DE840615C

DE840615C - Device for determining the rate of blood clotting

Info

Publication number: DE840615C
Application number: DEP24629A
Authority: DE
Inventors: Joerg Dr Med Juergens
Original assignee: HEINRICH JUERGENS DIPL CHEM DR
Current assignee: HEINRICH JUERGENS DIPL CHEM DR
Priority date: 1948-12-14
Filing date: 1948-12-14
Publication date: 1952-06-09

Description

Vorrichtung zur Bestimmung der Blutgerinnungsgeschwindigkeit Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist eine Vorrichtung zur Bestimmung der Blutgerinnungsgeschwindigkeit.Device for determining the rate of blood coagulation object of the present invention is an apparatus for determining the rate of blood clotting.

Bei einem Blutgerinnungsversuch ist die Blutgerinnung zeitlich nur von der Menge des im Blut vorhandenen Prothrombins abhängig, wenn genügend Thrombokinase und Calcium vorhanden sind, da das aktive, die lAlutgerinnung verursachende Gerunnungs ferment Thrombin aus dem im Blut vorhannden Prothrombin in Gegenwart der als Katalysator wirkenden Thrombokinase entsteht. When trying to clot blood, the clotting is only temporary depends on the amount of prothrombin in the blood, if there is enough thrombokinase and calcium are present as the active coagulation that causes alute coagulation ferment thrombin from the prothrombin present in the blood in the presence of the catalyst acting thrombokinase arises.

Man kann daher aus der Blutgerinnungsgeschwindigkeit, der sogenannten Prothrombinzeit, auf die Blutungsbereitschaft eines Patienten schließen.One can therefore from the blood coagulation speed, the so-called Prothrombin time, inferring a patient's willingness to bleed.

Alle ilteren quantitativen nestimmungsmethoden des l>rothroinhins durch Fällung wie auch durch indirekte Alethoden durch Bestimmung der Blutgerinnungsgeschwindigkeit bzw. der des Plasmas sind für klinische Zwecke entweder viel zu kompliziert, um in der Praxis angewendet werden zu können, oder sie sind so ungenau, daß auf sie von vornherein verzichtet werden muß. All of the older quantitative methods of matching the l> rothroinhin by precipitation as well as by indirect methods by determining the rate of blood coagulation and that of the plasma are either far too complicated for clinical purposes to be to be applied in practice, or they are so imprecise that on them must be waived from the outset.

Die erste Methode, die den klinischen Erfordernissen schon in vieler Hinsicht Rechnung trug, ist die Feststellung der Prothrombinzeit nach Quick. The first method that already meets the clinical needs in many The determination of the prothrombin time according to Quick.

Bei dieser Methode, die bei Einhaltung bestimmter Bedingungen genaue Resultate gibt, werden 4,5 ccm Venenblut mit 0,5 ccm I, 34°loiger Natriumoxalatlösung aufgezogen, zentrifugiert und das Plasma in einem Wasserbad von 380 mit Thrombokinase in reichlichem Überschuß versetzt. Anschließend wird durch Calciumzugabe die Gerinnung eingeleitet.With this method, the exact conditions are met when certain conditions are met Results are 4.5 ccm venous blood with 0.5 ccm I, 34 ° loiger sodium oxalate solution drawn up, centrifuged and the plasma in a water bath of 380 with thrombokinase added in ample excess. Then the coagulation is started by adding calcium initiated.

Gemessen wird die Zeit, die vom Augenblick der gesamten CaCl-Zugabe bis zur völligen Gerinnung vergeht. Sie beträgt l>ei günstigen Thrombokinasepräparaten beim gesunden Menschen 13 bis 14 Sekunden.The time is measured from the moment the entire CaCl addition is made until completely coagulated passes. It is l> ei cheap Thrombokinase preparations in healthy people 13 to 14 seconds.

Durch eine entsprechende Abwandlung dieser Methode hat auch schon F i e c h t e r eine mikrochemische Methode zur Bestimmung der Blutgerinnungsgeschwindigkeit ausgearbeitet, bei der das durch einen Schnepperstich aus der Fingerleere, dem Ohrläppchen oder kindlichen Ferse entnommene Kapillarblut in einer Mischpipette für insgesamt 0,15 ccm Blut zusammen mit einer sterilen Natriumoxalatlösung aufgezogen und durchgemischt wird. Die Gerinnungsbestimmung erfolgt dann auf einem Uhrglas, das auf einem Wasserhade von 380 schwimmt. Parallel zur Methode Quick werden zu diesem Zweck auf 380 C vorgewärmte Lösungen von Throml>okinase und Calciumchlorid zugegeben. By modifying this method accordingly, it has already F i e c h t e r a microchemical method to determine the rate of blood clotting elaborated, in which this was done by a snap stitch from the empty fingers, the earlobe or capillary blood drawn from child's heel in a mixing pipette for a total of 0.15 ccm blood drawn up together with a sterile sodium oxalate solution and mixed thoroughly will. The coagulation determination is then carried out on a watch glass that is on a water hade of 380 swims. In parallel to the Quick method, preheating to 380 C is used for this purpose Solutions of Throml> okinase and calcium chloride are added.

Für alle diese Bestimmungsmethoden der Blutgerinnungsgeschwindigkeit fehlt es vor allen Dingen an einer geeigneten Apparatur, die es gestattet, die Bestimmung schnell und ohne große Umstände in der Klinikpraxis durchzuführen. For all of these methods of determining the rate of blood clotting Above all, there is a lack of suitable apparatus which would allow the determination can be carried out quickly and easily in the clinic.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist eine solche Vorrichtung zur Bestimmung der Blutgerinnungsgeschwindigkeit, bei der sich der genaue Vorgang in einer Thermokapillarpipette a (vgl. die Zeichnung) abspielt, die, ähnlich wie die Mischpipetten zur Blutkörperzählung, eine kugelförmige Auftreibung b besitzt, in der das Kapillarblut mit physiologischer Kochsalzlösung und den die Gerinnung bewirdkenden Mitteln innig durchgemischt und zur Gerinnung gebracht wird. In das Lumen der Kugel ist eine stachelförmige Delle c vorgetriben, durch die die Erkennung des Gerinnungszeitpunktes mit großer Genauigkeit ermöglicht wird. The present invention relates to such a device to determine the rate of blood clotting, at which the exact process in a thermocapillary pipette a (see the drawing) that, similar to the mixing pipettes for counting blood cells have a spherical expansion b, in which the capillary blood with physiological saline solution and in which the coagulation effecting agents are intimately mixed and caused to coagulate. In the Lumen of the sphere is a spike-shaped dent c protruded through which the detection the coagulation time is made possible with great accuracy.

Die kugelförmige Auftreibung der Pipette ist an dieser derartig angeordnet daß der längere mit Markierungen versehene, zum aufsaugen der physiologischen Kochsalzlöung und der Gerinnungsmittel bestimmte Schenkel d doppelt so lange wie der kürzere, ebenfalls Markierungen tragende und zum Aufsaugen des Kapillarl) lutes hestimmte Schenkel e ist. l)ie ganze Kapillarpipette wird mit zwei zur \l>dichtung dienenden, auf die beiden Schenkel der P ipette aufgeschobenen durchbohrten Stopfen f und g in einen Kolben h geschoben, der noch eine dritte ol>en angel) rachte öffnung i beitzt, die el>enfalls verschließlar ist und zum Einfüllen des temperierten NYassers und Einsetzen eines Thermometers dient. lJm die Handhabung der Vorrichtung nach der Erfindung noch näher zu erläutern, soll diese bei spielsweise an Hand einer von dem Erfinder ausgearl>eiteten mikrochemischen Bestimmungsmethode der Blutgerinnungsgeschwindigkeit näher l) eschrieden werden: Nach Einführung der Pipette in den Kolben und Verschluß durch die Gummistopfen wird ein Gemisch von Th romloki nase und phys iologiscber Kochsalzlösung im Verhältnis I zu 10 bis zur 2/lo-Marke in den längeren der beiden Schenkel atifgezogen und durchAspiration in die Kugel gebracht. The spherical expansion of the pipette is arranged on this in this way that the longer one provided with markings to absorb the physiological saline solution and the coagulant determined leg d twice as long as the shorter one, also bearing markings and intended for sucking up the capillary tube Leg e is. l) The entire capillary pipette is supplied with two pierced stoppers f and g pushed onto the two legs of the pipette pushed into a piston h which opened a third oil opening I have it, which can be closed if necessary, and to fill in the tempered NYassers and inserting a thermometer is used. lJm the handling of the device according to the invention to explain in more detail, this is intended for example on the basis of a Microchemical method of determining the rate of blood coagulation developed by the inventor closer l) to be discussed: After inserting the pipette into the flask and cap a mixture of thromloki nase and phys iologiscber is drawn through the rubber stopper Saline at a ratio of 1 to 10 up to the 2 / lo mark in the longer of the two The thighs are drawn and drawn into the sphere by aspiration.

Durch die ohere Öffnung am Kolben wird darauf unter Beibehaltung der waagerechten Lage der Pipette 42gradiges Wasser eingefüllt, worauf die Offnung mit einem durchbohrten Stopfen, in dem ein Thermometer steckt, verschlossen wird. Der Aspriationsschlauch wird nun auf das andere Pipettenende aufgesetzt und das durch einen Schnepperstich aus Fingerbeere, Ohrläppchen oder kindlicher Ferse gewonnene Blut durch das kurze Pipettenende bis zur Marke ist aufgezogen und anschließend in die Kugel hineinpipettiert.The upper opening on the piston is followed by maintaining the horizontal position of the pipette filled with 42 degree water, whereupon the opening with a pierced stopper with a thermometer in it. Of the Aspriation tube is now placed on the other end of the pipette and through won a snip from a fingertip, earlobe or child's heel Blood is drawn through the short end of the pipette to the mark and then pipetted into the ball.

Sobald das gesamte Blut in die Kugel gelaufen ist, wird die Stoppuhr in Gang gebracht und nach einer kurzen schüttelnden Bewegung, die eine innige Durchmischung des Blutes mit der Thrombokinase bewirken soll, der gesamte Kolben um seine Längsachse nicht ganz um 1800 hin und her bewegt, so daß der kleine Glasdorn immer wieder in den Blutsee eintaucht und ähnlich wie ein rührendes Glasstäbchen wirkt. Once all of the blood has run into the ball, the stopwatch will started and after a short shaking movement, an intimate mixing of the blood with the thrombokinase is supposed to cause the entire piston around its longitudinal axis not quite moved back and forth around 1800, so that the small glass spike keeps going back and forth immersed in the lake of blood and acts like a touching glass rod.

Der Moment der Gerinnung läßt sich leicht dadurch erkennen, daß im Augenblick der Bildung eines Koagulums dieses am Glasdorn hängenbleibt und bei der Drehung mit nach oben genommen wird. The moment of coagulation can easily be recognized by the fact that im Moment of the formation of a coagulum this sticks to the glass mandrel and at the Rotation is taken with upwards.

Die gebrauchten Pipetten lassen sich bei einem Kapillardurchmesser von I,5 mm leicht mit der Wasserstrahlluftpumpe reinigen. Das Blutgerinnsel wird mühelos aus der Kugel gezogen. Anschließend kann eine gründliche Reinigung durch Einlegen in 50%ige Chromschwefelsäure für 24 Stunden erfolgen und die Pipette danach gründlich mit aqua dest. durchgespült werden. Bei der Ausführung der Bestimmung ist noch von Wichtigkeit, daß vom Augenblick des Einfüllens der Thrombokinaseverdünnung bis zum Abschluß der Untersuchung der Apparat nie seine waagerechte Lage verläßt, damit die aufgezogene Flüssigkeit nicht wieder hinausläuft. Besonders muß alter der Teil, durch den das Blut aufgezogen wird, nämlich der kürzere Schenkel der Pipette, völlig trocken bleil) en, damit dort nicht eine vorzeitige Gerinnung zustande kommt. The used pipettes can be used with a capillary diameter Easy to clean from 1.5 mm with the water jet air pump. The blood clot will easily pulled out of the ball. A thorough cleaning can then be carried out Soak in 50% chromosulfuric acid for 24 hours and then the pipette thoroughly with distilled water. flushed through. When performing the determination It is also important that from the moment the thrombokinase dilution is filled in until the examination has been completed, the apparatus never leaves its horizontal position, so that the drawn up liquid does not run out again. Especially must be older the part through which the blood is drawn, namely the shorter leg of the pipette, stay completely dry so that there is no premature coagulation.

Am zweckmäßigsten erwies es sich, Wasser von 420 C in den Kolben zu füllen, weil die Thrombokinase die Apparatur selbst auf die günstigste Temperatur von 380 erwärmt werden muß, was in einigen Augenblicken erreicht ist. Diese Zeit kann man bequem dazu benutzen, um den Patienten vorzubereiten und die Einstichstelle mit Äther, in dem auf 100 ccm einige Tropfen Öl gelöst sind (beispielsweise Sesamöl), zu reinigen. Gegebenenfalls kann dann zuletzt nochmals durch die kleine C)ffnung die Temperatur kontrolliert werden. Nach dieser Methode tritt die Gerinnung hei Verwendung von Thrombokinase aus Menschenhirn ad modum Q u i c k für Normalblut in 14.5 bis 15 Sek. ein.It was found to be most convenient to add 420 C water to the flask fill, because the thrombokinase the apparatus itself to the most favorable temperature must be heated by 380, which is achieved in a few moments. This time can be conveniently used to prepare the patient and the puncture site with ether in which a few drops of oil are dissolved per 100 ccm (e.g. sesame oil), to clean. If necessary, you can then finally go through the small C) opening again the temperature can be controlled. After this method, the coagulation occurs hot Use of thrombokinase from human brain ad modum Q u i c k for normal blood in 14.5 to 15 seconds.

Gegenüber dem Stande der Technik weist die Vorrichtung nach der Erfindung unter Anwendung der beschriebenen Mikromethode eine Reihe von Vorteilen auf: Die Bestimmung des Gerinnungszeitpunktes gelingt durch den Erfindungsgegenstand mit ein- faehen Mitteln, so daß die Bestimmung ohne weiteres am Kraitkeiiloett erfolgen und auf eine besendere Einrichtung im Laboratorium verzichete werden kann. Compared to the prior art, the device according to the invention using the described micro-method a number of advantages: The Determination of the time of coagulation succeeds with the subject of the invention a- means, so that the determination without further ado at the Kraitkeiiloett and there is no need for a more brisk facility in the laboratory.

Ferrner haben Vergleichsversuche mit der Makromethode nach Q uick ergeben, daß praktisch dieselben Werte erhlaten werden, so daß beid Methoden zur Kontrolle nebeneinander angewendet werden können, ohne daß (lie Schwierigkeit einer besonderen Umrechnung besteht. Dabei arbeitet die Vorrichtung nach der Erfindung zuverlässiger als die Nfethode O u i c k, bei der genaue Resultate nur dann erzieit werden können, wenn mit großer Exaktheit und Sorgfalt gearbeitet wird. Unsachgemäßes Aufziehen des Venenblutes durch Einströmenlassen von Luft in die Spritze bedeutet eine Verschiebung im O. xalatgehalt des Blutes und führt zu ungenauen Ergebnissen. Ebenso können durch utogenaues Abpipettieren der Lösungen ähnlich Fehlerquellen entstehen. Bei der Anwendung der Vorrichtung nach der Erfindung und der heschrie teuen Arbeitsmethode fallen diese Fehlerquetien fort, Das Blut gelangt unverändert von der Körperoberfläche in die körperwarme Pipette, ist also wder hinsichtlich der Temperatur noch des Kalkgehatles einem reversiblen Vorgang ausgesetzt. Ferrner have carried out comparative experiments with the Q uick macro method show that practically the same values are obtained, so that both methods for Controls can be applied side by side without the difficulty of any special conversion exists. The device works according to the invention more reliable than the O u i c k Nfethode, with which exact results can only be obtained can be achieved if the work is done with great precision and care. Improper Drawing up the venous blood by letting air flow into the syringe means a shift in the o. xalate content of the blood and leads to inaccurate results. Likewise, by pipetting down the solutions with utmost accuracy, similar sources of error can occur develop. When using the device according to the invention and the heschrie With a new working method these mistakes are eliminated. The blood arrives unchanged from the body surface into the body-warm pipette, so it is wder with regard to the temperature of the Kalkgehatles exposed to a reversible process.

Außerdem hat die Vorrichtung nach der Erfindung den bekanntern Makromethoden gegenüber den Vorteil, nur wenige Tropfen Kapillarblut für die Bestimmung zu benötigen, was von großer Bedeuung bei der Anwendung beim Säugling und bei Patientern mit schlechten Venen ist. In addition, the device according to the invention has the well-known macro methods compared to the advantage of only requiring a few drops of capillary blood for the determination, which is of great importance in the application in the infant and in patients with bad Veins is.

Asßer der vom Erfinder ausgearbeiteten Methode kann man selbstverständlich auch andere Methoden mit der Vorriclotung durchführen. Man kann z. 13. auch das nach der Methode Quick hei der Zentrifugierung erhaltene Plasma durch den einen Schenkel der Pipette aufziehen und in die Kugel ringen. nachdem man vorher dort Thromhokinase uti<l Calciumchlorid vorgelegt hat. Der Vorgang vollzieht sich mit der Vorrichtung nach der Erfindung einfacher. da das Abmessen des Blutes und der Lösungen sowie die Gerinnung mit der gleichen Apparatur in einem Arbeitsgang bewerkstelligt weren können. Außerdem werden die Fehlerquetten, die bei der bisher üblich gewesenen Ausfühung der Methode Quick durch ungenaues Abpipettieren der Lösungen entstehen können, ausgeschaltet. One can of course use the method worked out by the inventor also perform other methods with the prelimitory plumbing. You can z. 13. also that plasma obtained by the Quick method during centrifugation by one Open the legs of the pipette and wrestle into the ball. after getting there beforehand Thromhokinase uti <l calcium chloride submitted. The process takes place with the device according to the invention easier. since measuring the blood and of the solutions and the coagulation with the same apparatus in one operation can be accomplished. In addition, the queues of errors that have been made in the The usual execution of the Quick method due to inaccurate pipetting off of the solutions can arise, turned off.

Ebensogut llißt sich die Vorrichtung nach der Erfindung auch für die Mikromethode nach F i e c h t e r vorzüglich verwenden, wobei die Vorrichtung den Vorteil bietet, daß das in der Mischpipette mit Natriumoxalat vermischte Blut nicht in einem Uhrglas, das auf einem temperierten Wasserbad schwimmt, sondern in derselben kugelförmigen Auftreibung der Pipette zum Gerinnen gebracht wird, nachdem durch den anderen Schenkel der Pipette Thrombokinase und Calciumchlorid in die Kugel gebracht worden sind. The device according to the invention can just as well be used for Use the micro method according to F i e c h t e r excellently, whereby the device has the advantage that the blood mixed with sodium oxalate in the mixing pipette not in a watch glass that floats on a temperature-controlled water bath, but in the same spherical expansion of the pipette is made to coagulate after through the other leg of the pipette thrombokinase and calcium chloride into the ball have been brought.

PATENTANSPRECHE : I. Vorrichtung zur Bestimmung der Blutgerinnungsgeschwindigkeit, der sog. Prot'hrombinzeit, dadurch gekennzeichnet, daß in einer Kapillarpipette mit zwei verschieden langen, mit Markierungen versehenen Schenkeln, von denen der eine zum Aufsaugen des Kapillarblutes allein oder mit anderen Zusätzen zusammen und der andere zum Aufsaugen der die Gerinnung bewirkenden Mittel dient, eine kugelförmige, als Gerinnungsraum dienende Auftreibung angeordnet ist, die in ihrem Lumen eine stachelförmige, als Rührer und zur Erkennung des Gerinnungszeitpunktes dienende Delle aufweist, wobei die beiden Schenkel der Pipette mit Stopfen derart versehen sind, daß die Pipette in einen zur Aufnahme von temperierten Flüssigkeiten dienenden und mit seitlichen Offnungen versehenen Kolben wasserdicht hineingeschoben werden kann und der Kolben weitere Öffnungen zum Einfüllen der temperierten Flüssigkeiten und zum Einführen eines Thermometers aufweist. PATENT CLAIMS: I. Device for determining the rate of blood coagulation, the so-called. Prot'hrombinzeit, characterized in that in a capillary pipette with two legs of different lengths, provided with markings, of which the one for sucking up the capillary blood alone or with other additives and the other is used to absorb the coagulant, a spherical, is arranged serving as a coagulation swelling, the one in its lumen spike-shaped, used as a stirrer and to recognize the time of coagulation Has dent, the two legs of the pipette provided with stoppers in this way are that the pipette is used in a for holding temperature-controlled liquids and pistons with side openings can be pushed in in a watertight manner can and the piston further openings for filling the temperature-controlled liquids and for inserting a thermometer.

Claims

2. Apparatus according to claim 1, characterized in that the piston Openings are arranged such that the pipette with running tempered water can be kept at a constant temperature.

3. Apparatus according to claim I, characterized in that the pipette is made of glass.

. Device according to claim i and 2, characterized in that the flask is made of glass.