EA010156B1 - Peptide stimulating regeneration of lever tissue, pharmaceutical composition based thereon and use thereof - Google Patents
Peptide stimulating regeneration of lever tissue, pharmaceutical composition based thereon and use thereof Download PDFInfo
- Publication number
- EA010156B1 EA010156B1 EA200601581A EA200601581A EA010156B1 EA 010156 B1 EA010156 B1 EA 010156B1 EA 200601581 A EA200601581 A EA 200601581A EA 200601581 A EA200601581 A EA 200601581A EA 010156 B1 EA010156 B1 EA 010156B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- peptide
- regeneration
- pharmaceutical composition
- liver
- glutamyl
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 65
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 108010057083 glutamyl-aspartyl-leucine Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims abstract description 4
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 claims description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 21
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 31
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 31
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 9
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 8
- 238000012753 partial hepatectomy Methods 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 7
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 6
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 4
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 4
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 4
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 4
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 4
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 230000007665 chronic toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000160 chronic toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 3
- 231100000456 subacute toxicity Toxicity 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- -1 BOC - tert-butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVSBYEDSSRZQGV-GUBZILKMSA-N Glu-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JVSBYEDSSRZQGV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 238000012752 Hepatectomy Methods 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 2
- TXHIDIHEXDFONW-UHFFFAOYSA-N benzene;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.C1=CC=CC=C1 TXHIDIHEXDFONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 208000007348 Experimental Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 239000009456 Liv 52 Substances 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- SEBFKMXJBCUCAI-UHFFFAOYSA-N NSC 227190 Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C2C(OC3=CC=C(C=C3O2)C2C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)CO)=C1 SEBFKMXJBCUCAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000020584 Polyploidy Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- ZVDPYSVOZFINEE-UHFFFAOYSA-N aspartyl-leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O ZVDPYSVOZFINEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000027119 bilirubin metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- KJOZJSGOIJQCGA-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound ClCCl.OC(=O)C(F)(F)F KJOZJSGOIJQCGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000001553 hepatotropic effect Effects 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036796 hyperbilirubinemia Diseases 0.000 description 1
- 206010021654 increased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 210000002990 parathyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 210000001850 polyploid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- SEBFKMXJBCUCAI-HKTJVKLFSA-N silibinin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2[C@H](OC3=CC=C(C=C3O2)[C@@H]2[C@H](C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)CO)=C1 SEBFKMXJBCUCAI-HKTJVKLFSA-N 0.000 description 1
- 229950000628 silibinin Drugs 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014899 silybin Nutrition 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 102000014898 transaminase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0819—Tripeptides with the first amino acid being acidic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к лекарственным средствам для лечения заболеваний печени и может быть использовано как средство, стимулирующее регенерацию клеток печени.The invention relates to medicines for the treatment of liver diseases and can be used as a means of stimulating the regeneration of liver cells.
В настоящее время известны препараты, улучшающие метаболические процессы в печени, к которым относятся природные антиоксиданты, в частности витамины группы В (Вь В6, В12), аскорбиновая кислота, витамин Е, витамин А; препараты из лекарственных растений - Лив-52 (Большая Российская Энциклопедия лекарственных средств, М.: Издательство Ремедиум, т.2, 2002, с.435). Известны средства, улучшающие обмен веществ в клетках печени, среди которых следует отметить силибинин (Большая Российская Энциклопедия лекарственных средств, М.: Издательство Ремедиум, т.2, 2002, с.719); сирепар (Большая Российская Энциклопедия лекарственных средств, М.: Издательство Ремедиум, т.2, 2002, с.722); эссенциале (патент Франции № 2556050); а также синтетические пептидные препараты (патент РФ № 2166957, 2000г.).Currently known drugs that enhance the metabolic processes in the liver, which include natural antioxidants, in particular vitamins of group B (B s B 6, B 12), ascorbic acid, vitamin E, vitamin A; preparations from medicinal plants - Liv-52 (Big Russian Encyclopedia of Medicines, M .: Remediium Publishing House, t.2, 2002, p.435). Known drugs that improve metabolism in liver cells, among which should be noted silibinin (Big Russian Encyclopedia of medicines, M .: Publishing house Remedium, t.2, 2002, p.719); Sirepar (Big Russian Encyclopedia of Medicines, M .: Publishing House Remedium, t.2, 2002, p. 722); Essential (French Patent No. 2556050); as well as synthetic peptide preparations (RF patent No. 2166957, 2000).
Известные средства обладают только однонаправленным действием, а именно улучшают метаболические процессы в печени и повышают ее устойчивость к патогенным воздействиям.Known drugs have only a unidirectional effect, namely they improve metabolic processes in the liver and increase its resistance to pathogenic effects.
Необходимо отметить, что препараты, направленные на регенерацию гепатоцитов, в уровне техники не обнаружены.It should be noted that drugs aimed at the regeneration of hepatocytes are not found in the prior art.
В связи с этим актуальна разработка новых групп препаратов, в том числе биологически активных пептидных соединений, обладающих свойством регенерировать ткань печени.In this regard, the development of new groups of drugs, including biologically active peptide compounds with the ability to regenerate liver tissue, is relevant.
Структурных аналогов, представленных в уровне техники, предлагаемый пептид не имеет.The structural analogues represented in the prior art, the proposed peptide does not have.
Настоящим изобретением поставлена и решена задача получения пептида, стимулирующего регенерацию клеток печени и фармацевтической композиции, содержащей этот пептид в качестве активного начала, а также способа ее применения.The present invention has set and solved the problem of obtaining a peptide that stimulates the regeneration of liver cells and a pharmaceutical composition containing this peptide as an active principle, as well as a method for its use.
Технический результат изобретения заключается в создании пептида, обладающего биологической активностью, проявляющейся в стимулировании регенерации клеток печени, а также фармацевтической композиции, содержащей этот пептид в качестве активного начала, использование которой стимулирует регенерацию клеток печени за счет восстановления синтеза тканеспецифических белков и нормализации функций клеток печени.The technical result of the invention is to create a peptide with biological activity, which is manifested in stimulating the regeneration of liver cells, as well as a pharmaceutical composition containing this peptide as an active principle, the use of which stimulates the regeneration of liver cells by restoring the synthesis of tissue-specific proteins and normalizing the functions of liver cells.
Для решения поставленной задачи и достижения указанного технического результата предложена группа изобретений, объединенных общим изобретательским замыслом.To solve the problem and achieve the technical result, a group of inventions is proposed, united by a common inventive concept.
Одним из объектов предложенной группы изобретений является фармацевтическая композиция, стимулирующая регенерацию клеток печени, содержащая в качестве активного начала эффективное количество пептида глутамил-аспартил-лейцин общей формулы Н-С1и-А5р-Бси-ОН последовательности 1 |8ЕО Ш N0: 1] и фармацевтически приемлемый носитель.One of the objects of the proposed group of inventions is a pharmaceutical composition that stimulates the regeneration of liver cells, containing as an active principle an effective amount of a glutamyl-aspartyl-leucine peptide of the general formula H-C1i-A5p-Bsi-OH of the sequence 1 | 8EO Ш N0: 1] and pharmaceutically acceptable carrier.
При этом фармацевтическая композиция находится в форме, подходящей для парентерального введения.In this case, the pharmaceutical composition is in a form suitable for parenteral administration.
Другой аспект настоящего изобретения касается пептида глутамил-аспартил-лейцин общей формулы Н-С1и-А5р-Бси-ОН последовательности 1 |8ЕО 1Э N0: 1], обладающего способностью стимулировать регенерацию клеток печени. Предлагается применение пептида глутамил-аспартил-лейцин общей формулы Н-С1и-А5р-Бси-ОН последовательности 1 |8ЕО Ш N0: 1] для приготовления лекарственного средства, стимулирующего регенерацию клеток печени.Another aspect of the present invention relates to a glutamyl-aspartyl-leucine peptide of general formula H-C1i-A5p-Bsi-OH of the sequence 1 | 8EO 1E N0: 1], which has the ability to stimulate the regeneration of liver cells. The use of the glutamyl-aspartyl-leucine peptide of the general formula H-C1i-A5p-Bsi-OH of the sequence 1 | 8EO W N0: 1] for the preparation of a medicament stimulating the regeneration of liver cells is proposed.
Следующий аспект настоящего изобретения касается способа стимуляции регенерации клеток печени, заключающегося во введении пациенту фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного начала пептид глутамил-аспартил-лейцин общей формулы Н-С1и-А5р-Бси-0Н последовательности 1 |8Е0 Ш N0: 1] в дозе 0,01-100 мкг/кг массы тела, по крайней мере 1 раз в день в течение периода, необходимого для достижения терапевтического эффекта. При этом введение осуществляют парентерально.A further aspect of the present invention relates to a method for promoting liver cell regeneration, which comprises administering to a patient a pharmaceutical composition comprising, as an active principle, a glutamyl-aspartyl-leucine peptide of general formula H-C1i-A5p-Bsi-0H of sequence 1 | 8E0 W N0: 1] in a dose of 0.01-100 μg / kg body weight at least 1 time per day for the period necessary to achieve a therapeutic effect. In this case, administration is carried out parenterally.
Пептид глутамил-аспартил-лейцин общей формулы Н-С1и-А5р-Бси-0Н получают классическим методом пептидного синтеза в растворе.The glutamyl-aspartyl-leucine peptide of the general formula H-C1i-A5p-Bsi-0H is obtained by the classical method of peptide synthesis in solution.
Возможность объективного проявления технического результата при использовании изобретения подтверждена достоверными данными, приведенными в примерах, которые содержат сведения экспериментального характера, полученные в процессе проведения исследований по методикам, принятым в данной области.The possibility of an objective manifestation of a technical result when using the invention is confirmed by reliable data given in the examples, which contain experimental information obtained in the process of conducting research using methods adopted in this field.
Стимулирующее действие пептида Н-С1и-А5р-Бси-0Н на регенерацию клеток печени выявлено при его экспериментальном изучении.The stimulating effect of the peptide H-C1i-A5p-Bsi-0H on the regeneration of liver cells was revealed during its experimental study.
Изучение биологической активности проводили на эксплантатах печени, в экспериментальных моделях частичной гепатэктомии и цирроза печени.The study of biological activity was carried out on liver explants, in experimental models of partial hepatectomy and cirrhosis.
Понятие фармацевтическая композиция подразумевает различные лекарственные формы, содержащие пептид Н-С1и-А5р-Беи-0Н. которые могут найти лечебное применение в медицине в качестве средства, стимулирующего регенерацию ткани печени.The term pharmaceutical composition refers to various dosage forms containing the peptide H-C1i-A5p-Bei-0H. which can find therapeutic use in medicine as a means of stimulating the regeneration of liver tissue.
Для получения фармацевтических композиций, отвечающих изобретению, эффективное количество пептида Н-С1и-А5р-Беи-0Н. как активное начало, смешивают с фармацевтически приемлемым носителем согласно принятым в фармацевтике способам компаундирования.To obtain pharmaceutical compositions that meet the invention, an effective amount of the peptide H-C1i-A5p-Bay-0H. as an active principle, it is mixed with a pharmaceutically acceptable carrier according to pharmaceutical compounding methods.
Понятие эффективное количество подразумевает использование такого количества активного наThe term effective amount implies the use of such an amount
- 1 010156 чала, которое в соответствии с его количественными показателями активности и токсичности, а также на основании знаний специалиста должно быть эффективным в данной лекарственной форме.- 1 010156 beginning, which in accordance with its quantitative indicators of activity and toxicity, as well as on the basis of specialist knowledge should be effective in this dosage form.
Носитель может иметь различные формы, которые зависят от лекарственной формы препарата, желаемой для введения в организм.The carrier may take various forms, which depend on the dosage form of the drug desired for administration to the body.
Для парентерального введения носитель обычно включает физиологический раствор или стерильную воду, хотя могут быть включены другие ингредиенты, способствующие стабильности, или для сохранения стерильности.For parenteral administration, the carrier usually includes saline or sterile water, although other ingredients that promote stability or to maintain sterility may be included.
Сущность изобретения поясняется фигурой и таблицами.The invention is illustrated by the figure and tables.
На фигуре показано влияние пептида Н-С1и-А8р-Ьеи-ОН на развитие эксплантатов печени.The figure shows the effect of the peptide H-C1i-A8p-Ley-OH on the development of liver explants.
В табл. 1 представлено влияние пептида Н-С1и-Л8р-Ьеи-ОН на число делящихся клеток в регенерирующей печени крыс через 32 и 96 ч после частичной гепатэктомии (% от общего числа клеток печени).In the table. Figure 1 shows the effect of the peptide H-C1i-L8p-Ley-OH on the number of dividing cells in the regenerating rat liver 32 and 96 hours after partial hepatectomy (% of the total number of liver cells).
В табл. 2 представлено влияние пептида Н-С1и-Л8р-Ьеи-ОН на биохимические показатели крови у крыс с экспериментальным циррозом печени.In the table. Figure 2 shows the effect of the peptide Н-С1и-Л8р-Лей-OH on blood biochemical parameters in rats with experimental liver cirrhosis.
В табл. 3 представлено влияние пептида Н-С1и-Л8р-Ьеи-ОН на содержание суммарного гликогена (усл.ед.) в печени крыс с экспериментальным циррозом печени.In the table. Figure 3 shows the effect of the peptide Н-С1и-Л8р-Леи-ОН on the content of total glycogen (conventional units) in the liver of rats with experimental cirrhosis.
В табл. 4 представлено влияние пептида Н-С1и-Л8р-Ьеи-ОН на морфологические и биохимические показатели периферической крови морских свинок при изучении токсичности.In the table. Figure 4 shows the effect of the peptide Н-С1и-Л8р-Лей-OH on the morphological and biochemical parameters of the peripheral blood of guinea pigs in the study of toxicity.
В табл. 5 представлено влияние пептида Н-С1и-Л8р-Ьеи-ОН на биохимические показатели периферической крови больных хроническим гепатитом.In the table. Figure 5 shows the effect of the peptide Н-С1и-Л8р-Лей-OH on the biochemical parameters of the peripheral blood of patients with chronic hepatitis.
Изобретение иллюстрируется примером синтеза пептида глутамил-аспартил-лейцин общей формулы Н-С1и-Л8р-Ьеи-ОН (пример 1), примерами испытания биологической активности пептида (примеры 2, 3, 4), примером изучения токсичности (пример 5), а также примером результатов клинического применения пептида, демонстрирующим его фармакологические свойства и подтверждающим возможность достижения лечебного эффекта (пример 6).The invention is illustrated by an example of the synthesis of the glutamyl-aspartyl-leucine peptide of the general formula H-C1i-L8p-Lye-OH (example 1), examples of testing the biological activity of the peptide (examples 2, 3, 4), an example of the study of toxicity (example 5), and an example of the results of the clinical use of the peptide, demonstrating its pharmacological properties and confirming the possibility of achieving a therapeutic effect (example 6).
Пример 1. Синтез пептида Н-С1и-Л8р-Ьеи-ОН.Example 1. The synthesis of the peptide H-S1-L8p-Ley-OH.
1. Название соединения: глутамил-аспартил-лейцин.1. Name of compound: glutamyl-aspartyl-leucine.
2. Структурная формула: Н-С1и-Л8р-Ьеи-ОН.2. Structural formula: H-S1i-L8r-Ley-OH.
3. Брутто-формула без противоиона: С|5Н2^3О-.3. Gross formula without counterion: C | 5 H 2 ^ 3 O-.
4. Молекулярный вес без противоиона: 375,37.4. Molecular weight without counterion: 375.37.
5. Противоион: ацетат.5. Counterion: acetate.
6. Внешний вид: белый аморфный порошок без запаха.6. Appearance: odorless white amorphous powder.
7. Способ синтеза: пептид получен классическим методом синтеза в растворе по схеме7. Method of synthesis: the peptide obtained by the classical method of synthesis in solution according to the scheme
В0С-61и(0Вг1)-0НВ0С-61и (0Вг1) -0Н
НО5иHO5i
ОССOSS
ВОС-С1и(ОВг1)-О8иBOC-C1i (OVg1) -O8i
ΒΟ€-61υ(ΟΒζ1)-Α3ρ(ΟΒζ1)-ΟΗΒΟ € -61υ (ΟΒζ1) -Α3ρ (ΟΒζ1) -ΟΗ
I Н-Ьеи-ΟΒζΙ ψ ОССI N-lei-ΟΒζΙ ψ OSS
ВОС-01и(ОВг1)-А5р(ОВД)-Ьеи-ОВ21BOC-01i (OVg1) -A5r (OVD) -Ei-OV21
1) Н2/Р11) H 2 / P1
2) ТРА2) TRA
Н-СИи-Азр-Ьеи-ОНN-SI-Azr-Ley-OH
ВОС - трет.бутилоксикарбонильная группа, ОЗи - Ν-оксисукцинимидный эфир,BOC - tert-butyloxycarbonyl group, OZi - Ν-oxysuccinimide ether,
ОСС - Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид,OSS - Ν, Ν'-dicyclohexylcarbodiimide,
ОВ/1 - бензиловый эфир,OV / 1 - benzyl ether,
ТРА - трифторуксусная кислота.TPA - trifluoroacetic acid.
- 2 010156- 2 010156
8. Характеристики готового препарата.8. Characteristics of the finished product.
Содержание основного веществаThe content of the main substance
ТСХTLC
Содержание влаги рН 0,001% раствораMoisture content pH 0.001% solution
Удельное оптическое вращениеSpecific optical rotation
98,15% (по ВЭЖХ, 220 нм)98.15% (by HPLC, 220 nm)
Индивидуален, Я(=0,65 (ацетонитрил-вода 1:3) 6%Individual, I (= 0.65 (acetonitrile-water 1: 3) 6%
4,57 [а]с 22: -30° (с=1, Н2О), Ро1ата1 А, Саг1 Ζοίκκ 1епа4.57 [a] s 22 : -30 ° (c = 1, H 2 O), Po1ata1 A, Cag1 Ζοίκκ 1epa
Пример синтеза.Synthesis example.
1) ВОС-С1и(ОВ/1)-О5>и. Ν-оксисукцинимидный эфир И-трет.бутилоксикарбонил-(у-бензил)глутаминовой кислоты (I).1) BOC-C1i (OV / 1) -O5> and. I-tert-butyloxycarbonyl- (y-benzyl) glutamic acid окс-oxysuccinimide ester (I).
№трет.Бутилоксикарбонил-(у-бензил)глутаминовую кислоту ВОС-С1п(ОВх1)-ОН (33,7 г, 0,1 моль) растворяли в 50 мл Ν,Ν'-диметилформамида, охлаждали до температуры -10°С, добавляли при перемешивании охлажденные (4-6°С) растворы Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимида (23,0 г, 0,11 моль) в 30 мл Ν,Ν'-диметилформамида и Ν-гидроксисукцинимида (13,0 г, 0,11 моль) в 20 мл Ν,Ν'-диметилформамида. Реакционную смесь перемешивали в течение 12 ч при охлаждении льдом и далее в течение 1 суток при комнатной температуре. Выпавшую Ν,Ν'-дициклогексилмочевину отфильтровывали и полученный раствор активированного эфира использовали без выделения на следующей стадии.No. Tert. Butyloxycarbonyl- (y-benzyl) glutamic acid BOC-C1P (OBx1) -OH (33.7 g, 0.1 mol) was dissolved in 50 ml of Ν, Ν'-dimethylformamide, cooled to a temperature of -10 ° C, under stirring, cooled (4-6 ° C) solutions of Ν, Ν'-dicyclohexylcarbodiimide (23.0 g, 0.11 mol) in 30 ml of Ν, Ν'-dimethylformamide and Ν-hydroxysuccinimide (13.0 g, 0, 11 mol) in 20 ml of Ν, Ν'-dimethylformamide. The reaction mixture was stirred for 12 hours while cooling with ice and then for 1 day at room temperature. The precipitated Ν, Ν'-dicyclohexylurea was filtered off and the resulting activated ether solution was used without isolation in the next step.
2) ВОС-СЩОВ/О-Акр/ОВ/О-ОН, №трет.бутилоксикарбонил-(у-бензил)глутамил-(в-бензил)аспартат (II).2) BOC-SCHCHOV / O-Akr / OV / O-OH, No. tert.butyloxycarbonyl- (y-benzyl) glutamyl- (b-benzyl) aspartate (II).
((в-Бензил)аспарагиновую кислоту Н-Акр(ОВх1)-ОН (28,0 г, 0,12 моль) и 36 мл (0,12 моль) триэтиламина суспендировали в 50 мл Ν,Ν'-диметилформамида и перемешивали в течение 1 ч. Затем добавляли порциями раствор активированного эфира ВОС’-С1и(ОВ/1)-О8и (I), полученный на предыдущей стадии. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 суток. Затем подкисляли 0,5н. серной кислотой до рН 2-3 и экстрагировали этилацетатом 4x50 мл. Вытяжки объединяли и последовательно промывали 0,5н. Н28О4 3x50 мл, водой 2x50 мл, 5% раствором №1НС’О3 2x50 мл, водой 2x50 мл, насыщенным раствором №1С1 2x50 мл. Органический слой сушили над №28О4, упаривали растворитель в вакууме, остаток кристаллизовали под гексаном. Получено 50 г продукта (92%). Я(=0,34 (бензол-ацетон 2:1).((b-Benzyl) aspartic acid H-Acre (OBx1) -OH (28.0 g, 0.12 mol) and 36 ml (0.12 mol) of triethylamine were suspended in 50 ml of Ν, Ν'-dimethylformamide and stirred in within 1 h. Then, a solution of the activated BOC'-C1i (OB / 1) -O8i (I) ester obtained in the previous step was added in portions. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 days. Then it was acidified with 0.5N sulfuric acid to pH 2-3, and extracted with ethyl acetate 4x50 ml. Extractions were combined and washed successively with 0.5N. H 2 8o 4 3x50 ml, water 2x50 ml, 5% solution of 3 №1NS'O 2x50 ml, water 2x50 ml, nasy . ennym №1S1 2x50 ml solution The organic layer was dried over № 2 8o 4, the solvent was evaporated in vacuo, the residue is crystallized under hexane to give 50 g of product (92%) R (= 0.34 (benzene-acetone 2:.. 1).
3) ВОС-СбКОВ/О-Акр/ОВ/О-Веи-ОВхк бензиловый эфир №трет.бутилоксикарбонил-(у-бензил) глутамил-(в-бензил)аспартиллейцина (III).3) BOS-SbKOV / O-Akr / OV / O-Vei-OVhk benzyl ester No. tert.butyloxycarbonyl- (y-benzyl) glutamyl- (b-benzyl) aspartylleucine (III).
Дипептид ВОС-С1и(ОВ/1)-А8р(ОВх1)-ОН (II) (1,20 г, 2,2 ммоль) и Ν-оксибензотриазол (0,4 г, 3 ммоль) растворяли в 5 мл тетрагидрофурана и охлаждали до температуры -10°С. К суспензии То8Н-Беи-ОВ/1 (1,38 г, 3,5 ммоль) в 5 мл тетрагидрофурана добавляли 0,5 мл (3,5 ммоль) триэтиламина и тоже охлаждали. Ν,Ν'-Дициклогексилкарбодиимид (0,62 г, 3,0 ммоль) растворяли в 5 мл тетрагидрофурана и охлаждали. Охлажденные растворы объединяли и в течение 1 суток перемешивали при охлаждении льдом. Выпавшую Ν,Ν-дициклогексилмочевину отфильтровывали, растворитель упаривали в вакууме. Остаток растворяли в 50 мл этилацетата и последовательно промывали 0,5н. Н28О4 2x520 мл, водой 2x20 мл, 5% раствором NаНСОз 2x20 мл, водой 2x20 мл, насыщенным раствором №1С1 2x20 мл. Органический слой сушили над №28О4, упаривали растворитель в вакууме, остаток кристаллизовали под гексаном. Перекристаллизация из изопропилового спирта. Получено 0,97 г продукта (68%). Я(=0,88 (бензол-ацетон 1:1).The BOC-C1i (OB / 1) -A8p (OBx1) -OH (II) dipeptide (1.20 g, 2.2 mmol) and Ν-hydroxybenzotriazole (0.4 g, 3 mmol) were dissolved in 5 ml of tetrahydrofuran and cooled to a temperature of -10 ° C. To a suspension of To8H-Bei-OV / 1 (1.38 g, 3.5 mmol) in 5 ml of tetrahydrofuran was added 0.5 ml (3.5 mmol) of triethylamine and also cooled. Ν, Ν'-Dicyclohexylcarbodiimide (0.62 g, 3.0 mmol) was dissolved in 5 ml of tetrahydrofuran and cooled. The cooled solutions were combined and stirred for 1 day while cooling with ice. The precipitated Ν, Ν-dicyclohexylurea was filtered off, and the solvent was evaporated in vacuo. The residue was dissolved in 50 ml of ethyl acetate and washed successively with 0.5N. H 2 8O 4 2x520 ml, water 2x20 ml, 5% NaHCO3 solution 2x20 ml, water 2x20 ml, saturated solution No. 1C1 2x20 ml. The organic layer was dried over No. 2 8O 4 , the solvent was evaporated in vacuo, and the residue was crystallized under hexane. Recrystallization from isopropyl alcohol. Received 0.97 g of the product (68%). I (= 0.88 (benzene-acetone 1: 1).
4) Н-СЫ-Акр-Ьеи-ОН, глутамил-аспартил-лейцин.4) H-SY-Acre-Ley-OH, glutamyl-aspartyl-leucine.
Защищенный трипептид ВОС-С1и(ОВ/1)-А8р(ОВ/1)-Веи-ОВх1 (III) (0,90 г) растворяли в смеси метиловый спирт-вода (4:1) и гидрировали над катализатором Рб/С (5%) в течение 4 ч. Катализатор отфильтровывали, растворитель упаривали в вакууме, остаток сушили в вакууме над КОН и Р2О5. Далее продукт растворяли в 2 мл смеси хлористый метилен-трифторуксусная кислота (5:1) и выдерживали при комнатной температуре в течение 2 ч. Полноту прохождения реакции деблокирования контролировали по ТСХ в системе ацетонитрил-вода (1:3). Растворитель упаривали в вакууме, остаток сушили в вакууме над КОН.The protected BOC-C1i (OB / 1) -A8p (OB / 1) -Vey-OBx1 (III) tripeptide (0.90 g) was dissolved in methyl alcohol-water (4: 1) and hydrogenated over a Pb / C catalyst ( 5%) for 4 hours. The catalyst was filtered off, the solvent was evaporated in vacuo, and the residue was dried in vacuo over KOH and P 2 O 5 . Next, the product was dissolved in 2 ml of a mixture of methylene chloride-trifluoroacetic acid (5: 1) and kept at room temperature for 2 hours. The completion of the release reaction was monitored by TLC in an acetonitrile-water system (1: 3). The solvent was evaporated in vacuo, the residue was dried in vacuo over KOH.
Для очистки 300 мг препарата растворяли в 4 мл 0,01% трифторуксусной кислоты и подвергали высокоэффективной жидкостной хроматографии на колонке с обращенной фазой 50x250 мм И1а5ОтЬ-130С16Т, 7ткт. Хроматограф Весктап 8ук1ет 6о1б, 126 8о1уеп1 Моби1е, 168 Июбе Аггау Ие1ес1ог Моби1е. Условия хроматографирования: А: 0,1% ТРА; В: МеС№0,1% ТРА; градиент В 0^50% за 100 мин. Объем пробы: 5 мл, детекция: при 215 нм, сканирование: 190-600 нм, скорость потока: 10 мл/мин. Отбирали фракцию 47,0-54,0 мин. Растворитель упаривали в вакууме при температуре не выше 40°С, упаривание многократно (5 раз) повторяли с 10 мл 10% раствора уксусной кислоты. Окончательно остаток растворяли в 20 мл деионизованной воды и лиофилизовывали.For purification, 300 mg of the preparation was dissolved in 4 ml of 0.01% trifluoroacetic acid and subjected to high-performance liquid chromatography on a reverse phase column of 50x250 mm I1a5Ot-130C16T, 7kt. Chromatograph Vesktap 8uk1et 6o1b, 126 8o1uep1 Mobiе, 168 June Aggau Sе1еs1og Mobiе. Chromatography conditions: A: 0.1% TPA; B: MeC # 0.1% TPA; Gradient B 0 ^ 50% in 100 min. Sample volume: 5 ml, detection: at 215 nm, scanning: 190-600 nm, flow rate: 10 ml / min. The fraction 47.0-54.0 min was taken. The solvent was evaporated in vacuo at a temperature not exceeding 40 ° С, evaporation was repeated (5 times) with 10 ml of 10% acetic acid solution. Finally, the residue was dissolved in 20 ml of deionized water and lyophilized.
Получено 196 мг очищенного препарата в виде аморфного белого порошка без запаха.Received 196 mg of a purified preparation in the form of an odorless amorphous white powder.
5) Анализ готового препарата.5) Analysis of the finished product.
Содержание основного вещества определяли методом ВЭЖХ на колонке Рйепотепех С 18 ΒυΝΛ 4,6x150 мм. А: 0,1% ТРА; В: МеСИ; градиент В 0^ 100% за 10 мин. Скорость потока: 1 мл/мин. Детекция при 220 нм, сканирование: 190-600 нм, проба: 20цл. Содержание основного вещества: 98,15%.The content of the main substance was determined by HPLC on a Riepotepech C 18 ΒυΝΛ 4.6 x 150 mm column. A: 0.1% TPA; In: MeCI; Gradient B 0 ^ 100% in 10 min. Flow rate: 1 ml / min. Detection at 220 nm, scanning: 190-600 nm, sample: 20 tsl. The content of the main substance: 98.15%.
- 3 010156- 3 010156
ТСХ: индивидуален, ^,=0.65 (ацетонитрил-вода 1:3, пластинки ПТСХ-П-В-УФ 8огЬй1, силикагель СТХ-1ВЭ 8-12 мкм, проявление хлор/бензидин).TLC: individual,,, = 0.65 (acetonitrile-water 1: 3, PTCX-P-B-UV 8gb1 plates, CTX-1BE silica gel 8-12 μm, manifestation of chlorine / benzidine).
Содержание влаги: 6% (гравиметрически по потере массы при сушке 20 мг при 100°С). рН 0,001% раствора: 4,57 (потенциометрически).Moisture content: 6% (gravimetrically by weight loss during drying 20 mg at 100 ° C). pH 0.001% solution: 4.57 (potentiometric).
Удельное оптическое вращение: |α|υ 22: -30° (с=1, Н2О), Ро1ата1 А, Саг1 Ζοίδδ 1еиа.Specific optical rotation: | α | υ 22 : -30 ° (с = 1, Н 2 О), Ро1ата1 А, Саг1 Ζοίδδ 1ея.
Пример 2. Влияние пептида Н-С1и-А8р-Ьеи-ОН на развитие эксплантатов печени.Example 2. The effect of the peptide H-Cl-A8p-Ley-OH on the development of liver explants.
Эксперименты проведены на 27 фрагментах печени крыс линии \УМаг с массой тела 150-200 г. Питательная среда для культивирования эксплантатов состояла из 35% раствора Игла, 25% фетальной сыворотки теленка, 35% раствора Хенкса, 5% куриного эмбрионального экстракта, в среду добавляли глюкозу (0,6%), инсулин (0,5 ед./мл), пенициллин (100 ед./мл), глютамин (2 мМ). Фрагменты печени помещали в эту среду и культивировали в чашках Петри в термостате при температуре 36,7°С в течение 2 суток. В экспериментальную среду добавляли пептид Н-С1и-А8р-Ьеи-ОН в концентрациях 1,10 и 100 нг/мл. Критерием биологической активности служил индекс площади (ИП) - соотношение площади всего эксплантата вместе с зоной роста к исходящей площади фрагмента печени. Значения ИП выражали в процентах, контрольное значение ИП принималось за 100%.The experiments were carried out on 27 fragments of the liver of rats of the UMag rat with a body weight of 150-200 g. Nutrient medium for explant cultivation consisted of 35% Eagle's solution, 25% fetal calf serum, 35% Hanks' solution, 5% chicken embryonic extract; glucose (0.6%), insulin (0.5 units / ml), penicillin (100 units / ml), glutamine (2 mm). Liver fragments were placed in this medium and cultured in Petri dishes in an incubator at a temperature of 36.7 ° C for 2 days. The peptide Н-С1и-А8р-беи-ОН at concentrations of 1.10 and 100 ng / ml was added to the experimental medium. The criterion for biological activity was the area index (PI) - the ratio of the area of the entire explant along with the growth zone to the outgoing area of the liver fragment. The IP values were expressed as a percentage, the control IP value was taken as 100%.
На фигуре показано влияние пептида Н-С1и-А8р-Ьеи-ОН на развитие эксплантатов печени.The figure shows the effect of the peptide H-C1i-A8p-Ley-OH on the development of liver explants.
Установлено, что через 1 сутки культивирования происходило распластывание эксплантатов на коллагеновой подложке и начиналось выселение пролиферирующих и мигрирующих клеток по периферии эксплантата. На 3 сутки культивирования при концентрации пептида Н-СШ-Акр-Ьеи-ОН 10 нг/мл наблюдалось достоверное повышение ИП эксплантатов на 28% по сравнению с контрольными значениями ИП. При исследовании эксплантатов печени на более длительных сроках культивирования (7 дней) были выявлено аналогичное стимулирующее действие пептида Н-СШ-Акр-Ьеи-ОН в той же концентрации.It was found that after 1 day of cultivation, the explants spread on a collagen substrate and the proliferation of proliferating and migrating cells began on the periphery of the explant. On the 3rd day of cultivation, at a concentration of the peptide Н-СШ-Akr-Ley-ОН 10 ng / ml, a significant increase in the explant PI by 28% was observed compared with the control PI values. When studying liver explants for longer periods of cultivation (7 days), a similar stimulating effect of the peptide H-NW-Acr-Ley-OH in the same concentration was revealed.
Таким образом, в отношении ткани печени пептид Н-СЫ-Акр-Ьеи-ОН оказывает тканеспецифическое действие, проявляющееся в стимуляции роста эксплантатов.Thus, with respect to liver tissue, the peptide Н-СЫ-Akr-Lei-OH has a tissue-specific effect, which manifests itself in stimulating the growth of explants.
Пример 3. Влияние пептида Н-СШ-Акр-Ьеи-ОН на компенсаторную регенерацию печени после частичной гепатэктомии у крыс.Example 3. The effect of the peptide H-SSh-Akr-Ley-OH on compensatory regeneration of the liver after partial hepatectomy in rats.
Исследование проведено на 18 белых беспородных крысах-самцах с массой тела 150-200 г.The study was conducted on 18 white outbred male rats weighing 150-200 g.
Животные были разделены на 3 группы: 1 группа - здоровые животные, 2 группа - контроль (крысы, которым была произведена частичная гепатэктомия с удалением 2/3 печени), 3 группа - прооперированные животные, которым затем вводили подкожно через 2 и 24 ч после операции по 0,1 мкг пептида НС1и-А8р-Ьеи-ОН на крысу в 0,5 мл стерильного 0,9% физиологического раствора ИаС1. В эти же сроки животным 1-й и 2-й групп вводили стерильный физиологический раствор в том же объеме.Animals were divided into 3 groups: group 1 — healthy animals, group 2 — control (rats that underwent partial hepatectomy with removal of 2/3 of the liver), group 3 — operated animals, which were then injected subcutaneously 2 and 24 hours after surgery 0.1 μg of the HC1i-A8p-Ley-OH peptide per rat in 0.5 ml of sterile 0.9% physiological solution of IaCl. At the same time, animals of the 1st and 2nd groups were injected with sterile saline in the same volume.
Прооперированные крысы были умерщвлены эфиром через 32 и 96 ч после операции. В это же время забивали и крыс контрольной группы. Печень крыс фиксировали в формалине. После окраски препаратов гематоксилин-эозином определяли митотический индекс в клетках печени, а также количество полиплоидных клеток, находящихся в 8-фазе клеточного цикла (количество делящихся клеток).The operated rats were sacrificed with ether 32 and 96 hours after surgery. At the same time, the rats of the control group were killed. Rat liver was fixed in formalin. After staining the preparations with hematoxylin-eosin, the mitotic index in the liver cells was determined, as well as the number of polyploid cells in the 8th phase of the cell cycle (the number of dividing cells).
Изучение митотической активности клеток регенерирующей печени через 32 ч после частичной гепатэктомии показало, что число митозов и клеток в 8-фазе клеточного цикла становится в 2 раза больше, чем в печени здоровых животных. Эти отличия недостоверны в случае введения физиологического раствора, тогда как после инъекций пептида Н-СЫ-Акр-Ьеи-ОН увеличение количества митозов, клеток, синтезирующих ДНК, и общей суммы делящихся клеток становится достоверным (табл. 1).A study of the mitotic activity of cells of the regenerating liver 32 hours after partial hepatectomy showed that the number of mitoses and cells in the 8th phase of the cell cycle becomes 2 times greater than in the liver of healthy animals. These differences are unreliable in the case of the introduction of physiological saline, whereas after injections of the peptide НСЫ-Akr-Lei-OH, the increase in the number of mitoses, DNA synthesizing cells, and the total amount of dividing cells becomes significant (Table 1).
При изучении препаратов печени через 96 ч после гепатэктомии оказалось, что и у крыс, получавших физиологический раствор, и у крыс, получавших пептид Н-СШ-Акр-Ьеи-ОН, наблюдается значительное усиление митотической активности гепатоцитов. При сравнении данных подопытной (третьей) и контрольной (второй) групп выяснилось, что у крыс, которым вводили пептид Н-С1ц-А8р-Ьеи-ОН, наблюдается количество митозов, в 2 раза большее, чем у крыс, получавших физиологический раствор. Количество клеток, находящихся в 8-фазе митотического цикла, у крыс подопытной группы не отличалось достоверно от количества гепатоцитов в 8-фазе в контрольной группе, хотя, в целом, количество делящихся клеток через 96 ч после гепатэктомии в регенерирующей печени крыс с введением пептида НС1и-А8р-Ьеи-ОН было на 75% больше, чем у крыс после введения физиологического раствора (табл. 1).When studying liver preparations 96 hours after hepatectomy, it turned out that both rats treated with saline and rats treated with the H-SSh-Akr-Ley-OH peptide showed a significant increase in the mitotic activity of hepatocytes. When comparing the data of the experimental (third) and control (second) groups, it was found that in rats that were injected with the peptide H-Cl-A8p-Ley-OH, the number of mitoses was observed, 2 times greater than in rats treated with saline. The number of cells in the 8-phase of the mitotic cycle in rats of the experimental group did not differ significantly from the number of hepatocytes in the 8-phase in the control group, although, in general, the number of dividing cells 96 hours after hepatectomy in the rat regenerating liver with the introduction of the HC1 peptide -A8p-Ley-OH was 75% more than in rats after administration of physiological saline (Table 1).
Таким образом, установлено, что при введении крысам пептида Н-СШ-Акр-Ьеи-ОН через 96 ч после частичной гепатэктомии наблюдается усиление митотической активности гепатоцитов, свидетельствующее об ускорении репаративных процессов в печени.Thus, it was found that when rats were injected with the peptide H-SSh-Akr-Ley-OH, 96 hours after partial hepatectomy, an increase in the mitotic activity of hepatocytes was observed, indicating an acceleration of reparative processes in the liver.
Пример 4. Эффективность применения пептида Н-СЫ-Акр-Ьеи-ОН у крыс с экспериментальным циррозом печени.Example 4. The effectiveness of the use of the peptide HCH-Acr-Ley-OH in rats with experimental cirrhosis.
В работе использовали 45 белых беспородных крыс-самцов, масса которых в начале опыта составляла 120-180 г. Животных подвергали ингаляционному воздействию четыреххлористого углерода (СС14) в течение 6 месяцев. Половине животных вводили внутримышечно пептид Н-СШ-Акр-Ьеи-ОН по 0,5 мкг на крысу в 0,5 мл стерильного физиологического 0,9% раствора №С1 ежемесячно курсами по 5 последовательных дней. Животные контрольной группы получали инъекции стерильного физиологического раствора по аналогичной схеме.We used 45 white outbred male rats, the mass of which at the beginning of the experiment was 120-180 g. The animals were inhaled with carbon tetrachloride (CC14) for 6 months. Half of the animals were injected intramuscularly with the peptide H-SSh-Akr-Ley-OH at 0.5 μg per rat in 0.5 ml of sterile physiological 0.9% solution No. C1 monthly with courses of 5 consecutive days. Animals of the control group received injections of sterile saline according to a similar scheme.
Состояние печени у животных оценивали по данным биохимического анализа, определяя концентраThe liver condition in animals was evaluated according to biochemical analysis, determining the concentration
- 4 010156 цию белка, билирубина, холестерина, аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ).- 010156 tion of protein, bilirubin, cholesterol, alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST).
Содержание суммарного гликогена в гепатоцитах определяли цитофлуориметрически в препаратахмазках после проведения флуоресцентной РА8-реакции.The content of total glycogen in hepatocytes was determined cytofluorimetrically in smear preparations after conducting a fluorescent PA8 reaction.
Содержание гликогена является одним из важнейших индикаторов функциональной активности гепатоцитов. Известно, что цирроз печени характеризуется существенными нарушениями гликогенообразовательной функции гепатоцитов.Glycogen content is one of the most important indicators of the functional activity of hepatocytes. It is known that cirrhosis of the liver is characterized by significant violations of the glycogen-forming function of hepatocytes.
В результате проведенных исследований было установлено, что у животных после воздействия СС14 развивались выраженные нарушения в печени. Наблюдалось уменьшение содержания общего белка, уровня билирубина и холестерина. Резко возрастала активность аминотрансфераз (табл. 2).As a result of the studies, it was found that animals after exposure to CC1 4 developed severe disorders in the liver. A decrease in total protein, bilirubin and cholesterol levels was observed. The activity of aminotransferases sharply increased (Table 2).
При одновременном введении СС14 и пептида Н-ОШ-Акр-Ьеи-ОН биохимические показатели восстанавливались до нормальных значений и свидетельствовали о менее выраженной деструкции печени, чем у животных контрольной группы (табл. 2).With the simultaneous administration of CC1 4 and the peptide H-OSh-Akr-Lei-OH, biochemical parameters were restored to normal values and indicated less pronounced liver destruction than in animals of the control group (Table 2).
Приведенные данные свидетельствуют о том, что пептид Н-С1и-А8р-Ьеи-ОН ограничивает развитие патологического процесса в печени. Он уменьшает ферментемию, ограничивает признаки гепатоцеллюлярной недостаточности и тромбогеморрагического синдрома, увеличивая очаги регенерации в печени.The data presented indicate that the peptide H-C1i-A8p-Ley-OH limits the development of the pathological process in the liver. It reduces fermentemia, limits the signs of hepatocellular insufficiency and thrombohemorrhagic syndrome, increasing foci of regeneration in the liver.
На фоне воздействия гепатотропным ядом содержание суммарного гликогена в гепатоцитах увеличивается, в среднем, в 2,5 раза (табл. 3).Against the background of exposure to hepatotropic poison, the content of total glycogen in hepatocytes increases, on average, 2.5 times (Table 3).
Установлено, что после применения пептида Н-О1и-А8р-Ьеи-ОН повышенное содержание гликогена снижается практически до нормы.It has been established that after the use of the peptide H-O1i-A8p-Ley-OH, the increased glycogen content decreases almost to the norm.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о положительном действии пептида Н-О1иАкр-Ьеи-ОН на гликогенообразовательную функцию гепатоцитов цирротически измененной печени, а также о восстановлении метаболической состоятельности ткани печени.Thus, the data obtained indicate a positive effect of the peptide H-O1 and Acr-Ley-OH on the glycogen-forming function of hepatocytes of a cirrhotically altered liver, as well as the restoration of the metabolic viability of liver tissue.
Пример 5. Изучение токсичности пептида Н-О1и-А8р-Ьеи-ОН.Example 5. The study of the toxicity of the peptide H-O1i-A8p-Ley-OH.
Общетоксическое действие пептида Н-О1и-А8р-Ьеи-ОН исследовали в соответствии с требованиями Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (2000): острой токсичности при однократном введении препарата, а также подострой и хронической токсичности при длительном введении пептида.The general toxic effect of the peptide H-O1i-A8p-Ley-OH was studied in accordance with the requirements of the Guidelines for the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances (2000): acute toxicity with a single administration of the drug, as well as subacute and chronic toxicity with prolonged administration of the peptide.
Исследование по изучению острой токсичности проведено на 66 белых беспородных мышах-самцах с массой тела 20-22 г. Животные были рандомизированно разделены на 6 равных групп. Препарат вводили животным однократно внутримышечно в дозах 1, 2, 3, 4, 5 мг/кг в 0,25 мл стерильного 0,9% раствора ИаС1. Животным контрольной группы в том же объеме вводили 0,9% раствор №1С1.A study of acute toxicity was conducted on 66 white outbred male mice weighing 20-22 g. Animals were randomly divided into 6 equal groups. The drug was administered to animals once intramuscularly at doses of 1, 2, 3, 4, 5 mg / kg in 0.25 ml of a sterile 0.9% solution of IAl. Animals of the control group were injected with the same volume of 0.9% solution No. 1C1.
Исследования по изучению подострой токсичности проведено на 55 белых беспородных крысахсамцах с массой тела 140-180 г. Ежедневно однократно животным подопытных групп вводили препарат внутримышечно в течение 90 дней в дозах 1 мкг/кг, 0,1, 1 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9% раствора ИаС1. Животным контрольной группы вводили в том же объеме стерильный 0,9% раствор ИаС1. До введения препарата на 30, 60 и 90 сутки после начала введения препарата у животных исследовали морфологический состав и свойства периферической крови. При завершении эксперимента исследовали биохимические и коагулологические показатели крови.Studies on the study of subacute toxicity were carried out on 55 white mongrel rats with a body weight of 140-180 g. Daily, once a day, animals of the experimental groups were injected intramuscularly with doses of 1 μg / kg, 0.1, 1 mg / kg in 0.5 ml of sterile 0.9% solution of IAl. The animals of the control group were injected in the same volume with a sterile 0.9% solution of IAl. Before administration of the drug on the 30, 60 and 90 days after the start of drug administration, the morphological composition and properties of peripheral blood were studied in animals. At the end of the experiment, biochemical and coagulological blood parameters were examined.
Исследования по изучению хронической токсичности проводили в течение 6 месяцев, исходя из длительности рекомендуемого клинического назначения препарата, на 88 морских свинках-самцах с массой тела 260-300 г. Животные подопытных групп получали ежедневно однократно внутримышечно пептид в течение 6 месяцев в дозах 1 мкг/кг, 0,1, 1 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9% раствора ИаС1. В контрольной группе животным вводили по аналогичной схеме стерильный 0,9% раствор №С1 в том же объеме. У животных в периферической крови общепринятыми методами определяли количество эритроцитов, гемоглобина, ретикулоцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), резистентность эритроцитов. Наряду с этим определяли содержание в сыворотке крови общего белка по методу Лоури, калия и натрия методом плазменной спектрофотометрии. После завершения эксперимента проводили патоморфологическое исследование головного и спинного мозга, спинно-мозговых ганглиев, щитовидной железы, паращитовидных желез, надпочечников, семенников, гипофиза, сердца, легких, аорты, печени, почки, мочевого пузыря, поджелудочной железы, желудка, тонкой кишки, толстой кишки, тимуса, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга.Studies of chronic toxicity were carried out for 6 months, based on the duration of the recommended clinical purpose of the drug, in 88 male guinea pigs weighing 260-300 g. Animals of the experimental groups received a daily intramuscularly peptide for 6 months in doses of 1 μg / kg, 0.1, 1 mg / kg in 0.5 ml of a sterile 0.9% solution of IaS1. In the control group, animals were injected according to a similar scheme to a sterile 0.9% solution No. C1 in the same volume. In animals, the number of erythrocytes, hemoglobin, reticulocytes, platelets, leukocytes, leukocyte formula, erythrocyte sedimentation rate (ESR), and erythrocyte resistance were determined by the generally accepted methods in peripheral blood. Along with this, the content of total protein in blood serum was determined by the method of Lowry, potassium and sodium by plasma spectrophotometry. After the experiment, a pathomorphological study of the brain and spinal cord, spinal ganglia, thyroid gland, parathyroid glands, adrenal glands, testes, pituitary gland, heart, lungs, aorta, liver, kidney, bladder, pancreas, stomach, small intestine, colon intestines, thymus, spleen, lymph nodes, bone marrow.
При изучении острой токсичности установлено, что однократное введение исследуемого пептида животным в дозе, превышающей терапевтическую, рекомендованную для клинического применения, более чем в 5000 раз, не вызывает токсических реакций, что свидетельствует о большой терапевтической широте препарата.When studying acute toxicity, it was found that a single administration of the studied peptide to animals at a dose exceeding the therapeutic recommended for clinical use by more than 5000 times does not cause toxic reactions, which indicates a large therapeutic breadth of the drug.
Изучение подострой и хронической токсичности пептида свидетельствует об отсутствии побочных эффектов при длительном применении препарата в дозах, превышающих терапевтическую в 100-1000 раз. При исследовании влияния пептида на морфологический состав крови морских свинок не установлено достоверного изменения морфологических и биохимических показателей периферической крови морских свинок (табл. 4).The study of subacute and chronic toxicity of the peptide indicates the absence of side effects with prolonged use of the drug in doses exceeding the therapeutic by 100-1000 times. When studying the effect of the peptide on the morphological composition of the blood of guinea pigs, there was no significant change in the morphological and biochemical parameters of the peripheral blood of guinea pigs (Table 4).
При оценке общего состояния животных, морфологических и биохимических показателей периферической крови, морфологического состояния внутренних органов, состояния сердечно-сосудистой иWhen assessing the general condition of animals, morphological and biochemical parameters of peripheral blood, the morphological state of internal organs, the state of cardiovascular and
- 5 010156 дыхательной систем, функции печени и почек патологические изменения в организме не обнаружены. Отсутствие общетоксического действия позволяет рекомендовать фармацевтическую композицию, содержащую в качестве активного начала пептид Н-СШ-Акр-Ьеи-ОН, для проведения клинических испытаний. Пример 6. Эффективность применения пептида Н-О1и-Л8р-Ьеи-ОН у больных хроническим гепатитом. Исследование проведено на 34 больных хроническим гепатитом в возрасте от 30 до 56 лет, которых разделили на 2 группы методом рандомизации.- 5 010156 respiratory systems, liver and kidney function, pathological changes in the body were not detected. The absence of a general toxic effect makes it possible to recommend a pharmaceutical composition containing the peptide H-NW-Acr-bie-OH as an active principle for conducting clinical trials. Example 6. The effectiveness of the use of the peptide H-O1i-L8p-Ley-OH in patients with chronic hepatitis. The study was conducted on 34 patients with chronic hepatitis aged 30 to 56 years, who were divided into 2 groups by randomization.
больным основной группы вводили фармацевтическую композицию, содержащую в качестве активного начала пептид Н-О1и-Л8р-Ьеи-ОН, в дозе 10 мкг в 1,0 мл стерильного 0,9% физиологического раствора внутримышечно однократно ежедневно в течение 10 дней. Контрольная группа состояла из 15 аналогичных больных, которым назначалось общепринятое лечение.patients of the main group were injected with a pharmaceutical composition containing the peptide H-O1i-L8p-Ley-OH at a dose of 10 μg in 1.0 ml of a sterile 0.9% saline solution intramuscularly once daily for 10 days. The control group consisted of 15 similar patients who were prescribed conventional treatment.
В динамике оценивали жалобы больных и биохимические показатели крови.Patients' complaints and biochemical blood parameters were evaluated in dynamics.
На фоне проводимого лечения 89% больных основной группы отмечали исчезновение слабости, повышение аппетита и работоспособности, у 53% больных значительно снизилась интенсивность болевого синдрома.Against the background of the treatment, 89% of patients of the main group noted the disappearance of weakness, increased appetite and performance, in 53% of patients the intensity of the pain syndrome significantly decreased.
При проведении обследования больных наиболее значительное внимание уделялось оценке результатов биохимических исследований, характеризующих аминотрансферазную активность, пигментную и белковообразовательную функции печени.When examining patients, the most significant attention was paid to assessing the results of biochemical studies characterizing aminotransferase activity, pigment and protein-forming functions of the liver.
У 81% обследованных больных отмечались гипербилирубинемия и повышение уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ), что свидетельствует об определенной активности хронического воспалительного процесса.81% of the examined patients had hyperbilirubinemia and an increase in the level of alanine aminotransferase (ALT), which indicates a certain activity of the chronic inflammatory process.
Применение фармацевтической композиции, содержащей пептид Н-СШ-Акр-Ьеи-ОН, способствовало нормализации уровня билирубина и активности АЛТ (табл. 5), что свидетельствует о нормализации метаболических процессов в печени, снижении активности воспалительного процесса и восстановлении синтеза тканеспецифических белков клетками печени.The use of a pharmaceutical composition containing the peptide Н-СШ-Akr-Lei-OH contributed to the normalization of the level of bilirubin and ALT activity (Table 5), which indicates the normalization of metabolic processes in the liver, a decrease in the activity of the inflammatory process, and restoration of the synthesis of tissue-specific proteins by liver cells.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о свойстве фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного начала пептид Н-ОШ-Акр-Ьеи-ОН, стимулировать регенерацию ткани печени. Кроме того, результаты исследований подтверждают целесообразность применения фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного начала пептид Н-ОШ-Акр-Ьеи-ОН, в комплексном лечении хронического гепатита в фазе обострения и ремиссии.Thus, the results obtained indicate the property of a pharmaceutical composition containing the peptide H-OSh-Acr-Ley-OH as an active principle, to stimulate the regeneration of liver tissue. In addition, the research results confirm the feasibility of using a pharmaceutical composition containing H-OSH-Acr-Ley-OH peptide as an active principle in the complex treatment of chronic hepatitis in the phase of exacerbation and remission.
Таблица 1Table 1
* Р<0,001 по сравнению с показателями до операции;* P <0.001 compared with indicators before surgery;
** Р<0,05 по сравнению с показателями до операции;** P <0.05 compared with indicators before surgery;
& Р<0,001 по сравнению с показателями у животных контрольной группы;& P <0.001 compared with the animals in the control group;
# Р<0,05 по сравнению с показателями у животных контрольной группы.# P <0.05 compared with indicators in animals of the control group.
- 6 010156- 6 010156
Таблица 2table 2
* Р<0,05 по сравнению с показателем у здоровых животных;* P <0.05 compared with that in healthy animals;
** Р<0,05 по сравнению с показателем в соответствующей контрольной группе.** P <0.05 compared with the indicator in the corresponding control group.
Таблица 3Table 3
* Р<0,05 по сравнению с показателем у здоровых животных;* P <0.05 compared with that in healthy animals;
** Р<0,05 по сравнению с показателем у животных контрольной группы.** P <0.05 compared with the indicator in animals of the control group.
Таблица 4Table 4
- 7 010156- 7 010156
Таблица 5Table 5
* Р<0,05 по сравнению с показателем до лечения;* P <0.05 compared with the indicator before treatment;
# Р<0,05 по сравнению с показателями после лечения общепринятыми средствами.# P <0.05 compared with indicators after treatment with conventional means.
Перечень последовательностей <110> Общество с ограниченной ответственностью СИД пептайдс” <120> пептид, стимулирующий регенерацию ткани печени, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения <13 0> 5ΙΑ/04/2006 <160> 1 <170> РатепПп уегззоп 3.3 <210> 1 <211> 3 <212> РКТ <213> Аг11Яс1а1 <22О>The list of sequences <110> Limited liability company LED peptides ”<120> peptide that stimulates the regeneration of liver tissue, a pharmaceutical composition based on it and the method of its use <13 0> 5ΙΑ / 04/2006 <160> 1 <170> Ratepp PPG 3.3 <210> 1 <211> 3 <212> RCT <213> Ar11Nac1a1 <22O>
<223> Пептидное соединение н-с!и-А5р-кеи-он, стимулирующее регенерацию ткани печени за счет восстановления синтеза тканеспецифических белков и нормализации функций клеток печени.<223> The peptide compound nc! And -A5p-kei-on, which stimulates the regeneration of liver tissue by restoring the synthesis of tissue-specific proteins and normalizing the functions of liver cells.
<400> 1 и Азр ьей<400> 1 and Azr
Claims (6)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006118491/15A RU2297239C1 (en) | 2006-05-30 | 2006-05-30 | Peptide stimulating regeneration of liver tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200601581A1 EA200601581A1 (en) | 2007-12-28 |
| EA010156B1 true EA010156B1 (en) | 2008-06-30 |
Family
ID=38036774
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200601581A EA010156B1 (en) | 2006-05-30 | 2006-09-27 | Peptide stimulating regeneration of lever tissue, pharmaceutical composition based thereon and use thereof |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA010156B1 (en) |
| RU (1) | RU2297239C1 (en) |
| WO (1) | WO2007139430A1 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2643591C1 (en) * | 2017-03-30 | 2018-02-02 | Александр Иванович Леляк | Means for stimulation of liver tissue regeneration at parenteral administration and method for stimulation of liver tissue regeneration based thereon |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2010799C1 (en) * | 1988-09-13 | 1994-04-15 | Нюкомед Биорег АС | Derivatives of pentapeptides |
| RU2065445C1 (en) * | 1994-06-23 | 1996-08-20 | Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН | Peptides showing regenerative-reparative action |
| JPH111499A (en) * | 1998-07-09 | 1999-01-06 | Mitsubishi Chem Corp | Hepatocyte growth factor |
| RU2166957C1 (en) * | 2000-10-09 | 2001-05-20 | Санкт-Петербургская Общественная Организация "Санкт-Петербургский Институт Биорегуляции И Геронтологии Сзо Рамн" | Tetrapeptide stimulating functional activity of hepatocytes, pharmacological agent based on thereof and method of its use |
| RU2214269C1 (en) * | 2002-03-07 | 2003-10-20 | Курский государственный медицинский университет | Method for stimulation of physiological and reparative regeneration of liver |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4224509C2 (en) * | 1992-07-24 | 1995-04-20 | Ruhenstroth Bauer Gerhard Prof | Active ingredient for inhibiting the proliferation rate of liver cells |
| US5872210A (en) * | 1995-10-05 | 1999-02-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Transframe peptide inhibitor of viral protease |
| US6242190B1 (en) * | 1999-12-01 | 2001-06-05 | John Hopkins University | Method for high throughput thermodynamic screening of ligands |
| RU2205658C1 (en) * | 2002-02-11 | 2003-06-10 | Смахтин Михаил Юрьевич | Method of correction of biochemical and immunological disturbances at condition of experimental acute toxic hepatopathy accompanying with enhancement of immunological reactivity |
-
2006
- 2006-05-30 RU RU2006118491/15A patent/RU2297239C1/en active
- 2006-09-27 EA EA200601581A patent/EA010156B1/en not_active IP Right Cessation
- 2006-12-04 WO PCT/RU2006/000651 patent/WO2007139430A1/en active Application Filing
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2010799C1 (en) * | 1988-09-13 | 1994-04-15 | Нюкомед Биорег АС | Derivatives of pentapeptides |
| RU2065445C1 (en) * | 1994-06-23 | 1996-08-20 | Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН | Peptides showing regenerative-reparative action |
| JPH111499A (en) * | 1998-07-09 | 1999-01-06 | Mitsubishi Chem Corp | Hepatocyte growth factor |
| RU2166957C1 (en) * | 2000-10-09 | 2001-05-20 | Санкт-Петербургская Общественная Организация "Санкт-Петербургский Институт Биорегуляции И Геронтологии Сзо Рамн" | Tetrapeptide stimulating functional activity of hepatocytes, pharmacological agent based on thereof and method of its use |
| RU2214269C1 (en) * | 2002-03-07 | 2003-10-20 | Курский государственный медицинский университет | Method for stimulation of physiological and reparative regeneration of liver |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2297239C1 (en) | 2007-04-20 |
| EA200601581A1 (en) | 2007-12-28 |
| WO2007139430A1 (en) | 2007-12-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2295970C1 (en) | Peptide enhancing resistance of capillaries, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using | |
| RU2304444C1 (en) | Peptide possessing stress-protecting effect, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using | |
| RU2301074C1 (en) | Peptide possessing immunogeroprotective effect, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using | |
| RU2299741C1 (en) | Peptide normalizing metabolism in osseous and cartilage tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using | |
| US7101854B2 (en) | Tetrapeptide stimulating the functional activity of hepatocytes, pharmacological substance on its basis and the method of its application | |
| RU2297239C1 (en) | Peptide stimulating regeneration of liver tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using | |
| RU2363488C1 (en) | Pharmaceutical composition based on peptide regulating disturbances of angiogenesis, and way of its application | |
| CN110590921A (en) | A kind of human Kv1.3 type potassium ion channel activity inhibiting peptide, its preparation method and application | |
| RU2317097C2 (en) | Plant-originated heterocarpine protein having anti-cancer properties | |
| RU2301071C1 (en) | Hepatoprotective agent and method for production thereof | |
| EA010735B1 (en) | Medicament normalising reproductive male function and method for preparing thereof | |
| CN116768982B (en) | A polypeptide and its application in preparing medicine for preventing and treating tumors | |
| US5589461A (en) | Active substance for inhibiting the proliferation rate of hepatocytes | |
| EP2764009B1 (en) | Peptides for use in the treatment of il-1 related diseases and conditions | |
| RU2302875C1 (en) | Agent normalizing pancreas function and method for its preparing | |
| RU2302872C9 (en) | Agent normalizing cartilage tissue function and method for its preparing | |
| RU2301072C1 (en) | Agent for normalizing of blood-vessel function and method for production thereof | |
| EA010736B1 (en) | Medicament normalizing female reproductive function, and method for preparing thereof | |
| EA010739B1 (en) | Medicament normalizing drain functions and method for preparing thereof | |
| CN101077414A (en) | Medicine new use for liver hydrolysis-peptide | |
| EA010737B1 (en) | Medicament having heteroprotective activity and method for preparing thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC4A | Registration of transfer of a eurasian patent by assignment | ||
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): KG TM |
|
| PC4A | Registration of transfer of a eurasian patent by assignment |