

2. Дефекты шейки и средней части, а именно склоненная шейка (шейка и хвост образуют угол более 90° к длинной оси головки), ассиметричное прикрепление средней части к головке, утолщенная или неравномерная средняя часть, патологически тонкая средняя часть или любая их комбинация. Если головки подвергались абсорбции, в эякуляте обнаруживались только отдельные хвосты или так называемые булавочные головки. Булавочные головки не учитывали при подсчете как дефект головки, а подсчитывались как дефект шейки и средней части.2. Defects of the neck and middle part, namely the inclined neck (the neck and tail form an angle of more than 90 ° to the long axis of the head), asymmetric attachment of the middle part to the head, a thickened or uneven middle part, a pathologically thin middle part, or any combination thereof. If the heads were absorbed, only individual tails or the so-called pin heads were found in the ejaculate. The pin heads were not taken into account as a defect in the head, but as a defect in the neck and middle part.

3. Дефекты хвоста: короткие, множественные, в виде шпильки, сломанные, наклонные (угол больше 90°), хвосты неравномерной толщины, закрученные или любая их комбинация.3. Tail defects: short, multiple, in the form of hairpins, broken, inclined (angle greater than 90 °), tails of uneven thickness, twisted or any combination thereof.

- 10 014292- 10 014292

Порядок подсчета сперматозоидов при оценке их морфологии.The procedure for counting spermatozoa in assessing their morphology.

При исследовании окрашенных препаратов под микроскопом с иммерсией использовали объектив с увеличением х100 с ярко освещенным полем зрения и окуляр с увеличением не менее х10.In the study of colored preparations under an immersion microscope, a lens with a magnification of x100 with a brightly illuminated field of view and an eyepiece with an increase of at least x10 were used.

Морфологическую оценку проводили в нескольких последовательно выбранных участках мазка. По мере того как препарат систематически просматривали от одного поля зрения к другому, производили оценку и подсчет всех нормальных сперматозоидов, а также отмечали все их дефекты. Не учитывали сперматозоиды, наслоившиеся друг на друга, и с головками, лежащими на ребре. Их можно было оценить при изменении фокуса микроскопа. Нормативы представлены в табл. 7.Morphological evaluation was carried out in several successively selected sections of the smear. As the drug was systematically examined from one field of view to another, all normal spermatozoa were evaluated and counted, and all their defects were noted. Spermatozoa that lay on top of each other and with heads lying on the rib were not taken into account. They could be evaluated by changing the focus of the microscope. The standards are presented in table. 7.

Таблица 7Table 7

Нормативные значения показателей эякулятаStandard values for ejaculate

Показатели эякулята Ejaculate indicators Нормативные значения Normative values Объем Volume >2,0 мл > 2.0 ml Концентрация сперматозоидов Sperm concentration >20-10⁶/мл ' “ ~~> 20-10 ⁶ / ml '“~~ Подвижность · Mobility >50% подвижных или >25% с поступательным движением в течение 60 мин после эякуляции > 50% motile or> 25% with translational motion within 60 min after ejaculation Морфология Morphology <15% морфологически нормальных сперматозоидов ассоциируется со снижением частоты оплодотворения ΐη νΐΐτο <15% morphologically normal sperm is associated with a decrease in the rate of fertilization ΐη νΐΐτο Жизнеспособность Viability >50% живых, т.е. не окрашенных > 50% live, i.e. not stained

Образец бланка анализа эякулятаSample Ejaculate Analysis Form

Дата получения эякулята Date of receipt of ejaculate Исходный Source Через 30 мин After 30 min Через 60 мин After 60 min 1 one 2 2 3 3 4 4 Продолжительность воздержания Duration of Abstinence Интервал между эякуляцией и началом анализа (мин) The interval between ejaculation and the beginning of the analysis (min) Объем (мл) Volume (ml) Подвижность: a) быстрое поступательное движение; b) колебательное (медленное и вялопоступательное движение) и непоступательное движение; c) неподвижные сперматозоиды Mobility: a) rapid forward movement; b) oscillatory (slow and sluggish movement) and inaccessible movement; c) motionless sperm Жизнеспособность (% живых) Viability (% live) Концентрация (10⁶ /мл)Concentration (10 ⁶ / ml) Морфология: - нормальные - дефект головки - дефект шейки или средней части - дефект хвоста Morphology: - normal - head defect - defect of the neck or middle part - tail defect

После определения параметров эякулята доноров в те же пробирки с эякулятом при температуре 37°С добавляли необходимое количество предлагаемого средства, равное разовой дозе при интравагинальном применении. Для последовательного наблюдения оставляли в термостате на 30 и 60 мин при 37°С.After determining the parameters of the ejaculate donors in the same test tubes with ejaculate at a temperature of 37 ° C was added the required amount of the proposed funds, equal to a single dose for intravaginal use. For sequential observation, left in the thermostat for 30 and 60 min at 37 ° C.

Экспериментальные группы (в каждой группе п=10).Experimental groups (in each group n = 10).

1. Плацебо (основа таблеток).1. Placebo (pill base).

2. Предлагаемое средство вариант № 1.2. The proposed tool option No. 1.

3. Предлагаемое средство вариант № 2.3. The proposed tool option No. 2.

Влияние предлагаемых средств на жизнеспособность сперматозоидов в эякуляте здоровых мужчин ΐη νΐΐΓΟ.The influence of the proposed funds on the viability of sperm in the ejaculate of healthy men ΐη νΐΐΓΟ.

При макроскопическом анализе эякулята здоровых мужчин молодого возраста были получены следующие результаты (табл. 8).A macroscopic analysis of the ejaculate of healthy young men yielded the following results (Table 8).

Таблица 8 Данные макроскопической оценки эякулята здоровых молодых мужчин-доноров, , η=30 (Μ±8Ό)Table 8 Data of macroscopic evaluation of the ejaculate of healthy young male donors,, η = 30 (Μ ± 8Ό)

Объем (мл) Volume (ml) Концентрация (10⁶/мл)Concentration (10 ⁶ / ml) Подвижность (%) Mobility (%) Жизнеспособность (% живых) Viability (% live) а but Ь B с from 3,82±0,53 3.82 ± 0.53 352±149 352 ± 149 71,5 ±8,6 71.5 ± 8.6 11,2 ±4,04 11.2 ± 4.04 16,3 ±8,1 16.3 ± 8.1 85±7,1 85 ± 7.1

При сравнении со стандартами (табл. 7) можно сделать заключение, что исследуемые эякуляты соответствуют значениям нормальных показателей при макроскопическом описании.When comparing with the standards (Table 7), we can conclude that the studied ejaculates correspond to the values of normal indicators with a macroscopic description.

После добавления предлагаемого средства как подвижность, так и жизнеспособность сперматозоидов значительно снизилась в отличие от групп-плацебо (табл. 9) уже через 30 мин.After the addition of the proposed agent, both motility and sperm viability significantly decreased, unlike placebo groups (Table 9), after 30 minutes.

- 11 014292- 11 014292

Таблица 9Table 9

Влияние предлагаемого средства на подвижность и жизнеспособность сперматозоидов в эякуляте здоро вых молодых мужчин-доноров (Μ±8Ό)The effect of the proposed agent on sperm motility and viability in the ejaculate of healthy young male donors (Μ ± 8Ό)

Группа Group Подвижность (30 мин) Mobility (30 min) Жизнеспособность (% живых) Viability (% live) а but (%) ь (%) b с from 30 мин 30 min 60 мин 60 min Плацебо таблетки Предлагаемое Placebo Pills Suggested 45,8±8,2 . 45.8 ± 8.2. 15,0±6,7 15.0 ± 6.7 39,0±22,4 39.0 ± 22.4 74,25±7,88 74.25 ± 7.88 72,5±5,31 72.5 ± 5.31 средство, вариант № 1 tool option number 1 100 one hundred 2,0±1,90 2.0 ± 1.90 0 0 Предлагаемое средство, вариант №2 The proposed tool, option No. 2 - - - - 100 one hundred 1,25±0,350 1.25 ± 0.350 0 0

Таким образом, макроскопический анализ эякулята после применения предлагаемого средства в виде таблеток вагинальных выявил 1-2% жизнеспособных сперматозоидов через 30 мин, хотя через 60 мин результаты были сравнимы с действием других препаратов - обездвиживание и гибель сперматозоидов.Thus, a macroscopic analysis of the ejaculate after applying the proposed agent in the form of vaginal tablets revealed 1-2% of viable spermatozoa after 30 minutes, although after 60 minutes the results were comparable to the effect of other drugs - immobilization and death of sperm.

Результаты морфологического анализа мазков, позволяющего выявить структурные изменения сперматозоидов, после применения предлагаемого средства в течение 30 и 60 мин представлены в табл. 10.The results of the morphological analysis of smears, allowing to identify structural changes in sperm, after applying the proposed funds for 30 and 60 minutes are presented in table. 10.

Добавление предлагаемого средства вариант № 1 и вариант № 2 к порции эякулята т уйго оказывает повреждающее действие на структуру сперматозоидов. Основной точкой приложения являлся хвост сперматозоида, морфология которого наиболее повреждена через 30 и 60 мин после воздействия.Adding the proposed funds option No. 1 and option No. 2 to a portion of the ejaculate t uygo has a damaging effect on the structure of sperm. The main point of application was the tail of the sperm, the morphology of which is most damaged 30 and 60 minutes after exposure.

Таблица 10 Влияние предлагаемого средства на морфологию сперматозоидов в эякуляте здоровых молодых мужчиндоноров через 30 и 60 мин после воздействия (Μ±8Ό)Table 10 The effect of the proposed tool on the morphology of sperm in the ejaculate of healthy young male donors 30 and 60 minutes after exposure (Μ ± 8Ό)

Группа Group Норма Norm Патология Pathology головки heads шейки necks хвоста tail Исходные данные (п=30) Initial data (n = 30) 94,3±2,9 94.3 ± 2.9 2,2±1,9 2.2 ± 1.9 0,9±0,8 0.9 ± 0.8 2,7±1,5 2.7 ± 1.5 Плацебо таблеток (п=10) 30 мин 60 мин Placebo pill (n = 10) 30 min 60 min 66,25±20,2 62,25±23,0 66.25 ± 20.2 62.25 ± 23.0 2,5±1,29 2,5±1,29 2.5 ± 1.29 2.5 ± 1.29 9,5±4,35 10,0±9,52 9.5 ± 4.35 10.0 ± 9.52 27,75±17,9 26,25±20,53 27.75 ± 17.9 26.25 ± 20.53 Предлагаемое средство вариант № 1 (п=10) 30 мин 60 мин The proposed tool option No. 1 (p = 10) 30 min 60 min 63,54=12,8 54,3±8,0 63.54 = 12.8 54.3 ± 8.0 2,5±1,7 2,0±1,0 2.5 ± 1.7 2.0 ± 1.0 13,0±7,7 10,3±4,04 13.0 ± 7.7 10.3 ± 4.04 23,0±9,8 34,3±10,5 23.0 ± 9.8 34.3 ± 10.5 Предлагаемое средство вариант № 2 (п=10) 30 мин 60 мин The proposed tool option No. 2 (p = 10) 30 min 60 min 68±12,8 52,3±5,03 68 ± 12.8 52.3 ± 5.03 2,3±0,57 2,6±0,57 2.3 ± 0.57 2.6 ± 0.57 6,6±4,04 8,6±3,7 6.6 ± 4.04 8.6 ± 3.7 24,7±8,71 38,3±2,08 24.7 ± 8.71 38.3 ± 2.08

При сравнении результатов микроскопического анализа с результатами макроскопического анализа можно предположить, что при воздействии препаратов с хлоргексидином обездвиживание и гибель сперматозоидов обусловлена нарушением проницаемости мембраны и метаболизма клетки, но не нарушением ее структурной целостности путем разрыва мембраны.When comparing the results of microscopic analysis with the results of macroscopic analysis, it can be assumed that under the influence of drugs with chlorhexidine, immobilization and death of spermatozoa is due to a violation of the membrane permeability and cell metabolism, but not a violation of its structural integrity by rupture of the membrane.

Заключение. В исследовании изучали эффективность спермицидного действия предлагаемого средства в виде таблеток для интравагинального введения, разработанных ОАО Нижфарм, Россия, т уйго с использованием спермы мужчин-доноров.Conclusion The study examined the effectiveness of the spermicidal action of the proposed agent in the form of tablets for intravaginal administration, developed by OJSC Nizhpharm, Russia, using the sperm of male donors.

Предлагаемое средство применяли в дозе 1 таблетка однократно на порцию спермы человека (3,5 мл). В качестве контрольного вещества применяли основу таблеток.The proposed tool was used in a dose of 1 tablet once per serving of human sperm (3.5 ml). A tablet base was used as a control substance.

Показано, что т уйго при применении различных вариантов № 1 и 2 предлагаемого средства было выявлено 1-2% жизнеспособных сперматозоидов через 30 мин, хотя через 60 мин наблюдалось полное обездвиживание и гибель сперматозоидов (100%).It was shown that tugo when using various options No. 1 and 2 of the proposed remedy, 1-2% of viable spermatozoa were detected after 30 minutes, although after 60 minutes there was complete immobilization and death of spermatozoa (100%).

При оценке морфологии сперматозоидов в тесте ш уйго основным механизмом нарушения их подвижности и гибели при действии предлагаемого средства на основе хлоргексидина явилось нарушение проницаемости мембраны и метаболизма сперматозоидов, но не структурной целостности.When assessing the morphology of spermatozoa in the test, the main mechanism for the violation of their mobility and death under the action of the proposed chlorhexidine-based agent was a violation of membrane permeability and sperm metabolism, but not structural integrity.

Как показали проведенные исследования, предлагаемое средство в виде вагинальных таблеток является эффективным антибактериальным и спермицидным средством, удобным в применении.As studies have shown, the proposed tool in the form of vaginal tablets is an effective antibacterial and spermicidal agent, convenient to use.

Claims

CLAIM

1. A therapeutic and prophylactic agent having antibacterial and spermicidal action, in a dosage form for intravaginal administration, containing the active substance chlorhexidine or its salt and a base, characterized in that it is made in the form of a tablet, the base of which contains lactose as the main component, and also other pharmaceutically acceptable excipients in the following ratio, wt.%:

Chlorhexidine or salt 1.0 - 4.0 The basis: Lactose 60.0 - 95.0 Other pharmaceutically acceptable Excipients up to 100

2. The tool according to claim 1, characterized in that as the chlorhexidine salt it contains bigluconate, or acetate, or dihydrochloride.

3. The tool according to claim 1, characterized in that it may further comprise a regenerating substance, in particular dexpanthenol, or methyluracil, or sea buckthorn oil, in an amount of 0.5-10 wt.%.