DK175008B1 - Fremgangsmåde og udstyr til bestemmelse af et viralt antigen i en væske - Google Patents
Fremgangsmåde og udstyr til bestemmelse af et viralt antigen i en væske Download PDFInfo
- Publication number
- DK175008B1 DK175008B1 DK198905759A DK575989A DK175008B1 DK 175008 B1 DK175008 B1 DK 175008B1 DK 198905759 A DK198905759 A DK 198905759A DK 575989 A DK575989 A DK 575989A DK 175008 B1 DK175008 B1 DK 175008B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- enzyme
- membrane
- antigen
- substrate
- liquid
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 46
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 46
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 46
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims description 16
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 48
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 43
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 28
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 26
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 17
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 6
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 5
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 5
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 4
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 9
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 7
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 abstract description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 7
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 5
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 3
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 2
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 2
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 2
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 2
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 2
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 2
- 229920002494 Zein Polymers 0.000 description 2
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 2
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000005019 zein Substances 0.000 description 2
- 229940093612 zein Drugs 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SFRWMZNGJPNGEZ-UHFFFAOYSA-N (2-amino-2-methylpropyl) acetate Chemical compound CC(=O)OCC(C)(C)N SFRWMZNGJPNGEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DMBLCROMMOZRCN-UHFFFAOYSA-N (2-nitrophenyl) butanoate Chemical compound CCCC(=O)OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O DMBLCROMMOZRCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JTNGEYANGCBZLK-UHFFFAOYSA-N 1h-indol-3-yl dihydrogen phosphate Chemical compound C1=CC=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 JTNGEYANGCBZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWGFSQJQIHRAAE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol tetrahydrochloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.Cl.OCC(N)(CO)CO CWGFSQJQIHRAAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 108010051152 Carboxylesterase Proteins 0.000 description 1
- 102000013392 Carboxylesterase Human genes 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 101710095468 Cyclase Proteins 0.000 description 1
- YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N Fluorine atom Chemical compound [F] YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical group C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004308 acetylcysteine Drugs 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000005422 blasting Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- -1 ethyl ethyl thiocholine Chemical compound 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- JBOPQACSHPPKEP-UHFFFAOYSA-N indoxyl acetate Natural products C1=CC=C2C(OC(=O)C)=CNC2=C1 JBOPQACSHPPKEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 208000037799 influenza C Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000002964 rayon Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N tris acetate Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/581—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with enzyme label (including co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or substrates)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Analysing Materials By The Use Of Radiation (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
DK 175008 B1
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til bestemmelse af et vbalt antigen i en væske, samt til udstyr af materialer til udførelse af en bestemmelse af et viralt antigen.
^ Der er blevet udviklet mange forskellige målingssystemer, der er både hurtige og følsomme til at påvise eller bestemme koncentrationen af en ligand i en væske. Sædvanlige immunbestemmelser er afhængige af bindingen af liganden til en specifik antiligand og har været særligt nyttige, fordi de giver høje grader af specificitet og følsomhed. Disse bestemmelser an- jq vender i almindelighed et af de ovennævnte reagenser i mærket form, idet det mærkede reagens ofte omtales som sporstoffet.
Forskellige midler til mærkning er blevet udviklet. Radioimmun-bestemmelsesmetoder (RIA) anvender radioisotoper som mærker, giver høje grader af følsomhed og reproducerbarhed og egner sig til automatisering til hurtig behandling af et stort antal prøver. Fluorimmunbestemmelse (FIA) anvender fluorchromer som mærker og giver direkte påvisning af mærket ved at anslå farvestoffet med stimulerende stråling af passende bølgelængde og påvisning af fluorescens deraf.
2Q Enzymer har også været anvendt som mærker ved immunbestemmelse. Ved enzymimmunbestemmelse (EIA) er de enzymmærkede reagenser billige at fremstille og er meget stabile og giver således en lang holdbarhed og giver alligevel bestemmelser, der nærmer sig følsomheden af radioimmunbestemmelse, og som giver objektive resultater, der kan bestemmes enten visuelt eller med ret simpelt udstyr, såsom et spektrofotometer.
Ved sædvanlig EIA konjugeres et enzym covalent med den ene komponent af et specifikt bindende antigen-antistof par, og det fremkomne enzymkonjugat bringes til at reagere med et substrat til frembringelse af en farve, som måles. Ofte bliver en ukonjugeret komponent, såsom et antistof, immobiliseret på 2 DK 175008 B1 en fast bærer og tjener til indfangning af antigen i en specifik bindingsreaktion. Repræsentativt for en sådan sædvanlig EIA er US-patent nr. 3.654,090.
US-patent nr. 4.588.680 beskriver bestemmelse af M-protein i 5 forskellige vira, herunder Influenza A-, B- og C-vira. Bestemmelsen indbefatter sprængning af virusen for at frigøre M-proteinet, der absorberes direkte på en polymer bærer.
PCT-offentiiggjort ansøgning WO 86/02733 beskriver bestemmelse af Herpes simplex-virus (HSV), ved hvilken antigene glycoprote-10 iner gA/B, gC og gD absorberes direkte på en polymer bærer eller indfanges af specifikke monoklonale antistoffer på bæreren.
Sankolli m.fl. beskriver i Journal of Immunological Methods 104, 191 (1987) en immunbestemmelse for østradiol, ved hvilken en 15 fast bærer forbehandles med et specifikt anti-IgG-antistof.
Dette antistof indfanger specifikt anti-østradiol-antistof, som på sin side indfanger østradiol og giver en bestemmelse med forbedret reproducerbarhed.
US-patent nr. 4.497.899 beskriver en bestemmelse af Chlamydia-20 antigen, ved hvilken antigenet absorberes direkte på en fast bærer såsom en perle, et glas, en strimmel, en skive eller en mikrotiterplade. Det absorberede antigen bestemmes så ved enhver af de sædvanlige EIA-, RIA- eller FIA-teknikker.
Ved fastfase-immunbestemmelse, især af molekyler med høj molekyl-25 vægt, er der ofte en tendens til, at materialer i prøven, der skal bestemmes, fastgør sig på uspecifik måde til den faste bæ rer. En særlig årsag til tab af målingsfølsomhed eller ir-reproducerbarhed er uspecifik absorption af mærket antiligand-konjugat (sporstof) direkte på bindingssteder på den faste bæ-30 rer, som ikke er fyldt med antiligand. Dette problem er traditionelt blevet søgt løst ved at blokere ikke-optagne bindingssteder efter påføring af antiligand med et protein, som ikke 3 DK 175008 B1 •reagerer med det mærkede konjugat. US-patent nr. 4.407.943 beskriver belægning af en porøs membran med et vanduopløseligt protein, såsom et zein, fastgørelse af et antigen eller antistof til zeinlaget og immobilisering af et immunokemisk neutralt protein på antigenet for at forhindre uspecifik binding af fremmed protein.
Denne traditionelle efterblokering har forbedret målings føl soning hed, men påføring i rækkefølge af antiligand og blokerende protein på en fast fase før binding af ligand er besværlig, tidsrøvende og giver tab af kostbar antiligand. Følgelig er der et behov for yderligere forbedring i fastfase-immunbestem-melsesteknologi, især med hensyn til at undgå uspecifik binding.
15 Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til bestemmelse af et viralt antigen i en væske, som er ejendommeligt ved a) en forening af en første væske, der mistænkes for at indeholde et viral antigen, med en membran belagt med et indifferent protein og et sporstof indeholdende et en- 20 zym, hvorved det virale antigen bindes til den belagte membran og bindes til sporstoffet til dannelse af en bundet fraktion indeholdende enzymet på membranen.
b) adskillelse af membranen fra den første væske ved at bringe den første væske til at passere gennem membranen, 25 c) passage af en anden væske indeholdende et substrat for enzymet gennem membranen, hvilket substrat omdannes af enzymet på membranen til et farvet produkt, og 30 d) påvisning af det virale antigen ved hjælp af et signal, der står i forbindelse med farven af produktet.
4 DK 175008 B1 I den foreliggende beskrivelse betyder udtrykket "indifferent protein" et protein, som er immunologisk ureaktionsdygtigt over for nogen anden komponent i bestemmelsen, med den forståelse, at det indifferente protein godt kan være immunologisk reaktions-5 dygtigt over for andre materialer, som ikke er en del af bestemmelsen ifølge opfindelsen.
En anden side af opfindelsen er et udstyr af materialer, der er nyttige til udførelse af en bestemmelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
10
Opfindelsen angiver således en bestemmelse for et viralt antigen, ved hvilken i hovedsagen alle bindingssteder på en membran er fyldt med et indifferent protein. Antigenindfangning på membranen indeholdende indifferent protein opnås uden et specifikt indfangnings-antistof og undgår derved det tidsrøvende 15 og arbejdskrævende trin at fremstille specifikt indfangnings-; antistof. Det indifferente protein hæmmer i hovedsagen al uspecifik binding af andet protein, herunder sporstof, som ellers ville reducere bestemmelsens følsomhed. Da det indifferente protein er let tilgængeligt og billigt, angiver opfindelsen en forenklet bestemmelse med betydelige besparelser.
20
Opfindelsen er nærmere anskueliggjort på tegningen, hvor figur 1-3 illustrerer resultaterne af bestemmelser udført ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen for henholdsvis RSV, influenza A og HSV.
5 DK 175008 B1
Det virale angiven kan være fra enhver kilde og kan være et viralt antigen, der findes i en legemsvæske, eller den kan være isoleret af en legemsvæske og derefter indført i en anden væske, såsom en stødpude. I andre tilfælde kan det virale antigen være fra en anden kilde end legemsvæske, såsom f.eks. en kultur af mikroorganismer eller en celle-5 ekstrakt deraf. Foretrukne er virale antigener, der findes i en legemsvæske såsom Adenovirus, Parainfluenza 3-virus og, mest foretrukket, Herpes simplex-virus, HSV, respiratorisk syncytial virus, RSV, og Influenza A, Flu A. Opfindelsen beskrives i det følgende generisk ved hjælp af viralt antigen.
10 Hvad angår en detaljeret beskrivelse af bestemmelseskomponenteme, kan membraner være af nylon eller nitrocellulose. En særligt foretrukken membran er en modificeret nylonmembran, der fås i handelen fra Pali Corp., Glen Cove, New York, under handelsnavnene Immunodyne® og Biodyne® A, B og C.
15
Ethvert indifferent protein kan belægges på membranen, der ikke generer den påfølgende bindingsreaktion mellem antigen og sporstof, og som ikke væsentligt bindes uspecifikt til an-2Q dre proteiner i bestemmelsesmediet. Repræsentative, ikke-begrænsende eksempler på egnede indifferente proteiner er casein og albumin, men andre vil være indlysende for fagfolk. Belægning af det indifferente protein på membranen kan udføres ved enhver egnet metode, fortrinsvis ved inkubering af membranen med en opløsning af proteinet, hvorved proteinet absorbe-25 res fysisk i den polymere grundmasse i membranens overflade.
6 DK 175008 B1
Membranen, der har en belægning af indifferent protein, udsættes for en prøve, der mistænkes for at indeholde det vi-rale antigen. Fortrinsvis inkuberes den belagte membran med ^ prøven i et forbigående gennemstrømningsformat i ca. 1-15, fortrinsvis ca. 5 minutter ved en temperatur på ca. 0 - 50°C, fortrinsvis ca. omgivelsernes temperatur. Ved denne fremgangsmåde absorberes antigen i prøven på den belagte membran i forhold til dens koncentration i prøven. Desuden har det vist sig, at viralt antigen absorberes med fortrin, selv når IQ prøven indeholder et stort overskud af fremmed protein, som tilfældet er, når prøven er en legemsvæske.
Sporstoffet omfatter et antistof, der er specifikt for antigenet, og som har et enzym konjugeret dertil. Der kan anvendes ethvert enzym, som kan konjugeres til antistoffet, og 15 for hvilket der eksisterer et substrat, som kan omdannes til et farvet produkt. Egnede enzymer er f.eks. cyklaser, isomeraser og peroxidaser. En foretrukken peroxidase er peberrodsperoxidase. Foretrukne enzymer er hydrolaser såsom peptidaser, esteraser, phosphataser og glycosidaser. De mest foretrukne sporstoffer indbefatter alkalisk phosphatase eller carboxyesterase konjugeret til antistoffet. Konjugation af enzymer til 20 antistoffer er velkendt og fuldt forstået af fagfolk.
Alternativt kan enzymet være indkapslet i en liposom. Indkapsling af enzymer i lipo-somer og konjugation af liposomer til antistoffer til brug som sporstoffer ved immunbestemmelser er ligeledes helt traditionelt.
25
Valget af substrat afhænger naturligvis af enzymkomponenten i sporstoffet, og mange forskellige substrater er velkendt for hver klasse enzymer.
Foretrukne substrater er substrater, som danner uopløseligt bundfald på membraner. Når enzymet er en peroxidase, er et foretrukket substrat 30 diaminobenzidin. Foretrukne substrater til hydrolyser er indolylderivater. Når 7 DK 175008 B1 f.eks. enzymet er alkalisk phosphatase, er et foretrukket substrat 3-indolylphosphat. Når enzymet er en esterase, er foretrukne substrater 3-indolylacetat og butyrat. Disse substra-5 ter er velkendt.
Ifølge den foretrukne bestemmelsesmetode ifølge opfindelsen bliver membranen, der er belagt med indifferent protein, og som har viralt antigen indfanget derpå, som beskrevet ovenfor, inkuberet med en opløsning af sporstoffet i en væske for at 10 inducere immunologisk binding af antigen- og antistofkomponenter i sporstoffet. Membranen, der har en blindet antigenantistof fraktion derpå, kan så adskilles fra den flydende fase af bestemmelsesmediet ved enhver egnet metode, fortrinsvis ved at bringe væsken til at passere gennem membranen. Væskestrøm gennem membranen kan være ved tyngdekraft eller kan for-15 trinsvis forstærkes ved kapillarvirkning induceret af absorberende materiale anbragt under membranen. Membranen kan så suspenderes i en anden væske, f.eks. vand, saltvand eller stødpude, hvori enzymsubstratet er opløst. Enzym i den bundne fraktion omdanner substratet til et produkt, der kan påvises ved hjælp af et signal, der står i forbindelse med farve. Det 20 påviste signal kan således være udvikling eller forsvinding af I
en farve eller en ændring fra én farve til en anden, eller en ændring i den hastighed, hvormed substratet omdannes til produktet? f.eks. kan farven af et substrat iagttages at forblive uændret i en vis tid. Det foretrækkes, at substratet er farveløst, indtil det spaltes af enzymmærket til dannelse af et farvet produkt. Omfanget af farvedannelse er proportional med antigenkoncentrationen, som kan bestemmes ved at måle væskeprøver, der har forudbestemte mængder af antigen deri, og sammenligne farveintensiteter. Målinger kan foretages enten instrumentelt eller, fortrinsvis, med det blotte øje.
8 DK 175008 B1
En anden side af opfindelsen er et reagensudstyr eller en pakke af materialer til udførelse af en bestemmelse af et viralt antigen i overensstemmelse med fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Udstyret kan indbefatte en membran belagt med et indifferent protein, et antistof, der har et enzym konjugeret dermed, et substrat for enzymet og en ind-5 pakning indeholdende et absorberende materiale anbragt ved siden af membranen.
Udstyret kan også indbefatte et andet enzym og en blokeret inhibitor af det andet enzym, standarder for liganden såsom f.eks. en eller flere ligandprøver af kendt koncentration, eller det kan indbefatte andre reagenser, enzymsubstrater eller andre mærkede eller umærkede specifikke ligander, aiiti-^ ligander eller komplekser deraf, som er nyttige til udførelse af bestemmelsen. Det kan indbefatte opløsninger såsom saltvand eller stødpuder. Komponenterne i udstyret kan være sam-' let i en æske, fortrinsvis af plast, indeholdende et materiale anbragt tander membranen, såsom absorberende papir, for at lette strømning af målevæsker gennem membranerne ved kapillarvirkning.
15
Eksperimentelt: 20 Hæmningskonstanter blev målt i 50 niM Tris, pH = 8,0. Enzym og inhibitor blev inkuberet ved omgivelsernes temperatur i 20 minutter. Substrat for enzymet blev så tilsat, og hydrolysehastigheden blev fulgt spektrofotometrisk. Substratet for PLE og RLE var o-nitrophenylbutyrat, og for AChE var det aoetyl-25 thiocholin og Ellman's reagens.
De følgende eksempler anføres til nærmere at beskrive opfindelsen, men skal ikke betragtes som begrænsende for opfindelsen.
EKSEMPEL I.
DK 175008 B1 S
Måling af respiratorisk syncytial virus (RSV).
En membranfilterstabel blev samlet med følgende sammensætning:
Toplag: 3 mikron Immunodyne immunaffinitetsmembran 5 (Pall, East Hills, New York,?^IA0030HC5) .
Forud belagt ved neddykning i saltvand med phosphatstødpude indeholdende 0,3% casein i 30 minutter ved omgivelsernes temperatur.
Næste lag: Ikke-vævet rayon-ark (Schleicher & Schuell, ^ Keene, New Hampshire, 5-S).
Bundlag: Absorberende cellulosepuder (2) (Filtration
Sciences, Mount Holly Springs, Pennsylvania, y^ED 320-200) .
15 Membranlagene var indeholdt i en plastholder indeholdende en modtagende fordybning dannet over toplaget. Inde i denne fordybning var anbragt en indsats til begrænsning af strømningen, som havde en åbning, der var mere snæver end den modtagense fordybning og liggende tæt an mod topmembranen.
20 Et stammateriale af antigen blev fremstillet med HEp-2 celler inficeret med respiratorisk syncytial virus (RSV) (long strain) i en stødpude indeholdende: 250 mM Tris(hydroxymethyl)amino- methan-hydrochlorid (Tris-HCl), 150 mM natriumchlorid (NaCl), 10 mM ethylendiamintetraacetat (EDTA), 4% (v/v) polyoxyethylen-25 sorbitanmonolaurat ("Tween"20), 1% n-acetylcystein, 0,2% natrium-azid (NaN^), pH 8,5. Kontrol-antigen blev fremstillet på lignende måde ud fra ikke-inficerede HEp-2 celler.
En portion på 150 All af dette antigen (eller kontrol) blev påført apparatet og fik lov at løbe gennem den strømningsbegræn-30 sende indsats og ned på topmembranlaget. (Væske trækkes gennem topmembranen ved kapillarvirkningen af de understøttende ab- ΙΟ DK 175008 B1 sorberende lag). Den strømningsbegrænsende indsats blev så fjernet, og til apparatet blev sat 150 jul af en vaskeopløsning bestående af 50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 0,2% NaN3, pH 7,2 (saltvand med Tris-stødpude (TBS)) og yderligere indeholdende 5 1 mg/ml kanin-IgG.
En opløsning indeholdende 27 jug/ml anti-RSV-antistof konjugeret med alkalisk phosphatase blev fremstillet i en stødpude indeholdende 50 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 200 mM natriumphosphat, 1% casein, 1 mM magniumchlorid, 0,1 mM zinkchlorid og 1 mM 10 2-mercaptoethanol, pH 7,5. En portion på 150 jul af denne blanding blev sat til apparatet og fik lov at absorbere ind i membranstablen. Efter en kort (2 minutter) inkubation blev apparatet vasket med 300 jul TBS (uden IgG) .
En 150 ni opløsning indeholdende 0,33 mg/ml nitroblåt-tetrazolium, 15 1% methanol og 0,2% NaN3 blev sat til apparatet. Dette blev efterfulgt af tilsætning af 150 /il af en opløsning indeholdende 12 mM levamisol i 50 mM 2-amino-2-methyl-l-propanolacetat (AMP-HOAc), 0,2% NaN3, 19 mM magniumchlorid ved pH 9,8. Efter 5 minutters inkubation ved omgivelsernes temperatur blev den 20 farvedannende reaktion standset ved tilsætning af 150 jul af en opløsning indeholdende 200 mM kaliumphosphat, 10 mM EDTA og 0,2% NaN3, pH 7,2.
Farvetætheden af den fremkomne membran blev målt med et reflek-tans-densitometer (Gretag, Seattle, Washington, model 183).
25 Resultaterne af et forsøg udført med en række antigenfortyndinger er vist på figur 1.
EKSEMPEL II.
Måling af influenzavirus, type A.
En måling af influenzavirus blev udført på lignende måde som i 30 eksempel II med følgende undtagelser: DK 175008 B1
II
1) Antigenstainmaterialet blev fremstillet af Madin-Darby hundenyre(MDCK)-celler inficeret med Influenza A (stammen WSN) .
2) Toplagsmembranen var 3 mikron Biodyne C (Pall, East Hills, 5 New York, ^ABNPCH5) i stedet for Immunodyne .
3) Stødpuden til antigenstainmaterialet blev fremstillet med Tris-acetat i stedet for Tris-hydrochlorid (indeholdt intet natriumchlorid) og indeholdt desuden 1 mM ethylen-bis(oxy-ethylennitrilo)tetraeddikesyre (EGTA).
10 4) Konjugatfortyndingsmidlet indeholdt 100 mM i stedet for 50 mM Tris og 150 mM i stedet for 100 mM NaCl.
5) Levamisol - koncentrationen var 16 mM i stedet for 12 mM.
Resultaterne af et forsøg udført med en række antigenfortyndinger er vist på figur 2.
15 EKSEMPEL ΤΤΓ.
Måling af Herpes simplex-virus (HSV).
En måling af Herpes simplex-virus (type I og II) blev udført på lignende måde som i eksempel II med følgende undtagelse: 1) Antigenstainmaterialet blev fremstillet af Vero-celler infi-20 ceret med HSV, type II.
Resultaterne af et forsøg udført med en række antigenfortyndinger er vist på figur 3.
Claims (6)
1. Fremgangsmåde til bestemmelse af et viralt antigen i en væske, kendetegnet ved a) forening af en første væske, der mistænkes for at indeholde et viralt antigen, med en membran belagt med et indifferent 10 protein og et sporstof indeholdende et enzym, hvorved det vi” rale antigen bindes til den belagte membran og bindes til spor” stoffet til dannelse af en bundet fraktion indeholdende enzymet på membranen, b) adskillelse af membranen fra den første væske ved at bringe den første væske til at passere gennem membranen, 15 c) passage af en anden væske indeholdende et substrat for enzymet gennem membranen, hvilket substrat omdannes af enzymet på membranen til et farvet produkt, og d) påvisning af det virale antigen ved hjælp af et signal, der står i forbindelse med farven af produktet. 20
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det indifferente protein er valgt af gruppen bestående af casein og albumin.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at sporstoffet yderligere omfatter et antistof, der er specifikt for antigenet, og som har enzymet konjugeret dertil.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at sporstoffet yderligere omfatter et antistof, der er specifikt for antigenet, og en liposom, der har enzymet indkapslet deri, hvilken liposom er konjugeret med antistoffet. DK 175008 B1
5. Udstyr af materialer til udførelse af en bestemmelse af et viralt antigen, kendetegnet ved, at det omfatter en membran belagt med et indifferent protein, et antistof, der har et enzym konjugeret dermed, et substrat for enzymet og en indpakning indeholdende et absorberende materiale anbragt ved siden af membranen. 5
6. Udstyr ifølge krav 5, kendetegnet ved, at det yderligere omfatter mindst ét andet reagens valgt af gruppen bestående af enzym, et enzymsubstrat, en blokeret inhibitor, stødpude og saltvand. 10
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DK200301893A DK175273B1 (da) | 1988-11-17 | 2003-12-19 | Fremgangsmåde til bestemmelse af et antigen i en væske |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US27238088A | 1988-11-17 | 1988-11-17 | |
US27238088 | 1988-11-17 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DK575989D0 DK575989D0 (da) | 1989-11-16 |
DK575989A DK575989A (da) | 1990-05-18 |
DK175008B1 true DK175008B1 (da) | 2004-04-19 |
Family
ID=23039567
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DK198905759A DK175008B1 (da) | 1988-11-17 | 1989-11-16 | Fremgangsmåde og udstyr til bestemmelse af et viralt antigen i en væske |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6235464B1 (da) |
EP (2) | EP0369361B1 (da) |
JP (1) | JP2589830B2 (da) |
AT (2) | ATE127589T1 (da) |
AU (1) | AU625297B2 (da) |
CA (1) | CA2000685C (da) |
DE (2) | DE68929213T2 (da) |
DK (1) | DK175008B1 (da) |
ES (2) | ES2145084T3 (da) |
FI (1) | FI96802C (da) |
GR (1) | GR3018020T3 (da) |
IE (1) | IE69041B1 (da) |
MY (1) | MY104234A (da) |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995023969A1 (en) * | 1994-03-04 | 1995-09-08 | Aquaculture Diagnostics Limited | Rapid immunological test |
AU2736000A (en) | 1999-01-27 | 2000-08-18 | Bayer Corporation | Immunoassays using casein coating of particles |
AU2001273264A1 (en) * | 2000-07-21 | 2002-02-05 | Cuno, Incorporated | Improved blocking chemistries for nylon membrane |
US7052831B2 (en) * | 2000-09-29 | 2006-05-30 | Becton Dickinson And Company | Detection of multiple analytes from a single sample using a multi-well, multi-analyte flow-through diagnostic test device |
US7094528B2 (en) * | 2004-06-30 | 2006-08-22 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Magnetic enzyme detection techniques |
US7906276B2 (en) | 2004-06-30 | 2011-03-15 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Enzymatic detection techniques |
US7521226B2 (en) * | 2004-06-30 | 2009-04-21 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | One-step enzymatic and amine detection technique |
US7189522B2 (en) | 2005-03-11 | 2007-03-13 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Dual path immunoassay device |
WO2006098804A2 (en) | 2005-03-11 | 2006-09-21 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Dual path immunoassay device |
US7504235B2 (en) | 2005-08-31 | 2009-03-17 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Enzyme detection technique |
US8003399B2 (en) * | 2005-08-31 | 2011-08-23 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Nitrite detection technique |
US8758989B2 (en) * | 2006-04-06 | 2014-06-24 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Enzymatic detection techniques |
US7897360B2 (en) | 2006-12-15 | 2011-03-01 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Enzyme detection techniques |
US7935538B2 (en) * | 2006-12-15 | 2011-05-03 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Indicator immobilization on assay devices |
US20100022916A1 (en) | 2008-07-24 | 2010-01-28 | Javanbakhsh Esfandiari | Method and Apparatus for Collecting and Preparing Biological Samples for Testing |
US20100290948A1 (en) * | 2009-05-15 | 2010-11-18 | Xuedong Song | Absorbent articles capable of indicating the presence of urinary tract infections |
US8603835B2 (en) | 2011-02-10 | 2013-12-10 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Reduced step dual path immunoassay device and method |
EP3578635B1 (en) | 2014-04-02 | 2021-11-03 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Immunoassay utilizing trapping conjugate |
US20160116466A1 (en) | 2014-10-27 | 2016-04-28 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Rapid Screening Assay for Qualitative Detection of Multiple Febrile Illnesses |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1420916A (en) * | 1971-09-08 | 1976-01-14 | Bagshawe K D | Performance of chemical or biological reactions |
CA983358A (en) * | 1971-09-08 | 1976-02-10 | Kenneth D. Bagshawe | Performance of chemical or biological reactions |
US4407943A (en) * | 1976-12-16 | 1983-10-04 | Millipore Corporation | Immobilized antibody or antigen for immunoassay |
US4241175A (en) * | 1978-12-18 | 1980-12-23 | Merck & Co., Inc. | Assay for hepatitis B core antibody |
US4372745A (en) * | 1979-12-19 | 1983-02-08 | Electro-Nucleonics, Inc. | Chemical luminescence amplification substrate system for immunochemistry involving microencapsulated fluorescer |
US4342826A (en) * | 1980-02-04 | 1982-08-03 | Collaborative Research, Inc. | Immunoassay products and methods |
EP0060123B1 (en) * | 1981-03-07 | 1986-10-29 | Colin Henry Self | Assay and use |
US4459359A (en) * | 1981-11-19 | 1984-07-10 | New York Blood Center, Inc. | Sensitive immunoassays of antigens or antibodies sequestered within immune complexes |
US4477576A (en) * | 1982-07-26 | 1984-10-16 | Mex Research Associates | Antigen assay method and kit |
US4606855A (en) * | 1982-07-26 | 1986-08-19 | Mex Research Associates C/O Leon Reimer | Monoclonal antibody to digoxin |
US4659678A (en) * | 1982-09-29 | 1987-04-21 | Serono Diagnostics Limited | Immunoassay of antigens |
WO1984002193A1 (en) * | 1982-12-03 | 1984-06-07 | Du Pont | Chromogenic support immunoassay |
JPS62500686A (ja) * | 1984-10-31 | 1987-03-19 | アルコン ラボラトリ−ズ インコ−ポレイテツド | 抗原の定性試験、製品および方法 |
ATE75052T1 (de) * | 1986-09-24 | 1992-05-15 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Verfahren zur bestimmung von antistreptolysin-o und anwendungssatz dafuer. |
US4835099A (en) * | 1986-11-20 | 1989-05-30 | Becton, Dickinson And Company | Signal enhancement in immunoassay by modulation of enzymatic catalysis |
EP0280560B1 (en) * | 1987-02-27 | 1994-05-11 | EASTMAN KODAK COMPANY (a New Jersey corporation) | Membrane structure coated with low pI protein and methods of making and using |
US4847199A (en) * | 1987-02-27 | 1989-07-11 | Eastman Kodak Company | Agglutination immunoassay and kit for determination of a multivalent immune species using a buffered salt wash solution |
US5208143A (en) * | 1988-11-17 | 1993-05-04 | Becton, Dickinson And Company | Immunoassay on a preblocked solid surface |
CA2023850A1 (en) * | 1989-09-28 | 1991-03-29 | Randal A. Hoke | Stabilizing reagent for membrane immunoassay |
-
1989
- 1989-10-11 MY MYPI89001399A patent/MY104234A/en unknown
- 1989-10-13 CA CA002000685A patent/CA2000685C/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-17 AU AU42987/89A patent/AU625297B2/en not_active Expired
- 1989-11-01 IE IE351689A patent/IE69041B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-11-11 ES ES94115914T patent/ES2145084T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-11 DE DE68929213T patent/DE68929213T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-11 EP EP89120945A patent/EP0369361B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-11 ES ES89120945T patent/ES2076948T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-11 AT AT89120945T patent/ATE127589T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-11-11 EP EP94115914A patent/EP0633472B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-11 DE DE68924129T patent/DE68924129T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-11 AT AT94115914T patent/ATE193121T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-11-13 JP JP1294750A patent/JP2589830B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-16 FI FI895472A patent/FI96802C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-11-16 DK DK198905759A patent/DK175008B1/da not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-10-20 US US08/326,304 patent/US6235464B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-11-08 GR GR950403133T patent/GR3018020T3/el unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US6235464B1 (en) | 2001-05-22 |
ES2145084T3 (es) | 2000-07-01 |
JP2589830B2 (ja) | 1997-03-12 |
DE68924129T2 (de) | 1996-02-01 |
ATE127589T1 (de) | 1995-09-15 |
AU625297B2 (en) | 1992-07-09 |
EP0369361A3 (en) | 1991-06-05 |
DE68929213T2 (de) | 2000-12-28 |
FI895472A0 (fi) | 1989-11-16 |
ES2076948T3 (es) | 1995-11-16 |
IE69041B1 (en) | 1996-08-07 |
EP0633472A3 (en) | 1995-02-15 |
EP0633472A2 (en) | 1995-01-11 |
EP0633472B1 (en) | 2000-05-17 |
FI96802C (fi) | 1996-08-26 |
DK575989D0 (da) | 1989-11-16 |
MY104234A (en) | 1994-02-28 |
AU4298789A (en) | 1990-05-24 |
CA2000685C (en) | 2001-02-20 |
DE68924129D1 (de) | 1995-10-12 |
CA2000685A1 (en) | 1990-05-17 |
DK575989A (da) | 1990-05-18 |
GR3018020T3 (en) | 1996-02-29 |
ATE193121T1 (de) | 2000-06-15 |
FI96802B (fi) | 1996-05-15 |
DE68929213D1 (de) | 2000-06-21 |
EP0369361B1 (en) | 1995-09-06 |
JPH02187662A (ja) | 1990-07-23 |
IE893516L (en) | 1990-05-17 |
EP0369361A2 (en) | 1990-05-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK175008B1 (da) | Fremgangsmåde og udstyr til bestemmelse af et viralt antigen i en væske | |
AU625790B2 (en) | Method of immunoassay including deactivation of endogenous alkaline phosphatase | |
US5370994A (en) | Solid phase assay for urea | |
US4868106A (en) | Analytical element and method for determining a component in a test sample | |
US4016043A (en) | Enzymatic immunological method for the determination of antigens and antibodies | |
CA2001206C (en) | Substrate composition for alkaline phosphatase and method for assay using same | |
US5399484A (en) | Use of blocking protein with high pH extraction in method to determine a microorganism associated with periodontal disease and kit useful therefor | |
US5334503A (en) | Test kit and method for the detection of microorganisms associated with periodontal diseases using surfactant mixture as extraction composition | |
US5378629A (en) | Wash composition for determination of microorganisms associated with periodontal diseases | |
US5166054A (en) | Method for immunoassay using lactoperoxidase, starch and iodine | |
EP0420170A2 (en) | Stabilizing reagent for membrane immunoassay | |
US5093231A (en) | Substrate composition for alkaline phosphatase and method for assay using same | |
DK175273B1 (da) | Fremgangsmåde til bestemmelse af et antigen i en væske | |
CA2028146A1 (en) | Composition containing labeled streptococcal antibody, test kit and assay using same | |
CA2000686A1 (en) | High sensitivity detection of peroxidase activity | |
Dietzgen et al. | An azophenolic colorimetric reagent for use in enzyme-linked immunosorbent assays |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |