EA010499B1 - Ингибиторы каспаз в качестве материала для покрытия медицинских продуктов для ингибирования рестеноза - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей ингибитор каспаз и/или соединение общей формулы R-Lys-X, способам нанесения покрытия на медицинские продукты с использованием указанных ингибиторов каспаз и/или указанных соединений общей формулы R-Lys-X и к медицинским продуктам с покрытием из указанных ингибиторов каспаз и/или указанных соединений общей формулы R-Lys-X, где данное покрытие ингибирует рестеноз.

Description

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей ингибитор каспаз и/или соединение общей формулы К-Ьук-Х, способам нанесения покрытия на медицинские продукты с использованием указанных ингибиторов каспаз и/или указанных соединений общей формулы К-Ьук-Х и к медицинским продуктам с покрытием из указанных ингибиторов каспаз и/или указанных соединений общей формулы К-Ьук-Х.

Предшествующий уровень техники

В связи с коронарными вмешательствами и, особенно, чрескожной транслюминальной коронарной ангиопластикой (РТСА) было продемонстрировано, что этот вид нехирургической терапии ограничивается вследствие частоты рестеноза, составляющей вплоть до 35%. В нескольких исследованиях было показано, что баллонная ангиография, а также имплантация стентов (внутрисосудистых эндопротезов) вызывают повреждения и разрыв бляшек и стенок сосудов, приводящие к неоинтимальной гиперплазии и пролиферации гладкомышечных клеток.

Указанные гладкомышечные клетки производят внеклеточный матрикс во вновь образующейся интиме. Кроме того, такие повреждения вызывают локальные воспаления и миграцию лимфоцитов, макрофагов и моноцитов во вновь образующуюся интиму. Эта неоинтимальная пролиферация вызывает рестеноз, и необходимы способы, которые снижают риск рестеноза путем контролирования пролиферации и уменьшения воспалительных процессов.

Задача настоящего изобретения заключается в создании соединений и фармацевтических композиций для уменьшения рестеноза, покрытия для медицинских продуктов, которое уменьшает риск рестеноза, и способов производства указанных медицинских продуктов с покрытием.

Данная задача решается обращением к независимым пунктам формулы изобретения. Дополнительные предпочтительные воплощения настоящего изобретения очевидны из зависимых пунктов формулы изобретения, описания изобретения и примеров.

Описание изобретения

Настоящее изобретение относится к применению ингибиторов каспаз и/или по меньшей мере одного соединения общей формулы В-Ьук-Х для приготовления фармацевтической композиции, применению указанного ингибитора каспаз и/или по меньшей мере одного указанного соединения общей формулы РЬук-Х или указанной фармацевтической композиции для нанесения покрытия на поверхности медицинских продуктов, особенно стентов. Кроме того, настоящее изобретение относится к медицинским продуктам с покрытием, нанесенным согласно способу нанесения покрытия по изобретению, особенно к стентам с покрытием, нанесенным согласно способам по изобретению.

Каспазы представляют собой крайне консервативные протеазы, которые рассматриваются в качестве существенных эффекторов апоптоза.

Известен широкий диапазон ингибиторов каспаз, среди которых наиболее популярными примерами являются пептидные ингибиторы каспаз, такие как бензилоксикарбонил-Уа1-А1а-А§р-фторметилкетон или 11е-О1и-ТБт-А8р-фторметилкетон. Предпочтительными являются ингибиторы каспаз в форме свободных или защищенных пептидов, состоящих из двух, трех, четырех или пяти аминокислот.

Однако ингибиторы каспаз, состоящие только из одной аминокислоты, также полезны для применения в настоящем изобретении. Примеры указанных ингибиторов включают, например, трет-бутоксикарбонил-А8р(ОСН₃)-СН₂Р, Вос-аспартил(ОМе)-фторметилкетон (ВАР) и Вос-Акр-Гтк (ВЭ).

Примерами дипептидов в качестве ингибиторов каспаз являются ВЭ-Гшк и ζ-ЕА-Гтк.

Примерами трипептидов в качестве ингибиторов каспаз являются ζ-VΛ^, ζ-Vа1-Λ1а-Λ5рфторметилкетон Ц-УАО-Етк), 1АР, бензилоксикарбонил-Уа1-А1а-А§р(ОСН₃)-СН₂-фторметилкетон, бензилоксикарбонил-11е-61и(ОСН₃)-Тйг-А8р(ОСН₃)-СН₂-фторметилкетон и ζ-ΛΛ^-Гтк.

Примерами тетрапептидов в качестве ингибиторов каспаз являются ЭЕУЭ. Ас-ЭЕУО-СНО, 2-А8р-СН₂-ЭСВ, ацетил-А8р-О1и-Уа1-А8р-фторметилкетон (Ас-ЭЕУО-ЕМК), УУАЭ, ацетил-Тут-Уа1-А1а-А8р-хлорметилкетон (Ас-ΥУΛ^-СМК), ζ-ОЕУО-Гшк, бензилоксикарбонилА8р(ОСН₃)-О1и(ОСН₃)Уа1-А8р(ОСН₃)-СН₂-фторметилкетон и ζ-IЕТ^-Гтк.

Примеры пентапептидов в качестве ингибиторов каспаз включают, например, ζ-У^УΛ^-Гтк.

Сокращения, используемые выше для защитных групп, включают Ζ- (или ζ-) для бензилоксикарбонила; ВОС (или Бос) для трет-бутоксикарбонила; Вζ1 для бензила; Ешос для 9-флуоренилоксикарбонила; Ас для ацетила; ЕМК (или Гтк) для фторметилкетона; СМК (или стк) для хлорметилкетона.

Кроме того, кодируемые вирусом ингибиторы каспаз, такие как белок вируса коровьей оспы СгтА и онкобелок Вс1-2, или ингибиторы каспаз Э1ар1, с1АР1, с1АР2, Х1АР и р35 также могут быть использованы для фармацевтической композиции и в способе нанесения покрытия на медицинские продукты.

Ингибиторы каспаз могут быть приобретены в фирме Еηζуте ЗуЧепъ (Ыуеттоте СА).

Вышеупомянутые ингибиторы каспаз могут быть использованы для приготовления фармацевтической композиции. Указанная фармацевтическая композиция может быть далее использована для покрытия медицинских продуктов, таких как искусственное сердце, отделы сердца, легкие, артерии, вены, аорты, сердечные клапаны, вены трупов, клапаны, контейнер, баллончики, мешки, иглы, катетер и части,

- 1 010499 особенно искусственные части для сердечно-сосудистой системы и экстракорпорального кровообращения, хирургические имплантаты, такие как стенты или катетеры, и устройства для аналитических целей, такие как тест-пробирки, титрационные планшеты, титрационные микропланшеты, луночные планшеты, аналитические чипы или материал для хроматографии, такой как гели, силикагели, колонки, оксид алюминия, сефарозные гели и тому подобное. Более предпочтительными являются стенты, которые подлежат покрытию смесью для покрытия, такой как упомянутая выше фармацевтическая композиция.

Предпочтительными являются ингибиторы каспаз, состоящие из двух, трех или четырех аминокислот. Указанные ди-, три- или тетрапептиды могут быть использованы в их свободной форме или с одной или более защитными группами, связанными с ней.

В качестве защитных групп наиболее предпочтительными являются бензилоксикарбонил, фторметилкетон, хлорметилкетон и трет-бутоксикарбонил.

Особенно предпочтительным ингибитором каспаз является Туг-Уа1-А1а-Азр (УУАО) в качестве компонента покрытия вышеупомянутых медицинских продуктов.

Также предпочтительно, чтобы по меньшей мере одна аминокислота вышеупомянутых ингибиторов каспаз имела Ό-конфигурацию, особенно если одна аминокислота из Туг-Уа1-А1а-Азр имеет Ό-конфигурацию.

Известно, что нейропептиды, такие как проопиомеланокортиновые (РОМС) пептиды, особенно α-, β- и γ-меланоцитстимулирующий гормон (М8Н), более конкретно альфа-М8Н, и адренокортикотропин (адренокортикотропный гормон, АСТН) и родственные им трипептиды (КРУ), оказывают противовоспалительные и иммуносупрессивные воздействия на эндотелиальные клетки (Вгоаб шеб1С1иа1 гезеагсй ргодгат Гог (Не ΕΙί апб ЕбуГйе Ь. Вгоаб ЕоиибаГюи (Программа расширенных медицинских исследований для Фонда Илай и Эдит Л.); КисНатк. 2003). Эти свойства присущи С-концевой части тридекапептида альфа-М8Н и КРУ, которая состоит из Ьуз-Рго-Уа1 (СаГата апб ЫрГоп, Епбоспп. Ксу. 1993, 14, 564-578; ВНагбуа) еГ а1., 1. 1ттипо1. 1996, 156, 2517-2521). М8Н структурно похож на АСТН и биологически образуется из предшественника РОМС. Два различных вида М8Н, α-МБН и β-МБН, имеют первые 13 аминокислот, общие с АСТН. Плазмалипотропин (липотропный гормон, ЬРН) и кардиотропин-подобный пептид (СЫР) также происходят из предшественника РОМС, и полагают, что они оказывают положительные эффекты (С1ш. Епбоспп. & МеГаЬо1. 2001, 86(7), 2997-3000).

Таким образом, другой аспект настоящего изобретения относится к применению соединений, происходящих из семейства РОМС-пептидов, представляющих собой α-, β- или γ-МБН, АСТН, ЬРН или СЫР, или защищенных, ацилированных, ацетилированных производных указанных соединений для покрытия поверхностей медицинских продуктов.

Некоторые ингибиторы каспаз могут быть представлены формулой В-Ьу5-Х. Неожиданно было обнаружено, что не только ингибиторы каспаз, но также олигопептиды и пептиды общей формулы В-Ьу5-Х способны решать проблему, лежащую в основе изобретения. Указанные соединения, в том числе ингибиторы каспаз, которые также могут быть использованы для приготовления фармацевтической композиции и для покрытия поверхности медицинских продуктов, представлены общей формулой К.-Ту8-Х, где X представляет собой гидроксильную группу, аминогруппу, моноалкил- или диалкиламиногруппу, алкоксигруппу, аминокислоту, олигопептид из 1-10 аминокислот и где Я выбран из группы, включающей водород, ацильную группу, ацетильную группу, аминокислоту или пептид из 2-70 аминокислот. Соединения общей формулы В-Ьу5-Х также можно рассматривать в качестве ингибиторов каспаз. Таким образом, используемый в данном изобретении термин ингибиторы каспаз будет относиться к ингибиторам каспаз, известным из литературы, а также к соединениям формулы В-Ьу5-Х.

Предпочтительно Я представляет собой пептид, имеющий 3-50 аминокислот, более предпочтительно Я представляет собой пептид, имеющий 5-35 аминокислот, еще более предпочтительно Я представляет собой пептид, имеющий 6-20 аминокислот, кроме того, еще более предпочтительно Я представляет собой пептид, имеющий 7-15 аминокислот, еще более предпочтительно Я представляет собой пептид, имеющий 8-12 аминокислот, и наиболее предпочтительно Я представляет собой пептид, имеющий 9-11 аминокислот. Также наиболее предпочтительно Я представляет собой пептид из 10 аминокислот.

Кроме того, предпочтительно, когда Я представляет собой пептид, содержащий тетрапептид НйРНе-Агд-Тгр или трипептиды РНе-Агд-Тгр или Нй-РНе-Агд.

Следующие предпочтительные воплощения включают соединения общей формулы Я-Ьук-Х, где по меньшей мере одна аминокислота из остатков Я и/или X имеет Ό-конфигурацию. Более предпочтительными являются соединения, где X представляет собой Ь-аминокислоты, а Я представляет собой по меньшей мере одну Ό-аминокислоту. Другое более предпочтительное воплощение настоящего изобретения включает соединения общей формулы Я-Ьук-Х, где все аминокислоты остатка X имеют Ь-конфигурацию, и все аминокислоты остатка Я имеют Ό-конфигурацию. Для всех вышеупомянутых воплощений предпочтительно также, чтобы аминокислота -Ьуз- в Я-^у8-X имела Ь-конфигурацию.

В соответствии с номенклатурой пептидов Я представляет собой остаток, являющийся первым на Ν-терминальном конце пептида, а X представляет собой остаток, связанный с С-терминальным концом аминокислоты -Ьуз- в Я-Буз^.

- 2 010499

Оба конца, С-терминальный и Ν-терминальный конец, соединения общей формулы Я-Ьук-Х, могут быть защищены обычными защитными группами для амино- или карбоксильных групп, такими как ацильные группы. Предпочтительными защитными группами для аминогруппы являются ацильные группы, такие как формильная, ацетильная, пропионильная и предпочтительно ацетильная группа. Предпочтительными защитными группами для карбоновых кислот являются моноалкиламиногруппы, диалкиламиногруппы, алкоксигруппы, фторметилкетоны и хлорметилкетоны. Указанные защитные группы могут находиться на С-терминальном или Ν-терминальном конце, или на обоих концах, или ни на одном из них.

Еще одно предпочтительное воплощение настоящего изобретения включает соединения общей формулы Я-Ьук-Х, где X представляет собой олигопептид, выбранный из группы, включающей фармацевтическую композицию по любому из пп.5-18 формулы изобретения, где X представляет собой олигопептид, выбранный из группы, включающей Рго, Рго-Тйг, Рго-Уа1, Рго-А1а, Рго-Агд, Рго-Акп, Рго-Акр, Рго-Сук, Рго-О1и, Рго-О1и, Рго-01у, Рго-Ηίδ, Рго-11е, Рго-Ьеи, Рго-Ьук, Рго-Мс1. Рго-Рйе, Рго-Рго, Рго-8ег, Рго-Тгр, Рго-Тйг-Тйг, Рго-Тйг-Уа1, Рго-Тйг-А1а, Рго-Тйг-Агд, Рго-Тйг-Аки, Рго-Тйг-Акр, Рго-Тйг-Сук, Рго-Тйг-О1и, Рго-Тйг-О1и, Рго-Тйг-О1у, Рго-Тйг-Ηίδ, Рго-Тйг-Пе, Рго-ТИг-Ьеи, Рго-Тйг-Еук, Рго-Тйг-Ме!, Рго-Тйг-Рйе, Рго-Тйг-Рго, Рго-Тйг-8ег, Рго-Тйг-Тгр, Рго-Уа1-Тйг, Рго-Уа1-Уа1, Рго-Уа1-А1а, Рго-Уа1-Агд, Рго-Уа1-Акп, Рго-Уа1-Акр, Рго-Уа1-Сук, Рго-Уа1-О1и, Рго-Уа1-О1и, Рго-Уа1-О1у, Рго-Уа1-Н18, Рго-Уа1-11е, Рго-Уа1-Ьеи, Рго-Уа1-Ьу8, Рго-Уа1-Ме1, Рго-Уа1-Рйе, Рго-Уа1-Рго, Рго-Уа1-8ег и Рго-Уа1-Тгр.

Вышеупомянутые дипептиды и трипептиды и Рго могут быть также защищены одной из вышеупомянутых защитных групп для карбоновых кислот, в частности фторметилкетонами и хлорметилкетонами.

Другие предпочтительные примеры соединений, соответствующих формуле Я-Ьук-Х, выбраны из группы, включающей Я-Ьук-Рго-Х, Я-Еук-Рго-Тйг-Х и Я-Ьу8-Рго-Уа1-Х.

Кроме того, предпочтительными являются следующие соединения: Я-Н18-Рйе-Агд-Тгр-Я'-Еу8-Х, Я-Н18-Рйе-Агд-Тгр-Я'-Еу8-Рго-Х', Я-Н18-Рйе-Агд-Тгр-Я'-Еу8-Рго-Тйг-Х', Я-Н18-Рйе-Агд-Тгр-Я'-Еу8-РгоУа1-Х', Я-Рйе-Агд-Тгр-Я'-Еу8-Х, Я-Рйе-Агд-Тгр-Я'-Еу8-Рго-Х', Я-Рйе-Агд-Тгр-Я'-Еу8-Рго-Тйг-Х', Я-Рйе-Агд-Тгр-Я'-Еу8-Рго-Уа1-Х', Я-Н18-Рйе-Агд-Я'-Еу8-Х, Я-Н18-Рйе-Агд-Я'-Еу8-Рго-Х', Я-Н18-РйеАгд-Я'-Еук-Рго-Тйг-Х' и Я-Н18-Рйе-Агд-Я'-Еу8-Рго-Уа1-Х', где Х' представляет собой гидроксильную группу, аминогруппу, моноалкил- или диалкиламиногруппу, алкоксигруппу, аминокислоту, олигопептид из 1-8, предпочтительно 1-3 и более предпочтительно 1 или двух аминокислот; Я' представляет собой олигопептид из 1-10 аминокислот и Я выбран из группы, включающей водород, ацильную группу, ацетильную группу, аминокислоту или пептид из 1-60 аминокислот.

Наиболее предпочтительно Х' представляет собой один С-терминальный защищенный или незащищенный аминокислотный остаток. Кроме того, для Х' предпочтительной является Ь-конфигурация.

Я' более предпочтительно выбран из группы, включающей олигопептидные последовательности из 1-5, еще более предпочтительно из 1-3 и наиболее предпочтительно из одного или двух аминокислотных остатков. Кроме того, для Я' предпочтительной является Ь-конфигурация аминокислот.

В дополнение к этому, Ν-терминальные защищенные или незащищенные пептиды, состоящие из 1-40 аминокислот, предпочтительно из 2-30, более предпочтительно из 3-20, еще более предпочтительно из 3-13, еще более предпочтительно из 4-7 и наиболее предпочтительно из 5 или 6 аминокислот, полезны в качестве остатка Я. Кроме того, предпочтительно, если по меньшей мере одна аминокислота остатка Я имеет Ό-конфигурацию. Более предпочтительно, если 10%, и еще более предпочтительно, если 50%, и наиболее предпочтительно, если более 90% аминокислот остатка Я имеют Ό-конфигурацию.

Одним особенно предпочтительным соединением общей формулы Я-Ьук-Х является 8У8МЕНРЯАОКРУ. Также предпочтительно, если одна аминокислота, более предпочтительно, если 3 аминокислоты, еще более предпочтительно, если 6 аминокислот, и наиболее предпочтительно, если более чем 10 аминокислот имеют Ό-конфигурацию.

Также предпочтительными являются соединения общей формулы Я-Ьук-Х, где соединение формулы Я-Ьук-Х происходит из семейства РОМС-пептидов, обладающих противовоспалительными и антииммуносупрессивными свойствами.

Известно, что соединения формулы Ьук-Х, где Х представляет собой гидроксильную группу, аминогруппу, алкоксигруппу, пролин или Рго-Тйг, обладают противовоспалительными свойствами (АО 02/064131) и подходят для композиций покрытия на медицинские устройства. Получение производных по боковым цепям лизина или треонина также возможно без потери терапевтических свойств; удлинение цепи до длины альфа-М8Н и более дает широкий спектр производных.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способам нанесения покрытия на медицинские продукты. Такие способы включают стадии:

а) подготовки поверхности медицинского продукта,

б) нанесения на указанную поверхность композиции для покрытия, содержащей по меньшей мере один ингибитор каспаз и/или по меньшей мере одно соединение формулы Я-Ьук-Х.

Слой покрытия, содержащий ингибитор каспаз, может быть нанесен непосредственно на поверхность, обычно на непокрытую поверхность медицинского продукта. Также возможно создание первого слоя покрытия, содержащего биологически стабильные и/или биодеградируемые полимеры, и нанесение

- 3 010499 покрытия на указанный первый слой с использованием второго слоя, содержащего указанный ингибитор каспаз и/или по меньшей мере одно соединение общей формулы В-Ьук-Х, где В и X имеют значения, определенные выше. Указанный первый слой покрытия может дополнительно содержать по меньшей мере один противовоспалительный, антипролиферативный, антитромботический агент и/или антикоагулянт, или указанный первый слой покрытия может полностью или в основном состоять из противовоспалительного, антипролиферативного, антитромботического агента и/или антикоагулянта. Предпочтительно в способах нанесения покрытия используются противовоспалительные, антипролиферативные, антитромботические агенты и/или антикоагулянты из приведенного ниже списка.

Кроме того, полезно обеспечить другой слой в качестве слоя, наиболее удаленного от середины или лежащего поверх слоя, содержащего по меньшей мере один указанный ингибитор каспаз и/или по меньшей мере одно указанное соединение общей формулы В-Ьук-Х. Слой или слои, содержащие биологически стабильный полимер, биодеградируемый полимер, по меньшей мере один ингибитор каспаз и/или по меньшей мере одно соединение общей формулы В-Ьук-Х, могут дополнительно содержать по меньшей мере один противовоспалительный, антипролиферативный, антитромботический агент и/или антикоагулянт. Предпочтительными являются покрытия, состоящие из одного или двух слоев. Слои, предпочтительно наиболее удаленный от середины слой, могут быть созданы с возможностью контролируемого высвобождения по меньшей мере одного противовоспалительного, антипролиферативного, антитромботического агента и/или антикоагулянта, и/или по меньшей мере одного ингибитора каспаз, и/или по меньшей мере одного соединения общей формулы В-Ьук-Х.

Также полезно, что слой, находящийся ниже или на поверхности слоя, содержащего по меньшей мере одно соединение общей формулы В-Ьук-Х и/или по меньшей мере один ингибитор каспаз, дополнительно содержит по меньшей мере один противовоспалительный, антипролиферативный, антитромботический агент и/или антикоагулянт, или что указанный слой полностью или в основном состоит из указанного противовоспалительного, антипролиферативного, антитромботического агента и/или антикоагулянта. Таким образом, предпочтительными являются два воплощения:

а) первый слой, состоящий в основном или полностью по меньшей мере из одного противовоспалительного, антипролиферативного, антитромботического агента и/или антикоагулянта, предпочтительно таксола® (паклитаксел), или первый слой, состоящий в основном из биологически стабильного и/или биодеградируемого полимера, предпочтительно выбранного из группы, упомянутой ниже, причем указанный слой содержит по меньшей мере один противовоспалительный, антипролиферативный, антитромботический агент и/или антикоагулянт, предпочтительно таксол® (паклитаксел), и второй слой, сформированный на указанном первом слое, содержащий указанный ингибитор каспаз и/или указанное соединение общей формулы В-Ьук-Х, или

б) воплощения, где первый и второй слой поменяли местами. Таким образом, можно иметь один слой, состоящий из или состоящий в основном из по меньшей мере одного указанного противовоспалительного, антипролиферативного, антитромботического агента и/или антикоагулянта. Также возможно, чтобы по меньшей мере один противовоспалительный, антипролиферативный, антитромботический агент и/или антикоагулянт был включен по меньшей мере в один слой, содержащий биологически стабильный и/или биодеградируемый полимер, и/или по меньшей мере одно соединение общей формулы В-Ьук-Х, и/или по меньшей мере один ингибитор каспаз. Кроме того, возможно присутствие разных противовоспалительных, антипролиферативных, антитромботических агентов и/или антикоагулянтов в разных слоях или присутствие одного и того же противовоспалительного, антипролиферативного, антитромботического агента и/или антикоагулянта в разных слоях. Указанные агенты и/или указанные соединения общей формулы В-Ьук-Х, и/или указанные ингибиторы каспаз могут высвобождаться из разных слоев с разными скоростями высвобождения или из одного и того же слоя с разными скоростями высвобождения. Скорости высвобождения регулируют и контролируют с помощью свойств используемого(ых) полимера(рв).

Другое предпочтительное воплощение включает слой, состоящий только по меньшей мере из одного противовоспалительного, антипролиферативного, антитромботического агента и/или антикоагулянта и по меньшей мере одного соединения общей формулы В-Ьук-Х, и/илй по меньшей мере одного ингибитора каспаз. Указанные воплощения предпочтительно имеют один или два слоя. Воплощения с двумя слоями имеют один биологически стабильный и/или биодеградируемый полимерный слой, находящийся ниже или на поверхности указанного слоя, состоящего только по меньшей мере из одного противовоспалительного, антипролиферативного, антитромботического агента и/или антикоагулянта и по меньшей мере одного соединения общей формулы В-Ьук-Х, и/или по меньшей мере одного ингибитора каспаз.

Термин биологически стабильный и биодеградируемый полимер означает либо композицию по меньшей мере из одного биологически стабильного полимера и по меньшей мере одного биодеградируемого полимера, либо по меньшей мере один блок-сополимер, состоящий из последовательностей, которые являются биологически стабильными, и последовательностей, которые являются биодеградируемыми.

- 4 010499

Термин в основном имеет значение по меньшей мере 85%, предпочтительно по меньшей мере 90%, более предпочтительно более 95%, еще более предпочтительно по меньшей мере 98% и наиболее предпочтительно более 99%.

Слой, содержащий указанный ингибитор каспаз, и/или указанное соединение общей формулы К.-Ьу8-Х, и/или указанный противовоспалительный, антипролиферативный, антитромботический агент и/или антикоагулянт, может быть сформирован непосредственно на поверхности медицинского продукта в норме, не являющейся гемосовместимой, или на первом слое, нанесенном на поверхность медицинского продукта. Сверху слоя, содержащего указанный ингибитор каспаз, и/или указанное соединение общей формулы К-Ьук-Х, и/или указанный противовоспалительный, антипролиферативный, антитромботический агент и/или антикоагулянт, может быть сформирован другой слой.

Указанный наиболее удаленный от середины слой предпочтительно содержит биологически стабильные и/или биодеградируемые полимеры и более предпочтительно состоит в основном из биологически стабильных и/или биодеградируемых полимеров. Кроме того, указанный наиболее удаленный от середины слой может содержать другой противовоспалительный, антипролиферативный, антитромботический агент и/или антикоагулянт, который может быть идентичным или отличным от агента, используемого в слое под указанным наиболее удаленным от середины слоем. Другое предпочтительное воплощение содержит противовоспалительный, антипролиферативный, антитромботический агент и/или антикоагулянт только в наиболее удаленном от середины слое.

Поверхность медицинского продукта может состоять из металлов, таких как нержавеющая сталь или титан, хром, вольфрам, ванадий, золото, медь, нитинол, молибден, сплавов, керамики, минералов, силикатных материалов, таких как стекло, природных материалов, таких как ткань, клетки, биополимеры, синтетических полимеров или пластиков, таких как Тефлон® (тетрафторэтилен), ПВХ (поливинилхлорид), полиэтилентерефталаты, полиэтилен, полипропилен, полиамиды, полиуретаны, поликарбонаты, полисульфоны, полиарилсульфоны, полиэфирсульфоны, модифицированные полисульфоны, модифицированные полиарилсульфоны, модифицированные полиэфирсульфоны, гидрофилизированные полисульфоны, гидрофобизированные полисульфоны, полиэфир-эфиркетоны, силиконы, полистирол, полиметилметакрилаты, поливинилиденфториды и смеси или сополимеры упомянутых выше пластиков и синтетических полимеров.

В качестве биологически стабильных полимеров могут быть использованы полиакриловая кислота, полиакрилаты, полиметилметакрилаты, полибутилметакрилаты, полиакриламиды, полиакрилонитрилы, полиамиды, полиэфирамиды, полиэтиленамины, полиимиды, поликарбонаты, поликарбоуретаны, поливинилкетоны, поливинилгалогениды, поливинилиденгалогениды, поливиниловый простой эфир, ароматические поливинилы, поливиниловые сложные эфиры, поливинилпирролидоны, полиоксиметилен, полиэтилен, полипропилен, политетрафторэтилен, полиуретаны, полиолефин-эластомеры, полиизобутилен, ΕΡΌΜ-смола, фторсиликоны, карбоксиметилхитозан, полиэтилентерефталат, поливалерат, карбоксиметилцеллюлозы, целлюлоза, вискоза, триацетатный шелк, нитроцеллюлозы, ацетаты целлюлозы, гидроксиэтилцеллюлозы, бутираты целлюлозы, ацетат-бутираты целлюлозы, сополимеры этилвинилацетата, полисульфоны и их модифицированные гомологи, эпоксидные смолы, АВ8-смолы. ΕΡΌΜ-смола, силиконы, такие как полисилоксаны, поливинилгалогениды и сополимеры, простой эфир целлюлозы, триацетатцеллюлоза, хитозан и сополимеры и/или смеси вышеупомянутых полимеров.

Биодеградируемые полимеры могут быть выбраны из группы, состоящей из поливалеролактона, поли-е-декалактона, полилактидов, полигликолидов, сополимеров полилактида и полигликолида, поли-е-капролактона, полигидроксимасляной кислоты, полигидроксибутирата, полигидроксивалерата, полигидроксибутират-со-валерата, поли(1,4-диоксан-2,3-диона), поли(1,3-диоксан-2-диона), полипарадиоксанона, полиангидридов, таких как ангидрид полималеиновой кислоты, полигидроксиметакрилата, фибрина, полицианоакрилата, поликапролактондиметилакрилата, поли-в-малеиновой кислоты, поликапролактонбутилакрилата, многоблочных полимеров, изготовленных из олигокапролактондиола и олигодиоксанондиола, полиэфирэфирных многоблочных полимеров, изготовленных из ПЭГ и поли(бутилентерефталата), полипивотолактона, триметилкарбоната полигликолевой кислоты, поликапролактон-гликолида, поли(у-этилглутамата), полиЩТН-иминокарбонатов), полиЩТЕ-со-ОТкарбонатов), поли(бисфенол-А-иминокарбонатов), полиортоэфиров, триметилкарбонатов полигликолевой кислоты, политриметилкарбонатов, полииминокарбонатов, поли(Ы-винил)пирролидона, поливиниловых спиртов, полиэфирамидов, гликолевого полиэфира, полифосфоэфиров, полифосфазенов, поли[(паракарбоксифенокси)пропан], полигидроксипентановой кислоты, полиангидридов, полиэтиленоксид-пропиленоксида, однородных полиуретанов, полиуретанов, несущих аминокислотные остатки, полиэфирэфиров, таких как полиэтиленоксид, полиалкеноксалатов, полиортоэфиров и их сополимеров, каррагенанов, фибриногена, крахмала, коллагенов, полимеров на основе белков, полиаминокислот, синтетических полиаминокислот, зеина, модифицированного зеина, полигидроксиалканоатов, пектиновой кислоты, актиновой кислоты (αοίίηίο ас1й), модифицированного и немодифицированного фибрина и казеина, карбоксиметилсульфатов, альбумина, гиалуроновой кислоты, гепарансульфатов, гепарина, хондроитинсульфатов, декстранов, β-циклодекстринов, сополимеров с ПЭГ и/или полипропиленглико

- 5 010499 лем, гуммиарабика, гуаровой смолы, желатина, коллагенов, коллаген-Ы-гидроксисукцинимида, производных, модифицированных форм, сополимеров и/или смесей вышеупомянутых биодеградируемых полимеров.

Противовоспалительный, антипролиферативный, антитромботический агент и/или антикоагулянт может быть выбран из группы, состоящей из сиролимуса (рапамицин), эверолимуса, пимекролимуса, соматостатина, такролимуса, рокситромицина, дунаимицина, аскомицина, бафиломицина, эритромицина, мидекамицина, джозамицина, конканамицина, кларитромицина, тролеандомицина, фолимицина, церивастатина, симвастатина, ловастатина, флувастатина, розувастатина, аторвастатина, правастатина, питавастатина, винбластина, винкристина, виндезина, винорелбина, этобозида, тенипозида, нимустина, кармустина, ломустина, циклофосфамида, 4-гидроксиоксициклофосфамида, эстрамустина, мелфалана, ифосфамида, тропфосфамида, хлорамбуцила, бендамустина, дакарбазина, бусульфана, прокарбазина, треосульфана, тремозоломида, тиотепа, даунорубицина, доксорубицина, акларубицина, эпирубицина, митоксантрона, идарубицина, блеомицина, митомицина, дактиномицина, метотрексата, флударабина, флударабин-5'-дигидрогенфосфата, кладрибина, меркаптопурина, тиогуанина, цитарабина, фторурацила, гемцитабина, капецитабина, доцетаксела, карбоплатина, цисплатина, оксалиплатина, амсакрина, иринотекана, топотекана, гидроксикарбамида, милтефозина, пентостатина, алдеслейкина, третиноина, аспарагиназы, пэгаспаразы, анастрозола, экземестана, летрозола, форместана, аминоглутетемида, адриамицина, азитромицина, спирамицина, цефарантина, 8МС-(ингибитор пролиферации)-2те, эпотилона А и В, митоксантрона, азатиоприна, микофенолата мофетила, с-тус-антисенса, Ь-щус-антисенса, бетулиновой кислоты, камптотецина, ΡΙ-88 (сульфатированный олигосахарид), меланоцит-стимулирующего гормона (а-М8Н), активированного белка С, ингибитора 1Ь1 -β, тимозина α-1, фумаровых кислот и их сложных эфиров, кальципотриола, такалцитола, лапахола, β-лапахола, подофиллотоксина, бетулина, 2-этилгидразида подофилловых кислот, молграмостима (гйиСМ-С8Е), пэгинтерферона а-2Ь, ланограстима (г-НиС-С8Р), филграстима, макрогола, дакарбазина, базиликсимаба, даклизумаба, селектина (цитокиновый антагонист), ингибитора СЕТР, кадхерина, ингибиторов цитокинов, ингибитора СОХ-2, ЫЕкВ, ангиопептина, ципрофлоксацина, камптотецина, флуробластина, моноклональных антител, которые ингибируют пролиферацию мышечных клеток, антагонистов ЬЕСЕ, пробукола, простагландина, 1,11-диметоксикантин-6-она, 1-гидрокси-11-метоксикантин-6-она, скополектина, колхицина, доноров N0, таких как пентаэритритилтетранитрат и синдноеимин (8убпоспшпс). 8-нитрозопроизводных, тамоксифена, стауроспорина, β-эстрадиола, α-эстрадиола, эстриола, эстрона, этинилэстрадиола, фосфестрола, медроксипрогестерона, эстрадиолципионата, эстрадиолбензоата, траниласта, камебакаурина (КатеЬакаигт) и других терпеноидов, которые используются в терапии рака, верапамила, ингибиторов тирозинкиназ (тирфостин), циклоспорина А, паклитаксела и других его производных, таких как 6-а-гидроксипаклитаксел, баккатина, таксотера, синтетических макроциклических олигомеров субоксидов углерода (МС8) и их производных, мофебутазона, ацеметацина, диклофенака, лоназолака, дапсона, ортокарбамоилфеноксиуксусной кислоты, лидокаина, кетопрофена, мефенамовой кислоты, пироксикама, мелоксикама, хлорохинфосфата, пеницилламина, тумстатина, авастина. Ό-24851, 8С-58125, гидроксихлорохина, ауранофина, ауротиомалата натрия, оксацепрола, целекоксиба, β-ситостерина, адеметионина, миртекаина, полидоканола, нонивамида, левоментола, бензокаина, аэсцина, эллиптицина, Ό-24851 (Са1ЬюсЬет), колцемида, цитохалазина А-Е, инданоцина, нокадазола, белка 8100, бацитрацина, антагонистов рецепторов витронектина, азеластина, стимулятора гуанидилциклазы, ингибиторов металлопротеиназы-1 и 2, свободных нуклеиновых кислот, нуклеиновых кислот, включенных в вирусных хозяев, фрагментов ДНК и РНК, ингибитора активатора плазминогена 1 типа, ингибитора активатора плазминогена 2 типа, антисмысловых олигонуклеотидов, ингибиторов УЕСЕ, 1СЕ-1, антибиотиков, таких как цефадроксил, цефазолин, цефаклор, цефотиксин, тобрамицин, гентамицин, пенициллины, например диклоксациллин, оксациллин, сульфамид, метронидазол, антитромботических средств, таких как аргатробан, аспирин, абциксимаб, синтетический антитромбин, бивалирудин, кумадин, эноксапарин, десульфатированный и Ν-реацетилированный гепарин, тканевой активатор плазминогена, мембранный рецептор Ср11Ь/111а тромбоцитов, антитело к ингибитору фактора Х_а, гепарин, гирудин, г-гирудин, РРАСК, протамин, натриевая соль 2-метилтиазолидин-2,4дикарбоновой кислоты (тиалин-Ыа), проурокиназа, стрептокиназа, варфарин, урокиназа, вазодилататоров, таких как дипирамидол, трапидил, нитропруссид, антагонистов ΡΌΟΕ, таких как триазолопиримидин и серамин, ингибиторов АСЕ, таких как каптоприл, цилазаприл, лизиноприл, эналаприл, лозартан, ингибиторов тиопротеаз, простациклина, вапипроста, интерферона α, β и γ, антагонистов гистамина, блокатора серотонина, ингибиторов апоптоза, регуляторов апоптоза, таких как р65, ΝΕ-κΒ или ВсРхЬ-антисмысловые олигонуклеотиды, галофугинона, нифедипина, токоферола, витамина В1, В2, В6 и В12, фолиевой кислоты, транираста, молсидомина, типолифенола, эпикатехингаллата, эпигаллокатехингаллата, босвеллиновой кислоты и ее производных, лефлуномида, анакинра, этанерцепта, сульфасалазина, этопозида, диклоксациллина, тетрациклина, триамцинолона, мутамицина, прокаинимида, Ό24851, 8С-58125, ретиноевой кислоты, хинидина, дизопиримида, флекаинида, пропафенона, сотолола, амидорона, природных и синтетических стероидов, таких как бриофиллин А, инотодиол, махирозид А,

- 6 010499 галакинозид, манзонин, стреблозид, гидрокортизон, бетаметазон, дексаметазон, нестероидных веществ (Ν8ΑΙΌ), таких как фенопрофен, ибупрофен, индометацин, напроксен, фенилбутазон и другие противовирусные агенты, такие как ацикловир, ганцикловир и зидовудин, противогрибковых средств, таких как клотримазол, флуцитозин, гризеофульвин, кетоконазол, миконазол, нистатин, тербинафин, антипротозойных агентов, таких как хлорохин, мефлохин, хинин, природных терпеноидов, таких как гиппокаэскулин (НрросаексиНи), баррингтогенол-С21-ангелат, 14-дегидроагростистахин, агроскерин, агростистахин (АдтокбкйсЫи), 17-гидроксиагростистахин, оватодиолид, 4,7-оксициклоанисомелиновая кислота (4,7-охусус1оаш8оте11с ас1б), баккариноид (Вассйапио1бе) В1, В2, В3 и В7, тубеимозид (ТиЬетоыб), бруцеанол (Вгисеапо1е) А, В и С, бруцеантинозид (Вгисеаибио81бе) С, яданзиозид (Уабапхюмбе) N и Р, изодезоксиэлефантопин, томенфантопин А и В, коронарин А, В, С и Ό, урсоловая кислота, гиптатовая кислота (Нур!айс ааб) А, зеорин, изо-иридогерманал, мейтенфолиол (Мау!еиГо1ю1), эффузантин (Ейикаиΐίη) А, эксцизанин (Ехскаши) А и В, лонгикаурин (Еоидкаигш) В, скулпонеатин (8си1роиеа!ш) С, камебаунин (КатеЬаиши), леукаменин (Ъеикатеши) А и В, 13,18-дегидро-6-а-сенециоилоксихапаррин (Зеиесюу1охусйараггт), таксамаирин (Тахаташи) А и В, регенилол, триптолид, цимарин (Сутапи), апоцимарин, аристолохиевая кислота, аноптерин, гидроксианоптерин, анемонин, протоанемонин, берберин, хелибурина хлорид (СйеНЬиписЫопбе), циктоксин, синококулин, бомбрестатин А и В, кудраизофлавон (Сибта18оГ1ауои) А, куркумин, дигидронитидин, нитидина хлорид, 12-бета-гидроксипрегнадиен-3,20-дион, билобол, гинкгол (С1икдо1), гинкголовая кислота, хеленалин, индицин, индицина Ν-оксид, лазиокаприн, инотодиол, гликозид 1а, подофиллотоксин, джастицидин (1и8бс1бт) А и В, ларреатин, маллотерин, маллотохроманол, изобутирилмаллотохроманол, махирозид (Мас.|шго51б) А, мархантин (МатсИаШш) А, мейтанзин (МауЕиът). ликоридицин, маргетин, панкратистатин, лириоденин, оксоушинсунин (ОхоикЫикиши), аристолактам-А11, биспартенолидин, периплокозид (Рет1р1осо81б) А, галакинозид (6йа1ак1ио81бе), урсоловая кислота, дезоксипсороспермин, псикорубин (РкусотиЬт), рицин А, сангвинарин, манвувейоевая кислота (Мат\т1\уею1с ас1б), метилсорбифолин, сфателиахромен (ЗрИаШеНасИтотеи), стизофиллин (Зб/орИуШи), манзонин (Малоши), стреблозид (3!теЬ1о81б), акагерин, дигидроузамбараензин (^^йуб^ои8атЬа^аеη8^и), гидроксиузамбарин (НубгохуикатЬатш), стрихнопентамин, стрихнофиллин, узамбарин, узамбарензин, берберин, лириоденин, оксоушинсунин, дафноретин, ларицирезинол, метоксиларицирезинол, сирингарезинол, умбеллиферон, афромозон, ацетилвисмион (Асе!у1у18тюи) В, дезацетилвисмион А, висмион А и В, и серосодержащих аминокислот, таких как цистин, и их солей и/или смесей вышеупомянутых агентов.

Другой аспект настоящего изобретения относится к медицинским продуктам, получаемым в соответствии с одним из способов нанесения покрытия, описанных выше. Более предпочтительно медицинские продукты с покрытием представляют собой стенты.

Предпочтительными противовоспалительными, антипролиферативными, антитромботическими агентами и/или антикоагулянтами являются такролимус, пимекролимус, ΡΙ 88, паклитаксел и его производные, трапидил, α- и β-эстрадиол, 2-метилтиазолидин-2,4-дикарбоновая кислота и ее соли, предпочтительно натриевые соли, макроциклический субоксид углерода (МСЗ) и его производные, сиролимус, фумаровая кислота и ее сложные эфиры, активированный белок С, ингибиторы интерлейкина-1 β и меланоцитстимулирующий гормон (α-МЗН), цистин, эллиптицин, богемин, инданоцин, колцемид и его производные, метионин и его соли и/или смеси вышеупомянутых агентов.

Таксол® (паклитаксел) является наиболее предпочтительным противовоспалительным, антипролиферативным, антитромботическим агентом и/или антикоагулянтом.

Примеры

Способ действия стентов с покрытием, нанесенным в соответствии с настоящим изобретением, исследовали с использованием животных моделей.

Увеличение количества апоптотических гладкомышечных клеток в коронарных артериях свиней могло быть измерено через 30 мин после баллонной ангиопластики. С этого момента времени адвентициальную оболочку и неоинтиму анализировали отдельно и производили измерения различных зависимых от времени изменений в скорости апоптоза. Наивысшие уровни апоптотических гладкомышечных клеток, воспалительных клеток и фибробластов адвентициальной оболочки были зафиксированы соответственно через 18, 6 ч и 7 суток после РТСА (чрескожная транслюминальная коронарная ангиопластика). Количественное определение скорости апоптоза в различных типах клеток и в слоях стенок сосудов после баллонной ангиопластики и имплантации стента осуществляли следующим образом.

Домашних свиней массой от 20 до 30 кг кормили обычным кормом без добавления жировых добавок в течение всего тестирования. Свиней оставляли без пищи в течение ночи и после этого на них подвергали воздействию седативного средства, используя 30 мг кетамина на кг массы тела, 12 мг азепромазина и 1 ампулу рубинола. Перед интубацией вводили 5 мг/кг тиопентала. После эндотрахеальной интубации свиньям осуществляли искусственное дыхание с использованием смеси 20% чистого кислорода и 80% обычного воздуха. Эндотрахеальная интубация представляет собой процедуру, посредством которой трубку вводят через ротовое отверстие вниз в трахею (большой дыхательный путь изо рта в легкие). После введения 0,1 мг фентанила и 2,5 мг ацепроазина в виде болюса анестезию поддерживали посред

- 7 010499 ством введения 0,08 мг/кг фентанила (инфузия 0,05 мг/мл). Для защиты от микробного заражения внутримышечно вводили прокаин-пенициллин С (200000 МЕ/мл) и дигидрострептомицинсульфат (200 мг/10 кг массы тела).

После этого в стерильных условиях осуществляли артериотомию правой общей сонной артерии (а.еагоЙ8 сотшинк бех!та) и вводили 7Р-канал. В течение всей операции производили измерения частоты пульса, артериального кровяного давления и температуры тела. В дополнение к этому в образцах артериальной крови контролировали газы крови и кислотно-основный метаболизм. После введения гепарина 200 МЕ/кг массы тела и ацетилсалициловой кислоты 250 мг/кг 7Р-катетер вставляли в восходящую аорту. Дополнительно посредством инфузии вводили 400 МЕ гепарина в час. Ангиографию правой и левой коронарных артерий осуществляли с использованием неионных контрастирующих агентов после внутрикоронарного введения 200 мкг нитроглицерина.

Одна из артерий левой сосудистой системы (либо межжелудочковая артерия (а. |Щегуеп1пси1ап5). либо огибающая артерия (а. снситПеха)) была случайным образом выбрана для имплантации стента, а другую артерию использовали для баллонной ангиопластики. Венечную артерию (а. согопапа) использовали в качестве необработанного контрольного сосуда.

Для баллонной ангиопластики использовали баллончик, имеющий отношение баллончик/сосуд по меньшей мере 1,3:1, с целью повреждения артерии при его расширении. Сосуд расширяли (растягивали) три раза в одном и том же месте в течение 30 с и под давлением 6 атм. (6 атмосфер; 606 кПа).

После этого имплантировали стенты длиной 15 мм в соответствии со стандартными способами. Диаметр стента выбирали таким образом, чтобы получить отношение стент/сосуд 1,1:1. Во время имплантации баллончик стента надували три раза по 30 с, прикладывая давление 6 бар (600 кПа).

Ангиографию правой коронарной артерии проводили после того, как была осуществлена контрольная ангиография обработанных сосудов. Затем катетер и канал удаляли и после лигирования места артериотомии фасцию и кожу зашивали. После этого прекращали анестезию и вводили антибиотики триметоприм и сульфадоксин вместе с болеутоляющим лекарством метамизолом. В дополнение к этому для предупреждения острого или сверхострого тромбоза, вызываемого стентом, в течение оставшегося времени жизни животным давали рег о§ (перорально) 250 мг ацетилсалициловой кислоты в сутки.

Через 4 недели осуществляли контрольную ангиографию правой и левой коронарных систем и проводили внутрисосудистое ультразвуковое обследование стента и места, обработанного расширенным баллончиком.

После этого свиней умерщвляли внутривенной инъекцией 10 мл насыщенного раствора хлорида калия. Сердца свиней оставляли и промывали раствором хлорида натрия. После этого проводили фиксацию давления с использованием забуференного формальдегида (4%) и перфузионного давления приблизительно 100-110 мм рт. ст. (13,33-14,66 кПа). Затем коронарные артерии сердца извлекали, хранили в течение 24 ч в забуференном формальдегиде (2%) и после этого в парафине. Перед хранением сосуда в парафине стент извлекали, используя микроскоп, чтобы предотвратить повреждение сосуда.

В трех тестируемых сериях каждый из ингибиторов каспаз Туг-Уа1-А1а-А§р (УУАЭ) или 8Υ8ΜΕΗΡΚν0ΚΡν или Ас-Нк-Рйе-Агд-Ьук-Рго-Акр-СМК вводили местно в течение исследуемого периода посредством перфузионного баллончика, используя полиполостной катетер. Указанный катетер состоит из инфузионного коннектора, собственно катетера и дистальных инфузионных областей, содержащих 4 отдельные полости.

Одна группа тестируемых животных получала ингибитор каспаз (ΥνΛΩ или 8Υ8ΜΕΗΡΚ.ν0ΚΡν или Ас-Нк-Рйе-Агд-Ьук-Рго-Акр-СМК), в то время как другую группу держали без обработки в качестве контрольной группы. Неоинтимальную пролиферацию оценивали макроскопически с использованием ΐνϋδ (внутрисосудистого ультразвукового исследования), с помощью которого анализы проводили через 4 недели после баллонной ангиопластики и имплантации стента. Все измерения с использованием ΐνϋδ оценивали в автономном режиме с применением компьютерной системы анализа ΐνϋδ. Качественный ΐνυδ-анализ включал оценку состояния бляшек (твердые или гладкие, тромбы, разорванные бляшки или кальцификация, соответственно) и эксцентриситета. Неоинтимальную пролиферацию рассчитывали как среднее значение трех величин. Кроме того, проводили гистологические исследования. С этой целью срезы каждого сегмента артерии окрашивали гематоксилин-эозином и красителем Уег1юеГГ-уап-С|е5оп для выявления повреждений сосуда в результате вмешательства.

Количественную оценку повреждений сосуда и неоинтимального ответа на имплантацию стента проводили с использованием срезов, окрашенных по Vе^1юеίΤ-νаη-С^е5оη. применяя способ, разработанный Шварцем (8с11\\'аг1х) и др. Каждую проволоку стента оценивали и классифицировали в соответствии с серьезностью повреждений, вызванных этой проволокой и положением указанной проволоки в гистологических слоях сосудистой стенки.

Для идентификации макрофагов и гладкомышечных клеток использовали антитела мышей против макрофагов кролика (КАМ 11, ЭАКО Согр.) и моноклональные антитела мышей против α-актина гладкомышечных клеток кролика. Пролиферирующие клетки определяли посредством окрашивания срезов мышиными антителами против РСЫА (ядерного антигена пролиферирующих клеток; клон РС 10, ЭАКО). С этой целью ткань инкубировали в течение 1 ч вместе с первичными антителами при 37°С в

- 8 010499 увлажненной камере. Связывания антител достигали, применяя непрямой способ с использованием биотин-стрептавидин пероксидазы хрена (Атегкйат) или щелочной фосфатазы (81дта). Данные способы осуществляли в соответствии с инструкциями поставщика.

Окончательно проводили оценку апоптотических клеток ίη 8Йи. С этой целью в соответствии с инструкциями поставщиков применяли набор для опосредованного терминальной трансферазой мечения концов однонитевых разрывов (шск епй) с использованием йиТР (ΤϋΝΕΕ), набор для выявления апоптоза ίη 811и. В связи с этим положительные контроли обрабатывали ДНК-азой после фиксации и пермеабилизации для того, чтобы разрезать ДНК и получить куски нитей ДНК. Одновременно отрицательные контроли окрашивали раствором для окрашивания (без терминальной трансферазы) вместо реакционной смеси ΤυΝΕΕ. Связывание антител визуализировали с использованием диаминобензидина (Р1егсе). Взаимодействие с диаминобензидином дает коричневое окрашивание.

Можно было продемонстрировать, что указанные части кровеносного сосуда, который был обработан ингибитором апоптоза (в данном случае УУЛЭ или 8У8МЕНЕВАОКРУ, или Ас-Нщ-Рйе-Атд-ЕукРго-Акр-СМК) демонстрировали уменьшение объема бляшек до приблизительно 1/6-1/7, уменьшение максимальной площади бляшки до приблизительно 1/3 и уменьшение стентированной площади (площадь, которая приходит в контакт с введенным стентом) до приблизительно 30-40% по сравнению с величинами, полученными в отрицательной контрольной группе. Для каждой группы, положительной и отрицательной контрольной группы, использовали по 7 свиней.

Процитированные выше публикации включены в данной описание изобретения посредством ссылки.

Из предшествующего описания изобретения специалистам в данной области техники будут сразу очевидны дополнительные воплощения настоящего изобретения. Подразумевается, что все такие воплощения входят в объем данного изобретения, раскрытый в описании и определенный в нижеследующей формуле изобретения.

Claims (22)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Медицинский продукт, покрытый фармацевтической композицией, содержащей соединение формулы В-ЙУ5-Х и по меньшей мере одно из следующего: фармацевтически приемлемый носитель, полимерную матрицу, растворитель и/или разбавители, где X представляет собой гидроксильную группу, аминогруппу, моноалкил- или диалкиламиногруппу, алкоксигруппу, аминокислоту, олигопептид из 1-10 аминокислот и где В выбран из группы, включающей водород, ацильную группу, ацетильную группу, аминокислоту или пептид из 2-70 аминокислот.
2. 2. Медицинский продукт по п.1, где В представляет собой пептид, имеющий 8-12 аминокислот.
3. 3. Медицинский продукт по п.1, где В представляет собой пептид, содержащий тетрапептид Н18-Рйе-Атд-Тгр, или содержащий трипептид Рйе-Агд-Тгр, или содержащий трипептид Нк-Рйе-Атд.
4. 4. Медицинский продукт по п.1, где В представляет собой пептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислоту, имеющую Ό-конфигурацию.
5. 5. Медицинский продукт по п.1, где В представляет собой пептид, состоящий из аминокислот, имеющих Ό-конфигурацию.
6. 6. Медицинский продукт по п.1, где В представляет собой пептид, несущий ацильную группу или ацетильную группу на Ν-терминальном конце.
7. 7. Медицинский продукт по п.1, где X представляет собой олигопептид, выбранный из группы, включающей Рго, Рго-Тйг, Рго-Уа1, Рго-А1а, Рго-Агд, Рго-Акп, Рго-Акр, Рго-Сук, Рто-О1и, Рто-ΟΙη, Рто-О1у, Рто-Н18, Рго-11е, Рто-Ьеи, Рго-Ьук, Рто-Ме!, Рго-Рйе, Рго-Рго, Рто-8ет, Рго-Тгр, Рго-Тйг-Тйг, Рго-Тйг-Уа1, Рго-Тйг-А1а, Рго-Тйг-Агд, Рго-Тйг-Акп, Рго-Тйг-Акр, Рго-Тйг-Сук, Рго-Тйт-61и, Рто-Тйт-О1п, Рто-Тйт-01у, Рто-Тйт-Нк, Рго-Тйг-11е, Рто-Тйт-Ьеи, Рго-Тйг-Ьук, Рто-Тйт-Ме!, Рго-Тйг-Рйе, Рго-Тйг-Рго, Рто-Тйт-8ет, Рго-Тйг-Тгр, Рго-Уа1-Тйг, Рго-Уа1-Уа1, Рго-Уа1-А1а, Рго-Уа1-Агд, Рго-Уа1-Акп, Рго-Уа1-Акр, Рго-Уа1-Сук, Рто-Уа1-О1и, Рто-Уа1-О1п, Рто-Уа1-О1у, Рто-Уа1-Нщ, Рго-Уа1-11е, Рго-УайЬеи, Рго-Уа1-йу5. Рто-УайМе!, Рго-Уа1-Рйе, Рго-Уа1-Рго, Рто-Уа1-8ет и Рго-Уа1-Тгр.
8. 8. Медицинский продукт по п.1 или 7, где X представляет собой олигопептид, несущий аминогруппу, моноалкил- или диалкиламиногруппу, алкоксигруппу, фторметилкетон или хлорметилкетон на С-терминальном конце.
9. 9. Медицинский продукт по п.1, где X представляет собой олигопептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислоту, имеющую Ό-конфигурацию.
10. 10. Медицинский продукт по п.1, где соединение формулы представляет собой

    8У8МЕНЕВАОКРУ.
11. 11. Медицинский продукт по п.1, где по меньшей мере одна аминокислота соединения 8У8МЕНЕВАОКРУ имеет Ό-конфигурацию.
12. 12. Медицинский продукт по п.1, где соединение общей формулы представляет собой со- единение, происходящее из семейства РОМС(проопиомеланокортин)пептидов, обладающих противовоспалительными и антииммуносупрессивными свойствами.

    - 9 010499
13. 13. Медицинский продукт по п.12, где соединение, происходящее из семейства РОМС-пептидов, представляет собой α-, β- или γ-Μ8Η (меланоцитстимулирующий гормон), АСТН (адренокортикотропный гормон), ЬРН (липотропный гормон) или СЫР (кардиотропинподобный пептид), или защищенные, ацилированные, ацетилированные производные указанных соединений.
14. 14. Медицинский продукт по п.1, дополнительно содержащий по меньшей мере один противовоспалительный, антипролиферативный, антитромботический агент и/или антикоагулянт.
15. 15. Способ приготовления медицинского продукта с гемосовместимым покрытием, включающий стадии:

    а) подготовки поверхности медицинского продукта;

    б) нанесения на указанную поверхность композиции для покрытия, содержащей по меньшей мере одно соединение формулы Я-Ьук-Х, как определено в п.1.
16. 16. Способ приготовления медицинского продукта с гемосовместимым покрытием по п.15, дополнительно включающий стадию в) нанесения на слой, содержащий указанное соединение общей формулы Я-Ьук-Х, слоя, содержащего биологически стабильные и/или биодеградируемые полимеры.
17. 17. Способ приготовления медицинского продукта с гемосовместимым покрытием, включающий стадии:

    а) подготовки поверхности медицинского продукта, б') нанесения на указанную поверхность первого слоя, содержащего биологически стабильные и/или биодеградируемые полимеры, и

    б) нанесения композиции для покрытия, содержащей по меньшей мере одно соединение формулы Я-Ьук-Х, как определено в п.1, на указанный первый слой.
18. 18. Способ приготовления медицинского продукта с гемосовместимым покрытием по п.17, дополнительно включающий стадию в): нанесения на слой, содержащий соединение общей формулы К-Ьук-Х, слоя, содержащего биологически стабильные и/или биодеградируемые полимеры.
19. 19. Способ по любому из пп.15-18, где слой биологически стабильных и/или биодеградируемых полимеров и/или слой, содержащий указанное соединение общей формулы К-Ьук-Х, дополнительно содержит противовоспалительный, антипролиферативный, антитромботический агент и/или антикоагулянт.
20. 20. Способ по любому из пп.15-19, где соединение общей формулы К-Ьук-Х выбрано из группы, где Х представляет собой гидроксильную группу, аминогруппу, моноалкил- или диалкиламиногруппу, алкоксигруппу, аминокислоту, олигопептид из 1-10 аминокислот, и где Я выбран из группы, включающей водород, ацильную группу, ацетильную группу, аминокислоту или пептид из 2-70 аминокислот.
21. 21. Медицинский продукт с нанесенным покрытием, полученный согласно способу по любому из пп.15-19.
22. 22. Медицинский продукт по п.1 или 21, который представляет собой стент, вену, аорту, сердечный клапан, контейнер, баллончик, мешок, иглу, катетер, искусственную часть для сердечно-сосудистой системы, хирургический имплантат, тест-пробирку, титрационный планшет, титрационный микропланшет, луночный планшет, аналитический чип, силикагель, колонку, оксид алюминия или сефарозный гель.