DE950959C

DE950959C - Process for obtaining a kallikrein inactivator

Info

Publication number: DE950959C
Application number: DEK22401A
Authority: DE
Inventors: Dipl-Chem Ruth Koerbe Enkhardt; Dr Heinrich Kraut
Original assignee: Bayer AG
Current assignee: Bayer AG
Priority date: 1954-05-29
Filing date: 1954-05-30
Publication date: 1956-10-18

Description

Der Inaktivator des Kallikreins, der sich in Lymph- und Ohrspeicheldrüsen sowie dem Pankreas von RJindarn und im Blut von Säugetieren findet, wurde zuerst von H. Kraut, E. K. Frey und E. WerIe durch Extraktion der getrockneten Organe mit Wasser oder verdünnter Essigsäure und durch Fällung aus diesen Extrakten durch Zusatz von Alkohol dargestellt. (Hoppe-Seyler's Z. physiol. Chem. 192,1 [1930]). Es ist weiter vorgeschlagen worden, zur Gewinnung reinerer Präparate die Extrakte zuerst mit Trichloressigsäure zu versetzen, wobei Eiweiß ausgefällt wird, und dann bei schwach alkalischer Reaktion unwirksame Begleitstoffe mit Alkohol auszufällen.The inactivator of kallikrein, which is found in the lymph and parotid glands as well as the pancreas by RJindarn and found in mammalian blood was first published by H. Kraut, E. K. Frey and E. WerIe by extracting the dried Organs with water or dilute acetic acid and by precipitation from these extracts by addition depicted by alcohol. (Hoppe-Seyler's Z. physiol. Chem. 192.1 [1930]). It is suggested further to obtain purer preparations, the extracts first with trichloroacetic acid to move, whereby protein is precipitated, and then ineffective in the case of a weakly alkaline reaction Precipitate accompanying substances with alcohol.

Es wurde nun gefunden, daß der Kallikrein-Inaktivator bei schwachsaurer Reaktion in heißem verdünntem Alkohol löslich ist, so daß man ihn direkt aus den Organen oder aus Blutserum mit essigsaurem 7O%igem Alkohol bei 50⁰' extrahieren kann. Hierbei wird fast das gesamte Eiweiß ausgefällt, so daß man bei einer die oben beschriebenen Verfahren übertreffenden Ausbeute Extrakte desIt has now been found that the kallikrein inactivator is soluble in weakly acidic reaction in hot dilute alcohol, so that strength it directly from organs or from blood serum with acetic 7O% alcohol can extract at 50 ⁰ '. Almost all of the protein is precipitated here, so that extracts of the

Inaktivatoars von gutem Reinheitsgrad erhält. Eine Ausfällung von Eiweiß, z. B. mit Trichloressigsäure, wird damit überflüssig. Man. kann, die Extrakte ohne Wirksamkeitsverlust im Vakuum eindampfen und zur Entfernung von Fetten und Farbstoffen mit Äther ausschütteln. Anschließend fällt man den Inaktivator mit Aceton oder einem anderen, mit Wasser mischbarem organischem Lösungsmittel.Receives inaktivatoars of a good degree of purity. A precipitation of egg white, e.g. B. with trichloroacetic acid, becomes superfluous. Man. can, the extracts without loss of effectiveness in a vacuum evaporate and shake with ether to remove fats and dyes. Afterward the inactivator is dropped with acetone or another water-miscible organic Solvent.

ίο Der Inaktivator ist in diesem Stadium hauptsächlich von. Stoffen begleitet, die in. verdünnten Säuren löslich sind. Man kann daher eine weitere Reinigung dadurch vornehmen, daß man durch Zusatz von Ammoniak schwach alkalische Reaktion einstellt. Hierbei entsteht ein dichter Niederschlag, der nur sehr wenig Inaktivator enthält. Die Ausbeute beträgt ungefähr 80% der in den Organen oder im BJut enthaltenen Inaktivatormengen, der Reinheitsgrad 2 bis 3 γ Substanz je Inaktivatoreinheit. ίο The inactivator is mainly of at this stage. Substances which are soluble in dilute acids. You can therefore carry out a further purification by setting a weakly alkaline reaction by adding ammonia. This creates a dense precipitate that contains very little inactivator. The yield is about 80% of the inactivator quantities contained in the organs or in the BJut, the degree of purity is 2 to 3 γ substance per inactivator unit.

example 1

1000 g von anhaftendem Fett und Fleisch befreite Ohrspeicheldrüsen von Rindern werden im Fleischwolf zerkleinert und zweimal mit je 5000 ecm Aceton behandelt. Das Aceton wird, durch Absaugen möglichst entfernt und das feuchte Material 2V2 Stunden mit 1200 ecm n-Essigsäure und 2800 ecm o6°/oigem Alkohol bei 50°' behandelt. Das Filtrat enthält etwa 230 000 Inaktivatoreinheiten.1000 g of cattle parotid glands freed from adhering fat and meat are used in the Meat grinder chopped up and treated twice with 5000 ecm acetone each time. The acetone is removed by suction if possible removed and the moist material 2V2 hours with 1200 ecm n-acetic acid and 2800 ecm of 6% alcohol treated at 50 °. That The filtrate contains about 230,000 inactivator units.

Die alkoholische Lösung wird im Vakuum auf etwa 1200 ecm eingeengt und mit demselben Volumen Äther ausgeschüttelt," wobei dunkle Farbstoffe sowie Reste von Fetten in Lösung gehen. Die wäßrige Phase wird nun mit Aceton versetzt und der Niederschlag in verdünnter Essigsäure gelöst. Man bringt mit Ammoniak auf schwach alkalische Reaktion, zentrifugiert und fällt den Inaktivator mit der sfachen Menge Alkohol. Die Ausbeute beträgt etwa 180000 I. E. in 0,4 bis 0,5 g Substanz.The alcoholic solution is concentrated in vacuo to about 1200 ecm and with the same Volume of ether shaken out, "whereby dark dyes and residues of fats go into solution. The Acetone is then added to the aqueous phase and the precipitate is dissolved in dilute acetic acid. It is brought to a weakly alkaline reaction with ammonia, centrifuged and the inactivator is precipitated with six times the amount of alcohol. The yield is about 180,000 I.U. in 0.4 to 0.5 g of substance.

Example 2

1000 g Rinderpankreas werden im Fleischwolf zerkleinert und zweimal mit je 5 1 Aceton behandelt. Die Weiterbearbeitung erfolgt wie im Beispiel 1 für Ohrspeicheldrüsen, angegeben. Die Ausbeute nach der Fällung mit Alkohol und Äthertrocknung beträgt 20000 Inaktivatoreinheiten in 0,5 g Trockenpulver. 1000 g of beef pancreas are in the meat grinder crushed and treated twice with 5 liters of acetone each time. The further processing takes place as in example 1 for Parotid glands, indicated. The yield after precipitation with alcohol and ether drying is 20,000 inactivator units in 0.5 g dry powder.

Example 3

4000 ecm Rinderserum werden, mit 250 ecm Essigsäure und 10 000 ecm Alkohol 2 Stunden bei gerührt. Der essigsaure alkoholische Extrakt enthält 50000 Inaktivatoreinheiten. Die Lösung wird wie im Beispiel 1 aufgearbeitet. Die Ausbeute nach der Fällung mit Alkohol und Äthertrocknung beträgt 10 000 Inaktivatoreinheiten in 3 g Trockenpulver. 4000 ecm beef serum, with 250 ecm Acetic acid and 10 000 ecm alcohol for 2 hours with stirring. The acetic acid alcoholic extract contains 50000 inactivator units. The solution is worked up as in Example 1. The yield after precipitation with alcohol and ether drying is 10,000 inactivator units in 3 g of dry powder.

Claims

Claim:

Process for obtaining a kallikrein inactivator from lymph and parotid glands, pancreas or blood, characterized in that the fresh; Organs or that Blood serum extracted with acidic diluted alcohol in the heat, the extracts in vacuum constricts and shakes out with ether, from the aqueous phase the inactivator with alcohol, Acetone or another water-miscible organic solvent precipitates Precipitation dissolves in dilute acetic acid, ineffective accompanying substances by setting weak alkaline reaction removed and the inactivator again with alcohol, acetone or another water-miscible organic solvent precipitates.