Claims (9)
92 909 670.9 EPO 1257 IH/nl P ATEN TAN SPRUCHE92 909 670.9 EPO 1257 IH/nl PATENT TAN STATUTE
1. Anti-Enterobakterien-Antikörper, dadurch gekennzeichnet, daß sie
1. Anti-enterobacterial antibodies, characterized in that they
- aus monoklonalen Antikörpern, mit der Fähigkeit, alle ganzen
Enterobakterien, das heißt, solche, die insbesondere keinen Extraktionsschritt erlitten haben, zu erkennen, durch
Bindung mit einer antigenen Determinante des gemeinsamen Antigens der Enterobakterien (ACE), die auf der Oberfläche
der ganzen Enterobakterien vorhanden ist und den Antikörpern direkt zugänglich ist, bestehen, und- consist of monoclonal antibodies capable of recognising all whole
Enterobacteria, i.e. those which have not undergone an extraction step, by
binding to an antigenic determinant of the common antigen of enterobacteria (ACE) present on the surface
of the whole enterobacteria and directly accessible to the antibodies, and
- aus Hybridomen, die auf geeignete Weise hergestellt wurden, ausgewählt sind durch:- selected from hybridomas suitably produced by:
(a) ein erstes Absuchen jedes Überstands des Hybrids mit Hilfe eines ELISA-Verfahrens, bei dem als Antigen mindestens
zwei lebende Enterobakterien, die gegebenenfalls geeignet
behandelt wurden und mindestens ein Bakterium, das nicht der Familie der Enterobakterien angehört, eingesetzt werden,
dann(a) a first screening of each supernatant of the hybrid by an ELISA procedure using as antigen at least
two live enterobacteria, which may have been suitably treated, and at least one bacterium not belonging to the family Enterobacteria,
then
(b) ein zweites Absuchen mittels Immunfluoreszens des/der in
(a) ausgewählten Überstands/Überstände.(b) a second immunofluorescence screening of the supernatant(s) selected in
(a).
2. Antikörper nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das erste Absuchen (a) mit Hilfe von
mindestens 5 lebenden Enterobakterien durchgeführt wird.2. Antibody according to claim 1, characterized in that the first screening (a) is carried out using at least 5 living enterobacteria.
3. Antikörper nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie von einer Zellinie von
Maushybridzellen als Ergebnis der Fusion von bevorzugt nicht-sezernierenden Mausmyelomazellen und von Plasmozyten
von Mäusen, die mit einem geeigneterweise von einem Enterobakterium, ausgewählt aus der Gruppe umfassend E. coli
014:K7 (ATCC 19110) und E. coli 0124:B17 (ATCC 12806), hergestellt wurde, immunisiert wurden, erhalten werden.3. Antibodies according to claim 1 or 2, characterized in that they are obtained from a cell line of
mouse hybrid cells as a result of the fusion of preferably non-secreting mouse myeloma cells and of plasma cells
from mice which have been immunized with a suitably produced by an enterobacterium selected from the group comprising E. coli
014:K7 (ATCC 19110) and E. coli 0124:B17 (ATCC 12806).
4. Antigene Fragmente, dadurch gekennzeichnet,
daß sie von den Antikörpern nach einem der Ansprüche 1 bis 3 erkannt werden und daß sie aus einem Fragment des
gemeinsamen Antigens der Enterobakterien (ACE), das auf der Oberfläche von ganzen Enterobakterien vorhanden ist, bestehen,
wobei das Fragment den Antikörpern direkt zugänglich ist und mindestens eine antige Determinante von ACE darstellt.
4. Antigenic fragments, characterized in that they are recognized by the antibodies according to one of claims 1 to 3 and that they consist of a fragment of the common antigen of enterobacteria (ACE) which is present on the surface of whole enterobacteria, the fragment being directly accessible to the antibodies and representing at least one antigenic determinant of ACE.
5. Immunologisches Reagens zur Verwendung zum Nachweis von ganzen Enterobakterien, dadurch gekennzeichnet,
daß es einen Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 3 oder ein Fragment davon umfaßt, wobei der eine oder
der andere gegebenenfalls durch Markierung durch jeden geeigneten Marker, insbesondere ein Enzym, Fluorochrom, modifiziert
ist und/oder auf einen festen Träger fixiert ist.5. Immunological reagent for use in the detection of whole enterobacteria, characterized in that it comprises an antibody according to one of claims 1 to 3 or a fragment thereof, one or the other optionally modified by labeling with any suitable marker, in particular an enzyme, fluorochrome, and/or fixed to a solid support.
6. Verfahren zum Nachweis und gegebenenfalls zur Zählung
von ganzen Enterobakterien, die gegebenenfalls in einer zu
analysierenden Probe vorhanden sind, dadurch gekennzeichnet, daß man die zu analysierende Probe mit
mindestens einem immunologischen Reagens nach Anspruch 5 in Kontakt bringt, an das sich die ganzen Enterobakterien binden,
wenn diese in der zu kontrollierenden Probe vorhanden sind, dann die gegebenenfalls gebildeten Antikörper-Entero-6. Method for detecting and, if necessary, counting
entire enterobacteria which may be present in a sample to be analyzed, characterized in that the sample to be analyzed is brought into contact with
at least one immunological reagent according to claim 5, to which the whole enterobacteria bind,
if these are present in the sample to be controlled, then the antibody enterobacteria which may be formed
bakterienkomplexe durch jedes geeignete Mittel, insbesondere EIA, Durchflußzytometrie nachweist.bacterial complexes by any suitable means, in particular EIA, flow cytometry.
7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß vor dem Inkontaktbringen von Antikörper-Probe
letztere auf geeignete Weise solubilisiert wird.7. Method according to claim 6, characterized in that before bringing the antibody sample into contact, the latter is solubilized in a suitable manner.
8. Kit oder Diagnosebesteck zum spezifischen Nachweis und gegebenenfalls zur Zählung von Enterobakterien, dadurch
gekennzeichnet, daß es mindestens8. Kit or diagnostic device for the specific detection and, where appropriate, enumeration of enterobacteria, characterized in that it contains at least
- ein immunologisches Reagens nach Anspruch 5 und- an immunological reagent according to claim 5 and
- gegebenenfalls Mengen oder geeignete Dosen einer Detektionssubstanz
- where appropriate, quantities or appropriate doses of a detection substance
umfaßt.includes.
9. Verwendung der Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zum spezifischen Nachweis und gegebenenfalls zur Zählung
von Enterobakterien, insbesondere in Lebensmittelprodukten.9. Use of the antibodies according to one of claims 1 to 3 for the specific detection and, if appropriate, for the enumeration of
enterobacteria, in particular in food products.